CZ286066B6 - Způsob přípravy krystalického Lys B28 Pro B29-lidského inzulínu - Google Patents

Způsob přípravy krystalického Lys B28 Pro B29-lidského inzulínu Download PDF

Info

Publication number
CZ286066B6
CZ286066B6 CZ19951541A CZ154195A CZ286066B6 CZ 286066 B6 CZ286066 B6 CZ 286066B6 CZ 19951541 A CZ19951541 A CZ 19951541A CZ 154195 A CZ154195 A CZ 154195A CZ 286066 B6 CZ286066 B6 CZ 286066B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
lys
pro
human insulin
solution
insulin
Prior art date
Application number
CZ19951541A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ154195A3 (en
Inventor
Jeffrey Clayton Baker
Nancy Delores Carter
Bruce Hill Frank
Original Assignee
Eli Lilly And Company
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22990041&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ286066(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Eli Lilly And Company filed Critical Eli Lilly And Company
Publication of CZ154195A3 publication Critical patent/CZ154195A3/cs
Publication of CZ286066B6 publication Critical patent/CZ286066B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/62—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Způsob přípravy krystalického Lys.sup. B28.n.Pro.sup. B29.n. -lidského inzulinu pro ošetřování diabetes, který se provádí krystalizací při pH 5,5 až 6,5 v přítomnosti solí zinku.ŕ

