SI20644A - Ekspresijski sistem za faktor viii - Google Patents

Ekspresijski sistem za faktor viii Download PDF

Info

Publication number
SI20644A
SI20644A SI9920097A SI9920097A SI20644A SI 20644 A SI20644 A SI 20644A SI 9920097 A SI9920097 A SI 9920097A SI 9920097 A SI9920097 A SI 9920097A SI 20644 A SI20644 A SI 20644A
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
cells
leu
factor viii
protein
val
Prior art date
Application number
SI9920097A
Other languages
English (en)
Other versions
SI20644B (sl
Inventor
Cho
Chan
Kelsey
Yee
Original Assignee
Bayer Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Corporation filed Critical Bayer Corporation
Publication of SI20644A publication Critical patent/SI20644A/sl
Publication of SI20644B publication Critical patent/SI20644B/sl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/028—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a herpesvirus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Abstract

Ta izum opisuje proizvodni postopek brez proteinov za proteine, ki imajo prokoagulatno aktivnost faktorja VIII. Splošno postopek vključuje derivacijo stabilnih humanih celičnih klonov z visoko produktivnostjo za faktor VIII z deletirano B-domeno in (2) prilagoditev celic na rast v mediju brez plazemsko izvedenih proteinov. Bolj natančno postopek vključuje transfekcijo humanih celic z vektorjem, kot je na sliki, ki obsega selektibilni marker in sekvenco, ki kodira protein, ki ima prokoagulantno aktivnost faktorja VIII, selekcioniranje celic s selekcijskim sredstvom in izoliranje klonov, ki izražajo visoke nivoje proteina, ki ima prokoagulantno aktivnost faktorja VIII.ŕ

