KR100940058B1 - ＨＩＶ 역 전사 효소의 억제제로서 Ｓ-트리아졸릴 α-메르캅토아세트아닐리드 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하기 일반 구조 화학식(1)의 α-메르캅토아세트아닐리드 시리즈 화합물을 제공하며, 이 화합물은 HIV 역 전사 효소의 몇몇 변이체를 억제하므로 HIV 감염 질환 치료에 유용하게 사용된다.

[상기 식 중, Q는 CO₂H, CONR₂, SO₃H, 또는 SO₂NR₂이다]

Description

ＨＩＶ 역 전사 효소의 억제제로서 Ｓ-트리아졸릴 α-메르캅토아세트아닐리드 {S-TRIAZOLYL α-MERCAPTOACETANILIDES AS INHIBITORS OF HIV REVERSE TRANSCRIPTASE}

관련 기술

본 출원은 2004년 8월 25일에 출원된 미국 가출원 제60/604,219호 및 2004년 8월 25일에 출원된 미국 가출원 60/604,220호, 그리고 2005년 5월 31일에 출원된 미국 가출원 60/686,351호의 우선권들을 주장한 것으로서 이들 각 출원의 내용은 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.

기술 분야

본 발명의 기술 분야는 효소 억제제, 및 질환의 치료에 이 효소 억제제를 사용하는 효소 억제제의 용도에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 HIV 감염 질환을 치료하는 방법으로서 HIV 역 전사 효소를 시험관 내에서(in vitro) 및 생체 내에서(in vivo) 억제하는 것과 관련이 있다.

HIV를 치료하는 다수 치료법들이 당 기술 분야에 알려져 있으며, 다른 약학적 활성 화합물들 가운데 역 전사 효소 억제제가 많은 HIV 감염 환자들에게 놀라운 치료 효과를 제공해왔다. 예를 들면, 라미부딘(lamivudine)(3TC) 또는 지도부딘(zidovudine)(AZT)은 비교적 잘 허용되는(tolerated) 항레트로바이러스 약물이다. 그러나, 최근 이들 화합물에 대해서 다수의 바이러스 균주들이 상당한 내성(resistance)을 나타내왔다. 적어도 어느 정도로 내성을 극복하기 위해서 새로운 뉴클레오시드-유형의 억제제를 투여할 수 있으며(단독으로 투여하던지 또는 기타 다른 뉴클레오시드-유형의 억제제와 조합해서 투여하던지), 이러한 대안적 약물의 예로는 스타부딘(stavudine)(d4T), 디다노신(didanosine)(ddI), 콤비비르 (Combivir)(TM) (라미부딘과 지도부딘으로 이루어진 조합 약물의 상품명이다), 및 트리지비르(Trizivir)(TM) (3TC, AZT, 및 아바카비르(abacavir)로 이루어진 조합 약물의 상표명) 약물을 들 수 있다.

그러나 유감스럽게도, 뉴클레오시드-유형의 억제제에 대한 내성 발생은 흔히 다른 뉴클레오시드 유형의 억제제에 대한 내성 등급의 발생을 동반하므로, 다른 부류의 약물로 바꿔서 사용해야 할 필요가 왕왕 있다. 이 경우, 환자는 프로테아제 억제제 (예를 들면, 사퀴나비르(saquinavir), 인디나비르(indinavir), 넬피나비르(nelfinavir)등)를 기타 항 레트로바이러스 반응제와 조합해서 투여받는 것이 일반적이다. 하지만, 이러한 조합 약물이 제공하는 비교적 복잡한 투약법은 많은 환자들에게 조직상 및 재정적으로 부담을 주게 되므로 환자의 순응성이 바라는 것만큼 나타나지 않게 되는 일이 흔하다.

더욱 최근의 HIV 치료법은 조합 약물 요법에 무게를 싣고 있는 데, 이 치료법은 뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제와 프로테아제 억제제를 투여하는 것, 뉴클 레오시드 역 전사 효소 억제제와 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제를 투여하는 것, 그리고 뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제, 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제 및 프로테아제 억제제의 삼중 조합물과 관련한 조합 약물 요법이다. 그러나, 유감스럽게도, 프로테아제 억제제와 뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제로 이루어진 조합 약물은 낮은 관용성을 자주 나타내므로 이 요법을 조기에 끝내야 한다는 단점이 있다. 그러므로, 대부분의 현재 조합 약물 치료는 뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제 및 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제의 조합 약물을 포함한다.

비-뉴클레오시드-유형의 억제제들(예를 들면, 네비라핀(nevirapine), 데라비르딘(delavirdine), 및 에파비렌즈(efavirenz))은 역 전사 효소의 비-뉴클레오시드 포켓에 결합하는 것으로 생각되는 화합물로서 구조적으로 서로 동질성이 없는 군의 화합물들이다. 이 비-뉴클레오시드-유형의 억제제들은 뉴클레오시드-유형의 억제제와 공동 투여시 항바이러스성 효과를 크게 향상시킨다. 이 비-뉴클레오시드-유형의 억제제들이 신규 부류의 유망한 항바이러스 약물을 제공하긴 하지만, 아직도 여러 가지 단점을 내포하고 있다. 현재 알려져 있는 비-뉴클레오시드-유형의 억제제는 가격이 비교적 비쌀 뿐 아니라, 바이러스 역 전사 효소에서 일어나는 단일 변이는 광범위한 부류의 비-뉴클레오시드 역 전사 효소에 대해서 교차 내성을 유발할 수 있다. 그러므로, 강력한 항바이러스 효과를 나타내는 신규의 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제, 특히 현재 알려져 있는 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제에 대해서 내성을 보이는 HIV 변이 균주에 대해서 강력한 항바이러스 효과를 나타내는 새로운 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제를 제공할 필요성이 시급하게 요구되 고 있는 상태이다.

HIV 바이러스는 비교적 높은 빈도의 변이율을 지니고 있어서, 현재의 치료법에 대한 약물 내성을 종종 야기한다. 적어도 하나의 NNRTI와 관련한 치료법으로 효과를 보지 못한 환자들로부터 분리한 바이러스의 RT(역 전사 효소) 단백질에서 변이 스펙트럼을 동정하기 위한 연구를 수행한 결과, 변이주 K103N은 에파비렌즈를 투약받은 환자한테서 가장 많이 나타난 반면 Y181C는 네비라핀을 투약받은 환자의 경우에서 우세하게 나타났다. 기타 다른 단일 변이주로는 K101E, G190S/A/E 및 Y188L/C를 포함하였다. 에파비렌즈를 투약받아 치료 효과를 보지 못한 환자들에서 가장 우세하게 일어나는 일종의 이중 변이주로는 K103N-P225H, K103N-V108I, K103N-K101Q, K103N-L100I, K103N-F227L, V106I-Y188L, K103N-Y188L 및 K103N-G190A을 포함한다. 따라서, 상기 변이주 역 전사 효소 및 기타 다른 변이주 역 전사 효소를 억제하기 위한 신규의 조성물 및 신규의 억제 방법을 제공할 필요가 있다.

본 출원은, 이 출원과 공동 소유의 출원으로서 2002년 8월 23일에 출원된 PCT/US02/26186(비공개) 및 PCT/US03/27433(공개, 2004년 4월 15일에 WO 2004/030611로 공개됨)에 이전에 개시된 내용을 실시하는 것과 관련이 있다. 미국 특허 5,939,462 (Connell et al)는 NPY5 수용체 안타고니스트로서 유용하게 사용되는 다수의 치환된 헤테로사이클을 설명하는 데, 여기서 이 다수의 사이클 중 일부는 S-트리아졸릴 메르캅토아세트아닐리드류로서, 후술되는 일반 구조식 1의 것과 유사한 구조를 취한다. 국제 특허 공개 WO 2004/050643 (Simoneau et al)는 역 전 사 억제 활성을 지닌 본 발명의 것들과 유사한 구조를 지닌 몇몇 트리아졸류 및 테트라졸류를 개시하고 있다.

발명의 개요

본 발명자들은 HIV 역 전사 효소 (RT)가 하기의 구조 화학식 1로 나타나는 부류의 S-트리아졸릴 [α]-메르캅토아세트아닐리드에 의해 억제될 수 있다는 것을 발견하였다. 놀랍게도, 일부의 이들 화합물은 K103N, Yl81C 및 Yl88L을 포함하는 변이체로 다양하게 변이된 역 전사 효소를 억제할 수 있었다.

화학식 1

상기 식 1에서, R¹ 은 할로겐, 저급 알킬, 저급 알케닐, 또는 저급 알키닐이며, 여기서 상기 저급 알킬, 저급 알케닐, 또는 저급 알키닐 기는 임의적으로 치환될 수 있고, 바람직하게는 하나 또는 그 이상의 할로겐에 의해 바람직하게 치환될 수 있다. R³ 은 H 또는 메틸이며, 치환체 R⁰ 는 H, 할로겐, CF₃, 저급 알콕시, 또는 저급 알킬티오이다. Q는 CO₂H, SO₃H, CONR'R" 또는 SO₂NR'R"으로서, 여기서 R' 및R" 는 독립적으로 H, 저급 알킬, 또는 하나 또는 그 이상의 OR, CO₂R, NHR, NR₂, 또는 CF₃ 기에 의해 치환된 저급 알킬(여기서, R 은 H 또는 저급 알킬임)이거나, 또는 R' 및 R" 는 이들이 부착되는 질소 원자와 함께 4-, 5-, 또는 6-원 헤테로시클릭 고리를 형성한다. P 는 후술 되는 곳에서 더욱 자세히 설명할 치환체들을 지닌 방향족 고리 또는 헤테로방향족 고리이다.

따라서, 본 발명은 시험관 내에서 및 생체 내에서 HIV 역 전사 효소를 억제하는 화합물을 제공한다. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물 하나 또는 그 이상을 포함하는 조성물, HIV 치료용 약학 조성물의 제조에 본 발명의 화합을 사용하는 용도, 및 본 발명의 하나 또는 그 이상의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염의 치료 유효량을 투여함으로써 HIV 감염 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

발명의 상세한 설명

본 명세서에서 사용된 용어 "알킬"은 고리형 탄화수소, 분지형 탄화수소, 또는 선형 탄화수소 라디칼을 일컫는 말로서 여기서 모든 탄소-탄소 결합은 단일 결합며, 용어 "저급 알킬"은 1 내지 10개의 탄소 원자로 이루어진 알킬 기를 말한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "시클로알킬"은 3개 내지 15개의 탄소 원자를 함유하는 시클릭 알킬기 또는 폴리시클릭 알킬기를 의미한다. 시클로알킬 기는 말단 고리 중 하나가 방향족일 수 있는 다중 축합 고리(예를 들면, 인단-2-일, 테트라히드로나프트-1-일, 등)를 포함할 수 있다.

이와 유사하게, 본원 명세서에서 사용된 용어 "알케닐"은 고리형 탄화수소,분지형 탄화수소, 또는 선형 탄화수소 라디칼을 일컫는 말로서 여기서 하나 또는 이상의 탄소 결합은 이중 결합이며, 용어 "저급 알케닐"은 1 내지 10개의 탄소 원 자로 이루어진 알케닐 기를 말한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "시클로알케닐"은 3개 내지 15개의 탄소 원자를 함유하는 시클릭 알케닐 기 또는 폴리시클릭 알케닐 기를 의미하는 것으로서, 여기서 하나 또는 그 이상의 탄소-탄소 결합은 이중 결합이다. 시클로알케닐 기는 말단 고리 중 하나가 방향족일 수 있는 다중 축합 고리(예를 들면, 인덴-2-일, 1,2-디히드로나프트-1-일, 등)를 포함할 수 있다.

이와 유사하게, 본원 명세서에서 사용된 용어 "알키닐"은 전술한 알킬 기 또는 알케닐 기로서, 여기서 적어도 하나의 탄소-탄소 결합은 삼중 결합으로 대체되어 있다. 그러므로, 용어 "저급 알키닐"은 1개 또는 10개의 탄소 원자를 지닌 알키닐 기를 포함한다.

