CN102762206A - 免疫增强化合物的均匀悬液及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明一般涉及能刺激或调节需要对象中免疫反应的小分子免疫增强剂（SMIP）的均匀悬液。所述均匀悬液可以与多种抗原或佐剂联用于疫苗治疗。

Description

免疫增强化合物的均匀悬液及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2009年12月15日提交的美国临时申请号61/286,754的优先权，其通过引用全文纳入本文。
发明背景
近期开发的减毒病原或亚基蛋白疫苗尽管比传统全病原疫苗在产品安全和生产成本方面提供更大优势，相较全病原一般免疫原性有限。所以，这些疫苗一般需要有显著免疫刺激能力的佐剂以在预防疾病上达到其全部潜能。
已经努力确定新免疫调节物用作疫苗和免疫治疗的佐剂。特定地，很需要引起人和家畜中对多种抗原的强效细胞介导和体液免疫应答，但没有传统佐剂和其他免疫调节物副作用的佐剂。小分子免疫增强剂（“SMIP”）可满足这种需求，因为小分子平台提供选择性操作免疫反应的不同化合物，其为增加治疗指数免疫调节剂所必需。
Toll样受体（TLR）是一组模式识别受体，其结合来自细菌、真菌、原生动物和病毒的病原体相关分子模式（PAMP），并作为抵抗病原体入侵的第一道防线。TLR对诱导参与炎症应答的基因表达很关键，且TLR和所述先天免疫系统在抗原特异性获得性免疫发展中是关键步骤。
获得性（体液或细胞介导的）免疫与先天免疫的TLR信号机制有关。先天免疫是保护性免疫细胞应答，其快速起作用以对抗环境损伤，包括但不限于细菌或病毒剂。获得性免疫是较慢的应答，其涉及原初T淋巴细胞分化和激活成T辅助1（Th1）或T辅助2（Th2）细胞类型。Th1细胞主要促进细胞免疫，而Th2细胞主要促进体液免疫。
在识别病原生物上存在的特异或一组特异分子决定簇中所有TLR似乎作为同二聚体或异二聚体发挥作用，所述病原生物包括细菌细胞表面脂多糖、脂蛋白、细菌鞭毛蛋白、细菌和病毒的DNA和病毒RNA。对TLR激活的细胞应答涉及一种或多种转录因子的激活，引起生成和分泌有助于杀伤及清除所述病原入侵的细胞因子和共刺激分子如干扰素、TNF-、白介素、MIP-1和MCP-1。
十三种TLR（命名为TLR1-TLR13）在人和小鼠中已经确定，并且其中很多的等同形式在其他哺乳动物种类中也已发现。特定地，TLR7和TLR8的作用是检测细胞中是否存在“外源”单链RNA，作为响应病毒入侵的手段。TLR7和TLR8都是结构上高度保守的蛋白，其识别来自病毒的富含鸟苷或尿苷的单链RNA（ssRNA），所述病毒如人免疫缺陷病毒、水泡性口炎病毒和流感病毒。
WO 2009/111337公开结合Toll样受体（TLR）的一系列化合物，包括TLR7和TLR8。发现化合物用作免疫增强剂，但是包括疏水核心且溶解度低。
因此本发明的目标是提供能刺激或调节需要对象中免疫应答的SMIP的均匀悬液。
发明概述
本方面一般涉及能刺激或调节需要对象中免疫应答的小分子免疫增强剂（SMIP；即式I或式II的化合物）的均匀悬液。均匀悬液可以与多种免疫治疗抗原或佐剂联用。
一个示例性方法是用高压匀化与表面活性剂和黏性增强剂一起产生包括μm大小颗粒的SMIP稳定均匀悬液。所得悬浮特别适用于共递送SMIP与明矾和基于水包油乳剂的疫苗。
一方面，发明提供均匀悬浮剂，包括（a）式I或式II的苯并萘啶化合物，药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N-氧化物衍生物，受保护衍生物，单独异构体或其异构体混合物；（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C稳定至少约四周。在某些实施方式中，均匀悬液包括约0.5mg/mL-约50mg/mL苯并萘啶化合物。
在某些实施方式中，苯并萘啶化合物是：2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇;2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯;2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。
在一个优选实施方式中，均匀悬液包括（a）2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，或其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C稳定至少约四周。
在另一个优选实施方式中，均匀悬液包括（a）2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C稳定至少约四周。
在另一个优选实施方式中，均匀悬液包括（a）2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C稳定至少约四周。
示例性表面活性剂包括，例如，吐温（Tween）-80。在某些实施方式中，均匀悬液包含约0.1%-约10%表面活性剂。示例性悬浮剂包括，例如，黏性增强剂如羧甲基纤维素。在某些实施方式中，均匀悬液包含约0.1%-约10%悬浮剂。
在某些实施方式中，均匀悬液的至少约50%悬浮颗粒直径是约10μm或更小。在某些实施方式中，均匀悬液的至少约50%悬浮颗粒直径是约2μm或更小。
发明的均匀悬液能用于强化免疫应答并能与抗原、免疫原性组合物或疫苗共递送以增强诱导免疫应答的效果。佐剂（例如，明矾或水包油佐剂）可以与发明的均匀悬液联用。
本文也提供免疫原性组合物，包括（1）抗原和（2）发明的均匀悬液。
在某些实施方式中，免疫原性组合物还包含佐剂。示例性佐剂包括，例如，含铝佐剂（如氢氧化铝，羟基氧化铝或羟基磷酸铝），水包油乳剂（如MF59），脂质体（如外膜囊泡），寡核苷酸（如包括未甲基化CpG基序的寡核苷酸）。
在某些实施方式中，免疫原性组合物包括抗原，其为细菌抗原（如脑膜炎奈瑟球菌（Neisseria meningitides）抗原），病毒抗原（如呼吸道合胞病毒（RSV）或埃博拉病毒（Ebola virus）抗原）。在某些实施方式中，免疫原性组合物包括（1）病毒抗原（如埃博拉病毒抗原）和（2）2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。
本文还提供使用发明的均匀悬液来增强需要对象中免疫应答的方法和生产本发明均匀悬液的方法。
发明也涉及生产均匀悬液的方法，所述均匀悬液包括式I和式II的化合物，表面活性剂和悬浮剂。所述方法包括混合式I和式II的化合物、表面活性剂和悬浮剂，并且在高压例如15,000-20,000psi匀质化混合物以生产均匀悬液，所述均匀悬液优选有约10μm或更小的D50，更优选约2μm或更小，并可选约10μm或更小的D90。
本文也提供使用发明的免疫原性组合物在需要对象中产生免疫应答的方法。
发明也涉及本文所述用于治疗的均匀悬液，和均匀悬液在生产增强或诱导免疫应答的药物中的应用。
附图说明
图1A显示单独或加入不同剂量实施例47悬浮剂到Alum/3MenB制剂后，三个MenB抗原的电泳概况（用SDS-PAGE）。注解：SN=未吸附抗原（代表20%的10μg剂量）；T=未吸附抗原（代表200%的20μg剂量）；P=已吸附抗原修复（代表10%的10μg剂量）。图1B是显示明矾上抗原吸附百分比的表。
图2显示实施例47的均匀悬液对肠外致病性大肠杆菌（E.coli）（ExPEC）抗原PK1-3526吸附没有影响。注解：1.海蓝色加分子量标记；2.pK1-3526对照2ug（100%）；3.pK1-3526对照1ug（50%）；4.pK1-3526对照0.4ug（20%）；5.明矾/pK1-3526SN（20%）；6.明矾/pK1-3526+实施例47SN（20%）；7.明矾/pK1-3526SN TCA（240%）；8.明矾/pK1-3526+实施例47SN TCA（240%）；9.-;10.pK1-3526TCA对照2.4ug（240%）；11.明矾/pK1-3526颗粒解吸（50%）；12.明矾/pK1-3526+实施例47颗粒解吸（50%）。%值表明单独剂量制剂的比例。
图3A显示小鼠肌肉内注射4mpk（毫克/千克）标明3MenB/明矾的载剂后实施例47的血清水平（不均匀/DMSO悬液相比均匀悬液）。图3B显示小鼠肌肉内注射4mpk标明3MenB/明矾的载剂24小时后实施例47的注射位点肌肉水平（不均匀/DMSO悬液相比均匀悬液）。图3C显示小鼠肌肉内注射4mpk标明3MenB/明矾的载剂24小时后实施例47的腹股沟淋巴结水平（不均匀/DMSO悬液相比均匀悬液）。
图4显示不均匀/DMSO悬液加3MenB/明矾和实施例47的均匀悬液加3MenB/明矾的细胞因子释放概况相似。相较佐剂R848，接触均匀悬液或实施例47所配置DMSO后细胞因子释放最小。
图5A显示用每小鼠2-100微克范围的特定剂量实施例47均匀悬液配制的明矾/3MenB的血清杀菌抗体（SBA）效价。图5B显示每小鼠2-100微克范围的特定剂量实施例47均匀悬液配制的MF59/3MenB的SBA效价。
图6显示实施例47悬液（当用Alum/3MenB疫苗配制时）引起对16株脑膜炎奈瑟球菌组汇集血清的SBA效价的能力（所有株通常用明矾/3MenB制剂有低效价）。图显示这16株的覆盖百分比。截留指考虑到显示杀菌活性的最低效价。
图7A-7C显示体内MenB小鼠模型的IgG1/IgG2a比率评价的结果。图7A显示GNA2132-GNA1030的IgG1，IgG2a，IgG2b和IgG3效价。图7B显示GNA2091-GNA1870的IgG1，IgG2a，IgG2b和IgG3效价。图7C显示NadA的IgG1，IgG2a，IgG2b和IgG3效价。
图8显示使用实施例47不均匀悬液（DMSO中制备）的SBA分析结果。小鼠用MF59/3MenB+以实施例47所示量i.m.免疫两次。图基于三个独立SBA研究并且显示第二次注射后两周的平均效价±标准偏差。SBA分析用标准CFU方法和NZ98MenB菌株完成。
图9A概括了显示实施例47悬液引起对RSV F抗原免疫反应能力的研究结果。读数代表总抗F抗体（κ）和中和抗体（PRNT60）。图9B显示另一研究中实施例47悬液增强类型转换成IgG2a的F特异性抗体以及中和抗体。
发明详述
1.概述
一方面，本发明涉及小分子免疫增强剂（SMIP）的均匀悬液。所述均匀悬液能用于增强免疫应答。
如本文所述，发明人已评价示例性SMIP即2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺的均匀悬液功效。这些研究显示SMIP均匀悬液比非均匀悬液（在DMSO中）更有效增强免疫应答。
一个生成均匀悬液的示例性方法是用高压匀化与表面活性剂和黏性增强剂一起产生包括100nm-10μm大小范围颗粒的SMIP稳定均匀悬液。所得悬浮特别适用于共递送SMIP与明矾和基于水包油乳剂的疫苗。均匀悬液有确定的尺寸分布，使剂量更加均匀。另外，所得颗粒尺寸增加给药后SMIP对免疫细胞的生物可利用性。如用尺寸分布所测量，悬液也能随着时间而稳定。最终，与同一剂量的非均匀悬液相比，SMIP均匀悬液在更低剂量（例如每剂量10μg或更少）提供免疫刺激效果。
在一个优选实施方式中，均匀悬液包括（a）2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬浮在4°C稳定至少约四周。
在另一个优选实施方式中，均匀悬液包括（a）2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C稳定至少约四周。
在另一个优选实施方式中，均匀悬液包括（a）2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C稳定至少约四周。
发明的均匀悬液能用于强化免疫反应并能与抗原，免疫原性组合物或疫苗共递送以增强诱导免疫反应的效果。
本文还提供使用发明的均匀悬液来增强需要对象中免疫反应的方法和生产本发明均匀悬液的方法。
2.定义
如本文所用，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数指代物，除非内容中另有明确规定。
本文所用的术语“约”指某数值的+/-10%。
本文所用的术语“烯基”指部分不饱和的具有至少一个碳-碳双键的支链或直链烃类。绕所述双键的原子方向为顺式(Z)或反式(E)构象。烯基可以任选被取代。本文所用的术语"C2-C3烯基"、"C2-C4烯基"、"C2-C5烯基"、"C2-C6烯基"、"C2-C7烯基"和"C2-C8烯基"指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的烯基基团。除非另有说明，烯基基团通常是C2-C6烯基。如本文所用，烯基基团的非限制性示例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等。
本文所用的术语“亚烯基”指衍生自烯基的部分不饱和支链或直链二价烃基。亚烯基可以任选被取代。本文所用的术语"C2-C3亚烯基"、"C2-C4亚烯基"、"C2-C5亚烯基"、"C2-C6亚烯基"、"C2-C7亚烯基"和"C2-C8亚烯基"指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚烯基基团。除非另有说明，亚烯基基团通常是C1-C6亚烯基。如本文所用，亚烯基基团的非限制性示例包括亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚戊烯基、亚己烯基、亚庚烯基、亚辛烯基、亚壬烯基、亚癸烯基等。
本文所用的术语“烷基”指饱和的支链或直链烃。烷基可以任选被取代。本文所用的术语"C1-C3烷基"、"C1-C4烷基"、"C1-C5烷基"、"C1-C6烷基"、"C1-C7烷基"和"C1-C8烷基"指分别含至少1个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的烷基基团。除非另有说明，烷基基团通常是C1-C6烷基。如本文所用，烷基基团的非限制性示例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。
本文所用的术语“亚烷基”指衍生自烷基的饱和支链或直链二价烃基。亚烷基可以任选被取代。本文所用的术语"C1-C3亚烷基"、"C1-C4亚烷基"、"C1-C5亚烷基"、"C1-C6亚烷基"、"C1-C7亚烷基"和"C1-C8亚烷基"指分别含至少1个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚烷基基团。除非另有说明，亚烷基基团通常是C1-C6亚烷基。如本文所用，亚烷基基团的非限制性示例包括亚甲基、亚乙基、正亚丙基、异亚丙基、正亚丁基、异亚丁基、仲亚丁基、叔亚丁基、正亚戊基、异亚戊基、亚己基等。
本文所用的术语“炔基”指部分不饱和的具有至少一个碳-碳三键的支链或直链烃类。炔基可以任选被取代。本文所用的术语"C2-C3炔基"、"C2-C4炔基"、"C2-C5炔基"、"C2-C6炔基"、"C2-C7炔基"和"C2-C8炔基"指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的炔基基团。除非另有说明，炔基基团通常是C2-C6炔基。如本文所用，炔基基团的非限制性示例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基等。
本文所用的术语“亚炔基”指衍生自炔基的部分不饱和支链或直链二价烃基。亚炔基可以任选被取代。本文所用的术语"C2-C3亚炔基"、"C2-C4亚炔基"、"C2-C5亚炔基"、"C2-C6亚炔基"、"C2-C7亚炔基"和"C2-C8亚炔基"指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚炔基基团。除非另有说明，亚炔基基团通常是C2-C6亚炔基。如本文所用，亚炔基基团的非限制性示例包括亚乙炔基、亚丙炔基、亚丁炔基、亚戊炔基、亚己炔基、亚庚炔基、亚辛炔基、亚壬炔基、亚癸炔基等。
本文所用的术语“烷氧基”指-ORa基团，其中Ra为本文所定义的烷基。烷氧基可以任选被取代。本文所用的术语"C1-C3烷氧基"、"C1-C4烷氧基"、"C1-C5烷氧基"、"C1-C6烷氧基"、"C1-C7烷氧基"和"C1-C8烷氧基"指其中烷基部分含至少1个且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的烷氧基。如本文所用，烷氧基的非限制性示例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、壬氧基、癸氧基等。
本文所用的术语“芳基”指具有总共5-14个环原子的单环、双环和三环的环系统，其中所述系统中至少一个环为芳族且其中系统内各环含3-7个环原子。芳基可以任选被取代。如本文所用，芳基的非限制性示例包括苯基、萘基、芴基、茚基、薁基和蒽基等。
所用的术语“亚芳基”指衍生自芳基的二价基团。亚芳基可以任选被取代。
本文所用的术语“氰基”指-CN基团。
本文所用的术语“环烷基”指饱和或部分不饱和的，单环、稠合双环或稠合三环或桥接多环的环组装物。本文所用的术语"C3-C5环烷基"、"C3-C6环烷基"、"C3-C7环烷基"、"C3-C8环烷基、"C3-C9环烷基和"C3-C10环烷基所指环烷基中饱和或部分不饱和的，单环、稠合双环或桥接多环的环组装物含有至少3个，且最多5、6、7、8、9或10个碳原子。环烷基基团可以任选被取代。如本文所用，环烷基基团的非限制性示例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环戊烯基、环己烯基、十氢萘基、2,3,4,5,6,7-六氢-1H-茚基等。
本文所用的术语“卤素”指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。
本文所用的术语"卤代”指卤素基团：氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)和碘(-I)。
本文所用的术语“卤代烷基”或“卤素取代的烷基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的烷基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代烷基可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代烷基的非限制性示例包括取代有一个或多个卤素基团的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基，其中所述卤素基团相同或不同，包括但不限于三氟甲基、五氟乙基等。
本文所用的术语“卤代烯基”或“卤素取代的烯基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的烯基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代烯基可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代烯基的非限制性示例包括取代有一个或多个卤素基团的乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等，其中所述卤素基团相同或不同。
如本文所用，术语“卤代炔基”或“卤素取代的炔基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的炔基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代炔基基团可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代炔基基团的非限制性示例包括取代有一个或多个卤素基团的乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基等，其中所述卤素基团相同或不同。
本文所用的术语“卤代烷氧基”或“卤素取代的烷氧基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的烷氧基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代烷氧基基团可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代烷氧基基团的非限制性示例包括取代有一个或多个卤素基团的甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、壬氧基、癸氧基等，其中所述卤素基团相同或不同。
本文所用的术语“杂烷基”指如本文所定义的烷基，其中一个或多个碳原子独立地被一个或多个氧、硫、氮或其组合置换。
本文所用的术语“杂芳基”指具有总共5-14个环原子的单环、双环和三环的环系统，其中所述系统内至少一个环为芳族，系统内至少一个环含一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子，且其中系统内各环含3-7个环原子。杂芳基可含有一个或多个取代基。杂芳基基团可以任选被取代。如本文所用，杂芳基的非限制性示例包括苯并呋喃基、苯并呋咱基(benzofurazanyl)、苯并
Figure BDA00002004804900101
唑基、苯并吡喃基，苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并氮杂
Figure BDA00002004804900102
基(benzazepinyl)、苯并咪唑基、苯并噻喃基、苯并[1,3]间二氧杂环戊烯基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、噌啉基、呋咱基（furazanyl）、呋喃基、呋喃并吡啶基、咪唑基、吲哚基、中氮茚基、二氢吲哚-2-酮、吲唑基、异吲哚基、异喹啉基、异
Figure BDA00002004804900103
唑基、异噻唑基、1,8-萘啶基、
Figure BDA00002004804900104
唑基、吲哚基（oxaindolyl）、
Figure BDA00002004804900106
二唑基、吡唑基、吡咯基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹喔啉基、喹啉基、喹唑啉基、4H-喹嗪基、噻唑基、噻二唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基和四唑基。
本文所用的术语“杂环烷基”指如本文所定义的环烷基，其中一个或多个环碳被选自-O-、-N=、NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-的部分置换，其中R为氢、C1-C4烷基或氮保护基团，前提是所述基团的环不含两个相邻的O或S原子。杂环烷基基团可以任选被取代。如本文所用，杂环烷基的非限制性示例包括吗啉基、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮、1,4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基、2H-吡咯基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、1,3-二氧戊环基、2-咪唑啉基、咪唑烷基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、1,4-二
Figure BDA00002004804900111
烷基、1,4-二噻烷基、硫代吗啉基、氮杂环庚烷基、二氮杂
Figure BDA00002004804900112
基(diazepinyl)、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、噻喃基、吖丁啶基、氧杂环丁基、硫杂环丁基（thietanyl）、氧杂环庚烷基（oxepanyl）、硫杂环庚烷基（thiepanyl）、1,2,3,6-四氢吡啶基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二烷基、1,3-二氧戊环基、二噻烷基、二硫戊环基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己基和3-氮杂双环[4.1.0]庚基。
本文所用的术语“杂原子”指一个或多个氧、硫、氮、磷或硅。
本文所用的术语“羟基”指-OH基团。
本文所用的术语“羟烷基”指如本文所定义取代有一个或多个羟基的烷基。如本文所用，支链或直链“C1-C6羟烷基基团的非限制性示例包括取代有一个或多个羟基的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基基团。
本文所用的术语“异氰酸基”指-N＝C＝O基团。
本文所用的术语“异硫氰酸基”指-N＝C＝S基团。
本文所用的术语“巯基”指(烷基)S-基团。
本文所用的术语“可任选取代”指所述参考基团可被一个或多个额外基团取代或未被取代，所述额外基团单独且独立选自烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、羟基、烷氧基、巯基、氰基、卤素、羰基、硫代羰基、异氰酸基、硫氰酸基、异硫氰酸基、硝基、全卤代烷基、全氟代烷基和包括单取代及双取代氨基基团的氨基，及其受保护的衍生物。任选取代基的非限制性示例包括卤素、-CN、=O、=N-OH、＝N-OR、=N-R、OR、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-OC(O)OR、-C(O)NHR、-C(O)NR2、-OC(O)NHR、-OC(O)NR2、-SR-、-S(O)R、-S(O)2R、-NHR、-N(R)2、-NHC(O)R、-NRC(O)R、-NHC(O)OR、-NRC(O)OR、S(O)2NHR、-S(O)2N(R)2、-NHS(O)2NR2、-NRS(O)2NR2、-NHS(O)2R、-NRS(O)2R、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C8烷基、和卤素取代的C1-C8烷氧基，其中各R独立选自H、卤素、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C8烷基、和卤素取代的C1-C8烷氧基。此类取代基团的位置和数量按各基团熟知的价态限制确定，例如=O是烷基的合适取代基但不适于芳基。
本文所用的术语“前药”指在体内转化成母体药物的药剂。本文所述化合物的前药的非限制性示例是本文所述化合物作为酯给予，一旦进入细胞，该酯即代谢水解成活性实体——羧酸。前药的另一示例是连接于酸性基团的短肽，其中所述肽经代谢显现活性部分。
本文所用的术语“溶剂合物”指由溶质（例如，本文所述的式(I)化合物或其盐）和溶剂形成的可变化学计量的复合物。溶剂的非限制性示例为水、丙酮、甲醇、乙醇和乙酸。
“脊椎动物对象”指脊索动物亚门的任何成员，包括但不限于人和其他灵长类动物，包括非人灵长类动物如黑猩猩和其他猿和猴种；家畜如牛、绵羊、猪、山羊和马；家养哺乳动物如狗和猫；实验室动物，包括啮齿动物如小鼠、大鼠和豚鼠；包括家养、野生和狩猎鸟类在内的禽类如鸡、火鸡和其他鹑鸡类禽、鸭、鹅等。该术语不表示特定年龄。因此，旨在涵盖成年和新生个体。
本文所用的术语"治疗"指以下任意：(i)所研究(例如癌症或病原性感染，如在传统疫苗中)病症(例如，疾病或失调)的预防，(ii)所研究病症相关症状的减轻或消除，以及(iii)所研究病症的基本或完全消除。治疗可以是有效预防(在所研究病症发生前)或有效治疗(在所研究病症发生后)。
本发明均匀悬液的术语“有效量”或“药物有效量”指本文所述足以增强免疫反应的量，例如至少约10%。本发明免疫原性组合物的术语"有效量"或"药物有效量"在本文中指足以治疗或诊断感兴趣病症的所述免疫原性组合物量。所需的确切量将视对象而变化，取决于例如，所述对象的物种、年龄、总体状况；所治疗病症的严重程度；感兴趣的特定抗原；在免疫应答的情况中，取决于对象的免疫系统合成抗体的能力，和所需的保护程度；以及给予方式，和其他因素。个案中的适当“有效”量可由本领域普通技术人员确定。因此，“治疗有效量”通常会落入可通过常规试验确定的较宽范围内。
“药学上可接受的”或“药理学上可接受的”指在生物学或其它方面没有不良影响的材料，例如，可将该材料给予个体而不引起任何不当的不良生物学作用且不与含所述材料的组合物中任何成分发生不当的有害相互作用。
“生理pH”或“生理范围内的pH”指pH大致在6.5-8.0（含端值）范围内，更典型在约7.2-7.6（含端值）范围内。
本文所用的术语“可注射组合物”或其变体指适于注射入脊椎动物对象的药学上可接受的组合物，所述组合物通常无菌、无热原并具有特定pH和适于注射的等渗值。
本文所用的术语"颗粒"指直径为约10nm或更小-约150μm的颗粒，例如范围为10nm-25nm-50nm-100nm-250nm-500nm-1μm-2.5μm-5μm-10μm-25μm-50μm-100μm。因此，本文所用的术语"颗粒"包括在本文中定义为颗粒直径小于1000nm的"纳米颗粒"，以及在本文中定义为颗粒直径在1μm-1000μm范围内的"微米颗粒"。在一些实施方式中，本文所述聚合颗粒通常可为球形。
术语"多肽"指氨基酸残基的聚合物，且不限于产物的最小长度。因此，该定义中包括全长蛋白质、肽、寡肽、二聚体、多聚体等。
“含多肽的物质”是某分子，其至少部分为多肽。示例包括多肽，包括糖蛋白、金属蛋白和脂蛋白在内的蛋白，与载体蛋白偶联的多糖抗原等。本文所用蛋白包括全长蛋白及其片段。在某些实施方式中，采用天然序列的修饰，例如缺失、添加和取代(通常为保守性)。
本文所用术语的“片段”指生物分子一级结构的某个物理毗连部分。对于蛋白质，片段可由该蛋白氨基酸序列的毗连部分限定，可以为至少3-5个氨基酸、至少6-10个氨基酸、至少11-15个氨基酸、至少16-24个氨基酸、至少25-30个氨基酸和至少30-45个氨基酸。对于多核苷酸，片段可由该多核苷酸的核酸序列的毗连部分限定，可以为至少9-15个核苷酸、至少15-30个核苷酸、至少31-45个核苷酸、至少46-74个核苷酸、至少75-90个核苷酸和至少90-130个核苷酸。在一些实施方式中，生物分子的片段为免疫原性片段。
"多核苷酸"是核酸聚合物。多核苷酸可包含少至5、6、7或8个核苷酸。此外，"多核苷酸"可包含双链和单链序列，并指且不限于病毒的cDNA、原核或真核mRNA、病毒的基因组RNA与DNA序列(例如，病毒和逆转录病毒的RNA与DNA)、原核或真核生物以及合成的DNA序列。该术语也涵盖包含任何DNA与RNA的已知碱基类似物。该术语还包含修饰，例如天然序列的缺失、添加和取代(通常为保守性的)，其中核酸分子编码抗原性蛋白。这些修饰可以是有意的，例如通过定点诱变，或者可以是意外的，例如通过产抗原宿主的突变。
“含多核苷酸的物质”是某分子，其至少部分为多核苷酸。示例包括RNA载体构建物、DNA载体构建物等。
本文所用的术语“糖”包括单糖、寡糖和多糖。“含糖物质”是某分子，其至少部分为糖。示例包括糖抗原、含偶联于载体肽的糖的抗原等。
本文所用的术语"分离"指化学物质如多核苷酸、多肽和抗体等所处环境与天然产生该化学物质的环境不同。分离的化学物质通常基本纯化。分离细胞的方法是本领域技术人员熟知的。
“纯化的”蛋白是从其天然宿主产生(例如，重组或合成)或分离的蛋白质，从而组合物中蛋白质含量显著高于粗制品中的含量。通常，纯化的蛋白质的均一性至少约50%，更优选均一性至少约80%、约85%、约90%、约95%、约97%、约98%、约99%或更高。
本文所用的“免疫学应答”或“免疫应答”是对象中发生对免疫原性物质的体液和/或细胞免疫应答。
免疫应答包括先天和适应性免疫应答。先天免疫应答是为免疫系统提供一线防御的快速作用应答。相反，适应性免疫采用选择和克隆扩增含体细胞重排受体基因的免疫细胞(例如T-和B-细胞受体)来提供特异性和免疫记忆，所述受体基因识别给定病原或疾病(例如肿瘤)的抗原。在其很多效应中，先天免疫应答引起炎性细胞因子的快速突释并活化抗原呈递细胞(APC)如巨噬细胞和树突细胞。为区分病原体和自身组分，先天免疫系统利用多种相对不变的受体检测病原体的特征物，这些特征物称为病原体相关分子模式或PAMP。已知实验性疫苗中添加微生物组分导致发生强烈且持续的适应性免疫应答。据报道，这种免疫应答增强的机理涉及模式识别受体(PRR)，其在包括嗜中性粒细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、B细胞和一些非免疫细胞如上皮和内皮细胞在内的多种免疫细胞上差异表达。PRR的参与导致这类细胞中一些被活化并分泌细胞因子和趋化因子，以及其他细胞成熟并迁移。这以串联方式产生炎性环境导致适应性免疫应答的确立。PRR包括非吞噬细胞受体，如Toll样受体(TLR)和核苷酸结合寡聚结构域(NOD)蛋白，和诱发吞噬作用的受体如清除受体、甘露糖受体和β-葡聚糖受体。已报道的TLR(与一些已报道配体的示例一起，可在本发明的不同实施方式中用作免疫原性物质)包括如下：TLR1(来自分枝杆菌(Mycobacteria)、奈瑟菌(Neisseria)的细菌脂蛋白)，TLR2(酵母聚糖酵母颗粒、肽聚糖、脂蛋白、糖脂、脂多糖)，TLR3(病毒双链RNA、聚IC)，TLR4(细菌脂多糖、植物产物紫杉醇)，TLR5(细菌鞭毛)，TLR6(酵母聚糖颗粒、脂磷壁质酸、支原体的脂肽)，TLR7(单链RNA、咪喹莫特、雷索咪喹莫特(resimiquimod)和其他合成化合物如洛索立宾和溴匹立明)，TLR8(单链RNA、雷索咪喹莫特)和TLR9(CpG寡核苷酸)等。树突细胞被视为在启动初免初始CD4+辅助T(TH)细胞和诱导CD8+T细胞分化成杀伤细胞中最重要的细胞类型。据报道，TLR信号传递在确定这些辅助T细胞应答特性中起重要作用，例如TLR信号的特性决定所观察到TH应答的具体类型(例如，TH1与TH2应答)。产生抗体(体液)与细胞免疫的组合作为TH1型应答的部分，而TH2型应答主要是抗体应答。已记载不同TLR配体如CpG DNA(TLR9)和咪唑喹啉(TLR7,TLR8)在体外刺激免疫细胞产生细胞因子。咪唑喹啉是显示为TLR激动剂的第一种类似药物的小化合物。进一步的信息参见例如A.Pashine,N.M.Valiante和J.B.Ulmer，Nature Medicine,11,S63-S68(2005)，K.S.Rosenthal和D.H.Zimmerman，Clinical and Vaccine Immunology,13(8),821-829(2006)及其所引文献。
出于本发明的目的，体液免疫应答指由抗体分子介导的免疫应答，而细胞免疫应答是T-淋巴细胞和/或其他白细胞介导的免疫应答。细胞免疫的一个重要方面涉及细胞溶解T细胞(CTL)的抗原特异性应答。CTL特异性针对肽抗原，肽抗原与主要组织相容性复合体(MHC)编码并在细胞表面表达的蛋白关联呈递。CTL帮助诱导并促进胞内微生物的胞内破坏，或感染此类微生物的细胞的裂解。细胞免疫的另一方面涉及辅助T细胞的抗原特异性应答。辅助T细胞协助刺激非特异性效应细胞的功能并集中其活性，所述细胞针对在表面展示MHC分子相关肽抗原的细胞。"细胞免疫应答"也指由活化的T细胞和/或包括CD4+和CD8+T细胞衍生细胞在内的其他白细胞产生细胞因子、趋化因子和其他此类分子。
因此，引起细胞免疫应答的组合物如免疫原性组合物或疫苗可通过在细胞表面呈递MHC分子相关抗原而使脊椎动物对象致敏。细胞介导的免疫应答指向在表面呈递抗原的细胞或其附近。此外，可产生抗原特异性T淋巴细胞用于今后保护免疫宿主。特定抗原或组合物刺激细胞介导免疫应答的能力可通过本领域已知的多种试验确定，例如通过淋巴增殖(淋巴细胞活化)试验、CTL细胞毒性细胞试验，通过测试敏化对象中的抗原特异性T淋巴细胞，或通过测量T细胞响应抗原再刺激的细胞因子生成来确定。这些试验为本领域熟知。参见例如Erickson等，(1993)J.Immunol.151:4189-4199；Doe等，(1994)Eur.J.Immunol.24:2369-2376。因此，本文所用的免疫应答可刺激CTL生成和/或辅助T细胞产生或激活。感兴趣的抗原还可引发抗体介导的免疫应答。因此，免疫应答可包括例如以下一种或多种效果：由例如B细胞生产抗体；和/或特异性针对感兴趣组合物或疫苗中一种或多种抗原的抑制T细胞和/或γδT细胞的激活。例如，这些应答可用以中和感染性和/或介导抗体-补体或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)来为经免疫宿主提供保护。这些应答可采用本领域熟知的标准免疫试验和中和试验确定。
“抗原”指含能引起免疫学应答的一个或多个表位(线性、构象或兼有)的分子。该术语可与术语“免疫原”互换使用。“表位”是给定物质(例如，抗原性分子或抗原性复合物)中确定其免疫学特异性的部分。表位包含在所述抗原的定义范围内。通常，表位是天然产生抗原中的多肽或多糖。在人工抗原中，其可为低分子量物质如对氨苯基胂酸衍生物。B细胞表位一般包括至少约5个氨基酸，但可以小到3-4个氨基酸。T细胞表位如CTL表位通常包含至少约7-9个氨基酸，而辅助T细胞表位通常包括至少约12-20个氨基酸。术语“抗原”表示2种亚基抗原，即与该抗原天然关联的全生物体或细胞，以及杀死、减毒或灭活的细菌、病毒、真菌、寄生虫或其他微生物或肿瘤细胞分离且单独的抗原。抗体如抗独特型抗体，或其片段以及能模拟抗原或抗原决定簇的合成肽模拟表位也涵盖在本文所用的抗原定义下。类似地，在体内如在基因治疗和DNA免疫应用中，表达抗原或抗原决定簇的寡核苷酸或多核苷酸也包含在本文的抗原定义中。
因此，出于本发明的目的，抗原可衍生自任何不同的病毒、细菌、寄生虫、真菌和其他微生物以及任何不同的肿瘤抗原。抗原还包括在体内表达抗原或抗原决定簇的核酸。稍作举例，抗原可以是来自或衍生自疱疹病毒家族的蛋白质，包括1和2型单纯疱疹病毒(HSV)的衍生蛋白如HSV-1和HSV-2糖蛋白gB、gD和gH；巨细胞病毒(CMV)衍生蛋白包括CMV gB和gH；肝炎病毒家族包括甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)、戊型肝炎病毒(HEV)和庚型肝炎病毒(HGV)的衍生蛋白；衍生自HIV的蛋白，包括gp120、gp160、gp41、p24gag和p55gag包膜蛋白，所述HIV包括HIV分离物的不同遗传亚型HIVIIIb、HIVSF2、HIVLAV、HIVLAI、HIVMN、HIV-1CM235、HIV-1US4、HIV-2的成员；猿免疫缺陷病毒(SIV)的衍生蛋白；和衍生自脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitides)(A,B,C,Y)、B型流感嗜血杆菌(Hemophilus influenza)(HIB)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)的蛋白；人血清白蛋白和卵清蛋白等。
与用不同递送系统给予等量抗原如将抗原作为可溶蛋白给予所引起的免疫应答相比，含本发明所述抗原的免疫原性组合物具有的引发免疫应答的能力更强时，该组合物显示“增强的免疫原性”。因此，免疫原性或疫苗组合物可因为抗原更具免疫原性或因为在给予抗原的对象中实现免疫应答所需抗原剂量更低或剂量数更少而显示“增强的免疫原性”。此类增强的免疫原性可通过将所述抗原组合物和抗原对照给予动物并采用本文所述的标准试验比较两者的抗体效价和/或细胞介导的免疫加以确定。
术语“佐剂”或“免疫学佐剂”指辅助或调节抗原在免疫系统中作用的任何物质。佐剂可增强体液和/或细胞免疫。
术语“赋形剂”指可能存在于成品剂型中的任何基本辅助物质。例如，术语“赋形剂”包括载剂、粘合剂、崩解剂、填料(稀释剂)、悬浮/分散剂等。
本文所用的术语"载体构建物"通常指能引导感兴趣核酸序列或基因表达的任何组件。"DNA载体构建物"指能引导感兴趣核酸序列或基因表达的DNA分子。DNA载体构建物的一种具体类型是质粒，其为能在宿主细胞内自主复制的环形附加体DNA分子。通常，质粒是环形双链DNA环，其中可接入额外的DNA片段。pCMV是本领域熟知的一种具体质粒。已知其他基于RNA病毒的DNA质粒构建物。这些DNA载体构建物通常含能在真核细胞中起作用的启动子，其转录产物是RNA载体构建物(例如α病毒RNA载体复制子)的5'cDNA序列，和3'终止区。载体构建物的其他示例包括RNA载体构建物(例如，α病毒载体构建物)等。如本文所用，"RNA载体构建物"、"RNA载体复制子"和"复制子"指能在体内，通常在靶细胞内指导其自身扩增或自体复制的RNA分子。所述RNA载体构建物直接使用，无需将DNA引入细胞并转运到可发生转录的核中。通过使用RNA载体直接递送入宿主细胞的胞质，可有效发生异源核酸序列的自主复制和翻译。
术语“均匀”指成分的混合物或掺混物，其结构和组成普遍均一且整个混合物中几乎没有变化。在整个混合物的每一个部分，均匀混合物的不同部分基本充分地显示相同的物理和化学性质。均匀混合物的化学计量学也在整个混合物中基本恒定。
术语“悬浮液”涉及液体中分散的颗粒。
术语“水性悬浮液”指悬浮在含水的水（连续）相液体中的颗粒。
“稳定”均匀悬液是悬浮颗粒的大小不随时间而实质改变（即，改变不超过约10%）的悬浮液。
3.免疫增强化合物的均匀悬液
一方面，发明是包括下列的均匀悬液：（a）式I或式II的苯并萘啶化合物，药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护的衍生物，单独异构体或其异构体混合物；（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂。均匀悬液包括水相，可以是水或任何其他合适的水相，例如缓冲水溶液。
均匀悬液优选在4°C稳定至少约2周，至少约4周，至少约2月，至少约3月，至少约4月，至少约5月，至少约6月，至少约7月，至少约8月，至少约9月，至少约10月，至少约11月，至少约1年或更长。
均匀悬液优选具有大小分布，其中50%颗粒（D50）小于约10M，小于约9μM，小于约8μM，小于约7μM，小于约6μM，小于约5μM，小于约4μM，小于约3μM，小于约2μM，小于约1μM，或小于约0.9μM。或者或另外，均匀悬液能具有大小分布，其中90％颗粒（D90）小于约10μM，小于约9μM，小于约8μM，小于约7μM，小于约6μM，小于约5μM，小于约4μM，小于约3μM，或小于约2μM。
均匀悬液能包括任何合适的表面活性剂，例如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂，两性离子（两性）表面活性剂或非离子表面活性剂。示例性阴离子表面活性剂包括例如，全氟辛酸盐（PFOA或PFO）、全氟辛烷磺酸盐（PFOS），烷基硫酸盐如十二烷基硫酸钠（SDS）或月桂基硫酸铵，月桂醇聚醚硫酸钠（也称月桂基醚硫酸钠，SLES），烷基苯磺酸盐和脂肪酸盐。示例性阳离子表面活性剂包括例如，烷基三甲基铵盐如鲸蜡基三甲基溴化铵（CTAB，或十六烷基溴化三甲基铵），氯化鲸蜡基吡啶（CPC），聚乙氧基化牛油胺（POEA），苯扎氯铵（BAC）和苄索氯铵（BZT）。示例性两性离子（两性）表面活性剂包括例如，十二烷基甜菜碱，椰油酰胺丙基甜菜碱和椰油两性甘氨酸盐。示例性非离子型表面活性剂包括例如，烷基聚(氧化乙烯)、烷基苯酚聚(氧化乙烯)、聚(氧化乙烯)和聚(氧化丙烯)的共聚物[商品名为泊洛沙姆（Poloxamer）或泊洛沙胺（Poloxamine）]、烷基聚葡萄糖苷（如辛基葡萄糖苷和癸基麦芽糖苷）、脂肪醇（例如鲸蜡醇和油醇）、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA，普流罗尼克F68和聚山梨醇酯，如吐温（Tween）-20（聚山梨醇酯20）、吐温-80（聚山梨醇酯80），和十二烷基二甲基氧化胺。如果需要，均匀悬液能包括任何组合的两个或多个表面活性剂。
均匀悬液能包括约0.1%-约10%表面活性剂（v/v或w/v），约0.1%-约5%表面活性剂，0.1%-约4%表面活性剂，0.1%-约3%表面活性剂，0.1%-约2%表面活性剂，0.1%-约1%表面活性剂，0.1%-约0.5%表面活性剂，约0.1%表面活性剂，约0.2%表面活性剂，约0.3%表面活性剂，约0.4%表面活性剂，约0.5%表面活性剂，约0.6%表面活性剂，约0.7%表面活性剂，约0.8%表面活性剂，约0.9%表面活性剂，或约1%表面活性剂。
本文所述均匀悬液中使用的优选表面活性剂是吐温-80（聚山梨醇酯80）。均匀悬液优选包括约0.1%-约5%，0.1%-约4%，0.1%-约3%，0.1%-约2%，0.1%-约1%，0.1%-约0.5%，约0.1%，约0.2%，约0.3%，约0.4%，约0.5%，约0.6%，约0.7%，约0.8%，约0.9%，或约1%吐温80。
均匀悬液能包括任何合适悬浮剂，例如增加黏性的悬浮剂。本领域熟知的多种这类试剂包括，例如，纤维素衍生物（羧甲基纤维素，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素），黄原胶，藻酸钠，角叉菜胶，黄蓍胶，熟化淀粉（如马铃薯淀粉），瓜耳胶，熔凝二氧化硅，香茅醇，香叶醇，二氢mercinol，芳樟醇，橙花醇，罗丁醛，α萜品醇，β-香茅醇，玫瑰醇，香茅油腈，香芹酮，小茴香酮，薄荷醇和异龙脑。如果需要，均匀悬液能包括任何组合的两个或多个悬浮剂。
均匀悬液能包括约0.1%-约10%悬浮剂（v/v或w/v），约0.1%-约5%悬浮剂，0.1%-约4%悬浮剂，0.1%-约3%悬浮剂，0.1%-约2%悬浮剂，0.1%-约1%悬浮剂，0.1%-约0.5%悬浮剂，约0.1%悬浮剂，约0.2%悬浮剂，约0.3%悬浮剂，约0.4%悬浮剂，约0.5%悬浮剂，约0.6%悬浮剂，约0.7%悬浮剂，约0.8%悬浮剂，约0.9%悬浮剂，或约1%悬浮剂。
本文所述均匀悬液使用的优选悬浮剂是羧甲基纤维素（CMC）。均匀悬液优选包括约0.1%-约5%，0.1%-约4%，0.1%-约3%，0.1%-约2%，0.1%-约1%，0.1%-约0.5%，约0.1%，约0.2%，约0.3%，约0.4%，约0.5%，约0.6%，约0.7%，约0.8%，约0.9%，或约1%羧甲基纤维素（CMC）。
均匀悬液也包括式I或式II的苯并萘啶化合物，药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护的衍生物，单独异构体或其异构体混合物。均匀悬液也包括苯并萘啶化合物，浓度为约0.1mg/mL-约50mg/ml，约0.1mg/mL-约40mg/ml，约0.1mg/mL-约30mg/ml，约0.1mg/mL-约20mg/ml，约0.1mg/mL-约10mg/ml，约0.1mg/mL-约5mg/ml，约0.5mg/mL，约1.0mg/mL，约1.5mg/mL，约2mg/mL，约2.5mg/mL，约3mg/mL，约3.5mg/mL，约4mg/mL，约4.5mg/mL，约5mg/mL，约5.5mg/mL，约6mg/mL，约6.5mg/mL，约7mg/mL，约7.5mg/mL，约8mg/mL，约8.5mg/mL，约9mg/mL，约9.5mg/mL，约10mg/mL，约15mg/mL，或约20mg/mL。
在优选实施方式中，均匀悬液包括苯并萘啶化合物，选自2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇；2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯；2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，和2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。
在另一个优选实施方式中，均匀悬液包括苯并萘啶化合物，选自2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇；2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯；2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，和2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。
在一个特定优选实施方式中，均匀制剂包括2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。
在另一个特定优选实施方式中，均匀制剂包括2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。
在某些实施方式中，均匀制剂包括（a）式I或式II的苯并萘啶化合物，药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护的衍生物，单独异构体或其异构体混合物；（b）0.1%-约5%吐温80，和（c）0.1%-约10%羧甲基纤维素，并且稳定。在这些实施方式的某些示例中，均匀制剂的D50约为1，并且任选D90约为2。均匀制剂优选稳定至少约一个月。例如，一些实施方式中均匀制剂能稳定至少约一个月，至少约两个月，至少约三个月，至少约四个月，至少约五个月，至少约六个月，至少约七个月，至少约八个月，至少约九个月，至少约十个月，至少约十一个月，或至少约十二个月。
苯并萘啶化合物
适用于本发明的苯并萘啶化合物包括含有式（I）或式（II）化合物，药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物（如水合物），N-氧化物衍生物，前药衍生物，受保护衍生物，个体异构体及其异构体混合物。
在本文所提供免疫原性组合物的某些实施方式中，所述苯并萘啶化合物是结构式（I）所示化合物或其药学上可接受的盐：
式(I)
其中：
R4选自H、卤素、-C(O)OR7、-C(O)R7、-C(O)N(R11R12)、-N(R11R12)、-N(R9)2、-NHN(R9)2、-SR7、-(CH2)nOR7、-(CH2)nR7、-LR8、-LR10、-OLR8、-OLR10、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基，其中R4的C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基各自任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、-CN、-NO2、-R7、-OR8、-C(O)R8、-OC(O)R8、-C(O)OR8、-N(R9)2、-P(O)(OR8)2、-OP(O)(OR8)2、-P(O)(OR10)2、-OP(O)(OR10)2、-C(O)N(R9)2、-S(O)2R8、-S(O)R8、-S(O)2N(R9)2和-NR9S(O)2R8；
各L独立地选自键、-(O(CH2)m)t-、C1-C6烷基、C2-C6亚烯基和C2-C6亚炔基，其中L的C1-C6烷基、C2-C6亚烯基和C2-C6亚炔基各自可选取代有1-4个取代基，所述取代基独立地选自卤素、-R8、-OR8、-N(R9)2、-P(O)(OR8)2、-OP(O)(OR8)2、-P(O)(OR10)2和-OP(O)(OR10)2；
R7选自H、C1-C6烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C3-C8杂环烷基，其中R7的C1-C6烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C3-C8杂环烷基各自可任选由1-3个R13基团取代；
各R8独立地选自H、-CH(R10)2、C1-C8烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6杂烷基、C3-C8环烷基、C2-C8杂环烷基、C1-C6羟基烷基和C1-C6卤代烷氧基，其中R8的C1-C8烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C2-C8杂环烷基、C1-C6羟基烷基和C1-C6卤代烷氧基各自可任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自-CN、R11、-OR11、-SR11、-C(O)R11、-OC(O)R11、-C(O)N(R9)2、-C(O)OR11、-NR9C(O)R11、-NR9R10、-NR11R12、-N(R9)2、-OR9、-OR10、-C(O)NR11R12、-C(O)NR11OH、-S(O)2R11、-S(O)R11、-S(O)2NR11R12、-NR11S(O)2R11、-P(O)(OR11)2和-OP(O)(OR11)2；
各R9独立地选自H、-C(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)R10、-C(O)OR10、-S(O)2R10、-C1-C6烷基、C1-C6杂烷基和C3-C6环烷基，或各R9独立为与所连N一起形成C3-C8杂环烷基的C1-C6烷基，其中所述C3-C8杂环烷基环可任选含有选自N、O和S的额外杂原子，且其中R9的C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C3-C6环烷基或C3-C8杂环烷基可任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自-CN、R11、-OR11、-SR11、-C(O)R11、-OC(O)R11、-C(O)OR11、-NR11R12、-C(O)NR11R12、-C(O)NR11OH、-S(O)2R11、-S(O)R11、-S(O)2NR11R12、-NR11S(O)2R11、-P(O)(OR11)2和-OP(O)(OR11)2；
各R10独立地选自芳基、C3-C8环烷基、C3-C8杂环烷基和杂芳基，其中所述芳基、C3-C8环烷基、C3-C8杂环烷基和杂芳基可任选由1-3个取代基取代，所述取代基选自卤素、-R8、-OR8、-LR9、-LOR9、-N(R9)2、-NR9C(O)R8、-NR9CO2R8、-CO2R8、-C(O)R8和-C(O)N(R9)2；
R11和R12独立地选自H、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基，其中R11和R12的C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基各自可任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、-CN、R8、-OR8、-C(O)R8、-OC(O)R8、-C(O)OR8、-N(R9)2、-NR8C(O)R8、-NR8C(O)OR8、-C(O)N(R9)2、C3-C8杂环烷基、–S(O)2R8、-S(O)2N(R9)2、-NR9S(O)2R8、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基；
或者R11和R12各自独立为C1-C6烷基，并与所连接的N原子一起形成可任选取代的C3-C8杂环烷基环，该环可任选含有选自N、O和S的额外杂原子；
各R13独立地选自卤素、-CN、-LR9、-LOR9、-OLR9、-LR10、-LOR10、-OLR10、-LR8、-LOR8、-OLR8、-LSR8、-LSR10、-LC(O)R8、-OLC(O)R8、-LC(O)OR8、-LC(O)R10、-LOC(O)OR8、-LC(O)NR9R11、-LC(O)NR9R8、-LN(R9)2、-LNR9R8、-LNR9R10、-LC(O)N(R9)2、–LS(O)2R8、-LS(O)R8、-LC(O)NR8OH、-LNR9C(O)R8、-LNR9C(O)OR8、-LS(O)2N(R9)2、-OLS(O)2N(R9)2、-LNR9S(O)2R8、-LC(O)NR9LN(R9)2、-LP(O)(OR8)2、-LOP(O)(OR8)2、-LP(O)(OR10)2和-OLP(O)(OR10)2；
各RA独立地选自-R8、–R7、-OR7、-OR8、–R10、-OR10、-SR8、-NO2、-CN、-N(R9)2、-NR9C(O)R8、-NR9C(S)R8、-NR9C(O)N(R9)2、-NR9C(S)N(R9)2、-NR9CO2R8、-NR9NR9C(O)R8、-NR9NR9C(O)N(R9)2、-NR9NR9CO2R8、-C(O)C(O)R8、-C(O)CH2C(O)R8、-CO2R8、-(CH2)nCO2R8、-C(O)R8、-C(S)R8、-C(O)N(R9)2、-C(S)N(R9)2、-OC(O)N(R9)2、-OC(O)R8、-C(O)N(OR8)R8、-C(NOR8)R8、-S(O)2R8、-S(O)3R8、-SO2N(R9)2、-S(O)R8、-NR9SO2N(R9)2、-NR9SO2R8、-P(O)(OR8)2、-OP(O)(OR8)2、-P(O)(OR10)2、-OP(O)(OR10)2、-N(OR8)R8、-CH=CHCO2R8、-C(=NH)-N(R9)2和-(CH2)nNHC(O)R8；或结合环上两个相邻RA取代基形成含最多两个杂原子作为环成员的5-6元环；
各n独立地为0、1、2、3、4、5、6、7或8；
各m独立地选自1、2、3、4、5和6，以及
t为1、2、3、4、5、6、7或8。
在其他实施方式中，所述苯并萘啶化合物是结构式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA00002004804900251
式(II)
其中：
R4选自H、卤素、-C(O)OR7、-C(O)R7、-C(O)N(R11R12)、-N(R11R12)、-N(R9)2、-NHN(R9)2、-SR7、-(CH2)nOR7、-(CH2)nR7、-LR8、-LR10、-OLR8、-OLR10、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基，其中R4的C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基各自任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、-CN、-NO2、-R7、-OR8、-C(O)R8、-OC(O)R8、-C(O)OR8、-N(R9)2、-P(O)(OR8)2、-OP(O)(OR8)2、-P(O)(OR10)2、-OP(O)(OR10)2、-C(O)N(R9)2、-S(O)2R8、-S(O)R8、-S(O)2N(R9)2和-NR9S(O)2R8；
各L独立地选自键、-(O(CH2)m)t-、C1-C6烷基、C2-C6亚烯基和C2-C6亚炔基，其中L的C1-C6烷基、C2-C6亚烯基和C2-C6亚炔基各自可选取代有1-4个取代基，所述取代基独立地选自卤素、-R8、-OR8、-N(R9)2、-P(O)(OR8)2、-OP(O)(OR8)2、-P(O)(OR10)2和-OP(O)(OR10)2；
R7选自H、C1-C6烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C3-C8杂环烷基，其中R7的C1-C6烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C3-C8杂环烷基各自可任选由1-3个R13基团取代；
各R8独立地选自H、-CH(R10)2、C1-C8烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6杂烷基、C3-C8环烷基、C2-C8杂环烷基、C1-C6羟基烷基和C1-C6卤代烷氧基，其中R8的C1-C8烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C2-C8杂环烷基、C1-C6羟基烷基和C1-C6卤代烷氧基各自可任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自-CN、R11、-OR11、-SR11、-C(O)R11、-OC(O)R11、-C(O)N(R9)2、-C(O)OR11、-NR9C(O)R11、-NR9R10、-NR11R12、-N(R9)2、-OR9、-OR10、-C(O)NR11R12、-C(O)NR11OH、-S(O)2R11、-S(O)R11、-S(O)2NR11R12、-NR11S(O)2R11、-P(O)(OR11)2和-OP(O)(OR11)2；
各R9独立地选自H、-C(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)R10、-C(O)OR10、-S(O)2R10、-C1-C6烷基、C1-C6杂烷基和C3-C6环烷基，或各R9独立为与所连N一起形成C3-C8杂环烷基的C1-C6烷基，其中所述C3-C8杂环烷基环可任选含有选自N、O和S的额外杂原子，且其中R9的C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C3-C6环烷基或C3-C8杂环烷基可任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自-CN、R11、-OR11、-SR11、-C(O)R11、-OC(O)R11、-C(O)OR11、-NR11R12、-C(O)NR11R12、-C(O)NR11OH、-S(O)2R11、-S(O)R11、-S(O)2NR11R12、-NR11S(O)2R11、-P(O)(OR11)2和-OP(O)(OR11)2；
各R10独立地选自芳基、C3-C8环烷基、C3-C8杂环烷基和杂芳基，其中所述芳基、C3-C8环烷基、C3-C8杂环烷基和杂芳基可任选由1-3个取代基取代，所述取代基选自卤素、-R8、-OR8、-LR9、-LOR9、-N(R9)2、-NR9C(O)R8、-NR9CO2R8、-CO2R8、-C(O)R8和-C(O)N(R9)2；
R11和R12独立地选自H、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基，其中R11和R12的C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基各自可任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、-CN、R8、-OR8、-C(O)R8、-OC(O)R8、-C(O)OR8、-N(R9)2、-NR8C(O)R8、-NR8C(O)OR8、-C(O)N(R9)2、C3-C8杂环烷基、-S(O)2R8、-S(O)2N(R9)2、-NR9S(O)2R8、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基；
或者R11和R12各自独立为C1-C6烷基，并与所连接的N原子一起形成可任选取代的C3-C8杂环烷基环，该环可任选含有选自N、O和S的额外杂原子；
各R13独立地选自卤素、-CN、-LR9、-LOR9、-OLR9、-LR10、-LOR10、-OLR10、-LR8、-LOR8、-OLR8、-LSR8、-LSR10、-LC(O)R8、-OLC(O)R8、-LC(O)OR8、-LC(O)R10、-LOC(O)OR8、-LC(O)NR9R11、-LC(O)NR9R8、-LN(R9)2、-LNR9R8、-LNR9R10、-LC(O)N(R9)2、–LS(O)2R8、-LS(O)R8、-LC(O)NR8OH、-LNR9C(O)R8、-LNR9C(O)OR8、-LS(O)2N(R9)2、-OLS(O)2N(R9)2、-LNR9S(O)2R8、-LC(O)NR9LN(R9)2、-LP(O)(OR8)2、-LOP(O)(OR8)2、-LP(O)(OR10)2和-OLP(O)(OR10)2；
RA选自-R8、–R7、-OR7、-OR8、–R10、-OR10、-SR8、-NO2、-CN、-N(R9)2、-NR9C(O)R8、-NR9C(S)R8、-NR9C(O)N(R9)2、-NR9C(S)N(R9)2、-NR9CO2R8、-NR9NR9C(O)R8、-NR9NR9C(O)N(R9)2、-NR9NR9CO2R8、-C(O)C(O)R8、-C(O)CH2C(O)R8、-CO2R8、-(CH2)nCO2R8、-C(O)R8、-C(S)R8、-C(O)N(R9)2、-C(S)N(R9)2、-OC(O)N(R9)2、-OC(O)R8、-C(O)N(OR8)R8、-C(NOR8)R8、-S(O)2R8、-S(O)3R8、-SO2N(R9)2、-S(O)R8、-NR9SO2N(R9)2、-NR9SO2R8、-P(O)(OR8)2、-OP(O)(OR8)2、-P(O)(OR10)2、-OP(O)(OR10)2、-N(OR8)R8、-CH=CHCO2R8、-C(=NH)-N(R9)2和-(CH2)nNHC(O)R8；
各n独立地为0、1、2、3、4、5、6、7或8；
各m独立地选自1、2、3、4、5和6，以及
t为1、2、3、4、5、6、7或8。
在式(I)或式(II)苯并萘啶化合物的某些实施方式中，各R13独立地选自卤素、-CN、-LR9、-LOR9、-OLR9、-LR10、-LOR10、-OLR10、-LR8、-LOR8、-OLR8、-LSR8、-LSR10、-LC(O)R8、-OLC(O)R8、-LC(O)OR8、-LC(O)R10、-LOC(O)OR8、-LC(O)NR9R11、-LC(O)NR9R8、-LN(R9)2、-LNR9R8、-LNR9R10、-LC(O)N(R9)2、LS(O)2R8、-LS(O)R8、-LC(O)NR8OH、-LNR9C(O)R8、-LNR9C(O)OR8、-LS(O)2N(R9)2、-OLS(O)2N(R9)2、-LNR9S(O)2R8、-LC(O)NR9LN(R9)2、-LP(O)(OR8)2、-LOP(O)(OR8)2、-LP(O)(OR10)2和-OLP(O)(OR10)2，且各RA独立地选自-R7、-OR7、-R8、-OR8、R10、-OR10、-SR8、-N(R9)2、-S(O)2R8、-S(O)3R8、-SO2N(R9)2、-S(O)R8、-NR9SO2N(R9)2、-CH=CHCO2R8、(CH2)nCO2R8、-NR9SO2R8、-P(O)(OR8)2、-OP(O)(OR8)2、-P(O)(OR10)2和-OP(O)(OR10)2。
在式(I)或式(II)苯并萘啶化合物的某些实施方式中，各L独立地选自-(O(CH2)m)t-和C1-C6烷基，其中L的C1-C6烷基可选取代有1-4个取代基，所述取代基独立地选自卤素、-R8、-OR8、-N(R9)2、-P(O)(OR8)2、-OP(O)(OR8)2、-P(O)(OR10)2和-OP(O)(OR10)2。
在式(I)或式(II)苯并萘啶化合物的某些实施方式中，RA是H或C1-C6烷基。
式(I)或式(II)的苯并萘啶化合物的某些实施方式中，RA是H、-CH3或-CH2CH3；且各R13独立地选自H、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-CH2OH、-OCH3、-COOCH3、-COOCH2CH3、F、Cl、Br、-CH2OCH3、CH2OCH2CH3、-N(CH3)2、-((O(CH2)2)2-4OH、-O(CH2)2-4-OH、-O(CH2)2-4-(PO3H2)、-O(CH2)2-4-COOH、-O(CH2)2-4-CH(CH3)2和取代有1-3个取代基的C2-C6烷基，所述取代基选自-OH、-CH3、-COOH、-COOCH3、环丙基、-O(CH2)2-4-COOH、-O(CH2)2-4(PO3H2)、和-COOCH2CH3。