Description

Ekspresijski sistem za faktor VIII
Sorodne prijave: Prijava Cho-ja, imenovana MSB-7241 (US serijska št. 09/209,920), Human Hybrid Host Celi for Mammalian Gene Expression, in prijava Cho-ja in Chan-a, imenovana MSB-7254 (US serijska št. 09/209,915), Vectors Having Terminal Repeat Sequence of Epstein-Barr Virus, vsebujeta sorodni predmet. Obe prijavi sta bili vloženi 10. decembra 1998.
OZADJE IZUMA
Področje: Predloženi izum se nanaša na izboljšan postopek proizvodnje faktorja
VIII in njegovih derivatov. Postopek se splošno nanaša na konstrukcijo vektorja, transfekcijo in selekcijo celičnih linij s povečano produktivnostjo pod pogoji brez proteinov. Se zlasti se ta izum nanaša na postopek za pripravo proteina, ki ima prokoagulantno aktivnost faktorja VIII, v industrijskem merilu.
Ozadje: Humani faktor VIII je sledilni plazemski glikoprotein, vpleten kot sofaktor v aktivaciji faktorja X in faktorja IXa. Podedovano pomanjkanje faktojja VIII ima za posledico z X-povezano krvavitveno motnjo, hemofilijo A, ki jo je možno uspešno zdraviti z očiščenim faktorjem VIII. Nadomestitvena terapija hemofilije A se je razvijala od uporabe faktorja VIII, izvedenega iz plazme, do uporabe rekombinantega faktorja VIII, dobljenega s kloniranjem in ekspresijo cDNA faktorja VIII v sesalčjih celicah. (Wood et al., 1984, Nature 312: 330).
Faktor Vlil ima organizacijo domene A1-A2-B-A3-C1-C2 in je sinetiziran kot enojnoverižni polipeptid z 2351 aminokislinami, od katerega se signalni peptid z 19aminokislinami cepi po translokaciji v lumen endoplazmatskega retikuluma. Zaradi dejstva, da se faktor Vlil težko glikozilira, je bilo težko doseči ekspresijo faktorja VIII v visokem nivoju (> 0,2 pg/c/d) (Lind et al., 1995, Eur J Biochem. 232: 19-27; Kaufman et al., 1989, Mol Celi Biol. 9: 1233-1242). Ekspresija faktorja VIII v sesalčjih celicah je značilno 2-3 rede magnitude nižja od tiste, ki jo opazimo pri drugih genih z uporabo podobnih vektorjev in pristopov. Produktivnost produkcije celičnih linij za faktor Vilije bila v območju 0,5-1 μυ/c/d (0,1 - 0,2 pg/c/d).
Pokazalo se je, da se lahko za prokoagulantno aktivnost B-domena faktorja Vil 1 pogreša. Ob uporabi prirezanih variant faktorja VIII so o izboljšani ekspresiji faktorja VIII v sesalčjih celicah poročale različne skupine (Lind et al., 1995, Eur J Biochem 232: 19-27; Tajima et al., 990, Proč 6th Int Symp H., str. 51-63; US patent 5,661,008 Almstedta, 1997). Vendar pa je ekspresijski nivo variant faktorja VIII iz stabilnega celičnega klona ostal pod 1 pg/c/d.
POVZETEK IZUMA
Sedaj smo odkrili (i) postopek, ki izvaja celične linije z izredno visoko produktivnostjo proteinov s prokoagulantno aktivnostjo faktorja VIII in (ii) proizvodni postopek brez plazemskih proteinov za proteine s prokoagulantno aktivnostjo faktorja VIII.
Postopek za proizvodnjo proteinov, ki imajo prokoagulantno aktivnost faktorja VIII, v industrijskem merilu. Z uporabo na novo ustvarjenega celičnega gostitelja smo izvedli celične klone s specifičnimi produktivnostmi v območju 2-4 pg/celico/dan (10-20 μυ/c/d). Pod pogoji brez seruma je en klon zadržal dnevno produktivnost 2-4 pg/c/d. Kloni s tem visokim nivojem produktivnosti so sposobni v 15-litrskem perfuzijskem fermentorju proizvesti 3-4 milijone enot na dan. Ena enota faktorja VIII je po definiciji aktivnost, prisotna v enem mililitru plazme. En pg faktorja VIII je splošno ekvivalent okoli 5pU aktivnosti FVIII.
Kot je uporabljen tukaj, je protein, ki ima prokoagulantno aktivnost faktorja VIII, protein, ki povzroči aktivacijo faktorja X v in vitro ali in vivo modelnem sistemu. Kot neomejujoče primere ta definicija vključuje rekombinantni humani faktor VIII polne dolžine in faktor VIII z deletirano B domeno, čigar sekvenca je opisana na sliki 1.
Visok nivo ekspresije proteina, ki ima prokoagulantno aktivnost faktorja VIII, pomeni vsaj okoli 2 pU/c/d, ali bolj prednostno vsaj okoli 4 pU/c/d, ali najbolj prednostno vsaj okoli 5 pU/c/d aktivnosti faktorja VIII, če ga gojimo v mediju brez iz plazme izvedenega proteina, ali vsaj okoli 4 pU/c/d, ali bolj prednostno vsaj okoli 8 pU/c/d, ali najbolj prednostno vsaj okoli 10 pU/c/d aktivnosti faktorja VIII, če ga gojimo v mediju, dopolnjenem z iz plazme izvedenim proteinom. Kadar je izraženi protein BDD-FVIII, lahko dobimo s tukaj opisanim postopkom celične linije, ki imajo specifične produktivnosti do okoli 15 pU/c/d, bolj prednostno do okoli 20 pU/c/d.
Kot uporabljamo tukaj za opis izvora celičnih linij, je mišljeno, da izveden iz vključuje, toda na to ni omejen, normalno mitotično celično divizijo in postopke kot so transfekcije, fuzije celic ali druge tehnike genetskega inženiringa, ki se uporabljajo za spreminjanje celic ali pripravljanje celic z novimi lastnostmi.
KRATEK OPIS SLIK
Slika 1. Aminokislinska sekvenca BDD-FVIII (SEQ ID NO;1).
Slika 2. Sekvenca terminalne ponavljalne (TR, terminal repeat) sekvence, izolirane iz Epstein-Barr virusa (SEQ ID NO:2).
Slika 3. Mapa plazmida pCIS25DTR.
Slika 4(a). Derivacija klona 20B8.
Slika 4(b) Primerjava produktivnosti večih klonov v različnih medijih. Tri podatkovne točke so predstavljene v obliki dvomesečnega testa stabilnosti za vsak klon.
Slika 5. Volumetična produktivnost klona 20B8.
SPECIFIČNE IZVEDBE
TestFVIII
Aktivnost derivatov faktorja VIII, dobljenih iz rekombinantne genske ekspresije, v na metotreksat (ΜΤΧ, methotrexate) odpornih celičnih populacijah, smo merili s kromogenskim testom. Aktivnost smo kvantificirali z uporabo Coatest® kompleta faktor VIII:C/4 (Cromogenix, Molndal, Švedska) po navodilih proizvajalca. Kot standard merjenja smo v tem testu uporabili ZDA standardni anti-hemofilni faktor (faktor VIII), znan kot MEGA 1 (Office of Biologics Research and Review, Bethesda, MD). Glej Barrowcliffe, 1993, Tromb Haem 70: 876.
Konstruiranje ekspresijskih vektorjev za FVIII z deletirano B-domeno
