RU2011126198A

RU2011126198A - Способ получения l-аминокислоты

Info

Publication number: RU2011126198A
Application number: RU2011126198/10A
Authority: RU
Inventors: Юори ВАКАСА; Рио ТАКЕСИТА
Original assignee: Адзиномото Ко., Инк.
Priority date: 2008-11-27
Filing date: 2009-11-26
Publication date: 2013-01-10
Also published as: WO2010061890A1; US20110281311A1; EP2360263A4; EP2360263B1; BRPI0921655A2; JP2012029565A; RU2518677C2; EP2360263A1; CA2744852A1; CN102227504A; ES2739909T3; BRPI0921655B1; US8673597B2; CN102227504B; CA2744852C; PL2360263T3

Abstract

1. Способ получения L-аминокислоты, предусматривающий культивирование бактерии, которая принадлежит семейству Enterobacteriaceae и обладает способностью продуцировать L-аминокислоту в среде для получения и накопления L-аминокислоты в среде, и сбор L-аминокислоты из среды, в котором:бактерия была модифицирована таким образом, чтобы увеличить экспрессию гена gltP и/или гена gltS, и L-аминокислоту выбирают из группы, состоящей из L-лизина, L-треонина, L-аспарагина, L-аспарагиновой кислоты, L-метионина, L-аланина, L-изолейцина и L-гомосерина.2. Способ по п.1, в котором ген gltP кодирует белок, показанный в следующих (А) или (В):(A) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 12 и обладающий активностью L-глутаматного транспортера,(B) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 12, включающий в себя замены, делеции, вставки, добавления или инверсии одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающий активностью L-глутаматного транспортера.3. Способ по п.2, в котором ген gltP кодирует белок, показанный в следующих (А1) или (В1):(А1) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 2,(B1) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 2, включающий в себя замены, делеции, вставки, добавления или инверсии одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающий активностью L-глутаматного транспортера.4. Способ по п.1, в котором ген gltP представляет собой ДНК, показанную в следующих пп. (а) или (b):(a) ДНК с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 1,(b) ДНК, способная к гибридизации с последовательностью, которая комплиментарна нуклеотидной последовательности, показанной в SEQ ID No

Claims

1. Способ получения L-аминокислоты, предусматривающий культивирование бактерии, которая принадлежит семейству Enterobacteriaceae и обладает способностью продуцировать L-аминокислоту в среде для получения и накопления L-аминокислоты в среде, и сбор L-аминокислоты из среды, в котором:

бактерия была модифицирована таким образом, чтобы увеличить экспрессию гена gltP и/или гена gltS, и L-аминокислоту выбирают из группы, состоящей из L-лизина, L-треонина, L-аспарагина, L-аспарагиновой кислоты, L-метионина, L-аланина, L-изолейцина и L-гомосерина.

2. Способ по п.1, в котором ген gltP кодирует белок, показанный в следующих (А) или (В):

(A) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 12 и обладающий активностью L-глутаматного транспортера,

(B) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 12, включающий в себя замены, делеции, вставки, добавления или инверсии одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающий активностью L-глутаматного транспортера.

3. Способ по п.2, в котором ген gltP кодирует белок, показанный в следующих (А1) или (В1):

(А1) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 2,

(B1) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 2, включающий в себя замены, делеции, вставки, добавления или инверсии одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающий активностью L-глутаматного транспортера.

4. Способ по п.1, в котором ген gltP представляет собой ДНК, показанную в следующих пп. (а) или (b):

(a) ДНК с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 1,

(b) ДНК, способная к гибридизации с последовательностью, которая комплиментарна нуклеотидной последовательности, показанной в SEQ ID No: 1, или зондом, который можно изготовить из нуклеотидной последовательности при жестких условиях, и которая кодирует белок, обладающий активностью L-глутаматного транспортера.

5. Способ по п.1, в котором ген glt3 кодирует белок, показанный в следующих (С) или (D):

(C) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 13 и обладающий активностью L-глутаматного транспортера,

(D) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 13, включающий в себя замены, делеции, вставки, добавления или инверсии одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающий активностью L-глутаматного транспортера.

6. Способ по п.5, в котором ген gltS кодирует белок, показанный в следующих (С1) или (D1):

(С1) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 4,

(D1) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 4, включающий в себя замены, делеции, вставки, добавления или инверсии одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающий активностью L-глутаматного транспортера.

7. Способ по п.1, в котором ген glt3 представляет собой ДНК, показанную в следующих (с) или (d):

(c) ДНК с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 3,

(d) ДНК, способная к гибридизации с последовательностью, которая комплиментарна нуклеотидной последовательности, показанной в SEQ ID No: 3, или зондом, который можно изготовить из нуклеотидной последовательности при жестких условиях, и которая кодирует белок, обладающий активностью L-глутаматного транспортера.

8. Способ по п.1, в котором повышена экспрессия гена путем увеличения числа копий гена, или модификации экспрессии контрольной последовательности гена.

9. Способ по п.1, в котором L-аминокислота представляет собой L-лизин, и у бактерии повышена экспрессия гена ybjE.

10. Способ по п.9, в котором ген ybjE кодирует белок, показанный в следующих (Е) или (F):

(Е) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 6, или аминокислотной последовательностью аминокислот от №№17 до 315 в SEQ ID No: 6,

(F) белок с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 6, или аминокислотной последовательностью аминокислот от №№17 до 315 в SEQ ID No: 6, которая включает в себя замены, делеции, вставки, добавления или инверсии одного или нескольких аминокислотных остатков, где белок обладает активностью экскреции L-лизина.

11. Способ по п.9, в котором ген ybjE представляет собой ДНК, показанную в следующих (е) или (f):

(e) ДНК с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 5, или нуклеотидной последовательностью нуклеотидов от №№49 до 948 в SEQ ID No: 5,

(f) ДНК, способная к гибридизации с последовательностью, которая комплиментарна нуклеотидной последовательности, показанной в SEQ ID No: 5, или нуклеотидной последовательностью нуклеотидов от №№49 до 948 в SEQ ID No: 5, или зондом, который можно изготовить из указанных нуклеотидных последовательностей при жестких условиях, и которая кодирует белок, обладающий активностью экскреции L-лизина.

12. Способ по п.1, в котором L-аминокислотой является L-лизин, уровень рН среды регулируют таким образом, чтобы он составлял от 6,0 до 9,0 во время культивирования для продуцирования, и от 7,2 до 9,0 в конце культивирования, для обеспечения периода культивирования, когда в среде присутствуют ионы бикарбоната и/или ионы карбоната в количестве 20 мМ или больше, с тем, чтобы ионы бикарбоната и/или ионы карбоната служили противоионами основной аминокислоты.

13. Способ по любому из пп.1-12, в котором бактерия представляет собой бактерию Escherichia.