PT519673E

PT519673E - Composicao contendo derivado de dioxabiciclo¬3.3.0|octano

Info

Publication number: PT519673E
Application number: PT92305491T
Authority: PT
Inventors: Ayako Nakabayashi; Yoshinori Kitagawa; Kengo Akimoto; Michihiro Sugano
Original assignee: Suntory Ltd
Priority date: 1991-06-15
Filing date: 1992-06-15
Publication date: 2000-09-29
Also published as: JP3283274B2; ATE192038T1; EP0519673B1; ES2145003T3; US5637610A; DE69230958T2; DE69230958D1; SG47437A1; CA2071248A1; JPH04368326A; DK0519673T3; CA2071248C; EP0519673A1

Description

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DESCRICÂO "COMPOSIÇÃO CONTENDO DERIVADO DE DIOXABICICLO[3.3.01OCTANO" A presente invenção refere-se a uma composição alimentar ou farmacêutica contendo um derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano e um anti-oxidante. A patente US-A-4427694 revela que a sesamina é eficaz para aliviar os sintomas de intoxicação alcoólica e/ou remoção de álcool ou tabaco, e a patente JP-A-2/138120 revela que o sesaminol e o episesaminol são eficazes para o tratamento terapêutico ou profilático de doenças alérgicas tal como a asma bronquial.

Contudo, não são conhecidos compostos que sejam seguros e que aumentem a actividade dos derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano e, por isso, é desejável o desenvolvimento de novas composições que proporcionem uma melhoria das acções dos derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano.

Note-se que os presentes inventores propuseram várias utilizações para os derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, incluindo a inibição da A5-desaturase (JP-A-3/27319 e EP-A-387000), uma melhoria das funções do fígado (Japanese Patent Application No. 2-002345), uma diminuição dos níveis de colesterol (Japanese Patent Application No. 2-002637), uma inibição de oncogénese {Japanese Patent Application No. 2-002818) e uma prevenção de doenças devidas ao álcool {Japanese Patent Application No. 3-104016). -2-

Sabe-se que o sesaminol, e 3 possíveis estereoisómeros do mesmo, i.e., 2-episesaminol, 6-episesaminol e disesaminol, são compostos antioxidantes do tipo lignano (Agr. Biol. Chem. 51(5), 1285-1289, 1987). O sesaminol é também conhecido como uma substância antioxidante natural (Agr. Biol. Chem. 49(11),3351-3352(1985)). A patente US-A-4836987 revela que compostos com uma espinha dorsal lignano e cadeia lateral contendo oxigénio em anel contendo oxigénio, tais como 1-sesamina, sesamolina, etc., exibem uma aceleração da acção de coagulação do sangue e da acção hemostática. A patente JP-A-60/224629 revela um agente para inibir in-vivo a formação de lípido peroxidado compreendendo extracto de sésamo com actividade antioxidante. É conhecida a utilização da sesamina como insecticida sinergético. Além disso, como uma utilização da sesamolina, são conhecidos insecticidas sinergéticos de píretro (The MERCK INDEX 11 th Edition 1989, 1343). A presente invenção proporciona composições farmacêuticas, alimentos e bebidas, bem como aditivos alimentares, compreendendo derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano e um composto que aumenta as acções dos derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano.

Num aspecto a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo uma mistura de -3- a) um ou mais compostos de dioxabiciclo[3.3.0]octano representados pela seguinte fórmula geral (I):

<*) na qual R1, R2, R3, R4, R5 e R6 são independentemente seleccionados de H e alquilo Ci_3, contanto que R1 e R2 e/ou R4 e R5 juntos possam formar um grupo metileno ou um grupo etileno, e n, m e 1 são 0 ou 1; e b) um antioxidante que não é um composto de fórmula (I); estando a razão em peso (a):(b) na mistura na gama de 1:0,1 a 1:20.

Outro aspecto é um método de síntese de tal composição, compreendendo a mistura de (a) e (b).

Um aspecto adicional é um alimento ou bebida compreendendo uma mistura artificial dos componentes (a) e (b) conforme anteriormente exposto.

Um aspecto adicional é um método de modificar um alimento ou uma bebida contendo um ou mais compostos de fórmula (I) por adição de um antioxidante ao alimento ou à bebida para proporcionar uma razão em peso -4- conforme anteriormente exposto, e para aumentar a actividade in vivo do composto de fórmula (I).

Um aspecto adicional é a utilização de (a) e (b) através da mistura destes na preparação de uma composição farmacêutica, alimentos, bebidas, ou aditivo de alimentos ou de bebidas, para se aumentar a actividade fisiológica de (a).

Na presente invenção podem ser utilizados, como derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, sesamina, sesaminol, episesamina, episesaminol, sesa-molina, 2-(3,4-metilenodioxifenil)-6-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-3,7-dioxabiciclo-[3.3.0]octano, 2,6-bis-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]octano ou 2-(3,4-metilenodioxifenil)-6-(3-metoxi-4-hidroxifenoxi)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]-octano. Estes derivados podem ser utilizados sozinhos ou na forma de uma mistura de dois ou mais deles. O composto, ou extracto constituído principalmente pelo composto, pode ser obtido de acordo com os seguintes procedimentos. Primeiro, um extracto constituído principalmente pelo composto da presente invenção pode ser obtido a partir de óleo de sésamo, por um método compreendendo a extracção de óleo de sésamo com um solvente orgânico substancialmente imiscível com óleo de sésamo e capaz de extrair e dissolver o composto da presente invenção, e concentração do extracto. Como solvente orgânico, pode-se mencionar, por exemplo, acetona, metiletilcetona, dietilcetona, metanol e etanol. Por exemplo, um extracto constituído principalmente pelo composto da presente invenção pode ser obtido por mistura homogénea do óleo de sésamo com um solvente orgânico conforme acima mencionado, deixando-se ficar a mistura a uma temperatura baixa, realizando-se uma separação de fases de acordo com um processo usual, e removendo-se o solvente da fracção de solvente por evaporação.

Mais especificamente, o óleo de sésamo é dissolvido em 2 a 10 volumes, preferencialmente 6 a 8 volumes de acetona, e deixa-se ficar a solução a -80°C durante a noite. Como resultado, o componente do óleo precipita e o solvente orgânico é removido do filtrado obtido por destilação, pelo que se obtém um extracto constituído principalmente pelo composto da presente invenção. Altemativamente, o óleo de sésamo é misturado com metanol quente ou com etanol quente, deixando-se ficar a mistura à temperatura ambiente, e o solvente é removido da fracção de solvente para se obter um extracto constituído principalmente pelo composto da presente invenção. Mais especificamente, o óleo de sésamo é misturado com metanol quente (superior a 50°C) ou etanol quente (superior a 50°C) num volume de 2 a 10 vezes, preferencialmente 5 a 7 vezes o volume do óleo de sésamo, para se efectuar uma extracção violenta. A separação de fases é efectuada por uma separação de fases quando se deixa à temperatura ambiente ou por uma separação centrífuga de acordo com os procedimentos usuais, e o solvente é removido da fracção de solvente por destilação para se obter um extracto constituído principalmente pelo composto da presente invenção. Além disso, pode ser utilizada a extracção gasosa supercrítica. O composto da presente invenção pode ser obtido a partir de um extracto conforme anteriormente mencionado por tratamento do extracto por um método usual tal como cromatografia em coluna, cromatografia líquida de alta eficiência, recristalização, destilação, ou cromatografia líquido-líquido de distribuição em contracorrente. Mais especificamente, utilizando-se uma coluna de fase invertida (5Cig) e metanol/água (60/40) como eluente, o extracto é submetido à cromatografia líquida de alta eficiência, o solvente é removido por destilação, e o cristal obtido é recristalizado a partir de etanol para se obter o . composto utilizado na presente invenção, tal como sesamina, episesamina, -6- sesaminol ou episesaminol. O óleo de sésamo utilizado na presente invenção pode ser quer um produto purificado, quer um produto bruto. Além disso, podem ser utilizadas sementes de sésamo ou sedimentos de sésamo (sementes de sésamo desengorduradas com um teor de óleo residual de 8 a 10%). Neste caso, as sementes de sésamo ou os sedimentos de sésamo são pulverizados se necessário, e em seguida submetidos à extracção de acordo com os procedimentos usuais utilizando-se um solvente qualquer, por exemplo, um solvente conforme acima mencionado com respeito à extracção a partir de óleo de sésamo. O resíduo da extracção é separado, e o solvente é removido do extracto por evaporação ou por outra operação semelhante para se obter um produto da extracção. O composto utilizado na presente invenção, por exemplo, sesamina, sesaminol, episesamina, episesaminol, sesamolina, 2-(3,4-metilenodioxifenil)-6-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]octano, 2,6-bis-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0] octano ou 2-(3,4-metilenodioxifenil)-6-(3 -metoxi-4-hidroxifenoxi)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]octano, pode ser obtido a partir de um extracto de semente de sésamo, um extracto de sedimento de sésamo ou um extracto de óleo de sésamo bruto de acordo com os mesmos procedimentos que foram anteriormente descritos. Além disso, o composto utilizado na presente invenção pode ser obtido a partir de um sub-produto formado no processo de preparação de óleo de sésamo.

Note-se que a sesamina obtida a partir de Piper lonzum L exibe os mesmos efeitos que os proporcionados pelas sementes de sésamo, sedimentos de sésamo e óleo de sésamo. Além disso, na presente invenção podem também ser utilizados os isómeros opticamente activos dos compostos anteriores. O processo para a purificação do composto utilizado na presente invenção e o processo para se obter o extracto não estão limitados aqueles anteriormente mencionados, e o composto utilizado na presente invenção e o extracto constituído principalmente pelo composto da presente invenção não estão limitados aqueles obtidos a partir de óleo de sésamo, sedimentos de sésamo e sementes de sésamo, mas tal como é evidente para as pessoas com um conhecimento vulgar na arte, podem ser utilizadas todas as substâncias por exemplo naturais contendo o composto utilizado na presente invenção. Por exemplo, podem-se mencionar AcanthoDanax zhacilistvlus. Asari Herba Cum Redice, Ginkso-bUoba e Piper lonsum L.

