SE453507B - 7-amino-3-(1-karboxi-(legre alkyl)-tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyror till anvendning som mellanprodukter for framstellning av motsvarande 7-acylamido-cefalosporiner - Google Patents

7-amino-3-(1-karboxi-(legre alkyl)-tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyror till anvendning som mellanprodukter for framstellning av motsvarande 7-acylamido-cefalosporiner

Info

Publication number
SE453507B
SE453507B SE8305539A SE8305539A SE453507B SE 453507 B SE453507 B SE 453507B SE 8305539 A SE8305539 A SE 8305539A SE 8305539 A SE8305539 A SE 8305539A SE 453507 B SE453507 B SE 453507B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
solution
added
acid
cephem
mixture
Prior art date
Application number
SE8305539A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8305539L (sv
SE8305539D0 (sv
Inventor
W J Gottstein
M A Kaplan
A P Granatek
Original Assignee
Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Co filed Critical Bristol Myers Co
Publication of SE8305539L publication Critical patent/SE8305539L/sv
Publication of SE8305539D0 publication Critical patent/SE8305539D0/sv
Publication of SE453507B publication Critical patent/SE453507B/sv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D257/04—Five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C265/00—Derivatives of isocyanic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/06—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D333/24—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

453 507 vari n har ovan angivna betydelse, eller ett salt eller en pivaloyloximetyl-, acetoximetyl-, metoximetyl-, acetonyl-, fenacyl-, p-nitrobensyl-, fi,;åfi¥trikloretyl~, 3~ftalidyl- eller 5-indanylester därav, med en organisk monokarboxylsyraklorid eller en funktionell ekvivalent därav såsom acyleringsmedel.
Dylika funktionella ekvivalenter innefattar motsvarande syraanhydrider, innefattande blandanhydrider och speciellt ~de blandanhydrider som framställes utgående från starkare syror såsom de lägre alifatiska monoestrarna av kolsyra, av alkyl- och arylsulfonsyror och av mera steriskt hind- rade syror såsom difenylättiksyra. En speciellt användbar anhydrid är en N-karboxianhydrid (även benämnd Leuch's an- hydrid; se amerikanska patentskrifterna 3 080 356 och 3 206 455), innefattande men icke begränsade till D-mandel- syrakarboxianhydrid (se amerikanska patentskriften 3 167 549) och motsvarande substituerade D-mandelsyrakar- boxianhydrid. Dessutom kan man använda en syraazid eller en aktiv ester eller tioester (t.ex. med p-nitrofenyl, 2,4-dínitrofenol, tiofenol eller tioättiksyra) eller också kan den fria syran själv kopplas med förening II efter det att den fria syran först har omsatts med N,N'- dimetylkloroformiminiumklorid (se brittiska patentskrif- ten 1 008 170 och Novak och Weichte: “Experientia XXI" Q (1965) 360) eller genom användning av enzymer eller av en N,N'-karbonyldiimidazol eller en N,N'-karbonylditriazol (se sydafrikanska patentskriften 63/2684) eller ett karbo- diimidreagens [speciellt N,N'-dicyklohexylkarbodiimid, N,N'-diisopropylkarbodíimid eller N-cyklohexyl-N'-(2-mor- folinoetyl)karbodiimid; se även Sheehan och Hess: “J. Amer.
Chem. Soc." 11 (1955) 19617, ett alkylylaminreagens [še R. Buijle och H.G. Viehe: "Angew. Chem. International Edition" 5 (1964) 5827, ett isoxasoliumsaltreagens [še R.B. Woodward, R.A. Olofson och H. Mayer: “J. Amer. Chem.
Soc." gå (1961) l0lQ7, ett keteniminreagens [se C.L. 453 507 Stevens och M.F. Munk: “J. Amer. Chem. Soc." §Q (1958) 40657, hexaklorcyklotrífosfattriazin, hexabromcyklotrifos- fattriazín (se amerikanska patentskriften 3 651 050), di- fenylfosforylazid LDPPA; “J. Amer. Chem. Soc.“ gg (1972) 6203-62057, dietylfosforylcyanid ÅÖEPC; “Tetrahedron Letters" No. 18 (1973) 1595-l59&] eller difenylfosfit Dwetrahedron Letters” no. 49 (1972) 5o47-sosg7. nn annan ekvivalent av syrakloriden är en motsvarande azolid, dvs. en amid av motsvarande syra, vars amidkväve utgör del av den kvasiaromatisk, femledad ring innehållande minst tvà kväveatomer, dvs. imidazol, pyrazol, tríazolerna, bensimi- dazol, bensotriazol och substituerade derivat därav. Så- som ett exempel pà det allmänna förfaringssättet för fram- ställning av en azolid kan nämnas följande: N,N'-karbonyl- diimidazol omsättes med en karboxylsyra i ekvimolära pro- portioner vid rumstemperatur i tetrahydrofuran, kloroform, dimetylformamid eller ett liknande inert lösningsmedel för bildning av karboxylsyraimidazoliden i praktiskt taget kvantitativt utbyte under frigörande av koldioxid och 1 mol imidazol. Dikarboxylsyror ger diimidazolíd. Bi- produkten ímidazol utfaller och kan avskiljas och imidazo- liden isoleras, men detta är icke kritiskt. Sätten att ut- föra dessa reaktioner för framställning av en cefalosporin och de metoder som användes för isolering av den på så sätt framställda cefalosporinen är väl kända inom tekniken.
Ovan har nämnts användningen av enzymer för koppling av den fria syran med förening II. Inom ramen för dylika för- faranden innefattas användningen av en ester, t.ex. metyl- estern, av denna fria syra med enzymer, som alstras av olika mikroorganismer, t.ex. de som beskríves av T. Taka- hashi et al.; "J. Amer. Chem. Soc." 4 (ll) (1972) 4035- 4037 och av T. Nara et al.; "J. Antibiotics" (Japan) gg (Q) (1971), 321-323 och i den amerikanska patentskriften 3 682 777. 453 507 För koppling av den organiska karboxylsyran, innefattande men icke begränsad till en substituerad eller osubstitu- erad D-mandelsyra (med eller utan en skyddsgrupp på mf hydroxylgruppen), med förening II (eller ett salt eller företrädesvis en lätthydrolyserad ester därav) är det även lämpligt och effektivt att såsom kopplingsmedel ut- nyttja fosfonitrilkloridtrimer ("J. Org. Chem." 33 (7) (1968) 2979-81) eller N-etoxí-l,2-díhydrokinolin (EEDQ) såsom beskrives i “J. Amer. Chem. Soc." gg (1968) 823-824 och 1652-1653 och i amerikanska patentskriften 3 455 929.
Reaktionen utföres företrädesvid vid 30-35° i bensen, etanol eller tetrahydrofuran under användning av ungefär- ligen ekvimolära mängder av samtliga tre reagens, följt av konventionell isolering och avlägsnande medelst kon- ventionella metoder av eventuellt närvarande blockerings- grupper.
Då den organiska karboxylsyran innehåller en funktionell grupp såsom amino eller hydroxyl är det ofta önskvärt att först blockera (eller skydda) amino- eller hydroxigruppen, därefter utföra kopplingsreaktionen och slutligen avlägsna skyddsgruppen kemiskt från den resulterande föreningen, dvs. underkasta den resulterande föreningen en eliminerings- reaktion med avseende på skyddsgruppen.
Man kan medelst ovan angivna acyleringsförfarande framställa antibakteriella medel under användning av de organiska mono- karboxylsyror eller deras syraklorider eller andra ekviva- lenter därav som tidigare har använts för acylering av 7- aminopenicillansyra. Hänvisning sker därvid till de ameri- kanska patentskrifterna 2,94l,995, 2,95l,839, 2,985,648, 2,996,501, 3,007,920, 3,025,290, 3,028,379, 3,035,047, 3,040,033, 3,l20,5l2, 3,04l,332, 3,04l,333, 3,043,83l, 3,053,83l, 3,07l,575, 3,07l,576, 3,079,305, 3,079,306, 3,080,356, 3,Q82,204, 3,093,547, 3,093,633, 3,ll6,285, 3,l17,1l9, 3,ll8,877, 3,l20,513, 3,120,5l4, 3,l27,394, 453 507 3,l40,282, 3,040,032, 3,l42,673, 3,147,247, 3,l74,964, 3,180,863, 3,198,804, 3,202,653, 3,202,654, 3,202,655, 3,210,337, 3,157,639, 3,l34,767, 3,132,l36, de brittiska patentskrifterna 874,414, 874,416, 876,5l6, 876,662, 877,120, 877,323, 877,531, 878,233, 880,042, 880,400, 882,335, 888,110, 888,552, 889,066, 889,069, 889,070, 889,168, 889,231, 890,201, 891,174, 891,279, 891,586, 891,777, 89l,938, 893,5l8, 894,247, 894,457, 894,460, 896,072, 899,199, 900,666, 902,703, 903,785, 904,576, 905,778, 906,383, 908,787, 914,419, 916,097, 9l6,204, 9l6,205, 916,488, 9l8,169, 920,176, 920,177, 920,300, 92l,513, 922,278, 924,037, 925,281, 93l,567, 932,644, 938,066, 938,321, 939,708, 940,488, 943,608, 944,4l7, till talrika belgiska patentskrifter, t.ex. 593,222, 595,171, 597,857, 602,494, 603,703, 609,039, 616,419, 617,18? och till de sydafrikanska patentskrifterna 60/2882; 60/3057; 60/3748; 61/1649; R61/2751; 62/54; 62/4920; 63/1612 och 63/2423.
De nya och värdefulla mellanprodukterna med formeln S n / \ N-- N HEN-ÉH-'ÉIH çHÉ n J! . - c-CH ~S-c 0/1 \C% 2 \N/ n | i åoofl (°“2)nc°°” vari n är 2 eller 3 kan framställas genom att man omsätter 7-aminocefalosporansyra eller ett salt eller lätthydrolyserad ester därav med en förening med formeln <åfi2)pcoon 453 507 varå n är'2 eller 3 och som även i det följande benämnes HSR .
De föredragna estrarna enligt föreliggande uppfinning är pivaloyloximetyl-, acetoximetyl-, metoximetyl-, acetonyl- och fenacylestrarna. Samtliga är användbara mellanproduk- ter vid framställning av en cefalosporin med en fri kar- boxylgrupp.