Description

Vynález se týká monomemího analogu lidského inzulínu. Především se vynález týká způsobu přípravy krystalického analogu inzulínu. Způsob je užitečný pro čištění a výrobu Lys Pro ' lidského inzulínu. LysB28ProB29-lidský inzulín je užitečný pro ošetřování diabetes.
Dosavadní stav techniky
Od zavedení inzulínu v roce 1920 se dosahuje stálých velkých pokroků ve zlepšení ošetřování diabetes mellitus. Hlavního pokroku se dosáhlo v čistotě a v dostupnosti inzulínu. Byly rovněž vyvinuty různé farmaceutické prostředky s různou časovou aktivací. Nehledě na toto zlepšení, terapie subkutánního vstřikování je stále neuspokojivá pro jedince potřebujícího regulaci a normalizaci glycemické kontroly. U jedinců dochází opakovaně k hyperglycemia nebo k hypoglycemia a k dlouhodobým komplikacím včetně retinopathy, neuropathy, nefropathy, mikroangiopathy a makroangiopathy.
Aby se předešlo extrémním glycemickým hladinám, diabetici často praktikují terapii opakovaného vstřikování, přičemž se inzulín podává při každém jídle. Nejrychleji působící, obchodně dostupný inzulín vykazuje vrchol příliš pozdě po vstřiknutí a trvá příliš dlouho, než se dosáhne optimálního seřízení hladin glukózy. Nejnověji se věnuje velké úsilí vývoji inzulínových prostředků a inzulínových analogových prostředků, které by měly jinou kinetiku procesu subkutánní absorpce.
Jelikož všechny obchodní farmaceutické prostředky inzulínu obsahují inzulín ve spontánně asociovaném stavu a převážně v zinkové hexamemí formě, je domněnka, že stupněm limitujícím rychlost absorpce inzulínu z místa subkutánního vstřiku do krevního oběhu je disociace spontánně agregovaného inzulínového hexameru. K urychlení procesu absorpce se vyvinuly monomemí inzulínové analogy. Tyto monomemí inzulínové analogy vykazují srovnatelně rychlejší nastartování aktivity než inzulín za současného zachování biologické účinnosti nativního lidského inzulínu. Vykazují rychlejší absorpci na místě vstřiku a píkové působení inzulínu těsně s poobědovou glukózou jakožto odezvou na jídlo.
Vynález se týká nového způsobu přípravy krystalů takového monomemího analogu LysB28ProB29-lidského inzulínu (LysB28ProB29-hI). LysB28ProB29-hI je popsán v evropské zveřejněné přihlášce vynálezu číslo 383472. Není však popsán provozně schůdný proces přípravy LysB28ProB29-hI.
Krystalizace inzulínu je v oboru dobře známa. Počáteční objevy spadají do roku 1926, kdy Ábel krystaloval inzulín v isoelektrické oblasti z roztoku pufrovaného brucinem, pyridinem a octanem amonným (Ábel J. J., Proč. Naťl Acad. Sci. U. S. 12, str. 132, 1926). Peterson a kol. popisují v americkém patentovém spise číslo 2 920104 inzulínové krystaly, způsob jejich přípravy a farmaceutické prostředky, které je obsahují. V současně době sestává průmyslový proces krystalizace inzulínu z nastavení zásaditosti inzulínového roztoku, obsahujícího 0,25N kyselinu octovou, přibližně 2 g/1 inzulínu a 2 % (procenta jsou vždy míněna hmotnostně, pokud není uvedené jinak) zinečnaté soli na hodnotu pH 5,9 až 6,0 zásadou, s výhodou hydroxidem amonným (Jens Brange, Galenics of Inzulín, Springer-Verlag, 1987). Především jestliže se LysB28-ProB29-hI podrobuje podmínkám, které umožňují vytvářet jakékoliv zinečnaté krystaly, nedojde k takové krystalizací.
- 1 CZ 286066 B6
Vynález se týká způsobu krystalizace LysB28ProB29-hI jedinečného pro molekulu, to znamená podmínek, za kterých nekrystaluje lidský inzulín.
Podstata vynálezu
Způsob přípravy krystalického LysB28ProB29-lidského inzulínu spočívá podle vynálezu v tom, že se krystaluje LysB28ProB29-lidského inzulín z roztoku obsahujícího LysB28ProB29-lidský inzulín, zinečnatou sůl, alespoň 0,3N organickou kyselinu ze souboru zahrnujícího kyselinu octovou, citrónovou a glycin a fenolickou sloučeninu volenou ze souboru zahrnujícího fenol, resorcinol, m-kresol, methyl-p-hydroxybenzoát a jejich směsi při hodnotě pH 5,5 až 6,5.
Způsobem podle vynálezu se produkují vysoce kvalitní zinečnaté krystaly ve vysokém výtěžku v provozním měřítku. Krystaly vytvářejí stálou pevnou formu molekuly. Krystalická pevná hmota je obzvláště výhodná, jelikož se snadněji charakterizuje, čistí a je farmaceuticky elegantnější než pevné látky, které jsou amorfní. Proto je způsob vhodný pro průmyslové využití.
Jak shora uvedeno, týká se vynález způsobu přípravy krystalického LysB28ProB29-lidského inzulínu. Výraz „LysB28ProB29-lidský inzulín“ nebo „LysB28ProB29-hI“ se zde vždy míní rychle působící analog inzulínu, který je méně náchylný k dimerizaci nebo ke spontánní asociaci. LysB28ProB29-hI je lidský inzulín, jehož prolin je v poloze B28 řetězce B je substituován lysinem a lysin je v poloze B29 řetězce B substituován prolinem, jak je popsáno v evropské zveřejněné přihlášce vynálezu číslo 383472.
Všechny zkratky, používané pro aminokyseliny, jsou v souladu s 37 C, F, R, § 1.822(b) (2) úřadu United States Patent & Trademark Office.
Výrazem „fenolická sloučenina“ nebo „fenolický derivát“ se zde vždy míní fenol, resorcinol, nkresol nebo methyl-p-hydroxy-benzoát nebo jejich směsi.
Výrazem „krystalizace“ se zde vždy míní vytváření krystalů LysB28ProB29-lidského inzulínu.
Výraz „fyziologicky vhodná zásada“ je pracovníkům v oboru znám. Jakožto fyziologicky vhodné zásady se příkladně uvádějí hydroxid sodný, hydroxid draselný a hydroxid amonný. Výhodný je hydroxid amonný.
Zinkem se vždy míní zinečnatá sůl, přičemž se procenta míní hmotnostně a vztahují se na obsažený zinek. Vytváření inzulínových krystalů bylo široce studováno. Lidský inzulín se provozně krystaluje v přítomnosti 0,25N kyseliny octové, 1,6 až 2,1 g/1 inzulínu a 2 % zinečnaté soli při hodnotě pH 5,95 až 6,05. Krystalizace postupuje přecházením krystalizační směsi z kyselé oblasti za přidání zásady, zpravidla hydroxidu sodného. Je nejvíce překvapivé, že rozpustný LysB28ProB29-hI nekrystaluje za známých podmínek přípravy inzulínových krystalů. O LysB28ProB29-hI se uvádí, že vykazuje minimální spontánní asociaci a agregaci. Poznatek, že LysB28ProB29-hI neagreguje zaznamenali jako první Brems a kol., Protein Engineering, 5:6, str 527 až 533 (1992). Minimální spontánní asociace a agregace, pro kterou je analog monomemí, způsobuje pravděpodobně, že LysB28ProB29-hI nekrystaluje za podmínek, vyvinutých pro inzulín.
Vynález popisuje podmínky, za kterých LysB28ProB29-hI krystaluje v přítomnosti zinku a fenolické sloučeniny za vytvoření stálé, krystalické pevné látky. Výhodné fenolické sloučeniny jsou voleny ze souboru zahrnujícího fenol, resorcinol a jejich směsi. Jak přítomnost zinku, tak fenolické sloučeniny mají pro krystalizaci rozhodující význam.
