RU2592680C2 - Способ снижения накопления лактата при культивировании и способ получения антитела - Google Patents

Способ снижения накопления лактата при культивировании и способ получения антитела Download PDF

Info

Publication number
RU2592680C2
RU2592680C2 RU2013153090/10A RU2013153090A RU2592680C2 RU 2592680 C2 RU2592680 C2 RU 2592680C2 RU 2013153090/10 A RU2013153090/10 A RU 2013153090/10A RU 2013153090 A RU2013153090 A RU 2013153090A RU 2592680 C2 RU2592680 C2 RU 2592680C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
lactate
accumulation
cells
cultivation
cell
Prior art date
Application number
RU2013153090/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2013153090A (ru
Inventor
Ручика СРИВАСТАВА
Снеха Лакшмандас ХЕМДЕВ
Анкур БХАТНАГАР
Сараванан ДЕСАН
Ануй ДЖОЕЛ
Хариш АЙЕР
Вана РАДЖА
Лаванья РАО
Original Assignee
Биокон Рисерч Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47072831&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2592680(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Биокон Рисерч Лимитед filed Critical Биокон Рисерч Лимитед
Publication of RU2013153090A publication Critical patent/RU2013153090A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2592680C2 publication Critical patent/RU2592680C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ снижения накопления лактата от 5% до 40% при культивировании клеток млекопитающих и способ получения антитела. Для снижения накопления лактата от 5% до 40% к культивируемым клеткам млекопитающих добавляют соль цинка в концентрации в диапазоне от 0,2 мМ до 0,4 мМ. В способе получения антитела добавляют соль цинка в концентрации от 0,2 мМ до 0,4 мМ для снижения накопления лактата от 5% до 40% к культивируемым клеткам млекопитающих, продуцирующим указанное антитело, и извлекают антитело. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 7 ил., 9 табл., 7 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способу снижения накопления лактата в культуре клеток, указанный способ, включающий добавление соли двухвалентных переходных металлов к культуре клеток. Настоящее изобретение также относится к способу получения полипептида, указанный способ, включающий добавление соли двухвалентных переходных металлов к среде для культивирования клеток для снижения накопления лактата, ферментирование и извлечение полипептида. Более конкретно, изобретение относится к способу выращивания клеток в системе культивирования клеток, снижающему накопление лактата в культуральной среде.
Уровень техники
Технологии культивирования животных клеток широко применяют в биомедицинских исследованиях и в фармацевтической промышленности. Оценка роста и метаболической активности клеток имеет большое значение для успешного контроля и совершенствования процесса культивирования клеток. Глюкоза и лактат представляют собой два метаболита, которые чаще всего требуют контроля. В составах большинства сред глюкоза служит в качестве как основного источника углерода, так и важного источника энергии. Вхождение глюкозы в гликолитический путь приводит к образованию пирувата в качестве конечного продукта. В клетках животных пируват или может быть направлен в цикл трикарбоновых кислот, или может быть превращен в лактат. При непрерывном культивировании клеток, из-за высокой скорости превращения глюкозы в пируват и неэффективного сопряжения между гликолизом и циклом трикарбоновых кислот, существует тенденция к накоплению лактата. Накопление лактата, в свою очередь, приводит к закислению культуральной среды. Кроме того, сам лактат также может быть токсичен для клеток млекопитающих даже при контролируемом рН. Накопление лактата часто представляет собой критический фактор, ограничивающий процесс культивирования клеток, в особенности, если плотность клеток высока.
В биофармацевтическом производстве, контроль глюкозы и лактата представляет собой установившуюся практику благодаря простоте и надежности измерений, а также их химической стабильности в культуральной среде. Что еще более важно, концентрация глюкозы дает возможность оценить энергию, тогда как лактат рассматривают как важный параметр для оценки накопления побочных продуктов метаболизма и ухудшения среды культивирования. В качестве критических параметров для культивирования, измерения уровней глюкозы и лактата часто представляет собой ключевой момент в разработках по управлению процессом при выполнении операций в биореакторе, таких как подпитка или перфузия.
Ранее были предприняты значительные усилия для корреляции метаболизма глюкозы и лактата с плотностью клеток. Скорость потребления глюкозы и скорость накопления лактата отражают метаболические активности культивируемых клеток.
Как уже говорилось ранее, накопление токсичных побочных продуктов, таких как лактат, ингибирует рост клеток и продукцию антител. Чрезмерное накопление лактата может привести к увеличению осмолярности среды или, в отсутствии контроля рН, к снижению рН культуры. Основное негативное воздействие лактата обусловлено снижением рН, которое возникает как следствие выделения лактата в культуральную среду.
В патенте США №6156570 раскрывается способ культивирования клеток, предпочтительно, клеток млекопитающих, который минимизирует накопление лактата.
В патенте США №7429491 раскрывается способ усовершенствования продукции белка в культуре клеток животных с применением глюкозы в ограниченной концентрации в культуре с подпиткой.
Предпринимаемые в прошлом попытки уменьшения уровня лактата, главным образом, были сосредоточены на А] подаче и поддержании глюкозы на очень низком уровне или на В] метаболической инженерии клеток, с применением различных молекулярно-биологических методов.
Данная работа раскрывает корреляцию между добавлением солей двухвалентных переходных металлов (меди, цинка) и накоплением лактата и возможные пути снижения накопления лактата.
Раскрытие изобретения
Соответственно, настоящее изобретение относится к способу снижения накопления лактата в культуре клеток, указанный способ, включающий добавление соли двухвалентных переходных металлов к культуре клеток, и к способу получения полипептида, указанный способ, включающий следующее: а) добавление соли двухвалентных переходных металлов к культуре клеток для снижения накопления лактата и b) ферментирование и извлечение полипептида.
Краткое описание чертежей
На фигуре 1А показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли меди по сравнению с контролем.
На фигуре 1В показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли цинка по сравнению с контролем.
На фигуре 2А показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли меди по сравнению с контролем.
На фигуре 2В показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли цинка по сравнению с контролем.
На фигуре 3 показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли цинка по сравнению с контролем.
На фигуре 4А показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли меди по сравнению с контролем.
