HU224306B1 - Eljárás, tápközeg és sejttenyésztő rendszer rekombináns VIII. faktor előállítására fehérjementes közegben - Google Patents
Eljárás, tápközeg és sejttenyésztő rendszer rekombináns VIII. faktor előállítására fehérjementes közegben Download PDFInfo
- Publication number
- HU224306B1 HU224306B1 HU9800901A HUP9800901A HU224306B1 HU 224306 B1 HU224306 B1 HU 224306B1 HU 9800901 A HU9800901 A HU 9800901A HU P9800901 A HUP9800901 A HU P9800901A HU 224306 B1 HU224306 B1 HU 224306B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- medium
- concentration
- vili
- molybdenum
- lithium
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 18
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims 2
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 title abstract description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 47
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 claims abstract description 20
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 17
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 claims abstract description 10
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 8
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims abstract description 5
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 239000011651 chromium Substances 0.000 claims abstract description 4
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 44
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 7
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- -1 molybdenum ions Chemical class 0.000 claims description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 5
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 5
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 5
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 claims description 4
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 3
- 229910021654 trace metal Inorganic materials 0.000 claims 7
- HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N Lithium ion Chemical compound [Li+] HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910001430 chromium ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims 1
- 229910001416 lithium ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 abstract description 8
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 abstract description 8
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 abstract description 6
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 abstract description 2
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 abstract description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 101150017040 I gene Proteins 0.000 abstract 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 4
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 3
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 2
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 108090000295 Nucellin Proteins 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N flutamide Chemical compound CC(C)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 229910004806 Na2 SiO3.9H2 O Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 1
- 229960000900 human factor viii Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002687 intercalation Effects 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000006175 metal-ion buffer Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008263 repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/20—Transition metals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/35—Polyols, e.g. glycerin, inositol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
- C12N2500/95—Protein-free medium and culture conditions
Abstract
A találmány tárgyát eljárások képezik rekombináns VIII. faktorelőállítására a VIII. faktor génjét hordozó emlőssejtekben, plazmábólszármazó fehérjéktől – például albumintól – mentes, poliolokat ésrézionokat tartalmazó tápközegben tenyésztve a sejteket. A tápközegelőnyösen egyéb nyomfémeket is tartalmaz. A találmány egy igen előnyösmegvalósítási módja szerint a tápközeg Pluronic F–68 néven ismertpoliglikolt, réz-szulfátot, vas-szulfát–EDTA komplexet, valamintnyomfémek sóit, például mangánt, molibdént, szilíciumot, lítiumotés/vagy krómot tartalmazó sókat tartalmaz. A találmány tárgyát képeziktovábbá a találmány szerinti eljárás során alkalmazható, plazmábólszármazó fehérjétől mentes, poliolt és rézionokat, továbbá előnyösennyomfémeket tartalmazó tápközegek is. A találmány szerinti megoldásalkalmas rekombináns VIII. faktor folyamatos üzemű előállítására, aplazmából származó fehérjék hiánya miatt lényegében a vírusbevitelkockázata nélkül.
Description
A találmány tárgyát eljárások képezik rekombináns Vili. faktor előállítására a Vili. faktor génjét hordozó emlőssejtekben, plazmából származó fehérjéktől mentes, poliolokat és rézionokat tartalmazó tápközegben tenyésztve a sejteket. A találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti eljárás során alkalmazható, plazmából származó fehérjétől mentes, poliolt és rézionokat, továbbá előnyösen nyomfémeket tartalmazó tápközegek is.
A találmány szerinti megoldás előnyösen alkalmazható rekombináns Vili. faktor folyamatos üzemű előállítására nagy termelékenységgel, lényegében a vírusbevitel kockázata nélkül.
A hemofília-A egy X-kromoszómához kapcsolt (a továbbiakban: X-kapcsolt) genetikai betegség, amelyet a Vili. faktor elnevezésű molekula hibájának vagy hiányának köszönhetően vérzésre való hajlam jellemez. A vérzés megfékezésére a hemofíliás betegeket Vili. faktorral kezelik. Eredetileg a Vili. faktort emberi vérplazmából izolálták. A plazmából származó, Vili. faktorral folytatott terápia azonban számos emberi vírus - például a hepatitisvírus és a HÍV (emberi immunhiányt okozó vírus, „humán immunodeficiency vírus”) - átvitelével járt.
A rekombináns DNS-technológia beköszöntével megállapították az emberi Vili. faktor és génje szerkezetét. A gén transzkripciós terméke - amely összesen 26 exonból származik - egy, kb. 9000 bázis hosszúságú „messenger”-RNS-molekula (mRNS), amely egy, 2351 aminosav hosszúságú, nagyméretű fehérjét kódol. A Vili. faktor szerkezeti vizsgálatai arra utalnak, hogy a molekula egy jelentős számú szénhidrátoldalláncot tartalmazó glikoprotein.
A Vili. faktort kódoló cDNS-t ΒΗΚ-21-sejtekbe („baby hamster kidney cells” újszülött hörcsög veséjéből származó sejtek) és CHO-sejtekbe („Chinese hamster ovary cells”, kínai hörcsög petefészeksejtjei) klónozták, és ezekben a sejtekben expresszáltatták. Kereskedelmi eljárásokat is kifejlesztettek rekombináns Vili. faktor előállítására és hemofília-A kezelésére. A rekombináns Vili. faktort jelenleg is génsebészetileg átalakított emlőssejtek felhasználásával állítják elő, így megelőzve azt, hogy a plazmára kelljen támaszkodni, és minimálisra csökkentve a vírusátvitel bármilyen lehetséges kockázatát.
A lehetséges eljárások közül a génamplifikálást választották terápiás fehérjéket nagy termelékenységgel előállító sejtvonalak kifejlesztésére. Az amplifikálás stratégiája magában foglalja a kívánt fehérjét kódoló transzkripciós egység amplifikálható markerhez - például dihidrofolát-reduktázhoz - való kapcsolását. Ezután transzfekciós eljárásokkal juttatták be a vektor-DNS-t a fogadó sejtekbe. Az adott hatóanyagokkal (például metotrexát) szemben megnövekedett ellenállást mutató sejtpopulációkat kiválasztották. Annak vizsgálatát, hogy egy adott sejtklón stabil-e, határhígításí klónozással, „limiting dilution cloning végezték. Ezeket a sejtklónokat azután szérummentes, termeltetésre alkalmas tápközeghez adaptálták, majd követték a kívánt fehérje termelődését.
