RU2692646C2 - Новый промотор и пути его применения - Google Patents
Новый промотор и пути его применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2692646C2 RU2692646C2 RU2017128034A RU2017128034A RU2692646C2 RU 2692646 C2 RU2692646 C2 RU 2692646C2 RU 2017128034 A RU2017128034 A RU 2017128034A RU 2017128034 A RU2017128034 A RU 2017128034A RU 2692646 C2 RU2692646 C2 RU 2692646C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- expression
- host cell
- peccg117
- vector
- promoter
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 70
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 55
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 11
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 27
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 21
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 42
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 32
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 23
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 17
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 17
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 17
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 15
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 14
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 11
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 7
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 6
- 101150029940 argJ gene Proteins 0.000 description 6
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 6
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 101150099953 ilvE gene Proteins 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 5
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 5
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 5
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 5
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 4
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 3
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 2
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001485655 Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 2
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 241000319304 [Brevibacterium] flavum Species 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIONDZDPPYHYKY-SNAWJCMRSA-N (2E)-hexenoic acid Chemical compound CCC\C=C\C(O)=O NIONDZDPPYHYKY-SNAWJCMRSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- NYPYHUZRZVSYKL-UHFFFAOYSA-N -3,5-Diiodotyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 NYPYHUZRZVSYKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYPYHUZRZVSYKL-ZETCQYMHSA-N 3,5-diiodo-L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 NYPYHUZRZVSYKL-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000007610 Amino-acid N-acetyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010032178 Amino-acid N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088278 Branched-chain-amino-acid transaminase Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 1
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 1
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N Chick antidermatitis factor Natural products OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000186145 Corynebacterium ammoniagenes Species 0.000 description 1
- 241000807905 Corynebacterium glutamicum ATCC 14067 Species 0.000 description 1
- 241000337023 Corynebacterium thermoaminogenes Species 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588768 Providencia Species 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- -1 acetic acid Chemical class 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000001486 biosynthesis of amino acids Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 150000005693 branched-chain amino acids Chemical class 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000415 diiodotyrosine Drugs 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108010050322 glutamate acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M lithium acetate Chemical compound [Li+].CC([O-])=O XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940055726 pantothenic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229920001522 polyglycol ester Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 229940005605 valeric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/77—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Corynebacterium; for Brevibacterium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/34—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Corynebacterium (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/10—Citrulline; Arginine; Ornithine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/101—Plasmid DNA for bacteria
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описан промотор, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 1. Описана нуклеиновая кислота, регулирующая экспрессию, содержащая указанный промотор. Представлен вектор экспрессии, содержащий последовательность, регулирующую экспрессию, и целевой ген, функционально связанный с последовательностью, регулирующей экспрессию. Также представлен челночный вектор экспрессии, содержащий последовательность, регулирующую экспрессию, и целевой ген, функционально связанный с последовательностью, регулирующей экспрессию. Описана прокариотическая клетка-хозяин для продуцирования целевого продукта, содержащая указанный вектор. При этом клетка-хозяин может представлять собой клетку бактерии, относящейся к родуили роду. Представлен способ продуцирования целевого продукта, при этом способ включает: культивирование клетки-хозяина и извлечение целевого продукта из клетки-хозяина или культуральной среды, содержащей культивируемую клетку-хозяина. Изобретение расширяет арсенал технических средств. 6 н. и 2 з.п. ф-лы, 4 табл., 3 пр.
Description
Область техники
[0001] ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ
[0002] Настоящая заявка заявляет преимущество приоритета по заявке на корейский патент №10-2015-0014587, поданной 29 января 2015 г. в Корейское ведомство по интеллектуальной собственности, раскрытие которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
[0003]
[0004] Один или несколько иллюстративных вариантов осуществления относятся к новому промотору и способу продуцирования целевого продукта с его помощью.
Уровень техники
[0005] Для продуцирования целевых продуктов, например, L-аминокислот, органических кислот или материалов на основе нуклеиновых кислот, с высоким выходом посредством применения микроорганизмов существует необходимость в избирательном контроле экспрессии генов, связанных с рядом метаболических процессов у микроорганизмов. В частности, существует необходимость в повышении экспрессии целевых генов, вовлеченных в путь биосинтеза целевых продуктов, и, например, можно осуществить модификацию последовательности, регулирующей экспрессию. Такая модификация последовательности, регулирующей экспрессию, может включать, например, замену нативного промотора сильным промотором, модификацию нативного промотора или модификацию последовательности Шайна-Дальгарно (SD). Замену нативного промотора сильным промотором применяли в большинстве случаев, и в этом отношении она считается существенно необходимой для разработки применимого промотора.
[0006] Сильные промоторы, известные из уровня техники, однако, ограничены и могут экспрессироваться только у ограниченного числа микроорганизмов. В некоторых случаях сильные промоторы могут быть неспособны продемонстрировать желаемые сильные эффекты экспрессии на различных уровнях интенсивности.
[0007] Тас-промотор, полученный из Escherichia coli, широко известен из уровня техники в качестве сильного промотора. В случае рода Corynebacterium новый промотор был разработан путем модификации нативного промотора (см. Gene, 102, 93-98, 1991; Microbiology, 142, 1297-1309, 1996). Например, сообщалось, что промотор, полученный из Corynebacterium ammoniagenes, обладает на приблизительно 10% более высокой активностью, чем tac-промотор, полученный из Е. coli (см. Biotechnol. Lett. 25, 1311-1316, 2003). В дополнение, в качестве сильного промотора, полученного из Corynebacterium ammoniagenesis, были разработаны промоторы Pcj1-Pcj7 с различными уровнями интенсивности, которые обладали сильной промоторной активностью, по меньшей мере в 10 раз превышающей таковую у tac-промотора (см. KR 10-0620092). В дополнение, сообщалось, что промотор, полученный из Brevibacterium flavum MJ-233 (FERM BP-1497), обладает более сильной активностью, чем tac-промотор, но его экспрессия у микроорганизма, отличного от микроорганизма, относящегося к роду Brevibacterium, затруднена (см. US 5593781).
[0008] В этом отношении, когда авторы идеи настоящего изобретения исследовали участок, содержащий промоторную последовательность, которая может характеризоваться различными уровнями интенсивности во множестве различных микроорганизмов, было обнаружено, что новый промотор, синтезированный в соответствии с идеей настоящего изобретения, экспрессируется во множестве различных микроорганизмов и демонстрирует намного более сильные эффекты экспрессии, чем существующие промоторы, известные из уровня техники, довершая таким образом идею настоящего изобретения.
Раскрытие настоящего изобретения
Техническая задача
[0009] Один или несколько иллюстративных вариантов осуществления включают новый промотор, последовательность, регулирующую экспрессию, содержащую новый промотор, вектор, содержащий новый промотор, клетку-хозяина, содержащую вектор, и способ продуцирования целевого продукта с помощью клетки-хозяина.
Решение задачи
[00010] В соответствии с одним или несколькими иллюстративными вариантами осуществления предусмотрен промотор, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 1. В рамках идеи настоящего изобретения промотор называют "промотором о2" (далее в данном документе именуемым как "Ро2").
[00011] Термин "промотор", используемый в данном документе, относится к участку ДНК, с которым соединяется РНК-полимераза для обеспечения инициации транскрипции гена, функционально связанного с промотором, и который может располагаться на 5'-конце сайта инициации транскрипции мРНК.
[00012] Как используется в данном документе, полинуклеотид, обладающий промоторной активностью, можно в некоторой степени модифицировать в соответствии с недавними исследованиями некоторых методик, таких как методика направленной эволюции или методика сайт-направленного мутагенеза. Например, промотор, обладающий гомологией, составляющей 70% или более, 80% или более, 90% или более или 95% или более, с нуклеотидной последовательностью, представленной под SEQ ID NO: 1, также включен в объем идеи настоящего изобретения.
[00013] Термин "гомология", используемый в данном документе, относится к степени идентичности последовательностей (представленной в виде процентного значения) между полинуклеотидными последовательностями. В настоящем описании гомология последовательности, идентичной указанной полинуклеотидной последовательности, или последовательности, обладающей сходной активностью с указанной полинуклеотидной последовательностью, представлена в виде "% гомологии". Например, гомологию полинуклеотидных последовательностей можно определить посредством применения стандартного программного обеспечения, например, BLAST 2.0, для расчета параметров, таких как вес выравнивания, идентичность и подобие. В качестве альтернативы, гомологию полинуклеотидных последовательностей можно идентифицировать путем сравнения последовательностей в соответствии со способом гибридизации, осуществляемым в определенных условиях жесткости. Определенные и соответствующие условия для способа гибридизации можно определить с учетом способов, хорошо известных специалисту в данной области (см. выше в Sambrook et al., 1989).
[00014] В соответствии с одним или несколькими иллюстративными вариантами осуществления предусмотрена последовательность, регулирующая экспрессию, которая контролирует экспрессию целевого гена, содержащая нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 1.
[00015] Термин "последовательность, регулирующая экспрессию", используемый в данном документе, относится к последовательности ДНК, применяемой для экспрессии кодирующей последовательности, которая функционально связана с данной последовательностью ДНК в организме-хозяине. Такая последовательность, регулирующая экспрессию, может содержать промотор, требуемый для инициации транскрипции, операторную последовательность для регуляции транскрипции, последовательность, кодирующую подходящий сайт связывания рибосомы в мРНК, и последовательность для регуляции терминации транскрипции и трансляции. Например, последовательность, регулирующая экспрессию, подходящая для прокариот, может содержать промотор, операторную последовательность и сайт связывания рибосомы, но не ограничена ими. Последовательность, регулирующая экспрессию, содержит Ро2 согласно идее настоящего изобретения и при необходимости может быть определена специалистом в данной области как последовательность, регулирующая экспрессию, описанная выше.
