PT889875E - Derivados de acidos ciclopropilalcanoicos - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE ÁCIDOS CICLOPROPILALCANÓICOS" A presente invenção relaciona-se com agentes farmacêuticos (compostos) que são úteis como antagonistas ou inibidores de integrina ανβ3 e como tal são úteis em composições farmacêuticas.

Antecedentes da Invenção

Integrinas são um grupo de glicoproteínas da superfície celular que mediam a adesão celular e portanto são mediadores úteis das interacções de adesão celular que ocorrem durante vários processos biológicos. Integrinas são heterodímeros compostos por sub-unidades de polipeptídeo α e β ligados de modo não covalente. Até ao momento foram identificadas sete sub-unidades α diferentes e foram identificadas seis sub-unidades β diferentes. As várias sub-unidades α podem combinar-se com as várias sub-unidades β para formar integrinas distintas. A integrina identificada como ανβ3 (também conhecida como o receptor vitronectina) foi identificada como uma integrina que desempenha um papel em vários patologias ou estados de doença incluído tumor metastático, tumor sólido em crescimento (neoplasia), osteoporose, doença de Paget, hipercalcémia humoral maligna, angiogénese, incluindo angiogénese tumoral, retinopatia, artrite, incluindo artrite reumatóide, doença periodontal, psoríase e migração de células de músculo liso (e.g. restenosis). Para além disso, verificou-se que tais agentes seriam úteis como antivirais, antifungicos e antibacterianos. -2-

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Portanto, tais compostos que selectivamente inibem ou antagonizam ανβ3 seriam benéficos para tratar tais patologias.

Foi demonstrado que a integrina ανβ3 e outro av contendo integrinas ligadas a um número de Arg-Gli-Asp (RGD) contendo matrizes macromoleculares. Compostos contendo a sequência RGD mimetizam ligandos de matriz extracelular de modo a ligar-se a receptores de superfície celular. No entanto, também é sabido que peptídeos RGD em geral são não selectivos para integrinas dependentes de RGD. Por exemplo, a maior parte dos peptídeos RGD que se ligam a ανβ3 também se ligam a ανβ5, ανβι e 011^3. Sabe-se que o antagonista cxm,P3 de plaquetas (também conhecido como receptor fibrinogeno) bloqueia a agregação de plaquetas em seres humanos. De modo a evitar os efeitos secundários de hemorragia quando se tratam os estados de situação ou doença associados com a integrina ανβ3, seria benéfico desenvolver compostos que são antagonistas selectivos de ανβ3 em oposição a αιη,β3· A invasão de células tumorais ocorre por um processo em três passos: 1) ligação das células tumorais à matriz extracelular; 2) dissolução proteolítica da matriz; e 3) movimento das células através da barreira dissolvida. Este processo pode ocorrer repetidamente e pode resultar em metástases em locais distantes do tumor original.

Seftor et al. (Proc. Natl. Acad. Sei. USA, Vol. 89 (1992) 1557-1561) demostraram que a integrina ανβ3 tem uma função biológica na invasão de células de melanoma. Montgomery et al., (Proc. Natl. Acad. Sei. USA, Vol. 91 (1994) 8856-60) demonstraram que a integrina ανβ3 expressa em células de melanoma humano promove um sinal de sobrevivência, protegendo as células de apoptose. Será benéfica a mediação da via de metástase das células tumorais por interferência com o receptor de adesão celular integrina ανβ3 para impedir a metástase tumoral. -3-

Brooks et al. (Cell, Vol. 79 (1994) 1157-1164) demonstraram que antagonistas de ανβ3 fornecem uma aproximação terapêutica para o tratamento de neoplasia (inibição de crescimento de tumor sólido) uma vez que a administração sistémica de antagonistas de ανβ3 causa uma drástica regressão de vários tumores humanos histologicamente distintos. O receptor de adesão integrina ανβ3 foi identificado como um marcador de vasos sanguíneos angiogénicos em animais de capoeira e seres humanos e portanto este receptor tem um papel crítico na angiogénese ou neovascularização. Angiogénese é caracterizada pela invasão, migração e proliferação de células de músculo liso e endoteliais. Antagonistas de ανβ3 inibem este processo por promoção selectiva de apoptose de células em neovasculatura. O crescimento de novos vasos sanguíneos, ou angiogénese, também contribui para patologias tal como retinopatia diabética (Adónis et al., Amer. J. Ophthal., Vol. 118, (1994) 445-450) e artrite reumatóide (Peacock et al., J. Exp. Med., Vol. 175, (1992), 1135-1138). Portanto, antagonistas de ανβ3 serão alvos terapêuticos benéficos para tratar tais patologias associadas com neovascularização (Brooks et al., Science, Vol. 264, (1994), 569-571).

Foi relatado que o receptor de superfície celular ανβ3 é a integrina mais importante no osteoclasto responsável pela ligação ao osso. Osteoclasto causa reabsorção óssea e quando tal actividade de reabsorção óssea excede a actividade de formação óssea resulta em osteoporose (uma perda de massa óssea), que conduz a num aumento do número de ffacturas ósseas, incapacidade e aumento da mortalidade. Mostrou-se que antagonistas de ανβ3 são potentes inibidores da actividade ostoclástica tanto in vitro [Sato et al., J. Cell. Biol., Vol. 111 (1990) 1713-1723] como in vivo [Ficher et al., Endocrinology, Vol. 132 (1993) 1411-1413]. Antagonismo de ανβ3 conduz à diminuição de reabsorção -4- (Μη

óssea e portanto restaura um balaço normal da actividade de formação e reabsorção óssea. Deste modo será benéfico estabelecer antagonistas de osteoclasto ανβ3 que são inibidores eficazes de reabsorção óssea portanto são úteis no tratamento ou prevenção da osteoporose. O papel da integrina ανβ3 na migração celular do músculo liso também o toma um alvo terapêutico para a prevenção ou inibição de hiperplasia neointimal que é uma das principais causas de restenosis após intervenções vasculares (Choi et al., J. Vasc. Surg. Vol. 19(1) (1994) 125-34). Prevenção ou inibição de hiperplasia neointimal por agentes farmacêuticos para prevenir ou inibir restenosis seria benéfica.

White (Current Biology, Vol. 3(9) (1993) 596-599) relatou que adenovims utiliza ανβ3 para entrar nas células hospedeiras. A integrina surge como sendo necessária para a endocitose da partícula de vírus e pode ser necessária para penetrar no genoma virai no citoplasma da célula hospedeira. Assim compostos que inibem ανβ3 são considerados inúteis como agentes anti virais.

Sumário da Invenção

A presente invenção relaciona-se com uma classe de compostos representada pela Fórmula I

A

Z1 Z2 z< __ R50 Λ

(CH2)i~COR

-5- ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que A é Y*

N—R7 I Re em que Y1 é seleccionado do grupo constituído por N-R2,0, e S; R2 é seleccionado do grupo constituído por H; alquilo; arilo; hidroxi; alcoxi; ciano; nitro; amino; aminocarbonilo; alquenilo; alquinilo; alquilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de alquilo de baixo peso molecular, halogéneo, hidroxilo, halogenoalquilo, ciano, nitro, carboxilo, amino, alcoxi, arilo ou arilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, alquilo de baixo peso molecular, alcoxi, ciano, alquilsulfonilo, alquiltio, nitro, carboxilo, amino, hidroxilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos, ou heterociclicos monocíclicos fundidos; arilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, hidroxi, alquilo de baixo peso molecular, alcoxi, metilenodioxi, etilenodioxi, ciano, nitro, alquiltio, alquilsulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, derivados carboxílicos, amino, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos e heterociclos monocíclicos fundidos; heterociclos monocíclicos; e heterociclos monocíclicos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, alquilo de baixo peso molecular, alcoxi, amino, nitro, hidroxi, derivados carboxílicos, ciano, alquiltio, alquilsulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo ou arilo fundido; ou -6-

R2 considerado em conjunto com R7 forma um heterociclo de 4-12 membros contendo um azoto opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados do grupo constituído por alquilo de baixo peso molecular, hidroxi e fenilo; ou R2 considerado em conjunto com R7 forma um anel heteroaromático de 5 membros; ou R2 considerado em conjunto com R7 forma um anel heteroaromático de 5 membros fundido com um grupo fenilo; R7 (quando não considerado em conjunto com R2) e R8 são independentemente seleccionados do grupo constituído por H; alquilo; alquenilo; alquinilo; aralquilo; cicloalquilo; bicicloalquilo; arilo; acilo; benzoílo; alquilo opcionalmente substiuído com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo de baixo peso molecular, halogéneo, hidroxi, halogenoalquilo, ciano, nitro, derivados carboxílicos, amino, alcoxi, tio, alquiltio, sulfonilo, arilo, aralquilo, arilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, alquilo de baixo peso molecular, alcoxi, metilenodioxi, etilenodioxi, alquiltio, haloalquiltio, tio, hidroxi, ciano, nitro, derivados carboxílicos, ariloxi, amido, acilamino, amino, alquilamino, dialquilamino, trifluoroalquiloxi, trfluorometil, sulfonil, alquilsulfonil, halogenoalquilsulfonil, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos, heterociclos monocíclicos fundidos; arilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, alquilo de baixo peso molecular, alcoxi, metilenodioxi, etilenodioxi, alquiltio, halogenoalquiltio, tio, hidroxi, ciano, nitro, derivados carboxílicos, ariloxi, amido, acilamino, amino, alquilamino, -7-

dialquilamino, trifluoroalquiloxi, trifluorometilsulfonilo, alquilsulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos, ou heterociclos monocíclicos fundidos; heterociclos monocíclicos; heterociclos monocíclicos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, alquilo de baixo peso molecular, alcoxi, ariloxi, amino, nitro, hidroxi, derivados carboxílicos, ciano, alquiltio, alquilsulfonilo, arilo ou arilo fundido; heterocicloalquilos monocíclicos e bicíclicos; -SO2R10 em que R10 é seleccionado do grupo constituído por alquilo, arilo, e heterociclos monocíclicos, todos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados do grupo constituído por halogéneo, halogenoalquilo, alquilo, alcoxi, ciano, nitro, amino, acilamino, trifluoroalquilo, amido, alquilaminossulfonilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonilamino, alquilamino, dialquilamino, trifluorometiltio, trifluoroalcoxi, trifluorometilsulfonilo, arilo, ariloxi, tio, alquiltio, e heterociclos monocíclicos; e

O 11 C R10 em que R10 é definido acima; ou NR7 e R8 considerados em conjunto formam um anel monocíclico ou bicíclico de 4-12 membros contendo um azoto opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de alquilo de baixo peso molecular, derivados carboxílicos, arilo ou hidroxi e em que o referido anel contem opcionalmente um heteroátomo seleccionado do grupo constituído por O, NeS; R5 é seleccionado do grupo constituído por H, alquilo, alquenilo, alquinilo, benzilo, e fenetilo; ou -8-