На фигуре 4В показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли цинка по сравнению с контролем.
На фигуре 5А показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли меди по сравнению с контролем.
На фигуре 5В показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли цинка по сравнению с контролем.
На фигуре 6 показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли магния по сравнению с контролем.
На фигуре 7 показана разница в уровне накопления лактата в присутствии соли цинка по сравнению с контролем.
Осуществление изобретения
Настоящее изобретение относится к способу снижения накопления лактата в культуре клеток, указанный способ, включающий добавление соли двухвалентных переходных металлов к культуре клеток.
В воплощении настоящего изобретения, соль двухвалентных переходных металлов содержит металл, который выбирают из группы, включающей медь и цинк.
В воплощении настоящего изобретения, соль меди представляет собой сульфат меди и соль цинка представляет собой сульфат цинка.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, клетку получают из линии клеток млекопитающих.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, линию клеток млекопитающих выбирают из группы, включающей без ограничения клетки яичника китайского хомячка (СНО), NS0 (клетки несекретирующие 0) и BHK (клетки почки новорожденного хомячка).
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, ион двухвалентного переходного металла добавляют в концентрации в диапазоне от примерно 0,2 мМ до примерно 0,4 мМ.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, культивирование проводят в системе, которую выбирают из группы, включающей без ограничения культивирование с подпиткой, периодическое культивирование, культивирование во встряхиваемых колбах и в биореакторе.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, снижение накопления уровня лактата равно от примерно 5% до примерно 40%.
Настоящее изобретение также относится к способу получения полипептида, где указанный способ, включает добавление соли двухвалентных переходных металлов к культуре клеток для снижения накопления лактата, ферментирование и извлечение полипептида.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, клетки получают из линии клеток млекопитающих.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, линию клеток млекопитающих выбирают из группы, включающей без ограничения клетки яичника китайского хомячка (СНО), NS0 и BHK.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, соли двухвалентных переходных металлов содержат металл, который выбирают из группы, включающей медь и цинк.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, соль меди представляет собой сульфат меди и соль цинка представляет собой сульфат цинка.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, соль добавляют в концентрации в диапазоне от примерно 0,2 мМ до примерно 0,4 мМ.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, полипептид выбирают из группы, включающей без ограничений антитела против VEGF-A, антитела против Her-2, антитела против CD6 и антитела против TNF.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, культивирование проводят в любой системе, которую выбирают из группы, включающей без ограничения культивирование с подпиткой, периодическое культивирование, культивирование во встряхиваемых колбах и в биореакторе.
В воплощении настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к способам снижения накопления лактата с применением модифицированного способа культивирования клеток, включающего фазу роста клеток и фазу продукции полипептида.
Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает способ получения полипептидов, показанный на примере получения моноклональных антител, способом со сниженным накоплением лактата.
Кроме того, в дальнейшем раскрытии показано, что снижение накопления лактата происходит в диапазоне от примерно 5% до примерно 40%.
Настоящее изобретение относится к способу получения моноклональных антител способом со сниженным накоплением лактата.
В воплощении настоящего изобретения, снижают количество накопленного лактата, которое в норме связано со стандартной процедурой получения.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, описан способ, в котором добавление солей двухвалентных переходных металлов снижает накопление лактата в системе с подпиткой.
В воплощении настоящего изобретения, соли двухвалентных переходных металлов включают соли цинка и меди.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, концентрация солей цинка и меди, примененных в культуральной среде, равно примерно на 0,4 мМ.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, соль двухвалентного переходного металла в случае меди представляет собой сульфат меди, и соль металла в случае цинка представляет собой сульфат цинка.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, концентрация солей двухвалентных переходных металлов указана как концентрация соли в культуральной среде.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, данные ионы металлов, цинка и меди, необходимы для активности ферментов, вовлеченных в реакции гликолиза и цикла трикарбоновых кислот, и, следовательно, добавление данных ионов улучшает общую метаболическую эффективность клеток, приводя к тому, что большая часть глюкозы полностью окисляется, следовательно, накопление лактата снижается.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, среда представляет собой среду определенного химического состава, которую выбирают из группы, включающей без ограничений и HyClone CDM4NS0, и HyClone CDM4Mab.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, клетки млекопитающих могут быть выбраны из группы, включающей без ограничений клетки яичника китайского хомячка (СНО), несекретирующие 0 клетки (NS0) и клетки почек новорожденного хомяка (BHK).
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, полипептид может быть выбран из группы, включающей без ограничений антитела против VEGF-A, антитела против Her-2, антитела против CD6 и антитела против TNF.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, уровень лактата в среду анализируют с помощью устройства «YSI 7100 MBS Analyzer».
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, снижение накопления лактата приводит к улучшению характеристик культуры в целом, поскольку поддержание рН, в целом, приводит к улучшению стабильности клеток. Добавление солей двухвалентных переходных металлов, например солей цинка/меди, снижает накопления лактата и, следовательно, рН среды также сохраняется.
