KR20080114683A - 질병에 대한 바이오마커로서의 지방생성 아데노바이러스 - Google Patents

질병에 대한 바이오마커로서의 지방생성 아데노바이러스 Download PDF

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Abstract

본 발명은 지방생성 아데노바이러스, 예를 들면 아데노바이러스-36(Ad-36) 감염과 비만 및 비만 관련된 암 및 기타 질병의 병인 사이의 관계에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 대상을 Ad-36 상태에 대해 분석하고, 암의 존재에 대한 마커로서 Ad-36 상태를 이용하여, 암, 예를 들면 유방암 또는 전립선암이 발병할 미래의 위험을 예측하고/하거나 이들 암의 공격성 및 예후를 예측하는 방법에 관한 것이다.
아데노바이러스, 지방생성 아데노바이러스, 비만

Description

질병에 대한 바이오마커로서의 지방생성 아데노바이러스{ADIPOGENIC ADENOVIRUSES AS A BIOMARKER FOR DISEASE}
관련 출원에 대한 상호참조
본 발명은 35 U.S.C. § 119(e) 하에 그 개시내용 전체가 본원에 참고로 인용되어 있는 2005년 12월 27일자로 출원된 가출원 연속 번호 60/753,402에 관한 것이며, 그리고 상기 가출원 연속 번호에 대한 이익을 특허 청구한 것이다.
발명의 분야
본 발명은 지방생성(adipogenic) 아데노바이러스, 예를 들면 아데노바이러스-36(Ad-36) 등과 비만 및 비만 관련된 암 및 기타 질환의 병인 사이의 관계에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 대상이 유방암이나 전립선암에 걸리기 쉬운지를 예측하는 방법론에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 Ad-36 상태에 대해 대상을 분석하고, 암의 존재에 대한 마커로서 Ad-36 상태를 이용하여 그러한 암이 발병할 미래의 위험을 예측하고/하거나 암의 공격성 및 예후를 예측하는 방법에 관한 것이다.
비만의 유병력(prevalence)과 특정 유형의 암의 유병력은 극적으로 동시에 증가하여 왔다. 약 1980년을 시작으로 비만이 세계적으로 유행되는 속도가 빨라졌 다. 미국에서 성인의 비만 유병력은 1960년에서 1980년까지의 이전 20년 동안에는 단지 약간 증가한 반면(13.5%에서 15%로), 1980년에서 2000년까지의 20년 동안에는 2배가 되었다(15%에서 31%로). 약 1970년에서 2000년까지 어린이의 비만 유병력은 3배가 되었다. 이와 유사하게, 유방암, 전립선암, 결장암 및 간염 또한 최근에 유병력이 급속히 증가하고 있다.
비만에서 생식 호르몬의 변화가 (다른 것들 중에서도 특히) 유방암 및 전립선암과의 연관성에 역할을 하며 그리고 이들 암의 공격성에 역할을 하는 것으로 제안되고 있다. 그러나, 생식 호르몬의 변화는 호르몬의 제어를 받지 않는 결장암, 신장암 또는 췌장암과 같은 암을 설명할 수 없다.
비만과 암 사이의 연관에 대한 다른 가능성은 비만한 사람에서 나타나는 감소된 면역 기능에 있다. 비만한 사람은 비만하지 않은 사람에 비해 간염 B 백신 접종에 반응하는 항체의 양을 더 적게 갖는다. 면역 시스템이 신생물의 성장을 억제하는데 중요하므로, 만일 이것이 비만한 사람들에서 많은 유형의 암이 증가하는 기작이라면, 이는 놀랍지 않을 것이다. 그러나, 아데노바이러스가 인간 숙주를 비롯한 숙주의 내부에서 복제를 강화시키는 방식으로 면역 기능을 감소시킨다는 점은 잘 알려져 있다. 보다 관련되게는, 비만을 야기하는 것으로 보고괸 바 있는, SMAM-1 조류 아데노바이러스는 닭의 면역 기능을 감소시키는 데 주된 영향을 미쳤다. 따라서, 비만을 야기하는 아데노바이러스와 또한 면역 기능을 손상시키는 아데노바이러스 사이에는 직접적인 연관이 있다. 본 발명자들은 SMAM-1이 인간의 비만과 관련이 있다는 점을 보고한 바 있는데, 이는 아데노바이러스와 인간의 비만 사이에 연 관이 있다는 것을 부언해 준다.
일부 인간 아데노바이러스 혈청형은 발암성인 것으로 알려졌고, 래트나 햄스터에서 종양을 유도한다. 아데노바이러스 혈청형은 다음과 같은 그룹으로 나누어진다: 그룹 A 아데노바이러스(예를 들면 Ad-12, Ad-18)는 고도로 발암성이고, 대부분의 동물에서 4달 이내에 종양을 생성하고; 그룹 B 아데노바이러스(예를 들면 Ad-3, Ad-7)는 약한 발암성이고, 대부분의 동물에서 4 내지 18달 이내에 종양을 야기하고; 그룹 D 바이러스는 보다 덜 발암성인 것으로 생각되지만 혈청형-9는 3 내지 5달 이내에 유방 종양을 효과적으로 유도한다. 아데노바이러스가 유도하는 암에 대해 광범위한 연구가 진행되어 왔으나, 현재까지는 아데노바이러스가 인간의 암을 야기한다는 증거가 없다.
아데노바이러스가 인간의 암을 야기한다면, 아데노바이러스는 조절되지 않는 세포 성장이 일어날 수 있도록 숙주의 유전자 발현을 변화시킴으로써 암을 야기하기 쉬울 것이다. 많은 이러한 종양 마커가 확인되어왔다. 일부는 유전자 변형에 기인한다. 유전성 유방암은 BRCA1, BRCA2, CHEK 2, TP53 또는 PTEN과 같은 높은 침투 감수성 유전자의 한가지 대립 유전자에서의 생식 계열 돌연변이와 연관이 있다. 아데노바이러스 감염은 이러한 유전학적으로 감수성이 있는 개체가 암에 걸리는 것을 촉진시킬 수 있다. 그러나, 아데노바이러스는 다양한 종양 유전자의 발현을 유도하거나 숙주의 종양 억제 유전자의 발현을 억제함으로써 자발적인 종양 발생에 기여할 수 있다. 암에 기여하는 것으로 생각되는 아데노바이러스로 인한 변화(alternation) 중에, DNA-의존성 단백질 키나제, 지방산 결합 단백질, mTOR, p16, p53, PDZ 단백질, 포스파티딜이노시톨 3-키나제, PML, 티미딘 키나제 및 Zip 키나제에서의 변화들이 있다. 아데노바이러스 E4 영역에 의해 변화되는 이러한 종양 관련 인자, 특히 E4orf1 유전자가 특히 흥미롭다. E4 종양 유전자는 DNA-의존성 단백질 키나제, p53, PDZ 단백질, 포스파디틸이노시톨 3-키나제, PML, 티미딘 키나제 및 Zip 키나제를 포함한다. 이하 설명되는 바와 같이, Ad-36 E4orf1 유전자는 지방 세포 대사에 직접적인 영향을 미침으로써 비만의 생성에 관여하는 것으로 보인다. 인간 아데노바이러스-5의 E4orf1 영역은 종양 유전자인 것으로 보이고, 최근의 논문은 Ad-5가 마우스에서 비만을 생성하는 것으로 보고하였다. 이들 발견은 비만과 암 사이의 직접적인 연관을 나타내고(이들 둘 모두가 인간 아데노바이러스에 기인한다), 바이러스 유전자를 통한 유망한 기작을 제공한다.
암 연구 분야의 많은 연구자들 사이에서는 아데노바이러스가 인간의 암의 병인에 기여하지 않는 것으로 일반적으로 합의되어 있다. 따라서, 지방생성 아데노바이러스, 예를 들면 Ad-36이 비만 관련 암, 예를 들면 유방암 및 전립선암과 관련되어 있다는 것을 입증하는 것은 중요한 기술적 진보가 될 것이다.
발명의 개요
본 발명의 한 양태는 대상이 지방생성 아데노바이러스 관련된 질병에 걸리기 쉬운지를 예측하는 방법에 관한 것이다. 이 방법론은 대상에게서 시료를 수득하는 단계, 및 시료 중의 지방생성 아데노바이러스에 특이적인 항체의 존재에 대해 스크리닝하고 시료 중의 지방생성 아데노바이러스에 특이적인 항체의 존재를 측정함으로써 대상이 지방생성 아데노바이러스에 감염되었는지를 결정하는 단계를 포함한다. 그 항체는 서열 번호 5, 서열 번호 6 및 서열 번호 7의 핵산 서열에 의해 코딩된 하나 이상의 펩타이드에 대해 특이적일 수 있다. 게다가, 그 스크리닝 단계는 혈청 중화 분석법(serum neutralization assay) 및 ELISA로 구성된 군에서 선택된 방법을 이용하여 수행할 수 있다.
추가의 양태에서, 지방생성 아데노바이러스는 아데노바이러스 5형, 아데노바이러스 36형 및 아데노바이러스 37형을 포함할 수 있다. 또한, 지방생성 아데노바이러스 관련된 질병은 암, 전립선암, 유방암, 췌장 기능장애, 췌장 질병, 당뇨병, 폐 질병, 뇌 및 신경계 기능장애 및 부신 기능장애를 포함할 수 있다.
또다른 양태에서, 대상은 인간 또는 동물일 수 있다. 게다가, 시료는 생물학적 시료, 예를 들면 체액, 조직 시료, 기관 시료, 변, 혈액, 침, 및 이들의 임의의 조합일 수 있다.
본 발명의 다른 양태는 대상에게 항-지방생성 아데노바이러스 백신을 투여함으로써 대상에서 지방생성 아데노바이러스 관련된 질병을 예방하는 방법에 관한 것이다. 그 항-지방생성 아데노바이러스 백신은 효과적인 투여량의 활성 성분, 예를 들면 사멸된 아데노바이러스 36형, 불활성화된 아데노바이러스 36형, 아데노바이러스 36 코트 단백질 또는 이의 단편을 코딩하는 단백질 또는 펩타이드 서열, 아데노바이러스 36 코트 단백질 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산 서열, 아데노바이러스 36형 E1A 단백질, 유전자적으로 변형된 비-병원성 바이러스, 및 비-병원성 바이러스를 포함할 수 있다.
추가의 양태에서, 백신은 대상에게 비강내, 경구, 정맥내, 근육내, 피하 및/또는 복막내 투여될 수 있다. 대상은 인간 또는 동물일 수 있다. 지방생성 질병은 암, 전립선암, 유방암, 췌장 기능장애, 췌장 질병, 당뇨병, 폐 질병, 뇌 및 신경계 기능장애, 및 부신 기능장애를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 양태는 대상에서 암의 공격성을 측정하는 방법에 관한 것이다. 이 방법론은 대상에게서 시료를 수득하는 단계, 및 시료 중의 지방생성 아데노바이러스에 특이적인 항체의 존재에 대해 스크리닝하고 시료 중의 지방생성 아데노바이러스에 특이적인 항체의 존재를 측정함으로써 대상이 지방생성 아데노바이러스에 감염되었는지를 결정하여 지방생성 아데노바이러스의 존재를 공격성 암과 연관시키는 단계를 포함한다. 그 항체는 서열 번호 5, 서열 번호 6 및 서열 번호 7의 핵산 서열에 의해 코딩된 하나 이상의 펩타이드에 특이적일 수 있다. 더구나, 스크리닝 단계는 혈청 중화 분석법 및 ELISA로 구성된 군에서 선택된 방법을 이용하여 수행할 수 있다.
추가의 양태에서, 지방생성 아데노바이러스는 아데노바이러스 5형, 아데노바이러스 36형 및 아데노바이러스 37형을 포함할 수 있다. 또한, 암은 유방암, 전립선암, 자궁암, 난소암, 결장암, 신장암, 췌장암 및 폐암을 포함할 수 있다.
또다른 양태에서, 대상은 인간 또는 동물일 수 있다. 또한, 시료는 생물학적 시료, 예를 들면 체액, 조직 시료, 기관 시료, 변, 혈액, 침, 및 이들의 임의의 조합일 수 있다.
본 발명의 추가의 특징, 이점 및 양태는 후술한 상세한 설명, 도면 및 청구범위를 고려할 때 명백히 설명 또는 이해할 수 있다. 더욱이, 전술한 본 발명의 개요 및 후술한 상세한 설명은 예시적인 것으로, 특허 청구된 본 발명의 범위를 제한하는 일 없이 추가 설명을 제공하고자 하는 것임을 이해해야 한다.
도면의 간단한 설명
본 발명에 대한 추가 이해를 제공하고자 첨부된 도면은 본원에 혼입되어 본원의 일부를 구성하고, 본 발명의 양태를 설명하며, 상세한 설명과 함께 본 발명의 원리를 설명하는 역할을 한다. 본 발명의 기본적인 이해 및 본 발명이 실시될 수 있는 다양한 방식에 필요할 수 있는 것보다 더 상세히 본 발명의 구조적인 세부사항을 제시하고자 하는 것은 아니다.
도 1은 MDI 처리 5일 후의 3T3-L1 세포의 BODIPY 염색를 도시한 것이다. 이 도면은 시험관 내에서 감염되지 않은 3T3-L1 세포 및 Ad-36 바이러스로 감염된 3T3-L1 세포 중의 트라이글리세라이드를 나타낸다. 대조군 세포는 온화한 BODIPY 지방 염색을 나타내는데 반해, Ad-36으로 감염된 세포는 약 2배나 많은 트라이글리세라이드를 갖는데, 이는 지방세포 생화학이 변화되었음을 보여준다.
도 2는 임의로 먹이를 먹인 레수스 원숭이에서 자발적 Ad-36 감염의 효과를 나타내는 그래프를 도시한 것이다. 원숭이가 감염되기 전의 기간과 비교했을 때, 일단 감염이 개시되면(↑로 표시됨), 체중이 서서히 증가하고, 이는 약 18개월에도 여전히 증가하였다.
도 3은 Ad-36으로 감염된 원숭이의 체중 증가를 나타내는 그래프를 도시한 것이다. 감염되지 않은 원숭이와 비교하였을 때, 감염된 원숭이는 약 7달 만에 약 4배나 많은 체중이 늘어 났다.
도 4는 Ad-36으로 감염된 명주원숭이(marmoset)에서 혈청 콜레스테롤의 감소를 나타내는 그래프를 도시한 것이다. 혈청 콜레스테롤은 감염 직후에 떨어지기 시작하고 약 10주까지 떨어진다. 이는 감염된 원숭이에서의 기준선과는 상당히 다르다. 감염되지 않은 원숭이에서는 변화가 없다.
도 5는 네스티드(nested) PCR 분석을 이용하여 감염된 명주원숭이의 지방 조직에서 Ad-36 DNA의 존재를 나타내는 겔을 도시한 것이다. 제1 레인은 Ad-36 DNA이고, 제2 내지 제4레인은 감염되지 않은 원숭이에서 지방내에 Ad-36 DNA가 없음을 보여주고, 제5 내지 제7 레인은 모든 감염된 원숭이에서 Ad-36 DNA의 존재를 보여준다.
도 6은 네스티드 PCR 분석을 이용하여 감염된 명주원숭이의 간 조직(위쪽 레인)과 근육 조직(아래쪽 레인)중의 Ad-36 DNA를 나타내는 겔을 도시한 것이다. 감염된 원숭이에서 나온 Ad-36 DNA은 간 조직의 제7 내지 제9 레인에서 보이고, 감염되지 않은 원숭이에서 나온 제4 내지 제6 레인에서는 존재하지 않는다. 제2 레인은 배양액에서 나온 Ad-36이고, 제3 레인은 마커이다.
도 7은 네스티드 PCR 분석에 의해 감염된 동물의 뇌 및 근육 조직 중의 Ad-36 DNA를 나타내는 겔을 도시한 것이다. 위쪽 레인은 명주원숭이에서 나온 뇌 조직이고, 아래쪽 레인은 근육 조직이다. 감염된 명주원숭이에서 나온 Ad-36 DNA는 제8 및 제9 레인에서 명확하게 보이고, 제7 레인에서는 보다 희미하다. Ad-36 DNA는 감염되지 않은 명주원숭이에서 나온 제4 내지 제6 레인에서는 존재하지 않는다. 제2 레인은 Ad-36 배양물에서 나온 양성 대조군이다.
도 8은 네스티드 PCR 분석(바닥 레인)을 이용하여 인간의 지방 세포 조직 중의 Ad-36 DNA를 나타내는 겔을 도시한 것이다. 이 겔은 위쪽 레인에서 명주원숭이의 지방 세포 조직 중의 Ad-36 DNA를 보여준다(도 5의 자료의 반복: 제4 내지 제6 레인은 대조군 명주원숭이에서 나온 음성이고, 제7 내지 제9레인은 감염된 명주원숭이에서 나온 Ad-36 DNA이다). 바닥 레인에서, Ad-36 DNA는 생검시 사체에서 수득된 인간의 내장 지방 조직 6개 시료 중에서 2개에서 나타난다(제 2 레인은 양성 대조군이고, 제6 및 제7 레인은 Ad-36 양성이고, 제4, 제5, 제8 및 제9 레인은 음성이다).
도 9는 닭에서 여러 인간 아데노바이러스가 총 체지방에 미치는 효과를 나타내는 차트를 도시한 것이다. Ad-2 및 Ad-31은 체지방을 증가시키지 않았지만, Ad-37은 현저한 효과를 나타내었다.
도 10은 닭에서 여러 인간 아데노바이러스가 내장 지방에 미치는 효과를 보여주는 차트이다. Ad-2 및 Ad-31은 내장 지방을 증가시키지 않았지만, Ad-37은 현저한 효과를 나타내었다.
도 11은 여러 인간 아데노바이러스에 노출된 동물의 먹이 섭취량을 나타내는 차트를 도시한 것이다. 여러 군들 사이에서 누적된 먹이 섭취량은 차이가 나지 않았지만, Ad-37로 감염된 동물들은 비만해지는 반면, Ad-2 또는 Ad-31로 감염된 동물은 비만해지지 않았다.
도 12는 마우스에서 인간 Ad-5가 비만을 야기한다는 점을 보여주는 표를 도시한 것이다. 또한 체지방은 거의 3배 증가하였다.
도 13은 3곳의 미국 도시에 사는 사람들 중에 인간 Ad-36에 대한 항체의 존재를 나타내는 표를 도시한 것이다. 비만한 사람들은 평균 약 30%가 Ad-36에 감염된 반면, 비만하지 않은 사람들은 약 11%가 Ad-36에 감염되었다.
도 14는 Ad-36의 감염 상태에 따라 3곳의 미국 도시에 사는 502명의 사람들의 체지방 지수를 나타내는 차트를 도시한 것이다. 전반적으로, 감염되지 않은 사람에 비해 감염된 사람의 BMI가 약 9 단위 더 높다(p < 0.0001). 비만 그룹과 비-비만 그룹 둘 모두 중에서 감염된 사람들이 각 그룹에서 감염되지 않은 사람들에 비해 상당히 더 무거웠다.
도 15는 Ad-36 감염에 대하여 불일치한 쌍둥이 쌍들의 비교를 나타내는 표를 도시한 것이다. 89쌍의 쌍둥이 중에서 26쌍이 불일치하였다. Ad-36으로 감염된 쌍둥이들이 감염되지 않은 쌍둥이들에 비해 더 무겁고 더 뚱뚱했다.
도 16은 전립선암 조직에서 Ad-36 DNA의 존재를 나타내는 겔을 도시한 것이다.
도 17는 원숭이에서 Ad-36 DNA의 존재를 나타내는 겔을 도시한 것이다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 본원에 설명된 특정한 방법론, 프로토콜, 장치, 기구, 재료 및 시약 등에 국한되지 않고, 이들이 다양하게 변화될 수 있다는 점을 이해해야 한다. 또한 본원에 사용된 용어는 특정한 양태를 설명하기 위해서만 사용된 것일 뿐, 본 발명의 범위를 한정하고자 하는 것은 아님을 이해해야 한다. 본원 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태는 달리 명확하게 언급되어 있지 않은 한 복수 형태를 포함한다는 점도 유의해야 한다. 따라서, 예를 들면 "바이러스 입자"란 의미는 해당 기술 분야 및 기타 기술 분야의 당업자에게 공지되어 있는 하나 이상의 바이러스 입자 및 그 등가물을 의미하는 것이다.
달리 정의되어 있지 않은 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 해당 기술 분야의 당업자에게 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 바람직한 방법, 장치 및 재료가 설명되어 있지만, 본원에 설명된 것들과 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있다. 본원에서 언급된 모든 참고 문헌은 그 전체 내용이 본원에 참고로 인용되어 있다.
본원에서 언급되는 임의의 수치는, 임의의 더 낮은 값과 임의의 더 높은 값 사이에 2개 이상의 단위가 분리되어 있는 한, 1 단위씩 증가하면서 더 낮은 값에서 더 높은 값까지의 모든 값을 포함한다. 예로서, 성분의 농도 또는 공정 변수, 예를 들면 투여량, 희석 등의 값이 예를 들면 1 내지 90, 특히 20 내지 80, 보다 특히 30 내지 70이라고 지정되면, 이는 15 내지 85, 22 내지 68, 43 내지 51, 30 내지 32 등과 같은 값들이 본 명세서에서 명확하게 열거되는 것으로 의도된다. 1 보다 적은 값의 경우 1 단위는 적절한 경우 0.0001, 0.001, 0.01 또는 0.1로서 간주된다. 이는 구체적으로 의도되는 것의 단지 예일 뿐이고, 열거된 하한값과 상한값 사이의 수치의 모든 가능한 조합이 유사한 방식으로 본원에서 명확하게 지정되는 것으로 간주된다.
더욱이, 본 발명과 관련된 일부 용어가 명확성을 위해 구체적으로 정의되어 있는 바로 아래의 "정의" 단원이 제공되어 있지만, 모든 정의는 당업자가 이들 용어를 어떻게 이해하는 방법과 일치한다. 특정한 방법, 장치 및 재료가 설명되어 있긴 하지만, 본원에 설명된 것들과 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다.
정의
Ad-2는 아데노바이러스 2형이다.
Ad-5는 아데노바이러스 5형이다.
Ad-31은 아데노바이러스 31형이다.
Ad-36는 아데노바이러스 36형이다.
Ad-37은 아데노바이러스 37형이다.
BMI는 체질량 지수이다.
FAS는 지방산 신테타제이다.
PPAR은 퍼옥시좀 증식자 활성화된 수용체이다.
CEBP는 CCAAT-개선자(enhancer) 결합 단백질이다.
본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "지방생성 아데노바이러스"는 일반적으로 감염된 숙주에서 세포 기관을 작동시켜서 숙주의 지질생성 효소 생산을 작동시킴에 따라 과량 지방산을 생산하고 감염된 세포에 대한 지방 저장을 촉진시킴으로써, 세포, 조직 및/또는 기관에서 지질 생산의 증가를 자극할 수 있는 아데노바이러스를 의미한다. 이 지방생성 아데노바이러스는 Ad-5, Ad-36 및 Ad-37을 포함하지만, 이로 한정되지는 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "BMI"는 일반적으로 신장에 따라 등급화된 개인 체중의 통계적 측정수단을 의미한다. BMI는 개인의 체중을 신장의 제곱으로 나눈 값으로 정의될 수 있고 kg/m2의 단위로 표현될 수 있다. BMI는 성인과 아동의 가능한 체중 문제를 확인하기 위한 스크리닝 도구로서 사용될 수 있다. 그러나 과체중이 건강 위임인지를 결정하기 위해서는, 건강 관리 제공자가 추가적인 평가, 예를 들면 피부 두겹 두께 측정(skinfold thickness measurement), 주사위 평가, 신체적 활동, 가족력, 엉덩이 대 허리 비율, 지방생성 아데노바이러스 감염, 및 다른 적절한 건강 스크리닝을 수행할 필요가 있을 수 있다. 20세 이상의 성인의 경우, BMI는 모든 연령과 남녀 모두에게 동일한 표준 체중 상태 카테고리를 이용하여 해석할 수 있다. 다르게는, 아동과 10대들의 경우, BMI의 해석은 연령과 성별 둘 모두에 특이적이다. 예를 들면 (i) 약 18.5% 미만의 BMI는 저체중으로 간주될 수 있고, (ii) 약 18.5 내지 약 24.9의 범위의 BMI는 정상 체중으로 간주될 수 있고, (iii) 약 25 내지 약 29.9의 범위의 BMI는 과체중으로 간주될 수 있고, (iv) 약 30.0 초과의 BMI는 비만으로 간주될 수 있다.
용어 "엉덩이 대 허리 비"는 비만인지 결정하는데 도움을 줄 수 있는 측정수단을 의미한다. 지방의 분포는 허리 둘레를 엉덩이 둘레로 나누어서 평가된다. 예를 들면, 허리 둘레가 약 30인치이고 엉덩이 둘레가 약 40인치인 사람은 약 0.75의 비를 갖고, 허리 둘레가 약 41인치이고, 엉덩이 둘레가 약 39인치인 사람은 약 1.05의 비를 가질 것이다. 비가 더 높을수록 심장 질환 및 비만과 관련된 기타 질환의 위험이 더 높다.
"생물학적 시료"란 인간 또는 동물에서 나온 조직 또는 유체의 시료를 의미하는 것으로, 혈장, 혈청, 척수액, 림프액, 피부, 호흡관, 내장관 및 비뇨생식기 관의 외부 단편, 눈물, 침, 혈액 세포, 종양, 기관, 조직 및 시험관내 세포 배양 구성물의 시료를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.
"단리된" 또는 "실질적으로 순수한" 핵산(예를 들면 DNA, RNA 또는 혼합된 중합체)은 예를 들면 인간 또는 동물의 서열 또는 단백질, 예를 들면 리보솜, 중합효소, 많은 다른 인간과 동물의 게놈 서열 및 단백질을 자연적으로 수반하는 다른 세포 구성 성분으로부터 실질적으로 분리된 것이다. 이 용어는 자연적으로 발생하는 환경으로부터 제거된 핵산 서열 또는 단백질을 포함하고, 재조합물 또는 클로닝된 DNA 단리물, 및 화학적으로 합성된 유사체 또는 이종 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 유사체를 포함한다.
용어 "면역성"은 일반적으로 백신이 투여된 후 사람을 감염시킬 수 있는 비만을 야기하는 살아있는 바이러스에 대한 중화 항체를 생성하는 면역 반응을 면역화된 동물에서 일으킬 수 있는 능력을 갖고 있는 항-비만 백신을 의미한다.
용어 "항체"는 항체, 이의 분해 단편(digestion fragment), 특정 부분 및 변이체를 의미하는 것으로, 항체 또는 이의 특정 단편 또는 부분의 구조 및/또는 기능을 모방하는 항체의 부분(단일 쇄 항체 및 이의 단편을 포함함)을 포함하는 항체 모방체를 포함한다. 본 발명은 항체 및 생물학적 분자(예를 들면 항원 또는 수용체)에 결합할 수 있는 항체 단편, 예를 들면 아데노바이러스, 특히 Ad-36의 섬유 코트 단백질, 또는 이의 일부를 포함한다.
용어 "핵산 서열"은 올리고뉴클레오타이드, 뉴클레오타이드, 또는 폴리뉴클레오타이드, 및 이들의 단편을 포함하는 것으로, 단일 나선 또는 이중 나선일 수 있고 센스 또는 안티센스 스트랜드를 나타낼 수 있는 게놈 또는 합성 기원의 DNA 또는 RNA를 의미하거나, 펩타이드 핵산(PNA: petide nucleic acid)을 의미하거나, 또는 임의의 DNA-류 또는 RNA-류 물질인 천연 또는 합성 기원의 물질을 의미한다.
단편: 이종 펩타이드 또는 핵산 서열의 임의의 일부를 포함한다. 이종 펩타이드 단편은 대상이 되는 이종 폴리펩타이드의 하나 이상의 구조적 또는 기능적 특징을 보유하고 있다. 핵산 서열 단편은 약 60개 뉴클레오타이드 초과의 길이를 갖고 있고, 가장 바람직하게는 약 100개 뉴클레오타이드 이상, 약 1000개 뉴클레오타이드 이상, 약 10,000개 뉴클레오타이드 이상의 길이를 갖는 단편을 포함한다.
상보적 또는 상보성: 본원에서 사용되는 바와 같이, 허용가능한 염 및 온도 조건 하에서 염기 쌍 형성에 의한 폴리뉴클레오타이드의 자연적인 결합을 포함한다. 예를 들면 서열 "A-G-T"는 상보적 서열인 "T-C-A"에 결합한다.
2개의 단일 스트랜드 분자 사이의 상보성은 "부분적"(이 경우, 핵산 중의 단지 일부만이 결합한다)일 수 있거나, 단일 스트랜드 분자들 사이에 전체 상보성이 존재하는 경우 완전할 수도 있다. 핵산 스트랜드 사이의 상보성 정도는 핵산 스트랜드 사이의 혼성화 효율 및 강도에 상당한 영향을 미친다. 이는, 핵산 스트랜드 사이의 결합에 의존하는 증폭 반응, 및 분자의 설계 및 용도에서 특히 중요하다.
기능적 등가물: 이종 단백질, 폴리펩타이드, 효소 또는 헥산과 실질적으로 유사한 기능적 또는 구조적 특징을 갖는 단백질 또는 핵산 분자. 단백질의 기능적 등가물은 특정한 기능을 수행하기 위한 변형의 필요성에 따라 그러한 변형을 함유할 수 있다. 용어 "기능적 등가물"은 분자의 "단편", "돌연변이", "하이브리드", "변이체", "유사체" 또는 "화학적 유도체"를 포함하는 것으로 의도된다.
단백질 정제: 넓게 정의하자면, 전하, 분자 크기 또는 결합 친화도에 기초하여 단백질이 다른 성분 또는 화합물로부터 분리되는 임의의 공정을 의미한다.
실질적으로 정제된: 본원에서 사용되는 바와 같이, 천연 환경으로부터 제거되거나, 단리되거나, 분리되고, 자연적으로 결합되어 있는 다른 성분들로부터 60% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 가장 바람직하게는 90% 이상 제거되는 핵산 또는 아미노산 서열을 포함한다.
억제: 본원에서 사용되는 바와 같이, 아데노바이러스 36형의 성장 또는 생존 능력이 있는지의 여부에 대한 측정된 파라미터의 감소를 의미한다. 이런 감소량은 기준(대조군)에 대해 측정된다. 본원에서 "감소"는 대조군에 비해 약 25% 이상, 바람직하게는 약 50% 이상, 가장 바람직하게는 약 75% 이상의 감소로 정의된다.
면역원성 성분이, 비병원성, 유전자적으로 변형된 담체 바이러스, 예를 들면 백시니아 바이러스 또는 계두 바이러스의 사용을 전제로 하는, 살아있는, 불활성화된 바이러스, 사멸된 바이러스, 코트 단백질 그 자체, 코트 단백질 단편을 포함하는 에피토프, 또는 코트 단백질(또는 이의 일부를 포함하는 에피토프)인 본 발명의 항-지방생성 아데노바이러스 백신은 해당 기술 분야에 잘 공지된 방법을 이용하여 제조된다. 따라서, 백신은 또한 해당 기술 분야에서 잘 이해되어 있는 바와 같이 담체, 부형제, 어쥬반트, 항균제, 방부제 등을 포함한다. 따라서, 활성 성분 이외에도, 백신은 적합한 조성물, 일반적으로 수성 완충액, 예를 들면 인산염 완충된 염수 등을 가질 것이고, 여기서 활성 성분은 선택적으로 인간 백신 제제에서 사용되는 임의의 다양한 면역계 자극 어쥬반트, 항균 조성물 및 제제를 안정화시키는 기타 조성물 중 어느 것과도 함께 현탁될 것이다. 백신 제제에 포함되는 모든 조성물은 인간에게 투여되기에 적합하다. 백신 제제는 동결건조된 형태로 저정된 후 투여하기 직전에 용액과 조합될 수 있다. 경구 투여의 경우, 백신 제제는 용액, 정제 또는 선택적으로 해당 기술 분야에서 이해되는 바와 같은 장내 코팅을 갖는 환제 형태일 수 있다. 함께 투여되는 용액 중의 (면역원성 또는 면역원-제공) 활성 성분의 농도는 약 1 ng 내지 약 1 mg/ml이다.
본 발명의 항-지방생성 아데노바이러스 백신은 비강내, 경구, 또는 정맥내 주사, 근육내 주사, 피하 주사 또는 복막 주사에 의해 투여될 것이다. 본 발명의 백신 투여는 전문의의 지시에 따라 행해져야 한다.
항-지방생성 아데노바이러스 백신의 적절한 투약은 의료 개업의의 기술 범위 이내이고, 치료받는 환자의 연령, 환자의 발전하는 보호 면역성의 응급성, 개인의 면역계 상태, 및 당업자에게 공지된 다른 인자를 비롯한 다수의 인자에 의존적이다. 백신은 전형적으로 예방 접종을 받는 사람에게서 비만을 야기하는 바이러스에 대해 보호 면역성이 유발되고 유지될 수 있도록 여러 단계로 투여될 것이다. 따라서, 1차 예방 접종 후에, 전형적으로 약 1주 내지 10년의 기간으로 분리되는 1 내지 약 10회의 부스터 예방 접종이 있을 것이다.
(용액 형태인) 본 발명의 항-비만 백신의 1회 투여량은 약 0.1 ml 내지 10 ml의 부피를 가질 것이고, 임의의 형태에서 약 1 ng 내지 10 mg의 사멸되거나 불활성화된 지방생성 바이러스, 약 1 ng 내지 10 mg의 유전자적으로 변형된, 비-병원성 바이러스, 또는 약 1 ng 내지 10 mg의 코트 단백질(예를 들면 섬유 단백질) 또는 (면역원성이 되도록 변형된 형태인) 6 내지 30 아미노산 펩타이드를 가질 것이다.
활성 성분이 핵산인 본 발명의 항-지방생성 아데노바이러스 백신은 또한 이 유형의 백신을 위한 표준 제제이다. 이 유형의 백신을 이용하면, 핵산은 면역원이 아니지만, 백신이 투여된 후에 생체 내에서 펩타이드 또는 단백질로서 발현되고, 이들 펩타이드 또는 단백질이 면역원성이 된다. 이 유형의 백신은 이런 백신 분야에 공지된 기법에 의해 투여될 것이다(예를 들면 근육내 주사). 또한 투약은 예방 접종을 받은 개인에서 바이러스 비만에 대한 보호 면역성이 야기되고 유지되도록 해당 기술 분야에 공지된 방법에 따라 결정될 것이다.
본 발명에 따른 항-지방생성 아데노바이러스 백신이 하나 이상의 지방생성 바이러스(또는 코트 단백질, 예를 들면 섬유 단백질, 또는 이의 코트 단백질의 에피토프 분획)에 근거한 활성 성분을 포함할 수 있다는 점에 주목해야 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 바이러스에 의해 야기된 지방생성 아데노바이러스 관련된 질병에 걸리기 쉬운 인간에서 그러한 지방생성 아데노바이러스 관련된 질병을 예방하는 방법으로서, 상기 인간에게 지방생성 아데노바이러스에 대한 보호 면역 반응을 일으키고 유지하기에 효과적인 양의 본 발명의 항-지방생성 아데노바이러스 백신을 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 일반적으로 인간 지방생성 아데노바이러스, 예를 들면 Ad-5, Ad-36 및 Ad-37의 감염과 비만, 및 세포, 조직 및/또는 기관의 기능장애, 예를 들면 암, 췌장 기능장애, 골격근 및 심혈관근의 기능장애, 폐 기능장애, 뇌 및 신경계의 기능장애 및 부신 질환 및 기능장애의 병인과의 관계에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 질병 상태, 예후, 치료 결과, 및 감염 및 질병의 예방에 대한 예측자로서 지방생성 아데노바이러스 상태를 이용하는 것에 관한 것이다.
지방생성 아데노바이러스 관련된 질병의 주된 기작은 세포내의 지질 생산에 있다. 지방생성 아데노바이러스는 감염된 대상에서 세포 기작을 변화시켜 숙주가 지질생성 효소의 생산을 작동시킬 수 있다. 그 결과, 지질생성 효소는 과다 지방산을 생산하고, 여러 기관의 세포내에서의 지방 저장을 촉진시킨다.
신체의 여러 세포가 세포 내부에서 지방산을 만들 수 있는 능력을 갖고 있는 것으로 알려져 있다. 지방산 신테타제(FAS: fatty acid synthetase)는 가장 중요한 지질생성 효소중 하나이고, 다수의 성인 및 태아 세포에서 발현되는데, 이는 이들 조직이 지방산을 생성할 수 있다는 점을 보여준다. 예를 들면 FAS는 십이지장 및 위의 상피 세포, 조혈 세포, 맹장, 영양관의 신경절 세포, 간세포, 비만 세포, 정낭, 방광의 우산 세포, 부신 속상대(zona fasciculate) 세포, 지방 세포, 하수체 전엽 세포, 소뇌의 바구니 세포, 대뇌 피질 뉴런, 탈락막, 자궁내막의 탈락된 간질 세포, 아포크린샘의 상피 세포, 유방의 관 및 선방, 전립선 및 피지선, 레테인(letein) 세포, 및 폐의 II형 폐포 세포에서 발현된다.
추가적으로, FAS는 또한 하수체 전엽 세포, 기관기관지의 연골 세포, 혈관 및 심장의 상피 세포, 기관지의 상피 세포, 식도위내장관, 폐, 췌장, 전립선, 갑상선, 혀, 기관, 신장의 근위 세관, 섬유아 세포, 림프구 결절, 부신 수질의 신경아 세포, 흉선 세포, 혀의 줄무늬근 세포, 침샘의 상피 세포, 및 기관기관지샘, 조혈 세포, 간 세포, 융모막 융모의 랑그한스(Langhans) 세포, 골아 세포, 척추주변 섬유아 세포, 교감 신경절과 아우에르바하(Auerbach) 신경총의 슈반(Schwann) 세포, 부신의 피막하 세포, 지방 세포, 고환의 레이디흐(Leidig) 세포, 비만 세포, 뇨관의 요상피세포 및 상부 층의 부신피질 세포와 같은 태아 세포에서 발현된다.
지방산이 많은 생화학적 과정을 위한 세포내 환경에 중요하긴 하지만, 세포 내부의 과다한 지방산은 세포의 생화학을 근본적으로 변화시킨다. 세포 내부의 과다한 지방산은 다수의 세포내 공정이 비정상적으로 작동하도록 유발할 수 있다. 예를 들면 췌장 조직에서 과다한 지방산은 인슐린 분비를 감소시키고, 암 세포 중의 지방산은 암이 성장하기 위한 주된 에너지 공급원을 제공한다. 또한, 폐 세포 내부의 지방산은 그 영역으로 대식 세포가 모여드는 것을 촉진시켜 천식과 기종과 관련된다. 따라서, 세포가 과다한 지방산에 노출되면 부정적인 결과가 발생한다.
한 양태에 따르면, 세포와 조직에서 과다한 지방산과 트라이글리세라이드가 생성되는 기작이 지방생성 아데노바이러스일 수 있다. 여러 연구에 의해 지방생성 아데노바이러스가 지방 세포 조직과 간에서 지질생성 효소를 변화시킬 수 있음이 입증되었다. 예를 들면 다른 연구들은 지방생성 아데노바이러스인 Ad-36으로 감염되면 글리세롤-3-포스포데하이드로게나제, PPAR-감마, CEBP-알파 및 베타, 및 3T3-L1 세포중의 지단백질 리파제를 포함하는 분화 인자의 신속한 출현이 촉진됨을 보여왔다. 여러 조직이 지방생성 아데노바이러스 DNA를 축적하기 때문에, 과다한 지방생성 효소가 이들 효소를 생성할 수 있는 모든 감염된 조직에 존재할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 지방생성 아데노바이러스 감염을 이용하여 비만과 관련된 암의 존재를 측정할 수 있다. 추가의 양태에서, 지방생성 아데노바이러스 감염을 이용하여 대상이 비만과 관련된 암에 걸리기 쉬운지를 측정할 수 있다.
비만한 사람들에게서 여러 유형의 암의 유병력이 증가되고 있다. 이들 암은 유방암, 전립선암, 자궁암, 난소암, 결장암, 신장암, 췌장암 및 폐암을 포함하지만, 이로 한정되지는 않는다. 간세포 암 또한 비만 및 대사 증후군과 연관될 수 있다. 또한, 비만은 일부 유형의 암의 공격성과 더 나쁜 예후와 연관될 수 있다. 예를 들면 비만은 더 높은 등급의 전립선암 및 철저한 전립선 절제술 후의 더 높은 재발율과 연관되어 있을 수 있다. 또한, 일부 비-히스패닉 백인 여성의 경우, 유방 종양 크기는 비만 정도에 비례한다. 구체적으로, 이는 허리 둘레의 가장 높은 4분위수(여기서, 확률 정량은 2.76이다)의 경우 가장 현저하다.
연구는 지방산이 암 세포에서 에너지 소비를 위한 기질이고, FAS를 차단하면 암 성장을 차단할 수 있음을 보여주었다. 더욱이, 많은 비만과 관련된 암에서 FAS가 증가되고, FAS가 종양 성장을 선호하는 것으로 나타났다. 암 세포에서 지방생성 아데노바이러스 감염은 세포 중의 지방산을 자극할 수 있고, 이에 의해 암 세포를 위한 에너지 공급원을 제공함으로써 암의 성장을 촉진할 수 있다.
FAS 발현은 많은 종양에서 검출되었고, 조직학 아형, 조직병리학 등급 및 종양의 공격성과 관련되어 있다. 연구는 FAS가 인간의 신생물, 예를 들면 유방암, 전립선암, 자궁암, 결장직장암 및 자궁내막암에서 높게 발현됨을 입증하였다. FAS(OA-519)가 전립선 암의 예보자인 것으로 결정되었다. OA-519의 면역반응성은 조사된 99개의 1차 전립선 암 중에서 56개(57%)에서 나타난 것으로 관찰되었다. OA-519 암은 비-OA-519 암에 비해 더 잘 진행되었다.
실제로, Ad-36의 존재는 인간 전립선암 조직의 61%에서 확인되었고, 유방암 및 전립선암 환자의 각각 50% 및 51%가 Ad-36에 대한 항체를 갖고 있는 반면, 정상 모집단에서는 13.8%만이 항체를 갖고 있는 것으로 관찰되었다.
따라서, Ad-36으로 감염된 것으로 관찰된 암 환자와 대략적으로 같은 수의 전립선 암 조직중에 FAS가 존재한다는 사실을, 지방생성 아데노바이러스가 세포 중에서 FAS를 증가시키고 FAS를 억제하면 암이 억제될 수 있다는 사실과 조합하면, 지방생성 아데노바이러스의 감염이 대상에게서 비만과 비만과 관련된 암 둘 모두를 유발하는 것으로 제안된다.
본 발명의 한 양태에 따르면, Ad-36 감염의 유병력은 암이 없는 개인에서보다 유방암 및 전립선암 환자에서 통계학적으로 더 높을 수 있다. 또다른 양태에서는, Ad-36 상태가 유방암과 전립선암을 위한 마커로서 작용할 수 있다. 또다른 양태는 조직 중에 Ad-36 DNA를 갖는 유방암 또는 전립선 환자가 Ad-36 DNA를 갖지 않는 환자에 비해 보다 공격적인 암 및/또는 더 나쁜 예후를 갖는다는 점에 관한 것이다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 지방생성 아데노바이러스 감염은 질병 진단과 치료 진단을 위한 예보자로서, 또는 종양 공격성의 예보자로서 사용될 수 있다. 유방 암종, 전립선 암종 및 난소 암종에서, 더 높은 수준의 FAS는 종종 나쁜 예후와 관련되어 있다. FAS 발현과 종양 크기 또는 종양 세포의 증식 활성의 마커 사이의 연관성으로 인해 FAS가 이들 악성 종양의 성장 및 증식에 관련되어 있는 것으로 제안될 수 있다.
예를 들면 연구에서는 FAS의 과발현이 래트의 간암 발생을 증가시킨다는 점을 보여주었다. 다른 연구는 초기 유방암 환자의 약 30%가 FAS를 발현함을 보여주었다. FAS를 발현하는 유방암 환자는 상당히 더 높은 종양 등급, 더 큰 종양 부피, 진전된 임상 단계, 및 글리슨(Gleason) 점수(가장 막강한 예보자 중 하나)를 가졌다. FAS 발현은 또한 난소 신생물에서 연구되었고, 조직학적 종양 등급 및 더 짧은 생존과 연관되어 있는 것으로 나타났다. 더욱이, 연구는 과체중인 사람과 비만인 사람이 여러 유형의 인간 암 환자중에서 상당히 증가된 사망율을 가졌음을 보여주었다.
FAS는 결장암 및 이의 심각성과 연관되어 있다. 연구는 낮은 등급의 형성 장애를 갖는 43개의 선종 중에서 2개만이(5%)이 FAS에 대한 반응성을 보였음을 나타내었다. 그러나, 중간 등급 형성 장애를 갖는 40개의 선종 중에서 7개(17%), 높은 등급 형성 장애를 갖는 17개의 선종 중에서 9개(53%), 그리고, 선암 중 81%에서 양성 FAS 면역염색이 나타났다(p<0.0001).
따라서, 본 발명의 한 양태는 대상에게서 지방생성 아데노바이러스 감염이 존재하는지에 대한 진단적 스크리닝 시험에 관한 것이다. 대상이 지방생성 아데노바이러스에 대해 양성이면, FAS 발현이 암 세포에서 증가되어, 보다 공격적인 암 및/또는 더 나쁜 예후를 생성할 수 있다. Ad-36과 암을 연결하는 다른 정보는 비만과 관련된 암, 예를 들면 전립선 암에서는 중합효소 연쇄 반응 시험(PCR: polymerase chain reaction test)에 의해 Ad-36 DNA의 독특한 서열이 발견된다는 점이다. Ad-36 섬유 단백질에서 나온 DNA의 독특한 서열(이는 양수인의 이전 미국 특허 제6,664,050호 및 제6,127,113호에 설명되어 있다)은 전립선암 조직 시료 18개 중에서 11개에서 검출되었다. 예시적인 스크리닝 기법이 하기에 개시되어 있다.
지방생성 아데노바이러스 시험은 2가지 방식으로 유용하다. 유방에 덩어리가 만져지거나 전립선이 확대된 대상이 지방생성 아데노바이러스 시험에서 양성이면(예를 들면 양성 혈청 시험 또는 양성 PCR 조직 시험중 하나에 의해 시험됨), 대상이 암에 걸렸을 위험이 더 높고, "살펴보면서 기다리기" 보다는 시험을 수행하여 암에 대해 평가해야 한다(예를 들면 생검). 반대로, 대상이 지방생성 아데노바이러스 시험에서 양성인 경우, Ad-36 시험에서 음성인 사람보다 보다 정기적인 간격으로 암에 대해 스크리닝해야 한다.
Ad-36에 대한 백신은 사멸된 바이러스를 이용하여 토끼에서 개발되어왔다. 토끼에서 나온 혈청은 17회 순차 희석(원래 농도의 1:131,072 희석)시켰을 때까지 조직 배양액에서 Ad-36 성장을 방지하는 항체를 함유하고 있다. 아데노바이러스 성장에 대해 유일하게 효과적인 항체가 다양한 아데노바이러스의 섬유 단백질 분획에 대한 것(중화 항체)이라는 점은 공지되어 있다. Ad-36 항체는 임의의 다른 아데노바이러스와 교차 반응하지 않고, Ad-36 섬유 단백질에서 이렇게 독특한 DNA 서열이 이 특이성의 원인이다. Ad-36 고유의 Ad-36 섬유 단백질의 3가지 서열이 확인되었다. 해당 기술 분야의 표준 기법을 사용하여 이들 서열에서 나온 단백질을 이용하여 최소한의 알레르기 반응을 가져야만 하는 매우 정제된 백신을 제조한다. 펩타이드는 효율을 증대시키기 위해 백신에 흔히 사용되는 어쥬반트에 결합될 것이다. 이들 기법은 해당 기술 분야의 당업자에게 공지되어 있다.
특정한 양태에서, 암을 예방하기 위한 지방생성 아데노바이러스, 예를 들면 Ad-36에 대한 백신이 제조될 수 있다. 지방생성 아데노바이러스가 암과 연관되어 있기 때문에 지방생성 아데노바이러스에 대한 백신을 이용하여 암을 예방할 수 있다. 예를 들면 섬유 단백질 DNA에 함유된 독특한 DNA 서열을 이용하여 펩타이드를 제조하여 Ad-36에 대한 백신을 개발할 수 있다. 이들 기법은 해당 기술 분야의 당업자에게 공지되어 있다.
추가의 양태에서, 모든 지방생성 아데노바이러스에서 나온 섬유 단백질의 서열을 확인하여 DNA의 구조를 결정하는 새로운 구상이 수행될 수 있다. 서열확인 후, 많은 또는 모든 섬유 단백질에 존재하는 DNA 서열을 해당 기술 분야에서 흔히 사용되는 DNA 비교 데이터베이스를 이용하여 확인한다. 이는 예를 들면 진뱅크(GenBank)를 이용하여 Ad-36 섬유 단백질 DNA에 독특한 서열을 확인함으로써 달성될 수 있다. 그런 다음 약 10 내지 25개 아미노산의 펩타이드를 코딩하는 약 30 내지 75 염기쌍의 DNA 서열을 선택한다. 섬유 단백질의 혹(knob) 부분의 펩타이드가 효과적인 것으로 공지되어 있으므로, 이들 서열을 검사한다. 서열 확인 후, 펩타이드를 어쥬반트와 커플링하여 임의의 인간 아데노바이러스에 의한 감염을 예방하는 백신을 제조한다. 지방생성 아데노바이러스에 대한 공통적인 백신의 유용성은 비만, 암, 및 지방생성 아데노바이러스로 인한 인간의 기타 질환이 예방된다는 점이다. 예를 들면 군대의 신병들 중 상당한 비율이 기초 훈련동안 아데노바이러스 감염과 접촉한다. 또한, 출생한 후 초기 2년 동안의 열, 감기, 설사 또는 결막염과 연관된 약한 질병중 대부분은 아데노바이러스 때문이다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 비만, 및 비만과 체중에 영향을 미치는 섭생의 결과의 합병증으로 인한 질병의 예보자로서 지방생성 아데노바이러스 감염이 이용될 수 있다. 비만의 합병증은 당뇨병, 고혈압, 고리포단백혈증, 심장병, 예를 들면 동맥경화 질병 및 울혈성 심장 기능장애, 폐 질병, 예를 들면 수면성 무호흡증 및 천식, 뇌혈관 장애, 암, 예를 들면 유방암, 자궁암, 결장암 및 전립선암, 담낭 질병, 예를 들면 담석 및 감염, 임신 동안의 독혈증, 수술 동안의 위험, 통풍, 감소된 번식력, 퇴행성 관절염 및 이른 사망을 포함할 수 있다.
인간의 Ad-36이 마우스의 전지방 세포(preadipocyte)(3T3-L1 세포)(도 1) 및 인간의 전지방 세포에서 지방의 저장 및 새로운 지방 세포의 형성을 자극한다는 점이 양수인에 의해 입증되었다. 또한 양수인은 본원에 전체 내용이 참고로 혼입되어 있는 미국 특허 제6,127,113호 및 제6,664,050에서 Ad-36 감염이 비만과 관련되어 있음을 입증하였다. 예를 들면 닭에서 4가지 실험이, 마우스에서 1가지 실험이, 원숭이에서 2가지 실험이 수행되었고, 이들 모두는 Ad-36 감염이 체중을 증가시켰고, 혈청 콜레스테롤과 트라이글리세라이드를 감소시켰음을 보여준다. 가장 주목할 점은, 닭, 마우스 및 래트에서 측정된 음식 섭취는 감염된 동물과 대조군 동물 사이에서 차이가 없었다는 것으로, 이는 에너지 소비가 다르다는 점을 알려준다. Ad-36의 기작은 지질생성 효소와 분화 인자가 증가되도록 지방 세포에 직접적인 영향을 미친다. Ad-36으로 감염된 세포는 제5일에 저장된 트라이글리세라이드의 약 2배나 많은 트라이글리세라이드를 나타내었다.
또한, 지방생성 아데노바이러스인 Ad-36을 이용하여 많은 수의 연구가 수행되었다. Ad-36으로 자발적으로 감염된 레수스 원숭이는 감염된 지 18개월 후에 상당한 체중 증가를 나타내었다(도 2). 또한 명주원숭이를 Ad-36으로 감염시켰고, 감염된 명주원숭이는 감염되지 않은 명주원숭이와 비교하여 4배의 체중이 증가하였다(도 3). 더욱이, 감염 후에 체 지방은 약 70% 증가하였고, 혈청 콜레스테롤은 약 35mg/dl 감소하였다(도 4). 주목할 점은, 초기 감염된 지 7달 후에 원숭이의 여러 조직, 예를 들면 뇌, 간, 폐, 근육 및 지방 세포 조직에서 Ad-36 DNA가 관찰되었고, 2달 후에는 감염된 원숭이의 혈액이나 변에서 바이러스가 더 이상 성장하지 않았다는 점이다(도 5 내지 도 7). 도 8에 도시된 바와 같이, 인간 지방 세포 조직에서도 Ad-36 DNA가 또한 관찰되었다.
다른 연구는 Ad-37이 닭에서 비만을 야기하지만, Ad-2와 Ad-31은 그렇지 않음을 입증하였다(도 9 내지 도 11). 누적 먹이 섭취량은 연구된 군들 사이에서 다르지 않았다. 더욱이, 연구는 Ad-5가 마우스에서 비만을 유도함을 입증하였다(도 12). 이들 연구는 지질생성 효소의 자극 및 비만이 모든 아데노바이러스 감염의 비-특이적 효과는 아니지만, 여러 아데노바이러스가 그럴 수 있음을 보여준다.
본 발명의 다른 양태는 당뇨병과 다른 췌장 기능장애를 예보하기 위해 지방생성 아데노바이러스를 이용하는 것을 포함한다. 또한 다른 양태는 일부 경우에는 당뇨병을 포함하는 췌장 질환을 예방할 수 있는 아데노바이러스에 대한 백신에 관한 것이다.
췌장 베타 세포는 지질을 생성하고, 베타 세포에서의 지질 대사가 인슐린 분비의 조절에 중요하다. 지질 합성 또는 산화와 관련된 효소는 생성되고 분비되는 인슐린의 양을 감소시킨다. 연구는 베타 세포에서 SREBP-1이 과발현되면 인슐린 합성이 감소됨을 입증하였다. SREBP-1은 FAS의 직접적인 전구체이고, 간 세포에서 생체외 및 생체내 아데노바이러스 감염에 의해 증가되는 것으로 발견되었다. 다른 연구는 L-형 파이루베이트 키나제 유전자 및 지방산 합성효소에 결합하는 탄수화물 반응성 요소-결합 단백질(ChREBP: carbohydrate responsive element-binding protein)이 췌장 베타 세포에서 글루코즈에 의해 자극됨을 입증하였다. 베타 세포에서 카르니틴 팔미토일트란스퍼라제 I(CPT I: carnitine palmitoyltransferase I) 단백질 수준은 글루코즈에 반응하는 인슐린 분비를 감소시킨다. 지방생성 아데노바이러스는 당뇨병을 일으킬 수 있는데, 이는 이들이 비만을 증가시키고, 인슐린 내성을 생성시키기 때문이지만, 췌장의 바이러스 감염으로 인해 지질생성 효소가 변화된 것 또한 한 역할을 담당할 수 있다.
본 발명의 추가의 양태는 간 질환, 간경변, 및 기타 간 기능장애를 예보하는데 지방생성 아데노바이러스를 이용하는 것이다. 또한, 아데노바이러스에 대한 백신을 이용하여 지방생성 아데노바이러스로 인한 간 질환을 예방할 수 있다.
비만은 간 질환과 관련되어 있다. 비만이 있는 간 질환의 스펙트럼은 간의 지방 침윤에서 시작하여 지방간염(비-알콜성 지방간염 = NASH: non-alcoholic steatohepatitis)까지 진행되고, NASH 환자의 상당 비율은 원인불명의 간경변까지 계속 진행된다. 간의 지방 침윤 빈도 및 심각성은 체중이 증가함에 따라 증가하고, 병적인 비만 환자의 거의 대부분에서 나타난다. 비알콜성 지방간 질병(NAFLD: non-alcoholic fatty liver disease)의 약 30% 내지 약 100%에서 비만이 나타난다. 다른 연구는 심한 비만 환자 중 약 95% 초과의 환자가 다양한 정도의 간의 지방 침윤을 갖고 있고, 약 65%가 NASH를 갖고 있음을 입증하였다.
지방생성 아데노바이러스는 증가된 수준의 지질생성 효소를 생성하고, 간에 지방을 축적시킨다. 상기에서 언급된 바와 같이, 간의 지방 침윤으로 인해 간경변이 야기될 수 있다. 간의 지방 침윤에는 다수의 원인이 있고, 간이 추가로 손상되면 간경변 발생 확률이 증가될 수 있다. 간 질환 위험 인자를 갖고 있거나 비정상적인 간 기능을 갖고 있는 개인은, 지방간이 간경변으로 진행되는 것을 예방하는데 특별한 주의를 기울일 필요가 있을 수 있기 때문에, 지방생성 아데노바이러스에 대해 시험해야만 한다. 지방생성 아데노바이러스에 대한 백신은 많은 지방간과 간경변 사례를 감소시키거나 예방할 수 있다.
본 발명의 또다른 양태는 근육 기능장애를 예보하는데 지방생성 아데노바이러스를 이용하는 것을 포함한다. 또한 아데노바이러스에 대한 백신을 이용하여 근육 기능장애를 예방할 수 있다.
근육은 지방생성 효소를 갖고 있고 세포내 지질을 저장하는 것으로 알려져 있다. 비만은 비정상적인 지질 대사와 근육내 지질의 축적과 관련되어 있다. 연구는 지질생성 유전자인 스테아로일-CoA 데새튜라제 1(SCD1: stearoyl-CoA desaturase 1)이 매우 비만한 사람의 골격근에서 상승 조절됨을 보여준다. 높은 근육내 지방은 비만한 사람의 낮은 근육 기능과 관련되어 있고, 인슐린 내성 및 당뇨병과 관련되어 있다. 다른 연구는 인슐린 내성 및 2형 당뇨병이 지방 저장에 적합하지 않은 조직, 예를 들면 골격근 및 간에서 지질이 축적된 결과임을 보여준다. FFA는 인슐린의 작용을 억제하는 것으로 이전에 보여진 2가지 스핑고지질(sphingolipid)인 세라마이드와 스핑고신의 드 노보(de novo) 합성을 자극하였다. 지방이 1차 연료 공급원인 글루코즈로 전환될 수 없다는 것은 인슐린 내성, 대사 조절이상 및 심혈관 위험과 관련될 수 있다. Ad-36으로 감염된 지방 세포에서 렙틴이 감소되는 것으로 나타나기 때문에, 이로 인해 인슐린 내성이 생성될 수 있다.
비만한 사람은 운동으로 인한 통증을 호소한다. 그 원인은 명확하지 않지만, 비만한 사람은 더 많은 근육내 지질과 더 낮은 운동 능력을 갖고 있다. 근육내 지질은 골격근의 기질 이용성을 변화시킨다. 지방생성 아데노바이러스로 인해 증가된 근육내 지질은 운동능을 제한하고, 통증을 증가시키고, 기질 이용성을 변화시킬 수 있다. 이는 경주마나 경주견과 같이 성능 또는 지구력이 중요한 동물의 경우 특히 중요하다. 지방생성 아데노바이러스로 감염된 동물(또는 사람)은 감염되지 않은 동물처럼 좋은 성능을 발휘할 수 없을 것이고, 따라서, 지방생성 아데노바이러스에 대한 시험이 성능 품질의 예보자로서 이용될 수 있다.
최종적으로, 심근에서 근육내 지질이 증가되면 심근 기능을 변화시켜 심근증 및 울혈성 심장 기능장애를 일으킬 수 있다. 연구는 심근 내부의 과다한 지방산 및 트라이글리세라이드 축적이 심장 인슐린 내성과 심장 기능장애와 연관되어 있음을 보여준다.
본 발명의 추가의 양태는 폐 기능장애를 예보하는데 지방생성 아데노바이러스 상태를 이용하는 것에 관한 것이다. 또한 아데노바이러스에 대한 백신은 폐 기능장애를 예방한다.
몇 년 동안 비만이 천식 및 기종과 같은 폐 질환과 관련되어 있는 것으로 알려져 왔다. 이러한 연관성의 기작은 명확하지 않다. 폐가 FAS를 생성하고 지질을 합성하는 것은 알려져 있다. 따라서, 지방생성 아데노바이러스가 폐질환을 야기할 수 있다는 발견이 아데노바이러스에 의한 폐에서의 FAS 생산과 관련될 수 있다. 연구는 Ad-5 감염으로 인해 기니아 피그의 폐 중의 대식 세포의 수가 2배로 늘었음을 나타내었다. 흡연과 Ad-5의 조합은 대식 세포의 수를 4배로 늘렸다. 천식과 기종 환자에서 잠복된 바이러스 감염이 존재하였고, 폐 중의 Ad-5 E1A 단백질은 천식과 기종 환자의 염증과 관련되어 있다.
본 발명의 한 양태는 뇌와 신경계 기능장애를 예보하는데 지방생성 아데노바이러스 상태를 이용하는 것이다. 또한 아데노바이러스에 대한 백신을 이용하여 뇌및 신경계 기능장애를 예방할 수 있다.
지방생성 바이러스는 뇌 조직을 감염시킨다. 신경 및 뇌가 FAS를 생산하는 것은 공지되어 있다. 비만은 감소된 인지 기능 및 알쯔하이머병을 포함하는 부정적인 신경인식 결과와 관련되어 있다. 연구는 BMI가 모든 인지 시험에서의 성적에 반비례함을 입증하였고, BMI와 연령이 상호작용한다는 증거는 없었다. 비만한 사람들 사이에서는 알쯔하이머 병의 유병력이 증가되었다. 알쯔하이머 환자에서 축적되는 아밀로이드의 일종인 베타42는 BMI와 관련되어 있다. 비만한 사람은 치매에 걸릴 확률이 약 74% 더 높다. 다른 연구는 유전자 치료에 사용되어온 Ad-5 벡터가 뇌의 염증을 유발하였음을 입증하였다. 야생형 Ad-5는 비만을 유도하는 것으로 보고되었고, 본 발명자들은 유전자 이동에 이용된 Ad-5 벡터가 간 세포에서 SREBP-1과 FAS 합성을 자극하는 능력을 보유하고 있음에 주목하였다. 따라서, 이들 자료는 지방생성 아데노바이러스가 뇌와 신경에서 지질생성 효소를 증가시키고, 과다한 지방산과 트라이글리세라이드를 생산하여, 기능장애를 유발할 수 있다는 개념을 지지한다.
본 발명의 한 양태는 지방생성 아데노바이러스에 대한 시험을 이용하여 부신 기능장애를 예측할 수 있다는 것이다. 또한 아데노바이러스에 대한 백신을 이용하여 부신 기능장애를 예방할 수 있을 것이다.
비만은 부신선 기능에 상당히 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 알도스테론의 분비가 증가되지만, 레닌은 분비되지 않고, 이는 고혈압과 관련될 수 있다. 연구는 부신 기능이 비만한 여성에서 정상적이지 않지만, 복부 지방 분포와는 다르다는 점을 입증하였다. 부신 호르몬은 생산 기질로서 콜레스테롤을 이용하고, 지방생성 아데노바이러스가 세포내 지방산과 콜레스테롤 둘 모두의 대사를 변화시키므로, 지방생성 아데노바이러스를 검출하기 위한 시험을 이용하여 부신 기능장애를 예보할 수 있다.
예시적인 스크리닝 면역분석 기법은 해당 기술 분야에 잘 공지되어 있는 표준 바이러스 중화 기법 또는 효소 면역분석 기법을 포함하지만 이로 한정되지는 않는다. 이러한 면역분석 기법에서 사용하기 위해 이들 바이러스 또는 이의 단편(예를 들면 섬유 단백질 또는 이의 단편) 또는 이들 바이러스에서 나온 단백질(또는 이의 단편)에 대한 항체를 생성하고 정제하는 기법은 해당 기술 분야에 잘 공지되어 있다. 본 발명의 특정한 양태에서, 항체는 용액에서 나온 아데노바이러스 단백질 또는 아데노바이러스 바이러스를 면역침강시킬 것이고, 또한 웨스턴 블럿 또는 면역블럿 또는 폴리아크릴아미드 겔 상에서 이들 단백질과 반응한다. 특정한 양태에서, 면역세포화학 기법을 이용하여 항체가 냉동된 조직 단편 중의 아데노바이러스 또는 아데노바이러스 단백질의 존재를 검출한다. 아데노바이러스 또는 아데노바이러스 단백질을 검출하기 위한 방법에 관한 특정한 양태는 단일클론 및/또는 다중클론 항체를 이용한 샌드위치 분석법을 포함하는, 효소 결합된 면역흡수 분석법(ELISA: enzyme linked immunosorbent assay), 방사면역분석법(RIA: radioimmunoassay), 면역방사분석 분석법(IRMA: immunoradiometric assay) 및 면역효소 분석법(IEMA: immunoenzymatic assay)를 포함한다.
유사하게, 본 발명의 이들 방법에 이용되는 핵산 프로브 혼성화 분석 기법은 본 발명에서 확인되고 이용가능하게 만들어진 비만 유발 바이러스에 의해 이용가능하게 만들어진 핵산 프로브(및 증폭이 이용되는 경우 프라이머)를 이용하는 (선택적으로는 혈액, 다른 유체, 변, 조직 또는 기관의 시료로부터 추출된 DNA 또는 RNA의 증폭 후) 표준 기법이다. 이들 바이러스의 특징적인 핵산의 서열은, 일단 이들 바이러스가 통상적으로 단리되고, 그 바이러스에 특이적이고, 그 바이러스를 위한 핵산에 근거한 분석에서 사용될 수 있는 핵산 프로브 및 프라이머에 대한 근거를 제공하는 프로브 및 프라이머가 서열에 근거하여 통상적인 기법을 이용하여 제조되면, 표준 기법에 의해 결정될 수 있다.
예를 들면, 사람이 비만해지기 쉽게 만드는 아데노바이러스의 존재를 검출하기 위해서, 혈액과 같은 생물학적 시료를 제조하고, 아데노바이러스 단백질, 예를 들면 Ad-36 섬유 코트 단백질 서열의 존재 유무에 대해 분석한다. 이들 시험 결과 및 해석 정보를 피시험자에게 알려주도록 건강 관리 제공자에게 돌려준다. 이런 진단은 진단 실험실에 의해 수행될 수 있거나, 또는 다르게는 진단 키트가 제조되어 건강 관리 제공자에게 시판되거나 자가 진단을 위해 개인에게 제공될 수 있다.
먼저, 스크리닝은 관련된 아데노바이러스 서열을 증폭시키는 단계를 포함한다. 본 발명의 특정한 양태에서, 스크리닝 방법은 비-PCR계 전략을 포함한다. 이런 스크리닝 방법은 해당 기술 분야에 잘 알려져 있는 2단계 라벨 증폭 방법을 포함한다. PCR 및 비-PCR계 스크리닝 방법은 둘 모두 표적 서열을 높은 수준의 민감성으로 검출할 수 있다.
본 발명의 한 양태는 표적 증폭에 관한 것이다. 여기서, 표적 핵산 서열은 중합효소에 의해 증폭된다. 중합효소-구동되는 증폭을 이용한 한가지 특정한 방법은 중합효소 연쇄 반응(PCR)이다. 중합효소 연쇄 반응 및 다른 중합효소-구동된 증폭 분석법은 중합효소-구동된 증폭 사이클을 이용함으로써 카피(copy) 수를 백만 배 이상 증가시킬 수 있다. 일단 증폭되면, 생성된 핵산은 그 서열을 확인하거나, DNA 프로브용 기질로서 이용될 수 있다.
프로브를 이용하여 목표 서열이 존재하는지를 확인하는 경우, 분석하고자 하는 생물학적 시료, 예를 들면 혈액 또는 혈청은, 경우에 따라, 핵산이 추출되도록 처리될 수 있다. 시료 핵산은 목표 서열의 검출이 용이해지도록 다양한 방법으로, 예를 들면 변성, 제한효소 분해, 전기영동 또는 점 블럿팅으로 처리될 수 있다. 분석물 핵산의 목표 영역은 일반적으로 프로브의 목적 서열과 혼성체를 형성할 수 있도록 최소한 부분적으로는 단일 나선이어야만 한다. 서열이 자연적으로 단일 나선인 경우에는 변성이 필요하지 않을 것이다. 그러나, 서열이 이중 나선인 경우, 서열은 아마도 변성될 필요가 있을 것이다. 변성은 해당 기술 분야에 잘 알려진 다양한 기법으로 수행될 수 있다.
분석물 핵산 및 프로브는 분석물 중의 목표 서열의 안정한 혼성체 형성이 촉진되는 조건 하에서 항온처리된다. 분석물에 결합되는데 이용되는 프로브의 영역은 대상 아데노바이러스의 목표 영역, 특히 섬유 코트 단백질에 완전히 상보적이 되도록 만들어질 수 있다. 따라서, 가짜 양성 반응을 방지하기 위해 매우 엄격한 조건이 바람직하다. 그러나, 매우 엄격한 조건은 프로브가 아데노바이러스의 영역에 상보적인 경우에만 사용된다. 혼성화의 엄격성은 혼성화 동안, 그리고 세척 과정 동안의 다수의 인자(이는 온도, 이온 강도, 염기 조성, 프로브 길이 및 포름알데하이드 농도를 포함한다)에 의해 결정된다.
생성된 혼성체(존재한다면)의 검출은 일반적으로 라벨이 붙은 프로브를 이용하여 달성된다. 그러나, 다르게는, 프로브에 라벨을 붙이지 않고, 직접 또는 간접적으로 라벨이 붙은 리간드를 이용한 특이적 결합에 의해 검출될 수도 있다. 적합한 라벨, 및 프로브 및 리간드에 라벨을 붙이는 방법은 해당 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들면 공지된 방법(예를 들면 닉(nick) 번역, 무작위 프라이밍 또는 키나제 이용)에 의해 혼입될 수 있는 방사활성 라벨, 바이오틴, 형광 기, 화학발광기(예를 들면 다이옥세탄) 효소, 항체, 금 나노입자 등을 포함한다. 이 기본 계획의 변형은 해당 기술 분야에 공지되어 있으며, 외인성 물질로부터 검출하고자 하는 혼성체가 분리되는 것을 용이하게 하고/하거나 라벨이 붙은 잔기에서 나오는 신호를 증폭시키는 다양한 변형 방법을 포함한다.
상기 언급된 바와 같이, 비-PCR계 스크리닝 분석 또한 본 발명에서 고려된다. 이 방법에서는 핵산 프로브(또는 정상적인 포스포다이에스터를 대체하는 메틸 포스포네이트 주쇄와 같은 유사체)를 낮은 수준의 DNA 표적에 혼성화시킨다.
이 프로브는 공유 결합이 혼성화의 특이성을 방해하지 않도록 프로브에 공유결합된 효소를 가질 수 있다. 그런 다음, 효소-프로브-컨쥬게이트-목표 핵산 복합체를 자유로운 프로브 컨쥬게이트로부터 단리하고, 효소가 검출되도록 기질을 첨가한다. 효소 분석은 색 전개의 변화 또는 형광 생성으로 관찰되고, 이는 민감성을 약 103 내지 약 106 증가시킨다.
2단계 라벨 증폭 방법이 해당 기술 분야에 알려져 있다. 이들 분석법은, 작은 리간드(예를 들면 디지옥시게닌, 바이오틴 등)가 흥미있는 아데노바이러스 서열 영역에 특이적으로 결합할 수 있는 핵산 프로브에 결합되는 원리에 근거하여 작용된다. 한 예에서, 핵산 프로브에 결합된 작은 리간드는 항체-효소 컨쥬게이트에 의해 특이적으로 인식된다. 이 실시예의 한 양태에서, 디지옥시게닌은 핵산 프로브에 결합된다. 혼성화는 항체-알칼린 포스파타제 컨쥬게이트(이는 화학발광 기질을 전환시킨다)에 의해 검출된다. 제 2 실시예에서는, 작은 리간드가 제 1 리간드에 특이적으로 복합체를 형성할 수 있는 제 2 리단드-효소 컨쥬게이트에 의해 인식된다. 이 실시예의 잘 알려진 양태가 바이오틴-아비딘 유형의 상호작용이다.
본 발명의 핵산 프로브 분석법이 다양한 종의 아데노바이러스를 검출할 수 있는 핵산 프로브의 칵테일을 이용하는 것도 본 발명의 범위 이내에서 고려된다. 따라서, 한 실시예에서는, 예를 들면 생물학적 시료중의 Ad-36, Ad-37 및/또는 Ad-5의 존재를 검출하기 위해서, 다양한 유형의 아데노바이러스 중에서 흥미로운 목표 영역에 상보적인 하나 이상의 프로브를 이용할 수 있다.
해당 기술 분야의 당업자들은 하나 이상의 비만 유발 바이러스 균주가 본 발명에 따른 바이러스의 면역학적 또는 핵산계 분석 방법에서 동시에 시험될 수 있고, 특정한 바이러스 또는 다수의 바이러스의 경우 방법을 수행하는 것을 용이하게 하기 위해 키트를 조립할 수도 있음을 이해할 수 있을 것이다.
본 발명은 넓게 개시되어 있고 상기 개시된 대표적인 양태를 언급하여 예시되었다. 해당 기술 분야의 당업자는 본 발명의 사상 및 영역을 벗어나는 일 없이 본 발명을 다양하게 변형시킬 수 있다는 점을 인식할 수 있을 것이다. 추가로 더 상세히 말하지 않더라도, 해당 기술 분야의 당업자는 전술된 상세한 설명을 이용하여 본 발명을 완전히 이용할 수 있을 것이다. 하기의 실시예는 단지 예시일 뿐이고, 명세서의 개시내용 부분을 어떤 방식으로든 제한하고자 하는 것이 아니다.
실시예 1
3곳의 도시(위스콘신주의 매드슨, 플로리다주의 내플스, 뉴욕주의 뉴욕)의 서로 분리된 모집단의 502명의 사람으로부터 얻은 혈액 시료를 Ad-36 감염에 대해 측정하였다. 비만의 정의는 BMI가 약 30kg/m2 보다 큰 것이었고, 모집단은 비만한 사람과 비만하지 않은 사람으로 나누어졌다. 비만한 사람의 혈청 중의 Ad-36 항체의 유병력은 약 30%였고, 비만하지 않은 사람의 혈청에서는 약 11%였다(즉, 3:1의 비율)(도 13).
대상을 항체 양성과 항체 음성으로 나누었을 때, 항체 양성은 약 9 BMI 단위(즉, 약 50 파운드 이상)가 더 무거운 것으로 관찰되었다(p<0.001)(도 14).
더욱이 혈청 콜레스테롤과 트라이글리세라이드는 항체 양성 인간에서 더 낮았고(약 -35mg/dl보다 더 작음, p<0.001), 정확하게 동일한 감소가 예상 감염된 원숭이에게서 관찰되었다. Ad-2 또는 Ad-31에 대한 항체와 사람의 신체 조성 또는 혈청 콜레스테롤 및 트라이글리세라이드 중 하나와의 상관 관계는 없었고, 이는 Ad-36의 효과가 특이적이고 모든 인간 바이러스에서 공통적이지는 않다는 것을 암시한다.
두번째 연구는 Ad-36 항체에 대한 28쌍의 쌍둥이 불일치에서 수행되었다. 정상적으로는 쌍둥이의 체중 및 BMI가 밀접하게 따라가지만, Ad-36 항체 양성인 쌍둥 이는 Ad-36 항체 음성인 나머지 쌍둥이에 비해 더 뚱뚱하였다(p<0.04)(도 15).
결론적으로 이들 발견은 Ad-36이 동물과 인간에게서 비만을 일으킨다는 점을 보여준다.
실시예 2
Ad-36과 암과의 연관성에 대한 매우 강한 증거가 위스콘신 대학의 연구에서 나왔다. 128명의 유방암 환자 및 37명의 전립선암 환자에서 나온 예탁된 혈청을 수득하였고, 혈청 중화 분석법을 이용하여 Ad-36 항체에 대해 분석하였다. 전립선암 환자의 51% 및 유방암 환자의 50%가 Ad-36 항체에 대해 양성인 것으로 관찰되었다. 그러나, 시료가 익명이었기 때문에, 비만, 암의 유형 및 단계, 또는 전이 여부에 대한 자료가 없었다. 비만한 사람과 비만하지 않은 사람에서 Ad-36 항체에 대한 자료로부터 일반적인 모집단의 약 14%가 Ad-36 항체를 가진 것으로 추정되었다. 따라서, 유방암 환자와 전립선암 환자 둘 모두에서 Ad-36 항체의 유병력이 거의 4배 높다.
실시예 3
18명의 환자로부터 전립선암 조직을 수득하였고, Ad-36 섬유 단백질 게놈의 독특한 DNA 서열에 대해 만들어진 프라이머를 이용한 네스티드 중합효소 연쇄 반응 분석법(PCR)에 의해 Ad-36 DNA에 대해 분석하였다. 18명 중 11명, 또는 61%가 암 조직에서 Ad-36 DNA를 가졌다. 도 16은 전립선암 조직에서 Ad-36 DNA의 존재를 입증하는 PCR 겔을 보여준다. 상기 언급된 바와 같이, Ad-36 섬유 단백질 게놈의 독특한 DNA 서열에 대해 만들어진 프라이머를 이용한 네스티드 PCR에 의해 실험 동물 의 여러 조직, 특히 지방 세포 조직에서 Ad-36 DNA가 발견되었다. 도 17은 Ad-36으로 감염된 원숭이의 지방 조직으로부터 추출된 DNA에서 얻은 PCR 겔을 보여준다. 감염된 원숭이 3마리 모두가 바이러스 DNA를 갖지만, 대조군 중에서는 한 마리도 갖지 않았다.
실시예 4
본 실시예는 암이 발병될 위험이 있는 사람을 확인하기 위한 마커로서 Ad-36 실험실 시험을 이용함을 보여준다: 암 환자는 암에 걸리지 않은 환자에 비해 훨씬 더 높은 양성 Ad-36 실험실 시험 유병력을 갖는다. 유방암에 걸린 128명의 여성 및 전립선암에 걸린 37명의 남성을 시험하여 그 결과를 502명의 암에 걸리지 않은 환자와 비교하였다. 총 165명의 암 환자 중에, 83명(50%)이 양성 Ad-36 시험을 가졌다(유방암 환자의 50% 및 전립선암 환자의 51%). 미국 인구에서 비만의 유병력에 근거하면, 502명의 암에 걸리지 않은 환자의 자료는 암에 걸리지 않은 환자의 17%가 양성 Ad-36 시험을 가짐을 보여주었다. 위스콘신 출신의 암에 걸리지 않은 환자만을 고려한다면(모든 암환자가 위스콘신 출신이기 때문에, 이것이 더 좋은 비교이다), 암에 걸리지 않은 환자의 14%가 양성 Ad-36 시험을 가졌다. 따라서, 암 환자가 암에 걸리지 않은 환자에 비해 4배나 더 양성이었다.
실시예 5
위스콘신 대학 병원에서 생검한 9명의 사람에서 나온 지방 세포 조직을 수득하고, Ad-36 DNA에 대해 분석하였다. 9명중 7명이 지방 세포 조직에 Ad-36 DNA를 가졌다. 이들 자료는 Ad-36 DNA가 인간과 동물의 지방 세포 조직으로부터 단리될 수 있고, 보다 중요하게는 조직 중에 Ad-36 DNA가 존재하는 것이 후 Ad-36 감염에 대한 마커임을 입증하였다. Ad-36 DNA가 감염된 동물의 다수의 조직에서 나타났기 때문에, 초기의 바이러스혈증이 신체의 대부분의 조직에서 감염을 일으키는 것이 명확해 보인다. 따라서, 하기 실시예 6에 개시된 방법 단락에 개시된 바와 같이, Ad-36 DNA 존재에 대해 시험하기 위해 암 조직 또는 암에서 나온 지방 세포 조직을 환자로부터 수득하였다.
실시예 6
Ad-36 감염의 유병력이 암 환자에서 더 큰 지를 측정하기 위해 암 환자와 암에 걸리지 않은 환자에서 나온 유방 조직 및 전립선 조직 시료 중의 Ad-36 DNA에 대해 시료를 분석하였다. Ad-36 상태는 암의 존재와 관련될 수 있고, 암의 단계, 전이의 존재 및 암 환자의 진단과 관련될 수 있다. Ad-36에 대한 백신은 Ad-36이 유발하는 암을 예방할 수 있다.
실험 설계:
익명의 시료 조직 및 완전한 의학적 정보를 NCI 리소스 뱅크(NCI resource banks), NCI 코퍼레이티브 휴먼 티슈 네트워크(NCI Coorperative Human Tissue Network: CHTN)) 및 NCI 코퍼레이티브 브레스트 캔서 티슈 리소스(NCI Cooperative Breast Cancer Tissue Resource: CBCTR)에서 수득한다. 하기 개시된 바와 같은 네스티드 PCR 분석법을 이용하여 시료를 Ad-36 DNA에 대해 분석한다. 대안으로, DNA 시료를 이용할 수 없는 경우, 이들을 주문할 수 있다. DNA가 시료로부터 추출되지 않은 경우, 하기 설명된 바와 같을 수 있다.
유방암을 평가하기 위해서, 100명의 유방암에 걸린 여성의 유방암 조직 또는 유방 근처의 지방 세포 조직의 시료를, 암에 걸리지 않고 유방 수술을 받은 50명의 여성에서 나온 유방 조직 또는 지방 세포 조직과 비교하였다. 상기 언급된 바와 같이, 유방암 조직을 이용할 수 없는 경우, 유방 근처의 지방 세포 조직도 허용가능하다. 감염된 후 Ad-36 DNA가 모든 조직에서 나타나므로 실제 유방 조직은 중요하지 않고, 따라서, 지방 세포 조직이 적합하다.
전립선암을 평가하기 위해, 100명의 남성에게서 나온 전립선암 조직 시료를, 양성 전립선 비대증(BPH: benign prostatic hypertrophy)으로 인해 수술을 받은 남성에서 나온 전립선 조직과 비교하였다.
NCI 조직 은행은 2곳 모두 연령, 여성 환자의 폐경기 상태, 신장, 체중, 유방암 또는 전립선 암의 가족력, 암의 유형 및 단계, 전이 여부, 및 일부 경우 생존 기간에 대한 정보를 갖고 있다. 비만과 관련된 유방암이 폐경기 여성에서 보다 흔하기 때문에, 암에 걸리지 않은 대상은 또한 가능한 한 연령에 대해 일치시킨다. 시료를 얻은 전립선 암 환자가 나이가 더 많은 군(50세 초과)일 것으로 예상될 수 있는데, 이는 이 모집단에서 전립선 암과 BPH가 발생하기 때문이다. 소아 환자의 경우 유방암과 전립선암이 매우 드물기 때문에 소아 환자에서 나온 조직을 얻을 수는 없을 것 같다.
실험실 기법: 이 프로토콜에 필요한 방법은 의학 서적에 공개되어 있고, 해당 기술 분야의 당업자는 이해하고 있다. 각각의 방법에 대한 간단한 요약을 아래에 제공한다:
Ad-36의 배양: A549 인간 기관지 암 세포를 이용하여 전술된 바와 같이 조직 배양액에서 바이러스 제제를 성장시킨다. A549 세포는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection: ATCC, 메릴랜드주 록빌 소재)에서 수득하였다. 불필수 아미노산, 얼스(Earle's) 염 및 L-글루타민이 있는 최소 필수 이글 배지(MEM: Minimum Essential Media Eagle)(Cat # M-0643, Sigma Chemicals)를 이용하여 A549 세포를 성장시킨다. 작업 저장액은 10% 소의 태아 혈청(FBS: fetal bovine serum) 및 2.9% NaHCO3(v/v)가 있는 MEM을 이용하여 pH 7.4에서 A549 세포 중에서 성장시킨다.
플라크 형성 단위 분석법: 이 분석법에 의해 A549 세포를 이용하여 Ad-36 바이러스의 역가를 측정하였다. 100㎕의 바이러스 현탁액 및 900㎕의 배지로부터 출발하여 연속적으로 10배씩 희석시켰다. A549 세포를 6개 웰의 플레이트에서 컨플루언스(confluence)가 될 때까지 성장시키고, 3개 웰을 각각의 희석에 이용한다. 3개의 웰을 블랭크 대조군으로 이용하고, 바이러스 현탁액으로 감염시키지 않는다. 각각의 웰로부터 배지를 제거하고, 피펫을 이용하여 100㎕의 연속적으로 희석된 바이러스 현탁액을 웰로 옮긴다. 플레이트를 37℃에서 배양하고, 15분마다 부드럽게 진탕한다. 1시간 동안 배양한 후, 웰에서 바이러스 현탁액을 제거하고 버린다. 1x 항생제-안티마이코틱(antimycotic) 용액이 있는 배지 중의 1% 아가를 웰당 약 3ml씩 웰 위에 덮는다. 플레이트를 뒤집고 플라크가 나타날 때까지 8일 동안 37℃에서 배양한다. 8일 후에, 웰당 약 1 ml의 크리스탈 바이올렛을 이용하여 하룻밤 동안 웰 을 염색시킨다. 다음날, 아가를 제거한 후, 형성된 플라크의 수를 센다. 형성된 플라크의 수 x 사용된 바이러스 현탁액의 희석도가 사용된 접종원 100㎕ 당 PFU이다. 여기에 10을 곱하여 PFU/ml를 나타낸다.
조직 배양액 감염 투여량(Tissue culture infectivity dose: TCID50)(66-72): A549 세포를 함유하는 웰의 50%에서 세포변성 효과(cytopathic effect: CPE)를 유발하는 작업 저장액의 역가가 계산되고, ml당 조직 배양액 감염 투여량(TCID-50) 단위로 표현된다. 작업 저장액의 TCID-50는 바이러스 작업 저장액을 연속적으로 10배씩 희석시켜 측정한다. TCID50은 바이러스 저장 용액을 연속적으로 희석시키고, 세포를 희석액으로 접종시켜 접종된 세포의 50%에서 세포 변성 효과(CPE)를 유발하는 바이러스의 가장 높은 희석도의 역수를 발견함으로써 계산된다. 바이러스 희석물로 접종된 세포를 37℃에서 8일 동안 배양한 후 역가를 계산한다.
네스티드 PCR 분석법: 네스티드 PCR은 생물학적 시료에서 Ad-36 DNA를 검출한다. 전술된 바와 같이, 바이러스 DNA를 검출하기 위한 네스티드 PCR 분석법에서 사용하기 위해 Ad-36 섬유 단백질 유전자의 독특한 영역에 대해 4개의 프라이머를 디자인하였다. 프라이머의 서열은 다음과 같다:
외부 순방향 프라이머(5'-GTCTGGAAAACTGAGTGTGGATA)(서열 번호: 1)
외부 역방향 프라이머(5=-ATCCAAAATCAAATGTAATAGAGT)(서열 번호: 2)
내부 순방향 프라이머(5=-TTAACTGGAAAAGGAATAGGTA)(서열 번호: 3)
내부 역방향 프라이머(5=-GGTGTTGTTGGTTGGCTTAGGATA)(서열 번호: 4)
큐아이앰프 조직 키트(QIAamp Tissue Kit)(Qiagen, 미국 캘리포니아주 발렌 시아 소재; Cat # 29304)를 이용하여 인간의 유방 및 전립선 조직으로부터 DNA를 단리한다. 음성 PCR 대조군은 물 및 A549 세포에서 나온 DNA이다. 양성 PCR 대조군은 Ad-36으로 감염된 A-549 세포에서 나온 DNA이다. DNA를 95℃에서 2분동안 변성시키고, PCR을 35 사이클 돌리고(94℃에서 1분, 55℃에서 1분, 72℃에서 2분), 72℃에서 5분동안 항온처리한다. PCR 생성물을 크기 마커와 함께 1% 아가로즈 겔 상에서 가시화시킨다.
이 분석법은 위스콘신 대학에서 개발되었고, 이때 동물 및 인간 조직 및 3T3-L1 세포로 구성된 시료에서 온도, 마그네슘 농도, 및 사이클 횟수에 대해 조건을 최적화시켰다. PCR 생성물 시료를 겔로부터 추출하고, 증폭된 DNA 서열이 목표 영역으로부터 나온 것인지를 보증하기 위한 서열 확인을 위해 위스콘신 대학 바이오텍 센터(University of Wisconsin Biotech Center)로 보냈다. 바이오텍 센터에서 정확성을 확인하였다. CLIA 내역과 우수한 실험실 관행에 따라 이들 품질 대조 과정을 반복하였다. 증폭의 정확성을 보증하기 위해, 유방암 및 전립선 암 각각의 2개의 양성 시료 및 A549 양성 대조군 DNA 시료의 DNA 서열을 확인한다.
통계 분석 및 힘 계산: 버지니아 커몬웰쓰 유니버시티(Virginia Commonwealth University)의 통계 과학 및 조작 연구과(Department of Statistical Sciences and Operations Research)에서 통계에 대한 보조가 가능하다.
힘 계산: 일반적인 모집단 대 위스콘신 매디슨 소재의 암 환자의 Ad-36 항체의 유병력에 대한 초기 자료를 이용하여 힘 분석을 수행하였다. 위스콘신 대학 병원의 유방암 환자 및 전립선암 환자의 각각 50% 및 51%가 Ad-36에 대한 항체를 갖 고 있는 것으로 나타났다. 일반적인 모집단과 위스콘신 대학의 비만 치료 프로그램에서 나온 지원자의 샘플 중에서, 247명을 평가하였고, 이중 183명은 비만하고, 64명은 비만하지 않았다. Ad-36 항체의 유병력은 각각 20% 및 11%였다. CDC 그림은 성인 미국인의 약 31%가 비만하고 69%가 비만하지 않음을 보여준다. 이들 수치를 이용하면 위스콘신주 매디슨의 일반적인 모집단에서 Ad-36 항체의 유병력은 13.8%인 것으로 추정되었다. 따라서, 암 환자중의 Ad-36의 유병력은 거의 4배나 더 높다. 이들 수치를 이용하면, 힘 계산은 암 환자 대 암이 아닌 환자에서 Ad-36의 유병력의 차이를 확인하기 위해서는 0.05 수준에서 80%의 힘을 달성하는데 1개 그룹당 32명이 필요함을 밝혀냈다. 예비 자료에 따르면, 유방암 환자와 전립선암 환자는 둘 모두에서 약 50%가 Ad-36 항체 양성인 것으로 예상될 수 있다. 그러나, NCI 조직 은행(또는 애스터랜드(Asterand) 조직 은행))에 예탁된 시료의 Ad-36 유병력이 더 낮을 가능성이 있고, 이는 힘에 상당한 영향을 미칠 것이다. 따라서, 충분한 힘을 갖기 위해서는, 100명의 암 환자 및 50명의 암이 아닌 환자가 확실할 수 있다.
통계적 분석: 치-스퀘어(Chi-square) 분석을 이용하여 암에 걸린 대상의 Ad-36 DNA 유병력이 암이 아닌 대상에서보다 더 큰지를 결정한다. 대상의 수는 다중 회귀 분석보다 상대적으로 작고, 효과가 강력하지않는 한 상당한 연관성을 볼 것으로는 예상되지 않는다.
실시예 7
Ad-36 게놈의 cDNA 서열을 모두 공지된 cDNA 서열에 대해 스크리닝하였고, 2 개의 25 염기 서열 및 1개의 28 염기 서열을 발견하였고, 모두 Ad-36에 대해 독특한 섬유-코딩 서열에 위치하였다. 이들 3가지 서열은 다음과 같다:
서열 번호 5: 5'-AGTTGAAACAGCAAGAGACTCAAAG
서열 번호 6: 5'-GGTACTGGATCAAGTGCACATGGAG
서열 번호 7: 5'-TTGAAACAGCAAGAGACTCAAAGCTAAC
상기 서열 3을 4마리의 닭(이중 2마리는 바이러스로 감염되어 비만해졌고, 이들 중 2마리는 감염되지 않았고 비만하지 않았다)에서 단리된 DNA의 종래의 핵산 프로브 혼성화 분석법에서 Ad-36에 대한 프로브로 이용하였다. 프로브에 대한 DNA 혼성화는 2마리의 감염된 닭에서 나온 DNA를 이용한 경우에만 관찰되었다. 분석은 직접적인 검출을 포함하고, 검출을 위해 레이저 유도된 형광을 이용한 모세관 전기영동에 의해 수행되었다. 보다 구체적으로, 대체가능한 폴리아크릴아미드 매트릭스를 전기영동 분리에 이용하였고, 올리고를 5'-라벨링하고 완충 시스템에 티아졸 오렌지 삽입제가 함유된 이중 시스템을 이용하여 검출하였다.
해당 기술 분야의 당업자는 길이가 약 15 내지 30 염기인 프로브 및 프라이머(증폭이 또한 사용되는 경우)를 이용하는 것이 적합한 특이성 및 민감성을 제공하는데 유리하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. PCR을 이용한 증폭 방법 및 이의 변형 방법(이들 또한 해당 기술 분야에서 잘 알려져 있다)을 또한 사용할 수 있다.
상기 실시예는 단지 예시적인 것일 뿐이고, 본 발명의 모든 가능한 양태, 적용예 및 변형예의 완전한 목록을 의미하는 것은 아니다. 따라서, 전술된 본 발명의 방법 및 시스템의 다양한 변형예 및 변경예는 본 발명의 사상 및 영역을 벗어나는 일 없이 해당 기술 분야의 당업자에게는 명백히 이해될 수 있을 것이다. 비록 본 발명이 구체적인 양태와 관련되어 설명되고 있긴 하지만, 특허 청구된 본 발명은 이런 구체적인 양태에 부적절하게 제한하지 않는다는 점을 이해해야 한다. 실제로, 분자 생물학 분야 또는 관련 분야의 당업자에게는 자명한, 본 발명을 수행하기 위해 설명된 양태의 다양한 변형예는 첨부된 청구범위 내에 속하는 것으로 이해해야 한다.
상기 언급된 모든 참고 문헌 및 공보의 개시내용은 마치 각각이 개별적으로 참고 인용되어 있는 것과 동일한 정도로 그 전체 내용이 명확히 참고 인용되어 있다.
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Claims (24)

  1. 대상이 지방생성(adipogenic) 아데노바이러스 관련된 질병에 걸리기 쉬운지를 예측하는 방법으로서,
    대상으로부터 시료를 수득하는 단계; 및
    대상이 지방생성 아데노바이러스로 감염되었는지를 결정하는 단계
    를 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 대상이 지방생성 아데노바이러스로 감염되었는지를 결정하는 단계는
    시료 중의 지방생성 아데노바이러스에 특이적인 항체의 존재에 대해 스크리닝하는 단계; 및
    시료 중의 지방생성 아데노바이러스에 특이적인 항체의 존재를 측정하는 단계
    를 포함하는 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 지방생성 아데노바이러스가 아데노바이러스 5형, 아데노바이러스 35형 및 아데노바이러스 37형으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 지방생성 바이러스인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 지방생성 아데노바이러스 관련된 질병이 암, 전립선암, 유방암, 췌장 기능장애, 췌장 질병, 당뇨병, 폐 질병, 뇌 및 신경계 기능장애 및 부신 기능장애로 구성된 군에서 선택된 질병인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 대상이 인간인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 대상이 동물인 방법.
  7. 제2항에 있어서, 상기 결정 단계에서 항체는 서열 번호 5, 서열 번호 6 및 서열 번호 7로 구성된 군에서 선택되는 핵산 서열에 의해 코딩된 하나 이상의 펩타이드에 특이적인 것인 방법.
  8. 제2항에 있어서, 상기 스크리닝 단계는 혈청 중화 분석법 및 ELISA로 구성된 군에서 선택되는 방법을 이용하여 수행하는 것인 방법.
  9. 제1항에 있어서, 상기 시료는 생물학적 시료, 체액, 조직 시료, 기관 시료, 변, 혈액, 침 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군에서 선택하는 것인 방법.
  10. 대상에서 지방생성 아데노바이러스 관련된 질병을 예방하는 방법으로서,
    상기 대상에게 항-지방생성 아데노바이러스 백신을 투여하는 단계를 포함하 는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 항-지방생성 아데노바이러스 백신은 사멸된 아데노바이러스 36형, 불활성화된 아데노바이러스 36형, 아데노바이러스 36 코트 단백질 또는 이의 단편을 코딩하는 단백질 또는 펩타이드 서열, 아데노바이러스 36 코트 단백질 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산 서열, 아데노바이러스 36형 E1A 단백질, 유전자적으로 변형된 비-병원성 바이러스, 및 비-병원성 바이러스로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 화합물을 포함하는 활성 성분을 효과적인 투여량으로서 포함하는 것인 방법.
  12. 제10항에 있어서, 상기 항-지방생성 아데노바이러스 백신은 비강내, 경구, 정맥내, 근육내, 피하 및/또는 복막 투여하는 것인 방법.
  13. 제10항에 있어서, 상기 대상이 인간인 방법.
  14. 제10항에 있어서, 상기 대상이 동물인 방법.
  15. 제10항에 있어서, 상기 지방생성 아데노바이러스 관련된 질병이 암, 전립선암, 유방암, 췌장 기능장애, 췌장 질병, 당뇨병, 폐 질병, 뇌 및 신경계 기능장애 및 부신 기능장애로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 질병인 방법.
  16. 대상에서 암의 공격성을 예측하는 방법으로서,
    대상으로부터 시료를 수득하는 단계; 및
    대상이 지방생성 아데노바이러스로 감염되었는지를 결정하여 지방생성 아데노바이러스의 존재를 공격성 암과 연관시키는 단계
    를 포함하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 대상이 지방생성 아데노바이러스로 감염되었는지를 결정하는 단계는
    시료 중의 지방생성 아데노바이러스에 특이적인 항체의 존재에 대해 스크리닝하는 단계; 및
    시료 중의 지방생성 아데노바이러스에 특이적인 항체의 존재를 결정하는 단계
    를 포함하는 것인 방법.
  18. 제16항에 있어서, 상기 지방생성 아데노바이러스가 아데노바이러스 5형, 아데노바이러스 35형 및 아데노바이러스 37형으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 지방생성 바이러스인 방법.
  19. 제1항에 있어서, 상기 암은 유방암, 전립선암, 자궁암, 난소암, 결장암, 신 장암, 췌장암 및 폐암으로 구성된 군에서 선택하는 것인 방법.
  20. 제16항에 있어서, 상기 대상이 인간인 방법.
  21. 제16항에 있어서, 상기 대상이 동물인 방법.
  22. 제17항에 있어서, 상기 결정 단계에서 항체는 서열 번호 5, 서열 번호 6 및 서열 번호 7로 구성된 군에서 선택되는 핵산 서열에 의해 코딩된 하나 이상의 펩타이드에 특이적인 것인 방법.
  23. 제17항에 있어서, 상기 스크리닝 단계는 혈청 중화 분석법 및 ELISA로 구성된 군에서 선택되는 방법을 이용하여 수행하는 것인 방법.
  24. 제16항에 있어서, 상기 시료는 생물학적 시료, 체액, 조직 시료, 기관 시료, 변, 혈액, 침 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군에서 선택하는 것인 방법.
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