RU2261248C2 - Замещенные бензимидазолы и лекарственное средство на их основе - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к замещенным бензимидазолам формулы (I):

и/или к их стереоизомерным формам и/или их физиологически приемлемым солям, причем один из заместителей R¹, R², R³ и R⁴ означает остаток формулы (II):

где D означает -С(О)-; R⁸ означает атом водорода или (C₁-C₄)-алкил; R⁹ означает: 1. (C₁-С₆)-алкил, где алкил является линейным или разветвленным и незамещен или одно-, двух- или трехкратно, независимо друг от друга, замещен; Z означает: 1. остаток 5-14-членной ароматической системы, которая содержит от 1 до 4 гетероатомов в качестве членов цикла, которые представляют собой азот и кислород, где ароматическая система незамещена или замещена; 1.1 гетероцикл, выбранный из группы оксадиазола или оксадиазолона, которые могут быть незамещены или замещены; 2. (C₁-C₆)-алкил, где алкил является линейным или разветвленным и однократно замещен фенилом или группой -ОН; или 3. -C(O)-R¹⁰, где R¹⁰ означает -O-R¹¹, -N(R¹¹)₂ или морфолинил; или R⁸ и R⁹ вместе с атомом азота и атомом углерода, с которым они, соответственно, связаны, образуют гетероцикл формулы (IIa):

где D, Z и R¹⁰ имеют указанные в формуле (II) значения; А означает остаток -СН₂-; В означает остаток -CH₂-; Х означает остаток -CH₂-; Y отсутствует или означает остаток -СН₂-; или Х и Y вместе образуют фенил; причем образованная N, А, X, Y, В и атомом углерода циклическая система не замещена или однократно замещена (C₁-C₈)-алкилом, где алкил однократно замещен фенилом; и соответственно другие заместители R¹, R², R³ и R⁴, независимо друг от друга, означают атом водорода; R⁵ означает атом водорода; R⁶ означает гетероароматическую циклическую систему с 5-14 членами в цикле, которая содержит 1 или 2 атома азота и является незамещенной или замещенной. Изобретение также относится к лекарственному средству для ингибирования IkB-киназы на основе этих соединений и к способу получения указанного средства. Технический результат - получение новых соединений и лекарственных средств на их основе в целях профилактики и лечения заболеваний, в протекании которых принимает участие усиленная активность NFkB. 3 н. 1 з.п. ф-лы, 7 табл.

Description

Изобретение относится к новым замещенным бензимидазолам, способу их получения и их применению в качестве лекарственных средств.

В международной заявке WO-94/12478 описываются, в частности, производные бензимидазола, которые ингибируют агрегацию тромбоцитов.

NFkB представляет собой гетеродимерный фактор транскрипции, который может активировать множество генов, кодирующих, в частности, провоспалительные цитокины, как IL-1, IL-2, TNFα или IL-6. NFkB находится в цитозоли клеток в виде комплекса с его встречающимся в природе ингибитором IkB. Стимуляция клеток, например, с помощью цитокинов приводит к фосфорилированию и последующему протеолитическому расщеплению IkB. Это протеолитическое расщепление приводит к активированию NFkB, который затем мигрирует в ядро клетки и там активирует множество провоспалительных генов.

При заболеваниях, как ревматоидный артрит (при воспалении), остеоартрит, астма, инфаркт сердца, болезнь Альцгеймера или атеросклероз, NFkB активируется сверх нормы. Ингибирование NFkB полезно также при лечении рака, так как там оно используется для усиления цитостатической терапии. Обнаружено, что лекарственные средства, как глюкокортикоиды, салицилаты или соли золота, которые используют при лечении ревматизма, ингибирующе воздействуют на различные участки активирующей NFkB сигнальной цепи или прямо интерферируют с транскрипцией генов.

Первой стадией в указанном сигнальном каскаде является расщепление IkB. Это фосфорилирование регулируется с помощью специфической IkB-киназы. До сих пор не известны ингибиторы, которые специфически ингибируют IkB-киназу.

В стремлении получить эффективные соединения для лечения ревматоидного артрита (при воспалении), остеоартрита, астмы, инфаркта сердца, болезни Альцгеймера, раковых заболеваний (усиление цитостатических терапий) или атеросклероза показано, что предлагаемые согласно изобретению бензимидазолы являются сильными и очень специфическими ингибиторами IkB-киназы.

Изобретение, следовательно, относится к соединению формулы (I):

и/или стереоизомерной форме соединения формулы (I) и/или физиологически приемлемой соли соединения формулы (I), причем один из заместителей R¹, R², R³ и R⁴ означает остаток формулы (II):

где D означает -С(О)-, -S(O)или -S(O)₂-;

R⁸ означает атом водорода или (C₁-C₄)-алкил;

R⁹ означает:

1. характерный остаток аминокислоты;

2. арил, где арил незамещен или замещен;

3. 5-14-членный гетероарил, где гетероарил незамещен или замещен;

4. 5-12-членный гетероцикл, где гетероцикл незамещен или замещен;

5. (C₁-C₆)-алкил, где алкил является линейным или разветвленным и незамещен или одно-, двух- или трехкратно, независимо друг от друга, замещен:

5.1 арилом, где арил незамещен или замещен;

5.2 5-14-членным гетероарилом, где гетероарил незамещен или замещен;

5.3 5-12-членным гетероциклом, где гетероцикл незамещен или замещен;

5.4 -O-R¹¹;

5.5 =О;

5.6 галогеном;

5.7 -CM;

5.8 -CF₃;

5.9 -3(O)_x-R¹¹, где х означает целое число нуль, 1

или 2;

5.10 -C(O)-O-R¹¹;

5.11 -C(O)-N(R¹¹)₂;

5.12 -C(R¹¹)₂;

5.13 (С₃-С₆)-циклоалкилом;

5.14 остатком формулы:

или

5.15 остатком формулы:

где R¹¹ означает:

a) атом водорода;

b) (C₁-C₆)-алкил, где алкил незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен

1. арилом, где арил незамещен или замещен;

2. 5-14-членным гетероарилом;

3. 5-12-членным гетероциклом;

4. галогеном;

5. -N-(C₁-С₆) n-алкилом, где n означает целое число нуль, 1 или 2 и алкил незамещен или одно-, двух- или трехкратно, независимо друг от друга, замещен галогеном или -СООН;

6. -О-(C₁-C₆)-алкилом или

7. группой -СООН;

c) арил, где арил незамещен или замещен;

d) 5-14-членный гетероарил или

e) 5-12-членный гетероцикл; и

в случае (R¹¹)₂ остатки R¹¹, независимо друг от друга, имеют значение от а) до е);

Z означает:

1. арил, где арил незамещен или замещен;

2. 5-14-членный гетероарил, где гетероарил незамещен или замещен;

3. 5-12-членный гетероцикл, где гетероцикл незамещен или замещен;

4. -(C₁-С₆)-алкил, где алкил замещен или незамещен; или

5. -C(O)-R¹⁰, где R¹⁰ означает:

1. -O-R¹¹ или

2. -N(R¹¹)₂;

или R⁸ и R⁹ вместе с атомом азота и атомом углерода, с которыми

они, соответственно, связаны, образуют гетероцикл формулы (IIa):

где D, Z и R¹⁰ имеют указанное в формуле (II) значение;

А означает атом азота или остаток -СН₂-;

В означает атом кислорода, атом серы, атом азота или

остаток -СН₂-;

Х означает атом кислорода, атом серы, атом азота или

остаток -СН₃-;

Y отсутствует или означает атом кислорода, атом серы,

атом азота или остаток -СН₂-; или

Х и Y вместе образуют фенил; 1,2-, 1,3 или 1,4 - диазиновый остаток;

причем образованная N, А, X, Y, В и атомом углерода циклическая система содержит не более одного атома кислорода; Х не означает атом кислорода, атом серы или атом азота, когда А означает атом азота; содержит не более одного атома серы; содержит 1, 2, 3 или 4 атома азота, и при этом одновременно не присутствуют атом кислорода и атом серы;

причем образованная N, А, X, Y, В и атомом углерода циклическая система незамещена или одно-, двух или трехкратно, независимо друг от друга, замещена (C₁-C₈)-алкилом, где алкил незамещен или одно- или двукратно замещен

1.1 группой -ОН;

1.2 (C₁-C₈)-алкоксилом;

1.3 галогеном;

1.4 NO₂;

1.5 -NH₂;

1.6 -CF₃;

1.7 метилендиоксигруппой;

1.8 -С(O)-СН₃;

1.9 -СН(O);

1.10 -CN;

1.11 -СООН;

1.12 -C(O)-NH₂;

1.13 (C₁-C₄)-алкоксикарбонилом;

1.14 фенилом;

1.15 феноксигруппой;

1.16 бензилом;

1.17 бензилоксигруппой или

1.18 тетразолилом;

или

R⁹ и Z вместе с атомами углерода, с которыми они, соответственно, связаны, образуют гетероцикл формулы (IIc):

где D, R⁸ и R¹¹ имеют указанное в формуле (II) значение;

Т означает атом кислорода, атом серы, атом азота или остаток -СН₂-;

W означает атом кислорода, атом серы, атом азота или остаток -СН₂-;

V отсутствует или означает атом кислорода, атом серы, атом азота или остаток -СН₂-; или

Т и V или V и W вместе образуют фенил; 1,2-, 1,3- или 1,4-диазиновый остаток;

причем образованная N, Т, V, W и двумя атомами углерода циклическая система содержит не более одного атома кислорода, не более одного атома серы, и 1, 2, 3 или 4 атома азота, при этом одновременно не присутствуют атом кислорода и атом серы; и причем образованная N, Т, V, W и двумя атомами углерода циклическая система незамещена или одно-, двух- или трехкратно, независимо друг от друга, замещена указанными выше в п.п.1.1 - 1.18 заместителями,

и, соответственно, другие заместители R¹, R², R³ и R⁴,

независимо друг от друга, означают:

1. атом водорода;

2. галоген;

3. (C₁-C₄)-алкил;

4. 5-14-членный гетероарил, где гетероарил незамещен или замещен;

5. 5-12-членный гетероцикл, где гетероцикл незамещен или замещен;

6. (C₁-C₄) -алкил;

7. -CN;

8. -О-(С₀-С₄)-алкиларил;

9. -О-(C₁-C₄)-алкил;

10. OR¹¹;

11. -OR¹¹;

12. S(O)_x-R¹¹, где х означает целое число нуль, 1 или 2;

13. -NO₂; или

14. -CF₃;

R⁵ означает:

1. атом водорода;

2. -ОН; или

3. =О;

и

R⁶ означает:

1. арил, где арил незамещен или замещен;

2. фенил, одно- или двукратно замещенный;

2.1 -CN;

2.2 -NO₂;

2.3 -O-(C₁-C₄)-алкилом;

2.4 -N(R¹¹)₂;

2.5 -NH-C(O)-R¹¹;

2.6 -S(O)_x-R¹¹, где х означает целое число нуль, 1 или 2;

2.7 -C(O)-R¹¹; или

2.8 (C₁-C₄)-алкил-NH₂;

3. 5-12-членный гетероцикл, где гетероцикл незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен.

Предпочтительным является соединение формулы (I), причем один из заместителей R¹, R², R³ и R⁴ означает остаток формулы (II), где:

R⁸ означает атом водорода;

R⁹ означает:

1. характерный остаток аминокислоты;

2. (C₁-C₆)-алкил, где алкил является линейным или разветвленным и незамещен или одно- или двукратно замещен остатком из группы, состоящей из пиррола, одно- или двукратно замещенного (C₁-C₄)-алкилом пиррола, пиразола, фенила, имидазола, триазола, тиофена, тиазола, оксазола, изоксазола, пиридина, пиримидина, индола, бензотиофена, бензимидазола, бензоксазола, бензотиазола, азетидина, пирролина, пирролидина, пиперидина, изотиазола, диазепина, тиоморфолина, -CN, морфолина, азепина, пиразина, 1,3,4-оксадиазола, -N(R¹³)-фенила, где R¹³ имеет нижеуказанное значение, (С₃-С₆) -циклоалкила, -OR¹¹; -NH(R¹¹), где R¹¹, соответственно, имеет вышеуказанное значение; -S(О)_x-R¹², где х означает нуль, 1 или 2 и R¹² означает нафтил, пиримидинил, морфолинил или фенил, которые незамещены или одно- или двукратно замещены группой -ОН, (C₁-C₄)-алкилом, -CF₃, галогеном, -О-(C₁-C₄)-алкилом, -СООН, -С(О)-О(C₁-C₄)-алкилом, -NH₂ или -NH-C(О)-(C₁-C₄) -алкилом, или C(O)-R¹², где R¹² имеет вышеуказанное значение;

Z означает -C(O)-R¹⁰, тетразол, (C₁-С₆)-алкил, где алкил является линейным или разветвленным и незамещен или одно- или двукратно замещен фенилом или группой -ОН, или 1,3,4-оксадиазол, где 1,3,4-оксадиазол незамещен или однократно замещен группой -NH₂, -NH(C₁-C₄)-алкилом, -N-[(C₁-C₄)-алкил]₂, -NH-C (О) (C₁-C₄)-алкилом, -NH-C(О)-NH-(C₁-C₄)-алкилом, -NH-C(О)-NH-(С₃-С₇)-циклоалкилом, -NH-C(О)-NH-арилом, -NH-C(О)-NH-фенилом, -NH-SO₂-арилом, -NH-SO₂-(C₁-C₄)-алкилом, группой -ОН или (C₁-C₄) -алкилом, где

R¹⁰ означает -O-R¹¹, фенил, пиримидинил, -ОН, морфолинил, -N(R¹¹)₂ или -NH₂;

R¹¹ означает:

1. (C₁-C₄) -алкил;

2. R¹³ или

3. -N(R¹³)₂,

где R¹³, независимо друг от друга, означает:

a) атом водорода;

b) - (C₁-С₆)-алкил;

c) - (C₁-C₄) -алкил-O(C₁-C₄) -алкил;

d) - (C₁-C₆)-алкил-NH₂;

e) галоген или

f) -(С₀-С₄)-алкил, одно- или двукратно замещенный арилом, имидазолилом, морфолинилом или фенилом;

или

R⁸ и R⁹ вместе с атомом азота и атомом углерода, с которыми они, соответственно, связаны, образуют цикл формулы (IIa) из группы, состоящей из пиррола, пирролина, пирролидина, пиридина, пиперидина, пиперилена, пиридазина, пиримидина, пиразина, пиперазина, пиразола, имидазола, пиразолина, имидазолина, пиразолидина, имидазолидина, оксазола, изоксазола, 2-изоксазолидина, изоксазолидина, морфолина, изотиазола, тиазола, тетразола; 1,2,3,5-оксатиадиазол-2-оксидов, оксадиазолонов, изоксазолонов, триазолонов, оксадиазолидиндионов, триазолов, которые замещены F, CN, CF₃ или COO-(C₁-C₄)-алкилом; 3-гидроксипирро-2,4-дионов, 5-оксо-1,2,4-тиадиазолов, 1,3,4-оксадиазола, изотиазолидина, тиоморфолина, индазола, тиадиазола, бензимидазола, хинолина, триазола, фталазина, хиназолина, хиноксалина, пурина, птеридина, индола, тетрагидрохинолина, тетрагидроизохинолина и изохинолина;

или

R⁹ и Z вместе с атомами углерода, с которыми они, соответственно, связаны, образуют цикл формулы (IIc) из группы, состоящей из пиррола, пирролина, пирролидина, пиридина, пиперидина, пиперилена, пиридазина, пиримидина, пиразина, пиперазина, пиразола, имидазола, пиразолина, имидазолина, пиразолидина, имидазолидина, оксазола, изоксазола, 2-изоксазолидина, изоксазолидина, морфолина, изотиазола, тиазола, изотиазолидина, тиоморфолина, индазола, тиадиазола, бензимидазола, хинолина, триазола, фталазина, хиназолина, хиноксалина, пурина, птеридина, индола, тетрагидрохинолина, тетрагидроизохинолина, изохинолина, тетразола; 1,2,3,5-оксатиадиазол-2-оксидов, оксадиазолонов, изоксазолонов, триазолонов, оксадиазолидиндионов, триазолов, которые замещены F, CN, CF₃ или COO-(C₁-C₄)-алкилом; 3-гидроксипирро-2,4-дионов, 1,3,4-оксадиазола и 5-оксо-1,2,4-тиадиазолов; и, соответственно, другие заместители R¹, R², R³ и R⁴, независимо друг от друга, означают:

1. атом водорода;

2. галоген;

3. (C₁-C₄)-алкил;

4. CN;

5. -NO₂;

6. -О(С₀-С₄)-алкиларил;

7. -О-(C₁-C₄)-алкил;

8. -N-(С₀-С₄)-алкиларил;

9. -N-(C₁-C₄)-алкил; или

10. -CF₃;

R⁵ означает:

1. атом водорода;

2. -ОН; или

3. =О; и

R⁶ означает:

1. фенил, одно- или двукратно замещенный

1.1. -CN;

1.2 -NO₂;

1.3 -О-(C₁-C₄)-алкилом;

1.4 -NH₂; или

1.5 (C₁-C₄)-алкил Н₂; или

2. 5-14-членный гетероарил, незамещенный или от однократно до трехкратно замещенный группой -N-R¹⁴, где R¹⁴ означает (C₁-C₆)-алкил, (С₃-С₄)-циклоалкил или фенил; галогеном, группой -ОН или -(C₁-C₄)-алкилом; или

3. 5-12-членный гетероцикл, незамещенный или от однократно до трехкратно замещенный группой -N-R¹⁴, где R¹⁴ означает (C₁-C₆)-алкил, (С₃-C₆)-циклоалкил или фенил; галогеном, группой -ОН или -(C₁-C₄)-алкилом.

Под определением "галоген" понимают фтор, хлор, бром или иод. Под ≪(C₁-С₆)-алкилом≫ понимают углеводородные остатки, углеродная цепь которых является линейной или разветвленной и содержит 1-6 атомов углерода. Под "С₀-алкилом" понимают ковалентную связь. Циклическими алкильными остатками являются, например, 3-6-членные моноциклы, как циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил.

Под определением "R⁸ и R⁹ вместе с атомом азота и атомом углерода, с которыми они, соответственно, связаны, образуют гетероцикл формулы (IIa)" понимают остатки, которые образованы от пиррола, пирролина, пирролидина, имидазола, пиразола, оксазола, тетразола; 1,2,3,5-оксатиадиазол-2-оксидов, триазолонов, оксадиазолонов, изоксазолонов, 1,3,4-оксадиазола, оксадиазолидиндионов, триазолов, которые замещены F, CN, CF₃ или COO-(C₁-C₄)-алкилом; 3-гидроксипирро-2,4-дионов, 5-оксо-1,2,4-тиадиазолов, изоксазола, индола, изоксазолина, изоксазолидина, морфолина, тиазола, изотиазола, изотиазолина, пурина, изотиазолидина, тиоморфолина, пиридина, пиперидина, пиразина, пиперазина, пиримидина, пиридазина, изоиндола, индазола, бензимидазола, фталазина, хинолина, изохинолина, хиноксалина, хиназолина, циннолина, птеридина, имидазолидина, карболина и бензаннелированных производных этих гетероциклов.

Под определением "арил" понимают ароматические углеводородные остатки с 6-14 атомами углерода в цикле. (С₆-C₁₄) -арильными остатками являются, например, фенил; нафтил, например, 1-нафтил, 2-нафтил; бифенилил, например, 2-бифенилил, 3-бифенилил и 4-бифенилил; антрил или флуоренил. Бифенилильные остатки, нафтильные остатки и в особенности фенильные остатки представляют собой предпочтительные арильные остатки. Арильные остатки, в особенности фенильные остатки, могут быть однократно или многократно, предпочтительно однократно, двукратно или трехкратно, замещены одинаковыми или разными остатками, предпочтительно остатками из ряда: (C₁-C₈)-алкил, в особенности (C₁-С₄)-алкил; (C₁-C₈)-алкоксил, в особенности (C₁-C₄)-алкоксил; галоген, нитрогруппа, аминогруппа, трифторметил, гидроксил; гидрокси-(C₆-C₁₄)-алкил, как гидроксиметил или 1-гидроксиэтил или 2-гидроксиэтил; метилендиоксигруппа, этилендиоксигруппа, формил, ацетил, цианогруппа, гидроксикарбонил, аминокарбонил, (C₁-C₄)-алкоксикарбонил, фенил, феноксигруппа, бензил, бензилоксигруппа, тетразолил. Соответственно это относится, например, к таким остаткам, как арилалкил или арилкарбонил. Арилалкильными остатками являются, в особенности, бензил, а также 1 и 2-нафтилметил; 2-, 3 или 4-бифенилилметил и 9-флуоренилметил. Замещенными арилалкильными остатками являются, например, замещенные в арильной части одним или несколькими (C₁-C₈)-алкильными остатками, в особенности (C₁-C₄)-алкильными остатками, бензильные остатки и нафтилметильные остатки, как, например, 2-, 3 и 4-метилбензил, 4-изобутилбензил, 4-трет-бутилбензил, 4-октилбензил, 3,5-диметилбензил, пентаметил-бензил; 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7 и 8-метил-1-нафтилметил; 1-,3-, 4-, 5-, 6-, 7 и 8-метил-2-нафтилметил; замещенные в арильной части одним или несколькими (C₁-C₈)-алкоксильными остатками, в особенности (C₁-C₄)-алкоксильными остатками, бензильные остатки и нафтилметильные остатки, как, например, 4-метоксибензил, 4-неопентилоксибензил, 3,5-диметоксибензил, 3,4-метилендиоксибензил, 2,3,4-триметоксибензил; нитробензильные остатки, как, например, 2-, 3 и 4-нитробензил; галогенбензильные остатки, как, например, 2-, 3-и 4-хлор- и 2-, 3 и 4-фторбензил, 3,4-дихлорбензил, пентафторбензил; трифторметилбензильные остатки, как, например, 3- и 4-трифторметилбензил или 3,5-бис(трифторметил)бензил.

В монозамещенных фенильных остатках заместитель может находиться в положении 2, положении 3 или положении 4. Двукратно замещенный фенил может быть замещен в 2,3-положении, 2,4-положении, 2,5-положении, 2,6-положении, 3,4-положении или 3,5-положении. В трехкратно замещенных фенильных остатках заместители могут находиться в 2,3,4-положении, 2,3,5-положении, 2,4,5-положении, 2,4,6-положении, 2,3,6-положении и 3,4,5-положении.

Пояснения к арильным остатками соответственно относятся к двухвалентным ариленовым остаткам, например к фениленовым остаткам, которые могут быть, например, в виде 1,4-фенилена или в виде 1,3-фенилена.

Фенилен-(C₁-C₆)-алкил представляет собой в особенности фениленметил (-С₆Н₄-СН₂-) и фениленэтил; (C₁-C₆)-алкиленфенил представляет собой в особенности метиленфенил (-СН₂-С₆Н₄-). Фенилен-(С₂-С₆)-алкенилом является в особенности фениленэтенил и фениленпропенил.

Определение "5-14-членный гетероарил" означает остаток 5-14-членной моноциклической или полициклической ароматической системы, которая содержит 1, 2, 3, 4 или 5 гетероатомов в качестве членов цикла. Примерами гетероатомов являются N, О и S. Если содержатся несколько гетероатомов, то они могут быть одинаковыми или разными. Гетероарильные остатки также могут быть однократно или многократно, предпочтительно однократно, двукратно или трехкратно, замещены одинаковыми или разными остатками из ряда: (C₁-C₈)-алкил, в особенности (C₁-C₄)-алкил; (C₁-C₈)-алкоксил, в особенности (C₁-C₄)-алкоксил; галоген, нитрогруппа, -N(R¹¹)₂, трифторметил, гидроксил; гидрокси (C₁-C₄) -алкил, как гидроксиметил или 1-гидроксиэтил или 2-гидроксиэтил; метилендиоксигруппа, формил, ацетил, цианогруппа, гидроксикарбонил, аминокарбонил, (C₁-C₄)-алкоксикарбонил, фенил, феноксигруппа, бензил, бензилоксигруппа, тетразолил. Предпочтительно 5-14-членный гетероарил означает моноциклический или бициклический ароматический остаток, который содержит 1, 2, 3 или 4, в особенности 1, 2 или 3, одинаковых или разных гетероатомов из ряда N, О и 3 и который может быть замещен 1, 2, 3 или 4, в особенности 1-3, одинаковыми или разными заместителями из ряда: (C₁-C₆)-алкил, (C₁-С₆)-алкоксил, фтор, хлор, нитрогруппа, -N(R¹¹)₂ трифторметил, гидроксил, гидрокси (C₁-C₄) -алкил, (C₁-C₄)-алкоксикарбонил, фенил, феноксигруппа, бензилоксигруппа и бензил. Особенно предпочтительно гетероарил означает 5-10-членный моноциклический или бициклический ароматический остаток, в особенности пятичленный или шестичленный моноциклический ароматический остаток, который содержит 1, 2 или 3, в особенности 1 или 2, одинаковых или разных гетероатомов из ряда N, О и S и может быть замещен одним или двумя, одинаковыми или разными заместителями из ряда: (C₁-C₄)-алкил, галоген, гидроксил, -N(R¹¹)₂ (C₁-C₄)-алкоксил, фенил, феноксигруппа, бензилоксигруппа и бензил.

Определение "5-12-членный гетероцикл" означает от 5-членного до 12-членного моногетероцикл или бигетероцикл, который является частично или полностью насыщенным. Примерами гетероатомов являются N, О и S. Гетероцикл незамещен или у одного или нескольких атомов углерода или у одного или нескольких гетероатомов замещен одинаковыми или разными заместителями. Эти заместители указаны выше в случае гетероарильного остатка. В особенности, гетероцикл однократно или многократно, например, однократно, двукратно, трехкратно или четырехкратно, у атомов углерода замещен одинаковыми или разными остатками из ряда: (C₁-C₈)-алкил, например (C₁-C₄)-алкил; (C₁-C₈) -алкоксил, например (C₁-C₄)-алкоксил, как метоксигруппа; фенил-(C₁-C₄)-алкоксил, например бензилоксигруппа; гидроксил, оксогруппа, галоген, нитрогруппа, аминогруппа или трифторметил; и/или у атома (атомов) азота в цикле он замещен (C₁-C₈)-алкилом, например (C₁-C₄)-алкилом, как метил или этил; возможно замещенным фенилом или фенил-(C₁-C₄)-алкилом, например бензилом. Азотсодержащие гетероциклы также могут находиться в виде N-оксидов или в виде четвертичных солей.

Примерами "5-14-членных гетероарилов или 5-12-членных гетероциклов" являются остатки, которые образованы от пиррола, фурана, тиофена, имидазола, пиразола, оксазола, изоксазола, тиазола, изотиазола, тетразола; 1,3,4-оксадиазола, 1,2,3,5-оксатиадиазол-2-оксидов, триазолонов, оксадиазолонов, изоксазолонов, оксадиазолидиндионов, триазолов, которые замещены F, CN, CF₃ или СОО-(C₁-C₄)-алкилом; 3-гидроксипирро-2,4-дионов, 5-оксо-1,2,4-тиадиазолов, пиридина, пиразина, пиримидина, индола, изоиндола, индазола, фталазина, хинолина, изохинолина, хиноксалина, хиназолина, циннолина, карболина и бензаннелированных, циклопента-, циклогекса- или циклогептааннелированных производных этих гетероциклов. В особенности предпочтительны следующие остатки: 2 или 3-пирролил; фенилпирролил, как 4- или 5-фенил-2-пирролил; 2-фурил, 2-тиенил, 4-имидазолил; метилимидазолил, например, 1-метил-2-, -4 или -5-имидазолил; 1,3-тиазол-2-ил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил; 2-, 3- или 4-пиридил-N-оксид; 2-пиразинил; 2-, 4-или 5-пиримидинил; 2-, 3- или 5-индолил; замещенный 2-индолил, например, 1-метил-, 5-метил-, 5-метокси-, 5-бензилокси-, 5-хлор- или 4,5-диметил-2-индолил; 1-бензил-2- или -3-индолил; 4,5,6,7-тетрагидро-2-индолил; циклогепта [b]-5-пирролил; 2-, 3-или 4-хинолил; 1-, 3- или 4-изохинолил; 1-оксо-1,2-дигидро-3-изохинолил; 2-хиноксалинил, 2-бензофуранил, 2-бензотиенил, 2-бензоксазолил или бензотиазолил или дигидропиридинил; пирролидинил, например, 2 или 3-(N-метилпирролидинил); пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидротиенил или бензодиоксоланил.

Общая структурная формула α-аминокислот является следующей:

α-Аминокислоты различаются между собой остатком R, который согласно изобретению обозначается как "характерный остаток" аминокислоты. В случае, когда R⁹ означает характерный остаток аминокислоты, предпочтительно используют характерные остатки следующих, встречающихся в природе α-аминокислот: глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, фенилаланин, тирозин, триптофан, серин, треонин, цистеин, метионин, аспарагин, глутамин, лизин, гистидин, аргинин, глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота. В особенности предпочтительны гистидин, триптофан, серин, треонин, цистеин, метионин, аспарагин, глутамин, лизин, аргинин, глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота. Далее, предпочтительными характерными остатками аминокислоты, которые используют в качестве остатка R⁹, являются также остатки не встречающихся в природе аминокислот, таких как 2-аминоадипиновая кислота, 2-аминобутановая кислота, 2-аминоизобутановая кислота, 2,3-диаминопропионовая кислота, 2,4-диаминобутановая кислота, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-карбоновая кислота, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота, 2-аминопимелиновая кислота, фенилглицин, 3-(2-тиенил)аланин, 3-(3-тиенил)аланин, саркозин, 2-(2-тиенил)глицин, 2-аминогептановая кислота, пипеколиновая кислота, гидроксилизин, N-метилизолейцин, 6-N-метиллизин, N-метилвалин, норвалин, норлейцин, орнитин, аллоизолейцин, 4-гидроксипролин, аллогидроксилизин, аллотреонин, 3-гидроксипролин, 3-(2-нафтил)аланин, 3-(1-нафтил)-аланин, гомофенилаланин, гомоцистеин, 2-амино-3-фениламино-этилпропионовая кислота, гомоцистеиновая кислота, гомотриптофан, цистеиновая кислота, 3-(2-пиридил)аланин, 3-(3-пиридил)-аланин, 3-(4-пиридил)аланин, фосфинотрицин, 4-фторфенилаланин, 3-фторфенилаланин, 3-фторфенилаланин, 2-фторфенилаланин, 4-хлорфенилаланин, 4-нитрофенилаланин, 4-аминофенилаланин, циклогексилаланин, цитруллин, 5-фтортриптофан, 5-метокситриптофан, 2-амино-3-фениламинопропионовая кислота, метионин-сульфон, метионинсульфоксид или -NHNR¹¹-CON(R¹¹)₂, которые могут быть также замещены. В случае встречающихся или не встречающихся в природе аминокислот, которые содержат функциональную группу, как аминогруппа, гидроксил, карбоксил, меркаптогруппа, гуанидил, имидазолил или индолил, эта группа также может быть защищена.

В качестве пригодной для этого защитной группы предпочтительно используют обычные в химии пептидов N-защитные группы, например защитные группы уретанового типа, как бензилоксикарбонил (Z), трет-бутилоксикарбонил (Boc), 9-флуоренилоксикарбонил (Fmoc), аллилоксикарбонил (Aloc), или амидокислотного типа, в особенности формил, ацетил или трифторацетил, а также алкильного типа, как, например, бензил. В случае имидазольного остатка в R⁹ служит, например, используемое для образования сульфонамида производное сульфокислоты формулы (IV) в качестве защитной группы имидазольного азота, которая снова может отщепляться в особенности в присутствии оснований, как раствор гидроксида натрия.

Исходные вещества для химических превращений известны или их можно получать известными из литературы способами.

Изобретение относится, далее, к способу получения соединения формулы (I) и/или стереоизомерной формы соединения формулы (I) и/или физиологически приемлемой соли соединения формулы (I), отличающемуся тем, что:

а) соединение формулы (IV):

где Pg означает пригодную защитную группу (например, метильный остаток), амидную группу или гидроксил и Z, R⁸ и R⁹ имеют указанное в формуле (II) значение, подвергают взаимодействию с хлорангидридом кислоты или активированным сложным эфиром соединения формулы (III):

причем D₁ означает -СООН или галогенсульфонил и R⁵ и R⁶ имеют указанное в формуле (I) значение, в присутствии основания или, в случае необходимости, обезвоживающего средства, в растворе, и после отщепления защитной группы переводят в соединение формулы (I); или

b) соединение формулы (IVa):

где R⁸ и R⁹ имеют указанное в формуле (II) значение и Е означает защитную для N аминогруппы группу, с помощью его карбоксильной группы через промежуточную цепь L связывают с полимерной смолой общей формулы PS, причем образуется соединение формулы (V):

которое после селективного отщепления защитной группы Е подвергают взаимодействию с соединением формулы (III), причем R⁵ и R⁶ имеют указанное в формуле (I) значение, в присутствии основания или, в случае необходимости, обезвоживающего средства, с получением соединения формулы (VI):

и соединение формулы (VI) после отщепления от материала-носителя переводят в соединение формулы (I); или

с) соединение формулы (V) после селективного отщепления защитной группы Е подвергают взаимодействию с соединением формулы (VII):

причем D₁ означает -СООН или галогенсульфонил и RX означает галоген и RY означает остаток -NO₂ или -NH-E и Е означает защитную группу, с получением соединения формулы (VIII):

и затем соединение формулы (VIII) подвергают взаимодействию с соединением формулы (IX):

NH₂-R⁶ (IX)

где R⁶ имеет указанное в формуле (I) значение, до получения промежуточного соединения формулы (VIa):

затем промежуточное соединение формулы (VIa) либо после отщепления от материала-носителя переводят в соединение формулы (I), либо, например, с помощью трибутилфосфина восстанавливают до соединения формулы (VI) и после отщепления от материала-носителя переводят в соединение формулы (I); или

d) соединение формулы (I) переводят в физиологически приемлемую соль.

Согласно варианту способа а), кислотные функциональные группы соединений формулы (IVa) снабжают защитной группой Р_g, эту селективную дериватизацию карбоновых кислот осуществляют способами, описанными в книге Губен-Вейл "Методы органической химии", том 15/1. Согласно варианту способа b, аминогруппы исходных соединений формул (IVa) снабжают защитной группой Е, эту селективную дериватизацию аминогрупп осуществляют способами, описанными в книге Губен-Вейл "Методы органической химии", том 15/1.

В качестве пригодной для этого защитной группы Р_д предпочтительно используют обычные в химии пептидов защитные для карбоксила группы, например, защитные группы типа сложноэфирных алкильных групп, как метил, этил, трет-бутил, изопропил, бензил, флуоренилметил, аллил; типа сложноэфирных арильных групп, как фенил; амидного типа, как амид- или бензгидриламин. В качестве пригодной защитной группы Е для этой цели предпочтительно используют обычные в химии пептидов N-защитные группы, например, защитные группы уретанового типа, как бензилоксикарбонил (Z), трет-бутилоксикарбонил (Boc), 9-флуоренилметоксикарбонил (Fmoc) и аллилоксикарбонил (Aloc), или амидокислотного типа, в особенности формил, ацетил или трифторацетил; и алкильного типа, как бензил.

Особенно пригодной для этой цели оказалась также (триметилсилил)этоксикарбонильная группа (Теос) (Р.

Protecting Groups, изд. Thieme, 1994).

В качестве исходных продуктов для получения производных бензимидазола формулы (III) предпочтительными являются 2,3 и 3,4-диаминобензойные кислоты и арил- или гетероарилальдегиды, которые вводят во взаимодействие в присутствии нитробензола в качестве растворителя при температуре 145°С. Далее, указанные кислоты вводят во взаимодействие с метил- или этилимидатами, которые получают по реакции Пиннера из соответствующих арилнитрилов или гетероарилнитрилов.

Для реакции конденсации соединений формулы (IV) с соединениями формулы (III) предпочтительно используют само по себе хорошо известные специалисту методы сочетания химии пептидов (см., например, Губен-Вейл, Методы органической химии, том 15/1 и 15/2, изд. Georg Thieme, Штутгарт, 1974 г.). В качестве конденсирующих средств или связывающих реагентов используют такие соединения, как карбонилдиимидазол, карбодиимиды, как дициклогексилкарбодиимид или диизопропилкарбодиимид (DIC), О-((циано(этоксикарбонил)метилен)амино)-N,N,N',N' -тетраметилуронийтетрафторборат (TOTU) или ангидрид пропанфосфоновой кислоты (РРА).

Конденсацию можно осуществлять в стандартных условиях. При конденсации, как правило, необходимо, чтобы имеющиеся, не реагирующие аминогруппы были защищены обратимыми защитными группами. То же самое относится к не принимающим участие в реакции карбоксильным группам, которые во время реакции конденсации предпочтительно находятся в виде сложных (C₁-C₆)-алкиловых эфиров, сложных бензиловых эфиров или сложных трет-бутиловых эфиров. Защита аминогрупп является излишней, когда аминогруппы находятся еще в форме предшественников, как нитрогруппы или цианогруппы, и образуются лишь после реакции конденсации за счет гидрирования. После реакции конденсации имеющиеся защитные группы пригодным образом отщепляют. Например, NO₂-группы (гуанидиновая защита в аминокислотах), бензилоксикарбонильные группы и бензильные группы в сложных бензиловых эфирах удаляют путем гидрирования. Защитные группы трет-бутильного типа отщепляют в кислых условиях, в то время как 9-флуоренилметилоксикарбонильный остаток удаляют с помощью вторичных аминов.

Указанный в формулах (V) и (VI), обозначаемый как PS полимерный носитель представляет собой поперечно сшитую полистирольную смолу с обозначаемым как промежуточная цепь L линкером. Этот линкер включает пригодную функциональную группу, например, аминогруппу, известный, например, как амидная смола Ринка, или ОН-группу, известный, например, как смола Ванга, или оксимная смола Кайзера. Альтернативно можно использовать другие полимерные носители, как стекло, хлопок или целлюлоза, с различными промежуточными цепями L.

Обозначаемая как L промежуточная цепь ковалентно связана с полимерным носителем и позволяет осуществлять обратимое, амидообразное или типа сложноэфирного связывание с соединением формулы (IVa), которая во время дальнейшего превращения остается стабильной на связанном соединении формулы (IVa), однако, в сильно кислых условиях реакции, например, в случае смесей с трифторуксусной кислотой, находящаяся на линкере группа снова высвобождается. Высвобождение желаемого соединения общей формулы (I) от линкера может происходить на различных стадиях проведения реакции.

А. Общая методика связывания защищенных аминокарбоновых кислот формулы (IVa) с твердым носителем согласно варианту способа b:

Синтез осуществляли в реакторах с реакционными объемами по 15 мл. Каждый из реакторов заполняли 0,179 г смолы Ринк-амид-АМ (Fmoc-Rink-Amid-AM, фирма Nova-Biochem; нагрузка 0,56 ммоль/г; то есть, 0,1 ммоль/реактор). Для отщепления Fmoc-защитной группы от смолы в каждый реактор добавляли 30%-ный раствор пиперидина в диметилформамиде и смесь встряхивали в течение 45 минут. Затем отфильтровывали и смолу промывали 3 раза с помощью диметилформамида (ДМФА).

Для связывания защищенной аминокислоты, к таким образом подготовленной смоле добавляли в каждом случае 0,5 М раствор соответствующей Fmoc-аминокислоты (0,3 ммоль в диметилформамиде), раствор HOBt (0,33 ммоль в диметилформамиде) и раствор DIC (0,33 ммоль в диметилформамиде) и смесь встряхивали в течение 16 часов при температуре 35°С. Затем смолу многократно промывали с помощью диметилформамида.

Для контроля связывания извлекали несколько шариков смолы и подвергали тесту КАЙЗЕРА; во всех случаях тест был отрицательным.

Отщепление Fmoc-защитной группы осуществляли как указано выше, с помощью 30%-ного раствора пиперидина в диметилформамиде.

Для связывания бензимидазолкарбоновых кислот добавляли 0,1 М раствор соответствующей 4- или 5-замещенной кислоты (0,4 ммоль в диметилформамиде); 0,5 М раствор реагента связывания TOTU (0,44 ммоль в диметилформамиде) и 0,5 М раствор DIPEA (0,6 ммоль в диметилформамиде) и смесь встряхивали в течение 16 часов при температуре 40°С. Затем многократно промывали диметилформамидом.

Для контроля в отношении протекания реакции снова извлекали несколько шариков смолы и подвергали тесту КАЙЗЕРА.

Для отщепления желаемых веществ от твердого носителя смолу многократно промывали дихлорметаном. Затем добавляли раствор для отщепления (50% дихлорметана и 50% смеси из 95% трифторуксусной кислоты, 2% H₂O, 3% триизопропилсилана) и смесь встряхивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали досуха. Остаток осаждали из диэтилового эфира и отфильтровывали.

Твердые остатки содержали желательные продукты чаще всего высокой степени чистоты или их фракционировали, например, с помощью препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой (элюенты: А: Н₂О/0,1% трифторуксусной кислоты; В: ацетонитрил/0,1% трифторуксусной кислоты). Путем лиофилизации полученных фракций получали желательные продукты.

Физиологически приемлемые соли способных к солеобразованию соединений формулы (I), включая их стереоизомерные формы, получают само по себе известным образом. Карбоновые кислоты с основными реагентами, как гидроксиды, карбонаты, гидрокарбонаты, алкоголяты, а также аммиак или с органическими основаниями, как, например, триметил- или триэтиламин, этаноламин или триэтаноламин, или также с основными аминокислотами, как, например, лизин, орнитин или аргинин, образуют стабильные соли щелочных металлов, щелочноземельных металлов или, в случае необходимости, замещенные аммониевые соли. Если соединения формулы (I) содержат основные группы, то при использовании сильных кислот также можно получать стабильные аддитивные соли кислот. Для этого используются как неорганические, так и органические кислоты, как соляная кислота, бромоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, метансульфокислота, бензолсульфокислота, п-толуолсульфокислота, 4-бромбензолсульфокислота, циклогексиламидосульфокислота, трифторметилсульфокислота, уксусная кислота, щавелевая кислота, винная кислота, янтарная кислота или трифторуксусная кислота.

Изобретение относится также к лекарственным средствам, отличающимся эффективным количеством по меньшей мере одного соединения формулы (I) и/или физиологически приемлемой соли соединения формулы (I) и/или, в случае необходимости, стереоизомерной формы соединения формулы (I), вместе с фармацевтически пригодным и физиологически приемлемым носителем, добавкой и/или другими биологически активными и вспомогательными веществами.

Благодаря фармакологическим свойствам предлагаемые согласно изобретению соединения пригодны для профилактики и лечения всех тех заболеваний, в протекании которых участвует усиленная активность IkB-киназы. К ним относятся, например, астма, ревматоидный артрит (при воспалении), остеоартрит, болезнь Альцгеймера, раковые заболевания (усиление цитостатических терапий), инфаркт сердца, сердечная недостаточность, острый коронарный синдром (нестабильная стенокардия), септический шок, острая и хроническая почечная недостаточность, удар или атеросклероз.

Предлагаемые согласно изобретению лекарственные средства вводят, в основном, перорально или парентерально. Также возможно ректальное, ингаляционное или чрескожное введение.

Изобретение относится также к способу получения лекарственного средства, отличающемуся тем, что по меньшей мере одно соединение формулы (I) вместе с фармацевтически пригодным и физиологически приемлемым носителем и, в случае необходимости, пригодными биологически активными веществами, добавками или вспомогательными веществами доводят до пригодной формы введения.

Пригодными твердыми или галеновыми формами композиции являются, например, грануляты, порошки, драже, таблетки, (микро)капсулы с лекарством, суппозитории, сиропы, соки, суспензии, эмульсии, капли или растворы для инъекции, а также препараты с пролонгированным высвобождением биологически активного вещества, при приготовлении которых используют обычные вспомогательные средства, как носители, расширители, связующие, покрытия, способствующие набуханию средства, антиадгезивы или смазки, вкусовые вещества, подслащивающие вещества и агенты растворения. В качестве часто используемых вспомогательных веществ следует назвать карбонат магния, диоксид титана, лактозу, маннит и другие сахара, тальк, молочный белок, желатину, крахмал, целлюлозу и ее производные, животные и растительные масла, как рыбий жир, подсолнечное масло, арахисовое масло или кунжутное масло, полиэтиленгликоль и растворители, как, например, стерильная вода и одно- или многоатомные спирты, как глицерин.

Фармацевтические препараты предпочтительно приготовляют и вводят в разовых дозах, причем каждая разовая доза в качестве активного компонента содержит определенное количество предлагаемого согласно изобретению соединения формулы (I). В случае твердых разовых доз, как таблетки, капсулы, драже или суппозитории, это количество может составлять вплоть до примерно 1000 мг, предпочтительно от примерно 50 мг до 300 мг, а в случае растворов для инъекции в виде ампул оно может составлять вплоть до примерно 300 мг, предпочтительно от примерно 10 мг до 100 мг.

Для лечения взрослого пациента массой примерно 70 кг, в зависимости от эффективности соединения согласно формуле (I), показаны суточные дозы от примерно 20 мг до 1000 мг биологически активного вещества, предпочтительно от примерно 100 мг до 500 мг. При известных условиях, однако, можно применять также более высокие или более низкие суточные дозы. Введение суточной дозы можно осуществлять как путем одноразового приема в форме отдельной разовой дозы или в виде нескольких меньших разовых доз, как также путем многократного приема разделенных доз в определенные интервалы времени.

Целевые продукты, как правило, определяют с помощью методов масс-спектрометрии (бомбардировка быстрыми атомами (FAB-MS), ионизация электронным распылением (ESI-MS)). Температурные данные указаны в градусах Цельсия; RT означает комнатную температуру (22-26°С). Используемые сокращения либо пояснены, либо соответствуют обычным условным сокращениям.

Примеры согласно варианту способа b) осуществляли по общей методике; высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) (RP 18; УФ 210 нм); градиент 0-15 минут, В=5-70% (А=100% Н₂О/0,1% трифторуксусной кислоты; В=100% ацетонитрила/0,1% трифторуксусной кислоты).

Соединения согласно указанным в следующей таблице 1 примерам получают аналогично варианту способа b по общей методике.

Пример 91

Метиловый эфир (2-(пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбонил, L)-лейцина (1)

Аммониевая соль амида 3-нитрофталевой кислоты (1а)

Помещают в колбу 100 г (518 ммоль) ангидрида 3-нитрофталевой кислоты при комнатной температуре и при перемешивании быстро смешивают со 170 мл концентрированного раствора гидроксида аммония. Дополнительно перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Осадок отфильтровывают и высушивают в эксикаторе. Выход: 95,6 г (88%). 2-Амино-3-нитробензойная кислота (1b)

22 г (105,2 ммоль) Аммониевой соли амида 3-нитрофталевой кислоты (1а) при перемешивании смешивают со 165 мл раствора гипохлорита натрия. Спустя 5 минут добавляют раствор 8,8 г гидроксида натрия в 22 мл воды и затем перемешивают в течение 1 часа при температуре 70°С. Суспензию при перемешивании выливают в 500 мл воды. Образовавшийся прозрачный раствор подкисляют с помощью концентрированной HCl. Осадок отфильтровывают и высушивают в эксикаторе. Выход: 9,68 г (51%).

2,3-Диаминобензойная кислота (1с)

2-Амино-3-нитробензойную кислоту (1b) в количестве 14 г (76,9 ммоль) растворяют в 500 мл метанола, смешивают с Pd/C и гидрируют с помощью водорода. Спустя 4 часа катализатор отфильтровывают и раствор концентрируют. Получают твердое вещество темнокоричневого цвета. Выход: 11,67 г (99%).

2(Пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбоновая кислота (1d)

700 мг (4,6 ммоль) 2,3-Диаминобензойной кислоты (1с) и 0,47 мл (4,95 ммоль) 4-пиридилальдегида растворяют в 40 мл нитробензола и при перемешивании нагревают в течение двух часов при температуре 145°С. Затем охлаждают и осадок отфильтровывают. Осадок промывают этилацетатом и высушивают в эксикаторе. Выход: 800 мг (73%).

Метиловый эфир (2-(пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбонил)-(L)-лейцина (1)

120 мг (0,5 ммоль) 2(пирид-4-ил)-1Н-бекзимидазол-4-карбоновой кислоты (1d) и 84 мг (0,5 ммоль) метилового эфира Н-(L)-лейцина растворяют в 5 мл диметилформамида. Добавляют 164 мг (0,5 ммоль) TOTU (О-[(циано(этоксикарбонил)-метилиден)амино-1,1,3,3-тетраметил]уронийтетрафторборат) и 0,086 мл диизопропилэтиламина и перемешивают в течение 3 часов при комнатной температуре. Осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют. Остаток растворяют в этилацетате, промывают водой, органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют. Выход: 180 мг (98%).

Масс-спектр (химическая ионизация⁺): (М+Н)⁺=367,1

Пример 92

Амид (2-(пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбонил)-(L)-валина (2)

120 мг (0,5 ммоль) 2-(пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбоновой кислоты (1d) и 76,4 мг (0,5 ммоль) амида H-(L)-валина растворяют в 5 мл диметилформамида. Добавляют 164 мг (0,5 ммоль) TOTU (О-[(циано(этоксикарбонил)метилиден)амино-1,1,3,3-тетраметил]уронийтетрафторборат) и 0,086 мл диизопропилэтиламина и перемешивают в течение 3 часов при комнатной температуре. Осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют. Остаток растворяют в этилацетате, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют. Выход: 168 мг (99%).

Масс-спектр (химическая ионизация⁺)(M+H⁺)=338,2

Пример 93

Метиловый эфир (2-(пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбонил)-

(S)-гистидина (3)

Метиловый эфир (2-(пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбонил)-(L)-гистидина (Trt) (3a) 120 мг (0,5 ммоль) (2-(пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбоновой кислоты (1d) и 242 мг (0,5 ммоль) метилового эфира Н-(L)-гистидина (Trt) растворяют в 5 мл диметилформамида. Добавляют 164 мг (0,5 ммоль) TOTU и 0,172 мл диизопропилэтиламина и перемешивают в течение 3 часов при комнатной температуре. Прозрачный раствор концентрируют. Остаток растворяют в этилацетате, промывают водой, органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют. Выход: 380 мг сырого продукта.

Масс-спектр (ионизация электронным распылением+) (М+Н)⁺=633,3.

Пример 94

Амид (2-(пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбонил)-(L)-метионина (4)

120 мг (0,5 ммоль) 2-(пирид-4-ил)-1Н-бензимидазол-4-карбоновой кислоты (1d) и 74,2 мг (0,5 ммоль) амида H-(L)-метионина растворяют в 5 мл диметилформамида. Добавляют 164 мг (0,5 ммоль) TOTU и 0,086 мл диизопропилэтиламина и перемешивают в течение 3 часов при комнатной температуре. Прозрачный раствор концентрируют. Остаток растворяют в этилацетате, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют. Выход: 149 мг (81%).

Масс-спектр (ионизация электронным распылением⁺) (М+Н)⁺=370,2.

Соединения согласно указанным в следующей таблице 2 примерам получают аналогично методикам примеров 91-94.

Пример 156

Нижеследующие соединения получают по варианту способа а):

а) Получение 2-фторизоникотиновой кислоты

5,00 г (45 ммоль) 2-фтор-4-метилпиридина и 1,00 г (17 ммоль) КОН смешивают с 50 мл пиридина и кипятят с обратным холодильником. При этой температуре в течение 30 минут порциями добавляют 20,00 г (127 ммоль) перманганата калия и следующие 1,5 часа кипятят с обратным холодильником. Затем охлаждают на бане со льдом, смешивают со 100 мл воды и с помощью концентрированной соляной кислоты доводят до значения рН, равного 1. После добавления 100 мл этилацетата отфильтровывают от нерастворимого остатка и водную фазу экстрагируют еще два раза по 100 мл этилацетатом. Объединенные этилацетатные фазы сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Получают 2,70 г 2-фторизоникотиновой кислоты. Выход: 42%.

b) Получение (2-фторпиридин-4-ил)метанола

12,60 г (89 ммоль) 2-Фторизоникотиновой кислоты вместе с 13,3 мл (95 ммоль) триэтиламина вносят в 300 мл толуола и смешивают с 9,08 мл (95 ммоль) этилового эфира хлормуравьиной кислоты и перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре (20-23°С). Затем триэтиламмонийхлорид отфильтровывают и толуольную фазу концентрируют при пониженном давлении. Остаток обрабатывают с помощью 200 мл абсолютного тетрагидрофурана и охлаждают до температуры -78°С. При этой температуре добавляют по каплям суспензию 3,55 г (95 ммоль) литийалюминийгидрида в тетрагидрофуране и перемешивают в течение следующих 30 минут. После этого реакционную смесь доводят до комнатной температуры и выливают в 1 л воды со льдом. После осуществления экстракции 4 раза по 300 мл этилацетатом, высушивания объединенных этилацетатных фаз над сульфатом магния и выпаривания растворителя получают сырой продукт, который после очистки путем хроматографии среднего давления (CH₂Cl₂:СН₃ОН в соотношении 9:1) дает 5,10 г (40 ммоль) желательного продукта. Выход: 45%.

c) Получение 2-фторпиридин-4-карбальдегида

К раствору 4,6 мл (54 ммоль) оксалилхлорида и 7,6 мл (106 ммоль) диметилсульфоксида (ДМСО) в 450 мл дихлорметана при температуре -78°С добавляют по каплям раствор 5 г (39 ммоль) (2-фторпиридин-4-ил)метанола в дихлорметане и перемешивают дополнительно в течение 15 минут. Затем добавляют 24 мл (180 ммоль) триэтиламина и реакционный раствор медленно нагревают до комнатной температуры. Выливают в 500 мл воды и промывают по одному разу с помощью 200 мл 10%-ной лимонной кислоты и с помощью 10%-ного раствора карбоната натрия. Дихлорметановую фазу сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Выход: 4,60 г (37 ммоль; 94%).

d) Получение 2-(2-фторпиридин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты

2,00 г (15 ммоль) 2-фторпиридин-4-карбальдегида вместе с 2,40 г (15 ммоль) 3,4-диаминобензойной кислоты суспендируют в 100 мл нитробензола и перемешивают в течение трех часов при температуре 145°С. Затем реакционный раствор охлаждают до температуры 0°С и медленно образующиеся при этом кристаллы отфильтровывают. Получают 2,53 г (9,8 ммоль) желательного бензимидазола. Выход: 62%.

e) Получение 2-(2-метиламинопиридин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты 100 мг (0,38 ммоль) 2-(2-фторпиридин-4-ил)-1H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты растворяют в 5 мл метанола. Затем метанольный раствор насыщают с помощью газообразного метиламина и реакционную смесь перемешивают в автоклаве в течение 10 часов при собственном давлении при температуре 120°С. Путем хроматографим среднего давления (CH₂Cl₂:СН₃ОН=2:1) получают 56 мг (0,21 ммоль) продукта замещения. Выход: 55%.

f) Получение трифторацетата 2-(S)-{[2-(2-метиламино-пиридин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбонил]амино}-4-пиррол-1-ил-бутановой кислоты

50 мг (0,186 ммоль) 2-(2-фторпиридин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты растворяют в 3 мл диметилформамида и охлаждают до температуры 0°С. К полученному раствору добавляют 100 мкл (0,58 ммоль) диизопропилэтиламина и 64 мг (0,195 ммоль) TOTU. Затем добавляют 33 мг (0,196 ммоль) 2-(S)-амино-4-пиррол-1-ил-бутановой кислоты и реакционный раствор доводят до комнатной температуры. Дополнительно перемешивают в течение 18 часов, затем выливают в 20 мл 10%-ного раствора гидрокарбоната натрия и экстрагируют 3 раза по 50 мл н-бутанолом. После выпаривания бутанола остаток очищают путем препаративной ВЭЖХ (ацетонитрил, 0,1%-ная трифторуксусная кислота). Таким образом получают 40 мг (0,075 ммоль) связанного продукта. Выход: 42%.

Соединения согласно указанным в следующей таблице 3 примерам получают аналогичным образом:

Пример 163

Нижеследующее соединение получают по варианту способа а,

a) Получение этилового эфира 2-(S)-амино-3-фенилсульфанилпропионовой кислоты

К растворенному в 10 мл метанола 1,00 г (5 ммоль) 2-(S)-амино-3-фенилсульфанилпропионовой кислоты при температуре -10°С добавляют по каплям 1,7 мл (23 ммоль) тионилхлорида. Затем реакционный раствор доводят до комнатной температуры и добавляют 5 мл диметилформамида. После этого нагревают при температуре 70°С в течение 23 часов и после охлаждения до температуры -10°С снова добавляют 1 мл (13,5 ммоль) тионилхлорида. Затем перемешивают еще в течение 14 часов при температуре 70°С. После выпаривания жидкой фазы остаток обрабатывают водой и подщелачивают с помощью концентрированного водного раствора аммиака и экстрагируют 3 раза по 75 мл этилацетатом. После высушивания над сульфатом магния и выпаривания получают продукт в виде масла, который без дальнейшей очистки используют для реакции сочетания с карбоновой кислотой в качестве компонента. Выход: 830 мг (3,7 ммоль) (74%).

b) Получение этилового эфира З-фенилсульфанил-2-(S)[(2-(пиридин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбонил)амино]пропионовой кислоты

В этом случае реакция сочетания стандарта TOTU со 188 мг (0,83 ммоль) этилового эфира 2-(S)-амино-3-фенилсульфанилпропионовой кислоты и 200 мг (0,83 ммоль) 2-пиридин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты приводит к получению желательного продукта. Выход: 43% (160 мг, 0,36 ммоль).

Соединения согласно указанным в таблице 4 примерам получают аналогичным образом:

Пример 168

Нижеследующее соединение получают по варианту способа а):

а) Получение [1(2-морфолин-4-ил-этилкарбамоил)-2-фенилсульфанилэтил]амида 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты

100 мг (0,24 ммоль) 3-Фенилсульфанил-2-[(2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбонил)амино]пропионовой кислоты растворяют в 10 мл диметилформамида. К полученному раствору при температуре 0°С добавляют 68 мкл (0,39 ммоль) диизопропилэтиламина и 248 мг (0,48 ммоль) бензотриазол-1-илокситрипирролидинфосфонийгексафторфосфата. Затем доводят до комнатной температуры и перемешивают дополнительно в течение 24 часов. Растворитель удаляют в высоком вакууме при комнатной температуре и остаток очищают путем хроматографии среднего давления (CH₂Cl₂:СН₃ОН=8:2). Выход: 73 мг (0,1376 ммоль) (57%).

Соединения согласно указанным в таблице 5 примерам получают аналогичным образом:

Пример 180

Нижеследующее соединение получают по варианту способа а)

а) Получение Z-гомофенилаланингидразида

5 г (16 ммоль) Z-Гомофенилаланина при комнатной температуре растворяют в 100 мл метил-трет-бутилового эфира, смешивают с 3,3 г (16 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и 50 мг диметиламинопиридина и перемешивают в течение двух часов при комнатной температуре. Затем реакционную смесь фильтруют через складчатый фильтр и фильтрат промывают с помощью 1М раствора гидросульфата калия, насыщенного раствора гидрокарбоната натрия и воды. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, отфильтровывают и концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в 20 мл безводного этанола, смешивают с 0,78 мл (16 ммоль) гидразингидрата и перемешивают в течение двух часов при комнатной температуре. За протеканием реакции следят с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ), и по окончании реакции смесь концентрируют при пониженном давлении. Остаток перекристаллизуют из смеси этилацетата с н-гептаном в соотношении 1:1 и получают Z-гомофенилаланингидразид, который, таким образом, подвергают дальнейшему превращению.

b) Получение бензилового эфира [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты

0,66 г Z-Гомофенилаланингидразида при комнатной температуре суспендируют в 10 мл воды, смешивают с 200 мг гидрокарбоната калия и затем добавляют по каплям 0,4 мл 5М раствора бромциана в ацетонитриле. Смесь перемешивают в течение 3 часов при комнатной температуре и затем многократно экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом магния, отфильтровывают и концентрируют при пониженном давлении. Остаток перемешивают с метил-трет-бутиловым эфиром, отфильтровывают под вакуумом и высушивают при пониженном давлении. Таким образом полученный бензиловый эфир [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты без дальнейшей очистки используют в следующей стадии.

c) Получение 5-(1-амино-3-фенилпропил)-[1,3,4]оксадиазол-2-иламина

0,33 г Бензилового эфира [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты при комнатной температуре растворяют в 50 мл безводного метанола, в атмосфере аргона смешивают с катализатором гидрирования (10%-ный палладий-на-угле) и гидрируют в течение трех часов при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют через целит, фильтрат концентрируют при пониженном давлении и остаток высушивают в высоком вакууме. Получают 5-(1-амино-3-фенилпропил)[1,3,4] оксадиазол-2-иламин, который без дальнейшей очистки используют в следующей стадии.

d) Получение [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил] амида 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты

0,18 г 5-(1-Амино-3-фенилпропил)-[1,3,4]оксадиазол-2-иламина при комнатной температуре растворяют в 10 мл безводного диметилформамида, смешивают с 200 мл 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, 270 мг TOTU и 0,12 мл диизопропиламина и перемешивают в течение 4 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют, остаток обрабатывают этилацетатом и промывают последовательно водой, насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, водой и насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, отфильтровывают и концентрируют. Остаток перемешивают с метил-трет-бутиловым эфиром, отфильтровывают и высушивают в высоком вакууме. Получают [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]амид 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, который плавится при температуре 160°С при разложении.

Пример 181

Нижеследующее соединение получают по варианту способа а):

a) Z-Гомофенилаланингидразид получают как описывается в примере 180.

b) Получение бензилового эфира (1-[1,3,4]оксадиазол-2-ил-3-фенилпропил)карбаминовой кислоты

1 г Z-Гомофенилаланингидразида при комнатной температуре суспендируют в 8 мл этилового эфира ортомуравьиной кислоты и кипятят с обратным холодильником в течение 4 часов. Охлажденную реакционную смесь смешивают с метил-трет-бутиловым эфиром, осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографированию на силикагеле с помощью смеси этилацетата с н-гептаном в соотношении 1:1 и получают бензиловый эфир (1-[1,3,4]оксадиазол-2-ил-3-фенилпропил)карбаминовой кислоты, который используют на следующей стадии.

c) Получение 1-[1,3,4]оксадиазол-2-ил-3-фенилпропиламина осуществляют аналогично получению 5-(1-амино-3-фенилпропил)-[1,3,4]оксадиазол-2-иламина, как описывается в примере 180.

d) Получение (1[1,3,4]оксадиазол-2-ил-3-фенилпропил)амида 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты

220 мг 1-[1,3,4]-Оксадиазол-2-ил-3-фенилпропиламина при комнатной температуре растворяют в 10 мл безводного диметилформамида, смешивают с 260 мг 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, 350 мг TOTU и 0,15 мл диизопропиламина и перемешивают в течение 4 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют, остаток обрабатывают этилацетатом и промывают последовательно водой, насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, водой и насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют. Остаток подвергают хроматографированию на силикагеле с помощью смеси дихлорметана с метанолом в соотношении 8:1 и получают (1-[1,3,4]оксадиазол-2-ил-З-фенилпропил)амид 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, который плавится при температуре 103°С при разложении.

Пример 182

Нижеследующее соединение получают по варианту способа а):

a) Получение L-N-бензилоксикарбонил-4-([1,3,4]оксадиазол-2-ил)-2-аминобутановой кислоты

1 г γ-Гидразида Z-глутаминовой кислоты вместе с 30 мг п-толуолсульфокислоты суспендируют в 20 мл метилового эфира ортомуравьиной кислоты и перемешивают при комнатной температуре. Суспензия осветляется в течение 30 минут, образовавшийся благодаря этому раствор фильтруют и разбавляют с помощью 100 мл воды. После добавления 20 мл 2 н. соляной кислоты экстрагируют 5 раз этилацетатом и затем объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия. После фильтрации раствор концентрируют при пониженном давлении и получают вязкую непрозрачную массу.

b) Получение морфолида L-N-бензилоксикарбонил-4-([1,3,4]окса-диазол-2-ил)-2-аминобутановой кислоты

300 мг L-М-бензилоксикарбонил-4( [1, 3, 4 ] оксадиазол-2-ил) -2-аминобутановой кислоты и 200 мг N-этил-N'-(3-диметиламино-пропил)карбодиимидгидрохлорида растворяют в 20 мл дихлорметана и затем смешивают с 2 мл морфолина. После перемешивания в течение двух дней при комнатной температуре раствор встряхивают 3 раза с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, 3 раза с водным раствором лимонной кислоты и один раз с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и после фильтрации концентрируют при пониженном давлении. Получают желтоватый непрозрачный остаток.

c) Получение морфолида L-4-([1,3,4]оксадиазол-2-ил)-2-аминобутановой кислоты

70 мг Морфолида L-N-бензилоксикарбонил-4-([1,3,4]оксадиазол-2-ил)-2-аминобутановой кислоты растворяют в 20 мл метанола и смешивают с вносимым один раз на кончике шпателя 5%-ным палладием-на-угле и суспензию перемешивают в атмосфере водорода. Спустя три часа катализатор отфильтровывают на целите и фильтрат после фильтрации через 0,45 мкм-фильтр концентрируют при пониженном давлении.

d) Получение [1-(морфолин-4-карбонил)-3-[1,3,4]оксадиазол-2-илпропил]амида 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты

43 мг 2-Пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбонозой кислоты, 75 мг HATU и 51 мг диизопропилэтиламина растворяют в 1 мл N,N-диметилформамида и после перемешивания в течение 10 минут смешивают с 40 мг морфолида L-4-([1,3,4]оксадиазол-2-ил)-2-аминобутановой кислоты в 0,4 мл N,N-диметилформамида. После перемешивания в течение 7 часов при комнатной температуре добавляют 200 мг аминометилполистирола (1,37 ммоль/г) и 20 мл N,N-диметилформамида. Спустя 1 час отфильтровывают и отгоняют N,N-диметилформамид при пониженном давлении. Остаток настаивают с холодным ацетонитрилом. Нерастворимый остаток отбрасывают и ацетонитрильный раствор подвергают градиентной фильтрации через RP18-силикагель с помощью смесей воды с ацетонитрилом. Выделяют желтоватое стекловидное твердое вещество.

Пример 183

Гидроацетат 3-фенокси-2-[(2-(пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбонил)амино]пропионовой кислоты

а) 2-Пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновая кислота (называемая в дальнейшем как соединение 1)

15,2 г (0,1 моль) 3,4-Диаминобензойной кислоты суспендируют в 1 л нитробензола и смешивают с 11,2 г (0,104 моль) пиридин-4-альдегида. Затем смесь при интенсивном перемешивании нагревают в течение 8 часов при температуре в интервале от 145°С до 155°С. После охлаждения раствора выпавший в осадок продукт отфильтровывают под вакуумом и тщательно промывают этилацетатом и дихлорметаном. Для очистки сырой продукт в смеси из 300 мл метанола, 100 мл дихлорметана и 10 мл диметилформамида нагревают до кипения. После охлаждения нерастворившийся продукт отфильтровывают и промывают дихлорметаном. Полученное вещество обрабатывают с помощью примерно 200 мл диметилсульфоксида, затем смесь нагревают вплоть до образующегося гомогенного раствора, охлаждают до температуры примерно 50°С и смешивают с 200 мл метанола; продукт выкристаллизовывается спустя примерно 30 минут при комнатной температуре. Осадок отфильтровывают и тщательно промывают метанолом. Выход: 19,4 г.

b) Гидрохлорид (S)-2-амино-3-феноксипропионовой кислоты (М.М. 217,6)

2,8 г Trt-Ser-OMe (Bachem), 0,75 г фенола и 2,25 г трифенилфосфина совместно растворяют в 60 мл абсолютного тетрагидрофурана и при температуре 0°С в течение 30 минут по каплям смешивают с 1,49 г диэтилового эфира азодикарбоновой кислоты. Реакционную смесь дополнительно перемешивают в течение 30 минут при температуре 0°С, нагревают до комнатной температуры (в течение примерно 1 часа). С целью обработки удаляют растворитель при пониженном давлении и сырой продукт очищают путем хроматографии на силикагеле (гептан:этилацетат=1,5:1). Таким образом полученный метиловый эфир (S)-2-тритиламино-3-феноксипропионовой кислоты медленно кристаллизуется в виде длинных игл, и для отщепления защитных групп его кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа в 5М НС1. Реакционный раствор выпаривают досуха при пониженном давлении путем многократного совместного выпаривания с толуолом и остаток перекристаллизуют из небольшого количества трет-бутанола.

Стадия с)

239 мг 2-Пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты из стадии а) суспендируют в 10 мл диметилформамида и смешивают последовательно с 328 мг TOTU и 0,17 мл этилдиизопропиламина. Перемешивают в течение 45 минут при комнатной температуре и к образовавшемуся прозрачному раствору добавляют 217,6 мг гидрохлорида (S)-2-амино-3-феноксипропионовой кислоты, полученного как описывается в стадии b), а также 0,34 мл этилдиизопропиламина. После перемешивания в течение 4 часов концентрируют при пониженном давлении и выделяют целевое соединение путем флэш-хроматографии на силикагеле (дихлорметан:метанол:уксусная кислота:вода=70:10:1:1). Полученное, указанное в заголовке соединение имеет молекулярную массу, равную 402,41; молярную массу, равную 402; суммарная формула соединения: C₂₂H₁₈N₄O₄

Пример 184

Гидроацетат 3-фениламино-2-[(2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбонил)амино]пропионовой кислоты

а) L-2-Амино-3-фениламинопропионовая кислота

2,74 г Трифенилфосфина растворяют при нагревании в 30 мл ацетонитрила и охлаждают при исключении влаги до температуры в интервале от -35°С до -45°С (при этом осаждается высокодисперсный фосфин) и после этого при этой температуре в течение 40 минут добавляют по каплям 1,82 мл диэтилового эфира азодикарбоновой кислоты. Перемешивают дополнительно в течение 15 минут при температуре -35°С. К этой смеси добавляют по каплям раствор 2,5 г N-бензилоксикарбонил-L-серина в 5 мл ацетонитрила и 2 мл тетрагидрофурана, при этом температура не должна превышать -35°С. Затем оставляют дополнительно реагировать в течение 1 часа при температуре -35°С и нагревают до комнатной температуры. Из реакционного раствора удаляют растворитель при пониженном давлении и сырой продукт тотчас очищают путем хроматографии среднего давления на силикагеле (дихлорметан/ацетонитрил=20:1). После удаления растворителя получают 1,4 г очищенного N-бензилокси-карбонил-L-серин-β-лактона (см. также Org. Synth., 1991 (70), с. 1 и последующие) в виде тонких игл. 1,2 г Лактона растворяют в 10 мл ацетонитрила и вместе с 0,51 г анилина кипятят с обратным холодильником в течение двух часов. После удаления растворителя продукт выделяют путем хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол/уксусная кислота=100:5:1). Получают 1,1 г (68%) L-2-бензил-оксикарбониламино-3-фениламинопропионовой кислоты.

Для отщепления защитной группы Z-защищенное производное растворяют в метаноле, в атмосфере инертного газа добавляют 80 мг катализатора (10%-ный палладий-на-угле) и пропускают водород вплоть до полного отщепления Z-защитной группы. После отфильтровывания катализатора и выпаривания фильтрата получают 0,58 г (92%) L-2-амино-3-фениламинопропионовой кислоты в виде желтоватых мягких иглообразных образований.

Стадия b)

239 мг 2-Пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, полученной как описывается в примере 183, суспендируют в 10 мл диметилформамида и смешивают последовательно с 328 мг TOTU и 0,17 мл этилдиизопропиламина. Перемешивают в течение 45 минут при комнатной температуре и к образовавшемуся прозрачному раствору добавляют 180,2 мг (S)-2-амино-3-фениламинопропионовой кислоты, полученной согласно а), а также 0,34 мл этилдиизопропиламина. После перемешивания в течение 4 часов концентрируют при пониженном давлении и выделяют целевое соединение путем флэш-хроматографии на силикагеле (дихлорметан:метанол:уксусная кислота:вода=70:10:1:1). Полученное, указанное в заголовке соединение имеет молекулярную массу, равную 401,43; суммарная формула соединения: C₂₂H₁₉N₅O₃

Пример 185

239,2 мг (1 ммоль) Соединения 1, полученного как описывается в примере 183, примерно в 8 мл диметилформамида последовательно смешивают с 182,7 мг (1 ммоль) H-Leu-OMe.HC1, 328 мг (1 ммоль) TOTU и 0,34 мл (2 ммоль) этилдиизопропиламина. После выдерживания в течение 6 часов при комнатной температуре растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток обрабатывают этилацетатом и промывают по 3 раза водой и насыщенным раствором NaCl. Органическую фазу сушат и выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток очищают путем флэш-хроматографии на силикагеле (дихлор-метан/метанол=15:1). Выход: примерно 200 мг

Пример 186

239,2 мг (1 ммоль) Соединения 1, полученного как описывается в примере 183, примерно в 8 мл диметилформамида последовательно смешивают со 166,6 мг (1 ммоль) H-Leu-NH2·HCl, 328 мг (1 ммоль) TOTU и 0,34 мл (2 ммоль) этилдиизопропиламина. После выдерживания в течение 6 часов при комнатной температуре растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток обрабатывают этилацетатом и промывают 1 раз водой. Водную фазу затем насыщают хлоридом натрия и экстрагируют 2 раза смесью этилацетата с тетрагидрофураном в соотношении 1:1. Объединенные органические фазы промывают 1 раз насыщенным раствором NaCl, сушат и выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток осаждают с помощью дихлорметана и отфильтровывают. Для очистки сырой продукт подвергают кипячению со смесью дихлорметана и этилацетата в соотношении 1:1, отфильтровывают и тщательно промывают смесью дихлорметана с диэтиловым эфиром. Выход: примерно 200 мг.

Пример 187

239,2 мг (1 ммоль) Соединения 1, полученного как описывается в примере 183, примерно в 8 мл диметилформамида последовательно смешивают со 152,6 мг (1 ммоль) H-Val-NH₂·HCl, 328 мг (1 ммоль) TOTU и 0,34 мл (2 ммоль) этилдиизопропиламина. После выдерживания в течение 6 часов при комнатной температуре растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток обрабатывают этилацетатом и промывают 1 раз водой. Водную фазу затем насыщают хлоридом натрия и экстрагируют 2 раза смесью этилацетата с тетрагидрофураном в соотношении 1:1. Объединенные органические фазы промывают 1 раз насыщенным раствором NaCl, сушат и выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток осаждают с помощью дихлорметана и отфильтровывают. Для очистки сырой продукт подвергают кипячению со смесью дихлорметана и этилацетата в соотношении 1:1, отфильтровывают и тщательно промывают смесью дихлорметана с диэтиловым эфиром. Выход: примерно 200 мг.

Пример 188

239,2 мг (1 ммоль) Соединения 1, полученного как описывается в примере 183, примерно в 8 мл диметилформамида последовательно смешивают с 247,7 мг (1 ммоль) H-Dopa-OMe·HCl, 328 мг (1 ммоль) TOTU и 0,34 мл (2 ммоль) этилдиизопропиламина. После выдерживания в течение 6 часов при комнатной температуре растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток обрабатывают этилацетатом и промывают по 3 раза водой и насыщенным раствором NaCl. Органическую фазу сушат и выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток осаждают с помощью дихлорметана и отфильтровывают. Для очистки сырой продукт подвергают кипячению со смесью дихлорметана и этилацетата в соотношении 1:1, отфильтровывают и тщательно промывают смесью дихлорметана с диэтиловым эфиром. Выход: примерно 200 мг.

Пример 189

Нижеследующее соединение получают по варианту способа с):

2,0 г Смолы полистирол-АМ RAM, 160-200 микрон (0,64 ммоль/г; Rapp Polymere) помещают в пластмассовый шприц, оставляют набухать в течение 20 минут в диметилформамиде и затем обрабатывают раствором диметилформамид/пиперидин (1:1) в течение 20 минут. После промывки с помощью диметилформамида, дихлорметана и еще раз диметилформамида смолу используют на следующей стадии синтеза.

Стадия а)

К раствору 0,71 г (3,84 ммоль) Fmoc-гомоPheOH и 0,59 г (3,84 ммоль) HOBt-гидрата в диметилформамиде добавляют 0,59 мл (3,84 ммоль) DIC ((диметиламино)изопропилхлоридгидрохлорид).

Образовавшийся раствор вводят в вышеуказанный шприц и смесь встряхивают в течение 16 часов при комнатной температуре. Смолу промывают 10 раз по 15 мл диметилформамидом, 4 раза по 15 мл дихлорметаном и 2 раза по 15 мл диметилформамидом и затем хранят при температуре 4°С. Для контроля за протеканием реакции на нескольких шариках смолы осуществляют тест КАЙЗЕРА.

Стадия b)

Из смолы удаляют защитные группы, как описано выше, и ее промывают. К раствору 0,71 г (3,84 ммоль) 4-фтор-3-нитробензойной кислоты и 0,59 г (3,84 ммоль) HOBt-гидрата примерно в 15 мл диметилформамида добавляют 0,59 мл (3,84 ммоль) DIC. Образовавшийся раствор вводят в шприц с подготовленной смолой и смесь встряхивают в течение 16 часов при комнатной температуре. Смолу промывают 10 раз по 15 мл диметилформамидом и хранят при температуре 4°С. Для контроля за протеканием реакции на нескольких шариках смолы осуществляют тест КАЙЗЕРА.

Стадия с)

Раствор 1,4 мл (12,8 ммоль) 4-(аминометил)пиридина в 10 мл диметилформамида добавляют к подготовленной смоле и смесь встряхивают в течение двух дней при комнатной температуре. Смолу промывают 8 раз по 15 мл диметилформамидом, 4 раза по 15 мл дихлорметаном и 2 раза по 15 мл диметилформамидом. Примечание: позднее найдено, что простое нагревание включающей смолу смеси в диметилацетамиде (вместо диметилформамида) в течение 16 часов приводит к желательному гидроксибенз-имидазолу; таким образом, синтез может ускоряться.

Стадия d)

Раствор смолы в диметилацетамиде помещают в закрывающийся стеклянный реактор и реакционную смесь нагревают в течение 16 часов при температуре 125°С слегка при покачивании. Прошедшую циклизацию можно подтверждать с помощью газовой хроматографии/масс-спектрометрии (после отщепления аликвоты вещества от смолы). После промывки 5 раз по 15 мл диметилацетамидом таким образом полученную смолу используют в стадии синтеза е).

Стадия е)

К раствору 0,5 г смолы со стадии d) в 5,0 мл диметилацетамида добавляют 0,6 мл трибутилфосфина и смесь выдерживают, слегка перемешивая, в течение 6 часов при температуре 150°С. Смолу затем промывают 20 раз по 10 мл диметилформамидом, 10 раз по 10 мл метанолом и 10 раз по 10 мл дихлорметаном.

Стадия f): Отщепление и очистка

Полученную на стадии е) смолу в течение 3 часов при комнатной температуре обрабатывают с помощью смеси трифторуксусная кислота/вода (95:5). Смесь трифторуксусной кислоты и воды удаляют при пониженном давлении и получают стекловидное твердое вещество коричневого цвета в виде сырого продукта. Сырой продукт хроматографируют на силикагеле (флэш-хроматография; растворитель: дихлорметан/2,0 М NH₃ в метаноле в соотношении 95:5; затем дихлорметан/2,0 М NH₃ в метаноле в соотношении 92:8). Желательные фракции собирают и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт получают в виде твердого вещества белого цвета.

Масс-спектр (ионизация электронным распылением; М+Н⁴=400)

¹Н-ЯМР-спектр соответствует вышеуказанной структурной формуле,

Пример 190

Нижеследующее соединение получают по варианту способа с)

А) Синтез 3(R/S)-винил-2(S)-азидо-3-фенилпропионовой кислоты

a) К раствору 0,129 моль этилового эфира 3-винил-4-фенилбутановой кислоты в водном тетрагидрофуране (120 мл/20 мл Н₂O) добавляют 21 г (645 ммоль) гидроксида лития в виде моногидрата. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи и затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток распределяют между этилацетатом и водным 0,1 М раствором HCl, фазы разделяют и водную фазу промывают 2 раза этилацетатом. Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении. Получают 15,6 г (выход 62%) кислоты, которую, таким образом, используют в следующей реакции.

b) К охлажденному до температуры -78°С раствору 1,74 г (9,16 ммоль) вышеуказанной кислоты в 10 мл безводного тетрагидрофурана добавляют 1,27 мл триэтиламина и спустя 15 минут 1,18 мл пивалоилхлорида. Смесь перемешивают в течение 1 часа при температуре 0°С и охлаждают до температуры -78°С. В отдельной колбе к охлажденному до температуры -78°С раствору 1,64 г S-фенилоксазолидинона в 36 мл тетрагидрофурана медленно добавляют 5,7 мл 1,6 М раствора н-бутиллития в гексане. Раствор перемешивают в течение 1 часа при температуре -78°С, нагревают до 0°С и через канюлю добавляют по каплям к вышеполученному раствору. По окончании добавления раствор перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Добавляют 20 мл насыщенного раствора NH₄Cl и объем раствора уменьшают до 1/3 при пониженном давлении. Водный раствор экстрагируют 3 раза дихлорметаном, объединенные органические фазы промывают водным раствором гидроксида натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и выпаривают. Остаток очищают путем флэш-хроматографии (силикагель; 5-20% этилацетат/гексан). Получают 2,06 г (выход 67 %) имида в виде смеси обоих диастереомеров.

с) К охлажденному до температуры -78°С раствору 1,88 г (5,61 ммоль) имида в 15 мл безводного тетрагидрофурана добавляют по каплям 14,6 мл 0,5 М раствора в толуоле калиевой соли 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазана. Спустя 40 минут добавляют охлажденный (-78°С) раствор 2,51 г триметилсилилазида в тетрагидрофуране. Спустя следующие 35 минут добавляют 1,47 мл уксусной кислоты и раствор перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь распределяют между дихлорметаном и насыщенным раствором хлорида натрия, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и выпаривают. Остаток подвергают флэш-хроматографии на силикагеле (элюенты: а) дихлорметан/метанол/водный раствор аммиака = 95:5:1; b) дихлорметан; исходное соотношение а:b=1:10, вплоть до чистого дихлорметана). Получают 2,5 г (выход 95%) азидосоединения.

d) К охлажденному (0°С) раствору 2,5 г вышеуказанного азидосоединения в 20 мл тетрагидрофурана, 4 мл воды и 558 мг моногидрата гидроксида лития добавляют 3 мл пероксида водорода (30%). Смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре и затем добавляют 19 мл 10%-ного раствора сульфата натрия. Объем раствора уменьшают при пониженном давлении до 1/10 первоначального объема, полученный остаток экстрагируют 3 раза этилацетатом, объединенные органические фазы сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток очищают на силикагеле (флэш-хроматография; элюенты: 1-5% метанола в 1%-ном водном растворе аммиака/99% дихлорметан). Получают 912 мг желательной кислоты (выход: 74%).

В) Синтез 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбонил-3-Р,S-бензил-3-пролинамида

0,4 г Смолы полистирол-смола Knorr (0,61 ммоль/г) помещают в пластмассовый шприц, оставляют набухать в течение 20 минут в диметилформамиде и затем обрабатывают раствором диметилформамид/пиперидин (1:1) в течение 20 минут. После промывки с помощью диметилформамида, дихлорметана и еще раз диметилформамида смолу используют в следующей стадии синтеза.

Стадия а)

К вышеуказанной смоле добавляют раствор 0,28 ммоль 3(R/S)-винил-2(S)-азидо-3-фенилпропионовой кислоты (см. также стадии а-d)), 0,28 ммоль РуВОР и 0,32 ммоль DIPEA. Полученную смесь встряхивают в течение 16 часов при комнатной температуре. Смолу промывают 3 раза по 15 мл метанолом и 4 раза по 15 мл дихлорметаном и высушивают при пониженном давлении. Для контроля за протеканием реакции на нескольких шариках смолы осуществляют тест КАЙЗЕРА.

Стадия b)

В атмосфере инертного газа 23 ммоль циклогексена добавляют к 2 М раствору комплекса дициклогексилборан/диметилсульфид (11,6 ммоль) в безводном диэтиловом эфире. Спустя один час образуется твердое вещество белого цвета. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют туда вышеуказанную смолу и 10 мл дихлорметана. Гетерогенную смесь слегка перемешивают в течение 2,5 часов вплоть до прекращения выделения газа. Смолу промывают метанолом и высушивают при пониженном давлении. Затем в течение 1 часа ее перемешивают со смесью в соотношении 50:50 (объем/объем) из этаноламина и диметилформамида и после этого промывают по 3 раза метанолом и дихлорметаном, после чего высушивают.

Стадия с)

К раствору 0,69 ммоль 4-фтор-3-нитробензойной кислоты и 0,69 ммоль HOAt примерно в 5 мл диметилформамида добавляют 0,69 ммоль DIC. Этот раствор вносят в шприц с подготовленной смолой и смесь встряхивают в течение 16 часов при комнатной температуре. Смолу промывают 10 раз по 15 мл диметилформамидом и высушивают в вакууме. Для контроля за протеканием реакции на нескольких шариках смолы осуществляют тест КАЙЗЕРА.

Стадия d)

Раствор 4-(аминометил)пиридина (4,6 ммоль) в 4 мл диметилформамида добавляют к подготовленной смоле и смесь встряхивают в течение 32 дней при комнатной температуре. Смолу промывают 3 раза по 15 мл метанолом и 3 раза по 15 мл дихлорметаном и высушивают.

Стадия е)

Раствор смолы в диметилацетамиде помещают в закрывающийся стеклянный реактор и реакционную смесь нагревают в течение 16 часов при температуре 125°С слегка при покачивании. Прошедшую циклизацию можно подтверждать с помощью газовой хроматографии/масс-спектрометрии (после отщепления аликвоты вещества от смолы). Смолу промывают 3 раза по 15 мл метанолом и 3 раза по 15 мл дихлорметаном и высушивают.

Стадия f)

К раствору 0,021 ммоль смолы со стадии е) в 3,0 мл диметилацетамида добавляют 0,5 мл трибутилфосфина и смесь выдерживают, слегка перемешивая, в течение 5 часов при температуре 125°С. Смолу затем промывают 2 раза по 10 мл диметилформамидом, 2 раза по 10 мл метанолом и 3 раза по 10 мл дихлорметаном и высушивают при пониженном давлении.

Стадия g): Отщепление и очистка

Полученную на стадии f) смолу в течение 1 часа при комнатной температуре обрабатывают с помощью смеси трифторуксусная кислота/вода (97:3). Смесь трифторуксусной кислоты и воды удаляют при пониженном давлении и получают стекловидное твердое вещество коричневого цвета в виде сырого продукта. Сырой продукт хроматографируют на силикагеле (флэш-хроматография; растворитель: дихлорметан/2,0 NH₃ в метаноле в соотношении 95:5; затем дихлорметан/2,0 NH₃ в метаноле в соотношении 92:8). Желательные фракции собирают и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт получают в виде твердого вещества белого цвета.

Масс-спектр (ионизация электронным распылением; М+Н⁴=426)¹Н-ЯМР-спектр соответствует вышеуказанной структурной формуле.

Пример 191

Нижеследующее соединение получают по варианту способа с):

1,5 г Полистирольной смолы Knorr (0,64 ммоль/г) помещают в пластмассовый шприц, оставляют набухать в течение 20 минут в диметилформамиде и затем обрабатывают раствором диметилформамид/пиперидин (1:1) в течение 20 минут. После промывки с помощью диметилформамида, дихлорметана и еще раз диметилформамида смолу используют на следующей стадии синтеза.

Стадия а)

К смоле добавляют раствор 1,5 ммоль Fmoc-3R,S-фенил-3-пролина, 1,5 ммоль РуВОР и 2,1 ммоль DIPEA в дихлорметане. Полученную смесь встряхивают в течение 16 часов при комнатной температуре. Смолу промывают 4 раза по 15 мл дихлорметаном, 2 раза по 15 мл метанолом и дихлорметаном и высушивают при пониженном давлении. Для контроля за протеканием реакции на нескольких шариках смолы осуществляют тест КАЙЗЕРА.

Стадия b)

Смолу, как описывается в примере 190 согласно способу В, далее вводят во взаимодействие для получения желательного соединения.

Масс-спектр (ионизация электронным распылением; М+Н⁴=412) ¹Н-ЯМР-спектр соответствует вышеуказанной структурной формуле.

Пример 192

Нижеследующее соединение получают по варианту способа а):

a) Получение Z-гомофенилаланингидразида

Z-Гомофенилаланингидразид получают как описывается в примере 180а.

b) Получение бензилового эфира [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты

Бензиловый эфир [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты получают как описывается в примере 180b.

с) Получение бензилового эфира [1-(5-бензолсульфониламино-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты

0,35 г Соединения согласно примеру 192b при комнатной температуре растворяют в 5 мл пиридина, смешивают с 0,13 мл бензолсульфонилхлорида и перемешивают в течение 4 часов при температуре 80°С. Добавляют еще раз 0,13 мл бензолсульфонилхлорида и перемешивают дальнейшие 2 часа при температуре 80°С. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и остаток обрабатывают этилацетатом, этилацетатную фазу промывают два раза водой и три раза насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получают бенэиловый эфир[1-(5-бензолсульфониламино-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты, который без дальнейшей очистки вводят во взаимодействие дальше.

d) Получение N[5-(1-амино-3-фенилпропил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]бензолсульфонамида

0,18 г Соединения из примера 192с при комнатной температуре растворяют в 30 мл безводного метанола, в атмосфере аргона смешивают с катализатором Pd/C и гидрируют в течение 4 часов при комнатной температуре. После фильтрации, промывки остатка метанолом и концентрирования фильтрата получают N-[5-(1-амино-3-фенилпропил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-бензолсульфонамид, который используют на следующей стадии.

е) Получение [1-(5-бензолсульфониламино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]амида 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты

70 мг Соединения согласно примеру 192d при комнатной температуре растворяют в 5 мл безводного диметилформамида, смешивают с 30 мкл диизопропиламина, 48 мг 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты и 66 мг TOTU. После перемешивания в течение 4 часов при комнатной температуре реакция заканчивается и реакционную смесь концентрируют. Остаток обрабатывают этилацетатом и водой. Растворитель декантируют; маслянистый остаток обрабатывают теплым ацетоном, охлаждают и кристаллический продукт собирают на фильтре, промывают ацетоном и высушивают. Получают [1-(5-бензолсульфониламино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]-амид 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, который плавится начиная с температуры 220°С при разложении.

Пример 193

Нижеследующее соединение получают по варианту способа а):

а) Получение Z-гомофенилаланингидразида

Z-Гомофенилаланилгидразид получают как описывается в примере 180а.

b) Получение бензилового эфира [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты

Бензиловый эфир [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты получают как описывается в примере 180b.

c) Получение бензилового эфира {1-[5-(3-метилуреидо)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-3-фенилпропил}карбаминовой кислоты

350 мг Бензилового эфира [1-(5-амино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]карбаминовой кислоты растворяют в 5 мл безводного диметилсульфоксида, смешивают со 140 мг карбоната калия и 140 мг метилизоцианата и перемешивают в течение 16 часов при температуре 80°С. Реакционную смесь охлаждают, смешивают с этилацетатом, промывают два раза водой и один раз насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получают бензиловый эфир {1-[5-(3-метилуреидо)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-3-фенилпропил}карбаминовой кислоты, который без дальнейшей очистки используют на следующей стадии (гидрогенолиз).

d) Получение 1-[5-(1-амино-3-фенилпропил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-3-метилмочевины

120 мг Полученного в стадии с) соединения при комнатной температуре растворяют в 20 мл безводного метанола, в атмосфере аргона смешивают с катализатором Pd/C и гидрируют в течение 4 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют, остаток промывают метанолом и фильтрат концентрируют в вакууме. 1[5-(1-Амино-3-фенилпропил)-[1,3,4] -оксадиазол-2-ил]-3-метилмочевину без дальнейшей очистки используют на следующей стадии.

е) Получение {1-[5-(3-метилуреидо)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-3-фенил-пропил}амида 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты

40 мг Предыдущего соединения при комнатной температуре растворяют в 3 мл безводного диметилформамида и смешивают последовательно с 33 мг 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, 20 мкл диизопропиламина и 40 мг TOTU и перемешивают в течение 4 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, остаток обрабатывают смесью этилацетат/тетрагидрофуран 1/1, промывают водой, насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получают {1-[5-(3-метилуреидо) -[1,3,4]-оксадиазол-2-ил]-3-фенилпропил}амид 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, который согласно масс-спектру имеет m/z=497,3(=МН⁺).

Пример 194

Нижеследующее соединение получают по варианту способа а):

[1-(5-Ацетиламино[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-3-фенилпропил]-амид 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты получают в принципе аналогичным образом, однако, с тем различием, что вместо метилизоцианата вводят во взаимодействие с ацетилхлоридом. Соединение имеет температуру плавления 183-186°С при разложении.

Пример 195

Нижеследующее соединение получают по варианту способа а):

а) Получение бензилового эфира (1-циано-3-фенилпропил)-карбаминовой кислоты

2,78 г Бензилового эфира (1-карбамоил-3-фенилпропил)-карбаминовой кислоты, полученного из L-гомофенилаланинамидгидрохлорида и N-Cbz-сукцинимида, растворяют в 30 мл безводного пиридина и смешивают с 6 мл ацетангидрида. Реакционную смесь перемешивают в течение 24 часов при температуре 75°С. Охлажденный раствор концентрируют в вакууме, смешивают со 100 мл этилацетата и затем встряхивают по три раза с 50 мл 5%-ного раствора лимонной кислоты и насыщенного раствора хлорида натрия. Органический экстракт сушат над сульфатом магния, концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле с помощью смеси н-гептан/этилацетат в соотношении 1:1. Получают бензиловый эфир (1-циано-3-фенилпропил)карбаминовой кислоты, который без дальнейшей очистки используют на следующей стадии.

b) Получение бензилового эфира [3-фенил-1-(1Н-тетразол-5-ил)-пропил]карбаминовой кислоты

0,15 г Соединения, полученного в примере 195а, вместе с 0,115 г триметилоловоазида суспендируют в 5 мл безводного толуола и перемешивают в течение 6 часов при кипячении с обратным холодильником. Охлажденную реакционную смесь подкисляют с помощью раствора хлороводорода в диэтиловом эфире и выдерживают в течение ночи в холодильнике. На следующий день смесь концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле с помощью смеси дихлорметан/метанол в соотношении 9:1. Таким образом полученный бензиловый эфир [3-фенил-1-(1Н-тетразол-5-ил)пропил]карбаминовой кислоты без дальнейшей очистки используют на следующей стадии.

c) Получение 3-фенил-1-(1Н-тетразол-5-ил)пропиламина

337 мг Соединения, полученного в примере 195b, растворяют в 2 мл ацетонитрила, смешивают с 0,477 мл триэтилсилана, одной каплей триэтиламина и с количеством на кончике шпателя хлорида палладия-(II) и перемешивают в течение 3 часов при кипячении с обратным холодильником. Охлажденный раствор фильтруют, концентрируют в вакууме и остаток высушивают в высоком вакууме. Таким образом полученный 3-фенил-1-(1Н-тетразол-5-ил)пропиламин вводят во взаимодействие дальше.

d) Получение [З-фенил-1-(1Н-тетразол-5-ил)пропил]амида 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты

0,9 ммоль Соединения, полученного в примере 195с, растворяют в 5 мл безводного диметилформамида и смешивают с 0,9 ммоль 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, 0,365 мл диизопропиламина и 415 мг TOTU, перемешивают в течение 20 часов при комнатной температуре и в течение следующих 4 часов при температуре 50°С. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, остаток обрабатывают этилацетатом, этилацетатную фазу промывают водой, насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Таким образом полученный сырой продукт хроматографируют на силикагеле с помощью смеси дихлорметан/метанол/вода/ледяная уксусная кислота в соотношении 60:10:1:1. Получают [3-фенил-1-(1Н-тетразол-5-ил)-пропил]амид 2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, который начиная с температуры 87°С разлагается и имеет молекулярный пик при m/z=425,2(М⁺).

Пример 196

Трифторацетат 3-фениламиноэтил-2-[(2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбонил)амино]пропионовой кислоты

а) L-2-Амино-3-фениламиноэтилпропионовая кислота

54,8 г (0,209 моль) Трифенилфосфина суспендируют в 600 мл ацетонитрила и при исключении влаги охлаждают до температуры в интервале от -35°С до -45°С. Затем при этой температуре в течение 50 минут добавляют по каплям 36,4 г (0,209 моль) диэтилового эфира азодикарбоновой кислоты. Дополнительно перемешивают в течение 15 минут при температуре -35°С. К этой смеси добавляют по каплям раствор 50 г (0,209 моль) N-бензилоксикарбонил-L-серина в 500 мл ацетонитрила, при этом температура не должна превышать -35°С. После этого оставляют дополнительно реагировать в течение 12 часов при температуре 5°С и нагревают до комнатной температуры. Из реакционного раствора удаляют растворитель при пониженном давлении и сырой продукт очищают путем хроматографии среднего давления на силикагеле (дихлорметан/ацетонитрил=25:1). После удаления растворителя получают 20,8 г (выход 45%) очищенного N-бензилоксикарбонил-L-серин-β-лактона (см. также Org. Synth. 1991 (70), с. 1 и последующие) в виде тонких игл. Суммарная формула: С₁₁Н₁₁NO₄; молекулярная масса=221,2; масс-спектр (М+Н):222,1.

К 7,3 мл (57,36 ммоль) N-этиламина в 250 мл ацетонитрила в атмосфере аргона добавляют 15,5 мл (63,51 ммоль) N,O-бис(триметилсилил)ацетамида и перемешивают в течение 3 часов при температуре 50°С. Затем при температуре 20°С добавляют раствор 10,7 г (48,37 ммоль) вышеполученного лактона в 250 мл ацетонитрила и кипятят с обратным холодильником в течение 17 часов. После удаления растворителя остаток смешивают с насыщенным раствором карбоната натрия, причем значение рН раствора не превышает 9. Водную суспензию промывают небольшим количеством диэтилового эфира и затем с помощью концентрированной соляной кислоты устанавливают значение рН от 6 до 7 и с помощью NaHPO₄ ^--буфера устанавливают значение рН, равное 5. Водный раствор многократно экстрагируют этилацетатом. После выпаривания растворителя получают желательный продукт с выходом 45% (7,4 г). Суммарная формула: C₁₉H₂₂N₂О₄; молекулярная масса=342,4; масс-спектр (М+Н):343,2.

К 75 мл метанола при температуре -10°С добавляют по каплям 6,5 мл (89,1 ммоль) тионилхлорида и перемешивают в течение 30 минут. После этого добавляют раствор 8,6 г (25,12 ммоль) L-2-аминоэтил-3-фениламинопропионовой кислоты в 75 мл метанола, перемешивают в течение 30 минут при температуре -10°С и в течение дальнейших трех часов при комнатной температуре. После выпаривания растворителя остаток обрабатывают этилацетатом и этилацетатную фазу промывают раствором карбоната натрия. После выпаривания растворителя и очистки путем флэш-хроматографии (н-гептан/этилацетат=7:3) получают 4,43 г (выход 50%) метилового эфира L-2-аминоэтил-3-фениламинопропионовой кислоты. Суммарная формула: C₂₀H₂₄N₂O₄; молекулярная масса=356,4; масс-спектр (М+Н):357,3.

Для отщепления защитной группы 4,4 г (12,35 ммоль) Z-защищенного производного растворяют в 500 мл метанола, в атмосфере инертного газа добавляют 100 мг катализатора (10% Pd(OH)₂-C) и пропускают водород вплоть до полного отщепления Z-защитной группы. После отфильтровывания катализатора и выпаривания фильтрата получают 2,8 г (выход количественный) L-2-аминоэтил-3-фениламинопропионовой кислоты. Суммарная формула: C₁₂H₁₈N₂O₂; молекулярная масса=222,3; масс-спектр (М+Н): 223,1.

Стадия b)

2,4 г (10,03 ммоль) 2-Пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, полученной как описывается в примере 183, суспендируют в 350 мл диметилформамида и смешивают последовательно с 4,2 г (12,80 ммоль) TOTU и 2,3 мл (13,52 ммоль) этилдиизопропиламина. Перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре и к образовавшемуся прозрачному раствору добавляют 2,8 г (12,60 ммоль) метилового эфира (S)-2-амино-3-фениламиноэтилпропионовой кислоты, полученного согласно стадии а). После перемешивания в течение двух часов концентрируют при пониженном давлении и выделяют метиловый эфир целевого соединения путем флэш-хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол=9:1). Выход: 4,36 г (98%); суммарная формула: С₂₅Н₂₅N₅О₃; молекулярная масса=443,5; масс-спектр (М+Н):444,3.

4,3 г (9,7 ммоль) Таким образом полученного сложного метилового эфира в 400 мл метанола гидролизуют в течение двух часов при комнатной температуре путем добавления 200 мл 1 М раствора гидроксида натрия. После выпаривания метанола в полученной суспензии с помощью раствора NaH₂PO₄ устанавливают значение рН=5. При этом продукт осаждается из раствора. Очистка с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол=4:1) и препаративной ВЭЖХ (ацетонитрил/0,1% трифторуксусная кислота) дает 2,92 г (выход 70%) трифторацетата 3-фениламиноэтил-2-[(2-пиридин-4-ил-1Н-бензимидазол-5-карбонил)амино]пропионовой кислоты. Суммарная формула: С₂₄Н₂₃N₅О₃; молекулярная масса=429,5; масс-спектр (М+Н):430,3; температура плавления составляет примерно 25°С (при разложении).

Фармакологические примеры

Фильтр-тест в отношении IkB-киназы

Активность IkB-киназы определяли с помощью системы для анализа протеинкиназы "Signa TEST™(Promega; каталог 1998, с. 330; аналогично инструкции "Signa TEST™" в отношении ДНК-зависимой протеинкиназы). Киназу очищали согласно Z.J. Chen(Cell, 84, 853-862 (1996)) из экстрактов клеток HeLa и инкубировали с 20 мкмоль субстрата-пептида (биотин-(СН₂)₆-DRHDSGLDSMKD-CONH₂). Буфер для реакции содержит 50 мМ HEPES, рН 7,5; 10 мМ MgCl₂; 5 мМ дитиотреитола (DTT); 10 мМ β-глицерофосфата, 10 мМ 4-нитрофенилфосфата; 1 мкМ микроцистин-LR и 50 мкМ аденозин-5' -трифосфата (АТФ) (содержащего 1 мКи γ-³³Р-АТФ).

Метод РКА, РКС, СК II

цАМФ (циклический аденозинмонофосфат)-зависимую протеинкиназу (РКА), протеинкиназу С (РКС) и казеинкиназу II (СК II) определяли с помощью тест-набора Upstate Biotechnology согласно инструкции изготовителя при концентрации АТФ 50 мкМ. В отличие, не использовали никаких фосфоцеллюлозных фильтров, а применяли планшеты для мультискрининга (фирма Millipore; фосфоцеллюлоза Ms-PH, кат. MAPHNOB10) с соответствующей системой отсоса. Планшеты или мембраны (IkB-киназа) затем измеряли в сцинтилляционном счетчике Wallac MicroBeta. В каждом случае использовали 100 мкмоль тестируемого вещества.

Каждое вещество тестировали два раза. Из средних значений (фермент с веществами и без веществ) вычитали среднее значение контроля (без фермента) и рассчитывали процент ингибирования. Расчеты ИК₅₀ (ингибирующая на 50% концентрация) осуществляли с помощью пакета программ GraFit 3.0. Результаты представлены в нижеследующей таблице 6.

Примеры 197-224, приведенные в таблице 7, были осуществлены в соответствии с одним из описанных способов а), b) или с).

Claims (45)

1. Замещенные бензимидазолы формулы (I)

и/или их стереоизомерные формы и/или их физиологически приемлемые соли, причем один из заместителей R¹, R², R³ и R⁴ означает остаток формулы (II)

где D означает -С(О)-;

R⁸ означает атом водорода или (C₁-C₄)-алкил;

R⁹ означает:

1. (C₁-С₆)-алкил, где алкил является линейным или разветвленным и незамещен или одно-, двух- или трехкратно независимо друг от друга замещен:

1.1 фенилом, нафтилом, бифенилом, которые незамещены или одно-, двух- или трехкратно замещены (C₁-C₄)-алкилом, (C₁-C₄)-алкоксилом, галогеном, нитрогруппой, аминогруппой, трифторметилом, гидроксилом, цианогруппой, гидроксикарбонилом, феноксигруппой;

1.2 остатком 5-14-членной ароматической системы, которая содержит 1 или 2 гетероатома в качестве членов цикла, которые представляют собой азот, где ароматическая система незамещена или замещена;

1.3 1,3,4-оксадиазол, который незамещен или замещен;

1.4 5-12-членным гетероциклом, который является частично или полностью ненасыщенным и который содержит 1 гетероатом, представляющий собой серу, где гетероцикл незамещен или замещен;

1.5 -O-R¹¹;

1.6 -CN;

1.7 -S(O)_x-R¹¹, где х означает целое число - нуль, 1 или 2;

1.8 -N(R¹¹)₂;

1.9 (С₃-С₆) -циклоалкилом;

1.10 остатком формулы

или 1.11 остатком формулы ≡R¹¹;

где R¹¹ означает

a) атом водорода;

b) (C₁-С₆)-алкил, где алкил незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен:

1. фенилом, где фенил незамещен или замещен;

2. остатком 5-14-членной ароматической системы, которая содержит 1 или 2 гетероатома в качестве членов цикла, которые представляют собой азот;

3. 5-12-членным гетероциклом, который является частично или полностью ненасыщенным и который содержит 1 или 2 гетероатома, представляющие собой азот и кислород;

4. галогеном;

5. -NH-(C₁-C₆)_n-алкилом, где n означает целое число - нуль, 1 или 2 и алкил незамещен;

6. -О-(C₁-С₆)-алкилом;

с) фенил, нафтил, которые незамещены или замещены;

d) 5-12-членный гетероцикл, который является ненасыщенным и который содержит 1 или 2 гетероатома, представляющие собой азот и кислород, и

е) 5-12-членный гетероцикл, который является ненасыщенным и содержит 2 гетероатома, представляющие собой азот и серу;

и в случае (R¹¹)₂ остатки R¹¹ независимо друг от друга имеют значение от а) до е);

Z означает:

1. остаток 5-14-членной ароматической системы, которая содержит от 1 до 4 гетероатомов в качестве членов цикла, которые представляют собой азот и кислород, где ароматическая система незамещена или замещена;

1.1 гетероцикл, выбранный из группы оксадиазола или оксадиазолона, которые могут быть незамещены или замещены;

2. (C₁-C₆)-алкил, где алкил является линейным или разветвленным и однократно замещен фенилом или группой -ОН, или

3. -C(O)-R¹⁰, где R¹⁰ означает -O-R¹¹, -N(R¹¹)₂ или морфолинил;

или R⁸ и R⁹ вместе с атомом азота и атомом углерода, с которым они соответственно связаны, образуют гетероцикл формулы (IIa)

где D, Z и R¹⁰ имеют указанные в формуле (II) значения;

А означает остаток -СН₂-;

В означает остаток -CH₂-;

Х означает остаток -CH₂-;

Y отсутствует или означает остаток -СН₂-; или

Х и Y вместе образуют фенил;

причем образованная N, А, X, Y, В и атомом углерода циклическая система незамещена или однократно замещена (C₁-C₈)-алкилом, где алкил однократно замещен фенилом, и

соответственно другие заместители R¹, R², R³ и R⁴ независимо друг от друга означают атом водорода;

R⁵ означает атом водорода;

R⁶ означает гетероароматическую циклическую систему с 5-14 членами в цикле, которая содержит 1 или 2 атома азота и является незамещенной или замещенной.

2. Замещенные бензимидазолы формулы (I) по п.1, отличающиеся тем, что один из заместителей R¹, R², R³ и R⁴ означает остаток формулы (II), где

R⁸ означает атом водорода;

R⁹ означает:

1. (C₁-С₆)-алкил, где алкил является линейным или разветвленным и незамещеным или одно- или двукратно замещенным:

1.1 фенилом, нафтилом, бифенилом, которые являются незамещенными или одно-, двух- или трехкратно замещенными (C₁-С₄)-алкилом, (C₁-C₄)-алкокси, галогеном, нитро, амино, трифторметилом, гидрокси, циано, гидроксикарбонилом, феноксигруппой;

1.2 остатком 5-14-членной ароматической системы, содержащей 1 или 2 гетероатома, представляющих азот, в качестве членов цикла, выбранной из группы пиррол, пиррол, одно- или двукратно замещенный - (C₁-C₄)-алкилом, имидазол, пиридин, пиримидин, пиразин, пиразол, индол, индазол, индолин, бензимидазол, хиназолин, хинолин, хиноксалин, изохинолин;

1.3 1,3,4-оксадиазол;

1.4 5-12-членный гетероцикл, который является частично или полностью ненасыщенным и содержит 1 гетероатом, представляющий серу, выбранный из группы тиофен, бензотиофен, которые являются незамещенными или однократно замещенными галогеном;

1.5 -OR¹¹;

1.6 -CN;

1.7 -S(О)_х-(C₁-C₄)-алкил, -S(O)_х-нафтил, -S(О)_х-пиримидинил или -S(O)_х-фенил, которые являются незамещенными или одно- или двукратно замещенными -ОН, (C₁-C₄)-алкилом, CF₃, галогеном, O-(C₁-C₄)-алкилом, -СООН, С(О)-О-(C₁-C₄)-алкилом, -NH₂ или -NH-C(O)-(C₁-C₄)-алкилом, где х означает нуль, 1 или 2;

1.8 -N(R¹¹)-фенил, -NH(R¹¹);

1.9 (С₃-С₆)-циклоалкил, или

1.10 стирольный остаток;

где R¹¹ означает

a) атом водорода;

b) (C₁-C₆)-алкил, где алкил незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен:

1. фенилом;

2. остатком 5-14-членной ароматической системы, которая содержит 1 или 2 гетероатома в качестве членов цикла, которые представляют собой азот, выбранную из группы пиридин, пиримидин, пиррол, пиразол, имидазол, пиразин, индол, индазол, индолин, бензимидазол, хиназолин, хинолин, хиноксалин, изохинолин;

3. 5-12-членным гетероциклом, который является частично или полностью ненасыщенным и который содержит 1 или 2 гетероатома, представляющие собой азот и кислород, выбранный из группы фуран, оксазол, изоксазол;

4. галогеном;

5. -NH-(C₁-C₆)_n-алкилом, где n означает целое число нуль, 1 или 2 и алкил является незамещенным;

6. -О-(C₁-С₆)-алкилом;

c) фенил, нафтил, которые являются незамещенными или однократно замещенными галогеном;

d) 5-12-членный гетероцикл, который является ненасыщенным и который содержит 1 или 2 гетероатома, представляющих собой азот и кислород, выбранный из группы пиридин, пиримидин, фуран, оксазол, изоксазол, пиррол, пиразол, имидазол, пиразин, индол, индазол, индолин, бензимидазол, хиназолин, хинолин, хиноксалин, изохинолин;

e) 5-12-членный гетероцикл, который является ненасыщенным и содержит 2 гетероатома, представляющие собой азот и серу, выбранный из группы тиазол, изотиазол, бензотиазол;

и в случае (R¹¹)₂ остатки R¹¹, независимо друг от друга, имеют значение от а) до е);

Z означает:

1. тетразол, оксадиазолон, 1,3,4-оксадиазол, где 1,3,4-оксадиазол является незамещенным или однократно замещенным группой -NH₂, -NH(C₁-C₄)-алкилом, -N-[(C₁-C₄)-алкил]₂, -NH-C(О)-(C₁-C₄)-алкилом, -NH-C(О)-NH-(C₁-C₄)-алкилом, -NH-C(O)-NH-(С₃-С₇)-циклоалкилом, -NH-C(О)-NH-арилом, -NH-C(О)-NH-фенилом, -NH-SO₂-фенилом, -NH-SO₂-(C₁-C₄)-алкилом, -ОН или -(C₁-C₄)-алкилом,

2. (C₁-С₆)-алкил, где алкил является линейным или разветвленным и незамещенным или одно- или двукратно замещенным фенилом или -ОН;

3. -C(O)-R¹⁰, где R¹⁰ означает -O-R¹³, -ОН, морфолинил, -N(R¹³)₂ или NH₂;

R¹³ независимо друг от друга означает:

a) атом водорода;

b) -(C₁-C₆)-алкил;

c) -(C₁-C₄)-алкил-О-(C₁-C₄)-алкил;

d) -(C₁-С₆)-алкил-N((C₁-C₆)-алкил)₂;

e) галоген или

f) -(С₀-С₄)-алкил, одно- или двукратно замещенный имидазолилом, морфолинилом или фенилом, или

R⁸ и R⁹ вместе с атомом азота и атомом углерода, с которыми они, соответственно, связаны, образуют цикл формулы (IIa) из группы пирролидина или пиперидина, который является незамещенным или однократно замещенным (C₁-C₈)-алкилом, где алкил является однократно замещенным фенилом;

и соответственно другие заместители R¹, R², R³ и R⁴ означают атом водорода;

R⁵ означает атом водорода;

R⁶ означает пиридин или пиримидин, который является незамещенным или однократно замещенным галогеном, -ОН, -(C₁-C₄)-алкилом, -NH₂ или -NH-R¹⁴, -N(R¹⁴)₂, где R¹⁴ означает -(C₁-С₆)-алкил, -(С₃-С₆)-циклоалкил или фенил.

3. Лекарственное средство для ингибирования IkB-киназы, отличающееся тем, что оно содержит эффективное количество по меньшей мере одного соединения формулы (I) по п.1 или 2 вместе с фармацевтически пригодным и физиологически приемлемым носителем, добавкой и/или другими биологически активными и вспомогательными веществами.

4. Способ получения лекарственного средства для ингибирования IkB-киназы, отличающийся тем, что по меньшей мере одно соединение формулы (I) по п.1 или 2 смешивают вместе с фармацевтически пригодным и физиологически приемлемым носителем и в случае необходимости другими пригодными биологически активными веществами, добавками или вспомогательными веществами.