RS 1/ΐΛη em que Y2 é seleccionado do grupo constituído por alquilo; cicloalquilo; bicicloalquilo; arilo; heterociclos monocíclicos; alquilo opcionalmente substituído com arilo que pode também ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, alquilo, nitro, hidroxi, alcoxi, ariloxi, arilo, ou arilo fundido; arilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, arilo, arilo fundido, nitro, metilenodioxi, etilenodioxi, ou alquilo; alquinilo; alquenilo; -S-R9 e -O-R9 em que R9 é seleccionado do grupo constituído por H; alquilo; aralquilo; arilo; alquenilo; e alquinilo; ou R9 considerado em conjunto com R7 forma um anel heterocíclico de 4-12 membros contendo um azoto contendo enxofre ou oxigénio; e R5 e R7 são como definido acima; ou Y2 (quando Y2 é carbono) considerado em conjunto com R7 forma um anel de 4-12 membros contendo um azoto opcionalmente substituído com alquilo, arilo ou hidroxi; Z1, Z2, Z4 e Z5 são independentemente seleccionados do grupo constituído por H; alquilo; hidroxi; alcoxi; ariloxi; arilalquiloxi; halogéneo; halogenoalquilo; halogenoalcoxi; nitro; amino; aminoalquilo; alquilamino; dialquilamino; ciano; alquiltio; alquilsulfonilo; derivados carboxílicos; aceta-mida; arilo; arilo fundido; cicloalquilo; tio; heterociclos monocíclicos; heterociclos monocíclicos fundidos; e A, em que A é definido acima; B é seleccionado do grupo constituído por -CH2CONH-, -CONH- -9-

(CH2)p-, -CONR11-, -NHCO-(CH2)n-, -C(0)0-, e -SO2NH-, em que p é um número inteiro seleccionado do grupo constituído por 0, 1 e 2; em que R11 é seleccionado do grupo constituído por H, alquilo, alquenilo, alquinilo, benzilo e fenetilo; em que n é um número inteiro seleccionado do grupo constituído por 0, 1,2 e 3; 1 é um número inteiro 0, 1, 2, ou 3; t é um número inteiro 0,1 ou 2; R50 é seleccionado do grupo constituído por H, alquilo e arilo; R é X-R3 em que X é seleccionado do grupo constituído por O, S e NR4, em que R3 e R4 são independentemente seleccionados do grupo constituído por hidrogénio; alquilo; alquenilo; alquinilo; halogenoalquilo; arilo; ariloalquilo; açucares; esteróides; e no caso do ácido livre todos os seus sais farmaceuticamente aceitáveis Y3 e Z3 são independentemente seleccionados do grupo constituído por H, alquilo, arilo, cicloalquilo e aralquilo; R1 é seleccionado do grupo constituído por hidrogénio; alquilo; amino;

O II o

—N—C—R12, -NH-C—O—R12, -NHSO2-R12. H 00 íl —C-R13, -C-OR13, -SO2R13. -C-NHR», o II o

II s II o s —C-S-R13· and -C-NHR13; U**j R12 é seleccionado do grupo constituído por H, alquilo, cicloalquilo, alquilarilo e arilo; R51 é seleccionado do grupo constituído por pirrolidinilo, piperidinilo e morfolinilo N-substituídos; R13 é seleccionado do grupo constituído por hidrogénio; alquilo; alquenilo; alquinilo; arilo; derivados carboxílicos; halogenoalquilo; heterociclos monocíclicos; heterociclos monocíclicos opcionalmente substituídos com alquilo, halogéneo, halogenoalquilo, ciano, hidroxi, arilo, arilo fundido, nitro, alcoxi, ariloxi, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, sulfonamida, tio, alquiltio, derivados carboxílicos, amino, amido; alquilo opcionalmente substituído com halogéneo, halogenoalquilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, tio, alquiltio, ariltio, alquilsulfóxido, alquilsulfonilo, arilsulfóxido, arilsulfonilo, ciano, nitro, amino, alquilamino, dialquilamino, alquilsulfonamida, arilsulfonamida, acilamida, derivados carboxílicos, sulfonamida, ácido sulfónico, derivados de ácido fosfónico, derivados de ácido fosfmico, arilo, ariltio, arilsulfóxido, ou arilsulfona toda opcionalmente substituída no anel arilo com halogéneo, halogenoalquilo, ciano, nitro, hidroxi, derivados carboxílicos, alcoxi, ariloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, amido, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos; e heterociclos monocíclicos fundidos, tio-heterociclo monocíclico, sulfóxido-heterociclo monocíclico, e sulfona-heterociclo monocíclico, que pode ser opcionalmente substituído com halogéneo, halogenoalquilo, nitro, hidroxi, alcoxi, arilo fundido, ou alquilo; arilo opcionalmente substituído numa ou mais posições com halogéneo, halogenoalquilo, alquilo, alcoxi, ariloxi, metilenodioxi, etilenodioxi, - 11 - yuu alquiltio, halogenoalquiltio, tio, hidroxi, ciano, nitro, derivados carboxílicos, amido, acilamino, amino, alquilamino, dialquilamino, trifluoroalcoxi, trifluorometilsulfonilo, alquilsulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilfimdido, heterociclos monocíclicos e heterociclos monocíclicos fundidos; í? βτ

—C-N NRa n em que R7 e R8 são como definido acima e desde que considerados em conjunto com o azoto, R7 e R8 compreendem um aminoácido.

Compostos preferidos são aqueles que estão de acordo com a fórmula anterior em que t é 0; aqueles da fórmula seguinte e entre esses aqueles em que 1 é 0 e especialmente em que B é -CONH-(CH2)p com p=0 ou 1, e especialmente entre esses aqueles em que R50, R1 são H e especialmente em que R é hidroxi ou alcoxi e aqueles dos exemplos 1-9 seguintes (como tal ou os seus sais). A invenção também compreende composições farmacêuticas de tais compostos e a sua utilização na preparação de medicamentos para o tratamento de patologias medicadas com integrina ανβ3 e.g. como se descreve a seguir.

Outro dos objectivos desta invenção consiste na obtenção de composições farmacêuticas compreendendo compostos de Fórmula I. Tais compostos e composições são úteis na inibição ou no antagonismo em relação à integrina ανβ3 de um modo selectivo e portanto noutra forma de realização específica a presente invenção relaciona-se com o sua utilização na preparação de um medicamento para o tratamento das patologias relacionadas com a inibição ou o antagonismo selectivo da integrina ανβ3· A sua utilização também envolve tratamento ou inibição de condições patológicas associadas com elas tal como osteoporose, hipercalcémia humoral maligna, doença de Paget, metástases tumorais, crescimento de tumor sólido (neoplasia), angiogénese, incluindo angiogénese tumoral, retinopatia, incluindo retinopatia diabética, artrite, -12- (ΑΛη ^ incluindo artrite reumatóide, doença periodontal, a psoríase, migração de células de músculo liso, e restenosis num mamífero que necessite deste tratamento. Para além disso, tais agentes farmacêuticos são úteis como agentes antivirais, e antibacterianos.

Descrição Detalhada A presente invenção relaciona-se com uma classe de compostos representados pela Fórmula I, descrita acima.

Uma forma de realização preferida da presente invenção é um composto de Fórmula II

Outra forma de realização preferida da presente invenção é um composto de Fórmula III

Outra forma de realização preferida da presente invenção é um composto de Fórmula IV - 13 - - 13 -

ί>^7 Ζ5

Outra forma de realização preferida da presente invenção é um composto de Fórmula V 25

A invenção também está relacionada com composições farmacêuticas contendo quantidades terapeuticamente eficazes dos compostos de Fórmulas I-V. A invenção também está relacionada com a utilização para preparar um medicamento para inibição ou antagonismo selectivo da integrina ayB3 e mais especificamente relaciona-se com um método de inibição da reabsorção óssea, doença periodontal, osteoporose, hipercalcémia humoral maligna, doença de Paget, metástase tumoral, crescimento de tumor sólido (neoplasia), angiogénese, incluindo angiogénese tumoral, retinopatia, incluindo retinopatia diabética, artrite, incluindo artrite reumatóide, migração de células de músculo liso, e restenosis por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmulas I-V para atingir tal inibição em conjunto com um - 14- Ι/Λη veículo farmaceuticamente aceitável.

Segue-se uma lista de definições de vários termos aqui utilizados:

Como são aqui utilizados, os termos "alquilo" ou "alquilo de baixo peso molecular" refere-se a radicais hidrocarboneto de cadeia ramificada ou cadeia linear tendo desde 1 até 10 átomos de carbono, e mais preferencialmente de 1 até 6 átomos de carbono. Exemplos de tais radicais alquilo são metilo; etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, pentilo, neopentilo, hexilo, isohexilo, e outros semelhantes.

Como são aqui utilizados os termos "alquenilo" ou "alquenilo de baixo peso molecular" refere-se a radicais hidrocarboneto acíclico insaturado contendo pelo menos uma ligação dupla e 2 até 6 átomos de carbono, ligação dupla carbono-carbono que pode ter geometria çis ou trans dentro da ffacção alquenilo, relativamente aos grupos substituídos nos carbonos da dupla ligação. Exemplos de tais grupos são etenilo, propenilo, butenilo, isobutenilo, pentenilo, hexenilo e outros semelhantes.

Como são aqui utilizados os termos "alquinilo" ou "alquinilo de baixo peso molecular" refere-se a radicais hidrocarboneto acíclico contendo uma ou mais ligações triplas e 2 até 6 átomos de carbono. Exemplos de tais grupos são etinilo, propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo e outros semelhantes. O termo "cicloalquilo" como é aqui utilizado significa radicais carbono cíclicos parcialmente insaturados ou saturados contendo de 3 até 8 átomos de carbono e mais preferencialmente de 4 até 6 átomos de carbono. Exemplos de tais radicais cicloalquilo incluem ciclopropilo, ciclopropenilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 2-ciclohexen-l-ilo, e outros semehantes. - 15- O termo "arilo" como é aqui utilizado refere-se a sistemas de aneis aromáticos compostos por um ou mais aneis aromáticos. Grupos arilo preferidos são os que consistem em um, dois ou três anéis aromáticos. O termo abrange radicais aromáticos tal como fenilo, piridilo, naftilo, tiofeno, furano, bifenilo e outros semelhantes.

Como é aqui utilizado, o termo "ciano" é representado por um |—CN radical de fórmula

Como é aqui utilizado, o termo "pirrolidinilo N-substituído" refere-se a um radical de fórmula

Como é aqui utilizado, o termo "piperidinilo N-substituído" refere-se a um radical de fórmula O termo "morfolinilo" como é aqui utilizado refere-se a um radical * ^

N O de fórmula \_/ .

Os termos "hidroxi" e "hidroxilo" como são aqui utilizados são

sinónimos e são representados pelo radical de fórmula O termo "alquileno de baixo peso molecular" ou "alquileno" como é aqui utilizado refere-se a radicais hidrocarbonetos saturados lineares ou ramificados divalentes de 1 até 6 átomos de carbono. -16-

Como é aqui utilizado o termo "alcoxi" refere-se a cadeias oxi lineares ou ramificadas contendo radicais de fórmula -OR20, em que R20 é um grupo alquilo como definido acima. Exemplos de grupos alcoxi incluem metoxi, isobutoxi, sec-butoxi, t-butoxi, isopropoxi, isobutoxi, t-butoxi e outros semelhantes.

Como são aqui utilizados os termos "arilalcoxi" ou "aralquilo" refere-se a um radical de fórmula I ^22 ^21 em que R21 é arilo como se define acima e R22 é um alquileno como se define acima. Exemplos de grupos aralquilo incluem benzilo, piridilmetilo, naftilpropilo, fenetilo e outros semelhantes.

Como são aqui utilizados os termos "aralquiloxi" ou "arilalquiloxi" referem-se a um radical de fórmula se define acima. ^ ^ ^ em que R52 é "arilalquilo" como é representado por um

Como é aqui utilizado o termo "nitro" radical de fórmula

Como é aqui utilizado o termo "halo" ou "halogéneo" refere-se a bromo, cloro, flúor ou iodo.

