KR20130046115A

KR20130046115A - 시링가레시놀을 포함하는 혈관 노화 억제용 조성물

Info

Publication number: KR20130046115A
Application number: KR1020110110486A
Authority: KR
Inventors: 조시영; 박찬웅; 서대방; 김완기; 이상준
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2011-10-27
Filing date: 2011-10-27
Publication date: 2013-05-07
Also published as: HK1197019A1; WO2013062332A3; CN104023716A; US20140248381A1; JP2015501318A; WO2013062332A2; US9192597B2; JP6184414B2

Abstract

본 발명은 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 혈관 노화 억제용 조성물을 개시한다.

Description

시링가레시놀을 포함하는 혈관 노화 억제용 조성물{Composition for inhibition of vascular aging comprising syringaresinol}

본 발명은 시링가레시놀을 포함하는 혈관 노화 억제용 조성물에 관한 것이다.

혈관내피세포는 내피세포 유래성 산화 질소(nitric oxide, NO)와 프로스타노이드(prostanoid)를 유리하고, 혈관 활성과 관련된 호르몬을 활성화 혹은 분해하여 혈관 평활근의 기능을 조절함으로써 혈관을 수축 및/또는 이완시킬 수 있다.

혈관내피세포의 텔로머라제(telomerase) 활성은 노화가 이루어짐에 따라 감소한다. 또한, 노화된 혈관내피세포에서는 NO의 생성, eNOS(endothelial nitric oxide synthase)의 발현 및 프로스타시클린(prostacyclin)의 생성이 감소하여 현격히 낮은 혈관의 수축력을 나타내며, PAI-1(type I plasminogen activator) 발현은 증가하여 혈전 생성이 촉진되고, Inter-Cellular Adhesion Molecule 1(ICAM-1), 인터루킨-1, 인터루킨-8과 같은 세포 부착 단백질 및 케모카인의 발현이 증가되어 염증 반응이 증가함에 따라 혈관이 좁아지게 된다. 실제로, 동맥경화 병변 조직의 혈관내피세포는 정상 조직의 세포에 비해 세포 노화 표지로 잘 알려진 SA-β-Gal(senescence-associated beta-galactosidase) 활성이 증가되어 있다고 알려져 있다. 아울러, 동맥경화 병변 조직의 세포들은 정상 조직의 세포에 비해 텔로미어 단축 정도가 더 높다.

따라서 혈관내피세포의 노화를 억제, 지연시키면 그로 인한 심혈관 질환을 예방, 치료할 수 있을 것으로 여겨진다. 지금까지 혈관 노화를 지연시키는 방법 중 잘 알려진 방법으로 칼로리 제한을 들 수 있다. 하지만 이는 실제 적용이 쉽지 않고 일상 생활의 불편을 야기한다는 점에서 다른 대안이 요구된다.

한국특허공개 제10-2004-0050396호(2004.06.16. 공개) 명세서

본 발명은 혈관 세포의 SIRT 1 발현을 증가시키고 텔로머라제를 활성화 시킴으로써 우수한 혈관 노화 억제 효과를 가지며, 심혈관 질환 예방 또는 개선의 우수한 효과를 가지는 조성물을 제공하고자 한다. 또한 본 발명은 뛰어난 혈관 노화 억제 효과를 가지는 식품 및 약학 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명의 일측면은 시링가레시놀(syringaresinol)을 유효 성분으로 포함하는 혈관 노화 억제용 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 일측면은 시링가레시놀(syringaresinol)을 유효 성분으로 포함하는 혈관 노화 억제용 식품 및 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 조성물은 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하여, 혈관 세포의 SIRT 1 발현을 촉진하고, 텔로머라제를 활성화시키며, 혈관의 수축/이완이 원활하게 이루어지도록 하여 혈관 노화를 억제할 수 있고, 특히 심혈관 질환을 예방 또는 개선함에 있어 뛰어난 효과를 나타낸다.