Os processos seguintes podem ser adoptados para a síntese do composto da presente invenção.

Por exemplo, a sesamina e a episesamina podem ser sintetizadas de acordo com o processo de Beroza et al. [J. Am. Chem. Soc., 78, 1242 (1956)]. O pinoresinol [na fórmula geral (I), R1 e R4 representam H, R2 e R5 representam CH3, e n, m e l são zero] pode ser sintetizado de acordo com o processo de Freundenberg et al. [Chem. Ber., 86, 1157 (1953)]. Além disso, o siringaresinol [na fórmula geral (I), R1 e R4 representam H, R2, R3, R5 e R6 representam CH3, n é zero, e cada um de m e / é 1] pode ser sintetizado de acordo com o processo de Freundenberg et al. [Chem. Ber., 88> 16 (1955)]. O composto utilizado na presente invenção pode também ser utilizado na forma de um glicósido. Além disso, os compostos utilizados na presente invenção podem ser utilizados sozinhos ou em combinação.

Como antioxidantes na presente invenção, estão incluídos anti-oxidantes naturais tais como tocoferóis, derivados de flavona, filodulcinas, ácido -8- cógico, derivados do ácido gálico, catequinas, ácido fuquinólico, gossipol, derivados de pirazina, sesamol, guaiacol, resina guaiaca, ácido p-cumárico, ácido nordi-hidroguaiarético, esteróis, terpenos, bases de purina ou de pirimidina, carotenóides e semelhantes, bem como antioxidantes sintéticos tais como butil-hidroxianisol (BHA), butil-hidroxitolueno (BHT), mono-íerí-butil-hidroquinona (TBHQ), 4-hidroximetil-2,6-di-terí-butilfenol (HBMP).

Os tocoferóis incluem a-tocoferol, β-tocoferol, γ-tocoferol, δ-tocoferol, ε-tocoferol, ξ-tocoferol, η-tocoferol, e ésteres de tocoferol tais como acetatos de tocoferol, e os carotenóides incluem β-caroteno, canxantina, astaxantina.

Como acções dos derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano são conhecidas a inibição da A5-desaturase, a inibição da subida do colesterol, a inibição da síntese do colesterol, o controlo do metabolismo do colesterol, a prevenção ou tratamento da gordura no fígado, as doenças do fígado provocadas pelo álcool, o tratamento das doenças do fígado provocadas por químicos, a aceleração do metabolismo do álcool, a diminuição do colesterol ou gordura neutra do soro, a depressão das funções nervosas parassimpáticas quando se come ou bebe, a depressão de um aumento da temperatura da superfície facial por ingestão de álcool e aceleração do regresso à temperatura normal, e a inibição do cancro da mama.

Como acções da sesamina, são conhecidas a aceleração da coagulação do sangue e da acção hemostática, o aumento da actividade insecticida, a acção psicotropicamente eficaz e semelhantes. Além disso, é sabido que a sesamolina exibe uma aceleração da coagulação do sangue e da acção hemostática. -9-

Sabe-se que o sesaminol e os estereoisómeros do mesmo, sesa-mobinol (2-(3,4-metilenodioxifenil)-6-(3-metoxi-4-hidroxifenoxi)-3,7-dioxabici-clo[3.3.0]octona), 2-(3,4-metilenodioxifeml)-6-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-3,4-di-oxabiciclo[3.3.0]octano, pinoresinol (2,6-bis-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-3,7-di-oxabiciclo[3.3.0]octano, têm actividade antioxidante.

Conforme anteriormente descrito, embora os derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano tenham várias acções, a tendência das acções é a seguinte: controlo do metabolismo in-vivo de ácido gordo, aumento do ácido dihomo-y-linolénico e eicosanóide do mesmo, repressão de inflamação e trombo, diminuição da pressão do sangue, melhoria da função do fígado, inibição da oncogénese do cancro do cólon e do cancro da mama, prevenção de doenças devidas à bebida, alívio do alcoolismo, aceleração da coagulação do sangue, prevenção e tratamento de doenças cardio-vasculares provocadas por elevado colestrol no sangue, e prevenção da acumulação de colesterol em várias partes do sistema circular; e no caso daqueles que têm acção antioxidante, prevenção da oxidação de óleo ou de gordura per se., alimentos contendo óleo ou gordura e cosméticos, inibição do radical de oxigénio activo formado por peroxidação de lípido citoplásmico e componentes celulares ou por metabolismo para prevenir a lesão da célula. Segundo a presente invenção, as acções anteriormente mencionadas são aumentadas por combinação com um antioxidante tal como tocoferol, e uma menor quantidade do derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano proporciona actividades significativas.

