CZ20003218A3

CZ20003218A3 - Deriváty meta-azacyklické aminobenzoové kyseliny a jejich deriváty, které jsou antagonisty integrinu

Info

Publication number: CZ20003218A3
Application number: CZ20003218A
Authority: CZ
Inventors: Thomas E. Rogers; Peter G. Ruminski
Original assignee: G.D. Searle & Co.
Priority date: 1999-02-22
Filing date: 1999-02-22
Publication date: 2001-03-14

Abstract

Řešení se zaměřuje na sloučeniny obecného vzorce I ajejich farmaceuticky přijatelné soli sjejich izomery, které jsou užitečné jako antagonisté integrinu

Description

Tento vynález se týká léčivých látek (sloučenin), které jsou užitečné jako antagonisté integrinu α_νβ₃, a které jsou k použití ve farmaceutických prostředcích a při způsobech ošetřování stavů zprosředkovaných α_νβ₃, inhibicí nebo antagonismem integrinu α_νβ3·

Dosavadní stav techniky

Integriny jsou skupinou glykoproteinů buněčného povrchu, které zprostředkují adhezi buňky, a jsou · tudíž uřitečnými mediátory interakcí buněčné adheze, která je přítomna při různých biologických procesech. Integriny jsou heterodimery složené z nekovalentně vázaných podjednotek polypeptidů a a β. V současné době bylo rozpoznáno 11 odlišných podjednotek a a 6 odlišných podjednotek β. K vytvoření odlišných integrinů se mohou různé podjednotky a spojit s různými podjednotkami β.

Integrin označený jakoa_vp₃ (známý také jako receptor pro vitronektin) byl rozpoznaný jako integrin, který hraje roli při různých stavech nebo onemocněních, která zahrnují nádorové metastázy, růst pevného nádoru (neoplazii), osteoporózu, Pagetovu chorobu, humorální hyperkalcémii při malignitě, angiogenezi včetně nádorové angiogeneze, retinopatii včetně makulární degenerace, artritidu včetně revmatoidní artritidy, periodontální onemocnění, psoriázu a migraci buněk hladké svaloviny (např. restenózu). Navíc bylo nalezeno, že tato. léčiva budou užitečná jako antivirotika, antimykotika a protimikrobni látky. Sloučeniny,. které selektivně inhibuji nebo . antagonizuji α_νβ3 tedy budou užitečné při léčbě takových stavů.

Ukázalo se, že integrin α_νβ₃ a jiné integriny obsahující a_v se váže k mnoha makromolekulám matrix obsahujícím sekvenci aminokyselin Arg-Gly-Asp (RGD). Sloučeniny obsahující sekvenci RGD napodobují extracelulární ligandy matrix, aby se vázaly na receptory buněčného povrchu. Avšak je také známo, že peptidy RGD obvykle nejsou selektivní pro * RGD-dependentní integriny. Například většina RGD peptidů, které se váží na α_νβ3, se také váží na α_νβ5, α_νβι a «ι^β3· Je známo, že antagonismus destičkového α^β3 (známého také jako receptor pro fibrinogen) blokuje agregaci destiček u lidí. Za účelem odstranění vedlejších účinků krvácení při léčbě 'stavů nebo onemocnění spojených s integrinem α_νβ₃ bude užitečné vyvinout sloučeniny, které jsou selektivními antagonisty α_νβ3 oproti 0ίιη>β3·

K invazi nádorovými buňkami dochází procesem ve třech krocích: 1) připojením buňky nádoru k extracelulární matrix, 2) proteolytickou disolucí matrix a .3) pohybem buněk přes rozpuštěnou bariéru. K tomuto procesu může dojít opakovaně a může mít za následek metastázy v místech vzdálených od původního nádoru.

Seftor a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 8 9, 1557 - 1561 (1992) prokázal, . že integrin α_νβ₃ má biologickou funkci v invazi buněk melanomu. Montgomery a kol. v Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 91, 8856 - 8860 (1994) ukázal, že *5’ . integrin α_νβ3 exprimovaný na lidských buňkách melanomu podněcuje signál pro přežití chránící buňky před apoptózou. K zabránění metastáze nádoru bude užitečné zprostředkování cesty tvorby metastázy nádorové buňky interferencí s integrinem α_νβ₃ receptoru adheze buňky.

Brooks a kol., Cell, 7 9, 1157 - 1164 (1994) prokázal, že antagonisté α_νβ₃ poskytují terapeutický přístup k léčbě neoplazie (inhibice růstu pevného nádoru), neboť systémové * · · · · ······ ··· · · · · · · ···· ·· · · · · · · ·» · · podání antagonistů α_νβ3 způsobuje výraznou regresi různých histologicky odlišných nádorů u člověka.

Integrin adhezního receptoru α_νβ3 byl označen jako ukazatel angiogenních cév u kuřete a člověka, a tento receptor tedy hraje rozhodující roli při angiogenezi nebo neovaskularizaci. Angiogeneze se vyznačuje invazí, migrací a proliferaci buněk hladkého svalstva a endotelu. Antagonisté Οίνββ inhibují tento proces selektivním podnícením apoptózy buněk v neovaskulatuře. Růst nových cév, neboli angiogeneze, také podporuje patologické stavy, jako například diabetickou retinopatii a makulární degeneraci /Adonis a kol,, Amer. J. i-'- 'Ophtal., 118, 445 - 450 (1994)/ a revmatoidní artritidu /Peacock a kol., . J. Exp. Med., 175, 1135 - 1138 (1992)/.

Antagonisté α_νβ3 budou proto užitečnými terapeutickými cíly k ošetřování . těchto’ stavů spojených s neovaskularizaci /Brooks a kol., Science, 264, 569 - 571 (1994)/.

Bylo publikováno, že receptor buněčného povrchu α_νβ3 je hlavním integrinem na osteoklastech, zodpovědný za jejich přilnutí ke kosti. Osteoklasty podmiňují resorpci kosti a převáží-li tato resorpční aktivita kosti nad aktivitou formace kosti, má to za následek osteoporózu (úbytek kosti), která vede ke zvýšení počtu kostních zlomenin, invaliditě a zvýšené mortalitě. Antagonisté α_νβ₃ se ukázaly být potenciálními inhibitory aktivity osteoklastů jak in vitro /Sáto a kol., J. Cell. Biol., 111, 1713 - 1723 (1990)/, tak , in vivo /Fisher a kol., Endocrinology, 132, 1411 - 1413 (1993)/. Antagonismus α_νβ3 vede ke snížení resorpce kosti, a tudíž znovu navozuje normální rovnováhu aktivity t tvorby kosti a její remodelace. Tudíž bude přínosné poskytnout antagonisty α_νβ₃ osteoklastů, které jsou účinnými inhibitory resorpce kosti, a jsou tudíž užitečné při léčbě nebo prevenci osteoporózy.

Úloha integrinu α_νβ₃ při migraci buněk hladkého svalstva z něj činí terapeutický cíl k prevenci či inhibici hyperplazie neointimy, která je vedoucí příčinou restenózy

44 ··			.4	4 4		4 4
• · ·	«	4	• ·	*		•	•
• 4	•		'4	9	•	4	«1
							9
• ·	•	•	•		•	•	4
• · · · · ·		4 4 4	• 4 4	4 4		4 4

po cévních postupech / Choi. a .kol,, J. Vasc. Surg., 19 (1) , 125 - 134 (1994)/. K prevenci nebo inhibici restenózy bude přínosná prevence nebo inhibice hyperplazie neointimy léčivými látkami.

White v Current Biology, _3 (9), 596 - 599 (1993) uvedl, že adenovirus používá α_νβ3 ke vstupu do hostitelských buněk. Zdá se, že integrin je žádoucí pro endocytózu virových částic, a může být žádoucí pro penetraci virového genomu do cytoplazmy . hostitelské buňky. Sloučeniny, které inhibují α_νβ₃, se tedy budou pokládat za užitečné jako antivirotika.

ř·

Souhrnný popis vynálezu

Tento vynález se týká sloučeniny obecného vzorce

ve kterém'

X a Y představují stejný nebo rozdílný atom halogenu, a jejích farmaceuticky přijatelných solí.

Výše posané sloučeniny mohou existovat v různých izomerních formách a míní se, že všechny tyto izomerní formy jsou zde zahrnuty. Tautomerní formy jsou zde také zahrnuty, stejně jako farmaceuticky přijatelné soli těchto izomerů a· tautomerů.

Přesněji se tento vynález týká těchto sloučenin:

OH

CO2R .OH (i)

Br

V

(II)

(III) (IV)

» (VI)

» · · *

« t > *

„.'í-te ϊ·«Λύί

(χιΐ)

(XIV)

(XV)

• · ·		•	’· · ·
• ·		•	• 9 9
• · · ·	·· b	»· ·	9 ·

ve kterých

R představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu, nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí.

f'-^r

Dalším předmětem tohoto vynálezu je poskytnout farmaceutické prostředky obsahující sloučeniny popsané výše. Takové sloučeniny a prostředky jsou užitečné při selektivní inhibici nebo antagonismu integrinu, a tudíž v dalším ztělesnění se tento vynález týká způsobu selektivní inhibice nebo antagonismu integrinu α_νβ3· Tento vynález dále zahrnuje léčbu nebo potlačení patologických stavů s tím spojených, jako je osteoporóza, humorální hyperkalcémie při malignitě, Pagetova choroba, nádorová metastáza, růst pevného nádoru (neoplazie), angiogeneze včetně nádorové angiogeneze, retinopatie včetně diabetické retinopatie a makulární degenerace, artritida včetně révmatoidní -artritidy, periodontální onemocnění, psoriáza, migrace buněk hladkého svalstva a restenóza, u savce potřebujícího takovou léčbu. Navíc jsou taková léčiva užitečná jako antivirotika a protimikrobní léčiva.

Detailní popis vynálezu

Tento vynález se týká skupiny sloučenin zastoupených výše znázorněnými vzorci I až XVI.

Upřednostňovaná ztělesnění tohoto vynálezu jsou sloučeniny obecných vzorců

• 4 ·· • * · * :·« ·· *

» 4 ·

I 4 '4

OH (XXVI)

♦ ·	• ·	• . « ♦ · ··
• ·	• '·	• ·	• ·	.· .··'·*	•
•	• ·			• '· -·	9
					9
•	• ·		'·	(· (· ·	9
····	• ·	1’· · ·	·· ·	' ^f· · <9 ·

<-

HO

N

CO2H .OH (XXXI)

Tento vynález se dále týká farmaceutických prostředků obsahujících terapeuticky účinná, množství výše popsaných sloučenin. · ·

Tento vynález se také týká způsobu 'selektivní inhibice nebo antagonismu integrinu α_νβ3, a přesněji se týká způsobu inhibice resorpce kosti, . periodontálního onemocnění, osteoporózy, humorální hyperkalcémie při malignitě, Pagetovy choroby, nádorové metastázy, růstu pevného nádoru (neoplazie) , angiogeneze včetně tumorové angiogeneze, fetinopatie,. včetně diabetické' retnopatie a makulární degenerace, artritidy včetně revmatoidní artritidy, migrace buněk .hladké svaloviny a restenózy podáním terapeuticky účinného množství výše,popsané sloučeniny k dosažení takové inhibice společně s' farmaceuticky přijatelnou nosnou látkou.

Následuje seznam definicí,různých zde použitých výrazů:

Jak se zde používá, výrazy „alkylová skupina a „nižší alkylová skupina se týkají uhlovodíkových zbytků s přímým nebo rozvětveným řetězcem s přibližně jedním až přibližně deseti atomy uhlíku, a výhodněji s jedním až přibližně šesti atomy uhlíku. Příklady takových alkylových skupin jsou methylová skupina, ethylová skupina, norm/propylová skupina, isopropylová skupina, norm.butylová skupina, isobutylová skupina, sek. butylová skupina, terč. butylová skupina, pentylová skupina, neopentylová skupina, hexylová skupina, isohexylová skupina, a podobně.

Jak se zde používá, výraz „halogen nebo „atom halogenu se týká atomu bromu, chloru nebo jodu.

Jak se zde používá, výraz ,;halogenalkylová skupina se týká alkylové skupiny, jak se definuje výše, s jedním nebo více, stejnými nebo rozdílnými, atomy halogenu na jednom nebo více atomech uhlíku. Příklady takových halogenalkylových skupin zahrnují trifluormethylovou skupinu, dichlorethylovou skupinu, fluorpropylovou skupinu, a podobně.

Výraz „prostředek, jak se zde používá, znamená výrobek, který vzniká smísením nebo spojením více než, jedné součásti nebo složky.

Výraz „farmaceuticky přijatelná nosná látka, jak se zde používá, znamená farmaceuticky přijatelnou látku, směs nebo vehikulum, jako, například kapalné nebo pevné plnivo, ředidlo., excipient, rozpouštědlo nebo látku k enkapsulaci, zapojenou do nesení nebo transportu chemického léčiva.

Výraz „terapeuticky účinné množství .bude znamenat takové množství léčivé látky nebo léčiva, které vyvolá takovou biologickou nebo léčebnou odpověď tkáně, systému nebo živočicha,.-o jakou usiluje vědec nebo lékař.

Následuje seznam zkratek a odpovídajících významů, jak se zde zaměnitelné eventuálně používají:

¹H-NMR = protonová nukleární magnetická rezonance AcOH = kyselina octová Ar = argon

CH3CN = acetonitril

CHN analýza = elementární analýza uhlík/vodík/dusík CHNC1 analýza = elementární analýza uhlík/vodík/dusík/chlor CHNS analýza = elementární analýza uhlík/vodík/dusík/síra Dl voda = deionizovaná voda

DMA = N,N-dimethylacetamid

'•'Φ'Φ'Φ

DMAP = 4-(Ν,Ν-dimethylamino)pyridin DMF 5= N,N-dimethylformamid

EDC1 = 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiímidhydrochlorid

EtOAc = ethylacetát EtOH = ethanol

FAB MS = hmotnostní spektrometrie s bombardováním rychlými atomy ^r g = gram(y)

HOBT = 1-hydroxybenztrizazolhydrát «!

HPLC = vysokoúčinná kapalinová chromatografie _ IBCF = izobutylchloroformiát

KSCN = thiokyanatan draselný 1 = litr

LiOH = hydroxid lithný

MEM = methoxyethoxymetyl

MEMC1 = methoxyethoxymethylchlórid'

MeOH = methanol mg = miligram

MgSO₄ = síran horečnatý .ml = mililitr

MS = hmotnostní spektrometrie MTBE = methyl-terc.butylether N₂ = dusík

NaHCO₃ = hydrogenuhličitan sodný NaOH = hydroxid sodný Na2SO₄ = síran sodný r-'· NMM = N-methylmorfolin

NMP = N-methylpyrrolidon . NMR = nukleární magnetická rezonance P₂0₅ = oxid fosforečný PTSA = kyselina para-toluensulfonová

RPHPLC = vysokoúčinná kapalinová chromatografie s reverzní fází

t.m. = teplota místnosti

TFA = kyselina trifluoroctová

THF = tetrahydrofuran

TMS = trimethylsilyl /

Δ = zahřívání reakční směsi

Výše popsané sloučeniny mohou být přítomny v různých izomerních formách a míní se, že všechny tyto izomerní formy jsou zde zahrnuty. Také jsou zde zahrnuty tautomerní formy, stejně jako farmaceuticky přijatelné soli těchto izomerů a tautomerů.

Ve zde uvedených strukturách a vzorcích se vazby zakreslené cyklickým kruhem napříč mohou vázat na některý z vhodných atomů cyklického kruhu.

Výraz „farmaceuticky přijatelná sůl se týká soli připravené sloučením výše popsané sloučeniny s kyselinou, jejíž anion se obvykle považuje za vhodný ke spotřebě člověkem. Příklady farmaceuticky přijatelných solí zahrnují soli hydrochloridové, hydrobromidové, hydrojodidové, sulfátové, fosfátové, acetátové, propionátové, laktátové, maleátové, malátové, sukcinátové, tartrátové, a podobně. Všechny· tyto farmaceuticky přijatelné soli se mohou připravit běžnými způsoby /další příklady farmaceuticky přijatelných solí viz Berge a kol., J. Pharm. Sci., 66 (1) , 1 - 19 (1977)/.

K selektivní inhibici nebo antagonismu integrinů α_νβ3 se sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou podávat perorálně, parenterálně, nebo inhalací sprejem, nebo topicky, v jednotkově dávkovaných přípravcích obsahujících běžné farmaceuticky přijatelné nosné látky, adjuvancia a vehikula. Výraz parenterální, jak se zde používá, zahrnuje například způsob subkuténní, intravenózní, íntramuskulární, intrasternální, infúzní nebo intraperitoneální.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu se podávají některým vhodným způsobem v podobě farmaceutického prostředku ·· ·· • · · · ·· '· ···· >· τ·.

přizpůsobeného takovému. způsobu, a v dávce . účinné k zamýšlené léčbě. . Terapeuticky účinné dávky sloučenin požadované k prevenci nebo k zástavě rozvoje nebo k léčení lékařského stavu snadno zjistí běžný odborník v oboru použitím preklinických a klinických přístupů obvyklých v medicínských vědách.

Podle toho tento vynález poskytuje způsob léčby stavů zprostředkovaných selektivní inhibicí nebo antagonismem receptoru povrchu buňky α_νβ₃, kterýžto způsob zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny zvolené ze skupiny výše popsaných sloučenin, kde jedna nebo více sloučenin se podává ve spojení s jednou nebo více netoxickými, farmaceuticky přijatelnými nosnými látkami a/nebo ředidly a/nebo adjuvanty (společně zde uváděné jako „nosné látky) a, požaduje-li se, s¹jinými .účinnými látkami..Přesněji.tento vynález poskytuje způsob inhibic.e receptoru povrchu buňky a_vŮ3. Výhodněji tento vynález poskytuje způsob inhibice resorpce kosti, léčby osteoporózy, inhibice humorální hyperkalcémie při malignitě, léčby Pagetovy choroby, inhibice nádorové metastázy, inhibice neoplazie (růstu pevného nádoru), inhibice angíogeneze včetně nádorové angiogenezé, léčby diabetické retínopatie a makulární degenerace, inhibice' artritidy, psoriázy . a periodontálního onemocnění a inhibice migrace buněk hladkého svalstva včetně restenózy.

Podle standardních laboratorních experimentálních způsobů a postupů dobře známých a ceněných odborníkem v oboru, stejně tak i podle srovnání se sloučeninami se známou užitečností, mohou se výše popsané sloučeniny použít k léčbě pacientů trpících výše uvedenými patologickými stavy. Odborník v oboru zjistí, že výběr nejvhodnější sloučeniny podle tohoto vynálezu patří do rámce schopnosti odborníka v oboru, a bude záviset na různých faktorech včetně zhodnocení výsledků získaných ve standardních zkouškách a na zvířecích modelech.