Como é aqui utilizado o termo "halogenoalquilo" refere-se a grupos alquilo como se define acima substituídos com um ou mais grupos halogéneo iguais ou diferentes num ou em mais átomos de carbono. Exemplos de grupos halogenoalquilo incluem trifluorometilo, dicloroetilo, fluoropropilo e outros semelhantes. -17-

Como é aqui utilizado o termo "carboxilo" ou "carboxi" refere-se a um radical de fórmula -COOH.

Como é aqui utilizado o termo "derivados carboxílicos" refere-se a Y*

_II um radical de fórmula C—Y?R23 em que γ6 e γ7 sã0 independentemente seleccionados do grupo constituído por O, N ou S e R23 é seleccionado do grupo constituído por H, alquilo, aralquilo ou arilo como se definiu acima.

Como é aqui utilizado o termo "amino" é representado por um radical de fórmula -NH2.

Como é aqui utilizado o termo "alquilsulfonilo" ou "alquilsulfona"

v II I—S—R2<

V II refere-se a um radical de fórmula ® em que R24 é alquilo como se definiu acima.

Como é aqui utilizado o termo "alquiltio" refere-se a um radical de fórmula -SR24 em que R24 é alquilo como definido acima.

Como é aqui utilizado o termo "ácido sulfónico" refere-se a um . O \ 11

HfrORM radical de fórmula 0 em que R25 é H, alquilo ou arilo como definido acima. de fórmula

Como é aqui utilizado o termo "sulfonamida" refere-se a um radical (—S~NS O ^ em que R7 e R8 são como definido acima. -18- Ονη

Como é aqui utilizado o termo "arilo fundido" refere-se a um anel aromático tal como os grupos arilo definidos acima fundidos a um ou mais anéis fenilo. Incluído no termo "arilo fundido" está o radical naftilo.

Como são aqui utilizados os termos "heterociclo monocíclico" ou "heterocíclico monocíclico" referem-se a um anel monocíclico contendo desde 4 até 12 átomos, e mais preferencialmente desde 5 até 10 átomos, em que de 1 até 3 dos átomos são heteroátomos seleccionados do grupo constituído por oxigénio, azoto e enxofre sendo necessário compreender que se estão presentes dois ou mais heteroátomos diferentes pelo menos um dos heteroátomos tem de ser azoto. Exemplos representativos destes heterociclos monocíclicos são imidazole, furano, piridina, oxazole, pirano, triazole, tiofeno, pirazole, tiazole, tiadiazole, e outros semelhantes.

Como é aqui utilizado o termo "heterociclo monocíclico fundido" refere-se a um heterociclo monocíclico como definido acima com um benzeno a ele fundido. Exemplos de tais heterociclos monocíclicos incluem benzofiirano, benzopirano, benzodioxole, benzotiazole, benzotiofeno, benzimidazole e outros semelhantes.

Como é aqui utilizado o termo "metilenodioxilo" refere-se ao radical

e o termo "etilenodioxilo" refere-se ao radical

Como é aqui utilizado o termo "heterociclos de 4-12 membros -19- (Μη N""s

Ji (CHnOre contendo um azoto" refere-se a um radical de fórmula R1* em que m é 1 ou 2 e R19 é H, alquilo, arilo, ou aralquilo e mais preferivelmente refere-se a um anel de 4-9 membros e incluí anéis tal como imidazole.

Como é aqui utilizado o termo "anel heteroaromático de 5-

membros" incluí por exemplo um radical de fórmula “ e "anel heteroaromático de 5-membros fundido com um fenilo" refere-se a esse "anel heteroaromático de 5-membros" com um fenilo a ele fundido. Exemplo de tais anéis heteroaromáticos de 5-membros fundidos com um fenilo é benzimidazole.

Como é aqui utilizado o termo "bicicloalquilo" refere-se a um radical hidrocarboneto bicíclico contendo de 6 até 12 átomos de carbono que é saturado ou parcialmente insaturado.

Como é aqui utilizado o termo "acilo" refere-se a um radical de

O

II V^C'SR26 fórmula ' em que R26 é alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo ou aralquilo como definido acima. Incluídos nestes radicais estão o grupo acetilo, benzoílo e outros semelhantes.

Como é aqui utilizado o termo "tio" refere-se a um radical de fórmula

Como é aqui utilizado o termo "sulfonilo" refere-se a um radical de -20-

fórmula acima.

em que R27 é alquilo, arilo ou aralquilo como se define

Como é aqui utilizado o termo "halogenoalquiltio" refere-se a um radical de fórmula -S-R28 em que R28 é halogenoalquilo como se definiu acima.

Como é aqui utilizado o termo "ariloxi" refere-se a um radical de fórmula

em que R29 é arilo como se definiu acima.

Como é aqui utilizado o termo "acilamino" refere-se a um radical O >i *

ΜΗ—I de fórmula I em que R30 é alquilo, aralquilo ou aril como se definiu acima.

Como é aqui utilizado o termo "amido" refere-se a um radical de

O

II fórmula em qUe r31 é uma ligação ou alquileno como se definiu acima.

Como é aqui utilizado o termo "alquilamino" refere-se a um radical de fórmula -NHR32 em que R32 é alquilo como se definiu acima.

Como é aqui utilizado o termo "dialquilamino" refere-se a um radical de fórmula -NR33R34 em que R33 e R34 são o mesmo ou diferentes grupos alquilo como se definiu acima.

Como é aqui utilizado o termo "trifluorometilo" refere-se a um -21 -

Uuj ^ radical de fórmula

Como é aqui utilizado F3C-R35-0-| radical de fórmula como se definiu anteriormente. o termo "trifluoroalcoxi" refere-se a um em que R35 é uma ligação ou alquileno

Como é aqui utilizado o termo "alquilaminossulfonilo" refere-se a

O

Rae—N—S—I H 1 O em que R36 é alquilo como se definiu um radical de fórmula acima.

Como é aqui utilizado o termo "alquilsulfonilamino" refere-se a um em que R36 é alquilo como se definiu radical de fórmula acima. O II v R36—s—NH—I II *0

Como é aqui utilizado o termo "trifluorometiltio" refere-se a um radical de fórmula ^ S 1 .

Como é aqui utilizado o termo "trifluorometilsulfonilo" refere-se a Ϊ,

FjC-H

um radical de fórmula O

Como é aqui utilizado o termo "anel monocíclico ou bicíclico de 4-12 membros contendo um azoto" refere-se a um anel monocíclico ou bicíclico parcialmente saturado ou saturado de 4-12 átomos e mais preferencialmente um -22- u~, ^ anel de 4-9 átomos em que um átomo é azoto. Tais anéis podem opcionalmente conter heteroátomos adicionais seleccionados de azoto, oxigénio ou enxofre. Incluídos dentro deste grupo estão morfolina, piperidina, piperazina, tiomorfolina, pirrolidina, prolina, azaciclohepteno e outros semelhantes.

Como é aqui utilizado o termo "benzilo" refere-se ao radical

Como é aqui utilizado o termo "fenetilo" refere-se ao radical

Como é aqui utilizado o termo "anel heterocíclico de 4-12 membros com um azoto contendo enxofre ou oxigénio" refere-se a um anel contendo de 4 até 12 átomos e mais preferencialmente de 4 até 9 átomos em que pelo menos um átomo é um azoto e pelo menos um átomo é oxigénio ou enxofre. Incluídos dentro desta definição estão anéis tais como tiazolina e outros semelhantes. "arilsulfonilo" ou "arilsulfona" em que R37 é arilo como se

Como é aqui utilizado o termo

O

refere-se a um radical de fórmula definiu anteriormente.

Como é aqui utilizado o termo "alquilsulfóxido" ou "arilsulfóxido" O refere-se a um radical de fórmula alquilo ou arilo como se definiu anteriormente. R38—S—| em que R38 é, respectivamente, -23 -

Como é aqui utilizado o termo "derivado de ácido fosfónico" lÍ |—P-OR38 refere-se a um radical de fórmula OR<0 em que R39 e R40 são o mesmo ou diferente H, alquilo, arilo ou aralquilo.

Como é aqui utilizado o termo "derivados de ácido fosfónico"

O

II —P—0R<1 refere-se a um radical de fórmula H em que R41 é H, alquilo, arilo ou aralquilo como se definiu anteriormente.

Como é aqui utilizado o termo "ariltio" refere-se a um radical de hSR« em que R42 é arilo como se definiu anteriormente.

Como é aqui utilizado o termo "tio heterociclo monocíclico" refere-I—sr-o se a um radical de fórmula « em que R43 é um radical heterociclo monocíclico como se definiu anteriormente.

Como é aqui utilizado o termo "heterociclo monocíclico sulfóxido " e "heterociclo monocíclico sulfona " refere-se, respectivamente, a um radical de i_L* Hl·*43 fórmula 1 e ° em que R43 é um radical heterociclo monocíclico como se definiu anteriormente. O termo "composição" como é aqui utilizado significa um produto que resulta da mistura ou combinação de mais de um elemento ou ingrediente. O termo "veículo aceitável farmaceuticamente", como é aqui 24. (Μη utilizado, significa um material, composição ou veículo farmaceuticamente aceitável, tal como um enchimento, diluente, excipiente, solvente líquido ou sólido ou material encapsulador, envolvido no transporte de um agente activo. O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" deve significar a quantidade de fármaco ou agente farmacêutico que irá originar a resposta biológica ou médica de um tecido, sistema ou animal que é tratado por um investigador ou clínico. O que se segue é uma lista de abreviaturas e os significados correspondentes como são aqui utilizados de um modo intercambiável.: ^-NMR = ressonância magnética nuclear de protão AcOH - ácido acético BH3-THF = complexo tetrahidrofurano-borano BOC = tert-butoxicarbonilo

Cat. = quantidade catalítica CH2CI2 = diclorometano CH3CN = acetonitrilo CH3I = iodometano análise CHN = análise elementar carbono/hidrogénio/ azoto análise CHNC1 = análise elementar carbono/ hidrogénio/azoto/cloro análise CHNS = análise elementar carbono/ hidrogénio/azoto/enxofre DCC = 1,3-dicicloxexilcarbodiimida DIEA = diisopropiletilamina DMA = N,N-dimetilacetamida DMAP = 4-(N,N-dimetilamino)piridina DMF = N,N-dimetilformamida -25- DSC = carbonato de di-succinilo EDC1 = cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida

Et20 = éter dietílic

Et3N = trietilamina

EtOAc = acetato de etilo

EtOH = etanol FAB MS = espectroscopia de massa de borbardeamento por átomos rápidos g = grama(s) GIHA HC1 = cloridrato do ácido meta-guanidino-hipúrico GIHA = ácido meta-guanidino-hipúrico HPLC = cromatografía líquida de alta resolução IBCF = isobutilcloroformato ' K2CO3 = carbonato de potássio KOH = hidróxido de potássio LiOH = hidróxido de lítio MCPBA = ácido m-cloroperoxibenzóico ou ácido m-cloroperbenzóico MeOH = metanol

MesCl = cloreto de metanossulfonilo mg = miligrama MgSC>4 = sulfato de magnésio mL = mililitro MS = espectroscopia de massa N2 — azoto

NaCNBH3 = cianoborohidreto de sódio Na2PC>4 = fosfato de sódio Na2SC>4 = sulfato de sódio NaHCC>3 = bicarbonato de sódio -26- (/Λη

NaOH = hidróxido de sódio NH4HCO3 = bicarbonato de amónio NH4+HC(>2 = formato de amónio NMM = N-metil morfolina NMR = ressonância magnética nuclear RPHPLC = cromatografia líquida de alta resolução em fase reversa TA = temperatura ambiente KSCN = tiocianato de potássio

Pd/C = carbono sobre paládio

Bn = benzilo

Et - etilo

Me = metilo

Ph = fenilo NEt3 = trietilamina t-BOC = tert-butilcarbonilo TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano Δ = aquecimento da mistura reaccional

Como é aqui utilizado o Método I-HPLC refere-se a coluna de sílica gel fimcionalizada de fase reversa C-18 (50 x 300 mm) utilizando um gradiente linear de 95% 0,6% THF/água:5% CH3CN até 60% 0,6% THF/água:40% CH3CN com uma velocidade de fluxo de 80 mL/minuto.