Segundo a presente invenção, embora não sendo crítica uma razão de dioxabiciclo[3.3.0]octano e antioxidante, particularmente para um aumento das acções dos derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, especialmente a acção de -10- diminuição do colesterol, a razão dioxabiciclo[3.3.0]octano/antioxidante está de preferência entre 0,001 e 1000, mais preferencialmente de 0,01 a 20, mais preferencialmente de 0,1 a 20, muito preferencialmente de 0,2 a 10.

As presentes composições são fornecidas como composições farmacêuticas, cosméticos, alimentos ou bebidas, ou aditivos alimentares. As composições farmacêuticas podem ser administradas extemamente, ou parente-ricamente, por exemplo, intramuscularmente, subcutaneamente, ou intravenosamente. A dosagem varia dependendo do objectivo da administração e das condições dos indivíduos que recebem a composição, mas para se baixar o nível de colesterol, uma dose para uma administração oral é geralmente 1 a 100 mg/dia, e uma dose para uma administração parentética é 0,1 a 20 mg/dia, para um humano adulto. Para se preparar uma composição injectável, pode-se utilizar um agente solubilizante clínico tal como um surfactante não iónico.

Mais particularmente, a presente composição farmacêutica pode ser preparada, por exemplo, por dissolução de um composto da presente invenção em 80 volumes de POE(60)-óleo de rícino endurecido, ou num surfactante não iónico tal como mono-oleato de sorbitano POE com aquecimento, e diluindo-se a mistura resultante com uma solução salina fisiológica. Opcionalmente, pode-se adicionar um agente isotónico, estabilizador, um agente conservante, um analgésico e semelhantes. Além disso, se necessário, podem-se preparar cápsulas de emulsões, pós, grânulos, comprimidos e semelhantes. A presente invenção proporciona adicionalmente aditivos alimentares compreendendo um derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano e um antioxi- - 11 - dante. A adição do aditivo é útil porque a maior parte dos alimentos não o contêm ou contêm apenas uma quantidade muito pequena do mesmo mesmo. A presente invenção refere-se ainda adicionalmente a alimentos ou bebidas aos quais são adicionados derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano e/ou um antioxidante. Uma vez que a maior parte dos alimentos e bebidas não contêm ou contêm apenas numa quantidade muito pequena ambos os ingredientes acima refridos, então os alimentos e bebidas presentes podem ser produzidos adicionando-se ambos os ingredientes a estes alimentos ou bebidas. Contudo, alguns alimentos já contêm uma quantidade suficiente de derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano, tal como sesamina, e assim é suficiente adicionar-se apenas um antioxidante para a produção dos presentes alimentos e bebidas. Uma vez que os derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, os quais são ingredientes activos das presentes composições, são compostos ou análogos destes encontrados nos alimentos convencionais, eles são vantajosos de um ponto de vista de segurança. Além disso, se se seleccionarem antioxidantes, capazes de aumentarem as acções dos derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, daqueles que são convencionalmente utilizados como antioxidantes, eles são inofensivos e não têm efeito no sabor dos alimentos ou das bebidas.

Os alimentos da presente invenção, e os alimentos aos quais são adicionados os presentes aditivos alimentares não são limitados, mas considerando a acção de diminuição do nível de colesterol, podem ser considerados alimentos contendo gordura ou óleo.

Por exemplo, podem-se mencionar alimentos naturais contendo gordura ou óleo, tais como came, peixe, nozes e semelhantes; alimentos aos quais é adicionada gordura ou óleo durante a sua confecção, tais como comida Chineses, massa Chinesa, sopa e semelhantes; alimentos cozinhados utilizando-se - 12- gordura ou óleo como um meio de aquecimento, tais como Tempura Japonesa, alimentos fritos, arroz frito Chinês, frituras, fritos cobertos de açúcar e semelhantes; alimentos gordos tais como manteiga, margarina, maionese, molho de maionese para salada, chocolate, massa instantânea, caramelo, biscoitos, gelado e semelhantes; e alimentos borrifados ou revestidos com uma gordura ou óleo no final, etc. Uma vez que a adição da presente composição a óleo ou gordura é fácil, a presente composição é preferencialmente adicionada a gordura ou óleo. Todavia, os alimentos aos quais é adicionada a presente composição não são limitados, e a presente composição pode ser adicionada a quaisquer alimentos para assim aumentar a acção do derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano desses alimentos.

Para os alimentos que contêm a presente composição, embora as quantidades de derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano e antioxidante não sejam críticas, os derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano são preferencialmente utilizados sozinhos ou como uma mistura numa quantidade de pelo menos 0,0001% por peso, mais preferencialmente pelo menos 0,001% por peso no total, na base do peso dos alimentos; e os antioxidantes são preferencialmente adicionados sozinhos ou como uma mistura numa quantidade de pelo menos 0,00001% por peso, mais preferencialmente pelo menos 0,0001% por peso no total, na base do peso dos alimentos. Quando for utilizado um extracto contendo derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, o extracto é de preferência utilizado numa quantidade de pelo menos 0,0004% por peso, mais preferencialmente pelo menos 0,004% por peso, na base do peso dos alimentos.

Uma vez que os derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, um ingrediente activo da presente composição, são compostos que estão presentes nos alimentos convencionais ou análogos destes, então os alimentos contendo derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano deveriam potencialmente ter as actividades dos derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano. Na realidade, contudo, os alimentos não exibem suficientemente as acções dos derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, porque o teor destes é demasiado baixo.

Por consequência, numa concretização da presente invenção, adiciona-se um antioxidante da presente invenção a um alimento contendo derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano numa quantidade de 0,001 a 100 partes por peso, de preferência 0,01 a 20 partes por peso, mais preferencialmente 0,1 a 20 partes por peso, muito preferencialmente 0,2 a 10 partes por peso, relativamente a uma parte por peso do derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano aí contido, para se aumentarem as acções dos derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, especialmente a acção de diminuição do nível de colesterol.

Quando alimentos ou bebidas contendo derivado de dioxabici-clo[3.3.0]octano contêm também um antioxidante, que aumenta as acções do derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano, pode-se adicionar ainda aos alimentos ou bebidas o mesmo ou outro antioxidante numa quantidade total de até 1000 partes por peso, de preferência até 100 partes por peso, mais preferencialmente até 20 partes por peso, muito preferencialmente até 10 partes por peso, relativamente a uma parte por peso do derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano, para se obterem alimentos ou bebidas com acções adicionalmente aumentadas, tal como uma acção de diminuição do nível de colesterol, do derivado de dioxabiciclo- [3.3.0] octano. Quando se utiliza tocoferol como antioxidante, por exemplo, quando os alimentos ou as bebidas contendo o derivado de dioxabiciclo- [3.3.0] octano não contêm um antioxidante, o tocoferol pode ser adicionado aos alimentos ou às bebidas numa quantidade de 0,01 a 100 partes por peso, de preferência 0,1 a 20 partes por peso, muito preferencialmente 0,2 a 10 partes por -14- peso, relativamente a uma parte por peso de derivado de dioxabiciclo-[3.3.0]octano, para aumentar as acções, tal como a acção de diminuição do nível de colesterol, do derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano.

Como alimentos contendo derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano, podem-se mencionar sésamo, sésamo lavado, sésamo descascado, sésamo torrado, sésamo torrado e descascado, pasta de sésamo, sésamo moído, sésamo amassado, coalhada de sésamo, azeite de sésamo, óleo de sésamo torrado, pó de sésamo e semelhantes. Note-se que os alimentos aos quais é adicionado um antioxidante não estão limitados a alimentos à base de sésamo, e que os presentes antioxidantes podem ser adicionados a qualquer alimento contendo derivados de dioxabiciclo[3.3.0]octano para assim aumentarem as acções do derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano.

Segundo a presente invenção, uma combinação de derivado de dioxabiciclo[3.3.0]octano e antioxidante proporciona uma acção sinergística, tal como diminuição sinergística do nível de colesterol.

Exemplos

Em seguida, a presente invenção é adicionalmente descrita nos seguintes Exemplos.

Exemplo 1

Primeiro, 36 ratos SD macho, com 5 semanas de idade, foram pré-alimentados com um alimento padrão (CE-2 sólido, Níppon Clea) durante uma semana, e em seguida foram divididos em 6 grupos, cada um consistindo de 6 animais. Os animais foram alimentados durante duas semanas com um alimento enriquecido em colesterol compreendendo 20% de caseína, 10% de sebo de boi pulverizado, 56,75% de açúcar em grânulos, 4% de celulose, 1% de colesterol, 0,25% de ácido eólico, 1% de mistura de vitaminas (AIN-TM) e 7% de mistura mineral (TIN-TM), ou com alimento experimental com suplemento de acetato de tocoferol e/ou sesamina, em diferentes quantidades. Os grupos experimentais foram dispostos como se segue: 1. Alimento de colesterol 2. Alimento de colesterol + 1,0% de acetato de tocoferol 3. Alimento de colesterol + 0,05% de sesamina 4. Alimento de colesterol + 0,05% de sesamina + acetato de tocoferol 1,0% de 5. Alimento de colesterol + 0,2% de sesamina 6. Alimento de colesterol + 0,2% de sesamina + acetato de tocoferol 1,0% de O tocoferol acima mencionado foi acetato de DL-a-tocoferol (Nacalai Tesque), e a "sesamina" acima mencionada significa uma mistura de sesamina e episesamina (55,2% sesamina, 44,4% episesamina, 99,6% de pureza) preparada de acordo com um procedimento descrito em JP-A-3/27319 (EP-A-387000).

