PT2135608E - S-triazolil-alfa-mercaptoacetanilidas como inibidores de transcritase inversa de vih - Google Patents

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Yung-Hyo Koh
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Description

ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
DESCRIÇÃO "S-triazolil-alfa-mercaptoacetanilidas como inibidores de transcritase inversa de VIH"
Campo da invenção 0 campo da invenção é o dos inibidores de enzimas e da utilização de inibidores de enzimas para o tratamento de doenças. Mais particularmente, a invenção lida com a inibição de transcritase inversa de VIH in vitro e in vivo como um método de tratamento da infecção por VIH.
Anterioridade da Invenção São conhecidos na especialidade numerosos tratamentos para o VIH, e entre outros compostos farmaceuticamente activos, os inibidores de transcritase inversa proporcionaram um efeito terapêutico significativo a muitos pacientes infectados com o VIH. Por exemplo, a lamivudina (3TC) ou a zidovudina (AZT) são fármacos anti-retrovirais relativamente bem tolerados. Contudo, emergiram recentemente numerosas estirpes virais com marcada resistência contra estes compostos. Para ultrapassar a resistência em pelo menos algum grau, podem ser administrados novos inibidores do tipo nucleosidico (isoladamente ou em combinação com outros inibidores do tipo nucleosidico), e os exemplos de fármacos alternativos incluem estavudina (d4T), didanosina (ddl), Combivir™ (marca de uma combinação de lamivudina e zidovudina), e Trizivir™ (marca de uma combinação de 3TC, AZT, e abacavir).
Infelizmente, o desenvolvimento de resistência a um inibidor do tipo nucleosidico é frequentemente acompanhado pelo desenvolvimento de um grau de resistência a outro inibidor do tipo nucleosidico, havendo frequentemente necessidade de uma troca para uma classe diferente de fármacos. Nestes casos, um paciente pode receber um inibidor de protease (e.g., saquinavir, indinavir, nelfinavir, etc.), tipicamente em combinação com outros agentes anti-retrovirais. Contudo, o regime de administração relativamente complexo destas combinações prova-se frequentemente um desafio 2 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ organizacional e financeiro para muitos pacientes, e a aceitação é frequentemente inferior à desejável.
Mais recentemente, o tratamento do VIH focou-se em terapias de combinação que envolvem a administração de inibidores de transcritase inversa nucleosidicos com inibidores de protease e com inibidores de transcritase inversa não nucleosidicos, e combinações triplas de inibidores de transcritase inversa nucleosidicos, inibidores de transcritase inversa não nucleosidicos e inibidores de protease. Infelizmente, as terapias de combinação de inibidores de protease com inibidores de transcritase inversa nucleosidicos são frequentemente pouco toleradas e frequentemente conduzem à terminação prematura da terapia. Portanto, os tratamentos de combinação mais correntes incluem uma combinação de inibidores de transcritase inversa nucleosidicos e inibidores de transcritase inversa não nucleosidicos.
Os inibidores do tipo não nucleosidico (e.g., nevirapina, delavirdina e efavirenz) são um grupo de compostos estruturalmente não homogéneo que se crê ligarem-se numa bolsa não nucleosidica das transcritases inversas. Aumentam significativamente a eficácia antiviral quando co-administrados com inibidores do tipo nucleosidico. Embora os inibidores do tipo não nucleosidico pareçam proporcionar uma promissora nova classe de fármacos antivirais, permanecem ainda várias desvantagens. 0 custo dos inibidores do tipo não nucleosidico actualmente conhecidos é relativamente elevado, e uma única mutação nas transcritases inversas virais pode induzir uma resistência cruzada contra uma ampla classe de inibidores de transcritase inversa não nucleosidicos. Portanto, existe urgência em proporcionar novos inibidores de transcritase inversa não nucleosidicos que tenham potentes efeitos antivirais, particularmente contra estirpes mutantes de VIH que exibem resistência contra os inibidores de transcritase inversa não nucleosidicos presentemente conhecidos. 0 virus VIH tem uma frequência de mutação relativamente elevada, que frequentemente conduz a resistência a fármacos para tratamentos correntes. Foram realizados estudos para 3 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ identificar ο espectro de mutações nas proteínas RT de vírus isolados de pacientes que tiveram terapias falhadas envolvendo pelo menos um NNRTI (inibidor de transcritase inversa não nucleosídico), e os resultados mostraram que o mutante K103N era o mais predominante para pacientes que tomavam efavirenz, enquanto o Y181C era predominante para pacientes que tomavam nevirapina. Outras mutações únicas incluíam K101E, G190S/A/E e Y188L/C. Algumas das mais prevalecentes mutações duplas em pacientes que falharam com efavirenz incluem K103N-P225H, K103N-V108I, K103N-K101Q, K103N-L100I, K103N-F227L, V106I- Y188L, K103N-Y188L e K103N-G190A. Existe uma necessidade de proporcionar novas composições e métodos para a inibição destas e outras transcritases inversas mutantes. 0 presente pedido de patente refere-se a trabalho anteriormente divulgado nos pedidos da mesma requerente PCT/US02/26186, apresentado em 23 de Agosto, 2002, não publicado, e PCT/US03/27433, apresentado em 22 de Agosto, 2003, que foi publicado como WO 2004/030611 em 15 de Abril, 2004. A patente dos Estados Unidos 5,939,462 de Connell et al. divulga um grande número de heterociclos substituídos, úteis como antagonistas do receptor de NPY5, alguns dos quais são S-triazolilmercaptoacetanilidas similares à estrutura geral 1 adiante. Simoneau et al., na publicação do pedido internacional de patente WO 2004/050643, divulgam tetrazoles e alguns triazoles possuindo estruturas similares às da presente invenção, possuindo actividade inibidora de transcritase inversa.
Breve Descrição
Os inventores verificaram que a transcritase inversa (RT, do inglês "Reverse Transcriptase") de VIH pode ser inibida por uma classe seleccionada de S-triazolil-cx-mercaptoacetanilidas representadas pela estrutura geral 1. Surpreendentemente, alguns destes compostos foram capazes de inibir várias RT mutadas, incluindo K103N, Y181C e Y188L. 4 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Q 1
Na fórmula 1, R1 é halogéneo, alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, em que os grupos alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior podem opcionalmente ser substituídos, preferivelmente com um ou mais halogéneos. R3 é H ou metilo, e o substituinte R° é H, halogéneo, CF3, alcoxi inferior ou alquiltio inferior. Q é C02H, S03H, CONR' R" ou S02NR'R", em que R’ e R" são independentemente H, alquilo inferior ou alquilo inferior substituído com um ou mais grupos OR, C02R, NHR, NR2 ou CF3 em que R é H ou alquilo inferior, ou R' e R", juntamente com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 4, 5, ou 6 membros. P é um anel aromático ou um heteroaromático possuindo substituintes como descrito com mais detalhes adiante.
Deste modo, a presente invenção proporciona compostos que são úteis como intermediários para a síntese de compostos de fórmula 1.
Descrição Detalhada 0 termo "alquilo", como aqui se utiliza, refere-se a um radical hidrocarboneto, cíclico, ramificado ou linear, em que todas as ligações carbono-carbono são ligações simples, e o termo "alquilo inferior" refere-se a grupos alquilo de um a dez átomos de carbono. 0 termo "cicloalquilo", como aqui se utiliza, refere-se a um grupo alquilo cíclico ou policíclico contendo 3 a 15 carbonos. Um grupo cicloalquilo pode compreender múltiplos anéis condensados em que um dos anéis distais pode ser aromático (e.g., indan-2-ilo, tetra-hidronaft-l-ilo, etc.)
Similarmente, o termo "alcenilo", como aqui se utiliza, refere-se a um radical hidrocarboneto, cíclico, ramificado ou linear em que uma ou mais das ligações carbono-carbono são uma 5 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ ligação dupla, e o termo "alcenilo inferior" refere-se a grupos alcenilo de um a dez átomos de carbono. 0 termo "cicloalcenilo", como aqui se utiliza, refere-se a um grupo alquilo cíclico ou policíclico contendo 3 a 15 carbonos, em que uma ou mais das ligações carbono-carbono são uma ligação dupla. Um grupo cicloalcenilo pode compreender múltiplos anéis condensados em que um dos anéis distais pode ser aromático (e.g., inden-2-ilo, 1,2-di-hidronaft-l-ilo, etc.)
Do mesmo modo, o termo "alcinilo", como aqui se utiliza, refere-se a um grupo alquilo ou alcenilo, como acima definido, em que pelo menos uma ligação carbono-carbono foi substituída por uma ligação tripla. 0 termo "alcinilo inferior" inclui assim grupos alcinilo com um a dez átomos de carbono.
Como aqui se utiliza, o termo "alcoxi" refere-se a um grupo -0R, em que R é alquilo inferior, alcenilo inferior, alcinilo inferior, arilalquilo inferior, heteroarilalquilo inferior ou heterociclo-alquilo inferior. Similarmente, o termo "ariloxi" refere-se a um grupo -OAr, em que Ar é um grupo arilo ou heteroarilo.
Os termos "arilo" e "Ar" são aqui utilizados indiferentemente, e referem-se a um grupo hidrocarboneto monocíclico ou policíclico de 6 a 14 carbonos, possuindo pelo menos um anel aromático que proporciona o ponto de fixação do grupo. Os grupos arilo policíclicos podem ter anéis isolados (e.g. bifenilo) ou anéis condensados em que pelo menos um anel é aromático, (e.g., 1,2,3,4-tetra-hidronaft-6-ilo, naftilo, antrilo ou fenantrilo). "heteroarilo" e
Os termos "heterociclo" ou "anel heterocíclico" são aqui utilizados indiferentemente e referem-se a um grupo cicloalquilo ou arilo saturado, parcialmente insaturado ou aromático, possuindo um único anel (e.g., morfolino, piridilo ou furilo) ou múltiplos anéis condensados (e.g., naftiridilo, quinoxalinilo, quinolinilo ou indolizinilo) em que pelo menos um átomo de carbono num anel foi substituído por um heteroátomo. 0 termo "heteroátomo", como aqui se utiliza, refere-se a um átomo outro que não carbono (tipicamente S, 0, P ou N). Os termos "heteroarilo" e "heteroaromático" 6 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ referem-se a heterociclos em que pelo menos um anel heterociclico é aromático.
Ainda adicionalmente, a expressão "opcionalmente substituído", como aqui se utiliza, significa que um ou mais átomos de hidrogénio que estão covalentemente ligados a um grupo ou substituinte como acima definido, ou um par de electrões livres num átomo de azoto ou de fósforo, podem estar substituídos por um substituinte que não hidrogénio, covalentemente ligado, seleccionado do grupo que consiste em R, Ar, arilalquilo inferior, OH, SH, OR, SR, OAr, SAr, S(=0)R, S(=0)Ar, SO2R, S02Ar, halogéneo, CF3, OCF3, SCF3, NH2, NHR, NR2, NR3+, NHCOR, NHCOAr, NHS(=0)R, NHS(=0)Ar, NHS02R, NHS02Ar, N02, CN, C02R, CONH2, CONHR, CONR2, C (=0) R, heteroarilo e heteroarilalquilo inferior. Nos substituintes anteriores, R é alquilo inferior, alcenilo inferior, alcinilo inferior, arilalquilo inferior, heteroarilalquilo inferior ou heterociclilalquilo inferior. 0 termo "pró-fármaco", como aqui se utiliza, refere-se a uma modificação de um composto da invenção, em que o composto modificado exibe menos actividade farmacológica (comparativamente com o composto não modificado) e em que o composto modificado é convertido novamente na forma não modificada in vivo, preferivelmente no interior de uma célula alvo (e.g.r uma célula T ou um hepatócito) ou de um órgão alvo (e.g., nódulo linfático ou baço). A conversão de um composto da invenção numa forma de pró-fármaco pode ser útil quando o fármaco activo é demasiado tóxico para uma administração sistémica segura, quando o composto não modificado é fracamente absorvido a partir do tracto digestivo, ou quando o corpo tende a quebrar o composto não modificado antes de este atingir o seu alvo. A expressão "inibição de uma transcritase inversa" refere-se a uma redução directa ou indirecta na formação de ADN a partir de um ARN ou ADN molde por uma transcritase inversa. A inibição directa inclui suicídio, inibição competitiva e não competitiva, inibição alostérica ou ligação de um inibidor numa bolsa não nucleosídica. Os exemplos de inibição indirecta incluem depleção de nucleósidos para a 7 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ síntese de ADN, indução ou contribuição para alterações conformacionais, etc.