Os compostos como se mostra nas Figuras I-V podem existir em várias formas isoméricas e tais formas isoméricas estão incluídas. Formas tautoméricas estão também incluídas assim como os sais farmaceuticamente aceitáveis de tais isómeros e tautómeros.

-27-

Nestas estruturas e fórmulas, uma ligação desenhada ao longo de uma ligação de um anel pode ser para qualquer átomo disponível do anel. O termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal preparado por contacto de um composto de Fórmula I com um ácido cujo anião é geralmente considerado adequado para consumo humano. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais cloridrato, bromidrato, iodato, sulfato, fosfato, acetato, propionato, lactato, maleato, malato, succionato, tartarato e outros semelhantes. Todos os sais farmacologicamente aceitáveis podem ser preparados por métodos convencionais. (Ver Berge et al., J. Pharm. Sei.. 66(1), 1-19 (1977) para outros exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis.)

Para a inibição selectiva ou antagonismo de ανβ3 integrinas, os compostos da presente invenção podem ser administrados oralmente, parentericamente, ou por inalação por spray, ou topicamente em formulações de dosagens unitárias contendo veículos, adjuvantes e diluentes convencionais farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo parentérico como é aqui utilizado inclui, por exemplo, subcutâneo, intravenoso, intramuscular, intraestemal, técnicas de infusão ou intraperitonealmente.

Os compostos da presente invenção são administrados por qualquer via adequada na forma de uma composição farmacêutica adaptada a tal via, e numa dose eficaz para o tratamento pretendido. Doses terapeuticamente eficazes dos compostos necessárias para prevenir ou parar o progresso de ou para tratar a doença são facilmente verificadas por um perito na arte utilizando aproximações pré-clínicas e clínicas familiares das artes médicas.

Conformemente, a presente invenção fornece a utilização dos (Αη compostos anteriormente mencionados ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para preparar um medicamento para inibir selectivamente ou antagonizar as células ανβ3 da superfície do receptor utilização que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um compostos seleccionado da classe de compostos descritos nas Fórmulas I-V, em que um ou mais compostos das Fórmulas I-V é administrado em associação com um ou mais veículos e/ou diluentes e/ou adjuvantes não-tóxicos farmaceuticamente aceitáveis (colectivamente aqui referidos como materiais "veículos") e se desejado outros ingredientes activos. Mais especificamente, a presente utilização é direccionada para inibição das células ανβ3 da superfície do receptor. Mais preferencialmente a utilização anteriormente mencionada é direccionada para a inibição de reabsorção óssea, tratamento de osteoporose, inibição humoral de hipercalémia maligna, tratamento da doença de Paget, inibição de metástase tumoral, inibição de neoplasia (crescimento de tumor sólido), inibição de angiogenesis incluindo angiogeneis tumoral, psoríase e doença periodontal, e inibição de migração de células de m'suculo liso incluindo restenósis.

Baseados em técnicas experimentais padrão de laboratório e procedimentos bem conhecidos e avaliados pelos peritos na arte, assim como comparações com compostos de utilidade conhecida, os compostos de Fórmula I podem ser utilizados na preparação de um medicamento para o tratamento das patologias anteriores. Um perito na arte reconhecerá que a selecção do composto da invenção mais apropriado está dentro da capacidade de um perito na arte e dependerá de uma variedade de factores incluindo a avaliação dos resultados obtidos em ensaio padrão e modelos animais.

Tratamento de estados patológicos compreendendo a administração a um paciente de uma quantidade de composto de Fórmula I que á terapeuticamente eficaz no controlo da doença ou em prolongar a capacidade de -29-

sobrevivência do doente para além do que era esperado na ausência de tal tratamento. Como é aqui utilizado, o termo "inibição" do estado referido refere-se à diminuição, interrupção, ou paragem da doença e não indica necessariamente uma eliminação total da doença. Crê-se que prolongando a capacidade de sobrevivência de um doente, para além de ser um efeito vantajoso significativo por si só, também indica que a doença está a ser controlada beneficamente numa dada extensão.

Como foi dito anteriormente, os compostos da invenção podem ser utilizados em várias áreas biológicas, profilácticas ou terapêuticas. Observa-se que estes compostos são úteis na prevenção ou no tratamento de qualquer doença ou estado em que a integrina ανβ3 tem um papel. O regime de dosagem para os compostos e/ou composições contendo os compostos baseia-se numa variedade de factores, incluindo o tipo, idade, peso, sexo e condição médica do doente; a gravidade da doença; a via de administração; e a actividade do composto particular utilizado. Portanto o regime de dosagem pode ser muito variado. Níveis de dosagem da ordem de desde cerca de 0,01 mg até cerca de 1000 mg/kg de peso corporal por dia são úteis no tratamento das doenças acima indicadas e mais preferencialmente 0,01 mg até cerca de 100 mg/kg de peso corporal. O ingrediente activo administrado por injecção é formulado como uma composição em que, por exemplo, solução salina, dextrose ou água podem ser utilizados como um veículo adequado. Uma dose diária adequada será tipicamente de cerca de 0,01 até 10 mg/kg de peso corporal injectada por dia em doses múltiplas dependendo dos factores listados abaixo.

Os compostos numa quantidade terpeuticamente eficaz são -30-

habitualmente combinados com um ou mais adjuvantes apropriados para a via de administração indicada. Os compostos podem ser misturados com lactose, sacarose, amido em pó, ésteres de ácidos alcanóicos de celulose, ésteres alquílicos de celulose, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio, óxido de magnésio, sais de sódio e cálcio dos ácido fosfórico e sulfurico, gelatina, acácia, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, e/ou álcool polivinílico, e comprimidos ou encapsulados para administração conveniente. Altemativamente, os compostos podem ser dissolvidos em água, polietileno glicol, etanol, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, álcool benzílico, cloreto de sódio, e/ou vários tampões. Outros adjuvantes e modos de administração são bem e largamente conhecidos na arte farmacêutica.

As composições farmacêuticas úteis na presente invenção podem ser submetidos a operações farmacêuticas convencionais tal como esterilização e/ou podem conter adjuvantes farmacêuticos tais como conservantes, estabilizadores, agentes secantes, emulsionantes, tampões, etc.

As sequências de síntese gerais para a preparação dos compostos úteis na presente invenção são esquematizadas nos Esquemas I-III. Ambas uma interpretação de, e os procedimentos actuais para, os vários aspectos da presente invenção são descritos quando apropriado. Pretende-se que os Esquemas e Exemplos que se seguem sejam meramente ilustrativos, e não são limitados por eles quer no objectivo ou espírito. Os que são peritos na arte irão facilmente compreender que variações conhecidas das condições e processos descritos nos Esquemas e Exemplos podem ser utilizados para apresentar o processo da presente invenção. A não ser no caso de indicação em contrário todos os materiais de partida e equipamento utilizados estão disponíveis comercialmente. -31 -

ESQUEMA I

ω -32- iyim ESQUEMA I (Continuação)

LU Γ4 O O

LU <5 O

31 <N z _£N Ά X o O < õS •δ4 Ό LU O.

Si O

LU6 o <

0=£L I (0 Z llT s

ff LU

3] tí'8 CO *-

-34-

ESQUEMA I (Continuação)

<N

X D iJZ o <

Ό Q_ lu

ó1 -35-

Umj ESQUEMA I (Continuação) itJCÍ lo

ΓΜ z <N I o T3 -S4 Q_ LU

X -36- -36-

<~2a/^

Os Esquemas I-III são ilustrativos de metodologia útil para a preparação de vários compostos da presente invenção. Tal metodologia é mais especificamente definida nos exemplos que se seguem. Tal metodologia pode ser modificada por um perito na arte, substituindo reagentes e condições conhecidos de metodologias convencionais para produzir os compostos desejados.

No Esquema I(A) ciclopropano Ç1 é facilmente preparado partindo do quer de aldeidos Bi como de brometos B2.

Aldeido Bi é condensado com (Et0)2P(0)CH2C02Et sob condições padrão (NaH/THF, 0o até à temperatura ambiente). O derivado de ácido cinâmico resultante pode ser ciclopropanado (Pd(OAc)2, Et20, CH2N2; ver exemplo 1B) e em seguida desprotegido (TFA, CH2CI2, 0o) para dar o ciclopropano desejado Cl.

Num processo complementar, o brometo B2 pode ser acoplado com acrilato de etilo (Pd(OAc)2, P(0-Tol)3, i-Pr2NH, 120°) para dar o análogo de ácido cinâmico anteriormente mencionado. Ciclopropanação, seguida por desprotecção origina o ciclopropano Çi como se descreve acima.

No Esquema I(B) o ciclopropano Ç2 é facilmente preparado a partir do aldeido B3. O aldeido B3 é condensado com (EtO)2P(0)CH2C02Et sob condições padrão (NaH, THF, 0o até à temperatura ambiente.) O derivado de ácido nitrofenicinâmico resultante pode ser ciclopropanado (Pd(OAc)2, Et20, CH2N2) e em seguida a fimção nitro pode ser reduzida (SnCl2, Et20, EtOH, 100°) para dar o ciclopropano Ç2. -37-

No Esquema I(C) o ciclopropano Ç3 é facilmente preparado a partir do aldeido B4 utilizando as condições reaccionais descritas no Esquema I(B).

No Esquema I(D) o ciclopropano Ç4 pode ser preparado a partir do brometo B5. O brometo B5 pode ser acoplado com acrilatos de alquilo utilizando um procedimento de acoplamento padrão de Heck (Pd(OAc)2, P(0-Tol)3 i-P^NH, 120°) para dar um análogo de ácido nitrocinâmico. Ciclopropanação do análogo de ácido nitrocinâmico (Pd(OAc)2, Et20, CH2N2) seguida por redução (SnCl2, Et20, EtOH, 100°) dá o ciclopropano Ç4.

No Esquema I(E) 0 ciclopropano Ç5 pode ser preparado a partir do aldeido B6 como se descreve a seguir. O aldeido B6 é condensado com N-benzoilglicina (AC2O, 100°) e a azalactona resultante é hidrolizada (MeOH/K^COs) para dar o análogo do dehidroaminoácido correspondente. Ciclopropanação do análogo do dehidroaminoácido, seguida pela redução por cloreto de estanho II irá dar o ciclopropano Ç5.

No Esquema I(F) de um modo análogo ao descrito no Esquema I(E), o aldeido B7 pode ser convertido no ciclopropano Ç6.

No Esquema I(G) de um modo análogo ao descrito no Esquema I(B), aldeídos ou cetonas B26 podem ser convertidos no ciclopropano Ç7.

No Esquema I(H) ciclopropano C8 pode ser preparado a partir dos aldeídos ou cetonas B28 como se descreve a seguir.

-38-

Aldeido/ou cetona B28 é condensado com (Et0)2P(0)CH2C02Et sob condições padrão (NaH. THF, 0o até temperatura ambiente). O derivado de ácido cianofenil cinâmico resultante pode ser ciclopropanado (Pd(OAc)2, Et20, CH2N2) e em seguida reduzido (Ni Raney, EtOH, 60 psi) para dar o ciclopropano C8.

