PT2076541E

PT2076541E - Proteínas de ligação de antigénio de receptor a de il-17

Info

Publication number: PT2076541E
Application number: PT78671948T
Authority: PT
Inventors: Joel Tocker; Jacques J Peschon; David Fitzpatrick; James F Smothers; Christopher Mehlin; Ai Ching Lim
Original assignee: Kirin Amgen Inc
Priority date: 2006-10-02
Filing date: 2007-10-01
Publication date: 2015-03-31
Also published as: HUS1800005I1; HUE032421T2; HUE033216T2; US10208122B2; US20100028345A1; AU2007314519A1; CY1118994T1; IL197636B; IL228672A; US9073999B2; ES2616210T3; MY187263A; US7833527B2; US20080220479A1; US7767206B2; IL197636A0; EP3165539A1; EP2487188A2; JP2010505416A; CY2018001I2

Description

DESCRIÇÃO "Proteínas de ligação de antigénio de receptor A de IL-17"

CAMPO DO INVENTO 0 presente invento refere-se a anticorpos do receptor A de IL-17 (IL-17RA ou IL-17R), sequências de polinucleótidos que codificam os referidos anticorpos e composições dos anticorpos para uso no tratamento de doenças mediadas por activação do receptor A de IL-17 por um ou mais ligandos IL-17.

ANTECEDENTES A IL-17 é uma citocina inflamatória inicialmente identificada como um produto de transcrição expresso selectivamente por células T activadas. A IL-17RA tem expressão ubíqua e demonstrou-se que liga IL-17A com uma afinidade de aproximadamente 0,5 nM (Yao et al., 1995,

Immunity 3:811-821). Foram identificados cinco ligandos adicionais do tipo IL-17 (IL-17B-IL-17F) e quatro receptores adicionais do tipo IL-17RA (IL-17RB-IL-17RE) (Rolls e Linden, 2004, Immunity 21:467-476).

Demonstrou-se que IL-17RC se liga a IL-17A e IL-17F. As observações que a deficiência de IL-17RA e a neutralização do anticorpo IL-17RA eliminam as funções tanto de IL-17A como de IL-17F, sugerem que IL-17RC não pode entregar um sinal IL-17A ou IL-17F na ausência de IL-17RA (Toy et ai., 2006, J. Immunol. 177:36-39; McAllister et al., 2005, J. Immunol. 175:404-412). Adicionalmente, a expressão forçada de IL-17RC em células deficientes em IL-17RA não restabelece as funções IL-17A ou IL-17F (Toy et al., 2006, J. Immunol. 177:36-39) . IL-17A e IL-17F são predominantemente expressos por células T de memória CD4+ activadas (Rolls e Linden, 2004, anteriormente). Propôs-se que um subconjunto de células T CD4+ patogénicas e produtoras de IL-17A, ThIL-17, é expandido na presença de IL-23 (Langrish et al., 2005, J. Exp. Med. 201:233-240) . Adicionalmente, demonstrou-se que tanto IL-15 como o membro da superfamília TNF, OX40L induzem a expressão de IL-17A (Nakae et al., 2003b, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100:5986-5990; Ziolkowska et al., 2000, J. Immunol. 164:2832-2838) . IL-6 e TGF-beta também induzem a expressão de IL-17A. IL-17A e IL-17F ligam e activam IL-17RA. Demonstrou-se que IL-17RA é importante na regulação de respostas imunitárias. A activação do IL-17RA leva à produção de citocinas, quimiocinas, factores de crescimento e outras proteinas que contribuem para os sintomas e/ou patologia de várias doenças. A IL-17A é uma citocina inflamatória que induz a produção de citocinas e outros mediadores que levam a doenças e efeitos fisiológicos tais como inflamação, degradação da cartilagem e reabsorção de osso. A IL-17A também desempenha um papel em várias condições inflamatórias incluindo artrite (artrite reumatóide), psoriase, doença inflamatória dos intestinos, esclerose múltipla e asma. (Li et ai., 2004, Huazhong Univ. Sci. Technolog. Med. Sci. 24:294-296; Fujino et al., 2003, Gut. 52:65-70; Kauffman et al., 2004, J. Invest. Dermatol. 123: 1037-1044; Mannon et al., 2004, N. Engl. J Med. 351:2069-2079; Matusevicius et al., 1999, Mult Scler 5, 101-104; Linden et al., Eur Respir J. Maio de 2000; 15(5) :973-7; Molet et al., 2001, J. Allergy Clin. Immunol. 108:430-438) . Estudos recentes sugeriram que IL-17F desempenha um papel na indução de respostas inflamatórias (Oda et al. , 2006, American J. Resp. Crit. Care Medicine, 15 Jan. 2006; Numasaki et al., 2004, Immunol Lett. 95:97-104) .

Aspectos do invento proporcionam proteinas de ligação de antigénio que ligam especificamente IL-17RA e inibem activação de IL-17RA mediada pelos membros da família IL-17, tais como IL-17A e/ou IL-17F, não se lhe limitando, tal como aqui descrito mais detalhadamente.

DESCRIÇÃO SUCINTA DOS ESQUEMAS A figura 1 apresenta uma análise de dendograma filogenético das CDR (regiões determinantes da complementaridade) dos domínios variável pesado (Vh) e variável leve (VL) das diferentes proteínas de ligação de antigénio IL-17R (anticorpos). A figura 2 apresenta um alinhamento das sequências de aminoácidos das CDR dos domínios variáveis pesados (Vh) de diferentes proteínas de ligação de antigénio IL-17R (anticorpos). As regiões CDR1, CDR2 e CDR3 estão salientadas. A figura 3 apresenta um alinhamento das sequências de aminoácidos das CDR dos domínios variáveis leves (Vl) de diferentes proteínas de ligação de antigénio IL-17R (anticorpos). As regiões CDR1, CDR2 e CDR3 estão salientadas. A figura 4 mostra que as pontuações clínicas médias de ratinhos IL-17RA-/- (ratinhos knockout ou ratinhos KO) são muito inferiores às de ratinhos de tipo selvagem (WT) num modelo CIA de artrite. A figura 5 apresenta o atraso no início de encefalomielite auto-imune experimental (EAE) para ratinhos knockout IL-17RA comparativamente com ratinhos de tipo selvagem num modelo induzido por glicoproteína de oligodendrócito de mielina (MOG). A figura 6 mostra pontuações clínicas reduzidas em ratinhos knockout IL-17RA comparativamente com ratinhos de tipo selvagem num modelo induzido por MOG. A figura 7 mostra que ratinhos knockout IL-17RA têm números totais reduzidos de células inflamatórias em fluido BAL comparativamente com tipo selvagem num modelo de asma induzida por ovalbumina. A figura 8 mostra que ratinhos knockout IL-17RA têm números reduzidos de eosinófilos (figura 8A) , neutrófilos (figura 8B) e linfócitos (figura 8C) em fluido de lavagem broncoalveolar (BAL) comparativamente com ratinhos de tipo selvagem num modelo de asma induzida por ovalbumina. A figura 8D não mostra quaisquer alterações em macrófagos de fluido BAL observadas em ratinhos WT ou ratinhos knockout IL-17RA (naives e provocados com OVA). A figura 9 apresenta inibição dependente da dose por um mAb IL-17RA num modelo de artrite induzida por colagénio (CIA) em tipo selvagem. Observou-se um P<0,05 quando se comparou mAb IL-17RA em grupos de tratamento de 100 pg e 300 pg comparativamente com grupos de tratamento de controlo (dias 13, 15 e 16). A figura 10 apresenta os resultados do tratamento terapêutico com mAb IL-17RA. Os dados apresentam pontuações clínicas médias estabilizadas em ratinhos de tipo selvagem num modelo de artrite CIA padrão. Estes dados demonstram que a inibição de IL-17RA por uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA pode ser terapeuticamente útil no tratamento de artrite reumatóide (RA), especialmente na conservação da articulação óssea e da cartilagem. A figura 11 mostra que o tratamento terapêutico com anti-IL-17RA estabilizou as pontuações clínicas médias em ratinhos knockout TNFR p55/p75 num modelo mAb de artrite CIA padrão. Estes dados mostram que a inibição de IL-17RA por uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA pode ser terapeuticamente útil no tratamento de RA, especialmente na conservação da articulação óssea e da cartilagem. Nitidamente, a inibição de IL-17RA foi capaz de estabilizar a doença num modelo independente de sinalização de TNF. A figura 12 mostra que alguns exemplos de mAb IL-17RA humanos (AMH14/AML14, AMH22/AML22, AMH19/AML19 e AMH18/AML18) foram capazes de inibir produção de IL-6 induzida por IL-17 cinomolgos por células JTC-12 (linha celular de rim cinomolgo) . A linha (----) representa o valor do controlo positivo de IL-17 cinomolgo em combinação com TNF-alfa. A linha (-.-.-) representa o valor do controlo positivo de TNF-alfa cinomolgo. A linha (....) representa o valor de controlo dos meios. A figura 13 apresenta variação de sequência nas regiões de esqueleto de SEQ ID NO: 40 (AMl14) em relação aos resíduos da linha germinal e o efeito nos valores de IC50. A figura 14 mostra que os dois variantes com resíduos que voltaram aos da linha germinal (consultar figura 13) tinham actividade de inibição de IL-17A reduzida relativamente a AMh14/AMl14, indicando que alguma variação nas regiões de esqueleto foi tolerada mas alguns resíduos podem influenciar a actividade. A linha (----) representa o valor do controlo positivo de estimulação de IL-17 na ausência de anticorpo (aproximadamente 4062 pg/ml). A figura 15 mostra que os dois variantes com resíduos que voltaram aos da linha germinal (consultar figura 13) tinham actividade de inibição de IL-17A reduzida (em combinação com TNF-alfa) em relação a AMh14/AMl14.

As figuras 16A e 16B mostram os resultados de divisões multiplexadas de anticorpos IL-17RA. Os valores a sombreado indicam pares de anticorpos que se podem ligar a IL-17RA simultaneamente, o que sugere que esses anticorpos se ligam a diferentes determinantes de neutralização. Os valores em caixas indicam anticorpos emparelhados entre si. A figura 17 apresenta IL-17RA de ratinho (SEQ ID NO:432) e os 5 domínios, A, B, C, D, E e F que substituem os domínios respectivos na sequência de IL-17RA humano.

As figuras 18A-18D apresentam as sequências de aminoácidos para IL-17RA humano e de ratinho e as proteínas quiméricas IL-17RA humanas/ratinho. A figura 19 é uma tabela que resume a capacidade dos mAb IL-17RA se ligarem a diferentes proteínas quiméricas. Os valores a sombreado indicam que os mAb IL-17RA perderam a ligação a essa quimera específica (n.d. significa que não foi determinado). A figura 20 apresenta os resíduos de aminoácidos que foram substituídos por um resíduo de arginina em SEQ ID NO:431. A figura 21 ilustra as curvas de titulação da ligação de vários mAb IL-17RA ao mutante D152R IL-17RA. A figura 22 é um resumo dos dados de rastreio de arginina, divisões e quimeras para diferentes mAb IL-17RA.

DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO

Os cabeçalhos de secção aqui utilizados têm apenas objectivos de organização e não devem ser interpretados como limitantes da matéria objecto descrita.

Podem utilizar-se técnicas padrão para ADN recombinante, síntese de oligonucleótidos, cultura de tecidos e transformação, purificação de proteína etc. Podem efectuar-se reacções enzimáticas e técnicas de purificação de acordo com as especificações do fabricante ou como habitualmente efectuado na especialidade ou como aqui descrito. Os seguintes procedimentos e técnicas podem ser geralmente efectuadas de acordo com métodos convencionais bem conhecidos na especialidade e tal como descrito em várias referências gerais e outras mais específicas que são citadas e discutidas ao longo do fascículo. Consultar, e.g., Sambrook et al., 2001,

Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3a ed., Cold Spring

Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. Excepto se forem proporcionadas definições específicas, a nomenclatura usada relativamente a química analítica, química orgânica e química medicinal e farmacêutica e os respectivos procedimentos laboratoriais e técnicas aqui descritos, são os bem conhecidos e comummente usados na especialidade. Podem usar-se técnicas padrão para síntese química, análises químicas, preparação farmacêutica, formulação e entrega e tratamento de doentes.

IL-17A, IL-17F e IL-17RA

As actividades biológicas de IL-17A e IL-17F dependem de IL-17RA, tal como aqui demonstrado usando tanto células como ratinhos que são geneticamente deficientes em IL-17RA e com mAb (anticorpos monoclonais) neutralizantes dirigidos contra IL-17RA (ver exemplos seguintes). "Receptor A de IL-17" ou "IL-17RA" (usados aqui indiferentemente, assim como Receptor de IL-17 e IL-17R em referência ao mesmo receptor) tal como aqui usados significam o receptor de superfície celular e complexos de receptor (tal como o complexo IL-17RA-IL-17RC, não se lhe limitando), que ligam IL-17A e IL-17F e em resultado dessa ligação inicia-se uma via de transdução de sinal no interior da célula. As proteínas IL-17RA podem também incluir variantes. As proteínas IL-17RA podem também incluir fragmentos, tal como o domínio extracelular que não inclui todo ou parte do domínio transmembranar e/ou do domínio intracelular, assim como fragmentos do domínio extracelular. Descrevem-se a clonagem, caracterização e preparação de IL-17RA, por exemplo, na patente U.S. n2 6 072 033. A sequência de aminoácidos de IL-17RA humano apresenta-se em SEQ ID NO:430. As formas solúveis de huIL-17RA incluem o domínio extracelular ou a forma madura isenta de péptido de sinalização ou um fragmento do domínio extracelular que retém a capacidade de ligar IL-17A e/ou IL-17F ou uma versão heteromérica de IL-17A e/ou IL-17F. Outras formas de IL-17RA incluem muteínas e variantes que são pelo menos entre 70% e 99% homólogos ao IL-17RA nativo de SEQ ID NO:430 e tal como descrito na patente U.S. n2 6 072 033, desde que o IL-17RA retenha a capacidade de ligar IL-17A e/ou IL-17F ou uma versão heteromérica de IL-17A e/ou IL-17F. A expressão "IL-17RA" também inclui modificações pós-tradução da sequência de aminoácidos de IL-17RA. As modificações pós-tradução incluem glicosilação ligada a N e ligada a O, não se lhes limitando.

Proteínas de ligação de antigénio IL-17RA O presente invento proporciona proteínas de ligação de antigénio, especificamente um anticorpo isolado ou um seu fragmento compreendendo uma sequência de aminoácidos de CDR1 de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO :224, uma sequência de aminoácidos de CDR2 de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO :225, uma sequência de aminoácidos de CDR3 de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO:226, uma sequência de aminoácidos de CDR1 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO:146, uma sequência de aminoácidos de CDR2 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO :147 e uma sequência de aminoácidos de CDR3 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO:148, em que o referido anticorpo ou seu fragmento liga receptor de IL-17A humano. O invento inclui opcionalmente modificações pós-tradução. Os aspectos do invento podem incluir anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem a ligação de IL-17A e/ou IL-17F a IL-17RA e a activação deste, ou um complexo heteromérico de IL-17RA e IL-17RC. Os aspectos do invento podem incluir anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem a ligação do heterómero IL-17A/IL-17F a IL-17RA e a activação deste, ou um complexo heteromérico de IL-17RA e IL-17RC. Ao longo do fascículo, quando se faz referência à inibição de IL-17A e/ou IL-17F, assume-se que tal também inclui a inibição dos heterómeros de IL-17A e IL-17F. Os aspectos do invento podem incluir anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem parcial ou completamente a formação de complexos receptores funcionais homoméricos ou heteroméricos de IL-17RA, tal como um complexo IL-17RA-IL-17RC, não se lhe limitando. Os aspectos do invento podem incluir anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem parcial ou completamente a formação de complexos receptores funcionais homoméricos ou heteroméricos de IL-17RA, tal como um complexo IL-17RA/IL-17RC, não se lhe limitando e não inibe necessariamente a ligação de IL-17A e/ou IL-17F ou de um heterómero IL-17A/IL-17F a IL-17RA ou a um complexo de receptor heteromérico IL-17RA.

As proteínas de ligação de antigénio do invento ligam-se especificamente a IL-17RA. "Liga-se especificamente" tal como aqui usado significa que a proteína de ligação de antigénio liga-se preferentemente a IL-17RA relativamente a outras proteínas. Em algumas concretizações "liga-se especificamente" significa que as proteínas de ligação a antigénio IL-17RA têm uma maior afinidade para IL-17RA do que para outras proteínas. Por exemplo, a constante de equilíbrio de dissociação é < lCh7 a 1 CF11 M ou <1CR8 a <lCr10 M ou <lCr9 a <lCr10 M.

Entende-se que quando se referenciam as diferentes concretizações dos anticorpos IL-17RA aqui descritos, tal também abrange os seus fragmentos de ligação a IL-17RA. Um fragmento de ligação a IL-17RA compreende qualquer dos fragmentos ou domínios de anticorpo aqui descritos que retêm a capacidade de se ligar especificamente a IL-17RA. Os referidos fragmentos de ligação a IL-17RA podem estar em qualquer dos esqueletos aqui descritos. Os referidos fragmentos de ligação a IL-17RA podem também ter a capacidade de inibir activação do IL-17RA, tal como descrito ao longo do fascículo.

Em concretizações nas quais a proteína de ligação a antigénio IL-17RA é usada para aplicações terapêuticas, uma característica de uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA pode ser a de poder inibir a ligação de IL-17A e/ou IL-17F a IL-17RA e uma ou mais actividades biológicas de IL-17RA ou mediadas por este. Tais anticorpos consideram-se anticorpos neutralizantes devido à sua capacidade de inibir a ligação de IL-17A e/ou IL-17F e causar sinalização e/ou actividade biológica de IL-17RA. Neste caso, uma proteína de ligação de antigénio liga especificamente IL-17RA e pode inibir a ligação de IL-17A e/ou IL-17F a IL-17RA numa percentagem entre 10 a 100%, tal como pelo menos cerca de 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% ou mais (por exemplo por medição da ligação num ensaio de ligação competitiva in vitro tal como aqui descrito). Por exemplo, podem testar-se anticorpos IL-17RA relativamente à sua

capacidade neutralizante, ensaiando-os para produção de IL-6 num ensaio de fibroblastos de prepúcio humano (HFF) (consultar por exemplo os exemplos 8 e 9) ou qualquer ensaio adequado conhecido na especialidade. Os exemplos, apenas com objectivos ilustrativos, de actividade biológica adicional de IL-17RA (e.g., leituras do ensaio) para testar a inibição de sinalização e/ou actividade biológica de IL-17RA incluem medições in vitro e/ou in vivo de um ou mais de IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1 , TNF , RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP (tais como MMP3 e MMP9, não se lhes limitando) , GRO , NO e/ou C-telopéptido e semelhantes.

As concretizações das proteínas de ligação de antigénio compreendem uma estrutura de esqueleto, tal como aqui definido em diferentes ocasiões, com uma ou mais regiões determinantes da complementaridade (CDR). As concretizações incluem anticorpos que compreendem o anticorpo isolado ou seu fragmento da reivindicação 1, em que o referido anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO:40 e uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 14, em que o referido anticorpo ou seu fragmento liga o receptor A de IL-17 humano.

Os exemplos adicionais de esqueletos que podem ser concebidos incluem: fibronectina, neocarzinostatina, CBM4-2, lipocalinas, receptor de células T, domínio de proteína-A (proteína Z), Im9, proteínas TPR, domínios de dedos de zinco, pVIII, polipéptido pancreático aviário, GCN4, domínio WW, domínio de homologia 3 de Src, domínios PDZ, Beta-lactamase TEM-1, tiorredoxina, nuclease de estafilococos, domínios de dedo PHD, CL-2, BPTI, APPI, HPSTI, ecotina, LACI-D1, LDTI, MTI-II, toxinas de escorpião, péptido defensina-A de insecto, EETI-II, Min-23, CBD, PBP, citocromo b-562, domínios de receptor Ldl, gama-cristalina, ubiquitina, transferina e/ou domínios do tipo lectina do tipo C.

Noutra variação, a proteína de ligação de antigénio pode compreender uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de aminoácidos da cadeia pesada de SEQ ID NO:14 ou uma sequência de aminoácidos da cadeia leve de SEQ ID NO:40.

Os aspectos do invento podem incluir anticorpos que compreendem uma região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 14 com não mais de uma, duas, três, quatro, cinco ou seis adições, deleções ou substituições de aminoácidos. Os aspectos do invento podem incluir anticorpos compreendendo uma região variável de cadeia leve seleccionada do grupo que consiste de SEQ ID NO:40 com não mais de uma, duas, três, quatro, cinco ou seis adições, deleções ou substituições de aminoácidos.

Os aspectos do invento incluem várias concretizações incluindo os seguintes exemplos de concretizações, não se lhes limitando: Concretização 1: um anticorpo isolado, compreendendo um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação ao receptor A de IL-17 que não é completamente murino e que liga especificamente o receptor A de IL-17 e inibe a ligação de IL-17A e a activação do referido receptor em que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos de CDR1 de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO :224, uma sequência de aminoácidos de CDR2 de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO :225, uma sequência de aminoácidos de CDR3 de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO:226, uma sequência de aminoácidos de CDR1 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO:146, uma sequência de aminoácidos de CDR2 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO:147 e uma sequência de aminoácidos de CDR3 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO:148.

Concretização 2: o anticorpo da concretização 1, em que o referido anticorpo inibe adicionalmente a ligação de IL-17F e activação do referido receptor. Concretização 3: o anticorpo da concretização 1 ou concretização 2, em que o referido anticorpo é seleccionado do grupo que consiste de: a. um anticorpo humanizado; b. um anticorpo quimérico; c. um anticorpo recombinante; d. um anticorpo de cadeia simples; e. um diacorpo; f. um triacorpo; g. um tetracorpo; h. um fragmento Fab; i. um fragmento F(ab' )2; j. um anticorpo IgD; k. um anticorpo IgE; 1. um anticorpo IgM; m. um anticorpo IgGl; n. um anticorpo IgG2; o. um anticorpo IgG3; e p. um anticorpo IgG4.

Concretização 4: o anticorpo da concretização 3, em que o referido anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos seleccionados do grupo que consiste de: A. a. uma sequência de domínio variável de cadeia leve que é pelo menos 80% idêntica a uma sequência de domínio variável de cadeia leve de AMl14 (SEQ ID NO:40); b. uma sequência de domínio variável de cadeia pesada que é pelo menos 80% idêntica a uma sequência de domínio variável de cadeia pesada de AMh14 (SEQ ID NO:14); ou c. o domínio variável de cadeia leve de (a) e o domínio variável de cadeia pesada de (b); e B. uma CDR1, CDR2, CDR3 de cadeia leve e uma CDR1, CDR2, CDR3 de cadeia pesada de:

Uma CDR1 (SEQ ID NO:224), uma CDR2 (SEQ ID NO:225), uma CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadeia leve e uma CDR1 (SEQ ID NO:146), uma CDR2 (SEQ ID NO:147), uma CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadeia pesada do anticorpo AM-14; em que o referido anticorpo liga especificamente o receptor A de IL-17.

Concretização 5: o anticorpo da concretização 4, em que o referido anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada do grupo que consiste de: um domínio variável de cadeia leve e um domínio variável de cadeia pesada de AML14/AMH14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14); em que o referido anticorpo liga especificamente o receptor A de IL-17.

