DK148796B

DK148796B - Cephalosporansyrederivater til anvendelse som mellemprodukter ved fremstilling af andre cephalosporansyrederivater

Info

Publication number: DK148796B
Application number: DK240582A
Authority: DK
Inventors: William J Gottstein; Murray A Kaplan; Alphonse P Granatek
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1974-09-03
Filing date: 1982-05-27
Publication date: 1985-09-30
Also published as: FI752434A; DK367279A; IL48020A0; SE8305539L; US4297489A; FR2283686B1; NL161758C; SE453507B; YU44833B; NO152509B; YU223381A; YU223181A; JPS6150956B2; SE8305539D0; ES440707A1; NO152509C; NL7510391A; DD123471A5; SE431548B; SE7509702L

Description

148796

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte cephalo-sporansyrederivater til anvendelse som mellemprodukter ved fremstilling af cephalosporansyrederivater med den almene formel (I) R3 ^

R-CH-CO-NH-C-CH^ N-N

4 1

0 lo„ (CH2)nCOOH

II

0 hvori R betegner 148796 2 hvor R2 betegner hydrogen, hydroxy eller en eventuelt substitueret aminomethylgruppe, Y betegner hydrogen, hydroxy eller en eventuelt substitueret aminogruppe, R3 betegner hydrogen eller methoxy, og n er et helt tal fra 1-9 incl., eller let hydrolyserbare estere eller ikke-toksiske farmaceutisk acceptable salte deraf, med den begrænsning, at når n er 2-9, har R - CH - betydningen _^---ch2nh2 Y CH2- og R3 betegner hydrogen.

Cephalosporanderivateme ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de har den almene formel (II) R3 ]—il I—i cooh (ch2)„-cooh hvori R3 betegner hydrogen eller methoxy, og n er et helt tal fra 1-9 incl., med den begrænsning, at når n er 2-9, betegner R3 hydrogen, eller de er salte eller let hydrolyserbare estre heraf, bortset fra forbindelsen 7-amino-3-[l-(2-methoxycarbonylethyl)-tetrazol-5-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre.

Forbindelserne med den almene formel (I) er hidtil ukendte forbindelser, der er værdifulde som antibakterielle midler, og de har i forhold til kendte nært beslægtede cephalosporan-syrederivater vist sig at have forbedret vandopløselighed og i almindelighed give en højere blodspejlsværdi ved parenteral administrering ad intramuskulær vej.

Forbindelserne med formel (I), hvori n er 2-9, og deres værdifulde egenskaber er beskrevet og dokumenteret i dansk fremlæggelsesskrift nr. 147.483, mens de øvrige forbindelser med formel (I) og deres værdifulde egenskaber er beskrevet og dokumenteret i dansk fremlæggelseskrift nr. 145.262.

Cephalosporansyrederivaterne med formel (II) kan fremstilles ved, at man omsætter 7-aminocephalosporansyre eller et salt eller en let hydrolyserbar ester eller Schiff-base deraf med en forbindelse med formlen 148796 3

N-N

J j HS •'vfj /

(^H2)n_C00H

hvori n er 1-9.

De omtalte salte omfatter de ikke-toksiske carboxylsyre-salte af cephalosporansyrederivaterne, herunder ikke-toksiske metalsalte, f.eks. med natrium, kalium, calcium og aluminium, ammoniumsaltet og de substituerede ammoniumsalte, f.eks. salte af ikke-toksiske aminer såsom trialkylaminer, herunder triethylamin, procain, dibenzylamin, N-benzyl-beta-phenetyl-amin, 1-ephenamin, N,N'-dibenzylethylendiamin, dehydroabietyl-amin, N,N1-bis-dehydroabiethylethylendiamin, N-(lavere)alkyl-piperidin, f.eks. N-ethylpiperidin og andre aminer, som har været anvendt til at danne salte med benzylpenicillin; endvidere de ikke-toksiske syreadditionssalte deraf (dvs. amin-salte) herunder mineralsyreadditionssalte såsom hydrogenchlo-ridet, hydrogenbromidet, hydrogeniodidet, sulfatet, sulfa-matet og phosphatet og de organiske syreadditionssalte som maleatet, acetatet, citratet, oxalatet, succinatet, benzoate t, tartratet, fumaratet, malatet, mandelatet, ascorbatet og lignende.

Forbindelserne med formel (II) kan endvidere fremstilles ved, at man i rækkefølge a) behandler en silylester af en forbindelse med formlen R3

Ri-NH-C-r^S \ ||

° T (CH_) -COOH

COOH 2 n hvori n er 1-9, og R1 har formlen 148796 4 0 ?, H02C-CH-(CH2)3-C- , H02C-CH-(CH2)3-C-

NH NH

I i c=o c=0

OR16 NH

R19 eller 0 ho2c-<j:h-(ch2)3-c-

NH

i2° hvori R16 og R19 hver for sig er en (lavere)alkyl- eller aral-kylgruppe med 1-6 carbonatomer i alkyldelen, og R20 er hydrogen, en α-halogen- eller a, or-dihalogen-(C2_4)alkanoyl-eller N-isobornyloxycarbonylgruppe eller en gruppe med formlen R21 -C-N""^ eller -C-O-R23 x \r^ 0 hvori R21 og R22 hver betegner H, (lavere)alkyl, phenyl, ha-logenphenyl, tolyl, (lavere)alkoxyphenyl eller naphthyl, X betegner oxygen eller svovl, og R23 betegner (lavere)alkyl, med PCI,- til frembringelse af det tilsvarende imino-chlorid; (b) behandler dette imino-chlorid med methanol og (c) hydrolyserer den resulterende imino-ether til det ønskede produkt.

Udtrykket "(lavere)alkyl" betegner i den her anvendte betydning såvel ligekædede som forgrenede aliphatiske carbon-hydridgrupper med fra 1-10 carbonatomer såsom methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t.butyl, amyl, hexyl, 2-ethylhexyl, heptyl, decyl, etc. Tilsvarende henviser udtrykket "(lavere)", hvor det anvendes som del af beskrivel- 5 1A8796 sen af en anden gruppe, f.eks. "(lavere) alkoxy" til alkyldelen af en sådan gruppe, som derfor har den ovenfor i forbindelse med "(lavere)alkyl" anførte betydning.

Cephalosporansyrederivateme med formel (I) kan fremstilles ud fra mellemprodukterne med formel (II) ved, at man behandler disse mellemprodukter med et acyleringsmiddel med formlen

R-CH-CO-X

Y

hvori X betegner halogen eller et funktionelt ækvivalent deraf, og R og Y har den ovenfor angivne betydning, som når Y er fri amino eller hydroxyl, beskyttes på disse grupper ved hjælp af konventionelle beskyttende grupper, som senere fjernes til frembringelse af en forbindelse med formel (I), og at man om ønsket omdanner en resulterende fri syre eller et salt af en forbindelse med formel (I) til en let hydrolyserbar ester eller et ikke-toksisk farmaceutisk acceptabelt salt deraf eller omdanner et resulterende salt eller en let hydrolyserbar ester af en forbindelse med formel (I) til den tilsvarende frie syre med formlen (I).

Som acyleringsmiddel anvendes som nævnt et halogenid eller et funktionelt ækvivalent deraf.

Sådanne funktionelle ækvivalenter omfatter de tilsvarende syreanhydrider, herunder blandede anhydrider og især de blandede anhydrider fremstillet ud fra stærkere syrer såsom de lavere aliphatiske monoestere af carbonsyre, eller alkyl- og arylsulfon-syrer og af mere hindrede syrer såsom diphenyleddikesyre. Et særligt værdifuldt anhydrid er et N-carboxy-anhydrid (også kaldet et Leuch's anhydrid; se USA Patentskrifter nr. 3.080.356 og 3.206.455) inklusive men ikke begrænset til D-mandelsyrecarboxy-anhydrid (USA Patentskrift nr. 3.167.549) eller det tilsvarende substituerede D-mandelsyrecarboxyanhydrid. Endvidere kan anvendes et syreazid eller en aktiv ester eller thioester (f.eks. med p-ni-trophenol, 2,4-dinitrophenol, thiophenol eller thioeddikesyre) eller selve den frie syre kan kobles med forbindelsen II efter forudgående omsætning af den frie syre med N,N'-dimethylchlorformiminium-chlorid [Britisk Patentskrift nr. 1.008.170 og Novak og Weichet, 148796 6

Experientia XXI, 6, 360 (1965)] eller ved anvendelse af enzymer eller af en Ν,Ν'-carbonyldiimidazol eller en Ν,Ν'-carbonylditriazol [jvf. Sydafrikansk Patentskrift nr. 63/2684] eller et carbodiimid reagens [især Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimid, N,Ν'-diisopropyl-carbodiimid eller N-cyclohexyl-N'-(2-morpholinoethyl)carbodiimid; jvf. Sheehan og Hess, J. Amer. Chem. Soc., 77, 1967, (1955)] eller af alkylylamin-reagens [jvf. R. Buijle og H. G. Viehe, Angew. Chem. International Edition 3_, 582, (1964)] eller af et isoxasoliumsalt-reagens [jvf. R. B. Woodward, R. A. Olofson og H. Mayer, J. Amer.

Chem. Soc., J33, 1010 (1961)], eller af et ketenimin-reagens [jvf.

C. L. Stevens og Μ. E. Munk, J. Amer. Chem. Soc., 80, 4065 (1958)] ' eller af hexachlorcyclotriphosphatriazin eller hexabromcyclotri-phosphatriazin (USA Patentskrift nr. 3.651.050) eller af diphenyl-phosphorylazid [DPPA; J. Arner. Chem. Soc., 94, 6203-6205 (1972)] eller af diethylphosphorylcyanid [DEPC; Tetrahedron Letters' nr. 18, pp. 1595-1598 (1973)] eller af diphenylphosphit [Tetrahedron Letters nr. 49, pp. 5047-5050 (1972)]. Et andet ækvivalent af syrechloridet er et tilsvarende azolid, d.v.s. et amid af den tilsvarende syre, hvis amidnitrogen indgår i en quasi-aromatisk 5-leddet ring indeholdende mindst to nitrogenatomer, d.v.s. imidazol, pyrazol, tri-azolerne, benzimidazol, benzotriazol og deres substituerede derivater. Som et eksempel på den almene fremgangsmåde til fremstilling af et azolid, omsættes Ν,Ν'-carbonyldiimidazol med en carboxylsyre i ækvimolære mængder ved stuetemperatur i tetrahydro-furan, chloroform, dimethylformamid eller et tilsvarende inert opløsningsmiddel til dannelse af carboxylsyre-imidazolidet i praktisk taget kvantitativt udbytte under frigørelse af carbondioxid og et mol imidazol. Dicarboxylsyrer danner diimidazolid. Biproduktet, imidazol, udfælder og kan fraskilles og imidazolidet isoleres, men dette er ikke væsentligt. Fremgangsmåderne til udførelse af disse omsætninger til fremstilling af en cephalosporin, og fremgangsmåderne som anvendes til isolering af den således fremstillede cephalosporin er i og for sig kendte.

Ovenfor omtaltes anvendelsen af enzymer til kobling af den frie syre med forbindelse II. Indenfor rammerne af sådanne fremgangsmåder falder anvendelsen af en ester, f.eks. methylesteren, af den pågældende frie syre med enzymer tilvejebragt af forskellige 148796 7 mikroorganismer, f.eks. de som er beskrevet af T. Takahashi et al., J. Amer. Chem. Soc., 94 (11), 4035-4037 og af T. Nara et al., J. Antibiotics (Japan) 24(5), 321-323 (1971) og i USA Patentskrift nr. 3.682.777.

Til kobling af den organiske carboxylsyre, inklusive men ikke begrænset til en substitueret eller usubstitueret D-mandelsyre (med eller uden en beskyttende gruppe på a-hydroxylgruppen) som beskrevet ovenfor med forbindelse II (eller et salt eller fortrinsvis en let hydrolyseret ester eller Schiff-base såsom med benzalde-hyd, deraf) er det også hensigtsmæssigt og effektivt som koblingsmiddel at benytte phosphonitrilchlorid-trimer (J, Org. Chem., 33(7), 2979-81, 1968) eller N-ethoxy-l,2-dihydroquinolin (EEDQ) som beskrevet i J. Amer. Chem. Soc., 90.» 823-824 og 1652-1653 (1968) og USA Patentskrift nr. 3.455.929. Omsætningen udføres fortrinsvis ved 30-35° C i benzen, ethanol eller tetrahydrofuran . under anvendelse af omtrentlig ækvimolære mængder af alle 3 reagenser efterfulgt af konventionel isolering og fjernelse ved hjælp af konventionelle metoder af eventuelle tilstedeværende blokerende grupper.

Når den organiske carboxylsyre indeholder en funktionel gruppe såsom amino eller hydroxyl , er det ofte ønskeligt først at blokere (eller beskytte) amino- eller hydroxygruppen, dernæst udføre koblingsreaktionen og endelig underkaste den resulterende forbindelse kemisk fjernelse af den beskyttende gruppe, d.v.s. underkaste den resulterende forbindelse en elimineringsreaktion for den beskyttende gruppe.

I de forbindelser (anvendt enten som mellemprodukter eller metaboliske prekursorer), hvori aminogruppen er "blokeret", kan f.eks. anvendes substituenter såsom 2-iod-ethoxy-carbonyl (Britisk patentskrift nr. 1.349.673) t-butoxycarbonyl carbobenzyloxy, formyl, o-nitrophenylsulfenyl, β,β,β-trichlor-ethoxycarbonyl, 4-oxo-2-pentenyl-2, l-carbomethoxy-l-propenyl-2-og lignende. Navnlig omfatter sådanne blokerende grupper ketonerne (specielt acetone) og aldehyderne (specielt formaldehyd og acet-aldehyd) som eksempelvis er omhandlet i USA Patentskrifter nr.

3.198.804 og 3.347.851 samt β-ketoestrene og β-diketonerne, der f.eks. er omhandlet i USA Patentskrift nr. 3.325.479 og β-keto-amiderne, som er omhandlet i Japansk Patentskrift nr. 71/24714 (Farmdoc 47.321S).

148796 8

De foretrukne estere af cephalosporansyrederivaterne ifølge den foreliggende opfindelse eller de deraf fremstillede slutprodukter er pivaloyloxymethyl-, acetoxymethyl-, methoxymethyl, acetonyl- og phenacetylestrene. Alle er værdifulde mellemprodukter til fremstilling af cephalosporinen med en fri carboxylsyregruppe, og de 3 førstnævnte er endvidere af interesse, fordi de ved oral administrering tilvejebringer forskellige absorptionshastigheder og -mængder og giver varierende koncentrationer af det aktive antibakteri-eller middel i blod og væv.

Som antydet ovenfor fremstilles hver af disse 5 estere af 7-aminocephalosporansyre ved hjælp af i og for sig kendte fremgangsmåder. En særlig god fremgangsmåde er den i USA Patentskrift nr. 3.284.451 omhandlede, ifølge hvilken natrium-cephalothin esterificeres ved omsætning med den tilsvarende aktive chlor- eller bromforbindelse (f.eks. phenacylbromid, chloracetone, chlormethylether, pivaloyloxymethylchlorid [også kaldet chlormethylpivalat], acetoxymethylchlorid) hvorefter thienyleddikesyre-sidekæden fjernes enzymatisk, f.eks. som beskrevet i samme patentskrift eller kemisk som beskrevet i USA Patentskrift nr. 3.575.970 og i Journal of Antibiotics, XXIV, (11), 767-773 (1971). En anden god fremgangsmåde består i at triethylaminsaltet af 7-aminocephalosporansyre omsættes direkte med den aktive halogenforbindelse, f.eks. som beskrevet i Britisk Patentskrift nr.

1.229.453.

9 148796

De mest aktive af de her omhandlede forbindelser er sådanne, som har D-configuration ved α-carbonatomet i 7-sidekæden, d.v.s. de som fremstilles ud fra D-2-phenylglycin eller D-mandelsyre eller en monosubstitueret D-2-phenylglycin eller D-mandelsyre som belyst her. Endvidere er konfigurationen ved de to optisk aktive asymmetriske centre i β-lactamkernen den samme som i cephalosporin C fremstillet ved fermentering og i 7-aminocephalosporansyre afledt deraf.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses i det følgende nærmere ved udførelseseksempler. Alle temperaturer er i grader Celcius. 7-Aminocephalosporansyre forkortes til 7-ACA; -ACA- betegner den del, som har strukturen -NH-CH— CH CH2 0^C__N\c^'C'CH2"

COOH

0 ti og 7-ACA kan derfor betegnes H-ACA-O-C-CH-j.

Methylisobutylketon betegnes MIBK.

"Skellysolve B" er en petroleumsetherfraktion med kogepunkt 60-68 C bestående i det væsentlige af n-hexan.

"LA-1" harpiks er en blanding af sekundære aminer, hvori hver sekundær amin har formlen R1 I 2 CH3(CH2)10CH2NHC - r h 12 3 hvori-hver af R , R og R er en monovalent aliphatisk carbonhydrid- 12 3 gruppe, og hvori R , R og R i aggregatet indeholder fra 11 til 14 carbonatomer. Denne særlige blanding af sekundære aminer, der undertiden i eksemplerne er betegnet som "flydende aminblanding nr. II", er en klar ravgul væske med følgende fysiske egenskaber: 148796 ίο

Viskositet ved 25° C 70 cpd, vægtfylde ved 20° C 0.826, brydningsindeks ved 25° C 1.4554, destillationsinterval ved 10 mm, indtil 170° C - 0.5%, 170-220° C - 3%, 220-230° C - 90% og over 230° C -6.5%.

"IR-120'1 kaldes også "Amberlite IR-120" og er en stærk kation-bytter-harpiks indeholdende sulfonsyreradikaler. "Amberlite IR-120" er en i handelen tilgængelig kationbytter-harpiks af polystyren-sulfonsyretypen, og den er mere specielt en kernesulfoneret polystyrenharpiks tværbundet med divinylbenzen opnået ved den fremgangsmåde, som er anført af Kunin,Ion Exchange Resins, 2. udgave (1958), John Wiley and Sons, Inc. Der henvises der f.eks. til sider 84 og 87.

UDGANGSMATERIALER

l-Carboxymethyl-5-mercaptotetrazol N-N

|l II

HS - C N

^N^

CH2COOH

a) Omkrystallisation af l-methyl-5-mercaptotetrazol

Fremgangsmåde; 1. 110 g l-methyl-5-mercaptotetrazol opslæmmes i 350 ml kogende chloroform. Der opnås næsten fuldstændig opløsning.

2. Den varme opløsning (50-60°) filtreres hurtigt ved hjælp af vakuum gennem en opvarmet Biichner-tragt (11 cm SS nr. 604 papir indeholdende ca. 6.4 til ca. 8.5 mm pakket filtreringshjælpemiddel ("Supercel"). Filtreringspuden udvaskes med 50 ml 50-60° C chloroform, som sættes til filtratet.

3. Filtratet afkøles til ca. 0-6° C og holdes ved 0-6° C i to timer. Krystallerne, som er dannet, opsamles ved filtrering ved 0-6° C og vaskes med 60 ml 0-6° C chloroform, som sættes til filtratet. Krystallerne (portion Λ) lufttørres ved 37-45° C i 18 timer.

4. Filtratet koncentreres på vakuum-rotationsfordamper (60° C bad) til ca. halvt volumen. Denne opslæmning afkøles til 0-6° C og holdes ved 0-6° C i 2 timer. Krystallerne opsamles ved filtrering ved 0-6° C, vaskes med 40 ml 0-6° C chloroform, som sættes til fil- 148796 11 tratet. Krystallerne (portion B) lufttørres ved 37-45° C i 18 timer. Krystalportionerne A og B blandes til opnåelse af et udbytte på ca. 65 vægtprocent.

5. Filtratet fra portion B, trin 4, kan oparbejdes to gange som beskrevet i trin 4 til opnåelse af yderligere 15% udbytte.

b) Fremstilling af di-natriumsaltet af 1-carboxymethyl- 5-mercaptotetrazol_

Fremgangsmåde; 1. 500 ml praktisk taget tør og ren tetrahydrofuran i en 2 1 3-halset kolbe med omrører afkøles i et salt-acetone-is bad til ca.

- 10°C. Tør nitrogengas blæses på væskeoverfladen.

2. 500 ml 15.06% (1.6 N) butyllithium i hexan (Foote Mineral Co.) sættes til tetrahydrofuranen over et tidsrum af 10 minutter under tør nitrogen, og der omrøres. Den praktisk taget fuldstændige opløsning afkøles til -5 - -10° C.

3. 46.4 g l-methyl-5-mercaptotetrazol (omkrystalliseret som ovenfor) opløses i 200 ml i det væsentlige ren og tør tetrahydrofuran. Opløsningen filtreres, hvis den er uklar og afkøles dernæst til 5 - 10° C.

i 4. Den afkølede opløsning fra trin 3 sættes over et tidsrum af 10 minutter under omrøring og under tør nitrogen til butyllithium-opløsningen. Temperaturen bør holdes på -5° C til højst +10° C.

Et bundfald kan dannes.

5. Blandingen omrøres under tør nitrogen og 0° C til +10° C i en halv time.

6. Vandig carbondioxidgas bobles ved stor hastighed og under hurtig omrøring igennem i 15 - 30 minutter ved omtrentlig omgivelsernes temperatur (0 - 10° C) og ikke højere end +20° C.

7. Det hvide bundfald som dannes opsamles på passende måde ved filtrering i et område med lav fugtighed. Bundfaldet udvaskes med ca. 75 ml tetrahydrofuran.

12 148796 8. Bundfaldet opløses i 250 ml vand (pH-værdi 8.5-9.5).

Et andet lag tetrahydrofuran kan være tilstede. Dette fjernes på vakuum-rotationsfordamperen (50° C bad).

9. Den vandige opløsning indstilles på pH-værdien 1.6-2.0 med koncentreret saltsyre.

10. Den sure vandige opløsning ekstraheres to gange med 250 ml portioner ethylacetat. Hver 250 ml ethylacetat-ekstrakt modstrøms ekstraheres med 100 ml portioner vand. Vand-ekstrakterne kasseres. Ethylacetat-ekstrakterné (uden noget vandlag) filtreres og blandes.

11. De forenede ethylacetat-ekstrakter koncentreres til tørhed på vakuum-rotationsfordamperen (60° C bad).

12. Krystallerne i kolben koges med 300 ml chloroform i ca.

2 minutter. Den varme opslæmning (50-60° C) vakuumfiltreres gennem en opvarmet Buchner tragt (11 cm-SS-604 papir). Krystallerne vaskes med ca. 75 ml. - 50° C chloroform. Krystallerne lufttørres ved stuetemperatur i ca. 3 timer og bringes dernæst til ca. 100 -200 mesh.

13. De 100-200 mesh store krystaller behandles med kogende chloroform nøjagtig som beskrevet i trin 12 (den varme chloroform fjerner det meste af den uomsatte l-methyl-5-mercaptotetrazol).

..Udbytte: ca. 45-50 g krystallinsk l-carboxymethyl-5-mercapto-tetrazol. Disse krystaller kan indeholde 0.02 - 0.05 mol 1-methyl- 5-mercaptotetrazol.

14. Krystallerne fra trin 13 opslæmmes med 250 ml ethylether ved stuetemperatur i 3 - 5 minutter. Blandingen filtreres. De uopløselige stoffer (0.5 - 5%) kan være en forurenende symmetrisk mercaptotetrazol-keton med følgende formodede struktur:

N—: N n N —N

I I || I I

N /N - Cfl, - C - ClL· -N -N

I l

SH SH

13 1Λ8796 ADVARSEL; Denne forbindelse EKSPLODERER ved ca. 205-210° C.

15. Etherfiltratet fra trin 14 inddampes til tørhed på vakuui rotationsfordamperen (50° C. bad). Ca. 42 til ca. 48 g krystallinsk l-carboxymethyl-5-mercaptotetrazol indeholdende ca. 0.01 til ca. 0.05 mol l-methyl-5-mercaptotetrazol udvindes.

16. Krystallerne opløses i 420 ml absolut ethanol (ca. 100 mg/ml). Opløsningen varmes til 50-60° C.

17. Til den varme opløsning fra trin 16 sættes 310 ml af en 41% natrium 2-ethylhexanoat (SEH) opløsning i isopropanol under meget hurtig omrøring over et tidsrum af 10 minutter. Et krystallinsk bundfald dannes. Blandingen opslæmmes ved 50-60° C i 20 minutter.

18. Blandingen filtreres varm (50-60° C) gennem en opvarmet Buchner tragt (11 cm-SS-nr. 604 papir). Krystallerne vaskes med 75 ml 50° C ethanol.

19. De ethanol-fugtige krystaller fra trin 18 opslæmmes i 200-300 ml ethanol. Opslæmningen ledes gennem en 200 mesh sigte. Opslæmningen opvarmes til 50-60° C i 5 minutter under hurtig omrøring (uomsat natrium l-methyl-5-mercaptotetrazol er meget opløselig i varm ethanol).

20. Krystallerne opsamles ved 50-60° C på et 11 cm-SS nr.

604 papir i en opvarmet Buchner tragt. Krystallerne vaskes med 75-100 ml ethanol og vakuumtørres ved 50-60° C i 24-48 timer. Udbytte; 40-48 g di-natrium-l-carboxymethyl-5-rnercaptotetrazol (uden l-methyl-5-mercaptotetrazol påvist ved NMR).

14 148796

Alternativ syntese af l-carboxymethyl-5-mercapto- tetrazol__ CH2C02C2H5 + CS2 + NaN3 vandig NaOH ^ nh2 N =

N-CH-CO-H + Na„S + C-H..OH

/ 2 2 2 2 5 N = <

^SH

Til en omrørt blanding af 13.95 g (0.10 m) glycinethvl-esterchlorid, 8.0 g (0.20 m) natriumhydroxid og 8.37 g(0.11 m) carbondisulfid sattes en opløsning af 7.47 g (0.115 m) natrium-azid i 125 ml vand. Opløsningen opvarmedes ved tilbagesvaling i 6 1/2 time og opbevaredes i 16 timer ved 25°. Den mørkebrune blanding filtreredes, og filtratet syrnedes til en pH-værdi 1.5 med koncentreret saltsyre. Opløsningen blev behandlet med carbon, og det gule filtrat ekstraheredes med 4 x 100 ml ethylacetat. Ethylacetatet vaskedes med vand, tørredes over magnesiumsulfat og inddampedes ved 40° (15 mm) til en olie. Olien tritureredes med methylenchlorid, og produktet opsamledes. Prøven tørredes i vakuum over phosphorpentoxid i 16 timer ved 25°. IR- og NMR-spektrene var i overensstemmelse med strukturen.

Reference: Tysk Patentskrift nr. 106645.

Fremstilling af l-Carboxyethyltetrazol-5-thiol.

N_N

I II

HS—ILn>

(Atyj-COjH

148796 15 A) 2-Carboethoxyethylisocyanat β-alaninethylester, hydrochlorid (93.6 g), triethylamin (123.5 g) og methylenchlorid (400 ml) sammenblandedes og afkøledes til -10° C. Carbondisulfid (46.5 g) opløst i 150 ml chloroform sattes til ovennævnte opløsning over et tidsrum af 2 timer, mens temperaturen holdtes på ca. -10° C. Da tilsætningen var afsluttet, lod man temperaturen stige til 10° C i ca. 10 minutter. Opløsningen afkøledes igen til -10° C, og 66.8 g ethylchlorformiat i 60 ml chloroform tilsattes dråbevis over et tidsrum af 40 minutter med omrøring. Temperaturen fik lov at stige til stuetemperatur i 30 minutter, og der afkøledes igen til 0° C og tilsattes yderligere 61.6 g triethylamin ved 0° C, hvorefter opløsningen omrørtes ved stuetemperatur i 3 timer.

Blandingen behandledes med vand og den organiske fase opsamledes, vaskedes med 2 x 250 ml 2N HC1, dernæst med 2 x 250 ml NaHCO^, dernæst med 2 x 250 ml vand. Den organiske fase tørredes over Na2SO£, og opløsningsmidlet fjernedes i vakuum til dannelse af 93.7 g af en olie, som viste sig at være det ønskede produkt. IR-og NMR-spektrene var i overensstemmelse med strukturen.

B) l-Carboxyethyltetrazol-5-thiol

Natriumazid (29.7 g) opløstes i 400 ml vand og opvarmedes til 60° C i en nitrogenatmosfære. 2-Carboethoxyethylisocyanat (46.9 g) opløst i 50 ml "Skellysolve B" (i det væsentlige n-hexan) sattes til den opvarmede natriumazid-opløsning. Opløsningen omrørtes i ca. 150 minutter ved ca. 70-72° C. og dernæst afkøledes til 30° C på et isbad. 50% natriumhydroxid-opløsning tilsattes, indtil pH-værdien var 12. Blandingen opvarmedes i 40 minutter ved 70° C og afkøledes til 15° C i et isbad. pH-værdien indstilledes til 2 ved anvendelse af koncentreret HCl og dernæst ekstraheredes med ethylacetat (4 x 150 ml). Ethylacetatekstrakterne vaskedes med vand, tørredes derefter over natriumsulfat. Opløsningsmidlet afdam-pedes i vakuum, og produktet opsamledes som krystaller fra methylenchlorid til dannelse af 19.5 g af produktet nævnt i overskriften.

16 1487 96

De øvrige reagenser som anvendes til fremstilling af de her omhandlede forbindelser eller de deraf fremstillede slutprodukter, syntetiseres enten som beskrevet i den kendte teknik (som f.eks. i de ovenfor nævnte patentskrifter og publikationer) eller ved hermed helt analoge fremgangsmåder. Når der eksempelvis anvendes en D-(-)-a-aminosyre fremstilles den i henhold til de fremgangsmåder, der er omtalt i USA Patentskrifter nr.

3.198.804, 3.342.677 eller 3.634.418 eller af Friis et al., Acta Chem. Scand. 17, 2391-2396 (1966) eller af Neims et al., Biochemistry (Wash.) 5, 203-213 (1966) eller i andre publikationer om dette emne. Nogle specifikke eksempler på sådanne synteser er anført i det tidligere omtalte DK Fremlæggelsesskrift nr.

145.262.

Eksempel 1 17 148796 7-Amino-3- (l-carboxymethyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxysyre.__

„ M S

Λ + Yf^i ? y}·-:N ^-CHgCOgNa ^ ~CH2-0-C_CH;2

COgH

v —ι~Γ3Ί 'Γ'Ν

I-N^^J^Ch SJ!-jJ -CIICOH

Ο I ^ 2 2

COgH

1. I en 3-halset kolbe forsynet med omrører, temperaturregulator, termometer og nitrogentilførselsrør, anbringes 18 g (0.066 mol) 7-aminocephalosporansyre og 300ml 0.1 M pH 6.4 phosphat-buffer (20.7 g monobasisk natriumphosphat, ll^O + 8.5 g dibasisk vandfrit natriumphosphat, q.s. til 2 liter).

2. Under omrøring af den i trin 1 beskrevne blanding tilsættes 1.5 g natriumbisulfit og 16 g (0,078 mol) l-carboxymethyl-5-mer-captotetrazol-dinatrium.

3. Under fortsat omrøring bobles nitrogen gennem blandingen i 10 minutter.

4. Under opretholdelse af omrøring og nitrogentilførsel opvarmes opslæmningen over en 20 minutters periode til 56° C. I løbet af dette tidsrum tilsættes 6.5 g natriumbicarbonat i små portioner.

148796 18 5. Under fortsat omrøring og nitrogentilførsel holdes opløsningens temperatur på 56° C i 4 timer. pH-Værdien bør forblive mellem 6.2 og 6.6.

6. Reaktionsblandingen afkøles i et isbad til 5° C.

7. Der tilsættes 50 ml 1:1 phosphorsyre/vandopløsning til blandingen eller koncentreret HC1 til en pH-værdi på 2.0 - 3.0.

8. Produktet opsamles ved filtrering. Pilterkagen udvaskes med 20 ml koldt vand efterfulgt af 200 ml kold methanol.

9. Det faste stof lufttørres til konstant vægt. (Et typisk forsøg gav 14.5 g produkt). Dette produkt kan variere i farve fra gult til mørkebrunt.

10. Produktet ledes gennem en 200 mesh rustfri stålsigte.

11. 10 g af 200 mesh pulveret suspenderes i 200 ml n-propanol under kraftig omrøring.

12. 2.0 ml koncentreret saltsyre tilsættes, og der omrøres kraftigt i 0.5 time ved stuetemperatur.

13. Opslæmningen filtreres. De brune faste stoffer udvaskes med 20 ml n-propanol, og vaskevæsken sættes til filtratet (filterkagen gemmes til eventuel udvinding af yderligere produkt).

14. 1.5 g trækul ("Darco G-60") sættes til n-propanol filtratet fra trin 13. Der opslæmmes i 0.5 time. Carbonet fjernes ved filtrering. Carbonet vaskes med 20 ml. n-propanol, og vaskevæsken sættes til filtratet.

15. Under kraftig omrøring sættes triethylamin til n-propanol-filtratet til en tilsyneladende pH-værdi på 3.0. Der dannes krystaller. Der opslæmmes i 10 minutter.

16. De hvide krystaller opsamles ved filtrering og vaskes med 30 ml n-propanol, 50 ml methanol og vakuumtørres ved 40° i 24 timer. Udbytte: 4 - 8 g 7-amino-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

19 148798 17. En alternativ fremgangsmåde til rensning af 7-amino-3-(l-carboxylmethyltetrazpl-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre er følgende: a) 10 g af 200 mesh produktet (fra trin 10) opslæmmes i 75 ml 1 N saltsyre i 10-15 minutter ved stuetemperatur. Der filtreres til fjernelse af mørkebrune stoffer.

b) 2.5 g trækul ("Darco G-60") tilsættes, og der opslæmmes i 0.5 time.

c) Carbonet fjernes ved filtrering. Carbonet vaskes med 15 ml vand, og vaskevæsken sættes til filtratet.

d) Under kraftig omrøring sættes koncentreret ammoniakvand til filtratet til pH-værdi 2.5 - 3.0. Krystaller dannes.

e) Krystalmassen opslæmmes i 25 minutter. Krystallerne fjernes ved filtrering. Krystallerne vaskes med 30 ml vand, 50 ml methanol og vakuumtørres ved stuetemperatur. Udbytte: 4-7 g næsten hvide krystaller.

Eksempel 2

Fremstilling af 7-amino-3-(l-carboxyethyltetrazol-2- ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre_

Til en suspension af 5 g (0,029 mol) 1-carboxyethyltetrazol- 5-thiol, 7 g (0,026 mol) 7-aminocephalosporansyre og 500 mg na-triumbisulfit i 300 ml ΙΚΓ phosphatpuffer med pH 6,4 sattes fast natriumbicarbonat, indtil der opnåedes en klar opløsning. Opløsningen opvarmedes til 55°C under nitrogen i 3 1/2 time. Derefter køledes opløsningen til 5°C og gjordes sur til pH 2 med 1:1 phosphorsyre. Det rå faste stof opsamledes, vaskedes med vand og overførtes til en kolbe indeholdende 200-300 ml methanol. Opslæmningen behandledes dråbevis med koncentreret saltsyre, indtil det faste stof gik i opløsning. Efter dråbevis tilsætning af koncentreret ammoniumhydroxid til pH 7 fældede produktet ud, og det vejede 5 g. Produktet omkrystalliseredes fra fortyndet saltsyre (pH 1,5), behandledes med carbon og indstilledes til pH 5 med koncentreret ammoniumhydroxid, hvilket gav ialt 2 g af det 148796 É? ønskede produkt. IR (KBr) 1810 (s), 1725 (s), 1725 (s), 1520 (m), 1550 (s), 1420 (s), 1355 (m) cm-1. Ή NMR (CD3OD/DCl) 5,2-5,4 (d,2), 4,4-4,8 (m,4); 3,9 (s,2), 3,1-3,3 (m,2).

Analyse beregnet for ci2H14N6°5S2 H2°: C' 35,66; H' 3»99; N, 20,70. Fundet: C, 36,09; H, 3,85; N, 20,12.

Eksempel 3 7-(2-Aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxy-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre_ /CE2NH2

\\ //-CHgCONHW^ ^ Μ-N

o>Y-cVsV

C00H CHgCOOH

1. I en 3-halset kolbe indeholdende 100 ml afioniseret vand og forsynet med en omrører og termometer tilsættes 7.6 g (0.021 mol) 7-amino-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre og 3.4 g (0.034 mol) N-methylmorpholin.

Der afkøles til 0° C. Med omrøring holdes opløsningen på 0° C ved anvendelse af isbad.

2. I en separat kolbe forsynet med en omrører anbringes 9.6 g (0.03 mol) natrium 2-(l-methoxycarbonyl-l-propen-2-ylaminomethyl)-phenylacetat og 184 ml tetrahydrofuran. Med omrøring afkøles suspensionen til -30° C ved anvendelse af et tøris-acetone-bad.

Under fortsat omrøring og temperaturen på -30° C tilsættes 20 dråber dimethylbenzylamin og 4.4 g (0.03 mol) isobutylchlorformiat.

2i 148796

Den fremkomne blanding omrøres i 5 minutter.

3. Tilsæt hele blandingen fra trin 2 til omrøringsopløsningen i trin 1 på én gang. Den resulterende opløsning holdes på 3° C med omrøring 1 time.

4. Afdamp tetrahydrofuranen fra reaktionsblandingen ved 30° C. ved at anvende vakuum (15 mm).

5. Indstil pH-værdien af den tilbageblevne vandige opløsning til 4.0 ved anvendelse af koncentreret saltsyre.

6. Tilsæt 2.5 g trækul ("Darco G-60") til opløsningen og bland i 20 minutter. Fjern carbonet ved filtrering.

7. Filtratet lagdeles med 120 ml ethylacetat, og med omrøring sænkes pH-værdien til 3.8 med koncentreret saltsyre. Lyst tanfarvet fast stof kan udskille og fjernes ved filtrering.

(Gemmes til oparbejdning og genindvinding).

8. Ved anvendelse af isbad afkøles filtratet til 5°C, og med omrøring sænkes pH-værdien til 2.5 - 2.8.med koncentreret saltsyre. Temperaturen holdes ved 5° C, og omrøringen fortsættes 1 time.

9. Produktet opsamles ved filtrering. Filterkagen vaskes med 5 ml koldt afioniseret vand efterfulgt af 5 ml kold methanol.

10. Den faste 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxy-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre lufttørres til konstant vægtmængde. (Ved et typisk forsøg opnåedes 4.1 g af produktet).

11. Det opnåede produkt fra trin 10 ledes gennem en 200 mesh rustfri' stålsigte.

12. 10 g af dette 200t mesh produkt opslæmmes i 100 ml chloroform. 5 ml triethylamin tilsættes, og blandingen opvarmes til 50°C med hurtig omrøring. Blandingen opslæmmes ved 50° C i 5 minutter.

13. Blandingen filtreres varm (7-ACA, 7-amino-3-(1-carboxy-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, pigmenter og andre urenheder er opløselige i den varme chloroformtriethyl-amin opløsning). Filterkagen vaskes med 25 ml chloroform og lufttørres i 2 timer. Udbytte: 1-8 g 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

22 148796 14. Produktet der opnåedes i trin 13 ledes gennem en 200 mesh sigte.

15. 10 g af dette 200 mesh produkt opslæmmes i 75 ml 0.1 N saltsyre i 10 - 15 minutter. Blandingen filtreres, og filterkagen vaskes med 25 ml vand, 50 ml methanol og lufttørres ved stuetemperatur i 2 - 3 timer. Udbytte: Der opnåedes op til 10 g.

16. 10 g 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, der opnåedes i trin 15, opslæmmes i 65 ml methanol.

a) Der tilsættes 2 ml koncentreret saltsyre. Der opnås en opløsning eller næsten opløsning. Der omrøres i 5 minutter.

b) Til opløsningen a) ovenfor sættes hurtigt 130 ml vand med kraftig omrøring. Der opnåedes en øjeblikkelig udfældning (indeholdende det meste af farven). (Det er nødvendigt med en pH-værdi på 1.3 til 1.6).

c) Blandingen opslæmmes i 1 minut og filtreres hurtigt. (Det faste stof gemmes til oparbejdning og genindvinding).

d) Filtratet podes og omrøres moderat. Krystalliseringen vil indtræde efter 15 - 30 minutter.

e) Blandingen omrøres ved omgivende stuetemperatur eller ved 4° C i 2 timer efter krystalliseringen er begyndt.

f) Krystallerne fjernes ved filtrering, vaskes med 25 ml 65% vand-, 35% methanolblanding (v/v), 50 ml methanol og vakuum-tørres ved 50° C i 24 timer. Udbytte: Op til 9 g renset, hvidt 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiométhyl)-3-cephem-4-carboxylsyre opnås.

17. I det følgende belyses to alternative fremgangsmåder til krystallisering af 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxy-methy1tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

A.

1. 10 g af det opnåede produkt i trin 15 opslæmmes i 100 ml methanol.

23 148796 2. Der tilsættes 2 ml koncentreret saltsyre, og der opnås en opløsning eller næsten opløsning.

3. Der tilsættes 1.5 g trækul ("Darco G-60", og blandingen opslæmmes i 0.5 time.

4. Carbonet fjernes ved filtrering og vaskes med 20 ml methanol. Methanolvaskevæsken tilsættes filtratet.

5. 120 ml vand tilsættes filtratet. (En lille mængde udfældning kan vise sig. Dette fjernes ved filtrering og gemmes til oparbejdning og genindvinding).

6. Opløsningen fra trin 5 omrøres hurtigt og indstilles til en pH-værdi 2.5 - 3.0 med 10% natriumhydroxid. Der dannes krystaller.

7. Blandingen opslæmmes i 0.5 time. Krystallerne fjernes ved krystallisering, vaskes med 20 ml 50% methanolvand (v/v), 30 ml methanol og vakuumtørres ved 50° C i 24 timer. Udbytte: Der opnås op til 9 g renset 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxy-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

B.

1. 10 g af det opnåede produkt i trin 15 opslæmmes i 75 ml vand.

2. 10% natriumhydroxid tilsættes til en'fastholdt pH-værdi 6.8-7.2. Der kan opnås en opløsning eller delvis opløsning.

3. Der tilsættes 1.5 g trækul ("Darco G-60"), og blandingen opslæmmes i 0.5 time ved en fastholdt pH-værdi 6.8 - 7.2 (fortsat tilsætning af 0.1 til 1 N natriumhydroxid).

4. Carbonet fjernes ved filtrering. Carbonet vaskes med 20 ml vand som tilsættes filtratet.

5. pH 6.8-7.2 opløsningen i trin 4 kan krystalliseres ved en pH-værdi 2.5-3.0 som beskrevet under A, trin 6 og 7 ovenfor, eller ved en pH-værdi 1.2-1.5 (ved tilsætning af saltsyre) og som beskrevet i d, e, og f i trin 16. I begge tilfælde opnås op til 9 g 148796 24 krystallinsk 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthioxnethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

Dette produkt opnås ofte som et krystallinsk monohydrat.

Når denne forbindelse administreredes intramuskulært ved injektion i en dosis på 10 mg/kg legemsvægt i mus, opnåedes på 15 minutter en blodspejlsværdi på 19.7 mg/ml.

Den dosis af titelforbindelsen, som beskyttede 50% af de udsatte dyr, mod en lethal intramulskulær dosis af E.Coli A 15119, K. Pneumoniae A 9977 og E. cloacae A21020 i mus var 0.39-0.42, 1.5-25 og 1-3.2 mg/kg.

Eksempel 4

Dikalium - 7-(D-a-hydroxyphenylacetamido)-3-(1- carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylat._ <Q/fHCOW .s

OH fyUvsAI

f("0K CHgC-OK

D- ° A). 7-(D-a-formyloxyphenylacetamido)-3-(1-carboxymethyΙ- ίο trazol-5-yl-thiomethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre.

Til en opløsning af 500 mg (0.0134 mol) 7-amino-3-(1-carboxy-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre i 10 ml vand ved 0° sattes med omrøring 200 mg natriumbicarbonat. Såsnart opløsningen var færdig tilsattes på én gang 340 mg (0.0172 mol) D-(-)-2-formyloxy-2-phenyl-acetylchlorid i 10 ml acetone. Såsnart der var dannet bundfald tilsattes fast natriumbicarbonat, og opløsningen omrørtes ved en pH-værdi 8 i 1 time. Acetonen afdampedes ved 15 mm's tryk og 30°, og opløsningen lagdeltes med 20 ml ethyl-acetat og syrnedes med 1:1 phosphorsyre. Efter ekstraktion med ethylacetat filtreredes blandingen, og det organiske lag fraskiltes og inddampedes til dannelse af det der identificeredes som så godt som ren 7-(D-a-formyloxyphenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol- 25 148796 5-yX-thiomethy1)-3-cephem-4-carboxy1syre.

B) Dikalium-7-(D-a-hydroxyphenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat_

Det faste stof isoleret i trin A) opløstes i 5 ml methanol og 5 dråber koncentreret saltsyre. Opløsningen behandledes med carbon og opvarmedes i 3 minutter på dampbad. Blandingen filtreredes og fortyndedes med 15 ml vand. Det gummiagtige faste stof tritureredes med koldt vand og til sidst med vandfri ether. Det faste stof opløstes i 5 ml acetone og behandledes med 50 mg kalium- 2-ethyl-hexanoat. Dikalium - 7- (D-a-hydroxyphenylacetamido)-3- (1-carboxy-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat opsamledes som et hvidt fast stof og vejede 90 mg, smeltepunkt 375°, langsom dekomp.

Analyse beregnet for C^gH^gK2NgO^S2: C, 39.19; H, 2.77; N, 14.42.

Fundet: C, 39.87; H, 3.50; N, 12.58.

Når denne forbindelse administreredes intramuskulært ved injektion i en dosis på 10 mg/kg legemsvægt i mus opnåedes en blodspejlsværdi på 21.4 mg/ml på 15 minutter.

Den dosis af titelforbindelsen, som beskyttede 50% af de udsatte dyr, mod en lethal intramuskulær dosis af E. Coli A 15119 i mus, var 0.8 mg/kg.

Eksempel 5 7-(D-a-Aminophenylacetamid)-3-(1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre

<Λ /ν.Μ-ΟΟΝΗτ-γΝ N-N

m2 „Ji

D- ° C00H CH^COOH

26 148796

En opløsning af 0.55 g (0.0022 mol) D-(-)-a-tert.-butoxycar-boxamidophenyleddikesyre og0*22 g (0.0022 mol) triethylamin (TEA) i 17 ml tetrahydrofuran (THF) omrørtes kraftigt ved 0° med 0.300 g (0.0022 mol) isobutylchlorformiat. Blandingen omrørtes i 30 minutter ved 0°, og en opløsning af 0.0022 mol 7-amino-3-(1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre og 0.445 g (0.0044 mol) TEA i 6.8 ml 50% THF tilsattes. Den resulterende opløsning omrørtes i 2 timer ved 25° og dernæst afdampedes THF ved 40° ved 15 mm's tryk til en olie. Olien vaskedes med 2 x 50 ml ether, fortyndedes til halvdelen med vand og syrnedes til en pH-værdi 3.0 med fortyndet saltsyre. Blandingen omrørtes i en time på et isbad og produktet ekstraheredes til 75 ml ethylacetat. Ekstrakten vaskedes med 2 x 20 ml vand og 2 x 50 ml mættet natrium-chlorid-opløsning. Ethylacetaten afdampedes ved 15 mm's tryk og 35° til en olie og tritureredes med "Skellysolve B" til dannelse af 480 mg (35.3%) 7-(D-a-tert.-butoxycarboxamidophenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-yl-thiomethyl)- 3-cephem-4-carboxylsyre. Denne prøve sattes til 1 ml trifluor-eddikesyre og opløsningen omrørtes en time ved 0° og fortyndedes dernæst med 50 ml ether. Saltet opsamledes, opløstes i 10 ml ^0 og indstilledes til en pH-værdi 4.0 med fortyndet ammoniumhydroxid (NH^OH). Produktet opsamledes, vaskedes med vand og acetone og tørredes i vakuum over Ρ20,- *· timer ved 25° til dannelse af 150 mg (23.96%) 7-(D-a-aminophenylacetamido)-3-(1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, smeltepunkt JT>180°, langsom dekomp. JR- og NMR-spektrene var i overensstemmelse med strukturen.

Analyse beregnet for ci9Hi9N7°gS2" 1 1/2 H20: C, 42.84; H, 4.16; N, 18.41.

Fundet: C, 43.12; H, 4.12; N, 16.74.

27 148796

Eksempel 6 7-(2-Aminomethyl-l.4-cyclohexadienylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre._ H —Ijl

COOH . CHgCOOH

En opløsning af 0.80 g (0.003 mol) 2-t-butoxycarbonylamino-methyl-1.4-cyclohexadienyleddikesyre og 0.303 g (0.003 mol) tri-ethylamin i 19.2 ml THF omrørtes ved 0°, og 0.41 g (0.003 mol) isobutylchlorformiat tilsattes. Blandingen omrørtes i 30 minutter ved 0° og sattes til en opløsning af 0.003 mol 7-amino-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre og 0.61 g (0.006 mol) TEA i 9.2 ml 50% THF. Den resulterende opløsning omrørtes i 1 1/2 time ved 25°. Tetrahydrofuranen afdampedes ved 15 mm's tryk og 30°, og remanensen vaskedes 2 x 30 med ether og fortyndedes dernæst til halvdelen med vand. Opløsningen syrnedes til en pH-værdi 3.5 med fortyndet saltsyre, og produktet opsamledes, tørredes i 18 timer i vakuum over P20,- ve<^ 25° til dannelse af 1.55 g (54.0%) hvidt pulver. Der sattes ialt 3.4 ml trifluor-eddikesyre til ovenstående 7-(a-(2-t-butoxycarbonylaminomethyl-1.4-cyclohexadienylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre og omrørtes 1 time ved 0°. Opløsningen fortyndedes med 150 ml ether og bundfaldet opsamledes ved filtrering. Trifluoracetatsaltet suspenderedes i 3.4 ml vand og indstilledes til en pH-værdi 4.5 med fortyndet ammoniumhydroxid. Den gummiagtige remanens tritureredes med vand, opsamledes og vaskedes med vand og acetone. Produktet tørredes i 18 timer i vakuum over P2°5 dannelse af 53 mg (15.72%) 7-(2-aminomethyl- 28 148796 1.4-cyclohexadienylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre; smeltepunkt>160°, langsom dekomp.

Analyse beregnet for C20H23N7°6S2* 1/2 H20; C, 45.18; H, 4.55; N, 18.44.

Fundet: C, 45.46; H, 4.68; N, 17.09.

IR- og NMR-spektrene var i overensstemmelse med strukturen.

Eksempel 7 7- (ct-Amino-4-hydroxyphenylacetamido·) -3-(1- carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxyl syre.__ H°—/)~CH-C0NH-i-$-ff

D- 0 COOH CH2 COOH

Til en opløsning af 2.7 g (0.01 mol) D-(-)-N-tert.-butoxy-carbonyl-p-hydroxyphenylglycin i 92 ml tetrahydrofuran sattes 1.1 g (0.01 mol) N-methylmorpholin. Opløsningen afkøledes til 0°, og 1.4 g (0.01 mol) isobutylchlorformiat tilsattes straks på én gang. Omrøringen fortsatte i 10 minutter og den blandede anhydridopløsning .sattes til en 0° opløsning af 3.7 g (0.01 mol) 7-amino-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthionethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre og 1.1 g (0.01 mol) N-methylmorpholin i 50 ml vand. Opløsningen omrørtes 1 time, og tetrahydrofuranen afdampedes ved 30° (15 mm) til et totalt volumen på 45 ml. Opløsningens pH-værdi sænkedes til 2 med 1:1 phosphorsyre og ekstraheredes med ethylacetat, vaskedes med vand og opløsningsmidlet azeotrop destilleredes til et glas- . agtigt fast stof ved 30° (15 mm). Remanensen tritureredes 148796 29 med ether for at fjerne eventuel udgangssyre og opsamledes ved filtrering. Denne var hydroskopisk og blev øjeblikkelig overført til 5 ml. trifluoreddikesyre og omrørt i 1 time ved 27°. Opløsningen fortyndedes med 25 ml ether, og produktet opsamledes ved filtrering og suspenderedes i 5 ml vand. Blandingen indstilledes til pH-værdi 3 med koncentreret ammoniumhydroxid og fortyndedes med 10 ml isopropanol. Det lyse tanfarvede faste stof opsamledes ved filtrering og tørredes i vakuum over P2°5 * ^4 timer til dannelse af 300 mg 7-(a-amino-4-hydroxyphenylacetamido)-3-(1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Smeltepunkt 175° langsom dekomp.

Analyse beregnet for cigHi9N7°7S2 3/4 i-C^H^O: C, 42.78; H, 4.44; N, 17.32.

Fundet: C, 42.86; H, 4.55; N, 15.39.

IR- og NMR_spektrene var i overensstemmelse med strukturen. NMR-spektret viste dog tilstedeværelsen af 0.75 mol isopropylalcohol i produktet.

148796 30 I ίΊ Γ" s s _ U-2 ii in i Q. (VI ΙΛ jjj o r-t-to co co cvi o co on r-co r-in m in in oj m fOl

<5 Λ T- oo oo CVI CVI CV] CVI CVI lw J

in r- T- r- τ- t- Λ Λ Λ U.

ω S

CM

ta ts i

2 CM

"55 to co co ^ ® q. o r- in oo tn i— oo oo oo oo au § o o' o ων r w -r o' r ω o' w o' oo m m m o' n v <y o r- cvi oj cvi oo yy' y tn "33 q. co cd in in co 1 ™

^ ^ ^ ^ ΙΠ X

o o oj tvjcomoootor-oot-cviininint-oo m_2 S ΝΛΠ- r- 00 CVI 04 OJ 10 7 <n oo r-1-1- J.

r-s y. Λ Λ Λ IS

ε

N

D! 3.

"φ oo i α to co co in o in a b «7 § ο o r- cvT'icoo^i-cvit-cviocoLninincviin u—o

2 S to 00 00 «- CVJ CVI CVI CVI | C

ft .2 Λ A Λ Λ 13 3 ® in S- +d a) > w

ft Ό dP

-* a) in (0 > _ Ί-» w

^ oo^Eg 2 'c I

in _ σ> 7= „ in a ft

T ω ~ 5¾. co ro co οo oo in au F

Ο α«Γ® r-c- o in r- r- w g V is ft I *o2 o'oc-vrt-wvro’o'too'wowinamoN ΥρΛ Ϊ i « aw ε ^ "£2?* w ΙΟ) 3 •Ω it Q Ο /\ /\ (/)

+3 lUvAllw W

£ ” ?c o oc Z 5 8 ffi o .t; c

^ ^ Λ C

c * - 2 in ft o o n<« ' ,2 in'3-r'>r'*cDcoo>r-c-iOJ'*oooinooi-ioi'-o> 2 +c MOoonooonrNNrOrcroininin incoinincocominincoooinoiincoococoto — ft s.

æcncx)cr)cno5c-ooc-cno)c-o)r-oocMOOOioo " 23 <<<<<<<<<<<<<<<<<<< o £±d o S 1 ri ^ U η rj * «Τ' a=E . ™ « 2 i CO I ' BO O) ft jT' 1 > to O oC.n ^ _ Q. 3 '-o o ε cc to1 T T /-./-T ° a ^ ~ v *~SEn«£Sr ?SfT -^ffT V .2¾ g*rS22'^o w°?uf °oo _J o s oi

.5 u, .id λγ ri 5r ® i w O »uCG t V S n C

c S ε^χχ ®ό"ϊΓ,2.2 S S ? -¾ , ocu)Smai2 5-T c c ~ 7 c “> ϊ ϊ S \-y 3 c ^ E d) i ·— d) 10 10 iD i p "Z V.

® 3α)<ηιη<η<οιο^3°ρρ^32.0)υΰΰ2 I ^ ε 0 0 3 3 3 3 3»oC|=i pjlggg r-Ss Λο t.

w c >>«hmd ® ni r 55s.^t.2°oo a o ft o ιχ“·33333<ϋ0033εεαΐ o ™ ..(BioraiDnj.uuQ·0- · · · · „ CD t t _; . . . s. p p p u i- 4Jj->.....ij . . · - !.!.iMlCCC t * O ςη(Λΐηιη(Λ(ΛΐΛ(Λωω^:ΐί:ο.ο.ο.(ηωιιιιη « **

Eksempel 8 31 148796

Trihydrat af mononatriumsalt af 7-(2-aminomethyl-phenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem~4-carboxylsyre._ 1. 10 g krystallinsk 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (som omhandlet og fremstillet i Eksempel 3) suspenderes i 50 ml afioniseret vand.

2. 10% Natriumhydroxid tilsættes langsomt med hurtig omrøring til en stadig eller konstant pH-værdi på 7.4 - 7.7. Der opnås en opløsning eller næsten opløsning.

3. Der tilsættes 2 g aktiveret trækul ("Darco G-60"), og blandingen opslæmmes i 0.5 time. pH-værdien holdes på 7.4 - 7.7 med 1 N natriumhydroxid.

4. Carbonet fjernes ved filtrering og vaskes med 10 ml vand. Vaskevæsken tilsættes filtratet.

5. Opløsningen fra trin 4 med pH-værdien 7.4 - 7.7 gøres steri-1 og pyrogenfri ved hjælp af passende aseptisk filtrering og teknik.

Den nødvendige tid til færdiggørelse af trin 3, 4 og 5 skulle ikke overstige 5 timer ved omgivende stuetemperatur.

6. Ved anvendelse af den sterile teknik sættes et omtrent lige så stort volumen (65 ml) steril, pyrogenfri acetone til den hurtigt omrørte sterile opløsning i trin 5 over en 5 minutters periode.

7. Baseret på det omtrentlige oprindelige vandige volumen tilsættes yderligere 2 volumener (120 ml) steril, pyrogenfri acetone med hurtig omrøring i 15-20 minutter. Der dannes krystaller.

8. Blandingen opslæmmes i 10 minutter.

9. Der tilsættes yderligere 3 volumener(180 ml) steril acetone over et 15 minutters interval. Blandingen opslæmmes i 0.5 time.

148796 32 10. Krystallerne opsamles ved filtrering, vaskes med 75 ml steril acetone og vakuumtørres ved 45-50° C eller lufttørres ved 50-56° C i 24 timer. Udbytte: ca. 8.8 g.

Egenskaber for trihydrat af mononatriumsalt af 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(l-carboxymethvl-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre: % vand (KF) = 9.2 (teori = 9.05%) % natrium (flammefotometer) = 4.0 (teori = 3.86%) opløselighed i vand = 500 mg/ml stabilitet i vand = stabil i mindst 24 timer ved stuetemperatur ved 250 mg/ml.

Formulering af injektionsprodukter.

In situ fremstilling af mononatriumsalt af 7-(2-aminomethylphenylacetamido) -3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre: A) 2.5 g af 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxy-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (zwitterion) suspenderes i 8.5 ml vand med hurtig omrøring, natriumcitrat eller NajHPC)^ eller Na^PO^ eller andre passende "baser" tilsættes indtil der opnås en opløsning (pH-værdien bør ikke være over 7.8). Mængden af tilsat "base" noteres.

B) Der fremstilles en fysisk blanding af 2.5 g 7-(2-aminomethylphenylacetamido) -3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre og den faste "base" i forhold bestemt i "A" ovenfor. Den senere tilsætning af vand til opnåelse af forskellige koncentrationer af 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxy-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre giver en opløsning af in situ fremstillet mononatriumsalt af 7-(2-amino-methylphenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

33 148796

Denne fremgangsmåde kan være Ønskelig fordi trihydrat af mononatriumsalt af 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre ikke er så stabilt ved hævede temperaturer som den fri syre 7-(2-aminomethylphenylacetamido) -3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre (zwitterion) monohydrat.

Med hensyn til stabiliteten af 7-(o-amino-methylphenylacet-amido)-3-(l-methyl-l,2,3,4-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-opløsninger ved stuetemperatur og en pH-værdi 10.3 (den laveste pH-værdi der er i stand til at opløse 150 mg/ml) bemærkes et næsten øjeblikkeligt 50% tab af bioaktivitet. I løbet af de næste 30 minutter tabes yderligere 21% aktivitet.

Som modsætning viste en opløsning der indeholdt 125.0 mg/ml af trihydratet af mononatriumsalt af 7-(2-aminomethylphenylacetamido) -3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre med pH-værdi 7.0 intet særligt tab ved stuetemperatur for i det mindste 24 timer.

-o-o-o-o-o-o-o-o-o-o-o-o-

Porbindelsen kaldet 7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-methyl-1,2,3,4-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre ifølge eksempel 1 og krav 1 af USA Patentskrift nr. 3.766.175 er en meget kraftigt virkende cephalosporin, som udviser et særlig ønskeligt aktivitetsspektrum, især overfor visse gram-negative organismer. Desværre udviser denne zwitterion imidlertid en meget lav opløselighed i vand og især i blodstrømmen, hvilket vil sige ved en pH-værdi på ca. 7.2 eller deromkring. Mere specielt gav forsøg på at måle denne opløselighed resultater i intervallet ca.

1.0 - 3.0 mg/ml i både forpufret vandigt medium og i hundeurin ved stuetemperatur. pH-værdien af frisk beagle hundeurin er 7.6. Dette rejser spørgsmålet hvorvidt der er en eventuel toksisk effekt ved indgivelse af denne zwitterion i mennesker, fordi det kan antages, at den ville udfælde på krystallinsk form i nyrerne, 148796 34 når den koncentreres heri under udskillelse. Dette ville hos mennesker være særdeles uønsket. Konventionelle forsøg på at løse dette mulige problem ved anvendelse af sædvanlige vandopløselige former og derivater af 7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-methyl-l,2,3, 4-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre har været uden resultat på grund af omdannelse i legemet af saltet eller derivatet til-zwitterionen, der så udviser sin naturlige lave opløselighed i vandige medier og blod. Den foreliggende opfindelse har til formål at løse dette problem uden tab af den værdifulde biologiske aktivitet af 7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(l-methyl-l,2,3/4-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. Efter forskellige mislykkede forsøg løstes problemet ved tilvejebringelsen ifølge den foreliggende opfindelse af 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, der har de ønskede egenskaber. Mere specielt udviser en prøve af 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre i phosphatpuffer med pH- værdi 7.0 ved 25° C en opløselighed i mg/ml på mindre end 15.3 og mere end 13.6. I dette tilfælde var pufferens kapacitet ikke tilstrækkelig og pH-værdien faldt til 6.48. Således er 7-(2-aminomethylphenylacetamido) -3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)- 3- cephem-4-carboxylsyre tilvejebragt ifølge den foreliggende opfindelse selv på zwitterionformen for opløselig i blodstrømmen til at krystallisere i nyrerne og herved bevirke risiko for toksiske resultater hos i det mindste visse patienter.

Trihydratet af mononatriumsaltet af 7-(2-aminomethylphenyl-acetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem- 4- carboxylsyre udviser ønsket opløselighed ved pH-værdier, som er egnede til injektion i mennesker såsom pH-værdi ca. 7 og udviser stadig tilfredsstillende opløselighed i blodstrømmen og i nyrevæskerne selv efter omdannelse i legemet til zwitterionformen.

35 148796 I overensstemmelse med det foregående er fordelen ved de her omhandlede forbindelser, således deres forbedrede vandopløselighed i forhold til mange andre kendte forbindelser og endvidere de i almindelighed højere blodspejlsværdier, som opnås med forbindelserne ved parenteral administrering af den intramuskulære vej.

Eksempel 9 .7-(3-aminomethyl-2-thienylacetamido)-3-(1-carboxy- methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxyl- syre_ A) 7-(3-t-butoxycarbonylaminomethyl-2-thienyl- acetamido)-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre_

En blanding af 3-t-butoxycarbonyl-aminomethyl-2-thienyl eddikesyre (542 mg, 2 mmol), 2,4-dinitrophenol (368 mg, 2 mmol) og dicyclohexylcarbodiimid (412 mg, 2 mmol) i tetrahydrofuran (THF) omrørtes ved stuetemperatur i 1.5 time. Det udfældede urinstof fjernedes og filtratet inddampedes under reduceret tryk. Den resulterende aktive ester (1.0 g) opløstes i 10 ml THF og sattes til en blanding af 7-amino-3-(l-carboxymethyltetrazol-5-ylthio-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (656 g, 2 mmol) og triethylamin (816 g, 8 mmol) i vand (5 ml) ved 0° C med omrøring. Omrøringen fortsattes i 3.5 time ved stuetemperatur, og reåktionsblandingen sattes til vand (20 ml) og vaskedes med ether (4 x 20 ml). Den vandige opløsning skiltes med ethylacetat og indstilledes til pH-værdi 2 med koncentreret HC1 ved 5° C. Det organiske lag fraskiltes, og det vandige lag ekstraheredes med ethylacetat (2 x 50 ml) Ethylacetat-ekstrakterne forenedes, vaskedes med mættet vandig natriumchlorid, tørredes over HgS04 og inddampedes under reduceret tryk. Den tilbageblevne olie kromatograferedes på silicagel (10 g). Kolonnen udvikledes successivt med chloroform (150 ml) og 3% methanol-chloroform (100 ml). Fra chloroformeluatet udvandtes 2,4-dinitrophenol (50 mg), og titel-cephalosporinen isoleredes ved afdampning af methanol-chloroformeluatet.

Udbytte: 29%, smeltepunkt 185-188°C med dekomponering.

Analyse beregnet for C23H27N7®8S3: C, 42.91; H, 4.54; N, 15.23; S, 14.94.

Fundet: C 43.02; H, 4.17; N, 15.07; S, 15.04.

36 148796 B) 7-( 3-aminomethyl-2-thienylacetamido) -3- (1- carboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre._

Trifluoreddikesyre (0.6 ml) sattes til den blokerede cephalosporin, der var opnået i trin A (610 mg, 1.05 mmol) og 0° C, og blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 15 minutter. Til reaktionsblandingen sattes vandfri ether (15 ml) for at udskille bundfaldet, som opsamledes ved filtrering, vaskedes med vandfri ether (2 x 10 ml) og opløstes i acetonitril (10 ml). Til opløsningen sattes 2 dråber koncentreret ammoniumhydroxid. Det udskilte faste stof opsamledes ved filtrering, vaskedes med acetonitril (2 x 10 ml) og tørredes ved 75°C/lmmHg i 7 timer til dannelse af titelproduktet, som opsamledes som monoammoniumsaltet efter behandling med én ækvivalent ammoniumhydroid.

Udbytte: 83%, smeltepunkt 174-178°C med dekomponering.

Analyse beregnet for ci8H21N8®6^3*H20: C, 38.56; H, 4.32; N, 19.98; S, 17.16.

Fundet: C, 38.89; H, 4.06; N, 18.83; S, 15.24.

IR- og NMR-spektrene var i overensstemmelse med strukturen.

Eksempel 10 7-(2-aminomethylphenylacetamido)-3-(1-carboxyethyl- tetrazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

A) Kalium-O-(l-carbomethoxy-propen-2-ylamino-methyl)-phenylacetat (Enamin)._ 1. Anbring 1000 g O-aminomethylphenyleddikesyre, 340 g kaliumhydroxid, 1412 g methylacetoacetat og 32.400 ml absolut methanol i en tank.

2. Opvarm blandingen til tilbagesvaling i 4 timer under omrøring.

3. Koncentrer reaktionsblandingen under reduceret tryk ved <50°C til ca. 1/5 af udgangsvolumenet.2 4. Sæt 10.000 ml MIBK til koncentratet og fortsæt koncentreringen ved reduceret tryk, indtil methanolen er fjernet.

5. Tilsæt 10.000 ml MIBK eller hvilken som helst mængde, der er nødvendig til at fremstille en bearbejdelig opslæmning af koncentratet .

37 1A8796 6. Omrør og afkøl blandingen til 5-10° C i 30 minutter.

7. Filtrer opslæmningen og vask kagen med 5000 ml MIBK og 3 dernæst med 5000 ral acetone.

8. Tør produktet i en luftcirkuleringsovn ved "v40oC.

9. Udbyttet er 1605 - 1680 g eller 88 - 92% hvidt krystallinsk produkt. Smeltepunkt = 140-142° C.

B) 7-(2-aminomethylphenylacetamid)-3-(1-carboxy-ethyltetrazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre._ A^) Enamin (4.09 g) fra trin A og 90 ml tetrahydrofuran blandedes i en 3-halset kolbe forsynet med en omrører, tørrerør og afkøledes på et tøris-acetonebad. Der tilsattes 8 dråber N,N-dimethylbenzylamin, og blandingen afkøledes til -38° C. Der tilsattes isobutylchlorformat (1.95 g) og omrørtes i 15 minutter.

B1) 7-amino-3(l-carboxyethyltetrazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (3.5 g) opløstes i 50 ml vand og 2.29 g N-methylmorpholin og afkøledes til 2° C. Anhydridet fra trin A1 tilsattes opløsningen med omrøring. Blandingen omrørtes i 1.5 time ved 2° C. Tetrahydrofuranen fjernedes i vakuum, det tilbageblevne skiltes med ethylacetat og indstilledes til en pH-værdi 3. Efter omrøring på et isbad opsamledes produktet; 250 mg, smeltepunkt 140 c dekomponering.

IR- og NMR-spektrene var i overensstemmelse med titelproduktet, men antydede ca. 20% urenheder, først og fremmest udgangsmateriale. Når denne forbindelse blev indgivet intra-muskulært ved injektion ved en dosis på 10 mg/kg legemsvægt i mus, opnåedes en blodspejlsværdi på 22.3 mg/ml efter 15 minutter.

Claims

148796

1. Cephalosporansyrederivater til anvendelse som mellemprodukter ved fremstilling af cephalosporansyrederivater med den almene formel (I) R3 ! R-CH-CO-NH-C-CH CHg i /'k 1 ° U <i»2>nCOOH II 0 hvori R betegner _ R2—C jl rO'*eiie7T-s^' hvor R2 betegner hydrogen, hydroxy eller en eventuelt substitueret aminomethylgruppe, Y betegner hydrogen, hydroxy eller en eventuelt substitueret aminogruppe, R3 betegner hydrogen eller methoxy, og n er et helt tal fra 1-9 incl., eller let hydrolyserbare estere eller ikke-toksiske farmaceutisk acceptable salte deraf, med den begrænsning, at når n er 2-9, har R - CH - betydningen __--CH2NH2 Y CH2- og R3 betegner hydrogen, KENDETEGNET ved, at de har den almene formel (II) R3 Λ-'-γ5"! jnl I-i ^ Lh (i"2)n-COOH hvori R3 betegner hydrogen eller methoxy, og n er et helt