ESQUEMA II H,N. R* NH sCOtH *Z«

NH2 • HCl 1) DEA Dioxano/H20 Δ 2) HCl

r R5 z* j—6^m = 1-3 NH S-Me -Hl

1) DEA Dioxano/H2o Δ 2) HCl

-39- -39-

^ U^-η ESQUEMA II (Continuação) T R5 (A5)

^COaH 2 R9—I

-40-

Uuj / ESQUEMA II (Continuação)

HNV R5 .CO3M0

R7N=C=S 1) THF 2) NaOH/H2o/Dioxano 3) H*

R7\ R8X‘

NH

«7v R8^

1) THF

NH (Ar)- H2N OEt .OEt 1) Δ 2) HCI Δ 2) NaOH/H^O/Dioxano 3) H* ΓΛ• uor°r (A15)

-41 -

ESQUEMA III

Método A

COjH 42- l/U#l ESQUEMA III (Continuação)

Ui <N O O

_C< υ O) LU £ O

X â (J

H £

z£

Método B

No Esquema II:

Na síntese dos ácidos benzóicos intermediários (Al) através de HM. X02H \ (A15), os ácidos amino benzóicos

/ estão disponíveis comercialmente ou podem ser convertidos nesses ácidos amino benzóicos por redução do ácido nitro benzóico correspondente, que pode ser obtido comercialmente ou sintetizado por nitração do ácido benzóico apropriado, seguida por redução no ácido amino benzóico desejado. Estes são todos quando R5 é H. Se R5 é diferente de H, a alquilação da função amino pode ser conseguida por metodologias convencionais.

Para além disso, a síntese do intermediário (A2) pode também ser conseguida como se revela de um modo geral em US 3.202.660, partindo do ácido amino benzóico apropriado. Para além disso, intermediários (A2) e (A15) assim como outros análogos de (A2) e (A 15) tal como substituições no anel heterocíclico, oxazolidinas, tiazolidinas, benzimidazoles e outros semelhantes podem também ser conseguidos como se revela em 1) Chem. Pharm. Buli. 41(1) 117-125 (1993) 2) Chem. Pharm. Buli. 33(10) 4409-4421 (1985) 3) J. Med. Chem. 18 (1), 90-99 (1975)

m = 1-4 utilizado na síntese do intermediário (A3), pode ς»

= 1-4 NH ser sintetizado a partir de Õ (Me)30BF4 em diclorometano. -44-

HC1 utilizado na síntese do intermediário (A4), pode ser sintetizado a partir de Y2-CN e MeOH (1 equivalente) e HC1 gasoso (1 equivalente) em heptano.

Todos os outros reagentes no Esquema II são ou disponíveis comercialmente ou facilmente sintetizados por metodologias conhecidas pelos peritos na arte.

Acoplamento dos intermediários do Esquema II [(Al) através de (A 15)] com os intermediários (C1-C8) do Esquema I pode ser levada a cabo utilizando reagentes de acoplamento conhecidos na arte e como se descreve no Esquema III. Quando R11 não é Η, o azoto apropriado pode ser alquilado num passo apropriado por metodologias conhecidas dos peritos na arte. Altemativamente derivados ácidos R são sintetizados por metodologias conhecidos dos peritos na arte.

Para sintetizar compostos em que e Z3 são ambos hidrogénio:

em que t=l e Y3

que é então tratado do mesmo modo de outras derivatizações como exemplificado nos esquemas anteriores para:

CO2H ^ 1 -45- ο

ESQUEMA IV ULI (Ν Ο

-46-

De um modo análogo ao descrito no Esquema Il(a-h) e como representado no Esquema IV, o aldeído G1 ou o brometo G2 pode ser convertido no ciclopropano Hl (utilizando uma química bem estabelecida e conhecida para proteger e desproteger a fracção hidroxi). O ciclopropano G2 é então facilmente acoplado aos ácidos benzóicos AI-AI5 utilizando processos anteriormente descritos para dar os compostos da presente invenção.

Exemplo A (Cloridrato do ácido 3-guanidinobenzóico)

NH

Adicionou-se ácido 3-aminobenzóico (2,7 g, 0,02 mole) a nitrato de 3,5-dimetilpirazole-l-carboxamidina (6 g, 0,03 mole) (Aldrich) e diisopropil-amina (3,8 g, 0,03 mole) em dioxano (20 mL) e H2O (10 mL). A reacção foi agitada ao refluxo durante 2,5 horas em seguida de um dia para 0 outro à temperatura ambiente. O precipitado resultante foi filtrado, lavado com dioxano/H20 e seco. O precipitado foi em seguida suspenso em H2O e acidificado com HC1 concentrado até se formar uma solução. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi suspenso duas vezes em éter (éter foi separado por decantação). O produto foi seco sob vácuo para dar cloridrato do ácido 3-guanidinobenzóico (1,77 g) como um sólido branco. MS e NMR eram consistentes com a estrutura desejada.

-47-

Exemplo B

Cloridrato do ácido 3-(l-aza-2-amino-ciclopentil)benzóico

H

HCI .COOH A l-aza-2-metoxi-l-ciclohepteno (3,67 g, 0,0288 mole) (Aldrich) em etanol absoluto (20 mL) adicionou-se cloridrato do ácido 3-aminobenzóico (5 g, 0,0288 mole). Formou-se rapidamente uma solução. A mistura reaccional foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. O precipitado resultante foi filtrado, lavado com éter e seco sob vácuo para dar ácido 3-(l-aza-2-amino-l-ciclohepteno)-benzóico.

Exemplo C

Cloridrato do ácido 3-(l-aza-2-amino-l-ciclohepteno)-5-trifluorometilbenzóico

H

CF3 O composto em epígrafe foi sintetizado de acordo com a metodologia do Exemplo B, substituindo uma quantidade equivalente de ácido 3-amino-5-trifluorometilbenzoico [que foi sintetizado por redução do ácido 3-nitro-5-trifluorometilbenzoico (Lancaster) em etanol com Pd/C 10% sob 50 psi de H2 durante 4 horas] por ácido 3-aminobenzóico.

-48-

Exemplo D

Cloridrato do ácido 3-guanidino-5-trifluorometilbenzóico

O composto em epígrafe foi sintetizado de acordo com a metodologia do Exemplo A, substituindo uma quantidade equivalente de ácido 3-amino-5-trifluorometilbenzoico (ver Exemplo C) por ácido 3-aminobenzóico.

Exemplo E

O composto anterior foi preparado de acordo com Bematowicz, JOC, Vol. 57, No. 8, (1992), p. 2497-2502. O NMR era consistente com a estrutura proposta.

Exemplo F

-49-

Um, ^

Refluxou-se uma solução de ácido 3-aminofenilacético (2,712 g, 17,9 mmole), o composto de Exemplo E (3,023 g, 20,6 mmole), e base de Hunig (3,6 mL, 20,6 mmole) em dioxano (30 mL)/água (15 mL) durante 16 horas sob argon. Durante o aquecimento formou-se um precipitado branco. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e o sólido branco foi separado por filtração. O sólido foi lavado com dioxano/água 1:1 (3x5 mL). Fez-se uma suspensão do sólido em 15 mL de água e acidificou-se com HC1 concentrado até dissolução do sólido. A solução foi concentrada in vacuo e o resíduo amarelo resultante foi suspenso em éter. O sólido amarelo foi separado por filtração em vácuo (3,025 g, 74 %). O NMR estava consistente com a estrutura proposta.

Exemplo G

Passo A

M

-SMe

N

H A uma mistura de 2-tiohidantoina (5,5 g, 47,4 mmole) em etanol absoluto (60 mL) adicionou-se iodeto de metilo (3,5 mL, 56,6 mmole). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 5 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente em concentrada in vacuo e o produto bruto foi utilizado directamente no passo seguinte.

A uma mistura do material de partida tiometilo do Passo A (1,0 g, -50-

3,8 mmole) em etanol absoluto (20 mL) adicionou-se 3-aminobenzoato de etilo (2,5 g, 15,3 mmole). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi concentrada in vácuo e o resíduo foi cromatografado (CH2Cl2:Me0H:NH40H 85:14:1) para dar o produto desejado (414 mg, 44%).

Passo C

A uma mistura do éster do Passo B (250 mg, 1,0 mmole) em THF (2 mL) e metanol (2 mL) adicionou-se NaOH sol. 1,0 N (2 mL). A solução reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e concentrada in vacuo. Fez-se uma suspensão do resíduo em água e acidifícou-se cuidadosamente apH 4 com HC1 IN. O sólido foi recolhido por filtração e lavado com água e éter para dar o produto desejado (190 mg, 87%).

Exemplo 1 Síntese do sal trifluoroacetato monohidratado de 2-[4-[[[3-[(aminoiminome-til)amino] fenil] carbonil] amino] fenil] ciclopropanocarboxilato de etilo

NH i

CONH

•CO2B

mQT

-51 - Passo A

BOC-NH

CC^Et

Uma mistura de 4-aminocinamato de etilo (2 g, 10,45 mmole), dicarbonato de di-tertbutilo (2,5 g, 11,5 mmole) e carbonato de potássio (4,3 g, 31,4 mmole) em THF/H2O (1:1 36 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para 0 outro. A solução foi concentrada e o resíduo dissolvido em acetato de etilo. A solução foi lavada sucessivamente com água, HC1 IN e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2SC>4, filtrada e concentrada in vacuo para dar 1,2 g do composto desejado como um sólido amarelo.

Passo B

BOC—N H

Ao composto do Passo A (1,2 g, 4,12 mmol) e Pd(OAc)2 em éter (20 mL) adicionou-se lentamente uma solução etérea de CH2N2 (30 mL, preparada a partir de 2,1 g de N-nitroso-N-metil ureia) a 0°C. A mistura reaccional foi aquecida à temperatura ambiente, agitada durante 3 horas e em seguida adicionou-se ácido acético glacial (2 mL) para remover o excesso de CH2N2. A mistura reaccional foi lavada sucessivamente com água, solução saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, foi seca sobre Na2SC>4 e evaporada para dar 1,2 g de um óleo preto.

-52- / Passo C

,C02Et

H2N O composto do Passo B (1,2 g, 3,9 mmole) foi dissolvido em cloreto de metileno (6 mL) e a solução resultante foi arrefecida a 0°C num banho de gelo. Adicionou-se à mistura reaccional ácido trifluoroacético (2 mL). Após 15 minutos removeu-se o banho gelado e a reacção foi agitada durante 3 horas. A mistura reaccional foi concentrada e o resíduo tratado com K2CO3 aquoso a 5%, e extraída com acetato de etilo (3 x). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04 e evaporadas. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel, eluíndo com MeOH/CPbC^ 1% para dar 550 mg do composto puro desejado como um sólido castanho.

Passo D

NH

CC^Et A uma solução do composto do Exemplo A (526 mg, 2,4 mmole) em formamida de dimetilo (10 mL) adicionou-se com agitação a 0°C 1-metilpiperidina (238 mg, 2,4 mmole) seguida pela adição de cloroformato de -53-

isobutilo (328 mg, 2,4 mmole). Após 5 minutos introduziu-se o composto do Passo C (492 mg, 2,4 mmole) em formamida de dimetilo (1 mL). A mistura reaccional foi aquecida à temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa-Método 1 para dar 300 mg de óleo amarelo.

Análise calculada para 02(^22^03*1,5 TFA*1 H2O: C, 49,73; H, 4,63; N, 10,09.

Encontrada: C, 49,74; H, 4,50; N, 10,29.