Uma concretização adicional: uma composição farmacêutica, compreendendo o anticorpo da concretização 4. Uma concretização adicional: um anticorpo isolado, seleccionado do grupo que consiste de: a) um anticorpo que consiste de uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO :427 e uma sequência de cadeia leve de SEQ ID NO:42 9; b) um anticorpo compreendendo uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 427 e uma sequência de cadeia leve de SEQ ID NO:42 9; c) um anticorpo ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO:427 e uma sequência de cadeia leve de SEQ ID NO:429; d) um anticorpo ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo uma sequência de região variável de cadeia leve de SEQ ID NO:40 e uma sequência de região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO:14; e) um anticorpo ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada de SEQ ID NO: 146, uma CDR2 de cadeia pesada de SEQ ID NO: 147, uma CDR3 de cadeia pesada de SEQ ID NO: 148, uma CDR1 de cadeia leve de SEQ ID NO:224, uma CDR2 de cadeia leve de SEQ ID NO:225 e uma CDR3 de cadeia leve de SEQ ID NO:226.

Uma concretização 20 adicional: o anticorpo da concretização anterior, em que o referido anticorpo é uma composição farmacêutica.

Como estrutura geral, as proteínas de ligação de antigénio do invento compreendem (a) um esqueleto e (b) CDR. Uma "região determinante da complementaridade" ou "CDR", tal como aqui utilizado, refere-se a uma região de proteína de ligação que constitui os principais pontos de contacto da superfície para ligação de antigénio. As concretizações do invento incluem CDR integradas numa estrutura de esqueleto de uma proteína de ligação de antigénio. A estrutura de esqueleto das proteínas de ligação de antigénio podem ser o esqueleto de um anticorpo ou seu fragmento ou variante ou podem ser de natureza completamente sintética. Descrevem-se adicionalmente aqui seguidamente exemplos de várias estruturas de esqueleto das proteínas de ligação de antigénio do invento.

As proteínas de ligação de antigénio do invento incluem regiões de esqueleto e CDR. Uma proteína de ligação de antigénio do invento pode ter seis CDR (tal como ocorre tipicamente de forma natural em anticorpos), por exemplo, uma CDR1 de cadeia pesada ("H-CDR1") e uma CDR2 de cadeia pesada ("H-CDR2") e uma CDR3 de cadeia pesada ("H-CDR3") e uma CDR1 de cadeia leve ("L-CDR1") e uma CDR2 de cadeia leve ("L-CDR2") e uma CDR3 de cadeia leve ("L-CDR3"). A expressão "de ocorrência natural" tal como utilizada ao longo do fascículo em relação a materiais biológicos tais como péptidos, polipéptidos, ácido nucleicos, células hospedeiras e semelhantes, refere-se a materiais que se encontram na natureza. Em anticorpos de ocorrência natural, uma H-CDR1 compreende tipicamente cerca de cinco (5) a cerca de sete (7) aminoácidos, H-CDR2 compreende tipicamente cerca de dezasseis (16) a cerca de dezanove (19) aminoácidos e H-CDR3 compreende tipicamente cerca de três (3) a cerca de vinte e cinco (25) aminoácidos. L-CDR1 compreende tipicamente cerca de dez (10) a cerca de dezassete (17) aminoácidos, L-CDR2 compreende tipicamente cerca de sete (7) aminoácidos e L-CDR3 compreende tipicamente cerca de sete (7) a cerca de dez (10) aminoácidos. Proporcionam-se na Tabela 1 e na Listagem de Sequências, CDR específicas dos diferentes anticorpos do invento.

A estrutura geral e as propriedades das CDR presentes em anticorpos de ocorrência natural foram descritas na especialidade. Sucintamente, num esqueleto de anticorpo tradicional, as CDR estão inseridas no interior de um esqueleto nas regiões variáveis das cadeias leves e pesadas nas quais constituem as principais regiões responsáveis por ligação e reconhecimento de antigénio. Uma região variável compreende pelo menos três CDR de cadeias leves ou pesadas, consultar anteriormente (Kabat et al. , 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda, MD; consultar igualmente Chothia e Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al. , 1989, Nature 342: 877-883), no interior de uma região de esqueleto (designadas regiões de esqueleto 1-4, FR1, FR2, FR3 e FR4 por Kabat et al., 1991, anteriormente; consultar igualmente Chotia e Lesk, 1987, anteriormente). Consultar seguidamente. As CDR proporcionadas pelo presente invento, contudo, podem não ser apenas usadas para definir o domínio de ligação de antigénio de uma estrutura de anticorpo tradicional, mas podem estar inseridas em várias outras estruturas de esqueleto, tal como aqui descritas.

Os anticorpos do invento podem compreender qualquer região constante conhecida na especialidade. A região constante de cadeia leve pode ser, por exemplo, uma região constante de cadeia leve do tipo kapa ou do tipo lambda, e.g., uma região constante de cadeia leve do tipo kapa humana ou do tipo lambda humana. A região constante de cadeia pesada pode ser, por exemplo, uma região constante de cadeia pesada do tipo alfa, do tipo delta, do tipo épsilon, do tipo gama ou do tipo mu, e.g., uma região constante de cadeia pesada do tipo alfa humana, do tipo delta humana, do tipo épsilon humana, do tipo gama humana ou do tipo mu humana. A região constante de cadeia leve ou de cadeia pesada é um fragmento, derivado, variante ou muteina da região constante de ocorrência natural. 0 invento proporciona uma proteína de ligação de antigénio que liga especificamente IL-17RA, em que a referida proteína de ligação de antigénio compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve e CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada, CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadeia leve e CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadeia pesada do anticorpo AM-14; e seus fragmentos.

As CDR também incluem sequências consensuais derivadas de grupos de anticorpos monoclonais relacionados. Os anticorpos podem ser relacionados tanto por homologia de sequência como de função, tal como mostrado nos exemplos. Tal como aqui descrito, uma "sequência consensual" refere-se a sequências de aminoácidos com aminoácidos conservados comuns entre várias sequências e aminoácidos variáveis que variam no interior de determinadas sequências de aminoácidos. As CDR de sequências consensuais incluem CDR correspondendo a cada um de H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 e L-CDR3.

Determinaram-se sequências consensuais utilizando análises filogenéticas padrão das CDR correspondendo à VH (i.e., pesada variável, etc.) e VL de anticorpos anti-IL-17RA. Utilizaram-se duas abordagens diferentes. Numa primeira abordagem, determinaram-se as sequências consensuais mantendo as CDR contíguas no interior da mesma sequência correspondente a uma VH ou VL. Numa segunda abordagem, determinaram-se as sequências consensuais por alinhamento dos diferentes tipos de CDR, i . e . , sequências H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 e L-CDR3 das proteínas de ligação de antigénio IL-17RA aqui divulgadas independentemente.

Numa primeira abordagem, sucintamente, converteram-se para FASTA as sequências de aminoácidos correspondentes aos domínios variáveis completos de VH ou de VL, formatando para facilitar o processamento de alinhamentos comparativos e inferir filogenias. Seguidamente, substituíram-se as regiões de esqueleto dessas sequências com uma sequência ligante artificial (GGGAAAGGGAAA, SEQ ID NO: 448) de modo a se poder efectuar análise apenas das CDR sem introduzir qualquer peso relativo de composição de aminoácidos devido a eventos coincidentes (e.g., tal como anticorpos não relacionados que partilham casualmente uma herança de esqueleto de linha germinal comum) enquanto se mantêm ainda as CDR contíguas no interior da mesma sequência correspondente a VH ou VL. Submeteram-se então as sequências VH ou VL neste formato a teste de alinhamento de semelhança de sequências utilizando um programa que utiliza um algoritmo do tipo ClutalW padrão (consultar, Thompson et ai., 1994, Nucleic Acids Res. 22:4673-4680). Utilizou-se uma penalidade por criação de falha de 8,0 conjuntamente com uma penalidade de extensão de falha de 2,0. Do mesmo modo, este programa gerou filogramas (ilustrações de árvores filogenéticas) com base em alinhamento de semelhança de sequências usando os métodos UPGMA (método de grupo emparelhado não pesado usando médias aritméticas) ou de junção de vizinhos (consultar, Saitou e Nei, 1987, Molecular Biology and Evolution 4:406-425) para construir e ilustrar semelhança e distinção de grupos de sequências através de comparação e agrupamento ao longo do comprimento do ramo. Ambos os métodos produziram resultados semelhantes mas em última análise utilizaram-se árvores derivadas de UPGMA uma vez que o método utiliza um conjunto mais simples e mais conservado de princípios. Apresentam-se na figura 1 as árvores derivadas de UPGMA nas quais se definiram grupos semelhantes de sequências como aqueles que apresentavam menos de 15 substituições por cada 100 resíduos (para escala, consultar a legenda nas ilustrações em árvore) entre sequências individuais no interior do grupo e usaram-se para definir colecções de sequências consensuais. Utilizaram-se os alinhamentos da sequência original gerados para examinar empiricamente e documentar a ocorrência de aminoácidos tolerados em cada posição com um grupo consensual e apresentam-se nas figuras 2 e 3. Prepararam-se então as sequências consensuais para os grupos de sequências semelhantes no interior de cada CDR. Os aminoácidos que variaram no interior de cada grupo foram anotados com a notação Xn no interior de cada sequência consensual.

As sequências consensuais H-CDR1 incluem as sequências de aminoácidos seleccionadas do grupo que consiste de: a) XiYGIS (SEQ ID NO:453), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de R, Se G; b) X1YX2MX3 (SEQ ID NO:454), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de D e S; X2 é seleccionado do grupo que consiste de Y e S; e X3 é seleccionado do grupo que consiste de S e N; e c) SYGMXi (SEQ ID NO:455), em que

Xi é seleccionado do grupo que consiste de H e Q;

As sequências consensuais H-CDR2 incluem as sequências de aminoácidos seleccionadas do grupo que consiste de: a) WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (SEQ ID NO: 456) , em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de A e T; X2 é seleccionado do grupo que consiste de N, Se K; X3 é seleccionado do grupo que consiste de N e K; X4 é seleccionado do grupo que consiste de K e N; e X5 é seleccionado do grupo que consiste de L e F; b) X1X2SX3X4X5SX6IX7YADSVKG (SEQ ID NO: 457) , em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de Y, I e F; X2 é seleccionado do grupo que consiste de I e S; X3 é seleccionado do grupo que consiste de S e A; X4 é seleccionado do grupo que consiste de S e R; e X5 é seleccionado do grupo que consiste de G, Se nenhum aminoácido; Xe é seleccionado do grupo que consiste de T e I; e X7 é seleccionado do grupo que consiste de Y e H; e c) VIWYDGX1X2KX3YADSVKG (SEQ ID NO:458), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de S e N; X2 é seleccionado do grupo que consiste de N e K; e X3 é seleccionado do grupo que consiste de H e Y.

As sequências consensuais H-CDR3 incluem as sequências de aminoácidos seleccionadas do grupo que consiste de: a) X1QLX2X3DY (SEQ ID NO:459), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de R e K, X2 é seleccionado do grupo que consiste de Y, V e A, e X3 é seleccionado do grupo que consiste de F e L e b) X1QLX2FDY (SEQ ID NO:460), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de R e K, e X2 é seleccionado do grupo que consiste de Y e V. A sequência consensual L-CDR1 inclui uma sequência de aminoácidos seleccionada do grupo que consiste de: a) RASQX1IX2X3X4LX5 (SEQ ID NO: 461), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de G, Se A; X2 é seleccionado do grupo que consiste de R e S; X3 é seleccionado do grupo que consiste de S, I e N; X4 é seleccionado do grupo que consiste de W e Y; e X5 é seleccionado do grupo que consiste de A e N; b) RASQSX1X2X3X4LA (SEQ ID NO:462), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de V e I; X2 é seleccionado do grupo que consiste de I e S; X3 é seleccionado do grupo que consiste de S e T; X4 é seleccionado do grupo que consiste de N e S; e X5 é seleccionado do grupo que consiste de A e N; e c) RASQSVX1X2NLX3 (SEQ ID NO: 463) , em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de Y e S; X2 é seleccionado do grupo que consiste de S e R; e X3 é seleccionado do grupo que consiste de A e V. A sequência consensual L-CDR2 inclui uma sequência de aminoácidos seleccionada do grupo que consiste de: a) AASSXiQS (SEQ ID NO:464), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de L e F; b) AASXiLQS (SEQ ID NO:465), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de S e T; c) X1X2STRAX3, em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de G e D; X2 é seleccionado do grupo que consiste de A e T; e X3 é seleccionado do grupo que consiste de T e A; e d) GASTRAXi (SEQ ID NO:466), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de A, Te N.

As sequências consensuais L-CDR3 incluem sequências de aminoácidos seleccionadas do grupo que consiste de: a) LQHX1SYX2X3T (SEQ ID NO:467), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de K e N; X2 é seleccionado do grupo que consiste de P e N; e X3 é seleccionado do grupo que consiste de L, Fe P; b) QX1X2X3X4X5PX6T (SEQ ID NO:468), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de Q e K; X2 é seleccionado do grupo que consiste de A, Se Y; X3 é seleccionado do grupo que consiste de N, Y e S; X4 é seleccionado do grupo que consiste de N, Se R; X5 é seleccionado do grupo que consiste de F, T, Y e A; e Χδ é seleccionado do grupo que consiste de R e F; c) QQYDXiWPLT (SEQ ID NO:469), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de N, T e I; e d) QX1YX2X3WX4X5X6T (SEQ ID NO:470), em que Xi é seleccionado do grupo que consiste de H e Q; X2 é seleccionado do grupo que consiste de I, Y, N e K; X3 é seleccionado do grupo que consiste de N e S; X4 é seleccionado do grupo que consiste de P e R; X5 é seleccionado do grupo que consiste de K, nenhum aminoácido e T; e Xe é seleccionado do grupo que consiste de W e nenhum aminoácido.

As figuras 1, 2, 3, 16A, 16B, 19 e 22 mostram que existe um padrão claro nos dados entre a homologia de sequências nos domínios CDR e na função dos anticorpos, tal como determinado por divisões de competição cruzada e pela determinação do local de ligação dos anticorpos a IL-17RA. Assim, estabeleceu-se uma relação estrutura/função para classes de anticorpos para os anticorpos IL-17RA aqui descritos.

Numa segunda abordagem, determinaram-se sequências consensuais CDR para cada CDR individual, independentemente dos seu contexto contíguo no interior da mesma sequência correspondente a uma VH ou VL. Nesta abordagem determinaram-se as sequências consensuais por alinhamento de cada H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 e L-CDR3 em grupos, i.e., por alinhamento das sequências H-CDR1 individuais das proteínas de ligação de antigénio IL-17RA aqui divulgadas para determinar uma sequência consensual H-CDR1, por alinhamento das sequências H-CDR2 individuais das proteínas de ligação de antigénio IL-17RA aqui divulgadas para determinar uma sequência consensual H-CDR2, por alinhamento das sequências H-CDR3 individuais das proteínas de ligação de antigénio IL-17RA aqui divulgadas para determinar uma sequência consensual H-CDR3, por alinhamento das sequências L-CDR1 individuais das proteínas de ligação de antigénio IL-17RA aqui divulgadas para determinar uma sequência consensual L-CDR1, por alinhamento das sequências L-CDR2 individuais das proteínas de ligação de antigénio IL-17RA aqui divulgadas para determinar uma sequência consensual L-CDR2, por alinhamento das sequências L-CDR3 individuais das proteínas de ligação de antigénio IL-17RA aqui divulgadas para determinar uma sequência consensual L-CDR3. Identificaram-se as semelhanças entre sequências no interior de cada sequência CDR individual. Prepararam-se então sequências consensuais para os grupos de sequências semelhantes no interior de cada CDR. Anotaram-se os aminoácidos que variaram dentro de cada grupo com a notação Xn no interior de cada sequência consensual. 0 invento proporciona uma proteína de ligação de antigénio que liga especificamente IL-17RA, em que a referida proteína de ligação de antigénio compreende pelo menos três regiões H-CDR de SEQ ID NO: 146, 147, 148 e pelo menos três regiões L-CDR de qualquer de SEQ ID NO:224, 225, 226.

Tal como aqui mencionado, as proteínas de ligação de antigénio do presente invento compreendem uma estrutura de esqueleto na qual se podem inserir a(s) CDR do invento. 0 género de proteína de ligação a antigénio IL-17RAS compreende o subgénero de anticorpos, tal como aqui definido de diferentes formas. Os aspectos incluem concretizações em que a estrutura de esqueleto de anticorpo é uma estrutura tradicional, tetramérica. Assim, as combinações de proteína de ligação de antigénio aqui descritas incluem as componentes adicionais (esqueleto, regiões J e D, regiões constantes, etc.) que formam uma cadeia pesada e/ou uma cadeia leve.

As concretizações incluem o uso de componentes do esqueleto humano. Um exemplo de concretização de uma região variável VH inserida numa estrutura de esqueleto de anticorpo tradicional é apresentada em SEQ ID NO :427 e um exemplo de concretização de uma região variável VL inserida numa estrutura de esqueleto de anticorpo tradicional é apresentada em SEQ ID NO: 42 9. Claro que se admite que se pode empregar qualquer esqueleto de anticorpo conhecido na especialidade.

Num aspecto, o presente invento proporciona anticorpos que compreendem uma região variável de cadeia leve de AMl14 e uma região variável de cadeia pesada de AMh14 e seus fragmentos. Os anticorpos do invento incluem: anticorpos compreendendo AMl 14/AMh14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID N0:14), assim como seus fragmentos de ligação de IL-17RA, não se lhes limitando.

Numa concretização, o presente invento proporciona um anticorpo compreendendo um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos que difere da sequência de um domínio variável de cadeia leve de AMl14 apenas em 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 resíduo (s) , em que cada uma de tais diferenças de sequência é independentemente uma deleção, inserção ou substituição de um resíduo de aminoácido. Noutra concretização, o domínio variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de um domínio variável de cadeia leve de AMl14. Noutra concretização, o domínio variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é codificada por uma sequência de nucleótidos que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% ou 99% idêntica a uma sequência de nucleótidos que codifica um domínio variável de cadeia leve de AMl14. Noutra concretização, o domínio variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é codificada por um polinucleótido que híbrida em condições moderadamente rigorosas com o complementar de um polinucleótido que codifica um domínio variável de cadeia leve de AMl14. Noutra concretização, o domínio variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é codificada por um polinucleótido que híbrida em condições moderadamente rigorosas com um complementar de um polinucleótido de cadeia leve proporcionado pela sequência de polinucleótidos AMl14 (SEQ ID NO:93). O presente invento proporciona um anticorpo compreendendo um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos que difere da sequência de um domínio variável de cadeia pesada de AMh14 apenas em 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 resíduo (s), em que cada uma de tais diferenças de sequência é independentemente uma deleção, inserção ou substituição de um resíduo de aminoácido. Noutra concretização, o domínio variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de um domínio variável de cadeia pesada de AMH14. Noutra concretização, o domínio variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é codificada por uma sequência de nucleótidos que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de nucleótidos que codifica um domínio variável de cadeia pesada de AMh14. Noutra concretização, o domínio variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é codificada por um polinucleótido que híbrida em condições moderadamente rigorosas ou rigorosas com o complementar de um polinucleótido que codifica um domínio variável de cadeia pesada de AMh14. Noutra concretização, o domínio variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é codificada por um polinucleótido que híbrida em condições moderadamente rigorosas ou rigorosas com um complementar de um polinucleótido de cadeia pesada proporcionado pela sequência de polinucleótidos AMh14 (SEQ ID NO:67).

Assim, em diferentes concretizações, as proteínas de ligação de antigénio do invento compreendem os esqueletos de anticorpos tradicionais, incluindo anticorpos humanos e monoclonais, anticorpos biespecíficos, diacorpos, minicorpos, anticorpos de domínio, anticorpos sintéticos (algumas vezes referidos aqui como "miméticos de anticorpo"), anticorpos quiméricos, fusões de anticorpo (algumas vezes referidos como "conjugados de anticorpo") e fragmentos de cada, respectivamente. As CDR acima descritas e combinações de CDR podem ser inseridas em qualquer um dos esqueletos seguintes.

Tal como aqui utilizada, a expressão "anticorpo" refere-se às diferentes formas de proteínas monoméricas ou multiméricas compreendendo uma ou mais cadeias de polipéptidos que se ligam especificamente a um antigénio, tal como aqui descrito de várias formas. Os anticorpos podem ser produzidos por técnicas de ADN recombinante. Os anticorpos podem ser produzidos por clivagem enzimática ou química de anticorpos de ocorrência natural. Noutro aspecto, o anticorpo é seleccionado do grupo que consiste de: a) um anticorpo humano; b) um anticorpo humanizado; c) um anticorpo quimérico; d) um anticorpo monoclonal; e) um anticorpo policlonal; f) um anticorpo recombinante; g) um fragmento de anticorpo de ligação de antigénio; h) um anticorpo de cadeia simples; i) um diacorpo; j) um triacorpo; k) um tetracorpo; 1) um fragmento Fab; m) um fragmento F (ab' j ; n) um anticorpo IgD; o) um anticorpo IgE; p) um anticorpo IgM; q) um anticorpo IgA; r) um anticorpo

IgGl; s) um anticorpo IgG2; t) um anticorpo IgG3; e u) um anticorpo IgG4.

Uma região variável compreende pelo menos três CDR de cadeia pesada ou de cadeia leve, consultar anteriormente (Rabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda, MD; consultar igualmente Chothia e Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342: 877-883), inserido numa região de esqueleto (designada região de esqueleto 1-4, FR1, FR2, FR3 e FR4, por Rabat et al., 1991, anteriormente; consultar igualmente Chothia e Lesk, 1987, anteriormente). Consultar seguidamente.

As unidades estruturais de anticorpo tradicionais compreendem tipicamente um tetrâmero. Cada tetrâmero é tipicamente composto por dois pares idênticos de cadeias de polipéptido, tendo cada par uma cadeia "leve" (tipicamente com um peso molecular de cerca de 25 kDa) e uma cadeia "pesada" (tipicamente com um peso molecular de cerca de 50-70 kDa) . A parte do terminal amino de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos que são os principais responsáveis por reconhecimento de antigénio. A parte do terminal carboxilo de cada cadeia define uma região constante que é a principal responsável pela função efectora. As cadeias leves humanas classificam-se como cadeias leves kapa e lambda. As cadeias pesadas classificam-se como mu, delta, gama, alfa ou épsilon e definem o isotipo de anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. IgG tem várias subclasses, incluindo IgGl, IgG2, IgG3 e IgG4, não se lhes limitando. IgM tem subclasses, incluindo IgMl e IgM2, não se lhes limitando. As concretizações do invento incluem todas tais classes de anticorpos que incorporam os domínios variáveis ou as CDR das proteínas de ligação de antigénio, tal como aqui descritas.

No interior das cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis e constantes estão ligadas conjuntamente por uma região "J" com cerca de doze (12) ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada incluindo também uma região "D" com cerca de dez (10) aminoácidos adicionais. Consultar, na generalidade, Paul, W., ed., 1989, Fundamental Immunology Cap. 7, 2a ed. Raven

Press, N.Y. As regiões variáveis de cada par cadeia leve/cadeia pesada formam o local de ligação do anticorpo. Os esqueletos do invento incluem tais regiões.

Alguns anticorpos de ocorrência natural, por exemplo presentes em camelos e lamas, são dimeros que consistem de duas cadeias pesadas e não incluem quaisquer cadeias leves. Muldermans et al., 2001, J. Biotechnol. 74:277-302; Desmyter et al., 2001, J. Biol. Chem. 216:26285-26290. Os estudos cristalográficos de um anticorpo de camelo revelaram que as regiões CDR3 formam uma superfície que interage com o antigénio e assim são críticas para ligação de antigénio tal como nos anticorpos tetraméricos mais típicos. O invento abrange anticorpos diméricos consistindo de duas cadeias pesadas ou seus fragmentos, que podem ligar e/ou inibir a actividade biológica de IL-17RA.

As regiões variáveis das cadeias pesada e leve apresentam tipicamente a mesma estrutura geral de regiões de esqueletos (FR) relativamente conservadas juntas entre si por três regiões hipervariáveis, i.e., as regiões determinantes da complementaridade ou CDR. As CDR são as regiões hipervariáveis de um anticorpo (ou proteína de ligação de antigénio, tal como aqui estabelecido), que são responsáveis por reconhecimento e ligação de antigénio. As CDR das duas cadeias de cada par estão alinhadas pelas regiões de esqueleto, permitindo a ligação a um epítopo específico. De N-terminal para C-terminal, tanto a cadeia leve como a cadeia pesada compreendem os domínios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. A atribuição de aminoácidos a cada domínio é feita de acordo com as definições de Sequences of Proteins of Immunological Interest de Rabat. Chothia et al., 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917;Chothia et al., 1989, Nature 342:878-883. Os esqueletos do invento incluem tais regiões.

As CDR constituem os principais pontos de contacto de superfície para ligação de antigénio. Consultar, e.g., Chothia e Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917. Além disso, CDR3 da cadeia leve e especialmente, CDR3 da cadeia pesada podem constituir os determinantes mais importantes para ligação de antigénio no interior das regiões variáveis de cadeia leve e pesada. Consultar, e.g., Chothia e Lesk, 1987, anteriormente; Desiderio et al., 2001, J. Mol. Biol. 310:603-615; Xu e Davis, 2000, Immunity 13:37-45; Desmyter et al. , 2001, J. Biol. Chem. 276:26285-26290; e Muyldermans, 2001, J. Biotechnol. 14:277-302. Em alguns anticorpos, a CDR3 de cadeia pesada parece constituir a principal área de contacto entre o antigénio e o anticorpo. Desmyter et al., 2001, anteriormente. Podem usar-se esquemas de selecção in vitro nos quais apenas se varia CDR3 para variar as propriedades de ligação de um anticorpo. Muyldermans, 2001, anteriormente; Desiderio et al., 2001, anteriormente.

Os anticorpos de ocorrência natural incluem tipicamente uma sequência de sinalização que dirige o anticorpo para a via celular para excreção de proteína e que não está presente no anticorpo maduro. Um polinucleótido que codifica um anticorpo do invento pode codificar uma sequência de sinalização de ocorrência natural ou uma sequência de sinalização heteróloga tal como seguidamente descrita.

Numa concretização, a proteína de ligação de antigénio é um anticorpo monoclonal, compreendendo seis (6) das CDR descritas, tal como aqui geralmente descrito (consultar Tabela 1). Os anticorpos do invento podem ser de qualquer tipo incluindo anticorpos IgM, IgG (incluindo IgGl, IgG2, IgG3, IgG4), IgD, IgA ou IgE. Numa concretização específica, a proteína de ligação de antigénio é um anticorpo do tipo IgG. Numa concretização ainda mais específica, a proteína de ligação de antigénio é um anticorpo do tipo IgG2.

Em algumas concretizações, por exemplo quando a proteína de ligação de antigénio é um anticorpo com cadeias pesada e leve completas, as CDR são todas da mesma espécie, e.g., humana. Alternativamente, por exemplo em concretizações em que a proteína de ligação de antigénio contém menos de seis CDR das sequências geralmente descritas anteriormente, as CDR adicionais podem ser de outra espécie (e.g., CDR murinas) ou podem ser CDR humanas diferentes das representadas nas sequências. Por exemplo, podem usar-se as regiões H-CDR3 e L-CDR3 humanas das sequências adequadas aqui identificadas, sendo H-CDR1, H-CDR2, L-CDR1 e L-CDR2 opcionalmente seleccionadas de espécies alternativas ou sequências diferentes de anticorpos humanos ou suas combinações. Por exemplo, as CDR do invento podem substituir as regiões CDR de anticorpos quiméricos ou humanizados comercialmente relevantes.

As concretizações específicas utilizam componentes de esqueleto das proteínas de ligação de antigénio que são componentes humanas.

Em algumas concretizações, contudo, as componentes de esqueleto podem ser uma mistura de diferentes espécies. Como tal, se a proteína de ligação de antigénio é um anticorpo, tal anticorpo pode ser um anticorpo quimérico e/ou um anticorpo humanizado. De um modo geral, tanto "anticorpos quiméricos" como "anticorpos humanizados" refere-se a anticorpos que combinam regiões de mais de uma espécie. Por exemplo, "anticorpos quiméricos" compreendem tradicionalmente uma ou mais regiões variáveis de um ratinho (ou rato, em alguns casos) e uma ou mais regiões constantes de um humano. "Anticorpos humanizados" geralmente refere-se a anticorpos não humanos que têm as regiões de esqueleto do domínio variável mudadas para sequências presentes em anticorpos humanos. De um modo geral, num anticorpo humanizado, o anticorpo completo, com excepção das CDR, é codificado por um polinucleótido de origem humana ou é idêntico a tal anticorpo excepto no interior das CDR. Algumas ou todas as CDR que são codificadas por ácidos nucleicos originários de um organismo não humano, são inseridas num esqueleto em folha beta da região variável de um anticorpo humano para criar um anticorpo, cuja especificidade é determinada pelas CDR inseridas. A criação de tais anticorpos é descrita em, e.g., WO 92/11018, Jones, 1986, Nature 321:522-525, Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-1536. Os anticorpos humanizados podem também ser gerados utilizando ratinhos com sistema imunitário concebido por engenharia genética. Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654. No presente invento, as CDR identificadas são humanas e assim tanto os anticorpos humanizados como os anticorpos quiméricos neste contexto incluem algumas CDR não humanas; por exemplo, podem gerar-se anticorpos humanizados que compreendem as regiões CDRH3 e CDRL3, sendo uma ou mais das outras regiões CDR de uma origem especial diferente.

Numa concretização, a proteína de ligação de antigénio IL-17RA é um anticorpo multiespecífico e nomeadamente um anticorpo biespecífico, também algumas vezes referidos como "diacorpos". Estes são anticorpos que se ligam a dois (ou mais) antigénios diferentes. Os diacorpos podem ser fabricados por várias formas conhecidas na especialidade (Holliger e Winter, 1993, Current Opinion Biotechnol. 4:446-449), e.g., preparados quimicamente ou a partir de hibridomas híbridos.

Descreve-se uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA que é um minicorpo. Os minicorpos são proteínas tipo anticorpo minimizadas compreendendo uma scFv ligada conjuntamente a um domínio CH3. Hu et ai., 1996, Cancer Res. 56:3055-3061.

Numa concretização, a proteína de ligação a antigénio IL-17RA é um anticorpo de domínio; consultar, por exemplo patente U.S. n2 6 248 516. Os anticorpos de domínio (dAb) são domínios de ligação funcionais de anticorpos, correspondentes às regiões variáveis das cadeias quer pesadas (VH) quer leves (VL) de anticorpos humanos. Os dAb têm um peso molecular de aproximadamente 13 kDa ou menos de um décimo do tamanho de um anticorpo completo. Os dAb são bem expressos em vários hospedeiros incluindo sistemas de células bacterianas, de levedura e de mamífero. Além disso, os dAb são altamente estáveis e retêm actividade mesmo após serem submetidos a condições extremas, tais como liofilização ou desnaturação pelo calor. Consultar, por exemplo, patente US 6 291 158; 6 582 915; 6 593 081; 6 172 197; publicação US n2 2004/0110941; patente europeia 0368684; patente US 6 696 245, W004/058821, WOO4/003019 e W003/002609.

Numa concretização, a proteína de ligação a antigénio IL-17RA é um fragmento de anticorpo, que é um fragmento de qualquer dos anticorpos aqui referidos de uma forma geral que retém especificidade de ligação a IL-17RA. Em diferentes concretizações, as proteínas de ligação de anticorpo compreendem fragmentos F (ab), F (ab' ), F (ab' )2, Fv ou Fv de cadeia simples, não se lhes limitando. No mínimo, um anticorpo, tal como aqui considerado, compreende um polipéptido que se pode ligar especificamente a IL-17RA compreendendo a totalidade ou parte de uma região variável de cadeia pesada ou leve, tal como uma ou mais CDR.

Exemplos adicionais de fragmentos de anticorpo de ligação a IL-17RA incluem, (i) o fragmento Fab consistindo dos domínios VL, VH, CL e CHI, (ii) o fragmento Fd consistindo dos domínios VH e CHI, (iii) o fragmento Fv consistindo dos domínios VL e VH de um anticorpo simples; (iv) o fragmento dAb (Ward et al., 1989, Nature 341:544-546) que consiste de uma única variável, (v) regiões CDR isoladas, (vi) fragmentos F (ab' } , um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados entre si, (vii) moléculas Fv de cadeia simples (scFv), em que o domínio VH e o domínio VL estão ligados entre si por um ligante peptídico que permite que os dois domínios se associem para formar um local de ligação de antigénio (Bird et al., 1988, Science 242:423-426, Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 85:5879-5883), (viii) dímeros de cadeia única Fv biespecíficos (WO/1993/011161) e (ix) "diacorpos" ou "triacorpos", fragmentos multivalentes ou multiespecíficos construídos por fusão génica (Tomlinson et. al., 2000, Methods Enzymol. 326:461-479; WO94/13804; Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 90:6444-6448), não se lhes limitando. Os fragmentos de anticorpo podem ser modificados. Por exemplo, as moléculas podem ser estabilizadas pela incorporação de ligações dissulfureto ligando entre si os domínios VH e VL (Reiter et al., 1996, Nature Biotech. 14:1239-1245). Aspectos do invento incluem concretizações em que as componentes não CDR desses fragmentos são sequências humanas.

Numa concretização, a proteína de ligação a antigénio IL-17RA é um anticorpo completamente humano. Nesta concretização, tal como descrito anteriormente na generalidade, as estruturas específicas compreendem cadeias pesadas e leves completas representadas compreendendo as regiões CDR. Concretizações adicionais utilizam uma ou mais das CDR do invento, com as outras CDR, regiões de esqueleto, regiões J e D, regiões constantes, etc., derivadas de outros anticorpos humanos. Por exemplo, as CDR do invento podem substituir as CDR de qualquer de vários anticorpos humanos, nomeadamente anticorpos relevantes comercialmente.

Os anticorpos em cadeia simples podem ser formados por ligação de fragmentos dos domínios variáveis de cadeias leve e pesada (região Fv) através de uma ponte de aminoácidos (ligante peptídico curto), resultando numa única cadeia de polipéptido. Tais Fv de cadeia simples (scFv) têm sido preparados por fusão de ADN que codifica um ligante peptídico entre ADN que codificam os dois polipéptidos de domínio variável (Vl e Vh) . Os polipéptidos resultantes podem enrolar-se sobre si próprios para formar monómeros de ligação de antigénio ou podem formar multímeros (e.g., dímeros, trímeros ou tetrâmeros), dependendo do comprimento de um ligante flexível entre os dois domínios variáveis (Kortt et al., 1997, Prot. Eng. 10:423;Kortt et al., 2001, Biomol. Eng. 18:95-108). Por combinação de diferentes polipéptidos compreendendo Vl e Vh, podem-se formar scFv multiméricos que se ligam a diferentes epítopos (Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng. 18:31-40). As técnicas desenvolvidas para a produção de anticorpos de cadeia simples incluem as descritas na patente U.S. n2 4 946 778; Bird, 1988, Science 242:423; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85:5879; Ward et al., 1989, Nature 334:544, de Graaf et al., 2002, Methods Mol Biol. 178:379-87. Os anticorpos em cadeia simples derivados de anticorpos aqui proporcionados (incluindo scFv compreendendo as combinações de domínios variáveis AMl14/AMh14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14), não se lhes limitando, são abrangidos pelo presente invento.

Numa concretização, a proteína de ligação a antigénio IL-17RA é uma proteína de fusão de anticorpo (algumas vezes denominada aqui como um "conjugado de anticorpo"). O parceiro conjugado pode ser proteináceo ou não proteináceo; estes últimos são geralmente gerados usando grupos funcionais na proteína de ligação de antigénio (consultar a discussão sobre modificações covalentes das proteínas de ligação de antigénio) e no parceiro conjugado. Por exemplo conhecem-se ligantes na especialidade; por exemplo, os ligantes homo-bifuncionais ou hetero-bifuncionais são bem conhecidos (consultar, 1994, catálogo de Pierce Chemical Company, secção técnica sobre agentes de reticulação, páginas 155-200).

Numa concretização, a proteína de ligação a antigénio IL-17RA é um análogo de anticorpo, algumas vezes referidos como "anticorpos sintéticos". Por exemplo, muito do trabalho recente utiliza esqueletos de proteína alternativos ou artificiais com CDR inseridas. Tais esqueletos incluem mutações introduzidas para estabilizar a estrutura tridimensional da proteína de ligação assim como esqueletos completamente sintéticos consistindo por exemplo de polímeros biocompatíveis, não se lhes limitando. Consultar, por exemplo, Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, volume 53, fascículo 1:121-129. Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654. Adicionalmente, podem usar-se miméticos de anticorpo peptídico ("PAM"), assim como trabalho baseado em miméticos de anticorpo utilizando componentes de fibronectina como um esqueleto. Tal como é conhecido na especialidade, podem usar-se vários programas diferentes para identificar os graus de identidade de sequência ou de semelhança de sequência que determinada proteína ou ácido nucleico tem com uma sequência conhecida. "Proteína", tal como aqui usado, significa pelo menos dois aminoácidos ligados covalentemente, que inclui proteínas, polipéptidos, oligopéptidos e péptidos. Em algumas concretizações, os dois ou mais aminoácidos ligados covalentemente estão ligados por uma ligação peptídica. A proteína pode ser constituída por aminoácidos de ocorrência natural e ligações peptídicas, por exemplo quando a proteína é produzida de forma recombinante usando sistemas de expressão e células hospedeiras, tal como descrito geralmente seguidamente. Alternativamente, a proteína pode incluir aminoácidos sintéticos (e.g., homofenilalanina, citrulina, ornitina e norleucina) ou estruturas peptidomiméticas, i.e., "análogos de péptido ou de proteína", tal como peptóides ('consultar, Simon et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 89:9367), que podem ser resistentes a protéases ou outras condições fisiológicas e/ou de armazenamento. Tais aminoácidos sintéticos podem ser incorporados nomeadamente quando a proteína de ligação de antigénio é sintetizada in vitro por métodos convencionais bem conhecidos na especialidade. Além disso, podem usar-se quaisquer combinações de resíduos/estruturas peptidomiméticas, sintéticas e de ocorrência natural. "Aminoácido" também inclui resíduos de iminoácidos tais como prolina e hidroxiprolina. O "grupo R" ou "cadeia lateral" do aminoácido pode estar na configuração (L) ou na configuração (S). Numa concretização específica, os aminoácidos estão na configuração (L) ou na configuração (S).

Em determinados aspectos, o invento proporciona proteínas de ligação de antigénio recombinantes que ligam um IL-17RA, em algumas concretizações um IL-17RA humano recombinante ou uma sua parte. Neste contexto, uma "proteína recombinante" é uma proteína produzida por utilização de técnicas recombinantes usando quaisquer técnicas e métodos conhecidos na especialidade, i.e., através da expressão de um ácido nucleico recombinante tal como aqui descrito. Os métodos e técnicas para a produção de proteínas recombinantes são bem conhecidos na especialidade. As concretizações do invento incluem proteínas de ligação de antigénio recombinantes que ligam IL-17RA de tipo selvagem e suas variantes. "Consistindo essencialmente de" significa que a sequência de aminoácidos pode variar em cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15% relativamente à referida sequência SEQ ID NO: e apesar disso manter actividade biológica, tal como aqui descrito.

Em algumas concretizações, as proteínas de ligação de antigénio do invento são proteínas isoladas ou substancialmente puras. Uma proteína "isolada" não está acompanhada por pelo menos algum do material com o qual se encontra normalmente associada no seu estado natural, por exemplo constituindo pelo menos cerca de 5% ou pelo menos cerca de 50% em peso da proteína total numa dada amostra. Considera-se que a proteína isolada pode constituir entre 5 e 99,9% em peso do teor em proteína total dependendo das circunstâncias. Por exemplo, a proteína pode ser produzida a uma concentração significativamente maior através do uso de um promotor indutível ou promotor de expressão elevada, de modo a que a proteína seja produzida a níveis de concentração mais elevados. A definição inclui a produção de uma proteína de ligação de antigénio numa vasta variedade de organismos e/ou células hospedeiras que são conhecidos na especialidade.

Para sequências de aminoácidos, a identidade e/ou similaridade de sequência é determinada por utilização de técnicas padrão conhecidas na especialidade, incluindo o algoritmo de identidade local de sequência de Smith e Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482, o algoritmo de alinhamento de identidade de sequência de Needleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48:443, o método de busca de semelhanças de Pearson e Lipman, 1988, Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A. 85:2444, implementações computorizadas desses algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA e TFASTA no Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wis.), o programa de sequências Best Fit descrito por Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387-395, preferentemente utilizando os valores por omissão ou por inspecção, não se lhes limitando. Preferentemente, a percentagem de identidade é calculada por FastDB com base nos seguintes parâmetros: penalidade por desemparelhamento de 1; penalidade por falha de 1; penalidade por tamanho de falha de 0,33; e penalidade conjugada de 30, "Current Methods in Sequence Comparison and Analysis" Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, p. 127-149 (1988), Alan R. Liss, Inc .

Um exemplo de um algoritmo útil é PILEUP. O PILEUP cria um alinhamento de múltiplas sequências a partir de um grupo de sequências relacionadas usando alinhamentos progressivos e por pares. Pode também desenhar uma árvore que mostra as relações agregadas usadas para criar o alinhamento. O PILEUP usa uma simplificação do método de alinhamento progressivo de Feng e Doolittle, 1987, J. Mol. Evol. 35:351-360; o método é semelhante ao descrito por Higgins e Sharp, 1989, CABIOS 5:151-153. Os parâmetros úteis de PILEUP incluem um peso de falha por omissão de 3,00, um peso de comprimento de falha por omissão de 0,10 e falhas finais pesadas.

Outro exemplo de um algoritmo útil é o algoritmo BLAST descrito em: Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410; Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; e Karin et al. , 1993, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 90:5873-5787. Um programa BLAST particularmente útil é o programa WU-BLAST-2 que foi obtido por Altschul et al., 1996, Methods in Enzymology 266:460-480. O WU-BLAST-2 usa vários parâmetros de busca, a maioria dos quais está estabelecida nos valores por omissão. Estabelecem-se os parâmetros ajustáveis com os seguintes valores: extensão de sobreposição=l, fraeção de sobreposição=0,125, limiar de palavra (T)=II. Os parâmetros HSP S e HSP S2 são valores dinâmicos e são estabelecidos pelo próprio programa dependendo da composição da sequência especifica e da base de dados especifica na qual se está a buscar a sequência de interesse; contudo, os valores podem ser ajustados para aumentar a sensibilidade.

Um algoritmo útil adicional é BLAST com falhas tal como relatado por Altschul et al., 1993, Nucl. Acids Res. 25:3389-3402. O BLAST com falhas usa pontuações de substituição de BLOSUM-62; parâmetro T de limiar em 9; o método de dois acertos para desencadear extensões sem falhas, conta com comprimentos de falhas de k com um valor de 10+k; Xu em 16 e Xg em 40 para estágio de busca de base de dados e em 67 para estágio de saida dos algoritmos. Os alinhamentos com falha são desencadeados por uma pontuação correspondente a cerca de 22 bits.

De um modo geral, a homologia, semelhança ou identidade de aminoácidos entre CDR variantes individuais são pelo menos de 80% das sequências aqui representadas e mais tipicamente com homologias ou identidades preferentemente em aumento de pelo menos 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% e quase 100%. De um modo semelhante, "percentagem (%) de identidade de sequência de ácidos nucleicos" relativamente à sequência do ácido nucleico das proteínas de ligação aqui identificadas define-se como a percentagem de resíduos de nucleótidos numa sequência candidata que são idênticos aos resíduos de nucleótidos na sequência de codificação da proteína de ligação de antigénio. Um método específico utiliza o módulo BLASTN de WU-BLAST-2 com os valores por omissão, com extensão de sobreposição e fracção de sobreposição em 1 e em 0,125, respectivamente.

De um modo geral, a homologia, semelhança ou identidade de sequência de ácido nucleico, entre a sequência de nucleótidos que codificam as CDR variantes individuais e as sequências de nucleótidos aqui representadas são pelo menos 80% e mais tipicamente com homologias ou identidades preferentemente aumentando para pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% e quase 100%.

Assim, uma "CDR variante" é aquela que apresenta a homologia, a semelhança ou a identidade especificadas com a CDR parental do invento e partilha função biológica, incluindo pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% da especificidade e/ou actividade da CDR parental, não se lhes limitando.

Apesar do local ou região para introduzir uma variação de sequência de aminoácidos ser pré-determinado, a própria mutação não necessita de ser pré-determinada. Por exemplo, de modo a optimizar o desempenho de uma mutação num determinado local, pode efectuar-se mutagénese aleatória no códão ou região alvo e as CDR variantes da proteína de ligação de antigénio expressas são rastreadas para a combinação óptima da actividade pretendida. São bem conhecidas técnicas para fazer mutações por substituição em locais pré-determinadas no ADN com uma sequência conhecida, por exemplo, mutagénese com iniciador M13 e mutagénese por PCR. Efectua-se o rastreio dos mutantes usando ensaios de actividades de proteína de ligação de antigénio, tal como ligação de IL-17RA.

As substituições de aminoácidos são tipicamente de resíduos únicos; as inserções serão habitualmente na ordem de cerca de um (1) a cerca de vinte (20) resíduo de aminoácidos, apesar de poderem tolerar inserções consideravelmente maiores. As deleções variam na gama entre cerca de uma (1) a cerca de vinte (20) resíduos de aminoácidos, apesar de em alguns casos as deleções poderem ser muito maiores.

Podem usar-se substituições, deleções, inserções ou qualquer combinação destas para chegar a um derivado ou variante final. Geralmente efectuam-se estas alterações em alguns aminoácidos para minimizar a alteração da molécula, nomeadamente a imunogenicidade e especificidade da proteína de ligação de antigénio. Contudo, podem tolerar-se alterações maiores em determinadas circunstâncias. As substituições conservativas são geralmente efectuadas de acordo com o seguinte registo representado como Tabela 2. TABELA 2

Resíduo original Exemplos de substituições

Ala Ser

Arg Lys

Asn Gin, His

Asp Glu

Cys Ser

Gin Asn

Glu Asp

Gly Pro

His Asn, Gin

Ile Leu, Vai

Leu Ile, Vai

Lys Arg, Gin, Glu

Met Leu, Ile

Phe Met, Leu, Tyr

Ser Thr

Thr Ser

Trp Tyr

Tyr Trp, Phe

Vai Ile, Leu

Fazem-se alterações substanciais na função ou na identidade imunológica por selecção de substituições que são menos conservat ivas do que as apresentadas na Tabela 2. Por exemplo, podem fazer-se substituições que afectam mais significativamente: a estrutura do esqueleto de polipéptido na área da alteração, por exemplo a estrutura em hélice alfa ou em folha beta; a carga ou hidrofobicidade da molécula no local alvo; ou o volume da cadeia lateral. As substituições que se espera em geral produzam as maiores alterações nas propriedades do polipéptido são aquelas nas quais (a) um resíduo hidrofílico, e.g., serilo ou treonilo é substituído por um resíduo hidrofóbico, e.g., leucilo, isoleucilo, fenilalanilo, valilo ou alanilo ou vice-versa; (b) uma cisteína ou prolina é substituída por qualquer outro resíduo ou vice-versa; (c) um resíduo com uma cadeia lateral electropositiva, e.g., lisilo, arginilo ou histidilo, é substituído por um resíduo electronegativo, e.g., glutamilo ou aspartilo ou vice-versa; ou (d) um resíduo com uma cadeia lateral volumosa, e.g., fenilalanina, é substituído por outro que não tem uma cadeia lateral, e.g., glicina ou vice-versa.

