RU2156257C2 - Способ получения стабильного кристаллического аналога цинк-инсулина - Google Patents
Способ получения стабильного кристаллического аналога цинк-инсулина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2156257C2 RU2156257C2 RU95110107/04A RU95110107A RU2156257C2 RU 2156257 C2 RU2156257 C2 RU 2156257C2 RU 95110107/04 A RU95110107/04 A RU 95110107/04A RU 95110107 A RU95110107 A RU 95110107A RU 2156257 C2 RU2156257 C2 RU 2156257C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pro
- human insulin
- lys
- zinc
- insulin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
- A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Описывается новый способ получения кристаллического ЛизB28 ПроB29 человеческого инсулина, который включает кристаллизацию ЛизB28 ПроB29 человеческого инсулина из раствора, содержащего ЛизB28 ПроB29 человеческого инсулина, цинк в концентрации от около 400 мг на 1 г ЛизB28 ПроB29 человеческого инсулина, по меньшей мере, 0,3 N органическую кислоту, выбранную из группы, состоящей из уксусной, лимонной кислоты или глицина, и фенольное соединение в концентрации от 0,15 до 0,25 об.% при рН приблизительно от 5,5 до 6,5. Предложенный способ позволяет получать аналоги инсулина с более быстрыми правлением активности при сохранении биологической активности нативного инсулина человека. 3 з.п. ф-лы.
Description
Настоящее изобретение относится к мономерному аналогу инсулина человека. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способу получения кристаллического аналога инсулина. Этот способ используется в очистке и производстве ЛизB28ПроB29-инсулина человека. ЛизB28ПроB29-инсулин человека применяется для лечения диабета.
Со времен открытия инсулина в 1920 гг. не прекращаются попытки усовершенствования лечения диабета. Большой прогресс был достигнут в способах очистки и доступности инсулина. Были разработаны также различные препараты разного срока действия. Несмотря на эти улучшения, терапия с помощью подкожных инъекций все еще не обеспечивает пациенту должной регуляции и контроля уровня сахара в крови.
В течение жизни пациента частые отклонения от нормальных уровней сахара в крови приводят к гипер- или гипогликемическим состояниям и осложнениям, включающим ретинопатию, нефропатию, невропатию и микро-, макроангиопатию.
Чтобы избежать крайних уровней гликемии, диабетики зачастую практикуют множественные инъекции, когда инсулин вводится во время каждого приема пищи. Эта терапия, однако, далеко еще не оптимизирована.
Самый быстродействующий коммерческий инсулин слишком поздно достигает пика после инъекции, а действие его продолжается чересчур долго, что не позволяет эффективно контролировать уровни глюкозы. В недавнем времени были предприняты серьезные попытки создания препаратов инсулина и его аналогов, которые ускоряют процесс всасывания препарата при подкожном введении.
Поскольку все коммерческие фармацевтические препараты инсулина содержат инсулин в самосвязанном состоянии и, в основном, в форме цинк-гексамера, считают, что фактором, ограничивающим скорость всасывания инсулина с места подкожной инъекции, является диссоциация самосвязанного инсулинового гексамера. Чтобы ускорить процесс всасывания, были разработаны мономерные аналоги инсулина.
Эти мономерные аналоги обладают более быстрым по сравнению с инсулином проявлением активности, в то же время сохраняя биологическую активность нативного инсулина человека. Они обеспечивают быстрое всасывание с места инъекции и достигают пика своего действия близко по времени к повышению уровня глюкозы в крови, связанному с приемом пищи.
В настоящем изобретении предложен новый способ приготовления кристаллов одного из таких мономерных аналогов, ЛизB28ПроB29-инсулина человека (ЛизB28ПроB29-чИ). ЛизB28ПроB29-чИ раскрывается в публикации EPO N 383472. Однако эта публикация не раскрывает коммерчески доступного способа приготовления кристаллического ЛизB28ПроB29-чИ.
Кристаллизация инсулина хорошо известна специалистам. Первые открытия датируются 1926 годом, когда Абель получил кристаллический инсулин в изоэлектрической точке из раствора с буфером в виде бруцина, пиридина и ацетата аммония (Abel J.J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. 12: 132, (1926). Peterson и др. в патенте США 2920104 описывает кристаллы инсулина, препараты и способы их приготовления.
В наши дни производственный процесс кристаллизации инсулина включает доведение основности раствора инсулина, содержащего 0,25 N уксусную кислоту, около 2 г/л инсулина и 2% цинка, до pH 5,9-6,0 с помощью основания, предпочтительно, гидроксида аммония. Jehr Brange, Galenics of Insulin, Springer-Verlag (1987). Важно, что, когда ЛизB28ПроB29-чИ помещают в условия, которые позволяют инсулину человека образовать цинк-кристаллы, такой кристаллизации не наблюдается.
Настоящим изобретением предложен способ кристаллизации ЛизB28ПроB29-чИ, при котором инсулин человека не кристаллизуется. Этот способ обеспечивает получение высококачественных цинк-кристаллов при высоком выходе. Эти кристаллы представляют стабильную твердую форму вещества.
Кристаллические твердые вещества особенно удобны в практике, поскольку их легко характеризовать, очищать, они более элегантны с фармацевтической точки зрения, чем аморфные твердые вещества. Помимо этого, этот процесс удобен для производства.
Настоящее изобретение обеспечивает способ получения кристаллического ЛизB28ПроB29-инсулина человека, включающий: кристаллизацию ЛизB28ПроB29-инсулина человека из раствора, содержащего ЛизB28ПроB29-инсулин человека, цинк, по меньшей мере 0,3 N органическую кислоту, выбранную из группы: уксусная, лимонная кислоты и глицин, и фенол при pH около 5,5-6,5.