Como aqui se utiliza, a expressão "redução da propagação virai" significa que o título de um vírus numa amostra é diminuído. A redução pode ser efectuada de várias maneiras, incluindo inibição parcial ou total de replicação virai, inibição parcial ou total de processamento ou montagem de proteínas virais, inibição de entrada ou saída virai numa célula infectada e/ou depuração do vírus de um sistema por via de uma resposta imunitária ao vírus. São aqui descritos compostos com a seguinte estrutura:
P 1 em que P, Q, R1, R3 e R° são como acima definido. Em concretizações preferidas, R1 é seleccionado entre Cl, Br, I, CH3, CF3, CHF2 e CH2F; R3 é H; R° é seleccionado entre Cl, Br, CF3 e CH3; e Q é CO2H ou SO2NH2. Em concretizações particularmente preferidas, R° é Cl. P é preferivelmente um anel fenilo, naftilo, 1,2,3,4-tetra-hidronaftilo, quinolinilo, isoquinolinilo ou cinolinilo substituídos. Em concretizações preferidas, o grupo P é seleccionado entre as porções (a), (b), (c) e (d) seguintes:
ΕΡ 2 135 608/ΡΤ •νυν (c) R6 rS_R7 Τγ» (d)
em que Rp é seleccionado entre metilo, etilo, propilo, isopropilo, ciclopropilmetilo ou cicloalquilo C3-6 ; R4, R5 e R6 são independentemente seleccionados entre H, F, Cl, Br, CH3, CF3, CFH2, CF2H, isopropilo, ciclopropilo, OCH3, OH, OCF3, NH2 e NHCH3. •7 y ' são independentemente seleccionados entre N e CH; R e
U e U isopropilo, , 11 seleccionado entre Cl, Br, I, CH3, CF3, OCH3, ciclopropilo, t-butilo e ciclobutilo; e R°-R" são independentemente H ou CH3. Preferivelmente, quando Q é S02NH2, R1 não é metilo a menos que Rp seja ciclopropilo ou ciclopropilmetilo, metilo. e R7 é metilo apenas quando R6 é também
As classes preferidas de compostos são aquelas possuindo as Estruturas 2 e 3 adiante:
em que R1 é CF3, CHF2, CH2F ou halogéneo; R° é halogéneo, CF3 ou metilo, R' e R" são independentemente H ou um grupo alquilo inferior, acilo C1-5 ou 1-(aciloxi C2-4) alcoxicarbonilo C1-4 opcionalmente substituídos, e Rp é como acima definido. de compostos
As classes particularmente preferidas correspondem às estruturas 4 e 5 9 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
onde Rp é seleccionado entre metilo, etilo, propilo, isopropilo, ciclopropilo e ciclopropilmetilo. 0 mais preferido é que Rp seja etilo ou ciclopropilo. Os compostos que combinam as caracteristicas R1 = Br, R° = Cl ou CH3, P = naftilo ou tetra-hidronaf tilo, e Q = CO2H ou S02NR'R" exibem surpreendentemente uma potente actividade contra RT de vários isolados de VIH, combinada com uma farmacocinética inesperadamente boa in vivo.
Os compostos proporcionados em acordo com a presente invenção são como estabelecido nas reivindicações. Síntese de compostos A síntese dos compostos da invenção pode ser realizada seguindo procedimentos substancialmente como descrito em WO 2004/030611, WO 2004/050643 e US 5,939,462. Deverá contudo notar-se que são possíveis numerosas vias sintéticas alternativas para os compostos da invenção. As vias exemplificativas que se seguem são proporcionadas a título de exemplo, para orientação dos peritos a especialidade da química orgânica sintética.
Numa via sintética, uma anilina adequadamente substituída é amidada com um composto de ácido carboxílico activado (preferivelmente um halogeneto de carbonilo), em que o composto de ácido carboxílico activado adicionalmente inclui um grupo rejeitado L2 (preferivelmente bromo). Após a formação da anilida, o produto da reacção é feito reagir com um mercaptotriazole (Het-SH), que desloca o grupo rejeitado para formar o composto desejado como representado no Esquema la adiante. 10 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Esquema la
Este esquema é vantajoso quando o mercaptotriazole "Het-SH" é valioso relativamente à anilina, pois o triazole não é utilizado até ao último passo e não é sujeito às inevitáveis perdas que ocorrem durante a manipulação sintética de intermediários. A escolha dos grupos rejeitados L1 e L2 dependerá em alguma extensão da escolha particular da amina e em menor grau do mercaptotriazole particular. Prefere-se particularmente que L1 e L2 sejam halogeneto, o mais preferivelmente cloreto ou brometo. Os solventes adequados para a reacção de amidação incluem éteres, álcoois e hidrocarbonetos (preferivelmente halogenados) e a escolha de solventes adequados irá, pelo menos em parte, depender da natureza química dos reagentes. Em relação aos solventes, catalisadores e/ou bases empregues na reacção anterior, aplicar-se-ão genericamente as considerações descritas por Connell et al. (Pat. U.S. 5,939,462).
Uma estratégia geral alternativa é apresentada no Esquema lb adiante. Esta abordagem envolve a acilação de anilinas com ácidos S-triazolilmercaptoacéticos, que são prontamente preparados por alquilação de mercaptotriazoles com um ácido ou um éster α-haloacético.
Esquema lb 11 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Os reagentes adequados incluem, mas não se lhes limitam, ácido iodoacético e bromoacetato de metilo, e α-bromopropionato de etilo quando se pretende que R3 seja metilo. Se for utilizado um éster, este é hidrolisado após a S-alquilação para proporcionar um ácido carboxilico livre. 0 ácido e a anilina podem ser acoplados com qualquer dos reagentes ou misturas de reagentes activadores de carboxilo usuais, por exemplo uma carbodiimida na presença de uma base de amina terciária, opcionalmente com N-hidroxibenzotriazole como catalisador, ou cloreto de tionilo ou de oxalilo, com dimetilaminopiridina como catalisador. Este esquema é vantajoso quando a anilina é valiosa relativamente ao triazole.
Um exemplo do Esquema la é a síntese delineada no Esquema 2, em que um composto da invenção é preparado a partir de dois precursores preparados separadamente. 0 primeiro precursor, compreendendo uma triazina substituída, e o segundo precursor, compreendendo uma anilina substituída, podem ser preparados seguindo os protocolos que são apresentados adiante na secção intitulada "Exemplos". A reacção dos precursores é tipicamente realizada num solvente aprótico polar tal como DMF, na presença de uma base tal como carbonato de potássio.
Esquema 2 12 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Quando a triazina está substituída com um grupo alquilo fluorado, pode ser empregue um procedimento sintético como mostrado no Esquema 3. É apresentado adiante um procedimento similar na secção intitulada "Exemplos".
Esquema 3
S02NHj
Um triazole substituído com halogéneo pode ser preparado por di-halogenação de um triazole, seguida por deslocamento de um dos halogenetos, como mostrado no Esquema 4, que segue um procedimento apresentado adiante na secção intitulada "Exemplos".
Esquema 4
Outra maneira de construir um triazole substituído com um halogéneo é por diazotização de um aminotriazole, como mostrado no Esquema 5 adiante, que segue um procedimento apresentado adiante na secção intitulada "Exemplos". 13 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
—MgBr
ΗΝ03
CSCI2 CI2Ni(cfppp)2
Alternativamente, quando o triazole está substituído com um CF3, pode ser empregue o procedimento sintético apresentado no Esquema 6, seguindo procedimentos similares apresentados adiante na secção intitulada "Exemplos".
Q
Esquema 6
Um exemplo da abordagem sintética alternativa delineada no Esquema la está apresentado no Esquema 7 adiante, em que uma anilina é acilada por um ácido S-triazolilmercaptoacético pré-formado. 14 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Esquema 7
Composições farmacêuticas
Quando os compostos da invenção são administrados como parte de uma composição farmacológica, está contemplado que compostos adequados possam ser formulados em mistura com transportadores, excipientes e outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis. Prefere-se particularmente que os compostos da invenção sejam incluídos numa composição farmacêutica que é formulada com um ou mais transportadores não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis. As composições farmacêuticas podem ser formuladas para administração oral na forma sólida ou líquida, para injecção parentérica, ou para administração rectal.
As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas a seres humanos e outros animais por via oral, rectal, parentérica, intravaginal, intraperitoneal, tópica, bucal, ou na forma de uma pulverização oral ou nasal. 0 termo administração "parentérica", como aqui se utiliza, refere-se a modos de administração que incluem, mas não se lhes limitam, injecção e infusão intravenosas, intramusculares, intraperitoneais, subcutâneas e intra-articulares.
As composições farmacêuticas para injecção parentérica compreendem preferivelmente soluções, dispersões, suspensões ou emulsões aquosas ou não aquosas, estéreis, farmaceuticamente aceitáveis, assim como pós estéreis para reconstituição em soluções ou dispersões estéreis injectáveis 15 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ imediatamente antes da utilização. Os exemplos de transportadores, diluentes, solventes e veículos aquosos e não aquosos adequados incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, propilenoglicol, polietilenoglicol, e similares), e suas misturas adequadas, óleos vegetais (tais como azeite), e ésteres orgânicos injectáveis tais como oleato e etilo. A correcta fluidez pode ser mantida, por exemplo, por utilização de materiais de revestimento tais como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersões, e pela utilização de tensioactivos.
As composições podem também conter aditivos tais como conservantes, agentes molhantes, agentes emulsionantes e agentes dispersantes. A prevenção da acção de microorganismos pode ser assegurada pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, fenol ácido sórbico, e similares. Pode ser também desejável incluir agentes isotónicos tais como açúcares, cloreto de sódio, e similares. A absorção prolongada da forma farmacêutica injectável pode ser conseguida pela inclusão de agentes que retardam a absorção tais como monoestearato de alumínio e gelatina.
De modo a prolongar o efeito de um composto da invenção, pode ser desejável desacelerar a absorção do fármaco da injecção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser conseguido pela utilização de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo com fraca solubilidade em água. A taxa de absorção do composto depende então da sua taxa de dissolução, que por sua vez pode depender do tamanho do cristal e da forma cristalina. Alternativamente, a absorção retardada de um composto da invenção administrado parentericamente pode ser realizada por dissolução ou suspensão do fármaco num veículo oleoso.
As formas de depósito injectáveis são preparadas formando matrizes unitárias ou microparticuladas de um composto da invenção em polímeros biodegradáveis, incluindo, mas não se lhes limitando, polilactida-poliglicolida, poli(ortoésteres) e poli (anidridos) . A taxa de libertação do fármaco pode ser controlada fazendo variar a razão de fármaco para polímero e a natureza do polímero particular empregue. As formulações de 16 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ depósito injectáveis podem também ser preparadas aprisionando o composto em lipossomas ou microemulsões que são compatíveis com tecidos corporais.
As formas de dosagem sólidas para administração oral incluem, mas não se lhes limitam, cápsulas, comprimidos, pílulas, pós, drageias e grânulos. Nestas formas de dosagem sólidas, o composto activo é misturado com pelo menos um excipiente ou transportador inertes, farmaceuticamente aceitáveis tais como citrato de sódio ou fosfato dicálcico e/ou (a) enchimentos ou extensores, tais como amidos, lactose, sacarose, glucose, manitol e ácido silícico, (b) aglutinantes, tais como carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarose e goma-arábica, (c) humectantes, tais como glicerol, (d) agentes desintegrantes, tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou de tapioca, ácido algínico, determinados silicatos, e carbonato de sódio, (e) agentes retardadores da dissolução, tais como parafina, (f) aceleradores da absorção, tais como compostos de amónio quaternário, (g) agentes molhantes, tais como álcool cetílico e monoestearato de glicerol, (h) absorventes, tais como caulino e argila de bentonite, e (i) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, laurilsulfato de sódio, e suas misturas. As formas de dosagem sólidas podem também compreender agentes tamponantes.