Az olyan labilis fehérjékhez, mint például a Vili. faktor is, az előállítás és a tisztítási eljárások során emberi albumint adnak stabilizálószerként. Bár az albumint a pasztörizálással virális inaktiválásnak vetik alá, az volna az ideális, ha a rekombináns Vili. faktort emberi és állati vérfehérjék teljes távolléte mellett lehetne előállítani. Felfedeztük, hogy ez lehetséges egy új sejttenyésztő tápközeg alkalmazásával. Ezt az alábbiakban részletesebben is ismertetjük.
A találmány tárgyát képező, rekombináns Vili. faktor (rFVIII) - viszonylag nagy mennyiségben, emlőssejtekben, minden emberi, illetve állati fehérje távollétében történő - folyamatos előállítására szolgáló eljárást az jellemzi, hogy az emlősgazdasejteket fehérjementes tápközegben tenyésztjük, amit előzőleg poliolpolimerrel, például Pluronic F-6S-cal egészítettünk ki. A találmány szerinti tápközeg előnyösen réz-szulfátot, vas-szulfát EDTA-komplexét, valamint nyomfémek mint például a mangán, a molibdén, a szilícium, a lítium és a króm - sóit tartalmazza.
Az alábbiakban a találmány szerinti megoldást részletekbe menően ismertetjük.
A rekombináns fehérjeexpresszálási technológia mostani fejlődése lehetővé tette fehérjék nagy mennyiségben történő előállítását emlőssejtekben. Vili. faktor előállítására alkalmas gazdasejtek például a következők: BHK-sejtek („baby hamster kidney”, újszülött hörcsög vesesejtjei), CHO-sejtek („Chinese hamster ovary’’ kínai hörcsög petefészeksejtjei), HEK-sejtek („humán embryonic kidney”, emberi embrionális vesesejtek). A BHK-sejtek különösen előnyösen alkalmazhatók, azok közül is leginkább azok, amelyeket Vili. faktor expresszálásának irányítására képes génnel transzfektáltak, mint azt Wood és munkatársai ismertetik [Wood és munkatársai, (1984)], valamint ezen sejtek klonális változatai és leszármazottai. Egy ilyen sejtvonal került letétbe helyezésre az „American Type Culture Collection”-nél az ATCC CRL-8544-es nyilvántartási számon.
A kívánt, Vili. faktor génjét hordozó gazdasejtvonal jellemzője, hogy képes fehérjementes, termelésre alkalmas tápközegben, amely lipoproteinnel van kiegészítve, szuszpenziós kultúrákban szaporodni. A találmány szerinti tápközeg alapjául szolgáló tápközeg milyensége nem kritikus, és bármelyik, technika állása szerint ismert, emlőssejtek tenyésztésére alkalmas tápközeg alkalmazható erre a célra, önmagában vagy kombinálva. Ilyen tápközegek például a következők: Dulbecco-féle módosított Eagle tápközeg („Dulbecco's Modified Eagle Médium”), Ham-féle F-12-es tápközeg („Ham’s Médium F-12”), Eagle-féle minímáltápközeg („Eagle’s Minimál Essential Médium”), valamint az RPMI-1640 iápközeg és hasonló, kereskedelmi forgalomban kapható tápközegek. A technika állása szerint ismert növekedési, mint például rekombináns inzulin hozzáadása is.
A Vili. faktor labilis természetének köszönhetően a génsebészetileg módosított gazdasejtek termelékenysége fehérjementes körülmények között jelentősen csökken. Az emberi szérumalbumint közönségesen használják szérummentes tenyészetek kiegészítő tápanyagaként rekombináns fehérjék előállítása során. Az emberi szérumalbumin egyszerre több szerepet tölt be:
HU 224 306 Β1
1. zsírsavak, koleszterin, tipofil vitaminok, szteroidhormonok és növekedési faktorok hordozója; 2. védőhatású szer nyíróerők okozta károsodásokkal szemben; 3. pH-változásokkal szemben pufferként működik; és 4. ozmózisnyomást szabályozó hatása is van. Az albumin egy másik kritikus szerepe talán az, hogy megvédi az érzékeny fehérjéket, mint amilyen a Vili. faktor is attól, hogy proteázok mint szubsztrátjukat hasítsák.
Az albuminkészítményekben jelen lévő szennyeződések szintén hozzájárulhatnak az albumin stabilizálóhatásához. Egyes faktorokról, például a lipoproteinről [Chan és munkatársai, (1996)] megállapították, hogy alkalmas emberi szérumalbumin helyettesítésére rekombináns Vili. faktor szérummentes körülmények közötti előállítása során.
Célul tűztük ki egy olyan, termelésre alkalmas, emberi plazmából származó albumint nem tartalmazó tápközeg megalkotását, és a cél elérése érdekében tett erőfeszítéseink a találmány szerinti megoldáshoz, azaz egy, rekombináns Vili. faktor előállítására alkalmas, fehérjementes tápközeg megalkotásához vezettek. A találmány szerinti tápközeg előnyösen módosított Dulbecco-féle, nélkülözhetetlen anyagokat tartalmazó minimáltápközegből („Dulbecco’s Minimum Essential Médium”) és Ham-féle F-12-es tápközegből áll (50:50 tömegarányban), kiegészítve rekombináns inzulinnal (Nucellin, Eli Lilly) 10 ug/ml-es koncentrációban, valamint FeSO4.EDTA-val (50 μΜ). A Vili. faktor termelésétől eltekintve a génsebészetileg átalakított BHK-sejtek jól nőnek ebben a proteinmentes alaptápközegben.
Meglepő módon poliolok, például Pluronic F-68 hozzáadása nem volt hatással a sejttömeg-növekedésre, de növelte a BHK-sejtek specifikus termelékenységét Vili. faktorra nézve. Nem várt, de szerencsés módon, réz-szulfát hozzáadása tovább javította a Vili. faktor termelődését. Ezenfelül nyomfémek egy csoportjának a táptalajhoz adása a Vili. faktor termelődésének további növekedését eredményezte. Ezután egy folyamatos eljárást fejlesztettünk ki a Vili. faktor előállítására emberi plazmából származó fehérjéktől mentes körülmények között. A Pluronic poliolokkal kapcsolatos további tudnivalókat Papoutsakis (1991) és Schmolka (1977) ismerteti részletesebben.
A Pluronic F-68 poliglikolt (BASF, Wyandot) közönségesen alkalmazzák felhabzás megakadályozására rázatott tenyészetekben, valamint kevertetett tenyészetekben a sejtek megvédésére a nyíróhatások következményeitől és a buborékok okozta károsodástól. A Pluronic F-68 egy nemionos blokkokból felépülő, 8400 D átlagos molekulatömegü kopolimer, amelynek középső blokkjának anyaga poli(oxi-propilén) (20 tömeg%), szélső blokkjainak anyaga pedig poli(oxi-etilén). A Pluronic F-68 szerepének tisztázása érdekében folytatott kiterjedt kutatások azt mutatják, hogy a Pluronic F-68 felületaktív anyagként hat, és azáltal akadályozza meg a sejtek károsodását, hogy lehetővé teszi a sejtek elvezetődését a bioreaktorokban - kevertetés vagy rázatás eredményeképpen - keletkező buborékok közeléből. Jó néhány kutató észrevette azonban a Pluronic F-68 jótékony hatását a sejttömeg-növekedésre olyan tenyésztési körülmények között, ahol a nyírás minimális [Mizrahi, (1975); Murhammer és Goochee, (1990)]. Lipidek és Pluronic F-68 együttes tisztítása a termék tisztítása során anekdotába illő bizonyítékát szolgáltatta annak, hogy a Pluronic polimer nem csupán felületaktív anyagként helyettesítheti az albumint, hanem úgy is, mint lipidek hordozója. A Pluronic F-68 megakadályozhatja azt is, hogy a membrán károsodása elpusztítsa a sejteket, még mielőtt a javító mechanizmusok hathatnának. Elképzelhető, hogy ezt a membránba való interkalálódással éri el. A Pluronic F-68 azon képessége, hogy fémionpufferként is hat, a technika állása szerint teljesen ismeretlen.
Bár vannak híradások arra nézve, hogy a Pluronic F-68 növeli a térfogategységre vetített termelékenységet, ez a hatás, úgy tűnik, csupán a sejtek életképessége fenntartásának következménye [Schneider, (1989); Qi, (1996)]. Ismereteink szerint ez az első megfigyelés arra nézve, hogy a Pluronic F-68 egy meghatározott fehérjetermék termelődését növeli specifikusan. Mivel a találmány szerinti megoldásban alkalmazott rendszerben a sejtek életképessége és szaporodási sebessége összehasonlítható Pluronic F-68-cal és a nélkül, a Pluronic F-68 hatásmechanizmusa nem lehet a sejtek életképességének a fenntartása. Mindazonáltal a Pluronic F-68 hatása azonnali és drámai, akármi is a mechanizmus.
Előre látható, hogy számos más poliolnak is hasonló a hatása. Ilyen egyéb poliolok például a poli(oxietilén) és a poli(oxi-propilén) nemionos blokk-kopolimerjei, amelyek molekulatömege 1000 és 16 000 között van.
A hagyományos szuszpenziós tenyésztési eljárások mellett, amelyekhez rázatható edényt, kevertethető edényt vagy „görgethető” edényt használhatunk, a találmány szerinti megoldás megvalósítása során alkalmazhatunk perfúziós és szakaszosan üzemeltethető bioreaktorokat is. A gazdasejtek tenyésztését követően a Vili. faktort az elhasznált tápközegből szokványos módszerekkel, például ultraszűréssel és ultracentrifugálással nyerhetjük ki. Kívánt esetben a Vili. faktort megtisztíthatjuk ioncsere- vagy méretkizárásos kromatográfiával, immunaffinitási vagy fémkelát-kromatográfiával és hasonlókkal.
A leírás szerinti értelemben az „emberi és állati fehérjétől mentes tápközeg” olyan sejttenyésztő tápközeget jelöl, amely mentes minden emberi vagy állati forrásból származó fehérjétől. Az emberi vagy állati forrásból származó fehérjék velejárója a vírusszennyeződések átvitelének kockázata. Az emberi és állati fehérjétől mentes tápközeg így azt a célt valósítja meg, hogy megszünteti vagy legalább nagymértékben csökkenti a vírus átvitelének kockázatát.
1. példa
BHK-21-sejteket - amelyeket a Genentech Inc. cégtől (South San Francisco, California, USA) szereztünk be - transzfektáltunk Vili. faktor expresszálásának irányítására képes génnel. A sejtvonalat úgy készítettük, amint azt Wood és munkatársai (1984) részlete3
HU 224 306 Β1 sen ismertetik, és amely sejtvonal az „American Type Culture Collection”-nél az ATTC CRL-8544-es hozzáférési számon van letétbe helyezve. Ezen sejtvonal egy klonális változatát szintén a Genentech Inc. cégtől szereztük be és alkalmaztuk minden példában. 5
A Vili. faktort kódoló gént tartalmazó ΒΗΚ-21-sejteket szuszpenziós tenyészetekben, a tenyésztőedényeket rázatva tenyésztettük, az alábbiakat tartalmazó alaptápközegben: Ham-féle F-12-es tápközeg és Dulbecco-féle nélkülözhetetlen anyagokat tartalmazó mini- 10 máltápközeg („Dulbecco’s Minimum Essential Médium”) (50:50 tömegarányban), Nucellin (rekombináns inzulin 5-10 gg/ml), FeSO4.EDTA-val (50 gm) és MgCI2 (15 mM). A sejteket tenyésztettük, és 48 óránként tápközeget cseréltünk rajtuk. Ennek első lépéseként eltá- 15 volítottuk a tenyésztőedény(ek)ből és 800 g-vel 5 percig centrifugáltuk. Ezután a sejteket megszámoltuk, és
1*106 sejt/ml sűrűségű szuszpenziót készítettünk belőlük. Minden edény 50-100 ml tápközeget tartalmazott. A rázatható edényeket (rázóedényeket) egy forgómozgást végző rázógépre (rotátor) helyeztük, a hőmérsékletet 37 °C-ra állítottuk be, és a szuszpenziós tenyészetet gyengéden, 90-110 ford./perccel forgatva tartottuk fent. A poliol (például 0,1 %-ban hozzáadott Pluronic F-68, lent F-68-nak jelöltük) és a réz-szulfát hatását a Vili. faktor termelésére a rázóedényekben vizsgáltuk. A Vili. faktor mennyiségét kromogén vizsgálati eljárással határoztuk meg. A vizsgálati eljáráshoz való anyagokat tesztreagenskészletként forgalmazza Coatest VIll;C/4 néven a Baxter Healthcare Products cég. A sejteket 24 napon keresztül tartottuk fenn ezen eljárás során. A Vili. faktor aktivitását mindegyik tápközegben meghatároztuk a Coatest VIII:C/4 reagenskészlettel. A mért értékeket az 1. táblázatban foglaltuk össze.
1. táblázat
| Feltételek | Titer (egység/ml) | Specifikus termelékenység (μ-egység/sejt/nap) | Százalékos növekedés az alaptápközeghez képest |
| Alaptápközeg | 0,15±0,07* | 0,026±0,013 | 0 |
| Alaptápközeg+F-68 (0,1%)“ | 0,24±0,04 | 0,052±0,013 | 200 |
| Alaptápközeg+F-68 (0,1%)+Cu (50 nM**) | 0,42±0,09 | 0,091+0,013 | 350 |
* 36 minta átlaga±a standard deviációk. A sejteket Vili. faktor termelődés szempontjából figyeltük meg 24 napos időszakon keresztül a fent leírtak szerint.
** A titrálási kísérletek azt mutatták, hogy a Pluronic F-68 optimális adagja 0,1%. A koncentráció 0,3%-ra növelésének nem volt szignifikáns hatása a Vili. faktor termelődésére. A „adag-válaszreakció” kísérletek szerint a réz-szulfát optimális koncentrációja 50 és 800 nM között van a Vili. faktor termelődése szempontjából.
Amint azt az 1. táblázat mutatja, a Pluronic F-68 hozzáadása önmagában, vagy előnyösen réz-szulfáttal kombinálva jelentősen megnövelte a Vili. faktor génjét tartalmazó BHK-sejtek titerét és specifikus termelékenységét fehérjementes körülmények között. 40
2. példa
A Vili. faktor termelődésének fehérjementes körülmények közötti, további optimalizálása érdekében nyomfémeket adtunk a fehérjementes termelésre alkalmas tápközeghez. A Vili. faktor termelődését ezután az 1. példában leírt folyamatos rázatásos tenyésztőrendszerben tenyésztettük 16 napon át. Az adatokat a 2. táblázat mutatja be. Réz-szulfát távollétében a nyomfémeknek nem volt hatásuk a Vili. faktor termelődésére.
2. táblázat
| Feltételek | Titer (egység/ml) | Specifikus termelékenység (μ-egység/sejt/nap) | Százalékos növekedés az alaptápközeg+F-68-hoz képest |
| Alaptápközeg+F-68 | 0,46±0,11 | 0,065±0,013 | 0 |
| Alaptápközeg+F-68+Cu | 0,53±0,15 | 0,078±0,026 | 120 |
| Alaptápközeg+F-68+Cu+fémek* | 0,73±0,16 | 0,104±0,026 | 160 |
*A fémek a következők voltak: CuSO4.5H2O (50 nM), MnSO4 (3 nM), Na2SiO3.9H2O (1,5 μΜ), (NH4)6Mo7O24.4H2O (3 nM),
CrK(SO4)2.4H2O (1,5 nM) és LiCI (236 nM).
HU 224 306 Β1
3. példa
A nyomfémek és a rézionok hatását a Vili. faktor termelékenységére tovább vizsgáltuk egy átfolyós rendszerű fermentorban. Két, egyenként 1,5 literes fermentorba a BHK-sejtek klonális változatát oltottuk be 2*10® sejt/ml sűrűségben, az 1. táblázatban is feltüntetett alaptápközeget alkalmazva. A fermentoron 0,5 l/nap térfogatáramot folyattunk át. Az egyik fermentort kontrollként használtuk, a másikban a tápközeget kiegészítettük rézzel és nyomfémekkel, ahogy azt a 2. táblázatban feltüntettük. A fermentorokat 15 napig üzemeltettük átlagosan 2-3*106 sejtsűrűséggel. Amint az a 3. táblázatban látható, a Pluronic F-68, a réz és a nyomfémek hozzáadása jelentősen megnövelte a Vili. faktor génjét hordozó BHK-sejtek termelékenységét fehérjementes körülmények között, folyamatos átáramoltatás mellett. Ez a termelési eljárás könnyen adaptálható nagyobb (200-500 literes) fermentorokra is, amelyek a sejteket visszatartó berendezésekkel (például ülepítőkkel) is fel vannak szerelve.
3. táblázat
| Napok száma | Specifikus termelékenység (μ-egység/sejt/nap) | |
| Alaptápközeg | Réz+más fémek | |
| 1 | 0,02 | 0,04 |
| 2 | 0,02 | 0,05 |
| 3 | 0,02 | 0,045 |
| 4 | 0,018 | 0,05 |
| 5 | 0,02 | 0,05 |
| 6 | 0,035 | 0,06 |
| 7 | 0,025 | 0,055 |
| 8 | 0,02 | 0,04 |
| 9 | 0,025 | 0,06 |
| 10 | 0,02 | 0,065 |
| 11 | 0,025 | 0,070 |
| 12 | 0,025 | 0,065 |
| 13 | 0,02 | 0,060 |
| 14 | 0,03 | 0,06 |
| 15 | 0,02 | 0,05 |
A fenti példák a találmány szerinti megoldás bemutatását szolgálják, nem pedig a találmány oltalmi körének korlátozását. A találmány oltalmi körét a szabadalmi igénypontok határozzák meg.
IRODALOM
Bihoreau, N. és munkatársai, Eur. J. Biochem. 222,
41-48(1994)
Chan, S. Y. 5576194-es számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1996)
Eis-Hubinger, A. M. és munkatársai Thromb. Heamost.
76, 1120(1996)
Mizrahi, A., J. Clin. Microbiol. 11-13 (1975) Murhammer, D. W., és munkatársai Biotechnoi. Prog.
6, 142-148 (1990)
Papoutsakis, E. T., Trends in Biotechnology (Tibtech)
9, 316-324(1991)
Qi, Y. M. és munkatársai, Cytotechnology 21, 95-109 (1996)
Schmolka, I. R. J. Am. Oil Chemist's Soc. 54, 110-116 Schneider, Y. J., J. Immunoi. Meth. 116, 65-77 (1989) Wood, W. és munkatársai, Natúré, 312, 330-337, (1984) Xu, D. és munkatársai, China J. Biotech. 11, 101-107 (1995)
Zhang, J. és munkatársai, Biotechnoi. 33, 249-258
Claims (24)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás rekombináns Vili. faktor előállítására annak génjét hordozó emlőssejtekben, azzal jellemezve, hogy az emlőssejteket plazmából származó fehérjétől mentes, poliolokkal és rézionokkal kiegészített tápközegben tenyésztjük.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy poliolt tartalmazó tápközegként mintegy 0,025 tömeg% és mintegy 0,2 tömeg% közötti koncentrációban Pluronic F-68-at tartalmazó tápközeget alkalmazunk.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként mintegy 50 nM és mintegy 800 nM közötti koncentrációban réz-szulfátot tartalmazó tápközeget alkalmazunk.
- 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként mintegy 1,5 nM és mintegy 4,5 nM közötti koncentrációban mangánionokat is tartalmazó tápközeget alkalmazunk.
- 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként mintegy 1,5 nM és mintegy 4,5 nM közötti koncentrációban molibdéntartalmú ionokat is tartalmazó tápközeget alkalmazunk.
- 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként mintegy 75 nM és mintegy 300 nM közötti koncentrációban szilíciumtartalmú ionokat is tartalmazó tápközeget alkalmazunk.
- 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként 1,0 nM és 4,0 nM közötti koncentrációban krómionokat is tartalmazó tápközeget alkalmazunk.
- 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként mintegy 120 nM és mintegy 480 nM közötti koncentrációban lítiumionokat is tartalmazó tápközeget alkalmazunk.
- 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy emlősgazdasejtként újszülött hörcsögből származó vesesejteket, emberi magzati vesesejteket vagy kínai hörcsögből származó petefészeksejteket alkalmazunk.
- 10. Sejttenyésztő tápközeg rekombináns Vili. faktor előállítására, amely (a) alaptápközeget (b) poliolt és (c) rézionokat tartalmaz, ahol a sejttenyésztő tápközeg plazmából származó fehérjétől mentes.HU 224 306 Β1
- 11. A 10. igénypont szerinti tápközeg, amely az alábbi nyomfémek közül legalább egyet tartalmaz: mangán, molibdén, szilícium, króm és lítium.
- 12. A 11. igénypont szerinti tápközeg, amely nyomfémként molibdént tartalmaz. 5
- 13. A 11. igénypont szerinti tápközeg, amely nyomfémként lítiumot tartalmaz.
- 14. A 11. igénypont szerinti tápközeg, amely nyomfémként molibdént és lítiumot tartalmaz.
- 15. A 10. igénypont szerinti tápközeg, amelyben a 10 rézionok mintegy 50-800 nM koncentrációban vannak jelen.
- 16. A 15. igénypont szerinti tápközeg, amely az alábbi nyomfémek közül legalább egyet tartalmaz: mangán, molibdén, szilícium, króm és lítium. 15
- 17. A 16. igénypont szerinti tápközeg, amely nyomfémként molibdént tartalmaz.
- 18. A 16. igénypont szerinti tápközeg, amely nyomfémként lítiumot tartalmaz.
- 19. A 16. igénypont szerinti tápközeg, amely nyomfémként molibdént és lítiumot tartalmaz.
- 20. A 10-19. igénypontok bármelyike szerinti tápközeg, amely rekombináns úton előállított inzulint is tartalmaz.
- 21. Sejttenyésztő rendszer, amely rekombináns Vili. faktor előállítására alkalmas sejtet, valamint sejttenyésztö tápközeget tartalmaz, amely tápközeg alaptápközeget, poliolt és rézionokat tartalmaz, és plazmából származó fehérjétől mentes.
- 22. A 21. igénypont szerinti rendszer, ahol a rézionok a sejttenyésztő tápközegben 50-800 nM koncentrációban vannak jelen.
- 23. A 21. igénypont szerinti rendszer, ahol a sejttenyésztő tápközeg rekombináns úton előállított inzulint is tartalmaz.
- 24. A 21-23. igénypontok bármelyike szerinti rendszer, amelyben a sejttenyésztő tápközeg nyomfémként molibdént és/vagy lítiumot tartalmaz.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/844,714 US5804420A (en) | 1997-04-18 | 1997-04-18 | Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9800901D0 HU9800901D0 (en) | 1998-07-28 |
| HUP9800901A2 HUP9800901A2 (hu) | 1999-05-28 |
| HUP9800901A3 HUP9800901A3 (en) | 2001-08-28 |
| HU224306B1 true HU224306B1 (hu) | 2005-07-28 |
Family
ID=25293446
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9800901A HU224306B1 (hu) | 1997-04-18 | 1998-04-17 | Eljárás, tápközeg és sejttenyésztő rendszer rekombináns VIII. faktor előállítására fehérjementes közegben |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5804420A (hu) |
| EP (1) | EP0872487B1 (hu) |
| JP (1) | JP4257685B2 (hu) |
| KR (1) | KR100496111B1 (hu) |
| CN (1) | CN1127518C (hu) |
| AR (1) | AR012451A1 (hu) |
| AT (1) | ATE342921T1 (hu) |
| AU (1) | AU748731B2 (hu) |
| BR (1) | BRPI9801092B8 (hu) |
| CA (1) | CA2234215C (hu) |
| CO (1) | CO4790112A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ295049B6 (hu) |
| DE (1) | DE69836164T2 (hu) |
| DK (1) | DK0872487T3 (hu) |
| ES (1) | ES2273380T3 (hu) |
| HK (1) | HK1018797A1 (hu) |
| HU (1) | HU224306B1 (hu) |
| ID (1) | ID20193A (hu) |
| IL (1) | IL124123A (hu) |
| MY (1) | MY115583A (hu) |
| NZ (1) | NZ330183A (hu) |
| PL (1) | PL192072B1 (hu) |
| PT (1) | PT872487E (hu) |
| RU (1) | RU2222547C2 (hu) |
| SK (1) | SK285684B6 (hu) |
| TR (1) | TR199800493A1 (hu) |
| TW (1) | TW490469B (hu) |
| UA (1) | UA66340C2 (hu) |
| ZA (1) | ZA983234B (hu) |
Families Citing this family (91)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9501040D0 (en) * | 1995-01-19 | 1995-03-08 | Quadrant Holdings Cambridge | Dried composition |
| US8183344B2 (en) * | 1996-04-24 | 2012-05-22 | University Of Michigan | Inactivation resistant factor VIII |
| US6475725B1 (en) * | 1997-06-20 | 2002-11-05 | Baxter Aktiengesellschaft | Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same |
| US6528286B1 (en) * | 1998-05-29 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Mammalian cell culture process for producing glycoproteins |
| AUPP521298A0 (en) * | 1998-08-12 | 1998-09-03 | Life Therapeutics Limited | Purification of fibrinogen |
| US6358703B1 (en) | 1998-12-10 | 2002-03-19 | Bayer Corporation | Expression system for factor VIII |
| AUPP790698A0 (en) | 1998-12-23 | 1999-01-28 | Life Therapeutics Limited | Separation of microorganisms |
| AUPP790898A0 (en) | 1998-12-23 | 1999-01-28 | Life Therapeutics Limited | Renal dialysis |
| US20050224355A1 (en) * | 1999-12-23 | 2005-10-13 | Brendon Conlan | Removal of biological contaminants |
| AUPP971399A0 (en) | 1999-04-12 | 1999-05-06 | Life Therapeutics Limited | Separation of plasma components |
| AT409379B (de) | 1999-06-02 | 2002-07-25 | Baxter Ag | Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen |
| JP4674021B2 (ja) * | 1999-07-13 | 2011-04-20 | ビオヴィトルム・アクチボラゲット（プブリクト） | 安定第ｖｉｉｉ因子組成物 |
| US6767741B1 (en) * | 1999-08-27 | 2004-07-27 | Invitrogen Corporation | Metal binding compounds and their use in cell culture medium compositions |
| DE60041573D1 (de) | 1999-08-31 | 2009-04-02 | Sony Computer Entertainment Inc | Unterhaltungssystem, aufzeichnungsmdeium und programm |
| US7077942B1 (en) * | 1999-12-23 | 2006-07-18 | Gradipore Limited | Removal of biological contaminants |
| AUPQ691400A0 (en) | 2000-04-14 | 2000-05-11 | Life Therapeutics Limited | Separation of micromolecules |
| AUPQ697300A0 (en) * | 2000-04-18 | 2000-05-11 | Life Therapeutics Limited | Separation apparatus |
| ATE449200T1 (de) | 2000-04-18 | 2009-12-15 | Gradipore Ltd | Trennung und behandlung von proben durch elektrophorese |
| US6923896B2 (en) * | 2000-09-22 | 2005-08-02 | The Texas A&M University System | Electrophoresis apparatus and method |
| CN1235667C (zh) * | 2000-10-06 | 2006-01-11 | 格拉迪普有限公司 | 多口分离装置及方法 |
| AUPR222300A0 (en) * | 2000-12-21 | 2001-01-25 | Life Therapeutics Limited | Electrophoresis device and method |
| US7220718B2 (en) | 2001-08-03 | 2007-05-22 | United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Oral treatment of hemophilia |
| EP2298354B1 (en) | 2001-10-10 | 2014-03-19 | ratiopharm GmbH | Remodelling and glycoconjugation of interferon-beta |
| KR20040065278A (ko) * | 2001-12-21 | 2004-07-21 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 변경된 인자 ⅶ 폴리펩티드의 액체 조성물 |
| BR0215216A (pt) | 2001-12-21 | 2004-11-16 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Composição aquosa lìquida, método para preparar uma composição aquosa lìquida de um polipeptìdeo de fator vii, uso de uma composição aquosa lìquida, e, método para o tratamento de uma sìndrome de resposta ao fator vii |
| US20040009918A1 (en) * | 2002-05-03 | 2004-01-15 | Hanne Nedergaard | Stabilised solid compositions of modified factor VII |
| KR101212025B1 (ko) | 2002-06-21 | 2013-01-09 | 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 | 인자 ⅶ 폴리펩티드의 안정화된 고체 조성물 |
| AU2003249990B2 (en) | 2002-07-09 | 2007-06-28 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Animal protein free media for cultivation of cells |
| EP2572732A1 (en) | 2003-02-26 | 2013-03-27 | Nektar Therapeutics | Polymer-factor VIII moiety conjugates |
| CA2518327A1 (en) * | 2003-03-18 | 2004-09-30 | Novo Nordisk Health Care Ag | Liquid, aqueous, pharmaceutical compositions of factor vii polypeptides |
| US7897734B2 (en) * | 2003-03-26 | 2011-03-01 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Method for the production of proteins |
| AU2004241698A1 (en) * | 2003-05-23 | 2004-12-02 | Novo Nordisk Health Care Ag | Protein stabilization in solution |
| ES2382157T3 (es) * | 2003-06-25 | 2012-06-05 | Novo Nordisk Health Care Ag | Composición líquida de polipépttidos del factor VII |
