PT97621B - Processo para a preparacao de vacinas contra o papilomavirus humano 18 (hpv 18) - Google Patents
Processo para a preparacao de vacinas contra o papilomavirus humano 18 (hpv 18) Download PDFInfo
- Publication number
- PT97621B PT97621B PT97621A PT9762191A PT97621B PT 97621 B PT97621 B PT 97621B PT 97621 A PT97621 A PT 97621A PT 9762191 A PT9762191 A PT 9762191A PT 97621 B PT97621 B PT 97621B
- Authority
- PT
- Portugal
- Prior art keywords
- leu
- arg
- glu
- asp
- pro
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 101710132594 Protein E6 Proteins 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 7
- 241000388169 Alphapapillomavirus 7 Species 0.000 claims 2
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 claims 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- 101000954519 Human papillomavirus type 18 Protein E6 Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101710088839 Replication initiation protein Proteins 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000689231 Aeromonas salmonicida S-layer protein Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Asp-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 241000702374 Enterobacteria phage fd Species 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000767629 Human papillomavirus type 18 Protein E7 Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000748795 Thermus thermophilus (strain ATCC 27634 / DSM 579 / HB8) Cytochrome c oxidase polypeptide I+III Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- UVCJGUGAGLDPAA-UHFFFAOYSA-N ensulizole Chemical compound N1C2=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C2N=C1C1=CC=CC=C1 UVCJGUGAGLDPAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910000363 nickel(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920009537 polybutylene succinate adipate Polymers 0.000 description 1
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 208000024719 uterine cervix neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
- A61K39/285—Vaccinia virus or variola virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
A sequência de A1)N e a organização do genoma do vírus do HFV18 foram publicadas Virology 145» 181 -- 185 (1985). 0 HPY18 induz não só lesões benignas do canal anogenital mas também tumores malignos do colo do uterq do pénis ou da vagina» Além disso, encontram-se no entanto também HFV18 em raspagens genitais de indivíduos clinicamente sem sintomas· Até boja pouco se sabe sobre a resposta imune que se segue à infecção por HPV18 e por outros papillomavirus. TTas primeiras experiências, foram ensaiados soros humanos de pacientes STD, de pacientes que padecem de tumores cervicais e de indivíduos saudáveis sobre a presen ça de anticorpos que são dirigidos contra proteínas de vírus· Estas proteínas de vírus foram expressas como proteínas de fusão que foram ligadas a diversos péptidos procarióticos através da sua extremidade íf. Essas proteínas de fusão foram então usadas como antigenes em experiências de manchamento de "western, Este ensaio ê» no entanto, relativamente moroso e complicado e realiza-se apenas com grandes custos de modo que não parece apropriado à análise quantitativa de grandes quantidades de soro humano. Além disso, este ensaio não é muito específico porque os diferentes tipos de papillomavirus também são utilizados relativamente ao seu núcleo de proteína e dessa forma não se excluem reacções cruzadas de anticorpos com proteínas ou proteínas de fusão de diferentes tipos de papillomavirus . 0 objectivo da presente invenção é, por consequência, a identificação de estrutura virais do HPV18 que são apropriadas como meio auxiliar na profilaxia» diagnóstico e terapia de doenças provocadas por HPV18 em seres humanos. 0 conhecimento sobre essas estruturas (domínios de proteínas) é um conhecimento prévio necessário para o estabelecimento de um ensaio com a grande quantidade de soro humano sobro a presença de vírus HPV específicos. - 2 -
A presente invenção abrange neste ponto em epítopo sero-reaotivo com a proteína EI de HPV18 com a seguinte sequência de aminoácidos
Tbr-Glu-Asn-Ser-Pro-Leu-Glu-Glu-Arg-Leu- -Glu-Val-Asp~!£kr-Glu-Leu--Ser«-Pro«-Arg-Leu- -51n-Glu~IXe-Ser~Leu-Asn-Ser assim como epítopos sero-reactivos com a proteína E6 de HPY18 com uma das seguintes sequências de aminoácidos I Asp—Pro—Thr—Arg—Arg—Pro—Iyr—Lys —Leu—Pro— -Asp-Leu-Cys-Tbr^lu-Leu-Asn-Thr-Ser-Leu-—Gln-*Asp-Ile—Glu—Ile—Íhr-Oys—Yal—Tyr-Oys— -Lys-Ihr XI Met-Ala-Arg-Pbe-Glu-Asp-Pro-Ilir-Arg-Arg--Pro-íyr-Lys-Leu III Ala-Ala-Cys-Bis-Lys-Oys-Ilô-Asp-Plie-Iyr--Ser-Arg-Ile-Arg-Glu-Leu-Arg-His-Iyr-Ser-—Asp—Ser—V al—Syr-Glu—Asp—Ihr—Leu—Glu—Iiya— -Leu-Ihr assim como epítopos sero-reactivos com a proteína E? de ΗΡΎ18 com uma das seguintes sequências de aminoácidos I Val-Leu-His-Leu-Grlu-Pro-Gln-Asn-Glu-Ile--Pro-Val-Asp-Leu-Leu-Cys-His-Glu-Gln-Leu--Ser-Asp-3er-Glu-Glu-Glu-Asn-Asp-Glu-Ile--Asp-Glu-Yal-Asn-His-Gln-His-Leu-Pro-Ala--Arg-Arg-Ala-G-lu-Pro-Gln-Àrg-His - 3 - IX Ile-Asp-Gly-Val-Asn-His-Gln-His-Leu-Pro- -Ala-Arg-Arg A invenção abrange ainda péptidos que contêm, «ma ou mais sequências de aminoácidos de acordo com a presente invenção dos epítopos sero-reactivos acima mencionados . A invenção refere-se também a vacinas que se baseiam em péptidos que contêm uma ou várias sequências de aminoácidos dos epítopos acima referidos das proteínas de HPV18.