본 명세서에서 사용된, 용어 "알콕시"는 -OR 기로서 여기서 R 은 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 아릴-저급 알킬, 헤테로아릴-저급 알킬, 또는 헤테로시클로-저급 알킬이다. 이와 유사하게, 용어 "아릴옥시"는 -OAr 기로서 여기서 Ar 은 아릴 기 또는 헤테로아릴 기를 말한다.

용어 "아릴" 및 "Ar"은 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용되며, 이는 기의 부착 지점을 제공하는 적어도 1개의 방향족 고리를 지닌 6개 내지 14개의 탄소원자로 이루어진 모노시클릭 기 또는 폴리시클릭 탄화수소 기를 말한다. 폴리시클릭 아릴 기는 분리된 고리(예를 들면 바이페닐) 또는 적어도 하나의 고리가 방향족인 축합 고리(예를 들면, 1,2,3,4-테트라히드로나프트-6-일, 나프틸, 안쓰릴, 또는 페난쓰릴) 고리를 가질 수 있다.

용어 "헤테로사이클" 또는 "헤테로시클릭 고리"는 상호 호환적으로 사용되며 이는 포화되거나, 부분적으로 포화되거나 또는 방향족인 시클로알킬 또는 아릴 기를 말하는 것으로서, 이는 단일 고리 (예를 들면, 모르폴리노, 피리딜 또는 푸릴) 또는 다중 축합 고리(예를 들면, 나프티리딜, 퀴녹사리닐, 퀴놀리닐, 또는 인돌리지닐)를 지니며, 여기서 고리 하나의 적어도 하나의 탄소 원자는 헤테로원자에 의해 치환 것이다. 본 명세서에 사용된 용어 "헤테로원자"는 탄소 이외의 다른 원자(일반적으로 S, O, P 또는 N)를 말한다. 용어 "헤테로아릴" 및 "헤테로방향족" 은 헤테로사이클을 말하며, 여기서 적어도 하나의 헤테로시클릭 고리는 방향족이다.

더 나아가, 본 명세서에서 사용된 용어 "임의적으로 치환된"는 전술한 치환체 또는 기에 공유 결합한 하나 또는 그 이상의 수소 원자, 또는 질소 또는 인(포스포러스) 원자 상의 자유 전자 쌍이 공유 결합된 비-수소 치환체로 치환된 것이며, 상기 치환체는 R, Ar, 아릴-저급 알킬, OH, SH, OR, SR, OAr, SAr, S(=O)R, S(O)Ar, SO₂R, SO₂Ar, 할로겐, CF₃, OCF₃, SCF₃, NH₂, NHR, NR₂, NR₃ ⁺, NHCOR, NHCOAr, NHS(=0)R, NHS(=O)Ar, NHSO₂R, NHSO₂Ar, NO₂, CN, CO₂R, CONH₂, CONHR, CONR₂, C(=O)R, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴-저급 알킬로 구성된 군에서 선택된다. 전술한 치환체들에서, R 은 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 아릴-저급 알킬, 헤테로아릴-저급 알킬, 또는 헤테로시클릴-저급 알킬이다.

본원 명세서에서 사용된 용어 "프로드럭"은 본 발명의 화합물을 변형한 것으로서, 여기서 변형된(개질된) 화합물은 약력학적으로 활성이 덜하고(개질 되지 않은 화합물에 비해서) 그리고 개질된 화합물은 생체 내에서, 바람직하게는 표적 세 포(예를 들면, T-세포 또는 간세포) 또는 표적 조직(예를 들면 림프 결정 또는 비장)내에서 비개질된 형태로 전환된다. 본 발명의 화합물을 프로드럭 형태로 전환하는 것은, 활성 약물을 안전하게 전신적으로 투여하기에는 독성이 너무 강한 경우라든가, 비개질된 화합물이 소화관에 불량하게 흡수되는 경우라든가, 또는 비개질된 화합물이 표적 부위에 도달하기 전에 체내가 이 화합물을 분해하려고 하는 경우에 유용하게 사용할 수 있다.

"역 전사 효소를 억제하는"이란 용어는 역 전사 효소에 의해 주형 RNA 또는 DNA로부터 DNA의 생성이 직접적/간접적으로 감소하는 것을 말한다. 직접 억제 작용은 자멸, 경쟁적 및 비-경쟁적 억제, 알로스테릭 억제, 또는 비-뉴클레오시드 포켓에 억제제를 결합하는 것을 포함한다. 간접 억제 작용의 예로는 DNA 합성에서 뉴클레오시드 가 고갈되는 것, 구조적 변화가 유발되거나 또는 구조적 변화를 일으키는 데 공헌하는 것 등을 포함한다.

본원 명세서에서 사용된 "바이러스 번식을 감소하는"이란 용어는 시료 중의 바이러스 역가가 낮은 것을 의미한다. 이러한 감소는 다양한 방식으로 이루어질 수 있는 데, 그 방식으로는 바이러스 복제의 부분 또는 전체가 억제되거나, 바이러스 단백질의 가공 또는 어셈블리의 부분 또는 전체가 억제되거나, 감염된 세포 내로 바이러스가 진입하는 것이 억제되거나 또는 이 세포로부터 바이러스가 배출되는 것을 억제하는 것 및/또는 바이러스에 대한 면역 반응하는 것을 통하여 시스템으로 부터 바이러스를 클리어런스 하는 것을 포함한다.

본 발명은 그 중에서 하기의 구조 화학식으로 이루어진 화합물을 제공한다:

화학식 1

상기 식에서 P, Q, R¹, R³ 및 R⁰ 는 전술한 바와 같다. 바람직한 구체예에 있어서, R¹ 은 Cl, Br, I, CH₃, CF₃, CHF₂, 및 CH₂F에서 선택되며; R³ 은 H이며; R⁰ 는 Cl, Br, CF₃ 및 CH₃에서 선택되고; Q는 CO₂H 또는 SO₂NH₂이다. 특히 바람직한 구체예에 있어서, R⁰ 는 Cl이다.

P 는 바람직하게는 치환된 페닐, 나프틸, 1,2,3.4-테트라히드로나프틸, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 또는 시놀리닐 고리이다. 바람직한 구체예에 있어서, P 기는 후술되는 기 (a), (b), (c) 및 (d)에서 선택된다:

상기 식에서 R^P 는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 시클로프로필메틸, 또는 C_3-6 시클로알킬에서 선택되며; R⁴, R⁵ 및 R⁶ 은 독립적으로 H, F, Cl, Br, CH₃, CF₃, CFH₂, CF₂H, 이소프로필, 시클로프로필, OCH₃, OH, OCF₃, NH₂ 및 NHCH₃에서 선택된다.

U 및 U' 는 독립적으로 N 및 CH에서 선택되고; R⁷ 은 Cl, Br, I, CH₃, CF₃, OCH₃, 이소프로필, 시클로프로필, t-부틸, 및 시클로부틸에서 선택되며; R⁸ - R¹¹ 는 독립적으로 H 또는 CH₃이다. 바람직하게, Q가 SO₂NH₂일 때 R^P 이 시클로프로필 또는 시클로프로필메틸이 아닌 한, R¹ 은 메틸이 아니며, R⁶ 이 메틸일 때만 R⁷ 은 메틸이다.

바람직한 부류의 화합물은 하기 구조식 2 또는 3으로 나타나는 화합물이다:

화학식 2 화학식 3

상기 식에서 R¹ 은 CF₃, CHF₂, CH₂F, 또는 할로겐이며; R⁰ 은 할로겐, CF₃ 또는 메틸이고, R' 및 R" 은 독립적으로 H 또는 임의적으로 치환된 저급 알킬, C_1-5 아실, 또는 1-(C_2-4 아실옥시)C_1-4알콕시카르보닐 기이며, 그리고 R^P는 전술한 바와 같다.

특히 바람직한 부류의 화합물은 구조식 4와 5의 화합물에 해당한다.

화학식 4 화학식 5

상기 식에서 R^P 는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 시클로프로필, 및 시클로프로필-메틸에서 선택된다. 가장 바람직하게는 R^P 은 에틸 또는 시클로프로필이다. R¹ = Br, R⁰ = Cl 또는 CH₃, P = 나프틸 또는 테트라히드로나프틸, 및 Q = CO₂H 또는 SO₂NR'R"의 특성을 가진 화합물은 생체 내에서 다수의 HIV 단리물로부터 역 전사 효소에 대해 강력한 활성뿐 아니라 놀랍게도 우수한 약력학 특성을 함께 나타낸다.

화합물의 합성

본 발명의 화합물의 합성은 WO 2004/030611, WO 2004/050643, 및 US 5,939,462에 설명된 실질적으로 유사한 절차에 따라 수행할 수 있다. 그러나, 본 발명의 화합물을 합성하는 데는 다수의 수많은 선택 경로가 가능함을 주목해야 한다. 하기에 제시한 예들의 경로는 합성 유기 화학의 기술 분야에 숙련된 개업의의 안내에 따라 제공된 것이다.

한 가지 합성 경로로서, 적합하게 치환된 아닐린은 활성화된 카르복실산 화합물(바람직하게는 카르보닐 할라이드)에 의해 아미드화한 것으로서, 여기서 활성화된 카르복실산은 추가로 이탈기 L² (바람직하게는 브롬)를 포함한다. 아닐리드를 생성한 후에, 반응 생성물을 메르캅토트리아졸 (Het-SH)과 반응시켜, 이탈기를 치환한 후에 하기 반응식 Ia에 도시된 소정의 화합물을 형성한다.

반응식 Ia

상기 반응식은 메르캅토트리아졸 "Het-SH"이 아닐린에 비해서 의미가 있는 경우에 유리한데, 그 이유는 트리아졸이 최종 단계까지는 사용되지 않고 또한 이 트리아졸이 중간체의 합성 조작시에 일어나는 불가피한 손실을 겪지 않아도 되기 때문다. 이탈기 L¹ 및 L² 를 선택하는 것은 특정 아민을 선택하는 것에 어느 정도 좌우되며 특정 메르캅토트리아졸의 선택은 이보다 소소하게 좌우된다. L¹ 및 L² 는 할라이드, 더욱 바람직하게는 클로라이드 또는 브로마이드인 것이 특히 바람직하다. 아미드화 반응의 적합한 용매의 예로는 에테르, 알코올, 및 탄화수소 (바람직하게는 할로겐화된 것)를 들 수 있으며 적합한 용매의 선택은 적어도 부분적으로 반응물의 화학적 특성에 좌우될 것이다. 상기 반응에 사용된 용매, 촉매 및/또는 염기에 대해서는, Connell 등의 미국 특허 제5,939,462호에서 설명한 고려 사항이 일반적으로 적용될 것이다.

또 다른 일반 전략이 하기의 반응식 Ib으로 설명된다. 이 방법은 아닐린을 S-트리아졸릴 메르캅토아세트산으로 아실화하고, 이것을 α-할로아세트산 또는 에스테르로 메르캅토트리아졸을 알킬화함으로써 용이하게 제조된 것을 포함한다.

반응식 Ib

적합한 시약으로는, 국한하는 것은 아니지만, R³ 가 메틸인 경우에 아이오도아세트산 및 메틸 브로모아세테이트 및 에틸 α-브로모프로피오네이트를 포함한다. 에스테르를 사용하는 경우, S-알킬화 반응 후에 가수분해되어 유리 카르복실산을 제공한다. 이 산과 아닐린은 삼차 아민 염기 존재하에 임의 촉매로서 N-히드록시벤조트리아졸과 함께 통상의 카르복실 활성화 시약 또는 시약 혼합물, 예를 들면 카르보디이미드에 의해 커플링할 수 있거나, 또는 촉매로서 디메틸아미노피리딘 존재하에 염화티오닐 또는 염화옥사릴에 의해 커플링할 수 있다. 상기 반응식은 아닐린이 트리아졸에 대해서 의미가 있는 경우에 유리하다.