В воплощении настоящего изобретения, соль двухвалентных переходных металлов также может быть определена как ионы двухвалентных переходных металлов.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, настоящее изобретение также относится к способу усовершенствования продукции белка, например крупномасштабной коммерческой продукции белка, например продукции антител.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, настоящее изобретение также относится к способам выращивания клеток в системе культивирования клеток, которая снижает накопление лактата в культуральной среде.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, добавление солей двухвалентных переходных металлов, т.е. солей цинка/меди дополнительно усиливает снижение накопления лактата от примерно 5% до примерно 40%.
Определение терминов:
В описании и в формуле настоящего изобретения, в соответствии с определениями, приведенными в настоящем документе, будет применена следующая терминология.
Термин «антитело» включает антитела или производные антител или их фрагменты, и характеристики антител также применяют к препаратам антитела настоящего изобретения. К фрагментам антител, функциональным эквивалентам или гомологам антител, относят любой полипептид, который включает связывающий домен иммуноглобулина или пептиды, имитирующие данный связывающий домен вместе с Fc-областью или областью, гомологичной Fc-области или, по меньшей мере, ее части. Химерные молекулы, включающие связывающий домен иммуноглобулина, или эквиваленты, слитые с другим полипептидом, также включены.
Типичные молекулы антител представляют собой интактные молекулы иммуноглобулина и те части иммуноглобулина, которые содержат паратоп, включая те части молекулы, которые известны как Fab, Fab′, F(ab′)2, Fc и F(v), а также структуру N-гликана.
Антитело описывают как функциональный компонент сыворотки, и этот термин часто относят или к набору молекул (антител или иммуноглобулинов, фрагментам и т.п.), или к одной молекуле (к молекуле антитела или молекуле иммуноглобулина). Молекула антитела способна связываться или взаимодействовать со специфической антигенной детерминантой (антигеном или эпитопом антигена), что, в свою очередь, может привести к индукции иммунологических эффекторных механизмов. Индивидуальную молекулу антитела обычно рассматривают как моноспецифическую, а композиция молекул антител может быть как моноклональной (т.е. состоящей из идентичных молекул антитела) или поликлональной (т.е. состоящей из разных молекул антител, реагирующих с одним и тем же или с различными эпитопами на одном и том же антигене или на отдельных, различных антигенах). Отдельные и различные молекулы антител, составляющие поликлональное антитело, могут быть названы «члены». Каждая молекула антитела обладает уникальной структурой, которая дает ей возможность специфически связываться с соответствующим ей антигеном, и все природные молекулы антител, в целом, имеют одинаковую основную структуру, состоящую из двух идентичных легких цепей и двух идентичных тяжелых цепей.
Как применены в настоящем документе, выражения «полипептид» или «полипептидный продукт» представляют собой синонимы терминов «белок» и «белковый продукт», соответственно, и, как это обычно понимают в данной области техники, относятся, по меньшей мере, к одной цепи аминокислот, последовательно связанных посредством пептидных связей. В определенных воплощениях, «представляющий интерес белок» или «представляющий интерес полипептид» или тому подобное представляет собой белок, кодируемый экзогенной молекулой нуклеиновой кислоты, которой была трансформирована клетка-хозяин. В определенных воплощениях, в которых экзогенная ДНК, которой была трансформирована клетка-хозяин, кодирует «представляющий интерес белок», последовательность нуклеиновой кислоты экзогенной DNA определяет последовательность аминокислот. В определенных воплощениях, «представляющий интерес белок» представляет собой белок, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, которая эндогенна по отношению к клетке-хозяину. В определенных воплощениях, экспрессию такого эндогенного представляющего интерес белка изменяют путем трансфекции в клетку-хозяина молекулы экзогенной нуклеиновой кислоты, которая, например, может содержать одну или несколько регуляторных последовательностей и/или кодирует белок, который увеличивает экспрессию представляющего интерес белка.
В настоящем документе, термин «вариант антитела» относится к антителу, имеющему последовательность аминокислот, которая отличается от аминокислотной последовательности исходного антитела. Предпочтительно, вариант антитела включает вариабельный домен тяжелой цепи или вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая не встречается в природе. Такие варианты обязательно имеют менее чем 100% идентичности или сходства в последовательности с родительским антителом. В предпочтительном воплощении, вариант антитела будет иметь аминокислотную последовательность с от примерно 75% до менее чем 100% идентичности или сходства аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена или тяжелой, или легкой цепи исходного антитела, более предпочтительно, от примерно 80% до менее чем 100%, более предпочтительно, от примерно 85% до менее чем 100%, более предпочтительно, от примерно 90% до менее чем 100%, и наиболее предпочтительно, от примерно 95% до менее чем 100%. Идентичность или сходство по отношению к данной последовательности определяют в настоящем документе как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, который идентичен (т.е. тот же самый остаток) остаткам исходного антитела, после выравнивания последовательностей и введения, при необходимости, разрывов для достижения максимального процента идентичности последовательности.
Термины «среда», «среды», «среда для культивирования клеток» и «культуральная среда», как применены в настоящем документе, относятся к раствору, содержащему питательные вещества, которые питают растущие животные клетки, например клетки млекопитающих, и также могут относиться к среде вместе с клетками.
Предпочтительные клетки-хозяева млекопитающих представляют собой клетки яичника китайского хомячка (СНО). Способы и векторы для генетической модификации клеток и/или линий клеток для экспрессии представляющего интерес белка хорошо известны специалистам в этой области техники. Генно-инженерные методики включают, но не ограничиваются векторами для экспрессии, направленной гомологической рекомбинацией и активацией гена. Необязательно, белки экспрессируются под контролем гетерологичного элемента контроля, такого как, например, промотор, который в природе не контролирует продукцию данного полипептида. Например, промотор может представлять собой сильный вирусный промотор (например, CMV, SV40), который направляет экспрессию полипептида млекопитающего. Клетка-хозяин может или не может в норме продуцировать данный белок. Например, клетка-хозяин может представлять собой клетку СНО, которая была модифицирована генетическими способами так, чтобы продуцировать белок, это означает, что нуклеиновая кислота, кодирующая белок, была введена в клетку СНО.
