RU2580020C2 - Способ снижения гетерогенности антител и способ получения соответствующих антител - Google Patents

Способ снижения гетерогенности антител и способ получения соответствующих антител Download PDF

Info

Publication number
RU2580020C2
RU2580020C2 RU2013152982/10A RU2013152982A RU2580020C2 RU 2580020 C2 RU2580020 C2 RU 2580020C2 RU 2013152982/10 A RU2013152982/10 A RU 2013152982/10A RU 2013152982 A RU2013152982 A RU 2013152982A RU 2580020 C2 RU2580020 C2 RU 2580020C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
antibodies
antibody
cells
heterogeneity
cultivation
Prior art date
Application number
RU2013152982/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2013152982A (ru
Inventor
Ручика СРИВАСТАВА
Снеха Лакшмандас ХЕМДЕВ
Анкур БХАТНАГАР
Сараванан ДЕСАН
Ануй ДЖОЕЛ
Хариш АЙЕР
Original Assignee
Биокон Рисерч Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47071657&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2580020(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Биокон Рисерч Лимитед filed Critical Биокон Рисерч Лимитед
Publication of RU2013152982A publication Critical patent/RU2013152982A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2580020C2 publication Critical patent/RU2580020C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантному получению антител, и может быть использовано для снижения гетерогенности антител во время культивирования. Получают антитела с пониженной гетерогенностью, вызванной вариациями в относительном содержании лизинового остатка на С-концах, путем добавления в культуральную среду во время культивирования двухвалентных ионов цинка (Zn+2) в концентрации 0,05-1,5 мМ и путем снижения осмотического давления клеточной культуральной среды от 240 до 260 мОсм/кг. Изобретение позволяет получить моноклональные антитела повышенного качества, по сравнению со стандартной процедурой получения, путем снижения доли основных вариантов у антител, у которых наблюдается С-концевая вариация лизина, что снижает гетерогенность в антителах. 2 н. и 13 з.п. ф-лы, 12 ил., 12 табл., 12 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способам улучшения получения белков, например крупномасштабного получения коммерческих белков, например получения антител с использованием модифицированного способа культивирования клеток, включающего фазу клеточного роста и фазу продуцирования полипептидов. Модифицированный способ культивирования клеток регулирует качественные характеристики процесса и рабочие параметры для получения полипептидных продуктов, у которых изменилось соотношение заряженных/основных вариантов. Настоящее описание относится к снижению гетерогенности в антителах. Конкретнее, в описании раскрыт способ выращивания клеток в системе для культивирования клеток, которая снижает гетерогенность среди заряженных вариантов путем снижения доли основных вариантов.
Предпосылки создания изобретения и известный уровень техники
Большую долю продуктов биотехнологии, являются ли они коммерчески доступными или разрабатываются, составляют белковые терапевтические средства. Поэтому имеется постоянно возрастающая потребность в получении белков в клеточных культурах, например культурах животных клеток, и в улучшенных способах, относящихся к такому получению. Так, существенная часть исследований фокусируется на условиях культивирования животных клеток и способах, которые могут оптимизировать выход полипептидов, т.е. условиях и способах, в которых поддерживается высокая плотность клеток и высокий белковый титр.
В биофармацевтических моноклональных антителах часто наблюдается С-концевая вариация лизина. Гетерогенность моноклональных антител может быть связана с различными факторами, такими как аминоконцевые модификации (например, для пироглутамата), неполный процессинг С-конца, деамидирование аспарагина, фосфорилирование, гликозилирование, окисление, мутации и т.д. Подобные вариации происходят во многих типах белков и могут влиять на их активность и устойчивость в биотерапевтических средствах. Однородность антител является важной качественной характеристикой антител и считается существенной для безопасности и эффективности лекарственных средств согласно требованиям FDA и других контролирующих органов.
Показано, что моноклональные антитела имеют С-концевую гетерогенность за счет либо аргинина (Arg), либо лизина (lys) с С-конца. Когда такие С-концевые варианты МАb обрабатывают экзопептидазой карбоксипептидазой В, Arg и Lys отщепляются от С-конца обеих субъединиц антитела, что элиминирует С-концевую гетерогенность.
Карбоксипептидазы (CP) представляют собой ферменты, которые катализируют гидролиз С-концевой пептидной связи в пептидах и белках. Удаление одной или нескольких аминокислот из С-конца пептида или белка может оказать сильное влияние на биологическую активность такой молекулы. Гетерогенность MAb обычно имеет место из-за различных модификаций, вводимых в период жизни молекул от момента синтеза до момента полного выведения из организма. Исследование модификаций терапевтического средства является важным, так как существует возможность влияния на активность/безопасность препарата, что в итоге может привести к потере эффективности и повышенному риску возникновения вредного побочного эффекта.
В патенте США №5126250 раскрывается способ снижения гетереогенности антител, секретированных из клеток, продуцирующих антитела.
Сущность изобретения
Соответственно, настоящее изобретение относится к способу снижения гетерогенности антител, полученных путем культивирования клеток, который включает добавление двухвалентных ионов переходных металлов в культуральную среду для продукции антител, или изменение осмотического давления культуральной среды, или их комбинацию для получения указанных антител с пониженной гетерогенностью, и к способу получения антител с пониженной гетерогенностью, причем указанный способ включает этапы (а) культивирования клеток в культуральной среде для продуцирования антител и добавления в культуральную среду двухвалентных ионов переходных металлов, или изменения осмотического давления культуральной среды, или их комбинацию и (b) извлечения из культуральной среды антител с пониженной гетерогенностью.
Краткое описание прилагаемых фигур
Для того чтобы описание было легче понять и перенести описанное здесь на практику, можно обратиться к примерам осуществления, которые проиллюстрированы прилагающимися фигурами. Фигуры вместе с нижерасположенным подробным описанием включены в описание как его часть или служат для дополнительной иллюстрации вариантов изобретения и для пояснения различных принципов и преимуществ настоящего изобретения.
На фигуре 1 показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов цинка на момент 264 час, т.е. на 11 день (антитела 1).
На фигуре 2а показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов цинка на момент 168 час, т.е. на 7 день (антитела 1).