반응식 Ia의 예로는 반응식 2에 도시된 합성법으로서, 여기서 본 발명의 화합물은 2개의 분리 제조된 전구체로부터 제조한다. 치환된 트리아진을 포함하는 제1 전구체, 및 치환된 아닐린을 포함하는 제2 전구체는 후술하는 "실시예"의 부분에 제시된 프로토칼에 따라 제조할 수 있다. 전구체의 반응은 일반적으로 DMF와 같은 극성 양성자 용매 중에서 염기, 예를 들면 탄산 칼륨 존재하에 수행된다.

반응식 2

트리아진이 플루오르화된 알킬 기로 치환된 경우, 반응식 3에 제시된 합성 절차를 사용할 수 있다. 이와 유사한 절차는 후술하는 "실시예"에 제시된다.

반응식 3

할로겐-치환된 트리아졸은 반응식 4에 제시한 것처럼, 트리아졸을 탈할로겐화 시킨 후 할라이드 중 하나를 제거하고, 이후의 절차는 후술하는 "실시예"의 절 차를 따라서 수행하여 제조한다.

반응식 4

할로겐으로 치환된 트리아졸을 제조하는 다른 방법으로는 후술하는 반응식 5에 제시한 바와 같이, 아미노트리아졸을 디아조화 반응시키고, 이후의 절차를 후술하는 "실시예"에 제시된 절차에 따라 제조하는 것이다.

반응식 5

대안적으로, 트리아졸이 CF₃으로 치환된 경우에, 후술하는 "실시예"에 설명된 것과 유사한 절차를 사용한 후 반응식 6에 제시된 합성 절차를 사용하여 제조할 수 있다.

반응식 6

반응식 Ia에 제시된 대안적인 합성법의 예는 후술하는 반응식 7에 나와 있으며, 여기서 아닐린은 사용된 S-트리아졸릴 메르캅토아세트산에 의해 아실화된다.

반응식 7

약학적 조성물

본 발명의 화합물이 약학 조성물의 일부 성분으로서 투여되는 경우, 적당한 화합물은 약학적 허용 담체, 부형제 및 기타 다른 첨가제와의 혼합물로서 제형화 된다. 본 발명의 화합물은 하나 또는 그 이상의 비독성 약학적 허용 담체로 제형화된 조성물에 포함되는 것이 특히 바람직하다. 약학 조성물은 비경구 주사용의 고체 형태 또는 액체 형태로, 또는 직장 투여용의 고체 형태 또는 액체 형태로 제형화될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 사람 및 다른 동물에게 경구적으로, 직장으로, 비경구적으로, 질 내로, 복강 내로, 국소적으로, 협측 내로, 또는 경구 스프레이 또는 비강 스프레이로서 투여할 수 있다. 본원 명세서에 사용된 용어 "비경구" 투여는 국한하는 것은 아니지만 정맥 주사 및 주입, 근육 주사 및 주입, 복강 내 주사 및 주입, 피하 주사 및 주입, 관절 내 주사 및 주입을 포함하는 투여 모드를 의미하는 것이다.

비 경구 주사용의 약학적 조성물은 바람직하게는 약학적 허용 멸균 수성 용액 또는 약학적 허용 멸균 비-수성 용액, 분산물, 서스팬션 또는 에멀젼뿐 아니라 사용하기 직전의 멸균성 주사 용액 또는 분산물로 재구성하기 위한 멸균성 파우더를 포함한다. 적합한 수성 담체 및 비수성 담체, 희석제, 용매 및 비히클의 예로는 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들면 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 및 기타 등), 및 이의 적합한 혼합물, 식물성 오일 (예를 들면 올리브 오일), 및 주사용 유기 에스테르, 예를 들면 에틸 올레이트를 포함한다. 적당한 유동도는, 예를 들면, 레시틴과 같은 코팅 재료를 사용하고, 분산물의 경우 필요한 입도를 유지 하고 또한 계면활성제를 사용함으로써 유지할 수 있다.

조성물은 또한 첨가제, 예를 들면 방부제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 포함한다. 미생물의 작용을 방지하는 것은 다양한 항세균제 및 항진균제, 예를 들면 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산, 및 기타 등을 포함함으로써 확실히 할 수 있다. 이 조성물은 또한 등장화제 예를 들면 슈가, 염화 나트륨 및 기타 등을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 주사용의 약학적 제형을 장기간 흡수하게 하려면 알루미늄 모노스테아레이트와 젤라틴과 같은 흡수 작용을 지연시키는 제ㅈ제를 유입하는 것을 고려해볼 수 있다.

본 발명의 화합물의 효과를 지속시키기 위해서는, 피하 주사 또는 근육 주사를 통해 약물을 서서히 흡수하게 하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 불량한 수 용해도를 지닌 무정형 재료 또는 결정질 재료의 액체 현탁액을 사용하여 이루어질 수 있다. 이후에 화합물의 흡수 속도는 용해 속도에 좌우되며, 교대로 결정의 크기와 결정 형태에 좌우될 수 있다. 대안으로서, 본 발명 화합물을 비경구 투여한 경우의 화합물의 지연 흡수는 오일 비히클 중에 약물을 용해 또는 현탁시킴으로써 이루어질 수 있다.

주사용 데포 제형은 생분해성 중합체, 예를 들면 국한하는 것은 아니지만 폴리락타이드-폴리글리콜라이드, 폴리(오르토에스테르), 및 폴리무수물을 포함하는 생분해성 중합체중에서 본 발명의 화합물의 단일 매트릭스 또는 미립성 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 약물의 방출 속도는 약물 대 중합체의 비를 변형하고 또한 사용된 중합체의 특성에 따라 컨트롤할 수 있다. 데포 주사용 제제는 또한 리포좀 또는 생체 조직과 상용성인 마이크로에멀젼 또는 리포좀 중에 화합물을 포획시키는 방식으로 제조할 수 있다.

국한하는 것은 아니지만 경구 투여용 고형의 복용 제형은 캡슐, 정제, 환제, 파우더, 당의정, 및 과립제를 포함한다. 이러한 고형의 복용 제형에 있어서, 활성 화합물은 적어도 하나의 불활성의 약학적 허용 부형제 또는 담체, 예를 들면 구연산 나트륨 또는 인산2칼슘 및/또는 (a) 충진제 또는 증량제, 예를 들면 스타치, 락토즈, 슈크로즈, 글루코스, 만니톨, 및 살리실산, (b) 바인더, 예를 들면, 카르복시메틸셀룰로즈, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 슈크로즈, 및 아카시아, (c) 습윤제, 예를 들면 글리세롤, (d) 붕해제, 예를 들면 아가-아가, 탄산 칼슘, 감자 스타치 또는 식용 전분, 알긴산, 일종 종류의 실리케이트, 및 탄산 나트륨, (e) 용해 지연제, 예를 들면 파라핀, (f) 흡수 촉진제, 예를 들면 4가 암모늄 화합물, (g) 습윤제, 예를 들면 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트, (h) 흡수제, 예를 들면 카올린 및 벤토나이트 클레이, 및 (i) 활택제, 예를 들면 탈크, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고형의 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트, 및 이의 혼합물을 포함한다. 고형의 복용 제형은 또한 완충제를 포함할 수 있다.

고형의 조성물은 예를 들면 락토즈 또는 밀크 슈가 뿐 아니라 고분자량의 폴리에틸렌 글리콜 및 기타 등과 같은 부형제를 사용하는 연질 및 경질 충진된 젤라틴 캡슐 중에서 충진제로서 사용될 수 있다. 이 고형의 복용 제형은 약학 제형화 기술에 널리 공지된 기타 코팅 및 장용피 코팅과 같은 쉘 및 코팅물로 제조될 수 있다. 이들은 임의적으로 불투명화제를 포함할 수 있으며 또한 활성 성분 만을 방출하거나, 또는 우세하게는 소화관의 일부 부위에서 임의 지연된 방식으로 방출하는 조성물일 수 있다. 이 활성 화합물은 또한 마이크로-캡슐 형태로 존재할 수 있다.

경구 투여용의 액체 복용 형태는 약학적으로 허용가능한 에멀젼, 용제, 현탁제, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 화합물 외에, 액체 복용 형태는 기술 분야에 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예를 들면 물, 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들면 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸 포름아미드, 오일(특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 겨오일, 올리브, 피마자유 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라히드로푸르푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 이의 혼합물을 포함한다. 경구 액체 조성물은 또한 어쥬반트, 예를 들면 습윤제, 유화제 및 현탁제, 착색제, 감미제, 향미제 및 향료 제제를 포함한다.

직장 투여 조성물 또는 질내 투여 조성물로는 바람직하게는 좌약인데, 이 좌약은 본 발명의 화합물을 적절한 비-자극성 부형제 또는 담체, 예를 들면 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 또는 실온에서는 고형이지만 체온에서는 액체여서 직장 또는 질강에서 활성 성분을 방출하는 기타 좌약 왁스 등과 혼합하여 제조할 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 리포좀의 형태로 투여할 수 있다. 기술 분야에 공 지된 바와 같이, 리포좀은 일반적으로 포스포리피드 또는 기타의 지질 성분으로 부터 유래한다. 리포좀은 수성 매질중에 분산되어 있는 모노- 또는 멀티-라멜라 수화된 액체 결정으로부터 형성되는 것이 일반적이다. 리포좀을 형성할 수 있는 임의의 비-독성의, 약리적 허용 지질이 사용될 수 있다. 리포좀 형태의 조성물은, 본 발명의 화합물 이외에, 멤브레인 안정화제, 방부제, 부형제, 및 기타 등을 포함할 수 있다. 바람직한 지질은 포스포리피드 및 포스파티딜 콜린(레시틴)으로서 자연산이거나 또는 합성산이다. 리포좀을 형성하는 방법은 기술 분야에 잘 알려져 있다. 예를 들면, 문헌[Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N. Y. (1976), p. 33 et seq]을 참조할 수 있다.

본 발명의 화합물은 무기산 또는 유기산으로 부터 유래한 약학적 허용 염의 형태로 사용될 수 있다. "약학적 허용 염"이란 과도한 독성, 불쾌한 자극, 알러지 반응 및 기타 등을 일으키지 않고 유익/위험 비율이 합리적이면서 하등 동물이나 인간의 조직과 접촉시에 사용하기 적합한 것으로서 합리적인 건전한 의료적 판단의 영역 내에 속하는 염들을 의미한다. 약학적 허용 염들은 기술 분야에 널리 잘 알려져 있다. 예를 들면, 문헌[S. M. Berge, et al, J Pharmaceutical Sciences, 1977, 66:1 et seq ]에는 약학적 허용 염에 관해서 자세히 기술한다. 이들 염은 본 발명의 화합물의 최종 이성화 단계 및 정제 과정 시에 동일계 상태로 제조되거나 적당한 산을 유리 염기 형태와 반응시켜 각기 분리하여 제조할 수 있다. 대표적인 산 부가염으로는, 국한하는 것은 아니지만, 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스팔테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 바이설페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포설포네이트, 시트레이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 푸마레이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시에탄설포네이트(이세티오네이트), 락테이트, 말레이트, 메탄설포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 옥살레이트, 파마오에이트, 펙티네이트, 3-페닐프로프오네이트, 포스페이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 바이카르보네이트, p-톨루엔설포네이트 및 운데카노에이트를 포함한다. 염기성 질소-함유 기는 또한 다음과 같은 제제로 4급화 된 것일 수 있다: 저급 알킬 할라이드, 예를 들면 염화 메틸, 염화 에틸, 염화 프로필, 및 염화 부틸, 브롬화 메틸, 브롬화 에틸, 브롬화 프로필, 및, 브롬화 부틸, 요오드화 메틸, 요오드화 에틸, 요호드화 프로필 및 요오드화 부틸; 디알킬 설페이트(디메틸 설페이트, 디에틸 설페이트, 디부틸 설페이트 및 디아밀 설페이트); 장쇄 할라이드, 예를 들면 염화 데실, 브롬화 데실, 요오드화 데실, 염화 라우릴, 브롬화 라우릴, 요오드화 라우릴, 염화 미리스틸, 브롬화 미리스틸, 요오드화 미리스틸 및 염화 스테아릴, 브롬화 스테아릴, 요오드화 스테아릴; 아릴알킬 할라이드(브롬화 벤질 및 브롬화 페네틸) 및 기타 등. 수용성 또는 불수용성 또는 분산성 생성물이 얻어진다.