As composições sólidas podem também ser empregues como enchimentos de cápsulas de gelatina moles e duras utilizando excipientes como lactose ou açúcar do leite assim como polietilenoglicóis de elevado peso molecular e similares. As formas de dosagem sólidas podem ser preparadas com revestimentos e invólucros tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na especialidade da formulação farmacêutica. Podem opcionalmente conter agentes opacificantes e podem também ter uma composição tal que ocorra a libertação do(s) ingrediente (s) activo(s) apenas, ou preferencialmente, numa determinada parte do tracto intestinal, opcionalmente de uma maneira retardada. Os compostos activos podem também estar numa forma micro-encapsulada. 17 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
As formas de dosagem líquidas para administração oral incluem emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Em adição aos compostos activos, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes vulgarmente utilizados na especialidade tais como, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsionantes tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, álcool benzílico, benzoato de benzilo, propilenoglicol, 1,3-butilenoglicol, dimetilformamida, óleos (em particular, óleos de semente de algodão, de amendoim, milho, de germe, azeite, óleo de rícino e óleo de sésamo) , glicerol, álcool tetra-hidrofurfurílico, polietilenoglicóis e ésteres de sorbitano de ácidos gordos, e suas misturas. As composições líquidas orais podem também incluir adjuvantes tais como agentes molhantes, emulsionantes e de suspensão, agentes corantes, edulcorantes, aromatizantes e perfumantes.
As composições para administração rectal ou vaginal são preferivelmente supositórios que podem preparados por mistura dos compostos da presente invenção com excipientes ou transportadores não irritantes adequados tais como manteiga de cacau, polietilenoglicol ou outras ceras de supositórios que são sólidas à temperatura ambiente mas líquidas à temperatura corporal e portanto derretem na cavidade rectal ou vaginal e libertam o composto activo.
Os compostos da presente invenção podem também ser administrados na forma de lipossomas. Como é conhecido na especialidade, os lipossomas são geralmente derivados de fosfolípidos ou outras substâncias lipídicas. Os lipossomas são tipicamente formados a partir de cristais líquidos hidratados mono- ou multi-lamelares que são dispersos num meio aquoso. Pode ser utilizado qualquer lípido não tóxico, fisiologicamente aceitável, capaz de formar lipossomas. As composições na forma de lipossomas podem conter, em adição a um composto da presente invenção, estabilizantes da membrana, conservantes, excipientes, e similares. Os lípidos preferidos são fosfolípidos e fosfatidilcolinas (lecitinas), tanto naturais como sintéticos. Os métodos para formar lipossomas são conhecidos na especialidade. Veja-se, por exemplo, Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), p. 33 et seq. 18 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Os compostos da presente invenção podem ser utilizados na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis derivados de ácidos inorgânicos ou orgânicos. Por "sal farmaceuticamente aceitável" entenda-se os sais que são, no âmbito da opinião médica, adequados para utilização em contacto com os tecidos de seres humanos e animais inferiores sem toxicidade, irritação, resposta alérgica e similares indevidos, e estão comensurados a uma razão risco/beneficio razoável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na especialidade. Por exemplo, S.M. Berge, et al. descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhe em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66: 1 et seq. Os sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação finais dos compostos da invenção ou separadamente por reacção de uma forma de base livre com um ácido adequado. Os sais de adição de ácido representativos incluem, mas não se lhes limitam, acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, gluconato, glutamato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, cloridrato, bromidrato, iodidrato, 2-hidroxietanossulfonato (isetionato), lactato, maleato, metanossulfonato, nicotinato, 2- naftalenossulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, 3- fenilpropionato, fosfato, pivalato, propionato, succinato, sulfato, tartarato, bicarbonato, p-toluenossulfonato e undecanoato. Os grupos contendo azoto básico também podem ser quaternizados com agentes como halogenetos de alquilo inferior como cloretos, brometos e iodetos de metilo, etilo, propilo e butilo; sulfatos de dialquilo como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo e diamilo; halogenetos de cadeia longa tais como cloretos, brometos e iodetos de decilo, laurilo, miristilo e estearilo; halogenetos de arilalquilo como brometos de benzilo e fenetilo e outros. São assim obtidos produtos solúveis ou dispersáveis em água ou em óleo.
Os sais de adição de base podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação finais dos compostos da presente invenção, ou subsequentemente, por reacção de uma porção contendo ácido carboxilico com uma base adequada tal como o hidróxido, o carbonato ou o bicarbonato de um catião metálico farmaceuticamente aceitável ou com amónia ou uma 19 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ amina orgânica primária, secundária ou terciária. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não se lhes limitam, metais alcalinos e alcalino-terrosos tais como sais de litio, sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio e similares, e sais não tóxicos de amónio e de amina quaternária incluindo amónio, tetrametilamónio, tetraetilamónio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, dietilamina, etilamina e similares. Outras aminas orgânicas representativas úteis para a formação de sais de adição de base incluem etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina, piperazina, glucosamina, leucina, e similares.
Os níveis de dosagem efectivos dos ingredientes activos nas composições farmacêuticas da presente invenção podem ser variados de modo a obter-se uma quantidade do(s) composto(s) activo(s) que seja eficaz para se conseguir a resposta terapêutica desejada para um paciente, uma composição e um modo de administração particulares. 0 nível de dosagem seleccionado dependerá da actividade do composto particular, da via de administração, do esquema de dosagem, da gravidade da condição a tratar, e da condição e história médica anterior do paciente a tratar. Os estudos de variação da dosagem são de rotina, e faz parte das capacidades dos peritos na especialidade começar com doses do composto em níveis inferiores aos necessários para se conseguir o efeito terapêutico pretendido e gradualmente aumentar a dosagem até ser conseguido o efeito pretendido. Geralmente, são administrados oralmente a um paciente mamífero níveis de dosagem de cerca de 0,1 a cerca de 100, mais preferivelmente de cerca de 5 a cerca de 50 mg de um composto activo por quilograma de peso corporal por dia. Se pretendido, a dose eficaz diária pode ser dividida em múltiplas doses para fins de administração, e.g., duas a quatro doses separadas por dia.
Os compostos da invenção podem ser administrados sozinhos ou em combinação com outros agentes para o tratamento do VIH. Os compostos adicionais particularmente contemplados incluem inibidores de transcritase inversa do tipo nucleosídico (e.g., lamivudina, zidovudina, estavudina, abacavir, tenofovir ou didanosina), inibidores de transcritase inversa não nucleosídicos (e.g., nevirapina, delavirdina, efavirenz) , inibidores de protease (e.g., ritonavir, saquinavir, 20 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ indinavir, nelfinavir), inibidores de fusão [e.g., enfuvirtida), antagonistas de CCR5, agentes imunoterapêuticos (e.gribavirina, IL-2), e vacinas activas, passivas e/ou terapêuticas. As terapias de combinação de acordo com a presente invenção compreendem a administração de pelo menos um composto da presente invenção, ou um seu derivado funcional, e pelo menos um outro ingrediente farmaceuticamente activo. 0(s) ingrediente(s) activo(s) e os agentes farmaceuticamente activos podem ser administrados separadamente ou em conjunto, e quando administrados separadamente podem-no ser em simultâneo ou separadamente por qualquer ordem. As quantidades do(s) ingrediente(s) activo(s) e do(s) agente(s) farmaceuticamente activo(s) e os tempos relativos de administração serão seleccionados de modo a se conseguir o efeito terapêutico combinado pretendido.
Portanto, a presente invenção proporciona composições farmacêuticas compreendendo um ou mais compostos possuindo uma estrutura de acordo com qualquer das fórmulas 1-5, como acima definido, em que o composto ou compostos estão presentes numa concentração eficaz para inibir uma transcritase inversa e/ou a replicação do VIH numa célula de um paciente quando a composição é administrada ao paciente. Em concretizações preferidas, a composição farmacêutica da invenção compreende um ou mais compostos de acordo com qualquer das fórmulas 2-5. Está particularmente contemplado que possam ser incorporados, numa única composição farmacêutica, uma pluralidade de compostos, de modo a obter uma inibição de grande amplitude de uma pluralidade de enzimas RT mutantes.
Em relação às concentrações adequadas de compostos contemplados em composições farmacêuticas, deverá notar-se que uma pessoa competente na matéria pode prontamente ajustar a quantidade do composto para conseguir a inibição da transcritase inversa e/ou da replicação do VIH. Por exemplo, a inibição da replicação do VIH numa célula (tipicamente uma célula T infectada com o virus VIH) pode ser monitorada in vitro utilizando uma cultura de sangue e um sistema de ensaio à base de luciferase como descrito adiante. Alternativamente, a inibição da transcritase inversa pode ser monitorada in vivo utilizando RT-PCR para determinar a quantidade de cópias de ADN e/ou ARN virai no sangue ou nos nódulos linfáticos 21 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ (contendo células infectadas com VIH) . Está geralmente contemplado que as concentrações adequadas atingirão uma concentração sérica entre 1 nM e 100 uM, e em alguns casos entre 0,01 nM e 1 nM).
EXEMPLOS
As experiências que se seguem são proporcionadas meramente a titulo de exemplo, e não deverão ser entendidos como limitantes do âmbito da invenção.
