RU2003135292A

RU2003135292A - Способ получения l-треонина с использованием бактерий, принадлежащих к роду escherichia

Info

Publication number: RU2003135292A
Application number: RU2003135292/13A
Authority: RU
Inventors: н Валерий Завенович Ахверд (RU); Валерий Завенович Ахвердян; Екатерина Алексеевна Саврасова (RU); Екатерина Алексеевна Саврасова; Алла Мар ковна Каплан (RU); Алла Мар ковна Каплан; Андрей Олегович Лобанов (RU); Андрей Олегович Лобанов; Юрий Иванович Козлов (RU); Юрий Иванович Козлов
Original assignee: Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномо то-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU); Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномо то-Генетика" (ЗАО АГРИ)
Priority date: 2003-12-05
Filing date: 2003-12-05
Publication date: 2005-05-27
Also published as: CN1914328A; US7186531B2; CN1914328B; US20050124048A1; ZA200604819B; RU2275424C2; ES2392825T3; CN102816804A

Claims

1. Бактерия, принадлежащая к роду Escherichia, - продуцент треонина, отличающаяся тем, что такая бактерия модифицирована таким образом, что активность аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы увеличена.

2. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что активность аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы увеличена за счет увеличения экспрессии гена аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы.

3. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что активность аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы увеличена за счет увеличения числа копий гена аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы или модификации последовательности, осуществляющей контроль экспрессии гена таким образом, что экспрессия указанного гена увеличивается.

4. Бактерия по п.3, отличающаяся тем, что число копий гена увеличено за счет трансформации бактерии с помощью низкокопийного вектора, содержащего указанный ген.

5. Бактерия по любому из пп.2-4, отличающаяся тем, что ген аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы получен из бактерии, принадлежащей к роду Escherichia.

6. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что ген аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы кодирует белки (А) или (В):

(A) белок, включающий последовательность аминокислот, приведенную в списке последовательностей под номером 2;

(B) белок, включающий последовательность аминокислот, содержащую делеции, замены, вставки или добавление одной или нескольких аминокислот в последовательность аминокислот, приведенную в списке последовательностей под номером 2, и обладающий активностью аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы.

7. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что ген аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы содержит следующую ДНК (а) или (b):

(а) ДНК, состоящую из последовательности нуклеотидов с 1 по 1104, приведенной в списке последовательностей под номером 1;

(b) ДНК, которая гибридизуется в жестких условиях с последовательностью нуклеотидов с 1 по 1104, приведенной в списке последовательностей под номером 1, или с зондом, приготовленным из указанной последовательности нуклеотидов, и кодирует белок, обладающий активностью аспартат-β-полуальдегиддегидрогеназы.

8. Бактерия по п.7, отличающаяся тем, что жесткими условиями являются условия, при которых отмывка осуществляется при 60°С, а концентрация соли соответствует 1xSSC и 0,1% SDS, продолжительность отмывки составляет 15 мин.

9. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что указанной бактерии повышена экспрессия одного или нескольких генов, выбранных из группы, состоящей из: мутантного гена thrA, кодирующего аспартокиназа-гомосериндегидрогеназу I, устойчивую к ингибированию треонином по типу обратной связи; гена thrB, кодирующего гомосеринкиназу; гена thrC, кодирующего треонинсинтазу; гена rhtA, кодирующего предполагаемый трансмембранный белок.

10. Бактерия по п.9, отличающаяся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что экспрессия мутантного гена thrA, гена thrB, гена thrC и гена rhtA повышена.

11. Способ получения L-треонина, включающий стадии выращивания бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, - продуцента треонина, в питательной среде; и выделения L-треонина из культуральной жидкости, отличающийся тем, что в качестве бактерии - продуцента треонина используют бактерию по любому из пп.1-10.