На фигуре 2b показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов магния на момент 168 час, т.е. на 7 день (антитела 1).
На фигуре 3 показано различие в % основных вариантов в среде с низким осмотическим давлением (240-260 мОсм/кг (mOsm/kg)) с ионами цинка и продуцирующей средой с осмотическим давлением 320 мОсм/кг на момент 168 час, т.е. на 7 день (антитела 1).
На фигуре 4 показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов цинка на момент 168 час, т.е. на 7 день (антитела 2).
На фигуре 5 показано различие в % основных вариантов в среде с низким осмотическим давлением (240-260 мОсм/кг) с ионами цинка и продуцирующей среде с интервалом осмотического давления (310-320 мОсм/кг) (антитела 3).
На фигуре 6 показано различие в % всех основных вариантов с различным начальным осмотическим давлением среды (антитела 1).
На фигуре 7 показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов цинка (1 мМ) на момент 168 час, т.е. на 7 день (антитела 1).
На фигуре 8 показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов цинка (0,5 мМ) на момент 168 час, т.е. на 7 день (антитела 1).
На фигуре 9 показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов цинка на момент 168 час, т.е. на 7 день (антитела 3).
На фигуре 10 показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов цинка на момент 168 час, т.е. на 7 день (антитела 4).
На фигуре 11 показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов цинка на момент 168 час, т.е. на 7 день (антитела 1).
На фигуре 12 показано различие в % основных вариантов в присутствии и в отсутствие ионов цинка на момент 192 час, т.е. на 8 день (антитела 3).
Примечание: в контрольные образцы ионы цинка не вводят.
Подробное описание раскрытия
Настоящее изобретение относится к способу снижения гетерогенности антител, полученных путем культивирования клеток, который включает добавление ионов металлов в культуральную среду, продуцирующую антитела, или изменение осмотического давления культуральной среды или их комбинацию для получения указанных антител с пониженной гетерогенностью.
В одном воплощении настоящего изобретения гетерогенность имеет место из-за доли заряженных вариантов антител, и при этом снижение гетерогенности осуществляют путем уменьшения доли антител с лизиновым остатком на С-конце.
В другом воплощении настоящего изобретения путем осуществления указанного способа снижается гетерогенность для доли антител, колеблющейся от примерно 75% до примерно 100%.
В еще одном воплощении настоящего изобретения антитела являются антителами, встречающимися в природе, или рекомбинантными антителами, выбранными из группы, включающей моноклональные антитела, модифицированные антитела, производные антител и фрагменты антител или их любую комбинацию.
В еще одном воплощении настоящего изобретения гетерогенность снижают путем уменьшения доли основных вариантов антител на от примерно 3% до примерно 30% и возрастания отношения основной пик/0 лизин на от примерно 5% до примерно 25%.
В еще одном воплощении настоящего изобретения двухвалентный ион переходного металла представляет собой Zn+2 в концентрации, колеблющейся от примерно 0,05 мМ до примерно 1,5 мМ.
В еще одном воплощении настоящего изобретения осмотическое давление культуральной среды изменяют для обеспечения осмотического давления, колеблющегося от примерно 240 мОсм/кг до примерно 260 мОсм/кг.
В еще одном воплощении настоящего изобретения культивирование представляет собой периодическое культивирование с подпиткой и включает культивирование клеток млекопитающих, предпочтительно культивирование линии клеток яичника китайского хомячка (СНО).
В еще одном воплощении настоящего изобретения добавление ионов металла осуществляют во время культивирования клеток, первый раз во время фазы клеточного роста и второй раз во время фазы продуцирования полипептидов; или добавление ионов металла осуществляют на начальной фазе перед указанным культивированием клеток.
Настоящее изобретение также относится к способу получения антител с пониженной гетерогенностью, причем указанный способ включает действия (а) культивирования клеток в культуральной среде для продуцирования антител и добавления в культуральную среду двухвалентных ионов переходных металлов, или изменения осмотического давления культуральной среды, или их комбинацию и (b) извлечения из культуральной среды антител с пониженной гетерогенностью.
В одном воплощении настоящего изобретения клетки культивируют в концентрации, колеблющейся от примерно 0,5×106 клеток/мл до примерно 0,6×106 клеток/мл.
В другом воплощении настоящего изобретения культивирование осуществляют при температурах, колеблющихся от примерно 36°С до примерно 38°С.
В еще одном воплощении настоящего изобретения антитела являются антителами, встречающимися в природе, или рекомбинантными антителами, выбранными из группы, включающей моноклональные антитела, модифицированные антитела, производные антител и фрагменты антител или их любую комбинацию.
В еще одном воплощении настоящего изобретения гетерогенность имеет место из-за доли заряженных вариантов антител, и при этом снижение гетерогенности осуществляют путем уменьшения доли антител с лизиновым остатком на С-конце.
В еще одном воплощении настоящего изобретения путем осуществления указанного способа снижают гетерогенность для доли антител, колеблющейся от примерно 75% до примерно 100%.
В еще одном воплощении настоящего изобретения гетерогенность снижают путем уменьшения доли основных вариантов антител на от примерно 3% до примерно 30% и возрастания отношения основной пик/0 лизин на от примерно 5% до примерно 25%.
В еще одном воплощении настоящего изобретения культивирование представляет собой периодическое культивирование с подпиткой и включает культивирование клеток млекопитающих, предпочтительно культивирование клеточной линии яичника китайского хомячка (СНО).
В еще одном воплощении настоящего изобретения ион металла представляет собой Zn+2 в концентрации, колеблющейся от примерно 0,05 мМ до примерно 1,5 мМ.
В еще одном воплощении настоящего изобретения осмотическое давление культуральной среды изменяют для обеспечения осмотического давления, колеблющегося от примерно 240 мОсм/кг до примерно 260 мОсм/кг.
В еще одном воплощении настоящего изобретения добавление ионов металла осуществляют во время культивирования, во-первых, первый раз во время фазы клеточного роста и второй раз во время фазы продуцирования полипептидов при температурах, колеблющихся от примерно 30°С до примерно 32°С, или добавление ионов металла осуществляют на начальной фазе перед указанным культивированием клеток.