| ATE446768T1 (de) * | 2003-07-01 | 2009-11-15 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Flüssige wässrige pharmazeutische zusammnesetzung von factor vii polypeptiden |
| EP1656158B1 (en) * | 2003-08-14 | 2016-03-09 | Novo Nordisk Health Care AG | Liquid, aqueous pharmaceutical composition of factor vii polypeptides |
| MXPA06006886A (es) * | 2003-12-19 | 2006-09-04 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Composiciones estabilizadas de polipeptidos del factor vii. |
| GB0414825D0 (en) | 2004-07-02 | 2004-08-04 | Biostatus Ltd | Gel formulations and uses thereof |
| US7422875B2 (en) * | 2004-07-20 | 2008-09-09 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Compositions and methods for increasing protein production |
| US20060094104A1 (en) | 2004-10-29 | 2006-05-04 | Leopold Grillberger | Animal protein-free media for cultivation of cells |
| WO2006050050A2 (en) * | 2004-10-29 | 2006-05-11 | Centocor, Inc. | Chemically defined media compositions |
| CA2594580C (en) * | 2005-01-25 | 2013-09-24 | Wyeth Research Ireland Limited | Method for diafiltration |
| EP1707634A1 (en) * | 2005-03-29 | 2006-10-04 | Octapharma AG | Method for isolation of recombinantly produced proteins |
| US20070212770A1 (en) * | 2006-01-04 | 2007-09-13 | Baxter International Inc. | Oligopeptide-free cell culture media |
| US20090203077A1 (en) * | 2006-06-30 | 2009-08-13 | The Regents Of The University Of Michigan | Method of producing factor viii proteins by recombinant methods |
| WO2008005847A2 (en) * | 2006-06-30 | 2008-01-10 | The Regents Of The University Of Michigan | Method of producing factor viii proteins by recombinant methods |
| DK2126106T3 (en) | 2007-02-23 | 2017-12-04 | Sk Chemicals Co Ltd | Process for the preparation and purification of Factor VIII and its derivatives |
| RU2469739C2 (ru) * | 2007-04-26 | 2012-12-20 | БАЙЕР ХЕЛСКЕА ЛЛСи | Стабилизация жидких растворов рекомбинантного белка для хранения в замороженном состоянии |
| BRPI0818913A2 (pt) * | 2007-11-01 | 2015-05-12 | Univ Rochester | Fator viii recombinante tendo elevada estabilidade |
| SG10201503304RA (en) * | 2007-12-27 | 2015-06-29 | Baxter Int | Cell culture processes |
| DE102008051574A1 (de) | 2008-10-14 | 2010-04-15 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Verfahren zur Herstellung von Interferon-beta und deren Varianten |
| JP5719301B2 (ja) * | 2008-11-12 | 2015-05-13 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ | 血清不含インスリン不含で第ｖｉｉ因子を産生する方法 |
| KR101574056B1 (ko) | 2009-07-31 | 2015-12-02 | 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 | Ａｄａｍｔｓ 단백질 발현을 위한 세포 배양 배지 |
| ES2865250T3 (es) | 2009-09-21 | 2021-10-15 | Takeda Pharmaceuticals Co | Formulaciones de ADAMTS13 líquidas y liofilizadas estabilizadas |
| CN102648212B (zh) | 2009-11-13 | 2014-12-03 | 基立福疗法公司 | 包含冯维勒布兰德因子(vWF)的制剂及其相关制备方法、试剂盒和用途 |
| MX2012012526A (es) | 2010-04-26 | 2012-11-23 | Novartis Ag | Medio de cultivo celular mejorado. |
| BR112013000512A2 (pt) | 2010-07-08 | 2016-05-17 | Baxter Healthcare Sa | método para produzir uma composição de adamts 13 (ra13) recombinante, sobrenadante de cultura de célula, e , composição adamts13 recombinante (ra13)' |
| GB201014121D0 (en) * | 2010-08-24 | 2010-10-06 | Univ Gent | Particulate biologic drug delivery system |
| EP2702077A2 (en) | 2011-04-27 | 2014-03-05 | AbbVie Inc. | Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins |
| RU2592680C2 (ru) * | 2011-04-29 | 2016-07-27 | Биокон Рисерч Лимитед | Способ снижения накопления лактата при культивировании и способ получения антитела |
| DK3626737T3 (da) | 2011-05-13 | 2024-02-05 | Octapharma Ag | Fremgangsmåde til at forøge produktiviteten af eukaryote celler i produktionen af rekombinant fviii |
| AU2012324020A1 (en) | 2011-12-30 | 2013-07-18 | Grifols, S.A. | Method for purifying Factor VIII |
| WO2013158279A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Protein purification methods to reduce acidic species |
| WO2013158273A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution |
| US9067990B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-06-30 | Abbvie, Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
| US9512214B2 (en) | 2012-09-02 | 2016-12-06 | Abbvie, Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
| SG11201507230PA (en) | 2013-03-12 | 2015-10-29 | Abbvie Inc | Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same |
| US9677105B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-06-13 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Methods of cell culture |
| US9217168B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-12-22 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Methods of cell culture |
| US9017687B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-28 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography |
| US8956830B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-02-17 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Methods of cell culture |
| US20140271622A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Methods of cell culture |
| WO2014151878A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides |
| EP3052640A2 (en) | 2013-10-04 | 2016-08-10 | AbbVie Inc. | Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins |
| US9181337B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same |
| US9085618B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-07-21 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
| WO2015073884A2 (en) | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Abbvie, Inc. | Glycoengineered binding protein compositions |
| CA2942770A1 (en) * | 2014-03-23 | 2015-10-01 | Advantech Bioscience Farmaceutica Ltda. | Enhancement of recombinant protein expression with copper |
| KR102352250B1 (ko) | 2014-03-25 | 2022-01-17 | 제넨테크, 인크. | 세포 배양 배지에 사용하기 위한 폴록사머를 제조하는 방법 |
| MX2016012870A (es) | 2014-04-01 | 2017-05-12 | Advantech Bioscience Farmacêutica Ltda | Formulaciones de factor viii estables con bajo tenor de azucar - glicina. |
| US9855319B2 (en) | 2014-04-01 | 2018-01-02 | Advantech Bioscience Farmacêutica Ltda | Stabilization of factor VIII without calcium as an excipient |
| JP6917984B2 (ja) * | 2016-05-09 | 2021-08-11 | 協和発酵バイオ株式会社 | 培地、アルブミン非含有培地用添加剤および多能性幹細胞の培養方法 |
| EP3625329A1 (en) * | 2017-05-17 | 2020-03-25 | Octapharma AG | Method for the production of a recombinant target protein |
| PL3781943T3 (pl) | 2018-04-20 | 2022-08-01 | Janssen Biotech, Inc | Kwalifikacja kolumny chromatograficznej w sposobach produkcji w celu wytwarzania kompozycji przeciwciał anty-il12/il23 |
| MA54248A (fr) | 2018-11-13 | 2021-09-22 | Janssen Biotech Inc | Régulation de métaux traces pendant la production d'anticorps anti-cd38 |
| CN113825765A (zh) | 2019-03-14 | 2021-12-21 | 詹森生物科技公司 | 用于制备抗il12/il23抗体组合物的制造方法 |
| US20220153830A1 (en) | 2019-03-14 | 2022-05-19 | Janssen Biotech, Inc. | Manufacturing Methods for Producing Anti-TNF Antibody Compositions |
| MY193349A (en) | 2019-12-06 | 2022-10-06 | Regeneron Pharma | Anti-vegf protein compositions and methods for producing the same |
| BR112022019817A2 (pt) | 2020-04-02 | 2022-12-06 | Takeda Pharmaceuticals Co | Variante de adamts13, composições e usos das mesmas |
| WO2023281463A1 (en) | 2021-07-09 | 2023-01-12 | Janssen Biotech, Inc. | Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions |
| IL309987A (en) | 2021-07-09 | 2024-03-01 | Janssen Biotech Inc | Production methods for the production of anti-IL12/IL23 antibody compositions |
| US20230332084A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-10-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Bioreactor for antibody production |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4440679A (en) * | 1980-03-05 | 1984-04-03 | Cutter Laboratories, Inc. | Pasteurized therapeutically active protein compositions |
| US4767704A (en) * | 1983-10-07 | 1988-08-30 | Columbia University In The City Of New York | Protein-free culture medium |
| NO162160C (no) * | 1987-01-09 | 1989-11-15 | Medi Cult As | Serumfritt vekstmedium, samt anvendelse derav. |
| US5024947A (en) * | 1987-07-24 | 1991-06-18 | Cetus Corporation | Serum free media for the growth on insect cells and expression of products thereby |
| JPH0387173A (ja) * | 1987-09-10 | 1991-04-11 | Teijin Ltd | ヒト活性化天然型ファクター８ｃの製造方法及びそれに用いる形質転換体 |
| US5378612A (en) * | 1990-05-11 | 1995-01-03 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Culture medium for production of recombinant protein |
| CA2078721A1 (en) * | 1991-09-24 | 1993-03-25 | Hiroshi Yonemura | Process for preparing human coagulation factor viii protein complex |
| ATE399855T1 (de) * | 1996-10-10 | 2008-07-15 | Invitrogen Corp | Tierzellkulturmedium mit pflanzlichen nährstoffen |
-
1997
- 1997-04-18 US US08/844,714 patent/US5804420A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-02-26 ID IDP980270A patent/ID20193A/id unknown
- 1998-03-18 TR TR1998/00493A patent/TR199800493A1/xx unknown
- 1998-04-03 EP EP98106133A patent/EP0872487B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-03 DE DE69836164T patent/DE69836164T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-03 CA CA002234215A patent/CA2234215C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-03 PT PT98106133T patent/PT872487E/pt unknown
- 1998-04-03 ES ES98106133T patent/ES2273380T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-03 AT AT98106133T patent/ATE342921T1/de active
- 1998-04-03 DK DK98106133T patent/DK0872487T3/da active
- 1998-04-13 JP JP11590398A patent/JP4257685B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-15 NZ NZ330183A patent/NZ330183A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-16 CZ CZ19981156A patent/CZ295049B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-16 IL IL124123A patent/IL124123A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-16 AR ARP980101761A patent/AR012451A1/es active IP Right Grant
- 1998-04-17 UA UA98041965A patent/UA66340C2/uk unknown
- 1998-04-17 RU RU98107565/13A patent/RU2222547C2/ru active
- 1998-04-17 MY MYPI98001736A patent/MY115583A/en unknown
- 1998-04-17 AU AU61982/98A patent/AU748731B2/en not_active Expired
- 1998-04-17 ZA ZA983234A patent/ZA983234B/xx unknown
- 1998-04-17 CN CN98114971A patent/CN1127518C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-17 PL PL325862A patent/PL192072B1/pl unknown
- 1998-04-17 HU HU9800901A patent/HU224306B1/hu active IP Right Grant
- 1998-04-17 SK SK497-98A patent/SK285684B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-04-17 CO CO98021300A patent/CO4790112A1/es unknown
- 1998-04-17 BR BRPI9801092-1 patent/BRPI9801092B8/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-04-18 KR KR10-1998-0013934A patent/KR100496111B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-07-29 TW TW087105849A patent/TW490469B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-09-04 US US09/146,708 patent/US6171825B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-09-08 HK HK99103899A patent/HK1018797A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU224306B1 (hu) | Eljárás, tápközeg és sejttenyésztő rendszer rekombináns VIII. faktor előállítására fehérjementes közegben | |
| JP4240818B2 (ja) | 第ｖｉｉｉ因子のための発現系 | |
| EA029503B1 (ru) | Способ получения рекомбинантного adamts13 в культуре клеток | |
| EP0254076B1 (en) | Improved recombinant protein production | |
| JP5781067B2 (ja) | ビタミンｋ依存性タンパク質の発現収率を増加させる方法 | |
| US5576194A (en) | Recombinant protein production | |
| MXPA98003051A (en) | Preparation of recombinant factor viii in a protei free medium | |
| KR102639552B1 (ko) | 구리염을 이용한 재조합 혈장 단백질의 생산 방법 | |
| KR101452286B1 (ko) | Gdf5 발현 세포를 mtx 및 제오신이 포함된 무혈청 배지에서 단일클론으로 배양하는 방법 | |
| MXPA01005667A (en) | Expression system for factor viii |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20050610 |