Sekvenca FVIII z deletirano B-domeno (BDD, B-domain deleted) je prikazana na sliki 1. 90-kD in 80-kD verigi smo povezali z linkerjem, ki sestoji iz 14 aminokislin. Glej Chan, S.-Y., Production of Recombinant Factor VIII in the Presence of Liposomelike Substances of Mixed Composition, US patentna prijava št. 08/634,001, vložena 16. aprila 1996. Ekspresijski vektor za BDD-FVIH smo izdelali z uporabo standardnih tehnik rekombinante DNA. Struktura ekspresij skega vektorja (pCIS25DTR) je prikazana na sliki 3. Vektor vključuje transkripcij sko enoto za BDD-FVIII in selektibilni marker dihidrofolat reduktazo (dhfr). Poleg tega smo v vektor vstavili terminalno ponavljalno sekvenco iz Epstein-Barr virusa, ki kaže razmerje pospešene selekcije zdravila (slika 2), da smo povečali učinkovitost interakcije. Vektor je v bistvu konstrukt vektorja (deponiranega pod št. ATCC 98879 pri American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110, ZDA, dne 16.09.1998), kije bil z inženiringom skonstruiran tako, da vsebuje transkripcij sko enoto, ki ustreza sekvenci, prikazani na sliki 1. Nadaljnjo informacijo o terminalni ponavljalni sekvenci lahko najdemo v sorodni patentni prijavi, tu notri vključeni z referenco, Cho-ja in Chan-a, imenovani MSB-7254, Terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus enhances drug selection ratio, vloženi na isti dan kot predmetna prijava.
Strokovnjaki bi lahko skonstruirali in uporabili podobne vektorje z namenom dobiti celice, ki izražajo proteine, ki imajo prokoagulantno aktivnost faktorja VIII. Na primer, kodirne sekvence, ki kodirajo za znane variante faktorja VIII, ki ohranijo prokoagulantno aktivnost, lahko nadomestimo z BDD-FVIII kodirno sekvenco. Namesto dhfr lahko uporabimo tudi druge selektibilne markerje, kot je glutamin sintetaza (gs) ali gen za odpornost na več zdravil (mdr, multidrug-resistance gene). Izvesti moramo ustrezno izbiro selekcijega sredstva, kot je znano v stroki, npr. za dhfr je prednostno selekcijsko sredstvo metotreksat, za gs je prednostno selekcijsko sredstvo metionin sulfoksimin in za mdr je prednostno selekcijsko sredstvo kolhicin (colchicine).
DELOVNI PRIMERI
Derivacija celičnih linij, ki izražajo BDD-FVIII: Transfekcija, selekcija zdravila in pomnoževanje genov
Trideset mikrogramov DNA pCIS25DTR smo prenesli v HKB11 celice (ATCC št. depozita CRL12568, deponiran pri American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110, ZDA, dne 16.09.1998 - hibrid celic 293S in humanih celic Burkittovega limfoma, glej US patentno prijavo Cho-je et al., vložena na isti dan kot predmetna prijava in imenovana MSB-7241, tu notri vključena z referenco) z elektroporacijskim nizom pri 300 Voltih in 300 mikro Faradih (ΒΤΧ Electro celi Manipulator 6000) z uporabo 2 mm kivete (ΒΤΧ del št. 620). V primerjalnih poizkusih, narejenih na vzporednem delu s HKB11 celicami, smo celice CHO (Chinese hamster ovary - ovarija hrčka) in 293S (human embryonic kidney, humane embrionalne ledvice) transfektirali z uporabo kationskega lipidnega reagenta
DMRIE-C (Life technologies, Gaithersburg, MD) po protokolu, ki ga je zagotovil Life Technologies. Pomnoževanje transfektiranih celic smo izvedli s povišanjem koncentracij metotreksata (ΜΤΧ) (100 nM, 200 nM, 400 nM in 800 nM) z 1 χ 106 celicami na mirkotitrski plošči s 96 vdolbinicami v ΜΤΧ-selekcijskem mediju, ki mu manjkata hipoksantin in timidin (DME/F12 medij brez hipoksantina in timidna plus 5 % dializiran fetalni bovini serum Hycolne-a, Logan, UT). Na ΜΤΧ odporne celice smo ovrednotili na rast in sekrecijo BDD-FVIII presejali z uporabo Coatest® kompleta faktorja VIII okoli 2-3 tedne po transfekciji. Gojenje celic smo izvedli pri 37°C v navlaženem 5 % CO2 inkubatorju.
Omejujoče razredčitveno kloniranje
Posamezne celične klone (SCC, single celi clones) smo izvedli z omejujočim razredčitvenim kloniranjem (LDC, limiting dilution cloning) visoko produktivnih populacij v ploščah s 96 vdolbinicami pod pogoji brez seruma. Celice smo zasejali z 1 - 10 celicami na vdolbinico v DME/F12 medij, dopolnjen s Humulin® rekombinantnim insulinom (Lilly, Indianapolis, IN) z 10 μg/ml, 10Χ esencialnimi aminokislinami (Life Technology, Gaithersburg, MD) in Plasmanate® frakcijo humanega plazemskega proteina (Bayer, Clayton, NC). Plasmanate , frakcija humanega plazemskega proteina (HPP, human plasma protein), vsebuje humani albumin (88 %) in različne globuline (12 %). Klone smo presejali na BDD-FVIII produktivnost s kompleti Coatest® faktorja VIII. Najbolj produktivne klone smo izbrali za oceno stabilnosti v stresalnih bučkah. Za HKB celice smo prvi krog LCD izvedli z uporabo selekcijskega medija, dopolnjenega s 5 % dializiranim FBS. Drugi krog LDC smo izvedli v mediju, ki je brez seruma, vsebuje pa Plasmanate® HPP frakcijo, z uporabo prvih SCC, prilagojenih v mediju brez seruma, dopolnjenem s Plasmanate® HPP frakcijo.
Derivacija HKB klona 20B8
Kot je povzeto na sliki 4(a), smo začetno populacijo 1C10 izvedli iz HKB celic, transfektiranih s pCIS25DTR, po pomnoževanju s 400 nM ΜΤΧ v selekcijskem mediju s 5 % FBS. Eden od prvih posameznih celičnih klonov (SCC-jev), 10A8, izveden iz 1C10 z LDC z uporabo selekcijskega medija, dopolnjenega s 5 % FBS, smo prilagodili v mediju brez seruma, dopolnjenem s Plasmanate® HPP frakcijo. Nepričakovano je 10A8 v tej stopnji pokazal izredno povišane nivoje produkcije rFVIII (slika 4b). Zato smo naredili drugo LDC z uporabo medija, dopolnjenega s Plasmanate® HPP frakcijo. Produktivnost SCC-jev (npr. 20B8), izvedenih iz drugega LDC, je bila podobna Plasmanate® HPP frakciji-prilagojenem 10A8. 20B8 je pokazal višje nivoje BDD-FVIII kot originalni 10A8, izveden iz prvega LDC v serumvsebujočem mediju. Na koncu smo 20B8 prilagodili na rast v mediju brez plazemskega proteina (PPF - plasma protein-free). Vzorce 20B8 smo deponirali pri American Type Culture Collection, 10801 Universtiy Boulevard, Manassas, Virginia 20110, ZDA, dne 06.10.1998, pod ATCC depozitno št. CRL-12582,