Ett utmärkt förfarande för framställning av dessa fem est- rar beskrives i den amerikanska patentskriften 3 284 451, vid vilket natriumcefalotin förestras genom omsättning med motsvarande aktiva klor- eller bromförening (t.ex. fenacyl- bromid, kloraceton, klormetyleter, pivaloyloximetylklorid (även benämnd klormetylpivalat) och acetoximetylklorid) och därefter tienylättiksyrakedjan avlägsnas enzymatiskt såsom beskrives i nyssnämnda patentskrift eller kemisk så- som beskrives i amerikanska patentskriften 3 575 970 och i "Journal of Antibiotícs" XXIV (ll) (1971) 767-773. Vid ett annat bra förfarande omsättes trietylaminsaltet av 7- aminocefalosporansyra direkt med den aktiva halogenföre- ningen, såsom beskrives i brittiska patentskriften 1 229 453. Dessa estrar av 7-aminocefalosporansyra omsättes där- efter med nukleofilen HSR pà samma sätt som beskrivits ovan för 7-aminocefalosporansyra själv.
Den 3-tiolerade estern av 7-aminocefalosporansyra kopplas därefter med den organiska karboxylsyran, t.ex. D-(-)-2- fenylglycin, såsom beskrivits ovan. Före eller efter avlägsnande av eventuella blockeringsgrupper, t.ex. på en amino- eller hydroxigrupp i 7-sidokedjan, omvandlas estern av den på så sätt erhållna cefalosporínen om den inte användes som sådan, till motsvarande fria syra inne- fattande dess zwitterjon (och om så önskas, ett salt där- av) genom avlägsnande av förestringsgruppen såsom genom hydrolys i vattenlösning eller enzymatisk hydrolys (såsom 453 507 med humant eller animalt serum) eller genom sur eller al- kalisk hydrolys eller genom behandling med natriumtiopen- oxid såsom beskrives i amerikanska patentskriften 3 284 451 och av Sheehan et al., "J. Org. Chem.' 29 (7) (1964) 2006-2008.
Vid en annan alternativ syntes framställes den 3-tiolerade 7-aminocefalosporansyran såsom beskrivits ovan och acyle- ras därefter vid 7-aminogruppen och förestras slutligen, t.ex. genom omsättning av en lämplig alkohol med den fram- ställda syrakloriden, såsom genom omsättning av den slut- liga cefalosporinen med tionylklorid eller genom något annat i huvudsak surt förestringsförfarande.
Uppfínníngen àskådliggöres närmare medelst följande exempel, vari temperaturangivelserna avser Celsiusgrader.
Framställning av utdánqsmaterial A. l-karboximetvl-5-merkaptotetrazol | CH2COOH a) Omkristallisation av 1-metvl-5-merkaptotetrazol Metodbeskrivning: l. 110 g l-metyl-5-merkaptotetrazol uppslammas i 350 ml kokande kloroform. Man erhåller en praktiskt taget full- ständig lösning. 2. Den varma lösningen (50-60°) filtreras snabbt i vakuum genom en uppvärmd Büchner-tratt (ll cm SS No. 604 papper) innehållande 6-8 mm packat filterhjälpmedel ("Supercol").
Filterdynan tvättas med 50 ml kloroform med en temperatur av 50-60°, som sättes till filtratet. 453 507 3. Filtratet kyles till ca 0-6°och1á1les vid 0-6° under 2 timmar. De bildade kristallerna tillvaratages genom filtrering vid O-6° och tvättas med 60 ml kloroform med temperaturen 0-6°, som sättes till filtratet. Kristallerna (fraktion A) lufttorkas vid 37-45° under 18 timmar. 4. Filtratet koncentreras på en roterande vakuumindunstare (badtemperatur 60°) till ca halva volymen. Den erhållna uppslamningen kyles till 0-6” och hàlles vid 0-6” under 2 timmar. Kristallerna tillvaratages genom filtrering vid 0-6° och tvättas med 40 ml kloroform med temperaturen 0-6°, som sättes till filtratet. Kristallerna (fraktion B) luft- torkas vid 37-45° under 18 timmar. Kristallfraktionerna A och B sammanföres för erhållande av ett ungefärligen 65%- igt utbyte.
. Filtratet av fraktion B i steg 4 kan upparbetas två gånger såsom beskrives i steg 4 för erhållande av ytterligare 15 % material. b) Framställninq av di-natriumsaltet av 1-karboximetvl-5- -merkaptotetrazol Metodbeskrivning: 1. 500 ml i huvudsak torr och ren tetrahydrofuran i en 2- liters trehalsad kolv med omrörare kyles i ett salt- aceton-isbad till ca -10°. Torr kvävgas blàses på vätske- ytan. 2. 500 ml l5,06%-igt (1,6 N) butyllitium i hexan (Foote Mineral Co.) sättes under en tidsrymd av 10 minuter under torr kvävgas och omröríng till tetrahydrofuranen. Den prak- tiskt taget fullständiga lösningen kyles till -5° - -10°. 3. 46,4 g l-metyl-5-merkaptotetrazol (omkristalliserad i enlighet med ovan) upplöses i 200 ml i huvudsak ren och 453 507 torr tetrahydrofuran. Lösningen filtreras om den är grum- lig och kyles därefter till 5-10°. 4. Den kylda lösningen från steg 3 sättes under 10 minuter under omröring och under torr kvävgas till butyllitíumlös- ningen. Temperaturen bör hållas mellan -5° till högst 10°.
Fällningar kan förekomma.
. Blandningen omröres under torr kvävgas och vid 0-l0° under en halv timme. 6. Vattenfri koldíoxidgas får snabbt bubbla igenom lös- ningen under kraftig omröring under 15-30 minuter vid ungefärligen omgivningens temperatur (0-10°) och vid en temperatur av högst 20°. 7. Det vita precipitat som bildas tillvaratas lämpligen genom filtrering inom ett område med låg fuktighet. Pre- cipitatet tvättas med ca 75 ml tetrahydrofuran. 8. Precipitatet upplöses i 250 ml vatten (pH 8,5-9,5).
Ett andra skikt av tetrahydrofuran kan vara närvarande.
Detta kan avlägsnas i en roterande vakuumindunstare (bad- temperatur 50°). 9. Vattenlösningen inställes på pH 1,6-2,0 med koncentre- rad klorvätesyra.
. Den sura vattenlösningen extraheras 2 gånger med 250 ml portioner av etylacetat. Varje extrakt om 250 ml etyl- acetat återextraheras med 100 ml portioner vatten. Vatten- extrakten kasseras. Etylacetatextrakten (som är befriade från eventuellt närvarande vatten) filtreras och samman- föres. 453 507 ll. De kombinerade etylacetatextrakten koncentreras till torrhet på en roterande vakuumíndunstare (badtemperatur 60°). 12. Kristallerna i kolven kokas med 300 ml kloroform under ca 2 minuter. Den varma uppslamningen (50-60°) vakuumfiltreras genom en uppvärm Büchner-tratt (ll cm SS 604 papper). Kristallerna tvättas med ca 75 ml kloroform med temperaturen 50°. Krístallerna lufttorkas vid rums- temperatur under ca 3 timmar och överföres därefter till en storlek av ca 0,07-0,15 mm. 13. Kristallerna med storlek 0,07-0,15 mm behandlas med kokande kloroform exakt pà det sätt som beskrivits i steg 12 (den varma kloroformen avlägsnas större delen av orea- gerad 1-metyl-5-merkaptotetrazol). Utbyte ca 45-50 g kristallin l-karboxímetyl-5-merkaptotetrazol. Dessa kristaller kan innehålla 0,02-0,05 mol l-metyl-5-merkapto- tetrazol. 14. Kristallerna från steg 13 uppslammas med 250 ml etyl- eter vid rumstemperatur under 3-S minuter. Blandningen filtreras. Det olösliga materialet (0,5-5%) kan vara en kontaminerande symmetrisk merkaptotetrazolketon med följande antagna struktur: _ ' I | N\\C/N cna-c-cnz -nkc//N I SH šfl Varning: Denna förening exploderar vid ca 205-210°. 453 507 11 . Eterfiltratet från steg 14 indunstas till torrhet pà en roterande vakuumindunstare (badtemperatur 50°).
Ca 42-48 g kristallint 1-karboxímetyl-5-merkaptotetrazol innehållande ca 0,01-0,05 mol l-metyl-5-merkaptotetrazol utvínnes. 16. Kristallerna upplöses i 420 ml absolut etanol (ca 100 mg/ml). Lösningen uppvärmes till 50-60°. 17. Till den varma lösningen från steg 16 sättas 310 ml av en 41%-ig lösning av natrium-2-etylhexanoat (SEB) i isopropanol under mycket kraftig omröring under en tids- rymd av 10 minuter. Ett kristallint precipitat bildas.
Blandningen uppslammas 20 minuter vid 50-60°. 18. Blandningen filtreras varm (50-60°) genom en uppvärmd Büchner-tratt (ll cm SS No. 604 papper). Kristallerna tvättas med 75 ml etanol med temperaturen 50°. 19. De etanolfuktiga kristallerna från steg 18 uppslammas i 200-300 ml etanol. Uppslamningen får passera en sikt med maskvidden 0,074 mm. Uppslamningen uppvärmes till 50-60° under 5 minuter och under kraftig omröring (oreagerad natrium-1-metyl-5-merkaptotetrazol är synnerligen löslig i varm etanol).
. Kristallerna tillvaratages vid 50-60° på ett ll cm SS No. 604 papper i en uppvärmd Büchner-tratt. Krístallerna tvättas med 75-100 ml etanol och vakuumtorkas 24-48 timmar vid 50-60°. Utbyte 40-48 g av dinatrium-l- karboximetyl-5-merkaptotetrazol (befriad från l-metyl-5- merkaptotetrazol sàsom framgår av NMR-spektrum).
B. 1-karboxietvltetrazol-5-tiol_ -N---ä .Si i N/ (cfi2)¿-cozn n-u (41 453 507 12 a) 2-karboetoxietylisocyanat /d-alaninetylester-hydroklorid (93,6 g), trietylamin (123,5 g) och metylenklorid (400 ml) sammanblandades och kyldes till -10°. xolalsulfla (4s,s g) upplagt l lso ml kloroform sattes till denna lösning under en tidsrymd av två timmar medan temperaturen hölls vid -10°. Efter full- bordad tillsats fick temperaturen stiga till 10° under ca minuter. Lösningen kyldes ånyo till -10° och 66,8 g etylklorformiat i 60 ml kloroform tillsattes droppvis under en tidsperiod av 40 minuter under omröring. Tempera- turen fick stiga till rumstemperatur under 30 minuter och lösningen kyldes ånyo till 0°. Ytterligare 61,6 g trietyl- amin tillsattes vid 0° och därefter omrördes lösningen vid rumstemperatur under 3 timmar.
Blandningen behandlades med vatten och den organiska fasen tillvaratogs och tvättades med 2 x 250 ml 2N HCl, 2 x 250 ml NaHCO och 2 x 250 ml vatten. Den organiska fasen torkades över Na S0 och lösningsmedlet avlägsnades i vakuum för erhållande av 93,7 g av en olja, som befanns vara den önskade produkten. IR- och NMR-spektra var i överensstämmelse med strukturen. b) 1-karboxietvltetrazol-5-tiol Natriumazid (29,7 g) upplöstes i 400 ml vatten och upp- värmdes till 60° i kvâveatmosfär. 2-karboetoxietyliso- cyanat (46,9 g), upplöst i 50 ml Skellysolve B (i huvud- sak n-hexan), sattes till den uppvärmda natriumazidlös- ningen. Lösningen omrördes ca 150 minuter vid ca 70-72° och kyldes därefter till 30° på isbad. En 50%-ig natriumhydroxidlösning tillsattes till dess pH blev 12.
Blandningen upphettades 40 minuter vid 70° och kyldes till l5° på isbad. pH inställdes på 2 under användning av koncentrerad HCl och lösningen extraherades därefter med 453 507 13 etylacetat (4 x 150 ml). Etylacetatextrakten tvättades med vatten och torkades därefter över natriumsulfat. Lös- ningsmedlet avdrevs i vakuum och produkten tillvaratogs såsom kristaller ur metylenklorid i en mängd av 19,5 g.
Exemgel 1 7-amíno-3-(l-karboximetvltetrazol-5-vl-tiometvl)-3-cefem- -4-karboxylsyra H2N N/"w . + S o ll ' /-cn -o-'É-cn N S/-fn -cnzcozlea 04 _ 2 5 a - co2n _ S.
N __í . N H2 I \i ä, šï __. ' / _ _ o// \|/\CH2 S CHQCOQH CO2H l. I en trehalsad kolv försedd med omrörare, temperatur- regulator, termometer och kväveinloppsrör införes 18 g (0,066 mol) 7-aminocefalosporansyra och 300 ml av en 0,1 M fosfatbuffert med pH 6,4 (20,7 g natriumfosfat, enbasiskt innehållande ett kristallvatten, +8,5 g natriumfosfat, 2-basiskt och vattenfritt, q.s. till 2 liter). 2. Under omröring av den i steg 1 beskrivna blandningen utsättes 1,5 g natriumbisulfit och 16 g (0,078 mol) l~kar- boximety1-5-merkaptotetrazol~dinatrium. 3. Under fortsatt omröring får kväve bubbla genom bland- ningen under 10 minuter. 453 507 14 4. Under fortsatt omröring och genomströmníng av kväve uppvärmes uppslamníngen 20 minuter vid 56°. Under denna tid tillsättes 6,5 g natriumbikarbonat i små portioner.
. Under fortsatt omröring och kvävegenomströmning upp- rätthàlles lösningens temperatur 4 timmar vid 56°. pH bör ligga mellan 6,2 och 6,6. 6. Reaktionsblandningen kyles i isbad till 5°. 7. 50 ml av en 1:1-lösning av fosforsyra och vatten sättes till blandningen eller koncentrerad HCl till ett pH av 2,0-3,0. 8. Produkten tillvaratages genom filtrering. Filterkakan tvättas med 20 ml kallt vatten, följt av 200 ml kall metanol. 9. Det fasta materialet lufttorkas till konstant vikt.
(En typisk sats innefattar 14,5 g produkt). Denna produkt kan variera i färgen från gul till mörk brun.
. Produkten får passera en sikt av rostfritt stål med maskvidden 0,074 mm. ll. 10 g av det erhållna pulvret suspenderas i 200 ml n-propanol under kraftig omröring. 12. 2,0 ml koncentrerad klorvätesyra tillsättes och bland- ningen omröres kraftigt 0,5 timmar vid rumstemperatur. 13. Uppslamningen filtreras. Det bruna fasta materialet tvättas med 20 ml n-propanol och tvättvätskan sättes till filtratet (filterkakan sparas för eventuell utvinning av ytterligare produkt). 453 507 14. 1,5 g träkol (“Darco G-60") sättes till n-propanol~ filtratet fràn steg 13. Det hela uppslammas 0,5 timmar.
Kolet avlägsnas genom filtrering. Kolet tvättas med 20 ml n-propanol och tvättvätskan sättes till filtratet.
. Under kraftig omröring sättes trietylamín till n-pro- panolfiltratet till ett skenbart pH av 3,0. Kristaller bildas därvid. Dessa uppslammas under 10 minuter. -16. De vita kristallerna tillvaratages genom filtrering och tvättas med 30 ml n-propanol och 50 ml metanol och vakuumtorkas 24 timmar vid 40°. Utbyte 4-8 g 7-amino-3- -(l-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxyl- syra. 17. Alternativt förfarande för rening av 7-amino-3-(l- -karboxylmetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxyl- syra sker på följande sätt: a) 10 g av produkten med partikelstorleken 0,074 mm (frán steg 10) uppslammas i 75 ml l N klorvätesyra vid rumstem- peratur under 10-15 minuter. Filtrering sker för avlägs- nande av mörkbrunt fast material. b) 2,5 g träkol ("Darco G-60") tillsättes och det hela uppslammas 0,5 timmar. c) Kolet avlägsnas genom filtrering. Kolet tvättas med 15 ml vatten och tvättvätskan sättes till filtratet. d) Under kraftig omröring tillsättes koncentrerad ammonium- hydroxid till filtratet till ett pH av 2,5-3,0. Kristaller bildas därvid. e) Kristallmassan uppslammas under 25 minuter. Kristallerna avlägsnas genom filtrering och tvättas med 30 ml vatten 453 507 16 och 50 ml metanol och vakuumtorkas vid rumstemperatur. Ut- byte 4-7 g av nära nog vita kristaller.
Exempel 2 7-(2-amínometvlfenvlacetamído3-3-(l-karboximetvltetrazol- -5-vltíometvl)-3-cefem-4-karboxvlsvra N coon \ zcoon //CHÉNH2 _ \ Qcflzconnlrl/fl | i lï ""' 0/ / CH Metodbeskrivníng 1. I en 3-halsad kolv innehållande 100 ml avjoniserat vatten och försedd med omrörare och termometer införes 7,6 g (0,02l mol) 7-amino-3-(1-karboximetyltetrazol-5-yl- tiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra och 3,4 g (0,034 mol) N- -metylmorfolin. Blandningen kyles till 0° och hàlles under omröring vid 0° under använding av ett isbad. 2. I en separat kolv försedd med omrörare införes 9,6 g (0,03 mol natrium-2-(1-metoxikarbonyl-l-propen-2-ylamino- metyl)fenylacetat och 184 ml tetrahydrofuran. Under omrö- ring kyles suspensionen till -30° under använding av ett torris-acetonbad. Under omröring och under uppräthàllande av temperaturen vid -30° tillsättes 20 droppar dimetylben- sylamin och 4,4 g (0,03 mol) isobutylklorformiat. Den er- hållna blandningen omröres 5 minuter. 3. All blandning från steg 2 sättes till den omrörda lös- ningen i steg 1 i en portion. Den resulterande lösningen hàlles vid 3° l timme under omröring. 453 507 17 4. Tetrahydrofuranen avdrives från reaktíonsblandningen vid 30° under användning av vakuum (15 mm).
. Den kvarvarande vattenlösningens pH-värde inställes på 4,0 under användning av koncentrerad klorvätesyra. 6. 2,5 g träkol ("Darco G-60") sättes till blandningen och omblandning sker under 20 minuter. Kolet avlägsnas genom filtrering. 7. Filtratet beskiktas med 120 ml etylacetat och under omröring sänkes pH-värdet till 3,8 med koncentrerad klor- vätesyra. En liten mängd ljusbrunfärgat fast material kan avskiljas och avlägsnas genom filtrering. (Detta material sparas för upparbetning och ytterligare utvinning av produkt). 8. Under användning av ett isbad kyles filtratet till 5° och under omröring sänkes pH till 2,5-2,8 med koncentrerad klorvätesyra. Temperaturen hålles vid 5° och omröringen fortsättes 1 timme. 9. Produkten tillvaratages genom filtrering. Filterkakan tvättas med 5 ml kallt avjoniserat vatten, följt av 5 ml kall metanol.
. Den fasta 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3-(1-karboxi- metyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyran luft- torkas till konstant vikt. (En typisk körning ger 4,1 g produkt). ll. Den i steg 10 erhållna produkten får passera en sikt av rostfritt stål med maskvidden 0,074 mm. 12. 10 g av denna produkt med partikelstorleken 0,074 mm uppslammas i 100 ml kloroform. 5 ml trietylamin tillsättes 453 507 18 och blandningen uppvärmes till 50° under snabb omröring.
Blandingen uppslammas 5 minuter vid 50°. 13. Blandningen filtreras varm (7-ACA, 7-amino-3-(1-karboxi- metyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra, färg- ämnen och andra föroreningar är lösliga i den varma kloro- formtrietylaminlösningen). Filterkakan tvättas med 25 ml kloroform och lufttorkas 2 timmar. Utbyte: 1-8 g 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3-(1-karboximetyl- tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra. 14. Produkten från steg 13 får passera en sikt med mask- vidden 0,074 mm. . 10 g av den siktade produkten uppslammas i 75 ml 0,1 N klorvätesyra under 10-15 minuter. Blandningen filtreras och filterkakan tvättas med 25 ml vatten, 50 ml metanol, och lufttorkas vid rumstemperatur under 2-3 timmar.
Utbyte: upp till 10 g. 16. 10 g 7-(2-amínometylfenylacetamido)-3-(1-karboxímetyl- tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra, som har er- hållits i steg 15, uppslammas i 65 ml metanol. a) 2 ml koncentrerad klorvätesyra tillsättes. En lösning eller praktiskt taget fullständig lösning erhålles. Det hela omröres 5 minuter. b) 130 ml vatten tillsättes snabbt under kraftig omröríng till lösningen enligt a) ovan. En fällning (innehållande huvuddelen av färgen) erhålles omedelbart (Ett pH av 1,3- -1,6 kräves). c) Blandningen uppslammas 1 minut och filtreras snabbt.
(Det fasta materialet sparas för upparbetning och utvin- ning av ytterligare produkt). m' 453 507 19 d) Filtratet försättes med groddkristaller och omröres måttligt. Kristallisationstiden är ca 15-30 minuter. e) Blandningen omröres vid omgivningens temperatur eller vid 4° under 2 timmar efter avslutad kristallísation. f) Kristallerna avlägsnas genom filtrering, tvättas med ml av en blandning innehållande 65 volym% vatten och volym% metanol och med 50 ml metanol och vakuumtorkas 24 timmar vid 50°. Utbyte upp till 9 g renad, vit 7-(2- -aminometylfenylacetamido)-3-(1-karboximety1tetrazol-5- -yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra. 17. Nedan anges 2 alternativa metoder för kristallisation av 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3-(1-karboximetyltetra- zol-5-yltiometyl)-3-cefem-4~karboxylsyra.
A) 1. 10 g av den i steg 15 erhållna produkten uppslammas i 100 ml metanol. 2. 2 ml koncentrerad klorvätesyra tillsättes och man erhåller en lösning eller praktiskt taget fullständig lös- ning. 3. 1,5 g träkol ("Darco G-60") tillsättes och bland- ningen uppslammas under 0,5 timmar. 4. Kolet avlägsnas genom filtrering och tvättas med ml metanol. Metanoltvättvätskan sättes till filtratet. . 120 ml vatten sättes till filtratet. (En liten mängd precipitat kan utfalla. Detta avlägsnas genom filtrering och sparas för upparbetning-produktutvinning). 6. Lösningen från steg 5 omröres hastigt och inställes 455 507 på pH 2,5-3,0 med 10%-ig natriumhydroxid, varvid kristaller bildas. 7. Blandníngen uppslammas under 0,5 timmar. Kristal- lerna avlägsnas genom filtrering, tvättas med 20 ml av en 50 volym%-ig vattenlösníng av metanol, 30 ml metanol och vakuumtorkas 24 timmar vid 50°. Utbyte upp till 9 g renad 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3-(l-karboximetyltetrazol- -5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra.
B) l. 10 g av den i steg 15 erhållna produkten uppslammas i 75 ml vatten. 2. 10%-ig natriumhydroxíd tillsättes till ett pH av 6,8-7,2. En lösning eller partiell lösning kan erhållas. 3. 1,5 g träkol ("Darco G-60") tillsättes och bland- ningen uppslammas 0,5 timmar vid ett pH av 6,8-7,2 (kon- tinuerlig tillsats av 0,l-l N natriumhydroxid). 4. Kolet avlägsnas genom filtrering. Kolet tvättas med ml vatten, som sättes till filtratet.
. Lösningen från steg 4 med pH 6,8-7,2 kan kristalli- eras vid pH 2,5-3,0 såsom beskrivits i steg 6 och 7 under A) ovan eller vid pH 1,2-1,5 (genom tillsats av klorvätesyra) såsom beskrivits under d, e och f i steg 16 ovan. I båda fallen erhålles upp till 9 g kristallin 7-(2- -aminometylfenylacetamido)-3-(1-karboximetyltetrazol-5-yl- tiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra. Denna produkt erhålles ofta såsom ett kristallint monohydrat. Om denna förening administreras intramuskulärt genom injicering i en dosering av 10 mg/kg kroppsvikt till möss erhålles en blodnivâ av 19,7 mg/ml på 15 minuter. å! 453 507 21 Skyddsdosen av den i rubriken angivna föreningen för 50 % av djuren gentemot en letal intramuskulär dos av E. Coli Al51l9, K. Pneumoniae A9977 och E. cloacae A 21020 är 0,39-0,42, 1,5-25 resp. 1-3,2 mg/kg.
Exemgel 3 Dikalíum-7-(D- -hvdroxifenvlacetamído)-3-(l-karboximetvl- tetrazol-S-vltiometvl3-3-cefem-4-karboxvlat S CHCONH -- Q» Ü i i OH 47 ,/ H2~S N/N O ° c-ox än cfën D- ° ' u 2 A. 7-(D-Q»formvloxifenvlacetamido)-3-(1-karboximetvltetra- zol-5-vl-tíometvl1-3-cefem-4-karboxvlsvra Till en suspension av 500 mg (0,0134 mol) 7-amino-3-(l- -karboximetyltetrazol~5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra i 10 ml vatten vid 0° sattes under omröring 200 mg natri- umbíkarbonat. Sá snart allt hade gått till lösning tillsat- tes 340 mg (0,0l72 mol) D-(-)-2-formyloxi-2-fenylacetylklorid i en portion i 10 ml aceton. Så snart ett precipitat hade bildats tillsattes fast natriumbikarbonat och lösningen om- rördes 1 timme vid pH 8. Acetonet avdrevs vid 30° (15 mm) och lösningen beskiktades med 20 ml etylacetat och surgjor- des med 1:1 fosforsyra. Efter extraktion med etylacetat filtrerades blandningen och det organiska skiktet avskilj- des och indunstades för erhållande av en produkt, som identifierades såsom i huvudsak ren 7-(D-mfformyloxifenyl- acetamido)-3-(1-karboximetyltetrazol-5-yl-tiometyl)-3- -cefem-4-karboxylsyra.
B. Dikalium-7-(D-mfhvdroxifenvlacetamido)-3-(1-karboxime- tvltetrazol-5-vltiometvl5-3-cefem-4-karboxvlat Det i steg A isolerade fasta materialet upplöstes i 5 ml 455 507 22 metanol och 5 droppar koncentrerad klorvätesyra. Lösningen behandlades med kol och upphettades 3 minuter pá àngbad.
Blandningen filtrerades och späddes med 15 ml vatten. Det erhållna gummiartade fasta materialet triturerades med kallt vatten och slutligen med vattenfri eter. Det fasta materialet upplöstes i 5 ml aceton och behandlades med S0 mg kalium-2-etylhexanoat. Man tillvaratog dikalium-7- -(D-a-hydroxifenylacetamído)-3-(1-karboximetyltetrazol-5- i ,....__.. ._..v.-_...._..._ ._ ...._._._ií___. -yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylat såsom ett vitt fast mate- rial i en mängd av 90 mg och med smältpunkten l75° (lång- sam sönderdelning).
Analys: Beräknat för C H K N O S : C 39,19 H 2,77 N 14,42 19 16 2 6 7 2 Funnet: C 39,87 H 3,50 N 12,58 Då denna förening administreras intramuskulärt genom inji- ceríng i en dos av 10 mg/kg kroppsvikt till möss erhålles en blodnivå av 21,4 mg/ml pá 15 minuter.
Skyddsdosen av denna förening hos 50 % av möss gentemot en letal intramuskulär dos av E. Coli A 15119 är 0,8 mg/kg.
Exemgel 4 7- D-1-aminofen lacetamido -3- 1-karboximet ltetrazol-5- -vltiometvl)-3-cefem-4-karboxvlsvra i s ®fcmcor~m . l-ín :m2 / y eng-s WA; | D- _ . 0 COOH cnzcoon En lösning av 0,55 g (0,0022 mol) D-(-)-a-tert.-butoxikar- boxamidofenylättiksyra och 0,22 g (0,0022 mol) trietylamin (TEA) i 17 ml tetrahydrofuran (THF) vid 0° omrördes kraf- lf' 453 507 23 tigt med 0,300 g (0,0022 mol) isobutylklorformiat. Bland- ningen omrördes 30 minuter vid 0° och en lösning av 0,0022 mol 7-amíno-3-(1-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)- -3-cefem-4-karboxylsyra och 0,445 g (0,0044 mol) TEA i 6,8 ml 50%-ig THF tillsattes. Den resulterande lösningen omrördes 2 timmar vid 25° och därefter indunstades THF vid 40° (15 mm) till en olja. Oljan tvättades med 2 x 50 ml eter, späddes till hälften med vatten och surgjordes till pH 3,0 med utspädd klorvätesyra. Blandningen omrördes 1 timme på isbad och produkten extraherades med 75 ml etylacetat.
Extraktet tvättades med 2 x 20 ml vatten och 2 x 50 ml av en mättad natriumkloridlösning. Etylacetatet avdrevs vid ° (15 mm) till en olja och triturerades med Skellysolve B i ett utbyte av 480 mg (35,3 %) 7-(D-1-tert.-butoxikar- boxamidofenylacetamido)-3-(1-karboximetyltetrazol-5-yl- tiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra. Detta prov sattes till 1 ml trifluorättiksyra och lösningen omrördes 1 timme vid 0° och späddes därefter med 50 ml eter. Saltet tillvara- togs, upplöstes i 10 ml H 0 och inställdes på pH 4,0 med utspädd ammoniumhydroxid (NH40H). Produkten tillvaratogs, tvättades med vatten och aceton och torkades i vakuum över P 05 under 18 timmar vid 25°, varvid man erhöll 150 mg (23,96 %) 7-(D-afamínofenylacetamido)-3-(l-karboximetyl- tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra med en smält- punkt överstigande l80° (långsam sönderdelning). IR- och NMR-spektra var i överensstämmelse med strukturen.
Analys: Beräknat för C H N O S . l 1/2 H O: C 42,84 H 4,16 19 19 7 6 2 N 18,41 Funnet: C 43,17 H 4,12 N 16,74 453 507 24 Exemgel 5 7-(2-amínometvl-1,4-cvklohexadienvlacetamido3-3-(1-karboxi- metvltetrazol-5-vltiometvl3-3-cefem-4-karboxvlsvra 2NH2 3 CH CONH --N 0 \ 2 n coon " cnâcoon En lösning av 0,80 g (0,003 mol) 2-t-butoxikarbonylamino- metyl-1,4-cyklohexadienylättiksyra och 0,303 g (0,003 mol) trietylamin i 19,2 ml THF omrördes vid 0° och 0,41 g (0,003 mol) isobutylklorformiat tillsattes. Blandingen om- rördes 30 minuter vid 0° och sattes till en lösning av 0,003 mol 7-amino-3-(1-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)- -3-cefem-4-karboxylsyra och 0,61 g (0,006 mol) TEA i 9,2 ml 50%-ig THF. Den resulterande lösningen omrördes 1,5 timmar vid 25°. Tetrahydrofuranen avdrevs vid 30° (15 mm) och återstoden tvättades med 2 x 30 ml eter och späddes där- efter till hälften med vatten. Lösningen surgjordes till pH 3,5 med utspädd klorvätesyra och produkten tillvaratogs och torkades 18 timmar i vakuum över P 0 vid 25° varvid man erhöll 1,55 g (54,0 %) av ett vitt pulver. Totalt 3,4 ml trifluorättiksyra sattes till den erhållna 7-JG(2-t- -butoxikarbonylaminometyl-1,4-cyklohexadienylacetamido)-3- -(1-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxyl- syra och omrördes 1 timme vid 0°. Lösningen späddes med 150 ml eter och precipitatet tillvaratogs genom filtre- ring. Trifluoratetatsaltet suspenderades i 3,4 ml vatten och inställdes på pH 4,5 med utspädd ammoniumhydroxid.
Den gummiartade återstoden triturerades med vatten, till- varatogs och tvättades med vatten och aceton. Produkten torkades 18 timmar i vakuum över P205 vid 25°, varvid man O i: 453 507 erhöll 53 mg (15,72 %) 7-(2-aminometyl-1,4-cyklohexadienyl- acetamído)-3-(1-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem- -4-karboxylsyra med en smältpunkt överstigande l60° (läng- sam sönderdelning).
Analys: Beräknat för C H N 0 S . 1/2 H 0: C 45,18 H 4,55 23 7 6 2 N 18,44 Funnet: C 45,46 H 4,68 N 17,09 IR- och NMR-spektra var i överensstämmelse med strukturen.
Exempel 6 7-tafamino-4-hvdroxifenvlacetamido)-3-(1-karboximetvl- tetrazol-5-vltiometvl)-3-cefem-4-karboxvlsvra.
S ___ H0 -cn-comi N ' en -s I H NH2 /, // 2 w/N _ o ' D- coon cnz coon Till en lösning av 2,7 g (0,0l mol) D-(-)-N-tert.-butoxi- karbonyl-p-hydroxifenylglycin i 92 ml tetrahydrofuran sattes 1,1 g (0,0l mol) N-metylmorfolin. Lösningen kyldes till 0° och 1,4 g (0,0l mol) isobutylklorformiat tillsat- tes í en portion. Omröringen fortsattes 10 minuter och blandanhydridlösningen sattes till en 0° lösning av 3,7 g (0,0l mol) 7-amino-3-(1-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)~ -3-cefem-4-karboxylsyra och 1,1 g (0,0l mol) N-metylmorfo- lin i 50 ml vatten. Lösningen omrördes 1 timme och tetra- hydrofuranen avdrevs vid 30° (15 mm) till en total volym av 45 ml. Lösningens pH-värde sänktes till 2 med 1:1 fos~ forsyra och extraherades med etylacetat, tvättades med 453 507 26 vatten och lösningsmedlet avdrevs azeotropiskt varvid man T erhöll ett glasartat fast material vid 30° (15 mm). Åter- stoden triturerades med eter för avlägsnande av eventuell utgángssyra och tillvaratogs genom filtrering. Produkten var hydroskopisk och överfördes omedelbart'i 5 ml trifluor- ättiksyra och lösningen omrördes l timme vid 27°. Lösning- en späddes med 25 ml eter och produkten tillvaratogs genom filtrering och suspenderades i 5 ml vatten. Blandningen inställdes på pH 3 med koncentrerad ammoniumhydroxid och _späddes med 10 ml isopropanol. Det ljusbruna fasta materi- alet tillvaratogs genom filtering och torkades i vakuum över P O under 24 timmar, varvid man erhöll 300 mg 7-(d- -amino-4-hydroxífenylacetamido)-3-(1-karboximetyltetrazol- -5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra. Smp. 175° (långsam sönderdelning).
Analys: Beräknat för C H N O S 3/4 i-C H O: C 42,78 H 4,44 19 19 7 7 2 3 7 N 17,32 Funnet: C 42,86 H 4,55 N 15,39 IR- och NMR-spektra var i överensstämmelse med strukturen.
NMR-spektrum visade närvaro av 0,75 mol ísopropylalkohol i produkten.
Exempel 7 Dikalium-7-(Daä-hvdroxífenvlacetamido)-3-(1-karboxietvl- tetrazol-5-yltiometgl)-3-cefem-4-karboxilat En lösning av 1,5 g (0,0039 mol) D-(-)-afformyloxifenyl- acetylklorid i 20 ml aceton sattes vid 5° till en kall lösning av 1,6 g (0,008 mol) 7-amino-3-(1-karboxietyltetra- zol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra och 2,1 g natrium- bikarbonat i 25 ml vatten. Lösningen omrördes 1 timme och i acetonet avlägsnades under reducerat tryck och blandningen beskiktades med 50 ml etylacetat. Blandningen surgjordes fd 453 507 27 därefter till pH 2 med 1:1 fosforsyra. Etylacetatet tvät- tades med vatten, indunstades azeotropiskt till torrhet vid 15 mm Hg, varefter återstoden uppslammades med eter.
Produkten tillvaratogs och torkades i vakuum över P2O5, varvid man erhöll 500 mg produkt med en smältpunkt över- stigande 140” (sönderdelning).
Analys: Beräknat för C H N 0 S .(C H ) O: C 48,23 H 4,84 21 20 6 8 2 2 5 2 N 13,49 Funnet: C 48,12 H 4,31 N 12,02 IR- och NMR-spektra var i överensstämmelse med strukturen.
Dä denna förening administreras íntramuskulärt genom inji- cering i en dos av 10 mg/kg kroppsvikt till möss uppnås en blodnivà av 16,0 mg/ml på 15 minuter.
Exempel 8 7-(3-aminometvl-2-tienvlacetamido)-3-(1-karboximetvltetra- zol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra A) 7-(3-t-butoxikarbonylaminometyl-2-tienylacetamido)-3- -(1-karboximetvltetrazol-5-vltiometvl3-3-cefem-4-karboxvl- Byrå En blandning av 3-t-butoxikarbonyl-aminometyl-2-tíenylättik- syra (542 mg; 2 mmol), 2,4-dinitrofenol (368 mg; 2 mmol) och dícyklohexylkarbodiimid (412 mg; 2 mmol) i tetrahydro- furan (THF) omrördes vid rumstemperatur 1,5 timmar. Den utfällda karbamiden avlägsnades och fíltratet indunstades 453 507 E 28 under reducerat tryck. Den resulterande aktiva estern } (1,0 g) upplöstes i 10 ml THF och sattes till en blandning i av 7-amino-3-(1-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem- ' -4-karboxylsyra (656 mg; 2 mmol) och trietylamin (816 mg; 8 mmol) i vatten (5 ml) vid Oc under omröring. Omröringen fortsattes 3,5 timmar vid rumstemperatur och reaktionsbland- ningen sattes till vatten (20 ml) och tvättades med 4 x ml eter). Vattenlösningen beskiktades med etylacetat och inställdes på pH 2 med koncentrerad HC1 vid 5”. Det organiska skiktet avskiljdes och vattenskiktet extrahera- des med 2 x 50 ml etylacetat. Etylacetatextrakten kombi- nerades, tvättades med en mättad vattenlösning av natrium- klorid, torkades över HgSO och indunstades under reducerat tryck. Den resterande oljan kromatograferades på 10 g si- líkagel. Kolonnen eluerades i tur och ordning med 150 ml kloroform och 100 ml 3%-ig metanol-kloroform. Från kloro- formeluatet utvanns 2,4-dinítrofenol (50 mg) och den i rubriken angivna cefalosporinen isolerades genom indunst- ning av metanol-kloroform-eluatet. Utbyte 29 %; smältpunkt 185-l88° (sönderdelning).
Analys: Beräknat för C23H27N708S3: C 42,91 H 4,54 N 15,23 S 14,94 Funnet: C 43,02 H 4,17 N 15,07 S 15,04 B) 7-(3-aminometyl-2-tíenylacetamído)~3~(l-karboximetyl- tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra 0,6 ml trifluorättiksyra sattes till den i steg A erhåll- na blockerade cefaolosporinen (610 mg; 1,05 mmol) vid 0” (I a -«-\_ fl-Å- al» 453 507 29 och blandningen omrördes vid rumstemperatur under 15 minu- ter. Till reaktionsblandningen sattes 15 ml vattenfri eter för avskiljande av ett precipitat, som tillvaratogs genom filtrering, tvättades med 2 x 10 ml vattenfri eter och upplöstes i 10 ml acetonitríl. Till lösningen sattes 2 droppar koncentrerad ammoniumhydroxid. Det avskiljda fasta materialet tillvaratogs genom filtrering, tvättades med 2 x 10 ml acetonítril och torkades vid 75°/l mm Hg under 7 timmar för erhållande av den i rubriken angivna före- ningen, som tillvaratogs såsom monoammoniumsaltet efter behandling med en ekvivalent ammoniumhydroxid. Utbyte as æ; 174-17s° (sönderdelning).
Analys: Beräknat för C H N O S .H 0: C 38,56 H 4,32 N 19,98 18 21 8 6 3 2 S 17,16 Funnet: C 38,89 H 4,06 N 18,83 S 15,24 IR- och NMR-spektra var i överensstämmelse med strukturen.
Exempel 9 7-(2-aminometvlfenvlacetamido)-3-(1-karboxietvltetrazol-2- -yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra A) Kalium-O-(l-karbometoxi-grogen-2-ylaminometyl)-fenyl- acetat (enamín).
Metodbeskrivning 1. 1000 g 0-aminometylfenylättisyra, 340 g kalíumhydroxid, 1412 g metylacetoacetat och 32 400 ml absolut metanol in- införas i en tank . 2. Blandningen återloppskokas 4 timmar under omröring. 453 507 3. Reaktionslösningen koncentreras under reducerat tryck vídzen temperatur under -50° till ca l/5 av utgàngsvoly- men . 4. 10 000 ml MIBK sättes till koncentratet och koncentre- ringen fortsättes under reducerat tryck till dess metanolen har avlägsnats. . 10 000 ml MIBK eller en för framställning av en uppar- betbar uppslamning av koncentratet erforderlig mängd till- sättes. 6. Blandningen omröres och kyles till 5-l0° under 30 minu- ter. 7. Uppslamníngen filtreras och filterkakan tgättas med 5000 ml MIBK och därefter med 5000 ml aceton . 8. Produkten torkas i en ugn med cirkulerande luft med en temperatur av ca 40°. 9. Utbytet är 1605-1680 g eller 88-92 % vit kristallin produkt med smältpunkten 140-142".
B) 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3-(l-karboetyltetrazol- -2-tiometvl)-3-cefem-4-karboxvlsvra A1) 4,09 g enamin från steg A och 90 ml tetrahydrofuran blandades i en 3-halsad kolv försedd med omrörare och torkrör och kyldes i ett torris-acetonbad. 8 droppar N,N- -dimetylbensylamin tillsattes och blandningen kyldes till -38°. 1,95 g butylklorformiat tillsattes och det hela om- rördes 15 minuter. 1 B ) 7-amino-3(1-karboxietyltetrazol-2-yltiometyl)-3-cefem- -4-karboxylsyra upplöstes iÄ50 ml vatten och 2,29 g i, ._..-. -_....._.,,-_.._ ..._..._.. .___ .-......4 w 453 507 31 Nïmetylmorfolin och kyldes till 2”. Anhydriden från steg A sattes till lösningen under omröríng. Blandningen om- rördes 1,5 timmar vid 2°. Tetrahydrofuranen avlägsnades i vakuum och återstoden beskiktades med etylacetat och inställdes på pH 3. Efter omröring på isbad tillvaratogs produkten i en mängd av 250 mg och med smältpunkten 140” (sönderdelning).
IR- och NMR-spektra var i överensstämmelse med den önskade produkten men antydde ca 20 % föroreningar, i huvudsak utgängsmaterial. Då denna förening administreras intramuskulärt genom injicering i en dos av 10 mg/kg kroppsvikt till möss uppnås en blodnivå av 22,3 mg/ml på minuter.