Anticorpos específicos contra as proteínas El, E6 e E7 de HPV18 podem ser evidenciados com o auxílio de um estojo de diagnóstico de acordo com a presente invenção em soros de pacientes· Este estojo contám os péptidos de acordo com a represente invenção. A fim de se conseguir realizar a profilaxia, as.proteínas virais específicas que contêm as regiões sero-reactivas podem também ser identificadas precocemente por anticorpos policlonais ou monoclonais que são dirigidos contra essas regiões, no soro do sangue. Oorrespondentemente, a presente invenção refere-se também a um estojo de diagnóstico que contém anticorpos policlonais ou monoclonais que se dirigem especificamente contra as regiões sero-reactivas ào HPV18.
Para a identificação dos epítopos sero--reactivos, utilizaram-se os seguintes métodos, independentes uns dos outros: A. Um ensaio de selecção de um banco de expressão "shot-gun": 0 HPV18-ADH clonado no vector plasmídio de bactérias pSP65 foi transformado» mediante tratamento oom ultra-sons e subsequente tratamento com DITase, num tamanho de fragmento médio de 100 pares de bases· As extremidades destes fragmentos foram preenchidas com TA ADIT-polimerase e ligadas ao veotor de expressão dos fagos. 0 fragmento de fusão 1 é derivado pelo bacteriófago fd e é descrito em Science 228* 1315 - 1317 (1985)· Os fagos foram placados com Escherichia coli Kjgl* passaram-se réplicas para um filtro de microeelulose e incubou--se o filtro com soro de coelho policlonal apropria do· Isolaram-se os clones positivos por meio de vá rias operações de isolamento e identificaram-se as sequências de péptidos imuno-reactivas por sequên-ciamento de ADN. B· Sobreposição de Péptidos:
Sinteti2aram-se 127 péptidos que se sobrepõem e que correspondem às partes curtas das proteínas E6 e E7 de HPV18 em *pernos* de polieti-leno, em que se utilizou a química de Fmoc (Proc· Hatl. Acad· Sei* 82, 178 (1985)· A sequência de proteínas das proteínas E6 e E? foi subdividida em deoámeros que estão de acordo com o péptido mais préximo. Os péptidos foram ensaiados nos correspondentes anti-soros por ELISA (ensaio de imuno-adsorção por ligação com enzimas)· - 5 -
Exemplo 1
Utilizaram-se derivados do fago filamentoso fd para se obter um sistema de expressão para fragmentos de ÂDN de HPV18. Para isso, cortou-se o produto de fusão 1 (fà-tet-J6, Science 118, 1315-131? (1985); Gene 73, 305 - 318 (1988)). Xiigaram-se fragmentos de ADH genómicos de BPV18 a partir de uma digestão com DHasel de acordo com a reparação de AM numa extremidade embotada com uma T4~ADU-ligase. Para transformação do vector 1 de fusão, utilizou-se a estirpe ΕΒ02 de E. coli (ϋΤ gslK2 gal0?22 metBl supE44 bsdr(2) (J. of Molecular Biology 16, 118 - 133 (1966)) de acordo com o processo de Hanáhan em Journal of Molecular Biology 166, 55? * 580 (1988). As colónias resistentes ao ensaio produziram bactériófagos que não são infecciosos para as bactérias por causa do seu fenótipo P“. para se placarem os fagoe, utilizou-se a estirpe K91 de E. coli (F+, um derivado de E. coli K38, Virology 49, 45 - 60 (1972)).
Exemplo 2
Placaram-se aproximadamente 50 000 fagos recombinados do banco aleatório acima descrito com 0,2 ml áe células de E. coli K91 que se desenvolvem exponencialmente em 3,3 ml de agarose a 0,5 % que continha MgSO^ 10 mM, em placas de agar mínimo. Retiraram-se réplicas das placas para filtros de microcelulose e, em seguida, inc^baram-se ao longo de seis horas a 3?°0 em agar mínimo fresco para fortalecer o sinal.
Em seguida, bloqueou-se o filtro durante sessenta minutos com 10 % de leite desgordurado em PBS e incubou-se durante a noite em 5 % de leite-PBS com uma diluição de anti-soros específicos de HPV de 1 : 100 até 1 : 1 000. Em vez dos anti-soros específicos de HPV, podem utilizar-se também anticorpos monoclo-nais. Os anti-soros foram previamente adsorvidos por células - 6 -
Κ91 irradiadas. Os filtros foram em seguida lavados cinco vezes e incubaram-se durante cinco minutos num meio de PBS/O,1% de 2?ween 20 e em seguida durante três horas à temperatura ambiente com anticorpos de cabra snti-coelho, no caso da utilização de anticorpos monoclonais com anticorpos de anti-rato--peroxidase (1:1 000) em 5% de leite desengordurado. Depois de se lavar o filtro, tingiu-se em 50 ml de PBS que continha 30 mg de diaminobenzidina, 30 microlitros de ELpOg a 30% e 1,5 ml de NiSQ^ a 1%. Ea seguida, lavou-se o filtro durante trinta minutos com Ho0 e depois secou-se sobre papel de filtro.
Oom o soro policlonal de coelho contra HPV18, isolaram-se primeiramente vinte e cinco fagos, dos quais se verificou serem positivos dezóito nas fases subsequen tes de purificação. Ba seguida, cultivaram*se partículas dos fagos em meio de cultura e preparou-se AON de um cordão.
Exemplo 3
Escolheu-se a mesma mistura que no Exemplp 2 também para a proteína E6 de HPV18. Gomo o soro de coelho policlonal utilizado apresentava reacções cruzadas com epítopos não virais, ensaiou-se também o método do manchamento de Western com fragmentos de KDN específicos para identificar entre todos os recombinantes reactivos aqueles que contém de E6 de HFV18. A partir de setenta mil fagos recombinantes, isolaram-se quinze e finalmente sequenciaram-se. Determinou--se o epí topo HPV18 E6 Nfi. 1 assim para o Exemplo 1 no banoo de fagos investigado no total de dez vezes.
Exemplo 4
Preparação de ADN de Fita Única a partir de l-Heoombinantes de Fuse
Para esse efeito, utilizou-se uma maneira . de proceder descrita em Proc. ííatl. Aead. Sei., USA 7^, 5463 -
- 5467 (1977)· Incubaram-se 50 ml de LM com células de Ei coli K91 resistentes a tet que possuíam o 1-plasmídio fuse e incubou-se esta mistura durante dezasseis horas a 57^0. Pele-tizaram-se em seguida as bactérias a 6 000 rotações por minuto durante trinta minutos* Depois da adição de 2 ml de PEG 6 OCX) a 40 % e de 2 ml de acetato áe sódio 5 4 de pK 6,5 ao sobrenadante, precipitaram-se os fagos a 0°0 durante sessenta minutos e centrifugou-se o precipitado a 6 000 rotações por minuto durante sessenta minutos, Ressuspendeu-se o pelete em 0,3 ml de TE, Depois de duas extracções com fenol, precipitou-se o ADR. Em seguida, utilizaram-se cerca de 25 % das preparações para o sequenciamento.
Exemplo 5 Sequenciamento
Para sequenciamento do ADR, utilizou-se o método padrão USB (United States Biochemicals) (USB, 1987)· Substituíu-se o primário universal por um oligonucleótido de vinte meros ( 5' -Thr-Cys-Cys-Ala-Gly-Âla-Cys-Gly-fhr-Thr-Ala--Gly-Ehr-Al a-Àl a-Al a-Thr -Gly-Al a-Al a-3 - ) ♦
Exemplo 6 Síntese de PÓptidos
Cento e vinte e sete péptidos que se sobrepõem e que em fragmentos curtos representam as ORFs HPV18 E6 e E7 foram sintetizados de acordo com a química de Pmoc em "pinos* de polietileno, como se descreve em Proc. Ratl. Acad. Sei. 82, 178 (1985) e em Proc. Hatl. Acad. Sei 81, 3998 (1985)· Os "pinos* de polietileno que foram derivatizados com \3>-alanina foram obtidos na firma CKB, Inglaterra. Diferentemente das publicações acima citadas, distribuíu-se a sequência de proteínas em decapéptidos que se sobrepõem com o péptido próximo em oito aminoácidos. Realizou-se a síntese ·* 8 ·
com o auxílio da química de Pmoe e activaçSo in situ por BOP (reagente de Castro) (letrahedron Letters, 14, 1219 (1975))« Distriuíram-se os derivados de Pmoe-aminoãcido (6 micromoles), 30P e solução de H-metil-morfolina em insertos de polietileno (CHB) que correspondem â sequencia de péptidos que se deve sintetizar. Realizaram-se todas as outras reacções de acordo com as indicações da ORB,
Sxemplo 7
Incubaram-se os *£inosw de polietileno de acordo com 0 processo de ensaio ELISA com os soros de coelho policlonais acima mencionados, anticorpos ligados com proteína -Â-peroxidase· Quantificou-se 0 ruído do fundo obtido pelas ligações não específicas por meio de incubação de proteína-A--incubação sem os primeiros anticorpos· Os péptidos reactivos ficam em zonas que foram identificadas como epítopo soro-reac-tivo por meio da selecção dos fagos.
Iodos os ensaios se realizaram sobre os péptidos que estão ligados eovalentemente aos "pinos* de polie tileno e aos que também foram sintetizados originalmente· Utilizaram-se conjuntos de noventa e seis pinos, que foram fixados segundo uma configuração tal que pudessem ser inseridos nas reentrâncias de placas de micro titulação # Realizou-se a incubação para o ensaio ELISA mediante a qual os pinos foram mergulhados nas reentrâncias. Lavaram-se os pinos com etanol e PB3 e, em seguida, bloquearam-se com gelatina a 0,25%* 0,1% de Iween 20 em PBS durante duas horas a 37°0, seguido de incubação durante uma hora a 37°G com soro que foram diluídos nas proporções de 1 1 200 e 1 : 4 000 em gelatina a 0,125 % e (Bween 20 a 0,05 %· Depois de uma outra operação de lavagem com PBS/0,1 % de Tween 20, incubaram-se os pinos durante uma hora 37°G com proteína-A-peroxidase 1 j 4 000, seguida de uma operação de lavagem e coloração com tetrametilbenzidina (TMB) durante quinze minutos. A operação de tingimento foi termina- - 9 -
da retirando os pinos da solução de tingimento e introdução em 100 microlitnos de uma solução 0,2 molar de HgSO^· Em seguida, mediu-se a absorção num leitor automático ELISA.
Para eliminar o complexo anticorpo-enzima de acordo com o processo ELISA, incubaram-se os pemos durante uma hora áua-taaente com a acção de ultra-sons (banho-maria, 30 W, 48 3cHz) a 60°G em PBSA% de SDS/0,1% de beta-mercapto-etanol e lavaram-se em sequida com metanol. A eficácia deste procedimento foi ensaiada com auxílio de ELISA com utilização de proteína A-peroxidase sem participação de um soro primário. Ensaiaram-se os mesmos péptidos mais de quarente vezes de acordo com os seguintes ensaios de ELISA.
I ABEL A
Epítopo sero-reactivo de EI CHPV18) bpll93-
Thr-Glu-Asn-Ser-Pro-Leu-G-lu-Glu-Arg-Leu--Glu-Val-Asp-Ihr-Grlu-Leu-Ser-Pro-Arg-Leu— -Grln-Glu-Il e-Ser-Leu-Asn-Ser -bp!273
Epítopo sero-reactivo de E6 CHPV18) pbl20— A sp -Pro -Ilir-Ar g~Arg-Pr o -lyr-Lys -Leu-Pr o --Asp-Leu~Cye-$hr-Glu~Leu~Asn-Thr-Ser-Leu--Gln-Asp-Ile-Grlu-Ile-!3íhr-Oys-Val-3íyr-Gys--Lys-Thr -bp215 - 10 -
II Met-Ala-Arg-Phe-Slu-Asp-Pro-Ehr-Arg-Arg--Pro-Iyr-Lys-Iieu bp294~ III Ala-Ala-Gys-His-Lys-Cys-Ile-Asp-Phe-Tyr--Ser-Arg-11e-Arg-Glu-L eu-Arg-Hi s-lyr-Ser--Asp-Ser-Y al-£yr~Gly-Asp-Ihr- Leu-Glu-Lys --Leu-lhe -bp386
Epitopo sero-reaotlvo E7 (HPYI8) bp623- I Val-Leu-Hi s-Leu-Glu-Pro-Gln-Asn-Glu-Ile - -Pro-Yal-Asp-Leu-Leu-Oys-His-Grlu-G-ln-Leu-~Ser-Asp~3er-Glu-Glu-Glu~Asn-Asp-G-lu~Ile--Asp-Gly-Val-Asn-His-Gln-His-Leu-Pro-Ala--Arg-Arg-Al a-Glu-Fro -Grln-Arg-H i s -bp763 II Ile Asp-Gly-Val-Asn-His-Gln-His-Leu-Pro--Ala-Arg-Arg 11 - R Ε I \r I aí Β I 0 A Ç φ Ε 3 - la -
Processo para a preparação de vacina contra ο PAPILLOiiyftRUS iiufflano 18 (ΗΡΥ 18), caracterizado por se incorporar um ou mais péptidos de HPV 18 com a sequência de aminoácidos {Dhr^lu-Asn^er~Pro-LôU~tfly-Glu-Arg--Leu- -dlu-Val-Asp-Tiir-Glu-Leu-Ser-Pro-Àrg-Xieu-» -Gln-úlu-Ile-Ser-Leu-Ãsn-Ser
da proteína EI ou com as sequências de aminoácidos I Asp-pro-Thr-Arg-Arg-Pro-Iyr-Lys-Leu-Pro--Asp-Leu-Oys-Thr-G-lu-Leu-Asn-ílir-Ser-Leu--Gln-Asp-Ile-Glu-X le-Ihr-Oys-V al-Tyr-Gys--Lys-Thr II £Íet~Ala-Arg-Phe-Glu~Âsp-Pro-3?hr~Arg-Arg- -Pro-Iyr-Eys-Leu III Ala-Ala-Oys-His-Lys-Oys-Ile~Aso-Phe-Tyr- -Ger-Arg~Ile-Arg-Glu-Leu~Arg-His-Tyr-Ser~ -Asp-Ser-*7al-^Dyr--Gly-Asp-Xlir-Lôu--íxlu-*Iiys-· -Leu-Thr da proteína E6 ouccom as sequências de aminoácidos I Val-Leu-His-Leu-31u~Pro~31n-Asn-Glu-Ile- -Pro-Val-Asp-Leu-Leu-Cys-His-Glu-Gln-Leu--Ser-Aap-Ser-Glu-Glu-Asn-Asp-Glu-Ile*--Asp-Gly-Yal-Asn-His-Gln-His-Eeu-Pro--Ala-Arg-Arg*Ala-Glu-?ro-Gln-A,rs-His II Ile-Asp-G-ly-Val-Asn-His-Gln-His-Leu-Pro--Ala-Arg-Arg da proteína E?
Claims (2)
- nos adjuvantes e substâncias auxiliares usuais numa proporção de mistura dos peptidos compreendida entre aproximadamente hl e 1:10 em peso.
