RU2222547C2 - Получение рекомбинантного фактора viii в среде, не содержащей белка - Google Patents

Получение рекомбинантного фактора viii в среде, не содержащей белка Download PDF

Info

Publication number
RU2222547C2
RU2222547C2 RU98107565/13A RU98107565A RU2222547C2 RU 2222547 C2 RU2222547 C2 RU 2222547C2 RU 98107565/13 A RU98107565/13 A RU 98107565/13A RU 98107565 A RU98107565 A RU 98107565A RU 2222547 C2 RU2222547 C2 RU 2222547C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
medium
factor viii
cells
nmol
amount
Prior art date
Application number
RU98107565/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU98107565A (ru
Inventor
Шем-Юен ЧАН (US)
Шем-Юен ЧАН
Кэтлин ХАРРИС (US)
Кэтлин ХАРРИС
Original Assignee
Байер Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Байер Корпорейшн filed Critical Байер Корпорейшн
Publication of RU98107565A publication Critical patent/RU98107565A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2222547C2 publication Critical patent/RU2222547C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/20—Transition metals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/35—Polyols, e.g. glycerin, inositol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
    • C12N2500/95—Protein-free medium and culture conditions

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Рекомбинантный фактор VIII получают из клеток млекопитающих путем культивирования клеток в среде, не содержащей белка, с добавлением полиольных сополимеров, предпочтительно в присутствии микроэлементов, таких как медь. Среда для получения рекомбинантного фактора VIII содержит полигликоль, известный как плюроник F-68, сульфат меди, комплекс сульфата железа с этилендиаминтетрауксусной кислотой и соли микроэлементов, таких как марганец, молибден, кремний, литий и хром. Способ позволяет усилить образование фактора VIII и снизить опасность его инфицирования. 2 с. и 11 з.п. ф-лы, 3 табл.