Как указывалось выше, настоящее изобретение обеспечивает способ получения кристаллического инсулина человека ЛизB28ПроB29. Термин ЛизB28ПроB29-инсулии человека" или "ЛизB28ПроB29-чИ" представляет быстродействующий аналог инсулина, который меньше склонен к димеризации или самоассоциации. ЛизB28ПроB29-чИ является инсулином человека, в котором пролин в положении B28 B-цепи замещен на лизин, а лизин в положении B29 B-цепи замещен на пролин, как описано в публикации EPO N 383472, включенной в настоящий документ в качестве ссылки.
Все аббревиатуры аминокислот, используемые в настоящем описании, представляют собой сокращения, принятые патентным ведомством США и приведенные в 37 C.F.R. 1. 822 (в) (2).
Термин "фенол" или "производное фенола" означает собирательное обозначение фенола, м-крезола, резорцинола, метил-п-гидроксибензоата или их смесей.
Термин "кристаллизация" относится к образованию кристаллов ЛизB28ПроB29-инсулина человека.
Термин "физиологически приемлемое основание" хорошо известен специалистам. Физиологически приемлемые основания включают гидроксид натрия, гидроксид калия и гидроксид аммония. Предпочтительно применять гидроксид аммония.
Кристаллообразование инсулина интенсивно изучалось. В промышленном производстве инсулин человека кристаллизуется в присутствии 0,25 N уксусной кислоты, 1,6-2,1 г/л инсулина и 2% цинка при pH 5,95-6,05. Кристаллизация происходит при приближении к точке кристаллизации с кислой стороны путем прибавления основания, обычно, гидроксида натрия.
Неожиданно оказалось, что растворимый ЛизB28ПроB29-чИ не кристаллизуется при обычных условиях кристаллизации инсулина. Самоассоциация и аггрегация у ЛизB28ПроB29-чИ сведена к минимуму. Тот факт, что ЛизB28ПроB29-чИ не аггрегирует, был впервые отмечен Brems и др. Protein Engineering, 5:6, 527-533 (1992).
Считают, что минимальная самоассоциация и аггрегация, которая вызывает мономерность аналога, является причиной отсутствия кристаллизации ЛизB28ПроB29-чИ при условиях, разработанных для инсулина.
Настоящее изобретение описывает условия, при которых ЛизB28ПроB29-чИ кристаллизуется с цинком и фенольным соединением и образует стабильное твердое кристаллическое вещество. Предпочтительные фенолы выбирают из группы, состоящей из фенола, резорцинола и их смесей. Как цинк, так и фенол являются существенными факторами для достижения кристаллизации.
Раствор ЛизB28ПроB29-чИ приготавливают путем растворения аналога инсулина в водном растворителе. Концентрация ЛизB28ПроB29-чИ составляет приблизительно от 1,8 до 2,5 г/л. Предпочтительна концентрация аналога около 2 г/л. Растворению может способствовать так называемое кислотное растворение, т. е. pH снижают приблизительно до 3,0-3,5 с помощью физиологически переносимой кислоты, предпочтительно, хлористоводородной. Другие физиологически приемлемые кислоты включают уксусную кислоту, лимонную кислоту и фосфорную кислоту.
Концентрация органической кислоты, выбранной из группы, состоящей из уксусной, лимонной кислот или глицина, составляет по крайней мере 0,3 N; при более низкой концентрации получается в большой степени аморфный продукт. Предпочтительно, ЛизB28ПроB29-чИ растворяют в 0,8-1,2 N растворе уксусной кислоты; более предпочтительно - в 1 N растворе уксусной кислоты.
Концентрация добавляемого цинка такова, что конечная концентрация составляет приблизительно от 40 до 400 мг на грамм аналога. Предпочтительно добавлять цинк в виде соли. Примерами солей цинка могут служить ацетат цинка, бромид цинка, хлорид цинка, фторид цинка, йодид цинка и сульфат цинка.
Опытному специалисту известно, что существует множество других солей цинка, которые также можно использовать в способе настоящего изобретения. Предпочтительно использовать ацетат цинка или хлорид цинка, поскольку эти соли не добавляют новых химических ионов к промышленно разработанным способам. Оптимальная концентрация цинка для кристаллизация составляет приблизительно от 100 до 300 мг на грамм ЛизB28ПроB29-чИ.
Условия кристаллизации чувствительны к присутствию фенола, основания и концентрации цинка; поэтому специалист, выполняющий процесс кристаллизации, подберет оптимальные параметры, упомянутые выше, для получения хорошо оформленных кристаллов. Оптимальные условия для каждой комбинации фенол-основание варьируют в изложенных пределах. Предпочтительно в качестве фенольного соединения использовать фенол в концентрации приблизительно от 0,15 до 0,25% (об./об., конечная концентрация). Более предпочтительно использовать фенол в концентрации 0,2%.
Способ, которым производится растворение ЛизB28ПроB29-чИ, или порядок, в котором фенол, цинк и ЛизB28ПроB29-чИ добавляют в раствор, не являются принципиальными для настоящего способа. Однако, принципиальным является тот факт, что фенол взаимодействует с ЛизB28ПроB29-чИ ниже изоэлектрической точки ЛизB28ПроB29-чИ.
Соответственно, кристаллизация может быть инициирована как добавлением цинка, так и переводом кислотности раствора от кислого pH до приблизительно 5,5-6,5 с помощью физиологически переносимого основания. Физиологически приемлемые основания включают гидроксид натрия, гидроксид калия и гидроксид аммония. Предпочтительно использовать гидроксид аммония.
Кристаллизацию можно выполнять посредством перевода кислотности раствора, содержащего ЛизB28ПроB29-чИ, цинк, по крайней мере, 0,3 N органической кислоты, выбранной из группы уксусной кислоты, лимонной кислоты или глицина, и фенол до приблизительно pH 5,5-6,5 с помощью физиологически приемлемого основания. Предпочтительно pH доводят до значений приблизительно 5,9-6,2, после чего формируются кристаллы.
Более предпочтительно, ЛизB28ПроB29-чИ растворяют приблизительно в 1 N растворе уксусной кислоты (если необходимо способствовать растворению, pH можно довести до 3,0-3,5). Затем к раствору добавляют фенол, и раствор уравновешивается. pH раствора доводят до приблизительно 5,5-6,5 с помощью физиологически приемлемого основания. Предпочтительно использовать гидроксид аммония, а pH доводят до приблизительно 5,9-6,2. Затем инициируется кристаллизация посредством прибавления цинка.
При различных способах кристаллизации кристаллы образуются при перемешивании или без перемешивания и могут быть собраны и отмыты. Предпочтительно выполнять кристаллизацию с перемешиванием. Для облегчения фильтрования, если требуется, можно рекристаллизовать ЛизB28ПроB29. Кристаллы могут быть собраны и высушены с помощью стандартных методик.
Если кристаллы собирают фильтрованием, к фильтрату можно добавить дополнительное количество цинка, или к маточному раствору, для дальнейшего восстановления ЛизB28ПроB29-чИ. Кристаллы, приготовленные согласно настоящему изобретению, являются высококачественными и дают большой выход в промышленном масштабе.
Кристаллы обеспечивают стабильную твердую форму массы лекарственного вещества, удобную для хранения, а также для выполнения последующих технологических операций. Процедура кристаллизации не изменяет чистоту и аггрегационные характеристики материала.
Температура кристаллизации не является принципиальной. Приемлемый температурный режим составляет приблизительно от 4 до 26oC. Предпочтительно поддерживать температуру приблизительно от 22 до 24oC.
ЛизB28ПроB29-чИ можно получить с помощью любого из способов пептидного синтеза, включая классический способ (раствор), способ твердой фазы, полусинтетические способы и наиболее современные способы с рекомбинантной ДНК. Например, Chance и др., публикации EPO N 383472, раскрывают приготовление -инсулина человека.
Следующие примеры приводятся для целей иллюстрации приготовления аналогов инсулина и настоящего изобретения и не должны истолковываться как ограничивающие рамки настоящего изобретения.
Пример 1
846,5 г ЛизB28ПроB29-чИ в 116 л уксуснокислого буфера разводили до поглощения 2,25 на 276 нм очищенной водой (260,6 л) и ледяной уксусной кислотой (19,44 л) в барабане из нержавеющей стали до конечной концентрации уксусной кислоты 1 N.
846,5 г ЛизB28ПроB29-чИ в 116 л уксуснокислого буфера разводили до поглощения 2,25 на 276 нм очищенной водой (260,6 л) и ледяной уксусной кислотой (19,44 л) в барабане из нержавеющей стали до конечной концентрации уксусной кислоты 1 N.
К раствору добавляли жидкий фенол до концентрации 2 мл/л (общее количество 792 мл) и pH полученного раствора был ниже 3. Далее pH раствора доводили до 6,01 путем добавления 24 л гидроксида аммония и подогревали до 22oC.
После этого добавляли 5,35 л раствора хлорида цинка (2% вес./об. в воде). Затем убеждались, что pH раствора находится в желаемых пределах (5,9-6,1), и раствор перемешивали в течение 12 часов. Затем раствор охлаждали до 8oC, прекращали перемешивание и кристаллам позволяли осесть в течение 18 часов при 2-8oC.
После оседания кристаллов 370 л надосадочного раствора декантировали, а оставшийся надосадок и кристаллы перемещали в барабан меньшего размера для добавочного оседания с использованием декантированного надосадка для промывания первого барабана. После 14 часов оседания 61 л надосадка декантировали, оставляя приблизительно 9 л сырых кристаллов и надосадка.
Кристаллы суспендировали в этом объеме и центрифугировали в шести литровых центрифужных колбах при 4000 об./мин (приблизительно 4000 • G) на центрифуге DPR6000 в течение 45 минут. Для центрифугирования всего кристаллического шлама потребовались две загрузки центрифуги. Центрифугат декантировали.
Кристаллы (приблизительно 250 мл на колбу) суспендировали в 500 мл очищенной воды на центрифужную колбу и вновь центрифугировали на 4000 об./мин в течение 45 минут. Кристаллы затем вновь суспендировали в центрифужных колбах в приблизительно 500 мл охлажденного (2-8oC) абсолютного спирта SD N 3A на колбу и рецентрифугировали на 4000 об./мин в течение 15 минут.
Спиртовой центрифугат сливали и такое спиртовое отмывание повторяли еще два раза. Кристаллы, отмытые спиртом (1,9 кг сырого веса), высушивали в вакууме.
Пример 2
Раствор ЛизB28ПроB29-чИ приблизительно 2 г/л приготавливали до конечной концентрации 1 N уксусной кислоты (определяли по поглощению на 280 нм). После добавления жидкого фенола (3,3 мл/л) pH раствора доводили до 5,9-6,2 концентрированным гидроксидом аммония и добавляли хлорид цинка в воде 2% (вес. /об. ) или 20% (вес./об.) до конечной концентрации 40-160 мг хлорида цинка на грамм ЛизB28ПроB29-чИ.
Раствор ЛизB28ПроB29-чИ приблизительно 2 г/л приготавливали до конечной концентрации 1 N уксусной кислоты (определяли по поглощению на 280 нм). После добавления жидкого фенола (3,3 мл/л) pH раствора доводили до 5,9-6,2 концентрированным гидроксидом аммония и добавляли хлорид цинка в воде 2% (вес. /об. ) или 20% (вес./об.) до конечной концентрации 40-160 мг хлорида цинка на грамм ЛизB28ПроB29-чИ.
Полученные кристаллы оседали, а маточный раствор удаляли декантированием после центрифугирования. Кристаллы отмывали последовательным суспендированием и центрифугированием в воде и в абсолютном этаноле, после чего высушивали в вакууме.
Второй сбор кристаллов можно получить путем добавления цинка к маточному раствору до предела в 160 мг/г ЛизB28ПроB29-чИ.
Пример 3
ЛизB28ПроB29-инсулин человека (222 мг) растворяли в 100 мл воды Milli-Q. В растворе определили содержание 2,0 мг на миллилитр раствора ЛизB28ПроB29-чИ с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения. Раствор осветляли путем доведения pH приблизительно до 3,0 с помощью 10% HCl. Отбирали четыре 5 мл аликвоты, прибавляли ледяную уксусную кислоту до концентрации 1 N, и pH был ниже 3,5.
ЛизB28ПроB29-инсулин человека (222 мг) растворяли в 100 мл воды Milli-Q. В растворе определили содержание 2,0 мг на миллилитр раствора ЛизB28ПроB29-чИ с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения. Раствор осветляли путем доведения pH приблизительно до 3,0 с помощью 10% HCl. Отбирали четыре 5 мл аликвоты, прибавляли ледяную уксусную кислоту до концентрации 1 N, и pH был ниже 3,5.
К каждому образцу добавляли по десять микролитров жидкого фенола и затем по шесть микролитров раствора хлорида цинка (20% вес./об. в воде). pH доводили до 6,0 путем прибавления концентрированного гидроксида аммония, гидроксида натрия (10% вес./об.) или гидроксида калия (10% вес./об.).
Растворы перемешивали приблизительно 15 минут, а затем оставляли стоять под крышкой при комнатной температуре. Спустя приблизительно 2 часа, во всех трех растворах хорошо определялись ромбоэдрические кристаллы, причем наиболее быстро кристаллы образовывались в растворе, в который добавляли гидроксид калия.
Пример 4
Приблизительно 42 мг ЛизB28ПроB29-чИ растворяли в 20 мл (по два образца) воды Milli-Q, содержащей 1,2 мл ледяной уксусной кислоты. В первый образец добавляли сорок четыре микролитра жидкого фенола, а во второй - 34 микролитра жидкого фенола. В обоих случаях pH доводили до 6,0 путем прибавления концентрированного гидроксида аммония, а затем добавляли по сорок пять микролитров раствора хлорида цинка (20% вес./об. в воде).
Приблизительно 42 мг ЛизB28ПроB29-чИ растворяли в 20 мл (по два образца) воды Milli-Q, содержащей 1,2 мл ледяной уксусной кислоты. В первый образец добавляли сорок четыре микролитра жидкого фенола, а во второй - 34 микролитра жидкого фенола. В обоих случаях pH доводили до 6,0 путем прибавления концентрированного гидроксида аммония, а затем добавляли по сорок пять микролитров раствора хлорида цинка (20% вес./об. в воде).
Растворы перемешивали приблизительно 5 минут, после чего их оставляли стоять под крышкой при комнатной температуре. Спустя приблизительно 24 часа наблюдали хорошо оформленные ромбоэдрические кристаллы.
Пример 5
ЛизB28ПроB29-инсулин человека (222 мг) растворяли в 100 мл воды Milli-Q. В растворе определяли содержание 2,0 мг ЛизB28ПроB29-чИ в миллилитре раствора посредством жидкостной хроматографии высокого разрешения. Раствор осветляли доведением pH приблизительно до 3,0 прибавлением 10% HCl. Отбирали четыре 5 мл аликвоты, прибавляли ледяную уксусную кислоту до концентрации 1 N, и pH был определен ниже 3,5.
ЛизB28ПроB29-инсулин человека (222 мг) растворяли в 100 мл воды Milli-Q. В растворе определяли содержание 2,0 мг ЛизB28ПроB29-чИ в миллилитре раствора посредством жидкостной хроматографии высокого разрешения. Раствор осветляли доведением pH приблизительно до 3,0 прибавлением 10% HCl. Отбирали четыре 5 мл аликвоты, прибавляли ледяную уксусную кислоту до концентрации 1 N, и pH был определен ниже 3,5.
В аликвоты добавляли или м-крезол (12 мкл), или фенол (10 мкл), или резорцинол (2,1 мкл 100 мг/мл раствора в воде), или метилпарабен (1,6 мл 10 мг/мл раствора в воде), что вызывало в аликвотах одинаковые молярные соотношения пептида и фенольного соединения.
К каждому образцу добавляли по шесть микролитров раствора хлорида цинка (20% вес. /об. в воде) и pH доводили до 6,0 с помощью концентрированного гидроксида аммония. Растворы перемешивали приблизительно 15 минут, а затем оставляли стоять под крышкой при комнатной температуре.
Спустя приблизительно 24 часа в растворах, содержавших фенолы, наблюдали хорошо оформленные ромбоэдрические кристаллы. В растворе, содержавшем метилпарабен, образовалось небольшое количество плохо определяемых плоских кристаллов. Растворы, содержавшие м-крезол и резорцинол, при этих условиях кристаллы не образовывали.
Сходную процедуру предприняли с одной десятой количества резорцинола и доведением pH с помощью гидроксида натрия (10% вес./об. раствора); при этом получались хорошо оформленные ромбоэдрические кристаллы. Этот пример показывает, что с фенольными соединениями могут образовываться хорошо оформленные кристаллы при рутинной оптимизации условий.
Пример 6
ЛизB28ПроB29-чИ (222 мг) растворяли с 100 мл воды Milli-Q. В растворе определяли содержание 2,0 мг ЛизB28ПроB29-чИ в миллилитре раствора посредством жидкостной хроматографии высокого разрешения.
ЛизB28ПроB29-чИ (222 мг) растворяли с 100 мл воды Milli-Q. В растворе определяли содержание 2,0 мг ЛизB28ПроB29-чИ в миллилитре раствора посредством жидкостной хроматографии высокого разрешения.
Раствор осветляли доведением pH приблизительно до 3,0 с помощью 10% HCl. Отбирали одну аликвоту 5 мл и добавляли ледяную уксусную кислоту до концентрации 0,25 N и подтверждали pH ниже 3,5.