Exemplo 2 Síntese do sal trifluoroacetato do ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)ami-no] fenil] carbonil] amino] fenil]ciclo-propanocarboxílico

O produto do Exemplo 1 (220 mg, 0,6) foi dissolvido em metanol (2 mL) à temperatura ambiente. Adicionou-se hidróxido de lítio (1M, 1 mL) e a mistura reaccional foi agitada de um dia para o outro. A solução foi concentrada e purificada por HPLC de fase reversa-Método 1 para dar 120 mg de um sólido amarelo.

Análise calculada para CisHi8^03*1,0 TFA*0,2 H2O: C, 52,68; H, 4,29; N, 12,29.

Encontrada: C, 52,64; H,3,93;N, 12,31. -54-

Os compostos que se seguem são sintetizados utilizando metodologia e condições semelhantes à metodologia descrita acima.

Exemplo 3 sal trifluoroacetato do ácido 2-[3-[[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbo-nil] amino]metil] fenil] -ciclopropanocarboxílico

Anál. calcd. para CisHisN/^ri TFA*0,2 H2O: C, 52,68; H, 4,29; N, 12,29.

Encontrada: C, 52,64; H, 3,93; N, 12,31.

Exemplo 4 sal trifluoroacetato monohidratado do ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)ami-no]fenil]carbonil]amino]-2-metoxifenil]ciclopropano-carboxílico

-55- {/Αη

Anál. calcd. para C2iH24N404*l TFAOl H2O: C, 52,27; H, 5,15; N, 10,60.

Encontrada: C, 52,28; H, 4,97; N, 10,54.

Exemplo 5 sal trifluoroacetato do ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]-2-metoxifenil]ciclopropano-carboxílico

Anál. calcd. para Ci9H2oN404*l,5 TF A: C, 48,99; H, 4,02; N, 10,39.

Encontrada: C, 48,89; H, 4,18; N, 10,34.

Exemplo 6 sal trifluoroacetato do ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorome-til)fenil]carbonil]-amino]fenil]ciclopropanocarboxílico

-56-

Passo A

O composto anterior foi preparado do mesmo modo como o descrito no Exemplo 1 substituindo o composto do Exemplo A utilizado no Passo D pelo composto do Exemplo D.

Passo B O composto do Passo A foi hidrolizado do mesmo modo como o descrito no Exemplo 2 para produzir o composto em epígrafe.

Análise calculada para Ci9Hi7N4C>3F3*l,3 TFA: C, 46,78; H, 3,30, N, 10,10.

Encontrada: C, 46,45; H, 3,46; N, 10,11.

Exemplo 7 sal trifluoroacetato do ácido 2-[4-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino]fe-nil]carbonil] amino] fenil] -ciclopropanocarboxílico

-57-

Passo A

O composto anterior foi preparado seguindo o procedimento descrito no Exemplo 1, Passo D, substituindo o composto do Exemplo A por ácido 3-(3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino]benzóico. O NMR estava consistente com a estrutura proposta.

Passo B O composto do Passo A foi hidrolizado do mesmo modo descrito no Exemplo 2 para produzir o composto em epígrafe.

Anál. calcd. para C2iH22N403*l,l TFA + 0,6 H2O: C, 54,14; H, 4,76; N, 10,89.

Encontrada: C, 54,29; H, 4,98; N, 10,53.

Exemplo 8 sal trifluoroacetato do ácido 2-[4-[[[3-[amino-[(aminocarbonil)imino]metil]ami-no]fenil]carbonil]amino]fenil] ciclopropano-carboxílico

O

-58-

Passo A

Preparação do 3-[[(cianoimino)(metiltio)metil]amino]benzoato de metilo

H NC' γΝΎ^γ-αθ2Μθ SMe

Uma mistura de benzoato de 3-amino metil (6,04 g, 40 mmole) e N-cianoditioiminocarbonato de dimetilo (11,96 g, 80 mmole) em piridina (70 mL) foi aquecida ao refluxo com agitação sob atmosfera de azoto durante 2,5 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente. Ficando de um dia para o outro à temperatura ambiente o composto acima cristalizou da mistura reaccional dando 6,2 g (dois núcleos). O composto foi utilizado sem mais purificação. O NMR era consistente com a estrutura proposta.

Passo B

Preparação do 3-[[amino(cianoimino)metil]amino]benzoato de metilo

Uma mistura do composto produzido no Passo A (1,0 g) e hidróxido de amónio (2 mL) em etanol (20 mL) foi aquecida a 70°C num tubo -59-

Umj ^ selado durante 3,5 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e o seu volume reduzido a metade. Após ficar de um dia para o outro à temperatura ambiente obteve-se um sólido branco, que foi isolado por filtração e lavado com metanol. Isto deu o composto anterior (389 mg) como um sólido branco. O NMR era consistente com a estrutura proposta.

Passo C

H

COaH JA.

NC A uma solução do composto produzido no Passo B (2,9 g, 13,3 mmole) em THF (15 mL) e metanol (15 mL), adicionou-se com agitação NaOH IN (14 mL). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e concentrada in vacuo para dar um sólido branco. O resíduo foi acidificado por suspensão em água seguido de adição de HC1 IN. O sólido resultante foi filtrado, lavado com éter dietílico e seco para dar o composto anterior (2,4 g). O NMR era consistente com a estrutura proposta.

Passo D

-60-

Is* / O composto anterior foi preparado seguindo o procedimento descrito no Exemplo 1, Passo D, substituindo o composto do Exemplo A pelo composto produzido no Passo C. O NMR era consistente com a estrutura proposta.

Passo E

A uma solução do composto produzido no Passo D (0,23 g, 0,58 mmole) em CH2CI2 (4 mL) foi adicionado com agitação THF (4 mL). A mistura reaccional foi agitada a 25°C durante 2 horas. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo para dar um óleo castanho. O NMR era consistente com a estrutura proposta.

Passo F A uma solução do composto produzido no Passo E (0,23 g, 0,58 mmole) em MeOH (4 mL), adicionou-se hidróxido de sódio IN (2 mL). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A reacção foi concentrada in vacuo e 0 resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa (eluente, água/acetonitrilo/ácido trifluoroacético) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (178 mg). Anál. calcd. para Ci9Hi9N5(Vl,2 TFA:

Encontrada: C, 49,60; H, 3,93; N, 13,51. C, 49,85; H, 3,69; N, 13,75. -61 -

J

Exemplo 9 sal trifluoroacetato do ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)-amino]fenil]carbonil]-amino]-3-fluorofenil]ciclo-propanocarboxílico

Passo A

F

Uma solução de 4-bromo-2-fluoroanilina (10 g, 52,6 mmole), acrilato de í-butilo (8,2 g, 65,8 mmole), tri-otolilfosfina (1,28 g, 4,2 mmole), trietilamina (5,32 g, 52,6 mmole) e acetato de paládio (II) foi aquecida num tubo pressurizado a 100°C durante 2 horas. A mistura reaccional foi filtrada através de celite, e o filtrado foi fraccionado entre éter dietílico e água. Os extracto de éter dietílico foram separados, combinados, secos (Na2S04) e concentrados in vacuo para dar o produto bruto (15 g). O produto bruto foi cromatografado (sílica gel, acetato de etilo/hexano 20%) para dar o produto puro (4,9 g) como um óleo cor de laranja. NMR era consistente com a estrutura proposta. -62- -62-

<^~}AÀCn~-

Passo B

A uma solução de cloreto de 3-nitrobenzoílo (473 mg, 2,55 mmole) e do composto produzido no Passo A (0,6 g, 2,55 mmole) em cloreto de metileno (13 mL) a 0°C adicionou-se com agitação trietilamina (258 mg, 2,55 mmole) Deixou-se a mistura reaccional aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 2 horas. A mistura reaccional foi tratada com água e em seguida fraccionada entre éter dietílico e água. A fase de éter foi separada, seca (Na2S(>4) e evaporada para dar o produto bruto. O produto bruto foi cromatografado (sílica gel, acetato de etilo/hexano 30%) para dar o produto puro (660 mg, 67%). NMR era consistente com a estrutura proposta.

Passo C

A uma solução do composto produzido no Passo B (660 mg, 1,71 mmole) em etanol (10 mL) a 75°C, adicionou-se com agitação cloreto de estanho (II) desidratado (1,54 g, 6,88 mmole) em pequenas porções. A mistura reaccional foi mantida a 75°C durante 30 minutos, deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente e tratou-se com hidrogenocarbonato de sódio sólido até cessar a -63-

efervescência. A mistura reaccional bruta foi fraccionada entre água e acetato de etilo. A fase orgânica foi separada, seca (Na2S04) e evaporada para dar o produto bruto. O produto bruto foi cromatografado (sílica gel, cloreto de metileno/metanol/hidróxido de amónio; 98/1/1) para dar o produto puro (450 mg). NMR era consistente com a estrutura proposta.

Passo D

A uma solução do composto produzido no Passo C (350 mg, 0,98 mmole) e Ν,Ν'-bisboc tioureia (216 mg, 0,98 mmole) em formamida de dimetilo (0,29 mL) a 0°C, adicionou-se com agitação cloreto de mercúrio (II) (293 mg, 1,1 mmole) todo de uma vez. A mistura reaccional foi agitada a 0°C durante 30 minutos, filtrou-se através de celite e o filtrado foi evaporado in vacuo para dar o produto bruto. O produto bruto foi cromatografado (sílica gel, acetato de etilo/hexano 20%) para dar o produto desejado (400 mg). NMR era consistente com a estrutura proposta.

Passo E

A uma solução do composto produzido no Passo D (350 mg, 0,58 mmole) e acetato de paládio (II) (30 mg, 0,32 eq) em éter dietílico (5 mL) a 0°C foi adicionada com agitação uma solução etérea de diazometano (excesso). Durante aproximadamente 2 horas deixou-se a mistura reaccional atingir a temperatura ambiente e em seguida evaporou sob uma corrente de azoto de um dia para o outro. O produto bruto foi cromatografado (sílica gel, acetato de etilo/hexano 20%) para dar o produto desejado (230 mg). NMR era consistente com a estrutura proposta.

Passo F

A uma solução do composto produzido no Passo E (230 mg) em cloreto de dimetilo (3 mL) adicionou-se com agitação ácido trifluoroacético (3 mL). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e evaporada para dar o produto bruto. O produto bruto foi purificado utilizando HPLC de fase reversa (eluente, água/acetonitrilo/ácido acético) para dar o produto em epígrafe (100 mg).

Anál. calcd. para CisHi7N4O3*l,05 TFA: C, 50,71; H, 3,82; N, 11,77. Encontrada: C, 50,61; H, 3,66; N, 11,60. A actividade dos compostos da presente invenção foram testados nos ensaios que se seguem. Os resultados dos testes nos ensaios estão tabelados na Tabela 1.

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ENSAIO DE ADESÃO DA VITRONECTINA

MATERIAIS

Receptor de vitronectina humana (ανβ3) foi purificada a partir de placenta humana como se descreveu anteriormente [Pytela et al., Methods jn Enzvmology. 144:475-489 (1987)]. Vitronectina humana foi purificada a partir de de plasma fresco congelado como descrito previamente por [Yatohgo et al., Çell Structure and Function, 13:281-292 (1988)]. Vitronectina humana biotinilada foi preparada por acoplamento de NHS-biotina de Pierce Chemical Company (Rockford, IL) a vitronectina purificada como se descreveu anteriormente [Charo et al.,h Biol, Chem.. 266 (3):1415-1421 (1991)]. Tampão de ensaio, comprimidos de substrato OPD, e RIA qualidade BSA foram adquiridos de Sigma (St. Louis, MO). Anticorpo anti-biotina foi adquirido de Calbiochem (La Jolla, CA). Placas microtituladas Limbro foram adquiridas de Flow Labs (McLean, VA). Reagentes ADP foram adquiridos de Sigma (St. Louis, MO).