Kot je prikazano v tabeli 1, izražajo HKB kloni odlično produktivnost za BDD-FVIII. V HKB celicah smo opazili 10-20 -kratno povišanje produktivnosti v primerjavi s kloni, izvedenimi iz transfektiranih CHO in 293S celic. HKB celice, ki ne tvorijo velikih agregatov celic, kadar jih gojimo v suspenzijski kulturi, so prednostne celice za ekspresijo proteinov, ki imajo prokoagulantno aktivnost faktorja VIII.
Tabela 1. Ekspresija FVIII in BDD-FVIII v humanih in glodalskih celičnih linijah
Specifična produktivnost (pU/c/d)*
FVIII derivati BHK 293 S CHO HKB
FVIII polne dolžine 0,45 1,2 0,5 1,0
BDD-FVIII ND 2,5 1,0 20
* povprečje 5 visoko produktivnih klonov (v mediju brez seruma)
ND = ni bil narejen
Prilagoditev klonov na odsotnost plazemskega proteina
HKB klone, ki smo jih prilagodili na rast kot suspenzijske kulture brez seruma, smo nadalje odločili od plazemskih proteinskih suplementov. Odločevanje smo izvedli v sterilnih polikarbonatnih stresalnih bučkah (Corning, Corning, NY) z gostoto celic okoli 0,5 x 106 celic/ml z uporabo medija brez iz plazme izvedenih proteinov. Medij brez plazemskih proteinov (PPF - plasma protein free) je bil DME/F12 medij, dopolnjen s pluronic F68 (0,1 %), SuSO4 (50 nM) in FeSO4/EDTA (50 μΜ). Popolno izmenjavo medija smo izvedli vsakih 48 ur in stresalne bučke smo ponovno zasejali z 0,5 x 106 celicami/ml.
Fermentacija klona 20B8
Produktivnost klona 20B8 smo ovrednotili v 15 literskem perfuzijskem fermentorju. Fermentor smo zasejali s celicami klona 20B8 z gostoto okoli 3 χ 106 celic/ml. Fermentor smo škropili s hitostjo 4 volumnov na dan s produkcijskim medijem brez seruma, kot je opisano v predhodnem odstavku. Končno gostoto celic 2 χ 107 celic/ml smo vzdrževali preko obdobja evaluacije (45 dni). Kot je prikazano na sliki 5, smo prve 4 tedne fermentiranja klon 20B8 škropili s produkcijskim medijem brez seruma, dopolnjenim s Plasmanate® HPP frakcijo, in ki je bil sposoben zadržati visoko produktivnost. Od 28. dne do konca poteka fermentacije smo celice škropili z enakim produkcijskim medijem brez seruma, toda brez Plasmanate® HPP frakcije. Kot je prikazano na sliki 5, so celice nadaljevale s proizvodnjo visokih nivojev FVIII v okolju brez plazemsko izvedenega proteina. Brez plazemsko izvedenega proteina pomeni, da mediju v bistvu nismo dodali nobenih proteinov, izoliranih iz plazme.
DISKUSIJA
Derivacija HKB celic zagotavlja produkcijski sistem brez proteinov ne le za proizvodnjo BDD-FVIII, ampak tudi drugih terapevtskih proteinov. Proteini, proizvedeni iz HKB celic, imajo humane glikozilacijske vzorce, ki lahko izboljšajo razpolovno dobo določenih glikoproteinov in vivo. Te celice bi lahko bile uporabne tudi za proizvodnjo adenovirusnih in z adeno-povezanih virusnih sevov, ki so bili oblikovani za namene genske terapije.
Gornji primeri so mišljeni za ilustracijo izuma in mislimo, da se bodo strokovnjakom pojavile variacije. Potemtakem je mišljeno, da naj bo obseg izuma omejen le s spodnjimi zahtevki.
Za
Bayer Corporation:
-1010
SEKVENČNA LISTA <110> Cho, Myung-Sam Chan, Sham-Yuen Kelsey, William Yee, Helena <120> Ekspresijski sistem za faktor VIII <130> MSB-7255 <140>
<141>
<160> 2 <170> Patentln Ver. 2.0 <21O> 1 <211> 1438 <212> PRT <213> Umetna sekvenca <220>
<223> Opis umetne sekvence; izvedena iz sekvence humanega faktorja VIII <400> 1
Ala 1 Thr Arg Arg Tyr 5 Tyr Leu Gly Ala Val 10 Glu Leu Ser Trp Asp 15 Tyr
Met Gin Ser Asp 20 Leu Gly Glu Leu Pro 25 Val Asp Ala Arg Phe 30 Pro Pro
Arg Val Pro 35 Lys Ser Phe Pro Phe 40 Asn Thr Ser Val Val 45 Tyr Lys Lys
Thr Leu 50 Phe Val Glu Phe Thr 55 Val His Leu Phe Asn 60 Ile Ala Lys Pro
Arg 65 Pro Pro Trp Met Gly 70 Leu Leu Gly Pro Thr 75 Ile Gin Ala Glu Val 80
Tyr Asp Thr Val Val 85 Ile Thr Leu Lys Asn 90 Met Ala Ser His Pro 95 Val
Ser Leu His Ala 100 Val Gly Val Ser Tyr 105 Trp Lys Ala Ser Glu 110 Gly Ala
Glu Tyr Asp 115 Asp Gin Thr Ser Gin 120 Arg Glu Lys Glu Asp 125 Asp Lys Val
Phe Pro 130 Gly Gly Ser His Thr 135 Tyr Val Trp Gin Val 140 Leu Lys Glu Asn
Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser Tyr Leu Ser
145 150 155 160
-1111
Hi s Val Asp Leu Val 165 Lys Asp Leu Asn Ser 170 Gly Leu Ile Gly Ala 175 Leu
Leu Val Cys Arg 180 Glu Gly Ser Leu Ala 185 Lys Glu Lys Thr Gin 190 Thr Leu
His Lys Phe 195 Ile Leu Leu Phe Ala 200 Val Phe Asp Glu Gly 205 Lys Ser Trp
Hi s Ser 210 Glu Thr Lys Asn Ser 215 Leu Met Gin Asp Arg Asp 220 Ala Ala Ser
Al a 225 Arg Al a Trp Pro Lys 230 Met His Thr Val Asn 235 Gly Tyr Val Asn Arg 240
Ser Leu Pro Gly Leu 245 Ile Gly Cys His Arg 250 Lys Ser Val Tyr Trp 255 His
Val Ile Gly Met 260 Gly Thr Thr Pro Glu 265 Val His Ser Ile Phe 270 Leu Glu
Gly His Thr 275 Phe Leu Val Arg Asn 280 His Arg Gin Ala Ser 285 Leu Glu Ile
Ser Pro 290 Ile Thr Phe Leu Thr 295 Ala Gin Thr Leu Leu 300 Met Asp Leu Gly
Gin 305 Phe Leu Leu Phe Cys 310 His Ile Ser Ser His 315 Gin His Asp Gly Met 320
Glu Al a Tyr Val Lys 325 Val Asp Ser Cys Pro 330 Glu Glu Pro Gin Leu 335 Arg
Met Lys Asn Asn 340 Glu Glu Ala Glu Asp 345 Tyr Asp Asp Asp Leu 350 Thr Asp
Ser Glu Met 355 Asp Val Val Arg Phe 360 Asp Asp Asp Asn Ser 365 Pro Ser Phe
Ile Gin 370 Ile Arg Ser Val Ala 375 Lys Lys His Pro Lys 380 Thr Trp Val His
Tyr 385 Ile Ala Ala Glu Glu 390 Glu Asp Trp Asp Tyr .395 Ala Pro Leu Val Leu 400
Al a Pro Asp Asp Arg 405 Ser Tyr Lys Ser Gin 410 Tyr Leu Asn Asn Gly 415 Pro
Gin Arg Ile Gly Arg 420 Lys Tyr Lys Lys 425 Val Arg Phe Met Ala 430 Tyr Thr
As p Glu Thr 435 Phe Lys Thr Arg Glu 440 Ala Ile Gin His Glu 445 Ser Gly Ile
Leu Gly 450 Pro Leu Leu Tyr Gly 455 Glu Val Gly Asp Thr 460 Leu Leu Ile Ile
Phe 465 Lys Asn Gin Ala Ser 470 Arg Pro Tyr Asn Ile 475 Tyr Pro His Gly Ile 480
-1212
The Asp Val Arg Pro 485 Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys Gly Val Lys
490 495
His Leu Lys Asp 500 Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu 505 Ile Phe Lys Tyr Lys 510
Trp Thr Val 515 Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys 520 Ser Asp Pro Arg Cys 525