Incluem compostos da invenção e exemplos comparativos. 2-[5-Bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida (Método A)
1-Ciclopropilnaftaleno
Adicionou-se lentamente brometo de ciclopropilmagnésio (150 mL, 0,5 M em tetra-hidrofurano) a uma solução de 1-bromo-naftaleno (10 g, 50 mmol) e [1,3-bis(difenilfosfino)propano]-dicloroníquel(II) em tetra-hidrofurano (10 mL) agitada a 0°C. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 horas e evaporou-se o solvente sob pressão reduzida. Adicionaram-se EtOAc e cloreto de amónio em água. Após extracção, secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em silica-gel para obter 1-ciclopropilnaftaleno (6,4 g, 76%). l-Ciclopropil-4-nitronaftaleno
Nitrito de sódio (30 mL) foi lentamente adicionado (ao longo de 2 horas) a 1-ciclopropilnaf taleno (6,4 g, 38 mmol) agitado a 0 °C. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante mais 30 min e depois verteu-se lentamente sobre gelo. Adicionou-se água, seguida de EtOAc. Após extracção, lavou-se a camada orgânica com uma solução aquosa a 1% de NaOH, depois lavou-se com água, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se 22 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em sílica-gel para obter l-ciclopropil-4-nitronaftaleno (5,2 g, 64%). l-Amino-4-ciclopropilnaftaleno
Agitou-se uma solução de l-ciclopropil-4-nitronaftaleno (5 g, 23 mmol) em etanol (200 mL), sob hidrogénio e na presença de Pd/C (10% em bruto, 1,8 g) . Agitou-se a mistura reaccional durante a noite, depois filtrou-se sobre celite. Evaporou-se o solvente, e purificou-se o resíduo por cromatografia em sílica-gel para obter l-amino-4-ciclopropilnaftaleno (3,1 g, 73%). l-Ciclopropil-4-isotiocianatonaftaleno
Adicionou-se tiofosgénio (1,1 g, 9,7 mmol) a uma solução de l-amino-4-ciclopropilnaftaleno (1,8 g, 9,7 mmol) e diisopropiletilamina (2 eq) em diclorometano (50 mL) agitada a 0°C. Agitou-se a mistura reaccional durante 5 min e esta temperatura, depois adicionou-se uma solução a 1% de HC1 em água e separou-se a camada orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e evaporou-se o solvente sob pressão reduzida. Adicionou-se hexano e filtrou-se o precipitado resultante. Evaporou-se o solvente para obter l-ciclopropil-4-isotiocianatonaftaleno (1,88 g, 86%) . 5-Amino-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazolo-3-tiol
Agitou-se a 50°C, durante 15 horas, uma mistura de cloridrato de aminoguanidina (3,18 g, 29 mmol), 1-ciclopropil-4-isotiocianatonaftaleno (3,24 g, 14 mmol) e diisopropiletilamina (3 eq) em DMF (20 mL) . Evaporou-se o solvente, adicionou-se tolueno, e evaporou-se o solvente novamente. Adicionou-se uma solução aquosa 2,0 M de hidróxido de sódio (30 mL) e aqueceu-se a mistura reaccional a 50°C durante 60 horas. Filtrou-se a mistura reaccional, e neutralizou-se o filtrado com uma solução aquosa 2,0 M de HC1. Uma nova filtração, e depois evaporação do solvente e purificação do resíduo por cromatografia em sílica-gel, originaram 5-amino-4-(4- ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazolo-3-tiol (2,0 g, 49%) . 23 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ 2-[5-Amino-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il]-4Η-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida
Numa solução de 5-amino-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazolo-3-tiol (708 mg, 2,5 mmol), K2CO3 (380 mg, 2,5 mmol) em DMF (20 mL) adicionou-se 2-cloro-A/-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida (710 mg, 2,5 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante a noite. Após conclusão da reacção, evaporou-se o solvente. Purificou-se o resíduo por cromatografia em sílica-gel para obter 2-[5-amino-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H- [1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida (1,26 g, 95%). 2-[5-Bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida
Adicionou-se ácido dicloroacético (180 uL, 2,2 mmol) a uma suspensão de 2-[5-amino-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)-acetamida (0,59 g, 1,1 mmol), nitrito de sódio (l,5g, 22 mmol) e BTEABr (0,91 g, 3,3 mmol) em dibromometano (30 mL) . Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 4 horas, depois extractou-se com diclorometano e bicarbonato de sódio em água. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo cromatografia em sílica-gel para obter 2-[5-bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida (224 mg, 31%). 24 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ 2-[5-Bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4Η- [1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida (Método B) OCHa
N-N H2N^N^S—rocH3 O
NaNQz Cl^CCQgH
N-N
KjCOj DMF |TA, 24h
er^N^S-^-OCH,
BnEl3NBr CHSr3 ΠΑ, 3h
N-N
UOH THF-BOH-HjO tPC, 1h
Éster metílico de ácido 2-[5-amino-4-(4-ciclopropilnaftalen-1-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]acético
Materiais Quantidade Peso Mol. mmol tiotriazole 2,24 g 282,36 7,9 cloroacetato de metilo 0,73 mL 108,52 8,3 (1, 05 eq) carbonato de potássio 1,21 g 138,21 8,7 (1,1 eq) dime t i1f0 rmami da 4 0 mL (5 mL/mmol)
Procedimento: A uma suspensão de tiotriazole e carbonato de potássio em DMF adicionou-se cloroacetato de metilo, gota a gota, à temperatura ambiente, durante 5 min. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 24 h e verteu-se lentamente para uma solução agitada de água gelada. Recolheu-se o precipitado amarelo-torrado por filtração a vácuo e secou-se sob alto vácuo a 50°C durante 16 h na presença de P2O5, para obter 2,24 g (80%) do composto do titulo. 25 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ Éster metílico de ácido 2-[5-bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-1-il)-4H- [1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]acético
Materiais Quantidade Peso Mol. mmol tiotriazole L10183-58 7 09 mg 354,43 2,0 Bromofórmio 10 mL (5 mL/mmol) nitrito de sódio 2,76 g 69, 00 40 (20 eq) brometo de benziltrietilamónio 1, 63 g 272,24 6,0 (3 eq) Ácido dicloroacético 0,33 mL 128,94 4,0 (2 eq)
Procedimento: A uma solução de éster metílico de ácido 2-[5-amino-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-AH- [1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-acético e cloreto de benziltrietilamónio em bromofórmio adicionou-se nitrito de sódio. À mistura adicionou-se ácido dicloroacético e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 3 h. Carregou-se a mistura directamente numa coluna de sílica-gel de 7 polegadas que foi compactada com CH2C12. A coluna foi primeiro eluída com CH2C12 até que todo o CHBr3 eluiu, e foi depois eluída com acetona/CH2Cl2 (5:95) para se obter 713 mg (85%) do composto do título. Ácido 2-[5-bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]acético
Materiais Quantidade Peso Mol. mmol éster metílico de tiotriazole 1,14 g 418,31 2,7 tetra-hidrofurano 10 mL (~3 mL/mmol) Etanol 10 mL (~3 mL/mmol) Água 10 mL (~3 mL/mmol) hidróxido de lítio 98 mg 23, 95 4,1 (1,5 eq)
Procedimento: A uma solução de éster metílico de ácido 2-[5-bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-AH- [1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-acético, numa mistura de THF e EtOH a 0°C, adicionou-se uma 26 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ solução de LiOH em H20, gota a gota, ao longo de 5 min. A reacção ficou completa após agitação a 0°C durante mais 45 min. Neutralizou-se a mistura reaccional a pH 7 por adição de solução de HC1 0,5 N a 0°C, e concentrou-se a mistura resultante in vacuo para 1/5 do seu volume original. Diluiu-se a mistura com H20 (~20 mL) e acidificou-se a pH 2-3 por adição de HC1 0,5 N para produzir um sólido pegajoso. (Se o produto se tornar num óleo durante a acidificação, recomenda-se a extracção com CH2C12.) Recolheu-se o sólido amarelo-torrado por filtração a vácuo e secou-se sob alto vácuo a 50°C durante 16 h na presença de P2O5 para obter 1,02 g (93%) do composto do titulo.
2-[5-Bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H- [1,2,4 ]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamidA
Materiais Quantidade Peso Mol. mmol Ácido tiotriazolocarboxilico 8 84 mg 404,28 2,2 4-amino-3-clorofenilsulfonamida 452 mg 206,65 2,2 Piridina 22 mL (10 mL/mmol) Oxicloreto de fósforo 0,24 mL 153,33 2,6 (1,2 eq)
Procedimento: A uma solução do ácido carboxilico e da anilina apresentados acima, em piridina a 0°C, adicionou-se POCI3, gota a gota, durante 5 min. A reacção ficou completa após agitação a 0°C durante mais 50 min. Extinguiu-se a mistura reaccional por adição de H20 (1 mL) , depois concentrou-se in vácuo obtendo-se um óleo castanho claro que se diluiu com CH2C12 (200 mL) . Lavou-se a camada orgânica com H20 (1 x 50 mL) , solução saturada de NaHC03 (1 x 50 mL) , e depois salmoura (1 x 50 mL). Secou-se a solução orgânica sobre Na2S04 e concentrou-se até à secura. Triturou-se o óleo resultante com EtOH para obter um sólido amarelo claro. À mistura, adicionou-se H20 para recolher mais sólido. Recolheu-se o sólido amarelo claro por filtração a vácuo e secou-se sob alto vácuo durante 16 h para obter 930 mg (72%) de produto. Recuperou-se produto adicional (132 mg, 10%) por extracção do filtrado com CH2C12 seguida por cromatografia em coluna com acetona/CH2Cl2 (20:80). 27 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ 2-[5-Bromo-4-(4-ciclopropil-7-metoxinaftalen-l-il)-4 H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida
1-ami ηο-4-ciclopropi1-7-metoxinaftaleno A uma solução agitada de 8-amino-2-naftol (5 g, 31,4 mmol) numa mistura de tetra-hidrofurano (50 mL) e diclorometano (100 mL) adicionou-se di-t-butildicarbonato (6,86g, 31,4 mmol) . Agitou-se a mistura a 70°C durante 18 horas. Após a mistura ter arrefecido até à temperatura ambiente, adicionou-se carbonato de sódio aquoso saturado e extractou-se o produto com diclorometano. Lavou-se a camada orgânica com água e salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo obtido por cromatografia em coluna de sílica-gel (diclorometano:acetato de etilo, 9:1) para produzir o derivado N-BOC a. (4,85g, rendimento de 60%) A uma mistura do derivado N-BOC a (4,85g, 18,7 mmol) e trietilamina (3,91, 28,1 mmol) em diclorometano (170 mL) adicionou-se anidrido metanossulfónico (3, 58g, 20,6 mmol) a 0°C. Agitou-se a mistura durante 30 min e verteu-se sobre solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. Extractou-se a camada orgânica com diclorometano, secou-se sobre sulfato de 28 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter o éster metanossulfonato b. (6,22 g, rendimento quantitativo) A uma solução de metanossulfonato b (6,12g, 18,1 mmol) em 150 mL de ácido acético adicionou-se N-bromossuccinimida (3,39g, 19 mmol). Agitou-se a mistura durante 2h e adicionaram-se água e diclorometano. Ajustou-se a camada aquosa a pH 7 por adição de hidróxido de sódio aquoso 10N. Extractou-se a camada orgânica com diclorometano, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para obter o derivado 5-bromo c em bruto. (7,6 g, rendimento quantitativo)
Agitou-se a 50°C, durante 5 dias, uma mistura de c (7,72g, 18,5 mmol) e solução aquosa a 10% de hidróxido de sódio (370 mL) em tetra-hidrofurano (220 mL) . Arrefeceu-se a mistura a 0°C e neutralizou-se com ácido clorídrico concentrado. Concentrou-se a mistura sob pressão reduzida, e extraiu-se o produto com acetato de etilo. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se para obter o naftol d. (5,87g, rendimento de 94%).
Agitou-se, à temperatura ambiente durante 4 horas, uma mistura do naftol d (3,53g, 10,4 mmol), iodeto de metilo (0,65 mL, 10,4 mmol) e hidróxido de sódio (417 mg, 10,4 mmol) em acetona (25 mL). Concentrou-se a mistura resultante e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (85% de hexano/15% de acetato de etilo) para produzir 2,39 g, rendimento de 65%, do éter metílico e.
Agitou-se, à temperatura ambiente durante 1 hora, uma mistura do éter metílico e (3,25g, 9,22 mmol) em HC1 4N em 1,4-dioxano (92 mL). Concentrou-se a mistura sob pressão reduzida e adicionou-se acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio. Lavou-se a camada orgânica extractada com água e salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida para obter 2-metoxi-5-bromo-8-aminonaftaleno f (2,14g, rendimento de 92%). A uma solução do aminonaftaleno f (1 g, 4,0 mmol), ácido ciclopropilborónico (438 mg, 5,1 mmol), fosfato de potássio 29 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ (2,97g, 14mmol) e triciclo-hexilfosfina (112 mg, 0,4 mmol) em tolueno (21 mL) e água (0,8 mL), sob atmosfera de azoto, adicionou-se acetato de paládio (45 mg, 0,2 mmol) com agitação vigorosa. Aqueceu-se a mistura a 100°C durante 3h e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Adicionou-se água e extractou-se a mistura com acetato de etilo, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se. A purificação por cromatografia em coluna (50% de hexano/50% de acetato de etilo) produziu o composto g do titulo. (699 mg, rendimento de 82%)
N-N O
Dissolveu-se o composto g (699 mg, 3,28 mmol) em 18 mL de diclorometano. Adicionaram-se bicarbonato de sódio (9 mL, solução sat.) e tiofosgénio (0,25 mL, 3,28 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante lh. Separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 819 mg, rendimento de 98% de composto h que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Dissolveu-se o composto h (819 mg, 3,21 mmol) em 6 mL de dimetilformamida, adicionaram-se sal cloridrato de aminoguanidina (532 mg, 4,8 mmol) e diisopropiletilamina (0,84 mL, 4,8 mmol), e agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas. Concentrou-se então a mistura e adicionou-se ao resíduo solução aquosa 2M de hidróxido de sódio (10 mL). Agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Neutralizou-se então a mistura resultante com HC1 aquoso IN e recolheu-se o 30 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ precipitado para obter o composto i. (200 mg, rendimento de 25%)
Dissolveram-se os compostos i (63 mg, 0,2 mmol) e j (57 mg, 0,2 mmol) em DMF (2 mL) e adicionou-se carbonato de potássio (30 mg, 0,2 mmol) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 18 horas. Adicionou-se então água à mistura e recolheu-se o precipitado formado para obter 70 mg (57%) de composto k.