Description

Изобретение относится к получению рекомбинантного фактора VIII, а именно к получению рекомбинантного фактора VIII в сыворотке или в среде, не содержащей белка.
Гемофилия А является связанным с Х-хромосомой рецессивным наследственным заболеванием, вызванным нарушением или недостаточностью фактора VIII, что приводит к повышенной кровоточивости. Для того чтобы контролировать случаи кровотечения, в лечении больных гемофилией используют фактор VIII. Исторически фактор VIII был выделен из плазмы крови человека. Однако терапия полученным из плазмы фактором VIII была связана с передачей некоторых человеческих вирусов, таких как вирус гепатита и вирус иммунодефицита человека.
С появлением технологии рекомбинантной ДНК была установлена структура человеческого фактора VIII и его гена. Транскриптом гена из 26 экзонов является молекула мРНК протяженностью примерно 9000 оснований, кодирующая белок, состоящий из 2351 аминокислоты. Исследования структуры фактора VIII свидетельствуют о том, что он представляет собой гликопротеин, содержащий значительное количество углеводных остатков.
Кодирующая фактор VIII кДНК была клонирована и стабильно экспрессирована в клетках почки новорожденного хомяка (ВНК-21) и в клетках яичника китайского хомяка (СНО). Для лечения гемофилии А были разработаны промышленные способы получения рекомбинантного фактора VIII. В настоящее время рекомбинантный фактор VIII производится генно-инженерным способом с использованием клеток млекопитающих, тем самым устраняется необходимость использования плазмы и сводится к минимуму вероятность внесения вируса.
Амплификация генов была тем самым методом, который обеспечил эффективное воспроизведение клеточных линий для получения белков терапевтического назначения. Стратегия амплификации состоит в привязке транскрибированного участка, кодирующего целевой белок, к амплифицируемому маркеру, такому как дигидрофолатредуктаза. Затем для внесения векторной ДНК в реципиентные клетки используется техника трансфекции. Отбирают популяции клеток с повышенной резистентностью к выбранному препарату, такому как метотрексат. Получение устойчивого клона достигается путем клонирования предельных разведений.
При получении и очистке лабильных белков, таких как фактор VIII, в качестве стабилизатора добавляется человеческий альбумин. Несмотря на то что при пастеризации альбумин подвергается вирусной инактивации, было бы предпочтительным производить рекомбинантный фактор VIII при полном отсутствии белков крови человека и млекопитающих. Заявитель обнаружил, что это осуществимо при использовании новой культуральной среды. Подробности описаны ниже.
Способ непрерывного получения относительно больших количеств рекомбинантного фактора VIII из клеток млекопитающих в отсутствие любых человеческих или полученных от млекопитающих белков плазмы состоит в культивировании клеток млекопитающего в среде, не содержащей белка, с добавлением полиольного полимера, такого как плюроник F-68. Предпочтительная среда содержит сульфат меди, комплекс этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) с сульфатом железа и соли микроэлементов, таких как марганец, молибден, кремний, литий и хром.
Последние достижения в экспрессионной технологии рекомбинантного белка позволили производить белок в больших количествах в клетках млекопитающих. Клетки-хозяева, пригодные для получения фактора VIII, включают такие клеточные линии, как клетки ВНК, клетки СНО и человеческие эмбриональные клетки почки (НЕК). Особо предпочтительными являются клетки почки новорожденного хомяка, а именно те, которые трансфицированы геном, способным направлять экспрессию фактора VIII, как описано у Wood и др. (1984) (включая производные, такие как клональные варианты и их потомство). Такая клеточная линия была заложена на хранение в Американскую коллекцию типов культур и обозначена вступительным номером АТСС CRL-8544.
Требуемая клеточная линия, несущая ген фактора VIII, обычно адаптируется к росту в виде суспензионных культур в не содержащей белка среде продуцирования с добавлением липопротеина. Базальная среда, выбранная для культивирования клеточной линии, не является существенной для настоящего изобретения и может быть одной из сред, известных специалистам, или комбинацией таких сред, применяемых для культивирования клеток млекопитающих. Такие среды, как модифицированная Дюльбекко среда Игла, среда Хэма F-12, минимальная эссенциальная среда Игла, среда RPMI-1640 и им подобные, являются коммерчески доступными. О добавлении факторов роста, таких как рекомбинантный инсулин, известно специалистам.
По причине лабильности фактора VIII продуктивность подвергшихся генно-инженерной обработке клеток-хозяев в отсутствие белка значительно снижена. При получении рекомбинантных белков обычно используют человеческий сывороточный альбумин в качестве бессывороточной культуральной добавки. Человеческий сывороточный альбумин выполняет многочисленные функции, включая: 1) функцию носителя жирных кислот, холестерина и липофильных витаминов, стероидных гормонов и факторов роста; 2) функцию защитного агента от разрушения клеток; 3) функцию буфера при изменениях значений рН; 4) функцию регулятора осмотического давления. Другая важная роль альбумина, возможно, состоит в том, чтобы, служа субстратом для протеаз, защитить лабильные белки, такие как фактор VIII, от протеолиза.
Примеси, присутствующие в препаратах альбумина, могут также содействовать стабилизирующему эффекту альбумина. В качестве заменителей человеческого сывороточного альбумина при получении рекомбинантного фактора VIII в бессывороточных условиях были идентифицированы такие факторы, как липопротеин (Chan, 1996).
Попытка заявителя создать среду для продуцирования, не содержащую выделенного из человеческой плазмы альбумина, привела к открытию объекта данного изобретения - базальной среды, не содержащей белка, предназначенной для получения рекомбинантного фактора VIII. Предпочтительная среда состоит из модифицированной Дюльбекко минимальной эссенциальной среды и среды Хэма F-12 (50: 50 по весу) с добавлением 10 мкг/мл рекомбинантного инсулина (нуцеллин фирмы Эли Лилли) и 50 мкМ комплекса сульфата железа с этилендиаминтетрауксусной кислотой. На этой базальной среде, не содержащей белка, подвергшиеся генно-инженерной обработке клетки ВНК росли хорошо, если не учитывать продуцирование фактора VIII.
Неожиданным оказался тот факт, что добавление полиола, такого как плюроник F-68, не повлияло на рост клеток ВНК, но повысило их специфическую продуктивность в отношении фактора VIII. Непредвиденным оказалось и то, что добавление сульфата меди приводит к дальнейшему усилению образования фактора VIII. Включение в среду микроэлементов, таких как марганец, молибден, кремний, литий и хром, еще более усиливало образование фактора VIII. Затем был разработан непрерывный процесс продуцирования фактора VIII в условиях, при которых отсутствовал полученный из человеческой плазмы белок. Дальнейшую информацию об использовании полиолов типа плюроника можно найти в работах Papoutsakis (1991) и Schmolka (1977).
Плюроник F-68, полигликоль (фирма БАСФ, Вайандот), обычно используется для предотвращения вспенивания при перемешивании культур, для защиты клеток от разрушения и от повреждения пузырьками в барботируемой культуре. Плюроник F-68 представляет собой неионный блочный сополимер со средней молекулярной массой 8400 и состоит из центрального блока полиоксипропилена (20% весовых) и блоков полиоксиэтилена по обоим концам. Многочисленные исследования роли плюроника F-68 свидетельствуют о том, что он действует как поверхностно-активное вещество и предотвращает повреждение клеток, избавляя их от пузырьков, образующихся в биореакторах при перемешивании или барботировании. Однако некоторые исследователи отметили благоприятное действие плюроника F-68 на рост культуры в условиях минимального повреждения (Mizrahi, 1975; Murhammer, Goochee, 1990). Соочистка липидов с плюроником F-68 подтверждает, что полимер может не только заменять альбумин в качестве поверхностно-активного вещества, но и действовать в качестве носителя липидов. Плюроник F-68 может также предотвратить повреждение мембраны клетками-убийцами еще до того, как произойдет репарация, путем предполагаемого непосредственного интеркалирования в мембрану. Совершенно не изучена роль плюроника F-68, действующего в качестве металл-ионного буфера.
Несмотря на сообщения о том, что плюроник F-68 при добавлении в среду может повысить объемную продуктивность, механизм его действия, по-видимому, состоит в поддержании жизнеспособности клеток (Schneider, 1989; Qi, 1996). По имеющимся у заявителя данным, впервые показано, что плюроник F-68 усиливает специфическую продукцию конкретного белка. Поскольку в заявляемой системе жизнеспособность клеток и скорости их роста при добавлении плюроника F-68 и без него являются сопоставимыми, то в данном случае механизм действия плюроника F-68 не состоит в поддержании жизнеспособности клеток. Однако каков бы ни был механизм его действия, эффект добавления плюроника F-68 проявляется быстро и является выраженным.
Предполагается, что ряд других полиолов может оказывать подобное действие. Такие полиолы включают неионные блочные сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена, имеющие молекулярную массу от примерно 1000 до примерно 16000.
Помимо обычного оборудования для суспензионного культивирования, такого как встряхиваемые сосуды, вращающиеся сосуды и перекатываемые по роликовому настилу бутыли, способ настоящего изобретения применим для биореакторов непрерывного и периодического действия. После культивирования клеток-хозяев фактор VIII может быть выделен из отработанной среды с помощью стандартных приемов, таких как ультрафильтрация или центрифугирование. При необходимости регенерированный фактор VIII может быть очищен хроматографией, например, ионообменной, эксклюзионной, иммуно-аффинной или металл-хелатной и т.п.
Использованный здесь термин "среда, не содержащая белка человека или млекопитающего" означает культуральную среду, в которой нет белков, полученных от человека или млекопитающих. Белкам, выделенным из человеческих источников или от млекопитающих, сопутствует риск вирусного инфицирования. Цель создания среды, не содержащей белка человека или млекопитающих, состоит в том, чтобы исключить или, по меньшей мере, значительно снизить опасность передачи вируса.
Пример 1
Клетки почки новорожденного хомяка (ВНК-21), трансфицированные геном, способным вызвать экспрессию фактора VIII, были получены от фирмы Дженентек, Инк. Южный Сан-Франциско, Калифорния, США. Клеточная линия получена, как подробно описано Wood и др. (1984), и заложена на хранение в Американскую коллекцию типов культур под вступительным номером АТСС CRL-8544. Клональный вариант этих клеток получали также от фирмы Дженентек, Инк. и использовали во всех примерах.
Клетки ВНК-21, содержащие ген, кодирующий фактор VIII, культивировали в виде суспензионных культур во встряхиваемых сосудах, используя бессывороточную базальную среду, которая содержала среду Хэма F-12 и минимальную эссенциальную среду Дюльбекко (50:50 по весу), нуцеллин (рекомбинантный инсулин, 5-10 мкг/мл) комплекс ЭДТА с FeSО4 (50 мкМ) и MgCl2 (15 мМ). Клетки поддерживали и пассировали с 48-часовыми интервалами. Клетки центрифугировали при 800g в течение 5 минут, считали и пересевали с плотностью 1•106 клеток/мл. Каждый сосуд содержал 50-100 мл свежей среды. Сосуды для встряхивания помещали на вращающее устройство, инкубировали при 37oС и поддерживали в виде суспензионной культуры путем осторожного вращения со скоростью 90-110 оборотов/минуту. Влияние полиола плюроник F-68 (0,1%), обозначенного ниже как F-68, и сульфата меди (50 нМ) на продукцию фактора VIII исследовали в сосудах для встряхивания. Фактор VIII определяли количественно хромогенным анализом. Реагенты для анализа коммерчески доступны в виде тест-набора, известного под названием Коатест VIII: C/4, который поставляется фирмой Бэкстер Хелс Кэер Продактс. Таким способом клетки поддерживались в течение 24 дней. Активность фактора VIII в каждой из сред, определенная с помощью Коатест VIII:C/4, приведена в табл. 1.
Увеличение концентрации до 0,3% не оказало значительного влияния на образование фактора VIII. Дозо-зависимые эксперименты показали, что для образования фактора VIII оптимальной является концентрация сульфата меди 50-800 нМ.
Как показано в табл. 1, в условиях отсутствия белка добавление одного плюроника F-68 или, предпочтительно, в комбинации с сульфатом меди значительно повышает титр и специфическую продуктивность клеток ВНК, содержащих ген, кодирующий фактор VIII.
Пример 2
С целью дальнейшей оптимизации процесса получения фактора VIII в условиях, при которых отсутствует белок, к среде добавляли микроэлементы. Образование фактора VIII оценивали, используя установку с непрерывно встряхивающимися культуральными сосудами, как описано в примере 1, в течение 16 дней. Данные приведены в табл. 2. В отсутствие сульфата меди микроэлементы не оказывали влияния на продукцию фактора VIII.
Пример 3
Влияние микроэлементов и меди на продукцию фактора VIII изучали в перфузионном ферментере. Два ферментера по 1,5 л каждый засевали клональным вариантом клеток ВНК с плотностью 2•106 клеток/мл, используя базальную среду, описанную в табл. 1. Ферментер перфузировали со скоростью 0,5 л/день. Один ферментер служил контролем, в другой добавляли соль меди и микроэлементы, как описано в табл. 2. В ферментерах поддерживали плотность клеток на уровне примерно 2-3•106 клеток/мл в течение 15 дней. Как показано в табл. 3, в отсутствие белка добавление плюроника F-68, меди и микроэлементов в условиях непрерывной перфузии значительно усиливало специфическую продуктивность клеток ВНК, содержащих ген, кодирующий фактор VIII. Этот способ может быть легко адаптирован к большим ферментерам (200-500 л), снабженным удерживающим клетки устройством, таким как сепаратор.
Вышеприведенные примеры являются лишь иллюстрацией и не рассматриваются как ограничение настоящего изобретения, область применения которого определяется формулой изобретения.
Источники информации
Bihoreau N. и др., Eur. J. Biochem. 222:41-48 (1994).
Chan S.Y, US Pat. No 5576194 (1996).
Eis-Hubinger A.M. и др., Thronb. Haemost. 76: 1120 (1996).
Mizrahi A., J. Clin. Microbiol. 11-13 (1975).
Murhammer D.W, и др., Biotechnol. Prog. 6: 142-148 (1990).
Papoutsakis E.T., Trends in Biotechnology (Tibtech) 9: 316-324 (1991).
Qi Y-M. и др., Cytotechnology 21:95-109 (1996).
Schmolka I.R., J. Am. Oil Chem. Soc. 54:110-116.
Schneider Y-J., J. Immunol: Meth. 116:65-77 (1989).
Wood W. и др.. Nature 312:330-337 (1984).
Хu D. и др., China J. Biotech. 11:101-107(1995).
Zhang J. и др.. Biotechnol. 33:249-258 (1994).

Claims (13)

1. Способ получения рекомбинантного фактора VIII, включающий культивирование клеток-хозяев млекопитающих, содержащих ген, кодирующий фактор VH1, выделение рекомбинантного фактора VIII и, при необходимости, его очистку, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в присутствии полиолов и ионов меди в среде, свободной от происходящего от плазмы белка.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве полиола используют Pluronic F-68 в концентрации от примерно 0,025 до примерно 0,2% от веса среды.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что ионы меди добавляют в форме сульфата меди, используемого в количестве от примерно 50 до примерно 800 нмоль.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в среде, дополнительно содержащей ионы марганца в количестве от примерно 1,5 до примерно 4,5 нмоль.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в среде, дополнительно содержащей ионы молибдена в количестве от примерно 1,5 до примерно 4,5 нмоль.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в среде, дополнительно содержащей ионы кремния в количестве от примерно 75 до примерно 300 нмоль.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в среде, дополнительно содержащей ионы хрома в количестве от примерно 1,0 до примерно 4,0 нмоль.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в среде, дополнительно содержащей ионы лития в количестве от примерно 120 до примерно 480 нмоль.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве клеток-хозяев млекопитающего используют клетки, выбранные из группы, состоящей из клеток почки новорожденного хомяка, человеческих эмбриональных клеток почки и клеток яичника китайского хомяка.
10. Рекомбинантный фактор VIII, полученный в соответствии со способом по п.1, при этом он свободен от белка, происходящего от плазмы.
11. Культуральная среда для получения рекомбинантного фактора VIII, содержащая базальную среду и клетки млекопитающих, содержащих ген, кодирующий фактор VIII, отличающаяся тем, что базальная среда содержит полиол в концентрации от примерно 0,025 до примерно 0,2% от веса среды и ионы меди в количестве от примерно 50 до примерно 800 нмоль, при этом среда свободна от белка, происходящего от плазмы.
12. Культуральная среда по п.11, отличающаяся тем, что дополнительно содержит, по меньшей мере, один микроэлемент, выбранный из группы, состоящей из марганца, молибдена, хрома и лития.
13. Культуральная среда по п.11, отличающаяся тем, что дополнительно содержит рекомбинантный инсулин.
RU98107565/13A 1997-04-18 1998-04-17 Получение рекомбинантного фактора viii в среде, не содержащей белка RU2222547C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/844,714 1997-04-18
US08/844,714 US5804420A (en) 1997-04-18 1997-04-18 Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU98107565A RU98107565A (ru) 2000-02-20
RU2222547C2 true RU2222547C2 (ru) 2004-01-27

Family

ID=25293446

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU98107565/13A RU2222547C2 (ru) 1997-04-18 1998-04-17 Получение рекомбинантного фактора viii в среде, не содержащей белка

Country Status (29)

Country Link
US (2) US5804420A (ru)
EP (1) EP0872487B1 (ru)
JP (1) JP4257685B2 (ru)
KR (1) KR100496111B1 (ru)
CN (1) CN1127518C (ru)
AR (1) AR012451A1 (ru)
AT (1) ATE342921T1 (ru)
AU (1) AU748731B2 (ru)
BR (1) BRPI9801092B8 (ru)
CA (1) CA2234215C (ru)
CO (1) CO4790112A1 (ru)
CZ (1) CZ295049B6 (ru)
DE (1) DE69836164T2 (ru)
DK (1) DK0872487T3 (ru)
ES (1) ES2273380T3 (ru)
HK (1) HK1018797A1 (ru)
HU (1) HU224306B1 (ru)
ID (1) ID20193A (ru)
IL (1) IL124123A (ru)
MY (1) MY115583A (ru)
NZ (1) NZ330183A (ru)
PL (1) PL192072B1 (ru)
PT (1) PT872487E (ru)
RU (1) RU2222547C2 (ru)
SK (1) SK285684B6 (ru)
TR (1) TR199800493A1 (ru)
TW (1) TW490469B (ru)
UA (1) UA66340C2 (ru)
ZA (1) ZA983234B (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2531493C2 (ru) * 2007-11-01 2014-10-20 Юниверсити Оф Рочестер Рекомбинантный фактор viii, обладающий повышенной стабильностью
RU2710551C2 (ru) * 2014-03-25 2019-12-27 Дженентек, Инк. Способы приготовления полоксамера для применения в клеточной культуральной среде

Families Citing this family (89)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9501040D0 (en) * 1995-01-19 1995-03-08 Quadrant Holdings Cambridge Dried composition
US8183344B2 (en) * 1996-04-24 2012-05-22 University Of Michigan Inactivation resistant factor VIII
US6475725B1 (en) * 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
US6528286B1 (en) * 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
AUPP521298A0 (en) * 1998-08-12 1998-09-03 Life Therapeutics Limited Purification of fibrinogen
US6358703B1 (en) 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
AUPP790698A0 (en) 1998-12-23 1999-01-28 Life Therapeutics Limited Separation of microorganisms
AUPP790898A0 (en) 1998-12-23 1999-01-28 Life Therapeutics Limited Renal dialysis
US20050224355A1 (en) * 1999-12-23 2005-10-13 Brendon Conlan Removal of biological contaminants
AUPP971399A0 (en) 1999-04-12 1999-05-06 Life Therapeutics Limited Separation of plasma components
AT409379B (de) 1999-06-02 2002-07-25 Baxter Ag Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen
JP4674021B2 (ja) * 1999-07-13 2011-04-20 ビオヴィトルム・アクチボラゲット（プブリクト） 安定第ｖｉｉｉ因子組成物
US6767741B1 (en) * 1999-08-27 2004-07-27 Invitrogen Corporation Metal binding compounds and their use in cell culture medium compositions
DE60041573D1 (de) 1999-08-31 2009-04-02 Sony Computer Entertainment Inc Unterhaltungssystem, aufzeichnungsmdeium und programm
US7077942B1 (en) * 1999-12-23 2006-07-18 Gradipore Limited Removal of biological contaminants
AUPQ691400A0 (en) 2000-04-14 2000-05-11 Life Therapeutics Limited Separation of micromolecules
AUPQ697300A0 (en) * 2000-04-18 2000-05-11 Life Therapeutics Limited Separation apparatus
ATE449200T1 (de) 2000-04-18 2009-12-15 Gradipore Ltd Trennung und behandlung von proben durch elektrophorese
US6923896B2 (en) * 2000-09-22 2005-08-02 The Texas A&M University System Electrophoresis apparatus and method
CN1235667C (zh) * 2000-10-06 2006-01-11 格拉迪普有限公司 多口分离装置及方法
AUPR222300A0 (en) * 2000-12-21 2001-01-25 Life Therapeutics Limited Electrophoresis device and method
US7220718B2 (en) 2001-08-03 2007-05-22 United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Oral treatment of hemophilia
EP2298354B1 (en) 2001-10-10 2014-03-19 ratiopharm GmbH Remodelling and glycoconjugation of interferon-beta
KR20040065278A (ko) * 2001-12-21 2004-07-21 노보 노르디스크 에이/에스 변경된 인자 ⅶ 폴리펩티드의 액체 조성물
BR0215216A (pt) 2001-12-21 2004-11-16 Novo Nordisk Healthcare Ag Composição aquosa lìquida, método para preparar uma composição aquosa lìquida de um polipeptìdeo de fator vii, uso de uma composição aquosa lìquida, e, método para o tratamento de uma sìndrome de resposta ao fator vii
US20040009918A1 (en) * 2002-05-03 2004-01-15 Hanne Nedergaard Stabilised solid compositions of modified factor VII
KR101212025B1 (ko) 2002-06-21 2013-01-09 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ⅶ 폴리펩티드의 안정화된 고체 조성물
AU2003249990B2 (en) 2002-07-09 2007-06-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited Animal protein free media for cultivation of cells
EP2572732A1 (en) 2003-02-26 2013-03-27 Nektar Therapeutics Polymer-factor VIII moiety conjugates
CA2518327A1 (en) * 2003-03-18 2004-09-30 Novo Nordisk Health Care Ag Liquid, aqueous, pharmaceutical compositions of factor vii polypeptides
US7897734B2 (en) * 2003-03-26 2011-03-01 Novo Nordisk Healthcare Ag Method for the production of proteins
AU2004241698A1 (en) * 2003-05-23 2004-12-02 Novo Nordisk Health Care Ag Protein stabilization in solution
ES2382157T3 (es) * 2003-06-25 2012-06-05 Novo Nordisk Health Care Ag Composición líquida de polipépttidos del factor VII
ATE446768T1 (de) * 2003-07-01 2009-11-15 Novo Nordisk Healthcare Ag Flüssige wässrige pharmazeutische zusammnesetzung von factor vii polypeptiden
EP1656158B1 (en) * 2003-08-14 2016-03-09 Novo Nordisk Health Care AG Liquid, aqueous pharmaceutical composition of factor vii polypeptides
MXPA06006886A (es) * 2003-12-19 2006-09-04 Novo Nordisk Healthcare Ag Composiciones estabilizadas de polipeptidos del factor vii.
GB0414825D0 (en) 2004-07-02 2004-08-04 Biostatus Ltd Gel formulations and uses thereof
US7422875B2 (en) * 2004-07-20 2008-09-09 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Compositions and methods for increasing protein production
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
WO2006050050A2 (en) * 2004-10-29 2006-05-11 Centocor, Inc. Chemically defined media compositions
CA2594580C (en) * 2005-01-25 2013-09-24 Wyeth Research Ireland Limited Method for diafiltration
EP1707634A1 (en) * 2005-03-29 2006-10-04 Octapharma AG Method for isolation of recombinantly produced proteins
US20070212770A1 (en) * 2006-01-04 2007-09-13 Baxter International Inc. Oligopeptide-free cell culture media
US20090203077A1 (en) * 2006-06-30 2009-08-13 The Regents Of The University Of Michigan Method of producing factor viii proteins by recombinant methods
WO2008005847A2 (en) * 2006-06-30 2008-01-10 The Regents Of The University Of Michigan Method of producing factor viii proteins by recombinant methods
DK2126106T3 (en) 2007-02-23 2017-12-04 Sk Chemicals Co Ltd Process for the preparation and purification of Factor VIII and its derivatives
RU2469739C2 (ru) * 2007-04-26 2012-12-20 БАЙЕР ХЕЛСКЕА ЛЛСи Стабилизация жидких растворов рекомбинантного белка для хранения в замороженном состоянии
SG10201503304RA (en) * 2007-12-27 2015-06-29 Baxter Int Cell culture processes
DE102008051574A1 (de) 2008-10-14 2010-04-15 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Verfahren zur Herstellung von Interferon-beta und deren Varianten
JP5719301B2 (ja) * 2008-11-12 2015-05-13 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ 血清不含インスリン不含で第ｖｉｉ因子を産生する方法
KR101574056B1 (ko) 2009-07-31 2015-12-02 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 Ａｄａｍｔｓ 단백질 발현을 위한 세포 배양 배지
ES2865250T3 (es) 2009-09-21 2021-10-15 Takeda Pharmaceuticals Co Formulaciones de ADAMTS13 líquidas y liofilizadas estabilizadas
CN102648212B (zh) 2009-11-13 2014-12-03 基立福疗法公司 包含冯维勒布兰德因子(vWF)的制剂及其相关制备方法、试剂盒和用途
MX2012012526A (es) 2010-04-26 2012-11-23 Novartis Ag Medio de cultivo celular mejorado.
BR112013000512A2 (pt) 2010-07-08 2016-05-17 Baxter Healthcare Sa método para produzir uma composição de adamts 13 (ra13) recombinante, sobrenadante de cultura de célula, e , composição adamts13 recombinante (ra13)'
GB201014121D0 (en) * 2010-08-24 2010-10-06 Univ Gent Particulate biologic drug delivery system
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
RU2592680C2 (ru) * 2011-04-29 2016-07-27 Биокон Рисерч Лимитед Способ снижения накопления лактата при культивировании и способ получения антитела
DK3626737T3 (da) 2011-05-13 2024-02-05 Octapharma Ag Fremgangsmåde til at forøge produktiviteten af eukaryote celler i produktionen af rekombinant fviii
AU2012324020A1 (en) 2011-12-30 2013-07-18 Grifols, S.A. Method for purifying Factor VIII
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
SG11201507230PA (en) 2013-03-12 2015-10-29 Abbvie Inc Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US9677105B2 (en) 2013-03-14 2017-06-13 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
US9217168B2 (en) 2013-03-14 2015-12-22 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US8956830B2 (en) 2013-03-14 2015-02-17 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
US20140271622A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-18 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
EP3052640A2 (en) 2013-10-04 2016-08-10 AbbVie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CA2942770A1 (en) * 2014-03-23 2015-10-01 Advantech Bioscience Farmaceutica Ltda. Enhancement of recombinant protein expression with copper
MX2016012870A (es) 2014-04-01 2017-05-12 Advantech Bioscience Farmacêutica Ltda Formulaciones de factor viii estables con bajo tenor de azucar - glicina.
US9855319B2 (en) 2014-04-01 2018-01-02 Advantech Bioscience Farmacêutica Ltda Stabilization of factor VIII without calcium as an excipient
JP6917984B2 (ja) * 2016-05-09 2021-08-11 協和発酵バイオ株式会社 培地、アルブミン非含有培地用添加剤および多能性幹細胞の培養方法
EP3625329A1 (en) * 2017-05-17 2020-03-25 Octapharma AG Method for the production of a recombinant target protein
PL3781943T3 (pl) 2018-04-20 2022-08-01 Janssen Biotech, Inc Kwalifikacja kolumny chromatograficznej w sposobach produkcji w celu wytwarzania kompozycji przeciwciał anty-il12/il23
MA54248A (fr) 2018-11-13 2021-09-22 Janssen Biotech Inc Régulation de métaux traces pendant la production d'anticorps anti-cd38
CN113825765A (zh) 2019-03-14 2021-12-21 詹森生物科技公司 用于制备抗il12/il23抗体组合物的制造方法
US20220153830A1 (en) 2019-03-14 2022-05-19 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing Methods for Producing Anti-TNF Antibody Compositions
MY193349A (en) 2019-12-06 2022-10-06 Regeneron Pharma Anti-vegf protein compositions and methods for producing the same
BR112022019817A2 (pt) 2020-04-02 2022-12-06 Takeda Pharmaceuticals Co Variante de adamts13, composições e usos das mesmas
WO2023281463A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions
IL309987A (en) 2021-07-09 2024-03-01 Janssen Biotech Inc Production methods for the production of anti-IL12/IL23 antibody compositions
US20230332084A1 (en) 2022-03-02 2023-10-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bioreactor for antibody production

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4440679A (en) * 1980-03-05 1984-04-03 Cutter Laboratories, Inc. Pasteurized therapeutically active protein compositions
US4767704A (en) * 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
NO162160C (no) * 1987-01-09 1989-11-15 Medi Cult As Serumfritt vekstmedium, samt anvendelse derav.
US5024947A (en) * 1987-07-24 1991-06-18 Cetus Corporation Serum free media for the growth on insect cells and expression of products thereby
JPH0387173A (ja) * 1987-09-10 1991-04-11 Teijin Ltd ヒト活性化天然型ファクター８ｃの製造方法及びそれに用いる形質転換体
US5378612A (en) * 1990-05-11 1995-01-03 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Culture medium for production of recombinant protein
CA2078721A1 (en) * 1991-09-24 1993-03-25 Hiroshi Yonemura Process for preparing human coagulation factor viii protein complex
ATE399855T1 (de) * 1996-10-10 2008-07-15 Invitrogen Corp Tierzellkulturmedium mit pflanzlichen nährstoffen

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2531493C2 (ru) * 2007-11-01 2014-10-20 Юниверсити Оф Рочестер Рекомбинантный фактор viii, обладающий повышенной стабильностью
RU2710551C2 (ru) * 2014-03-25 2019-12-27 Дженентек, Инк. Способы приготовления полоксамера для применения в клеточной культуральной среде
US11034793B2 (en) 2014-03-25 2021-06-15 Genentech, Inc. Methods of preparing a poloxamer for use in cell culture medium
US11912823B2 (en) 2014-03-25 2024-02-27 Genentech, Inc. Methods of preparing a poloxamer for use in cell culture medium

Also Published As

Publication number Publication date
HU224306B1 (hu) 2005-07-28
KR19980081531A (ko) 1998-11-25
CN1127518C (zh) 2003-11-12
CA2234215A1 (en) 1998-10-18
CN1210866A (zh) 1999-03-17
HUP9800901A3 (en) 2001-08-28
KR100496111B1 (ko) 2005-09-09
AU6198298A (en) 1998-10-22
TR199800493A1 (xx) 1998-11-23
HUP9800901A2 (hu) 1999-05-28
US6171825B1 (en) 2001-01-09
PL325862A1 (en) 1998-10-26
CZ295049B6 (cs) 2005-05-18
US5804420A (en) 1998-09-08
TW490469B (en) 2002-06-11
ZA983234B (en) 1998-10-22
AR012451A1 (es) 2000-10-18
PL192072B1 (pl) 2006-08-31
CZ115698A3 (cs) 1998-11-11
EP0872487B1 (en) 2006-10-18
IL124123A (en) 2006-07-05
CO4790112A1 (es) 1999-05-31
BRPI9801092A (pt) 2000-01-11
DE69836164T2 (de) 2007-08-16
SK49798A3 (en) 1998-12-02
DK0872487T3 (da) 2007-02-05
ATE342921T1 (de) 2006-11-15
NZ330183A (en) 1999-08-30
AU748731B2 (en) 2002-06-13
CA2234215C (en) 2008-06-17
HU9800901D0 (en) 1998-07-28
HK1018797A1 (en) 2000-01-07
BRPI9801092B8 (pt) 2021-07-06
BRPI9801092B1 (pt) 2013-04-02
ID20193A (id) 1998-10-22
EP0872487A3 (en) 1999-10-27
JP4257685B2 (ja) 2009-04-22
UA66340C2 (ru) 2004-05-17
SK285684B6 (sk) 2007-06-07
EP0872487A2 (en) 1998-10-21
PT872487E (pt) 2007-01-31
ES2273380T3 (es) 2007-05-01
DE69836164D1 (de) 2006-11-30
JPH10295397A (ja) 1998-11-10
MY115583A (en) 2003-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2222547C2 (ru) Получение рекомбинантного фактора viii в среде, не содержащей белка
RU2266325C2 (ru) Среда для культивирования клеток без белков и без сыворотки
RU2249041C2 (ru) Способ получения и выделения белка, обладающего активностью фактора viii, линия клеток нкв, экспрессирующая белок, обладающий активностью фактора viii (варианты)
EP0786989A1 (en) Lipid vesicles containing adeno-associated virus rep protein for transgene integration and gene therapy
CA2328084C (en) Viral production process
JPH11501820A (ja) 疎水性ポリペプチドの細菌生産
JPS6332484A (ja) 生物学的に活性なプラスミノ−ゲン活性化因子の製造方法
EP0254076B1 (en) Improved recombinant protein production
JPH04228066A (ja) 外来遺伝子発現用培養細胞
KR100255228B1 (ko) 글리코프로테인을 발현시키는 포유류 세포계 및 글리코프로테인의 제조 방법
CN101646779B (zh) 制备和纯化因子viii及其衍生物的方法
JP5781067B2 (ja) ビタミンｋ依存性タンパク質の発現収率を増加させる方法
US5576194A (en) Recombinant protein production
AU710853B2 (en) Production of recombinant factor VIII in the presence of lipsome-like substances of mixed composition
EP0248656B1 (en) Composition for cell cultivation and use thereof
MXPA98003051A (en) Preparation of recombinant factor viii in a protei free medium
KR102639552B1 (ko) 구리염을 이용한 재조합 혈장 단백질의 생산 방법
JPH0732705B2 (ja) 動物細胞増殖用組成物およびそれを用いる動物細胞の増殖方法
AU1369801A (en) Mammal cell lines and method of obtaining glycoproteins