Claims (1)

453 507 52 PATENTKRAV Föreningar med formeln
1. . N.___ H21» _ JL i _ ' q /, CH2~S ? C021; (C32 ) n"CQ2H vari n är 2 eller 3, och salter och pivaloyloximetyl-, acetoximetyl-, metoximetyl-, acetonyl-, fenacyl-, p-nitrobensyl-, B,ß,B-trikloretyl-, 3-ftalidyl- eller 5-indanylestrar därav, för användning som mellanprodukter vid framställning av farmakologiskt aktiva 7-acylamido- -3-(l-karboxi-(lägre alkyl)-tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem- -4-karboxylsyror. ti;
SE8305539A 1974-09-03 1983-10-07 7-amino-3-(1-karboxi-(legre alkyl)-tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyror till anvendning som mellanprodukter for framstellning av motsvarande 7-acylamido-cefalosporiner SE453507B (sv)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US50299174A 1974-09-03 1974-09-03
US05/590,971 US4297489A (en) 1974-09-03 1975-06-27 7-α-Amino-substituted acylamino-3-(1-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylic acids

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE8305539L SE8305539L (sv) 1983-10-07
SE8305539D0 SE8305539D0 (sv) 1983-10-07
SE453507B true SE453507B (sv) 1988-02-08

