RO121604B1 - Sistem de expresie pentru factorul viii - Google Patents

Sistem de expresie pentru factorul viii Download PDF

Info

Publication number
RO121604B1
RO121604B1 ROA200100649A RO200100649A RO121604B1 RO 121604 B1 RO121604 B1 RO 121604B1 RO A200100649 A ROA200100649 A RO A200100649A RO 200100649 A RO200100649 A RO 200100649A RO 121604 B1 RO121604 B1 RO 121604B1
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
serum
lion
wave
gly
thr
Prior art date
Application number
ROA200100649A
Other languages
English (en)
Inventor
Myung-Sam Cho
Sham Yuen Chan
William Kelsey
Helena Yee
Original Assignee
Bayer Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Corporation filed Critical Bayer Corporation
Publication of RO121604B1 publication Critical patent/RO121604B1/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/028—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a herpesvirus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Abstract

Prezenta inventie se refera la o metoda de producere si izolare a unei proteine având activitate defactor VIII si la derivatii acestuia, metoda carecuprinde constructia vectorului, transfectia si selectia liniilor celulare cu productivitate sporita, în conditii de absenta a proteinelor, si la o linie celulara umana care exprima o proteina cu activitate de factor VIII.

Description

Prezenta invenție se referă la o metodă de producere și izolare a unei proteine având activitate de factor VIII și la derivații acestuia. Metoda prezintă, în mod general, construcția vectorului, transfecția și selecția liniilor celulare cu productivitate sporită, în condiții de absență a proteinelor. în special, invenția descrie procesul de preparare la scară industrială a unei proteine cu activitate procoagulantă a factorului VIII.
Factorul uman VIII este un rest de glicoproteină plasmatică, implicată, sub formă de cofactor, în activarea factorului X și a factorului IXa. Deficiența moștenită a factorului VIII determină tulburările de sângerare X-lincate din hemofilia A, care poate fi tratată cu succes cu factorul VIII purificat. Modificarea terapiei în hemofilia A s-a dezvoltat de la utilizarea factorului VIII, derivat din plasmă, la utilizarea factorului VIII, recombinat, obținut prin donarea și exprimarea ADNC -ului factorului VIII din celulele mamaliene. (Wood și colab., 1984, Nature 312:330).
Factorul VIII prezintă o organizare a domeniului de Al- A2- B - A3 - CI - C2 și este sintetizat sub forma unui lanț polipeptidic, unic, de 2351 aminoacizi, din care peptida semnal de 19 aminoacizi este clivată după translocareîn lumenul reticulului endoplasmatic. Datorită faptului că factorul VIII este puternic glicosilat, a fost dificil de atins o expresie de înalt nivel (>0,2 pg/c/d) a factorului VIII (Lind și col., 1995, Eur. J. Biochem. 232:19-27; Kaufman și col, 1989, Mol. Cell. Biol., 9: 1233-1242). Expresia factorului VIII în celulele mamaliene este în mod tipic mai joasă cu 2...3 ordine de magnitudine decât cea observată cu alte gene, folosind vectori similari și abordări similare. Productivitatea liniilor celulare producătoare de factor VIII s-a situat în zona de 0,5...1 pU/c/d (0,1...0,2 pg/c/d).
S-a demonstrat că domeniul B al factorului VIII este dispensabil pentru activitatea procoagulantă. Folosind variante scurtate de factor VIII, s-au raportat expresii ameliorate ale factorului VIII în celulele mamaliene de către diferiți autori (Lind și col., 1995, Eur. J. Biochem. 232:19-27; Tajima și col., 1990, Proc. 6th Int. Symp. H.T., pag. 51...63, brevet US 5661008 la Almstedt, 1997). Cu toate acestea, nivelul de expresie a variantelorfactorului VIII a rămas sub 1 pg/c/d pentru clona celulară stabilă.
Prezenta invenție se referă la (i) o metodă prin care se obțin linii celulare cu o extrem de înaltă productivitate de proteine, având activitatea procoagulantă a factorului VIII și (ii)linii celulare uman e, care exprimă factorul VIII. Celulele au fost înregistrate în colecția internațională cu numărul ATCC-CRL 12568.
Producția proteinelor având activitatea procoagulantă a factorului VIII se realizează la scară industrială. Folosind o gazdă celulară nou creată, au fost obținute clone celulare cu productivitate specifică în zona de 2...4 pg/celulă/zi (10...20 pU/c/d). în condiții de absență a serului, o clonă a susținut o producție zilnică de 2...4 pg/c/d. Clone cu acest nivel înalt de productivitate au fost capabile să producă 3...4 milioane de unități pe zi, într-un fermentator de perfuzie de 151. O unitate de activitate a factorului VIII este prin definiție activitatea prezentă într-un mililitru de plasmă. Un picogram din factorul VIII este în general echivalent cu aproape 5 pU de activitate a factorului VIII.
Așa cum este utilizată în prezenta lucrare, o proteină având activitatea procoagulantă a factorului VIII este acea proteină care produce activarea factorului X într-un sistem model in vitro sau in vivo. Conform unor exemple nelimitante, această definiție include factorul VIII, uman, recombinat în totalitatea lungimii și factorul VIII, lipsit (deleted) de domeniul B, a cărui secvență este descrisă în fig. 1.
Un nivel înalt al expresiei proteinei având activitatea procoagulantă a factorului VIII înseamnă cel puțin în jur de 2 pU/c/d sau, mai preferabil, cel puțin în jur de 4 pU/c/d sau, cel mai preferabil, cel puțin în jur de 5 pU/c/d de activitate a factorului VIII, dacă este crescut în mediu fără proteine (protein-free) derivate din plasmă, sau cel puțin în jur de 4 pU/c/d sau,
RO 121604 Β1 mai preferabil, cel puțin în jur de 8 sau, cel mai preferabil, cel puțin 10 pU/c/d de activitate 1 a factorului VIII, dacă este crescut în mediu suplimentat cu proteine derivate din plasmă.
Când proteina exprimată este BDD-FVIII, pot fi obținute linii celulare având o productivitate 3 specifică de până la aproape 15 pll/c/d și, mai preferabil, de până la aproape 20 pU/c/d prin metoda descrisă în prezenta lucrare. 5
Așa cum este utilizată în prezenta lucrare, pentru descrierea originii liniilor celulare, termenul „derivat din intenționează să includă, dar fără să se limiteze la diviziunea celulară 7 mitotică normală și procese cum sunt transfecția, fuziunea celulară sau alte tehnici de inginerie genetică, folosite pentru a altera celulele sau a produce celule cu noi proprietăți: 9
-fig. 1, secvența de aminoacizi ai BDD-FVIII (SECV. ID. nr. 1);
- fig. 2, secvența terminală repetitivă (TR) izolată din virusul Epstein-Barr (SECV.ID. 11 nr. 2);
- fig. 3, harta plasmidei pCIS25DTR;13
- fig. 4a, obținerea clonei 20B8;
-fig. 4 b, compararea productivității câtorva clone pe diferite medii. Trei serii dedate 15 sunt prezentate din testul de stabilitate pe două luni, pentru fiecare clonă;
- fig. 5, productivitatea volumetrică a clonei 20B8.17 în continuare, se dau câteva exemple de realizare a invenției.
Analiza FVIII19
Activitatea derivaților factorului VIII, obținuți prin expresia genelor recombinate, din populații celulare rezistente la metotrexat (MTX), a fost măsurată prin analiză cromogenică. 21 Activitatea a fost cuantificată, folosind kitulCoatest ©factor VIII: C/4 (Cromogenicx, Molndal, Sweden), corespunzător instrucțiunilor de folosire. Un factor antihemofilic standard SUA 23 (factorul VIII), cunoscut ca MEGA1 (Office of Biologics Research and Rewiew, Betheseda, MD), a fost folosit ca standard de măsurare în această analiză (vezi Barrowcliffe, 1993, 25
Thromb Haem 70:876).
Construirea vectorului de expresie pentru FVIII lipsit de domeniul B 27
Secvența lui FVIII lipsit de domeniul B(BDD) este prezentată în fig. 1. Lanțurile 90-kD și 80-kD au fost lincate cu un linker constând din 14 aminoacizi. (Vezi Chan, S.-Y., 29 „Producerea factorului VIII recombinat în prezența substanțelor de tip lipozom de compoziție amestecată(Production of recombinant Factor VIII in the Presence of Liposomene-like 31 Substances ofMixed Composition), brevet US, Aplicația nr. 08/634.001, depus la 16 aprilie 1996). Vectorul de expresie pentru BDD-FVI11 a fost făcut folosind tehnicile ADN recombinant 33 standard. Structura vectorului de expresie (pCIS25DTR) este prezentată în fig. 3. Vectorul include o unitate transcripțională pentru BDD-FVIII și un marker selectabil, dihidrofolat 35 reductaza (dhfr). în plus, o secvență repetitivă terminală din virusul Epstein-Barr, care prezintă un raport ameliorat de selecție pentru medicament, (fig. 2), a fost inserat în vector, 37 pentru a spori eficiența integrării. Vectorul este în mod esențial un construct vectorial (cu numărul de depozit ATCC 98879), care a fost făcut să includă o unitate transcripțională 39 corespunzătoare secvenței prezentate în fig. 1. Alte informații despre secvența repetitivă terminală pot fi găsite în cererea de brevet înrudită, încorporată în prezenta prin referirea la 41 Cho și Chan, desemnată MSB-7254, „Terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus enhances drug selection ratio, depusă în aceeași zi cu prezenta cerere. 43
Vectori similari pot fi construiți și utilizați de cei care lucrează în domeniu, pentru a obține celule exprimând proteine având activitate procoagulantă a factorului VIII. De exem- 45 piu, secvențe codificatoare, care codifică variantele cunoscute ale factorului VIII care rețin activitatea procoagulantă, pot fi înlocuite de secvența codificând BDD-FVIII. De asemenea, 47 în loc de dhfr, alți markeri selectabili pot fi folosiți, cum arfi glutamine sintetaze (gs) sau gena
RO 121604 Β1 rezistenței la polimedicamente (mdr). Alegerea agentului de selecție trebuie să fie făcută corespunzător, după cum este cunoscut în domeniu, de exemplu, pentru dhfr, agentul de selecție preferat este metotrexat, pentru gs, agentul de selecție preferat este metionin sulfoximina, și pentru mdr, agentul de selecție preferat este colchicina.
Obținerea de linii celulare exprimând BDD-FVIII: transfecția, selecția la medicament și amplificarea genică
Treizeci de micrograme de ADN pCIS25DTR au fost transferate în celule HKB11 (ATCC depozit nr. CRL 12568 - un hibrid de celule 293S și celule de limfom Burkitt uman, vezi aplicația brevetului lui Cho și col., depusă în aceeași zi cu prezenta aplicație și denumită MSB-7241, încorporată în prezenta lucrare la referințe) prin electroporare la 300 volți și 300 micro farazi (BTX Electro cell Manipulator 600), folosind o cuvă de 2 mm (BTX part #620). în experiențele comparative efectuate în paralel cu celule HK11, CHO (Chinese hamster ovary) și celule 293 S (human embryonic kidney), celulele au fost transfectate, folosind ca reactiv lipidic cationic DMRIE-C (Life Technologies, Gaithersburg, MD), corespunzător protocolului furnizat de LifeTechnologies. Amplificarea celulelor transfectate a fost efectuată cu metotrexat (MTX) în concentrații crescânde (100, 200, 400 și 800nM) la un număr de 1 x 106 celule dispuse pe 96 plăci (well plate) cu mediu de selecție MTX lipsit de hipoxantină și timidină (mediu DME/F12 fără hipoxantină și timidină plus 5% ser bovin fetal dializat, de la Hyclone, Logan, UT). Celulele MTX rezistente au fost evaluate pentru creștere și secreția de BDD-FVIII a fost testată pentru selecție, folosind un kit Coatest® Factor VIII, la 2...3 săptămâni după transfecție. Cultivarea celulelor a fost făcută la 37’C, într-un incubator umidificat, cu 5% CO2.
Clonarea în diluție limitantă
Clone din celule unice au fost obținute prin clonarea în diluție limitantă (LDC) a populațiilor înalt producătoare, din cele 96 de plăci, în condiții de „serum - free. Celulele au fost inoculate în număr de 1 ...10 celule pe placă cu mediu DME/F12 suplimentat cu insulină recombinată Humulin® (Lilly, Indianopolis, IN) în concentrație de 10 pg/ml,10X aminoacizi esențiali (Life Technology, Gaithersburg, MD) și o fracție proteică de plasmă umană Plasmanate® (Bayer, Clayton, NC). Fracția proteică (HPP) de plasmă umană Plasmanate® conține albumină umană (88%) și diferite globuline (12%). Clonele au fost testate în vederea selecției pentru productivitatea de BDD-FVIII, folosind kitul Coatest® Factor VIII. Clonele cele mai înalt producătoare au fost selectate, pentru evaluarea stabilității, în flacoane agitate. Pentru celulele HKB, prima rundă de donare în diluție limitantă (LDC) a fost efectuată folosind mediu de selecție suplimentat cu 5% FBS dializat. A doua rundă de donare în diluție limitantă a fost efectuată în condiții de „serum - free, dar fracția HPP Plasmanate® a conținut mediu utilizat la prima adaptare a clonelor de celule unice (SCC) în mediu serum-free, suplimentat cu fracția HPP Plasmanate®
Obținerea clonei 20B8 din celule HKB
Așa cum este prezentată în rezumat în fig. 4a, populația inițială 1C10 a fost derivată din celule HKB transfectate cu pCIS25DTR, după amplificarea cu 400 nM MTX, în mediu de selecție cu 5% FBS. Una dintre primele clone de celule unice, 10A8, derivată din 1C10 prin LDC, folosind un mediu de selecție suplimentat cu 5% FBS, a fost adaptată la mediu serum-free, suplimentat cu fracția HPP Plasmanate®. în mod neaștaptat, dona 10A8 a prezentat niveluri extrem de crescute ale producției de rFVIII pentru acest stadiu (fig. 4b). Prin urmare, s-a efectuat o a doua donare în diluție limitantă, folosind un mediu suplimentat cu fracția HPP Plasmanate®. Productivitatea clonelor de celule unice (de exemplu 20B8) derivată din a doua donare în diluție limitantă a fost similară cu 10A8, adaptată la fracția HPP Plasmanate®. Clona 20B8 a prezentat niveluri mai mari de BDD-FVIII decât originalul 10A8,
RO 121604 Β1 derivat din prima LDC, pe mediu conținând ser. în final, clona 20B8 a fost adaptată pentru 1 creștere pe mediu fără proteină plasmatică (PPF). Mostre ale clonei 20B8 au fost depozitate la Colecția Americană de culturi de celule (Manassas, VA) (ATCC CRL-12582). 3
După cum sunt prezentate în tabelul de mai jos, clonele HKB prezintă o productivitate superioară pentru BDD-FVI11. La celulele HKB a fost observată o creștere a productivității de 5 10...20 de ori, atunci când au fost comparate cu clonele derivate din celule CHO și 293 S transfectate. Celulele HKB care nu formează agregate mari de celule când sunt cultivate în 7 suspensie celulară sunt celule preferate pentru expresia proteinelor cu activitatea procoagulantă a factorului VIII. 9
Expresia lui FVIII și BDD-FVIII în liniile celulare umane și de rozătoare 11
Productivitatea specifică (pU/c/d)*
Derivați de FVIII BHK 293s CHO HKB
FVIII total 0,45 1,2 0,5 1,0
BDD-FVIII ND 2,5 1,0 20
* media a 5 clone înalt productive (în mediu fără ser) ND = nu dă rezultate 17
Adaptarea clonelor la plasmă fără proteine 19
Clonele HKB care au fost adaptate să crească ca culturi în suspensii fără ser au fost mai departe dezobișnuite de suplimente de proteină plasmatică. Dezobișnuința a fost făcută 21 în flacoane agitate sterile de policarbonat (Corning, Corning, NY), la o densitate celulară în jur de 0,5x10® celule /ml, folosind plasmă obținută din mediu fără proteină. Mediul plasmatic 23 fără proteină (PPF) a fost mediul DME/F12, suplimentat cu pluronic F68 (0,1%), CuSO4 (50nM) și FeSOVEDTA (50 μΜ). Schimbarea mediului complet a fost făcută la fiecare 48 h 25 și flacoanele agitate au fost reinoculate cu 0,5x10® celule/ml.
Fermentarea clonei 20B827
Productivitatea clonei 20B8 a fost evaluată într-un fermentator de perfuzie de 15 I.
Fermentatorul a fost inoculat cu celulele clonei 20B8, la o densitate de aproximativ 3x10629 celule/ml. Fermentatorul a fost perfuzat la o rată de 4 vol/zi, cu mediu de producție fără ser, așa cum a fost descris în paragraful precedent. O densitate celulară finală de 2x10731 celule/ml a fost menținută de-a lungul perioadei de evaluare (45 zile). Așa cum se prezintă în fig. 5, în timpul primelor 4 săptămâni de fermentare, clona 20B8 a fost perfuzată cu mediu 33 de producție fără ser, suplimentat cu fracția HPP Plasmanat® și a fost capabilă să mențină o înaltă productivitate. Din ziua 28, până la terminarea fermentației, celulele au fost perfuzate 35 cu același mediu de producție fără ser, dar fără fracția HPP Plasmanat®. Așa cum este prezentat în fig. 5, celulele continuă să producă niveluri înalte de FVIII în mediul cu derivatul de 37 plasmă fără proteine. „Derivatul de plasmă fără proteine înseamnă că în mod esențial nici o proteină nu a fost izolată din plasma care a fost adăugată la mediu. 39
Derivata din celule HKB furnizează un sistem de producție în mediu liber de proteine, pentru a produce nu numai BDD-FVIII, dar și alte proteine terapeutice. Proteinele produse 41 de celule HKB au un model de glicozilare umană care poate ameliora jumătatea vieții (half-life) unor glicoproteine in vivo. Aceste celule ar putea fi folosite pentru producerea de 43 sușe de adenovirusuri și adeno asociat, virusuri care sunt indicate pentru scop de terapie genică. 45
RO 121604 Β1
Exemplele de mai sus intenționează să ilustreze invenția și să imagineze variantele care vor fi făcute de cei care lucrează în domeniu. Corespunzător, se intenționează ca scopul invenției să fie limitat numai la revendicările următoare.
Lista de secvențe <11O> Ch.o, Myung-Sam
Chan, sharn - Yuen
Kelsey, William
Yee, Helena <i2o> Sistem de expresie pentru factorul VIII <130> MSB-7255 <140>
<141» <160> 2 <i7o> Secvența artificială <210» 1 <211> 1438 <212= PRT <2i3> Secvența artificială <220=· <223> Descrierea secvenței artificiale: obținută din secvența factorului uman VIII <400> 1
Ala 1 Thr Arg Arg Tyr 5 Tyr Leu Gly Ala Val 10 Glu teu Ser Trp Asp 15 Tyr
Met Gin Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg Phe pro Pro
20 25 30
RO 121604 Β1
Arg Val Pro 35 Lys Ser Phe Pro Phe 40 Asn Thr ser val Val 45 Tyr Lys Lys 1 3
Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Val His Leu Phe Asn Ile Ala Lys Pro 5
50 55 60 7
Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gin Ala Glu val 9
65 70 75 80
11
Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser His Pro Val
85 90 95 13
15
Ser Leu His Ala Val Gly val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser Glu Gly Ala
100 105 110 17
Glu 19
Glu Tyr Asp Asp Gin Thr Ser Gin Arg Glu Lys ASp ASp Lys Val
115 12 0 125 21
Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gin val Leu Lys Glu Asn 23
130 135 140 25
Gly Pro Met Ala ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser Tyr Leu Ser 27
14 5 150 155 160 29
His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile Gly Ala Leu 31
165 170 17 5 33
Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys GlU Lys Thr Gin Thr Leu 35
180 185 190 37
His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly Lys Ser Trp
195 200 205
RO 121604 Β1
1 His Ser Glu Thr lys Asn Ser Leu Met Gin Asp Arg Asp Ala Ala Ser
3 210 215 220
5 Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr val Asn Gly Tyr val Asn Arg
7 225 230 235 240
9 Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser val Tyr Trp His
11 245 250 255
13 Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile Phe Leu Glu
15 260 265 270
17 Gly His Thr Phe Leu Vai Arg Asn His Arg Gin Ala Ser Leu Glu ile
19 275 280 285
21 Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gin Thr Leu Leu Met Asp Leu Gly
23 290 295 300
25 Gin Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gin His Asp Gly Met
27 305 310 315 320
29 Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro Gin Leu Arg
31 325 330 335
33 Met Lys Asn Asn G1U Glu Ala Glu Asp Tyr ABp Asp Asp Leu Thr Asp
35 340 345 350
37 Ser Glu Met Asp val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser Pro Ser Phe
39 3 55 360 3 65
41 Ile Gin Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr Trp val His
43 370 375 380
RO 121604 Β1
Tyr Ile Ala Ala G1U Glu G1U Asp Trp Asp Tyr Ala Pro Leu Val Leu 1
385 390 3 95 400 3
Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gin. Tyr Leu Asn Asn Gly Pro 5
405 410 4 ÎS 7
Gin Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met Ala Tyr Thr 9
420 425 430 11
Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gin His Glu Ser Gly Ile 13
435 440 445 15
Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu val Gly Asp Thr Leu Leu Ile Ile 17
450 455 460 19
Phe Lys Asn Gin. Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro· His Gly Ile 21
465 470 475 480 23
Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys Gly val Lys 25
4S5 4 90 495 27
Hi 8 Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe Lys Tyr Lys 29
500 505 510 31
Trp Thr val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp Pro Arg Cys 33
515 52 0 525 35
Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg Asp Leu Ala 37
530 535 540 39
Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu Ser val Asp 41
545 550 555 560 43
RO 121604 Β1
1 Gin Arg Gly Asn Gin Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val Ile Leu Phe
3 565 570 57 5
5 Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu Asn Ile· Gin
7 580 585 590
9 Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gin Leu Glu Asp Pro Glu Phe
11 595 600 605
13 Gin Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr val Phe Asp Ser
15 610 615 620
17 Leu Gin Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp Tyr Ile Leu
19 €25 630 635 64 0
21 Ser Ile Gly Ala Gin Thr Asp Phe Leu Ser val Phe Phe Ser Gly Tyr
23 645 650 655
25 Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr Leu Phe Pro
27 660 665 670
29 Phe Ser Gly G1U Thr Val Phe Met Ser Met GLU Asn Pro Gly Leu Trp
31 675 680 685
33 ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly Met Thr Ala
35 390 695 700
37 Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp Tyr Tyr Glu
39 7D5 710 715 720
41 Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys Asn Asn Ala
43 725 730 735
RO 121604 Β1
Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gin Asn Pro Pro val Leu Lys Arg His 1
740 745 750 3
Gin Arg Glu Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gin Ser Asp Gin Glu Glu Ile 5
755 760 765 7
Asp Tyr Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp Phe Asp 9
770 775 780 11
Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gin Ser Pro Arg Ser Phe Gin Lys Lys 13
785 790 795 800 15
Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr Gly 17
805 810 815 19
Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gin Ser Gly Ser 21
820 825 830 23
Val Pro Gin Phe Lys Lys Val Val Phe Gin Glu Phe Thr Asp Gly Ser 25
835 84 0 845 27
Phe Thr Gin Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu Hls Leu Gly Leu 29
850 855 860 31
Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu ASp Asn Ile Met Val Thr 33
865 870 8 75 880 35
Phe Arg Asn Gin Ala Ser Arg pro Tyr Ser Phe Tyr Ser ser Leu Ile 37
885 890 895 39
Ser Tyr Glu □lu Asp Gin Arg GLn Gly Ala Glu Pro Arg Lys Asn Phe 41
900 905 910 43
RO 121604 Β1
Val Lys Pro 915 Asn Glu Thr Lys Thr Tyr 920 Phe Trp Lys Val 925 Gin Kls His
Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe
930 935 940
ser Asp val Asp Leu Glu Lys Asp val His Ser Gly Leu Ile Gly Pro
945 95 0 955 960
Leu Leu val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn pro Ala His Gly Arg Gin
965 970 975
Val Thr Val Gin Glu Phe Ala Leu Pbe Phe Thr Ile Phe Aep Glu Thr
98 0 985 990
Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro
995 1000 1005
Cys Asn Ile Gin Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe
1010 1015 1020
His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met
1025 1030 1035 1040
Ala Gin Asp Gin Arg Ile Arg Trp Tyr Leu 1050 Leu Ser Met Gly Ser 1055 Asn
1045
Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg
106 0 1065 1070
Lys Lys GLu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val
1075 1DB0 1085
RO 121604 Β1
Phe Glu Thr val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg Val 1
1090 1095 1100 3
Glu Cys Leu Ile Gly Glu Hi a Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu Phe 5
1105 1110 1115 1120 7
Leu Val Tyr Ser Asn Lys cys Gin Thr Pro Leu Gly Met Ala ser Gly 9
1125 1130 1135 11
His Ile Arg Asp Phe GLn Ile Thr Ala ser Gly Gin Tyr Gly Gin Trp 13
1140 1145 1150 15
Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp 17
1155 neo 1155 19
Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys val Asp Leu Leu Ala Pro 21
1170 1175 1180 23
Met Ile ile His Gly Xle Lya Thr Gin Gly Ala Arg Gin Lys Phe Ser 25
1185 1190 1195 1200 27
Ser Leu Tyr Ile Ser GLn Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys 29
1205 1210 1215 31
Lys Trp Gin Thr Tyr Arg Gly Asn. Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe 33
1220 1225 1230 35
phe Gly Asn. val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro 37
1235 1240 1245 39
Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile 41
12S0 1255 1260 43
RO 121604 Β1
1 Arg Sei' Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys
3 12 65 1270 12 75 1280
5 Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gin Ile
7 1285 1290 12 95
9 Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn. Met Phe Ala Thr Trp ser Pro ser
11 1300 1305 1310
13 Lys Ala Arg Leu His Leu Gin Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gin
15 1315 1320 1325
17 Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gin val Asp Phe Gin Lys Thr Met
19 1330 1335 1340
21 Lys val Thr Gly Val Thr Thr Gin Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser
23 1345 1350 1355 1360
25 Met Tyr Val Lye Glu Phe Leu ile Ser Ser Ser Gin Asp Gly Hls Gin
27 1365 1370 13 75
29 Trp Thr Leu Phe Phe Glu Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gin Gly Asn.
31 1330 1385 1390
33 Gin Asp Ser Phe Thr Pro val val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu
35 1395 1400 1405
37 Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gin Ser Trp Val His Gin ile Ala
39 1410 1415 1420
41 Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gin Asp Leu Tyr
14 2 5 1430 1435
RO 121604 Β1 <210> 2 <211> 402 3 <212> DNA c □
<2i3> Secvența artificiala <220> 9 <223> Descrierea secvenței artificiale: obținută din secvența virusului Epstein-Barr <400> 2-|5 ggcaatggag cgtgacgaag ggccccaggg ctgaccccgg caaacgtgac ccggggctcc 60 ggggtgaccc aggcaagcgt ggccaagggg cccgtgggtg acacaggcaa ccctgacaaa 120 ggccccGcag gaaagacccc cggggggcat cgggggggtg ttggcgggtc atgggggggg 18019 cgggtcatgc cgcgcattcc tggaaaaagt ggagggggcg tggccttccc cccgcggccc 240 cctagccccc ccgcagagag cggcgcaacg gcgggcgagc ggcggggggt cggggtccgc 300 gggctccggg ggctgcgggc ggtggatggc ggctggcgtt ccggggatcg ggggggggtc360 ggggggcgct gcgcgggcgc agccatgcgt gaccgtgatg ag 40225

Claims (8)

1. Metodă de producere și izolare a unei proteine având activitate de factor VIII, 29 caracterizată prin aceea că aceasta cuprinde creșterea celulelor desemnate cu numele ATCC-CRL 12568, care includ o secvență care codifică proteina legată în mod operabil la 31 un promotor, creșterea fiind realizată în condiții suficiente, pentru exprimarea și izolarea proteinei. 33
2. Metodă conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că proteina are secvența de aminoacizi prezentată în SECV. ID. NR: 1. 35
3. Metodă conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că proteina este exprimată la un nivel de cel puțin 2 pU/c/d când celulele sunt crescute pe un mediu fără proteine 37 derivate din plasmă.
4. Metodă conform revendicării 3, caracterizată prin aceea că proteina este expri- 39 mată la un nivel de cel puțin 4 pU/c/d.
5. Metodă conform revendicării 4, caracterizată prin aceea că proteina este expri- 41 mată la un nivel de cel puțin 5 pU/c/d.
6. Linie de celule umane, obținute din celule desemnate cu numele ATCC-CRL 43 12568, care exprimă o proteină care are activitate de factor VIII.
7. Linie de celule umane, conform revendicării 6, care exprimă factorul VIII cu 45 domeniul B deletat.
8. Linie de celule desemnate ca ATCC-CRL-12582, care exprimă proteina factorului 47
VIII cu domeniul B deletat.
ROA200100649A 1998-12-10 1999-12-08 Sistem de expresie pentru factorul viii RO121604B1 (ro)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/209,916 US6358703B1 (en) 1998-12-10 1998-12-10 Expression system for factor VIII
PCT/US1999/029169 WO2000034505A1 (en) 1998-12-10 1999-12-08 Expression system for factor viii

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RO121604B1 true RO121604B1 (ro) 2007-12-28

Family

ID=22780858

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ROA200100649A RO121604B1 (ro) 1998-12-10 1999-12-08 Sistem de expresie pentru factorul viii

Country Status (26)

Country Link
US (10) US6358703B1 (ro)
EP (1) EP1137797B1 (ro)
JP (1) JP4240818B2 (ro)
KR (1) KR100616028B1 (ro)
AT (1) ATE412765T1 (ro)
AU (1) AU761801B2 (ro)
BG (1) BG65431B1 (ro)
BR (1) BRPI9916069B8 (ro)
CA (1) CA2354845C (ro)
CZ (1) CZ302330B6 (ro)
DE (1) DE69939839D1 (ro)
DK (1) DK1137797T3 (ro)
ES (1) ES2315026T3 (ro)
HU (1) HU228489B1 (ro)
IL (2) IL143353A0 (ro)
NO (1) NO329544B1 (ro)
NZ (1) NZ512234A (ro)
PL (1) PL200676B1 (ro)
PT (1) PT1137797E (ro)
RO (1) RO121604B1 (ro)
RU (1) RU2249041C2 (ro)
SI (1) SI20644B (ro)
SK (1) SK286945B6 (ro)
TR (1) TR200101592T2 (ro)
UA (1) UA77383C2 (ro)
WO (1) WO2000034505A1 (ro)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6475725B1 (en) 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
US6358703B1 (en) * 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
US6180108B1 (en) * 1998-12-10 2001-01-30 Bayer Corporation Vectors having terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus
DE60115613T2 (de) * 2000-03-22 2006-08-24 Octagene Gmbh Herstellung von rekombinanten muteine des blutgerinnungsfaktors viii in humanen zellinien
AU2002310438B2 (en) * 2001-06-14 2008-05-01 The Scripps Research Institute Stabilized proteins with engineered disulfide bonds
EP2572732A1 (en) 2003-02-26 2013-03-27 Nektar Therapeutics Polymer-factor VIII moiety conjugates
US7485291B2 (en) * 2003-06-03 2009-02-03 Cell Genesys, Inc. Compositions and methods for generating multiple polypeptides from a single vector using a virus derived peptide cleavage site, and uses thereof
US7498024B2 (en) * 2003-06-03 2009-03-03 Cell Genesys, Inc. Compositions and methods for enhanced expression of immunoglobulins from a single vector using a peptide cleavage site
JP2008518597A (ja) * 2004-10-29 2008-06-05 セントカー・インコーポレーテツド 化学的規定培地組成物
EP1824988B1 (en) * 2004-11-12 2017-04-19 Bayer HealthCare LLC Site-directed modification of fviii
AR058568A1 (es) 2005-12-20 2008-02-13 Bristol Myers Squibb Co Metodos para producir una composicion con moleculas ctla4-ig a partir de un medio de cultivo
KR101398713B1 (ko) 2005-12-20 2014-06-12 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 조성물 및 조성물의 제조 방법
MX343271B (es) 2007-12-27 2016-10-31 Baxalta Inc Procesos de cultivo celular.
KR101005967B1 (ko) * 2008-04-12 2011-01-05 (주)셀트리온 우수한 재조합 단백질을 생산하기 위한 인간 숙주 세포
WO2009158511A1 (en) * 2008-06-25 2009-12-30 Bayer Healthcare Llc Factor viii muteins with reduced immunogenicity
MX2011001624A (es) 2008-08-21 2011-03-28 Octapharma Ag Factor viii y ix humano producido en forma recombinante.
RU2510279C3 (ru) * 2008-09-03 2017-04-17 Октафарма Аг Новые защитные композиции для рекомбинантного фактора viii
SI2393828T1 (sl) 2009-02-03 2017-01-31 Amunix Operating Inc. Podaljšani rekombinantni polipetidi in sestavki, ki jih obsegajo
US8716448B2 (en) 2009-02-03 2014-05-06 Amunix Operating Inc. Coagulation factor VII compositions and methods of making and using same
CN102427823A (zh) * 2009-03-24 2012-04-25 拜耳医药保健有限公司 因子viii变体及使用方法
US20110150843A1 (en) * 2009-10-30 2011-06-23 National Institute Of Immunology Method for the therapeutic correction of hemophilia a by transplanting bone marrow cells
US20130017997A1 (en) * 2010-08-19 2013-01-17 Amunix Operating Inc. Factor VIII Compositions and Methods of Making and Using Same
ES2970057T3 (es) * 2011-05-13 2024-05-24 Octapharma Ag Un procedimiento para aumentar la productividad de células eucarióticas en la producción de FVIII recombinante
US11370827B2 (en) 2012-01-12 2022-06-28 Bioverativ Therapeutics Inc. Chimeric factor VIII polypeptides and uses thereof
EP3564260B1 (en) * 2012-02-15 2022-10-19 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii compositions and methods of making and using same
DK2822577T3 (en) 2012-02-15 2019-04-01 Bioverativ Therapeutics Inc RECOMBINANT FACTOR VIII PROTEINS
TWI667255B (zh) 2013-08-14 2019-08-01 美商生物化學醫療公司 因子ｖｉｉｉ－ｘｔｅｎ融合物及其用途
MY192481A (en) 2014-01-10 2022-08-23 Bioverativ Therapeutics Inc Factor viii chimeric proteins and uses thereof
EP3331608A4 (en) 2015-08-03 2019-05-01 Bioverativ Therapeutics Inc. FUSION XI FUSION PROTEINS AND METHODS OF MAKING AND USING THE SAME
AU2017250570A1 (en) 2016-04-15 2018-11-15 Takeda Pharmaceutical Company Limited Method and apparatus for providing a pharmacokinetic drug dosing regiment
EP3487538A1 (en) 2016-07-22 2019-05-29 Nektar Therapeutics Conjugates of a factor viii moiety having an oxime-containing linkage
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
US20200245667A1 (en) * 2017-09-13 2020-08-06 Evolve Biosystems, Inc. Oligosaccharide compositions and their use during transitional phases of the mammalian gut microbiome
KR20190086269A (ko) * 2018-01-12 2019-07-22 재단법인 목암생명과학연구소 체내 지속형 재조합 당단백질 및 이의 제조방법
EP3870206A4 (en) * 2018-10-23 2023-04-26 The Children's Hospital Of Philadelphia COMPOSITIONS AND METHODS OF MODULATION OF FACTOR VIII FUNCTION

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6045849B2 (ja) * 1980-08-25 1985-10-12 林原 健 ヒトエリトロポエチンの製造方法
US4766075A (en) * 1982-07-14 1988-08-23 Genentech, Inc. Human tissue plasminogen activator
GB8308235D0 (en) * 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4757006A (en) * 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4703008A (en) * 1983-12-13 1987-10-27 Kiren-Amgen, Inc. DNA sequences encoding erythropoietin
KR890002004B1 (ko) * 1984-01-11 1989-06-07 가부시끼 가이샤 도오시바 지폐류 판별장치
US4965199A (en) * 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4970300A (en) * 1985-02-01 1990-11-13 New York University Modified factor VIII
ES8801674A1 (es) * 1985-04-12 1988-02-16 Genetics Inst Un procedimiento para la preparacion de una proteina que presenta actividad procoagulante.
US5198349A (en) * 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
EP0254076B1 (en) * 1986-07-11 1991-05-08 Miles Inc. Improved recombinant protein production
DE3730599A1 (de) 1986-09-12 1988-07-07 Genentech Inc Verfahren zur kontinuierlichen herstellung von heterologen proteinen in eukaryontischen wirtszellen
IE69026B1 (en) * 1987-06-12 1996-08-07 Immuno Ag Novel proteins with factor VIII activity process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
US5661008A (en) * 1991-03-15 1997-08-26 Kabi Pharmacia Ab Recombinant human factor VIII derivatives
US5859204A (en) 1992-04-07 1999-01-12 Emory University Modified factor VIII
ES2226029T3 (es) * 1993-06-10 2005-03-16 Bayer Corporation Vector y linea celular de mamifero con productividad mejorada.
US5952198A (en) * 1995-05-04 1999-09-14 Bayer Corporation Production of recombinant Factor VIII in the presence of liposome-like substances of mixed composition
DE19517194A1 (de) * 1995-05-11 1996-11-14 Giesecke & Devrient Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur Prüfung von Blattgut, wie z.B. Banknoten oder Wertpapiere
MX9504215A (es) 1995-10-05 1997-04-30 Inst Politecnico Nacional Procedimiento mejorado para la purificacion de oligopeptidos con pesos moleculares de 1000 a 10,000 daltones, a partir de estractos leucocitos y su presentacion farmaceutica.
US5922959A (en) * 1996-10-15 1999-07-13 Currency Systems International Methods of measuring currency limpness
US5923413A (en) * 1996-11-15 1999-07-13 Interbold Universal bank note denominator and validator
US5804420A (en) * 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
CA2312291A1 (en) * 1997-12-05 1999-06-17 The Immune Response Corporation Novel vectors and genes exhibiting increased expression
US6040584A (en) * 1998-05-22 2000-03-21 Mti Corporation Method and for system for detecting damaged bills
US6528286B1 (en) * 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
US6136599A (en) * 1998-12-10 2000-10-24 Bayer Corporation Human hybrid host cell for mammalian gene expression
US6358703B1 (en) * 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
US6180108B1 (en) * 1998-12-10 2001-01-30 Bayer Corporation Vectors having terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus

Also Published As

Publication number Publication date
PL349284A1 (en) 2002-07-15
US20110144025A1 (en) 2011-06-16
HUP0200558A2 (en) 2002-06-28
HU228489B1 (en) 2013-03-28
US20130267468A1 (en) 2013-10-10
CA2354845A1 (en) 2000-06-15
US7459525B2 (en) 2008-12-02
BG65431B1 (bg) 2008-07-31
CZ20012024A3 (cs) 2001-10-17
JP2002531137A (ja) 2002-09-24
BG105567A (en) 2002-03-29
US6358703B1 (en) 2002-03-19
BRPI9916069B8 (pt) 2021-05-25
RU2249041C2 (ru) 2005-03-27
US8945869B2 (en) 2015-02-03
SI20644A (sl) 2002-02-28
US20090036358A1 (en) 2009-02-05
US20020115152A1 (en) 2002-08-22
SK286945B6 (sk) 2009-08-06
US20160115219A1 (en) 2016-04-28
SK7922001A3 (en) 2002-01-07
CA2354845C (en) 2008-08-12
TR200101592T2 (tr) 2001-11-21
PT1137797E (pt) 2008-12-26
BR9916069A (pt) 2001-09-04
US9650431B2 (en) 2017-05-16
PL200676B1 (pl) 2009-01-30
US9249209B2 (en) 2016-02-02
US8207117B2 (en) 2012-06-26
EP1137797A4 (en) 2005-06-22
EP1137797B1 (en) 2008-10-29
US20030077752A1 (en) 2003-04-24
IL143353A0 (en) 2002-04-21
AU761801B2 (en) 2003-06-12
NO20012718D0 (no) 2001-06-01
AU2170100A (en) 2000-06-26
US20130143818A1 (en) 2013-06-06
EP1137797A1 (en) 2001-10-04
ATE412765T1 (de) 2008-11-15
IL143353A (en) 2010-12-30
DK1137797T3 (da) 2009-02-23
DE69939839D1 (de) 2008-12-11
WO2000034505A1 (en) 2000-06-15
US20020102730A1 (en) 2002-08-01
KR100616028B1 (ko) 2006-08-28
HUP0200558A3 (en) 2004-11-29
UA77383C2 (uk) 2006-12-15
US20170267745A1 (en) 2017-09-21
CZ302330B6 (cs) 2011-03-16
NZ512234A (en) 2002-12-20
KR20020013481A (ko) 2002-02-20
ES2315026T3 (es) 2009-03-16
NO329544B1 (no) 2010-11-08
SI20644B (sl) 2009-04-30
BRPI9916069B1 (pt) 2016-08-02
NO20012718L (no) 2001-06-01
JP4240818B2 (ja) 2009-03-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RO121604B1 (ro) Sistem de expresie pentru factorul viii
EP0506757B2 (en) A recombinant human factor viii derivative
CA2451584A1 (en) Modified cdna factor viii and its derivatives
KR20210100661A (ko) 인자 ix를 발현하는 렌티바이러스 벡터의 용도
AU606925B2 (en) A method for producing factor viii in high yield
JP4804356B2 (ja) 第ＶＩＩＩ因子及びその誘導体の高発現レベルのための改変されたｃＤＮＡ
CA2854685A1 (en) Optimized messenger rna
EP1502921A1 (en) Recombinant mutated human factor VIII (FVIII) with improved stability
MXPA01005667A (en) Expression system for factor viii
NO300428B1 (no) Fremgangsmåte ved fremstilling av proteiner med FVIII aktivitet eller FVIII derivater
CA2149212A1 (en) Improved recombinant production of proteins having factor viii:c activity