NO300428B1 - Fremgangsmåte ved fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet eller FVIII derivater - Google Patents
Fremgangsmåte ved fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet eller FVIII derivater Download PDFInfo
- Publication number
- NO300428B1 NO300428B1 NO920080A NO920080A NO300428B1 NO 300428 B1 NO300428 B1 NO 300428B1 NO 920080 A NO920080 A NO 920080A NO 920080 A NO920080 A NO 920080A NO 300428 B1 NO300428 B1 NO 300428B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- fviii
- cells
- temperature
- hours
- heavy chain
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 title claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 8
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 title claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 22
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 14
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 4
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 53
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 53
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 53
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 6
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 3
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 2
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 2
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 1
- CWRVKFFCRWGWCS-UHFFFAOYSA-N Pentrazole Chemical compound C1CCCCC2=NN=NN21 CWRVKFFCRWGWCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 101150091879 neo gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte ved fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet og/eller FVIII derivater ved in vitro dyrking av pattedyrceller.
Blødersykdommen Hemophilia A forårsakes av manglende faktor VIII (FVIII). FVIII er et glykoprotein som kan isoleres fra blod-plasma (US nr. 4 650 858) . Renset FVIII brukes i behandlingen av Hemophilia A. Ved bruken av genteknologi er det mulig å synteti-sere FVIII (EPO 160 457, WO 85/01961, US 570 062). Mengden av FVIII som kan fremstilles i pattedyrceller er temmelig lav sammen-lignet med andre menneskeproteiner. Mengden protein kan økes hvis avstumpede varianter av FVIII biosyntetiseres (WO 86/06101, DK 3443/87), eller hvis de to underenheter (FVIII tung kjede og FVIII lett kjede) produseres samtidig (US 822 989) . Det er også mulig in vitro å sette sammen aktiv FVIII fra separat fremstilte underenheter (DK 2957/86). De ovenfor nevnte former av FVIII har alle egenskapene til menneske-FVIII: aktivitet ved biologiske målinger, aktiverbart med protein og biologisk aktivitet i hemophilia-hunder.
Pattedyr er delviskarakterisert vedevnen til å holde en konstant legemstemperatur nær 37°C. Derfor dyrkes pattedyrceller generelt in vitro ved 37"C. Det er kjent fra EP-A-0 265 778 at man kan dyrke pattedyrceller ved 37°C i4timer for å fremstille FVIII analoger. FVIII sirkulerer i legemet ved denne temperaturen, og ved dyrking i serumholdig medium (som etterligner legemsvæske) kan man forvente at FVIII har optimal stabilitet. FVIII fremstilt i serumfritt medium er temmelig ustabilt, men ikke desto mindre er det attraktivt å emitere serum fra mediet, og WO 87/04187 viser at FVIII kan stabiliseres i serumfritt medium ved tilsetning av bærer-proteinet von Willebrand Factor (vWF). DK 3594/87 viser at FVIII også kan stabiliseres i serumfritt medium ved tilsetning av lipo-proteiner. Disse stabiliseringsmidler viser ingen utpreget virkning i serumholdig medium.
Det er overraskende funnet at ved å dyrke pattedyrceller ved en temperatur under 37°C, nærmere bestemt under 33°C, økes utbyttene av avstumpede FVIII varianter og FVIII avledede underenheter (spesielt FVIII tung kjede) drastisk, både i serumholdig og i serumfritt medium.
Oppfinelsen omhandler således en fremgangsmåte for fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet eller FVIII derivater, der det fremstilte FVIII derivat er 92,5 kD-fragmentet eller "den tunge kjede", eller 80 kD-fragmentet eller "den lette kjede", ved in vitro dyrkning av pattedyrceller som er transfektert med plasmider som koder for "den tunge kjede" og/eller "den lette kjede", som erkarakterisert vedat dyrkningen utføres ved en temperatur under 3 3°C.
Det foretrekkes å utføre dyrkingen ved en temperatur fra 10 til 32°C, mer foretrukket ved en temperatur fra 2 5 til 30°C, og helst ved 27°C.
Videre har det overraskende vist seg at utbyttene økes ved å forkorte mediumoppholdstiden under de vanlige 24-72 timer, hvilket normalt gir de optimale utbytter fra pattedyrceller.
Det foretrekkes å bruke mediumoppholdstid på 3 0 timer eller lavere, mer foretrukket 24 timer eller lavere, særlig foretrukket 10 timer eller lavere og helst under 4 timer.
Den kombinerte virkning av lav veksttemperatur og kort mediumoppholdstid er spesielt utpreget i tilfellet FVIII tung kjede, for hvilket utbyttet kan økes 25 ganger.
Det økede utbyttet av FVIII tung kjede (HC) ved lave temperaturer og kort mediumoppholdstid kan settes i forbindelse med produktets ustabilitet ved normale vekstbetingelser. Tabell I viser at FVIII tung kjede ved 37°C taper evnen til å kombinere med FVIII lett kjede. Figur 1 viser at FVIII tung kjede danner aggregater ved 37°C. Disse aggregater kan oppløses etter reduksjon. Avstumpede varianter av FVIII kan oppføre seg lik FVIII-HC og danne aggregater ved høye temperaturer. Imidlertid kan det økede utbyttet ved lav temperatur også være forårsaket av andre faktorer enn en reduksjon i aggregering. For eksempel kan en større motstand mot proteolytisk nedbrytning være viktig.
De foretrukne vertsceller vil innbefatte pattedyrceller så som CHO celler, COS-7 apeceller, melanoma-cellelinjer så som Bowes celler, muse L-929 celler 3T3 linjer, Balb-c eller NIH mus, BHK eller HAK hamster-cellelinjer og lignende.
Eksemplene viser at utbyttene av avstumpede FVIII varianter, FVIII tung kjede, FVIII lett kjede og FVIII oppnådd fra celler kotransfektert med plasmider som koder for hver av de to underenheter økes ved lav temperatur.
FVIII-HC fra plasma (300 U/ml) ble fortynnet 4 ganger i 0,05% BSA, 50 mM tris, 0,1 M NaCl, 0,02% NaN^, 150/zM 2-ME, pH 7,4 og inkubert ved 22°C og 37"C. Ved t=0, 4, 24 timer ble prøver frosset ved -80°C. Prøvene ble tint og analysert (ukokt) redusert og ikke-redusert i Western blot. Videre ble prøver fortynnet 3 00 ganger og undersøkt etter kombinasjonen med FVIII-LC (WO 88/00210).
Oppfinnelsen er videre forklart under henvisning til tegningene hvori figur 1 viser Western blot av FVIII-HC inkubert ved 22°C og 37°C (prøver er de samme som i tabell 1).
Beskrivelse av plasmider
Plasmid Beskrivelse
pPR49 cDNA som koder for en faktor VIII variant, hvori 880
aminosyrer er deletert i B-området (varianten er identisk med den som kodes av pLA-2 plasmidet i PCT patentsøknad, publikasjon nr. WO 86/06101), er blitt innsatt i ekspresjonsvektoren pSV7d (Truett et al.,
1985, DNA 4; 333-349).
pPR60 cDNA som koder for en faktor VIII variant hvori Arg-740 er blitt direkte sammensmeltet med Ser-1690, er
blitt innsatt i pSV7d.
pSVF8-92E cDNA som koder for faktor VIII avledet 92 kD peptid
(tung kjede) er blitt innsatt i pSV7d.
pSVF8-80K cDNA som koder for faktor VIII avledet 80 kD peptid
(lett kjede) har blitt insatt i pSV7d.
Eksempel 1
Virkningen av vekst- temperatur på utbyttet av proteiner
med faktor VIII aktivitet
Ekspresjonsplasmidene pPR49 og pPR60 ble transfektert til COS-7 apeceller (Glusman, 1981, Cell 23.; 175-182 ved bruk av kalsiumfosfat-teknikken (Graham and van der Eb, 1973, Virology 52; 456-467) med modifikasjonene som er beskrevet i: DNA Cloning,
A Practical Approach, bind I+II/IRL Press. (Hvert plasmid ble totalt transfektert til åtte 5 cm skåler: 2 ganger 2 skåler bestemt for ekspresjon ved 37°C og henholdsvis 27°C i serumholdig medium (10%), og det samme antall skåler i serumfritt medium). 16 timer etter transfeksjon ble mediene skiftet; halvparten av skålene ble skiftet til serumfritt medium. 40 timer etter transfeksjonen ble mediene skiftet og halvparten av skålene ble overført til en 27°C inkubator. Etter ytterligere 24 timer ble mediene høstet, og faktor VIII aktiviteten ble bestemt ved bruk av Kabi "coatest chromogenic assay method". Resultatene er oppført i tabell 2:
Eksempel 2
Den kombinerte vikning av lav vekst- temperatur og kort mediumoppholdstid for utbytte av faktor VIII tung kjede fra CHO- cellelinje
CHO (Chinese Hamster Ovary) cellelinje (DUKX-B11 Urlaub and Chasin, 1989, PNAS 77; 4216-4220), som er mutert i dihydrofolat-reduktase-genet, ble ko-transfektert med plasmidene pSVF8-92E og pSVF8-80K pluss et plasmid som koder for dihydrofolat-reduktasen.
(Disse ko-transfeksjoner er beskrevet i US-patentsøknad nr. 82989).