염기성 부가 염은 본 발명의 화합물을 최종적으로 이성화하여 정제하는 것을 동일계로 수행하여 제조하거나, 또는 카르복실산 함유 부분을 적당한 염기, 예를 들면 약학적 허용 금속 양이온의 수산화물, 탄산염 또는 중탄산염이나 또는 암모니아나, 또는 유기 1차 아민, 2차 아민, 또는 3차 아민과 반응시켜서 순차적으로 제 조할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염으로는, 국한하는 것은 아니지만, 알카리 금속 및 알카리 토금속, 예를 들면 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 알루미늄 염 및 기타의 것과, 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디에틸아민, 에틸아민 및 등을 비롯한 비독성 4가 암모늄 및 아민 염을 포함한다. 염기성 첨가 염을 형성하는 데 유용하게 사용되는 기타의 대표적인 예로는 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피레리딘, 피페라진, 글루코사민, 루이신, 및 기타 등을 포함한다.

본 발명의 약학 조성물에 존재하는 활성 성분의 실제 복용량 레벨은 특정 환자, 조성 및 투여 모드와 관련하여 바람직한 치료 반응을 끌어내기에 효과적인 활성 화합물의 양을 얻는 방식으로 변형할 수 있다. 복용량 레벨의 선택은 특정 화합물의 활성, 투여 경로, 복용 스케줄, 치료되는 질병의 심각성 및 치료중인 환자의 예전 의료 병력에 좌우될 것이다. 용량-범위 연구는 통상적인 것이며, 소정의 치료 효과를 얻기 위해서 요구하는 것보다는 적은 양으로 화합물의 복용을 시작해서 소정의 효과가 나타날 때까지 점진적으로 용량을 증가시키는 것은 기술 분야에 숙련된 당업자 범위에 있다. 일반적으로, 복용량 레벨은 하루에 체중 1kg 당 약 0.1 내지 약 100mg, 더욱 바람직하게는 약 5 내지 약 50mg의 활성 화합물을 포유 동물에 경구 투여한다. 필요하다면, 효과적인 일일 용량은 투여의 목적에 따른 다양한 용량, 예를 들면 하루에 2 내지 4회의 분리 용량으로 나눌 수 있다.

본 발명의 화합물은 단독으로 투여되거나 HIV 치료에 다른 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 특히 바람직한 부가성 화합물은 뉴클레오시드-유형의 역 전사 효소 억제제 (예를 들면, 라미부딘, 지도부딘, 스타부딘, 아바카비르, 테노포비르 또는 디나노신), 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제 (예를 들면, 네비라핀, 데라비르딘, 에파비렌즈), 프로테아제 억제제 (예를 들면, 리토나비르, 사퀴나비르, 인디나비르, 넬피나비르), 융합 억제제 (예를 들면, 엔푸비르타이드(enfuvirtide)), CCR5 안타고니스트, 면역치료제(예를 들면, 리바비린, I1-2), 및 활성의 수동 및/또는 치료 백신을 포함한다. 본 발명에 따른 조합 치료제는 본 발명의 적어도 하나의 화합물 또는 이의 작용성 유도체 및 적어도 하나의 기타 약학적 활성 성분을 투여하는 것을 포함한다. 활성 성분 및 약학적 활성제들은 개별적으로 또는 함께 투여될 수 있으며 개별적으로 투여할 때 이것은 동시에 투여하거나 또는 임의의 순서를 통해서 개별적으로 투여할 수 있다. 활성 성분 및 약학적 활성 성분의 양 및 투여의 상대적 타이밍을 선택하여 소정의 연합된 치료 효과를 얻을 수 있다.

그러므로, 본 발명은, 전술한 바와 같이, 화학식 1-5에 따른 구조식을 갖는 하나 또는 그 이상의 화합물을 함유하는 약학적 조성물을 제공하는데, 여기서 화합물 또는 화합물들은 본 조성물이 환자에게 투여되었을 때 환자의 세포 중에서 역 전사 효소 및/또는 HIV 복제를 억제하기에 유효한 농도로 존재한다. 바람직한 구체예에 있어서, 본 발명의 약학적 조성물은 화학식 2-5의 것에 따른 하나 또는 그 이상의 화합물을 포함한다. 다수의 변이 RT 효소를 광범위하게 억제하기 위해서 다수의 화합물을 단일 약학 조성물에 혼입하는 것도 고려할 수 있다.

약학적 조성물 중에 존재하는 화합물의 적합한 농도와 관련하여, 기술 분야 에 숙련된 당업자는 역 전사 효소 및/또는 HIV 복제의 억제 작용을 달성하도록 화합물의 양을 조정할 수 있음을 숙지해야 할 것이다. 예를 들면, 세포(일반적으로 HIV 바이러스로 감염된 T-세포)에서의 HIV 복제의 억제 작용은 후술하는 바와 같이 혈액 배양 및 루시퍼라제 계 분석 시스템을 사용하여 시험관 내에서 측정할 수 있다. 또는 다른 방법으로서, 역 전사 효소의 억제는 혈액 중에 또는 림프 결절(HIV 감염 세포를 함유함) 중에 존재하는 바이러스성 DNA 및/또는 RNA의 복사물의 양을 측정하기 위해서 RT-PCR을 사용하여 생체 내에서 모니터할 수 있다. 적합한 농도는 혈청 농도가 1nM 내지 100μM이며, 어떤 경우에는 0.01 nM 내지 1 nM 라는 것을 알 수 있을 것이다.

하기의 실시예는 예시의 목적으로만 제공된 것이므로 이것이 본 발명의 영역을 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

본 발명의 화합물

2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]- N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드 (방법 A)

1-시클로프로필-나프탈렌

시클로프로필마그네슘 브로마이드(150 mL, 0.5 M, 테트라히드로푸란 중에서)를 테트라히드로푸란 (10 mL) 중의 1-브로모-나프탈렌(10 g, 50 mmol) 및 [1,3-비스(디페닐포스피노)프로판]디클로로니켈(II) 용액(0 ℃에서 교반됨)에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 용매를 감압하에서 증발하였다. 물 중의 암모늄 클로라이드 및 EtOAc를 첨가하였다. 추출한 후에, 유기 층을 황산 나트륨 상에 건조하고, 여과한 후 감압하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 1-시클로프로필-나프탈렌 (6.4 g, 76%)을 얻었다.

1-시클로프로필-4-니트로-나프탈렌

아질산 나트륨(30 mL)을 (2시간에 걸쳐서) 0℃에서 교반한 1-시클로프로필- 나프탈렌 (6.4 g, 38 mmol)에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 여분의 30분 동안 0℃에서 교반한 다음에 얼음에 서서히 부었다. 물을 첨가하고, 에탄올을 첨가하였다. 추출한 후에, 유기층을 1%의 NaOH 수용액으로 세척한 후, 물로 세척하고, 황산나트륨 상에 건조하고, 여과한 후 감압하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 1-시클로프로필-4-니트로-나프탈렌 (5.2 g, 64%)을 얻었다.

1-아미노-4-시클로프로필-나프탈렌

에탄올(200 mL) 중의 1-시클로프로필-4-니트로-나프탈렌 (5 g, 23 mmol) 용액을 Pd/C (10% 네트, 1.8 g) 존재 하에 수소 분위기로 교반하였다. 반응 혼합물을 밤새도록 진탕 한 후에 셀라이트 상에 여과하였다. 용매를 증발하고, 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 1-아미노-4-시클로프로필-나프탈렌 (3.1 g, 73%)을 얻었다.

1-시클로프로필-4-이소티오시아네이토-나프탈렌

티오포스겐 (1.1 g, 9.7 mmol)을 0℃에서 교반한 디클로로메탄 (50 mL) 중의 디이소프로필에틸아민(2 당량)과 1-아미노-4-시클로프로필-나프탈렌 (1.8 g, 9.7 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 5 분간 교반하고, 물 중의 1% HCl 용액을 첨가한 후 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, 다음에 황산 나트륨 상에 건조한 후 여과하고, 용매를 감압하에서 증발하였다. 헥산을 첨가하고, 생성된 침전물을 여과하였다. 용매를 증발시켜 1-시클로프로필-4-이소티오시아네이토나프탈렌 (1.88 g, 86%)을 얻었다.

5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-티올

DMF (20 mL) 중의 아미노구아니딘 히드로클로라이드 (3.18 g, 29 mmol), 1-시클로프로필-4-이소티오시아네이토-나프탈렌 (3.24 g, 14 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (3 eq)의 혼합물을 15시간 동안 50 ℃에서 교반하였다. 용매를 증발하고, 톨루엔을 첨가한 후, 용매를 다시 증발하였다. 2.0 M의 수산화나트륨 용액(30 mL)을 첨가하고 반응 혼합물을 50℃에서 60시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 2.0 M의 HCl 수용액으로 중화하였다. 다시 여과한 후에, 용매를 증발하고 실리카겔 크로마토그래피로 잔사를 정제하여 5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-티올 (2.0 g, 49%)을 얻었다.

2-[5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

DMF (20 mL) 중의 5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트 리아졸-3-티올 (708 mg, 2.5 mmol), K₂CO₃ (380 mg, 2.5 mmol)의 용액 내로 2-클로로-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드 (710 mg, 2.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응이 완결되었을 때, 용매를 증발하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2-[5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드 (1.26 g, 95%)를 얻었다.

2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

디브로모메탄 (30 mL)중의 2-[5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4- 설파모일페닐)아세트아미드 (0.59 g, 1.1 mmol), 아질산 나트륨 (1.5g, 22 mmol) 및 BTEABr (0.91 g, 3.3 mmol)의 현탁액에 디클로로아세트산(180 uL, 2.2 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반한 후, 디클로로메탄 및 물 중의 중탄산 나트륨으로 추출하였다. 유기층을 황산 나트륨 상에 건조하고, 여과한 후 감압하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드 (224 mg, 31%)를 얻었다.

2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4 H -[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드 (방법 B)

2-[5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4 H -[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]아세트산 메틸 에스테르

재료	양	분자량	mmol
티오트리아졸	2.24 g	282.36	7.9
메틸 클로로아세테이트	0.73 ml	108.52	8.3 (1.05 eq)
탄산 칼륨	1.21 g	138.21	8.7 (1.1 eq)
디메틸포름아미드	40 ml		(5 mL/mmol)

절차:

DMF 중의 티오트리아졸과 탄산 칼륨의 현탁액에 메틸 클로로아세테이트를 소적으로 5분간 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고 교반된 냉수 용액에 서서히 부었다. P₂O₅ 존재하에 황갈색 침전물을 진공 여과로 수거하고 50℃에서 16 시간 동안 고 진공하에서 건조하여 표제 화합물 2.24 g (80%) 을 얻었다.

2-(5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4 H -[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]아세트산 메틸 에스테르

재료	양	분자량	mmol
티오트리아졸 L10183-58	709 mg	354.43	2.0
브로모포름	10 ml		(5ml/mmol)
아질산 나트륨	2.76 g	69.00	40(20 eq)
벤질트리에틸암모늄 브로마이드	1.63 g	272.24	6.0(3 eq)
디클로로아세트산	0.33 ml	128.94	4.0(2 eq)

절차:

브로모포름 중의 2-[5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]아세트산 메틸 에스테르 및 벤질트리에틸암모늄 클로라이드의 용액에 아질산 나트륨을 첨가하였다. 이 혼합물에 디클로로아세트산을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂로 팩킹한 실리카겔 7 인치 칼럼 상에 직접 넣었다. 처음에 이 칼럼에서 모든 CHBr₃ 이 용출될 때까지 칼럼을 CH₂Cl₂로 용출하고, 아세톤/CH₂Cl₂ (5:95)으로 용출하여 713 mg (85%)의 표제 화합물을 얻었다.

