DK151340B

DK151340B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af et krystallinsk cephalosporinderivat

Info

Publication number: DK151340B
Application number: DK385777AA
Authority: DK
Inventors: Kenzo Naito; Kazuo Tsukamura; Haruo Sinbo
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1976-08-31
Filing date: 1977-08-30
Publication date: 1987-11-23
Also published as: JPS603314B2; NO154015B; DK385777A; BE858296A; US4146710A; CA1102310A; SE7709745L; BG60439B2; NL7709614A; NO154015C; FR2364922B1; JPS5329913A; DK151340C; NO772960L; FR2364922A1; NL189355C; GB1589841A; NL189355B; HK27784A; CH630088A5

Description

151340 j

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af et hidtil ukendt, krystallinsk cephalosporinderivat.

Dette derivat har formlen

HEJ_CH2C0HH _A H-N

.. J J_N Å_CH0S_I Ή * 2ΗΧ·ηΞο0 f I (I) C00H CH2CH2I(CH3)2 hvori X er chlor eller brom og n et tal fra 0,1 til 4.

Det er kendt, at forbindelsen med formlen 2 151340

HF .._ΠΗ^ΠΠ~ΝΤΓ—-j/S\ F_F

1 jl 1-F \—CELS—[I F

I l COOH CH2CH2F(CH3)2 (II) liar en udmærket antibiotisk aktivitet (tysk offentliggørelsesskrift nr. 2461478). En af ulemperne ved forbindelsen (II) er, at dens rensning er meget vanskelig på grund af tilstedeværelsen af to basiske grupper, nemlig en iminothiazolin-.’og dimethyl amino gruppe, og en car-boxylgruppe i dens molekyle, og dens store vandopløselighed. En anden ulempe er dens utilstrækkelighed ved en lang lagringstid, idet den er ustabil i den frie syreform (amfoion) eller som et salt med en base. Den til overvindelse af disse ulemper gennemførte forskning har nu overraskende vist,' at faste cephalosporinderivater (i) kan fremstilles ved omsætning a'f nævnte forbindelse (II) eller et' salt deraf med mindst 2 molækvivalenter af en syre med formlen BX (hvor symbolet har den ovenfor angivne betydning), om nødvendigt under tilstedeværelse af vand, og opsamling af det resulterende faste materiale, at de således opnåede forbindelser (I) i høj grad er stabile under lagring og, at hvor nævnte forbindelser (I) kan udvindes i krystallisk form, kan urenhederne, som ellers er vanskelige at fjerne ved konventionelle rensningsmetoder, fjernes næsten fuldstændigt. Den foreliggende opfindelse er baseret på de ovennævnte iagttagelser.

Forbindelser med formlen (I) indeholder ikke over 4 vandmolekyler.

Der findes fire forskellige hydrater, fra mono- til tetra hydrat er, idet der også er tilfælde, hvor mindre end ét molekyle vand absorberes og/eller inkorporeres, afhængigt af betingelserne ved fremstillingen, og selv i sådanne tilfælde kan forbindelserne udvindes og isoleres som krystaller, Anhydraterne kan, som amorfe eller krystallinske pulvere, indeholde mindre end ét molekyle absorberet og/eller inkorporeret vand. Formalt viser forbindelserne (i), hvori vandindholdet bestemt ved Earl Fischer’s metode er mere end ca. 1%, krystallinsk form i et røntgendiffraktions-pulverdiagram, og forbindelser med formlen (I), hvori vandindholdet er mere end ca. 0,3%, viser krystallinsk form ved polarisationsmikroskopisk observation. Forbindelserne (i) kan og- 3

15134 O

så isoleres i amorf tilstand, ifølge røntgendiffraktions-pulverdia-gram og polarisationsmikroskopisk observation. Disse produkter er også ufravigeligt omfattet af den foreliggende opfindelse. Af hensyn til stabilitet og renhed er n fortrinsvis indenfor området 0,1^ n^4-, og især indenfor området l§n<2, i hvilket tilfælde forbindelserne (I) er krystallinske. Set ud fra et kommercielt synspunkt er sådanne produkter ønskelige, som har en n-værdi på ca, 1 eller ca. 2. Forbindelserne (I) kan også indeholde en mindre mængde reaktionsopløsningsmiddel, såsom methanol, ethanol, propanol eller acetone, og disse opløsningsmiddelholdige forbindelser er også omfattet af forbindelserne (I), der fremstilles ifølge den foreliggende opfindelse.

Forbindelserne (I) kan fremstilles ved per se kendte fremgangsmåder. Dvs. at forbindelserne (i) f.eks. kan opnås ved omsætning af udgangsforbindelsen (II) eller et salt deraf med mindst 2 molækvivalenter af en syre med formlen HI, om nødvendigt under tilstedeværelse af vand, og opsamling af det resulterende faste materiale. Som udgangsforbindelse (II) kan f.eks, anvendes (l) reaktionsblandingen, hvori forbindelsen (II) er syntetiseret, (2) en opløsning opnået ved fjernelse af hovedparten af urenhederne fra denne reaktionsblanding, (j) et pulver opnået ved blanding af den i (2) opnåede opløsning med et opløsningsmiddel, hvori forbindelsen (II) kun er sparsomt opløselig, og (4) et pulver opnået ved koncentration til tørhed eller lyofili-sering af den i (2) opnåede opløsning. Udgangsforbindelsen (II) kan underkastes den omhandlede omsætning i fri form (amfoion) eller i form af et salt med et alkalimetal eller jordalkalimetal, såsom natrium, kalium og lithium, eller en organisk amin, såsom triethylamin, di-n-butylamin eller di-cyclohexylamin. Syren HT er hydrogenchlorid eller hydrogenbromid, og kan være opnåelig som et biprodukt ved fremstilling af udgangsmaterialet (II). Syren anvendes normalt i mængder på 2 til 10 molækvivalenter og fortrinsvis 2 til 6 ækvivalenter, idet en mængde mindre end 2 mol pr, mol udgangsforbindelse (II) resulterer i nogen vanskelighed ved at opnå homogene krystaller, mens et uforholdsmæssigt stort overskud af syren kan forårsage dekomposition af udgangsforbindelsen (II). Af hensyn til arbejdsmæssig lethed, udbytte, rensningseffektivitet etc. udføres reaktionen normalt under tilstedeværelse af vand eller et organisk opløsningsmiddel eller en blanding deraf. Det organiske opløsningsmiddel· der anvendes i reaktionen, kan være: 4 1513 4", 1) et opløsningsmiddel, hvori den omhandlede forbindelse (I) kun er sparsomt opløselig, og som er opløseligt i vand, f.eks. ethanol, n-propanol, 2-propanol, butanol, 2-methyl-l-propanol, acetone, methyl-ethylketon, acetonitril, tetrahydrofuran eller dioxan, 2) en blanding af et opløsningsmiddel, såsom et af de ovennævnte, og et opløsningsmiddel, hvori den omhandlede forbindelse (i) er let opløselig, og som er opløseligt i vand, f.eks. methanol, dimethylsulfoxid, formamid, Η,ΪΓ-dimethylformamid, U,U-dimethylacetamid eller methylcel-losolve, eller 3) en blanding af et sådant opløsningsmiddel som ovenfor (1) eller en blanding som ovenfor (2) med et opløsningsmiddel, hvori den omhandlede forbindelse (I) kun er sparsomt opløseligjog som er tungtopløse-ligt i vand,ff.eks. ethylacetat, ether, dichlormethan eller chloroform. Særligt ønskelige er blandinger af vand med acetone, ethanol, n-pro-panol, 2-propanol, me thyl ethylketon og tetrahydrofuran. Reaktionen udføres normalt ved en temperatur i området fra -10 til +4-0°C, fortrinsvis 0 til +30°C. Under -10°C vokser krystallerne langsomt, mens enhver temperatur over 40°C er ufordelagtig, fordi udgangsforbindelsen (il) dekomponeres. Reaktionstiden afhænger af renheden af udgangsforbindelsen (II) og typen af indeholdt urenhed, men hvis der gøres brug af et materiale (II) med en renhed på over 80%, som opnået ved en konventionel rensningsmetode, såsom kromatografi på en adsorberende søjle, forløber reaktionen i 30 minutter til 24 timer, fortrinsvis 30 minutter til 4 timer. Reaktionsproduktet isoleres ved filtrering, centrifugering eller lyofilisering. Hvis det organiske opløsningsmiddel er indeholdt i den isolerede forbindelse (I), kan forbindelsen (i) anvendes som den er, hvis det indeholdte organiske opløsningsmiddel ikke skader dens stabilitet ved lagring og dens anvendelse.

De følgende udførelsesformer af den foreliggende opfindelse er foretrukne.

A) Forbindelsen (il) opløses i et af de ovennævnte opløsningsmidler, hvorefter der tilsættes den beregnede mængde HK (hvori X har den ovenfor angivne betydning). Reaktionsproduktet lyofiliseres. Lyofilisatet tørres under reduceret tryk og under tilstedeværelse af et dehydrati-serende middel, såsom silicagel eller phosphorsyreanhydrid, hvorved der opnås anhydratet af forbindelse (I).

B) Forbindelsen (II) eller dens salt opløses i vand eller en blanding af vand og et af de ovennævnte hydrofile organiske opløsningsmidler, i 5 '151340 hvorefter der tilsættes ΕΚ, Efter endt reaktion sættes et organisk opløsningsmiddel, hvori den omhandlede forbindelse (I) kun er sparsomt opløseligt, gradvis til den resulterende opløsning,indtil opløsningen begynder at blive uklar. Opløsningen henstår i 1 til flere timer, derefter tilsættes lidt efter lidt et organisk opløsningsmiddel, hvori den omhandlede forbindelse (I) kun er sparsomt opløselig, indtil krystaludskillelsen ophører. De således opnåede krystaller udvindes f,eks. ved filtrering eller centrifugering. Krystallerne er forskellige former for hydrater, afhængigt af krystallisationsbetingelserne, f.eks, temperatur, opløsningsmiddel eller krystallisationstid, men normalt tri- til decahydrater. De opnåede krystaller indeholder undertiden mindre mængder af et Organisk opløsningsmiddel, afhængigt af reaktionsbetingelserne, men et sådant organisk opløsningsmiddel kan sædvanligvis fjernes ved tørring under reduceret tryk, om nødvendigt, Imidlertid er nogle typer organiske opløsningsmidler vanskelige at fjerne ved simpel tørring under reduceret tryk,og i dette tilfælde bringes krystallerne i kontakt med vanddamp, indtil ca. 5 til 10 molækvivalenter vand pr. mol anhydrat af forbindelsen (I) er absorberet, hvorved det organiske opløsningsmiddel er fjernet. Det opnåede vandholdige produkt holdes derefter under reduceret tryk (ca. O til 20 mm Hg), hvorved vandet gradvis fjernes, hvilket giver krystaller af hexahydratet, p ent ahydrat et, tetrahydratet og derefter trihydratet^ i den nævnte rækkefølge. Hår krystaller af trihydratet henstår under reduceret tryk som ovenfor og under tilstedeværelse af et dehydratise-rende middel, såsom phosphorsyreanhydrid, opnås krystaller af dihydra-tet, monohydratet og til sidst anhydratet, i den nævnte rækkefølge. Mindre end 1 mol vand kan være indeholdt (absorberet eller inkorporeret) i disse krystaller. Alternativt må der, når vandet fjernes fra de forskellige hydrater, formodes at være indeholdt (absorberet eller inkorporeret) mindre end 1 mol vand i disse hydrater, og der kan opnås en blanding af forskellige hydrater.

C) Det ovennævnte lyofilisat A) bringes i kontakt med vanddamp, hvorved dampen absorberes, hvilket giver krystaller af hydrat. Når krystallerne tørres,opnås hexahydratet, pentahydratet, tetrahydratet, trihydratet, dihydratet, monohydratet og anhydratet i den nævnte rækkefølge, idet der er mindre end 1 mol vand indeholdt (absorberet eller inkorporeret) i disse hydrater og dette anhydrat, D) Forbindelsen (II) eller dens salt opløses i vand indeholdende ca.

5 til 35% MX (hvori M betyder natrium, kalium eller lithium og X chlor 6 151340 eller brom.), hvorefter der tilsættes HX. Yed afkøling af opløsningen begynder udfældning af den omhandlede forbindelse (I) som krystaller. De således opnåede krystaller udvindes f.eks. ved filtrering eller centrifugering. Kar krystallerne tørres, opnås pen-tahydratet, tetrahydratet, trihydratet, dihydratet, monohydratet og anhydratet i den nævnte rækkefølge, idet der er mindre end 1 mol vand indeholdt (absorberet eller inkorporeret) i disse hydrater og anhydratet.

E) Til blandingen af forbindelsen (II) eller dens salt og det førnævnte organiske opløsningsmiddel, hvori den omhandlede forbindelse (I) er opløselig, sættes vandfrit HX. Den resulterende blanding filtreres, om nødvendigt, og filtratet blandes med det førnævnte organiske opløsningsmiddel, hvori den omhandlede forbindelse (i) er sparsomt opløselig. Det resulterende bundfald, som f.eks. udvindes ved filtrering eller centrifugering, tørres under reduceret tryk og under tilstedeværelse af et dehydratiserende middel, såsom silicagel eller phosphorsyreanhydrid, hvorved der opnås et amorft pulver af anhydratet af forbindelsen (I). De resulterende krystaller af den omhandlede forbindelse (I) indeholder 2 mol EX pr. mol udgangsforbindelse (II) som bekræftet ved element ar analyse og titrering eller anden'kvantitativ analyse, Krystalliteten af forbindelsen (i) kan fastslås ved mikroskopisk iagttagelse· polarisationsmikroskopi eller røntgendiffraktionsanalyse. Det infrarøde absorptionsspektrum af produktet viser smalle skarpe toppe i modsætning til dem, der er forbundne med de ikke-krystallinske pulvere. Der er tilfælde, hvor tegn på krystalliteten forsvinder fra røntgendiffraktions-pulverdiagrammet, når vandindholdet i de omhandlede krystaller er reduceret til mindre end 1 mol ved tørring, men interferensfarver (tegn på krystallitet) observeres stadig under et polarisationsmikroskop.

Produkterne, som opnås ved de ovenstående fremgangsmåder A) og E), er sædvanligvis amorfe ifølge røntgendiffraktions-pulverdiagram og polarisationsmikroskopisk observation, og de har en mindre stabilitet og renhed end produkterne,der opnås ved de ovenstående fremgangsmåder B), G) og D), idet der blandt produkterne er nogle, som da har mistet krystalliteten som følge af tab af krystalvand (generelt under 0,3%).

i

De omhandlede forbindelser (i) kan ifølge den foreliggende opfindelse bringes til anvendelse i form af krystaller og/eller som ikke-krystal- 7 151340 linske pulvere, der er opnåelige ved tørring af sådanne krystaller, eller i nogle tilfælde som amorfe pulvere, eller de kan anvendes som injicerbare eller oralt administrerbare præparater i forbindelse med et ikke-toksisk alkali- eller jordalkalimetalsalt, f.eks. natriumhy-drogencarbonat, natriumcarbonat eller trinatriumphosphat, dvs. efter indstilling til det ønskede pH, den ønskede type ioner og den ønskede ionstyrke. F.eks. kan en opløsning af en omhandlet forbindelse (I) i en vandig opløsning af en støkiometrisk ækvivalent mængde natriumcarbonat (i det følgende kaldt ”C"-opløsning) administreres intramuskulært eller intravenøst til varmblodede dyr, herunder menneske, mus, rotte og hund, til behandling af infektionssygdomme forårsaget af gram-positive bakterier (f.eks. Staphylococcus aureus) eller gram-negative bakterier (f.eks. Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris og Proteus morganii).

Til behandling af en urinvejsinfektion forårsaget af Escherichia coli hos menneske eller mus kan "C"-opløsningen, indeholdende ca. 5 til 50 mg (på anhydratbasis) af den omhandlede forbindelse (I) pr. kg legemsvægt, administreres intravenøst dagligt delt i tre doser.

Eeferenceeksempel

Den antibakterielle styrke (udtrykt som MIO) og toksiciteten af den omhandlede forbindelse (I) på anhydratbasis 1) Antibakterielt spektrum (agarfortynding)

Staphylococcus aureus IDA 209 P 0,39 pg/ml

Staphylococcus aureus 1840 0,78 pg/ml

Escherichia coli MIHJ JC-2 0,2 pg/ml

Escherichia coli 0-111 0,05 Rg/oil

Escherichia coli 1-7 1,56 μg/ml

Klebsiella pneumoniae DT 0,1 pg/ml

Proteus vulgaris HO 3988 1,56 pg/ml

Etfoteus morganii ΙΕ0 3848 0,3^ pg/ml 8 151340 . -...... " * \ .:.

2) Akut toksicitet (mus, intraperitonealt) 20 g/kg

Data for akut toksicitet angår en 1:1 (molforhold) blanding af den omhandlede forbindelse (I) og natrium.

Det skal bemærkes, at de omhandlede forbindelser (I) kan antage en tautomer form ved tautomerisering, som vist nedenfor.

|T_^_CH2C01TH ___A Ή_Ή . J ___Ή J_0HoS_II Ν ♦ 2ΗΧ·ηΗο0

Or2 2 000Η 0H20H2K(0H3)2

Der er foretaget mange undersøgelser angående eksistensformerne af denne type forbindelser, idet den eksisterende litteratur refererer til thiazolinformen af forbindelserne under visse omstændigheder [Acta Crystallographica 2£, 326 (1971)] og thiazolformen under andre omstændigheder [Chemistry and Industry, 1966 ed,, p. 1634-]. Imidlertid antyder resultaterne af forskellige bestemmelser, at de omhandlede forbindelser (I) er stabile i thiazolinformen på grund af bidrag fra hydrogenbindingen som vist i den følgende formel

?.....V» A

VW> rh 1 ft [ ]— 2 i-IT J-OE-S__ IT · 2HX*oHo0 I_I y 2 Npk 2 COOH CH2CH2F(CH3)2 og således fortrinsvis antager denne thiazolinform. Imidlertid er det muligt, at denne ligevægt vil forskydes til en af siderne, alt efter omstændighederne hvorunder forbindelserne (I) optræder, f.eks. pH* et og polariteten af opløsningsmidlet, temperaturen og andre parametre. Derfor refereres der heri til de omhandlede forbindelser (I) på basis 9 151340 af deres thiazolinform, selv om de naturligvis ellers kan betegnes ifølge thiazolformen.

Den foreliggende opfindelse belyses nærmere i de følgende eksempler, det skal dog forstås,at eksemplerne udelukkende tjener dette formål og ikke skal udlægges som begrænsninger af opfindelsen, og at mange variationer er mulige indenfor opfindelsens rammer. Alle temperaturer er ukorrigerede, og procenter er alle på vægtbasis, med mindre andet er specielt angivet, be angivne 3MR-spektrer måltes under anvendelse af et Varian Model HA 100 (100 MHz) eller 160 (60 MHz) spektrometer med tetrametbylsilan som intern eller ekstern reference, og alle T_vær-dier er i ppm. Symbolet s står for en singlet, d en dublet, t en triplet, dd en dobbelt dublet og m en multiplet og sh en skulder. I de følgende eksempler er vandindholdet overalt bestemt ved Earl Fischer's metode.

Eksempel 1 l) lil 400 g 2-(U,U-dimethylamino)ethylamin sattes 2,4 liter ether, og der tilsattes efter afkøling en blanding af 400 g carbondisulfid og 4,0 liter ether dråbevis ved 18-23°C i løbet af 1 time. Blandingen omrørtes i yderligere 1 time ved en temperatur i samme område, og de resulterende krystaller af 2-(U,U-dimethylamino)-ethylamin-carbo-dithiosyre isoleredes ved filtrering og tørredes. Udbytte 695 S? 93»3%; smeltepunkt; 156-157°0»

Til de ovennævnte krystaller sattes 4,4 liter vand,og der tilsattes dråbevis under omrøring ved 8-13°0 4,32 liter IH ΕΟΞ-opløsning i løbet af 30 til 40 minutter, herefter tilsattes ved 0-5°C en blanding af 668 g methyliodid og 6,68 liter acetone dråbevis i løbet af 30-40 minutter, efterfulgt af 30 minutters omrøring ved en temperatur i samme område. Acetonet destilleredes af under reduceret tryk,og det vandige lag ekstraheredes med 3 liters og 2 liters portioner af ethyl-acetat. Ethylacetatiagene samledes, vaskedes med 2 liter af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørredes over vandfrit natriumsulfat og koncentreredes. ben krystallinske remanens omkrystalliseredes ved tilsætning af 500 ml n-hexan. Ved ovenstående fremgangsmåde opnåedes 575 g S-methyl-[2-(N,H-dimethylamino)]ethylamin-carbodithioat. Udbytte 75?5%; smeltepunkt; 61~62°C, Til 520 g af de ovennævnte kry- JJO 151340 staller sattes 1,05 liter ethanol, 190 g natriumazid og 2,1 liter rent vand, og blandingen opvarmede s under tilbage svaling i 3 timer. Hertil sattes en opløsning af 52 g S-me thyl-[ 2-(Η,Π-dimethyl amino)] e thyl amin-carbodithioatkrys taller i 100 ml ethanol , hvorefter der opvarmedes under tilbagesvaling i 1 time. Blandingen afkøledes til 20°0 og indstilledes, efter tilsætning af 2,0 liter rent vand, til pH 2 til 2,5 med koncentreret saltsyre under en nitrogenstrøm. Etha-nolet destilleredes af under reduceret tryk,og remanensen hældtes på "Amberlite IR-120" (Ξ-form), hvorefter harpiksen vaskedes med rent vand,indtil aciditeten var forsvundet. Fraktionerne, som elueredes med en 5%' s vandig ammoniakopløsning, samledes og koncentreredes.

Der opnåedes 350 g l-[2-(U,F-dimethylamino)-ethyl]-5-mercapto-lH-te-trazol som krystaller. Udbytte 69,3%; smeltepunkt: 218-219°C.

HMR(i D2O, med en støkiometrisk mængde UaHCO^) τ; ΪΓ = Iv 5,'33(2H, t, 1 >T-CHp-), 6,50(2H, t, -CHpU< ), /CH3 7,20(6H, s, -N ) XCH_, 5 2) Til 2,6 liter vand sattes 206 g 7p-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl) acetamido]-3~acetyloxymethyl-3-cephem-4—carboxylsyre, og der tilsattes under omrøring 86,5 g af det ovenfor i l) opnåede 1-[2-(U,D-dimethyl-amino)ethyl]-5-mercapto-lH-tetrazol sammen med 42 g natriumhydrogen-carbonat. Blandingen omrørtes ved 65°C i 75 minutter, hvorefter den afkøledes til 10°C. Blandingen indstilledes til pH 2,0 ved tilsætning af 250 ml 5 FHC1, og det resulterende uopløselige materiale samledes ved filtrering og vaskedes med vand. Filtratet og vaskevandet samledes, indstilledes til pH 5»2 med natriumhydrogencarbonat og hældtes på en søjle af 10 liter "Amberlite XAD-2" (100-200 masker). Søjlen vaskedes med 60 liter vand, og der elueredes med 20%'s methanol og derefter med 40%*s methanol. 11 liter af fraktionerne, som indeholdt det omhandlede produkt, koncentreredes til 5 liter og passeredes gennem en søjle af 300 g aktiveret aluminiumoxid ["Activated Alumina" (ca. 3OO masker)] og en søjle af 100 ml "Amberlite IR-120" (H-form). Søjlen vaskedes med vand. Den gennemstrømmede væske og vaskevandet samledes og koncentreredes til 2 liter. Koncentratet afkøledes til 5°C og omrørtes med 5 g aktivt kul i 5 minutter, hvorefter kullet filtre- n 151340 redes fra* Filtratet lyofiliseredes. Ved den ovennævnte fremgangsmåde opnåedes 51,2 g 7p-[2-(2-imino-4-thiazolin~4-yl)acetamido]-3-[l-(2-(Ν,Ν-dimethylamino)ethyl]-lH-tetrazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem- 4-c arboxylsyre.

m(60 MHz, H20) t: 3,43(s, thiazolin 5-Ξ); 4,35(1, 7-H); 4,88(d, 6-H); 5,0-6,7(m, 5 x 0H2); 6,95(s, 2 x CH^).

3) I 1,0 liter vand opløstes 263 g af et lyofilisat af 7p-[2-(2-imi-no-4-thi az olin-4-yl)ac et amido]-3-[1-[2-(H,Η-dimethylamino) ethyl] -1H-tetrazol-5-yl]-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, som opnåedes ved seks gange at gentage fremgangsmåden i 2) ovenfor, renheden, som bestemtes ved hurtig-kromatografering, var 93% på anhydratbasis, hvorefter der tilsattes 1,0 liter acetone og derefter 150 ml 12 H H01.

Efter tilsætning af 20 g aktivt kul til denne opløsning omrørtes blandingen ved 5°C i 10 minutter, hvorefter kullet filtreredes fra. Til filtratet sattes 5 liter acetone,og blandingen omrørtes ved 10°C i 1 time. Derefter tilsattes yderligere 2 liter acetone, og efter 1 times omrøring samledes de resulterende krystaller ved filtrering, og de vaskedes fire gange med 500 ml's portioner af acetone og tørredes. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnåedes 262 g krystaller af nævnte carboxylsyres dihydrochloridmonohydrat (udbytte 94% på basis af det rene produkt).

IE(KBr)cm""^: 1770 (β -laet am)

Element ar analyse for 2Η01·Η20

Beregnet: C, 35,06; H, 4,47; H, 20,45; S, 15,60; 01, 11,50 Fundet: C, 34,87; H* 4,52; H, 20,01; S, 15,33; Cl, 11,24

Vandindhold:

Beregnet: 2,92%

Fundet: 3,,15% HMR(60 MHz, D20) t: 3,20(s, thiazolin 5-H), 4,25(d, 7-H), 4,75(d, 6-H), 4,9-6,5(m, 5 x CH2), 6,85(s, 2 x OH^)

Renheden af dette· produkt, bestemt ved hurtig-kromatografering, var 99,6% på anhydratbasis, og røntgendiffraktions-pulverdiagrammet af produktet viste, at det var krystallinsk.

12 151340

Betingelser ved hurtig-kromatograf eringen:

Adskillelsessøjle: "Hitachi Ion Exchange Resin 2614", ^,1 mm x 50 cm; søjletemperatur 50°C; eluant-0,5Ά citratpuffer, pH 6,5» 0,2 ml/min.; tryk 4,3 kg/cm ; instrumentf ølsomhed 10 mV; registreringspapirhastighed 2,5 mm/min.

4) Under tilstedeværelse af phosphorsyreanhydrid og ved 35°0- tørredes 10 g af krystallerne, som opnåedes i 3) ovenfor, i vakuum (2 mm Hg) i 3 timer, hvorved der opnåedes 9,8 g af den nævnte carboxylsyres di-hydrochlorid-0,64 hydrat som et pulver.

Vandindhold: 1,9%.

Baseret på dets røntgendiffraktions-pulverdiagram, fandtes dette produkt at være et ikke-krystallinsk pulver. Observation med et polarisationsmikroskop viste, at produktet ved drejning af objektbordet frembragte interferensfarve gennem krydsede Uicol-prismer, hvilket bekræftede optisk anisotropi og således, at pulveret var krystallinsk.

5) I 200 ml vand opløstes 20 g af det krystallinske produkt, som opnåedes i 3), og opløsningen afkøledes til 10°C. Opløsningen passeredes gennem en søjle af 135, ml "Amberlite IR-45" (0H-form) i løbet af 30 minutter» og søjlen vaskedes med 300 ml vand. Den gennemstrømmede væske lyofiliseredes, hvorved der udvandtes 16,0 g 7p-[2-(2-imino-4-thi az o lin-4-yl) ac et amido ] - 3- [ 1- [ 2- (U, H-dimethyl amino ) - ethyl ] -ΙΞ-t e-trazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Vandindholdet af dette produkt var 3,20%, og dets renhed, bestemt ved hurtig-kromatogra-fering, var 99,2% på ahhydratbasis.

Eksempel 2 I 30 ml vand opløstes 10 g af 7P-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)aceta-mido ] - 3-[ l-[ 2-(ΪΓ, H-dime thyl amino ) e thyl ]-lH-(betr az o 1-5-yl ] thiomethyl- 3-cephem-4-carboxylsyren, som opnåedes i eksempel 1-2), og der tilsattes under omrøring ved 5°0, 5,5 ml 12 FH01 og 150 ml methylethylketon. Blandingen omrørtes i 3 timer og henstod derefter ved 5°C i 16 timer. De resulterende krystaller samledes ved filtrering, vaskedes fire gange med 20 ml's portioner af methylethylketon og tørredes. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnåedes 10,5 g af den nævnte carboxylsyres dihydrochloriddihydrat, som krystaller.

i3 151340

Element ar analyse, for Cp8H23^9^4^3* 2HC1· 2H,-,0

Beregnet: C, 34,07; Η, 4,61; IT, 19,86; 01, 11,17 Bundet : 0, 33,94; Η, 4,80; N, 20,02; 01. 11,15

Vandindhold:

Beregnet; 5,68%

Bundet : 5,80%

Eksempel 3 I 1,5 ml vand opløstes 0,53 g af 7p-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl) acet-amido ] - 3- [ 1- [ 2- (H,N-dimethylamino) ethyl]-ΙΞ-tetrazo1-5-yl]thi ornethyl- 3- cephem-4-carboxylsyren, som opnåedes i eksempel 1-2), og der tilsattes ved 5°0 0,7 ml af en 5^ vandig opløsning af HBr. Efter tilsætning af 11 ml acetone omrørtes blandingen ved 10°C i 2 timer. Derefter tilsattes der yderligere 5 ni acetone, og blandingen omrørtes ved 25°C i 1 time. De resulterende krystaller samledes ved filtrering, vaskedes fem gange med 2 ml1 s portioner af acetone og tørredes i luften. Produktet tørredes derefter i vakuum* hvorved der opnåedes 0,56 g krystaller af den nævnte carboxylsyres ddhydrobromiddihydrat.

ΗΜΕ(60 MHz, i D20) t: 3,22(s, thiazolin 5-H), 4,26(d, 7-H), 4,75(d, 6-H), 4,9-6,5(m, 5 x 0¾), 6,88(s, 2 x OH^).

Krysta'lliteten af dette produkt bekræftedes ved et røntgendiffrak-tions-pulverdiagram og ved polarisationsmikroskopisk observation.

Eksempel 4 1) I 50 ml vand opløstes 5,26 g af et lyofilisat af 7P-[2-(2-imino- 4- thi az olin-4-yl)ac et amido] - 3- [ 1- [ 2- (N,H-dimethylamino) ethyl]-IH-1 e-trazol-5-yl]-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, fremstillet på lignende måde som i eksempel 1-2), under anvendelse af 15 g i stedet for 5 g aktivt kul (idet syrens vandindhold var 3,2%, og dens amfoionind-hold, bestemt ved hurtig-kromatografering, var 95,5%)· Opløsningen afkøledes til 5°0, og der tilsattes 18,7 ml II H01, Ted lyofilisering opnåedes 6,2 g af nævnte carboxylsyres 2HCl»l,5H20-derivat i pulverform.

Vandindhold: 4,2% (beregnet for C-^g^^H^O^S^^HCl’1,5^0: 4,3%) w 151340

El ement ar an alys e for C-^gB^ ^ * 2HC1 · 1,

Beregnet: C, 34,56; Ξ, 4,19; R, 20,15; 01, 11,33 Pundet: 0, 34,21; H, 4,03; R, 19,82; 01, 11,50

Renhed som anhydrat (bestemt ved hurtig-kromatografering): 95,3% Røntgendiffraktions-pulverdiagram: ikke-krystallinsk. Polarisationsmikroskopi (krydsede Ricol-prismer): ingen interferensfarver observeredes, når objektbordet drejedes, hvilket bekræftede, at pulveret var ikke-krystallinsk.

2) 2 g af produktet, som opnåedes i l) ovenfor, tørredes i vakuum i en silicagel-ekssikkator, hvorved der opnåedes 1,9 S af nævnte car-boxylsyres 2HC1·0,^H^O-lerivat i pulverform.

Vandindhold: 0,5% (beregnet for ^18^23^9^4*^3*2HC1.0,17^0: 0,5%); renhed som anhydrat (bestemt ved hurtig-kromatografering): 95,3%; rønt-gendiffraktions-pulverdiagram: ikke-krystallinsk; polarisationsmikroskopi: ingen interferensfarver.

3) I 0,5 S rent vand opløstes 1 g af et lyofilisat af den 7β-[2-(2-imino-4-thi az o lin-4-yl) - ac e t amido ] - 3- [ 1- [ 2- (R, R-dimethyl amino ) ethyl ] -1Ξ - tetrazol-5-yl]thiomethyl-3/-cephem-4-carboxylsyre· 2HC1* 1,5^0, som opnåedes i l) ovenfor, og opløsningen henstod ved 5°0 i 15 timer. Den tørredes derefter i en phosphorsyreanhydrid-ekssikkator, hvorved der opnåedes 1,05 g krystaller af nævnte carboxylsyres dihydrochloriddi-hydrat.

El ement ar analyse, for ^18^23^9^4^3* 2HC1· 2Η^0

Beregnet: 0, 34,07; Ξ, 4,61; R, 19,86; S, 15,16; 01, 11,17 Pundet: 0, 35,84; H, 4,63; R, 19,71; S, 15,40; Cl, 11,29

Vandindhold: 6,00% (beregnet 5,68%); —1 IR(EBr)cm“ : 1770(β-laetam), med smalle, skarpe toppe, som karakteriserer, at der er krystaller tilstede ved 1670, 1190 og 1170.

Eksempel 5 I 25 ml vand opløstes 5,5 g af et lyofilisat af 7β-[2-(2-ΐιιιίηο-4-ΐ]ιΐη-zolin-4-yl)acetamido]-3-[l-[2-(R,R dimethylamino)ethyl]-lH-tetrazol- i5 151340 5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyren, som opnåedes i eksempel 1-2) (renhed 93% på anhydratbasis), hvorefter der tilsattes 25 ml acetone og derefter 4 mll2H HCl. Efter at yderligere 100 ml acetone var tilsat, omrørtes blandingen ved 15°C i 1 time, hvorefter endnu 50 ml acetone tilsattes. Blandingen omrørtes i 1 time og filtreredes. Det faste produkt vaskedes fire gange med 10 ml's portioner af acetone. Ved tørring opnåedes 5»55 g krystaller af nævnte carboxylsyres dihydro-chloridmonohydrat♦ (Udbytte: 92% på basis af det rene produkt)

Elementaranalyse for C-^gH^NgO^S^* 2HC1 ·H^O

Beregnet: C, 35,06; H, 4,41; H, 20,45; S, 15,60; Cl, 11,50 Bundet: C, 34,48; H, 4,48; Π, 20,55; S, 15,22; Cl, 11,49 Røntgendiffraktions-pulverdiagrammet af dette produkt viste, at det var et krystallinsk pulver, og dets renhed, bestemt ved hurtig-kro-matografering, var 99,4% på anhydratbasis.

Eksempel 6

Til 6,2 g 7P“[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido-3-[l-[2-(lT,N-dimethylamino)ethyl]-lH-tetrazol-5“yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxyl-syre-dihydrochlorid-1,5hydrat opnået på samme måde som i eksempel 4- 1) sattes 19 ml2u HCl, og den resulterende opløsning omrørtes ved 5°C sammen med 250 ml ethanol i 2 timer. Blandingen omrørtes ved 10°C i yderligere 2 timer, hvorefter bundfaldet samledes ved filtrering, vaskedes fire gange med 15 ml's portioner af ethanol, tørredes i luften og derefter under reduceret tryk ved 30°C. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnåedes 5,6 g af nævnte carboxylsyres dihydrochloriddihy-drat.

Ved røntgendiffraktion og polarisationsmikroskopiske bestemmelser blev det fastslået, at dette produkt var krystallinsk.

Eksempel 7 l) 5,0 liter af en vandig opløsning, der var gjort sur med 12 U HCl i6 151340 til pH 2,0, indeholdende 510 g af 5p-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl) ac e t amido ] - 3- [ 1- [ 2- (H, H-dimethyl amino ) ethyl ]-ΙΞ-t etraz o 1-5-yl ] thio-methyl-3-cephem-4-carboxylsyren, som opnåedes ved ti ganges gentagelse af den samme fremgangsmåde som i eksempel 1-2), afkøledes til 10°C og omrørtes, efter tilsætning af 7,0 g aktivt kul, i 5 minutter. Kullet fjernedes ved filtrering og vaskedes med 500 ml vand. Filtratet samledes med vaskevandet og koncentreredes til 2,28 liter under reduceret tryk ved en intern temperatur på 15 til 17°C. Den koncentrerede opløsning filtreredes atter og vaskedes. Filtratet og vaskevandet på 2,38 liter indeholdt 478 g af den nævnte carboxylsyre. Til filtratet sattes 0,2 liter acetone, efterfulgt af 170 ml 12 H HC1. Derefter tilsattes 7 liter acetone i løbet af 10 minutter. Opløsningen omrørtes ved 5 til 10°C i 2 timer, derefter tilsattes yderligere 7 liter acetone i løbet af 30 minutter, hvorefter der omrørtes i yderligere 1 time. Blandingen henstod i 16 timer, og de resulterende krystaller opsamledes ved filtrering og vaskedes fire gange med 1 liters portioner af acetone. Krystallerne (en del af det krystallinske produkt tørredes i en ekssikkator ved stuetemperatur og 30 mm Hg i 30 minutter. De tørrede krystaller indeholdt 8,9% vand og 2,2% acetone inkorporeret. Det beregnede vandindhold baseret på C^gH^^H^O^S^*2H01·3^0: 8,28%) overførtes til et separat glasfilter og nitrogengas, som forinden var fugtet ved passage gennem en vandholdig strippingflaske (hvor-i vandtemperaturen holdtes på 25 til 30°0), sendtes gennem krystallejet med en strømningshastighed på 8 liter/min, i 6 timer. Krystallerne (vandindholdet i en prøve var 19,5%; beregnet vandindhold baseret på ^18^23^904®3*2HC1*8^0: 19,41%. Dette produkt indeholdt ikke acetone, og dets røntgendiffraktions-pulverdiagram bekræftede krystallini-tet) spredtes på et leje i en tykkelse på ca. 3 cm og tørredes ved 30°C og under et vakuum på 5 mm Hg i 1,5 time (vandindholdet i en prøve var 17,2%; det beregnede indhold baseret på ^]_8^23^β^4^3*2HC1·7^0: 17,41%). Krystallerne tørredes under de samme betingelser i endnu 1,5 time (vandindholdet var 15,4%, det beregnede indhold baseret på C-^g H2jHg0Z(_Sj»2HQl»6H20 er 15,3%) °S derefter i endnu 1,5 time (hvorefter vandindholdet var 13,3%», idet det beregnede vandindhold baseret på C18H23^9^4^3* ^¾0 er Krystallerne tørredes i yderligere 1,5 time (vandindholdet blev 10,5%, idet det beregnede vandindhold baseret på ^18^23-¾¾3^2HC1-4H20 er 10,75%)« Efter tørring under de samme betingelser i endnu 1,5 time havde krystallerne følgende egenskaber: 17 151340

Vandindhold: 8,50% (beregnet vandindhold baseret på 2HC1 ♦ 32^,0: 8,28%); røntgendiffraktions-pnlverdiagram: krystallinsk; Cl-indhold (bestemt ved titrering med AgHO^): 10,6% (beregnet for C18H23N9°4S3’2HC1* 5H2°: 10,8%).

2) Krystallerne, som opnåedes i 1) ovenfor, tørredes ved 30°C og 2 mm Hg under tilstedeværelse af phosphor syre anhydrid i 5 timer.

Ved denne fremgangsmåde opnåedes 510 g af et krystallinsk produkt. Vandindhold: 5,7% (beregnet vandindhold baseret på O^g^^N^O^S^· 2HC1 *2^0: 5j68%); røntgendiffraktions-pulverdiagram: krystallinsk, IR(KBr)cm""^: 1770(p-lactam), med skarpe toppe karakteristiske for krystaller ved 1670, 1190 (sh,) og 1170, 3) Krystallerne, som opnåedes i 2) ovenfor, tørredes ved 30°C under et vakuumpå 2 mm Hg under tilstedeværelse af phosphor syre anhydrid i 8 timer.

Ved denne fremgangsmåde opnåedes 495 g af et krystallinsk produkt. Vandindhold: 3>12% (beregnet for O^H^^HgO^S^^HOl’H^O: 2,92%); renhed som ahhydrat (bestemt ved hurtig-kromatografering): 9955%; røntgendiffraktions-pul verdiagram: krystallinsk;

Element ar analyse for C^^^NgO^S^^HCl’^O:

Beregnet: C, 35,06; H, 4,41; N, 20,45; S 15,60; Cl, 11,50 Eundet: C, 34·,78; H, 4,51; N, 20,62; S 15,31; 01, 11,77 [a]p° (0=1%, H20)= +67,0°;

Resterende opløsningsmiddel (acetone) - ikke over 50 ppm; Cl-indhold (bestemt ved titrering med AgHO^): 11,4%, beregnet 11,50%; \ max(H20): 258 mp (g 19,500); Bioassay*: 865 pg/ml.

4:· Bioassayet ved cylindermetoden udførtes under anvendelse af 7β-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)acetamido]-3-[l-[2-(N,H-dimethylamino)ethyl] -lH-tetrazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre· 2HCl-salt som standardprodukt mod Bacillus subtilis AICC 6633 som assaymikroorganisme.

18 151340

Styrken af den vandfrie amfoionforbindelse var 1000 μ§/ιιι1. Den beregnede styrke af en prøve indeholdende 2 mol H01 pr. mol amfoionforbin-delse og intet ikke-bundet saltsyre, vand, resterende opløsningsmiddel eller anden nrenhed er 878 pg/ml.

Eksempel 8 1) I 20 ml vand opløstes 5,26 g af et lyofilisat af 7P-[2-(2-imino- 4-thi az o 1 in-4-yl) ac et amido ]—3—[l—[ 2— (Ή, N-dimethyl amino ) ethyl ]-ΙΗ-te-trazo 1-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyren, som opnåedes i eksempel 1-2) (vandindhold: amfoionindholdet bestemt ved hurtig- kromatografering: 93,5%)♦ Til opløsningen sattes 20 ml acetone, efterfulgt af 4 ml 10F HC1. herefter tilsattes 96 ml acetone under omrøring ved 20°C i løbet af 10 minutter. Efter at blandingen var omrørt i 2 timer, tilsattes endnu 72 ml acetone i løbet af 20 minutter. Efter endt tilsætning omrørte s blandingen i 30 minutter, og de resulterende krystaller samledes ved filtrering og vaskedes fem gange med 13 ml's portioner af acetone. Krystallerne tørredes i fugtig luft (relativ fugtighed 58%) i 2 timer. Yed denne fremgangsmåde opnåedes 6,0 g fugtige krystaller med et vandindhold på 13%y Dette produkt tørredes yderligere under reduceret tryk i 2 timer, hvorved der opnåedes 5,7 g krystaller (af nævnte carboxylsyres 2HCl»4H20-derivat). Vandindhold: 10,9% (beregnet for 2HC 1^40^0: 10,8%); renhed som anhy- drat: (bestemt ved hurtig-léromatografering): 99?6%; røntgendiffraktions -pulver di agr am: krys t allinsk.

2) Under tilstedeværelse af phosphor syr eanhydr id tørredes 3 S af krystallerne; som opnåedes i l) ovenfor,! et vakuum på 5 mmHg ved 30°C i 2 timer og ved 50°C i 5 timer. Fremgangsmåden gav 2,6 g af nævnte car-boxylsyres 2H01*0,lH20-derivat. Vandindhold: 0,3% (beregnet for ^18^23^9^4^3* 2HC1 * 0, IH20: 0,3%); røntgendiffraktions-pulverdiagram: ikke-krystallinsk; polarisationsmikroskopi: ved drejning af -objektbordet observeredes interferensfarver gennem krydsede Hicol-prismer, hvilket bekræftede optisk anisotropi og således et krystallinsk pulver. Renhed som anhydrat (bestemt ved hurtig-kromato graf ering): 99,6%.

Eksempel 9 1) Til 5 ml af en vandig opløsning af 7 β - [ 2- (2-imino-4-thi az o lin-4- i9 151340 yl)acetamido]-3-[l-[2-(R,N-dimethylamino)ethyl]-lH-tetrazol-5-yl]thio-methyl-3-cephem-4-carboxylsyren,som opnåedes i eksempel 1-2), (ifølge hurtig-kromatografering indeholdt denne opløsning 1,03 g af ovennævnte carboxylsyre og 15 mg 1-[ 2- (ST,R-dimethyl amino) ethyl]-5-mercapto-ΙΗ-tetrazol såvel som spor af andre urenheder) sattes 1,0 ml4 R Cl, og den resulterende opløsning sattes lidt efter lidt dråbevis til 300 ml acetone, som forinden var afkølet til 5°0, under omrøring. Det pulveragtige bundfald samledes ved filtrering, vaskedes fire gange med 5 ml's portioner af acetone og tørredes under reduceret tryk. Yed den ovenstående fremgangsmåde opnåedes 1,2 g af nævnte carboxylsyres 2Η01Ί, 2iL,0 -derivat i pulverf orm. Vandindhold: 3,f5% (beregnet for ^18^23^9^4^3* 2HC1* 1,2H20: 3*4-8%) ; Cl-indhold (bestemt ved titrering med AgEO^.): 11,6% (beregnet for Ci8^23^9^4^3'^^*^,'^2^: 11,4%); Renhed som anhydrat (bestemt ved hurtig-kromatografering): 96,2%; røntgendif-fraktions-pulverdiagram: ikke-krystallinsk.

2) 0,3 g af pulveret ,som opnåedes i l) ovenfor,udspredtes i en skål således, at det kunne absorbere fugtighed i en lukket beholder indeholdende en mættet vandig opløsning af DaBr ved 25°0 i 16 timer. Pulveret blev fugtigt, derefter olieagtigt og endelig fast. Dette faste stof tørredes under reduceret tryk, hvorved der opnåedes 0,3 g af nævnte carboxylsyres 2HC1·2,3H20-derivat i krystallinsk form. Vandindhold: 6,6% (beregnet for 2HC1-2,3H20: 6,5%); renhed 95,2%; Cl- indhold (bestemt ved elementaranalyse): 11,5% (beregnet 11,1%); rønt-gendif f r akti ons-pulverdiagram: krystallinsk,

Eksempel 10 1) Til 1,1 liter dichlormethan sattes 42,4 g 7-amino-3-[l-[2-(ir,E'-dimethylamino)ethyl]-lH-tetrazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxyl-syre, og der tilsattes under omrøring ved -10°C, 59,8 g dicyclohexyl-amin i løbet af 5 minutter. Efter omrøring i 20 minutter, tilsattes 154- g af en opløsning af 4-chlor-3-oxo-butyrylchlorid i dichlormethan (1,4 mol/kg) i løbet af y? minutter. Efter omrøring i 35j minutter tilsattes endnu 22 g af den samme opløsning, hvorefter der omrørtes i 20 minutter. Til denne opløsning sattes 300 ml vand sammen med 20 ml 5RHCl,og blandingen omrørtes ved 25°0 i 30 minutter, hvorefter den filtreredes og vaskedes med vand. Filtratet blev sammen med vaskevandet vasket med dichlormethan,og dichlormethanlaget ekstraheredes med 20 151340 vand. Til de samlede vandlag sattes 12,5 S thiourea?og blandingen indstilledes til pH 5,0 med natriumhydro gene arb onat og henstod ved stuetemperatur i 3 timer. Blandingen henstod i yderligere 16 timer ved 10°G og indstilledes derefter til pH 5>2 med natriumhydrogencar-bonat. Denne oplosning passeredes gennem en søjle "Åmberlite XAD-2" (100-200 masker; 2,5 liter), som skylledes med 7? 5 liter vand og elu-eredes med 4 liter 15%‘s methanol og derefter med 6 liter 4-0%1 s methanol i 6 fraktioner. Fraktionerne 2 til 6, som elueredes med 40%' s methanol, samledes, koncentreredes og lyofiliseredes. Den ovenstående fremgangsmåde gav 3751 S 7P—[2—(2—imino-4-1hi az o1in-4-yl)acetamido] -3-[l-[2-(N, H-dimethyl amino ) -ethyl ] -ΙΗ-t etraz ol-5-yl ] thiomethyl- 3-c ephem-4-c arb oxylsyre.

ZR(KBr) cm-^: 1765(β-laetam) HMR(60 MHz, D20) t: 3,45(s, thiazolin 5-H), 4,35(01, 7-H), 4,88(d, 6-H), 5.,0-6,7(m, 5 x CH2), 6,95(s, 2 x CH^); Cl-indhold (elementaranalyse): ikke over 0,1%; Ha+-indhold (atomabsorptionsspektroskopi): ikke over 100 ppm.

2) Et lyofilisat af 7p-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido]-3-[ 1- [ 2-(H, H-dimethyl amino ) ethyl ] - ΙΗ-t etraz ol-5-yl ] thiomethyl-3-c ephem- 4-carboxylsyre, som opnåedes i l) ovenfor, behandledes på en lignende måde som i 3) og 4) i eksempel 1, hvorved der opnåedes nævnte earboxyl-syres dihydrochlorid-0,64 hydrat i pulverform.

HMR(60 HHz, D20) t: 3,20(s, thiazolin 5-H), 4,25(d, 7-H), 4,75(d, 6-H), 4,9-6,5(m, 5 x CH2), 6,85(s, 2 x OH^.

Eksempel 11

Mens en blanding af 3 ml 1,5 HHG1 og 3 ml n-propanol omrørtes ved 10°C, tilsattes 0,53 g af 7p-[2-(2-imino-4-thiazoline-4-yl)acetamido]-3-[ 1- [ 2- (U, H-dimethyl amino ) - ethyl ] -IH-1 e t r az o 1- 5-yl ] thi orne thyl- 3- c ephem- 4-carboxylsyren, som opnåedes i eksempel 10-1). Efter tilsætning af 9 ml n-propanol omrørtes blandingen derefter ved 10°C i 5 timer, hvorefter 9 ml n-propanol tilsattes. Blandingen henstod ved 5°0 i 16 timer. De ekstraherede krystaller blev samlet ved filtrering, tørret i luften og endelig dehydratiseret, hvorved der opnåedes 0,50 g af nævnte carboxylsyres dihydrochloriddihydrat i krystallinsk form.

IE(EBr)cm-’1: 1770(β-laetam) , 1670, 1190, 1170.

a 151340

Element ar analys e, for C^g]^ ^ ♦ 2HC1 ♦ 211^0

Beregnet 0, 34,07; H, 4,61; N, 19,86; 01, 11,17 Pundet C, 33,81; H, 4,50; N, 20,11; Cl, 10,98 lest

En prøve af hver af de følgende forbindelser opbevaredes i en forseglet hætteflaske ved 50°C i 4 uger.

Natriumsaltet, amfoionen og monohydroehloridet af 7p-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)acetamido]-3~[l-[2-(N,N-dimethylamino)ethyl]-lH-tetra-zol-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, såvel som det lyofilise-rede pulver af nævnte syres dih drochlorid (amorft pulver, eksempel 4-2), krystallerne af nævnte syres dihydrochlorid (eksempel 1-3)) og det ikke-krystallinske pulver, der opnåedes ved tørring af nævnte di-hydrochloridkrystaller (eksempel 1-4)), som opnåedes ifølge den foreliggende opfindelse.

De procentuelle remanenstal er som følger

Prøve Vandindhold i % Remanens i %

Krystaller fra eksempel 1-3) 3,1 99

Pulver fra eksempel 1-4) 1,9 98

Produkt fra eksempel 4-2) 0,50 86

Natriumsalt (lyofilisat) 0,48 76

Amfoion (lyofilisat) 0,50 54

Monohydrochlorid (lyofilisat) 0,58 73

Eksempel 12

Til en blanding af 12,5 S 7p-^in°-3-[l-[2-(N,N-dimethylamino)ethyl]-lH-tetrazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 180 ml dichlor-methan sattes 11,6 g di-n-butylamin under omrøring ved -10 til -15°C, Efter 15 minutter opnåedes en klar opløsning. Til denne opløsning sattes 39,0 ml 4-chlor-3-oxo-butyrylchlorid i dichlormethan (1,54 mM/ml) ved -15 til -20°C i løbet af 5 minutter under omrøring. Efter omrøring i 15 minutter ved -10°0 ekstraheredes 7P-(4-chlor-3-oxobutyramido)-3-[1-[2-(Ν,Ν-dimethylamino) ethyl]-lH-tetrazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem- 22 151340 HC1 fra reaktionsblandingen. De ekstraherede vandige lag samledes og vaskedes to gange med 30 ml's portioner af dichlormethan. 5,7 g thiourea og 4-55 ml acetone sattes til vandlaget, og blandingen omrørtes i 7 timer ved 20 til 22°0 og henstod i 16 timer. Filtrering og vask med 4- portioner å 60 ml acetone og tørring i vakuum gav 17,5 g krystaller af 7β - [ 2- ( 2-imino-4—thi az olin-4—yl) ac et amido ] - 3- [ 1- [ 2- (H, U-dimethyl-amino ) ethyl ] - IH-1 e t r az o 1- 5-y 1 ] thiome t hyl- 3- c ephem-4— c arb oxylsyre · 2HC1 •4-Η,-,Ο. Acetoneindholdet i disse krystaller viste sig ved MR-spektret at være 0,25 mol pr. 1 mol af nævnte carboxylsyre.

EMR(60 MHz, D20) t: 3,20(s, thiazolin 5-H), 4-,25(4-, 7-H), 4,75(d, 6-H), 4-,9-6,5(m, 5 x CH2), 6,85(s, 2 x CH^), 7j70(s, CH^ i acetone). Vandindhold: 10,5%, røntgendiffraktions-pulverdiagram: krystallinsk.

Eksempel 13

Til 1,0 g 7p-[2-(2-iminoth±azolin-4~yl)acetamido]-3-[l-[2-(H,H-di-methylamino) ethyl ] -lH-tetrazol-5-yl ] thiomethyl-3-cephem-4—c arboxyl-syre, som opnåedes ved den samme fremgangsmåde som i l) i eksempel 10, sattes 4-6 ml vand og 4-mllMHCl. Efter tilsætning af 500 ml acetone omrørtes blandingen i 2 timer, og der tilsattes endnu 700 ml acetone, hvorefter blandingen henstod i 16 timer ved 5°C. De bundfældede nåle samledes ved filtrering, vaskedes med acetone og tørredes i en ekssikkator i 15 timer ved 15-20°C i vakuum, hvilket gav 0,4 g krystaller.

Element ar analyse for C^gH2^Hg0z^S^,2HCl»H20»0,13 acetone

Beregnet: C, 35,39; H, 4,49; H 20,20; S, 15,38 Fundet: C, 34,78; H, 4,53; H 19,87; S, 15,38

Vandindhold: 2,91%, røntgendiffraktions-pulverdiagram: krystallinsk.

Eksempel 14

Til 1,7 g 7p-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)acetamido]-3-[l-[2-(H,H-di-methylamino) ethyl]-lH-tetrazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsy-re sattes 8 ml 2H HCl, efterfulgt af 73 ml ethanol. Efter henstand i 16 timer ved 5°0 samledes de bundfældte krystaller ved filtrering, og de tørredes i 30 minutter i vakuum, hvilket gav 1,0 g krystaller, Ethanolindholdet i disse krystaller var ifølge HMR(60 MHz, D20)-spek-tret 0,65 mol pr. 1 mol af nævnte carboxylsyre.

23 151340

Vandindhold: 7,70%; beregnet for ^gH^H^O^S^· 2HC1* 3H20»0,65 ethanol: 7,92%, røntgendiffraktions-pulverdiagram: krystallinsk.

Eksempel 15

Til 1,64 g 7p-[2-(2-imino~4-thiazolin-4-yl)acetamido]-3-[l-[2-(N,K-dimethyl amino)ethyl]-lH-tetrazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-earboxyl-syre, som opnåedes ved den samme fremgangsmåde som i l) i eksempel 10, sattes 10 ml vandfrit methanol og 6,2mil F methanolisk HCl-op-løsning (vandfri). Blandingen omrørtes til opnåelse af en klar opløsning, som sattes til 150 ml vandfri diethylether under omrøring.

Det resulterende bundfald frafiltreredes, vaskedes med vandfri diethylether og tørredes i vakuum, hvilket gav 1,74 g af nævnte carboxylsyres 2 HCl-derivat, som et pulver.

MR(60 MHz, D20) T: 3,20(s, thiazolin 5-H), 4,25(d, 7-H), 4,75(d, 6-H), 4,9-6,5(m, 5 x 0H2), 6,85(s, 2 x OH^)

Elementaranalyse for C-^gH^H^O^S^* 2Ξ01

Beregnet: C, 36,12; H, 4,21; N, 21,06 Bundet: C, 36,20; H, 4,25; N, 20,80 Røntgendiffraktions-pulverdiagram: amorft Polarisationsmikroskopisk observation: amorft

Claims

2„ 151340

1 JJ J-Έ i_GHpS—il / o ^ 2 Sj/ cooh ch2ch2h(ch3)2 eller et salt deraf med mindst to molækvivalenter af en syre med formlen HX hvori X er chlor eller brom, om nødvendigt under tilstedeværelse af vand/ og samler det resulterende krystallinske materiale.

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af et krystallinsk cephalosporinderivat med formlen HK__CH^COHH—._/ \ H-K ._3ST /<_CH0S_^ I . 2ΗΧ»ηΗο0 (I) HK^Nk 0^ 2 N®/ 2 i 1 , Λ cooh ch2ch2k(ch^)2 hvori X er chlor eller brom og n et tal fra 0/1 til 4, k endete g n e t ved, at man omsætter en forbindelse med formlen S. HK , ΟΗ.ΟΟΗΕ—,_/ \ Ή-H 11

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1/ kendetegnet ved, at produktet er en forbindelse, hvori X er chlor og n et tal fra 1 til 2.