SE458361B - Nya 2-imino-2-(2-amino-tiazol-4-y)-aettiksyror till anvaendning som mellanprodukt vid framstaellning av 7-(2-amino-tiazol-4-yl)-acetamido-cefalosporansyra-acyloximderivat,samt foerfarande foer framstaellning daerav - Google Patents

Description

458 361 syn-isomer, vari R betecknar - antingen Ra , Ra betecknar en grupp -(CH2)n-S-R2, vari R2 betecknar grupper- na NH NH \. *x -C eller -C \NH I/ 2 NH- NHZ vilka grupper eventuellt föreligger i protonerad form. och n betecknar ett heltal 1-4 - eller betecknar R Rb, Rb betecknar antingen en grupp -(CH2)n-S-CN, vari n betecknar ett heltal 1-4, eller en grupp -CHF2, R1 betecknar antingen en väteatom eller en klor- eller metoxigrupp eller en aikyl-, cykioaikyi-, aikyltiogrupp med högst s koiatø- mer eller en grupp -CH2-S-R', vari R' betecknar 1,2,3-, 1,2,S-, 1,2,4- eller 1,3,4-tiadiazolyl; 1-H-tetrazolyl, 1,3-tiazolyl; 1,2,3-, 1,2,4- eller 1,3,4-triazolyl; 1,2,3-, 1,2,4- eller 1,2,5- eller 1,3,4-oxadiazolyl, vilka grupper kan vara substi- tuerade med en eller flera grupper, valda från den grupp, som består av metyl-, etyl-, propyl-, isopropyl-, metoxi-, etoxi-, propyloxi-, isopropyloxi-, amino-, hydroxikarbonylmetyl-, di- metylaminoetyl- och dietylaminoetylgrupperna, en acylgrupp med 2-4 kolatomer, eller betecknar R1 en acetoximetyl- eller karbamoyloximetyl- QIUPP 458 361 - eller en grupp -NH-C-Alk, vari Alk innehåller 1-4 kolatomer 0 - eller en azidometylgrupp, A kan antingen beteckna en väteatom eller en farmaceutisk god- tagbar estergrupp, som lätt kan spaltas, eller, när R betecknar Ra, kan gruppen CO2A även betecknar en anjon -CO2_, eller, när R betecknar Rb, kan A även beteckna en alkalimetall-, jordalka- limetall-, magnesium-, ammoniumekvivalent eller en ekvivalent av en organisk aminbas, samt additionssalter av föreningarna med for- meln I med organiska syror eller mineralsyror.

Dessa föreningar samt framställningsmetoder därför beskrivas i den svenska utläggningsskriften 953 993.

De nya mellanprodukterna enligt uppfinningen med formeln Vd, de- finierad ovan, kan framställas genom att man omsätter en förening med formeln IV vari R2 betecknar en väteatom eller en skyddsgrupp för aminogrup- pen, och R3 betecknar antingen en väteatom eller R'3, R'3 beteck- nar en grupp -(CH2)n-Hal, vari Hal betecknar en halogenatom, och n betecknar ett heltal 1-4, antingen, när R3 betecknar en väteatom, med en produkt med formeln Hal1-CHF2, ställning av en förening med formeln NHR vari Han betecknar en klor- eller bromatom, for fram- 458 361 vari R2 har ovan angiven betydelse, eller, när R3 betecknar R' 3, antingen med tiourinämne eller med en förening med formeln NH-NH~R // 4 S=C \\ NHZ vari R4 betecknar en skyddsgrupp för aminogruppen, eller med en förening med formeln NEC-S-R5, vari R eller en alkalimetallatom, formeln V' 5 betecknar en ammoniumgrupp för framställning av en förening med NHR n' V' \\ _ _ _ 0 (CH2)n s RC vari RZ har ovan angiven betydelse, och Rc betecknar grupperna NH NI-FNH-R / f 4 -C -C\\ \ NHZ \ NH eller nitril.

För framställning av antibiotikana med formeln I omsättes för- eningarna med formeln V och V' som de är eller i form av funktio~ nellt derivat med en förening med formeln VI ñ-ü L ,S. \ï}::1/ ¿S1\ _ VI 0/ Y R1 COQA1 vari A1 betecknar en väteatom eller en ester, som lätt kan spal- tas, och R1 har ovan angiven betydelse, för framställning av för- eningarna med formlerna III respektive III', S0m, Om Så Önskas, behandlas med det förfarande, som beskrivits ovan. 458 361 Omsättningen av föreningarna med formeln Hal1-CHF2 med de förenin- gar med formeln IV, vari R3 betecknar en väteatom, samt av tiourin- 5 ämne, föreningarna med formeln I H-NH-R Ä Se” 4 f NH och föreningarna med formeln NEC-S-R5 med de föreningar med for- 2 meln IV, vari R3 betecknar en grupp -(CH2)n-Hal utföres under sam- ma betingelser som de, som beskrivits ovan för omsättningen av samma föreningar med de föreningar, som har formeln III.

Det funktionella derivatet av föreningen med formeln V eller V' kan vara en halogenid, en symmetrisk eller sammansatt anhydrid, en amid eller en aktiv ester.

Som exempel på sammansatt anhydrid kan t.ex. nämnas den, som bil- dats med isobutylklorformiat eller tosylklorid. Som exempel på ak- tiv ester kan nämnas estern med 2,4-dinitrofenol eller den, som bildats med 1-hydroxibensol[ï]triazol; Som exempel på halogenid kan nämnas kloriden eller bromiden.

Man kan även nämna syraaziden eller syraamiden.

Anhydriden kan bildas in situ genom omsättning av N)N-disubstitue- rade karbodiimider, t.ex. N,N-dicyklohexylkarbodiimid.

Acyleringsreaktionen utföres företrädesvis i ett organiskt lösnings- medel såsom metylenklorid. Man kan emellertid använda andra lös- ningsmedel såsom tetrahydrofuran, kloroform eller dimetylformamid.

När man använder en syrahalogenid eller en sammansatt anhydrid, bildad genom omsättning av isobutylklorformiat utföres acylerings- reaktionen företrädesvis i närvaro av en bas såsom natriumhydr- oxid, kaliumhydroxid, natrium- och kaliumkarbonat och natrium- och kaliumvätekarbonat, natriumacetat, trietylamin, pyridin, morfolin eller N-metylmorfolin. 458 361 Reaktionstemperaturen ligger i allmänhet under eller vid rumstem- peratur. uppfinningen avser isynnerhet det förfarande som beskrivits ovan, kännetaágat av att man omsätter de föreningar, vari substituenten R2 väljs från den grupp, som består av trityl-, kloracetyl-, t.- -pentyloxikarbonyl-, t.-butyloxikarbonyl-, bensyloxikarbonylgrup- perna.

Föreningarna med formeln I och deras användbarhet beskrives när- mare i den svenska utläggningsskriften 453 993- Förutom följande exempel, som beskriver uppfinningen utan att be- gränsa den, utgör föreningarna med formeln NH2 A S H N \o 0 // IL\¿;:l\ H \__R i C028 vari A har ovan angiven betydelse, och R betecknar NH // 2 2)2-S-C eller -CHF \šNH - (en 2 ytterligare substanser, som kan erhållas enligt uppfinningen- Exemgel 1: Triíluoracetat av 3-acetoxímetyl~7-[2É-(2-aminotiazol- -4-yl)-2-¿É-(amino-imino-metyltio)-etoxi]-imino]-acet- amidQ]-cef-3-em-4-karboxylsyra (syn-isomer) Steg A: 2-(2-tritylamino-tiazol-4~yl)-2-[Y2-aminoimino-metyltio)- ~etoxi-imino7-ättiksyra, synisomer (i form av inre salt).

Under 27 timmar omröres vid rumstemperatur och i skydd från ljus 4,6 g 2-(2-jodo-etoxi)-imino-2-(2-tritylamino-tiazol-4-yl)-ättik- 458 361 syra, syn-isomer, solvat i dikloretan, 1 g tiourinämne och 20 ml hexametylfosfortriamid. Blandningen hälles i 320 ml isoprolyleter.

Det utfällda gummit upptages i isopropyleter och därefter i vat- ten. Därefter centrifugeras, tvättas med vatten, torkas och man erhåller 3,59 g produkt med en smältpunkt av 260°C.

NMR-spektrum (CF3 C02 D) -CH2-S- : triplett centrerad vid 3,57 ppm J = 6 Hz 6 Hz -N-O-CH2 . triplett centrerad vid 4,72 ppm J Steg B: jodhydrat av 3-acetoximetyl-7-¿ZÉ-(2-tritylamino-tiazol- -4-yl)-2-¿]2-amino-imino-metyltio)-etoxi]-iminqj-acetami- do]-cef-3-em-4-benshydrylkarbooxylat 10,63 g av den ovan erhållna produkten, 4,14 g pyridinjodhydrat, 8,24 g dicyklohexylkarbodiimid, 7 g 7-amino-3-acetoximetyl-cef-3- -em-4-benshydrylkarboxylat och 60 ml vattenfri dimetylformamid omröres. Efter 25 minuter vid 15OC och 10 minuter vid rumstempe- ratur centrifugeras reaktionsblandningen och olösligt material tvättas med metylenklorid. Metylenkloriden avlägsnas från filtratet under sänkt tryck vid högst 45°C, och den återstående vätskan häl- les i 1 l isopropyleter och omröres 20 minuter. Därefter dekante- ras, övervätskan tages av, fällningen försättes med isopropyleter, och suspensionen omröres 20 minuter. Efter dekantering upplöses olösligt material i metanol. Därefter fälles med etyleter, omröres 70 minuter, centrifugeras, tvättas med eter, torkas och man erhål- ler 18,2 g produkt.

Steg C: trifluoracetat av 3-acetoximetyl-7-[2É-(2-amino-tiazol-4- yl)-2-¿§-(amino-imino-metyltio)-etoxi]-iminq]-acet«amidQ]-cef-3- -em-4-karboxylsyra (syn-isomer) 7,5 g av den produkt, som erhölls ovan och 75 g trifluorättiksyra omröres 3 minuter vid rumstemperatur. Olösligt material centrifu- geras, och filtratet upptages i 1,2 l iseter. Efter 15 minuter vid rumstemperatur centrifugeras den bildade fällningen, den upp- löses i metanol och âterutfälles genom tillsats av eter samt om- röres 15 minuter. Därefter centrifugeras, tvättas med eter, tor- kas och man erhåller 2,19 g av den önskade produkten. Smältpunkt 458 361 (sönderfall) = 256°c- §MR-spektrum (C2 D3)2 S0 -OAC : 2,02 ppm singlett N-0-CH2- : 4,25 ppm H5 tiazol: 6,78 ppm singlett ER-spektrum (nujol) E-laktam - 1768 cm_1 Amid II + heterocykel ~ 1538 cm_1 UV-spektrum (EtOH,HCl N/10) max. 262 um E: = 291 2-(2-jodoetoxiimino)-2-(2-tritylamino-tiazol-4-yl)-ättiksyra, syn- isomer, använd som utgångssubstans i exempel 1, beskrives i det belgiska patentet 875 217.

Exempel 2: 3-acetoximetyl-7-[ZÉ-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-tiocya- nato-etoxi)-iming]-acetamidq7-cef-3-em-4-karboxylsyra Steg A: 2-(2-tritylamino-tiazol-4-yl)-2-(2-tiocyanato-etoxi-imi- no)-ättiksyra Under 139 timmar omröres vid +15°C under uteslutning av ljus 6,83 g 2-(2-jodoetoxi)-imino-2-(2-tritylamino-tiazol-4-yl)-ättiksyra, syn- isomer, solvatiserad med dikloretan, 7,61 g ammoniumtiocyanat och 35 ml dimetylacetamid. Lösningen kyles i ett is-vattenbad, och 400 ml destillerat vatten och sedan 150 ml mättaa lösning av natrium- klorid tillsättes. Därefter omröres 2 timmar, centrifugeras, tvät- tas med vatten, torkas och man erhåller 4,55 g rå produkt. Efter två omkristallisationer i etylacetat erhålles 3,44 g av den önska- kade produkten. Smältpunkt = 194°C.

Steg B: 3-acetoximetyl-7-[Z2-(2-trietylaminotiazol-4-yl)-2-(2- -tiocyanato-etoxi)-iminq]-acetamidqj-cef-3-em-4-benshyd- rylkarboxylat 1,69 g av den produkt, som erhölls ovan, 0,685 g pyridinjodhydrat, 1,16 g 7-amino-3-acetoxímetyl-cef-3~em-4-benshydr/ylkarboxylat och 1,36 g dicyklohexylkarbodiimid blandas. Omedelbart därefter till- 458 361 sättes 17 ml dimetylformamid, kyles till 16°C under 30 minuter, olösligt material centrifugeras, filtratet försättes med 400 ml etyleter, omröres 5 minuter och får vila 1 timme. Efter dekante- ring tvättas det erhållna gummit med eter, och därefter tillsät- tes 50 ml eter och knådas till fastare form. Därefter centrifu- geras, tvättas med eter, torkas och man erhåller 1,92 g rä pro- dukt, som renas genom kromatografi på silikagel med användning av en blandning av kloroform och acetonitril (91-9) såsom eluerings- medel. Man utvinner 790 mg amorf produkt.

NMR-spektrum (CZDC13) OAC : 2,0 ppm singlett Cëz-S-grupper: 3,17 till 3,65 ppm N-O~CH2 : triplett 4,58 ppm J = 6 Hz Cgz-OAC : 4,65-4,87 ppm och 4,93_5,2 ppm H5 tiazol syn: 6,77 ppm singlett :la-spektrum (CHC13) 1 can = 2156 cm' fiflaktam = 1793 cm'1 _ ester + oAc = 1739-1733 cm'1 amia = 1689 cm'1 UV-spektrum (Et0H HCl N/10) Max. 267 nm El = 209 a 19 540 Steg C: 3-acetoximetyl-7-[ZÉ-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-tiocyana- to-etoxi)iminq]-acetamidq]-cef-3-em-4-karboxylsyra 445 mg av den produkt, som erhölls ovan, och 4,4 ml trifluorättik- syra omröres 3 minuter vid rumstemperatur. 44 ml iskyld isopropyl- eter tillsättes, varefter omröres 5 minuter, centrifugeras, tvät- tas med en blandning av isopropyleter och etyleter (1-1) och där- efter med etyleter. Produkten upplöses i 0,8 ml metanol, lösnin- gen fälles med 8 ml etyleter, omröres 10 minuter, centrifugeras, tvättas med eter, torkas och man erhåller 199 mg produkt med en smältpunkt (sönderfall) av ca 200°C.

NMR-spektrum (C2D3)2SO OAC : 2,03 ppm singlett Cë S-grupper: 3,17 till 3,83 ppm 2 458 361 10 H5 tiazol syn: 6,82 ppm singlett IR-spektrum (nujol) a S-CEN . 2153 cmf1 få-laktam : 1781 CHF1 UV-spektrum (EtOH Cl N/10) Max. 264 nm &18 900 Éxempel 3: 3-acetoximetyl-7-LZ2-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-imino- -hydrazino-metyltio)-etoxi-iminqj-acetamidgj-cef-3-em- -4-karboxylsyra (i form av inre salt) Steg A: 2-(2-tritylamino-tiazol-4-yl)-2-[É-(tritylhydrazino-imino- -metyltio)-etoxi-iminqy-ättiksyra i form av inre salt 7,5 g 2-(2-jodoetoxi)-imino-2-(2-tritylamino-tiazol-4-yl)-ättik- syra, syn-isomer, solvatiserad i dikloretan, 3,5 g N-trityltio- semikarbazid upplöses i 45 ml vattenfri dimetylformamid. Lösnin- gen värmes vid 30-32OC under uteslutning av syre 65 timmar, varef- ter den hälles i 900 ml vatten¿“omröres 10 minuter, 60 ml mättad lösning av natriumklorid tillsättes och efter i timme centrifuge- ras, tvättas med vatten, torkas och man erhåller 18,14 g rå pro- dukt. Man renar 5 g av den senare med kromatografi över silikagel med användning av en blandning av kloroform och metanol (85-15) såsom elueringsmedel, âterupptar substansen i isopropyleter, tor- kar och erhåller 1,44 g produkt med en smältpunkt av ca 200°C. nun-spektrum _(czncl3) H5 tiazol : 5,87 ppm singlett N~O-Cëz : 4,33 ppm tritylväten : 7,18-7,35 ppm rörligt väte : 5,42 ppm IR-spektrum (CHCl3) NH : 3392 cm_1 UV-spektrum (EtOH HCl N/10) Max. 378 mn E: = 180 458 361 11 Steg B: jodhydrat av 3-acetoximetyl-7-[2É-(2-tritylamino-tiazol- -4-yl)~2-(2-tritylhydrazino-imino-metyltio)-etoxi-iminq?- -acetamidQ7-cef-3-em-4-benshydrylkarboxylat Under 20 minuter omröres vid rumstemperatur 513 mg av den produkt, som erhölls ovan, 134 mg pyridinjodhydrat, 268 mg dicyklohexyl- karbodiimid, 227 mg 7-amino-3-acetoximetyl~cef-3-em-4-benshydryl- karboxylat och 3 ml vattenfri dimetylformamid. 10 ml metylenklorid tillsättes, varefter det bildade dicyklohexylurinämnet centrifuge- ras, filtratet koncentreras under sänkt tryck, återstoden omröres under 5 minuter med 40 ml isopropyleter och dekanteras. Det erhåll- na hartset försättes med 40 ml av en blandning av isopropyleter- -etyleter (1-1), krossas, omröres 20 minuter, centrifugeras, tvät- tas med isopropyleter och torkas. Man erhåller 680 mg produkt med en smältpunkt (sönderfall) av 162°C.

IR-spektrum (CHCI3) 1 NH = 3391 cm' c=o = 1782 :m4 Ester och oAc= 1736-1730 cm"1 Aromater : 1594 cm_1, 1576 cm_1; 1496 cm-1 Steg C: 3-acetoximetyl-7-[Z2-(2-amino-tiazol-4-yl)-2-(2-iminohydr- azinometyl-tio)-etoxi-iminQ]-acetamidq]-cef-3-em-4-karb- oxylsyra (i form av inre salt) Under 45 minuter omröres vid SOOC 0,94 g av den produkt, som er- hölls ovan, 9,4 ml myrsyra och 4,7 ml vatten. Därefter kyles till rumstemperatur, centrifugeras och filtratet koncentreras till torr- het. Aterstoden försättes med 9 ml trifluorättiksyra och omröres 4 minuter. Olösligt material centrifugeras, 90 ml isopropyleter sättes till filtratet, varefter omröres 5 minuter, fällningen cent- rifugeras, tvättas med isopropyleter och upptages i minsta möj- liga mängd metanol och utfälles med etyleter. Man erhåller 282 mg rå produkt. 558 mg produkt, framställd enligt ovan, suspenderas i 7 ml vatten, och pyridin tillsättes till pH 6,6. En lätt fäll- ning filtreras, och filtratet koncentreras till torrhet under sänkt tryck. Återstoden försättes med 5 ml etyleter och rives. 458 561 12 Den erhållna fällningen centrifugeras, tvättas med eter och man erhåller 500 mg produkt, som omröres 10 minuter i 5 ml metanol.

Olösligt material centrifugeras, utröres i etyleter till en deg och 96 mg produkt med en smältpunkt (sönderfall) av 210°C erhål- les. Från moderlutarna utvinnes 66 mg identisk produkt.

NMR-spektrum (C2D3)2SO OAC : N-o-cg 2,03 ppm singlett 2 : 4,25 ppm H5 i tiazol : 6,78 ppm singlett UV-spektrum (Et0H-HCl N/10) Max. 262 nm El = 301 5 = 16aoo Tritylsemikarbaziden, använd som utgångssubstans i exemplet har framställts på följande sätt: Snabbt tillsättes under omröring 100 ml dimetylacetamid till 9,11 g tiosemikarbazid och 27,9 g tritylklorid. +15OC och droppvis tillsättes 13 ml trietyl 1 timme vid 15°c, Temperaturen hålles vid amin. Lösningen får stå varefter pH-värdet justeras till ca 7 med tri- etylamin och därefter hälles vatten och is i denna 2 liters bland- ning. Efter omröring under å timme centrifugeras, tvättas med vat- ten, torkas vid 50°C under sänkt tryck och man erhåller 31,1 g pro- dukt med en smältpunkt av 194°C.

Under š timme omröres 29,3 g av den föregående produkten med 90 ml etylacetat, varefter centrifugeras, tvättas med etylacetat och torkas. Man erhåller 25,05 g produkt med en smältpunkt av 208°C.

NMR-spektrum (C DCl3) rörliga väten: 5,08 ppm 6,92 ppm tritylväten : 3 7,33 ppm 6,33 ppm IR-spektrum (CHCI3) =c=NH2 = 3505 cm"1 UV-spektrum (Et0H.HCl N/10) Max. 245,nm E: = 405 458 361 13 Exempel 4; s-acetoximetyl-v-Qâ- (z-amino-tiazol-fryl)-z-aifluoro- metoxi-iminQ]-acetamidq]-cef-3-em-4-karboxylsyra, syn-isomer Steg A: 2-(2-tritylamino-tiazol-4-yl)-2-(diflourometoxi-imino)- -etylacetat, syn-isomer Under 5 minuter omröres 3 g 2-hydroxiimino-2-Q-tnüyLmumrtiazol-4- yl)-etylacetatklorhydrat, syn-isomer, 20 ml 2N natriumhydroxid och 20 ml etanol 1000. Natriumsaltet faller ut. 60 ml dioxan tillsät- tes för att lösa upp det och monoklordifluorometan bubblas igenom blandningen under 30 minuter och kraftig omröring. Därefter till- sättes 20 ml ZN natriumhydroxid, 20 ml etanol 1000 och 60 ml di- oxan och genombubblingen fortsättes ytterligare 30 minuter. Däref- ter tillsättes 6,7 g natriumbikarbonat och omröres 15 minuter vid rumstemperatur. En lätt fällning centrifugeras, och filtratet kon- centreras under sänkt tryck vid en temperatur, som ej överstiger 400C, och tills en sirapskonsistens erhålles. Därefter spädes med kloroform, dekanteras, tvättas en gång med vatten och därefter en gång med en mättad vattenlösning av natriumklorid, torkas, induns- tas till torrhet och kromatograferas på silikagel med användning av bensen som elueringsmedel. Man utvinner 652 mg vitt harts.

NMR-spektrum (C2DCl3) Cë P2 : 5,55-6,75-7,95 ppm H5 tiaaol syn: 6,77 ppm singlett QV-spektrum: (EtOH) Max. 308 nm E1= so 5= 4100 IR-spektrum c=NoR = 1141 mfl CHF2 : 1145 cm_1 - 1117 Cm'š §teg B: 2-(2-tritylamino-tiazol-4-yl)-Z-(difluorometoxiimino)-ät- tiksyra, syn-isomer 51 mg av den produkt, som erhölls ovan, 0,05 ml dioxan, 0,35 ml ' etanol 1000 och 0,1 ml 1N natriumhydroxid blandas. Ett lätt gum- mi bildas, som upplöses med 0,1 ml etanol 1000. Man tillsluter hermetiskt och värmer vid 40°C under 2% timme och låter blandnin- gen stå en natt vid rumstemperatur under kraftig omröring. Den bil- 458 361 14 dade fällningen centrifugeras och tvättas med några droppar av en blandning av dioxan och etanol (1-7), därefter med eter och man erhåller 25 mg natriumsalt, som försättes med 1 ml kloroform, 1 ml vatten och 1N saltsyra till pH 2. Därefter omröres kraftigt, kloroformen dekanteras, den tvättas med vatten, torkas, indunstas till torrhet och man erhåller 16 mg vitt harts. ' NMR-spektrum (C2DCl3) Cg F2 : 5,4 - 6,6 - 7,8 ppm H5 tiaxol syn : 6,72 ppm singlett OH och Nä : 9,33 och 10,25 ppm Steg C: 3-acetoximetyl-7-[[2-(2-tritylamino-tiazol-4-yl)-4-difluoro- metoxi-iminojlacetamidqytcef-3-em-4-t.-butylkarboxylat I ett isbad omröres 820 mg produkt, framställd enligt steg B, 492 mg 3-acetoximetyl-7-amino-cef-3-em-4-t. -butylkarboxylat och 16 ml- kloroform.

Droppvis satsas 2 ml av en kloroformlösning, innehål- lande 309 mg dicyklohexylkarbodiimid. Blandningen får stå 1§ timme vid rumstemperatur och därefter centrifugeras det bildade dicyklo- hexylurinämnet. Filtratet indunstas under sänkt tryck, kromatogra- feras genom silikagel med användning av en blandning av metylen- klorid och etylacetat (94-6) såsom elueringsmedel. Man erhåller 574 mg vitt harts.

NMR-spektrum (C2DCl3) t.-butyl : 1,54 ppm singlett OAC : 2,0 ppm singlett CQFZ : 5,6 - 6,8 - 8,0 ppm H5 tiazol syn: 6,92 ppm singlett UV-spektrum (EtOH HCl N/10) Max. 161 nn E: = 217 Steg D: 3-acetoximetyl-7-{Z2-(2-amino-tiazol-4 -yl)-2-difluoromet- oxi-iminof-acetamido7Äcef-3-em- 4-karboxylsyra, syn~isomer Under 3 minuter vid rumstemperatur omröres 0,32 g av den produkt, som erhölls ovan, en 1,6 ml ren trifluorättiksyra. Blandningen hälles i 16 ml av en iskyld blandning av isopropyleter och etyl- eter (1-1) och omröres 15 minuter. Därefter centrifugeras, tvät- tas med eterblandningen och därefter med ren etyleter och man er~ 458 361 15 håller 130 mg vit produkt med en smältpunkt av ca 176°C (sönder- fall).

NMR-sgektrum (C2D3)2SO à OAC : 2,03 ppm singlett Ä cg F2 = 5,95 - 7,13 8,23 ppm I H5 tiazol syn: 7,05 singlett Uv-sgektrum (EtoH Hcl N/10) Max. 278 nm El = 265 IRrs2ektrum (nujol) /5-laktam : 1777 cm- oAc 1726 cm' -c=NoR . 1031 cm' 1 1 1 o Farmakologisk undersökning av produkterna med formeln I, som kan f framställas med mellanprodukterna enligt uppfinningen.

I - Aktivitet in vitro utspädningsförfarande i vätskemiljö.

En serie rör beredes, i vilka man satsar en och samma mängd ste- rilt näringsmedium. I varje rör fördelas ökande mängder av den produkt, som skall undersökas, och därefter ympas varje rör med en bakteriestam. Efter inkubering 24 timmar eller 48 timmar i ugn vid 37°C bedömes inhiberingen genom den ökande koncentratio- nen med genomlysning, vilket medger bestämning av de minsta inhi- berande koncentrationerna (M.I.C.) uttryckta i mikrogram/ml.

Följande resultat har erhållits: 458 361 16 Produkter enligt exempel. 1 Stannar H.I.C. i yg/ml 2H tim. #8 tim. taphylococcus aureus ATCC 6 538 Pen-känslig Staphylococcus aureus UC 1 128 Pen-resístent Staphylococcus aureus exp.n°5H 146 Streptococcus pyogenes A 561 Bacíllus subtilís ATCC 8 633 Escherichia Coli ATCC 9 637 tetracyklínkïnslig Zscheríchia Coli ATCC 11 303 tetracyklínresistent 0,05 0,05 Éscheríchia Coli Exp. TO 6 0,5 0,5 ,B 20 Éscheríchia Coli R S5 123 3 resistent mot Centamycina, Tobra- nycíne Klebsiella pneumoniae Exp. 52 1k5 Klebsíella pneumoníae 2 536 Gentanycínrestistent 1 Proteus mlrabilís (indol-) A 235 0 1 Salmonella typhímurium 420 9,5 Enterobacter cloacae 591 2 Providencía Eu H28 2 ?seudo:onas 3951 resístent mot Ccntamycine tetracyklin 20 = 2 532 Gentamycín- errati_ es; tert _ 0,5 0,5 m 3 Produkt enligt exempel 2 17 458 361 Stammar M.I.C. i P3/ml 2U tim.

H8 tim.

Pen-känslig Pen-resistent tetracyklínkänslig Gentamycínresistent Providencía Du US Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Irscherichia Coli ATCC 11 tetracyklinresistent Escherichia Coli Exp. TO UC 1 128 Exp.š Streptococcus pyogenes A 561 Bacíllus subtilis ATCC 6 833 Escherichia Colí ATCC 9 637 Klebsiella pneumoníae Exp.52 1H5 Klebsíella pneumoníae 2 536 Proteus mirabílís (índól-) Salmonella typhimuriun H20 Serratía 2 532 Gentamycšnresístent 'J .a .B 200 Escherchia Coli R 55 123 D resistent mot Gentamycín, Tobramycin 458 361 18 Produkt enligt exempel 3 Stannar ¥.I.C. i pg/nl ZR tíï. M8 tim. q..__=....1 ,J,+ococcus aureus ATCC 6 533 xansllv - aureus HC 1 12° aureus exn Yofifl 1%* 1 -L .kïnslíg Išcherihia Colí ATC 11 333 fctracyklínresistent Üscheríchía Coli šxo. TÖG ^ ¿ Ézchcríchía Colí R 55 123 D rusistent mot Gentamycln, Tobramycin Klebsiella pneumoníae Exp. 52 1ä5 Ylebsíella pneumoníae 538 Senïamycinresístent Proteus mírabílís (índol-) I 235 fi¿_wonsl1e ïyphízuríufi H29 -rnw-.ff- , n \ »_ J euïamycínresístent Ix) UI L f) PJ ...nia-IN I-J ...t _n-\CJUI V NJ h! IQ 458 19 Produkt enligt exempel 4_ 361 Stafincr fl.I.C i yg/ml 21% Éim. 74-? fin.

Staphylococcus aureus ATCC 6 533 ?en~kånslig 1 1 Staphylococcus aureus UC 1 123 ?cn~resistent 1 2 - _ o ntapnylococcus aureus exp.n 50 105 1 2 °tococcus pyogenes Å S51 0,05 0,05 Strentococcus faecalís 5 032 5 - Zacillus subtilís ATCC 5 G33 1 S Ischeríchiu Coli ATC 9 537 tetracyklínkënslíj 0,5 1 Escheríchía Colí ÅTCC 11 303 tetPacyP1inresistent 0,05 , Éschzríchia Colí Uxp. TO,5B5 ,. , Escheríchia Colí R 55 123 D resistent mot Gentanycin, Tobramycln 0,2 0,2 Klebsiella pneumoniae Exp. 52 1u5 0,05 0,05 Klebsiella pncumoníae 2 536 Ûentanycinresístent 0,5 0:5 Proteus mírabílis (indol-) A 235 0,05 0,05 Salmonella typhimurium #20 3,5 0,5 Providencia Du HS 2 2 Serratia 2 532 Gentamycínresístent 0,5 0,5 458 361 20 II - Aktivitet in vivo A) Experimentell infektion med Escherichia Coli TO. B ¿6 6 Verkan av produkten enligt exempel 1 på en experimentell infek- tion av Escherichia Coli har studerats på mus. Grupper om 10 hanmöss med en medelvikt av 21,5 g infekterades med intraperito- neal injektion om 0,5 ml av en 22 timmars odling i näringsbul- jong av stammen Escherichia Coli TO26B6 från Institut Pasteur, spädd till en femtedel med destillerat vatten. 1,5 och 24 timmar efter injektionen administrerades genom subku- tan injektion en bestämd mängd av produkten.

Dödligheten observerades under 8 dagar. Följande resultat har er- hållits: manlighet efter antal timmar Överleïande möss pa Dos 7 7,25 21,50 24 28 36 8:e dagen Kontroller 1 1 8 0/10 0,1 mg 1 1 1 1 6/10 0,75 mg 10/10 B) Experimentell infektion med Proteus Mirabilis Man har undersökt inverkan av produkten enligt exempel 1 på en ex- perimentell infektion av Proteus Mirabilis på mus.

Grupper om 10 möss med en medelvikt av 21,5 g infekterades genom intraperitoneal injektion om 0,5 ml av en 24 timmars odling i oxoidbuljong av stammen Proteus Mirabilis A 235 , spädd till en tiondedel. 1,5 och 24 timmar efter injektionen administreras genom kutan in- jektion en bestämd mängd av produkten.

Följande resultat har erhållits: 458 361 21 Dödlighet efter antal timmar N N Overlevande moss Dos 21,25 33,75 25 31 på 8:e dagen Kontroller 9 1 0/10 0,025 mg 1 1 1 7/10 0,05 mg 10/10 0,1 mg 10/10 0,25 mg 10/10 0,5 mg 10/10 C) Experimentell infektion av Proteus Morganii A 236 Verkan av föreningen enligt exempel 1 på en experimentell infek- tion av Proteus Morganii A 236 på mus har undersökts. Grupper om 10 möss med en medelvikt av 20,5 mg infekterades genom intrape- ritoneal injektion om 0,5 ml av en odling i miljö vid pH 7, spädd till en tiondedel. 1,5 och 24 timmar efter injektionen administreras genom subkutan injektion en bestämd mängd av produkten.

