PT850221E - Derivados de meta-guanidina ureia tioureia ou acido aminobenzoico azaciclico como antagonistas de integrina - Google Patents

Derivados de meta-guanidina ureia tioureia ou acido aminobenzoico azaciclico como antagonistas de integrina Download PDF

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PT850221E
PT850221E PT96932142T PT96932142T PT850221E PT 850221 E PT850221 E PT 850221E PT 96932142 T PT96932142 T PT 96932142T PT 96932142 T PT96932142 T PT 96932142T PT 850221 E PT850221 E PT 850221E
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carbonyl
phenyl
acetyl
aminoiminomethyl
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PT96932142T
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Bipinchandra Nanubhai Desai
Mark Andrew Russell
Peter Gerrard Ruminski
Joseph Gerace Rico
Michael Clare
Paul W Collins
Thomas Edward Rogers
Richard John Lidmark
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Searle & Co
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Description

iSO 2·2^ - 1 -
C—U DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE META-GUANIDINA, UREIA, TIOUREIA OU ÁCIDO AMINOBENZÓICO AZACÍCLICO COMO ANTAGONISTAS DE INTEGRINA"
Este pedido reivindica prioridade, sob o 35 de USC §119 (e), do pedido provisório dos Estado Unidos com o n° de Série 60/003.277, entrado a 30 de Agosto de 1995.
Domínio da Invenção A inveção presente diz respeito a agente farmacêuticos (compostos) que são úteis como antagonistas de integrina ανβ3 e como tal são úteis em composições farmacêuticas e em métodos para tratar estados medisdos por ανβ3, por inibirem ou antagonizarem as integrinas ανβ3.
Estado dos Conhecimentos da Invenção
As integrinas são um grupo de glicoproteínas da superfície da célula que medeiam a adesão celular e portanto são mediadores úteis das interacções de adesão celular que ocorrem durante diversos processos biológicos. As integrinas são heterodímeros compostos por sub-unidades polipeptídicasa e β que se ligam de forma não covalente. Até este momento forma identificadas onze sub-unidades α diferentes e seis sub-unidades β diferentes. As diversas sub- -2- A.( unidades a podem combinar-se com várias sub-unidades β para se obterem integrinas distintas. A integrina identificada como ανβ3, (também conhecida como o receptor da vitronectina) tem sido identificada como uma integrina que desempenha um papel em diversas disfunções ou estados de doença incluindo metástase de tumores, crescimento de tumores sólidos (neoplasia), osteoporose, doença de Paget, hipercalcemia humoral da lesão maligna, angiogénese, incluindo a angiogénese tumoral, retinopatia, artrite, incluindo artrite reumatóide, doença periodontal, psoríase e migração de células musculares lisas (por exemplo, restenose). Para além disso, descobriu-se que tais agentes poderiam ser úteis como antivirais, antifungicos e antimicrobianos. Portanto, os compostos que inibam selectivamente ou antagonizem ανβ3 seriam beneficiais para o tratamento de tais estados. Já se demonstrou que a integrina ανβ3 e outras integrinas contendo av se ligam a diversas macromoléculas da matriz que conêm sub-unidades Arg-Gly-Asp (RGD). Os compostos que contêm a sequência RGD são miméticos de ligandos extracelulares da matriz, por forma a ligarem-se aos receptores da superfície da célula. No entanto, também se sabe que os péptidos RGD em geral são não selectivos para as integrinas dependentes de RGD. Por exemplo, a maior parte dos péptidos RGD que se ligam a ανβ3, também se ligam a ανβ5, ανβι e a απΐ3β3. Sabe-se que o antagonismo da plaquete αιη,β3 (também conhecida como receptor do fibrinogénio) bloqueia a agregação de plaquetas em humanos. Para evitar efeitos colaterais de hemorragia quando se tratem os estados ou situações de doença ligados à integrina ανβ3, seria vantajoso desenvolverem-se compostos que fossem antagonistas selectivos de ανβ3, por oposição a αιη>β3. A invasão por células tumorais ocorre por um processo em três passos: 1) ligação de células tumorais à matriz extracelular; 2)dissolução -3- Αϋ ^3·'- Υ ^ proteolítica da matriz; e 3) movimento das células através da barreira dissolvida. Este processo pode ocorrer repetidamente e pode resultar em metástases em locais diferentes do do tumor original.
Seftor et al. (Proc. Natl. Acad. Sei. USA, Vol. 89 (1992) 1557-1561) mostraram que a integrina ανβ3 desempenha uma função biológica na invasão de células por melanoma. Montgomery et al. (Proc. Natl. Acad. Sei. USA, Vol. 91 (1994) 8856-60) demonstraram que a integrina ανβ3 expressa nas células de melanoma humano promove um sinal de sobrevivência, protegendo as células da apoptose. Uma mediação do caminho metastático da célula tumoral através de uma interferência com o receptor celular de adesão da integrina ανβ3 para impedir metástase do tumor seria beneficiai.
Brooks et al. (Cell, Vol. 79 (1994) 1157-1164) provaram que os antagonistas de ανβ3 proporcionam uma via terapêutica para o tratamento da neoplasia (inibição do crescimento de tumor sólido), uma vez que a administração sistémica de antagonistas de ανβ3 provoca uma regressão brutal de diversos tumores humanos histologicamente distintos. O receptor de adesão integrina ανβ3 foi identificado como marcador de vasos sanguíneos andiogénicos no pinto e no homem e portanto esse receptor desempenha um papel fulcral na angiogénese ou na neovascularização. A angiogénese caracteriza-se pela invasão, migração e proliferação de células de músculo liso e endoteliais. Os antagonistas de ανβ3 inibem este processo ao promoverem a apoptose de células na neovasculatura. A crescimento de novos vasos sanguíneos, ou angiogénese, também contribui para estados patológicos tais como a retinopatia diabética (Adónis et al., Amer. J. Ophtal., Vol. 118, (1994) 445-450) e a artrite reumatóide (Peacock et al., J. Exp. Med. Vol. 175, (1992), 1135-1138). Portanto, os antagonistas de ανβ3 seriam úteis para o -4- tratamento de estados associados com a neovascularização (Brooks et al., Science, Vol. 264, (1994), 569-571).
Foi descrito que o receptor ανβ3 da superfície da célula é a principal integrina nos osteoclastos que são responsáveis pela ligação ao osso. Os osteoclastos provocam resorção óssea, e quando essa actividade de resorção óssea excede a actividade de formação óssea, resulta em osteoporose (uma perda de osso), da qual resulta um aumento da frequência de fracturas, incapacitação e uma mortalidade aumentada. Demonstrou-se que os inibidores de ανβ3 são inibidores potentes da actividade osteoclástica, tanto in vitro [Sato et al, J. Cell. Biol., Vol. 111 (1990) 1713-1723], como in vivo [Fisher et al., Endocrinology, Vol. 132 (1993) 1411-1413]. Antagonisando-se ανβ3 resulta uma menor resorção óssea e portanto restabelece-se o o equilíbrio normal das actividades de formação e de resorção. Seria portanto benéfico providenciarem-se antagonistas de ανβ3 que sejam inibidores da resorção óssea e são portanto úteis para o tratamento ou para a prevenção da osteoporose. O papel da integrina ανβ3 na migração das células de músculo liso também a toma num alvo terapêutico para a prevenção ou inibição da hiperplasia neointimal que é a principal causa da restenose após intervenções vasculares (Choi et al, J. Vasc. Surg. Vol. 19(1) (1994) 125-34). Seria benéfico impedir-se ou inibir-se a hiperplasia neointimal através de agentes farmacêuticos para impedir ou inibir a restenose.
White (Current Biology, Vol. 3(9) (1993) 596-599) verificou que o adenovírus utiliza ανβ3 para entrar nas células hospedeiras. A integrina é aparentemente indispensável para a endocitose da partícula virai, e pode ser necessária para a penetração do genoma virai no citoplasma da célula hospedeira. Portanto, os compostos que inibem ανβ3 encontrariam utilidade como agentes antivirais. -5-
Na EP-A 0 445.796 revelam-se ácido acético e derivados com a fórmula geral H2N(HN)-C-X-CO-ZCH(Q1)COOQ2 na qual X pode ser para-fenileno. Tais compostos podem actuar como antagonistas de receptor de fíbrinogénio Ilb/IIIa.
Na WO 94/18981 revelam-se compostos com as fórmulas (1)-(3) o f ?* (i) P) II II, Q- (CH3)„— a—AE— C—tjj— r5-C-Hj R·* R1 O Rs 9' II 1 I ,
Q- a—AS—C -as~C -HJ
HN HNSOj-
COjH CH, que são úteis como antagonistas de receptores de fíbrinogénio.
Sumário da Invenção
A invenção presente diz respeito a uma classe de compostos que é representada pela Fórmula I
-6- Αί h^rb
[ ou a um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que A seja
—N Y1
RS N—R7 I R*
1 O em que Y seja seleccionado de entre o grupo constituído por N-R , O, e S; R2 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H; alquilo Q-Ci0; arilo; hidroxilo; alcoxilo CrCio; ciano; nitro; amino; alcenilo C2-C6; alcinilo C2-C6; amido; alquil CrCio-carbonilo; arilcarbonilo; alcoxil Ci-C10-carbonilo; ariloxicarbonilo; haloalquil CrCio-carbonilo; haloalcoxil Ci-Cio-carbonilo; alquil CrCio-tiocarbonilo; ariltiocarbonilo; aciloximetoxicarbonilo; alquilo CrCi0 substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo Q-Qo, halogéneo, hidroxilo, haloalquilo CrCio, ciano, nitro, carboxilo, amino, alcoxilo Q-Cio, arilo ou arilo substituído opcionalmente com um ou mais halogéneos, haloalquilo CpCio, alquilo CpCio, alcoxilo Ci-C]0, ciano, alquil Cr Cio-sulfonilo, alquiltio, nitro, carboxilo, amino, hidroxilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterociclos C4-C12, ou heterociclos monocíclicos C4-C12 fundidos a benzeno; arilo substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo Q-Cio, hidroxilo, alquilo CpCio, alcoxilo Q-Cio, metilenodioxilo, etilenodioxilo, ciano, nitro, alquil CpCio-tio, alquil Ci-Cio-sulfonilo; ácido sulfónico, sulfonamida, derivados de carboxílicos, amino, arilo, arilo fundido, heterociclos C4-C12, ou heterociclos monocíclicos C4-C12 fundidos a benzeno; heterociclos monocíclicos C4-C12; e heterociclos monocíclicos C4-Q2 opcionalmente substituídos com um -7- h*.rh ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo CpQo, hidroxilo, alquilo Cj-Cio, alcoxilo CpCio, amino, nitro, hidroxilo, derivados carboxílicos, ciano, alquil CrCio-tio, alquil CrCio-sulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo ou arilo fundido; ou R tomado em conjunto com R forme um heterociclo com 4 a 12 membros contendo dois átomos de azoto, substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre o grupo constituído por alquilo Ci-C!0, hidroxilo, ceto, alcoxilo Q-Qo, halo, fenil, amino, carboxilo ou éster carboxílico, e fenilo fundido; R2 tomado em conjunto com R7 forme um anel heteraromático com 5 membros substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo CpCio, fenilo e hidroxilo; 9 7 R tomado em conjunto com R forme um anel heteraromático com 5 membros fundido a um grupo fenilo; R (quando se não tome em conjunto com R) e R sejam seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por H; alquilo Cr Ci0; alcenilo C2-C6; alcinilo C2-C6; haloalquilo Ci-Ci0; arilalquilo Q-Qo; amino; alquil CpCio-amino; hidroxilo, alcoxilo CrCi0; arilamino; amido, alquil CrCi0 -carbonilo, arilcarbonilo; alcoxil Q-Qo -carbonilo; ariloxicarbonilo; haloalcoxil CpCio-carbonilo; alquil CrCi0-tiocarbonilo; ariltiocarbonilo; aciloximetoxicarbonilo; cicloalquilo C3-Cg; bicicloalquilo; arilo; acilo, benzoílo; alquilo substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo Q-Cio, halogéneo, hidroxilo, haloalquilo Ci-C10, ciano, nitro, derivados de carboxilo, amino, alcoxilo CpCjo; tio, alquil CpCio-tio, sulfonilo, arilo, aril-alquilo Q-Q, arilo substituído opcionalmente com um ou mais -8-substituintes seleccionados independentemente de entre halogéneo, haloalquilo CrCio, alquilo CrCio, alcoxilo Cj-Cio, metílenodioxilo, etilenodioxilo, alquil Cr Cjo-tio, haloalquil Q-Cio-tio, tio, hidroxilo, ciano, nitro, derivados de carboxilo, ariloxilo, amido, acilamino, amino, alquil CrCio-amino, di-alquil CpCio-amino, trifluoroalcoxilo CpCg, trifluorometilo, sulfonilo, alquil Ci-Ci0-sulfonilo, haloalquil CrC10-sulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterocíclicos monocíclicos C4-C12, heterocíclicos monocíclicos C4-C12 fundidos com benzeno; arilo substituído opcionalmente com com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo CpCio, alquilo CrC10, alcoxilo Cr C10, metilenodioxilo, etilenodioxilo, alquil Ci-Qo-tio, haloalquil CrCi0-tio, tio, hidroxilo, ciano, nitro, derivados de carboxilo, ariloxilo, amido, acilamino, amino, alquil Ci-Cio-amino, di-alquil Ci-Cio-amino, trifluoroalcoxilo C|-C6, trifluorometilsulfonilo, alquil CrCio-sulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterocíclicos monocíclicos C4-C12 ou heterocíclicos monocíclicos C4-C12 fundidos com benzeno; heterociclos monocíclicos C4-C12 substituídos opcionalmente com com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo Ci-Ci0, alquilo Cj-Cio, alcoxilo Q-C10, ariloxilo, amino, nitro, hidroxilo, derivados de carboxilo, ciano, alquil CpCio-tio, alquil Cr Cio-sulfonilo, arilo, arilo fundido; heterociclo-alquilos monocíclicos C4-Ci2 e bicíclicos C4-C12; -S02R10 em que R10 seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo Q-Cio, arilo e heteroclos monocíclicos C4-C12, todos eles substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo C1-C10, alquilo C1-C10, alcoxilo Ci-Ci0, ciano, nitro, amino, acilamino, trifluoroalquilo C1-C10, amido, alquil Ci-Cio-amino-sulfonilo, alquil Cj-Cio-sulfonilo, alquil Ci-Cio-sulfonilamino, trifluorometiltio, trifluoroacoxilo Ci-Cô-amino, trifluorometilsulfonilo, arilo, ariloxilo, tio, alquil Ci-Cio-tio, e heterocíclicos monocíclicos C4-Ci2; e -C(=0)R10, em que R10 seja tal como se definiu acima; -9-
ou NR7 e R8 quando tomados em conjunto, formem um sistema anelar monocíclico ou bicíclico, contendo um átomo de azoto, com 4-12 membros, substituído com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo Ci-Qo, derivados de carboxilo, arilo ou hidroxilo, e em que o referido sistema anelar pode conter opcionalmente um heteroátomo seleccionado de entre o grupo constituído por O, N, e S; R5 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo Cp Cio, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, benzilo, e fenetilo; A seja -N(R5)C(=NR7)Y2 em que Y2 seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo Ci-C)0; cicloalquilo C^-Csl bicicloalquilo Cô-C^; arilo; heterociclos monocíclicos C4-Ci2; alquilo CrCi0 substituído opcionalmente com arilo que pode também ser substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo Cj-Cio, alquilo CpCio, nitro, hidroxilo, alcoxilo CpCio, arilo ou arilo fundido; arilo substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre halo, haloalquilo CrCio, hidroxilo, alcoxilo CpCio, ariloxilo, arilo, arilo fundido nitro, metilenodioxilo, etilenodioxilo, ou alquilo CpCio; alcinilo C2-C6; alcenilo C2-C6; -S-R9 e -O-R9 em que R9 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H; alquilo CrCio, arilalquilo Cr C6; arilo; alcenilo C2-C6 e alcinilo C2-C6; ou R9, tomado em conjunto com R7, forme um anel heterocíclico com 4 a 12 membros, contendo um átomo de azoto e um átomo de oxigénio ou um átomo de enxofre, e sendo substituído opcionalmente com alquilo CpCio, hidroxilo, ceto, fenilo, carboxilo ou éster carboxílico, e fenilo fundido; ou ou R9, tomado em conjunto com R7 'e tiazole; oxazole; benzoxazole; ou benzotiazole; e - 10- r *7 R e R são tal como acima se definiram; ou Y2 (quando Y2 for carbono), tomado em conjunto com R7, forme um anel de 4 a 12 membros contendo um átomo de azoto, substituído opcionalmente com alquilo CpCio, arilo ou hidroxilo; ou A seja -N(R5)-C(=N-R2)-NR7R8
Λ O em que R e R tomados em conjunto formem um heterociclo com 5-8 membros contendo dois átomos de azoto, substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre o grupo constituído por alquilo CrCio, o hidroxilo, ceto, fenilo, ou derivados de carboxilo; e R seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquil Ci-Cio-carbonilo, arilcarbonilo, alcoxil CrCio-carbonilo, ariloxicarbonilo, haloalquil CrCi0-carbonilo, haloalcoxil CrCi0-carbonilo, alquil CpCio-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, ou aciloximetoxicarbonilo; e R5 seja definido tal como acima; ou A seja -N=C(-N-R2R8)-NR7R8 em que R e R tomados em conjunto formem um heterociclo com 5-8 membros contendo dois átomos de azoto, substituído opcionalmente com hidroxilo, ceto, fenilo, ou alquilo Q-Cio; e ambos os R8 sejam seleccionados de entre o grupo constituído por alquil Ci-Cio-carbonilo, arilcarbonilo, alcoxil CpCio-carbonilo, ariloxicarbonilo, haloalquil Cr Cjo-carbonilo, haloalcoxil Ci-Cjo-carbonilo, alquil CrCi0-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, e aciloximetoxicarbonilo; Z1 seja um ou mais substituintes seleccionados de entre o grupo constituído por - 11 - H; alquilo CrCi0; hidroxilo; alcoxilo CrCi0; ariloxilo; halogéneo;haloalquilo Cp Ci0; haloalcoxilo CpCi0; nitro; amino; alquil CpCi0-amino; ciano; alquil CpCjo-tio; alquil CpCio-sulfonilo; derivados de carboxilo; trihaloacetamida; acetamida; arilo; arilo fundido; cicloalquilo C3-C8; tio; heterociclos monocíclicos CrCi2; heterociclos monocíclicos CpC12 fundidos a benzeno; e A, em que A seja tal como acima se definiu; V seja seleccionado de entre o grupo constituído por -N-(R6)-, em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H; alquilo CpCio; cicloalquilo C3-C8; arilalquilo CpCó', arilo; e heterociclos monocíclicos C4-Ci2; ou R6, tomado em conjunto com Y forme um anel com 4 a 12 membros contendo um átomo de azoto; Y, Y3, Z e Z3 sejam seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por hidrogénio; alquilo CrCi0; arilo; e cicloalquilo C3-C8; ou Y e Z sejam tomados em conjunto para formarem um cicloalquilo C3-C8; ou Y e Z sejam tomados em conjunto para formarem um cicloalquilo C3-C8; n seja um inteiro 1, 2, ou 3; t seja um interio o, 1, ou 2; p seja um inteiro 1,2, ou 3; R seja X-R em que X seja seleccionado de entre o grupo constituído por O, S e NR4, em que R3 e R4 sejam seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por alquilo CpCio; alcenilo C2-C6; alcinilo C2-Cô; haloalquilo CpCio; arilo; arilalquilo CrC6; amino; açúcares; esteróides; poli(éteres alquílicos); alquil CpCio -amido; alquil CpCi0-N,N- - 12- dialquil CpCio-amido; e no caso do ácido livre, todos os seus sais farmaceuticamente aceitáveis; R1 seja seleccionado de entre o grupo constituído por hidrogénio; alquilo CrCi0; alcenilo C2-C6; alcinilo C2-C6; arilo; derivados de carboxilo; haloalquilo Ci-Ci0; heterociclos monocíclicos C4-C12; heterociclos monocíclicos C4-C12 substituídos opcionalmente com alquilo Cj-Cio, halogéneo, haloalquilo Cj-Cio, ciano, hidroxilo, arilo, arilo fundido, nitro, alcoxilo Q-Qo, ariloxilo, alquil Ci-Cjo-sulfonilo, arilsulfonilo, sulfonamida, tio, alquil CrC10-tio, derivados de carboxilo, amino, amido; alquilo CrCi0 opcionalmente substituído com um ou mais de entre halo, haloalquilo Cj-Cio, hidroxilo, alcoxilo CrCi0, ariloxilo, tio, alquil CrCi0-tio, alcinilo C2-C6, alcenilo C2-C6, alquilo CrCi0, ariltio, alquil CrCi0-sulfóxido, di-alquil Ci-Ci0-amino, alquil CrCio-sulfonamida, arilsulfonamida, acilamida, derivados de carboxilo, sulfonamida, ácido sulfónico, derivados de ácido fosfónico, derivados de ácido fosfínico, arilo, ariltio, arilsulfóxido, ou arilsulfona, todos eles substituídos opcionalmente no anel arilo com halo, alquilo CpCio, haloalquilo C1-C10, ciano, nitro, hidroxilo, derivados de carboxilo, alcoxilo Ci-C10, ariloxilo, amino, alquil CrCio-amino, di-alquil-amino, amido, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos C4-CI2, e heterociclos monocíclicos C4-C12 fundidos a benzeno, heterociclos monocíclicos C4-C]2-tio, heterociclos monocíclicos C4-C]2-sulfóxido, e heterociclos monocíclicos C4-Ci2,-sulfona, os quais podem ser substituídos opcionalmente com halo, haloalquilo Q-Cio, nitro, hidroxilo, alcoxilo CpCio, arilo fundido, ou alquilo Cj-Cio; alquil CpCio-carbonilo, haloalquil CrCio-carbonilo, e arilcarbonilo; arilo substituído opcionalmente numa ou em mais posições com -13 - -13 -
{ halo, haloalquilo CrCio, alquilo Cj-Cio, alcoxilo CpCio; ariloxilo, metilenodioxilo, etilenodioxilo, alquil Cj-Cio-tio, haloalquil Ci-Cio-tio, tio, hidroxilo, ciano, nitro, aciloxilo, derivados de carboxilo, carboxilalcoxilo Q-Cio, amido, acilamino, amino, alquil CrCio-amino, di-alquil CrCio-amino, trifluoroalcoxilo Q-Có, trifluorometilsulfonilo, alquil Ci-Cjo-sulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterocíclicos monocíclicos C4-C12 e heterocíclicos monocíclicos C4-C12 fundidos com benzeno; e -C(=0)-NR7R8 em que R7 e R8 sejam tal como se definiram acima e 7 δ desde que tomados em conjunto com o azoto, R e R formem um aminoácido; e R11 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo CpCio, arilalquilo CrC6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, haloalquilo Ci-C10, ou haloalcinilo C2-C6, ou R11, tomado em conjunto com Y, forme um anel com 4 a 12 membros e contendo um átomo de azoto; em que arilo signifique fenilo, piridilo, naftilo, tiofeno, furano ou 26 26 bifenilo e acilo seja um grupo com a fórmula -C(=0)-R , em que R seja alquilo Ci-C10, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, arilo ou arilalquilo CpCio, e arilo fundido signifique um arilo fundido a um ou mais fenilos. É outro objectivo da invenção providenciar composições farmacêuticas que incluam compostos com a fórmula I. Tais compostos e composições são úteis para inibirem selectivamente ou antagonizar a integrina avp3 e portanto, outra concretização da invenção presente diz respeito a um método de inibir selectivamente ou antagonizar a integrinaavp3. A invenção inclui ainda tratar ou inibir estados patológicos associados com ela, tais como - 14- - 14- «-Λ C—Λ osteoporose, hipercalcemia humoral da lesão maligna, doença de Paget, metástase tumoral, crescimento de tumor sólido (neoplasia), angiogénese, incluindo a angiogénese tumoral, retinopatia incluindo a retinopatia diabética, artrite, incluindo artrite reumatóide, doença periodontal, psoríase, migração de células musculares lisas e restenose, num mamífero que necessite de um tal tratamento. Para além disso, tais agentes são úteis como agentes antivirais, e antimicrobianos.
Descrição Detalhada A invenção presente diz respeito a uma classe de compostos representada pela Fórmula I, descrita acima. Uma concretização preferida da presente invenção é um composto da fórmula acima, em que A seja
N—R7 I RB em que Y1 seja seleccionado de entre o grupo constituído por N-R2, O, e S; R2 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, ciano, alquilo Q-Cio, arilo, alquilo CrCjo substituído, hidroxilo; alcoxilo CrCi0, alquil CrQo-carbonilo, amido, nitro, amino e heterociclos monocíclicos C4-Ci2, arilcarbonilo; alcoxil CrCio-carbonilo; ariloxicarbonilo, haloalcoxil CrCi0-carbonilo, alquil Ci-Cio-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, aciloximetoxicarbonilo; ou R2 tomado em conjunto com R7 forme um anel com 4 a 12 membros; -15- C- r *7 q R , R e R sejam seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por H, alquilo Q-Cio, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, bicicloalquilo C6-Q2, amino, alquilo Q-Qo substituído, arilalquilo CrC6, ariloxilo, ariloxicarbonilo, haloalquil CrCi0-carbonilo haloalcoxil Cj-Cio-carbonilo, alquil Ci-Ci0-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, aciloximetoxicarbonilo, fenilo substituído, arilacilo, heterocíclicos monocíclicos C4-C12 e bicíclicos C6-C12 e -SO2R10 em que R10 seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo CrCi0, amino e arilo que sejam todos eles substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre 0 grupo constituído por acilamino, amino, carbonilo, ciano, nitro, alcoxilo Q-C10, halo, alquilo Q-Qo, trifuloroalquilo, amido, alquil Ci-Cio-amino-sulfonilo, alquil Cj-Cio-sulfonilo, alquil Ci-Cio-sulfonil-amino, alquil CrCi0-amino, di-alquil Cr Cio-amino, ariloxilo, tio, trifluorometiltio, trifluoroalcoxilo Q-Cô e trifluorometilsulfonilo; ou NR7 e Rs, tomados em conjunto, formem um anel com 4-12 membros, em que o referido anel contenha opcionalmente um heteroátomo seleccionado de entre o grupo constituído por O, N, e S e em que o referido anel seja substituído, opcionalmente.
Entre estes compostos, encontram-se os especialmente preferidos, nos quais V é -N(R6)- em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H e alquilo C1-C10; n é 1; t é 0 ou 1; - 16- Μ ρ é Ο, 1, ou 2; R é 0-R1 2 3 4.
Um outro grupo de compostos preferidos são aqueles em que A seja
—N Λ
Rs N—R5 f Rs 1 'y ·η n 2 em que Y seja N-R ; R tomado em conjunto com R , forme um 3 anel com 4-a 12 membros; e R6 7 e R8 9 sejam seleccionados independentemente de 4 entre o grupo constituído por H, alquilo CpCio, alcenilo C2-Cô, alcinilo C2-Q, 5
Cio —amino, arilamino, amido, alquil Ci-C10-carbonilo, arilcarbonilo, alcoxil Cp Cio-carbonilo, ariloxicarbonilo, haloalquil CpCio-carbonilo, haloalcoxil CpCio- 6 cicloalquilo C3-C8, alquilo CpCio substituído com bicicloalquilo C3-C8, 7 arilalquilo CpQ, ariloxilo, hidroxilo, amino, alcoxilo CpCio, amino, alquil Cp 8 carbonilo, alquil CpCio-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, aciloximetoxicarbonilo, 9 fenilo substituído, arilacilo, heterocíclicos monocíclicos C4-C12 e bicíclicos Có-C12 e -S02R10 em que R10 seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo CpCio, amino e arilo, que sejam todos eles substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre o grupo constituído por acilamino, amino, carbonilo, ciano, nitro, alcoxilo CpCio, halo, alquilo CpCio, trifuloroalquilo CpCio, amido, alquil CpCio-amino-sulfonilo, alquil CpCio- 10 sulfonilo, alquil CpCi0-sulfonil-amino, alquil CpCi0-amino, di-alquil CpCio- - 17- amino, ariloxilo, tio, trifluoroalquil Ci-Cô-tio, trifluoroalcoxilo Q-Cô e trifluorometilsulfonilo; ou NR7 e R8, tomados em conjunto, formem um anel com 4-12 membros, em que o referido anel contenha opcionalmente um heteroátomo seleccionado de entre o grupo constituído por O, N, e S e em que o referido anel seja substituído, opcionalmente.
Entre estes compostos, encontram-se aqueles que são especialmente preferidos, nos quais V é -N(R6)- em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H e alquilo Cj-Cio; n é 1; t é 0; e pé 1;
Um outro grupo de compostos preferidos com a Fórmula I são aqueles em que A seja -N(R5)C(=NR7)Y2 em que Y2 seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo Q-Cio, alquilo CrCi0 substituído, fenilo, fenilo substituído, cicloalquilo C3-C8; heterociclos monocíclicos C4-Ci2, -S-R9 e -O-R9 em que R9 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo Q-Cio, alquilo Q-Cio substituído, fenilo, fenilo substituído, cicloalquilo C3-Cg e heterociclos monocíclicos C4-C12 ou R9, tomado em conjunto com R7, forme um anel com 4 a 12 membros; ou -18- y η Y , tomado em conjunto com R , forme um anel de 4 a 12 membros, substituído opcionalmente. São especialmente preferidos aqueles compostos do grupo acima em que 0 Ί Y , tomado em conjunto com R , forme um anel de 4 a 12 membros, substituído opcionalmente, ou em que, adicionalmente V seja -N-(R6)-, em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H e alquilo CrCi0; n seja 1; t seja 0 ou 1; e p seja 1.
Existem dentro do grupo de compostos preferidos acima, aqueles compostos especialmente preferidos, nos quais Y2 seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo Cr Ci0; alquil Ci-Ci0-fenil; fenilo substituído; cicloalquilo C3-Cg e monociclos heterocíclicos C4-C12, ou em que, adicionalmente, - 19- /Qt bv.KÍ-' C- V seja -N-(R6)-, em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H e alquilo CrCi0; n seja 1; t seja 0; e p seja 1. São compostos adicionais do grupo preferido com a fórmula acima aqueles em que Y2 seja -S-R9 ou -O-R9 em que R9 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo, alquilo substituído, fenilo, fenilo substituído, e heterociclos monocíclicos, ou R , tomado em conjunto com R , forme um anel com 4 -12 membros, e entre estes, em especial aqueles em que V seja-N-(R6)-, em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo CpCio, alquilo CpCio substituído, cicloalquilo C3-C8, arilo, arilo substituído, heterociclos monocíclicos e benzilo; n seja 0; t seja 0; e p seja 1 ou 2. A invenção diz também respeito a composições farmacêuticas contendo quantidades terapeuticamente eficazes dos compostos acima mencionados. -20- A invenção também diz respeito a um método de inibir selectivamente ou de antagonizar a integrina ανβ3 e mais em particular a um método de inibir a resorção óssea, a doença periodontal, a osteoporose, a hipercalcemia humoral da lesão maligna, a doença de Paget, a metástase tumoral, o crescimento de tumores sólidos (neoplasia), a angiogénese, incluindo a angiogénese tumoral, a retinopatia, incluindo a retinopatia diabética, a artrite, incluindo artrite reumatóide, a migração de células musculares lisas e a restenose, através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto com a Fórmula I-V para se conseguir uma tal inibição, em conjunto com um veículo farmaceuticamente aceitável.
Segue-se uma lista de definições dos diversos termos e expressões utilizados neste documento:
Tal como são utilizadas neste documento, as expressões “alquil(o)” ou “alquilo inferior” referem-se a grupos hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada contendo entre cerca de 1 e cerca de 10 átomos de carbono, e mais preferivelmente e a cerca de 6 átomos de carbono. São exemplos de tais grupos alquilo os metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, pentilo, neopentilo, hexilo, isohexilo, e ou tros semelhantes.
Tal como são utilizadas neste documento, as expressões “alcenil(o)” ou “alcenilo inferior” referem-se a grupos hidrocarboneto insaturados contendo pelo menos uma ligação dupla e 2 a cerca de 6 átomos de carbono, átomos de carbono esses que podem assumir geometrias çis ou trans dentro do grupo alcenilo, relativamente aos grupos que se encontram a substituir os átomos de carbono de duplas ligações. São exemplos de tais grupos os etenilo, propenilo, butenilo, isobutenilo, pentenilo, hexenilo, e outros semelhantes. -21 - •I V · 1
Tal como são utilizadas neste documento, as expressões “alcinil(o)” ou “alcinilo inferior” referem-se a grupos hidrocarboneto insaturados contendo uma ou mais ligações triplas e 2 a cerca de 6 átomos de carbono. São exemplos de tais grupos os etinilo, propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo, e outros semelhantes.
Tal como utilizado neste documento, o termo “cicloalquil(o)” significa grupos cíclicos de carbono, saturados ou parcialmente insaturados, contendo 3 a cerca de 8 átomos de carbono e mais preferivelmente 4 a cerca de 6 átomos de carbono. Incluem-se nos exemplos de tais grupos os ciclopropilo, ciclopropenilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 2-ciclohexen-l-ilo, e outros semelhantes
Tal como utilizado neste documento, o termo “arilo” denota sistemas anelares aromáticos compostos por um ou mais anéis aromáticos. Os grupos arilo preferidos são aqueles que consistem de um, dois, ou três anéis aromáticos. O termo inclui grupos aromáticos tais como fenilo, piridilo, naftilo, tiofeno, furano, bifenilo e outros semelhantes.
Tal como utilizado neste documento, o termo “ciano” é representado por um grupo com a fórmula ^ CN *
Tal como utilizado neste documento, os termos “hidroxi” e
“hidroxilo” são sinónimos e são representados por um grupo com a fórmula |—OH
Tal como utilizadas neste documento, as expressões (alquileno inferior” ou “alquileno”, referem-se a grupos hidrocarboneto saturado divalentes, -22- /4^· h*’ v ^ de cadeia linear ou ramificada, com 1 a cerca de 6 átomos de carbono.
Tal como utilizado neste documento, o termo “alcoxil(o)” refere grupos de cadeia linear ou ramificada contendo oxi-, com a fórmula -OR20, em que R é um grupo alquilo tal como se definiu acima. Incluem-se como exemplos de grupos alcoxilo os metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, n-butoxilo, isobutoxilo, sec-butoxilo, t-butoxilo, e outros semelhantes.
Tal como utilizados neste documento, os termos “arilalquil(o)” ou |—-R22—R2i “arralquil(o)” refere um grupo com a fórmula , em que R é um arilo tal como ase definiu acima e R é um alquileno tal como se definiu acima. Incluem-se nos exemplos de grupos aralquilo os benzilo, piridilmetilo, naftilpropilo, fenetilo e outros semelhantes.
Tal como utilizado neste documento, o termo “nitro” é representado |-NOj por um grupo com a fórmula
Tal como utilizados neste documento, os termos “halo” ou “halogéneo” referem bromo, cloro, fluoro ou iodo.
Tal como utilizado neste documento, o termo “haloalquil(o)” refere grupos alquilo tal como se definiram acima, substituídos com um ou mais grupos halo iguais ou diferentes, em um ou mais átomos de carbono, incluem-se como exemplos de grupos haloalquilo os trifluorometilo, dicloroetilo, fluoropropilo e outros semelhantes.
Tal como utilizado neste documento, os termos “carboxil(o)” ou “carboxi” referem grupos com a fórmula -C=(Y6)-Y7R23 em que Y6 e Y7 são seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por O, N, e S e R23 é seleccionado de entre o grupomconstituído por H, alquilo, aralquilo ou arilo tal como se definiram acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “amino” é reperesentado por um grupo com a fórmula -NH2.
Tal como utilizado neste documento, o termo “alquilsulfonil(o)” ou
O v II |—S—R2* 1 11 “alquilsulfona” refere-se um grupo com a fórmula O em qUe r24 é um grupo alquilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “alquiltio” refere-se a grupos com a fórmula -S-R24 em que R24 é um grupo alquilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizada neste documento, a expressão “ácido sulfónico” O hll S—OR2S II 0 em que R25 é um grupo alquilo tal refere-se a grupos com a fórmula como se definiu acima. neste documento, o termo “ sulfonamida”
Tal como utilizado
refere-se a grupos com a fórmula 0 em que R' e R° são tal como definiram acima.
Tal como utilizada neste documento, a expressão “arilo fundido” refere-se a um anel aromático tal como os grupos arilo dfinidos acima, fundido a um ou mais anéis fenilo. Inclui-se na expressão “arilo fundido” o grupo naftilo. -24- £L~——
Tal como utilizadas neste documento, as expressões “heterociclo monocíclico” e “heterocíclico monocíclico” referm um anel monocíclico contendo entre 4 e cerca de 12 átomos, e mais preferivelmente entre 5 e cerca de 10 átomos, nos quais 1 a 3 dos átomos são heteroátomos seleccionados de entre o grupo constituído por oxigénio,enxofre e azoto com a limitação tácita de que qundo estão presentes dois heteroátomos diferentes, pelo menos um dos heteroátomos tem que ser azoto São representativos de tais heterociclos monocíclicos os imidazole, furano, piridina, oxazole, pirano, triazole, tiofeno, pirazole, tiazole, tiadiazole, e outros semelhantes.
Tal como utilizada neste documento, a expressão “heterociclo monocíclico fundido” refere-se a um heterociclo monocíclico tal como se definiu acima, ao qual se fundiu um anel de benzeno. Incluem-se como exemplos de tais heterociclos monocíclicos fundidos os benzofurano, benzopirano, benzodioxole, benzotiazole, benzotiofeno, benzimidazole, e outros semelhantes.
Tais como utilizados neste documento, o termo “metilenodioxilo’ I—o refere o grupo 1 , e o termo “etilenodioxilo” refere o grupo
Tal como utilizada neste documento, a expressão “heterociclo com 4-12 membros contendo dois átomos de azoto” refere um grupo com a fórmula N—n R19 na qual m é 1 ou 2 e R19 é H, alquilo, arilo, ou aralquilo, e mais preferivelmente -25-
M refere-se a anéis com 4 a 9 membros e inclui aneis tais como imidazolina.
Tal como utilizada neste documento, a expressão “anel heteroaromático de 5- membros substituído opcionalmente”, inclui por exemplo um grupo com a fórmula
H-N
X N'
H e “anel heteroaromático de 5- membros fundido a fenilo” refere um tal“anel heteroaromático de 5- membros” com um anel fenílico a ele fundido. O benzimidazole é representativo de tais anéis heteroaromáticos de 5- membros fundidos a fenilo.
Tal como utilizado neste documento, o termo “bicicloalquilo” refere-se a grupos hidrocarboneto bicíclicos contendo entre 6 e cerca de 12 átomos de carbono, que é saturado ou parcialmente insaturado.
Tal como utilizado neste documento, o termo “acilo” refere-se a O II grupo s com a fórmula ' em qu R26 é alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, ou aralquilo sendo estes grupos opcionalmente substituídos tal como se definiu acima. Inclem-se em tais grupos os acetilo, benzoílo, e outros semelhantes. grupo com a fórmula
Tal como utilizado neste documento, o termo “tio” refere-se a um |—SH -26- /<jd. ί>- Υ ^
Tal como utilizado neste documento, o termo “sulfonilo” refere-se O I—S—R27 * Π a um grupo com a fórmula ® , em que R27é alquilo, arilo ou aralquilo como se definiram acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “haloalquiltio” refere- 70 fyet se a um grupo com a fórmula -S-R , em que R é haloalquilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “ariloxilo” refere-se a HR29 29 * um grupu uum a lumiuia , em que R é arilo tal como acima se definiu.
Tal como utilizado neste documento, o termo “acilamino” refere-se
O a um grupo com a fórmula 2 em que R30 é alquilo, aralquilo ou arilo tal como acima se definiram.
Tal como utilizado neste documento, 0 termo “amido” refere-se a
O
II —NH2 um grupo com a fórmula
Tal como utilizado neste documento, o termo “alquilamino” refere-se a um grupo com a fórmula -NHR , em que R é alquilo tal como acima se definiu.
Tal como utilizado neste documento, o termo “dialquilamino” 33 34 33 34 refere-se a um grupo com a fórmula -NR R , em que R e R são grupos alquilo iguais ou diferentes, tal como acima se definiram. J^IIÍIII >**Ίιΐ ( -27-
Tal como utilizado neste documento, o termo “trifluorometilo” I—CF3 refere-se a um grupo com a fórmula. *
Tal como utilizado neste documento, 0 termo “atrifluoroalcoxilo” F3c-R35-o-4 refere-se a um grupo com a fórmula em que R é uma ligação ou um alquileno tal como acima se definiu.
Tal como utilizado neste documento, o termo “alquilamino-
O
rk~h~H sulfonilo” refere-se a um grupo com a fórmula ® , em que R36 é alquilo tal como acima se definiu.
Tal como utilizado neste documento, o termo “alquilsulfonilamino”
O 11 t R36-S—NH-1 11 * refere-se a um grupo com a fórmula, em que R é alquilo tal como acima se definiu.
Tal como utilizado neste documento, o termo “trifluorometiltio”
f3c-s—I refere-se a um grupo com a fórmula
Tal como utilizado neste documento, 0 termo ϊ, “trifluorometilsulfonilo” refere-se a um grupo com a fórmula 0
Tal como utilizada neste documento, a expressão “sistema anelar -28-
C
monocíclico ou bicíclico com 4-12 membros contendo um átomo de azoto” refere-se a um sistema anelar saturado ou parcialmente insaturado, monocíclico ou bicíclico, com 4-12 átomos, e mais preferivelmente um anel com 4-9 átomos, em que um átomo é azoto. Tais anéis poderão opcionalmente conter heteroátomos adicionais seleccionados de entre azoto, oxigénio ou enxofre. Estão incluídos neste grupo as morfolina, piperidina, piperazina, tiomorfolina, pirrolidina, prolina, azaciclohepteno, e outros semelhantes.
Tal como utilizado neste documento, o termo “benzilo” refere-se a
um grupo
Tal como utilizado neste documento, o termo “fenetilo” refere-se a
um grupo
Tal como utilizada neste documento, a expressão “anel heterocíclico com 4-12 membros contendo um átomo de oxigénio ou de enxofre” refere-se a um anel com 4-12 átomos, e mais preferivelmente um anel com 4-9 átomos, em que pelo menos um átomo é oxigénio ou enxofre. Incluem-se nesta definição anéis tais como tiazolina e outros semelhantes.
Tal como utilizados neste documento, os termos “arilsulfonil(o)” ou “arilsulfona” referem-se a grupos com a fórmula tal como acima se definiu.
, em que R37 é arilo
Tal como utilizados neste documento, os termos “alquilsulfóxido” -29- A< hy-Y*' C-Λ «-i R38—S-| ou “arilsulfóxido” referem-se a grupos com a fórmula é, respectivamente, alquilo ou arilo tal como acima se definiram.
50 ,em que R
Tal como utilizada neste documento, a expressão “derivado de ç P—OFF» h ácido fosfónico” refere um grupo com a fórmula , em que R39 e R40 são grupos H, alquilo, arilo ou aralquilo, iguais ou diferentes.
Tal como utilizada neste documento, a expressão “derivado de
O II .
—P—OR·41 H ácido fosfínico” refere um grupo com a fórmula , em que R41 é um grupo H, alquilo, arilo ou aralquilo, tal como acima se definiram.
Tal como utilizado neste documento, o termo “ariltio” refere um J—SR« grupo com a fórmula , em que R42 é um grupo arilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizada neste documento, a expressão “heterociclo |—SR43 monocíclico tio” refere um grupo com a fórmula , em que R43 é um grupo heterocíclico monocíclico tal como se definiu acima.
Tal como utilizada neste documento, as expressões “sulfóxido de heterociclo monocíclico” e “sulfona de heterociclo monocíclico” referem,
O i ” I—s |—S—R« r| o —R« respectivamente, grupos com as fórmulas e em que R43
-30- é um grupo heterocíclico monocíclico tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “alquilcarbonilo” refere um grupo com a fórmula R50-C(=O)- em que R50 é um alquilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “arilcarbonilo” refere um grupo com a fórmula R51-C(=0)- em que R51 é um arilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “acoxilcarbonilo” refere um grupo com a fórmula R52-C(=0)- em que R52 é um alcoxilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “ariloxicarbonilo” C1 ri refere um grupo com a fórmula R -0-0(=0)- em que R é um arilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “haloalquilcarbonilo” refere um grupo com a fórmula R -C(=O)- em que R é um haloalquilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “haloalcoxilcarbonilo” refere um grupo com a fórmula R -0-0(=0)- em que R é um haloalquilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “ariltiocarbonilo” refere um gmpo com a fórmula R51-S-C(=0)- em que R51 é um arilo tal como se definiu acima. -31 -
M
Tal como utilizado neste documento, o termo “aciloximetoxicarbonilo” refere um grupo com a fórmula R54-0-CH2-0-C(=0)-em que R54 é um acilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “arilamino” refere um grupo com a fórmula R51-NH- em que R51 é um arilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizada neste documento, a expressão “poli(éteres alquílicos)” refere glicóis habitualmente utilizados tais como trietilenoglicol e outros semelhantes.
Tal como utilizado neste documento, o termo “alquilamido” refere um grupo com a fórmula R50-NH-C(=O)- em que R50 é um alquilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “N,N-dialquilamido” refere um grupo com a fórmula (R50)2-N-C(=O)- em que R50 são grupos alquilo iguais ou diferentes tal como se definiram acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “pivaloíloximetilo” refere um grupo com a fórmula Me3-C-C(=0)-0-CH2-.
Tal como utilizado neste documento, o termo “aciloxilo” refere um grupo com a fórmula R55-0- em que R55 é um grupo acilo tal como se definiu acima.
Tal como utilizado neste documento, o termo “composição” significa um produto que provém da mistura ou combinação de mais do que um -32-
elemento ou ingrediente.
Tal como utilizada neste documento, a expressão “veículo farmaceuticamente aceitável” significa um material, uma composição ou umveículo farmaceuticamente aceitável, tais como uma carga, ou um material diluente, excipiente, solvente ou encapsulante, líquido ou sólido, que tenha funções de transportar ou veicular o agente químico.
Tal como utilizada neste documento, a expressão “quantidade terapeuticamente eficaz” significará aquela quantidade de fármaco ou agente farmacêutico que será responsável pela resposta biológica ou medicinal do tecido, sistema ou animal em epreço pelo investigador ou médico.
Segue-se uma lista de abreviaturas e os significados correspondentes, tal como se utilizam, indiferentemente, neste documento: RMN de *Η = ressonância magnética nuclear de protão AcOH = ácido acético BH3-THF = complexo borano-tetrahidrofurano Bn = benzilo BOC = terí-butoxicarbonilo ButLi = butil-lítio Cat. = quantidade catalítica CH2C12 = diclorometano CH3CN = acetonitrilo CH3I = iodometano análise CHN = análise elementar de carbono/hidrogénio/azoto análise CHNC1 = análise elementar de carbono/hidrogénio/azo-to/cloro -33- ^rí. b·^ ^ Cl análise CHNS = análise elementar de carbono/hidrogénio/azo-to/enxofre DCC = 1,3-diciclohexilcarbodi-imida DIBAL = hidreto de di-isobutilalumínio DIEA = di-isopropiletilamina DMA = A,A-dimetilacetamida DMAP = 4-(A,A-dimetilamino)piridina DMF = A,7V-dimetilformamida DSC = carbonato de di-succinilo EDC1 = cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida EM = espectroscopia de massa EM FAB = espectroscopia de massa de bombardeamento com átomos rápidos Et = etilo
Et20 = éter dietílico Et3N = trietilamina EtOAc = acetato de etilo EtOH = etanol g = grama(s) GIHA = ácido meta-guanidino-hipúrico GIHA HC1 = cloridrato de ácido meta-guanidino-hipúrico HPLC = cromatografía líquida de elevada eficiência IBCF = isobutilcloroformiato i-Pr = isopropilo i-Prop = isopropilo K2CO3 = carbonato de potássio KOH = hidróxido de potássio KSCN = tiocianato de potássio
LiOH = hidróxido de lítio
34 - M MCPBA = ácido m-cloroperoxibenzóico ou ácido m-cloroperben-zóico
Me = metilo MeOH = metanol
MesCl = cloreto de metano-sulfonilo mg = miligrama
MgS04 = sulfato de magnésio ml = mililitro mL = mililitro N2 = azoto
NaCNBH3 = cianoborohidreto de sódio
NaH = hidreto de sódio
NaHC03 = bicarbonato de sódio
NaOH = hidróxido de sódio
Na3P04 = fosfato de sódio
Na2S04 = sulfato de sódio NEt3 0 trietilamina NH4HC03 = bicarbonato de amónio NH4+HC02' = formiato de amónio NMM = N-metilmorfolina NMR = ressonância magnética nuclear RPHPLC = cromatografia líquida de elevada eficiência em fase reversa
Pd/C = paládio sobre carbono Ph = fenilo
Pt/C = platina sobre carbono t-BOC = terí-butoxicarbonilo TA = temperatura ambiente TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano -35- C~~—*-( TME = trimetiletilenodiamina TMS = trimetilsililo Δ = aquecer a mistura reaccional
Os compostos tal como ilustrados nas Fórmulas I-V podem existir sob diversas formas isoméricas e pretende-se que todas essas formas isoméricas sejam incluídas. Também estão incluídas as formas tautoméricas, bem como os sais farmaceuticamente acitáveis de tais isómeros e tautómeros.
Nas estruturas e fórmulas deste documento, entende-se que uma ligação desenhada por forma a cruzar-se com uma ligação ou com um anel, pode ser uma ligação a qualquer átomo do anel que esteja disponível. A expressão “ sal farmaceuticamente aceitável” refere-se a um sal preparado levando ao contacto um composto com a Fórmula I com um ácido cujo anião seja em geral considerado apropriado para consumo humano. Incluem-se como exemplos de sais farmacologicamente aceitáveis os sais cloridrato, bromidrato, iodidrato, sulfato, fosfato, acetato, propionato, lactato, maleato, malato, succinato, tartarato e ou tros semelhantes. Todos os sais farmacologicamente aceitáveis podem ser preparados pelos meios habituais. (Vejam-se, em Berge et ai, J. Pharm. Sei., 66 (1), 1-19, (1977), exemplos adicionais de sais farmaceuticamente aceitáveis.)
Para a inibição selectiva ou o antagonismo das integrinas ανβ3, podem administrar-se os compostos desta informação pelas vias oral, parentérica, ou por inalação de um aerossol, ou topicamente em formas de dosagem unitárias contendo os veículos, adjuvantes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis habituais. O termo parentérica, tal como utilizado neste documento, inclui, por exemplo, subcutânea, endovenosa, intramuscular, intraestemal, por técnicas de infusão ou intraperitoneal.
Administram-se os compostos da invenção presente por qualquer via adequada, sob a forma de uma composição que seja adaptada para essa via,e numa dose que seja eficaz para o tratamento pretendido. Qualquer especialista da técnica determina facilmente as doses terapeuticamente eficazes dos compostos, que são necessárias para impedir ou para parara o progresso de, ou para tratar o estado de doença, utilizando métodos pré-clínicos e clínicos que são conhecidos dos especialistas em medicina.
Por esta razão, a invenção presente providencia um método de tratamento dos estados mediados por ανβ3 ao inibir ou antagonizar os seus receptores na superfície celular, método esse que inclui administrar-se uma quantidade terapeuticamente eficaz de composto seleccionado de entre a classe de compostos ilustrada pelas Fórmulas I-V, método esse em que se administra um ou mais compostos com a Fórmula I-V em conjunto com um ou mais veículos e/ou diluentes e/ou adjuvantes não tóxicos e farmaceuticamente aceitáveis (os quais serão colectivamente desigandos como materiais “veículantes”) e, se tal for pretendido, outros ingredientes activos. Mais especificamente, a invenção presente proviedencia um método para a inibição do receptor de ανβ3 da superfície celular. Em máxima preferência, a invenção presente providencia um método para inibir a resorção óssea, tratar a osteoporose, inibir a hipercalcemia humoral da lesão maligna, tratar a doença de Paget, inibir a metástase tumoral, inibir a neoplasia (crescimento de tumores sólidos), inibir a angiogénese incluindo a angiogénese tumoral, tratar a retinopatia diabética, inibir a artrite, a psoríase e a doença periodontal, e inibir a migração de células musculares lisas incluindo a restenose,
Podem utilizar-se os compostos com a Fórmula I para o tratamento de pacientes que sofram das doenças e estados patológicos descritos acima, em comformidade com técnicas habituais de laboratório e processos bem conhecidos vi vi -37- Μ e avaliados pelos especialistas da técnica, bem como em comparações com compostos de utilidade reconhecida. Qualquer especialista da técnica saberá que a selecção do composto mais apropriado da invenção se encontra no âmbito das capacidades de um especialista com conhecimentos técnicos médios, e que que dependerá de uma série de factores entre os quais a avaliação dos resultados obtidos em testes de avaliação habituais em em modelos animais. O tratamento de um paciente que sofra de um dos estados patológicos inclui administra-se a um tal paciente uma quantidade de um composto com a Fórmula I que seja terapeuticamente eficaz em controlar esse estado ou em prolongar a sua sobrevivência para além da que seria de esperar na ausência de um tal tratamento. Tal como se utiliza neste documento, o termo “inibição” do estado significa, abrandar, interromper, estacar ou parar o estado, e não indica necessariamente a eliminação total desse estado. Crê-se que o prolongamento da sobrevivência do paciente, para além de ser um efeito significativamente vantajoso de e por si próprio, também indica que o estado foi em certa medida controlado de forma benéfica.
Tal como se afirmou acima, podem utilizar-se os compostos da invenção numa diversidade de áreas biológicas, profiláticas e terapêuticas. Considera-se que estes compostos são úteis na prevenção ou tratamento de qualquer estado de doença no qual a integrina ανβ3 desempenhe um papel. O regime de dosagem para os compostos e/ou composições contendo os compostos baseia-se numa diversidade de afctores, que incluem o tipo, a idade, a massa corporal, o género e o estado de doença do paciente; da severidade do estado; da via de administração; e da actividade do composto específico que for utilizado. Portanto o regime de dosagem pode variar amplamente. São úteis para o tratamento dos estados acima indicados níveis de dosagem da ordem de cerca de 0,01 mg a cerca de 100 mg, por quilograma de -38-
massa corporal e por dia.
Formula-se o ingrediente activo destinado a ser administrado por injecção sob a forma de uma composição em que, por exemplo, se utiliza como veículo apropriado soro salino, soluçaõ de dextrose ou água. Uma dose diária apropriada seria tipicamente de entre cerca de 0,01 a 10 mg/kg de massa corporal injectada ao longon do dia em doses múltiplas, em função dos factores acima listados. para administração a um mamífero que necessite de um tal tratamento, combinam-se habitualmente quantidades terapeuticamente eficazes dos compostos com um ou mais adjuvantes apropriados para a via de administração pretendida. Podem misturar-se os compostos com lactose, sacarose, amido em pó, ésteres de celulose dos ácidos alcanóicos, ésteres de alquilceluloses, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio, óxido de magnésio, sais de sódio e potássio dos ácidos fosfórico e sulfurico, gelatina, goma arábica, alginato de sódio, polivinilpirrolidona e/ou álcool polivinílico, sendo comprimidos ou encapsulados para administração conveniente. Em alternativa podem dissolver-se os compostos em áqgua, polietilenoglicol, propilenogligol, etanol, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, óleo de gergeli, 'qalcool benzílico, cloreto de sódio e/ou diversos tampões. São muito bem conhecidos na técnica farmacêutica outros adjuvantes e modos de administração.
Podem submeter-se as composições farmacêuticas úteis na invenção presente, às operações farmacêuticas habituais, tais como esterilização, e/ou elas podem conter adjuvantes farmacêuticos habituais tais como conservantes, estabilizadores, agentes molhantes, emulsionantes, tampões, etc..
As sequências sintéticas gerais que são utilizadas para a preparação -39- A/Lb^rlr' dos compostos úteis na invenção presente são delineadas nos Esquemas I-XXI. Descrevem-se os processos exactos e explicam-se, sempre que é apropriado, os diversos aspectos da invenção presente. Oe Esquemas e Exemplo seguintes são apresentados a título meramente ilustrativo da invenção presente. Quem seja especialista na técnica compreenderá facilmente que se podem utilizar variantes conhecidas das condições e dos processos descritos nos Esquemas e Exemplos para aisntetizar os compostos da invenção presente. A não ser quando se indique expressamente o contrário, todas as matérias primas e equipamentos utilizados encontravam-se comercialmente disponíveis.
ESQUEMA I
O ho2c C02H + + NfVCH3C02* H2
2HCI HO— -...... »» Δ
EtOH HCI (anidro) Δ -40-
At O Esquema I descreve a síntese de um β-aminoácido piridílico, que pode ser utilizada para sintetizar compostos da invenção presente nos quais R1 seja piridilo. Pode modificar-se a reacção utilizando metodologia conhecida, para preparar outros β-aminoácidos aromáticos, alquílicos ou heterocíclicos substituídos, pela substituição do piridilcarboxaldeído por outro qualquer aldeído apropriado. Em suma, no Esquema I adiciona-se acetato de amónio, e em seguida ácido malónico, a piridinacarboxaldeído em isopropanol. Aquece-se a mistura reaccional ao refluxo, filtra-se o precipiatdo resultante e lava-se como isopropanol quente, e seca-se para se obter o ácido 3-amino-3-(3-piridil)propiónico. Sintetiza-se o éster etílico aquecendo este ácido em etanol em excesso, na presença de HC1 gasoso em excesso.
Para além disto, podem obter-se os β-aminoácidos que são úteis na invenção presente por reacções de Knoevenagel modificadas (Secor, Η. V.; Edwards, W.B.J. J. Org. Chem., 1979, 44, 3136-40; Bellasoued, M.; Arou-Chtar, R.; Gaudemar, M.J.; J. Organometal. Chem. 1982, 231, 185-9), por reacção de Reformatski com bases de Schiff (Furukawa, M.; Okawara, T.; Noguchi, Y.; Terawaki, Y.; Chem. Oharm. Buli. 1978, 26, 260), por adição de Michael a derivados acrílicos (Davies, S. G.; Ichihara, O., Tetrahedrorv.Asymmetry, 1991, 2, 183-6; Furukawa, M.; Okawara, TR.; Y.; Terawaki, Y.; Chem. Oharm. Buli. 1977, 25, 1319-25). Incluem-se nos métodos mais recentes a utilização de acoplamentos mediados por reagentes organometálicos de Pd ou Zn (Konopelski, J.; Chu, K.S.; Negrete, G.R. J. Org. Chem. 1991, 56, 1355; Mokhallalati, M.K.; Wu, M-J.; Prigden, L.N. Tetrahedron lett., 1993, 34, 47-50), que complementam reacções mais tradicionais tais como a aminação redutiva de β-cetoésteres. -41 -
M CL~-<-( ·Ί
Podem também preparar-se os beta-alquil beta aminoésteres racémicos, de forma cómoda, a partir da beta lactama correspondente, por tratamento com HC1 gasosos anidro em etanol. Prepararam-se as beta lactamas a partir do alceno correspondente e de isocianato de cloro-sulfonilo (Szabo, W.A., Aldrichquimica Acta, 1977, 23 e referências citadas nesse texto). Este último método é útil para a preparação de β-aminoácidos substituídos em a- e em β·. (Manhas, M.S.; Wagle, D.R.; Chong, J.; Bose, A. K. Heterocycles, 1988, 27, 1755). Outra via para os β-aminoácidos substituídos em a- é a redução com Níquel de Raney dos ésteres cianoacéticos, a temperaturas na gama de entre 20 e 80°C, e a pressões de 20 a 100 atm (Testa, E.; Fontanella, L.; Fava, F. Fermaco Ed. Sei., 1958, 13 152; Testa, E., Fontanella, L. Annalen 1959, 625, 95). Encontram-se também disponíveis uma série de procedimentos para a preparação de β-aminoácidos por redução de hidrazonas de cetoácidos (Gootijes, J.; Nomte, W.Th. Rec. Trav. Chim. 1953, 72, 721), de oximas (Anziegin, A.; Gulewivich, W. Z. Physiol. Chem 1926, 158, 32) e de ácidos nitropropiónicos. A purificação dos compostos finais faz-se em geral por cromatografia de elevada eficiência em fase reversa (RP HPLC) [High Performance Liquid Chromatography Protein and peptide Chemistry, F. Lottspeich, A. Henscher, K.P. Hupa, (eds.) Walter DeGruyter, New York, 1981], ou por cristalização.
ESQUEMA II
t-BocNH C02H +CICO2
O N—CHj
DMF (2) (A) + NMM em DMF
O Esquema II ilustra metodologia útil para ao acoplamento de um α-aminoácido com os compostos de β-aminoácido preparados no Esquema I. Os compostos que desta forma se obtêm são úteis para se acoplarem a compostos de ácidos benzóicos substituídos, para se prepararem os compostos da invenção presente. Tal metodologia pode ser modificada utilizando metodologia conhecida para acoplar outros ácidos aminoalquílicos aos β-aminoésteres preparados no Esquema I. -43-
Em suma, no Esquema II, adiciona-se N-metilmorfolina e em seguida cloroformiato de isobutilo, a uma solução de t-Boc-glicina em DMF. Num balão diferente, mistura-se o β-aminoéster substituído com N-metilmorfolina em DMF. Juntam-se as duas misturas e agita-se à temperatura ambiente para se obter o
Desprotege-se o produto obtido utilizando HCl/dioxano, para se obter (B).
ESQUEMA III H2N.
CO2H
Me
NH
1) DEA
bioxano/HjO Δ 2) HCi O Esquema III ilustra metodologia útil para a preparação da parte de ácido guanidinobenzóico da invenção presente, a qual pode ser utilizada para se acoplar com gly-p-aminoácido. Pode também levar-se a cabo esta preparação utilizando outros reagentes de guanidação apropriados conhecidos dos especialistas da técnica, por exemplo, utilizando pirazole-carboxamidina.HCl (Aldrich). A metodologia do Esquema III pode ser modificada utilizando -44- C.—** metodologia conhecida para preparar compostos alternativos úteis para se acoplarem aos β-aminoácidos.
Em suma, no Esquema III, adiciona-se ácido 3-aminobenzóico a nitrato de 3,5-dimetilpirazole-l-carboxamidina dioxano, água e DIEA. Agita-se a mistura ao refluxo, filtra-se o precipitado, lava-se e seca-se. Volta-se então a suspender o precipitado em água, acidifica-se com HC1 e concentra-se. Retira-se o solvente, suspende-se o resíduo em éter e seca-se, para se obter o cloridrato de ácido 3-guanidinobenzóico (C).
ESQUEMA IV (1)/—^ o^yt-cHs » (C) + CC02
DMF
(2) {B),NMM em DMF
-2TFA O Esquema IV ilustra metodologia útil para acoplar o ácido guanidinobenzóico (C) à parte β-aminoéster (B) dos compostos pretendidos da invenção presente. Tal metodologia pode ser modificada utilizando métodos habituais conhecidos de quantos detenham conhecimentos técnicos médios.
Em suma,, no Esquema IV, adiciona-se cloroformiato de isobutilo ao ácido 3-guanidinobenzóico (C) (preparado no Esquema III), em DMF e N-metilmorfolona. Agita-se a mistura reaccional e prepara-se uma suspensão do composto de p-aminoéster(B) (PREPARADO NO Esquema II) em DMF e N-metilmorfolina, que se adiciona em porções. Agita-se a mistura reaccional, filtra-se o precipitado, e lava-se com DMF. Retira-se a DMF. Dissolve-se o éster resultante em água, lava-se com éter e adiciona-se liOH à fase aquosa agitando-se durante cerca de 1 hora. Trata-se a solução com ácido trifluoroacético até pH=5 e purifica-se o produto por RPHPLC para se obter o composto pretendido (D).
ESQUEMA V Passo A
H02C'^C02H + R1CHO + NH/CHaCOz
C02H
H2N R3QH w HCI gas
/—CO2R3 Ri -HCI
Passo B
HCI/Oioxono ** Se R11 não for H, leva-se a cabo a alquilação nesta altura da reacção, utilizando procidementos de alquilação habituais, para se formar .HCl ^.COjRí HN^R1 I Rit que pode ser utilizado em vez de (E) nos métodos sintéticos deste documento.
Passo C HN A.
CQjH otn
Atí-^rb CL-—í -47-
t) D EA
ri^ ^ 1 * Z' í (J* ‘HCI &*oxano/HjO -! A
Δ 2) HCI ,Λ
(A1J 51-3 HN i*
COjH I—f^m= 1-3 ♦ N_NH'2* T S-Me · Hl
υ OEA bioxono /Η*0Δ - 2) HCI HN. ,Μ Ύ R5^\^N^Cp2Hxx '2' (A2)
HCI HN R.
COjH HCI j—= 1-4 OM«
EtOH
m = t-4 -isr: HN A>
•COjH V2 \ · HCI T.A.-
1} Oioxano/fyO D EA (A3) OMe
2) HCI ~&efluxo ^•γΝΗ (A4) -48- Passo C (cont.)
F.SOTIRMA V ÍConO C~- ""víV011*" HCI aquaso . "Ν^^ΟΟ,Η «O©-* *KSCN '21
(A5) ♦ R»—I
THF S—R* (A5) híAn-^^.co.h‘W.„ S—Me (AS)
Zi
(A5) ♦ CH3I
THF
(A7) * HN
✓R7 1) DlEA R»
Dioxano /H2O "\A w
2) HCI R* s \
CO2H 5 -HCI (A8} ^^Zi
RS HN Rs
.CO2H R2 I N II.c
Piridina R2 Z1
HjCS'' ''SCFfe Δ
SMeyQL
R2 I N R8 ">Λ DEA H2O/ Dioxano Δ
.CO2H
-49-ESQUEMA V (ConQ
Passo C (cont.)
COjU* ♦ TMS—N—C—O
1) THF
COjMe 2' R* R7N=C=0
1) THF 2) HjO/NaOHJDioxano 3} H* 2) NaOH/HjO/Dioxano 3) H*
CO^Me + R7N=C—S R»
1) THF 2) KaOHHjO/Dioxono 3) H*
S II C
COpMe 2' R\ 1) THF -uA ,ΝΗ -2) NaOH/HjO/Dioxano 3) H* R» R7 1) THF R\ 1 ,NT í MH R»' 2) NaOH^O/Dioxano 3) H* R«x (At 3) '2' (AI 4) '1'
ESQUEMA V (ConO
Passo D O N-CHj (A1-14) + CIC02 \-y
DMF (2) (F), NMM em DMF
No Esquema V ilustra-se metodologia útil para a preparação de diversos compostos da invenção presente. Tal metodologia encontra.se especificada de forma mais específica nos exemplos seguintes e nos Esquema l.IV. Tal metodologia pode ser modificada por um especialista da técnica, substituindo por reagentes e condições conhecidos da metodologia habitual, para se obterem os compostos pretendidos.
Especificamente no Passo C do Esquema V:
Na síntese dos ácidos benzóicos intremediários, (Al) até (AI4), os ácidos benzóicos de que se parte adquiridos podem ser comercialmente, ou podem ser obtidos a partir da redução do ácido nitrobenzóico correspondente, que pode ser adquirido comercialmente, ao aminoácido pretendido, ou podem ainda ser sintetizados por nitração do ácido benzóico apropriado, seguida da redução ao aminoácido benzóico pretendido. Estes são todos aqueles em que R5 é H. Quando R5 não é H, pode conseguir-se por metodologia convencional a alquilação da funcionalidade amino por metodologia conhecida.
Para além disso, a síntese do intermediário (A2) pode ser feita tal como se revela com generalidade na Patente E.U.A. 3.202.660, partindo do ácido aminobenzóico apropriado. m = 1-4
N O (A3) pode ser OMe utilizado na síntese dosnintermediários sintetizado a partir de e de (Me)3OBF4 em diclorometano. -52- o
OMe .HC1 utilizado na síntese do intermediário (A4) pode ser sintetizado a partir de Y2-CN, MeOH (1 equivalente) e HC1 gasoso (1 equivalente, em heptano.
Todos os outros reagentes do Esquema V, ou podem ser adquiridos comercialmente, ou são facilmente sintetizados por metodologias conhecidas dos especialistas da técnica. O acoplamento dos intermediários do Passo C do Esquema V [(Al) a (A14)] com o intermediário (F) (do Passo B do Esquema V) pode ser levado a cabo utilizando outros reagentes de acoplamento conhecidos pelos especialistas da técnica, para além do método do anidrido misto descrito no Passo D do Esquema V, por forma a obterem-se os produtos finais pretendidos.
-53 - ESQUEMA VA
λ Síntese al+ena+iva de aldeídos
Z10define-se tal com Z h - 54- O Esquema VA ilustra metodologia útil para a preparação de aldeídos (R1) que não são adquiríveis comercialmente, e que são utilizados na preparação dos β-aminoácidos tal como no Passo A do Esquema V. Tais β-aminoácidos são então também utilizados para sintetizar os compostos da invenção presente como se exemplifica també, nos Passos A a D do Esquema V. São conhecidas dos especialistas da técnica outras metodologias semelhantes, as quais também se encontram disponíveis, e também podem ser utilizadas, para preparar os compostos da invenção presente. -55- RSOUEMA VI (A)
-56-
-57-
No Esquema VI(A) apresenta-se um método alternativo para se sintetizarem os compostos com a Fórmula I. Todos os reagentes ou são comercialmente adquiríveis ou são feitos por métodos conhecidos pelos especialistas da técnica. A síntese dos β-aminoésteres é tal como se descreveu para o Composto (E) no Passo A do Esquema V.
Podem utilizar-se métodos alternativos, com os quais os especialistas da técnica são familiares, para o acoplamento, guanidação ou formação das ureias e tioureias. O Esquema VI(B) ilustra outra técnica alternativa para a síntese dos compostos desta invenção. Todos os reagentes ou são comercialmente adquiríveis ou são feitos por métodos habituais e conhecidos. -58- M h^b C-Λ
i -59-ESQUEMA VII (B)
x §
U5 o o o O T3 £ /*> LU lr * s :£ L o 2 V V “O s tO V λ u-* 5 O c o o </> "i V) s 0 <^S < Q. > ax
3 O
O XJ s. α N X V) >8 O σ £ "δ C Η 8ω. w i» t5 c o o ω 3 σ' CO *w ο L. α 1 Η Ο O « Ο Q. *σ §£ 2r* to o 4» c “O Ο ο to α XI α Έ ω Ό £« V ςη tu oc to 10 σ ο. 4Ν ‘«Ρ 3 < Ο
CS
O
T- CV
-60-
M
Os Esquemas VII(A) e (B) são semelhantes aos esquemas VI(A) e (B) e providenciam métodos adicionais de síntese dos compostos da invenção presente. (Sendo o Esquema VIIB mais geral do que o Esquema VILA). Tal como no Esquema VI, os reagentes e condições não se restringem aos definidos nestes esquemas, mas podem ser substituídos por reagentes alternativos conhecidos pelos especialistas da técnica. -61 - o
ESQUEMA VIII
NaOH, H20
-62-
à*· 1 a
O esquema VIII é ilustrativo da síntese utilizada para se formar o grupo A na Fórmula geral I, em que A é uma aminotiazolina ou aminotiazina. Todas as matérias primas e reagentes podem ser adquiridos comercialmente ou encontram-se definidos noutro local dos Esquemas e Exemplos deste documento. Podem empregar-se, tal como é do conhecimento dos especialistas da técnica, métodos alternativos de acoplamento e reagentes alternativos. -63- C—Λ*
ESQUEMA IX
UJ u- <i> ι _Β _£ ο ο g- 2-n.õ. 8 8 f f UJUI c ® . *r (QSXUI tl II U II r— r—_ n* cr a: cr cr ^ ϋ _1 ο Ο _ α_ <χ-£ -2 Ε Ε | ρ ω ο» Ε = V V U V C Φ - ^ bSZIU II U U Μ „ κ I** ►·zca ακ
Ό N cn ^ H ^ .2 -2 CL £ i i J u5 -Cf JÇf £L 0-II II : ; ii oo o\ co oo a.ε « x o _o - CL· Q- O E | 5 ftj 7^ UJ UJ t) xf f· -< « _ =, <r K a. « iSS ii ii η •«ta Jv K * d «' CD S II IISc & ir ir e:
a 0 Cl 1•S
κ a a a: Q£ £ V) o 1 oo Έ o 3 CTJ o C ao .2
XZ z £ (£
O I) Piridina . N-cianoditioiminocarbonato de dimetilo 70 C. il) R^NH?, EtOH.Ref luxo iii) THF, MeOH, H2O, NaOH. Iv) CHjCt, DMAP, NEt3, EDCl v) 1) THF, MeOH. HjO, NaOH 2) HT.
-64- ESQUEMA X
-65-
ϋ) MeOH, THF, H20, KOH. iii) CH2C12, TFA, 0o, 90 mins. -66-
Os Esquemas IX, X e XI são outros exemplos de síntese de compostos específicos da invenção presente. Todas as matérias primas e reagentes estão disponíveis comercialmente ou são revelados na especificação em apreço. Podem ser empregues pelos especialistas da técnica métodos, reagentes e condições alternativos.
Esquema XII
Para composto que
1) R1 = C02H (E) é o produto adquirível no mercado
C02Et H2N —í .HCi C02Et 2) R1 = o —n: R? 'Re -CC^Et
BOCNH CICO2
CO2H 1) NMM DMF-- J&7 em DMF 2) HN^ Re (adquirível no mercado)
Dioxano/HCl
((E) do passo A do esquema V quando R1 = -C(=0)NR7 R8) ^70 em que HNR R significa um aminoácido, sendo este aminoácido protegido com os grupos protectores apropriados.
As metodologias apropriadas para mais grupos R1 são como segue:
-68- SOCNI COjSn
rΗ-Λ C02H (adquirível no mercado)
Esquema XII ícont.)
1) B2H6.THFcrc 2) AcOH/MeOH
/—COjBn BOCNH—( N—OH
CHaCfe
(TC MesCl EtsN
BOCNH
-COjBn BOC-NH—(
MCPBA ou HjOz/HjO/CHjCN
BOCNH
'—S—Y* ll O
BOC—NH- -S—Y4 (Y4 = alquilo, arilo, heterociclo, todos substituídos opcionalmente como se definem na Fórmula I) ^-COjBn BOCNH—( S-Y* II O COjBn BOCNH—/ O '—S—Y*
HCI/Oioxano ___COzBn HjN—/ .HCÍ '—R' em que: Ri =—CH2S-Y4 —CHjj-Y· O —CH2S02-Y* •COjBn O || BOCNH— Cj '—0—s—CH3 ll -S—Y* II 0 O MCPBA 01Ή2Ο2 I hs-y«.k2co3.omf I 7crc dmap CO^Bn * Estes podem todos ser também utilizados como intermediários tais como (E) nos vários Esquemas utilizados para exemplificar 0 método de síntese dos compostos da invenção presente. -69 -69 <-λ C—Λ
Esquema XII (cont.)
De um modo semelhante, podem sintetizar-se compostos da invenção presente em que R1 é alquilo substituído:
+ KCN
OMF _ 7CfC OMAP
80CNI
COjBn!-«. II 0
70TC DMAP
BOCNH DMF ·*· Na—O—V4-► BOCN
0038« NH3
-*OH
25 C ! NHj
ClSOj—'Y* DMF, DMAP ___COjBn BOCNH—/ '—NHSO2—Y* __COjBn R? K2COa / DMF 80C~A_^R7 R 70*C NsRt OMAP "
Dioxano/HCI ’Γ r—COjBn HjN-l R1 .HCI
-70- ESQUEMA XIIA
O
OBnH
Nucleófilo, p.ex0. MgXfti
O o
OH HCl/dioxano «-ou rFA/CH2Cl2
Boc^
OBnH Ri
Ox. Swern
-71 - O esquema XII A delineia a síntese de aldeído aspártico protegido a partir do álcool aspartílico preparado no Esquema XII utilizando procedimentos de oxidação de Swem e a elaboração do aldeído por reacção com um nucleófilo, por exemplo, quer um Reagente de Grignard que se possa adquirir comercialmente, quer um Reagente de Grignard preparado pelos processos habituais, por forma a obter-se o derivado de álcool aspartílico substituído com R1, C-4. Pode preparar-se a amina primária pretendida removendo o grupo BOC pela utilização das condições ácidas habituais para se obterem os β-aminoácidos intermediários (por exemplo, Esquema I). O álcool substituído protegido com BOC C-4 pode ser transformado no seu derivado cetónico por uma segunda oxidação de Swem seguida de remoção do BOC para se obter a amina intermediária pretendida (por exemplo, Esquema I). d—Λ -72- Αί,ίο-^
ESQUEMA XIII
Para se sintetizarem compostos em que
3 3 em que t=l e Y e Z são ambos hidrogénio
que é em seguida tratado da mesma forma conducente a derivatização adicional, que a exemplificada nos esquemas anteriores para:
CO2H -73-
ESOUEMA XIV
-74-
M Ο Esquema XIV representa a síntese de aminohidrocumarinas (veja-se J. Rico, Tett. Lett., 1994,35, 6599-6602) que são facilmente abertas para dar a forma em que R1 é um grupo ortohidroxifenilo, substituído ainda com Z1. -75-
C
ESQUEMA XIV A
Acoplar a (H) do Esquema VII(B) usando activagão quer por DSC/NMM quer por IBCF/NMM em DMF
quer: a)NaOH ou LiOH em dioxano: H2 O ou THF: H20 ou CH3 CN:H20, ou b) Esterease de fígado de suíno (PLE) em tampão aquoso, ou c) ácido aquoso t
Z?°é tal como se definiu em Z1 -76- O Esquema XIV A representa a síntese de ésteres de aminohidrocumarinas a partir das aminohidrocumarinas do esquema XIV, e o seu subsequente acoplamento com os intermediários (H) do Esquema VII(B) utilizando quer a activação com DSC/NMM/DMF quer com IBCF/NMM/DMF seguida da síntese do sal cloridrato do éster de aminohidrocumarina/NMM. Por hidrólise subsequente utilizando as condições habituais dá-se a formação do derivado de ácido carboxílico. -77-
ESQUEMA XIV B
a. (TMSbNXf THF/-78eC to 0°C b. HCl/dioxano Z10
Acoplar a (H) do Esquema VII (B) usando activação quer por DSC/NMM quer por ICBF/NMM em DMF
O
Na OH ou LÍOH em dioxano: H2O ou THF: H2O ou CH3CN: H H2°
z“é tal como se definiu Z1 -78- -78-
Γ ! Ο Esquema XIV Β representa a síntese de 4-aminohidrotiocumarina a partir de tiocumarina. As tiocumarinas são facilmente preparadas conforme J.A. Panetta e H. Rapoport, J. Org. Chem., 1982, 47, 2626-2628 e referências citadas nesse documento, e podem ser transformadas nos derivados de 4-aminotiocumarina seguindo o procedimento geral do Esquema XIV. Pode levar-se a cano o acoplamento das aminohidrotiocumarinas ao intermediário (H) do esquema VII(B) utilizando metodologia semelhante à dos Esquemas XIV e XIV A. Consegue-se facilmente fazer a hidrólise para se obter o carboxilato-tiol pretendido, utilizando uma base (por exemplo LiOH ou NaOH) num solvente orgânico aquoso.
-80- Ο esquema XVI representa uma síntesev alternativa dos compostos da invenção presente nos quais A é representado por guanidinas cíclicas. Podem substituír-se apropriadamente reagentes e materiais alternativos conhecidos pelos especialistas da técnica, tal como facilmente um especialista da técnica se aperceberá, para se obterem os compostos pretendidos.
ESQUEMA XVII Ο
NRe -82-
ESQUEMA XVII (conO
<N
<r> LU Z ir δ V X PM zx | O O °=-t . + I V >--o—N r*-" 0* .d;
li.' 5 Q <3
(N X
QVS
LU LU
z <N| X
-83-
O Esquema XVIII ilustra métodos de síntese em que A é representado por uma guanidina cíclica com 5 ou 6 membros. AA a FF podem ser hidrogénio, ou os substituintes adicionais quando A é um heterociclo com dois átomos de azoto, desde que se possa obter comercialmente ou possa ser facilmente sintetizada por um especialista da técnica a diamina substituída apropriada.
-84- ESOUEMA XVIII
C02R3
I JX
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CM
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cr Z O to X o i
a ε V 3 ST LU £
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-85- ESOUEMA XIX o c <y 3cr * .§ i O si o § 3 Ο β α 3 Ο Ο ° = 3 tf) J2" σ-« β ο Ο ιι ο Λί,β X α χ o=o
0=0I χI I
Lli Ζ _£Ν Ο (Ν Xο
I 0=0ο +
<
I 0=0 1 2 0=0 I xI l U.j1 ι ο=ο ιο 0£ ηΓ -86-
ESQUEMA XX rv X ζ ζ£ Μ _σ· α <·> £ «Ν 21
0=0 ! χI ι
-87- í h .Λ Ϊ * Λ C— Ui ESQUEMA XX (cont.) OC â O L·
03 -88-
Os Esquemas XVIII-XX representam a síntese de precursores potenciais em que quer um quer dois dos azotos da da guanidina se encontram derivatizados com uma funcionalidade potencialmente lábil. Estes métodos destinam-se a ser meramente ilustrativos da metodologia para se prepararem os compostos da invenção presente. Podem utilizar-se outroas metodologias, reagentes e condições conhecidas dos especialistas da técnica para sintetizar os compostos da invenção presente. -89- Μ
ESQUEMA XXI —Ο—R*5
χ f Τ C«N
X 'Π » χ O r l z <N & X Λ X C4 O H w ó1 9 & V χ· .2 ίο o r- 0) 00 *1 <4- CM U LU *- a a» il λ CQ rl
? Z X r X 2
5ΪI □ 5ΓΊ3 LU L. O O o -O
Xz ^=o X z
CQ do Esquema VIB e referência (2) da referência (2)=Sci.Pharm. (1989),57(4), 375-80 oz < -90- Μ
Ο Esquema XXI ilustra mais exemplos de precursores potenciais ou de entidades activas dos compostos da invenção presente.
Em particular, o Esquema XXI ilustra a síntese de análogos N-Hidroxilo ou N-alcoxilo dos compostos de guanidina cíclicos ou acíclicos.
As referências citadas providenciam detalhes científicos acerca da derivatização apropriada das anilinas exemplificadas no Esquema VIB. w
Exemplo A
Preparação de 3-N-t-Boc-amino-4-hidroxi-(3S)-butirato de benzilo
Dissolveu-se em THF (30 mL) éster β-benzílico do ácido N-t-Boc-L-aspártico (75 g, 20 mmol), e adcicionou-se esta solução gota a gota ao longo de 30 minutos a BH3-THF (400 mL, 40 mmol), a 0°C, sob atmosfera de N2. Depois de se agitar a solução durante 2,5 horas a 0°C, interrompeu-se a reacção adicionando uma solução de ácido acético a 10% em MeOH (50 mL), e evaporou-se o solvente. Dissolveu-se o resíduo em éter (200 mL) e lavou-se com HC1 IN, com solução saturada de K2CO3, com água, e secou-se sobre MgS04. Isolou-se o produto por remoção do solvente em vazio (p.f. 56-57°C de éter isopropílico/hexano). RMN de *H (DMSO-d6) δ 1,4 (s, 9H), 2,68 (d, 2H, J=6 Hz), 3,82 (d, 2H, J=5 Hz), 4,01 (m, 1H), 5,16 (m, 1H), 5,21, s. lg, 1H), 7,37 (s. lg-, 5H).
Exemplo B
Preparação de 3-amino-4-(antranilato) de (3S)-butirato de benzilo
Dissolveu-se 3-N-t-Boc-amino-4-hidroxi-(3S)-butirato de benzilo do Exemplo A (10 g, 32 mmol) em dimetilformamida (50 mL) adicionando-se em seguida trietilamina (4,4 g, 46 mmol). Adicionou-se anidrido isatóico (5,0 g, 3 mmol) e agitou-se a mistura reaccional durante 24 horas a 25°C. Quando a reacção se completou (monitorizada por RPHPLC), adicionou-se-lhe água e xtraíu-se o produto com acetato de etilo (100 mL) e secou-se sobre Na2S04. Após evaporação do solvente obtiveram-se 12,2 g de um óleo amarelo. Adicionou-se a este óleo dioxano (20 mL) e em seguida uma solução 4N de HC1 em dioxano (20 mL).Deixou-se a mistura reaccional prosseguir durante 4 horas, adicionou-se éter, e separou-se da solução uma massa oleosa.que se decantou, repetiu-se por duas vezes este procedimento. Adicionou-se éter ao semi-sólido obtido e agitou-se vigorosamente durante 16 horas. Obteve-se um sólido branco cujos EM e RMN eram consistentes com a estrutura proposta.
Exemplo BB
Preparação de 3-nitrobenzoílglicina
Adicionou-se glicina (20 g, 266 mmol) a água (200 mL), e em seguida hidróxido de potássio (20 g, 357 mmol), e arrefeceu-se a 0°C num banho de gelo.Adicionou-se a gota a gota ao longo de 10 minutos a esta solução uma solução de cloreto de 3.nitrobenzoílo (20 g, 108 mmol) em acetonitrilo (20 mL). Completada a reacção (3-4 horas), adicionou-se-lhe ácido clorídrico concentrado até pH=2, e em seguida solução aquosa saturada de NaCl (75 mL). Filtrou-se o produto, lavou-se com água e secou-se ao ar (22 g, rendimento de 90%). RMN de Ή (DMSO-d6) δ 3,92 (d, 2H, J=6,l), 7,9 (t, 1H, J=7,9), 8,3 (t, 1H, J=5,6), 8,35 (m, 2H), 8,69, (s, 1H), 9,25 (t, 1H, J=7,2 Hz). EM (FAB) m/e 231,0 (M+Li+).
Análise elementar: C7H8N205 Calculado: C, 45,89 Determinado: C, 45,97 H, 4,25 H, 4,44 N, 9,92 N, 10,11
Exemplo C
Preparação de éster etílico de N-[2-[[(3-nitrofenil)carbonil]amino] 1 -oxoetil]-P-alanina
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidillo (14 g, 5,5 mmol) a 3-nitrobenzoílglicina (10 g, 4,5 mmol) do Exemplo BB em dimetilformamida seca (30 mL), e em seguida N,N-dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 1 hora adicionou-se-lhe de uma só vez uma solução de cloridrato do éster etílico de beta-alanina (7 g, 4,6 mmol) em solução aquosa de carbonato de potássio a 20% (50 mL). Depois de se completar a reacção, recolheu-se o produto por filtração (14 g, rendimento de 97%). RMN de (DMSO-dô) δ 1,18 (t, 3H, J=7,2 Hz), 2,46 (t, 1H, J=7,0 Hz), 3,34 (q, aH, J,=6,7 Hz, J2=14,2 Hz), 7,8 (t, 1H, J=8,0 Hz), 8,1 (t, 1H, J=5,6 Hz), 8,35 (m, 2H), 8,71 (s, 1H), 9,22 (s. lag., 1H). EM (FAB) m/e 324,3 (M+H+).
Análise elementar:
Ci4H17N306 H20 Calculado: C, 49,26 H, 4,99 N, 12,32
Determinado: C, 49,42 H, 5,01 N, 12,21 -94-
Exemplo D
Preparação de 3-[[(cianoimino)(metiltio)metíl]amino]benzoato de metilo
H NC
COjMe
Aqueceu-se ao refluxo sob atmosfera de azoto durante 2,5 horas, com agitação, uma mistura de 3-aminobenzoato de metilo (6,04 g, 40 mM) e N-cianiditioiminocarbonato de dimetilo (11,96 g, 80 mM) em piridina (70 mL). Arrefeceu-se então a mistura reaccional até à temperetura ambiente. O composto cristalizou quando se deixou repousar a mistura reaccional de um dia para o outro, obtendo-se 6,2 g (duas colheitas). Utilizou-se o composto em título nos outros Exemplos, sem purificação adicional. O RMN era consistente com a estrutura proposta. -95-
Exemplo E
Preparação de 3-[[(cianoimino)[(fenilmetil)amino]metil]amino]-benzoato de metilo
Aqueceu-se ao refluxo sob atmosfera de azoto durante 3 horas, com agitação, uma mistura do composto do Exemplo D (1,0 g) e benzilamina (440 mg) em etanol (15 mL). Arrefeceu-se a mistura reaccional à temperatura ambiente. Durante o repouso de um dia para o outro precipitou um sólido branco que se isolou por filtração (720 mg). Purificou-se mais o filtrado em bruto por cromatografia sobre silica (eluente; acetato de etilo/hexano, 1:1) para se obter o composto em título (550 mg) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura proposta. -96-
Exemplo F
Preparação de 3-[[(cianoimino)(metilamino)metil]amino]benzoato de metilo
Preparou-se o composto em título tal como se descreveu no Exemplo E, substituindo a benzilamina por uma quantidade equivalente de metilamina. Obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco (rendimento de 55%). O RMN era consistente com a estrutura proposta. -97-
Exemplo G
Preparação de 3-[[amino(cianoimino)metil]amino]benzoato de metilo
Aqueceu-se a 70°C em tubo fechado durante 3,5 horas, uma mistura do composto do Exemplo D (1,0 g) e hidróxido de amónio (2 mL) em etanol (20 mL). Arrefeceu-se a mistura reaccional à temperatura ambiente e reduziu-se o seu volume a metade. Durante o repouso de um dia para o outro à temperatura ambiente precipitou um sólido branco que se isolou por filtração e lavou com metanol. Obteve-se deste modo o composto em título (389 mg) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo Η
Preparação de 3-[[(cianoimino)(etilamino)metil]amino]benzoato de metilo
Preparou-se o composto em título tal como se descreveu no Exemplo G, substituindo o hidróxido de amónio por uma quantidade equivalente de etilamina. Obteve-se o composto em título (rendimento de 78%) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura proposta. -99-
Exemplo I
Preparação de ácido 3-[[(cianoimino)(fenilmetil)amino]metil]-aminojbenzóico
Adicionou-se a uma solução do composto do Exemplo E (250 mg) em THF (2 mL) e MeOH (2 mL), NaOH IN (1 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas e concentrou-se em vazio para se obter um sólido branco. Acidificou-se o resíduo suspendendo-o em água e adicionando-lhe HC1 IN. Filtrou-se o sólido resultante, lavou-se com éter dietílico e secou-se para se obter o composto em título (140 mg) que se utilizou em Exemplos subsequentes sem purificação adicional. O RMN era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo J
Preparação de ácido 3-[[(cianoimino)(metilamino)metil]amino]- benzóico
Preparou-se o composto em título tal como se descreveu no Exemplo I, substituindo o composto do exemplo E por uma quantidade equivalente de composto do Exemplo F. Obteve-se o composto em título (rendimento de 87%) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura proposta. - 101 -
Exemplo K
Preparação de ácido 3-[[amino(cianoimino)metil]amino]-benzóico
CO2H
Preparou-se o composto em título tal como se descreveu no Exemplo I, substituindo o composto do exemplo E por uma quantidade equivalente de composto do Exemplo G. Obteve-se o composto em título (rendimento de 92%) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura proposta. 1 ^ —* - 102-
Exemplo L
Preparação de ácido 3-[[(cianoimino)(etilamino)metil]amino]- benzóico
Preparou-se o composto em título tal como se descreveu no Exemplo I, substituindo o composto do exemplo E por uma quantidade equivalente de composto do Exemplo H. Obteve-se o composto em título (rendimento de 81%) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura proposta. - 103- »-Λ
Exemplo M
Preparação de ácido m-guanidinohipúrico
Passo A
Tratou-se uma solução de glicina (200 g) e KOH (200 g) em água (1000 mL), a 0°C, por adição gota a gota de uma solução de cloreto de m-nitrobenzilo (100 g) em acetonitrilo (100 mL). Deixou-se a mistura reaccional aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 4 horas. Adicionou-se solução aquosa de HC1 12N até pH<2. Deixou-se repousar a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o sólido resultante e lavou-se com água (2 x 250 mL) e secou-se em vazio a 60°C. Isolaram-se 100 g de ácido m-nitrohipúrico.
Os resultados analíticos de EM, RMN de 1 e CHN eram consistentes com o produto pretendido.
Passo b
Sujeita-se uma suspensão de ácido m-nitrohipúrico (50 g), e de Pd/c a 5% (5 g) em metanol (200 mL), a 50 psi de H2. Após 2 horas, filtrou-se a mistura reaccional.lavou-se o sólido cinzento resultante com solução aquosa de HC1 a 2% ( 2 x 250 mL). Liofílizou-se a solução amarelada para se obter ácido - 104-
m-aminohipúrico.HCl (30 g). Passo C
Aqueceu-se ao refluxo durante 6 horas uma mistura de ácido m-aminohipúrico.HCl (10 g), NMM (12 mL) e lH-pirazole-l-carboxamidina .HC1 (8,3 g) em dioxano (80 mL). Removeu-se a fonte de calor e arrefeceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente. Adicionou-se solução aquosa saturada de NaCl (10 mL) e filtrou-se a mistura reaccional. lavou-se o sólido obtido com dioxano (20 mL) e em seguida com acetona (20 mL). Dissolveu-se o sólido cor de salmão em CH3CN:H2= 1:1, e tratou-se com solução aquosa a 20% de HC1 (pH<3). O sólido liofilizado, ácido m-guanidinohipúrico.HCl (10 g) apresentava resultados analíticos de EM, RMN de 1 e CHN eram consistentes com o produto pretendido. - 105-
Exemplo N
Preparação de 3-[[(cianoimino)(2-piridinilmetil)amino]metil]-amino]benzoato de metilo
Preparou-se o composto em título tal como se descreveu no Exemplo E, substituindo a benzilamina por uma quantidade equivalente de 2-(aminometil)piridina. Obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco (rendimento de 75%). O RMN era consistente com a estrutura proposta. -106- Μ. C-~—(*-1
Exemplo O
Preparação de ácido 3-[[(cianoimino)(2-piridinilmetil)amino]me-til]-amino]benzóico
Preparou-se o composto em título tal como se descreveu no Exemplo I, excepto que se substituiu o composto do Exemplo E por uma quantidade equivalente composto do Exemplo N. Obteve-se assim o composto em título sob a forma de um sólido branco (rendimento de 70%). O RMN era consistente com a estrutura proposta. - 107 -
z^\L í «-A
Exemplo P
Preparação de 3-[[(cianoimino)(3-piridinilmetil)amino]metil]-ami-nojbenzoato de metilo
Preparou-se o composto em título tal como se descreveu no Exemplo E, substituindo a benzilamina por uma quantidade equivalente de 3-(aminometil)piridina. Obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco (rendimento de 70%). O RMN era consistente com a estrutura proposta. - 108 -
Exemplo Ο
Preparação de ácido 3-[[(cianoimino)(3-piridinilmetil)amino]me-til]-amino]benzóico
Preparou-se o composto em título tal como se descreveu no Exemplo I, excepto que se substituiu o composto do Exemplo E por uma quantidade equivalente composto do Exemplo P. Obteve-se assim o composto em título sob a forma de um sólido branco (rendimento de 65%). O RMN era consistente com a estrutura proposta.
Preparação de
Exemplo R
HN— i t-8oc
Adicionou-se, a uma solução de ácdio DL-3-amino-3-fenilpropiónico (16,5 gO,l M), dioxano (160 mL), água (40 mL), e trietilamina (25 mL), dicarbonato de di-tert-butilo (18,6 g, 0,1 mole). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter uma goma oleosa que se dissolveu em acetato de etilo. lavou-se a solução resultante com água, NaCl saturado e água. Separou-se a fase orgânnica, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter o produto em bruto (8,9 g), que se utilizou no passo seguinte 8Exemplo S) sem purificação adicional. O RMN era consistente com a estrutura proposta. - 110- C-----
Exemplo S
Preparação de
Adicionaram-se a uma solução de composto do Exemplo R (8,3 g, 30 mmol) em DMF (50 mL), sob agitação, K2C03 (10 g) e brometo de benzilo (5,7 g, 30 mmole). Agitou-se a mistura reaccional sob uma atmosfera de azoto, à temperatura ambiente, durante 16 horas. Diluiu-se a mistura reaccional com água (400 mL) e extraíu-se com acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica e lavou-se com água, NaHC03 a 5%, água, secou-se (Na2S04) e concentrou-se em vazio para se obter o éster em bruto (8,5 g). Utilizou-se o composto em título no passo seguinte (Exemplo T) sem purificação adicional. O RMN era consistente com a estrutura proposta. * - 111 -
At-
Exemplo T
Preparação de
Adicionou-se a uma solução de composto do Exemplo S (2,0 g) em cloreto de metileno (20 mL), sob agitação, ácido trifluoroacético (20 mL), e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obterem 2,05 g do produto em bruto, o qual se. utilizou no passo seguinte (Exemplo U) sem purificação adicional. O RMN era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo U
Preparação de
O II r( CC^Bn HN—CH2—C—NH—ÇH t-Boc
Adicionaram-se a uma solução de N-t-Boc-glicina (876 mg, 5 mmole), cloreto de metileno (20 mL), N-metilmorfolina (1,01 g), a 0°C, sob agitação, IBCF (690 mg), e agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 15 minutos. Adicionou-se à mistura reaccional a 0°C o produto do Exemplo T (1,845 g). Aqueceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente, e agitou-se durante 6 horas. Lavou-se a mistura reaccional com água, seguida de solução saturada de bicarbonato de sódio e de água, secou-se (Na2SC>4) e concentrou-se em vazio para se obter o produto em bruto (2,2 g). Purificou-se o produto em bruto passando-o por uma coluna de cromatografia rápida utilizando como eluente CHCl3:etanol:NH4OH a 92,5:7:0,5 para se obter o composto em título (1,82 g)sob a forma de um óleo O RMN era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo V
Preparação de
Adicionaram-se a uma solução de composto do Exemplo U (1,8 g) e cloreto de metileno (20 mL), sob agitação, ácido trifluoroacético (12 mL), e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente, durante 16 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter o produto (1,7 g) em bruto, sob a forma de uma goma oleosa, que se utilizou no passo seguinte (Exemplo 132, Exemplo 133, Exemplo 134) sem purificação adicional. O RMN era consistente com a estrutura proposta. - 114- h+.rín C~—«-«-! ^
Exemplo 1
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)- amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridin-3-propanoato de etilo
Passo A
Adicionou-se a 3-piridinacarboxaldeído (300 ml) em 2-propanol (3 litros), acetato de amónio (297 g) seguido por ácido malónico (398 g). Agitou-se a mistura reaccional ao refluxo durante 5 horas. Filtrou-se o precipitado enquanto quente e lavou-se com isopropanol quente (2 litros). Secou-se então o sólido branco resultante para proporcionar ácido DL-3-amino-3-(3-piridil)propiónico (220 g) sob a forma de um sólido branco.
Os RMN e EM eram consistentes com o produto pretendido.
Passo B
Suspendeu-se ácido DL-3-amino-3-(3-piridil)propiónico (220 g) do Passo A em EtOH absoluto (3,6 litros). Borbulhou-se gás de HC1 (de um tubo de leitura única de Vi lb) na mistura reaccional enquanto se agitou durante 40 - 115- minutos (exotermia lenta até 61°C). Aqueceu-se então a suspensão ao refluxo durante 4 horas (forma-se uma solução após 1 a 1,5 horas). Arrefeceu-se a mistura reaccional a 5°C num banho de gelo. Após agitação a 5°C durante 1,5 horas, filtrou-se o precipitado branco resultante e lavou-se completamente com éter. Após secagem em vazio a 50°C, o rendimento de dicloridrato de DL-3-amino-3-(3-piridil)propionato de etilo foi de 331,3 g sob a forma de um sólido branco.
Os RMN e EM eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C A dicloridrato de DL-3-amino-3-(3-piridil)propionato de etilo (220,6 g, 0,83 mole) do Passo B, em THF anidro (2 litros) e trietilamina (167,2 g, 1,65 moles), adicionou-se éster de N-hidroxisuccinimida de N-t-BOC-glicina(225 g, 0,826 moles) (Sigma) em várias porções, a 5-10°C (sem exotermia). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o precipitado resultante e lavou-se com THF. Retirou-se então em vazio o solvente do filtrado. Dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo (2,3 litros). Lavou-se a fase de acetato de etilo com solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 900 ml) e H20 (3 x 900 ml), secou-se sobre MgS04 e retirou-se o solvente em vazio. Suspendeu-se o resíduo, de um dia para o outro, em 10% de acetato de etilo/hexano (2,5 litros). Filtrou-se o precipitado, lavou-se com 10% de acetato de etilo/hexano (1 litro), depois hexano, secou-se então para se obter /3-[[2-[[(l,l-dimetiletoxi)carbonil]amino]acetil]amino]-piridin-3-propanoato de etilo (233 g) sob a forma de um sólido branco.
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 116- Αα {^.«ΜΙΙΙΧ..^ ( *Ί,
Passo D
Dissolveu-se /5-[[2-[[(l ,1 -dimetiletoxi)carbonil]amino]acetil]-ami-no]-piridin-3-propanoato de etilo (do Passo C) (232 g, 0,66 mole) em dioxano quente (1 litro). Após arrefecimento até à temperatura ambiente, adicionou-se lentamente HC1 4M em dioxano (1,6 litros) (Aldrich). Formou-se um precipitado branco após vários minutos e tomou-se então numa substância pegajosa espessa. Após 2 horas, retirou-se o solvente por decantação. Suspendeu-se a substância pegajosa em éter e retirou-se o éter por decantação até que resultou num sólido branco. Este foi seco em vazio para se obter sal biscloridrato de β-[(2-aminoacetil)amino]piridin-3-propanoato de etilo (224,2 g) sob a forma de um sólido higroscópico branco.
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo E
Adicionou-se ácido 3-aminobenzóico (2,7 g, 0,02 mole) a nitrato de 3,5-dimetilpirazole-l-carboxamidina (6 g, 0,03 mole) (Aldrich) e di-isopropilamina (3,8 g, 0,03 mole) em dioxano (20 ml) e H20 (10 ml). Agitou-se a mistura reaccional ao refluxo durante 2,5 horas e deixou-se repousar de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o precipitado resultante, lavou-se com dioxano/H20 e secou-se. Suspendeu-se então o precipitado em H20 e acidificou-se com HC1 concentrado até se formar uma solução. Retirou-se o solvente em vazio e suspendeu-se o resíduo duas vezes em éter (retirou-se o éter por decantação). Secou-se o produto em vazio para se obter cloridrato de ácido 3-guanidinobenzóico (l,77g) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 117 -
Passo F
Adicionou-se cloroformiato de isobutilo (0,31 g, 0,0023 mole) ao produto do Passo E (0,49g, 0,0023 mole) e N-metilmorfolina (0,23 g, 0,0023 mole) em DMF anidro (8 ml) à temperatura do banho de gelo. Após agitação durante 5 minutos à temperatura do banho de gelo, adicionou-se uma suspensão do produto do Passo D (0,73 g, 0,0023 mole) e N-metilmorfolina (0,46 g, 0,0045 mole) em DMF anidro (8 ml) numa só porção. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em vazio num banho de água a 78°C e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]piridin-3-propanoato de etilo (800 mg) sob a forma de um sólido higroscópico branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 118- Aí h-rlr* C~ i { l-i
Exemplo 2
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[ (aminoiminometil)-amino] fenil] carb onil] amino] acetil] amino] piridin-3 -propanóico
NH
.2TFA
Adicionou-se LiOH (160 mg, 0,0038 mole) ao produto do Exemplo 1 (700 mg, 0,001 mole), em H20 (20 ml). Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora à temperatura ambiente. Após se baixar o valor de pH até = 5 com TFA, isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de ácido (+)-/0- [ [2- [[ [3 - [(aminoiminometil)-amino] fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-piridin-3-propanóico (640 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. -119 -
Exemplo 3
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 1, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído no Passo A por uma quantidade equivalente de benzaldeído.
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 4
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?- [[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzeno-propanóico
Ao produto do Exemplo 3 (0,37 g, 0,0007 mole) em H20 (10 ml) adicionou-se LiOH (80 mg, 0,002 mole). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Baixou-se o valor de pH até = 3 com TF A e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal trifluoroacetato de ácido (±)-/3-[ [2- [[ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-benzenopropanóico (280 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 121 -
Exemplo 5
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-y9-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 1, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído no Passo A por uma quantidade equivalente de piperonal (Aldrich).
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 122- í*pi. Y{*3 { ui
Exemplo 6
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y9-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-1,3 -benzodioxole-5-propanóico
Adicionou-se LiOH (70 mg, 0,0017 mole) ao produto do Exemplo 5 (0,35 g, 0,0006 mole) em H2O (40 ml) e CH3CN (5 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Baixou-se o valor do pH até = 4,5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal trifluoroacetato de ácido {±)-β-[[2-[ [ [3 - [(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] ace til] amino]-l,3-benzodioxole-5-propanóico (280 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 123- M C--—-J>·ι
Exemplo 7
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]naftalen-l-il]carbonil]amino]acetil]amino]-piridina-3-propanoato
.2TFA
Passo A
Adicionou-se LiOH (1,8 g, 4 equivalentes) a 3-nitro-l-naftoato de metilo (2,5 g, 0,011 mole) (Aldrich) em MeOH/H20 (40 ml) (1:1). Agitou-se a solução de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente sob uma corrente de N2. Dissolveu-se o resíduo em H20 e acidificou-se a solução com HC1 concentrado. Filtrou-se o precipitado resultante, lavou-se com H20 e secou-se para se obter ácido 3-nitro-l-naftóico (2,18 g) sob a forma de um sólido branco.
Passo B
Dissolveu-se ácido 3-nitro-l-naftóico (1,77 g, 0,008 mole) numa quantidade mínima de MeOH quente. Adicionou-se Pd/C a 10% (300 mg) e agitou-se a mistura reaccional numa bomba de Parr sob 50 psi de H2 durante 5 horas. Filtrou-se o catalisador através de celite e retirou-se o solvente em vazio. Secou-se o resíduo para se obter ácido 3-amino-l-naftóico (1,43 g) sob a forma - 124-
de um sólidos com coloração rosa. Passo C
Adicionou-se ácido 3-amino-l-naftóico (1 g, 0,0053 mole) a nitrato de 3,5-dimetilpirazole-l-carboxamidina (1,6 g, 0,008 mole) (Aldrich) e di-isopropiletilamina (1,02 g, 0,008 mole) em dioxano (5 ml) e H20 (2,5 ml). Agitou-se a mistura reaccional ao refluxo de um dia para o outro. Arrefeceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e filtrou-se o precipitado, lavou-se com dioxano/H20, e então secou-se. Suspendeu-se então o precipitado em H20 e acidificou-se com HC1 concentrado. Retirou-se o solvente em vazio num banho de água a 70°C. Suspendeu-se o resíduo em éter 3x (retirou-se o éter por decantação), secando-se depois em vazio para se obter cloridrato de ácido 3-guanidino-l-naftóico (460 mg) sob a forma de um sólido branco.
Passo D
Adicionou-se cloroformiato de isobutilo (210 mg) a cloridrato de ácido 3-guanidino-l-naftóico (400 mg, 0,0015 mole) e N-metilmorfolina (150 mg) em DMF anidro (8 ml) à temperatura do banho de gelo. Após agitação à temperatura do banho de gelo durante 5 minutos, adicionou-se uma suspensão do produto do Exemplo 1, Passo D (490 mg, 0,0015 mole), N-metilmorfolina (300 mg) em DMF anidro (6 ml), numa só porção. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em vazio num banho de água a 78°C. Isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de (+)-/?-[ [2- [[ [3 - [(aminoiminometil) - amino] naftalen-1 - il]carbonil]amino]acetil]-amino]-piiidina-3-propanoato (410 mg) sob a forma de um sólido branco.
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 125 - CL—
Exemplo 8
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]naftalen-l-il]carbonil]amino]acetil]amino]-piridina-3-propanóico
.2TFA
Adicionou-se LiOH (70 mg, 0,0016 mole) ao produto do Exemplo 7, Passo D (280 mg, 0,0004 mole) em H20 (15 ml) e CH3CN (2 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Baixou-se o valor do pH até 5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/2-[[2-[[[l-[(aminoiminometil)-amino]naftalen-3-il]carbonil]amino]acetil]amino]-piridina-3-propanóico (240 mg) sob a forma de um sólido higroscópico branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 126-
Exemplo 9
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de (±)-/^[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-il)-amino] fenil] carbonil] amino]acetil] ammo]-piridina-3 -propanoato de etilo
Passo A
Adicionou-se ácido 3-aminobenzóico (5,4 g, 0,04 mole) a iodidrato de 2-metiltio-2-imidazolina (14,6 g, 0,06 mole) (Aldrich) e di-isopropiletilamina (7,6 g, 0,06 mole) em dioxano (40 ml) e H20 (20 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro ao refluxo. Arrefeceu-se a solução num banho de gelo e filtrou-se o precipitado resultante e lavou-se com dioxano. Purificou-se o produto impuro por RPHPLC para se obter ácido 3-(2-aminoimidazolin)-benzóico (800 mg).
Passo B
Adicionou-se cloroformiato de isobutilo (170 mg, 0,00125 mole) ao produto do Passo A (400 mg, 0,00125 mole) em N-metilmorfolina (130 mg, 0,00125 mole) em DMF anidro (8 ml). Após agitação à temperatura do banho de gelo durante 5 minutos, adicionou-se o produto do Exemplo 1, Passo D (410 mg, 0,00125 mole) e N-metilmorfolina (250 mg, 0,0025 mole) em DMF anidro (6 ml) - 127-
numa só porção. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em vazio num banho de água a 79°C e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de (±)-/3-[[2-[[[3-[(4,5 -dihidro-1 H-imidazol-2-il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -amino]-piridina-3-propanoato (600 mg) sob a forma de um sólido higroscópico branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 128 -
Exemplo 10
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-1H-imidazol-2-il)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-piridina-3-propanóico
.OH .2TFA
Adicionou-se LiOH (110 mg, 0,0027 mole) ao produto do Exemplo 9, Passo B (450 mg, 0,00068 mole) em H20 (20 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Baixou-se o valor do pH até 5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/^[[2-[[[l-[(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-piridina-3-propanóico (250 mg) sob a forma de um sólido higroscópico branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 129-
Exemplo 11
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de (±)-^-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin- 7-il) amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -pr opanoato de etilo
(Racémico )
Passo A
Adicionou-se cloridrato de ácido 3-aminobenzóico (5 g, 0,0288 mole) a l-aza-2-metoxi-l-ciclohepteno (3,67 g, 0,0288 mole) (Aldrich) em etanol absoluto (20 ml). Formou-se rapidamente uma solução. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o precipitado resultante, lavou-se com éter e secou-se em vazio se obter ácido 3-(l-aza-2-amino-1 -ciclohepteno)benzóico (4,9g).
Passo B
Adicionou-se cloroformiato de isobutilo (0,25 g, 0,0019 mole) ao produto do Passo A (0,5 g, 0,0019 mole) e N-metilmorfolina (0,19 g, 0,0019 mole) em DMF anidro (8 ml). Após agitação à temperatura de banho de gelo durante 5 minutos, adicionou-se o produto do Exemplo 1, Passo D (0,6 g, 0,0019 -130 - mole) e N-metilmorfolina (0,38 g, 0,0037 mole) em DMF anidro (7 ml) numa só porção. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em vazio num banho de água a 78°C e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (490 mg). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida.
-131 -
Exemplo 12
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)->3-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -piridina-3 -propanóico
(Racémico )
Adicionou-se LiOH (80 mg, 0,0019 mole) ao produto do Exemplo 11, Passo B (400 mg, 0,00058 mole) em H20 (20 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Baixou-se o valor do pH até 4,8 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter 320 mg de sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/3-[[2-[[[l-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepinl-7-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-piridina-3-propanóico sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 132 - β^ ί$Λ. γ h ^ ^
Exemplo 13
Preparação do sal TFA de (±)-y5-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-1,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 11, substituindo o 3-piridina-carboxaldeído do Exemplo 1, Passo A, pela quantidade equivalente de piperonal (Aldrich) no Exemplo 11, Passo B.
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. -133 -
Exemplo 14
Preparação do sal TFA de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanóico
Adicionou-se LiOH (80 mg, 0,0018 mole) ao produto do Exemplo 13 (0,46 g, 0,00091 mole) em H2O (10 ml) e dioxano (7,5 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas. Baixou-se o valor do pH até 5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter ácido (±)-β-[[2-[[[ 1-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepinl-7-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-l,3-benzodioxole-5-propanóico (440 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida.
- 134-
Exemplo 15
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-benzenopropanóico
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 12, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A, usado novamente no Exemplo 11, Passo D, pela quantidade equivalente de benzaldeído tal como se descreve no Exemplo 11, Passo B.
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. -135 -
Exemplo 16
Preparação do sal bis(trífluoroacetato) de (±)-/?-[[2-[[[3-[(3,4-dihidro-2H-pirrol-5 -il)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-piridina-3-propanoato de etilo
(Racémico)
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do
Exemplo 11, substituindo l-aza-2-metoxi-l-ciclohepteno por l-aza-2-metoxi-l-cilcopenteno* no Passo A. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. produziu-se l-aza-2-metoxi-l-ciclopenteno tal como se segue: Adicionou-se tetrafluoroborato de trimetiloxónio (10 g) (Aldrich) a 2-pirrolidinona (2,7 g, 0,033 mole) em CH2CI2 (100 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 dias. Adicionou-se NaHCCb e após agitação numa ampola de decantação, separou-se o CH2C12 e retirou-se por destilação. Isolou-se 1 g do produto pretendido por nova destilação à pressão atmosférica recolhendo a porção que ebulia a = 120°C. - 136 -
Exemplo 17
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido /H[2-[[[3-[(3,4-dihidro-2H-pirrol-5 -il)-amino] fenil]carbonil] amino] acetiljamino] -piridina-3 -propanóico
.2TFA
Adicionou-se LiOH (100 mg, 0,002 mole) ao produto do Exemplo 16 (380 mg, 0,00057 mole) em H2O (15 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas. Baixou-se o valor do pH até 5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-y5-[[2-[[[3-[(3,4-dihidro-2H-pirrol-5-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]piridina-3-propanóico (150 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 137- hs~ d——(t-j,
Exemplo 18
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de (±)-/?- [ [ 1 - [[ [ [3 - [(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] -1 -ciclopropil] carbonil] amino] -piridina-3 -propanoato de etilo
.2TFA (Racémico)
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 1, substituindo o éster de N-hidroxisuccinimida de N-t-Boc-glicina do Exemplo 1, Passo C, por uma quantidade equivalente de carboxilato de l-(N-t-Boc-amino)ciclopropano-N-hidroxisuccinimida (Sigma).
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 19
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido /?- [[ 1 -[[[[3- [(aminoiminometil)- amino]fenil]carbonil]amino]cicloprop-l-il]carbonil]amino]-piridina-3- propanóico
.2TFA
Adicionou-se LiOH (60 mg, 0,0013 mole) ao produto do Exemplo 18 (220 mg, 0,00033 mole) em H20 (15 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Baixou-se o valor do pH até 3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de ácido β- [ [ 1 - [ [ [ [3~ [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] cicloprop-1 -il] -carbonil]amino]piridina-3-propanóico (170 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 139 -
Exemplo 20
Preparação do sal TFA de (±)-/?-[[2-[[[4-cloro-3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 11, substituindo o cloridrato de ácido 3-amino-benzóico no Exemplo 11, Passo A por uma quantidade equivalente de cloridrato de ácido 3-amino-4-cloro-benzóico (Aldrich). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 21
Preparação do sal TF A de ácido (±)-/^[[2-[[[4-cloro-3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2F[-azepin-7-il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico
Adicionou-se LiOH (40 mg, 0,0008 mole) ao produto do Exemplo 20 (150 mg, 0,0002 mole) em H20 (15 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Baixou-se o valor do pH até 3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter ácido yff-[[2-[[[4-cloro-3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico (100 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 141 - A. Í
Exemplo 22
Preparação do sal tris(trifluoroacetato) de ácido (±)-/?-[[2-[[[3,5-bis-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino] fenil] carbonil] amino]acetil] amino]piridina-3 -propanóico
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 12, substituindo o cloridrato de ácido 3-aminobenzóico no Exemplo 11, Passo A uma quantidade equivalente de cloridrato de ácido 3,5-diaminobenzóico (0,3 equivalentes) (Fluka). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 142-
Exemplo 23
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de (±)-/^[[2-[[[3-[[imino-[(fenilmetil)amino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo
Passo A
Agitaram-se l-(3-carboxifenil)-2-tioureia (5 g, 0,025 mole) (Trans World Chemicals) em THF (75 ml) e CH3I (3,62 g, 0,025 mole) ao refluxo durante 2 horas. Retirou-se o solvente em vazio e suspendeu-se o resíduo em éter (3x), (retirou-se 0 éter por decantação em cada vez) para se obter, após secagem em vazio, iodidrato de N-(3-carboxifenil)-S-metilisotiourónio (7,8 g) sob a forma de um sólido amarelo.
Passo B
Adicionou-se benzilamina (0,48 g, 0,0044 mole) ao produto do Passo A (1,5 g, 0,0044 mole) e di-isopropíletilamina (0,57g, 0,0044 mole) em H20 (5 ml) e dioxano (5 ml). Aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo durante
- 143- 6 horas. Arrefeceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e formou-se um precipitado. Adicionou-se dioxano (6 ml) e agitou-se a suspensão de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o precipitado, lavou-se com dioxano/H20, secou-se, suspendeu-se em H20, e acidificou-se com HC1 concentrado. Retirou-se o solvente em vazio e suspendeu-se o resíduo em éter (3x; decantando-se o éter em cada vez). Após secagem, isolou-se cloridrato de 1-(3-carboxifenil)-2-benzilguanidina (800 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo C
Preparou-se o composto em título de acordo com o Exemplo 1, Passo F, substituindo no Passo F, o produto do Exemplo 1, Passo E, por uma quantidade equivalente do produto do Passo B acima. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 144-
Exemplo 24
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[[imino-[(fenilmetil)amino]metil] amino]fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico
Adicionou-se LiOH (80 mg) ao produto do Exemplo 23, Passo C (330 mg, 0,00045 mole) em H20 (20 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Baixou-se o valor do pH até 3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de ácido /3-[[2-[[[3-[ [imino [(fenilmetil)amino]metil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -amino]piridina-3-propanóico (330 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 25
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de (+)-/?-[ [2- [[ [3 - [[iminofenilmetil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo
Passo A
Adicionou-se ácido 3-aminobenzóico (2,22 g, 0,016 mole) (Aldrich) a cloridrato de benzimidato de etilo (3 g, 0,016 mole) (Fluka) e di-isopropiletilamina (2,1 g, 0,016 mole) em H20 (15 ml) e dioxano (15 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 4 dias. Filtrou-se o precipitado resultante, lavou-se com dioxano/H20 e secou-se. Suspendeu-se o precipitado em H20 e acidificou-se com HCI concentrado. Retirou-se o solvente em vazio e suspendeu-se o resíduo em éter. Retirou-se o éter por decantação e secou-se o resíduo em vazio para se obter cloridrato de N-(3-carboxifenil)benzamidina (700 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 1, Passo F, substituindo o produto do Exemplo 1, Passo E, no Passo F, por uma quantidade equivalente do produto do Passo A acima. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 146- /4^· «»» ·*. (
Exemplo 26
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(iminofenilmetil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Adicionou-se LiOH (50 mg) ao produto do Exemplo 25, Passo B (240 mg, 0,0034 mole) em H20 (20 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 35 minutos. Baixou-se o valor do pH até 3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter sal bis(trifluoroacetato) de ácido β- [ [2- [ [ [3 - [(iminofenilmetil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]- piridina-3-propanóico (120 mg) sob a forma de um sólido branco. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. - 147-
Ai C.
Exemplo 27
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /H[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico w
Preparou-se o composto acima de acordo com o método do Exemplo 2 substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3,5-diclorobenzaldeído (Aldrich). n - 148-
Exemplo 30
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /5S-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino] feniljcarbonil] amino] acetil]amino] -4-pentinóico
Preparou-se o composto acima de acordo com o método do Exemplo 12, substituindo o dicloridrato de DL-3-amino-3-(3-piridil)propionato do Exemplo 1, Passo C também utilizado no Exemplo 1, Passo D, tal como se descreve no Exemplo 11, Passo B, por uma quantidade equivalente de cloridrato de 3-S-amino-4-pentinoato de etilo (J. Med. Chem. 1995, 38, 3378-2394). - 149-
Exemplo 34
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido ySS-[[2-[[[3-[[imino( 1 -pirrolidinil)-metil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -4-pentinóico
CNH
CH TFA
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do
Exemplo 12, substituindo a benzilamina do Exemplo 23, Passo B por uma quantidade equivalente de pirrolidina e o dicloridrato de DL-3-amino-3-(3-piridil)propionato no Exemplo 1, Passo C, também utilizado no Exemplo 1, Passo D, por uma quantidade equivalente de cloridrato de 3-S-amino-4-pentinoato de etilo, tal como se descreve no Exemplo 23, Passo C. - 150 -
Exemplo 35
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido ySS,-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]-2,5,6-trifluorofenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 2, substituindo o dicloridrato de DL-3-amino-3-(3-piridil)propionato do Exemplo 1, Passo C, por uma quantidade equivalente de cloridrato de 3-S-amino-4-pentinoato de etilo, e substituindo o ácido 3-aminobenzóico do Exemplo 1, Passo E por uma quantidade equivalente de ácido 3-amino-2,5,6-trifluorobenzóico. -151 -
Exemplo 36
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y3-[[2-[[[3-[(aminoimmometil)- amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-bis(trifluorometil)- benzenopropanóico
Passo A (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-bis(trifluorometil)benzenopropanoato de etilo.
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 1, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Passo A por uma quantidade equivalente de 3,5-bis-trifluorometilbenzaldeído (Aldrich).
Os RMN e espectrometria de massa eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se LiOH (41 mg, 0,00098 mole) a 260 mg (0,00039 mole) do produto do Passo A acima em H20 (25 ml) e CH3CN (10 ml). Agitou-se - 152 -
a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Baixou-se o valor do pH até 3 com TFA e isolou-se o produto por HPLC preparativa de fase reversa para se obterem (após liofilização) 210 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco.
Os RMN e espectrometria de massa eram consistentes com a estrutura pretendida. - 153-
Exemplo 37
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-[ 1,1 '-bifenil]-4-propanóico
Passo A
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 2, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A, por uma quantidade equivalente de 4-bifenilcarboxaldeído.
- 154-
Exemplo 38
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/?- [ [2-[ [ [3 - [(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)-fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-3,5-bis(tri fluorometil)-benzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 1, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Passo A, por uma quantidade equivalente de 3,5-bis-trifluorometilbenzaldeído (Aldrich) e substituindo ácido 3-aminobenzóico no Passo E pela quantidade equivalente de ácido 3-amino-5-trifluorometilbenzóico [que se sintetizou por redução de ácido 3-nitro-5-trifluorometilbenzóico (Lancaster) em etanol com 10% Pd/C sob H2 a 50 psi durante 4 horas], e agitando a mistura reaccional resultante do Passo E ao refluxo de um dia para o outro em vez de durante 2,5 horas.
Os RMN e espectrometria de massa eram consistentes com a estrutura pretendida. - 155 -
Exemplo 39
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] - 5 - (trifluorometil)fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,5-bis(trifluorometil)benzenopropanóico
Adicionou-se 140 mg (0,0033 mole) de LiOH a 600 mg (0,00082 mole) do produto do Exemplo 38 em 12 ml de H20 e 12 ml de CH3CN. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Baixou-se o valor do pH até 2,5 com TFA e isolou-se o produto por HPLC preparativa de fase reversa para se obter (após liofilização) 520 mg de sal trifluoroacetato de ácido (+)-^-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-3,5-bis(trifluorometil)benzenopropanóico sob a forma de um sólido branco.
Os RMN e espectrometria de massa eram consistentes com a estrutura pretendida. - 156-
Exemplo 40
Preparação do ácido 3S-[[2-[[[3-(aminocarbonilamino)-fenil]carbonil]amino]-acetil] amino] -4-pentinóico
Passo A
Preparou-se cloridrato de 3S-amino-4-pentinoato de etilo utilizando o método em J. Med. Chem. 1995, 38, 3378-94.
Passo B
Tratou-se 2 g de ácido m-aminohipúrico em solução aquosa de HC1 a 5% (25 ml) com ureia (2 g) e aqueceu-se a solução ao refluxo durante 4 horas. Purificou-se ácido m-N-carbamoíl-aminohipúrico por HPLC (FR-CH3CN/H20) e liofilizou-se para se obter 1,2 g de um sólido branco. O EM era consistente com o produto pretendido.
Passo C
Tratou-se uma suspensão de ácido m-ureiahipúrico (1,2 g) em DMF (5 ml) e piridina (5 ml) com DSC (1,5 g). Adicionou-se uma quantidade catalítica de DMAP e agitou-se a mistura reaccional durante 3 horas. Adicionou-se à mistura reaccional uma solução de cloridrato de ácido 3S-aminopentinóico (0,8 - 157 - g) e K2C03 (0,7 g) em solução aquosa saturada de NaHC03 (5 ml). Agitou-se a mistura reaccional resultante de um dia para o outro à temperatura ambiente. Diluiu-se a mistura reaccional a 45 ml com CH3CN:H20 a 1:1 e acidificou-se com ácido trifluoroacético (5 ml). Purificou-se o éter por HPLC (FR-CH3CN/H20) e recuperou-se um sólido branco (125 mg), após liofilização. Tratou-se então este material com CH3CN:H20 a 1:1 (20 ml) e tomou-se básica (pH>12) com LiOH. Após a conclusão da reacção, purificou-se o produto por HPLC (FR-CH3CN/H20) e obteve-se o produto pretendido (60 mg). O EM, as análises por RMN de 'H e CHN eram consistentes com o produto pretendido. - 158 -
Exemplo 41
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] naftaleno-1 -propanóico
Passo A
Aqueceu-se uma mistura de naftalenocarboxaldeído (8,6 g) acabado de destilar, acetato de amónio (10,6 g) e ácido malónico (5,7 g) em álcool isopropílico (50 ml) ao refluxo durante 4 horas. Filtrou-se a mistura reaccional enquanto quente e lavou-se com álcool isopropílico quente (2 x 50 ml), lavou-se com H2O (125 ml) e isopropanol (100 ml) e secou-se em vazio a 40°C. Isolou-se 4,6 g de ácido yS-S-aminonaftaleno-l-propanóico sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo B
Tratou-se uma suspensão do produto do Passo A (4,6 g) em metanol (100 ml) com HC1 4N/dioxano (10 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro e retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida. Dissolveu-se o óleo em CH3CN:H20 a 1:1 e purificou-se por HPLC (FR- CH3CN/H20). Obteve-se /^S-aminonaftaleno-1 -propanoato de metilo (4,6 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C
Tratou-se uma suspensão de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (1,4 g) em DMF (5 ml) e piridina (5 ml) com DSC (3 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Tratou-se a solução resultante com uma solução do produto do Passo B (1,7 g) e NMM (0,6 ml) em DMF (2,5 ml) e piridina (2,5 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Tratou-se então a mistura reaccional com TFA e diluiu-se a 50 ml com CH3CN:H20 a 1:1. Purificou-se a solução por HPLC (FR-CH3CN/H20) e Obteve-se (±)-/^S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]naftaleno-l-propanoato de metilo (1,3 g) sob a forma de um sólido branco, após liofilização. Os EM e RMN de *H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo D
Tratou-se uma solução do produto do Passo C (0,5 g) em CH3CN:H20 a 1:1 (15 ml) com LiOH até um valor de pH > 12. Monitorizou-se a reacção por HPLC (FR-CH3CN/H20) e ao concluir-se a hidrólise, purificou-se o material pretendida por HPLC (FR-CH3CN/H20). Recuperaram-se sólido branco (0,3 g) após liofilização. O EM, as análises RMN de !H e CHN eram consistentes com o produto pretendido. - 160- d-· —k. (
Exemplo 42
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] -2-oxopirrolidin-1 -propanóico
Passo A
Tratou-se uma solução de iV-(/er/-butoxicarbonil)-L-metionina (6,2 g) em DMF (25 ml) e piridina (25 ml) com DSC (9,6 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 4 horas, adicionou-se uma solução de HC1 de éster etílico de /3-alanina (3,8 g) e K2CO3 (3,5 g) em solução aquosa saturada de NaHCC>3 (25 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). Obteve-se éster etílico de N-[2-[[(l,l-dimetiletoxi)carbonil]amino]-4-(metiltio)-l-oxobutil]-/?-alanina (7,0 g) sob a forma de um óleo incolor. Confirmou-se o óleo como o produto pretendido por EM e utilizou-se sem purificação adicional.
Passo B
Dissolveu-se 6,5 g do óleo do Passo A em DMF (25 ml) e tratou-se com CH3I (5,0 ml). Após aproximadamente 1 hora, adicionou-se NaH (0,50 g), seguido de nova adição de NaH (0,50 g). Tratou-se a mistura reaccional com H20 (25 ml) e EtOAc (200 ml). Lavou-se a fase orgânica com H20 adicional (3 x 25 ml), solução aquosa saturada de NaCl (1 x 25 ml) e secou-se sobre NaS04. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida para se obterem 4 g de -161 -
CC^Et sob a forma de um semi-sólido acastanhadoa. O EM era consistente com a estrutura e utilizou-se o produto sem purificação adicional.
Passo C
Tratou-se uma solução do produto do Passo B (4 g) em etanol (50 ml) com HC1 4N/dioxano (20 ml). Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida. Purificou-se o sólido impuro por HPLC (FR-CH2CN/H2O). Adicionou-se solução aquosa de HC1 a 20% (10 ml) e obteve-se 1 g de 3-amino-2-oxopirrolidin-l-propanoato de etilo sob a forma de um sólido branco após liofilização. O EM era consistente com o produto pretendido.
Passo D
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinobenzóico (0,7 g) em DMF (3 ml) e piridina (3 ml) com DSC (0,8 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 3 horas, adicionou-se uma solução do produto do Passo C (0,7 g) em H20 (3 ml) com uma quantidade molar igual de K2CO3. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Isolou-se o éster pretendido por HPLC (FR-CH3CN/H20). Tratou-se o sólido branco (100 mg) com H20 (10 ml) e tomou-se o meio básico com LiOH (pH>12). Após 2 horas, isolou-se o produto pretendido por HPLC (FR-CH3CN/H20) e liofilizou-se. Obteve-se sal trifluoroacetato de ácido (±)-3-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]-2-oxopirrolidin-l-propanóico sob a forma de um sólido branco. O EM, as análises RMN de *H e CHN eram consistentes com o produto pretendido.
Exemplo 43
Preparação do sal cloridrato de ácido 3R-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico
Passo A
Tratou-se éster 3-(N-(tert-butoxicarbonil)amino)pent-4-inóico de etilo (3 g) U. Med. Chem.. 1995, 38, 3378-94] em CH2C12 (60 ml) a 0°C com TFA (30 ml). Agitou-se a mistura reaccional durante 3 horas. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida e obteve-se um óleo amarelo (3,3 g). Confirmou-se que o óleo era o produto pretendido por EM.
Passo B
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido w-guanidinohipúrico (3,3 g) em DMF (12 ml) e piridina (12 ml), com DSC (6,1 g) e uma quantidade catalítica de DM AP. Após 3 horas, adicionou-se uma solução de produto impuro (3,3 g) do Passo A em solução aquosa saturada de NaHC03 (12 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida. Tratou-se o sólido resultante com TFA e CH3CN:H20 a 1:1. Isolou-se o produto por HPLC (FR-CH3CN/H20) para se obter sal trifluoroacetato de 3R-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]- - 163 -
carbonil]amino]acetil]amino]propionato de etilo (3 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ‘H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C
Dissolveu-se o produto do Passo B (3 g) em CH3CN/H2O (50 ml) a 1:1 e tratou-se com LiOH (pH>12). Após 4 horas acidificou-se a mistura reaccional com TFA e isolou-se 0 sal TFA do produto pretendido por HPLC (FR-CH3CN/H2O). Suspendeu-se 0 sólido liofilizado (2,5 g) com CH3CN:H20 (100 ml) a 1:3 e resina de permuta iónica, sob a forma de cloreto, AG 2-X8 (BioRad) (50g). Filtrou-se a mistura e tratou-se com HC1 a 20% (5 ml). Liofilizou-se a solução transparente e repetiu-se o processo de permuta em resina. Obteve-se o produto pretendido (2,2 g). O EM, as análises RMN de *H e CHNC1 eram consistentes com o produto pretendido. - 164-
Exemplo 44
Preparação do ácido 3S-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]-carbonil]amino]fenil]-carbonil] amino] acetil] amino] -4-pentinóico
Passo A
Tratou-se ácido m-aminohipúrico.HCl (20 g) em CH3CN (100 ml) com isocianato de benzilo (16 ml). Tratou-se a mistura reaccional com solução aquosa de HC1 a 5% (400 ml), filtrou-se e lavou-se com H20 (50 ml) para se obter 21 g de ácido ra-(benzilureia)hipúrico. Os EM e RMN de Ή eram consistentes com o produto pretendido. Não se levou a cabo qualquer purificação adicional. 'n-/
Passo B
Preparou-se 3S-[[-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil] amino] acetil] amino]-4-pentinoato de etilo utilizando o método do Exemplo 40 substituindo o ácido m-ureiahipúrico por uma quantidade molar igual de ácido m-(benzilureia)hipúrico. Purificou-se o éster pretendido por HPLC (FR-CH3CN/H20) para se obter 1,2 g sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C
Tratou-se uma solução de 3S-[[-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo (1,0 g) em CH3CN/H20 (20 ml) a 1:1 com KOH (pH>12). Após 4 horas acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se duas vezes por HPLC (FR-CH3CN/H20). Obteve-se um sólido branco (300 mg). O EM, as análises RMN de 'Η e CHN eram consistentes com o produto pretendido.
Exemplo 45
Preparação do sal cloridrato de ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -4-pentinóico
.HC1
Dissolveu-se o produto do Exemplo 58 (6 g) em CH3CN:H20 a 1:1 (75 ml) e tratou-se com KOH. Manteve-se o valor do pH superior a 12 por adição de KOH. Após 4 horas acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). Obteve-se o sal de TFA (4,2 g) após se liofilizarem as fracções apropriadas. Suspendeu-se o sólido em CH3CN:H20 a 1:1 (100 ml) e tratou-se com resina de permuta iónica AG 2-X8 sob forma de cloreto (BioRad) (50 g). Filtrou-se a mistura reaccional e tratou-se com HC1 a 20% (5 ml). Após liofilização repetiu-se a permuta com resina. Obteve-se o produto pretendido sob a forma do sal de HC1 (3,5 g). Os EM, RMN de Ή e CHNC1 eram consistentes com o produto pretendido. -167-
Exemplo 46
Preparação do sal cloridrato de ácido /5-[[2-[[[3-[(aminocarbonilamino)fenil]- carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Dissolveram-se ureia (4 g) e /?-[[2-[[(3-aminofenil)-carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo (4 g) em solução aquosa de HC1 (50 ml) e aqueceu-se ao refluxo durante 6 horas. Tomou-se a mistura reaccional básica com KOH (pH>12). Após 4 horas acidificou-se a mistura reaccional com TF A e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). Dissolveu-se o sólido branco em CH^CNiI-yD a 1:1 (100 ml) e sujeitou-se à permuta com resina descrita no Exemplo 43, Passo C. A liofilização proporcionou o produto pretendido (3,2 g). Os EM, RMN de 'H e CHNC1 eram consistentes com o produto pretendido. - 168-
Exemplo 47
Preparação do sal cloridrato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]-carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] piridina-3 -propanóico
Dissolveu-se o produto do Exemplo 48 (5 g) em CH3CN:H20 a 1:1 (75 ml) e tratou-se com KOH. Manteve-se o valor do pH superior a 12 por adição com KOH. Após 4 horas acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). Obteve-se o sal TFA (4,5 g) após liofilização. Suspendeu-se o sólido em CH3CN:H20 a 1:1 (100 ml) e resina de permuta iónica AG 2-X8 sob forma de cloreto (BioRad) (50 g). Filtrou-se a mistura e tratou-se com HC1 a 20% (5 ml). Após liofilização repetiu-se o processo de permuta com resina. Obteve-se o produto pretendido (4,1 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM, RMN de !H e CHNC1 eram consistentes com o produto pretendido. -169- c_a
Exemplo 48
Preparação do sal cloridrato de (±)-/3-[[2-[[[3-[ [ [(fenilmetil)amino]carbonil]-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanoato de etilo
Passo A
Tratou-se uma solução de ácido m-nitrohipúrico (5,6 g) em DMF (25 ml) com DSC (9,6 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 5 horas, adicionou-se uma solução de 2HC1 de 3-amino-3-(3-piridil)propanoato de etilo (8 g) e K2CO3 (2 g) em solução aquosa saturada de NaHC03 (25 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Adicionou-se H20 (25 ml) e filtrou-se a mistura. Lavou-se o sólido resultante com H20 (25 ml), suspendeu-se em CH3CN (25 ml) e filtrou-se. Obteve-se y3-[[2-[[(3-nitrofenil)carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo (6,5 g) sob a forma de um sólido branco. O EM era consistente com o produto pretendido.
Passo B
Sujeitou-se uma suspensão do produto do Passo A (6,5 g) e 5% Pd/C (0,6 g) em H20 (50 ml) e etanol (50 ml) a H2 a 50 psi durante 3 horas. Filtrou-se a mistura através de uma almofada de celite e retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida. Tratou-se o óleo resultante com CH2C12 e retirou- - 170-
At w*'1
«-A se novamente o solvente sob pressão reduzida. Recuperou-se /?--[[2-[[(3-aminofenil)carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo(5,8 g) sob a forma de uma espuma acastanhada. Os EM e RMN de *H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C
Tratou-se uma solução do produto do Passo B (1,9 g) em CH3CN (5 ml) com isocianato de benzilo (0,8 ml). Após 1 hora, adicionou-se isocianato de benzilo (0,1 ml) para se concluir a reacção. Após 0,25 horas, tratou-se a mistura reaccional com H20 (50 ml). Dissolveu-se o óleo viscoso resultante em CH3CN e acidificou-se com TFA. Purifícou-se a solução com por HPLC (FR-CH3CN/H20) e liofílizou-se. Voltou-se a purificar o sólido branco por HPLC (FR-CH3CN/H20) e tratou-se com HC1 a 20% (5 ml). Obteve-se o produto pretendido (1,3 g) sob a forma de um sólido branco. O EM, as análises RMN de e CHNC1 eram consistentes com o produto pretendido.
Exemplo 51
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/^[[2-[[[3-[aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]furan-3-propanoato de etilo
Passo A
Aqueceu-se uma suspensão de 3-furancarboxaldeído (8,6 ml), éster monoetílico de ácido malónico (15,8 g) e acetato de amónio (9,6 g) em álcool isopropílico (200 ml) até ao refluxo sob azoto. Após 5 horas, retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida e tratou-se o semi-sólido com H20 (250 ml) e acidificou-se até um valor de pH de 2 utilizando HC1 12N. Lavou-se a fase aquosa com CH2CI2 (2 x 100 ml). Neutralizou-se a fase aquosa a um valor de pH >9 com K2C03. Extraiu-se o produto com CH2C12 (2 x 100 ml). Secou-se a fase orgânica sobre Na2SC>4 e retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida para se obter /?-aminofuran-3-propanoato de etilo (5 g) sob a forma de um óleo dourado. Os EM e RMN de !H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo B
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (1,4 g) em DMF (5 ml) e piridina (5 ml), com DSC (1,9 g) e uma quantidade catalítica -172- M- k'·1'*'* ^--- ^ de DMAP. Após 5 horas, adicionou-se solução aquosa saturada de NaHC03 (1 ml) a uma solução do produto do Passo A (1,2 g) em CH3CN (1 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para 0 outro à temperatura ambiente e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H2O). O sólido liofilizado (1,2 g), tinha EM, análises RMN de [H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. - 173 -
Exemplo 52
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-yS-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]furan-3-propanóico
.TFA
Dissolveu-se o produto do Exemplo 51 (0,6 g) em CH3CN:H20 a 1:1 (15 ml) e tratou-se com NaOH (pH>12). Após 4 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purifícou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofílizado (0,3 g), tinha EM, análises RMN de !H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. - 174-
C~~~J
Exemplo 53
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]pentanodióico
Passo A
Tratou-se 3-cetoglutarato de dimetilo (13 g) em metanol (50 ml) formato de amónio (5 g) e NaCNBH3 (2 g). Adicionou-se 10 ml de H20 e retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida. Dissolveu-se o semi-sólido em HC1 aquoso a 5% (250 ml), e lavou-se com CH2C12 (2 x 50 ml). Tomou-se básica a fase aquosa (pH>9) com K2C03 e extraiu-se o produto utilizando CH2C12 (2 x 75 ml). Combinaram-se as fases orgânicas e secou-se sobre Na2S04. Retirou-se o solvente em excesso para se obter 2,5 g de (±)-3-aminoglutarato de dimetilo. Este dissolveu-se em metanol (50 ml) e tratou-se com HC1 4N/Dioxano (10 ml). Retirou-se o solvente em excesso para se obter 2,7 g de cloridrato de (±)-aminoglutarato de dimetilo. Os EM e RMN de !H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo B
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (1,5 g) em DMF (4,5 ml) e piridina (4,5 ml) com DSC (1,8 g) e uma quantidade - 175- catalítica de DMAP. Após 2 horas, adicionou-se uma solução de HC1 de 3-aminoglutarato de dimetilo (1,1 g) e NMM (350 μΐ) em H2O (3 ml) à mistura reaccional. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente e isolou-se o produto por HPLC. Obteve-se 1,5 g do éster bismetílico de ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-pentanodióico sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C
Dissolveu-se o produto do Passo B (750 mg) em CH3CN:H20 a 1:1 (40 ml) e tratou-se com KOH (pH>12). Após 4 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofilizado (400 mg), tinha EM, análises RMN de !H e CHN que eram consistentes com 0 produto pretendido. - 176-
Exemplo 54
Preparação do sal trifluoroacetato de hidrogeno-(±)-3-[[2-[[[3-[(aminoimi-nometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]pentanodioato de metilo
Passo A
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (1,5 g) em DMF (4,5 ml) e piridina (4,5 ml) com DSC (1,8 g) e uma quantidade catalítica de DM AP. Após 2 horas, adicionou-se uma solução de HC1 de 3-aminoglutarato de dimetilo (1,1 g) e NMM (350 μΐ) em H20 (3 ml) à mistura reaccional. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente e isolou-se o produto por HPLC. Obteve-se o éster bismetílico de ácido 3 - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino]acetil] amino] -pentanodióico (1,5 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo B
Dissolveu-se 750 mg do produto do Passo A em tampão de Na2P04 (50 ml, 50 mM, pH 8,5) e tratou-se com esterase porcina (200 μΐ). Ajustou-se o valor do pH utilizando LiOH. Após 48 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofilizado (175 mg), tinha EM, análises RMN de ’H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido.
Exemplo 55
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?- [ [2- [ [ [3- [(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]furan-2-propanóico
Passo A
Aqueceu-se uma suspensão de 2-furanocarboxaldeído (4,8 g), acetato de amónio (9,6 g) em isopropanol (50 ml) ao refluxo durante 6 horas. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida e tratou-se o óleo resultante com acetato de etilo (100 ml) e solução aquosa de HC1 a 5% (400 ml). Lavou-se então a fase aquosa com acetato de etilo (100 ml). Tomou-se básica a fase aquosa com K2CO3 (pH 9). Extraiu-se 0 produto com CH2CI2 (2 x 100 ml). Combinaram-se as fases orgânicas e secou-se sobre Na2S04 e retirou-se o solvente em excesso. Recuperou-se y?-aminofuran-2-propanoato de etilo (2,5 g) sob a forma de um óleo escuro. Os EM e RMN de !H eram consistentes com o produto pretendido. Tratou-se o óleo escuro tal como se descreve no Exemplo 53, Passo A para se obterem 2,7 g de cloridrato de y3-aminofuran-2-propanoato de etilo.
Passo B
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (272 - 178 - A*, mg) em DMF (1 ml) e piridina (1 ml) com DSC (450 mg) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 2 horas, adicionou-se uma solução do produto do Passo A (221 mg), NMM (111 μΐ) em H20 (1 ml) e CH3CN (1 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Purificou-se (±)-yff-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-furan-2-propanoato por HPLC (FR-CH3CN/H2O) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (200 mg). O EM era consistente com o produto pretendido.
Passo C
Dissolveu-se o produto do Passo B (200 mg) em CH3CN:H20 a 1:1 (20 ml) e tratou-se com LiOH (pH>12). Após 4 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofilizado (175 mg), tinha EM, análises RMN de JH e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. - 179-
Exemplo 56
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (+)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminomeíil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]naftaleno-2-propanóico
Passo A
Aqueceu-se uma suspensão de 2-naftaldeído (7,8 g) e acetato de amónio (9,6 g) em álcool isopropílico (50 ml) durante 1 hora ao refluxo. Adicionou-se ácido malónico (5,2 g) e continuou-se ao refluxo durante 3 horas. Filtrou-se a mistura reaccional enquanto quente e lavou-se o sólido com álcool isopropílico quente (50 ml) seguido por CH3CN (100 ml). Secou-se o sólido branco de um dia para o outro em vazio e recuperou-se ácido /2-aminonaftaleno-2-propanóico (9 g). Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura.
Passo B
Tratou-se uma suspensão do produto do Passo A (2,5 g) em metanol (100 ml) com HC1 4N/dioxano (10 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida e purificou-se o semi-sólido por HPLC (FR-CH3CN/H20). Dissolveu-se o sólido em CH3CN/H20, tratou-se com solução aquosa de HC1 a 20% (5 ml) e liofilizou- -180-
At
se para se obter cloridrato de /?-aminonaftaleno-2-propanoato de metilo (1,1 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura.
Passo C
Tratou-se uma solução de ácido m-guanidinohipúrico (0,7 g) em DMF (4 ml) e piridina (4 ml), com DSC (1,1 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 4 horas, adicionaram-se uma solução do produto do Passo B (0,9 g), NMM (0,4 ml) em DMF (2 ml), piridina (2 ml) e H2O (1 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente e acidificou-se com TFA. Isolou-se o produto pretendido por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofilizado (0,7 g), tinha EM, análises RMN de Ή e CHN que eram consistentes com o produto pretendido.
Passo D
Dissolveu-se o produto do Passo C (200 mg) em CH3CN:H20 a 1:1 (20 ml) e tratou-se com KOH (pH>12). Após 4 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofilizado (175 mg), tinha EM, análises RMN de *H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. - 181 -
Exemplo 57
Preparação do sal trifluoroacetato de (±) -/?- [ [2- [ [ [3 - [(ammoiminometil)arnino]-fenil] carb onil] amino] acetil] amino]tiofeno- 3 -propanoato de metilo
Passo A
Tratou-se uma solução de 3-tiofenocarboxaldeído (11,2 g) em isopropanol (100 ml) com acetato de amónio (20 g). Aqueceu-se a mistura resultante e adicionou-se ácido malónico (10,4 g). Aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo durante 4 horas e filtrou-se enquanto quente. Lavou-se o sólido com isopropanol quente (2 x 50 ml) e secou-se em vazio de um dia para o outro a 40°C. Recuperaram-se 8 g de ácido /^aminotiofeno-3-propanóico. Os EM e RMN de !H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo B
Tratou-se uma suspensão do produto do Passo A (5 g) em metanol (100 ml) com HC1 4N/dioxano (10 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida. Isolou-se cloridrato de /?-aminotiofeno-3-propanoato de metilo (7,8 g) sob a forma de uma espuma amarela. Os EM e RMN de !H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (2,7 g) em DMF (10 ml) e piridina (10 ml), com DSC (4,5 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 4 horas, adicionou-se uma solução do produto do Passo B (2,2 g) e NMM (1,3 ml) em DMF (5 ml) e agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Tratou-se a mistura reaccional com CH3CN:H20 a 1:1 (50 ml) e acidificou-se com TF A. Isolou-se o composto pretendido por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofilizado (400 mg), tinha EM, análises RMN de !H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. - 183- C—«Λ·-*
Exemplo 58
Preparação do sal trifluoroacetato de 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo
.TFA
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido w-guanidinohipúrico (2,7 g) em DMF (10 ml) e piridina (10 ml), com DSC (4,5 g) e uma quantidade catalítica de DM AP. Após 4 horas, adicionou-se uma solução de cloridrato de ácido 3S-amino-4-pentinóico de etilo (1,8 g) e NMM (1,1 ml) em DMF (5 ml) e agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Tratou-se a miatura reaccional com CE^CNiF^O a 1:1 (50 ml) e acidificou-se com TFA. Isolou-se o composto pretendido por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofilizado (2,6 g), tinha EM, análises RMN de !H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. - 184- 4-1
Exemplo 59
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]tiofeno-3-propanóico
Dissolveu-se o produto do Exemplo 57 (750 mg) em CH3CN:H20 a 1:1 (20 ml) e tratou-se com KOH (pH>12). Após 4 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofilizado (500 mg), tinha EM, análises RMN de *H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. - 185-
Exemplo 60
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-2-[3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-carboxibutil]sulfonil]benzóico
Passo A
Tratou-se uma solução de ácido 2-[(3-amino-4-carboxibutil)tio]-benzóico (1 g) (preparada de acordo com a E. U. A. N° 5.409.939) em metanol (50 ml) com HC1 4N/dioxano (10 ml) de um dia para o outro. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida para se obter o produto pretendido (0,9 g). O EM do sólido branco, 2-[(3-amino-4-(metoxicarbonil)butil]tio]benzoato era consistente com a estrutura apresentada.
Passo B
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (0,8 g) em DMF (3 ml) e piridina (3 ml), com DSC (1,2 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 2 horas, adicionou-se uma solução do produto do Passo A (1 g), NMM (0,3 ml) em DMF (3 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Adicionou-se KOH até o valor do pH ser superior a 12. Após 4 horas, acidificou-se a mistura reaccional e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H2O). O sólido liofilizado, sal trifluoroacetato de ácido (±)-2-[3-[[2-[[[[3-[(aminoiminometil)amino]feml]carbonil]amino]acetil]amino]-4-carboxibutil]-tio]benzóico (750 mg), tinha EM, análises RMN de lH e CHN que eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C
Tratou-se uma solução do produto do Passo B (320 mg) em CH3CN:H20 a 1:1 (50 ml) com ácido m-cloroperoxibenzóico (340 mg). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H2O). O sólido liofilizado (300 mg), tinha EM, análises RMN de Ή e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. - 187 - β<ί
Exemplo 61
Preparação do sal trifhioroacetato de ácido (±)-y5- [ [2- [[ [3 - [(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]tiofeno-2-propanóico
H2N
.TFA
Passo A
Tratou-se uma solução de ácido 3-amino-3-(2-tienilo)propanóico (0,5 g) [preparada substituindo uma quantidade molar equivalente de 2-tiofeno-carboxaldeído segundo o Exemplo 57, Passo A] em metanol (50 ml), com HC1 4N/dioxano (10 ml). Após 6 horas, retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida para se obter um sólido sob a forma de cera. O tratamento com Et20/CH3CN permitiu obter /?-aminotiofeno-2-propanoato de metilo (370 mg) sob a forma de um pó branco. Os EM e RMN de *1! eram consistentes com o produto pretendido.
Passo B
Tratou-se uma solução de ácido m-guanidinohipúrico.HCl (0,4 g) em DMF (1,5 ml) e piridina (1,5 ml), com DSC (0,6 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 3 horas, adicionou-se uma solução do produto do Passo A (0,3 g) e NMM (220 μ\) em DMF (1,5 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Isolou-se o éster por - 188-
HPLC (FR-CH3CN/H2O) e liofilizou-se. Tratou-se o sólido branco resultante com KOH (pH>12) em CE^CN^O a 1:4. Após 4 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). O sólido liofilizado (300 mg), tinha EM, análises RMN de 1H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido.
£ I - 189-
Exemplo 62
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-2-[[3-[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil]amino] acetil] amino] -4-carboxibutil]tio]benzoato de metilo
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (0,8 g) em DMF (3 ml) e piridina (3 ml) com DSC (1,2 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 2 horas, adicionou-se uma solução de 2-[[3-amino-4-(metoxicarbonil)-butil]tio]benzoato de metilo (1 g) [preparada de acordo com a E. U. A. N° 5.409.939], NMM (0,3 ml) em DMF (3 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Adicionou-se KOH até o valor do pH ser superior a 12. Após 2 horas, acidificou-se a mistura reaccional e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H2O). O sólido liofilizado, (250 mg), tinha EM, análises RMN de ‘H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido.
I - 190 - I - 190 - ui tf
Exemplo 63
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-[(4-metilfenil)tio]pentanoato de metilo
Passo A
Tratou-se uma solução de ácido 3-amino-5-[(4-metilfenil)-tio]pentanóico (1,0 g) [preparada de acordo com a E. U. A. N° 5.409.939] em metanol (50 ml) com HC1 4N/dioxano (10 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida. Obteve-se 3-amino-5-[(4-metilfenil)tio]pentanoato (1,1 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ]H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo B
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (0,6 g) em DMF (2 ml) e piridina (2 ml), com DSC (0,7 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 1 hora, adicionou-se uma solução do produto do Passo A (0,6 g) em solução aquosa saturada de NaHCOs (1,5 ml) e acetonitrilo (1,5 ml). Agitou-se a mistura reaccional durante 2 horas à temperatura ambiente. Acidificou-se a mistura reaccional com TFA e isolou-se o composto em título (0,6 g) por HPLC soba forma de um sólido branco. Os EM e RMN de *H eram consistentes com o produto pretendido. - 191 - Μ
Exemplo 64
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-[[(4-metilfenil)sulfonil]amino]butanoato de metilo
Agitou-se uma mistura de dimetilacetal de aminoacetaldeído (15,8 g), cloreto de p-tolueno-sulfonilo (19,1 g) e Et3N (10,1 g) em CH2C12 (200 ml) durante 2 horas. Tratou-se a mistura reaccional com solução aquosa de HC1 a 5% (50 ml) e Et20 (200 ml). Separaram-se as fases e lavou-se a fase orgânica com solução aquosa de HC1 a 5% (50 ml), H20 (50 ml) e secou-se sobre Na2SC>4. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida para se obter 30 g do acetal pretendido;
confirmado por EM e RMN de !Η.
Passo B
Aqueceu-se uma mistura do acetal do Passo A (10 g), CH3CN (70 ml) e solução aquosa de HC1 (15 ml) a 50°C durante 10 minutos. Adicionou-se éter dietílico e extraiu-se o aldeído pretendido. Utilizou-se então o aldeído sem purificação adicional. Verificou-se o aldeído pretendido
Passo C
Tratou-se uma mistura de diazoacetato de etilo (2,3 g), SnCL2 (2,5 g) em CH2CI2 (75 ml) com o aldeído do Passo B (5 g). Após 2 horas, adicionaram-se HC1 e Et20. Separou-se a fase orgânica e secou-se com MgS04. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obterem 5 g do β-ceto éster impuro
; confirmado por EM e RMN de ’H e
utilizado sem purificação adicional. Passo D
Agitou-se o β-ceío éster do Passo C (12 g), metanol (100 ml), H4N+ HCO2' (30 g) e NaCNBH3 (1,3 g). Após 24 horas, retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida. Tratou-se o semi-sólido resultante com CH2C12 e extraiu-se o produto pretendido utilizando solução aquosa de HC1. A remoção do solvente permitiu obter 6 g de lamino éster impuro JJJsr ^CQjCHj ; confirmado por EM e RMN de lH.
Passo E
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido w-guanidinohipúrico (337 mg) em DMF (1 ml) e piridina (1 ml), com DSC (0,4 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 2 horas, adicionou-se uma solução do produto do Passo D (332 mg) e NMM (220 μ\) em DMF (1 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Acidificou-se a mistura reaccional com TFA e isolou-se o composto em título por HPLC (FR-CH3CN/H20) sob a forma de um sólido branco. Os EM, CHN e RMN de JH eram consistentes com o produto pretendido. - 194- Μ
Exemplo 65
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -4- [ [(metilfenil)sulfonil]amino]butanóico
O
Tratou-se uma solução do produto do Exemplo 64 (180 mg) em CH3CN:H20 a 1:1 (4 ml) com LiOH (100 mg). Após 2 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TF A e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H2O). Isolou-se o composto em título (100 mg) sob a forma de um sólido branco. Os EM, análises de RMN de Ή e CHN eram consistentes com o produto pretendido.
Exemplo 66
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-[(metilfenil)tio]pentanóico
Tratou-se uma solução de 180 mg do produto do Exemplo 63 em CH3CN:H20 a 1:1 (4 ml) com LiOH (100 mg). Após 2 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H2O). Isolou-se o sal trifluoroacetato de ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)ammo]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-5-[(metilfenil)tio]pentanóico (100 mg) sob a forma de um sólido branco. Os EM, análises de RMN de Ή e CHN eram consistentes com o produto pretendido. - 196-
Exemplo 67
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-[(metilfenil)sulfonil]pentanóico
Tratou-se uma solução do produto do Exemplo 63 (200 mg) em CH3CN:H20 a 1:1 (4 ml) com ácido m-cloroperoxibenzóico (460 mg). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Tratou-se a mistura reaccional com LiOH (200 mg). Após 2 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se por HPLC (FR-CH3CN/H20). Isolou-se o sal trifluoroacetato de ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-5-[(metilfenil)sulfonil]pentanóico (180 mg) sob a forma de um sólido branco. Os EM, análises RMN de 'H e CHN eram consistentes com o produto pretendido. - 197- Aíb-rt' «-λ
Exemplo 68
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] ammo] acetil] amino] -4- [(feniltio)butanóico
Passo A
Agitou-se uma suspensão de 3S-[[(l,l-dimetiletoxi)carbonil]-amino]-4-[(metilsulfonil)-oxi]butanoato de fenilmetilo (3,9 g) [preparada de acordo com a E. U. A. N° 5.409.939], tiofenol (1,1 ml) e K2CO3 (1,4 g) em DMF (20 ml) à temperatura ambiente de um dia para o outro. Tratou-se a mistura reaccional com acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica com H20 (2 x 25 ml) e solução saturada de NaCl (25 ml). Secou-se a fase orgânica com Na2S04 e w retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida para se obter um óleo dourado (4,5 g). Dissolveu-se o óleo em CH2C12 (100 ml) e tratou-se com TFA (20 ml). Após 4 horas, retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida e purificou-se o produto por HPLC (FR-CH3CN/H20). Isolou-se o sal TFA de 3S-amino-4-(feniltio)butanoato de fenilmetilo (1,2 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo B
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (273 mg) e NMM (110 μ\) em DMF (1 ml) com cloreto de pivaloílo (120 μ\). Após 30 - 198- - 198- vi C—d minutos, adicionou-se uma solução do produto do Passo A (208 mg), NMM (110 μϊ) e uma quantidade catalítica de DMAP em DMF (1 ml). Após 4 horas, isolou-se 3S-[[2-[[[3-[(ammoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-4-[(feniltio)butanoato de fenilmetilo (200 mg) por HPLC (FR-CH3CN/H20) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ]H eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C
Tratou-se uma solução de 200 mg do produto do Passo B em CH3CN:H20 a 1:1 (4 ml) com KOH (pH>12). Após 2 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e isolou-se o produto por HPLC (FR-CH3CN/H20). Isolou-se sal trifluoroacetato de ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-[(feniltio)butanóico (100 mg) sob a forma de um sólido branco. Os EM, análises RMN de *H e CHN eram consistentes com o produto pretendido. - 199 -
Exemplo 69
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico
Passo A
Tratou-se uma solução de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (2,7 g) em DMF (10 ml) com cloreto de pivaloílo (1,3 ml). Após 30 minutos, adicionou-se uma solução de monocloridrato de ácido 3S-amino-4-pentinóico (1,8 g), NMM (1,5 ml) e uma quantidade catalítica de DMAP em DMF (10 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Isolou-se o sal TFA de 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo (1,5 g) por HPLC (FR-CH3CN/H20) sob a forma de um sólido branco. O EM era consistente com o produto pretendido.
Passo B
Tratou-se uma solução do produto do Passo A (1,5 g) em H2O/CH3CN a 1:1 (75 ml) com LiOH (pH>12). Após 2 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se o produto por HPLC (FR-CH3CN/H2O). O composto em título, sob a forma de um sólido liofilizado (1,2 g), tinha EM, análises RMN de e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. -200- Μ C—Λ
Exemplo 70
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3R-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-4-pentinóico
Passo A
Tratou-se uma suspensão de HC1 de ácido m-guanidinohipúrico (0,8 g) e NMM (0,3 ml) em DMF (2,5 ml) com cloreto de pivaloílo (0,4 ml). Após 30 minutos, adicionou-se uma solução de 3R-amino-4-pentinoato de etilo (0,4 g), NMM (0,3 ml) e uma quantidade catalítica de DMAP em DMF (2,5 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Isolou-se o sal trifluoroacetato de ácido 3R-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico (0,5 g) por HPLC (FR-CH3CN/H20) sob a forma de um sólido branco. O EM era consistente com o produto pretendido.
Passo B
Tratou-se uma solução do produto do Passo A (0,5 g) em CH3CN/H2O a 1:1 (75 ml) com LiOH (pH>12). Após 2 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e purificou-se o produto por HPLC (FR-CH3CN/H2O). O composto em título sob a forma de um sólido liofilizado (250 mg), tinha EM, análises RMN de !H e CHN que eram consistentes com o produto pretendido. -201 -
Exemplo 71
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 2-[[2S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-2-(carboximetil)etil]sulfonil]benzóico
Tratou-se uma solução do Exemplo 72 (120 mg) em metanol (10 ml) com ácido m-clorobenzóico (100 mg). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Purificou-se o produto por HPLC (FR-CH3CN/H2O). Isolou-se o composto em título (100 mg) sob a forma de um sólido branco. Os EM, análises RMN de !H e CHNS eram consistentes com o produto pretendido. -202-
At
Exemplo 72
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 2-[[2S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-2-(carboximetil)etil]tio]benzóico
Passo A
Tratou-se uma solução do Exemplo A (6,2 g) em CH2C12 (40 ml) a 0°C com trietilamina (4,25 ml) e cloreto de mesilo (2,3 ml). Após 3 horas, isolou-se 3S-[[(l,l-dimetiletoxi)carbonil]amino]-4-[(metilsulfonil)oxi]butanoato de fe-nilmetilo por extracção utilizando acetato de etilo/éter dietílico. Secou-se a fase orgânica utilizando Na2S04 e retirou-se o solvente em excesso para se obter 3S-[[(1,1 -dimetiletoxi)carbonil]amino]-4-[(metilsulfonil)oxi]butanoato de fenilme-tilo (8,8 g). Tratou-se uma suspensão do produto resultante, K2C03 (3,0 g), e quantidades catalíticas de 18-crown-6, DMAP e hidrogeno-sulfato de tetrabutilamónio em DMF (10 ml) com acetato de etilo. Secou-se a fase orgânica com Na2S04 e retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida. Dissolveu-se o óleo resultante (10,2 g) em CH2C12 (50 ml) e tratou-se com TFA (20 ml). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em excesso sob pressão reduzida e dissolveu-se o o óleo em CH3CN:H20 e tomou-se a solução básica utilizando NaOH (pH>12). Após 2 -203 - horas, acidificou-se a mistura reaccional utilizando TFA e isolou-se o produto por HPLC (FR-CH3CN/H2O). Adicionou-se HC1 a 20% (2 ml) e liofilizou-se o produto. Obteve-se um sólido amarelo (0,9 g). O EM era consistente com o sal de HC1 de ácido 2-[(2-amino-3-carboxipropil)tio]benzóico.
Passo B
Tratou-se uma solução de ácido 3-aminobenzóico (41,1 g) em ^ dioxano (300 ml) com 3,5-dimetil-(pirazole-l-carboxamidina) HN03 (100 g), DIEA (90 ml) e H20 (100 ml). Aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo durante 3 horas e agitou-se de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o sólido e lavou-se com dioxano (150 ml) e com dioxano:H20 a 1:1 250 ml). Fez-se uma suspensão do sólido em éter dietílico (400 ml) e CH3CN (100 ml) e tratou-se com HC14N/dioxano (100 ml) e HC1 a 20% (1 ml). Após 48 horas, filtrou-se a mistura reaccional e secou-se para se obter ácido 3-[(aminoiminometil)amino]benzóico (34,1 g) sob a forma de um sólido cor de lavanda. O EM era consistente com o produto pretendido.
Passo C
Tratou-se uma solução de ácido 2-[(2S-amino-4-carboxibutil)tio]-benzóico (0,9 g) e DIEA (1,5 ml) em DMF (5 ml) com éster de 2,5-dioxopirrolidin-l-ilo de N-[(l,l-dimetiletoxi)carbonil]-glicina (1,1 g) e uma quantidade catalítica de DMAP. Após 1 hora, adicionaram-se metanol (5 ml) e HC1 4N/dioxano (10 ml). Após 18 horas, isolou-se 2-[[2S-[(2-aminoacetil)-amino]-3-(metoxicarbonil)-propil]benzoato por HPLC (FR-CH3CN/H20). Obteve-se o produto pretendido (1,0 g) sob a forma de um sólido branco. O EM era consistente com o produto pretendido. -204-
Passo D
Tratou-se uma solução do Passo C (200 mg) e NMM (130 μ1) em DMF (1 ml) com IBCF (152 μΐ). Após 2 minutos, tratou-se a mistura reaccional com uma solução do produto do Passo B (330 mg), NMM (260 μΐ) e uma quantidade catalítica de DM AP em DMF (1 ml). Após 2 horas, tratou-se a mistura reaccional com H2O e tomou-se básica utilizando NaOH (pH>12). Após 4 horas, acidificou-se a mistura reaccional com TFA e isolou-se o produto por HPLC (FR-CH3CN/H20). Obteve-se o composto em título (200 mg) sob a forma de um sólido branco. Os EM, análises RMN de !Η e CHNS eram consistentes com o produto pretendido. -205-
Exemplo 79
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil]metilamino] acetil] amino] -piridina-3 -propanoato de etilo
Passo A
Adicionou-se N-t-Boc-sarcosina (3,80 g, 0,019 mole) e DMF seco (70 mL) a um balão de 200 ml equipado com uma vareta de agitação revestida com teflon. A este adicionou-se N-metilmorfolina, (NMM), (2,1 mL, 1,92 g, 0,019 mole) e arrefeceu-se a mistura resultante até 0°C (banho de gelo e água com sal). Após alguns minutos adicionou-se cloroformiato de isobutilo, (IBCF), (95%, 2,74 g, 2,6 mL, 0,019 mole). Após cerca de cinco minutos, adicionou-se uma solução do sal dicloridrato de propionato de 3-amino-3-pirid-3-iletilo (5,0 g, 0,019 mole) e NMM (3,84 g, 0,038 mole) em DMF (40 mL) e deixou-se reagir a mistura resultante de um dia para o outro a 0-5 °C. Retiraram-se os voláteis num evaporador rotativo (60°C) e obteve-se um semi-sólido. Este foi retomado em acetato de etilo e solução diluida de ácido clorídrico, pH 2. A fase aquosa adicionou-se EtOAc (200 mL) e elevou-se o valor do pH da fase aquosa para cerca de 7 pela adição de bicarbonato de sódio sólidos. Ajustou-se o valor do pH a 8 pela adição de solução aquosa diluida de NaOH. Separaram-se as fases e lavou-se a fase aquosa com EtOAc. Secaram-se as fases orgânicas combinadas (Na2S04) e retiraram-se os voláteis para se obter um óleo espesso cujo EM era consistente com o produto pretendido. -206-
Passo B
Dissolveu-se o produto do Passo A em dioxano (20 mL) e transferiu-se para um balão com fundo arredondado equipado com uma vareta de agitação revestida com teflon e ligado a um borbulhador de óleo mineral. A este adicionou-se HC1 4N em dioxano (cerca de 30 mL). Após cerca de uma hora, retirou-se o gás de HC1 em excesso em vazio e concentrou-se a mistura reaccional num rotavapor. Eliminou-se o HC1 em excesso recorrendo a uma segunda evaporação a partir de dioxano para se obter uma espuma branca. Os EM e RMN eram consistentes com o produto pretendido sob a forma de um sal dicloridrato.
Passo C
Obteve-se o composto em título juntando ácido 3-guanidino-benzóico ao produto do Passo B, utilizando substancialmente as mesmas condições e procedimento utilizados no Passo A. Assim, adicionou-se um equivalente de NMM (0,77 mL, 7,0 mmole) a cloridrato de ácido 3-guanidinobenzóico (1,5 g, 7,0 mmole, Aldrich) e arrefeceu-se a mistura até 0°C. A esta adicionou-se um equivalente de IBCF (0,91 mL, 7 mmole) e, após alguns minutos, adicionou-se uma solução de 1,1 equivalentes de éster de aminoácido de piridilo de sarcosina preparado no Passo B (2,4 g de sal di HC1) e NMM (0,78 mL) em DMF (cerca de 50 mL) e deixou-se aquecer a mistura reaccional até à temperatura ambiente de um dia para o outro. Retiraram-se os voláteis e isolou-se o produto por cromatografia líquida de elevada eficiência em fase reversa (RPHPLC) utilizando um gradiente de 99:1 de água com 0,05% de TFA:acetonitrilo com 0,05% de TFA até 45:55 de água com 0,05% de TFA:acetonitrilo com 0,05% de TFA durante 60 minutos, com um caudal de 80 mL/min. Combinaram-se as fracções do produto pretendido e liofilizaram-se para se obter o composto em título (0,96 g) sob a forma de sólidos fofo cujos RMN e EM eram consistentes com o produto pretendido. -207-
Exemplo 80
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoimino-metil) amino] fenil] carbonil]metilamino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico 'w'
Dissolveu-se o produto do Exemplo 79 (0,33 g) em água (20 mL) e ajustou-se o valor do pH a 11 pela adição de solução aquosa diluida de LiOH. Após cerca de uma hora, tinha-se hidrolisado substancialmente o éster, tal como se identificou por HPLC analítica sobre C-18. Isolou-se o produto pretendido, sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-y5-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]-carbonil]metilamino]acetil]amino]piridina-3-propanóico por HPLC preparativa sobre C-18 utilizando substancialmente a mesmas condições delineadas no Exemplo 79, Passo C, e liofílizou-se (0,19 g). Os RMN de protão, EM FAB, e análise elementar (CHN) eram consistentes com o produto pretendido.
Exemplo 81
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de /^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]-1 -oxopropil]amino]piridina-3-propanoato de etilo
Passo A
Juntou-se R,S-N-t-Boc-alanina (2,0 g, 0,0106 mole) a dicloridrato de 3-amino-3-piridil-propionato de etilo (3,2 g). Utilizou-se o procedimento do Exemplo 79, Passo A. O produto obtido (3,42 g, 88% de rendimento isolado), tinha EM e RMN que eram consistentes com o produto N-Boc pretendido.
Passo B
Retirou-se o grupo Boc protector do produto do Passo A utilizando o procedimento do Exemplo 79, Passo B para se obter o sal dicloridrato (3,5 g) sob a forma de um sólido branco cujos EM e espectro de RMN eram consistentes com o éster de aminoácido pretendido.
Passo C
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de /?-[[2-[[[3-[(aminoimino-metil)amino]-fenil]carbonil]amino]-l-oxopropil]amino]piridina-3-propanoato de etilo. Juntou-se o éster de aminoácido (1,6 g) obtido no Passo B a ácido 3-guanidinobenzóico (0,75 g, 3,5 mmole) utilizando as condições do Exemplo 79, Passo C para se obter o sal bis(trifluoroacetato) do composto em título (1,8 g, 2,7 mmole, 79% de rendimento isolado) sob a forma de um sólido branco após liofi-lização. Os EM e RMN de protão eram consistentes com o produto pretendido. -209-
'•'A
Exemplo 82
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido /9-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] -1 -oxopropil] amino]piridina-3 -propanóico
Hidrolisou-se o produto do Exemplo 81 (0,5 g) ao ácido correspondente utilizando o procedimento do Exemplo 80. Isolou-se o produto pretendido sob a forma do sal di-TFA por HPLC preparativa em C-18 utilizando substancialmente as mesmas condições delineadas no Exemplo 79, Passo C, e liofilizou-se (0,45 g). Os RMN de protão e EM FAB eram consistentes com o produto pretendido. f ' u ^ -210-
Exemplo 83
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido yS-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]-4-metilfenil]carbonil]amino]acetil]ammo]piridma-3-propanóico
Passo A
Juntou-se N-t-Boc-glicina a dicloridrato de ácido 3-amino-3-(3-piridil)propiónico (5,0 g, 0,019 mole) utilizando o procedimento do Exemplo 79, Passo A para se obter, após tratamento, um óleo amarelo (6,0 g, 90%) cujo EM era consistente com o produto pretendido.
Passo B
Retirou-se o grupo Boc protector por dissolução do produto do Passo A (5,9 g) em dioxano (cerca de 20 mL) e TFA e deixou-se decorrer a reacção durante alguns minutos até que a evolução de gás terminasse. Retiraram-se os voláteis num rotavapor para se obter um óleo castanho. Os EM e RMN eram consistentes com o produto pretendido.
Passo C
Acoplou-se o éster de aminoácido preparado no Passo B a ácido 4- -211 -
At wí"1
metil-3-nitrobenzóico utilizando o procedimento do Exemplo 79, Passo C para se obter um óleo que se purificou por RPHPLC preparativa (C-18) para se obter o produto acoplado pretendido (1,76 g) sob a forma de sólidos amorfos cujos RMN e EM eram consistentes com o produto pretendido.
Passo D
Reduziu-se o grupo nitro presente no produto do Passo C à anilina utilizando o procedimento seguinte. Transferiu-se o produto do Passo C (1,75 g) para um reactor de pressão Fischer-Porter de 6 onças, equipado com um manómetro de pressão e válvulas de entrada e saída. Dissolveu-se o composto de partida em ácido acético glacial, adicionou-se catalisador de Pd a 3% sobre carbono (cerca de 1 g) e selou-se o recipiente. Após três ciclos de azoto e vazio pressurizou-se o recipiente com hidrogénio (55 psig) e deixou-se decorrer a reacção de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o catalisador por filtração através de celite e concentrou-se a solução incolor para se obter um óleo viscoso amarelo (2,0 g) cujo EM era consistente com a anilina pretendida.
Passo E
Guanilou-se a anilina (1,0 g, 2,12 mmole) do Passo D utilizando o procedimento seguinte. Dissolveu-se a anilina em acetonitrilo (cerca de 50 mL) e adicionou-se cloridrato de lH-pirazole-l-carboxamidina (0,342 g, 2,3 mmole) em água em conjunto com trietilamina (0,64 g, 0,92 mL, 6,4 mmole) e levou-se a solução ao refluxo. Após aquecimento de um dia para o outro, retiraram-se os voláteis no evaporador rotativo e purificou-se os semi-sólido obtido por RPHPLC preparativa para se obter o produto guanidinado pretendido (0,3 g após liofílização) cujos RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. -212 -
Passo F
Hidrolisou-se o guanidino-éster obtido no Passo E ao ácido correspondente dissolvendo o éster (0,3 g) em água (20 mL) e levando o valor do pH até 11 pela adição de LiOH diluido. Após cerca de uma hora, observou-se a conversão total no ácido por RPHPLC analítica e purificou-se o composto em título por HPLC preparativa e liofilizou-se para se obter o sal di-TFA sob a forma de um pó branco (0,19 g) cujos RMN e MS eram consistentes com o produto pretendido.
-213- /^ί. ί>.(Φ 1
Exemplo 84
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido /H[2-[[(3-amino-4-metilfenil)-carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Hidrolisou-se o anilino-éster obtido no Exemplo 83, Passo D, ao ácido correspondente utilizando condições semelhantes e um esquema de purificação semelhante aos do Exemplo 83, Passo F, para se obter o anilino-ácido pretendido, ácido β- [ [2- [ [(3 -amino-4-metilfenil)-carbonil]amino] acetil] amino] -piridina-3-propanóico, sob a forma do sal di-trifluoroacetato cujos RMN e MS eram consistentes com o produto pretendido. -214-
Exemplo 85
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/3-[[2-[[[3-[ [(aminoiminometil)amino]metil] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico
Passo A
Adicionou-se ácido cianobenzóico (7,0 g, 0,476 mole) a um balão com fundo arredondado (200 mL) e dissolveu-se em DMF:piridina (50 mL). Adicionaram-se carbonato de di-succinilo (DSC, 14,6 g, 0,0571 mole) e uma quantidade catalítica de DMAP a esta solução. Após a conclusão da evolução gasosa, adicionou-se éster t-butílico de glicina (9,6 g, 0,057 mole) e deixou-se reagir de um dia para o outro. Adicionou-se trietilamina (10 mL) e agitou-se durante alguns minutos. Retiraram-se os voláteis num evaporador rotativo e tratou-se dissolvendo a mistura reaccional impura em água e acetato de etilo. Tomou-se a fase aquosa ácida por adição de solução diluída de ácido clorídrico, separaram-se as fases, e rejeitou-se a fase aquosa. Lavou-se a fase orgânica com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, secou-se (Na2S04), e concentrou-se para se obter um produto (11,1 g) cujo EM era consistente com o produto acoplado pretendido.
Passo B -215- /í\< Φ C—
Reduziu-se o éster ciano-t-butílico obtido no Passo A ao composto de benzilamina correspondente de forma semelhante ao Exemplo 82, Passo D. Assim, dissolveu-se éster ciano-t-butílico (10,0 g, 0,0681 mole) em ácido acético (cerca de 70 mL) com aquecimento e arrefeceu-se. Adicionou-se catalisador (0,5 g de Pd a 3% sobre carbono) e transferiu-se a mistura reaccional para um reactor de Fischer-Porter de 6 onças e pressurizou-se com hidrogénio (55 psig). Adicionou-se hidrogénio continuamente até à conclusão da absorção de hidrogénio. Retirou-se o catalisador por filtração através de celite e retirou-se o solvente por evaporação para se obter éster benzilamino-t-butílico cujo EM era consistente com o composto pretendido.
Passo C
Retirou-se o grupo Boc ao produto do Passo B de forma semelhante ao Exemplo 83, Passo B, para se obter benzilaminoácido cujo EM era consistente com o produto pretendido.
Passo D
Dissolveu-se o aminoácido (9,0 g, 0,03 mole) obtido no Passo C em acetonitrilo:água (cerca de a 1:1) e adicionou-se trietilamina em excesso. Após alguns minutos, retiraram-se os voláteis e obteve-se o sal de trietilamina impuro. Dissolveu-se este sal novamente em acetonitriloiágua (200 mL) e adicionou-se cloridrato de lH-pirazino-l-carboxamidina (4,3 g, 0,03 mole) e levou-se a mistura reaccional ao refluxo. Após se deixar a mistura reaccional ao refluxo de um dia para o outro concentrou-se a mistura reaccional para se obter um semi-sólido. Dissolveu-se este semi-sólido em água (20 mL) e ajustou-se o valor do pH a cerca de 7 por adição de bicarbonato de sódio sólido. Formou-se um precipitado que se retirou por filtração. Os EM e RMN eram consistentes com o zwitterião. -216-
Converteu-se este produto no sal cloridrato tratando o zwitterião com água e adicionando ácido clorídrico até o valor do pH ser cerca de 2. Liofilizou-se esta solução para se obter o sal cloridrato.
Passo E
Obteve-se o guanidino-ácido hidrolisando o produto obtido no Passo D (0,47 g) utilizando o procedimento do Exemplo 83, Passo F. Obteve-se um sólido ao liofilizar, sob a forma do sal di-TFA cujos RMN e EM eram consistentes com o produto pretendido.
Passo F
Acoplou-se o guanidino-ácido preparado no Passo E a ácido 3-amino-3-(3-piridil)propiónico utilizando o procedimento do Passo A. Levou-se a cabo uma RPHPLC preparativa para se obter um sólido (1,66 g) cujos RMN e MS eram consistentes com o produto pretendido. -217-
Exemplo 86
Preparação de ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoimmometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil] amino] -4-hidroxibutanóico
Passo A
Preparação do éster benzílico de ácido 3-N-t-Boc-amino-4-hidroxi-butírico.
Dissolveu-se éster alfa-benzílico de ácido N-t-Boc-aspártico (10,0 mmole) em THF (10 mL) e adicionou-se gota a gota durante um período de 30 minutos, a uma solução a 0°C de BH3-THF (20 mL, 20,0 mmole), sob N2. Após agitar-se a mistura reaccional durante 1-2 horas adicionais a 0°C, interrompeu-se a reacção com uma solução de AcOH a 10% em MeOH (10 mL), e evaporou-se o solvente. Dissolveu-se o resíduo em EtOAc e extraiu-se com HC1 IN, H2O, e NH4HCO3 1M. Após secagem sobre MgS04, recuperou-se o produto por remoção do solvente em vazio. O EM era consistente com o produto pretendido.
Passo B
Preparação de N-t-Boc-3-amino-2,3-dihidro-5-oxo-3S-furano.
Agitou-se o éster benzílico de ácido 3-N-t-Boc-amino-4-hidroxi- -218- Μι
«_ν butírico (20 g, 64 mmole) em diclorometano (200 mL) a 25°C durante 16 horas na presença de uma quantidade catalítica de ácido cãnfor-sulfónico. Retirou-se o solvente em vazio. Purificou-se o material impuro por cromatografia rápida num leito de silicagel (22 cm x 6 cm de Merck 60 Silicagel) fazendo-se a eluição com hexano/acetato de etilo (90/10 até 70/30; caudal de 200 mL/min). Isolou-se a N-t-Boc-3-aminolactona pura sob a forma de um sólido branco (5,4 g) cujo EM era consistente com o composto pretendido.
Passo C
Preparação de cloridrato de 3-amino-2,3-dihidro-5-oxo-3S-furano.
Dissolveu-se a 3-N-t-Boc-amino-lactona (5,0 g, 25 mmole) isolada no Passo B em HC1 4N em dioxano (20 mL). Após agitação durante 45 minutos a 25°C, adicionou-se solução de HC1 4N em dioxano (10 mL) e após uma hora a 25°C, retirou-se o HC1 em excesso em vazio. A solução resultante depositou cristais ao deixar-se repousar. Filtrou-se e secou-se o material branco cristalino (2,9 g); RMN de *H (DMSO-de) £2,55 (dd, 1H, J1 = 18,3 Hz, J2 - 2,5 Hz), 3,0 (dd, 1H, J1 = 8,5 Hz, J2 = 18,3 Hz), 4,1 (m, 1H), 4,35 (dd, 1H, J1 = 10,5 Hz, J2 = 2,7 Hz), 4,5 (dd, 1H; J1 = 10,5 Hz, J2 = 6,5 Hz), MS (FAB) 102,1 (M+H+).
Passo D
Acoplou-se o cloridrato de 3-amino-2,3-dihidro-5-oxo-3S-furano a cloridrato de ácido raeta-guanidino-hipúrico (GIHA) utilizando o seguinte procedimento. Adicionou-se um equivalente de NMM (0,59 g, 0,64 mL, 5,82 mmole) a GIHA (1,6 g, 5,9 mmole) em DMF (cerca de 30 mL) e deixou-se agitar a mistura durante alguns minutos até se formar um precipitado. Arrefeceu-se a mistura até 0°C e adicionaram-se um equivalente de DSC (1,49 g, 5,82 mmole) e -219- uma quantidade catalítica de DMAP e deixou-se prosseguir a reacção durante pelo menos 0,5 hora. Ao atingir-se uma activação substancialmente completa adicionou-se cloridrato de 3-amino-5-oxo-3S-furano (0,8 g, 5,82 mmole) à mistura reaccional seguido de um equivalente de NMM (0,59 g, 0,64 mL, 5,82 mmole) e deixou-se prosseguir a reacção até à sua conclusão (1-16 horas). Retiraram-se os voláteis (evaporação rotativa em vazio a 60°C) e dissolveu-se o resíduo numa quantidade mínima de água:acetonitrilo (utilizando a quantidade mínima de acetonitrilo para levar a dissolução a cabo). Levou-se a solução a um valor de pH de cerca de 3 adicionando TFA puro e conseguiu-se o isolamento do produto acoplado pretendido por RPHPLC preparativa para se obter sal de mono-TFA sob a forma de um sólido higroscópico, após liofilização (0,54 g).
Passo E
Obteve-se o composto em título dissolvendo o produto do Passo D (0,54 g) em água (20 mL). Levou-se o valor do pH da solução a cerca de 11 adicionando solução aquosa diluida de NaOH. Ao completar-se a reacção, tal como se determinou por RPHPLC analítica, liofilizou-se a solução (valor do pH final de cerca de 8). Confirmou-se a identidade do produto por RMN de protão e EM. -220-
Exemplo 87
Preparação do sal trifluoroacetato do sal de sódio de (±)-/5L[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-2-hidroxibenzenopropanoato de sódio
Acoplou-se cloridrato de 3-amino-hidrocumarina (2,0 g, 0,010 mole), preparado de acordo com J. Rico, Tett. Let., 1994, 35, 6599-6602, a GIHA (1,50 g, 0,0041 mole) utilizando substancialmente o mesmo procedimento do Exemplo 86, Passo D. A purificação por RPHPLC preparativa proporcionou o produto pretendido sob a forma de uma mistura de sais de TF A, de cumarina e de hidroxiácido, sob a forma de um pó amarelo claro após liofilização (1,50 g). Obteve-se a conversão essencialmente completa no ácido fenólico pretendido dissolvendo a mistura purificada em água, ajustando o valor do pH a 7-8 com solução aquosa diluída de NaOH, e levando a cabo uma liofilização. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura de ácido fenólico (carboxilato) da molécula (sob a forma do sal sódico do trifluoroacetato). -221 -
Exemplo 88
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -2-hidroxi-5 -metilbenzenopr opanóico
Acoplou-se a 3-amino-6-metilhidrocumarina, preparada de acordo com a referência citada no Exemplo 87, com GIHA utilizando quantidades, condições, e purificação semelhantes ao Exemplo 87 para se obter um sólido escuro (0,76 g) cujos RMN e EM eram consistentes com o produto pretendido (sob a forma do sal sódico do TFA). -222-
Exemplo 89
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)- amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-[(2-hidroxietil)amino]-4- oxobutanóico
Passo A
Dissolveu-se éster benzílico de ácido N-t-Boc-aspártico (7,7 mmole, 2,50 g) em DMF:piridina (1:1, 70 mL) e adicionou-se DSC (8,5 mmole, 2,2 g) em conjunto com uma quantidade catalítica de DMAP. Após a cessação da evolução de gás (cerca de 1 hora), adicionou-se etanolamina (0,52 g, 8,3 mmole) em piridina (20 mL) e deixou-se reagir à temperatura ambiente de um dia para o outro. Retiraram-se os voláteis para se obter um óleo dourado. Fraccionou-se o produto resultante entre EtOAc e solução aquosa de HC1. Lavou-se a fase orgânica com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, água, secou-se (sulfato de sódio anidro) e retiraram-se os voláteis para se obter um óleo dourado -223 -
At
(2,64 g) cujos espectros de RMN de protão e de massa correspondiam à amida protegida pretendida.
Passo B
Desbenzilou-se o produto impuro do Passo A (2,3 g) utilizando um procedimento habitual. Assim, dissolveu-se o produto do Passo A em ácido acético (cerca de 70 mL) e transferiu-se para uma reactor de pressão Fischer-Porter com paládio a 3% sobre carbono (1 g) e adicionou-se hidrogénio (54 psig). Agitou-se vigorosamente a mistura reaccional e encheu-se de novo com hidrogénio quando necessário. Após não haver mais consumo de hidrogénio (cerca de 1 hora) retirou-se o catalisador por filtração através de uma almofada de celite e retiraram-se os voláteis para se obter um óleo incolor (1,73 g). Os RMN w de protão e EM eram consistentes com o produto desbenzilado.
Passo C
Dissolveu-se o produto impuro obtido no Passo B em dioxano (20 mL) e adicionou-se-lhe HC1 4N em dioxano (40 mL) com agitação vigorosa. -224-
Deixou-se prosseguir a reacção até terminar a evolução de gás (cerca de 15 minutos). Retiraram-se os voláteis e obteve-se um óleo dourado que se triturou com éter dietílico. Os espectros de RMN de protão e de massa eram consistentes com o produto aminoácido N-protegido pretendido.
Passo D
Acoplou-se o produto do Passo C (1,0 gm, 4,7 mmole) com GIHA (1,5 g, 4,11 mmole) utilizando um procedimento semelhante ao do Exemplo 86, Passo D. A mistura reaccional impura de acoplamento foi concentrada para se obter um óleo espesso e reconstituída em águaracetonitrilo, e purificou-se por RPHPLC preparativa para se obter o sal trifluoroacetato de ácido (±)-3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-[(2-hidroxietil)amino]-4-oxobutanóico pretendido (0,44 g após liofílização). Os espectros de RMN de protão e de massa eram consistentes com o produto pretendido. -225-
Exemplo 94
Preparação de monohidrato do sal bis(trifluoroacetato) de 2-aminobenzoato de 2S-[[2-[[[3-[[aminoiminometil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3- carboxipropilo
Passo A
Preparação de 3-N-t-Boc-amino-4-hidroxi-(3S)-butirato de benzilo.
Dissolveu-se éster /?-benzílico de ácido N-t-Boc-L-aspártico (Sigma) (75 g, 20 mmole) em THF (30 ml) e adicionou-se gota a gota durante um período de 30 minutos a BH3-THF (400 ml, 40 mmole) a 0°C sob uma atmosfera de N2. Após agitar-se a solução durante 2,5 horas a 0°C, interrompeu-se a reacção com 50 ml de solução de ácido acético a 10% em MeOH, e evaporou-se o solvente. Dissolveu-se o resíduo em éter (200 ml) e lavou-se com HC1 IN, solução saturada de K2C03, água e secou-se sobre MgSC>4. Isolou-se o produto removendo o solvente em vazio (p.f. 56-57°C a partir de éter isopropílico/hexano). RMN de Ή (DMSO-d6) δ 1,4 (s, 9H), 2,68 (d, 2H, J = 6 Hz), 3,82 (d, 2H, J = 5 Hz), 4,01 (m, 1H), 5,16 (s, 2H), 5,21 (s largo, 1H), 7,37 (s largo, 5H). -226-
'νΛ. I
Passo B
Preparação de 3-amino-4-(antranilato)-(3S)-butirato de benzilo.
Dissolveu-se 3-N-t-Boc-amino-4-hidroxi-(3S)-butirato de benzilo (10 g, 32 mmole) em 50 ml de dimetilformamida seguida por trietilamina (4,4 g, 46 mmole). Adicionou-se anidrido isatóico (5,0 g, 3 mmole) e agitou-se a solução durante 24 horas a 25°C. Após a conclusão da reacção (monitorizada por RPHPLC), adicionou-se água e extraiu-se o produto com acetato de etilo (100 mL) e secou-se sobre Na2S04. Da evaporação do solvente resultaram 12 g de um óleo amarelo. A este óleo, adicionou-se dioxano (20 mL) seguido por HC14N em dioxano (20 mL). Deixou-se prosseguir a reacção durante 4 horas, adicionou-se éter e separou-se da solução uma massa oleosa. Adicionou-se éter novamente à massa oleosa e decantou-se. Repetiu-se este procedimento por duas vezes. Adicionou-se éter ao semi-sólido e agitou-se vigorosamente durante 16 horas. Recolheu-se um sólido branco tendo EM e RMN de !H consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) a GIHA (1,0 g, 0,5 mmole) em dimetilformamida seca (20 mL) seguida por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um periodo de 1 hora, adicionou-se 3-amino-4-antranilato-(3S)-butirato de benzilo (0,7 g, 0,5 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL) numa só porção. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,0 g). Os EM, e RMN de eram consistentes com a estrutura apresentada. -227-
C_J
«~A
Passo D
Hidrogenou-se o éster benzílico do Passo C utilizando H2 gasoso e catalisador de Pd/C (500 mg, 5%) durante 4 horas. Após a conclusão da reacção, purificou-se o produto por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,0 g). Os EM e RMN de *13 eram consistentes com a estrutura apresentada. -228-
Exemplo 95
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido β- [ [2-[[[3 - [(aminoiminometil) amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-l,4-benzodioxin-6-propanóico
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (12,5 g) a l,4-benzodioxan-6-carboxaldeído (Aldrich) (10 g) em isopropanol (205 mL) seguido por ácido malónico (6,0 g). Agitou-se a mistura reaccional ao refluxo durante 5 horas. Filtrou-se a mistura reaccional quente e lavou-se com isopropanol (100 mL) quente. Secou-se o sólido branco resultante para se obter ácido DL-3-amino-3-(l,4-benzodioxano)propiónico (6,3 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM, e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Suspendeu-se ácido DL-3-amino-3-(l,4-benzodioxano)propiónico (6 g) do Passo A em EtOH absoluto (250 mL) e cloreto de acetilo (20 mL). Aqueceu-se então a suspensão refluxo durante 4 horas. Arrefeceu-se a mistura reaccional até aos 25°C e evaporou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter um sólido que se lavou com éter dietílico (50 mL) para se obter DL-3-amino-3-(l,4-benzodioxano)propionato de etilo (6,5 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada. -229-
Mb-rln
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) a GIHA (1,0 g, 0,5 mmole) em dimetilformamida seca (20 mL) seguida por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se o produto do Passo B (0,7 g, 0,5 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL) numa só porção. Após a conclusão da reacção purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o aducto de DL3-amino-3-(l,4-benzodioxano)-propionato de etilo (o produto do Passo C) (500 mg) em águaracetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até o valor do pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um 255 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada. -230-
Exemplo 96
Preparação do éster etílico de N-[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]-carbonil] amino] acetil] -/í-alanina
II
NH
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) a GIHA (1,0 g, 0,5 mmole) em dimetilformamida seca (20 mL) seguida por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se cloridrato de éster etílico de beta-alanina (0,7 g, 0,5 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL) numa só porção. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para ss obterem 1,1 g de um sólido branco. Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada. -231 -
Exemplo 97
Preparação de N-[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-/2-alanina
Dissolveu-se o composto do Exemplo 98 (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (200 mg). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até o valor do pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obterem 375 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada. -232-
Exemplo 98
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -quinolino-3 -propanoato de etilo
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (12,5 g) a 3-quinolinocarboxaldeído (Aldrich) (10 g) em isopropanol (205 mL) seguido por ácido malónico (6 g). Agitou-se a mistura reaccional ao refluxo durante 5 horas. Filtrou-se a mistura reaccional quente e lavou-se com isopropanol (100 mL) quente. Secou-se o sólido branco resultante para se obter ácido DL-3-amino-3-(3-quinolino)propiónico (6,3 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Suspendeu-se ácido DL-3-amino-3-(3-quinolino)propiónico (6 g) do Passo A em EtOH absoluto (250 mL) e cloreto de acetilo (20 mL). Aqueceu-se então a suspensão ao refluxo durante 4 horas. Arrefeceu-se a mistura reaccional até aos 25°C e evaporou-se o solvente sob pressão reduzida para se -233 - C--Λ,( obter um sólido que se lavou com éter etílico (50 mL) para se obter DL-etil-3-amino-3-(3-quinolino)propionato (6,5 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ‘H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) a GIHA (1,0 g, 0,5 mmole) em dimetilformamida seca (20 mL) seguida por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se DL-3-amino-3-(3-quinolino)propionato de etilo (1,2 g, 0,5 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL) numa só porção. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,2 g). Os EM e RMN de eram consistentes com a estrutura apresentada. -234- βτΐ CL~—~^
Exemplo 99
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido y0-[[2-[[[3-[(aminoiminome-til) amino] fenil] carbonil] -amino] acetil] amino] quinolino-3 -propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 98 (600 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até o valor do pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obterem 470 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de XH eram consistentes com a estrutura apresentada. -235- C--Λ'"1
Exemplo 100
Preparação do sal trifluoroacetato de /?-[[2-[[[3-[(4,5-dihidrotiazol-2-il)amino] fenil] carbonil] amino]acetil] amino]piridina-3 -propanoato de etilo
Passo A
Preparação de Glicina de 3-Nitrobenzoilo:
Adicionou-se glicina (20 g, 266 mmole) a água (200 mL), seguida por hidróxido de potássio (20 g, 357 mmole) e arrefeceu-se até 0°C num banho de gelo. Adicionou-se cloreto de 3-nitrobenzoílo (Aldrich) (20 g, 108 mmole) a esta solução numa solução em acetonitrilo (20 mL) gota a gota durante um período de 10 minutos. Após a conclusão da reacção (3-4 horas), adicionou-se ácido clorídrico concentrado até o valor do pH = 1 seguido por solução aquosa saturada de NaCl (75 mL). Filtrou-se o produto, lavou-se com água e secou-se com ar (22 g, rendimento de 90%). RMN de ]H (DMSO-d6) δ, 3,92 (d, 2H, J - 6,1), 7,9 (t, 1H, J = 7,9), 8,3 (t, 1H, J = 5,6), 8,35 (m, 2H), 8,69 (s, 1H), 9,25 (t, 1H, J = 7,2 Hz). EM (FAB) m/z 231 (M+Li+). -236-
Análise Elementar para C9H8N205 Calculado: C, 45,89; H, 4,25; N, 9,92.
Determinado: C, 45,97; H, 4,44; N, 10,11.
Passo B
Dissolveu-se glicina de 3-nitrobenzoilo, preparada no Passo A acima (4 g) em etanol (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psig num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio.
Passo C
Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura do Passo B seguido por 2-(metiltio)-2-tiazolina (7 g) e aqueceu-se até ao refluxo durante 6 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obterem uns sólidos. Adicionou-se éter dietílico e filtraram-se o sólido para se obterem sólidos de cor escura (4,6 g).
Passo D
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) a 2-(metiltio)-2-tiazolina (1,0 g, 0,5 mmole) em dimetilformamida seca (20 mL) seguida por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se DL-3-amino-3-(3-piridil)propionato de etilo (1,2 g, 0,5 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL) numa só porção. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (520 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada. -237- £--
Exemplo 101
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /H[2-[[[3-[(4,5-dihidrotiazol-2-il)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 100 (600 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até o valor do pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obterem 470 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 102
Preparação do éster etílico de N-[2-[[[3-[[[(fenilmetil)ami-no] carbonil] amino] -fenil] carbonil] amino] acetil] -/2-alanina
Adicionou-se (3-nitrobenzoilglicil)-3-amido-propionato de etilo (2 g, 0,62 mmole) (Exemplo 100, Passo A) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura seguido por isocianato de benzilo (700 mg, 0,75 mmole). A solução solidificou. Adicionou-se éter dietílico e filtrou-se o sólido para se obter a benzilureia sob a forma de sólidos cor de salmão (2,6 g, rendimento de 99%). Purificou-se o produto (porção de 1 g) por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco: RMN de *H (DMSO-d6) δ, 1,17 (t, 3H, J = 7,3 Hz), 2,48 (t, 2H, J - 7,1 Hz), 3,45 (q, 2H, J! = 6,8 Hz, J2 = 13,2 Hz), 3,80 (d, 2H, J = 6,9 Hz), 4,06 (q, 2H, J, = 7,5 Hz, J2 = 13,4 Hz), 4,31 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 7,2-7,4 (m, 5H), 7,8 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 7,85 (s largo, 1H), 8,1 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 8,35 (m, 2H), 8,71 (s, 1H), 8,78 (s largo, 1H), 9,22 (s largo, 1H). MS (FAB) m/z 427,3 (M+H+).
Análise Elementar para C22H26N405 1,5 H20 Calculado: C, 58,28; H, 5,74; N, 12,36.
Determinado: C, 58,48; H, 5,57; N, 12,25. -239-
M
Exemplo 103
Preparação de ácido 3-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]ami-no] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 102 (400 mg, 0,094 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obterem 265 mg de um sólido branco: RMN de 'H (DMSO-de) δ, 2,48 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 3,45 (q, 2H, .h = 6,8 Hz, J2 - 13,2 Hz), 3,80 (d, 2H, J = 6,9 Hz), 4,31 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 7,2-7,4 (m, 5H), 7,8 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 7,85 (s largo, 1H), 8,1 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 8,35 (m, 2H), 8,71 (s, 1H), 8,78 (s largo, 1H), 9,22 (s largo, 1H). MS (FAB) m/z 405,6 (M+Li+).
Análise Elementar para C20H22N4O5 0,5 H20 Calculado: C, 59,00; H, 5,39; N, 13,75.
Determinado: C, 59,29; H, 5,11; N, 13,63. C_cUi -240-
Exemplo 104
Preparação de y5- [ [2- [ [(3 -nitrofenil)carbonil] amino] acetil] amino] -piridina-3-propanoato de etilo
Seguiu-se o mesmo procedimento utilizado na preparação do Exemplo C substituindo o cloridrato de etil-beta-alanina por uma quantidade equivalente de DL-3-amino-3-piridil-propionato de etilo. Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succimmidilo (14 g, 5,5 mmole) a 3-nitro-benzoíl-glicina (10 g, 4,5 mmole) em dimetilformamida seca (30 mL) seguido de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se dicloridrato de DL-3-amino-3-(3-piridil)propionato de etilo (13 g, 4,6 mmole) em solução aquosa de w carbonato de potássio a 20% (50 mL) numa só porção. Após a conclusão da reacção, recolheu-se o produto por filtração (11,5 g, rendimento de 80%). Os EM e RMN de TH eram consistentes com a estrutura apresentada. -241 -
At
C_uU
Exemplo 105
Preparação do sal trifluoroacetato de y0-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)-amino]carbonil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo
Adicionou-se DL-(3-nitrobenzoilglicil)-3-amido-3-piridil-propio-nato de etilo (2 g, 0,62 mmole) do Exemplo 104 a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura seguido por isocianato de benzilo (700 mg, 0,75 mmole). A solução solidificou. Adicionou-se éter dietílico e filtrou-se o produto. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,5 g). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura apresentada. -242- A- //-------
Exemplo 106
Preparação de ácido (±)-/?- [ [2-[ [ [3 - [ [ [(fenilmetil)amino] carbonil] -amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 105 (400 mg, 0,094 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até o um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (200 mg). Os EM e RMN de eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 107
Preparação de /?- [ [2- [ [ [3 - [ [(fenilamino)carb onil] amino] fenil] - carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo
Adicionou-se DL-(3-nitrobenzoilglicil)-3-amido-3-(3-piridil)-propionato de etilo (2 g, 0,64 mmole) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura seguido por isocianato de fenilo (600 mg, 0,75 mmole). A solução solidificou. Adicionou-se éter dietílico e filtrou-se o produto. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada. -244-
At
Exemplo 108
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido y$-[[2-[[[3-[[(fenilamino)carbonil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 107 (500 mg, 0,095 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até o valor do pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (350 mg). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada. -245- A<- __—(*' -
Exemplo 109
Preparação do sal trifluoroacetato de /?-[[2-[[[3-(aminocarbonil-amino)fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo
Adicionou-se DL-(3-nitrobenzoilglicil)-3-amido-3-(3-piridil)-pro-pionato de etilo (2 g, 0,62 mmole) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se ácido clorídrico (20%, 75 mL) à anilina impura seguido por ureia (2 g). Aqueceu-se a solução ao refluxo durante 15 horas. Após a conclusão da reacção (15 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,2 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 110
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido y3-[[2-[[[3-(aminocarbonilamino)-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 109 (500 mg, 0,095 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até o um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (350 mg). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -247-
Exemplo 111
Preparação do sal trifluoroacetato de y3-[[2-[[[3-[[[[(4-metilfenil) sulfonil] amino] carbonil] amino] fenil] carb onil] amino] acetil] amino] -piridina-3-propanoato de etilo
Adicionou-se DL-(3-nitrobenzoilglicil)-3-amido-3-(3-piridil)-propionato de etilo (2 g, 0,64 mmole) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura seguido por isocianato de tolueno-sulfonilo (600 mg, 0,75 mmole). A solução solidificou. Adicionou-se éter dietílico e filtrou-se o produto. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 112
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /H[2-[[[3-[[[[(4-metilfenil) sulfonil] amino] carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -piridina-3-propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 111 (500 mg, 0,095 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até a um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (350 mg). Os EM e RMN de ] H eram consistentes com a estrutura apresentada. -249-
Exemulo 113
Preparação do sal trifluoroacetato de y?-[[2-[[[3-[(aminotioxometil)-amino]fenil]-carbonil]amino]acetíl]amino]piridma-3-propanoato de etilo
CC^Et
Adicionou-se DL-(3-nitrobenzoilglicil)-3-amido-3-(3-piridil)-pro-pionato de etilo (2 g, 0,64 mmole) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura seguido por isotiocianato de benzoilo (600 mg, 0,75 mmole). Após a conclusão da reacção retirou-se o solvente sob pressão reduzida. Adicionou-se metanol (50 mL) ao óleo resultante seguido por K2C03 (2 g) e deixou-se agitar a mistura reaccional até à conclusão da hidrólise. Purificou-se o produto por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (980 mg). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada. -250- Aí
Exemplo 114
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /5-[[2-[[[3-[(aminotioxometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 113 (500 mg, 0,095 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (350 mg). Os EM e RMN de H eram consistentes com a estrutura apresentada. -251 -
Exemplo 115
Preparação de DL-(3-nitrobenzoilglicil)-3-amido-fenil-propionato de etilo
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (14 g, 5,5 mmole) a 3-nitro-benzoílglicina (10 g, 4,5 mmole) em dimetilformamida seca (30 mL) seguida por dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-fenilpropionato de etilo (12 g, 4,6 mmole) em solução aquosa de carbonato de potássio a 20% (50 mL) numa só porção. Após a conclusão da reacção, recolheu-seo produto por filtração (12 g, rendimento de 87%). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -252-
Exemplo 116
Preparação de y9-[[2-[[[3-[(aminotioxometil)amino]fenil]carboniI]-amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo
Adicionou-se o composto do Exemplo 115 (2 g, 0,64 mmole) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura seguido por isocianato de fenilo (600 mg, 0,75 mmole). Após a conclusão da reacção, retirou-se o solvente sob pressão reduzida. A este óleo, adicionou-se metanol (50 mL) seguido por K2CO3 (2 g) e deixou-se agitar a mistura reaccional até se completar a hidrólise. Purificou-se 0 produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (980 mg). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -253 - Μ
Exemplo 117
Preparação de ácido y9-[[2-[[[3-[(aminotioxometil)amino]-fenil]car-bonil] amino] -acetil] aminojbenzenopropanóico
Dissolveu-se o produto do Exemplo 116 (500 mg, 0,095 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (350 mg). Os EM e RMN de eram consistentes com a estrutura apresentada. -254-
Exemplo 118
Preparação de /H [2- [ [ [3 - [ [ [(fenilmetil)amino] carbonil] amino] - fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo
Adicionou-se DL-(3-nitrobenzoilglicil)-3-amido-3-fenil-propionato de etilo (2 g, 0,62 mmole) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura seguido por isocianato de benzilo (700 mg, 0,75 mmole). A solução solidificou. Adicionou-se éter dietílico e filtrou-se o produto. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (1,5 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada. -255 -
Exemplo 119
Preparação de ácido /H[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Dissolveu-se o produto do Exemplo 118 (400 mg, 0,094 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (200 mg). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -256-C-—'-í ^
Exemplo 120
Preparação de y9- [ [2-[ [(3 -nitrofenil)carbonil]amino]acetil] amino] -1,3-benzodioxole-3-propanoato
BrvHN
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (14 g, 5,5 mmole) a 3-nitro-benzoílglicina (10 g, 4,5 mmole) em dimetilformamida seca (30 mL) seguida por dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-piperinalpropionato de etilo (7 g, 4,6 mmole) em solução aquosa de carbonato de potássio a 20% (50 mL) numa só porção. Após a conclusão da reacção, recolheu-seo produto por filtração (14 g, rendimento de 97%). Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada. -257-
At
Exemplo 121
Preparação de /H[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-1,3-benzenodioxole-5-propanoato de etilo
Adicionou-se o composto do Exemplo 120 (2 g, 0,62 mmole) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura seguido por isocianato de benzilo (700 mg, 0,75 mmole). A solução solidificou. Adicionou-se éter dietílico e filtrou-se o produto. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (1,5 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 122
Preparação de ácido ^-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 121 (400 mg, 0,094 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (200 mg). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
-259-
Exemplo 123
Preparação de /^[[2-[[[3-3-[[(fenilammo)carbonil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-l,3-benzenodioxole-5-propanoato de etilo
Adicionou-se DL-(3-nitrobenzoilglicil)-3-amido-3-piperidinal-propionato de etilo (2 g, 0,62 mmole) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Após a conclusão da reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura seguido por isocianato de fenilo (700 mg, 0,75 mmole). A solução solidificou. Adicionou-se éter dietílico e filtrou-se o produto. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (1,5 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada. -260- C— l -1
Exemplo 124
Preparação de ácido /H[2-[[[3-3-[[(fenilamino)carbonil]amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanóico
Dissolveu-se o composto do Exemplo 123 (400 mg, 0,094 mmole) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg, 0,4 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa ^ (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (200 mg). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 126
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /H[2-[[[3-[[[[(4-aminosulfonil)fenilmetil]amino]carbonil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]piridina-3-propanóico
Passo A
Adicionaram-se fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (Lancaster) (5 g) e trietilamina (5 ml) a hidrato de cloridrato de 4-(aminometil)-benzeno-sulfonamida (Aldrich) (6 g) em acetonitrilo. Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter uma massa sólida. Adicionou-se água e filtrou-se o sólido (10,2 g). Os EM de RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o composto do Passo A (10 g) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (4 g). Agitou-se a mistura -262- Μ·
Λ. ( reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (4-6 horas), adicionou-se solução aquosa de HC1 a 10% até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por filtração para se obterem um sólido branco (7 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) a ácido carboxílico-ureia de 4-(aminometil)benzeno-sulfonamida e fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (1 g, 0,5 mmole) [Consultar o Esquema V(A13)] em dimetilformamida seca (20 mL) seguida por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se o composto do Exemplo 1, Passo C (2,2 g, 0,5 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL) numa só porção. Após a conclusão da reacção, purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (1,2 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o composto do Passo C (600 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obterem 500 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada. -263 - r\
Exemplo 127
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido /?-[[2-[[[3-[[[(3-piridinilmetil)amino] carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] piridina-3-propanóico
Passo A
Adicionaram-se fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (Lancaster) (5 g) e trietilamina (5 ml) a 3-piridinametilamina (Aldrich) (6 g) em acetonitrilo. Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter uma massa sólida. Adicionou-se água e filtrou-se o sólido (12 g). Os EM de RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o composto do Passo A (10 g) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (4 g). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (4-6 horas), adicionou-se solução aquosa de HC1 a 10% até o valor do pH = 2. -264- Aí
Purificou-se o produto por filtração para se obter um sólido branco (5,6 g). Os EM e RMN de *Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) a ácido carboxílico-ureia de metilamina de 3-piridina (Aldrich) e fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (1 g, 0,5 mmole) [Consultar o Esquema V(A13)] em dimetilformamida seca (20 mL) seguida por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se o composto do Exemplo 1, Passo C (2,2 g, 0,5 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL) numa só porção. Após a conclusão da reacção, purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o composto do Passo C (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obterem 430 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 129
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?-[[2-[[[3-[[[(2-carboxietil)amino]-carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico HO> II I O HN.^0
? H C"N^C-V I o \ o / h i 1 It íS 0 ™ KJ
Passo A
Dissolveu-se o composto do Exemplo 104 (1,5 g) em etanol (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio sobre carbono a 5% (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr durante um período de 1,5 horas. Retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio.
Passo B
Adicionou-se acetonitrilo (5 mL) à anilina impura do Passo A seguido por isocianatopropionato de etilo (Aldrich) (800 mg) e agitou-se durante 1 hora. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obterem uns sólidos. Adicionou-se éter dietílico e filtrou-se o sólido para se obter um sólido de cor -266-
escura. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obterem 500 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o composto do Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obterem 220 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 130
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido yS-[[2-[[[3-[[[(3-fenilmetil) amino] carbonil] amino] fenil] carb onil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico
Passo A
Adicionaram-se fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (Lancaster) (5 g) e trietilamina (5 ml) a cloridrato de feniletilamina (Aldrich) (6 g) em acetonitrilo. Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter uma massa sólida. Adicionou-se água e filtraram-se o sólido (11 g). Os EM de RMN de ’Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o composto do Passo A (10 g) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (4 g). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (4- -268-
6 horas), adicionou-se solução aquosa de HC1 a 10% até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por filtração para se obter um sólido branco (5,6 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) a ácido carboxílico-ureia de feniletilamina e fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (1 g, 0,5 mmole) [Consultar o Esquema V(A13)] em dimetilformamida seca (20 mL) seguida por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se o composto do Exemplo 1, Passo C (2,2 g, 0,5 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL) numa só porção. Após a conclusão da reacção, purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (1,0 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o composto do Passo C (800 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obterem 633 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada. -269-
Atw<H
Exemplo 131
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?-[[2-[[[3-[[[(l-naftalenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Passo A
Adicionaram-se fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (Lancaster) (5 g) e trietilamina (5 ml) a 1-naftalenometilamina (Aldrich) (5 g) em acetonitrilo. Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter uma massa sólida. Adicionou-se água e filtrou-se o sólido (9 g). Os EM de RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o composto do Passo A (8 g) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (3 g). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (4-6 horas), adicionou-se solução aquosa de HC1 a 10% até um valor de pH = 2. -270-
Purificou-se ο produto por filtração para se obterem um sólido branco (5,6 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) a ácido carboxílico-ureia de metilamina e l-naftaleno e fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (1 g, 0,5 mmole) [Consultar o Esquema V(A13)] em dimetilformamida seca (20 mL) seguida por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se o composto do Exemplo 1, Passo C (2,2 g, 0,5 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL) numa só porção. Após a conclusão da reacção, purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter um sólido branco (1,0 g). Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o composto do Passo C (600 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obterem 410 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -271 -
Exemplo 132
Preparação de /H [2-[ [ [3 - [ [(cianoimino)(fenilmetilamino)metil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de fenilmetilo
Adicionaram-se trietilamina, (0,5 ml), DMAP (10 mg), EDC1 (95 mg) e o composto do Exemplo V (215 mg, 0,52 mM) a uma solução agitada do produto do Exemplo I (140 mg, 0,52 mM), em cloreto de metileno (25 ml) a 0°C. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 15 minutos, deixou-se atingir a temperatura ambiente e agitou-se então durante mais 16 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter uma goma oleosa que se dissolveu em acetato de etilo. Lavou-se a solução resultante com água, solução aquosa saturada de NaHC03 e água. Separou-se a fase orgânica, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter o produto impuro. Purificou-se ainda o produto impuro por cromatografia sobre sílica (eluente: acetato de etilo) e retirou-se o solvente em excesso para se obter o composto em título (88 mg) sob a forma de um óleo transparente.
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 133
Preparação de /^[[2-[[[3-[[(cianoimmo)metilamino)metil]amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de fenilmetilo
Adicionaram-se trietilamina, (0,5 ml), DMAP (10 mg), EDC1 (95 mg) e o composto do Exemplo V (215 mg, 0,52 mM) a uma solução agitada do produto do Exemplo J (90 mg, 0,41 mM), em cloreto de metileno (25 ml) a 0°C. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 15 minutos, deixou-se atingir a temperatura ambiente e agitou-se então durante mais 16 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter uma goma oleosa que se dissolveu em acetato de etilo. Lavou-se a solução resultante com água, solução aquosa saturada de NaHC03 e fmalmente água novamente. Separou-se a fase orgânica, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter o produto impuro. Purificou-se ainda o produto impuro por cromatografia sobre sílica (eluente: acetato de etilo) e retirou-se o solvente em excesso para se obter o composto em título (SO mg) sob a forma de um óleo transparente. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo 134
Preparação de y9-[[2-[[[3-[[(cianoimino)-(amino)metil]amino]-fenil] carbonil] amino] acetil] aminojbenzenopropanoato de fenilmetilo
Adicionaram-se trietilamina, (0,5 ml), DMAP (10 mg), EDC1 (95 mg) e o composto do Exemplo V (215 mg, 0,52 mM) a uma solução agitada do produto do Exemplo K (215 mg, 0,52 mM), em cloreto de metileno (25 ml) a 0°C. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 15 minutos, deixou-se atingir a temperatura ambiente e agitou-se então durante mais 16 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter uma goma oleosa que se dissolveu em acetato de etilo. Lavou-se a solução resultante com água, solução aquosa saturada de NaHC03 e novamente com água. Separou-se a fase orgânica, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter o produto impuro. Purificou-se ainda o produto impuro por cromatografia sobre sílica (eluente: acetato de etilo) e retirou-se o solvente em excesso para se obter o composto em título (285 mg) sob a forma de um óleo transparente. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -274- C,_->-i ‘-i
Exemplo 135
Preparação de /5-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(etilamino)metil]amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo
Adicionou-se EDC1 (191 mg) a uma solução agitada do produto do Exemplo L (464 mg, 2,0 mM), y3-[(2-amino-l-oxoetil)amino]fenil-3-propanoato de DL-etilo (728 mg, 2,0 mM) [preparado de acordo com o Exemplo 1 (Passos B, C e D) substituindo o ácido DL-3-amino-3-(3-piridil)propiónico por uma quantidade equivalente de ácido DL-3-amino-3-(3-fenil)propiónico], trietilamina (2,0 ml) e DMAP (20 mg) em cloreto de metileno (15 ml) a 0°C. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 15 minutos, deixou-se atingir a temperatura ambiente e agitou-se então durante mais 16 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter uma goma oleosa que se dissolveu em acetato de etilo. Lavou-se a solução resultante com água, solução aquosa saturada de NaHC03 e água. Separou-se a fase orgânica, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter o produto impuro. Purificou-se ainda o produto impuro por RPHPLC (eluente: TFA a 0,5%-água/acetonitrilo) para se obter o composto em título (280 mg) sob a forma de um sólido branco.
Análise para C24H28N6O4 0,3 H20:
Calculado: C, 61,34; H, 6,13; N, 17,88.
Determinado: C, 61,17; H, 6,26; N, 17,85. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -275- -275-
c
Exemplo 136
Preparação de ácido /?-[[2-[[[3-[[(cianoimino)[(fenilmetil)amino]-metil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Adicionou-se hidróxido de sódio IN (2 ml) a uma solução agitada do composto do Exemplo 132 (88 mg) em metanol (2 ml) e THF (2 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas, evaporou-se e dissolveu-se o resíduo em água. Ajustou-se a solução resultante ao valor de pH de 4 com ácido clorídrico IN e isolaram-se o sólido resultantes por filtração. Lavou-se ainda o filtrado com água seguida de éter dietílico.
Obteve-se assim o composto em título (62 mg) sob a forma de um sólido branco.
Análise para C27H26N604 0,5 H20 0,25 Et20:
Calculado: C, 63,93; H, 5,65; N, 15,97.
Determinado: C, 63,96; H, 5,73; N, 15,81. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
-276-
Exemplo 137
Preparação de ácido /H[2-[[[3-[[(cianoimino)-(metilamino)me-tiljamino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanóico
Adicionou-se hidróxido de sódio IN (3 ml) a uma solução agitada do composto do Exemplo 133 (240 mg) em metanol (3 ml) e THF (3 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas, evaporou-se e dissolveu-se o resíduo em água. Ajustou-se a solução resultante ao valor de pH de 4 com ácido clorídrico IN e extraiu-se com acetato de etilo/MeOH. Lavaram-se os extractos orgânicos com água, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter uma goma transparente. Purificou-se ainda o produto impuro por RPHPLC numa coluna Cl8 (eluente: TFA a 0,5%-água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter o composto em título (88 mg) sob a forma de um sólido branco.
Análise para C21H22N6O4 0,55 TFA:
Calculado: C, 54,71; H, 4,68; N, 17,32.
Determinado: C, 54,92; H, 4,70; N, 16,93. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -277-
Exemplo 138
Preparação de ácido /7-[[2-[[[3[[amino(cianoimino)metil]amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Adicionou-se hidróxido de sódio IN (3 ml) a uma solução agitada do composto do Exemplo 134 (285 mg) em metanol (3 ml) e THF (3 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas, evaporou-se e dissolveu-se o resíduo em água. Ajustou-se a solução resultante ao valor de pH de 4 com ácido clorídrico IN e extraiu-se com acetato de etilo/MeOH. Lavaram-se os extractos orgânicos com água, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter um sólido branco sujo. Purificou-se ainda o produto impuro por RPHPLC numa coluna Cl8 (eluente: TFA a 0,5%-água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter o composto em título (65 mg) sob a forma de um sólido branco.
Análise para C20H20N6O4 1,25 H20, 0,3 MeOH:
Calculado: C, 55,35; H, 5,42; N, 19,08.
Determinado: C, 55,70; H, 5,01; N, 18,69. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -278-
Exemplo 139
Preparação de ácido /?-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(etilamino)metil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Adicionou-se hidróxido de sódio IN (3 ml) a uma solução agitada do composto do Exemplo 135 (285 mg) em metanol (3 ml) e THF (3 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas, evaporou-se e
dissolveu-se o resíduo em água. Ajustou-se a solução resultante ao valor de pH de 4 com ácido clorídrico IN e extraiu-se com acetato de etilo/MeOH. Lavaram-se os extractos orgânicos com água, secou-se (Na2SC>4) e evaporou-se para se obter um sólido branco sujo. Purificou-se ainda o produto impuro por RPHPLC numa coluna Cl8 (eluente: TFA a 0,5%-água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter o composto em título (180 mg) sob a forma de um sólido branco.
Análise para C22H24N604 0,35 H20:
Calculado: C, 59,68; H, 5,62; N, 18,98.
Determinado: C, 59,80; H, 5,61; N, 18,59. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -279-
Exemplo 140
Preparação de 3S-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(metilamino)metil]-ami-no]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo
Adicionou-se EDC1 (382 mg, 2,0 mM) a uma solução agitada do produto do Exemplo J (436 mg, 2,0 mM), DL-/?-[(2-amino-l-oxoetil)amino]-4-pentinoato de etilo (624 mg, 2,0 mM) [preparado de acordo com o Exemplo 1 (Passos B, C e D) substituindo ácido DL-3-amino-3-(3-piridil)propiónico por uma quantidade equivalente de 3S-amino-4-pentinoato de etilo (J. Med. Chem., 1995, 38, 3378], trietilamina (2,0 ml) e DMAP (20 mg) em cloreto de metileno (20 ml) a 0°C. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 15 minutos, deixou-se atingir a temperatura ambiente e agitou-se então durante mais 16 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter uma goma oleosa que se dissolveu em acetato de etilo. Lavou-se a solução resultante com água, solução aquosa saturada de NaHCC>3 e água. Separou-se a fase orgânica, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter o produto impuro. Purificou-se ainda o produto impuro por RPHPLC numa coluna Cl8 (eluente: TFA a 0,5%-água/acetonitrilo) e liofílizou-se para se obter o composto em título (280 mg) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C17H18N6O4 0,45 TFA:
Calculado: C, 50,99; H, 4,41; N, 19,93.
Determinado: C, 51,28; H, 4,70; N, 19,72. -280-
Exemplo 141
Preparação de ácido 3S-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(metilamino)metil]-ammo]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico
Adicionou-se hidróxido de sódio IN (3 ml) a uma solução agitada do composto do Exemplo 140 (280 mg) em metanol (3 ml) e THF (3 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas, evaporou-se e dissolveu-se o resíduo em água. Ajustou-se a solução resultante ao valor de pH de 4 com ácido clorídrico IN e extraiu-se com acetato de etilo/MeOH. Lavaram-se os extractos orgânicos com água, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obterem sólidos branco sujo. Purificou-se ainda o produto impuro por RPHPLC numa coluna Cl8 (eluente: TFA a 0,5%-água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter o composto em título (122 mg) sob a forma de um sólido branco.
Análise para Ci7Hi8N604 0,45 TFA:
Calculado: C, 50,99; H, 4,41; N, 19,93.
Determinado: C, 51,28; H, 4,70; N, 19,72. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo 143
Preparação do sal trifluoroacetato de /?-[[2-[[[3-[[(cianoimino)-(2-piridinilmetil)amino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-benzenopropanoato de etilo
Sintetizou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 135 excepto que se substituiu o composto do Exemplo L por uma quantidade equivalente do composto do Exemplo O. Deste obteve-se o composto em título. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C28H29N7O4 1 TF A, 1 H20:
Calculado: Determinado: C, 54,63; H, 4,89; N, 14,86. C, 54,28; H, 4,58; N, 14,63. ___. v ( -282-
Exemplo 144
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido y3-[[2-[[[3-[ [(cianoimino)-(2-piridinilmetil)amino]metil] amino] feniljcarbonil] amino] acetil] -amino]-benzenopropanóico
Preparou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 136 excepto que se substituiu o composto do Exemplo 132 por uma quantidade equivalente do composto do Exemplo 143. Deste obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C26H25N7O4 2 TF A, 1 H20:
Calculado: C, 48,33; H, 3,92; N, 13,15.
Determinado: C, 48,21; H, 3,59; N, 13,19. -283 - C—«-1
Exemplo 145
Preparação do sal trifluoroacetato de y3-[[2-[[[3-[[(cianoimino)-(3-piridinilmetil)amino] metil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -benzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 135 excepto que se substituiu o composto do Exemplo L por uma quantidade equivalente do composto do Exemplo Q. Deste obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C28H29N7O4 1 TFA, 1 H2O:
Calculado: Determinado: C, 54,63; H, 4,89; N, 14,86. C, 54,24; H, 4,85; N, 14,41. -284- C—
Exemplo 146
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido /9-[[2-[[[3-[[(cianoimino)-(3-piridinilmetil)amino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]benzenopropanóico
Preparou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 136 excepto que se substituiu o composto do Exemplo 132 por uma quantidade equivalente do composto do Exemplo 145, para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C26H25N7O4 2 TF A, 0,25 H20:
Calculado: C, 49,22; H, 3,79; N, 13,39.
Determinado: C, 49,50; H, 4,05; N, 13,64. - 285 -
Exemplo 147
Preparação de /^[[2-[[(3-amino-4-clorofenil)carbonil]amino]ace-til]-amino]benzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 135 excepto que se substituiu o composto do Exemplo L por uma quantidade equivalente de ácido 3-amino-4-clorobenzóico para se obter o composto em título sob a forma de sólidos castanhos (rendimento de 93,5%). O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -286-
Exemplo 148
Preparação de β- [ [2- [ [ [4-cloro-3 -[[[[(1,1 -dimetiletoxi) carbonil]- amino]-[[(l,l-dimetiletoxi)carbonil]imino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]-benzenopropanoato de etilo
Adicionou-se HgCl2 (360 mg) a uma solução do produto do
Exemplo 147 (400 mg, 1,13 mM), N,N’-bis-Boc-tioureia (311 mg, 1,13 mM) [Edwin J. Iwanowicz et al, Synthetic Communications, 23 (10) (1993), 1443-1445], DMF (6 ml), trietilamina (0,6 ml) a 0-5°C. Agitou-se a mistura reaccional a 0-5°C durante 15 minutos e deixou-se aquecer até à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas. Diluiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo (50 ml) e filtrou-se através de celite em vazio. Concentrou-se o filtrado em vazio para se obter uma goma oleosa que se purificou por cromatografia rápida em coluna sobre silica utilizando acetato de etilo a 100% como eluente, para se obter o composto em título (254 mg) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C31H40N5O81,5 H20:
Calculado: C, 55,31; H, 6,44; N, 10,40.
Determinado: C, 55,17; H, 6,50; N, 10,56. -287- CL——<-(1,1
Exemplo 149
Preparação do sal trifluoroacetato de /?-[[2-[[[3-[(aminoimino-metil)-amino] -4-(clorofenil)carbonil] amino] acetil] amino] -benzenopropanoato de etilo
Adicionou-se TFA (9 ml) a uma solução agitada do Exemplo 148 (420 mg) em cloreto de metileno (5 ml) a 0°C. Aqueceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e agitou-se à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter o produto impuro. Purificou-se ainda o produto impuro por RPHPLC numa coluna Cl8 (eluente: TFA a 0,5%-H2O/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter o composto em título (68 mg) sob a forma de um sólido branco.
Análise para C21H24N5O4CI 1,0 TFA, 0,45 H20:
Calculado: C, 48,63; H, 4,60; N, 12,33.
Determinado: C, 48,28; H, 4,16; N, 12,13. -288- /4ct.
Exemplo 150
Preparação de ácido /?- [ [2-[ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] -4-(clorofenil)carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Preparou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 136 excepto que se substituiu o composto do Exemplo 132 por uma quantidade equivalente do composto do Exemplo 149 para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C19H20N5O4CI 1,5 TFA:
Calculado: Determinado: C, 44,87; H, 3,68; N, 11,89. C, 44,54; H, 3,80; N, 11,43. -289-
Exemplo 152
Preparação de /^[[2-[[(5-amino-2-clorofenil)carbonil]amino]-acetil]amino]benzenopropanoato de metilo
Preparou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 135 excepto que se substituiu o composto do Exemplo L por uma quantidade equivalente de ácido 3-amino-6-clorobenzóico para se obter o composto em título sob a forma de sólidos castanhos claros. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
-290-
Exemplo 153
Preparação de /H[2-[[[2-cloro-5-[[[[(l,l-dimetiletoxi)carbonil]-amino] [[(1,1 -dimetiletoxi)carbonil]imino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]benzenopropanoato de metilo
Preparou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 148 excepto que se substituiu o composto do Exemplo 146 por uma quantidade equivalente do composto do Exemplo 152 para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -291 -
Exemplo 154
Preparação de ácido /H[2-[[[2-cloro-5-[[[[(l,l-dimetiletoxi)-carbonil]amino]-[[(l,l-dimetiletoxi)carbonil]imino]metil]amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Preparou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 136 excepto que se substituiu o composto do Exemplo 132 por uma quantidade equivalente do composto do Exemplo 153 para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo 155
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido y#-[[2-[[[5-[(aminoiminometil)-amino]-2-clorofenil]carbonil]amino]acetil]amino]-benzenopropanóico
Preparou-se o composto em título respeitando o procedimento descrito no Exemplo 150 excepto que se substituiu o composto do Exemplo 149 por uma quantidade equivalente do composto do Exemplo 154 para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C19H20N5O4CI 1 TFA, 0,25 H20:
Calculado: Determinado: C, 47,02; H, 4,04; N, 13,06. C, 47,17; H, 3,85; N, 12,72. -293 - ,Ai t (λ
Exemplo 156
Prepararam-se os seguintes compostos, utilizando os procedimentos da revelação presente e partindo dos reagentes necessários: =Y 8 sY^Omf' R3 . Y1 . R7 . Et ou H 0 n-Bu Et ou H 0 i-Pr Et ou H 0 t-Bu Et ou H 0 n-Pr Et ou H 0 γ^^ Et ou H 0 γ^^ Et ou H 0 ciclohexilo Et ou H 0 ciclohexilmetilo Et ou H 0 CXa CXa
Et ou H S -294- R3 . Y1 . R7 . Et ou H s cilcohexilmetilo Et ou H s 3-piridilo 0 II Et ou H 0 u ο
Et ou H
S
Cl O
Et ou H
Et ou H
O
Ou.
Et ou H
; H
Et ou H
O -295 -
Υ1 .
Et ou H
Et ou H
Et ou H
O
Et ou H
O
Et ou H
O
Et ou H
O
Et ou H
O
R7 .
Et ouH
O
Et ou H
O
R Y1 . -296- H2N02S, C-------1 <Λ
Et ou H
O
R
MeC^S,
Ou
Et ou H
O
Et ou H
O
Et ou H
O
Et ou H
O '"Ou"o*
Et ou H
O
Br. ^
Et ou H
O
Et ou H
O
Ou
Et ou H
O
-297-
R Y1 Μβ2Ν,
R
Et ou H
O
F3CO
Et ou H
Et ou H
Et ou H
Et ou H
Et ou H
Et ou H
Et ou H
Et ou H
O
Ο
Et ou Η
Et ou Η
Et ou H
Et ou H
Et ou H
Et ou H Υ1 -298-
Me
O
O
O
Me OMe
F
«Λ
Exemplo AA
Preparação de
Preparou-se o composto acima seguindo o procedimento descrito no Exemplo E, substituindo a benzilamina pela p-aminometilbenzeno-sulfonamida. Obteve-se o composto acima sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo AB
Preparação de
Preparou-se o composto acima seguindo o procedimento descrito no Exemplo I, substituindo o composto do Exemplo E pelo composto do Exemplo R. Obteve-se o composto acima sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
-300- Exemplo AC
Preparação de
Preparou-se o composto acima seguindo o procedimento descrito no Exemplo 140, substituindo o composto do Exemplo J com N-t-Boc-glicina e substituindo o DL-y0-[(2-amino-l-oxoetil)amino]-4-pentinoato de etilo por DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)propionato de etilo. Obteve-se o composto acima sob a forma de uma goma oleosa. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo AD
Preparação de 0O2Et H2N—CH2'
Preparou-se 0 composto acima seguindo o procedimento descrito no Exemplo 161, substituindo o composto do Exemplo 159 pelo do Exemplo AC. Obteve-se o composto acima sob a forma de uma goma oleosa. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -301 -
At Wh
Exemplo 157
Preparação de 3S-[[2-[[[3-[[[[(4-(aminosulfonil)fenilmetil]amino]-(cianoimino)metil] amino] fenil] carbonil]amino] acetil] amino] -4-pentinoato de etilo
H
N-^^Y^COjEl
H
C I H
Preparou-se o composto em título seguindo o procedimento descrito no Exemplo 140, substituindo o composto do Exemplo J pelo do Exemplo AA. Obteve-se o composto acima sob a forma de uma goma oleosa. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -302-
Exemplo 158
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido 3S-[[2-[ [ [3 - [ [ [ [(4-(aminosulfonil)fenilmetil] amino] (cianoimino)metil] amino] fenil] -carbonil] amino] acetil]amino] -4-pentinóico
SO2NH2
Preparou-se o composto acima seguindo o procedimento descrito no Exemplo 141, substituindo o composto do Exemplo 140 pelo do Exemplo 157. Purificou-se o produto impuro por RPHPLC numa coluna Cl 8 (eluente: TF A a 0,5%-água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C23H23N706S.1,25 TFA:
Calculado: Determinado: C, 44,64; H, 3,86; N, 14,29. C, 44,85; H, 4,00; N, 14,36. -303-
Alt γ |3 ^ A
Exemplo 159
Preparação de /H[2-[[[3-[[amino(cianoimino)metil]amino]fenil]-carbonil] amino] acetil] amino] -3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto em título seguindo 0 procedimento descrito no Exemplo 140, substituindo o composto do Exemplo J pelo do Exemplo K e substituindo o DL-y3-[(2-amino-1 -oxoetil)amino]-4-pentinoato de etilo pelo composto do Exemplo AD. Obteve-se o composto acima sob a forma de uma goma oleosa.
Vw/ O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -304-
Exemplo 160
Preparação de ácido /5-[[2-[[[3-[[amino(cianoimino)metil]amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico
Preparou-se o composto em título seguindo o procedimento descrito no Exemplo 141, substituindo o composto do Exemplo 140 pelo do Exemplo 159. Purificou-se o produto impuro por RPHPLC numa coluna Cl8 (eluente: TFA a 0,5%/água/acetonitrilo) e liofilizou-se para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -305-
Exemplo 161
Preparação do sal trifluoroacetato de y£-[2[[[3-[[amino-(aminocarbonil)imino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo
Adiçionou-se ácido trifluoroacético (60 ml) a uma solução agitada do Exemplo 159 (2,65 g) em cloreto de metileno (120 ml). Agitou-se a mistura reaccional a 25°C durante 1 hora. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter um produto impuro que ao cristalizar a partir de éter permitiu obter o composto em título (2,02 g) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C21H22N5O4CI31,05 TFA:
Calculado: C, 43,31; H, 3,79; N, 10,98.
Determinado: C, 43,18; H, 3,81; N, 10,64.
Exemplo 162
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /5-[2-[[[3-[[amino(aminocarbonil)-imino]metil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,5 -diclorobenzenopropanóico
Preparou-se o composto em título seguindo o procedimento descrito no Exemplo 141, substituindo o composto do Exemplo 140 pelo composto do Exemplo 161. Obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C20H20N6O5CI2 1,25 TFA:
Calculado: Determinado: C, 42,37; H, 3,36; N, 13,18. C, 42,48; H, 3,46; N, 12,96. -307- C_cUl
Exemplo AE
Preparação de
Preparou-se o composto em título seguindo o procedimento descrito no Exemplo 141, substituindo o composto do Exemplo 140 pelo composto do Exemplo AC. Obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo AF
Preparação de
Adicionou-se 363 mg de 2-cloro-N,N-dimetilacetamida (363 mg, 3 mmole) a uma solução agitada do composto do Exemplo AE (954 mg, 33 - 308 -mmole), DMF (10 ml), K2C03 (1 g), Nal (129 mg) e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter uma goma oleosa, que ao cristalizar a partir de éter dietílico permitiu obter um sólido branco (AF) (610 mg). O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo AG
Preparação de
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento descrito no Exemplo 161, substituindo o composto do Exemplo 159 pelo composto do Exemplo AF. Obteve-se o composto em título sob a forma de uma goma oleosa. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -309- Aí
Exemplo 163
Preparação de y9-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de [(dimetilamino)carbonil]metilo
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento ^ descrito no Exemplo 132, substituindo o composto do Exemplo I por ácido m- guanidino-benzóico e substituindo o composto do Exemplo V pelo composto do Exemplo AG. Obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C23H26N6O3CI2 1,3 TFA:
Calculado: C, 44,85; H, 4,01; N, 12,28.
Determinado: C, 44,51; H, 3,88; N, 12,38. '•w' -310- A$:
Exemplo AH
Preparação de
N
SMe
Adicionaram-se cloroformiato de etilo (8 ml) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (150 ml) a uma solução agitada de sulfato de 2-metil-2-tiopseudoureia (11,1 g) em cloreto de metileno (150 ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 18 horas. Lavou-se a mistura reaccional com água, secou-se sobre Na2S04 e concentrou-se em vazio para se obter uma goma oleosa impura, que ao purificar-se por cromatografía rápida em coluna proporcionou o composto acima (9,8 g) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo 164
Preparação de
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento descrito no Exemplo 140, substituindo o composto do Exemplo J por 3-aminobenzoilglicina e substituindo DL-etil-y9-[(2-amino-l-oxoetil)amino]-4-pentinoato com éster tert-butílico de ácido 3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propiónico. Obteve-se o composto em título sob a forma de uma goma oleosa. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo 165
Preparação de 3,5-dicloro-/5-[[2-[[[3-[[[(etoxicarbonil)amino]-[(etoxicarbonil)-imino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de 1,1- dimetiletilo
Adicionou-se o composto do Exemplo 164 (150 mg) a uma solução agitada do composto do Exemplo AH (250 mg) em DMF (2 ml), e trietilamina (150 mg). Arrefeceu-se a mistura reaccional até 0°C e agitou-se a 0°C durante 5 minutos. Tratou-se a mistura reaccional com HgCb (50 mg), e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter uma goma oleosa que por purificação adicional utilizando cromatografia rápida em coluna permitiu obter uma goma oleosa. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
-313-
Exemplo 166
Preparação de ácido 3,5-dicloro-/?- [ [2-[ [ [3 - [ [ [(etoxicarbonil) amino] -[(etoxicarbonil)imino]metil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] - benzenopropanóico
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento descrito no Exemplo 160, substituindo o composto do Exemplo 159 pelo composto do Exemplo 165. Obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C25H27N508Cl2 0,5 H20, 0,25 TFA:
Calculado: Determinado: C, 48,31; H, 4,49; N, 11,05. C, 48,55; H, 4,21; N, 10,84.
Exemplo AI
Preparação de .HCl
C
Adicionou-se cloreto de hidrogénio gasoso a uma suspensão agitada de ácido 3-amino-4-clorobenzóico (25,0 g, 157 mmole) em MeOH (300 ml) a 0°C, até que a solução metanólica se encontrasse saturada. Agitou-se a mistura reaccional a 0-5°C durante 30 minutos, deixou-se alcançar a temperatura ambiente, e agitou-se em seguida durante mais 4 dias. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio e triturou-se o sólido branco resultante com éter dietílico para se obter o composto acima; 26,2 g de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo AJ
Preparação de
Adicionou-se cloreto de mercúrio (II) (30,1 g, 111 mmole) a uma solução de bis-t-Boc-tioureia (24,8 g, 90 mmole) e 3-amino-4-clorobenzoato de -315-
metilo (20 g, 90 mmole) em dimetilformamida (120 ml) e trietilamina (45 ml). Agitou-se a mistura reaccional durante 15 minutos a 0°C, deixou-se atingir a temperatura ambiente e agitou-se por mais 2 horas. Diluiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo (600 ml) e filtrou-se a suspensão resultante sob pressão reduzida. Concentrou-se o filtrado, para se obter uma goma oleosa que se purificou por cromatografia sobre sílica (eluente: acetato de etilo/heptano a 20:80) para se obter o composto acima (8,6 g) sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Exemplo AK
Preparação de
Dissolveu-se o produto do Exemplo AI em MeOH (3 mL) e adicionou-se NaOH 1M (14 mL), à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio e dissolveu-se o resíduo em água; lavou-se com éter. Acidificou-se a fase aquosa até um valor de pH = 3 com HC1 IN. Formou-se um precipitado branco, filtrou-se e lavou-se com água e éter e secou-se para se obterem 1,2 g de sólido branco. O RMN era consitente com a estrutura apresentada. -316-
Exemplo AL
Preparação de
Adicionou-se TFA (1 mL) a uma solução do produto do Exemplo AJ (550 mg, 1,33 mmole) em CH2CI2 (4 mL) a 0°C. Retirou-se 0 banho de gelo após a adição e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas. Concentrou-se a mistura reaccional em vazio para se obter um óleo incolor. A este adicionou-se solução de HC1 4N em dioxano (2 mL) e formou-se um precipitado branco. Concentrou-se a solução em vazio para se obterem 280 mg do produto pretendido sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -317-
Exemolo 167
Preparação de β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-4-clorofenil]carbonil] -amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo
Arrefeceu-se uma solução do composto do Exemplo AL (500 mg) e 1-metilpiperidina (400 mg), em DMF (20 ml) até 0°C, e adicionou-se cloroformiato de isobutilo (274 mg) sob uma atmosfera de azoto. Deixou-se agitar a mistura reaccional durante 5 minutos antes de se adicionar uma solução do composto do Exemplo AD (866 mg) em DMF (2 ml). Deixou-se aquecer lentamente a mistura reaccional até à temperatura ambiente durante 16 horas. Interrompeu-se a solução com água e extraiu-se com acetato de etilo. Lavaram-se os extractos orgânicos com água, secou-se sobre Na2S04 e concentrou-se em vazio. Purificou-se o resíduo por RPHPLC e liofílizou-se para se obter o produto pretendido sob a forma de uma goma oleosa (329 mg).
Análise para C21H22N5O4CI3 1 TF A, 0,5 H20:
Calculado: C, 43,31; H, 3,79; N, 10,98.
Determinado: C, 43,18; H, 3,81; N, 10,64. -318- d-—-*-v( «Ί
Exemplo 168
Preparação do sal trifhioroacetato de ácido /H[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-4-clorofenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento descrito no Exemplo 141, substituindo o composto do Exemplo 140 pelo do Exemplo 167. Obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para C19H18N5O4CI3. 1 TFA:
Calculado: Determinado: C, 41,98; H, 3,19; N, 11,66. C, 42,14; H, 3,30; N, 11,18.
Exemplo 169
Preparação de
·Ν/νγ"Ννγ^οο2Εΐ A 0 8 c
I
H
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento descrito no Exemplo 140, substituindo o composto do Exemplo J pelo do Exemplo K. Obteve-se o composto em título sob a forma de uma goma oleosa. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para Ci8H2oN604 0,6 TFA:
Calculado: Determinado: C, 50,93; H, 4,59; N, 18,56. C, 50,69; H, 4,71 ;N, 18,32. t-i -320-
Exemplo 170
Preparação de 3S-[[2-[[[3-[[amino[(aminocarbonil)imino]metil]-amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo
H
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento descrito no Exemplo 161, substituindo o composto do Exemplo 159 pelo do Exemplo 169. Obteve-se o composto em título sob a forma de uma goma oleosa. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -321 - A^b^rt· C—(‘i
Exemplo 171
Preparação de hidrato do sal trifluoroacetato de ácido 3S-[[2-[[[3-[[amino-[(aminocarbonil)imino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico
CO2H
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento descrito no Exemplo 141, substituindo o composto do Exemplo 140 pelo composto do Exemplo 170. Obteve-se 0 composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada. -322-
Exemplo 172
Preparação de 3 S- [ [2- [ [ [3- [(aminoiminometil)amino] -4-clorofenil]-carbonil]-amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo
C02Et
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento descrito no Exemplo 167, substituindo o composto do Exemplo AD por DL-etil-/?-[(2-amino-1 -oxoetil)amino]-4-pentinoato de etilo. Obteve-se o composto em título sob a forma de uma goma oleosa. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
O -323 -
Exemplo 173
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]-4-clorofenil] carbonil] amino] acetil] amino]-4-pentinóico
Preparou-se o composto em título utilizando o procedimento descrito no Exemplo 141, substituindo o composto do Exemplo 140 pelo composto do Exemplo 172. Obteve-se o composto em título sob a forma de um sólido branco. O RMN era consistente com a estrutura apresentada.
Análise para Ci5H]6N504Cl, 1 TFA, 0,5 H20:
Calculado: C, 41,77; H, 3,71; N, 14,33.
Determinado: C, 41,84; H, 3,64; N, 13,94. -324- M h- r^
Exemplo 174
Preparação do sal trifluoroacetato de (+)-/?-[ [2- [[ [3 -[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,4-diclorobenzenopropanoato de etilo
Passo A
Preparou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3,4-diclorofenil)-propionato de etilo de acordo com o Exemplo 1, Passos AeB, substituindo a 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A por uma quantidade equivalente de 3,4-diclorobenzaldeído (Aldrich).
Passo B
Adicionou-se cloroformiato de isobutilO (200 mg, 0,0015 mmole) a cloreto de ácido m-guanidinohipúrico (Exemplo M) (400 mg, 0,0015 mmole) e N-metilmorfolina (150 mg, 0,0015 mmole) em DMF anidra (6 mL); à temperatura de banho de gelo. Após agitação durante 5 minutos, adicionou-se-lhe uma suspensão do produto do Passo A acima, cloridrato de DL-3-amino-3-(3,4-dicloro-fenil)-propionato de etilo (440 mg, 0,0015 mmole), e N-metilmorfolina (150 mg, 0,0015 mmole) em DMF anidra (6 mL) numa só porção, à temperatura de banho de gelo. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em vazio num banho de gelo a 78°C e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (520 mg) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -325-
Mks-ttr'
Exemplo 175
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,4-diclorobenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (118 mg, 0,003 mole) ao produto do Exemplo 174 (420 mg, 0,0007 mole) em H20 (8 mL) e CH3CN (8 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Reduziu-se o valor do pH até ~3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (390 mg) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 176
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-y?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)]carbonil]amino]acetil]amino]-3,4-diclorobenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 38, substituindo o 3,5-bis-trifluorometilbenzaldeído pela quantidade equivalente de 3,5-diclorobenzaldeído (Aldrich).
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -327-
Exemplo 177
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]-5-(triflurometil)fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (157 mg, 0,0037 mole) ao produto do Exemplo 176 (620 mg, 0,00094 mole) em H20 (10 mL) e CH3CN (10 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas. Reduziu-se o valor do pH até ~3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (560 mg) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. - 328 -
Exemplo 178
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/?-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-il)amino] fenil] carb onil] amino] acetil] amino] -3,5-bis(trifluorometil)-benzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 9, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A pela quantidade equivalente de 3,5-bis-trifluorometilbenzaldeído (Aldrich) e actuando tal como no Exemplo 9, Passo B.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -329-
Exemplo 179
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y5-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-il)amino] fenil] carboniljamino] acetil] amino]-3,5-bis(trifluorometil)- benzenopropanóico
Adicionou-se Li OH (88 mg, 0,0021 mole) ao produto do Exemplo 178 (360 mg, 0,0005 mole) em H20 (8 mL) e CH3CN (8 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 3 horas. Reduziu-se o valor do pH até ~3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (300 mg) (após liofílização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -330-
Exemplo 180
Preparação do sal trifluoroacetato de (+)-/?-[[2-[[[3- [(aminoiminometil)amino] -fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-2,5-dimetilbenzenopropanoato de etilo
O
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 174, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A por uma quantidade equivalente de 2,5-dimetilbenzaldeído (Aldrich).
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -331 -
Exemplo 181
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-2,5-dimetilbenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (215 mg, 0,005 mole) ao produto do Exemplo 180 (710 mg, 0,0013 mole) em H2O (10 mL) e CH3CN (10 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2,5 horas. Reduziu-se 0 valor do pH até ~3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (600 mg) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 182
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/f-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3 -clorobenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 174, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A por uma quantidade equivalente de 3-clorobenzaldeído (Aldrich).
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. - 333 - C—--Í"1
Exemplo 183
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3 -clorobenzenopropanóico
O
Adicionou-se LiOH (880 mg, 0,02 mole) ao produto do Exemplo 182 (720 mg, 0,0013 mole) em H2O (15 mL) e CH3CN (10 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Reduziu-se o valor do pH até ~2 com TFA e isolou-se 0 produto por RPHPLC para se obter o composto em título (550 mg) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 184
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/?-[[2-[[[3 -[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-bromobenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 174, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A por uma quantidade equivalente de 3-bromobenzaldeído (Aldrich).
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 185
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]feml]carbonil]amino]acetil]amino]-3-bromobenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (210 mg, 0,005 mole) ao produto do Exemplo 184 (1,0 mg, 0,00165 mole) em H20 (15 mL) e CH3CN (10 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Reduziu-se o valor do pH até ~2,5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (460 mg) (após liofílização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. - 336 -
Exemplo 186
Preparação do sal trifhioroacetato de (±)-y9-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carb onil] amino] acetil] amino] -4-bromobenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 174, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A por uma quantidade equivalente de 4-bromobenzaldeído (Aldrich).
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -337-
Cl~-c( «-A
Exemplo 187
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-bromobenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (290 mg, 0,0069 mole) ao produto do Exemplo 186 (1,3 mg, 0,0023 mole) em H20 (15 mL) e CH3CN (15 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Reduziu-se o valor do pH até ~2,5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (1,1 g) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. - 338 -
Exemplo 188
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/^[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,5 -diclorobenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 11, substituindo o 3,4-piridinacarboxaldeído no Exemplo 1, Passo A por uma quantidade equivalente de 3,5-diclorobenzaldeído (Aldrich) e seguindo a técnica do Exemplo 11, Passo B.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
C~*—»- (*·A - 339-
Exemplo 189
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/3-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino] feniljcarbonil] amino] acetil] amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (192 mg, 0,0046 mole) ao produto do Exemplo 188 (370 mg, 0,00057 mole) em H20 (20 mL) e CH3CN (15 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 3 horas. Reduziu-se o valor do pH até ~2,5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (280 mg) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -340-
Exemplo 190
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/?-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-il) amino] fenil] carbonil]amino]acetil] amino] -3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 9, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A por uma quantidade equivalente de 3,5-diclorobenzaldeído (Aldrich) e seguindo a técnica do Exemplo 9, Passo B.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -341 -
Exemplo 191
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazol-2 -il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,5 -diclorobenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (54 mg, 0,0013 mole) ao produto do Exemplo 190 (200 mg, 0,00032 mole) em H20 (10 mL) e CH3CN (10 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Reduziu-se o valor do pH até ~2,5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o produto em título (190 mg) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -342- b
. I. 4. f H
í ta
Exemplo 192
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/7- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] -fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-dimetilbenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 174, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A por uma quantidade equivalente de 3,5-dimetilbenzaldeído (Lancaster).
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -343-
Exemplo 193
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,5-dimetilbenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (221 mg, 0,005 mole) ao produto do Exemplo 192 (730 mg, 0,0013 mole) em H20 (10 mL) e CH3CN (10 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Reduziu-se o valor do pH até ~2,5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (570 mg) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -344-
Exemplo 194
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]- fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-dimetoxibenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 174, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A por uma quantidade equivalente de 3,5-dimetoxibenzaldeído (Aldrich).
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -345- -345-
*ί
Exemplo 195
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino]acetil]amino] -3,5 -dimetoxibenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (230 mg, 0,0055 mole) ao produto do Exemplo 194 (800 mg, 0,00014 mole) em H20 (20 mL) e CH3CN (8 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Reduziu-se o valor do pH até ~3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (670 mg) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -346- k*- £1——v (
Exemplo 196
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)ammo]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de (2,2- dimetil-1 -oxopropoxi)metilo
Passo A
Preparou-se ácido DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)propiónico de acordo com a metodologia do Exemplo 1, Passo A, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A por uma quantidade equivalente de 3,5-diclorobenzaldeído (Aldrich). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se NaOH (0,52 g, 0,013 mole) em H20 (13 mL) ao produto do Passo A (3,0 g, 0,0128 mole) em dioxano (25 mL) e H20 (13 mL), à temperatura de banho de gelo. Após agitação à temperatura de banho de gelo durante 10 minutos, adicionou-se-lhe anidrido de BOC (3,0 g, 0,014 mole) à temperatura de banho de gelo. Agitou-se então a mistura reaccional durante 2 horas à temperatura ambiente. Após a remoção do dioxano em vazio, arrefeceu-se -347- 1?Λ- Υ Í a solução aquosa num banho de gelo e reduziu-se o valor do pH até 2,5 com KHSO4 depois de se lhe sobrepor uma camada de acetato de etilo. Separou-se a fase de acetato de etilo e extraiu-se a fase aquosa mais duas vezes com acetato de etilo. Lavaram-se as fases de acetato de etilo combinadas com H20 (3X), secou-se sobre MgS04 e retirou-se o solvente em vazio. Suspendeu-se 0 resíduo em acetato de etilo a 5%/hexano de um dia para o outro resultando num sólido branco. Filtrou-se este sólido, lavou-se com acetato de etilo a 10%/hexano e secou-se para se obter ácido N-BOC-DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propiónico (2,9 g) sob a forma de um sólido branco.
Passo C
Adicionou-se KOH (87%) (0,5 g, 0,0075 mole) ao produto do Passo B (2,5 g, 0,0075 mole) em acetona (30 mL) e H20 (5 mL). A este adicionou-se pivalato de clorometilo (1,3 g, 0,0084 mole) (Aldrich), seguido por Nal (190 mg). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro com aquecimento ao refluxo. Retirou-se o solvente em vazio. Dissolveu-se o resíduo em éter. Lavou-se o éter com solução aquosa saturada de NaHC(>3 (2X), H20 (3X), secou-se sobre MgS04 e retirou-se o solvente em vazio para se obter N-BOC-DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)propionato de pivaloíloximetilo (2,92 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo D
Adicionou-se HC14M em dioxano (Aldrich) em excesso ao produto do Passo C (2,92 g, 0,0065 mole). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente de um dia para o outro. Retirou-se o solvente em vazio e suspendeu-se o resíduo 2X em éter de petróleo/éter isopropílico (50:50), e depois IX com éter -348-
Mh
de petróleo (decantam-se os solventes a cada vez). Secou-se o sólido em vazio para se obter cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)propionato de pivaloiloximetilo (2,0 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo E
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 174, Passo B, substituindo o produto do Exemplo 174, Passo A por uma quantidade equivalente do produto do Passo D acima e seguindo a técnica do do Exemplo 174, Passo B. Isolou-se o composto em título sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -349-
Exemplo 197
Preparação de (±)-3,5-dicloro-/^[[2-[[[3-[(cianoimino)-(metilamino)metil]-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] aminojbenzenopropanoato de etilo
Passo A
Preparou-se cloridrato de /?-[(2-aminoacetil)amino]-(3,5-diclorofe-nil)-3-propanoato de etilo de acordo com a metodologia do Exemplo 1, Passos A-D, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A por uma quantidade equivalente de 3,5-diclorobenzaldeído. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se EDCI (600 mg, 0,0031 mole) ao produto do Passo A acima (1,1 g, 0,0031 mole), ao produto do Exemplo J (680 mg, 0,0031 mole), DMAP (38 mg, 0,00031 mole), trietilamina (320 mg, 0,0031 mole) e cloreto de metileno (12 mL), à temperatura de banho de gelo. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura de banho de gelo durante 15 minutos e depois à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após se retirar o solvente em vazio, dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo. Lavou-se o acetato de etilo com solução aquosa saturada de NaHCOs (IX), H20 (2X), secou-se sobre MgSCL e retirando-se então o solvente em vazio. Suspendeu-se o sólido resultante em acetato de etilo:éter isopropílico (1:3) durante 1 hora. Filtrou-se o sólido resultante, lavou-se com éter isopropílico e filtrou-se em vazio para se obter o composto em título (1,35 g) sob a forma de um sólido branco. -350-
Exemplo 198
Preparação de ácido (±)-3,5-dicloro-/^[[2-[[[3-[(cianoimino)-(metilamino)metil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico
co2h “Cl
Adicionou-se LiOH (240 mg, 0,0057 mole) ao produto do Exemplo 197, Passo B (1,18 g, 0,0023 mole) em H20 (15 mL) e CH3CN (15 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 3 horas. Reduziu-se o valor do pH até ~3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (1,02 g) (após liofilização) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -351 -
Exemplo 199
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -benzenopropanoato de etilo
Passo A
Adicionaram-se 1,3-diaminopropano (2,3 g, 0,031 mole), trietilamina (3,9 g, 0,03 mole) e DMAP (420 mg) ao produto do Exemplo 23, Passo A (10,1 g, 0,03 mole) em DMF (15 mL). Aqueceu-se a mistura reaccional a 140-150°C durante 4,5 horas (precipitado espesso). Após arrefecimento até à temperatura ambiente, adicionou-se H20 (30 mL) e, após agitação durante 15 minutos, fíltrou-se o precipitado e lavou-se com H20. Suspendeu-se o precipitado em H20 e tomou-se ácido com HC1 concentrado. Formou-se uma solução. Após se retirar o solvente por liofilização, suspendeu-se o resíduo 2X com éter isopropílico (que se retirou por decantação de cada vez). Após secagem em vazio, o rendimento em cloridrato de ácido 3-(2-amino-l,4,5,6-tetrahidropirimidina)benzóico foi de 4,0 g, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se cloroformiato de isobutilo (470 mg, 0,0035 mole) ao produto do Passo A acima (884 mg, 0,0035 mole) e NMM (350 mg, 0,0035 mole) em DMF anidra (6 mL), à temperatura de banho de gelo. Após agitação durante 5 minutos, adicionou-se uma suspensão do produto do Exemplo 197, Passo A (1,07 g, 0,003 mole) e NMM (300 mg, 0,003 mole) em DMF anidra (6 mL), à temperatura de banho de gelo. Agitou-se a solução de um dia para o outro à temperatura ambiente. Retirou-se o solvente em vazio e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (820 mg após liofilização) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -353 - M fe'-1'5'1
Exemplo 200
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-y3-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]ammo]- benzenopropanóico
NH N
Adicionou-se LiOH (830 mg, 0,005 mole) ao produto do Exemplo 199, Passo B (780 mg, 0,0012 mole) em H20 (10 mL) e CH3CN (10 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Reduziu-se o valor do pH até —2,5 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (560 mg após liofilização) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -354-
Exemplo 201
Preparação de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[[[[(aminocarbonil)imino]metilamino]metil]-amino]fenil]carbonil]ammo]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico
Adicionou-se TF A (6 mL) ao produto do Exemplo 198 (300 mg, 0,0006 mole) em CH3CN (10 mL) e H20 (25 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 semanas. Isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (290 mg após liofilização) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. - 355 -
At
Exemplo 202
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-yS-[[2-[[[3-[(3,4-dihidro-2H-pirrol-5-il)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 16, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3,5-diclorobenzaldeído (Aldrich) que se utilizou para se sintetizar o produto do Exemplo 1, Passo D, utilizado no Exemplo 11, Passo B. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -356-
Exemplo 203
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(3,4-dihidro-2H-pirrol-5-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-dicloro-diclorobenzenopropanóico
Adicionou-se LiOH (345 mg, 0,0082 mole) ao produto do Exemplo 202 (1,27 g, 0,002 mole) em H20 (15 mL) e CH3CN (15 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Reduziu-se o valor do pH até 2,7 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (80 mg após liofilização) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 204
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[(2,3,4,5-tetrahidropiridin-6-il)amino] fenil] carbonil] aminojacetil] amino] -benzenopropanoato de etilo
Passo A
Adicionou-se cloridrato de ácido 3-aminobenzóico (Aldrich) (10 g, 0,0576 mole) a O-metilvalerolactima (Oakwood) (6,9 g, 0,061 mole) em CH3CN (75 mL). Após aquecimento breve para se formar uma solução, agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o precipitado resultante, lavou-se com CH3CN e secou-se em vazio para se obter cloridrato de ácido 3-(l-aza-2-amino-l-ciclohexeno)benzóico (12,2 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 199, substituindo o produto do Exemplo 199, Passo A por uma quantidade equivalente do produto do Passo A acima, e seguindo a técnica do Exemplo 199, Passo B.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -358-
l
Exemplo 205
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-/^[[2-[[[3-[(2,3,4,5-tetrahidropiridin-6-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]- benzenopropanóico
Adicionou-se Li OH (236 mg, 0,0056 mole) ao produto do Exemplo 204, Passo B (890 mg, 0,0014 mole) em H20 (20 mL) e CH3CN (20 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Reduziu-se o valor do pH até ~3 com TFA e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (320 mg após liofilização) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -359- Μ
Exemplo 206
Preparação de ácido (±)-/9-[[2-[[[3-[(aminotioxometil)ammo]fenil]carbonil]-amino] acetil] amino] -3,5 - di clorobenzenopropanóico
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 198, substituindo o produto do Exemplo J no Exemplo 197, Passo B, por uma quantidade equivalente de l-(3-carboxifenil)-2-tioureia (Transworld). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. - 360- Αι ί'^κί-' C___<-t ·Ί
Exemplo 207
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,4-dibromobenzenopropanóico
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 175, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3,4-dibromobenzaldeído (Lancaster). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -361 - -361 -
Exemplo 208
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-3 -fluoro-5-(trifluorometil)- benzenopropanóico
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 175, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3-fluoro-5-trifluorometilbenzaldeído (Lancaster).
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Cl -362-
Exemplo 209
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y5-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil]amino] -3 -bromo- 5-fluorobenzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se butil-lítio 1,6 M em hexano (Aldrich) gota a gota a 1-fluoro-3,5-dibromobenzeno (Lancaster) (10 g, 0,0394 mole) em éter etílico anidro (50 mL), num balão seco à chama, sob N2 e a -78°C, mantendo a temperatura abaixo dos -78°C durante a adição. Após completar-se a adição, agitou-se a mistura reaccional a —78°C durante mais 50 minutos. Aqueceu-se a mistura reaccional lentamente até aos —30°C, adicionando-se então DMF anidra (3,6 g, 0,049 mole) gota a gota e a uma cadência tal que a temperatura se mantivesse abaixo dos -20°C.
Após completar-se a adição, elevou-se a temperatura lentamente até 0°C durante uma hora, deixando-se com agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente. Verteu-se a mistura reaccional lentamente por sobre uma solução aquosa fria de HC1 a 10% (80 ml). Após agitação durante 15 minutos, separou-se a fase de éter e lavou-se o éter com H20 (4X), secou-se sobre MgS04 e retirou-se o solvente em vazio para se obter 3-bromo-5-fluorobenzaldeído (8,16 - 363 -
g) sob a forma de um líquido âmbar. Os EM e RMN eram „ . , A n ldrn consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 175, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3-bromo-5-fluorobenzaldeído (Passo A acima). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -364-
Exemplo 210
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,5 - dibromobenzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se hexametilenotetramina (Aldrich) a 3,5-dibromobenzaldeído (Lancaster) (20 g, 0,061 mole) em H20 (27 mL) e ácido acético arrefecido (27 mL). Aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo durante 2 horas. Adicionou-se então HC1 concentrado (22 mL) e manteve-se a temperatura de refluxo durante 30 minutos. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, colocou-se a mistura reaccional em H20 (230 mL) e agitou-se durante 10 minutos. Filtrou-se o precipitado resultante, lavou-se com H20 e secou-se para se obter 3,5-dibromobenzaldeído (11,45 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 175, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3,5-dibromobenzaldeído (Passo A acima). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -365 -
Exemplo 211
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dibromo-/?-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino] fenil] carbonil] amino]acetil] amino] - benzenopropanóico n
Passo A
Preparou-se cloridrato de /^[(2-aminoacetil)amino]-(3,5-dibromofenil)-3-propanoato de etilo de acordo com a metodologia do Exemplo 1, Passos A-D, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3,5-dibromobenzaldeído (Exemplo 210, Passo A). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 200, substituindo o produto do Exemplo 197, Passo A no Exemplo 199, Passo B por uma quantidade equivalente do produto do Exemplo 211, Passo A (acima). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
At -366- C— l
Exemplo 212
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-bromo-5-metilbenzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se peróxido de benzoílo (3,04 g, 0,013 mole) a 5-bromo-m-xileno (24,03 g, 0,13 mole) em benzeno (125 mL). Aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo num balão de fundo arredondado de 250 mL. Adicionou-se N-bromosucinimida (18,15 g, 0,10 mole) em porções durante 15 minutos. Após 2 horas, descontinuou-se o aquecimento e deixou-se arrefecer a mistura reaccional até à temperatura ambiente. Retirou-se o sólido precipitado por filtração e concentrou-se o filtrado. Dissolveu-se o resíduo em hexano e retirou-se o sólido adicional por filtração. Passou-se o filtrado através de uma pequena almofada de silicagel e concentrou-se o filtrado. Triturou-se o óleo resultante com MeOH sobre gelo para se obter brometo de 3-bromo-5-metilbenzilo (7,34 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se hexametilenotetramina (4,50 g, 32 mmole) a brometo -367-
de 3-bromo-5-metilbenzilo (Passo A acima) (5,49 g, 20 mmole) em ácido acético arrefecido (9,0 mL) e H20 (9 mL), e agitou-se a mistura reaccional ao refluxo durante 2 horas. Adicionou-se HC1 concentrado (7,0 mL) e colocou-se a mistura reaccional à temperatura de refluxo durante 15 minutos adicionais. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, diluiu-se a mistura reaccional com H20 (75 mL) e extraiu-se com éter (150 mL). Lavou-se a fase de éter com H20 (3 X 25 mL), NaOH a 10% (2 X 50 mL) e secou-se sobre MgS04. Retirou-se o éter em vazio e cromatografou-se o resíduo em silicagel fazendo-se a eluição com hexano e Et20 a 10%/hexano para se obter 3-bromo-5-metilbenzaldeído (2,80 g) sob a forma de um óleo amarelo claro que se solidificou após se deixar repousar. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo C
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 175, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3-bromo-5-metilbenzaldeído (Passo B acima). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -368 -
M
*-λ
Exemplo 213
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?- [ [2-[ [ [3 - [(aminoiminometil)-amino]-5-(trifluorometil)fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-dibromobenzenopropanóico
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 39, substituindo o 3,5-bis-trifluorometilbenzaldeído no Exemplo 38 pela quantidade equivalente de 3,5-dibromobenzaldeído (Exemplo 210, Passo A). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -369- -369-
(
Exemplo 214
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/3-[[2-[[[3 - [(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-bromo-5-clorobenzenopropanóico
Passo A A-78°C, adicionou-se butil-lítio 1,6 M em hexano, gota a gota, a 1-cloro-3,5-dibromobenzeno (Esprit) (20 g, 0,074 mole) em éter etílico anidro (150 mL), num balão seco à chama, sob N2, mantendo a temperatura abaixo dos -78°C, aquecendo-se então até aos -30°C. Adicionou-se DMF (6,8 g, 0,092 mole) gota a gota, mantendo a temperatura abaixo dos -20°C. Depois de se completar a adição, aqueceu-se lentamente a mistura reaccional a 0°C, aquecendo-se então de um dia para 0 outro à temperatura ambiente. Verteu-se lentamente a mistura reaccional por sobre solução aquosa arrefecida de HC1 a 10% (160 mL). Após agitação durante 15 minutos, separou-se o éter, lavou-se com H20 (4X), secou-se sobre MgS04 e retirou-se 0 solvente em vazio para se obter 3-bromo-5-clorobenzaldeído (13 g) sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 175, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A por uma quantidade equivalente de 3-bromo-5-clorobenzaldeído (Passo A acima). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -370-
At Wh
Exemplo 215
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3-bromo-5-cl0ro-/?-[[2-[[[3-[(1 >4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] - benzenopropanóico
Passo A
Preparou-se cloridrato de β- [(2-aminoacetil) amino]-(3 -bromo- 5-clorofenil)-3-propanoato de etilo de acordo com a metodologia do Exemplo 1, Passos A-D, substituindo o 3-piridinacarboxaldeído do Exemplo 1, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3-bromo-5-clorobenzaldeído (Exemplo 214, Passo A). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 200, substituindo o produto do Exemplo 197, Passo A no Exemplo 199, Passo B, por uma quantidade equivalente do produto do Passo A (acima). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -371 - Μ
Exemplo 216
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] - 5 - (trifluorometil) fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3 -bromo- 5- clorobenzenopropanóico
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 39, substituindo o 3,5-bis-trifluorometilbenzaldeído do Exemplo 38 por uma quantidade equivalente de 3-bromo-5-clorobenzaldeído (Exemplo 214, Passo A). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 217
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -benzenopropanoato de [2-[2-[2-(2-hidroetoxi)etoxi]etoxi]etilo]
Adicionou-se carbonildi-imidazole (67 mg, 0,00041 mole) ao produto do Exemplo 200 (200 mg, 0,00033 mole) em DMA (1,5 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Adicionou-se então tetraetilenoglicol (214 mg, 0,0011 mole) e agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro a 60°C. Arrefeceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter o composto em título (120 mg após liofilização) sob a forma de um sólido higroscópico branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -373 - C—Λ
Exemplo 218
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-y3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de [2-[2-[2-(2- hidroetoxi)etoxi] etoxi] etilo]
O
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 217, substituindo o produto do Exemplo 200 por uma quantidade equivalente do produto do Exemplo 27. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 219
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-bromo-5-iodobenzenopropanóico H2
Passo A
Adicionou-se metanol (40 mL) a um balão com o fundo arredondado de 250 mL seguido por 60 mL de uma solução saturada com ácido clorídrico anidro. Adicionou-se então ácido 3-bromo-5-iodobenzóico (Aldrich) (5,02 g, 0,015 mole) e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 6 horas. Colocou-se a mistura reaccional em solução saturada de NaHC03 (700 mL). Extraiu-se a mistura 3X com cloreto de metileno (100 mL). Combinaram-se as fases orgânicas, secou-se sobre MgS04 e concentrou-se em vazio para se obter metil-5-bromo-3-iodobenzoato (5,08 g) sob a forma de um sólido cor de rosa. PF = 55-57°C. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se hidreto de di-isobutilalumínio (5,50 mL, 0,03 mole), gota a gota durante dois minutos, a 5-bromo-3-iodobenzoato de metilo (Passo A acima) (5,01 g, 0,015 mole) em cloreto de metileno anidro (100 mL), a -78°C. -375-
Agitou-se a mistura durante 1 hora deixando-se então aquecer até 0°C. Colocou-se a solução da reacção em 600 mL de HC1 3N arrefecido, e extraiu-se 3X com cloreto de metileno (150 mL). Combinaram-se as fases orgânicas, secou-se sobre MgS04 e concentrou-se em vazio para se obter álcool 5-bromo-3-iodobenzílico (4,54 g) sob a forma de um sólido branco. PF = 110-112°C. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo C
Agitou-se magneticamente álcool 5-bromo-3-iodobenzílico (3,01 g, 9,6 mmole) num balão com o fundo arredondado de 50 mL e diluiu-se com 15 mL de cloreto de metileno anidro para se obter uma solução turva. Tamponizou-se então o balão da reacção e o fixou-se a rolha de septo com um arame.
Adicionou-se cloreto de metileno anidro (15 mL) a um balão com o fundo arredondado de 100 mL em separado que se apetrechou com um dedo frior. Condensou-se dióxido de azoto (1,72 g, 18,7 mmole) na solução de cloreto de metileno a -20°C.
Arrefeceu-se a solução de álcool benzílico até 0°C e transferiu-se a solução de dióxido de azoto/cloreto de metileno, por uma cânula, para o balão com a mistura reaccionalm sob uma atmosfera estática de azoto. Agitou-se magneticamente a solução reaccional a 0°C durante 15 minutos após a conclusão da transferência da solução de dióxido de azoto. Agitou-se a solução reaccional à temperatura ambiente durante 18 horas.
Ventilou-se num armário ventilado o balão com a mistura reaccional e expeliu-se o dióxido de azoto em excesso com uma corrente de azoto. Concentrou-se então a solução reaccional num evaporador rotativo e re- -376-
M
.1 ι-i suspendeu-se em 30 mL de éter. Lavou-se a solução de éter com 200 mL de bicarbonato de sódio a 10% numa ampola de decantação de 500 mL. Extraiu-se a solução aquosa resultante três vezes com 150 mL de éter. Combinaram-se as fases orgânicas, secou-se com sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se em vazio para se obterem 2,89 g de um sólido amarelo.
Isolou-se o produto por cromatografia rápida para se obter 5-bromo-3-iodobenzaldeído sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo D
Preparou-se o composto em título de acordo com a metodologia do Exemplo 175, substituindo o 3,4-diclorobenzaldeído do Exemplo 174, Passo A por uma quantidade equivalente de 5-bromo-3-iodobenzaldeído (Passo C, acima). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -377 -
Exemplo 220
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -benzenopropanoato de [2-[2-(2-hidroxietoxi)-etoxi]etoxi]etilo
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 217, substituindo o tetraetilenoglicol por uma quantidade equivalente de trietilenoglicol. Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. -378 -
Exemplo 222
Preparação de ácido (±)-J/5-[[2-[[[3-[(ammoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-2-hidroxi-4-metoxibenzenopropanóico
OCHs
Hb H2b
Acoplou-se cloridrato de (R,S)-4-amino-7-metoxi-hidrocumarina (1,26 g, 5,5 mmole), preparado a partir de 7-metoxicumarina (Aldrich) de acordo com J. Rico, Tett. Let, 1994, 35, 6599-6602, com GIHA (1,50 g, 5,5 mmole) utilizando substancialmente o procedimento e as proporções do Exemplo 86, Passo D. Da purificação por RPHPLC preparativa obteve-se o produto pretendido sob a forma de uma mistura de sais TFA de hidrocumarina (lactona) e de fenoxi-ácido sob a forma de um pó amarelo claro após liofilização (1,25 gm). Pode obter-se uma conversão essencialmente completa no ácido fenólico pretendido pela dissolução da mistura purificada em água, ajustando o valor do pH a 7-8 com solução aquosa diluída de NaOH até se completar a reacção por HPLC, e liofilizando (0,5 gm). Os EM e RMN eram consistentes com a forma de ácido fenol-carboxílico da molécula pretendida. - 379- M ία-'-*'*'1
Exemplo 223
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/3-[ [2- [[ [3 -[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-hidroxi-4-metoxibenzofuran-6- propanóico
Acoplou-se cloridrato de (R,S)-4-amino-8-metoxi-hidropsoralene (2,2 gm, 8,1 mmole), preparado a partir de 8-metoxipsoralene de acordo com J. Rico, Tett. Let.. 1994, 35, 6599-6602, com GIHA (2,0 g, 7,3 mmole) utilizando substancialmente os mesmos procedimento e proporções do Exemplo 86, Passo D. Isolou-se o produto por RPHPLC preparativa sob a forma do ácido fenólico pretendido. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura pretendida. -380
Exemplo 224
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-9H-fluoreno-2-propanóico
Passo A Ácido (±)-/f-amino-9H-fluoreno-2-propanóico
Combinou-se 2-fluoreno-carboxaldeído (5,0 gm, 26 mmole, Aldrich) com ácido malónico (3,25 gm, 31 mmole), acetato de amónio (2,4 gm, 31 mmole), e álcool isopropílico (70 mL) e aqueceu-se ao refluxo de um dia para o outro. Após o arrefecimento, recolheu-se o precipitado por filtração e concentrou-se. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B (±)-/^ Amino-9H-fluoreno-2-propanoato de etilo
Dissolveu-se o produto do Passo A em EtOH absoluto, adicionou-se gás seco de HC1 até à saturação, e aqueceu-se a mistura ao refluxo de um dia para o outro. Retiraram-se os voláteis e fraccionou-se o semi-sólido resultante entre acetato de etilo e água. Tomou-se a fase aquosa básica com a adição de NaOH 2,5 N e extraiu-se com EtOAc (2 X 200 mL). Secou-se a fase orgânica (NaSC>4 anidro) e adicionou-se HC1 gasoso seco até terminar a precipitação. Retiraram-se os voláteis até que restasse um resíduo semi-sólido. Este triturou-se com éter dietílico para se obter um sólido que se reuniu por filtração. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Preparou-se o composto em título do seguinte modo. Acoplou-se GIHA (0,41 gm, 1,5 mmole) com o produto do Passo B (0,42 gm, 1,5 mmole) acima utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 86, Passo D. Utilizou-se RPHPLC preparativa para se isolar o éster etílico do composto em título. Hidrolisou-se este produto (280 mg) para o ácido tratando uma solução aquosa de dioxano (1:1) com LiOH em excesso, acidificando-se com TFA e purificando-se o produto por RPHPLC. Obtém-se um sólido branco amorfo após liofilização (250 mg). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada. - 382-
Exemplo 225
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-dicloro-2- hidroxibenzenopropanóico
Passo A
Preparou-se o composto acima fazendo reagir dicloro-salicilaldeído (10,0 gm, 52,4 mmole, Aldrich), ácido malónico, e acetato de amónio em álcool isopropílico utilizando substancialmente os mesmos procedimento e proporções do Exemplo 224, Passo A. Os RMN e EM eram consistentes com o intermediário pretendido.
Passo B
Acoplou-se GHIA (1,0 gm, 3,7 mmole) com o produto do Passo A (1,1 gm, 4,4 mmole) utilizando substancialmente os mesmos procedimento e proporções que os do Exemplo 86, Passo D. Isolou-se o produto pretendido por RPHPLC C-18 e combinaram-se as fracções apropriadas e liofilizaram-se para se obter o composto em título (0,42 gm). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada. - 383 -
Exemplo 226
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carboniljamino] acetil] amino] -2-hidroxi-5 -nitrobenzenopropanóico
.CO2H
NO2
Acoplou-se cloridrato de (R,S)-4-amino-6-nitro-hidrocumarina (1,1 g, 4,4 mmole) preparado a partir de nitrocumarina (Aldrich) de acordo co J. Rico, Tett. Let.. 1994, 35, 6599-6602, com GIHA (1,0 g, 3,7 mmole) utilizando substancialmente os mesmos procedimento e proporções do Exemplo 86, Passo D. A purificação por RPHPLC preparativa proporcionou o produto pretendido sob a forma de uma mistura de sais TFA de hidrocumarina (lactona) e de fenoxi-ácido sob a forma de um pó após liofilização. Obteve-se a conversão essencialmente completa no ácido fenólico pretendido dissolvendo a mistura purificada em água, ajustando o valor do pH a 7-8 com solução aquosa diluida de NaOH até se completar a reacção por HPLC, e liofilizando-se. Os EM e RPHPLC eram consistentes com a forma de ácido fenol-carboxílico da molécula pretendida. -384-
Exemplo 227
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoimmometil)amino] fenil] carboniljamino] acetiljamino]-3,5-dibromo-2- hidroxibenzenopropanóico
Passo A
Preparou-se o sal cloridrato do éster de beta-aminoácido acima seguindo substancialmente a metodologia do Exemplo 1, Passos A e B substituindo a 3-piridina-carboxaldeído do Passo A por 3,5-dibromo-salicilaldeído (20,0 gm, 0,0715 mole, Aldrich) e mantendo as proporções constantes. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Monohidrato do sal trifluoroacetato de (±)-/?-[[2-[[[3- - 385 -
Cl'—>-' [(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-dibromo-2-
Acoplou-se GIHA (1,0 gm, 3,7 mmole) e o produto do Passo A (1,78 gm, 4,4 mmole) utilizando substancialmente os mesmos procedimento e proporções utilizados no Exemplo 86, Passo D. Isolou-se o produto pretendido por RPHPLC C-18 e combinaram-se as fracções apropriadas e liofílizaram-se para se obter monohidrato do sal trifluoroacetato de (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-dibromo-2-hidroxibenzeno-propanoato de etilo (0,52 gm). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Converteu-se o produto obtido no Passo B no ácido utilizando substancialmente o procedimento e as condições do Exemplo 6, contudo, o solvente da hidrólise era dioxano:água. A purificação por RPHPLC C-18 preparativa permitiu obter o sal TFA (300 mg). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 228
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y5-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-bromo-2- hidroxibenzenopropanóico
Preparou-se o composto em título utilizando substancialmente o prodedimento e as proporções do Exemplo 224, e substituindo 3,5-dicloro-salicilaldeído por 5-bromo-salicilaldeído para se obter o éster etílico do composto em título. Obteve-se o ácido fenólico após hidrólise do éster (0,3 gm após liofilização). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada. -387-
C i
Exemplo 229
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]ciclohexano- propanóico
Passo A
Adicionou-se Pt a 5% sobre carbono a uma solução de cloridrato de (R,S)-3-amino-3-fenil-propionato de etilo (1,7 gm) dissolvida em EtOH absoluto (70 mL) e transferiu-se a mistura reaccional para uma frasco de pressão. Após purgar-se, pressurizou-se o recipiente reaccional com hidrogénio (54 psig) e deixou-se continuar a reacção até à sua conclusão. Retiraram-se os voláteis e utilizou-se o produto sem mais purificação. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Acoplou-se cloridrato de (R,S)-3-amino-3-ciclohexilpropionato de - 388 -
etilo com GIHA utilizando substancialmente os mesmos procedimento e proporções tais como no Exemplo 86, Passo D. Isolou-se monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?- [ [2- [ [ [ 3 -[(aminoiminometil)amino]fenil]-carbo-nil]amino]acetil]amino]ciclohexanopropanoato de etilo utilizando RPHPLC C-18 e liofilizou-se para se obter um pó amorfo branco. Hidrolizou-se monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-y#-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fe-nil]carbonil]amino]acetil]amino]-ciclohexanopropanoato de etilo utilizando o procedimento do Exemplo 224, Passo C, para se obter o composto em título (0,5 gm). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 230
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] - 3, 5-dicloro-2-hidroxibenzenopropanoato de etilo
Passo A
Preparou-se cloridrato de (R,S)-4-amino-6,8-diclorocumarina de acordo com o procedimento do Exemplo 233, Passos AeB, substituindo 3-bromo-5-cloro-salicilaldeído no Exemplo 233, Passo A por 3,5-dicloro-salicilaldeído.
Preparou-se o sal cloridrato do éster etílico do beta aminoácido dissolvendo o cloridrato de (R,S)-4-amino-6,8-diclorohidrocumarina (8,0 g, 0,0207 mole) em EtOH absoluto (30 mL) e adicionando HC1 4N em dioxano (10 mL) e agitando a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2,5 horas. Retirou-se o HC1 em excesso num evaporador rotativo (a frio) e concentrou-se a mistura reaccional para se obter um sólido (50°C). Tratou-se o sólido com EtOAc (25 mL) e Et20 (10 mL) e agitou-se para se obter um sólido branco que se isolou por filtração (5,84 g). Os EM e RMN eram consistentes com o éster de beta-aminoácido pretendido sob a forma do sal cloridrato.
Passo B
Adicionou-se N-metilmorfolina, NMM, (1,36 mL, 0,0124 mole) a uma solução de HC1 GIHA (3,4 gm, 0,0124 mole) em dimetilacetamida (40 mL) e arrefeceu-se a solução até 0-5°C com uma ligeira agitação. Adicionou-se cloroformiato de isobutilo (1,61 mL, 0,0124 mole) e deixou-se a reacção continuar durante cerca de 10 minutos. Nessa altura adicionaram-se uma solução do produto do Passo A (3,90 gm, 0,0124 mole) e NMM (1,36 mL) em DMA (20 mL) à mistura reaccional e deixou-se o acoplamento proseguir um dia para o outro. Retiraram-se os voláteis e voltou-se a dissolver a mistura reaccional em acetonitrilo:água e levou-se a um valor de pH de cerca de 2 com a adição de TFA. Isolou-se o produto pretendido por RPHPLC C-18 preparativa e liofilizou-se para se obter o sal TFA (2,61 gm). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura do composto em título. -391 -
Exemplo 231
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil]amino] - 5-cloro-2- hidroxibenzenopropanóico
Preparou-se o composto acima utilizando substancialmente os procedimento e proporções do Exemplo 224 e substituindo o 3,5-dicloro-salicilaldeído por 5-cloro-salicilaldeído. Após hidrólise do éster no final obteve-se o ácido fenólico (0,3 gm após liofilização). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada. -392-
Exemplo 232
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-2-hidroxi-/?-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetradidro-2H-azepin-7-il)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Cl
Passo A
Adicionou-se l-aza-2-metoxi-l-ciclopentano (1,2 gm, 9,5 mmole) (Aldrich) a ácido m-aminohipúrico (2,0 gm, 8,7 mmole) em acetonitrilo (50 mL). Deixou-se prosseguir a reacção à temperatura ambiente durante um fim-de-semana. Retirou-se o solvente e triturou-se o reíduo com éter dietílico para se obter um sólido (1,6 gm) que era ácido 3-(l-aza-2-amino-l-ciclopentano)-hipúrico substancialmente puro, por RPHPLC analítica, EM e RMN.
Passo B
Acoplou-se o produto obtido no Passo A, ácido 3-(l-aza-2-amino-l-ciclopentano)-hipúrico (1,0 gm, 3,2 mmole) com o composto preparado no -393 - /5(1 \/μ,ϊ*ο
Exemplo 230, Passo A (1,0 gm, 3,2 mmole), utilizando substancialmente as condições e os procedimentos do Exemplo 230, Passo B, e substituindo GIHA por ácido 3-(l-aza-2-amino-l-ciclopentano)-hipúrico. Da purificação por RPHPLC C-18 obteve-se o éster etílico do composto em título (0,5 gm). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura proposta.
Passo C
Dissolveu-se o produto preparado no Passo B (0,35 gm) em dioxano-água (1:1, 30 mL) e ajustou-se o valor do pH a cerca de 11 pela adição de LiOH (poderá substituir-se livremente o LiOH por NaOH). Ao concluir-se a hidrólise ao ácido (determinada por RPHPLC analítica) acidificou-se a mistura reaccional até cerca do valor de pH de 2-3 pela adição de TFA e isolou-se o composto pretendido por RPHPLC C-18 à escala preparativa. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura do composto em título. -394- i/t ÍA. í >
Exemplo 233
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/H[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-bromo-5-cloro-2-hidroxibenzenopropanóico
Aqueceu-se uma solução de 3-bromo-5-cloro-salicilaldeído (11,0 gm, 0,047 mole) e trietilamina (5,6 mL) dissolvidos em anidrido acético (14,0 mL) ao refluxo, durante 4 horas. Deixou-se arrefecer a mistura reaccional até à temperatura ambiente e retiraram-se os voláteis em vazio. Fraccionou-se o sólido resultante entre EtOAc e solução aquosa de bicarbonato de sódio e separaram-se as fases. Voltou-se a extrair a fase aquosa com EtOAc e combinaram-se as fases orgânicas, secou-se (Na2S04) e retiraram-se os voláteis em vazio para se obter um sólido (13,5 gm). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Converteu-se o produto obtido no Passo A (10,0 gm, 0,039 mole) no cloridrato de (R,S)-4-amino-6-cloro-8-bromo-hidrocumarina (5,1 g, 18,5 mmole) de acordo com J. Rico, Tett. Let., 1994, 35, 6599-6602 com a seguinte modificação: o produto de adição foi obtido pela adição de bis-trimetilsililamideto de lítio à cumarina do Passo A e terminou-se a reacção pela adição de um equivalente de HO Ac a 0°C antes da purificação restante.
Passo C
Acoplou-se o produto do Passo B (4,0 gm, 0,013 mole) com HC1 GHIA (3,3 gm, 0,012 mole) utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 230 mas substituindo o composto do Exemplo 30, Passo A, pelo composto obtido no Passo B para se obter, após purificação por RPHPLC C-18 e hidrólise da fracção apropriada de acordo com o procedimento do Exemplo 232, Passo C, o composto pretendido (sal de TF A) sob a forma de um pó branco e fofo (4,8 g), após liofilização. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada. -396-
Exemplo 234
Preparação de monohidrato do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-5-amino-/?-[ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carboni 1] amino] acetil] amino] -2- hidroxibenzenopropanóico
•CO2H
H2N
Dissolveu-se o produto do Exemplo 226 (0,5 gm) em AcOH:H20 (2:1, 60 mL) e adicionou-se Pd a 3% sobre carbono (0,5 gm, Aldrich). Pressurizou-se a mistura reaccional com hidrogénio (20 psig) e deixou-se reagir com agitação vigorosa, durante 2 horas. Retirou-se o catalisador por filtração e concentrou-se a mistura para se obter um óleo espesso. Dissolveu-se o óleo em água e isolou-se o composto pretendido por RPHPLC C-18. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 235
Preparação de monohidrato do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-bromopiridina-3- propanóico
Passo A N(OCH3)CH3
Adicionou-se 1-hidroxitriazole (200 mL de solução 0,5 M em DMF, 0,10 mole) e trietilamina (19,7 mL, 0,14 mole) a uma solução de ácido 5-bromonicotínico (20,0 gm, 0,10 mole), Ο,Ν-dimetilhidroxilamina (9,8 gm, 0,1 mole) e sal cloridrato de l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida em DMF (200 mL), e agitou-se vigorosamente a mistura reaccional durante 18 horas. Retiraram-se os voláteis em vazio a 60°C até se obter uma papa. Fraccionou-se a mistura reaccional entre acetato de etilo (300 mL) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, separaram-se as fases e vlotou-se a extrair a fase aquosa com EtOAc. Combinaram-se as fases orgânicas, secou-se (Na2S04) e concentrou-se para se obter um óleo amarelo escuro (21,4 gm). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
H 0
Br
Arrefeceu-se uma solução do produto do Passo A (12,9 gm, 0,053 mole) em THF (300 mL) até 0°C e adicionou-se LAH em THF (53 mL de uma solução 1,0 M em stock, Aldrich), através de uma seringa. Após 0,5 horas adicionou-se KHS04 (19,6 gm, 0,13 mole, em 100 mL de água). Após vários minutos adicionou-se solução aquosa diluida de HC1 (50 mL) e separou-se a fase orgânica, secou-se (Na2S04) e retiraram-se os voláteis para se obter um óleo amarelo que se solidificou ao deixar-se repousar. Purificou-se o sólido por sublimação para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco (7,8 gm). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
O
H2N
Br
Preparou-se o sal cloridrato do éster de beta aminoácido acima substancialmente de acordo com a metodologia do Exemplo 1, Passos A e B, substituindo a 3-piridina-carboxaldeído, no Passo A, pelo composto do Passo B (6,24 gm, 0,034 mole), e mantendo as proporções constantes. Isolou-se o produto sob a forma do sal di-TFA por RPHPLC C-18. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Acoplou-se o produto do Passo C com HC1.GIHA (0,5 gm, 1,8 mmole) utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 230, Passo B, e substituindo o produto do Exemplo 230, Passo A, pelo produto do Passo C acima (e, de forma correspondente, dois equivalentes de NMM). Isolou-se o éster etílico do produto sob a forma do sal di-TFA por RPHPLC C-18. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo E
Conseguiu-se a hidrólise do produto do Passo D (200 mg) ao ácido correspondente utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 232, Passo C. Isolou-se o produto sob a forma do sal di-TFA por RPHPLC C-18, e liofilizou-se para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco (150 mg). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
-400-
Exemplo 236
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3-bromo-5-cloro-2-hidroxi-/?-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)-amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se iodometano (10,2 gm) a uma solução de l-(3-carboxifenil)-2-tioureia (14,0 gm, 71,3 mmole) em EtOH (absoluto, 140 mL) e aqueceu-se a solução ao refluxo durante 2,5 horas. Retiraram-se os voláteis em vazio a 60°C para se obter um óleo amarelo. Tratou-se este óleo com éter metil-t-butílico, e retiraram-se os voláteis para se obter uma espuma amarela que se tomou firme ao arrefecer. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
- 401 - Iq*. { t-A
Adicionaram-se uma quantidade catalítica de DM AP e 1,3-diaminopropano (1,2 gm, 0,016 mole) ao produto do Passo A (5,0 gm, 0,015 mole), e aqueceu-se a solução a 100°C durante 48 horas. Retiraram-se os voláteis até restar um óleo espesso. Tratou-se este óleo sequencialmente com EtOAc, Et20 e MeOH (50 mL) para se obter um sólido que se isolou por filtração. Fez-se uma suspensão deste produto em HC1 4N em dioxano e agitou-se durante várias horas. Filtrou-se o sólido resultante, lavou-se com Et20 e secou-se (800 mg). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada sob a forma do sal HC1.
Passo C
Adicionou-se trietilamina (1,0 mL) e éster de N-t-Boc-glicina-N-hidroxisucinimida (2,0 gm, Sigma) a uma solução de cloridrato de (R,S)-4-amino-6-cloro-8-bromo-hidrocumarina (2,6 g) preparado no Exemplo 233, Passo B, dissolvido em THF (50 mL), e deixou-se decorrer a reacção até à sua conclusão. Retiraram-se os voláteis e ffaccionou-se o resíduo entre EtOAc e água. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com solução aquosa diluida de HC1, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e secou-se (Na2S04) e concentrou-se para se obter uma espuma escura (3,2 gm). Utilizou-se este produto no passo seguinte sem purificação adicional. -402-
Passo D -402-
Br
Retirou-se o grupo protector BOC dissolvendo a mistura reaccional obtida no Passo C em dioxano (20 mL) e adicionou-se HC1 (4N em dioxano, Aldrich) à solução bem agitada. Ao cessar a evolução de gás (cerca de 0,5 hora), retiraram-se os voláteis para se obter um resíduo escuro que se triturou com éter dietílico para se obter, por filtração, um sólido amarelo (2,46 gm). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada sob a forma do sal cloridrato.
Passo E
Acoplou-se o produto do Passo D (1,4 gm) com o produto do Passo B (1,0 gm) utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 230, Passo B. Ao completar-se a reacção de acoplamento retiraram-se os voláteis a partir da mistura reaccional impura. Voltou-se a dissolver subsequentemente a mistura reaccional em dioxano:água e ajustou-se o valor do pH a aproximadamente 11 adicionando solução aquosa de NaOH. Manteve-se o valor do pH acima de 10 até se constatar a conclusão da hidrólise por RPHPLC analítica. Nesse momento ajustou-se o valor do pH a 2-3 adicionando TFA e isolou-se o produto pretendido por RPHPLC C-13 preparativa (0,35 gm após liofílização). Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada sob a forma do sal TFA. -403- /<λ. h-*- κ ^ dl—(«Ά
Exemplo 237
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-2-hidroxi-y9-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]benzenopropanóico 'v-'
O
Cl
Preparou-se o composto acima (350 mg) utilizando essencialmente as condições e procedimentos do Exemplo 236 mas substituindo o cloridrato de (R,S)-4-amino-6-bromo-8-clorohidrocumarina do Passo E por cloridrato de (R,S)-4-amino-6,8-dicloro-hidrocumarina preparado a partir do salicilaldeído correspondente de acordo com o procedimento do Exemplo 233, Passos A e B. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada sob a forma do sal TFA. -404-
Exemplo 238
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-pirrolidm-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]- 2-hidroxibenzenopropanóico
Passo A
Preparou-se o composto acima de acordo com o procedimento do Exemplo 236, Passos A e B, substituindo 1,3-diaminopropano, no Passo B, por etilenodiamina (1,2-diaminoetano).
O
Preparou-se o produto final pretendido (300 mg) acoplando o produto do Passo A com o sal cloridrato do composto acima (preparado no Exemplo 237) de acordo com o procedimento de acoplamento do Exemplo 237, Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada sob a forma do sal TFA. -405-
Exemplo 239
Preparação de monohidrato do sal trifhioroacetato de ácido (±)-3-bromo-5-cloro-β- [ [2- [ [ [3 - [(4,5-dihidro-1 H-pirrolidin-2-il)amino]fenil] carbonil] -amino]acetil]amino]-2-hidroxibenzenopropanóico
Preparou-se o composto acima de acordo procedimento do Exemplo 238 substituindo o produto do Exemplo 237, Passo B, pelo produto do Exemplo 238, Passo A. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada, sob a forma do sal TFA.
Exemplo 240
Preparação de ácido (±)-3,5-dicloro-/?- [[2-[ [ [3 - [ [ [(etoxicarbonil)amino] -tioxometil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanóico
Passo A Éster tert-butílico de ácido 3-amino-3-(3,5-diclorofenil)propiónico
Preparou-se uma mistura de 13,5 g de l-bromo-3,5-diclorobenzeno (Aldrich, 13,5 g), acrilato de tert-butilo (Aldrich, 11,1 mL), trietilamina (8,4 mL), Pd(OAc)2 (0,12 g), tris-p-toluilfosfina (0,9 g) e acetonitrilo (20 mL) num reactor em aço, sob azoto. Selou-se o reactor e aqueceu-se a 120°C durante 16 horas. Adicionou-se clorofórmio (40 mL) à mistura reaccional arrefecida e extraiu-se a mistura com éter e água. Lavou-se a fase orgânica com água, secou-se sobre MgS04 e concentrou-se em vazio. Filtrou-se rapidamente o resíduo através de -407-
silicagel utilizando acetato de etilo a 8% em hexano como eluente, para proporcionar 13 g de um líquido espesso. Aqueceu-se uma mistura deste produto (12,6 g), tert-butanol (35 mL) e amoníaco (40 mL) num reactor em aço a 80°C durante 25 horas (a pressão, à temperatura ambiente, era de 130 psi; a 80°C, 500 psi). Após arrefecimento e ventilação, concentrou-se o conteúdo em vazio. Extraiu-se o resíduo com acetato de etilo (100 mL) e adicionou-se ácido clorídrico diluido frio (IN, 100 mL). Basificou-se a fase aquosa com K2CO3 e extraiu-se com éter e cloreto de metileno. Secou-se a fase orgânica sobre K2C03 e concentrou-se em vazio para se obter o composto acima (11 g) sob a forma de um líquido espesso castanho-avermelhado.
Passo B
Adicionou-se cloridrato de éster metílico de glicina (5 g, Aldrich) seguido de trietilamina (20 mL) a uma solução agitada de cloreto de 3-nitrobenzoilo (7 g, Aldrich) em CH2C12 a -78°C. Deixou-se aquecer a mistura reaccional até à temperatura ambiente durante 16 horas. Retiraram-se os voláteis e extraiu-se o resíduo com acetato de etilo e água. Lavou-se a fase orgânica com água, secou-se sobre MgS04 e concentrou-se em vazio. Agitou-se o resíduo em tetrahidrofurano (50 mL) e solução aquosa de hidróxido de lítio (50 mL, 1M), durante 15 minutos. Retiraram-se os voláteis e tratou-se o resíduo com ácido clorídrico (50 mL, 3M) e extraiu-se com acetato de etilo e água. Lavou-se a fase -408- Μ
C
orgânica com água, secou-se sobre MgS04 e concentrou-se em vazio. Adicionou-se 4-metilmorfolina (1,1 mL, Aldrich) e cloroformiato de isobutilo (1,3 mL, Aldrich), sucessivamente, a uma solução agitada do resíduo (2,24 g) em tetrahidrofurano (15 mL) a -78°C. Após 30 minutos, adicionou-se éster tert-butílico de ácido 3-amino-3-(3,5-diclorofenil)propiónico (2,91 g, preparado no Passo A). Deixou-se aquecer a mistura até à temperatura ambiente durante 2 horas. Retiraram-se os voláteis e extraiu-se o resíduo com acetato de etilo e água. Lavou-se a fase orgânica com água, secou-se sobre MgS04 e concentrou-se em vazio. Agitou-se uma solução do resíduo em tetrahidrofurano e etanol (1:1, 30 mL) num hidrogenador de Parr com Pd a 3%/C (0,5 g) sob 5 psi de pressão de hidrogénio durante 5 horas. Filtrou-se a mistura e concentrou-se o filtrado para proporcionar o composto acima sob a forma de uma goma espessa. Utilizou-se esta amostra sem mais purificação.
Passo C
Aqueceu-se uma mistura do composto do Passo B (1,2 g) e isotiocianato de etoxicarbonilo (Aldrich, 0,3 /áL) em tolueno (5 mL) ao refluxo durante 30 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional e cromatografou-se o resíduo sobre silicagel para se obter o éster tert-butílico do composto em título (0,78 g) sob a forma de um sólido branco. Deixou-se repousar uma solução do éster t-butílico (0,3 g) em ácido trifluoroacético (4 mL) a 23°C durante 16 horas. Retiraram-se os voláteis e purificou-se o resíduo por HPLC para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. C22H22N406S . 0,5 H20
Calculado: Determinado: C, 48,01; H, 4,21; N, 10,18; S, 5,83. C, 47,61; H, 4,11; N, 9,94; S, 5,83. -409-
Atb-í'*'1
Exemplo 241
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido 3,5-dicloro-/?-[[2-[ [ [3 - [ [[(etoxicarbonil)amino]iminometil] aminojfenil] carbonil]-amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Aqueceu-se uma mistura de carbamato de tert-butilo (Lancaster, 5 g) e de isotiocianato de etoxicarbonilo (Aldrich, 5 mL) em tolueno (15 mL) ao refluxo durante 2 horas. Deixou-se arrefecer a solução até à temperatura ambiente durante 16 horas. Filtrou-se o sólido precipitado e lavou-se com hexano para se obter o composto acima (5,5 g) sob a forma de um sólido branco.
Passo B
-410-
Adicionaram-se cloreto mercúrico (0,77 g) e trietilamina (0,8 mL), em sucessão, a uma solução agitada do composto produzido no Exemplo 240, Passo B (1,3 g), e do produto do Passo A (0,7 g) em DMF (7 mL) a -15°C. Deixou-se aquecer a mistura reaccional até à temperatura ambiente durante 1 hora e continuou-se a agitação durante mais 1 hora. Diluiu-se a mistura com acetato de etilo e filtrou-se através de celite. Lavou-se o filtrado com água, secou-se sobre MgSC>4 e concentrou-se em vazio. Purificou-se o resíduo por cromatografia para se obter o composto acima sob a forma de um sólido branco.
Passo C
Deixou-se repousar uma solução do produto do Passo B (0,5 g) em ácido trifluoroacético (10 mL) a 23°C durante 2 horas. Retiraram-se os voláteis e purificou-se o resíduo por HPLC para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. C22H23N506Cl2 . 1,25 CF3COOH . 0,5 H20
O
Calculado: Determinado: C c , 42,96; H, 3,86; N, 10,23; Cl, 10,35. , 43,21; H, 3,49; N, 10,20; Cl, 10,52. .nr—1 -411 -
Exemplo 242
Preparação de ácido y5-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil] amino] -[1,1’ -bifenil] -3 -propanóico
Passo A
COO-t-Bu
Agitou-se uma mistura de 9,64 g (41,4 mmoles) de 3-bromobifenilo, 5,8 mL (4,2, 41 mmoles) de trietilamina, 6,73 g (52,6 mmoles) de acrilato de t-butilo, 624 mg (2,05 mmoles) de tri-p-toluilfosfína, e 83 mg de acetato de paládio em 15 mL de dimetilformamida de um dia para o outro a 110°C num banho de óleo. Após o arrefecimento, fraccionou-se a mistura entre acetato de etilo e água, e extraiu-se ainda a fase aquosa com acetato de etilo. Lavaram-se os extractos orgânicos combinados com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se. Da cromatografia do resíduo sobre silicagel, utilizando misturas de diclorometano e hexano como eluentes, obteve-se um óleo amarlo muito claro. RMN de Ή (CDC13) 7,77-7,36 (m, 9H), 7,69 (d, J=15Hz, 1H), 6,47 (d, J=15Hz, 1H), 1,58 (s, 9H).
Passo B
Aqueceu-se uma mistura de 10,5 g (37,5 mmoles) do Produto do Passo A, 50 mL de amoníaco líquido, 5,2 g de ácido acético, e 80 mL de t-butanol a 100°C durante 18 horas. Após o arrefecimento, concentrou-se a mistura e fraccionou-se entre acetato de etilo e solução aquosa de bicarbonato de sódio. Extraiu-se ainda a fase aquosa com acetato de etilo, lavaram-se os extractos orgânicos combinados com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se, e evaporou-se. Da cromatografia do resíduo sobre silicagel, utilizando acetato de etilo e depois 10% de metanol - 1% de hidróxido de amónio - 89% de acetato de etilo como eluentes, obteve-se o composto acima, 4,75 g, sob a forma de um óleo incolor.
Análise Calculado para C19H23NO2. 1/8 H20 (MW 299,65): C, 76,16; H, 7,74; N, 4,67. Determinado: C, 76,29; H, 7,57; N, 4,66.
Passo C y3-[[2-[[[3-[(Aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-[l, 1 ’bifenil]-3-propanoato de 1,1-dimetiletilo
Adicionou-se 467 μ\ (3,84 mmole) de N-metilpiperidina a uma solução de 1,00 g (3,66 mmole) do composto do Exemplo M em 20 mL de dimetilformamida seca, num banho de gelo, sob uma atmosfera de árgon, obtendo-se um sólido branco. Após agitação durante 15 minutos, adicionou-se 500 μ\ (3,84 mmoles) de cloroformiato de isobutilo gota a gota e agitou-se continuamente durante cerca de 20 minutos, resultando numa solução homogénea. Adicionou-se uma solução de 1,09 g (3,66 mmoles) do produto do Passo B em 5 mL de dimetilformamida e agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura para se obter 2,88 g de um óleo cor de laranja. A HPLC preparativa em fase reversa de 1,50 g de mistura impura utilizando um gradiente de 90% a 50% de solução aquosa de ácido trifluoroacético - acetonitrilo seguida por evaporação de fracções apropriadas, proporcionou o composto acima, 800 mg, sob a forma de um sólido branco. RMN de *H (CDCl3-DMSO) 8,93 (s largo, 1H), 8,56 (t, 1H), 8,22 (d, 1H), 7,81-7,12 (m, 13H), 5,46 (dd, 1H), 4,12 (t, 2H), 2,88 (dd, 1H), 2,77 (dd, 1H), 1,31 (s, 9H).
Passo D
Adicionou-se 10 mL de ácido trifluoroacético a uma solução de 800 mg do produto do Passo C em 10 mL de diclorometano, e agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após concentração, a HPLC em fase reversa preparativa utilizando misturas de solução aquosa de ácido trifluoroacético - acetonitrilo como eluente permitiu obter, após evaporação das fracções apropriadas, o composto acima (250 mg) sob a forma de um sólido branco puro.
Análise para C25H26N504 . CFCOOH 1/2 H20 (MW 581,53): Calculado: C, 55,77; H, 4,33; N, 12,04.
Determinado: C, 55,81; H, 4,57; N, 11,68. -414-
At C—Λ -1
Exemplo 243
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carbonil] amino]acetil] amino] - [pirimidina-5-propanóico]
O nh2 o
TFA
Passo A
N^N
COO-t-Bu
Agitou-se uma mistura de 5,00 g (31,1 mmoles) de 5-bromopiridina, 3,14 g (31,1 mmoles) de trietilamina, 5,06 g (39,5 mmoles) de acrilato de t-butilo, 475 mg de tri-o-toluilfosfina, e 63 mg de acetato de paládio em 11 mL de acetonotrilo, aquecendo-se ao refluxo sob árgon durante 8 horas. Após o arrefecimento, fraccionou-se a mistura entre acetato de etilo e água. Extraiu-se ainda a fase aquosa com acetato de etilo, lavaram-se os extractos orgânicos combinados com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se, e evaporou-se. Da cromatografía do resíduo sobre silicagel, utilizando um gradiente de 30-50% de acetato de etilo - hexano, obteve-se o composto acima, 0,99 g, sob a forma de um sólido branco cristalino. RMN de 'H (CDC13) 9,19 (s, 1H), 8,86 (s, 2H), 7,53 (d, J=15Hz, 1H), 6,54 (d, J=15Hz, 1H), 1,55 (s, 9H). -415-
Passo B
Agitou-se uma solução de 1,28 g (6,21 mmoles) do produto do Passo A em 12 mL de benzilamina, num banho de óleo a 70-80°C, de um dia para o outro. Após o arrefecimento, evaporou-se a benzilamina em excesso. Da cromatografia do resíduo sobre silicagel, utilizando acetato de etilo a 50% -hexano como eluente, obteve-se o composto acima, 1,33 g, sob a forma de um óleo incolor. RMN de *H (CDC13) 9,18 (s, 1H), 8,78 (s, 2H), 7,21 (m, 5H), 4,14 (t, 1H), 3,68 (d, 1H), 3,59 (d, 1H), 2,73 (dd, 1H), 2,57 (dd, 1H), 1,41 (s, 9H).
Passo C
Adicionou-se paládio a 10% sobre carbono a uma solução de 1,33 g (4,25 mmoles) do produto do Passo B em 50 mL de etanol - ciclohexeno a 4:1. Agitou-se a mistura reaccional, aquecendo-se ao refluxo de um dia para o outro sob árgon, adicionou-se 35 mg de p-tolueno-sulfonato de piridínio, e mantiveram-se as condições de refluxo durante mais 8 horas. Após o arrefecimento, filtrou-se a mistura através de um adjuvante de filtração, e concentrou-se o filtrado. Filtrou-se o resíduo através de silicagel, utilizando -416-
metanol a 10% - acetato de etilo como eluente, para se obter o composto acima (852 mg) sob a forma de um sólido ceroso. RMN de *H (CDC13) 9,26 (s, 1H), 8,78 (s, 2H), 4,46 (dd, 1H), 2,64 (m, 2H), 1,81 (s largo, 1H), 1,43 (s, 9H).
Passo D
TFA
Adicionou-se 398 mg (4,01 mmoles) de N-metilpiperidina gota a gota a uma solução de 1,04 g (3,82 mmoles) de ácido m-guanidinohipurico em 8 mL de dimetilformamida seca, num banho de gelo, sob árgon. Agitou-se a mistura reaccional durante 10 minutos, e então adicionou-se 1,03 g (4,01 mmoles) de carbonato de di-sucinimidilo sob a forma de um sólido. Após agitação durante 1,5 horas, obteve-se uma solução homogénea, transparente, à qual se adicionou uma solução de 852 mg (3,82 mmoles) do produto do Passo C. Após agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente, evaporou-se a mistura até à secura. Da HPLC em fase reversa da mistura, utilizando misturas de solução aquosa de ácido trifluoroacético - acetonitrilo, seguida pela evaporação das fracções apropriadas, obteve-se o composto acima (230 mg) de um sólido branco. RMN de 'H (CDCl3-DMSO) 10,58 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 8,76 (s, 2H), 8,57 (t, 1H), 8,49 (d, 1H), 7,79-7,11 (m, 4H), 5,36 (dd, 1H), 4,07 (t, 2H), 2,90 (dd, 1H), 2,79 (dd, 1H), 1,35 (s, 9H). -417- h*
Passo E
Dissolveu-se 230 mg do produto do Passo D em 20 mL de diclorometano - ácido trifluoroacético a 1:1, e agitou-se a mistura resultante de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após a evaporação, da HPLC em fase reversa da mistura, utilizando misturas de solução aquosa de ácido trifluoroacético - acetonitrilo seguida pela evaporação das fracções apropriadas, obteve-se o composto acima (183 mg) sob a forma de um sólido branco.
Análise para C17Hi9N704 . CFCOOH 1/2 H20 (MW 508,41): Calculado: C, 44,89; H, 3,97.
Determinado: C, 44,75; H, 4,16. -418-
M
Exemplo 244
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /H[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-metiltiofeno-2-propanóico
Passo A
Agitou-se uma mistura de 10,0 g (56,5 mmoles) de 2-bromo-3-metiltiofeno, 10,5 mL (9,18 g, 71,8 mmoles) de acrilato de t-butilo, 15,7 mL (11,4 g, 113 mmoles) de trietilamina, 857 mg de tri-o-toluilfosfina, e 113 mg de acetato de paládio em 20 mL de acetonotrilo, aquecendo-se ao refluxo sob árgon durante 8 horas. Após o arrefecimento, fraccionou-se a mistura entre acetato de etilo e água, extraiu-se ainda a fase aquosa com acetato de etilo, secaram-se os extractos orgânicos combinados sobre sulfato de sódio, filtrou-se, e evaporou-se para se obter o composto acima (12,7 g) sob a forma de um óleo encarnado. RMN de !H (CDC13) 7,78 (d, J=15Hz, 1H), 7,24 (d, J=6Hz, 1H), 6,87 (d, J=6Hz, 1H), 6,13 (d, J=15Hz, 1H), 2,36 (s, 3H), 1,56 (s, 9H). -419- C-'—
Passo B
Fez-se reagir 8,00 g (35,7 mmoles) do produto do Passo A com amoníaco segundo o método do Exemplo 242, Passo B. Da cromatografia do produto impuro sobre silicagel, utilizando acetato de etilo a 50% - hexano como eluente, obteve-se o composto acima (1,78 g) sob a forma de um óleo avermelhado que cristalizou ao repousar.
Passo C yff- [ [2- [ [ [3 - [ (Aminoiminometil)amino] feniljcarbonil] amino] acetil] -amino]-3-metiltiofeno-2-propanoato de 1,1-dimetiletilo
Adicionou-se 530 (A (432 mg, 4,36 mmoles) de N-metilpiperidina gota a gota a uma solução de 1,13 g (4,15 mmoles) de ácido m-guanidinohipúrico em 20 mL de dimetilformamida seca agitada num banho de gelo sob árgon, obtendo-se um sólido branco. Adicionou-se a esta mistura 1,12 g (4,36 mmoles) de carbonato de di-sucinimidilo sob a forma de um sólido, e agitou-se a mistura -420-
At h*· ^ ^
resultante durante 30 minutos, obtendo-se uma solução transparente. Adicionou-se-lhe uma solução de 1,00 g (4,15 mmoles) do produto do Passo B em 8 mL de dimetilformamida, agitando-se a mistura de um dia para o outro à temperatura ambiente. Da evaporação dos voláteis obteve-se 3,8 g do resíduo. Da HPLC em fase reversa de 1,5 g da mistura, utilizando misturas de solução aquosa de ácido trifluoroacético - acetonitrilo seguida pela evaporação das fracções apropriadas, obteve-se o composto acima (171 mg) sob a forma de um sólido branco sujo que se identificou por conversão ao ácido tal como se descreve no Passo D.
Passo D
Agitou-se uma solução de 167 mg do produto do Passo C em 15 mL de diclorometano - ácido trifluoroacético a 1:1 de um dia para o outro à temperatura ambiente. Da HPLC em fase reversa do resíduo, utilizando misturas de solução aquosa de ácido trifluoroacético - acetonitrilo seguido pela evaporação das fracções apropriadas, obteve-se o composto acima (103 mg) sob a forma de um sólido branco.
Análise para C18H21N504S . CF3COOH (MW 517,48): Calculado: C, 46,42; H, 4,29; N, 13,53.
Determinado: C, 46,88; H, 4,52; N, 13,24.
Exemplo 245
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3 -(metiltio)benzenopropanóico SMe
Passo A 3-[3-(Metiltio)fenil]-2E-propenoato de 1,1-dimetiletilo
C02--
Aqueceu-se uma solução de acetato de paládio (110 mg, 0,00049 mole), 3-bromotioanisole (10 g, 0,05 mole), t-butilacrilato (7,7 g, 0,06 mole), tri-para-tolilfosfina (0,76 g, 0,0025 mole) e trietilamina (5,1 g, 0,05 mole) em 20 mL de DMF a 120°C durante 20 horas. Retirou-se o sólido por filtração e lavou-se com CH2C12. Concentrou-se o filtrado para se obter um sólido oleoso. Adicionou- -422-
se acetato de etilo e retirou-se o sólido por filtração. Concentrou-se o filtrado para se obter um óleo. Purificou-se o produto por cromatografia de silicagel. A estrutura foi confirmada por RMN.
Análise para Ci4Hi802S (250,36):
Calculado: C, 67,16; H, 7,25.
Determinado: C, 67,33; H, 7,24.
Passo B
Monohidrato de /?-amino-3-[3-(metiltio)fenil]propanoato de (±)-1,1-dimetiletilo
Tratou-se o produto do Passo A (10 g, 0,04 mole) com t-BuOH saturado com amoníaco e 1 mL de ácido acético a 110 °C e 900 psi numa bomba de Parr durante 78 horas. Filtrou-se a mistura e concentrou-se para se obter um óleo escuro. Purificou-se o produto por cromatografia em silicagel. Tratou-se uma solução da base livre em 100 mL de EtOAc com HC1 7N em dioxano. Filtrou-se o precipitado, lavou-se com EtOAc e secou-se. A estrutura foi confirmada por RMN. -423 - Μ Λ». (
Análise para C14H22N02SC1.0,1 H20 (303,85 + 0,1 m H20): Calculado: C, 55,01; H, 7,32; N, 4,58.
Determinado: C, 54,89; H, 7,36; N, 4,41.
Passo C
Sal trifluoroacetato de (±)-β-[[2-[[[ί- [(aminoiminometil)amino]-feniI]carbonil]amino]acetil]amino]-3-(metiltio)fenilpropanoato de 1,1-dimetiletilo SMe
Adicionou-se N-metilpiperidina (0,69 g, 0,007 mole) ao composto do Exemplo M (0,91 g, 0,00334 mole) em 20 mL de DMF a 0°C. Precipitou um sólido branco. Após 10 minutos, adicionou-se IBCF (0,47 g, 0,00351 mole). Após 15 minutos (sempre em solução), adicionou-se uma solução do produto do Passo B (1,01 g, 0,00334 mole) em 6 mL de DMF. Retirou-se o banho e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 20 horas. Concentrou-se a solução para se obter um xarope cor de laranja. Purificou-se o produto por HPLC de fase reversa. [CH3CN/H20 (0,06% TF A)]. A estrutura foi confirmada por RMN.
Análise para C24H31N5O4S.TFA. 1/2 H20 (608,64):
Calculado: C, 51,31; H, 5,47; N, 11,51.
Determinado: C, 51,46; H, 5,67; N, 11,51.
Agitou-se o produto do Passo C (0,50 g) em 10 mL de CH2C12/TFA (1:1) durante 24 horas à temperatura ambiente. Após concentrar-se para se obter um óleo amarelo claro, purificou-se o produto por HPLC de fase reversa (CH3CN/H20.0,6% TF A). A estrutura foi confirmada por RMN.
Análise para C2oH23N504S.TFA. 1/4 H20 (548,03):
Calculado: Determinado: C, 48,22; H, 4,51; N, 12,78. C, 48,19; H, 4,66; N, 12,80.
Exemplo 246
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido (±)-/3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-6-metilpiridina-2-propanóico
Passo A 3-(6-Metil-2-piridinil)-2E-propanoato de 1,1-dimetiletilo
Aqueceu-se a 85-90°C durante 5 horas, uma solução de 6-metil-2-piridina-carboxaldeído (9,0 g, 0,074 mole) e (t-butilcarbonilmetileno)-trifenilfosforano (28,0 g, 0,074 mole) em 150 mL de tolueno, e agitou-se à temperatura ambiente durante 20 horas. Separou-se o sólido branco por filtração e concentrou-se o filtrado. Por adição de tolueno/hexano a 1:1 (100 mL) precipitou mais sólido branco, que se retirou por filtração. Concentrou-se o filtrado para se obter um óleo. Purificou-se o produto por cromatografia sobre silicagel. A estrutura foi confirmada por RMN.
Análise calculado para Ci3H17N02 (219,29):
Calculado: C, 71,21; H, 7,81; N, 6,39.
Determinado: C, 70,84; H, 7,81; N, 6,32.
Passo B (±)-6-Metil-/?-[[(feniloxicarbonil)-metil]amino]-piridina-2-propanoato de 1,1-dimetiletilo
Aqueceu-se uma solução do produto do Passo A (5,0 g, 0,0228 mole) em benzilamina (48,9 g, 0,456 mole) a 80°C durante 6 horas e, em seguida, a 100°C durante 20 horas. Aqueceu-se a solução a 115°C durante 3 horas e, em seguida, concentrou-se para se obter um óleo. Purificou-se o produto por cromatografia sobre silicagel. A estrutura foi confirmada por RMN.
Análise calculado para C20H26N2O2 (326,44):
Calculado: C, 73,59; H, 8,03; N, 8,58.
Determinado: C, 73,12; H, 8,14; N, 8,41.
Passo C (±)-/£-Amino-6-metilpiridina-2-propanoato de 1,1-dimetiletilo
!<* l·' * -427-
Tratou-se o produto do Passo B (5,7 g, 0,017 mole) em 3A-EtOH (100 mL) com uma quantidade catalítica de Pd a 4%/C, a 5 psi e à temperatura ambiente, durante 48 horas. Após filtração, concentrou-se o filtrado para se obter um óleo. Purificou-se o produto por cromatografia sobre silicagel. A estrutura foi confirmada por RMN.
Análise calculado para C13H20N2O2 . H20 0,3 m (242,62): Calculado: C, 64,35; H, 8,60; N, 11,55.
Determinado: C, 64,15; H, 8,38; N, 11,46.
Passo D
Preparou-se o composto em título seguindo a sequência reaccional descrita no Exemplo 245, Passos C e D, e substituindo (±)-/?-amino-3-(metiltio)fenilpropanoato de 1,1-dimetiletilo por (±)-/^amino-6-metilpiridina-2-propanoato de 1,1-dimetiletilo. A estrutura foi confirmada por RMN.
Análise calculado para C23H24N608F6 (626,47):
Calculado: Determinado: C, 44,10; H, 3,86; N, 13,41. C, 44,12; H, 3,70; N, 13,36.
Exemplo 247
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido /?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-(metilsulfonil)-benzenopropanóico
Passo A
Metil-3 -bromofenilsulfona
Br
Adicionou-se uma solução de Oxone® (90,8 g, 0,15 mole) em 250 mL de H20 a uma solução agitada de 3-bromotioanisole (15 g, 0,0739 mole) em 250 mL de MeOH e 200 mL de acetona. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 20 horas. Concentrou-se a solução para se retirar o MeOH e a acetona. Adicionou-se água (400 mL) e extraiu-se o produto para EtOH. Secou-se o EtOH sobre Na2S04, filtrou-se e concentrou-se para se obter um sólido. A estrutura foi confirmada por RMN.
Passo B
Preparou-se o composto em título seguindo a sequência reaccional descrita no Exemplo 245, Passos A-D, e substituindo o 3-bromotioanisole por metil-3-bromofenil-sulfona.
Análise calculado para C2oH23N506S . 2TFA (689,55):
Calculado: Determinado: C, 41,81; H, 3,65; N, 10,16; S, 4,65. C, 41,91; H, 3,74; N, 10,45; S, 5,15. -430-
Exemplo 249
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-dietoxibenzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se K2CO3 (20 g) e iodeto de etilo (20 g) a 3,5- dihidroxibenzaldeído (10 g) em DMF (100 mL). Agitou-se a mistura durante 3 w dias a 25°C. Adicionou-se água (250 mL) e extraiu-se o produto com acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água, salmoura e secou-se sobre Na2S04 para se obter 3,5-dietoxifenilcarboxaldeído (12 g) sob a forma de um óleo escuro. Utilizou-se este material tal como se obteve para o próximo passo. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
-431 - C-j-l
Adicionou-se acetato de amónio (12,5 g), seguido por hidrogenomalonato de etilo (6,0 g), a 3,5-dietoxifenilcarboxaldeído (Passo A) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2SC>4. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(3,5-dietoxifenil)-propionato de etilo sob a forma de um óleo. Adicionou-se éter (100 mL), seguido por HC1 em dioxano (20 mL, 4N) e agitou-se vigorosamente durante uma hora. Recolheu-se o sal de HC1 por filtração (6,3 g). Os EM e RMN de JH eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-dietoxifenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a -432
reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3,5-dietoxifenil)- propionato de etilo (500 mg) produzido no Passo C em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada. - 433 -
F.xemplo 250
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-4-bromotiofeno-2-propanóico
O
Br
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 3-bomotiofeno-5-carboxaldeído (Aldrich) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(3-bromotiofeno)-propionato de etilo sob a forma de um óleo. Adicionou-se éter (100 mL), seguido por HC1 em dioxano (20 mL, 4N) e agitou-se vigorosamente durante uma hora. Recolheu-se o sal de HC1 por filtração (6,3 g). Os EM e RMN de !Η eram consistentes com a estrutura apresentada. -434-
O
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto H no Esquema VII (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3-bromotiofeno)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3-bromotiofeno)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obterem 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada. -435 - /<5^.
Exemplo 251
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido β-{[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-clorotiofeno-2-propanóico v„y
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 2-clorotiofeno-5-carboxaldeído (Aldrich) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(2-clorotiofeno)-propionato de etilo sob a forma de um óleo. Adicionou-se éter (100 mL), seguido por HC1 em dioxano (20 mL, 4N) e agitou-se vigorosamente durante uma hora. Recolheu-se o sal de HC1 por filtração (6,3 g). Os EM e RMN de !Η eram consistentes com a estrutura apresentada. -436-
«Ί
Passo Β
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(2-clorotiofeno)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(2-clorotiofeno)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -437-
Exemplo 252
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /M[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-1 H-pirazole-3-propanóico
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 3-pirazole-carboxaIdeído (Maybridge) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional aquecendo-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(3-pirazole)-propionato de etilo sob a forma de um óleo. Adicionou-se éter (100 mL), seguido por HC1 em dioxano (20 mL, 4N) e agitou-se vigorosamente durante uma hora. Recolheu-se o sal de HC1 por filtração (6,3 g). Os EM e RMN de ^ eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto H do Esquema VII (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3-pirazole)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de TH eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3-pirazole)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -439-
Exemplo 253
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-5 -metiltiofeno-2-propanóico
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 5-metiltiofeno-2-carboxaldeído (Lancaster) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional aquecendo-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2SC>4. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(5-metiltiofeno)-propionato de etilo sob a forma de um óleo. Adicionou-se éter (100 mL), seguido por HC1 em dioxano (20 mL, 4N) e agitou-se vigorosamente durante uma hora. Recolheu-se o sal de HC1 por filtração (6,3 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada. -440- c \
Passo B
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(5-metiltiofeno)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de ’Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(5-metiltiofeno)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada. -441 -
Exemplo 254
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carboml]amino]acetil]amino]-2,3,5-tricloro-benzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 2,3,5-triclorobenzaldeído (Lancaster) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional aquecendo-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(2,3,5-triclorofenil)-propionato de etilo sob a forma de um óleo (6,3 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada. -442-
Passo B
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(2,3,5-triclorofenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(2,3,5-triclorofenil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de lH eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 255
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /H [2- [ [ [ 3 - [(aminoiminornetil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-2(carboximetoxi)-benzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a ácido 2-formil-fenoxiacético (Fisher) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Filtrou-se a solução para se obter DL-3-amino-3-(ácido 2-formil-fenoxiacético)-propionato de etilo sob a forma de um sólido. (6,3 g). Os EM e RMN de eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
-444- C--uUl
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(ácido 2-formil-fenoxiacético)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(ácido 2-formil-fenoxiacético)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -445-
Exemplo 256
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-metoxi-l,3benzodioxole-6-propanóico
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 3-metoxi-piperinal (Fisher) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(2-metoxi-piperinal)-propionato de etilo sob a forma de um óleo (6,3 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
-446- Passo B
O COsEt O-J
Adicionou-se carbonato de N,N ’ -di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(2-metoxi-piperinal)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole) seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
b~J
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(2-metoxi-piperinal)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo ((1:1)), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada. i -447-
Exemplo 257
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido A-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-bromo-2 metoxibenzenopropanóico
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 3-bromo-6-metoxibenzaldeído (Aldrich) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2SC>4. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(3-bromo-6-metoxifenil)-propionato de etilo sob a forma de um óleo (6,3 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
-448- Passo B
O
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(3-bromo-6-metoxifenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3-bromo-6-metoxifenil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo ((1:1)), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -449- lo*, rh { «- a
Exemplo 258
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-6-cloro-l,3-benzodioxole-5-propanóico
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 6-cloropiperinal (Lancaster) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2C03 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(6-cloropiperinil)-propionato de etilo sob a forma de um óleo (6,3 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada. -450-
At·*-·*’
Passo B
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(3-cloropiperinil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo), para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3,5-dietoxifenil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), -451 - seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 259
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido yff-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-benzofurano-2-propanóico
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 2-benzofurano-carboxaldeído (Lancaster) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu- -452-
se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(2-benzofuranil)-propionato de etilo sob a forma de um óleo (6,3 g). Os EM e RMN de eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
C02Et
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(2-benzofuranil)-propionato (1,1 g, 0,5 mmole) de etilo, seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo), para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(2-benzofuranil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 260
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido y3- [ [2- [ [ [3 - [(ammoiminometil)amino] -fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-(carboximetoxi)benzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a ácido 3-formil-fenoxiacético (Fisher) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Fitrou-se a solução para se obter DL-3-amino-3-(ácido 3-formil-fenoxiacético)-propionato de etilo sob a forma de um óleo (6,3 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(ácido 3-formil-fenoxiacético)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole) de etilo, seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada. -455 - fc-Y\
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3,5-dietoxifenil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 261
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4,4,4-trifluorobutanóico
Passo A HCi · H2N, ‘C02Et CF3
Adicionou-se HCI em dioxano (20 mL, 4N) a ácido 3-amino-4,4,4-trifluorobutírico (Lancaster) (2 g) em etanol (70 mL), e agitou-se vigorosamente durante 16 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida. Recolheu-se o sal de HCI sob a forma de um sólido (2,3 g). Os EM e RMN de lH eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succimmidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(4,4,4-trifluoro)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(4,4,4-trifluoro)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 262
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carbonil] aminojacetil] amino] -3 -bromo-4,5-dimetoxibenzenopropanóico
-458- Passo A
H2N. B
C02Et OMe OMe
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido por hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 3-bromo-4,5-dimetoxi-benzaldeído (Aldrich) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica com K2C03 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2SC>4. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(3-bromo-4,5-dimetoxifenil)-propionato de etilo sob a forma de um óleo (6,3 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Η2ΝγΝΗ Q
NH
s O. ch3 -459-
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succmimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(2-bromo-4,5-dimetoxifenil)-propionato (1,1 g, 0,5 mmole) de etilo, seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
OMe
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3-bromo-4,5-dimetoxifenil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 263
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-metilpentanóico
Passo A
CC^Et i-Pr
H2N
Preparou-se DL-3-amino-3-(isopropil)-propionato de etilo segundo o método do Exemplo 53, Passo A, substituindo dimetil-3-cetoglutarato por isopropilacetoacetato (10 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(isopropil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 -461 -
<2_U mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(isopropil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 264
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-pentanóico
Passo A
H2N 'V^C02Et
Et
Preparou-se DL-3-amino-3-(3-etil)-propionato de etilo segundo o método do Exemplo 53, Passo A, substituindo o 3-cetoglutarato de dimetilo por cetoacetato de etilo (10 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(3-etil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
-463-
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3,5-dietoxifenil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 265
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido y3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-bromo-3-cloro-2-hidroxibenzeno- propanóico
Passo A
O
.Cl
Br -464-
Preparou-se cloridrato de DL-3-bromo-5-cloro-2-hidroxi-aminocoumarina de acordo com o Esquema XIV. Utilizou-se o método de G. Casiraghi, et ai, J. Chem. Soe.. Perkin Trans 1, p.318, 1978, para a preparação dos aldeído 4-bromo-2-cloro-salicílico e a 6-bromo-8-cloro-coumarina segundo o método de VogePs Textbook of Practical Organic Chemistrv, quinta edição, p. 1040. Preparou-se a amino-coumarina segundo o método citado no Exemplo 87, utilizando 7-cloro-5-bromo-coumarina (7 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-bromo-5-cloro-2-hidroxi-aminocoumarina (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
-465- Passo C
H CON.
C
TFA
Br
H
CO2H .OH
Cl
O aducto de DL-3-bromo-5-cloro-2-hidroxi-aminolactona produzido no Passo B (500 mg) dissolvido em água/acetonitrilo clivou-se lentamente para formar um (2-hidroxiácido) resultando em 255 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco, após purificação por cromatografia de fase reversa e liofilização sob a forma do seu sal TFA. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 266
Preparação do sal (bis)trifluoroacetato de ácido /H[2-[[[3-[[[(4-piridinilmetil)-amino] carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina- 3-propanóico
NK ÇO2H -466-
Passo A
-466- - H
Adicionou-se éster tert-butílico de glicina (20 g, 119 mmole) a água (200 mL), seguido por carbonato de potássio (20 g, 180 mmole) e arrefeceu-se até 0°C num banho de gelo. Adicionou-se cloreto de 3-nitrobenzoílo (20 g, 108 mmole) em acetonitrilo (20 mL) gota a gota, durante um periodo de 10 minutos. Após se completar a reacção (3-4 horas) adicionou-se ácido clorídrico concentrado até ao valor de pH = 3, seguido por solução aquosa saturada de NaCl (75 mL). Filtrou-se o produto, lavou-se com água e secou-se com ar (22 g, rendimento de 90%). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
H CON>s^<'C02“-j—
Adicionou-se glicinato de tert-butil(3-nitrobenzoílo) (1,0 g) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio a 5% sobre carbono (1 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr, durante um periodo de 2,5 horas. Após se completar a reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio. Adicionou-se dimetilformamida -467- (25 mL) ao éster tert-butílico de anilina impuro, seguida por trietilamina (1,5 equivalentes) e arrefeceu-se até 0°C. Adicionou-se cloroformato de fenilo (6,5 g, 1,1 equivalentes) e agitou-se a mistura reaccional durante 2 horas. Adicionou-se água e filtrou-se o sólido para se obter o éster tert-butílico de carbamato de fenilo sob a forma de um sólido branco (12,5 g, rendimento de 99%). Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se dimetilformamida (25 mL) ao éster tert-butílico de carbamato de fenilo do Passo B, seguida por 4-piridilmetilamina (1,1 equivalentes). Aqueceu-se a mistura reaccional a 70°C com agitação durante 2 horas, e agitou-se a 25°C durante 12 horas. Adicionou-se água, e fraccionou-se a mistura entre acetato de etilo, separou-se e lavou-se com salmoura e secou-se sobre Na2S04 para se obter um óleo (6 g). Os EM e RMN de ‘H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
-468-
Dissolveu-se o composto do Passo C (6 g) em dioxano (25 mL). A esta solução adicionou-se solução de HC1 em dioxano (20 mL, 4N). Agitou-se a solução durante 12 horas e retirou-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela adição de éter. Filtrou-se o sólido e secou-se numa estufa em vazio, durante 12 horas.
Passo E
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto produzido no Passo D (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloreto de DL-3-amino-3-piridil-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -469-
í-.S
Passo F
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-piridil-propionato de etilo produzido no Passo E (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 255 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 267
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3,5-dicloro-y9-[[2-[[[3-[[[(4- piridinilmetil)ammo]carbonil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]- amino]benzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto produzido no Passo B, Exemplo 268 (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(l,3-diclorofenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(l,3-diclorofenil)- w-A„. v -471 - propionato de etilo produzido no Passo A (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 315 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 268
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido /7-[[2-[[[3-[[[(2-piridilmetil)-amino] carbonil]amino] fenil] carbonil] amino] acetil]amino] - 5 -piridina-3 - propanóico
Passo A
Adicionou-se dimetilformamida (25 mL) ao éster tert-butílico de carbamato de fenilo do Exemplo 266, Passo B, seguida por 2-piridilmetiIamina (1,1 equivalentes), e aqueceu-se a mistura reaccional a 70°C com agitação durante 2 horas, e agitou-se a 25°C durante 1-2 horas. Adicionou-se água, e fraccionou-se a mistura entre acetato de etilo, separou-se, e lavou-se com -472- salmoura e secou-se sobre Na2S04 para se obter um óleo (6 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o composto do Passo A (6 g) em dioxano (25 mL). A esta solução adicionou-se solução de HC1 em dioxano (20 mL, 4N). Agitou-se a solução durante 1-2 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela adição de éter. Filtrou-se o sólido e secou-se em vazio numa estufa, durante 12 horas.
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto produzido no Passo B (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloreto de DL-3-amino-3-piridil-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,1 g). Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada. -473-
Passo D
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-piridil-propionato de etilo produzido no Passo C (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 550 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 269
Preparação de monohidrato de ácido 3,5-dicloro-/^[[2-[[[3-[[[(fenihnetil)amino]-carbonil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico
-474- Passo A
H H2Nvs^vN^C0NVv/C02-f-
Adicionou-se glicinato de tert-butil(3-nitrobenzoílo) (10 g) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio a 5% sobre carbono (1 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr, durante um período de 2,5 horas. Após se completar a reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio.
Passo B
H C0N^C02-f-
Adicionou-se acetonitrilo (50 mL) à anilina impura (10 g) produzida no Passo A, seguido por isocianato de benzilo (7,0 g). Aqueceu-se a mistura reaccional a 70°C durante 2 horas, e retirou-se o solvente. Adicionou-se éter dietílico e filtrou-se o sólido para se obter o éster tert-butílico de ureia de benzilo sob a forma de um sólido cor de salmão (12,6 g).
Passo C
Dissolveu-se o composto do Passo B (6 g) em dioxano (25 mL). A -475 -
esta solução adicionou-se solução de HC1 em dioxano (20 mL, 4N). Agitou-se a solução durante 12 horas e retirou-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela adição de éter. Filtrou-se o sólido e secou-se numa estufa em vazio, durante 12 horas.
Passo D
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto produzido no Passo C (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(l,3-diclorofenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,2 g). Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo E
C
CO£H
Cl -476- -476-
í,1
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(l,3-diclorofenil)-propionato de etilo produzido no Passo D (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 250 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 270
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido 3-cloro-/?-[[2-[[[3-[ [ [(fenilmetil)amino] carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -amino]benzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 -477- Qs- r,' *r\ { ·> 1
mmole) ao composto produzido no Passo C, Exemplo 269 (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3-clorofenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,9 g). Os EM e RMN de lH eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3-clorofenil)-propionato de etilo produzido no Passo A (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 350 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 271
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /H[2-[[[3-[[[(l-feniletil)amino]-carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico
Phv^,CH3
TFA
Passo A
Adicionou-se dimetilformamida (25 mL) ao éster tert-butílico de carbamato de fenilo do Passo B do Exemplo 266, seguida por a-metil-benzilamina (1,1 equivalentes). Aqueceu-se a mistura reaccional a 70°C com agitação durante 2 horas, e agitou-se a 25°C durante 1-2 horas. Adicionou-se água, e fraccionou-se a mistura entre água e acetato de etilo, separou-se, e lavou-se com salmoura e secou-se sobre Na2S04, para se obter um óleo (6 g). Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o composto do Passo A (6 g) em cloreto de metileno (50 mL). A esta mistura adicionou-se solução de TFA (20 mL). Agitou-se a solução durante 12 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela adição de éter. Filtrou-se o sólido e secou-se numa estufa em vazio, durante
-479- Passo C
CC^Et
Adicionou-se carbonato de N,N ’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto produzido no Passo B (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-piridil-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido porNMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,0 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-piridil-propionato de etilo produzido no Passo C (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 150 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ’Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 272
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?-[[2-[[[3-[[[[(lH-benzaimidazol-2-il)metil] amino] carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,5-dicloro-benzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se dimetilformamida (25 mL) ao éster tert-butílico de carbamato de fenilo do Passo B do Exemplo 266, seguida pela adição de 2-aminometilbenzimidazole (Aldrich) (1,1 equivalentes). Aqueceu-se a mistura reaccional a 70°C com agitação durante 2 horas, e agitou-se a 25°C durante 1-2 horas. Adicionou-se água, e fraccionou-se a mistura entre acetato de etilo, separou-se, lavou-se com salmoura e secou-se sobre Na2S04 para se obter um óleo (6 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -481 -
.( *~Α
Passo Β
Dissolveu-se ο composto do Passo A (6 g) em cloreto de metileno (50 mL). A esta mistura adicionou-se TFA (20 mL). Agitou-se a mistura durante 1-2 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela adição de éter. Filtrou-se o sólido e secou-se numa estufa em vazio, durante 1-2 horas.
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto produzido no Passo B (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(l,3-diclorofenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,8 g). Os EM e RMN de *Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(l,3-diclorofenil)-propionato de etilo produzido no Passo C (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 125 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 273
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /^[[2-[[[3-[[[[(3,5-diclorofenil)metil]-amino]carbonil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Cl
Adicionou-se dimetilformamida (25 mL) ao éster tert-butílico de carbamato de fenilo do Passo B do Exemplo 266, seguida pela adição de 3,5- -483 -
diclorobenzilamina (Lancaster) (1,1 equivalentes). Aqueceu-se a mistura reaccional a 70°C com agitação durante 2 horas, e agitou-se a 25°C durante 1-2 horas. Adicionou-se água, e fraccionou-se a mistura entre acetato de etilo, separou-se, lavou-se com salmoura e secou-se sobre Na2S04, para se obter um óleo (6 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Cl
Dissolveu-se o composto do Passo A (6 g) em cloreto de metileno (50 mL). A esta mistura adicionou-se TFA (20 mL, 4N). Agitou-se a mistura durante 1-2 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela adição de éter. Filtrou-se o sólido e secou-se numa estufa em vazio, durante 1-2 horas.
Passo C
Cl
'CC^Et
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto produzido no Passo B (1,0 g, 0,4 mmole) em -484 ιΟ·*- ¥ ^ dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(l,3-piridil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido por NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,8 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(l,3-diclorofenil)-propionato de etilo produzido no Passo C (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 125 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 274
Preparação de ácido /H [2-[ [ [3 -[ [[ [(3,5-diclorofenil)metil] amino]carbonil] -amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]butanóico
Cl
Passo A
Cl
Adicionou-se dimetilformamida (25 mL) ao éster tert-butílico de carbamato de fenilo do Passo B do Exemplo 266, seguida pela adição de 3,5-diclorobenzilamina (Lancaster) (1,1 equivalentes). Aqueceu-se a mistura reaccional a 70°C com agitação durante 2 horas, e agitou-se a 25°C durante 1-2 horas. Adicionou-se água, e fraccionou-se a mistura entre acetato de etilo, separou-se, lavou-se com salmoura e secou-se sobre Na2S04 para se obter um óleo (6 g). Os EM e RMN de !Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Cl
Dissolveu-se o composto do Passo A (6 g) em cloreto de metileno (50 mL). A esta mistura adicionou-se TFA (20 mL). Agitou-se a mistura durante 1-2 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela adição de éter. Filtrou-se o sólido e secou-se numa estufa em vazio, durante 1-2 horas. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Cl
Adicionou-se carbonato de N,N ’ -di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto produzido no Passo B (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(metil)-propionato de etilo (Aldrich) (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,8 g). Os EM e RMN de ^ eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(metil)-propionato de etilo produzido no Passo C (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 125 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 275
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido j#-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]- fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-bis(l-metiletoxi)benzenopropanóico
Passo A
CHO
Adicionou-se K2CO3 (20 g) e iodeto de isopropilo (20 g) a 3,5-dihidroxibenzaldeído (10 g) em acetona (100 mL). Aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo e agitou-se durante 2 dias. Adicionou-se água (250 mL) e extraiu-se o produto para acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água, salmoura e secou-se sobre Na2S04 para se obter 3,5-di-isopropiloxifenilcarboxaldeído (12 g) sob a forma de um óleo escuro. Utilizou-se esta matéria tal como estava para o próximo passo. Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se acetato de amónio (12,5 g), seguido por hidrogenomalonato de etilo (6,0 g), a 3,5-di-isopropiloxifenilcarboxaldeído (Passo A) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a solução, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e ffaccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se 0 solvente para se obter DL-3-amino-3-(3,5-di-isopropilfenil)-propionato de etilo sob a forma de um óleo. Adicionou-se éter (100 mL), seguido por HC1 em dioxano (20 mL, 4N) e agitou-se vigorosamente durante uma hora. Recolheu-se o sal de HC1 por filtração (4,3 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido por dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-di-isopropiloxifenil)- -489-
propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,8 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3,5-di-isopropiloxifenil)-propionato de etilo produzido no Passo C (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 625 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 276
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometi l)amino] -fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-3,5-dibromo-4-hidroxibenzenopropanóico
-490- A*- ^ 1-1
Passo A
B
‘C02Et
Br
OH
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido pela adição de hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 4-hidroxi-3,5-dibro-mobenzaldeído (Aldrich) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccio-nal aquecendo-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a mistura, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2C03 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(4-hidroxi-3,5-di-bromofenil)-propionato de etilo sob a forma de um sólido, e reuniu-se por filtração (1,3 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
OH
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um -491 -
( «~Α período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(4-hidroxi-3,5-dibromofenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,89 g). Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(4-hidroxi-3,5-di-isopropiloxifenil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 425 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 277
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /H[2-[ [[3 - [(aminoiminometil)amino] -feniljcarbonil] aminojacetil] amino] -3,5-dicloro-4-hidroxibenzenopropanóico
-492- h*- y
Passo A
Adicionou-se acetato de amónio (2,5 equivalentes), seguido pela adição de hidrogenomalonato de etilo (1,1 equivalentes), a 4-hidroxi-3,5-diclorobenzaldeído (Aldrich) (10 g) em etanol (70 mL). Agitou-se a mistura reaccional aquecendo-se ao refluxo durante 5 horas. Arrefeceu-se a mistura, e retirou-se o etanol sob pressão reduzida. Adicionou-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e fraccionou-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Eliminou-se a fase orgânica e tomou-se básica a fase ácida com K2CO3 sólido. Fraccionou-se a mistura resultante adicionando cloreto de metileno (150 mL), separou-se e secou-se sobre Na2S04. Evaporou-se o solvente para se obter DL-3-amino-3-(4-hidroxi-3,5-diclorofenil)-propionato de etilo sob a forma de um sólido (2,5 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto do Exemplo M (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um -493 -
C_J período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-amino-3-(4-hidroxi-3,5-diclorofenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,9 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-amino-3-(4-hidroxi-3,5-di-isopropilo-xifenil)-propionato de etilo produzido no Passo B (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 325 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 278
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido y5-[[2-[[[3-[(5,6-dihidro-4H-tiazin-2-il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina- 3 -propanóico
Passo A
Adicionou-se o composto preparado no Exemplo 104 (2,0 g) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio a 5% sobre carbono (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr, durante um período de 2,5 horas. Após se completar a reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio.
Passo B
Adicionou-se o composto preparado no Passo A a acetonitrilo (20 mL), seguido pela adição de 2-metil-tiodihidro-l,3-tiazina (2,0 g) [preparado de acordo com J. Chem. Soc.. Perkin Transaction, 1943, p. 243-245] e aqueceu-se durante 4 horas. Ao completar-se a reacção, adicionou-se água e purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (1,3 g). Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(piridil)-propionato de etilo com tiazina preparado no Passo B (700 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 520 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 279
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /^[[2-[[[5-[(aminoiminometil)amino]-2-hidroxifenil] carbonil] amino] acetil] amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico
Passo A
O
Colocaram-se ácido amino-salicílico (10 g), K2CO3 (10 g), e di-tert-
butoxicarbonato (12 g) num balão contendo água/acetonitrilo (100 mL, (1:1)). Monitorizou-se o decurso da reacção por RPHPLC. Ao completar-se a reacção adicionou-se solução aquosa diluída de HC1 (valor do pH = 4), separou-se o produto da mistura, e filtrou-se resultando num sólido vermelho escuro (15 g).