>^ííi ·· ·« » « « · • · · • · • t .· *

Léčba pacienta postiženého jedním z patologických stavů zahrnuje podání množství výše popsané sloučeniny tomuto pacientovi, které je . terapeuticky účinné při . ovládání takového stavu nebo při prodloužení schopnosti · přežití u pacienta oproti- očekávanému za nepřítomnosti takového ošetření. Jak se zde používá, výraz „inhibice stavu se týká zpomalení, přerušení, zabránění nebo zastavení stavu a nutně neukazuje úplnou eliminaci stavu.

Věří se, že kromě značně výhodného účinku samotného, také prodloužení schopnosti přežití pacienta ukazuje, že tento stav je do jisté míry příznivě ovládán.

Jak je dříve řečeno, sloučeniny podle tohoto vynálezuse mohou pužít v různých oblastech biologie, profylaxe nebo terapie. Tyto sloučeniny se považují za užitečné v prevenci nebo při léčbě některého chorobného stavu, nebo stavu, ve kterém hraje roli integrin α_νβ₃.

Dávkový režim pro sloučeniny a/nebo prostředky obsahující takové sloučeniny závisí na různých faktorech, které zahrnují typ, věk, hmotnost, pohlaví a léčený stav pacienta, vážnost stavu, způsob podávání a účinek konkrétní použité sloučeniny. Dávkový režim se tedy může široce odlišovat. Při léčbě výše uvedených stavů jsou užitečné hladiny dávek v rozmezí od přibližně 0,01 mg do přibližně 1000 mg na kilogram tělesné hmotnosti a den, a výhodněji od přibližně 0,01 mg do přibližně 100 mg na kilogram tělesné hmotnosti a den.

Účinná složka podaná injekcí se zformuluje do přípravku, ve kterém se může jako vhodná nosná látka použít například roztok chloridu sodného, dextróza nebo voda. Vhodná denní dávka podaná injekcí v několika dávkách v závislosti na výše uvedených faktorech by obvykle byla od přibližně 0,01 do přibližně 10 mg/kg tělesné hmotnosti.

K podání savci potřebujícímu takovou léčbu se sloučeniny v terapeuticky účinném množství obvykle spojí s jedním nebo více adjuvancii vhodnými k použitému způsobu

·99· ·· podání. Sloučeniny. se mohou smíchat s laktózou, sacharózou, škrobovým práškem, estery alkanových kyselin s celulózou, alkylestery celulózy, talkem, kyselinou' stearovou, stearátem hořečnatým, oxidem horečnatým, sodnými a vápenatými solemi kyseliny fosforečné a sírové, želatinou, akácií, alginátem sodným, polyvinylpyrrolidonem a/nebo polyvinylalkoholem, a tabletovat nebo enkapsulovat k vhodnému podání. Alternativně se mohou sloučeniny rozpustit ve vodě, polyethylenglykolu, propylenglykolu, ethanolu, kukuřičném oleji, oleji ze semen bavlníku, podzemnicovém oleji, sezamovém oleji, benzylalkoholu, roztoku chloridu sodného a/nebo v různých pufrech. V oboru farmacie jsou dobře a široce známa jiná adjuvancia a způsoby podání.

Farmaceutické prostředky užitečné v tomto vynálezu se mohou podrobit běžným farmaceutickým způsobům, jako například sterilizaci, a/nebo mohou obsahovat běžná farmaceutická adjuvancia, jako například' konzervační látky, stabilizátory, vlhčiva, emulgátory, pufry, atd.

Ve schématech I až III jsou naznačeny obecné způsoby syntéz k přípravě sloučenin užitečných v tomto vynálezu. V různých aspektech jsou na příslušném místě popsány jak jejich vysvětlení, tak i současné způsoby. Následující schémata a příklady jsou zamýšleny být pouze ilustrací tohoto vynálezu a .nejsou vymezením jeho rozsahu ani jeho podstaty. Odborník v oboru okamžitě pochopí, že k syntéze sloučenin podle tohoto vynálezu se mohou použít známé obměny podmínek a způsobů popsaných ve schématech a příkladech.

Pokud není uvedeno jinak, byly všechny použité výchozí látky a zařízení obchodně dostupné.

Schéma I

Schéma I znázorňuje metodiku užitečnou k přípravě části kyseliny tetrahydropyrimidinbenzoové podle tohoto vynálezu, která může kondenzovat s esterem . gly-p-aminokyseliny. Krátce, ve schématu. I se kyselina 3,5-dihydroxybenzoová převede na kyselinu 3-amino-5-hydroxybenzoovou použitím způsobu popsaného v Austr. J. Chem., 34 (6),' 1319 1324 (1981) . Produkt se podrobí reakci s thiokyanatanem amonným v horké zředěné kyselině chlorovodíkové, aby se po normálním zpracování dostala kyselina 3-thiomočovina-5hydroxybenzoová. Tento meziprodukt thiomočoviny se reakcí s methyljodidem v ethanolu . pod refluxem převede na Smethylderivát. 1,3-Diamino-2-hydroxypropan se podrobí reakci s tímto výsledným meziproduktem v horkém N,Ndimethylacetamidu. Po ochlazení se vytvoří sraženina -a produkt obojetného iontu se oddělí filtrací.

získat lyofilizací Alternativně se

Sůl kyseliny ze zředěné produkt může chlorovodíkové se může kyseliny chlorovodíkové.

oddělit z původní reakční směsi odpařením rozpouštědel. Výsledný produkt se vyjme vodou a hodnota pH se upraví na přibližně 5 až 7, kdy se vysráží produkt obojetného iontu a oddělí se filtrací. Sůl s kyselinou chlorovodíkovou se může získat dříve uvedeným způsobem nebo jednoduchým rozpuštěním ve zředěné kyselině chlorovodíkové a odpařením na pevnou látku a vysušením.

•S

• · ·	9		• 9 9
* 9 · ···· 99	9 9 9 9-	• · ·	'9 9 • ·

Schéma ΙΑ

EtOH/HjO

Δ

SMe

BOCjO

CH^j. DMA, EtjN

Schéma IA znázorňuje metodiku užitečnou k přípravě části kyseliny tetrahydropyrimídinbenzoové podle tohoto vynálezu, která může kondenzovat s esterem gly-βaminokyseliny. Krátce, ve schématu IA se 1,3-diamino-2hydroxypropan podrobí reakci se sirouhlíkem v příslušném rozpouštědle, jako například směsi ethanolu a vody, refluxuje, ochladí, přidá se kyselina chlorovodíková, znovu se refluxuje, ochladí a produkt, 5-hydroxytetrahydro-2pyrímidinthion, se získá filtrací meziprodukt cyklické thiomočoviny methylderivát reakcí thionu a methyljodidu v ethanolu pod a vysuší se. Tento se převede na Sí*

refluxem. Odpařením tekavých rozpouštědel za sníženého tlaku se ihned izoluje požadovaný 2-methylthioetheř . 5hydroxypyrimidinhydrojodidu. Roztok 2-methylthioether 5hydroxypyrimidinhydrojodidu ve směsi dichlormethanu a N,Ndímethylacetamidu (přibližně 10:1) a ekvivalentní . množství triethylaminu.se ochladí přibližně na teplotu ledové lázně a přidá se ekvivalentní množství anhydridu di-terc.

butyldikarbonátu. Běžné zpracování poskytne di-terc.

butyldikarbonát-2-methylthioether-5-hydroxypyrimidin jako olej ovitou látku.

Kyselina 3, _5-dihydroxybenzoová sé převede na kyselinu 3-amino-5-hydroxybenzoovou použitím způsobu podle Aust. J. Chem., 34 (6), 1319 - 1324 (1981).

Konečný požadovaný produkt, kyselina 3-hydroxy-5-[(5-hydroxy-l,4,5,6-tetrahydro-2-pyřimidinyl)amino]benzoová, se připraví podrobením di-terc.butyldikarbonát-2-methylthioether-5-hydroxypyrimidinu reakci s kyselinou 3-amino-5-hydroxybenzoovou v horkém N,N-dimethylacetamidu. Po ochlazení,se vytvoří sraženina a produkt obojetného iontu se izoluje filtrací. Sůl kyseliny chlorovodíkové se může například získat lyofilizací ze . zředěné kyseliny chlorovodíkové.

fe·

Schéma II

O

X2 nebo N-X-sukcinímid nebo jiný zdroj X

HCI ·'· · ·. · · • · · · · ' ·' « · · · · * o · · · • ·· ·· »·

Y a X představují atom halogenu

Schéma II znázorňuje způsob užitečný k přípravě části ethyl-N-gly-amino-3-(3,5-dihalogen-2—hydroxy)fenylpropionátu podle tohoto . vynálezu, který může kondenzovat s částí kyseliny tetrahydropyrimidinbenzoové. Krátce, salicylaldehydy , substituované v polohách 3,5 atomem halogenu, se mohou připravit .přímou halogenací, jako . tomu bude například v případě, kdy se 5-bromsalicylaldehyd, suspenduje v kyselině octové a přidá se evivalentní množství . nebo víc.e chloru, aby se vytěžil. 3-chlor-5-brom-2-hydroxybenzaldéhyd. Malé množství produktu se .vysráží a . může se oddělit fitrací. Zbytek .se znovu získá zředěním filtrátu vodou a oddělením sraženiny. Spojením pevných látek a vysušením se dostane 3-chlor-5-brom-2-hydroxybenzaldehyd.. 3-Jod-5-chlorsalicylaldehyd se může připravit podrobením 5 -chlorsalicýlaldehydu reakci s N-jodsukcinimidem v dimethylformamidu a vystavením reakční směsi běžným .3-jod-5-bromsalicylaldehyd se může 5-bromsalicylaldehydu v acetonitrilu sjodidem draselným a chloraminem T. Zpracování poskytne látku, která po zpracování s hexany poskytne požadovaný 3-jod-5-chlorsalicylaldehyd.

zpracovaní. reakcí podmínkám připravit

Kumariny se snadno připraví ze salicylaldehydů použitím modifikované Perkinovy reakce /viz Vogel's Textbook of Practícal Organic Chemistry, 5.vyd., str.1040 (1989)/.

Kumariny substituované atomem halogenu se převedou na 3aminohydrokumariny /viz Rico J. G., Tett, Let., 35,. 6599 6602 (1994), které se v okyseleném alkoholu snadno otevřou, aby se dostaly estery kyseliny 3-amino-3-(3,5-halogen-2-hydroxy)fenylpropanové.

Estery kyseliny 3-amino-3-(3,5-halogen-2-hydroxy)fenylpropanové se převedou na estery kyseliny N-gly-3-amino3-(3, 5-halogeno-2-hydroxy)fenylpropanové podrobením reakci s di-terc.butyldikarbonát-N-gly-N-hydroxysukcinimidem, aby se dostaly estery kyseliny di-terc.butyldikarbonát-N-gly-3-amino-3-(3,5-halogen-2-hydroxy)fenylpropanové, které se převedou na HX soli esterů kyseliny N-gly-3-amino-3-(3,5halogeno-2-hydroxy). fenylpropanové (kde X .představuje atom halogenu) odstraněním chránící skupiny . diterc. butyldikarbonátu, například použitím kyseliny chorovodíkové v ethanolu.

Sloučeniny aminokyselin použité při přípravě sloučenin podle tohoto vynálezu se mohou připravit podle na tomto místě a níže popsaných způsobů, a podle způsobu popsaného a nárokovaného v současně podávané přihlášce USSN Attorney Docket 3076 přihlašované současně s touto přihláškou na tomto místě začleněného odkazem.

Schéma III

1. ÍBCF, NMM, C3MA.

CfcEt

>HCI

O

Schéma - III znázorňuje způsob užitečný k přípravě různých sloučenin podle tohoto vynálezu. Kyselina 3-hydroxy-5-[(1,4,5,6-tetrahydro-5-hydroxy-2-pyrimidinyl)amino]benzoová se aktivuje k vytvoření vazby použitím známých způsobů. Po rozpuštění ve vhodném rozpouštědle, jako například Ν,Ν-dimethylacetamidu, se tedy přidá ekvivalentní množství N-methylmorfolinu. Reakční směs se ochladí na teplotu ledové lázně a přidá se izobutylchloroformiát. K promísenému anhydridu meziproduktu se přidá ester gly-βaminokyseliny a N-methylmorfolin. Po ukončení reakce se produkt čistí preparativní chromatografií HPLC a ester se hydrolyzuje na kyselinu zpracováním s bází, jako například hydroxidem lithným,. ve vhodném rozpouštědle (směs dioxanu a vody nebo acetonitrilu a vody). Alternativně se může použít vhodná kyselina, jako například kyselina trifluoroctová. Produkt se oddělí preparativní chromatografií HPLC nebo oddělením obojetného iontu při hodnotě pH 5 až 7 a převedením standardními způsoby na požadovanou sůl.

9 ·· 9j · ·· ·· · · * · · * · 9 ·· 9 i · · e * »99 9 * 9 ♦ 9 I ·9 9 9 9 «

99 « 9 9 » · 9 • 99 9 9 9 ·· ··· ·· 9 9

Příklady provedení vynálezu

PŘÍKLAD J

Příprava

Krok 1 Příprava

Do baňky ó objemu 21 s kulatým dnem opatřené mechanickým míchadlem a kondenzátorem se přidalo 200 g (1,05 mol, 1 ekvivalent) 3,5-dichlorsalicylaldehydu, 356 g (3,49 mol) acetanhydridu a 95,0 g (0,94 mol, 0,90 ekvivalentu) triethylaminu. Reakční roztok se přes noc zahříval pod refluxem. Tmavě hnědá reakční-směs se ochladila na 50 °C. a za míšení se přidal 1 1 vody. Po jedné hodině se směs zfiltrovala a filtrát se smíchal -s 1 1 ethanolu. Směs se 1 hodinu zahřívala při teplotě 45 °C, ochladila se na teplotu místnosti, zfiltrovala se a pevná látka (frakce A) se promyla- 0,5 1 ethanolu. Spojené ethanolické roztoky se odpařily rotační evaporací na olejovitou látku (frakce B) . Pevná látka z frakce A se rozpustila v 1,5 1 dichlormethanu a výsledný roztok se nechal projít přepážkou ze silikagelu • · * · ··· *··· ·· ·♦ (objem 1300 ml). Výsledný tmavě hnědý roztok se odpařil na olej ovitou látku, která se triturovala 1,3 1 hexanů, aby se dostala pevná látka, která se oddělila filtrací a promyla hexany, aby se dostalo 163 g v podstatě čistého 6,8dichlorkumarinu. Dalších 31 g produktu se obdrželo zpracováním olejovité látky (frakce B) jednoduchým způsobem, olej ovitá látka se rozpustila v 0,5 1 dichlormethanu, nechala se projít přepážkou s oxidem křemičitým (objem 0,5 1) a triturovala hexany. Získalo se celkem 194 g (výtěžek 86 %) hnědé pevné látky. .

MS a NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 2

Příprava

H₂N_X/	^CO₂Et
A	/OH .	HCI

cr	ΌΙ
Do baňky o	objemu	2 1 se	třemi	hrdly opatřené
mechanickým míchadlem se	přidalo	160 g	(0,74 mol) 6,8-

dichlorkumarinu (připraveného v kroku 1) á 375 ml bezvódého tetrahydrofuranu (Aldrich Sure Seal) . Výsledná směs . se ochladila na teplotu -40 °C (lázeň suchého ledu a acetonu) a za udržování teploty nižší než -40 °C se přidalo 800 ml 1M roztoku (0,80 mol) lithiumbis (trimethylsilyl) amidu v tetrahydrofuranu., Po skončení přidávání se chladící lázeň odstranila. Po 0,5 h se směs zahřála na teplotu. -5 °C. Reakční směs se prudce ochladila přidáním roztoku kyseliny chlorovodíkové (0,5 1 4M roztoku v dioxanu) v 1,25 1 ethanolu. Teplota se přes noc udržovala nižší než 0 °C. Reakční směs se odpařila na přibližně polovinu původního objemu a rozdělila mezi 3 1 ethylacetátu a 2 1 vody. Organická vrstva se třikrát po sobě promyla 1 1 0,5M vodného ¢1 .< ♦' · · • ♦ « · * · · · «, ·' '· · * ι· » · · ·· 4 · « β β '· « · · β ·#·· · * ·'·· '· · * ·· ·'» roztoku kyseliny chlorovodíkové. ρΗ spojených vodných vrstev se upravilo na hodnotu, přibližně 7 přídavkem 10% vodného roztoku hydroxidu sodného a třikrát po sobě se extrahovala 2 1 dichlormethanu. Spojené organické vrstvy se vysušily síranem hořečnatým, zfiltrovaly a za míšení se přidalo 210 ml 4M roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Po vytvoření sraženiny se pevná látka, oddělila. filtrací.

Filtrát se odpařil na malý objem a přidal se methyl-terc.butylether. Získaná pevná látka se spojila s původně vytvořenou pevnou látkou a spojený produkt se promyl methyl-terc.butyletherem, oddělil filtrací a vysušil (vakuová sušárna přes víkend), aby se dostalo 172 g (výtěžek 74 %) požadovaného produktu.

MS a NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 3 Příprava

Do plamenem vyžíhané baňky o objemu 0,51 s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací tyčinkou se pod inertní *· argonovou atmosférou přidalo 15,0 g (0,055 mol) (N—terč.

butyldikarb’onát-gly-N-hydroxysukcinimidesteru (Sigma)., .e .

* 200 ml bezvodého dímethylformamidu (Aldrich Sure Seal) a

21,67 g (0,055 mol) produktu z kroku 2. Reakční směs se ochladila na teplotu přibližně 0 °C (lázeň ledu a soli), a přidalo se 5,58 g (0, 056 mol) N-methylmorfolinu a katalytické množství 4-(N,N-dimethylamino)pyridinu a reakce se nechala probíhat přes noc. Reakční směs se odpařila na kaši a rozdělila mezi 0,4 1 ethylacetátu a vodný roztok báze (dvakrát po sobě 0,2 1 nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného). Organická vrstva se promyla postupně dvakrát po sobě 0,2 1 vodného roztoku- kyseliny citrónové (10 % hmot./obj.), znovu dvakrát po sobě 0,2 1 nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, roztokem chloridu sodného a vysušila síranem sodným. Těkavá rozpuštědla se odpařila ve vakuu při teplotě 55 °C, aby se dostalo 22,5 g (výtěžek 92 %) olejovité látky, která stáním ztuhla.

MS a NMR byly shodné, s požadovanou strukturou.

Krok 4 Příprava

HCI

Použitím následujícího způsobu se provedla deprotekce produktu získaného v kroku 3, aby se dostala hydrochloridová sůl aminu. Do plamenem vyžíhané baňky s kulatým, dnem o objemu 0,1 1 opatřené míchadlem se 14,0g (0,032 mol) produktu z kroku 3 se přidalo 40 ml bezvodého dioxanu. K tomu se při teplotě 0 °C přidalo 6,32 ml (2 ekvivalenty) 4,ON roztoku, kyseliny chlorovodíkové v dioxanu a reakce se nechala probíhat, . dokud neustal vývoj . plynu a reakce neskončila.- Těkavá rozpouštědla - se ve vakuu odpařila a odparek se trituroval 50 ml diethyl.etheru. Pevné látky se shromáždily filtrací a promyly dieťhyletherem a vysušily, aby se dostalo 12,5 g požadovaného produktu.

MS a NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD B Příprava

Krok 1 Příprava

K suspenzi 175,0 g (743,2 mmol) 3-brom-5chlorsaličylaldehydu ve 280,5 ml (3,0 mol) acetanhydridu se přidalo 103,6 ml (743,2 mmol) triethylaminu. Reakční roztok se 4,5 h zahříval pod refluxem. Roztok se ochladil a ve vakuu odpařil. Ke hnědému odparku se přidalo 730 ml absolutního ethanolu. Směs. sel 14 h uchovávala při teplotě 0 °C. Hnědá pevná látka se shromáždila filtrací a promyla chladným ethanolem. Pevná látka se vysušila ve vakuu, aby se dostalo 123,0 g (výtěžek 64 %) požadovaného.produktu. ¹H NMR byla shodná s navrhovanou strukturou.

Krok 2 Příprava

K suspenzi tetrahydrofuranu g (154,1 mmol) kumarinu ve se za míšení po kapkách při teplotě

400. ml -76 °C ( _: 57. . · ·· -·>* «··· ϊ· · »·· *«'·» f « t « i · '· i »·« ι » .« « roztok 9,25 g tetrahydrofuranu.

přidalo 154,1 ml 1M roztoku lithiumbis(trimethylsilyl)amidu v tetrahydrofuranu. Přidávání skončilo za 10 min. Potom, se reakční směs 5 min míchala, ohřála na teplotu -20 °C a 15 min míchala. K tomuto roztoku· se během 5 min přidal (154,1 mmol) kyseliny octové ve 28 ml Směs se ohřála na teplotu místnosti a těkavá rozpouštědla se odpařila ve vakuu. Odparek se rozpustil v 850 ml diethyletheru, dvakrát po sobě promyl 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát po sobě 40 ml roztoku chloridu sodného a vysušil síranem hořečnatým. Roztok v diethyletheru se odpařil na přibližně 160 ml a ochladil na teplotu 0 °C. K této suspenzi se přidalo 56,3 ml (225 mmol) 4M roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu a směs se 30 min míchala při teplotě 0 °C. Suspenze se zfiltrovala a filtrační koláč se promyl diethyletherem. Pevná látka se vysušila ve vakuu, aby se dostalo 45,0 g požadovaného produktu jako soli kyseliny chlorovodíkové, solvátu dioxanu.

¹H NMR byla shodná s navrhovanou strukturou.

Krok 3 Příprava

H,N

CO₂Et

OH . _HC1

K suspenzi 142,2 g (354,5 mmol) laktonu. v 533 ml absolutního ethanolu se během 10 min přidalo 157,8 ml (631,1 mmol) 4M roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Reakční směs se míchala 2,5 h pří teplotě místnosti. Těkavá rozpouštědla se ve vakuu odpařila. Odparek se rozpustil ve 450 ml ethylacetátu a roztok se udržoval 15 h při teplotě 0 °C. Žlutohnědá sraženina se shromáždila filtrací a promyla «- ·φ «φ '· ··. φ ·>

'<!)<'.· φ '· .<·'·♦ <· /# ’* *' « .· · · 9 '· Φ ·[<* ·9 β '9 9 ·'· 9 ''·· ··> ^L«.·» ''»* <· · chladným ethylacetátem.. Pevná látka ' se vysušila ve ·vakuu, aby se dostalo 100,4 g (výtěžek 79 %) požadovaného produktu jako hydrochoridové soli.

¹H NMR byla shodná s navrhovanou strukturou.

Krok 4 . Příprava

Do plamenem vyžíhané baňky, o objemu 0,1 1 s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací tyčinkou se pod inertní· argonovou atmosférou přidalo 2,72 g (0,010 mol) Nterč.butyldikarbonát-gly-N-hydroxysukcinimidesteru (Sigma) , 50 ml bezvodého tetrahydrofuranu (Aldrich Sure Seal) a 3,10 g. (0,01 mol) produktu z kroku 3 vysušeného přes noc ve vakuu, oxidem fosforečným. Reakční směs se ochladila na teplotu přibližně 0 °C (lázeň ledu a soli) a přidalo se 1,01 g (0,010 mol) tr.iethylaminu. Reakce se nechala probíhat přes noc. Reakční směs se odpařila na polotuhou látku a zpracovala způsobem podobným příkladu A, krok 3. Těkavá rozpuštědla se z organické vrstvy odpařila ve vakuu při teplotě 55 °C, aby se dostaly 4 g (výtěžek 83 %) olejovité

látky, která stáním ztuhla. MS a NMR byly shodné s	požadovanou strukturou
Krok 5
Příprava
H
Η₂Ν^γ^Νγ^	'co^t
⁰	.OK
	HC1
	‘Br

• ·,» ·

Použitím následujícího způsobu se provedla deprotekce produktu získaného v kroku 4, aby se dostala hydrochloridová sůl aminu. Do plamenem vyžíhané baňky s kulatým dnem o objemu 0,1 1 opatřené míchadlem se ke 4,0 g .(0,0084 mol) produktu z kroku 4 se přidalo 20 ml bezvodého dioxanu. K tomu se přidalo 20 ml 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu a reakce se nechala probíhat, dokud neustal vývoj plynu a reakce neskončila (přibližně 1 h). Těkavá rozpouštědla se ve vakuu odpařila a odparek se trituroval 50 ml diethyletheru. Pevné látky se shromáždily filtrací a promyly etherem a vysušily, aby se dostalo 2,7 g (výtěžek 78 %) světle hnědé pevné látky.

MS a NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD C Příprava

Krok 1

HC1

K suspenzi 100 g ve 16'4,8 ml (1,8 mol) (357 mmol) 3,5-dibromsalicylaldehydu acetanhydridu se přidalo 45 ml ’»/· · ♦· ·· >♦ , > > · i* .

• ,. · , '·· '··· • · -9 '<& · ♦ • · í·'· .'· '-· · * · (·'>'» · · ' · e *♦ <· -« ’« .· • ·» '(··· ' í··· '·* >· (375 mmol.) triethylaminu. Reakční . roztok, se přes noc zahříval pod refluxem pod argonovou atmosférou. Roztok se ochladil na teplotu místnosti a vytvořila . sě pevná látka. Tmavě hnědá reakční směs se třikrát po sobě promyla 300 ml horkých hexanů a nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Výsledná . pevná látka se rozpustila ve 2 1 ethylacetátu a promyla vodou. Organická vrstva se vysušila síranem sodným a odpařila, aby se dostala hnědá pevná látka, . která se shromáždila filtrací. Pevná .látka se vysušila ve vakuu, aby se dostalo 94,2 g (výtěžek 87 %) v podstatě čistého 6,8-dibromkumarinu.

MS a ^XH NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 2

K roztoku 20,0 g (0,066 mol) 6,8-dibromkumarinu připraveného v kroku 1 ve . 100 ml tetrahydrofuranu se 'při teplotě -78, °C po kapkách za míšení přidalo '66 ml 1M roztoku lithiumbis(trimethylsilyl)amidu . .v tetrahydrofuranu. Přidávání skončilo za 10 min. Potom se reakční směs 5 min míchala, ohřála na teplotu.0 °C a 15 min míchala. K tomuto roztoku se během 1 min přidalo 3,95 g kyseliny octové. Směs se ohřála na teplotu místnosti a těkavá rozpouštědla se odpařila ve vakuu. Odparek se rozpustil, v 500 ml hexanů, dvakrát po sobě se · promyl 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vysušil síranem. sodným. Organický roztok se odpařil za poskytnutí olejovité látky, která se ihned vyjmula 400 ml diethyletheru a za míšení se přidalo 30 ml 4M roztoku kyseliny chlorovodíkově v dioxanu a směs se 30 min míchala při teplotě 0 °C. Nadbytek kyseliny .«£· '4’Χ· (♦»··· <·» <· · · » ί ·**> I » ·> <· ·1 » ‘· · « k ·'« -4 '9 · ί» · chlorovodíkové se odpařil ve vakuu,.suspenze se zfiltrovala a filtrační koláč se promyi diethyletherem. .Pevná látka se vysušila ve vakuu, aby ^: se dostalo 19,9 g požadovaného produktu jako hydrochloridové soli, solvátu dioxanu.

MS a ^XH NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 3

• HCi g laktonu připraveného v kroku 2 se rozpustilo ve 400 ml absolutního ethanolu a 1 min se nechal procházet, plynný bezvodý chlorovodík. Reakční směs se 2,5 h míchala při teplotě místnosti. Chromatografie HPLC s reverzní fází ukázala ukončení reakce. Těkavá rozpouštědla se ve vakuu odpařila, aby se dostal tmavý odparek. Odparek se trituroval 500 ml diethyletheru a směs se míchala přes noc. Žlutohnědá sraženina se shromáždila filtrací a promyla diethyletherem. Pevná látka se vysušila ve vakuu, aby se dostalo 15,2 g požadovaného produktu jako hydrochloridové soli.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 4

Do plamenem vyžíhané baňky o objemu 0,2 1 s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací tyčinkou se pod inertní

Jo ·· <··

Ιι ««►<· ^Ζ· .♦ '» ·'♦ ♦ > <

»···“ Λ 9 !» ♦.»'» -'« '· '♦ (♦ i'«.

99 · .·· (·· argonovou atmosférou přidalo 8,1 g (0,030 mol) N-terc. butyldikarbonát-gly-N-hydroxysukcinimidesteru (Sigma), 50 ml bezvodého dimethylformamidu (Aldrich Sure Seal) a 12 g (0,03 mol) produktu z kroku 3 vysušeného přes noc ve vakuu nad oxidem fosforečným. Reakční směs se ochladila na teplotu přibližně 0 °C (lázeň ledu a soli) a přidaly se 3,03 g (0,030 mol) N-methylmorfolinu a katalytické množství 4-(N,Ndímethylamino)pyridinu. Po ohřátí na teplotu místnosti se reakce nechala probíhat přes noc. Reakční směs se odpařila na polotuhou látku a zpracovala způsobem podobným způsobu v příkladu A, krok 3. Těkavá rozpuštědla se z organické vrstvy odpařila ve vakuu při teplotě 55 °C, aby se dostalo 15,7 g (výtěžek 93 %) olejovité látky, která stáním ztuhla.

MS a NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 5

Použitím následujícího způsobu se provedla deprotekce produktu získaného v kroku 4, aby se' dostala hydrochloridová sůl aminu. Do plamenem vyžíharié baňky s kulatým dnem . o objemu 0,1 1 opatřené míchadlem se ke 13,0 g (0, 0084 mol) produktu z kroku 4 přidalo 40 ml bezvodého, dioxanu. K tomu se přidalo 30 ml 4, ON roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu a reakce se nechala probíhat, dokud neustal vývoj plynu a reakce neskončila (přibližně ' 1 h). Těkavá rozpouštědla se ve vakuu odpařila a . odparek se trituroval 50 ml diethyletheru. Pevné látky se shromáždily filtrací a promyly diethyletherem a vysušily, aby se dostalo 10,6 g (výtěžek 93 %) požadovaného produktu.

MS a NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

HCI

Krok 1

Příprava 3-chlor-5-bromsalicylaldehydu

Do baňky o objemu 5 1 s kulatým dnem ’ opatřené mechanickou míchací tyčinkou a hadičkou k přívodu plynu se při teplotě místnosti přidalo 495.g (2,46 mol) 3,5-dibromsalicylaldehydu a kyselina octová, aby se vytvořila suspenze.. K této směsi se pomalu přidávalo 183 g (1,05.mol) plynného chloru., dokud se lehký nadbytek chloru nerozpustil.

Po skončení přidávání se nechala reakce probíhat přes noc.

Vytvořená pevná látka, se znovu obdržela filtrací a filtrát se zředil 2,5 1 vody. Směs se opatrně 20 min míchala, produkt se shromáždil filtrací a promyl vodou. Shromážděné pevné látky se vysušily ve. vakuu, . aby se. dostalo 475 g (výtěžek 82 %) požadovaného 3-chlor-5-bromsalicylaldehydu.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 2

Příprava 6-brom-8-chlorkumarinu ft, '*· ίΓ· (* • * <·· ·* ·· ^r·· '· V’· ’* • .· * .♦ V · · • í« · ·’· '« · e • · - ;· λ· · . λ ;·,·· «·· '·· ·* '

Do baňky o objemu 51 s kulatým dnem opatřené mechanickým míchadlem a kondenzátorem se přidalo 554,1 g (2,35 mol, 1 ekvivalent) 3-chlor-5-bromsalicylaldehydu, 1203 g (11,8 mol, 5 ekvivalentů) acetanhydr.idu a 237,4 g (2,35 .mol, 1 ekvivalent) triethylaminu. Reakční roztok se přes noc zahříval pod refluxem při teplotě 131 až 141 °C. Tmavě, hnědá reakční směs se ochladila na 50 °C a za míšení se· přidaly 2 1 ledu (chlazení v ledové lázni). Po jedné hodině se směs zfíltrovala a filtrát se smíchal sil ethanolu. K této směsi se přidalo 300 ml ethanolu a reakční směs se I h míchala. Vytvořená sraženina se shromáždila filtrací a třikrát po sobě promyla 1,3 1 směsi vody a ethanolu, odpařila ve vakuu a vysušila sušárnou 's fluidním ložem. Celkem se izoloval výtěžek 563 g. (92 %) .

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

i

Krok 3

Přípravaethylesteru kyseliny 3-amino-3-(2-hydroxy-3-chlor-5-brom)fenylpropanové

HCI

Do baňky o objemu 5 1 se třemi hrdly opatřené mechanickým míchadlem se přidalo 300 g (1,16 mol) 6-brom-8-chlorkumarinu (připraveného v kroku 2) a 900 ml bezvodého tetrahydrofuranu (Aldrich Sure. Seal). Výsledná směs se ochladila na teplotu nižší než -45 °C (lázeň suchého ledu a

acetonu) a zatímco se teplota 0,5 h udržovala nižší než -45 °C, přidalo , se 800 ml 1M roztoku (0,80 mol, 1,2 ekvivalentu) lithiumbis(trimethylsilyl)amidu v tetrahydrofuranu v 0,6 1 hexanu. V jiné baňce o objemu 5 1 se při teplotě -15 °C smíchalo 2,5 1 ethanolu a 1 1 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Kumarinová reakce se prudce přerušila přidáním ochlazeného roztoku ethanolu a kyseliny chlorovodíkové. Po 0,5 h byla teplota výslednéreakční směsi -8,3 °C. Reakční směs se přes noc udržovala při teplotě 0 °C, odpařila na přibližně 2,5 1 a rozdělila mezi .3 1 ethylacetátu a 41 vody. Organická vrstva se čtyřikrát po sobě promyla 1,2 1 0,5N. vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové.. pH shromážděných vodných vrstev se upravilo na hodnotu přibližně 7 přídavkem 10% vodného roztoku hydroxidu sodného a vrsvy se extrahovaly jedenkrát 7 1 a třikrát po sobě 2 1 d.ichlormethanu. Shromážděné organické vrstvy se vysušily 900 g síranu hořečnatého, zfiltrovaly a za míšení -se přidalo i 400 ml 4M roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Po vytvoření sraženiny se pevná, látka oddělila filtrací. Směs se odpařila na objem '2,5 1, přidalo se 2,5 1 hexanů a sraženina se oddělila filtrací. Filtrační koláč se promyl směsí.dichlormethanu a hexanů v poměru 1:2/ vysušil se ; za podtlaku a ve vakuové sušárně při teplotě 4-0 °C, aby se dostalo 251 g (výtěžek 60·. %) požadovaného produktu. . .

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 5

Příprava

CO₂Et .OH

Cl

• 4*4 • 4 '· • <· ·	4 4 » 4	4 • 4 4	4 4 • · 4 • 4 4
4 4 • r* ··	• • 4-4,	4 • i« 4	• 4 4 4 4

Výše uvedená sloučenina se připravila použitím v podstatě stejného způsobu a relativních množství, jako je uvedeno pro její izomer v příkladu B, krok 4.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 6

Příprava <· '*·

Tato sloučenina se připravila použitím v podstatě stejného způsobu a relativních množství, jako je uvedeno pro její izomer v příkladu B,. krok 5.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD E Příprava

• HC1

Krok 1

Příprava 3-jod-5-chlorsalicylaldehydu

OH

444 444 ·· 44 • 4 4 * • 4 4 4 • 4 4 · • 4 4 ·

44'

K roztoku 100 g (0,638 mol) .5-chlorsalicy.laldehydu ve 400 ml dimethylformamidu se přidalo 144,0 g (0,641 mol) . Njodsukcinimidu, Reakční smšs se míchala 2 dny při teplotě místnosti. Přidalo se dalších 20,0 g N-jodsukcinimidu a míšení pokračovalo další 2 dny. Reakční směs se zředila 1 1 ethylacetatu, promyla 300 ml 0,lN kyseliny chorovodíkové, 300 ml vody, 300 ml 5% roztoku thiosíranu sodného, 300 ml roztoku chloridu sodného,, vysušila síranem hořečnatým a odpařila do sucha, aby se obdrželo 162 g (výtěžek 90 %) požadovaného aldehydu jako světle, žluté pevné látky.

MS a NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 2

Příprava 6-chlor-8-jodkumarinu

Směs 100 g (0,354 mol) 3-jod-5-chlorsalicylaldehydu, 300 ml acetanhydridu a 54 ml triethylaminu se 18 h zahřívala pod refluxem. Po ochlazení se požadovaný kumarin vysrážel jako tmavě hnědá krystalická látka. Ta se zfiltrovala, promyla 200 ml směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 4:1 a na vzduchu se vysušila. Výtěžek: 60 g (55 %) .

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 3

Příprava (2?,S) -4-amino-3,4-dihydro-6-chlor-8-jodkumarinhydrochloridu *· • · ·

Φ·

-« • · · • φ <

φφφ ···· φφ φφ »· • · • ' · φ' φ ·«· Φβ« •Φ ·· φ φ » φ · φ ♦ · · · .9 Φ Φ «Φ €·

Κ roztoku 6,63 g (21,62 mmol) 6-chlor-8-jodkumarinu ve 100 ml tetrahydrofuranu se při teplotě -78 °C přidalo 21,62 ml (21,62 mmol, 1 M) lithiumhexamethyldisilazanu. Reakční směs se při této teplotě míchala 30 min, a potom 1 h při teplotě 0 °C. K reakční směsi se přidalo 1,3 g (21,62 mmol) kyseliny octové. Reakční směs se přidala ke 300 ml ethylacetátu. a 200 ml nasyceného roztoku uhličitanu sodného. Organická vrstva se oddělila, promyla 200 ml. roztoku chloridu sodného, vysušila síranem hořečnatým a odpařila, aby se obdržel odparek. Odparek se přidal k 200 ml bezvodého diethyletheru, a následně se přidalo 30 ml 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Reakční směs se 1 h míchala při teplotě místnosti, zfiltrovala se a vysušila' ve vakuu, aby se obdrželo 4,6 g (výtěžek 59 %) .požadovaného produktu jako práškovité látky (chromatografie HPLC s reverzní fází: R_f: 6,8 min, gradient rozpouštědel .10% acetonitril až 90% acetonitril během 15 min, potom až 100% acetonitril během dalších 6 min, voda i acetonitril obsahovaly 0,1 % kyseliny trifluoroctové,. protein-peptidová kolona· Vydac Cis, rychlost proudění 2 ml/min, měřeno při 254 nm).

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 4

Příprava (R,S) -ethyl-3-amino-3- (5-chlor-2-hydroxy-3-jod) fenylpropionáthydrochlorid

• HCI

Do.roztoku 22,0 g (61,09 mmol) 4-amino-3,4-dihydro-6-chlor-8-jodkumarinhydrochloridu ve 250 ml ethanolu se za udržování teploty reakční směsi v rozmezí 0 až 10 °C nechal probublávat plynný chlorovodík až do nasycení. Po 6 h pod refluxem se většina rozpouštědla oddestilovala. Ochlazený odparek se přidal k bezvodému, diethyletheru a míchalo se 2 h. Zpočátku vzniklá látka charakteru gumy se přeměnila.'na krystalickou látku.· Krystalický produkt se zfiltroval a vysušil, aby se obdrželo.. 20 g (výtěžek 81 %) požadovaného produktu jako bělavé .krystalické práškovité látky (R_f: 52 min, podmínky stejné jako v kroku 3). ·

MS a ¹H’ NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 5

Příprava (R,S)-ethyl 3-(N-di-terc.butyldikarbonát-gly) -amino-3-(5-chlor-2-hydroxy-3-jod)fenylpropionátu

Směs 2,16 g (12,31 mmol) N-di-terc.butyldikarbonát-gly, 1,67 g (12,31 mmol) 1-hydroxybezotriazolhydrátu, 2,36 g (12,31 mmol) 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridu a 50 ml dimethylformamidu se míchala 1 h při teplotě 0 °C. K reakční směsi se přidalo 5,0 g (12,31 mmol) ethy1-3-amino-3- (5-chlor-2-hydroxy-3-jod) propionáthydrochloridu- a následně 3,5 ml triethylaminu. Reakční směs se 18 h míchala při teplotě místnosti. Dimethylformamid se

Odpařil ve vakuu a odparek se rozdělil mezi 300 ml ethylacetátu. a 200 ml roztoku hydrogenuhličitanu· sodného. Organická vrstva se . promyla 100 ml 1N kyseliny chlorovodíkové, 200 ml roztoku chloridu sodného, vysušila síranem hořečnatým a odpařila, aby se obdrželo 6 g (výtěžek 93 %) požadovaného produktu jako pevné látky.

MS a ^XH NMR byly shodné s požadovanou^ stukturou.

Krok 6

Příprava (R,S)-ethyl-3-(N-gly)amino-3-(5-chlor-2-hydroxy-3— jod)fenylpropionáthydrochoridu

ml 4N Roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu se při teplotě 0 °C přidalo k 6,0 g (11,39 mmol) ethyl-3-(N-diterc.butyldikarbonátgly)amino-3-(5-chlor-2-hydroxy-3-jodjpropionátu a míchalo se 3 h při teplotě místnosti. Reakční směs se odpařila,, a po přidání 100 ml toluenu ještě jednou odpařila. . Získaný odparek se suspendoval v diethyletherú, zfiltroval se a vysušil, aby se obdrželo 5,0 g (výtěžek 95 %) požadovaného produktu jako krystalické práškovité látky (chromatografie HPLC s reverzní fází: R_f: 8,3 min, podmínky stejné jako v kroku 3)

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou stukturou.

PŘÍKLAD F Příprava

* • HCI

4 4	• ·	•		4 4		4 4
							•
•	• 4	•	4	4	4	4	4
•	4 ' · · '		•	• ·	4	4	•
4 4 4 4 4	β 4 4 O	• · 4	• • 4 ·	4 4 ·	e	« 4 4	4

Krok 1

Příprava 3-jod-5-bromsalicylaldehydu í·

Do baňky o objemu 5.00 ml s kulatým dnem. opatřené magnetickou míchací tyčinkou se k roztoku 20,0 g (0,1 mol) 5-bromsalicylaldehydu a 17 g (0,1 mol) jodidu draselného .ve 150 ml acetonitrilu a 50 ml vody přidalo 23 g (0,1 mol)' chloraminu T. Směs se nechala 1 h reagovat. Reakční směs se rozdělila mezi 200 ml 10% kyseliny chlorovodíkové a ethylacetát. Organická vrstva se vysušila síranem sodným, zfiltrovala a odpařila ve vakuu. K odparku se přidaly hexany a reakční směs se 15 min zahřívala při teplotě 50 °C. Nerozpustná látka se oddělila filtrací. Filtrát se odpařil ve vakuu, aby se dostalo 26 g kanárkově žlutého 3-jod-5-bromsalicylaldehydu.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Výše uvedená sloučenina se připravila použitím v podstatě stejného způsobu jako v příkladu E; kroky 2 až'6, přičemž v kroku 2 se ekvivalentní množství produktu z kroku 1, 3-jod-5-chlorsalicylaldehydu nahradilo 1,3-jod-5-brom-

99 9 99 • · · · 1 ^{9 9} β « .<· ·· salicylaldehydem.

MS a ^ΧΗ NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD H Příprava

Do baňky o objemu 2 1 . s kulatým dnem a třemi hrdly opatřené mechanickým míchadlem, Claisenovým nástavcem, přídatnou nálevkou, refluxním kondenzátorem a termočlánkem se vneslo 375 ml ethanolu a 375 ml deionizované vody. Do reakční baňky se přidalo 125,04 g (1,39 mol) 1,3-diamino-2hydroxypropanu (Aldrich) a vše se míchalo do rozpuštění. Přídatnou nálevkou se při teplotě v rozmezí 25 až 33 °C během 35 min po kapkách přidávalo 84 ml . (1,39 mol) sirouhlíku, aby se obdržela mléčně bílá směs. Teplota se udržovala pomocí ledové lázně. Reakční směs se při teplotě 73,4 °C 2 h refluxovala, aby se obdržel žlutý, roztok. Reakční směs se ochladila pomocí ledové lázně na teplotu °C a po kapkách se přidávalo 84 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové, zatímco se teplota udržovala v rozmezí 25 až °C. Reakční směs se 21 h refluxovala při teplotě 78,4 °C. Reakční roztok se ochladil na teplotu 2 °C a produkt se shromáždil vakuovou filtrací. Bílá pevná látka se třikrát po sobě promyla 50 ml směsi ' ethanolu a vody v poměru 1:1 ochlazené ledovou lázní a vysušila vé vakuu při teplotě 40 °C, aby se obdrželo 63,75 g (výtěžek 34,7%) 5-hydroxytetrahydropyrimidin-2-thionu jako bílé pevné látky.

·· ·'· * · ·· • · · · . · · · · ·

MS a NMR byly shodné š požadovanou strukturou..

Krok 2

Do baňky' o objemu 21 s kulatým dnem opatřené mechanickým míchadlem a termočlánkem , se přidalo 95 g (0,72 mol) 5-hydroxytetrahydropyrimidin-2-thionu připraveného v kroku 1, 570 ml absolutního ethanolu a 45 ml (0,72 mol) methyljodidu. Reakční směs se refluxovala 5 h při teplotě 78/.0, a potom se ochladila na teplotu místnosti. Reakční směs se odpařila ve vakuu, aby se obdrželo 194,92 g bílé pevné látky. Bílá pevná látka se triturovala třikrát po sobě 500 ml diethyletheru a ve vakuu vysušila, aby se obrželo 188,22 g (výtěžek 95,4 %) 2-methylthioether-5hydroxytetra- · * . .

hydropyrimidinhydrojodidu jako bílé pevné látky..

MS a ‘‘.H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 3

Do . baňky o objemu 2 .1 se třemi hrdly a s. kulatým dnem opatřené ' refluxním kondenzátořem, mechanickým míchadlem a statickou dusíkovou atmosférou se přidalo 150,81 g (0,55 mol) 2-methylthioetheru 5-hydroxypyrimidínhydroj odidu, 530 ml dichlormethanu, 53. ml, dímethylacetamidu a 7 6,7 ml (0,55 mol) triethylaminu. Směs se ochladila ledovou lázní a při teplotě 4 °C se. přidalo 120,12 g (0,55 mol) di-terc.butyldikarbonátu. Reakční směs se zahřívala 18 h pří teplotě 42,5 °C, aby se dostal světle žlutý roztok. Reakční roztok se přemístil do separační nálevky o objemu 2 1a třikrát po sobě se promyl 200 ml deionizované vody, vysušil síranem hořečnatým,· zfiltroval a odpařil ve vakuu, aby se obdrželo 134,6 g (99,35 %) di-terc.butyldikarbonát-2-methylthioetheru 5-hydroxypyrimidinu jako světle žluté viskózní olejovité látky.

MS a ^XH NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 4 · .

50,3 g (0,204 mol) di-terc.butyldikarbonát-2-methylthioetheru 5-hydroxypyrimidinu, 25,0 g (0,1625 mol) kyseliny 3-amino-5-hydroxybenzoové /Aust. J. Chem., 34 (6),. 1319 -

- 1324 (1981)/	a 50 ml bezvodého	N,N-dimethylacetamidu se
zahřívalo	za	míšení 2 dny	při	teplotě 100 °C.	Vznikla
suspenze	sraženiny. Reakční	směs	se ochladila na	teplotu
místnosti	a	sraženina	se	odfiltrovala,	promyla

acetonitrilem, potom diethyletherem a vysušila. Tato pevná látka se suspendovala ve vodě a okyselila koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou za vzniku roztoku. Ten se zmrazil a lyofilizoval, aby se vytěžilo 14,4 g požadovaného produktu jako bílé pevné látky.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

<ř

PŘÍKLAD I Příprava

Krok 1

Příprava Reformantského reakčního činidla

Br-Zn

CO2-t-Bu

Baňka o objemu 4 1 opatřená kondenzátorem, teploměrem a mechanickým míchadlem se naplnila 180,0 g (2,76 mol, vel.

8 částic 0,147 až 0,542 mm) kovového zinku . a 1,25 1 tetrahydrofuranu. Za míšení se injekční stříkačkou přidalo. 4,74 ml (0,05 mol) 1,2-díbromethanu (alternativně se může. nahradit 0,1 ekvivalentem trimethylsilylchloridu při teplotě místnosti na 1 hj . Po promytí inertním, plynem (tři cykly směsi dusíku a vakua) se suspenze zinku v tetrahydrofuranu zahřívala pod refluxem při teplotě 65 °C a při této teplotě se udržovala 1 h. Před přidáním 488 g (369 ml, 2,5 mol) během 1,5 h terč.butylbromacetátu injekční stříkačkou o objemu 50 ml a injekční pumpou (kapačka o rychlosti

4,1 ml/min). se směs ochladila na teplotu 50 °C. Po dobu přidávání, se reakční směs udržovala při teplotě 50 °C ±5 °C. Po ukončení přidávání se reakční směs nechala 1 h míchat při teplotě 50 °C.· Následně se směs nechala ochladit na teplotu 25 °C a vzniklá sraženina se nechala usadit. Matečný roztok tetrahydrofuranu se dekantoval do baňky použitím- hrubého filtru (20 mm Hg, tj. 2,6664 kPa) směsi·přibližně 65 % tetrahydrofuranu. Přidalo se 800 ml 1methyl-2-pyrrolidinonu a míšení pokračovalo 5 min.. Reakční směs se může zfiltrovat k odstranění zbývajícího zinku. Analýza ukázala .titr požadovaného Reformantského reakčního činidla 1,57 M s molárním- výtěžkem 94 %. Alternativně se může' pevné reakční činidlo oddělit filtrací z původní reakční směsi. Koláč se může promývat tetrahydrofuranem, dokud se. získává bílá pevná látka, a vysuší se pod dusíkovou atmosférou, aby se obdržel požadovaný produkt jako monosolvát tetrahydrofuranu, který se může po delší dobu o objemu 2 1 a částečného To oddělilo ze s kulatým. dnem transferu vakuem uchovávat při teplotě jsou v rozmezí 85 až 90

-20 °C (vysušený) . Obvyklé výtěžky

Krok 2 2A Příprava

K roztoku 11,46 g (60 mmol) 3,5-dichlorsalicyladehydu ve 40 ml dimethylformamidu se při. teplotě místnosti přidalo 8,82 g (60 mmol) uhličitanu draselného (prášek,, vysušený v sušárně ve vakuu při teplotě 100 °C), aby se vytvořila světle žlutá suspenze. Za udržování teploty lázně na 20 °C. se potom přidalo 7,64 g (61 mmol) čistého methoxyethoxymethylchloridu. Potom se směs míchala 6 h při teplotě 22 °C a přidalo se 0,3 g (2,4 mmol) méthoxýethoxymethylchloridu. Směs se míchala další 0,5 h a reakční směs se vlila do 200 ml studené vody, aby se vysrážel produkt. Suspenze se zfiltrovala tlakovým filtrem a koláč se dvakrát po sobě promyl 50 ml vody a vysušil se pod atmosférou směsi dusíku a vakua, aby se obrželo 14,94 g (výtěžek 89 %) produktu jako bělavé pevné látky.

NMR (CDC1₃, TMS) : 3,37 (s, 3H); 3,54 až 3,56 (m, 2H) ; 3,91 až 3,93 (m,,2H); 5,30 (s, 2H) ; 7,63 (d, . 1H) ; 7,73 (d, 1H) ;

10,30 (s, 1H);

¹³C NMR (CDCI3, TMS) d (ppm) : 59,03; 70,11; 99,57; 126,60;

129,57; 130,81; 132,07; 135,3.6; 154,66; 188,30.

DSC: 48,24 °C (endo 90,51 J/g).

Mikroanalýza:

Vypočteno pro C11H12CI2O4: C: 47,3 %; H: 4,33 %; Cl: 25,40 %;. Nalezeno: C: 47,15 %; H: 4,26 %; Cl: 25,16 %.

2B Příprava

• · · ···· ··

Baňka o objemu 1 1 se třemi, hrdly a s kulatým dnem opatřená mechanickým míchadlem a přídatnou nálevkou se naplnila 35,0 g (0,125 mol) produktu z kroku 2A, a' následně se přidalo 200 ml tetrahydrofuranu. Roztok se míchal při teplotě 22 °C a najednou se přidalo 17,20 g (0,125 mol) (Sj-fenylglycinolu. Po 30 min při teplotě 22 °C se přidalo 20 g síranu hořečnatého. Směs se 1 h míchala při teplotě·22 °C a zfiltrovala se na hrubozrnném filtru.. Filtrát se odpařil za sníženého tlaku. Žádné další čištění se neprovádělo a· sur.ový imin se přímo použil v kondenzační reakci, krok 2C.

2C Příprava

Baňka o objemu 1 1 se třemi hrdly a s kulatým dnem opatřená mechanickým míchadlem a přídatnou nálevkou se pod dusíkovou atmosférou naplnila 91,3 g (0,275 mol) . pevného reakčního činidla vyrobeného v kroku 1 a 200 ml Nmethylpyrrolidinonu. Potom se roztok ochladil na teplotu -10 °C a míchal se při frekvenci otáček 350 za min. Pod .dusíkovou atmosférou se připravil roztok iminu (připravený v kroku 2B) v N-methylpyrrolidinonu, a potom, zatímco se teplota udržovala při -5 °C (teplota pláště -10 °C), se během 20 min přidal k výše uvedené reakční směsi. Po ukončení přidávání se směs míchala dalších 1,5 h při teplotě -8 °C a 1 h při teplotě -5 °C. Po ochlazení na teplotu -10 °C se během 10 min přidal roztok 8,1 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové ve 200 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Přidalo se 200 ml methyl-terc. butyl etheru a směs se 15 min míchala frekvencí otáček 200 za - min při tepj

OD o

Míšení se ukončilo *♦ v· 4- t»» » <4 /“4 Ί -i *1 t r

Vlbcvy OC AJk-l\U^_L_LXy

Vodná vrstva se extrahovala 100 ml methyl-terc.butyletheru. Dvě organické vrstvy se spojily, postupně promyly 100 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, 100 ml vody a 100 ml roztoku chloridu sodného. Roztok se vysušil 30 g síranu horečnatého, zfiltroval a odpařil, aby se obdrželo 66,3 g oranžové olejovité látky . (stáním ztuhne) obsahující požadovaný produkt jako jeden diastereoizomer (ověřený protonovou a uhlíkovou NMR). Vzorek k analýze se očistil rekrystalizací z heptanu, aby se obdržel produkt jako bělavá pevná látka.

Protonová a uhlíková spektra NMR a IČE spektra byla shodná s požadovanou strukturou, [o] 25 ⁼ +8,7 ⁰ (c = 1,057, methanol).

Mikroanalýza:

Vypočteno pro C25H33CI2NO6:

C: 58,77 %; H: 6,47 %; N: 2,72 %; Cl: 13,78 %.

Nalezeno:

C:58.,22

H: 6,54

N: 2,70

Cl: 13,66

Krok 3 Příprava l·

3A

Opláštěný reaktor o objemu 1 .1 se třemi hrdly opatřený mechanickým míchadlem se naplnil roztokem 17,40 g /0,03.3 mol (teoreticky)/ surového esteru připraveného v kroku 2 a 250 ml ethanolu. Roztok se ochladil na teplotu 0 °C a najednou se přidalo 14,63 g (0,033 mol) octanu olovničitého.

i .52 • 9

9 9 9' · ·«·· ·· ₉·· 9·»

Po 2 h se přidalo 30 ml 15% roztoku hydroxidu sodného a ethanol se oddělil za sníženého tlaku.· Přidalo se dalších 100 ml 15% roztoku hydroxidu sodného a směs se extrahovala dvakrát po sobě 100 ml methyl-terc.butyletheru, dvakrát po sobe promyla 100 ml vody a 50 ml roztoku chloridu sodného, vysušila síranem sodným, zfiltrovala přes celit a odpařila za sníženého tlaku, aby se obdrželo 12,46.g oranžové olejovité látky. Olejovitá látka při chromatografii na tenké vrstvě homogenní a použila se bez dalšího čištění.

3B

Olejovitá látka připravená způsobem 3A se zředila 30 ml ethanolu a přidalo se 8,18 g (0,043 mol, 1,3 ekvivalentu) kyseliny p-toluensulfonové. Roztok se zahříval 8 h pod refluxem, ochladil na teplotu místnosti a za sníženého tlaku se odpařil. Odparek se zpracoval s 20 ml tetrahydrofuranu a zahříval pod reluxem, aby se vytvořil roztok. Roztok se ochladil na teplotu místnosti·a sloučenina vykrystalizovala. Přidalo se 30 ml heptanu a ’ 10 ml tetrahydrofuranu, aby se vytvořila tekutá suspenze, která se zfiltrovala. Koláč se promyl 40 ml směsi tetrahydrofuranu a heptanu v poměru 1:1 a 2 h se vakuově sušil na tlakovém filtru pod dusíkovou atmosférou, aby se obdrželo 7,40 g bílé pevné látky.

Protonová a uhlíková NMR a IČ spektra byla shodná s požadovaným produktem jako v podstatě jedním enantiomerem. Mikroanalýza:

Vypočteno pro C18H21CI2NO6S. 0,25 C4H8O:

C: 48,73 %; Η:·4,95 %; N: 2,99 %; Cl: 15,14 %.

Nalezeno:

C:48,91 %; H: 4,95 %; N: 2,90 %; Cl: 14,95 %.

Krok 4 Příprava

Ιέ»

• ·	·*		•	··
9 '<* *	•	'9 ·	♦ ·	β φ	• ·
<· >’·	•	9	•	• ·	• *

• 9	•			• ·	• ·
···«	♦ ·	• ··	·· ·	·· ·	··

Baňka o objemu 500 ml s kulatým dnem opatřená magnetickou míchací tyčinkou a přívodem plynného dusíku se naplnila 21,7 g (0,065 mol) volnou bází produktu vyrobeného v kroku 3, 17,7 g (0,065 mol) N-terc.butyldikarbonát-gly-Nhydroxysukcinimidesteru a 200 ml dimethylformamidu. Reakční směs se· 3,25 h míchala pod dusíkovou atmosférou, při teplotě místnosti a vytvořil se světle oranžový roztok. Reakční.směs se vlila do 1,2 1 ledově chladného ethylacetátu. Organický roztok se promyl 250 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkové, a potom 500 ml roztoku chloridu sodného, vysušil síranem, hořečnatým. a odpařil za sníženého tlaku téměř dosucha, aby se dostala olejovitá látka, která se· následně vysušila při teplotě 50 °C, aby se obdrželo 28,12 g (výtěžek 99 ..%) produktu jako bezbarvé olejovité látky. Matečné krystaly se připravily ze směsi ethylacetátu a hexanů. Přibližně 28 g produktu se rozpustilo . ve 35 ml ethylacetátu a 125 ml hexanů. Roztok se naočkoval matečnými krystaly a vytvořila se sraženina. Pevné látky se zfiltrovaly a vysušily přes noc ve vakuu při teplotě 55 °C, aby se vytěžilo 27,0.g (výtěžek 95 % bezbarvé pevné látky. MS a ^ΧΗ NMR byly shodné s požadovanou strukturou..

Krok 5 Příprava

4 44 * <4 ''·

4'44 4 44

,.- 4 . · 4 4 ··

4 44 4 < 4 4 • · · · ,4 4 • 4 4 4 4 ·

444 4·· 44 44

27,0 σ (0,0 62 mol) glycinamidu chráněného di-terc.butyldikarbonátem připraveného v kroku .4 se. přes noc vysušilo peletami oxidu fosforečného' a hydroxidu sodného. Pevná látka se. rozpustila ve 40 ml dioxanu a roztok se ochladil na teplotu 0 °C. Přidal se .ekvivalentní objem 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové 'v dioxanu (0,062 mol) a reakce se nechala 2 h - probíhat. . V tomto okamžiku byla konverze (chromatografie HPLC s reverzní fází) .80 %. Reakční směs se během 4 h nechala ohřát na teplotu místnosti, Reakční směs se při teplotě 40 °C odpařila na pěnu, která se triturovala 200 ml diethyletheru. Bílá pevná látka, která se vytvořila, se zfiltrovala a vysušila oxidem fosforečným, aby se vytěžilo' 20,4 g (izolovaný výtěžek 88/5 %) požadované sloučeniny ethylesteru glycin-p-aminokyseliny, jako hydrochloridové soli. ,

MS a 'Ή NMR¹ byly· shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD J Příprava

• HC1

Krok 1 Příprava'

Připravilo se 129,42 g (0,4 mol) 3-brom-5chlorsalicylaldehydu chráněného methoxyethoxymethylem podle v* ·* , 9) ·· ·· '* ·,.· · ^r·· ·'· * »» 9 • · · 9 9 9 9 9 9 '999-9 99 999 »·'·' *r · · způsobu z příkladu I, krok 2A. 3,5-Dichlorsalicylaldehyd se nahradil ekvivalentním množstvím ’ 3-brom-5chlorsalicylaldehydu, kterým se naplnila baňka o objemu 2 1 se třemi hrdly a s kulatým dnem opatřená mechanickým míchadlem se naplnila, a následně se přidalo 640 ml tetrahydrofuranu a 54,86 g (0,4 mol) (S)-fenylglycinolu. Po 30 min při teplotě 30 °C se přidalo 80 g.síranu horečnatého. Směs se 1 h míchala při teplotě 22 °C a zfiltrovala se na hrubozrnném filtru. Filtrát se odpařil za sníženého tlaku, aby se obdrželo .180,0 g světle žluté olejovité látky, obsahující požadovaný imin. Žádné další čištění se neprovádělo a surový imin se přímo použil v kondenzační reakci, krok 2.

Mikroanalýza:

Vypočteno pro Ci9H2iBrClNO₄:

C: 51,54 %; H: 4,78 %; N: 3,16 %; Br: 18,04 %; Cl: 8,00 %. Nalezeno:

C: 50,22

H: 4,94%; Ni 2,93

Br: 17,15

Cl: 7,56 %.

Krok 2 Příprava

V baňce' o objemu 5 1 se třemi hrdly a s kulatým dnem opatřené mechanickým míchadlem se pod dusíkovou atmosférou rozpustilo 332,0 g (0,8 mol) reakčního činidla vyrobeného v příkladu 1, kroku 1, v 660 ml N-methylpyrrolidinonu. Potom se roztok ochladil na teplotu -10 °C'. Pod dusíkovou atmosférou se připravil roztok iminu (připraveného v kroku 1) ve 32 0 ml N-methylpyrrolidinonu a potom, zatímco se teplota udržovala při -5 °C, se během 30 min přidával k výše * i;

•i 4 '4 · 4 4 .4 ·

» 9'9 . (4 4 4 uvedené reakční směsi. Po ukončení přidáváni se směs míchala při teplóťě -8 °C další.1 h a při teplotě -5 °C 2 h, a potom se ochladila na teplotu -10 °C. Během 10 min se přidala směs 30 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a 720 ml nasyceného roztoku chloridu amonného.. · Přidalo se 760 ml methyl-terc.butyletheru a.směs se 30 min míchala při teplotě 23 °C. Míšení se ukončilo a vrstvy se oddělily. Vodná vrstva se extrahovala 320 ml methyl-terc.butyletheru. Dvě organické vrstvy se spojily, ' postupně promyly 320 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, 320 ml deionizované vody a 320 ml roztoku chloridu sodného. Roztok se vysušil 60 g síranu hořečnatého, zfiltroval a odpařil, aby se obdrželo 221,0 g žluté olej ovité látky obsahující požadovaný produkt jako jeden diastereoizomer, jak se.stanovilo protonovou NMR.

DSC: 211,80 °C (endo. 72,5.6 J/g); 228,4 °C <98,23 J/g). Mikroanalýza:

Vypočteno pro .C25H₃3BrClNOg:

C: 53,72 %; H: Nalezeno:

C: 52,11 %; H:

5,95.%; N: 2,50 %; Brr 14,29; Cl: 6,33 %;

6,09 '%; N: 2,34 %; Br: 12,84; Cl: 6,33 %.

Krok 3 Příprava

Baňka o objemu. 3 1 se třemi hrdly . a s. kulatým dnem opatřená mechanickým míchadlem se pod dusíkovou atmosférou naplnila roztokem asi 111 g surového esteru připraveného v kroku 2 ve 1500 ml ethanolu. Reakční směs se ochladila na teplotu 0 °C a v jedné porci se přidalo 88,67 g (0,2 mol) octanu olovničitého. Reakční směs se míchala 3 h při teplotě š· ·*' ·' ·'· '·· (»' . · ί· · • · » · • !< · ·♦··* ·· {« • <· • · · <

I ·· · ι ·«' ··

O °G a potom se k reakční směsi s teplotou nižší , než; 5 °C přidalo 150 ml 15% vodného roztoku hydroxidu sodného. Methanol se na rotační odparce odpařil za sníženého tlaku. Přidalo se dalších 150- ml 15% vodného roztoku hydroxidu sodného a reakční směs se extrahovala třikrát po sobě 300 ml ethylacetátu a dvakrát po sobě se promyla 100 ml deionizované vody a dvakrát po sobě 100 ml roztoku chloridu sodného a vysušila se 30 g- bezvodého síranu hořečnatého. Potom se zfiltrovala přes celit a odpařila za sníženého tlaku, aby se obdrželo 103 g požadovaného produktu jako červené olejovité látky.

Krok 4 Příprava

CO2EI

HC1

Výše uvedená sloyčenina se připravila podle způsobu použitého v příkladu 1, krok 4 a krok 5, s nahrazením ekvivalentního množství produktu z kroku 3 v příkladu 1, krok 4. MS a ^XH NMR byly byly- shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD K * Alternativní příprava sloučeniny 2 příkladu J

Krok 1: Příprava

Cl . 58 φφ ·· φ φ « • ΦΦ ··

Κ 50,0 g (139,2 mmol) produktu z. příkladu B, krok 3, a 33,5 g (398,3 mmol) hydrogenuhličitanu sodného se přidalo 500 ml dichlormethanu a 335 ml vody. Směs se 10 min míchala při teplotě místnosti. Během 20 min se za rychlého míšení přidával roztok 38,0 g (222,8 mmol) benzylchlorformiátu ve 380 ml dichlormethanu. Po 50 min se reakční směs vpravila do dělící nálevky a organická vrstva se shromáždila. Vodná fáze se promyla 170 ml dichlormethanu.. Spojené organické f vrstvy se vysušily síranem hořečnatým a odpařily ve vakuu.

Výsledná pevná látka charakteru gumy se triturovala hexanem a shromáždila filtrací. Žlutohnědá pevná, látka se ve vakuu vysušila, aby se dostalo 61,2 g (výtěžek 96%). Tato látka se podrobila chromatografii HPLC s reverzní fází použitím chirální kolony, aby se dostal každý z enantiomerův .čisté formě. Použila se kolona Whelk-0 (R,R), velikost částic 10 pm, s použitím mobilní fáze směsi heptanu a ethanolu v poměru 90:10. Stanovila se optická čistota >98 % použitím analytické chromatografie HPLC s použitím obdobné kolony a rozpouštěcích podmínek. ¹H NMR byla shodná s navrhovanou strukturou.

Krok 2 , ^COjEt · .

x^0H ^Br (106,2 mmol) sloučeniny získané v kroku 1 ve 450 ml dichlormethanu se kanylou přidalo 25,5 g (127,4 mmol) trimethylsilyljodidu ve 100 ml dichlormethanu. Oranžový roztok se míchal 1 h při teplotě místnosti. Po kapkách se přidalo 20,6 ml (509,7 mmol) methanolu a' roztok se míchal 15 min. Reakční roztok se odpařil ve vakuu, aby se

K roztoku 48,5 q /V - ,

«i • 1· ‘ · • '9 · ,···· <··

99

Odparek se rozpustil . extrahoval 318 ml 1N jednou 200 ml vody a dostala oranžová olejovité látka, v 500 ml methyl-terc.butyletheru a roztoku kyseliny chlorovodíkové a jednou 100 ml vody. Vodné extrakty se zpětně promyly. 100 ml methyl-terc.butyletheru. K vodnému roztoku ..se po malých částech přidalo 40,1 g (478 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. Zásaditá vodná směs se extrahovala jednou 11a dvakrát 200 ml methyl-terc.butyletheru. Spojený organický roztok se promyl roztokem chloridu sodného a odpařil ve vakuu, aby se dostalo 23,3 g (výtěžek 68 %) požadovaného produktu.

.NMR byla shodná s navrhovanou strukturou.

Krok 3 Příprava

K roztoku 23,3 g (72,1 mmol) produktu z kroku 2 ve 200 ml dimethylformamidu se přidalo 17,9 g (65,9 mmol) N-di- . -terč.butyldikarbonátglycin-N-hydroxysukcinimidesteru.

Reakční směs se 'míchala 20 h při teplotě místnosti. Směs se vlila do 1,2.1 ethylacetátu a dvakrát po sobě promyla 250 ml 1M kyseliny chlorovodíkové, dvakrát po sobě 250 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát po sobě 250 ml roztoku chloridu sodného. Roztok se vysušil síranem hořečnatým a odpařil, aby se obdrželo 3.2,0 g (výtěžek 100 %) požadovaného produktu.

Analýza:

Vypočteno pro Ci₈H24BrClN₂C>6:

C: 45,06 %; H: 5,04 %; N: 5,84 %.

Nalezeno:

Ť, !» '»· ·♦

»· Λ· • * · · • · · 4

C: 45,17%; Η: 5,14 ¹Η NMR byla shodná s %; N: 6,12 %.

požadovanou strukturou.

Krok 4

K roztoku 31,9 g (66,5 mmol) produktu z kroku 3 ve 205 ml absolutního ethanolu se přidalo 111 ml. (332,4 mmol) 3M ethanolického roztoku kyseliny chlorovodíkové. Reakční roztok se 30 min zahříval při teplotě 58 °C. Roztok se ochladil a odpařil ve vakuu. Odparek se rozpustil ve 250 ml ethylacetátu a míchal 2 h při teplotě 0 °C. Bílá sraženina se shromáždila filtrací a promyla chladným ethylacetátem. Pevná látka se vysušila ve vakuu, aby se obdrželo 23,5 g (výtěžek 85 %) požadovaného- produktu.

Analýza:

Vypočteno pro Ci₃Hi6BrClN₂O4 + 1', 0 HCI:

C: 37,53 %; H: 4,12 %; N:6,73 %..

Nalezeno:

C: 37,29 %; H: 4,06 %; N: 6,68 %. · ¹H NMR byla shodná s požadovanou- strukturou.

PŘÍKLAD L Příprava

•HCI * · · · · ·'·····

.....* ·®.....τ€~· --------·Λ^·-9-9-9· ···* ·,· ·'·> ··» . >·

Krok 1

Příprava

	K roztoku	35,0 g .	(0,15 mol)	3-chlor-5-
	bromsalicylaldehydu	ve 175	ml dímethylformamidu se při
	teplotě místnosti	přidalo	22,1 g (0,16 mol.)	uhličitanu
•	draselného (prášek,	vysušen	v sušárně ve vakuu	při teplotě
	100 °C) , aby se obdržela světle žlutá suspenze.	Potom se za
	udržování teploty	lázně 20	°C přidalo 25,0	g (0,2 mol)
	methóxyethoxymethylchloridu	(čistého). Potom sě	směs míchala
	6 h při teplotě 22	°C a vlila se do 1200 ml	deionizované
	vody, aby se vysrážel produkt. Suspenze se	zfiltrovala

tlakovým filtrem a koláč se dvakrát po sobě promyl 400 ml deionizované vody a vysušil se pod atmosférou směsi dusíku a

vakua,	aby se obdrželo 46,0 g	(výtěžek	95%)	produktu	j ako
bělavé	pevné látky.
NMR	(CDCI3, TMS): 3,35 (s, 3H)	; 3,54 až	3,56	(m, 2H) ;	3, 91
až 3,93 (m, 2H) ; 5,30 (s., 2H) ;	7,77 (d,	1H) ;	7,85 (d,	1H) ;
10,30	(s, 1H);

¹³C NMR (CDC1₃, TMS) (ppm) : 59,05; 70,11; 71,49; 99, 50;

117,93; 129,69; 129,78; 132,37; 138,14;, 155,12; 188,22.

DSC: 48,24 °C (endo 90,51 J/g) .

Mikroanalýza:

Vypočteno pro CnHuBrClO^:

C: 40,82 %; H: 3,74 %; Cl: 10,95 %; Br: 24,69%. Nalezeno:

C: 40,64 %; H: 3,48 %; Cl: 10,99 %; Br: 24,67 %.

Krok 2

Příprava •v

· · . *** « 4 « '4

4'4 ·

4'

4 ,4 • 444 49 ·· *

4~. ¹

444 4 «4 • 4 4 ·

·. -·: 4u4_= «

4 4 4 • 44 4

4» 44

Do baňky o objemu 500 ml se třemi hrdly a kulatým dnem opatřené . mechanickým míchadlem se přidalo 32,35 g (0,1 mol) produktu z kroku 1, a následně 160 ml tetrahydrofuranu a. 13,71 g (0,1 mol) (S) -fenylglycinol.. Po 30 min při teplotě 22 °C se přidalo 20 g síranu hořečnatého. Směs se 1 h míchala,-při. teplotě 22 °C a zfiltrovala se na hrubém filtru. Filtrát se odpařil za. sníženého tlaku, aby se dostalo 48,0' g světle - žluté olej ovité · látky obsahující požadovaný imin. Žádné další čištění se neprovádělo a surový produkt se přímo použil v dalším reakčním kroku. '

Mikroanalýza:

Vypočteno pro Ci₉H2iBrClNO4: ’

C: '51,54 %; H: 4,78 %; N: 3,16%; Br: 18,04; -Cl.: 8,00 %. '

Nalezeno: ⁷ . - ' C:’51,52

H: 5,02

N: 2,82

Br: 16;31; Cl: 7,61 %

Krok 3 Příprava

V baňce o objemu' 5 1 se třemi hrdly a s kulatým, dnem opatřené mechanickým míchadlem se pod dusíkovou atmosférou rozpustilo 332 g (0,8 mol) reakčního činidla vyrobeného v příkladu I, krok 1, v 660 ml N-methylpyrrolidínonu. Roztok se ochladil na teplotu -10 °C. Pod dusíkovou atmosférou ‘se .X ··· ··· připravil roztok iminu (připraveného v kroku 2) ve. 320 ml N-methylpyrrolidinonu, a potom, zatímco se teplota udržovala /

při -5 °C, se během 30 min přidal k výše uvedené reakční směsi. Po ukončení přidávání se směs míchala další i h a ochladila na teplotu -10 °C. Během 10 min se přidala směs 30 ml koncentrované kyseliny. chlorovodíkové a . 720 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Přidalo se 760 ml methyl-terc.butyletheru a směs se 1 h míchala při teplotě 23 °C. Míšení se ukončilo a vrstvy se oddělily. Vodná vrstva se extrahovala 320 ml methyl-terc.butyletheru. Dvě organické vrstvy se spojily, postupně- promyly 320 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, 320 ml deionizované vody a 320 ml. roztoku chloridu sodného. Roztok se vysušil 60 g síranu hořečnaťého, zfiltroval a odpařil, aby se obdrželo 228 g žlutého oleje- obsahujícího požadovaný produkt jako jeden diastereoizomer.

DSC: 227,54 °C (endo 61,63 J/g).

Mikroanalýza: ' Vypočteno pro C₂5H₃3BrClNO6:

C: 53,72 %; H: 5,95 %; N: 2,50 %; Br: 14,29%; Cl: 6,33 %. Nalezeno:

C:53.,80 %; H:. 6,45 %; N: 2,23 %; Br: 12,85;. Cl: 6,12 %.

Krok 4 '

Příprava

Baňka o objemu 3 1 se třemi hrdly a s kulatým dnem opatřená mechanickým míchadlem se pod dusíkovou atmosférou ·· ·* » · · « • · ( ···· ·« naplnila roztokem· asi 111 g surového esteru připraveného v kroku 3 v 1500 ml ethanolu. Reakční směs se ochladila na teplotu 0 °C a v jedné porci se přidalo 88,67 g (0,2 mol) octanu olovničitého. Reakční směs se míchala 3’ h při teplotě 0 °C a potom se k reakční směsi s teplotou nižší než 5 °C přidalo 150 ml 15% vodného roztoku hydroxidu sodného. Ethanol se odpařil na rotační odparce za sníženého tlaku. Přidalo se dalších 600 ml 15%. vodného roztoku hydroxidu sodného a reakční směs se extrahovala dvakrát po sobě 300 ml ethylacetátu a dvakrát po sobě 200 ml. methylterc.butyletheru a dvakrát po sobě 200 ml ethylacetátu. Organické vrstvy se spojily a dvakrát po sobě se promyly 200 ml deionizované vody a dvakrát po sobě 100 ml roztoku chloridu sodného a vysušily se 30 g bezvodého síranu horečnatého. Potom se roztok zfiltroval přes celit a odpařil za sníženého tlaku; aby se obdrželo 96 g požadovaného produktu jako oranžové olejovité látky, která se použila v dalším kroku bez dalšího čištění.

DSC: 233, 60 °C (endo 67,85 J/g.) .

Mikroanalýza:

Vypočteno pro C24H29BrClNO₅:'

C: 54,71 %; H: 5,54 %; N: 2,65 %; Br: 15,16

Nalezeno:

C: 52,12 %;

H: 5,40

N: 2,47

Cl: 6,72

Br: 14,77;. Cl: 6,48 %

Krok 5 Příprava

Asi 94 g surového ‘produktu z kroku 4 se rozpustilo ve 180 ml absolutního ethanolu a přidalo se 50,0 g (0,26 mol) monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové. Potom se reakční směs zahřívala 8 h pod refluxem, poté se rozpouštědlo odpařilo za sníženého tlaku. Pevný odparek se přidal ke 100 ml tetrahydrofuranu a potom se tetrahydrofuran odstranil za sníženého tlaku. Odparek se . rozpustil v 500 ml ethylacetátu a ochladil na teplotu asi 5 °C. Pevná látka se zfíltrovala a dvakrát po sobě promyla 50 ml heptanu, aby se obdržela bílá pevná látka. Pevná látka se vysušila na vzduchu, aby se obdrželo 38 g bílé pevné látky jako jeden izomer.

^ΤΗ NMR (CDC1₃, TMS) (ppm): 1,12 (t, 3H); 2,29 (s, 3H);

3,0 (m, 2H) ; 4,05 (q, 2H) ; 4,88 (t·, 1H) ; 7,11 (d, 2H) ;

7,48 (d, 2H);; 7,55 (d, 1H) ; 7,68 (d, 1H) ; 8,35 (široký s,

3H) ;

¹³C NMR (CDCI3, TMS) (ppm): 13,82; 20,75; 37,13; 45, 59;

60,59; 110,63; 122,47; 125,44; 127,87 ; · 128,06;. 129, 51;

131,95; 137,77; 145,33; 150,14; 168,98.·

	DSC: 69, 86 °C (end. 406,5 J/g); 165,72 °C (end. 211,24 °C (exo. 20,56 J/g) . '[cx]^d25 = +4,2° (c = 0,960, methanol).	62,27	J/g);
	IČ: (MIR) (cm'¹) 2922, 1726, 1621, 1376, 1324, 128.6, 1237, 1207. Mikroanalýza: -Vypočteno pro Cis^iBr.ClNOeS:	1591, 1494,	1471,	1413,
	C: 43,69 %; H: 4,27 %; N: 2,83 %;	Br: 16,15; Cl:	7,16	%; S:
	6,48 %. Nalezeno.:
$	C: 43,40 %; H: 4,24 %; N: 2,73 %;	Br: 16,40; Cl:	7,20	%; S:

Krok 6 Příprava

Br ^H2^N^V co₂eí

Cl •HC!

Výše. uvedená sloučenina se připravila podle způsobů popsaných v příkladu I, ' krok 4 a krok 5, kde se nahradí ekvivalentní množství , meziproduktu připravené v kroku 5 jako volná báze v příkladu I, krok 4.

MS a ¹H NMR byly byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD M

Příprava .

K- roztoku 100 g (0,63.8 mol) 5-chlorsalicylaldehydu ve 400 ml dimethylfórmamidu se přidalo 144,0 g (0,641 molu) N-jodsukcinimidu.. Reakční .směs' se míchala 2 'dny při teplotě· místnosti. Přidalo se dalších 20 g N-jodsukcinimidu a míšení pokračovalo . další 2 dny. Reakční směs se zředila 1 1 ethylacetátu, promyla 300 ml 0,lN .kyseliny chlorovodíkové, 300 ml vody, 300 ml 5% roztoku thiosíranu sodného, 300 ml roztoku chloridu sodného, vysušila síranem hořečnatým a odpařila dosucha,. aby se obdrželo 162 g (výtěžek 90 %) požadovaného aldehydu jako světle žluté pevné látky.

MS a ^XH NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 2 .

Příprava 2-0-methoxýethoxymethyl-3-jod-5-chlorsalicyl61

aldehydu

K roztoku 84,74 g (0,30 mol) 3-jod-5-chlorsalicylaldehydu ve 200 ml dimethylformamidu se při teplotě 20 °C přidalo 41,4 g (0,30 mol) uhličitanu draselného. Vytvořila se .žlutá suspenze a za udržování reakční teploty se přidalo 38,2 g (0,305 mol) methoxyethoxymethylchloridu. Po 2 h. se přidalo dalších 1,5 g methoxyethoxymethylchloridu. Poté, co se míchala 1 h, se reakční směs vlila do směsi vody a ledu a míchala. Vytvořila se sraženina, která se zfiltrovala a vysušila ve vakuu, aby se obrželo 95 g (výtěžek 85 %) požadovaného chráněného aldehydu.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 3 Příprava

K roztoku 41,5 g (.0,112 mol) 2-0-methoxyethoxymethyl-3-jod-5-chlors'alicylaldehydu ve 200 ml tetrahydrofuranu se při teplotě místnosti přidalo 15,37 g (0,112 mol) (S)-fenylglycinolu. Po 1 h míšení se přidalo 16 g síranu horečnatého a míšení pokračovalo 2 h. Reakční směs se. zfiltrovala a filtrát se odpařil a 2 h sušil ve vakuu, aby se obdržel meziprodukt, imin. Baňka se dvěma hrdly a dnem se naplnila 81,8 g (0,2464 mol)

Reformantského reakčního· činidla. z příkladu I, krok .1, a 300 ml N-methylpyrrolidonu a směs se míchala při teplotě -10 °C. Zatímco se teplota udržovala při -10 °C, přidal se pomalu roztok iminu ve 100 ml N-methylpyrrolidonu. Směs se udržovala 2 h při této teplotě a 1 h při teplotě -5 °C. Po požadovaný s kulatým ‘· ochlazení reakční směsi na teplotu -10 °C' se přidal roztok 16 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové ve 200 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Přidalo se 500 ml diethyietheru a směs se míchala 2 h při teplotě místnosti. Etherová vrstva se oddělila a vodná vrstva se dále extrahovala 300 ml diethyietheru. Spojené etherové vrstvy se promyly 200 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, 200 ml vody a 2.00 ml roztoku chloridu sodného, vysušily se síranem hořečnatým a odpařily, aby se obdrželo 61,0 g (výtěžek 90 %) olejovité látky.

^XH NMR ukázala, že požadovaná	struktura byla	v podstatě
jeden diastereoizomer a MS	byla	shodná	požadovanou
strukturou. ? Krok 4 Příprava ' JQr i	SOaH O
Ηο^γ·^
I	ch₃		>
Roztok 48,85 g (80,'61	mmol)	surového. esteru
připraveného v kroku 3 se rozpustil	v 500 ml	ethanolu a
ochladil se na teplotu 0 °C. Přidalo se	35,71 g	(80,61 mmol)

octanu olovničitého. Po 3 h se k reakční·směsi přidalo' 73 ml 15% roztoku hydroxidu sodného. Většina ethanolu se odpařila za sníženého tlaku. K odparku se přidalo 200 ml 15% roztoku hydroxidu sodného, který se potom extrahoval 400 ml diethyietheru. Etherová vrstva se promyla 100 ml vody, 100 ml roztoku chloridu sodného, vysušila se a odpařiLa se, aby se obdržel oranžová olejovitá látka. Olejovité látka se rozpustila ve 100 ml ethanolu a přidalo se 19,9 g kyseliny p-toluensulfonové. Roztok se zahříval 8 h pod refluxem. a za odpařil se sníženého tlaku. Odparek . se zředil 60 ml

·· ··

• ·' · · · · · · · • · 99 tetrahydrofuranu, zahříval se pod reluxem a ochladil se. Sraženina se zfiltrovala, promyla se 300 ml směsi hexanu a tetrahydrofuranu v poměru 1:1 a vysušila se, aby se obdržel požadovaný produkt.

^ΧΗ NMR a MS byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 5 (S) -Ethyl-3- (N-di-terc.butyldikarbonát-gly) -amino-3- (S) -(5-chlor-2-hydroxy-3yjod)fenylpropionát

Ke směsi · 9,4 g (.34,51 mmol)' di-terc.butyldikarbonátgly-O-sukcinátu a 17,0 g (3.1,38 mmol) soli kyseliny ptoluensulfonové š ethyl-3-(S)-amino-3-(5-chlor-2-hydroxy-3-jod)propionátem ve 200 ml', dimethylformamidu . se přidalo 4,8 ml triethylamínu. Reakční . směs se míchala 18 h při teplotě místnosti. Dimethylformamid se odpařila ve .vakuu a odparek se. rozdělil mezi. 600 ml ethylacetátu · a 100 ml zředěné, kyseliny, chlorovodíkové.. Organická vrstva se promyla 200 ml. roztoku hydrogénuhličitanu sodného, 200 ml roztoku chloridu sodného, ’ vysušila síranem horečnatým a- odpařila, aby .se obdrželo 14,2 g (výtěžek.86. %) požadovaného produktu jako pevné látky. ' .

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 6 (S)-Ethyl-3-(N-gly)amino-3-(5-chlor-2-hydroxy-3-jod)fenylpropionáthydrochlorid ‘

Ke 37,20 g (70,62 mmol) ethyl-[3-(S)-(N-di-terc.butyldikarbonát-gly) amino-3-(5-chlor-2-hydroxy-3-jod)fenylpropionátu se při teplotě 0 °C přidalo 70 ml 4N roztoku

·· ·· ·· ·' 99 _ ·· • ·' · · · · · · · · · 9 · · · · 9 9 9 9

.. · « · · 9 9 9 9 9 9

9 9.. · .9 9 9 9 9

99 9 9 9 9 9 9 «·· 9 9. 9 9 kyseliny chlorovodíkové v dioxanu a 3 h se míchalo -při teplotě místnosti. Reakční směs se .odpařila, a po .přidání 100 ml toluenu znovu odpařila. Získaný odparek se suspendoval v diethyletheru, zfiltroval a vysušil., aby se obdrželo 32,0 g (výtěžek 98 %) produktu jako krystalického prášku.

MS a NMR .byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD N Příprava

Krok 1 Příprava

Výše uvedená sloučenina se připravila způsobem podle příkladu I, krok 2A, s nahrazením 3,5-dichlorsalicylaldehydu ekvivalentním množstvím 2-hydroxy-3,5-dibrombenzaldehydu. Výtěžek 88 %, světle žlutá, pevná látka, t.t.: 46 až 47 °C.

R_f = 0,6 (směs ethylacetátu a hexanu v poměru 1:1 obj.) . ^rH NMR (CDC1₃) : d 3,37 (s, 3H) ; 3,56 (m, 2H) ; 3,92 (m, 2H) ; 5,29 (s, 2H); 7,91 (d, 1H, J = 2,4 Hz); 7,94 (d, 1H,

J = 2,4 Hz).; 10,27 (s, 1H) .

FAB-MS m/z 367 (M⁺) ,

HR-MS vypočteno pro C₁₁H₁₂Br₂O4: 367,9083, nalezeno: 367,9077.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 2

Výše uvedená 'sloučenina se připravila způsobem podle příkladu I, krok 2B a krok 2C, s nahrazením ekvivalentního množství sloučeniny z kroku 1 v příkladu I, krok 2B.

Výtěžek 90 %, žlutá pevná látka, t.t.: 57 až 59 °C. R_f = 0,46 (směs ethylacetátu a.hexanu v poměru 1:1 obj.) .

^lH NMR.(CDC1₃):

1/45. (s,

2,1 (široký, 1H,· zaměnitelný); 2,66 (d, 1H, zaměnitelný);

2,51 (d, 1H, . J₃ = 9, 9 Hz, J₂ = 15,3 Hz);

J₃ = 4,2 Hz, J₂ = 15,3 Hz); 3,02 (široký, 1H,

3,39 (s, 3H); 3,58 - 3,62 (m,

1H); 3,93 (m, 2H); 4,63 (dd, 1H, J= 4,2 Hz| 7,17 -7,25 (m, 6H); 7,49 (d, 1H).

FAB-MS m/z 602 (M+H).

HR-MS vypočteno pro Ο₂5Η₃₄ΝΒγ₂Ο6: 602,0753, nalezeno: 602,0749.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou

4H) ; 3,81 (m,

5,15 ά, 2H) ;

Krok 3 Příprava

Výše uvedená sloučenina (sůl kyseliny p • ·· ·· • · · ♦ * » • · ··· • ·. · · · · • ' · · · · ··· -9 9, 9 9

TM toluensulfonové) se připravila způsobem podle příkladu I, krok ’3, , s nahrazením ekvivalentního množství produktu připraveného v kroku 2 v příkladu I, krok 3A.

Výtěžek 62 %, bílá pevná látka,

NMR (DMSO-dg) : d	1,09	(t,	3H, J = 7,2 Hz);	2,27	(s, 3H);
2,97.(dd, 2H, Ji	= 3,0	Hz,	J₂ = 7,2 Hz) ;	4,02	(q, 2H,
J - 7,2 Hz); 4,87	(t,	1H,	J = 7,2 Hz) ;	7,08	(d, 2H,
J = 4,8 Hz); 7,45	(m,	3H) ;	7,57 (d, 1H,	J =	2,4 Hz);
8,2 (široký, 3H).
FAB-MS m/z 365 (M+H)	• '
HR-MS vypočteno pro	CiiHuB^Cb	: 365,9340,
nalezeno			365,9311.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 4 Příprava

Výše uvedená sloučenina se .připravila způsobem podle příkladu I, .krok .4, . s nahrazením sloučeniny připravené v kroku ,3. Výsledný meziprodukt chráněný di-terc. butyldikarbonátem se převedl na požadovanou sloučeninu použitím způsobu z příkladu I, krok 5.

· MS a ¹H ŇMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD P Příprava

· 9 · ··

9 ··· ’··· · · 9 9 *·

Výše uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu I s nahrazením 3,5-dichlorsalicylaldehydu v příkladu I, krok 2A, ekvivalentním množstvím 3-jod-5-bromsalicylaldehydu připraveným v příkladu F, krok 1.

PŘÍKLAD 1

Trifluoracetátová sůl kyseliny (±) -3-brom-5-chlor-2-hyd.roxy-β-[/2-([(3-hydroxy-5-[(1,4,5,6-tetrahydro-5-hydroxy-2-pyrimidinyl) amino] fenyl) karbonyl] amino) acetyl/amino] benzenpropanové

Příprava

OH

«»

Při teplotě ledové lázně se produktu z příkladu H, 0,58 g k 0,4 g (0,0014 mol) (0,0014 mol) produktu z příkladu B, . 0,142 g (0,0014 mol) triethylaminu, 17 mg- 4/- (Ν,Ν-dimeth.ylaminopyridinu) a 4 ml bezvodého N,N-dimethylacetamidu přidalo 0,268 g (0,0014 mol) 1-(3-dimethylami.nopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridu. Reakce se míchala přes noc při teplotě místnosti. Výsledný esterový meziprodukt se izoloval preparativní chromatografií HPLC s reverzní fází. K tomuto esteru- se v 10 ml vody a 5 ml acetonitrilu přidalo 580 mg (0,0138 mol) hydroxidu lithného. Poté, co se míchalo 1 h při teplotě místnosti, se pH snížilo na hodnotu 2 kyselinou trifluoroctovou a produkt se čistil preparativní chromatografií HPLC s reverzní fází, aby se získalo (po lyofilizací) 230 mg produktu jako bílé pevné látky.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD 2

Příprava

Výše uvedená sloučenina se připravila způsobem podle příkladu 1, s nahrazením produktu z příkladu B ekvivalentním množstvím produktu z příkladu A. Výtěžek po lyofilizací byl 320 mg bílé pevné látky.

MS a ^AH NMR byly shodně s požadovanou strukturou.

'1*·'

PŘÍKLAD 3 Příprava

Výše uvedená sloučenina se připravila způsobem podle příkladu 1, s nahrazením produktu z příkladu B ekvivalentním množstvím produktu z příkladu F. Výtěžek po lyofilizací byl 180 mg bílé pevné látky.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou:

'· · · · '··’··· .'*· '»· ·· · · · · φ · · · · • ·· · · · • · · · ·

Ιφ · · ' -·· ' '··

Φ·

PŘÍKLAD 4

Příprava

Výše uvedená sloučenina se připravila způsobem podle příkladu 1, s nahrazením produktu z příkladu B ekvivalentním množstvím produktu ’z příkladu D, Výtěžek po lyofilizaci byl 180 mg bílé pevné’látky.

MS a ^XH NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘIKLAD 5

Příprava

Výše . uvedená sloučenina se připravila způsobem podle příkladu 1, s nahrazením produktu z příkladu B ekvivalentním množstvím produktu z příkladu E. Výtěžek po lyofilizaci byl 250 mg bílé pevné látky.

MS a ‘H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD 6

•· · * · · · ' · ·

Výše uvedená sloučenina se připravila způsobem podle příkladu 1, s nahrazením produktu z příkladu B ekvivalentním množstvím produktu z příkladu C. Výtěžek po lyofilizací byl 220 mg bílé pevné látky.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD 7 Příprava

O

V plamenem vyžíhané baňce se pod dusíkovou atmosférou při' teplotě ’ ledové lázně k 7,8 g (0/027 mol) produktu z příkladu H rozpuštěnému v 50 ml bezvodého N,N-dimethylacetamidu pomalu. přidávalo 3,7 g (0,027 mol), isobutylchlorformiátu, a následně 2,73 g (0,027 mol) Nmethylmorfolinu. Roztok se míchal 15 min při teplotě ledové lázně. Potom se .k reakční směsi při teplotě ledové lázně přidalo 10,0 g (0,024 mol) produktu z příkladu L, a následně 2,43 g (0,024 mol) N-methylmorfolinu. . Potom se reakce míchala· přes noc' při teplotě místnosti. Výsledný esterový meziprodukt se izoloval preparativní chromatografií HPLC s reverzní fází. K tomuto · esteru v 60 ml vody a '30 ml acetonitrilu se přidalo 10 g (0,-238 mol) hydroxidu lithného. Reakční směs se míchala 1 h při teplotě místnosti. Potom se pH snížilo na hodnotu 2 kyselinou trifluoroctovou. Produkt .· ·

4'· * 4 4 4

4 4 4 4 · · 4 · 4

4 4 4 4 !4'4 4 4 4 4 4 se čistil preparativní chromatografií s. reverzní fází, aby se získalo (po lyofilizací) 9,7 g požadovaného produktu jako bílé pevné látky.

MS a ^XH NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD 8

Monohydrát monohydrochloridu kyseliny (S)-3,5-dichlor-2-hydroxy-β-[/2-([(3-hydroxy-5-[(1,4,5,6-tetrahydro-5hydroxy-2-pyrimidinyl) amino] fenyl) karbonyl] amino) acetyl/amino]benzenpropanové

Krok A

K 9,92 g (0,0345 mol) produktu z příkladu H rozpuštěnému ve 200 ml bezvodého N,N-dimethylacetamidu se přidá 4,0 ml (0,0362 mol) N-methylmorfolinu. Reakční směs se ochladila na teplotu -5 °C (lázeň soli a ledu) , v průběhu jedné minuty se přidalo 4,48 ml (4,713 g, 0,0345 mol) isobutylchlorformiátu a reakční směs se míchala 12 min při teplotě ledové lázně. K reakční směsi se potom při teplotě ledové lázně přidalo 11,15 g (0,030 mol) produktu z příkladu I, a následně 4,0 ml (0,0362 mol) N-methylmorfolinu. Reakční směs se nechala ohřát na teplotu místnosti a dojít do konce, potom se při teplotě 50 °C odpařila ve vakuu, aby se dostal tmavý odparek. Odparek se rozpustil v přibližně 50 ml směsi acetonitrilu s vodou. Hodnota pH se upravila na- kyselou stranu přidáním malého množství kyseliny trifluoroctové.

·· «· · · B« ·· ··«« · · · · · · · ·

Odparek se umístil na kolonu 10 x 500 cm C-18 (velikost částic 50 pm) a izoloval se ester požadovaného produktu (plán rozpouštědel: 100 % voda . + 0,05 % kyseliny trifluoroctové až směs vody s 0,05 % kyseliny trifluoroctové a acetonitrilu s 0,05 % kyseliny trifluoroctové v poměru 30:70 v průběhu. 1 h, rychlost 100 ml/min, plán rozpouštědel započal po vymytí čela rozpouštědlem) . Čištěním preparativní HPLC chromatografií s reverzní fází se po lyofilizaci dostalo 10,5 g (50 %) bílé pevné látky.

MS'a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok B

Přibližně 11 g produktu vyrobeného v kroku A se rozpustilo ve směsi vody a dioxanu a pH roztoku se upravilo přidáním 2,5N roztokem, hydroxidu sodného na hodnotu přibližně 11,5 ,(pH metr). Reakční směs se míchala při teplotě místnosti. pH se opakovaně znovu upravilo na hodnotu >11 dalším přídavkem báze. Po 2 až 3 hodinách byla konverze esteru na kyselinu chromatografií HPLC s reverzní fází uznána za ukončenou. pH reakční směsi se upravilo na hodnotu přibližně 6 a z roztoku se vysrážela viskózní olejovitá látka. Olejovitá látka se izolovala dekantací a promyla 200 ml horké vody. Výsledná vodná směs se nechala ochladit a pevná látka se shromáždila filtrací, aby se po lyofilizaci z roztoku kyseliny chlorovodíkové získalo 2,6 g výše uvedené sloučeniny. Odparek, kterým byla tmavá viskózní olejovitá látka, se zpracoval s horkou vodou, aby se ochlazením (po lyofilizaci z roztoku kyseliny chlorovodíkové) dostalo 4,12 g žlutohnědého prášku.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘÍKLAD 9

Trifluoracetátová sůl kyseliny (S) -3-brom-5-chlor-2-hyclřoxyΊ9 • <· • · *9 >9 « · 9 1

9 9 <

• · · 9 1 • · · 1 «· 99

-β-[/2-([(3-hydroxy-5-[(1,4,5,6-tetrahydro-5-hydroxy-2pyrimidinyl) amino] fenyl) karbonyl] amino) acetyl/amíno]benzenpropanové

Krok 1: Příprava

K suspenzi 1,0 g (2,4 mmol) produktu z příkladu J, 0,75 g (2,6 mmol) produktu z příkladu H a 40 mg 4-dimethylaminopyridinu v 10 ml N,N-dimethylacetamidu se přidalo 0,24 g (2,4 -mmol) triethylaminu: Směs se míchala 15 min při teplotě místnosti a přidalo se 0,60 g (3,1 mmol) l-(3-dimethylaminopropvl) -3-ethylkarbodiimidhydrochloridu.

Směs'

HPLC vody

Reakční směs se míchala přes noc pří teplotě místnosti se odpařila ve vakuu a čistila chromatografií s reverzní fází (výchozí gradient rozpouštědel směs s kyselinou trifluoroctovou a acetonitrilu v poměru 90:10, retenční čas 22 min),, aby se obdrželo 1,6 g (výtěžek 52 %) požadovaného produktu.

MS a ’ή NMR byly shodné s navrhovanou strukturou.

Krok 2

TFA

K roztoku 800 mg (1,2 mmol) esteru vyrobeného v kroku 1 v 7 ml roztoku,acetonitrilu a vody v poměru 1:4 se přidalo • c • · · · · · · · » ·· ·· · · · · » · · « · · · · ···· ·'··· ·· »·· ··· *· ·«

148 mg (6,2. mmol) hydroxidu lithného. Reakční směs se míchala 2 h při teplotě místnosti. Přidalo se 0,71 ml (9,2 mmol) kyseliny trifluoroctové a tato směs se čistila chromatografií HPLC s reverzní .fází (výchozí gradient rozpouštědel směs vody s kyselinou trifluoroctovou a acetonitrilu v poměru 95:5, retenční čas 24 min), aby se dostalo 860 mg (výtěžek 83 %) požadovaného produktu.

Analýza:

Vypočteno pro C₂2H23BrClN5C>7 + 1,7 TFA:

C: 39,18 %; H: 3,20 %; N:8,99 %.

Nalezeno:

C: 39,11 %; H: 3,17 %; N: 9,07 %.

MS a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

Krok 3

Příprava hydrochloridové solí

Produkt z kroku 2 se rozpustil ve vhodném rozpouštědle (směs vody a acetonitrilu) .a tento roztok se pomalu nechal projít iontoměničovou kolonou ' Bio-Rad AG2-8X (forma chloridu, 0,038 až 0,074 mm, >5 ekvivalentů). Lyofilizace poskytla požadovaný produkt jako hydrochlorídovou sůl.

PŘÍKLAD 10

Příprava

Výše uvedená sloučenina se příkladu 8 s nahrazením produktu připravila z příkladu způsobem podle I v příkladu 8, • ·.

kroku A produktem z příkladu N. preparativní “ chromatografií HPLC

Produkt se s reverzní izoloval fází a lyofilizoval, aby se dostal požadovaný produkt -jako trifluoracetátová sůl.

MS a NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

PŘIKLAD 11

Příprava

Výše uvedená sloučenina se připravila v podstatě způsoby podle příkladu 8 s nahrazením produktu z příkladu I v příkladu 8, kroku A produktem z příkladu M. Produkt se izoloval preparativní chromatografií HPLC s reverzní fází a .lyofilizoval, aby se dostal požadovaný produkt jako trifluoracetátová sůl..

MS .a ¹H NMR byly shodné s požadovanou strukturou.

* PŘIKLAD 12 ^;

Příprava

Výše uvedená sloučenina se připravila použitím způsobů

podle příkladu 8 s nahrazením produktu z příkladu I v příkladu 8, kroku A produktem z příkladu P. Produkt se izoloval preparativní chromatografií HPLC s reverzní fází a lyofilizoval, aby se dostal požadovaný produkt jako trifluoracetátová sůl.

PŘÍKLAD 13

Příprava

Příprava 2-0-(methoxyethoxymethyl)-3,5-dijodsalicylaldehydu

CHO

K-roztoku 50,0 g (0,134 mol) 3,5-dijodsalicylaldehydu ve 150 ml dimethylformamidu se při teplotě 20 °C přidalo 18,5 g (0,134 mol) uhličitanu draselného. . To mělo za následek žlutou suspenzi a za udržování reakční teploty, se

». přidalo 15,8 ml (0,134 mol) methoxyethoxymethylchloridu.

Poté, co se míchala další hodinu, se reakční směs vlila do *

ledové vody a míchala. Vytvořila se sraženina, zfiltrovala se, a ve vakuu vysušila, aby se obdrželo 61 g (výtěžek 99 %) požadovaného chráněného aldehydu.

¹H NMR byla shodná s požadovanou strukturou.

Krok 2 Příprava • · * « ·' · • ·

' K roztoku 41,5 g (0,112 mol) 2-0-methoxyethoxymethyl-3,5-dijodsalicylaldehydu ve 150 ml tetrahydrofuranu se při teplotě místnosti přidalo 17,9 g (0,13 mol) (S)-fenylglycinolu. Po 1 h míšení se přidalo 20,7 g síranu horečnatého a míšení pokračovalo 2 h. Reakční směs se zfiltrovala a filtrát se odpařil a 2 h sušil ve vakuu. Baňka se dvěma hrdly a S'kulatým dnem se naplnila 96 g (0,289 mol) Reformantského reakčního činidla a 250 ml N-methylpyrrolídonu a směs se míchala při teplotě· -10 °C. Zatímco se teplota udržovala při -10 °C,^: přidalo se pomalu 100 ml roztoku iminu v N-methylpyrrolidionu. Směs se udržovala 2 h při této teplotě a 1 h při teplotě -5 °C. Po ochlazení reakční směsi na teplotu -10 °C se přidal roztok 16 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové ve 200 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Přidalo se 500 ml diethyletherú a směs.se 2 h míchala při -teplotě místnosti. Etherová vrstva se , oddělila a vodná vrstva se dále extrahovala 300 ml diethyletherú. Spojené etherové vrstvy se promyly 200 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, 200 ml vody a 200 ml roztoku chloridu sodného, vysušily se síranem hořečnatým a odpařily, aby se obdrželo 90,0 g (výtěžek 99 %) olejovité látky.

NMR ukázala požadovanou strukturu a jeden diastereoizomer.

Krok 3 Příprava

^H2^NS^\_gooh • · ♦ · • · · · «. · « · . · « · · » · ·♦ * * * · · * · · · ·

*·.»

14,0 g (20,1 mmol) surového esteru 7 kroku 2 se rozpustilo ve 100 ml ethanolu a ochladilo se na teplotu 0 °C. V jedné dávce se přidalo 9,20 g (20,75 mmol) octanu olovničitého. Po 3 h se k reakční směsi přidalo 73 ml 15% roztoku hydroxidu sodného. Většina ethanolu se odpařila za sníženého tlaku. K_r odparku se přidalo 200 ml 15% roztoku hydroxidu sodného, který se potom extrahoval 400 ml diethyletheru. Etherová vrstva se promyla 100 ml vody, 100 ml roztoku chloridu sodného, vysušila se a odpařila se, aby se obdržela oranžová olejovitá látka. Ta se rozpustila ve 100 ml ethanolu a přidalo se 6,08 g kyseliny p-toluensulfonové. Roztok se zahříval 8 h pod refluxem a. za sníženého tlaku se odpařil. Odparek se zředil 60 ml tetrahydrofuranu, zahříval se pod relfuxem a ochladil se. Při skladování se nevytvořila žádná sraženina. Reakční směs se odpařila a čistila se preparativní chromatografií HPLC, aby se obdržela aminokyselina jako sůl kyseliny p-toluen'sulfonové. Získaná pevná látka se rozpustila v ethanolu a nasytila plynným chlorovodíkem. Reakční směs se 6 h zahřívala pod refluxem. Reakční směs se odpařila, aby se obdrželo 12,47'g požadované aminokyseliny jako soli kyseliny p-toluensulfonové.

Krok 4

Příprava ethyl-[3-(N-di-terc.butyldikarbonát-gly)amino-3.(S) - (3, 5-di j od-2-hydroxyfenylj propionátu]

CuOH

OH

Ke směsi 7,48 g (27,04 mmol) di-terc.butyldikarbonát-gly-O-sukcinátu a 12,47 g (27,04 mmol) soli kyseliny p-toluensulfonové s ethyl-[3-(S)-amino-3-(3, 5-dijod-2-hydroxyfenylpropionátem] ve 100 ml dimethylformamidu še přidalo 3,8 ml triethylaminu. Reakční směs se 18 h míchala při teplotě místnosti. Dimethylformamid se odpařil ve vakuu a odparek se rozdělil mezi 600.ml ethylacetátu a 100 ml zředěné kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva se promyla 200 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 200 ml roztoku chloridu sodného, vysušila síranem hořečnatým a odpařila, aby se obdrželo 17,0 g . (výtěžek 96 %) požadovaného produktu jako pevné látky.

¹H NMR byla shodná s požadovaným produktem.

Krok 5

Příprava ethyl- [3- (N-gly) amin'o-3- (3,5-dijod-2-hydroxy'f enyl) propionát ] hydrochloridu

H

N,

COOH

OH

Ke 4 0 ml 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu se při teplotě 0 °C přidalo 17,0 g (25,97 mmol) 3-(S)-(N-di-terc.butyldikarbonát-gly) amino-3- (S) - (3,5-dijod-2-hydr oxyfenyl)propionátu a reakční směs se míchala 3 h při teplotě místnosti. Reakční směs se odpařila a po přidání 200 ml toluenu znovu odpařila. Získaný odparek se vysušil, aby se

• ·		• <		•	• ·		• ·	•
•	•	•	•	•	»	4'	•	4
•	•	• ·		•		•l	•	•
•	•	•	•	•	•	4	•	•
• · · ·		• ·	• · ·	·'· ·	• ·		• ♦

obdrželo 8,0 g (výtěžek 56 %) produktu jako krystalického prášku.

^ΧΗ NMR je shodná s požadovaným produktem..

Krok 6

Roztok 3,74 g (12,98 mmol) kyseliny m-(5-hydroxypyrimidino)hippurové ve 25 ml dimethylacetamidu se zahříval, dokud se všechna látka nerozpustila. Ten se potom ochladil na teplotu 0 °C a v jediné dávce se přidalo 1,68 ml izobutylchlorformiátu, a následně. 1,45 ml N-methylmorfolinu. Po 10 min se v jediné dávce přidalo 6,0 g (10,82 mmol) ethyl[-3-(N-gly)amino-3-(3,5-dijod-2-hydroxyfenyl)propionát]hydrochloridu, a následně 1,45 ml N-methylmorfolinu. Reakční směs se. míchala 18 h při teplotě místnosti. Reakční směs se odpařila, odparek se rozpustil ve 20 ml směsí tetrahydrofuranu a vody v poměru 1:1 a podrobil se chromatografii (reverzní fáze, během. 60 min, směs vody a acetonitrilu v poměru 95:5 až směs vody a acetonitrilu s obsahem kyseliny trifluoroctové 0,1 % v poměru 30:70). Spojené frakce se odpařily. Odparek se rozpustil ve směsi acetonitilu a vody a přidával se hydroxid lithný, dokud se pH nepřevedlo na zásaditou stranu. Roztok se míchal 2 h. Reakční směs se odpařila a čistila způsobem uvedeným výše, chromatografií HPLC, aby se obdržela požadovaná kyselina jeko trifluoracetátová sůl. Trifluoracetátová- sůl se převedla na odpovídající hydrochloridovou sůl projitím iontoměničovou kolonou a následnou lyofilizací.

¹H NMR byla shodná s požadovaným produktem.

PŘÍKLADY 14 až 18

Sloučeniny obecných vzorců VII, VIII, IX, XIII a XIV a jejich izomery se mohou připravit na tomto místě uvedeným

způsobem s nahrazením reakčních činidel, jak v oboru.

příslušných bude ' zřejmé výchozích průměrnému látek a odborníkovi

Účinnost sloučenin podle tohoto vynálezu se testovala dále uvedenými zkouškami. .Výsledky testování ve. zkouškách jsou shrnuty v tabulce 1.

ADHEZNÍ ZKOUŠKY S VITRONEKTINEM

Materiály

Lidský receptor pro vitronektin se izoloval z lidské placenty, jak bylo dříve popsáno /Pytela a kol., Methods in Enzymology, 144, 475 - 489 (1987)/. Lidský vitronektin se izoloval z čerstvě zmrazené plazmy, jak bylo dříve popsáno /Yatohgo a kol., Cell. structure and function, 13, 281 - 292 (1988)/. Lidský biotinylovaný vitronektin se připravil kondenzací NHS-biotinu získaného od společnosti Píerce Chemical Company (Rockford, II) s izolovaným vítronektinem, jako bylo popsáno dříve /Charo a kol., J. Biol’. Chem., 266 (3), 1415 - 1421 (1991)/. Testovací puf.r, tablety substrátu OPD a BSA jakosti RIA se získaly od Sigma (St. Louis, MO) . Antibiotinová protilátka se získala od Calbiochem (La Jolla, CA) . Mikrotitrační plotny Linbro se získaly od Flow Labs (McLean, VA) . Reakční činidlo ADP se získalo od Sigma (St. Louis, MO).

Způsoby

Receptorové zkoušky s pevnou fází

Toto zkoušení je v podstatě shodné s dříve publikovaným /Niiya a kol., Blood,’ 70, 475 - 483 (1987)/. Čištěný lidský receptor pro vitronektin (α_νβ3) v roztoku chloridu sodného

pufrovaném TRIS-pufrem obsahujícím 1,0 mM Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ a Mn⁺⁺, s hodnotou pH = 7,4 (TBS⁺⁺⁺j se tředil ze zásobních roztoků na obsah 1,0 g/ml. Zředěný receptor se ihned přenesl na mikrotitrační plotny Linbro v množství 100 μΐ. na jamku (100 ng receptoru/jamka). Plotny se uzavřely a inkubovaly při teplotě 4 °C přes noc, aby se umožnila vazba receptoru na 'jamky. Všechny zbývající kroky se provedly při teplotě místnosti. Testovací plotny se vyprázdnily a přidalo se 200 μΐ 1% BSA jakosti RIA v TBS⁺⁺⁺ (TBS⁺⁺⁺/BSA) , aby se blokovaly exponované plastové povrchy. Po 2 h kultivace se testovací plotny promyly TBS⁺⁺⁺ za použití promývače desky s 96 'jamkami.’ Logaritmickým sériovým ředěním testované kontrol/ sé vyrobil výchozí roztok v zásobní 2<mM i s použitím 2 nM biotinylovaného sloučeniny a koncentraci vitronektinu v TBS⁺⁺⁺/BSA jako ředidla. Toto . předmísení značeného ligandu s testovaným (nebo/kontrolním) - ligandem a postupný přenos alikvotních 50 μΐ na testovací plotnu se provedlo automatem CETUS Properte, konečná koncentrace značeného .ligandu byla 1 nM a nejvyšší koncentrace testované sloučeniny byla 1,0 x 10~⁴ M. Po kompetici trvající 2 h se všechny jamky promyly promývačem desky, jak. se uvádí dříve. Antibiotinová kozí protilátka značená křenovou peroxidázou ocítěnou od afinity se zředila 1:3000 v TBS⁺⁺⁺/BSA a do každé jamky se přidalo 125 μΐ. Po 30 min se plotny promyly a inkubovaly substrátem OPD/H₂O ve 100 mM/Ι citrátového pufru s hodnotou pH = 5,0. Plotna se detekovala detektorem pro mikrotitrační plotnu při vlnové délce 450 nm a při dosažení hodnoty, absorbance kontrolních jamek s maximální vazbou přibližně 1,0 se zaznamenala konečná A₄₅₀ pro analýzu. Údaje se analyzovaly použitím programu makro napsaného k použití s programem EXCEL. Pro dvojí koncentrace se stanovila průměrná · hodnota, standardní odchylka a % CV. Průměrné hodnoty A₄₅o se normalizovaly na průměrnou hodnotu ze 4 kontrol s maximální vazbou (bez přidání kompetitoru) jako BMAX. Normalizované hodnoty se ' podrobily čtyřparametrové

• · • · • · • · · · 1 algoritmické aproximaci křivky /Rodbař a kol., Int. Atomic Energy Agency, Vídeň, str. 469 (1977)/, sestavené v semilogaritmickém měřítku a vypočítaná koncentrace odpovídající 50% inhibici maximální vazby biotinylovaného vitronektinu (IC50) a odpovídající R² se zaznamenaly pro sloučeniny projevující větší než 50% inhibici v největší testované koncentraci, neboli se zaznamená IC50, která je větší než nejvyšší testovaná koncentrace. Kyselina β—[/2—

-([5-[(aminoíminomethyl)amino]-l-oxopentyl]amino)-1-oxoethyl/amino]-3-pyridinpropanová (USSN 08/375 338, příklad 1) , která je potenciálním antagonistou α_νβ3 (ICs₀ v rozmezí 3 až 10 nM) , byla na každé plotně obsažena jako pozitivní kontrola.

ZKOUŠKY IZOLOVANÉHO RECEPTORU Ib/IIIa

Materiály

Lidský receptor pro fibrinogen (αι^ββ) se izoloval ze starých· krevních destiček /Pytela R., Pierschbacher M. D,., Argraves S., Suzuki S. a Rouslahtí E., Arginine-Glycine-Aspartic acid adhesion receptors, v Methods in Enzymology, 144, 475 -'489 (1987)/. Lidský vitronektin se izoloval z čerstvě zmrazené plazmy, jak popsal Yatohgo T., Izumi M., Kashiwagi H. a Hayashi M., Novel purification of vitronektin from human plasma by heparin affinity chromatography, v Cell Structure and Function, 13, 281 - 292 (1988) . Lidský biotinylovaný vitronektin se připravil kondenzací NHSbiotinu od společnosti Pierce Chemical Company (Rockford, II) s izolovaným vitronektinem, jako.je popsáno dříve ýCharo I. F. , Nannizzi L., Phillips D. R., Hsu M. A., Scaround bottomorough R. M., Inhibition of fibrinogen binding to GP Ilb/IIIa a GP lila peptide, v J. Biol. Chem., 266 (3), 1415 - 1421 (1991)/. Testovací pufr, tablety substrátu OPD a

-l/L·

BSA jakosti RIA se získaly od Sigma (St. Louis, MO) . Antibiotinová protilátka se získala od Cal-biochem (La Jolla, CA) , Mikrotitrační plotny Linbro se získaly od Flow Labs (McLean, VA) . Reakční činidlo ADP se získalo od Sigma (St. Louis, MO).

Způsoby

Receptorové .zkoušky s pevnou fází

Toto zkoušení je v podstatě shodné s dříve publikovaným /Niiya K., Hodson E., Bader R., Byers-Ward V., Koziol J. A., Plow E. F. a Ruggeri- Z. M., Increased surface expression of the membrane glycoprotein Ilb/IIIa complex induced by platelet activation: Relationships to the binding of fibrinogen and palateled agregation v Blood, 7 0, ~

483 (1987)/. Čištěný.lidský receptor pro fibrinogen (QTibPs) se v roztoku chloridu sodného pufrovaném TRIS-pufrem obsahujícím 1,0 mM Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ a Mn⁺⁺ s hodnotou pH = 7,4 (TBS⁺⁺⁺) zředil ze zásobních roztoků na obsah 1,0 pg/ml.. Zředěný receptor se ihned přenesl na mikrotitrační plotny Linbro v koncentraci 100 μΐ na jamku (100 ng receptoru/jamka). Plotny se uzavřely a inkubovaly, při teplotě 4 °C přes noc, aby se umožnila vazba receptoru na jamky. Všechny zbývající kroky se provedly při teplotě místnosti. Testovací plotny se vyprázdnily a přidalo se 200 μΐ 1% BSA jakosti RIA v TBS⁺⁺⁺ (TBS⁺⁺⁺/BSA) , aby se blokovaly exponované plastové povrchy. Po 2 h‘ kultivace se testovací plotny, promyly TBS⁺⁺⁺ použitím promývače plotny s 96 jamkami. Logaritmickým sériovým ředěním testované sloučeniny a kontrol se vyrobil výchozí roztok v zásobní koncentraci 2 mM s použitím 2 nM biotinylovaného vitronektinu v TBS⁺⁺⁺/BSA .jako ředidla. Toto předmísení značeného ligandu s testovacím (nebo kontrolním) ligandem a postupný přenos alikvotních 50 μΐ na testovací plotnu se provedlo automatem CETUS Propette, značeného ligandu byla 1 nM a nejvyšší koncentrace testované sloučeniny byla 1,0 x 10~⁴ M. Po kompetici trvající 2 h se všechny jamky promyly promývačem plotny, jak se uvádí dříve. Antibiotinová kozí protilátka značená křenovou peroxidázou ocítěnou od afinity se zředila 1:3000 v TBS⁺⁺⁺/BSA a do každé jamky se přidalo 125 μΐ. Po 30 min se plotny promyly a inkubovaly substrátem ODD/H2O2 ve 100 mM/1 citrátového pufru s hodnotou pH = 5,0. Plotna se detekovala detektorem pro mikrotitrační plotnu při vlnové délce 450 nm a při dosažení hodnoty absorbance kontrolních jamek s maximální vazbou přibližně 1,0 se zaznamenala konečná A450 pro analýzu. Údaje se analyzovaly použitím programu makro napsaného k použití s programem EXCEL. Pro dvojí koncentrace se průměrná hodnota, standardní odchylka a % CV.

hodnoty A450 se normalizovaly na průměrnou hodnotu ze 4 kontrol s maximální vazbou (bez přidání kompetitoru) jako BMAX. Normalizované hodnoty se podrobily čtyřparametrové algoritmické aproximaci křivky /Rodbard a kol., Int. Atomic Energy Agency, Vídeň, str. 469 (1977)/, v semilogaritmickém měřítku a vypočítaná odpovídající 50% inhibicí maximální vazby biotinylovaného vitronektinu (IC50) a odpovídající R² se zaznamenala pro sloučeniny projevující větší než 50% inhibicí v největší testované koncentraci, neboli se zaznamená IC50, která je větší než nejvyšší testovaná koncentrace. Kyselina β—[/2— —([5—[(aminoiminomethyl)amino]-1-oxopentyl]-amino)-1-oxoethyl/amino]-3-pyridinpropanová (USSN 08/375 338, příklad 1) , která je potenciálním antagonistou α_νβ3 (IC50) v rozmezí 3 až 10 nM, byla na každé plotně obsažena jako pozitivní kotrola.

stanovila

Průměrné •ΐ¹ sestavené koncentrace

ZKOUŠKY PLASMY BOHATÉ NA LIDSKÉ KREVNÍ DESTIČKY

Ze souboru dobrovolníků se vybrali zdraví dárci, kteří neužívali aspirin. Kultivace plazmy bohaté na krevní destičky a postupné zkoušky agregace destiček indukované ADP se provedly způsobem, jaký popsal Zucker Μ. B., Platelet Aggregation Measured by the Photometric Method v Methods in Enzymology, 169, 117 - 133 (1989). . Standardní způsoby venepunkce s použitím škrtidla umožnily odebrání 45 ml kompletní krve do 60ml injekční stříkačky s obsahem 5 ml 3,8% citrátu sodného. Po důkladném promísení obsahu stříkačky se nesrážlivá kompletní krev přenesla do 50ml kónické polyethylenové zkumavky. Krev se odstřeďovala 12 min při teplotě místnosti při rychlosti 200 x mg, aby sedimentovaly nedestičkové buňky. Plazma bohatá na destičky se oddělila do polyethylenové zkumavky a do použití se skladovala při teplotě místnosti. Plazma bez krevních destiček se obdržela po druhém odstřeďování zbylé krve. po dobu 15 min při 2000 x g. Obvykle je počet destiček od 300 000 do 500 000 na mikrolitr. 0,45 ml plazmy bohaté na krevní destičky se před přidáním 50 μΐ předem zředěné testované sloučeniny rozdělilo do silikonizovaných kyvet a míchalo 1 min při teplotě 37 °C frekvencí otáček 1100 za min. Po 1 min míšení se započala agregace přidáním 50 μΐ 200μΜ ADP. Agregace se zaznamenávala 3 min na Paytonově agregometru s duplexním kanálem (Payton Scientific, Buffalo, . New York) . Ke stanovení křivky odpovědi na dávku se použila procenta inhibice maximální odpovědi (kontrola roztok chloridu sodného) pro řadu ' ředění testované sloučeniny. Všechny sloučeniny se testovaly dvakrát· a- koncentrace poloviční maximální inhibice (IC50) se spočítala graficky z křivky odpovědi na dávku pro ty sloučeniny, které projevily 50% nebo vyšší inhibici v nejvyšší testované koncentraci, neboli se zaznamená IC50 ,která je větší než nejvyšší testovaná koncentrace.

Tabulka 1 ·* ·«·· ·· • ·* «· ·· · · · · • · · · · • * · · · · • · · · · e ·» ·· ··

Tabulka 1

Příklad	0ívp3 IC₅₀ (nM)	Ilb/IIIa IC₅₀ (nM)
1	0,88 '	310
2	1,04	430
3	23,7	2440
4	2,02	575
5	2,13	744
.6	^; .. 6,46	919
• 7 · ’.	1,01	262
8	.> 0,40	131
9	. 0,37	338
9. HC I	0,82	. 226,2
........10....	......... 9 9 6	. 641

11	-	—
12	9,59	1060.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1·. Sloučenina obecného vzorce ve kterém

X a Y představují stejný nebo rozdílný atom halogenu, .R představuje atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu,

a. g.ej.í-.farmaceu.ticky*.-p-ř-ig^telné -soli·.—. - ______: —_____________________

2. Sloučenina podle nároku 1 zvolená ze skupiny zahrnující i

CT ve kterých

R představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli

3. Sloučenina podle nároku 1 zvolená ze skupiny zahrnující

101 .9

i.

í '£

4. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že zahrnuje terapeuticky účinné množství sloučeniny podle nároku 1 a farmaceuticky přijatelnou nosnou látku.

5. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že zahrnuje terapeuticky účinné množství sloučeniny podle nároku. 2 a farmaceuticky přijatelnou nosnou látku.

6. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že zahrnuje terapeuticky účinné množství sloučeniny podle nároku 3 a farmaceuticky přijatelnou nosnou látky.

7. . Způsob léčby stavů zprostředkovaných integrinem α_νβ₃ u savce potřebujícího takovou léčbu, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství inhibujícího α_νβ₃ sloučeniny podle nároku 1.

8.

•Způsob léčby stavů zprostředkovaných integrinem

102 oí_vp3 u savce potřebujícího takovou léčbu, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství inhibujícího α_νβ₃ sloučeniny podle nároku 2.

9. Způsob léčby stavů zprostředkovaných integrínem α_νβ3 u savce potřebujícího takovou léčbu, vyznačující ί-s se tím, že zahrnuje podání účinného množství inhibujícího

-· α_νβ3 sloučeniny podle nároku 3.

(» ·

-

10.. Způsob podle nároku 7 vyznačující se tím, že ..léčeným stavem je nádorová metastáza.

11. Způsob podle nároku 8 vyznačující se tím, --•že—léěeným~s-t'avem“je“ná'db^byá^meiřašť'á'za7“ ~ ~ '

12. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, ž,e léčeným stavem je nádorová metastáza.

13. Způsob podle nároku 7 vyznačující se tím, že léčeným stavem je růst pevného nádoru.

14. .Způsob podle nároku 8 vyznačující se tím, že léčeným stavem.je růst pevného nádoru.

15. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, že léčeným stavem je růst pevného nádoru.

4' řt·

103

4· ·· • 4 4 4 4 4 · 4 4 • • 4 4 · • 4 4. • • • * 4 -4 • 4 4e i· 4 4 4· • 4 · • 4 4 ·

16. Způsob podle nároku 7 vyznačující se tím, že léčeným stavem.je angiogeneze.

17. Způsob podle nároku 8 vyznačující se tím, že léčeným stavem je angiogeneze.

<

íjb

18. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, že léčeným stavem je angiogeneze.

í ·

19. Způsob podle, nároku 7 vyznačující se tím, že léčeným stavem je osteoporóza.

20. Způsob podle nároku 8 vyznačující se tím, že léčeným stavem je osteoporóza.

21. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, že léčeným stavem je osteoporóza.

22. Způsob, podle nároku 7 vyznačující se tím, že léčeným stavem je humorální hyperkalcémie při malignitě.

23. Způsob podle nároku 8 vyznačující se tím, že léčeným stavem je humorální hyperkalcémie při malignitě.

24. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, že léčeným stavem' je humorální hyperkalcémie při malignitě.

104 ·· ··

I · · ♦ • · · . · · · · • · · » · · · · · ► · ··.· • · · • · ·

25. Způsob podle nároku 7 vyznačující se tía, že léčeným stavem je migrace buněk hladkého svalstva.

26. Způsob podle nároku 8 vyznačující se tím, že léčeným stavem je migrace buněk hladkého svalstva.

27. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, že léčeným stavem je migrace buněk hladkého svalstva.

28. Způsob podle nároku 7 vyznačující se tím, že se inhibuje restenóza. ·.·..

29. Způsob podle nároku 8 vyznačující se tím, že se inhibuje restenóza.

30. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, že se inhibuje restenóza.

31. Způsob podle nároku 7 vyznačující se tím, že léčeným stavem je revmatoidní artritida.

32. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že léčeným stavem je revmatoidní artritida.

33. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím,

105

KČ

V \ •4-> ' ·.

II 44 • 4 4

4 4 4 že léčeným stavem je revmatoidní artritida.

34. Způsob podle nároku 7 vyznačující se tím, že léčeným stavem je makulární degenerace.

35. Způsob podle nároku 8 vyznačující se tím, že léčeným stavem je makulární degenerace.

36.. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, že léčeným stavem je makulární degenerace.·