Лактат, побочный продукт, генерируемый при росте клеток млекопитающих, потенциально токсичен для клеток. Накопление лактата влияет на буферную емкость среды, что приводит к снижению рН. Было показано, что лактат негативно воздействует не только на рост и продуктивность клеток, но также и на качество продукта в целом. Для снижения накопления лактата в культуральной среде было предпринято несколько подходов. Они включают рост клеток при низкой концентрации глюкозы, сверхэкспрессию пируватдекарбоксилазы и нокаут гена лактатдегидрогеназы-А (LDH-A).
Следующие примеры показывают, как способ может быть осуществлен путем добавления определенных солей двухвалентных переходных металлов для снижения накопления лактата при культивировании. Лактат снижается почти на 5-40% в течение цикла культивирования.
В воплощении настоящего изобретения, соль двухвалентных переходных металлов может также быть определена как ионы двухвалентных переходных металлов.
В воплощении настоящего изобретения, общеизвестные методики для выделения белков/антител из культуральных сред, которые могут быть применены, представляют собой ионообменную хроматографию, гель-фильтрационную хроматографию и аффинную хроматографию.
Еще в одном воплощении настоящего изобретения, в качестве предпочтительной методики для выделения антител из среды была применена методика аффинной хроматографии.
Следующие описания конкретных воплощений настоящего изобретения представлены для целей иллюстрации и описания. Они не предназначены для того, чтобы быть исчерпывающими или ограничивать изобретение определенными раскрытыми формами. С учетом вышеизложенных идей возможны различные модификации и вариации. Кроме того, многие модификации могут быть сделаны для адаптации конкретной ситуации, материала, состава вещества, способа, стадии или стадий способа к цели, духу и объему настоящего изобретения. Все такие модификации должны находиться в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
Далее, технология настоящей заявки будет детально представлена с помощью следующих примеров. Однако примеры не должны быть истолкованы как ограничивающие объем изобретения.
ПРИМЕРЫ:
Уровень лактата анализировали для всех экспериментов, представленных в приведенных ниже примерах, с помощью устройства «YSI 7100 MBS Analyzer». pH для всех приведенных ниже экспериментов, как указано в следующих примерах, поддерживали в диапазоне pH 6,85-7,2. Уровень кислорода также поддерживали путем взбалтывания в шейкер-инкубаторе. Во всех указанных ниже примерах, концентрация добавленной соли равна концентрации соли, присутствовавшей в среде. Температуру можно соответствующим образом изменять, на основании природы примененных клеток и прочих связанных параметров.
При осуществлении настоящего изобретения применяли две соли двухвалентных переходных металлов. Данные две соли двухвалентных переходных металлов представляют собой сульфат меди пентагидрат и сульфат цинка гептагидрат.
ПРИМЕР 1:
Пример 1(А)
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток, в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NS0. Клетки СНО были генетически модифицированы так, чтобы производить антитела против VEGF-A. Соль сульфата меди пентагидрат добавляли в среду в концентрации, равной 0,4 мМ. Напротив, в контрольную среду никакой соли меди не добавляли. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в периодической фазе. На следующей стадии температуру понижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня. В приведенной ниже таблице 1 показан уровень лактата, сниженный за время цикла культивирования клеток. Полученные антитела против VEGF-A затем выделяли из среды, применяя методику аффинной хроматографии.
Figure 00000001
В контроле накопление лактата снизилось примерно на 61%, в то же время в среде с добавленной солью накопление лактата снизилось примерно на 87,5%. Настоящий пример показал дополнительное снижение накопления лактата примерно на 26,5% в присутствии указанной соли.
На фигуре 1(А) показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
Пример 1(В)
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток, в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NSO. Клетки СНО были генетически модифицированы так, чтобы производить антитела против VEGF-A. Соль сульфата цинка гептагидрат добавляли в среду в концентрации, равной 0,4 мМ. Напротив, никакой соли цинка в контрольную среду не добавляли. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. На следующей стадии, температуру понижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня. В приведенной ниже таблице 2 показано, что уровень лактата снизился за время цикла культивирования. Полученные антитела против VEGF-A затем выделяли из среды, применяя методику аффинной хроматографии.
Figure 00000002
В контроле накопление лактата снизилось примерно на 61,32%, в то же время в среде с добавленной солью накопление лактата снизилось примерно на 72,89%. Настоящий пример показал дополнительное снижение накопления лактата примерно на 11,57% в присутствии указанной соли.
На фигуре 1(В) показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
ПРИМЕР 2:
Пример 2А:
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток, в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NS0. Клетки СНО были генетически модифицированы так, чтобы производить антитела против Her-2. Соль сульфата меди пентагидрат добавляли в среду в концентрации, равной 0,4 мМ. В контрольную среду, напротив, никакой соли меди не добавляли. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. На следующей стадии температуру понижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня. В приведенной ниже таблице 3 показан уровень лактата, сниженный за время цикла культивирования. Полученные антитела против Her-2 затем выделяли из среды, применяя методику аффинной хроматографии.
Figure 00000003
В контроле накопление лактата снизилось примерно на 50,5%, в то же время в среде с добавленной солью накопление лактата снизилось примерно на 65%. Настоящий пример показал дополнительное снижение накопления лактата примерно на 14,5% в присутствии указанной соли.
На фигуре 2(А) показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
Пример 2В:
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток, в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NS0. Клетки СНО были генетически модифицированы так, чтобы производить антитела против Her-2. Соль сульфата цинка гептагидрат добавляли в среду в концентрации, равной 0,4 мМ. Напротив, в контрольную среду никакой соли цинка не добавляли. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. На следующей стадии температуру понижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня. В приведенной ниже таблице 4 показан уровень лактата, сниженный за время цикла культивирования. Полученные антитела против Her-2 затем выделяли из среды, применяя методику аффинной хроматографии.
Figure 00000004
В контроле накопление лактата снизилось примерно на 34,5%, в то же время в среде с добавленной солью накопление лактата снизилось примерно на 64,88%. Настоящий пример показал дополнительное снижение накопления лактата примерно на 30,38% в присутствии указанной соли.