Secou-se o composto num forno a 70°C durante 16 horas. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
OH H BocN'
CON----^c°2h
H
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (2,0 g, 0,8 mmole) ao composto de N-Boc produzido no Passo A (2,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (4 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de glicinato de etilo (2,1 g, 0,9 mmole), seguido pela adição de DIEA (2,0 mL). Após se completar a reacção (2 horas), extraiu-se o produto com acetato de etilo (100 mL), lavou-se com solução aquosa de HC1, salmoura e secou-se sobre Na2S04 para se obter um óleo escuro (2,5 g). Os EM e RMN de fH eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C H Boc N‘
.OH
CO!^w^C01 H C02Et
Cl
Dissolveu-se aducto de N-Boc-benzamida de glicinato de etilo produzido no Passo B (2 9) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (200 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Ao completar-se a hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido clorídrico até ao valor de pH = 4. Extraiu-se o produto com acetato de etilo (100 mL), lavou-se com solução aquosa de HC1, salmoura e secou-se sobre Na2S04, para se obter um óleo escuro. Agitou-se vigorosamente o óleo com éter para se obter um sólido (1,9 g) após filtração, e secou-se numa estufa em vazio durante 16 horas. Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,0 g, 0,4 mmole) ao composto de glicina produzido no Passo C (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,9 g). Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada. -498-
Passo E
Dissolveu-se o composto do Passo D (6 g) em cloreto de metileno (50 mL). A esta mistura adicionou-se HCl/dioxano (20 mL, 4N). Agitou-se a mistura durante 1-2 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela adição de éter. Retirou-se o solvente novamente sob pressão reduzida. Purificou-se o sólido por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,8 g). Os EM e RMN de ’Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo F
Dissolveu-se a anilina do Passo E em acetonitrilo (20 mL). Adicionou-se cloridrato de pirazole-carboxamidina (2 g) a esta mistura, seguido pela adição de DIEA. Aqueceu-se a mistura ao refluxo durante 4 horas. Ao completar-se a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,9 g). Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada. -499-
Passo G
Dissolveu-se o aducto de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato de etilo produzido no Passo F (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 125 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 280
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /^[[2-[[[3-[(fenoxiamino)carbonil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
O
CO2H
Passo A
O
Adicionaram-se fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (Lancaster) (5 g) e NMM (1 equivalente) a cloridrato de O-fenil-hidroxilamina (Fluka) (4 g). -500-
Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora a 70°C. Após se completar a reacção, retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter uma massa sólida. Adicionou-se água e filtrou-se um sólido escuro (7,5 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Ph—O
Dissolveu-se o composto produzido no Passo A (7 g) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (4 g). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Ao completar-se a hidrólise (4-6 horas), adicionou-se solução aquosa de HC1 a 10% até ao valor de pH = 2. Filtrou-se o produto para se obter um sólido branco (7 g) que se secou-se numa estufa em vazio, a 70°C durante 16 horas. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,4 g, 0,5 mmole) à ureia-ácido carboxílico de O-fenil-hidroxilamina no Passo B e a fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo [(A13) no Esquema V] (1,0 g, 0,5 mmole) em ^ ' "«* * ( -501 - dimetilformamida seca (20 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(piridil)-propionato de gly (2,2 g, 0,7 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL), numa só porção. Após se completar a reacção, purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,8 g). Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o composto do Passo C (300 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 500 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 281
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido y9-[[2-[[[3-[[[(fenilamino)amino]-carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico
co2h
-502- Passo A
co2et
PKH
Adicionaram-se fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (Lancaster) (5 g) e NMM (1 equivalente) a cloridrato de fenil-hidrazina (Aldrich) (3,5 g). Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora a 70°C. Após se completar a reacção, retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter uma massa sólida. Adicionou-se água e filtrou-se o sólido escuro (8,7 g). Os EM e RMN de H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
CO2H
Dissolveu-se o composto produzido no Passo A (5 9) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (3 g). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Ao completar-se a hidrólise (4-6 horas), adicionou-se solução aquosa de HC1 a 10% até ao valor de pH = 4. Filtrou-se o produto para se obter um sólido amarelo (3,2 g) e secou-se numa estufa em vazio, a 70°C durante 16 horas. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (500 mg, 0,5 mmole) ao composto produzido no Passo B e a fenilisocianato de 3-etoxicarbonilo (1,0 g, 0,5 mmole) em dimetilformamida seca (20 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 1 hora, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(piridil)-propionato de glicina (1,0 g, 0,7 mmole) em DMF/NMM (1:1) (5,0 mL), numa só porção. Após se completar a reacção, purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,8 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Dissolveu-se o composto do Passo C (300 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 500 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada. -504-
Exemplo 282
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /^[[2-[[[5-[(aminoiminometiI)amino]-2-hidroxifenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se glicina (20 g, 266 mmole) a água (200 mL), seguida pela adição de hidróxido de potássio (20 g, 357 mmole), e arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo. Adicionou-se cloreto de 3-nitrobenzoílo (Aldrich) (20 g, 108 mmole) para acetonitrilo (20 mL) gota a gota, durante um período de 10 minutos. Após se completar a reacção (3-4 horas), adicionou-se ácido clorídrico concentrado até ao valor de pH = 1, seguido pela adição de solução aquosa saturada de NaCl (75 mL). Filtrou-se o produto, lavou-se com água e secou-se com ar (22 g, rendimento de 90%).
Passo B 02i
C02Et
O C!
Cl l.- —tii ·Α,. \ - 505 - M-
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1,5 g, 0,7 mmole) ao composto produzido no Passo A (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato de etilo (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), isolou-se o produto adicionanado água/solução aquosa de HC1 (5 mL) e filtrando o produto para se obter um sólido branco (0,9 g). Os EM e RMN de !Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Sujeitou-se o composto produzido no Passo B às condições descritas nas Tetrahedron Letters. Vol. 25, 1984, 839-842, para a resução do grupo nitro. Levou-se a cabo a redução sobre 2 g do composto de nitro.
Passo D
Ph—O
-506- -506-
C_J
Adicionou-se isopropanol (20 mL) ao composto produzido no Passo C (2 g), seguido pela adição de difenoxicianamina (1 g) (Aldrich). Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora a 70°C. Após a conclusão da reacção, retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter uma massa sólida. Adicionou-se éter e filtrou-se o sólido escuro (3,2 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo E
Adicionou-se etanol (10 mL) ao composto produzido no Passo D (1 g), seguido pela adição de hidrazina (1,5 mL) (Aldrich). Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora a 25°C. Após se completar a reacção, retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter uma massa sólida. Após se completar a reacção (1 hora), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo), para se obter um sólido branco (0,7 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo F
Dissolveu-se o composto produzido no Passo E (300 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao -507-
valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 430 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 283
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /?-[[2-[[[3-[(l,2,3,4-tetrahidro-2,4-dioxopirimidin-6-il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3- propanóico
Passo A
O
Adicionou-se ácido 3-aminobenzóico (4 g) a etoxietanol (4 mL), seguido por 6-cloro-uracilo (4 g), e aqueceu-se a 125°C durante 3-4 horas. Filtrou-se o produto, lavou-se com éter e secou-se com ar (4,5 g) para se obter um sólido escuro. Os EM e RMN de *Η eram consistentes com a estrutura apresentada. - 508 -
.(
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (2 g, 0,7 mmole) ao composto produzido no Passo A (2,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de tert-butil-glicina (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de DIEA (2,0 mL). Após se completar a reacção (2-3 horas), isolou-se o produto extraindo-o em acetato de etilo, lavou-se com solução aquosa de HC1, solução aquosa saturada de K2C03, salmoura e secou-se sobre Na2S04 para se obter um óleo amarelo (3 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o composto produzido no Passo B (2 g) em cloreto de metileno (50 mL). Adicionou-se TFA (20 mL) a esta mistura. Agitou-se a mistura reaccional durante 12 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela adição de éter. Filtrou-se o sólido (1,8 g) e secou-se em vazio durante 1-2 horas. Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (1.5 g, 0,7 mmole) ao composto produzido no Passo C do Exemplo 283 (1,0 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3-piridil)-propionato (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo), para se obter um sólido branco (0,9 g). Os EM e RMN de *Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo E
Dissolveu-se o composto produzido no Passo D (300 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 430 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -510-
C—J
Exemplo 284
Preparação de ácido 3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[(l,2,3,4-tetrahidro-2,4~ dioxopirimidin-6-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]- benzenopropanóico
O
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (0,6 g) ao composto produzido no Passo C do Exemplo 283 (0,6 9,) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,9 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
-511 - Passo B
Dissolveu-se o composto produzido no Passo A (200 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 105 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 285
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3,5-dicloro-/^[[2-[[[3-[[imino( 1 -
Passo A
TF A ' 0
N
-Cl -COsEt
TFA O -512-
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 24, substituindo benzilamina no exemplo 23, Passo B, por um equivalente de piperidina, e dicloridrato de DL-3-amino-3-(3-piridil)-propionato de etilo no Exemplo 1, Passo C e utilizado ainda no Exemplo 1, Passo D, por uma quantidade equivalente de cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato de etilo, tal como se descreve no Exemplo 23, Passo C. Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o composto produzido no Passo A (200 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 105 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 286
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido y3-[[2-[[[3-[(benzoxazol-2-il)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico
- 513 -
C—J «Ά
Passo A
Adicionou-se o composto preparado no Exemplo 104 (2,0 g) a etanol absoluto (60 mL) numa bomba de Parr. Adicionou-se paládio a 5% sobre carbono (500 mg) e hidrogenou-se a mistura sob 50 psi num equipamento de Parr, durante um período de 2,5 horas. Após se completar a reacção, retirou-se o catalisador de paládio por filtração através de uma almofada de celite. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se a amostra em vazio.
Passo B
Dissolveu-se o composto preparado no Passo A em DMF (20 mL). Adicionaram-se 2-clorobenzoxazole (Aldrich) (2,0 g) e K2C03 (4 g) a esta mistura. Aqueceu-se esta mistura a 70°C até se consumir a anilina. Após se completar a reacção, purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 215 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o composto preparado no Passo B (200 mg) em -514- Μ
água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítío (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 185 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 287
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /^[[2-[[[3-[(5-fenil-lH-imidazol-2-il)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-propanóico
O
Passo A HCI * H2N.
H 0°Ν^0°2Β
Adicionou-se o composto preparado no Exemplo M, Passo B (5 g) a etanol (100 mL), seguido pela adição de HCI seco em dioxano (10 mL). Aqueceu-se a mistura ao refluxo durante 2 horas. Retirou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter o éster etílico (5,6 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se acetonitrilo (50 mL) ao produto do Passo A (3 g), seguido pela adição de bromoacetofenona (2,7 g) e DIEA (2 mL). Aqueceu-se a mistura reaccional durante 2 horas e retirou-se o solvente sob pressão reduzida. Isolou-se o produto por extracção em acetato de etilo e secou-se sobre Na2SC>4 para se obter um sólido vermelho escuro (5 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Dissolveu-se o composto produzido no Passo B (2 g) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se solução aquosa de HC1 até ao valor de pH = 7. Filtrou-se o produto e secou-se numa estufa para se obter 2,6 g de um sólido escuro. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -516-
«•α. I
Passo D Ο
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (0,3 g, 0,7 mmole) ao composto produzido no Passo C (0,5 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (5 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3-piridil)-propionato (1,1 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,9 g). Os EM e RMN de ^ eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo E
Dissolveu-se o composto produzido no Passo D (250 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após a conclusão da hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até ao valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 110 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada. -517-
Kxemplo 288
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-[(3,5-diclorofeml)amino]-5-oxopentanóico
Passo A
Agitou-se uma mistura de ácido /^-aminoglutárico (Sigma) (5 9) e anidrido trifluoroacético (Sigma) (20 mL) durante 1-2 horas a 25°C. Removeu-se o solvente sob pressío reduzida para se obter um óleo. Adicionou-se éter (50 mL) ao óleo e filtrou-se o produto (5 g). Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
-518-
Agitou-se uma mistura em DMF (20 mL) do produto do Passo A e 3,5-dicloroanilina (6 g) durante 16 horas. Após se completar a reacção, adicionaram-se solução aquosa de HC1 (100 mL) e acetato de etilo (100 mL),e agitou-se a mistura, e separou-se. Lavou-se a fase orgânica com salmoura e secou-se sobre Na2S04 para se obter a amida do ácido (4 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Removeuu-se o grupo trifluoroacetato do produto do Passo B aquecendo o composto produzido no Passo B com solução diluída de hidróxido de amónio (10 mL em 50 mL de água). Após se completar a reacção, acidificou-se a mistura com HC1 a 10% e filtrou-se o produto (2,5 g). Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Adicionou-se o composto produzido no Passo C (2 g) a etanol (100 mL), seguido por HC1 seco em dioxano (10 mL). Aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo durante 2 horas. Removeu-se o solvente sob pressão -519-
e~~J reduzida para se obter o éster etílico (1,9 g). Os EM e RMN de 'h eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo E
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (0,6 g, 0,7 mmole) ao composto produzido no Exemplo M, Passo A, (0,6 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida seca (5 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (100 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se o composto produzido no Passo D do Exemplo 288 (0,7 g, 0,5 mmole), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (1-16 horas), purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter um sólido branco (0,51 g). Os EM e RMN de !Η eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo F
Dissolveu-se o composto produzido no Passo E (250 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após se completar a hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 110 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada. -520- C--'-f ^
Exemplo 289
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido y3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]-5-carboxifenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico
Passo A
H
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (6,5 g) a 5-nitroiso-hidrogenofitalato de metilo (5 g) em dimetilformamida seca (10 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se tert-butil-/?-glicina (2,6 g), seguida pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (4 horas), isolou-se o produto por extracção com acetato de etilo e secou-se sobre Na2S04, para se obter um sólido branco (0,51 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o composto produzido no Passo A (5 g) em dioxano (50 mL). Adicionou-se HC1 seco (20 mL, 4N) a esta mistura. Agitou-se a mistura reaccional durante 1-2 horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pelas adição de éter e remoção do solvente sob pressão reduzida. Filtrou-se o sólido para se obter um sólido branco (4 g) e secou-se numa estufa de vazio. Os EM e RMN de lH eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succmimidilo (DSC) (2 g) ao composto produzido no Passo B (2 g) em dimetilformamida seca (10 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(3-piridil)-propionato de etilo (1,6 g), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (4 horas), isolou-se o produto por extracção com acetato de etilo e secou-se sobre Na2S04 para se obter um óleo (3 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada. -522- h-ϊΐ'' £----- ^
Passo D
Sujeitou-se o composto produzido no Passo C às condições descritas em Tetrahedron Letters, Vol. 25, 1984, 839-842 para se reduzir o grupo nitroílo. Levou-se a cabo a redução sobre 2 g de nitrocomposto, para se obter 1 g de produto. Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo E
Guanidou-se o composto produzido no Passo D de acordo com o método no Exemplo M numa escala de 1 g, e purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo), para se obterem 110 mg do composto sob a forma um sólido branco. Os EM e RMN de ^ eram consistentes com a estrutura apresentada.
-523- Passo F
Dissolveu-se o composto produzido no Passo E (100 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após se completar a hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 110 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de 1H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 290
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido j#-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]-5-carboxifenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico
Passo A
H
ΟφΜβ -524-
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (65 g) a 5-nitroiso-hidrogenoftalato de metilo (5 g) em dimetilformamida seca (10 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se tert-butil-/?-glicina (2,6 g), seguida pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (4 horas), isolou-se o produto por extracção com acetato de etilo e secou-se sobre Na2S04, para se obter um sólido branco (5,1 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Dissolveu-se o composto produzido no Passo A (5 g) em dioxano (50 mL). Adicionou-se HC1 seco (20 mL, 4N) a esta mistura. Agitou-se a mistura reaccional durante 12 horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pelas adição de éter e remoção do solvente sob pressão reduzida. Filtrou-se o sólido para se obter um sólido branco (4 g) e secou-se numa estufa de vazio. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C -525-
M C~
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (2 g) ao composto produzido no Passo B (2 g) em dimetilformamida seca (10 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato de etilo (1,6 g), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (4 horas), isolou-se o produto por extracção com acetato de etilo e secou-se sobre Na2S04 para se obter um óleo (3 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Sujeitou-se o composto produzido no Passo C às condições descritas em Tetrahedron Letters, Vol. 25, 1984, 839-842 para se reduzir o grupo nitroílo. Levou-se a cabo a redução sobre 2 g de composto de nitro, para se obter 1 g de produto.
Passo E
Guanidou-se o composto produzido no Passo D de acordo com o método no Exemplo M numa escala de 1 g e purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo), para se obterem 110 mg do composto sob a forma um sólido branco. Os EM e RMN de eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo F
Dissolveu-se o composto produzido no Passo E (100 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após se completar a hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obterem 25 mg do composto em título, sob a forma de -527- Μ ______ [ *-Α um sólido branco. Os EM e RMN de lH eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 291
Preparação do sal bis(trifluoroacetato) de ácido y5-[[2-[[[3,5-bis-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino] -3,5-diclorobenzenopropanóico
Passo A
Adicionou-se glicina (20 g, 266 mmole) a água (200 mL), seguida pela adição de hidróxido de potássio (20 g, 357 mmole), e arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo. Adicionou-se cloreto de 3-dinitrobenzoilo (Aldrich) (20 g, 108 mmole) em acetonitrilo (20 mL) gota a gota, durante um período de 10 minutos. Após se completar a reacção (3-4 horas), adicionou-se ácido clorídrico concentrado até um valor de pH = 1. Filtrou-se o produto, lavou-se com água e -528-
secou-se ao ar (20 g). Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succimmidilo (DSC) (1,2 g) ao composto produzido no Passo A (2 g) em dimetilformamida seca (10 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato de etilo (1,2 g), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (4 horas), isolou-se o produto por extracção com acetato de etilo e secou-se sobre Na2S04, para se obter um óleo amarelo (2,1 g). Os EM e RMN de 'H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
Sujeitou-se o composto produzido no Passo B às condições descritas em Tetrahedron Letters. Vol. 25, 1984, 839-842, para a redução do grupo nitroílo. Levou-se a cabo a redução sobre 2,5 g do composto nitro para se -529- M b-a-h
obter 2,1 g do derivado de 3,5-dianilino. Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Guanidou-se o composto produzido no Passo C de acordo com o método no Exemplo M numaescala de 2 g (utilizando 4 g de agente de guanidação) e purificou-se por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo), para se obterem 800 mg de um sólido branco. Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo E
Dissolveu-se o composto produzido no Passo D (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após se completar a hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obterem 450 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada. - 530-
Exemplo 292
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido /^[[2-[[[[3-[(aminoiminometil)-amino]-5-(trifluoroacetil)amino] fenil] carbonil] amino]acetil] amino]-3,5- diclorobenzenopropanóico
Passo A
Agitou-se uma mistura de ácido 5-amino-3-nitro-benzóico (Lancaster) (3 g) e anidrido acético (Sigma) (20 mL) em cloreto de metileno durante 2 dias a 25°C. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter um óleo. Adicionou-se o óleo a água (50 mL) e filtrou-se o produto (4,5 g). Secou-se o produto numa estufa a 70°C durante 16 horas. Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada. -531 - Passo Β Ο2Ν
.CO MsSv^C02~f~
HN
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (3 g) ao composto produzido no Passo A (2,7 g) em dimetilformamida seca (4 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de tert-butil-glicina (2,7 g), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (4 horas), isolou-se o produto por extracção com acetato de etilo e secou-se sobre Na2SC>4, para se obter um óleo amarelo (3,3 g). Os EM e RMN de *H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
O2N
HN
Dissolveu-se o composto produzido no Passo B (3 g) em cloreto de metileno (50 mL). Adicionou-se TFA (20 mL) a esta mistura. Agitou-se a mistura durante 12 horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela - 532-
At- adição de éter. Filtrou-se o sólido (2,7 g) e secou-se numa estufa de vazio durante 1-2 horas. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,5 g) ao composto produzido no Passo C (1,2 g) em dimetilformamida seca (10 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato de etilo (1,7 g), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (4 horas), isolou-se o produto por extracção com acetato de etilo e secou-se sobre Na2S04, para se obter um óleo amarelo (2,1 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada, w
Passo E
Sujeitou-se o composto produzido no Passo D às condições I - 533 -
>/Η ί >
.-►-Ι «-λ descritas em Tetrahedron Letters, Vol. 25, 1984, 839-842, para a redução do grupo nitroílo. Levou-se a cabo a redução sobre 1,8 g do composto nitro para se obter 1,8 g do derivado 3,5-dianilino. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo F
Guanidou-se o composto produzido no Passo E de acordo com o método no Exemplo M numa escala de 1,5 g (utilizando 3 g de agente guanidação) e purificou-se por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo), para se obterem 750 mg do composto acima sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo G
Dissolveu-se o composto produzido no Passo F (500 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após se completar a hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obterem 300 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de ]H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 293
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido y5-[[2-[[[3-(acetiIamino)-5-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,5-diclorobenzenopropanóico
Passo A
CF3
Agitou-se uma mistura de ácido 5-amino-3-nitro-benzóico (Lancaster) (5 g) e anidrido acético (Sigma) (10 mL) em cloreto de metileno durante 2 dias a 25°C. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter um óleo. Adicionou-se o óleo a água (50 mL) e filtrou-se o produto (4,5 g). - 535 -
Secou-se o produto numa estufa a 70°C durante 16 horas. Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo B
O2 HN-COCH3
Adicionou-se carbonato de N,N’-di-succinimidilo (DSC) (3 g) ao composto produzido no Passo A (3 g) em dimetilformamida seca (6 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de tert-butil-glicina (2,1 g), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (4 horas), isolou-se o produto por extracção com acetato de etilo e secou-se sobre Na2SC>4, para se obter um óleo amarelo (3,3 g). Os EM e RMN de ’H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo C
H
Dissolveu-se o composto produzido no Passo B (3 g) em cloreto de metileno (10 mL). Adicionou-se TFA (10 mL) a esta mistura. Agitou-se a mistura durante 12 horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, seguido pela ( ‘'i -536-
adição de éter. Filtrou-se o sólido (3 g) e secou-se numa estufa de vazio durante 1-2 horas. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo D
Adicionou-se carbonato de Ν,Ν’-di-succinimidilo (DSC) (1,5 g) ao composto produzido no Passo C (1,2 g) em dimetilformamida seca (10 mL), seguido pela adição de dimetilaminopiridina (200 mg). Após um período de 20 minutos, adicionou-se cloridrato de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato de etilo (1,7 g), seguido pela adição de NMM (2,0 mL). Após se completar a reacção (4 horas), isolou-se o produto por extracção com acetato de etilo e secou-se sobre Na2S04, para se obter um sólido escuro (2 g). Os EM e RMN de Ή eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo E
Sujeitou-se o composto produzido no Passo D às condições descritas em Tetrahedron Letters. Vol. 25, 1984, 839-842, para a redução do grupo nitroílo. Levou-se a cabo a redução sobre 1,5 g do composto nitro para se -537- cl~—*.1 ‘-i obter 1,5 g do derivado 3-anilino. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo F
Guanidou-se o composto produzido no Passo E de acordo com o método no Exemplo M numa escala de 1,4 g (utilizando 2 g de agente de guanidação) e purificou-se por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo), para se obterem 750 mg do composto acima sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Passo G
Dissolveu-se o composto produzido no Passo F (300 mg) em água/acetonitrilo (1:1), seguido pela adição de hidróxido de lítio (100 mg). Deixou-se agitar a mistura reaccional a 25°C, e monitorizou-se por HPLC. Após se completar a hidrólise (1-2 horas), adicionou-se ácido trifluoroacético até um valor de pH = 2. Purificou-se o produto por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para se obter 200 mg do composto em título, sob a forma de um sólido branco. Os EM e RMN de !H eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplos 294-296
Passo A
Adicionou-se ácido /3-amino-3,5-dicloro-benzenopropanóico (52,78 g, 0,2255 mole) a um balão de 2L com 3 tubuladuras com fundo redondo, apetrechado com um agitador mecânico. Dissolveu-se o ácido /?-amino-3,5-dicloro-benzenopropanóico em 900 mL de acetona e 300 mL de água e carbonato de sódio (3,0 eq., 71,70 g, 0,6765 mole). A um valor de pH = 10. Dissolveu-se o carbonato de succinimidilo FMOC (Sigma Chemical Co., 1,0 eq., 76,06 g, 0,2255 mole) em 600 mL de acetona e adicionou-se lentamente à solução aquosa básica através de um funil de adição, durante 45 minutos. Agitou-se a mistura reaccional durante 16 horas à temperatura ambiente. A análise por HPLC (Waters, Cl 8, fase reversa, coluna de 25 cm, acetonitrilo a 50-90% em água durante 30 minutos) indicou que tinha sido consumido o ácido j#-amino-3,5-dicloro-benzenopropanóico. Retirou-se a acetona da mistura reaccional, em vazio. Acidificou-se a fase aquosa básica até se alcançar um valor de pH = 3, utilizando ácido clorídrico 3,0 N. Lavou-se a fase ácida com 1 L de acetato de etilo numa ampola de decantação de 2 L, separou-se a fase aquosa e lavou-se a fase orgânica (2 x 250 mL de água, 2 x 250 mL de solução aquosa saturada de cloreto de sódio). Secou-se (sulfato de magnésio), filtrou-se e concentrou-se a fase orgânica em vazio até se obterem 300 mL. Adicionou-se éter de petróleo (300 mL) e precipitou-se um sólido floculento branco. Após 24 horas de secagem ao ar, -539- h-rb isolaram-se 38,49 g como primeira colheita (rendimento de 38%). Armazenou-se o licor original para utilização futura. RMN (DMSO): 2,62-2,72 (m, 2H), 4,15-4,32 (m, 1H), 7,21-7,40 (m, 5H), 7,45 (s, 1H), 7,60-7,70 (m, 2H), 7,85 (d, J=7 Hz, 2H), 7,99 (d, J=7 Hz, 1H). EM (FAB) m/z (intensidade relativa): 456,2 (20), 179 (100).
Passo B
Colocou-se resina de Wang (25,0 g, 28,0 mmole) num balão de 1L e 3 tubuladuras com o fundo redondo, apetrechado em cima com um agitador e com uma entrada de azoto. Expandiu-se a resina com 250 mL de cloreto de metileno durante 15 minutos, drenando-se em seguida o excesso de solvente. Activou-se o aminoácido protegido com FMOC, produzido no Passo A (25,66 g, 56,0 mmole) num balão com o fundo redondo de 500 mL, em separado, dissolvendo-o em cloreto de metileno/dimetilformamida (4:1, 125 mL) e adicionando di-isopropilcarbodi-imida (DIC, 8,77 mL, 56,0 mmole) através de uma seringa, seguida por dimetilaminopiridina (DMAP, 0,342 g, 2,8 mmole). Agitou-se a solução a 25°C durante 15 minutos, e adicionou-se então à resina de Wang pré-expandida. Agitou-se a suspensão durante 2 horas a 25°C. Drenou-se a mistura reaccional e lavou-se com metanol (3 x 250 mL), cloreto de metileno (3 x 250 mL) e éter dietílico (3 x 250 mL). Expandiu-se a resina com 250 mL de cloreto de metileno e drenou-se. Adicionou-se o produto do Passo A activado (12,83 g, 28,0 mmole, DIC, 4,36 mL, 28,0 mmole, DMAP, 0,170 g, 1,4 mmole .1 .1
-540- em 100 mL de cloreto de metileno/dimetilformamida a 4:1) à resina expandida. Agitou-se a suspensão a 25°C durante 1 hora. Drenou-se a resina e lavou-se tal como anteriormente. Análise elementar, calculado para materiais ligados à resina:
Calculado: C, 81,31; H, 6,30; N, 1,05; Cl, 5,33.
Determinado: C, 79,03; H, 6,37; N, 1,16; Cl, 5,74.
Passo C
O
Pré-expandiu-se o produto do Passo B (28,0 mmole) num balão de 1L e 3 tubuladuras com o fundo redondo, apetrechado em cima com um agitador e uma entrada de azoto, utilizando 250 mL de cloreto de metileno durante 15 minutos. Drenou-se o solvente e adicionou-se uma solução de piperidina a 20% /dimetilformamida (125 mL) e agitou-se a suspensão a 25°C durante 2 horas. Drenou-se a resina e lavou-se com dimetilformamida (3 x 100 mL), metanol (3 x 100 mL), cloreto de metileno (3 x 100 mL) e éter dietílico (3 x 100 mL). Secou-se a resina utilizando um vazio moderado durante 1 hora. Adicionou-se uma solução activada de FMOC-Glicina (20,81 g, 70,0 mmole, DIC, 10,95 mL, 70,0 mmole, DMAP, 0,85 g, 7,0 mmole, em 150 mL de cloreto de metileno/dimetilformamida, a 4:1) à resina pré-expandida através de uma seringa, e agitou-se a 25°C durante 2 horas. Drenou-se a resina e lavou-se (cloreto de metileno, metanol e éter dietílico, 3 x 100 mL cada um). Pré-expandiu-se a resina -541 - com 250 mL de cloreto de metileno durante 15 minutos, drenou-se e adicionou-se uma solução de FMOC-Glicina activada (10,45 g, 35,0 mmole, DIC, 5,42 mL, 35,0 mmole, DMAP, 0,42 g, 3,5 mmole, em 100 mL de cloreto de metileno/dimetilformamida, a 4:1) à resina pré-expandidâ através de uma seringa. Agitou-se a suspensão a 25°C durante 1 hora. Drenou-se a resina e lavou-se (cloreto de metileno, metanol e éter dietílico, 3 x 100 mL cada um). Secou-se a resina em vazio durante 1 hora. O teste de Kaiser (Kaiser, E., Color Test for Detection of Free Terminal Amino Groups in the Solid-Phase Synthesis of Peptides. Anal. Biochem., 1970, 34, 595-598) indicou que a ligação se encontrava completa.
Passo D
Num balão de 500 mL com o fundo redondo, apetrechado com um agitador magnético, dissolveu-se ácido 3-amino-benzóico (Aldrich, 10,0 g, 50,8 mmole) em 50 mL de dioxano e 133 mL de carbonato de sódio a 10%. Arrefeceu-se a solução agitada até 0°C (gelo/água) e adicionou-se uma solução de cloroformiato de fluorenilmetilo (13,78 g, 53,3 mmole, em 50 mL de dioxano) gota a gota durante 15 minutos. Aqueceu-se a solução a 25°C de um dia para o outro. A análise por HPLC (tal como acima se descreveu) indicou que se tinham consumido as matérias primas. Adicionou-se 500 mL de água à mistura reaccional e formou-se imediatamente um precipitado. Recolheu-se o sólido, lavou-se com ácido cítrico a 10% e secou-se em vazio. Isolou-se 15,23 g -542- Μ- C_ (rendimento de 83,4%) de um sólido floculento branco. RMN (DMSO): 4,18-4,25 (m, 3H), 7,25-7,41 (m, 6H), 7,62-7,72 (m, 3H), 7,89-7,90 (m, 3H). EM (FAB): ião do produto M+H observado a m/z: 360.
Passo E
Pré-expandiram-se 20,0 g do produto do Passo C (22,4 mmole) em 500 mL de cloreto de metileno durante 30 minutos. Drenou-se o solvente e adicionou-se 250 mL piperidina a 20% /dimetilformamida e deixou-se agitar a 25°C durante 40 minutos. Drenou-se a resina e lavou-se com dimetilformamida, metanol, cloreto de metileno, éter dietílico (cada solvente, 3 x 150 mL). O teste de Kaiser indicou que a desprotecção se encontrava concluída. Secou-se a resina utilizando um vazio moderado durante 45 minutos. Pré-expandiu-se a resina utilizando 250 mL de cloreto de metileno, drenou-se e adicionou-se o produto do Passo D (13,54 g, 35,5 mmole, DIC, 5,55 mL, 35,5 mmole, DMAP, 0,88 g, 7,2 mmole, em 100 mL de cloreto de metileno/dimetilformamida, a 4:1) à resina pré-expandida. Agitou-se a mistura reaccional durante 16 horas a 25°C. Drenou-se a resina e lavou-se tal como anteriormente se descreveu. O teste de Kaiser indicou que a reacção não se encontrava concluída. Repetiu-se a reacção de ligação, drenou-se a resina e lavou-se. Uma repetição do teste de Kaiser indicou que a reacção de ligação se havia concluído. Desprotegeu-se de FMOC uma pequena porção de resina (30 minutos com piperidina a 20% /dimetilformamida) -543- (2-^—Λ '~λ retirando-se então da resina (1 hora com ácido trifluoroacético a 95% /água) para análise de RMN. RMN (DMSO): 2,68-2,78 (m, 2H), 3,88 (d, J=7 Hz, 2H), 5,06-5,20 (m, 1H), 7,32-7,69 (m, 4H), 7,54 (t, J=8 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,83 (d, J=8 Hz, 1H), 8,57 (d, J=9 Hz, 1H), 8,87 (t, J=9 Hz, 1H).
Passo F
NH—
Pré-expandiu-se a resina do Passo E (2,0 g, 2,0 mmole), num balão de 100 mL com o fundo redondo, com 20 mL de dimetilformamida, drenou-se, tratando-se então com 20 mL de piperidina a 20% /dimetilformamida, durante 40 minutos a 25°C. Filtrou-se a resina e lavou-se com dimetilformamida, metanol, cloreto de metileno e éter dietílico (3x10 mL, cada um). O teste de Kaiser foi inconclusivo, e repetiram-se o passo de desprotecção e as lavagens. Uma repetição do teste de Kaiser foi novamente inconclusiva, e utilizou-se o material tal como estava. Dividiram-se os 2,0 g de resina em duas porções de 1,0 g e colocaram-se em tubos de vidro de 2 dracmas. Adicionou-se dimetilformamida (4,0 mL/tubo), seguida por isotiocianato de metilo (1,4622 g, 20 mmole). Tamponaram-se os tubos hermeticamente e aqueceram-se a 80°C durante 4 horas. Filtrou-se a resina, e lavou-se com dimetilformamida, metanol, cloreto de metileno e éter dietílico (3x10 mL, cada um). Secou-se a resina em vazio. -544-
Passo G
Transferiu-se o produto sobre resina do Passo F para um balão reaccional com filtro de vidro sinterizado, de 100 mL. Expandiu-sea resina com cloreto de metileno (3 x 10 mL) e drenou-se. Num tubo separado dissolveu-se iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (Aldrich, 0,405 g, 1,58 mmole) em 5 mL de dimetilformamida/cloreto de metileno, a 4:1, e adicionou-se à resina pré-expandida, seguido por trietilamina (0,441 mL, 3,17 mmole). Agitou-se a suspensão reaccional durante 8 horas a 25°C. Drenou-se a resina, e lavou-se com dimetilformamida e cloreto de metileno (3x10 mL, cada um). Secou-se a resina em vazio.
Passo H
Transferiu-se o produto sobre resina do Passo G (0,666 g, 0,7 mmole) para um balão com um filtro de vidro sinterizado, de 15 mL e fez-se a suspensão em 3,5 mL de dimetilformamida/cloreto de metileno (1:1). Adicionou-se metilamina (2,0 M em tetrahidrofurano, 4,4 mL, 8,8 mmole) à suspensão resinosa e deixou-se agitar a 25°C, durante 16 horas. Drenou-se a resina, e lavou- -545-
se com dimetilformamida, metanol, cloreto de metileno e éter dietílico (3 x 10 mL, cada um). Secou-se a resina em vazio durante 1 hora.
Passo I
Transferiu-se o produto sobre resina do Passo G (0,666 g, 0,7 mmole) para um balão com filtro de vidro sinterizado, de 15 mL e fez-se a suspensão em 3,5 mL de dimetilformamida/cloreto de metileno (1:1). Adicionou-se etilamina (2,0 M em tetrahidrofurano, 4,4 mL, 8,8 mmole) à suspensão resinosa e deixou-se agitar a 25°C, durante 16 horas. Drenou-se a resina, e lavou-se com dimetilformamida, metanol, cloreto de metileno e éter dietílico (3 x 10 mL, cada um). Secou-se a resina em vazio durante 1 hora.
Passo J
-546- /<1(1
Transferiu-se o produto sobre resina do Passo G (0 666 g 0 7 mmole) para um balão com filtro de vidro sinterizado, de 15 mL e fez-se a suspensão em 3,5 mL de dimetilformamida/cloreto de metileno (1:1). Adicionou-se isopropilamina (0,749 mL, 8,8 mmole) à suspensão resinosa e deixou-se agitar a 25°C, durante 16 horas. Drenou-se a resina, e lavou-se com dimetilformamida metanol, cloreto de metileno e éter dietílico (3 x 10 mL, cada um). Secou-se a resina em vazio durante 1 hora.
Exemplo 294
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[[(metilamino)-(metilimino)metil]amino]fenil]carbonil]amino]-acetil] amino]benzenopropanóico
Tratou-se o produto sobre resina do Passo H com 2,5 mL de ácido trifluoroacético a 95% /água durante 1 hora, a 25°C. Recolheu-se o filtrado. Lavou-se a resina com 2x1 mL de ácido trifluoroacético a 50% /cloreto de metileno e recolheu-se o filtrado. Lavou-se a resina mais uma vez com 1 mL de cloreto de metileno. Combinaram-se todos os filtrados num tubo tarado de 2 dracmas e concentrou-se sob caudal de azoto. Adicionou-se tolueno (1 mL) para ajudar à remoção do ácido trifluoroacético em excesso, e concentrou-se a amostra novamente sob azoto. Finalmente, adicionou-se cloreto de metileno (1 mL) e -547-
Λ voltou-se a concentrar a amostra para se obter 198,3 mg de um óleo dourado. A HPLC (tal como acima se descreveu, 220 nM) revela um pico principal 91% puro. RMN (DMSO): 2,72 (d, J=7 Hz, 2H), 2,79 (s, 6H), 3,87 (d, J=7 Hz, 3H), 5,11-5,20 (m, 1H), 7,30-7,58 (m, 5H), 7,70-7,80 (m, 4H), 8,55 (d, J=8 Hz, 1H), 8,76 (t, J-3 Hz, 1H), 9,39 (s, 1H). EM (ES): ião do produto observado a m/z: 480.
Exemplo 295
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[[(etilamino)-(metilimino)metil]amino]fenil]carbonil]amino]-acetil] aminojbenzenopropanóico
Tratou-se o produto sobre resina do Passo I com 2,5 mL de ácido trifluoroacético a 95% /água durante 1 hora, a 25°C. Recolheu-se o filtrado. Lavou-se a resina com 2x1 mL de ácido trifluoroacético a 50% /cloreto de metileno e recolheu-se o filtrado. Lavou-se a resina mais uma vez com 1 mL de cloreto de metileno. Combinaram-se todos os filtrados num tubo tarado de 2 dracmas e concentrou-se em caudal de azoto. Adicionou-se tolueno (1 mL) para ajudar a remoção do ácido trifluoroacético em excesso, e concentrou-se a amostra novamente sob azoto. Finalmente, adicionou-se cloreto de metileno (1 mL) e voltou-se a concentrar a amostra para se obterem 261,2 mg de um óleo dourado. -548-
A HPLC (tal como acima se descreveu, 220 nM) revela um pico principal 94% puro. RMN (DMSO): 1,11 (d, J=7 Hz, 3H), 2,72 (d, J=7 Hz, 2H), 2,79 (s, 3H), 3,25-3,60 (m, 2H), 3,87 (d, J=7 Hz, 2H), 5,02-5,20 (m, 1H), 7,30-7,58 (m, 5H), 7,70-7,85 (m, 4H), 8,55 (d, J=8 Hz, 1H), 8,76 (t, J=3 Hz, 1H), 9,40 (s, 1H). EU (ES): ião do produto observado a m/z: 494.
Exemplo 296
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-y3-[[2-[[[3-[[[(L metiletil)amino]-(metilimino)metil]amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]benzenopropanóico
Tratou-se o produto sobre resina do Passo J com 2,5 mL de ácido trifluoroacético a 95% /água durante 1 hora, a 25°C. Recolheu-se o filtrado. Lavou-se a resina com 2x1 mL de ácido trifluoroacético a 50% /cloreto de metileno e recolheu-se o filtrado. Lavou-se a resina mais uma vez com 1 mL de cloreto de metileno. Combinaram-se todos os filtrados num tubo tarado de 2 dracmas e concentrou-se sob caudal de azoto. Adicionou-se tolueno (1 mL) para ajudar na remoção do ácido trifluoroacético em excesso, e concentrou-se a amostra novamente sob azoto. Finalmente, adicionou-se cloreto de metileno (1 mL) e voltou-se a concentrar a amostra para se obter 330,3 mg de um óleo - 549-
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dourado. A HPLC (tal como acima se descreveu, 220 nM) revela um pico principal 89% puro. RMN (DMSO): 1,15 (d, J=7 Hz, 6H), 2,72 (d, J=7 Hz, 2H), 2,79 (d, J=7 Hz, 3H), 3,79-3,92 (m, 3H), 5,05-5,20 (m, 1H), 7,30-7,50 (m, 5H), 7,60-7,78 (m, 4H), 8,55 (d, J=8 Hz, 1H), 8,76 (t, J=3 Hz, 1H), 9,40 (s, 1H). EM (ES): ião do produto observado a m/z: 508.
Exemplo 297-299
Passo A
Adicionou-se ácido 3-amino-3-(4-fluoro-fenil)-propiónico (0,300 g, 1,64 mmole) a um balão de 50 mL com o fundo redondo, apetrechado com um agitador magnético. Dissolveu-se o ácido propiónico em 1 mL de acetona e 6 mL de água, e adicionou-se carbonato de sódio (0,53 g, 4,92 mmole). A um valor de pH =10. Dissolveu-se o carbonato de succinimidilo FMOC (Sigma Chemical Co., 0,553 g, 1,64 mmole) em 6 mL de acetona e adicionou-se lentamente à solução aquosa básica através de uma ampola de carga, durante 20 minutos. Agitou-se a mistura reaccional durante 16 horas à temperatura ambiente. A análise por HPLC (Waters, Cl8, fase reversa, coluna de 25 cm, acetonitrilo a 50-90% em água durante 30 minutos) indicou que se havia consumido a matéria prima. Retirou-se a acetona da mistura reaccional, em vazio. Acidificou-se a fase aquosa básica para se alcançar um valor de pH = 3, utilizando ácido clorídrico 3,0 N. Lavou-se a fase ácida num ampola de decantação de 50 mL com 15 mL de -550- Μ C—-( acetato de etilo, retirou-se a fase de água e lavou-se a fase orgânica (2x30 mL de água, 2 x 30 mL se solução aquosa saturada de cloreto de sódio). Secou-se (sulfato de magnésio), filtrou-se e concentrou-se a fase orgânica em vazio. Adicionou-se éter de petróleo (10 mL) e precipitou um sólido floculento branco. Após 24 horas de secagem com ar, isolou-se 0,582 g como primeira colheita (rendimento de 87,5%). Armazenou-se o licor original para utilização posterior. RMN (DMSO): 2,55-2,75 (m, 2H), 4,10-4,30 (m, 3H), 4,85-4,95 (m, 1H), 7,12 (t, J=8 Hz, 2H), 7,24-7,42 (m, 5H), 7,64 (d, J=8 Hz, 2H), 7,82-7,94 (m, 3H). EM (FAB): ião do produto M+Li observado a m/z: 412.
Passo B
Colocou-se resina de Wang (0,60 g, 0,36 mmole) num balão de 100 mL com o fundo redondo. Expandiu-sea resina com 8 mL de cloreto de metileno durante 15 minutos, drenando-se em seguida. Activou-se o aminoácido protegido com FMOC produzido no Passo A (0,365 g, 0,9 mmole) numa balão com o fundo redondo de 25 mL, em separado, dissolvendo-o em cloreto de metileno/dimetilformamida (4:1, 19 mL) e adicionando di-isopropilcarbodi-imida (DIC, 0,141 mL, 0,90 mmole) através de uma seringa, seguida pela adição de dimetilaminopiridina (DMAP, 22 mg, 0,18 mmole). Agitou-se a solução a 25°C durante 15 minutos, e adicionou-se então à resina de Wang pré-expandida. Agitou-se a suspensão durante 2 horas a 25°C. Drenou-se a mistura reaccional e - 551 - - 551 -
c~~a lavou-se com metanol (3 x 10 mL), cloreto de metileno (3 x 10 mL) e éter dietílico (3x10 mL). Repetiu-se a sequência de ligação, para se assegurar que se havia completado a reacção. Após secagem em vazio, expandiu-sea resina em 8 mL de cloreto de metileno, drenou-se e adicionou-se 8 mL de piperidina a 20% /dimetilformamida e agitou-se a suspensão durante 30 minutos. Drenou-se a resina e lavou-se tal como anteriormente se descreveu. Secou-se a resina em vazio durante 1 hora. Análise elementar calaculada para os materiaiss ligados à resina:
Calculado: C, 88,23; H, 7,36; N, 0,76; F, 1,03.
Determinado: C, 87,13; H, 7,31; N, 0,79; F, 1,06.
Passo C
Expandiu-se o produto sobre resina do Passo B com 8 mL de cloreto de metileno, drenando-se em seguida. Adicionou-se uma solução activada de FMOC-Glicina (0,267 g, 0,90 mmole, DIC, 0,140 mL, 0,90 mmole, DMAP, 22 mg, 0,18 mmole, em 10 mL de cloreto de metileno/dimetilformamida, a 4:1) à resina pré-expandida, através de uma seringa, e agitou-se a 25°C durante 2 horas. Drenou-se a resina e lavou-se (cloreto de metileno, metanol e éter dietílico, 3 x 10 mL cada um). Pré-expandiu-se a resina com 20 mL de cloreto de metileno durante 15 minutos, drenou-se e repetiu-se a reacção de ligação para se assegurar -552-
Ay í>-,ín
C~~J que se havia completado a reacção. O teste de Kaiser (Kaiser, E., Color Test for Detection of Free Terminal Amino Groups in the Solid-Phase Synthesis of Peptides. Anal. Biochem., 1970, 34, 595-598) indicou que a ligação se encontrava completa. Fez-se então a suspensão em 8 mL de piperidina a 20% /dimetilformamida durante 30 minutos, drenou-se e lavou-se com dimetilformamida, metanol, cloreto de metileno e éter dietílico (3x10 mL, cada um). Secou-se a resina em vazio durante 1 hora.
Passo D
C°2K. J4H-FMOC
Num balão de 500 mL com o fundo redondo, apetrechado com um agitador magnético, dissolveu-se ácido 3-amino-benzóico (Aldrich, 10,0 g, 50,8 mmole) em 50 mL de dioxano e 133 mL de carbonato de sódio a 10%. Arrefeceu-se a solução agitada até 0°C (gelo/água) e adicionou-se uma solução de cloroformiato de fluorenilmetilo (13,78 g, 53,3 mmole, em 50 mL de dioxano) gota a gota durante 15 minutos. Aqueceu-se a solução a 25°C de um dia para o outro. A análise por HPLC (tal como acima se descreveu) indicou que se haviam consumido as matérias primas. Adicionou-se 500 mL de água à mistura reaccional e formou-se imediatamente um precipitado. Recolheu-se o sólido, lavou-se com ácido cítrico a 10% e secou-se em vazio. Isolou-se 15,23 g (rendimento de 83,4%) de um sólido floculento branco. RMN (DMSO): 4,18-4,25 (m, 3H), 7,25-7,41 (m, 6H), 7,62-7,72 (m, 3H), 7,89-7,90 (m, 3H). EM (FAB): ião do produto M+H observado a m/z: 360. - 553 -
Passo E
Pré-expandiu-se o produto do Passo C utilizando 10 mL de cloreto de metileno, drenou-se e adicionou-se o produto activado do Passo D (0,343 g, 0,90 mmole, DIC, 0,141 mL, 0,90 mmole, DMAP, 22 mg, 0,18 mmole, em 5 mL de cloreto de metileno/dimetilformamida, a 4:1) à resina pré-expandida. Agitou-se a mistura reaccional durante 16 horas a 25°C. Drenou-se a resina e lavou-se tal como anteriormente se descreveu. O teste de Kaiser indicou que a reacção não se encontrava concluída. Repetiu-se a reacção de ligação, drenou-se a resina e lavou-se. Uma repetição do teste de Kaiser indicou que a reacção de ligação se havia concluído. Secou-se a resina em vazio durante 1 hora.
Passo F
Pré-expandiu-se o produto sobre resina do Passo E, colocado num balão de 100 mL com o fundo redondo, com 10 mL de dimetilformamida, drenou-se, tratando-se então com 20 mL de piperidina a 20% /dimetilformamida, -554-
M C_Λ durante 10 minutos a 25°C. Drenou-se a resina e repetiu-se o procedimento. Filtrou-se a resina e lavou-se com dimetilformamida, metanol, cloreto de metileno e éter dietílico (3 x 10 mL, cada um). O teste de Kaiser indicou que o passo de desprotecção se encontrava concluído. Colocou-se a resina num tubo de vidro de 2 dracmas com dimetilformamida (8,0 mL), seguida por isotiocianato de metilo (0,526 g, 7,2 mmole). Tamponizou-se o tubo hermeticamente e aqueceu-se a 80°C durante 4 horas. Filtrou-se a resina, e lavou-se com dimetilformamida, metanol, cloreto de metileno e éter dietílico (3 x 10 mL, cada um). Secou-se a resina em vazio. Análise elementar calculada para material ligado à resina:
Calculado: C, 83,56; H, 6,46; N, 2,19; F, 1,03; S, 1,35.
Determinado: C, 82,32; H, 6,67; N, 2,53; F, 1,02; S, 1,44.
Passo G
Transferiu-se o produto sobre resina do Passo F (100 mg, 0,06 mmole) para um tubo em vidro de 2 dracmas. Expandiu-sea resina com cloreto de metileno (3x1 mL), e drenou-se. Num tubo separado dissolveu-se iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (Aldrich, 18,4 mg, 0,072 mmole) em 3 mL de dimetilformamida/cloreto de metileno, a 4:1, e adicionou-se à resina pré-expandida, seguido por trietilamina (20,1 pL, 0,144 mmole). Agitou-se a suspensão reaccional durante 16 horas a 25°C. Drenou-se a resina, e lavou-se com dimetilformamida, metanol, cloreto de metileno, e éter dietílico (3x4 mL, cada um). Secou-se a resina em vazio durante 3 horas. Tratou-se a resina com ácido trifluoroacético a 95% (1,5 mL), durante 1 hora. Filtrou-se a resina e lavou-se com ácido trifluoroacético a 50% /cloreto de metileno (2 x 1,0 mL), seguido pela adição de cloreto de metileno (1x10 mL). Combinaram-se os filtrados e secou-se em vazio em tubos tarados de 2 dracmas. - 555 - Μ
Exemplo 297
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/5-[[2-[[[3-[[(etilamino)-(metilimino)metil]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]ammo]-4-fluorobenzenopropanóico
Isolaram-se 28,1 mg de um óleo dourado. RMN (DMSO): 1,13 (t, J=7 Hz, 3H), 2,65-2,75 (m, 2H), 2,76-2,85 (m, 3H), 3,25 (t, J=3 Hz, 2H), 3,80-3,95 (m, 2H), 5,10-5,21 (m, 1H), 7,13 (t, J=8 Hz, 2H), 7,30-7,40 (m, 3H), 7,52 (d, J=8 Hz, 1H), 7,65-7,85 (m, 3H), 8,49 (d, J=8 Hz, 1H), 8,71 (t, J=8 Hz, 1H), 9,40 (s, 1H). HPLC (tal como acima se descreveu, 220 nM) 90,15% puro. EM (ES): ião do produto observado a m/z: 444.
Exemplo 298
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-4-fluoro-/?-[[2-[[[3-[[[(l-metiletil)amino]-(metilimino)metil]amino]fenil]carbonil]amino]-acetil] amino]benzenopropanóico
-556-
Isolaram-se 44,9 mg de um óleo dourado. RMN (DMSO): 1,16 (d, J=7 Hz, 6H), 2,61-2,70 (m, 2H), 2,73-2,80 (m, 3H), 3,75-3,90 (m, 3H), 5,10-5,21 (m, 1H), 7,11 (t, J=8 Hz, 2H), 7,25-7,37 (m, 3H), 7,49 (t, J=8 Hz, 1H), 7,59-7,82 (m, 3H), 8,49 (d, J=8 Hz, 1H), 8,70 (t, J=3 Hz, 1H), 9,40 (s, 1H). HPLC (tal como acima se descreveu, 220 nM) 98% puro. EM (ES): ião do produto observado a m/z: 458.
Exemplo 299
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-4-fluoro-/?-[[2-[[[3-[[[(4-piridinilmetil)amino] -(metilimino)metil] amino] fenil] carbonil] -amino] acetil] aminojb enzenopropanóico
Isolaram-se 31,6 mg de um óleo dourado. RMN (DMSO): 2,60-2,72 (m, 2H), 2,81-2,89 (d, J=7 Hz, 3H), 3,80-3,95 (m, 2H), 4,61-4,80 (s largo, 2H), 5,10-5,21 (m, 1H), 7,01-7,22 (m, 4H), 7,29-7,44 (m, 3H), 7,50 (t, J=8 Hz, 1H), 7,65-7,85 (m, 3H), 8,40-8,50 (d, J=8 Hz, 1H), 8,70-8,85 (m, 3H), 9,73 (s, 1H). HPLC (tal como acima se descreveu, 220 nM) 98% puro. EM (ES): ião do produto observado a m/z: 507. - 557 -
At
Prepararam-se os compostos seguintes de acordo com métodos sintéticos em fase sólida, análogos descritos nos Exemplos 294-299.
Exemplo Ri r2 r3 R4 r5 300 Cl H Cl -H uc 301 Cl H Cl -H X 302 Cl H Cl -H | .TFA 303 Cl H Cl -H , .TFA 304 Cl H Cl -H .TFA 305 Cl H Cl -H . .TFA - 558 - - 558 -
Exemplo Ri r2 r3 R4 Rs 306 Cl H Cl -H -ch2ch3 307 Cl H Cl -H -ch2ch2ch3 308 Cl H Cl -H 309 Cl H Cl -H ΚΠ tfa 310 Cl H Cl -H 0 311 Cl H Cl -H kJO 312 Cl H Cl -H 313 Cl H Cl -H ¥ 314 Cl H Cl -H 315 Cl H Cl -H k/CHj CH3 316 Cl H Cl -H Cl - 559-
Exemplo Ri r2 r3 R4 r5 317 Cl H Cl -H ‘CC 318 Cl H Cl -H 319 Cl H Cl -H 320 Cl H Cl -ch3 kJO 321 Cl H Cl -ch3 TFA 322 Cl H Cl -ch3 |^>^N.TFA 323 Cl H Cl -ch3 j^N .TFA 324 Cl H Cl -ch3 - 560- Μ
Exemplo Ri r2 r3 R4 Rs 325 Cl H Cl -ch3 NH 326 Cl H Cl -ch3 -CH2(CF2)CF3 327 Cl H Cl 1 o 9F3 kA 328 Cl H Cl -ch3 o> 329 Cl H Cl -ch3 kJv 330 Cl H Cl -ch3 331 Cl H Cl -ch3 0 332 Cl H Cl -ch3 |—C—N 333 Cl H Cl -ch3
Exemplo Ri r2 r3 R4 Rs 334 Cl H Cl -ch3 ^^1^2 .TFA 335 Cl H Cl -ch3 336 Cl H Cl -ch3 337 Cl H Cl -ch3 ΚΛ-; 338 Cl H Cl -ch3 OH 339 Cl H Cl 1 o u> k0-CH3
Exemplo 361
Preparação do sal trifluoroacetato de (±)-3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidro-5,5-dimetilpirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]benzenopropanoato de etilo
Passo A
Adicionou-se iodometano (3,5 mL) a uma suspensão da l-(3-carboxifenil)-2-tioureia (produzida no Exemplo 236, Passo A) (10,00 g, 0,051 mmole) em etanol (100 mL), e aqueceu-se a 70°C sob atmosfera de azoto, durante 2,5 horas. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida, triturou-se o resíduo com éter contendo EtOAc a 10% (2 x 100 mL) e decantou-se o sobrenadante. Secou-se o sólido resultante em vazio durante 2 horas, dissolveu-se em DMF (75 mL) e adicionou-se gota a gota a uma solução de 2,2-dimetil-l,3-propanodiamina (42 g, 0,41 mole) em DMF (20 mL), durante um período de 1 hora. Aqueceu-se a mistura resultante a 80°C sob atmosfera de azoto durante 16 horas, com armadilhagem simultânea do metilmercaptano em solução aquosa de hipoclorito de sódio a 5%. Destilou-se DMF em vazio, dissolveu-se o resíduo em água (50 mL) e lavou-se com éter dietílico (3 x 25 mL). Acidificou-se a fase aquosa com HC1 2N para um valor do pH de 4,0, momento em que se obteve um precipitado branco. Este filtrou-se, lavou-se com água e éter, e secou-se para se obter o produto pretendido, 8,0 g (63%) sob a forma de um pó branco. Os RMN se !H e EM eram consistentes com a estrutura. -563 -
Passo B
Adicionou-se N-metilmorfolina (0,46 mL) a uma suspensão do sal de HC1 do Passo A (1,0 g, 0,0035 mole) em DMF (15 mL), e arrefeceu-se até -10°C num banho de gelo e sal. Tratou-se então esta mistura reaccional com cloroformiato de isobutilo (0,45 mL), agitou-se a -10°C durante 30 minutos, e gerou-se uma solução de amina pela adição de N-metilmorfolina (0,46 mL) a uma solução de cloridrato de glicinato de butilo (0,6 g) em DMF (5 mL), a 0°C. Agitou-se a mistura reaccional resultante a -10°C durante 1 hora e à temperatura ambiente durante 16 horas, sob atmosfera de árgon. Destilou-se DMF em vazio, tratou-se o resíduo com solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5% (25 mL) e EtOAc (25 mL), e agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. Obteve-se um precipitado branco. Filtrou-se o precipitado, lavou-se com água (2 x 20 mL), e EtOAc (2 x 20 mL), e secou-se para se obter o composto pretendido, 0,58 g (46%). Os RMN de ]H e EM eram consistentes com a estrutura.
Passo C
- 564- - 564-
Η*'
Fez-se a suspensão do produto do Passo B (0,6 g, 0,0017 mole) em dioxano (2,0 mL) e tratou-se com HC1 4N em dioxano (0,9 mL), e agitou-se de um dia para o outro à temperatura ambiente. Diluiu-se a mistura reaccional com éter dietílico, filtrou-se, e lavou-se o resíduo com éter dietílico (3 x 20 mL). Secou-se o sólido amarelo claro resultante num exsicador sobre NaOH em pastilhas e utilizou-se no passo seguinte, sem purificação.
Passo D
Adicionou-se N-metilmorfolina (0,21 mL) a uma solução de sal de HC1 tal como se preparou no Passo C, em DMF (10 mL), e arrefeceu-se até -10°C num banho de gelo e sal. Tratou-se então esta mistura reaccional com cloroformiato de isobutilo (0,24 mL), agitou-se a -10°C durante 30 minutos, e gerou-se uma solução da amina pela adição de N-metilmorfolina (0,46 mL) a uma solução de DL-3-amino-3-(3,5-diclorofenil)-propionato de etilo (produzido tal como no Exemplo 1, Passos A e B, substituindo 3-piridina-carboxaldeído por 3,5-diclorobenzaldeído) (0,6 g, 0,002 mole) em DMF (5 mL), a 0°C. Agitou-se a mistura reaccional resultante a -10°C durante 1 hora e à temperatura ambiente, durante 16 horas sob atmosfera de árgon. Destilou-se em DMF em vazio, triturou-se o resíduo com éter (2 x 25 mL) e decantou-se o sobrenadante. Purificou-se o resíduo insolúvel por HPLC de fase reversa utilizando um -565- gradiente de 30 minutos de CH3CN a 5-70% em água, com um caudal de 70 mL/minuto. Combinaram-se as fracções apropriadas e liofilizaram-se para se obter o sal TFA pretendido, sob a forma de um pó amarelo claro. Os RMN de !H e EM eram consistentes com a estrutura.
Exemplo 362
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-2-hidroxi-/?-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidro-5,5-dimetilpirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]benzenopropanóico
Preparou-se o composto acima pela ligação do produto do Passo C no Exemplo 361 com o produto do Exemplo 440, Passo A, tal como se descreveu no Exemplo 361. Isolou-se o produto pretendido por HPLC de fase reversa utilizando um gradiente de CH3CN de 5 a 70% em água em 30 minutos, com um caudal de 70 mL/minuto. Combinaram-se as fracções apropriadas e secaram-se por congelamento para se obter o sal TFA pretendido. Os RMN de ‘H e EM eram consistentes com a estrutura. - 566-
Exemplo 363
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido y5-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-fenil] carbonil] amino] acetil]amino] -4-fluorobenzenopropanóico
Passo A
Aqueceu-se uma mistura de brometo de 4-fluorofenilo (10,0 g, 0,057 mole), acrilato de tert-butilo (9,52 g, 0,074 mole) acetato de paládio (0,13 g, 0,0057 mole) e trietilamina (5,78 g, 0,057 mole) em 30 mL de DMF a 120°C durante 16 horas. Arrefeceu-se a mistura e tratou-se com 500 mL de água. Extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo (3 x 200 mL) e lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado e purificou-se o resíduo por cromatografia sobre silicagel (acetato de etilo/hexano, a 1:9), para se obterem 10,13 g do produto sob a forma de um óleo amarelo (80%). O RMN era consistente com a estrutura apresentada. C, 70,25; H, 6,80. C, 69,77; H, 7,08.
Análise Calculado para C13H15FO2: Determinado:
Passo B
Tratou-se o produto do Passo A (8,7 g, 0,039 mole) com tert-butanol saturado com amoníaco e 3 mL de ácido acético, a 110°C e 900 psi, num aparelho de Parr durante 48 horas. Filtrou-se a mistura e concentrou-se. Dissolveu-se o resíduo com 200 mL de HC1 IN frio e extraiu-se com acetato de etilo. Basificou-se então a fase aquosa com carbonato de potássio e extraiu-se com cloreto de metileno (2 x 200 mL). Lavaram-se os extractos combinados com salmoura, secaram-se sobre sulfato de magnésio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado para se obter 4,23 g de um óleo amarelo (41%).A atribuição estrutural foi fundamentada pelo espectro de RMN.
Passo C
Adicionou-se rapidamente N-metilpiperidina (0,42 g, 0,0037 mole) a uma solução do composto do Exemplo M (1,0 g, 0,0037 mole) em 10 mL de DMF. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 20 minutos, tratou-se então com cloroformiato de isobutilo a 0°C. Após 15 minutos, adicionou-se uma solução do produto do Passo B em 3 mL de DMF. Deixou-se aquecer a mistura reaccional até à temperatura ambiente e agitou-se de um dia para o outro. Retirou-se a dimetilformamida em vazio e purificou-se o resíduo por HPLC de fase reversa [acetonitrilo/água (contendo 0,5% de TF A)] para se obterem 0,97 g de um sólido amarelo claro (44%):
Análise Calculado para C^H^NsC^F-ljO H2O-l,0 TFA: C, 50,93; H, 5,30; N, 11,88. Determinado: C, 50,61; H, 4,92; N, 11,74. - 568 -
Passo D
Adicionou-se 6 mL de TFA a uma suspensão do produto do Passo C em 10 mL de cloreto de metileno a 0°C. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4 horas. Removeu-se o solvente e purificou-se o resíduo por HPLC de fase reversa [acetonitrilo/água (contendo 0,5% de TFA)] para se obterem 0,75 g do composto em título sob a forma de um sólido branco (75%):
Análise Calculado para Ci9H2oN504F l,5 TFA: C, 46,16; H, 3,79; N, 12,23.
Determinado: C, 45,86; H, 3,68; N, 12,23.
Exemplo 364
Preparação do sal tris(trifluoroacetato) de ácido (±)-y5-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-1 H-imidazole-2-propanóico
Passo A
Aqueceu-se uma solução de 2-imidazole-carboxaldeído (6,0 g, 0,063 mole) e (tert-butilcarbonilmetileno)trifenilfosforano (29,4 g, 0,078 mole) em 150 mL de tetrahidrofurano a 55°C de um dia para o outro. Arrefeceu-se a solução transparente e concentrou-se em vazio. Purificou-se o resíduo por -569- cromatografia sobre silicagel (acetato de etilo/hexano, a 8:2) para se obter 9,7 g do produto (mistura E/Z a 1:1) sob a forma de um sólido branco (79%):
Análise Calculado para C10H14N2O2: C, 61,84; H, 7,27; N, 14,42. Determinado: C, 61,52; H, 7,39; N, 14,21.
Passo B
Adicionou-se lentamente o produto do Passo A a uma suspensão de hidreto de sódio pré-lavado (0,62 g, 0,026 mole) em 40mL de dimetilformamida seca. Após 30 minutos, adicionou-se cloreto de 2-(trimetilsilil)etoximetilo e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionou-se água e extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado e purificou-se o resíduo por cromatografia sobre silicagel (acetato de etilo/hexano, a 1:1) para se obter 3,54 g de isómero E sob a forma de um óleo incolor e 2,66 g de isómero Z sob a forma de um sólido branco (73%).
Análise Calculado para C16H28N2O3S1: C, 59,22; H, 8,70; N, 8,63. Determinado: C, 58,94; H, 9,12; N, 8,53.
Passo C
Adicionou-se lentamente n-butil-lítio (0,012 mole) a uma solução de N-benzil(trimetilsilil)amina (2,16 g, 0,012 mole) em 30 mL de - 570- tetrahidrofiirano seco a -78°C. Após 30 minutos, adicionou-se uma solução do produto do Passo B (2,6 g, 0,008 mole) em 15 mL de tetrahidrofurano, e agitou-se a mistura reaccional a esta temperatura durante 2,5 horas. Interrompeu-se então a reacção com uma solução de ácido acético em tetrahidrofurano, seguida pela adição de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio até se obter um valor de pH de 9. Extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado e purificou-se por cromatografia sobre silicagel (acetato de etilo/hexano, a 6:4) para se obter 1,96 g do produto sob a forma de um óleo transparente (60%).
Análise Calculado para C23H37N3O3S1: C, 64,00; H, 8,64; N, 9,73.
Determinado: C, 63,72; H, 8,85; N, 9,73.
Passo D
Adicionou-se Pd/C (170 mg) a uma solução do produto do Passo C (5,4 g, 0,0125 mole) e formamida de amónio (7,89 g, 0,125 mole) em 150 mL de metanol. Agitou-se a mistura, aquecendo-se ao refluxo, durante 3 horas. Filtrou-se 0 catalisador através de celite e concentrou-se 0 filtrado. Dissolveu-se o resíduo em 400 mL de água, solução aquosa saturada de carbonato de potássio, extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado para se obter 3,9 g do produto sob a forma de um óleo incolor (91%). O espectro de RMN indicou que o composto se encontrava suficientemente puro para o passo seguinte. -571 -
Passo E
Sintetizou-se o composto acima sob as mesmas condições que se descreveram no Passo C do Exemplo 363. Purificou-se o produto impuro por HPLC de fase reversa [acetonitrilo/água (contendo 0,5% de TF A)] para se obter 1,5 g do produto sob a forma de um sólido amarelo (60%):
Análise Calculado para C26H4iN705Si-2,5 TFA: C, 44,07; H, 5,19; N, 11,61. Determinado: C, 44,24; H, 5,14; N, 11,91.
Passo F
Obteve-se o composto em título a partir do produto do Passo E observando o procedimento descrito no Passo D do Exemplo 363. Purificou-se o produto impuro por HPLC de fase reversa [acetonitrilo/água (contendo 0,5% de TFA)] para se obter 0,35 g do composto em título sob a forma de um sólido amarelo (24%):
Análise Calculado para Ci6H19N7O4-3,0 TFA: C, 36,93; H, 3,10; N, 13,70.
Determinado: C, 37,76; H, 2,95; N, 14,22. -572-
Exemplo 365
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/^[[2-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-2,3,5,6-tetrafluorobenzenopropanóico F ·
Produziu-se o composto acima observando a sequência reaccional descrita no Exemplo 364, Passo A e Passo C a Passo F. Confirmou-se a estrutura pelo espectro de RMN.
Análise Calculado para CigH^NsC^F^l^ TFA: C, 42,18; H, 2,98; N, 11,18. Determinado: C, 42,24; H, 3,07; N, 11,12.
Exemplo 366
Preparação de monohidrato do sal trifluoroacetato de ácido (±)-/?-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-bromotiofeno-2-propanóico
- 573 -
Agitou-se uma solução do produto de éster t-butílico do composto acima (preparado de acordo com metodologia análoga tal como se descreve neste documento) (1,0 g, 1,91 mmole) e ácido trifluoroacético (14,8 g, 10,0 mL, 13,0 mmole) em diclorometano (25 mL) a 0°C durante 30 minutos. Deixou-se aquecer a mistura reaccional até à temperatura ambiente e agitou-se durante 6 horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Purificou-se o produto impuro por HPLC (acetonitrilo, água, ácido trifluoroacético) para se obter o composto em título puro (0,43 g, 38%) sob a forma de um sólido branco.
Análise Calculado para CnHigNsC^SBr· CF3C00H-H20: C, 38,01; H, 3,53; N, 11,67; S, 5,34.
Determinado: C, 38,07; H, 3,23; N, 11,48; S, 4,99.
Exemplo 367
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3,5-dicloro-/?-[[2-[[[3-[( 1,4,5,6-tetrahidro-5,5-dimetilpirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]- aminojbenzenopropanóico
Hidrolisou-se o éster etílico preparado no Exemplo 361, Passo D -574-
C ( *Ά (0,22 g) ao ácido, utilizando LiOH 1M, (1,8 mL) em acetonitrilo (0,2 mL), seguido por acidifícação e purificação por HPLC de fase reversa para se obter 0,18 g do ácido sob a forma de um pó amarelo claro. Os RMN de 'H e EM eram consistentes com a estrutura.
Exemplo 368
Preparação do sal trifluoroacetato de ácido (±)-3-bromo-5-dicloro-2-hidroxi-/?-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidro-5,5-dimetilpirimidin-2-il)amino]fenil]-carbonil] amino] acetil] aminojbenzenopropanóico
Preparou-se o composto acima acoplando o ácido preparado no Exemplo 361, Passo C, (0,6 g) com o produto do Exemplo 233, Passo B (0,5 g), de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 361. Isolou-se o produto pretendido por HPLC de fase reversa para se obter 0,38 g do composto acima sob a forma de um pó amarelo claro. Os RMN de !H e EM eram consistentes com a estrutura. - 575 -
Exemplo 370
Preparação do sal de lítio de ácido β- [ [2-[[ [3-[(aminoiminometil)amino] -fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-2-mercaptobenzenopropanóico
Síntese de Tiocinamato de S-Fenilo: Adicionou-se uma solução de cloreto de cinamoílo (14,6 g, 87,68 mmole) em diclorometano (100 mL) a uma solução de tiofenol (9,55 g, 86,68 mmole) e piridina (7 mL) em diclorometano (150 mL) num banho de gelo e água. Após 18 horas à temperatura ambiente, lavou-se a mistura reaccional com ácido clorídrico diluido (100 mL, IN), salmoura (100 mL), secou-se (MgS04) e concentrou-se para se obter 19,0 g (91%) do tioéster pretendido sob a forma de um sólido cristalino.
Passo B Síntese de Tiocoumarina: Agitou-se e aqueceu-se uma mistura de tiocinamato de S-fenilo (14,0 g, 58,25 mmole) e cloreto de alumínio (39 g) a 85°C durante 3 horas. Colocou-se cuidadosamente a mistura reaccional quente sobre gelo, extraindo-se então com acetato de etilo (3 x 300 mL), lavou-se com salmoura (200 mL), secou-se (MgS04) e concentrou-se. Recristalizou-se o resíduo a partir de hexano-acetato de etilo para se obter 5,2 g (52%) do produto pretendido sob a forma de cristais amarelo claro. -576-
Passo C Síntese do Sal Cloridrato de 4-Amino-3,4-Dihidrotiocoumarina: Adicionou-se lentamente hexametildisilazano de lítio (10,22 mL, IN, 10,22 mmole) a uma solução de tiocoumarina (1,41 g, 8,52 mmole) em tetrahidrofurano (20 mL), a -78°C. Após 45 minutos, aqueceu-se a mistura reaccional até 0°C, interrompendo-se então com ácido acético glacial (0,511 g). Após 10 minutos, ffaccionou-se a mistura reaccional entre acetato de etilo (100 mL) e bicarbonato de sódio (100 mL). Secou-se a fase orgânica (MgSC^) e concentrou-se. Dissolveu-se o resíduo obtido em éter (100 mL) e adicionou-se dioxano/HCl (20 mL, 4N). Filtrou-se o precipitado formado e secou-se o sólido em vazio para se obter 0,50 g (27%) do produto pretendido sob a forma de um pó amarelo.
Passo D
Arrefeceu-se uma solução de ácido m-guanidinohipúrico (0,506 g, 1,855 mmole) em dimetilformamida (5 mL) e N-metilmorfolina (0,187 g, 1,855 mmole) até 0°C, e agitou-se durante 15 minutos. Adicionou-se cloroformiato de isobutilo (0,253 g, 1,855 mmole) em três porções. Após 10 minutos, adicionou-se cloridrato de 4-amino-3,4-dihidrotiocoumarina (0,404 g, 1,855 mmole) numa só porção seguido por N-metilmorfolina (0,187 g, 1,855 mmole). Agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional e dissolveu-se o resíduo em tetrahidrofurano/água (1:1,5 mL) e cromatografou-se (fase reversa, água:acetonitrilo a 95:5 durante 60 minutos até água:acetonitrilo a 30:70, contendo TFA a 0,1%). Liofilizaram-se os eluentes para se obter 0,300 g do composto em título sob a forma de um pó amarelo claro.
Os RMN de protão e EM eram consistentes com o produto pretendido.
Exemplo 371
Preparação do sal de dilítio de ácido /?- [ [2-[[[3- [(aminoiminometil)amino] -fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-5-cloro-2-mercaptobenzenopropanóico
Cl
Passo A Síntese de Tiocinamato de S-(4-Clorofenilo): Adicionou-se uma solução de cloreto de cinamoílo (26,0 g, 156,3 mmole) em diclorometano (100 mL) a uma solução de tiofenol (22,6 g, 156,3 mmole) e piridina (12,6 mL) em diclorometano (200 mL) num banho de gelo e água. Após 18 horas à temperatura ambiente, lavou-se a mistura reaccional com ácido clorídrico diluído (100 mL, IN), salmoura (100 mL), secou-se (MgS04) e concentrou-se para se obter 41,0 g (96%) do tioéster pretendido sob a forma de um sólido cristalino.
Passo B Síntese de 6-Clorotiocoumarina: Agitou-se e aqueceu-se uma mistura de tiocinamato de S-(4-clorofenilo) (19,4 g) e cloreto de alumínio (52 g), em pó, a 125°C durante 3 horas. Colocou-se cuidadosamente a mistura reaccional quente sobre gelo/água, extraindo-se então com acetato de etilo (3 x 300 mL), -578- C—«.Ui lavou-se com salmoura (200 mL), secou-se (MgS04) e concentrou-se. Triturou-se o resíduo com hexano/acetato de etilo para se obter 2,0 g (14%) do produto pretendido sob a forma de cristais amarelo claro.
Passo C Síntese do Sal Cloridrato de 4-Amino-6-cloro-3,4-Dihidrotiocoumarina: Adicionou-se lentamente hexametildisilazano de lítio (6,4 mL, IN, 6,4 mmole) a uma solução de 6-clorotiocoumarina (1,05 g, 5,345 mmole) em tetrahidrofurano (20 mL), a -78°C. Após 45 minutos, aqueceu-se a mistura reaccional até 0°C, interrompendo-se então com ácido acético glaciar (0,321 g). Após 10 minutos, fraccionou-se a mistura reaccional entre acetato de etilo (100 mL) e bicarbonato de sódio (100 mL). Secou-se a fase orgânica (MgS04) e concentrou-se. Dissolveu-se o resíduo obtido em éter (100 mL) e adicionou-se dioxano/HCl (20 mL, 4N). Filtrou-se o precipitado formado e secou-se o sólido em vazio para se obter 0,80 g (60%) do produto pretendido sob a forma de um pó amarelo.
Passo D
Arrefeceu-se uma solução de ácido m-guanidinohipúrico (0,548 g, 2,0 mmole) em dimetilformamida (5 mL) e N-metilmorfolina (0,220 mL, 2,0 mmole) até 0°C, e agitou-se durante 15 minutos. Adicionou-se isobutilcloroformiato (0,260 g, 2,0 mmole) em três porções. Após 10 minutos, adicionou-se cloridrato de 4-amino-6-cloro-3,4-dihidrotiocoumarina (0,50 g, 2,0 mmole) numa só porção seguido por N-metilmorfolina (0,220 mL, 2,0 mmole). Agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional e dissolveu-se o resíduo em tetrahidrofurano/água (1:1, 5 mL) e cromatografou-se (fase reversa, -579-
água:acetonitrilo a 95:5 durante 60 minutos até água:acetonitrilo a 30:70, contendo TFA a 0,1%). Basificaram-se os eluentes com uma solução aquosa de hidróxido de lítio e liofilizaram-se então para se obter 0,300 g do composto em título sob a forma de um pó amarelo claro.
Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada.
Exemplo 372
O X=SH; R,,R2=C1; R3,R4=H. X=SH; R] ,R2-F; R3,R4=H. X=SH; RbR2=Me; R3,R4=H. X=SH; Ri,R2=CF3; R3,R4=H. X=SH; Ri,R2=Br; R3,R4=H. X=SH; R,=H, R2=F; R3,R4=H. X=SH; Ri=H, R2=Br; R3,R4=H. X=SH; R,=H, R2=CF3; R3,R4=H. X=SH; Ri=H, R2=CH3; R3,R4—H. e os compostos acima, em que R3 e R4, em conjunto, eram (CH2)3 ou (CH2)2. C—J «-i - 580 -
Exemplo 374
Prepara-se o composto acima fazendo reagir o composto preparado no Exemplo 233, Passo B, com ácido 3-guanidino-5-trifluorometil-hipúrico (preparado de acordo com o procedimento do Exemplo 38) utilizando substancialmente as proporções e o procedimento do Exemplo N, Passo 3, e substituindo GIHA.HC1 por ácido 3-guanidino-5-trifluorometil-hipúrico. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 375
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374 e substituindo o composto do Exemplo 233, Passo B, por cloridrato de (RS)-4-amino-6,8-dicloro-hidrocoumarina preparado no Exemplo 237. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18. -581 -
Exemplo 376
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374 e substituindo o composto do Exemplo 233, Passo B, por cloridrato de (RS)-4-amino-6-cloro-hidrocoumarina preparado no Exemplo 231. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 377
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374 e substituindo o composto do Exemplo 233, Passo B, pelo composto do Exemplo 227. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-l 8.
Exemplo 378
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374 e substituindo o composto preparado no Exemplo 233, Passo B, por cloridrato de (RS)-4-amino-6-nitro-hidrocoumarina preparado no Exemplo 226. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 379
Prepara-se o composto acima a partir do produto do Exemplo 378 utilizando as condições do Exemplo 234. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18. - 583 -
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374 e substituindo o composto preparado no Exemplo 233, Passo B, e um equivalente de NMM, pelo composto preparado no Exemplo 235, Passos A-C, e dois equivalentes de NMM no passo de acoplamento. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 381
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374 e substituindo o composto preparado no Exemplo 233, passo B, por cloridrato de (RS)-4-amino-6-metil-hidrocoumarina (preparado no Exemplo 88). Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 382
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374 e substituindo o composto preparado no Exemplo 233, Passo B, por cloridrato de (RS)-4-amino-hidrocoumarina (preparado no Exemplo 87). Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 383
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374 e substituindo o composto do Exemplo 233, Passo B, por cloridrato de (RS)-4-amino-7-metoxi-hidrocoumarina (preparado no Exemplo 222). Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18. - 585 - C.—<.( >-i
Exemplo 384
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374 e substituindo o composto do Exemplo 233, Passo B, por cloridrato de (RS)-4-amino-8-metoxi-hidropsoraleno (preparado no Exemplo 223). Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 385
Preparação de
Prepara-se o composto acima a partir de 7,8-metilenodioxi-coumarina (que se poderá preparar a partir de 7,8-dihidroxi-cromen-2-ona de - 586-
( acordo com Ρ. Castillo, J.C. Rodriguez-Ubis, e F. Rodriguez, Svnthesis. 10, 839-840 (1986)) utilizando o procedimento do Exemplo 233, Passos A e B.
Passo B
Prepara-se o composto do Exemplo acima utilizando o procedimento do Exemplo 374, substituindo o composto do Exemplo 233, Passo B, pelo sal cloridrato do produto do Passo A. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 386
Passo A
Preparação de
Prepara-se o composto acima a partir de 6,7-metilenodioxi-coumarina [que se poderá preparar a partir de 6,7-dihidroxi-cromen-2-ona de acordo com Spaeth, et al, Chem. Ber.. 70, 702 (1937)] utilizando o procedimento do Exemplo 233, Passos A e B. - 587- C_Λ
Passo B
Prepara-se o composto do Exemplo acima utilizando o procedimento do Exemplo 374, substituindo o composto do Exemplo 233, Passo B, pelo sal cloridrato do produto do Passo A. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 387
Passo A
Preparação de
Prepara-se o composto acima a partir de 5,6-metilenodioxi-coumarina [prepararada a partir de 5,6-dihidroxi-cromen-2-ona de acordo com P.
Castillo, J.C. Rodriguez-Ubis, e F. Rodriguez, Svnthesis. 10, 839-840 (1986)] utilizando o procedimento do Exemplo 233, Passos A e B. -588 -
Passo B
Prepara-se o composto do Exemplo acima utilizando o procedimento do Exemplo 374, substituindo o composto do Exemplo 233, Passo B, pelo sal cloridrato do produto do Passo A. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Passo A
Exemplo 388
Preparação de
O
O - 589-
Pode preparar-se o composto acima fazendo reagir esculina (Aldrich, tomada substancialmente isenta de água de hidratação por armazenamento de P2O5 num exsicador em vazio) substancialmente de acordo com o procedimento de S. Kato, et al., Buli. Chem. Soc. Jap., 54, 6, 1981, 1895-1896, para a conversão de fenil-a-D-glucoparanósido em fenil-2,3,4,6-tetra-0-benzil-a-D-glucoparanósido e subtituindo as quantidades molares de reagentes para se efectuar a completa conversão de esculinan do composto acima. Pode isolar-se o produto pretendido utilizando cromatografia sobre silicagel habitual ou por HPLC de C-18 preparativa.
Passo B
Bz
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 233, Passo B, e substituindo o produto do Exemplo 233, Passo A pelo produto do Passo A.
Passo C
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 374, substituindo o composto preparado no Exemplo 233, Passo B, pelo sal cloridrato do produto do Passo B. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC deC-18.
Passo D
,C02H CF3
O
ΌΗ - 591 -
Prepara-se o composto acima tomando o produto do Passo C, dissolvendo-o num solvente apropriado (e.g. solução aquosa de etanol), transferindo a solução para um reactor de pressão de Fischer-Porter apetrechado com válvulas de entrada e de saída, manómetro de pressão e válvula para libertação de pressão e retirando os grupos benzilo segundo o procedimento habitual de hidrogenólise catalítica: catalisador de Pd a 5% sobre carbono e atmosfera de hidrogénio, até a reacção de desbenzilação se encontrar substancialmente completa. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 389
Passo A
Preparação de
Prepara-se o composto acima utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 235, Passos A-C.
Passo B
Prepara-se o composto do Exemplo acima utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 235, Passo D e E e isola-se utilizando RPHPLC C-18 preparativa.
Exemplo 390
Passo A
Preparação de 4-cloro-2-iodofenol
OH
Cl
Prepara-se o composto acima de acordo com o procedimento de KJ. Edgar e S.N. Falling, J. Org. Chem., 55, 16, 1990, 5287-5291. - 593 - Μ
Passo B
Preparação de 5-cloro-3-iodo-salicilaldeído
OH
Converte-se 4-cloro-2-iodofenol preparado no Passo A no seu salicilaldeído utilizando o procedimento de G. Casiraghi, et al., J.C.S. Perkin I. 1978,318-321.
Passo C
Preparação de 6-cloro-8-iodocoumarina
O
Converte-se 5-cloro-3-iodo-salicilaldeído na coumarina correspondente, 6-cloro-4-iodocoumarina, utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 233, Passo A, e substituindo 3-bromo-5-cloro-salicilaldeído por 5-cloro-3-iodo-salicilaldeído. Pode isolar-se o produto pretendido por cromatografia sobre silicagel habitual ou por distilação. -594-
Passo D
Preparação de (R,S)-4-amino-6-cloro-8-iodo-hidrocoumarina
O
Prepara-se o composto acima utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 233, Passo B, e substituindo 3-bromo-5-cloro-salicilaldeído pelo produto do Passo C, para se obter o produto sob a forma do sal cloridrato substancialmente puro.
Passo E
Prepara-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 274, e substituindo o composto preparado no Exemplo 233, Passo B, pelo produto do Passo D. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18. -595 -
Ai vi
Exemplo 391
Prepara-se o composto acima utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 86, Passo D, substituindo GIHA.HC1 por cloridrato de ácido guanidino-5-triluorometil-hipúrico. Isola-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplo 392
Passo A
Preparação de
Η O - 596-
Prepara-se ο composto acima utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 235, Passo A, substituindo ácido 5-bromonicotínico pelo éster 4-tert-butílico de ácido aspártico.
Passo B
Preparação de
O
Prepara-se o composto acima de acordo com substancialmente o procedimento de M.R. Angelastro, et ai, J. Med. Chem., 1994, 37, 4538-4554, substituindo o composto 2 da Referência {éster 1,1-dimetiletilíco de ácido (S)-[l-(metoximetilamino)carbonil]-2-metilpropil]carbâmico} pelo produto do Passo A e desprotegendo substancialmente de acordo com o procedimento utilizado para a obtenção do composto 3 da Referência, para se obter o composto acima, sob a forma do sal de HC1.
Passo C
Prepara-se o composto do Exemplo acima utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 85, Passo A, substituindo éster t-butílico de glicina pelo produto do Passo B, e substituindo GIHA.HC1 pelo cloridrato de ácido 3-guanidino-5-trifluorometil-hipúrico. Pode obter-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18. -597-
Exemplo 393
Passo A
Preparação de éster benzílico de ácido 3-N-t-Boc-amino-4-hidroxi- (3S)-butírico
Dissolveu-se éster /J-benzílico de ácido N-t-Boc-L-aspártico (10,0 mmole) em 10 mL de THF e adicionou-se gota a gota, ao longo de um período de 30 minutos, a uma solução a 0°C de BH3-THF (20 mL, 20,0 mmole), sob árgon. Após se agitar a mistura reaccional durante 1-2 horas adicionais a 0°C, interrompeu-se a reacção pela adição gota a gota de ácido acético a 10% em metanol, e evaporou-se o solvente. Dissolveu-se o resíduo oleoso em acetato de etilo e extraiu-se com HC1 IN, água, e NH4HCO3 1M. Secou-se a fase de acetato de etilo (Na2S04) e evaporaram-se os voláteis para se obter um óleo que se cristalizou a partir de isopropanol/hexano (p.f. 56-57°C): RMN de 'H, CDC13, S, 1,45 (s, 9H), 2,65 (d, 2H), 3,68 (d, 2H), 5,12 (s, 2H), 5,25 (m, 1H), 7,35 (m, 5H). - 598 - ? β
Passo B
Preparação de
Oxidou-se o éster benzílico de ácido 3-N-t-Boc-amino-4-butírico preparado no Passo A para o aldeído correspondente utilizando as seguintes condições de oxidação de Swem: dissolveu-se cloreto de oxalilo (6,40 g, 20,72 mmole) em CH2C12 (25 mL) sob árgon e arrefeceu-se até -63°C utilizando um banho de gelo seco/clorofórmio. Adicionou-se DMSO seco (32,2 g, 41,4 mmole) dissolvido em CH2CI2 (12 mL), gota a gota, ao longo de 15 minutos. Adicionou-se então o álcool (6,40 g, 20,7 mmole) dissolvido em cloreto de metileno (50 mL), durante 10 minutos. Após se agitar a mistura reaccional durante mais 10 minutos, adicionou-se Et3N (11,6 mL, 82,9 mmole, 4,0 equivalentes) em CH2C12 (25 mL) durante 15 minutos. Agitou-se a mistura reaccional durante 15 minutos e interrompeu-se pela adição de água (31 mL). Colocou-se a suspensão resultante sobre hexanos (250 mL) e lavou-se a fase orgânica com solução aquosa de KHSO4. Extraiu-se a fase aquosa com éter dietílico e lavaram-se os extractos orgânicos combinados com solução aquosa saturada de NaHC03, secou-se (Na2S04) e evaporou-se pajra se obter 5,8 g de um óleo amarelo claro que era substancialmente o aldeído pretendido. Purificou-se uma pequena porção por cromatografia rápida (hexano: acetato de etilo, silicagel Merck 60): RMN de *Η ! (300 MHz), CDC13, δ, 1,46 (s, 9H), 2,95 (m, 2H), 4,37 (m, 1H), 5,13 (s, 2H), 5,62 (m, 1H), 7,38 (m, 5H), 9,65 (s, 1H); EM (FAB+): 314,3 (M+Li).
Passo C
Preparação de éster benzílico de ácido 3-N-t-Boc-amino-4-hidroxi-4-fenil-(3 S)-butírico
Adicionou-se, gota a gota, uma solução 3,0 M de brometo de fenilmagnésio em éter dietílico (10,8 mL, 32,6 mmole, 2 equivalentes), a uma solução do aldeído preparado no Passo B (5,0 g, 15 mmole) em éter dietílico (150 mL) a -40°C (banho de acetonitrilo/gelo seco). Agitou-se a mistura resultante durante 15 minutos e aqueceu-se até à temperatura ambiente. Após alguns minutos, colocou-se a mistura em K2HPO4 1M. Extraiu-se novamente a fase aquosa com éter, lavaram-se as fases etéreas combinadas com solução aquosa de NaHC03, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter um óleo (5,66 g) que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional: RMN de 'H (300 MHz), CDCI3, δ, 1,4 (singuletos múltiplos, 9H), 2,65 (m, 2H), 4,18 (m, 1H), 5,15 (m, 2H), 7,4 (m, 10H); MS(FAB+): 392,4 (M+Li+).
Passo D
Preparação de 2-fenil-3-N-t-Boc-amino-5-oxo-3S-furano
Dissolveu-se o produto, hidroxi-éster, do Passo C (5,31 g, 13,8 mmole) em benzeno (100 mL) e adicionou-se uma quantidade catalítica de ácido cânfora-sulfónico, e aqueceu-se a solução ao refluxo (Dean-Stark) durante cinco horas, e removeu-se o solvente. A conversão em lactona foi de 50% e, portanto, reconstituiu-se a mistura reaccional e aqueceu-se ao refluxo durante mais 6 horas. Removeu-se o solvente e dissolveu-se o óleo resultante em acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com solução aquosa saturada de NaHC03, secou-se (Na2S04) e evaporou-se para se obter uma mistura das lactonas diaestereoméricas pretendidas, sob a forma de um óleo viscoso, num rácio de 2:1, e álcool benzílico: RMN de !H (300 MHz), CDC13, δ, 1,35, 1,45 (s, 2:1, 9H), 2,75 (m, -600-
Atíj-r*·» «.'i 2H), 4,5, 4,75 (m, 2:1, 1H), 4,7 (s, 2H), 5,1 (m, 1H), 5,7 (d, 1H), 7,35 (m, 10H); MS(FAB+): 284,6 (M+Li+).
Passo E
Preparação de cloridrato de 2-fenil-3-amino-5-oxo-3S-furano
.HCI
Tratou-se a lactona (0,94 g, 3,4 mmole) preparada no Passo D com HCI 4N em dioxano (20 mL), à temperatura ambiente até que terminasse a evolução de gás. Retirou-se o HCI em excesso por evaporação e isolou-se a amino-lactona pretendida sob a forma de um sólido cristalino branco que se exsicou (0,48 g, 66%): RMN de *H (300 MHz), d6-DMSO, δ, 3,05 (m, 2H), 4,4 (m, 1H), 5,85 (d, 1H), 7,4 (s, 5H), 8,2 (s largo, 3H); MS(FAB+): 178 (M+H+).
Passo F
Preparação de
-601 -
Preparou-se o composto acima utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 374, substituindo o composto preparado no Exemplo 233, Passo B pelo produto do Passo E. Isolou-se o produto pretendido por HPLC deC-18.
Exemplo 394
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de 4-fluorofenilmagnésio.
Exemplo 395
-602-
Al·
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de 4-clorofenilmagnésio.
Exemplo 396
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de 4-bromofenilmagnésio.
Exemplo 397
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de vinilmagnésio. -603-
«-A
Exemplo 398
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de etinilmagnésio.
Exemplo 399
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de alilmagnésio. -604-
Exemplo 400
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de ciclopentenilmagnésio.
Exemplo 401
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de feniletinilmagnésio.
Exemplo 402
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de metilmagnésio.
Exemplo 403
Preparou-se o composto acima seguindo substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio, no Passo C, por brometo de isopropilmagnésio.
Passo A
Exemplo 404
Preparação de 4-bromomagnésio-l,2-(metilenodioxi)benzeno BrMg
Adicionou-se 13,1 gm (0,062 mole) de 4-bromo-l,2-(metilenodioxi)benzeno em 50 mL de THF seco, gota a gota, a 1,74 gm (0,072 mole) de magnésio moído de fresco em 100 mL de THF seco, num balão com o fimdo redondo. Sonicou-se a mistura reaccional durante a adição, e manteve-se a temperatura da reacção abaixo dos 50°C por intermédio da utilização de um banho de água. Ao completar-se a reacção, filtrou-se a mistura e utilizou-se no passo seguinte.
- 607- Passo B
Preparação de
Prepara-se o composto acima respeitando substancialmente o procedimento do Exemplo 393, substituindo brometo de fenilmagnésio no Exemplo 393, Passo C pelo Reagente de Grignard do Passo A.
Passo A
Exemplo 405
Preparação de
O
OEt
MeC>2C - 608 -
Prepara-se o composto acima de acordo com o procedimento do Exemplo 55, Passo A, substituindo 2-furanocarboxaldeído por 2-formilbenzoato de metilo.
Passo B
Preparação de
Prepara-se o composto acima de acordo com o procedimento do Exemplo 55, Passos B e C, substituindo o produto do Exemplo 55, Passo A, pelo produto do Passo A.
Exemplo 406 CF3
O
OH O
Passo A -609-
Preparação de
O
Oxida-se o produto do Exemplo 393, Passo C, para dar a cetona acima, utilizando o procedimento do Exemplo 393, Passo B.
Passo B
Preparação de
Prepara-se o produto acima utilizando o procedimento do Exemplo 393, Passo E, utilizando o produto do Passo A acima.
Passo C
Preparação de
Prepara-se o composto do Exemplo utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 374, substituindo o composto preparado no Exemplo 233, Passo B pelo produto do Passo B. Obtém-se o produto pretendido convertendo o éster benzílico no ácido carboxílico correspondente por hidrólise, utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 4 e isolando o produto pretendido por RPHPLC de C-18.
Exemplos 407-414
Preparam-se os compostos representativos seguintes utilizando o procedimento do Exemplo 406, substituindo o álcool aspartílico do Exemplo 406, Passo A, pelos alcoóis aspartílicos protegidos apropriados dos Exemplos 394- -611 EX. 407
Ex. 408 EX. 409
Ex. 410
EX. 411 EX. 413 EX. 414 -612-
At
Exemplo 415
Preparação de
OH
Passo A
Adicionam-se l,3-diamino-2-hidroxipropano, em excesso, e uma quantidade catalítica de DM AP, ao produto do Exemplo 23, Passo A, em DMF, e aquece-se a solução até se conseguir a conversão substancialmente completa do sal de S-metilisotiourónio de que se partiu. Pode isolar-se o produto pretendido por precipitação do zwiterião ou por RPHPLC de C-18 preparativa (para se encontrar um procedimento relacionado, consultar a Patente U.S. N° 2.899.426). Após a secagem para se retirar a água, forma-se o sal cloridrato pela agitação do zwiterião em HC1 4N em dioxano (Aldrich), em excesso, e isolando o sal de HC1 por filtração.
Passo B
Prepara-se o composto acima utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 233, substituindo o cloridrato de GIHA no Exemplo 233, Passo C, pelo produto do Passo A. -615- /4^ wí·
«a
Exemplos 416-439
Preparam-se os compostos representativos seguintes utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 415, substituindo cloridrato de (RS)-4-amino-6-cloro-8-bromo-hidrocoumarina pela amina apropriada:
-616- /4<.
ch3 -617-Ex. ΕΧ. Εχ.
424 425
cco 42 6 Η
C02H:^ύ5· Εχ. Εχ.
- 618 - íj*. ---- ^
-619-
-620-
/<S
-621 -
Exemplo 440
Passo A
Preparou-se o composto acima utilizando o procedimento do Exemplo 233, Passos A e B, substituindo 3-bromo-5-cloro-salicilaldeído, no Passo A, por 3,5-dicloro-salicilaldeído. Os RMN e EM eram consistentes com a estrutura apresentada (sal de HC1).
Passo B
O -622-
Prepara-se o composto acima tratando o produto do Passo A com solução de HC1 gasoso seco em metanol, num reactor adequado, enquanto se mantém uma agitação vigorosa. Ao completar-se a reacção, retira-se o HC1 em excesso em vazio e concentra-se a solução até à secura. Utiliza-se o produto impuro no passo seguinte. Altemativamente, pode isolar-se o produto por RPHPLC de C-18 e liofilizar-se para se obter um material substancialmente puro.
Passo C
Prepara-se o composto acima tomando o produto do Passo B e dissolvendo-o em DMF. Adiciona-se uma quantidade equimolar de dicarbonato di-tert butílico e também de trietilamina, com uma quantidade catalítica de DM AP. Ao completar-se a reacção, retiram-se os voláteis em vazio e ffacciona-se o produto entre solução aquosa diluída de ácido clorídrico e acetato de etilo. Lava-se a fase orgânica com água, seca-se (Na2S04) e concentra-se para se obter substancialmente o composto acima que se pode utilizar no passo seguinte sem purificação adicional. Altemativamente, pode isolar-se o produto por RPHPLC de C-18 e liofilizar-se para se obter o material substancialmente puro.
Passo D
O
CHa
Prepara-se o composto acima adicionando, sob uma atmosfera inerte, um equivalente de anidrido acético ou de cloreto de acetilo e um equivalente de trietilamina a uma solução agitada do produto do Passo C, em DMF. Ao completar-se a reacção, retiram-se os voláteis em vazio e fracciona-se o resíduo reaccional entre solução aquosa diluída de ácido clorídrico e acetato de etilo. Lava-se a fase orgânica com solução aquosa de bicarbonato de sódio, seca-se (Na2S04) e concentra-se para se obter substancialmente o composto acima que se pode utilizar no passo seguinte sem purificação adicional. Altemativamente, pode isolar-se o produto por RPHPLC de C-18 e liofílizar-se para se obter um material substancialmente puro.
Passo E
O
ch3 -624-
Prepara-se o composto acima tratando o produto do Passo D com HC1 4N em dioxano com agitação vigorosa. Pouco tempo após a cessação da evolução de gás, retira-se o gás de HC1 em excesso em vazio e concentra-se a mistura reaccional a menos de cerca de 40°C. Tritura-se o produto com éter dietílico para se obter substancialmente o produto pretendido. Altemativamente, pode isolar-se o produto por RPHPLC de C-18 e liofilizar-se para se obter o material substancialmente puro.
Passo F
Prepara-se o composto acima de acordo com o procedimento do Exemplo 230, Passo B, substituindo o produto do Exemplo 230, Passo A, pelo produto do Passo E.
Exemplo 441
Prepara-se o composto acima tratando uma mistura em DMF do composto do Exemplo 225 com dois equivalentes de N-metilmorfolina e um equivalente de anidrido acético ou cloreto de acetilo. Ao completar-se a reacção, pode isolar-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18 e por liofilização.
Exemplo 442
O
Prepara-se o composto acima tratando uma mistura em DMF do composto do Exemplo 225 com dois equivalentes de N-metilmorfolina e um equivalente de anidrido benzóico ou cloreto de benzoilo. Ao completar-se a reacção, pode isolar-se o produto pretendido por RPHPLC de C-18 e por liofilização.
Exemplos 443-452 -626-
Podem preparar-se os compostos representativos seguintes utilizando substancialmente o procedimento do Exemplo 230, Passo B, e substituindo o produto do Exemplo 230, Passo A, pela amina apropriada:
-627-Εχ.
Ο Εχ.
Εχ.
ΟΒζ -628- Εχ. 450
ΕΧ. 451
-629- Aí
Exemplos 453-460
Podem preparar-se os compostos representativos seguintes utilizando o procedimento do Exemplo 393, substituindo o produto do Passo E no Passo F pelo cloridrato da amina apropriada, e substituindo o ácido 3-guanidino-5-trifluorometil-hipúrico no Passo F por GIHA.HC1:
Ex. 453
Ex. 454
ο ΕΧ. 457
ΌΗ ΌΗ Ο Η 631 - Α<· Εκ. 458 Εχ. 459
ch2 Εχ. 460
Exemplo 461-469
Podem preparar-se os compostos representativos seguintes utilizando o procedimento do Exemplo 406, substituindo o álcool aspartílico do Exemplo 406, Passo A, pelo álcool aspartílico protegido apropriado preparado no Exemplo 394-403, e substituindo o ácido 3-guanidino-5-trifluorometil-hipúrico no Exemplo 393, Passo F, por GIHA.HC1: -632-
Ή
- 633 -Ex. £χ. ΕΧ- &
1 -634-
O
Ex. 469
O
ΌΗ .0
Exemplo 470
Preparação de
Passo A
Adicionou-se, gota a gota e à temperatura de banho de gelo, cloroformiato de fenilo [(Aldrich) 13,5 g, 0,086 mole)] a 3,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidina-tiol (Aldrich) (5,0 g, 0,043 mole) e trietilamina (8,7 g, 0,086 mole) em CH2C12 (50 mL). Agitou-se então a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o precipitado e lavou-se com CH2C12. Lavou-se o filtrado de CH2C12 com H20 (3X), secou-se sobre MgS04, e retirou-se em vazio. Recristalizou-se o resíduo a partir de EtOAc a 50% /Hexano para se obterem 9,03 g de 3,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidinationa-N,N’-difenilcarbamato sob a forma de um sólido amarelo.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se 250 mg (0,00046 mole) de HgCl2, à temperatura de banho de gelo, ao produto do Exemplo 282, Passo C (200 mg, 0,00042 mole), o produto do Passo A acima (150 mg, 0,00042 mole) e trietilamina (142 mg,
-636- 0,0014 mole) em 3 mL de DMF. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura de banho de gelo durante lA hora, e à temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionou-se 100 mg adicionais de HgCl2 e agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro a 60°C. Adicionou-se acetato de etilo em excesso e filtrou-se a suspensão através de celite. Lavou-se o filtrado com H20 (3X), passou-se através de uma almofada de silicagel e isolou-se o produto por cromatografia sobre silicagel, para se obter o composto acima (110 mg) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. Exemplo 471
Preparação de
Passo A
Adicionou-se iodeto de metilo (12,2 g, 0,086 mole) a 3,4,5,6-tetrahidro-2-pinmiclinatiol (Aldrich) (10 g, 0,086 mole) em etanol absoluto (75 mL). Agitou-se a mistura reaccional aquecendo-se ao refluxo durante 2,5 horas. Retirou-se o solvente em vazio e secou-se o resíduo para se obter 3,4,5,6-tetrahidro-2-nietiltiopirimidina-HI (22 g) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se cloroformiato de fenilo (Aldrich) (3,13 g, 0,02 mole), gota a gota e à temperatura de banho de gelo, ao produto do Passo A acima (5,16 g, 0,02 mole) e trietilamina (4,1 g, 0,04 mole) em CH2C12 (25 mL). Agitou-se então a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o precipitado e lavou-se com CH2C12. Lavou-se o CH2C12 do filtrado com H20 (3X), secou-se sobre MgS04 e retirou-se em vazio para se obter 3,4,5,6-tetrahidro-2-metiltiopirimidina-N-fenilcarbamato (4,8 g) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo C
Adicionou-se o produto do Exemplo M, Passo B, (1,84 g, 0,008 mole) ao produto do Passo B acima (2 g, 0,008 mole) em CH2CN (12 mL). Agitou-se a mistura reaccional aquecendo-se ao refluxo de um dia para o outro, e isolou-se o produto por RPHPLC para se obter ácido 3,4,5,6-tetrahidro-N-fenilcarbamil-2-pirimidina-m-amino-hipúrico-TFA (1 g) sob a forma de um sólido branco.
Passo D
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 174, substituindo 3,4-diclorobenzaldeído no Exemplo 174, Passo A, por uma quantidade equivalente de 3,5-diclorobenzaldeído, e substituindo ácido m-guanidino-hipúrico-HCl no Exemplo 174, Passo B, por uma quantidade equivalente do produto do Passo C acima. -638-
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida. Exemplo 472 Preparação de ΓΛ
Passo A
Adicionou-se anidrido de BOC (Aldrich) (8,94 g, 0,041 mole), à temperatura de banho de gelo, a 2-metiltio-2-imidazolina-HI (Aldrich) (10 g, 0,041 mole) e trietilamina (4,14 g, 0,041 mole) em CH2CI2 (50 mL). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Lavou-se o CH2C12 com H20 (3X), secou-se sobre MgS04, lavou-se com H20 (3X), secou-se sobre MgS04 e retirou-se em vazio para se obter N-BOC-2-metiltio-2-imidazolina (8,1 g) sob a forma de um líquido transparente que passou a um sólido branco ao deixar-se repousar.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se ácido 3-amino-5-trifluorometilbenzóico (sintetizado por hidrogenação catalítica (Pd/C) de ácido 3-nitro-5-trifluorobenzóico (Lancaster) seguido por um tratamento com HC1) (3 g, 0,0124 mole). Agitou-se a -639 - Μ reacção a 35-40°C durante 10 dias. Após o arrefecimento até à temperatura ambiente, filtrou-se o precipitado, lavou-se com CH3CN e secou-se para se obter ácido 3-(N-BOC-4,5-dihidroimidazol-2-il)amino-5-trifluorometilbenzóicoHCl (3,2 g) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo C
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 200, substituindo o produto do Passo A no Exemplo 199, Passo B, por uma quantidade equivalente do produto do Passo B acima, e pelo tratamento adicional do intermediário de éster etílico, derivado de N-BOC com TF A, durante 1 hora para se retirar o grupo protector de BOC.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 473
Preparação de
Passo A
Adicionou-se o produto do Exemplo 472, Passo A (2,2 g, 0,01 mole) a cloridrato de ácido 3-amino-5-trifluorometil-hipúrico [preparado de -640-
acordo com o Exemplo M, Passos A e B, substituindo cloreto de M-nitrobenzoilo no Exemplo M, Passo A, por cloreto de 3-nitro-5-trifluorometilbenzoilo (preparado a partir de ácido 3-nitro-5-trifluorometilbenzóico (Lancaster) e cloreto de tionilo)] (3 g, 0,01 mole) em CH3CN (5 mL). Agitou-se a mistura reaccional a 35°C durante 3 dias, e aquecendo-se em seguida ao refluxo durante 4 horas. Após o arrefecimento, retirou-se o CH3CN por decantação, fez-se a suspensão do resíduo em éter por variadas vezes (retirou-se o éter por decantação) e secou-se então para se obter ácido 3-(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-il)amino-5-trifluorometil-hipúrico-HCl (2,5 g) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 210, substituindo ácido m-guanidino-hipúrico-HCl no Exemplo 174, Passo B, por uma quantidade equivalente do produto do Passo A acima.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 474
Preparação de
Passo A
Adicionou-se cloroformiato de etilo (Aldrich) (4,5 g, 0,041 mole), gota a gota e à temperatura de banho de gelo, a 2-metiltio-2-imidazolina-HI (Aldrich) (10 g, 0,041 mole) e trietilamina (8,3 g, 0,0082 mole) em CH2C12 (50 mL). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se o precipitado e lavou-se com CH2C12. Lavou-se o CH2C12 do filtrado com H20 (3X), secou-se sobre MgS04 e retirou-se em vazio para se obter 2-metiltio-2-imidazolina-N-etilcarbamato (7,1 g) sob a forma de um óleo amarelo transparente.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo B
Adicionou-se ácido m-amino-hipúrico-HCl (Exemplo M, Passo B) (7,02 g, 0,0305 mole) ao produto do Passo A acima (5,73 g, 0,0305 mole) em CH3CN (12 mL). Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente, em seguida a 50°C durante 6 horas e a 80°C durante 2 horas. Após o arrefecimento até à temperatura ambiente e a agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro, filtrou-se o precipitado, lavou-se com CH3CN e secou-se para se obter ácido 3-(4,5-dihidro-N-etilcarbamato-imidazol-2-il)amino-hipúrico,HCl (9,6 g) sob a forma de um sólido branco.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Passo C
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 174, substituindo ácido m-amino-hipúrico no Exemplo 174, Passo B, 1 ‘'i -642- por uma quantidade equivalente do produto do Passo B acima, e substituindo o produto do Exemplo 174, Passo A, no Exemplo 174, Passo B, por uma quantidade equivalente do produto do Exemplo 230, Passo A.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Exemplo 475
Preparação de
Preparou-se o composto acima de acordo com a metodologia do Exemplo 474, substituindo o cloroformiato de etilo no Exemplo 474, Passo A, por uma quantidade equivalente de cloroformiato de fenilo (Aldrich), e aquecendo a mistura reaccional a 70°C durante 8 horas e depois à temperatura ambiente durante 2 dias, no Exemplo 474, Passo B.
Os EM e RMN eram consistentes com a estrutura pretendida.
Sintetizam-se os compostos seguintes da invenção presente utilizando as metodologias, reagentes e condições exemplificados nos esquemas e nos exemplos desta descrição (ou fez-se a síntese de reagentes a partir de matérias primas prontamente disponíveis respeitando metodologias conhecidas pelos especialistas da técnica): -643- c
Exemplos 476-517 ΓΛ
cf3 Br Br
-645-
C
A t C- -646-
ΓΛ
-647- /<$£. ÍQa. Ϊ t h C~
-647- /<$£. ÍQa. Ϊ t h C~ NH
O o
II II C02Et
EtOC-N. JMH—C—OEt
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Ex. 496 -648-
-649-
° /-\ ίι Ph—Ο—C—Ν. Ν—C—OPhγ Ο*** νη^^νι
α Γ~~~\ ff Μ^^Ν—C—OPh ΗΝ Εχ 507
PhOC-NK ..NHC—OPh Ο
V Εχ 508
l^}i-C-OEt ΗΝ Εχ. 509
ο/Νοιι I . I ιι EtO-CN^^NC-OEt ^ ^C02Et
CI -651 -
Ex. 511 Ex. 512
Q - 652-
Exemplo # A B C D E F 518 OH Cl Cl Br H H 519 OH Cl Cl OH H H 520 OH Cl Cl no2 H H 521 OH Cl Cl I H H 522 OH Cl Cl Cl H H 523 OH Cl Cl Cl H Cl 524 OH Cl Cl OMe H H 525- OH Cl Cl H cf3 H 526 OH Cl Cl H OH H 527 OH Cl Cl H OMe H 528 OH Cl Cl H Cl H 529 OH Cl Cl H Cl Cl 530 OH Cl Cl Cl Br H 531 OH Cl Cl Cl OH H 532 OH Cl Cl Br OH H 533 OH Cl Cl I OH H -654-
Atb^í·'
Exemplo # A B Ç D E I 534 OH Br Cl Br H H 535 OH Br Cl OH H H 536 OH Br Cl no2 H H 537 OH Br Cl I H H 538 OH Br Cl Cl H H 539 OH Br Cl Cl H Cl 540 OH Br Cl OMe H H 541 OH Br Cl H cf3 H 542 OH Br Cl H OH H 543 OH Br Cl H OMe H 544 OH Br Cl H Cl H 545 OH Br Cl H Cl Cl 546 OH Br Cl H Br H 547 OH Br Cl Cl OH H 548 OH Br Cl Br OH H 549 OH Br Cl I OH H - 655 - Aí h-KÍ1
Exemplo # A B c D E F 550 OH I Cl Br H H 551 OH I Cl OH H H 552 OH r Cl no2 H H 553 OH I Cl I H H 554 OH I Cl Cl H H 555 OH I Cl Cl H Cl 556 OH I Cl OMe H H 557 OH I Cl H cf3 H 558 OH I Cl H OH H 559 OH I Cl H OMe H 560 OH I Cl H Cl H 561 OH I Cl H Cl Cl 562 OH I Cl H Br H 563 OH I Cl cf3 H H 564 OH I Cl Cl OH H 565 OH I Cl Br OH H 566 OH I Cl I OH H - 656 - Μ
Exemplo # A B Ç D E F 567 H Br Cl Br H H 568 H Br Cl OH H H 569 H Br Cl no2 H H 570 H Br Cl I H H 571 H Br Cl Cl H H 572 H Br Cl Cl H Cl 573 H Br Cl OMe H H 574 H Br Cl H cf3 H 575 H Br Cl H OH H 576 H Br Cl H OMe H 577 H Br Cl H Cl H 578 H Br Cl H Cl Cl 579 H Br Cl H Br H 580 H Br Cl Cl OH H 581 H Br Cl Br OH H 582 H Br Cl I OH H -657- CL—
NH
Exemplo # A B C D E I 583 H Br Br Br H H 584 H Br Br OH H H 585 H Br Br no2 H H 586 H Br Br I H H 587 H Br Br Cl H H 588 H Br Br Cl H Cl 589 H Br Br OMe H H 590 H Br Br H cf3 H 591 H Br Br H OH H 592 H Br Br H OMe H 593 H Br Br H Cl H 594 H Br Br H Cl Cl 595 H Br Br H Br H 596 H Br Br Cl OH H 597 H Br Br Br OH H 598 H Br Br I OH H - 658 -
Exemplo # A B C D E F 599 H Br I Br H H 600 H Br I OH H H 601 H Br I no2 H H 602 H Br I I H H 603 H Br I Cl H H 604 H Br I Cl H Cl 605 H Br I OMe H H 606 H Br I H cf3 H 607 H Br I H OH H 608 H Br I H OMe H 609 H Br I H Cl H 610 H Br I H Cl Cl 611 H Br I H Br H 612 H Br I Cl OH H 613 H Br I Br OH H 614 H Br I I OH H - 659- - 659-
Exemplo # A B ç D E F 615 H I I Br H H 616 H I I OH H H 617 H I I no2 H H 618 H I I I H H 619 H I I Cl H H 620 H I I Cl H Cl 621 H I I OMe H H 622 H I I H cf3 H 623 H I I H OH H 624 H I I H OMe H 625 H I I H Cl H 626 H I I H Cl Cl 627 H I I H Br H 628 H I I Cl OH H 629 H I I Br OH H 630 H I I I OH H -660- -660- c
Exemplo # A B c D E F 631 H Cl Cl Br H H 632 H Cl Cl OH H H 633 H Cl Cl no2 H H 634 H Cl Cl I H H 635 H Cl Cl Cl H H 636 H Cl Cl Cl H Cl 637 H Cl Cl OMe H H 638 H Cl Cl H cf3 H 639 H Cl Cl H OH H 640 H Cl Cl H OMe H 641 H Cl Cl H Cl H 642 H Cl Cl H Cl Cl 643 H Cl Cl H Br H 644 H Cl Cl Cl OH H 645 H Cl Cl Br OH H 646 H Cl Cl I OH H -661 -
At b··-^'
Exemplo # A s ç D E F 647 OH Cl Cl Br H H 648 OH Cl Cl OH H H 649 OH Cl Cl no2 H H 650 OH Cl Cl I H H 651 OH Cl Cl Cl H H 652 OH Cl Cl Cl H Cl 653 OH Cl Cl OMe H H 654 OH Cl Cl H cf3 H 655 OH Cl Cl H OH H 656 OH Cl Cl H OMe H 657 OH Cl Cl H Cl H 658 OH Cl Cl H Cl Cl 659 OH Cl Cl H Br H 660 OH Cl Cl Cl OH H 661 OH Cl Cl Br OH H 662 OH Cl Cl I OH H
-662-
At- b*-rh
Exemplo # A B Ç D E F 663 OH Br Cl Br H H 664 OH Br Cl OH H H 665 OH Br Cl no2 H H 666 OH Br Cl I H H 667 OH Br Cl Cl H H 668 OH Br Cl Cl H Cl 669 OH Br Cl OMe H H 670 OH Br Cl H cf3 H 671 OH Br Cl H OH H 672 OH Br Cl H OMe H 673 OH Br Cl H Cl H 674 OH Br Cl H Cl Cl 675 OH Br Cl H Br H 676 OH Br Cl Cl OH H 677 OH Br Cl Br OH H 678 OH Br Cl I OH H -663 -
Exemplo # A B c D I F 679 OH I Cl Br H H 680 OH I Cl OH H H 681 OH I Cl no2 H H 682 OH I Cl I H H 683 OH I Cl Cl H H 684 OH I Cl Cl H Cl 685 OH I Cl OMe H H 686 OH I Cl H cf3 H 687 OH I Cl H OH H 688 OH I Cl H OMe H 689 OH I Cl H Cl H 690 OH I Cl H Cl Cl 691 OH I Cl H Br H 692 OH I Cl Cl OH H 693 OH I Cl Br OH H 694 OH I Cl I OH H -664- /Qçt y
Exemplo # A B ç D E F 695 H Cl Cl Br H H 696 H Cl Cl OH H H 697 H Cl Cl no2 H H 698 H Cl Cl I H H 699 H Cl Cl Cl H H 700 H Cl Cl Cl H Cl 701 H Cl Cl OMe H H 702 H Cl Cl H cf3 H 703 H Cl Cl H OH H 704 H Cl Cl H OMe H 705 H Cl Cl H Cl H 706 H Cl Cl H Cl Cl 707 H Cl Cl H Br H 708 H Cl Cl Cl OH H 709 H Cl Cl Br OH H 710 H Cl Cl I OH H - 665 -
- 665 - C
Exemplo # A B Ç D E F 711 H Br Cl Br H H 712 H Br Cl OH H H 713 H Br Cl no2 H H 714 H Br Cl I H H 715 H Br Cl Cl H H 716 H Br Cl Cl H Cl 717 H Br Cl OMe H H 718 H Br Cl H cf3 H 719 H Br Cl H OH H 720 H Br Cl H OMe H 721 H Br Cl H Cl H 722 H Br Cl H Cl Cl 723 H Br Cl H Br H 724 H Br Cl Cl OH H 725 H Br Cl Br OH H 726 H Br Cl I OH H - 666-
At fcKrt·»
Exemplo # A B Ç D E F 727 H Br Br Br H H 728 H Br Br OH H H 729 H Br Br no2 H H 730 H Br Br I H H 731 H Br Br Cl H H 732 H Br Br Cl H Cl 733 H Br Br OMe H H 734 H Br Br H cf3 H 735 H Br Br H OH H 736 H Br Br H OMe H 737 H Br Br H Cl H 738 H Br Br H Cl Cl 739 H Br Br H Br H 740 H Br Br Cl OH H 741 H Br Br Br OH H 742 H Br Br I OH H -667-
Exemolo # A B Ç D E F 743 H Br I Br H H 744 H Br I OH H H 745 H Br I no2 H H 746 H Br I I H H 747 H Br I Cl H H 748 H Br I Cl H Cl 749 H Br I OMe H H 750 H Br I H cf3 H 751 H Br I H OH H 752 H Br I H OMe H 753 H Br I H Cl H 754 H Br I H Cl Cl 755 H Br I H Br H 756 H Br I Cl OH H 757 H Br I Br OH H 758 H Br I I OH H -668- Μ C—-.Ui ΓΛ
Exemplo # A B £ D E F 759 H I I Br H H 760 H I I OH H H 761 H I I no2 H H 762 H I I I H H 763 H I I Cl H H 764 H I I Cl H Cl 765 H I I OMe H H 766 H I I H cf3 H 767 H I I H OH H 768 H I I H OMe H 769 H I I H Cl H 770 H I I H Cl Cl 771 H I I H Br H 772 H I I Cl OH H 773 H I I Br OH H 774 H I I I OH H -669- Μ
Exemplo # A B c D E F 775 OH Cl Cl Br H H 776 OH Cl Cl OH H H 777 OH Cl Cl no2 H H 778 OH Cl Cl I H H 779 OH Cl Cl Cl H H 780 OH Cl Cl Cl H Cl 781 OH Cl Cl OMe H H 782 OH Cl Cl H cf3 H 783 OH Cl Cl H OH H 784 OH Cl Cl H OMe H 785 OH Cl Cl H Cl H 786 OH Cl Cl H Cl Cl 787 OH Cl Cl H Br H 788 OH Cl Cl Cl OH H 789 OH Cl Cl Br OH H 790 OH Cl Cl I OH H -670-
Exemplo # A B Ç D E E 791 OH Br Cl Br H H 792 OH Br Cl OH H H 793 OH Br Cl no2 H H 794 OH Br Cl I H H 795 OH Br Cl Cl H H 796 OH Br Cl Cl H Cl 797 OH Br Cl OMe H H 798 OH Br Cl H cf3 H 799 OH Br Cl H OH H 800 OH Br Cl H OMe H 801 OH Br Cl H Cl H 802 OH Br Cl H Cl Cl 803 OH Br Cl H Br H 804 OH Br Cl Cl OH H 805 OH Br Cl Br OH H 806 OH Br Cl I OH H -671 - C—>-! <-y
Exemplo # A B ç D E F 807 OH I Cl Br H H 808 OH I Cl OH H H 809 OH I Cl no2 H H 810 OH I Cl I H H 811 OH I Cl Cl H H 812 OH I Cl Cl H Cl 813 OH r Cl OMe H H 814 OH I Cl H cf3 H 815 OH I Cl H OH H 816 OH I Cl H OMe H 817 OH I Cl H Cl H 818 OH I Cl H Cl Cl 819 OH I Cl H Br H 820 OH I Cl Cl OH H 821 OH I Cl Br OH H 822 OH I Cl I OH H -672- -672-
Exemplo # A B ç D E F 823 H Cl Cl Br H H 824 H Cl Cl OH H H 825 H Cl Cl no2 H H 826 H Cl Cl I H H 827 H Cl Cl Cl H H 828 H Cl Cl Cl H Cl 829 H Cl Cl OMe H H 830 H Cl Cl H cf3 H 831 H Cl Cl H OH H 832 H Cl Cl H OMe H 833 H Cl Cl H Cl H 834 H Cl Cl H Cl Cl 835 H Cl Cl H Br H 836 H Cl Cl Cl OH H 837 H Cl Cl Br OH H 838 H Cl Cl I OH H -673 -
« ff ·* '·>
Exemplo # A B C D E F 839 H Br Cl Br H H 840 H Br Cl OH H H 841 H Br Cl no2 H H 842 H Br Cl I H H 843 H Br Cl Cl H H 845 H Br Cl Cl H Cl 846 H Br Cl OMe H H 847 H Br Cl H cf3 H 848 H Br Cl H OH H 849 H Br Cl H OMe H 850 H Br Cl H Cl H 851 H Br Cl H Cl Cl 852 H Br Cl H Br H 853 H Br Cl Cl OH H 854 H Br Cl Br OH H 855 H Br Cl I OH H -674-
Exemplo # A B C D E F 856 H Br Br Br H H 857 H Br Br OH H H 858 H Br Br no2 H H 859 H Br Br I H H 860 H Br Br Cl H H 861 H Br Br Cl H Cl 862 H Br Br OMe H H 863 H Br Br H cf3 H 864 H Br Br H OH H 865 H Br Br H OMe H 866 H Br Br H Cl H 867 H Br Br H Cl Cl 868 H Br Br H Br H 869 H Br Br Cl OH H 870 H Br Br Br OH H 871 H Br Br I OH H
Exemplo # A B C D E F 872 H Br I Br H H 873 H Br I OH H H 874 H Br I no2 H H 875 H Br I I H H 876 H Br I Cl H H 877 H Br I Cl H Cl 878 H Br I OMe H H 879 H Br I H cf3 H 880 H Br I H OH H 881 H Br I H OMe H 882 H Br I H Cl H 883 H Br I H Cl Cl 884 H Br I H Br H 885 H Br I Cl OH H 886 H Br I Br OH H 887 H Br I I OH H
Exemplo # A B ç D E F 888 H I I Br H H 889 H I I OH H H 890 H I I no2 H H 891 H I I I H H 892 H I I Cl H H 893 H I I Cl H Cl 894 H I I OMe H H 895 H I I H cf3 H 896 H I I H OH H 897 H I I H OMe H 898 H I I H Cl H 899 H I I H Cl Cl 900 H r I H Br H 901 H I I Cl OH H 902 H I I Br OH H 903 H I I I OH H
Exemplo # A B ç D E F 904 H cf3 Br Br H H 905 H cf3 Br OH H H 906 H cf3 Br no2 H H 907 H cf3 Br I H H 908 H cf3 Br Cl H H 909 H cf3 Br Cl H Cl 910 H cf3 Br OMe H H 911 H cf3 Br H cf3 H 912 H cf3 Br H OH H 913 H cf3 Br H OMe H 914 H cf3 Br H Cl H 915 H cf3 Br H Cl Cl 916 H cf3 Br H Br H 917 H cf3 Br cf3 H H 918 H cf3 Br H H H 919 H cf3 Br Cl OH H 920 H cf3 Br Br OH H 921 H cf3 Br I OH H
Exemplo # A B ç D E F 922 H cf3 Br Br H H 923 H cf3 Br OH H H 924 H cf3 Br no2 H H 925 H cf3 Br I H H 926 H cf3 Br Cl H H 927 H cf3 Br Cl H Cl 928 H cf3 Br OMe H H 929 H cf3 Br H cf3 H 930 H cf3 Br H OH H 931 H cf3 Br H OMe H 932 H cf3 Br H Cl H 933 H cf3 Br H Cl Cl 934 H cf3 Br H Br H 935 H cf3 Br cf3 H H 936 H cf3 Br H H H 937 H cf3 Br Cl OH H 938 H cf3 Br Br OH H 939 H cf3 Br I OH H -679-
C
Exemplo # A B ç D E I 940 H cf3 Br Br H H 941 H cf3 Br OH H H 942 H cf3 Br no2 H H 943 H cf3 Br I H H 944 H cf3 Br Cl H H 945 H cf3 Br Cl H Cl 946 H cf3 Br OMe H H 947 H cf3 Br H cf3 H 948 H cf3 Br H OH H 949 H cf3 Br H OMe H 950 H cf3 Br H Cl H 951 H cf3 Br H Cl Cl 952 H cf3 Br H Br H 953 H cf3 Br cf3 H H 954 H cf3 Br H H H 955 H cf3 Br Cl OH H 956 H cf3 Br Br OH H 957 H cf3 Br I OH H / V -680 - η. c~
I
958 959 960 961 962 963 964 965 966 967 968 969 970 971 972 973 974 975
H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I H cf3 I
Br Η H OH Η H N02 H H I Η H Cl Η H Cl H Cl OMe Η H H CF3 H H OH H H OMe H H Cl H H Cl Cl H Br H CF3 H H Η Η H Cl OH H Br OH H I OH
H -681 -
Exemplo # A B ç D E F 976 H cf3 I Br H H 977 H cf3 I OH H H 978 H cf3 I no2 H H 979 H cf3 I I H H 980 H cf3 I Cl H H 981 H cf3 I Cl H Cl 982 H cf3 I OMe H H 983 H cf3 I H cf3 H 984 H cf3 I H OH H 985 H cf3 I H OMe H 986 H cf3 I H Cl H 987 H cf3 I H Cl Cl 988 H cf3 I H Br H 989 H cf3 I cf3 H H 990 H cf3 I H H H 991 H cf3 I Cl OH H 992 H cf3 I Br OH H 993 H cf3 I I OH H -682-
At ί'______^ (*-ν
Exemplo # A Β ç D E F 994 Η cf3 I Br H H 995 Η cf3 I OH H H 996 Η cf3 I no2 H H 997 Η cf3 I I H H 998 Η cf3 I Cl H H 999 Η cf3 I Cl H Cl 1000 Η cf3 I OMe H H 1001 Η cf3 I H cf3 H 1002 Η cf3 I H OH H 1003 Η cf3 I H OMe H 1004 Η cf3 I H Cl H 1005 Η cf3 I H Cl Cl 1006 Η cf3 I H Br H 1007 Η cf3 I cf3 H H 1008 Η cf3 I H H H 1009 Η cf3 I Cl OH H 1010 Η cf3 I Br OH H 1011 Η cf3 I I OH H -683- Μ
Testou-se a actividade dos compostos da invenção presente nas determinações seguintes. Os resultados dos testes encontram-se tabulados na Tabela 1, para as diversas determinações.
DETERMINAÇÃO DA ADESÃO A VIBRONECTINA
MATERIAIS
Purificou-se o receptor de vibronectina humano (ανβ3) a partir de placenta humana tal como se descreveu precedentemente [Pytela et ah, Methods in Enzymology, 144:475-489 (1987]. Obteve-se a vibronectina humana purificada a partir de plasma fresco congelado tal como havia sido previamente descrito [Yatohgo et ah, Cell Structure and Function, 13:281-292 (1988)]. Preparou-se a vibronectina humana biotinilada acoplando NHS-biotina da Pierce Chemical Company (Rockford, IL) a vibronectina purificada tal como havia sido decrito previamente [Charo, et ah, J. Biol. Chem., 266:1415-1421 (1991)]. O tampão da determinação, os comprimidos de substrato OPD, e a BSA de grau RIA foram obtidos na Sigma (St. Louis, MO). Obteve-se anticorpo para biotina na Calbiochem (La Jolla, CA). Obtiveram-se as placas de microtítulo nos Flow Labs (McLean, VA). O reagente de ADP foi obtido na Sigma (St. Louis, MO).
MÉTODOS
Determinações com Receptores em Fase Sólida
Esta determinação foi essencialmente a mesma que já havia sido descrita anteriormente [Niiya, et al, Blood, 70:475-483 (1987)]. Diluiu-se o receptor (ανβ3) de vibronectina humano purificado a partir de soluções pré-preparadas até 1,0 μg/mL em soro salino tamponizado com Tris e contendo Ca**, Mg++ e Mn^ 1 mM, a pH 7,4 (TBS+++). Transferiu-se imediatamente a solução diluída de receptor para as placas de microtítulo Linbro, a 100 pL/poço (100 ng de receptor/poço). Selaram-se as placas e incubaram-se de um dia para o outro a 4°C para permitir que o receptor se ligasse aos poços. Todos os passoa seguintes foram levados a cabo à temperatura ambiente. Esvaziaram-se os poços e adicionaram-se 200 pL de BSA de gruu RIA a 1% às superfícies plásticas expostas para as bloquear. Após 2 horas de incubação, lavaram-se as placas da determinação com TBS+++ utilizando um lavador de placas de 96 poços. Fez-se uma diluição logarítmica em série do composto em teste e fizeram-se controlos começando por uma concentração da solução armazenada de 2 mM e utilizando vibronectina biotinilada 2 nM em TBS^/BSA como diluente. Levou-se a cabo esta pré-mistura do ligando marcado com o ligando em teste (ou de controlo), bem como a transferência subsequente de alíquotas de 50 pL para a placa de determinação, utilizando um robot Propette da CETUS; a concentração final de ligando marcado foi de 1 nM e a concentração máxima de composto em teste foi de 1,0 x 10'4 M. deixou-se a competição deorrer durante duas horas, findas as quais se lavaram todos os poços no lavador de placas tal como anteriormente. Diluiu-se a 1:3000 em TBS^/BSA anticorpo anti-biotina de cabra marcado com peroxidase de raiz forte purificado por afinidade, e adcionaram-se 125 pL a cada poço. Ao fim de 30 minutos, lavaram-se as placas e incubaram-se com substrato de 0PD/H202 em tampão de citrato a 100 mM/litro, pH=5,0. Leu-se a placa com um leitor de placas de microtítulo, a um comprimento de onda de 450 nm e, quando os poços de controlo de absorção máxima atingiram uma absorvância de cerca de 1,0, tomou-se nota dos valores de A450 finais para análise posterior. Analisaram-se os dados utilizando um macro escrito para o programa de folha de cálculo Excel™. Determinaram-se para cada concentração em duplicado, a média, o desvio padrão e a %CV. Normalizaram-se os valores médios de A450 à média dos quatro controlos de ligação máxima 8sem competidor adicionado) (B-MAX). Sujeitaram-se os valores normalizados a um algoritmo de ajustamento de uma curva tetraparamétrica [Rodbard et aL, Int. Atomic Energy Agency, Vienna, pp. 469 (1971)], representaram-se em escala semi-logarítmica, e tomou-se nota -685- ^ C·”·- do valor calculado de concentração que correspondia a uma inibição de 50% da ligação máxima de vibronectina biotinilada (IC50), e do correspondente R , para os compostos que exibiam mais do que 505 de inibição á concentração máxima testada; nos outros casos, anotou-se que o valor de IC50 era superior à concentração mais elevada que se testou. Foi incluído em cada placa, como controlo positivo, ácido P-[[2-[5-[(aminoiminometil)amino]-1 -oxopentil]amino]-l-oxoetil]amino]-3-piridinapropanóico [USSN 08/375.338, Exemplo 1], que é um potente antagonista de ανβ3 (com IC50 na gama de 3-10 nM).
DETERMINAÇÃO COM RECEPTOR Ilb/IIIa PURIFICADO
MATERIAIS
Purificou-se receptor de fibrinogénio humano (αιη>β3) a partir de plaquetas fora de prazo (Pytela, R., Pierschbacher, M.D., Argraves, S., Suzuki, S. e Roushlati, E. “Arginine-Glycine-Aspartic acid adhesion receptors”, Methods in Enzymologyl 144(1987):475-489). Obteve-se a vibronectina humana purificada a partir de plasma fresco congelado tal como havia sido previamente descrito em Yatohgo, T., Izumi, M., Kashiwagi, H., e Hayashi, M., Cell Structure and Function, 13:281-292 (1988). Preparou-se a vibronectina humana biotinilada acoplando NHS-biotina da Pierce Chemical Company (Rockford, IL) a vibronectina purificada tal como havia sido decrito previamente (Charo, I.F., Nannizzi, L., Phillips, D.R. Hsu, M.A., Scarborough, R,M.”Inhibition of fibrinogen binding to GP Ilb/IIIa by a GP Illa peptide”, J. Biol. Chem., 266:1415-1421 (1991). Obtiveram-se na Sigma (St. Louis MO) o tampão da determinação, os comprimidos de substrato OPD, e BSA de grau RIA. Obteve-se o anticorpo anti-biotina da Calbiochem (La Jolla, CA). As placas de microtítulo Lnbro foram obtidas da Flow Labs (McLean, VA). O reagente de ADP foi obtido da Sigma (St. Louis, MO). - 686-
.1 ‘Λ
MÉTODOS
Detreminacões com Receptores em Fase Sólida
Esta determinação foi essencialmente a mesma que já havia sido descrita anteriormente em Niiya, K., Hodson, E., Bader, R., Buers-Ward, V., Koziol, J.A., Plow, E.F., e Ruggeri, Z.M., “Increased surface expression of the membrane glycoprotein Ilb/IIIa complex induced by platelet activation: Relationships to the binding of fibrinogen and platelet aggregation” Blood, 70:475-483 (1987). Diluiu-se o receptor (aIIbp3) de fibrinogénio humano purificado a partir de soluções pré-preparadas até 1,0 pg/mL em soro salino tamponizado com Tris e contendo Ca++, Mg++ e Mn++ 1 mM, a pH 7,4 (TBS+++). Transferiu-se imediatamente a solução diluída de receptor para as placas de microtítulo Linbro, a 100 pL/poço (100 ng de receptor/poço). Selaram-se as placas e incubaram-se de um dia para o outro a 4°C para permitir que o receptor se ligasse aos poços. Todos os passoa seguintes foram levados a cabo à temperatura ambiente. Esvaziaram-se os poços e adicionaram-se 200 pL de BSA de gruu RIA a 1% às superfícies plásticas expostas para as bloquear. Após 2 horas de incubação, lavaram-se as placas da determinação com TBS+++ utilizando um lavador de placas de 96 poços. Fez-se uma diluição logarítmica em série do composto em teste e fizeram-se controlos começando por uma concentração da solução armazenada de 2 mM e utilizando vibronectina biotinilada 2 nM em TBS^/BSA como diluente. Levou-se a cabo esta pré-mistura do ligando marcado com o ligando em teste (ou de controlo), bem como a transferência subsequente de alíquotas de 50 pL para a placa de determinação, utilizando um robot Propette da CETUS; a concentração final de ligando marcado foi de 1 nM e a concentração máxima de composto em teste foi de 1,0 x 10'4 M. deixou-se a competição deorrer durante duas horas, findas as quais se lavaram todos os poços no lavador de placas tal como anteriormente. Diluiu-se a 1:3000 em TBS+++/BSA -687-
At
«'i anticorpo anti-biotina de cabra marcado com peroxidase de raiz forte purificado por afinidade, e adcionaram-se 125 μι a cada poço. Ao fim de 30 minutos, lavaram-se as placas e incubaram-se com substrato de 0PD/H202 em tampão de citrato a 100 mM/litro, pH=5,0. Leu-se a placa com um leitor de placas de microtítulo, a um comprimento de onda de 450 nm e, quando os poços de controlo de absorção máxima atingiram uma absorvância de cerca de 1,0, tomou-se nota dos valores de A450 finais para análise posterior. Analisaram-se os dados utilizando um macro escrito para o programa de folha de cálculo Excel™. Determinaram-se para cada concentração em duplicado, a média, o desvio padrão e a %CV. Normalizaram-se os valores médios de A450 à média dos quatro controlos de ligação máxima 8sem competidor adicionado) (B-MAX). Sujeitaram-se os valores normalizados a um algoritmo de ajustamento de uma curva tetraparamétrica [Rodbard et al., Int. Atomic Energy Agency, Vienna, pp. 469 (1971)], representaram-se em escala semi-logarítmica, e tomou-se nota do valor calculado de concentração que correspondia a uma inibição de 50% da ligação máxima de vibronectina biotinilada (IC50), e do correspondente R2, para os compostos que exibiam mais do que 505 de inibição á concentração máxima testada; nos outros casos, anotou-se que o valor de IC50 era superior à concentração mais elevada que se testou. Foi incluído em cada placa, como controlo positivo, ácido P-[[2-[5-[(aminoiminometil)amino]-1 -oxopentiljamino]-l-oxoetil]amino]-3-piridinapropanóico [USSN 08/375.338, Exemplo 1], que é um potente antagonista de ανβ3 (com IC50 na gama de 3-10 nM).
Determinações em Plasma Rico em Plaquetas Humanas
Seleccionaram-se de entre um grupo de voluntários, doadores isentos de aspirina. Levaram-se a cabo as tarefas de recolha de plasma rico em plaquetas e a agregação de plaquetas induzida por ADP subsequente tal como descrito em Zucker, M.B., “Platelet Aggregation Measured by the Photometric Method”, Methods in Enzymology 169(1989): 117-133. Utilizando técnicas -»*—ί»^Ί|ι*^·ρ l -688- habituais de punção venosa com uma borboleta conseguiu-se retirar 45 mL de sangue inteiro para uma seringa de 60 mL contendo 5 mL de solução a 3,8% de citrato tri-sódico. Após uma mistura forte dentro da seringa, transferiu-se o sangue anti-colagulado para um tubo cónico de 50 mL em polietileno. Centrifugou-se o sangue à temperatura ambiente durante 12 minutos a 200 x g para sedimentar as células não-plaquetas. Removeu-se o plasma rico em plaquetas para um tubo em polietileno e armazenou-se à temperatura ambiente até ser utilizado. Obteve-se plasma pobre em plaquetas de uma segunda centrifugação do sangue remanescente a 2000 x g durante 15 minutos. As contagens de plaquetas típicas eram de 3000.000 a 5000.000 por microlitro. Colocaram-se alíquotas de plasma rico em plaquetas (0,45 mL) em cuvettes siliconizadas e agitou-se (1100 rpm) a 37°C durante 1 minuto antes de se lhes adicionarem 50 pL de composto em teste pré-diluído. Após 1 minuto de agitação, iniciou-se a agregação por adição de 50 pL de ADP 200 pM. Gravou-se a agregação durante 3 minutos num agregómetro Playton de duplo canal (Playton Scientific, Buffalo, NY). Utilizou-se para determinar a curva de resposta à dose uma série de diluições do composto em teste a percentagem de inibição da resposta máxima (controle com soro salino), testaram-se todos os compostos em duplicado e calculou-se graficamente a concentração correspondente a metade da máxima inibição (IC50) a partir da curva de resposta à dose, para os compostos que exibiam uma inibição superior ou igual a 50% na concentração máxima testada; para os outros casos, o volar de IC50 é apresentado como sendo superior à concentração máxima testada. DETERMINAÇÃO DE ADESÃO A CÉLULAS DE MEL ΑΝΟΜΑ M21
Esta determinação diz respeito a uma adesão dependente de ανβ3, das células de melanoma humano M21 a placas de cultura plásticas revestidas com fibrinogénio humano. -689-
Purificou-se fibrinogénio de plasma humano. Eliminaram-se a fibronectina e o plasminogéneo das amostras passando-as sobre resinas de gelatina-sepharose 4B e lisina-sepharose 4B, respectivamente. Dilui-se o fibrinogénio a 10 pg/mL em tampão de revestimento (Tris -HC1 20 mM, NaCl 150 mM, pH 7,4). Adicionam-se a cada poço de uma placa de de microtítulo de 96 poços Imulon 2 (Dynatech,; Chantilly, VA) 100 pL de fibrinogénio diluído, e deixa-se revestir de um dia para o outro a 4°C. Bloqueiam-se as placas com BSA a 1% (Miles/Pentex; Kankakee, IL) em tampão de adesão (solução balanceada de sais de Hanks sem Ca** nem Mg"1-1" [HBS—], Hepes 50 mM, 1 mg(mL de BSA, pH 7,4) durante 1 hora a 37°C.
Obtiveram-se células de melanoma humano M21 do Dr. J. Smith, La Jolla Câncer Institute. Recolhem-se as células dos frascos de cultura de tecido lavando com HBS—e adicionando solução de dissocição de células (Sigma) e incubando durante 5 minutos a 37°C. As células obtidas são lavadas 3 vezes com tampão do ensaio de adesão contendo Mn++ 200 pM. Contam-se as células e suspendem-se a uma densidade de 2xl06/mL em tampão do ensaio de adesão contendo Mn++ 200 pM. Pré incubam-se com antagonistas de ανβ3 as células M21, durante 30 minutos à temperatura ambiente. A seguir à pré-incubação, adiciona-se a cada poço da placa de micritítulo as soluções contendo uma mistura de células e antagonistas, e deixa-se ligar durante 30 minutos a 37°C. A seguir à adesão, lavam-se cuidadosamente as placas, 3 vezes, com 200 pL de tampão de lavagem (Tris-HCl 50 mM, NaCl 150 mM, pH 7,4) utilizando pontas de pipetas de boca larga. Secam-se suavemente as placas com um absorvente e adiciona-se a cada poço 100 pL de tampão de lise celular (acetato de sódio 50 mM, pH 5,0, 0,5% de Triton-X-100. 0,3 mg/mL de fosfato de p-nitrofenilo [Sigma]). Incubam-se as placas durante 60 minutos a 37°C e adicionam-se 50 pl de NaOH IN para parar a reacção. Lê-se a absorvância dos poços a 421 nm utilizando um leitor automático de placas. -690- M b*·^
C—cU TABELA 1
Exemplo ανβ3 IC50 (nM) IIB/IIIA IC50 (nM) Células de melanoma M21 IC50(NM) PRP humano (μΜ) 1 76.9 8350 >200 2 0,54 51,2 0,25 200 3 498 72900 3050 4 3,17 473 3,3 >200 5 227 3150 6 1,04 15,9 80 8 0,69 9,83 0,38 73,2 10 0,92 54,4 1,82 >200 12 U 595 9,32 >200 14 1,62 139 5,42 >200 15 10,2 3830 202 >200 17 2,66 137 3,64 >200 19 303 72000 21 2,44 1910 >200 22 1,37 280 >200 24 0,91 58,6 12,7 >200 26 14,2 809 >200 27 1,53 178 >200 30 1,75 424 320 >200 34 94,3 269 >200 35 57,1 6,21 69,5 36 Passo B 14,6 1580 143 >200 37 0,88 13,9 >20,0 -691 - -691 - f''1 J. _ |~
Exemplo ανβ3 IC50(nM) IIB/IIIA IC50 Células de melanoma PRP humano (nM) M21 IC50 (NM) (μΜ) 39 12,2 1540 >20,0 40 10,3 834 >200 41 12,1 830 >200 42 124 9800 43 28,3 1640 188 >200 44 0,33 998 >20,0 45 0,69 39,5 2,54 46 5,34 1680 147 47 0,6 4270 1,18 51 9730 >100000 52 3,62 139 11,7 53 54,6 930 54 10,7 175 55 4,77 117 56 3,12 65,3 6,87 >200 57 1340 15300 >200 58 162 5740 >200 59 2,35 172 24,3 >200 60 (B) 1,21 72,7 >200 60 (C) 0,73 16,4 0,74 >200 61 1,76 192 228 >200 62 1,42 28,4 >200 65 9,7 170 13,8 >200 66 1,44 73,7 2,51 >200 67 2,05 92,3 4,08 >200 -692-
M
Exemplo ανβ3 IC50 (nM) IIB/IIIAIC50 Células de melanoma PRP humano (nM) M21 IC50(NM) (μΜ) 68 5,48 125 >200 69 0,92 33,6 0,95 >200 70 63 3240 924 >200 71 20,4 202 1040 >200 72 1,21 152 >200 80 9,49 4,35 30 82 334 353 83 3,39 97,7 11 >200 84 2800 246 85 6,65 8,07 86 8,79 246 >200 87 6,35 732 >200 88 8,44 945 52,3 >200 89 1240 9830 94 1,16 101 1 >200 95 1,43 25,4 >200 96 1810 5400 97 26,9 1170 163 98 146 500 99 0,38 1,89 0,49 57,5 100 8560 >100000 101 1680 65700 103 16,6 18100 0,81 >20,0 106 ,79 3140 >200 107 6400 18700 -693 -
«-Λ
Exemplo ανβ3 IC50 (nM) IIB/IIIA IC50 (nM) Células de melanoma M21 IC50 (NM) PRP humano (μΜ) 108 25,2 4870 >200 109 575 >100000 177 110 4,5 1860 >200 112 284 6340 113 276 100000 114 3,26 2940 200 >200 116 15500 117 60,1 20100 >200 119 3,61 11100 90,4 >20,0 121 2840 >100000 122 0,79 420 >20,0 123 11800 8550 124 22 317 >20,0 126 2,48 2010 >200 127 0,51 451 >200 129 68,9 9460 >200 130 47 2690 >200 131 3,82 176 >20,0 135 50700 >100000 136 54,4 14200 >20,0 137 16,2 6500 >200 138 36,9 5820 >200 139 23,8 16100 >200 140 4590 >100000 141 3,09 125 >200 -694- h
Exemplo ανβ3 IC50 (nM) IIB/IIIAIC50 Células de melanoma PRP humano (nM) M21 IC50(NM) (μΜ) 143 6700 >100000 144 55,3 5830 >200 145 2720 >100000 146 14,3 879 >200 150 5,74 631 >200 155 5,05 81,1 >200 158 10,1 547 160 25,6 10400 162 4,62 1340 >200 166 13000 45900 168 2,29 260 171 0,35 83,2 173 0,5 16,4 175 2,12 205 177 0,58 137 >20,0 179 2,72 927 181 132 22800 183 1,58 258 185 1,47 166 187 1,31 264 189 4,03 1980 191 0,49 70,3 >20,0 193 2,56 209 >20,0 195 1,09 98 198 114 37800 i -695 - /5íl k*·
Exemplo ανβ3 IC50 (nM) IIB/IIIA IC50 Células de melanoma PRP humano (nM) M21 IC50 (NM) (μΜ) 200 0,48 1100 >20,0 201 58,1 10800 203 3,56 650 205 1,68 1240 206 78,5 22000 207 0,89 148 208 1,15 277 209 0,83 140 210 2,62 343 211 0,47 607 212 1,93 306 213 2,93 334 214 2,35 454 215 0,41 656 216 1 326 217 70,5 78900 219 2,29 253 221 70,5 23,7 >200 222 2,02 112 >200 223 4,36 293 >200 224 0,71 25,9 225 2,76 471 >20,0 226 7,07 2910 >200 227 14,1 2640 >200 228 3,36 583 >200 -696- C-—
Exemplo ctvp3 IC50 (nM) IIB/IIIA IC50 (nM) Células de melanoma M21 IC50 (NM) PRP humano (μΜ) 229 39,1 10600 231 2,99 424 232 19,1 12100 >200 233 3,31 647 >200 234 89,3 830 235 0,54 29,9 236 0,53 1250 237 0,57 1950 238 0,92 646 239 0,83 673 240 49400 76400 241 557 17200 242 2,28 533 243 0,35 23,6 244 17,6 4560 245 0,96 134 246 7,24 802 247 1,24 417 248 12300 21000 249 5,31 244 251 (B) 3,49 280 251 (C) 0,76 124 252 1,52 213 253 0,84 109 254 16,5 6910 -697- /<£Í {
Exemplo ανβ3 IC5o (nM) IIB/IIIA IC50 Células de melanoma PRP humano (nM) M21 IC50 (NM) (μΜ) 255 28,4 6050 256 0,58 22 257 49,2 4660 259 0,81 86,7 260 0,74 65,3 261 6,47 4710 262 1,24 172 263 4,19 2760 264 2,18 574 265 6,19 706 266 0,77 1810 267 131 43900 268 0,67 7430 269 209 25400 270 5,51 9160 271 29,9 4610 272 893 8210 273 12,9 4160 274 31,1 21200 275 6,98 1200 276 1,25 111 277 1,41 198 278 0,45 150 279 7,12 637 281 4,16 11500 -698-
Exemplo ανβ3 IC50 (nM) IIB/IIIAIC50 (nM) Células de melanoma M21 IC50 (NM) PRP humano (μΜ) 282 864 9770 2b4 195 18400 285 229 3170 286 413 8090 287 49,7 41,1 288 8,62 1060 289 0,9 621 290 1,62 1020 291 1,24 27,4 292 3,55 337 294 173 1990 295 144 4560 296 404 9450 297 89,8 3920 298 252 5560 299 109 927 362 0,84 7260 363 2,12 509 364 3,58 223 365 16,9 8470 366 0,44 91,3 367 0,35 1540
Lisboa, 4 de Setembro de 2001 u
ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industriai RUA VICTOR CORDON, ^ 1200 LISBOA

Claims (39)

  1. . ι - ------- í ^ REIVINDICAÇÕES 1. Um composto com a fórmula O
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que A seja γι
    N—R7 RS R8 1 2 em que Y seja seleccionado de entre o grupo constituído por N-R , O, e S; R seja seleccionado de entre o grupo constituído por H; alquilo Cp Cio; arilo; hidroxilo; alcoxilo CpCio; ciano; nitro; amino; alcenilo C2-C6; alcinilo C2-C6; amido; alquil Ci-Ci0-carbonilo; arilcarbonilo; alcoxil CpCi0-carbonilo; ariloxicarbonilo; haloalquil CrCio-carbonilo; haloalcoxil Ci-C]0-carbonilo; alquil C1 -C ] o-tiocarbonilo; ariltiocarbonilo; aciloximetoxicarbonilo; alquilo CpCio substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo CpCio, halogéneo, hidroxilo, haloalquilo CrCi0, ciano, nitro, carboxilo, -2-
    amino, alcoxilo CpCio, arilo ou arilo substituído opcionalmente com um ou mais halogéneos, haloalquilo CrCi0, alquilo CrCi0, alcoxilo Ci-Cio, ciano, alquil Cr Cjo-sulfonilo, alquiltio, nitro, carboxilo, amino, hidroxilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterociclos C4-C12, ou heterociclos monocíclicos C4-C12 fundidos a benzeno; arilo substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo CrCi0, hidroxilo, alquilo C1-C10, alcoxilo CpCio, metilenodioxilo, etilenodioxilo, ciano, nitro, alquil Ci-Cio-tio, alquil CrCi0-sulfonilo; ácido sulfónico, sulfonamida, derivados de carboxílicos, amino, arilo, arilo fundido, heterociclos C4-C12, ou heterociclos monocíclicos C4-C12 fundidos a benzeno; heterociclos monocíclicos C4-C12; e heterociclos monocíclicos C4-C12 opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo CrCi0, hidroxilo, alquilo CpCio, alcoxilo CpCio, amino, nitro, hidroxilo, derivados carboxílicos, ciano, alquil CpCio-tio, alquil Ci-Cio-sulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo ou arilo fundido; ou R2 tomado em conjunto com R7 forme um heterociclo com 4 a 12 membros contendo dois átomos de azoto, substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre o grupo constituído por alquilo Cj-Ciq, hidroxilo, ceto, alcoxilo CrCi0, halo, fenil, amino, carboxilo ou éster carboxílico, e fenilo fundido; 7 R tomado em conjunto com R forme um anel heteraromático com 5 membros substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo Q-Cio, fenilo e hidroxilo; 0 7 R tomado em conjunto com R forme um anel heteraromático com 5 membros fundido a um grupo fenilo; -3-
  2. 2. Um composto conforme a fórmula da reivindicação 1 em que A seja Yt
    N—R7 í R8 em que Y1 seja seleccionado de entre o grupo constituído por N-R2, O, e S; R2 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, ciano, alquilo CpCio, arilo, alquilo CrCi0 substituído, hidroxilo; alcoxilo Q-Cio, alquil CrCio-carbonilo, amido, nitro, amino e heterociclos monocíclicos C4-C12, arilcarbonilo; alcoxil Ci-Ci0-carbonilo; ariloxicarbonilo, haloalcoxil Ci-Cio-carbonilo, alquil Ci-Cio-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, aciloximetoxicarbonilo; ou R tomado em conjunto com R forme um anel com 4 a 12 membros; R , R e R sejam seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por H, alquilo CpCio, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6,
  3. (±) 3,5-dicloro- β - [ [2- [ [ [3 - [(1,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo; (±) ácido 3,5-dicloro-P-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] aminojbenzenopropanóico; (±) ácido 3,5-dibromo-p-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]b enzenopropanóico; (±) ácido 3 -bromo- 5-cloro- β - [[2- [ [ [3 - [(1,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] aminojbenzenopropanóico; (±) 3,5-dicloro^-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)-ami-no] fenil] carbonil] amino] acetil]amino]benzenopropanoato de [2-[2-[2-(2-hidro-xietoxi) etoxi] etoxi] etilo]; (±) ácido 3-bromo-5-cloro-2-hidroxi^-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetra-hidropirimidin-2-il)-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-benzenopropa-nóico; (±) 3-bromo-5-cloro-2-hidroxi^-[[2-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropiri-midin-2-il)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-benzenopropanoato de etilo; (±) ácido 3,5 -dicloro-2-hidroxi- β - [ [2- [[ [3- [(1,4,5,6-tetrahidropiri-midin-2-il)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-benzenopropanóico; (±) ácido 3,5-dicloro-P-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazolil)ami- -44- h-~rh uX no] fenil] carb onil] amino] acetil] amino] -2-hidroxib enzenopropanóico; (±) ácido 3-bromo-5-dicloro-P-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazo-lil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]-2-hidroxibenzenopropanóico; (±) ácido β - [ [2- [ [ [3 - [ [5-fenil-1 H-imidazol-2-il)amino] fenil] -carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico; (±) P-[[2-[[[3-[[5-fenil-lH-imidazol-2-il)amino]fenil]carbonil]-amino] acetil] amino]piridina-3-propanoato de etilo; (±) ácido 3,5-dicloro-P-[[2-[[[3-[(l,4,56-tetrahidro-5,5-dimetil-pirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-benzenopropanóico; (±) 3,5-dicloro-P-[[2-[[[3-[(l,4,56-tetrahidro-5,5-dimetilpirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo; (±) ácido 3-bromo-5-dicloro-2-hidroxi-P-[[2-[[[3-[(l,4,56-tetra-hidro-5,5-dimetilpirimidin-2-il)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -benzenopropanóico; e (±) 3-bromo-5-dicloro-2-hidroxi-P-[[2-[[[3-[(l,4,56-tetrahidro-5,5-dimetilpirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-benzenopropanoato de etilo.
    3 S- [ [2- [ [ [3 - [ [ [ [(4-(amino-sulfonil)fenilmetil] amino] (cianoimino)] -metil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -4-pentinoato de etilo; ácido 3S-[[2-[[[3-[[[[(4-(amino-sulfonil)fenilmetil]amino]-(ciano-imino)]metil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -4-pentinóico; β- [ [2- [ [ [3 - [ [amino(cianoimino)]metil] amino] fenil] carbonil] amino] -acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido β-[ [2-[[ [3-[[amino(cianoimino)]metil] amino] fenil] carbonil] -amino] acetil] amino] -3,5 - diclorobenzenopropanóico; (±) 3,5 -dicloro- β- [ [2- [ [ [3 - [(cianoimino)(metilamino)]metil] -ami no] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanoato de etilo; ácido 3,5-dicloro-β-[[2-[[[3-[(cianoimino)(metilamino)]metil]-amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanóico; e 3 - [ [2- [ [ [3 - [ [amino(cianoimino)metil] amino] fenil] carbonil] amino] -acetil]amino]-4-pentinoato de etilo.
    3. Um composto conforme a Reivindicação 2, em que V seja -N(R6)- em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H e alquilo Q-Cio; n seja 1; t seja 0 ou 1; - 11 - p seja 0, 1, ou 2; e R seja O-R3.
  4. 4. Um Composto conforme a Reivindicação 3, seleccionado de entre o grupo constituído por (±) β4 [2-[[ [3-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido (±) p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - acetil]amino]benzenopropanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino] acetil] amino]benzenopropanóico; (+) β - [ [2 - [ [ [3 - [ (aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] -ace-til]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo; ácido (±) β- [ [2- [ [ [3- [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -amino] acetil] amino]-1 ,3-benzodioxolepropanóico; (±) β- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - ace-til]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido (±) β-[ [2-[[ [3-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil]-ami- no]acetil]amino]piridina-3-propanóico; ácido (±) β-[[ 1 -[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]piridina-3-propanóico; (±) β-[[ 1 - [[[3-[(aminoiminometil)amino] fenil]carbonil] amino]-ace-til]amino]benzenopropanoato de etilo; (±) β-[[2-[[[3-[[imino[(fenilmetil)amino]metil]amino]fenil]-carbo-nil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[[immo[(fenilmetil)amino]metil]amino]fenil]-carbonil] amino] acetil] amino] -3 -propanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(ammoiminometil)amino]fenil]carboml]-ami-no] acetil] amino] -3,5 -diclorobenzenopropanóico; ácido (±) 3S-[[2-[[[3-(aminocarbonilmetil)fenil]carbonil]amino]-acetil] amino] -4-pentinóico; (±) 3S-[[2-[[[3-(aminocarbonilmetil)fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-4-pentinoato de etilo; ácido (±) βS-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)]amino]-2,5,6-trifluoΓO-fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -4-pentinóico; ácido (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -ami-no]acetil]amino]-3,5-bis(trifluorometil)benzenopropanóico; - 13 - fa*.vh>
    (±) P-[[2-[[[3-[(aminoiminometi])amino]fenil]carbonil]amino]-ace-til]amino]-3,5-bis(trifluorometil)benzenopropanoato de etilo; ácido (±) p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino] - [ 1, Γ -bifenil] -4-propanóico; (±) β- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] -acetil] amino]-[ 1,1’-bifenil]-4-propanoato de etilo; (±) β- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] -5-(trifluorometil)fenil] - carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-bis(trifluorometil)benzenopropanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-bis(trifluorometil)benzenopropanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(ammoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino]naftaleno-1 -propanóico; (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] -acetil] amino]naftaleno-l-propenoato de etilo; ácido (±) 3 - [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino]-2-oxopirrolidina-1 -propanóico; ácido 3R- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino]-acetil] amino] -4-pentinóico; 3R-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-4-pentinoato de etilo; - 14- iy-rh
    [ ácido 3S-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbo-nil] amino] acetil] amino] -4-pentinóico; 3S-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo ácido 3 S-[ [2-[[[3-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] -acetil]amino]-4-pentinóico; ácido P-[[2-[[[3-[(aminocarbonilamino)fenil]carbonil]amino]-ace-til]amino]piridina-3-propanóico; P-[[2-[[[3-[(aminocarbonilamino)fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido (±) P-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-car-bonil]amino]acetil]aminopiridina-3-propanóico; (±) β- [ [2- [ [ [3 - [ [ [(fenilmetil)amino] carbonil] amino] fenil] carbonil] -amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; (±)P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]fiirano-3-propanoato de etilo; ácido (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil]-amino] acetil] amino] fiirano-3-propanóico; ácido 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]- - 15-acetil] amino] pentanodióico; 3 - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil]- amino]pentanodioato de bismetilo; 3 - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -amino]pentanodioato de hidrogénio e metilo ácido (±)P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino] furano-2-propanóico; (±) β- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil) amino] fenil] carb onil] amino] -acetil] amino] fiirano-2-propanoato de etilo; ácido (±) P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]naftaleno-2-propanóico; (±)β-[[2-[[[3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] -acetil]amino]tiofeno-3-propanoato de metilo; 3 S-[ [2-[[ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino]-acetil] amino]-4-pentinoato de etilo; ácido (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil]-amino] acetil] amino]tiofeno-3 -propanóico; ácido (±) 2- [3- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -amino]acetil]amino]-4-carboxibutil]tio]benzóico; - 16- h*- fti
    Λ ácido (±) 2-[3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-4-carboxibutil]sulfonil]benzóico; ácido (±) β - [ [2-[ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil]-ami-no]acetil]amino]tiofeno-2-propanóico; (±) 2-[3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]-acetil]amino]-4-carboxibutil]tio]benzoato de metilo; (±) 3 - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -amino] - acetil]amino]-5-[(4-metilfenil)tio]pentanoato de metilo (±) 3- [[2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino]fenil] carbonil] -amino] ace-til]amino]-4-[[(4-metilfenil]sulfonil]amino]butanoato de metilo ácido 3 - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - acetil] amino]-4- [ [(4-metilfenil] sulfonil] amino]butanóico; ácido (±) 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-5-[(4-metilfenil)tio]pentanóico; ácido (±) 3 - [ [2- [ [ [3- [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -ami-no]acetil]amino]-5-[(4-metilfenil)sulfonil]pentanóico; ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]-acetil] amino] -4- [(4- feniltio]butanóico; ácido 3R-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino] -4-pentinóico; - 17- 3R-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]feml]carbonil]amino]acetil]-amino]-4-pentinoato de etilo; ácido 2- [ [2 S- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] - amino] acetil] amino]-2-(carboximetil)etil] sulfonil]benzóico; ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]-acetil]amino]-4-pentinóico; 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-4-pentinoato de etilo; ácido 2-[[2S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-2-(carboximetil)etil]tio]benzóico; (±) β- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil]metilamino]-acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -me-tilamino]acetil]ammo]piridina-3-propanóico; (±) β - [ [2- [ [ [ 3 - [(aminoiminometil) amino] fenil] carb onil] amino] -1 - oxopropil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido (±) β - [[2- [[ [3 -[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -amino]-1 -oxopropil]amino]piridina-3-propanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]4-metilfenil]-carbo- -18- d**- nil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; ácido (±) p-[[2-[[[3-[[(aminoiminometil)amino]metil]fenil]-carbo-nil] amino] acetil]amino]pirídina-3 -propanóico; ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]-acetil]amino]-4-hidroxibutanóico; ácido (±) β- [ [2- [[[3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -ami-no]acetil]amino]-2-hidroxibenzenopropanóico; ácido (±) β - [[2-[[ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil ] carbonil]-ami-no]acetil]amino]-2-hidroxi-5-metilbenzenopropanóico; ácido (±) 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)ammo]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino] -4- [(2-hidroxietil)amino]-4-oxobutanóico; 2-aminobenzoato de 2S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]-carb onil] amino] acetil] -amino] -3 -carb oxipropilo; ácido (±)p-[[2-[[[3-[(aminoimmometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-1,4-benzodioxin-6-propanóico; éster etílico de N-[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino] acetil] - β -alanina N- [2- [ [ [3 - [ (aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] - β -alanina - 19- (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino] -ace-til]amino]quinolina-3-propanoato de etilo; ácido β- [ [2- [ [[3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - acetil] amino] quinolina- 3 -propanóico; éster etílico de N-[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]-fe-nil] carbonil] amino] acetil] -β-alanina ácido 3 - [ [2- [ [ [3 - [ [ [(fenilmetil)amino] carbonil] amino] fenil] -carb o-nil] amino] acetil] amino]propanóico; (±) β-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil]- amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido β4[2-[[[3-[[[(ί6ηϊ^6ίί1)ηηιϊηο]θ3Λοηί1]ηηιΐηο]ί6ηΐ1]-οηΛο-nil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico; β-[[2-[[[3-[ [(fenilamino)carbonil] amino] fenil] carbonil] amino] -acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[[(fenilamino)carbonil]amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino]piridina-3 -propanóico; β-[[2-[[[3-^ΓηϊηοϋηΛοηΐΐ3ηηηο^ηϊ1]ϋηΓ0οηΐ1]3ηιΐηο]ηϋ6ΐΠ]-amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-(aminocarbonilamino)fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]piridina-3-propanóico -20- At c-J-i P“[[2-[[[3-[[[[(4-metilfenil)sulfonil]amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido β- [[2- [[ [3 - [ [[ [(4-metilfenil)sulfonil]amino]carbonil]amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; P-[[2-[[[3-[(aminotioxometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido β - [ [2 - [ [ [3 - [(aminotioxometil)amino] fenil] carbonil]-amino] -acetil]amino]piridina-3-propanóico; β- [ [2- [ [ [3 - [(aminotioxometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -aminojbenzenopropanoato de etilo; ácido β- [ [2- [ [[3-[(aminotioxometil) amino] fenil]carbonil]-amino]-acetil] amino]benzenopropanóico; P"[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]ammo]fenil]carbonil]-aminojacetil]aminojbenzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbo-nil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico; P"[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbo- -21 -nil]amino]acetil]amino]-1,3-benzodioxole-5-propanóico; P-[[2-[[3-[[(fenilamino)carbonil]amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo; ácido p-[[2-[[[3-[[(fenilamino)carbonil]amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-1,3-benzodioxole-5-propanóico; ácido P-[[2-[[[3-[[[[(4-amino-sulfonil)fenilmetil]amino]carbonil]-amino] fenil] carbonil] amino] acetil]amino]piridina-3 -propanóico; ácido β - [[2- [[ [3 - [[[(3 -piridinilmetil)amino] carbonil] aminojfenil]- carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; ácido P-[[2-[[[3-[[[(2-carboxietil)amino]carbonil]amino]-fenil]car-bonil] -amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico; ácido β-[[2-[[[3-[[[(2-feniletil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil] amino] acetil] amino]piridina- 3 -propanóico; ácido β-[[2-[[[3-[[[(1 -naftalenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; β·[[24[[34(αΜίηοΐπΰηο™6ύ1)3πΰηο]-4-ο1θΓθ£6ηΐ1]ϋηΛοηΠ]3ππηο]-acetil]amino]benzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-4-clorofenil]carbonil]-amino]-acetil]amino]benzenopropanóico; -22- ácido (±) β-[[2- [[ [ 5- [(aminoiminometil)amino]-2-clorofenil]-carbo-nil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico; β- [2- [[ [3- [ [amino(aminocarboml)immo]metil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[[amino(aminocarbonil)imino]metiI]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; P_[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]feiiil]carbonil]amino]acetil]-amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de [(dimetilamino)carbonil]metilo; β- [ [2- [[[3 - [ [[(etoxicarbonil)amino] [(etoxicarbonil)imino]metil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de 1,1-dimetiletilo; ácido β-[[2-[[[3-[[[(etoxicarbonil)ammo][(etoxicarbonil)imino]-metil] amino] fenil] carb onil] amino] acetil] amino] -3,5- diclorob enzenopropanóico; β- [ [2- [[[3 - [(aminoiminometil)amino]-4-clorofenil] carbonil] amino] -acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[(3ηιΐηο^ΐηοηΐ6ϋ1)3ηιΐηο]-4-ο1οι·οί6ηΐ1^ή)οηΐ1]-amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; 3S-[[2-[[[3-[ [amino [(aminocarbonil)imino]metil] amino] fenil] -carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo; ácido 3S-[[2-[[[3-[[amino[(aminocarbonil)imino]metil]amino]-fe- -23- nil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico; 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-4-clorofenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo; ácido 3S-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)]amino]-4-clorofeml]-carbo-nil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico; (±) p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-ace-til]amino]-3,4-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido (±) p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-3,4-diclorobenzenopropanóico; (±) p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)-carbo-nil]amino]acetil]amino]-3,4-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido (±) P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)-carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; (±) p- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil]carbonil]-amino] ace-til]amino]-2,5-dimetilbenzenopropanoato de etilo; ácido (±) p- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-2,5-dimetilbenzenopropanóico; (±) P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-ace-til]amino]-3-clorobenzenopropanoato de etilo; -24- ácido (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -ami-no]acetil]amino]-3-clorobenzenopropanóico; (±) β-[[2-[[[3 -[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]- ace-til]amino]-3-bromobenzenopropanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoimmometil)amino]fenil]carboml]-ami-no]acetil]amino]-3-bromobenzenopropanóico; (±) β - [ [2 - [ [ [3 - [ (aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] -ace-til]amino]-4-bromobenzenopropanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-4-bromobenzenopropanóico; (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] - amino] - acetil]amino]-3,5-dimetilbenzenopropanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoimmometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-3,5-dimetilbenzenopropanóico; (±) β- [ [2- [ [ [3 - [ (aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] - amino] ace-til]amino]-3,5-dimetoxibenzenopropanoato de etilo; ácido (+) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -amino] acetil] amino] -3,5 -dimetoxibenzenopropanóico; (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - ace-til]amino]-3,5-dicloroenzenopropanoato de (2,2-dimetil-l-oxopropoxi)metilo; -25- /2rt h- -------- ( ^ ácido (±) β-[[2-[[[3-[[[(aminocarbonil)imino)metilamino)-metil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; ácido (±) β4[24[[Μ(&™ηοΐΜΐηΟΜ6ύ0&Μΐηο]&ηΐ1]Ο3Γβ°ηΉ~&1™' no]acetil]amino]-3,4-dibromobenzenopropanóico; ácido (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -ami-no]acetil]amino]-3-fluoro-5-(trifluorometil)benzenopropanóico; ácido (±) P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-anii-no]acetil]amino]-3-bromo-5-fluorobenzenopropanóico; ácido (±) β- [ [2- [ [[3- [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -ami-no]acetil]amino]-3,5-dibromobenzenopropanóico; ácido (±) p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino]-3 -bromo- 5-metilbenzenopropanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(3ηιίηοΐηιίηοηΐ6ίΐ1)3ηιιηο]-5-(ίπί1ηοΓοηΐ6ίΐ1)-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-dibromobenzenopropanóico; ácido (±) P-[[2-[[[3-[(aminoimÍnometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-3-bromo-5-clorobenzenopropanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)- -26-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-bromo-5-clorobenzenopropanóico; (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] -ace-til]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de 2-[2-[2-[2-(hidroxietoxi)etoxi]eto-xi]etilo; ácido (±) P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3-bromo-5-iodobenzenopropanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino] acetil] amino]-2-hidroxi-4-metoxibenzenopropanóico; ácido (±) β-[ [2-[[ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] -ami-no]acetil]amino]-5-hidroxi-4-metoxibenzofuran-6-propanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil] -ami-no]acetil]amino]-9H-fluoreno-2-propanóico; (±) β-[[2-[[[3-[(ammoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-ace-til]amino]-9H-fluoreno-2-propanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino] acetil] amino]-3,5 -dicloro-2-hidroxibenzenopropanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-2-hidroxi-5-nitrobenzenopropanóico; ácido (±) β- [[2-[[[3 - [(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil] -am-no]acetil]amino]-3,5-dibromo-2-hidroxibenzenopropanóico; -27- /<^ ¢1---t u (±) P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-ace-til]amino]-3,5-dibromo-2-hidroxibenzenopropanoato de etilo; ácido (+) β- [ [2- [ [ [3 - [(aminoimmometil)amino] fenil] carbonil] -ami-no]acetil]amino]-5-bromo-2-hidroxibenzenopropanóico; (±) β - [ [2- [ [ [3 - [ (aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] -ace-til]amino]-5-bromo-2-hidroxibenzenopropanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]ciclohexanopropanóico; (±) β-[[2-[[[3-[^ηιίηο^ΐηοηΐ6ύ1)3ηιΐηο]Γβηϋ]03Λοηί1]3ππηο]-306-til]amino]ciclohexanopropanoato de etilo; (±) β - [ [2- [ [ [3-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino]-ace-til]amino]-3,5-dicloro-2-hidroxibenzenopropanoato de etilo; (±) ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)ammo]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-5-cloro-2-liidroxibenzenopropanóico; (±) β-[[2- [ [[3- [(aminoiminometil)amino] fenil]carbonil]amino]-ace-til]amino]-3-bromo-5-cloro-2-hidroxibenzenopropanóico; (±) ácido 5-amino-β - [[2- [ [ [3 - [(aminoiminometi 1) amino] fenil]-car-bonil] amino] acetil] amino] -2-hidroxibenzenopropanóico; (±) ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami- -28-no]acetil]amino]-5-bromopiridina-3-propanóico; (±) β- [[2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino]-ace-til]amino]-5-bromopiridina-3-propanoato de etilo; (±) ácido 3,5-dicloro-β-[[2-[[[3-[[[(etoxicarbonil)amino]-tioxome-til]amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico; (±) ácido 3,5-dicloro-β-[[2-[[[3-[[ [(etoxicarbonil)amino] -iminome-til] amino] fenil] carbonil] amino]acetil] amino]benzenopropanóico; (±) ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino][l,r-bifenil]-3-propanóico; (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil) amino] fenil] carb onil] -amino] - acetil]amino][l,l’-bifenil]-3-propanoato de 1,1-dimetiletilo; (±) ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino]pirimidina- 5-propanóico; (±) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-ace-til]amino]pirimidina-5-propanoato de 1,1-dimetiletilo; (±) ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carboml]-ami-no]acetil]amino]-3-metiltiofeno-2-propanóico; (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - ace-til]amino]-3-metiltiofeno-2-propanoato de 1,1-dimetiletilo; 29 " ί>.|Φ 4* ί (±) ácido P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-3-(metiltio)benzenopropanóico; (±) P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-ace-til]amino]-3-(metiltio)benzenopropanoato de l,ldimetiletilo; (±) ácido p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino]- 6-metilpiridina-2-propanóico; ácido P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]-acetil] amino] -3 -(metilsulfonil)benzenopropanóico; ácido p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amÍno]-acetil]amino]-3,5-dietoxibenzenopropanóico; < p-[[2-[[[3-[(ammoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-3,5-dietoxibenzenopropanoato de etilo; ácido P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]-4-bromotiofeno-2-propanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetiI]-amino]-4-bromotiofeno-2-propanoato de etilo; ácido β - [ [2- [ [[3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino]- acetil]amino]-5-clorotiofeno-2-propanóico; β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-5-clorotiofeno-2-propanoato de etilo; -30- ácido β-[ [2- [ [[3- [(aminoiminometil)amino]fenil] carbonil] amino] - acetil]amino]-1 H-pirazole-3-propanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-lH-pirazole-3-propanoato de etilo; ácido P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]-5-metiltiofeno-2-propanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-5-metiltiofeno-2-propanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3 - [(aminoimmometil)amino] fenil]carbonil] amino] - acetil] amino] -2,5,3 -triclorob enzenopropanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-2,5,3-triclorobenzenopropanoato de etilo; ácido β - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - acetil]amino]-2-(carboximetoxi)-benzenopropanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]ammo]acetil]-amino]-2-(carboximetoxi)-benzenopropanoato de etilo; ácido P-[[2-[[[3-[(ammoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil] amino]-4-metoxi-1,3-benzodioxole-6-propanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]- -31 - íh d*—*.*. (*-i amino]-4-metoxi-l,3-benzodioxole-6-propanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino] fenil]carbonil]amino]- acetil]amino]-5-bromo-2-metoxibenzenopropanóico; β- [ [2- [ [ [ 3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -amino]-5-bromo-2-metoxibenzenopropanoato de etilo; ácido β- [ [2- [ [ [3- [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - acetil] amino] -6-cloro-1,3 -benzodioxole- 5-propanóico; p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-6-cloro-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo; ácido p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]-benzofurano-2-propanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-benzofarano-2-propanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - acetil] amino] -3 -(carboximetoxi)benzenopropanóico; β- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -amino]-3-(carboximetoxi)benzenopropanoato de etilo; ácido 3 - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil) amino] fenil] carbonil] amino] - acetil]amino]-4,4,4-trifluorobutanóico; -32- Af.lfr.rfr £-—d*'* 3 - [ [2-[ [ [3-[(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -amino]-4,4,4-trifluorobutanoato de etilo; ácido (±) P-[[2-[[[3-[(aminoimmometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-3-bromo-4,5-dimetoxibenzenopropanóico; (±) β - [ [2 - [ [ [3 - [(aminoiminometil) amino] fenil]carbonil] amino]-acetil] amino]-3-bromo-4,5-dimetoxibenzenopropanoato de etilo; ácido 3 - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - acetil] amino] -4-metilpentanóico; 3 - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil) amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -amino]-4-metilpentanoato de etilo; ácido 3-[[2-[[[3 - [(aminoiminometil) amino] fenil] carbonil] amino]- acetil]amino]pentanóico; 3-[[2-[[[3-[(aminoiminometil) amino] fenil] carbonil] amino] acetil]-amino]pentanoato de etilo; ácido β - [[2- [ [[3 - [(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]- acetil]amino]-5-bromo-3-cloro-2-hidroxibenzenopropanóico; ácido P-[[2-[[[3-[[[(4-piridinilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil] amino] acetil] amino]-piridina-3-propanóico; P'[[2-[[[3-[[[(4-piridinilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-piridina-3-propanoato de etilo; -33 - ácido 3,5-dicloro-P-[[2-[[[3-[[[(4-piridinilmetil)amino]carbonil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetiI]amino]benzenopropanóico; 3.5- dicloro-P-[[2-[[[3-[[[(4-piridinilmetil)amino]carbonil]-amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo; ácido P-[[2-[[[3-[[[(2-piridinilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-piridina-3-propanóico; P-[[2-[[[3-[[[(2-piridinilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-piridina-3-propanoato de etilo; ácido 3,5-dicloro-P-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico; 3.5- dicloro-p-[[2-[[[3-[[[(fenilmetil)amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo; ácido 3 -cloro- β-[[2-[[[3-[[ [(fenilmetil)amino] carbonil] amino] -fe- nil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico; 3 -cloro- β-[ [2-[ [ [3 - [ [ [(fenilmetil)amino] carbonil] amino] fenil] -carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo ácido β-[[2- [[[3-[[[(1 -feniletil)amino] carbonil]amino]-fenil]carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico; P-[[2-[[[3-[[[(l-feniletil)amino]carbonil]amino]fenil]carbonil]- - 34 - Y H ( amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo ácido β- [ [2- [ [ [3- [[[ [(1 H-benzimidazol-2-il)metil]amino] carbonil] -amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino] -3,5 -diclorobenzenopropanóico; β-[[2-[[[3-[[[[(1 H-benzimidazol-2-il)metil]amino] carbonil] amino]-fenil] carbonil] amino] acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[[[[(3,5^ΐο1θΓθ£βηί1)ηΐ6ίΐ1^ηιΐηο^Λοηί1^ηιπιο]-fenil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3-propanóico; β-[[2-[[[3-[[[[(3,5-diclorofenil)metil]amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido 3-[[2-[[[3-[[[[(3,5-diclorofenil)metil]amino]carbonil]amino]-fenil]carbonil] amino] acetil] amino]butanóico; 3-[[2-[[[3-[[[[(3,5-diclorofenil)metil]amino]carbonil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]butanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil] amino] -3,5-bis( 1 -metiletoxi)benzenopropanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-3,5-bis(l-metiletoxi)benzenopropanoato de etilo; ácido p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]-3,5-dibromo-4-hidroxibenzenopropanóico; -35-
    p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-3,5-dibromo-4-hidroxibenzenopropanoato de etilo; ácido β- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] - acetil]amino]-3,5-dicloro-4-hidroxibenzenopropanóico; β- [ [2- [[ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] acetil] -amino]-3,5-dicloro-4-hidroxibenzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[5-[(aminoiminometil)amino]-2-hidroxifenil]-carbo-nil] amino] acetil] amino] -3,5 -diclorobenzenopropanóico; β - [ [2- [ [ [5 - [(aminoiminometil) amino] -2-hidroxifenil] carbonil] -amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[[(fenoxiamino)carbonil]amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; β 4 [24 [[M[(fenoxiamino)carb°nil] amino] fenil]carbonil] amino] -acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[[[(fenilamino)amino]carbonil]amino]fenil]-carbo-nil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; β-[[2-[[[3-[[[(fenilamino)amino]carbonil]amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido 3 - [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] -acetil]amino]-5-[(3,5-diclorofenil)amino]-5-oxopentanóico; -36-
    P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]-5-[(3,5-diclorofenil)amino]-5-oxo-pentanoato de etilo; ácido p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-carboxifenil]-carbo-nil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-carboxifenil]carbonil]-amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido β- [ [2- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino]- 5-carboxifenil] -carbo-nil] amino] acetil] amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-carboxifenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido P-[[2-[[[3,5-bis[(ammoiminometil)amino]-5-carboxifenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; P‘[[2-[[[3,5-bis[(aminoiminometil)amino]-5-carboxifenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3- [(aminoiminometil)amino] -5 -tri fluoroacetil] -car- bonil] amino] acetil] amino] -3,5-diclorobenzenopropanóico; P4[24[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-trifluoroacetil]carbonil]-amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-(acetilamino)-5-[(aminoiminometil)amino]fenil]- -37- carbonil] amino] acetil] amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; β-[[2-[[[3 -(acetilamino)-5- [(aminoiminometil)amino] fenil]-carbonil] amino] acetil] amino] -3,5 -diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido (±) 3,5-dicloro-β-[[2-[[[3-[[(metilamino)(metilimino)metil]-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico; ácido (±) 3,5-dicloro- β-[ [2- [[[3 - [ [(etilamino)(metilimino)metil] -amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico; ácido (±) 3,5-dicloro-P-[[2-[[[3-[[[( 1 -metiletil)amino](metilimino)-metil]amino]fenil]carbonil]ammo]acetil]amino]benzenopropanóico; ácido (±) P-[[2-[[[3-[[(etilamino)(metilimino)metil]-amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-4-fluorobenzenopropanóico; ácido (±) 4-fluoro-P-[[2-[[[3-[[[(piridinilmetil)amino](metilimino)-metil] amino] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanóico; ácido β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil] carbonil]amino]- acetil]amino]-4-flnorobenzenopropanóico; ácido (±) p-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino] -1 H-imidazole-2-propanóico; ácido (+) β-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-2,3,4,6-tetrafluorobenzenopropanóico; -38- A< fe- £ ácido P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]ammo]-5-bromotiofeno-2-propanóico; ácido β-[[2-[[[3- [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino]- acetil] amino] -2-mercaptobenzenopropanóico; e ácido (±) P-[[2-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-ami-no]acetil]amino]-5-cloro-2-mercaptobenzenopropanóico.
  5. 5. Um composto conforme a reivindicação 3 no qual Y1 seja N-R2 e R2 seja ciano.
  6. 6. Um composto conforme a reivindicação 5 em que o composto seja seleccionado de entre o grupo que consiste em P-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(fenilmetilamino)metil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de fenilmetilo; P-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(metilamino)metil]amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]benzenopropanoato de fenilmetilo; P‘[[2-[[[3-[[(cianoimino)(amino)metil]amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]benzenopropanoato de fenilmetilo; p-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(etilamino)metil]amino]fenil]carbonil]- amino]acetil]amino]benzenopropanoato; -39- ácido β-[ [2-[[ [ 3 - [ [(cianoimino) (fenilmetil)amino]metil] amino] - fe-nil] carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanóico; ácido β-[ [2-[[[3-[[(cianoimino)(metilamino)]metilamino] fenil]-carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanóico; ácido β-[[2-[[[3-[[amino(cianoimino)]metil]amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]benzenopropanóico; ácido P^[2-[[[3-[[(cianoimino)(etilamino)]metil]amino]fenil]-car-bonil] amino] acetil] amino]benzenopropanóico; 3S-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(metilamino)]metil]amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinoato de etilo; ácido 3S-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(metilamino)]metil]ammo]fenil]-carb onil] amino] acetil] amino] -4-pentinóico; β-[ [2-[ [ [3 -[[(cianoimino)(2-piridinilmetil)amino]metil] amino] -fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(2-piridinilmetil)amino]metil]-ami-no] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanóico; β - [[2-[ [ [3 - [ [(cianoimino)(3-piridinilmetil)amino] metil] amino] -fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanoato de etilo; ácido β-[[2-[[[3-[[(cianoimino)(3-piridinilmetil)amino]metil]-ami-no] fenil] carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanóico; -40-
  7. 7. Um composto conforme a Reivindicação 2 em que A seja -41 -
    Υ1
    N—R7 R5 R8 em que Yl seja N-R2; R2 tomado em conjunto com R7, forme um anel com 4-a 12 membros; e R e R sejam seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por H, alquilo CpCio, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, alquilo CpCio substituído com bicicloalquilo C3-C8, arilalquilo C;-C6, ariloxilo, hidroxilo, amino, alcoxilo CpCio, amino, alquil Cp Cio-amino, arilamino, amido, alquil Ci-Cio-carbonilo, arilcarbonilo, alcoxil Cp Cio-carbonilo, ariloxicarbonilo, haloalquil CrCio-carbonilo, haloalcoxil CpCi0-carbonilo, alquil Ci-Cio-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, aciloximetoxicarbonilo, fenilo substituído, arilacilo, heterocíclicos monocíclicos C4-Ci2 e bicíclicos C6-C\2 e -S02R10 em que R10 sejaseleccionado de entre o grupo constituído por alquilo CpCio, amino e arilo, que sejam todos eles substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre o grupo constituído por acilamino, amino, carbonilo, ciano, nitro, alcoxilo CrCi0, halo, alquilo CpCio, trifuloroalquilo CpCio, amido, alquil Ci-Ci0-amino-sulfonilo, alquil CpCio-sulfonilo, alquil CpCio-sulfonil-amino, alquil Ci-Cio-amino, di-alquil CpC10-amino, ariloxilo, tio, trifluoroalquil Ci-C6-tio, trifluoroalcoxilo Ci-C6 e trifluorometilsulfonilo; ou NR7 e R8, tomados em conjunto, formem um anel com 4-12 membros, em que o referido anel contenha opcionalmente um heteroátomo seleccionado de entre o grupo constituído por O, N, e S e em que o referido anel seja substituído, opcionalmente, e em que arilo, acilo e arilo fundido sejam tais como se definiram na reivindicação 1.
  8. 8. Um composto conforme a Reivindicação 7 em que -42-
    V seja -N(R6)- em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H e alquilo CrCio; n seja 1; t seja 0; e p seja 1.
    7 7 R R (quando se não tome em conjunto com R) e R sejam seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por H; alquilo Cp Cio; alcenilo C2-C6; alcinilo C2-C6; haloalquilo CrCi0; arilalquilo CpCi0; amino; alquil CpCio -amino; hidroxilo, alcoxilo CpCio; arilamino; amido, alquil CpC10 -carbonilo, arilcarbonilo; alcoxil CpCio -carbonilo; ariloxicarbonilo; haloalcoxil CpCio-carbonilo; alquil CpCjo-tiocarbonilo; ariltiocarbonilo; aciloxime-toxicarbonilo; cicloalquilo C3-Cg; bicicloalquilo; arilo; acilo, benzoílo; alquilo substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo CpCio, halogéneo, hidroxilo, haloalquilo CpCio, ciano, nitro, derivados de carboxilo, amino, alcoxilo CpC^; tio, alquil CpCio-tio, sulfonilo, arilo, arilalquilo CpCg, arilo substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados independentemente de entre halogéneo, haloalquilo CpCio, alquilo CpCio, alcoxilo CpCio, metilenodioxilo, etilenodioxilo, alquil CpCio-tio, haloalquil CpCio-tio, tio, hidroxilo, ciano, nitro, derivados de carboxilo, ariloxilo, amido, acilamino, amino, alquil CpCio-amino, di-alquil CpCio-amino, trifluoroalcoxilo CpC6, trifluorometilo, sulfonilo, alquil CpCi0-sulfonilo, haloalquil CpCi0-sulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterocíclicos monocíclicos C4-C12, heterocíclicos monocíclicos C4-C12 fundidos com benzeno; arilo substituído opcionalmente com com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo CpCio, alquilo CpCio, alcoxilo Cp C10, metilenodioxilo, etilenodioxilo, alquil CpCio-tio, haloalquil CpCio-tio, tio, hidroxilo, ciano, nitro, derivados de carboxilo, ariloxilo, amido, acilamino, amino, alquil CpCio-amino, di-alquil CpCio-amino, trifluoroalcoxilo CrC6, trifluorometilsulfonilo, alquil CpCi0-sulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterocíclicos monocíclicos C4-Ci2 ou heterocíclicos monocíclicos C4-C12 fundidos com benzeno; heterociclos monocíclicos C4-C12 substituídos opcionalmente com com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo CpCio, alquilo CpCio, alcoxilo CrCI0, ariloxilo, amino, nitro, hidroxilo, derivados de carboxilo, ciano, alquil CpCi0-tio, alquil Cp -4- Cio-sulfonilo, arilo, arilo fundido; heterociclo-alquilos monocíclicos C4-Ci2 e bicíclicos C4-C12; -SO2R10 em que R10 seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo C1-C10, arilo e heteroclos monocíclicos C4-C12, todos eles substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo CpCio, alquilo CrCi0j alcoxilo C]-C10, ciano, nitro, amino, acilamino, trifluoroalquilo CpCio, amido, alquil Ci-Cio-amino-sulfonilo, alquil CrCio-sulfonilo, alquil Ci-Cio-sulfonilamino, trifluorometiltio, trifluoroacoxilo Ci-C6-amino, trifluorometilsulfonilo, arilo, ariloxilo, tio, alquil CpCio-tio, e heterocíclicos monocíclicos C4-Ci2; e -C(=0)R10, em que R10 seja tal como se definiu acima; ou NR e R quando tomados em conjunto, formem um sistema anelar monocíclico ou bicíclico, contendo um átomo de azoto, com 4-12 membros, substituído com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo Ci-C10, derivados de carboxilo, arilo ou hidroxilo, e em que o referido sistema anelar pode conter opcionalmente um heteroátomo seleccionado de entre o grupo constituído por O, N, e S; R5 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo Cr C10, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, benzilo, e fenetilo; A seja -N(R5)C(=NR7)Y2 •j em que Y seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo C,-C,0; cicloalquilo C3-C8; bicicloalquilo C6-Ci2; arilo; heterociclos monocíclicos C4-C12; alquilo C1-C10 substituído opcionalmente com arilo que pode também ser substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre halogéneo, haloalquilo Q-Cio, alquilo Q-Qo, nitro, hidroxilo, alcoxilo Q-Cio, arilo ou arilo fundido; arilo substituído opcionalmente com um ou mais ^ »1 —*-Α— ^ <Ί -5- substituintes seleccionados de entre halo, haloalquilo CrCio, hidroxilo, alcoxilo Q-Cio, ariloxilo, arilo, arilo fundido nitro, metilenodioxilo, etilenodioxilo, ou alquilo Q-Cio; alcinilo C2-C6; alcenilo C2-Q; -S-R9 e -O-R9 em que R9 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H; alquilo Ci-Qo, arilalquilo Cr C6; arilo; alcenilo C2-C6 e alcinilo C2-C6; ou R , tomado em conjunto com R , forme um anel heterocíclico com 4 a 12 membros, contendo um átomo de azoto e um átomo de oxigénio ou um átomo de enxofre, e sendo substituído opcionalmente com alquilo CrC10, hidroxilo, ceto, fenilo, carboxilo ou éster carboxílico, e fenilo fundido; ou ou R , tomado em conjunto com R 'e tiazole; oxazole; benzoxazole; ou benzotiazole; e f 7 R eR são tal como acima se definiram; ou Y2 (quando Y2 for carbono), tomado em conjunto com R7, forme um anel de 4 a 12 membros contendo um átomo de azoto, substituído opcionalmente com alquilo CpCio, arilo ou hidroxilo; ou A seja -N(R5)-C(=N-R2)-NR7R8 7 Q em que R e R tomados em conjunto formem um heterociclo com 5-8 membros contendo dois átomos de azoto, substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre o grupo constituído por alquilo CrCio, hidroxilo, ceto, fenilo, ou derivados de carboxilo; e R seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquil CrQo-carbonilo, arilcarbonilo, alcoxil CrCio-carbonilo, ariloxicarbonilo, haloalquil CrCio-carbonilo, haloalcoxil CrCi0-carbonilo, alquil CrQo-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, ou aciloximetoxicarbonilo; e R5 seja definido tal como acima; -6- h*.Y^ 04 ou A seja -N=C(-N-R2R8)-NR7R8 0 H em que R e R tomados em conjunto formem um heterociclo com 5-8 membros contendo dois átomos de azoto, substituído opcionalmente com hidroxilo, ceto, fenilo, ou alquilo Ci-C10; e o ambos os R sejam seleccionados de entre o grupo constituído por alquil CrCi0-carbonilo, arilcarbonilo, alcoxil Ci-Cio-carbonilo, ariloxicarbonilo, haloalquil Cr Cio-carbonilo, haloalcoxil Ci-Ci0-carbonilo, alquil Ci-Cio-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, e aciloximetoxicarbonilo; Z1 seja um ou mais substituintes seleccionados de entre o grupo constituído por H; alquilo CpCio; hidroxilo; alcoxilo CrCi0; ariloxilo; halogéneo;haloalquilo Cr Cio; haloalcoxilo Q-Cio; nitro; amino; alquil Ci-Cio-amino; ciano; alquil Ci-Cio-tio; alquil CpCio-sulfonilo; derivados de carboxilo; trihaloacetamida; acetamida; arilo; arilo fundido; cicloalquilo C3-C8; tio; heterociclos monocíclicos C1-C12; heterociclos monocíclicos C1-C12 fundidos a benzeno; e A, em que A seja tal como acima se definiu; V seja seleccionado de entre o grupo constituído por -N-(R6)-, em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H; alquilo Q-C10; cicloalquilo C3-C8; arilalquilo Ci-C6; arilo; e heterociclos monocíclicos C4-Q2; ou R6, tomado em conjunto com Y forme um anel com 4 a 12 membros contendo um átomo de azoto; Λ Λ Y, Y , Z e Z sejam seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por hidrogénio; alquilo C1-C10; arilo; e cicloalquilo C3-C8; ou Y e Z sejam tomados em conjunto para formarem um cicloalquilo C3-C8; ou Y3 e Z3 -7- sejam tomados em conjunto para formarem um cicloalquilo C3~Cg; n seja um inteiro 1,2, ou 3; t seja um interio o, 1, ou 2; p seja um inteiro 1, 2, ou 3; R seja X-R3 em que X seja seleccionado de entre o grupo constituído por O, S e NR4, em que R3 e R4 sejam seleccionados independentemente de entre o grupo constituído por alquilo Ci-Ci0; alcenilo C2-C6; alcinilo C2-C6; haloalquilo Ci-Ci0; arilo; arilalquilo CrC6; amino; açúcares; esteróides; poli(éteres alquílicos); alquil CrC10 -amido; alquil CrC10-N,N-dialquil Cj-Ci o-amido; e no caso do ácido livre, todos os seus sais farmaceuticamente aceitáveis; R1 seja seleccionado de entre o grupo constituído por hidrogénio; alquilo CrCio; alcenilo C2-Cg; alcinilo C2-C6; arilo; derivados de carboxilo; haloalquilo Cj-Cio; heterociclos monocíclicos C4-Ci2; heterociclos monocíclicos C4-Ci2 substituídos opcionalmente com alquilo Ci-Cjo, halogéneo, haloalquilo Ci-Cio, ciano, hidroxilo, arilo, arilo fundido, nitro, alcoxilo Q-Cio, ariloxilo, alquil Ci-Cio-sulfonilo, arilsulfonilo, sulfonamida, tio, alquil CpCio-tio, derivados de carboxilo, amino, amido; alquilo CrC10 opcionalmente substituído com um ou mais de entre halo, haloalquilo CrCi0, hidroxilo, alcoxilo CrCio, ariloxilo, tio, alquil CrCi0-tio, alcinilo C2-Có, alcenilo C2-Cô, alquilo CrC10, ariltio, alquil Ci-Cio-sulfóxido, di-alquil Ci-Cio-amino, alquil Ci-C10-sulfonamida, arilsulfonamida, acilamida, derivados de carboxilo, sulfonamida, ácido sulfónico, derivados de ácido -8-fosfónico, derivados de ácido fosfinico, arilo, ariltio, arilsulfóxido, ou arilsulfona, todos eles substituídos opcionalmente no anel arilo com halo, alquilo Q-Cio, haloalquilo Cj-Cio, ciano, nitro, hidroxilo, derivados de carboxilo, alcoxilo Cr Cio, ariloxilo, amino, alquil Ci-C10-amino, di-alquil-amino, amido, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos C4-C12, e heterociclos monocíclicos C4-C12 fundidos a benzeno, heterociclos monocíclicos C4-Ci2-tio, heterociclos monocíclicos C4-Ci2-sulfóxido, e heterociclos monocíclicos C4-Ci2,-sulfona, os quais podem ser substituídos opcionalmente com halo, haloalquilo Q-Cio, nitro, hidroxilo, alcoxilo Ci-Ci0) arilo fundido, ou alquilo CpCioJ alquil CrCio-carbonilo, haloalquil Cj-Cio-carbonilo, e arilcar- bonilo; arilo substituído opcionalmente numa ou em mais posições com halo, haloalquilo CrCi0, alquilo Ci-Qo, alcoxilo CrCio; ariloxilo, metileno-dioxilo, etilenodioxilo, alquil Cj-Cio-tio, haloalquil Ci-Ci0-tio, tio, hidroxilo, ciano, nitro, aciloxilo, derivados de carboxilo, carboxilalcoxilo C1-C10, amido, acilamino, amino, alquil Ci-Cio-amino, di-alquil Ci-Cio-amino, trifluoroalcoxilo Ci-C6, trifluorometilsulfonilo, alquil Ci-Ci0-sulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterocíclicos monocíclicos C4-C12 e heterocíclicos monocíclicos C4-C12 fundidos com benzeno; e -C(=0)-NR R em que R e R sejam tal como se definiram acima e *7 o desde que tomados em conjunto com o azoto, R e R formem um aminoácido; e R11 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo Q-Qo, arilalquilo Q-Cé, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, haloalquilo CrCw, ou -9- haloalcinilo C2-C6, ouR11, tomado em conjunto com Y, forme um anel com 4 a 12 membros e contendo um átomo de azoto; em que arilo signifique fenilo, piridilo, naftilo, tiofeno, furano ou bifenilo e acilo seja um grupo com a fórmula -C(=0)-R , em que R seja alquilo Q-Cio, alcenilo C2-Cô, alcinilo C2-Q, arilo ou arilalquilo CrCi0, e arilo fundido signifique um arilo fundido a um ou mais fenilos.
  9. 9. Um composto conforme a Reivindicação 8, seleccionado de entre o grupo que consiste em (±) β - [ [2- [ [ [3 - [(4,5-dihidro-1 H-imidazol-2-il)amino] fenil] carbonil] -amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; (±) ácido β - [ [2- [ [[3 - [(4,5-dihidro-1 H-imidazol-2-il)amino] fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; (±) β-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-1 H-imidazol-2-il)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-3,5-bis(trifluorometil)benzenopropanoato de etilo; (±) ácido β-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-il)ammo]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-bis(trifluorometil)benzenopropanóico; (±) β-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-il)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; (±) ácido β-[[2-[[[3-[(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-il)ammo]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; -43- Αί
  10. 10. Um composto conforme a fórmula da Reivindicação 1 em que -45- C—* (^ A seja -N(R5)C(=NR7)Y2 em que Y2 seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo CrCi0, alquilo CpCio substituído, fenilo, fenilo substituído, cicloalquilo C3-Q; heterociclos monocíclicos C4-C12, -S-R9 e -O-R9 em que R9 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo Q-Cio, alquilo C1-C10 substituído, fenilo, fenilo substituído, cicloalquilo C3-Cg e heterociclos monocíclicos C4-C12 ou R9, tomado em conjunto com R7, forme um anel com 4 a 12 membros; ou Λ -7 Y , tomado em conjunto com R , forme um anel de 4 a 12 membros, substituído opcionalmente.
    - 10- cicloalquilo C3-C8, bicicloalquilo C6-Ci2, alquilo C]-Ci0 substituído, arilalquilo CrC6, ariloxilo, ariloxicarbonilo, haloalquil CrCio-carbonilo haloalcoxil CpCio-carbonilo, alquil Ci-Cio-tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, aciloximetoxicarbonilo, fenilo substituído, arilacilo, heterocíclicos monocíclicos C4-C12 e bicíclicos C6-C12 e -SO2R10 em que R10 seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo Q-C10, amino e arilo que sejam todos eles substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre o grupo constituído por acilamino, amino, carbonilo, ciano, nitro, alcoxilo Q-Cio, halo, alquilo Q-Cio, trifuloroalquilo, amido, alquil C]-Ci0-amino-sulfonilo, alquil Ci-Ci0-sulfonilo, alquil Ci-C10-sulfonil-amino, alquil Ci-Cio-amino, di-alquil Ci-Cio-amino, ariloxilo, tio, trifluorometiltio, trifluoroalcoxilo CrC6 e trifluorometilsulfonilo; ou NR e R , tomados em conjunto, formem um anel com 4-12 membros, em que o referido anel contenha opcionalmente um heteroátomo seleccionado de entre 0 grupo constituído por O, N, e S e em que 0 referido anel seja substituído, opcionalmente. em que arilo e acilo, arilo fundido sejam como definidos na Reivindicação 1.
  11. 11. Um composto conforme a Reivindicação 10 em que Y, tomado em conjunto com R7, forme um anel de 4 a 12 membros, substituído opcionalmente
  12. 12. Um composto conforme a Reivindicação 11 em que V seja -N-(R6)-, em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H e alquilo CrCI0; n seja 1; tsejaO ou 1; e p seja 1.
  13. 13. Um composto conforme a Reivindicação 12 em que o composto seja seleccionado de entre o grupo consistindo em -46- (±) P-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]feml]- carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]fe-nil] carbonil] amino] acetil] amino]piridina-3 -propanóico; (±) β-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]fenil] -car-o bonil]ammo]acetil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo; ácido (±) P-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]-fe-nil]carbonil]amino]acetil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanóico; ácido (+) P-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]-fe-nil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico; (±) β- [ [2- [ [ [3 - [(3,4-dihidro-2H-pirrol-5-il)amino] fenil] carbonil] - amino] acetil] amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(3,4-dihidro-2H-pirrol-5-il)amino]fenil]-carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; (±) β-[[2-[[[4-cloro-3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]- fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido (±) β-[[2-[[[4-ο1θΓθ-3-[(3,4,5,6-ί6ΐΓ3ΐ^Γο-2Η-ηζ6ρϊη-7-ϊ1)-amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3,5-^8-[(3,4,5,6-ίβίΓ3]ιίοΐΓθ-2Η-3Ζ6ρΐη-7-ϊ1)3ηΉ- -47- At fcu. r h C-— no]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]fe-nil]carbonil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico; (±) P-[[2-[[[3,5-bis-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]-fe-nil]carbonil]ammo]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; (±) ácido P-[[2-[[[3,5-bis-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)ami-no]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; (±) ácido P-[[2-[[[3,5-bis-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)ami-no]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; (±) ácido P-[[2-[[[3,5-bis-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)ami-no]-fenil]carbonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; (±) P-[[2-[[[3-[(3,4-dihidro-2H-pirrol-5-il)amino]fenil]carbonil]-amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanoato de etilo; ácido (±) P-[[2-[[[3-[(3,4-dihidro-2H-pirrol-5-il)amino]fenil]-car-bonil]amino]acetil]amino]-3,5-diclorobenzenopropanóico; (±) ácido 3,5-dicloro-P-[[2-[[[3-[(2,3,4,5-tetrahidropiridin-6-il)-amino] fenil] carbonil] -amino] acetil] amino]benzenopropanóico; (±) ácido 3,5 -dicloro-2-hidroxi- β - [ [2- [ [ [3,5-bis- [(3,4,5,6-tetrahidro-2H-azepin-7-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]benzenopropanóico; -48- C-—.-(-i e (±) 3,5-dicloro-2-hidroxi-p-[[2-[[[3,5-bis-[(3,4,5,6-tetrahidro-2H- azepin-7-il)amino] feniljcarbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanoato de etilo;
  14. 14. Um composto conforme a Reivindicação 10 em que Λ Y seja seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo Cp Ci0; alquil CpCio-fenil; fenilo substituído; cicloalquilo C3-C8 e monociclos heterocíclicos C4-C12,
  15. 15. Um composto conforme a Reivindicação 10 em que V seja -N-(R6)-, em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H e alquilo CpCio; n seja 1; t seja 0; e p seja 1.
  16. 16. Um composto conforme a Reivindicação 15, em que o composto seja seleccionado de entre o grupo que consiste em (±) β - [[2- [ [ [3- [(iminofenilmetil)amino]fenil] carbonil] amino] -ace-til]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido pS-[[2-[[[3-[[imino(l-pirrolidinil)metil]amino]fenil]-carbo- -49- ΙφΛ,ΥΫ1 nil]amino]acetil]amino]-4-pentinóico; ácido (±) β-[[2-[[[3-[(immofenilmetil)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]piridina-3-propanóico; ácido (±)3,5-dicloro-P-[[2-[[[3-[[imino(l-piperidinl)metil]amino]-fenil] carbonil] amino] acetil] aminojbenzenopropanóico; e (±) 3,5-dicloro- β-[[2-[[[3-[ [imino( 1 -piperidinl)metil] amino] fenil] -carbonil] amino] acetil] amino]benzenopropanoato de etilo;
  17. 17. Um composto conforme a Reivindicação 10 em que Y seja -S-R9 ou -O-R9 em que R9 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo, alquilo substituído, fenilo, fenilo substituído, e heterociclos monocíclicos, ou R , tomado em conjunto com R , forme um anel com 4-12 membros.
  18. 18. Um composto conforme a Reivindicação 17 em que V seja-N-(R6)-, em que R6 seja seleccionado de entre o grupo constituído por H, alquilo CpCjo, alquilo CpCio substituído, cicloalquilo C3-C8, arilo, arilo substituído, heterociclos monocíclicos e benzilo; n seja 0; t seja 0; e -50-
    p seja 1 ou 2. em que arilo seja tal como se definiu na Reivindicação 1.
  19. 19. Um composto conforme a Reivindicação 18 em que esse composto seja seleccionado de entre o grupo que consiste em P-[[2-[[[3-[(4,5-dihidrotiazol-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]-acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido p-[[2-[[[3-[(4,5-dihidrotiazol-2-il)amino]fenil]carbonil]-ami-no] acetil] amino]piridina-3 -propanóico; ácido β -[ [2-[ [ [3 - [(benzoxazol-2-il)amino]fenil] carboniljamino]- acetil]amino]piridina-3-propanóico; P-[[2-[[[3-[(benzoxazol-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]-amino]piridina-3-propanoato de etilo; ácido β - [[2- [[ [3 -[(5,6-dihidro-4H-tiazin-2-il)amino] fenil] carbonil] -amino]acetil]amino]piridina-3-propanóico; e β -[[2 - [ [[3 - [(5,6-dihidro-4H-tiazin-2-il)amino] fenil] carbonil] -amino]acetil]amino]piridina-3-propanoato de etilo.
  20. 20. Um composto conforme a Reivindicação 1, com a fórmula -51 - ui
    Ο -52- c
    -53- í>v í ^
    -54-
    -55-
    -57-
    -58-
    - 59-
    ί ^x
    ch3 · -61 -
    r ,---*-· l U
    0
    0
    -62- C-—^
    -63- M
    Ο
    -64 - /&,< Μ*1, ^^ ^ ο
    Ο }—ΟΒζ 8 ΟΒζ
    ο
    -66- C
    -68- C
    -69-
    ο
    -71 - A* n
    \ 0
    O
    -72-
    -73-
  21. 21. Uma composição farmacêutica contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto conforme qualquer da reivindicações 1-20 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
  22. 22. A utilização de um composto conforme a reivindicação 1 para preparar um medicamento para tratar estados mediados pela integrina ανβ3 num mamífero que necessite de um tal tratamento.
  23. 23. A utilização de um composto conforme qualquer das reivindicações 4, 6, 9, 13, 16 ou 19 para preparar um medicamento para tratar estados mediados pela integrina ανβ3 num mamífero que necessite de um tal tratamento.
  24. 24. A utilização conforme a Reivindicação 22 em que o estado -74- tratado seja uma metástase tumoral.
  25. 25. A utilização conforme a Reivindicação 23 em que o estado tratado seja uma metástase tumoral.
  26. 26. A utilização conforme a Reivindicação 22 em que o estado tratado seja o crescimento de tumor sólido.
  27. 27. A utilização conforme a Reivindicação 23 em que o estado tratado seja o crescimento de tumor sólido.
  28. 28. A utilização conforme a Reivindicação 22 em que o estado tratado seja a angiogénese.
  29. 29. A utilização conforme a Reivindicação 23 em que o estado tratado seja a angiogénese.
  30. 30. A utilização conforme a Reivindicação 22 em que o estado tratado seja a osteoporose.
  31. 31. A utilização conforme a Reivindicação 23 em que o estado tratado seja a osteoporose.
  32. 32. A utilização conforme a Reivindicação 22 em que o estado tratado seja a hipercalcemia humoral da lesão maligna.
  33. 33. A utilização conforme a Reivindicação 23 em que o estado tratado seja a hipercalcemia humoral da lesão maligna.
  34. 34. A utilização conforme a Reivindicação 22 em que o estado tratado seja a migração de células de músculo liso.
  35. 35. A utilização conforme a Reivindicação 23 em que o estado tratado seja a migração de células de músculo liso.
  36. 36. A utilização conforme a Reivindicação 34 em que se iniba a restenose.
  37. 37. A utilização conforme a Reivindicação 35 em que se iniba a restenose.
  38. 38. A utilização conforme a Reivindicação 22 em que o estado tratado seja a artrite reumatóide.
  39. 39. A utilização conforme a Reivindicação 23 em que o estado tratado seja a artrite reumatóide. Lisboa, 4 de Setembro de 2001
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