Leu Thr Arg 530 Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met 535 Glu Arg Asp Leu Ala 540
Ser 545 Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr 550 555 Lys Glu Ser Val Asp 560
Gin Arg Gly As n Gin 565 Ile Met Ser Asp Lys Arg 570 Asn Val Ile Leu Phe 575
Ser Val Phe Asp 580 Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu 585 Thr Glu Asn Ile Gin 590
Arg Phe Leu 595 Pro Asn Pro Ala Gly Val Gin Leu 600 Glu Asp Pro Glu Phe 605
Gin Al a Ser 610 Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly 615 Tyr Val Phe Asp Ser 620
Leu 625 Gin Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala 630 635 Tyr Trp Tyr Ile Leu 640
Ser Ile Gly Al a Gin 645 Thr Asp Phe Leu Ser Val 650 Phe Phe Ser Gly Tyr 655
Thr Phe Lys His 660 Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr 665 Leu Thr Leu Phe Pro 670
Phe Ser Gly 675 Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu 680 Asn Pro Gly Leu Trp 685
Ile Leu Gly 690 Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn 695 Arg Gly Met Thr Ala 700
Leu 705 Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr 710 .715 Gly Asp Tyr Tyr Glu 720
Asp Ser Tyr Glu Asp 725 Ile Ser Ala Tyr Leu Leu 730 Ser Lys Asn Asn Ala 735
Ile Glu Pro Arg 740 Ser Phe Ser Gin Asn Pro Pro 745 Val Leu Lys Arg His 750
Gin Arg Glu 755 Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gin Ser 760 Asp Gin Glu Glu Ile 765
Asp Tyr Asp Asp 770 Thr Ile Ser Val Glu Met Lys 775 Lys Glu Asp Phe Asp 780
Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gin Ser Pro Arg Ser Phe Gin Lys Lys
785 790 795 800
-1313
Thr Arg His Tyr Phe 805 Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr Gly
810 815
Met Ser Ser Ser 820 Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gin 825 Ser Gly Ser 830
Val Pro Gin Phe 835 Lys Lys Val Val Phe Gin Glu Phe Thr 840 845 Asp Gly Ser
Phe Thr Gin Pro 850 Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His 855 860 Leu Gly Leu
Leu Gly Pro Tyr 865 Ile Arg 870 Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile 875 Met Val Thr 880
Phe Arg Asn Gin Ala 885 Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser 890 Ser Leu Ile 895
Ser Tyr Glu Glu 900 Asp Gin Arg Gin Gly Ala Glu Pro Arg 905 Lys Asn Phe 910
Val Lys Pro Asn 915 Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val 920 925 Gin His His
Met Ala Pro Thr 930 Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp 935 940 Ala Tyr Phe
Ser Asp Val Asp 945 Leu Glu 950 Lys Asp Val His Ser Gly Leu 955 Ile Gly Pro 960
Leu Leu Val Cys His 965 Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His 970 Gly Arg Gin 975
Val Thr Val Gin 980 Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe 985 Asp Glu Thr 990
Lys Ser Trp Tyr 995 Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys 1000 1005 Arg Ala Pro
Cys Asn Ile Gin 1010 Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn 1015 1020 Tyr Arg Phe
His Ala Ile Asn 1025 Gly Tyr 1030 Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly 1035 Leu Val Met 1040
Ala Gin Asp Gin Arg 1045 Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met 1050 Gly Ser Asn 1055
Glu Asn Ile His 1060 Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe 1065 Thr Val Arg 1070
Lys Lys Glu Glu 1075 Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr 1080 1085 Pro Gly Val
Phe Glu The Val 1090 Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile 1095 1100 Trp Arg Val
Glu Cys Leu Ile 1105 Gly Glu 1110 His Leu His Ala Gly Met Ser 1115 Thr Leu Phe 1120
-1414
Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gin Thr Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly
1125 1130 1135
His Ile Arg Asp Phe Gin Ile Thr Ala Ser Gly Gin Tyr Gly Gin Trp
1140 1145 1150
Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp
1155 1160 1165
Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro
1170 1175 1180
Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gin Gly Ala Arg Gin Lys Phe Ser
1185 1190 1195 1200
Ser Leu Tyr Ile Ser Gin Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys
1205 1210 1215
Lys Trp Gin Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe
1220 1225 1230
Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro
1235 1240 1245
Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile
1250 1255 1260
Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys
1265 1270 1275 1280
Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gin Ile
1285 1290 1295
Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser
1300 1305 1310
Lys Ala Arg Leu His Leu Gin Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gin
1315 1320 1325
Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gin Val Asp Phe Gin Lys Thr Met
1330 1335 1340
Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gin Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser
1345 1350 1355 1360
Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gin Asp Gly His Gin
1365 1370 1375
Trp Thr Leu Phe Phe Gin Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gin Gly Asn
1380 1385 1390
Gin Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu
1395 1400 1405
Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gin Ser Trp Val His Gin Ile Ala
1410 1415 1420
Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Cin Asp Leu Tyr
1425 1430 1435
-1515 <210> 2 <211> 402 <212> DNA <213> Umetna sekvenca <220>
<223> Opis umetne sekvence: izvedena iz sekvence
Epstein-Barr virusa <400> 2 ggcaatggag ggggtgaccc ggccccccag cgggtcatgc cctagccccc gggctccggg ggggggcgct cgtgacgaag ggccccaggg ctgaccccgg caaacgtgac ccggggctcc 60 aggcaagcgt ggccaagggg cccgtgggtg acacaggcaa ccctgacaaa 120 gaaagacccc cggggggcat cgggggggtg ttggcgggtc atgggggggg 180 cgcgcattcc tggaaaaagt ggagggggcg tggccttccc cccgcggccc 240 ccgcagagag cggcgcaacg gcgggcgagc ggcggggggt cggggtccgc 300 ggctgcgggc ggtggatggc ggctggcgtt ccggggatcg ggggggggtc 360 gcgcgggcgc agccatgcgt gaccgtgatg ag 402

Claims (18)

  1. Patentni zahtevki
    1. Postopek za proizvodnjo celic, ki izražajo protein, ki ima prokoagulantno aktivnostjo faktorja VIII, označen s tem, da obsega zaporedne stopnje:
    a) pridobivanja celic, ki so izključno humanega izvora,
    b) vzpostavitve celic stopnje a) v stik z vektorjem pod pogoji, ki so dovoljšnji, da omogočijo vektorju, da vstopi v celice, pri čemer vektor obsega selektibilni marker in sekvenco, ki kodira za protein, ki ima prokoagulantno aktivnost faktorja VIII, kije operabilno vezan na promotor,
    c) selekcije celic iz stopnje b) s selekcijskim sredstvom in
    d) izoliranja posameznih klonov, ki izražajo visoke nivoje proteina, ki ima prokoagulantno aktivnost faktorja VIII, iz celic, dobljenih iz stopnje c).
  2. 2. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da nadalje obsega stopnjo
    e) prilagoditve klonov stopnje d) na rast v mediju brez plazemsko izvedenega proteina.
  3. 3. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da so celice stopnje a) hibridi humanih limfomskih celic in 293S celic.
  4. 4. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da so celice stopnje a) HKB 11 celice (ATCC CRL-12568, deponirane pri American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110, ZDA, dne 16.09.1998).
  5. 5. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da stopnji c) in d) izvedemo več kot enkrat.
  6. 6. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da sekvenca stopnje b) kodira za sekvenco prikazano na sliki 1 (SEQ ID NO:1).
  7. 7. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da sekvenca stopnje b) kodira za humani faktor VIII.
    -1717
  8. 8. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, daje selektibilni marker stopnje b) dhfr in je selekcijsko sredstvo stopnje c) metotreksat.
  9. 9. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, daje selektibilni marker stopnje b) gs in je selekcijsko sredstvo stopnje c) metionin sulfoksimin.
  10. 10. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, daje selektibilni marker stopnje b) mdr in je selekcijsko sredstvo stopnje c) kolhicin.
  11. 11. Postopek za proizvodnjo proteina z aktivnostjo faktorja VIII, ki obsega gojenje celic, proizvedenih s postopkom po zahtevku 1, v gojitvenem mediju in nato izoliranje proteina, ki ima aktivnost faktorja VIII, iz medija.
  12. 12. Postopek po zahtevku 10, označen s tem, daje protein humani faktor VIII.
  13. 13. Postopek po zahtevku 10, označen s tem, da ima protein aminokislinsko sekvenco, kije prikazana na sliki 1 (SEQ ID NO: 1).
  14. 14. Humana celična linija, označena s tem, da je izvedena iz humanih limfomskih celic in 293S celic, ki izraža visoke nivoje proteina, ki ima aktivnost faktorja VIII.
  15. 15. Humana celična linija po zahtevku 13, označena s tem, daje humana celična linija izvedena iz HKB 11 celic (ATCC CRL-12568 deponirane pri American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110, ZDA, dne 16.09.1998).
  16. 16. Humana celična linija, izvedena iz humanih limfomnih celic in 293S celic, označena s tem, da izraža visoke nivoje proteina, ki ima aktivnost faktorja VIII, kadar jo gojimo v mediju brez plazemskega proteina.
    -1818
  17. 17. Celična linija po zahtevku 15, označena s tem, da je izvedena iz HKB11 celic (ATCC CRL-12568 deponirane pri American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110, ZDA, dne 16.09.1998).
  18. 18. Celična linija imenovana 20B8 (ATCC CRL-12582, deponirana pri American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110, ZDA, dne 06.10.1998).
SI9920097A 1998-12-10 1999-12-08 Ekspresijski sistem za faktor viii SI20644B (sl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/209,916 US6358703B1 (en) 1998-12-10 1998-12-10 Expression system for factor VIII
PCT/US1999/029169 WO2000034505A1 (en) 1998-12-10 1999-12-08 Expression system for factor viii