Os variantes apresentam tipicamente a mesma actividade biológica qualitativa e desencadearão a mesma resposta imunitária do que o análogo de ocorrência natural, apesar de serem também seleccionados variantes para modificar as características das proteínas de ligação de antigénio tal como necessário. Alternativamente, pode conceber-se o variante de modo a que a actividade biológica da proteína de ligação de antigénio seja alterada. Por exemplo, podem alterar-se ou remover-se os locais de glicosilação tal como aqui discutido. Tal modificação das proteínas de ligação a antigénio IL-17RA, incluindo anticorpos, é um exemplo de um derivado. Um "derivado" de um polipéptido é um polipéptido (e.g., um anticorpo) que foi modificado quimicamente, e.g., através de conjugação com outra parte química tal como, por exemplo, polietilenoglicol, albumina (e.g., albumina de soro humano), fosforilação e glicosilação.

Outros derivados de anticorpos IL-17RA incluem conjugados covalentes ou de agregação de anticorpos IL-17RA ou de seus fragmentos com outras proteínas ou polipéptidos, tal como por expressão de proteínas de fusão recombinantes compreendendo polipéptidos heterólogos fundidos ao terminal N ou ao terminal C de um polipéptido do anticorpo IL-17RA. Por exemplo, o péptido conjugado pode ser um polipéptido de sinalização (ou líder) heterólogo, e.g., o líder do factor alfa de levedura ou um péptido tal como um marcador de epítopo. As proteínas de fusão contendo anticorpo IL-17RA podem compreender péptidos adicionados para facilitar purificação ou identificação do anticorpo IL-17RA (e.g., poli-His). Um polipéptido do anticorpo IL-17RA pode também estar ligado ao péptido FLAG DYKDDDDK (SEQ ID NO:447) tal como descrito em Hopp et al. , Bio/Technology 6:1204, 1988 e patente U.S. 5 011 912. O péptido FLAG é altamente antigénico e proporciona um epítopo ligado reversivelmente por um anticorpo monoclonal (mAb) específico, permitindo um ensaio rápido e purificação fácil da proteína recombinante expressa. Estão disponíveis comercialmente (Sigma, St. Louis, MO) reagentes úteis para preparar proteínas de fusão nas quais o péptido FLAG está fundido com um determinado polipéptido.

Podem utilizar-se os oligómeros que contêm um ou mais polipéptidos de anticorpo IL-17RA como antagonistas de IL-17RA. Os oligómeros podem estar na forma de dímeros, trímeros ou oligómeros superiores ligados covalentemente ou ligados de forma não covalente. Consideram-se para utilização oligómeros compreendendo dois ou mais polipéptidos de anticorpo IL-17RA, sendo um exemplo um homodímero. Outros oligómeros incluem heterodímeros, homotrímeros, heterotrímeros, homotetrâmeros, heterotetrâmeros, etc.

Uma concretização é dirigida a oligómeros compreendendo vários polipéptidos de anticorpo IL-17RA ligados conjuntamente através de interacções covalentes ou não covalentes entre partes de péptido fundidas a polipéptidos de anticorpo IL-17RA. Tais péptidos podem ser ligantes de péptido (espaçadores) ou péptidos que têm a propriedade de promover oligomerização. As cremalheiras de leucina e determinados polipéptidos derivados de anticorpos estão entre os péptidos que podem promover oligomerização de polipéptidos de anticorpo IL-17RA a eles ligados, tal como descrito mais detalhadamente seguidamente.

Em concretizações específicas, os oligómeros compreendem dois a quatro polipéptidos de anticorpo IL-17RA. As partes de anticorpo IL-17RA dos oligómeros podem estar em qualquer das formas descritas anteriormente, e.g., variantes ou fragmentos. Preferentemente, os oligómeros compreendem polipéptidos de anticorpo IL-17RA que têm uma actividade de ligação de IL-17 RA.

Numa concretização, prepara-se um oligómero usando polipéptidos derivados de imunoglobulinas. Descreveu-se a preparação de proteínas de fusão compreendendo determinados polipéptidos heterólogos fundidos com várias partes de polipéptidos derivados de anticorpo (incluindo o domínio Fc) em, e.g., Ashkenazi et al.r 1991, PNAS USA 88:10535; Byrn et al. , 1990, Nature 344:677; e Hollenbaugh et al. , 1992 "Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", em Current Protocols in Immunology, supl. 4, páginas 10.19.1 - 10.19.11.

Uma concretização do presente invento é dirigida contra um dimero compreendendo duas proteínas de fusão criadas por fusão de um fragmento de ligação a IL-17RA de um anticorpo IL-17RA à região Fc de um anticorpo. 0 dimero pode ser produzido, por exemplo, por inserção de um gene de fusão que codifica a proteína de fusão num vector de expressão apropriado, expressando a fusão génica em células hospedeiras transformadas com um vector de expressão recombinante e permitindo que a proteína de fusão expressa se monte de forma semelhante a moléculas de anticorpo, nas quais se formam ligações dissulfureto intercadeia entre as partes Fc para proporcionar o dimero. A expressão "polipéptido Fc" tal como aqui utilizada inclui formas nativas e de muteína de polipéptidos derivados da região Fc de um anticorpo. Incluem-se também formas truncadas de tais polipéptidos contendo a região de dobra que promove dimerização. As proteínas de fusão compreendendo partes Fc (e oligómeros formados a partir deles) oferecem a vantagem de purificação fácil por cromatografia de afinidade em colunas de proteína A ou de proteína G.

Um polipéptido Fc adequado, descrito na publicação PCT WO 93/10151, é um polipéptido de cadeia simples estendendo-se da região de dobra do terminal N para o terminal C nativo da região Fc de um anticorpo IgG humano. Outro polipéptido Fc útil é a muteína Fc descrita na patente U.S. 5 457 035 e em Baum et al. , 1994, EMBO J. 13:3992-4001. A sequência de aminoácidos desta muteína é idêntica à da sequência Fc nativa apresentada em WO 93/10151, excepto que o aminoácido 19 foi alterado de Leu para Ala, o aminoácido 20 foi alterado de Leu para Glu e o aminoácido 22 foi alterado de Gly para Ala. A muteína apresenta afinidade reduzida para receptores Fc.

Noutras concretizações, a parte variável das cadeias pesadas e/ou leves de um anticorpo pode ser substituída pela parte variável das cadeias pesadas e/ou leves de um anticorpo IL-17RA.

Alternativamente, o oligómero é uma proteína de fusão compreendendo vários polipéptidos de anticorpo IL-17RA, com ou sem ligantes de péptido (péptidos espaçadores). Entre os ligantes de péptido adequados estão os descritos nas patentes U.S. 4 751 180 e 4 935 233.

Outro método para preparar derivados de anticorpo IL-17RA oligoméricos envolve o uso de uma cremalheira de leucina. Os domínios de cremalheira de leucina são péptidos que promovem oligomerização das proteínas nas quais se encontram. As cremalheiras de leucina foram originalmente identificadas em várias proteínas de ligação de ADN (Landschulz et al., 1988, Science 240:1759) e desde então têm sido encontradas em várias proteínas diferentes. Entre as cremalheiras de leucinas conhecidas encontram-se péptidos de ocorrência natural e seus derivados que dimerizam ou trimerizam. Descrevem-se exemplos de domínios de cremalheira de leucina adequados para produzir proteínas oligoméricas solúveis no pedido de patente PCT WO 94/10308 e a cremalheira de leucina derivada da proteína D tensioactiva de pulmão (SPD) descrita em Hoppe et al.r 1994, FEES Letters 344:191 e aqui incorporada por referência. Descreve-se o uso de uma cremalheira de leucina modificada que permite trimerização estável de uma proteína heteróloga com ela fundida em Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-78. Numa abordagem, expressam-se proteínas de fusão recombinantes compreendendo um fragmento ou derivado de anticorpo IL-17RA fundido com um péptido de cremalheira de leucina em células hospedeiras adequadas e os fragmentos ou derivados de anticorpo IL-17RA oligoméricos solúveis que se formam são recuperados a partir do sobrenadante da cultura.

Consideram-se também as modificações covalentes como derivados das proteínas de ligação a antigénio IL-17RA e incluem-se no âmbito deste invento e são geralmente efectuadas após a tradução, embora nem sempre. Por exemplo, introduzem-se vários tipos de modificações covalentes da proteína de ligação de antigénio na molécula por reacção de resíduos de aminoácidos específicos da proteína de ligação de antigénio com um agente de derivatização orgânico que é capaz de reagir com cadeias laterais seleccionadas ou com os resíduos N terminal ou C terminal.

Os resíduos cisteinilo são mais habitualmente feitos reagir com -haloacetatos (e aminas correspondentes), tais como ácido cloroacético ou cloroacetamida, para dar derivados carboximetil ou carboxiamidometil. Também se derivatizam os resíduos cisteinilo por reacção com bromotrifluoroacetona, ácido -bromo- -(5-imidozoil)propiónico, fosfato de cloroacetilo, N-alquilmaleimidas, dissulfureto de 3-nitro-2-piridilo, dissulfureto de metil-2-piridilo, p- cloromercuriobenzoato, 2-cloromercurio-4-nitrofenol ou cloro-7-nitrobenzo-2-oxa-l,3-diazola.

Derivatizam-se resíduos histidilo por reacção com dietilpirocarbonato a pH 5,5-7,0 porque este agente é relativamente específico para a cadeia lateral de histidilo. Também é útil o brometo de para-bromofenacilo; a reacção é preferentemente efectuada em cacodilato de sódio 0,1 M a pH 6, 0 .

Fazem-se reagir os resíduos lisinilo e amino terminal com anidrido succínico ou outros anidridos de ácidos carboxílicos. A derivatização com estes agentes tem o efeito de reverter a carga dos resíduos de lisinilo. Outros reagentes adequados para derivatizar resíduos contendo alfa-amino incluem imidoésteres tal como metilpicolinimidato; fosfato piridoxal; piridoxal; cloroboro-hidreto; ácido trinitrobenzenossulfónico; O-metilisoureia; 2,4-pentanodiona; e reacção com glioxilato catalisada por transaminase.

Modificam-se os resíduos arginilo por reacção com um ou mais reagentes convencionais, entre eles fenilglioxal, 2,3-butanodiona, 1,2-ciclo-hexanodiona e ninidrina. A derivatização de resíduos de arginina requere que a reacção seja efectuada em condições alcalinas devido ao pKa elevado do grupo funcional de guanidina. Além disso, estes reagentes podem reagir com os grupos de lisina assim como com o grupo épsilon-amino de arginina.

Pode efectuar-se a modificação específica de resíduos tirosilo, com especial interesse na introdução de marcadores espectrais em resíduos de tirosilo por reacção com compostos de diazónio aromáticos ou tetranitrometano. Mais

habitualmente, usam-se N-acetilimidizola e tetranitrometano para formar a espécie O-acetiltirosilo e derivados 3-nitro, respectivamente. Iodam-se resíduos tirosilo usando 125I ou 131I para preparar proteínas marcadas para uso em radioimunoensaio, sendo adequado o método da cloramina T anteriormente descrito.

Os grupos laterais carboxilo (aspartilo ou glutamilo) são modificados selectivamente por reacção com carbodiimidas (R' -N=C=N--R' ) , em que R e R' são grupos alquilo opcionalmente diferentes, tais como l-ciclohexil-3-(2-morfolinil-4-etil) carbodiimida ou l-etil-3-(4-azonia-4,4-dimetilpentil) carbodiimida. Além disso, os resíduos aspartilo e glutamilo são convertidos a resíduos asparaginilo e glutaminilo por reacção com iões amónio. A derivatização com agentes bifuncionais é útil para reticular proteínas de ligação de antigénio a uma matriz de suporte ou superfície insolúveis em água para uso em vários métodos. Os agentes de reticulação habitualmente usados incluem, e.g., 1,1-bis(diazoacetil)-2-feniletano, glutaraldeído, ésteres de N-hidroxisuccinimida, por exemplo, ésteres com ácido 4-azidossalicílico, imidoésteres homobifuncionais, incluindo ésteres disuccinimidilo tal como 3,3' -ditiobis(succinimidilpropionato) e maleimidas bifuncionais tal como bis-N-maleimido-1,8-octano. Os agentes de derivatização tal como metil-3-[(p- azidofenil)ditio]propioimidato dão origem a intermediários fotoactiváveis que são capazes de reticular na presença de luz. Alternativamente, utilizam-se para imobilização de proteínas matrizes reactivas insolúveis em água tais como hidratos de carbono activados por brometo de cianogénio e os substratos reactivos descritos nas patentes U.S. n2 3 969 287; 3 691 016; 4 195 128; 4 247 642; 4 229 537; e 4 330 440.

Os resíduos glutaminilo e asparaginilo são frequentemente desamidados aos resíduos glutamilo e aspartilo correspondentes, respectivamente. Alternativamente, estes resíduos são desamidados em condições fracamente ácidas. Qualquer das formas destes resíduos está abrangida pelo âmbito deste invento.

Outras modificações incluem hidroxilação de prolina e lisina, fosforilação de grupos hidroxilo de resíduos de serilo ou treonilo, metilação de grupos -amino de cadeias laterais de lisina, arginina e histidina (T. E. Creighton, Proteins:

Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, 1983, p. 79-86), acetilação da amina do terminal N e amidação de qualquer grupo carboxilo do terminal C.

Outro tipo de modificação covalente da proteína de ligação de antigénio incluído no âmbito deste invento compreende alterar o padrão de glicosilação da proteína. Tal como é conhecido na especialidade, os padrões de glicosilação podem depender tanto da sequência da proteína (e.g., presença ou ausência de resíduos de aminoácido específicos de glicosilação, seguidamente descritos) como da célula ou organismo hospedeiro no qual a proteína é produzida. Discutem-se seguidamente sistemas de expressão específicos. A glicosilação de polipéptidos é tipicamente ligada a N ou ligada a 0. Ligada a N refere-se à ligação da parte de hidrato de carbono à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As sequências tri-peptídicas asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, nas quais X é qualquer aminoácido excepto prolina, são as sequências de reconhecimento para ligação enzimática da parte de hidrato de carbono à cadeia lateral de asparagina. Assim, a presença de qualquer destas sequências tri-peptídicas num polipéptido cria um local de glicosilação potencial. A glicosilação ligada a 0 refere-se à ligação de um dos açúcares N-acetilgalactosamina, galactose ou xilose a um hidroxiaminoácido, mais habitualmente serina ou treonina, apesar de também se poderem usar 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina. A adição de locais de glicosilação à proteína de ligação de antigénio é convenientemente conseguida por alteração da sequência de aminoácidos de modo a conter uma ou mais das sequências tri-peptídicas anteriormente descritas (para locais de glicosilação ligados a N) . A alteração pode também ser feita pela adição de um ou mais resíduos de serina ou treonina, ou à substituição por estes resíduos, à sequência nascente (para locais de glicosilação ligados a 0) . Para facilitar, a sequência de aminoácidos da proteína de ligação de antigénio é preferentemente alterada através de alterações ao nível do ADN, particularmente por mutação do ADN que codifica o polipéptido alvo em bases pré-seleccionadas de modo a que sejam gerados codões que serão traduzidos para os aminoácidos pretendidos.

Outro meio de aumentar o número de partes de hidrato de carbono na proteína de ligação de antigénio é por acoplamento químico ou enzimático de glicosídeos à proteína. Estes procedimentos são vantajosos na medida em que não necessitam produção da proteína numa célula hospedeira que tenha capacidade de glicosilação para glicosilação ligada a N e ligada a 0. Dependendo do modo de acoplamento usado, pode(m) ligar-se o(s) açúcar(es) a (a) arginina e histidina, (b) grupos carboxilo livres, (c) grupos sulfidrilo livres tais como os de cisteína, (d) grupos hidroxilo livres tais como os de serina, treonina ou hidroxiprolina, (e) resíduos aromáticos tais como os de fenilalanina, tirosina ou triptofano ou (f) o grupo amida de glutamina. Estes métodos são descritos em WO 87/05330 publicada a 11 de Setembro de 1987 e em Aplin e Wriston, 1981, CRC Crit. Rev. Biochem., p. 259-306. A remoção de partes de hidrato de carbono presentes numa proteína de ligação de antigénio nascente pode ser obtida química ou enzimaticamente. A desglicosilação química necessita de exposição da proteína ao composto ácido trifluorometanossulfónico ou a um composto equivalente. Este tratamento resulta na clivagem da maioria ou de todos os açúcares com excepção do açúcar ligante (N-acetilglucosamina ou N-acetilgalactosamina), deixando o polipéptido intacto. A desglicosilação química é descrita por Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52 e por Edge et al., 1981, Anal. Biochem. 118:131. Pode obter-se clivagem enzimática de partes de hidrato de carbono em polipéptidos por uso de várias endo-glicosidases e exo-glicosidases tal como descrito por Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol. 138:350. Pode evitar-se a glicosilação em locais de glicosilação potenciais pelo uso do composto tunicamicina tal como descrito por Duskin et al. , 1982, J. Biol. Chem. 257:3105. A tunicamicina bloqueia a formação de ligações proteína-N-glicosídeo.

Outro tipo de modificação covalente da proteína de ligação de antigénio compreende ligar a proteína de ligação de antigénio a vários polímeros não proteináceos, incluindo vários polióis tais como polietilenoglicol, polipropilenoglicol ou polioxialquilenos, não se lhes limitando, do modo estabelecido nas patentes U.S. n2 4 640 835; 4 496 689; 4 301 144; 4 670 417; 4 791 192 ou 4 179 337. Além disso, tal como é conhecido na especialidade, podem fazer-se substituições de aminoácidos em várias posições no interior da proteína de ligação de antigénio para facilitar a adição de polímeros tais como PEG.

Em algumas concretizações, a modificação covalente das proteínas de ligação de antigénio do invento compreende a adição de um ou mais marcadores. A expressão "grupo marcador" significa qualquer marcador detectável. Os exemplos de grupos marcadores adequados incluem os seguintes: radioisótopos ou radionuclídeos (e. g., 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, "Tc, 311In, 125I, 131I), grupos fluorescentes (e.g., FITC, rodamina, fósforos de lantanídeos), grupos enzimáticos (e.g., peroxidase de rábano, galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina), grupos quimioluminescentes, grupos biotinilo ou epítopos de polipéptido pré-determinados reconhecidos por um repórter secundário (e.g., sequências de par de cremalheira de leucina, locais de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metal, marcadores de epítopo), não se lhes limitando. Em algumas concretizações, o grupo marcador está acoplado à proteína de ligação de antigénio através de braços espaçadores de diferentes comprimentos para reduzir o impedimento estérico potencial. São conhecidos na especialidade vários métodos para marcar proteínas e podem usar-se para levar à prática o presente invento.

De um modo geral, os marcadores podem ser classificados em várias classes, dependendo do ensaio no qual serão detectados: a) marcadores isotópicos, que podem ser radioactivos ou isótopos pesados; b) marcadores magnéticos (e.g., partículas magnéticas); c) partes com actividade redox; d) corantes; grupos enzimáticos (e.g. peroxidase de rábano, galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina); e) grupos biotinilados; e f) epítopos de polipéptido pré-determinados reconhecidos por um repórter secundário (e.g., sequências de par de cremalheira de leucina, locais de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metal, marcadores de epítopo, etc.). Em algumas concretizações, o grupo marcador está acoplado à proteína de ligação de antigénio através de braços espaçadores de diferentes comprimentos para reduzir o impedimento estérico potencial. São conhecidos na especialidade vários métodos para marcar proteínas e podem usar-se para levar à prática o presente invento.

Os marcadores específicos incluem corantes, incluindo, cromóforos, fósforos e fluoróforos, sendo estes últimos específicos em muitas circunstâncias, não se lhes limitando. Os fluoróforos podem ser "moléculas pequenas" fluorescentes ou fluoróforos proteináceos. "Marcador fluorescente" significa qualquer molécula que possa ser detectada através das suas propriedades fluorescentes inerentes. Os marcadores fluorescentes adequados incluem, fluoresceína, rodamina, tetrametilrodamina, eosina, eritrosina, cumarina, metilcumarinas, pireno, verde de malaquite, estilbeno, Amarelo de Lúcifer, AzulJ de Cascata, Vermelho do Texas, IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC Red 640, Cy 5, Cy 5.5, LC Red 705, Verde do Orégão, os corantes Alexa-Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), Azul de Cascata, Amarelo de Cascata e R-ficoeritrina (PE) (Molecular Probes, Eugene, OR), FITC, Rodamina e Vermelho do Texas (Pierce, Rockford, IL) , Cy5, Cy5.5, Cy7 (Amersham Life Science, Pittsburgh, PA), não se lhes limitando. Os corantes adequados, incluindo fluoróforos, são descritos em Molecular Probes Handbook por Richard P. Haugland.

Os marcadores fluorescentes proteináceos adequados também incluem, proteína fluorescente verde, incluindo uma espécie de GFP de Renilla, Ptilosarcus ou Aequorea (Chalfie et al., 1994, Science 263:802-805), EGFP (Clontech Laboratories, Inc., número de acesso Genbank U55762), proteína fluorescente azul (BFP, Quantum Biotechnologies, Inc. 1801 de Maisonneuve Blvd. West, 82 andar, Montreal, Quebec, Canada H3H 1J9; Stauber, 1998, Biotechniques 24:462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6:178-182), proteína fluorescente amarela melhorada (EYFP, Clontech Laboratories, Inc.), luciferase (Ichiki et al., 1993, J. Immunol. 150:5408-5417), galactosidase (Nolaret al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2603-2607) e Renilla (W092/15673, WO95/07463, WO98/14605, W098/26277, WO99/49019, patentes U.S. n2 5292658, 5418155, 5683888, 5741668, 5777079, 5804387, 5874304, 5876995, 5925558), não se lhes limitando.

Polinucleótidos que codificam proteínas de ligação a antigénio IL-17RA

Abrangem-se pelo invento ácidos nucleicos que codificam proteínas de ligação a antigénios IL-17RA, incluindo anticorpos, tal como aqui definidos. A sequência de polinucleótidos para as regiões variáveis de cadeia pesada AMh14 encontra-se em SEQ ID NO: 67 e a sequência de polinucleótidos para as regiões variáveis de cadeia leve AMl14 encontra-se em SEQ ID NO: 93, respectivamente. As SEQ ID NO para a sequência de polinucleótidoss que codificam H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 e L-CDR3 são proporcionadas na Tabela 1.

Aspectos do invento incluem variantes de polinucleótido (e.g., devidas a degenerescência) que codificam as sequências de aminoácidos aqui descritas.

Aspectos do invento incluem várias concretizações incluindo os seguintes exemplos de concretizações, não se lhes limitando: um polinucleótido isolado, em que o referido polinucleótido codifica um polipéptido compreendendo uma sequência de aminoácidos seleccionada do grupo que consiste de: A. a. uma sequência de domínio variável de cadeia leve que é pelo menos 80% idêntica a uma sequência de domínio variável de cadeia leve de AMl14 (SEQ ID NO:40); b. uma sequência de domínio variável de cadeia pesada que é pelo menos 80% idêntica a uma sequência de domínio variável de cadeia pesada de AMh14 (SEQ ID NO:14); ou c. o domínio variável de cadeia leve de (a) e o domínio variável de cadeia pesada de (b); e B. uma CDR1, CDR2, CDR3 de cadeia leve e uma CDR1, CDR2, CDR3 de cadeia pesada das seguintes sequências: a. uma CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadeia leve e uma CDR1 (SEQ ID NO:14 6) , CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadeia pesada do anticorpo AM-14; em que o referido polipéptido liga especificamente o receptor A de IL-17 .

Descreve-se um polinucleótido que híbrida em condições rigorosas com o complementar completo de: a. um polinucleótido que codifica um domínio variável de cadeia leve e um polinucleótido que codifica um domínio variável de cadeia pesada de AMl14/AMh14 (SEQ ID NO:93/SEQ ID NO:67);

Também se descreve um polinucleótido que híbrida em condições rigorosas com o complementar completo de: a. um polinucleótido que codifica CDR1 de SEQ ID NO:384, um polinucleótido que codifica CDR2 de SEQ ID NO:385, um polinucleótido que codifica CDR3 de SEQ ID NO:386, de cadeia leve e um polinucleótido que codifica CDR1 de SEQ ID NO:305, um polinucleótido que codifica CDR2 de SEQ ID NO:306, um polinucleótido que codifica CDR3 de SEQ ID NO:387, de cadeia pesada do anticorpo AM-14;

Uma concretização do invento inclui um polinucleótido que codifica um polipéptido compreendendo uma sequência de aminoácidos de: a. um domínio variável de cadeia leve e um domínio variável de cadeia pesada de AMl14/AMh14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14);

Uma concretização adicional inclui um polinucleótido que codifica um polipéptido compreendendo uma sequência de aminoácidos de: a. uma CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO: 22 6) de cadeia leve e uma CDR1 (SEQ ID NO: 146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadeia pesada do anticorpo AM-14;

Uma concretização adicional inclui: a. um polinucleótido que codifica um domínio variável de cadeia leve e um polinucleótido que codifica um domínio variável de cadeia pesada de AMl14/AMh14 (SEQ ID NO:93/SEQ ID NO:67);

Uma concretização adicional inclui: a. um polinucleót ido que codifica uma CDR1 de SEQ ID NO: 384, um polinucleót ido que codifica uma CDR2 de SEQ ID NO: 385, um polinucleót ido que codifica uma CDR3 de SEQ ID NO:386 de cadeia leve e um polinucleótido que codifica uma CDR1 de SEQ ID NO:305, um polinucleótido que codifica uma CDR2 de SEQ ID NO: 306, um polinucleót ido que codifica uma CDR3 de SEQ ID NO :307 de cadeia pesada do anticorpo AM-14;

Uma concretização adicional do invento inclui: um plasmideo compreendendo o referido polinucleótido do invento. O referido plasmideo pode ser um vector de expressão.

Uma concretização adicional inclui: uma célula isolada, compreendendo o vector de expressão do invento. A célula isolada é seleccionada do grupo que consiste de: a. uma célula procariótica; b. uma célula eucariótica; c. uma célula de mamífero; d. uma célula de insecto; e e. uma célula CHO. Uma concretização adicional inclui: um método de produzir um anticorpo do invento que liga especificamente receptor A de IL-17, compreendendo incubar a referida célula isolada do invento em condições que permitem expressar o referido anticorpo. O referido anticorpo pode ser seleccionado do grupo que consiste de: a. um anticorpo humanizado; b. um anticorpo quimérico; c. um anticorpo recombinante; d. um anticorpo de cadeia simples; e. um diacorpo; f. um triacorpo; g. um tetracorpo; h. um fragmento Fab ; i. um fragmento F (ab' )2; j. um anticorpo IgD; k. um anticorpo IgE; 1. um anticorpo IgM; m. um anticorpo IgGl; n. um anticorpo IgG2; o. um anticorpo IgG3; e p. um anticorpo IgG4.

Uma concretização do invento inclui um polinucleótido que codifica o referido anticorpo do invento e em que o referido anticorpo é: a) um anticorpo consistindo de uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO :427 e uma sequência de cadeia leve de SEQ ID NO:42 9; b) um anticorpo compreendendo uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 427 e uma sequência de cadeia leve de SEQ ID NO:42 9; c) um anticorpo ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO :427 e uma sequência de cadeia leve de SEQ ID NO:429; d) um anticorpo ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo uma sequência de região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 40 e uma sequência de região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO:14; e) um anticorpo ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada de SEQ ID NO: 146, uma CDR2 de cadeia pesada de SEQ ID NO: 147, uma CDR3 de cadeia pesada de SEQ ID NO: 148, uma CDR1 de cadeia leve de SEQ ID NO :224, uma CDR2 de cadeia leve de SEQ ID NO:225 e uma CDR3 de cadeia leve de SEQ ID NO:226; e

Uma concretização adicional inclui o polinucleótido da concretização anterior, em que o referido anticorpo é codificado por um polinucleótido seleccionado do grupo que consiste de: a) uma sequência de polinucleótidos que codifica uma cadeia pesada consistindo de SEQ ID NO:426 e uma sequência de polinucleótidos que codifica uma cadeia leve consistindo de SEQ ID NO:428; b) uma sequência de polinucleótidos que codifica uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 42 6 e uma sequência de polinucleótidos que codifica uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO:428; c) uma sequência de polinucleótidos que codifica uma cadeia pesada ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo SEQ ID NO: 42 6 e uma sequência de polinucleót idos que codifica uma cadeia leve ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo SEQ ID NO:428; d) uma sequência de polinucleótidos que codifica uma região variável de cadeia pesada ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo SEQ ID NO:67 e uma sequência de polinucleótidos que codifica uma região variável de cadeia leve ou um seu fragmento de ligação a receptor A de IL-17 compreendendo SEQ ID NO:93; e) um polinucleótido que codifica CDR1 compreendendo SEQ ID NO:384, um polinucleótido que codifica CDR2 compreendendo SEQ ID NO:385, um polinucleótido que codifica CDR3 compreendendo SEQ ID NO: 38 6 de cadeia leve e um polinucleótido que codifica CDR1 compreendendo SEQ ID NO:305, um polinucleótido que codifica CDR2 compreendendo SEQ ID NO:306, um polinucleótido que codifica CDR3 compreendendo SEQ ID NO :307 de cadeia pesada; e O plasmídeo do invento pode incluir o polinucleótido de qualquer concretização. A célula isolada do invento inclui um vector de expressão que compreende o polinucleótido de qualquer concretização. A célula pode ser uma célula CHO. Também se inclui no invento um anticorpo isolado, compreendendo um anticorpo produzido pela célula CHO da reivindicação 9, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada por uma sequência compreendendo SEQ ID NO: 426 e uma cadeia leve codificada por uma sequência compreendendo SEQ ID NO: 428.

As sequências de nucleótidos correspondentes às sequências de aminoácidos aqui descritas, para serem usadas como sondas ou iniciadores para o isolamento de ácidos nucleicos ou como sequências de comparação para buscas em bases de dados, podem ser obtidas por "retroversão" das sequências de aminoácidos ou por identificação de regiões de identidade de aminoácidos com polipéptidos para os quais se identificou a sequência de ADN codificante. Pode utilizar-se o procedimento bem conhecido de reacção de polimerização em cadeia (PCR) para isolar e amplificar uma sequência de ADN que codifica proteínas de ligação a antigénio IL-17RA ou uma combinação pretendida de fragmentos polipeptídicos de proteína de ligação a antigénio IL-17RA. Os oligonucleótidos que definem os terminais pretendidos da combinação de fragmentos de ADN utilizam-se como iniciadores 5' e 3' . Os oligonucleótidos podem conter

adicionalmente locais de reconhecimento para endonucleases de restrição, para facilitar a inserção da combinação de fragmentos de ADN amplificados num vector de expressão. As técnicas de PCR descrevem-se em Saiki et ai., Science 239:487 (1988); Recombinant DNA Methodology, Wu et al., ed., Academic Press, Inc., San Diego (1989), p. 189-196; e PCR Protocols: A

Guide to Methods and Applications, Innis et al., ed., Academic Press, Inc. (1990).

As moléculas de ácido nucleico do invento incluem ADN e ARN tanto na forma em cadeia simples como na forma em cadeia dupla, assim como as sequências complementares correspondentes. O ADN inclui, por exemplo, ADNc, ADN genómico, ADN sintetizado quimicamente, ADN amplificado por PCR e suas combinações. As moléculas de ácido nucleico do invento incluem genes completos ou moléculas de ADNc assim como combinações dos seus fragmentos. Os ácidos nucleicos do invento são preferentemente derivados de fontes humanas, mas o invento inclui igualmente aqueles que são derivados de espécies não humanas.

Um "ácido nucleico isolado" é um ácido nucleico que foi separado de sequências genéticas adjacentes presentes no genoma do organismo a partir do qual se isolou o ácido nucleico, no caso de ácidos nucleicos isolados de fontes de ocorrência natural. No caso de ácidos nucleicos sintetizados enzimaticamente a partir de um molde ou quimicamente, tais como produtos de PCR, moléculas de ADNc ou oligonucleótidos por exemplo, considera-se que os ácidos nucleicos resultantes de tais processos são ácidos nucleicos isolados. Uma molécula de ácido nucleico isolado refere-se a uma molécula de ácido nucleico sob a forma de um fragmento independente ou como uma componente de uma construção de ácido nucleico maior. Os ácidos nucleicos estão substancialmente isentos de material contaminante endógeno. A molécula de ácido nucleico foi preferentemente derivada de ADN ou ARN isolados pelo menos uma vez sob uma forma substancialmente pura e numa quantidade ou concentração que permita identificação, manipulação e recuperação das suas sequências de nucleótidos componentes por métodos bioquímicos padrão (tal como os geralmente descritos em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)). Tais sequências são preferentemente proporcionadas e/ou construídas na forma de um quadro de leitura aberto não interrompido por sequências internas não traduzidas ou intrões, que estão tipicamente presentes em genes eucarióticos. As sequências de ADN não traduzido podem estar presentes a 5' ou a 3' de um quadro de leitura aberto, onde as mesmas não interferem com manipulação ou expressão da região de codificação.

Descrevem-se aqui os ácidos nucleicos que hibridam em condições moderadamente rigorosas e mais preferentemente condições altamente rigorosas, com ácidos nucleicos que codificam proteínas de ligação a antigénio IL-17RA. Os parâmetros básicos que afectam a escolha das condições de hibridação e orientações para a escolha de condições adequadas são estabelecidos por Sambrook, Fritsch e Maniatis (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor

Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., capítulos 9 e 11; e Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al., ed., John Wiley & Sons, Inc., secções 2.10 e 6.3-6.4) e podem ser facilmente determinadas pelos peritos na especialidade com base, por exemplo, no comprimento e/ou composição em bases do ADN. Uma forma de obter condições moderadamente rigorosas envolve o uso de uma solução de pré-lavagem contendo 5 x SSC, SDS a 0,5%, EDTA 1,0 mM (pH 8,0), tampão de hibridação com formamida a cerca de 50%, 6 x SSC e uma temperatura de hibridação de cerca de 55 graus C (ou outras soluções de hibridação semelhantes, tal como uma contendo formamida a cerca de 50%, com uma temperatura de hibridação de cerca de 42 graus C) e condições de lavagem de cerca de 60 graus C, em 0,5 x SSC, SDS a 0,1%. De um modo geral, definem-se condições altamente rigorosas como condições de hibridação como anteriormente, mas com lavagem a aproximadamente 68 graus C, 0,2 x SSC, SDS a 0,1%. Pode substituir-se SSC (lxSSC é NaCl 0,15 M e citrato de sódio 15 mM) por SSPE (lxSSPE é NaCl 0,15 M, NaH.sub.2 PO.sub.4 10 mM e EDTA 1,25 mM, pH 7,4) nos tampões de hibridação e de lavagem; efectuam-se as lavagens durante 15 minutos após completar a hibridação. Considera-se que a temperatura de lavagem e a concentração do sal de lavagem podem ser ajustadas como necessário para atingir um grau de rigor pretendido por aplicação dos princípios básicos que governam as reacções de hibridação e a estabilidade da cadeia dupla, tal como conhecido dos peritos na especialidade e descrito adicionalmente seguidamente (consultar, e.g., Sambrook et al., 1989). Quando se híbrida um ácido nucleico com um ácido nucleico alvo de sequência desconhecida, assume-se que o comprimento do híbrido é o comprimento do ácido nucleico que híbrida. Quando se hibridam ácidos nucleicos de sequência conhecida, o comprimento do híbrido pode ser determinado por alinhamento das sequências dos ácidos nucleicos e identificação da(s) região (ões) de complementaridade de sequência óptima. A temperatura de hibridação para híbridos que se antecipe terem menos de 50 pares de bases de comprimento, deve ser 5 a 10 graus C inferior à temperatura de fusão (Tm) do híbrido, em que se determina Tm de acordo com as equações seguintes. Para híbridos de comprimento inferior a 18 pares de bases, Tm (graus C) = 2(n2 de bases A + T) +4 (n2 de bases G + C). Para híbridos de comprimento superior a 18 pares de bases, Tm (graus C) = 81,5 + 16, 6 (logio [Na+] ) + 0,41(% G + C) - (600/N), em que N é o número de bases no híbrido e [Na+] é a concentração de iões sódio no tampão de hibridação ( [Na+] para lxSSC = 0,165 M) . Preferentemente, cada um de tais ácidos nucleicos que hibridam tem um comprimento que é pelo menos de 15 nucleótidos (ou mais preferentemente pelo menos 18 nucleótidos, ou pelo menos 20 nucleótidos, ou pelo menos 25 nucleótidos, ou pelo menos 30 nucleótidos, ou pelo menos 40 nucleótidos ou com a maior preferência pelo menos 50 nucleótidos) ou pelo menos 25% (mais preferentemente pelo menos 50%, ou pelo menos 60%, ou pelo menos 70% e com a maior preferência pelo menos 80%) do comprimento do ácido nucleico com o qual híbrida e tem pelo menos 60% de identidade de sequência (mais preferentemente pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% e com a maior preferência pelo menos 99,5%) com o ácido nucleico com o qual híbrida, em que a identidade de sequência é determinada por comparação das sequências dos ácidos nucleicos que hibridam quando alinhadas de modo a maximizar a sobreposição e a identidade, minimizando as falhas de sequência tal como descrito mais detalhadamente anteriormente.

Os variantes são habitualmente preparados por mutagénese específica do local de nucleótidos no ADN que codifica a proteína de ligação de antigénio, usando mutagénese de cassete ou por PCR ou outras técnicas bem conhecidas na especialidade, para produzir ADN que codifica o variante e consequentemente expressar o ADN recombinante em cultura de células tal como aqui descrito na generalidade. Contudo, os fragmentos de proteína de ligação de antigénio compreendendo CDR variantes contendo até cerca de 100-150 resíduos podem preparar-se por síntese in vitro usando técnicas estabelecidas. Os variantes apresentam tipicamente a mesma actividade biológica qualitativa do que o análogo de ocorrência natural, e.g., ligação a IL-17RA e inibição da sinalização, apesar de poderem ser também seleccionados variantes que têm características modificadas tal como será melhor descrito geralmente seguidamente.

Tal como poderão considerar os peritos na especialidade, devido à degenerescência do código genético, pode produzir-se um número extremamente elevado de ácidos nucleicos, codificando todos eles as CDR (e as cadeias pesadas e leves ou outras componentes da proteína de ligação de antigénio) do presente invento. Assim, após identificação de uma sequência de aminoácidos específica, os peritos na especialidade poderão produzir um qualquer número de ácidos nucleicos diferentes, simplesmente por modificação da sequência de um ou mais codões de forma a que não se modifique a sequência de aminoácidos da proteína codificada. O presente invento também proporciona sistemas de expressão e construções sob a forma de plasmídeos, vectores de expressão, cassetes de transcrição ou de expressão que compreendem pelo menos um polinucleótido tal como anteriormente. Além disso, o invento proporciona células hospedeiras compreendendo tais sistemas de expressão ou construções.

Tipicamente, os vectores de expressão usados em qualquer das células hospedeiras conterão sequências para manutenção do plasmídeo e para clonagem e expressão de sequências de nucleótidos exógenas. Tais sequências, colectivamente referidas como "sequências flanqueadoras" em determinadas concretizações incluirão tipicamente uma ou mais das seguintes sequências de nucleótidos: um promotor, uma ou mais sequências facilitadoras, uma origem de replicação, uma sequência de terminação de transcrição, uma sequência de intrão completa contendo um local de splicing dador e aceitador, uma sequência que codifica uma sequência líder para excreção de polipéptido, um local de ligação de ribossoma, uma sequência de poliadenilação, uma região poliligante para inserir o ácido nucleico que codifica o polipéptido a ser expresso e um elemento marcador seleccionável. Cada uma destas sequências é discutida seguidamente.

Opcionalmente, o vector pode conter uma sequência que codifica uma "cauda", i.e., um molécula de oligonucleótido localizada na extremidade 5' ou 3' da sequência de codificação da proteína de ligação a antigénio IL-17RA; a sequência de oligonucleótidos codifica poliHis (tal como hexaHis) ou outra "cauda" tal como FLAG, HA (hemaglutinina do vírus influenza) ou myc, para os quais existem anticorpos disponíveis comercialmente. Esta cauda está tipicamente fundida a um polipéptido quando ocorre expressão do polipéptido e pode servir como um meio de purificação por afinidade ou detecção da proteína de ligação a antigénio IL-17RA a partir da célula hospedeira. Pode efectuar-se purificação por afinidade, por exemplo, por cromatografia em coluna usando anticorpos contra a cauda como uma matriz de afinidade. Opcionalmente, a cauda pode ser subsequentemente removida da proteína de ligação a antigénio IL-17RA purificada através de diversos meios tal como por utilização de determinadas peptidases para clivagem.

As sequências flanqueadoras podem ser homólogas (i.e., da mesma espécie e/ou estirpe da célula hospedeira), heterólogas (i.e., de uma espécie diferente da espécie ou estirpe da célula hospedeira), híbridas (i.e., uma combinação de sequências flanqueadoras de uma ou mais fontes), sintéticas ou nativas. Como tal, a fonte de uma sequência flanqueadora pode ser qualquer organismo procariótico ou eucariótico, qualquer organismo vertebrado ou invertebrado ou qualquer planta, desde que a sequência flanqueadora seja funcional na maquinaria da célula hospedeira e possa ser activada por esta.

As sequências flanqueadoras úteis para os vectores deste invento podem obter-se por qualquer de vários métodos bem conhecidos na especialidade. Tipicamente, as sequências flanqueadoras úteis aqui terão sido previamente identificadas por mapeamento e/ou por digestão com endonucleases de restrição e podem assim ser isoladas a partir da fonte de tecido adequada usando as endonucleases de restrição apropriadas. Em alguns casos, pode conhecer-se a sequência de nucleótidos completa de uma sequência flanqueadora. Aqui, pode sintetizar-se a sequência flanqueadora usando os métodos aqui descritos para síntese ou clonagem de ácidos nucleicos.

Conhecendo-se toda ou apenas parte da sequência flanqueadora, esta pode ser obtida usando reacção de polimerização em cadeia (PCR) e/ou por rastreio de uma biblioteca genómica com uma sonda adequada tal como um oligonucleótido e/ou fragmento de sequência flanqueadora da mesma espécie ou de outra espécie. Quando a sequência flanqueadora não é conhecida, pode isolar-se um fragmento de ADN contendo uma sequência flanqueadora a partir de uma parte de ADN maior que pode conter, por exemplo, uma sequência de codificação ou mesmo outro (s) gene(s) . Pode efectuar-se o isolamento por digestão com endonuclease de restrição para produzir o fragmento de ADN apropriado seguido de isolamento usando purificação em gel de agarose, cromatografia em coluna Qiagen® (Chatsworth, CA) ou outros métodos conhecidos do perito na especialidade. A selecção das enzimas adequadas para conseguir este objectivo será óbvia para o perito na especialidade.

Uma origem de replicação é tipicamente uma parte dos vectores de expressão procarióticos adquiridos comercialmente e a origem auxilia na amplificação do vector numa célula hospedeira. Se o vector seleccionado não contém um local de origem de replicação, este pode ser sintetizado quimicamente com base numa sequência conhecida e ligado ao vector. Por exemplo, a origem de replicação do plasmídeo pBR322 (New England Biolabs, Beverly, MA) é adequado para a maioria das bactérias gram-negativas e várias origens víricas (e.g., SV40, polioma, adenovirus, vírus da estomatite vesicular (VSV) ou vírus do papiloma tais como HPV ou BPV) são úteis para vectores de clonagem em células de mamífero. De um modo geral, a componente de origem de replicação não é necessária para vectores de expressão mamíferos (por exemplo, a origem SV40 é muitas vezes utilizada apenas porque também contém o promotor precoce do vírus).

Uma sequência de terminação de transcrição localiza-se tipicamente a 3' da extremidade da região de codificação de um polipéptido e serve para terminar a transcrição.

Habitualmente, uma sequência de terminação de transcrição em células procarióticas é um fragmento rico em G-C seguido por uma sequência poli-T. Apesar da sequência ser facilmente clonada a partir de uma biblioteca ou mesmo adquirida comercialmente como parte de um vector, pode também ser facilmente sintetizada usando métodos para síntese de ácidos nucleicos tal como os aqui descritos.

Um gene marcador seleccionável codifica uma proteína necessária para a sobrevivência e crescimento de uma célula hospedeira num meio de cultura selectivo. Os genes marcadores seleccionáveis típicos codificam proteínas que (a) conferem resistência a antibióticos ou outras toxinas, e.g.f ampicilina, tetraciclina ou canamicina para células hospedeiras procaróticas; (b) complementam deficiências auxotróficas da célula; ou (c) fornecem nutrientes críticos não disponíveis a partir de meios complexos ou definidos. Os marcadores seleccionáveis específicos são o gene de resistência à canamicina, o gene de resistência à ampicilina e o gene de resistência à tetraciclina. Vantajosamente, pode também usar-se um gene de resistência à neomicina para selecção em células hospedeiras tanto procarióticas como eucarióticas.

Podem usar-se outros genes seleccionáveis para amplificar o gene que será expresso. A amplificação é um processo em que os genes que são necessários para a produção de uma proteína crítica para crescimento ou sobrevivência celular são reiterados conjuntamente nos cromossomas de gerações sucessivas de células recombinantes. Os exemplos de marcadores seleccionáveis adequados para células de mamífero incluem di-hidrofolato reductase (DHFR) e genes de timidina cinase sem promotor. Os produtos de transformação de células de mamífero são colocados sob pressão selectiva em que apenas os produtos de transformação estão adaptados de forma única para sobreviver em virtude do gene seleccionável presente no vector. A pressão selectiva é imposta por cultura das células transformadas sob condições nas quais a concentração do agente de selecção no meio é sucessivamente aumentada, levando assim à amplificação tanto dos genes seleccionáveis como do ADN que codifica outro gene, tal como um anticorpo proteína de ligação de antigénio que se liga a polipéptido IL-17RA. Em resultado, sintetizam-se quantidades aumentadas de um polipéptido tal como uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA a partir do ADN amplificado. É habitualmente necessário um local de ligação de ribossoma para iniciação de tradução de ARNm e caracteriza-se por uma sequência de Shine-Dalgarno (procariotas) ou uma sequência Kozak (eucariotas). 0 elemento localiza-se tipicamente a 3' do promotor e a 5' da sequência de codificação do polipéptido a expressar.

Em alguns casos, tal como quando se pretende glicosilação num sistema de expressão de células hospedeiras eucarióticas, podem manipular-se as diferentes pré-sequências ou pró-sequências para melhorar a glicosilação ou o rendimento. Por exemplo, pode alterar-se o local de clivagem da peptidase de um péptido de sinalização específico ou podem adicionar-se pró-sequências, que podem também afectar a glicosilação. 0 produto de proteína final pode ter, na posição -1 (relativamente ao primeiro aminoácido da proteína madura) um ou mais aminoácidos adicionais obtidos na expressão, que pode não ter sido totalmente removido. Por exemplo, o produto final de proteína pode ter um ou dois resíduos de aminoácido no local de clivagem por peptidase, ligado ao terminal amino. Alternativamente, o uso de alguns locais de clivagem enzimática pode resultar numa forma ligeiramente truncada do polipéptido pretendido, se a enzima cortar nessa área do interior do polipéptido maduro.