2-[5-브로모-4-4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4 H -[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]아세트산

재료	양	분자량	mmol
티오트리아졸 메틸 에스테르	1.14 g	418.31	2.7
테트라히드로푸란	10 ml		(~3ml/mmol)
에탄올	10 ml		(~3ml/mmol)
물	10 ml		(~3ml/mmol)
수산화리튬	98 mg	23.95	4.1(1.5 eq)

절차:

0℃에서 THF 및 EtOH 혼합물 중의 2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필나프팔렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]아세트산 메틸 에스테르에 H₂O중의 LiOH를 5 분간 소적으로 첨가하였다. 0℃에서 45분간 추가 교반한 후 반응을 완결하였다. 반응물을 0℃에서 0.5 N HCl 용액을 첨가하여 pH 7로 중화한 다음에, 반응 혼합물을 진공 중에서 농축하여 원래의 부피의 1/5로 줄였다. 혼합물을 H₂O (~20 mL)로 희석하고, 0.5 N HCl을 첨가하여 pH 2-3으로 산성화시켜 점성이 있는 고체를 생성하였다(산성화 과정시 생성물이 오일로서 생성되는 경우, CH₂Cl₂로 추출할 것이 권고된다). 황갈색 고체를 진공 여과하여 수집하고 P₂O₅ 존재하에 고진공으로 50℃에서 16시간 동안 건조하여 1.02 g (93%)의 표제 화합물을 얻었다.

2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4 H -[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

재료	양	분자량	mmol
티오트리아졸 카르복실산	884 mg	404.28	2.2
5-아미노-3-클로로페닐설폰아미드	452 mg	206.65	2.2
피리딘	22 ml		(10 ml/mmol)
포스포러스 옥시클로라이드	0.24 ml	153.33	2.6 (1.2 eq)

절차:

0℃에서 피리딘 중의 전술한 카르복실산 및 아닐린 용액에 POCl₃ 을 소적으로 5 분간 첨가하였다. 추가의 50분 동안 0℃에서 교반하여 반응을 완결하였다. 반 응 혼합물에 H₂O (1 mL)을 첨가하여 냉각하고, 진공 중에서 농축하여 밝은 갈색 오일을 얻었는데, 이것을 CH₂Cl₂ (200 ml)로 희석하였다. 유기층을 H₂O (1 x 50 ml)로 세척하고, 포화된 NaHCO₃ 용액(1 x 50 ml)으로 세척한 다음에, 염수(1 x 50 ml)로 세척하였다. 유기 용액을 Na₂SO₄ 에 건조하고 건조 농축하였다. 생성 오일을 에탄올로 적정하여 밝은 황색 고체를 생성하였다. 혼합물에 H₂O를 첨가하여 더 많은 고체를 수집하였다. 밝은 황색 고체를 진공 여과로 수집하고 고진공하에서 16시간 동안 건조하여 930 mg (72%)의 생성물을 얻었다. CH₂Cl₂로 여과물을 추출하여 부가의 생성물(132 mg, 10%)을 회수하고, 아세톤/CH₂Cl₂(20:80)으로 칼럼 크로마토그래피를 수행하였다.

2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필-7-메톡시나프탈렌-1-일)-4 H -[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

1-아미노-4-시클로프로필-7-메톡시나프탈렌

테트라히드로푸란 (50 mL) 및 디클로로메탄 (100 mL) 혼합물 중의 교반된 용액에 디-t-부틸디카보네이트(6.86g, 31.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 포화된 탄산 나트륨을 첨가하고 생성물을 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 물과 염수로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조한 후 여과하고, 감압하에서 농축하였다. 얻은 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트, 9:1)로 정제하여 N-BOC 유도체 a (4.85g, 60% 수율)를 얻었다

디클로로메탄(170 mL) 중의 N-BOC 유도체 a (4.85g, 18.7 mmol) 및 트리에틸아민 (3.91, 28.1 mmol)의 혼합물에 메탄설폰 무수물(3.58g, 20.6 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 30분간 교반하고 포화된 중탄산 나트륨 수용액에 부었다. 유 기층을 디클로로메탄으로 추출하고, 황산 나트륨 상에 건조하고, 여과하여 감압하에 농축하여 메탄설포네이트 에스테르 b (6.22 g, 수득량)를 첨가하였다.

150mL의 아세트산 중의 메탄설포네이트 b (6.12g, 18.1 mmol) 용액에 N-브로모숙신이미드(3.39g, 19 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하고 물과 디클로로메탄을 첨가하였다. 수성층을 10 N 수성 수산화나트륨으로 첨가하여 pH를 7로 조정하였다. 유기층을 디클로로메탄으로 추출하고, 황산 나트륨 상에 건조하고, 여과한 다음 감압하에서 농축하여 조 5-브로모 유도체 c (7.6g, 수득량)를 얻었다.

테트라히드로푸란 (220 mL)중의 c (7.72g, 18.5 mmol) 및 10% 수성 수산화 나트륨 용액(370 mL)의 혼합물을 50℃에서 5일간 교반하였다. 혼합물을 0 ℃로 냉각하고 진한 염산으로 중화하였다. 혼합물을 감압하에 농축하고, 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 황산 나트륨 상에 건조하고, 여과한 후 농축하여 나프톨 d (5.87g, 94% 수율)를 얻었다.

아세톤 (25 mL) 중의 나프톨 d (3.53g, 10.4 mmol), 요오드화 메틸(0.65 mL, 10.4 mmol) 및 수산화 나트륨 (417mg, 10.4 mmol)의 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성 혼합물을 농축하고, 잔사를 칼럼 크로마토그래피(85% 헥산/15% 에틸 아세테이트)로 정제하여 2.39 g, 65% 수율의 메틸 에테르 e를 얻었다.

1,4-디옥산 (92 mL)중의 4 N HCl 중의 메틸 에테르 e (3.25g, 9.22 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하고 여기에 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산 나트륨 용액을 첨가하였다. 추출된 유기상을 물과 염수로 세척하고, 황산 나트륨 상에 건조하고, 감압하에 농축하여 2-메톡시-5-브로모-8-아미노나프탈렌 f (2.14g, 92% 수율)를 얻었다.

질소 분위기 하에서 툴루엔 (21 mL)과 물 (0.8 mL)중의 아미노나프탈렌 f (1g, 4.0 mmol), 시클로프로필 붕소산 (438mg, 5.1 mmol), 인산 칼륨(2.97g, 14mmol) 및 트리시클로헥실포스핀 (112mg, 0.4 mmol)의 용액에 팔라듐 아세테이트 (45mg, 0.2 mmol)를 강력한 교반과 함께 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열한 후 실온으로 냉각하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 황산 나트륨 상에 건조하여 농축하였다. 칼럼 크로마토그래피(50% 헥산/50% 에틸 아세테이트)로 정제하면 표제 화합물 g (699mg, 82% 수율)가 얻어졌다.

화합물 g (699mg, 3.28 mmol)를 18 mL의 디클로로메탄에 용해하였다. 중탄산 나트륨 (9 mL, 포화 용액) 및 티오포스겐(0.25 mL, 3.28 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 유기층을 분리하고, 황산 나트륨 상에 건조하 고 농축하여 819 mg의 98% 수율을 갖는 화합물 h를 얻었다. 이를 더 이상의 정제 하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

화합물 h (819 mg, 3.21 mmol)를 6 mL의 디메틸포름아미드, 아미노구아니딘 히드로클로라이드 염 (532 mg, 4.8 mmol) 및 디이소프로필 에틸아민 (0.84 mL, 4.8 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 18시간 동안 50℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축하고 잔사를 2M 수성의 수산화 나트륨 용액(10 mL)에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하고 실온으로 냉각하였다. 생성 혼합물을 수성의 1N HCl으로 중화하고 침전물을 수거하여 화합물 i (200 mg, 25% 수율)를 얻었다.

화합물 i (63mg, 0.2 mmol) 및 j (57mg, 0.2 mmol)를 DMF (2 mL)에 용해하고, 탄산 칼륨(30mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 물을 혼합물에 첨가하고 형성된 침전물을 수거하여 70 mg (57%)의 화합물 k를 얻었다.

디클로로아세트산(0.05 mL, 0.226 mmol)을 디브로모메탄(5 mL) 중의 화합물 k (63mg, 0.113 mmol), 벤질트리에틸 암모늄 브로마이드(93mg, 0.34 mmol) 및 아질산 나트륨(156mg, 2.26 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 이후에 농축하고, 생성된 잔사를 예비 TLC (95% 디클로로메탄/5% 메탄올)로 정제하여 13.8 mg의 설폰산 및 2 mg의 표제 화합물 l 을 얻었다.

2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필-2-메틸나프탈렌-1-일)-4 H -[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

테트라히드로푸란 (225 mL) 중의 2-메틸-1-아미노나프탈렌 a (7.5g, 47.7 mmol)의 교반 용액에 N-브로로숙신이미드 (10g, 56.2 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 물을 혼합물에 첨가하고 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물과 염수로 세척하고, 황산 나트륨 상에 건조하고, 여과한 후 감압하에서 농축하였다. 생성된 잔사를 칼럼 크로마토그래피(75% 헥산/25% 에틸 아세테이트)으로 정제하여 4.73g의 42% 수율을 지닌 화합물 b를 얻었다.

톨루엔(22 mL) 및 물 (0.85 mL) 중의 화합물 b (Ig, 4.24 mmol), 시클로프로필 붕소산 (472mg, 5.5 mmol), 인산 칼륨 (3.14g, 14.8 mmol) 및 트리시클로헥실포스핀(118mg, 0.42 mmol)의 용액에 질소 분위기하에서 팔라듐 아세테이트 (47mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하고 실온으로 냉각하였다. 물을 첨가하고 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 황산 나트륨 상에 건조하고 농축하였다. 칼럼 크로마토그래피(90% 헥산/10% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 c (728mg, 87% 수율)를 얻었다.

화합물 c (728mg, 3.7 mmol)를 18 mL의 디클로로메탄에 용해하였다. 중탄산나트륨 (9 mL, 포화 용액) 및 티오포스겐(0.28 mL, 3.7 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 다음에, 유기층을 분리하고, 황산 나트륨 상에 건조하고, 농축하여 877 mg의 99% 수율을 지닌 화합물 d를 얻었다. 이를 더 이상 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

화합물 d (877mg, 3.7 mmol)를 6 mL의 디메틸포름아미드, 아미노구아니딘 히드로클로라이드 염 (608.5 mg, 5.5 mmol) 및 디이소프로필 에틸아민 (1.0 mL, 5.5 mmol)에 첨가하고 이 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 농축하고 생성된 잔사를 2M 수산화나트륨 수용액(15 mL)에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하고 실온으로 냉각하였다. 생성된 혼합물을 1N 수성 HCl로 중화하고, 침전물을 수집하여 화합물 e (472 mg, 50% 수율)를 얻었다.

화합물 e (lOOmg, 0.34 mmol) 및 f (96mg, 0.34 mmol)를 DMF (2 mL)에 용해하고, 탄산 칼륨(51mg, 0.37 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 다음에 물을 혼합물에 첨가하고 형성된 침전물을 수집하여 예비 TLC (90% 디클로로메탄/10% 메탄올)로 정제하여 83 mg, 45% 수율의 화합물 g를 얻었다.

디클로로아세트산(0.03 mL, 0.31 mmol)을 디브로모메탄(5 mL) 중의 화합물 g (83mg, 0.15 mmol), 벤질트리에틸 암모늄 브로마이드(125mg, 0.46 mmol) 및 아질산 나트륨(21 lmg, 3.06 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간동안 교반하였다. 다음에 반응 혼합물을 농축하고 생성된 잔사를 예비 TLC (95% 디클로로메탄/5% 메탄올)로 정제하여 55.7 mg의 설폰산 및 7mg의 표제 화합물 h를 얻었다.

2-[5-브로모-4-(2-클로로-4-시클로프로필페닐)-4 H -[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

화합물 α (1 g, 4.8 mmol)를 10 mL의 무수 염화 메틸렌 중에 용해하였다. 이 혼합물에 트리에틸아민 (0.68 mL, 4.8 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5분간 교반하였다. 염화아세틸 (0.5 mL, 7.2 mmol)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물과 디클로로메탄을 첨가하고 층들을 분리하였다. 유기층을 황산 나트륨 상에 건조하고 농축하여 1.11 g의 92% 수율의 화합물 b 를 얻었다.