На фигуре 2(В) показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
ПРИМЕР 3:
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток, в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NS0. Клетки СНО были генетически модифицированы так, чтобы производить антитела против CD6. Соль сульфата цинка гептагидрат добавляют в среду в концентрации, равной 0,4 мМ. Напротив, в контрольную среду никакой соли цинка не добавляли. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. На следующей стадии температуру понижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня. В приведенной ниже таблице 5 показан уровень лактата, сниженный за время цикла культивирования. Полученные антитела против CD6 затем выделяли из среды, применяя методику аффинной хроматографии.
Таблица 5
Возраст (в часах) Контроль-Остаточный лактат (мМ) С солью цинка-Остаточный лактат (мМ)
72 18 18
96 11,2 11,2
120 9,8 6,2
144 4,6 3
168 5,3 3,2
В контроле накопление лактата снизилось примерно на 70,55%, в то же время в среде с добавленной солью накопление лактата снизилось примерно на 82,22%. Настоящий пример показал дополнительное снижение накопления лактата примерно на 11,67% в присутствии указанной соли.
На фигуре 3 показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
ПРИМЕР 4:
Эксперимент для 4(А)
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток, в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NS0. Клетки СНО были генетически модифицированы так, чтобы производить антитела к TNF. Соль сульфат меди пентагидрат также добавляли в среду в концентрации, равной 0,4 мМ. В контрольную среду, напротив, никакой соли меди не добавляли. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. На следующей стадии температуру понижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня. В приведенной ниже таблице 6 показан уровень лактата, сниженный за время цикла культивирования. Полученные антитела к TNF затем выделяли из среды, применяя методику аффинной хроматографии.
Figure 00000005
В контроле накопление лактата снизилось примерно на 15,38%, в то же время в среде с добавленной солью накопление лактата снизилось примерно на 28,43%. Настоящий пример показал дополнительное снижение накопления лактата примерно на 13,05% в присутствии указанной соли.
На фигуре 4А показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
Эксперимент для 4(В)
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток, в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NS0. Клетки СНО были генетически модифицированы так, чтобы производить антитела к TNF. Соль сульфата цинка гептагидрат также добавляли в среду в концентрации, равной 0,4 мМ. Напротив, в контрольную среду никакой соли цинка не добавляли. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. На следующей стадии температуру понижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня. В приведенной ниже таблице 7 показан уровень лактата, сниженный за время цикла культивирования. Полученные антитела против TNF затем выделяли из среды, применяя методику аффинной хроматографии.
Figure 00000006
В контроле накопление лактата снизилось примерно на 17,37%, в то же время в среде с добавленной солью накопление лактата снизилось примерно на 23,46%. Настоящий пример показал дополнительное снижение накопления лактата примерно на 6,09% в присутствии указанной соли.
На фигуре 4В показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
ПРИМЕР 5:
Эксперимент для 5(А)
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток, в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NS0. Клетки СНО были генетически модифицированы так, чтобы производить антитела против VEGF-A. Соль сульфат меди пентагидрат также добавляли в среду в концентрации, равной 0,2 мМ. В контрольную среду, напротив, никакой соли меди не добавляли. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. На следующей стадии температуру понижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня. В приведенной ниже таблице 8 показан уровень лактата, сниженный за время цикла культивирования. Полученные антитела против VEGF-A затем выделяли из среды, применяя методику аффинной хроматографии.
Figure 00000007
В контроле накопление лактата снизилось примерно на 79,23%, в то же время в среде с добавленной солью накопление лактата снизилось примерно на 85,40%. Настоящий пример показал дополнительное снижение накопления лактата примерно на 6,17% в присутствии указанной соли.
На фигуре 5А показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
Эксперимент для 5(В)
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток, в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NS0. Клетки СНО были генетически модифицированы так, чтобы производить антитела против VEGF-A. Соль сульфата цинка гептагидрат также добавляли в среду в концентрации, равной 0,2 мМ. Напротив, в контрольную среду никакой соли цинка не добавляли. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. На следующей стадии температуру снижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня. В приведенной ниже таблице 9 показан уровень лактата, сниженный за время цикла культивирования. Полученные антитела против VEGF-A затем выделяли из среды, применяя методику аффинной хроматографии.
Figure 00000008
В контроле накопление лактата снизилось примерно на 79,23%, в то же время в среде с добавленной солью накопление лактата снизилось примерно на 88,41%. Настоящий пример показал дополнительное снижение накопления лактата примерно на 9,18% в присутствии указанной соли.
На фигуре 5В показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
ПРИМЕР 6:
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культурах клеток в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4NS0. В среду также добавляли соль сульфата магния, примененную в качестве негативного контроля в концентрации, равной 0,4 мМ. В контрольную среду, напротив, не добавляли никакой соли сульфата магния. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. На следующей стадии температуру снижали до 31±1°C и цикл культивирования клеток продолжали до 7-го дня.
На фигуре 6 показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.
ПРИМЕР 7:
Культивирование клеток осуществляли в режиме культуры с подпиткой. В культуре клеток в качестве клеток-хозяев млекопитающих применяли клетки яичника китайского хомячка (СНО) и исходно поставляли культуральную среду HyClone CDM4Mab. Соль сульфата цинка гептагидрат также добавляли в среду в концентрации, равной примерно 0,3 мМ. Напротив, в контрольную среду не добавляли никакой соли сульфата цинка. Производственный цикл ферментации начинали с исходной концентрации клеток, равной 0,3-0,45×106 клеток/мл при 37±1°C, первые 3-4 дня были отведены для роста клеток в фазе периодической культуры. Следующая стадия включала понижение температуры до 31±1°C и продолжение цикла культивирования клеток до 7-го дня.
На фигуре 7 показано снижение концентрации лактата в культуральной среде.

Claims (9)

1. Способ снижения накопления лактата от 5% до 40% при культивировании клеток млекопитающих, где указанный способ включает добавление к культуре клеток млекопитающих соли цинка в концентрации в диапазоне от 0,2 мМ до 0,4 мМ.
2. Способ по п.1, в котором соль цинка представляет собой сульфат цинка.
3. Способ по п.1, в котором линию клеток млекопитающих выбирают из группы, включающей без ограничения клетки яичника китайского хомячка (СНО), NS0 (клетки несекретирующие 0) и BHK (клетки почки новорожденного хомяка).
4. Способ по п.1, в котором культивирование проводят в системе, которую выбирают из группы, включающей без ограничения культивирование с подпиткой, периодическое культивирование, культивирование во встряхиваемых колбах и в биореакторе.
5. Способ получения антитела, где указанный способ включает следующее:
a. добавление к культивируемым клеткам млекопитающих, которые продуцируют указанное антитело, соли цинка в концентрации в диапазоне от 0,2 мМ до 0,4 мМ для снижения накопления лактата от 5% до 40%; и
b. ферментирование и извлечение указанного антитела.
6. Способ по п.5, в котором линию клеток млекопитающих выбирают из группы, включающей без ограничения клетки яичника китайского хомячка (СНО), NS0 и BHK.
7. Способ по п.5, в котором соль цинка представляет собой сульфат цинка.
8. Способ по п.5, в котором антитело выбирают из группы, включающей без ограничений антитела против VEGF-A, антитела против Her-2, антитела против CD6 и антитела к TNF.
9. Способ по п.5, в котором способ культивирования осуществляют в любой системе, которую выбирают из группы, включающей без ограничения культивирование с подпиткой, периодическое культивирование, культивирование во встряхиваемых колбах и в биореакторе.
RU2013153090/10A 2011-04-29 2012-04-27 Способ снижения накопления лактата при культивировании и способ получения антитела RU2592680C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN1486/CHE/2011 2011-04-29
IN1486CH2011 2011-04-29
PCT/IB2012/052108 WO2012147048A2 (en) 2011-04-29 2012-04-27 Methods for reducing accumulation of lactate during culturing and method for producing polypeptide

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2013153090A RU2013153090A (ru) 2015-06-10
RU2592680C2 true RU2592680C2 (ru) 2016-07-27

Family

ID=47072831

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013153090/10A RU2592680C2 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Способ снижения накопления лактата при культивировании и способ получения антитела

Country Status (7)

Country Link
US (1) US9670519B2 (ru)
EP (1) EP2702143B1 (ru)
KR (1) KR101644954B1 (ru)
CN (1) CN105189735B (ru)
MY (1) MY166973A (ru)
RU (1) RU2592680C2 (ru)
WO (1) WO2012147048A2 (ru)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
SG10201510384UA (en) 2006-09-13 2016-01-28 Abbvie Inc Cell culture improvements
WO2010048192A2 (en) 2008-10-20 2010-04-29 Abbott Laboratories Viral inactivation during purification of antibodies
MX2011004200A (es) 2008-10-20 2011-05-24 Abbott Lab Aislamento y purificacion de anticuerpos usando la cromatografia de afinidad de proteina a.
US9062106B2 (en) 2011-04-27 2015-06-23 Abbvie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
EP2702143B1 (en) 2011-04-29 2018-06-06 Biocon Research Limited Methods for reducing accumulation of lactate during culturing and method for producing polypeptide
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
PT3489254T (pt) * 2012-04-30 2022-12-30 Biocon Ltd Proteínas de fusão direcionadas/imunomoduladoras e seus métodos de fabrico
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
BR112015004467A2 (pt) 2012-09-02 2017-03-21 Abbvie Inc método para controlar a heterogeneidade de proteínas
AU2013381687A1 (en) 2013-03-12 2015-09-24 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
BR112016017660B1 (pt) 2014-02-27 2022-04-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Método para a produção de uma glicoproteína recombinante
JP7471220B2 (ja) 2017-11-30 2024-04-19 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 哺乳動物細胞の培養方法
IL302538A (en) 2019-12-06 2023-07-01 Regeneron Pharma Anti-VEGF protein preparations and methods for their production
KR102284800B1 (ko) * 2020-12-30 2021-08-03 주식회사 하플사이언스 재조합 세포외 기질 단백질의 생산을 위한 동물세포 배양용 배지 조성물 및 이를 이용한 방법

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010125187A2 (en) * 2009-04-30 2010-11-04 Ablynx Nv Method for the production of domain antibodies
UA93859C2 (en) * 2004-08-27 2011-03-25 Уайет Ресерч Айрленд Лимитед Production of polypeptides

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6156570A (en) 1997-03-20 2000-12-05 Regents Of The University Of Minnesota Process for the continuous culture of cells
US5804420A (en) 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
CA2447791A1 (en) * 2001-06-13 2002-12-19 Neslihan Delacruz Methods of culturing animal cells and polypeptide production in animal cells
ES2344789T5 (es) 2003-05-15 2017-06-14 Wyeth Llc Alimentación restringida de glucosa para el cultivo de células animales
RU2009132986A (ru) 2007-03-02 2011-04-10 Уайт (Us) Применение меди и глутамата в культуре клеток для производства полипептидов
US8470552B2 (en) * 2009-10-12 2013-06-25 Keck Graduate Institute Strategy to reduce lactic acid production and control PH in animal cell culture
EP2702143B1 (en) 2011-04-29 2018-06-06 Biocon Research Limited Methods for reducing accumulation of lactate during culturing and method for producing polypeptide

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA93859C2 (en) * 2004-08-27 2011-03-25 Уайет Ресерч Айрленд Лимитед Production of polypeptides
WO2010125187A2 (en) * 2009-04-30 2010-11-04 Ablynx Nv Method for the production of domain antibodies

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PELLETIER B. C. "Effect of copper sulfate addition on the growth and productivity of a serum-free CHO cell culture producing a recombinant antibody", 229th ACS National Meeting, in San Diego, CA, March 13-17, 2005, PAGE BIOT - 232. RUSSELL B. A. "Identification of copper as the root cause of lactate differences between raw materials sourced from different vendors", 239th ACS National Meeting & Exposition, March 21-25, 2010, PAGE BIOT - 498. BORCHARDT T. ET AL. "Differential effects of zinc on amyloid precursor protein (APP) processing in copper-resistant variants of cultured Chinese hamster ovary cells", CELLULAR AND MOLECULAR BIOLOGY, 2000, v.46, no.4, p.785-795. *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20140051174A (ko) 2014-04-30
KR101644954B1 (ko) 2016-08-02
RU2013153090A (ru) 2015-06-10
MY166973A (en) 2018-07-27
EP2702143B1 (en) 2018-06-06
WO2012147048A3 (en) 2013-01-31
US20140051124A1 (en) 2014-02-20
US9670519B2 (en) 2017-06-06
WO2012147048A2 (en) 2012-11-01
CN105189735B (zh) 2019-04-12
EP2702143A4 (en) 2014-12-17
CN105189735A (zh) 2015-12-23
EP2702143A2 (en) 2014-03-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2592680C2 (ru) Способ снижения накопления лактата при культивировании и способ получения антитела
RU2580020C2 (ru) Способ снижения гетерогенности антител и способ получения соответствующих антител
AU2014288811B2 (en) Improved process for production of monoclonal antibodies
US12018070B2 (en) Methods of shifting an isoelectric profile of a protein product and uses thereof
US9206390B2 (en) Methods to control protein heterogeneity
US11118208B2 (en) Methods for modulating protein galactosylation profiles of recombinant proteins using peracetyl galactose
US20230203554A1 (en) Process for reducing unwanted culture byproducts in cell culture medium
JP2009514532A (ja) 哺乳動物細胞を適応させるための方法
CN111373028B (zh) 蛋白质的生产方法
JP6974341B2 (ja) 改善された発酵プロセス
US20190390170A1 (en) Methods for modulating production profiles of recombinant proteins

Legal Events

Date Code Title Description
HE9A Changing address for correspondence with an applicant
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20200826