도 1은 인삼 열매 추출물로부터 시링가레시놀을 분리 및 정제하는 방법을 나타낸 개략도이다.
도 2는 시링가레시놀의 화학 구조이다.
도 3은 시링가레시놀을 처리한 노화된 혈관세포에서 SIRT 1 유전자의 발현이 증가함을 나타낸 그래프이다.
도 4는 시링가레시놀을 처리한 노화된 혈관세포에서의 노화 표지자 정도를 나타낸 사진이다.
도 5는 시링가레시놀을 처리한 노화된 혈관세포에서의 노화 표지자의 양을 나타낸 그래프이다.
도 6은 시링가레시놀을 처리한 노화된 혈관세포에서 텔로머라제의 활성 정도를 나타낸 그래프이다.
도 7은 시링가레시놀을 처리한 노화된 혈관세포에서 eNOS와 PAI-1의 발현 정도를 나타낸 그래프이다.

본 명세서에서 “추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다.

칼로리를 제한하는 경우, 혈관내피세포에서 SIRT 1의 발현이 증가된다고 알려져 있다. SIRT 1(Sirtuin 1)은 NAD⁺-의존적 히스톤 단백질 탈아세틸화효소(NAD+-dependent histone deacetylase)로서 에너지 대사, 호르몬 신호 전달, 스트레스에 대한 반응 등 다양한 과정을 조절한다. 따라서, 혈관 세포의 SIRT 1 발현을 촉진하는 물질을 적용하는 경우, 칼로리를 제한하는 경우와 마찬가지로 혈관내피세포의 노화를 억제하여 동맥경화를 비롯한 심혈관 질환을 예방 및 치료할 수 있을 것이다.

본 발명의 일측면은 시링가레시놀(syringaresinol)을 유효 성분으로 포함하는 혈관 노화 억제용 조성물을 제공한다. 시링가레시놀은 혈관내피세포에서 SIRT 1의 발현 및 텔로머라제의 활성을 촉진하며, 노화 표지자인 SA-β-Gal의 활성을 감소시킴으로써, 혈관 세포의 노화를 억제할 수 있다. 한편 노화된 세포에서는 eNOS의 발현이 감소하여 NO의 생성이 감소됨에 의해 혈관의 수축/이완이 원활하게 이루어지지 않으며, PAI-1의 발현이 증가하여 혈전 생성이 촉진된다. 시링가레시놀은 노화된 혈관 세포에서 eNOS의 발현을 증가시킴과 동시에 PAI-1의 발현은 감소시켜 혈관 세포의 노화를 억제하고, 혈관 세포의 기능을 정상화시킬 수 있다. 따라서 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 혈관 노화를 억제할 수 있다.

심혈관질환은 혈관이 막히거나 터지면서 조직에 혈액 공급의 장애를 유발하는 질환으로서, 뇌경색, 뇌출혈, 허혈성 심질환, 심근경색, 동맥경화 등을 대표적인 예로 들 수 있다. 이러한 심혈관 질환은 나이가 들어감에 따라 혈관을 구성하는 내피세포가 노화되고 그 과정에서 기능 이상이 축적되어 발생할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하여 혈관 노화를 억제하는 효과가 우수하므로, 심혈관 질환, 특히 노화성 심혈관 질환을 예방 또는 개선함에 있어 뛰어난 효과를 가질 수 있다.

시링가레시놀은 도 2와 같은 화학 구조를 가지는 리그난계 화합물로, 화학 합성을 통해 얻거나, 아마씨, 황백, 오가피, 참깨 및 인삼 열매 중 하나 이상으로부터 추출할 수 있다. 상기 아마씨, 황백, 오가피 및 참깨는 각 식물의 잎, 줄기, 뿌리, 열매 또는 씨를 예로 들 수 있는 식물의 각 부위를 모두 포함하며, 인삼 열매는 인삼 열매 과피 또는 과육을 포함한다.

본 발명의 일측면에서, 시링가레시놀은 아마씨, 황백, 오가피, 참깨 및 인삼 열매 중 하나 이상을 물, 유기 용매 및 물과 유기 용매의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 추출하여 수득할 수 있다. 상기 유기 용매는 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 알코올은 C₁~C₅의 저급 알코올을 포함하며, C₁~C₅의 저급 알코올은 메탄올, 에탄올, 이소프로필알코올, n-프로필알코올, n-부탄올 및 이소부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 일측면에서, 시링가레시놀은 아마씨, 황백, 오가피, 참깨 및 인삼 열매의 추출물로 조성물에 포함될 수 있으며, 그 중 혈관 노화 억제에 특히 효과적인 분획이 포함될 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 시링가레시놀을 인삼 열매로부터 분리 및 정제하는 방법은 다음과 같은 단계를 포함할 수 있다. 인삼 열매 과육의 알코올 추출물을 제조하는 단계; 제조한 알코올 추출물을 물과 알코올 중 하나 이상을 포함하는 용매로 용출시켜 분획을 수득하는 단계; 및 수득한 분획에 대해 유기 용매를 전개 용매로 사용하여 크로마토그래피, 구체적으로 얇은 막 크로마토그래피(TLC)를 수행하는 단계. 상기에서 유기 용매는 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하며, 알코올은 C₁~C₅의 알코올을 포함한다. 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 상기와 같이 정제된 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함할 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 조성물 전체 중량을 기초로 1 중량% 내지 80 중량%, 구체적으로 5 중량% 내지 60 중량%, 더 구체적으로 10 중량% 내지 30 중량%의 시링가레시놀을 포함할 수 있다. 상기 범위로 포함하는 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 사용하는 것이 적절할 수 있다. 구체적으로 시링가레시놀이 1 중량% 미만인 경우 충분한 혈관 노화 억제 효과를 얻을 수 없고, 80 중량%를 초과하는 경우 안전성 및 제형 안정성이 낮아질 수 있다.

본 발명의 일측면은 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품 조성물은 혈관 노화를 억제할 수 있으며, 나아가 뇌경색, 뇌출혈, 허혈성 심질환, 심근 경색 또는 동맥 경화와 같은 심혈관 질환을 예방 또는 개선할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 식품 조성물은 기호 식품 또는 건강 식품 조성물을 포함한다.

상기 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.

본 발명의 일측면은 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 상기 약학 조성물은 혈관 노화를 억제 및 방지할 수 있으며, 특히 뇌경색, 뇌출혈, 허혈성 심질환, 심근 경색 또는 동맥 경화와 같은 심혈관 질환을 예방 또는 치료할 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.

경구 투여를 위한 제형은 정제(錠劑), 환제(丸劑), 연질 및 경질 캅셀제, 과립제(顆粒劑), 산제, 세립제, 액제, 유탁제(乳濁濟) 또는 펠렛제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들 제형은 유효 성분 이외에 희석제(예: 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 폴리에틸렌 글리콜), 또는 결합제(예: 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 또는 폴리비닐피롤리딘)를 함유할 수 있다. 경우에 따라 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 또는 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제는 점안제, 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제(坐劑), 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5 mg/kg/일 내지 50 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.

[실시예] 시링가레시놀의 분리 및 분석

1. 인삼 열매의 전처리

생(生) 인삼 열매를 수확하고, 종자를 분리하여 제거한 후, 인삼 열매의 과피를 제거하고 과육만을 일광 건조 또는 열풍 건조하여 인삼 열매 과육 건조물을 제조하였다.