在式(I)或式(II)苯并萘啶化合物的某些实施方式中，各R8独立地选自H、-CH(R10)2、C1-C8烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6杂烷基、C3-C8环烷基、C2-C8杂环烷基、C1-C6羟基烷基和C1-C6卤代烷氧基，其中R8的C1-C8烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C2-C8杂环烷基、C1-C6羟基烷基和C1-C6卤代烷氧基各自可选取代有1-3个取代基，所述取代基独立地选自-CN、R11、-OR11、-SR11、-C(O)R11、-OC(O)R11、-C(O)N(R9)2、-C(O)OR11、-NR9C(O)R11、-NR9R10、-NR11R12、-N(R9)2、-OR9、-OR10、-C(O)NR11R1、-C(O)NR11OH、-S(O)2R11、-S(O)R11、-S(O)2NR11R12、-NR11S(O)2R11、-P(O)(OR11)2和-OP(O)(OR11)2。
式(I)或式(II)苯并萘啶化合物的某些实施方式中，R8是H或C1-C6烷基。
在式(I)或式(II)苯并萘啶化合物的某些实施方式中，R9是H或C1-C6烷基。
在式(I)或式(II)苯并萘啶化合物的某些实施方式中，RA是H或CH3。
在式(I)或式(II)苯并萘啶化合物的某些实施方式中，R4是H。
在某些实施方式中，苯并萘啶化合物选自：
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇；
2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；
2-(2,4-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯；
2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；
和2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。
式(I)或式(II)苯并萘啶化合物能使用合适方法制备，例如WO 2009/111337公开的方法，其全部内容通过引用纳入本文。普通技术人员定向参考公开方案1-XIX的WO 2009/111337第71-83页，所述方案是适合生成式(I)或式(II)化合物的示例性方案。
本文提供的式(I)或式(II)化合物、药学上可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体，以及药物组合物也包括此类化合物、其药学上可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体，以及药物组合物的所有合适同位素变化。本发明提供的化合物或其药学上可接受盐的同位素变化定义为其中至少一个原子被与天然条件下通常所发现原子的原子编号相同、但原子量不同的原子替代。可掺入本文所提供化合物及其药学上可接受盐的同位素示例包括但不限于氢、碳、氮和氧的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、35S、18F、36Cl和123I。本文提供的化合物及其药学上可接受盐的某些同位素变化，如掺有放射性同位素如3H或14C，可用于药物和/或底物的组织分布研究。在具体示例中，3H和14C同位素可因其易于制备和检测而使用。在其他示例中，用同位素如2H取代可提供某些治疗优势，产生更好的代谢稳定性，例如提高体内半衰期或降低剂量需求。本文所提供的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体以及药物组合物的同位素变化利用合适试剂的适当同位素变化通过常规方法制备。
4.免疫增强和免疫原性组合物
本文所述SMIP的均匀悬液，即式I或式II化合物，能用作免疫增强剂。式I或式II化合物包括疏水核心，并且均匀悬液提供能将有效量SMIP方便地给予需要其的对象的优点。
一方面，发明是增强免疫反应的方法，包括将有效量的发明均匀悬液给予需要其的对象。免疫反应能是自然发生的免疫反应，或诱导免疫反应，例如由免疫作用诱导。当给予均匀悬液以增强诱导免疫反应时，优选与诱导免疫反应的试剂基本同时给予。例如，有效量的均匀悬浮物能与免疫原性组合物或疫苗同时给予，或在给予免疫原性组合物或疫苗之前或之后约1天时间内给予。
另一方面，发明提供免疫原性组合物，包括抗原和SMIP均匀悬液，即式I或式II的化合物。在某些实施方式中，免疫原性组合物还包含其他免疫刺激试剂，例如佐剂。免疫原性组合物能包括任何所需抗原和/或佐剂。例如，本文所述免疫原性组合物能包括细菌抗原，细菌囊泡抗原，病毒抗原，真菌抗原，原生动物抗原，植物抗原，STD抗原，呼吸性抗原，儿童疫苗抗原，适合老年或免疫受损个体的抗原，适用于青少年疫苗的抗原，或肿瘤抗原。本文所述免疫原性组合物也能包括佐剂（如明矾，MF59）。
在某些实施方式中，免疫原性组合物包括足以增强对抗原免疫反应的均匀组合物量。所述免疫原性组合物能用于生成疫苗。在某些实施方式中，疫苗为预防性的（即防止感染），而在其他实施方式中，所述疫苗为治疗性的（即治疗感染）。
本文所述免疫刺激效应通常是增强免疫原性组合物效应。在某些实施方式中，相对于没有SMIP均匀悬液的免疫原性组合物的效果，免疫原性组合物功效增强至少约10%，至少约20%，至少约30%，至少约40%，至少约50%，至少约60%，至少约70%，至少约80%，至少约90%，或至少约100%。
在某些实施方式中，用免疫原性组合物实现其保护效应的有效性增加来测量所述免疫原性组合物效应的增强。在某些实施方式中，所述增加的有效性测量为接受该免疫原性组合物的对象经历病症的概率降低，或所述病症效应的持续时间或严重性降低，其中该免疫原性组合物被认为对所述病症有保护性。在其他实施方式中，该增加的有效性测量为处理对象中该免疫原性组合物引起的抗体效价增加。
所述免疫原性组合物还包含药学可接受的载体。所述载体包括但不限于蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、氨基酸共聚物、蔗糖、海藻糖、乳糖、脂质聚集体(如油滴或脂质体)和灭活的病毒颗粒。所述免疫原性组合物通常还包含稀释剂，如水、盐水、和甘油，且任选地含其他赋形剂如湿润剂或乳化剂和pH缓冲液物质。
(a)佐剂
在某些实施方式中，所述免疫原性组合物任选包括一种或多种免疫调节剂。在某些实施方式中，一种或多种免疫调节剂包括一种或多种佐剂。所述佐剂包括但不限于TH1佐剂和/或TH2佐剂，其在下文中进一步讨论。在某些实施方式中，用于本文所提供免疫原性组合物的佐剂包括但不限于：
1.含矿物质的组合物；
2.油乳剂；
3.皂苷制剂；
4.病毒体和病毒样颗粒；
5.细菌或微生物衍生物；
6.人免疫调节剂；
7.生物粘着剂和粘膜粘着剂；
8.微粒；
9.脂质体；
10.聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯制剂；
11.聚磷腈(PCPP)；
12.胞壁酰肽，和
13.咪唑并喹诺酮化合物。
适用作佐剂的含矿物质的组合物包括但不限于矿物盐，例如铝盐和钙盐。仅举例来说，所述矿物盐包括氢氧化物（例如，羟基氧化物，包括氢氧化铝和羟基氧化铝）、磷酸盐（例如，羟基磷酸盐和正磷酸盐，包括磷酸铝、羟基磷酸铝、正磷酸铝和磷酸钙）、硫酸盐（例如硫酸铝）、或不同矿物化合物的混合物。所述矿物盐为任何合适的形式，仅举例来说如凝胶、晶体和无定形形式。在某些实施方式中，所述含矿物质的组合物制备为矿物盐颗粒。在某些实施方式中，本文所述免疫原性组合物的组分吸附到所述矿物盐中。在某些实施方式中，氢氧化铝和/或磷酸铝佐剂用在本文所述免疫原性组合物中。在其他实施方式中，本文所述免疫原性组合物中使用的抗原吸附到所述氢氧化铝和/或磷酸铝佐剂中。在某些实施方式中，磷酸钙佐剂用在本文所述免疫原性组合物中。在其他实施方式中，本文所述免疫原性组合物中使用的抗原吸附到所述磷酸钙佐剂中。
在某些实施方式中，磷酸铝在本文所述免疫原性组合物中用作佐剂。在其他实施方式中，磷酸铝在本文所述免疫原性组合物中用作佐剂，其中所述组合物包括流感嗜血杆菌（H.influenzae）糖抗原。在某些实施方式中，所述佐剂是PO4/Al摩尔比为0.84-0.92的无定形的羟基磷酸铝，包含0.6mg Al3+/ml。在其他实施方式中，采用低剂量磷酸铝吸附，仅举例来说为每剂量50-100μg Al3+/偶联物。当组合物中含有一种以上偶联物时，不需要吸附所有偶联物。
适用作佐剂的油乳剂包括但不限于角鲨烯-水乳剂，如MF59（5%角鲨烯、0.5%吐温80和0.5%司盘85，用微流化床配制成亚微米颗粒)、完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)。
皂苷是在许多种类植物的树皮、叶、茎干、根甚至花中发现的甾醇糖苷和三萜糖苷的异质群体。适用作佐剂的皂苷制剂包括但不限于来自皂树(Quillaiasaponaria)Molina树皮、来自丽花菝葜(Smilax ornata)(墨西哥菝葜)、满天星(Gypsophilla paniculata)(婚纱花)和肥皂草(Saponaria officianalis)(皂根)的皂苷。在某些实施方式中，适用作佐剂的皂苷制剂包括但不限于纯化制剂，其包括但不限于QS7、QS17、QS18、QS21、QH-A、QH-B和QH-C。QS21作为STIMULOMTM市售。在其他实施方式中，皂苷制剂包括固醇、胆固醇和脂质制剂，例如由皂苷和胆固醇的组合所形成的称为免疫刺激复合物(ISCOM)的独特颗粒。在某些实施方式中，ISCOM还包含磷脂，如磷脂酰乙醇胺或磷脂酰胆碱。任何已知的皂苷均可用于ISCOM中。在某些实施方式中，ISCOM包含QuilA、QHA和QHC中的一种或多种。在其他实施方式中，ISCOMS可选不含其他去污剂。
适用作佐剂的病毒体和病毒样颗粒(VLP)包括但不限于来自病毒的一种或多种蛋白，可选与磷脂联用或一同配制。此类病毒体和VLP通常无病原性，非复制，且通常不含任何天然病毒基因组。在某些实施方式中，病毒蛋白重组生成，而其他实施方式中，病毒蛋白分离自全病毒。
适用于病毒体或VLP的病毒蛋白包括但不限于来自流感病毒（例如HA或NA）、乙肝病毒（例如核心蛋白或衣壳蛋白）、戊肝病毒、麻疹病毒、辛德比斯病毒、轮状病毒、口蹄疫病毒、逆转录病毒、诺沃克病毒、人乳头状瘤病毒、HIV、RNA-噬菌体、Q□-噬菌体（如外壳蛋白）、GA-噬菌体、fr-噬菌体、AP205噬菌体和Ty（如反转录转座子Ty蛋白p1）的蛋白。
适用作佐剂的细菌或微生物衍生物包括但不限于细菌或微生物衍生物如肠细菌脂多糖(LPS)的无毒衍生物、脂质A衍生物、免疫刺激性寡核苷酸和ADP-核糖基化毒素及其脱毒衍生物。这类LPS的无毒衍生物包括但不限于单磷酰脂质A(MPL)和3-O-脱酰基MPL(3dMPL)。3dMPL是3脱-O-酰基单磷酰脂质A与4、5或6条酰化链的混合物。其它无毒LPS衍生物包括单磷酰脂质A模拟物，如氨烷基氨基葡萄糖苷磷酸盐衍生物(例如RC-529)。脂质A衍生物包括但不限于来自大肠杆菌（Escherichia coli）的脂质A衍生物（如OM-174）。
用作佐剂的免疫刺激性寡核苷酸包括但不限于含CpG基序（含有通过磷酸键与鸟苷连接的非甲基化胞嘧啶的二核苷酸序列）的核苷酸序列。此类CpG序列可以是双链或单链。在某些实施方式中，此类核苷酸序列为含回文结构或聚(dG)序列的双链RNA或寡核苷酸。在其他实施方式中，CpG包含核苷酸修饰/类似物如硫代磷酸酯修饰。
在某些实施方式中，CpG序列指向TLR9，而在某些实施方式中，所述基序为GTCGTT或TTCGTT。在某些实施方式中，CpG序列特异性诱导Th1免疫应答，仅举例来说如CpG-A ODN，或在其他实施方式中，CpG序列更特异性诱导B细胞应答，仅举例来说如CpG-B ODN。在某些实施方式中，CpG是CpG-A ODN。
在某些实施方式中，构建CpG寡核苷酸使其5’末端可为受体所识别。在其他实施方式中，可选将两个CpG寡核苷酸序列的3’末端相连接形成“免疫聚体”。
基于免疫刺激性寡核苷酸的特别有用佐剂称为IC-31TM。在某些实施方式中，用于本文所述免疫原性组合物的佐剂包含(i)和(ii)的混合物：(i)含有至少一个（优选多个）CpI基序（仅举例来说，如胞嘧啶与肌苷相连形成二核苷酸）的寡核苷酸（仅举例来说，如15-40个核苷酸），和(ii)聚阳离子聚合物，仅举例来说如含有至少一个（优选多个）Lys-Arg-Lys三肽序列的寡肽（仅举例来说，如5-20个氨基酸）。在某些实施方式中，所述寡核苷酸是包含26聚体序列5'-(IC)13-3'的脱氧核苷酸。在其他实施方式中，所述聚阳离子聚合物是含有11-聚体氨基酸序列KLKLLLLLKLK的肽。
在某些实施方式中，细菌ADP-核糖基化毒素及其脱毒衍生物用作本文所述免疫原性组合物中的佐剂。在某些实施方式中，此类蛋白衍生自大肠杆菌(大肠杆菌不耐热肠毒素“LT”)、霍乱(“CT”)或百日咳(“PT”)菌。在其他实施方式中，所述毒素或类毒素为全毒素形式，包含A和B亚单位。在其他实施方式中，A亚单位含有脱毒突变；而B亚单位未突变。在其他实施方式中，所述佐剂为脱毒的LT突变体，如LT-K63、LT-R72和LT-G192。
适用作佐剂的人免疫调节剂包括但不限于：细胞因子，仅举例来说如白介素(IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12等)、干扰素(如仅举例来说，干扰素-□)、巨噬细胞集落刺激因子和肿瘤坏死因子。
用作本文所述免疫原性组合物中佐剂的生物粘着剂和粘膜粘着剂包括但不限于：酯化的透明质酸微球和聚丙烯酸、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖和羧甲基纤维素的交联衍生物。在某些实施方式中，壳聚糖及其衍生物用作本文所述疫苗组合物中的佐剂。
适用作佐剂的微粒包括但不限于可生物降解的和无毒的材料（如聚α-羟基酸、多羟基丁酸、聚原酸酯、聚酐、聚己内酯等）和聚乙丙交酯共聚物形成的微粒。在某些实施方式中，处理所述微粒以具有带负电表面（如用SDS）或带正电表面（如用阳离子去污剂如CTAB）。适用作佐剂的微粒具有约100nm-约150μm的粒径。在某些实施方式中，所述粒径为约200nm-约30μm，且在其他实施方式中所述粒径为约500nm-10μm。
适用作佐剂的聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯制剂包括但不限于聚氧乙烯去水山梨糖醇酯表面活性剂和辛苯糖醇的组合，以及聚氧乙烯烷基醚或酯表面活性剂和至少一种其它非离子表面活性剂如辛苯糖醇的组合。在某些实施方式中，聚氧乙烯醚选自聚氧乙烯-9-月桂醚（月桂醇聚醚9）、聚氧乙烯-9-硬脂醚、聚氧乙烯-8-硬脂醚、聚氧乙烯-4-月桂醚、聚氧乙烯-35-月桂醚和聚氧乙烯-23-月桂醚。
适用作佐剂的胞壁酰肽包括但不限于N-乙酰基-胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺（thr-MDP）、N-乙酰基-正胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺（去甲-MDP）和N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺酰-L-丙氨酸-2-(1'-2'-二棕榈酰-s-n-甘油-3-羟基磷酰氧基)-乙胺MTP-PE）。
在某些实施方式中，用作免疫增强剂的一种或多种式(I)化合物包括在具有一种或多种上述已鉴定佐剂组合的组合物中。所述组合包括但不限于：
(1)皂苷和水包油乳液；
(2)皂苷（例如QS21）+无毒LPS衍生物（例如3dMPL）；
(3)皂苷（例如QS21）+无毒LPS衍生物（例如3dMPL）+胆固醇；
(4)皂苷（例如QS21）+3dMPL+IL-12（任选包括固醇）；
(5)3dMPL与例如QS21和/或水包油乳液的组合；
(6)SAF，含10%角鲨烷、0.4%吐温80.TM、5%普流罗尼克嵌段聚合物L121和thr-MDP，微流化形成亚微米乳液或涡旋形成较大粒度的乳液；
(7)RIBITM佐剂系统(RAS)（瑞比免疫化学公司（Ribi Immunochem）），含2%角鲨烯、0.2%吐温80和一种或多种细菌细胞壁组分，所述细胞壁组分由单磷酰脂质A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和细胞壁骨架(CWS)组成，优选MPL+CWS(DetoxTM)；和
(8)一种或多种无机盐（如铝盐）+无毒LPS衍生物（如3dMPL）。
在其他实施方式中，用于本文所提供免疫原性组合中的佐剂组合包括Th1和Th2佐剂的组合，例如（仅示例性）CpG和明矾或雷西莫特和明矾。
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物引起细胞介导的免疫应答以及体液免疫应答。在其他实施方式中，所述免疫应答诱导接触感染剂时迅速响应的持久性(如中和性)抗体和细胞介导的免疫。
TH1佐剂可用于引发TH1免疫应答。相对于不用佐剂的抗原免疫，TH1佐剂通常引起IgG2a生成水平增加。适用于本文提供的免疫原性组合物的TH1佐剂包括但不限于：皂苷制剂、病毒体和病毒样颗粒、肠细菌脂多糖(LPS)的无毒衍生物、免疫刺激性寡核苷酸。在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物中用作TH1佐剂的免疫刺激性寡核苷酸含CpG基序。
TH2佐剂可用于引发TH2免疫应答。相对于不用佐剂的抗原免疫，TH2佐剂通常引起IgG1生成水平增加。适用于本文所提供免疫原性组合物中的TH2佐剂包括但不限于：含矿物质组合物、油乳剂和ADP-核糖基化毒素和其脱毒衍生物。在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物中用作TH2佐剂的含矿物质组合物为铝盐。
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含TH1佐剂和TH2佐剂。在其他实施方式中，这种组合物引起增强的TH1和增强的TH2应答，如IgG1和IgG2a的生成相对于不用佐剂的免疫均有增加。在其他实施方式中，相对于用单一佐剂的免疫(即，相对于只用TH1佐剂的免疫或只用TH2佐剂的免疫)，这种包含TH1和TH2佐剂组合的组合物引起TH1和/或TH2免疫应答增强。
在某些实施方式中，所述免疫应答可以是TH1免疫应答和TH2免疫应答之一或两种。在其他实施方式中，所述免疫应答提供增强的TH1应答和增强的TH2应答之一或两种。
在某些实施方式中，增强的免疫应答是全身和粘膜免疫应答之一或两种。在其他实施方式中，该免疫应答提供增强的全身免疫应答和增强的粘膜免疫应答之一或两种。在某些实施方式中，粘膜免疫应答是TH2免疫应答。在某些实施方式中，粘膜免疫应答包括IgA生成增加。
(b)抗原
在某些实施方式中，免疫原性组合物包括至少一种抗原，其可为细菌抗原或癌症相关抗原或病毒抗原。在某些实施方式中，本文提供的均匀悬液包括在预防性疫苗中或与之联用。在某些实施方式中，本文提供的均匀悬液包括在治疗性病毒疫苗中，或与之联用。在某些实施方式中，本文提供的均匀悬液包括在癌症疫苗中，或与之联用。
与本文提供的免疫原性组合物一起使用的抗原包括但不限于一种或多种下列抗原，或衍生自一种或多种下列病原体的抗原。
细菌抗原
适用于本文提供的免疫原性组合物的细菌抗原包括但不限于从细菌分离、纯化或衍生的蛋白质、多糖、脂多糖和外膜囊泡。在某些实施方式中，细菌抗原包括细菌裂解物和灭活的细菌制剂。在某些实施方式中，细菌抗原由重组表达制得。在某些实施方式中，细菌抗原包括在细菌生命周期的至少一个阶段中暴露于细菌表面的表位。细菌抗原优选在多种血清型之间具有保守性。在某些实施方式中，细菌抗原包括衍生自一种或多种下述细菌的抗原以及以下鉴定的特定抗原例子：
脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)：脑膜炎球菌抗原可包括但不限于纯化或衍生自脑膜炎奈瑟球菌血清群如A、C、W135、Y、X和/或B的蛋白质，糖(包括多糖、寡糖、脂寡糖或脂多糖)或外膜囊泡。在某些实施方式中，脑膜炎蛋白质抗原选自粘附蛋白、自身转运蛋白、毒素、摄铁蛋白和膜相关蛋白（优选完整的外膜蛋白）。
肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)：肺炎链球菌抗原包括但不限于来自肺炎链球菌的糖（包括多糖或寡糖）和/或蛋白质。糖可以是多糖，其大小是在从细菌纯化该糖时形成，或者可以是这种多糖片段化产生的寡糖。例如，在7价PREVNARTM产品中，6种糖是完整多糖，而一种(18C血清型)是寡糖。在某些实施方式中，糖抗原选自下列肺炎球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和/或33F中的一种或多种。免疫原性组合物可包含多种血清型，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多种血清型。本领域已知7价、9价、10价、11价和13价偶联物组合，也了解23价非偶联组合。例如，10价组合可包含来自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F的糖。11价组合还可包含来自血清型3的糖。12价组合可加入10价混合物：血清型6A和19A；6A和22F；19A和22F；6A和15B；19A和15B；r 22F和15B；13价组合可加入11价混合物：血清型19A和22F；8和12F；8和15B；8和19A；8和22F；12F和15B；12F和19A；12F和22F；15B和19A；15B和22F；等等。在某些实施方式中，蛋白抗原可选自下列文献鉴定的蛋白质：WO98/18931、WO98/18930、美国专利6,699,703、美国专利6,800,744、WO97/43303、WO97/37026、WO 02/079241、WO 02/34773、WO 00/06737、WO 00/06738、WO 00/58475、WO 2003/082183、WO 00/37105、WO 02/22167、WO 02/22168、WO 2003/104272、WO 02/08426、WO 01/12219、WO 99/53940、WO 01/81380、WO 2004/092209、WO 00/76540、WO 2007/116322、LeMieux等，Infect.Imm.(2006)74:2453-2456，Hoskins等，J.Bacteriol.(2001)183:5709-5717，Adamou等，Infect.Immun.(2001)69(2):949-958，Briles等，J.Infect.Dis.(2000)182:1694-1701，Talkington等，Microb.Pathog.(1996)21(1):17-22，Bethe等，FEMS Microbiol.Lett.(2001)205(1):99-104,Brown等，Infect.Immun.(2001)69:6702-6706，Whalen等，FEMSImmunol.Med.Microbiol.(2005)43:73-80，Jomaa等，Vaccine(2006)24(24):5133-5139。在其他实施方式中，肺炎链球菌蛋白可选自聚组氨酸三聚体家族（PhtX）、胆碱结合蛋白家族（CbpX）、CbpX截短物、LytX家族、LytX截短物、CbpX截短物-LytX截短物嵌合蛋白、肺炎链球菌溶血素（Ply）、PspA、PsaA、Sp128、SpIO1、Sp130、Sp125、Sp133、肺炎球菌菌毛亚基。
酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)(A群链球菌)：A群链球菌抗原包括但不限于WO 02/34771或WO 2005/032582中鉴定的蛋白质(包括GAS40)、GASM蛋白片段的融合物(包括WO 02/094851和Dale,Vaccine(1999)17:193-200与Dale,Vaccine 14(10):944-948所述融合物)、纤连蛋白结合蛋白(Sfb1)、链球菌血红素相关蛋白(Shp)和链球菌素S(SagA)。
粘膜炎莫拉菌(Moraxella catarrhalis)：莫拉菌抗原包括但不限于WO02/18595和WO 99/58562中鉴定的抗原、外膜蛋白抗原（HMW-OMP）、C-抗原和/或LPS。
百日咳博德特菌(Bordetella pertussis)：百日咳抗原包括但不限于来自百日咳博德特菌(B.pertussis)的百日咳全毒素（PT）和丝状血凝素（FHA），还可选与百日咳杆菌粘附素和/或凝集原2和3联用。
伯克霍尔德氏菌(Burkholderia)：伯克霍尔德氏菌抗原包括但不限于鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia mallei)、鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapseudomallei)和洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)：金葡菌抗原包括但不限于来自金黄色葡萄球菌（S.aureus）的多糖和/或蛋白。金黄色葡萄球菌多糖包括但不限于5型和8型荚膜多糖(CP5和CP8)，可选与无毒重组绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A偶联，如StaphVAXTM、336型多糖(336PS)、多糖胞内粘附素(PIA，也称为PNAG)。金黄色葡萄球菌蛋白包括但不限于：衍生自表面蛋白的抗原，侵袭素(杀白细胞素、激酶、透明质酸酶)，抑制吞噬细胞吞噬的表面因子(荚膜、蛋白质A)，类胡萝卜素，过氧化氢酶产生，蛋白质A，凝固酶，凝血因子和/或裂解真核细胞膜的膜损伤性毒素(可选经脱毒)(溶血素、白细胞毒素、杀白细胞素)。在某些实施方式中，金黄色葡萄球菌抗原可选自以下文献鉴定的蛋白：WO 02/094868、WO 2008/019162、WO 02/059148、WO 02/102829、WO 03/011899、WO 2005/079315、WO 02/077183、WO99/27109、WO 01/70955、WO 00/12689、WO 00/12131、WO 2006/032475、WO 2006/032472、WO 2006/032500、WO 2007/113222、WO 2007/113223、WO2007/113224。在其他实施方式中，金黄色葡萄球菌抗原可选自IsdA、IsdB、IsdC、SdrC、SdrD、SdrE、ClfA、ClfB、SasF、SasD、SasH(AdsA)、Spa、EsaC、EsxA、EsxB、Emp、HlaH35L、CP5、CP8、PNAG、336PS。
表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermis)：表皮葡萄球菌（S.epidermidis）抗原包括但不限于黏液相关性抗原(SAA)。
破伤风梭菌(Clostridium tetani)(破伤风)：破伤风抗原包括但不限于破伤风类毒素(TT)。在某些实施方式中，此类抗原用作载体蛋白与本文提供的免疫原性组合物结合/偶联。
产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)：抗原包括但不限于来自产气荚膜梭菌的ε毒素。
肉毒梭菌(Clostridium botulinums)(肉毒杆菌中毒)：肉毒杆菌中毒抗原包括但不限于衍生自肉毒梭菌（C.botulinum）的抗原。
白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheriae)(白喉)：白喉抗原包括但不限于白喉毒素，优选经脱毒，如CRM197。此外，考虑将能够调节、抑制ADP核糖基化或与其相关的其它抗原与本文提供的免疫原性组合物联合/共同给予/结合。在某些实施方式中，白喉类毒素用作载体蛋白。
B型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzaeB)(Hib)：Hib抗原包括但不限于Hib糖抗原。
绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)：假单胞菌抗原包括但不限于内毒素A、Wzz蛋白、绿脓假单胞菌(P.aeruginosa)LPS、分离自PAO1(O5血清型)的LPS，和/或外膜蛋白，包括外膜蛋白F(OprF)。
嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)。细菌抗原衍生自嗜肺军团菌。
贝氏柯克斯体(Coxiella burnetti)。细菌抗原衍生自贝氏柯克斯体。
布鲁氏菌(Brucella)。细菌抗原衍生自布鲁氏菌，包括但不限于牛种布鲁氏菌(B.abortus)、犬种布鲁氏菌(B.canis)、羊种布鲁氏菌(B.melitensis)、沙林鼠种布鲁氏菌(B.neotomae)、绵羊种布鲁氏菌(B.ovis)、猪种布鲁氏菌(B.suis)和海豹种布鲁氏菌(B.pinnipediae)。
弗朗西斯氏菌(Francisella)。细菌抗原衍生自弗朗西斯氏菌，包括但不限于新凶手弗朗西斯氏菌(F.novicida)、蜃楼弗朗西斯氏菌(F.philomiragia)和土拉热弗朗西斯氏菌(F.tularensis)。
无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)(B群链球菌)：B群链球菌抗原包括但不限于WO 02/34771、WO 03/093306、WO 04/041157或WO 2005/002619中鉴定的蛋白质或糖抗原（包括蛋白质GBS 80、GBS 104、GBS 276或GBS 322，且包括衍生自血清型Ia、Ib、Ia/c、II、III、IV、V、VI、VII和VIII的糖抗原）。
淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhoeae)：淋病抗原包括但不限于Por蛋白（或膜孔蛋白）如PorB（参见Zhu等,Vaccine(2004)22:660-669）、转移结合蛋白如TbpA和TbpB（参见Price等,Infection and Immunity(2004)71(1):277–283）、混浊蛋白（如Opa）、可修饰还原蛋白（Rmp）和外膜囊泡（OMV）制备物（参见Plante等,J.Infectious Disease 182,848-855,2000；另参见例如WO99/24578、WO99/36544、WO99/57280、WO02/079243）。
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)：沙眼衣原体抗原包括但不限于衍生自血清型A、B、Ba和C(沙眼病原体，引起失明)，血清型L1、L2和L3(与性病淋巴肉芽肿有关)和血清型D-K的抗原。在某些实施方式中，沙眼衣原体抗原包括但不限于WO 00/37494、WO 03/049762、WO 03/068811或WO 05/002619中鉴定的抗原，包括PepA(CT045)、LcrE(CT089)、ArtJ(CT381)、DnaK(CT396)、CT398、OmpH-样(CT242)、L7/L12(CT316)、OmcA(CT444)、AtosS(CT467)、CT547、Eno(CT587)、HrtA(CT823)和MurG(CT761)。
苍白密螺旋体(Treponema pallidum)(梅毒)：梅毒抗原包括但不限于TmpA糖抗原。
杜氏嗜血菌(Haemophilus ducreyi)(引起软下疳)：杜氏嗜血菌抗原包括但不限于外膜蛋白(DsrA)。
粪肠球菌(Enterococcus faecalis)或屎肠球菌(Enterococcus faecium)：抗原包括但不限于三糖重复或其他肠球菌衍生抗原。
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)：幽门螺杆菌抗原包括但不限于Cag、Vac、Nap、HopX、HopY和/或脲酶抗原。
腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)：抗原包括但不限于腐生葡萄球菌（S.saprophyticus）抗原的160kDa血凝素。
小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）抗原包括但不限于LPS。
大肠杆菌（E.coli）：大肠杆菌抗原可衍生自肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠聚集性大肠杆菌（EAggEC）、弥散粘附性大肠杆菌（DAEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠外致病性大肠杆菌（ExPEC）和/或肠出血性大肠杆菌（EHEC）。ExPEC抗原包括但不限于辅助定居因子(orf3526)、orf353、细菌Ig-样结构域(1型)蛋白(orf405)、orf1364、NodT族外膜因子脂蛋白流出转运蛋白(orf1767)、gspK(orf3515)、gspJ(orf3516)、tonB-依赖性铁载体受体(orf3597)、菌毛蛋白(orf3613)、upec-948、upec-1232、1型菌毛蛋白的A链前体(upec-1875)、yap H同源物(upec-2820)和溶血素A(recp-3768)。
炭疽杆菌(Bacillus anthracis)(炭疽)：炭疽杆菌（B.anthracis）抗原包括但不限于A组分(致死因子(LF)和水肿因子(EF))，二者共有称为保护性抗原(PA)的B组分。在某些实施方式中，炭疽杆菌抗原可选经脱毒。
鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)(鼠疫)：鼠疫抗原包括但不限于F1荚膜抗原、LPS、鼠疫耶尔森菌V抗原。
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)：结核病抗原包括但不限于脂蛋白、LPS、BCG抗原、抗原85B(Ag85B)的融合蛋白、可选配制入阳离子脂质囊泡中的ESAT-6、结核分枝杆菌(Mtb)异柠檬酸脱氢酶相关抗原和MPT51抗原。
立克次体(Rickettsia)：抗原包括但不限于外膜蛋白，包括外膜蛋白A和/或B(OmpB)，LPS和表面蛋白抗原(SPA)。
单核细胞增生利斯特菌(Listeria monocytogenes)：细菌抗原包括但不限于衍生自单核细胞增生利斯特菌的抗原。
肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)：抗原包括但不限于WO 02/02606中鉴定的抗原。
霍乱弧菌(Vibrio cholerae)：抗原包括但不限于蛋白酶抗原、LPS，具体是霍乱弧菌II脂多糖、O1群稻叶型O（O1Inaba O）特异性多糖、霍乱弧菌(V.cholerae)O139、IEM108疫苗抗原和封闭带毒素(Zot)。
鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhi)(伤寒)：抗原包括但不限于荚膜多糖，优选偶联物(Vi，即vax-TyVi)。
布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)(莱姆病)：抗原包括但不限于脂蛋白(如OspA、OspB、OspC和OspD)，其它表面蛋白如OspE-相关蛋白(Erps)，核心蛋白聚糖结合蛋白(如DbpA)和抗原性可变的VI蛋白，如与P39和P13(完整的膜蛋白)相关的抗原，VlsE抗原变异蛋白。
牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)：抗原包括但不限于牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）外膜蛋白(OMP)。
克雷伯菌(Klebsiella)：抗原包括但不限于：包括OMP A在内的OMP，或可选地偶联于破伤风类毒素的多糖。
本文所提供免疫原性组合物中使用的其他细菌抗原包括但不限于上述任意的荚膜抗原、多糖抗原或蛋白抗原。本文所提供免疫原性组合物中使用的其他细菌抗原包括但不限于外膜囊泡(OMV)制品。此外，本文所提供免疫原性组合物中使用的其他细菌抗原包括但不限于活、减毒和/或纯化形式的任意上述细菌。在某些实施方式中，本文所提供免疫原性组合物中使用的细菌抗原衍生自革兰氏阴性菌，而其他实施方式中，它们衍生自革兰氏阳性菌。在某些实施方式中，本文所提供免疫原性组合物中使用的细菌抗原衍生自好氧细菌，而其他实施方式中，它们衍生自厌氧细菌。
在某些实施方式中，任何上述细菌来源的糖（多糖、LPS、LOS或寡糖）可与另一种试剂或抗原如载体蛋白（例如CRM197）偶联。在某些实施方式中，此类偶联物是通过将糖的羰基部分还原氨化到蛋白的氨基上而作用的直接偶联。在其他实施方式中，糖通过接头偶联，例如采用1996年的BioconjugateTechniques(《生物偶联技术》)和1993年的CRC，Chemistry of Protein Conjugationand Cross-Linking(《蛋白质偶联与交联化学》)中提供的琥珀酰胺或其他连接。
在可用于治疗或预防奈瑟菌感染和相关基疾病和紊乱的某些实施方式中，用于本文所提供免疫原性组合物的脑膜炎奈瑟菌重组蛋白可参见WO99/24578、WO99/36544、WO99/57280、WO00/22430、WO96/29412、WO01/64920、WO03/020756、WO2004/048404和WO2004/032958。这些抗原可单独或联用。当联用多个纯化蛋白时，使用10种或更少(例如，9、8、7、6、5、4、3、2种)纯化抗原的混合物是有益的。
用于本文所提供免疫原性组合物的特别有用的抗原组合公开于Giuliani等(2006)Proc Natl AcadSci U S A 103(29):10834-9和WO2004/032958中，因此免疫原性组合物可包含以下1、2、3、4或5种：(1)‘NadA’蛋白(也称GNA1994和NMB1994)；(2)‘fHBP’蛋白(也称‘741’、LP2086、GNA1870和NMB1870)；(3)‘936’蛋白(也称GNA2091和NMB2091)；(4)‘953’蛋白(也称GNA1030和NMB1030)；以及(5)‘287’蛋白(也称GNA2132和NMB2132)。其他可能的抗原组合可包含转铁蛋白结合蛋白(例如TbpA和/或TbpB)和Hsf抗原。用于本文所提供免疫原性组合物的其他可能的纯化抗原包括含下列氨基酸序列之一的蛋白：来自WO99/24578的SEQ ID NO:650；来自WO99/24578的SEQ ID NO:878；来自WO99/24578的SEQ ID NO:884；来自WO99/36544的SEQ ID NO:4；来自WO99/57280的SEQ ID NO:598；来自WO99/57280的SEQ ID NO:818；来自WO99/57280的SEQ ID NO:864；来自WO99/57280的SEQ ID NO:866；来自WO99/57280的SEQ ID NO:1196；来自WO99/57280的SEQ ID NO:1272；来自WO99/57280的SEQ ID NO:1274；来自WO99/57280的SEQ ID NO:1640；来自WO99/57280的SEQ ID NO:1788；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2288；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2466；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2554；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2576；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2606；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2608；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2616；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2668；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2780；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2932；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2958；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2970；来自WO99/57280的SEQ IDNO:2988(各前述氨基酸序列均通过对所引文献的引用纳入本文)，或含以下某一氨基酸序列的多肽：(a)与所述序列具有50%或更高的相同性(如60%、70%、80%、90%、95%、99%或更高)；和/或(b)包含所述序列的至少n个连续氨基酸的片段，其中n是7或更多(如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。(b)的优选片段包含来自相关序列的表位。在免疫原性组合物中可包括超过一种(例如，2、3、4、5、6种)的这些多肽。
所述fHBP抗原落入三种不同变体(WO2004/048404)。基于本文所公开免疫原性组合物的利用本文所公开化合物之一的脑膜炎奈瑟球菌血清群疫苗可包含单一fHBP变体，但包括来自两种或所有三种变体的fHBP将是有益的。因此，免疫原性组合物可包含两种或三种不同的纯化fHBP的组合，所述fHBP选自：(a)第一蛋白，所含氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少a%的序列相同性和/或所含氨基酸序列由SEQ ID NO:1的至少x个连续氨基酸的片段组成；(b)第二蛋白，所含氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少b%的序列相同性和/或所含氨基酸序列由SEQ ID NO:2的至少y个连续氨基酸的片段组成；和/或(c)第三蛋白，所含氨基酸序列与SEQ ID NO:3具有至少c%的序列相同性和/或所含氨基酸序列由SEQ ID NO:3的至少z个连续氨基酸的片段组成。
SEQ ID NO：1
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO：2
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ
SEQ ID NO：3
VAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ。
a值至少为85，例如86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5或更高。b值至少为85，例如86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5或更高。c值至少为85，例如86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5或更高。a、b和c的值本质上彼此并不相关。
x值至少为7，例如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250)。y值至少为7，例如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250)。z值至少为7，例如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250)。x、y和z的值本质上彼此并不相关。
在一些实施方式中，本文公开的免疫原性组合物包括脂化的fHBP蛋白，例如在N-末端半胱氨酸处脂化。在其他实施方式中，它们未脂化。
本文公开的有用免疫原性组合物包括纯化蛋白，其含如下混合物：(i)含SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的第一多肽；(ii)含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的第二多肽；和(iii)含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的第三多肽。参见Giuliani等，(2006)Proc Natl Acad Sci U S A 103(29):10834-9和WO2004/032958。本文公开的有用免疫原性组合物包括纯化蛋白，其含如下混合物：(i)与SEQ ID NO:4所示氨基酸序列有至少a%序列相同性的第一多肽；(ii)与SEQ ID NO:5所示氨基酸序列有至少b%序列相同性的第二多肽；和(iii)与SEQ ID NO:6所示氨基酸序列有至少a%序列相同性的第三多肽。
SEQ ID NO：4
MASPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQGGQDMAAVSEENTGNGGAAATDKPKNEDEGAQNDMPQNAADTDSLTPNHTPASNMPAGNMENQAPDAGESEQPANQPDMANTADGMQGDDPSAGGENAGNTAAQGTNQAENNQTAGSQNPASSTNPSATNSGGDFGRTNVGNSVVIDGPSQNITLTHCKGDSCSGNNFLDEEVQLKSEFEKLSDADKISNYKKDGKNDGKNDKFVGLVADSVQMKGINQYIIFYKPKPTSFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDGEAVSLTGHSGNIFAPEGNYRYLTYGAEKLPGGSYALRVQGEPSKGEMLAGTAVYNGEVLHFHTENGRPSPSRGRFAAKVDFGSKSVDGIIDSGDGLHMGTQKFKAAIDGNGFKGTWTENGGGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPTDAEKGGFGVFAGKKEQDGSGGGGATYKVDEYHANARFAIDHFNTSTNVGGFYGLTGSVEFDQAKRDGKIDITIPVANLQSGSQHFTDHLKSADIFDAAQYPDIRFVSTKFNFNGKKLVSVDGNLTMHGKTAPVKLKAEKFNCYQSPMAKTEVCGGDFSTTIDRTKWGVDYLVNVGMTKSVRIDIQIEAAKQ
SEQ ID NO：5
MVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKGYTPQISVVGYNRHLLLLGQVATEGEKQFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASLPRTAGDIAGDTWNTSKVRATLLGISPATQARVKIVTYGNVTYVMGILTPEEQAQITQKVSTTVGVQKVITLYQNYVQRGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO：6
ATNDDDVKKAATVAIAAAYNNGQEINGFKAGETIYDIDEDGTITKKDATAADVEADDFKGLGLKKVVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAALADTDAALDATTNALNKLGENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFNDIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEAAAGTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKDNIAKKANSADVYTREESDSKFVRIDGLNATTEKLDTRLASAEKSIADHDTRLNGLDKTVSDLRKETRQGLAEQAALSGLFQPYNVG。
细菌囊泡抗原
本文公开的免疫原性组合物可包括外膜囊泡。这些外膜囊泡可获自各种病原菌并用作本文所公开免疫原性组合物的抗原组分。用作这类免疫原性组合物抗原组分的囊泡包括任何通过破坏细菌外膜以由此形成包含外膜蛋白组分的囊泡而获得的脂蛋白体囊泡。因此该术语包括OMV（有时称为“小泡”）、微囊泡（MV，参见如WO 02/09643）和“天然OMV”（“NOMV”，参见如Katial等，(2002)Infect.Immun.70:702-707）。包含一种或多种病原菌囊泡的本文所公开免疫原性组合物可用于治疗或预防此类病原菌的感染和相关疾病与紊乱。
MV和NOMV是天然产生的膜囊泡，在细菌生长时自发形成并释放到培养基中。MV可以通过以下方法获得：在肉汤培养基中培养细菌如奈瑟菌，将全细胞与肉汤培养基中较小的MV分离（例如，通过过滤或低速离心，只沉淀细胞而不沉淀较小囊泡），然后从细胞耗尽的培养基中收集MV（例如，通过过滤、示差沉淀或MV聚集，通过高速离心沉淀MV）。一般可以根据培养中产生的MV量来选择用于生产MV的菌株(参见例如，美国专利6,180,111和WO01/34642，其描述了具有高MV产量的奈瑟菌)。
从细菌人工制备OMV，可以利用去污剂处理（例如用脱氧胆酸盐）或通过非去污剂方式（例如参见WO04/019977）进行制备。获取适当OMV制品的方法是本领域熟知的。形成OMV的技术包括：用胆酸盐去污剂（例如，石胆酸、鹅脱氧胆酸、乌索脱氧胆酸、脱氧胆酸、胆酸、乌索胆酸等的盐，优选用脱氧胆酸钠(EP0011243和Fredriksen等，(1991)NIPH Ann.14(2):67-80)处理奈瑟球菌）在不会沉淀去污剂的充分高的pH下(参见如WO01/91788)处理细菌。其它技术基本可以在没有去污剂的情况下(参见如WO04/019977)利用如超声、匀化、微流化、空化、渗透压休克、研磨、弗氏压碎、混合等技术进行。不使用去污剂或使用低去污剂的方法可以保留有用的抗原，如奈瑟菌OMV中的NspA。因此一种方法可以使用含有约0.5%或更低如约0.2%、约0.1%、<0.05%或0浓度的脱氧胆酸盐的OMV提取缓冲液。
WO05/004908描述了一种制备OMV的有用过程，涉及对粗OMV进行超滤，代替高速离心。该过程可以涉及在超滤后进行超离心的步骤。
囊泡可从任何病原菌株如脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria minigtidis)制备以用于本发明。B群脑膜炎奈瑟球菌的囊泡可以是任意血清型(例如，1、2a、2b、4、14、15、16等)、任意血清亚型和任意免疫型(例如，L1；L2；L3；L3,3,7；L10等)。脑膜炎球菌可以来自任何适当谱系，包括高侵袭性与超毒力谱系，如以下7种超毒力谱系中任一种：亚群I、亚群III、亚群IV 1、ET 5复合物、ET 37复合物、A4簇、谱系3。这些谱系通过多位点酶电泳（MLEE）确定，但也使用多位点序列分型（MLST）对脑膜炎球菌分类，例如ET 37复合物为由MLST所分的ST 11复合物，ET 5复合物为ST-32(ET-5)，谱系3为ST 41/44等。囊泡可从具有下列亚型之一的菌株制得：P1.2；P1.2,5；P1.4；P1.5；P1.5,2；P1.5,c；P1.5c,10；P1.7,16；P1.7,16b；P1.7h,4；P1.9；P1.15；P1.9,15；P1.12,13；P1.13；P1.14；P1.21,16；P1.22,14。
本文公开的免疫原性组合物中所含囊泡可从野生型病原菌株如脑膜炎奈瑟球菌株或从突变菌株制得。例如，WO98/56901公开了从具有经修饰fur基因的脑膜炎奈瑟球菌获得的囊泡制品。WO02/09746教授了nspA表达可随同时敲除porA与cps而上调。WO02/0974、WO02/062378和WO04/014417描述了用于产生OMV的其他脑膜炎奈瑟球菌敲除突变体。WO06/081259公开了fHBP上调的囊泡。Claassen等(1996)14(10):1001-8描述从表达6种不同PorA亚型的改良菌株进行囊泡构建。也可以使用通过敲除参与LPS生物合成的酶而获得的具有低内毒素水平的突变奈瑟球菌(参见例如WO99/10497和Steeghs等(2001)i20:6937-6945)。这些或其它突变体均可以与本发明一起使用。
因此，在一些实施方式中，本文所公开免疫原性组合物中包括的B群脑膜炎奈瑟球菌可表达多于一种PorA亚型。之前已构建出6价和9价PorA菌株。所述菌株可表达2、3、4、5、6、7、8或9种PorA亚型：P1.7,16；P1.5-1,2-2；P1.19,15-1；P1.5-2,10；P1.121.13；P1.7-2,4；P1.22,14；P1.7-1,1和/或P1.18-1,3,6。在其它实施方式中，可下调菌株中PorA的表达，例如，PorA的量相对于野生型水平（例如相对于WO03/105890中公开的H44/76菌株）减少了至少20%（例如，>30%、>40%、>50%、>60%、>70%、>80%、>90%、>95%等），或甚至被敲除。
在一些实施方式中，B群脑膜炎奈瑟球菌可过表达（相对于相应的野生型菌株）某些蛋白质。例如，菌株可过表达NspA、蛋白287(WO01/52885—也称作NMB2132和GNA2132)，一种或多种fHBP(WO06/081259和美国专利公开2008/0248065—也称作741蛋白、NMB1870和GNA1870)，TbpA和/或TbpB(WO00/25811)，Cu,Zn-超氧化物歧化酶(WO00/25811)等。
在一些实施方式中，B群脑膜炎奈瑟球菌菌株可包括一种或多种敲除和/或过表达突变。下调和/或敲除的优选基因包括：(a)Cps、CtrA、CtrB、CtrC、CtrD、FrpB、GalE、HtrB/MsbB、LbpA、LbpB、LpxK、Opa、Opc、PilC、PorB、SiaA、SiaB、SiaC、SiaD、TbpA和/或TbpB(WO01/09350)；(b)CtrA、CtrB、CtrC、CtrD、FrpB、GalE、HtrB/MsbB、LbpA、LbpB、LpxK、Opa、Opc、PhoP、PilC、PmrE、PmrF、SiaA、SiaB、SiaC、SiaD、TbpA和/或TbpB(WO02/09746)；(c)ExbB、ExbD、rmpM、CtrA、CtrB、CtrD、GalE、LbpA、LpbB、Opa、Opc、PilC、PorB、SiaA、SiaB、SiaC、SiaD、TbpA和/或TbpB(WO02/062378)；和(d)CtrA、CtrB、CtrD、FrpB、OpA、OpC、PilC、PorB、SiaD、SynA、SynB和/或SynC(WO04/014417)。
在使用突变菌株时，在一些实施方式中，可以具有一个或多个或全部下列特征：（i）LgtB和/或GalE下调或敲除，以截短脑膜炎球菌LOS；（ii）TbpA上调；（iii）Hsf上调；（iv）Omp85上调；（v）LbpA上调；（vi）NspA上调；（vii）PorA敲除；（viii）FrpB下调或敲除；（ix）Opa下调或敲除；（x）Opc下调或敲除；（xii）cps基因复合体缺失。截短的LOS可以不包括唾液酸-乳糖-N-新四糖表位，例如，其可以为半乳糖缺陷型LOS。所述LOS可以没有α链。
如果LOS存在于囊泡中，则可对囊泡进行处理，以连接其LOS与蛋白质组分(“泡内”偶联(WO04/014417))。
本文公开的免疫原性组合物可包括来自不同菌株的囊泡的混合物。例如，WO03/105890公开了含多价脑膜炎球菌囊泡组合物的疫苗，含有从具有所用国家流行性血清亚型的脑膜炎球菌菌株衍生的第一囊泡，和从无需具有所用国家流行性血清亚型的菌株衍生的第二囊泡。WO06/024946公开了不同囊泡的有用组合。在一些实施方式中，可使用各来自L2和L3免疫型菌株的囊泡组合。
可从B群以外的脑膜炎奈瑟球菌血清群(例如，WO01/91788公开了用于A群的方法)制备基于囊泡的抗原。因此，本文所公开免疫原性组合物可包含的囊泡由非血清群B(例如、A、C、W135和/或Y)制得和来自奈瑟菌以外的细菌病原体。
病毒抗原
适用于本文所提供免疫原性组合物的病毒抗原包括但不限于灭活（或杀死的）病毒，减毒病毒，裂解病毒制剂、纯化的亚基制剂，分离、纯化或衍生自病毒的病毒蛋白，以及病毒样颗粒(VLP)。在某些实施方式中，病毒抗原可衍生自在细胞培养物或其它底物上增殖的病毒。在其他实施方式中，病毒抗原为重组表达。在某些实施方式中，病毒抗原优选包括在其生命周期的至少一个阶段中暴露于病毒表面的表位。病毒抗原优选在多种血清型或分离物之间具有保守性。适用于本文所提供免疫原性组合物的病毒抗原包括但不限于衍生自一种或多种下述病毒的抗原以及下面鉴定的特定抗原示例。
正粘病毒(Orthomyxovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自正粘病毒如流感病毒A、B和C型的抗原。在某些实施方式中，正粘病毒抗原选自一种或多种病毒蛋白，包括血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、核蛋白（NP）、基质蛋白（M1）、膜蛋白（M2）、一种或多种转录酶组分（PB1、PB2和PA）。在某些实施方式中，病毒抗原包括HA和NA。在某些实施方式中，流感抗原衍生自暴发流行期之间（年度）的流感毒株，而在其他实施方式中，流感抗原衍生自可能引起流行爆发的毒株（即与目前流行毒株的血凝素相比具有新型血凝素的流感毒株，或对禽类对象具有致病性并可能水平传播给人群的流感毒株，或对人具有致病性的流感毒株）。
副粘病毒(Paramyxoviridae)：病毒抗原包括但不限于衍生自副粘病毒，如肺炎病毒(RSV)、副粘病毒(PIV)、偏肺病毒和麻疹病毒(麻疹)的抗原。
肺炎病毒(Pneumovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自肺炎病毒，如呼吸道合胞病毒(RSV)、牛呼吸道合胞病毒，小鼠肺炎病毒和火鸡鼻气管炎病毒的抗原。肺炎病毒优选为RSV。在某些实施方式中，肺炎病毒抗原选自一种或多种以下蛋白，包括表面蛋白融合物（F），糖蛋白（G）和小疏水蛋白（SH），基质蛋白M和M2，核衣壳蛋白N、P和L，以及非结构蛋白NS1和NS2。在其他实施方式中，肺炎病毒抗原包括F、G和M。在某些实施方式中，肺炎病毒抗原也可配制入或衍生自嵌合病毒，仅举例来说，如同时含RSV与PIV组分的嵌合型RSV/PIV病毒。
副粘病毒(Paramyxovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自副粘病毒，如1-4型副流感病毒(PIV)、腮腺炎、仙台病毒、猴病毒5、牛副流感病毒、尼帕病毒、亨尼帕病毒和新城疫病毒的抗原。在某些实施方式中，副粘病毒为PIV或流行性腮腺炎病毒。在某些实施方式中，副粘病毒抗原选自一种或多种以下蛋白质：血凝素-神经氨酸酶（HN）、融合蛋白F1和F2、核蛋白（NP）、磷蛋白（P）、大蛋白（L）和基质蛋白（M）。在其他实施方式中，副粘病毒蛋白包括HN、F1和F2。在某些实施方式中，副粘病毒抗原也可配制入或衍生自嵌合病毒，仅举例来说，如同时含RSV与PIV组分的嵌合型RSV/PIV病毒。市售流行性腮腺炎疫苗包括单价形式或与麻疹和风疹疫苗(MMR)联用的减毒型活流行性腮腺炎病毒。在其他实施方式中，副粘病毒是尼帕病毒或亨尼帕病毒，抗原选自一种或多种以下蛋白质：融合(F)蛋白、糖(G)蛋白、基质(M)蛋白、核衣壳(N)蛋白、大(L)蛋白和磷蛋白(P)。
痘病毒(Poxviridae)：病毒抗原包括但不限于衍生自正痘病毒（Orthopoxvirus）如天花（Variola vera）的抗原，包括但不限于重型天花（Variolamajor）和轻型天花（Variola minor）。
偏肺病毒(Metapneumovirus)：病毒抗原包括但不限于偏肺病毒如人偏肺病毒(hMPV)和禽偏肺病毒(aMPV)。在某些实施方式中，偏肺病毒抗原选自一种或多种以下蛋白，包括表面蛋白融合物（F），糖蛋白（G）和小疏水蛋白（SH），基质蛋白M和M2，核衣壳蛋白N、P和L。在其他实施方式中，偏肺病毒抗原包括F、G和M。在某些实施方式中，偏肺病毒抗原也可配制成嵌合病毒形式或衍生自嵌合病毒。
麻疹病毒(Morbillivirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自麻疹病毒如麻疹的抗原。在某些实施方式中，麻疹病毒抗原选自一种或多种以下蛋白质：血凝素（H）、糖蛋白（G）、融合因子（F）、大蛋白（L）、核蛋白（NP）、聚合酶磷蛋白（P）和基质（M）。市售麻疹疫苗包括减毒的活麻疹病毒，通常与流行性腮腺炎和风疹(MMR)联用。
小核糖核酸病毒(Picornavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自小核糖核酸病毒，如肠道病毒、鼻病毒、嗜肝RNA病毒、心脏病毒和口蹄疫病毒的抗原。在某些实施方式中，抗原衍生自肠道病毒，而在其他实施方式中，所述肠道病毒是脊髓灰质炎病毒。在其他实施方式中，抗原衍生自鼻病毒。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
肠道病毒(Enterovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自肠道病毒的抗原，如1、2或3型脊髓灰质炎病毒，1-22型和24型柯萨奇病毒A，1-6型柯萨奇病毒B，1-9、11-27和29-34型艾柯(ECHO)病毒和肠道病毒68-71。在某些实施方式中，抗原衍生自肠道病毒，而在其他实施方式中，所述肠道病毒是脊髓灰质炎病毒。在某些实施方式中，肠道病毒抗原选自一种或多种衣壳蛋白VP0、VP1、VP2、VP3和VP4。市售脊髓灰质炎疫苗包括灭活的脊髓灰质炎疫苗(IPV)和口服脊髓灰质炎病毒疫苗(OPV)。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒。
布尼亚病毒(Bunyavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自正布尼亚病毒(Orthobunyavirus)如加利福尼亚脑炎病毒、白蛉病毒(Phlebovirus)如裂谷热病毒或内罗病毒(Nairovirus)如克里米亚-刚果出血热的抗原。
鼻病毒(Rhinovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自鼻病毒的抗原。在某些实施方式中，鼻病毒抗原选自一种或多种以下衣壳蛋白：VP0、VP1、VP2、VP2和VP4。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
嗜肝RNA病毒(Heparnavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自嗜肝RNA病毒，仅举例来说如甲型肝炎病毒(HAV)的抗原。市售HAV疫苗包括灭活的HAV疫苗。
披膜病毒(Togavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自披膜病毒，如风疹病毒、α病毒或动脉炎病毒的抗原。在某些实施方式中，抗原衍生自风疹病毒属，仅举例来说如风疹病毒。在某些实施方式中，披膜病毒抗原选自E1、E2、E3、C、NSP-1、NSPO-2、NSP-3或NSP-4。在某些实施方式中，披膜病毒抗原选自E1、E2或E3。市售风疹疫苗含有冷适应活病毒，通常与流行性腮腺炎和麻疹疫苗(MMR)联用。
黄病毒(Flavivirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自黄病毒，如蜱传脑炎(TBE)病毒、登革热(1、2、3或4型)病毒、黄热病毒、日本脑炎病毒、开萨诺森林病毒、西尼罗河脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、俄国春夏脑炎病毒、波瓦生脑炎病毒的抗原。在某些实施方式中，黄病毒抗原选自PrM、M、C、E、NS-1、NS-2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5。在某些实施方式中，黄病毒抗原选自PrM、M和E。市售TBE疫苗包括灭活病毒疫苗。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
瘟病毒(Pestivirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自瘟病毒，如牛病毒性腹泻(BVDV)、猪瘟(CSFV)或边界病(BDV)的病毒抗原。
嗜肝DNA病毒(Hepadnavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自嗜肝DNA病毒如乙型肝炎病毒的抗原。在某些实施方式中，嗜肝DNA病毒抗原选自表面抗原（L、M和S）、核心抗原（HBc、HBe）。市售HBV疫苗包括含有表面抗原S蛋白的亚基疫苗。
丙肝病毒：病毒抗原包括但不限于衍生自丙肝病毒(HCV)的抗原。在某些实施方式中，HCV抗原选自E1、E2、E1/E2、NS345聚蛋白、NS345-核心聚蛋白、核心和/或非结构区肽中的一种或多种。在某些实施方式中，丙肝病毒抗原选自以下一种或多种：HCV E1和/或E2蛋白，E1/E2异二聚体复合物、核心蛋白和非结构蛋白，或这些抗原的片段，其中可任选地修饰所述非结构蛋白以在保持免疫原性的同时消除酶活性。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
杆状病毒(Rhabdovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自杆状病毒如恐水病病毒(狂犬病病毒)和水泡病毒(VSV)的抗原。杆状病毒抗原可选自糖蛋白(G)、核蛋白(N)、大蛋白(L)、非结构蛋白(NS)。市售狂犬病病毒疫苗包含用人双倍体细胞或胎猕猴肺细胞培养的灭活病毒。
杯状病毒(Caliciviridae)：病毒抗原包括但不限于衍生自杯状病毒，如诺沃克病毒和诺沃克样病毒，如夏威夷病毒和雪山病毒的抗原。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
冠状病毒(Coronavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自冠状病毒、SARS、人呼吸道冠状病毒、禽传染性支气管炎(IBV)、小鼠肝炎病毒(MHV)和猪传染性肠胃炎病毒(TGEV)的抗原。在某些实施方式中，冠状病毒抗原选自刺突(S)、包膜(E)、基质(M)、核衣壳(N)和血凝素-酯酶糖蛋白(HE)。在某些实施方式中，冠状病毒抗原衍生自SARS病毒。在某些实施方式中，冠状病毒衍生自WO04/92360所述的SARS病毒抗原。
逆转录病毒(Retrovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自逆转录病毒，如肿瘤病毒、慢病毒或泡沫病毒的抗原。在某些实施方式中，肿瘤病毒抗原衍生自HTLV-1、HTLV-2或HTLV-5。在某些实施方式中，慢病毒抗原衍生自HIV-1或HIV-2。在某些实施方式中，抗原衍生自HIV-1亚型(或进化支)，包括但不限于HIV-1亚型(或进化支)A、B、C、D、F、G、H、J、K、O。在其他实施方式中，抗原衍生自HIV-1循环重组形式(CRF)，包括但不限于A/B、A/E、A/G、A/G/I等。在某些实施方式中，逆转录病毒抗原选自gag、pol、env、tax、tat、rex、rev、nef、vif、vpu和vpr。在某些实施方式中，HIV抗原选自gag(p24gag和p55gag)、env(gp160和gp41)、pol、tat、nef、rev vpu、小蛋白(优选p55gag和gp140v缺失)。在某些实施方式中，HIV抗原衍生自一种或多种以下菌株：HIVIIIb、HIVSF2、HIVLAV、HIVLAI、HIVMN、HIV-1CM235、HIV-1US4、HIV-1SF162、HIV-1TV1、HIV-1MJ4。在某些实施方式中，抗原衍生自人内源性逆转录病毒，包括但不限于HERV-K (“旧型”HERV-K和“新型”HERV-K)。
呼肠病毒(Reovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自呼肠病毒，如正呼肠病毒、轮状病毒、环状病毒或科罗拉多蜱传热病毒的抗原。在某些实施方式中，呼肠病毒抗原选自结构蛋白λ1、λ2、λ3、μ1、μ2、σ1、σ2或σ3，或非结构蛋白σNS、μNS或σ1s。在某些实施方式中，呼肠病毒抗原衍生自轮状病毒。在某些实施方式中，轮状病毒抗原选自VP1、VP2、VP3、VP4(或切割产物VP5和VP8)、NSP 1、VP6、NSP3、NSP2、VP7、NSP4或NSP5。在某些实施方式中，轮状病毒抗原包括VP4（或切割产物VP5和VP8）和VP7。
细小病毒(Parvovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自细小病毒如细小病毒B19的抗原。在某些实施方式中，细小病毒抗原选自VP-1、VP-2、VP-3、NS-1和NS-2。在某些实施方式中，细小病毒抗原是衣壳蛋白VP-1或VP-2。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
丁肝病毒(HDV)：病毒抗原包括但不限于衍生自HDV的抗原，特定是HDV的δ-抗原。
戊肝病毒(HEV)：病毒抗原包括但不限于衍生自HEV的抗原。
庚肝病毒(HGV)：病毒抗原包括但不限于衍生自HGV的抗原。
人疱疹病毒(Human Herpesvirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自人疱疹病毒，仅举例来说如单纯疱疹病毒(HSV)，水痘-带状疱疹病毒(VZV)，EB病毒(EBV)，巨细胞病毒(CMV)，人疱疹病毒6(HHV6)，人疱疹病毒7(HHV7)和人疱疹病毒8(HHV8)的抗原。在某些实施方式中，人疱疹病毒抗原选自立即早期蛋白（α）、早期蛋白（β）和晚期蛋白（γ）。在某些实施方式中，HSV抗原衍生自HSV-1或HSV-2毒株。在某些实施方式中，HSV抗原选自糖蛋白gB、gC、gD或gH，融合蛋白(gB)，或免疫逃避蛋白(gC、gE或gI)。在某些实施方式中，VZV抗原选自核心、核衣壳、被膜或包膜蛋白。可市售获得减毒的活VZV疫苗。在某些实施方式中，EBV抗原选自早期抗原(EA)蛋白、病毒衣壳抗原(VCA)和膜抗原(MA)的糖蛋白。在某些实施方式中，CMV抗原选自衣壳蛋白、包膜糖蛋白（如gB与gH）和被膜蛋白。在其他实施方式中，CMV抗原可选自一种或多种以下蛋白质：pp65、IE1、gB、gD、gH、gL、gM、gN、gO、UL128、UL129、gUL130、UL150、UL131、UL33、UL78、US27、US28、RL5A、RL6、RL10、RL11、RL12、RL13、UL1、UL2、UL4、UL5、UL6、UL7、UL8、UL9、UL10、UL11、UL14、UL15A、UL16、UL17、UL18、UL22A、UL38、UL40、UL41A、UL42、UL116、UL119、UL120、UL121、UL124、UL132、UL147A、UL148、UL142、UL144、UL141、UL140、UL135、UL136、UL138、UL139、UL133、UL135、UL148A、UL148B、UL148C、UL148D、US2、US3、US6、US7、US8、US9、US10、US11、US12、US13、US14、US15、US16、US17、US18、US19、US20、US21、US29、US30和US34A。CMV抗原还可以是一种或多种CMV蛋白的融合体，仅举例来说如pp65/IE1(Reap等，Vaccine(2007)25:7441-7449)。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
乳头状多瘤空泡病毒(Papovaviruses)：抗原包括但不限于衍生自乳头状多瘤空泡病毒如乳头瘤病毒和多瘤病毒的抗原。在某些实施方式中，乳头瘤病毒包括HPV血清型1、2、4、5、6、8、11、13、16、18、31、33、35、39、41、42、47、51、57、58、63和65。在某些实施方式中，HPV抗原衍生自血清型6、11、16或18。在某些实施方式中，HPV抗原选自衣壳蛋白(L1)和(L2)或E1-E7，或其融合物。在某些实施方式中，HPV抗原配制为病毒样颗粒(VLP)。在某些实施方式中，多瘤病毒包括BK病毒和JK病毒。在某些实施方式中，多瘤病毒抗原选自VP1、VP2或VP3。
腺病毒(Adenovirus)：抗原包括衍生自腺病毒的抗原。在某些实施方式中，腺病毒抗原衍生自腺病毒血清型36(Ad-36)。在某些实施方式中，抗原衍生自编码Ad-36外壳蛋白或其片段的蛋白或肽序列(WO 2007/120362)。
还提供包含在Vaccines(《疫苗》)第4版(Plotkin和Orenstein编，2004)；Medical Microbiology(《医学微生物学》)第4版(Murray等编，2002)；Virology(《病毒学》)第3版(W.K.Joklik编，1988)；Fundamental Virology(《基础病毒学》)第2版(B.N.Fields和D.M.Knipe编，1991)中的抗原、组合物、方法和微生物，考虑将它们与本文所述免疫原性组合物联用。
真菌抗原
用于本文所提供免疫原性组合物的真菌抗原包括但不限于衍生自一种或多种下述真菌的抗原。
真菌抗原衍生自皮肤真菌，包括：絮状表皮霉菌(Epidermophytonfloccusum)，奥杜安氏小孢子菌(Microsporum audouini)，犬小孢子菌(Microsporum canis)，扭曲小孢子菌(Microsporum distortum)，马小孢子菌(Microsporum equinum)，石膏样小孢子菌(Microsporum gypsum)，矮小小孢子菌(Microsporum nanum)，同心性毛癣菌(Trichophyton concentricum)，马毛癣菌(Trichophyton equinum)，鸡毛癣菌(Trichophyton gallinae)，石膏样毛癣菌(Trichophyton gypseum)，(Trichophyton megnini)，须癣毛癣菌(Trichophytonmentagrophytes)，(Trichophyton quinckeanum)，红色毛癣菌(Trichophytonrubrum)，许兰毛癣菌(Trichophyton schoenleini)，断发毛癣菌(Trichophytontonsurans)，疣状毛癣菌(Trichophyton verrucosum)，疣状毛癣菌(T.verrucosum)白变种、盘状变种、赭黄变种，紫色毛癣菌(Trichophyton violaceum)和/或蜜块状毛癣菌(Trichophyton faviforme)；和
真菌病原体衍生自烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、黄曲霉(Aspergillusflavus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、土曲霉(Aspergillus terreus)、聚多曲霉(Aspergillus sydowi)、黄曲菌(Aspergillus flavatus)、灰绿曲霉(Aspergillus glaucus)、头状芽裂殖菌(Blastoschizomyces capitatus)、白假丝酵母(Candida albicans)、烯醇酶假丝酵母(Candida enolase)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、光滑假丝酵母(Candida glabrata)、克柔假丝酵母(Candidakrusei)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、类星形假丝酵母(Candidastellatoidea)、克鲁斯假丝酵母(Candida kusei)、帕拉克斯假丝酵母(Candidaparakwsei)、葡萄牙假丝酵母(Candida lusitaniae)、伪热带假丝酵母(Candidapseudotropicalis)、季也蒙假丝酵母(Candida guilliermondi)、卡氏枝孢霉(Cladosporium carrionii)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatidis)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、棒地霉(Geotrichum clavatum)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、微孢子虫(Microsporidia)、脑炎微孢子虫属(Encephalitozoon spp)、表层角结膜炎微孢子虫(Septata intestinalis)和肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)；较不常见的短粒虫属(Brachiola spp.)、微胞子虫属(Microsporidium spp.)、微孢子虫属(Nosema spp.)、皮里虫属(Pleistophora spp)、气管普孢虫属(Trachipleistophora spp.)、条孢虫属(Vittaforma spp.)、巴西芽生菌(Paracoccidioides brasiliensis)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、苜蓿腐酶(Pythiumn insidiosum)、皮屑芽胞菌(Pityrosporum ovale)、酿酒酵母(Sacharomycescerevisae)、布拉酵母(Saccharomyces boulardii)、粟酒酵母(Saccharomycespombe)、尖端赛多孢子菌(Scedosporium apiosperum)、申克孢子丝菌(Sporothrixschenckii)、白吉利丝孢酵母(Trichosporon beigelii)、弓形虫(Toxoplasma gondii)、马尔尼菲青霉菌(Penicillium marneffei)、马拉色菌属(Malassezia spp.)、着色真菌属(Fonsecaea spp.)、王氏霉菌属(Wangiella spp.)、孢子丝菌属(Sporothrixspp.)、蛙粪霉属(Basidiobolus spp.)、耳霉属(Conidiobolus spp.)、根霉属(Rhizopusspp.)、毛霉属(Mucor spp.)、犁头霉属(Absidia spp.)、被孢霉属(Mortierella spp.)、小克银汉霉属(Cunninghamella spp.)、瓶霉属(Saksenaea spp.)、链格孢菌属(Alternaria spp.)、弯孢菌属(Curvularia spp.)、长蠕孢菌属(Helminthosporiumspp.)、镰胞菌属(Fusarium spp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、青霉属(Penicilliumspp.)、链核盘菌属(Monolinia spp.)、丝核菌属(Rhizoctonia spp.)、拟青霉属(Paecilomyces spp.)、皮司霉属(Pithomyces spp.)和枝孢霉属(Cladosporium spp.)。
在某些实施方式中，制备真菌抗原的工艺包括如下方法：提取溶解部分，使之与可从细胞壁已基本除去或至少部分除去的真菌细胞获得的不溶性部分分离，其特征在于，所述工艺包括以下步骤：获得活真菌细胞；获得细胞壁已基本除去或至少部分除去的真菌细胞；破碎细胞壁已基本除去或至少部分除去的真菌细胞；获得不溶性部分；以及从所述不溶性组分中提取和分离溶解部分。
原生动物抗原/病原体
用于本文所提供免疫原性组合物的原生动物抗原/病原体包括但不限于衍生自一种或多种下列原生动物的抗原：痢疾内变形虫(Entamoeba histolytica)、贾第鞭毛虫(Giardia lambli)、小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、卡宴环孢子球虫(Cyclospora cayatanensis)和弓形虫(Toxoplasma)。
植物抗原/病原体
用于本文所提供免疫原性组合物的植物抗原/病原体包括但不限于衍生自蓖麻(Ricinus communis)的抗原。
STD抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含衍生自性传播疾病(STD)的一种或多种抗原。在某些实施方式中，这种抗原可预防STD，如衣原体、生殖器疱疹、肝炎(如HCV)、生殖器疣、淋病、梅毒和/或软下疳。在其他实施方式中，这种抗原可治疗STD，如衣原体、生殖器疱疹、肝炎(如HCV)、生殖器疣、淋病、梅毒和/或软下疳。此类抗原衍生自一种或多种病毒或细菌STD。在某些实施方式中，病毒STD抗原衍生自HIV、单纯疱疹病毒（HSV-1和HSV-2）、人乳头瘤病毒（HPV）和肝炎（HCV）。在某些实施方式中，细菌STD抗原衍生自淋病奈瑟球菌(Neiserria gonorrhoeae)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、苍白密螺旋体(Treponema pallidum)、杜氏嗜血菌(Haemophilus ducreyi)、大肠杆菌和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。以上描述了衍生自这些病原体的特定抗原的例子。
呼吸道抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含衍生自导致呼吸道疾病的病原体的一种或多种抗原。仅举例来说，此类呼吸道抗原衍生自呼吸道病毒，如正粘病毒(流感)、肺炎病毒(RSV)、副粘病毒(PIV)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、VZV和冠状病毒(SARS)。在某些实施方式中，呼吸道抗原衍生自导致呼吸道疾病的细菌，仅举例来说如肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、百日咳博代杆菌(Bordetella pertussis)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、炭疽杆菌(Bacillus anthracis)和卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis)。以上描述了衍生自这些病原体的特定抗原的例子。
儿童疫苗抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含适用于儿童对象的一种或多种抗原。儿童对象通常年龄小于约3岁，或小于约2岁，或小于约1岁。儿童用抗原可在6个月、1年、2年或3年的过程中多次给药。儿童用抗原衍生自可靶向儿童群体的病毒和/或儿童群体易受感染的病毒。儿童用病毒抗原包括但不限于衍生自正粘病毒(流感)、肺炎病毒(RSV)、副粘病毒(PIV和腮腺炎)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、肠道病毒(脊髓灰质炎)、HBV、冠状病毒(SARS)和水痘带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)中一种或多种的抗原。儿童用细菌抗原包括衍生自肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)、酿脓链球菌(A群链球菌)、粘膜炎莫拉菌、百日咳博德特菌、金黄色葡萄球菌、破伤风梭菌(破伤风)、白喉棒状杆菌(白喉)、B型流感嗜血杆菌(Hib)、绿脓假单胞菌、无乳链球菌(B群链球菌)和大肠杆菌中一种或多种的抗原。以上描述了衍生自这些病原体的特定抗原的例子。
适用于老年人或免疫受损个体的抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含适用于老年人或免疫受损个体的一种或多种抗原。这类个体可能需要更为频繁地接种较高剂量或用佐剂辅助的制剂，以提高其对靶抗原的免疫应答。靶向用于老年人或免疫受损个体的抗原包括衍生自一种或多种以下病原体的抗原：脑膜炎奈瑟球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌(A群链球菌)、粘膜炎莫拉菌、百日咳博德特菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、破伤风梭菌(破伤风)、白喉棒状杆菌(白喉)、B型流感嗜血杆菌(Hib)、绿脓假单胞菌、嗜肺军团菌、无乳链球菌(B群链球菌)、粪肠球菌、幽门螺杆菌、肺炎衣原体、正粘病毒(流感)、肺炎病毒(RSV)、副粘病毒(PIV和腮腺炎)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、肠道病毒(脊髓灰质炎)、HBV、冠状病毒(SARS)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)。以上描述了衍生自这些病原体的特定抗原的例子。
适用于青少年疫苗的抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含适用于青少年对象的一种或多种抗原。青少年需要先前已给予的儿童用抗原加强型。上文描述了适用于青少年的儿童用抗原。此外，青少年靶向接受衍生自STD病原体抗原，以保证在性行为开始之前产生保护性或治疗性免疫力。上文描述了适用于青少年的STD抗原。
肿瘤抗原
在某些实施方式中，肿瘤抗原或癌抗原与本文提供的免疫原性组合物联用。在某些实施方式中，肿瘤抗原是含肽的肿瘤抗原，如多肽肿瘤抗原或糖蛋白肿瘤抗原。在某些实施方式中，肿瘤抗原是含糖的肿瘤抗原，如糖脂肿瘤抗原或神经节苷脂肿瘤抗原。在某些实施方式中，肿瘤抗原是表达含多肽的肿瘤抗原的多核苷酸包含肿瘤抗原，例如，RNA载体构建物或DNA载体构建物，如质粒DNA。
适合与本文所提供免疫原性组合物联用的肿瘤抗原包括各种分子，如(a)含多肽的肿瘤抗原，包括多肽(长度范围可以是(例如)8-20个氨基酸，虽然超出此范围以外的长度也常见)、脂多肽和糖蛋白，(b)含糖肿瘤抗原，包括多糖、粘蛋白、神经节苷脂、糖脂和糖蛋白；(c)表达抗原性多肽的多核苷酸。
在某些实施方式中，肿瘤抗原是例如：(a)与癌细胞相关的全长分子，(b)相同的同源物和修饰形式，包括含有缺失、添加和/或取代部分的分子，以及(c)相同的片段。在某些实施方式中，肿瘤抗原以重组形式提供。在某些实施方式中，肿瘤抗原包括例如：CD8+淋巴细胞识别的I型-限制性抗原或CD4+淋巴细胞识别的II型-限制性抗原。
在某些实施方式中，肿瘤抗原包括但不限于(a)睾丸癌抗原如NY-ESO-1、SSX2、SCP1以及RAGE、BAGE、GAGE和MAGE家族多肽，如GAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6和MAGE-12(例如，可用于检测黑色素瘤、肺肿瘤、头颈肿瘤、NSCLC瘤、乳腺肿瘤、胃肠道肿瘤和膀胱肿瘤)，(b)突变抗原，例如p53(与各种实体瘤如结直肠癌、肺癌、头颈癌有关)、p21/Ras(例如，与黑色素瘤、胰腺癌和结直肠癌有关)、CDK4(例如，与黑色素瘤有关)、MUM1(例如，与黑色素瘤有关)、胱冬酶-8(例如，与头颈癌有关)、CIA0205(例如，与膀胱癌有关)、HLA-A2-R1701、β联蛋白(例如，与黑色素瘤有关)、TCR(例如，与T-细胞非霍奇金淋巴瘤有关)、BCR-abl(例如，与慢性髓细胞性白血病有关)、磷酸丙糖异构酶、KIA 0205、CDC-27和LDLR-FUT，(c)过量表达抗原，例如半乳糖凝集素4(例如，与结直肠癌有关)、半乳糖凝集素9(例如，与霍奇金病有关)、蛋白酶3(例如，与慢性髓细胞性白血病有关)、WT 1(例如，与多种白血病有关)、碳酸酐酶(例如，与肾癌有关)、醛缩酶A(例如，与肺癌有关)、PRAME(例如，与黑色素瘤有关)、HER-2/neu(例如，与乳腺癌、结肠癌、肺癌与卵巢癌有关)、甲胎蛋白(例如，与肝细胞癌有关)、KSA(例如，与结直肠癌有关)、胃泌素(例如，与胰腺癌和胃癌有关)、端粒酶催化蛋白、MUC-1(例如，与乳腺癌和卵巢癌有关)、G-250(例如，与肾细胞癌有关)、p53(例如，与乳腺癌和结肠癌有关)和癌胚抗原(例如，与乳腺癌、肺癌和胃肠道癌如结直肠癌有关)，(d)共有抗原，例如黑色素瘤-黑素细胞分化抗原如MART-1/Melan A、gp100、MC1R、黑素细胞-刺激激素受体、酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1/TRP1和酪氨酸酶相关蛋白-2/TRP2(例如，与黑色素瘤有关)，(e)前列腺相关抗原如PAP、PSA、PSMA、PSH-P1、PSM-P1、PSM-P2，例如与前列腺癌有关，(f)免疫球蛋白独特型(例如，与骨髓瘤和B细胞淋巴瘤有关)，以及(g)其他肿瘤抗原，例如含多肽与糖的抗原，包括(i)糖蛋白如唾液酸Tn和唾液酸Lex(例如，与乳腺癌和结直肠癌有关)以及各种粘蛋白；与载体蛋白偶联的糖蛋白(例如，MUC-1偶联KLH)；(ii)脂多肽(例如，连有脂质部分的MUC-1)；(iii)偶联于载体蛋白(如KLH)的多糖(例如，GloboH合成己糖)，(iv)偶联于载体蛋白(如KLH)的神经节苷脂如GM2、GM12、GD2、GD3(例如，与脑癌、肺癌、黑色素瘤有关)。
在某些实施方式中，肿瘤抗原包括但不限于p15、Hom/Mel-40、H-Ras、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、EB病毒抗原、EBNA、人乳头瘤病毒(HPV)抗原，包括E6和E7、乙肝和丙肝病毒抗原、人T细胞嗜淋巴细胞病毒抗原、TSP-180、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、mn-23H1、TAG-72-4、CA 19-9、CA 72-4、CAM 17.1、NuMa、K-ras、p16、TAGE、PSCA、CT7、43-9F、5T4、791Tgp72、β-HCG、BCA225、BTAA、CA 125、CA 15-3(CA27.29\BCAA)、CA 195、CA 242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2结合蛋白\亲环蛋白C相关蛋白)、TAAL6、TAG72、TLP、TPS等。
与本文所提供免疫原性组合物联用的含多核苷酸的抗原包含编码如上所列多肽癌抗原的多核苷酸。在某些实施方式中，含多核苷酸的抗原包括但不限于DNA或RNA载体构建物，如质粒载体(如pCMV)，它们能在体内表达多肽癌抗原。
在某些实施方式中，肿瘤抗原衍生自突变或改变的细胞组分。改变后，这些细胞组分不再行使其调节功能，因此细胞可能发生非受控制生长。已改变细胞组分的代表性示例包括但不限于ras，p53，Rb，威尔姆氏肿瘤基因编码的已改变蛋白，泛素，粘液素，DCC、APC和MCC基因编码的蛋白，以及受体或受体样结构，如neu、甲状腺激素受体、血小板衍生生长因子(PDGF)受体、胰岛素受体、表皮生长因子(EGF)受体和集落刺激因子(CSF)受体。
此外，细菌和病毒抗原与本文所提供免疫原性组合物联用以治疗癌症。在某些实施方式中，载体蛋白如CRM197、破伤风类毒素或鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)抗原可与本文提供的化合物组合/结合使用以治疗癌症。癌抗原联合疗法的效力和生物利用度高于现有疗法。
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含来自脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y血清群中至少两种的荚膜糖。在其他实施方式中，此类疫苗还包含一种或多种以下来源的抗原：(a)B群脑膜炎奈瑟球菌；(b)B型流感嗜血杆菌；和/或(c)肺炎链球菌。
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含脑膜炎奈瑟球菌C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含脑膜炎奈瑟球菌B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含脑膜炎奈瑟球菌A、B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟球菌C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟球菌B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟球菌A、B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌A、B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌A、B、C、W135和Y血清群。
5.药物组合物和给药
另一方面，发明提供含SMIP均匀悬液的药物组合物，并且还可包括一个或多个药学上可接受载体，稀释剂或赋形剂。
本文提供的药物组合物可以单独或与一种或多种其他治疗试剂联合给药。给药的方法包括但不限于口服给药、直肠给药、胃肠外、静脉内给药、玻璃体内给药、肌肉内给药、吸入、鼻内给药、局部给药、眼部给药或耳部给药。
所述SMIP治疗有效量根据所示疾病、疾病严重度、对象年龄和相对健康状况、给予的化合物的效力、给药方式和所需的治疗等而不同。
在其他实施方式中，本文所述均匀悬液、本文所述免疫原性组合物、或其药物组合物，与一种或多种其他治疗试剂联合给药。其他治疗试剂包括但不限于抗生素或抗细菌剂，止吐剂，抗真菌剂，消炎剂，抗病毒剂，免疫调节剂，细胞因子，抗抑郁药，激素，烷化剂，抗代谢物，抗肿瘤抗生素，抗有丝分裂剂，拓扑异构酶抑制剂，抑制细胞生长剂，抗入侵剂，抗血管新生剂，生长因子功能抑制剂，病毒复制抑制剂，病毒酶抑制剂，抗肿瘤剂，α干扰素，β干扰素，利巴韦林，激素，和其他Toll样受体调节剂，免疫球蛋白（Ig），和调节Ig功能的抗体（例如抗IgE（奥马珠单抗））。
在某些实施方式中，本文提供的药物组合物用于治疗传染病，包括但不限于：病毒疾病如生殖器疣、寻常疣、脚底疣、呼吸道合胞病毒(RSV)、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、登革热病毒、单纯疱疹病毒(仅举示例来说，HSV-I、HSV-II、CMV、或VZV)、传染性软疣、牛痘、天花、慢病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、人乳头瘤病毒(HPV)、巨细胞病毒(CMV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、鼻病毒、肠病毒、腺病毒、冠状病毒(如SARS)、流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、乳多空病毒、嗜肝DNA病毒、黄病毒、逆转录病毒、沙粒病毒（仅举例来说，LCM、胡宁病毒、马丘博病毒、瓜纳瑞托病毒（Guanaritovirus）和拉沙热）和纤丝病毒(仅举例来说，埃博拉病毒或马尔堡病毒)。
在某些实施方式中，本文提供的药物组合物用于治疗细菌、真菌和原生动物感染，包括但不限于：肺结核和鸟分枝杆菌病,麻疯病;卡氏肺囊虫肺炎（pneumocystis carnii）,隐孢子虫病,组织胞浆菌病,弓形体病,锥虫病感染,利什曼病,埃希氏菌属（Escherichia）、肠细菌属（Enterobacter）、沙门氏菌属（Salmonella）、葡萄球菌属（Staphylococcus）、克氏杆菌属（Klebsiella）、变形杆菌属（Proteus）、假单胞菌属（Pseudomonas）、链球菌属（Streptococcus）和衣原体属（Chlamydia）的细菌引起的感染，和真菌感染如念珠菌病（candidiasis）、曲霉病(aspergillosis）、组织胞浆菌病(histoplasmosis）、隐球菌脑膜炎(cryptococcal meningitis）。
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物用于治疗呼吸疾病和/或紊乱，皮肤病，眼睛疾病和/或紊乱，泌尿生殖系统疾病和/或紊乱，包括同种异体移植物排斥，自身免疫和过敏，癌症，或损伤或老化皮肤如疤痕和皱纹。
另一方面，发明提供在所需对象，如哺乳动物中产生免疫反应的方法，包括给予有效量的本文所公开免疫原性组合物。所述免疫应答优选为保护性，并优选涉及抗体和/或细胞介导免疫。该方法可以引起增强的应答。
其他方面，文本提供的均匀悬液和/或免疫原性组合物用于诱导或增强免疫反应，例如，在治疗细菌，真菌和原生动物感染的治疗中，包括但不限于：脑膜炎球菌血症（meneingococcemia），脑膜炎，脑膜炎球菌肺炎（pheumonia），脑膜炎球菌心包炎，脑膜炎球菌心肌炎，脑膜炎球菌咽炎，脑膜炎球菌结膜炎，脑膜炎球菌骨髓炎，脑膜炎球菌眼内炎，脑膜炎球菌尿道炎，脑膜炎奈瑟球菌感染，结核病和肺结核和鸟分枝杆菌病，麻疯病，卡氏肺囊虫肺炎，隐孢子虫病，组织胞浆菌病，弓形体病，锥虫病感染，利什曼病，埃希氏菌属（Escherichia）、肠细菌属（Enterobacter）、沙门氏菌属（Salmonella）、葡萄球菌属（Staphylococcus）、克氏杆菌属（Klebsiella）、变形杆菌属（Proteus）、假单胞菌属（Pseudomonas）、链球菌属（Streptococcus）和衣原体属（Chlamydia）的细菌引起的感染，和真菌感染如念珠菌病（candidiasis）、曲霉病(aspergillosis）、组织胞浆菌病(histoplasmosis）、隐球菌脑膜炎(cryptococcalmeningitis）。
在某些实施方式中，文本提供的均匀悬液和/或免疫原性组合物用于诱导或增强免疫反应，例如，在治疗呼吸疾病和/或紊乱（如RSV），脑膜炎病（如脑膜炎球菌血症，脑膜炎，脑膜炎球菌肺炎，脑膜炎球菌心包炎，脑膜炎球菌心肌炎，脑膜炎球菌咽炎，脑膜炎球菌结膜炎，脑膜炎球菌骨髓炎，脑膜炎球菌眼内炎，脑膜炎球菌尿道炎）皮肤病，眼睛疾病和/或紊乱，泌尿生殖系统疾病和/或紊乱，包括同种异体移植物排斥，自身免疫和过敏，癌症，或损伤或老化皮肤如疤痕和皱纹的治疗中。
在一些优选实施方式中，文本提供的均匀悬液和/或免疫原性组合物用于诱导或增强免疫反应，如，针对RSV，埃博拉或脑膜炎奈瑟球菌的保护性免疫反应。
在一些实施方式中，发明提供产生或增强免疫反应的方法，包括将有效量的本文所公开免疫原性组合物和均匀悬液给予需要对象。免疫反应能是自然发生的免疫反应，或诱导免疫反应，例如由免疫作用诱导。
当给予式I和式II的苯并萘啶化合物均匀悬液增强诱导免疫反应时，优选与诱导免疫反应的试剂基本同时给予。例如，有效量的均匀悬液能与免疫原性组合物或疫苗同时给予，或在给予免疫原性组合物或疫苗之前或之后约1天时间内给予。
在某些实施方式中，如果使用含铝佐剂，需要分别封装明矾吸附抗原和式I和式II苯并萘啶化合物的均匀悬液。所述两种成分可以合并，如在给药前72小时内，从而来自含铝佐剂的抗原吸附降低。例如，明矾吸附抗原和均匀悬液能在患者身旁混合。优选地，明矾吸附抗原和均匀悬液的混合是在给药前约72小时内，约48小时，约24小时，约12小时，约10小时，约9小时，约8小时，约7小时，约6小时，约5小时，约4小时，约3小时，约2小时，约1小时，约45分钟，约30分钟，约15分钟，约10分钟，或约5分钟。
在某些实施方式中，本文所述免疫原性组合物可用作药物，如用于引起或增加需要其的对象，如哺乳动物中的免疫应答。
在某些实施方式中，本文所述组合物也可以用于生产引起需要其的对象，如哺乳动物中免疫应答的药物。本发明还提供了一种预填充有本发明所述免疫原性组合物的递送装置。
所述哺乳动物优选人，但可以是如牛、猪、鸡、猫或狗，因为本文包括的病原体在广泛的物种中可能有问题。当疫苗用于预防性用途时，人优选为儿童(如幼童或婴儿)或青少年；当疫苗用于治疗性用途时，人优选为青少年或成人。用于儿童的疫苗也可给予成人，例如，以评估其安全性、剂量、免疫原性等。
检测治疗性处理功效的一种方式包括在给予本发明所述免疫原性组合物后监测病原体感染。一种检查预防性治疗功效的途径包括给予所述免疫原性组合物（以及抗原，若分别给予）后监测针对本文所述免疫原性组合物中包括的或与之联合给予的抗原的全身免疫应答(如监测IgG1和IgG2a产生水平)和/或粘膜免疫应答(如监测IgA产生水平)。通常，在免疫后但在刺激前测定抗原特异性血清抗体应答，而在免疫后且刺激后测定抗原特异性粘膜抗体应答。
另一评价本文所述免疫原性组合物（其中抗原是蛋白）的免疫原性的方法是重组表达蛋白，以通过免疫印迹和/或微阵列筛查患者血清或粘膜分泌。蛋白质和患者样品间的阳性反应表明患者已经产生对受试蛋白的免疫应答。该方法也可用于鉴定免疫显性抗原和/或蛋白抗原中的表位。
所述免疫原性组合物的功效还可通过体内攻击感兴趣的病原体感染的合适动物模型来确定。
可以通过单剂量方案或多剂量方案进行给药。多剂量可以用于初次免疫方案和/或加强免疫方案。在多剂量方案中，可通过相同或不同的途径如胃肠道外初次和粘膜加强、粘膜初次和胃肠道外加强等给予各剂量。一般以至少1周（例如约2周、约3周、约4周、约6周、约8周、约10周、约12周、约16周等）的间隔给予多个剂量。
包括一种或多种抗原或者与一种或多种抗原联用的本文所述免疫组合物可用于治疗儿童和成人。因此，人类对象可以小于1岁、1-5岁、5-15岁、15-55岁或至少55岁。接受所述免疫原性组合物的对象优选老年人(如>50岁，>60岁并优选>65岁)，幼童(如<5岁)，住院病人、保健护理人员、武装部队和军人、孕妇、慢性病人或免疫缺陷病人。然而所述免疫原性组合物不仅适用于这些人群，还可用于更广泛的人群。
包括一种或多种抗原或者与一种或多种抗原联用的本文所述免疫组合物可与其它疫苗基本上同时(在健康护理专业人员或疫苗接种中心的同一用药咨询或就诊期间)给予患者，例如与麻疹疫苗、腮腺炎疫苗、风疹疫苗、MMR疫苗、水痘疫苗、MMRV疫苗、白喉疫苗、破伤风疫苗、百日咳疫苗、DTP疫苗、偶联的B型流感嗜血杆菌疫苗、脊髓灰质炎病毒灭活疫苗、乙型肝炎病毒疫苗、脑膜炎球菌偶联疫苗(如四价A-C-W135-Y疫苗)、呼吸道合胞病毒疫苗等基本上同时给药。
6.药盒
发明也提供包括在分开容器中的均匀悬液和含抗原组合物的药盒。例如，药盒能包括含有均匀悬液的第一容器，和含有包括抗原的组合物的第二容器。包括抗原的组合物可以液体形式或固体形式（如冻干），单独抗原亦如此。合适的组合物容器包括例如，瓶、小瓶、注射器和试管。容器可由各种材料，包括玻璃或塑料制成。容器可具有无菌存取口（例如，所述容器可以是具有用皮下注射针可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。
所述药盒还可包括含有药学上可接受缓冲剂如磷酸盐缓冲盐水、林格溶液或右旋糖溶液的第三容器。其还可包括可用于最终使用者的其它材料，包括其它药学可接受的配制试剂，如缓冲剂、稀释剂、滤器、针和注射器或其他递送设备。所述药盒还可以包括含有佐剂（例如含铝佐剂或MF59）的第四容器。
所述药盒还可包括产品说明书，其包含诱导免疫或者用于治疗感染的方法书面说明书。所述产品说明书可以是未经批准的产品说明书草案，或可以是经食品药物管理局(FDA)或其他管理机构批准的产品说明书。
实施例
现已总体描述了本发明，参考以下实施例更易于理解本发明，这些实施例只是用于说明本发明的某些方面与实施方案，而非限制本发明。
实施例（I）：制备所选苯并[F][1,7]萘啶-5-胺类似物
以下实施例说明本发明的组合物和方法中某些有用化合物的制备方法。技术人员能基于这些实施例制得用于本方法的大量其他化合物。
实施例1
苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900701
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料获得白色固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.04(d,1H),8.91(d,1H),8.45(d,1H),7.86(dd,1H),7.53-7.62(m,2H),7.35(t,1H),6.65(br,2H)。LRMS[M+H]=196.1。
实施例3
9-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900711
步骤1：2-溴-4-氯苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下向0℃的含2-溴-4-氯代苯胺(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900712
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤2：4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基-氨基甲酸 叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-4-氯苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-10%乙酸乙酯的己烷纯化粗混合物，获得4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基-氨基甲酸叔丁酯。
步骤3：氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基-氨基甲酸叔丁酯(步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，然后用含0-5%甲醇的二氯甲烷再纯化得到固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.08(d,1H),8.96(d,1H),8.45(s,1H),7.86-7.89(dd,1H),7.60(d,1H),7.54(d,1H),6.78(br,2H)。LRMS[M+H]=230.1。
实施例4
8-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900721
步骤1：2-溴-5-氯苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下向0℃的含2-溴-5-氯代苯胺(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900722
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤2：5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基-氨基甲酸 叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-5-氯苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900723
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗混合物，获得5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基-氨基甲酸叔丁酯。
步骤3：8-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基-氨基甲酸叔丁酯(步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900731
系统(ISCO)上利用含0-5%甲醇的二氯甲烷纯化粗产物得到半纯固体，然后在含10%热乙酸乙酯的己烷中搅拌该固体，过滤并干燥得到纯的固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.03(d,1H),8.93(d,1H),8.46(d,1H),7.85-7.88(dd,1H),7.57(s,1H),7.32(d,1H),6.94(br,2H)。LRMS[M+H]=230.1。
实施例5
8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900732
步骤1：2-溴-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下于0℃向含2-溴-5-甲基苯胺(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤2：5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲 酸叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-8%醚的己烷纯化粗料，获得5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯。
步骤3：8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900741
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗产物获得纯的固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ8.98(d,1H),8.87(d,1H),8.32(d,1H),7.79-7.82(dd,1H),7.42(s,1H),7.18(d,1H),6.6(br,2H),2.45(s,3H)。LRMS[M+H]=210.1。
实施例6
9-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900742
步骤1：2-溴-4-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下于0℃向含2-溴-4-甲基苯胺(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900743
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤2：4-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基 甲酸叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-4-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900744
系统(ISCO)上利用含0-8%醚的己烷纯化粗料，获得4-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯。
步骤3：9-甲基苯并[f][[1,7]萘啶-5-胺
将含4-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900751
系统(ISCO)上利用含0-5%甲醇的二氯甲烷纯化粗产物得到半纯固体，然后该固体在热乙酸乙酯中涡旋，过滤，并干燥得到纯的固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.02(d,1H),8.89(d,1H),8.25(s,1H),7.80-7.84(dd,1H),7.52(d,1H),7.40(d,1H),6.5(br,2H),2.48(s,3H)。LRMS[M+H]=210.2。
实施例7
10-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900752
步骤1：2-溴-3-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下于0℃向含2-溴-3-甲基苯胺(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤2：3-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基 甲酸叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-3-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900761
系统(ISCO)上利用含0-10%醚的己烷纯化粗料，获得3-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯。
步骤3：10-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含3-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900762
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗产物得到半纯固体，然后该固体在含10%热乙酸乙酯的己烷中涡旋，过滤，并干燥得到纯的固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.22(d,1H),8.90(d,1H),7.82-7.85(dd,1H),7.54(d,1H),7.45(t,1H),7.19(d,1H),6.6(br,2H),2.98(s,3H)。LRMS[M+H]=210.2。
实施例8
5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-9-羧酸乙酯
Figure BDA00002004804900763
步骤1：3-溴-4-(叔-丁氧基羰基氨基)苯甲酸乙酯
N2气氛下于0℃向含4-氨基-3-溴苯甲酸甲酯(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900771
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤2：4-(叔-丁氧基羰基氨基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼 烷-2-基)苯甲酸乙酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合3-溴-4-(叔-丁氧基羰基氨基)苯甲酸乙酯(步骤1所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900772
系统(ISCO)上利用含0-10%醚的己烷纯化粗料，获得4-(叔-丁氧基羰基氨基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酸乙酯。
步骤3：5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-9-羧酸乙酯
将含4-(叔-丁氧基羰基氨基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酸乙酯(步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯/乙醇溶液(10:1,0.23M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和无水碳酸钾(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应混合物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900773
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗料得到半纯固体，然后该固体在含10%热乙酸乙酯的己烷中涡旋，过滤，并干燥得到纯的固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.11(d,1H),9.05(s,1H),8.95(d,1H),8.14(d,1H),7.89-7.92(dd,1H),7.63(d,1H),4.38(q,2H),1.40(t,3H)。LRMS[M+H]=268.2。
实施例9
5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-9-羧酸
Figure BDA00002004804900774
在乙醇(0.12M)中混合5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-9-羧酸乙酯(实施例8)(1.0当量)与1N NaOH(2.0当量)。反应加热至80℃，并搅拌36小时。真空除去溶剂。残留物悬浮于水，用5%柠檬酸水溶液调节pH至中性。悬液离心(2500rpm，5分钟)，除去上清液。所得固体通过涡旋重悬于水中，离心(2500rpm，5分钟)，并除去上清液。用热甲醇、热乙酸乙酯和醚重复所述重悬、离心和除上清步骤以得到纯的固体。1H NMR(DMSO):δ12.86(s,1H),9.15(d,1H),9.00(s,1H),8.97(d,1H),8.07(d,1H),7.88-7.91(dd,1H),7.56-7.59(m,3H)。LRMS[M+H]=240.1。
实施例10
8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900781
步骤1：2-溴-5-甲氧基苯胺
在乙醇(0.64M)中混合含1-溴-4-甲氧基-2-硝基苯(1.0当量)的溶液、铁粉(3.0当量)和浓缩HCL(1.04当量)，加热回流。该反应搅拌24小时，然后蒸发溶剂。所得残留物用乙酸乙酯和饱和氯化铵水溶液稀释。水层用乙酸乙酯提取3次，合并的有机层用水、盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900782
系统(ISCO)上利用含0-15%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为油。
步骤2：2-溴-5-甲氧基苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下于0°C向含2-溴-5-甲氧基苯胺(1.0当量)(步骤1所得)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900783
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤3：5-甲氧基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨 基甲酸叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-5-甲氧基苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(2当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-15%醚的己烷纯化粗料，获得5-甲氧基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯。
步骤4：8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-甲氧基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤3所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯/乙醇溶液(10:1,0.23M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和无水碳酸钾(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-5%甲醇的二氯甲烷纯化粗产物得到半纯固体，然后该固体在乙酸乙酯中重结晶，过滤，并干燥得到纯的固体。1HNMR(丙酮d-6)：δ8.91(d,1H),8.82(d,1H),8.33(d,1H),7.76-7.79(dd,1H),7.07(s,1H),6.96(d,1H),6.6(br,2H),3.90(s,3H)。LRMS[M+H]=226.1。
实施例11
7-氟苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900793
步骤1：2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下于0℃向含2-氟苯胺(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900801
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤2：2-(叔-丁氧基羰基氨基)-3-氟苯基硼酸
N2气氛下向-78℃的含2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.25M)中滴加1.7M叔丁基锂(2.4当量)。反应用2小时缓慢升至-40℃，加入纯硼酸三甲酯(3.8当量)。反应用30分钟升至室温。向反应中缓慢加入1N NaOH水溶液，并搅拌15分钟。混合物倒入乙酸乙酯并用3N HCl酸化以溶解固体。水层用乙酸乙酯提取2次，合并的有机层用水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。所得固体在1:1醚/己烷中搅拌，过滤，并干燥。所述固体无需进一步纯化即用于下一步。
步骤3：7-氟苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)-3-氟苯基硼酸(步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。检查后，粗产品重悬于热甲苯中，离心(2500rpm，5分钟)，并除去上清液。用热乙酸乙酯、醚和己烷重复所述悬浮、离心和除上清步骤以得到纯的固体。1HNMR(丙酮d-6)：δ9.04(d,1H),8.96(d,1H),8.27(d,1H),7.86-7.90(dd,1H),7.28-7.34(m,2H),6.9(br,2H)。LRMS[M+H]=214.1。
实施例12
8-(甲磺酰基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900802
步骤1：2-溴-5-(甲磺酰基)苯胺
在乙醇(0.64M)中混合含1-溴-4-甲磺酰基-2-硝基苯(1.0当量)的溶液、铁粉(3.0当量)和浓缩HCL(1.04当量)，加热回流。该反应搅拌24小时，然后蒸发溶剂。所得残留物用乙酸乙酯和饱和氯化铵水溶液稀释。水层用乙酸乙酯提取3次，合并的有机层用水、盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过在1:1己烷/醚中研磨纯化粗料得到浅黄色固体。
步骤2：2-溴-5-(甲磺酰基)苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下于0℃向含2-溴-5-(甲磺酰基)苯胺(步骤1所得)(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900811
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到2-溴-5-(甲磺酰基)苯基氨基甲酸叔丁酯。
步骤3：5-(甲磺酰基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯 基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-5-(甲磺酰基)苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤2所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900812
系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗料得到固体，然后在10%醚/己烷中研磨该固体得到5-(甲磺酰基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯白色固体。
步骤4：8-(甲磺酰基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-甲磺酰基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤3所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.24M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(4.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900821
系统(ISCO)上利用含0-5%甲醇的二氯甲烷纯化粗料得到固体，然后在1:1己烷/乙酸乙酯中研磨该固体得到8-(甲磺酰基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.16(d,1H),9.03(d,1H),8.71(d,1H),8.11(s,1H),7.93-7.96(dd,1H),7.81(d,1H),7.0(br,2H),3.19(s,3H)。LRMS[M+H]=274.1。
实施例13
8-(三氟甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900822
步骤1：2-溴-5-(三氟甲基)苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下于0℃向含2-溴-5-(三氟甲基)苯胺(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900823
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤2：2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯 基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-5-(三氟甲基)氯苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900824
系统(ISCO)上利用含0-10%醚的己烷纯化粗料，得到不纯产物无需进一步纯化即进入下一步。
步骤3：8-(三氟甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.24M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(4.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应混合物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900831
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗产物得到固体，然后在含10%乙酸乙酯的己烷中研磨该固体得到8-(三氟甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.13(d,1H),9.00(d,1H),8.67(d,1H),7.91-7.94(dd,1H),7.86(s,1H),7.58(d,1H),6.9(br,2H)。LRMS[M+H]=264.1。
实施例14
8-氟苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900832
步骤1：2-溴-5-氟苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下于0℃向含2-溴-5-氟代苯胺(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900833
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到的产物为浅黄色油。
步骤2：5-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲 酸叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-5-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900841
系统(ISCO)上利用含0-5%醚的己烷纯化粗料，得到的产物为黄色固体。
步骤3：8-氟苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.24M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(4.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900842
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗产物得到固体，然后在含10%乙酸乙酯的己烷中研磨该固体得到8-氟苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.00(d,1H),8.90(d,1H),8.46-8.50(dd,1H),7.83-7.87(dd,1H),7.26(d,1H),7.15(t,1H),6.9(br,2H)。LRMS[M+H]=214.1。
实施例16
3-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900843
步骤1：3-溴-6-甲氧基-2-氰基吡啶
含3-溴-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-腈(实施例15/步骤2所得)(1.0当量)、碳酸银(1.3当量)和碘甲烷(1.2当量)的甲苯溶液(0.2M)室温避光搅拌过夜。真空浓缩溶剂，所得残留物通过
Figure BDA00002004804900844
系统(ISCO)用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化得到3-溴-6-甲氧基-2-氰基吡啶。
步骤2：3-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和3-溴-6-甲氧基-2-氰基吡啶(步骤1所得)(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900851
系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到3-甲氧基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ8.91(d,1H),8.34(d,1H),7.63(d,1H),7.51-7.53(dd,1H),7.27-7.33(m,2H),6.65(br,2H),4.11(s,3H)。LRMS[M+H]=226.1。
实施例17
3-丁氧基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900852
步骤1：3-溴-6-丁氧基-2-氰基吡啶
含3-溴-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-腈(实施例15/步骤2所得)(1.0当量)、碳酸钾(1.3当量)和1-碘丁烷(1.2当量)的丙酮溶液(0.3M)在70°C搅拌过夜。真空浓缩溶剂，所得残留物收集在水和乙酸乙酯中。水层用乙酸乙酯提取3次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900853
系统(ISCO)上利用含0-30%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物获得无色固体。
步骤2：3-丁氧基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和3-溴-6-丁氧基-2-氰基吡啶(步骤1所得)(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的甲醇纯化粗产物，得到3-丁氧基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺的黄色固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ8.91(d,1H),8.34(d,1H),7.61(d,1H),7.48-7.52(dd,1H),7.27-7.33(m,2H),6.51(br,2H),6.55(t,2H),1.81-1.88(m,2H),1.50-1.59(m,2H),1.00(t,3H)。LRMS[M+H]=268.1。
实施例18
3-(苄氧基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900861
步骤1：6-(苄氧基)-3-溴-2-氰基吡啶
含3-溴-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-腈(实施例15/步骤2所得)(1.0当量)、碳酸银(1.3当量)和碘甲烷(1.2当量)的甲苯溶液(0.16M)50°C避光搅拌过夜。真空浓缩溶剂，所得残留物通过
Figure BDA00002004804900862
系统(ISCO)用含0-20%乙酸乙酯的己烷纯化得到6-(苄氧基)-3-溴-2-氰基吡啶。
步骤2：3-(苄氧基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和6-(苄氧基)-3-溴-2-氰基吡啶(步骤1所得)(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到3-(苄氧基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺的黄色固体。1HNMR(丙酮d-6)：δ8.95(d,1H),8.35(d,1H),7.58-7.63(m,2H),7.49-7.53(dd,1H),7.30-7.44(m,5H),6.61(br,2H),5.64(s,2H)。LRMS[M+H]=302.1。
实施例19
3-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
步骤1：5-溴-2-甲基吡啶1-氧化物
向含5-溴-2-甲基吡啶(1.0当量)的氯仿溶液(0.38M)中添加77%间氯过苯甲酸(mCPBA)(4.0当量)并于60℃加热持续20小时。冷至室温后，加入Ca(OH)2(5.3当量)，所得沉淀搅拌30分钟。过滤沉淀并用3:1CHCl3/甲醇洗涤。真空浓缩滤液得到固体，该固体在含30%乙酸乙酯的己烷中搅拌并过滤得到所需的N-氧化物。真空浓缩滤液，所得残留物通过
Figure BDA00002004804900872
系统(ISCO)用含0-100%乙酸乙酯的己烷纯化得到更多的所需N-氧化物。合并两批用于下一步。
步骤2：3-溴-6-甲基-2-氰基吡啶
向含5-溴-2-甲基吡啶1-氧化物(步骤1所得)(1.0当量)的乙腈(0.2M)溶液中加入三甲基氰硅烷(TMSCN)(4.0当量)和三乙胺(3.0当量)。反应加热至100℃过夜。冷至室温后，真空浓缩溶剂，残留物通过系统(ISCO)用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化得到3-溴-6-甲基-2-氰基吡啶。
步骤3：3-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和3-溴-6-甲基-2-氰基吡啶(步骤2所得)(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-70%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到3-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。1H NMR(甲醇d-4)：δ8.85(d,1H),8.38(d,1H),7.72(d,1H),7.53-7.61(m,2H),7.34-7.38(dd,1H),2.76(s,3H)。LRMS[M+H]=210.1。
实施例20
3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900881
步骤1：5-溴-2-氯吡啶1-氧化物
向含5-溴-2-氯吡啶(1.0当量)的氯仿溶液(0.38M)中添加77%间氯过苯甲酸(mCPBA)(4.0当量)并60℃加热持续20小时。冷至室温后，加入Ca(OH)2(5.3当量)，所得沉淀搅拌30分钟。过滤沉淀并用3:1CHCl3/甲醇洗涤。真空浓缩滤液得到固体，该固体在含30%乙酸乙酯的己烷中搅拌并过滤得到所需的N-氧化物。真空浓缩滤液，所得残留物通过
Figure BDA00002004804900882
系统(ISCO)用含0-100%乙酸乙酯的己烷纯化得到更多的所需N-氧化物。合并两批用于下一步。
步骤2：3-溴-6-氯-2-氰基吡啶
向含5-溴-2-氯吡啶1-氧化物(步骤1所得)(1.0当量)的乙腈(0.2M)溶液中加入三甲基氰硅烷(TMSCN)(4.0当量)和三乙胺(3.0当量)。反应加热至100℃过夜。冷至室温后，真空浓缩溶剂，残留物通过
Figure BDA00002004804900883
系统(ISCO)用含0-40%乙酸乙酯的己烷纯化得到3-溴-6-氯-2-氰基吡啶。
步骤3：3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和3-溴-6-氯-2-氰基吡啶(步骤2所得)(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900884
系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物得到固体，然后在含10%乙酸乙酯的己烷中研磨该固体得到3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.10(d,1H),8.45(d,1H),7.89(d,1H),7.58-7.65(m,2H),7.35-7.39(dd,1H),6.67(br,2H)。LRMS[M+H]=230.1。
实施例21
N3,N3-二甲基苯并[f][1,7]萘啶-3,5-二胺
Figure BDA00002004804900891
3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例20)(1.0当量)溶液在40%二甲胺水溶液(0.26M)中溶解并在微波反应器中100℃加热30分钟。真空浓缩反应混合物，所得残留物通过
Figure BDA00002004804900892
系统(ISCO)用含0-90%乙酸乙酯的己烷纯化得到N3,N3-二甲基苯并[f][1,7]萘啶-3,5-胺。1H NMR(甲醇d-4)：δ8.63(d,1H),8.20(d,1H),7.55(d,1H),7.41-7.45(dd,1H),7.29-7.33(dd,1H),7.27(d,1H),3.26(s,6H)。LRMS[M+H]=239.1。
实施例22
N3-丁基苯并[f][1,7]萘啶-3,5-二胺
Figure BDA00002004804900893
3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例20)(1.0当量)溶液在正丁胺(0.1M)中溶解并110℃加热过夜。真空浓缩反应混合物，所得残留物通过
Figure BDA00002004804900894
系统(ISCO)用含0-90%乙酸乙酯的己烷纯化得到N3-丁基苯并[f][1,7]萘啶-3,5-二胺。1H NMR(甲醇d-4)：δ8.42(d,1H),8.13(d,1H),7.53(d,1H),7.38-7.42(dd,1H),7.25-7.29(dd,1H),6.96(d,1H),3.48(t,2H),1.63-1.71(m,2H),1.43-1.52(m,2H),0.99(t,3H)。LRMS[M+H]=267.2。
实施例23
3-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900895
含3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例20)(1.0当量)，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.2当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(4:1,0.1M)溶液加热至100°C并搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取三次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900901
系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物得到固体，然后在含10%乙酸乙酯的己烷中研磨该固体得到3-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮d-6)：δ8.99(d,1H),8.42(d,1H),8.01(d,1H),7.53-7.62(m,2H),7.30-7.35(dd,1H),7.03-7.10(dd,1H),6.77(br,2H),6.56(d,1H),5.66(d,1H)。LRMS[M+H]=222.1。
实施例24
3-乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900902
向3-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例23)的乙酸乙酯/乙醇溶液(1:1,0.07M)中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气囊引入氢气，反应搅拌过夜。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。真空浓缩滤液得到3-乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色固体。1H NMR(丙酮d-6)：δ8.93(d,1H),8.41(d,1H),7.76(d,1H),7.61(d,1H),7.51-7.55(dd,1H),7.30-7.34(dd,1H),6.55(br,2H),6.03(q,2H),1.41(t,3H)。LRMS[M+H]=224.1。
实施例25
3-氟苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900903
含3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例20)(1.0当量)、氟化钾(3.0当量)和18-冠-6(2.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液(0.4M)在微波反应器中210℃加热80分钟。冷至室温后，粗反应混合物用10-50%乙腈的水溶液通过HPLC纯化得到3-氟苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮d-6)：δ11.40(br,2H),9.38-9.42(dd,1H),8.60(d,1H),7.89-7.92(dd,1H),7.81-7.83(m,2H),7.59-7.66(m,1H)。LRMS[M+H]=214.1。
实施例26
2-(三氟甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900911
步骤1：3-氯-5-(三氟甲基)吡啶甲醛肟
将含3-氯-5-(三氟甲基)吡啶甲醛(1.0当量)、盐酸羟胺(5.0当量)和吡啶(4.0当量)的乙醇溶液加热至95℃并搅拌1小时。反应冷却至室温，用乙酸乙酯与水稀释。有机层用盐水、水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩得到固体，该固体无需进一步纯化即用于下一步。
步骤2：3-氯-5-(三氟甲基)-2-氰基吡啶
将含3-氯-5-(三氟甲基)吡啶甲醛肟(1.0当量)和Burgess试剂(1.5当量)的四氢呋喃(0.5M)溶液加热至65℃并搅拌1小时。反应冷却至室温，用乙酸乙酯与水稀释。有机层用水、盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩得到固体，该固体无需进一步纯化即用于下一步。
步骤3：2-(三氟甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和3-氯-5-(三氟甲基)-2-氰基吡啶(步骤2所得)(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900912
系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到2-(三氟甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮d-6)：δ9.44(s,1H),9.20(s,1H),8.65-8.63(d,1H),7.70-7.61(m,2H),7.44-7.36(m,1H),6.84(br,2H)。LRMS[M+H]=264.2。
实施例27
2-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
步骤1：3-氯-5-甲氧基-2-氰基吡啶
向含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量)的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(0.5M)中加入甲醇钠(1.5当量)并加热至75℃。搅拌14小时后，用乙酸乙酯和水稀释反应。有机层用饱和水性NaHCO3洗涤3次，用水洗涤2次，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。在
Figure BDA00002004804900922
系统(ISCO)上用含15%乙酸乙酯的己烷纯化粗残留物获得两种甲氧基区域异构体的混合物，其一为所需产物。混合物无需进一步纯化即用于下一步。
步骤2：2-甲氧基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和3-氯-5-甲氧基-2-氰基吡啶(步骤1所得)(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释反应内容物。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900923
系统(ISCO)上利用含50-100%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到2-甲氧基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。
实施例28
2-(苄氧基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900924
步骤1：3-(苄氧基)-5-溴吡啶
含5-溴吡啶-3-醇(1.0当量)、苄基溴(1.2当量)和碳酸银(1.3当量)的甲苯溶液(0.1M)加热至50℃并搅拌18小时。冷却至室温后，过滤反应物混合物，用乙酸乙酯洗脱。滤液真空浓缩成残留物，所述残留物由
Figure BDA00002004804900931
系统(ISCO)用含20%乙酸乙酯的己烷纯化得到3-(苄氧基)-5-溴吡啶。
步骤2：3-(苄氧基)-5-溴吡啶1-氧化物
含3-(苄氧基)-5-溴吡啶(步骤1所得)(1.0当量)和间氯过苯甲酸(mCPBA)(4.0当量)的二氯甲烷(0.1M)溶液室温搅拌18小时。用饱和NaHCO3水溶液淬灭反应并用二氯甲烷提取3次。合并的有机层用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过
Figure BDA00002004804900932
系统(ISCO)用含0-100%乙酸乙酯的己烷纯化粗残留物得到3-(苄氧基)-5-溴1-氧化物。
步骤3：5-(苄氧基)-3-溴-2-氰基吡啶
向含53-(苄氧基)-5-氯吡啶1-氧化物(步骤2所得)(1.0当量)的乙腈(0.2M)溶液中加入三甲基氰硅烷(TMSCN)(4.0当量)和三乙胺(3.0当量)。反应加热至100℃过夜。冷至室温后，真空浓缩溶剂，残留物通过
Figure BDA00002004804900933
系统(ISCO)用含0-40%乙酸乙酯的己烷纯化得到两种苯酰氧基区域异构体的混合物，其一为所需产物。混合物无需进一步纯化即用于下一步。
步骤4：2-(苄氧基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和5-(苄氧基)-3-溴-2-氰基吡啶(步骤3所得)(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%甲醇的二氯甲烷与水稀释。分离两相，水层用含2%甲醇的二氯甲烷提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含50-100%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到2-(苄氧基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮d-6)：δ8.36(s,1H),7.86(s,1H),7.59-7.56(d,2H),7.46-7.42(dd,2H),7.40-7.37(d,1H),7.20-7.15(dd,1H),7.12-7.09(d,1H),6.88-6.86(d,1H),6.77-6.73(dd,1H),5.51(s,2H),4.74(br,2H)。LRMS[M+H]=302.3。
实施例29
2-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900941
步骤1：3-氯-5-乙烯基-2-氰基吡啶
将含3.5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量)，4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(3.4当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.04M)溶液95℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900942
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物获得白色固体。
步骤2：2-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和3-氯-5-乙烯基-2-氰基吡啶(步骤1所得)(1.0当量)、四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900943
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到2-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。1H NMR(甲醇-d4-CDCl3)：δ8.87(d,1H),8.69(d,1H),8.28(d,1H),7.49-7.58(m,2H),7.32(dt,1H),6.90(dd,1H),6.09(d,1H),5.54(d,1H)。LRMS[M+H]=222.1。
实施例30
2-乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向含2-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例29)的乙酸乙酯/甲醇溶液(1:4,0.05M)中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气球引入氢气，反应搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。滤液真空浓缩，并通过
Figure BDA00002004804900951
系统(ISCO)用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化，得到2-乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺固体。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.78-8.81(m,2H),8.45(d,1H),7.55–7.63(m,2H),7.35-7.40(m,1H),2.97(q,2H),1.43(t,2H)。LRMS[M+H]=224.1。
实施例31
2-苯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
步骤1：3-氯-5-苯基-2-氰基吡啶
将含3.5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量)，4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(3.4当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.04M)溶液100℃搅拌2小时，然后80℃搅拌4小时。反应内容物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900953
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料获得白色固体。
步骤2：2-苯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)和3-氯-5-苯基-2-氰基吡啶(步骤1所得)(1.0当量)、四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900954
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到2-苯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色固体。1H NMR(dmso-d6):δ9.13(d,1H),9.03(d,1H),8.56(d,1H),7.98(d,2H),7.43-7.56(m,5H),7.27(m,1H),7.13(bs,2H)。LRMS[M+H]=272.2。
实施例32
(E)-2-苯乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900961
步骤1：(E)-3-氯-5-苯乙烯基-2-氰基吡啶
将含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量)，(E)-4,4,5,5-四甲基-2-苯乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(3.4当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.04M)溶液100℃搅拌2小时，然后80℃搅拌4小时。反应内容物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900962
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物获得白色固体。
步骤2：(E)-2-苯乙烯基并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)，和(E)-3-氯-5-苯乙烯基-2-氰基吡啶(步骤1所得)(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900963
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到(E)-2-苯乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺棕色固体。1H NMR(dmso-d6):δ9.22(d,1H),9.06(d,1H),8.51(d,1H),7.78(d,1H),7.66(d,2H),7.46-7.56(m,3H),7.70(t,2H),7.26-7.32(m,2H),7.08(bs,2H)。LRMS[M+H]=298.2。
实施例33
2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900971
向(E)-2-苯乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例32)的乙酸乙酯/甲醇溶液(1:4,0.05M)中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气球引入氢气，反应搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900972
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.54(d,1H),8.32(d,1H),8.10(dd,1H),7.63(dd,1H),7.51(m,1H),7.03–7.32(m,6H),6.16(bs,2H),3.11(t,2H),2.97(t,2H)。LRMS[M+H]=300.1。
实施例34
(E)-2-(3-甲氧基丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900973
步骤1：(E)-3-氯-5-(3-甲氧基丙-1-烯基)-2-氰基吡啶
将含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量)，(E)-2-(3-甲氧基丙-1-烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(3.4当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.04M)溶液100℃搅拌2小时，然后80℃搅拌4小时。反应内容物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900974
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到(E)-3-氯-5-(3-甲氧基丙-1-烯基)-2-氰基吡啶白色固体。
步骤2：(E)-2-(3-甲氧基丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)，和(E)-3-氯-5-(3-甲氧基丙-1-烯基)-2-氰基吡啶(步骤1所得)(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900981
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到(E)-2-(3-甲氧基丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺的黄色固体。1H NMR(dmso-d6):δ9.24(d,1H),9.18(d,1H),8.54(d,1H),7.52-7.58(m,2H),7.31(m,1H),7.11(bs,2H),6.86–7.00(m,2H),4.18(d,2H),3.36(s,3H)。LRMS[M+H]=266.2。
实施例35
2-(3-甲氧基丙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900982
向含(E)-2-(3-甲氧基丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例34)的乙酸乙酯/甲醇(1:4,0.05M)溶液中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气球引入氢气，反应搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。真空浓缩滤液，通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900983
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到2-(3-甲氧基丙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.64(d,1H),8.46(d,1H),8.19(d,1H),7.66(d,1H),7.53(m,1H),7.31(m,1H),6.56(bs,2H),3.37(t,2H),3.31(s,3H),2.91(t,2H),1.93–2.00(m,2H)。LRMS[M+H]=268.1。
实施例36
2-(丙-1-烯-2-基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
步骤1：3-氯-5-(丙-1-烯-2-基)-2-氰基吡啶
将含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量)，4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(3.4当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.04M)溶液100℃搅拌2小时，然后80℃搅拌4小时。反应内容物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900991
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到3-氯-5-(丙-1-烯-2-基)-2-氰基吡啶白色固体。
步骤2：2-(丙-1-烯-2-基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)，和3-氯-5-(丙-1-烯-2-基)-2-氰基吡啶(步骤1所得)(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900992
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到2-(丙-1-烯-2-基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色固体。1H NMR(dmso-d6)：δ9.03(d,1H),8.96(d,1H),8.55(d,1H),7.47-7.53(m,2H),7.25(m,1H),7.07(bs,2H)5.80(s,1H),5.36(s,1H),2.27(s,3H)。LRMS[M+H]=236.2。
实施例37
2-异丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804900993
向含2-(丙-1-烯-2-基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例36)的乙酸乙酯/甲醇(1:4,0.05M)溶液中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气球引入氢气，反应搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。滤液真空浓缩，并且通过快速色谱在
Figure BDA00002004804900994
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到2-异丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.69(d,1H),8.49(d,1H),8.25(dd,1H),7.65(dd,1H),7.53(m,1H),7.31(m,1H),6.02(bs,2H),3.15(septet,1H),1.37(d,6H)。LRMS[M+H]=238.2。
实施例38
1-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901001
步骤1：5-溴-2-氯-4-甲基吡啶1-氧化物
含5-溴-2-氯-4-甲基吡啶(1.0当量)和间氯过苯甲酸(mCPBA)(2.5当量)的氯仿(0.1M)溶液50℃搅拌过夜。冷却至室温后，向反应混合物中加入Ca(OH)2(2.5当量)。过滤沉淀，用含5%甲醇的二氯甲烷和乙酸乙酯洗涤。用饱和Na2S2O3水溶液和饱和NaHCO3水溶液洗涤滤出物。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩成浅色固体，该固体无需进一步纯化即用于下一步。
步骤2：3-溴-6-氯-4-甲基-2-氰基吡啶
向含5-溴-2-氯-4甲基吡啶1-氧化物(步骤1所得)(1.0当量)的乙腈(0.2M)溶液中加入TMSCN(4.0当量)和三乙胺(3.0当量)。反应加热至100℃过夜。冷却至室温后，真空浓缩溶剂，残留物通过
Figure BDA00002004804901002
系统(ISCO)用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化得到3-溴-6-氯-4-甲基-2-氰基吡啶。
步骤3：3-氯-1-甲基苯基并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(1.0当量)，和3-溴-6-氯-4-甲基-2-氰基吡啶(步骤2所得)(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901003
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到3-氯-1-苯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色固体。1H NMR(dmso-d6):δ8.44(d,1H),7.83(s,1H),7.50-7.58(m,2H),7.02(bs,2H),2.98(s,3H)。LRMS[M+H]=244.1。
步骤4：1-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向含3-氯-1-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(步骤3所得)的乙酸乙酯/甲醇溶液(1:2,0.03M)中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。反应容器于氢帕尔(Parr)设备中在50psi氢气下振荡过夜。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。滤液真空浓缩，并由
Figure BDA00002004804901004
系统(ISCO)用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化，得到1-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.63(d,1H),8.44(d,1H),7.71(dd,1H),7.54(m,1H),7.45(d,1H),7.30(m,1H),6.20(bs,2H),3.01(s,3H)。LRMS[M+H]=210.1。
实施例40
吡啶并[3,2-f][f][1,7]萘啶-6-胺
Figure BDA00002004804901011
将含3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901012
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到吡啶并[3,2-f][1,7]萘啶-6-胺白色固体。1H NMR(dmso-d6):δ9.14(dd,1H),8.98(dd,1H),8.90(dd,1H),7.93(dd,1H),7.60(bs,2H),7.30(dd,1H)。LRMS[M+H]=197。
实施例41
2-乙基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901013
步骤1：8-甲基-2-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.0当量)和3-氯-5-乙烯基-2-氰基吡啶(实施例29/步骤1所得)(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901021
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到8-甲基-2-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。
步骤2：2-乙基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向含8-甲基-2-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)的乙酸乙酯/甲醇溶液(1:4,0.05M)中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气球引入氢气，反应搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。滤液真空浓缩，并通过
Figure BDA00002004804901022
系统(ISCO)用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化，得到2-乙基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺灰白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.61(d,1H),8.42(d,1H),8.10(d,1H),7.44(s,1H),7.12(dd,1H),6.00(bs,2H),2.84(q,2H),2.45(s,3H),1.33(t,3H)。LRMS[M+H]=238.1。
实施例42
(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)甲醇
Figure BDA00002004804901023
步骤1：5-氯-6-氰基烟酸乙酯
将含5,6-二氯烟酸乙酯(1当量)、氰化锌(0.75当量)和四(三苯基膦)钯(0.10当量)的DMF(0.3M)溶液除气，然后100°C加热3小时。真空除去溶剂以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901024
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物得到5-氯-6-氰基烟酸乙酯白色固体。
步骤2：5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-羧酸乙酯
将含5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.0当量)和5-氯-6-氰基烟酸乙酯(上述步骤所得)(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901025
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-羧酸乙酯。
步骤3：2-乙基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向冰水浴冷却并搅拌的含5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-羧酸乙酯(前步所得)的THF(0.2M)溶液中加入含1N超氢化物的THF溶液(10当量)。反应完成后，用1N HCl淬灭反应，并用EtOAc提取。合并的有机提取物通过真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901031
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)甲醇白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.68(d,1H),8.52(d,1H),8.04(d,1H),7.44(s,1H),7.12(dd,1H),6.00(bs,2H),4.90(s,2H),2.45(s,3H)。LRMS[M+H]=240.1。
实施例43
8-甲基-2-丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901032
步骤1：(E)-3-氯-5-(丙-1-烯基)-2-氰基吡啶
将含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量)，(E)-4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯基)-1,3,2-氧杂环戊硼烷(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(3.4当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.04M)溶液95℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901033
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到(E)-3-氯-5-(丙-1-烯基)-2-氰基吡啶白色固体。
步骤2：(E)-8-甲基-2-(丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.0当量)和(E)-3-氯-5-(丙-1-烯基)-2-氰基吡啶(上述步骤所得)(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901041
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到(E)-8-甲基-2-(丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺的黄色固体。
步骤3：8-甲基-2-丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向含(E)-8-甲基-2-(丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)的乙酸乙酯/甲醇溶液(1:4,0.05M)中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气球引入氢气，反应搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。滤液真空浓缩，并通过
Figure BDA00002004804901042
系统(ISCO)用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化，得到8-甲基-2-丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺灰白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.59(d,1H),8.41(d,1H),8.10(d,1H),7.43(s,1H),7.13(dd,1H),5.94(bs,2H),2.78(t,2H),2.44(s,3H),1.75(m,2H),0.95(t,3H)。LRMS[M+H]=252.1。
实施例44
2-(2-(1H-吲哚-5-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
步骤1：5-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吲哚
闪烁管内加入-碘-1H-吲哚(1.1当量)、三乙基(乙炔基)硅烷(1当量)、三乙胺(5当量)和无水DMF(0.2M)。抽真空并氮气吹扫三次。加入CuI(0.1当量)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.1当量)。将管密封并60°C加热过夜。由TLC监控待反应完成后，将管的内容物加载到经己烷预处理的硅胶柱上。柱用己烷和二乙醚清洗直到收集了所有含产物的洗脱液。用旋转蒸发仪以最小加热小心蒸馏除去己烷和醚得到产物5-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吲哚无色油，其直接用于下一步。
步骤2：5-乙炔基-1H-吲哚
冷至0°C并搅拌的含5-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吲哚(前步所得)的THF(0.2M)溶液用四丁基氟化铵溶液(0.5当量)以滴加方式处理。反应混合物变黑并继续搅拌30分钟，然后升至室温。TLC显示转化完全。用水淬灭该反应，并用二乙醚萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并用旋转蒸发仪以最低加热浓缩。由色谱(硅胶，二乙醚)得到产物5-亚炔基-1H-吲哚无色油。
步骤3：5-((1H-吲哚-3-基)乙炔基)-3-氯-2-氰基吡啶
盖有隔片的圆底烧瓶内加入5-乙炔基-1H-吲哚(前步所得)(1.1当量)、3,5-二氯-2-氰基吡啶(1当量)、三乙胺(5当量)和无水DMF(0.2M)。抽真空并氮气吹扫三次。加入CuI(0.05当量)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.05当量)。用回流冷凝器替换隔片并在氮气下将烧瓶60°C加热过夜。由TLC监控待反应完成后，将烧瓶的内容物加载到经己烷预处理的大型硅胶柱上。由快速色谱(硅胶，己烷:EtOAc(1:4%))得到产物5-((1H-吲哚-5-基)乙炔基)-3-氯-2-氰基吡啶。
步骤4：2-(2-(1H-吲哚-3-基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1，7]萘啶-5-胺；
向装有回流冷凝器的圆底烧瓶中加入5-((1H-吲哚-3-基)乙炔基)-3-氯-2-氰基吡啶(从上述步骤所得)(1当量)、2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.25当量)、K3PO4(2当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.05当量)和2-二环己基膦-2',6'-甲氧基联苯(0.1当量)。加入正丁醇与水(5:2,0.2M)，将内容物除气(抽真空然后氮气吹扫)3次。反应混合物在氮气下油浴中于100°C剧烈搅拌过夜。冷却内容物，收集到200mL水中，然后用二氯甲烷提取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，并浓缩。由快速色谱(硅胶，含0-50%EtOAc的CH2Cl2)得到产物2-((1H-吲哚-5-基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。
步骤5：2-(2-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；
圆底烧瓶内加入2-((1H-吲哚-5-基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1当量)与搅拌子。添加乙醇和二氯甲烷(1:2，0.2M)，然后加入碳载钯(活性粉，湿，10%碳载，0.1当量)。内容物抽真空然后氢气吹扫三次。反应混合物在氢气囊下室温剧烈搅拌过夜。此后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，随后用二氯甲烷和EtOAc清洗硅藻土垫直至滤液无UV吸光。浓缩合并的有机洗液。由快速色谱(硅胶，含0-50%EtOAc的CH2Cl2)得到产物2-(2-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。1H-NMR(CDCl3)：δ8.54(d,1H),8.34(d,1H),8.28(s,1H),7.99(d,1H),7.64-7.56(m,1H),7.50-7.35(m,1H),7,24(d,1H),7.12(t,1H),7.08(dd,1H),6.92(dd,1H),6.41(s,1H),6.01(bs,2H),3.16–3.12(m,2H),3.10–3.05(m,2H),2.43(s,3H)。LRMS[M+H]=353.2。
实施例45
2-(4-乙氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901061
步骤1：3-氯-5-((4-乙氧基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶
盖有隔片的圆底烧瓶内加入1-乙氧基-4-乙炔基苯(1.1当量)、3,5-二氯-2-氰基吡啶(1当量)、三乙胺(5当量)和无水DMF(0.2M)。抽真空并氮气吹扫三次。加入CuI(0.05当量)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.05当量)。用回流冷凝器替换隔片并在氮气下将烧瓶加热至60°C过夜。由TLC监控待反应完成后，烧瓶的内容物加载到经己烷预处理的大型硅胶柱上。快速色谱(硅胶，己烷:EtOAc(1:4%))得到产物3-氯-5-((4-乙氧基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶。
步骤2：2-((4-乙氧基苯乙基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向装有回流冷凝器的圆底烧瓶中加入3-氯-5-((4-乙氧基苯乙基)乙炔基)-2-氰基吡啶(前步所得)(1当量)、5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.25当量)、K3PO4(2当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.05当量)和2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(0.1当量)。加入正丁醇与水(5:2,0.2M)，将内容物除气(抽真空然后氮气吹扫)3次。反应混合物在氮气下油浴中于100°C剧烈搅拌过夜。冷却内容物，收集到200mL水中，然后用二氯甲烷萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，并浓缩。由快速色谱(硅胶，含0-50%EtOAc的CH2Cl2)得到产物2-((4-乙氧基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。
步骤3：2-(4-乙氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1，7]萘啶-5-胺。
圆底烧瓶内加入2-((4-乙氧基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1当量)与搅拌子。添加乙醇和二氯甲烷(1:2，0.2M)，然后加入碳载钯(活性粉，湿，10%碳载，0.1当量)。内容物真空下除气然后氢气吹扫(3次)。反应混合物在氢气囊下室温剧烈搅拌过夜。此后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，随后用二氯甲烷和EtOAc清洗硅藻土垫直至滤液无UV吸光。浓缩合并的有机洗液。由快速色谱(硅胶，含0-50%EtOAc的CH2Cl2)得到黄色固体产物。用甲苯进一步重结晶得到产物2-(4-乙氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色细粒晶体（fine crystal）。1H-NMR(CDCl3):δ8.52(d,1H),8.30(d,1H),8.10(d,1H),7.46(s,1H),7.12(dd,1H),7.06(d,2H),6.75(d,2H),5.95(bs,2H),3.93(q,2H),3.11–3.05(dd,2H),2.95–2.90(dd,2H),2.44(s,3H),1.33(t,3H)。LRMS[M+H]=358.2。
实施例46
8-甲基-2-(4-苯氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
步骤1：3-氯-5-((4-苯氧基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶
3-氯-5-((4-苯氧基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶按实施例45步骤1所述过程由1-乙炔基-4-苯氧基苯(市售可得)制得。
步骤2：8-甲基-2-((4-苯氧基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
8-甲基-2-((4-苯氧基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例45步骤2所述过程由3-氯-5-((4-苯氧基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。
步骤3：8-甲基-2-(4-苯氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
8-甲基-2-(4-苯氧基苯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例45步骤3所述过程由8-甲基-2-((4-苯氧基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3)：δ8.54(d,1H),8.30(d,1H),8.01(d,1H),7.45(s,1H),7.25-7.20(m,2H),7.12(dd,1H),7.07-6.84(m,8H),6.00(bs,2H),3.13-3.08(dd,2H),2.99-2.94(dd,2H),2.44(s,3H)。LRMS[M+H]=406.2。
实施例47
 2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901081
步骤1：((2,4-二甲基苯基)乙炔基)三乙基硅烷
((2,4-二甲基苯基)乙炔基)三乙基硅烷按实施例44步骤1所述过程由1-碘-2,4-二甲基苯(市售可得)制得。
步骤2：1-乙炔基-2,4-二甲基苯
1-乙炔基-2,4-二甲基苯按实施例44步骤2所述过程由((2,4-二甲基苯基)乙炔基)三乙基硅烷(前步所得)制得。
步骤3：3-氯-5-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶
3-氯-5-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶按实施例44步骤3所述过程由1-乙炔基-2,4-二甲基苯(市售可得)制得。
步骤4：2-((2,4-二甲基苯乙基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；
2-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例44步骤4所述过程由3-氯-5-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。
步骤5：2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；
2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例44步骤5所述过程由2-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.60(d,1H),8.33(d,1H),8.14(d,1H),7.67(d,1H),7.54(t,1H),7.31(t,1H),6.96-6.86(m,3H),6.29(bs,2H),3.04-3.10(dd,2H),2.97-2.91(dd,2H),2.24(s,3H),2.20(s,3H)。LRMS[M+H]=328.2。
实施例48
2-(2,4-二甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901082
步骤1：2-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例44步骤4所述过程由3-氯-5-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(实施例47/步骤3所得)和5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯制得。
步骤2：2-(2,4-二甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-(2,4-二甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例44步骤5所述过程由1-乙炔基-4-苯氧基苯(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.56(d,1H),8.28(d,1H),8.00(d,1H),7.46(s,1H),7.14(dd,1H),6.95–6.85(m,3H),6.26(bs,2H),3.08–3.02(dd,2H),2.96–2.90(dd,2H),2.45(s,3H),2.23(s,3H),2.19(s,3H)。LRMS[M+H]=342.2。
实施例49
2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901091
步骤1：3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶
3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶按实施例44/步骤3所述由1-乙炔基-4-甲氧基-2-甲基苯(市售可得)制得。
步骤2：2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例44步骤4所述过程由3-氯-5-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。
步骤3：2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯[f][1,7]萘啶-5-胺
2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例44步骤5所述过程由2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.53(d,1H),8.29(d,1H),8.01(d,1H),7.44(s,1H),7.12(dd,1H),6.93(d,1H),6.67(d,1H),6.60(dd,1H),5.93(bs,2H),3.70(s,3H),3.05–3.00(dd,2H),2.93–2.88(dd,2H),2.44(s,3H),2.19(s,3H)。LRMS[M+H]=358.2。
实施例50
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚
Figure BDA00002004804901101
于冰水浴中向含2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例49)的二氯甲烷(0.2M)搅拌溶液中滴加含1N BBr3的CH2Cl2溶液(2当量)。反应在30分钟内用甲醇淬灭并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901102
系统(ISCO)上利用含0-20%甲醇的二氯甲烷纯化粗料以得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚白色固体。1HNMR(DMSO-d6):δ8.99(s,1H),8.75(d,1H),8.60(d,1H),8.27(d,1H),7.28(s,1H),7.09(dd,1H),6.99(bs,2H),6.88(d,1H),6.49(d,1H),6.42(dd,1H),3.02–2.96(dd,2H),2.86–2.81(dd,2H),2.38(s,3H),2.13(s,3H)。LRMS[M+H]=344.2。
实施例51
2-(2-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901103
步骤1：((2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙炔基)三乙基硅烷
((2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙炔基)三乙基硅烷按实施例44步骤1所述过程由5-碘-2,3-二氢苯并呋喃(市售可得)制得。
步骤2：5-乙炔基-2,3-二氢苯并呋喃
5-乙炔基-2,3-二氢苯并呋喃按实施例44步骤2所述过程由((2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙炔基)三乙基硅烷(前步所得)制得。
步骤3：3-氯-5-((2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙炔基)-2-氰基吡啶
3-氯-5-((2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙炔基)2-氰基吡啶按实施例44步骤3所述过程由5-乙炔基-2,3-二氢苯并呋喃(市售可得)制得。
步骤4：2-((2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-((2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例44步骤4所述过程由3-氯-5-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。
步骤5：2-(2-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺；
2-(2-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例44步骤5所述过程由2-((2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.62(d,1H),8.40(d,1H),8.11(d,1H),7.53(s,1H),7.21(dd,1H),6.99(s,1H),6.95(dd,1H),6.74(d,1H),6.05(bs,2H),4.57(t,2H),3.19–3.13(m,4H),3.03–2.98(dd,2H),2.54(s,3H)。LRMS[M+H]=356.2。
实施例52
2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙醇
步骤1：(Z)-3-氯-5-(2-乙氧基乙烯基)-2-氰基吡啶
(Z)-3-氯-5-(2-乙氧基乙烯基)-2-氰基吡啶按实施例43/步骤1所述过程由(Z)-2-(2-乙氧基乙烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(市售可得)制得。
步骤2：(Z)-2-(-2-乙氧基乙烯基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
(Z)-2-(2-乙氧基乙烯基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例43/步骤2所述过程由(Z)-3-氯-5-(2-乙氧基乙烯基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。
步骤3：2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙醇
含(Z)-2-(2-乙氧基乙烯基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)的HCl与二噁烷2:5浓度混合物的溶液60°C加热过夜。冷却至室温后，反应混合物用过量NaHCO3饱和溶液处理，然后用EtOAc提取。浓缩合并的有机提取物，并收集到THF(0.2M)中，用含1N超氢化物的THF溶液(10当量)在0°C下处理。反应混合物升温至室温，并搅拌过夜。按实施例42/步骤3所述过程进行反应，得到2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙醇白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.61(d,1H),8.47(d,1H),8.01(d,1H),7.41(s,1H),7,10(d,1H),6.40(s,1H),6.01(bs,2H),4.01(t,2H),3.06(t,2H),2.43(s,3H)。LRMS[M+H]=254.1。
实施例53
3-甲基-9-苯基-9,10-二氢苯并[f]呋喃并[2,3-b][1,7]萘啶-6-胺
Figure BDA00002004804901121
步骤1：5-溴-2-氯-3-甲吡啶1-氧化物
5-溴-2-氯-3-甲基吡啶1-氧化物按实施例19/步骤1所述过程由5-溴-2-氯-3-甲基吡啶(市售可得)制得。
步骤1：3-溴-6-氯-5-甲基-2-氰基吡啶
3-溴-6-氯-5-甲基-2-氰基吡啶按实施例19/步骤2所述过程由(Z)-3-氯-5-(2-乙氧基乙烯基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。
步骤1：3-溴-6-氯-5-(2-羟基-2-苯基乙基)-2-氰基吡啶
含3-溴-6-氯-5-甲基-2-氰基吡啶(前步所得)的THF溶液(0.2M)冷却至-78°C。滴加LDA(2N溶液，2当量)。反应在-78°C下继续搅拌1小时，然后添加苯甲醛(1当量)。反应在-78°C下再搅拌30分钟，然后缓慢升温至室温。用饱和NH4Cl淬灭该反应，并用EtOAc提取。浓缩合并的有机洗液。由快速色谱(硅胶，含20-50%EtOAc的己烷))得到产物3-溴-6-氯-5-(2-羟基-2-苯基乙基)-2-氰基吡啶黄色固体。
步骤4：3-甲基-9-苯基-9,10-二氢苯并[f]呋喃并[2,3-b][1,7]萘啶-6-胺
3-甲基-9-苯基-9,10-二氢苯并[f]呋喃并[2,3-b][1,7]萘啶-6-胺按实施例44/步骤4所述过程由3-溴-6-氯-5-甲基-2-氰基吡啶(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.45(s,1H),7.98(d,1H),7.45(s,1H),7.40–7.28(m,5H),7.12(d,1H),5.93(t,1H),5.93(brs,2H),3.86(dd,1H),3.40(dd,1H),2.44(s,3H)。LRMS[M+H]=328.1。
实施例54
8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2,5-二胺
Figure BDA00002004804901131
步骤1：5,6-溴-3-二氯吡啶-3-基氨基甲酸叔丁酯
向0°C搅拌的含5,6-二氯吡啶-3-胺(市售可得)的THF溶液(0.2M)中添加(BOC)2O(1.2当量)。反应混合物40°C加热直至完全转化，由TLC监控。然后浓缩反应混合物。快速色谱(硅胶，含20-50%EtOAc的己烷)纯化粗料得到5,6-二氯吡啶-3-基氨基甲酸叔丁酯。
步骤2：5-氯-6-氰基吡啶-3-基氨基甲酸叔丁脂
5-氯-6-氰基吡啶-3-基氨基甲酸叔丁酯按实施例42/步骤1所述过程由5,6-二氯吡啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(前步所得)制得。
步骤3：8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2.5-二胺
8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2,5-二胺(作为次要产物)和5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基氨基甲酸叔丁酯(作为主要产物)一起按实施例5/步骤2所述过程由5-氯-6-氰基吡啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(前步所得)制得。1H NMR(DMSO-d6):δ10.11(s,1H),9.02(s,1H),8.82(d,1H),8.06(d,1H),7.34(s,1H),7,15(dd,1H),6.99(s,2H),2.44(s,3H)。LRMS[M+H]=225.1。
实施例55
1-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)丙-2-醇
Figure BDA00002004804901132
步骤1：3-溴-5-甲基-2-氰基吡啶
3-溴-5-甲基-2-氰基吡啶按实施例42/步骤1所述过程由2,3-二溴-5-甲基吡啶(市售可得)制得。
步骤2：3-溴-5-(2-羟基丙基)-2-氰基吡啶
3-溴-5-(2-羟基丙基)-2-氰基吡啶按实施例53/步骤3所述过程由3-溴-5-甲基-2-氰基吡啶(前步所得)和乙醛制得。
步骤3：1-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)丙-2-醇
1-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)丙-2-醇按实施例53步骤4所述过程由3-溴-5-(2-羟基丙基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.72(d,1H),8.68(d,1H),8.24(d,1H),7.38(s,1H),7,18(dd,1H),4.16–4.07(m,1H),3.05–2.99(m,2H),2.97–2.90(m,2H),2.47(s,3H),1.28(d,3H)。LRMS[M+H]=268.1。
实施例56
2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙腈
Figure BDA00002004804901141
步骤1：2,3-二氯-5-((甲氧基甲氧基)甲基)吡啶
向0°C搅拌的含(5,6-二氯吡啶-3-基)甲醇(市售可得)的CH2Cl2溶液(0.2M)中添加三乙胺(3当量)和氯(甲氧基)甲烷(2当量)。0°C搅拌3小时后，浓缩反应混合物，粗料通过色谱(硅胶，含20-50%EtOAc的己烷)纯化得到2,3-二氯-5-((甲氧基甲氧基)甲基)吡啶无色油。
步骤2：3-氯-5-((甲氧基甲氧基)甲基)-2-氰基吡啶
3-氯-5-((甲氧基甲氧基)甲基)-2-氰基吡啶按实施例42/步骤1所述过程由2,3-二氯-5-((甲氧基甲氧基)甲基)吡啶(前步所得)制得。
步骤3：3-氯-5-(羟基甲基)-2-氰基吡啶
向含2,3-二氯-5-((甲氧基甲氧基)甲基)吡啶(前步所得)的甲醇(0.2M)搅拌溶液中添加浓HCl(10当量)。室温搅拌过夜后，真空下浓缩反应混合物，所得粗料通过色谱(硅胶，含20-50%EtOAc的己烷)纯化得到3-氯-5-(羟基甲基)-2-氰基吡啶。
步骤4：3-氯-5-(氯甲基)-2-氰基吡啶
向0°C搅拌的含3-氯-5-(羟基甲基)-2-氰基吡啶(前步所得)的CH2Cl2溶液(0.2M)中添加亚硫酰氯(10当量)。室温搅拌过夜后，真空下浓缩反应混合物，所得粗料通过色谱(硅胶，含20-50%EtOAc的己烷)纯化得到3-氯-5-(氯甲基)-2-氰基吡啶无色油。
步骤5：3-氯-5-(氰基甲基)-2-氰基吡啶
向含3-氯-5-(氯甲基)-2-氰基吡啶(前步所得)的DMSO(0.2M)搅拌溶液中添加氰化钠(1.25当量)。反应混合物在微波辐射下130°C加热。反应混合物收集到水和EtOAc中，并用EtOAc提取。有机相用无水Na2SO4干燥并浓缩。快速色谱(硅胶，含20-50%EtOAc的己烷)纯化粗料得到3-氯-5-(氰基甲基)-2-氰基吡啶。
步骤6：2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙腈
2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙腈按实施例44/步骤4所述过程由3-氯-5-(氰基甲基基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.79(d,1H),8.78(d,1H),8.20(d,1H),7.66(s,2H),7.36(s,1H),7,18(dd,1H),4.15(d,2H),2.43(s,3H)。LRMS[M+H]=249.1。
实施例57
N-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙酰胺
Figure BDA00002004804901151
步骤1：N-(5,6-二氯吡啶-3-基)乙酰胺
向0°C搅拌的含5,6-二氯吡啶-3-胺(市售可得)和三乙胺(3当量)的CH2Cl2溶液(0.2M)中添加乙酰氯(2当量)。室温搅拌过夜后，真空下浓缩反应混合物，所得粗残留物通过色谱(硅胶，含20-50%EtOAc的己烷)纯化得到N-(二氯吡啶-3-基)乙酰胺。
步骤2：N-(5-氯-6-氰基吡啶3-基)乙酰胺
N-(5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙酰胺按实施例42/步骤1所述过程由N-(5,6-二氯吡啶-3-基)乙酰胺(前步所得)制得。
步骤3：N-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙酰胺
N-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙酰胺按实施例44/步骤4所述过程由N-(5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙酰胺(前步所得)制得。1H NMR(DMSO-d6):δ10.99(s,1H),8.18(d,1H),8.95(d,1H),8.12(d,1H),7.44(s,1H),7,35(dd,1H),2.43(s,3H),2.16(s,3H)。LRMS[M+H]=267.1。
实施例58
2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)-1-(2,4-甲基苯基)乙醇
Figure BDA00002004804901161
步骤1：3-溴-5-(2-(2,4-二甲基苯基)-2-羟乙基)-2-氰基吡啶
3-溴-5-(2-(2,4-二甲基苯基)-2-羟基乙基)-2-氰基吡啶按实施例53/步骤3所述过程由3-溴-5-甲基-2-氰基吡啶(实施例55/步骤1)和2,4-二甲基苯甲醛制得。
步骤2：2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)-1-(2,4-二甲基苯基)乙醇
2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)-1-(2,4-二甲基苯基)乙醇按实施例53步骤4所述过程由3-溴-5-(2-(2,4-二甲基苯基)-2-羟基乙基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.67(d,1H),8.45(d,1H),8.06(d,1H),7.57(s,1H),7.42(d,1H),7.23(d,1H),7.11(d,1H),7.01(s,1H),5.31(dd,1H),3.28-3.25(m,2H),2.53(s,3H),2.35(s,3H),2.33(s,3H)。LRMS[M+H]=358.2。
实施例59
2-(2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901162
步骤1：2-甲氧基-4-甲基-5-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)吡啶
2-甲氧基-4-甲基-5-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)吡啶按实施例44/步骤1所述过程由5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶(市售可得)制得。
步骤2：5-乙炔基-2-甲氧基-4-甲基吡啶
5-乙炔基-2-甲氧基-4-甲基吡啶按实施例44/步骤2所述过程由2-甲氧基-4-甲基-5-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)吡啶(前步所得)制得。
步骤3：3-氯-5-((6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙炔基)-2-氰基吡啶
3-氯-5-((6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙炔基)-2-氰基吡啶按实施例44步骤3所述过程由5-乙炔基-2-甲氧基-4-甲基吡啶(市售可得)制得。
步骤4：2-((6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5- 胺
2-((6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例44步骤4所述过程由3-氯-5-((6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙炔基)-2-氰基吡啶(前步所得)制得。
步骤5：2-(2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5- 胺
2-(2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-4-胺按实施例44步骤5所述过程由2-((6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.65(d,1H),8.43(d,1H),8.13(d,1H),7.87(s,1H),7.57(s,1H),7.24(dd,1H),6.60(s,1H),6.39(bs,2H),3.91(s,3H),3.17–3.11(dd,2H),3.03–2.98(dd,2H),2.54(s,3H),2.28(s,3H)。LRMS[M+H]=359.2。
实施例60
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丁-1-醇
Figure BDA00002004804901171
步骤1：4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)丁-3-炔-1-醇
4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)丁-3-炔-1-醇由((4-溴苯基)乙炔基)三甲基硅烷(市售可得)和丁-3-炔-1-醇(市售可得)按实施例44/步骤1所述过程制得。
步骤2：4-(4-乙炔基苯基)丁-3-炔-1-醇
4-(4-乙炔基苯基)丁-3-炔-1-醇按实施例44/步骤2所述过程由4-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)丁-3-炔-1-醇和丁-3-炔-1-醇制得。
步骤3：5-((4-(4-羟基丁-1-炔基)苯基)乙炔基)-3-甲基-2-氰基吡啶
5-((4-(4-羟基丁-1-炔基)苯基)乙炔基)-3-甲基-2-氰基吡啶按实施例44/步骤3所述过程由4-(4-乙炔基苯基)丁-3-炔-1-醇(前步所得)制得。
步骤4：4-(4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯基)丁-2-炔-1- 醇
4-(4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯基)丁-2-炔-1-醇按实施例44/步骤4所述过程由5-((4-(4-羟基丁-1-炔基)苯基)乙炔基)-3-甲基-2-氰基吡啶(前步所得)制得。
步骤5：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丁-1-醇；
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丁-1-醇按实施例44/步骤5所述过程由4-(4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯基)丁-2-炔-1-醇(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.58(d,1H),8.36(d,1H),8.07(d,1H),7.53(s,1H),7.20(dd,1H),7.10(dd,4H),6.20(bs,2H),3.68(t,2H),3.20–3.15(dd,2H),3.06–3.01(dd,2H),2.64(t,2H),2.52(s,3H),1.75–1.57(m,4H)。LRMS[M+H]=386.2。
实施例61
甲基3-4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙酸甲酯
Figure BDA00002004804901181
步骤1：甲基3-(4-碘苯基)丙酸甲酯
向0°C搅拌的含3-(4-碘苯基)丙酸(市售可得)的甲苯与甲醇溶液(9:1，0.2M)中添加(偶氮甲基)三甲基硅烷(Et2O2溶液中1N，2当量)。室温搅拌过夜后，真空下浓缩反应混合物，所得粗残留物通过色谱(硅胶，含20-50%EtOAc的己烷)纯化得到3-(4-碘苯基)丙酸甲酯。
步骤2：甲基3-(4-乙炔基苯基)丙酸甲酯
3-(4-乙炔基苯基)丙酸甲酯按实施例44/步骤1和2所述过程由3-(4-碘苯基)丙酸甲酯(前步所得)制得。
步骤3：3-(4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)苯基)丙酸甲酯
3-(4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)苯基)丙酸甲酯按实施例44/步骤3所述过程由3-(4-乙炔基苯基)丙酸甲酯(前步所得)制得。
步骤4：3-4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯基)丙酸甲酯
3-(4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯基)丙酸甲酯按实施例44/步骤4所述过程由3-(4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)苯基)丙酸甲酯(前步所得)制得。
步骤5：3-4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙酸甲脂
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙酸甲酯按实施例44/步骤5所述过程由3-(4-((5-氨基-8-甲基吡啶[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯基)丙酸甲酯(前步所得)制得。1H NMR(DMSO-d6):δ8.83(d,1H),8.72(d,1H),8.32(d,1H),7.35(s,1H),7.21-7.12(m,5H),7.05(br s,2H),7.05(dd,2H),3.57(s,3H),3.19–3.13(dd,2H),3.06–3.00(dd,2H),2.81(t,2H),2.60(t,2H),2.45(s,3H)。LRMS[M+H]=400.2。
实施例62
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙-1-醇
Figure BDA00002004804901191
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙-1-醇按实施例42/步骤3所述过程由3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基吡啶[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙酸甲酯(实施例61所得)制得。TFA盐的 1H NMR：(DMSO-d6):δ9.56(s,1H),9.24(s,1H),8.92(d,1H),8.81(d,1H),8.43(d,1H),7.44(d,1H),7.35(d,1H),7.13(dd,2H),7.05(dd,2H),3.32(t,2H),3.18–3.12(dd,2H),3.02–2.95(dd,2H),2.50(t,2H),2.44(s,3H),1.65–1.57(m,2H)。LRMS[M+H]=372.2。
实施例63
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)-2-甲基丁-2-醇
Figure BDA00002004804901201
向0°C的含3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙酸甲酯(实施例61所得)的THF溶液(0.2M)中滴加含溴化甲基镁的THF溶液(1.0M，2当量)。室温搅拌过夜后，真空下浓缩反应混合物，所得粗残留物通过色谱(硅胶，含50-100%EtOAc的己烷)纯化得到4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)-2-甲基丁-2-醇。1H-NMR(CDCl3):δ8.64(d,1H),8.34(d,1H),8.06(t,1H),7.57(d,1H),7.30–7.20(m,2H),7.18–7.07(m,4H),6.67(bs,2H),3.24–3.16(dd,2H),3.08–3.01(dd,2H),2.73–2.66(m,2H),2.53(s,3H),1.82–1.75(m,2H),1.31(s,3H),1.29(s,3H)。LRMS[M+H]=400.2。
实施例64
2-(4-(氨基甲基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901202
步骤1：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苄腈
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苄腈按实施例44/步骤3-5所述过程由4-乙炔基苄腈(市售可得)制得。
步骤2：2-(4-(氨基甲基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向室温搅拌的含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苄腈(前步所得)的乙醇和氢氧化铵溶液(4:1,0.2M)中添加拉尼镍(10当量)。反应混合物在氢气气氛下搅拌至TLC显示转化完全。该反应混合物通过硅藻土垫过滤。用EtOAc清洗硅藻土垫。合并的有机提取物在真空下浓缩，所得粗残留物通过色谱(硅胶，含50-100%EtOAc的己烷)纯化得到产物2-(4-(氨基甲基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。TFA盐的1H NMR：(甲醇-d4):δ8.81(d,1H),8.79(d,1H),8.38(d,1H),7.51(s,1H),7.44(dd,1H),7.36(dd,4H),4.07(s,2H),3.29(s,2H),3.20–3.14(dd,2H),2.55(s,3H)。LRMS[M+H]=343.2。
实施例65
(E)-3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙烯酸乙酯
Figure BDA00002004804901211
步骤1：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)甲醇
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)甲醇按实施例42/步骤3所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基吡啶[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸(实施例115)制得。
步骤2：4-(2(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲醛
向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基）甲醇(前步所得)的DMSO溶液中添加2-碘氧苯甲酸(IBX，2.5当量)。反应在室温下搅拌3小时，然后用水稀释。用EtOAc提取，然后浓缩得到粗残留物，其通过色谱(硅胶，含50-100%EtOAc的己烷)纯化得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲醛。
步骤3：(E)-3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基) 丙烯酸乙酯
向0°C搅拌的含NaH(3当量)的THF悬液(0.2M)中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(市售可得)(3当量)。搅拌30分钟后，滴加含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲醛(前步所得)的THF溶液(0.2M)。反应升温至室温，并搅拌过夜。用饱和NH4Cl溶液淬灭反应，并用EtOAc提取。合并的有机提取物进行干燥并浓缩以得到粗残留物，其通过色谱(硅胶，含50-100%EtOAc的己烷)纯化得到(E)-3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙烯酸乙酯白色固体。1H NMR:(CDCl3):δ8.54(d,1H),8.29(d,1H),7.99(d,1H),7.57(d,1H),7.44(s,1H),7.23(dd,1H),7.11(dd,1H),7.05(d,1H),6.33(d,1H),5.93(s,2H),4.19(q,2H),3.10–2.95(m,4H),2.44(s,3H),2.23(s,3H),1.26(t,3H)。LRMS[M+H]=426.2。
实施例66
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯
Figure BDA00002004804901221
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯按实施例44/步骤5所述过程由(E)-3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙烯酸乙酯(实施例65所得)制得。1H NMR:(CDCl3):δ8.55(d,1H),8.26(d,1H),7.99(d,1H),7.45(s,1H),7.12(dd,1H),6.98-6.88(m,3H),6.02(s,2H),4.06(q,2H),3.04(dd,2H),2.93(dd,2H),2.83(t,2H),2.53(t,2H),2.44(s,3H),2.19(s,3H),1.17(t,3H)。LRMS[M+H]=428.2。
实施例67
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苄基)丙-1,3-二醇
Figure BDA00002004804901231
步骤1：2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苄基)丙 二酸二乙酯
向含(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)甲醇(实施例65/步骤1所得)和丙二酸二乙酯(2当量)的干燥甲苯搅拌溶液中添加三丁基膦(2当量)和N1,N1,N2,N2-四甲基二氮烯-1,2-二羧酰胺(2当量)。反应混合物在120°C搅拌过夜。反应完成后，真空下浓缩反应混合物，所得粗残留物通过色谱(硅胶，含50-100%EtOAc的己烷)纯化得到2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苄基)丙二酸二乙酯白色固体。
步骤2：2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苄基)丙 -1,3-二醇
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苄基)丙-1,3-二醇按实施例42/步骤3所述过程由2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苄基)丙二酸二乙酯(前步所得)制得。1H NMR:(甲醇-d4):δ8.51(d,1H),8.39(d,1H),8.05(d,1H),7.45(s,1H),7.10(dd,1H),6.91-6.87(m,2H),6.83(dd,1H),3.42(d,4H),3.08–3.02(m,2H),2.96–2.91(m,2H),2.47(d,2H),2.38(s,3H),2.13(s,3H)。LRMS[M+H]=416.2。
实施例68
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙酸
Figure BDA00002004804901232
将含3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(实施例66所得)的1N NaOH、THF和甲醇溶液(1:5:2,0.1N)60°C加热3小时。冷却至室温后，反应混合物用1N HCl中和到pH 7，并浓缩得到粗残留物，其通过色谱(硅胶，含0-20%甲醇的二氯甲烷)纯化得到(E)-3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙烯酸乙酯白色固体。1H NMR:(甲醇-d4):δ8.73(d,1H),8.54(d,1H),8.20(d,1H),7.45(s,1H),7.37(d,1H),7.00-6.97(m,2H),6.92(d,1H),3.19(t,2H),3.04(t,2H),2.81(t,2H),2.53(t,2H),2.50(s,3H),2.25(s,3H)。LRMS[M+H]=400.2。
实施例69
5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛
Figure BDA00002004804901241
5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛按实施例65/步骤2所述过程由(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇(实施例108所得)制得。1H NMR:(CDCl3):δ10.19(s,1H),8.74(d,1H),8.43(d,1H),8.32(d,1H),8.18(d,1H),7.88(dd,1H),7.00(d,1H),6.76(d,1H),6.70(dd,1H),6.30(s,2H),3.80(s,3H),3.16(dd,2H),3.02(dd,2H),2.29(s,3H)。LRMS[M+H]=372.2。
实施例70
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲酸乙酯
Figure BDA00002004804901242
步骤1：4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)苯甲酸乙酯
含3,5-二氯-2-氰基吡啶(市售可得)(1.0当量)、4-乙炔基苯甲酸乙酯(市售可得)(1.0当量)、反式-二氯双(三苯基膦)钯(II)(10mol%)、碘化铜(I)(20mol%)和三乙胺(5.0当量)的DMF溶液(0.3M)在50℃下搅拌3小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与10%氢氧化铵水溶液稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901251
系统(ISCO)上利用含0-20%乙酸乙酯的己烷纯化粗料得到4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)苯甲酸乙酯白色固体。
步骤2：4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯甲酸乙酯
将含4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)苯甲酸乙酯(前步所得)(1.0当量)、5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(2.6当量)、四(三苯基膦)钯(10mol%)和碳酸钾(5.3当量)的甲苯/乙醇溶液(2:1,0.2M)在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%MeOH的DCM稀释反应混合物。分离两相。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901252
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗产物，得到4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯甲酸乙酯。
步骤3：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲酸乙酯
含4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯甲酸乙酯(前步所得)(1.0当量)的THF/乙酸乙酯溶液(1:1,0.05M)用氮气吹扫，并加入碳载钯(10重量%)。反应容器抽真空，用氢气吹扫，并室温下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，用含2%MeOH的DCM洗涤并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901253
系统(ISCO)上利用含0-5%MeOH的DCM纯化粗产物，得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲酸乙酯。1H NMR(丙酮d-6)：δ8.80(s,1H),8.69(s,1H),8.25(d,1H),7.90(d,2H),7.40-7.42(m,3H),7.12(d,1H),6.55(br,2H),4.28(q,2H),3.2-3.3(m,4H),2.44(s,3H),1.31(t,3H)。LRMS[M+H]=386.2。
实施例71
8-甲基-2-(4-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901261
步骤1：3-氯-5-(对甲苯基乙炔基)-2-氰基吡啶
含3,5-二氯-2-氰基吡啶(市售可得)(1.0当量)、1-乙炔基-4-甲基苯(市售可得)(1.0当量)、反式-二氯双(三苯基膦)钯(II)(10mol%)、碘化铜(I)(20mol%)和三乙胺(5.0当量)的DMF溶液(0.3M)在50℃下搅拌3小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与10%氢氧化铵水溶液稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过在热醚/己烷混合物中搅拌并过滤来纯化粗料得到3-氯-5-(对甲苯基乙炔基)-2-氰基吡啶。
步骤2：8-甲基-2-(对甲苯基乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含3-氯-5-(对甲苯基乙炔基)-2-氰基吡啶(前步所得)(1.0当量)、5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.2当量)、四(三苯基膦)钯(10mol%)和2N碳酸钠水溶液(4.0当量)的甲苯/乙醇溶液(2:1,0.2M)在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%MeOH的DCM稀释反应混合物。分离两相，水层用含2%MeOH的DCM提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901262
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗料，得到8-甲基-2-(对甲苯基乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。
步骤3：8-甲基-2-(4-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
含8-甲基-2-(对甲苯基乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1.0当量)的EtOH/乙酸乙酯溶液(1:1,0.05M)用氮气吹扫，并加入碳载钯(10重量%)。反应容器抽真空，用氢气吹扫，并室温下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，用含2%MeOH的DCM洗涤并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901263
系统(ISCO)上利用含0-5%MeOH的DCM纯化粗料，得到8-甲基-2-(4-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮d-6)：δ8.74(s,1H),8.68(s,1H),8.24(d,1H),7.41(s,1H),7.13-7.15(m,3H),7.06(d,2H),6.6(br,2H),3.19(t,2H),3.06(t,2H),2.44(s,3H),2.25(s,3H)。LRMS[M+H]=328.1。
实施例72
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙-2-醇
Figure BDA00002004804901271
向0℃的4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲酸乙酯(实施例70所得)(1.0当量)的DCM溶液中添加含3.0M碘化甲基镁(10当量)的醚并升至室温过夜。反应冷却至0℃并用1N HCl水溶液和醚淬灭。搅拌15分钟后，反应混合物用碳酸氢钠的饱和水溶液中和。分离两相，水层用醚提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过用含10-50%MeCN的水梯度进行RP-HPLC然后DCM提取纯化粗料得到2-(4-(2-(5-氨基-8甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙-2-醇。1H NMR(丙酮d-6)：δ8.73(m,2H),8.22(d,1H),7.40-7.44(m,3H),7.20(d,2H),7.12(d,1H),6.5(br,2H),3.94(s,1H),3.21(t,2H),3.08(t,2H),2.44(s,3H),1.47(s,6H)。LRMS[M+H]=372.2。
实施例73
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)甲醇
Figure BDA00002004804901272
向0℃的含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲酸乙酯(实施例70)(1.0当量)的THF溶液(0.1M)中添加含1.0M三乙基硼氢化锂的THF(10当量)并升至室温2小时。缓慢加入1N HCl水溶液以淬灭反应，混合物加热回流30分钟。用饱和碳酸氢钠溶液中和反应混合物。分离两相，水层用乙酸乙酯(EA)提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过用含10-50%MeCN的水梯度进行RP-HPLC然后DCM提取纯化粗料得到(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)甲醇。1H NMR(丙酮d6)：δ8.77(s,1H),8.69(s,1H),8.26(d,1H),7.40(s,1H),7.21-7.28(m,4H),7.13(d,1H),6.5(br,2H),4.56(s,2H),4.1(br t,1H),3.10-3.23(m,4H),2.44(s,3H)。LRMS[M+H]=344.2。
实施例74
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯
Figure BDA00002004804901281
步骤1：4-溴-3-甲基苯甲酸乙酯
向含4-溴-3-甲基苯甲酸(市售可得)(1.0当量)的EtOH溶液(0.3M)中加入硫酰氯(1.5当量)并加热回流2小时。真空浓缩溶剂，残留物用醚稀释并用碳酸氢钠饱和水溶液中和。分离两相，水层用醚提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得4-溴-3-甲基苯甲酸乙酯。
步骤2：3-甲基-4-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸乙酯
将含4-溴-3-甲基苯甲酸乙酯(前步所得)(1.0当量)、三乙基(乙炔基)硅烷(1.1当量)、反式-二氯双(三苯基膦)钯(II)(10mol%)、碘化铜(I)(20mol%)和三乙胺(5.0当量)的DMF溶液(0.3M)在60℃下搅拌过夜。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与10%氢氧化铵水溶液稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物，得到3-甲基-4-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸乙酯黄色油。
步骤3：4-乙炔基-3-甲基苯甲酸乙酯
向0℃含3-甲基-4-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸乙酯(前步所得)(1.0当量)的THF溶液(0.3M)滴加含1.0M TBAF的THF(1.2当量)。0°C搅拌10分钟后，用碳酸氢钠饱和水溶液淬灭反应。分离两相，水层用醚提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901291
系统(ISCO)上利用含0-5%乙酸乙酯的己烷纯化粗产物得到4-乙炔基-3-甲基苯甲酸乙酯白色固体。
步骤4：4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)-3-甲基苯甲酸乙酯
将含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量）、4-乙炔基-3-甲基苯甲酸乙酯(前步所得)(1.0当量)、反式-二氯双(三苯基膦)钯(II)(10mol%)、碘化铜(I)(20mol%)和三乙胺(5.0当量)的DMF溶液(0.3M)在50℃下搅拌3小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与10%氢氧化铵水溶液稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901292
系统(ISCO)上利用含0-10%乙酸乙酯的己烷纯化粗料得到4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)-3-苯甲酸乙酯白色固体。
步骤5：4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)-3-甲基苯甲酸 乙酯
将含4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)-3-苯甲酸乙酯(前步所得)(1.0当量)、5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.1当量)、四(三苯基膦)钯(8mol%)和碳酸钾(3.0当量)的甲苯/乙醇溶液(9:1,0.2M)在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%MeOH的DCM稀释反应混合物。分离两相。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901293
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗料，得到4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)-3-甲基苯甲酸乙酯。
步骤6：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸 乙酯
含4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)-3-甲基苯甲酸乙酯(前步所得)(1.0当量)的THF/乙酸乙酯溶液(1:1,0.05M)用氮气吹扫，并加入10%碳载钯(10重量%)。反应容器抽真空，用氢气吹扫，并室温下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，用含2%MeOH的DCM洗涤并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含30-100%EA的己烷纯化粗料，得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯。1H NMR(丙酮d6)：δ8.79(s,1H),8.71(s,1H),8.24(d,1H),7.80(s,1H),7.73(d,1H),7.40(s,1H),7.31(d,1H),7.12(d,1H),6.5(br,2H),4.29(q,2H),3.19-3.22(m,4H),2.44(s,3H),2.39(s,3H),1.31(t,3H)。LRMS[M+H]=400.2。
实施例75
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸
向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯(实施例74所得)(1.0当量)的乙醇溶液中加入1N氢氧化钠水溶液(1.5当量)并加热至80°C持续5小时。通过添加1N HCl水溶液(1.5当量)中和反应混合物并真空浓缩。用含10-50%MeCN的水梯度进行RP-HPLC然后真空浓缩纯化粗料得到TFA盐。TFA盐的 1H NMR(DMSO-d6)：δ7.94-7.96(m,2H),7.55(d,1H),7.00(s,1H),6.91(d,1H),6.62-6.66(m,2H),6.39(d,1H),2.36-2.5(m,4H),1.73(s,3H),1.54(s,3H)。LRMS[M+H]=372.2。
实施例76
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)甲醇
Figure BDA00002004804901302
向-78℃的含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯(实施例74所得)(1.0当量)的THF溶液(0.1M)中添加含1.0MDIBAL-H的甲苯(10当量)并升至室温2小时。缓慢加入1.5M罗谢尔盐水溶液以淬灭反应，然后加入EA，混合物搅拌45分钟。分离两相，水层用EA提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过用含10-50%MeCN的水梯度进行RP-HPLC然后DCM提取纯化粗料得到(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)甲醇。1H NMR(丙酮d6)：δ8.77(s,1H),8.71(s,1H),8.25(d,1H),7.41(s,1H),7.10-7.15(m,4H),6.5(br,2H),4.54(s,2H),4.05(br,1H),3.08-3.18(m,4H),2.44(s,3H),2.31(s,3H)。LRMS[M+H]=358.2。
实施例77
8-甲基-2-(2,4,6-三甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901311
步骤1：3-氯-5-(
Figure BDA00002004804901312
基乙炔基)-2-氰基吡啶
将含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量）、2-乙炔基-1,3,5-三甲基苯(市售可得)(1.0当量)、反式-二氯双(三苯基膦)钯(II)(10mol%)、碘化铜(I)(20mol%)和三乙胺(5.0当量)的DMF溶液(0.3M)在50℃下搅拌3小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与10%氢氧化铵水溶液稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901313
系统(ISCO)上利用含0-10%乙酸乙酯的己烷纯化粗料得到3-氯-5-(
Figure BDA00002004804901314
基乙炔基)-2-氰基吡啶白色固体。
步骤2：2-
Figure BDA00002004804901315
基乙炔基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含3-氯-5-(
Figure BDA00002004804901316
基乙炔基)-2-氰基吡啶(前步所得)(1.0当量)、5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.1当量)、四(三苯基膦)钯(8mol%)和2N碳酸钠水溶液(3.0当量)的甲苯/乙醇溶液(4:1,0.2M)在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%MeOH的DCM稀释反应混合物。分离两相。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901317
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗料，得到2-(基乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。
步骤3：8-甲基-2-(2,4,6-三甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
含2-(
Figure BDA00002004804901319
基乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1.0当量)的EtOH溶液(0.05M)用氮气吹扫，并加入碳载钯(10重量%)。反应容器抽真空，用氢气吹扫，并室温下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，用含2%MeOH的DCM洗涤并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901321
系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到8-甲基-2-(2,4,6-三甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮-d6):δ8.73-8.74(m,2H),8.25(d,1H),7.42(s,1H),7.14(d,1H),6.83(s,2H),6.55(br,2H),3.07(m,4H),2.47(s,3H),2.29(s,6H),2.22(s,3H)。LRMS[M+H]=356.2。
实施例78
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇
Figure BDA00002004804901322
向0℃的含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯(实施例74所得)(1.0当量)的DCM溶液中添加含3.0M甲基碘化镁(10当量)的醚并升至室温过夜。反应液冷却至0℃，用水淬灭。搅拌15分钟后，反应混合物用碳酸氢钠饱和水溶液中和并添加EA。分离两相，水层用EA提取3次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-5%MeOH的DCM纯化粗料，得到2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)-丙-2-醇。1HNMR(丙酮-d6):δ8.72-8.75(m,2H),8.23(d,1H),7.41(s,1H),7.32(s,1H),7.25(d,1H),7.12-7.14(m,2H),6.6(br,2H),3.91(s,1H),3.07-3.18(m,4H),2.44(s,3H),2.31(s,3H),1.48(s,6H)。LRMS[M+H]=386.2。
实施例79
8-甲基-2-(4-丙氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901324
步骤1：3-氯-5-((4-丙氧基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶
将含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量）、1-乙炔基-4-丙氧基苯(市售可得)(1.0当量)、反式-二氯双(三苯基膦)钯(II)(10mol%)、碘化铜(I)(20mol%)和三乙胺(5.0当量)的DMF溶液(0.3M)在50℃下搅拌3小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与10%氢氧化铵水溶液稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901331
系统(ISCO)上利用含0-10%乙酸乙酯的己烷纯化粗料得到3-氯-5-((4-丙氧基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶白色固体。
步骤2：3-氯-5-(4-丙氧基苯乙基)-2-氰基吡啶
含3-氯-5-((4-丙氧基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(前步所得)(1.0当量)的EtOH溶液(0.05M)用氮气吹扫，并加入氧化铂(VI)(0.5当量)。反应容器抽真空，用氢气吹扫，并室温下搅拌5小时。反应混合物通过硅藻土过滤，用含2%MeOH的DCM洗涤并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901332
系统(ISCO)上利用含0-15%乙酸乙酯的己烷纯化粗料得到3-氯-5-(4-丙氧基苯乙基)-2-氰基吡啶。
步骤3：8-甲基-2-(4-丙氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含3-氯-5-(4-丙氧基苯乙基)-2-氰基吡啶(前步所得)(1.0当量)、5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.1当量)、四(三苯基膦)钯(8mol%)和含2N碳酸钠水溶液(3.0当量)的甲苯溶液(0.2M)在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%MeOH的DCM稀释反应混合物。分离两相。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901333
系统(ISCO)上利用含0-40%乙酸乙酯的甲苯纯化粗料，得到8-甲基-2-(4-丙氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(丙酮-d6):δ8.74(s,1H),8.67(s,1H),8.24(d,1H),7.41(s,1H),7.15-7.17(m,3H),6.81(d,2H),6.5(br,2H),3.87(t,2H),3.18(t,2H),3.04(t,2H),2.44(s,3H),1.73(m,2H),0.99(t,3H)。LRMS[M+H]=372.2。
实施例80
(E)-3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙烯酸乙酯
(E)-3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙烯酸乙酯按实施例65/步骤3所述过程由5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(实施例69所得)和2-(二乙氧基磷酰)乙酸乙酯(市售可得)制得。LRMS[M+H+]=442.2。
实施例81
(E)-3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙烯酸
Figure BDA00002004804901342
(E)-3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙烯酸按实施例68所述过程由(E)-3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙烯酸乙酯(实施例80所得)制得。TFA盐的 1H NMR(DMSO-d6)：δ12.66(s,1H),9.09(s,1H),8.88(s,1H),8.66(d,1H),7.95(d,1H),7.91(s,1H),7.75(d,1H),7.10(d,1H),6.77–6.71(m,2H),6.68(dd,1H),3.70(s,3H),3.16(t,2H),3.00(t,2H),2.30(s,3H)。LRMS[M+H]=414.2。
实施例82
3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯
Figure BDA00002004804901343
3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯按实施例44/步骤5所述过程由(E)-3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙烯酸乙酯(实施例80所得)制得。1H NMR(CDCl3):δ8.63(d,1H),8.37(d,1H),8.13(d,1H),7.56(d,1H),7.24(dd,1H),7.02(d,1H),6.75(d,1H),6.69(dd,1H),6.15(br s,2H),4.17(q,2H),3.79(s,3H),3.12(dd,4H),2.99(dd,2H),2.75(t,2H),2.29(s,3H),1.27(t,2H),0.99(t,3H)。LRMS[M+H]=444.2。
实施例83
3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸
Figure BDA00002004804901351
3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸按实施例68所述过程由3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(实施例82所得)制得。1H NMR(DMSO-d6):δ12.18(s,1H),8.84(d,1H),8.70(d,1H),8.36(d,1H),7.39(d,1H),7.20(dd,1H),7.09(m,2H),6.74(d,1H),6.68(dd,1H),3.70(s,3H),3.09(dd,2H),2.96(dd,4H),2.63(t,2H),2.27(s,3H)。LRMS[M+H]=416.2。
实施例84
3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙-1-醇
Figure BDA00002004804901352
3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙-1-醇按实施例42/步骤3所述过程由3-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(实施例82所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.54(d,1H),8.30(d,1H),8.05(d,1H),7.48(d,1H),7.15(dd,1H),6.93(d,1H),6.66(d,1H),6.61(dd,1H),5.98(br s,2H),3.71(s,3H),3.66(t,2H),3.03(dd,2H),2.91(dd,2H),2.81(t,2H),2.20(s,3H),1.98–1.90(m,2H)。LRMS[M+H]=402.2
实施例85
(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
Figure BDA00002004804901361
步骤1：2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸
含2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(市售可得)(1.0当量)、三乙胺(3.0当量)、二碳酸二叔丁酯(1.1当量)和DMAP(0.1当量)的CH3CN溶液(0.3M)在40℃下搅拌过夜。冷却至室温后，反应混合物真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901362
系统(ISCO)上利用0-30%MeOH/DCM纯化粗料以得到2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸棕色固体。
步骤2：5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸(前步所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)、四(三苯基膦)钯(5mol%)与2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。冷却至室温后，过滤反应混合物以收集沉淀。用EtOAc冲洗沉淀以得到5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯浅棕色固体。
步骤3：(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)甲醇
25°C下向含5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯(前步所得)(1.0当量)的EtOH溶液(0.03M)中添加NaBH4(10当量)。溶液加热至80°C持续5小时。冷却至室温后，反应混合物真空浓缩。残留物在NaHCO3与EtOAc间分配。分离各层，水层用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用0-10%MeOH/DCM纯化粗料以得到(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇的灰白色固体：1H NMR(甲醇-d4)：δ8.82(dd,1H),8.77(dd,1H),7.26(d,1H),7.70(dd,1H),7.50(d,1H),7.27(dd,1H),4.66(s,2H)。LRMS[M+H]=226.1。
实施例86
(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-醇
Figure BDA00002004804901371
N2下于-20°C向含8-甲氧基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例10所得)(1.0当量)的DCM溶液(0.04M)中滴加BBr3(2.5当量)。反应在30分钟内升至室温。该反应随后搅拌过夜。用饱和NaHCO3淬灭反应并用EtOAc提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901372
系统(ISCO)上利用0-20%MeOH/DCM纯化粗料以得到5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-醇的黄色固体：1H NMR(丙酮-d6):δ8.90(dd,1H),8.83(dd,1H),8.32(d,1H),7.83(dd,1H),7.11(br s,2H),7.10(d,1H),6.96(dd,1H),5.86(br s,1H)。LRMS[M+H]=212.1。
实施例87
(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛
Figure BDA00002004804901373
含(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇(实施例85所得)(1.0当量)和活化MnO2(20当量)的DCM溶液(0.1M)室温搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释。滤除MnO2，滤液真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901374
系统(ISCO)上利用0-10%MeOH/DCM纯化粗料以得到5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛的黄色固体：1H NMR(丙酮-d6):δ10.19(s,1H),9.14(dd,1H),9.01(dd,1H),8.63(d,1H),8.14(d,1H),7.93(dd,1H),7.81(dd,1H),6.96(br s,2H)。LRMS[M+H]=224.1。
实施例88
1-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙醇
在-78°C下向含5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(实施例87所得)(1.0当量)的THF溶液(0.02M)中添加MeLi(2.5当量)。反应升至室温过夜。反应用饱和NH4Cl淬灭并用EtOAc提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901382
系统(ISCO)上利用0-5%MeOH/DCM纯化粗料以得到1-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙醇黄色固体：1H NMR(甲醇-d4)：δ8.94(dd,1H),8.88(dd,1H),8.38(d,1H),7.81(dd,1H),7.62(d,1H),7.41(dd,1H),4.97(q,1H),1.53(d,3H)。LRMS[M+H]=240.1。
实施例89
1-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙酮
Figure BDA00002004804901383
含1-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙醇(实施例88所得)(1.0当量)和活化MnO2(20当量)的DCM溶液(0.1M)室温搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释。滤除MnO2，滤液真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901384
系统(ISCO)上利用0-5%MeOH/DCM纯化粗料以得到1-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙酮黄色固体：1H NMR(丙酮-d6):δ9.11(dd,1H),8.99(dd,1H),8.56(d,1H),8.20(d,1H),7.94-7.88(m,2H),6.90(br s,2H),2.70(s,3H)。LRMS[M+H]=238.1。
实施例90
8-异丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901391
步骤1：2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙-2-醇
在-78°C下向含5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯(实施例85/步骤2所得)(1.0当量)的THF溶液(0.02M)中添加MeLi(10当量)。反应升至室温过夜。反应用饱和NH4Cl淬灭并用EtOAc提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901392
系统(ISCO)上利用0-10%MeOH/DCM纯化粗料以得到2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙-2-醇黄色油。
步骤2：8-(丙-1-烯-2-基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
含2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙-2-醇(前步所得)(1.0当量)和p-TsOH(2当量)的甲苯溶液(0.01M)在90°C下搅拌6小时。反应用饱和NaHCO3淬灭并用EtOAc提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901393
系统(ISCO)上利用0-5%MeOH/DCM纯化粗料以得到8-(丙-1-烯-2-基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。
步骤3：8-异丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含8-(丙-1-烯-2-基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1.0当量)和Pd/C(湿，10%重量)的乙醇混合液在H2气囊下搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释。通过硅藻土滤除Pd/C，滤液真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901394
系统(ISCO)上利用0-60%EtOAc/己烷纯化粗料，得到8-异丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体：1H NMR(丙酮-d6):δ8.98(dd,1H),8.88(dd,1H),8.37(d,1H),7.83(dd,1H),7.49(d,1H),7.27(dd,1H),6.66(br s,2H),3.10-3.00(m,1H),1.33(d,6H)。LRMS[M+H]=238.1。
实施例91
8-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901401
于-78°C向甲基三苯基碘化鏻(6.0当量)的溶液中添加nBuLi(7.0当量)。使该反应混合物升温至0°C，并搅拌30分钟(深橙色)。反应再次冷却至-78°C并向反应中滴加含5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(实施例87所得)(1.0当量)的THF。使反应升温至室温过夜。反应用饱和NH4Cl淬灭并用EtOAc提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901402
系统(ISCO)上利用0-50%EtOAc/己烷纯化粗料，得到8-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色固体：1H NMR(丙酮-d6):δ9.00(dd,1H),8.90(dd,1H),8.41(d,1H),7.84(dd,1H),7.65(d,1H),7.52(dd,1H),6.91(dd,1H),6.77(br s,2H),5.97(dd,1H),5.34(dd,1H)。LRMS[M+H]=222.1。
实施例92
8-乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含8-乙烯基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例91所得)(1.0当量)和Pd/C(湿，10%重量)的EtOH混合液在H2气囊下搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释。通过硅藻土滤除Pd/C，滤液真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901404
系统(ISCO)上利用0-60%EtOAc/己烷纯化粗料，得到8-乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色泡沫：1H NMR(丙酮-d6):δ8.98(dd,1H),8.88(dd,1H),8.35(d,1H),7.82(dd,1H),7.46(d,1H),7.22(dd,1H),6.63(br s,2H),2.78(q,2H),1.30(t,3H)。LRMS[M+H]=224.1。
实施例93
8-(甲氧基甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901411
步骤1：2-氯-5-(甲氧基甲基)苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下向0℃的含2-氯-5-(甲氧基甲基)苯胺(市售可得)(1.0当量)的THF溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的THF溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901412
系统(ISCO)上利用0-30%EtOAc/己烷纯化粗料以得到2-氯-5-(甲氧基甲基)苯基氨基甲酸叔丁酯无色油。
步骤2：5-(甲氧基甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-氯-5-(甲氧基甲基)苯基氨基甲酸叔丁酯(前步所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(3.0当量)、Pd2dba3(2.5%)、XPhos(10%)和KOAc(3当量)。反应加热至110℃并搅拌过夜。所得悬液冷却至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤液。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901413
系统(ISCO)上利用0-20%EtOAc/己烷纯化粗料，获得5-(甲氧基甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯白色泡沫。
步骤3：8-(甲氧基甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-(甲氧基甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(前面步骤所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，用含2%MeOH的DCM和水稀释反应混合物。分离两相，水层用含2%MeOH的DCM提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用0-100%EtOAc/己烷纯化粗料，得到8-(甲氧基甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色固体：1H NMR(甲醇-d4)：δ8.97(dd,1H),8.91(dd,1H),8.41(dd,1H),7.83(dd,1H),7.59(d,1H),7.37(dd,1H),4.62(s,2H),3.45(s,3H)。LRMS[M+H]=240.1。
实施例94
(5-氨基-2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
步骤1：5-氨基-8-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸(实施例85/步骤1所得)(1.0当量)和2-氯-6-苯乙基尼古丁腈(由(E)-3-氯-5-苯乙烯基-2-氰基吡啶(实施例32/步骤1所得)按实施例114/步骤3所述过程制得)(1.0当量)、四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇溶液(2:1,0.03M)于100℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温后，用EtOAc与水稀释。分离两相，水层用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901423
系统(ISCO)上利用0-60%EtOAc/己烷纯化粗料以得到5-氨基-2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯白色固体。
步骤2：(5-氨基-2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
0℃下向含5-氨基-2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯(前步所得)(1.0当量)的THF溶液(0.03M)中添加Super-H(10当量)。30分钟后使溶液升至室温过夜。用水淬灭反应直至不再起泡。分离各层，水层用EtOAc提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901424
系统(ISCO)上利用0-10%MeOH/DCM纯化粗料以得到(5-氨基2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇的灰白色固体：1H NMR(甲醇-d4)：δ8.63(dd,1H),8.56(dd,1H),8.24(d,1H),7.57(d,1H),7.35(dd,1H),7.27-7.15(m,5H),4.75(s,2H),3.20(t,2H),3.06(t,2H)。LRMS[M+H]=330.1。
实施例95
(5-氨基-2-(4-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
步骤1：5-氨基-2-(4-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基-羧酸甲酯
将含2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸(实施例85/步骤1所得)(1.0当量)和2-氯-6-(4-甲氧基苯乙基)尼古丁腈(由3,5-二氯-2-氰基吡啶与1-乙炔基-4-甲氧基苯按实施例44/步骤3所述过程反应，并将产物按实施例114/步骤3所述过程还原)(1.0当量)、四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇溶液(2:1,0.03M)于100℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温后，用EtOAc与水稀释。分离两相，水层用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901432
系统(ISCO)上利用0-80%EtOAc/己烷纯化粗料以得到5-氨基-2-(4-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯白色固体。
步骤2：(5-氨基-2-(4-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
0°C下向含5-氨基-2-(4-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯(前步所得)(1.0当量)的THF溶液(0.03M)中添加Super-H(10当量)。溶液在30分钟内升至室温。用水淬灭反应直至不再起泡。分离各层，水层用EtOAc提取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901433
系统(ISCO)上利用0-100%EtOAc/己烷纯化粗料以得到(5-氨基-2-(4-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇的灰白色固体(31%)：1H NMR(丙酮-d6):δ8.79(d,1H),8.70(d,1H),8.35(d,1H),7.61(d,1H),7.33(dd,1H),7.13(d,2H),6.83(d,2H),6.62(br s,2H),4.47(s,2H),4.40(br s,1H),3.75(s,3H),3.22(t,2H),3.06(t,2H)。LRMS[M+H]=360.2
实施例96
苯并[f][1,7]萘啶-5.8-二胺
Figure BDA00002004804901441
步骤1：2-溴-5-硝基苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气氛下向0℃的含2-溴-5-硝基苯胺(市售可得)(1.0当量)的THF溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0°C下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的THF溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901442
系统(ISCO)上利用0-30%EtOAc/己烷纯化粗料以得到2-溴-5-硝基苯基氨基甲酸叔丁酯无色油。
步骤2：5-硝基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基 甲酸叔丁酯
N2气氛下在二噁烷(0.2M)中混合2-溴-5-硝基苯基氨基甲酸叔丁酯(前述步骤所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.8当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)(5%)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷却至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤液。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901443
系统(ISCO)上利用0-30%EtOAc/己烷纯化残留物以获得5-硝基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯白色泡沫。
步骤3：8-硝基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-硝基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(前面步骤所得)(1.0当量)和3-溴-2-氰基吡啶(1.0当量)的甲苯溶液(0.44M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，过滤反应混合物以收集沉淀。用EtOAc冲洗沉淀以得到8-硝基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。
步骤4：苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺
将含8-硝基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1.0当量)和Pd/C(湿，10%重量)的EtOH混合液在H2气囊下搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释。通过硅藻土滤除不溶固体，滤液真空浓缩以获得粗残留物。用丙酮洗涤粗料以获得苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺灰白色固体：1H NMR(甲醇-d4)：δ8.73(dd,1H),8.71(dd,1H),8.11(d,1H),7.69(dd,1H),6.86(d,1H),6.82(dd,1H)。LRMS[M+H]=211.1。
实施例97
8-(氨基甲基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901451
步骤1：2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-氰基苯基硼酸
按实施例85/步骤1所述过程制备标题化合物，但使用2-氨基-4-氰基苯基硼酸盐酸盐(市售可得)作为起始材料。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901452
系统(ISCO)上利用0-30%MeOH/DCM纯化粗料以得到2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-氰基苯基硼酸灰白色固体。
步骤2：5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-腈
按实施例96/步骤3所述过程制备标题化合物，但使用2-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-氰基苯基硼酸(前步所得)作为起始材料。用1:1EtOAc/己烷冲洗粗料以得到5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-腈浅黄色固体。
步骤4：苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺
将含8-硝基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1.0当量)和拉尼镍(湿，10%重量)的EtOH/氨水(2:1)混合液在H2气囊下搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释。通过硅藻土滤除不溶固体，滤液真空浓缩以获得粗残留物。用10%MeOH/DCM和70%EtOAc/己烷洗涤粗料以获得苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺灰白色固体：1H NMR(甲醇-d4)：δ8.97(dd,1H),8.90(dd,1H),8.41(d,1H),7.83(dd,1H),7.57(d,1H),7.39(dd,1H),3.96(s,2)。LRMS[M+H]=229.1。
实施例98
3-氟-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901461
步骤1：3-氯-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.0当量)和3-溴-6-氯-2-氰基吡啶(实施例20/步骤2所得)(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.03M)溶液100℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温后，用EtOAc与水稀释。分离两相，水层用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901462
系统(ISCO)上利用0-40%EtOAc/己烷纯化粗料以得到3-氯-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺浅黄色固体。
步骤2：3-氟-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将含3-氯-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1.0当量)、氟化钾(4.0当量)和18-冠-6(0.4当量)的NMP混合液(0.1M)在微波反应器中210°C加热2小时。反应残留物冷却至室温后，通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901463
系统(ISCO)上利用0-30%EtOAc/己烷纯化以得到3-氟-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺白色固体。1H NMR(丙酮-d6):δ9.20(dd,1H),8.32(d,1H),7.58(dd,1H),7.46(d,1H),7.21(dd,1H),6.51(br s,2H),2.47(s,3H)。LRMS[M+H]=228.1。
实施例99
(5-氨基-3-氟苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
Figure BDA00002004804901464
步骤1：5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2- 二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯
按实施例93/步骤1和2所述过程制备标题化合物，但使用5-((叔丁基二甲基甲硅氧基)甲基)-2-氯代苯胺(市售可得)作为起始材料。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901471
系统(ISCO)上利用0-20%EtOAc/己烷纯化粗料，获得5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯白色泡沫。
步骤2：8-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5- 胺
按实施例98/步骤1所述过程制备标题化合物，但使用5-((叔丁基二甲基甲硅氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(前步所得)作为起始材料。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901472
系统(ISCO)上利用0-15%EtOAc/己烷纯化粗料以得到8-((叔丁基二甲基甲硅氧基)甲基)-3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺浅黄色固体。
步骤3：(5-氨基-3-氯苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
将含8-((叔丁基二甲基甲硅氧基)甲基)-3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1.0当量)和TBAF(1.1当量)的THF溶液在室温搅拌过夜。用饱和NaHCO3淬灭该反应。分离两相，水层用Et2O提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用0-5%MeOH/DCM纯化粗料以得到(5-氨基-3-氯苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇白色固体。
步骤4：(5-氨基-3-氟苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
按实施例98/步骤2所述过程制备标题化合物，但使用(5-氨基-3-氯苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇(前步所得)作为起始材料。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用0-40%EtOAc/己烷纯化粗料以得到(5-氨基-3-氟苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇白色固体。1H NMR(甲醇-d4)：δ9.15(dd,1H),8.38(d,1H),7.64(d,1H),7.55(dd,1H),7.41(dd,1H),4.77(s,2H)。LRMS[M+H]=244.1。
实施例100
3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺
Figure BDA00002004804901481
步骤1：3-氯-8-硝基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
按实施例98/步骤1所述过程制备标题化合物，但使用5-硝基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(市售可得)作为起始材料。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901482
系统(ISCO)上利用0-40%EtOAc/己烷纯化粗料以得到3-氯-8-硝基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺浅黄色固体。
步骤2：3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺
将含8-硝基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1.0当量)和拉尼镍(湿，10%重量)的EtOH混合液在H2气囊下搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释。通过硅藻土滤除不溶固体，滤液真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901483
系统(ISCO)上利用0-100%EtOAc/己烷纯化粗料，得到3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺白色固体：1H NMR(甲醇-d4)：δ8.75(d,1H),8.08(dd,1H),7.70(d,1H),6.84-6.81(m,2H)。LRMS[M+H]=245.1。
实施例101
3-氟苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺
Figure BDA00002004804901484
按实施例98/步骤2所述过程制备标题化合物，但使用3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺(实施例100所得)作为起始材料。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901485
系统(ISCO)上利用0-7%MeOH/DCM纯化粗料，得到3-氟苯并[f][1,7]萘啶-5,8-二胺白色固体：1H NMR(甲醇-d4)：δ8.93(dd,1H),8.09(d,1H),7.44(dd,1H),6.86-6.83(m,2H)。LRMS[M+H]=229.1。
实施例102
8-异丁基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901491
8-异丁基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例91(维蒂希反应)和实施例92(还原)所述过程由5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(实施例87所得)与异丙基(三苯基)溴化膦制备。1H NMR(丙酮-d6):δ8.98(dd,1H),8.88(dd,1H),8.35(d,1H),7.82(dd,1H),7.44(d,1H),7.18(dd,1H),6.73(br s,2H),2.63(d,2H),2.04-1.94(m,1H),0.94(d,6H)。LRMS[M+H]=252.1。
实施例103
(E)-8-(丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901492
(E)-8-(丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例91所述过程由5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(实施例87所得)与乙基(三苯基)溴化膦制备。1H NMR(丙酮-d6):δ8.98(dd,1H),8.88(dd,1H),8.36(d,1H),7.83(dd,1H),7.54(d,1H),7.43(dd,1H),6.67(br s,2H),6.60-6.42(m,2H),1.92(dd,3H)。LRMS[M+H]=236.1。
实施例104
8-丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901493
8-丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例92所述过程由(E)-8-(丙-1-烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例103所得)制备。1H NMR(丙酮-d6):δ8.99(dd,1H),8.88(dd,1H),8.35(d,1H),7.83(dd,1H),7.45(d,1H),7.21(dd,1H),6.64(br s,2H),2.74(t,2H),1.74(qt,2H),0.98(t,3H)。LRMS[M+H]=238.1。
实施例105
8-(2-环丙基乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901501
8-(2-环丙基乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例91(维蒂希反应)和实施例92(还原)所述过程由5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(实施例87所得)与(环丙基甲基)三苯基溴化膦制备。1H NMR(丙酮-d6):δ8.99(dd,1H),8.88(dd,1H),8.35(d,1H),7.83(dd,1H),7.47(d,1H),7.23(dd,1H),6.64(br s,2H),1.60(q,2H),1.34-1.25(m,1H),0.91-0.72(m,2H),0.45-0.41(m,2H),0.11-0.07(m,2H)。LRMS[M+H]=264.1。
实施例106
8-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901502
8-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例91(维蒂希反应)和实施例92(还原)所述过程由5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(实施例87所得)与苄基三苯基溴化膦制备。1H NMR(丙酮-d6):δ8.99(dd,1H),8.88(dd,1H),8.35(d,1H),7.83(dd,1H),7.49(d,1H),7.29-7.15(dd,6H),6.70(br s,2H),3.10-3.00(m,4H)。LRMS[M+H]=300.1。
实施例107
(5-氨基-2-(4-溴苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
Figure BDA00002004804901503
(5-氨基-2-(4-溴苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇按实施例86所述过程由(5-氨基-2-(4-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇(实施例95所得)制得。1HNMR(丙酮-d6):δ8.81(d,1H),8.72(d,1H),8.40(d,1H),7.68(d,1H),7.39(dd,1H),7.08(d,2H),6.74(d,2H),6.66(br s,2H),4.49(s,2H),3.21(t,2H),3.03(t,2H)。LRMS[M+H]=408.1。
实施例108
(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
Figure BDA00002004804901511
(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇由5-((叔丁基二甲基甲硅氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例99/步骤1)和3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(实施例49/步骤1)按实施例44/步骤4所述过程制备并按实施例99/步骤3所述过程将TBS基团脱保护。1H NMR(丙酮-d6):δ8.79(s,1H),8.73(s,1H),8.35(d,1H),7.61(s,1H),7.33(d,1H),7.09(d,1H),6.75(d,1H),6.68(dd,1H),6.57(br s,2H),4.47(d,2H),4.32(t,1H),3.58(s,3H),3.17(t,2H),3.04(t,2H),2.30(s,3H)。LRMS[M+H]=374.2。
实施例109
2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-戊基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901512
和
实施例110
8-(2-环丙基乙基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901521
步骤1：5-溴-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯
按实施例5/步骤1所述过程制备标题化合物，但使用5-溴-2-氯代苯胺(市售可得)作为起始材料。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901522
系统(ISCO)上利用0-40%EtOAc/己烷纯化粗料以得到5-溴-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯浅黄色油。
步骤2：(E)-2-氯-5-(2-环丙基乙烯基)苯基氨基甲酸叔丁酯
将含5-溴-4-氯苯基氨基甲酸叔丁酯(前步所得)(1.0当量)和(E)-2-(2-环丙基乙烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.0当量)的甲苯溶液(0.2M)与四(三苯基膦)钯(5mol%)和2N碳酸钾水溶液(2.0当量)混合。反应加热至100℃，并搅拌过夜。反应混合物冷却至室温后，用EtOAc与水稀释。分离两相，水层用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用0-5%EtOAc/己烷纯化粗料以得到(E)-2-氯-5-(2-环丙基乙烯基)苯基氨基甲酸叔丁酯浅黄色固体。
步骤3：5-(2-环丙基乙烯基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2- 基)苯基氨基甲酸叔丁脂
按实施例93/步骤2所述过程制备标题化合物，但使用(E)-2-氯-5-(2-环丙基乙烯基)苯基氨基甲酸叔丁酯(前步所得)作为起始材料。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用0-10%EtOAc/己烷纯化粗产物以获得(E)-5-(2-环丙基乙烯基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯浅黄色固体。
步骤4：2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-戊基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺和 8-(2-环丙基乙基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
标题混合物按实施例44/步骤4(铃木偶联)和5(还原)所述过程制备，但使用(E)-5-(2-环丙基乙烯基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(前步所得)和3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(实施例49/步骤1所得)作为起始材料。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901531
系统(ISCO)上利用0-40%EtOAc/己烷纯化粗料以得到实施例109的白色固体：1HNMR(丙酮-d6):δ8.76(d,1H),8.70(d,1H),8.29(d,1H),7.44(d,1H),7.18(dd,1H),7.08(d,1H),6.74(d,1H),6.68(dd,1H),6.59(br s,2H),3.74(s,3H),3.18(t,2H),3.04(t,2H),2.75(t,2H),2.29(s,3H),1.75-1.68(m,2H),1.40-1.35(m,4H),0.90(s,3H);LRMS[M+H]=414.3;和实施例110的白色固体：1H NMR(丙酮-d6):δ8.76(d,1H),8.70(d,1H),8.28(d,1H),7.45(d,1H),7.19(dd,1H),7.08(d,1H),6.74(d,1H),6.67(dd,1H),6.55(br s,2H),3.73(s,3H),3.16(t,2H),3.03(t,2H),2.29(s,3H),1.60(q,2H),1.29-1.28(m,1H),0.89-0.74(m,2H),0.44-0.41(m,2H),0.10-0.07(m,2H)。LRMS[M+H]=412.3。
实施例111
(5-氨基-2-(2,4,6-三甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
Figure BDA00002004804901532
(5-氨基-2-(2,4,6-三甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇由5-((叔丁基二甲基甲硅氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例99/步骤1)、2-乙炔基-1,3,5-三甲基苯(市售可得)和3-氯-5-(
Figure BDA00002004804901533
基乙炔基)-2-氰基吡啶(实施例77/步骤1所得)按实施例44/步骤4、实施例99/步骤3(TBS脱保护)和实施例77/步骤3（还原）所述过程制备。1H NMR(丙酮-d6):δ8.77(s,2H),8.34(d,1H),7.61(s,1H),7.33(d,1H),6.84(s,2H),6.60(br s,2H),4.77(d,2H),4.35(t,1H),3.08(s,3H),2.84(s,6H),2.30-2.29(m,4H)。LRMS[M+H]=372.2。
实施例112
(5-氨基-2-(4-丙氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
Figure BDA00002004804901534
(5-氨基-2-(4-丙氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇由8-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-3-氯苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例99/步骤1所得)和3-氯-5-(4-丙氧基苯乙基)-2-氰基吡啶(实施例79/步骤2所得)按实施例44/步骤4和实施例99/步骤3(TBS脱保护)所述过程制备。1H NMR(丙酮-d6):δ8.79(d,1H),8.70(d,1H),8.35(d,1H),7.61(d,1H),7.33(dd,1H),7.17(d,2H),6.83(d,2H),6.57(br s,2H),4.77(d,2H),4.34(t,1H),3.89(t,2H),3.22(t,2H),3.06(t,2H),1.83-1.70(m,2H),1.00(t,3H)。LRMS[M+H]=388.2。
实施例113
(2-(2-(1H-吲哚-5-基)乙基)-8-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
Figure BDA00002004804901541
(2-(2-(1H-吲哚-5-基)乙基)-5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇由5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例99/步骤1所得)和5-((1H-吲哚-5-基)乙炔基)-3-氯-2-氰基吡啶(实施例44/步骤3所得)按实施例44/步骤4和实施例99/步骤3(TBS脱保护)所述过程制备。1H NMR(丙酮-d6):δ10.19(t,1H),8.83(d,1H),8.71(d,1H),8.35(d,1H),7.60(d,1H),7.46(d,1H),7.36-7.27(m,3H),7.04(dd,1H),6.57(br s,2H),6.38(dt,1H),4.77(d,2H),4.36(t,1H),3.29(t,2H),3.19(t,2H)。LRMS[M+H]=369.2。
实施例114
N-4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酰胺
Figure BDA00002004804901542
步骤1：N-(4-乙炔基苯基)乙酰胺
向含4-乙炔基苯胺(市售可得)(1.0当量)和三乙胺(1.0当量)的二氯甲烷(0.04M)溶液中缓慢添加乙酰氯(1.5当量)。然后将反应混合物在0°C搅拌1小时。反应混合物升至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901551
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料以得到N-(4-乙炔基苯基)乙酰胺白色固体。
步骤2：N-(4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)苯基)乙酰胺
将含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量）、N-(4-乙炔基苯基)乙酰胺(前步所得)(1.0当量)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(10mol%)、碘化铜(I)(10mol%)和三乙胺(5.0当量)的DMF溶液(0.04M)在60℃下搅拌4小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相。有机层用水洗涤两次，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901552
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料得到N-(4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)苯基)乙酰胺白色固体。
步骤3：N-(4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙基)苯基)乙酰胺
向含N-(4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)苯基)乙酰胺（前步所得）的乙酸乙酯/甲醇溶液(1:4,0.05M)中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气球引入氢气，反应搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。滤液真空浓缩，并通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901553
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化以得到N-(4-(2-(5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙基)苯基)乙酰胺。
步骤4：N-4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酰胺
将含N-(4-(2-(5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙基)苯基)乙酰胺(前步所得)(1.0当量)、4-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.5当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(10mol%)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯基-2-基)膦(20mol%)与碳酸钾(2.0当量)的正丁醇/水(2.5:1，0.04M)在100℃下搅拌过夜。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901554
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料以得到N-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酰胺白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.51(s,1H),8.32(s,1H),8.01(d,1H),7.44(s,1H),7.33-7.36(m,2H),7.03-7.19(m,3H),5.98(br,2H),3.07-3.11(m,2H),2.94-2.98(m,2H),2.44(s,3H),2.10(s,3H)。LRMS[M+H]=371.2。
实施例115
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸甲酯
Figure BDA00002004804901561
步骤1：3-甲基-4-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯
将含4-溴-3-甲基苯甲酸甲酯(1.0当量）、三乙基(乙炔基)硅烷(1.0当量)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(10mol%)、碘化铜(I)(10mol%)和三乙胺(5.0当量)的DMF溶液(0.04M)在60℃下搅拌4小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相。有机层用水洗涤两次，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901562
系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到3-甲基-4-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯白色固体。
步骤2：4-乙炔基-3-甲基苯甲酸甲酯
在0°C下向含3-甲基-4-((三乙基甲硅烷基)乙炔基)苯甲酸甲酯(前步所得)(1.0当量)的THF溶液(0.2M)中缓慢添加TBAF(0.2当量)。然后将反应混合物在0°C搅拌1小时。反应混合物升至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901563
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料得到4-乙炔基-3-甲基苯甲酸甲酯白色固体。
步骤3：4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)-3-甲基苯甲酸甲酯
将含3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.0当量）、4-乙炔基-3-甲基苯甲酸甲酯(前步所得)(1.0当量)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(10mol%)、碘化铜(I)(10mol%)和三乙胺(5.0当量)的DMF溶液(0.04M)在60℃下搅拌4小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相。有机层用水洗涤两次，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901571
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料得到4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)-3-苯甲酸甲酯白色固体。
步骤4：甲基4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)-3-甲基苯 甲酸甲酯
将含4-((5-氯-6-氰基吡啶-3-基)乙炔基)-3-甲基苯甲酸(前步所得)(1.0当量)、4-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例5/步骤2所得)(1.5当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(10mol%)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯基-2-基)膦(20mol%)与碳酸钾(2.0当量)的正丁醇/水(2.5:1，0.04M)在100℃下搅拌过夜。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901572
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到甲基4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)-3-甲基苯甲酸甲酯白色固体。
步骤5：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸 甲酯
向含甲基4-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)-3-甲基苯甲酸甲酯(前步所得)的乙酸乙酯/甲醇溶液(1:4,0.05M)中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气球引入氢气，反应搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。滤液真空浓缩，并通过
Figure BDA00002004804901573
系统(ISCO)用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化，得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸甲酯。1H-NMR(CDCl3):δ8.61(s,1H),8.40(s,1H),8.09(d,1H),7.83(s,1H),7.81(d,1H),7.54(s,1H),7.18-7.20(m,2H),6.17(br,2H),3.92(s,3H),3.10-3.16(m,4H),2.53(s,3H),2.36(s,3H)。LRMS[M+H]=386.2。
实施例116
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N,3-二甲基苯甲酰胺
Figure BDA00002004804901581
步骤1：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸
将含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸甲酯(实施例115所得)(1.0当量)和1N氢氧化钠(1.5当量)的甲醇溶液(0.04M)于60°C搅拌4小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相。有机层用水洗涤两次，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901582
系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸白色固体。
步骤2：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰 氯
含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸(前步所得)的亚硫酰氯溶液60°C搅拌3小时。冷却至室温后，反应混合物真空浓缩。该粗料无须纯化即用于下一步骤。
步骤3：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N，3-二甲基苯 甲酰胺
向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(前步所得)(实施例5)和三乙胺(2.5当量)的醚溶液(0.05M)中添加甲胺(5.0当量)。反应混合物搅拌过夜。然后将该反应混合物用乙酸乙酯和水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901583
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N,-3-二甲基苯甲酰胺白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.62(s,1H),8.32(s,1H),8.04(d,1H),7.60(s,1H),7.46-7.52(m,2H),7.09-7.11(m,2H),6.05(br,2H),3.09-3.17(m,4H),3.00(d,3H),2.52(s,3H),2.33(s,3H)。LRMS[M+H]=385.2。
实施例117
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-N,3-二甲基苯甲酰胺
向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(前步所得)(实施例116/步骤2)和三乙胺(2.5当量)的醚溶液(0.05M)中添加N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(5.0当量)。反应混合物搅拌过夜。然后将该反应混合物用乙酸乙酯和水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901592
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-N,-3-二甲基苯甲酰胺白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.66(s,1H),8.37(s,1H),8.07(d,1H),7.63(s,1H),7.09-7.30(m,4H),3.90(br,2H),3.01-3.19(m,4H),3.08(s,6H),2.72(br,5H),2.52(s,3H),2.33(s,3H)。LRMS[M+H]=456.3。
实施例118
2-(4-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-(4-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例45/步骤1-3所述过程由1-乙炔基-4-甲氧基苯(实施例116/步骤2)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.69(s,1H),8.47(s,1H),8.27(d,1H),7.80(d,2H),7.58-7.66(m,1H),7.33-7.42(m,1H),7.15(d,2H),6.90(d,2H),6.25(br,2H),3.86(s,3H),3.13-3.23(m,2H),2.97-3.10(m,2H)。LRMS[M+H]=330.2。
实施例119
2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901601
2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例45/步骤1-3所述过程由1-乙炔基-4-甲氧基-2-甲基苯(市售可得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.60(s,1H),8.37(s,1H),8.18(d,1H),7.69(d,1H),7.49-7.57(m,1H),7.24-7.34(m,1H),6.98(d,1H),6.56-6.70(m,2H),6.00(br,2H),3.70(s,3H),3.00-3.09(m,2H),2.83-2.96(m,2H),2.20(s,3H)。LRMS[M+H]=344.2。
实施例120
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰胺
Figure BDA00002004804901602
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰胺按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和氨制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.60(s,1H),8.35(s,1H),8.05(d,1H),7.65(s,1H),7.51-7.53(m,2H),7.13-7.21(m,2H),3.09-3.16(m,4H),2.51(s,3H),2.34(s,3H)。LRMS[M+H]=371.2。
实施例121
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N,N,3-三甲基苯甲酰胺
Figure BDA00002004804901603
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N,N,3-三甲基苯甲酰胺按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和二甲胺制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.68(s,1H),8.32(s,1H),8.04(d,1H),7.66(s,1H),7.31(d,1H),7.06-7.18(m,3H),3.08-3.19(m,4H),2.96(d,3H),2.54(s,3H),2.33(s,3H),2.05(s,3H)。LRMS[M+H]=399.2。
实施例122
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-羟乙基)-3-甲基苯甲酰胺
Figure BDA00002004804901611
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-羟乙基)-3-甲基苯甲酰胺按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和2-氨基乙醇制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.59(s,1H),8.34(s,1H),8.04(d,1H),7.50-7.62(m,3H),7.08-7.25(m,2H),3.80(t,2H),3.63(t,2H),3.07-3.16(m,4H),2.51(s,3H),2.32(s,3H)。LRMS[M+H]=415.2。
实施例123
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-甲基苯甲酰胺
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-甲基苯甲酰胺按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和N1,N1-二甲基乙烷-1,2-二胺制得。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.60(s,1H),8.39(s,1H),8.08(d,1H),7.68(s,1H),7.57-7.59(m,2H),7.19-7.22(m,2H),3.57-3.61(m,2H),3.07-3.16(m,4H),2.64-2.67(m,2H),2.52(s,3H),2.38(s,6H),2.35(s,3H)。LRMS[M+H]=442.3。
实施例124
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮
Figure BDA00002004804901621
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和吡咯烷制得。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.60(s,1H),8.42(s,1H),8.09(d,1H),7.34(s,1H),7.23(s,1H),7.05-7.15(m,3H),3.49(t,2H),3.27(t,2H),3.05-3.17(m,4H),2.42(s,3H),2.26(s,3H),1.88-1.91(m,2H),1.73-1.77(m,2H)。LRMS[M+H]=425.2。
实施例125
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)-3-甲基苯甲酰胺
Figure BDA00002004804901622
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2--(二乙基氨基)乙基)-3-甲基苯甲酰胺按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和N1,N1-二乙基乙烷-1,2-二胺制得。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.55(s,1H),8.48(s,1H),8.10(d,1H),7.56(s,1H),7.47-7.50(m,1H),7.33(s,1H),7.10-7.14(m,2H),3.44(t,2H),3.25(t,2H),3.08-3.14(m,4H),2.62-2.72(m,4H),2.42(s,3H),2.27(s,3H),1.05(t,6H)。LRMS[M+H]=470.3。
实施例126
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮
Figure BDA00002004804901631
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和1-乙基哌嗪制得。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.59(s,1H),8.37(s,1H),8.06(d,1H),7.32(s,1H),7.00-7.12(m,4H),3.67(br,2H),3.06-3.13(m,4H),2.45(br,4H),2.37(q,2H),2.41(s,3H),2.26(s,3H),2.19(br,2H),1.04(t,3H)。LRMS[M+H]=468.3。
实施例127
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)(哌嗪-1-基)甲酮
Figure BDA00002004804901632
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)(哌嗪-1-基)甲酮按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和哌嗪制得。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.66(s,1H),8.55(s,1H),8.19(d,1H),7.38(s,1H),7.21-7.23(m,2H),7.10-7.15(m,2H),3.66(br,6H),3.08-3.18(m,6H),2.45(s,3H),2.30(s,3H)。LRMS[M+H]=440.2。
实施例128
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基-N-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)苯甲酰胺
Figure BDA00002004804901641
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基-N-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)苯甲酰胺按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和2-(吡咯烷-1-基)乙胺制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.58(s,1H),8.38(s,1H),8.07(d,1H),7.64(s,1H),7.51-7.55(m,2H),7.12-7.20(m,2H),6.26(br,2H),3.61(dd,2H),3.05-3.12(m,4H),2.81(t,2H),2.69(br,4H),2.50(s,3H),2.33(s,3H),1.83-1.85(m,4H)。LRMS[M+H]=468.3。
实施例129
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-氨基乙基)-3-甲基苯甲酰胺
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-氨基乙基)-3-甲基苯甲酰胺按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基吡啶[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和乙烷-1,2-二胺制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.59(s,1H),8.37(s,1H),8.07(d,1H),7.63(s,1H),7.51(br,2H),7.12-7.21(m,2H),6.25(br,2H),3.48-3.52(m,2H),3.08-3.15(m,4H),2.94(t,2H),2.51(s,3H),2.34(s,3H)。LRMS[M+H]=414.2。
实施例130
4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-N,3-二甲基苯甲酰胺
Figure BDA00002004804901651
4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-N,3-二甲基苯甲酰胺按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺制得。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.84(s,1H),8.63(s,1H),8.39(d,1H),7.76-7.83(m,2H),7.60-7.64(m,1H),7.37(s,1H),7.19-7.29(m,2H),3.96(t,2H),3.48(t,2H),3.32(t,2H),3.20(t,2H),3.09(s,3H),3.06(s,6H),2.42(s,3H)。LRMS[M+H]=442.3。
实施例131
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-N-甲基苯甲酰胺
Figure BDA00002004804901652
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-甲基苯甲酰胺按实施例117所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.64(s,1H),8.36(s,1H),8.05(d,1H),7.60(s,1H),7.41(d,2H),7.31(d,1H),7.21(d,2H),3.91(t,2H),3.44(t,2H),3.25(t,2H),3.12(t,2H),3.03(s,3H),3.01(s,6H),2.53(s,3H)。LRMS[M+H]=442.3。
实施例132
2-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇
Figure BDA00002004804901653
2-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇按实施例78所述过程制备，但使用4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸甲酯，其制备与实施例115类似但在步骤4使用2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯。LRMS[M+H]=372.2。
实施例133
2-(4-丁氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901661
2-(4-丁氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例45/步骤1-3所述过程制备，但在步骤1中使用1-丁氧基-4-乙炔基苯(市售可得)与3,5-二氯-2-氰基吡啶(市售可得)。1H NMR(丙酮-d6):δ8.75(s,1H),8.68(s,1H),8.28(d,1H),7.42(s,1H),7.10-7.18(m,3H),6.84(d,2H),6.58(br,2H),3.94(t,2H),3.21(t,2H),3.05(t,2H),2.46(s,3H),1.65-1.75(m,2H),1.41-1.58(m,2H),0.94(s,3H)。LRMS[M+H]=386.2。
实施例134
2-(2-(联苯基-4-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901662
2-(4-(联苯基-4-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例45/步骤1-3所述过程制备，但在步骤1中使用4-乙炔基联苯(市售可得)与3,5-二氯-2-氰基吡啶(市售可得)。1H NMR(丙酮-d6):δ8.80(s,1H),8.75(s,1H),8.26(d,2H),7.55-7.69(m,4H),7.30-7.46(m,4H),7.13(d,2H),6.58(br,2H),3.30(t,2H),3.18(t,2H),2.45(s,3H)。LRMS[M+H]=390.2。
实施例135
2-((1,3-二氢异苯并呋喃-1-基)甲基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
步骤1：2-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯基)甲醇
2-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯基)甲醇按实施例45/步骤1-2所述过程制备，但在步骤1中使用(2-乙炔基苯基)甲醇(市售可得)与3,5-二氯-2-氰基吡啶(市售可得)。
步骤2：2-((1,3-二氢异苯并呋喃-1-基)甲基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5- 胺
向含2-((5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙炔基)苯基)甲醇(1.0当量)(前步所得)的乙醇(0.05M)溶液中添加10重量%的碳载钯(0.2当量，以重量计)。用气球引入氢气，反应搅拌18小时。此时，通过硅藻土垫过滤该混合物，用甲醇洗涤。真空去除挥发物，所得残留物通过
Figure BDA00002004804901672
系统(ISCO)用含0-60%乙酸乙酯的己烷纯化以得到2-((1,3-二氢异苯并呋喃-1-基)甲基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺固体。1H NMR(丙酮-d6):δ8.78(s,1H),8.74(s,1H),8.24(d,2H),7.40-7.44(m,2H),7.20-7.34(m,3H),6.61(br,2H),5.63-5.69(m,1H),4.89-5.00(dd,2H),3.51-3.56(dd,1H),3.28-3.34(dd,1H),2.46(s,3H)。LRMS[M+H]=342.1。
实施例136
8-甲基-2-(4-(2-甲基烯丙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)(1.0当量)的二甲基甲酰胺溶液(0.10M)中添加无水碳酸钾(1.5当量)，然后添加甲基烯丙溴(1.2当量)。所得化合物在100°C下搅拌18小时。混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相层，水层用乙酸乙酯洗涤两次。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空除去挥发物。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-60%乙酸乙酯的己烷纯化所得残留物以提供8-甲基-2-(4-(2-甲基烯丙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺固体。1HNMR(丙酮-d6):δ8.75(s,1H),8.68(s,1H),8.27(d,1H),7.41(s,1H),7.12-7.19(m,3H),6.87(d,2H),6.60(br,2H),5.06(s,1H),4.93(s,1H),4.43(s,2H),3.20(t,2H),3.05(t,2H),2.45(s,3H),1.79(s,3H)。LRMS[M+H]=384.2。
实施例137
2-(4-(异戊氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-(4-(异戊氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例136所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制得，但使用1-溴-3-甲基丁烷。1H NMR(丙酮-d6):δ8.72(s,1H),8.69(s,1H),8.26(d,1H),7.43(s,1H),7.12-7.18(m,3H),6.84(d,2H),6.50(br,2H),3.98(t,2H),3.21(t,2H),3.06(t,2H),2.46(s,3H),1.78-1.87(m,1H),1.61-1.67(dd,2H),0.96(s,3H),0.95(3H)。LRMS[M+H]=400.2。
实施例138
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基碳酸丙酯
Figure BDA00002004804901683
0°C下向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)(1.0当量)和三乙胺(2当量)的二氯甲烷溶液(0.10M)中添加氯甲酸乙酯(1.2当量)。所得化合物于0°C搅拌30分钟，此后用水和二氯甲烷稀释。分离两相层，水层用二氯甲烷洗涤两次。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空除去挥发物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901691
系统(ISCO)上利用含0-50%乙酸乙酯的己烷纯化所得残留物以提供4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-苯基碳酸乙酯固体。1H NMR(丙酮-d6):δ8.78(s,1H),8.73(s,1H),8.28(d,1H),7.43(s,1H),7.33(d,2H),7.10-7.17(m,3H),6.64(br,2H),4.18(t,2H),3.25(t,2H),3.14(t,2H),2.45(s,3H),1.68-1.77(m,2H),0.97(t,3H)。LRMS[M+H]=416.2。
实施例139
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)戊酸乙酯
22°C下向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)(1.0当量)的二甲基甲酰胺溶液(0.10M)中添加60%氢化钠的矿物油分散液(1.5当量)，然后将所得化合物搅拌30分钟。此时，将5-溴戊酸乙酯(1.2当量)加入该化合物。然后将反应混合物搅拌18小时，此后用乙酸乙酯和水稀释。分离两相层，有机层用水洗涤两次。有机层用无水Na2SO4干燥并真空除去挥发物。所得残留物通过RP-HPLC用含10-50%MeCN的水梯度纯化。然后用StratoSpheresTMPL-SO3H SPE离子交换树脂将所得三氟乙酸盐转化成游离碱形式，提供5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)戊酸乙酯固体。1H NMR(丙酮-d6):δ8.80(s,1H),8.74(s,1H),8.33(d,1H),7.47(s,1H),7.24(d,1H),7.17(d,2H),6.85(d,2H),4.10(q,2H),3.97(t,2H),3.25(t,2H),3.07(t,2),2.50(s,3H),2.37(t,3H),1.74-1.84(m,4H),1.21(t,3H)。LRMS[M+H]=458.2。
实施例140
2-(4-(环戊氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901701
2-(4-(环戊氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例136所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制得，但使用溴代环戊烷。1H NMR(丙酮-d6):δ8.75(d,2H),8.30(d,1H),7.45(s,1H),7.20(d,1H),7.14(d,2H),6.79(d,2H),4.73-4.81(m,1H),3.22(t,2H),3.05(t,2H),2.47(s,3H),1.85-1.96(m,2H),1.70-1.79(m,4H),1.56-1.64(m,2H)。LRMS[M+H]=398.2。
实施例141
2-(4-(环丁基甲氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901702
2-(4-(环丁基甲氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例136所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制得，但使用(溴甲基)环丁烷。1H NMR(丙酮-d6):δ8.79(s,1H),8.73(s,1H),8.33(d,1H),7.47(s,1H),7.26(d,1H),7.16(d,2H),6.82(d,2H),3.90(d,2H),3.23(t,2H),3.06(t,2H),2.68-2.79(m,1H),2.49(s,3H),2.05-2.14(m,2H),1.80-1.98(m,4H)。LRMS[M+H]=398.2。
实施例142
8-甲基-2-(4-(2-吗啉乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901711
8-甲基-2-(4-(2-吗啉乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例139所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制备，但使用4-(2-溴乙基)吗啉。1H NMR(丙酮-d6):δ8.78(s,1H),8.72(s,1H),8.30(d,1H),7.46(s,1H),7.17-7.24(m,3H),6.85(d,2H),4.08(t,2H),3.56-3.62(m,4H),3.45-3.53(m,2H),3.24(t,2H),3.07(t,2H),2.73(t,2H),2.52-2.56(m,2H),2.49(s,3H)。LRMS[M+H]=443.2。
实施例143
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)-1-苯基乙酮
Figure BDA00002004804901712
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)-1-苯基乙酮按实施例139所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制备，但使用2-溴-1-苯基乙酮。1H NMR(丙酮-d6):δ8.76(s,1H),8.71(s,1H),8.27(d,1H),8.06(d,2H),7.67(t,1H),7.57(t,2H),7.43(s,1H),7.17(d,3H),6.90(d,2H),5.45(s,2H),3.21(t,2H),3.06(t,2H),2.45(s,3H)。LRMS[M+H]=448.2。
实施例144
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)戊酸
Figure BDA00002004804901713
向含5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)戊酸乙酯(1.0当量)(实施例139所得)的乙醇溶液(0.10M)中添加无水氢氧化钠(2.0当量)，所得化合物在80°C下搅拌2小时。混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相层，水层用乙酸乙酯洗涤两次。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空除去挥发物。在
Figure BDA00002004804901721
系统(ISCO)上利用含0-10%甲醇的二氯甲烷纯化所得残留物以得到5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)戊酸固体。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.61(s,1H),8.57(s,1H),8.20(d,1H),7.40(s,1H),7.20(d,1H),7.07(d,2H),6.81(d,2H),3.93(t,2H),3.18(t,2H),3.00(t,2H),2.48(s,3H),2.25(t,2H),1.74-1.81(m,2H),0.86-0.96(m,2H)。LRMS[M+H]=430.2。
实施例145
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)乙醇
Figure BDA00002004804901722
步骤1：2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙氧基)苯乙基)-8-甲基苯 并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例139所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制得，但使用(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷。
步骤2：2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)乙醇
向含2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)乙氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.10M)中加入1.0M四丁基氟化铵(5当量)的THF溶液，所得化合物在22°C下搅拌2小时。此时，该混合物用乙酸乙酯和水稀释。分离两相层，水层用乙酸乙酯洗涤两次。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空除去挥发物。在
Figure BDA00002004804901723
系统(ISCO)上利用含0-10%甲醇的二氯甲烷纯化所得残留物以得到2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)乙醇固体。1H NMR(丙酮-d6):δ8.76(s,1H),8.67(s,1H),8.28(d,1H),7.40(s,1H),7.15(t,3H),6.84(d,2H),6.54(br,2H),4.00(t,2H),3.83(t,2H),3.21(t,2H),3.05(t,2H),2.45(s,3H)。LRMS[M+H]=374.2。
实施例146
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)-N,N-二甲基乙酰胺
Figure BDA00002004804901731
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)-N,N-二甲基乙酰胺根据实施例139所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制备，但使用2-溴-N,N-甲基乙酰胺。1H NMR(丙酮-d6):δ8.75(s,1H),8.70(s,1H),8.28(d,1H),7.40(s,1H),7.18(t,3H),6.87(d,2H),6.56(br,2H),4.72(s,2H),3.20(t,2H),3.07(s,3H),3.05(t,2H),2.87(s,3H),2.45(s,3H)。LRMS[M+H]=415.2。
实施例147
8-甲基-2-(2-甲基-4-(2-吗啉乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901732
按实施例139所述制备的类似过程制备8-甲基-2-(2-甲基-4-(2-吗啉乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，但使用4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例50所得)和4-(2-溴乙基)吗啉。1H NMR(丙酮-d6):δ8.73(d,2H),8.26(d,1H),7.44(s,1H),7.17(d,1H),7.05(d,1H),6.76(s,1H),6.67(d,1),4.04-4.08(m,3H),3.60-3.62(m,4H),3.30(s,1H),3.16(t,2H),3.04(t,2H),2.71(t,2H),2.50-2.52(m,2H),2.47(s,3H),2.28(s,3H)。LRMS[M+H]=457.3。
实施例148
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇
Figure BDA00002004804901741
步骤1：2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯 乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
按实施例145/步骤1所述制备的类似过程制备2-(4-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，但使用4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例50所得)与叔丁基(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)二甲基硅烷。
步骤2：2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)乙氧基)乙醇
2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇按实施例145/步骤2所述过程由2-(4-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)制得。1HNMR(丙酮-d6):δ8.74(s,1H),8.69(s,1H),8.27(d,1H),7.41(s,1H),7.14(d,1H),7.06(d,1H),6.75(s,1H),6.69(d,1),6.54(br,2H),4.07(t,2H),3.79(t,2H),3.64(t,2H),3.59(t,2H),3.16(t,2H),3.03(t,2H),2.45(s,3H),2.29(s,3H)。LRMS[M+H]=432.2。
实施例149
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基磷酸二乙酯
Figure BDA00002004804901751
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基磷酸二乙酯按实施例139所述制备的类似过程制得，但使用4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例50所得)与3-溴丙基磷酸二乙酯。1H NMR(丙酮-d6):δ9.52(s,1H),9.47(s,1H),9.03(d,1H),8.21(s,1H),7.93(d,1H),7.84(d,1H),7.60(br,2H),7.53(s,1),7.45(d,1H),4.76-4.91(m,6H),3.93(t,2H),3.81(t,2H),3.24(s,3H),3.06(s,3H),2.76-2.86(m,2H),2.61-2.72(m,2H),2.07(t,6H)。LRMS[M+H]=522.2。
实施例150
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸
Figure BDA00002004804901752
将12N盐酸溶液(0.10M)加入3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基磷酸二乙酯(实施例149所得)并将所得混合物在100°C下搅拌18小时。此时，减压除去盐酸，所得残留物通过RP-HPLC用含10-50%MeCN的水梯度纯化。然后通过添加碳酸氢钠饱和水溶液将所得三氟乙酸盐转化成游离碱形式，然后用乙酸乙酯洗涤3次。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，并真空除去挥发物以提供3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸固体。1H NMR(二甲基亚砜-d6):δ9.72(br,1H),9.01(s,1H),8.96(br,1H),8.85(s,1H),8.54(d,1H),7.54(s,1H),7.42(d,1H),7.08(d,1),6.74(s,1H),6.66(d,1H),3.95(t,2H),3.14(t,2H),2.97(t,2H),2.50(s,3H),2.27(s,3H),1.81-1.91(m,2H),1.56-1.67(m,2H)。LRMS[M+H]=466.2。
实施例151
2-(4-丁氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901761
按实施例139所述制备的类似过程制备2-(4-丁氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，但使用4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例50所得)与1-溴丁烷。1H NMR(丙酮-d6):δ8.75(s,1H),8.71(s,1H),8.28(d,1H),7.43(s,1H),7.15(d,1H),7.07(d,1H),6.75(s,1H),6.69(d,1H),6.54(br,2H)3.95(t,2H),3.16(t,2H),3.04(t,2H),2.47(s,3H),2.30(s,3H),1.69-1.77(m,2H),1.43-1.54(m,2H),0.97(t,3H)。LRMS[M+H]=400.2。
实施例152
2-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙醇
Figure BDA00002004804901762
步骤1：4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚
4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚按实施例145所述制备的类似过程制得，但使用2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例119所得)。
步骤2：2-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙醇
2-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙醇按实施例145/步骤1-2所述过程由(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(前步所得)制得。LRMS[M+H]=374.2。
实施例153
2-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙醇
Figure BDA00002004804901771
步骤1：4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚
4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚按实施例50所述制备的类似过程制得，但使用2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(实施例119所得)。
步骤2：2-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙醇
4-(2-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙醇按实施例148/步骤1-2所述过程制得。LRMS[M+H]=418.2。
实施例154
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊酸乙酯
Figure BDA00002004804901772
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊酸乙酯按实施例139所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例50所得)制得，但使用5-溴戊酸乙酯。1H-NMR(CDCl3):δ8.64(s,1H),8.27(s,1H),8.02(d,1H),7.66(s,1H),7.32(d,1H),6.91(d,1H),6.66(s,1H),6.63(d,1H),4.13(q,2H),3.93(t,2H),3.14(t,2H),2.99(t,2H),2.54(s,3H),2.38(t,2H),2.25(s,3H),1.79-1.83(m,4H),1.26(t,3H)。LRMS[M+H]=472.3。
实施例155
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊酸
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊酸按实施例144所述过程由5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊酸乙酯(前步所得)制得。1H-NMR(CDCl3):δ8.52(s,1H),8.27(s,1H),8.02(d,1H),7.65(s,1H),7.32(d,1H),6.86(d,1H),6.72(s,1H),6.63(d,1H),3.95(t,2H),3.15(t,2H),2.99(t,2H),2.54(s,3H),2.45(t,2H),2.23(s,3H),1.79-1.83(m,4H)。LRMS[M+H]=444.2。
实施例156
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙醇
Figure BDA00002004804901781
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙醇按实施例145/步骤1-2所述过程制得，但使用4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例50所得)。1H NMR(丙酮-d6):δ8.76(s,1H),8.69(s,1H),8.28(d,1H),7.40(s,1H),7.15(d,1H),7.09(d,1H),6.75(s,1H),6.68(d,1H),6.57(br,2H),4.00(t,2H),3.79-3.88(m,2H),3.17(t,2H),3.04(t,2H),2.46(s,2H),2.29(s,2H)。LRMS[M+H]=388.5。
实施例157
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基碳酸乙酯
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基碳酸乙酯按实施例138所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制备，但使用氯甲酸乙酯。LRMS[M+H]=402.2
实施例158
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)丁酸甲酯
Figure BDA00002004804901791
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)苯氧基)丁酸甲酯按实施例139所述制备过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制得，但使用与4-溴丁酸甲酯。1H NMR(丙酮-d6):δ8.74(s,1H),8.67(s,1H),8.24(d,1H),7.39(s,1H),7.09-7.19(m,3H),6.82(d,2H),6.53(br,2H),3.97(t,2H),3.60(s,3H),3.19(t,2H),3.04(t,2H),2.48(t,2H),2.44(s,3H),0.84-0.91(m,2H)。LRMS[M+H]=430.2。
实施例159
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)丁酸
Figure BDA00002004804901792
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)丁酸)按实施例144所述过程由4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯氧基)丁酸甲酯(前步所得)制得。1H NMR(丙酮-d6):δ7.47(s,1H),7.41(s,1H),7.09(d,1H),6.21(s,1H),6.18(d,1H),5.82(d,2H),5.52(d,2H),2.66(t,2H),1.99(t,2H),1.77(t,2H),1.28(s,3H),1.17(t,2H),0.70-0.79(m,2H)。LRMS[M+H]=416.2。
实施例160
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁酸
Figure BDA00002004804901793
步骤1：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧 基)丁酸甲酯
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁酸甲酯按实施例158所述制备过程制得，但使用4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例50所得)。
步骤2：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧 基)丁酸
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁酸按实施例144所述过程由4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁酸甲酯(前步所得)制得。1H NMR(丙酮-d6):δ8.38(s,1H),8.24(s,1H),7.90(d,1H),6.90(s,1H),6.68(d,1H),6.54-6.63(m,2H),6.27(d,1H),6.20(d,1H),3.40(t,2H),2.62(t,2H),2.47(t,2H),1.99(s,3H),1.80(s,2H),1.45(t,2H),1.27-1.39(m,2H)。LRMS[M+H]=430.2。
实施例161
2-(4-(异戊氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901801
2-(4-(异戊氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例136所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例50所得)制得，但使用1-溴-3-甲基丁烷。1H NMR(丙酮-d6):δ8.75(s,1H),8.72(s,1H),8.29(d,1H),7.43(s,1H),7.17(D,1H),7.10(d,1H),6.76(d,1H),6.68(d,1H),6.56(br,2H),4.00(t,2H),3.17(t,2H),3.07(t,2H),2.48(s,3H),1.76-1.91(m,1H),1.60-1.71(m,2H),0.96(s,6H)。LRMS[M+H]=414.2。
实施例162
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基碳酸己酯
Figure BDA00002004804901811
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基碳酸己酯按实施例138所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚(实施例170所得)制备，但使用氯甲酸己酯。LRMS[M+H]=458.2。
实施例163
2-(2,4,6-三甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901812
步骤1：2-(
Figure BDA00002004804901813
基乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-(
Figure BDA00002004804901814
基乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺由3-氯-5-(基乙炔基)-2-氰基吡啶(实施例77/步骤1)和2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(市售可得)制得。
步骤2：2-(2,4,6-三甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-(2,4,6-三甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例45/步骤2所述过程由2-(
Figure BDA00002004804901815
基乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)制得。1H NMR(丙酮-d6):δ8.80(s,2H),8.38(d,1H),7.60(d,2H),7.54(d,2H),7.31(t,1H),6.84(s,2H),6.61(br,2H),3.08(s,2H),2.30(s,6H),2.23(s,3H)。LRMS[M+H]=342.2.
实施例164
(5-氨基-2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
Figure BDA00002004804901816
步骤1：5-氨基-2-(2,4-二甲基苯乙基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基-羧 酸甲酯
5-氨基-2-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯按实施例95/步骤1中所述过程由3-氯-5-((2,4-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(实施例47/步骤3所得)和2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸(实施例85/步骤1所得)制得。
步骤2：5-氨基-2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基-羧酸甲酯
5-氨基-2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯按实施例44/步骤5所述过程由5-氨基-2-((2,4-二甲基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯(前步所得)制得。
步骤3：(5-氨基-2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
(5-氨基-2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇按实施例95/步骤2所述过程由5-氨基-2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-羧酸甲酯(前步所得)制得。1H NMR(丙酮-d6):δ8.79(s,1H),8.73(s,1H),8.35(d,1H),7.61(s,1H),7.34(d,1H),7.08(d,1H),6.97(s,1H),6.91(d,1H),6.51(br.2H),4.77(s,2H),3.16-3.20(m,2H),3.04-3.10(m,2H),2.28(s,3H),2.25(s,3H)。LRMS[M+H]=358.2。
实施例165
3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)丙基磷酸二乙酯
Figure BDA00002004804901821
3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)丙基磷酸二乙酯按实施例139所述过程制得，但使用4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例156所得)与3-(2-溴乙氧基)丙基磷酸二乙酯。LRMS[M+H]=566.3。
实施例166
3-(2-(2-(4-2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)丙基磷酸二乙酯
3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)丙基磷酸二乙酯按实施例139所述过程制得，但使用4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例148所得)与3-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)丙基磷酸二乙酯。1H NMR(丙酮-d6):δ8.75(s,1H),8.70(s,1H),8.26(d,1H),7.42(s,1H),7.16(d,1H),7.09(d,1H),6.77(s,1H),6.71(d,1H),6.58(br,2H),3.95-4.11(m,6H),3.76-3.80(m,2H),3.63-3.67(m,2H),3.55-3.58(m,2H),3.57-3.51(m,2H),3.14-3.18(m,2H),3.04-3.05(m,2H),2.46(s,3H),2.29(s,3H),1.71-1.87(m,4H),1.22-1.29(m,8H)。LRMS[M+H]=610.3。
实施例167
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基二甲基氨基磺酸酯
Figure BDA00002004804901832
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基二甲基氨基磺酸酯按实施例138所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(实施例50所得)制备，但使用二甲基氨基磺酰氯。1H NMR(丙酮-d6):δ8.79(s,1H),8.72(s,1H),8.28(d,1H),7.42(s,1H),7.27(d,1H),7.17(s,1H),7.14(t,1H),7.05-7.10(d,1H),3.19-3.25(m,2H),3.11-3.17(m,2H),2.92(s,6H),2.46(s,3H),2.37(s,3H)。LRMS[M+H]=451.2。
实施例168
(5-氨基-2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇
Figure BDA00002004804901841
(5-氨基-2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇由5-((叔丁基二甲基甲硅氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(实施例99/步骤1所得)和4-乙炔基-N,N-二甲基苯胺(市售可得)按实施例45/步骤1-4所述过程制备，然后如实施例99/步骤3对TBS基团脱保护。1H NMR(丙酮-d6):δ8.78(s,1H),8.73(s,1H),8.35(d,1H),7.61(s,1H),7.31-7.35(d,1H),7.08(d,1H),6.68(d,2H),6.50(br,2H),4.78(s,2H),4.34(s,1H),3.16-3.20(m,2H),3.03-3.10(m,2H),2.83(s,3H),2.80(s,3H)。LRMS[M+H]=373.2。
实施例169
2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901842
2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例45/步骤1-3所述过程制备，但在步骤1中使用4-乙炔基-N，N-甲基苯胺。1H NMR(丙酮-d6)游离碱:δ8.60(s,1H),8.55(s,1H),8.15(d，1H),7.28(s,1H),7.03(d，1H),6.96(d,2H),6.56(d,2H),6.55(br s,2H),3.05(t,2H),2.88(t,2H),2.75(s,6H),2.33(s,3H)。LRMS[M+H]=357.2。
实施例170
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚
步骤1：2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例79/步骤1-3所述过程制备，但在步骤1中使用1-乙炔基-4-甲氧基苯。
步骤2：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚按实施例50所述过程由2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)制得。1H NMR(甲醇-d4)：δ8.59
实施例171
1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮
Figure BDA00002004804901852
步骤1：5-((4-乙酰基苯基)乙炔基)-3-氯-2-氰基吡啶
含1-(4-乙炔基苯基)乙酮(市售可得)(1当量)、3,5-二氯-2-氰基吡啶(1当量)、二氯双(三苯基膦)钯(II)(20mol%)、碘化铜(10mol%)和DMF:三乙胺(10:1)(0.13M)溶液在常温下搅拌过夜。然后，反应混合物用乙酸乙酯和碳酸氢钠溶液稀释。分离两相，水相用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-100%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，5-((4-乙酰基苯基)乙炔基)-3-氯-2-氰基吡啶分离为黄色固体。
步骤2：5-(4-乙酰基苯乙基)-3-氯-2-氰基吡啶
向含5-((4-乙酰基苯基)乙炔基)-3-氯-2-氰基吡啶(前步所得)(1当量)的乙醇溶液(0.1M)中添加氧化铂(30mol%)。用气球引入氢气，反应搅拌0.5小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。真空浓缩滤液，并通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901861
系统(ISCO)上用含0-100%的己烷纯化以得到5-(4-乙酰基苯乙基)-3-氯-2-氰基吡啶灰白色固体。
步骤3：1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮
含5-(4-乙酰基苯乙基)-3-氯-2-氰基吡啶(前步所得)(1当量)和5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)、四(三苯基膦)钯(10mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(1:1,0.09M)溶液利用BIOTAGE INITIATOR 2.0在微波条件下150℃加热20分钟。反应混合物冷却至室温后，用乙醇/水稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901862
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料以得到1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮黄色固体。1H NMR(甲醇-d4)TFA盐：δ8.69(d,2H),8.30(d,1H),7.80(d,2H),7.38(s,1H),7.36(d,1H),7.28(d,2H),3.25(t,2H),3.13(t,2H),2.47(s,3H),2.45(s,3H)。
LRMS[M+H]=356.2
实施例172
2-(4-((二甲基氨基)甲基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901863
步骤1：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲醛
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲醛按实施例171/步骤1-3所述过程由4-乙炔基苯甲醛(市售可得)制得。
步骤2：2-(4-((二甲基氨基)甲基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
将4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲醛(前步所得)(1当量)、乙酸钠(3.5当量)和N,N’-二甲基胺盐酸盐(3.5当量)溶于1,2-二氯乙烷(0.04M)的溶液在密闭管中80℃加热2小时。反应混合物冷至室温后，进一步冷却至0°C并添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.25当量)。反应混合物在室温下搅拌1小时。该混合物用乙酸乙酯和水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC用10-90%乙腈/水作为梯度纯化粗料并分离出2-(4-((二甲基氨基)甲基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺的灰白色粉末TFA盐。1H NMR(甲醇-d4)TFA 盐：δ8.83(s,1H),8.81(s,1H),8.41(d,1H),7.52(s,1H),7.45(d,1H),7.43(s,1H),7.40(m,3H),4.29(s,2H),3.30-3.24(m,4H),2.79(s,6H),2.60(s,3H)。LRMS[M+H]=371.2。
实施例173
2-(4-(1-(二甲基氨基)乙基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
2-(4-(1-(二甲基氨基)乙基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶5-胺按实施例172步骤2所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)制得。1H NMR(甲醇-d4)TFA盐：δ8.84(s,1H),8.79(s,1H),8.40(d,1H),7.52(s,1H),7.44-7.46(m,2H),7.38-7.42(m,3H),4.45(m,1H),3.31(t,2H),3.19(t,2H),2.83(s,3H),2.66(s,3H),2.56(s,3H),1.70(d,3H)。LRMS[M+H]=385.2。
实施例174
1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮肟
Figure BDA00002004804901872
将1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)(1当量)、羟胺盐酸盐(2当量)和1滴HOAc溶于无水乙醇(0.028M)的溶液在室温下搅拌1.5小时。该混合物用乙酸乙酯和水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901881
系统(ISCO)上利用含10-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料以得到1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮肟白色固体。1HNMR(甲醇-d4)：δ8.56(s,1H),8.52(s,1H),8.12(d,1H),7.45(d,2H),7.31(s,1H),7.12(m,3H),4.51(s,OH),3.15(t,2H),3.01(t,2H),2.39(s,3H),2.09(s,3H)。LRMS[M+H]=371.2。
实施例175
8-甲基-2-(4-((甲基氨基)甲基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
8-甲基-2-(4-((甲基氨基)甲基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例172步骤2所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲醛(实施例172/步骤1所得)和甲基胺制备。1H NMR (丙酮-d6)TFA盐：δ8.95(s,1H),8.88(s,1H),8.43(d,1H),7.58(s,1H),7.54(d,2H),7.42(d,1H),7.37(d,2H),4.30(s,2H),3.32-3.37(m,4H),2.75(s,3H),2.55(s,3H)。LRMS[M+H]=357.2。
实施例176
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苄基氨基)乙醇
将4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲醛(实施例172/步骤1所得)(1当量)、乙醇胺(8当量)和1滴HOAc溶于无水乙醇(0.018M)所得溶液在80°C下搅拌2小时。混合物冷却至0°C并加入NaBH4(3.5当量)，反应混合物在室温下再搅拌1小时。该混合物用乙酸乙酯和水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。粗料通过制备型HPLC在19x50mm的
Figure BDA00002004804901891
10微米C18(沃特斯公司(Waters Corp.))系统上用含10-90%乙腈(0.035%TFA)的水(0.05%TFA)纯化以得到呈浅黄色固体的TFA盐。1H NMR(丙酮-d6)TFA盐：δ8.82(s,1H),8.75(s,1H),8.30(d,1H),7.44(m,3H),7.28(d,1H),7.21(d,2H),4.22(s,2H),3.72(t,2H),3.22(t,2H),3.09(m,2H),3.07(t,2H),3.01(bs,OH),2.41(s,3H),LRMS[M+H]=387.2。
实施例177
8-甲基-2-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
8-甲基-2-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例172步骤2所述过程由4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯甲醛(实施例172/步骤1所得)和吡咯烷制备。1H NMR (丙酮-d6)TFA盐：δ8.88(s,1H),8.82(s,1H),8.82(s,1H),8.43(d,1H),8.38(d,1H),7.58(s,1H),7.51(m,1H),7.33(d,2H),4.16(s,2H),3.32-3.38(m,4H),2.55(s,3H),2.20-2.32(m,4H),1.90-1.99(m,4H)。LRMS[M+H]=397.2。
实施例178
2-(3,4-二甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901901
2-(3,4-二甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例45/步骤1-3所述过程由4-乙炔基-1,2-二甲氧基苯(市售可得)制得。1H NMR(丙酮-d6):δ8.64(s,1H),8.56(s,1H),8.14(d,1H),7.29(s,1H),7.03(d,1H),6.77(s,1H),6.71(s,1H),6.62(d,1H),6.45(bs,2H),3.62(s,6H),3.12(t,2H),2.94(t,2H),2.33(s,3H)。LRMS[M+H]=374.2。
实施例179
2-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)乙醇
2-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)乙醇(实施例171所得)按实施例176所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮和乙醇胺(市售所得)制得。TFA盐的1H NMR (丙酮-d6)：δ8.78(d,1H),8.29(d,1H),7.83(s,1H),7.45(m,3H),7.28(m,3H),4.22(m,1H),3.52(m,2H),3.23(t,2H),3.09(t,2H),2.85(m,1H),2.65(m,1H),2.41(s,3H),1.61(d,3H)。LRMS[M+H]=401.2。
实施例180
1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙醇
Figure BDA00002004804901911
1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙醇(实施例171所得)在实施例173所示还原氨化中作为副产物分离得到。TFA盐的1H NMR(丙酮-d6)：δ8.90(s,1H),8.88(s,1H),8.42(d,1H),7.57(s,1H),7.43(d,1H),7.33(d,2H),7.26(d,2H),4.82(q,1H),3.32(t,2H),3.17(t,2H),3.012.55(s,3H),1.41(s,3H)。LRMS[M+H]=358.2。
实施例181
8-甲基-2-(4-(噁唑-5-基)苯乙基)苯并[f][[1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901912
8-甲基-2-(4-(噁唑-5-基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例45/步骤1-3所述过程由5-(4-乙炔基苯基)噁唑(市售可得)制得。TFA盐的1H NMR (丙酮-d6)：8.69(s,1H),8.59(s,1H),8.16(d,1H),8.04(s,1H),7.55(m,2H),7.38(s,1H),7.28(m,2H),7.01(m,2H),3.16(t,2H),3.07(t,2H),2.33(s,3H)。LRMS[M+H]=381.2。
实施例182
3-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)丙腈
Figure BDA00002004804901913
将1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)(1当量)、3-氨基丙腈(市售可得)(2.5当量)溶入无水乙醇(0.014M)所得溶液在80°C搅拌2小时。混合物冷却至0°C并加入NaCNBH3(2当量)，反应混合物在室温下再搅拌1小时。该混合物用乙酸乙酯和氯化铵稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。粗料通过制备型HPLC在19x50mm的10微米C18(沃特斯公式)系统上用含10-90%乙腈(0.035%TFA)的水(0.05%TFA)纯化以得到3-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)丙腈的浅黄色固体TFA盐。1H NMR(丙酮-d6):δ8.60(s,1H),8.59(s,1H),8.11(d,1H),7.29(s,1H),7.16(d,2H),7.09(d,2H),7.03(d,1H),6.43(bs,2H),3.65(m,1H),3.12(t,2H),2.99(t,2H),2.56(m,2H),2.35(m,2H),2.32(s,3H),1.16(d,3H)。LRMS[M+H]=410.2。
实施例183
(2R)-2-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)丙-1-醇
(2R)-2-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)丙-1-醇按实施例182所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和(R)-2-氨基丙-1-醇(市售可得)制备。1H NMR(丙酮-d6):δ:8.94(m,2H),8.45(m,1H),7.64(d,2H),7.59(s,1H),7.55(br s,2H),7.41(m,3H),4.65(m,1H),3.81(m,1H),3.35(t,2H),3.25(t,2H),2.56(s,3H),1.73(m,3H),1.29(d,3H),1.23(d,3H)。LRMS[M+H]=415.2。
实施例184
8-甲基-2-(4-(1-(哌嗪-1-基)乙基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901931
8-甲基-2-(4-(1-(哌嗪-1-基)乙基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例182所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和哌嗪(市售可得)制备。1H NMR(甲醇-d4)TFA盐：δ8.83(s,1H),8.75(s,1H),8.39(d,1H),7.51(s,1H),7.46(d,1H),7.26(m,4H),3.62(m,1H),3.25(t,2H),3.12(t,2H),2.80(m,4H),2.69(m,4H),2.56(s,3H),1.42(d,3H)。LRMS[M+H]=426.2。
实施例185
((2S)-1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)吡咯烷-2-基)甲醇
((2S)-1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)吡咯烷-21-基)甲醇按实施例182所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和(S)-吡咯烷-2-基甲醇(市售可得)制备。1H NMR (丙酮-d6)TFA盐：δ8.83(s,1H),8.80(s,1H),8.43(d,1H),7.36-7.53(m,6H),4.68(m,1H),3.69(m,2H),3.19-3.21(m,4H),2.55(m,4H),1.75-1.78(m,6H),1.74(d,3H)。LRMS[M+H]=441.2。
实施例186
N1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)-N2,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺
Figure BDA00002004804901941
N1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)-N2,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺根据实施例182所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和N1,N1-二甲基乙烷-1,2-二胺(市售所得)制得。1H NMR(丙酮-d6)TFA盐：δ8.85(m,2H),8.43(d,1H),7.52(s,1H),7.48(m,2H),7.40(m,2H),6.69(m,1H),4.39(m,1H),3.42(m,2H),3.18-3.25(m,6H),2.87(s,6H),2.56(s,3H),1.69(d,3H)。LRMS[M+H]=428.2。
实施例187
3-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)丙酸
Figure BDA00002004804901942
将1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)(1当量)、3-氨基丙酸(市售可得)(5当量)、三乙胺(5当量)溶入无水乙醇(0.042M)所得溶液在50°C搅拌3小时。混合物冷却至0°C并加入NaCNBH3(1当量)，反应混合物在室温下再搅拌6小时。然后再加入1当量NaCNBH3，反应混合物在50°C再搅拌1小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与饱和氯化铵稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。粗料通过制备型HPLC在19x50mm的
Figure BDA00002004804901943
10微米C18(沃特斯公式)系统上用含10-90%乙腈(0.035%TFA)的水(0.05%TFA)纯化以得到3-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)丙酸的白色固体TFA盐。1H NMR(甲醇-d4)TFA盐：δ8.74(s,1H),8.42(d,1H),7.66(m,2H),7.50(m,1H),7.31(d,2H),7.23(m,2H),4.24(m,1H),3.21(t,2H),3.14(t,2H),2.75-3.10(m,2H),2.51(t,2H),2.10(s,3H),1.55(d,3H)。LRMS[M+H]=429.2。
实施例188
8-甲基-2-(4-(1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901951
8-甲基-2-(4-(1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺按实施例182所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和1-甲基哌嗪(市售可得)制备。1H NMR(丙酮-d6)TFA盐：δ8.84(s,1H),8.80(s,1H),8.41(d,1H),7.52(s,1H),7.42-7.46(m,3H),7.36-7.38(m,2H),3.53(m,1H),3.18(m,2H),3.12(m,2H),2.92(s,2H),2.66(s,2H),2.56(s,2H),2.16(s,3H),1.99(m,2H),1.69(d,3H),1.30(s,3H)。LRMS[M+H]=440.2。
实施例189
N2-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)-N1,N1-二甲基丙烷-1,2-二胺
Figure BDA00002004804901952
N2-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)-N1,N1-二甲基乙烷-1,2-二胺根据实施例182所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和N1,N1-二甲基丙烷-1,2-二胺(市售所得)制得。1H NMR(丙酮-d6)TFA盐：δ8.83(m,2H),8.40(d,1H),7.46-7.51(m,3H),7.43(m,1H),7.37(d,2H),4.54(m,1H),3.74(m,1H),3.19(m,4H),2.90(s,3H),2.77(s,3H),2.55(s,3H),2.41(d,2H),1.66(d,3H),1.39(d,3H)。LRMS[M+H]=442.2。
实施例190
8-甲基-2-(4-(1-(2-(吡啶-4-基)乙基氨基)乙基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
Figure BDA00002004804901961
8-甲基-2-(4-(1-(2-(吡啶-4-基)乙基氨基)乙基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺根据实施例182所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和2-(吡啶-4-基)乙胺(市售可得)制备。1H NMR(丙酮-d6)TFA盐：δ8.94(m,2H),8.92(d,2H),8.73(s,1H),8.43(d,1H),7.60(m,2H),7.40(m,2H),7.16-7.26(m,3H),4.55(m,1H),3.55(m,4H),2.56(m,4H),2.12(s,3H),1.73(d,3H)LRMS[M+H]=462.2。
实施例191
N1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)-N2,N2-二乙基乙烷-1,2-二胺
Figure BDA00002004804901962
N1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)-N2,N2-二乙基乙烷-1,2-二胺根据实施例182所述过程由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和N1,N1-二乙基乙烷-1,2-二胺(市售所得)制得。1H NMR (丙酮-d6)TFA盐：δ:8.81(s,1H),8.75(s,1H),8.23(d,1H),7.60(d,2H),7.39(d,2H),7.28(m,2H),4.51(m,1H),3.82(m,1H),3.62(m,1H),3.34(m,4H),3.20(t,2H),2.46(s,3H),2.10(m,4H),1.74(d,3H),1.34(t,6H)。LRMS[M+H]=456.2。
实施例192
2-(4-(二甲氨基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
步骤1：4-碘-N，N，3-三甲基苯胺
将含4-碘-3-甲基苯胺(市售可得)(1当量)、NaHCO3(2.5当量)和碘甲烷(2.5当量)的DMF(0.2M)溶液室温搅拌过夜。然后，反应混合物用乙酸乙酯和水稀释。分离两相，水相用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，4-碘-N,N,3-三甲基苯胺分离为黄色固体。
步骤2：合成N，N，3-三甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺
将含4-碘-N，N-3-三甲基苯胺(前步所得)(1当量)、乙炔基三甲基硅烷(1.5当量)、二氯双(三苯基膦)钯(II)(20mol%)、碘化铜(20mol%)和三乙胺(0.4M)的溶液室温搅拌过夜。然后，反应混合物用乙酸乙酯和氯化铵溶液稀释。分离两相，水相用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901973
系统(ISCO)上利用含0-100%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，N,N,3-三甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺分离为黄色固体。
步骤3：4-乙炔基-N，N，3-三甲基苯胺
将含N，N-3-三甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺(前步所得)(1当量)、K2CO3(2.5当量)的MeOH(0.15M)溶液在室温下搅拌6小时。滤除固体，将液体真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，4-乙炔基-N,N,3-三甲基苯胺分离为黄色固体。
步骤4：3-氯-5-((4-(二甲氨基)-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶
含4-乙炔基-N，N-3-三甲基苯胺(前步所得)(1当量)、3,5-二氯-2-氰基吡啶(1.2当量)、二氯双(三苯基膦)钯(II)(10mol%)、碘化铜(10mol%)和DMF:三乙基胺(0.28M)的溶液在室温下搅拌过夜。然后，反应混合物用乙酸乙酯和氯化铵溶液稀释。分离两相，水相用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901981
系统(ISCO)上利用含0-100%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，3-氯-5-((4-(二甲基氨基)-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶分离为灰黄色固体。
步骤5：2-((4-(二甲氨基)-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶 -5-胺
将含5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(1.3当量)和3-氯-5-((4-(二甲氨基)-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(前步所得)(1.0当量)，四(三苯基膦)钯(10mol%)和2N碳酸钠水溶液(2.0当量)的甲苯/乙醇(2:1,0.17M)溶液100℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温后，用甲醇稀释。滤除不溶的固体，滤液真空浓缩获得粗残留物。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804901982
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料，得到2-((4-(二甲氨基)-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。
步骤6：2-(4-(二甲氨基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向含2-((4-(二甲氨基)-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(1当量)，(前步所得)的乙酸乙酯/乙醇溶液(1:5,0.035M)中添加10重量%的碳载钯(0.2当量)。用气球引入氢气，反应搅拌3.5小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。滤液真空浓缩并通过制备型HPLC在19x50mm的
Figure BDA00002004804901983
10微米C18(沃特斯公式)系统上用含10-90%乙腈(0.035%TFA)的水(0.05%TFA)纯化以得到2-(4-(二甲基氨基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1，7]萘啶-5-胺的白色固体TFA盐。1H NMR(丙酮-d6)TFA盐：δ8.81(s,1H),8.74(s,1H),8.34(d,1H),7.89(s,1H),7.47(m,2H),7.38(m,2H),3.34(s,6H),3.32(t,2H),3.28(t,2H),2.57(s,3H),2.34(s,3H)。LRMS[M+H]=371.2。
实施例193
1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)吡咯烷-3-羧酸
Figure BDA00002004804901991
1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)吡咯烷-3-羧酸由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和吡咯烷-3-羧酸(市售可得)按实施例187所述过程制备，但在此例中，用乙酸替代三乙胺(30%)。1H NMR(丙酮-d6)TFA盐：δ8.81(s,1H),8.75(s,1H),8.70(s,1H),8.28(d,1H),7.59(d,2H),7.37(m,3H),4.46(m,1H),4.21(m 1H),3.45(m,2H),3.32(m,2H),3.21(m,2H),3.17(m,2H),2.27(m,2H),2.07(s,3H)1.77(d,3H)。LRMS[M+H]=455.2。
实施例194
4-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)苯酚
Figure BDA00002004804901992
4-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基氨基)苯酚由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和4-氨基苯酚按实施例187所述过程制备，但在此例中，用乙酸替代三乙胺(28%)。1H NMR(丙酮-d6)TFA盐：δ8.83(s,1H),8.73(s,1H),8.33(d,1H),7.44(s,1H),7.40(d,2H),7.36(d,1H),7.24(d,2H),7.10(d,2H),6.76(d,2H),4.72(m,1H)3.27(t,2H),3.12(t,2H),2.50(s,3H),2.06(d,3H)。LRMS[M+H]=449.2。
实施例195
1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)吡咯烷-3-醇
Figure BDA00002004804902001
1-(1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)吡咯烷-3-醇由1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酮(实施例171所得)和吡咯烷-3-醇(市售可得)按实施例187所述过程制备，但在此例中，用乙酸替代三乙胺(20%)。1H NMR (丙酮-d6)TFA盐：δ8.83(s,1H),8.76(s,1H),8.72(s,1H),8.29(d,1H),7.57(s,1H),7.42(s,1H),7.33-7.38(m,3H),4.41(m,2H),3.77(m,2H),3.33(t,2H),3.21(t,2H),3.19(m,2H),3.10(m,2H),2.10(s,3H),1.75(d,3H)。LRMS[M+H]=427.2。
实施例196
2-(4-(2-氨基丙-2-基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
向溶于干THF(0.029M)的4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苄腈(实施例64步骤1所得)(1当量)溶液中非常缓慢地添加甲基溴化镁(6当量)，反应混合物在室温下搅拌半小时。然后在10分钟内将四异丙氧基钛(3当量)加入反应瓶中。反应混合物回流16小时。反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯与饱和氯化铵稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。粗料通过制备型HPLC在19x50mm的
Figure BDA00002004804902003
10微米C18(沃特斯公式)系统上用含10-90%乙腈(0.035%TFA)的水(0.05%TFA)纯化以得到2-(4-(2-氨基丙-2-基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺的白色固体TFA盐。1H NMR(甲醇-d4)TFA盐：9.01(s,2H),8.92(s,1H),8.42(s,1H),7.65(d,2H),7.56(s,1H),7.39(m,2H),3.19(m,4H),2.54(s,3H),1.82(6H)。LRMS[M+H]=371.2。
实施例197
N-(2-乙酰胺乙基)-4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][[1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰胺
Figure BDA00002004804902011
向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氯(实施例116/步骤2)和三乙胺(2.5当量)的醚溶液(0.05M)中添加N-(2-氨乙基)乙酰胺(5.0当量)。反应混合物搅拌过夜。然后将该反应混合物用乙酸乙酯和水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在
Figure BDA00002004804902012
系统(ISCO)上利用含0-80%乙酸乙酯的己烷纯化粗料以得到N-(2-乙酰胺乙基)-4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰胺白色固体。1H-NMR(CDCl3):δ8.61(s,1H),8.38(s,1H),8.07(d,1H),7.65(s,1H),7.51-7.56(m,2H),7.10-7.16(m,2H),6.25(br,2H),3.50-3.59(m,4H),3.08-3.16(m,4H),2.62(s,3H),2.52(s,3H),2.35(s,3H)。LRMS[M+H]=455.2。
用于进行本发明的其他化合物包括：
8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-丙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(3-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-3-羧酸甲酯;(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-3-基)甲醇;2-(2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(3-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺,
8-甲基-2-(2-(萘-1-基)乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(2-(萘-2-基)乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基))乙基)苯甲酸;3-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基))乙基)苯甲酸;2-(3-氯苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2-氯苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;(3-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)甲醇;2-(4-氯苯乙基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-丁基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-丁基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-丙基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(三氟甲基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2,5-二甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-丙基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(2,4,5-三甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2,5-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-异丙基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-庚基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-异丁氧基苯乙基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-((2-甲氧基乙氧基)甲氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-(2-苯氧基乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-(4-苯基丁氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(烯丙氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-(3-苯基丙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(庚烷-4-基氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-(4-甲基戊-3-烯氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(2-环己基乙氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-异丙氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(3,3-二甲基丁氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-(2-环丙基乙基)-2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-(2-环丙基乙基)-2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;N-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙酰胺;N-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)-4-甲基苯磺酰胺;3-甲基-9-对甲苯基-9,10-二氢苯并[f]呋喃并[2,3-b][1,7]萘啶-6-胺;4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苄腈;4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-(2-氨基乙基)-3-甲基苯甲酰胺;8-甲基-2-(2-甲基-4-(1H-四唑-5-基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氨基)-4-甲基戊酸甲酯;2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氨基)乙酸甲酯;2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氨基)-4-甲基戊酸;2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酰氨基)乙酸;6-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)己-1-醇;7-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)庚酸;11-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)十一烷-1-醇;2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙酸乙酯;2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙酸;3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙酸;6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己酸;8-甲基-2-(2-甲基-4-(甲硫基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-(甲磺酰基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(己氧基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-苯乙氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-(戊氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-(4-甲基戊氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2-氟苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(3-氟苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-氟苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2-(噻吩-3-基)乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)甲醇;2-(3,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(3,4-二甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(3,5-二甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2-(苯并呋喃-5-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(2-硝基乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(氨基甲基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;N2,8-二甲基苯并[f][1,7]萘啶-2,5-二胺;2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)-1-苯基乙醇;2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)-1-(4-甲氧基苯基)乙醇;2-(联苯基-2-基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2-(2,6-二甲基吡啶-3-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2-(5-甲氧基吡啶-2-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)丙酸;5-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-4-甲基吡啶-2(1H)-酮;6-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)吡啶-3-醇;8-甲基-2-(4-(三氟甲氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(2-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;(E)-3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙烯酸;(E)-8-(2-环丙基乙烯基)-2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-戊基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;(E)-8-(2-环丙基乙烯基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-(2-环丙基乙基)-2-苯乙基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;3-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯酚;2-(2-甲氧基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-乙基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-乙基苯乙基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(哌啶-1-基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-叔丁基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(4-(哌啶-1-基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(3,5-二甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;8-甲基-2-(2-(三氟甲基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-N-羟基苯甲脒;4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苄腈;8-甲基-2-(4-(1-吗啉乙基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-氨基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;1-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)胍;8-甲基-2-(4-(1-(苯乙氨基)乙基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙腈;2-(4-(哌啶-1-基甲基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;1-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苄基)哌啶-4-醇;2-(4-(氨基甲基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-((乙基氨基)甲基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-(2-氨基丙-2-基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;1-(1-(4-(2-(5-氨基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)苯基)乙基)吡咯烷-3-羧酸,和8-甲基-2-(4-(1-(苯基氨基)乙基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。
实施例（II）：实施例47均匀悬液的发展
评价小分子免疫增强制剂（SMIP）作为针对细菌和病毒感染的疫苗佐剂或免疫调节试剂的稳定性和活性。
实施例47是有极佳化学稳定性的高结晶度药物物质。由于其在整个pH范围（<0.5μg/ml）的极度低水溶性和高度疏水核心结构，明矾（美国唯一许可的疫苗佐剂）制剂受到挑战。然而，基于TLR7激动剂-明矾的疫苗能提供优势，例如，Th1极化反应的诱导，和增强的血清杀菌活性（SBA）和呼吸覆盖率（如MenB）。
本实施例描述实施例47的稳定和可重复均匀悬液的开发，其作为载剂在体内递送分子，粒度在微米范围内。
表面活性剂、悬浮剂和匀质化方法的评价
评价很多匀质化方法，包括漩涡、超声、和臼研和杵磨方法。
对漩涡而言，实施例47以2.5mg/mL悬于0.1%吐温80和0.5%羧甲基纤维素（CMC），随后漩涡。平均粒度是约100μm。
就超声处理而言，实施例47以2.5mg/mL悬于0.1%吐温80和0.5%CMC，随后漩涡。混合物然后进行探头超声处理5分钟（用冰，3W，基于瓶大小的最大功率）最终，混合物用手持均化器匀匀化几分钟。平均粒度是约80μm。
臼研和杵磨方法中，10mg的实施例47用臼和杵研磨5分钟，然后悬浮于0.5%吐温80。观察到的两个粒度峰值是粒度0.1μm和~8μm。较大峰值粒度是1-100μm。
也评价很多表面活性剂和悬浮剂。表面活性剂和悬浮剂的基质，和相应悬浮颗粒的大小分布显于下表1（D50，D90（μm））。
表1
Figure BDA00002004804902051
每个实验中，10mg实施例47与2mL表面活性剂和2mL悬浮剂混合。涡旋混合物5分钟，并以3W进行探头超声处理和匀质化2-4分钟。样品的大小分布用Mastersizer测量。
观察到所有样品甚至在探头超声处理过程中快速沉降。超声处理后没有观察到尺寸降低。匀质化后视觉观察到一些尺寸降低。
高压匀质化
实施例47用表面活性剂吐温80和悬浮剂羧甲基纤维素（CMC）高压匀质化后，评价很多表面活性剂和悬浮剂可鉴定出稳定均匀悬液。匀质化在高压下冰上进行多至30分钟。
制备溶于MilliQ水的1%CMC（羧甲基纤维素，钠盐；西格玛公司（sigma）419273，M5013）储液，和溶于MilliQ水的1%吐温80溶液。实施例47晶体（80mg）与相同体积（各10mL）1%CMC和1%吐温80混合至终化合物浓度4mg/ml（在0.5%CMC和0.5%吐温80中）。混合物首先充分涡旋并使用IKAT-25匀化器以24000rpm匀质化1分钟，然后用高压匀化器（Avestin EmulsifluxC-3）在冰下高压（15,000-20,000psi）处理20-30分钟。检测样品的大小分布。一旦至少约50%的悬浮颗粒的大小分布有约2微米或更小直径（D50），和至少约90%的悬浮颗粒有约10微米或更小直径（D90），优选约5微米或更小时，认为匀质化过程完成。匀质化悬液存储在4°C。
实施例47的均匀悬液使用相同的方案在两个不同位点独立重复（“悬液S”和“悬液C”）。实施例47的均匀悬液（高压下制备）有μm范围的颗粒大小，用Horiba粒度分析仪检测。两种悬液的颗粒大小分布非常相似。另外，悬液显示良好的时间-颗粒大小分布的稳定性，如D50和D90表示，30天和56天后没有明显改变。表2显示悬液S在4°C稳定超过4周（贝克曼库尔特（Beckmancoulter）粒度分析仪检测）。
表2：实施例47悬液在4°C稳定超过4周
  制备后时间   D50(μm)   D90(μm)
  第1天   1.25   3.37
  第30天   1.46   5.92
  第56天   1.45   7.3
表3显示，如检测大小分布，实施例47的均匀悬液在4°C稳定超过12个月。
表3：实施例47悬液在4°C稳定超过12个月
  制备后时间   D50(μm)   D90(μm)   平均(μm)
  0   0.5(0.5243)   0.9(0.9236)   0.6(0.5828)
  1   0.6(0.5860)   1.1(1.1114)   0.7(0.6676)
  6   0.7(0.6830)   1.4(1.3556)   0.8(0.7882)
  9   0.6(0.6493)   1.3(1.2869)   0.8(0.7540)
  12   0.7(0.6566)   1.4(1.3736)   0.8(0.7821)
实施例（III）：实施例47均匀悬液制剂与基于明矾的疫苗：吸附抗原效果
脑膜炎球菌B
Giuliani等(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:10834-10839(2006))公开从三个不同多肽（“5CVMB”）制备的血清组B脑膜炎球菌（“MenB”）疫苗。这些多肽能吸附氢氧化铝（“Al-H”），和使用SDS-PAGE检查是否发生吸附。
本研究中，评价有MenB抗原(“5CVMB”)和Al-H(3mg/ml)(“Alum/3MenB”)的不同配制剂量实施例47悬液的效果。如图1A和1B所示，当没有悬液（每剂量0μg）加入时，检测的三个抗原完全吸附在Al-H上。随着悬液剂量增加，少量抗原从Al-H上以时间依赖性方式解吸。图1B是显示氢氧化铝上抗原吸附百分比的表。尽管用实施例47悬液配制后观察到MenB抗原的一些剂量依赖性吸附，三个抗原在4°C 2小时后各自都保持>60%吸附。
肠外致病性大肠杆菌（“ExPEC”）
本研究中，评价有ExPEC抗原pK1-3526和Al-H的不同剂量配制实施例47的效果。实施例47悬液4°C保存16小时，然后加入多种pK1-3526制剂。如图2所示，pK1-3526抗原保持高效（超过90%）吸附，并且没有检测到吸附后抗原完整性改变。
研究也用呼吸道合胞病毒（RSV）抗原得到相似结果。
MenB，ExPEC和RSV研究显示实施例47悬液与抗原/Al-H制剂的组合对MenB，ExPEC和RSV抗原的吸附没有影响。在高剂量实施例47悬液下观察到一些MenB抗原从Al-H解吸，但是所述影响是时间依赖性的，并且当悬液与疫苗在临接种前混合时，该影响下降。
实施例（IV）：实施例47均匀悬液的药代动力学和药效学参数
本研究中，研究实施例47均匀悬液与Alum/3MenB的药代动力学（PK）和药效学（PD）参数，并且发现与实施例47作为DMSO/盐中非均匀悬液制备相似（图3A，3B和4）。确定了均匀悬液中所配制实施例47的可检测整体水平稍微增加（图3A）。PK研究显示DMSO（非均匀）和均匀悬液中的实施例47局部接触，但是系统性接触低。均匀悬液在局部肌肉接触中降低可变性且在局部引流淋巴结中提高接触（图3B和3C）。
图4显示实施例47与Alum/3MenB的非均匀/DMSO悬液和均匀悬液的药效学对比。实施例47的非均匀/DMSO悬液和均匀悬液细胞因子释放概况相似。与佐剂R848诱导的细胞因子释放相比，接触均匀悬液或DMSO配制的实施例47后细胞因子释放最小。
实施例（V）：体内MENB模型中实施例47均匀悬液功效
1.实施例47均匀悬液增加对脑膜炎奈瑟球菌的免疫反应
本研究中，使用MenB小鼠模型评价实施例47的体内功效，以每只小鼠2-100μg的剂量范围递送均匀悬液。所述评价用三个MenB多肽（“5CVMB”）完成，所述多肽吸附到Al-H（“明矾/3MenB”）或与MF59（“MF59/3MenB”）一起递送。用血清杀菌抗体(SBA)试验检测MenB抗原的体内免疫原性效力。图5A显示对NZ98株血清的杀菌效价，所述血清得自5CVMB与下述联合接种后：(a)只有Al-H，(b)Al-H+2μg实施例47，(c)Al-H+10μg实施例47，(c)Al-H+25μg实施例47，(d)Al-H+100μg实施例47或(e)Al-H和MenB外膜囊泡。图5B显示对NZ98株血清的杀菌效价，所述血清得自5CVMB与下述联合接种后：(a)只有MF59，(b)MF59+2μg实施例47，(c)MF59+10μg实施例47，(c)MF59+25μg实施例47，(d)MF59+100μg实施例47或(e)MF59和25μgCpG1826。
明矾/3MenB制剂（图5A）以75%体积制备，并且实施例47均匀悬液（4mg/mL）在接种前2小时分别以0、2、10、25和100μg剂量加入。CD1小鼠用包括10μgMenB抗原和10μg特定实施例47均匀悬液剂量的100μL免疫体积（每条腿50μL）在第0天和14天肌肉内免疫接种。小鼠在第28天进行眼眶后取血，并且用阿拉马蓝（Alamar blue）实验检测SBA效价。明矾/3MenB/OMV用作基准。
制备MF59/3MenB制剂（图5B）是通过将MenB抗原（5CVMB）（每个100μg/mL）和MF59加入实施例47均匀悬浮物（4mg/mL），浓度分别为0、20、100、250和1,000μg/mL。CD1小鼠用包括10μgMenB抗原和10μg特定实施例47均匀悬液剂量的100uL免疫体积（每条腿50μL）在第0天和14天进行肌肉内免疫。小鼠在第28天进行眼眶后取血，并且用阿拉马蓝实验检测SBA效价。MF59/3MenB+25μg CpG1826用作基准。
如图5A所示，明矾/3MenB加10μg、25μg和100μg实施例47均匀悬液产生的效价相对于只用明矾/3MenB观察到的SBA效价明显提高，并且SBA效价与使用明矾/3MenB/OMV所得SBA效价相当或更好。MF59/3MenB制剂得到相似结果。
2.相较单独Al-H，实施例47的均匀悬液提高菌株覆盖率
血清的菌株覆盖率在用5CVMB和下述物质联合肌肉内免疫小鼠后获得：(a)单独Al-H，(b)Al-H+100μg实施例47(DMSO)，(c)Al-H+25μg实施例47均匀悬液，(c)Al-H+100μg实施例47均匀悬液和(d)Al-H和MenB外膜囊泡，和评价5CVMB与(e)Al-H和MenB外膜囊泡联合腹膜内免疫小鼠。明矾/3MenB/OMV用作基准。功效读数表示为MenB小鼠模型中达到SBA实验确定杀死阈值的%菌株。
表4显示这些研究中使用的16个不同脑膜炎奈瑟球菌株。选择所述16菌株表示(1)对仅一个5CVMB抗原组分的特异性靶向，和(2)用明矾/3MenB的SBA效价历来较低或为负。>1084的SBA效价用作截止值以指示对特定菌株的覆盖率。
表4：
  cpx   ST   ET   年   分型   741   961
  NZ98/254   41/44   42   lin3   1998   NZ   B：4：P1.4   1.10/++   -
  H44/76   32   32   ET5   1976   N   B：15：P17，16   1.1/+++   -
  M01-240185   11   11   ET37   2001   UK   B：2a：P1.5，10   1.9/+++   -
  M2937   35   新   其他   1996   USA   B：4，7：P1.23，14   1.7/+++   -
  2996   8   540   A4   1975   UK   B：2b:P1.5，2   2.1/+   +
  961-5945   8   153   A4   1996   AUS   B：2b：P1.21，16   2.1/++   +
  B3937   18   新   其他   1995   D   B：22：P1.18   2.2/+++   +
  M2552   4   103   其他   1996   USA   B：NT：NT   2.10/+   -
  M4407   41/44   新   lin.3   1996   USA   B：NT：P1.15   2.4/++   -
  M0579   41/44   43   lin.3   1993   USA   B：NT：P1.5，2   2.5/+   -
  M986   11   11   ET37   1963   USA   B：2a：P1.5，2   2.7/-   +
  5/99   8   1349   A4   1999   N   B：2b：P1.5，2   2.8/+   +
  M4458   22   新   其他   1998   USA   B：NT：P1.3   210/+   +
  NGP165   11   11   ET37   1974   N   B：NT：P1.2   3.2/+++   +
  M01-0240364   11   11   ET37   2001   UK   B：2a：P1.5，2   3.4/+   +
  M3369   -   1576   其他   1997   USA   B：10：P1.19，15   3.4/++   -
在第1天和14天免疫方案后接种CD1小鼠。每一次接种，0.1ml剂量的各制剂通过肌肉内途径递送0.05ml到两腿中的每一条腿。小鼠在28天取血，并且用SBA实验分析血清。包括另外一个对照组，由在第1天和14天通过腹膜内途径递送0.2ml明矾/3MenB和OMV组成。进行有相当免疫方案的两个研究（“MenB研究1”和“MenB研究2”），所述研究都给出可比较的数据。
表5显示两个单独研究中对菌株NZ98/254的SBA效价。
表5：
Figure BDA00002004804902101
如图6所示，实施例47均匀悬液配制的明矾/3MenB（肌肉内，i.m.）能覆盖所述实验中使用的75%菌株，而单独明矾/3MenB只能覆盖19%。当Al-H配制和i.m.运输时，明矾/3MenB/OMV能覆盖约~50%菌株，并且经腹膜内（i.p.）途径递送时，覆盖80%株。剂量依赖性效果不明显。因此，相较单独明矾/3MenB，明矾/3MenB与25μg和100μg实施例47均匀悬液改善菌株覆盖率。
图7A-7C显示体内MenB小鼠模型的IgG1/IgG2a比率。总IgG效价用ELISA计算。图7A显示GNA2132-GNA1030的IgG1，IgG2a，IgG2b和IgG3效价。图7B显示GNA2091-GNA1870的IgG1，IgG2a，IgG2b和IgG3效价。图7C显示NadA的IgG1，IgG2a，IgG2b和IgG3效价。表6概括显示实施例47均匀悬液加入到明矾/3MenB时诱导IgG2a能力的ELISA实验结果。当用明矾/3MenB配制时（数量越低，实施例47悬液诱导的IgG2a倍数增加更大），实施例47增强IgG2a同种型转换（IgG1/IgG2a比率下降）。IgG2a视作所需引发Th1反应的替代物。
表6：
Figure BDA00002004804902112
本实施例显示实施例47均匀悬液能明显增加对明矾/3MenB的免疫反应，SBA效价相当于或优于采用10μg/剂量、25μg/剂量或100μg/剂量实施例47悬液的明矾/3MenB/OMV。另外，实施例47悬液能增加免疫反应宽度，如对多种脑膜炎奈瑟球菌株的保护宽度增加所示。
当非均匀实施例47悬液（DMSO中制备）与基于铝的疫苗和基于MF59的疫苗联用时，相比于同一剂量均匀悬液的效果，非均匀悬液明显造成更低的SBA剂量。在使用MenB小鼠模型的一组研究中，添加10μg/剂量的非均匀实施例47悬液后的SBA效价与单独MF59/3MenB相当（图8）。另一组研究中，非均匀实施例47悬液仅显示边缘佐剂效果。因此，本发明所述均匀悬液不仅降低重复动物之间的高变异程度和增加免疫后分子对免疫细胞的生物可用性，而且在更低剂量（如10μg/剂量或更小）提供免疫刺激效果。
实施例（VI）：体内RSV模型的实施例47均匀悬液功效
本实施例中，用RSV模型评价以均匀悬液递送的实施例47的体内效果。
A.研究1
一个研究中，RSV F-亚基抗原以10mM组氨酸缓冲液中的50μg/mL或10μg/mL靶浓度吸附到Al-H上。这些明矾制剂以75%体积制备以加入多种佐剂。在免疫前2小时，将25和100μg剂量的实施例47均匀悬液（4mg/mL），25μg剂量的R848(1mg/mL)和25μg剂量的CpG1826(10mg/mL)加入明矾制剂或F-亚基蛋白。Balb/c小鼠在第0天和14天用100μL免疫体积（每腿50μL）进行肌肉内免疫。小鼠在第28天进行眼眶后取血。ELISA效价用吸附到底物上的F-亚基蛋白的血清系列稀释检测。用多种血清稀释孵育时，基于噬斑数目下降检测对RSV病毒的中和效价。本研究中FIRSV，R848和CpG用作基准。
如图9A所示，实施例47均匀悬液增加所有样品的总抗体效价，和当F-抗原吸附到Al-H时增加中和效价。图9A显示总抗F抗体（ELISA-κ）和中和抗体（PRNT60）效价。就25μg剂量实施例47观察到最好中和效价。另外，加入实施例47均匀悬液也增加IgG2a与单独或用Al-H配制的RSV F抗原的同种型转换。
B.研究2
另一个研究得到相似结果。如图9B所示，实施例47悬液增加所有样品的总抗体效价，和当F-抗原吸附到Al-H时增加中和效价。另外，加入实施例47悬液也增加IgG2a与单独或用Al-H配制的RSV F抗原的同种型转换。
实施例（VII）：MENB制剂的菌株覆盖率研究
用MenB模型评价实施例47的体内效果，以每只小鼠25μg的剂量递送均匀悬液。所述研究在两个小鼠品系中完成，一个研究用CD1小鼠且另一研究用C57/BL6小鼠。评价用改性的5CVMB完成，其中GNA2091-GNA1870融合蛋白用“936-10A-10A”蛋白替代，其公开于国际专利申请号PCT/IB2010/002260（2010年8月27日提交，要求USSN 61/237,576的优先权）（其中的SEQ ID NO:126；本文的SEQ ID NO:4）。改性的5CVMB用Al-H递送。用SBA试验检测MenB抗原的体内免疫原性效力。CD1小鼠(实验I)或CD57/BL6小鼠(实验II)在第0天和14天用100μL免疫体积（每腿50μL）肌肉内免疫，所述免疫体积包括10μg的三种MenB多肽和25.0μg实施例47的均匀悬液，。小鼠在第28天进行眼眶后取血，并且检测SBA效价。明矾/3MenB*与25%标准临床OMV剂量用作基准。本实施例中，3MenB*指从下述三个单独多肽制备的MenB疫苗：GNA2132-GNA1030、936-10C-10C和NadA。
表7概括CD1小鼠的免疫（实验I）
表7
Figure BDA00002004804902131
Figure BDA00002004804902141
表8概括C57/BL6小鼠的免疫（实验II）
表8
Figure BDA00002004804902142
免疫前2小时内，明矾/3MenB*制剂（表9中的组G2，G3，G5）以75%体积制备，并且加入实施例47均匀悬液以达到20μg剂量。加入实施例47均匀悬液到明矾/3MenB*不改变制剂pH和渗透压方面的质量，因为值始终在临床前和临床评价的可接受范围内。实施例47均匀悬液与所用抗原相容，并且内毒素含量小于每剂量5EU。表9显示单独和与OMV配制的MenB标准制剂在明矾上吸附良好。实施例47的制剂显示加入实施例47均匀悬液后抗原的解吸，但是吸附保持>90%。
表9：制剂特性概述
Figure BDA00002004804902151
表10-13显示包括三个多肽的制剂和下述物质联合免疫后，对五个不同脑膜炎奈瑟球菌株的杀菌效价，(2)单独Al-H，(3)Al-H+250mcg/ml实施例47或(5)Al-H和MenB外膜囊泡。
表10：实验I（CD1小鼠）血清细菌抗体（SBA）分析
表11：实验II（C57/BL6小鼠）血清细菌抗体（SBA）分析
Figure BDA00002004804902162
表12：实验I（CD1小鼠）血清细菌抗体（SBA）分析
Figure BDA00002004804902163
Figure BDA00002004804902171
表13：实验II（C57/BL6小鼠）血清细菌抗体（SBA）分析
Figure BDA00002004804902172
实施例47制剂的SBA效价高于明矾/3MenB基线，并且可与Alum/3MenB+D-OMV相比。如表10-13所示，加入实施例47均匀悬液（组3）与明矾/3MenB（组2）相比产生更优疫苗覆盖率宽度，并且好于OMV配制组（组5）或与之相当。
NadA、GNA2132-GNA1030、GNA2091-GNA1870和936-10A-10A的氨基酸序列如下所示。
SEQ ID NO：1（NadA氨基酸序列）
ATNDDDVKKAATVAIAAAYNNGQEINGFKAGETIYDIDEDGTITKKDATAA
DVEADDFKGLGLKKVVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADT
DAALADTDAALDATTNALNKLGENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVD
KHAEAFNDIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETA
AGKAEAAAGTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKDNIAKKANSADVYTR
EESDSKFVRIDGLNATTEKLDTRLASAEKSIADHDTRLNGLDKTVSDLRKE
TRQGLAEQAALSGLFQPYNVG
SEQ ID NO：2（GNA2132-GNA1030氨基酸序列）
MASPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQGGQDMA
AVSEENTGNGGAAATDKPKNEDEGAQNDMPQNAADTDSLTPNHTPASNMPA
GNMENQAPDAGESEQPANQPDMANTADGMQGDDPSAGGENAGNTAAQGTNQ
AENNQTAGSQNPASSTNPSATNSGGDFGRTNVGNSVVIDGPSQNITLTHCK
GDSCSGNNFLDEEVQLKSEFEKLSDADKISNYKKDGKNDGKNDKFVGLVAD
SVQMKGINQYIIFYKPKPTSFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIV
DGEAVSLTGHSGNIFAPEGNYRYLTYGAEKLPGGSYALRVQGEPSKGEMLA
GTAVYNGEVLHFHTENGRPSPSRGRFAAKVDFGSKSVDGIIDSGDGLHMGT
QKFKAAIDGNGFKGTWTENGGGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPTDAEKGG
FGVFAGKKEQDGSGGGGATYKVDEYHANARFAIDHFNTSTNVGGFYGLTGS
VEFDQAKRDGKIDITIPVANLQSGSQHFTDHLKSADIFDAAQYPDIRFVST
KFNFNGKKLVSVDGNLTMHGKTAPVKLKAEKFNCYQSPMAKTEVCGGDFST
TIDRTKWGVDYLVNVGMTKSVRIDIQIEAAKQ
SEQ ID NO：3（GNA2091-GNA1870氨基酸序列）
MVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKG
YTPQISVVGYDRHLLLLGQVATEGEKQFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASL
PRTAGDIAGDTWNTSKVRATLLGISPATRARVKIVTYGNVTYVMGILTPEE
QAQITQKVSTTVGVQKVITLYQNYVQRGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLD
HKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRF
DFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKR
QFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGN
GKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGG
KAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO：4（936-10A-10A氨基酸序列）
MVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKG
YTPQISVVGYDRHLLLLGQVATEGEKQFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASL
PRTAGDIAGDTWNTSKVRATLLGISPATRARVKIVTYGNVTYVMGILTPEE
QAQITQKVSTTVGVQKVITLYQNYVQRGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLD
HKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRF
DFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKR
QFRIGDLGGEHTAFNQLPDGKAEYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFTKKQGNG
KIEHLKSPELNVELASAEIKADGKSHAVILGDVRYGSEEKGSYSLGIFGGR
AQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHK
DKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDF
IRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQF
RIGDLGGEHTAFNQLPDGKAEYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFTKKQGNGKI
EHLKSPELNVELASAEIKADGKSHAVILGDVRYGSEEKGSYSLGIFGGRAQ
EVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
本领域技术人员应了解或能够确定仅采用常规实验即可获得本文所述的本发明具体实施方式的许多等同形式。这类等同形式应包含在所附实施方式的范围内。
可根据说明书内所引用参考文献的讲述最充分理解本说明书。说明书内的实施方式提供本发明实施方式的说明，并且不会对本发明范围构成限制技术人员容易认识到本发明也包括许多其他实施方式。本公开引用的所有发表物和专利通过引用全文纳入本文。通过引用纳入的材料与本说明书冲突或不一致时，本说明书取代任何此类材料。本文引用任何参考文献并不视作承认这些文献优先于本发明。

Claims (55)

1.一种均匀悬液，所述悬液包括：（a）式I或式II的苯并萘啶化合物，其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护的衍生物，单独异构体或异构体混合物；（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C至少稳定约四周。
2.如权利要求1所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0.1%-约10%表面活性剂。
3.如权利要求1或2所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0.1%-约10%悬浮剂。
4.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0.5mg/mL-约50mg/mL苯并萘啶化合物。
5.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬浮物，其特征在于，所述表面活性剂是吐温80（聚山梨酯80）。
6.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述悬浮剂是黏性增强悬浮剂。
7.如权利要求6所述的均匀悬液，其特征在于，所述黏性增强剂是羧甲基纤维素钠。
8.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述至少约50%的悬浮颗粒的直径是约10μm或更小。
9.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述至少约50%的悬浮颗粒的直径是约2μm或更小。
10.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述苯并萘啶化合物是：2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇;2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯;2-(4-(二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺;或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。
11.一种免疫原性组合物，所述组合物包括抗原和权利要求1-10中任一项所述的均匀悬液。
12.如权利要求11所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述组合物还包含佐剂。
13.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是含铝佐剂。
14.如权利要求13所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述含铝佐剂是氢氧化铝，羟基氧化铝或羟基磷酸铝。
15.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是水包油乳液。
16.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是MF59。
17.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是脂质体。
18.如权利要求17所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述脂质体是外膜囊泡。
19.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是寡核苷酸。
20.如权利要求19所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述寡核苷酸包括未甲基化的CpG基序。
21.如权利要求11-21中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是细菌抗原。
22.如权利要求21所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述细菌抗原是来自脑膜炎奈瑟球菌的抗原。
23.如权利要求11-21中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是病毒抗原。
24.如权利要求23所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒抗原是来自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原。
25.如权利要求23所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒抗原是来自埃博拉病毒的抗原。
26.一种在对象中引起免疫应答的方法，所述方法包括将权利要求11-25中任一项所述的免疫原性组合物给予所述对象。
27.一种产生权利要求1所述均匀悬液的方法，所述方法包括：
（a）将式（I）或式（II）的苯并萘啶化合物、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物、N氧化物衍生物、受保护衍生物、个体异构体或其异构体混合物，与表面活性剂和悬浮剂混合。
（b）在压力下匀质化步骤(a)的混合物，其中，压力为约15,000psi-约20,000psi。
28.一种均匀悬液，所述均匀悬液包含：
（a）2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护衍生物，单独异构体或其异构体混合物，（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C稳定至少约四周。
29.如权利要求28所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0.1%-约10%表面活性剂。
30.如权利要求28或29所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0.1%-约10%悬浮剂。
31.如权利要求28-30中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0.5mg/mL-约10mg/mL 2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。
32.如权利要求28-31中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述表面活性剂是吐温80。
33.如前述权利要求28-32中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述悬浮剂是黏性增强悬浮剂。
34.如权利要求33所述的均匀悬浮物，其特征在于，所述黏性增强试剂是羧甲基纤维素钠。
35.如权利要求28-34中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述至少约50%悬浮颗粒的直径是约10μm或更小。
36.如权利要求28-35中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述至少约50%悬浮颗粒的直径是约2μm或更小。
37.一种免疫原性组合物，所述组合物包括抗原和权利要求28-36中任一项所述的均匀悬液。
38.如权利要求37所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述组合物还包含佐剂。
39.如权利要求38所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是含铝佐剂。
40.如权利要求39所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述含铝佐剂是氢氧化铝，羟基氧化铝或羟基磷酸铝。
41.如权利要求38所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是水包油乳液。
42.如权利要求41所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是MF59。
43.如权利要求38所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是脂质体。
44.如权利要求43所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述脂质体是外膜囊泡。
45.如权利要求38所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是寡核苷酸。
46.如权利要求45所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述寡核苷酸包括未甲基化的CpG基序。
47.如权利要求37-46中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是细菌抗原。
48.如权利要求47所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述细菌抗原是来自脑膜炎奈瑟球菌的抗原。
49.如权利要求37-46中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是病毒抗原。
50.如权利要求49所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒抗原是来自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原。
51.如权利要求49所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒抗原是来自埃博拉病毒的抗原。
52.一种在对象中产生免疫应答的方法，所述方法包括将权利要求37-51中任一项所述的免疫原性组合物给予所述对象。
53.一种产生权利要求28所述均匀悬液的方法，所述方法包括：
（a）混合2-(2,4-二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺与表面活性剂和悬浮剂。
（b）在约15,000psi-约20,000psi的高压下匀质化步骤（a）的混合物。
54.一种均匀悬液，所述均匀悬液包含：
（a）2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护衍生物，单独异构体或异构体混合物，（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C稳定至少约四周。
55.一种均匀悬液，所述均匀悬液包含：
（a）2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇，其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护衍生物，单独异构体或异构体混合物，（b）表面活性剂，和（c）悬浮剂，其中悬液在4°C稳定至少约四周。
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