Após terem sido alimentados durante 2 semanas, os animais foram submetidos a um regime de fome, e tiraram-se amostras de sangue. Mediram-se os níveis de colesterol total, colesterol-HDL, fosfolípido triglicénido, GOT e GTP no soro, utilizando-se um analisador bioquímico automático (Hitachi Model 7050). O valor de colesterol-LDL foi obtido por cálculo. Os resultados estão apresentados na Tabela 1.

Tabela 1 Alimento de colesterol + 0,2% SES. + V.E. *** * 149+21 30 * +! O * * * *** 24,2±5,7 136 * in CS +1 CS # * * 71 ±24 81+611 00 +1 m * Alimento de colesterol + 0,2% SES. 371+68 76 346±71 76 10,3±3,0 58 34 150±18 71 ±23 120±16 24± 2 Alimento de colesterol + 0,05% SES. + V.E. * 244+57 50 * * 213±55 47 13,1±2,4 74 vo ÍZ+9ZI 90±44 124± 8 27± 3 Alimento de colesterol + 0,05% SES. 437±187 89 405+181 89 10,5±3,0 59 39 168±43 91 ±28 157±34 37±10 Alimento de colesterol + 1,0% V.E. 460+172 94 421±174 92 9,9+0,9 56 43 186±39 * 135149 99+ZLI 65±48 Alimento de colesterol 490+229 100 456+221 100 17,8+8,4 100 26 176+52 79±32 129±11 27± 3 TC (mg/dl) (%) LDL-C (mg/dl) (%) HDL-C (mg/dl) (%) LDL-C/HDL-C PL (mg/dl) TG (mg/dl) GOT (IU/1) GPT (IU/1) 2 <υ 4-J CA JU O ϋ <υ T3 G <υ ε cd Ο cd cd α cd > *-G cd o CA o 1 £ 8 <8

cd í3 α cd > cd G 1 CA <υ CA cd u ο Ό g s?IS Q <u

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Um aumento do valor do colesterol total do soro proporcionado pelo alimento de colesterol foi inibido numa forma dependente da dose, e a inibição foi notavelmente aumentada pela a adição de tocoferol. No grupo de animais ao qual se ministrou tocoferol sozinho, o nível de colesterol total do soro não foi significativamente alterado, revelando que o tocoferol aumenta a acção da sesamina na diminuição do nível de colesterol.

Exemplo 2

Primeiro, 27 ratos SD, com 5 semanas de idade, foram pré-alimentadas com um alimento padrão (CE-2 sólido, Nippon Clea) durante uma semana, e em seguida foram divididos em 4 grupos consistindo de 6 ou 9 animais. De acordo com um procedimento semelhante ao descrito no Exemplo 1, os animais foram alimentados com um alimento de colesterol, ou com um alimento de colesterol com suplemento de acetato de tocoferol e/ou sesamina, durante 2 semanas. Os grupos experimentais foram como se segue: 1. Alimento de colesterol 2. Alimento de colesterol + 0,2% de sesamina 3. Alimento de colesterol + 0,2% de sesamina + 0,2% de acetato de tocoferol 4. Alimento de colesterol + 0,2% de sesamina + 1,0% de acetato de tocoferol O tocoferol e a sesamina acima mencionados foram os mesmos que os descritos no Exemplo 1. Após terem sido alimentados durante 2 semanas, os animais foram submetidos a um regime de fome durante 17 horas, e em seguida tiraram-se amostras de sangue. Mediram -se os níveis de colesterol total, colesterol-HDL, triglicérido, fosfolípido, GOT e GTP no soro utilizando-se um analisador bioquímico automático. O valor de colesterol-LDL foi calculado. Os resultados estão apresentados na Tabela 2.

Tabela 2

Alimento de colesterol + 0,2% SES. + 1,0% V.E. VO II £ *** 184±32 37 *** 154129 33 *** 17,712,8 242 oo * * * (N i—H +1 1—( (N 63,4134,0 142+18 34+ 5 Alimento de colesterol + 0,2% SES. + 0,2% V.E. Ό II £ *** 243±11 49 * * <N 1—H "'T +1 r**· (N * 12,8+4,3 175 0‘Z.I ** 137118 64,4+21,5 155117 411 9 Alimento de colesterol + 0,2% SES. VO II £ 3741157 76 *** 349+156 74 * 10,012,6 137 m 161141 71,6+27,4 147+29 Ό +1 m Alimento de colesterol Os II £ 492+66 100 471+65 100 7,311,7 100 Ό 185+32 67,0125,2 152128 391 8 Colesterol total (TC) (mg/dl) (%) (1) colesterol-LDL (LDL-C) (mg/dl) _(%)_ colesterol-HDL (HDL-C) (mg/dl) (%) (2) LDL-C/HDL-C Fosfolípido (PL) (mg/dl) Triglicérido (TG) (mg/dl) GOT (IU/1) GPT (IU/1) (1) LDL-C = TC-(TG/5 + HDL-C) Diferença significativa para o alimento de colesterol (2) LDL-C/HDL-C: índice de esclerose * P<0,05 SES: sesamina ** P<0,01 V.E.: acetato de tocoferol *** P<0,001

Verificou-se que o tocoferol aumentou as acções de sesamina numa forma dependente da dose, revelando assim a utilidade da presente composição.

Exemplo 3

Nas seguintes experiências utilizaram-se sesaminol (Composto A) preparado a partir de óleo de sésamo purificado de acordo com a Japanese Unexamined Patent Publication No. 1-243992, 2-(3,4-metilenodioxifenil)-6-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]octano (Composto C) preparado por extracção de sementes de sésamo com acetona, 2,6-bis-(3-metoxi-4-hidroxi-fenil)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]octano (Composto D), ou 2-(3,4-metilenodioxi-fenil)-6-(3-metoxi-4-hidroxifenoxi)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]octano (Composto E).

Primeiro, 42 ratos SD, com 5 semanas de idade, foram pré-ali-mentados com um alimento padrão (E-2 sólido, Nippon Clea), e em seguida foram divididos em 7 grupos cada um consistindo de 6 animais. Depois disso, os animais foram alimentados com o alimento de colesterol conforme descrito no Exemplo 1, ou com um alimento experimental com suplemento de acetato de tocoferol e/ou Composto A, B, C, D ou E, durante 2 semanas. Os grupos experimentais foram como se segue: 1. Alimento de colesterol 2. Alimento de colesterol + 0,2% de sesamina 3. Alimento de colesterol + 0,2% de Composto A + 1,0% de acetato de tocoferol 4. Alimento de colesterol + 0,2% de Composto B + 1,0% de acetato de tocoferol 5. Alimento de colesterol + 0,2% de Composto C + 1,0% de acetato de tocoferol 20-

6. Alimento de colesterol + 0,2% de Composto D + 1,0% de acetato de tocoferol 7. Alimento de colesterol + 0,2% de Composto E + 1,0% de acetato de tocoferol O acetato de tocoferol acima mencionado foi o mesmo que o utilizado no Exemplo 1. Após terem sido alimentados durante 2 semanas, os animais foram submetidos a um regime de fome durante 17 horas, e em seguida tiraram-se amostras de sangue. Mediu -se o nível de colesterol total utilizando-se um analisador bioquímico automático, e como um resultado, confirmou-se que o consumo de acetato de tocoferol aumenta significativamente a acção de cada composto na diminuição do nível de colesterol. Embora o valor de colesterol total no soro do primeiro grupo tenha aumentado para 419+153 mg/dl através do alimento de colesterol, a administração de sesamina ao segundo grupo reduziu o valor de colesterol para 361±128 mg/dl. Para os grupos 3, 4, 5, 6 e 7, nos quais os Compostos A, B, C, D e E com acetato de tocoferol foram adicionalmente administrados, os valores de colesterol total foram 198±33, 204±42, 186±37, 211±61 e 218±57 mg/dl respectivamente, revelando que os Compostos A, B, C, D ou E utilizados em combinação com tocoferol inibem adicionalmente o aumento do valor do nível de colesterol total.

Exemplo 4

Primeiro misturou-se 100 g de gordura de manteiga, preparada por eliminação do leite da manteiga durante a produção de manteiga por agitação (batimento para se fazer manteiga), com 1,2 g de uma mistura de sesamina e episesamina utilizada no Exemplo 1 e 1,2 g de acetato de tocoferol, e a operação de amassar foi levada a cabo para se obter uma manteiga homogénea para diminuição do nível de colesterol contendo a presente composição. -21 -

Exemplo de Formulação 1

Primeiro misturaram-se 0,25 g de sesamina e 0,25 g de acetato de tocoferol com 20,5 g de anidrido silícico, aos quais se adicionaram 79 g de amido de cereais, seguindo-se uma mistura adicional. Em seguida adicionou-se à mistura 100 ml de solução de hidroxipropilcelulose etanol a 10%, a mistura foi amassada e extrudida, e os grânulos resultantes foram secos.

Exemplo de Formulação 2

Primeiro misturaram-se 3,5 g de sesamina e 0,5 g de acetato de tocoferol com 20 g de anidrido silícico, e em seguida adicionaram-se à mistura 10 g de celulose microcristalina, 3,0 g de estearato de magnésio, e 60 g de lactose. A mistura foi comprimida para se formarem comprimidos com um diâmetro de 7 mm e um peso de 100 mg utilizando-se uma máquina de comprimidos de descarga única.

Exemplo de Formulação 3

Primeiro dissolveu-se 1,25 g de sesamina e 1,25 g de acetato de tocoferol em 200 g de um agente superficialmente activo não iónico TO-1014 (Nikko Chemicals) enquanto se aquecia a 122°C, aos quais se adicionou 4,7975 1 de salina fisiológica esterilizada. A mistura foi em seguida cuidadosamente agitada, e posta assepticamente em frascos pequenos, que foram em seguida fechados, para se obter uma formulação injectável.

Lisboa, 15 de Junho de 2000

JORGE CRUZ

Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Uma composição farmacêutica compreendendo uma mistura de (a) um ou mais compostos dioxabiciclo[3.3.0]octano representados pela seguinte fórmula geral (I):

na qual R1, R1, R2, R3, R5 e R6 são independentemente seleccionados de H e alquilo C1.3, contanto que R1 e R1 e/ou R3 e R5 juntos possam formar um grupo metileno ou um grupo etileno, e n, m e 1 são 0 ou 1; e (b) um antioxidante que não é um composto de fórmula (i); a razão em peso (a): (b) na mistura estando na gama de 1:0,1 a 1:20. 1 Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindi 2 cação 1, em que o composto dioxabiciclo[3.3.0]octano é seleccionado de 3 sesamina, sesaminol, episesamina, episesaminol, sesamolina, 2-(3,4-metileno- -2- tíSSS®889' dioxifenil)-6-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]octano, 2,6-bis-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]octano e 2-(3,4-metilenodioxife-nil)-6-(3-metoxi-4-hidroxifenoxi)-3,7-dioxabiciclo[3.3.0]octano.
3. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1 na qual o composto de fórmula (I) é sesamina, episesamina ou sesa-molina.
4. Uma composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes na qual o antioxidante é seleccionado de tocoferóis, derivados de flavona, filodulcinas, ácido cógico, derivados de ácido gálico, catequinas, ácido fuquinólico, gossipol, derivados de pirazina, sesamol, guaiacol, resina guaiaca, ácido p-cumárico, ácido nordi-hidroguaiarético, esteróis, terpenos, bases de purina e de pirimidina, carotenóides, butil-hidroxianisol (BHA), butil-hidroxitolueno (BHT), mono-férf-butil-hidroquinona (TBHQ), e 4-hidroximetil-2,6- di-íerí-butilfenol (HBMP).
5. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4 na qual o antioxidante é um tocoferol.
6. Uma composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes na qual a razão em peso (a):(b) está na gama de 1:0,2 a 1:10.
7. Um aditivo alimentar compreendendo uma mistura artificial dos componentes (a) e (b) conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 6.
8. Um alimento ou uma bebida compreendendo uma mistura artificial dos componentes (a) e (b) conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 6.
9. Um alimento ou uma bebida de acordo com a reivindicação 8 contendo o composto nativo de fórmula (I), ao qual se adicionou o antioxidante (b) para dar proporções (a):(b) na gama estabelecida.
10. Um método de modificar um alimento ou uma bebida contendo um ou mais compostos dioxabiciclo[3.3.0]octano conforme definido na reivindicação 1, para se aumentar a actividade in vivo do(s) dito(s) composto(s) no consumidor do alimentos ou da bebida, compreendendo a adição de antioxidante ao alimento ou à bebida para dar uma razão em peso do(s) dito(s) composto(s) para o antioxidante no dito alimento ou bebida na gama de 1:0,1 a 1:20, o antioxidante não sendo de fórmula (I).
11. Um método de acordo com a reivindicação 10 no qual a dita razão em peso é de 1:0,2 a 1:10.
12. Um método de acordo com a reivindicação 10 ou 11 no qual o(s) dito(s) composto(s) é/são conforme definido na reivindicação 2 ou na reivindicação 3.
13. Um método de acordo com as reivindicações 10, 11 ou 12 no qual o dito antioxidante é conforme definido na reivindicação 4 ou na reivindicação 5.
14. Utilização de (a) um ou mais compostos dioxabiciclo[3.3.0]octano representados pela seguinte fórmula geral (I): -4-

na qual R1, R2, R3, R4, R5 e R6 são independentemente seleccionados de H e alquilo C1.3, contanto que R1 e R2 e/ou R4 e R5 juntos possam formar um grupo metileno ou um grupo etileno, e n, m e 1 são 0 ou 1; e (b) um antioxidante que não é um composto de fórmula (I); por mistura do antioxidante com o(s) composto(s) na preparação de uma composição farmacêutica, alimento, bebida, ou aditivo de alimento ou de bebida, para se aumentar a actividade fisiológica do(s) composto(s).
15. Utilização de acordo com a reivindicação 14 na qual a razão em peso (a):(b) do(s) composto(s) para o antioxidante está na gama de 1:0,001 a 1:1000.
16. Utilização de acordo com a reivindicação 15 na qual a razão em peso (a):(b) está na gama de 1:0,01 a 1:20.
17. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14 a 16 na qual a actividade fisiológica é a inibição da subida do colesterol, a -5- inibição da síntese de colesterol ou o controle do metabolismo do colesterol,
18. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14 a 16 na qual a actividade fisiológica é o tratamento dos efeitos do consumo de álcool.
19. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14 a 18 na qual o(s) composto(s) é/são conforme definido na reivindicação 2 ou na reivindicação 3.
20. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14 a 19 na qual o antioxidante é conforme definido na reivindicação 4 ou na reivindicação 5. Lisboa, 15 de Junho de 2000 V Λ JORGE CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA V1CTOR CORDON, 14 1200 LISBOA