톨루엔 (10 mL) 및 물 (0.4 mL)중의 화합물 b (500 mg, 2.01 mmol), 시클로프로필 붕소산 (225 mg, 2.62 mmol), 인산 칼륨 (1.49 g, 7.04 mmol) 및 트리시클로헥실포스핀 (56 mg, 0.2 mmol)의 용액에 질소 분위기하에서 팔라듐 아세테이트 (23 mg, 0.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100 ℃에서 3시간 동안 가열하고 실온으로 냉각하였다. 물을 첨가하고 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출한 후, 황산 나트륨 상에 건조하여 농축하고 550mg의 조 생성물 c를 얻었다. 이를 더 이상 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

화합물 c (500mg, 2.4 mmol)를 4 mL의 에탄올에 용해하였다. 수성 1N HCl (4 mL)을 첨가하고 혼합물을 8시간 동안 환류하에 교반하였다. 용매를 진공 중에서 제거하여 440mg의 화합물 d를 생성하였는데, 이를 더 이상 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

화합물 d (440mg, 2.6 mmol)를 14 mL의 디클로로메탄에 용해하였다. 중탄산 나트륨(7 mL, 포화 용액) 및 티오포스겐(0.2 mL, 2.6 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 다음에, 유기층을 분리하고, 황산 나트륨 상에 건조하고 농축하여 877 mg의 99% 수율의 화합물 e를 얻었다. 이 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

화합물 e (447mg, 2.1 mmol)를 3 mL의 디메틸포름아미드에 용해하고, 아미노구아니딘 히드로클로라이드 염 (355 mg, 3.2 mmol) 및 디이소프로필 에틸아민 (0.56 mL, 3.2 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 50 ℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 생성된 잔사에 2M 수산화 나트륨 수용액(10 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하고 실온으로 냉각하였다. 생성 혼합물을 1N 수성 HCl로 중화하고 침전물(생성물)을 수집하여 화합물 f (240 mg, 44% 수율)를 얻었다.

화합물 f (89mg, 0.33 mmol) 및 화합물 g (94mg, 0.33 mmol)을 DMF (1.5 mL)에 용해하고 탄산 칼륨 (51mg, 0.37 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 다음에 물을 혼합물에 첨가하고 형성된 침전물을 수집하고 예비 TLC (90% 디클로로메탄/10% 메탄올)로 정제하여 116 mg의 68% 수율을 갖는 화합물 h를 제공하였다.

디클로로아세트산(0.04 mL, 0.46 mmol)을 디브로모메탄 (5 mL) 중의 화합물 h (116mg, 0.23 mmol), 벤질트리에틸 암모늄 브로마이드(183mg, 0.68 mmol) 및 아질산 나트륨(304mg, 4.6 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 어둠 속에서 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고 생성된 잔사를 예비 TLC (95% 디클로로메탄/5% 메탄올)로 정제하여 99.10 mg의 설폰산 및 17.90 mg의 표제 화합물 i를 얻었다.

4-(2-(5-브로모-4-(2-클로로-4-시클로프로필-6-메틸페닐)-4 H -1,2,4-트리아졸-3-일티오)아세트아미도)-3-클로로벤조산

질소 분위기하에서 톨루엔 (20 mL) 및 물 (0.76 mL) 중의 화합물 1 (Ig, 4.5 mmol), 시클로프로필 붕소선 (506mg, 5.9 mmol), 인산 칼륨 (3.34g, 15.8 mmol) 및 트리시클로헥실포스핀 (126mg, 0.45 mmol)의 용액에 팔라듐 아세테이트 (51mg, 0.23 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하고 실온으로 냉각하였다. 물을 첨가하고 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 황산 나트륨 상에 건조하고 농축하여 775mg의 조 2-클로로-4-시클로프로필-6-메틸벤젠아민 (2)을 생성하였는 데, 이를 더 이상 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

화합물 2 (775mg, 4.3 mmol)를 9 mL의 디클로로메탄에 용해하였다. 중탄산 나트륨 (4.5 mL, 포화 용액) 및 티오포스겐(0.33 mL, 4.3 mmol)을 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 다음에, 유기층을 분리하고, 황산 나트륨 상에 건조한 후 농축하여 935 mg의 1-클로로-5-시클로프로필-2-이소티오시아네이토- 3-메틸벤젠 (3)을 얻었다. 이를 추가 정제하지 않고서 다음의 단계에 사용하였다.

화합물 3 (935mg, 4.2 mmol)을 5 mL의 디메틸포름아미드, 아미노구아니딘 히드로클로라이드 염 (695 mg, 6.3 mmol) 및 디이소프로필 에틸아민 (1.1 mL, 6.3 mmol)에 첨가하고 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 다음에 혼합물을 농축하고 생성된 잔사에 2M 수산화나트륨 수용액(20 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 18 시간 동안 교반하고 실온으로 냉각하였다. 생성 혼합물을 수성 1N HCl로 중화하고 침전물(생성물)을 수집하여 5-아미노-4-(2-클로로-4-시클로프로필-6-메틸페닐)-4H-1,2,4-트리아졸-3 -티올 (4)(780 mg, 66% 수율)을 생성하였다.

화합물 4 (lOOmg, 0.36 mmol) 및 3-클로로-4-(2-클로로아세트아미도)벤조산 (5) (88mg, 0.36 mmol)을 DMF (2 mL)에 용해하고, 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 황산 나트륨 상에 건조하여 농축하면 192mg의 조 4-(2-(5-아미노-4-(2-클로로-4-시클로프로필-6-메틸페닐)-4H-1,2,4-트리아졸-3-일티오)아세트아미도)-3-클로로벤조산 (6)이 얻어졌는데, 이를 추가 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

디클로로아세트산(0.065 mL, 0.78 mmol)을 디브로모메탄(10 mL) 중의 화합물 6 (192mg, 0.39 mmol), 벤질트리에틸 암모늄 브로마이드(318mg, 1.17 mmol) 및 아질산 나트륨(538mg, 7.8 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 18시간 동안 어둠에서 교반하였다. 다음에, 반응 혼합물을 농축하고 생성된 잔사를 예비 TLC (95% 디클로로메탄/5% 메탄올)로 정제하여 88 mg의 42% 수율인 4-(2-(5-브 로모-4-(2-클로로-4-시클로프로필-6-메틸페닐)-4H-1,2,4-트리아졸-3-일티오)아세트아미도)-3-클로로벤조산 (7)을 얻었다.

4-[2-(5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-일티오)아세트아미도]-3-클로로벤조산

질소 분위기하에서 톨루엔 (10 mL) 및 물 (0.4 mL)중의 화합물 1 (500mg, 2.01 mmol), 시클로프로필 붕소산 (225mg, 2.62 mmol), 인산 칼륨 (1.49g, 7.04 mmol) 및 트리시클로헥실포스핀 (56mg, 0.2 mmol)의 용액에 팔라듐 아세테이트 (23mg, 0.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하고 실온으로 냉각하였다. 물을 첨가하고 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출한 후, 황산 나트륨상에 건조하고 농축하여 550mg의 조 4-시클로프로필나프탈렌-1-아민 (2)을 얻었는 데, 이를 더 이상 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

화합물 2 (440mg, 2.6 mmol)를 14 mL의 디클로로메탄에 용해하였다. 중탄산나트륨 (7 mL, sat. solution) 및 티오포스겐(0.2 mL, 2.6 mmol)을 첨가하고 이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 다음에, 유기층을 분리하고, 황산 나트륨상에 건조한 다음 농축하여 877 mg의 99% 수율을 갖는 1-시클로프로필-4-이소티오시아네이토나프탈렌 (3)을 얻었는데, 이를 더 이상 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

화합물 3 (447mg, 2.1 mmol)을 3 mL의 디메틸포름아미드를 용해하고, 아미노 구아니딘 히드로클로라이드 염 (355 mg, 3.2 mmol) 및 디이소프로필 에틸아민 (0.56 mL, 3.2 mmol)을 첨가하고 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 다음에, 혼합물을 농축하고 생성된 잔사에 2M 수산화나트륨 수용액(10 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하고 실온으로 냉각하였다. 다음에, 생성된 혼합물을 수성의 1N HCl로 중화하고 침전물(생성물)을 수집하여 5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-티올 (4)(240 mg, 44% 수율)를 생성하였다.

화합물 4 (789mg, 2.79 mmol) 및 3-클로로-4-(2-클로로아세트아미도)벤조산 (5) (693mg, 2.79 mmol)를 DMF (6 mL)에 용해하고 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고 이 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 황산 나트륨 상에 건조하고 농축하여 1.04 g의 75% 수율을 지닌 4-(2-(5-아미노-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-일티오)아세트아미도)-3-클로로벤조산 (6)을 얻었다.

디클로로아세트산 (0.35 mL, 4.2 mmol)을 디브로모메탄 (44 mL)중의 화합물 6 (1.04g, 2.1 mmol), 벤질트리에틸 암모늄 브로마이드 (1.65g, 6.1 mmol) 및 아질산 나트륨 (2.9g, 42.1 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 어둠 속에서 18시간 동안 교반하였다. 다음에, 반응 혼합물을 농축하고 생성된 잔사를 컬럼 크로마토그래피(95% 디클로로메탄 /5% 메탄올)로 정제하여 393 mg의 34% 수율을 지닌 4-(2-(5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-일티오)아세트아미도)-3-클로로벤조산 (7)을 얻었다.

4-(2-(5-브로모-4-(7-메톡시-4-메틸나프탈렌-1-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-일티오)아세트아미도)-3-클로로벤조산

THF (100 mL) 중의 8-아미노-2-나프톨 1 (8.2g, 52 mmol), 벤즈알데하이드 (16 mL, 156 mmol) 및 황산 나트륨 (41.3g, 291 mmol)을 밤새도록 환류하에 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 여과한 후 감압하에서 농축하였다. 생성된 잔사를 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트/트리에틸 아민 75/23/2)로 정제하여 12.65g의 조 (E)-8-(벤질리덴아미노)나프탈렌-2-올 (2)을 얻었는 데 이것을 더 이상 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

아세톤 (125 mL)중의 화합물 2 (12.65g, 51.2 mmol), MeI (6.4 mL, 102 mmol) 및 NaOH (6.14g, 153 mmol)를 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 농축하고 잔사를 에테르에 용해하고, 물과 염수로 세척한 후 농축하였다. 생성된 잔사를 2N HC1-THF (780 mL, 2 : 1)에 용해하고 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 에테르로 세척하고, 수성층을 Na₂CO₃으로 염기화한 후 에테르로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 황산 나트륨 상에 건조하고 농축하였다. 생성된 잔사를 칼럼 크로마토그래피(헥산/에탄올 3:1)로 정제하여 6.94g의 78% 수율을 지닌 7-메톡시나프탈렌-1-아민 (3)을 얻었다.

아세톤 (100 mL)중의 화합물 3 (6.94g, 40 mmol) 및 탄산 칼륨 (16.6g, 120 mmol)의 교반된 혼합물에 브롬화벤질(19.0 mL, 160 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 이 혼합물을 3일간 재환류하고 실온으로 냉각하였다. 침전물을 제거하고 여과물을 농축하였다. 생성된 잔사를 칼럼 크로마토그래피(헥산 100%)로 정제하여 반응하지 않은 브롬화벤질을 제거하고 에틸 아세테이트(100%)와 반응시키면 11.75g의 83% 수 율을 지닌 N,N-디벤질-7-메톡시나프탈렌-1-아민 (4)을 얻었다.

DMF (30 mL)의 교반된 용액에 POCl₃ (10.65 mL, 116 mmol)를 30분간 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분간 교반하고, DMF(120 mL) 중의 화합물 4(11.75g, 33.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 6일간 교반하고 냉수에 부었다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄으로 추출하고 유기층을 물로 세척한 다음, 수성의 중탄산 나트륨과 염수로 세척하고, 황산 나트륨 상에 건조한 후 농축하여 13.58g 의 4-(디벤질아미노)-6-메톡시-1-나프트알데하이드 (5)를 생성하였는데, 이를 더 이상 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다.

