CN103784966B - 羧甲基纤维素钠在鸡球虫活卵囊疫苗中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了羧甲基纤维素钠在鸡球虫活卵囊疫苗中的应用，包括将羧甲基纤维素钠溶液与鸡球虫活卵囊疫苗混合均匀的步骤。通过在传统的鸡球虫活卵囊疫苗中加入羧甲基纤维素钠溶液可以维持鸡球虫卵囊在水溶液中长时间不沉降，减少疫苗免疫副反应，明显提高鸡球虫疫苗的免疫效果。
Description
技术领域
本发明涉及羧甲基纤维素钠在鸡球虫活卵囊疫苗中的应用以及基于此应用的鸡球虫活卵囊疫苗溶液，属于免疫生物学领域。
背景技术
鸡球虫病是一种严重危害集约化养鸡业、世界性流行的寄生虫病，在无预防措施或预防失败(如因抗药性问题导致药物无效)的情况下，鸡的发病率可达30％-100％，致死率可高达80％，给养鸡业带来巨大的经济损失。
针对此一疾病，长期以来本领域主要是通过在饲料中添加抗球虫药物进行预防。随着抗球虫药物的长期使用，鸡球虫产生了广泛的抗药性使得其预防效果越来越差，同时药物在鸡体内的残留也成为影响人类健康的重大问题。
针对上述缺陷，近年来研发人员开始广泛尝试采用免疫接种鸡球虫活卵囊疫苗的免疫控制技术作为一种“新型的可持续的”球虫病控制方法。但是这种方法尚存在诸多缺陷。
已有的鸡球虫活卵囊疫苗属于感染性免疫，不能采用注射的免疫途径，必须经口服摄入，常见的免疫方法有：饮水免疫法、拌料免疫法、喷雾免疫法和凝胶免疫法等。临床上使用最广泛的是饮水免疫法，但鸡球虫卵囊的比重大于水，用水将疫苗卵囊重悬后很快沉淀于水底，在免疫过程中非常容易造成免疫不均匀而导致免疫失败。
发明内容
针对现有疫苗防疫技术的缺陷，本发明申请人通过大量实验和创造性研究发现羧甲基纤维素钠水溶液可以维持鸡球虫卵囊在水溶液中较长时间不发生沉降，保持在水中呈均匀分布，减少疫苗免疫副反应，明显提高鸡球虫疫苗的免疫效果。
基于上述发现，申请人完成了本发明的技术方案。
首先，本发明公开了羧甲基纤维素钠在鸡球虫活卵囊疫苗中的应用，包括将羧甲基纤维素钠溶液与鸡球虫活卵囊疫苗混合均匀的步骤。
其中，所用的羧甲基纤维素钠溶液浓度可以根据具体的疫苗种类进行调整，一般而言，浓度(质量体积浓度)为0.5-10％。
优选的，所述羧甲基纤维素钠溶液浓度(g／m1)为2-5％，在此浓度下羧甲基纤维素钠水溶液可以维持鸡球虫卵囊在水溶液中6小时不发生沉降，且对鸡球虫卵囊的活力无任何影响，减少球虫疫苗的副作用。
进一步的，为了便于实际应用，本发明所公开的应用还包括将羧甲基纤维素钠溶液与鸡球虫活卵囊疫苗混合均匀后用水稀释成球虫疫苗悬浮溶液的步骤。
在本发明中，羧甲基纤维素钠溶液、鸡球虫活卵囊疫苗、水的用量并未给出特别限定，主要是针对具体应用需要可以进行调整，通常当采用已有的球虫疫苗(1000羽／瓶)时，每瓶疫苗对应的羧甲基纤维素钠溶液用量为50-150ml，最终稀释时水的用量为2-5L。
基于上述发明，本发明还公开了一种鸡球虫活卵囊疫苗溶液，是一种悬浮溶液，在悬浮溶液中包含羧甲基纤维素钠。
其中，羧甲基纤维素钠的浓度如上所述，折合最终的悬浮溶液中浓度为0.4g-2.5g／L。
进一步的，本发明还公开了鸡球虫活卵囊疫苗溶液的制备方法，包括将羧甲基纤维素钠溶液与鸡球虫活卵囊疫苗混合均匀后用水稀释成球虫疫苗悬浮溶液的步骤。
具体实施方式
在下述实施例中，申请人提供了所用各种原料的来源，仅为示意性。
1.试验动物：岭南黄雏鸡，由广东省农业科学院动物科学研究所提供，饲养于已消毒的专用动物房内；鸡笼和所用器皿均严格消毒，自由采食和饮用纯净水；实验前观察雏鸡有无临床症状及连续2d检查粪便有无球虫卵囊，备用。
2.饲养用102型肉鸡料由广东省新南都饲料有限公司定制育雏料，不含任何抗球虫药物。
3.鸡柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球虫四联五价活疫苗，是广东省农业科学院动物卫生研究所销售的标准产品，商品名称为鸡柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球虫四联五价活疫苗，型号为FIVECOX，均可从该所购买。
4.疫苗检验用虫株柔嫩艾美耳球虫HZ株、堆型艾美耳球虫HZ株、巨型艾美耳球虫HZ株、巨型艾美耳球虫SG株、毒害艾美耳球虫HZ株，广东省农业科学院动物卫生研究所寄生生物研究室提供。
5.羧甲基纤维素钠购自广东省医药总公司。
实施例1：鸡球虫活卵囊疫苗悬浮溶液的制备
配制0、1％，2％，3％，4％，5％的羧甲基纤维素钠溶液各100mL，分别与1瓶鸡柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球虫四联五价活疫苗(1000羽／瓶)充分混匀，然后分别加入4L蒸馏水，配制成球虫疫苗悬浮溶液，再平均分成3组，分别置于2L烧杯中，静置。静置后0至8小时每隔两小时用移液管在烧杯400mL、800mL及1.2L刻度处分别吸取50μL疫苗悬浮溶液，以血细胞计数板在显微镜下进行计数，求三组相同时间三个刻度卵囊溶液的总卵囊数平均值，以0h为基数，计算其他各个时间段的相对卵囊比值(不同静置时间的平均总卵囊数／基数)。
结果显示在6小时内，鸡球虫卵囊在2％-5％的羧甲基纤维素钠悬浮溶液上中下三个刻度卵囊溶液的总卵囊数平均值相差小于10％，且羧甲基纤维素钠在水中的溶解速度与浓度成反比，结果如表1。
表1羧甲基纤维素钠溶液对鸡球虫活卵囊疫苗的助悬效果
实施例2：羧甲基纤维素钠溶液对鸡球虫活卵囊疫苗的免疫效果
下面以2％羧甲基纤维素钠为例说明其对免疫效果的影响。本领域技术人员可以理解，采用其它浓度也是可行的。
将50只1日龄雏鸡饲养于无球虫环境中，3日龄如表2分成5组，每组10只鸡。1至3组按照表1设计免疫分别经口接种疫苗1羽份鸡柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球虫四联活卵囊疫苗，第4、5组不接种分别作为空白和对照组，分别于平地进行饲养(地表添加垫料)。
接种后21日进行攻虫试验，除空白组外所有试验鸡分别口服柔嫩艾美耳球虫HZ株、毒害艾美耳球虫HZ株、巨型艾美耳球虫HZ株、巨型艾美耳球虫SG株、堆型艾美耳球虫HZ株强毒孢子化混合卵囊(含堆型艾美耳球虫HZ株10万个，其他4种球虫各5万个)，观察5～7日，记录血便记分，剖检所有试验用鸡，检查肠道部位(柔嫩艾美耳球虫检查盲肠；巨型及毒害艾美耳球虫检查小肠中段；堆型艾美耳球虫检查十二指肠)的病变并记分。
表2羧甲基纤维素钠溶液对鸡球虫活卵囊疫苗的免疫效果试验设计
参考表3的实验结果，对照试验鸡有20％的死亡率，肠道病变记分大于3，空白组所有鸡肠道的相应部位均应无任何病变；第1、2组的试验鸡血便记分及肠道病变记分均小于1，呈现100％的保护率，而第3组有30％的试验鸡肠道病变记分大于1。
表3羧甲基纤维素钠溶液对鸡球虫活卵囊疫苗的免疫效果
综合上述试验结果可以看到，鸡球虫活卵囊疫苗在免疫过程中，如果直接采用饮水免疫，部分鸡只会出现免疫失败。通过采用羧甲基纤维素钠的水溶液可以维持鸡球虫卵囊在水溶液中6小时不发生沉降，且对鸡球虫卵囊的活力无任何影响，可以减少球虫疫苗的副作用，适合用作鸡球虫活卵囊疫苗的助悬液。
Claims (5)
1.羧甲基纤维素钠在鸡球虫活卵囊疫苗中的应用，包括将羧甲基纤维素钠溶液与鸡球虫活卵囊疫苗混合均匀的步骤，其中所述羧甲基纤维素钠溶液浓度为0.5-10%。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述羧甲基纤维素钠溶液浓度为2-5%。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于还包括将羧甲基纤维素钠溶液与鸡球虫活卵囊疫苗混合均匀后用水稀释成球虫疫苗悬浮溶液的步骤。
4.一种鸡球虫活卵囊疫苗溶液，其特征在于采用羧甲基纤维素钠溶液作为疫苗的助悬液。
5.权利要求4所述鸡球虫活卵囊疫苗溶液的制备方法，其特征在于包括将羧甲基纤维素钠溶液与鸡球虫活卵囊疫苗混合均匀后用水稀释成球虫疫苗悬浮溶液的步骤。
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