Adicionou-se ácido dicloroacético (0,05 mL, 0,226 mmol) a uma mistura de composto k (63 mg, 0,113 mmol), brometo de benziltrietilamónio (93 mg, 0,34 mmol) e nitrito de sódio (156 mg, 2,26 mmol) em dibromometano (5 mL). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 18 horas no escuro. Concentrou-se então a mistura reaccional e purificou-se o resíduo resultante por TLC prep. (95% de diclorometano/5% de metanol) para obter 13,8 mg do ácido sulfónico e 2 mg do composto 1 do titulo. 2-[5-Bromo-4-(4-ciclopropil-2-metilnaftalen-l-il)-4 H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida
A uma solução agitada de 2-metil-l-aminonaftaleno a (7,5g, 47,7 mmol) em tetra-hidrofurano (225 mL) adicionou-se 31 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ N-bromossuccinimida (10g, 56,2 mmol) a 0°C. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4 horas. Adicionou-se água à mistura e extraiu-se o produto com acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (75% de hexano/25% de acetato de etilo) para obter 4,73g, 42% de rendimento do composto b. A uma solução de b (lg, 4,24 mmol), ácido ciclopropilborónico (472 mg, 5,5 mmol), fosfato de potássio (3,14g, 14,8 mmol) e triciclo-hexilfosfina (118 mg, 0,42 mmol) em tolueno (22 mL) e água (0,85 mL) , sob atmosfera de azoto, adicionou-se acetato de paládio (47 mg, 0,21 mmol). Aqueceu-se a mistura a 100°C durante 3h e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Adicionou-se água e extractou-se a mistura com acetato de etilo, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se. A purificação por cromatografia em coluna (90% de hexano/10% de acetato de etilo) produziu o composto c. (728 mg, rendimento de 87%)
Dissolveu-se o composto c (728 mg, 3,7 mmol) em 18 mL de diclorometano. Adicionaram-se bicarbonato de sódio (9 mL, solução sat.) e tiofosgénio (0,28 mL, 3,7 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante lh. Depois, separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 877 mg, rendimento de 99% de composto d que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional.
Dissolveu-se o composto d (877 mg, 3,7 mmol) em 6 mL de dimetilformamida, adicionaram-se sal cloridrato de aminoguanidina (608,5 mg, 5,5 mmol) e diisopropiletilamina (1,0 mL, 5,5 mmol) e agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas. Concentrou-se a mistura e ao resíduo resultante adicionou-se solução aquosa 2M de hidróxido de sódio (15 mL) . Agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Neutralizou-se então a mistura resultante com HC1 aquoso IN e recolheu-se o precipitado para obter o composto e. (472 mg, rendimento de 50%) 32 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Dissolveram-se os compostos e (100 mg, 0,34 mmol) e f (96 mg, 0,34 mmol) em DMF (2 mL) e adicionou-se carbonato de potássio (51 mg, 0,37 mmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 18 horas. Adicionou-se então água à mistura e recolheu-se o precipitado formado e purificou-se por TLC prep. (90% de diclorometano/10% de metanol) para obter 83 mg, rendimento de 45% de composto g.
Adicionou-se ácido dicloroacético (0,03 mL, 0,31 mmol) a uma mistura de composto g (83 mg, 0,15 mmol), brometo de benziltrietilamónio (125 mg, 0,46 mmol) e nitrito de sódio (211 mg, 3,06 mmol) em dibromometano (5 mL). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 18 horas no escuro. Concentrou-se então a mistura reaccional e purificou-se o resíduo resultante por TLC prep. (95% de diclorometano/5% de metanol) para obter 55,7 mg do ácido sulfónico e 7 mg do composto h do título. 2-[5-Bromo-4-(2-cloro-4-ciclopropilfenil)-4H- [1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoilfenil)acetamida
33 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Dissolveu-se ο composto a (1 g, 4,8 mmol) em 10 mL de cloreto de metileno anidro. A esta mistura adicionou-se trietilamina (0,68 mL, 4,8 mmol) e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 5 min. Adicionou-se então cloreto de acetilo (0,5 mL, 7,2 mmol) a 0°C e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionaram-se água e diclorometano e separaram-se as camadas. Secou-se então a camada orgânica sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 1,11 g, rendimento de 92% de composto b. A uma solução de b (500 mg, 2,01 mmol), ácido ciclopropilborónico (225 mg, 2,62 mmol), fosfato de potássio (1,49 g, 7,04 mmol) e triciclo-hexilfosfina (56 mg, 0,2 mmol) em tolueno (10 mL) e água (0,4 mL) , sob atmosfera de azoto, adicionou-se acetato de paládio (23 mg, 0,1 mmol). Aqueceu-se a mistura a 100°C durante 3h e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Adicionou-se água e extractou-se a mistura com acetato de etilo, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 550 mg de produto c em bruto que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Dissolveu-se o composto c (500mg, 2,4 mmol) em 4 mL de etanol. Adicionou-se HC1 aquoso IN (4 mL) e agitou-se a mistura em refluxo durante 8 horas. Removeu-se o solvente in vacuo para obter 440 mg de composto d que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Dissolveu-se o composto d (440 mg, 2,6 mmol) em 14 mL de diclorometano. Adicionaram-se bicarbonato de sódio (7 mL, solução sat.) e tiofosgénio (0,2 mL, 2,6 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante lh. Depois, separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 877 mg, rendimento de 99% de composto e que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Dissolveu-se o composto e (447 mg, 2,1 mmol) em 3 mL de dimetilformamida, adicionaram-se sal cloridrato de aminoguanidina (355 mg, 3,2 mmol) e diisopropiletilamina (0,56 mL, 3,2 mmol) e agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas. Concentrou-se então a mistura e ao resíduo 34 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ resultante adicionou-se solução aquosa 2M de hidróxido de sódio (10 mL) . Agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Neutralizou-se então a mistura resultante com HC1 aquoso IN e recolheu-se o precipitado (produto) para obter o composto f (240 mg, rendimento de 44%).
Dissolveram-se os compostos f (89 mg, 0,33 mmol) e g (94 mg, 0,33 mmol) em DMF (1,5 mL) e adicionou-se carbonato de potássio (51 mg, 0,37 mmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 18 horas. Adicionou-se então água à mistura e recolheu-se o precipitado formado e purificou-se por TLC prep. (90% de diclorometano/10% de metanol) para obter 116 mg, rendimento de 68% de composto h.
Adicionou-se ácido dicloroacético (0,04 mL, 0,46 mmol) a uma mistura de composto h (116 mg, 0,23 mmol), brometo de benziltrietilamónio (183 mg, 0,68 mmol) e nitrito de sódio (304 mg, 4,6 mmol) em dibromometano (5 mL). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 18 horas no escuro. Concentrou-se então a mistura reaccional e purificou-se o resíduo resultante por TLC prep. (95% de diclorometano/5% de metanol) para obter 99,10 mg do ácido sulfónico e 17,90 mg do composto í do título. Ácido 4-(2-(5-bromo-4-(2-cloro-4-ciclopropil-6-metilfenil)-4H-1,2,4-triazol-3-iltio)acetamido)-3-clorobenzóico
1 2 3
N-N O
4 5 6 35 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
"Ν Η Ç1 ík/CI ο
COOH A uma solução de 1 (lg, 4,5 mmol) , ácido ciclopropilborónico (506 mg, 5,9 mmol), fosfato de potássio (3,34g, 15,8 mmol) e triciclo-hexilfosfina (126 mg, 0,45 mmol) em tolueno (20 mL) e água (0,76 mL) , sob atmosfera de azoto, adicionou-se acetato de paládio (51 mg, 0,23 mmol). Aqueceu-se a mistura a 100°C durante 3h e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Adicionou-se água e extractou-se a mistura com acetato de etilo, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 775 mg de 2-cloro-4-ciclopropil-6-metilbenzenamina (2) em bruto que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Dissolveu-se o composto 2 (775 mg, 4,3 mmol) em 9 mL de diclorometano. Adicionaram-se bicarbonato de sódio (4,5 mL, solução sat.) e tiofosgénio (0,33 mL, 4,3 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante lh. Depois, separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 935 mg de l-cloro-5-ciclopropil-2-isotiocianato-3-metilbenzeno (3) que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Dissolveu-se o composto 3 (935 mg, 4,2 mmol) em 5 mL de dimetilformamida, adicionaram-se sal cloridrato de aminoguanidina (695 mg, 6,3 mmol) e diisopropiletilamina (1,1 mL, 6,3 mmol) e agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas. Concentrou-se então a mistura e ao resíduo resultante adicionou-se solução aquosa 2M de hidróxido de sódio (20 mL) . Agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Neutralizou-se então a mistura resultante com HC1 aquoso IN e recolheu-se o precipitado (produto) para obter 5-amino-4-(2-cloro-4-ciclopropil-6-metilfenil)-4H-1,2,4-triazolo-3-tiol (4) (780 mg, rendimento de 66%).
Dissolveram-se, o composto 4 (100 mg, 0,36 mmol) e ácido 3-cloro-4-(2-cloroacetamido)benzóico (5) (88 mg, 0,36 mmol) em DMF (2 mL) e agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas. 36 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Adicionou-se então água e extractou-se a mistura com acetato de etilo. Separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 192 mg, de ácido 4-(2-(5-amino-4-(2-cloro-4-ciclopropil-6-metilfenil)-4H-1,2,4-triazol-3-iltio)acetamido)-3-clorobenzóico (6) em bruto que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Adicionou-se ácido dicloroacético (0,065 mL, 0,78 mmol) a uma mistura do composto 6 (192 mg, 0,39 mmol), brometo de benziltrietilamónio (318 mg, 1,17 mmol) e nitrito de sódio (538 mg, 7,8 mmol) em dibromometano (10 mL). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 18 horas no escuro. Concentrou-se então a mistura reaccional e purificou-se o resíduo resultante por TLC prep. (95% de diclorometano/5% de metanol) para obter 88 mg, rendimento de 42% de ácido 4-(2-(5-bromo-4-(2-cloro-4-ciclopropil-6-metilfenil)-4H-1,2,4-triazol-3-iltio)acetamido)-3-clorobenzóico (7). Ácido 4-[2-(5-bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-1,2,4-triazol-3-iltio)acetamido]-3-clorobenzóico
A uma solução de 1 (500 mg, 2,01 mmol), ácido ciclopropilborónico (225 mg, 2,62 mmol), fosfato de potássio (l,49g, 7,04 mmol) e triciclo-hexilfosfina (56 mg, 0,2 mmol) 37 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ em tolueno (10 mL) e água (0,4 mL) , sob atmosfera de azoto, adicionou-se acetato de paládio (23 mg, 0,1 mmol). Aqueceu-se a mistura a 100°C durante 3h e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Adicionou-se água e extractou-se a mistura com acetato de etilo, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 550 mg de 4-ciclopropilnaftalen-1-amina (2) em bruto que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Dissolveu-se o composto 2 (440 mg, 2,6 mmol) em 14 mL de diclorometano. Adicionaram-se bicarbonato de sódio (7 mL, solução sat.) e tiofosgénio (0,2 mL, 2,6 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante lh. Depois, separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 877 mg, 99% de rendimento, de l-ciclopropil-4-isotiocianatonaftaleno (3) que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional
Dissolveu-se o composto 3 (447 mg, 2,1 mmol) em 3 mL de dimetilformamida, adicionaram-se sal cloridrato de aminoguanidina (355 mg, 3,2 mmol) e diisopropiletilamina (0,56 mL, 3,2 mmol) e agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas. Concentrou-se então a mistura e ao resíduo resultante adicionou-se solução aquosa 2M de hidróxido de sódio (10 mL) . Agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Neutralizou-se então a mistura resultante com HC1 aquoso IN e recolheu-se o precipitado (produto) para obter 5-amino-4-(4- ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-1,2,4-triazolo-3-tiol (4). (240 mg, rendimento de 44%).
Dissolveram-se, o composto 4 (789 mg, 2,79 mmol) e ácido 3-cloro-4-(2-cloroacetamido)benzóico (5) (693 mg, 2,79 mmol), em DMF (6 mL) e agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas. Adicionou-se então água e extractou-se a mistura com acetato de etilo. Separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 1,04 g, rendimento de 75% de ácido 4-(2-(5-amino-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-1,2,4-triazol-3-iltio)acetamido)-3-clorobenzóico (6).