Herunder ble et klon (10C2D2) isolert som varkarakterisertved å produsere 10 ganger mer tung kjede (HC) enn lett kjede (LC) når den dyrkes ved 37°C. Når 10C2D2 dyrkes ved 27°C økes utbyttet av HC dramatisk sett i sammenheng med utbyttet av LC (se tabell 3).
Eksempel 3
Fremstilling av FVIII:HC i Opticell bioreaktor ved 28- 30°C med 10C2D2
I Opticell bioreaktoren dyrkes cellene på en keramisk matrise, "Opticore", og dyrkningsmediene sirkuleres gjennom "opticoren". Oksygeninnholdet, pH, medium tilført og høstet, måles og kontrolleres alle av systemet.
Den gjennomsnittlige medium-sirkuleringstid var 5 timer (150 ml pr. time med et volumreservoar + "opticore" på 750 ml). Høsting ble samlet ved 5°C og frosset hver 24 time ved -80°C.
Cellene ble dyrket ved 37°C inntil det var nær sammenflytende (målt med oksygen konsumhastigheten) og temperaturen ble senket til 28-30"C for produksjon av FVIII:HC.
Cellene ble holdt på produksjonstemperaturen i 1000 timer. Oksygenforbruk-hastigheten avtok på et par timer når temperaturen ble senket fra 37°C til 30°C og fra 30°C til 28°C, men hver gang øket oksygenkonsum-hastigheten gradvis igjen. Således kunne cellene holdes på den lavere temperaturen selv lenger enn de 1000 timer.
I tabell 5 er mediumsammensetningen og tilførselses/høste-volumene samt FVIII:HC-nivåene for noen av høstingsprøvene vist.
r
Eksempel 4
Virkning av lav vekst- temperatur på utbytte av faktor VIII
lett kjede fra COS- 7 apeceller
Et ekspresjonsplasmid kalt pPR77 som koder for faktor VIII lett kjede ble transfektert til COS-7 celler på samme måte som beskrevet i eksempel 1. Plasmidet ble transfektert til fire 5 cm skåler: to ganger to skåler bestemt for ekspressjon ved henholdsvis 37°C og 27°C. Mediene (DMEM + 10% FCS) ble skiftet 16 og 40 timer etter transfeksjon (ved 4 0 timer ble halvparten av skålene overfort til en 27°C inkubator). Etter ytterligere 24 timer ble mediene høstet. Innholdet av faktor VIII lett kjede ble bestemt som beskrevet i eksempel 2. Resultatene er gitt i tabell 6.
Eksempel 5
Virkning av lav vekst- temperatur på utbyttet av proteinkompleks med faktor VIII aktivitet fra CHO celler transfektert med plasmider som koder hver for de to underenheter av faktor VIII: den tunge kjede og lette kjede
DHFR(-) CHO celle-linje DG44 (kfr. G. Urlaub et al., Proe. Nati. Sei., USA 77; 4216-4220, 1980) ble først transfektert med et plasmid som koder for den lette kjede av faktor VIII og dhfr-genet. Ved seleksjon av DHFR(+) celler ble en stabil lett-kjede produsent isolert. Denne nye celle-linjen ble ko-transfektert med et plasmid som koder for den tunge kjede av faktor VIII (og dhfr-genet) og et plasmid som koder for neo-genet (pSV2neo; P.J. Southern anf P. Berg, Journal of Molecular and Applied Genetics 1; 327-341, 1982). Transfektanter ble isolert i medium som inneholdt 700 isg Geneticin (G418 Sulphate, Gibco) pr. ml. Celler fra den primære pol ble formert direkte i medium som inneholder 0,1 jxM MTX. Celler isolert på denne måten ble sådd i to T-80 kolber, kalt A og B. Ved sammen-flyting ble mediene (DMEM + 10% DFCS + 700 Mg Geneticin/ml + 0,1 jliM MTX) skiftet (10 ml), og kolbene ble inkubert 24 timer ved 37°C, hvoretter medieprøver ble samlet. Mediene ble fornyet og B-kolben ble overført til en 27°C inkubator. Igjen ble kolbene inkubert i 24 timer etterfulgt av samling av medie-prøver og fornying av mediene. Denne prosessen ble gjentatt i 2 dager til (A-kolben fortsatt på 37°C og B-kolben fortsatt på 27°C). Faktor VIII aktiviteten ble målt ved Kabi "coatest chromogenic assay method". Resultatene er oppgitt i tabell 7.
Claims (5)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet eller FVIII derivater, der det fremstilte FVIII derivat er 92,5 kD-fragmentet eller "den tunge kjede", eller 80 kD-fragmentet eller "den lette kjede", ved in vitro dyrkning av pattedyrceller som er transfektert med plasmider som koder for "den tunge kjede" og/eller "den lette kjede", karakterisert ved at dyrkningen utføres ved en temperatur under 33°C.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at temperaturen er fra 10 til 32 °C.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2,
karakterisert ved at temperaturen er fra 2 5 til 30°C.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3,
karakterisert ved at temperaturen er 27°C.
5. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 1-4, karakterisert ved at som pattedyrceller anvendes COS-celler, CHO-celler eller BHK-celler.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/DK1989/000168 WO1991000347A1 (en) | 1989-07-04 | 1989-07-04 | Method of producing proteins with fviii activity and/or fviii derivatives |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO920080L NO920080L (no) | 1992-01-06 |
| NO920080D0 NO920080D0 (no) | 1992-01-06 |
| NO300428B1 true NO300428B1 (no) | 1997-05-26 |
Family
ID=8153554
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO920080A NO300428B1 (no) | 1989-07-04 | 1992-01-06 | Fremgangsmåte ved fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet eller FVIII derivater |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0480923B1 (no) |
| JP (1) | JP2810744B2 (no) |
| FI (1) | FI94148C (no) |
| NO (1) | NO300428B1 (no) |
| WO (1) | WO1991000347A1 (no) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4306813B2 (ja) | 1995-09-19 | 2009-08-05 | アスビオファーマ株式会社 | 動物細胞の新規培養方法 |
| TR200504220T2 (tr) | 1998-12-17 | 2007-04-24 | Biogen Idec Ma Inc. | Aktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimeAktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimerik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştrik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştırılması için bir yöntem.ırılması için bir yöntem. |
| NZ576424A (en) | 2006-10-20 | 2012-09-28 | Biogen Idec Inc | Treatment of demyelinating disorders with soluble lymphotoxin-beta-receptor |
| US8338376B2 (en) | 2006-10-20 | 2012-12-25 | Biogen Idec Ma Inc. | Compositions comprising variant LT-B-R-IG fusion proteins |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL84168A0 (en) * | 1986-10-15 | 1988-03-31 | Rorer Int Overseas | Human factor viii-c analogs,process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing the same |
-
1989
- 1989-07-04 JP JP1507715A patent/JP2810744B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-07-04 WO PCT/DK1989/000168 patent/WO1991000347A1/en active IP Right Grant
- 1989-07-04 EP EP89908155A patent/EP0480923B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-01-03 FI FI920037A patent/FI94148C/fi active
- 1992-01-06 NO NO920080A patent/NO300428B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1991000347A1 (en) | 1991-01-10 |
| JPH04506448A (ja) | 1992-11-12 |
| FI920037A0 (fi) | 1992-01-03 |
| JP2810744B2 (ja) | 1998-10-15 |
| NO920080L (no) | 1992-01-06 |
| EP0480923B1 (en) | 1993-09-29 |
| FI94148B (fi) | 1995-04-13 |
| FI94148C (fi) | 1995-07-25 |
| NO920080D0 (no) | 1992-01-06 |
| EP0480923A1 (en) | 1992-04-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2249041C2 (ru) | Способ получения и выделения белка, обладающего активностью фактора viii, линия клеток нкв, экспрессирующая белок, обладающий активностью фактора viii (варианты) | |
| CA1331157C (en) | Method for producing factor viii:c-type proteins | |
| US5250421A (en) | Method for producing factor VIII:C-type proteins | |
| EP0253870B1 (en) | Method for producing factor viii:c-type proteins | |
| JPS6342699A (ja) | 組み換え蛋白質の生産 | |
| KR20140036144A (ko) | 고수율 현탁세포주, 시스템 및 그 제조방법 | |
| NO300428B1 (no) | Fremgangsmåte ved fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet eller FVIII derivater | |
| EP0302925A1 (en) | A method for producing factor viii in high yield | |
| DK168713B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af proteiner med FVIII (Faktor VIII) aktivitet og/eller FVIII derivater | |
| JP4804356B2 (ja) | 第ＶＩＩＩ因子及びその誘導体の高発現レベルのための改変されたｃＤＮＡ | |
| US5610033A (en) | Method of producing proteins with FVIII activity and/or FVIII derivatives | |
| CA2058785C (en) | Method of producing proteins with fviii activity and/or fviii derivatives | |
| AU632495B2 (en) | Method of producing proteins with fviii activity and/or fviii derivatives | |
| DE68909617T2 (de) | Verfahren zur herstellung von proteinen mit fviii aktivität und/oder fviii derivate. | |
| MXPA01005667A (en) | Expression system for factor viii | |
| CA2149212A1 (en) | Improved recombinant production of proteins having factor viii:c activity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |