PT86054B - Instrumento automatizado para a analise de amostras de pacientes - Google Patents

Description

REQUERENTE: GENETIC SYSTEMS CORPORATION, norte-americana, industrial, com sede em 3005 Firts Avenue, Seattle, Washington 98121, Estados Uni. dos da América.

EPÍGRAFE: INSTRUMENTO AUTOMATIZADO PARA A ANÁLISE

DE AMOSTRAS DE PACIENTES

INVENTORES: Paul C. Harris e Curti s C. Genstler.

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883.

Estados Unidos da América, em 31 de Outubro de 1986, sob o n^s. 925,316.

INPI. MOO. 113 RF 18732

GENETIC SYSTEMS CORPORATION

INSTRUMENTO AUTOMATIZADO PARA A ANALISE DE AMOSTRAS DE PACIENTES

Campo Técnico

A presente invenção refere-se a processos e aparelhos para a realização de ensaios tipo (ELISA - Enzyme-linked immunoabsorbent assay - Análise imuno absorvente ligada a enzimas). Mais especificamente, a invenção refere-se a um aparelho automático para a realização de ensaios ELISA.

Técnica básica

Os progressos recentes na biotecnologia permitiram o desenvolvimento de ensaios ELISA para vários agentes infecciosos. Tais ensaios tornaram-se cada vez mais importantes, em especial para efeitos de filtração de sangue, para manter a integridade dos bancos de sangue nos hospitais. A introdução do erro humano, a velocidade limitada das técnicas de processamento manual e as limitações de equi pamento impediram que os ensaios ELISA atingissem todo o seu potencial de fiabilidade. Além disso, a preparação e a realização da análise podem ser fastidiosas, quando houver que

ensaiar um grande número de amostras de pacientes.

Tipicamente, os ensaios ELISA baseiam-se /0} na utilização de placas microtiter'·—' que possuem cavidades de reacção revestidas com um primeiro reagente. A amostra do paciente, sob a forma de soro ou plasma suspeitos de conter um analito (isto ê um anticorpo ou antigénio) que é susceptível de ligação especifica com o primeiro reagente, ê adicionada às cavidades. Após um tempo de incubação, removem -se a amostra do paciente e qualquer analito não ligado e lavam-se cuidadosamente as cavidades de reacção. Adiciona-se depois um conjugado ”reporter”/segundo reagente às cavidades e faz-se a incubação. No fim deste segundo período de incubação retira-se o conjugado não ligado, lavam-se de novo as cavidades e adiciona-se um substrato cromogénico e deixa-se incubar durante um terceiro tempo de incubação. Desenvolver-se-á então uma cor em proporção com a quantidade de analito que se ligou ao primeiro reagente. No fim do terceiro tempo de incubação, interrompem-se as reacções de cada cavidade de reacção por adição de uma solução ácida. A densidade óptica do fluido resultante indica a quantidade de analito ligado, que é um indicador da quantidade do agente infeccioso ou do anticorpo para o mesmo nas amostras. Incluem-se na análise controlos positivos e negativos para determinar a absorvência de corte, que indica se a amostra é positiva ou negati va.

As reacções químicas dependem do tempo, da temperatura e da concentração. Os processos manuais de condução dos ensaios ELISA conduzem invariavelmente a tempos de /

ι processamento diferentes para amostras diferentes. Por exemplo, numa placa Microtiter® contendo 96 cavidades de reacção, têm que ser preparadas 96 amostras de pacientes. Num ensaio preparado para a detecção de anticorpos do síndroma da imunodeficiência adquirida (SIDA), as amostras dos pacientes têm primeiro que ser diluídas, em duas fases, com um diluente (1 : 400) antes de se poder adicionar a diluição resultante às cavidades de reacção. 0 técnico tem também que identificar cuidadosamente qual é a amostra do paciente que está a ser colocada em qual cavidade de reacção e regista usualmente esta informação numa grelha que identifica as coordenadas das cavidades de reacção. A preparação das amostras dos pacientes, a transferência das amostras (ou de amostras diluídas) e a identificação das amostras podem levar até uma hora ou mais para uma única análise. Por conseguinte, a reacção entre o primeiro reagente e os analitos na cavidade de reacção carregada em primeiro lugar pode ter começado substancialmente antes da reacção na última cavidade de reacção a ser carregada, resultando daí o que é conhecido por erro entre a dianteira e traseira.

Podem verificar-se variações semelhantes nos tempos de reacção, especialmente se as cavidades de reacção forem lavadas manualmente e/ou carregadas manualmente com conjugado repórter/segundo reagente, substrato cromogénico e solução de interrupção. Quando se utilizarem lavadores de placas automáticos, verificou-se que os lavadores actualmente disponíveis não esvaziam completamente de fluido as cavidades de reacção, exigindo que as mesmas sejam enxutas pelo técnico.

- 4 Um outro problema na preparação manual das placas Microtiter^ é a contaminação cruzada entre as amostras dos pacientes. Tipicamente, os técnicos utilizam pipetas para retirar a amostra do paciente dos tubos de ensaio (e para a diluição dessas amostras) que têm pontas descartáveis. Se, inadvertidamente, a amostra do paciente for retirada demasiadamente para o interior da pipeta, a rejeição da ponta da pipeta não impede a contaminação da amostra seguinte, ê muitas vezes difícil para um técnico detectar este erro ou identificar posteriormente um resultado anómalo do ensaio como sendo consequência deste erro de procedimento.

As variações da temperatura durante os tempos de incubação entre as cavidades numa placa proporcionam também variações substanciais nas velocidades de reacção nas cavidades de reacção e, por conseguinte, na densidade óptica do fluido nelas contido. Tipicamente, as placas líicrotiter são incubadas em fornos que são essencialmente pequenos. Estes incubadores baseiam-se primariamente na convexão para distribuir o calor uniformemente entre as cavidades de reacção. Ê bem conhecido que se verifica nos incubadores um significativo “efeito dos bordos. Este efeito dos bordos é o resultado de um gradiente de temperatura entre o centro e os bordos da placa que é devido à ineficácia das correntes de convexão para aquecer uniformemente a placa.

problema mais sério para conseguir a fiabilidade e a capacidade de repetição do ensaio verificou-se ser a identificação errada das amostras. Este erro ocorre primariamente devido a erros de transcrição e a erros de transferên-

cia das amostras. No primeiro caso, ê sabido que os técnicos registam algumas vezes incorretamente a localização de uma amostra de um paciente num suporte de tubos de ensaio. No segundo caso, sabe-se que os técnicos transferem amostras de pacientes de um tubo de ensaio de amostras para a cavidade de reacção errada na placa Microtiter Embora tenham sido desenvolvidos processos de transcrição e técnicas de transferência para evitar estes erros, sabe-se que eles continuam a existir. Ê possível que a natureza fastidiosa da preparação e transferência de amostras possa levar os técnicos a não prestar toda a atenção à tarefa que têm entre mãos. Uma vez que se tenha verificado um erro de transcrição ou de transferência de uma amostra, é muitas vezes impossível para o técnico reconstituir o passo ou os passos dados para rectificar o engano. Muitas vezes, o facto de se ter verificado um erro pode não ser detectado antes de se ter completado o ensaio e os resultados positivos tornados impossíveis de repetir num ensaio de verificação subsequente. Neste caso, tem que refazer-se toda a análise.

Em face do exposto, há uma necessidade de um processo e um aparelho que reduzam substancialmente a possibilidade de erro humano, que aumentem a precisão, a velocidade, e a fiabilidade dos ensaios deste tipo e que vençam as limitações de eficácia do equipamento actualmente disponível.

Descrição da Invenção

A presente invenção compreende um aparelho automatizado que utiliza processos que identificam positivamente

e mantêm a identidade de um certo número de amostras de pacientes contidas em recipientes de amostras individuais. O aparelho prepara automaticamente diluições de amostras de pacientes e transfere as amostras de pacientes e/ou as diluições das amostras de pacientes para uma ou mais placas Microtiteí^ /n\

As placas Microtitersão processadas por uma linha de processamento que utiliza um processamento paralelo/série. Isto ê, são processadas simultaneamente todas as cavidades de reacção numa fiada, em ambas as placas Microtiter®.

De acordo com uma forma de realização preferida, processa-se uma fiada de 8 cavidades de reacção de quatro em quatro minutos. Por conseguinte, numa placa Microtiter® contendo doze fiadas, com oito cavidades de reacção em cada fiada, a diferença máxima dos tempos de processamento entre quaisquer duas cavidades de reacção ê de apenas quatro minutos. As cavidades de reacção com posições correspondentes em fiadas adjacentes têm tempos de processamento iguais. As placas Microtiter® são avançadas por incrementos ao longo de uma linha de processamento que inclui um incubador. Deste modo, cada fiada na placa fica exposta às mesmas secções do incubador durante o mesmo intervalo de tempo que todas as outras fiadas, sendo assim minimizado o efeito dos bordos.

A linha de processamento tem estações de processamento para a lavagem simultânea e para a adição simultânea de reagentes a cada cavidade de reacção numa fiada. As estações de processamento são móveis relativamente ao incubador de modo que pode-se variar os tempos de incubação em conformidade com o tipo de ensaios que estão a ser efectuados.

f

Um sistema de controlo controla o instrumento, permitindo a variação dos tempos de incubação, da quantidade dos reagentes adicionados, das diluições e de outras fases do processamento.

instrumento tem um fotodensímetro na extremidade da linha de processamento para determinar as densidades ópticas de fluido nas cavidades de reacção para determinar se as amostras dos pacientes são positivas ou negativas. Podem usar-se vários filtros com o fotodensímetro, escolhidos pelo sistema de controlo de acordo com o tipo de análise que está a ser efectuada.

De acordo com uma forma de realização preferida, o instrumento tem duas linhas de processamento que permitem realizar simultaneamente dois ensaios diferentes.

Breve descrição dos desenhos

As figuras dos desenhos representam:

A fig. 1, uma vista em perspectiva isométrica do instrumento de análise de amostras de pacientes automatizado segundo a presente invenção;

A fig. 2, uma representação esquemática do instrumento representado na fig. 1, que inclui uma estação de carga, um computador e um módulo eléctrónico de operação que funciona como interface entre o instrumento e um computador programável convencional;

A fig. 3, uma vista de lado do instrumento representado na fig. 1, com uma parte do instrumento removida e

- 8,5 um porta-tubos de ensaio no instrumento;

A fig. 4, uma vista em planta do instrumento representado na fig. 1 com uma parte do instrumento removida;

A fig. 5, um corte parcial em alçado, sendo o corte feito de uma maneira geral pela linha (5-5) da fig. 4;

A fig. 6, uma vista ampliada em corte de um canto inferior do porta-tubos de ensaio e da almofada do interruptor na estação de carga;

A fig. 7» uma vista ampliada em corte de um canto inferior do porta-tubos de ensaio em posição no instrumento, sendo o corte feito geralmente ao longo da linha (7-7) da fig. 4;

A fig. 8, uma vista em perspectiva isométrica de uma placa Microtiter® convencional com uma das linhas de cavidades de reacção retirada;

A fig. 9, uma vista em perspectiva isomérida ampliada de um mecanismo de retroacção indicador de posição;

A fig. 10, uma vista parcial em corte ampliada (§) da placa Microtiterrepresentada na fig. 8;

A fig. 11, uma vista em perspectiva de uma pipeta automática e do sistema de carga da pipeta associado;

A fig. 12, uma vista em corte parcial, ampliada, de um tubo de ensaio de amostras de pacientes contendo a amostra de um paciente com a ponta da pipeta nele introduzida;

A fig. 13, uma vista em perspectiva isométrica de ⁹ 7 __ / ~ Λ. /-, uma de duas estações de processamento idênticas;

A fig. 14, uma vista com corte ampliada, sendo o corte feito pela linha (14-14) da fig. 13;

A fig. 15, uma vista com corte ampliada, sendo o corte feito pela linha (15-15) da fig. 13;

A fig. 16, uma representação esquemática de um sistema ôptico usado numa porção fotodensimêtrica segundo a presente invenção;

A fig. 17, uma representação esquemática de uma porção do fotodensimetro; e

A fig. 18, uma vista em perspectiva parcial ampliada do porta-tubos de ensaio, da estação de carga e do escantilhão das taças de diluição.

Melhor forma de realização da presente invenção

Representa-se esquematicamente um instrumento automatizado de análises de pacientes segundo a presente invenção /referência (10) na fig. 27. 0 instrumento tem quatro componentes principais, constituídos por um instrumento principal (12), como se vê na fig. 1, um sistema de controlo por computador (14), representado na fig. 2, um módulo electrónico de operação (16) e uma estação de carga de porta-tubos de ensaio(18). 0 instrumento está adaptado para processar automaticamente dois ensaios diferentes tipo ELISA de um conjunto de amostras de pacientes. 0 instrumento elimina virtualmente resultados irreprodutíveis ELISA devidos a erros humanos. 0 instrumento também acelera o procedimento dos ensaios, reduz o tédio dos operadores e diminui a variabilidade de todo o

processo de ensaio.

Vista geral

Uma vista geral breve sobre o funcionamento do instrumento facilitará o entendimento da descrição pormenorizada dada mais adiante. Com referência às fig. 1 e 2, o ins trumento principal (12) tem um transportador (20) de porta-tubos de ensaio que faz progredir um porta-tubos de ensaio (22) para o interior do instrumento principal (12). 0 instrumento principal tem também duas linhas (24) e (26) de processamento de placas Microtiter® que aceitam placas Microtite £ convencionais. Uma placa iíicrotiter ®(28) está ilustrada na fig. 2 numa das linhas de processamento (24) de placas Micro$ titer que está também representada na fig. 2. Deve compreender-se que a linha de processamento (26) de placas Microti(S) ter é idêntica à linha (24) de processamento e, por isso, foi excluída da representação da fig. 2.

Os tubos de ensaio (30) contendo uma amostra (usualmente de soro ou plasma) de pacientes são primeiramente identificados pelo nome ou número de identificação do paciente para o instrumento (10), por um leitor de código de barras (32) ligado ao sistema de controlo por computador (14) ou faz-se a introdução manual no sistema de controlo por computador, através de um teclado (34). Tanto o técnico como o sistema de controlo por computador podem seleccionar um local do receptâculo desejado no porta-tubos de ensaio (22), e o sistema de computador (14) dá então instruções ao técnico, por meio de um visor (36), para introduzir o tubo de ensaio iden11

tificado (31) (fig. 2) no local de receptáculo desejado no porta-tubos de ensaio. Durante este processo, o porta-tubos de ensaio é colocado numa almofada (38) da estação de carga, como se mostra na fig. 18, que funciona como sensor da recepção do tubo de ensaio identificado na posição desejada no receptáculo .

Na forma de realização preferida, o sistema de controlo por computador selecciona as posições de receptáculo desejadas atribuindo os tubos de ensaio identificados a uma localização na matriz no porta-tubos de ensaio, num padrão regular com o qual o técnico está familiarizado. Por exemplo, as linhas e colunas numa placa Microtiter^k—^J sao tipicamente designadas por colunas A a H e linhas 1 a 12. A primeira posiçao numa placa Microtiter—⁷ é portanto (A,l). 0 porta-tubos de ensaio (22) é disposto com os receptáculos (40) dos tubos de ensaio em posições da matriz idênticas, pré-seleccionando portanto o sistema de controlo por computador (14) as posições desejadas por incrementos das coordenadas das colunas e das linhas para encher o porta-tubos de ensaio, usualmente numa progressão lógica de linha por linha.

operador/técnico recebe no visor (36) uma verificação visual e audível de que o tubo de ensaio identificado foi de facto recebido no local do receptáculo escolhido ou pré-seleccionado desejado. Isso pode conseguir-se por programação do sistema de computador para visualizar um carácter tal como 0 para a localização desejada seleccionada ou pré-seleccionada e um X para os locais que já receberam tubos de ensaio. Quando o tubo de ensaio identificado for introdu- 12

- / /

zido no receptáculo na posição desejada, o carácter 0 transforma-se no carácter X e o sistema de computador gera de preferência um som audível de verificação. Uma vez os tubos de ensaio recebidos no porta-tubos de ensaio (22) eles não podem ser removidos pelo operador/técnico de modo que as coordenadas da sua posição manter-se-ão inalteradas durante todo o processo de ensaio.

Se o tubo de ensaio tiver sido introduzido num receptáculo diferente do local desejado, o carácter 0 não se transformaria num carácter Σ, nem seria fornecido um sinal audível. Além disso, o sistema de controlo por computador está programado para impedir a identificação de um tubo de ensaio subsequente até que o tubo anteriormente identificado (31) tenha sido detectado como recebido no receptáculo no local desejado no porta-tubos de ensaio. Deste modo, um operador/técnico não pode prosseguir outras identificações de tubos de ensaio até ter sido apropriadamente posicionado o tubo de ensafo identificado no porta-tubos de ensaio. Uma vez o porta-tubos de ensaio completamente carregado com tubos de ensaio identificados, o porta-tubos de ensaio é transferido para o transportador (20) de porta-tubos de ensaio no instrumento principal (12).

transportador (20) de porta-tubos de ensaio faz avançar o porta-tubos de ensaio (22) até ser detectada a primeira fiada ou linha de tubos de ensaio como estando directamente por baixo de uma estação de transferência, indicada globalmente pela referência (44). A estação de transferência transfere (e, se necessário, dilui) a amostra do paciente

- 13 -/ t

__-~-i /

I dos tubos de ensaio (30) identificados para cavidades de ~ (r) reacção (46) correspondentes da placa Microtiter(28). De pois de uma fiada de amostras de pacientes de tubos de ensaio (30) identificados ter sido automaticamente transferida para cavidades de reacção (46) correspondentes na placa Microtiter ® (28), faz-se avançar a primeira a

ter no sentido do processamento por fiada da placa Microticima de uma primeira extremidade (48) de uma superfície de incubação alongada (50). A superfície de incubação tem uma segunda extremidade (51) afastada da primeira extremidade. A transferência de amostras dos pacientes de uma fiada de tubos de ensaio para uma fiada de cavidades de reacção (incluindo a diluição, se quatro minutos. Por conseguinte, uma linha de processamento (24) de placas Microtiter® tem transportador (52) de placas Microtiter que faz avançar (R) placas Microtiter por incrementos equivalentes à largunecessária) leva menos um as de ra entre centros de uma fiada de cavidades de reacção, de quatro em quatro minutos.

Depois de uma amostra de paciente (ou uma sua diluição) ter sido transferida para uma cavidade de reacção correspondente, lava-se a ponta da estação de transferência numa estação de lavagem (45), como se descreverá adiante mais em pormenor.

A linha de processamento (24) de placas Microtiter ® tem uma primeira e uma segunda estações de processamento (54) e (56), afastadas uma da outra e em relação à primeira extremidade (48) da superfície de incubação alongada (50), para definir um primeiro e um segundo intervalos de tempo de

- 14 -/ ✓ incubação. As estações de processamento são móveis uma em relação à outra, por incrementos iguais à largura de uma fiada ^distância percorrida pelo transportador (52) de placas Microtiter® de quatro em quatro minutos/ de modo a proporcionar meios para poder fezer varia? os tempos de incubação para se adaptarem ao ensaio particular que está a ser realizado.

A primeira estação de processamento realiza um certo número de funções. As cavidades de reacção (46) estão inicialmente revestidas com um primeiro reagente que é susceptivel de se ligar com um analito que se suspeite estar presente nas amostras dos pacientes. Depois da incubação das amostras dos pacientes e do primeiro reagente durante o primeiro tempo de incubação /definido pelo tempo necessário para percorrer a distância entre a primeira extremidade (48) da superfície de incubação alongada (50) e a posição da primeira estação de processamento (54).7, a estação de processamento remove simultaneamente a amostra do paciente e qualquer analito não ligado de cada uma das cavidades de reacção numa fiada. Então, a primeira estaçao de processamento lava completamente e em simultâneo todas as cavidades de reacção na fiada e depois, sequencialmente, adiciona uma quantidade pré-determinada de um conjugado de ”repórter”/segundo reagente a cada cavidade de reacção da fiada.

Para efectuar a lavagem, primeiramente removem-se a amostra do paciente e o analito não ligado das cavidades de reacção na fiada, através de um tubo de aspiração (58) que se esvazia para um recipiente â prova de risco biológico (60), contendo uma solução de hipoclorito de cálcio. 0 refe-

rido recipiente é mantido sob uma pressão ligeiramente negativa (designada como atmosférica) por meio de uma bomba de vácuo (62).

Cada uma das cavidades de reacção na fiada é depois lavada com uma solução de lavagem contida numa garrafa (64) da solução de lavagem, através de um tubo de lavagem (66) por meio de uma bomba de líquido (68) pulsatôria, operada por uma bobina magnética. A solução de lavagem ê aspirada das cavidades de reacção como atrás se descreveu.

A primeira estação de processamento adiciona então sequencialmente o conjugado reporter/segundo reagente que reagiu proveniente de uma garrafa do conjugado (70), através de um tubo do conjugado (72). A sequência aspiração/ /lavagem/adição de conjugado pode efectuar-se em menos de um minuto. 0 reagente conjugado é depois incubado durante o segundo tempo de incubação, que é definido como sendo o tempo necessário para percorrer a distância entre a primeira estação de processamento (54) e a segunda estação de processamento (56).

Quando ã^: prinsira fiada:âff cavidades de reacção (46) chega à posição ocupada pela segunda estação de processamento (56), começa uma sequência de acontecimentos semelhante à sequência de acontecimentos que ocorreram na primeira estação de processamento. 0 conjugado ^,,reporter/segundo reagente não ligado é simultaneamente retirado de cada uma das cavidades de reacção na fiada através do tubo de aspiração (74) e é recebido num recipiente à prova de riscos biológicos (60). Todas as microcavidades na fiada são depois lavadas simultaneamente /

- 16 com solução de lavagem proveniente da garrafa (64) da solução de lavagem, por meio de uma segunda bomba de líquido (76) accionada magneticamente, através de um tubo de lavagem (78). Adiciona-se depois, sequencialmente, uma quantidade pré-deter minada de um substrato cromogénico a cada uma das cavidades na fiada, proveniente de uma garrafa de substrato cromogénico (80), através de um tubo de substrato (82). A remoção do conjugado repórter/segundo reagente de cada cavidade de reacção na fiada, a lavagem de cada cavidade de reacção na fiada e a adição de uma quantidade pré-determinada de substra to cromogénico a cada cavidade de reacção na fiada podem realizar-se em menos de dez segundos.

Após uma terceira incubação relativamente curta, fornece-se sequencialmente uma solução de paragem contida numa garrafa da solução de paragem (84) a cada uma das cavidades de reacção na fiada, através do tubo da solução de paragem (86). A adição da solução de paragem pode fazer-se em menos de cinco segundos.

Depois de se adicionar o reagente cromogénico e se deixar a placa Micro titer® incubar durante o terceiro tempo de incubação, desenvolver-se-á uma cor em proporção com a quantidade de analito ligado presente. A adição da solução de paragem no fim do terceiro tempo de incubação interrompe todas as reacções na fiada de cavidades de reacção.

Um fotodensímetro (88) vertical e móvel está situado numa extremidade de saída (90) da linha de processamento (24) de placas Microtiter®. 0 fotodensímetro determina a densidade óptica da solução em cada cavidade de reacção de

uma fiada para comprimentos de onda específicos. Para algumas análises, por exemplo LAV, esta informação é então comparada pelo sistema de controlo por computador (14) a valores de absorvência para controlo de positivo e negativo incluídos na análise das placas Microtiter®. Com base nesta comparação, o sistema de controlo por computador indicará no visor (36) os resultados dos ensaios para cada amostra dos pacientes contida nos tubos de ensaio (30) identificados, como sendo positivos ou negativos. Para algumas análises, se se verificar um resultado positivo para qualquer amostra de um pa ciente, o ensaio tem de ser repetido para essa amostra individual.

Como será evidente para os entendidos na matéria, uma vez o porta-tubos de ensaio (22) transferido para o transportador (20) de porta-tubos de ensaio, pode ser identificado e posicionado um segundo conjunto de tubos de ensaio com amostras dos pacientes, em receptáculos apropriados num segundo porta-tubos de ensaio (não representado) colocado na almofada (38) da estação de carga agora vaga.

Ê importante notar que, uma vez os tubos de ensaio (30) com as amostras dos pacientes identificados para o sistema de controlo por computador (14) e o porta-tubos de ensaio completamente carregado (22) transferido para o transportador (20) de porta-tubos de ensaio, não é necessária qual, quer intervenção humana ulterior para completar o ensaio. Por conseguinte, elimina-se virtualmente a possibilidade de impre cisões dos resultados devidas a erro humano. Além disso, a variação máxima do tempo de reacção entre quaisquer duas

amostras dos pacientes (erro da dianteira para a traseira) é de quatro minutos, variação esta que ê considerada insignificante. Ainda, o processamento paralelo/série das fiadas de cavidades de reacção minimiza as variações de temperatura e de outros processamentos de fiada para fiada, pois cada fiada está sujeita às mesmas condições de processamento.

Descrição pormenorizada de utilização do ensaio

ELISA para anticorpos do LAV

A descrição pormenorizada seguinte utiliza um ensaio ELISA para o anticorpo LAV (vírus associado às linfoade nopatias)produzido por Genetic Systems, Inc., Seattle, Washington, e vendido sob a designação comercial LAV EIA^m. 0 ensaio LAV ElA^m da Genetic Systems é produzido a partir do vírus propagado numa linha de células CEM. Faz-se a cultura da linha de células injectadas e purifica-se o vírus por centrifugação. 0 concentrado virai é desmembrado e inactivado usando um agente caotrópico e o aquecimento antes do revesti(r) mento das cavidades de reacçao das placas Micro ti ter'-Λ A de_s crição pormenorizada que se segue também descreve a utilização do instrumento (10) com um ensaio ELISA para a detecção do antigénio de superfície da hepatite B, produzido por Connaught Laboratories Ltd., Willowdale, Ontário, Canadá.

Deve entender-se que estes exemplos se destinam apenas a ilustração. 0 instrumento (10) de análise de amostras de pacientes automatizado ê altamente versátil e pode ser adaptado para efectuar um certo número de outros ensaios do tipo ELISA.

A forma de realização preferida foi desenvolvida

- 19 (R) para processar independentemente placas Microtiterpreparadas para a detecção do anticorpo LAV e o antigénio de superfície da hepatite B. Estes dois ensaios são particularmente importantes nos programas de filtração de sangue para hospitais e outras instituições. Como será mais claramente compreendido a partir da descrição que se segue, o aparelho pode ser ajustado e modificado para realizar uma variedade de outros ensaios e de ensaios que foram já desenvolvidos.

Como atrás se estabeleceu, o instrumento (10) de análise de amostras de pacientes automatizado tem quatro componentes principais: o instrumento principal (12), o sistema de controlo por computador (14), o módulo electrónico de serviço (16) e a estação de carga de porta-tubos de ensaio (18). 0 sistema de controlo por computador serve para coordenar várias acções do instrumento principal (12) e serve como memória das localizações das amostras dos pacientes. 0 módulo electrónico de serviço (16) converte os sinais digitais do sistema de controlo por computador em sinais de accionamento analógicos para os vários motores e sistemas no instrumento principal (12). 0 módulo electrónico de serviço também converte os sinais analógicos provenientes dos sensores de retroacção e de outros detectores no instrumento principal em sinais digitais para utilização pelo sistema de controlo por computador. A estação de carga de porta-tubos de ensaio (18) proporciona um dispositivo sensorial para confirmar a recepção de tubos de ensaio identificados nos receptáculos apropriados nos porta-tubos de ensaio.

Na fig. 18 está representada uma vista mais por <____>χ / menorizada da estação de carga de porta-tubos de ensaios (18).

A estação de carga de porta-tubos de ensaio inclui o porta-tubos de ensaio (22), que possui uma placa superior (100), uma placa intermédia (110) e uma placa inferior (112). As placas são interligadas, com um certo espaçamento, por seis colunas de suporte verticais (114) espaçadas em torno da periferia da armação de suporte (22) dos tubos de ensaio, com uma coluna em cada canto da armação. Cada placa tem um agregado regular em forma de matriz de aberturas circulares (116) que definem receptáculos (40) de tubos de ensaio. Nesta forma de realização preferida, os receptáculos são concebidos para acomodar tubos de ensaio com dimensões de 12 x 75 mm, 13 x 100 mm, ou outras medidas normalizadas. 0 diâmetro dos receptáculos (40) é ligeiramente maior do que o diâmetro destes tubos de ensaio para permitir o movimento vertical relativo dos tubos de ensaio dentro dos receptáculos uma vez recebidos os tubos de ensaio.

Uma das colunas verticais (114), tal como se representa na fig. 18, está deslocada da posição do canto (118). Cada coluna vertical tem pernos de indexação (120), que se estendem a partir da mesma por baixo da placa inferior (112), que são recebidos em furos (122) correspondentes aos pernos na almofada (38) da estação de carga. Os pernos de indexação (120) estão portanto adaptados para se ajustarem aos furos (122) apenas quando o porta-tubos de ensaio estiver orientado numa certa direcção. A almofada (38) da estação de carga estã provida de um bloco de interruptores (124) com membranas de interruptor com posições múltiplas, situadas sob a armação quando recebida na almofada da estação de carga, com a armação convenientemente orientada, utilizando os pernos de indexação. 0 bloco de interruptores membrana interruptora (126) sensível baixo da posição de cada receptáculo tem um interruptor com à pressão situado por de tubos de ensaio (40)

Como se vê melhor na fig

6, a natureza elástica

do interruptor de membrana levanta ligeiramente o tubo de ensaio (50) da sua posição de repouso na armação (22) dos tubos de ensaio. 0 interruptor só se fecha quando o técnico/operador introduz o tubo de ensaio no receptáculo e exerce pressão no tubo para baixo contra o interruptor de membrana com uma força suficiente para provocar a actuação do interruptor. Este regista a colocação do tubo de ensaio e faz com que o visor (36) indique que 0 tubo de ensaio identificado foi recebido no receptáculo correcto desejado

Depois de o técnico/ /operador libertar o tubo de ensaio, o interruptor (126) retoma a sua posição normalmente aberta

Esta disposição do interruptor de membrana permite utilizar um circuito de descodificação (128) (fig. 2) convencional para fazer a entrada das coordenadas de localização de um tubo de ensaio para o sistema do computador (14). Poderiam usar-se recebido outros sistemas. Por exemplo, podem utilizar-se detectores ópticos para determinar se um tubo de ensaio está ou não colocado no receptáculo, proporcionando assim informação actualizada sobre se um tubo de ensaio foi inserido ou removido

Como se mencionou anteriormente, é vantajoso utilizar um leitor de código de barras (32) para fazer a entrada da informação da amostra do paciente a partir de uma eti-

queta (130) com o código de barras aplicada no exterior de cada tubo de ensaio (30) para identificar uma amostra de um paciente, como se faz hoje na prática em grandes hospitais e outras instituições. Existem disponíveis leitores de códigos de barras para um certo número de computadores pessoais como equipamento optativo. No caso de não se dispor de um leitor de códigos de barras ou não se desejar o mesmo, a informação da amostra do paciente pode ser introduzida no computador (14) por manipulação, através de um teclado (34). A forma de realização preferida usa um computador pessoal compatível com os IBM; porém, qualquer sistema computador com pelo menos 640 quilobites de memória de acesso aleatória seria suficiente para passar os programas do instrumento (10) de análise de amostras de pacientes automatizado. 0 sistema de computador (14) está também programado para visualizar ins truções especiais para cada ensaio individual a realizar. Para os ensaios LAV EIA , podem ser analisados dois controlos positivos e três controlos negativos com cada placa Microtiter® ou placa Micro titer ® parcial. Os controlos positivos contêm soro humano contendo imunoglobulina anti-LAV, que é não reactiva para HBsAg e não infecciosa para LAV (tratado pelo calor). Os controlos positivos estabelecem um valor máximo aceitável para a absorvência total. Os controlos negativos um valor de absorvência total que, somado a um valor pré-determinado, estabelece o valor de corte para um resultado positivo do ensaio. Como se mostra na fig. 8, as placas (28) possuem tiras (132) de cavidades de reacção amovíveis (incluindo uma fiada completa de cavidades) que podem ser remo£ /

-²³ L -/ / '> vidas se se desejar tratar menos de 96 amostras.

Os receptáculos (40) de tubos de ensaio estão espaçados entre centros de cerca de 19 mm (0,75”). A placa superior (100) também inclui receptáculos (134) de taças de diluição, espaçados segundo uma disposição em matriz com distâncias entre centros de cerca de 19 mm (0,75”) e afastados lateralmente de cerca de 9,5 mm (0,375”) dos locais das coordenadas dos receptáculos (40) de tubos de ensaio. Por conseguinte, o deslocamento lateral (nos dois sentidos horizontais) do centro de um receptáculo (134) de taças de diluição até um receptáculo (40) de tubos de ensaio é de cerca de 9,5 mm (0,375”).

A armação (22) dos tubos de ensaio avança a partir de uma primeira extremidade (140) do transportador (20) de porta-tubos de ensaio por meio de duas correias sem fim (142) afastadas uma da outra. Como melhor se vê na fig. 7, as correias têm depressões (144) separadas a intervalos de cerca de 9,5 mm (0,375”) para corresponder às distâncias de separação dos receptáculos (134) das taças de diluição e dos receptáculos (40) dos tubos de ensaio. As depressões estão adaptadas para receber os pernos de indexação (120) para posicionar de maneira positiva a armação (22) dos tubos de ensaio no transportador de porta-tubos de ensaio.

Como se representa na fig. 4, a armação (22) de suporte dos tubos de ensaio é posicionada lateralmente por meio de barras alongadas (145) fora das correias (142). Cada uma das correias é accionada por duas rodas de accionamento (146) afastadas fixadas de modo a poderem rodar nas extremi

- 24 -/ (

\ dades de um veio motor (148) e de um veio de rotação livre (150). As correias sem fim (142) sao accionadas por incrementos passo-a-passo, de cerca de 19 mm (0,375”), por um motor de corrente alternada de 300 r.p.m. (152) com um redutor (154) que reduz a velocidade de rotação do veio (148) para 8 r.p.m. quando o motor (152) rodar com a sua velocidade nominal .

A velocidade angular e a rotação do motor (152), e de todos os outros motores de corrente alternada a descrever adiante, são controlados por um circuito TRIAC no módulo electrónico de serviço (16). A posição angular do veio (148) é seguida por um mecanismo de retroacção (156) representado na fig. 9. 0 mecanismo de retroacção tem uma roda de dentes indicadores (158) com um certo número de dentes indicadores (164), apoiada num eixo, para rodar com o mesmo. Um par emissor/detector ópticos (160) abraça a roda de dentes indicadores de modo que as aberturas (162) na roda que definem os dentes indicadores podem ser detectadas pelo par emissor/detector ópticos. A saída do par emissor/detector ópticos (160) ê transmitida ao módulo electrónico de serviço (16), onde circuitos convencionais contam o número de passagens dos dentes indicadores em função do tempo, de modo que o sistema com putador (14) pode controlar o movimento das correias sem fim (142).

Os dentes indicadores da roda estão afastados de cerca de 9,5 mm (0,375”) na posição do par emissor/detector ópticos. Deste modo, a detecçao da passagem de um dente indicador indica que o porta-tubos de ensaio (22) avançou de / uma distância do centro de um cálice de diluição para o centro de um tubo de ensaio.

sistema computador (14) está programado para fazer avençar o porta-tubos de ensaio (22) no transportador (20) dos porta-tubos de ensaio até ser detectado um reflector (166) por um par emissor/detector ópticos (168) para indicar que uma primeira fiada (170) de receptáculos (40) de tubos de ensaio está centrada por baixo da estação de transferência (44). Se o reflector não for detectado dentro de meia rotação das correias sem fim (142), o sistema computador indica que o operador ou não colocou o porta-tubos de ensaio no transportador (20) de porta-tubos de ensaio ou orientou erradamente o porta-tubos de ensaio a 180°.

transportador (20) de porta-tubos de ensaio, bem como outros componentes do instrumento principal (12), incluindo as linhas de processamento das placas Microtiter (24) e (25), são suportados por cima de uma base (172) do instrumento por suportes (174), como se vê nas fig. 3, 4 e

5.

As partes da estação de transferência (44) e um mecanismo (180) de controlo do diluente associado estão re presentados em pormenor na fig. 11. Outros pormenores da estação de transferência estão representados nas fig. 3 e 5. A estação de transferência tem suportes verticais (182) que estão ligados à base (172) do instrumento principal lateralmente para fora do transportador (20) dos tubos de ensaio e da linha (26) de processamento de placas Microtiter® que suportam duas barras transversais (210) e (212). As barras / V

- 26 -/ — / i ·*« i transversais suportam, de maneira deslizante, uma pipeta automática móvel (214) que retira a amostra do paciente dos tubos de ensaio (30) na armação (22) dos tubos de ensaio no transportador (20), efectua as diluições necessárias e transfere a amostra do paciente diluida e não diluída para duas placas Microtiter ® separadas (28), uma placa (216) de noventa e seis cavidades e uma placa (218) de noventa e seis cavidades, respectivamente. Podem usar-se outras dimensões das placas, tais como placas de quarenta e oito cavidades e similares.

Numa análise de anticorpos LAV, utiliza-se a placa (216). Numa análise do antigénio superficial da hepatite B, usa-se a placa (218). A pipeta automática móvel (214) é ligada a uma cadeia de accionamento em anel (220), com uma porção arrastada por uma roda dentada (222) montada doida e uma porção oposta arrastada por uma roda dentada motriz (224). A roda dentada motriz está acoplada para rotação com um motor de corrente contínua convencional (225), com um comando de retroacção em quadratura (dois sensores desfasados de 90° relativamente aos indicadores, para indicar o sentido do movimento). 0 motor (225) é controlado por um controlador de corrente contínua Hewlett-Packard HCTL-1000 contido no módulo electrónico de serviço (16). Este sistema de accionamento propor^· ciona um posicionamento lateral preciso da pipeta automática móvel sobre cada receptáculo (40) do tubo de ensaio no porta-tubos de ensaio (22) posicionado.

A pipeta automática móel(214)teni um tubo de pipeta (230) com uma ponte terminal aberta (232) e uma extremidade

- 27 ί (234) de recepção do diluente. Como se vê melhor nas fig. 5 e 11, a extremidade de recepção do diluente é retida por um bloco móvel (236) para se mover na vertical com o mesmo. 0 bloco tem um furo roscado que recebe um parafuso (240). 0 parafuso tem uma roldana (244) montada numa das suas extremidades que é accionada por uma correia (246) arrastada pelo tambor de um motor (248). 0 tambor do motor é accionado por um motor de corrente continua (250), que possui um mecanismo de retroacção em quadratura (252), e ê controlado por um circuito de corrente contínua Hewlett-Packard HTLC-1000, tal como o descrito anteriormente. A rotação seleccionada do parafuso (240) pelo motor (250) faz com que o bloco móvel (236) se desloque para cima e para baixo para elevar ou descer o tubo (230) da pipeta.

A placa vertical (254) suporta uma placa horizontal superior (256) e uma placa horizontal inferior (258). A placa horizontal superior suporta o motor de corrente contínua (250) e suporta rotativamente a extremidade superior do parafuso (240). A placa horizontal inferior (258) proporciona um suporte rotativo à extremidade inferior do parafuso (240) e um suporte deslizante para o tubo (230) da pipeta. 0 bloco móvel (236) é posicionado, aplicado de maneira deslizante, na placa vertical (254) para impedir a rotação do bloco móvel, à medida que se roda o parafuso. 0 bloco móvel também tem um indicador de posição de repouso (260) que actua um detector de posição de repouso (262), que é exigido pela Hewlett-Packard no seu sistema de controlo de corrente contínua.

Como se mostra na fig. 12, a extremidade (232) / !

do tubo da pipeta com a ponta aberta tem dois eléctrodos (264) que têm extremidades livres (266) posicionadas ao nível de uma extremidade inferior (268) da extremidade (232) da ponta aberta. Os eléctrodos detectam o nível (270) da amostra do paciente no tubo de ensaio (30) no qual se introduz o tubo da pipeta (230) e indicam ao controlador do motor de corrente contínua (250) que interrompa a rotação do parafuso (240).

Com referência à fig. 11, o mecanismo de controlo do diluente (180) tem uma válvula de corte (280) de pequeno volume morto, que é accionada por um motor de corrente alternada (282), semelhante ao motor de corrente alternada (152). A válvula de oorte proporciona a continuidade entre um cilindro de uma seringa de precisão (284) e um tubo (286) de distribuição de diluente ou entre o cilindro da seringa de precisão e um tubo de alimentação de diluente (288). 0 tubo de alimentação de diluente está ligado a uma garrafa de fornecimento de diluente (280), como se mostra na fig. 2. A válvula de corte (289) tem um mecanismo de retroacção (290) que inclui dois sensores ópticos (292) e (294) que indicam a posição da válvula de acordo com a posição de rotação detectada das aberturas (296) numa saia periférica (298) da válvula.

cilindro (284) da seringa de precisão tem montado no seu interior um êmbolo (300) que pode efectuar um movimento alternativo. 0 êmbolo está ligado a uma haste do êmbolo (310) que é fixada a um bloco deslizante do êmbolo (312) por meio de uma placa (314). Fixado na haste do êmbolo, do lado oposto da placa, há um parafuso (316) que pode ser en ___ roscado no interior de uma porca (não representada)· A porca encontra-se contida numa manga (320) que está fixada rigidamente pelas suas extremidades em chumaceiras de impulso superior e inferior (322) e (324) para com ela rodarem. A chumaceira inferior (324) é accionada por um motor de corrente contínua (326), semelhante ao motor de corrente continua (250) e ao motor de corrente contínua (225) que acciona a roda dentada motriz (224) atrás descrita. Utilizam-se um mecanismo de retroacção em quadratura e um detector de posição de repouso (336), como é exigido pelo circuito controlador Hewlett-Packard HCT0-1000 DC.

Uma placa horizontal (328) está ligada a uma placa vertical (330). A placa horizontal suporta o motor de corrente contínua (326) e o mecanismo de retroacção em quadratura associado, um sistema (332) de accionamento por correia e um conjunto de manga e chumaceira de impulso (320, 322, 324). 0 bloco deslizante do êmbolo (312) é posicionado aplicado de maneira deslizante à placa vertical (330) para impedir a rotação do êmbolo (300) no interior do cilindro (284) da seringa de precisão à medida que o êmbolo se move no seu movimento alternativo. 0 bloco deslizante (312) do êmbolo tem também um dente indicador (334) que interrompe o feixe luminoso no detector de posição de repouso (336), para indicar o trajecto ascendente máximo do êmbolo (300).

A placa vertical (254) na pipeta automática móvel (214) está também: provida de um dente indicador (não representado) que colabora com um detector (33θ) indicador da primeira coluna para a linha (24) de processamento de antif

- 30 V corpos SIDA e um detector (340) indicador da primeira coluna para a linha (26) de processamento do antigénio superficial da hepatite B. Estes detectores indicam a posição da primeira coluna de cavidades em cada placa (216, 218), como se mostra na fig. 4. Um detector de posição de repouso (342) é igualmente previsto. Estes detectores são montados numa calha horizontal (344) que está colocada entre os suportes verticais (182).

Quando se executam as análises, quer LAV ou de hepatite B, o sistema de controlo por computador (14) está programado para operar a estação de transferência (44) da seguinte maneira. Primeiramente ê carregado o tubo (230) da pipeta com diluente proveniente do tubo de fornecimento de diluente (288) pelo mecanismo (180) de controlo do diluente. 0 mecanismo de controlo do diluente impele então uma pequena bolha de ar para o interior da pipeta (230) através da extremidade com a ponta aberta do tubo da pipeta (232) de modo a formar um pequeno intervalo de ar entre o diluente no tubo da pipeta (230) e qualquer amostra de um paciente ou amostra de um paciente diluída, para ser impelida depois. Este intervalo de ar serve para isolar a amostra de fluido impelida ou a amostra de fluido diluída Impelida da coluna de diluente por cima do mesmo.

sistema de controlo por computador (14) dá então instrução ao motor (225), que acciona a roda dentada (244), para posicionar lateralmente o tubo da pipeta (230) por cima da primeira amostra de um paciente (primeiro processam-se os controlos positivo e negativo por instrução prove/

ί niente do sistema de controlo por computador). 0 tubo da pi peta (230) desce, por operação do motor de corrente contínua (250), até ser atingido o nível (270) da amostra do paciente, indicado pelos eléctrodos (264)· São então extraídos cinco microlitros da amostra do paciente para a pipeta e esta é elevada para libertar as partes superiores dos tubos de ensaio, como se mostra na fig. 5«

Uma primeira diluição é preparada deslocando lateralmente o tubo da pipeta (230) para colocar o tubo sobre uma taça de diluição (348) situada junto do tubo de ensaio de onde foi retirada a amostra e distribuindo toda a amostra do paciente extraída para a taça de diluição com 95 microlitros de diluente, medidos e fornecidos pelo mecanismo cLe controlo do diluente para a taça de diluição.

Um processo preferido para proporcionar as taças de diluição encontra-se representado na fig. 18. Um escantilhão (346) de taças de diluição descartável é colocado por cima do suporte de tubos de ensaio (22) e tem taças de diluirão 9343) si tundas. c.e, modo a serem recebidas nos receptáculos (134) das taças de diluição na placa superior (100) do suporte. 0 escantilhão tem também aberturas (350) para permitir a introdução não inibida de tubos de ensaio nos receptáculos (40) dos tubos de ensaio por baixo das mesmas. Se se usar este tipo de disposição das taças de diluição, a amostra de um paciente e o diluente, que formam a primeira diluição, são fornecidos para o interior da cavidade de diluição (348) imediatamente adjacente ao tubo de ensaio (30) da amostra de um paciente correspondente. 0 suporte (22) de tubos de ensaio e a ί pipeta automática móvel (214) são accionados de maneira apropriada pelo motor de corrente alternada (152) e pelo motor de corrente contínua (225), respectivamente, para posicionar a extremidade (232) com a ponta aberta do tubo da pipeta por cima da taça de diluição correcta.

mecanismo (180) de controlo do diluente extrai então outra bolha de ar para o interior do tubo da pipeta (230) antes de extrair cinco microlitros da primeira diluição da taça de diluição para o interior do tubo da pipeta. A pipeta automática móvel (214) desloca então o tubo (230) da pipeta lateralmente para a posição por cima da cavidade de reacção (46) correspondente na placa (216), como é indicado pelo primeiro detector indicador de coluna (338) e o dispositivo de retroacção em quadratura no motor de corrente contínua (225), Que acciona a roda dentada (224). Como atrás se notou, a placa (216) é usada para a análise LAV.

Os cinco microlitros da primeira diluição são distribuídos para o interior desta cavidade de reacção correspondente (46) com um adicional de 95 microlitros de diluente para formar uma segunda diluição na cavidade de reacção de aproximadamente uma parte da amostra do paciente para 400 partes de diluente. 0 tubo da pipeta (230) é depois deslocado lateralmente para levar a extremidade (232) da ponta da pipeta na estação de lavagem das pontas (45). Como se representa na fig. 2, a solução de lavagem das pontas é fornecida a partir de uma garrafa (360) da solução de lavagem das pontas, para a estação de lavagem das pontas (45), através de um tubo (3θ2) da solução de lavagem das pontas. A garrafa

da solução de lavagem das pontas é pressurizada por uma bomba de ar regulada (364)· 0 fluxo da solução de lavagem é controlado por uma válvula (366), com um tempo de abertura controlado pelo sistema de controlo por computador (14). A estação de lavagem das pontas é aspirada por um tubo (368) de aspiração da estação de lavagem das pontas que fornece a solução de lavagem aspirada para o interior de um recipiente à prova de risco biológico (60). Durante o processo de lavagem das pontas, o tubo (230) da pipeta é lavado com diluente pelo mecanismo de controlo do diluente (180).

Uma vez terminada a sequência de lavagem da ponta da pipeta, introduz-se uma nova bolha de ar no tubo (230) da pipeta e o tubo da pipeta é deslocado lateralmente para a sua posição, mais uma vez sobre o tubo de ensaio (30) na armação de suporte (22) que tem a amostra de um paciente, para extrair aproximadamente 220 microlitros da mesma amostra de um paciente para o interior do tubo da pipeta. 0 tubo da pipeta automática móvel (214) desloca então o tubo da pipeta (230) lateralmente para a posição por cima da cavidade de reacção (46) correspondente na placa (218), como ê indicado pelo primeiro detector (340) indicador da coluna e pelo motor de corrente continua de retroacção em quadratura que acciona a roda dentada (224). A amostra do paciente não diluída é fornecida para a cavidade de reacção correspondente. Verificou-se que embora

220 microlitros da amostra de um paciente sejam extraídos para o interior do tubo da pipeta, aproximadamente 20 microlitros ficam na parede lateral da pipeta e têm que ser removidos por lavagem numa nova sequencia de lavagem da ponta da

- 34 pipeta, como se descreveu antes. Como atrás se notou, a placa (218) é usada para a análise do antigénio da hepatite B.

A sequência anterior é repetida até que a primeira linha de cada uma das placas (216) e (218) tenha sido preenchida com a quantidade apropriada de amostra de pacientes diluída e amostra de pacientes não diluída, respectivamente. A velocidade com que funciona o instrumento, pode preencher-se as duas linhas em menos de quatro minutos. Faz-se então avançar as placas ao longo das linhas de processamento (24) e (26), respectivamente, por incrementos iguais à distância entre centros das cavidades de reacção adjacentes, de quatro em quatro minutos.

Isso dá tempo suficiente para preencher cada uma das linhas sucessivas antes de estas avançarem do incremento seguinte.

Como se representa na fig. 4, cada uma das linhas de processamento (24) e (26) tem dois carris de guia (370) e (372), tendo cada um duas ranhuras laterais (374) e (378) opostas, dispostas longitudinalmente, adaptadas para receber abas (378) laterais que se esteuidem lateralmente para fora, na base das placas (216) e (218). Cada carril de guia tem porções abertas para cima (380) e (382), respectivamente, no início do carril que estão cortadas e removidas para deixar ver as ranhuras (374) e (378) de modo que as placas podem ser introduzidas nas ranhuras pelo lado de cima. Cada uma das linhas de processamento (24) e (26) das placas inclui uma correia sem fim (410) e (412), respectivamente, que é rodada por tambores (414) e (416), respectivamente, para deslocar t

as placas no sentido do processamento. As correias (410) e (412) estão equipadas com cavaletes (417) de accionamento posicionados a distâncias mútuas iguais ao comprimento de uma placa para posicionar de maneira positiva as placas em relação às correias. Os tambores (414) e (416) têm dentes periféricos para impedir que as correias escorreguem sobre os mesmos.

Os tambores estão fixados em veios motores (413) e (419), que são accionados rotativamente por motores de accionamento de corrente contínua (420) e (421), semelhantes ao motor de corrente alternada (152). A rotação dos veios motores (418) e (419) é seguida pelos mecanismos de retroacção (422) e (423), semelhantes ao mecanismo de retroacção comprimento de arco que separa os dentes roda no detector é igual à separação entre indicadores da centros das linhas da matriz nas placas. Por conseguinte, a detecção de um dente indicador pelo sensor indica que a placa avançou de uma linha. Uma vez que se desloquem pelas porções abertas dos carris (380) e (382) nos carris de guia (370) e (372), as placas (216) e (218) podem ser removidas apenas por inversão do sentido das correias sem fim (410) e (412) para a reposição das placas nas porções abertas dos carris ou para rodar até sairem na extremidade afastada.

Os emissores ópticos (424) e (426) emitem feixes que são detectados por detectores ópticos (423) e (430). Os emissores e os detectores estão situados de tal modo que a interrupção dos feixes luminosos pelas placas (216) e (218) in dica a presença da primeira linha de cada placa numa posição que está por baixo do tubo da pipeta (230) após o movimento

- 36 - /

I c

lateral apropriado da pipeta automática móvel (214).

Depois de a amostra de um paciente diluída ter sido adicionada a uma linha da placa (216) e depois de a amostra de um paciente não diluída ter sido adicionada a uma linha da placa (218), faz-se avançar as duas placas, em geral simultaneamente, pelas correias sem fim (410) e (412), de um passo incremental, para a primeira extremidade (48) da superfície de incubação alongada (50) para a linha de processamento (24, 26) da placa correspondente, como se descreveu antes. De salientar que este movimento incremental posiciona a linha seguinte de cavidades da reacção para enchimento pelo tubo da pipeta.

Cada uma das superfícies de incubação (50) é constituída a partir de uma placa de alumínio alongada, com uma espessura de 12,7 mm (0,50). Um aquecedor resistivo de borracha silicónica (436) está ligado à face inferior da superfície de incubação alongada. 0 aquecedor é controlado termostaticamente por meio de circuitos convencionais do módulo electrónico de serviço (16), de acordo com instruções pré-programadas pelo sistema de controlo por computador (14). Para estes ensaios, os termostatos são ajustados para manter uma temperatura de aproximadamente 37°C. 0 aquecedor é actuado proporcionalmente de modo que, quanto maior for o diferencial de temperatura que existe entre a temperatura medida termostaticamente e a temperatura desejada, mais tempo o aquecedor se manterá ligado.

Os primeiros tempos de incubação para cada linha de processamento (24, 26) das placas são determinados pelo

tempo necessário para as placas se deslocarem por incrementos da distância entre a primeira extremidade (48) das superfícies de incubação alongadas (50) e anticorpos lAV e para a análise de antigênios superficiais da hepatite 3, o primeiro tempo de incubação para cada linha de processamento deve ser uma hora. Como atrás se de processamento (54) e (56) são móveis uma em relação à outra e em relação às superfícies de incubação a fim de seleccionar o período de incubação desejado. Para estabelecer o tempo de incubação de uma hora, as primeiras cessmento devem ser posicionadas a uma distância suficiente das primeiras extremidades (48) de cavidades de reacção tenha quinze incrementos de 4 minutos para incubação. Quando cada linha atinge o fim do período de incubação, essa linha estará sob a posição da primeira estação de processamento.

As primeira e segunda estações de processamento (54) e (56) têm uma constituição substancialmente idêntica. Como se vê melhor nas fig. 3, 5 e 13, as primeira e segunda estações de processamento são móveis num plano vertical ao longo da linha de processamento. Cada estação de processamento tem uma armação (440) que é suportada por pilares (444), cujas extremidades são recebidas em blocos deslizantes (446). Os pilares passam através de blocos de casquilhos (448) que estão aplicados de maneira deslizante em flanges horizontais (450), representados na fig. 4. Os blocos de casquilhos (448) têm casquilhos através dos quais os pilares podem mover-se num movimento alternativo. Os flanges estão providos de furos

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( de localização abertos à broca ou retentores a intervalos correspondentes ao espaçamento entre centros das linhas de cavidades de reacção para o posicionamento dos blocos de casquilhos em relação às mesmas. Por estes meios, o posicionamento das estações de processamento é variável.

Cada um dos blocos deslizantes (446) é montado numa barra de ligação (454), que se vê melhor na fig. 3» com uma extremidade (456) montada excentricamente na periferia de uma roda de manivela (458), e uma outra extremidade (457) montada excentricamente numa segunda roda de manivela (459). As rodas de manivela são rodadas por um veio de accionamento (46O), que é accionado por um motor de accionamento de corrente alternada (462), análogo ao motor de corrente alternada de accionamento (152). As rodas de manivela (458) e (459) podem ser rodadas para elevar e baixar a barra de ligação (454) e portanto deslocar simultaneamente a primeira e a segunda estações de processamento (54) e (56), ai montadas pelos blocos deslizantes (446), entre uma posição subida e uma posição descida. Uma das rodas de manivela (458) tem dois dentes indicadores (464) (ver a fig. 5) semelhantes à saia periférica (298) no mecanismo de retroacção (290) da válvula de corte (280) de pequeno volume morto. Os dentes (464) estão afastados entre si de cerca de 80°. Assim, os detectores associados com os dentes (464) informam o sistema de controlo por computador (14) sobre quando os blocos deslizantes (464) e portanto as primeira e segunda estações de processamento (54) e (56), estão na sua posição completamente elevada ou completamente descida.

/ _____...

/' Como se vê melhor na fig. 14, cada estação de processamento tem. uma conduta de distribuição de aspiração (466) com oito tubos de aspiração verticais. Cada tubo de aspiração tem uma saída (470), aproximadamente no centro da con duta de distribuição, para reduzir as diferenças de pressão entre os tubos devidas ao escoamento laminar. Cada tubo de aspiração tem também uma entrada de fluido (472) situada de modo a estar acima do nível da parte superior (474) das cavidades de reacção quando as estações de processamento estão na posição elevada. 0 comprimento do trajecto vertical das estações de processamento ê suficiente para colocar a entrada de fluido (472) adjacente ao fundo transparente (476) da cavidade quando as estações de processamento estão na posição descida.

Forma-se um vácuo parcial na conduta de distribui ção (466) pelos tubos de aspiração (58, 74). Estabelece-se um vácuo parcial, como atrás se descreveu, pela bomba de vácuo (62). A bomba de vácuo (62) produz um vácuo relativamente fraco. Os tubos de aspiração (58, 74) podem ser controlados independentemente pelo sistema de controlo por computador (14), por meio de válvulas magnéticas convencionais (477) e (478), respectivamente.

Utilizam-se de preferência agulhas de calibre 18 para os tubos de aspiração. 0 diâmetro interior dos tubos de aspiração é de aproximadamente 0,84 mm (0,33). A velocidade a que o motor de accionamento de corrente alternada (462) roda é controlada de modo que os tubos de aspiração sejam descidos para o interior das cavidades de reacção com uma ve

locidade que é igual à velocidade com que o nivel do fluido desce nas cavidades. Assim, a entrada de fluido (472) mantém-se sempre ligeiramente avançada em relação ao nível do líqui do descendente. Isto provoca a formação de um mecanismo (480), que é formado pela tensão superficial no líquido, para lavar as paredes (482) da cavidade de reacção e secá-las eliminando quaisquer pequenas gotas de fluido residuais à medida que o nível do lícpido desce. 0 tempo do trajecto vertical dos tubos de aspiração ê de aproximadamente 1 s. Depois de a amostra do paciente e o analito não ligado (ou a amostra de um paciente diluída e o analito não ligado) terem sido retirados pelos tubos de aspiração, os tubos de lavagem (484) lavam vigorosamente os tubos de aspiração e as cavidades de reacção com jactos de alta pressão de solução de lavagem provenientes do tubo de lavagem (66) para a primeira estação de processamento e do segundo tubo de lavagem (78) para a segunda estação de processamento.

Cada estação de processamento tem uma conduta de distribuição de lavagem (486) que é carregada com uma corrente sob pressão elevada de solução de lavagem por uma bomba (68) operada por um solenóide, ou por uma segunda bomba de líquido (76) operada por solenóide. Uma bomba apropriada ê fabricada por Valcor Engineering Corp., Springfield, New Jersey. Cada uma das condutas de distribuição tem tubos de lavagem (484) de agulhas de calibre 19, com um diâmetro interior de aproximadamente 0,68 mm (0,027”). Os tubos de lavagem estão inclinados segundo um certo ângulo no sentido dos tubos de aspiração, sendo esse ângulo de aproximadamente 15°,

e têm saídas do fluido (488) situadas de modo a dirigirem um fluxo de alta pressão de solução de lavagem para o tubo de aspiração adjacente. A solução de lavagem incide sobre o tubo de aspiração para limpar o tubo de aspiração e dispersar a solução de lavagem no interior da cavidade de reacção correspondente situada por baixo do mesmo. Assim, ao contrário do que sucede na técnica anterior, a solução de lavagem injectada para o interior das cavidades de reacção pode ser imediatamente aspirada vistoiíb SErrecessário esperar pela difusão para limpar as cavidades. 0 borrifo da solução de lavagem dispersa proporciona uma acção de lavagem agitada e reduz substancialmente o tempo necessário para processar uma linha de cavidades de reacção e o tubo de aspiração correspondente.

Para se obter a pressão desejada, as bombas (68) e (76) operadas por solenóide têm um deslocamento de aproximadamente 1 mm por cada passeio, com um período dos passeios de aproximadamente 100 a 200 ms. Utilizam-se três passeios por lavagem. Verificou-se que o deslocamento desta quantidade de fluido neste intervalo de tempo, quando se usam tubos de lavagem com um diâmetro interior de 0,68 mm (0,027), proporciona uma acção de lavagem satisfatória. Completam-se três ciclos de lavagem e aspiração para a primeira linha de proces sarnento (24), para o ensaio LAV. Usam-se cinco desses ciclos para a segunda linha de processamento (26), para o ensaio de hepatite B. 0 sistema de controlo por computador (14) é programado de maneira apropriada para o número de ciclos de lavagem recomendados pelo fabricante do ensaiador. Ê vantajoso /

injectar três jactos de fluido de lavagem, como atrás se descreveu, antes de cada aspiração depois da aspiração inicial. Supõe-se que o ângulo dos tubos de lavagem, em associação com três jactos curtos de alta pressão de solução de lavagem, pro porcionou uma acção de lavagem superior nas cavidades de reac ção. Mas a aspiração final deve durar alguns segundos para remover quaisquer pequenas gotas da solução de lavagem residuais.

Cada uma das primeira e segunda estações de processamento (54) e (56) incluem uma agulha de calibre 21 (429, 493)., com um diâmetro interior de cerca de 0,5 mm (0,020), montada num bloco (490, 491) que se desloca lateral mente. Uma vez completado o primeiro ciclo de lavagem na primeira estação de processamento (54), a agulha (492) distribui separadamente um conjugado de reporter/segundo reagente (de aqui em diante denominado conjugado) a cada cavidade de reacção na linha de cavidades por baixo da mesma. No caso do ensaio LAV, o conjugado é uma imunoglobulina anti-humana de cabra denominada peroxidase, que se ligará ao complexo anticorpo-antigênio, se estiver presente. No caso do ensaio da hepatite B, o conjugado é o conjugado peroxidase anti-HB de chimpazê. A agulha tem uma extremidade (494) de distribuição do fluido que está suficientemente afastada acima da parte superior (474) da cavidade de reacção de modo a impedir a interferência com a mesma quando as estações de processamento (54) e (56) são deslocadas para a posição inferior. A agulha está suficientemente inclinada e o conjugado ê distribuído sob uma pressão suficiente para que seja distribuído para a *s-----2 / cavidade sem qualquer derrame para fora das cavidades de reacção»

Como atrás se descreveu, os conjugados estão contidos numa garrafa do conjugado (70) que ê pressurizada por uma bomba de ar (496) e regulada por um regulador (498). 0 escoamento do fluido é regulado por uma válvula do conjugado (500) controlada no tempo, no que convencionalemente se designa por sistema de distribuição com abertura por pressão. Neste sistema, a bomba funciona continuamente e o regulador mantém uma pressão controlada na garrafa. A válvula (500) ê uma válvula de aperto que se abre durante um curto intervalo de tempo. Assim, não há qualquer variação substancial na pressão da garrafa. A distribuição do conjugado é portanto medida com precisão.

bloco móvel (490) tem uma porção (510) roscada interiormente, estendendo-se lateralmente, que recebe um parafuso (512) (ver a fig. 14) que se estende lateralmente através de toda a largura da estação de processamento. 0 parafuso é rodado por um motor de corrente alternada (514) controlado por um Triac (ver a fig. 4), semelhante ao motor (152). A posição do bloco móvel é seguida por um par emissor/ /detector ópticos (516). 0 feixe luminoso produzido entre os dois ê interceptado por um certo número de dentes indicadores (518). Um dente indicador está situado no local de cada coluna de cavidades de reacção nas placas (216) e (218). 0 sistema de controlo por computador (14) considera a presença de um dente indicador no feixe luminoso como o sinal para parar o bloco móvel (490) e distribuir conjugado para o inte- 44 ( rior das cavidades de reacção. Utilizando este sistema, o conjugado pode ser adicionado a uma linha de oito cavidades de reacção em aproximadamente dez segundos. 0 bloco móvel está também provido de um detector de posição de repouso, que não está representado. 0 detector de posição de repouso está posicionado por forma a indicar que o bloco móvel está numa posição, adjacente ao bordo da placa, apropriada para permitir a descida das estações de processamento (54) e (56) sem interferência das agulhas (492) e (493).

Quando se realiza o ensaio LAV, adicionam-se cerca de 100 microlitros de conjugado na primeira estação de processamento para cada cavidade de reacção, quer contenha um espécime do paciente ou um controlo. Quando se executa o ensaio da hepatite, adicionam-se cerca de 200 microlitros de conjugado no primeiro processamento às cavidades de reacção.

Depois de ter sido adicionado o conjugado a cada cavidade de reacção numa linha, as correias sem fim (410) e (412) fazem avançar essa linha para além da primeira estação de processamento (54) e o segundo tempo de incubação é definido pelo tempo que a linha leva para se deslocar da distância entre a primeira estação de processamento (54) e a segunda estação de processamento (56). Tanto para o ensaio LAV como para o ensaio da hepatite, o tempo de incubação ê de uma hora, o que corresponde a quinze incrementos de uma linha. Os carris (372) e (374) podem estar providos de coberturas (519) de Plexiglas ® seccionadas (ver a fig. 3) situadas por cima das placas (216) e (218) para cobrir as porções da superfície (50) de incubação alongada que não estão ocupadas

pelas estações de processamento.

Como se representa na fig. 4, a segunda extremidade (51) da superfície de incubação alongada (50) está adjacente à segunda estação de processamento (56). Deste modo, o terceiro tempo de incubação verifica-se à temperatura ambiente. 0 comprimento da superfície de incubação deve ser escolhi do de acordo com os tempos de incubação especificados pelo fabricante do ensaio.

No fim do segundo tempo de incubação /depois de as placas (216) e (218) terem avançado quinze passos incrementais/, a primeira linha de cada placa estará na posição por baixo da segunda estação de processamento (56) correspondente. Nestas estações, completam-se os procedimentos de aspiração e lavagem, como atrás se descreveu para o fim do primeiro tempo de incubação. A segunda agulha vertical de calibre 21 (493) distribui então o substrato cromogénico (reagente cromogénico), a partir da garrafa do substrato cromogénico (80), para cada cavidade de reacção. As linhas de cavidades de reacção avançam assim para o terceiro tempo de incubação.

bloco móvel (491) da segunda estação de processamento (56) suporta uma terceira agulha de calibre 21 (520) inserida numa abertura (522) (ver as fig. 4 e 15) para distribuir a solução de paragem. A abertura (522) é uma de um conjunto de aberturas paralelas. Estas aberturas estão orientadas perpendicularmente à segunda agulha de calibre 21 (493) na segunda estação de processamento (56). Como se representa nas fig. 14 e 15, as posições extremas (527) de distribuição de fluido da terceira agulha de calibre 21, quando posiciona/ / ’ da naa várias aberturas (522), são colineares com a coluna de cavidades de reacção servida pela segunda agulha de calibre 19 (92). No entanto, as porções terminais (527) de distribuição de fluido da terceira agulha de calibre 21 (520) estão afastadas de modo a estarem deslocadas de 4, 5, 6 ou 7 incrementos correspondentes à largura de uma linha da extremidade de distribuição de fluido (494) da segunda agulha de calibre 21, conforme a abertura (522) em que está introduzida a terceira agulha. Esta distância define a duração do terceiro tempo de incubação para o substrato cromogénico.

A terceira agulha está ligada à garrafa (84) da solução de paragem através do tubo (86) da solução de paragem. A pressão na mesma é regulada da mesma maneira que para a garrafa (80) do substrato cromogénico e para a garrafa (70) do conjugado.

Para ambos os ensaios LAV e da hepatite, a solução de paragem é adicionada às cavidades de reacção aproximadamente trinta minutos (8 incrementos) depois de se ter adicionado o substrato cromogénico. Durante o terceiro tempo de incubação para o substrato cromogénico, desenvolve-se uma cor na proporção da quantidade de analito que se ligou ao primeiro reagente. A solução de paragem interrompe a reacção e conduz a uma outra alteração de cor.

Como atrás se mencionou, o fotodensímetro vertical (88) está situado na segunda extremidade (90) da superfície de incubação alongada (50). 0 fotodensímetro é móvel no sentido do processamento, de uma maneira semelhante à descrita para as primeira e segunda estações de processamento (54) f

/

- 47 ·Χ t * e (56), como atrás se descreveu. Nas fig. 16 e 17 está representada uma ilustração esquemática do fotodensímetro. Prefere -se adicionar aproximadamente 100 microlitros de substrato cromogénico no fim do segundo tempo de incubação e 50 a 100 microlitros de solução de paragem no fim do terceiro tempo de incubação de modo que todas as cavidades de reacção na placa contêm aproximadamente 150 a 200 microlitros de solução. Isso faz com que exista um menisco do fluido em cada cavidade de reacção substancialmente no mesmo local.

Como se representa na fig. 16, o fotodensímetro tem uma fonte luminosa (528), de preferência utilizando uma lâmpada de halogéneo de quartzo. Um sistema de lentes convencional (530) foca a imagem da fonte luminosa (528) num feixe de guia da luz (532). 0 feixe de guia da luz (528) na fig.

está representado como contendo apenas oito fibras. 0 sistema tem realmente dezasseis fibras, com oito fibras para cada uma das linhas de processamento (24) e (26). As fibras de guia de luz individuais (534) terminam numa extremidade polida (536). 0 feixe luminoso que sai da mesma passa através de uma primeira abertura (538) que rejeita qualquer luz vagabunda. 0 feixe luminoso passa depois através de uma lente de focagem (540), que faz o feixe convergir e ter uma porção mais estreita (542) substancialmente no centro do menisco de fluido (480) formado na cavidade de reacção. Uma segunda abertura (544) restringe ainda mais o feixe luminoso de modo que luz vagabunda não entra através do fundo transparente (476) da cavidade de reacção.

eixo óptico definido pela lente de focagem ( (540) é também substancialmente perpendicular ao menisco do fluido no seu centro. Verificou-se que, pela focagem do feixe luminoso de modo que o eixo óptico seja substancialmente perpendicular ao menisco e de modo que a parte mais estreita do feixe luminoso intercepte o menisco substancialmente no seu centro, é minimizada a refracção provocada pela curvatura do menisco. A refracção é particularmente indesejável nas medições do tipo de absorvéncia porque os feixes de luz refractada podem não entrar num detector e, portanto, ser interpretados incorrectamente como tendo sido absorvidos pela amostra de fluido. Na presente invenção, o detector (546) é colocado directamente por cima da parte superior aberta da cavidade de reacção e tem um diâmetro aproximadamente igual a duas vezes o diâmetro esperado do feixe luminoso no detector.

sistema de focagem do menisco está contido numa caixa óptica inferior (548), por baixo da superfície alongada de incubação (50). Nele formam-se oito aberturas (550) para permitir que o feixe luminoso passe através das mesmas. Os detectores (546) estão alojados numa unidade superior (552) que, como se vê melhor na fig. 3, está suficientemente afastada da superfície de incubação alongada (50) para permitir que uma placa avance entre os mesmos.

fotodensímetro também tem um certo número de filtros (554) com caracteristicas de transmissão diferentes. Os filtros são montados numa correia circulante accionada por um motor de accionamento de corrente alternada (558) controlado por um triac, semelhante ao motor de accionamento

- 49 -/ f · i (152). 0 motor de accionamento (558) utiliza um mecanismo de retroacção semelhante ao mecanismo de retroacção (156) para permitir ao sistema de controlo por computador (14) seleccionar os filtros apropriados para os ensaios que estão a ser realizados.

módulo electrónico de serviço (16) contêm oito cartões de circuitos operacionais. 0 primeiro e o segundo cartões de circuitos (570) contêm os circuitos de controlo por TRIAC para todos os motores de corrente alternada no instrumento principal (12). Os terceiro e quarto cartões de circuitos (572) contêm os circuitos de controlo de corrente contínua Hewlett-Packard HCTL-1000 para os motores de corrente contínua no instrumento principal. 0 quinto cartão de circuitos (574) contém os conversores analógico-digital para cada um dos dezasseis detectores ópticos (546) no fotodensímetro vertical (88). 0 sétimo cartão de circuitos (578) contêm as portas usadas pelo computador para comunicar com o módulo electrónico de serviço. 0 oitavo cartão de circuitos (580) contém portas e ligadores para ligar a unidade principal (12) ao módulo electrónico de serviço (16). 0 computador e o módulo electrónico de serviço utilizam também meios de alimentação, não representados.

Consideram-se várias modificações da presente invenção. Portanto, a descrição anterior não deve ser considerada como limitativa. Por exemplo, o instrumento principal (12) pode ser fornecido com uma única cavidade de diluição (582) tendo um dreno, ligado para a passagem de fluidos, ao tubo de aspiração (368) da estação de lavagem. As diluições f

podem ser feitas nesta taça única em vez de em taças de diluição separadas (348) no escantilhão das taças de diluição (346) para cada ura dos tubos de ensaio. Várias outras modificações podem ser introduzidas nas bombas e nos motores que accionam os vários componentes do instrumento principal (12) sem que se verifique um afastamento dos ensinamentos da presente invenção. Por exemplo, podem usar-se aparelhos diferentes de membranas sensíveis à pressão na estação de carga para determinar a colocação vertical de um tubo de ensaio identificado. Os entendidos na matéria encontrarão outras modificações que utilizam os princípios gerais atrás descritos. Portanto, o escopo da presente invenção é determinado pelas reivindicações anexas.

Claims (46)

1. Reivindicações

   1. - Instrumento automatizado para a análise de amostras de pacientes para identificar de maneira positiva e manter a identidade de um certo número de amostras de pacientes contidas em recipientes individuais das amostras, caracterizado por compreender:

   um suporte dos recipientes com um certo número de receptáculos para receber de maneira amovível os recipientes com as amostras em locais discretos;

   meios de identificação para identificar um recipiente de uma amostra de um paciente, podendo o recipiente identificado com a amostra ser posicionado num receptáculo seleccionado;

   meios sensores para detectar a presença do recipiente identificado da amostra no receptáculo seleccionado; e meios preventivos, associados operativamente com os meios de identificação e com os meios sensores, para impedir a identificação de um outro recipiente de uma amostra até que o recipiente identificado com a amostra seja detectado como estando presente no receptáculo seleccionado.
2. 2. - Instrumento de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o suporte dos recipientes ter meios para permitir um movimento vertical descendente relativo dos recipientes com amostra recebidos e um certo número de interruptores sensíveis ã pressão, estando um interruptor situado por baixo de cada receptáculo no suporte dos recipientes de modo que o movimento vertical descendente de um recipiente de amostra identificado activa o interruptor colocado por baixo do mesmo.
3. 3. - Instrumento de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por o suporte dos recipientes ter porções de indexação e por os meios sensores terem meios para receber as porções de indexação do suporte de recipientes para permitir a orientação repetitiva do suporte dos recipientes nos meios sensores.
4. 4. - Instrumento de acordo com a reivindicação 1, caracterizado ainda por incluir meios de pré-selecção, associados operativamente aos meios de identificação para pré-seleccionar automãticamente o receptãculo seleccionado.
5. 5. - Instrumento de acordo com a reivindicação 1 para ser utilizado com placas de reacção do tipo que possui um certo número de cavidades dereacção com as partes superiores abertas, dispostas num agregado regular em forma de matriz de linhas e colunas, caracterizado por incluir meios de transferência para transferir automaticamente uma porção de cada amostra de um paciente de cada um dos recipientes de amostra transferidos para uma cavidade de reacção correspondente, e meios de memória associados operativamente com os meios de transferência, para recordar a localização na matriz de cada uma das cavidades de reacção correspondentes contendo uma porção da amostra de um paciente transferida.
6. 6. _ Instrumento de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por os meios de transferência incluirem:

   uma pipeta que tem uma extremidade da ponta aberta e uma extremidade de recepção de um diluente;

   meios de carga da pipeta, ligados à extremidade de recepção do diluente, para carregar de maneira precisa a pipeta com diluente e para estabelecer e manter um espaço de ar entre o diluen te na pipeta e a amostra do paciente, ou uma diluição da amostra do paciente, extraída através da extremidade da pipeta com a ponta aberta;

   meios de controlo da pipeta, associados operativamente com os meios de memória, para a distribuição de toda a amostra do paciente com uma primeira quantidade medida de diluente numa taça de diluição para formar uma primeira diluição, e para extrair uma porção medida da primeira diluição e distribuir toda a primeira diluição extraída com uma segunda quantidade medida de diluente para o interior da cavidade de reacção correspondente; e meios automáticos para lavar a extremidade com a ponta aberta antes de a pipeta extrair a porção seguinte de amostra de um paciente.
7. 7.- Instrumento de acordo com a reivindicação 6, caracterizado ainda por incluir um escantilhão das taças de diluição que pode ser posicionado no suporte dos recipientes definindo um certo número de aberturas susceptíveis de serem alinhadas com os receptãculos dos recipientes para através delas passarem os receptáculos dos recipientes das amostras, tendo o referido escantilhão um certo número de taças de diluição, uma taça de diluição por cada receptáculo dos recipientes, tendo as taças de diluição as partes superiores abertas e as partes inferiores fechadas situadas intersti cialmente entre as aberturas, operando os meios de transferência das amostras de modo a distribuírem a amostra do paciente extraída e a primeira quantidade de diluente medida para uma das taças de diluição adjacente ao recipiente de amostras do qual foi extraída a amostra do paciente para formar a primeira diluição.

   -54/ /
8. 8. - Instrumento de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por a taça de diluição ter um dreno.
9. 9. - Instrumento de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por incluir meios para determinar a orientação do suporte dos recipientes em relação aos meios de transferência.
10. 10. - Instrumento de acordo com a reivindicação 1 para ser usado com placas de reacção do tipo que tem um certo número de cavidades de reacção com as partes superiores abertas, situadas num agregado regular em forma de matriz de linhas e colunas, caracterizado por as cavidades de reacção serem do tipo que contém um primeiro reagente susceptível de ligação com um analito suspeito de estar presente nas amostras dos pacientes e por incluir ainda uma linha de processamento para o processamento sequencial de linhas de placas de reacção para minimizar as variações de pressão entre as linhas de placas de reacção, tendo:

    meios de guia para guiar a placa de reacção ã medida que a placa avança ao longo de uma trajectória;

    Meios de accionamento para fazer avançar gradualmente a placa de reacção ao longo de uma trajectória num sentido de processamento com as linhastransversais em relação à trajectória e a intervalos de tempo medidos, tendo cada avanço incremental um comprimento aproximadamente igual à distância entre linhas adjacentes de placas de reacção;

    uma superfície de incubação com temperatura controlada, com uma extremidade de entrada e uma extremidade de saída, posicionada ao longo da trajectória de modo a ficar directamente por baixo da placa de reacção ã medida que a placa avança e tendo uma largura aproximadamente igual ao comprimento da linha de placas de reacção, para incubar as linhas de placas de reacção quando estas avançam por incrementos;

    meios de transferência para transferir automaticamente uma porção da amostra do paciente de pelo menos alguns dos recipientes de amostras recebidos para uma cavidade de reacção correspondente numa linha de cavidades de reacção adjacente ã extremidade de entrada da superfície de incubação com amostras de pacientes ou suas diluições, dentro do intervalo de tempo medido, definindo a posição da linha adjacente ã extremidade de entrada da superfície de incubação o início da trajectória;

    meios de memória associados operativamente com os meios de transferência para recordar a localização na matriz de cada cavidade de reacção correspondente na linha contendo uma porção da amostra de um paciente transferida;

    uma primeira estação de processamento situada ao longo da trajectória tendo primeiro meios de remoção para remover simultaneamente a amostra do paciente e os analitos não ligados de cada cavidade de reacção na referida linha, primeiros meios de lavagem para lavar simultaneamente todas as cavidades de reacção numa linha e primeiras meios de adição para adicionar rapidamente uma quantidade pré-determinada de um conjugado de reporter/segundo reagente a cada uma das cavidades de reacção numa linha;

    uma segunda estação de processamento, situada ao longo da trajectória e deslocada da primeira estação de processamento no sentido do processamento, tendo segundo meios de remoção para remover simultaneamente o conjugado não ligado de repórter/segundo reagen-56/ /

    f te de todas as cavidades de reacção na referida linha, segundos meios de lavagem para lavar simultaneamente todas as cavidades de reacção na referida linha, e segundos meios de adição para adicionar rapidamente uma quantidade pré-determinada de um substrato cromogénico a cada uma das cavidades de reacção na referida linha;

    meios de adição de solução de paragem para adicionar rapidamente uma solução de paragem a cada uma das cavidades de reacção na referida linha;

    meios de determinação, adjacentes ã extremidade de saída da superfície de incubação para determinar uma característica de cada cavidade de reacção processada na referida linha, definindo a posição dos meios de determinação o fim da trajectória; e meios de transmissão, associados operativamente com os meios de memória, para transmitir um sinal representativo da característica determinada de cada uma das cavidades de reacção na referida linha e a identidade do recipiente da amostra correspondente para um dispositivo visualizador.
11. 11.- Instrumento de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por incluir ainda meios para o posicionamento selectivo das primeira e segunda estações de processamento ao longo da trajectória relativamente às extremidades de entrada e de saída da superfície de incubação, de modo que uma primeira distância, variável, entre a extremidade de entrada da superfície de incubação e a primeira estação de processamento define um primeiro tempo variável de incubação e de modo que uma segunda distância variável entre a primeira estação de processamento e a segunda estação de processamento define um segundo tempo variável de incubação.

    / /
12. 12. - Instrumento de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por incluir ainda meios para posicionar selectivamente os meios de adição da solução de paragem ao longo da trajectória relativamente ã segunda estação de processamento de modo que uma terceira distância variável entre as mesmas define um terceiro tempo variável de incubação.
13. 13. - Instrumento de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por os primeiros e segundos meios de adição incluírem, cada um, meios para a localização da posição de cada cavidade de reacção na referida linha e meios para adicionar em série o conjugado de repórter /segundo reagente e o substrato cromogénico, respectivamente, a cada uma das cavidades de reacção localizadas na referida linha .
14. 14. - Instrumento de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por os segundos meios de adição em série terem meios para a montagem nos mesmos dos meios de adição da solução de paragem.
15. 15. - Instrumento de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por os primeiros e os segundos meios de remoção incluírem, cada um deles,um certo número de tubos de aspiração alongados, um tubo de aspiração por cada cavidade de reacção na referida linha, móveis entre uma posição recolhida e uma posição estendida, tendo cada tubo de aspiração uma entrada de fluido que pode ser posicionada por cima das partes superiores abertas das cavidades de reacção quan do os tubos de aspiração estão na posição recolhida e susceptíveis de serem colocados adjacentes ãs partes inferiores das cavidades de reacção quando os tubos da aspiração estão na posição estendida, incluindo ainda cada um dos meios de remoção meios de vácuo para estabelecer um vazio parcial regulado nos tubos de aspiração e meios para deslocar de maneira controlada os tubos de aspiração entre as posições recolhidas e estendidas, em coordenação com os meios de vãcuo, de modo que as entradas de fluido fiquem em contacto com a superfície do fluido nas cavidades de reacção ã medida que o fluido está a ser removido, de modo que um menisco do fluido, formado pela tensão superficial do fluido, lava e seca as cavidades de reacção.
16. 16. - Instrumento de acordo com a reivindicação 15, caracterizado por os meios para remover de maneira controlada os tubos de aspiração funcionarem de tal modo que a velocidade com que o menisco do fluido baixa nas cavidades de reacção é igual ã velocidade com que os tubos de aspiração se deslocam para as posições estendidas.
17. 17. - Instrumento de acordo com a reivindicação 15, caracterizado por os primeiros e segundos meios de lavagem incluírem, cada um, um certo número de tubos de lavagem, um tubo de lavagem para cada cavidade de reacção na referida linha, tendo cada tubo de lavagem uma saída de fluido situada de modo a dirigir um fluxo de alta pressão da solução de lavagem sobre um tubo de aspiração adjacente para incidir sobre o tubo de aspiração adjacente e dispersar a solução de lavagem no interior de uma cavidade de reacção correspondente situada por baixo do mesmo, e meios de carga dos tubos, associados operativamente com os primeiros e segundos meios de remoção, para carregar os tubos de lavagem com sucessivos fluxos de alta pressão de solução de lavagem para lavar vigorosamente as cavidades de reacção e os tubos de aspiração.

    -58·
18. 18, - Instrumento de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por os tubos de aspiração estarem posicionados de maneira substancialmente vertical e por os tubos de lavagem estarem posicionados relativamente aos tubos de aspiração segundo um ângulo de cerca de 15°.
19. 19. - Instrumento de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por os tubos de lavagem terem um diâmetro interior de cerca de 0,68 mm(0,027) e por os meios de carga dos tubos de lavagem incluírem uma bomba líquida operada magneticamente por um solenoide com um deslocamento suficiente para distribuir aproximadamente 0,125 ml de solução de lavagem a cada tubo de lavagem e um período dos passeios de cerca de 100 a 200 ms quando o solenoide for excitado para obter os fluxos de alta pressão da solução de lavagem.
20. 20. - Instrumento de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por os meios de determinação possuírem um fotodensímetro óptico com um certo número de filtros ópticos com características de transmissão da luz diferentes.
21. 21, - Instrumento automático para a análise de amostras de pacientes para ser utilizado com placas de reacção do tipo que possui um certo número de cavidades de reacção com as partes superiores abertas, situadas num agregado regular em matriz de linhas e colunas sendo as cavidades de reacção do tipo que contém um primeiro reagente susceptível de ligação com um analito suspeito de estar presente nas amostras dos pacientes, caracterizado por compreender:

    meios de guia para guiar uma placa de reacção à medida que a placa avança ao longo de uma trajectória;

    -55meios de accionamento para fazer avançar por incrementos a placa de reacção ao longo da trajectória num sentido de processamento com as linhas perpendiculares ã trajectória e a intervalos de tempo medidos, tendo cada avanço incremental um comprimento aproximadamente igual ã distância entre linhas adjacentes de placas de reacção;

    uma superfície de incubação com temperatura controlada, tendo uma extremidade de entrada e uma extremidade de saída, posicionada ao longo da trajectória de modo a ficar directamente por baixo da placa de reacção à medida que a placa avança e tendo uma largura aproximadamente igual ao comprimento da linha de placas de reacção para incubar as linhas de placas da reacção ã medida que a placa avança por incrementos;

    uma estação de enchimento com meios para carregar uma linha de cavidades de reacção adjacente ã extremidade de entrada da superfície de incubação com amostras dos pacientes ou diluições das mesmas, dentro do intervalo de tempo medido, definindo a posição da referida linha adjacente ã extremidade de entrada da superfície de incubação o início ch trajectória;

    uma primeira estação de processamento ao longo da trajectória com meios de remoção para remover simultaneamente a amostra do paciente e o analito não ligado de cada uma das cavidades de reacção na referida linha, primeiros meios de lavagem para lavar simultaneamente todas as cavidades de reacção da referida linha e primeiros meios de adição para adicionar rapidamente uma quantidade pré-determinada de um conjugado de repórter/segundo reagente a cada uma das cavidades de reacção na referida linha;

    -60uma segunda estação de processamento posicionada ao longo da trajectória e afastada da primeira estação de processamento no sentido do processamento, tendo segundos meios de remoção para remover simultaneamente o conjugado de repórter/segundo reagente não ligado de cada uma das cavidades de reacção na referida linha, segundos meios de lavagem para lavar simultaneamente todas as cavidades de reacção na referida linha e segundos meios de adição para adicionar rapidamente uma quantidade pré-determinada de um substrato cromogénico a cada cavidade de reacção na referida linha;

    meios de adição da solução de paragem para adicionar rapidamente uma solução de paragem a cada cavidade de reacção na referida linha; e meios de determinação, adjacentesã extremidade de saída da superfície de incubação para determinar uma característica de cada uma das cavidades de reacção processadas na referida linha, definindo a posição dos meios de determinação o fim da trajectória. >
22. 22, - Instrumento de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por incluir ainda meios para posicionar selectivamente as primeira e segunda estações de processamento ao longo da trajectória relativamente ãs extremidades de entrada e de saída da superfície de incubação de modo que uma primeira distância variável entre a extremidade de entrada da superfície de incubação e a primeira estação de processamento define um primeiro tempo variável de incubação e de modo que uma segunda distância variável entre a primeira estação de processamento e a segunda estação de processamento define um segundo tempo variável de incubação.
23. 23. - Instrumento de acordo com a reivindicação 22, caracteri-61 zado por incluir ainda meios para posicionar selectivamente os meios de posicionamento da solução de paragem ao longo da trajectória relativamente ã segunda estação de processamento de modo que uma terceira distância variável entre as mesmas define um terceiro tempo variável de incubação.
24. 24. - Instrumento de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por os primeiro e segundo meios de adição incluírem meios paraalocalização de cada uma das cavidades de reacção na referida linha e meios para adicionar em série o conjugado de reporta7'^;/segundo reagente e o substrato cromogénico, respectivamente, a cada uma das cavidades de reacção localizadas na referida linha.
25. 25. - Instrumento de acordo com a reivindicação 24, caracterizado por os segundos meios de adição em série servirem para a montagem dos meios de adição de paragem.
26. 26. - Instrumento de acordo com a reivindicação 21,caracterizado por os primeiros e segundos meios de remoção incluírem, cada um, um certo número de tubos de aspiração alongados, um tubo de aspiração por cada cavidade de reacção na referida linha, móveis entre uma posição recolhida e uma posição estendida, tendo cada tubo de aspiração uma entrada de fluido que pode ser posicionada por cima das partes superiores abertas das cavidades de reacção quando os tubos de aspiração estão na posição recolhida e posicionáveis junto das partes inferiores das cavidades de reacção quando os tubos de aspiração estão na posição estendida, incluindo ainda cada meio de remoção meios de vácuo para estabelecer um vazio parcial regulado nos tubos de aspiração e meios para deslocar de maneira

    -62/ c

    controlada os tubos de aspiração entre as posições recolhida e estendida, em coordenação com os meies cie vácuo, de modo que as entradas do fluido fiquem em contacto com o fluido nas cavidades de reacção ã medida que o fluido está a ser removido, de modo que um menisco do fluido, formado pela tensão superficial do fluido, lava e seca as cavidades de reacção.
27. 27. - Instrumento de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por os meios para deslocar de maneira controlada os tubos de aspiração funcionarem de tal modo que a velocidade a que o menisco do fluido baixa nas cavidades de reacção seja igual à velocidade com que os tubos de aspiração são deslocados para as posições estendidas .
28. 28. - Instrumento de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por os primeiros e os segundos meios de lavagem incluírem cada um, um certo número de tubos de lavagem, um tubo de lavagem por cada cavidade de reacção na referida linha, tendo cada tubo de lavagem uma saída de fluido situada por forma a dirigir um fluxo de alta pressão da solução de lavagem sobre um tubo de aspiração adjacente para incidir sobre o tubo de aspiração adjacente e dispersar a solução de lavagem no interior de uma cavidade de reacção correspondente posicionada por baixo, e meios de carga dos tubos, associados operativamente com os primeiros e segundos meios de remoção,para carregar os tubos de lavagem com fluxos de alta pressão sucessivos de solução de lavagem para lavar vigorosamente as cavidades de reacção e os tubos de aspiração.
29. 29. - Instrumento de acordo com a reivindicação 28, caracterizado por os tubos de aspiração serem posicionados de maneira subs

    -634· tancialmente vertical e por os tubos de lavagem serem posicionados em relação aos tubos de aspiração segundo um ângulo de aproximadamente 15°.
30. 30. - Instrumento de acordo com a reivindicação 28, caracterizado por os tubos de lavagem terem um diâmetro interior de aproximadamente 0,68 mm(0,027)e os meios de carga dos tubos incluírem uma bomba de líquido operada magneticamente por um solenoide com um deslocamento suficiente para distribuir aproximadamente 0,125 ml de solução de lavagem para cada tubo de lavagem e um período de passeio de deslocamento de aproximadamente 100 a 200 ms quando o solenoide é excitado para obter os fluxos de alta pressão da solução de lavagem .
31. 31. - Instrumento de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por os meios de determinação terem um fotodensímetro com um certo número de filtros ópticos com características de transmissão da luz diferentes.
32. 32. - Instrumento automatizado para análise de amostras de pacientes para identificar de maneira positiva e manter a identidade de um certo número de amostras de pacientes contidas em recipientes individuais de amostras, caracterizado por compreender:

    um suporte dos recipientes com porções de indexação e um certo número de receptáculos para receber de maneira amovível os recipientes das amostras em locais discretos;

    um dispositivo de identificação que gera um sinal único, indicativo do recipiente identificado de uma amostra, devendo o recipiente identificado da amostra ser recebido num receptáculo seleccionado;

    um agregado de sensores com porções de indexação adaptáveis ãs porções de indexação do recipiente para orientar o supor

    -64<___ / porte de recipientes no agregado de sensores e tendo um certo número de sensores posicionados em pontos discretos para detectar a recepção do recipiente de amostra identificado no receptáculo seleccionado; e um sistema de controlo, associado operativamente com os meios de identificação e o agregado de sensores, tendo um processador de sinais que processa os sinais únicos e impedindo a identificação de uma outra amostra até que a amostra identificada seja detectada como tendo sido recebida no receptáculo seleccionado, uma memória qué recorda a localização discreta do recipiente de amostra rece bica e um indicador que indica a um operador que o recipiente identificado de amostra foi recebido no receptáculo seleccionado.
33. 33,- Instrumento de acordo com a reivindicação 32 para ser usado com placas de reacção do tipo que possui um certo número de cavidades de reacção com as partes superiores abertas em locais conhecidos, incluindo o instrumento um sistema de tranferência de amostras de pacientes, associado operativamente com o sistema de controlo, que transfere uma porção de cada amostra do paciente para uma das cavidades de reacção correspondente, caracterizado por incluir:

    um transportador linear de placas de reacção tendo guias das placas de reacção que guiam a placa de reacção num sentido de processamento, um dispositivo transportador de placas de reacção para fazer avançar a placa de reacção nas guias das placas de reacção, e um sensor de posição das placas de reacção que gera um sinal de posição das placas de reacção;

    um transportador linear de suportes de recipientes, posicionado de maneira substancialmente paralela ao transportador de placas de reacção, tendo guias dos suportes dos recipientes que guiam o suporte dos recipientes, um accionamento do transportador de suportes de recipientes para fazer avançar o suporte de recipientes nas guias dos suportes de recipientes e um sensor da posição dos suportes de recipientes que gera um sinal de posição dos suportes de recipientes;

    um elemento transversal horizontal, colocado substancialmente perpendicular aos transportadores e suficientemente acima dos transror tadores para permitir que a placa de reacção e o suporte de recipientes passem por baixo da mesma guando avançam;

    um carro da·pipeta móvel horizontalmente, montado de maneira móvel no elemento transversal horizontal, tendo um sensor de posição horizontal que gera um sinal de posição do carro da pipeta e um accionamento do carro da pipeta;

    uma pipeta automática móvel verticalmente, posicionada no carro da pipeta móvel horizontalmente, tendo uma extremidade de recepção do diluente e uma extremidade com uma ponta aberta, e um sensor do nível do fluido adjacente ã extremidade com a ponta aberta, que gera um sinal de nível do fluido e um accionamento automático da pipeta;

    um mecanismo de controlo do diluente com uma seringa de precisão automática com ligação de fluidos a uma válvula automática de duas posições com uma abertura de alimentação ligada a uma alimentação de diluente e uma abertura da pipeta com uma ligação para fluidos ã extremidade de recepção do diluente, um sensor de posição da válvula que gera um sinal de posição da válvula e um sensor de posição da seringa que gera um sinal de posição da seringa; e

    -66/ /

    um emissor que emite o sinal de posição da placa de reacção, o sinal de posição do suporte de recipientes, o sinal de posição do carro da pipeta e um sinal do nível do fluido para o processador de sinais , operando o sistema de controlo o accionamento do transportador de placas de reacção, o accionamento do transportador de suportes de recipientes, o accionamento do carro da pipeta, o accionamento automático da pipeta, a válvula automática de duas posições e a seringa de precisão automática para transferir uma porção de pelo menos algumas das amostras de pacientes dos recipientes de amostras recebidos para as cavidades de reacção correspondentes nos locais conhecidos relembrando a memória do sistema de controlo a localização conhecida de cada posição de amostra de paciente transferida.
34. 34.- Instrumento automático de análise de amostras de pacientes para ser usado com placas de reacção do tipo que possui abas que se estendem para fora e um certo número de cavidades de reacção com as partes superiores abertas, situadas num agregado regular em forma de matriz com linhas e colunas, sendo as cavidades de reacção do tipo que contém um primeiro reagente susceptível de se ligar com um analito suspeito de estar presente nas amostras dos pacientes, caracterizado por compreender:

    um transportador de placas de reacção com dois carris alongados, substancialmente paralelos, para guiamento, definindo uma trajectória, tendo os carris de guia ranhuras longitudinais que recebem de maneira deslizante as abas das placas de reacção de modo que as linhas de placas de reacção são substancialmente perpendiculares ã trajectória;

    um accionamento do transportador de placas de reacção por incrementos que faz avançar por incrementos a placa de reacção nos carris e ao longo da trajectoria num sentido de processamento a intervalos de tempo medidos, tendo cada um dos incrementos de avanço um comprimento aproximadamente igual à distância entre as linhas de placas de reacção;

    uma placa de incubação com temperatura controlada, tendo uma extremidade de entrada e uma extremidade de saída posicionada transversalmente em relação à trajectoria e uma superfície de incubação posicionada ao longo da trajectória de modo a ficar directamente por baixo, mas não em contacto directo com a placa de reacção à medida que se faz avançar a placa nos carris e tendo uma largura aproximadamente igual ao comprimento da linha de placas de reacção para incubar as linhas de placas de reacção à medida que se faz avançar por incrementos a placa; e uma estação de enchimento com uma pipeta automática móvel que carrega uma linha de cavidades de reacção adjacentes à extremidade de entrada da superfície de incubação com amostras de pacientes ou diluições das mesmas, dentro do intervalo de tempo medido, definindo a posição da linha adjacente à extremidade de entrada da superfície de incubação o início da trajectoria.
35. 35·- Instrumento de acordo com a reivindicação 34-, que inclui uma primeira estação de processamento móvel verticalmente posiciona da ao longo da trajectoria e afastada da extremidade de entrada da superfície de incubação no sentido do processamento, de modo que a distância entre as mesmas define um primeiro intervalo de tempo de incubação, caracterizado por compreender:

    um certo número de tubos de aspiração alongados, um tubo de aspiração por cada cavidade de reacção numa linha, para remover

    -63simultaneamente a amostra do paciente e o analito não ligado de cada cavidade de reacção numa linha, móvel com a estação de processamento entre uma posição recolhida e uma posição estendida, tendo cada tubo de aspiração uma entrada de fluido que pode ser situada por cima das partes superiores abertas das cavidades de reacção quando os tubos de aspiração estão na posição recolhida e podendo ser colocados junto das partes inferiores das cavidades de reacção quando os tubos de aspiração estão na posição estendida, e meios de vãcuo para estabelecer um vazio parcial regulado nos tubos de aspiração;

    um certo número de tubos de lavagem, um tubo de lavagem por cada cavidade de reacção numa linha, tendo cada tubo de lavagem uma saída de fluido posicionada de modo a dirigir um fluxo de alta pressão da solução de lavagem sobre um tubo de aspiração adjacente e dispersar a solução de lavagem no interior de uma cavidade de reacção correspondente posicionada por baixo da mesma, e meios de carga dos tubos de lavagem, para carregar simultaneamente os tubos de lavagem com sucessivos fluxos de alta pressão da solução de lavagem para lavar vigorosamente as cavidades de reacção e os tubos de aspiração;

    meios para deslocar de maneira controlada a primeira estação de processamento verticalmente de modo que os tubos de aspiração são móveis entre as posições recolhida e estendida, em coordenação com os meios de vãcuo e de modo que as entradas do fluido se mantenham em contacto com o fluido nas cavidades de reacção ã medida que o fluido está a ser removido, de modo que um menisco de fluido, formado pela tensão superficial do fluido, lava e seca as cavidade de reacção; e primeiros meios de adição para adicionar rapidamente uma quan

    -69tidade pré-determinada de um conjugado de repórter/segundo reagente a cada cavidade de reacção numa linha.
36. 36.- Instrumento de acordo com a reivindicação 35, que inclui uma segunda estação de processamento, posicionada ao longo da trajectória e afastada da primeira estação de processamento no sentido do processamento de modo que a distância entre elas define um segundo tempo de incubação, caracterizado por compreender:

    um certo número de tubos de aspiração alongados, um tubo de aspiração por cada cavidade de reacção numa linha, para remover simultaneamente o conjugado de reporter/segundo reagente não ligado de cada cavidade de reacção numa linha, móvel com a estação de processamento entre uma posição recolhida e uma posição estendida, tendo cada tubo de aspiração uma entrada do fluido que pode ser situada por cima das partes superiores das cavidades de reacção quando os tubos de aspiração se encontram na posição recolhida e susceptiveis de serem posicionados junto das partes inferiores das cavidades de reacção quando os tubos de aspiração se encontram na posição estendida, e meios de vácuo para estabelecer um vazio parcial regulado nos tubos de aspiração;

    um certo número de tubos de lavagem, um tubo de lavagem por cada cavidade de reacção numa linha, tendo cada tubo de lavagem uma saída do fluido posicionada por forma a dirigir um fluxo de alta pressão da solução de lavagem sobre um tubo de aspiração adjacente para incidir no tubo de aspiração adjacente e dispersar a solução de lavagem no interior de uma cavidade de reacção correspondente posicionada por baixo do mesmo, e meios de carga dos tubos de lavagem, para carregar simultaneamente os tubos de carga com

    -70sucessivos fluxos de alta pressão de solução de lavagem para lavar vigorosamente as cavidades de reacção e os tubos de aspiração;

    meios para deslocar de maneira controlada a segunda estação de processamento verticalmente de modo que os tubos de aspiração são móveis entre as posições recolhida e estendida, em coordenação com os meios de vácuo, de modo que as entradas do fluido se mantêm em contacto com o fluido nas cavidades de reacção à medida queo fluido está a ser removido, de maneira que um menismo de fluido, formado pela tensão superficial do fluido, lava e seca as cavidades de reacção; e um segundo meio de adição para adicionar rapidamente uma quantidade pré-determinada de um substrato cromogénico a cada cavidade de reacção numa linha.
37. 37. - Instrumento de acordo com a reivindicação 35, caracterizado por os tubos de aspiração estarem posicionados de maneira substancialmente vertical e por tubos de lavagem estarem posicionados em relação aos tubos de aspiração segundo um ângulo de aproximadamente 15°.
38. 38. - Instrumento de acordo com a reivindicação 35, caracterizado por os tubos de lavagem terem um diâmetro interior de aproximadamente 0,68 mm (0,027) e os meios de carga dos tubos de lavagem incluirem uma bomba de líquido operada por um solenoide tendo um deslocamento suficiente para fornecer aproximadamente 0,125 ml da solução de lavagem a cada tubo de lavagem e um período do passeio de deslocamento de aproximadamente 100 a 200 ms, quando o solenoide é excitado para obter os fluxos de alta pressão da solução de lava gem.
39. 39. Instrumento automatizado para a análise de amostras de pacientes para identificar de maneira positiva e manter a identidade de um certo número de amostras de pacientes contidas em recipientes de amostras individuais para utilizar com placas de reacção do tipo que possui um certo número de cavidades de reacção com as partes superiores abertas, situadas num agregado em forma de matriz com linhas e colunas, caracterizado por compreender:

    um suporte de recipientes com um certo número de receptáculos para receber de maneira amovível os recipientes de amostras em locais discretos;

    meios de identificação para identificar um recipiente de amostras com uma amostra de um paciente, sendo o recipiente de amostras identificado posicionado num receptãculo seleccionado;

    meios sensores para detectar a presença do recipiente identificado com amostra no receptãculo seleccionado;

    meios de prevenção, associados operativamente com os meios de identificação e os meios sensores para impedir a identificação de um outro recipiente de amostras até que o recipiente identificado de amostras seja detectado como estando presente no receptãculo seleccionado;

    duas linhas de processamento independentes com meios para receber e processar independentemente duas placas de reacção;

    meios de transferência para transferir automaticamente uma porção de cada amostra de um paciente de cada recipiente recebido de amostras para uma cavidade de reacção correspondente em cada uma das duas placas de reacção; e meios de memória, associados operativamente com os meios de transferência, para relembrar a localização na matriz de cada cavidade de reacção correspondente de cada uma das duas placas contendo uma porção de amostra de um paciente transferida.

    4-0.- Instrumento para remover fluido de amostras de uma cavidade de reacção com a parte superior aberta, caracterizado por compreender:

    um tubo de aspiração alongado, móvel entre uma posição recolhida e uma posição estendida e tendo uma entrada de fluido que pode ser posicionada por cima da parte superior da cavidade de reacção quando o tubo de aspiração está numa posição recolhida e que pode ser posicionada adjacente à parte inferior da cavidade de reacção quando o tubo de aspiração está na posição estendida, e meios e vácuo para estabelecer um vácuo parcial regulado nos tubos de aspiração;

    meios para mover de maneira controlada o tubo de aspiração verticalmente, de modo que o tubo de aspiração é susceptível de ser movido entre as posições recolhida e estendida, em coordenação com os meios de vácuo, de modo que a velocidade com que baixa o tubo para o nível do fluido diminui na cavidade, permitindo que a entrada de fluido do tubo de aspiração se mantenha em contacto com o fluido na cavidade de reacção enquanto se está a retirar o fluido, de modo que o menisco do fluido formado pela tensão superficial do fluido mantém a cavidade de reacção substancialmente seca; e um tubo de lavagem com uma saída de fluido, estando o referido tubo de lavagem posicionado de modo a dirigir um fluxo de alta pressão de solução de lavagem a incidir no referido tubo de

    -72-Α aspiração e distribuir a solução de lavagem para o interior da referida cavidade de reacção colocada por baixo do mesmo, e meios para carregar o tubo de lavagem com o referido fluxo a alta pressão da solução de lavagem para lavar a cavidade de reacção e o tubo de aspiração.
40. 41, - Instrumento de acordo com a reivindicação 40, caracterizado por o diâmetro interior do tubo de aspiração ser de aproximadamente 0,838 mm (0,033)·
41. 42. - Instrumento de acordo com a reivindicação 40, caracterizado por a cavidade de reacção ser uma microcavidade.
42. 43·- Instrumento de acordo com a reivindicação 40, caracterizado por os meios de vácuo compreenderem uma bomba de vácuo.
43. 44. - Instrumento de acordo com a reivindicação 40, caracterizado por o tubo de aspiração estar ligado a uma conduta de aspiração, estando esta conduta por sua vez ligada aos referidos meios de vácuo e sendo controlada por uma bomba de líquido operada por um solenoide.
44. 45. - Instrumento de acordo com a reivindicação 40, caracterizado por o tubo de aspiração estar colocado substancialmente vertical e por o tubo de lavagem estar colocado segundo um ângulo de aproximadamente 15° em relação ao tubo de aspiração.
45. 46. - Instrumento de acordo com a reivindicação 40, caracterizado por o tubo de lavagem ter um diâmetro interior de aproximadamente 0,686 mm (0,027).
46. 47. - Instrumento de acordo com a reivindicação 40, caracterizado por os meios de carga do tubo de lavagem incluirem uma bomba de líquido operada por um solenoide.