메탄올 (150 mL) 중의 화합물 5 (5.0g, 13.1 mmol) 및 Pd/탄소 (812 mg) 혼합물을 수소 분위기(40 PSI)하에서 18시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 셀라이트 속으로 통과한 후 농축하였다. 생성된 잔사를 칼럼 크로마토그래피(헥산/에탄올 3:1)로 정제하여 826 mg의 35% 수율을 지닌 7-메톡시-4-메틸나프탈렌-1-아민 (6)을 얻었다.

화합물 6 (826mg, 4.4 mmol)을 25 mL의 디클로로메탄에 용해하였다. 중탄산 나트륨 (15 mL, 포화 용액) 및 티오포스겐(0.34 mL, 4.4 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 다음에, 유기층을 분리하고, 황산 나트륨 상에 건조하고 농축하여 1.9 g의 99% 수율을 갖는 4-이소티오시아네이토-6-메톡시-1-메틸나프탈렌 (7)을 생성하였는데, 이를 더 이상 추가 정제하지 않고서 다음 단계에 사용하였다

화합물 7 (1.0 g, 4.4 mmol)을 10 mL의 디메틸포름아미드에 용해하고, 아미노구아니딘 히드로클로라이드 염 (723 mg, 6.5 mmol) 및 디이소프로필 에틸아민 (1.14 mL, 6.5 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 50 ℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 생성된 잔사에 2M 수산화나트륨 수용액(10 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반한 후 실온으로 냉각하였다. 생성 혼합물을 수성 1N HCl로 중화하고 침전물(생성물)을 수집하여 5-아미노-4-(7-메톡시-4-메틸나프탈렌-1-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-티올 (8)을 얻었다(1.14 mg, 91% 수율)

화합물 8 (200mg, 0.7 mmol) 및 3-클로로-4-(2-클로로아세트아미도)벤조산 (9) (174mg, 0.7 mmol)을 DMF (3 mL)에 용해하고, 이 혼합물을 50 ℃에서 18시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 황산 나트륨 상에 건조한 후 농축하여 304mg의 4-(2-(5-아미노-4-(7-메톡시-4-메틸나프탈렌-1-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-일티오)아세트아미도)-3-클로로벤조산 (10)을 얻었는데, 이를 더 이상 정제하지 않고서 다음 단계에서 사용하였다.

디클로로아세트산 (0.1 mL, 1.2 mmol)을 디브로모메탄 (10 mL)중의 화합물 10 (304mg, 0.6 mmol), 벤질트리에틸 암모늄 브로마이드 (492mg, 1.8 mmol) 및 아질산 나트륨 (828mg, 12 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온의 어둠 속에서 18시간동안 교반하였다. 다음에, 반응 혼합물을 농축하고 생성된 잔사를 칼럼 크로마토그래피(95% 디클로로메탄/5% 메탄올)로 정제하여 80 mg의 24% 수율을 지닌 4-(2-(5-브로모-4-(7-메톡시-4-메틸나프탈렌-1-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-일티오)아 세트아미도)-3-클로로벤조산 (11)을 생성하였다.

2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]- N-(2-클로로-4-N-프로피오닐설파모일페닐)아세트아미드

50 mL의 둥근 바닥 플라스크에 5 mL THF 및 5 mL 염화메틸렌로 이루어진 혼합물 중의 2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)-아세트아미드 (45 mg, 0.076 mmol), EDC (29 mg, 0.15 mmol), 및 프로피온산(6.7 [mu]L, 0.09 mmol)을 첨가하였다. 혼합물에 DMAP (18.3 mg, 0.15 mmol)를 1 분량으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에서 증발시켜 두꺼운 오일형 잔사를 생성하였다. 잔사를 20 mL의 염화 메틸렌 중에 재용해 시키고, 다음에 20 mL의 2.0 M HCl 수용액으로 세척하였다. 유기층을 Na₂SO₄로 건조하였다. 용매를 회전 증발기로 제거하여 오일성 잔사를 얻었다. 잔사를 메탄올과 염화 메틸렌(1:9)의 혼합물을 사용하여 실리카겔-칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. 18.5 mg (38%)의 바람직한 생성물이 백색 고형분으로서 얻어졌다.

2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설 파닐]- N-(2-클로로-4-프로피오닐설파모일-페닐)리신아미드

25 mL의 둥근 바닥 플라스크에 5 mL THF 및 5 mL 염화 메틸렌 중의 2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드 (50 mg, 0.085 mmol), EDC (35 mg, 0.18 mmol), 및 Boc-Lys(Boc)-OH DCHA (47 mg, 0.09 mmol)을 넣었다. 이 혼합물에 DMAP (16 mg, 0.13 mmol)를 1 분량으로 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에 증발하여 두꺼운 오일층 잔사를 얻었다. 잔사를 디옥산 중의 5mL 4.0 M HCl에 용해하였다. 반응물을 실온에서 14시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에서 증발하여 두꺼운 오일층 잔사를 생성하였다. 잔사를 10 mL의 염화메틸렌 및 10 mL의 에테르로 차례로 세척하여 밝은 황색 고체로서 표제 화합물(44 mg, 65%)을 얻었다.

시약

1-메틸-4-니트로-나프탈렌

0℃에서 둥근 바닥 플라스크 중의 1-메틸나프탈렌 (8.0 g, 56 mmol)에 소적으로 질산 (26 mL)을 첨가하였다(NOTE: 질산을 서서히 첨가하는 것이 가장 중요한 데 그것은 기타의 위치 이성체가 형성되지 않게 하기 위해서이다). 반응 혼합물을 0℃에서 부가의 15분 동안 교반한 후, 이것을 65 mL의 H₂O에 부었다. 수용액을 벤젠으로 2회 추출하고 혼합된 벤젠 용액을 10 % NaOH 용액으로 세척하고, Na₂SO₄로 건조한 후 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(에탄올:헥산=5:95)로 처리하면 위치 이성체 몇몇 %를 함유하는 생성물이 산출되었다. 이를 에탄올/헥산을 사용하여 재결정하여 9.0 g (43 %)의 화합물 l을 생성하였다.

4-메틸-나프탈렌-1-일아민

에탄올 (300 mL) 중의 1-메틸-4-니트로-나프틸-아민 (4.0 g, 21 mmol) 용액에 레이니-니켈 (4 국자)을 첨가하였다. 혼합물을 H₂ (1 atm)하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트 패드 내로 통과시키고 농축하였다. 실리카겔 플래 쉬 칼럼 크로마토그래피(에탄올:헥산 = 15:85)로 정제한 결과 생성물(3.2 g, 75 %)을 얻었다.

4-에틸-5.6.7,8-테트라하이드로-나프탈렌-1-아민

전술한 바와 같이 4-메틸-나프탈렌-1-일아민의 경로에서 사용된 것과 동일한 절차를 사용하되 출발 물질로서 5-에틸-8-니트로-1,2,3,4-테트라히드로-나프탈렌 (795 mg, 3.95 mmol) 용액을 사용하였다.

4-메틸-나프탈렌-1-일-티오세미카르바지드

무수 염화 메틸렌(5 mL) 중의 티오포스겐 (0.33 mL, 4.3 mmol) 용액에 무수 염화 메틸렌(5 mL) 중의 4-메틸 나프틸 아민 (671 mg, 4.3 mmol) 및 디이소프로필에틸 아민 (1.5 mL, 8.6 mmol)을 소적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 추가로 10분간 더 교반한 후, 1% HCl 용액으로 세척하고 그 다음에는 H₂O로 세척하고, Na₂SO₄로 건조한 후 농축하여 어두운 갈색 오일을 얻었다. 이 오일을 헥산(15 mL) 중에 용해하고 생성된 갈색 슬러리를 여과하였다. 여과물을 농축하여 순수한 티오이소시아네이트를 생성하였다. 무수 아세토니트릴 (20 mL) 중의 티오이소시아네이트 용액에 실온에서 히드라진 (0.13 mL, 4.3 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 20분간 교반한 후에, 혼합물을 농축하였다. 생성된 황색 오일을 에탄올/헥산(1:1)로 분쇄하여 회백색의 고형 생성물(701 mg, 71 % 수율)을 얻었다.

5-디플루오로메틸-4-(4-메틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1.2.41트리아졸-3-티올

디플루오로아세트산(2 mL) 중의 4-메틸 나프틸 티오세미카르바지드 (180 mg, 0.78 mmol) 용액을 100 ℃에서 4시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 백색 고체를 반응 혼합물로부터 결정화하였다. 좀 더 많은 생성물을 수집하기 위해서, 2 mL의 헥산을 이 혼합물에 첨가하였다. 여과 처리하면 백색 고체 생성물 (179 mg, 79 % 수율)이 생성되었다.

5-플루오로메틸-4-(4-메틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2.4]트리아졸-3-티올

MeOH (10 mL) 및 4.37 M NaOMe (0.23 mL, 1.02 mmol) 중의 4-메틸-나프틸-티 오세미카르바지드 (158 mg, 0.68 mmol) 용액에 에틸 플루오로아세테이트 (0.13 mL, 1.37 mmol)를 첨가하고 실온에서 17시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 물을 첨가한 후 디에틸 에테르로 세척하였다. 수성 층에, pH를 HCl로 조정한 후 여과하면 백색 고형 생성물 (78 mg, 42 % 수율)이 얻어졌다. ¹H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 14.26 (s5 1H), 8.14 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.67-7.52 (m, 4H), 7.26 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.20 (dd, J= 12.0, 21.0 Hz, 1H), 5.03 (dd, J= 12.0, 20.4 Hz5 1H), 2.74 (s, 3H).

2-[5-디플루오로메틸-4-(4-메틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일)설파닐]-N-(2-메틸-4-설파모일-페닐)-아세트아미드

DMF (1.5 mL) 중의 5-디플루오로메틸-4-(4-메틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-티올 (53 mg, 0.18 mmol), K₂CO₃ (27.0 mg, 0.20 mmol)의 용액에 2-메틸-N-(2-메틸-4-설파모일-페닐)-아세트아미드 (47 mg, 0.18 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다, 반응 완결시에, H₂O (4.0 mL)를 반응물에 첨가하고 침전이 일어날 때까지 교반한 후 여과 분리하여 생성물 (77.0 mg, 83% 수율)을 얻었다. ¹H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 9.84 (broad s, 1H), 8.18 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.70-7.53 (m, 7H), 7.18 (t, J= 51.5 Hz, 1H), 7.11 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 2.82 (s, 3H), 2.27 (s, 3H).

N-(2-클로로-4-설파모일-페닐)-2-[5-디플루오로메틸-4-(4-에틸-5,6,7,8-테트라히드로-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4] 트리아졸-3-일설파닐]-아세트아미드

DMF (2.0 mL) 중의 5-디플루오로메틸-4-(4-에틸-5,6,7,8-테트라히드로-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-티올 (85 mg, 0.28 mmol), K₂CO₃ (41.8 mg, 0.30 mmol)의 용액에 2-클로로-N-(2-메틸-4-설파모일-페닐)-아세트아미드 (77.8 mg, 0.28 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새도록 실온에서 교반하였다. 반응 완결시에, MeOH를 반응물에 첨가하고 침전이 일어날 때까지 교반한 후 여과 분리하면 생성물(71.0 mg, 46% 수율)을 얻었다. ¹H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 10.14 (s, 1H), 8.03 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.88 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.74 (dd, J=2.1, 8.4 Hz, 1H), 7.46 (broad s, 2H), 7.34-7.00 (m, 3H), 4.33 (apparent q, J=15.6 Hz, 2H), 2.71 (t, J=5.7 Hz, 2H), 2.62 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 2.28-2.08 (m, 2H), 1.72-1.60 (m, 4H), 1.19 (t, J= 7.5 Hz, 3H).