2. 인삼 열매 과육 추출물로부터 시링가레시놀의 분리 및 분석

상기에서 제조한 인삼 열매 과육 건조물 1kg에 물 또는 주정 3L를 가하여 상온 또는 환류 추출하고 여과한 다음 40~45℃에서 감압 농축하여 인삼 열매 과육 추출물 300g을 얻었다. 추출물에 에테르(ether)를 처리하여 지용성 성분을 제거한 후, 부탄올(butanol)로 조사포닌을 추출 및 농축하였다. 이를 분리, 정제하여 시링가레시놀을 얻었으며, 구체적인 방법은 다음과 같다. 먼저 시료 194 g을 역상 컬럼 크로마토그래피(reversed-phase (ODS) column chromatography)로 정제하였으며, 이때 용출 용매로 처음에는 100% 물을 사용하였고 메탄올을 10%씩 점차 증가시켜 최종적으로는 100% 메탄올 용매를 사용하였다. 그 결과 GB-1 내지 GB-10 분획물을 얻었으며, 이들 분획물 중 SIRT 1 발현 활성을 나타낸 분획 GB-3을 선별하여 농축한 후 50% 수용성 메탄올(aqueous methanol)을 이용하여 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(Sephadex LH-20 column chromatography)를 수행하였다. 얻은 분획물 중 SIRT 1 발현 활성을 나타낸 GB-3-6(3F)을 선별하여 농축한 후, 클로로포름:메탄올(10:1)을 전개 용매로 예비 실리카겔(preparative silica gel) TLC를 수행하였고, 그 결과 Rf값 0.67의 활성 분획을 정제하였다. 상기 분리 및 정제 방법을 도식화하여 도 1에 나타내었다.

NMR 분광 분석과 데이터베이스 검색을 수행하여 분리 및 정제한 활성 화합물을 시링가레시놀(syringaresinol)로 동정할 수 있었다. 이를 재확인하기 위하여 질량(mass) 분석을 수행하였으며, ESI-mass를 positive mode에서 측정한 결과 [M+Na]+가 m/z 440.9에서, [2M+Na]+가 m/z 858.9에서 관찰되어 분자량이 418임을 알 수 있었다. 또한 NMR 분광 분석을 수행하여 화학 구조를 결정하였으며, 그 결과는 도 2와 같다. 도 2에서 볼 수 있듯이, 분리 및 정제한 활성 화합물은 시링가레시놀의 화학 구조를 가지고 있다.

이와 같이 인삼 열매 과육으로부터 시링가레시놀을 분리하였다.

[실험예 1] 노화된 인간 혈관내피세포에서 SIRT 1 발현 촉진 효과 평가

시링가레시놀의 노화된 인간 혈관내피세포에서 SIRT 1 유전자 발현 촉진 효과를 평가하기 위해, 아래와 같은 실험을 수행하였다.

인간 혈관내피세포는 LONZA(Walersville, MD, USA)로부터 구입하여, 혈관내피세포 전용 배지(EGM-2, EGM-2 SingleQuots, LONZA)에서 70% 컨플루언트(confluent)할 때까지 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 혈관내피세포의 노화는 자연 노화로 자라지 않을 때까지 계대 배양하는 방법으로 유도하였다. 집단 배가 지수(Poplulation-doubling level, PDL)는 아래의 식에 따라 세포 성장이 멈출 때까지 각 세대별로 계산하였다. PDL 값은 노화된 세포일수록 많아진다.

PDL = (Log₁₀Y-Log₁₀X)/Log₁₀2

Y는 각 세대 끝에서 센 세포수.

X는 처음 계대한 세포수.

DMSO에 녹인 시링가레시놀은 20, 50 및 100 μM 농도로 14 PDL 세포부터 이틀에 한번씩 처리하여 40 PDL 세포까지 노화를 유도하며 처리하였다. 음성 대조군에는 배지 부피 1/1000의 DMSO를 처리하였다. 각 시료들을 처리한 세포들을, 차가운 PBS로 2회 세척한 후, 트리졸 시약(TRIzol agent, Invitrogen)으로 RNA를 추출하였다. 상기에서 추출하여 정량한 1 ㎍/㎕의 RNA와 역전사 시스템(Promega)을 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성한 cDNA 및 SIRT 1과 GAPDH의 각 유전자에 대해 미리 디자인된 프라이머(Primer) 및 프루브(probe)(Applied biosystems; SIRT1, Hs01009006_m1; GAPDH, Hs99999905_m1)를 이용하여 각 유전자들의 발현 양상을 측정하였다. PCR 반응과 분석은 로터-진 3000 시스템(Rotor-Gene 3000 system; Corbett Research, Sydney, Australia)을 이용하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에서 볼 수 있듯이, 시링가레시놀은 노화된 혈관내피세포에서 감소된 SIRT 1의 발현을 농도 의존적으로 증가시킨다. 즉, 시링가레시놀은 혈관 노화를 억제하고, 나아가 심혈관 질환을 예방 또는 개선할 수 있음을 알 수 있다.

[실험예 2] 노화된 혈관내피세포의 노화 표지자 억제 효과 평가

실험예 1과 실질적으로 동일한 방법으로, 50 μM 시링가레시놀을 처리하면서 혈관내피세포의 노화를 유도하였다. 노화된 세포는 PBS로 세척하고, 세포 노화 분석 키트(Cellular Senescence Assay kit)(Cell Biolabs, Inc., San Diego, CA, USA)에서 제공한 고정액과 염색약으로 37℃에서 16시간 동안 염색하였다. 다음날 PBS로 세척하고, 20% 글리세롤 용액으로 덮어서 현미경으로 관찰한 결과를 도 4에 나타내고, 초록색으로 염색된 세포 수를 측정한 후 노화 표지자인 SA-b-Gal 활성 정도를 평가하여 도 5에 나타내었다.

도 4 및 도 5에서 볼 수 있듯이, 시링가레시놀을 처리한 세포는 DMSO만을 처리한 세포에 비해 초록색으로 염색된 세포 수가 현저히 적었으며, 최대 약 50% 가량 SA-b-Gal 활성이 감소하였다. 이를 토대로 시링가레시놀은 혈관 노화를 억제하여 심혈관 질환을 예방 또는 개선할 수 있음을 알 수 있다.

[실험예 3] 노화된 혈관내피세포의 텔로머라제 활성 촉진 효과 평가

실험예 1과 실질적으로 동일한 방법으로, 50 μM의 시링가레시놀을 처리하면서 또는 대조군으로 DMSO를 처리하면서 혈관내피세포의 노화를 유도하였다. 노화된 세포는 PBS로 세척하고, 완충액(lysis buffer, Sigma) 라이시스(lysis) 한 후 단백질을 얻어 정량하였다. 텔로머라제 활성은 Telo TAGGG 텔로머라제 PCR 일라이자 플러스 키트(Roche Applied Science, Indianapolis, IN, USA)를 이용하여 평가하고 그 결과를 도 6에 나타내었다.

도 6에서 볼 수 있듯이, 시링가레시놀을 처리한 세포는 DMSO만을 처리한 세포에 비해 약 30% 가량 텔로머라제 활성이 증가하였다. 이를 토대로 시링가레시놀은 노화된 혈관 세포의 텔로머라제를 활성화시켜 혈관 노화를 억제하고, 심혈관 질환을 예방 또는 개선할 수 있음을 알 수 있다.

[실험예 4] 노화된 혈관내피세포의 기능 정상화 효과 평가

시링가레시놀이 노화된 혈관세포의 기능 감소를 젊은 혈관 세포와 같은 수준으로 회복시킬 수 있는지 평가하고자, 먼저 실험예 1과 실질적으로 동일한 방법으로, 50 μM의 시링가레시놀을 처리하면서 또는 대조군으로 DMSO를 처리하면서 혈관내피세포의 노화를 유도하였다. 노화된 세포는 eNOS의 발현이 감소하여 NO의 생성이 감소되므로 혈관의 수축/이완이 잘 되지 않으며, PAI-1의 발현은 증가하여 혈전 생성이 촉진되어 동맥 경화 등과 같은 심혈관 질환이 쉽게 발생한다. 시링가레시놀을 처리한 세포와 DMSO를 처리한 세포를 PBS로 세척하고, 완충액(lysis buffer, Sigma)으로 라이시스한 후 상층액을 회수하였다. 각 상층액의 단백질을 단백질 염색 시약(Protein Dye ReagentTM, Bio-Rad)을 이용하여 정량하였다. 수득한 각 시료의 단백질을 100 ㎍씩 8% SDS-PAGE에 전기영동 하여 크기 별로 분리한 다음, 50Ｖ 조건에서 PVDF 막(Bio-Rad)에 12시간 동안 전이(transfer)시켰다. 그 후 단백질이 전이된 막을 5% 탈지우유 용액으로 1시간 동안 블로킹(blocking)한 다음, 1차 항체로서 다클론항체인 항-eNOS, 항-PAI-1 및 항-액틴(actin)을 처리하고, 2차 항체로서 HRP(horse radish peroxidase)가 결합된 항-토끼 IgG(Amersham) 항체를 처리하고서, ECL 키트(enhanced chemiluminescence kit, Amersham)를 이용하여 항체 반응시켰다. 반응시킨 PVDF 막을 X선 필름(Fuji)에 감광시킨 후 현상하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 그 결과는 도 7에 나타내었다.

도 7에서 볼 수 있듯이, 시링가레시놀을 처리한 세포에서는 노화되어 감소한 eNOS의 발현이 젊은 세포만큼 증가하였고, 또한 노화되어 증가한 PAI-1의 발현이 젊은 세포만큼 감소하였다. 이를 토대로 시링가레시놀은 노화된 혈관 세포의 혈관 수축/이완을 원활히 이루어지도록 할 수 있고, 혈전 생성을 억제할 수 있으므로, 혈관 노화를 억제하고 심혈관 질환을 예방 또는 개선할 수 있음을 알 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제형예 1] 건강 식품

시링가레시놀................... 1000 ㎎

비타민 혼합물

비타민 A 아세테이트...............70 ㎍

비타민 E ....................... 1.0 ㎎

비타민 B1...................... 0.13 ㎎

비타민 B2 ...................... 0.15 ㎎

비타민 B6........................ 0.5 ㎎

비타민 B12....................... 0.2 ㎍

비타민 C.......................... 10 ㎎

비오틴............................. 10 ㎍

니코틴산아미드.................... 1.7 ㎎

엽산............................... 50 ㎍

판토텐산 칼슘..................... 0.5 ㎎

무기질 혼합물

황산제1철........................ 1.75 ㎎

산화아연.......................... 0.82 ㎎

탄산마그네슘...................... 25.3 ㎎

제1인산칼륨......................... 15 ㎎

제2인산칼슘......................... 55 ㎎

구연산칼륨.......................... 90 ㎎

탄산칼슘........................... 100 ㎎

염화마그네슘...................... 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강 식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

[제형예 2] 건강 음료

시링가레시놀.......................... 1000 ㎎

구연산................................ 1000 ㎎

올리고당................................ 100 g

타우린.................................... 1 g

정제수............ ...................... 잔량

통상의 건강 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균한다.

[제형예 3] 정제

시링가레시놀 100 mg, 대두 추출물 50 mg, 포도당 100 mg, 홍삼 추출물 50 mg, 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정한다.

[제형예 4] 과립제

시링가레시놀 100 mg, 대두 추출물 50 mg, 포도당 100 mg 및 전분 600 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 다음 포에 충진한다.

[제형예 5] 연고

하기 표 1에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 연고를 제조하였다.

배합 성분	함량(중량%)
시링가레시놀	3.0
글리세린	8.0
부틸렌글리콜	4.0
유동파라핀	15.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알란	1.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
세테아릴 알코올	1.0
밀납	4.0
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

Claims

시링가레시놀(syringaresinol)을 유효 성분으로 포함하는 혈관 노화 억제용 조성물.
제 1 항에 있어서,
조성물은 심혈관 질환 예방 또는 개선용 조성물.
제 2 항에 있어서,
심혈관 질환은 뇌경색, 뇌출혈, 허혈성 심질환, 심근 경색 및 동맥 경화로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
시링가레시놀은 아마씨, 황백, 오가피, 참깨 및 인삼 열매 중 선택된 하나 이상의 추출물로 포함되는 조성물.
제 1 항에 있어서,
조성물은 조성물 전체 중량을 기초로 0.001 중량% 내지 80 중량%의 시링가레시놀을 포함하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
조성물은 노화된 혈관 세포에서 SIRT(Sirtuin) 1 및 eNOS(endothelial nitric oxide synthase)의 발현을 촉진하고, PAI-1(plasminogen activator inhibitor-1)의 발현을 감소시키는 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
조성물은 식품 조성물인 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
조성물은 약학 조성물인 조성물.