Adicionou-se ácido dicloroacético (0,35 mL, 4,2 mmol) a uma mistura de composto 6 (1,04 g, 2,1 mmol), brometo de 38 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ benziltrietilamónio (1,65 g, 6,1 mmol) e nitrito de sódio (2,9g, 42,1 mmol) em dibromometano (44 mL) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 18 horas no escuro. Concentrou-se então a mistura reaccional e purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (95% de diclorometano/5% de metanol) para obter 393 mg, rendimento de 34% de ácido 4-(2-(5-bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-1,2,4-triazol-3-iltio)acetamido)-3-clorobenzóico (7). Ácido 4-(2-(5-bromo-4-(7-metoxi-4-metilnaftalen-l-il)-4H-1,2,4-triazol-3-iltio)acetamido)-3-clorobenzóico
Agitou-se, em refluxo durante a noite, uma mistura de 8-amino-2-naftol 1 (8,2g, 52 mmol), benzaldeido (16 mL, 156 mmol) e sulfato de sódio (41,3g, 291 mmol) em THF (100 mL) . Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (hexano/acetato de etilo/trietilamina, 75/23/2) para obter 39 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ 12,65 g de (Ε)-8-(benzilidenoamino)naftalen-2-ol (2) impuro que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Agitou-se à temperatura ambiente, durante 2 horas, uma mistura de 2 (12,65 g, 51,2 mmol) , Mel (6,4 mL, 102 mmol) e NaOH (6,14 g, 153 mmol) em acetona (125 mL) . Concentrou-se a mistura resultante e dissolveu-se o resíduo em éter, lavou-se com água e salmoura e concentrou-se. Dissolveu-se o resíduo resultante em HC1 2N-THF (780 mL, 2:1) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1,5 h. Lavou-se a solução resultante com éter, basificou-se a camada aquosa com Na2C03 e extractou-se com éter. Lavou-se a camada orgânica com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (Hex/EtOAc 3:1) para obter 6,94g, rendimento de 78%, de 7-metoxinaftalen-l-amina (3). A uma mistura agitada de 3 (6,94 g, 40 mmol) e carbonato de potássio (16,6 g, 120 mmol) em acetona (100 mL) adicionou-se brometo de benzilo (19,0 mL, 160 mmol) a 0°C.
Manteve-se a mistura em refluxo durante 3 dias e arrefeceu-se à temperatura ambiente. Removeu-se o precipitado e concentrou-se o filtrado. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (Hex a 100%) para remover o brometo de benzilo não reagido e depois com acetato de etilo (100%) para obter 11,75 g, rendimento de 83%, de N,N-dibenzil-7-metoxinaftalen-l-amina (4). A uma solução agitada de DMF (30 mL) adicionou-se POCI3 (10,65 mL, 116 mmol) ao longo de 30 minutos a 0°C. Filtrou-se então a mistura a 0°C durante 30 minutos e adicionou-se 4 (ll,75g, 33,2 mmol) em DMF (120 mL). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante seis dias e verteu-se sobre água gelada. Extractou-se a mistura produto com diclorometano e lavou-se a camada orgânica com água, bicarbonato de sódio aquoso e salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 13,58 g de 4-(dibenzilamino)-6-metoxi-l-naftaldeído (5) que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Agitou-se uma mistura de 5 (5,0 g, 13,1 mmol) e
Pd/Carbono (812 mg) em metanol (150 mL) , sob atmosfera de 40 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ hidrogénio (40 PSI) durante 18 horas. Passou-se a mistura através de celite e concentrou-se. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (Hex/ EtOAC 3:1) para obter 826 mg, rendimento de 35%, de 7-metoxi-4-metilnaftalen-1-amina (6) .
Dissolveu-se o composto 6 (826 mg, 4,4 mmol) em 25 mL de diclorometano. Adicionaram-se bicarbonato de sódio (15 mL, solução sat.) e tiofosgénio (0,34 mL, 4,4 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante lh. Depois, separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 1,9 g, rendimento de 99%, de 4-isotiocianato-6-metoxi-l-metilnaftaleno (7) que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional
Dissolveu-se o composto 7 (1,0 g, 4,4 mmol) em 10 mL de dimetilformamida, adicionaram-se sal cloridrato de aminoguanidina (723 mg, 6,5 mmol) e diisopropiletilamina (1,14 mL, 6,5 mmol) e agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas. Concentrou-se então a mistura e ao resíduo resultante adicionou-se solução aquosa 2M de hidróxido de sódio (10 mL) . Agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Neutralizou-se então a mistura resultante com HC1 aquoso IN e recolheu-se o precipitado (produto) para obter 5-amino-4-(7-metoxi-4-metilnaftalen-l-il)-4H-1,2,4-triazolo-3-tiol (8). (1,14 mg, rendimento de 91%).
Dissolveram-se, o composto 8 (200 mg, 0,7 mmol) e ácido 3-cloro-4-(2-cloroacetamido)benzóico (9) (174 mg, 0,7 mmol), em DMF (3 mL) , e agitou-se a mistura a 50°C durante 18 horas. Adicionou-se então água e extractou-se a mistura com acetato de etilo. Separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para obter 304 mg de ácido 4 — (2 — (5-amino-4-(7-metoxi-4-metilnaftalen-l-il)-4H-l,2,4-triazol-3-iltio)acetamido)-3-clorobenzóico (10) que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional.
Adicionou-se ácido dicloroacético (0,1 mL, 1,2 mmol) a uma mistura de composto 10 (304 mg, 0,6 mmol), brometo de benziltrietilamónio (492 mg, 1,8 mmol) e nitrito de sódio (828 mg, 12 mmol) em dibromometano (10 mL) . Agitou-se a 41 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ mistura à temperatura ambiente durante 18 horas no escuro. Concentrou-se então a mistura reaccional e purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (95% de diclorometano/5% de metanol) para obter 80 mg, rendimento de 24%, de ácido 4-(2-(5-bromo-4-(7-metoxi-4-metilnaftalen-l-il)-4H-1,2,4-triazol-3-iltio)acetamido)-3-clorobenzóico (11). 2-[5-Bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-N-propionilsulfamoilfenil)acetamida ci
Carregou-se um balão de fundo redondo de 50 mL com 2-[5-bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[l,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida (45 mg, 0,076 mmol), EDC (29 mg, 0,15 mmol) e ácido propiónico (6,7 pL, 0,09 mmol) na mistura de 5 mL de THF e 5 mL de cloreto de metileno. À mistura adicionou-se DMAP (18,3 mg, 0,15 mmol) em uma só porção. Agitou-se a mistura reaccional à TA durante 14h. Evaporaram-se os solventes sob pressão reduzida obtendo-se um resíduo oleoso denso. Redissolveu-se o resíduo em 20 mL de cloreto de metileno, depois lavou-se com 20 mL de solução aq. 2,0 M de HC1. Secou-se a camada orgânica sobre Na2SC>4. Removeu-se o solvente através de um rotavapor obtendo-se um resíduo oleoso. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna de sílica-gel com uma mistura de metanol e cloreto de metileno (1:9). Obtiveram-se 18,5 mg (38%) do produto pretendido na forma de sólidos brancos. 42 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ 2-[5-Bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4Η-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-propionilsulfamoilfenil)lisinamida
Cl
Carregou-se um balão de fundo redondo de 25 mL com 2-[5-bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida (50 mg, 0,085 mmol), EDC (35 mg, 0,18 mmol), Boc-Lys(Boc)-OH DCHA (47 mg, 0,09 mmol) na mistura de 5 mL de THF e 5 mL de cloreto de metileno. À mistura adicionou-se DMAP (16 mg, 0,13 mmol) em uma só porção. Agitou-se a mistura reaccional à TA durante 14 h. Evaporaram-se os solventes sob pressão reduzida obtendo-se um resíduo oleoso denso. Dissolveu-se o resíduo em 5mL de HC1 4,0 M em dioxano. Agitou-se a mistura reaccional à TA durante 14 h. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se um resíduo oleoso denso. Lavou-se o resíduo sucessivamente com 10 mL de cloreto de metileno e 10 mL de éter obtendo-se o composto do título na forma de um sólido amarelo claro (44 mg, 65%) .
Reagentes 1-Metil-4-ni tronaftaleno
A 1-metilnaftaleno (8,0 g, 56 mmol) num balão de fundo redondo, a 0°C, adicionou-se ácido nítrico (26 mL) , gota a gota. (NOTA: Uma adição lenta de ácido nítrico é muito importante para evitar a formação dos outros régio-isómeros). Após agitação da mistura reaccional durante mais 15 min a 0°C, verteu-se sobre 65 mL de H2O. Extractou-se a solução aquosa com benzeno duas vezes e lavou-se a solução em benzeno combinada com solução de NaOH a 10%, secou-se com Na2SC>4, e concentrou-se. A cromatografia em sílica-gel (EtOAc:Hexanos = 43 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ 5:95) originou ο produto ainda contendo uma pequena percentagem dos outros régio-isómeros. Recristalizou-se com EtOAc/Hexanos para obter 9,0 g (43 %) de 1. 4-Metilnaftalen-l-ilamina
A uma solução de l-metil-4-nitronaftilamina (4,0 g, 21 mmol) em etanol (300 mL) adicionou-se Níquel de Raney (4 espátulas) . Agitou-se a mistura sob H2 (1 atm) durante 16 h. Filtrou-se a mistura reaccional através de uma almofada de Celite e concentrou-se. A purificação por cromatografia flash em coluna de sílica-gel (EtOAc:Hexanos = 15:85) proporcionou o produto (3,2 g, 75%). 4-Etil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-l-ilamina NH2 0 procedimento foi essencialmente idêntico à via da 4-metilnaftalen-l-ilamina como descrito acima, contudo, iniciada com uma solução de 5-etil-8-nitro-l,2,3,4-tetra-hidronaftaleno (795 mg, 3,95 mmol). 4-Metilnaftalen-l-iltiosemicarbazida
A uma solução de tiofosgénio (0,33 mL, 4,3 mmol) em cloreto de metileno anidro (5 mL) a 0°C adicionou-se, gota a gota, uma solução de 4-metilnaf tilamina (671 mg, 4,3 mmol) e diisopropiletilamina (1,5 mL, 8,6 mmol) em cloreto de metileno anidro (5 mL). Após agitação da mistura reaccional durante um adicional de 10 min a 0°C, lavou-se com solução a 1% de HC1 e 44 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ depois com Η20, secou-se com Na2S04 e concentrou-se para obter um óleo castanho-escuro. Dissolveu-se o óleo em hexanos (15 mL) e filtrou-se a pasta castanha resultante.