К образцу добавляли двадцать микролитров раствора хлорида цинка (2% вес. /об. в воде). pH раствора доводили до 6,0 добавлением концентрированного гидроксида аммония. Раствор перемешивали приблизительно 15 минут, после чего его оставляли стоять под крышкой при комнатной температуре. Спустя приблизительно 24 часа в растворе не наблюдалось образования кристаллов, но на дно сосуда выпал аморфный осадок.
В качестве контроля брали другую аликвоту в 5 мл и обрабатывали ее гидроксидом аммония, согласно процедуре, описанной в примере 1. Образовывались хорошо оформленные ромбоэдрические кристаллы ЛизB28ПроB29. Когда инсулин человека (2,3 мг/мл в 1 N уксусной кислоте) подвергали процедуре, описанной в примере 1, с использованием гидроксида аммония, в течение 7 дней кристаллы не образовывались.
Этот эксперимент показал, что условия, обычно применяемые при кристаллизации биосинтетического инсулина человека, не подходят для кристаллизации ЛизB28ПроB29-инсулина человека, а условия кристаллизации, описанные для кристаллизации ЛизB28ПроB29-чИ, не производят кристаллов инсулина человека.
Пример 7
Способом, описанным в примере 1, выполняли кристаллизацию, заменяя 1 N уксусную кислоту 1 N лимонной кислотой. Эта кристаллизация дала хорошо оформленные кристаллы ЛизB28ПроB29-чИ.
Способом, описанным в примере 1, выполняли кристаллизацию, заменяя 1 N уксусную кислоту 1 N лимонной кислотой. Эта кристаллизация дала хорошо оформленные кристаллы ЛизB28ПроB29-чИ.
Claims (4)
1. Способ получения кристаллического ЛизВ28 ПроВ29 человеческого инсулина, отличающийся тем, что включает кристаллизацию ЛизВ28 ПроВ29 человеческого инсулина из раствора, содержащего ЛизВ28 ПроВ29 человеческого инсулина, цинк в концентрации около 40 - 400 мг на 1 г ЛизВ28 ПроВ29 человеческого инсулина, по меньшей мере, 0,3 N органическую кислоту, выбранную из группы, состоящей из уксусной, лимонной кислоты или глицина, и фенольное соединение в концентрации 0,15 - 0,25 об.% при pH приблизительно 5,5 - 6,5.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрация ЛизВ28 ПроВ29 человеческого инсулина составляет приблизительно 1,8 - 2,5 г/л; фенольным соединением является фенол и концентрация цинка составляет приблизительно 40 - 400 мг/л ЛизВ28 ПроВ29 человеческого инсулина.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что pH составляет приблизительно 5,9 - 6,2.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что включает добавление фенола в количестве 0,15 - 0,25% от общего объема к раствору ЛизВ28 ПроВ29 человеческого инсулина в концентрации приблизительно 1,8 - 2,5 г/л в приблизительно 1N уксусной кислоте; доведение pH до значений приблизительно 5,9 - 6,2 гидроксидом аммония и добавление раствора соли цинка до конечной концентрации приблизительно 40 - 400 мг цинка на 1 г ЛизВ28 ПроВ29 человеческого инсулина.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/260.647 | 1994-06-16 | ||
US08/260,647 | 1994-06-16 | ||
US08/260,647 US5504188A (en) | 1994-06-16 | 1994-06-16 | Preparation of stable zinc insulin analog crystals |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95110107A RU95110107A (ru) | 1997-05-10 |
RU2156257C2 true RU2156257C2 (ru) | 2000-09-20 |
Family
ID=22990041
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95110107/04A RU2156257C2 (ru) | 1994-06-16 | 1995-06-14 | Способ получения стабильного кристаллического аналога цинк-инсулина |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5504188A (ru) |
EP (1) | EP0692489B1 (ru) |
JP (1) | JP3595607B2 (ru) |
KR (1) | KR100369951B1 (ru) |
CN (1) | CN1184234C (ru) |
AT (1) | ATE233278T1 (ru) |
AU (1) | AU697794B2 (ru) |
BR (1) | BR9502798A (ru) |
CA (1) | CA2151563C (ru) |
CO (1) | CO4410205A1 (ru) |
CZ (1) | CZ286066B6 (ru) |
DE (1) | DE69529708T2 (ru) |
DK (1) | DK0692489T3 (ru) |
ES (1) | ES2188637T3 (ru) |
FI (1) | FI952930A (ru) |
HU (1) | HUT73495A (ru) |
IL (1) | IL114152A (ru) |
IN (1) | IN178919B (ru) |
MY (1) | MY130551A (ru) |
NO (1) | NO952334L (ru) |
NZ (1) | NZ272358A (ru) |
PE (1) | PE21896A1 (ru) |
PL (1) | PL180968B1 (ru) |
RO (1) | RO113529B1 (ru) |
RU (1) | RU2156257C2 (ru) |
SI (1) | SI0692489T1 (ru) |
TW (1) | TW379228B (ru) |
YU (1) | YU39595A (ru) |
ZA (1) | ZA954942B (ru) |
Families Citing this family (83)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
YU18596A (sh) * | 1995-03-31 | 1998-07-10 | Eli Lilly And Company | Analogne formulacije monomernog insulina |
US5631347A (en) * | 1995-06-07 | 1997-05-20 | Eli Lilly And Company | Reducing gelation of a fatty acid-acylated protein |
US5869604A (en) * | 1995-11-09 | 1999-02-09 | Georgia Institute Of Technology | Crystallization and purification of polypeptides |
WO1998042367A1 (en) * | 1997-03-20 | 1998-10-01 | Novo Nordisk A/S | Method for preparation of a therapeutic powder through coprecipitation of insulin and absorption enhancer |
US6043214A (en) * | 1997-03-20 | 2000-03-28 | Novo Nordisk A/S | Method for producing powder formulation comprising an insulin |
ES2230727T3 (es) * | 1997-11-12 | 2005-05-01 | Alza Corporation | Procedimiento de administracion dermal de polipeptidos. |
RU2205188C2 (ru) | 1998-06-30 | 2003-05-27 | Ново Нордиск А/С | Затравочные кристаллы для получения пептидов или протеинов |
US6956021B1 (en) * | 1998-08-25 | 2005-10-18 | Advanced Inhalation Research, Inc. | Stable spray-dried protein formulations |
IL142002A0 (en) * | 1998-10-16 | 2002-03-10 | Novo Nordisk As | Insulin preparation for pulmonary delivery containing menthol |
UA65636C2 (ru) * | 1998-10-16 | 2004-04-15 | Ново Нордіск А/С | Стабильные концентрированные препараты инсулина для доставки через легкие |
US6211144B1 (en) | 1998-10-16 | 2001-04-03 | Novo Nordisk A/S | Stable concentrated insulin preparations for pulmonary delivery |
US6635617B1 (en) | 1998-10-16 | 2003-10-21 | Novo Nordisk A/S | Insulin preparations for pulmonary delivery containing menthol |
US20040214747A1 (en) * | 1999-01-06 | 2004-10-28 | Dimarchi Richard Dennis | Method for administering monomeric insulin |
US7169889B1 (en) | 1999-06-19 | 2007-01-30 | Biocon Limited | Insulin prodrugs hydrolyzable in vivo to yield peglylated insulin |
US7678364B2 (en) | 1999-08-25 | 2010-03-16 | Alkermes, Inc. | Particles for inhalation having sustained release properties |
EP1346726A4 (en) * | 2000-12-25 | 2004-09-15 | Shiseido Co Ltd | FRAGRANCE COMPOSITION STIMULATING THE SYMPATHETIC SYSTEM |
DK1358209T3 (da) * | 2001-02-09 | 2007-05-07 | Genentech Inc | Krystallisering af IGF-1 |
US7060675B2 (en) | 2001-02-15 | 2006-06-13 | Nobex Corporation | Methods of treating diabetes mellitus |
US6867183B2 (en) * | 2001-02-15 | 2005-03-15 | Nobex Corporation | Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith |
US6858580B2 (en) * | 2001-06-04 | 2005-02-22 | Nobex Corporation | Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same |
US6828297B2 (en) * | 2001-06-04 | 2004-12-07 | Nobex Corporation | Mixtures of insulin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same |
US6835802B2 (en) * | 2001-06-04 | 2004-12-28 | Nobex Corporation | Methods of synthesizing substantially monodispersed mixtures of polymers having polyethylene glycol moieties |
US6828305B2 (en) * | 2001-06-04 | 2004-12-07 | Nobex Corporation | Mixtures of growth hormone drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same |
US6713452B2 (en) | 2001-06-04 | 2004-03-30 | Nobex Corporation | Mixtures of calcitonin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same |
US7713932B2 (en) | 2001-06-04 | 2010-05-11 | Biocon Limited | Calcitonin drug-oligomer conjugates, and uses thereof |
US7030082B2 (en) * | 2001-09-07 | 2006-04-18 | Nobex Corporation | Pharmaceutical compositions of drug-oligomer conjugates and methods of treating disease therewith |
US7196059B2 (en) * | 2001-09-07 | 2007-03-27 | Biocon Limited | Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith |
US6913903B2 (en) | 2001-09-07 | 2005-07-05 | Nobex Corporation | Methods of synthesizing insulin polypeptide-oligomer conjugates, and proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same |
US6770625B2 (en) | 2001-09-07 | 2004-08-03 | Nobex Corporation | Pharmaceutical compositions of calcitonin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith |
US7312192B2 (en) * | 2001-09-07 | 2007-12-25 | Biocon Limited | Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same |
US7166571B2 (en) * | 2001-09-07 | 2007-01-23 | Biocon Limited | Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same |
US20030068361A1 (en) * | 2001-10-09 | 2003-04-10 | Rimona Margalit | Liposome-encapsulated insulin formulations |
EP1444219A1 (en) | 2001-10-12 | 2004-08-11 | Novo Nordisk A/S | Substituted piperidines and their use for the treatment of diseases related to the histamine h3 receptor |
WO2003105768A2 (en) * | 2002-06-13 | 2003-12-24 | Nobex Corporation | Methods of reducing hypoglycemic episodes in the treatment of diabetes mellitus |
WO2004089470A2 (en) | 2003-04-11 | 2004-10-21 | Novo Nordisk A/S | New amide derivatives and pharmaceutical use thereof |
PT3300721T (pt) | 2003-11-20 | 2019-06-06 | Novo Nordisk As | Formulações peptidicas contendo propileno glicol que sao ideais para a produção e para utilizacao em dispositivos de injeção |
EP2626368B1 (en) * | 2004-07-19 | 2016-12-21 | Biocon Limited | Insulin-oligomer conjugates, formulations and uses thereof |
US7597884B2 (en) | 2004-08-09 | 2009-10-06 | Alios Biopharma, Inc. | Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use |
EP1789074A4 (en) * | 2004-08-09 | 2009-08-12 | Alios Biopharma Inc | PROTEASE-RESISTANT HYPERGLYCOSYL SYNTHETIC POLYPEPTIDE VARIANTS, ORAL FORMULATIONS AND METHODS OF USING THE SAME |
US7833513B2 (en) | 2004-12-03 | 2010-11-16 | Rhode Island Hospital | Treatment of Alzheimer's Disease |
US8501739B2 (en) | 2005-07-04 | 2013-08-06 | High Point Pharmaceuticals, Llc | Medicaments |
EP1910317B1 (en) | 2005-07-20 | 2013-07-03 | Eli Lilly And Company | 1-amino linked compounds |
PT1951658E (pt) | 2005-11-17 | 2012-11-12 | Lilly Co Eli | Antagonistas do receptor do glucagon, preparação e utilizações terapêuticas |
EP1996224B1 (en) | 2006-03-15 | 2012-11-07 | Novo Nordisk A/S | Mixtures of amylin and insulin |
AU2007229492B2 (en) | 2006-03-28 | 2011-11-03 | High Point Pharmaceuticals, Llc | Benzothiazoles having histamine H3 receptor activity |
WO2007121318A2 (en) * | 2006-04-12 | 2007-10-25 | Emisphere Technologies, Inc. | Formulations for delivering insulin |
DK2049475T3 (da) | 2006-04-24 | 2012-03-05 | Lilly Co Eli | Cyclohexyl-substituerede pyrrolidinoner som inhibitorer af 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenase1 |
KR20090040259A (ko) | 2006-05-29 | 2009-04-23 | 하이 포인트 파마슈티칼스, 엘엘씨 | 3-(1,3-벤조디옥솔-5-일)-6-(4-시클로프로필피페라진-1-일)-피리다진, 그것의 염과 용매화합물 및 그것의 히스타민 h3 수용체 안타고니스트로서의 용도 |
US20080260820A1 (en) * | 2007-04-19 | 2008-10-23 | Gilles Borrelly | Oral dosage formulations of protease-resistant polypeptides |
KR20100017667A (ko) | 2007-06-01 | 2010-02-16 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 안정한 비-수성의 약학 조성물 |
EP2164466A1 (en) | 2007-06-01 | 2010-03-24 | Novo Nordisk A/S | Spontaneously dispersible preconcentrates including a peptide drug in a solid or semisolid carrier |
US9034818B2 (en) * | 2007-06-13 | 2015-05-19 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulations comprising an insulin derivative |
BRPI0818004B8 (pt) * | 2007-10-16 | 2021-05-25 | Biocon Ltd | composição farmacêutica sólida administrável por via oral e o processo da mesma. |
US20090271021A1 (en) * | 2008-04-28 | 2009-10-29 | Popp Shane M | Execution system for the monitoring and execution of insulin manufacture |
CN102209541B (zh) | 2008-09-08 | 2016-05-18 | 小利兰·斯坦福大学托管委员会 | 醛脱氢酶活性调节剂和其使用方法 |
WO2010062308A1 (en) | 2008-10-28 | 2010-06-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Modulators of aldehyde dehydrogenase and methods of use thereof |
US8927549B2 (en) | 2008-11-21 | 2015-01-06 | High Point Pharmaceuticals, Llc | Adamantyl benzamide derivatives |
NZ594248A (en) | 2009-01-28 | 2015-03-27 | Smartcells Inc | Conjugate based systems for controlled drug delivery |
WO2010088286A1 (en) | 2009-01-28 | 2010-08-05 | Smartcells, Inc. | Synthetic conjugates and uses thereof |
US8623345B2 (en) | 2009-03-20 | 2014-01-07 | Smartcells | Terminally-functionalized conjugates and uses thereof |
EP2464655B1 (en) * | 2009-08-11 | 2017-02-15 | Biocon Limited | Chromatographic processes |
KR20140007377A (ko) | 2011-02-01 | 2014-01-17 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 인슐린의 정제 |
WO2012104834A1 (en) | 2011-02-03 | 2012-08-09 | Pharmedica Ltd. | New oral dissolving films for insulin administration, for treating diabetes |
WO2012115641A1 (en) | 2011-02-23 | 2012-08-30 | Elona Biotechnologies | Lis-pro proinsulin compositions and methods of producing lis-pro insulin analogs therefrom |
US10457659B2 (en) | 2011-04-29 | 2019-10-29 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Compositions and methods for increasing proliferation of adult salivary stem cells |
CN102219851B (zh) * | 2011-05-09 | 2012-05-30 | 甘李药业有限公司 | 甘精胰岛素结晶的制备方法 |
US9707276B2 (en) | 2012-12-03 | 2017-07-18 | Merck Sharp & Dohme Corp. | O-glycosylated carboxy terminal portion (CTP) peptide-based insulin and insulin analogues |
JP6410790B2 (ja) | 2013-03-14 | 2018-10-24 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−2調節因子およびその使用方法 |
CN103342746B (zh) * | 2013-07-26 | 2014-07-30 | 珠海联邦制药股份有限公司 | 一种制备稳定的门冬胰岛素结晶的方法 |
WO2015084694A2 (en) | 2013-12-04 | 2015-06-11 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Method for preparing crystalline insulin |
EP3185887B1 (en) | 2014-08-26 | 2021-03-10 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Method for preparing crystalline insulin or insulin analog compositions |
EP2990033A1 (fr) * | 2014-08-26 | 2016-03-02 | Carlina Technologies | Procédé de préparation de nanoprécipites de peptide ou protéine de faible poids moléculaire |
CN104193819B (zh) * | 2014-09-03 | 2017-05-17 | 韩飞 | 胰岛素二聚体晶体的合成和保存方法 |
CN104761632A (zh) * | 2015-04-14 | 2015-07-08 | 珠海联邦制药股份有限公司 | 一种地特胰岛素结晶的制备方法及应用 |
CN106117345B (zh) * | 2015-05-05 | 2020-11-24 | 宜昌东阳光长江药业股份有限公司 | 一种制备甘精胰岛素结晶的方法 |
CN104892749B (zh) * | 2015-06-16 | 2019-02-05 | 珠海联邦制药股份有限公司 | 一种德谷胰岛素结晶的制备方法及应用 |
CN105753966A (zh) * | 2016-05-05 | 2016-07-13 | 通化东宝药业股份有限公司 | 一种重组人胰岛素结晶的制备方法 |
US11413352B2 (en) | 2017-12-18 | 2022-08-16 | Merck, Sharp & Dohme LLC | Conjugate based systems for controlled insulin delivery |
WO2019125878A1 (en) | 2017-12-18 | 2019-06-27 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Conjugate based systems for controlled insulin delivery |
JP2023520049A (ja) | 2020-03-31 | 2023-05-15 | プロトマー・テクノロジーズ・インコーポレイテッド | 隣接ジオールに対する選択的応答性のためのコンジュゲート |
MX2023005935A (es) | 2020-11-19 | 2023-05-29 | Protomer Tech Inc | Compuestos aromaticos que contienen boro y analogos de insulina. |
CN113896784B (zh) * | 2021-10-18 | 2024-04-16 | 合肥天麦生物科技发展有限公司 | 一种胰岛素结晶的制备方法及其产品 |
WO2023225534A1 (en) | 2022-05-18 | 2023-11-23 | Protomer Technologies Inc. | Aromatic boron-containing compounds and related insulin analogs |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BE533252A (ru) * | ||||
BE533298A (ru) * | ||||
BE515508A (ru) * | ||||
US2143590A (en) * | 1936-09-26 | 1939-01-10 | Univ Alberta | Insulin preparation and process of producing crystals of insulin |
US2626228A (en) * | 1945-05-17 | 1953-01-20 | Novo Terapeutisk Labor As | Method of producing crystalline insulin |
DK78069C (da) * | 1952-06-23 | 1954-09-06 | Novo Terapeutisk Labor As | Fremgangsmåde til fremstilling af krystallinsk insulin. |
US2920104A (en) | 1958-07-01 | 1960-01-05 | Vanderbilt Co R T | Stabilized solutions of a dithiocarbamate |
US3719655A (en) * | 1969-12-05 | 1973-03-06 | Lilly Co Eli | Process for the crystallization of the ammonium and alkali metal salts in insulin |
DE3326472A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
DE3327709A1 (de) * | 1983-07-29 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
PH25772A (en) * | 1985-08-30 | 1991-10-18 | Novo Industri As | Insulin analogues, process for their preparation |
US4764592A (en) * | 1987-04-23 | 1988-08-16 | Eli Lilly And Company | Crystalline human proinsulin and process for its production |
DE3717370A1 (de) * | 1987-05-22 | 1988-12-01 | Hoechst Ag | Mischkristalle aus insulin und insulinderivaten, verfahren zur herstellung dieser mischkristalle, diese mischkristalle enthaltende pharmazeutische mittel und ihre verwendung zur behandlung von diabetes mellitus |
ATE93238T1 (de) * | 1988-07-20 | 1993-09-15 | Novo Nordisk As | Menschliche insulinanalage und zubereitungen daraus. |
JPH04502465A (ja) * | 1988-12-23 | 1992-05-07 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | ヒトインシュリン類似物質 |
PT93057B (pt) | 1989-02-09 | 1995-12-29 | Lilly Co Eli | Processo para a preparacao de analogos da insulina |
-
1994
- 1994-06-16 US US08/260,647 patent/US5504188A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-29 TW TW083105905A patent/TW379228B/zh not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-05-12 MY MYPI95001263A patent/MY130551A/en unknown
- 1995-06-12 CA CA002151563A patent/CA2151563C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-13 YU YU39595A patent/YU39595A/sh unknown
- 1995-06-13 NO NO952334A patent/NO952334L/no not_active Application Discontinuation
- 1995-06-13 HU HU9501715A patent/HUT73495A/hu unknown
- 1995-06-14 RO RO95-01139A patent/RO113529B1/ro unknown
- 1995-06-14 KR KR1019950015780A patent/KR100369951B1/ko active IP Right Grant
- 1995-06-14 PE PE1995271264A patent/PE21896A1/es not_active Application Discontinuation
- 1995-06-14 AT AT95304098T patent/ATE233278T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 DE DE69529708T patent/DE69529708T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 ES ES95304098T patent/ES2188637T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 CZ CZ19951541A patent/CZ286066B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 FI FI952930A patent/FI952930A/fi unknown
- 1995-06-14 NZ NZ272358A patent/NZ272358A/en unknown
- 1995-06-14 JP JP14732095A patent/JP3595607B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 PL PL95309099A patent/PL180968B1/pl unknown
- 1995-06-14 EP EP95304098A patent/EP0692489B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 IN IN674CA1995 patent/IN178919B/en unknown
- 1995-06-14 CN CNB951065556A patent/CN1184234C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 BR BR9502798A patent/BR9502798A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-06-14 RU RU95110107/04A patent/RU2156257C2/ru active
- 1995-06-14 ZA ZA954942A patent/ZA954942B/xx unknown
- 1995-06-14 IL IL11415295A patent/IL114152A/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 SI SI9530647T patent/SI0692489T1/xx unknown
- 1995-06-14 DK DK95304098T patent/DK0692489T3/da active
- 1995-06-14 AU AU21681/95A patent/AU697794B2/en not_active Ceased
- 1995-06-14 CO CO95026237A patent/CO4410205A1/es unknown
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
МАШКОВСКИЙ М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1984, ч. 1, с. 551 - 553. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2156257C2 (ru) | Способ получения стабильного кристаллического аналога цинк-инсулина | |
EP0216832B1 (en) | Novel insulin derivatives and pharmaceutical preparations containing these derivatives | |
US5650486A (en) | Monomeric insulin analog formulations | |
EP0254516B1 (en) | Novel Peptides | |
US5157021A (en) | Insulin derivatives and pharmaceutical preparations containing these derivatives | |
US9187520B2 (en) | Method for preparing insulin glargine crystal | |
EA000970B1 (ru) | Парентеральный фармацевтический препарат длительного действия, содержащий мономерный аналог инсулина, кристаллический аналог инсулина и способ получения кристаллического аналога | |
JPH08225597A (ja) | 安定なインシュリンアナログ結晶の製造 | |
EP3077414B1 (en) | Method for preparing crystalline insulin | |
CN117624335A (zh) | 一种门冬胰岛素晶体的制备方法 | |
EP1539797A1 (en) | Process for manufacturing crystals of growth hormone | |
RU2154494C2 (ru) | Комплекс аналога инсулина и протамина, способ получения, фармацевтическая композиция и способ лечения диабета | |
SU745478A1 (ru) | Способ получени протеинов из ичного белка | |
AU738101B2 (en) | Monomeric insulin analog formulations |