MÉTODOS

Ensaios de Receptor de Fase Sólida

Este ensaio foi essencialmente o mesmo que o anteriormente descrito [Niiya et al., Blood, 70:475-483 (1987)]. O receptor vitronectina humana purificada (ανβ3) foi diluído de soluções de caldo a 1,0 pg/mL em solução salina Tris-tamponada contendo 1,0 mM Ca^, Mg++, e Mn++, pH 7,4 (TBS+++)· O receptor diluído foi transferido de imediato para placas microtituladas Linbro de 100 pL/poço (100 ng receptor/poço). As placas foram seladas e incubadas de um -66-

dia para o outro a 4°C para permitir que o receptor se ligue aos poços. Todos os passos seguintes foram à temperatura ambiente. As placas de ensaio foram esvaziadas e 200 pL de 1% de RIA qualidade BSA em TBS111 (TBS++'I'/BSA) foram adicionados às superfícies de plástico expostas do bloco. A seguir a 2 horas de incubação, as placas de ensaio foram lavadas com TBS+++ utilizando um lavador de placas de 96 poços. Diluições em série logarítmica dos compostos teste e de controlo foram feitas a partir de uma concentração de caldo de 2 nM e utilizando vitronectina biotinilada 2 nM em TBS+++/BSA como diluente. Esta pré-mistura de ligando marcado isotopicamente com ligando teste (ou controlo), e subsequente transferência de alíquotas de 50 pL para a placa de ensaio foram levadas a cabo com um robô CETUS Propette; a concentração final do ligando marcado isotopicamente era de 1 nM e a concentração mais elevada do composto teste era de 1,0 x ΙΟ-4 Μ. A competição ocorre durante duas horas após o que todos os poços foram lavados com um lavador de placas como anteriormente. Anticorpo com afinidade para anti-biotina de cabra marcada com peroxidase de beterraba purificada foi diluído 1:3000 em TBS+++/BSA e 125 pL foram adicionados a cada poço. Após 30 minutos, as placas foram lavadas e incubadas com substrato OPD/H2O2 em 100 nM/L de tampão citrato, pH 5,0. A placa foi lida com um leitor de placas microtituladas a um comprimento de onda de 450 nm e quando os poços de controlo de ligação máxima atingiram a absorvância de cerca de 1,0, as A450 finais foram registadas para análise. Os dados foram analisados utilizando um programa escrito para ser utilizado num programa de folha de cálculo de EXCEL™. A média, desvio padrão, e %CV foram determinados para concentrações duplicadas. Os valores médios de A450 foram normalizados ao valor médio de quatro controlos de ligação máxima (não foi adicionado competidor) (B-MAX). Os valores normalizados foram sujeitos a uma curva de quatro parâmetros ajustado a um algoritmo [Rodbard et al., Int. Atomic

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Energy Agencv. Vienna, pp 469 (1977)], representados numa escala semi-logarítmica, e a concentração calculada correspondendo a inibição de 50% do máximo de ligação de vitronectina biotinilada (IC50) e R2 correspondente foi relatada para os compostos exibindo inibição superior a 50% para a concentração mais elevada testada; por outro lado o IC50 é descrito como sendo maior que a concentração testada mais elevada. O ácido β-[[2-[[5-[(aminoiminometil)amino]-l-oxopentil]amino]-l-oxoetil]amino]-3-piridinopropanóico [USSN 08/375,338, Exemplo 1] que é um potente antagonista de ανβ3 (IC50 no intervalo de 30-10 nM) foi incluído em cada placa como um controlo positivo.

ENSAIO DO RECEPTOR Ilb/IIIa PURIFICADO

MATERIAIS

Receptor de fibrinogeno humano (αιη,ββ) foi purificado a partir de placas utilizadas. (Pytela, R., Pierschbacher, MD., Argraves, S., Suzuki, S., e Rouslahti, E. "Arginine-Glycine-Aspartic acid adhesion receptors", Methods in Enzvmologv 144 (1987):475-489.) Vitronectina humana foi purificada a partir de plasma fresco congelado como descrito em Yatohgo, T., Izumi, M., Kashiwagi, H., e Hayashi, M., "Novel purification of vitronectin from plasma by heparin affinity chromatography," Cell Structure and Function 13 (1988):281-292. Vitronectina humana biotinilada foi preparada por acoplamento da NHS-biotina a partir de Pierce Chemical Company (Rockford, IL) para purificar vitronectina como descrito anteriormente. (Charo, I.F., Nannizzi, L., Phillips, D.R., Hsu, M.A., Scarborough, R.M., "Inhibition of fibrinogen binding to GP Ilb/IIIa by a GP Illa peptide", J. Biol. Chem. 266(3)(1991):1415-1421.) Tampão de ensaio, comprimidos de substrato OPD, e RIA qualidade BSA foram adquiridos de -68- (μι

Sigma (St. Louis, MO). Anticorpo de antibiotina foi adquirido de Calbiochem (La Jolla, CA). Placas Linbro microtituladas foram adquiridas de Flow Labs (McLean, VA). Reagentes ADP foram obtidos de Sigma (St. Louis, MO).

MÉTODOS

Ensaios de Receptor de Estado Sólido

Este ensaio é essencialmente o mesmo que o descrito em Niiya, K., Hodson, E., Bader, R., Byers-Ward, V. Koziol, J.A., Plow, E.F. e Ruggeri, Z.M., "Increased surface expression of the membrane glycoprotein Ilb/IIIa complex induced by platelet activation:Relationships to the binding of fibrinogen and platelet aggregation", Blood 70(1987):475-483. O receptor de fibrinogeno humano (α^ββ) purificado foi diluído de soluções de caldo a l,0pg/mL em Tris-tamponada salina contendo 1,0 mM Ca++, Mg++, e Mn++, pH 7,4 (TBS+++). O receptor diluído foi transferido de imediato para placas microtituladas Linbro de 100 pL/poço (100 ng receptor/poço). As placas foram seladas e incubadas de um dia para o outro a 4°C para permitir que o receptor se ligue aos poços. Todos os passos seguintes foram à temperatura ambiente. As placas de ensaio foram esvaziadas e 200 pL de 1% de RIA qualidade BSA em TBS+++ (TBS+++/BSA) foram adicionados às superfícies de plástico expostas do bloco. A seguir a 2 horas de incubação, os placas de ensaio foram lavadas com TBS+++ utilizando um lavador de placas de 96 poços. Diluição em série logarítmica dos compostos teste e de controlo foram feitas a partir de uma concentração de caldo de 2 nM e utilizando vitronectina biotinilada 2 nM em TBS+++/BSA como diluente. Esta pré-mistura de ligando marcado isotopicamente com ligando teste (ou controlo), e subsequente transferência de alíquotas de 50 pL para a placa de ensaio foram -69-levadas a cabo com um robô CETUS Propette; a concentração final do ligando marcado isotopicamente era de 1 nM e a concentração mais elevada do composto teste era de 1,0 x ΙΟ'4 Μ. A competição ocorre durante duas horas após o que todos os poços foram lavados com um lavador de placas como anteriormente. Anticorpo com afinidade para anti-biotina de cabra marcada com peroxidase de beterraba purificada foi diluído 1:3000 em TBS+++/BSA e 125 pL foram adicionados a cada poço. Após 30 minutos, as placas foram lavadas e incubadas com substrato OPD/H2O2 em 100 nM/L de tampão citrato, pH 5,0. A placa foi lida com um leitor de placas microtituladas a um comprimento de onda de 450 nm e quando os poços de controlo de ligação máxima atingiram a absorvância de cerca de 1,0, as A450 finais foram registadas para análise. Os dados foram analisados utilizando um programa escrito para ser utilizado num programa de folha de cálculo de EXCEL™. A média, desvio padrão, e %CV foram determinados para concentrações duplicadas. Os valores médios de A450 foram normalizados ao valor médio de quatro controlos de ligação máxima (não foi adicionado competidor) (B-MAX). Os valores normalizados foram sujeitos a uma curva de quatro parâmetros ajustados a um algoritmo [Rodbard et al., Int. Atomic Energy Aeencv. Vienna. pp 469 (1977)], representados numa escala semi-logarítmica, e a concentração calculada correspondendo a inibição de 50% do máximo de ligação de vitronectina biotinilada (IC50) e R2 correspondente foi descrito para os compostos exibindo inibição superior a 50% para a concentração mais elevada testada; por outro lado o IC50 é descrito como sendo maior que a concentração testada mais elevada. O ácido β-[[2-[[5-[(aminoiminometil)amino]-1 -oxopentil]amino]-1 -oxoetil]amino]-3-piridinopropanóico [USSN 08/375,338, Exemplo 1] que é um potente antagonista de ανβ3 (IC50 no intervalo de 30-10 nM) foi incluído em cada placa como um controlo positivo. « f -70-

TABELA I

AvB3 Ilb/IIIa IC50 IC50 Exemplo (nM) (nM) 1 525 3650 2 30,5 533 3 923 5280 5 81,1 2890 6 122 9700 7 19,0 4800 8 1380 13100

Lisboa, 17 de Julho de 2001

LUIS SILVA CARVALHO

Agente Oficial da Propftá^ Wetnal

ΰ RUA VICTOR CORDON, 14 1200 USBOA

Claims (18)

1. iylM^ LsOts^i - 1 - REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula

   ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que Aé Y·

   N—R7 I R8 em que Y1 é seleccionado do grupo constituído por N-R2, O, e S; R2 é seleccionado do grupo constituído por H; alquilo; arilo; hidroxi; alcoxi; ciano; nitro; amino; aminocarbonilo; alquenilo; alquinilo; alquilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de Ci-Cio-alquilo, halogéneo, hidroxilo, halogenoalqilo, ciano, nitro, carboxilo, amino, alcoxi, arilo ou arilo opcionalmente substituído com um ou mais halogéneos, halogenoalquilo, Ci-Cio-alquilo, alcoxi, ciano, alquilsulfonilo, alquiltio, nitro, carboxilo, amino, hidroxilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos, ou heterociclos monocíclicos fundidos; arilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de

   -2- halogéneo, halogenoalquilo, hidroxi, Ci-Cio-alquilo, alcoxi, metilenodioxi, etilenodioxi, ciano, nitro, alquiltio, alquilsulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, derivados carboxílicos, amino, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos e heterociclos monocíclicos fundidos; heterociclos monocíclicos; e heterociclos monocíclicos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, Ci-Cio-alquilo, alcoxi, amino, nitro, hidroxi, derivados carboxílicos, ciano, alquiltio, alquilsulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo ou arilo fundido; ou R2 considerado em conjunto com R7 forma um heterociclo de 4-12 membros contendo um azoto opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados do grupo constituído por Ci-Cio-alquilo, hidroxi e fenilo; R2 considerado em conjunto com R7 forma um anel heteroaromático de 5 membros; ou R2 considerado em conjunto com R7 forma um anel heteroaromático de 5 membros fundido com um grupo fenilo; ou R7 (quando não considerado em conjunto com R2) e R8 são independentemente seleccionados do grupo constituído por H; alquilo; alquenilo; alquinilo; aralquilo; cicloalquilo; bicicloalquilo; arilo; acilo; benzoílo; alquilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de entre Cj-Cio-alquilo, halogéneo, hidroxi, halogenoalquilo, ciano, nitro, derivados carboxílicos, amino, alcoxi, tio, alquiltio, sulfonilo, arilo, aralquilo, arilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, Ci-Cio-alquilo, alcoxi, metilenodioxi, etilenodioxi, alquiltio, halogenoalquiltio, tio, hidroxi, ciano, nitro, derivados carboxílicos, -3- ariloxi, amido, acilamino, amino, alquilamino, dialquilamino, trifluoroalquiloxi, trifluorometil, sulfonilo, alquilsulfonilo, halogenoalquilsulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos, heterociclos monocíclicos fundidos; arilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, Q-Cio-alquilo, alcoxi, metilenodioxi, etilenodioxi, alquiltio, halogenoalquilo, tio, hidroxi, ciano, nitro, derivados carboxílicos, ariloxi, amido, acilamino, amino, alquilamino, dialquilamino, trifluoroalquiloxi, trifluorometilsulfonilo, alquilsulfonilo, ácido sulfónico, sulfonamida, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos, ou heterociclos monocíclicos fundidos; heterociclos monocíclicos; heterociclos monocíclicos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, Ci-Cio-alquilo, alcoxi, ariloxi, amino, nitro, hidroxi, derivados carboxílicos, ciano, alquiltio, alquilsulfonilo, arilo ou arilo fundido; heterocicloalquilos monocíclicos e bicíclicos; -SO2R10 em que R10 é seleccionado do grupo constituído por alquilo, arilo, e heterociclos monocíclicos, todos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados do grupo constituído por halogéneo, halogenoalquilo, alquilo, alcoxi, ciano, nitro, amino, acilamino, trifluoroalquilo, amido, alquilaminos-sulfonilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonilamino, alquilamino, dialquilamino, trifluorometiltio, trifluoroalcoxi, trifluorometilsulfonilo, arilo, ariloxi, tio, alquiltio, e heterociclos monocíclicos; e 0 II C R10 em que R10 é definido acima; ou NR7 e R8 considerados em conjunto formam anel monocíclico ou bicíclico de 4-12 membros contendo um azoto opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de Ci-Cio-alquilo, derivados carboxílicos, arilo ou hidroxi e em que o referido anel contem opcionalmente um heteroátomo seleccionado do grupo constituído por O, N e S; -4-

   R5 é seleccionado do grupo constituído por H, alquilo, alquenilo alquinilo, benzilo, e fenetilo; ou

   RS em que Y2 é seleccionado do grupo constituído por alquilo; cicloalquilo; cicloalquilo; arilo; heterociclos monocíclicos; alquilo opcionalmente substituído com arilo que pode também ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, alquilo, nitro, hidroxi, alcoxi, ariloxi, arilo, ou arilo fundido; arilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, halogenoalquilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, arilo, arilo fundido, nitro, metilenodioxi, etilenodioxi, ou alquilo; alquinilo; alquenilo; -S-R9 e -O-R9 em que R9 é seleccionado do grupo constituído por H; alquilo; aralquilo; arilo; alquenilo; e alquinilo; ou R9 considerado em conjunto com R7 forma um anel heterocíclico de 4-12 membros contendo um azoto contendo enxofre ou oxigénio; e R5 e R7 são como definido acima; ou Y2 (quando Y2 é carbono) considerado em conjunto com R7 forma um anel de 4-12 membros contendo um azoto opcionalmente substituído com alquilo, arilo ou hidroxi; -5-

   Ζ1, Ζ2, Ζ4 e Ζ5 são independentemente seleccionados do grupo constituído por H; alquilo; hidroxi; alcoxi; ariloxi; arilalquiloxi; halogéneo; halogenoalquilo; halogenoalcoxi; nitro; amino; aminoalquilo; alquilamino; dialquilamino; ciano; alquiltio; alquilsulfonilo; derivados carboxílicos; acetamida; arilo; arilo fundido; cicloalquilo; tio; heterociclos monocíclicos; heterociclos monocíclicos fundidos; e A, em que A é definido acima; B é seleccionado do grupo constituído por -CH2CONH-, -CONH-(CH2)P-, -CONR11-, -NHCO-(CH2)n-, -C(0)0-, e -S02NH-, em que p é um número inteiro seleccionado do grupo constituído por 0, 1 e 2; em que R11 é seleccionado do grupo constituído por H, alquilo, alquenilo, alquinilo, benzilo e fenetilo; em que n é um número inteiro seleccionado do grupo constituído por 0, 1, 2 e 3; 1 é um número inteiro 0, 1,2, ou 3; t é um número inteiro 0, 1 ou 2; R50 é seleccionado do grupo constituído por H, alquilo e arilo; R é X-R3 em que X é seleccionado do grupo constituído por O, S e NR4, em que R3 e R4 são independentemente seleccionados do grupo constituído por hidrogénio; alquilo; alquenilo; alquinilo; halogenoalquilo; aril; arilalquilo; açucares; esteróides e no caso do ácido livre, todos os seus sais farmaceuticamente aceitáveis; Y3 e Z3 são independentemente seleccionados do grupo constituído por H, alquilo, arilo, cicloalquilo e aralquilo; -6- R1 é independentemente seleccionado do grupo constituído por hidrogénio; alquilo; amino, 0 0 —N-C-R12.-NH-C-0-R12, -NHSCV-Ri*, H ° O $ -C-R13, -C-OR13, -SO2R13, -C—NHR13, 000 II II II NH—C-Rst, NH—C-NH—R**, -C-SR*3, S S " li —C-S-R13. e -C-NHR13; R12 é seleccionado do grupo constituído H, alquilo, cicloalquilo, alquilarilo e arilo; R51 é seleccionado do grupo constituído por pirrolidinilo N-substituído, piperidinilo e morfolinilo; R13 é seleccionado do grupo constituído por hidrogénio; alquilo; alquenilo; alquinilo; arilo; derivados carboxílicos; halogenoalquilo; heterociclos monocíclicos; heterociclos monocíclicos opcionalmente substituídos com alquilo, halogéneo, halogenoalquilo, ciano, hidroxi, arilo, arilo fundido, nitro, alcoxi, ariloxi, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, sulfonamida, tio, alquiltio, derivados carboxílicos, amino, amido; alquilo opcionalmente substituído com halogéneo, halogenoalquilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, tio, alquiltio, ariltio, alquilsulfóxido, alquilsulfonilo, arilsulfóxido, arilsulfonilo, ciano, nitro, amino, alquilamino, dialquilamino, alquilsulfonamida, arilsulfonamida, acilamida, derivados carboxílicos, sulfonamida, ácido sulfónico, derivados de ácido fosfónico, derivados de ácido fosfinico, arilo, ariltio, arilsulfóxido, ou arilsulfona toda -7-

   opcionalmente substituída no anel arilo com halogéneo, halogenoalquilo, ciano, nitro, hidroxi, derivados carboxílicos, alcoxi, ariloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, amido, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos; e heterociclos monocíclicos fundidos, tio-heterociclo monocíclico, sulfoxido-heterociclo monocíclico, e sulfona-heterociclo monocíclico, que pode ser opcionalmente substituído com halogéneo, halogenoalquilo, nitro, hidroxi, alcoxi, arilo fundido, ou alquilo; arilo opcionalmente substituído numa ou mais posições com halogéneo, halogenoalquilo, alquilo, alcoxi, ariloxi, metilenodioxi, etilenodioxi, alquiltio, halogenoalquiltio, tio, hidroxi, ciano, nitro, derivados carboxílicos, amido, acilamino, amino, alquilamino, dialquilamino, trifluoralcoxi, trifluorometilsulfonilo, alquilsulfonilo, ácido sulfónico, arilo, arilo fundido, heterociclos monocíclicos e heterociclos monocíclicos fundidos; e

   em que R7 e R8 são como definido acima e desde que considerados em conjunto com o azoto, R7 e R8 compreendem um aminoácido.
2. 2. Composto de acordo com a Reivindicação 1, em que t é 0.
3. 3. Composto de acordo com a Reivindicação 2 de fórmula

   -8-

   Ln j
4. 4. Composto de acordo com a Reivindicação 3, em que 1 é 0
5. 5. Composto de acordo com a Reivindicação 4, em que g . -CONH-(CH2)p- em que p é 0 ou 1.
6. 6. Composto de acordo com a Reivindicação 5, em que R5o G R1 são H.
7. 7. Composto de acordo com a Reivindicação 6, em que R £ seleccionada do grupo constituído por hidroxi ou alcoxi.
8. 8. Composto de acordo com a Reivindicação 7 seleccionado do grupo constituído por 2- [4- [ [ [3- [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] fenil]ciclopropanocar-boxilato de etilo; ácido 2- [4- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil]amino] fenil] ciclopropa-no-carboxílico ácido 2-[3-[[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]metil]fenil]-ci-clopropanocarboxílico; 2- [4- [ [ [3- [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil]amino]-2-metoxifenil]-ciclopropanocarboxilato de etilo; ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]-2-metoxifenil]" ciclopropanocarboxílico; -9-

   ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)fenil]carbonil]ami-ηο] -fenil] ciclopropanocarboxílico; ácido 2-[4-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]-fenil]ciclopropanocarboxílico; ácido 2-[4-[[[3-[(aminocarbonil)imino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]fenil]-ciclopropanocarboxílico; e ácido 2- [4- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil]carbonil]-amino]-3-fluorofenil]-ciclopropanocarboxílico.
9. 9. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou um seu sal farmaceuticamente eficaz de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-8, e um veículo farmaceuticamente eficaz.
10. 10. Utilização de um composto ou um seu sal farmaceuticamente eficaz de acordo com a reivindicação 1 para preparar um medicamento para tratar doenças mediadas pela ανβ3 num mamífero que necessite de tal tratamento.
11. 11. Utilização de acordo com a reivindicação 10 em que o composto é seleccionado do grupo constituído por 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]fenil]ciclopropano-carboxilato de etilo; ácido 2- [4- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino] fenil] ciclo-propa-nocarboxílico; -10-

    ácido 2- [3 - [[[3 - [(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]amino]metil]fenil]ciclo- propanocarboxílico; 2-[4- [ [ [3 - [(aminoiminometil)amino] fenil] carbonil] amino]-2-metoxifenil]ciclo-propanocarboxilato de etilo; ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]-2-metoxifenil]- ciclopropanocarboxílico; ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)amino]-5-(trifluorometil)fenil]carbonil]ami-no]-fenil]ciclopropanocarboxílico; ácido 2-[4-[[[3-[(l,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]-fe-nil]ciclopropanocarboxílico; ácido 2-[4-[[[3-[(aminocarbonil)imino]metil]amino]fenil]carbonil]amino]fenil]-ciclopropanocarboxílico; e ácido 2-[4-[[[3-[(aminoiminometil)amino]fenil]carbonil]-amino]-3-fluorofenil]-ciclopropanocarboxílico.
12. 12. Utilização de acordo com as Reivindicações 10 ou 11, em que a patologia a ser tratada é metástase tumoral.
13. 13. Utilização de acordo com as Reivindicações 10 ou 11, em que a patologia a ser tratada é crescimento de tumor sólido.
14. 14. Utilização de acordo com as Reivindicações 10 ou 11, em que a patologia a ser tratada é angiogénese. - 11 -
15. 15. Utilização de acordo com as Reivindicações 10 ou 11, em que a patologia a ser tratada é osteoporose.
16. 16. Utilização de acordo com as Reivindicações 10 ou 11, em que a patologia a ser tratada é hipercalcémia humoral maligna.
17. 17. Utilização de acordo com as Reivindicações 10 ou 11, em que a patologia a ser tratada é migração de células de músculo liso.
18. 18. Utilização de acordo com as Reivindicações 10 ou 11, em que a restenosis é inibida. Lisboa, 17 de Julho de 2001

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