Family

ID=27054342

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE7509702A SE431548B (sv) 1974-09-03 1975-09-01 Forfarande for framstellning av nya cefalosporinderivat
SE7907672A SE435279B (sv) 1974-09-03 1979-09-14 1-karboximetyl (respektive etyl) -5-merkapto-tetrazol till anvendning som mellanprodukt for framstellning av cefalosporinforeningar
SE8305539A SE453507B (sv) 1974-09-03 1983-10-07 7-amino-3-(1-karboxi-(legre alkyl)-tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyror till anvendning som mellanprodukter for framstellning av motsvarande 7-acylamido-cefalosporiner

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE7509702A SE431548B (sv) 1974-09-03 1975-09-01 Forfarande for framstellning av nya cefalosporinderivat
SE7907672A SE435279B (sv) 1974-09-03 1979-09-14 1-karboximetyl (respektive etyl) -5-merkapto-tetrazol till anvendning som mellanprodukt for framstellning av cefalosporinforeningar

Country Status (21)

Country Link
US (1) US4297489A (sv)
JP (1) JPS6150956B2 (sv)
AR (1) AR222771A1 (sv)
BG (1) BG27091A3 (sv)
CA (4) CA1135255A (sv)
CH (1) CH636882A5 (sv)
DD (2) DD123471A5 (sv)
DE (2) DE2560655C2 (sv)
DK (4) DK145262C (sv)
ES (2) ES440707A1 (sv)
FI (1) FI62841C (sv)
FR (1) FR2283686A1 (sv)
HU (1) HU169490B (sv)
IE (1) IE43123B1 (sv)
IL (1) IL48020A (sv)
LU (1) LU73306A1 (sv)
NL (1) NL161758C (sv)
NO (1) NO152509C (sv)
OA (1) OA05096A (sv)
SE (3) SE431548B (sv)
YU (5) YU213275A (sv)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4286089A (en) * 1974-12-27 1981-08-25 Smithkline Corporation 7-Acyl-3-(substituted tetrazolyl thiomethyl)cephalosporins
US4278670A (en) * 1976-07-12 1981-07-14 Smithkline Corporation 7-Alpha-oxyiminoacylcephalosporins
US4101656A (en) * 1976-07-12 1978-07-18 Smithkline Corporation 7β-Acylamino-3-(alkanesulfonamidoalkyl substituted tetrazolylthiomethyl) cephalosporins, antibacterial compositions containing them and methods of treating bacterial infections with them
DE2724092A1 (de) * 1977-05-27 1978-12-07 Smithkline Corp Cephalosporine, verfahren zu deren herstellung und diese verbindungen enthaltende arzneimittel
FR2387235A1 (fr) * 1978-01-23 1978-11-10 Fujisawa Pharmaceutical Co Procede de preparation de composes d'acide 3,7-disubstitue-3-cephem-4-carboxylique et nouveaux produits ainsi obtenus, ayant une forte activite antibacterienne
US4243803A (en) * 1979-07-05 1981-01-06 Bristol-Myers Company Production of 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylic acid
US4374994A (en) * 1979-07-05 1983-02-22 Bristol-Myers Company Process for preparation of 5-mercaptotetrazolyl-1-acetic acid
EP0029998B1 (en) * 1979-11-30 1985-03-06 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Cephem compounds, processes for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
JPS56158791A (en) * 1980-05-10 1981-12-07 Taisho Pharmaceut Co Ltd Cephalosporin compound
IL63767A0 (en) * 1980-09-17 1981-12-31 Lilly Co Eli Cephalosporin compounds
JPS57188594A (en) * 1981-05-15 1982-11-19 Eisai Co Ltd Preparation of 7-(2-amino-2-phenylacetamido)cephem derivative
US4448958A (en) * 1982-10-20 1984-05-15 Bristol-Myers Company Purification of ceforanide
US4749522A (en) * 1985-10-31 1988-06-07 Angio-Medical Corporation Supercritical fluid extraction of animal derived materials
DE3641822A1 (de) * 1986-12-06 1988-06-16 Goedecke Ag Verwendung von dihydrophenylaminosaeurederivaten und diese enthaltende arzneimittel zur immunmodulation und cytostase

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3819623A (en) * 1968-04-12 1974-06-25 Fujisawa Pharmaceutical Co 3,7-disubstituted cephalosporin compounds
DE1953861C2 (de) * 1969-10-25 1982-12-23 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd., Osaka 7-Tetrazolylacetamido-3-thiomethyl-3-cephem-4- carbonsäuren
US3814755A (en) * 1972-08-30 1974-06-04 Bristol Myers Co 7-(omikron-aminomethylphenylacetamido)-3-(tetrazolo(4,5-b)pyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylic acid
GB1478055A (en) 1973-07-27 1977-06-29 Erba Carlo Spa Cephalosporin compounds
US4074929A (en) 1973-08-29 1978-02-21 Amp Incorporated Cable card edge connector
NL7414119A (nl) * 1973-10-31 1975-05-02 Fujisawa Pharmaceutical Co Werkwijze ter bereiding van 1h-tetrazool-5-thiol- derivaten en 1-gesubstitueerde 1h-tetrazool- -5-thiolen.
US4205166A (en) * 1974-02-20 1980-05-27 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. 7-Substituted-3-aminoalkyl-, acylaminoalkyl-, or hydroxyalkyl-substituted heterocyclic thiomethyl-3-cephem-4-carboxylic acid derivatives and preparation thereof
US4092476A (en) * 1974-02-21 1978-05-30 Beecham Group Limited Phthalidyl esters of 7-[(α amino, 2 substituted acetamido)-3-(heterocyclic-thio methyl)]cephalosporins
US4068074A (en) * 1974-04-05 1978-01-10 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Cephalosporin derivatives having at the 3-position of the cephem ring a heterocyclic thiomethyl group with a carboxy or sulfo group and at the 7-position of the cephem ring an α-heterocylic acylaminophenyl-acetamide group
US4160086A (en) * 1974-04-27 1979-07-03 Beecham Group Limited 3-Heterocyclicthio-7-α-carboxy 2-aryl acetamido cephalosporanic acid
JPS612674B2 (sv) * 1974-06-20 1986-01-27 Meiji Seika Co
US4182863A (en) * 1974-09-03 1980-01-08 Bristol-Myers Company 7-Amino-3-(1-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylic acid
US4172196A (en) * 1974-09-03 1979-10-23 Bristol-Myers Company Certain 7-α-substituted-α-hydroxyacetamido-3-(1-carboxymethyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxylic acids
DK154939C (da) * 1974-12-19 1989-06-12 Takeda Chemical Industries Ltd Analogifremgangsmaade til fremstilling af thiazolylacetamido-cephemforbindelser eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf
US4286089A (en) * 1974-12-27 1981-08-25 Smithkline Corporation 7-Acyl-3-(substituted tetrazolyl thiomethyl)cephalosporins
US4183925A (en) * 1975-03-27 1980-01-15 Pfizer Inc. 7-Aminophenylacetamido-Δ3 -cephem antibacterial agents and method of use
JPS525787A (en) * 1975-06-27 1977-01-17 Bristol Myers Co Antiibacterial agent
US4013648A (en) * 1975-07-23 1977-03-22 Bristol-Myers Company Δ2,3 -0-2-Isocephem-4-carboxylic acid and derivatives as antibacterial agents
US4220644A (en) * 1976-05-03 1980-09-02 Smithkline Corporation 7-Acylamino-3-(substituted tetrazolyl thiomethyl) cephalosporins
US4118563A (en) * 1977-11-25 1978-10-03 Bristol-Myers Company Production of 7-(2-aminomethylphenylacetamido-3-(1-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylic acid

Also Published As

Publication number Publication date
CH636882A5 (de) 1983-06-30
DK367279A (da) 1979-08-31
DK147483B (da) 1984-08-27
IL48020A0 (en) 1975-11-25
CA1123840A (en) 1982-05-18
SE7907672L (sv) 1979-09-14
YU44964B (en) 1991-06-30
YU223281A (en) 1983-12-31
DK423383D0 (da) 1983-09-16
US4297489A (en) 1981-10-27
DK145262B (da) 1982-10-18
DE2538804C2 (de) 1986-10-16
OA05096A (fr) 1981-01-31
DK391075A (da) 1976-03-04
NL7510391A (nl) 1976-03-05
DK423383A (da) 1983-09-16
YU44669B (en) 1990-12-31
CA1135256A (en) 1982-11-09
DK148796B (da) 1985-09-30
DK145262C (da) 1983-03-14
YU223081A (en) 1983-12-31
DK162388B (da) 1991-10-21
YU44833B (en) 1991-04-30
HU169490B (sv) 1976-12-28
YU213275A (en) 1982-02-28
FI62841B (fi) 1982-11-30
SE435279B (sv) 1984-09-17
SE8305539L (sv) 1983-10-07
DE2560655C2 (sv) 1988-07-14
JPS5154580A (sv) 1976-05-13
NO152509C (no) 1985-10-09
SE7509702L (sv) 1976-03-04
ES440707A1 (es) 1977-07-01
DD130787A5 (de) 1978-05-03
FR2283686B1 (sv) 1983-07-08
DK147483C (da) 1985-03-25
CA1135254A (en) 1982-11-09
IL48020A (en) 1982-02-28
SE8305539D0 (sv) 1983-10-07
DK148796C (da) 1986-03-17
SE431548B (sv) 1984-02-13
DD123471A5 (sv) 1976-12-20
CA1135255A (en) 1982-11-09
ES457998A1 (es) 1978-03-01
JPS6150956B2 (sv) 1986-11-06
LU73306A1 (sv) 1976-08-13
NO152509B (no) 1985-07-01
BG27091A3 (sv) 1979-08-15
YU223381A (en) 1983-06-30
NL161758C (nl) 1980-03-17
AR222771A1 (es) 1981-06-30
YU223181A (en) 1983-12-31
FI752434A (sv) 1976-03-04
FI62841C (fi) 1983-03-10
DK162388C (da) 1992-03-16
DE2538804A1 (de) 1976-07-15
NO752983L (sv) 1976-03-04
IE43123L (en) 1976-03-03
IE43123B1 (en) 1980-12-31
DK240582A (da) 1982-05-27
FR2283686A1 (fr) 1976-04-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI74019C (sv) Förfarande för framställning av 7beta-acylamino-3-substitueradmetyl-3- cefem-4-karboxylsyraderivat
SE453507B (sv) 7-amino-3-(1-karboxi-(legre alkyl)-tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyror till anvendning som mellanprodukter for framstellning av motsvarande 7-acylamido-cefalosporiner
US4012382A (en) α-Amino and α-formyl-α-(p-acyloxyphenyl)acetamidocephalosporanic acid derivatives
US5401841A (en) Process for the production of cephalosporines
EP0399094A2 (en) Improved process for the preparation of ceftriaxone
NO171915B (no) Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive 1-azabicyklo(4.2.0)okt-2-en-derivater
CA2326441C (en) Process for purification of a cephalosporin derivative
SU867311A3 (ru) Способ получени D-7-[ @ -(4-окси-6-метилникотинамидо)- @ -(4-оксифенил)ацетамидо-3-(1-МЕТИЛТЕТРАЗОЛ-5-ИЛТИОМЕТИЛ)-3-ЦЕФЕМ-4-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ
SU546282A3 (ru) Способ получени 7- -амино-7 метокси-цефалоспориновых эфиров
SE458607B (sv) 1-metyltetrazol-5-yl-(4-etyl-2,3-dioxopierazin-1-yl)-karbonyltiolat och tetrazolo-(1,5-b)pyridazin-6-yl-(4-etyl-2,3-dioxopiperazin-l-yl) karbonyltiolat
FI66186C (fi) Foerfarande foer framstaellning av penicillansyra- och cefalosporansyraderivat
FI60209C (fi) Foerfarande foer framstaellning av alfa-aminobensylpenicilliner och salter daerav
RO109652B1 (ro) Procedeu pentru prepararea unui antibiotic cefepim dihidroclorura hidrat
CA1109462A (en) Production of 7(2-aminomethylphenylacetamido-3-(1- carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4- carboxylic acid
US4959495A (en) Process for the preparation of intermediates used to produce aminothiazoloximino cephalosporins
KR830001969B1 (ko) 6―｛D―(―) α-(4―에틸-2. 3-디옥소-1 피페라지노카보닐아미노) 페닐(또는 하이드록시페닐)아세트아미도 페니실란산 및 그 염의 제조방법
CA1080697A (en) 6&#39;-amino-spiro (cycloalkane-1,2-penam)-3&#39;-carboxylic acid derivatives
KR100472048B1 (ko) 아즈트레오남의 신규제조방법
KR830002896B1 (ko) 세팔로스포린 유도체의 제조방법
FI72123C (sv) 7-/D(-)- -(4-etyl-2,3-dioxo-1 -piperazinkarboxiamido)- -(4-hydroxifeny l)acetamido/-3-/5-(1-metyl -1,2,3,4-tetrazolyl)tiometyl/- 3-cefem-4-ka rboxylsyrans N,N-dimetylacetamidaddukt och förfarande förframställnin g av denna.
KR810001427B1 (ko) 불포화 7-아실아미도-3-세펨-4-카복실산 유도체의 제조방법
US4091217A (en) 7-((5&#39;-N-Methylthioacetamido)-adipoamido)cephalosporin derivatives
FI63943C (fi) Vid framstaellning av 7-acylamido-3-(1-karboxi-laegre-alkyl-tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyror och deras salter saosom mellanprodukter anvaendbara foereningar
KR830001970B1 (ko) 세파로스포린 유도체의 제조방법
US5066799A (en) Intermediates for the preparation of aminothiazoloximino cephalosporins

Legal Events

Date Code Title Description
NAL Patent in force

Ref document number: 8305539-2

Format of ref document f/p: F

NUG Patent has lapsed

Ref document number: 8305539-2

Format of ref document f/p: F