Följande resultat har erhållits: Dödlighet efter antal timmar överlevande möss Dos 4 6 6,25 21,17 45,34 _på 8:e dagen Kontroller 10 _ 0/10 0,05 mg 1 2 1 3 1 2/10 0,1 mg 10/10 0,25 mg 10/10 0,5 mg 10/10 D) Experimentell infektion av Klebsiella Pneumoniae Inverkan av produkten enligt exempel 1 på en experimentell infek- tion av Klebsiella Pneumoniae nr. 52 145 på mus har undersökts.

Grupper om 10 möss med en medelvikt av 21 g infekterades genom int~ raperitoneal injektion om 0,5 ml av en odling vid pH 6, spädd till 1/1500. 458 361 22 1,5 och 24 timmar efter injektionen administrerades genom sub- kutan injektion en bestämd mängd av produkten.

Följande resultat har erhållits: Dödlighet efter f i 1 1 1 f åxzlåäasï: Dos 30 45,50 45,75 49 70 4 5 6 8 dagen Kontroller 1 6 1 1 1 0/10 0,1 mg 1 1 1 1 6/10 0,25 mg 1 1 8/10 o, 5 mg 1 9/10 1 mg 10/10 1,5 mg 10/10

Claims (7)

458 361 23 Patentkrav

1. Föreningar med den allmänna formeln Vd: s \ __ Vd vari R2 betecknar en väteatom eller en skyddsgrupp för amino- gruppen och Rd betecknar - en grupp CHF2 eller - en grupp -(CH2)n-S-RC, vari n betecknar ett heltal från 1 till 4 och Rc betecknar en av grupperna NH NH-NH-R /_ C/ 4 -C , - eller nitril, \NH \ 2 NH R4 betecknar en skyddsgrupp för aminogruppen, syn-isomer.

2. Föreningar enligt krav 1 med den allmänna formeln V syn-isomer, vari R2 har den i krav 1 angivna betydelsen.

3. Föreningar enligt krav 1 med den allmänna formeln V' 458 361 Vi \ O* ~ _ _ (CHI-Jn 5 RC syn-isomer, vari n, R2 och Rc har den i krav 1 angivna betydelsen.

4. Föreningar enligt krav 1 med de allmänna formlerna V eller V' -såsom de definieras i något av kraven 2 eller 3, vari grupperna Rz och R4 väljs från den grupp, som utgöres av trityl, kloroace- tyl-, t.-pentyloxikarbonyl-,t.-butyloxikarbonyl-och bensyloxikar- bonyl-grupperna

5. Föreningar enligt krav 1 med de allmänna formlerna V eller V' såsom de definieras i något av kraven 2 eller 3, vari gruppen R2 betecknar en väteatom.

6. Föreningar enligt krav 1 med den allmänna formeln V såsom de definieras i krav 2,vari R2 betecknar en väteatom eller en trityl- grLlpp .

7. Sätt att framställa föreningarna med formeln Vd _ vd Y cozzi vari R2 betecknar en väteatom eller en skyddsgrupp för aminogrup- pen och Rd betecknar - en grupp CHF2 eller - en grupp -(CH2)n-S-RC, vari n betecknar ett heltal från 1 till 4 och RC betecknar en av grupperna /NH /VH-NH-R4 / -c \NH2 NH eller nitril, 458 361 zs R4 betecknar en skyddsgrupp för aminogruppen, syn-isomer, k ä n n e t e c k n a t av att man behandlar en produkt med formeln IV CO H IV vari R2 betecknar en väteatom eller en skyddsgrupp för aminogrup- Pen, 0Ch R3 betecknar en väteatom eller R'3, varvid R'3 betecknar en gruPP -(CH2)n-Hal, vari Hal betecknar en halogenatom och n betecknar ett heltal från 1 till 4 - antingen när R3 betecknar en väteatom med en produkt med for- meln Hal1CHF2, vari Hal1 betecknar en klor- eller bromatom för att erhålla en produkt med formeln \o'-caF2 vari R2 har den tidigare betydelsen. - eller när R3 betecknar R'3 med tiokarbamid eller med en pro- dukt med formeln NH-NH-R4 S = C \NH2 vari R4 betecknar en skyddsgrupp för aminogruppen, eller med en produkt med formeln NEC-S-R5, vari RS betecknar en ammoniumgrupp eller en alkalimetallatom för att erhålla en produkt med formeln V! 458 361 26 I/ïíïz N I \*0-(cH2)n-s-ut vari R2 har den föregående betydelsen och Rc betecknar grupperna NH -NH-NH- R / -c - -c \ NHZ \ NH 4 eller nitril.