SK286945B6 - Expresný systém faktora VIII - Google Patents

Expresný systém faktora VIII Download PDF

Info

Publication number
SK286945B6
SK286945B6 SK792-2001A SK7922001A SK286945B6 SK 286945 B6 SK286945 B6 SK 286945B6 SK 7922001 A SK7922001 A SK 7922001A SK 286945 B6 SK286945 B6 SK 286945B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
leu
ser
protein
factor viii
glu
Prior art date
Application number
SK792-2001A
Other languages
English (en)
Other versions
SK7922001A3 (en
Inventor
Myung-Sam Cho
Sham-Yuen Chan
William Kelsey
Helena Yee
Original Assignee
Bayer Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Corporation filed Critical Bayer Corporation
Publication of SK7922001A3 publication Critical patent/SK7922001A3/sk
Publication of SK286945B6 publication Critical patent/SK286945B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/028—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a herpesvirus

Abstract

Je opísaný spôsob výroby bez proteínov týkajúcich sa proteínov, ktoré majú prokoagulačnú aktivitu faktora VIII. Všeobecne tento spôsob zahrnuje (1) odvodenie stabilných klonov ľudských buniek s vysokou produktivitou faktora VIII bez domény B a (2) adaptáciu buniek na rast v médiu bez proteínov odvodených z plazmy. Špecifickejšie tento spôsob zahrnuje transfekciu ľudských buniek vektorom, ako je vektor na obrázku, ktorý obsahuje voliteľný markér a sekvenciu kódujúcu proteín, ktorý má prokoagulačnú aktivitu faktora VIII, pričom sekvencia je operabilne spojená s promótorom, ďalej selekciu buniek pomocou selekčného činidla a izoláciu klonov exprimujúcich vysoké hladiny proteínu, ktorý má prokoagulačnú aktivitu faktora VIII.

Description

Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka zlepšeného spôsobu výroby faktora VIII a jeho derivátov. Spôsob sa týka všeobecne konštrukcie vektora, transfekcie vektora a voľby bunkových línií so zvýšenou produktivitou za podmienok bez prítomnosti proteínov. Najmä sa tento vynález týka spôsobu výroby proteínu s prokoagulačnou aktivitou faktora VIII v priemyselnom meradle.
Doterajší stav techniky
Ľudský faktor VIII je stopový plazmatický proteín, ktorý sa ako kofaktor zúčastňuje aktivácie faktora X a faktora IXa. Dedičná deficiencia faktora VIII vedie k poruche krvácania, hemofílii A spojenej s faktorom X, ktorá sa dá úspešne liečiť čisteným faktorom VIII. Substitučná terapia hemofílie A sa vyvinula z používania faktora VIII odvodeného z plazmy až k použitiu rekombinantného faktora Vni získaného klonovaním a expresiou cDNA faktora VIH v cicavčích bunkách (Wood a kol., Náture, 312, 330 (1984)).
Faktor VIII má organizáciu domény A1-A2B-A3C1-C2 a syntetizuje sa ako polypeptid s jediným reťazcom s 2351 aminokyselinami, z ktorých sa pri translokácii do lumina endoplazmatického retikula odštiepi signálny peptid s 19 aminokyselinami. V dôsledku skutočnosti, že faktor VIII je silne glykozylovaný, bolo ťažké dosiahnuť vysokú mieru expresie faktora VIII (vyššiu ako 0,2 pg/bunka/deň) (Lind a kol., Eur. J. Biochem., 232, 19 - 27 (1995), Kaufman a kol., Mol. Celí. Biol., 9, 1233 - 1242 (1989)). Expresia faktora VIII v cicavčích bunkách je zvyčajne o 2 až 3 rády nižšia ako expresia pozorovaná pri iných génoch využívajúcich podobné vektory a prístupy. Produktivita tvorby bunkových línii pre faktor VIII je v rozmedzí od 0,5 do 1 pj/bunka/deň (0,1 až 0,2 pg/bunka/deň).
Ukázalo sa, že doména B faktora VIII je pre prokoagulačnú aktivitu nahraditeľná. S použitím skrátených variantov faktora VIII bola rôznymi skupinami oznámená zlepšená expresia faktora VIII v cicavčích bunkách (Lind a kol., Eur. J. Biochem., 232, 19 - 27 (1995), Tajima a kol., Proc. 6* Int Symp. H.T., str. 51 - 63, US patent č. 5 661 008 patriaci firme Almstedt, 1997). Expresná hladina variantov faktora VIII však zostáva pri stabilných bunkových klonoch pod 1 pg/bunka/deň.
Do stavu techniky týmto zahrnujeme súvisiace prihlášky autora Choa, ktorá je označená MSB-7241 (US sériové č. 09/209 920), „Human Hybrid Host Celí for Mammalian Gene Expression“ a prihláška autorov Choa a Chana označená MSB-7254 (US sériové č. 09/209 915) „Vectors Having Terminál Repeat Sequence ofEpstein-Barr Vírus“, obsahujúce súvisiaci predmet. Obe prihlášky boli podané 10. decembra 1998.
Podstata vynálezu
Autori v súčasnosti vynašli (i) spôsob, ktorý odvodzuje bunkové línie s mimoriadne vysokou produktivitou proteínov, ktoré majú prokoagulačnú aktivitu faktora VIII a (ii) spôsob výroby proteínov, ktoré majú prokoagulačnú aktivitu faktora VIII nevyžadujúcu prítomnosť plazmatických proteínov.
Bol vynájdený spôsob výroby proteínov, ktoré majú prokoagulačnú aktivitu faktora VIII v priemyselnom meradle. S použitím novovytvorenej hostiteľskej bunky sú odvodené bunkové klony so špecifickými produktivitami v rozmedzí od 2 do 4 pg/bunka/deň (10 až 20 pj/bunka/deň). Hostiteľská bunla obsahuje sekvenciu kódujúcu proteín, s aktivitou faktora VIII, pričom sekvencia je operabilne spojená s promótorom. Za podmienok neprítomnosti séra má jeden kloň predĺženú dennú produktivitu od 2 do 4 pg/bunka/deň. Klony s takto vysokou hladinou produktivity sú schopné produkovať od 3 do 4 miliónov jednotiek za deň v 15-litrovom perfuznom fermentore. Jedna jednotka aktivity faktora VIII je podľa definície aktivita prítomná v ml plazmy. Jeden pg faktora VIII je všeobecne ekvivalentný okolo 5 pJ aktivity faktora VIII.
Ako sa tu používa, proteín, ktorý má prokoagulačnú aktivitu faktora VIII, je proteín, ktorý spôsobuje aktiváciu faktora X v systémoch modelov in vitro a in vivo.
Ako neobmedzujúci príklad táto definícia zahrnuje rekombinantný ľudský faktor VIII v plnej dĺžke a faktor VIII bez domény B, ktorej sekvencia je opísaná na obr. L
Vysoká miera expresie proteínu, ktorý má prokoagulačnú aktivitu faktora VIII, znamená aspoň okolo pJ/bunka//deň alebo výhodnejšie aspoň okolo 4 pJ/bunka/ deň alebo najvýhodnejšie aspoň okolo 5 pJ/bunka/deň aktivity faktora VIII, pokiaľ sa pestuje v médiu bez proteínov odvodených z plazmy alebo aspoň 4 pj/bunka/deň alebo výhodnejšie aspoň okolo 8 pj/bunka/deň alebo najvýhodnejšie aspoň okolo 10 pJ/bunka/deň aktivity faktora VIII, pokiaľ sa pestuje v médiu dopĺňanom proteinom odvodeným z plazmy. Pokiaľ je exprimovaným proteinom BDD-FVIII, môžu sa bunkové línie, ktoré majú špecifické produktivity až okolo 15 pJ/bunka/deň, výhodnejšie až okolo 20 pj/bunka/deň, získať spôsobom tu opísaným.
Ako sa tu používa na opis pôvodu bunkových línií, „odvodený z“ sa myslí tak, že zahrnuje normálne mitotické bunkové delenie a spôsoby, ako sú transfekcia, fúzia buniek alebo ďalšie techniky genetického inži
SK 286945 Β6 nierstva používané na zmeny buniek alebo tvorbu buniek s novými vlastnosťami, výpočet tým však nie je obmedzený.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 Sekvencia aminokyselín BDD-FVIII (SEQ ID NO: 1).
Obr. 2 Sekvencia terminálne opakovanej (TR) sekvencie izolovanej z vírusu Epstein-Barrovej (SEQ ID NO: 2).
Obr. 3 Plazmidová mapa pCIS25DTR.
Obr. 4(a) Odvodenie klonu 20B8.
Obr. 4(b) Porovnanie produktivít niekoľkých klonov v rôznych médiách. 3 dátové body sú predložené z dvojmesačného testu stability každého klonu.
Obr. 5 Objemová produktivita klonu 20B8.
Stanovenie faktora VIII
Aktivita derivátov faktora VIII získaného expresiou rekombinantného génu v populáciách buniek odolných proti metotrexatu (MTX) sa meria cbromogénnym stanovením. Aktivita sa kvantiíikuje s použitím gitu Coatest” factor VIII:C/4 (Cromogenix, Molndal, Švédsko) podľa návodu výrobcu. V USA štandardný antihemofilický faktor (faktor VIII), známy ako MEGA 1 (Office of Biologics Research and Review, Bethesda, MD), sa pri tomto stanovení použije ako štandard merania. Pozri Barrowcliffe, Thromb. Heam., 70, 876 (1993).
Konštrukcia expresných vektorov pre faktor VIII bez domény B
Sekvencia faktora VIII bez domény B (BDD-FVIII) je ukázaná na obr. 1. Reťazce s hmotnosťou 90 kD a 80 kD sú spojené mostíkom pozostávajúcim zo 14 aminokyselín. Pozri Chán, S.Y. „Production of Rekombinant Factor VIII in the Presence of Liposome-like Substances of Mixed Composition“, US patentová prihláška č. 08/634 001, podaná 16. apríla 1996. Expresný vektor pre BDD-FVIII sa pripraví s použitím štandardných postupov rekombinácie DNA. Štruktúra expresného vektora (pCIS25DTR) je ukázaná na obr. 3. Vektor obsahuje transkripčnú jednotku pre BDD-FVIII a voliteľný markér, dihydrofolátreduktázu (dhfr). Navyše sa kvôli zvýšeniu účinnosti integrácie do vektora vloží koncová opakovaná sekvencia z vírusu Epstein-Barrovej, ktorá má zvýšený pomer selekcie liekom (obr. 2). Vektor je v podstate konštruktom vektora (uložený ATCC 98879), ktorý bol vytvorený kvôli zahrnutiu transkripčnej jednotky zodpovedajúcej sekvencií ukázanej na obr. 1. Ďalšie informácie o koncovej opakovanej sekvencií sa dajú nájsť v súvisiacej patentovej prihláške, zahrnutej tu formou odkazu, autorov Choa a Chana označenej MSB-7254, „Terminál repeat sequence of Epstein-Barr vírus enhances drug selection ratio“, podanej toho istého dňa ako predložená prihláška.
Odborník v odbore môže konštruovať a používať podobné vektory na získanie buniek exprimujúcich proteíny, ktoré majú prokoagulačnú aktivitu faktora VIII. Napríklad kódujúce sekvencie kódujúce známe varianty faktoru VIII, ktoré si zachovávajú prokoagulačnú aktivitu, môžu nahradiť sekvenciu kódujúcu BDD-FVIII. Rovnako namiesto dhfr sa môžu použiť iné voliteľné markéry, ako je glutamínsyntetáza (gs) alebo gén odolnosti proti mnohým liekom (multidrug resistance gene - mdr). Podľa toho sa musí vykonať voľba selekčného činidla, ako je v odbore známe, t. j. pre dhfr je výhodným selekčným činidlom metotrexat, pre gs je výhodným selekčným činidlom metionínsulfoximín a pre mdr je výhodným selekčným činidlom kolchicín.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Odvodenie bunkových línií exprimujúcich BDD-FVIII: Transfekcia, voľba lieku a množenie génu pg pCIS25DTR sa transfekuje do buniek HKB11 (ATCC depozit č. CRL 12568 - hybrid buniek 293S a buniek ľudského Burkittovho lymfómu, pozri US patentová prihláška autorov Choa a kol., podaná toho istého dňa ako táto prihláška a označená MSB-7241, zahrnutá tu formou odkazu) elektroporačnou súpravou pri 300 volt a 300 mikrofarad (BTX Electro Celí Manipulátor 600) s použitím 2 mm kyvety (BTX časť č. 620). V porovnávacích experimentoch vykonávaných kvôli porovnaniu s bunkami HKB11 sa bunky Cho (ovariálne čínskeho škrečka, Chinese hamster ovary) a 293S (ľudská embryonálna ľadvina) transfíkujú s použitím katiónového lipidového činidla DMRIE-C (Life Technologies, Gaithersburg, MD) podľa protokolu poskytnutého firmou Life Technologies. Množenie transfikovaných buniek sa vykoná pomocou zvyšujúcich sa koncentrácií metotrexatu (MTX) (100 nM, 200 nM, 400 nM a 800 nM) na 1 x 106 buniek na dosku s 96 jamkami v metotrexatovom selekčnom médiu bez hypoxantínu a tymidínu (médium DME/F12 bez hypoxantínu a tymidmu plus 5 % dialyzovaného fetálneho hovädzieho séra od firmy Hyclone, Logan, UT). Bunky odolné proti metotrexatu sa zhromažďujú kvôli pestovaniu a sekrécia BDD-FVIII sa testuje pomocou gitu Coatest” factor VIII asi 2 až 3 týždne po transfekcii. Kultivácia buniek sa vykonáva pri teplote 37 °C vo zvlhčovanom inkubátore s 5 % oxidu uhličitého.
Obmedzujúce klonovanie riedením
Klony jedinej bunky (SCC) sa odvodia obmedzujúcim klonovaním riedením (LDC) populácií s vysokou produkciou na doskách s 96 jamkami za podmienok bez séra. Bunky sa očkujú v množstve 1 až 10 buniek na jamku v médiu DME/F12 doplnenom rekombinantným inzulínom HumulinR (Lilly, Indianapolis, IN) v koncentrácii 10 pg/ml, esenciálnymi aminokyselinami 10X (Life Technology, Gaithersburg, MD) a proteínovou frakciou ľudskej plazmy PlasmanateR (Bayer, Clayton, NC). Proteínová frakcia ľudskej plazmy (HPP) PlasmanateR obsahuje ľudský albumín (88 %) a rôzne globulíny (12 %). Klony sa testujú na produktivitu BDD-FVIII s použitím gitov CoatestR factor VIII. Klony s najvyššou produkciou sa vyberú na vyhodnotenie stability v trepacích nádobách. Pri bunkách HKB sa prvé kolo LDC vykoná s použitím selekčného média doplneného 5 % dialyzovaného fetálneho hovädzieho séra. Druhé kolo LDC sa vykoná v médiu bez séra, ale obsahujúcom proteínovú frakciu ľudského séra PlasmanateR s použitím prvého SCC upraveného na médium bez séra doplnené proteínovou frakciou ľudského séra PlasmanateR.
Odvodenie HKB klonu 20B8
Ako je zhrnuté na obr. 4(a), odvodí sa počiatočná populácia IC10 z buniek HKB transfikovaných pCIS25DTR po namnožení v koncentrácii metotrexatu 400 nM v selekčnom médiu s 5 % fetálneho hovädzieho séra. Jeden z prvých klonov jednej bunky (SCC), 10A8, odvodený z 1C10 obmedzujúcim klonovaním riedením (LDC) s použitím selekčného média doplneného 5 % fetálneho hovädzieho séra sa upraví v médiu bez séra doplnenom proteínovou frakciou ľudského séra PlasmanateR. 10A8 neočakávane má v tomto štádium mimoriadne zvýšené hladiny produkcie rFVIII (obr. 4(b)). Pôvodcovia preto vykonali druhé obmedzujúce klonovanie riedením s použitím média doplneného proteínovou frakciou ľudského séra PlasmanateR. Produktivita klonov jednej bunky (napr. 20B8) odvodených z druhého obmedzujúceho klonovania riedením je pri 10A8 adaptovaných na proteínovú frakciu ľudského séra PlasmanateR podobná. 20B8 má vyššie hladiny BDD-FVIII ako pôvodný 10A8 odvodený z prvého obmedzujúceho klonovania riedením v médiu obsahujúcom sérum. Konečne, 20B8 sa adaptuje na rast v médiu bez proteínov. Vzorky 20B8 sa uložia v Američan Type Culture Collection (Manassas, VA) (ATCC depozit č. CRL-12582).
Ako je ukázané v tabuľke 1, klony HKB majú vyššiu produktivitu BDD-FVIII. Pri bunkách HKB sa pozoruje 10- až 20-násobné zvýšenie produktivity v porovnaní s klonmi z transfikovaných buniek CHO a 293S. Bunky HKB, ktoré netvoria veľké zhluky buniek, pokiaľ sa pestujú v suspenznej kultúre, sú výhodné bunky na expresiu proteínov, ktoré majú prokoagulačnú aktivitu faktora VIII.
Tabuľka 1 Expresia FVIII a BDD-FVIII pri bunkových líniách ľudí a hlodavcov
Špecifická produktivita (pj/bunka/deň )*
Deriváty FVIII BHK 293S CHO HKB
FVIII s plnou dĺžkou 0,45 1,2 0,5 1,0
BDD-FVIII ND 2,5 1,0 20
* Priemer 5 vysoko produkujúcich klonov (v médiu bez séra) ND - nevykonané
Adaptácia klonov na neprítomnosť plazmatických proteínov
Klony HKB, ktoré sa adaptujú na rast ako suspenzné kultúry bez séra, sa ďalej odvykajú od doplňovania plazmatických proteínov. Odvykanie sa vykonáva v sterilných polykarbonátových trepacích fľašiach (Corning, Coming, NY) pri hustote buniek okolo 0,5 x 106 buniek/ml s použitím média bez proteínov odvodených z plazmy. Médiom bez plazmatických proteínov je médium DME/F12 doplnené Pluronic F68 (0,1 %), CuSO4 (50 nM) a FeSO4/EDTA (50 μΜ). Každých 48 hodín sa vykoná úplná výmena média a trepacie fľaše sa znova naočkujú na koncentráciu 0,5 x 10s buniek/ml.
Fermentácia klonu 20B8
Produktivita klonu 20B8 sa vyhodnotí v 15-litrovomperfuznom fermentore. Fermentor sa naočkuje bunkami klonu 20B8 s hustotou okolo 3 x 106 buniek/ml. Fermentor sa perfunduje rýchlosťou 4 objemy za deň produkčným médiom bez séra podľa opisu v predchádzajúcom odseku. Konečná hustota 2 x 107 buniek/ml sa udržiava počas doby hodnotenia (45 dní). Ako je ukázané na obr. 5, v priebehu prvých 4 týždňov fermentácie sa kloň 2OB8 perfunduje produkčným médiom bez séra doplneným proteínovou frakciou ľudského séra PlasmanateR a udržiava si vysokú produktivitu. Od 28. dňa do konca behu fermentácie sa bunky perfundujú rovnakým médiom bez séra, ale bez proteínovej frakcie ľudského séra PlasmanateR. Ako je ukázané na obr. 5, bunky udržiavajú vysoké hladiny produkcie FVIII v prostredí bez proteínov odvodených z plazmy. „Bez proteínov odvodených z plazmy“ znamená, že do média sa nepridávajú v podstate žiadne proteíny izolované z plazmy.
Odvodenie buniek HKB poskytuje produkčný systém bez proteínov na tvorbu nie iba BDD-FVIII, ale i ďalších terapeutických proteínov. Proteíny tvorené bunkami HKB majú ľudské glykozylačné vzory, ktoré môžu zlepšiť polčas istých glykoproteínov in vivo. Tieto bunky môžu byť tiež užitočné na produkciu adenovírusových kmeňov a kmeňov spätých s adenovírusmi, ktoré sú určené na účely génovej terapie.
Uvedené príklady sa myslia ako ilustrácia vynálezu a predpokladá sa, že odborníkovi v odbore budú zrejmé jeho variácie. Chápe sa tiež, že rozsah tohto vynálezu je obmedzený iba patentovými nárokmi uvedenými ďalej.
ZOZNAM SEKVENCIÍ <110> Cho, Myung-Sam
Chán, Sham-Yuen
Kelsey, William
Yee, Helena <120> Expresný systém faktoru VIII <130> MSB-7255 <140>
<141>
<160>2 < 170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 1438 <212>PRT <213> Umelá Sekvencia <220>
<223> Opis umelej sekvencie: Odvodená zo sekvencie ľudského faktora VIII <400> 1
Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser Trp Asp Tyr
1 5 10 15
Met Gin Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg Phe Pro Pro
20 25 30
Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val Tyr Lys Lys
35 40 45
Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Val His Leu Phe Asn íle Ala Lys Pro
50 55 60
Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr íle Gin Ala Glu Val
65 70 75 80
Tyr Asp Thr Val Val 85 íle Thr Leu Lys Asn Met Ala 90 Ser His Pro Val 95
Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser Glu Gly Ala
100 105 110
Glu Tyr Asp Asp Gin Thr Ser Gin Arg Glu Lys Glu Asp Asp Lys Val
115 120 125
Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gin Val Leu Lys Glu Asn
130 135 140
Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser Tyr Leu Ser
145 150 155 160
His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu íle Gly Ala Leu
165 170 175
SK 286945 Β6
Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys 185 Thr Gin 190 Thr Leu
180
His Lys Phe íle Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly Lys Ser Trp
195 200 205
His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gin Asp Arg Asp Ala Ala Ser
210 215 220
Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr Val Asn Arg
225 230 235 240
Ser Leu Pro Gly Leu íle Gly Cys His Arg Lys Ser Val Tyr Trp His
245 250 255
Val íle Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser íle Phe Leu Glu
260 265 270
Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gin Ala Ser Leu Glu íle
275 280 285
Ser Pro íle Thr Phe Leu Thr Ala Gin Thr Leu Leu Met Asp Leu Gly
290 295 300
Gin Phe Leu Leu Phe Cys His íle Ser Ser His Gin His Asp Gly Met
305 310 315 320
Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro Gin Leu Arg
325 330 335
Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp Leu Thr Asp
340 345 350
Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser Pro Ser Phe
355 360 365
íle Gin íle Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr Trp Val His
370 375 380
Tyr íle Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro Leu Val Leu
385 390 395 400
Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gin Tyr Leu Asn Asn Gly Pro
405 410 415
Gin Arg íle Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met Ala Tyr Thr
420 425 430
Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala íle Gin His Glu Ser Gly íle
435 440 445
Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu Leu íle íle
450 455 460
Phe Lys Asn Gin Ala Ser Arg Pro Tyr Asn íle Tyr Pro His Gly íle
4 65 470 475 480
Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys Gly Val Lys
485 490 495
His Leu Lys Asp Phe Pro íle Leu Pro Gly Glu íle Phe Lys Tyr Lys
500 505 510
SK 286945 Β6
Trp Thr Val 515 Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp Pro Arg Cys
520 525
Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg Asp Leu Ala
530 535 540
Ser Gly Leu íle Gly Pro Leu Leu íle Cys Tyr Lys Glu Ser Val Asp
545 550 555 560
Gin Arg Gly Asn Gin íle Met Ser Asp Lys Arg Asn Val íle Leu Phe
565 570 575
Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu Asn íle Gin
580 585 590
Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gin Leu Glu Asp Pro Glu Phe
595 600 605
Gin Ala Ser Asn íle Met His Ser íle Asn Gly Tyr Val Phe Asp Ser
610 615 620
Leu Gin Leu Ser Val Cys Leu HiS Glu Val Ala Tyr Trp Tyr íle Leu
625 630 635 640
Ser íle Gly Ala Gin Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe Ser Gly Tyr
645 650 655
Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr Leu Phe Pro
660 665 670
Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro Gly Leu Trp
675 680 685
íle Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly Met Thr Ala
690 695 700
Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp Tyr Tyr Glu
705 710 715 720
Asp Ser Tyr Glu Asp íle Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys Asn Asn Ala
725 730 735
íle Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gin Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His
740 745 750
Gin Arg Glu íle Thr Arg Thr Thr Leu Gin Ser Asp Gin Glu Glu íle
755 760 765
Asp Tyr Asp Asp Thr íle Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp Phe Asp
770 775 780
íle Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gin Ser Pro Arg Ser Phe Gin Lys Lys
785 790 795 800
Thr Arg His Tyr Phe íle Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr Gly
805 810 815
Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gin Ser Gly Ser
820 825 830
Val Pro Gin Phe Lys Lys Val Val Phe Gin Glu Phe Thr Asp Gly Ser
835 840 845
Phe Thr 850 Gin Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His Leu Gly Leu
855 860
Leu Gly Pro Tyr íle Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn íle Met Val Thr
865 870 875 880
Phe Arg Asn Gin Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser Ser Leu íle
885 890 895
Ser Tyr Glu Glu Asp Gin Arg Gin Gly Ala Glu Pro Arg Lys Asn Phe
900 905 910
Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val Gin His His
915 920 925
Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe
930 935 940
Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His Ser Gly Leu íle Gly Pro
945 950 955 960
Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly Arg Gin
965 970 975
Val Thr Val Gin Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr íle Phe Asp Glu Thr
980 985 990
Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro
995 1000 1005
Cys Asn íle Gin Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe
1010 1015 1020
His Ala íle Asn Gly Tyr íle Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met
1025 1030 1035 1040
Ala Gin Asp Gin Arg íle Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn
1045 1050 1055
Glu Asn íle His Ser íle His Phe Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg
1060 1065 1070
Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val
1075 1080 1085
Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly íle Trp Arg Val
1090 1095 1100
Glu Cys Leu íle Gly Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu Phe
1105 1110 1115 1120
Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gin Thr Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly
1125 1130 1135
His íle Arg Asp Phe Gin íle Thr Ala Ser Gly Gin Tyr Gly Gin Trp
1140 1145 1150
Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser íle Asn Ala Trp
1155 1160 1165
Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp íle Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro
1170 1175 1180
Met íle 1185 íle His Gly íle Lys Thr 1190 Gin Gly Ala 11θ5 Arg Gin Lys Phe Ser 1200
Ser Leu Tyr íle Ser Gin Phe íle íle Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys
1205 1210 1215
Lys Trp Gin Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe
1220 L225 1230
Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly íle Lys His Asn íle Phe Asn Pro
1235 1240 1245
Pro íle íle Ala Arg Tyr íle Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser íle
1250 1255 1260
Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys
1265 1270 1275 1280
Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala íle Ser Asp Ala Gin íle
1285 1290 1295
Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser
1300 1305 1310
Lys Ala Arg Leu His Leu Gin Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gin
1315 1320 1325
Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gin Val Asp Phe Gin Lys Thr Met
1330 1335 1340
Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gin Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser
1345 1350 1355 1360
Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu íle Ser Ser Ser Gin Asp Gly His Gin
1365 1370 1375
Trp Thr Leu Phe Phe Gin Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gin Gly Asn
1380 1385 1390
Gin Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu
1395 1400 1405
Thr Arg Tyr Leu Arg íle His Pro Gin Ser Trp Val His Gin íle Ala
1410 1415 1420
Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gin Asp Leu Tyr
1425 1430 1435 <210>2 <211> 402 <212>DNA <213> Umelá sekvencia <220>
<223> Opis umelej sekvencie: Odvodená zo sekvencie vírusu Epstein-Barrovej <400> 2 ggcaatggag cgtgacgaag ggccccaggg ctgaccccgg caaacgtgac ccggggctcc60 ggggtgaccc aggcaagcgt ggccaagggg cccgtgggtg acacaggcaa ccctgacaaa120 ggccccccag gaaagacccc cggggggcat cgggggggtg ttggcgggtc atgggggggg180 cgggtcatgc cgcgcattcc tggaaaaagt ggagggggcg tggccttccc cccgcggccc240 cctagccccc ccgcagagag cggcgcaacg gcgggcgagc ggcggggggt cggggtccgc300 gggctccggg ggctgcgggc ggtggatggc ggctggcgtt ccggggatcg ggggggggtc360 ggggggcgct gcgcgggcgc agccatgcgt gaccgtgatg ag402

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Spôsob výroby a izolácie proteínu, ktorý má aktivitu faktora VIII, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje pestovanie buniek označených v Američan Type Culture Collection ako CRL-12568, ktoré obsahujú sekvenciu kódujúcu proteín operabilne spojený s promótorom, pričom rast prebieha za podmienok dostačujúcich na expresiu proteínu a izoláciu proteínu.
  2. 2. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že proteín má aminokyselinovú sekvenciu označenú ako SEQ ID NO: 1.
  3. 3. Spôsob podľa nároku / vyznačujúci sa tým, že proteín je exprimovaný s hladinou aspoň 2 pj ./bunka za deň, keď sú bunky pestované v médiu odvodenom z plazmy bez proteínov.
  4. 4. Spôsob podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že proteín je exprimovaný s hladinou aspoň
    4 pj ./bunka za deň.
  5. 5. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že proteín je exprimovaný s hladinou aspoň
    5 pj ./bunka za deň.
  6. 6. Ľudská bunková línia získaná z buniek označených v Američan Type Culture Collection ako CRL-12568, ktorá obsahuje sekvenciu kódujúcu proteín s aktivitou faktoru VIII, pričom sekvencia je operabilne spojená s promótorom.
  7. 7. Ľudská bunková línia podľa nároku 6, ktorá exprimuje faktor VIII s deléciou domény B.
  8. 8. Bunková línia, ktorá v Američan Type Culture Collection je označená ako CRL-12582.
    5 výkresov
    SK 286945 Β6
    1/5
    1 ATRRYYLGAV ELSWDYMQSD LGELPVDARF PPRVPKSFFF NTSWYKKTL
    51 FVEFTVHLFN IAKPRFPWMG LLGPTIQAEV YDTWITLKN MASHPVSLHA 101 VGVSYWKASE GAEYDDQTSQ REKEDDKVFP GGSHTYVWQV LKENGPMASD 151 PLCLTYSYLS HVDLVKDLNS GLIGALLVCR EGSLAKEKTQ TLHKFILLFA 201 VFDEGKSWHS ETKNSLMQDR DAASARAWPK MHTVNGYVNR SLPGLIGCHR 251 KSVYWHVIGM GTTPEVHSIF LEGHTFLVRN HRQASLEIS? ITFLTAQTLL 301 MDLGQFLLFC HISSHQHDGM EAYVKVDSCP EEPQLRMKNN EEAEDYDDDL 351 TDSEMDWRF DDDNSPSFIQ IRSVAKKHPK TWVHYIAAEE EDWDYAPLVL 401 APDDRSYKSQ YLNNGPQRIG RKYKKVREMA YTDETFKTRE AIQHESGILG 451 PLLYGEVGDT LLIIFKNQAS RPYNIYPHGI TDVRPLYSRR LPKGVKHLKD 501 FPILPGEIFK YKWTVTVEDG PTKSDPRCLT RYYSSFVNME RDLASGLIGP 551 LLICYKESVD QRGNQIMSDK RNVILFSVFD ENRSWYLTEN IQRFLPNFAG 601 VQLEDPEFQA SNIMHSINGY VFDSLQLSVC LHEVAYWYIL SIGAQTDFLS 651 VFFSGYTFKH KMVYEDTLTL FPFSGETVFM SMENPGLWIL GCHNSDFRNR 701 GMTALLKVSS CDKNTGĎYYE DSYEDISAYL LSKNNAIEPR SFSQNPPVLK 751 RHQREITRTT LQSDQEEIDY DDTISVEMKK EDFDIYDEDE NQSPRSFQKK 801 TRHYFIAAVE RLWDYGMSSS PHVLRNFAQS GSVPQFKKW FQEFTDGSFT 851 QPLYRGELNE HLGLLGPYIR AEVEDNIMVT FRNQASRPYS FYSSLISYEE 901 DQRQGAEPRK NFVKPNETKT YFWKVQHHMA PTKDEFDCKA WAYFSDVDLE 951 KDVHSGLIGP LLVCHTNTLN PAHGRQVTVQ EFALFFTIFD. ETKSWYFTEN 1001 MBRNCRAPCN IQMEDPTFKE NYRFHAINGY. IMDTLPGLVM AQDQRIRWYL 1051 LSMGSNENTH SIHFSGHVFT VRKKEEYKMA LYNLYPGVFE TVEMLPSKRG 1101 IWRVECLIGE HLHAGMSTLF LVYSNKCQTP LGMASGHIRD FQITASGQYG 1151 QWAPKLARĹH YSGSINAWST KEPFSWIKVD LLAPMIIHGI KTQGARQKFS 1201 SLYISQFIIM YSLDGKKWQT YRGNSTGTLM VFFGNVDSSG IKHNIFNPPI 1251 IARYIRLHPT HYSIRSTLRM ELMGCDLNSC SMPLGMESKA ISDAQITASS 1301 YFTNMFATWS PSKARLHLQG RSNAWRPQVN NPKEWLQVDF QKTMKVTGVT 1351 TQGVKSLLTS MYVKEFLISS SQDGHQWTLF FQNGKVKVFQ GNQDSFTPW 1401 NSLDPPLLTR YLRIHPQSWV HQIALRMEVL GCEAQDLY
    Obr. 1 n
    2/5
SK792-2001A 1998-12-10 1999-12-08 Expresný systém faktora VIII SK286945B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/209,916 US6358703B1 (en) 1998-12-10 1998-12-10 Expression system for factor VIII
PCT/US1999/029169 WO2000034505A1 (en) 1998-12-10 1999-12-08 Expression system for factor viii

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK7922001A3 SK7922001A3 (en) 2002-01-07
SK286945B6 true SK286945B6 (sk) 2009-08-06

Family

ID=22780858

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK792-2001A SK286945B6 (sk) 1998-12-10 1999-12-08 Expresný systém faktora VIII

Country Status (26)

Country Link
US (10) US6358703B1 (sk)
EP (1) EP1137797B1 (sk)
JP (1) JP4240818B2 (sk)
KR (1) KR100616028B1 (sk)
AT (1) ATE412765T1 (sk)
AU (1) AU761801B2 (sk)
BG (1) BG65431B1 (sk)
BR (1) BRPI9916069B8 (sk)
CA (1) CA2354845C (sk)
CZ (1) CZ302330B6 (sk)
DE (1) DE69939839D1 (sk)
DK (1) DK1137797T3 (sk)
ES (1) ES2315026T3 (sk)
HU (1) HU228489B1 (sk)
IL (2) IL143353A0 (sk)
NO (1) NO329544B1 (sk)
NZ (1) NZ512234A (sk)
PL (1) PL200676B1 (sk)
PT (1) PT1137797E (sk)
RO (1) RO121604B1 (sk)
RU (1) RU2249041C2 (sk)
SI (1) SI20644B (sk)
SK (1) SK286945B6 (sk)
TR (1) TR200101592T2 (sk)
UA (1) UA77383C2 (sk)
WO (1) WO2000034505A1 (sk)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6475725B1 (en) 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
US6180108B1 (en) * 1998-12-10 2001-01-30 Bayer Corporation Vectors having terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus
US6358703B1 (en) 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
EE200200538A (et) * 2000-03-22 2004-04-15 Octagene Gmbh Rekombinantsete verehüübimisfaktorite produtseerimine inimese rakuliinides
DE60234193D1 (de) * 2001-06-14 2009-12-10 Scripps Research Inst Stabilisierte faktor viii mit gentechnisch konstruierten disulfidbindungen
HUE058897T2 (hu) 2003-02-26 2022-09-28 Nektar Therapeutics Polimer VIII-as faktor egység konjugátumok
WO2005017149A1 (en) * 2003-06-03 2005-02-24 Cell Genesys, Inc. Compositions and methods for enhanced expression of recombinant polypeptides from a single vector using a peptide cleavage site
US7485291B2 (en) * 2003-06-03 2009-02-03 Cell Genesys, Inc. Compositions and methods for generating multiple polypeptides from a single vector using a virus derived peptide cleavage site, and uses thereof
CA2585547A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-11 Centocor, Inc. Chemically defined media compositions
EP1824988B1 (en) * 2004-11-12 2017-04-19 Bayer HealthCare LLC Site-directed modification of fviii
AR058568A1 (es) 2005-12-20 2008-02-13 Bristol Myers Squibb Co Metodos para producir una composicion con moleculas ctla4-ig a partir de un medio de cultivo
PL2253644T3 (pl) 2005-12-20 2014-04-30 Bristol Myers Squibb Co Kompozycje i sposoby wytwarzania kompozycji
PT2235197T (pt) 2007-12-27 2017-10-11 Baxalta Inc Processos para cultura de células
KR101005967B1 (ko) * 2008-04-12 2011-01-05 (주)셀트리온 우수한 재조합 단백질을 생산하기 위한 인간 숙주 세포
EP2304046A4 (en) * 2008-06-25 2011-11-23 Bayer Healthcare Llc FACTOR VIII MUTES WITH REDUCED IMMUNOGENITY
AU2009284113B2 (en) 2008-08-21 2015-05-14 Octapharma Ag Recombinantly produced human factor VIII and IX
AU2009289212B2 (en) * 2008-09-03 2015-02-12 Octapharma Ag New protecting compositions for recombinantly produced factor VIII
CN102348715B (zh) 2009-02-03 2017-12-08 阿穆尼克斯运营公司 延伸重组多肽和包含该延伸重组多肽的组合物
US8716448B2 (en) 2009-02-03 2014-05-06 Amunix Operating Inc. Coagulation factor VII compositions and methods of making and using same
US20120142593A1 (en) * 2009-03-24 2012-06-07 Bayer Healthcare Llc Factor VIII Variants and Methods of Use
US20110150843A1 (en) * 2009-10-30 2011-06-23 National Institute Of Immunology Method for the therapeutic correction of hemophilia a by transplanting bone marrow cells
US20130017997A1 (en) * 2010-08-19 2013-01-17 Amunix Operating Inc. Factor VIII Compositions and Methods of Making and Using Same
CN103517919B (zh) * 2011-05-13 2016-11-16 欧克塔医药公司 在重组fviii的生产中提高真核细胞生产率的方法
NZ626945A (en) 2012-01-12 2016-10-28 Biogen Ma Inc Chimeric factor viii polypeptides and uses thereof
CN111548418A (zh) 2012-02-15 2020-08-18 比奥贝拉蒂治疗公司 因子viii组合物及其制备和使用方法
KR20190094480A (ko) 2012-02-15 2019-08-13 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 재조합 인자 viii 단백질
TW202003554A (zh) 2013-08-14 2020-01-16 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ｖｉｉｉ－ｘｔｅｎ融合物及其用途
SI3091997T1 (sl) 2014-01-10 2022-10-28 Bioverativ Therapeutics Inc. Himerni proteini faktorja VIII in njihova uporaba
JP6909203B2 (ja) 2015-08-03 2021-07-28 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 第ｉｘ因子融合タンパク質及びそれらの製造方法及び使用方法
EP4343774A2 (en) 2016-04-15 2024-03-27 Takeda Pharmaceutical Company Limited Method and apparatus for providing a pharmacokinetic drug dosing regiment
JP2019532019A (ja) 2016-07-22 2019-11-07 ネクター セラピューティクス オキシム含有リンケージを有する第ｖｉｉｉ因子部分のコンジュゲート
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
WO2019055717A1 (en) * 2017-09-13 2019-03-21 Evolve Biosystems, Inc. OLIGOSACCHARIDE COMPOSITIONS AND THEIR USE DURING THE TRANSIENT PHASES OF INTESTINAL MICROBIOMA OF A MAMMALIAN
KR20190086269A (ko) * 2018-01-12 2019-07-22 재단법인 목암생명과학연구소 체내 지속형 재조합 당단백질 및 이의 제조방법
JP2022512787A (ja) * 2018-10-23 2022-02-07 ザ・チルドレンズ・ホスピタル・オブ・フィラデルフィア 第ｖｉｉｉ因子機能を調節するための組成物および方法

