SE435279B - 1-karboximetyl (respektive etyl) -5-merkapto-tetrazol till anvendning som mellanprodukt for framstellning av cefalosporinforeningar - Google Patents

Description

*3907672-5 bensoyl, naftyl, furoyl, tenoyl, nitrobensoyl, metylbensoyl, halobenscyl, fenylbensoyl, N-ftalimido, N-succinimido, N-sackarino, N-(lägre alkyl)-karbamoyl, lägre alkoxi, lägre alkyltio, fenoxi, karbalkori, karbobenscxi, karbamoyl,. bensyloxi, klorbensyloxi, karbofenoxi, karbo-tert-butoxi eller lägre alkylsulfonyl och, i det fall W betecknar karbalkoxi, Z betecknar karbalkoxi och, i det fall W betecknar fenyl, Z betecknar bensoyl eller cyano eller vari W och Z tillsammans betecknar 2~oxocykloalkyl innehållande 4~8 kolatomer.

Föredragna estrar är pivaloyloximetyl, acetoximetyl, metoximetyl, acetonyl, fenacyl, p-nitrobensyl, S, B, -trikloretyl, 3-ftalidyl och 5-indanyl.

Den bicykliska kärnans stereokemi är den som återfinnes i föreningen cefalosporin C.

De nya mellanprodukterna enligt uppfinningen är avsedda att användas för framställning av cefalosporinföreningar med formeln R3 I _ .

Rzïqükåšflqg/ \c!fl2 _. c -cn »s-ci . ' /G N\C'/ç~ 2 “lf ° _ 5 u íà-Ofi _ _(CH2)nCO0E . H _ ' .O - I vari Rl betecknar väte eller acyl, R3 betecknar väte eller metoxi och n är det hela talet l eller 2, eller en ester eller ett ogiftigt, farmaceutiskt godtagbart salt därav.

Därvid omsätter man en förening med formeln - m3 . 2 s Rl-NH-C-T _ lg , . o//\______N / Cnzøccna coon vari Rl och R eller lätt hydrolyserbar ester därav med en mellanprodukt 3 har ovan angivna betydelser, eller ett salt 7907672-5 med formeln N-x :Is y! I N/ - I . (eng) n coon vari n har ovan angivna betydelse, och att man eventuellt, i det fall Rl är väte, behandlar den resulterande föreningen med ett acylerande derivat av en syra med formeln Rl-x vari X betecknar halid och Rl betecknar acyl, varvid, i det fall acylgruppen innehåller fria amino- eller hydroxylgrupper, nämnda grupper är blockerade medelst konventionella skydds- grupper, och att man därefter avlägsnar nämnda skyddsgrupper för erhållande av en förening med formel I och att man, om så önskas, omvandlar en resulterande fri syra, salt eller lätt hydrolyserbar ester av en förening med formel I till motsvarande ester eller ogiftiga, farmaceutiskt godtagbara salt därav och att man, om så önskas, omvandlar ett resulterande salt eller lätt hydrolyserbar ester av en förening med formel I till motsvarande fria syra med formel I.

Det acylerande derivatet av en syra med formeln Rl-OH.innefattar motsvarande syraanhydrider, innefattande blandanhydrider och speciellt de bland anhydrider som framställes utgående från starkare syror såsom de lägre alifatiska monoestrarna av kolsyra, av alkyl- och arylsulfonsyror och av mera steriskt hindrade syror såsom difenylättiksyra. En speciellt användbar anhydrid är en N-karboxianhydrid (även benämnd Leuch's anhydrid; se ameri- kanska patentskrifterna 3 080 356 och 3 206 455) innefattande men icke begränsad till D-mandelsyrakarboxianhydrid (se amerikanska patentskriften 3 167 549) och motsvarande substituerade D-mandelsyrakarboxianhydrid. Dessutom kan man 790?672~5 använda en syraazid eller en aktiv ester eller tioester {t.ex. med p-nitrofenyl, 2,4-dinitrofenol, tiofenol eller tioättiksyra) eller också kan den fria syran själv kopplas med förening II efter det att den fria syran först har omsatts med N,Nf-dimetylkloroformiminiumklorid (se brittiska patent- skriften l 908 170 och Novak och Weichet: "Experientia XXI § (1365) 360) eller genom användning av enzymer eller av en N,N'-karbonyldiimidazol eller en N,N'-karbonylditriazol (se sydafrikanska patentskriften 63/2684) eller ett karbodiimidreagens ¿špecie1lt N,N“-dicyklohexylkarbodiimid, N,N'-diisopropylkarbodiimid eller N-cyklohexyl-N'-(2-morfolino- etyl)karbodiimid; se även Sheehan och Hess: "J. Amer. Chem.

Soc." ZZ (1955) 19617, ett alkylylaminreagens Åše R. Buijle och H.G. Viehe: "Angew. Chem. International Edition" Q (1964) 5827, ett isoxasoliumsaltreagens Åse R.B. Woodward, R.A. Olofson och H. Mayer: " J. Amer. Chem. Soc.", §â (1961) lQlQ7, ett keteniminreagens ¿še C.L. Stevens och M.F. Munk; "J. Amer. Chem. Soc.," QQ (1958) 406§7, hexaklorcyklotrifosfat- triazin, hexabromcyklotrifosfattriazin (se amerikanska patent- skriften 3 651 oso) , difenyifosforylazid ßppzx; "J." Amer.

Chem. Soc.," 9_4, (1972) 62o3-62o§7, aietylfcsforylcyanid _/_EEP_c; "fretrahearon Letters" No. 18 (1973) 1595-159_§7 eller difenylfosfit Ä_"Tetrahedron Letters" No. 49, (1972) 5047~505Q7.

En annan ekvivalent av syrakloriden är-en motsvarande azolid, dvs. en amid av motsvarande syra, vars amidkväve utgör del av en kvasiaromatisk, femledad ring innehållande minst två kväveatomer, dvs. imidazol, pyrazol, triaxolerna, bensimidazol, bensotriazol och substituerade derivat därav. Såsom ett exempel på det allmänna förfaringssättet för framställning av en azolid kan nämnas följande: N,N'-karbonyldiimidazol omsättes med en karboxylsyra i ekvimolära proportioner vid rumstemperatur i tetrahydrofuran, kloroform, dimetylformamid eller ett liknande inert lösningsmedel för bildning av _karboxylsyraimi- dazoliden i praktiskt taget kvantitativt utbyte under frigörande av koldioxid och l mol imidazol. Dikarboxylsyror ger diimidazolid.

Biprodukten imidazol utfaller och kan avskiljas och imidazoliden isoleras, men detta är icke kritiskt. Sättet att utföra dessa ä; _ 7907672-5 U1 reaktioner för framställning av en cefalosporin och de metoder som användes för isolering av den på så sätt framställda cefalosporinen är väl kända inom tekniken.

Ovan har nämnts användningen av enzymer för koppling av den fria syran med förening II. Inom ramen för dylika förfararden _innefattas användningen av en ester, t.ex. metylestern, av denna fria syra med enzymer, som alstras av olika mikroorganismer, t.ex. de som beskrives av T. Takahashi el al.; “J. Amer. Chem.

Soc.“ 2§_(ll) (1972) 4035-4037 och av T. Nara et al.; “J. Antibiotics" (Japan) 24 (5) (1971), 321-323 och i den amerikanska patentskriften 3 682 777.

För koppling av den organiska karboxylsyran, innefattande men icke begränsad till en suhstituerad eller osubstituerad D-mandelsyra (med eller utan en skyddsgrupp på qQ-hydroxyl- gruppen), med förening II (eller ett salt eller företrädesvis en lätthydrolyserad ester eller Schiffs bas såsom med bensal- dehyd därav) är det även lämpligt och effektivt att såsom kopplingsmedel utnyttja fosfonitrilkloridtrimer (“J. Org.

Chem." åålll (1968) 2979-Bl) eller N-etoxi-l.2-dihydrokinolin (EEDQ) såsom beskrives i “J. Amer. Chem. Soc.“ 22 (1968) 823-824 och 1652-1653 och i amerikanska patentskriften 3 455 929. Reaktionen utföres företrädesvis vid 3o-35°c i bensen, etanol eller tetrahydrofuran under användning av ungefärligen ekvimolära mängder av samtliga tre reagens, följt av konventionell isolering och avlägsnande medelst konventionella metoder av eventuellt närvarande blockerings- grupper.

Ett ytterligare förfarande innefattar framställning av föreningarna med formeln I genom utbyte av 3-acetoxigruppen i en 7-acylaminocefalosporansyra mot en tiolmellanprodukt enligt uppfinningen med formeln (betecknas ibland i det följande HSR för enkelhetens skull) HS.ï::;::g I (cHQncooH ?9G?672=5 6 vari n är l eller 2, och därefter avlägsnar eventuellt närvarande skyddsgrupper, såsom på en yL-hydroxi- eller :C-aminogrupp eller liknande eller på karboxylgruppen eller båda slagen av grupper. Utbytet.av en dylik 3-acetoxigrupp mot en dylik tiol kan utföras i lösning såsom i vatten eller en vattenlösning i aceton vid en temperatur av minst rumstemperatur och företrädesvis inom intervallet från ca 50 till lO0°C och i närvaro av en mild bas såsom natriumbikarbonat, t.ex. företrädesvis nära neutralitetspunkten såsom vid ca pH 6. Ett överskott av tiolen användes företrädesvis. Reaktionsprodukten isoleras genom omsorgsfull surgörning av reaktionsblandningen, följt av extraktion med ett med vatten icke blandhart organiskt_ lösningsmedel. I syfte att åskådliggöra nyssnämnda förfarande hänvisas vid framställningen av substituerade eller osubstituerade D-mandelamido-cefalosporansyror i enlighet med de förfaranden som beskrives allmänt eller specifikt i "J. Med. Chem." lill) (1974) 34-41 och de däri anförda hänvisningarna. Såsom anförts ovan beskrives framställningen av många andra 7-acylamidocefalosporansyror i patentlit- teraturen och den vetenskapliga litteraturen.

Då den organiska karboxylsyran innehåller en funktionell grupp såsom amino eller hydroxyl är det ofta önskvärt att först blockera (eller skydda) amino- eller hydroxigruppen, därefter utföra kopplingsreaktionen och slutligen avlägsna skyddsgruppen kemiskt från den resulterande föreningen, dvs. underkasta den resulterande föreningen en eliminerings- reaktion med avseende på skyddsgruppen.

Salterna innefattar ogiftiga karboxylsyrasalter därav, t.ex. ogiftiga metallsalter såsom natrium-, kalium- mflcnmp qj1ahm¿nymp salter, ammoniumsalter och substituerade ammoniumsalter, t.ex. salter av sådana ogiftiga aminer såsom trialkylaminer innefattande trietylamin, prokain, dibensylamin, N-bensyl- - fenetylamin, l-efenamin, N,NT-dibensyletylendiamin, dehydroabi- etylamin, N,N'-bis-dehydroabietyletylendiamin, N-(lägre alkyl)piperidin såsom N-etylpiperidin och andra aminer, som har använts för framställning av salter med bensylpeni- 7907672-5 cillinb Salterna innefattar även de ogiftiga syra~ additionssalterna (dvs. aminsalterna) innefattande mineralsyraadditionssalter sådom hydrokloriden, hydrobromiden, nydrojodiden,,sulfatet, sulfamatet och fosfatet och organiska syraadditionssalter såsom maleatet, acetatet, citratet, oxalatet, succinatet, bensoatet, tartratet, fumaratet, malatet, mandelatet, askorbatet och liknande.

De föredragna estrarna av cefalosporinerna är pivaloyloximetyl-, acetoximetyl-, metoximetyl~, acetonyl- och fenacylestrarna.

Samtliga är användbara mellanprodukter vid framställning av en cefalosporin med en fri karboxylgrupp och de förstnämnda tre är även av intresse eftersom de vid oral administrering ger olika absorptionshastigheter och -mängder och därmed ger olika koncentrationer av det aktiva antibakteriella medlet i blod och vävnader.

Dessa 5 estrar av 7-amino-cefalosporansyra framställes medelst kända metoder. Ett utmärkt förfarande beskrives i den amerikanska patentskriften 3 284 451, vid vilket natrium- cefalotin förestras genom omsättning med motsvarande aktiva klor- eller bromförening (t.ex. fenacylbromid, kloraceton, klormetyleter, pivaloyloximetylklorid (även benämnd klormetyl- pivalat) och acetoximetylklorid) och därefter'tienylättiksyra- kedjan avlägsnas enzymatiskt såsom beskrives i nyssnämnda patentskrift eller kemiskt såsom beskrives i amerikanska patentskriften 3 575 970 och i “Journal of Antibiotics" XXIV (ll) (1971) 767~773. Vid ett annat bra förfarande omsättes trietylaminsaltet av 7-aminocefalosporansyra direkt med den aktiva halogenföreningen, såsom beskrives i brittiska patent- skriften l 229453. 2 Dessa estrar av 7-aminocefalosporansyra omsättes därefter med nukleofilen HSR på samma sätt som beskrivits ovan för 7-aminocefalosporansyra själv. _Den 3-tiolerade estern av 7-aminocefalosporansyra kopplas därefter med den organiska karboxylsyran, t.ex. D-(-)~2-fenylglycin, såsom beskrivits WWNÉ-š ovan. Före eller efter avlägsnande av eventuella blockerings- grupper, t.ex. på en amino~ eller hydroxigrupp i 7-sidokedjan, omvandlas estern av den på så sätt erhållna cefalosporinen om den inte användes som sådan, till motsvarande fria syra inne- fattande dess zwitterjon (och om så-önskas, ett salt därav) genom avlägsnande av förestringsgruppen såsom genom hydrolys i vattenlösning eller enzymatisk hydrolys (såsom med humant eller animalt serum) eller genom sur eller alkalisk hydrolys eller genom behandling med natriumtiopenoxid såsom beskrivas i amerikanska patentskriften 3 284 451 och av Sheehan et al., "J. Org. Chem." 29(7) (1964) 2006-2008.

Vid en annan alternativ syntes framställes den 3-tioleradeá 7~aminocefalosporansyran såsom beskrivits ovan och acyleras därefter vid 7-aminogruppen och förestras slutligen, t.ex. genom omsättning av en lämnlig alkohol med den framställda syrakloriden, såsom genom omsättning av den slutliga cefalospo- rinen med tionylklorid eller genom något annat i huvudsak surt förestringsförfarande.

Föreliggande uppfinning avser även ett förfarande för framställ- ning av nya och värdefulla mellanprodukter med formeln N-N Essä i l _ \N/ . I Érnzcooà vilket förfarande utmärkes av att man i ett vattenfritt lös- ningsmedel bildar litioderivatet av en tiol med formeln N_"-N -f " N HS 'å " FN* en 3 790?672~5 och omsätter nämnda litioderivat med koldioxid för fram- ställning av en produkt, som därefter hydrolyseras för erhållande av en förening med formeln ___.fi ÉS % g 4 "' / '*N ånzcoon Föreliggande uppfinning avser även ett förfarande för framställning av nya och värdefulla mellanprodukter med formeln I N--~N li H HS~C\\ //N' *P (C112) “coon vari n är l-9, vilket förfarande utmärkes av att man A) behandlar ett isocyanat med formeln o H R1°°-o-c-(cH2)n-N=c=s vari n är ett helt tal l-9 och Rloo betecknar lägre alkyl med l-6 kolatomer eller en grupp med formeln R' - vari Rl betecknar H, Br, I, Cl,F, lägre alkyl eller alkoxi med l~6 kolatomer, N02 eller liknande och z är 0-4, med natriumazid för framställning av tiolestern med formeln N . lr .n \,,/'_°i I ~ (C82) n-cozn N H. as-c J 100 '?9Û?5“?2~5 ' io vari n och Rloo har ovan angivna betydelser, samt B) hydrolyserar tiolestern för framställning av tiolsyran med formeln _ _ N..._...._N Hß-kulía (CH2)n~CO2H vari n har ovan angivna betydelse.

Vid behandling av bakterieinfektioner hos människa administreras föreningarna enligt föreliggande uppfinning parenteralt eller oralt i en mängd av från ca 5-200 mg/kg/dygn och företrädesvis -20 mg/kg/dygn i avdelade doser, t.ex. 3-4 gånger per dygn.

De administreras i doseringsenheter, som t.ex. innehåller 125, 250 eller 500 mg aktiv beståndsdel jämte lämpliga fysio- logiskt godtagbara bärare eller exbipienter. Doseringsenheterna föreligger i form av flytande preparat såsom lösningar eller suspensioner.

Uppfinningen åskådliggöres närmare medelst följande exempel, vari temperaturangivelserna avser Celsiusgrader.

Exempel l l-karboximetyl-5-merkaptotetrazol N--N || H HS " C\N/N I CH2C00H a) Omkristallisation av l-metyl-5-merkaptotetrazol Metodbeskrivning: _l. Il0 g l-metyl-5-merkaptotetrazol uppslammas i 350 ml I kokande kloroform. Man erhåller en praktiskt taget fullständig lösning. _ 5 2. Den varma lösningen (50-600) filtreras snabbt i vakuum genom en uppvärmd Büchner-tratt (llcm SS No.* 604 papper innehållande 6-8 mm packat filterhjälp- b) 7907672-5 ll medel (“Supercol"). Filterdynan tvättas med 50 ml kloroform med en temperatur av 50-600. som sättes till filtratet, Filtratet kyles till ca o~6° och hållas vid 0-e° under 2 timmar. De bildade kristallerna tillvaratages genom filtrering vid 0~6° och tvättas med 60 ml kloroform med temperaturen 0-60, som sättes till filtratet. Kristallerna (fraktion A) lufttorkas vid 37-45° under 12 timmar.

Filtratet koncentreras på en roterande vakuumindunstare (badtemperatur 600) till ca halva volymen. Den erhållna uppslamningen kyles till 0-60 och hålles vid 0-60 under 2 timmar. Kristallerna tillvaratages genom filtrering vid 0-60 och tvättas med 40 ml kloroform med temperaturen 0-60, som sättes till filtratet.

Kristallerna (fraktion B) lufttorkas vid 37-450 under l8 timmar. Kristallfraktionerna A och B sammanföres för erhållande av ett ungefärligen 65%-igt utbyte.

Filtratet av fraktion B i steg 4 kan upparbetas två gånger såsom beskrives i steg 4 för erhållande av Wytterligare 15% material.

Framställning av di-natriumsaltet av l-karboximety1-5- mgrkagtotetrazol Metodbeskrivning: l. _salt-aceton-isbad till ca -100. 500 ml i huvudsak torr och ren tetrahydrofuran i en 2-liters trehalsad kolv med omrörare kyles i ett Torr kvävgas blåses på vätskeytan. 500 ml l5,06%-igt (1,6 N) butyllitium i hexan (Foote Mineral Co.) sättes under en tidsrymd av 10 minuter under torr kvävgas och omröring till tetrahydrofuranen.

Den praktiskt taget fullständiga lösningen kyles till -5 - -1o°. 46,4 g l-metyl-5-merkaptotetrazol (omkristalliserad i enlighet med ovan) upplöses i 200 ml i huvudsak ren och torr tetrahydrofuran. Lösningen filtreras om den är grumlig och kyles därefter till 5-100. “?907672==5 . ll. 12. 13. _-_-_-.~___-._.-..._...._..-_. ___", _ nhögst 1o°. fpaêper-) 12 Den kylda lösningen från steg 3 sättes under 10 minuter under omröring och under torr kvävgas till buty1låtis¶~ lösningen. Temperaturen bör hållas mellan -50 till, Fällningar kan förekomma." Blandningen omröres under torr kvävgas och vid 0-100 under en halv timme. 7 Vattenfri koldioxidgas får snabbt bubbla igenom lösningen under kraftig omröring under 15-30 minuter vid unge- färligen omgivningens temperatur (o-100) och vid en temperatur av högst 200. 5 Det vita precipitat som bildas tillvaratas lämpligen genom filtrering inom ett omrâde med låg fuktighet.

Precipitatet tvättas med ca 75 ml tetrahydrofuran.

Precipitatet upplöses i 250 ml vatten (pH 8,5-9,5).

Ett andra skikt av tetrahydrofuran kan vara närvarande.

Detta kan avlägsnas i en roterande vakuumindunstare (badtemperatur 500).

Vattenlösningen inställes på pH 1,6-2,0 med koncentrerad klorvätesyra. _ Den sura vattenlösningen extraheras 2 gånger med 250 ml portioner av etylacetat. Varje extrakt om 250 ml etylacetat âterextraheras med 100 ml portioner vatten.

Vattenextrakten kasseras. Etylacetatextrakten (som är befriade från eventuellt närvarande vatten) filtreras och sammanföres. _ De kombinerade etylacetatektrakteh koncentreras till torrhet på en roterande vakuumindunstare (badtempera- tur 600).

Kristallerna i kolven kokas med 300 ml kloroform under ca 2 minuter. Den varma uppslamningen (50-600) vakuum~ filtreras genom en uppvärmd Büchner-tratt (ll cm SS 604 Kristallerna tvättas med ca 75 ml kloroform med temperaturen 500. Kristallerna lufttorkas vid rumstemperatur under ca 3 timmar och överföres därefter till en storlek av ca 0,97-0,15 mm. i Kristallerna med storleken 0,07-0,15 mm behandlas med kokande kloroform exakt på det sätt som beskrivits i steg 12 (den varma kloroformen avlägsnas större delen av oreagerad l-metyl-5-merkaptotetrazol). Utbyte 14. . 16. 17. 18. 19. vscwéåï-s 13 ca 45-50 g kristallin l-karboximetyl-5-merkaptotetrazol.

Dessa kristaller kan innehålla 0,02-0,05 mol l~metyí~5~ merkaptotetrazol.

Kristallerna från steg 13 uppslammas med 250 ml etyleter vid rumstemperatur under 3-5 minuter. Blandningen filtreras. Det olösliga materialet (0.5-5%) kan vara en kontaminerande symmertrisk merkaptotetrazolketon med följande antagna struktur: N'=:=- . 9 ¥w:==ry Nšc/N " G12 " C' " G12 " N\C4.N | - I SH SH Varning: Denna förening exploderar vid ca 205-2100.

Efterfiltratet från steg 14 indunstas till torrhet på en roterande vakuumindunstare (badtemperatur 500).

Ca 42-48 gkristallint l-karboximetyl-5-merkaptotetrazol innehållande ca 0,01-0,05 mol l-metyl-5-merkaptotetrazol utvinnes. I Kristallerna upplöses i 420 ml absolut etanol (ca 100 mg/ml).

Till den varma lösningen från steg 16 sättes 310 ml Lösningen uppvärmes till 50-600. av en 41%-ig lösning av natrium-2-etylhexanoat (SEÉ) i isopropanol under mycket kraftig omröring under en tidsrymd av 10 minuter. bildas.

Blandningen filtreras varm (50-600) genom en uppvärmd Ett kristallint precipitat Blandningen uppslammas 20 minuter vid 50-600.

Büchner-tratt (ll cm SS No. 604 papper). Kristallerna tvättas med 75 ml etanol med temperaturen 500.

De etanolfuktiga kristallerna från steg 18 uppslammas i 200-300 ml etanol. sikt med maskvidden 0,074 mm. till 50-600 under 5 minuter och under kraftig omröring Uppslamningen får passera en Uppslamningen uppvärmes (oreagerad natrium-l-metyl-5-merkaptotetrazol är synnerligen löslig i varm etanol). 7907672°°5 14 . Kristallerna tillvaratages vid 50-600 på ett ll cm SS No. 604 papper i en uppvärmd Büchner-tratt.

Kristallerna tvättas med 75-100 ml etanol och vakuumtorkas 24-48 timmar vid 50Å60°. Utbyte 40~48 g av dinatriumfl-karboximetyl~$-merkaptc- tetrazol (befriad från l-metyl-5-merkaptotetrazol såsom framgår av NMR-spektrum). c) Alternativ syntes av l-karboximetyl-5-merkaptotetrazol CH2CO2C2H5 + CS2+ NaN-:š a"---*~*~“_? , NH2 vattenlösning av NaOH N = N\ /N-CHZCOZH + NazS + CZHBOH N = C \ SH Till en omrörd blandning av l3,95 g (0,l0 mol) glycinetylesterhydroklorid, 8,0 g (0,20 mol) natrium- hydroxid och 8,37 g (0,1l mol) koldisulfid sattes en lösning av 7,47 g (O,ll5 mol) natriumazid i l25 ml vatten. Lösningen återloppskokades 6,5 timmar och fick stå 16 timmar vid 250. Den mörkbruna blandningen filtrerades och filtratet surgjordes till pH l,5 med koncentrerad klorvätesvra. Lösningen behandlades med kol och det gula filtratet extraherades med 4 x 100 ml etylacetat. Etylacetatet tvättades med vatten. torkades över magnesiumsulfat och indunstades vid 400 (15 mm) _ till en olja. Oljan triturerades med metylenklorid och produkten tillvaratogs. Provet torkades i vakuum över fosforpentoxid l6 timmar vid 250. IR- och NMR- spektra var i överensstämmelse med strukturen.

Referens: tyska patentskriften 106 645. 1907672-s ExemEel 2 7~aminO-3-(1-karboximetyltetrazol-5-vl-tiometyl)-3-cefem-4- karboxylsyra l. I en trehalsad kolv försedd med omrörare, temperatur- regulator, termometer och kväveinloppsrör införes 18 g (0,066 mol) 7-aminocefalosporansyra och 300 ml av en O,l M fosfatbuffert med pH 6,4 (20,7 g natriumfosfat, enbasiskt innehållande ett kristall- vatten, +8,5 g natriumfosfat, 2-basiskt och vatten- fritt, q.s. till 2 liter). ' 2. Under omröring av den i steg l beskrivna blandningen utsärtes 1.5 g natriumbisulfit och 16 g (0,078 mol) l-karboximetyl-5-merkaptotetrazol-dinatrium, framställd enligt exempel l. '?90'?672°5 . ll. 12. 13. 14. . 16 Under fortsatt cmröring får kväve bubbla genom blandningen under 10 minuter. U Under fortsatt omrörning och genomströmning av kväve uppvärmes uppslamningen 20 minuter vid 560. Under denna tid tillsättes 6,5 g natriumbikarbonat i små portioner.

Under fortsatt omröring och kvävegenomströmning I upprätthålles lösningens temperatur 4 timmar vid 560. pH bör ligga mellan 6,2 och 6,6.

Reaktiansblananingen kyles i isbaa till 50. 50 ml av en 1:1-lösning av fosforsyra och vatten sättes till blandningen eller koncentrerad Hcl till ett pH av 2,0-3,0.

Produkten tillvaratages genom filtrering. Filterkakan tvättas med 20 ml kallt vatten, följt av 200 ml kall metanol. 7 Det fasta materialet lufttorkas till konstant vikt.

(En typisk sats innefattar 14,5 g produkt). Denna produkt kan variera i färgen från gul till mörk brun.

Produkten får passera en sikt av rostfritt stål med maskvidden 0,074 mm. g av det erhållna pulvret suspenderas i 200 ml n~propanol under kraftig omröring. ' 2,0 ml koncentrerad klorvätesyra tillsättes och bland- ningen omröres kraftigt 0,5 timmar vid rumstemperatur.

Uppslamningen filtreras. Det bruna fasta materialet tvättas med 20 ml n-propanol och tvättvätskan sättes till filtratet av ytterligare produkt). _ 1,5 g träkol ("Darco G-60") sättes till n-propanol- filtratet från steg 13. Det hela uppslammas 0,5 timmar.

Kolet avlägsnas genom filtrering. Kolet tvättas med ml n-propanol och tvättvätskan sättes till filtratet.

Under kraftig omröring sättes trietylamin till n-propanol- filtratet till ett skenbart pH av 3,0. Kristaller bildas Dessa uppslammas under 10 minuter. (filterkakan.sparas för eventuell utvinning därvid. 16. a) b) c) d) e) 7907672-5 17 De vita kristallerna tillvaratages genom filtrering och tvättas med 30 ml n-propanol och 50 ml metanol Utbyte 4-ö g 7-amino-3-(l-karboximetyltetrazol-5~yltiometyl)-3-_ och vakuumtorkas 26 timmar vid 400. cefem-4-karboxylsyra.

Alternativt förfarande för rening av 7-amino-3-(l- karboxylmetyltetrazol-5-ylticmetyl)-3-cefem-4-karboxyl- syra sker på följande sätt: l0 g av produkten med partikelstorleken 0,074 mm (från steg 103 uppslammas i 75 ml 1 N klorvätesyra vid rumstemperatur under 10-l5 minuter. Filtrering sker för avlägsnande av mörkbrunt fast material. 2,5 g träkol ("Darco G-60") tillsättes och det hela uppslammas 0,5 timmar.

Kolet avlägsnas genom filtrering. Kolet tvättas med l5 ml vatten och tvättvätskan sättes till filtratet.

Under kraftig omröring tillsättes koncentrerad ammoniumhydroxid till filtratet till ett pH av 2,5-3,0.

Kristaller bildas därvid.

Kristallmassan uppslammas under 25 minuter.

Kristallerna avlägsnas genom filtrering och tvättas med 30 ml vatten och 50 ml metanol och vakuumtorkas vid rumstemperatur. Utbyte 4-7 g av nära nog vita kristaller.

Exemgel 3 l~karboxietyltetrazol-5-tiol A) N-i Hs_JJ\ N N/' (C112) z-cozn 2-karboetoxietylisocyanat /Q-alaninetylester-hydroklorid (93,6 g), trietylamin (l23,5 g) och metylenklorid (400 ml) sammanblandades och kyldes till -1o°.

Koldisulfid (46,5 g) upplöst i 150 ml kloroform sattes till denna lösning under en tidsrymd av två timmar medan temperaturen hölls vid -100' Efter B) 7907672-5 18 fullbordad tillsats fick temperaturen stiga till l0° under ca l0 minuter. Lösningen kyldes ånyo till -100 och 66,8 g etylklorformiat i 60 ml klorofcrm tillsattes droppvis under en tidsperiod av 40 minuter under omröring.

Temperaturen fick stiga till rumstemperatur under 30 minuter och lösningen kyldes ånyo till 00. Ytterligare 6l,6 g trietylamin tillsattes vid 00 och därefter omrördes lösningen vid rumstemperatur under 3 timmar.

Blandningen behandlades med vatten och den organiska fasen tillvartcgs och tvättades med 2 x 250 ml 2N HCl, 2 x 250 ml NaHCO3 och 2 x 250 ml vatten.d Den organiska fasen torkades över Na2SO4 och lösningsmedlet avlägsnades i vakuum för erhållande av 93,7 g av en olja, som befanns vara den önskade produkten. IR- och NMR-spektra var i överens- stämmelse med strukturen. l-karboxietyltetrazol-5-tiol Natriumazid (29,7 g) upplöstes i 400 ml vatten och upp- värmdes till 600 i kväveatmosfär. 2-karboetoxietyliso- tyanat (46,9 g) , upplagt i so m1 skellyusdlve ß (i huvuatak n-hexan), sattes till den uppvärmda tnatriumazidlösningen.

Lösningen omrördes ca 150 minuter vid ca 70-720 och kylaes därefter till 3ø° pålisbaa. En sot-lg natrium- hydroxidlösning tillsattes till dess pH blev 12. Bland- ningen upphettades 40 minuter vid 700 och kyldes till 150 på isbad. pH inställdes pä 2 under användning av koncentrerad HCI och lösningen extraherades därefter med etylacetat (4 x 150 ml). Etylacetatextrakten tvättades med vatten och torkades Lösningsmedlet avdrevs i vakuum och produkten tillvaratogs såsom kristaller därefter över natriumsulfat. ur metylenklorid i en mängd av 19,5 g. 7907672-5 19 ExemBel_â 7-amino~7-metoxi-3-(l-karboximetyl-tetrazol-5-vltiomgtvlåj 3-cefem-4-karboxxlsyra I allmänhet följas det förfarande som beskrives i den amerikanska patentskriften 3 875 146 för framställning av 7-metoxisubstitue- rade-7-aminocefalosporansyror för framställning av utgångs- materialet för den i rubriken angivna föreningen.

Metod I ocxa3 H å N/“s e 2 S ' I I IF' cu o äta Na , -czxzoozna _ o Kf 2 3 - _ » , ozn E>cn3 s D . H2 - I _ _ Cu2-5-1-Q-Äá~CH2CO2H COZH I en 3-halsad kolfförsedd med omrörare, temperaturregu- lator, termometer och kväveinloppsrör, införes 18 9 (0,066 mol) 7-amino-7-metoxicefalosporansyra och 300 ml av en 0,1 M fosfatbuffert pH 6,4 (20,7 g natriumfosfat, enbasiskt. lH20 + 8.5 g natriumfosfat, 2-basiskt, vatten- fritt, q.s. till 2 liter).

Under omröring av blandningen i steg l tillsättes 1.5 g natriumbisulfit och l6'g (0,078 mol) l-karboximetyl-5- merkaptotetrazoldinatrium. I Under fortsatt omröring får kväve bubbla genom bland- ningen under 10 minuter. 7 Under fortsatt omröring och kvävegenomströmning uppvärmes uppslamningen till 560 under en tidsrymd av 20 minuter.

Under denna tid tillsättes 6,5 g natriumbikarbonat i små portioner. 7907672-'5 6. 7. l0. ll. l5. 16. __.-_-__.-__.._...-_._ ...___ .__._--. _ gzo Under fortsatt omröring och kvävegenomströmning hålles lösningens temperatur vid 560 under 4 timmar. pH bör ligga mellan 6,2 och 6,6.

Reaktionsblandningen kyles på isbad till 50. 50 ml av en l:l-lösning av forforsyra/vatten sättes till blandningen eller koncentrerad.HCl till ett pH av 2,0-3,0.

Produkten tillvaratages genom filtrering. Filterkakan tvättas med 20 ml kallt vatten, följt av 200 ml kall metanol. I Det fasta materialet lufttorkas till konstant vikt.

Den erhållna produkten_kan variera till färgen från gul till mörkbrun.

Produkten får passera en sikt av rostfritt stål med mask- vidden 0,074 mm. 7 g av pulvret med storleken 0,074 mm suspenderas i 200 ml n-propanol under kraftig omröring. 2,0 ml koncentrerad klorvätesyra tillsättes och blandningen omröres kraftigt 0,5 timmar vid rumstemperatur. _ Uppslamningen filtreras. Det bruna fasta materialet tvättas med 20 ml n-propanol och tvättvätskan sättes till filtratet (filterkakan sparas för eventuell utvinning av ytterligare produkt). . _ 1,5 g träkol (“Darco G-60“) sättes till n-propanolfiltratet från steg 13. Hålet av- lägsnas genom filtrering och tvättas med 20 ml n-propanol Det hela uppslammas 0,5 timmar. och tvättvätskan sättes till filtratet.

Under snabb omröring sättes trietylamin till n~propanol- filtratet till ett skenbart pH av 3,0. Kristaller bildas därvid. Det hela uppslammas l0 minuter. ' De vita kristallerna tillvaratages.genom filtrering och tvättas med 30 ml n-propanol och 50 ml metanol och vakuum- torkas vid 400 under 24 timmar. 7907672-5 Metod II . u m- ' °\ N'J%>N 2 . l| | \+ 0/ czgcozz coáz _ :I ocfl GH I 3 N/“w 01” cnzcozz °2? ' ¶ III ' ' \/ ocna Nnz r'S rffifiñ _N ,/* u -s - _ CF? 2 Åuaçoaz ' CO. 'l- I * ' xv vari Z betecknar benshydrylester.

A) B) C) D) 7907672-'5 22 7-amino-3-(l-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3- cefem-4-karboxylsyra upplöses i dioxan i närvaro av en katalytisk mängd p-toluensulfonsyra. Metanol tillsättes och lösningarna indunstas till torrhet i vakuum flera gånger, följt av ytterligare tillsats av vattenfri dioxan.

Difenyldiazometan tillsättes i en mängd av 2 mol diazometan per mol cefalosporin; Lösningsmedlen avlägsnas i vakuum för erhållande av 7-amino-3-(l-karboximetyltetrazol-5- yltiometyl)~3-cefem-4-karboxylsyradibenshydrylester (I)¿ Den i steg A ovan erhållna dibenshydrylestern upplöses i metylenklorid och p-nitrobensaldehyd tillsättes i ett molförhållande av ca l:l av aldehyd till cefalosporin.

En liten mängd vattenfritt magnesiumsulfat tillsättes och blandningen omröres 0,5 timmar vid omgivningens temperatur för erhållande av 7-(p-nitrobensylidenamino)-3-(l-karboxi- metyltetrazol-5-yl-tiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra- dibenshydrylester (II). ' Den i steg B erhållna föreningen II upplöses i torr tetra- hydrofuran och lösningen kyles till -780 under kväve- atmosfär. Fenyllitium i en ekvimolär mängd med avseende på mängden cefalosporin tillsättes vid -7É°.f Temperaturen får stiga till -500 och en mängd nyframställd o-metyl- aimetylsuifoxoniummetosulfat [cap 2s+ocH3o"so2cH3_7 i lzl dimetylsulfoxid (DMSO): hexametylfosforamid till- sättes. Metoxileringsreaktionsblandningen omröres 10 minuter vid -500 och får därefter antaga rumstemperatur för erhållande av produkten 7-metoxi-7-(p-nitrobensyliden- amino)-3-(l-karboximetyltetrazol-5-yl-tiometyl)-3-cefem- 4-karboxylsyradibenshydrylester (III).

Den i steg C erhållna föreningen III hydrolyseras genom behandling av föreningen med en ekvimolär mängd av anilinhydrokloridmetanol vid rumstemperatur under 1-24 timmar. 7907672-'5 l'\) b) Exemgel 5 7-(2-amincmetylfenylacetamido)-3-(L-karboximetyltetrazol: -yl-tiometyl)-3-cefem~4~karbcxylsyra //CHQNHQ ®cfl2com fl O/x \./'" CHQ"SI'“*~N f* n coon bnacoon Metodbeskrivning: l. I en 3-halsad kolv innehållande 100 ml avjoniserat vatten och försedd med omrörare och termometer införes 7,6 g (0,02l mol) 7-amino-3-(l-karboximetyltetrazol-5- yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra och 3,4 g (0,034 mol) N-metylmcrfolin. Blandningen kyles till Oo och hålles under omröring vid OO under användning av ett isbad. 2§ I en separat kolv försedd med omrörare införes 9,6 g (0,03 mol) natrium-2-(l-metoxikarbonyl-l~propen-2- ylaminometyl)fenylacetat och 184 ml tetrnnydrofuran.

Under omröring kyles suspensionen till -300 under använd- ning av ett torris-acetonbad. Under omröring och under upprätthållande av temperaturen vid -300 tillsättes doppar dimetylbensylamin och 4,4 g (0,03 mol) isobutyl- klorformiat. Den erhållna blandningen omröres 5 minuter. 3. All blandning från steg 2 sättes till den omrörda lösningen i steg l i en portion. Den resulterande lösningen hâlles vid 30 l timme under omröring. 4. Tetrahydrofuranen avdrives från reaktionsblandningen vid 300 under användning av vakuum (15 mm). a. Den kvarvarande vattenlösningens pH-värde inställes på 4,0 under användning av koncentrerad klorvätesyra. 6. 2,5 gram träkol ("Darco G-60") sättes till blandningen och omblandning sker under 20 minuter. Kolet avlägsnas genom~filtrering. 7. Filtratet heskiktas med 120 ml etylacetat och under omröring sänkes pH-värdet till 3,8 med koncentrerad 7907672-5 . ll. 12. 13. 24 ilorvätesyra. En liten mängd ljusbrunfärgat fast material kan avskiljas och avlägsnas genom filtrering.

(Detta material sparas för upparbetning och ytterligare utvinning av produkt).

Under användning av ett isbad kyles filtratet till 50 och under omröring sänkes pH till 2,5-2,8 med koncentrerad klorvätesyra. Temperaturen hålles vid 50 och omröringen fortsättes 1 timme.

Produkten tillvaratages genom filtrering. Filterkakan tvättas maa s m1 kallt avjoniserat vatten, följt av ml kall metanol.

Den fasta 7-(2-aminometylfenylacetamidc)»3-(l-karboxi- metyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyran lufttorkas till konstant vikt. (En typisk körning ger 4,1 g produkt).

Den i steg 10 erhållna produkten får passera en sikt av rostfritt stål med maskvidden 0,074 mm. l0 g av denna produkt med partikelstorleken 0,074 mm appalaxmnaa i loo m1 kloraform. 5 m1 'triatyiaminatiii- sättes och blandningen uppvärmes till 500 under snabb omröring. Blandningen uppslammas 5 minuter vid 500.

Blandningen filteras varm (7-ACA, 7?amino-3-(l-karboxi- metyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra, färgämnen och andra föroreningar är lösliga i den varma Filterkakan tvättas med Utbyte: l-8 g kloroformtrietylaminlösningen). ml kloroform och lufttorkas 2 timmar. 7 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3-(l-karboximetyltetrazol- 14. . .l6. 7 tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra, -yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra.

Produkten från steg 13 får passera en sikt med maskvidden 0,074 mm. g av den siktade produkten uppslammas i 75 ml 0,1 N klorvätesyra under 10-15 minuter. Blandningen filtreras och filterkakan tvättas med 25 ml vatten, S0 ml metanol, och lufttorkas vid rumstemperatur under 2¥3 timmar.

Utbyte: upp till 10 g. , l0 g 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3-(l-karboximetyl- som har erhållits i steg 15, uppslammas i 65 ml metanol. 17.

A) a) C) e) f) '7907672-5 2 ml koncentrerad klorvätesyra tillsättes. En lösning eller praktiskt taget fullständig lösning erhålles. Det hela omröres 5 minuter. 130 ml vatten tillsättes snabbt under kraftig omröring till lösningen enligt a) ovan. En fällning (innehållande huvuddelen av färgen) erhålles omedelbart (Ett pä av 1,3-1,6 kräves).

Blandningen uppslammas l minut och filtreras snabbt.

(Det fasta materialet sparas för upparbetning och utvinning av ytterligare produkt).

Filtratet försättes med groddkristaller och omröres måttligt.

Blandningen omröres vid omgivningens temperatur eller vid 40 under 2 timmar efter avslutad kristal- Kristallisationstiden är ca 15-30 minuter. lisation.

Kristallerna avlägsnas genom filtrering, tvättas med 25 ml av en blandning innehållande 65 volym% vatten och 35 volym% metanol och med 50 ml metanol och vakuumtorkas 24 timmar-vid 500. Utbyte upp till 9 g renad, vit 74(2-aminometylfenyiaaetamiao)-3-(1-kar- boximetyltetrazol-Seyltiometyl)-3-cefem-4-karboxyl- syra.

Nedan anges 2 alternativa metoder för kristallisation av 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3-(l-karboximetyltetrazol- -yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra. l. g av den i steg 15 erhållna produkten uppslammas i 100 ml metanol. 2 ml koncentrerad klorvätesyra tillsättes och man erhåller en lösning eller praktiskt taget fullständig lösning. 1.5 g träkol (“Darco G-60") tillsättes och blandningen uppslammas under 0,5 timmar._ Kolet avlägsnas genom filtrering och tvättas med 20 ml metanol. Metanoltvättvätskan sättes till filtratet. 120 ml vatten sättes till filtratet. (En liten mängd precipitat kan utfalla. Detta avlägsnas genom filtrering .B) 790767245 |.._| I ,monohydrat. 26 'och sparas för upparbetning-produktutvinning).

Lösningen från steg 5 omröres hastigt och inställes på pH 2,5-3,0 med l0%-ig natriumhydroxid, varvid kristaller bildas.

.Blandningen uppslammas under 0,5 timmar.. Kristal- lerna avlägsnas genom filtrering, tvättas med 20 ml av en 50 volym%-ig vattenlösning av metanol, 30 ml_ metanol och vakuumtorkas 24 timmar vid 500. Utbyte 7 upp till 9 g renad 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3- (l-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)~3-cefem-4-kar- boxylsyra. 7 7 l0 g av den i steg l5 erhållna produkten uppslammas i 75 ml vatten. %-ig natriumhydroxid tillsättes till ett pH av 6,8-7,2. En lösning eller partiell lösning kan erhållas. - l,5 g träkol (“Darco G-60“)tillsättes och blandningen uppslammas 0,5 timmar vid ett pH av 5,8-7,2 (kontinuerlig tillsats av 0,l-l N natriumhydroxid).

Kolet avläsnas genom filtrering. Kolet tvättas med zo m1 vatten, som sattes till filtratet.

Lösningen från steg 4 med pH 6,8-7,2 kan kristalliseras vid pH 2,5-3,0 såsom beskrivits i stegen 6 och 7 under A) ovan eller vid_pH l,2-1,5 (genom tillsats av klorvätesyra) såsom beskrivits under d,e, och f i steg l6 ovan. I båda fallen erhålles upp till 9 g kristallin 7-(2-aminometylfenylacetamido)-3-(l-karboxi- metyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra.

Denna produkt erhålles ofta såsom ett kristallint Om denna förening administreras intra- muskulärt genom injecering i en dosering av 10 mg/kg- kroppsvikt till möss erhålles en blodnivå av 19,7 mg/ml på 15 minuter; * U, _ Skvddsdosen av den i rubriken angivna föreningen för 50% av djuren gentemot en letal intramuskulär dos av E. Coli Al5ll9, K. Pneumoniae A9977 och E. cloacae A2l020 är o,39-o,42, l,5-as respi-Lz mg/kg. ' _-.._.,..._...-.__....

ExemQel_§ Dikalium-7-(D~°(-hydroxifenylacetamido)-3-fl-karboximetïjï tetrazol-5~yltiometyl)-3-cefem-4-karbcxylat "" I s <š::;>-cHcoNhT::ï/ on . T""'§ 1 H~SI N oáy ' 2 i/ ,/Q - _ fif0K cH2c-ox O ,.

D...

A) 7-(D~°¿-formyloxifenylacetamido)-3-(l-karboximetyltetra- zol-5-yl-tiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra Till en suspension av 500 mg (0,0l34 mol) 7-amino-3-(l-kar- boximetyltetrazol-5-yltiometyl)~3-cefem-4~karboxylsyra i 10 ml vatten vid 00 sattes under omröring 200 mg natriumbikarbonat. Så snart allt hade gått till lösning tillsattes 340 mg (0,0l72 mol D-(-)-2-formyloxi-2-fenyl- acetylklorid i en portion i 19 ml aceton. Så snat.ett precipitat hade bildats tillsattes fast natriumbikarbonat och lösningen omrördes l timme vid pH 8. Acetonet avdrevs 'vid 30° (15 mm) och lösningen beskiktades med 20 ml etylacetat och surgjordes med 1:1 fosforsyra. Efter extraktion med etylacetat filtrerades blandningen och det organiska skiktet avskiljades och indunstades för erhål- lande av en produkt, som identifierades såsom i huvudsak ren 7-(D-04-formyloxifenylacetamido)-3-(l~karboximetyl- tetrazol-Sfyl-tiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra.

B) Dikalium-7-(D-aš-hydroxifenylacetamido)-3-(l-karboximetyl- tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylat Det i steg A isolerade fasta materialet upplöstes i 5 ml metanol och 5 droppar koncentrerad klorvätesyra. Lösningen behandlades med kol och upphettades 3 minuter på ångbad.

Blandningen filtrerades och späddes med l5 ml vatten.

Det erhållna gummiartade fasta materialet triturerades med kallt vatten och slutligen med vattenfri eter. Det fasta materialet upplöstes i 5 ml aceton och behandlades med 50 mg kalium42-etylhexanoat. Man tillvaratog 7907672-5 7907I6?2~'5 dikalium-7-(D-04-hydroxifenylacetamido)-3-(1-karboxi- metyltetrazo1-5-yltiometyl)-3-cefem~4-karboxylat såsom ett vitt fast material i en mängd av 90 mg och med smältpunkten 1750 (långsam sönderdelning).

Analys: Beräknat för Cl9Hl6K2N6O7S2: C 39,19 H 2,77 N 14,42 i funnet: c 39,67 H 3,so N 12,58 Då denna förening administreras intramuskulärt genom injicering i en dos av 10 mg/kg kroppsvikt till möss verhâlles en blodnivå av 21,4 mg/ml på 15 minnter.

Skyddsdosen av denna förening hos 50% av möss gentemot en letal intramuskulär dos av E. Coli A 15119 är 0,8 mg/kg.

Exemgelgl 7-(D-oš-aminofenylacetamido)-3-(1-karboximety1tetrazol-5-yltio- metyl)43-cefem-4-karboxylsyra w ' NH2 _/ 0H2°'S O N/N \ n- . cngcooæz En lösning av 0,55 g (0,0022 mol) Dr(-)-0<-tert.-butoxikarhox- amidofenylättiksyra och 0,22 g (0,0022 mol) trietylamin (TEÅ) i 17 ml tetrahydrofuran (THF) vid 00 omrördes kraftigt med 0,300 g (0,0022 mol) isobutylklorformiat. Blandningen omrördes minuter vid Oo och en lösning av 0,0022 mol 7-amino-3-(l-kar- boximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra och 0,445 g (0,0044 mol) TEA i 6,8 ml 50%-ig THF tillsattes. Den resulterande lösningen omrördes 2 timmar_vid 250 och därefter indunstades THF vid 400 (15 mm) till en olja. Oljan tvättades med 2 x 50 ml eter, späddes till hälften med vatten och surgjordes till pH 3,0 med utspädd klorvätesyra. Blandningen ' onmördes 1 timme på isbad och produkten extraherades med 75 ml 'etylacetat. Extraktet tvättades med 2-x 20 ml vatten och 2 x 50 ml av en mättad natriumkloridlösning. Etylacetatet 7907672-5 29 avdrevs vid 350 (15 mm) till en olja och triturerades med Skellysolve B i ett utbyte av 480 mg (35,3%) 7-(D-cé-tertfdww toxikarboxamidofenylacetamidcl-3-(1~karboximety1tetrazo1-5-yl- tiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra. Detta prov sattes till 1 ml trifluorättiksyra och lösningen omrördes 1 timme vid 00 och späddes därefter med 50 ml eter; Saltet tillvaratogs, upp- löstes i 10 ml H20 och inställdes på pH 4.0 med utspädd ammonium- hydroxid (NH4OH). Produkten tillvaratogs, tvättades med vatten och aceton och torkades i vakuum över PZO5 under 18 timmar vid 25°, varvid man erhöll 150 mg (23,9e%) 'z-(n-»t-amino- feny1acetamido)-3-(1-karboximetyltetrazol-5-ylticmetyl)-3-cefem- 4-karboxylsyra med en smältpunkt överstigande 180C (långsam sönderdelning). IR- och NMR-spektra var i överensstämmelse med strukturen.

Analys: Beräknat för Cl9Hl9N7O6S2. 1 1/2 H O: C 42,84 H 4,16 N 18,41 _ Funnet: C 43,17 H 4,12 M 16,74 Exemgel 8 7-(2-aminometyl-l,4-cyklohexadienylacetamido)-3-(l~karboxi- metyltetrazol-5-yltiometyl)~3-cefem~4-karboxylsyra cazconxm _ ï__.¿? t _ . O N ,/ cH2s N,N \ I coqfi ' pnzcoon En lösning av 0,80 g (0,003 mol) 2-t*butoxikarbonylamino- metyl-1,4-cyklohexadienylättiksyra och 0,303 g (0,003 mol) trietylamin i 19,2 ml THF omrördes vid 00 och 0,41 g (0,003 mol) isobutylklorformiat tillsattes. Blandningen omrördes 30 minuter vid 00 och sattes till en lösning av 0,003 mol 7-amino-3-(l-kar- boximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra och 0,61 g (0,006 mol) TEA i 9,2 ml 50%-ig THF. Den resulterande lösningen omrördes 1,5 timmar vid 250. Tetrahydrofuranen TQOTWZ-"S avdrevs vid 300 (15 mm) och återstoden tvättades med 2 x 30 ml eter och späddes därefter till hälften med vatten, Lösningen surgjordes till pH 3,5 med utspädd klorvätesyra och produkten tillvaratogs och torkades 18 timmar i vakuum över P205 vid 250 varvid man erhöll 1,55 g (54,0%) av ett vitt pulver.

Totalt 3,4 ml trifluorättiksyra sattes till den erhållna 7-(oi-(Zft-butoxikarbonylaminometyl-l,4-cyklohexadienylacet- amido,-3-(l-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3~cefem-4-kar- bcxylsyra och omrördes 1 timme vid Oo. Lösningen späddes med *l50 ml eter och precipitatet tillvaratogs genom filtrering.

Trifluoracetatsaltet suspenderades i 3,4 ml vatten och inställdes på pH 4,5 med utspädd ammoniumhydroxid. Den gummiartade återstoden triturerades med vatten, tillvaratogs och tvättades med vatten och aceton. Produkten torkades 18 timmar i vakuum över P2O5 vid 250,-varvid man erhöll 53 mg (l5,72%) 7-(2-aminometyl-l,4-cyklchexadienylacetamido)-3-(l-kar- bcximetjltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra med en smältpunkt överstigande 1600 (lånqsam sönderdelning).

Analys: > > _ Beräknat för C20H23N7O6S2. 1/2 H O: C 45,18 H 4,55 N 18,44 . Funnet: C 45,Q6 H 4,68 N 17,09 IR~ och NMR-spektra var i överensstämmelse med strukturen.- Exemgel 9 _ 7-(nå-amino-4-hydroxifenylacetamido)-3-(l-karboximetyltet- razol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra. no-Cà- clni-coniàjjs - ' 15- coon cnecoou e Till en lösning ev 2,7 g (o,o1 mel) D-(-)-N-text.-butexi-' karbony1-p-hydroxifenylglycin i 92 ml tetrahydrofuran sattes l,l g (0,0l mol) N-metylmorfolin. Lösningen kyldes till 00 och 1,4 g (0,0l mol) isobutylklorformiat tillsattes i en portion. Omröringen fortsattes 10 minuter och blandanhydrid- lösningen sattes till en o° lösning av 3,7 g (o,o1 mel) 7907672-5 31 7-amino-3-(l-karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-kar- boxylsyra och 1,1 g (0,0l mol) N~metylmorfolin i 50 ml vatten.

Lösningen omrördes l timme och tetrahydrofuranen av revs viš 300 (15 mm) till en total volym av 45 ml. Lösningens pH-värde sänktes till 2 med l:l fcsforsyra coh extraherades med etyl- _ acetat, tvättades med vatten och lösninqsmedlet avdrevs azeotrcpiskt varvid man erhöll ett glasartat fast material vid 300 (15 mm). Återstoden triturerades med eter för avlägs- nande av eventuell utgângssyra och tillvaratoqs genom filtrering.

Produkten var hydroskopisk och överfördes omedelbart i 5 ml trifluorättiksyra och lösningen omrördes 1 timme vid 270.

Lösningen späddes med 25 ml eter och produkten tillvaratogs genom filtrering och suspenderades i 5 ml vatten. Blandningen inställdes på pH 3 med koncentrerad ammoniumhydroxid och späddes med 10 ml isopropanol. Det ljusbruna fasta materialet tillvaratogs genom filtrering och torkades i vakuum över P2O5 under 24 timmar, varvid man erhöll 300 mg 7-(°§-amino-4-hyd- roxifenylacetamido)-3-(i-karbcximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-ce- fem-4-karboxylsyra. Smp. l75° (långsam sönderdelning). ênalysz Beräknat för Cl9Hl9N707S23/4 i -C3H70: C 42,78 H 4,44 N 17,32 Funnet: C 42,86 H 4,55 N 15,39 IR- och NMR-spektra var i överensstämmelse med strukturen.

NMR~spektrum visade närvaro av 0,75 mol isopropylalkohol i produkten.

Exemgel 10 7-fenoxiacetamido-3-(l~karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-ce- femf4-karboxylsyra Natrium-7-fenoxiacetamidocefalosporanat (0,27 mol) suspenderades i 1000 ml 0,l M fosfatbuffert pH 6,4 vartill sattes 0,31 mol dinatrium-l-karboximetyl-5-merkaptotetrazol. Lösningen upp- värmdes vid 550 5 timmar under kväveatmosfär. Efter l timme inställdes pH på 6,4 av en liten mängd 40%-ig H3PO4. Vid slutet av den 5 timmar långa uppvärmningsperioden kyldes lösningen till 230 och pH inställdes på 2 genom tillsats av 3 N HCl under ett skikt av etylacetat. Produkten extraherades ?9Û»'?6?2“5 32 med etylacetat och omrördes 15 minuter vid 23° med 2 g avfärgande (“Darco KB"). Lösningen filtrerades därefter genom en dyna av diatomacêjord (“Celite") och etylacetatet avlägsnades i vakuum, varvid man erhöll en olja, som tri- turerades till ett fast material med dietyleter, tillvara- togs genom filtrering och torkades över P2O5 i vakuum för erhållande av fast 7-fenoxiacetamido-3-(l-karboximetyl- tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefemrå-karboxylsyra.

Exempel_ll 7-/ÖPQC-amino~0C-(p-hydroxifenyl)acetamido7~3-(1-karboxi- metyltetrazol-5-yltiometyl-3-cefem-4-karboxylsyra _ A_ 7-ÅÉ4-(4-hydroxifenyl)-04-De(t-butoxikarbonylamino)-acetami- QQZE3-(1-karboXimety1tetrazol-S-yltiometyl-3-cefem-4-karboxyl- säs , I Natriumrï-¿;2-(4-hydroxifenyl)-pí-D-(t-butoxikarbonyl- amino)-acetamidg7cefalosporanat (0,27 mol) suspenderades i 1000 ml 0,1 M fosfatbuffert pH 6,4, vartill sattes 0,31 mol dinatrium-l-karboximety1-5-merkaptotetrazo1.

Lösningen uppvärmdes i 550 under kväveatmosfär 5 timmar.

Efter 1 timme inställdes pH på 6,4_genom tillsats av en liten mängd 40%-ig H3PO4. Vid slutet av den 5 timmar långa uppvärmningsperioden kyldes lösningen till 230 och pH inställdes på 2 genom tillsats av 3 N HCl under ett skikt av etylacetat. Produkten extraherades med etyl- acetat och omrördes 15 minuter vid 230 med 2 g avfärgande träkol ("Darco KB"). Lösningen filtrerades därefter 7 genom en dyna av diatomacêjord ("Celite“) och etylacetatet avlägsnades i vakuum, varvid man erhöll en olja som triturerades till ett fast material med dietyleter, till- varatogs genom filtrering och torkades över P2O5 i vakuum, varvid man erhöll fast 7-¿;Z-(4-hydroxifenyl)-øí~D-(t-butoxi- karbonylamino)acetamid97-3-(l~karboximetyltetrazol-5-y1tio- metyl)-3-cefem-4-karboxylsyra.

B. 7-¿§Fv(-amino-0<-(p-hydroxifenyl)acetamidg7?3-(l-karboxi- metyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefemëé-karboxylsyra 7-¿§2-(4-hydroxifenyl)-ø<-D-(t-butoxikarbonylamino)-acet- amidg7-3-(l-karboximety1tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-kar- boxylsyra (0,1 mol) upplöstes i 30 ml trifluorättiksyra 1907672-5 33 vid 50. Lösningen fick anta en temperatur av 230 och omrördes ytterligare i 30 minuter. Lösningen hälldes därefter långsamt i 1000 ml vattenfri etyleter under kraftig omröring. Precipitatet tillvaratogs genom tvättades med 100 ml etyleter och torkades Det upplöstes därefter filtrering, över PZOS i vakuum l timme. i 75 ml H20 avfiltrerades det fasta materialet. träkol ("Darco KB") sattes till filtratet och efter och efter omröring 30 minuter i 230 2 g avfärgande omröring 10 minuter vid 230 filtrerades uppslamningen genom en "Celite"-dyna. Filtratets pH inställdes på 4 genom tillsats av trietylamin och det fasta materialet Filtratet indunstades i högvakuum till Produkten avfiltrerades. en olja, som triturerades med acetcnitril. 7-_/_]_3- OC -amino- 06 - (p- hydroxifenyl) acetamidg7-3- (l-karboxi- metyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra tillvaratogs genom filtrering och lufttorkades.

Exemgel 12 A.

Natrium-7-15-06-¿§-(2-furoyl)ureidg7F4~hvdroxifenyl- acetamido7cefalosporanat Trietylamin (6,4 ml; 0,0454 mol) och 12,7 g (0,l039 mol) 2-furoylisocyanat sattes till en iskyld suspension av ,8 g (0,04l3 mol) 7-(D-øé-amino-4-hydroxifenylacetami- do)cefalosporansyra (såsom ett dimetylformamid-vatten- solvat) i 175 ml torr dimetylformamid. Efter ca 1 minut avlägsnades isbadet och blandningen omrördes l timme.

Den mörka lösningen späddes med 600 ml vatten och beskiktades med etylacetat och vattenfasen surgjordes till pH 2,5 med 42%-ig fosforsyra. Faserna separerades och den vattenhaltiga dimetylformamidfasen extraherades 4 gånger ytterligare med etylacetat. De kombinerade organiska extrakten tvättades 5 gånger med vatten, behandlades med kol, filtrerades och koncentrerades under reducerat tryck för avlägsnande av resterande vatten.

Nyframställd etylacetat tillsattes och den omrörda lösningen behandlades långsamt med l5)l ml (0,0408 mol) 79Û7672~S i 34 natrium-2-etylhexanoat i l-butanol, vilket fick produkten att kristallisera i en mängd av 18,1 g (75,5%). önskade produkten.

.IR-spektrum var i överensstämmelse med den 7¥¿Ü-@L-¿§-(2-furoyl)ureidgf-4-hydrexifenylacetamidg7-3- (l~karboximetyltetrazol-5-yltiometyl)fcefem-4-karboxyl- syra-dinatriumsalt I 1 En blandning av 4,0 g (0,0069 mol) natrium-715-a-¿3_(2_fu_ royl)-ureid9/-4-hydroxifenylacetamidg/cefalcspcranat, 1,83 g (o,oos9s moi) s-merkapto-1-tetrazolättiksyra-ainat- riumsalt och 200 ml 0,1 M fosfatbuffert pH 6,4 uppvärmdes 6 timmar vid 750 under kväveatmosfär. Reaktionsblandningen, som hade förvarats över natten i kylskåp, filtrerades för avlägsnande av en liten mängd precipitat. Filtratet inställdes på pH 2 med 6 N HCl och blandningen extraherades 3 gånger med etylacetat. Blandningen filtrerades under den första extraktionen för avlägsnande av en liten mängd olösligt material. De kombinerade etylacetatextrakten (volym = 500 ml) tvättades två gånger med vatten, torkades (natriumsulfat), filtrerades och behandlades med l,5 ml (0,0l38 mol; 2 ekvivalenter) natrium-2-etylhexanoat i l-butanol, vilket fick en olja att utfalla. koncentrerades-något för avlägsnande av vatten och bland~ ningen fick stå i kylskåp. Lösningsmedlet avdekanterades Lösningsmedlet och den gummiartade produkten triturerades med aceton, varvid man erhöll ett filtrerbart, fast material i ett utbyte av 2,0 g. Produkten torkades i vakuum över fosfor- pentoxid. IR-spektrum var i överensstämmelse med den önskade produkten.

Prover av de enligt exemplen 5, 6, 7, 8, 9 och 12 framställda föreningarna, efter upplösning i vatten och spädning med näringsbuljong, visade sig ha i tabellen nedan angivna minsta hämmande koncentrationer (MHK) i pg/ml gentemot angivna mikroorganismer vid bestämning genom inkubering över natten vid 370 under användning av rör- spädningstekniken. 7907672-5 Nm m.o Nm mr HA m~.o m .xm m. m. mf. mr.

Nr 0 mmw mr WP O Mm N MmA HA O O -NW m.o P N m m.o F of mf m.~ w w~.o m.o w .wf m.N mv m.~ m.~^ m.o^ Nm m.o m.N w~.o w.o mo.o w.o ß .xm w .xm m.@ ~_.= oommm Nm N Qmrmfæ _ m~.o ßwmmw Nm wF mßwmm « m.O @PFm_m wo.° @o»Q fmmmæ w w ßmomræ v N @Qwm< m.~ P wowmm wfi « »Mmmm m.F F »Mmmm w.° m_.o vowmm @.Q mf.o mwmma m .xm .uHmmH_ Eommm flE\mE Qmmm pmzmfifl |moH. .xm .gå OHMH> fl #muw>Huxfl fiflß«Hmßy@¿H4C4 N| m\l. lOrv EÜHÜW WOMIMÜÜHÜM Aw!oP, mflfiflnmuflå Awlofv wmflfloëflmcm Åwlorv wmflcøädmflm Avlofv flfioo Å orv Hndb flaoo WI .HL .Z .Z .U .H ofv mH¶fiuHHwuCw .Hmm or. momusvmz mswnnm QPV mmmfxm msmusm øfiv mfiwfxm møwunm %|OHv,§UflEW MDÜHÖM .T .W .m .m .m .W :~v *mmcmmoæm .Mum ««^mxoF. xmmflnoënmcm .Mum Hmåmflcmmuø 36 '7907672-5 cwuvmfl Hm>m mum uvmm Bow Høuflüxmnofiflßn >m mflfiflwmmw xx Eflnwm wm + møofiabflmmflflumfl wom + mdonflflnwæflmnm xwflvoflflfluflm æmw K om -wš / , flšwš Nm ímw m.o H mNHA mNaA mmHA mNH^ mNHA mNflA w Nm w .xm ß .am WO mNHÅ mwflw m~fi^ m~H^ ma . . ïz ¶ z ïzäusooomš Mm 08 o . h í _ . z w J. \_ _ ¶ _ :mä um . wwiwwm .Awffiëénëæm -moåj . . ¶ _ . ¶ ._ ¶ _ w . mzwmu ..

Nm mmwm«¶ ^«|oHV wmumoflo .nam m~.°. ßmwma _^«|QHv wmomofio .gem m~H^. wmwmm ^«|oHv mmumofio .pmm mwfl mfioowm .wnoflv mcwuwwufims .Hmm mwfia fmmwæmm A roflv mmonflmøuwm .mm Nm mmflmH< ^«|oH. fiflnmwflos .nmí m .Nm umñmfinømuo .,. _ ,.._.._.___..._...:.____.:___._. . 7907672-5 37 Exemoel 13 A. 7ß-Wo-N-t-butoxikarbonyleminometylfenylacetamido)- -704-metoxi-3:(l-karboximetyltetrazol-5~yltiometyl)-3-ce- fem-4~karboxylsyrai cnznnsoc OMe , i S V HZCON-Jï-/l -mimll . gr _¿%r___N , _cn2á N¿,N 0 - ' I dl c i _ I cozn _ I2 OZH En blandning av 7,3-(O-N-t-butoxikarbonylaminometyl- fenylacetamido)-70(ëmetoxicefalosporansyra (549 mg, l mmol) natriumbikarbonat (84 mg; 1 mmcl) och l-karboxi- metyl-5-merkaptotetrazol-dinetriumsalt (816 mg; 4 mmol) i 0,1 M fosfatbuffert pH 7,0 (5 ml) upphettades l tim- me vid 850. Efter kylning surgjordes blandningen till pH l med utspädd HCl och extraherades med 3 x 30 ml etylacetat. De kombinerade extrakten tvättades med vatten, torkades och indunstades under reducerat tryck för erhållande av en oljig återstod, som kromato- graferades på en silikagelkolonn (Wako-gel, C-200, g). Kolonnen eluerades med kloroform-metanol (50:l).

Det första eluatet (100 ml) innehöll utgångsmerkaptanen <0,30 g). Def andra eluetet (50 ml) innehöll den önskade produkten, som behandlades med en liten mängd kol och indunstades under reducerat tryck för erhål- lande av den i rubriken angivna föreningen såsom ett_ amorft pulver i ett utbyte av 140 mg (É2%) och med emältpunkten llo-l20° 1R=Vââ: 3600-2400, 1780, 1690, 1520, 1385, l250,1l60 em'1 Uv=Aâ:íH 246 nm (E 6300), 274 nm (E 6700) NMR=&DMâP"d6 1,35 (9H, e, t-Bu-g), 3,38 (3H, e, ocH3), 3,65 (2H, e, cH2co), 4,13 (ln, d, 14Hz, 3-g), 4,16 7-997672-5 38 (zu, a, GHz, en singlar: med 020, 025m) , 4,50 (111, a, 14112, 3-3), s,01_(1H, s, e-H), ,26 (za, s, tetrazcu-cnzco), 7,20, (411, s, fenyl-H), 9,20 (lH, s, CONH, försvann vid tillsats av D20).

Analys: .

Beräknat för C26H3lN7O9S2.2H2O: C 45,54 H 5,14 N 14,30 Funnet: C 45,71 45,73; H 4,51, 4,42; N 13,65, 13,91 _B. 7 B-(o-aminometylfenylacetamido)-7 u~metoxi-3-(l~kar- boximetyltetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra _ en m: 2 2 . _ I I g g _ v n que, -D i ' cnzcom--f-f 0/ I v En kall blandning av den enligt AI ovan erhållna produkten (120 mg; 0,18 mmol) och 0,3 ml trifluor- ättiksyra (TFA) omrördes vid rumstemperatur 20 minuter för erhållande av en viskös lösning. Tillsats av. ml eter till lösningen gav TFA-saltet av produkten, som tillvaratogs genom filtrering och upplöstes i ml acetonitril-vatten (50:l). Lösningen behandlades med en liten mängd kol. En blandning av koncentrerad NHAOH-acetonitril_(l:2) sattes droppvis till filtratet under omröring till dess någon utfällning icke längre ägde rum. Det gummiartade precipitatet tillvaratogs och triturerades i 20 ml acetonitril för erhållande av den i rubriken angivna produkten, som tillvaratogs genom filtrering, tvättades med 5 ml acetonitril och torkades. Utbyte 62 mg (63%); smâltpunkt 185-1900 (sönderdelning). _ 7 _ 7 IR: 3600-2600, 1700,'1605, 1380, 1300, 1110, loss cm* 7907672-5 se Uv; åíflaflcøs 238 nm (E. 8300), 270 nm :E 9100) Analys: Beräknat för C2lH23N7O7S2. l/2H2O: C 45,15 H 4,23 N 17,55 Funnet: C 45,26 H 4,81 N 18,51

Claims (1)

1. 7907672-5 H0 Patentkrav Mellanprodukter med formeln N-“N ll H æxs-c\ /N V N z (czzz) r-Lcozu vari n är det hela talet 1 eller 2, och ogiftiga salter därav för framställning av cefalosporinföreningar med formeln 3 ä* »ß - »fw ya /]___x~:\_\¿;-'ca2s \b';/N 0 COOH 1 - coon (c¿2)n 1 är acyl eller väte, R3 betecknar väte eller metoxi vari R och n har ovan angivna betydelse, samt estrar och ogiftiga, farmaceutiskt godtagbara salter därav, speciellt kalium- och natriumsalter därav. SAMMANDRAG Uppfinningen avser mellanprodukter med formeln IN "' 1 '"| HSPG N .~ ~ *xf/ (Grfzäncozz-z a vari n är ett helt tal l-9, och ogiftlga salter därav för “' framställning av cefalosporinföreningar med formeln 'Wfif _ I 1 '_ v33 I . I . '°“ n* ~ m: ç _ 's li-N l i AT . J¿ *I / \// C525 N/N s 0 coon L . (cH2)nC0OH vari R är acyl eller väte, R3 betecknar väte eller metoxi och n har ovan angivna betydelse, samt estrar och ogiftiga, farmaceutiskt godtagbara salter därav. venvsvz-5