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SI20644A true SI20644A (sl) 2002-02-28
SI20644B SI20644B (sl) 2009-04-30

Family

ID=22780858

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI9920097A SI20644B (sl) 1998-12-10 1999-12-08 Ekspresijski sistem za faktor viii

Country Status (26)

Country Link
US (10) US6358703B1 (sl)
EP (1) EP1137797B1 (sl)
JP (1) JP4240818B2 (sl)
KR (1) KR100616028B1 (sl)
AT (1) ATE412765T1 (sl)
AU (1) AU761801B2 (sl)
BG (1) BG65431B1 (sl)
BR (1) BRPI9916069B8 (sl)
CA (1) CA2354845C (sl)
CZ (1) CZ302330B6 (sl)
DE (1) DE69939839D1 (sl)
DK (1) DK1137797T3 (sl)
ES (1) ES2315026T3 (sl)
HU (1) HU228489B1 (sl)
IL (2) IL143353A0 (sl)
NO (1) NO329544B1 (sl)
NZ (1) NZ512234A (sl)
PL (1) PL200676B1 (sl)
PT (1) PT1137797E (sl)
RO (1) RO121604B1 (sl)
RU (1) RU2249041C2 (sl)
SI (1) SI20644B (sl)
SK (1) SK286945B6 (sl)
TR (1) TR200101592T2 (sl)
UA (1) UA77383C2 (sl)
WO (1) WO2000034505A1 (sl)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6475725B1 (en) 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
US6180108B1 (en) * 1998-12-10 2001-01-30 Bayer Corporation Vectors having terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus
US6358703B1 (en) * 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
DE60115613T2 (de) * 2000-03-22 2006-08-24 Octagene Gmbh Herstellung von rekombinanten muteine des blutgerinnungsfaktors viii in humanen zellinien
EP2110385A1 (en) 2001-06-14 2009-10-21 The Scripps Research Institute Stabilized factor VIII with engineered disulfide bonds
WO2004075923A2 (en) * 2003-02-26 2004-09-10 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer-factor viii moiety conjugates
US7485291B2 (en) * 2003-06-03 2009-02-03 Cell Genesys, Inc. Compositions and methods for generating multiple polypeptides from a single vector using a virus derived peptide cleavage site, and uses thereof
WO2005017149A1 (en) * 2003-06-03 2005-02-24 Cell Genesys, Inc. Compositions and methods for enhanced expression of recombinant polypeptides from a single vector using a peptide cleavage site
EP1812557A4 (en) * 2004-10-29 2009-11-04 Centocor Ortho Biotech Inc COMPOSITIONS OF CHEMICALLY DEFINED MEDIA
ES2633916T3 (es) 2004-11-12 2017-09-26 Bayer Healthcare Llc Modificación de FVIII dirigida al sitio
JP5096369B2 (ja) 2005-12-20 2012-12-12 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 組成物および組成物の製造方法
AR058568A1 (es) 2005-12-20 2008-02-13 Bristol Myers Squibb Co Metodos para producir una composicion con moleculas ctla4-ig a partir de un medio de cultivo
PT2574677T (pt) * 2007-12-27 2017-10-19 Baxalta Inc Processos para cultura de células
KR101005967B1 (ko) * 2008-04-12 2011-01-05 (주)셀트리온 우수한 재조합 단백질을 생산하기 위한 인간 숙주 세포
CN102137935A (zh) * 2008-06-25 2011-07-27 拜耳医药保健有限公司 具有降低的免疫原性的因子viii突变蛋白
EP2331569A1 (en) 2008-08-21 2011-06-15 Octapharma AG Recombinantly produced human factor viii and ix
AU2009289212B2 (en) * 2008-09-03 2015-02-12 Octapharma Ag New protecting compositions for recombinantly produced factor VIII
EA020843B1 (ru) 2009-02-03 2015-02-27 Амуникс Оперейтинг Инк. Удлиненные рекомбинантные полипептиды и содержащие их композиции
JP5739865B2 (ja) * 2009-03-24 2015-06-24 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー 第ｖｉｉｉ因子変異体および使用の方法
US20120263701A1 (en) 2009-08-24 2012-10-18 Volker Schellenberger Coagulation factor vii compositions and methods of making and using same
US20110150843A1 (en) * 2009-10-30 2011-06-23 National Institute Of Immunology Method for the therapeutic correction of hemophilia a by transplanting bone marrow cells
US20130017997A1 (en) * 2010-08-19 2013-01-17 Amunix Operating Inc. Factor VIII Compositions and Methods of Making and Using Same
EP2707387B1 (en) * 2011-05-13 2019-12-25 Octapharma AG A method of increasing the productivity of eucaryotic cells in the production of recombinant fviii
CN104271150A (zh) 2012-01-12 2015-01-07 比奥根艾迪克Ma公司 嵌合因子viii多肽及其用途
MX369862B (es) 2012-02-15 2019-11-25 Bioverativ Therapeutics Inc Composiciones del factor viii y metodos para hacerlas y usarlas.
NZ628014A (en) 2012-02-15 2016-09-30 Biogen Ma Inc Recombinant factor viii proteins
WO2017180807A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Baxalta Incorporated Method and apparatus for providing a pharmacokinetic drug dosing regiment
EP3033097B1 (en) 2013-08-14 2021-03-10 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii-xten fusions and uses thereof
PT4176894T (pt) 2014-01-10 2024-05-21 Bioverativ Therapeutics Inc Proteínas quiméricas de fator viii e utilizações destas
CA2994547A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor ix fusion proteins and methods of making and using same
KR102580477B1 (ko) 2016-07-22 2023-09-19 넥타르 테라퓨틱스 옥심-함유 결합을 갖는 인자 viii 모이어티의 컨쥬게이트
WO2018102743A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilic arthropathy using chimeric clotting factors
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
WO2019055717A1 (en) * 2017-09-13 2019-03-21 Evolve Biosystems, Inc. OLIGOSACCHARIDE COMPOSITIONS AND THEIR USE DURING THE TRANSIENT PHASES OF INTESTINAL MICROBIOMA OF A MAMMALIAN
KR20190086269A (ko) * 2018-01-12 2019-07-22 재단법인 목암생명과학연구소 체내 지속형 재조합 당단백질 및 이의 제조방법
SG11202010767SA (en) 2018-05-18 2020-11-27 Bioverativ Therapeutics Inc Methods of treating hemophilia a
CA3115535A1 (en) * 2018-10-23 2020-04-30 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods for modulating factor viii function

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6045849B2 (ja) * 1980-08-25 1985-10-12 林原 健 ヒトエリトロポエチンの製造方法
US4766075A (en) * 1982-07-14 1988-08-23 Genentech, Inc. Human tissue plasminogen activator
GB8308235D0 (en) * 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4757006A (en) * 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4703008A (en) * 1983-12-13 1987-10-27 Kiren-Amgen, Inc. DNA sequences encoding erythropoietin
KR890002004B1 (ko) * 1984-01-11 1989-06-07 가부시끼 가이샤 도오시바 지폐류 판별장치
US4965199A (en) * 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4970300A (en) * 1985-02-01 1990-11-13 New York University Modified factor VIII
DE3683980D1 (de) * 1985-04-12 1992-04-02 Genetics Inst Neue prokoagulierungsproteine.
US5198349A (en) * 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
EP0254076B1 (en) * 1986-07-11 1991-05-08 Miles Inc. Improved recombinant protein production
DE3730599A1 (de) 1986-09-12 1988-07-07 Genentech Inc Verfahren zur kontinuierlichen herstellung von heterologen proteinen in eukaryontischen wirtszellen
IE69026B1 (en) * 1987-06-12 1996-08-07 Immuno Ag Novel proteins with factor VIII activity process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
EP0502976B1 (en) * 1989-12-01 1996-07-03 Pharming B.V. Production of recombinant polypeptides by bovine species and transgenic methods
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
US5661008A (en) * 1991-03-15 1997-08-26 Kabi Pharmacia Ab Recombinant human factor VIII derivatives
US5859204A (en) 1992-04-07 1999-01-12 Emory University Modified factor VIII
ATE272122T1 (de) * 1993-06-10 2004-08-15 Bayer Ag Vektoren und zelllinien von säugetieren mit erhöhter produktivität
US5952198A (en) * 1995-05-04 1999-09-14 Bayer Corporation Production of recombinant Factor VIII in the presence of liposome-like substances of mixed composition
DE19517194A1 (de) * 1995-05-11 1996-11-14 Giesecke & Devrient Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur Prüfung von Blattgut, wie z.B. Banknoten oder Wertpapiere
MX9504215A (es) 1995-10-05 1997-04-30 Inst Politecnico Nacional Procedimiento mejorado para la purificacion de oligopeptidos con pesos moleculares de 1000 a 10,000 daltones, a partir de estractos leucocitos y su presentacion farmaceutica.
US5922959A (en) * 1996-10-15 1999-07-13 Currency Systems International Methods of measuring currency limpness
US5923413A (en) * 1996-11-15 1999-07-13 Interbold Universal bank note denominator and validator
US5804420A (en) * 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
AU735763B2 (en) * 1997-12-05 2001-07-12 Immune Response Corporation, The Novel vectors and genes exhibiting increased expression
US6040584A (en) * 1998-05-22 2000-03-21 Mti Corporation Method and for system for detecting damaged bills
US6528286B1 (en) * 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
US6358703B1 (en) * 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
US6136599A (en) * 1998-12-10 2000-10-24 Bayer Corporation Human hybrid host cell for mammalian gene expression
US6180108B1 (en) * 1998-12-10 2001-01-30 Bayer Corporation Vectors having terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus

Also Published As

Publication number Publication date
CA2354845A1 (en) 2000-06-15
PL200676B1 (pl) 2009-01-30
CZ302330B6 (cs) 2011-03-16
NZ512234A (en) 2002-12-20
SI20644B (sl) 2009-04-30
HUP0200558A3 (en) 2004-11-29
US7459525B2 (en) 2008-12-02
KR20020013481A (ko) 2002-02-20
CA2354845C (en) 2008-08-12
US20030077752A1 (en) 2003-04-24
DE69939839D1 (de) 2008-12-11
BRPI9916069B8 (pt) 2021-05-25
ES2315026T3 (es) 2009-03-16
BR9916069A (pt) 2001-09-04
HUP0200558A2 (en) 2002-06-28
US8945869B2 (en) 2015-02-03
SK7922001A3 (en) 2002-01-07
KR100616028B1 (ko) 2006-08-28
IL143353A (en) 2010-12-30
IL143353A0 (en) 2002-04-21
HU228489B1 (en) 2013-03-28
BG105567A (en) 2002-03-29
RO121604B1 (ro) 2007-12-28
AU761801B2 (en) 2003-06-12
JP2002531137A (ja) 2002-09-24
CZ20012024A3 (cs) 2001-10-17
US20090036358A1 (en) 2009-02-05
BRPI9916069B1 (pt) 2016-08-02
US20110144025A1 (en) 2011-06-16
DK1137797T3 (da) 2009-02-23
AU2170100A (en) 2000-06-26
US8207117B2 (en) 2012-06-26
UA77383C2 (uk) 2006-12-15
JP4240818B2 (ja) 2009-03-18
US20020102730A1 (en) 2002-08-01
US9249209B2 (en) 2016-02-02
US20130267468A1 (en) 2013-10-10
US20160115219A1 (en) 2016-04-28
ATE412765T1 (de) 2008-11-15
US20170267745A1 (en) 2017-09-21
EP1137797A1 (en) 2001-10-04
US20130143818A1 (en) 2013-06-06
PT1137797E (pt) 2008-12-26
SK286945B6 (sk) 2009-08-06
US20020115152A1 (en) 2002-08-22
NO20012718L (no) 2001-06-01
WO2000034505A1 (en) 2000-06-15
PL349284A1 (en) 2002-07-15
US6358703B1 (en) 2002-03-19
EP1137797B1 (en) 2008-10-29
TR200101592T2 (tr) 2001-11-21
NO329544B1 (no) 2010-11-08
EP1137797A4 (en) 2005-06-22
US9650431B2 (en) 2017-05-16
RU2249041C2 (ru) 2005-03-27
NO20012718D0 (no) 2001-06-01
BG65431B1 (bg) 2008-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SI20644A (sl) Ekspresijski sistem za faktor viii
US5693499A (en) Process for preparing human coagulation factor VIII protein complex
AU627432B2 (en) Process for producing recombinant human factor viii:c and transformant to be used therefor
CA2234215C (en) Preparation of recombinant factor viii in a protein free medium
US20170152523A1 (en) Serum-free stable transfection and production of recombinant human proteins in human cell lines
ES2437068T3 (es) Líneas celulares para expresar enzima útil en la preparación de productos amidados
WO1999053059A1 (en) Secretion of glycosylated proteins using a tissue plasminogen activator pro-sequence
CN1265144A (zh) 鉴定可用于通过内源基因激活生产人蛋白质的人细胞系
AU600481B2 (en) Method of producing peptides, recombinant plasmid for use in the same and animal cells transformed with the same
KR100251286B1 (ko) 혈액응고 제 8인자의 중쇄와 경쇄, 폰 빌리 브란트 인자를 동시에 발현하는 세포주 및 그를 이용한재조합 혈액응고 제 8인자의 제조방법
MXPA01005667A (en) Expression system for factor viii
NO300428B1 (no) Fremgangsmåte ved fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet eller FVIII derivater
MXPA98003051A (en) Preparation of recombinant factor viii in a protei free medium

Legal Events

Date Code Title Description
IF Valid on the event date
OU02 Decision according to article 73(2) ipa 1992, publication of decision on partial fulfilment of the invention and change of patent claims

Effective date: 20090306