N-(2-클로로-4-설파모일-페닐)-2-[5-디플루오로메틸-4-(4-메틸나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-아세트아미드

DMF (1.5 mL) 중의 5-디플루오로메틸-4-(4-메틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-티올 (59 mg, 0.20 mmol), K₂CO₃ (30.0 mg, 0.22 mmol)의 용액에 2-클로로-N-(2-메틸-4-설파모일-페닐)-아세트아미드 (57 mg, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 완결시에, H₂O (4.0 mL)를 반응물에 첨가하고 침전이 일어날 때까지 교반하고, 여고 분리하여 생성물(77.0 mg, 71% 수율)을 얻었다. ¹H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 10.11 (broad s, 1H), 8.18 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 8.01 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.75-7.54 (m, 5H), 7.46 (broad s, 2H), 7.18 (t, J= 50.0 Hz, 1H), 7.11 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 4.32 (s, 2H), 2.27 (s, 3H).

2-[5-플루오로메틸-4-(4-메틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-메틸-4-설파모일-페닐)-아세트아미드

DMF (2.0 mL)중의 5-플루오로메틸-4-(4-메틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-티올 (89 mg, 0.33 mmol), K₂CO₃ (50.0 mg, 0.36 mmol)의 용액에, 2-클로로-N-(2-메틸-4-설파모일-페닐)-아세트아미드 (87 mg, 0.33 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완결될 시에, H₂O (2.0 mL)를 반응물에 첨가하고 침전이 형성될 때까지 교반하고 여과하였다. 역상 HPLC로 정제하여 고형 생성물(53.3 mg, 50% 수율)을 얻었다. ¹H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 9.84 (broad s, 1H), 8.18 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.71-7.53 (m, 7H), 7.26 (s, 2H), 7.10 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 5.34 (dd, J= 12.0, 27.3 Hz, 1H), 5.18 (dd, J= 12.3, 26.4 Hz, 1H), 4.22 (s, 2H), 2.75 (s, 3H), 2.25 (s, 3H).

N-(2-클로로-4-설파모일-페닐)-2-[5-플루오로메틸-4-(4-메틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-아세트아미드

DMF (2.0 mL) 중의 5-플루오로메틸-4-(4-메틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-티올 (89 mg, 0.33 mmol), K₂CO₃ (50.0 mg, 0.36 mmol)의 용액에 2-클로로-N-(2-클로로-4-설파모일-페닐)-아세트아미드 (93 mg, 0.33 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 완결시에, H₂O (2.0 mL)를 반응물에 첨가하여 침전이 형성될 때까지 교반하고 여과하여 백색 고체(126.8 mg, 74% 수율)를 얻었다. ¹H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 10.12 (broad s, 1H), 8.18 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 8.04 (dd, J= 4.8, 8.7 Hz), 7.87 (s, 1H), 7.76-7.52 (m, 5H), 7.46 (s, 2H), 7.11 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 5.35 (dd, J= 12.3, 26.7 Hz, 1H), 5.19 (dd, J= 11.7, 25.8 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 2.75 (s, 3H).

N-(2-클로로-4-설파모일-페닐)-2-[4-(4-에틸-5,6,7,8-테트라히드로-나프탈렌-1-일)-5-플루오로메틸-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-아세트아미드

DMF (2.0 mL)중의 4-(4-에틸-5,6,7,8-테트라히드로-나프탈렌-1-일)-5-플루오로메틸-4H-[1,2,4]트리아졸-3-티올 (85 mg, 0.29 mmol), K₂CO₃ (44.4 mg, 0.32 mmol)의 용액에 2-클로로-N-(2-클로로-4-설파모일-페닐)-아세트아미드 (82.6 mg, 0.29 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완결될 때, H₂O (2.0 mL)를 반응물에 첨가하고 침전이 일어날 때까지 교반하고 여과하여 고형분을 얻었다(73.0 mg, 47% 수율). ¹H NMP (ΔΜΣΟ, 300 MHζ) δ 10.15 (s, 1H), 8.05 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.74 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 2H), 7.21-7.06 (m, 2H), 5.26 (d, J= 48.0 Hz. 2H), 4.29 (apparent q, J= 15.6 Hz, 2H), 2.71-2.58 (m, 3H), 2.25 (s,lH), 2.25-2.09 (m, 2H), 1.72- 1.59 (m, 4H), 1.19 (t, J= 7.5 Hz, 3H).

적절한 출발 재료를 사용하여, 하기의 화합물들을 전술한 방법과 유사한 절차에 따라서 제조한다:

2-[5-브로모-4-(2-클로로-4-(시클로프로필메틸)페닐)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(2-클로로-4-시클로부틸페닐)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(2-클로로-4-(시클로프로필메틸)나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(2-클로로-4-시클로프로필페닐)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-트리플루오로메틸-4-(2-클로로-4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(4-에틸나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(4-에틸-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(5-시클로프로필퀴놀린-8-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(5-시클로프로필이소퀴놀린-8-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(5-시클로프로필신노린-8-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(1-메틸아세나프탈렌-5-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(2-메틸아세나프탈렌-5-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

2-[5-브로모-4-(1,1-디메틸아세나프탈렌-5-일)-4H-[1,2,4]-트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)아세트아미드

HIV-1 역 전사 효소의 억제 작용

소포성 구내염 바이러스 엔벨로프 글리코프로테인(VSV-G)로 슈도타입이 되었 고, 리포터 유전자로서 개똥 벌레 루시퍼라제를 형질 발현하는 HIV-1을 이용하는 높은 가공 처리량의 세포계 분석을 통해서 인간 면역 결핍 바이러스 타입 1(HIV-에 대한 본 화합물의 억제 활성을 스크린 하였다. 실험 절차는 문헌[Connor et al., Journal of Virology (1996), 70: 5306-5311 (Characterization of the functional properties of env genes from long-term survivors of human immunodeficiency virus type 1 infection)]에서 개시한 것과 문헌[Popik et al., Journal of Virology (2002), 76: 4709-4722 (Human immunodeficiency virus type 1 uses lipid raft-colocialized CD₄ 및 chemokine receptors for productive entry into CD4⁺ T cells)]에 개시된 것에 따라 수행하였다. 상기 바이러스는 RT 유전자 중에 도입된 2개의 변이체(K103N 및 Yl81C, PCR 돌연 변이법)를 함유하였음에 특히 주목하여야 하는데, 이는 이들 변이체가 바이러스를 현재 비-뉴클레오시드 HIV-1 약물에 매우 높은 내성을 나타내도록 만들기 때문이다. 바이러스 스톡은 VSV-G를 암호화하는 플라스미드 DNA를 벡터 pNL4-3Env(-)Luc(+)를 사용하여 293T 세포 내로 동시 트랜스팩숀시켜 생성하였다. 트랜스팩션을 수행한 지 64시간 후에, 바이러스-함유 배지를 원심분리로 수거하고 -80℃에서 동결 보관하였다.

HeLa 세포들은 384-웰 미량 역가 플레이트 포맷에서 스크리닝 화합물 존재하에 VSG-G 슈도 타입의 바이러스로 감염시켰다. 초기 감염을 수행한 지 48시간 후에, 용균 버퍼 및 루시퍼라제 분석 시약 (Promega)을 이들 세포에 첨가하고, 루시퍼라제 활성은 LJL 명도계를 사용하여 생성된 발광을 계수함으로써 측정하였다. 루 시퍼라제 유전자는 바이러스 게놈에 운반되기 때문에, 이의 형질 발현 수준은 화합물 존재하에 바이러스 복제 수준을 직접적으로 반영한다.

야생형 HIV-1에 대한 화합물의 활성을 평가하기 위해서, CD4 및 CCR5을 높은 수준으로 형질발현하는 HeLa-JC53 세포주를 사용하였다(Platt et al., Journal of Virology (1998), 72: 2855-2864: Effect of CCR5 및 CD4 cell surface concentrations on infection by macrophagetropic isolates of human immunodeficiency virus type 1). 이 세포주는 HIV-1 프로모터의 컨트롤 하에 루시퍼라제를 형질 발현하는 안정한 세포주를 단리 하여 변형되었다(긴 말단 반복부, 즉 LTR). 이 세포주의 HIV-1 감염은 HIV-1 프로모터에서 루시퍼라제의 전사를 자극하며, 루시퍼라제 유전자의 형질 발현 수준은 바이러스의 복제 수준에 비례한다(Harington et al. Journal of Virology Methods (2000), 88: 111-115: Direct detection of infection of HIV-1 in blood using a centrifugation-indicator cell assay; 및 Roos et al. Virology (2000), 273: 307-315: LuSIV cells: a reporter cell line for the detection and quantitation of a single cycle of HIV 및 SIV replication). 바이러스 감염 절차의 경우, 화합물을 테스트하는 것과 루시퍼라제의 활성을 측정하는 것은 VSV-G 슈도타입 HIV-1의 경우에서와 같았다.

두 가지 접근법을 사용하여 HIV-1 바이러스 분석에서 발견되는 양성 화합물들의 독성을 평가하였다. 제1 방법은 다른 변형된 HeLa-JC53 세포주를 사용하는 것으로서 이 세포주는 바이러스 감염 없이 루시퍼라제를 구성적으로 높은 수준으로 형질 발현하는 세포주이다. 이들 세포에서 루시퍼라제의 형질 발현 수준은 화합물 존재하에 세포 복제의 표시자로서 기능을 하였다. 화합물 테스트 절차 및 루시퍼라제 활성 측정은 바이러스 감염 테스트와 동일하게 하였다. 기타 다른 독성 분석으로는 HeLe-JC53 세포 및 상업적으로 시판되는 MTS 분석 키트 (Promega)를 사용하였는데, 이 키트는 세포의 미토콘드리아 기능을 측정하는 것이다.

전술한 것과 유사한 방법들을 사용하여, N-4-카르바밀 아날로그, 2-[5-브로모-4-(4-에틸-나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-카르바모일페닐)-아세트아미드 및 N-4-카르복실 아날로그에서와 마찬가지로, 2-[5-브로모-4-(4-시클로프로필나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-메틸-4-설파모일페닐)아세트아미드 및 2-[5-브로모-4-(4-에틸나프탈렌-1-일)-4H-[1,2,4]트리아졸-3-일설파닐]-N-(2-클로로-4-설파모일페닐)-아세트아미드를 합성하였다. 각 화합물을 변이 HIV 역 전사 효소 패널에 대해서 테스트하였는데, 이 패널은 가장 널리 사용되고 있는 비-뉴클레오시드 HIV-RT 억제제 에파비렌즈 ((4S)-6-클로로-4-(시클로프로필에티닐)-1,4-디하이드로-4-(트리플루오로메틸)-2H-3.11-벤즈옥사진-2-온)에 내성을 보이는 환자 시료 약 2% 또는 그 이상에서 발견되는 22개의 변이주 중 20개를 포함하였다. 변이율이 높은 각각의 20개의 변이주가 테스트 되었는데, 이들 화합물 중 적어도 하나는 에파비렌즈보다 20배 강력하였거나 또는 1nM 보다 낮은 EC₅₀를 보였다. 대부분의 경우, 두 개의 기준에 부합되었다. 대부분의 경우에서, 모든 3개의 화합물이 에파비렌즈보다 더욱 강력하게 나타났다. 야생형 Y181C 및 Y188L 변이주 역 전사 효소에 대한 본 화합물의 활성을 비교하였다. 두 가지 아 미드가 모든 세 개의 효소에서 카르복실산 보다 상당히 뛰어난 것으로 나타났다.

결과

본 발명의 화합물을 야생형 및 4 개의 변이 HIV 역 전사 효소에 대하여 테스트하였다. 그 결과를 하기 표 1에 EC₅₀ (nM) 및 IC₅₀ (nM)로 제시하였다. 하기 표에서, A는 < 50 nM를, B는 50 내지 100 nM를, 그리고 C는 > 100 nM를 의미한다. ND는 결정되지 않은 것을 나타낸다. 본 발명의 바람직한 화합물은 EC₅₀ 및 IC₅₀에서 모두 50 nM 미만인 야생형(WT) 및 내성 변이체에서 활성을 나타내었다.

Claims (2)

1. 하기 구조를 갖는 화합물:

   
2. 하기 구조를 갖는 화합물: