MX2008008453A

MX2008008453A - Adenovirus adipogenicos como biomarcadores para enfermedades.

Info

Publication number: MX2008008453A
Application number: MX2008008453A
Authority: MX
Inventors: Richard L Atkinson
Original assignee: Obetech Llc
Priority date: 2005-12-27
Filing date: 2006-12-27
Publication date: 2008-11-28
Also published as: US7745110B2; CN101389768A; EP2390372A1; RU2008130893A; EP1977009A2; WO2007120362A3; BRPI0620755A2; KR20080114683A; US20110189235A1; CA2635269A1; CN101389768B; WO2007120362A2; US7910310B2; JP2009521707A; EP1977009B1; EP1977009A4; AU2006342053A1; US20090087833A1; US20070218081A1; US20090087455A1

Abstract

Esta invención se refiere a la relación entre infección con adenovirus adipogénico, tal como adenovirus-36 (Ad-36) y las etiologías de obesidad y cánceres relacionados con obesidad y otras enfermedades. Adicionalmente, la invención se refiere a ensayar a un sujeto por el estado de Ad-36 y utilizar el estado Ad-36 como un marcador por la presencia de cáncer, para pronosticar el riesgo futuro de desarrollar cánceres tales como cáncer de mama y próstata y/o para pronosticar la agresividad y pronóstico de estos cánceres.

Description

ADENOVIRUS ADIPOGÉNICOS COMO BIOMARCADORES PARA ENFERMEDADES REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud se relaciona con y reclama el beneficio bajo 35 C. § 119(e) de la solicitud Provisional de patente de los E.U.A. Número de Serie 60/753,402, presentada en diciembre 27, 2005, la descripción de la cual se incorpora aquí en su totalidad. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la Invención Esta invención se refiere a la relación entre infección con adenovirus adipogénico, tales como, por ejemplo, adenovirus-36 (Ad-36) , y las etiologías de obesidad y cánceres?? relacionados a obesidad y otras enfermedades. Más específicamente, la invención se refiere a la metodología para pronosticar si un sujeto esta predispuesto a desarrollar cáncer de mama o cáncer de próstata. Adicionalmente , la invención se refiera a ensayar a un sujeto para el estado de Ad-36 y utilizar el estado de Ad-36 como un marcador para la presencia de cáncer, para pronosticar el riesgo futuro en desarrollar dicho cáncer, y/o para pronosticar la agresividad y pronostico del cáncer. Técnica Relacionada Ha habido un aumento simultáneo dramático en la preponderancia de obesidad y ciertos tipos de cáncer. Una epidemia mundial de obesidad se aceleró dramáticamente aproximadamente en 1980. En los E.U.A. la prevalencia de la obesidad en adultos más que se duplico en los 20 años de 1980 a 2000 (de 15% a 31%) , mientras que la prevalencia aumento solo ligeramente en los 20 años previos de 1960 a 1980 (de 13.5% a 15%). La prevalencia de la obesidad en niños se triplico de aproximadamente de 1970 a 2000. Igualmente, los cánceres de mama, próstata, colon e hígado también han aumentado rápidamente en prevalencia en recientes años. Cambios en hormonas reproductivas en obesidad han sugerido que juegan un papel en la asociación cáncer de pecho y próstata (entre otros) y en la agresividad de estos cánceres. Sin embargo, cambios en las hormonas reproductivas no pueden explicar cánceres tales como colon, renal, o pancreático que no están bajo control hormonal. Otra posibilidad para el vínculo entre obesidad y el cáncer es la función inmune disminuida que se ve en individuos obesos. Las personas obesas tienen una menor respuesta de anticuerpos a vacunación con hepatitis B que el vacunar a personas que no son obesas. El sistema inmune es critico para inhibir el crecimiento de neoplasmas, de manera tal que no seria sorprendente si este fuera el mecanismo para incrementar cánceres de muchos tipos en la obesidad. Sin embargo, adenovirus son bien conocidos que disminuyen la función inmune como una forma de mejorar su replicacion en el huésped, incluyendo anfitriones humanos. En forma más relevante, el adenovirus aviar SMAM-I, se ha reportado que provoca obesidad, tiene un impacto mayor a disminuir la función inmune de pollos. De esta manera, hay un vinculo directo entre un adenovirus que provoca obesidad y que también deteriora la función inmune. El inventor ha reportado que SMAM-I se asocia con obesidad en humanos, agregando un vínculo de adenovirus con obesidad humana. Algunos serotipos de adenovirus humanos se conocen que son oncogénicos, e inducen tumores en ratas o hámsteres. Los serotipos de adenovirus se dividen por grupos. Adenovirus de grupo A (por ejemplo, Ad-12, Ad-18) son altamente oncogénicos, produciendo tumores en la mayoría de los animales dentro de 4 meses; los adenovirus del grupo B (por ejemplo, Ad-3, Ad-7) son débilmente oncogénicos, induciendo tumores en la mayoría de los animales dentro 4 a 18 meses; los virus de grupo D se consideran menos oncogénicos, pero serotipo-9 eficientemente induce tumores mamarios dentro de 3 a 5 meses. Ha habido extenso trabajo en cáncer inducido por adenovirus, pero a la fecha, no hay evidencia de que los adenovirus provocan cáncer humano. Si los adenovirus provocan cánceres en humanos, es probable que lo hagan alterando la expresión de genes en el anfitrión que permite que ocurra crecimiento celular no regulado. Muchos de estos marcadores de tumor se han identificado. Algunos se deben a variantes genéticas.

Cáncer de mama hereditario se ha vinculado con mutaciones de línea germinal en un alelo de genes de alta susceptibilidad a penetración tales como BRCAl, BRCA2 , CHEK 2, TP53 o PTEN. Es posible que infecciones de adenovirus faciliten el cáncer en estos individuos genéticamente susceptibles. Sin embargo, los adenovirus pueden contribuir a ontogénesis espontánea al inducir expresión de diversos oncogenes o suprimir expresión de genes supresores de tumor del anfitrión. Entre las alteraciones debidas a adenovirus que se considera contribuyen a cáncer están cambios en la proteína cinasa dependiente de ADN, proteína de enlace de ácido graso, mTOR, pl6, p53, proteína PDZ, fosfatidilinositol 3-cinasa, PML, timidina cinasa, y Zip cinasa. De interés particular son aquellos factores relacionados a tumores que se alteran por la región E4 de adenovirus, y específicamente el gen E4orfl. Los oncogenes E4 incluyen la proteína cinasa dependiente de ADN, p53, proteína PDZ, fosfatidilinositol 3-cinasa, PML, timidina cinasa, y Zip cinasa. Como se describió a continuación, el gen Ad-36 E4orfl se ha mostrado que esta involucrado en producir obesidad por un efecto directo en metabolismo de adipocitos. La región E4orfl de adenovirus-5 humano se ha mostrado que es un oncogen, y un documento reciente reportó que Ad-5 produce obesidad en ratones. Estos hallazgos muestran un enlace directo entre la obesidad y el cáncer, con ambos debidos a un adenovirus humano, y proporcionan el mecanismo probable por un gen viral . El consenso general de muchos investigadores en el campo de investigación de cáncer ha sido que los adenovirus no contribuyen la etiología de cáncer humano. Por lo tanto, sería un avance tecnológico mayor el demostrar que los adenovirus adipogénicos, tales como as Ad-36, están asociados con cánceres relacionados a la obesidad, tales como cánceres de mama y próstata. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Un aspecto de la invención se refiere a un método para pronosticar si un sujeto esta predispuesto a desarrollar una enfermedad relacionada con adenovirus adipogénico. La metodología incluye obtener una muestra del sujeto y determinar si el sujeto esta infectado con el adenovirus adipogénico al cribar la presencia de anticuerpos específicos al adenovirus adipogénico en la muestra y determinar la presencia de anticuerpos específicos al adenovirus adipogénico en la muestra. Los anticuerpos pueden ser específicos a uno o más péptido codificados por la secuencia de ácidos nucleicos SEQ ID NO.: 5, SEQ ID NO.: 6, y SEQ ID N0.:7. Además, la etapa de tamizado puede realizarse utilizando un método seleccionado del grupo que consiste de ensayo de neutralización de suero y ELISA. En una aspecto adicional, el adenovirus adipogénico puede incluir adenovirus tipo 5, adenovirus tipo 6 y adenovirus tipo 7. En forma adicional, la enfermedad relacionada al adenovirus adipogénico puede incluir cáncer, cáncer de postrata, cáncer de mama, disfunción pancreática, enfermedad pancreática, diabetes, enfermedad pulmonar, disfunción del sistema nervioso y el cerebro y disfunción adrenal . En un aspecto aún adicional, el sujeto puede ser un humano o un animal. Aún más, la muestra puede ser una muestra biológica, tal como un fluido corporal, una muestra de tejido, una muestra de órgano, heces, sangre, saliva y cualesquiera combinación de los mismos. Otro aspecto de la invención se refiere a un método para evitar enfermedad relacionada con adenovirus adipogénico en un sujeto al administrar una vacuna de adenovirus adipogénico al sujeto. La vacuna de adenovirus anti-adipogénico puede incluir una dosis efectiva de un ingrediente activo tal como un adenovirus tipo 36 exterminado, un adenovirus tipo 36 inactivado, una secuencia de proteína o péptido que codifica una proteína de revestimiento de adenovirus 36 o su fragmento, una secuencia de ácido nucleico que codifica una proteína de revestimiento de adenovirus tipo 36 o su fragmento, una proteína de adenovirus tipo 36 El A, un virus no patogénico modificado genéticamente y un virus no patogénico. En un aspecto adicional, la vacuna puede administrarse al sujeto en forma intranasal, oral, intravenosa, intramuscular, subcutánea y/o peritoneal. El suj eto puede ser un humano o un animal . La enfermedad adipogénica puede incluir cáncer, cáncer de postrata, cáncer de mama, disfunción pancreática, enfermedad pancreática, diabetes, enfermedad pulmonar, disfunción del sistema nervioso y del cerebro y disfunción adrenal . Otro aspecto de la invención se refiere a un método para determinar agresividad de cáncer en un sujeto. La metodología incluye obtener una muestra del sujeto y determinar si el sujeto esta infectado con el adenovirus adipogénico al cribar la presencia de anticuerpos específicos al adenovirus adipogénico en la muestra y determinar la presencia de anticuerpos específicos al adenovirus adipogénico en la muestra de manera tal que la presencia del adenovirus adipogénico se correlacione con un cáncer agresivo. Los anticuerpos pueden ser específicos a uno o más péptido codificados por la secuencia de ácido nucleico SEQ ID NO.: 5, SEQ ID NO . : 6 , y SEQ ID NO.:7. Además, la etapa de tamizado puede realizarse al utilizar un método seleccionado del grupo que consiste de ensayo de neutralización de suero y ELISA. En un aspecto adicional, el adenovirus adipogénico puede incluir adenovirus tipo 5, adenovirus tipo 35 y adenovirus tipo 37. Adicionalmente , el cáncer puede incluir de pecho, postrata, útero, ovarios, colon, riñon, páncreas, y pulmón . En un aspecto aún adicional, el sujeto puede ser un humano o un animal. Aún más, la muestra puede ser una muestra biológica, tal como un fluido corporal, una muestra de tejido, una muestra órgano, heces, sangre, saliva y cualesquier combinaciones de los mismos. Características, ventajas y modalidades adicionales de la invención pueden establecerse o ser aparentes de consideración de la siguiente descripción detallada, dibujos y reivindicaciones. Aún más, habrá de entenderse que tanto el anterior resumen de la invención, la siguiente descripción detallada son ejemplares y se pretende que proporcionen mayor explicación sin limitar el alcance de la invención como se reivindica . BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Los dibujos acompañantes, que se incluyen para proporcionar una comprensión adicional de la invención, se incorporan en y constituye una parte de esta especificación, ilustran modalidad de la invención en conjunto con la descripción detallada sirven para explicar los principios de la invención. No se hace intento por mostrar detalles estructurales de la invención con más detalle que el que pueda ser necesario para una comprensión fundamental de la invención y diversas formas en las que puede practicarse.

La Figura 1 es una tinción BODIPY de células 3T3-L1 5 días posteriores a tratamiento MDI . Esta Figura muestra triglicéridos en células 3T3-L1 infectados con Ad-36 contra no infectados in vi tro. Células de control muestran una tinción de grasa BODIPY moderada mientras que células infectadas Ad-36 tienen aproximadamente el doble de triglicéridos, que muestran que la bioquímica de adipocitos ha cambiado. La Figura 2 es una gráfica que muestra los efectos de infección espontánea con Ad-36 en monos rhesus alimentados ad libitum. En comparación con el período antes de que se infectara un mono, una vez que se nota la infección (designado †) hubo un aumento uniforme en peso corporal que todavía aumentó a los aproximadamente 18 meses. La Figura 3 es una gráfica que muestra un aumento en peso corporal en monos infectados con Ad-36. En comparación con monos no infectados, los monos infectados ganaron aproximadamente cuatro veces su peso en aproximadamente siete meses. La Figura 4 es una gráfica que muestra una disminución en colesterol en suero en monos titi infectados a Ad-36. El colesterol en suero empezó a bajar inmediatamente después de infección y en aproximadamente 10 semanas. Esto es significativamente diferente que la línea base en monos infectados. No hay cambio en los monos no infectados.

La Figura 5 es un gel que muestra la presencia de ADN Ad-36 en tejido adiposo de titi infectados utilizando un ensayo PCR encajado. La pista 1 es ADN Ad-36, las pistas 2-4 no muestran ADN Ad-36 en grasa de monos no infectados, y las pistas 5-7 muestran la presencia de ADN Ad-36 en todos los monos infectados . La Figura 6 es un gel que muestra ADN Ad-36 en hígado (pistas superiores) y tejido muscular (pistas inferiores) de titis infectados utilizando el ensayo PCR encajado. ADN Ad-36 de monos infectados se ve en las pistas 7-9 de tejido de hígado y tejido muscular y no esta presente en pistas 4-6 de monos no infectados. La pista 2 es Ad-36 de cultivo, la pista 3 es marcador. La Figura 7 es un gel que muestra ADN Ad-36 en tej ido muscular y cerebro de animales infectados por ensayo PCR encajado. Las pistas superiores son tejido del cerebro de titis, las pistas inferiores son tejido muscular. ADN Ad-36 de titis infectado se ve claramente en las pistas 8-9 y más débilmente en la pista 7. ADN Ad-36 no está presente en las pistas 4-6 de titis no infectados. La pista 2 es control positive de cultivo Ad-36. La Figura 8 es un gel que muestra ADN Ad-36 en tejido adiposo de humanos que utilizan ensayo PCR encajado (pistas inferiores). Este gel muestra ADN Ad-36 en tejido adiposo de titis en la pista superior (repetición de datos en la data en la Figura 5: las pistas 4-6 negativa de titis de control, pistas 7-9 ADN Ad-36 de titis infectados) . En las pistas inferiores ADN Ad-36 se ve en 2 de 6 muestras de tejido adiposo visceral humano que se obtienen de cadáveres en la autopsia (pista 2 es control positivo, pistas 6-7 son Ad-36 positivo, pistas 4,5,8,9 son negativos). La Figura 9 en una gráfica que muestra los efectos de múltiples adenovirus humanos en la grasa total del cuerpo en pollos. Ad-2 y Ad-31 no aumentan la grasa del cuerpo pero Ad-37 tiene un efecto marcado. La Figura 10 es un diagrama de muestra los efectos de múltiples adenovirus humanos en grasa visceral en pollos. Ad-2 y Ad-31 no incrementa la grasa visceral, pero Ad-37 tiene un efecto marcado. La Figura 11 es un diagrama que muestra la ingestión de alimentos en animales expuestos a múltiples adenovirus humanos. No hubo diferencias en ingestión de alimentos acumulativa entre los grupos, sin embargo individuos infectados con Ad-37 se volvieron obesos mientras que los individuos infectados con Ad-2 o Ad-31 no. La Figura 12 es una tabla que muestra obesidad producida por Ad-5 humano en ratones. También, la grasa corporal aumentó casi en 3 veces. La Figura 13 es una tabla que muestra la presencia de anticuerpos del suero Ad-36 humano en personas de 3 ciudades de los E.U.A. Un promedio de aproximadamente 30% de personas obesas fueron infectados con As-36 contra aproximadamente 11% de no obesos que no fueron infectados con Ad-36. La Figura 14 es una gráfica que muestra índice de masa corporal en 502 individuos de 3 ciudades de los E.U.A. de acuerdo con estado de infección con Ad-36. En total, BMI fue aproximadamente 9 unidades superior en personas infectadas contra no infectadas (p<.0001). Individuos infectados de ambos grupos obesos como no obesos fueron significativamente más pesados que los no infectados en cada grupo . La Figura 15 es una tabla que muestra una comparación de pares gemelos discordantes para infección con Ad-36. De 89 pares gemelos, 26 fueron discordantes. Los gemelos infectados con Ad-36 fueron más pesados y más gordos que sus co-gemelos no infectados. La Figura 16 es un gel que muestra la presencia de ADN Ad-36 en tejido de cáncer de próstata. La Figura 17 es un gel que muestra la presencia de ADN Ad-36 en monos. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se entiende que la presente invención no se limita a la particular metodología, protocolo, dispositivos, aparatos, materiales y reactivos, etc., aquí descritos, ya que estos pueden variar. También habrá de entenderse que la terminología empleada aquí se utiliza con el propósito de describir solo modalidades particulares, y no se pretende que limite el alcance de la presente invención. Debe notarse que como se emplea aquí, y en las reivindicaciones anexas, las formas en singular "un/una" y "el/la" incluyen referencias en plural a menos de que el contexto claramente lo dicte de otra forma. De esta manera, por ejemplo una referencia a una "partícula de virus" es una referencia a una o más partículas de virus y sus equivalentes conocidos por aquellos con destreza en la técnica y así en adelante. A menos de que se defina de otra forma, todos los términos técnicos y científicos aquí empleados tienen los mismos significados como se entiende comúnmente por una persona con destreza ordinaria en la especialidad a la cual pertenece esta invención. Métodos, dispositivos y materiales preferidos se describen, aunque cualesquiera métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos aquí descritos pueden emplearse en la práctica o prueba de la presente invención. Todas las referencias citadas aquí se incorporan por referencia en su totalidad. Cualesquiera valores numéricos aquí descritos incluyen todos los valores desde el valor inferior al valor superior, en incrementos de una unidad siempre que hay una separación de cuando menos dos unidades entre cualquier valor inferior y cualquier valor superior. Como un ejemplo, si se establece que la concentración de componente o valor de una variable de proceso tal como por ejemplo dosis, diluciones y semejantes, por ejemplo es de 1 a 90, específicamente de 20 a 80, más específicamente de 30 a 70, se pretende que los valores tales como as 15 a 85, 22 a 68, 43 a 51, 30 a 32 etc., se enumeren expresamente en esta especificación. Para valores que son menores que 1, una unidad se considera como 0.0001, 0.001, 0.01 o 0.1 apropiada. Estos son solo ejemplos de lo que se pretende específicamente y todas las combinaciones posibles de valores numéricos entre el valor más bajo y el valor más alto enumerados habrán de considerarse que se establecen expresamente en esta solicitud de una forma similar. Aún más, inmediatamente a continuación se proporciona una sección de "definición" en donde ciertos términos relacionados a la invención se definen específicamente por claridad, pero todas las definiciones son consistentes como entienda estos términos una persona con destreza en la especialidad. Particulares métodos, dispositivos y materiales se describen, aunque cualesquiera métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos aquí descritos pueden emplearse en la práctica o prueba de la invención. Definiciones Ad-2 es el adenovirus tipo 2 Ad-5 es el adenovirus tipo 5 Ad-31 es el adenovirus tipo 31 Ad-36 es el adenovirus tipo 36 Ad-37 es el adenovirus tipo 37 BMI es índice de masa corporal FAS es sintetasa de ácido graso PPAR es receptores activados con proliferador peroxisoma CEBP es proteína de enlace mejorador CCAAT El término "adenovirus adipogénico" como se emplea aquí en general se refiere adenovirus que son capaces de estimular el incremento en producción de lípidos en células tejidos' y/o órganos al activar la maquinaria celular en anfitriones infectados para activar la producción del anfitrión de enzimas lipogénicas que entonces producen ácidos grasos en exceso y promueven almacenamiento de grasa con las células infectadas. Los adenovirus adipogénicos incluyen sin limitación Ad-5, Ad-36, y Ad- 37. El término "BMI" como se emplea aquí en general se refiere a una medida estadística del peso de una persona ajustada en escala de acuerdo con la altura. BMI puede definirse como el peso corporal del individuo dividido por el cuadrado de la altura y puede expresarse en la unidad kg/m2. BMI puede emplearse como una herramienta de clasificación para identificar problemas posibles de peso para adultos y niños. Sin embargo, para determinar si el exceso de peso es un riesgo a la salud, un proveedor del cuidado de la salud puede requerir el realizar mayores evaluaciones tales como mediciones de espesor de pliegue de la piel, evaluaciones de matrices, actividad física, historia familiar, proporción de cadera a cintura, infección con un virus adipogénico, y otras clasificaciones de salud apropiadas. Para adultos de 20 años de edad y mayores, el BMI puede interpretarse utilizando categorías de estado de peso standard que son las mismas para todas las edades y tanto para hombres como mujeres. En forma alterna, para niños y quinceañeros la interpretación de BMI es tanto específica de la edad y del sexo. Por ejemplo, un adulto que tiene (i) un BMI menor a aproximadamente 18.5 porciento puede considerarse de bajo peso, (ii) un BMI esta en el intervalo de aproximadamente 18.5 a aproximadamente 24.9 puede considerarse peso normal, (iii) un BMI en el intervalo de aproximadamente 25 a aproximadamente 29.9 puede considerarse con sobrepeso y (iv) un BMI superior a aproximadamente 30.0 puede considerarse obeso. El término "proporción de cadera a cintura" se refiere a una medida que puede emplearse para ayudar en determinar la obesidad. La distribución de grasa se evalúa al dividir el tamaño de la cintura por el tamaño de la cadera. Por ejemplo, un individuo con una cintura de aproximadamente 36.2 cm (30 pulgadas) y un tamaño de cadera de aproximadamente 101.6 cm (40 pulgadas) tendrá una proporción aproximada de 0.75 y un individuo con un tamaño de cintura de 101.14 cm (41 pulgadas) y aproximadamente un tamaño de cadera de 99.06 cm (39 pulgadas) tendrá una proporción de aproximadamente 1.05. Entre más sea la proporción, mayor será el riesgo de enfermedad del corazón y otros desórdenes relacionados a la obesidad. Una "muestra biológica" se refiere a una muestra de tejido o fluido de un humano o animal incluyendo pero no limitado a plasma, suero, fluido espinal, fluido linfático, las secciones externas de la piel, tractos respiratorio intestinal y genitourinario, lágrimas, saliva, células de sangre, tumores, órganos, tejido y muestras de constituyentes de cultivo de células in vitro. Un ácido nucleico "aislado" o " sustancialmente puro" (por ejemplo, ADN, ARN o un polímero mixto) por ejemplo es aquel que esta sustancialmente separado de otros componentes celulares, que acompañan en forma natural a una secuencia o proteína humana o animal nativa, por ejemplo ribosomas, polimerasas, muchos otras secuencias y proteínas de genoma humano o animal . El término abarca una secuencia de proteína de ácido nucleico que se ha retirado de su ambiente de origen natural, e incluye aislados de ADN recombinantes o clonados y análogos químicamente sintetizados o análogos biológicamente sintetizados por sistemas heterologos. El término " inmunogénico" en general se refiere a una vacuna anti-obesidad que tiene la capacidad de provocar en un animal inmunizado, una respuesta inmune que produce anticuerpos neutralizantes contra un virus vivo que provoca obesidad que puede infectar a la persona después de administración de la vacuna. El término "anticuerpo" se refiere a anticuerpos, fragmentos de digestión, porciones especificadas y sus variantes, incluyendo miméticos de anticuerpo o que comprenden porciones de anticuerpos que imitan la estructura y/o función del anticuerpo o fragmento o porción especificada del mismo, incluyendo anticuerpos de cadena sencilla y sus fragmentos. La invención abarca anticuerpos y fragmentos de anticuerpos capaces de ligar a una molécula biológica (tal como un antígeno o receptor) tal como una proteína de revestimiento de fibra de adenovirus, y específicamente Ad-36 o sus porciones. El término "secuencia de ácido nucleico" incluye un oligonucleótido nucleótido o polinucleótido y sus fragmentos, y a ADN o ARN de origen genómico o sintético, que puede ser de una sola o doble hebra y representan la hebra sentido o antisentido a ácido nucleico péptido (PNA= peptide nucleic acid) o a cualquier material tipo ADN o tipo ARN, natural o sintético de origen.

Fragmentos: incluyen cualquier porción de secuencia de péptido heterólogo o ácido nucleico. Fragmentos de péptido heterólogo retienen cuando menos una característica estructural o funcional de los polipéptidos heterólogos del sujeto. Fragmentos de secuencias de ácido nucleico son mayores que aproximadamente 60 nucleotidos de longitud y más preferible incluyen fragmentos que son de al menos aproximadamente 100 nucleotidos, al menos 1000 nucleotidos y al menos aproximadamente 10,000 nucleotidos de longitud. Complementario o complementariedad : como se emplea aquí, incluye el enlace natural de polinucleótidos bajo condiciones de temperatura y sal permisivas, por apareamiento base. Por ejemplo, la secuencia "A-G-T" liga a la secuencia complementaria "T-C-A" . Complementariedad entre dos moléculas de una sola hebra puede ser "parcial", en donde solo algo del ácido nucleico liga, o puede estar completo cuando existe complementariedad total entre las moléculas de una sola hebra. El grado de complementariedad entre hebras de ácido nucleico tiene efectos significantes en la eficiencia y fuerza de hibridización entre hebras de ácido nucleico. Esto es de importancia particular en reacciones de amplificación, que dependen del enlace entre hebras de ácido nucleico y en el diseño y uso de moléculas. Equivalente funcional : una molécula de proteína o ácido nucleico que posee características funcionales o estructurales que son sustancialmente similares a una proteína heteróloga, polipéptido enzima o ácido nucleico. Un equivalente funcional de una proteína puede contener modificaciones que dependen de la necesidad de estas modificaciones para el desempeño de una función específica. El término "equivalente funcional" se pretende que incluya los "fragmentos", "mutantes, "híbridos", "variantes", "análogos", o "derivados químicos" de una molécula. Purificación de proteína: definido ampliamente como cualquier proceso por el cual se separan proteínas de otros elementos o compuestos en base a carga, tamaño molecular o afinidad de enlace. Sustancialmente purificado: como se emplea aquí, incluye secuencias de ácido nucleico o aminoácido que se retiran de su ambiente natural aisladas o separadas, y son al 60% libres, de preferencia al menos 75% libres y más preferiblemente al menos 90% libres de otros componentes con los cuales se asocian naturalmente. Inhibición: como se emplea aquí, se refiere a una reducción en el parámetro que se mide, ya sea crecimiento o viabilidad de adenovirus tipo 36. La cantidad de esta reducción se mide respecto a una norma (control) . "Reducción" se define aquí como una disminución de al menos alrededor de 25% respecto al control, de preferencia al menos alrededor de 50%, y más preferible al menos alrededor de 75%. Las vacunas de adenovirus anti-adipogénicas de la invención, en donde el componente inmunogénico es virus inactivado vivo, virus exterminado, envoltura proteica per se, segmento de envoltura proteica que comprende epítope, o envoltura proteica (o sus segmento que comprende epítope) que se proporciona con el uso de un virus portador modificado genéticamente, no patogénico, tal como virus vaccinia o virus de viruela aviar, se preparan utilizando métodos bien conocidos en la técnica. De esta manera, las vacunas incluirán portadores excipientes adyuvantes antimicrobianos conservadores y semejantes como se entiende bien en la especialidad. De esta manera, además del ingrediente activo, las vacunas tendrán composiciones convenientes usualmente amortiguadores acuosos, tales como salino amortiguado con fosfato o semejantes, en donde el ingrediente activo será suspendido junto con, opcionalmente cualquiera de diversos adyuvantes que estimulan el sistema inmune empleados en preparación de vacuna humana, composiciones antimicrobianas y otras composiciones para estabilizar las preparaciones. Todas las composiciones incluidas con la preparación de vacuna serán adecuadas para administración a humanos. La preparación de vacuna puede almacenarse en forma liofilizada y después combinarse con solución pronto antes de la administración. Para administración oral, la preparación de vacuna puede ser en forma de solución, tabletas o pildoras con un revestimiento entérico como se comprende en la especialidad. La concentración de componente activo (inmunogénico o que proporciona inmunógeno) en solución con el cual se administra, típicamente estará entre aproximadamente 1 ng y aproximadamente 1 mg/ml. Las vacunas de adenovirus anti-adipogénico de la invención se administrarán en forma intranasal, oral o por inyección intravenosa, intramuscular, subcutánea o peritoneal . La administración de las vacunas de la invención será bajo la guía de un médico. Dosis apropiadas de la vacuna de adenovirus anti-adipogénico está bien dentro de la destreza de los practicantes médicos y dependerá de una cantidad de factores incluyendo la edad de la persona que se trata, la urgencia, que la persona desarrolle inmunidad protectora, el estado del sistema inmune de la persona y otros factores conocidos por las personas con destreza. La vacuna típicamente se administrará en varias etapas a fin de provocar y mantener la inmunidad protectora contra virus que provocan obesidad en la persona que se vacuna. De esta manera, después de la vacunación primaria, típicamente habrá entre una y aproximadamente 10 vacunas de refuerzo separadas por periodos entre aproximadamente 1 semana y 10 años. Una sola dosis de una vacuna anti obesidad de la invención (en forma de solución) tendrá un volumen de entre aproximadamente 0.1 mi y 10 mi y en cualquier forma tendrá entre aproximadamente 1 ng y 10 mg de virus adipogénico exterminado o inactivado, entre aproximadamente 1 ng y 10 mg de virus no patogénico genéticamente modificado o entre aproximadamente 1 ng y 10 mg de envoltura proteica (por ejemplo proteína de fibras) o un péptido de 6-30 aminoácidos (en su forma modificado para ser inmunogénico) . Una vacuna de adenovirus anti-adipogénico de la invención, en donde el ingrediente activo es ácido nucleico, también será una preparación estándar para vacunas de ese tipo. Con vacunas de este tipo, el ácido nucleico no es inmunógeno pero se expresa in vivo después de administración de la vacuna como un péptido o proteína que a su vez es inmunogénico. Vacunas de este tipo se administrarán por técnicas conocidas en especialidad para dichas vacunas (por ejemplo inyección intramuscular) . Dosis también serán de acuerdo con los procedimientos conocidos en la especialidad para provocar y mantener inmunidad protectora contra obesidad viral en el individuo vacunado. Hay que notar que la vacuna de adenovirus anti-adipogénico de acuerdo con la invención puede incluir ingredientes activos con base en más de un virus adipogénico (o la envoltura proteica (por ejemplo proteína de fibras) o segmentos epitopicos de su envoltura proteica) .

Todavía en otro aspecto, la invención es un método para evitar enfermedad relacionada con adenovirus adipogénico provocada por un virus en un humano susceptible que comprende administrar al humano una cantidad de una vacuna de adenovirus anti adipogénico de la invención que es efectiva para desarrollar y mantener una respuesta inmune protectora contra un adenovirus adipogénico. Esta invención en general se refiere a la relación entre infección con adenovirus adipogénicos humanos, tales como Ad-5, Ad-36 y Ad-37, las etiologías de obesidad y la disfunción de células, tejidos y/u órganos, tales como cánceres, disfunción del páncreas, disfunción del músculo cardiovascular y esquelético, disfunción pulmonar, disfunción del sistema nervioso y cerebro y enfermedad y disfunción adrenal . Aún más, la invención se refiere a utilizar el estado de virus adipogénico como un agente de pronóstico para estado de enfermedad, pronóstico, resultado de tratamiento y prevención de infección y enfermedad. El mecanismo principal de enfermedad relacionada a adenovirus adipogénico es la producción de lípidos dentro de células. Los adenovirus adipogénicos son capaces de cambiar la maquinaria celular en sujetos infectados para activar la producción del anfitrión de enzimas lipogénicas. Como resultado, las enzimas lipogénicas producen exceso de ácidos grasos y promueven almacenamiento de grasa dentro de las células de múltiples órganos. Múltiples células del cuerpo se conoce que tienen la capacidad para producir ácidos grasos dentro de sus células. La sintetasa de ácido graso (FAS) es una de las enzimas lipogénicas más importantes y se expresa en una cantidad de células de adultos y fetales, que sugiere que éstos tejidos son capaces de producir ácidos grasos. Por ejemplo, FAS se expresa en células de adultos tales como células epiteliales del duodeno y estómago, células hematopoyéticas, apéndice, células de ganglios del tracto alimentario, hepatocitos, mastocitos, vesículas seminales, células paraguas de vejiga urinaria, células fascículas de zona adrenal , adipocitos, células pituitarias anteriores, células canasta de cerebelo, neuronas corticales cerebrales, deciduas, células estromales decidualisadas del endometrio, células epiteliales de glándula apócrina, ducto y ácino de mama, próstata y glándulas sebácea, células de luteína y células alveolares Tipo II del pulmón. Adicionalmente, FAS también se expresa en células fetales tales como células pituitarias anteriores, condorcitos de pared bronquial, endotelio de vasos sanguíneos y corazón, células epiteliales del bronquio, tracto esófago gastrointestinal, pulmón, páncreas, próstata, tiroides, lengua, tráquea, túbulos próximos del riñon, fibroblastos, lipositos nodales, neuroblastos en médula drenal, timocitos, miocitos estriados de la lengua, células epiteliales de glándulas salivales y glándulas traqueobronquiales , células hematopoyéticas , hepatocitos, células de Lanhans de vellos coriónicos, osteoblastos, células fibroblásticas perivertebrales , células de Schwann de ganglios simpático y plexo de Auerbach, células subcapsulares adrenales, adipocitos, células de Leidig de testículos, mastocitos, uroepitelio de tracto urinario, células adrenocorticales de capa superior. Mientras que los ácidos grasos son críticos para el medio intracelulares para muchos procesos bioquímicos, excesos de ácidos grasos dentro las células alteran profundamente la bioquímica celular. Exceso de ácidos grasos dentro de las células puede llevar a un funcionamiento anormal de una cantidad de procesos intracelulares. Por ejemplo, exceso de ácidos grasos en tejido pancreático reduce la secreción de insulina y ácidos grasos en células de cáncer proporciona la fuente principal de energía para crecimiento de cáncer. Aún más, ácidos grasos dentro de las células del pulmón estimulan la atracción de macrófagos al área y se asocian con asma y enfisema. Por lo tanto, resultados adversos ocurren cuando las células se exponen a excesos de ácidos grasos. De acuerdo con una modalidad, los adenovirus adipogénicos pueden ser un mecanismo por el cual el exceso de ácidos grasos y triglicéridos se producen en las células y tejidos. Los estudios han demostrado que adenovirus adipogénicos pueden alterar las enzimas lipogénicas en tejido adiposo y en el hígado. Por ejemplo, otros estudios han mostrado que la infección con adenovirus adipogénico, Ad-36, estimula la aparición rápida de factores de diferenciación incluyendo glicerol-3-fosfodehidrogenasa, PPAR-gama, CEBP-alfa y beta y lipoproteína lipasa en células 3T3-L1. Ya que múltiples tejidos acumulan ADN adenoviral adipogénico, el exceso de enzimas lipogénicas puede estar presente en todos los tejidos infectados que son capaces de producir estas enzimas . De acuerdo con otra modalidad de la invención, infección de adenovirus adipogénicos puede emplearse para determinar la presencia de un cáncer relacionado a la obesidad. En una modalidad adicional, la infección de adenovirus adipogénico puede emplearse para determinar si un sujeto está predispuesto a desarrollar un cáncer relacionado a la obesidad. La prevalencia de múltiples tipos de cánceres se incrementa en personas obesas. Estos cánceres incluyen sin limitación de mama, próstata, útero, ovarios, colon, riñon, páncreas y pulmón. Cáncer hepatocelular también puede estar vinculado con la obesidad y el síndrome metabólico. Adicionalmente, la obesidad puede estar vinculada con la agresividad de algunos tipos de cáncer y a un más pobre pronóstico. Por ejemplo, la obesidad puede estar asociada con un grado superior de cáncer de próstata y superiores proporciones de recurrencia después de prostatectomía radical. También, en mujeres blancas no hispánicas, el tamaño del tumor de mama se correlaciona con la obesidad. Específicamente, esto es más notable para el cuartil más alto de la circunferencia de cintura cuando la proporción de probabilidades es 2.76. Estudios han mostrado que ácidos grasos son el sustrato para el gasto de energía en células de cáncer y que bloquear FAS puede bloquear el crecimiento de cáncer. Aún más, se ha mostrado que FAS se incrementa en muchos cánceres relacionados a la obesidad y que FAS favorece crecimiento de tumor. Infección de adenovirus adipogénicos en células de cáncer puede estimular ácidos grasos en las células de esta manera promoviendo el crecimiento de cáncer al proporcionar una fuente de energía para las células de cáncer. La expresión FAS se ha detectado en diversos tumores y asociado con subtipo histológico, grado histopatológico y agresividad de tumor. Estudios han demostrado que FAS se expresa altamente en neoplasma humano tal como cánceres de mama, próstata, de ovarios, colorrectal y endometrial. Se ha determinado que FAS (OA-519) fue un pronosticador de cáncer de próstata. Se ha observado que la inmunoreactividad OA-519 se ve en 56 (57%) de 99 cánceres de próstata primarios examinados. Los cánceres OA-519 fueron más probables que progresaran que los cánceres no-OA-519. Sin duda, la presencia de Ad-36 se confirma en el 61% de tejidos de cáncer de próstata humana, y se observó que 50% y 51% de los pacientes de cáncer de mamá y próstata respectivamente tienen anticuerpos a Ad-36 en comparación con 13.8% de la población normal. Por lo tanto, la presencia de FAS en tejido de cáncer de próstata en aproximadamente el mismo número de pacientes de cáncer que se observó infectado con Ad-36 en combinación con los hallazgos de que adenovirus adipogénicos aumentan FAS en células y que la inhibición de FAS puede inhibir cáncer, sugiere que la infección de un adenovirus adipogénico provoca tanto obesidad como cánceres relacionado a obesidad en un suj eto . De acuerdo con una modalidad de la invención, la prevalencia de infección de Ad-36 puede ser estadísticamente superior en pacientes con cáncer de mama y próstata que en individuos sin cáncer. En una modalidad adicional, el estado Ad-36 puede servir como un marcador para cáncer de mama y próstata. Todavía una modalidad adicional se refiere a pacientes con cáncer de mama o próstata que tienen ADN Ad-36 en sus tejidos tendrán un cáncer más agresivo y/o un pronóstico más pobre que aquellos con ADN Ad-36.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, puede emplearse infección de adenovirus adipogénico como un pronosticador para pronóstico de enfermedades, pronóstico de tratamiento o como un pronóstico de agresividad de tumor. En carcinomas de mama, próstata y ovarios, altos niveles de FAS a menudo se asocian con un pronóstico pobre. La asociación entre expresión de FAS y tamaño de tumor o un marcador de actividad proliferativa de células de tumor puede sugerir que FAS se relaciona a crecimiento y proliferación de estos tumores malignos. Por ejemplo, estudios han mostrado que la sobre expresión de FAS aumenta la heptacarcinogénesis en ratas. Otros estudios han mostrado que aproximadamente 30% de pacientes con cánceres de mama tempranos expresan FAS. Las pacientes con cáncer de mama que expresan FAS tienen un grado de tumor significativamente superior, más grande volumen de tumor, etapa clínica avanzada y calificación de Gleason, uno de los pronosticadores más poderosos. La expresión FAS también se ha estudiado en neoplasia de ovarios, en donde se ha visto asociada con un grado de tumor histológico y más corta supervivencia. Aún más, estudios han mostrado que individuos con sobrepeso y obesos tienen una significativamente incrementada mortalidad de múltiples tipos de cánceres en humanos . FAS se asocia con cáncer de colon y con su severidad.

Los estudios han mostrado que sólo 2 (5%) de 43 adenomas con displasia de bajo grado mostraron reactividad para FAS. Sin embargo, inmunotinción de FAS positiva se ve en 7 (17%) de 40 casos de adenomas con displasia a grado moderado, en 9 (53%) de 17 casos de adenomas con displasia de alto grado y en 81% de adenocarcinomas (pO.0001). Por lo tanto, una modalidad de la invención se dirige a una prueba de clasificación de diagnóstico para la presencia de infección de adenovirus adipogénico en un sujeto. Si el sujeto prueba positivo para adenovirus adipogénico, la expresión FAS puede incrementarse en células de cáncer resultando en un cáncer más agresivo y/o un más pobre pronóstico. Otra información que vincula Ad-36 y cáncer es el hallazgo de secuencias únicas de ADN Ad-36 en cánceres relacionados a la obesidad tales como tejido de cáncer de próstata por la prueba de reacción de cadena en polimerasa (PCR) . Las secuencias únicas de ADN de proteína de fibras Ad-36 que se describe en las patentes de los E.U.A. previas de la Cesionaria Números 6,664,050 y 6,127,113, se detectaron en 11 de 18 muestras de tejido de cáncer de próstata. Técnicas de tamizado o clasificación ejemplares se describen a continuación . La prueba de adenovirus adipogénico será útil en dos formas. Si un sujeto con una masa o bola de mama o una próstata agrandada, tiene una prueba de adenovirus adipogénica positiva (probada por ejemplo ya sea una prueba de suero positiva o una prueba de tejido PCR positivo) hay un riesgo superior de que el sujeto tenga cáncer y deberán hacerse pruebas para evaluar cáncer (por ejemplo biopsia) en vez de una "espera vigilante". Por el contrario, si una persona tiene una prueba de adenovirus adipogénico positiva, entonces el sujeto deberá ser supervisado para cáncer a intervalos más regulares, que una persona con una prueba Ad-36 negativa. Una vacuna contra Ad-36 se ha desarrollado de conejos utilizando virus muerto. Suero de los conejos contiene anticuerpos que evita crecimiento de Ad-36 en cultivo de tejido en hasta 17 diluciones en serie (una dilución de 1:131,072 de la concentración original). Se conoce que los únicos anticuerpos efectivos contra crecimiento de adenovirus se dirigen contra segmentos de la proteína de fibras de los diversos adenovirus (anticuerpos neutralizantes) . Anticuerpos Ad-36 no reaccionan de forma cruzada con cualquier otro adenovirus, de manera tal que secuencias de ADN únicas en la proteína de fibras Ad-36 son responsables por esta especificidad. Tres secuencias en proteína de fibras Ad-36 que son únicas para Ad-36 se han identificado. Utilizando tecnología standard en el campo, péptidos de esta secuencia se utilizarán para hacer una vacuna altamente purificada que deberá tener mínimas reacciones alérgicas. Los péptidos estarán ligados a adyuvantes comúnmente empleados en vacunas para mejorar la efectividad. Estas técnicas se conocen por aquellos con destreza en la especialidad. En una modalidad particular, puede elaborarse una vacuna contra adenovirus adipogénico, tal como Ad-36 para evitar cáncer. Ya que los adenovirus adipogénicos se asocian con cáncer, una vacuna contra adenovirus adipogénico puede emplearse para evitar cáncer. Por ejemplo, una vacuna contra Ad-36 utilizando secuencias de ADN únicas contenidas en el ADN de proteína de fibras para producir péptidos podrá desarrollarse. Esta tecnología se conoce por aquellos con destreza en la técnica. En una modalidad adicional, un concepto novedoso de secuenciado del ADN de proteína de fibras de todos los adenovirus adipogénicos para determinar su estructura, puede realizarse. Después de secuenciado, las secuencias de ADN que están presentes en muchas o en todas las proteínas de fibras, se identificarán utilizando bases de datos de comparación de ADN comúnmente empleadas en el campo. Esto puede lograrse por ejemplo al emplear GenBank para identificar las secuencias únicas en ADN de proteína de fibras de Ad-36. Se eligen secuencias de ADN de aproximadamente 36 a 75 pares base que codifican péptidos de aproximadamente 10 a 25 aminoácidos. Se conoce que los péptidos en la porción de protuberancia de la proteína de fibras son efectivos, de manera tal que estas secuencias se examinarán. Después de identificación, los péptidos pueden acoplarse con adyuvantes para producir una vacuna que evitará infección de cualesquiera de los adenovirus humanos. La utilidad de una vacuna común para los adenovirus adipogénicos, será el evitar obesidad, cáncer y otras enfermedades humanas que se deben a adenovirus adipogénicos. Por ejemplo, un porciento significante de reclutas militares contraen infecciones de adenovirus durante el entrenamiento básico. También, muchos de las enfermedades ligeras asociadas con fiebre, tos, diarrea o conjuntivitis en los primeros dos años de vida se deben a adenovirus . De acuerdo con una modalidad de la invención, la infección de adenovirus adipogénico puede emplearse como un pronosticador del desarrollo de obesidad y enfermedades debidas a complicaciones de obesidad y el resultado de regímenes que afectan el peso corporal. Las complicaciones de obesidad pueden incluir, ínter alia, diabetes melitus, hipertensión, hiperlipoproteinemia, enfermedad cardíaca tal como enfermedad asterosclerosica y falla cardíaca congestiva, enfermedades pulmonares tales como apnea de sueño y asma, accidentes cerebro-vasculares, cánceres tales como de mama, de útero, de colon y de próstata, enfermedad de vesícula biliar, enfermedades tal como cálculos e infección, toxemia durante embarazo, riesgos durante cirugía, gota, fertilidad disminuida, artritis degenerativa y mortalidad temprana. Se ha demostrado por la cesionaria que Ad-36 humano estimula el almacenamiento de grasa y formación de nuevas células de grasa en preadipocitos de ratón (células 3T3-L1) (Figura 1) y en preadipocitos humanos. Adicionalmente, la cesionaria ha demostrado en las patentes de los E.U.A. Números 6,127,113 y 6,664,050, aquí incorporadas en su totalidad por referencia, que la infección de Ad-36 se asocia con obesidad. Por ejemplo, se realizaron 4 experimentos en gallinas, un experimento en ratones y dos experimentos en monos, que todos muestran que la infección con Ad-36 aumenta la grasa corporal y reduce el colesterol y triglicéridos en suero. En forma más notable, la ingestión de alimentos medida en gallinas, ratones y ratas no hubo diferencia entre animales infectados y de control indicando que el gasto de energía fue diferente. El mecanismo de Ad-36 tiene un efecto directo en los adipocitos para incrementar enzimas lipogénicas y factores de diferenciación. Células infectadas con Ad-36 exhiben aproximadamente 2 veces la cantidad de triglicéridos almacenados en 5 días. Una gran cantidad de estudios también se realizaron con el adenovirus adipogénico Ad-36. Monos Rhesus o macanos que se infectaron espontáneamente con Ad-36 mostraron una ganancia en peso significante en 18 meses después de infección (FIGURA 2) . Monos titi también se infectaron con Ad-36 y se observo una ganancia en peso de 4 veces en titis infectados en comparación con titis no infectados (FIGURA 3) . Aún más, la grasa corporal aumentó en aproximadamente 70% y el colesterol en suero disminuyó en aproximadamente 35 mg/dl después de infección (FIGURA 4) . En forma notable, ADN Ad-36 se observó en múltiples tejidos del mono, tales como en el cerebro, hígado, pulmón, músculo y tejido de adipocitos siete meses después de la infección inicial y no fue más capaz de desarrollar el virus de la sangre o heces de los monos infectados después de dos meses (FIGURAS 5-7) . ADN Ad-36 también se ha observado en tejido de adipocitos humanos como se ve en la FIGURA 8. Otros estudios han demostrado que Ad-37 provoca obesidad en gallinas, pero Ad-2 y Ad-31 no (FIGURAS 9-11) . La ingestión de alimentos acumulativa no fue diferente entre los grupos estudiados. Aún más, estudios han demostrado que Ad-5 provoca obesidad en ratones (FIGURA 12) . Estos estudios muestran que el estímulo de enzimas lipogénicas y obesidad no tiene efectos no específicos de todas las infecciones de adenovirus, pero adenovirus múltiples pueden tenerlos. Otra modalidad de la invención incluye utilizar adenovirus adipogénicos para pronosticar diabetes y otra disfunción pancreática. Adicionalmente , otra modalidad se dirige a una vacuna contra adenovirus que pueda evitar enfermedad pancreática, incluyendo algunos casos de diabetes.

Células beta pancreáticas producen lípidos y el metabolismo de lípidos en las células beta, es crítico para la regulación de secreción de insulina. Enzimas que están asociadas con la síntesis de lípidos u oxidación, provocan una disminución en la cantidad de insulina producida y secretada. Estudios han demostrado que la sobre expresión de SREBP-I en células beta, disminuye la síntesis de insulina. SREBP-I es un precursor directo de FAS y se ha encontrado que aumenta por infección de adenovirus in vitro y in vivo en hepatocitos. Otros estudios han demostrado que el enlace de proteína de enlace de elemento que responde carbohidratos (ChREBP= carbohydrate responsive element-binding protein) a ácido graso sintasa y genes piruvato cinasa de tipo L se estimula por glucosa en células beta pancreáticas. Superiores niveles de proteína carnitina palmitolitransferasa I (CPT I) en células beta provocan una disminución en la secreción de insulina en respuesta a glucosa. Adenovirus adipogénicos pueden provocar diabetes debido que aumentan la obesidad y producen resistencia a insulina, pero los cambios en enzimas lipogénicas debidos a infección de virus del páncreas también juegan un papel. Una modalidad adicional de la invención es para utilizar el estado de adenovirus adipogénicos, para pronosticar enfermedad de hígado, cirrosis y otra disfunción del hígado. También, una vacuna contra adenovirus puede emplearse para evitar enfermedad de hígado debido a adenovirus adipogénicos . La obesidad se asocia con enfermedad del hígado. El espectro de enfermedad del hígado con la obesidad empieza con infiltración de grasa del hígado, avanza a esteatohepatitis (esteatohepatitis no alcohólica, NASH= non-alcoholic steatohepatitis) , y un sustancial porcentaje de pacientes con NASH pasan a desarrollo de cirrosis criptogénica . La frecuencia y severidad de infiltración de grasa del hígado continúa con el aumento de peso corporal y está presente en la vasta mayoría de pacientes con obesidad mórbida. Se ha reportado que la obesidad está presente en aproximadamente 30% a aproximadamente 100% de los casos de enfermedad de grasa en el hígado no alcohólica (NAFLD= nonalcoholic fatty liver disease) . Otros estudios han demostrado que más de aproximadamente 95% de los sujetos con severa obesidad tienen diversos grados de infiltración de grasa del hígado y aproximadamente 65% tuvo NASH. Adenovirus adipogénicos producen niveles incrementados de enzimas lipogénicas y una acumulación de grasa en el hígado. Como se notó anteriormente, la infiltración de grasa del hígado puede llevar a cirrosis. Hay una cantidad de causas de infiltración de grasa del hígado, e insultos adicionales al hígado, pueden aumentar la posibilidad de que ocurra cirrosis. Individuos con factores de riesgo para enfermedad del hígado o con pruebas de función de hígado anormales, deberán probarse por adenovirus adipogenicos ya que pueden requerir atención especial para evitar avance de la grasa en el hígado hasta llegar a cirrosis. Una vacuna contra adenovirus adipogénicos pueden reducir o evitar muchos casos de hígado con grasa y cirrosis. Todavía en otra modalidad de la invención incluye adenovirus adipogénicos para pronosticar disfunción muscular. También, una vacuna contra adenovirus puede usarse para evitar disfunción muscular. Se conocen músculos que tienen enzimas lipogénicas presentes y almacenan lipidos intracelulares . La obesidad se asocia con metabolismo anormal de lipidos y acumulación de lipidos intramuscular. Estudios han mostrado que un gen lipogénico, estearoil-CoA desaturasa 1 (SCDl) se regula a la alta en el músculo esquelético a partir de humanos extremadamente obesos. Alta grasa intramuscular se relaciona a deficiente función muscular en personas obesas y se relaciona a resistencia a insulina y diabetes. Otros estudios han mostrado que la resistencia a insulina y diabetes tipo 2 resultan de la acumulación de lipidos en tejidos no adecuados para almacenamiento de grasa, tales como músculo esquelético y el hígado. FFAs estimula la síntesis de novo de ceramida y esfingosina, dos esfingolípidos que previamente han mostrado que inhiben la acción de insulina. La inhabilidad para transitar de grasa a glucosa como la fuente primaria del combustible, puede estar asociada con la resistencia de insulina, desregulación metabólica y riesgo cardiovascular. Ya que la lectina ha mostrado que desciende en adipocitos infectados con Ad-36, esto puede producir resistencia a insulina . Personas obesas se quejan con dolor con el ejercicio. La razón por esto no es clara pero los individuos obesos tienen más lípidos intramusculares y menor capacidad de ejercitar. Los lípidos intramusculares alteran la utilización de sustrato de músculos esqueléticos. Incrementados lípidos intramusculares debido a adenovirus adipogénicos pueden limitar la capacidad del ejercicio, aumentar el dolor y alterar la utilización sustrato. Esto sería particularmente importante en animales empleados para desempaño o resistencia, tales como caballos de carreras o perros de carreras. Un animal (o persona) infectada con un adenovirus adipogenico puede no ser capaz de lograr tan buen desempeño como uno no infectado, de manera tal que puede emplearse la prueba de adenovirus adipogénicos como un pronosticador de calidad de desempeño. Finalmente, incrementados lípidos intramusculares en el músculo cardíaco pueden alterar la función cardíaca, producir cardiomiopatía y falla cardíaca congestiva. Los estudios han mostrado que la acumulación de exceso de ácidos grasos y triglicéridos dentro del músculo cardíaco se asocia con resistencia a insulina cardíaca y disfunción cardíaca. Una modalidad adicional de la invención se relaciona al estado de adenovirus adipogénicos , para pronosticar disfunción pulmonar. También, una vacuna contra adenovirus evitará la disfunción pulmonar. Se ha reconocido por muchos años que la obesidad se asocia con la enfermedad pulmonar tal como asma y enfisema. Los mecanismos de esta asociación no son claros. Se conoce que los pulmones producen FAS y sintetizan lípidos. Por lo tanto, el hallazgo de que adenovirus adipogénicos pueden provocar enfermedad pulmonar puede estar asociado con la producción de FAS en los pulmones por los adenovirus. Estudios han indicado que la infección Ad-5 duplica el número de macrófagos en el pulmón de conejillos de Indias. La combinación de fumar y Ad-5 cuadruplica el número de macrófagos. Infecciones virales latentes estuvieron presentes en pacientes con asma y enfisema y proteína 1A Ad-5 en los pulmones se correlaciona con inflamación en asma en pacientes de asma y enfisema. Una modalidad de la invención es utilizar el estado de adenovirus adipogénico para pronosticar disfunción del sistema nervioso y cerebro. También, una vacuna contra adenovirus puede utilizarse para evitar disfunción en el sistema nervioso y el cerebro.

Virus adipogénicos infectan el tejido del cerebro. Es bien conocido que los nervios y el cerebro producen FAS. La obesidad está vinculada con el resultado neurocognitivo adverso, incluyendo funcionamiento cognitivo reducido y enfermedad de Alzheimer. Estudios han demostrado que BMI se relaciona inversamente con el desempaño en todas las pruebas cognitivas y no hubo evidencia de una interacción BMI x edad. Hay una prevalencia incrementada de enfermedad de Alzheimer con la obesidad. Abeta42, un tipo de amiloide que se deposita en pacientes de Alzheimer, se correlaciona con BMI. Personas obesas pueden tener una probabilidad 74% superior de demencia. Otros estudios han demostrado que un vector Ad-5 que se ha utilizado en terapia de genes, provoca inflamación del cerebro. Ad-5 de tipo silvestre se ha reportado que provoca obesidad y hemos notado que un vector Ad-5 que se utiliza para transferencia de genes, retiene su capacidad para estimular síntesis de SREBP-I y FAS en hepatocitos. De acuerdo con esto, estos datos soportan el concepto de que los adenovirus adipogénicos pueden incrementar las enzimas lipogénicas en el cerebro y los nervios, producir ácido graso en exceso y triglicéridos , y resultar en disfunción. Un aspecto de la invención es que la prueba adenovirus adipogénicos puede emplearse para pronosticar disfunción adrenal . También, puede emplearse una vacuna contra adenovirus para evitar disfunción adrenal.

La obesidad se conoce que afecta significativamente la función de las glándulas adrenales. Hay una secreción incrementada de aldosterona, pero sin renina, puede asociarse con hipertensión. Estudios han demostrado que la función adrenal no fue normal en mujeres obesas, pero difirió con la distribución de grasa abdominal. Hormonas adrenales utilizan colesterol como un sustrato para la producción, y con cambios de adenovirus adipogénicos tanto en metabolismo de colesterol como en ácidos grasos intracelulares, el uso de una prueba para detectar adenovirus adipogénicos puede ser un pronosticador de disfunción adrenal. Técnicas inmunoanalíticas de tamizado ejemplares incluyen sin limitación, técnicas de ensayo de neutralización de virus estándar o técnicas de inmunoensayo de enzimas bien conocidas en la especialidad. Técnicas para desarrollar y purificar anticuerpos contra estos virus o sus fragmentos (por ejemplo una proteína de fibra o sus fragmentos) o proteínas (o sus fragmentos) de estos virus para utilizar en estas técnicas de inmunoensayo, pueden prepararse por técnicas convencionales o más bien conocida en la especialidad. En una modalidad específica de la invención, anticuerpos inmuno precipitarán virus de adenovirus o proteínas de adenovirus de solución así como reaccionan con estas proteínas en transferencias Western o inmunotransferencias o geles de poliacrilamida . En otra modalidad específica, anticuerpos detectarán la presencia de adenovirus o proteína de adenovirus en secciones de tejido congelado utilizando técnicas inmunocitoquímicas . Modalidades específicas referentes a métodos para detectar adenovirus o proteínas de adenovirus incluyen ensayos inmunosorbentes enlazados por enzima (ELISA) , radioinmunoensayo (RIA) , ensayos inmunoradiométricos (IRMA) y ensayos inmunoenzimáticos (IEMA) , incluyendo ensayos de emparedado utilizando anticuerpos monoclonales y/o policlonales. Similarmente, las técnicas de ensayo de hibridización de sonda con ácido nucleico utilizadas en estos métodos de la invención serán técnicas estándar (opcionalmente después de amplificación de ADN o ARN extraído de una muestra de sangre, otro fluido corporal, heces, tejido u órgano) utilizando sondas de ácido nucleico (y cebadores, si se emplea amplificación) disponibles por los virus que provocan la obesidad, identificados y revisados y hechos disponibles por la presente invención. Las secuencias de ácidos nucleicos características de estos virus pueden determinarse por técnicas estándar una vez que los virus se aislan convencionalmente y sondas y cebadores que son específicos para los virus y que proporcionan la base para sondas de ácido nucleico y cebadores que pueden emplearse en ensayos basados en ácido nucleico para los virus, se preparan utilizando técnicas convencionales en base a la secuencias.

Por ejemplo, a fin de detectar la presencia de un adenovirus que predispone a un individuo a la obesidad, una muestra biológica tal como sangre, se prepara y analiza por la presencia o ausencia de proteínas de adenovirus, tales como las secuencias de proteínas de revestimiento de fibras Ad-36. Resultados de estas pruebas e información interpretativa se regresan al proveedor del cuidado de la salud para comunicación con el individuo a prueba. Estos diagnósticos pueden realizarse por laboratorios de diagnóstico o en forma alterna se fabrican equipos de diagnóstico y venden a proveedores del cuidado de la salud o a individuos privados para autodiagnóstico . Inicialmente , tamizado involucra amplificación de la secuencia de adenovirus relevante. En una v modalidad específica de la invención, el método de tamizado involucra una estrategia no basada en PCR. Estos métodos de tamizado incluyen métodos de amplificación de etiqueta de dos etapas, que son bien conocidas en la técnica. Tanto estrategias de tamizado basadas en PCR y no PCR pueden detectar secuencias objetivo con un alto nivel de sensibilidad. Una modalidad de la invención se refiere a amplificación de objetivo. Aquí, la secuencia de ácido nucleico objetivo se amplifica con polimerasa. Un método específico que utiliza amplificación dirigida por polimerasa es la reacción de cadena polimerasa (PCR) . La reacción de cadena polimerasa y otros ensayos de amplificación dirigidos por polimerasa pueden lograr más de un aumento de 1 millón de veces en número de copia a través del uso de ciclos de amplificación dirigidos por polimerasa. Una vez amplificado, el ácido nucleico resultante puede ser secuenciado o utilizado como un sustrato para sondas de ADN. Cuando las sondas se emplean para detectar la presencia de las secuencias objetivo, la muestra biológica a analizar, tal como sangre o suero puede ser tratada, si se desea para extraer los ácidos nucleicos. El ácido nucleico de muestra puede ser preparado en diversas formas para facilitar la detección de la secuencia objetivo, por ejemplo desnaturalización, digestión restricción, electroforesis o transferencia de punto. La región objetivo del ácido nucleico analito usualmente debe ser cuando menos parcialmente de una sola hebra para formar híbridos con la secuencia de blanco de la sonda. Si la secuencia es de hebra sencilla natural, no se requerirá desnaturalización. Sin embargo, si las secuencias de doble hebra, la secuencia probablemente requerirá ser desnaturalizada. La desnaturalización puede llevarse a cabo por diversas técnicas bien conocidas en la especialidad. Sonda y ácido nucleico de analito se incuban bajo condiciones que promueven la formación de híbrido estable de la secuencia objetivo en el analito. La región de las sondas que se utiliza para ligar al analito puede hacerse completamente complementaria con la región objetivo del adenovirus de interés y en particular la proteína de revestimiento de fibra. Por lo tanto, son deseables condiciones de alta severidad a fin de evitar falsos positivos. Sin embargo, condiciones de alta severidad se utilizan solo si las sondas son complementarias a regiones del adenovirus. La severidad de hibridización se determina por una cantidad de factores durante hibridización y durante el procedimiento de lavado, incluyendo temperatura, concentración iónica, composición base, longitud de sonda y concentración de formamida. Detección, de haber, del híbrido resultante usualmente se logra por el uso de sondas etiquetadas. En forma alterna, sin embargo la sonda puede no estar etiquetada, pero puede ser detectable por enlace específico con un ligando que se etiqueta, ya sea en forma directa o indirecta. Etiquetas convenientes y métodos para etiquetar sondas y ligandos son bien conocidos en la técnica, e incluyen por ejemplo etiquetas radioactivas que pueden incorporarse por métodos conocidos (por ejemplo traducción de mella o muescado, cebado al azar o fosforilado) , biotina, grupos fluorescentes, grupos quimioluminiscentes (por ejemplo dioxetanos) enzimas, anticuerpos, nanopartículas de oro y semejantes. Variaciones de este esquema básico se conocen en la especialidad e incluyen aquellas variaciones que facilitan la separación de los híbridos para detectarse de materiales extraños y/o que amplifican la señal de la porción etiquetada . Como se notó anteriormente, ensayos de tamizado basados en sin-PCR también se contemplan por esta invención. Este procedimiento hibridiza una sonda de ácido nucleico (o análogo tal como una estructura principal metilfosfonato que reemplaza el fosfodiéster normal) al objetivo de ADN de bajo nivel . Esta sonda puede tener una enzima covalentemente ligada con la sonda, de manera tal que el enlace covalente no interfiere con la especificidad de la hibridización. El complejo de ácido nucleico objetivo-conjugado- sonda-enzima puede entonces aislarse separándolo del conjugado sonda libre y un sustrato se agrega para detección de enzima. Actividad enzimática se observa como un cambio en desarrollo de color o salida luminiscente que resulta en aproximadamente 103 de aproximadamente 106 incremento en sensibilidad. Se conocen en la técnica metodologías de amplificación de etiqueta en dos etapas. Estos ensayos trabajan en el principio de que un solo ligando (tal como digioxigenina , biotina, o semejantes) se conectan a una sonda de ácido nucleico capaz de ligar enlace específico a la región de secuencia de adenovirus de interés. En un ejemplo, el pequeño ligando conectado a la sonda de ácido nucleico se reconoce específicamente por un conjugado de anticuerpo-enzima. En una modalidad de este ejemplo, digioexigenina se conecta a la sonda de ácido nucleico. Hibridización se detecta por conjugado anticuerpo-fosfatasa alcalina que voltea un sustrato quimioluminiscente . En un segundo ejemplo, el pequeño ligando se reconoce por un segundo conjugado ligando-enzima que es capaz de complejar específicamente al primer ligando. Una modalidad bien conocida de este ejemplo son las interacciones de tipo biotina-avidina . También se contempla dentro del alcance de esta invención que los ensayos de sonda de ácido nucleico de esta invención emplean un cóctel de sonda de ácido nucleico capaces de detectar diversas especies de adenovirus. De esta manera, en un ejemplo para detectar la presencia de ad-36, ad-37 y/o ad-5, por ejemplo en una muestra biológica, más de una sonda complementaria de las regiones objetivo de interés en los diversos tipos de adenovirus, puede emplearse. Como comprenderá la persona con destreza, más de una cepa de virus que causa la obesidad puede probarse para simultáneamente en un método de ensayo basado en ácido nucleico o inmunológico probar virus de acuerdo con la invención y pueden ensamblarse equipos para facilitar el llevar a cabo los métodos para un virus particular o una pluralidad de estos. La invención se ha descrito ampliamente e ilustrado con referencia a modalidades representativas descritas anteriormente. Aquellos con destreza en la técnica reconocerán que diversas modificaciones pueden realizarse en la presente invención sin apartarse del espíritu y alcance de la misma. Sin mayor elaboración, se considera que una persona con destreza en la técnica utilizando la descripción precedente puede utilizar la presente invención a su mayor amplitud. Los siguientes ejemplos son solo ilustrativos, y no limitantes del resto de la descripción en forma alguna. EJEMPLOS Ejemplos específicos 1: Muestras de sangre de 502 humanos en poblaciones separadas de tres ciudades: Madison, WI , Nápoles, FL, y Ciudad de Nueva York, NY, fueron medidas para infección de Ad-36. La definición de obesidad fue un BMI mayor que aproximadamente 30 kg/m2 y la población fue dividida en sujetos obesos y no obesos. La prevalencia de anticuerpos Ad-36 en sujetos suero obesos fue aproximadamente 30% y en no obesos fue aproximadamente 11% (es decir, una proporción 3:1) (FIGURA 13) . Cuando los sujetos se dividieron en anticuerpo positivo contra anticuerpo negativo, el anticuerpo positivo se observó que es aproximadamente 9 unidades BMI más pesado (es decir, mayor que aproximadamente 22.68 kg (50 libras)) (p< .001) (FIGURA 14) . Aún más, colesterol en suero y triglicéridos fueron menores en humanos anticuerpo positivos (menos de aproximadamente -35 mg/dl, p<.001), exactamente las mismas reducciones observadas en monos infectados de manera prospectiva. No hubo correlaciones de anticuerpos a Ad-2 o Ad-31 con cualquier composición de cuerpo o colesterol y triglicéridos en suero en humanos, implicando que los efectos de Ad-36 son específicos y no son comunes a todos los adenovirus humanos . Un segundo estudio se realizó en 28 pares gemelos discordantes para anticuerpos Ad-36. Normalmente los gemelos siguen el peso corporal y BMI cercanamente, pero los gemelos anticuerpo Ad-36 positivo fueron más gordos que el co-gemelo anticuerpo Ad-36 negativo (p<.04) (FIGURA 15). En conclusión, estos hallazgos muestran que Ad-36 provoca obesidad en animales y en humanos. Ejemplo específico 2: Evidencia muy fuerte de una asociación de Ad-36 con cáncer proviene de estudios en la University of isconsin. Suero en bancos de 128 sujetos con cáncer de mama y 37 sujetos con cáncer de próstata se obtuvieron, y se ensayaron para anticuerpos Ad-36 utilizando un ensayo de neutralización de suero. Se observó que 51% de los pacientes con cáncer de próstata y 50% de los pacientes con cáncer de mama fueron positivos para anticuerpos Ad-36. Sin embargo, ya que las muestras fueron anónimas, sin datos de obesidad tipo o etapa de cáncer o presencia de metástasis. De los datos en anticuerpos Ad-36 en individuos obesos y no obesos se estimó que aproximadamente 14% de la población en general tuvo anticuerpos Ad-36. De esta manera, hay un aumento casi de 4 veces en la prevalencia de anticuerpos Ad-36 tanto en pacientes de cáncer de mama como de próstata. Ejemplo específico 3: Tejido cáncer de próstata de 18 pacientes se obtuvo y ensayó para ADN Ad-36 por ensayo de reacción de cadena polimerasa encajado (PCR) utilizando cebadores elaborados a secuencias únicas de ADN en el genoma de proteína de fibra Ad-36. Once de los 18 o 61% tuvieron ADN Ad-36 en el tejido de cáncer. La Figura 16 muestra un gel PCR que demuestra la presencia de ADN Ad-36 en tejidos de cáncer de próstata. Como se notó anteriormente, ADN Ad-36 en múltiples tejidos de animales experimentales se encontró, particularmente en tejido adiposo utilizando PCR encajado con cebadores elaborados a partir de secuencias de ADN únicas en el genoma de proteína de fibras Ad-36. La Figura 17 muestra un gel PCR de ADN extraído de tejido adiposo de monos infectados con Ad-36. A todos los tres monos infectados pero ninguno de los controles tuvieron ADN viral presente. Ejemplos específico 4: Este ejemplo muestra que el uso de prueba de laboratorio Ad-36 como un marcador para identificar individuos en riesgo de desarrollar cáncer. Personas con cáncer tienen una prevalencia muy superior de una prueba de laboratorio Ad-36 positiva que pacientes sin cáncer. Probamos a 128 mujeres con cáncer de mama y 37 hombres con cáncer de próstata y comparamos resultados con 502 pacientes sin cáncer. Del total de 165 pacientes de cáncer, 83 (50%) tuvieron una prueba Ad-36 positiva (50% de los pacientes de cáncer de mama y 51% de los pacientes de cáncer de próstata) . Con base en la prevalencia de obesidad en la población de los E.U.A., los datos de los 502 sujetos sin cáncer mostraron que 17% de los sujetos sin cáncer tuvieron una prueba Ad-36 positiva. Si sólo esos sujetos sin cáncer de Wisconsin se consideran (ya que todos los pacientes de cáncer eran de Wisconsin, esta es una mejor comparación) , 14% de los sujetos sin cáncer tuvieron una prueba Ad-36 positiva. De esta manera, casi 4 veces tantos pacientes de cáncer fueron positivos en comparación con los pacientes de cáncer. Ejemplo específico 5: Tejido adiposo de 9 humanos en la autopsia en la University of Wisconsin Hospital se obtuvo y ensayó para ADN Ad-36. Siete de los 9 tuvieron ADN Ad-36 en el tejido adiposo. Estos datos demuestran que ADN Ad-36 puede aislarse de tej ido adiposo humano y de animal y en forma más importante, que la presencia de ADN Ad-36 en tejidos es un marcador para postinfección con Ad-36. Ya que el ADN Ad-36 aparece en múltiples tejidos de animales infectados, parece claro que la viremia inicial resulta en infección de la mayoría de los tejidos del cuerpo. Por lo tanto, como se describió en la Sección de Métodos en el Ejemplo Específico 6, siguiente, tejidos de cáncer o tejido adiposo de cáncer pueden obtenerse de pacientes para probar la presencia de ADN AD-36. Ejemplo Específico 6: Se ensayan muestras para ADN Ad-36 en muestras de tejido de mama y próstata de pacientes de cáncer y pacientes sin cáncer para determinar si la prevalencia de infección con Ad-36 es mayor en pacientes de cáncer. El estado Ad-36 puede estar correlacionado con la presencia de cáncer y puede correlacionarse con la etapa de cáncer, presencia de metástasis y pronóstico de víctimas de cáncer. Una vacuna contra Ad-36 puede evitar cánceres inducidos por Ad-36. Diseño Experimentado: Muestras anónimas de tej ido e información medica completa se obtienen de los bancos de recursos de NCI, la Red de Tejido Humana Cooperativa de NCI (CHTN = Cooperative Human Tissue Network) y el Recurso de Tejido de Cáncer de Mama Cooperativo NCI (CBCTR = Cooperative Breast Cáncer Tissue Resource) . Las muestras se ensayan para ADN Ad-36 por ensayo PCR encajado como se describe a continuación. En forma alterna, si muestras de ADN no están disponibles, pueden ser ordenadas. Si el ADN no se ha extraído de las muestras, puede ser como se describe a continuación. Para evaluar el cáncer de mama, muestras de tejido de cáncer de mama o tejido adiposo cerca de la mama de 100 mujeres con cáncer, se compararon con tejido de cáncer o tejido adiposo de 50 mujeres que se someten a cirugía de mama que no tienen cáncer. Como se notó anteriormente, si tejido a cáncer de mama no está disponible, tejido adiposo cerca de la mama es aceptable. Tejido de mama actual no es crítico ya que el ADN Ad-36 se aparece en todos los tejidos después de infección de manera tal que tejido adiposo es conveniente. Para evaluar cáncer de próstata, muestras de cáncer de próstata de 100 hombres se comparan con tejido de próstata de hombres que se someten a cirugía para hipertrofia prostática benigna (PH = benign prostatic hypertrophy) . Tanto bancos de tejido CNCI tienen información de la edad, estado menopáusico de pacientes mujeres, altura, peso, historia familiar de cáncer de pecho o de próstata, tipo y etapa de cáncer, presencia de metástasis y en algunos casos tiempo de supervivencia. Debido a que el cáncer de mama asociado con obesidad es más predominante en mujeres postmenopáusicas, sujetos sin cáncer se acoplan por igual como sea posible para la edad. Puede esperarse que los pacientes de cáncer de próstata para quienes las muestras obtenidas están en el grupo de mayor edad (>50 años) debido a que ésta es la población en la que el cáncer de próstata y BPH ocurre . Es muy poco probable que tengamos tej idos de pacientes pediátricos ya que los cánceres de mama y próstata son muy raros en ellos. Técnicas de Laboratorio: Los procedimientos que se requerirán para este protocolo se publican en la literatura médica como se entiende por una persona con destreza relevante en la especialidad. Un breve compendio de cada uno se da a continuación: Cultivo de Ad-36: Preparaciones virales se desarrollan en cultivo de tejido como se describe brevemente utilizando células de carcinoma bronquial humano A546. Células A546 se obtienen del American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) . Medio Eagle Esencial Mínimo (MEM) (Cat # M-0643, Sigma Chemicals) sin aminoácidos esenciales, sales de Earle y L-glutamina se emplean para desarrollar células A549. Materiales de trabajo se desarrollan en células A549 utilizando MEM con suero bovino fetal al 10% (FBS) y NaHC03 al 2.9% (v/v) a pH 7.4. Ensayo de unidades formadoras de placa: Títulos de virus Ad-36 se determinan utilizando células A549 para este ensayo. Empezando con 100 µ? de suspensión de virus y 900 ul de medio, se elaboran diluciones en serie 10 veces. Células A549 se desarrollan a confluencia en placas de 6 pozos y 3 pozos se utilizan para cada dilución. 3 pozos se emplearon como el control de blanco, y no se infectan con la suspensión de virus. Medio se retira de cada pozo y 100 ul de suspensión de virus diluidas en serie se transfieren por pipeta a los pozos. Las placas se incuban a 37 grados C agitando suavemente cada 15 minutos. Después de una 1 de incubación, la suspensión viral de los pozos se retira y descarta. Los pozos se revisten con aproximadamente 3 mi de agar al 1% en medio por pozo, con solución antimicótica-antibiótica lx. Las placas se invierten e incuban a 37 grados C por 8 días hasta que aparecen las placas. Después de 8 días, los pozos se tiñen durante la noche con aproximadamente 1 mi de violeta cristal por pozo. El día siguiente, el número de placas formadas se cuenta después de retirar el agar. El número de placas formadas por dilución de suspensión viral empleada da PFU/100 uL de inoculo empleado. Esto se multiplica por 10 para expresar PFU/mL. Dosis de infectividad en cultivo de tejido (TCID50) (66-72) : El título de los materiales de trabajo que provoca un efecto citopático (CPE) en 50% de los pozos se que contienen las células A549 se calculan y expresan como dosis de infectividad de cultivo de tejido (TCID-50) en unidades por mi. TCID-50 de los materiales de trabajo se determinan utilizando diluciones diez veces en serie del material de trabajo de virus. TCID50 se calcula al diluir en serie la solución de material de virus e inocular células con las diluciones para encontrar la recíproca de la más alta dilución de virus que provoca efecto citopático (CPE) en 50% de las células inoculadas. Se calculan títulos después de que las células inoculadas con las diluciones de virus se incuban a 37 grados por 8 días. Ensayo PCR encajado: PCR encajado detecta ADN Ad-36 en muestras biológicas. Como se describió previamente, se diseñaron cuatro cebadores a regiones únicas del gen de proteína de fibras Ad-36 para utilizar en un ensayo de PCR encajado para detección de ADN viral. Secuencias de cebadores: iniciador hacia adelante exterior (S1-GTCTGGAAAACTGAGTGTGGATA) (SEQ ID NO: 1, iniciador hacia atrás exterior (5=- ATCC AAAATCAAATGT AAT AGAGT) (SEQ ID No:2), iniciador hacia adelante interior (5^TTAACTGGAAAAGGAATAGGTA) (SEQ ID NO. 3) , iniciador hacia atrás interior (5=-GGTGTTGTTGGTTGGCTT AGGATA) (SEQ ID No. 4) . ADN se aisla de tejidos de mama y próstata humanos utilizando un Equipo de Tejido QIAamp (Qiagen, Valencia, CA, USA; Cat # 29304) . Controles de PCR negativos son agua y ADN de células A549. Control PCR positivo es ADN de células A-549 infectadas con Ad-36. ADN se desnaturaliza por dos minutos a 95 grados C y somete a 35 ciclos de PCR (94 grados C por 1 min, 55 grados C por 1 min, 72 grados C por 2 min) por incubación a 72 grados C por 5 minutos. Productos PCR se visualizan en un gel de agarosa del 1% con un marcador de tamaño . Este ensayo se desarrolló en la University of isconsin y en ese tiempo las condiciones optimizaron por temperatura, concentración de magnesio y número de ciclos en muestras que consisten de tejidos de animales y humanos y de células 3T3-L1. Muestras de los productos PCR se extraen de los geles y se envían a la University of Wisconsin Biotech Center para asegurar que las secuencias de ADN amplificadas fueran de las regiones objetivo. El Biotech Center confirmó su precisión. Estos procedimientos de control de calidad se repiten para cumplir con las especificaciones de CLIA y buena práctica de laboratorio. El secuenciado de ADN de dos muestras positivas cada una de cáncer de mama y cáncer de próstata y las muestras de ADN de control positivo A549 se realizan para asegurar precisión de las amplificaciones. Análisis estadístico y cálculos de potencias: Asistencia estadística está disponible del Departamento de Ciencias Estadísticas e Investigación de Operaciones (Department of Statistical Sciences and Operations Research) de la Virginia Commonwealth University. Cálculo de potencia: El análisis de potencia se realiza utilizando datos preliminares en la prevalencia de Anticuerpos Ad-36 en la población general contra pacientes de cáncer en Madison, Wisconsin. Se mostró que 50% y 51% pacientes de cáncer de mama y cáncer de próstata respectivamente en la University of Wisconsin Hospital tiene anticuerpos a Ad-36. En una muestra de voluntarios de la población general y el Programa de Tratamiento de Obesidad (Obesity Treatment Program) en la University of Wisconsin, se evaluaron 247 sujetos de los cuales 183 fueron obesos y 64 no fueron obesos . La prevalencia de Anticuerpos Ad-36 fue 20% y 11% respectivamente. La cifra de CDC muestra que aproximadamente 31% de adultos americanos son obesos y 69% no son obesos. Usando éstas cifras, se estimó que la prevalencia de Anticuerpos Ad-36 en la población general de Madison, WI fue 13.8%. De esta manera, la prevalencia de Ad-36 en pacientes de cáncer es casi cuatro veces superior. Utilizando éstas cifras, los cálculos de potencias reveló que 32 sujetos por grupo es necesario para lograr una potencia de 80% al nivel de 0.05 para determinar una diferencia en prevalencia Ad-36 en pacientes de cáncer contra sin cáncer. Aproximadamente 50% de ambos pacientes de cáncer de mama y próstata se puede esperar que sean positivos a anticuerpo Ad-36 con base en los datos preliminares. Sin embargo, puede ser posible que la prevalencia de Ad-36 pueda ser menor en las muestras en bancos de los bancos de tejidos de NCI (o bancos de tejido Asterand) y esto afectará significativamente la potencia. Por lo tanto, 100 sujetos de cáncer y 50 sujetos sin cáncer pueden ser seguros que tengan suficiente potencia.

Análisis estadístico: Análisis Chi cuadrado se utilizará para determinar si la prevalencia de ADN Ad-36 en sujetos de cáncer es mayor que en sujetos sin cáncer. El número de sujetos es relativamente pequeño para análisis de regresión múltiple y no esperamos ver correlaciones significantes a menos de que el efecto sea poderoso. Ejemplo Específico 7: EJEMPLO 8 La secuencia de ADNc del genoma Ad-36 se cribó contra todas las secuencias ADNc y dos secuencias de base 25 y una secuencia de base 28 se encontraron, todos que se encuentran en la secuencia de codificación de fibras que fueron únicas para Ad36. Estas tres secuencias son como sigue: SEQ ID NO : 5 : 5 ' -AGTTGAAACAGCAAGAGACTCAAAG SEQ ID NO: 6 5 ' -GGTACTGGATCAAGTGCACATGGAG SEQ ID NO: 7 5'- TTGAAACAGCAAGAGACTCAAAGCTAAC secuencia 3 anterior se empleó una sonda para Ad-36 en un ensayo de hibridización de sonda de ácido nucleico convencional de ADN aislado de cuatro gallinas, dos de las cuales se infectaron con el virus y se volvieron obesas y dos de las cuales no se infectaron y no fueron obesas. ADN que hibridiza a las sondas se observa con sólo el ADN de dos gallinas infectadas. El ensayo involucró detección directa y se sometió por electroforesis capilar utilizando fluorescencia inducida por láser para detección. Más particularmente, una matriz de poliacrilamida reemplazable se empleó en la separación y detección electroforética empleando un sistema dual con etiquetado 5' del intercalador oligo y tiazol naranja en el sistema amortiguador . La persona con destreza comprenderá que sondas y cebadores cuando se utiliza también amplificación, de entre aproximadamente 15 y 30 base en longitud se emplean ventajosamente para proporcionar especificidad y sensibilidad conveniente. Métodos de amplificación que utiliza PCR y sus variantes pueden emplearse, como es bien conocido en la especialidad. Los ejemplos dados anteriormente son sólo ilustrativos y no se pretende que sean una lista exhaustiva de todas las modalidades, aplicaciones o modificaciones posibles de la invención. De esta manera, diversas modificaciones y variaciones de los métodos y sistemas descritos de la invención serán aparentes para aquellos con destreza en la técnica sin apartarse del alcance y espíritu de la invención. Aunque la invención se ha descrito en conexión con modalidades específicas, habrá de entenderse que la invención como se reivindica no deberá estar individualmente limitada a estas modalidades específicas. Sin duda, diversas modificaciones de los modos descritos para llevar a cabo la invención que son evidentes para aquellos con destreza en biología molecular o campos relacionados, se pretenden dentro del alcance las reivindicaciones anexas. Las descripciones de todas las referencias y publicaciones citadas anteriormente se incorporan expresamente por referencias en sus totalidades en la misma proporción, como si cada uno se incorporará individualmente por referencia.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para pronosticar si un sujeto está predispuesto a desarrollar una enfermedad relacionada a adenovirus adipogénico, el método se caracteriza porque comprende las etapas de: obtener una muestra del sujeto; y determinar si el sujeto está infectado con el adenovirus adipogénico .
2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de determinar si el sujeto está infectado con el adenovirus adipogénico, comprende las etapas de: cribar la presencia de anticuerpos específicos para el adenovirus adipogénico en la muestra; y determinar la presencia de anticuerpos específicos al adenovirus adipogénico en la muestra.
3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el adenovirus adipogénico es uno o más virus adipogénicos seleccionados del grupo que consiste de adenovirus tipo 5, adenovirus tipo 35 y adenovirus tipo 37.
4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la enfermedad relacionada adipogénica es una enfermedad seleccionada del grupo que consiste de cáncer, cáncer de próstata, cáncer de mama, disfunción pancreática, enfermedad pancreática, diabetes, enfermedad pulmonar, disfunción del sistema nervioso y cerebro y disfunción adrenal .
5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el sujeto es un humano.
6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el sujeto es un animal. 7. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque los anticuerpos en la etapa de determinación son específicos a uno o más péptidos codificados por las secuencias de ácidos nucleicos seleccionados del grupo que consiste de SEQ ID NO.: 5, SEQ ID NO.: 6 y SEQ ID NO.:
7.
8. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la etapa de cribar se realiza al utilizar un método seleccionado del grupo que consiste de ensayos de neutralización del suero y ELISA.
9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la muestra se elige del grupo que consiste de una muestra biológica, fluido corporal, una muestra de tejido, una muestra de órgano, heces, sangre, saliva y cualquier combinación de las mismas.
10. Un método para evitar enfermedad relacionada con adenovirus adipogénico en un sujeto, caracterizado porque comprende: administrar una vacuna de adenovirus anti-adipogénico al sujeto.
11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la vacuna de adenovirus anti-adipogénico comprende como una dosis efectiva de un ingrediente activo que comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de un adenovirus tipo 36 exterminado, un adenovirus tipo 36 inactivado, una secuencia de proteínas o péptidos que codifica una proteína de revestimiento de adenovirus 36 o su fragmento, una secuencia de ácidos nucleicos que codifica a una proteína de revestimiento de adenovirus tipo 36 o su fragmento, una proteína de adenovirus tipo 36, un virus no patogénico genéticamente modificado y un virus no patogénico.
12. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la vacuna de adenovirus anti-adipogénico se administra en forma intranasal, oral, intravenosa, intramuscular, subcutánea y/o peritoneal .
13. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el sujeto es un humano.
14. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el sujeto es un animal.
15. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la enfermedad relacionada con adenovirus adipogénico es una o más enfermedades seleccionadas del grupo que consiste de cáncer, cáncer de próstata, cáncer de mama, disfunción pancreática, enfermedad pancreática, enfermedad pulmonar de diabetes, disfunción del sistema nervioso y cerebro y disfunción adrenal.
16. Método para pronosticar agresividad de cáncer en un sujeto que tiene una anormalidad compatible con un tumor, el método se caracteriza porque comprende las etapas de: obtener una muestra del sujeto; ensayar la muestra para determinar si el sujeto está infectado con un adenovirus adipogénico; y pronosticar una forma más agresiva de cáncer en un sujeto infectado con un adenovirus adipogénico respecto a un sujeto no infectado con un adenovirus adipogénico.
17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la etapa de ensayar la muestra comprende las etapas de: cribar la presencia de anticuerpos específicos al adenovirus adipogénico en la muestra; y determinar la presencia de anticuerpos específicos al adenovirus adipogénico en la muestra.
18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el adenovirus adipogénico es uno o más virus adipogénicos seleccionados del grupo que consiste de adenovirus tipo 5, adenovirus tipo 35 y adenovirus tipo 37.
19. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el cáncer se elige del grupo que consiste de mama, de próstata, de útero, de ovarios, de colón, de riñon, de páncreas y de pulmón.
20. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el sujeto es un humano.
21. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el sujeto es un animal.
22. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque los anticuerpos en la etapa de determinación son específicos a uno o más péptidos codificados por las secuencias de ácido nucleico seleccionados del grupo que consiste de SEQ ID NO.: 5, SEQ ID NO . : 6 y SEQ ID NO. :7.
23. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la etapa de tamizado se realiza al utilizando un método seleccionado del grupo que consiste de un ensayo de neutralización de suero y ELISA.
24. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la muestra se elige del grupo que consiste de una muestra biológica, de fluido corporal, una muestra de tejido, una muestra de órgano, heces, sangre, saliva y cualquier combinación de las mismas.
25. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la forma más agresiva de cáncer en el sujeto infectado con el adenovirus adipogénico respecto al sujeto no infectado con el adenovirus adipogénico, se elige del grupo que consiste de un grado superior de tumor, volumen de tumor mayor, etapa clínica de avance, calificación Gleason incrementada y displasia de grado superior.