В еще одном воплощении настоящего изобретения в фазе клеточного роста концентрация клеток колеблется от примерно 12×106 клеток/мл до примерно 13×106 клеток/мл, и при этом в фазе продуцирования полипептида концентрация клеток колеблется от примерно 13×106 клеток/мл до примерно 15×106 клеток/мл.
В еще одном воплощении настоящего изобретения двухвалентные ионы цинка предпочтительно используют в форме гептагидрата сульфата цинка. Другие соединения цинка могут включать, но не ограничиваются указанным, ZnH2, Zn(OH)2, Zn(NO3)2·6H2O и ZnCl2.
В одном воплощении настоящего изобретения снижение гетерогенности осуществляют путем уменьшения доли антител с лизиновым остатком на С-конце без использования фермента для удаления лизиновых остатков.
Настоящее изобретение преодолевает ограничения известного уровня техники в отношении способа снижения гетерогенности антител. Целью настоящего изобретения являются способы улучшения получения белка, т.е. крупномасштабного получения белка, например получения антител, с использованием модифицированного способа культивирования клеток, включающего фазу клеточного роста и фазу продуцирования полипептидов.
В соответствии с другим вариантом настоящего изобретения количество основных вариантов антител уменьшают путем добавления ионов металла, подобных ионам цинк+2.
В соответствии с еще одним вариантом настоящего изобретения концентрация ионов цинка находится в интервале 0,05-1,5 мМ.
В соответствии с еще одним вариантом настоящего изобретения количество основных вариантов антител уменьшают путем снижения осмотического давления производственных питательных сред.
Еще один объект настоящего изобретения заключается в способе выращивания клеток в системе культивирования, которая снижает гетерогенность среди заряженных вариантов путем возрастания образования главный пик/0 лизин, при этом в С-концах любых цепей антитела имеется, по существу, ноль лизинов.
Еще одной целью настоящего изобретения является уменьшение основного варианта в клеточной культуральной среде на 3-30%.
Соответственно, настоящее изобретение относится к способам улучшения получения белка, например крупномасштабного коммерческого получения белка, например, получения антител, с использованием модифицированного способа культивирования клеток, включающего фазу клеточного роста и фазу продуцирования полипептидов.
Настоящее изобретение также относится к снижению микрогетерогенности в антителах. Конкретнее, изобретение включает способ выращивания клеток в системе культивирования клеток, которая снижает гетерогенность среди заряженных вариантов путем уменьшения образования основных вариантов.
Настоящее изобретение относится к способу получения моноклональных антител с измененной долей основных вариантов путем культивирования клеток млекопитающих и извлечения MAb из культуральной среды и/или клеток.
В одном воплощении настоящего изобретения количество основных вариантов антител уменьшают путем добавления ионов металла, подобных ионам цинк+2, в интервале 0,05-1,5 мМ и путем использования производственных питательных сред с осмотическим давлением в интервале 240-260 мОсм/кг.
В еще одном воплощении настоящего изобретения снижается % основных вариантов антитела, которые обычно связаны со стандартной процедурой получения. Преимущественно изобретение обеспечивает экономическую и коммерческую выгоду, возникшую благодаря получению большего количества продукта нужного качества, в особенности, в случае биоподобных антител.
Определение терминов
Термин «антитело» включает антитела или производные антител или их фрагменты, и характеристики антител также применяют к препаратам антитела настоящего изобретения. К фрагментам антител, функциональным эквивалентам или гомологам антител относят любой полипептид, который включает связывающий домен иммуноглобулина, или пептиды, имитирующие данный связывающий домен вместе с Fc-областью или областью, гомологичной Fc-области или, по меньшей мере, ее части. Химерные молекулы, включающие связывающий домен иммуноглобулина, или эквиваленты, слитые с другим полипептидом, также включены.
Типичные молекулы антител представляют собой интактные молекулы иммуноглобулина и те части иммуноглобулина, которые содержат паратоп, включая те части молекулы, которые известны как Fab, Fab′, F(ab′)2, Fc и F(v), а также структуру N-гликана.
Антитело описывают как функциональный компонент сыворотки, и этот термин часто относят или к набору молекул (антител или иммуноглобулинов, фрагментам и т.п.), или к одной молекуле (к молекуле антитела или молекуле иммуноглобулина). Молекула антитела способна связываться или взаимодействовать со специфической антигенной детерминантой (антигеном или эпитопом антигена), что, в свою очередь, может привести к индукции иммунологических эффекторных механизмов. Индивидуальную молекулу антитела обычно рассматривают как моноспецифическую, а композиция молекул антител может быть как моноклональной (т.е. состоящей из идентичных молекул антитела) или поликлональной (т.е. состоящей из разных молекул антител, реагирующих с одним и тем же или с различными эпитопами на одном и том же антигене или на отдельных, различных антигенах). Отдельные и различные молекулы антител, составляющие поликлональное антитело, могут быть названы «члены». Каждая молекула антитела обладает уникальной структурой, которая дает ей возможность специфически связываться с соответствующим ей антигеном, и все природные молекулы антител, в целом, имеют одинаковую основную структуру, состоящую из двух идентичных легких цепей и двух идентичных тяжелых цепей. Гетерогенность определяется как феномен, при котором секретированные антитела имеют различные дискретные биохимические формы, такие как дополнительная аминокислота или кислоты на карбокси-конце одной или обеих тяжелых цепей антитела, или как модификация аминокислоты, что вызывает различие в общем распределении заряда антитела, и другие.
Как применены в настоящем документе, выражения «полипептид» или «полипептидный продукт» представляют собой синонимы терминов «белок» и «белковый продукт», соответственно, и, как это обычно понимают в данной области техники, относятся, по меньшей мере, к одной цепи аминокислот, последовательно связанных посредством пептидных связей. В определенных воплощениях, «представляющий интерес белок» или «представляющий интерес полипептид» или тому подобное представляет собой белок, кодируемый экзогенной молекулой нуклеиновой кислоты, которой была трансформирована клетка-хозяин. В определенных воплощениях, в которых экзогенная ДНК, которой была трансформирована клетка-хозяин, кодирует «представляющий интерес белок», последовательность нуклеиновой кислоты экзогенной DNA определяет последовательность аминокислот. В определенных воплощениях, «представляющий интерес белок» представляет собой белок, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, которая эндогенна по отношению к клетке-хозяину. В определенных воплощениях, экспрессию такого эндогенного представляющего интерес белка изменяют путем трансфекции в клетку-хозяина молекулы экзогенной нуклеиновой кислоты, которая, например, может содержать одну или несколько регуляторных последовательностей и/или кодирует белок, который увеличивает экспрессию представляющего интерес белка.
В настоящем документе, термин «вариант антитела» относится к антителу, имеющему последовательность аминокислот, которая отличается от аминокислотной последовательности исходного антитела. Предпочтительно, вариант антитела включает вариабельный домен тяжелой цепи или вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая не встречается в природе. Такие варианты обязательно имеют менее чем 100% идентичности или сходства в последовательности с родительским антителом. В предпочтительном воплощении, вариант антитела будет иметь аминокислотную последовательность с от примерно 75% до менее чем 100% идентичности или сходства аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена или тяжелой, или легкой цепи исходного антитела, более предпочтительно, от примерно 80% до менее чем 100%, более предпочтительно, от примерно 85% до менее чем 100%, более предпочтительно, от примерно 90% до менее чем 100%, и наиболее предпочтительно, от примерно 95% до менее чем 100%. Идентичность или сходство по отношению к данной последовательности определяют в настоящем документе как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, который идентичен (т.е. тот же самый остаток) остаткам исходного антитела, после выравнивания последовательностей и введения, при необходимости, разрывов для достижения максимального процента идентичности последовательности. Термины «среда», «среда для культивирования клеток» и «культуральная среда», как применены в настоящем документе, относятся к раствору, содержащему питательные вещества, которые питают растущие животные клетки, например клетки млекопитающих, и также могут относиться к среде вместе с клетками (Например, могут использоваться коммерчески доступные среды, такие как культуральные среды Hyclone CDM4NS0, Hyclone CDM4Mab, Invitrogen CDOptiCHO и Lonza Power CHO).
Предпочтительными клетками-хозяевами млекопитающих являются клетки СНО, и предпочтительным типом ферментации является периодическая ферментация с подпиткой. Примерами других клеточных линий являются NS0 (несекретирующие) и ВНК (почки детеныша хомяка).
Способы и векторы для генной инженерии клеток и/или клеточных линий для экспрессии белка, представляющего интерес, хорошо известны специалистам в данной области техники. Методы генной инженерии включают, но не ограничиваются перечисленным, экспрессирующие векторы, направленную гомологичную рекомбинацию и активацию генов. Необязательно белки экспрессируются под контролем гетерологичного регуляторного элемента, такого как, например, промотор, который в природе не направляет продуцирование такого полипептида. Например, промотор может представлять собой сильный вирусный промотор (например, CMV, SV40), который направляет экспрессию полипептида млекопитающего. Клетка-хозяин может или не может продуцировать этот белок в природе. Например, клетка-хозяин может представлять собой клетку СНО, которая создана методами генной инженерией для продуцирования белка, что означает, что в клетку СНО введена нуклеиновая кислота, кодирующая белок.
Специалисту в данной области техники известно, при какой температуре и/или концентрации следует культивировать определенную клеточную линию. Например, большинство клеток млекопитающих, например клетки СНО, хорошо растут в интервале температур от примерно 35°С до 39°С, предпочтительно, при 37°С, в то время как клетки насекомых как правило, культивируют при 27°С.
В одном воплощении раскрытия белок, полученный с использованием способа по изобретению, представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Используемый в данном случае термин «антитело» включает белок, включающий, по меньшей мере, один, как правило, два домена VH или их части и/или, по меньшей мере, один, как правило, два домена VL или их части. В некоторых воплощениях антитело представляет собой тетрамер из двух тяжелых цепей иммуноглобулина и двух легких цепей иммуноглобулина, при этом тяжелые и легкие цепи иммуноглобулина взаимосвязаны, например, дисульфидными связями. Антитела или их части могут быть получены из любого источника, включая, но не ограничиваясь перечисленным, грызуна, примата (например, человека и примата, не являющегося человеком), акулы и т.д., или они могут быть получены рекомбинантно, например химерные, гуманизированные и/или созданными in vitro, например, способами, хорошо известными специалистам в данной области техники.
В предпочтительном воплощении культивирование клеток по настоящему раскрытию выполняют во встряхиваемой колбе (рабочий объем 30 мл) и/или биореакторе (1 л/50 л) и используют периодический способ с подпиткой. При культивировании с подпиткой сначала подают клетки-хозяева млекопитающих и культуральную среду с осмотическим давлением 300-310 мОсм/кг и периодически добавляют питательные вещества (аминокислоты, глюкозу и витамины). Цикл производственной ферментации начинают с начального числа клеток 0,5-0,6×106 клеток/мл при 37±1°С и первые 3-4 суток предназначают для роста клеток. Следующая стадия включает понижение температуры до 31±1°С и добавление ионов цинка дважды с промежутком, так что общее количество добавки доходит до 0,05-1,5 мМ (одна доза во время фазы роста на 3ий/4ый день и другая доза во время фазы продуцирования на 6ой/7ой/8ой день). В препарате антител в соответствии с воплощениями настоящего изобретения предпочтительно, по меньшей мере, 90%, предпочтительно, по меньшей мере, 95%, предпочтительнее, по меньшей мере, 99%, наиболее предпочтительно, 100% модифицированных антител, их производных или фрагментов утрачивают С-концевой остаток лизина, в частности, определенный по сумме тяжелых цепей (которые обычно могут включать лизин). Так как антитела могут иметь больше цепей, которые потенциально включают С-концевой лизин, следует иметь в виду, что количественный процент утраты лизина относится ко всем цепям, которые потенциально имеют С-концевой лизин. Показано, что моноклональные антитела являются гетерогенными в случае наличия С-концевого лизина.
В другом воплощении культивирование клеток по настоящему изобретению выполняют во встряхиваемой колбе (рабочий объем 30 мл) и/или биореакторе (1 л/50 л) и используют периодический способ с подпиткой. При предпочтительном культивировании с подпиткой сначала подают клетки-хозяева млекопитающих и культуральную среду с пониженным осмотическим давлением 240-260 мОсм/кг, и периодически добавляют питательные вещества (аминокислоты, глюкозу и витамины). Осмотическое давление среды снижают путем разбавления сред Milli/WFI. Цикл производственной ферментации начинают с начального числа клеток 0,5-0,6×106 клеток/мл при 37±1°С и первые 3-4 суток предназначают для роста клеток. Следующая стадия включает понижение температуры до 31±1°С и добавление ионов цинка дважды с промежутком в концентрации 0,1 мМ (одна доза во время фазы роста на 3ий/4ый день и другая доза во время фазы продуцирования на 5ый/6ой/7ой/80ой день). В препарате антител в соответствии с воплощениями настоящего изобретения предпочтительно, по меньшей мере, 90%, предпочтительно, по меньшей мере, 95%, предпочтительнее, по меньшей мере, 99%, наиболее предпочтительно, 100% модифицированных антител, их производных или фрагментов утрачивают С-концевой остаток лизина, в частности, определенный по сумме тяжелых цепей (которые обычно могут включать лизин). Так как антитела могут иметь больше цепей, которые потенциально включают С-концевой лизин, следует иметь в виду, что количественный процент утраты лизина относится ко всем цепям, которые потенциально имеют С-концевой лизин. Показано, что моноклональные антитела являются гетерогенными в случае наличия С-концевого лизина.
Следующие описания конкретных воплощений настоящего изобретения представлены для целей иллюстрации и описания. Они не предназначены для того, чтобы быть исчерпывающими или ограничивать изобретение определенными раскрытыми формами. С учетом вышеизложенных идей возможны различные модификации и вариации. Кроме того, многие модификации могут быть сделаны для адаптации конкретной ситуации, материала, состава вещества, способа, стадии или стадий способа к цели, духу и объему настоящего изобретения. Все такие модификации должны находиться в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
Далее, технология настоящей заявки будет детально представлена с помощью следующих примеров. Однако примеры не должны быть истолкованы как ограничивающие объем изобретения
Примеры
В настоящем изобретении раскрывается получение антител со сниженной гетерогенностью. Антитело-1 представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, которое ингибирует сосудистый эндотелиальный фактор роста A (VEGF-A). Антитело-2 представляет собой моноклональное антитело, которое препятствует рецептору HER2/neu (антитело против her 2). Антитело-3 представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, которое ингибирует TNF, и антитело-4 представляет собой антитело против CD6.
Пример 1
Использование ионов цинка для уменьшения основных вариантов или возрастания соотношения главный пик/0 лизин антитела-1
Обеспечивают культуральные среды с осмотическим давлением 300-310 мОсм/кг которые инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Когда количество клеток на 4ый день достигает 12-13×106/мл, температуру изменяют с 37°С на 31°С. Первую дозу цинка загружают в концентрации 0,1 мМ. На 8ой день загружают еще одну дозу цинка в концентрации 0,1 мМ, когда количество клеток достигнет 13-15×106/мл. Процесс проводят до 11го дня. Наблюдаемая гетерогенность приводится в таблице ниже.
Figure 00000001
Пример 2
Использование ионов цинка для уменьшения основных вариантов или возрастания соотношения главный пик/0 лизин антитела-1
Культивирование клеток выполняют по типу периодического культивирования с подпиткой. При периодическом культивировании с подпиткой сначала обеспечивают клетки-хозяева млекопитающих и культуральную среду и периодически добавляют питательные вещества. Культуральные среды инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Когда количество клеток достигает 12-13×106/мл (на 3ий день), температуру изменяют с 37°С на 31°С, и затем загружают первую дозу ионов цинка в концентрации 0,1 мМ. Другую дозу в концентрации 0,1 мМ загружают, когда количество клеток достигнет 13-15×106/мл (на 6ой день), и проводят процесс в колбе еще до 7ого дня. В другую культуральную среду загружают ионы магния, которые не показывают различия в отношении основных вариантов, и данный пример приводится как отрицательный контроль. Наблюдаемая гетерогенность приводится в таблице ниже.
Figure 00000002
Пример 3
Использование производственных питательных сред с низким осмотическим давлением с ионами цинка для уменьшения основных вариантов или возрастания соотношения главный пик/0 лизин антитела 1
Культивирование клеток выполняют по типу периодического культивирования с подпиткой. При культивировании сначала обеспечивают клетки-хозяева млекопитающих и культуральную среду с низким осмотическим давлением и периодически добавляют питательные вещества. Культуральные среды инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Когда количество клеток достигает 12-13×106/мл (на 3ий день), температуру изменяют с 37°С на 31°С, и затем загружают первую дозу ионов цинка в концентрации 0,1 мМ. Еще одну дозу в концентрации 0,1 мМ загружают, когда количество клеток достигнет 13-15×106/мл (на 6ой день), и проводят ферментацию еще до 7ого дня. Наблюдаемое осмотическое давление приводится в таблице ниже.
Figure 00000003
Пример 4
Использование ионов цинка для уменьшения основных вариантов или возрастания соотношения главный пик/0 лизин антитела-2
Культивирование клеток выполняют по типу периодического культивирования с подпиткой. Сначала обеспечивают культуры клеток-хозяев млекопитающих и культуральную среду (с низким осмотическим давлением) и периодически добавляют питательные вещества. Культуральные среды инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Когда количество клеток достигает 12-13×106/мл (на 3ий день), температуру изменяют с 37°С на 31°С, и затем загружают первую дозу ионов цинка в концентрации 0,1 мМ. Еще одну дозу в концентрации 0,1 мМ добавляют, когда количество клеток достигнет 13-15×106/мл (на 6ой день), и проводят ферментацию еще до 7ого дня. Наблюдаемая гетерогенность приводится в таблице ниже.
Figure 00000004
Пример 5
Использование производственных питательных сред с низким осмотическим давлением для уменьшения основных вариантов или возрастания отношения главный пик/0 лизин антитела 3
Культивирование клеток выполняют в промышленном биореакторе, и используют тип периодического культивирования с подпиткой. При культивировании с подпиткой сначала подают клетки-хозяева млекопитающих и культуральную среду с низким осмотическим давлением и периодически добавляют питательные вещества. В данном опыте биореактор инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Когда количество клеток достигает 12-13×106/мл (на 3ий день), температуру изменяют с 37°С на 31°С, и затем загружают первую дозу ионов цинка в концентрации 0,1 мМ. Еще одну дозу в концентрации 0,1 мМ загружают, когда количество клеток достигнет 13-15×106/мл (на 5ый день), и проводят ферментацию еще до 12ого дня.
Наблюдаемое осмотическое давление приводится в таблице ниже.
Figure 00000005
Пример 6
Использование производственных питательных сред с низким осмотическим давлением для уменьшения основных вариантов или возрастания отношения главный пик/0 лизин антитела 1
Культивирование клеток выполняют по типу периодического с подпиткой. При периодическом культивировании с подпиткой сначала подают клетки-хозяева млекопитающих и культуральную среду с низким осмотическим давлением и периодически добавляют питательные вещества. Используют три среды с различными уровнями начального осмотического давления. Культуральные среды инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Периодическое культивирование допускают еще до 7ого дня. Культуральные среды показывают, что при снижении осмотического давления начальной среды имеет место снижение общего % основных вариантов. Различия в профиле роста клеточной линии не отмечают. Наблюдаемое снижение количества основных вариантов со снижением осмотического давления приводится в таблице ниже.
Figure 00000006
Пример 7
Использование ионов цинка для уменьшения основных вариантов или повышения отношения главный пик/0 лизин антитела 1
Культивирование клеток выполняют по типу периодического с подпиткой. При периодическом культивировании с подпиткой сначала подают клетки-хозяева млекопитающих и культуральную среду (включая 1 мМ ионов цинка) и периодически добавляют питательные вещества. Культуральные среды инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Когда количество клеток достигает 12-13×106/мл, температуру изменяют с 37°С на 31°С, и проводят процесс в колбе еще до 7ого дня. Наблюдаемое снижение гетерогенности приводится в таблице ниже.
Figure 00000007
Пример 8
Использование ионов цинка для уменьшения основных вариантов или повышения отношения главный пик/0 лизин антитела 1
Культивирование клеток выполняют по типу периодического с подпиткой. Культуральные среды с 0,5 мМ ионов цинка инокулируют 0,5-0,6×106/мл клеток, и в культуру периодически добавляют питательные вещества. По достижении числа клеток 12-13×106/мл температуру изменяют с 37°С на 31°С, и проводят ферментацию еще до 7ого дня. Наблюдаемое снижение гетерогенности приводится в таблице ниже.
Figure 00000008
Пример 9
Использование ионов цинка для уменьшения основных вариантов или повышения отношения главный пик/0 лизин антитела-3
Культивирование клеток выполняют с использованием периодического типа культивирования с подпиткой. Культуральные среды инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. По достижении числа клеток 12-13×106/мл температуру изменяют с 37°С на 31°С, и загружают первую дозу ионов цинка в концентрации 0,1 мМ, и другую дозу загружают в 6ой день, и проводят процесс еще до 7ого дня. Наблюдаемая гетерогенность приводится в таблице ниже.
Figure 00000009
Пример 10
Использование ионов цинка для уменьшения основных вариантов или повышения отношения главный пик/0 лизин антитела-4
Культивирование клеток выполняют по типу периодического культивирования с подпиткой. При периодическом культивировании с подпиткой сначала подают клетки-хозяева млекопитающих и культуральную среду и периодически добавляют питательные вещества. Культуральные среды инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Когда количество клеток достигает 12-13×106/мл (на 3ий день), температуру изменяют с 37°С на 31°С, и загружают первую дозу ионов цинка в концентрации 0,1 мМ, а затем загружают другую дозу в концентрации 0,1 мМ, когда количество клеток достигает 13-15×106/мл (на 6ой день), и проводят ферментацию еще до 7ого дня. Наблюдаемое снижение гетерогенности приводится в таблице ниже.
Figure 00000010
Пример 11
Использование ионов цинка для уменьшения основных вариантов или повышения отношения главный пик/0 лизин антитела-1
Культивирование клеток выполняют по типу периодического культивирования с подпиткой. Культуральную среду Hyclone CDM4Mab периодически подпитывают питательными веществами. Культуральные среды инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Когда количество клеток достигает 12-13×106/мл (на 3ий день), температуру изменяют с 37°С на 31°С, и затем загружают первую дозу ионов цинка в концентрации 0,15 мМ, а затем загружают другую дозу в концентрации 0,1 мМ в 6ой день, и проводят ферментацию еще до дня 7. Наблюдаемое снижение гетерогенности приводится в таблице ниже.
Figure 00000011
Пример 12
Использование ионов цинка для уменьшения основных вариантов или повышения отношения главный пик/0 лизин антитела-3
Культивирование клеток выполняют по типу периодического с подпиткой. Культуральные среды Invitrogen CDOptiCHO периодически снабжают питательными веществами. Культуральные среды инокулируют клетками в концентрации 0,5-0,6×106/мл и позволяют им расти. Когда количество клеток достигает 12-13×106/мл (день 3), температуру изменяют с 37°С на 31°С, и загружают первую дозу ионов цинка в концентрации 0,1 мМ, а затем загружают другую дозу в концентрации 0,1 мМ в день 6, и проводят ферментацию еще до дня 8. Наблюдаемое снижение гетерогенности приводится в таблице ниже.
Figure 00000012

Claims (15)

1. Способ снижения гетерогенности, вызванной вариациями в относительном содержании лизинового остатка на С-конце антител, полученных путем культивирования клеток, путем уменьшения относительного содержания лизинового остатка на С-концах антител, включающий добавление двухвалентного иона цинка в концентрации, находящейся в диапазоне от примерно 0,05 мМ до примерно 1,5 мМ в культуральную среду, или уменьшение осмотического давления культуральной среды до давления, находящегося в диапазоне от примерно 240 мОсм/кг до примерно 260 мОсм/кг, или их комбинацию для получения указанных антител с пониженной гетерогенностью.
2. Способ по п. 1, при этом путем осуществления указанного способа снижают гетерогенность для доли антител, колеблющейся от примерно 75% до примерно 100%.
3. Способ по п. 1, при этом антитела являются антителами, встречающимися в природе, или рекомбинантными антителами, выбранными из группы, включающей моноклональные антитела, модифицированные антитела, производные антител и фрагменты антител или их любую комбинацию.
4. Способ по п. 1, при этом снижение гетерогенности относительного содержания лизина у антител составляет от 3% до 30%, и возрастание соотношения основной пик/0 лизин антител составляет от 5% до 25%.
5. Способ по п. 1, при этом культивирование представляет собой периодическое культивирование с подпиткой и включает культивирование клеток млекопитающих, предпочтительно культивирование линии клеток яичника китайского хомячка (СНО).
6. Способ по п. 1, при этом добавление двухвалентного иона цинка осуществляют во время культивирования клеток при температуре, находящейся в диапазоне от примерно 30°C до примерно 32°C, первый раз во время фазы клеточного роста и второй раз во время фазы продуцирования полипептидов; или добавление двухвалентного иона цинка осуществляют на начальной фазе перед указанным культивированием клеток.
7. Способ получения антитела с пониженной гетерогенностью, вызванной вариациями в относительном содержании лизинового остатка на С-конце антитела, путем уменьшения относительного содержания лизинового остатка на С-конце антитела, включающий следующие действия:
a) культивирования клеток в культуральной среде для получения антитела и добавления в культуральную среду двухвалентного иона цинка в концентрации, находящейся в диапазоне от примерно 0,05 мМ до примерно 1,5 мМ, или уменьшения осмотического давления культуральной среды до давления, находящегося в диапазоне от примерно 240 мОсм/кг до примерно 260 мОсм/кг, или их комбинацию; и
b) извлечения из культуральной среды антитела с пониженной гетерогенностью.
8. Способ по п. 7(a), при этом клетки культивируют в концентрации, находящейся в диапазоне от примерно 0,5×106 клеток/мл до примерно 0,6×106 клеток/мл.
9. Способ по п. 7(a), при этом культивирование осуществляют при температурах, находящихся в диапазоне от примерно 36°C до примерно 38°C.
10. Способ по п. 7, при этом антитело является антителом, встречающимся в природе, или рекомбинантным антителом, выбранным из группы, включающей моноклональное антитело, модифицированное антитело, производное антитела и фрагмент антитела или их любую комбинацию.
11. Способ по п. 7, при этом путем осуществления указанного способа снижают гетерогенность для доли антител, находящейся в диапазоне от примерно 75% до примерно 100%.
12. Способ по п. 7, при этом снижение в гетерогенности относительного содержания лизина в антителе составляет от 3% до 30%, и возрастание соотношения основной пик/0 лизин антител составляет от 5% до 25%.
13. Способ по п. 7, при этом культивирование представляет собой периодическое культивирование с подпиткой и включает культивирование клеток млекопитающих, предпочтительно культивирование линии клеток яичника китайского хомячка (СНО).
14. Способ по п. 7(b), при этом добавление двухвалентного иона цинка осуществляют во время культивирования, первый раз во время фазы клеточного роста и второй раз во время фазы продуцирования полипептидов при температурах, находящихся в диапазоне от примерно 30°C до примерно 32°C; или добавление двухвалентного иона цинка осуществляют на начальной фазе перед указанным культивированием клеток.
15. Способ по п. 14, при этом в фазе клеточного роста концентрация клеток находится в диапазоне от примерно 12×106 клеток/мл до примерно 13×106 клеток/мл, и при этом в фазе продуцирования полипептида концентрация клеток находится в диапазоне от примерно 13×106 клеток/мл до примерно 15×106 клеток/мл.
RU2013152982/10A 2011-04-29 2012-04-27 Способ снижения гетерогенности антител и способ получения соответствующих антител RU2580020C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN1483/CHE/2011 2011-04-29
IN1483CH2011 2011-04-29
PCT/IB2012/052114 WO2012147053A1 (en) 2011-04-29 2012-04-27 A method for reducing heterogeneity of antibodies and a process of producing the antibodies thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2013152982A RU2013152982A (ru) 2015-06-10
RU2580020C2 true RU2580020C2 (ru) 2016-04-10

Family

ID=47071657

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013152982/10A RU2580020C2 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Способ снижения гетерогенности антител и способ получения соответствующих антител

Country Status (10)

Country Link
US (1) US9631216B2 (ru)
EP (1) EP2702164B8 (ru)
KR (1) KR101591671B1 (ru)
CN (1) CN104024423B (ru)
DK (1) DK2702164T3 (ru)
ES (1) ES2560470T3 (ru)
MY (1) MY169935A (ru)
PL (1) PL2702164T3 (ru)
RU (1) RU2580020C2 (ru)
WO (1) WO2012147053A1 (ru)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112013018751B1 (pt) * 2010-12-28 2021-01-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha (Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) método para modular o nível de componentes de homogeneidade de uma proteína, método para produzir uma proteína desejada, medicamento e método para preparação do mesmo
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
KR101591671B1 (ko) 2011-04-29 2016-02-04 바이오콘 리서치 리미티드 항체의 이질성을 감소시키는 방법 및 그 항체의 제조방법
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
US9181572B2 (en) * 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
AU2013255542C1 (en) 2012-04-30 2017-06-22 Biocon Limited Targeted/immunomodulatory fusion proteins and methods for making same
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
WO2014035475A1 (en) 2012-09-02 2014-03-06 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
DK2970512T3 (en) * 2013-03-12 2019-01-14 Biocon Ltd IMMUNO MODULATOR FUSION PROTEINS AND PROCEDURES FOR PRODUCING THEREOF
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
US8921526B2 (en) 2013-03-14 2014-12-30 Abbvie, Inc. Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
CA2907140A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods to control c-terminal lysine, galactose and sialic acid content in recombinant proteins
WO2014182658A1 (en) * 2013-05-06 2014-11-13 Abbvie Inc. Compositions for cell culture and methods of using the same
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
KR101867134B1 (ko) * 2015-03-23 2018-06-12 한양대학교 산학협력단 포유류 세포를 이용하여 목적 물질을 고효율로 생산하기 위한 세포 배양 배지, 이를 이용한 세포 배양 방법 및 목적 물질의 생산 방법
PT3500586T (pt) 2016-10-17 2021-06-17 Enzene Biosciences Ltd Processo contínuo para reduzir a heterogeneidade da proteína terapêutica
EP3947632A1 (en) 2019-04-01 2022-02-09 The Automation Partnership (Cambridge) Ltd. Operation process for a cell cultivation system
MA56130A (fr) * 2019-06-10 2022-04-13 Takeda Pharmaceuticals Co Procédés de culture cellulaire et compositions pour la production d'anticorps
WO2021066772A1 (en) * 2019-10-01 2021-04-08 Arven Ilac Sanayi Ve Ticaret Anonim Sirketi Cell culture medium for reducing fucosylation and basic variants in the production of antibodies
WO2021112927A1 (en) 2019-12-06 2021-06-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-vegf protein compositions and methods for producing the same
CN118240744A (zh) * 2024-03-06 2024-06-25 上海迈邦生物科技有限公司 一种同时调节细胞表达产物聚体、电荷异质性和提高产量的方法

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US6048728A (en) 1988-09-23 2000-04-11 Chiron Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity, and product expression
EP0435911B1 (en) 1988-09-23 1996-03-13 Cetus Oncology Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression
US5126250A (en) * 1988-09-28 1992-06-30 Eli Lilly And Company Method for the reduction of heterogeneity of monoclonal antibodies
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
GB9022545D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Culture medium
US5705364A (en) 1995-06-06 1998-01-06 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process
US6528286B1 (en) 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
WO1999061650A1 (en) 1998-05-29 1999-12-02 Genentech, Inc. Cell culture process for producing glycoproteins
EP1404813A4 (en) * 2001-06-13 2004-11-24 Genentech Inc METHOD FOR CULTIVATING ANIMAL CELLS AND POLYPEPTIDE PRODUCTION IN ANIMAL CELLS
EA008670B1 (ru) 2003-05-09 2007-06-29 Круселл Холланд Б.В. Культуры e1-иммортализованных клеток и способы их культивирования с целью повышения выхода их продукции
US7294484B2 (en) 2004-08-27 2007-11-13 Wyeth Research Ireland Limited Production of polypeptides
TWI364458B (en) 2004-08-27 2012-05-21 Wyeth Res Ireland Ltd Production of tnfr-lg
NZ554520A (en) 2004-10-22 2010-03-26 Amgen Inc Methods for refolding of recombinant antibodies
RS51913B (en) 2004-11-02 2012-02-29 Ares Trading S.A. Mammalian cell culture medium without serum content
BRPI0518449A2 (pt) * 2004-11-19 2008-11-18 Biogen Idec Inc mÉtodos para produzir cÉlulas mamÍferas
US20070190057A1 (en) 2006-01-23 2007-08-16 Jian Wu Methods for modulating mannose content of recombinant proteins
PT2495307T (pt) 2006-07-13 2018-05-10 Wyeth Llc Produção do fator ix de coagulação com padrão melhorado de glicosilação
MX340242B (es) * 2006-07-14 2016-07-01 Dpx Holdings Bv Proceso mejorado para el cultivo de celulas.
EP2395077A1 (en) 2006-11-03 2011-12-14 Wyeth LLC Glycolysis-inhibiting substances in cell culture
EP2031064A1 (de) 2007-08-29 2009-03-04 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Verfahren zur Steigerung von Proteintitern
WO2009114641A1 (en) * 2008-03-11 2009-09-17 Genentech, Inc. Antibodies with enhanced adcc function
WO2009126564A1 (en) 2008-04-07 2009-10-15 Bayer Healthcare Llc Methods of recombinant production of glycoproteins
WO2010017338A1 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 Praxair Technology, Inc. METHOD FOR CONTROLLING pH, OSMOLALITY AND DISSOLVED CARBON DIOXIDE LEVELS IN A MAMMALIAN CELL CULTURE PROCESS TO ENHANCE CELL VIABILITY AND BIOLOGIC PRODUCT YIELD
CA2737580A1 (en) 2008-09-26 2010-04-01 Schering Corporation High titer antibody production
PL2424889T3 (pl) * 2009-04-30 2016-01-29 Ablynx Nv Sposób wytwarzania przeciwciał domenowych
WO2011039150A1 (en) 2009-10-02 2011-04-07 Roche Glycart Ag A-fucosylation detection in antibodies
KR101591671B1 (ko) 2011-04-29 2016-02-04 바이오콘 리서치 리미티드 항체의 이질성을 감소시키는 방법 및 그 항체의 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
MY169935A (en) 2019-06-18
EP2702164A1 (en) 2014-03-05
KR101591671B1 (ko) 2016-02-04
US20140199729A1 (en) 2014-07-17
US9631216B2 (en) 2017-04-25
EP2702164B8 (en) 2016-03-16
WO2012147053A1 (en) 2012-11-01
ES2560470T3 (es) 2016-02-19
RU2013152982A (ru) 2015-06-10
PL2702164T3 (pl) 2016-06-30
CN104024423B (zh) 2017-03-15
CN104024423A (zh) 2014-09-03
DK2702164T3 (en) 2016-02-01
KR20140078581A (ko) 2014-06-25
EP2702164B1 (en) 2015-11-25
EP2702164A4 (en) 2014-12-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2580020C2 (ru) Способ снижения гетерогенности антител и способ получения соответствующих антител
RU2592680C2 (ru) Способ снижения накопления лактата при культивировании и способ получения антитела
JP2023133559A (ja) タンパク質産物の等電性プロファイルをシフトさせる方法およびその使用
US20200299402A1 (en) Methods of Controlling the Formation of Disulfide Bonds in Protein Solutions
US20180312802A1 (en) Methods for modulating production profiles of recombinant proteins in perfusion mode
US10745663B2 (en) Methods for modulating production profiles of recombinant proteins
US10767160B2 (en) Methods for modulating production profiles of recombinant proteins
EP3510141B1 (en) Methods for modulating production profiles of recombinant proteins

Legal Events

Date Code Title Description
HE9A Changing address for correspondence with an applicant
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20200826