-2CZ 286066 B6
Roztok LysB28ProB29-hI se připravuje rozpouštěním inzulínového analogu ve vodném ředidle. Koncentrace LysB28ProB29-hI je přibližně 1,8 g/1 až 2,5 g/1. Rozpuštění se může napomáhat tak, jak je běžné pro rozpouštění kyselin, to znamená snižováním hodnoty pH na přibližně 3,0 až 3,5 přidáváním fyziologicky vhodné kyseliny, s výhodou kyseliny chlorovodíkové. Jakožto další fyziologicky vhodné kyseliny se uvádějí kyselina octová, citrónová a fosforečná.
Koncentrace organické kyseliny, volené ze souboru zahrnujícího kyselinu octovou, citrónovou a glycin, je alespoň 0,3 N; pod 0,3 N se vytváří ve velké míře amorfní produkt. S výhodou se LysB28ProB29-hI rozpouští v přibližně 0,8 až 1,2 N kyseliny octové; nej výhodněji se používá IN kyseliny octové.
Množství přidávaného zinku je takové, aby konečná koncentrace byla přibližně 40 mg až přibližně 400 mg na gram analogu. Zinek se s výhodou přidává ve formě soli. Jakožto representativní příklad zinečnatých solí se uvádějí octan, bromid, chlorid, fluorid, jodid a síran zinečnatý. Pracovníkům v oboru je jasné, že existují další četné soli, kterých se rovněž může použít při způsobu podle vynálezu. S výhodou se používá octanu a chloridu zinečnatého, jelikož tyto soli nezavádějí další chemické ionty do průmyslově vhodného procesu. Optimální koncentrace zinku při krystalizaci je přibližně 100 až přibližně 300 mg na 1 g LysB28ProB29-hI.
Podmínky krystalizace jsou citlivé na fenolickou sloučeninu, zásadu a koncentraci zinku; to znamená, že pracovník v oboru musí nastavit shora uvedené parametry k dosažení dobře definovaných krystalů. Optimální podmínky pro systém fenolická sloučenina-zásada se mění v uvedených mezích. S výhodou je fenolickou sloučeninou fenol v koncentraci přibližně 0,15 až přibližně 0,25 % (objem/objem, konečná koncentrace). Nejvýhodněji se pracuje s koncentrací fenolické sloučeniny 0,2 %
Způsob, podle kterého se LysB28ProB29-hI rozpouští v roztoku nebo podle kterého se fenolická οίο ROQ sloučenina, zinek a Lys Pro -hl přidávají do roztoku nemají při způsobu podle vynálezu rozhodující význam. Je však rozhodující, aby fenolická sloučenina interreagovala s Lys Pro ' hl pod isoelektrickým bodem LysB28ProB29-hI. V souhlase s tím se krystalizace má začínat přidáním buď zinku, nebo nastavením bazicity roztoku z kyselé oblasti na přibližnou hodnotu pH
5.5 až 6,5 přidáním fyziologicky vhodné zásady. Jakožto fyziologicky vhodné zásady se uvádějí hydroxid sodný, draselný a amonný. Výhodnou zásadou je hydroxid amonný.
Krystalizace se má provádět nastavením zásaditosti roztoku obsahujícího Lys Pro -lidský inzulín, zinek, alespoň 0,3 N organickou kyselinu, volenou ze souboru zahrnujícího kyselinu octovou, citrónovou a glycin a fenolickou sloučeninu, na hodnotu pH přibližně 5,5 až přibližně
6.5 za použití fyziologicky vhodné zásady. S výhodou se hodnota pH nastavuje na přibližně 5,9 až přibližně 6,2. Krystaly se vytvářejí po nastavení hodnoty pH.
S výhodou se LysB28ProB29-hI rozpouští v přibližně IN kyselině octové (pokud je potřeba podpořit rozpouštění, hodnota pH se má nastavit na 3,0 až 3,5). Do roztoku se přidá fenolická sloučenina a v roztoku se nechá nastavit rovnováha. Hodnota pH roztoku se upraví na přibližně
5.5 až přibližně 6,5 fyziologicky vhodnou zásadou. S výhodou se jakožto zásady používá hydroxidu amonného, přičemž se hodnota pH nastavuje na 5,9 až 6,2. Krystalizace se iniciuje přidáním zinku.
Ať se již krystalizace provádí jakkoliv vytvářejí se krystaly za míchání nebo bez míchání a mohou se oddělit a promýt. S výhodou se krystalizace provádí za míchání. LysB28ProB29-hI se může nechat popřípadě vykrystalovat k napomáhání filtraci. Krystaly se mohou oddělit a vysušit o sobě známými způsoby. Pokud se krystaly shromáždí odfiltrováním, může se přidávat přídavný zinek do filtrátu nebo do matečného louhu k získání dalšího LysB28ProB29-hI. Krystaly, připravené způsobem podle vynálezu, mají vysokou kvalitu a v provozním měřítku se získají ve
-3 CZ 286066 B6 vysokém výtěžku. Krystaly představují stabilní pevnou formu drogové substance, vhodnou pro konečné operace. Krystalizací se nemění čistota nebo agregační kinetika materiálu.
Krystalizační teplota nemá rozhodující význam. Vhodnou je teplota přibližně 4 až přibližně 26 °C. S výhodou se provádí kiystalizace při teplotě přibližně 22 až 24 °C.
Lys Pro -hl se může připravovat jakýmkoliv způsobem peptidové syntézy včetně klasických (roztokových) způsobů, způsobů v pevné fázi, polosyntetických způsobů, a nejnovějších rekombinantních DNA způsobů. Způsob přípravy LysB28ProB29-lidského inzulínu popisuje například Chance a kol. v evropské zveřejněné přihlášce vynálezu číslo 383472.
Následující příklady pouze dále objasnění způsob přípravy inzulínových analogů a není záměrem, aby vynález jakkoliv omezovaly.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Zředí se 846,5 g LysB28ProB29-hI ve 116 litrech kyseliny octové jakožto pufru na absorbanci při 276 nm 2,25 čištěnou vodou (260,61) a ledovou kyselinou octovou (19,441) v nádobě z nerezavějící oceli na konečnou koncentraci IN kyseliny octové. Přidá se ztekucená sloučenina fenolu do roztoku v množství 2 ml/1 (celkový objem 792 ml) a zjistí se hodnota pH roztoku pod
3. Hodnota pH roztoku se nastaví na 6,01 přidáním 24 litrů hydroxidu amonného a roztok se zahřeje na teplotu 22 °C. Po zahřátí se přidá 5,35 litrů vodného roztoku chloridu zinečnatého (2 %, hmotnost/objem). Znova se kontroluje hodnota pH, přičemž se zjistí, že je v žádoucím oboru (5,9 až 6,1) a roztok se míchá po dobu 12 hodin. Roztok se rychle ochladí na teplotu 8 °C, míchání se zastaví, krystaly se nechají usadit v průběhu 18 hodin při teplotě 2 až 8 °C. Po usazení krystalů se 370 1 supematantu dekantuje a zbylý supematant a krystaly se převedou do menší nádoby pro další usazení za použití části dekantovaného supematantu k vypláchnutí původní nádoby. Po 14 hodinách usazování se dekantuje 61 1 supematantu za získání přibližně 9 I vrstvy mokrých krystalů a supematantu.
Krystaly jsou suspendované v tomto objemu a odstřeďují se v šesti odstředivkách o objemu jednoho litru za počtu otáček 4000/min (přibližně 4000 x g) v odstředivce DPR6000 po dobu 45 minut. Aby se veškerá suspenze krystalů zpracovala v 6 odstředivkách, je zapotřebí dvojího plnění. Kapalina se dekantuje. Krystaly (přibližně 250 ml na nádobu) se suspendují v 500 ml čištěné vody na odstředivku a opět se odstřeďují za počtu otáček 4000/min po dobu 45 minut. Krystaly se resuspendují v odstředivkách použitím přibližně 500 ml chlazeného (na teplotu 2 až 8 °C) alkoholu SD No. 3A Absolute na odstředivku a opět se odstřeďují za počtu otáček 4000/min po dobu 15 minut. Alkoholový koncentrát se dekantuje a alkoholové promytí se provádí ještě dvakrát. Alkoholem promyté krystaly (1,9 kg mokré hmotnosti) se suší ve vakuu.
Příklad 2
Připraví se roztok LysB28ProB29-hI o koncentraci přibližně 2 g/1 na konečnou koncentraci 1M kyseliny octové (podle absorbance při 280 nm). Do roztoku se přidá ztekucená fenolová sloučenina (3,3 ml/l roztoku) s nastavením hodnoty pH 5,9 až 6,2 použitím koncentrovaného roztoku hydroxidu amonného a do roztoku se přidá chlorid zinečnatý ve formě 2 % (hmotnost/ objem) nebo 20% (hmotnost/objem) roztoku do konečné koncentrace 40 až 160 mg chloridu zinečnatého na gram LysB28ProB29-hI. Vzniklé krystaly se nechají usadit a matečný louh se odstraní dekantací s následným odstředěním. Krystaly se promyjí suspendováním ve vodě
-4CZ 286066 B6 a odstředěním a nakonec absolutním ethanolem před vysušením ve vakuu. Druhý výtěžek krystalů se může získat přidáním chloridu zinečnatého do matečného louhu v množství 160 mg/g LysB28ProB29-hI.
Příklad 3
Připraví se roztok LysB28ProB29-lidského inzulínu (222 mg) ve 100 ml vody Milli—Q. Podle stanovení chromatografií HPLC obsahuje roztok 2,0 mg LysB28ProB29-hI na 1 ml roztoku. Roztok se vyčeří nastavením hodnoty pH na přibližně 3,0 10% kyselinou chlorovodíkovou. Odeberou se čtyři 5 ml podíly a hodnota pH se v IN kyselině octové přidáním ledové kyseliny octové upraví na hodnotu nižší než 3,5. Do každého vzorku se přidá 10 μΐ ztekucené fenolové sloučeniny a pak 6 μΐ roztoku chloridu zinečnatého ve vodě (20 % hmotnost/objem). Hodnota pH se upraví na 6,0 přidáním buď koncentrovaného hydroxidu amonného, nebo roztoku hydroxidu sodného (10%, hmotnost/objem) nebo hydroxidu draselného (10%, hmotnost/objem). Roztoky se míchají po dobu přibližně 15 minut a pak se nechají stát v zakrytém stavu při teplotě místnosti. Přibližně po dvou hodinách se vytvoří dobře definované rhombohedrální krystaly ve všech třech roztocích, přičemž se krystaly vytvářejí mnohem rychleji v roztocích s upravenou hodnotou pH hydroxidem draselným.
Příklad 4
Rozpustí se přibližně 42 mg LysB28ProB29-hI ve 20 ml vody Milli—Q, obsahující 1,2 ml ledové kyseliny octové. Přidá se 44 ml ztekucené sloučeniny fenolu do prvního vzorku a 34 ml ztekucené sloučeniny fenolu do druhého vzorku, v obou případech se hodnota pH nastavuje na 6,0 přidáním koncentrovaného roztoku hydroxidu amonného, načež se přidá 45 ml vodného roztoku chloridu zinečnatého (20% hmotnost/objem). Roztok se míchá po dobu přibližně 5 minut a nechá se pak stát zakrytý při teplotě místnosti. Po přibližně 24 hodinách se vytvoří dobře definované rhombohedrální krystaly.
Příklad 5
Připraví se roztok LysB28ProB29-lidského inzulínu (222 mg) ve 100 ml vody Milli-Q. Podle stanovení chromatografií HPLC obsahuje roztok 2,0 mg LysB28ProB29-hI na 1 ml roztoku. Roztok se vyčeří nastavením hodnoty pH na přibližně 3,0 10% kyselinou chlorovodíkovou. Odeberou se čtyři 5 ml podíly a hodnota pH se v IN kyselině octové přidáním ledové kyseliny octové upraví na hodnotu nižší než 3,5. Do jednotlivých vzorků se přidá buď m-kresol (12 μΐ), nebo fenol (10 μΐ), nebo resorcinol (2,1 μΐ roztoku ve vodě obsahujícího 100 mg/ml) nebo methylparabenu (1,6 ml roztoku ve vodě obsahujícího 10 mg/ml), čímž se získají roztoky pro krystalizaci obsahující podobně molámí poměry peptidů k fenolické sloučenině. Do každého vzorku se přidá 6 ml roztoku chloridu zinečnatého ve vodě (20% hmotnost/objem). Hodnota pH se upraví na 6,0 přidáním koncentrovaného hydroxidu amonného. Roztoky se míchají po dobu přibližně 15 minut a pak se nechají stát v zakrytém stavu při teplotě místnosti. Přibližně po dvou hodinách se vytvoří dobře definované rhombohedrální krystaly v roztoku obsahujícím fenol. Roztoky, obsahující methylparaben, vytvářejí něco hůře definovaných planámích krystalů. Roztoky, obsahující m-kresol a resorcinol nevytvářejí krystaly za uvedených podmínek.
Postupuje se podobným způsobem použije se však desetiny množství resorcinolu a hodnota pH se upravuje roztokem hydroxidu sodného (10% hmotnost/objem), přičemž se získají dobře definované rhombohedrální krystaly. Tento příklad dokládá, že rutinní optimalizací podmínek se s fenolickými sloučeninami mohou vytvářet dobře definované krystaly.
-5CZ 286066 B6
Příklad 6
Připraví se roztok LysB28ProB29-lidského inzulínu (222 mg) ve 100 ml vody Milli—Q. Podle stanovení chromatografií HPLC obsahuje roztok 2,0 mg LysB28ProB29-hI na 1 ml roztoku. Roztok se vyčeří nastavením hodnoty pH na přibližně 3,0 10% kyselinou chlorovodíkovou. Odeberou se čtyři 5 ml podíly a hodnota pH se v 0,25 N kyselině octové přidáním ledové kyseliny octové upraví na hodnotu nižší než 3,5. Do vzorku se přidá 20 μΐ vodného roztoku chloridu zinečnatého (2% hmotnost/objem). Hodnota pH se nastaví na 6,0 přidáním koncentrovaného roztoku hydroxidu amonného. Roztok se míchá po dobu přibližně 15 minut a nechá se stát v zakrytém stavu při teplotě místnosti. Po přibližně 24 hodinách se nepozorují žádné krystaly v roztoku nýbrž amorfní sraženina, která se usazuje na dnu nádoby.
Pro kontrolu se jiný 5 ml podíl odtáhne a zpracuje se způsobem podle příkladu 1 za použití hydroxidu amonného. Vytvoří se dobře definované rhombohedrální krystaly LysB28ProB29-hI. Jestliže se zpracovává za podmínek podle příkladu 1 za použití hydroxidu amonného lidský inzulín (2,3 mg/ml v IN kyselině octové), nevytvoří se v průběhu sedmi dnů žádné krystaly.
Tato zkouška dokládá, že podmínky rutinně používané pro krystalizaci biosyntetického lidského inzulínu jsou nevhodné pro krystalizaci LysB28ProB29-lidského inzulínu a podobně krystalizační podmínky pro krystalizaci LysB28ProB29-hI nevedou k produkci krystalů lidského inzulínu.
Příklad 7
Obdobným způsobem jako podle příkladu 1 se provádí krystalizace za náhrady IN kyseliny octové IN kyselinou citrónovou. Krystalizaci se získají dobře definované krystaly LysB28ProB29hl.
Průmyslová využitelnost • i B28 B29
Způsob přípravy krystalického inzulínového analogu užitečný pro čištění a výrobu Lys Pro lidského inzulínu pro ošetřování diabetes.

Claims (5)

PATENTOVÉ NÁROKY
1. Způsob přípravy krystalického LysB28ProB29-lidského inzulínu, vyznačující se tím, že se krystaluje LysB28ProB29-lidský inzulín z roztoku obsahujícího LysB28ProB29-lidský inzulín, zinečnatou sůl, alespoň 0,3N organickou kyselinu ze souboru zahrnujícího kyselinu octovou, citrónovou a glycin fenolickou sloučeninu volenou ze souboru zahrnujícího fenol, resorcinol, m-kresol, methyl-p-hydroxybenzoát a jejich směsi při hodnotě pH 5,5 až 6,5.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že koncentrace Lys ' Pro lidského inzulínu v roztoku je 1,8 až 2,5 g/1, fenolickou sloučeninou je fenol a koncentrace zinečnaté soli je 40 až 400 mg/g LysB28ProB29-lidského inzulínu.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že koncentrace fenolické sloučeniny je objemově 0,15 až 0,25 %, vztaženo na konečný objem.
-6CZ 286066 B6
4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se krystalizace provádí při hodnotě pH 5,9 až 6,2.
5. Způsob přípravy krystalického LysB28ProB29-lidského inzulínu podle nároku 1, vyznačující se tím, že
a) se vnáší fenol v objemovém množství 0,15 až 0,25 %, vztaženo na konečný objem, do roztoku LysB28ProB29-lidského inzulínu obsahujícího 1,8 až 2,5 g/1 v IN kyselině octové,
b) hodnota pH se nastaví na 5,9 až 6,2 hydroxidem amonným a
c) přidává se roztok soli zinku do konečné koncentrace 40 až 400 mg zinečnaté soli na 1 g LysB28ProB29-lidského inzulínu.
CZ19951541A 1994-06-16 1995-06-14 Způsob přípravy krystalického Lys B28 Pro B29-lidského inzulínu CZ286066B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/260,647 US5504188A (en) 1994-06-16 1994-06-16 Preparation of stable zinc insulin analog crystals

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ154195A3 CZ154195A3 (en) 1996-02-14
CZ286066B6 true CZ286066B6 (cs) 2000-01-12

Family

ID=22990041

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19951541A CZ286066B6 (cs) 1994-06-16 1995-06-14 Způsob přípravy krystalického Lys B28 Pro B29-lidského inzulínu

Country Status (29)

Country Link
US (1) US5504188A (cs)
EP (1) EP0692489B1 (cs)
JP (1) JP3595607B2 (cs)
KR (1) KR100369951B1 (cs)
CN (1) CN1184234C (cs)
AT (1) ATE233278T1 (cs)
AU (1) AU697794B2 (cs)
BR (1) BR9502798A (cs)
CA (1) CA2151563C (cs)
CO (1) CO4410205A1 (cs)
CZ (1) CZ286066B6 (cs)
DE (1) DE69529708T2 (cs)
DK (1) DK0692489T3 (cs)
ES (1) ES2188637T3 (cs)
FI (1) FI952930A (cs)
HU (1) HUT73495A (cs)
IL (1) IL114152A (cs)
IN (1) IN178919B (cs)
MY (1) MY130551A (cs)
NO (1) NO952334L (cs)
NZ (1) NZ272358A (cs)
PE (1) PE21896A1 (cs)
PL (1) PL180968B1 (cs)
RO (1) RO113529B1 (cs)
RU (1) RU2156257C2 (cs)
SI (1) SI0692489T1 (cs)
TW (1) TW379228B (cs)
YU (1) YU39595A (cs)
ZA (1) ZA954942B (cs)

Families Citing this family (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
YU18596A (sh) * 1995-03-31 1998-07-10 Eli Lilly And Company Analogne formulacije monomernog insulina
US5631347A (en) * 1995-06-07 1997-05-20 Eli Lilly And Company Reducing gelation of a fatty acid-acylated protein
US5869604A (en) * 1995-11-09 1999-02-09 Georgia Institute Of Technology Crystallization and purification of polypeptides
EP0969860B1 (en) * 1997-03-20 2002-07-17 Novo Nordisk A/S Method for preparation of a therapeutic powder through coprecipitation of insulin and absorption enhancer
US6043214A (en) * 1997-03-20 2000-03-28 Novo Nordisk A/S Method for producing powder formulation comprising an insulin
CN1278737A (zh) * 1997-11-12 2001-01-03 阿尔萨公司 减少多肽自结合的方法
RU2205188C2 (ru) 1998-06-30 2003-05-27 Ново Нордиск А/С Затравочные кристаллы для получения пептидов или протеинов
US6956021B1 (en) * 1998-08-25 2005-10-18 Advanced Inhalation Research, Inc. Stable spray-dried protein formulations
DK1121144T3 (da) * 1998-10-16 2002-09-23 Novo Nordisk As Stabile koncentrerede insulinpræparater til pulmonar indgivelse
US6211144B1 (en) 1998-10-16 2001-04-03 Novo Nordisk A/S Stable concentrated insulin preparations for pulmonary delivery
US6635617B1 (en) 1998-10-16 2003-10-21 Novo Nordisk A/S Insulin preparations for pulmonary delivery containing menthol
ATE216258T1 (de) * 1998-10-16 2002-05-15 Novo Nordisk As Insulin präparationen enthaltend methanol zur pulmonaren verabreichung
US20040214747A1 (en) * 1999-01-06 2004-10-28 Dimarchi Richard Dennis Method for administering monomeric insulin
US7169889B1 (en) 1999-06-19 2007-01-30 Biocon Limited Insulin prodrugs hydrolyzable in vivo to yield peglylated insulin
US7678364B2 (en) 1999-08-25 2010-03-16 Alkermes, Inc. Particles for inhalation having sustained release properties
KR20030005204A (ko) * 2000-12-25 2003-01-17 가부시키가이샤 시세이도 교감신경 활성화 향료 조성물
HUP0500733A3 (en) * 2001-02-09 2010-01-28 Genentech Inc Crystallization of igf-1
US6867183B2 (en) * 2001-02-15 2005-03-15 Nobex Corporation Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith
US7060675B2 (en) * 2001-02-15 2006-06-13 Nobex Corporation Methods of treating diabetes mellitus
US7713932B2 (en) * 2001-06-04 2010-05-11 Biocon Limited Calcitonin drug-oligomer conjugates, and uses thereof
US6828305B2 (en) * 2001-06-04 2004-12-07 Nobex Corporation Mixtures of growth hormone drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6713452B2 (en) * 2001-06-04 2004-03-30 Nobex Corporation Mixtures of calcitonin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6835802B2 (en) * 2001-06-04 2004-12-28 Nobex Corporation Methods of synthesizing substantially monodispersed mixtures of polymers having polyethylene glycol moieties
US6828297B2 (en) * 2001-06-04 2004-12-07 Nobex Corporation Mixtures of insulin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6858580B2 (en) * 2001-06-04 2005-02-22 Nobex Corporation Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6913903B2 (en) * 2001-09-07 2005-07-05 Nobex Corporation Methods of synthesizing insulin polypeptide-oligomer conjugates, and proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
US7030082B2 (en) * 2001-09-07 2006-04-18 Nobex Corporation Pharmaceutical compositions of drug-oligomer conjugates and methods of treating disease therewith
US6770625B2 (en) 2001-09-07 2004-08-03 Nobex Corporation Pharmaceutical compositions of calcitonin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith
US7196059B2 (en) * 2001-09-07 2007-03-27 Biocon Limited Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith
US7312192B2 (en) * 2001-09-07 2007-12-25 Biocon Limited Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
US7166571B2 (en) * 2001-09-07 2007-01-23 Biocon Limited Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
US20030068361A1 (en) * 2001-10-09 2003-04-10 Rimona Margalit Liposome-encapsulated insulin formulations
JP4563675B2 (ja) 2001-10-12 2010-10-13 ハイ・ポイント・ファーマスーティカルズ、エルエルシー 置換ピペリジン類、およびヒスタミンｈ３受容体関連疾患の治療のためのその使用
AU2003236521A1 (en) * 2002-06-13 2003-12-31 Nobex Corporation Methods of reducing hypoglycemic episodes in the treatment of diabetes mellitus
EP1615698B1 (en) 2003-04-11 2010-09-29 High Point Pharmaceuticals, LLC New amide derivatives and pharmaceutical use thereof
CN104826116A (zh) 2003-11-20 2015-08-12 诺沃挪第克公司 对于生产和用于注射装置中是最佳的含有丙二醇的肽制剂
CA2580313C (en) * 2004-07-19 2016-03-15 Biocon Limited Insulin-oligomer conjugates, formulations and uses thereof
EP1789074A4 (en) * 2004-08-09 2009-08-12 Alios Biopharma Inc PROTEASE-RESISTANT HYPERGLYCOSYL SYNTHETIC POLYPEPTIDE VARIANTS, ORAL FORMULATIONS AND METHODS OF USING THE SAME
US7597884B2 (en) 2004-08-09 2009-10-06 Alios Biopharma, Inc. Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use
US7833513B2 (en) 2004-12-03 2010-11-16 Rhode Island Hospital Treatment of Alzheimer's Disease
AU2006264966B2 (en) 2005-07-04 2013-02-21 High Point Pharmaceuticals, Llc Histamine H3 receptor antagonists
ES2426345T3 (es) 2005-07-20 2013-10-22 Eli Lilly And Company Compuesto unidos en posición 1-amino
PL1951658T3 (pl) 2005-11-17 2013-02-28 Lilly Co Eli Antagoniści receptora glukagonu, preparatyka i zastosowania terapeutyczne
EP1996224B1 (en) 2006-03-15 2012-11-07 Novo Nordisk A/S Mixtures of amylin and insulin
KR101280333B1 (ko) 2006-03-28 2013-07-02 하이 포인트 파마슈티칼스, 엘엘씨 히스타민 ｈ３ 수용체 활성을 갖는 벤조티아졸
WO2007121318A2 (en) * 2006-04-12 2007-10-25 Emisphere Technologies, Inc. Formulations for delivering insulin
WO2007127704A1 (en) 2006-04-24 2007-11-08 Eli Lilly And Company Cyclohexyl substituted pyrrolidinones as inhibitors of 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1
CA2659570C (en) 2006-05-29 2015-10-06 High Point Pharmaceuticals, Llc 3-(1,3-benzodioxol-5-yl)-6-(4-cyclopropylpiperazin-1-yl)-pyridazine, its salts and solvates and its use as histamine h3 receptor antagonist
US20080260820A1 (en) * 2007-04-19 2008-10-23 Gilles Borrelly Oral dosage formulations of protease-resistant polypeptides
EP2514406A1 (en) 2007-06-01 2012-10-24 Novo Nordisk A/S Spontaneously dispersible preconcentrates including a peptide drug in a solid or semisolid carrier
WO2008145730A1 (en) 2007-06-01 2008-12-04 Novo Nordisk A/S Stable non-aqueous pharmaceutical compositions
WO2008152106A1 (en) * 2007-06-13 2008-12-18 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation comprising an insulin derivative
BRPI0818004B8 (pt) * 2007-10-16 2021-05-25 Biocon Ltd composição farmacêutica sólida administrável por via oral e o processo da mesma.
US20090271021A1 (en) * 2008-04-28 2009-10-29 Popp Shane M Execution system for the monitoring and execution of insulin manufacture
ES2477552T3 (es) 2008-09-08 2014-07-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Moduladores de la actividad de la aldehidodeshidrogenasa y métodos de uso de los mismos
EP2349279A4 (en) 2008-10-28 2013-12-25 Univ Leland Stanford Junior ALDEHYDE DEHYDROGENASE MODULATORS AND METHOD OF USE THEREOF
AU2009316802B2 (en) 2008-11-21 2015-02-26 Vtv Therapeutics Llc Adamantyl benzamide compounds
CA2750252A1 (en) 2009-01-28 2010-08-05 Smartcells, Inc. Synthetic conjugates and uses thereof
SG173112A1 (en) 2009-01-28 2011-08-29 Smartcells Inc Conjugate based systems for controlled drug delivery
AU2010226243A1 (en) 2009-03-20 2011-09-22 Smartcells, Inc. Terminally-functionalized conjugates and uses thereof
BR112012002934B1 (pt) * 2009-08-11 2021-12-21 Biocon Limited Processos cromatográficos e seus compostos purificados
AU2012213432B2 (en) 2011-02-01 2016-10-13 Novo Nordisk A/S Purification of insulin
EP2670368A4 (en) 2011-02-03 2015-04-15 Pharmedica Ltd NEW ORAL DISSOLUTION FILMS FOR INSULIN DELIVERY FOR THE TREATMENT OF DIABETES
WO2012115641A1 (en) 2011-02-23 2012-08-30 Elona Biotechnologies Lis-pro proinsulin compositions and methods of producing lis-pro insulin analogs therefrom
US10457659B2 (en) 2011-04-29 2019-10-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compositions and methods for increasing proliferation of adult salivary stem cells
CN102219851B (zh) * 2011-05-09 2012-05-30 甘李药业有限公司 甘精胰岛素结晶的制备方法
CA2890048C (en) 2012-12-03 2022-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. O-glycosylated carboxy terminal portion (ctp) peptide-based insulin and insulin analogues
CN105358531B (zh) 2013-03-14 2017-11-14 利兰-斯坦福大学初级学院的董事会 线粒体醛脱氢酶‑2调节剂和其使用方法
CN103342746B (zh) * 2013-07-26 2014-07-30 珠海联邦制药股份有限公司 一种制备稳定的门冬胰岛素结晶的方法
WO2015084694A2 (en) 2013-12-04 2015-06-11 Merck Sharp & Dohme Corp. Method for preparing crystalline insulin
US10124040B2 (en) 2014-08-26 2018-11-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Method for preparing crystalline insulin or insulin analog compositions
EP2990033A1 (fr) * 2014-08-26 2016-03-02 Carlina Technologies Procédé de préparation de nanoprécipites de peptide ou protéine de faible poids moléculaire
CN104193819B (zh) * 2014-09-03 2017-05-17 韩飞 胰岛素二聚体晶体的合成和保存方法
CN104761632A (zh) * 2015-04-14 2015-07-08 珠海联邦制药股份有限公司 一种地特胰岛素结晶的制备方法及应用
CN106117345B (zh) * 2015-05-05 2020-11-24 宜昌东阳光长江药业股份有限公司 一种制备甘精胰岛素结晶的方法
CN104892749B (zh) * 2015-06-16 2019-02-05 珠海联邦制药股份有限公司 一种德谷胰岛素结晶的制备方法及应用
CN105753966A (zh) * 2016-05-05 2016-07-13 通化东宝药业股份有限公司 一种重组人胰岛素结晶的制备方法
EP3740212A4 (en) 2017-12-18 2021-10-27 Merck Sharp & Dohme Corp. CONJUGATE-BASED SYSTEMS FOR CONTROLLED INSULIN DELIVERY
EP3727424A4 (en) 2017-12-18 2021-10-27 Merck Sharp & Dohme Corp. CONJUGATE-BASED SYSTEMS FOR CONTROLLED INSULIN RELEASE
PE20230457A1 (es) 2020-03-31 2023-03-10 Protomer Tech Inc Conjugados para reactividad selectiva a dioles vecinales
EP4247429A1 (en) 2020-11-19 2023-09-27 Protomer Technologies Inc. Aromatic boron-containing compounds and insulin analogs
CN113896784B (zh) * 2021-10-18 2024-04-16 合肥天麦生物科技发展有限公司 一种胰岛素结晶的制备方法及其产品
WO2023225534A1 (en) 2022-05-18 2023-11-23 Protomer Technologies Inc. Aromatic boron-containing compounds and related insulin analogs

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE515508A (cs) *
BE533298A (cs) *
BE533252A (cs) *
US2143590A (en) * 1936-09-26 1939-01-10 Univ Alberta Insulin preparation and process of producing crystals of insulin
US2626228A (en) * 1945-05-17 1953-01-20 Novo Terapeutisk Labor As Method of producing crystalline insulin
DK78069C (da) * 1952-06-23 1954-09-06 Novo Terapeutisk Labor As Fremgangsmåde til fremstilling af krystallinsk insulin.
US2920104A (en) 1958-07-01 1960-01-05 Vanderbilt Co R T Stabilized solutions of a dithiocarbamate
US3719655A (en) * 1969-12-05 1973-03-06 Lilly Co Eli Process for the crystallization of the ammonium and alkali metal salts in insulin
DE3326472A1 (de) * 1983-07-22 1985-02-14 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus
DE3327709A1 (de) * 1983-07-29 1985-02-07 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung
PH25772A (en) * 1985-08-30 1991-10-18 Novo Industri As Insulin analogues, process for their preparation
US4764592A (en) * 1987-04-23 1988-08-16 Eli Lilly And Company Crystalline human proinsulin and process for its production
DE3717370A1 (de) * 1987-05-22 1988-12-01 Hoechst Ag Mischkristalle aus insulin und insulinderivaten, verfahren zur herstellung dieser mischkristalle, diese mischkristalle enthaltende pharmazeutische mittel und ihre verwendung zur behandlung von diabetes mellitus
AU616205B2 (en) * 1988-07-20 1991-10-24 Novo Nordisk A/S Human insulin analogs and preparations containing them
KR910700262A (ko) * 1988-12-23 1991-03-14 안네 제케르 사람 인슐린 유사체
NZ232375A (en) 1989-02-09 1992-04-28 Lilly Co Eli Insulin analogues modified at b29

Also Published As

Publication number Publication date
MY130551A (en) 2007-06-29
RU2156257C2 (ru) 2000-09-20
RO113529B1 (ro) 1998-08-28
FI952930A0 (fi) 1995-06-14
JP3595607B2 (ja) 2004-12-02
AU2168195A (en) 1996-01-04
DK0692489T3 (da) 2003-03-31
FI952930A (fi) 1995-12-17
TW379228B (en) 2000-01-11
PL309099A1 (en) 1995-12-27
CA2151563C (en) 2007-08-07
PL180968B1 (pl) 2001-05-31
DE69529708D1 (de) 2003-04-03
ZA954942B (en) 1996-12-17
KR100369951B1 (ko) 2003-03-28
JPH08169899A (ja) 1996-07-02
CO4410205A1 (es) 1997-01-09
CZ154195A3 (en) 1996-02-14
AU697794B2 (en) 1998-10-15
HUT73495A (en) 1996-08-28
NO952334L (no) 1995-12-18
NZ272358A (en) 1996-12-20
CN1128271A (zh) 1996-08-07
RU95110107A (ru) 1997-05-10
EP0692489A1 (en) 1996-01-17
CN1184234C (zh) 2005-01-12
IL114152A0 (en) 1995-10-31
ES2188637T3 (es) 2003-07-01
NO952334D0 (no) 1995-06-13
PE21896A1 (es) 1996-06-15
ATE233278T1 (de) 2003-03-15
IN178919B (cs) 1997-07-19
DE69529708T2 (de) 2003-10-16
HU9501715D0 (en) 1995-08-28
US5504188A (en) 1996-04-02
SI0692489T1 (en) 2003-06-30
YU39595A (sh) 1997-08-22
CA2151563A1 (en) 1995-12-17
EP0692489B1 (en) 2003-02-26
KR960000922A (ko) 1996-01-25
IL114152A (en) 1999-12-31
BR9502798A (pt) 1996-06-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ286066B6 (cs) Způsob přípravy krystalického Lys B28 Pro B29-lidského inzulínu
NL1004643C2 (nl) Werkwijze voor het bereiden van kristallen van AspB28-menselijk insuline en protamine en deze kristallen bevattende farmaceutische formuleringen.
US5952297A (en) Monomeric insulin analog formulations
US5008241A (en) Novel insulin peptides
EP0254516B1 (en) Novel Peptides
RU2135205C1 (ru) Инсулиновый препарат, способ получения препарата, способ лечения сахарного диабета
EP0216832B1 (en) Novel insulin derivatives and pharmaceutical preparations containing these derivatives
EP2708550B1 (en) Preparation method for insulin glargine crystal
EP0705275A1 (en) Asp?b28 insulin crystals
US5597893A (en) Preparation of stable insulin analog crystals
HU202555B (en) Process for producing peptid-alcohol derivatives of anticoagulant activity
FI98309C (fi) Menetelmä synteettisten isohirudiinien valmistamiseksi, joilla on parantunut stabiilisuus
CN117624335A (zh) 一种门冬胰岛素晶体的制备方法
EP1539797A1 (en) Process for manufacturing crystals of growth hormone
AU738101B2 (en) Monomeric insulin analog formulations

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20020614