- 2£ - Processo para a preparação de dispositivos de diagnóstico para detectar a presença de anticorpos específicos de Papillomavirus 18 humano (HPV 18) no soro do sangue de se-res humanos ou noutros líquidos corporais e verificar se eles são ou não soro-reactivos, caracterizado por se fixar um ou mais peptidos de HPV 18 com a sequência de aminoáeidos 3}hr-Glu~Asn-Ser--Pro-Leu-G-ly-Glu-Arg-Leu*- -&lu-Yal-Asp-0?hr~&lu-Leu-3er-Pra.-Arg--.Leu~ -dln-Ile-der-leu-Asn-Ser da proteína EI ou com as sequências de aminoáeidos X Asp-Pro-Xhr-Arg-Arg-Pro-Xyr-Lyg-Leu-Pro- -Asp-Leu-Oys-Xhr-Glu-Leu-Asn-Xhr-Ser-Leu--Thr-Oys-Yal-£yr-Cys-Eys«fhr XI í;Iet-Ala-Arg-Phe-dlu-Asp-Pro-Ihr-Ars-A.rg- -Pr o-^yr-Xys-Leu III Ala-Ala-Oys-Iiis-Lys-Cys-Ile-Asp-Phe-Iyr--tíer-Arg-lle-Arg-aiu-Leu-Arg-His-Iyr-der--Asp-Ser-Yal-Olyr-Grlu-isp-Ihr-Leu-dlu-Lys- -Xieu-Ihr da proteína E6 ou com as sequências de aminoáeidos - 13 - IV al -L eu-Hi s -L eu-G-lu-Pr o -Gln-A sn-Glu-I1 e --Pro-Val-Àsp-Leu-Leu-Gys-His-Glu-Pln-Leu--3er-Asp-3er-&lu~Glu-Glu~Asn~\sp-Plu-Ile--Asp-vKLy-Val -Asn-Hi s-Sln-His-u eu-Pr o -Al a--Arg- Arg-Âla-GLu-^ ro-tiln-Arg-Eis II Ile-Asp-Gly-yal-Asn-His-Gln-His-Leu-Pro- -Ala-Arg-Arg da proteína £7* - 3& ~ Processo para a preparação de dispositivos de diagnóstico de acordo com a reivindicação 2» caracteriza-do por se empregarem anticorpos policlonais ou monoclonais contra um ou mais péptidos de HPV 18 com a sequência de amino ácidos Siir-Cilu-Asn-^er-Pro-Leu-Grly-G-lu-Arg-Leu- -Glu-Yal-Asp-Tnr-Glu-Leu-Ger-Pro-Arg-Leu- -Gln-Glu-Ile-Ber-Ieu-Asn-Ser da proteína SI ou com as sequências de aminoácidos I Asp-Pro-£Hr-Arg-Arg-Pro-£yr-Iiys-Leu-Pro- -Asp-Leu-Oys-IHr-Glu-Leu-Asn-Ihr-Ser-Iieu--Gln-Asp-I ie-Glu- Ile-Ihr-Oys-Val-$yr-Cys --Lys-Thr II ..let-lla-Arg-Plie-Glu-Asp^ro-^lir-Arg-Arg- -Pro-Tyr-Lys-Leu III Al a-Ala-Gys -His-Lys-Cys-Ile-Asp-PHe-Pyr- -Ber-Arg-Ile-Arg-Glu-Leu-Arg-HIs-Iyr-Ser--Asp-3er-2yr-Iyr-Ply-Asp~PHr~Leu-Glu~Lys--Leu-IHr da proteína E6 ou com as sequências de aminoácidos - 14 - I Vai -L eu-Hi s -L eu-crlu-X^r ο -ϊ 1 n-Asn-ulu-ííhr--Pro-Val-Asp-Leu-Leu-Cys-His-Glu-Gln-Leu--Ger-Asp-Ser-u-lu-Glu-ilu-AGn-^sp-íjrlu-Ile--À sp-dl y-V al-Asn-His -Gltt-Hi s-Leu-Prο -Λ1 a--Arg-Arg-Ala-(jlu-Pro-G'ln-Ar6-His II 11 e~A sp -G-ly-V al-A sn-Hi s -Gln-Hi s -Leu-P r o - -Ala-Arg-Arg da proteína B7« A requerente reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado em 10 de i.laio de 1990, sob o Hâ. P 40 15 044.5. Lisboa, 9 de Maio de 1991- 15RESUMO "iPIvOCESSO PARA A mS2f&kQlQ DS YAGIiiAS OQhíiHA Q PAFILI&JÍ.VÍRU3 HILíARO 13 (ΉΡΥ 18)" A presente invenção refere-se ao processo para a preparação de vacinas contra o Papillomavirus humano 18 (HFV 18) que compreende incorporar um ou mais plptidos com as sequências de aminoácidos da proteína EI ou da proteína Ξ6 ou da proteína E7, indicadas nas reivindicações» com os adjuvantes e as substancias auxiliares correntemente empregados*
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4015044A DE4015044A1 (de) | 1990-05-10 | 1990-05-10 | Seroreaktive epitope auf proteinen des menschlichen papillomavirus (hpv) 18 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PT97621A PT97621A (pt) | 1992-03-31 |
| PT97621B true PT97621B (pt) | 1998-08-31 |
Family
ID=6406140
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PT97621A PT97621B (pt) | 1990-05-10 | 1991-05-09 | Processo para a preparacao de vacinas contra o papilomavirus humano 18 (hpv 18) |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6322794B1 (pt) |
| EP (1) | EP0456197A1 (pt) |
| JP (3) | JP3401022B2 (pt) |
| KR (1) | KR100203547B1 (pt) |
| AU (1) | AU650648B2 (pt) |
| CA (1) | CA2042236C (pt) |
| DE (1) | DE4015044A1 (pt) |
| IE (1) | IE911584A1 (pt) |
| PT (1) | PT97621B (pt) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9207701D0 (en) * | 1992-04-08 | 1992-05-27 | Cancer Res Campaign Tech | Papillomavirus e7 protein |
| IL105554A (en) * | 1992-05-05 | 1999-08-17 | Univ Leiden | Peptides of human papillomavirus for use in preparations elicit a human T cell response |
| AUPN015794A0 (en) * | 1994-12-20 | 1995-01-19 | Csl Limited | Variants of human papilloma virus antigens |
| GB9503570D0 (en) * | 1995-02-23 | 1995-04-12 | Kodak Ltd | Process and apparatus for the development of photographic materials |
| WO1996026277A1 (en) * | 1995-02-24 | 1996-08-29 | Cantab Pharmaceuticals Research Limited | Polypeptides useful as immunotherapeutic agents and methods of polypeptide preparation |
| IL117459A (en) * | 1995-03-22 | 2005-11-20 | Merck & Co Inc | Dna encoding human papillomavirus type 18 |
| AUPN443995A0 (en) * | 1995-07-27 | 1995-08-17 | Csl Limited | Papillomavirus polyprotein |
| US6908615B1 (en) | 1996-03-18 | 2005-06-21 | Merck & Co., Inc. | DNA encoding human papilloma virus type 18 |
| JP3618497B2 (ja) * | 1996-12-27 | 2005-02-09 | 富士通株式会社 | タンパク質の抗原決定基予測方法及びシステム |
| GB9717953D0 (en) | 1997-08-22 | 1997-10-29 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| EP2100620A1 (en) * | 1999-09-16 | 2009-09-16 | Eisai Corporation of North America | Nucleic acids encoding polyepitope polypeptides |
| US20050100928A1 (en) * | 1999-09-16 | 2005-05-12 | Zycos Inc., A Delaware Corporation | Nucleic acids encoding polyepitope polypeptides |
| US7026443B1 (en) * | 1999-12-10 | 2006-04-11 | Epimmune Inc. | Inducing cellular immune responses to human Papillomavirus using peptide and nucleic acid compositions |
| US7312041B2 (en) * | 2001-02-16 | 2007-12-25 | Arbor Vita Corporation | Methods of diagnosing cervical cancer |
| US20040229298A1 (en) * | 2000-11-11 | 2004-11-18 | Lu Peter S. | Methods and compositions for treating cervical cancer |
| BR0314155A (pt) | 2002-09-09 | 2005-07-05 | Arbor Vita Corp | Métodos para diagnosticar câncer cervical |
| WO2005063286A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Arbor Vita Corporation | Antibodies for oncogenic strains of hpv and methods of their use |
| ES2293178T3 (es) | 2004-03-18 | 2008-03-16 | Institut Pasteur | Proteina recombinante que contiene epitopos del papilomavirus humano insertados en un proteina adenilato ciclasa o un fragmento de la misma y usos terapeuticos de la misma. |
| WO2016006873A1 (ko) * | 2014-07-09 | 2016-01-14 | 연세대학교 산학협력단 | 인유두종바이러스 펩타이드의 자궁경부암 진단 및 치료 용도 |
| CN105753980B (zh) * | 2016-03-29 | 2019-04-02 | 上海市普陀区中心医院 | 一种hpv18 e6单克隆抗体及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4777239A (en) * | 1986-07-10 | 1988-10-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Diagnostic peptides of human papilloma virus |
| DE3625257A1 (de) * | 1986-07-23 | 1988-02-04 | Behringwerke Ag | Expressionsprodukte der menschlichen papillomviren typ 16 und 18, fuer diese proteine spezifische antikoerper und diese antikoerper bzw. entsprechende dna enthaltende diagnostika |
-
1990
- 1990-05-10 DE DE4015044A patent/DE4015044A1/de not_active Withdrawn
-
1991
- 1991-04-29 AU AU76212/91A patent/AU650648B2/en not_active Ceased
- 1991-05-07 EP EP91107423A patent/EP0456197A1/de not_active Ceased
- 1991-05-09 IE IE158491A patent/IE911584A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-05-09 CA CA002042236A patent/CA2042236C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-05-09 PT PT97621A patent/PT97621B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-05-10 JP JP13575191A patent/JP3401022B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-05-10 KR KR1019910007527A patent/KR100203547B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-12-10 US US08/164,768 patent/US6322794B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-06-07 JP JP2000171081A patent/JP3676195B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-06-07 JP JP2000170971A patent/JP3717755B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3676195B2 (ja) | 2005-07-27 |
| JP3717755B2 (ja) | 2005-11-16 |
| IE911584A1 (en) | 1991-11-20 |
| JP2001017190A (ja) | 2001-01-23 |
| EP0456197A1 (de) | 1991-11-13 |
| JPH04227000A (ja) | 1992-08-17 |
| DE4015044A1 (de) | 1991-11-14 |
| CA2042236C (en) | 2002-07-09 |
| PT97621A (pt) | 1992-03-31 |
| KR100203547B1 (ko) | 1999-06-15 |
| CA2042236A1 (en) | 1991-11-11 |
| JP2001026600A (ja) | 2001-01-30 |
| JP3401022B2 (ja) | 2003-04-28 |
| US6322794B1 (en) | 2001-11-27 |
| AU7621291A (en) | 1991-11-14 |
| AU650648B2 (en) | 1994-06-30 |
| KR910019641A (ko) | 1991-12-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PT97621B (pt) | Processo para a preparacao de vacinas contra o papilomavirus humano 18 (hpv 18) | |
| JP3366350B2 (ja) | Ｈｐｖ‐１６ ｅ６およびｅ７‐遺伝子由来ペプチドの、診断のための使用 | |
| KR100204438B1 (ko) | 치킨 아네미아 바이러스 백신 및 진단방법 | |
| JPH08322580A (ja) | 乳頭腫ウイルス型特異的抗体 | |
| JP3164497B2 (ja) | Ｅｂｖゲノムのｄｎａ配列 | |
| Li et al. | Characterization of self-assembled virus-like particles of human polyomavirus BK generated by recombinant baculoviruses | |
| JP4612071B2 (ja) | エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 | |
| JPH04217998A (ja) | ヒトパピローマウイルス１６タン白質の血清反応性エピトープ | |
| HU220747B1 (hu) | Polinukleotid vakcina papillómavírus ellen | |
| KR20080114683A (ko) | 질병에 대한 바이오마커로서의 지방생성 아데노바이러스 | |
| JP2002509113A (ja) | 単純ヘルペスウイルス用のワクチン組成物および使用方法 | |
| US6013265A (en) | Vaccine composition for herpes simplex virus and methods of using | |
| US20100068229A1 (en) | Recombinant antigens of human cytomegalovirus (hcmv) | |
| US5753233A (en) | Seroreactive epitopes on proteins of human papilloma-virus (HPV) 18 | |
| EP0561885A1 (en) | Subunit papillomavirus vaccine and peptides for use therein | |
| Emini et al. | Antigenic analysis of the Epstein-Barr virus major membrane antigen (gp350/220) expressed in yeast and mammalian cells: implications for the development of a subunit vaccine | |
| JPH11508685A (ja) | Ｈｐｖ蛋白質に対する特異的抗体の検出方法 | |
| EP1137779A2 (en) | Identification of senv genotypes | |
| JP4945730B2 (ja) | 粘膜指向性ヒトパピローマウイルス群の感染予防ワクチン抗原 | |
| US8715681B2 (en) | Minimal motifs of linear B-cell epitopes in L1 protein from human papillomavirus type 58 and their applications | |
| KR100785397B1 (ko) | 인체 파필로마 바이러스 유사 입자를 생산하는 재조합아데노바이러스 벡터 및 자궁경부암 생백신 | |
| JPS61257188A (ja) | Ｅｂｖゲノムのｄｎａ配列、組換えｄｎａ分子、ならびにｅｂｖ関連抗原および該抗原を含有する診断用組成物および製剤組成物の製造法 | |
| ES2393963T3 (es) | Expresión de HBcAg y utilizaciones terapéuticas y de diagnóstico | |
| JPH10508182A (ja) | 活性化ウイルス | |
| Nelson | Nuclear import pathways for HPV* L1 major capsid proteins of human papillomaviruses |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB1A | Laying open of patent application |
Effective date: 19920313 |
|
| FG3A | Patent granted, date of granting |
Effective date: 19980521 |
|
| PC3A | Transfer or assignment |
Free format text: 19981125 BEHRING DIAGNOSTICS GMBH DE |
|
| PD3A | Change of proprietorship |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH Effective date: 19981125 |
|
| MM4A | Annulment/lapse due to non-payment of fees, searched and examined patent |
Free format text: LAPSE DUE TO NON-PAYMENT OF FEES Effective date: 20071121 |