Concentrou-se o filtrado para obter um tioisocianato puro. A uma solução do tioisocianato em acetonitrilo anidro (20 mL) adicionou-se hidrazina (0,13 mL, 4,3 mmol) à TA. Após agitação à TA durante 20 min, concentrou-se a mistura. Triturou-se o óleo amarelo resultante com EtOAc:Hexanos (1:1) para obter (701 mg, rendimento de 71%) de produto na forma de um sólido esbranquiçado. 5-Difluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]trizolo-3-tiol
Aqueceu-se uma solução de 4-metilnaftiltiosemicarbazida (180 mg, 0,78 mmol) em ácido difluoroacético (2 mL) a 100°C durante 4 h. Quando se arrefeceu a mistura até à temperatura ambiente, cristalizou um sólido branco da mistura reaccional. Para recolher mais produtos, adicionaram-se 2 mL de hexanos à mistura. A filtração originou (179 mg, rendimento de 79%) produto na forma de um sólido branco. 5-Fluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]trizolo-3-tiol
A uma solução de 4-metilnaftiltiosemicarbazida (158 mg, 0,68 mmol) em MeOH (10 mL) e NaOMe 4,37 M (0,23 mL, 1,02 mmol) adicionou-se fluoroacetato de etilo (0,13 mL, 1,37 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 17 h. Concentrou-se a mistura reaccional, adicionou-se água e lavou-se com éter dietilico. Ajustou-se o pH da camada aquosa com HC1 e removeu-se o produto por filtração na forma de um sólido 45 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ branco (78 mg, rendimento de 42%) . 1H RMN (DMSO, 300 MHz) δ 14.26 (s, 1H) , 8,14 (d, J= 8,4 Hz, 1H) , 7, 67-7,52 (m, 4H) , 7.26 (d, J= 8,4 Hz, 1H) , 5,20 (dd, J= 12,0, 21,0 Hz, 1H) , 5,03 (dd, J= 12,0, 20,4 Hz, 1H) , 2,74 (s, 3H) . 2-[5-Difluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsufanil]-N-(2-metil-4-sulfamoílfenil)acetamida
Numa solução de 5-difluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazolo-3-tiol (53 mg, 0,18 mmol), K2C03 (27,0 mg, 0,20 mmol) em DMF (1,5 mL) adicionou-se 2-metil-N-(2-metil-4-sulfamoílfenil)acetamida (47 mg, 0,18 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 h. Após a conclusão da reacção, adicionou-se H20 (4,0 mL) à mistura reaccional e agitou-se até ocorrer a precipitação e filtrou-se o produto (77,0 mg, rendimento de 83%). 1H RMN (DMSO, 300 MHz) δ 9,84 (s largo, 1H) , 8,18 (d, J= 8,0 Hz, 1H) , 7,70-7,53 (m, 7H) , 7,18 (t, J= 51,5 Hz, 1H) , 7,11 (d, J= 8,0 Hz, 1H) , 4,26 (s, 2H), 2,82 (s, 3H), 2,27 (s, 3H). N-(2-Cloro-4-sulfamoilfenil)-2-[5-difluorometil-4-(4-etil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3- i1sulfanil]acetamida
Numa solução de 5-difluorometil-4-(4-etil-5, 6, 7, 8-tetra-hidronaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazolo-3-tiol (85 mg, 0,28 mmol), K2C03 (41,8 mg, 0,30 mmol) em DMF (2,0 mL) adicionou-se 2-cloro-N- (2-metil-4-sulfamoílfenil)acetamida (77,8 mg, 0,28 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante a noite. Após a conclusão da reacção, adicionou-se MeOH à 46 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ mistura reaccional e agitou-se até ocorrer a precipitação e filtrou-se o produto (71,0 mg, rendimento de 46%). XH RMN (DMSO, 300 MHz) δ 10,14 (s, 1H) , 8,03 (d, J= 8,1 Hz, 1H) , 7,88 (d, J= 2,4 Hz, 1H) , 7,74 (dd, J = 2,1, 8,4 Hz, 1H) , 7,46 (s largo, 2H), 7,34-7,00 (m, 3H), 4,33 (q aparente, J = 15,6 Hz, 2H) , 2,71 (t, J = 5,7 Hz, 2H) , 2,62 (q, J= 7,5 Hz, 2H), 2,28-2,08 (m, 2H) , 1,72-1, 60 (m, 4H) , 1,19 (t, J = 7,5 Hz, 3H) . N-(2-Cloro-4-sulfamoílfenil)-2-[5-difluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]acetamida
Cl
Numa solução de 5-difluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazolo-3-tiol (59 mg, 0,20 mmol), K2CO3 (30,0 mg, 0,22 mmol) em DMF (1,5 mL) adicionou-se 2-cloro-N-(2-metil-4-sulfamoílfenil)acetamida (57 mg, 0,20 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 h. Após a conclusão da reacção, adicionou-se H2O (4,0 mL) à mistura reaccional e agitou-se até ocorrer a precipitação e filtrou-se o produto (77,0 mg, rendimento de 71%). 1H RMN (DMSO, 300 MHz) δ 10,11 (s largo, 1H) , 8,18 (d, J= 10,0 Hz, 1H) , 8,01 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,75-7,54 (m, 5H), 7,46 (s largo, 2H) , 7,18 (t, J= 50,0 Hz, 1H) , 7,11 (d, J= 10,0 Hz, 1H) , 4,32 (s, 2H), 2,27 (s, 3H). 2-[5-Fluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-metil-4-sulfamoilfenil)acetamida
Numa solução de 5-fluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazolo-3-tiol (89 mg, 0,33 mmol), K2C03 (50,0 mg, 0,36 mmol) em DMF (2,0 mL) adicionou-se 2-cloro-M- (2-metil-4- 47 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ sulfamoílfenil)acetamida (87 mg, 0,33 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 h. Após a conclusão da reacção, adicionou-se H20 (2,0 mL) à mistura reaccional e agitou-se até ocorrer precipitação e filtrou-se. Da purificação por HPLC de fase inversa resultou o produto na forma de um sólido (53,3 mg, rendimento de 50%). 1H RMN (DMSO, 300 MHz) δ 9,84 (s largo, 1H), 8,18 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,71- 7,53 (m, 7H) , 7,26 (s, 2H) , 7,10 (d, J= 8,7 Hz, 1H) , 5,34 (dd, J= 12,0, 27,3 Hz, 1H) , 5,18 (dd, J= 12,3, 26,4 Hz, 1H) , 4,22 (s, 2H), 2,75 (s, 3H), 2,25 (s, 3H). N-(2-Cloro-4-sulfamoílfenil)-2-[5-fluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]acetamida
Cl
Numa solução de 5-fluorometil-4-(4-metilnaftalen-l-il)-4H-[ 1,2,4 ] triazolo-3-tiol (89 mg, 0,33 mmol), K2C03 (50, 0 mg, 0,36 mmol) em DMF (2,0 mL) adicionou-se 2-cloro-N-(2-cloro-4-sulfamoilfenil)acetamida (93 mg, 0,33 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 h. Após a conclusão da reacção, adicionou-se H20 (2,0 mL) à mistura reaccional e agitou-se até ocorrer precipitação e filtrou-se para originar um sólido (126,8 mg, rendimento de 74%) . 1H RMN (DMSO, 300 MHz) δ 10,12 (s largo, 1H) , 8,18 (d, J= 8,7 Hz, 1H) , 8,04 (dd, J= 4,8, 8,7 Hz), 7,87 (s, 1H) , 7,76-7,52 (m, 5H) , 7,46 (s, 2H) , 7,11 (d, J= 8,7 Hz, 1H) , 5,35 (dd, J = 12,3, 26,7 Hz, 1H) , 5,19 (dd, J= 11,7, 25,8 Hz, 1H) , 4,26 (s, 2H), 2,75 (s, 3H). 48 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ Ν-(2-Cloro-4-sulfamoílfenil)-2-[4-(4-etil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-l-il)-5-fluorometil-4H-[1,2,4]triazol-3- i1sulfanil]acetamida
Cl
Numa solução de 4-(4-etil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-l-il) -5-fluorometil-4H-[1,2,4]triazolo-3-tiol (85 mg, 0,29 mmol), K2CO3 (44,4 mg, 0,32 mmol) em DMF (2,0 mL) adicionou-se 2-cloro-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida (82,6 mg, 0,29 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 h. Após a conclusão da reacção, adicionou-se H2O (2,0 mL) à mistura reaccional e agitou-se até ocorrer precipitação e filtrou-se para originar um sólido (73,0 mg, rendimento de 47%). ^ NMP (DMSO, 300 MHz) δ 10,15 (s, 1H) , 8,05 (d, J= 8,4 Hz, 1H) , 7,87 (s, 1H) , 7,74 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,46 (s, 2H) , 7,21-7,06 (m, 2H) , 5,26 (d, J= 48,0 Hz. 2H) , 4,29 (q aparente, J = 15,6 Hz, 2H) , 2,71-2,58 (m, 3H) , 2,25 (s,lH), 2,25-2, 09 (m, 2H) , 1,72-1,59 (m, 4H) , 1,19 (t, J= 7,5 Hz, 3H) .
Utilizando os materiais de partida apropriados, prepararam-se os seguintes compostos por procedimentos análogos aos métodos divulgados acima: 2-[5-Bromo-4-(2-cloro-4-(ciclopropilmetil)fenil)-AH-[1,2,4]— triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida 2-[5-Bromo-4-(2-cloro-4-ciclobutilfenil)-AH-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoilfenil)acetamida 2-[5-Bromo-4-(2-cloro-4-(ciclopropilmetil)naftalen-l-il)-AH- [1.2.4] triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)-acetamida 2-[5-Bromo-4-(2-cloro-4-ciclopropilfenil)-AH-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida 2- [5-Trifluorometil-4- (2-cloro-4-ciclopropilnaftalen-l-il) -AH- [1.2.4] triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoilfenil)-acetamida 49 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ 2-[5-Bromo-4-(4-ciclopropil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-l-il)-AH-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)-acetamida 2-[5-Bromo-4-(4-etilnaftalen-l-il)-AH-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida 2-[5-Bromo-4-(4-etil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-l-il)-AH-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)-acetamida 2-[5-Bromo-4-(5-ciclopropilquinolin-8-il)-AH-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida 2-[5-Bromo-4-(5-ciclopropilisoquinolin-8-il)-AH-[1,2,4]— triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida 2-[5-Bromo-4-(5-ciclopropilcinolin-8-il)-AH-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida 2-[5-Bromo-4-(1-metilacenaften-5-il)-AH- [1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoilfenil)acetamida 2-[5-Bromo-4-(2-metilacenaften-5-il)-AH-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoilfenil)acetamida 2-[5-Bromo-4-(1,1-dimetilacenaften-5-il)-AH-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoilfenil)acetamida
Inibição de transcritase inversa de VIH-1
Rastrearam-se os compostos quanto a actividade inibitória contra vírus da imunodeficiência humana de tipo 1 (VIH-1) utilizando um ensaio à base de células de elevado rendimento utilizando VIH-1 que expressa luciferase de pirilampo como gene repórter e pseudotipado com glicoproteína do envelope do vírus da estomatite vesicular (VSV-G). Os procedimentos experimentais foram essencialmente como descrito por Connor et al. em Journal of Vlrology (1996), 70: 5306-5311 ("Characterization of the functional properties of env genes from long-term survivors of human immunodeficiency vírus type 1 infection") , e Popik et al. em Journal of Vlrology (2002), 76: 4709-4722 ("Human immunodeficiency virus type 1 uses lipid raft-colocalized CD4 and chemokine receptors for productive entry into CD4+ T cells") . Deve notar-se particularmente que o vírus contém duas mutações introduzidas no gene de RT (K103N e Y181C, criadas por mutagénese por PCR) que tornam o vírus altamente resistente a fármacos não 50 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ nucleosídicos para VIH-1 correntes. Geraram-se reservas de vírus por co-transfecção de ADN plasmídico que codifica VSV-G com vector pNL4-3Env(-)Luc(+) em células 293T. Sessenta e quatro horas após a transfecção, recolheu-se o meio contendo o vírus, por centrifugação, e armazenou-se congelado a -80°C.
Infectaram-se células HeLa com o vírus pseudotipado com VSV-G na presença de compostos de rastreio num formato em placa de microtítulo de 384 poços. Quarenta e oito horas após a infecção inicial, adicionou-se às células tampão de lise e Reagente do Ensaio com Luciferase (Promega) e determinou-se a actividade da luciferase por contagem da luminescência resultante utilizando um luminómetro LJL. Como o gene da luciferase é transportado no genoma do vírus, o seu nível de expressão reflecte directamente o nível de replicação do vírus na presença de um composto.
Para avaliar a actividade do composto contra VIH-1 de tipo selvagem, empregou-se uma linha celular HeLa-JC53 que expressa níveis elevados de CD4 e CCR5 (Platt et al., Journal of Virology (1998), 72: 2855-2864: "Effect of CCR5 and CD4 cell surface concentrations on infection by macrophagetropic isolates of human immunodeficiency virus type 1"). A linha celular foi modificada por isolamento de uma linha celular estável que expressa luciferase sob o controlo do promotor de VIH-1 (repetição terminal longa, í.e., LTR) . A infecção por VIH-1 desta linha celular estimula a transcrição de luciferase a partir do promotor de VIH-1 e o nível de expressão do gene da luciferase é proporcional ao nível de replicação do vírus (Harrington et al. em Journal of Virology Methods (2000), 88: 111-115: "Direct detection of infection of HIV-1 in blood using a centrifugation-indicator cell assay"; e Roos et al. em Virology (2000), 273: 307-315: "LuSIV cells: a repórter cell line for the detection and quantitation of a single cycle of HIV and SIV replication") . Os procedimentos para a infecção pelo vírus, para o teste dos compostos e para a determinação da actividade da luciferase, foram os mesmos que para o VIH-1 pseudotipado com VSV-G.
Utilizaram-se duas abordagens para avaliar a citotoxicidade dos compostos positivos encontrados nos ensaios com o vírus VIH-1. A primeira abordagem empregou outra linha 51 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ celular HeLa-JC53 modificada que expressa constitutivamente um nível elevado de luciferase sem infecção pelo vírus. 0 nível de expressão da luciferase nestas células serviu como indicador para a replicação celular na presença dos compostos. Os procedimentos para o teste dos compostos e para a determinação da actividade da luciferase foram os mesmos que para os testes de infecção pelo vírus. 0 outro ensaio de toxicidade utilizou células HeLa-JC53 e um kit de ensaio MTS comercialmente disponível (Promega) que mede a função das mitocôndrias das células.
Utilizando métodos similares, como descrito acima, sintetizaram-se 2-[5-bromo-4-(4-ciclopropilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-metil-4-sulfamoílfenil)acetamida e 2-[5-bromo-4-(4-etilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-sulfamoílfenil)acetamida, assim como o análogo Ν-4-carbamilo, 2-[5-bromo-4-(4-etilnaftalen-l-il)-4H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil]-N-(2-cloro-4-carbamoílfenil)-acetamida e o análogo Ν-4-carboxilo. Testou-se cada um dos compostos contra um painel de transcritases inversas de VIH mutantes, incluindo 20 dos 22 mutantes que se encontram em cerca de 2% ou mais das amostras de pacientes que são resistentes ao inibidor de RT de VIH não nucleosídico mais amplamente utilizado, o efavirenz, ( (4S)-6-cloro-4-(ciclo-propiletinil)-1,4-di-hidro-4-(trifluorometil)-2H-3,1-benzoxazin-2-ona). Para cada um dos 20 mutantes altamente prevalecentes testados, pelo menos um destes compostos foi mais de 20 vezes mais potente do que o efavirenz ou apresentou uma EC50 inferior a 1 nM. Na maioria dos casos ambos os critérios foram cumpridos. Na maioria dos casos todos os três compostos foram mais potentes do que o efavirenz. Os compostos foram comparados quanto à actividade em transcritases inversas mutantes Y181C e Y188L, e de tipo selvagem (WT) . Ambas as amidas foram significativamente superiores ao ácido carboxílico em todas as três enzimas.
Resultados
Testaram-se compostos da invenção e compostos comparativos contra as transcritases inversas de VIH de tipo selvagem e quatro mutantes. Os resultados estão enumerados na Tabela 1 como EC50 (nM) e IC50 (nM) . Na Tabela, A representa <50 nM, B está entre 50 e 100 nM, e C é >100 nM. ND significa 52 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ não determinado. Os compostos preferidos da presente invenção são aqueles que exibem actividades no tipo selvagem (WT) e em mutantes resistentes inferiores a 50 nM tanto na EC50 como na IC50.
N-N
I
A
Tabela 1 N. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 1 cf2h φθ Me 1¾ H C C C A C C 2 cf2h òo Ms »xv OH H A A A A A C 3 cf2h rxv OH H A B C A C c 4 cf2h ÒO Ntfe :xv OH H A A A A A c 5 cf2h φο Me rrv OH H A C C A C c 6 Br ÒO H A A C A B c 7 Br ÒO Μθ IXV OH H 8 Br ÒO :xv OH H A A A A A c 9 Br ÒO ΐχγ OTte* H A A A 10 Br :xv OH H A A A A A c 53 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 11 Br (£q DOv 0'Na* H A A A A A B 12 Br :xv OK* H A A A A A B 13 Br àcr :xv OH H A A A A A C 14 cf2h :xv OH H A A A A A C 15 Br :a? /'OH H A B C A A B 16 cf3 ÒO MeT OH H A B C A A C 17 ch2f òo Me^ :xv OH H A A C A A C 18 Br ιί^ΤΎ^0 Me :xv OH H A A A A A A 19 Br :χχ,? /'OH H B B C A A B 20 Br ÒO W.er yxt â °H H C C C A A B 21 Br & Δ 0' OH H B C C A A C 22 Br ÒO Mtr :¾ H A A B A A B 23 Br :xv OH H A A A A A C 54 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 24 Br “P ixx/ d' °h H C C C A B C 25 Br 100 :xv OH H A A A A A B 26 Br ΠΠ :xv OH H A A A A A C 27 Br ÒQ OMe :xv OH H A A C A B C 28 Br M>vL·5' Y :xv OH H A A A A A C 29 Br “''Ò H A A C A B C 30 Br iJOp OH H A A C A B C 31 Br p 0|Χ1γΟ OH H A A C A A C 32 Br Cp :xv OH H C C C C C C 33 Br Y :xv OH H A A C A A C 34 Br ILo OH H A A A 35 Br oò IXV OH H A A 36 cf2h if? tf nh2 H A A A A A c 55 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 37 Br ip lxi,4 tf wh2 H A A A A A B 38 Br IXo MS ^ NH, H A A A A A C 39 Br 1X1/ C' H A A A A A B 40 Br òo IXX/ é m H A A A A A C 41 ch3 òo Me^ 1¾ tf NHi H A A C A C C 42 Br 00 “XI/ ct /'NH2 H A A A A A C 43 ch3 00 IAíT 1¾ tf NH2 H A A A A B C 44 cf2h ψ H A A A A A C 45 ch3 ÒO Me Q NH2 H A A B A C C 46 ch3 ψο Me ΓΧΟ Cl tfS"NH2 H A A A A B C 47 cf2h 00 :xxp C! tfS'NH2 H A A A A A C 48 cf2h ψθ Mfi 1X1/ Me tf'NHj H A A B A A C 56 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 49 cfh2 ÒO Me 1¾° * /'NHZ H A A C A B C 50 Br :¾ Cl /-nh2 H A A A A A B 51 cf2h òo m IXòo ix H A A A A A C 52 cfh2 m ixv H A A A A C C 53 cfh2 Me H A A A A A C 54 cf2h φο Me “%r H A A B A A C 55 cfh2 ÒO Me^ :xi/. /'Ν'' 0 H H A A B B A C 56 cf2h φθ Me :xx/x° <hr H A A C A C C 57 cf2h φο Me Xo o:s'i 0 H A A B A B C 58 cf2h φο Me IXO C /JH COQH H B C C A C C 59 cf2h φο Me 6'f ΠΟΟΤ^ H C C C A C c 60 cf2h φο Me :xx/ cl rfV HOOCT^V^ H C C C A C c 61 Br φο F ΓΌΟ Cl /'nh2 H A A A A A c 57 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 62 Br φο F ixo M /'NH; H A A C A C C 63 cf2h MesJSvN Me Me 1X1/ /'m2 H A A A A B C 64 cf2h i Mb hns^n “^Vnk, H A A A A C c 65 cfh2 φο Me "XO “•^Onh, H A A B A C c 66 H φο hnvo í nh2 H A A C A B c 67 cfh2 φο IXO 01 /'NH2 H A A A A A c 68 cf2h :xx Cl d' NH2 H A A C A A c 69 cf2h ΠΓϋ 1X1/ c‘ /'NH, H A A A A A B 70 I Cf*) Me^ 1X1/ 0' NH2 H A A A A B C 71 cf2h φο Me^^Me ixo C /'NH* H A A A A A C 72 Br /UyQMe :xo Cl /'NH, H A A A A A B 73 Br 1 Me :xx/ /-nh2 H A A A A A B 58 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 74 Br \ Me rxv /'nh2 H A A A A A B 75 Br Ϋ ΓΧΧ/ 01 /'NHa H A A A A A C 76 Br i^O "Xx-f /'NH2 Me A B C A B C 77 Br IjO IXX? 6' NH= H A B C A B C 78 Br IXv 01 /'NH2 H A A C A A C 79 Br òo Me^ Xs o" NH: H A A A A A B 80 Br φο Me IXX/ Me /'nh2 H A A A A A B 81 Br XXf B </'ΝΗ2 H A A A A A B 82 cfh2 Me Xs /'NH2 H A A A A A C 83 cf3 Me ΗΓιΤ λ Xkf * /'NH, H A A A A B C 84 cf3 “"'ÒO Me :xx/ H A A A A C C 85 Br 00 H A A A A A C 86 Br Me^J :¾ H A A A A A C 59 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 87 Br ÒQ Me^ IXO C! d'NH2 H A A A A A B 88 Br yxt c H A A A A A C 89 Cl ip rx^ d nh2 H A A A A A C 90 Br --A 1¾ á NH= H A A B A A C 91 Br “'ÓO H A A A A A B 92 Br aVn \κ -Ao, H A A A A A B 93 Br C,'N-A-'Me Y H A A A A A C 94 Br 00 Ao d nhj H A A A A A C 95 Br "XXj- Cl d?'NH‘ H A A A A A A 96 cf2h CN "A/ Cl d nh2 H A A C B C C 97 cf2h CN IXO Me /'m, H ND ND ND C C C 60 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 98 Br IXV HW MeCT^O H A A A A A B 99 cf2h ^0 yxf “ /'NH* H A A C A A C 100 cf2h £ ΓΟ, /'NH. H A A A A B B 101 Br $ Dcv 1 H A A A A B A 102 Br 1 ço Mb·^ HNn . Cl-^rui HNyk MeO^O H A A A B A A 103 Br ;xv, ΗΝγ-0 IWeO^O H A A B A A B 104 Br 4° tXV hjL w 0 H A A A A A A 105 Br óo MeT aXV” HN. HO^O H A A B A A C 106 Br ψ :xv( HO^O H A C B B A C 107 Br ÓO Me*^ :xv HN. BV°J □ H A A C A A B 108 Br ÓO MíT xv A, H A A A A A C 61 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 109 Br :xv A, H A A A B A C 110 Br «£ο :xv HN. HO^O H A C C A A B 111 Br αΑΛγ° :λ H B C C A A C 112 Br (jjO :χν HN HV D H A C C A A C 113 Br 1X1/ á ™ H B B C A A B 114 Br HNY^ii M0 0ΙΛΛγθο^ Hjy' H A A C B A B 115 Br HNn c,AíA^í0 0Me HN"r-Xo Me^A Μθ H A A B A A B 116 Br IXV™ HNvAo H B C C A A B 117 Br ΗΝγΑ, c,Àa^o oh η«>Λ0 Me H A B C A A B 118 Br ÓQ' Me^ clXiTo HN^ WteCTxlMe H A A A A A C 119 Br ào Me^ IXV HN. \Μβ Me H A A A A A C 62 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 120 Br òo α>Ογ0 rOH H A A A A A C 121 Br ÒO 1X1,0 ^es/V^ H A A A B A C 122 Br óo Me my\ 0|^Ογ0 H A A B A A c 123 Br ÒO M eT ixv H A A A A A c 124 Br ÒO M<T :xvn H A A A A A c 125 Br ÒO MNn ci-ΚΧγθ Q hNvV-V H A A A A B A 126 Br ÒO rxv °γΌ Ο H A A A A A C 127 Br òo M et rxv MeO-^--NH H A A A A A A 128 Br òo ΗΟγΟ ομ H A A A A A B 129 Br rxv •bs MeOOn H A A A A A A 130 Br òo ΗΝ^Λ cAiyO X™ H A A A A B B 131 Br ÒO Me"^ ΊΧν HN^ Me H A A A A A C 132 Br ÒO \AvT rxv HN. H A A A A A B 63 ΕΡ 2 135 608/ΡΤ
Ν. ° Ri A Ar r2 EC50 WT (nM) EC50 Y181C (nM) EC50 Y188L (nM) IC50 WT (nM) IC50 Y181C (nM) IC50 Y188L (nM) 133 Br òo Me·^ ixv ΗθΛ0 H A A A A A C 134 Br ÒO ;xv 0 CM H A A A A A c 135 Br (£o HYi OH m,L· “‘-Aac H A A C A B B 136 Br ixv HN. H A A A A A B 137 Br ÒO' Mb :xv H A A A A A A 138 Br òo IXV 9 NH, H A A A A A 139 Br òo Mb :xv Hrl ò H A A B C C C 140 Br Me"^ :xvr HN^A0 v„., un_ H A A A A A A 141 Br ixv Cl /-NH, Me A A B C 142 Br "'lio IXV /'nh2 Me A A C A C C
Lisboa, 2012-01-04

Claims (2)

  1. ΕΡ 2 135 608/ΡΤ 1/1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto representado pela fórmula:
  2. 2. Composto representado pela fórmula: Lisboa, 2012-01-04
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