[00016] В соответствии с одним или несколькими иллюстративными вариантами осуществления предусмотрен вектор, содержащий последовательность, регулирующую экспрессию, и целевой ген, функционально связанный с последовательностью, регулирующей экспрессию.
[00017] Термин "функционально связанный", используемый в данном документе, относится к связи между последовательностью, регулирующей экспрессию, которая контролирует целевой ген (например, промотором), и другими нуклеотидными последовательностями. В этом отношении последовательность, регулирующая экспрессию, может быть способна контролировать транскрипцию и/или трансляцию других нуклеотидных последовательностей.
[00018] Термин "вектор", используемый в данном документе, относится к ДНК-продукту, содержащему последовательности оснований полинуклеотида, кодирующего целевой белок, который функционально связан с соответствующей последовательностью, регулирующей экспрессию, для экспрессии целевого белка. В дополнение, множество нуклеотидных последовательностей может быть связано или рекомбинировано с вектором таким образом, что последовательность ДНК выбранного гена с соответствующей 3'-концевой нетранслируемой последовательностью и промотор можно ввести в клетку. Вектор может применяться для трансформации соответствующей клетки-хозяина и затем может реплицироваться независимо от генома клетки-хозяина. В качестве альтернативы, вектор может интегрироваться в геном клетки-хозяина. В дополнение, вектор может содержать промотор или его вариант и целевой ген и дополнительно может содержать точку начала репликации, промоторный регуляторный сайт, сайт связывания рибосом, сайт терминации транскрипции, селективный маркер или их комбинацию.
[00019] Вектор, применяемый в рамках идеи настоящего изобретения, конкретно не ограничен, при условии, что он может реплицироваться в клетке-хозяине, и можно применять любой вектор, доступный в данной области техники. Примеры вектора, обычно применяемого в данной области техники, включают природный или рекомбинантный плазмидный вектор, космидный вектор, вирусный вектор и бактериофаговый вектор. Примеры бактериофаговых и космидных векторов включают pWE15, М13, λMBL3, λMBL4, λIXII, λASHII, λAPII, λt10, λt11, Харон 4А и Харон 21А, и примеры плазмидных векторов включают векторы на основе pBR, на основе pUC, на основе pBluescript II, на основе pGEM, на основе pTZ, на основе pCL и на основе рЕТ, но векторы ими не ограничены.
[00020] Целевой ген относится к гену, кодирующему продукт, для которого необходима экспрессия в избыточном количестве. Например, целевой ген может представлять собой ген, вовлеченный в продуцирование продукта, выбранного из группы, состоящей из аминокислот (например, L-аминокислоты), органических кислот и их комбинации. Более подробно, целевой ген может представлять собой ген, кодирующий фермент, вовлеченный в биосинтез аминокислот, ген, кодирующий фермент, вовлеченный в биосинтез органических кислот, или ген, кодирующий белок, вовлеченный в экспорт целевого продукта, но не ограничен ими.
[00021] В соответствии с одним или несколькими иллюстративными вариантами осуществления предусмотрена клетка-хозяин, содержащая вектор, где вектор содержит последовательность, регулирующую экспрессию, которая контролирует целевой ген и содержит промотор, имеющий нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 1, и целевой ген, функционально связанный с последовательностью, регулирующей экспрессию.
[00022] Клетка-хозяин конкретно не ограничена, при условии, что в микроорганизм, применяемый в качестве клетки-хозяина, можно ввести вектор, содержащий последовательность, регулирующую экспрессию, которая контролирует целевой ген и содержит промотор, имеющий нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 1, и целевой ген, функционально связанный с последовательностью, регулирующей экспрессию. Клетка-хозяин может являться как прокариотической клеткой, так и эукариотической клеткой, но в иллюстративном варианте осуществления может являться прокариотической клеткой. Например, клетка-хозяин может включать в себя штамм микроорганизма, относящегося к роду Escherichia, роду Erwinia, роду Serratia, роду Providencia, роду Corynebacterium и роду Brevibacterium. Например, клетка-хозяин может представлять собой штамм микроорганизма, относящегося к роду Corynebacterium или роду Escherichia. Например, клетка-хозяин может представлять собой штамм микроорганизма, относящегося к Escherichia coli, Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium thermoaminogenes, Brevibacterium flavum или Brevibacterium lactofermentum.
[00023] Введение вектора можно осуществлять, как описано в уровне техники, путем выбора подходящей методики в зависимости от клетки-хозяина. Введение вектора можно осуществлять, например, с помощью электропорации, теплового шока, осаждения фосфатом кальция (СаРО4), осаждения хлоридом кальция (CaCl2), микроинъекции, полиэтиленгликоля (PEG), способа с использованием DEAE-декстрана, способа с использованием катионных липосом, способа с использованием ацетата лития и DMSO или их комбинации, но без ограничения ими.
[00024] В соответствии с одним или несколькими иллюстративными вариантами осуществления предусмотрен способ продуцирования целевого продукта, при этом способ включает культивирование клетки-хозяина в среде, где клетка-хозяин содержит вектор, содержащий последовательность, регулирующую экспрессию, содержащую промотор, имеющий нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 1, и целевой ген, функционально связанный с последовательностью, регулирующей экспрессию; и извлечение целевого продукта из клетки-хозяина или среды, содержащей культивируемую клетку-хозяина.
[00025] Целевой продукт может быть выбран из группы, состоящей из аминокислот (например, L-аминокислоты), органических кислот и их комбинации. Термин "аминокислота" или "L-аминокислота", используемый в данном документе, как правило, относится к основной структурной единице белка, образующего живой организм, в которой аминогруппа и карбоксильная группа связаны с одним и тем же атомом углерода. Аминокислота может быть выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, валина, лейцина, изолейцина, треонина, серина, цистеина, цистина, метионина, аспарагиновой кислоты, аспарагина, глутаминовой кислоты, дийодтирозина, лизина, аргинина, гистидина, фенилаланина, тирозина, триптофана, пролина, оксипролина и их комбинации, но не ограничена ими. Термин "органическая кислота", используемый в данном документе, относится к органическому соединению, обладающему кислотностью, и, например, может включать органическое соединение, имеющее карбоксильную группу и сульфоновую группу. Органическая кислота может включать, например, молочную кислоту, уксусную кислоту, янтарную кислоту, масляную кислоту, пальмитиновую кислоту, щавелевую кислоту, винную кислоту, пропионовую кислоту, гексеновую кислоту, каприновую кислоту, каприловую кислоту, валериановую кислоту или лимонную кислоту, но не ограничена ими.
[00026] Культивирование клетки-хозяина можно осуществлять в соответствии с типичными способами, известными из уровня техники. Среда, применяемая для культивирования клетки-хозяина, может содержать в качестве источника сахара сахар и углеводы, такие как глюкоза, сахароза, лактоза, фруктоза, мальтоза, крахмал и целлюлоза; масла и жиры, такие как соевое масло, подсолнечное масло, касторовое масло и кокосовое масло; жирные кислоты, такие как пальмитиновая кислота, стеариновая кислота и линолевая кислота; спирты, такие как глицерин и этанол; и органические кислоты, такие как уксусная кислота, в отдельности или в виде смеси, но без ограничения ими. Среда, применяемая для культивирования клетки-хозяина, может содержать в качестве источника азота пептоны, дрожжевой экстракт, мясной экстракт, солодовый экстракт, маисовый экстракт, соевую муку и мочевину или неорганические соединения, такие как сульфат аммония, хлорид аммония, фосфат аммония, карбонат аммония или нитрат аммония, в отдельности или в виде смеси, но без ограничения ими. Среда, применяемая для культивирования клетки-хозяина, может содержать в качестве источника фосфора дигидроортофосфат калия или гидроортофосфат калия или его соответствующие натрийсодержащие соли, но без ограничения ими. Среда, применяемая для культивирования клетки-хозяина, может содержать соли металлов, необходимые для роста, такие как сульфат магния или сульфат железа, но при этом соли металлов не ограничены ими. В дополнение, в ходе культивирования клетки-хозяина в культуральную среду можно добавлять необходимые ростовые вещества, такие как аминокислоты и витамины или их подходящие предшественники. Такие материалы можно добавлять в культуральную среду в ходе культивирования клетки-хозяина соответствующим образом и, например, можно добавлять периодически или непрерывно.
[00027] Дополнительно, в ходе культивирования клетки-хозяина в культуральную среду можно подходящим образом добавлять соединения, такие как гидроксид аммония, гидроксид калия, аммиак, фосфорная кислота и серная кислота, для регулирования рН культуральной среды. В дополнение, в ходе культивирования клетки-хозяина можно применять противовспениватель, такой как сложный эфир полигликоля и жирной кислоты, для предотвращения образования пены. Для поддержания аэробных условий в культуральной среде в культуральную среду можно вводить кислород или кислородсодержащий газ (например, воздух). В данном случае температура культуральной среды может находиться в диапазоне от приблизительно 20°C до приблизительно 45°C, например, от приблизительно 25°С до приблизительно 40°С. В дополнение, культивирование клетки-хозяина можно продолжать до тех пор, пока не будет получено желаемое количество целевого продукта, и в этом отношении культивирование клетки-хозяина может продолжаться от приблизительно 10 часов до приблизительно 160 часов.
[00028] Извлечение целевого продукта из клетки-хозяина или культуральной среды, содержащей культивируемую клетку-хозяина, можно осуществлять (т.е. отделять или извлекать) посредством соответствующей реакции, известной из уровня техники. Например, соответствующую реакцию можно проводить согласно обработке с помощью осаждения белков (т.е. способа высаливания), центрифугирования, экстрагирования, ультразвуковой обработки, ультрафильтрации, диализа, различных методик хроматографии, таких как хроматография на молекулярных ситах (т.е. гель-фильтрация), адсорбционная хроматография, ионообменная хроматография, аффинная хроматография, и их комбинации, но без ограничения ими. В этом отношении продуцируемый целевой продукт можно собирать, извлекать или отделять от клетки-хозяина или среды, содержащей культивируемую клетку-хозяина.
Принцип изобретения
[00029] Далее в данном документе идея настоящего изобретения будет описана более подробно со ссылками на следующие примеры. Однако, эти примеры служат только для целей иллюстрации и не предназначены для ограничения объема идеи настоящего изобретения.
[00030]
[00031] Пример 1. Получение рекомбинантного вектора, содержащего новый промотор, и трансформированного штамма с его помощью
[00032] (1) Получение рекомбинантного вектора, содержащего Ро2, и трансформированного штамма с его помощью
[00033] Применительно к синтезу промотора, индуцирующего экспрессию целевого гена, анализировали последовательности различных промоторов, полученных из микроорганизма, относящегося к роду Corynebacterium, и микроорганизма, относящегося к роду Escherichia, синтезируя благодаря этому промотор, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1. Синтезированный промотор именовали промотором о2 (далее в данном документе называемым "Ро2"). Для измерения активности Ро2 в отношении индуцирования экспрессии целевого гена Ро2 функционально связывали с открытой рамкой считывания (ORF) гена GFP таким образом, что получали рекомбинантный вектор. Затем каждый из штаммов Corynebacterium и Е. coli трансформировали рекомбинантным вектором, получая таким образом каждый из трансформированных штаммов Corynebacterium и Е. coli.
[00034] В дополнение, для получения штамма, обладающего повышенной способностью к продуцированию L-аминокислот, например, L-аргинина, или аминокислот с разветвленной цепью, таких как L-валин, в качестве примера целевого продукта, применяли Ро2 для повышения экспрессии гена, отвечающего за биосинтез аргинина или валина.
[00035]
[00036] (1.1) Получение вектора pECCG117-Po2-gfp и трансформированного штамма с его помощью
[00037] (1.1.1) Получение вектора
[00038] ПЦР осуществляли посредством применения синтезированного Ро2 в качестве матрицы и набора праймеров с SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, содержащих сайты рестрикции для Kpnl/EcoRV. ПЦР осуществляли согласно циклам денатурации при температуре 94°C в течение 5 минут, денатурации при температуре 94°C в течение 30 секунд, отжига при температуре 60°C в течение 30 секунд и полимеризации при температуре 72°С в течение 30 секунд, при этом циклы осуществляли 30 раз. После этого вновь осуществляли полимеризацию со штаммами при температуре 72°С в течение 7 минут, получая таким образом в результате этого Ро2, имеющий длину приблизительно 100 п.о.
[00039] ПЦР осуществляли посредством применения вектора pGFPuv (производимого Clontech, США) в качестве матрицы и набора праймеров с SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, содержащих сайты рестрикции для Pstl/EcoRV. ПЦР осуществляли согласно циклам денатурации при температуре 94°C в течение 5 минут, денатурации при температуре 94°C в течение 30 секунд, отжига при температуре 55°C в течение 30 секунд и полимеризации при температуре 72°C в течение 1 минуты, при этом циклы осуществляли 30 раз. После этого вновь осуществляли полимеризацию при температуре 72°C в течение 7 минут, получая таким образом в результате этого SEQ ID NO: 6, содержащую ORF гена GFP.
[00040] Ро2 обрабатывали ферментами рестрикции Pstl и EcoRV, а ORF гена GFP обрабатывали ферментами рестрикции Kpnl и EcoRV в сайтах для Pstl и Kpnl челночного вектора pECCG117 (см. Biotechnology letters vol 13, No. 10, p. 721-726 (1991)), который может экспрессироваться у Е. coli и Corynebacterium. Затем обработанные Ро2 и ORF гена GFP функционально связывали друг с другом посредством применения фермента для конъюгирования ДНК, получая таким образом рекомбинантный вектор, в котором Ро2 и ген GFP были связаны друг с другом. В данном случае рекомбинантному вектору давали название pECCG117-Po2-gfp.
[00041]
[00042] (1.1.2) Получение трансформированного штамма с помощью вектора
[00043] Corynebacterium glutamicum АТСС13032 трансформировали каждым из вектора pECCG117 и рекомбинантного вектора pECCG117-Po2-gfp с помощью способа с использованием электрических импульсов, и затем трансформированные штаммы получали из селективной среды, содержащей 25 мг/л канамицина. Каждому из полученных штаммов, трансформированных вектором pECCG117 и рекомбинантным вектором pECCG117-Po2-gfp, давали название ATCC13032/pECCG117 или ATCC13032/pECCG117-Po2-gfp.
[00044] В дополнение, DH5α Е. coli трансформировали рекомбинантным вектором pECCG117-Po2-gfp с помощью способа с использованием теплового шока, и затем трансформированные штаммы получали из агаровой среды Лурия-Бертани (LB), содержащей 25 мг/л канамицина. Полученным штаммам давали название DH5α/pECCG117-Po2-gfp и присваивали обозначение депонирования "СА01-2290". СА01-2290 депонировали в Корейском центре культур микроорганизмов (KCCM) 23 октября 2014 г. под номером доступа KCCM11591P в соответствии с условиями Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры.
[00045]
[00046] (1.2) Получение вектора pECCG117-Po2-argJ и трансформированного штамма с его помощью
[00047] (1.2.1) Получение вектора
[00048] Применительно к синтезу вектора, в котором основной ген, отвечающий за биосинтез, например, ген argJ (Ncgl1341, SEQ ID NO: 7), кодирующий бифункциональную орнитинацетилтрансферазу/N-ацетилглутаматсинтазу, для повышенного продуцирования аргинина, экспрессируется под управлением Ро2, применяли рекомбинантный вектор pECCG117-Po2-gfp для получения вектора pECCG117-Po2-argJ.
[00049] Более подробно, ПЦР осуществляли со штаммом посредством применения хромосом Corynebacterium glutamicum АТСС13869 в качестве матрицы и набора праймеров с SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9, обеспечивая таким образом получение фрагментов ДНК, содержащих гены argJ. ПЦР осуществляли согласно циклам денатурации при температуре 94°C в течение 1 минуты, отжига при температуре 58°C в течение 30 секунд и полимеризации при температуре 72°C в течение 2 минут посредством применения полимеразы Pfu, при этом циклы осуществляли 30 раз. В результате этого амплифицировали фрагмент, имеющий длину приблизительно 1201 п.о. и содержащий сайты для ферментов рестрикции EcoRV и 3'-Pstl на 5'-конце. Амплифицированные фрагменты, полученные с помощью ПЦР, очищали, смешивали с вектором pECCG117-Po2-gfp, который обрабатывали ферментами рестрикции EcoRV и Pstl, и затем соединяли друг с другом с помощью набора для клонирования In-Fusion, получая таким образом рекомбинантный вектор, которому давали название pECCG117-Po2-argJ.
[00050]
[00051] (1.2.2) Получение трансформированного штамма с помощью вектора
[00052] Corynebacterium glutamicum KCCM10741P, который представляет собой штамм, продуцирующий аргинин, трансформировали рекомбинантным вектором pECCG117-Po2-argJ с помощью способа с использованием электрических импульсов (см. KR 10-0791659), и затем трансформированные штаммы получали из селективной среды, содержащей 25 мг/л канамицина. Полученному штамму давали название KCCM10741P/pECCG117-Po2-argJ.
[00053]
[00054] (1.3) Получение вектора pECCG117-Po2-ilvE и трансформированного штамма с его помощью
[00055] (1.3.1) Получение вектора
[00056] Применительно к синтезу вектора, в котором основной ген, отвечающий за биосинтез, например, ген ilvE (Ncgl2123, SEQ ID NO: 10), кодирующий аминотрансферазу аминокислот с разветвленной цепью, для повышенного продуцирования валина, экспрессируется под управлением Ро2, применяли рекомбинантный вектор pECCG117-Po2-gfp для получения вектора pECCG117-Po2-ilvE.
[00057] Более подробно, ПЦР осуществляли со штаммом посредством применения хромосом Corynebacterium glutamicum АТСС14067 в качестве матрицы и набора праймеров с SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, обеспечивая таким образом получение фрагментов ДНК, содержащих гены ilvE. ПЦР осуществляли согласно циклам денатурации при температуре 94°C в течение 1 минуты, отжига при температуре 58°C в течение 30 секунд и полимеризации при температуре 72°C в течение 2 минут посредством применения полимеразы Pfu, при этом циклы осуществляли 30 раз. В результате этого амплифицировали фрагмент, имеющий длину приблизительно 1201 п.о. и содержащий сайты для ферментов рестрикции EcoRV и 3'-Pstl на 5'-конце. Амплифицированные фрагменты, полученные с помощью ПЦР, очищали, смешивали с вектором pECCG117-Po2-gfp, который обрабатывали ферментами рестрикции EcoRV и Pstl, и затем соединяли друг с другом с помощью набора для клонирования In-Fusion, получая таким образом рекомбинантный вектор, которому давали название pECCG117-Po2-ilvE.
[00058]
[00059] (1.3.2) Получение трансформированного штамма с помощью вектора
[00060] Corynebacterium glutamicum KCCM111201P, который представляет собой штамм, продуцирующий валин, трансформировали рекомбинантным вектором pECCG117-Po2-ilvE с помощью способа с использованием электрических импульсов (см. KR 10-1117022), и затем трансформированные штаммы получали из селективной среды, содержащей 25 мг/л канамицина. Полученным штаммам давали название KCCM11201P/pECCG117-Po2-ilvE.
[00061]
[00062] Сравнительный пример 1. Получение рекомбинантного вектора, содержащего контрольный промотор, и трансформированного штамма с помощью вектора
[00063] Для измерения активности Ро2 в отношении индуцирования экспрессии целевого гена ген GFP применяли для образования функциональной связи между известным сильным промотором (например, Ptrc, Pcj1, Pcj4 или Pcj7 (см. KR 10-0620092)) или промотором дикого типа (например, асеЕР (WT)) и ORF гена GFP с получением рекомбинантного вектора. Затем каждый из штаммов Corynebacterium и Е. coli трансформировали рекомбинантным вектором, получая таким образом каждый из трансформированных штаммов Corynebacterium и Е. coli.
[00064] В дополнение, для оценивания трансформированных штаммов, содержащих основной ген, отвечающий за биосинтез, в которых применяется Ро2 для повышенного продуцирования продукта целевого гена, получали каждый из трансформированного штамма, содержащего основной ген, отвечающий за биосинтез, для повышенного продуцирования аргинина или трансформированного штамма, содержащего основной ген, отвечающий за биосинтез, для повышенного продуцирования валина.
[00065]
[00066] (1) Получение вектора экспрессии gfp, имеющего промотор, отличающийся от Ро2 на основании сравнения активности с Ро2, и трансформированного штамма Corynebacterium glutamicum
[00067] Обеспечивали получение последовательностей оснований aceEP(WT) от Национального института здравоохранения США (NIH, Genbank), и с ними осуществляли ПЦР посредством применения хромосом Corynebacterium glutamicum АТСС13032 дикого типа в качестве матрицы и набора праймеров с SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14, содержащих сайты рестрикции для Kpnl/EcoRV. ПЦР осуществляли так же, как в (1.1) примера 1, получая таким образом рекомбинантный вектор под названием pECCG117-aceEP(WT)-gfp.
[00068] Штаммы Corynebacterium glutamicum трансформировали каждым из полученного вектора pECCG117-aceEP(WT)-gfp и векторов pECCG117-Pcj1-gfp, pECCG117-Pcj4-gfp и pECCG117-Pcj7-gfp (см. KR 10-0620092) так же, как в (1.1) примера 1, получая таким образом трансформированные штаммы, каждому из которых давали название ATCC13032/pECCG117-aceEP(WT)-gfp, ATCC13032/pECCG117-Pcj1-gfp, ATCC13032/pECCG117-Pcj4-gfp или ATCC13032/pECCG117-Pcj7-gfp.
[00069]
[00070] (2) Получение вектора экспрессии gfp, имеющего промотор, отличающийся от Ро2 на основании сравнения активности с Ро2, и трансформированного штамма Е. coli
[00071] Обеспечивали получение последовательностей оснований Ptrc от Национального института здравоохранения США (NIH, Genbank), и с ними осуществляли ПЦР посредством применения pTrc99A (NCBI, GenBank, М22744) в качестве матрицы и набора праймеров с SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 16, содержащих сайты рестрикции для Kpn/EcoR. ПЦР осуществляли так же, как в (1.1) примера 1, получая таким образом рекомбинантный вектор под названием pECCG117-Ptrc-gfp.
[00072] Штаммы Е. coli трансформировали каждым из полученного вектора pECCG117-Ptrc-gfp и векторов pECCG117-Pcj1-gfp и pECCG117-Pcj4-gfp так же, как в (1.1) примера 1, получая таким образом трансформированные штаммы, каждому из которых давали название DH5α/pECCG117-Ptrc-gfp, DH5α/pECCG117-Pcj1-gfp или DH5α/pECCG117-Pcj4-gfp.
[00073]
[00074] (3) Получение трансформированного штамма, имеющего промотор, отличающийся от Ро2 на основании сравнения способности к продуцированию целевого продукта с Ро2
[00075] (3.1) Получение трансформированного штамма Corynebacterium glutamicum, при этом трансформированный штамм обладает способностью к продуцированию аргинина
[00076] Вектор pECCG117-Pcj7-gfp применяли для получения вектора под названием pECCG117-Pcj7-argJ так же, как в (1.2.1) примера 1, за исключением того, что ПЦР осуществляли посредством применения набора праймеров с SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 17.
[00077] Затем получали трансформированный штамм посредством применения вектора pECCG117-Pcj7-argJ так же, как в (1.2.2) примера 1, и ему давали название KCCM10741P/pECCG117-Pcj7-argJ.
[00078]
[00079] (3.2) Получение трансформированного штамма Corynebacterium glutamicum, при этом трансформированный штамм обладает способностью к продуцированию валина
[00080] Вектор pECCG117-Pcj7-gfp применяли для получения вектора под названием pECCG117-Pcj7-ilvE так же, как в (1.3.1) примера 1, за исключением того, что ПЦР осуществляли посредством применения набора праймеров с SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 18.
[00081] Затем получали трансформированный штамм посредством применения вектора pECCG117-Pcj7-ilvE также, как в (1.3.2) примера 1, и ему давали название KCCM11201P/pECCG117-Pcj7-ilvE.
[00082]
[00083] Пример 2. Подтверждение активности Ро2 в отношении индуцирования экспрессии целевого гена
[00084] (1) Подтверждение активности Ро2 в отношении индуцирования экспрессии целевого гена у Corynebacterium glutamicum
[00085] Для измерения активности Ро2 в отношении индуцирования экспрессии целевого гена у трансформированных штаммов Corynebacterium glutamicum измеренную активность зеленого флуоресцентного белка (GFP) у трансформированного штамма под названием ATCC13032/pECCG117-Po2-gfp из (1.1.2) примера 1 сравнивали с измеренной активностью GFP у трансформированных штаммов, каждый из которых имел название ATCC13032/pECCG117 из (1.1.2) примера 1 или ATCC13032/pECCG117-aceEP(WT)-gfp, ATCC13032/pECCG117-Pcj1-gfp, ATCC13032/pECCG117-Pcj4-gfp или ATCC13032/pECCG117-Pcj7-gfp из (1) сравнительного примера 1.
[00086] Каждый из вышеуказанных трансформированных штаммов Corynebacterium glutamicum инокулировали в угольчатую бутылку на 250 мл, содержащую 25 мл среды для посева, в объемном соотношении 1:20 и затем культивировали со встряхиванием (при скорости приблизительно 200 об./мин.) при температуре 30°C, пока штаммы выращивали в культуре в фазе метафазы (OD600=10,0). После завершения культивирования клетки собирали путем центрифугирования (при скорости приблизительно 5000 об./мин. в течение приблизительно 15 минут). Собранные клетки дважды промывали 0,1% буферным раствором Tris-HCl (рН 8,0) и затем суспендировали в том же буферном растворе до мутности при 610 нм, составляющей приблизительно 160. Клетки разрушали в течение 6 минут посредством применения колотушки для дробления гранул после добавления стеклянных гранул при 1,25 г / 1,5 мл суспензии. Надосадочную жидкость, содержащую клеточный экстракт, собирали путем центрифугирования (при скорости приблизительно 15000 об./мин. в течение приблизительно 20 минут), а затем подвергали количественному измерению в отношении концентрации белка в ней в соответствии со способом Бредфорда (см. Bradford, М.М 1976. Anal. Biochem. 72: 248-254). Затем такое же количество клеточного экстракта облучали светом при длине волны возбуждения 488 нм с помощью способа по Laure Gory или подобного, и свет при длине волны испускания 511 нм измеряли посредством применения спектрофотометра LS-50B (Perkin-Elmer), определяя таким образом экспрессию гена GFP. Результаты измерения активности GFP у каждого из штаммов показаны в таблице 1.
[00087] [Среда для посева]
[00088] 20 г глюкозы, 5 г сульфата аммония, 5 г дрожжевого экстракта, 1,5 г мочевины, 4 г KH2PO4, 8 г K2HPO4, 0,5 г MgSO4⋅7H2O, 150 мкг биотина, 1,5 мг гидрохлорида тиамина, 3 мг кальциевой соли пантотеновой кислоты, 3 мг никотинамида (из расчета на 1 л дистиллированной воды) и рН 7,2.
[00089] [Таблица 1]
Интенсивность флуоресценции у Corynebacterium glutamicum
[00090]
[00091] Как показывают результаты в таблице 1, было подтверждено, что Ро2 обладал промоторной активностью у Corynebacterium glutamicum, и что штамм под названием ATCC13032/pECCG117-Po2-gfp демонстрировал интенсивность флуоресценции, по меньшей мере в 13 раз превышающую таковую для штамма ATCC13032/pECCG117-aceEP(WT)-gfp дикого типа. В дополнение, было подтверждено, что штамм под названием ATCC13032/pECCG117-Po2-gfp демонстрировал интенсивность флуоресценции на намного более высоком уровне, чем каждый из штаммов под названиями ATCC13032/pECCG117-Pcj1-gfp, ATCC13032/pECCG117-Pcj4-gfp и ATCC13032/pECCG117-Pcj7-gfp, в которых применяются известные сильные промоторы (например, Pcj1, Pcj4 и Pcj7). Следовательно, было подтверждено, что Ро2 служил в качестве сильного промотора для экспрессии целевого гена.
[00092]
[00093] (2) Подтверждение активности Ро2 в отношении индуцирования экспрессии целевого гена у Е. coli
[00094] Для измерения активности Ро2 в отношении индуцирования экспрессии целевого гена у трансформированных штаммов Е. coli измеренную активность GFP у трансформированного штамма под названием DH5α/pECCG117-Po2-gfp из (1.1.2) примера 1 сравнивали с измеренной активностью GFP у трансформированных штаммов, каждый из которых имел название DH5α/pECCG117-Ptrc-gfp, DH5α/pECCG117-Pcj1-gfp или DH5α/pECCG117-Pcj4-gfp из (2) сравнительного примера 2.
[00095] Каждый из вышеуказанных трансформированных штаммов Е. coli инокулировали в угольчатую бутылку на 250 мл, содержащую 25 мл среды LB, содержащей канамицин, в объемном соотношении 1:20 и затем культивировали со встряхиванием (при скорости приблизительно 200 об./мин.) при определенной температуре, пока штаммы выращивали в культуре в фазе метафазы (OD600=3,0). После завершения культивирования клетки собирали путем центрифугирования (при скорости приблизительно 5000 об./мин. в течение приблизительно 15 минут), дважды промывали 0,1% буферным раствором Tris-HCl (рН 8,0), суспендировали в том же буферном растворе, разрушали путем ультразвуковой обработки, а затем подвергали центрифугированию (при скорости приблизительно 15000 об./мин. в течение приблизительно 20 минут) с получением надосадочной жидкости, содержащей клеточный экстракт. Надосадочную жидкость подвергали количественному измерению в отношении концентрации белка в ней в соответствии со способом Бредфорда. Затем такое же количество клеточного экстракта облучали светом при длине волны возбуждения 488 нм с помощью способа по Laure Gory или подобного, и свет при длине волны испускания 511 нм измеряли посредством применения спектрофотометра LS-50B (Perkin-Elmer), определяя таким образом экспрессию гена GFP. Результаты измерения активности GFP у каждого из штаммов показаны в таблице 2.
[00096] [Таблица 2]
Интенсивность флуоресценции y Е. coli
[00097]
[00098] Как показывают результаты в таблице 2, было подтверждено, что Ро2 обладал промоторной активностью у Е. coli, и что штамм под названием DH5α/pECCG117-Po2-gfp демонстрировал интенсивность флуоресценции на уровне, сходном с таковым у штамма под названием DH5α/pECCG117-Ptrc-gfp, который, как известно, содержит сильный промотор, и более высоком, чем у штамма DH5α/pECCG117-Pcj4-gfp. Следовательно, было подтверждено, что Ро2 служил в качестве сильного промотора для экспрессии целевого гена у Е. coli.
[00099]
[000100] Пример 3. Оценивание штаммов в отношении повышенной способности к продуцированию целевого продукта
[000101] (1) Оценивание штаммов в отношении повышенного продуцирования аргинина
[000102] Применительно к оцениванию факторов, влияющих на продуцирование аргинина, в случае, когда основной ген, отвечающий за биосинтез аргинина, т.е. ген argJ, экспрессировался посредством применения Ро2, штамм под названием KCCM10741P/pECCG117-Po2-argJ из (1.2.2) примера 1, который применяли в качестве штамма для повышенного продуцирования гена argJ, сравнивали с нетрансформированным штаммом под названием KCCM10741P (не обладающим трансформированной способностью к продуцированию аргинина) и штаммом под названием KCCM10741P/pECCG117-Pcj7-argJ из (3.1) сравнительного примера 1 в отношении способности к продуцированию аргинина.
[000103] 1 петлю каждого из вышеуказанных трансформированных штаммов инокулировали в угольчатую бутылку на 250 мл, содержащую 25 мл среды для продуцирования, и затем культивировали со встряхиванием при скорости приблизительно 200 об./мин. при температуре 30°С в течение 48 часов. После завершения культивирования измеряли продуцирование L-аргинина с помощью HPLC. Результаты измерения продуцирования L-аргинина показаны в таблице 3.
[000104] [Среда для продуцирования]
[000105] Глюкоза 6%, сульфат аммония 3%, монофосфат калия 0,1%, гептагидрат сульфата магния 0,2%, кукурузный экстракт (CSL) 1,5%, NaCl 1%, дрожжевой экстракт 0,5%, биотин 100 мкг/л и рН 7,2.
[000106]
[000107] [Таблица 3]
Продуцирование аргинина у KCCM10741P
[000108]
[000109] Как показывают результаты в таблице 3, было подтверждено, что Ро2 обуславливал улучшение продуцирования аргинина у Corynebacterium glutamicum, у которого была повышена экспрессия гена argJ. В частности, продуцирование аргинина у Corynebacterium glutamicum увеличивалось на приблизительно 84% по сравнению с контрольным штаммом и увеличивалось на приблизительно 23% по сравнению со штаммом под названием KCCM10741P/pECCG117-Pcj7-argJ. Следовательно, было подтверждено, что Ро2 влиял на повышение экспрессии гена argJ.
[000110] (2) Оценивание штаммов в отношении повышенного продуцирования L-валина
[000111] Применительно к оцениванию факторов, влияющих на продуцирование валина, в случае, когда основной ген, отвечающий за биосинтез валина, т.е. ген ilvE, экспрессировался посредством применения Ро2, штамм под названием KCCM11201P/pECCG117-Po2-ilvE из (1.3.2) примера 1, который применяли в качестве штамма для повышенного продуцирования гена ilvE, сравнивали с нетрансформированным штаммом под названием KCCM11201P (не обладающим трансформированной способностью к продуцированию L-валина) и штаммом под названием KCCM11201P/pECCG117-Pcj7-ilvE из (3.2) сравнительного примера 1 в отношении способности к продуцированию L-валина.
[000112] 1 петлю каждого из вышеуказанных трансформированных штаммов инокулировали в угольчатую бутылку на 250 мл, содержащую 25 мл среды для продуцирования, и затем культивировали со встряхиванием при скорости приблизительно 200 об./мин. при температуре 30°С в течение 72 часов. После завершения культивирования измеряли продуцирование L-валина с помощью HPLC. Результаты измерения продуцирования L-валина показаны в таблице 4.
[000113] [Среда для продуцирования]
[000114] Глюкоза 5%, сульфат аммония 2%, монофосфат калия 0,1%, гептагидрат сульфата магния 0,05%, CSL 2,0%, биотин 200 мкг/л и рН 7,2.
[000115]
[000116] [Таблица 4]
Продуцирование валина у KCCM11201P
[000117]
[000118] Как показывают результаты в таблице 4, было подтверждено, что Ро2 обуславливал улучшение продуцирования валина у Corynebacterium glutamicum, у которого была повышена экспрессия гена ilvE. В частности, продуцирование валина у штамма под названием KCCM11201P/pECCG117-Po2-ilvE значительно увеличивалось на приблизительно 32% по сравнению с контрольным штаммом и увеличивалось на приблизительно 17% по сравнению со штаммом под названием KCCM10741P/pECCG117-Pcj7-ilvE. Следовательно, было подтверждено, что Ро2 влиял на повышение экспрессии гена ilvE.
[000119]
[000120] [Номер доступа]
[000121] Принимающая организация: Корейский центр культур микроорганизмов (международный)
[000122] Номер доступа: KCCM11591P
[000123] Дата приема: 23 октября 2014 г.
[000124]
[000125] В соответствии с одним или несколькими иллюстративными вариантами осуществления, приведенными выше, новый промотор может обладать различными видами активности в зависимости от микроорганизма, применяемого для индуцирования экспрессии целевого гена. В этом отношении новый промотор можно применять в случае, когда необходимо контролировать активность целевого гена в ходе продуцирования целевого продукта, что в результате приводит к эффективному продуцированию целевого продукта.
[000126] Следует понимать, что иллюстративные варианты осуществления, описанные в данном документе, следует рассматривать только в описательном смысле, а не для целей ограничения. Описание признаков или аспектов в рамках каждого иллюстративного варианта осуществления обычно следует рассматривать в качестве подходящего для других аналогичных признаков или аспектов в других иллюстративных вариантах осуществления.
[000127] При том, что были описаны один или несколько иллюстративных вариантов осуществления, средним специалистам в данной области будет понятно, что в них можно осуществить различные изменения формы и деталей без отступления от сущности и объема идеи настоящего изобретения, определенных в следующей формуле изобретения.
Claims (8)
1. Промотор, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 1.
2. Последовательность, регулирующая экспрессию, содержащая промотор по п. 1.
3. Вектор экспрессии, содержащий последовательность, регулирующую экспрессию, по п. 2 и целевой ген, функционально связанный с последовательностью, регулирующей экспрессию.
4. Челночный вектор экспрессии, содержащий последовательность, регулирующую экспрессию, по п. 2 и целевой ген, функционально связанный с последовательностью, регулирующей экспрессию.
5. Прокариотическая клетка-хозяин для продуцирования целевого продукта, содержащая вектор по п. 3 или 4.
6. Прокариотическая клетка-хозяин по п. 5, где прокариотическая клетка-хозяин представляет собой клетку бактерии, относящейся к роду Corynebacterium или роду Escherichia.
7. Способ продуцирования целевого продукта, при этом способ включает: культивирование клетки-хозяина по п. 5 и извлечение целевого продукта из клетки-хозяина или культуральной среды, содержащей культивируемую клетку-хозяина.
8. Способ по п. 7, где целевой продукт представляет собой аминокислоту.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2015-0014587 | 2015-01-29 | ||
| KR1020150014587A KR101632642B1 (ko) | 2015-01-29 | 2015-01-29 | 신규한 프로모터 및 그의 용도 |
| PCT/KR2016/000444 WO2016122146A1 (en) | 2015-01-29 | 2016-01-15 | Novel promoter and uses thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017128034A RU2017128034A (ru) | 2019-03-01 |
| RU2017128034A3 RU2017128034A3 (ru) | 2019-03-01 |
| RU2692646C2 true RU2692646C2 (ru) | 2019-06-25 |
Family
ID=56365278
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017128034A RU2692646C2 (ru) | 2015-01-29 | 2016-01-15 | Новый промотор и пути его применения |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10273491B2 (ru) |
| EP (1) | EP3250692B1 (ru) |
| JP (1) | JP6469874B2 (ru) |
| KR (1) | KR101632642B1 (ru) |
| CN (1) | CN106459977B (ru) |
| AR (1) | AR103553A1 (ru) |
| AU (1) | AU2016212931B2 (ru) |
| BR (1) | BR112017016301B1 (ru) |
| CA (1) | CA2975374C (ru) |
| DK (1) | DK3250692T3 (ru) |
| ES (1) | ES2743753T3 (ru) |
| HU (1) | HUE046621T2 (ru) |
| JO (1) | JO3613B1 (ru) |
| MX (1) | MX2017009697A (ru) |
| MY (1) | MY191210A (ru) |
| PH (1) | PH12017501365B1 (ru) |
| PL (1) | PL3250692T3 (ru) |
| RU (1) | RU2692646C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201705765VA (ru) |
| TW (1) | TWI591175B (ru) |
| UA (1) | UA116753C2 (ru) |
| WO (1) | WO2016122146A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2817768C2 (ru) * | 2020-05-21 | 2024-04-22 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Микроорганизм, обладающий усиленной способностью продуцировать L-аминокислоту с разветвленной цепью, и способ получения L-аминокислоты с разветвленной цепью с его использованием |
Families Citing this family (96)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR112019004161B1 (pt) | 2016-08-31 | 2021-07-27 | Cj Cheiljedang Corporation | Molécula de ácido nucleico que possui uma atividade promotora, cassete de expressão gênica, vetor recombinante, micro-organismo recombinante do gênero corynebacterium e método de produzir um produto-alvo |
| CA3048802C (en) * | 2016-12-28 | 2021-10-19 | Cj Cheiljedang Corporation | A novel isopropylmalate synthase variant and a method of producing l-leucine using the same |
| KR101968317B1 (ko) | 2018-02-23 | 2019-04-11 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규 l-트립토판 배출 단백질 및 이를 이용한 l-트립토판을 생산하는 방법 |
| KR102003911B1 (ko) | 2018-02-23 | 2019-07-25 | 씨제이제일제당 주식회사 | 마이코스포린 유사 아미노산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 마이코스포린 유사 아미노산의 생산방법 |
| KR101947959B1 (ko) | 2018-05-28 | 2019-02-13 | 씨제이제일제당 (주) | 변이형 호모세린 디하이드로게나제 및 이를 이용한 호모세린 또는 호모세린 유래 l-아미노산의 생산 방법 |
| KR101996769B1 (ko) | 2018-12-21 | 2019-10-01 | 씨제이제일제당 (주) | 변이형 호모세린 디하이드로게나제 및 이를 이용한 호모세린 또는 호모세린 유래 l-아미노산의 생산 방법 |
| KR102221040B1 (ko) | 2019-05-09 | 2021-03-03 | 씨제이제일제당 주식회사 | L-아미노산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-아미노산을 생산하는 방법 |
| KR102472558B1 (ko) | 2019-06-28 | 2022-12-01 | 씨제이제일제당 주식회사 | 황 함유 아미노산 또는 그 유도체 제조방법 |
| KR102472559B1 (ko) | 2019-06-28 | 2022-12-01 | 씨제이제일제당 주식회사 | 황 함유 아미노산 또는 그 유도체의 제조방법 |
| KR102153534B1 (ko) * | 2019-09-02 | 2020-09-09 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 프로모터 및 이를 이용한 아미노산 생산 방법 |
| KR102183209B1 (ko) | 2019-09-09 | 2020-11-26 | 씨제이제일제당 주식회사 | L-쓰레오닌 배출 단백질의 변이체 및 이를 이용한 l-쓰레오닌 생산 방법 |
| KR102377500B1 (ko) | 2019-10-28 | 2022-03-23 | 씨제이제일제당 주식회사 | 외래 metZ 유전자에 의해 코딩되는 단백질이 도입된 L-메티오닌 생산 미생물 및 이를 이용한 L-메티오닌 생산방법 |
| KR102147381B1 (ko) | 2019-11-22 | 2020-08-24 | 씨제이제일제당 주식회사 | 아세토하이드록시산 신타제 신규 변이체 및 이를 포함하는 미생물 |
| KR102316445B1 (ko) | 2019-11-29 | 2021-10-26 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규 세린 프로테아제 변이체 |
| KR102143964B1 (ko) | 2019-12-06 | 2020-08-12 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 분지쇄 아미노산 아미노트랜스퍼라제 변이체 및 이를 이용한 류신 생산방법 |
| KR102182497B1 (ko) | 2019-12-20 | 2020-11-24 | 씨제이제일제당 주식회사 | 내막 단백질의 변이체 및 이를 이용한 목적 산물 생산 방법 |
| KR102399441B1 (ko) | 2020-01-20 | 2022-05-18 | 씨제이제일제당 주식회사 | 타가토스 생산용 조성물 및 이를 이용한 타가토스 제조 방법 |
| KR102207867B1 (ko) | 2020-01-21 | 2021-01-26 | 씨제이제일제당 주식회사 | Nadp 의존적 글리세르알데하이드-3-포스페이트 디하이드로지나제를 포함하는 미생물을 이용하여 ｌ-아미노산을 생산하는 방법 |
| KR102198072B1 (ko) | 2020-03-04 | 2021-01-04 | 씨제이제일제당 주식회사 | 글루타민 신테타아제 변이형 폴리펩티드 및 이를 이용한 l-글루타민 생산 방법 |
| KR102311391B1 (ko) | 2020-05-21 | 2021-10-12 | 씨제이제일제당 주식회사 | L- 분지쇄 아미노산 생산능이 강화된 미생물 및 이를 이용하여 l-분지쇄 아미노산을 생산하는 방법 |
| KR102647745B1 (ko) | 2020-05-27 | 2024-03-14 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규 l-타이로신 배출 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-타이로신을 생산하는 방법 |
| KR102246288B1 (ko) | 2020-08-13 | 2021-04-29 | 씨제이제일제당 주식회사 | 퓨트레신 생산 미생물 및 이를 이용한 퓨트레신 생산방법 |
| KR102344689B1 (ko) | 2020-09-01 | 2021-12-29 | 씨제이제일제당 주식회사 | L-발린 생산 미생물 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102414743B1 (ko) | 2020-09-09 | 2022-06-29 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규 o-포스포세린 배출 단백질 및 이를 이용한 o-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산 방법 |
| CA3191344A1 (en) | 2020-09-09 | 2022-03-17 | Nara Kwon | A recombinant microorganism for producing l-glutamic acid and a method for producing l-glutamic acid using the same |
| KR102470602B1 (ko) | 2020-12-11 | 2022-11-25 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 분지 연쇄 아미노산 아미노트렌스퍼라아제 변이체 및 이를 이용한 이소류신 생산 방법 |
| KR102464883B1 (ko) | 2020-12-11 | 2022-11-09 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 감마-아미노부티르산 퍼미에이즈 변이체 및 이를 이용한 이소류신 생산 방법 |
| KR102254631B1 (ko) | 2021-01-15 | 2021-05-21 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 펩타이드 메티오닌 설폭사이드 환원효소 변이체 및 이를 이용한 imp 생산 방법 |
| KR102254209B1 (ko) | 2021-01-15 | 2021-05-18 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 dna 중합효소 ⅲ 감마 및 타우 서브유닛 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR102261851B1 (ko) | 2021-01-15 | 2021-06-04 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 abc 트랜스포터 atp-결합 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR102257841B1 (ko) | 2021-01-15 | 2021-05-28 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 피토엔 신타제 변이체 및 이를 이용한 xmp 또는 gmp 생산 방법 |
| KR102259337B1 (ko) | 2021-01-15 | 2021-06-01 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 포스포노아세테이트 하이드롤라제 변이체 및 이를 이용한 xmp 또는 gmp 생산 방법 |
| KR102287113B1 (ko) | 2021-01-25 | 2021-08-06 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 하이드로레이즈 변이체 및 이를 이용한 l-트립토판 생산 방법 |
| KR102284726B1 (ko) | 2021-01-25 | 2021-08-02 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 타우토머레이즈 pptA 변이체 및 이를 이용한 L-트립토판 생산 방법 |
| KR102287112B1 (ko) | 2021-01-25 | 2021-08-06 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 쿠퍼익스포팅 P-type 에이티피에이즈 A 변이체 및 이를 이용한 L-트립토판 생산 방법 |
| KR102287114B1 (ko) | 2021-01-25 | 2021-08-06 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 사이토신 퍼미에이즈 변이체 및 이를 이용한 l-트립토판 생산 방법 |
| KR102284728B1 (ko) | 2021-01-25 | 2021-08-02 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 H(+)/Cl(-) 익스체인지 트랜스포터 변이체 및 이를 이용한 L-트립토판 생산 방법 |
| KR102287111B1 (ko) | 2021-01-25 | 2021-08-06 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 데옥시구아노신트리포스페이트 트리포스포하이드로레이즈 변이체 및 이를 이용한 l-트립토판 생산 방법 |
| KR102284725B1 (ko) | 2021-01-25 | 2021-08-02 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 페로체라테이즈 변이체 및 이를 이용한 l-트립토판 생산 방법 |
| KR102284727B1 (ko) | 2021-01-25 | 2021-08-02 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 단백질 HtrL 변이체 및 이를 이용한 L-트립토판 생산 방법 |
| KR102281361B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 아스파라긴 신타제 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281362B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 스퍼미딘 신타제 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281364B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 우레아제 부속 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102495918B1 (ko) | 2021-01-26 | 2023-02-06 | 씨제이제일제당 주식회사 | aroG 알돌라아제 (Phospho-2-dehydro-3-deoxyheptonate aldolase) 변이체 및 이를 이용한 분지쇄 아미노산 생산 방법 |
| KR102281359B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281365B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 프롤린 탈수소효소 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281363B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 시스테인 설피네이트 디설피나제 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281367B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 5,10-메틸렌테트라하이드로폴레이트 리덕타제 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281360B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 atp 포스포리보실트랜스퍼라제 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281366B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 테트라하이드로디피콜리네이트 n-숙시닐트랜스퍼라제 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102277403B1 (ko) | 2021-01-27 | 2021-07-14 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 리보뉴클레아제 p 변이체 및 이를 이용한 l-글루탐산 생산 방법 |
| KR102254635B1 (ko) | 2021-01-27 | 2021-05-21 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 글루코사민-6-포스페이트 디아미나제 변이체 및 이를 이용한 l-글루탐산 생산 방법 |
| KR102277404B1 (ko) | 2021-01-27 | 2021-07-14 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 갈락토사이드 o-아세틸트랜스퍼라제 변이체 및 이를 이용한 l-글루탐산 생산 방법 |
| KR102281368B1 (ko) | 2021-01-28 | 2021-07-23 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102314883B1 (ko) | 2021-01-29 | 2021-10-19 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 Co/Zn/Cd 유출 시스템 컴포넌트 변이체 및 이를 이용한 L-라이신 생산 방법 |
| KR102344057B1 (ko) | 2021-01-29 | 2021-12-27 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR102291553B1 (ko) | 2021-01-29 | 2021-08-18 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 프리모솜 조립 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR102258159B1 (ko) | 2021-01-29 | 2021-05-27 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 말레이트 디하이드로게나제 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR102284729B1 (ko) | 2021-01-29 | 2021-08-02 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 시아네이트 트랜스포터 패밀리 단백질변이체 및 이를 이용한 l-트립토판 생산 방법 |
| KR102527096B1 (ko) | 2021-02-01 | 2023-04-28 | 씨제이제일제당 주식회사 | 프리페네이트 탈수 효소 (Prephenate dehydratase) 변이체 및 이를 이용한 분지쇄 아미노산 생산 방법 |
| KR102527102B1 (ko) | 2021-03-05 | 2023-04-28 | 씨제이제일제당 주식회사 | 이소프로필말레이트 신타제 변이체 및 이를 이용한 l-류신의 생산 방법 |
| KR102525074B1 (ko) | 2021-03-10 | 2023-04-24 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 시트레이트 신타아제 변이체 및 이를 이용한 o-아세틸-l-호모세린 또는 l-메티오닌 생산 방법 |
| KR102613549B1 (ko) | 2021-03-12 | 2023-12-13 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규 세린 프로테아제 변이체 |
| KR102281370B1 (ko) | 2021-04-07 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 2-이소프로필말레이트합성효소 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102306009B1 (ko) | 2021-04-07 | 2021-09-27 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 WhiB 계열 전사 조절자 WhcA 변이체 및 이를 이용한 L-발린 생산 방법 |
| KR102306008B1 (ko) | 2021-04-07 | 2021-09-27 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 전사 조절자 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281369B1 (ko) | 2021-04-07 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 디히드로리포일 아세틸기전이효소 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281371B1 (ko) | 2021-04-07 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 글리세르알데히드-3-인산탈수소효소 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR20220139085A (ko) | 2021-04-07 | 2022-10-14 | 씨제이제일제당 (주) | L-아르기닌을 생산하는 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-아르기닌 생산방법 |
| KR102306010B1 (ko) | 2021-04-07 | 2021-09-27 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 분지쇄아미노산 투과효소 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102306007B1 (ko) | 2021-04-07 | 2021-09-27 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 슈가 포터 계열 mfs 트랜스포터 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102314885B1 (ko) | 2021-04-12 | 2021-10-18 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR102338875B1 (ko) | 2021-04-12 | 2021-12-10 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 당 인산염 이성질화효소/에피머레이즈 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR102303747B1 (ko) | 2021-04-12 | 2021-09-16 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 주요 촉진제 수퍼패밀리 퍼미에이즈 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR102314884B1 (ko) | 2021-04-12 | 2021-10-18 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 세포분해 막단백질 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR102273639B1 (ko) | 2021-04-20 | 2021-07-06 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 이중기능성 메틸렌테트라히드로폴레이트 탈수소효소/메테닐테트라하이드로폴레이트 사이클로하이드롤라아제 변이체 및 이를 이용한 xmp 또는 gmp 생산 방법 |
| KR102284730B1 (ko) | 2021-04-28 | 2021-08-02 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 수용성 피리딘 뉴클레오티드 트랜스수소효소 변이체 및 이를 이용한 l-트립토판 생산 방법 |
| KR102284731B1 (ko) | 2021-04-28 | 2021-08-02 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 아이소시트르산 디하이드로게네이즈 키나아제/포스파타제 효소 변이체 및 이를 이용한 l-트립토판 생산 방법 |
| KR102279137B1 (ko) | 2021-04-29 | 2021-07-19 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 아데닌 포스포리보실기 전이효소 변이체 및 이를 이용한 imp 생산 방법 |
| KR102277410B1 (ko) | 2021-04-29 | 2021-07-14 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 이중기능성 pyr 오페론 전사조절자/우라실 포스포리보실 전달 효소 변이체 및 이를 이용한 IMP 생산 방법 |
| KR102634303B1 (ko) | 2021-05-21 | 2024-02-06 | 씨제이제일제당 주식회사 | 퓨린 뉴클레오티드를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 퓨린 뉴클레오티드의 생산방법 |
| KR20220163754A (ko) | 2021-06-03 | 2022-12-12 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 YhhS 변이체 및 이를 이용한 O-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
| KR102600520B1 (ko) | 2021-06-09 | 2023-11-09 | 씨제이제일제당 주식회사 | 제라닐제라닐 피로포스페이트 신타아제 변이체 및 이를 이용한 테트라테르펜, 이의 전구체, 및 테트라테르펜을 전구체로 하는 물질의 생산방법 |
| KR20220166947A (ko) | 2021-06-11 | 2022-12-20 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 MdtH 변이체 및 이를 이용한 O-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
| WO2022270991A1 (ko) | 2021-06-25 | 2022-12-29 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 폴리-4-하이드록시부티레이트 및 1,4-부탄다이올 생산방법 |
| WO2023277307A1 (ko) | 2021-06-30 | 2023-01-05 | 씨제이제일제당 (주) | 고농도 l-글루탐산을 생산하기 위한 균주 및 이를 이용한 l-글루탐산 생산방법 |
| KR102611977B1 (ko) | 2021-07-15 | 2023-12-08 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 베타-카로틴 15,15 -옥시게네이즈 변이체 및 이를 이용한 레티노이드 생산방법 |
| KR20230016505A (ko) | 2021-07-26 | 2023-02-02 | 씨제이제일제당 (주) | LacI 계열 DNA 결합 전사 조절자의 활성이 약화된 미생물 및 이를 이용한 L-글루탐산의 생산방법 |
| KR102619598B1 (ko) | 2021-08-23 | 2023-12-29 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 아세토하이드록시산 신타아제 소단위체 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR20230031624A (ko) | 2021-08-27 | 2023-03-07 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 초산 대사 조절자 a 변이체 및 이를 이용한 l-분지쇄 아미노산 생산 방법 |
| KR102419166B1 (ko) | 2021-09-23 | 2022-07-08 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 글루타민 가수분해 gmp 합성효소 변이체 및 이를 이용한 퓨린 뉴클레오티드의 생산방법 |
| KR20230042953A (ko) | 2021-09-23 | 2023-03-30 | 씨제이제일제당 (주) | 고농도 l-글루탐산을 생산하기 위한 균주 및 이를 이용한 l-글루탐산 생산방법 |
| KR20230045990A (ko) | 2021-09-29 | 2023-04-05 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 아세토하이드록시산 신테아제 변이체 및 이를 이용한 l-이소류신 생산방법 |
| KR20230045989A (ko) | 2021-09-29 | 2023-04-05 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 아세토하이드록시산 신테아제 변이체 및 이를 이용한 l-이소류신 생산방법 |
| KR20230054183A (ko) | 2021-10-15 | 2023-04-24 | 씨제이제일제당 (주) | L-아르기닌을 생산하는 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-아르기닌 생산방법 |
| KR20230059451A (ko) | 2021-10-26 | 2023-05-03 | 씨제이제일제당 (주) | LysE 변이체 및 이를 이용한 L-아르기닌 생산방법 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100620092B1 (ko) * | 2004-12-16 | 2006-09-08 | 씨제이 주식회사 | 코리네박테리움 속 세포로부터 유래된 신규한 프로모터서열, 그를 포함하는 발현 카세트 및 벡터, 상기 벡터를포함하는 숙주 세포 및 그를 이용하여 유전자를 발현하는방법 |
| KR20090082702A (ko) * | 2008-01-28 | 2009-07-31 | 씨제이제일제당 (주) | 개량된 프로모터 및 이를 이용한 ｌ-라이신의 생산 방법 |
| RU2501858C2 (ru) * | 2010-07-21 | 2013-12-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae |
| RU2515044C2 (ru) * | 2007-02-22 | 2014-05-10 | Адзиномото Ко., Инк. | Способ получения l-аминокислоты |
| US20140147889A1 (en) * | 2012-11-23 | 2014-05-29 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Promoter of corynebacteria |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988009819A2 (en) | 1987-06-12 | 1988-12-15 | Massachusetts Institute Of Technology | C. glutamicum threonine biosynthetic pathway |
| DE4212633A1 (de) | 1992-04-15 | 1993-10-21 | Inst Neue Mat Gemein Gmbh | Verfahren zur Herstellung oberflächenmodifizierter nanoskaliger keramischer Pulver |
| KR100791659B1 (ko) | 2006-07-13 | 2008-01-03 | 씨제이 주식회사 | 알지닌을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 엘-알지닌의제조방법 |
| WO2010017230A2 (en) | 2008-08-04 | 2010-02-11 | The Regents Of The University Of Colorado | Methods, systems and compositions related to microbial bio-production of butanol and/or isobutanol |
| RU2431672C2 (ru) | 2009-05-19 | 2011-10-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП ГосНИИгенетика) | Бактерия - продуцент 1-бутанола и способ получения 1-бутанола |
| CN101698844B (zh) * | 2009-06-29 | 2012-01-04 | 中国科学院微生物研究所 | 一种来源于谷氨酸棒杆菌的启动子及其应用 |
| KR101226384B1 (ko) * | 2010-03-05 | 2013-01-25 | 씨제이제일제당 (주) | 개량된 프로모터 및 이를 이용한 ｌ-라이신의 생산 방법 |
| US9790521B2 (en) | 2011-03-24 | 2017-10-17 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Host cells and methods for production of isobutanol |
| KR101117022B1 (ko) | 2011-08-16 | 2012-03-16 | 씨제이제일제당 (주) | Ｌ-발린 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용한 ｌ-발린 제조방법 |
| KR101481142B1 (ko) * | 2013-03-04 | 2015-01-15 | 한국과학기술원 | 코리네박테리아 발현용 합성프로모터 |
| WO2017167623A1 (en) | 2016-03-30 | 2017-10-05 | Basf Se | Fermentative production of n-butylacrylate using alcohol acyl transferase enzymes |
-
2015
- 2015-01-29 KR KR1020150014587A patent/KR101632642B1/ko active IP Right Grant
-
2016
- 2016-01-15 SG SG11201705765VA patent/SG11201705765VA/en unknown
- 2016-01-15 RU RU2017128034A patent/RU2692646C2/ru active
- 2016-01-15 UA UAA201707693A patent/UA116753C2/uk unknown
- 2016-01-15 EP EP16743624.5A patent/EP3250692B1/en active Active
- 2016-01-15 ES ES16743624T patent/ES2743753T3/es active Active
- 2016-01-15 MX MX2017009697A patent/MX2017009697A/es unknown
- 2016-01-15 MY MYPI2017001055A patent/MY191210A/en unknown
- 2016-01-15 WO PCT/KR2016/000444 patent/WO2016122146A1/en active Application Filing
- 2016-01-15 HU HUE16743624A patent/HUE046621T2/hu unknown
- 2016-01-15 BR BR112017016301-2A patent/BR112017016301B1/pt active IP Right Grant
- 2016-01-15 DK DK16743624.5T patent/DK3250692T3/da active
- 2016-01-15 AU AU2016212931A patent/AU2016212931B2/en active Active
- 2016-01-15 CN CN201680000214.6A patent/CN106459977B/zh active Active
- 2016-01-15 PL PL16743624T patent/PL3250692T3/pl unknown
- 2016-01-15 JP JP2017538588A patent/JP6469874B2/ja active Active
- 2016-01-15 CA CA2975374A patent/CA2975374C/en active Active
- 2016-01-15 US US15/547,398 patent/US10273491B2/en active Active
- 2016-01-28 JO JOP/2016/0016A patent/JO3613B1/ar active
- 2016-01-28 AR ARP160100243A patent/AR103553A1/es unknown
- 2016-01-28 TW TW105102596A patent/TWI591175B/zh active
-
2017
- 2017-07-28 PH PH12017501365A patent/PH12017501365B1/en unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100620092B1 (ko) * | 2004-12-16 | 2006-09-08 | 씨제이 주식회사 | 코리네박테리움 속 세포로부터 유래된 신규한 프로모터서열, 그를 포함하는 발현 카세트 및 벡터, 상기 벡터를포함하는 숙주 세포 및 그를 이용하여 유전자를 발현하는방법 |
| RU2515044C2 (ru) * | 2007-02-22 | 2014-05-10 | Адзиномото Ко., Инк. | Способ получения l-аминокислоты |
| KR20090082702A (ko) * | 2008-01-28 | 2009-07-31 | 씨제이제일제당 (주) | 개량된 프로모터 및 이를 이용한 ｌ-라이신의 생산 방법 |
| RU2501858C2 (ru) * | 2010-07-21 | 2013-12-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae |
| US20140147889A1 (en) * | 2012-11-23 | 2014-05-29 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Promoter of corynebacteria |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| MIROSLAV PATEK et al., Corynebacterium glutamicum promoters: a practical approach, Microbial Biotechnology Vol. 6, Issue 7, pp.103-117, 2013. * |
| MIROSLAV PATEK et al., Corynebacterium glutamicum promoters: a practical approach, Microbial Biotechnology Vol. 6, Issue 7, pp.103-117, 2013. SUNG SUN YIM et al., Isolation of Fully Synthetic Promoters for High-Level Gene Expression in Corynebacterium glutamicum, Biotechnology and Bioengineering Vol.110, Issue 11, pp. 2959-2969, 2013. * |
| SUNG SUN YIM et al., Isolation of Fully Synthetic Promoters for High-Level Gene Expression in Corynebacterium glutamicum, Biotechnology and Bioengineering Vol.110, Issue 11, pp. 2959-2969, 2013. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2817768C2 (ru) * | 2020-05-21 | 2024-04-22 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Микроорганизм, обладающий усиленной способностью продуцировать L-аминокислоту с разветвленной цепью, и способ получения L-аминокислоты с разветвленной цепью с его использованием |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2692646C2 (ru) | Новый промотор и пути его применения | |
| JP6679803B2 (ja) | 新規プロモーター及びその用途 | |
| JP6518317B2 (ja) | フィードバック抵抗性アセトヒドロキシ酸シンターゼ変異体及びそれを用いたｌ−バリンの生産方法 | |
| JP6476212B2 (ja) | Ｌ−アルギニンを生産するコリネバクテリウム属の微生物及びそれを用いたｌ−アルギニンの製造方法 | |
| RU2733426C1 (ru) | Модифицированная гомосериндегидрогеназа и способ получения гомосерина или l-аминокислоты, имеющей происхождение от гомосерина, с использованием такой гомосериндегидрогеназы | |
| ES2703256T3 (es) | Microorganismo que tiene una mejor capacidad de producción de ornitina y método de producción de ornitina usando el mismo | |
| RU2759956C1 (ru) | Микроорганизм, продуцирующий путресцин или орнитин, и способ получения путресцина или орнитина с использованием этого микроорганизма | |
| JP6750005B2 (ja) | Ｌ−リジン生産能を有するコリネバクテリウム属微生物及びそれを用いたｌ−リジン生産方法 | |
| CN108138191B (zh) | 具有l-赖氨酸生产能力的棒状杆菌属微生物及利用其生产l-赖氨酸的方法 | |
| RU2716573C1 (ru) | Микроорганизм рода Corynebacterium, продуцирующий L-аргинин, и способ получения L-аргинина с использованием этого микроорганизма | |
| KR101526047B1 (ko) | 아미노트랜스퍼라제 활성 강화를 통하여 ｌ-오르니틴 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용한 ｌ-오르니틴의 제조방법 | |
| JP7475408B2 (ja) | Ｌ－アルギニンまたはｌ－シトルリン生産能が向上したコリネバクテリウム属微生物およびこれを用いたｌ－アルギニンまたはｌ－シトルリンの生産方法 | |
| JP7475409B2 (ja) | Ｌ－アルギニンまたはｌ－シトルリン生産能が向上したコリネバクテリウム属微生物およびこれを用いたｌ－アルギニンまたはｌ－シトルリンの生産方法 | |
| RU2805253C1 (ru) | Новый модифицированный полипептид с ослабленной активностью цитратсинтазы и способ получения L-аминокислоты с его использованием | |
| US20220275412A1 (en) | Microorganism for producing l-amino acid having increased cytochrome c activity, and l-amino acid production method using same |