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6045849B2 (ja) 1980-08-25 1985-10-12 林原 健 ヒトエリトロポエチンの製造方法
US4766075A (en) 1982-07-14 1988-08-23 Genentech, Inc. Human tissue plasminogen activator
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4703008A (en) 1983-12-13 1987-10-27 Kiren-Amgen, Inc. DNA sequences encoding erythropoietin
KR890002004B1 (ko) * 1984-01-11 1989-06-07 가부시끼 가이샤 도오시바 지폐류 판별장치
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4970300A (en) * 1985-02-01 1990-11-13 New York University Modified factor VIII
US4868112A (en) 1985-04-12 1989-09-19 Genetics Institute, Inc. Novel procoagulant proteins
US5198349A (en) 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
EP0254076B1 (en) * 1986-07-11 1991-05-08 Miles Inc. Improved recombinant protein production
DE3730599A1 (de) 1986-09-12 1988-07-07 Genentech Inc Verfahren zur kontinuierlichen herstellung von heterologen proteinen in eukaryontischen wirtszellen
US5171844A (en) * 1987-06-12 1992-12-15 Gist-Brocades N.W. Proteins with factor viii activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
US5661008A (en) 1991-03-15 1997-08-26 Kabi Pharmacia Ab Recombinant human factor VIII derivatives
US5859204A (en) 1992-04-07 1999-01-12 Emory University Modified factor VIII
ES2226029T3 (es) * 1993-06-10 2005-03-16 Bayer Corporation Vector y linea celular de mamifero con productividad mejorada.
US5952198A (en) * 1995-05-04 1999-09-14 Bayer Corporation Production of recombinant Factor VIII in the presence of liposome-like substances of mixed composition
DE19517194A1 (de) * 1995-05-11 1996-11-14 Giesecke & Devrient Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur Prüfung von Blattgut, wie z.B. Banknoten oder Wertpapiere
MX9504215A (es) 1995-10-05 1997-04-30 Inst Politecnico Nacional Procedimiento mejorado para la purificacion de oligopeptidos con pesos moleculares de 1000 a 10,000 daltones, a partir de estractos leucocitos y su presentacion farmaceutica.
US5922959A (en) * 1996-10-15 1999-07-13 Currency Systems International Methods of measuring currency limpness
US5923413A (en) * 1996-11-15 1999-07-13 Interbold Universal bank note denominator and validator
US5804420A (en) * 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
WO1999029848A1 (en) * 1997-12-05 1999-06-17 The Immune Response Corporation Novel vectors and genes exhibiting increased expression
US6040584A (en) * 1998-05-22 2000-03-21 Mti Corporation Method and for system for detecting damaged bills
US6528286B1 (en) 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
US6180108B1 (en) 1998-12-10 2001-01-30 Bayer Corporation Vectors having terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus
US6136599A (en) * 1998-12-10 2000-10-24 Bayer Corporation Human hybrid host cell for mammalian gene expression
US6358703B1 (en) 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII

Also Published As

Publication number Publication date
US20130143818A1 (en) 2013-06-06
RO121604B1 (ro) 2007-12-28
US20020102730A1 (en) 2002-08-01
US8207117B2 (en) 2012-06-26
JP4240818B2 (ja) 2009-03-18
EP1137797A4 (en) 2005-06-22
RU2249041C2 (ru) 2005-03-27
US9249209B2 (en) 2016-02-02
US20160115219A1 (en) 2016-04-28
US7459525B2 (en) 2008-12-02
SI20644B (sl) 2009-04-30
JP2002531137A (ja) 2002-09-24
DK1137797T3 (da) 2009-02-23
WO2000034505A1 (en) 2000-06-15
SI20644A (sl) 2002-02-28
HUP0200558A2 (en) 2002-06-28
US8945869B2 (en) 2015-02-03
UA77383C2 (uk) 2006-12-15
PT1137797E (pt) 2008-12-26
PL349284A1 (en) 2002-07-15
AU761801B2 (en) 2003-06-12
US20110144025A1 (en) 2011-06-16
IL143353A0 (en) 2002-04-21
KR20020013481A (ko) 2002-02-20
HUP0200558A3 (en) 2004-11-29
DE69939839D1 (de) 2008-12-11
EP1137797A1 (en) 2001-10-04
SK7922001A3 (en) 2002-01-07
IL143353A (en) 2010-12-30
US20090036358A1 (en) 2009-02-05
CA2354845A1 (en) 2000-06-15
NO329544B1 (no) 2010-11-08
CZ302330B6 (cs) 2011-03-16
ATE412765T1 (de) 2008-11-15
US20170267745A1 (en) 2017-09-21
US20130267468A1 (en) 2013-10-10
CZ20012024A3 (cs) 2001-10-17
TR200101592T2 (tr) 2001-11-21
PL200676B1 (pl) 2009-01-30
KR100616028B1 (ko) 2006-08-28
AU2170100A (en) 2000-06-26
NZ512234A (en) 2002-12-20
NO20012718L (no) 2001-06-01
NO20012718D0 (no) 2001-06-01
BRPI9916069B8 (pt) 2021-05-25
HU228489B1 (en) 2013-03-28
CA2354845C (en) 2008-08-12
BR9916069A (pt) 2001-09-04
BG105567A (en) 2002-03-29
ES2315026T3 (es) 2009-03-16
BRPI9916069B1 (pt) 2016-08-02
BG65431B1 (bg) 2008-07-31
EP1137797B1 (en) 2008-10-29
US20020115152A1 (en) 2002-08-22
US6358703B1 (en) 2002-03-19
US20030077752A1 (en) 2003-04-24
US9650431B2 (en) 2017-05-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK286945B6 (sk) Expresný systém faktora VIII
EP0506757B2 (en) A recombinant human factor viii derivative
WO2008135498A2 (en) Prevention of protein degradation in mammalian cell cultures
KR20040047698A (ko) 변형된 ｃＤＮＡ 인자 Ⅷ 및 이의 유도체
JP2008522589A (ja) 組換えタンパク質の発現のための方法及び材料
KR20210100661A (ko) 인자 ix를 발현하는 렌티바이러스 벡터의 용도
JP4804356B2 (ja) 第ＶＩＩＩ因子及びその誘導体の高発現レベルのための改変されたｃＤＮＡ
MXPA01005667A (en) Expression system for factor viii
RU2429294C2 (ru) ЭКСПРЕССИОННАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ pOptivec/F8BDD, КОДИРУЮЩАЯ РЕКОМБИНАНТНЫЙ ФАКТОР СВЕРТЫВАЕМОСТИ КРОВИ VIII ЧЕЛОВЕКА С ДЕЛЕЦИЕЙ В-ДОМЕНА, И КЛЕТОЧНАЯ ЛИНИЯ DG-OV-F8BDD-18, ПРОДУЦИРУЮЩАЯ РЕКОМБИНАНТНЫЙ ФАКТОР СВЕРТЫВАЕМОСТИ КРОВИ VIII ЧЕЛОВЕКА С ДЕЛЕЦИЕЙ В-ДОМЕНА
NO300428B1 (no) Fremgangsmåte ved fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet eller FVIII derivater
DK168713B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af proteiner med FVIII (Faktor VIII) aktivitet og/eller FVIII derivater

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Expiry of patent

Expiry date: 20191208