Os vectores de expressão e clonagem do invento conterão tipicamente um promotor que é reconhecido pelo organismo hospedeiro e ligado operacionalmente à molécula que codifica a proteína de ligação a antigénio IL-17RA. Os promotores são sequências não traduzidas situadas a montante (i.e., 5' ) do códão de iniciação de um gene estrutural (geralmente numa gama de 100 a 1000 pb) que controlam a transcrição do gene estrutural. Os promotores estão convencionalmente agrupados em uma de duas classes: promotores indutíveis e promotores constitutivos. Os promotores indutíveis iniciam níveis aumentados de transcrição do ADN sob o seu controlo em resposta a alguma alteração das condições de cultura, tais como a presença ou ausência de um nutriente ou uma alteração de temperatura. Os promotores constitutivos, por outro lado, transcrevem uniformemente o gene ao qual estão ligados operacionalmente, ou seja, têm pouco ou nenhum controlo sobre a expressão do gene. É bem conhecido um grande número de promotores reconhecidos por várias células hospedeiras potenciais. Um promotor adequado está ligado operacionalmente ao ADN que codifica a cadeia pesada ou a cadeia leve compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA do invento por remoção do promotor do ADN fonte por digestão com enzimas de restrição e inserção da sequência de promotor pretendida no vector. São também bem conhecidos na especialidade promotores adequados para uso com hospedeiros de levedura. Os facilitadores de levedura são usados vantajosamente com promotores de levedura. Os promotores adequados para uso com células hospedeiras de mamífero são bem conhecidos e incluem os obtidos dos genomas de vírus, tais como vírus de polioma, vírus da varíola aviária, adenovirus (tal como Adenovirus 2), vírus do papiloma bovino, vírus do sarcoma aviário, citomegalovírus, retrovirus, vírus da hepatite B e com a maior preferência Vírus Símio 40 (SV40), não se lhes limitando. Outros promotores de mamífero adequados incluem promotores de mamífero heterólogos, por exemplo, promotores de choque térmico e o promotor de actina.

Promotores adicionais que podem ser interessantes incluem: promotor precoce de SV40 (Benoist e Chambon, 1981, Nature 290:304-310); promotor CMV (Thornsen et al.r 1984, Proc. Natl. Acad. U.S.A. 81:659-663); o promotor contido na repetição terminal longa 3' do vírus do sarcoma de Rous ('Yamamoto et al. , 1980, Cell 22:787-797); promotor da timidina cinase de herpes (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 78:1444-1445); sequências promotora e reguladora do gene de metalotionina Prinster et al., 1982, Nature 296:39-42); e promotores procarióticos tais como o promotor de beta-lactamase (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 75:3727-3731); ou o promotor tac (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 80:21-25). Também são de interesse as seguintes regiões de controlo de transcrição animal, que apresentam especificidade de tecido e têm sido utilizadas em animais transgénicos: a região de controlo do gene de elastase I que é activa em células pancreáticas acinar (Swift et al., 1984, Cell 38:639-646; Ornitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409; MacDonald, 1987, Hepatology 7:425-515); a região de controlo do gene de insulina que é activa em células beta pancreáticas (Hanahan, 1985, Nature 315:115-122); a região de controlo do gene de imunoglobulina que é activa em células linfóides (Grosschedl et al., 1984, Cell 38:647-658; Adames et al., 1985, Nature 318:533-538; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7:1436-1444); a região de controlo do virus de tumor mamário de ratinho que é activa em células testiculares, de mama, linfóides e mastócitos (Leder et al., 1986, Cell 45:485-495); a região de controlo do gene de albumina que é activa no fígado (Pinkert et al., 1987, Genes and Devei. 1 :268-276); a região de controlo do gene de alfa-fetoproteina que é activa no fígado (Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5:1639-1648;Hammer et al., 1987, Science 253:53-58); a região de controlo do gene de alfa-l-antitripsina que é activa no fígado (Kelsey et al., 1987, Genes and Devei. 1:161-171); a região de controlo do gene de beta-globulina que é activa em células mielóides (Mogram et al., 1985, Nature 315:338-340; Kollias et al., 1986, Cell 46:89-94); a região de controlo do gene de proteína básica de mielina que é activa em células oligodendrociticas no cérebro (Readhead et al., 1987, Cell 48:703-712); a região de controlo do gene de cadeia leve-2 de miosina que é activa no músculo esquelético (Sani, 1985, Nature 314:283-286); e a região de controlo do gene de hormona libertadora de gonadotrofina que é activa no hipotálamo (Mason et al., 1986, Science 234:1372-1378), não se lhes limitando.

Pode inserir-se uma sequência facilitadora no vector para aumentar a transcrição do ADN que codifica a cadeia leve ou a cadeia pesada compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA do invento por eucariotas superiores. Os facilitadores são elementos de ADN de actuação em cis, habitualmente com um comprimento de cerca de 10-300 pb, que actuam no promotor para aumentar a transcrição. A orientação e a posição dos facilitadores não é relevante, tendo sido encontrados em posições tanto a 5' como a 3' da unidade de transcrição. São conhecidas várias sequências de facilitador disponíveis de genes de mamífero (e.g., globina, elastase, albumina, alfa-feto-proteína e insulina). Tipicamente, contudo, usa-se um facilitador de um vírus. 0 facilitador de SV40, facilitador do promotor precoce de citomegalovírus, o facilitador de polioma e os facilitadores de adenovirus conhecidos na especialidade são exemplos de elementos facilitadores para a activação de promotores eucarióticos. Apesar do facilitador poder estar posicionado no vector a 5' ou a 3' da sequência de codificação, este localiza-se tipicamente num local a 5' do promotor. Pode incorporar-se num vector de expressão uma sequência que codifica uma sequência de sinalização (sequência líder ou péptido de sinalização) apropriada nativa ou heteróloga, para promover excreção extracelular do anticorpo. A escolha do péptido de sinalização ou líder depende do tipo de células hospedeiras nas quais o anticorpo será produzido e uma sequência de sinalização heteróloga pode substituir a sequência de sinalização nativa. Os exemplos de péptidos de sinalização que são funcionais em células hospedeiras de mamífero incluem as seguintes: a sequência de sinalização para interleucina-7 (IL-7) descrita em patente US n2 4 965 195; a sequência de sinalização para receptor de interleucina-2 descrita em Cosman et ai., 1984, Nature 312:768; o péptido de sinalização do receptor de interleucina-4 descrito em patente EP n2 0367 566; o péptido de sinalização do receptor de interleucina-1 do tipo I descrito em patente U.S. n2 4 968 607; o péptido de sinalização do receptor de interleucina-1 do tipo II descrito em patente EP n2 0 460 846.

Podem construir-se vectores de expressão do invento a partir de um vector de partida tal como um vector disponível comercialmente. Tais vectores podem conter ou não todas as sequências flanqueadoras pretendidas. Quando uma ou mais das sequências flanqueadoras aqui descritas não estão já presentes no vector, estas podem ser obtidas individualmente e ligadas no vector. Os métodos usados para obter cada uma das sequências flanqueadoras são bem conhecidos do perito na especialidade.

Após construção do vector e inserção de uma molécula de ácido nucleico que codifica uma cadeia leve, uma cadeia pesada ou uma cadeia leve e uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de ligação a antigénio IL-17RA no local apropriado do vector, pode inserir-se o vector completo numa célula hospedeira adequada para amplificação e/ou expressão de polipéptido. A transformação de um vector de expressão para uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA numa célula hospedeira seleccionada pode conseguir-se por métodos bem conhecidos incluindo transfecção, infecção, coprecipitação com sulfato de cálcio, electroporação, microinjecção, lipofecção, transfecção mediada por DEAE-dextrano ou outros técnicas conhecidas. 0 método seleccionado será parcialmente função do tipo de célula hospedeira a usar. Estes métodos e outros métodos adequados são bem conhecidos do perito na especialidade e são estabelecidos em, por exemplo, Sambrook et al., 2001, anteriormente.

Uma célula hospedeira, quando crescida em condições apropriadas, sintetiza uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA que pode ser subsequentemente recolhida a partir do meio de cultura (se a célula hospedeira a excreta para o meio) ou directamente a partir da célula hospedeira que a produz (se não for excretada). A selecção de uma célula hospedeira apropriada dependerá de vários factores, tais como os níveis de expressão pretendidos, modificações de polipéptido que sejam pretendidas ou necessárias para a actividade (tal como glicosilação ou fosforilação) e facilidade de enrolamento numa molécula biologicamente activa. Uma célula hospedeira pode ser eucariótica ou procariótica. São bem conhecidas na especialidade linhas celulares de mamífero disponíveis como hospedeiras para expressão e incluem linhas celulares imortalizadas disponíveis de American Type Culture Collection (ATCC), não se lhes limitando e quaisquer linhas celulares usadas num sistema de expressão conhecido na especialidade pode ser usado para produzir os polipéptidos recombinantes do invento. De um modo geral, transformam-se células hospedeiras com um vector de expressão recombinante que compreende ADN que codifica um polipéptido anticorpo anti-IL-17RA pretendido. Entre as células hospedeiras que podem ser utilizadas encontram-se procariotas, leveduras ou células de eucariotas superiores. Os procariotas incluem organismos gram negativos ou gram positivos, por exemplo E. coli ou bacilos.

As células de eucariotas superiores incluem células de insecto e linhas celulares estabelecidas de origem mamífera. Os exemplos de linhas celulares de origem mamífera adequadas incluem a linha COS-7 de células de rim de macaco (ATCC CRL 1651) (Gluzman et al. , 1981, Cell 23:175), células L, células 293, células C127, células 3T3 (ATCC CCL 163), células de ovário de hamster chinês (CHO) ou os seus derivados tal como CHO Veggie e linhas celulares relacionados que crescem em meios isentos de soro (Rasmussen et al. , 1998, Cytotechnology 28: 31), células HeLa, linhas celulares BHK (ATCC CRL 10) e a linha celular CVI/EBNA derivada da linha celular de rim de macaco verde africano CVI (ATCC CCL 70) tal como descrito por McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821, células de rim embrionário humano tal como 293, 293 EBNA ou MSR 293, células epidérmicas humanas A431, células Colo205 humanas, outras linhas celulares de primata transformadas, células diplóides normais, estirpes de células derivadas de cultura in vitro de tecido primário, explantes primários, células HL-60, U937, HaK ou Jurkat. Opcionalmente, podem usar-se linhas celulares de mamífero tais como HepG2/3B, KB, NIH 3T3 ou S49, por exemplo, para expressão do polipéptido quando se pretende usar o polipéptido em diferentes ensaios de transdução de sinal ou de repórter. Alternativamente, é possível produzir o polipéptido em eucariotas inferiores tais como leveduras ou em procariotas tais como bactérias. As leveduras adequadas incluem Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, estirpes de Kluyveromyces, Candida ou qualquer estirpe de levedura capaz de expressar polipéptidos heterólogos. As estirpes bacterianas adequadas incluem Escherichia coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium ou qualquer estirpe bacteriana capaz de expressar polipéptidos heterólogos. Se o polipéptido é produzido em levedura ou em bactérias, pode ser desejável modificar o polipéptido aí produzido, por exemplo por fosforilação ou glicosilação dos locais apropriados, de modo a obter o polipéptido funcional. Tais ligações covalentes podem conseguir-se usando métodos químicos ou enzimáticos. Pode também produzir-se o polipéptido por ligação operacional do ácido nucleico isolado do invento a sequências de controlo adequadas em um ou mais vectores de expressão de insecto e utilizar-se um sistema de expressão de insecto. Os materiais e métodos para sistemas de expressão de baculovírus/células de insectos estão disponíveis comercialmente sob a forma de kit de, e.g., Invitrogen, San Diego, Calif., U.S.A. (o kit MaxBac®) e tais métodos são bem conhecidos na especialidade, tal como descrito em Summers e Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin η2 1555 (1987) e Luckow e Summers, Bio/Technology 6:47 (1988) . Poderiam também utilizar-se sistemas de tradução isentos de células para produzir polipéptidos usando ARN derivados de construções de ácido nucleico aqui divulgadas. Descrevem-se vectores de clonagem e expressão adequados para uso com hospedeiros celulares de bactérias, fungos leveduras e mamíferos em Pouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, New York, 1985). Uma célula hospedeira que compreende uma ácido nucleico isolado do invento, preferentemente ligado operacionalmente a pelo menos uma sequência de controlo de expressão, é uma "célula hospedeira recombinante".

Em determinadas concretizações, podem seleccionar-se as linhas celulares por determinação de quais as linhas celulares que apresentam níveis de expressão elevados e produzem constitutivamente proteínas de ligação de antigénio com propriedades de ligação a IL-17RA. Noutra concretização, pode seleccionar-se uma linha celular da linhagem de células B que não produz o seu próprio anticorpo mas tem a capacidade de produzir e excretar um anticorpo heterólogo.

Identificação de domínios em IL-17RA humano ao qual se ligam anticorpos neutralizantes

Os exemplos 14-17 descrevem vários estudos que elucidam domínios em IL-17RA humano ao qual se ligam mAb IL-17RA neutralizantes. Estes domínios denominam-se determinantes neutralizantes. Um determinante neutralizante é um troço contíguo de IL-17RA, que quando mutado afecta negativamente a ligação de pelo menos um dos anticorpos neutralizantes aqui divulgados. Um determinante neutralizante compreende pelo menos um epítopo. Um determinante neutralizante pode ter características estruturais primárias, secundárias, terciárias e/ou quarternárias. Um anticorpo neutralizante é qualquer dos anticorpos aqui descritos que se liga especificamente a IL-17RA humano e inibe a ligação de IL-17A e/ou IL-17F e consequentemente inibe sinalização e/ou actividade biológica de IL-17RA. Os exemplos de anticorpos neutralizantes incluem

anticorpos compreendendo AMlI/AMhI (SEQ ID NO:27/SEQ ID N0:1), AMl2/AMh2 (SEQ ID NO:28/SEQ ID NO: 2) , AML3/AMH3 (SEQ ID NO :2 9/ SEQ ID NO:3), AML4/AMH4 (SEQ ID NO:30/SEQ ID NO: 4) ,

AMl5/AMh5 (SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:5), AML6/AMH6 (SEQ ID NO :32/ SEQ ID NO: 6), AML7/AMH7 (SEQ ID NO:33/SEQ ID NO: 7) ,

AMl 8 / AMh 8 (SEQ ID NO:34/SEQ ID NO: 8) , AML9/AMH9 (SEQ ID

NO :35/SEQ ID NO:9), AML10/AMH10 (SEQ ID NO:36/SEQ ID NO:10), AMl 11/ AMh 11 (SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:ll), AML12/AMH12 (SEQ ID NO :38/SEQ ID NO:12), AML13/AMH13 (SEQ ID NO:39/SEQ ID NO: 13),

AMl 14/ AMh 14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14), AML15/AMH15 (SEQ ID

NO :41/SEQ ID NO:15), AML16/AMH16 (SEQ ID NO:42/SEQ ID NO:16), AMl 17/ AMh 17 (SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:17), AML18/AMH18 (SEQ ID

NO :44/SEQ ID NO:18), AML19/AMH19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO:19), AMl20/AMh20 (SEQ ID NO:46/SEQ ID NO:20), AML21/AMH21 (SEQ ID

NO :47/ SEQ ID NO:21), AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22), AMl23/AMh23 (SEQ ID NO: 4 9 ou SEQ ID NO:50/SEQ ID NO:23), AMl24/AMh24 (SEQ ID NO:51/SEQ ID NO:24), AML25/AMH25 (SEQ ID NO:52/SEQ ID NO:25), AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26), assim como os seus fragmentos de ligação a IL-17RA e suas combinações.

As concretizações adicionais de anticorpos neutralizantes de acordo com o invento incluem anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem a ligação de IL-17A e/ou IL-17F e activação de IL-17RA ou um complexo heteromérico de IL-17RA e IL-17RC. Concretizações adicionais incluem anticorpos de acordo com o invento que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem a ligação de um heterómero IL-17A/IL-17F e activação de IL-17RA ou um complexo heteromérico de IL-17RA e IL-17RC. Concretizações adicionais incluem anticorpos de acordo com o invento que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem parcial ou completamente a formação de um complexo receptor funcional homomérico ou heteromérico de IL-17RA, tal como o complexo IL-17RA-IL-17RC, não se lhe limitando. Concretizações adicionais incluem anticorpos de acordo com o invento que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem parcial ou completamente a formação de um complexo receptor funcional homomérico ou heteromérico de IL-17RA, tal como o complexo IL-17RA/IL-17RC não se lhe limitando e não inibem necessariamente a ligação de IL-17A e/ou IL-17F ou um heterómero IL-17A/IL-17F a IL-17RA ou a um complexo receptor heteromérico IL-17RA.

As figuras 16A e 16B mostram que os anticorpos A: AMh 11/ AMl 11, B: AMH4/AML4, C: AMH8/AML8, D: AMH7/AML7, E: AMh6/AMl6, F: AMhIO/AMlIO e G: AMh18/AMl18 competiram entre si para a ligação a IL-17RA humano e estão incluídas num grupo definido (Divisão 1) . De um modo geral, os anticorpos I: AMh22/AMl22, J: AMh2 3/AMl2 3, K: AMh14/AMl14, L: AMh19/AMl19, M: AMh12/AMl12, N: AMh17/AMl17, 0: AMh16/AMl16 competiram entre si para a ligação a IL-17RA humano e em consequência pertencem a um grupo diferente (Divisão 3). De um modo geral, os anticorpos da Divisão 1 não competiram com os anticorpos da Divisão 3. Anticorpo H: AMhI/AMlI foi único no seu padrão de competição e formou a Divisão 2, mas é mais semelhante à Divisão 3. Anticorpo P: AMh26/AMl26 formou a Divisão 4 e mostrou pouca reactividade cruzada com qualquer dos outros anticorpos, sugerindo um determinante neutralizante único para este anticorpo. Os anticorpos Q: AMh21/AMl21 e R: AMh2 0/AMl2 0 mostraram individualmente padrões de competição únicos mas com semelhanças consideráveis aos anticorpos da Divisão 3 e formaram as Divisões 5 e 6, respectivamente. Este método identificou grupos de anticorpos que se ligam a diferentes determinantes neutralizantes e proporcionam evidência de várias espécies dentro de um subgénero de anticorpos com competição cruzada. 0 exemplo 16 descreve o uso de proteínas quiméricas IL-17RA humanas/ratinho para determinar determinantes neutralizantes em IL-17RA humanos. A figura 19 mostra que pelo menos três determinantes neutralizantes foram identificados com base nestas regiões que afectam a ligação de anticorpos IL-17RA neutralizantes, nomeadamente os aminoácidos 75-96 que abrangem o domínio B de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431), os aminoácidos 128-154 que abrangem o domínio C de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431) e os aminoácidos 176-197 que abrangem o domínio D de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431). Os aminoácidos 75-96 que abrangem o domínio B de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431) afectam negativamente a ligação de anticorpos neutralizantes AMhI/AMlI e AMh23/AMl23. Os aminoácidos 128-154 que abrangem o domínio C de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431) afectam negativamente a ligação de anticorpos neutralizantes AMh22/AMl22 e AMh23/AMl23. Os aminoácidos 176-197 que abrangem o domínio D de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431) afectam negativamente a ligação de anticorpos neutralizantes AMhI/AMlI, AMh2 2/AMl22, AMh14/AMl14, AMh19/AMl19, AMh2 3/AMl2 3, AMh21/AMl21 e AMh20/AMl20. Assim, os domínios B, C e D são considerados determinantes neutralizantes. 0 exemplo 17 descreve o uso de técnicas de rastreio de arginina para elucidar adicionalmente os domínios em IL-17R humano que são ligados por anticorpos neutralizantes IL-17RA. Apresenta-se na figura 22 um resumo do rastreio de arginina, distribuição por divisões e dados de quimeras. A metodologia de rastreio de arginina identificou vários determinantes neutralizantes: AMh18/AMl18 liga um domínio que abrange os aminoácidos 220-284 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMhI/AMlI liga um domínio focado no resíduo de aminoácido 152 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh22/AMl22 liga um domínio que abrange os aminoácidos 152-198 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh14/AMl14 liga um domínio que abrange os aminoácidos 152-297 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh19/AMl19 liga um domínio que abrange os aminoácidos 152-186 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh23/AMl23 liga um domínio que abrange os aminoácidos 97-297 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh26/AMl26 liga um domínio que abrange os aminoácidos 138-270 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh21/AMl21 liga um domínio que abrange os aminoácidos 113-198 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); e AMh20/AMl20 liga um domínio que abrange os aminoácidos 152-270 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431).

Demonstrou-se que todos os resíduos apresentados na figura 22 reduzem significativamente ou eliminam essencialmente a ligação de um anticorpo monoclonal humano neutralizante que se liga especificamente a IL-17RA humano.

Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a IL-17RA e compete para ligação com qualquer um dos anticorpos AMh3/AMl3, AMh2 0 / AMl2 0, AMh22/AMl22, AMh2 3/AMl2 3, AMh14/AMl14, AMh21/AMl21, AMh19/AMl19, AMh12/AMl12, AMh17/AMl17 ou AMh16/AMl16 ou qualquer destes subconjuntos.

Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a IL-17R e compete para ligação com qualquer um dos anticorpos AMh22/AMl22, AMh23/AMl23, AMh14/AMl14, AMh19/AMl19, AMh12/AMl12, AMh17/AMl17 ou AMh16/AMl16 ou qualquer destes subconjuntos.

Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a IL-17RA humano de SEQ ID NO: 431 mas não se liga especif icamente a um polipéptido quimérico consistindo de SEQ ID NO:434. As concretizações incluem um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a IL-17RA humano de SEQ ID NO:431 mas não se liga especificamente a um polipéptido quimérico consistindo de SEQ ID NO:435.

Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a IL-17RA humano de SEQ ID NO: 431 mas não se liga especif icamente a um polipéptido quimérico consistindo de SEQ ID NO:436.

Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 75-96 de SEQ ID NO :431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 128-154 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 176-197 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especif icamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 152-297 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 220-284 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 152-198 de SEQ ID NO :431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 152-186 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 97-297 de SEQ ID NO: 431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especif icamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 138-270 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 113-198 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um determinante neutralizante compreendendo os aminoácidos 152-270 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano.

Descreve-se aqui adicionalmente um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que liga IL-17RA humano de SEQ ID NO: 431, mas não liga o referido IL-17RA com um aminoácido substituído por arginina em qualquer uma de E97R, E113R, S115R, H138R, D152R, D154R, E156R, K166R, Q176R, S177R, D184R, E186R, S198R, H215R, S220R, T228R, T235R, E241R, H243R, L270R, Q284R, H297R de SEQ ID NO: 431, tal como um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que liga IL-17RA humano de SEQ ID NO: 431, mas não liga o referido IL-17RA com um aminoácido substituído por arginina em qualquer uma de D152R, D154R, E156R, D184R, E186R, H297R de SEQ ID NO:431, tal como um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que liga IL-17RA humano de SEQ ID NO:431, mas não liga o referido IL-17RA com um aminoácido substituído por arginina em D152R de SEQ ID NO:431.

Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um epítopo definido por qualquer um dos aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186, H297 de SEQ ID NO: 431. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um epítopo definido por pelo menos dois aminoácidos seleccionados do grupo que consiste de: D152, D154, E156, D184, E186, H297 de SEQ ID NO:431. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um epítopo definido por pelo menos três aminoácidos seleccionados do grupo que consiste de: D152, D154, E156, D184, E186, H297 de SEQ ID NO:431. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um epítopo definido por pelo menos quatro aminoácidos seleccionados do grupo que consiste de: D152, D154, E156, D184, E186, H297 de SEQ ID NO:431. Descreve-se aqui um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especif icamente a um epítopo definido por pelo menos cinco aminoácidos seleccionados do grupo que consiste de: D152, D154, E156, D184, E186, H297 de SEQ ID NO:431, tal

como um anticorpo ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a um epítopo definido pelos aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186, H297 de SEQ ID NO:431. a. uma sequência de cadeia pesada de domínio variável que é pelo menos 80% idêntica a uma sequência de domínio variável de cadeia pesada de AMh12, 14, 16, 17, 19 e 22 (SEQ ID NOs:12, 14, 16, 17, 19 e 22, respectivamente); b. o domínio variável de cadeia leve de (a) e o domínio variável de cadeia pesada de (b); em que o referido anticorpo se liga especificamente a IL-17RA humano; B. um anticorpo isolado ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, compreendendo a. um CDR1 (SEQ ID NO:218), CDR2 (SEQ ID NO:219), CDR3 (SEQ ID NO:220) de cadeia leve e um CDR1 (SEQ ID NO:140), CDR2 (SEQ ID NO: 141) , CDR3 (SEQ ID NO:142) de cadeia pesada do anticorpo AM-12; b. um CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadeia leve e um CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO: 147) , CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadeia pesada do anticorpo AM-14; c. um CDR1 (SEQ ID NO:230), CDR2 (SEQ ID NO:231), CDR3 (SEQ ID NO:232) de cadeia leve e um CDR1 (SEQ ID NO:152), CDR2 (SEQ ID NO: 153) , CDR3 (SEQ ID NO:154) de cadeia pesada do anticorpo AM-16; d. um CDR1 (SEQ ID NO:233), CDR2 (SEQ ID NO:234), CDR3 (SEQ ID NO:235) de cadeia leve e um CDR1 (SEQ ID NO:155), CDR2 (SEQ ID NO:156), CDR3 (SEQ ID NO:157) de cadeia pesada do anticorpo AM-17; e. um CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadeia leve e um CDR1 (SEQ ID NO:161), CDR2 (SEQ ID NO: 162) , CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadeia pesada do anticorpo AM-19; f. um CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadeia leve e um CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO: 171) , CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadeia pesada do anticorpo AM-22; em que o referido anticorpo se liga especificamente a IL-17RA humano; e C. um anticorpo isolado ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, compreendendo a. um domínio variável de cadeia leve e um domínio variável de cadeia pesada de AMl12/AMh12 (SEQ ID NO:38/SEQ ID NO:12); b. um domínio variável de cadeia leve e um domínio variável de cadeia pesada de AMl14/AMh14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14); c. um domínio variável de cadeia leve e um domínio variável de cadeia pesada de AMl16/AMh16 (SEQ ID NO:42/SEQ ID NO: 16) ; d. um domínio variável de cadeia leve e um domínio variável de cadeia pesada de AMl17/AMh17 (SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:17); e. um domínio variável de cadeia leve e um domínio variável de cadeia pesada de AMl19/AMh19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO: 19) ;

Descreve-se aqui um anticorpo monoclonal isolado ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, seleccionado do grupo que consiste de: a) um anticorpo monoclonal que se liga especificamente a IL-17RA humano de SEQ ID NO: 431 mas não se liga especificamente a um polipéptido quimérico que consiste de SEQ ID NO:434; b) a anticorpo monoclonal que se liga especificamente a IL- 17RA humano de SEQ ID NO: 431 mas não se liga especificamente a um polipéptido quimérico que consiste de SEQ ID NO:435; e c) a anticorpo monoclonal que se liga especificamente a IL- 17RA humano de SEQ ID NO: 431 mas não se liga especificamente a um polipéptido quimérico que consiste de SEQ ID NO:436.

Descreve-se adicionalmente um anticorpo monoclonal isolado ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que liga especificamente um determinante neutralizante seleccionado do grupo que consiste de: a) um polipéptido compreendendo aminoácidos 75-96 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; b) um polipéptido compreendendo aminoácidos 128-154 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; c) um polipéptido compreendendo aminoácidos 176-197 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; d) um polipéptido compreendendo aminoácidos 152-297 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; e) um polipéptido compreendendo aminoácidos 220-284 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; f) um polipéptido compreendendo aminoácidos 152-198 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; g) um polipéptido compreendendo aminoácidos 152-186 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; h) um polipéptido compreendendo aminoácidos 97-297 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; i) um polipéptido compreendendo aminoácidos 138-270 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; j) um polipéptido compreendendo aminoácidos 113-198 de SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; e k) um polipéptido compreendendo aminoácidos 152-270 de SEQ ID NO :431 de IL-17RA humano.

Descreve-se adicionalmente um anticorpo monoclonal isolado ou seu fragmento de ligação a IL-17RA, que se liga especificamente a IL-17RA humano de SEQ ID NO:431, mas não liga especificamente o referido IL-17RA, apresentando qualquer uma das seguintes substituições de aminoácidos E97R, E113R, S115R, H138R, D152R, D154R, E156R, K166R, Q176R, S177R, D184R, E186R, S198R, H215R, S220R, T228R, T235R, E241R, H243R, L270R, Q284R ou H297R de SEQ ID NO:431, tal anticorpo pode ligar especificamente IL-17RA humano de SEQ ID NO:431, mas não liga especificamente o referido IL-17RA apresentando qualquer uma das seguintes substituições de aminoácidos D152R, D154R, E156R, D184R, E186R, ou H297R de SEQ ID NO:431, ou o referido anticorpo liga especificamente IL-17RA humano de SEQ ID NO:431, mas não liga especificamente o referido IL-17RA com o resíduo de ácido aspártico na posição 152 de SEQ ID NO:431 substituído por uma arginina, ou o referido anticorpo liga especificamente um epítopo definido por qualquer um dos aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186 ou H297 de SEQ ID NO:431 ou o referido anticorpo liga especificamente um epitopo definido por pelo menos dois dos seguintes aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186 ou H297 de SEQ ID NO:431, ou o referido anticorpo liga especificamente um epitopo definido por pelo menos três dos seguintes aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186 ou H297 de SEQ ID NO:431, ou o referido anticorpo liga especificamente um epitopo definido por pelo menos quatro dos seguintes aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186 ou H297 de SEQ ID NO:431, ou o referido anticorpo liga especificamente um epitopo definido por pelo menos cinco dos seguintes aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186 ou H297 de SEQ ID NO:431, ou o referido anticorpo liga especificamente um epitopo definido pelos aminoácidos D152, D154, E156, D184, El 8 6, H297 de SEQ ID NO:431.

Uso de proteínas de ligação de antigénio IL-17RA para objectivos de diagnóstico e terapêuticos

As proteína de ligação a antigénio IL-17RA do invento podem ser usados em ensaios de diagnóstico, e.g., ensaios de ligação para detectar e/ou quantificar IL-17RA expresso em tecidos ou células. As proteína de ligação a antigénio IL-17RA podem ser usadas em investigação para investigar adicionalmente o papel de IL-17RA na doença. As proteínas de ligação a antigénio IL-17RA podem ser usadas para investigar adicionalmente o papel de IL-17RA na formação de complexos de receptor homoméricos e/ou heteroméricos e o papel dos referidos complexos em doença. As proteínas de ligação a antigénio IL-17RA podem ser usadas para investigar adicionalmente o papel de activação de IL-17RA para complexos de ligando IL-17 homoméricos e/ou heteroméricos. As proteínas de ligação a antigénio IL-17RA podem ser usadas para investigar adicionalmente o papel de activação de IL-17RA para complexos de ligando IL-17 homoméricos e/ou heteroméricos e como os referidos complexos de ligando IL-17 homoméricos e/ou heteroméricos se relacionam com doença.

As proteínas de ligação a antigénio IL-17RA do presente invento podem ser usadas na prevenção ou tratamento de doenças ou condições associadas com actividade IL-17A e/ou IL-17F. Uma doença ou condição associada com IL-17A e/ou IL-17F significa qualquer doença, condição ou patologia cuja manifestação inicial num doente é causada ou exacerbada pela interacção de IL-17A e/ou IL-17F com IL-17RA. A gravidade da doença, condição ou patologia pode também ser aumentada ou diminuída pela modulação da interacção de IL-17A e/ou IL-17F com IL-17RA ou um complexo heterólogo compreendendo IL-17RA e IL-17RC.

As proteínas de ligação a antigénio do invento que se ligam especificamente a IL-17RA podem ser usadas no tratamento de doenças mediadas por IL-17RA num doente que delas necessite. Todos os aspectos das proteínas de ligação a antigénio IL-17RA descritos ao longo deste fascículo podem ser usados na preparação de um medicamento para o tratamento de diferentes condições e doenças aqui descritas. Além disso, a proteína de ligação a antigénio IL-17RA do invento pode ser usada para inibir a formação de um complexo entre IL-17RA e o seu ligando, e.g., IL-17A e/ou IL-17F ou qualquer outro membro da família de ligandos IL-17 que liga IL-17RA ou um complexo heterólogo compreendendo IL-17RA e IL-17RC, modulando assim a actividade biológica de IL-17RA numa célula ou tecido. As proteínas de ligação a antigénio que se ligam a IL-17RA podem assim modular e/ou inibir interacção com outros compostos de ligação e como tal podem ter uso terapêutico na melhoria de doenças mediadas por IL-17RA. As proteínas de ligação a antigénio IL-17RA podem inibir a ligação de IL-17A e/ou IL-17F a IL-17RA, o que pode resultar na ruptura da cascata de transdução de sinal induzida por IL-17RA.

Demonstraram-se níveis aumentados de IL-17A e/ou o envolvimento de sinais mediados por IL-17A na patogénese de doença em várias condições e doenças. Rolls e Linden, 2004, anteriormente; Miossec, 2003, P. Arthritis Rheum. 48:594-601); W02005/063290; Cannetti et ai., 2003, J. Immunol. 171:1009-1015; Charles et ai., 1999, J. Immunol. 163: 1521-1528; Cunnane et ai., 2000, Online J. Rheumatol. 27 :58-63; Yoshimoto, 1998, J. Immunol. 161: 3400-3407), (W02005/063290) , (Niederau, 1997, Online NLM) , (W02004/002519) , (Tsutsui et al., 2000, anteriormente), (Konishi et al., 2002, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 99:11340-11345), Ziolkowska et al., 2000, anteriormente). (Chabaud, 2001, Arth & Rheumatism, 44:1293) . Assim, diz-se que IL-17RA influencia a patologia destas e de outras doenças ou condições aqui descritas.

Tal como aqui descrito, um anticorpo substituto de rato anti-ratinho IL-17RA inibe a progressão da doença e reduz a degradação de osso e cartilagem nos modelos profiláctico e terapêutico de artrite induzida por colagénio em roedor (consultar os exemplos seguintes). Como evidência adicional da eficácia de interrupção da via IL-17A/IL-17RA, os ratinhos knockout IL-17RA são resistentes a artrite induzida por colagénio e o tratamento com anticorpo IL-17RA é eficaz em artrite induzida em ratinhos knockout TNFR, mostrando um efeito independente de TNF (consultar o exemplo 6). A inibição de IL-17RA usando as proteínas de ligação de antigénio aqui divulgadas representa um mecanismo novo e eficaz para inibir os sintomas e patologia de doenças inflamatórias e auto-imunes e em particular inflamação e degradação das articulações encontradas em artrite reumatóide (RA) . Dados pré-clínicos e dados de tecidos de doentes de RA sugerem o potencial de proporcionar eficácia para aqueles a quem a terapia de inibidor TNF falhou e para conferir benefícios adicionais em combinação com inibidores de TNF, inibidores de IL-6 e inibidores de IL-1.

As proteínas de ligação de antigénio aqui descritas podem ser usadas em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais inibidores de TNF para o tratamento ou prevenção das doenças e perturbações aqui citadas tal como todas as formas de receptores de TNF solúveis incluindo Etanercept (tal como ENBREL®) , não se lhes limitando, bem como todas as formas de moléculas receptoras de TNF p75 e/ou p55 monoméricas ou multiméricas e seus fragmentos; anticorpos anti-TNF humano, tal como Infliximab (tal como REMICADE®) e D2E7 (tal como HUMIRA®) e semelhantes, não se lhes limitando. Tais inibidores de TNF incluem compostos e proteínas que bloqueiam a síntese in vivo ou a libertação extracelular de TNF. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais dos seguintes inibidores de TNF: proteínas de ligação de TNF (receptor de TNF de tipo I solúvel e receptor de TNF de tipo II solúvel ("sTNFR"), tal como aqui definido), anticorpos anti-TNF, factor de estimulação de colónias de granulócito; talidomida; BN 50730; tenidap; E 5531; tiapafant PCA 4248; nimesulida; panavir; rolipram; RP 73401; péptido T; MDL 201,449A; cloridrato de (IR,3S)-cis-1-[9-(2,6-diaminopurinil)]-3-hidroxi-4-ciclopenteno; (IR,3R)-trans-1-(9-(2,6-diamino)purina]-3-acetoxiciclopentano; (cloridrato de IR,3R)-trans-1-[9-adenil)-3-azidociclopentano e (IR,3R)-trans-1-(6-hidroxi-purin-9-il)-3-azidociclopentano. Divulgam-se na especialidade proteínas de ligação TNF (EP 308 378, EP 422 339, GB 2 218 101, EP 393 438, WO 90/13575, EP 398 327, EP 412 486, WO 91/03553, EP 418 014, JP 127,800/1991, EP 433 900, patente U.S. N2 5 136 021, GB 2 246 569, EP 464 533, WO 92/01002, WO 92/13095, WO 92/16221, EP 512 528, EP 526 905, WO 93/07863, EP 568 928, WO 93/21946, WO 93/19777, EP 417 563, WO 94/06476 e pedido internacional PCT publicado como W01998/01555.

Por exemplo, EP 393 438 e EP 422 339 referem as sequências de aminoácidos e de ácido nucleico de um receptor de TNF de tipo I solúvel (também denominado "sTNFR-Ι" ou "inibidor de TNF de 30 kDa") e um receptor de TNF de tipo II solúvel (também denominado "sTNFR-II" ou "inibidor de TNF de 40 kDa"), denominados colectivamente "sTNFR", bem como as suas formas modificadas (e.g., fragmentos, derivados funcionais e variantes) . EP 393 438 e EP 422 339 também divulgam métodos para isolar os genes responsáveis por codificar os inibidores, clonar o gene em vectores e tipos de células adequados e expressar o gene para produzir os inibidores. Adicionalmente, também foram divulgadas formas polivalentes (i.e., moléculas compreendendo mais do que uma parte activa) de sTNFR-Ι e sTNFR-II. Numa concretização, a forma polivalente pode ser construída por acoplamento químico de pelo menos um inibidor de TNF e outra parte com qualquer ligante clinicamente aceitável, por exemplo polietilenoglicol (WO 92/16221 e WO 95/34326), com um ligante peptídico (Neve et al. (1996), Cytokine, 8(5) : 365-370, por acoplamento químico a biotina e seguidamente ligação a avidina (WO 91/03553) e finalmente por combinação de moléculas de anticorpo quimérico (patente U.S. 5 116 964, WO 89/09622, WO 91/16437 e EP 315062.

Os anticorpos anti-TNF incluem o Fab de anticorpo MAK 195F (Holler et al. (1993), 1st International Symposium on Cytokines in Bone Marrow Transplantation, 147); anticorpo monoclonal anti-TNF CDP 571 (Rankin et al. (1995), British Journal of Rheumatology, 34:334-342); anticorpo monoclonal anti-factor de necrose de tumor BAY X 1351 murino (Kieft et al. (1995), 7th European Congress of Clinical Microbiology and

Infectious Diseases, página 9) ; anticorpo monoclonal anti-TNF CenTNF cA2 (Elliott et al. (1994), Lancet, 344:1125- 1127 e Elliott et al. (1994), Lancet, 344:1105-1110).

As proteínas de ligação de antigénio aqui descritas podem ser usadas em combinação com todas as formas de inibidores de IL-1, tal como kineret (por exemplo ANAKINRA®) , não se lhe limitando. O antagonista de receptor de interleucina 1 (IL-lra) é uma proteína humana que actua como um inibidor natural de interleucina 1. Descrevem-se antagonistas de receptores de interleucina 1, bem como os métodos de preparar e métodos dos seus usos em patentes U.S. N2 5 075 222; WO 91/08285; WO 91/17184; AU 9173636; WO 92/16221; WO 93/21946; WO 94/06457; WO 94/21275; FR 2706772; WO 94/21235; DE 4219626; WO 94/20517; WO 96/22793 e WO 97/28828. As proteínas incluem antagonistas de receptor IL-1 glicosilados, bem como não glicosilados. Especificamente divulgam-se três formas preferidas de IL-lra (IL-lra , IL-lra e IL-lrax), cada uma das quais é codificada pela mesma sequência de codificação de ADN e suas variantes e descrevem-se em patente U.S. N2 5 075 222. Também se divulgam métodos de produzir inibidores de IL-1, em particular IL-lras, na patente 5 075 222. Uma classe adicional de inibidores de interleucina 1 inclui compostos capazes de prevenir especificamente a activação de receptores celulares de IL-1. Tais compostos incluem proteínas de ligação de IL-1, tais como receptores solúveis e anticorpos monoclonais. Tais compostos também incluem anticorpos monoclonais para os receptores. Uma classe adicional de inibidores de interleucina 1 inclui compostos e proteínas que bloqueiam síntese in vivo e/ou libertação extracelular de IL-1. Tais compostos incluem agentes que afectam a transcrição de genes IL-1 ou processamento de pré-proteínas IL-1.

As proteínas de ligação de antigénio aqui descritas podem ser usadas em combinação com todas as formas de inibidores de CD28, tal como abatacept (por exemplo ORENCIA®) , não se lhe limitando.

As proteínas de ligação de antigénio aqui descritas podem ser usadas em combinação com todas as formas de inibidores de receptor de IL-6 e/ou IL-6, tal como abatacept (por exemplo ACTEMRA®) , não se lhe limitando.

As proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas em combinação com uma ou mais citocinas, linfócinas, factor (es) hematopoiético(s) e/ou um agente anti-inflamatório. 0 tratamento das doenças e perturbações aqui listadas pode incluir o uso de fármacos de primeira linha para controlo da dor e inflamação em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento concomitante) com tratamento com uma ou mais proteínas de ligação de antigénio aqui proporcionadas. Estes fármacos são classificados como fármacos anti-inflamatórios não esteróides (NSAID). Os tratamentos secundários incluem corticosteróides, fármacos anti-reumáticos de acção lenta (SAARD) ou fármacos de modificação da doença (DM) . A informação relativa aos seguintes compostos pode encontrar-se em The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 16a edição, Merck, Sharp & Dohme Research Laboratories, Merck & Co. , Rahway, N.J. (1992) e em Pharmaprojects, PJB Publications Ltd. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio e qualquer um ou mais NSAID para o tratamento das doenças e perturbações aqui citadas. A acção anti-inflamatória de NSAID é devida, pelo menos em parte, à inibição da síntese de prostaglandina (Goodman e Gilman em "The Pharmacological Basis of Therapeutics", MacMillan 7a edição (1985)). Os NSAID podem ser caracterizados em pelo menos nove grupos: (1) derivados de ácido salicílico; (2) derivados de ácido propiónico; (3) derivados de ácido acético; (4) derivados de ácido fenâmico; (5) derivados de ácido carboxílico; (6) derivados de ácido butírico; (7) oxicam; (8) pirazolas e (9) pirazolonas. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais derivados de ácido salicílico, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Tais derivados de ácido salicílico, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis compreendem: acetaminosalol, aloxiprina, aspirina, benorilato, bromossaligenina, acetilsalicilato de cálcio, trisalicilato de colina e magnésio, salicilato de magnésio, salicilato de colina, diflusinal, etersalato, fendosal, ácido gentísico, salicilato de glicol, salicilato de imidazola, acetilsalicilato de lisina, mesalamina, salicilato de morfolina, 1-naftilsalicilato, olsalazina, parsalmida, fenilacetilsalicilato, fenilsalicilato, salacetamida, salicilamida de ácido O-acético, salsalato, salicilato de sódio e sulfasalazina. Também se pretende que os derivados de ácido salicílico estruturalmente relacionados com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos neste grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais derivados de ácido propiónico, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Os derivados de ácido propiónico, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis compreendem: alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, dexindoprofeno, fenoprofeno, flunoxaprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, furcloprofeno, ibuprofeno, ibuprofeno de alumínio, ibuproxam, indoprofeno, isoprofeno, cetoprofeno, loxoprofeno, miroprofeno, naproxeno, naproxeno de sódio, oxaprozina, picetoprofeno, pimeprofeno, pirprofeno, pranoprofeno, ácido protizínico, piridoxiprofeno, suprofeno, ácido tiaprofénico e tioxaprofeno. Também se pretende que os derivados de ácido propiónico relacionados estruturalmente com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos neste grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento, ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais derivados de ácido acético, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Os derivados de ácido acético, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis compreendem: acemetacina, alclofenac, amfenac, bufexamac, cinmetacina, clopirac, delmetacina, diclofenac de potássio, diclofenac de sódio, etodolac, felbinac, fenclofenac, fenclorac, ácido fenclózico, fentiazac, furofenac, glucametacina, ibufenac, indometacina, isofezolac, isoxepac, lonazolac, ácido metiazinico, oxametacina, oxpinac, pimetacina, proglumetacina, sulindac, talmetacina, tiaramida, tiopinac, tolmetina, tolmetina de sódio, zidometacina e zomepirac. Também se pretende que os derivados de ácido acético relacionados estruturalmente com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidas por este grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento, ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais derivados de ácido fenâmico, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Os derivados de ácido fenâmico, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis compreendem: ácido enfenâmico, etofenamato, ácido flufenâmico, isonixina, ácido meclofenâmico, meclofenamato de sódio, ácido medofenâmico, ácido mefenâmico, ácido niflúmico, talniflumato, terofenamato, ácido tolfenâmico e ufenamato. Também se pretende que os derivados de ácido fenâmico relacionados estruturalmente com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos por este grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento, ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais derivados de ácido carboxílico, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Os derivados de ácido carboxílico, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados compreendem: clidanac, diflunisal, flufenisal, inoridina, cetorolac e tinoridina. Também se pretende que os derivados de ácido carboxílico relacionados estruturalmente com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos por este grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento, ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais derivados de ácido butírico, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Os derivados de ácido butírico, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis compreendem: bumadizon, butibufeno, fenbufeno e xenbucina. Também se pretende que os derivados de ácido butírico relacionados estruturalmente com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos por este grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento, ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais de oxicam, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Os oxicam, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis compreendem: droxicam, enolicam, isoxicam, piroxicam, sudoxicam, tenoxicam e 4-hidroxil-l,2-benzotiazina 1,1-dióxido 4-(N-fenil)-carboxamida. Também se pretende que os derivados de oxicam relacionados estruturalmente com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos por este grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais pirazolas, ésteres pró-fármaco, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. As pirazolas, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados compreendem: difenamizola e epirizola. Também se pretende que os derivados de pirazolas com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos por este grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais pirazolonas, ésteres pró-fármaco, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. As pirazolonas, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados compreendem: apazona, azapropazona, benzpiperilon, feprazona, mofebutazona, morazona, oxifenbutazona, fenilbutazona, pipebuzona, propilfenazona, ramifenazona, suxibuzona e tiazolinobutazona. Também se pretende que as pirazalonas estruturalmente relacionadas com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidas por este grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento, ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais dos seguintes NSAID: ácido acetamidocapróico, S-adenosilmetionina, ácido 3-amino-4-hidroxibutírico, amixetrina, anitrazafeno, antrafenina, bendazac, lisinato de bendazac, benzidamina, beprozina, broperamola, bucoloma, bufezolac, ciproquazona, cloximato, dazidamina, deboxamet, detomidina, difenpiramida, difenpiramida, difissalamina, ditazol, emorfazona, mesilato de fanetizola, fenflumizola, floctafenina, flumizola, flunixina, fluproquazona, fopirtolina, fosfosal, guaimesal, guaiazolena, isonixirna, lefetamina HC1, leflunomida, lofemizola, lotifazola, clonixinato de lisina, meseclazona, nabumetona, nictindola, nimesulide, orgoteina, orpanoxina, oxaceprol, oxapadol, paranilina, perisoxal, citrato de perisoxal, pifoxima, piproxeno, pirazolac, pirfenidona, proquazona, proxazola, tielavina B, tiflamizola, timegadina, tolectina, tolpadol, triptamid e os denominados pelo número de código da companhia tal como 4801565, AA861, AD1590, AFP802, AFP860, AI77B, AP 5 0 4, AU8001, BPPC, BW540C, CHINOIN 127, CN100, EB382, EL508, F1044, FK-506, GV3658, ITF182, KCNTEI6090, KME4, LA2851, MR714, MR897, MY309, 0N03144, PR823, PV102, PV108, R830, RS2131, SCR152, SH440, SIR133, SPAS510, SQ27239, ST281, SY6001, TA60, TAI-901 (ácido 4-benzoil-l-indanocarboxílico), TVX2706, U60257, UR2301 e WY41770. Também se pretende que os NSAID estruturalmente relacionados com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes aos NSAID sejam abrangidos por este grupo. O presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais corticosteróides, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis para o tratamento das doenças e perturbações aqui mencionadas, incluindo inflamação aguda e crónica, tais como doenças reumáticas, doença de enxerto contra hospedeiro e esclerose múltipla. Os corticosteróides, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis incluem hidrocortisona e compostos que são derivados de hidrocortisona, tais como 21-acetoxipregnenolona, alclomerasona, algestona, amcinonida, beclometasona, betametasona, valerato de betametasona, budesonideo, cloroprednisona, clobetasol, propionato de clobetasol, clobetasona, butirato de clobetasona, clocortolona, cloprednol, corticosterona, cortisona, cortivazol, deflazacon, desonideo, desoximerasona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato, enoxolona, fluazacort, flucloronideo, flumetasona, pivalato de flumetasona, acetonideo de flucinolona, flunisolideo, fluocinonideo, acetonideo de fluorocinolona, butilo de fluocortina, fluocortolona, hexanoato de fluocortolona, valerato de diflucortolona, fluorometolona, acetato de fluperolona, acetato de fluprednideno, fluprednisolona, flurandenolideo, formocortal, halcinonideo, halometasona, acetato de halopredona, hidrocortamato, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, fosfato de hidrocortisona, hidrocortisona 21-succinato de sódio, tebutato de hidrocortisona, mazipredona, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, furoato de mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisolona, prednisolona 21-diedriaminoacetato, prednisolona fosfato de sódio, prednisolona succinato de sódio, prednisolona 21-m-sulfobenzoato de sódio, prednisolona 21-estearoglicolato de sódio, tebutato de prednisolona, prednisolona 21-trimetilacetato, prednisona, prednival, prednilideno, prednilideno 21-dietilaminoacetato, tixocortol, triamcinolona, acetonideo de triamcinolona, betonideo de triamcinolona e hexacetonideo de triamcinolona. Também se pretende que os corticosteróides estruturalmente relacionados com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos por este grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento, ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais fármacos anti-reumáticos de acção lenta (SAARD) ou fármacos anti-reumáticos de modificação de doença (DMARDS), ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis para o tratamento das doenças e perturbações aqui mencionadas, incluindo inflamação aguda e crónica, tais como doenças reumáticas, doença de enxerto contra hospedeiro e esclerose múltipla. SAARD ou DMARDS, ésteres pró-fármaco e seus sais farmaceuticamente aceitáveis compreendem: alocupreideo de sódio, auranofin, aurotioglicose, aurotioglicanídeo, azatioprina, brequinar de sódio, bucilamina, 3-aurotio-2-propanol-l-sulfonato de cálcio, clorambucil, cloroquina, clobuzarit, cuproxolina, ciclofosfamida, ciclosporina, dapsona, 15-desoxispergualina, diacereina, glucosamina, sais de ouro (e.g., sal de cicloquina de ouro, tiomalato de ouro e sódio, tiossulfato de ouro e sódio), hidroxicloroquina, sulfato de hidroxicloroquina, hidroxiureia, cebuzona, levamisola, lobenzarit, melitina, 6-mercaptopurina, metotrexato, mizoribina, micofenolato de mofetil, mioral, mostarda de azoto, D-penicilamina, piridinol imidazolas tais como SKNF86002 e SB203580, rapamicina, tióis, timopoietina e vincristina. Também se pretende que os SAARD ou DMARD estruturalmente relacionados com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos por este grupo. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento, ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais inibidores C0X2, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, para o tratamento das doenças e perturbações aqui mencionadas, incluindo inflamação aguda e crónica. Os exemplos de inibidores C0X2, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, por exemplo, celecoxib. Também se pretende que os inibidores C0X2 estruturalmente relacionados com propriedades analgésicas e anti-inflamatórias semelhantes sejam abrangidos por este grupo. Os exemplos de inibidores selectivos de C0X2 incluem etoricoxib, valdecoxib, celecoxib, licofelona, lumiracoxib, rofecoxib e semelhantes, não se lhes limitando. 0 presente invento pode ser dirigido ao uso de uma proteína de ligação de antigénio em combinação (pré- tratamento, pós-tratamento, ou tratamento concomitante) com qualquer de um ou mais antimicrobianos, ésteres pró-fármaco ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis para o tratamento das doenças e perturbações aqui mencionadas, incluindo inflamação aguda e crónica. Os antimicrobianos incluem, por exemplo, a vasta gama de penicilinas, cefalosporinas e outras beta-lactamas, aminoglicosideos, azolas, quinolonas, macrolideos, rifamicinas, tetraciclinas, sulfonamidas, lincosamidas e polimixinas. As penicilinas incluem penicilina G, penicilina V, meticilina, nafcilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina, floxacilina, ampicilina, ampicilina/sulbactama, amoxicilina, amoxicilina/clavulanato, hetacilina, ciclacilina, bacampicilina, carbenicilina, indanilo de carbenicilina, ticarcilina, ticarcilina/clavulanato, azlocilina, mezlocilina, peperacilina e mecilinam, não se lhes limitando. As cefalosporinas e outras beta-lactamas incluem cefalotina, cefapirina, cefalexina, cefradina, cefazolina, cefadroxil, cefaclor, cefamandola, cefotetano, cefoxitina, ceruroxima, cefonicid, ceforadina, cefixima, cefotaxima, moxalactama, ceftizoxima, cetriaxona, cefoperazona, ceftazidima, imipenem e aztreonama, não se lhes limitando. Os aminoglicosideos incluem estreptomicina, gentamicina, tobramicina, amicacina, netilmicina, canamicina e neomicina, não se lhes limitando. As azolas incluem fluconazola, não se lhe limitando. As quinolonas incluem ácido nalidixico, norfloxacina, enoxacina, ciprofloxacina, ofloxacina, esparfloxacina e temafloxacina, não se lhes limitando. Os macrolideos incluem eritomicina, espiramicina e azitromicina, não se lhes limitando. As rifamicinas incluem rifampina, não se lhe limitando. As tetraciclinas incluem espiciclina, clortetraciclina, clomociclina, demeclociclina, desoxiciclina, guameciclina, limeciclina, meclociclina, metaciclina, minociclina, oxitetraciclina, penimepiciclina, pipaciclina, rolitetraciclina, sanciclina, senociclina e tetraciclina, não se lhes limitando. As sulfonamidas incluem sulfanilamida, sulfametoxazola, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfisoxazola e co-trimoxazola (trimetoprim/sulfametoxazola), não se lhes limitando. As lincosamidas incluem clindamicina e lincomicina, não se lhes limitando. As polimixinas (polipéptidos) incluem polimixina B e colistina, não se lhes limitando. A actividade mais citada de IL-17A in vitro é a indução de neutrófilos que mobilizam citocinas e quimiocinas pelas células estromais (e.g. GM-CSF, IL6, IL8) . Estas actividades são melhoradas potentemente na presença de TNF (Ruddy et al., 2004). Similarmente as actividades biológicas de IL-17F são também melhoradas por co-estimulo de TNF. É de especial relevância relativamente a um papel patogénico de IL-17A em destruição de cartilagem e erosão óssea associadas a artrite reumatóide, o facto de IL-17A induzir a expressão NO, MMP, PGE2 e RANKL e desempenhar um papel na activação especifica de antigénio de células T e B (Rolls e Linden, 2004, anteriormente; Lubberts et al. , 2005, Arthritis. Res. Ther. 7:29-37) . Assim, as proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas para inibir a via IL-17A e/ou IL-17F/IL-17RA e subsequente produção de NO, MMP, PGE2 e/ou RANKL e tratar doenças associadas a regulação positiva por IL-17A e/ou IL-17F de NO, MMP, PGE2 e/ou RANKL, bem como de outros mediadores pró-inflamatórios aqui descritos.

Além da presença de níveis elevados de IL-17A no fluido sinovial de doentes de artrite reumatóide, várias linhas de evidência sugerem que IL-17A é uma citocina patogénica chave em artrite. Primeiramente, a administração de IL-17A às articulações de ratinhos exacerba os sintomas de artrite induzida por colagénio (Lubberts et al., 2003, J. Immunol. 170:2655-2662) . Em segundo lugar, IL-17RA.FC solúvel inibe a ruptura de colagénio em RA sinovial humano e culturas de explantes ósseos e atenua os sintomas em artrite induzida no ratinho (Chabaud e Miossec, 2001, Arthritis Rheum. 44:1293-1303) (Lubberts et al., 2001, J. Immunol. 167:1004-1013)). Tal como previsto pela baixa afinidade de interacção entre IL-17F e IL-17R, IL-17R-FC não neutraliza a actividade de IL-17F e portanto os efeitos são específicos para antagonismo de IL-17A. Em terceiro lugar, os ratinhos isentos de IL-17A são resistentes a artrite induzida por IL-1 e apresentam supressão de artrite induzida por colagénio (Nakae et al., 2003a, J. Immunol. 171:6173-6177; Nakae et al., 2003b, anteriormente). Estes dados indicam que a sinalização IL-17A através de IL-17RA é um mediador importante de inflamação e danificação das articulações em artrite. As proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas para inibir actividade IL-17A e/ou IL-17F/IL- 17RA e portanto reduzir a inflamação e danificação de articulações em artrite.

Em artrite reumatóide, demonstraram-se níveis elevados de IL-17A maduro em soro e fluido sinovial de doentes. Em alguns estudos, demonstrou-se que os níveis de IL-17A se correlacionam com a actividade de doença e resposta a tratamento de modificação da doença. Foram medidos consistentemente níveis séricos extremamente elevados de IL-17A em artrite idiopática juvenil sistémica e em doença de Still do adulto, estritamente relacionada. W02005/063290; Cannetti et al., 2003, J. Immunol. 171:1009-1015; Charles et al., 1999, J. Immunol. 163: 1521-1528; Cunnane et al. , 2000, Online J. Rheumatol. 27 :58-63; Yoshimoto, 1998, J. Immunol. 161: 3400-3407. As proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas para inibir a actividade IL-17A e/ou IL-17F/IL-17RA e portanto tratar artrite idiopática juvenil sistémica e doença de Still do adulto. Várias outras doenças auto-imunes têm sido associadas com níveis aumentados de IL-17A quer em tecido doente, quer no soro. Estas incluem lúpus eritematoso sistémico, dermatite atópica, miastenia grave, diabetes de tipo I e sarcoidose. IL-17A pode também estar envolvido em asma GvHD. As proteínas de ligação de antigénio aqui divulgadas podem ser usadas para reduzir os efeitos da via IL-17A e/ou IL-17F/IL-17RA nestas doenças.

As proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas para reduzir a actividade de IL-17RA, compreendendo a administração de uma proteína de ligação de antigénio. Descrevem-se métodos de inibir ligação e/ou sinalização de IL-17A e/ou IL-17F a IL-17RA compreendendo proporcionar a proteína de ligação de antigénio do invento a IL-17RA. A proteína de ligação de antigénio pode inibir a ligação e/ou sinalização de IL-17A e IL-17F a IL-17RA. A proteína de ligação de antigénio pode inibir ligação e/ou sinalização de IL-17A mas não de IL-17F a IL-17RA. A proteína de ligação de antigénio pode inibir a ligação e/ou sinalização de IL-17F, mas não de IL-17A, a IL-17RA. As proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas no tratamento das consequências, sintomas e/ou patologia associada a actividade IL-17RA, compreendendo a administração de uma proteína de ligação de antigénio. As proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas para inibir a produção de uma ou mais citocinas inflamatórias, quimiocinas, metaloproteínase de matriz ou outra molécula associada a activação de IL-17RA, compreendendo administrar uma proteína de ligação de antigénio. As proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas em métodos de inibir a produção de moléculas tais como: IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL- 1 , TNF , RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP (tal como MMP3 e MMP9, não se lhes limitando), GRO , NO e/ou -Gelopéptido e semelhantes, não se lhes limitando, compreendendo administrar uma proteína de ligação de antigénio. As proteínas de ligação de antigénio inibem respostas imunitárias pró-inflamatórias e pró-auto-imunes e podem ser usadas para tratar doenças associadas a actividade da via IL-17A e/ou IL-17F/IL-17RA.

Divulgam-se anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem parcial ou completamente IL-17RA de formar um complexo de receptor funcional quer homomérico, quer heteromérico, tal como IL-17RA/IL-17RC, não se lhe limitando, e não inibem necessariamente IL-17A e/ou IL-17F ou um heterómero IL-17A/IL-17F de se ligar a IL-17RA ou um complexo de receptor heteromérico IL-17RA. Assim, os estados de doença associados a IL-17RC estão também associados a IL-17RA devido ao facto de IL-17RC não poder sinalizar sem IL-17RA. Por exemplo, consultar You, Z., et al., Cancer Res., 1 Jan 2006; 66 (1) :175-83 e You, Z., et al., Neoplasia, Jun 2007; 9 (6) :464-70. O invento proporciona as proteínas de ligação a antigénio IL-17RA do invento para uso no tratamento de doença associada a IL-17RA. As proteínas de ligação a antigénio IL-17RA podem ser para uso no tratamento de doenças incluindo inflamação, doença auto-imune, artrite, artrite reumatóide, artrite juvenil, artrite reumatóide juvenil, artrite reumatóide juvenil pauciarticular, artrite reumatóide juvenil poliarticular, artrite reumatóide juvenil sistémica, espondilite anquilosante juvenil, artrite psoriática juvenil, esclerodermia juvenil, lúpus eritematoso sistémico juvenil, artrite reumatóide pauciarticular, artrite reumatóide poliarticular, artrite reumatóide sistémica, espondilite anquilosante, dermatomiosite, artrite psoriática, esclerodermia, polimiosite, sarcoidose, psoriase, psoriase em placas, dermatite atópica, aterosclerose, lúpus eritematoso sistémico (SLE), doença intestinal inflamatória (IBD), doença de Crohn, colite ulcerativa, doença celíaca, esclerose múltipla (MS), asma, DPOC e GVHD, não se lhes limitando. 0 invento também proporciona o anticorpo do invento para uso no tratamento das doenças anteriores, compreendendo adicionalmente a administração de um segundo tratamento compreendendo uma composição farmacêutica. A segunda composição farmacêutica pode ser seleccionada do grupo que consiste de: inibidores de TNF, receptores de TNF solúvel,

Etanercept, ENBREL®, receptor de TNF solúvel do tipo I e receptor de TNF solúvel do tipo II, moléculas de receptor de TNF p75 e/ou p55 monoméricas ou multiméricas e seus fragmentos, anticorpos anti-TNF, Infliximab, REMICADE®, D2E7, ou HUMIRA®, inibidores de IL-1, inibidores de receptor de IL-1, inibidores de CD28, fármacos anti-inflamatórios não esteróides (NSAID), fármacos anti-reumáticos de acção lenta (SAARD) e fármacos anti-reumáticos de modificação de doença (DMARD). Descreve-se aqui um método de inibir a produção de pelo menos uma citocina, quimiocina, metaloproteínase de matriz ou outra molécula associada a activação de IL-17RA, compreendendo administrar o anticorpo do invento a um doente que dele necessite, em que a referida citocina, quimiocina, metaloproteínase de matriz ou outra molécula pode ser seleccionada do grupo que consiste de: IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1 , TNF , RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP3, MMP9, GRO , NO e C-telopéptido. A hepatite vírica crónica afecta mais de 500 milhões de pessoas no mundo, incluindo aproximadamente 10 milhões nos EUA e Europa com infecções de hepatite C crónica. Uma parte significativa dos doentes de hepatite crónica desenvolvem fibrose hepática progressiva e/ou carcinoma hepatocelular. Embora estejam disponíveis ou em desenvolvimento vacinas para hepatite vírica, a terapia actual para indivíduos afectados baseia-se em tratamento prolongado de combinação de fármacos antivíricos e interferão alfa (INF- ). Pensa-se que INF-é benéfico no tratamento de hepatite vírica pelas suas actividades imunológicas antivíricas aprovadas e efeitos antiproliferativos em fibroblastos, mas a duração e nível do seu uso é limitado devido a efeitos secundários graves.

Os dados recentes descrevem como INF- pode ser directamente apoptótico para células Thl7 (American

Association for Immunologists, resumo n2 42.8, 12-16 de Maio de 2006, Boston). As células Thl7 são um subconjunto distinto de células T CD4+ responsáveis pela produção de IL-17A e IL-17F em resposta a IL-23 (Harrington, et al., Nature Imm, 2005 vol. 6, no. 11, 1123-1132 e Park, et al., Nature Imm, 2005 vol. 6, no. 11, 1133-1141) . Pensamos que tal sugere um novo mecanismo de acção para INF- em hepatite vírica crónica que não envolve acção directa de INF- noívus ou fibroblastos, mas sim acções indirectas em células Thl7. Além disso, verificou-se recentemente que o factor beta de crescimento tumoral (TGF- ) e/ou IL-6, (consultar por exemplo, Kimera, A., et al., PNAS U.S.A., 17 Jul 2007; 104(29): 12099-104), ambos citocinas pró-fibróticas, também induzem o desenvolvimento de células TH17 por regulação positiva da expressão de receptor IL-23 e portanto conferem sensibilidade a IL-23 ((Mangan, et al., Nature, 2006 vol. 441 n2 11, 231-234) . A sensibilidade a IL-23 induz a diferenciação de células T CD4+ naives em células TH17. Tal como mencionado anteriormente, as células TH17 são responsáveis pela libertação de IL-17A e IL-17F e sabe-se que IL-17A tem vários efeitos de estimulação em fibroblastos em vários tecidos e órgãos. Conjuntamente, pensamos que a inibição da via IL-17RA - IL-17A/IL-17F pode proporcionar um benefício terapêutico em fibrose progressiva de hepatite vírica crónica.

Um benefício adicional de inibir a via IL-17RA - IL-17A/IL-17F no tratamento de hepatite vírica é que se pode reduzir a dose de INF- administrada ao doente e consequentemente limitar os efeitos secundários prejudiciais associados a terapia com INF- . Um benéfio adicional de inibir a via IL-17RA - IL-17A/IL-17F no tratamento de hepatite vírica é a possibilidade de conseguir um efeito terapêutico sinérgico com terapia de INF- em combição com terapia de antagonista IL-17RA - IL-17A/IL-17F ou outros antagonistas, tal como descrito em seguida mais detalhadamente.

Assim, aspectos do anticorpo do invento são dirigidos ao uso no tratamento da patologia associada a hepatite virica por inibição da interacção entre IL-17RA e IL-17A e/ou IL-17F, inibindo fibrose por inibição da interacção entre IL-17RA e IL-17A e/ou IL-17F, tratando fibrose associada a hepatite virica por inibição da interacção entre IL-17RA e IL-17A e/ou IL-17F. Podem usar-se antagonistas da via IL-17RA - IL-17A/IL-17F para inibir a interacção entre IL-17RA e IL-17A e/ou IL-17F. Os antagonistas da via IL-17RA - IL-17A incluem as proteínas de ligação a antigénio IL-17RA do invento, bem como as proteínas IL-17RA (bem como seus fragmentos e proteínas de fusão biologicamente activas, tais como proteínas de fusão IL-17RA-Fc), bem como as proteínas de ligação de antigénio, tais como anticorpos e seus fragmentos biologicamente activos, gue se ligam a IL-17A e inibem a activação de IL-17RA por IL-17A, bem como as proteínas de ligação de antigénio, tais como anticorpos e seus fragmentos biologicamente activos, gue se ligam a IL-17F e inibem a activação de IL-17RA por IL-17F.

Descrevem-se agui métodos de tratar a patologia associada a hepatite virica por antagonização da via de receptor IL-23 -IL-23 (IL-23R), métodos de inibir fibrose por antagonização da via IL-23 - IL-23R, métodos de tratar fibrose associada a hepatite virica por antagonização da via IL-23 - IL-23R. Por antagonização da via IL-23 - IL-23R, previne-se a diferenciação induzida por IL-23 das células TH17 e portanto em última análise limita-se a guantidade de IL-17A e IL-17F em circulação, gue pode reduzir a patologia associada a hepatite virica. Os antagonistas da via IL-23 - IL-23R incluem proteínas de ligação de antigénio, tais como anticorpos e seus fragmentos biologicamente activos, gue se ligam a IL-23 e bloqueiam a activação de IL-23R por IL-23. Os antagonistas adicionais da via IL-23 - IL-23R incluem proteínas de ligação de antigénio, tais como anticorpos e seus fragmentos biologicamente activos, que se ligam a IL-23R e bloqueiam a activação de IL-23E por IL-23. Os antagonistas adicionais da via IL-23 - IL-23R incluem proteínas IL-23R, bem como seus fragmentos e proteínas de fusão biologicamente activos, tais como proteínas de fusão IL-23R-FC, que se ligam a IL-23 e bloqueiam a activação de IL-23R por IL-23.

Descrevem-se aqui métodos de tratar a patologia associada a hepatite virica por antagonização da via TGF- - TGF- RI/ TGF- RII,éinodos de inibir fibrose por antagonização da via TGF- - TGF- RI/ TGF- étcDçioffi de tratar fibrose associada a hepatite virica por antagonização da via TGF- - TGF- RI/ TGF- RII. Por antagonição da via TGF- - TGF- RI/ TGF- Ri: previne-se o desenvolvimento de células TH17 induzido por TGF- e portanto em última análise limita-se a quantidade de IL-17A e IL-17F em circulação, o que pode reduzir a patologia associada a hepatite virica. Os antagonistas da via TGF-TGF- RI/ TGF- RII incluem pto&S de ligação de antigénio, tais como anticorpos e seus fragmentos biologicamente activos, que se ligam a TGF- e bloqueiam a activação de TGF- RI e/ou TGF- RII por TGF- . Os antagonistas adicionais da via TGF- TGF- RI/ TGF- RII incluem ptofis de ligação de antigénio, tais como anticorpos e seus fragmentos biologicamente activos, que se ligam a TGF- RI ou TGF- RII e bloqueiam a activação de TGF- RI ou TGF- RII por TGF-

Descrevem-se aqui métodos de tratar a patologia associada a hepatite virica por antagonização da via IL-6 - IL-6R, métodos de inibir fibrose por antagonização da via IL-6 - IL-6R, métodos de tratar fibrose associada a hepatite virica por antagonização da via IL-6 - IL-6R. Por antagonização da via IL-6 - IL-6R, pode reduzir-se a patologia associada a hepatite virica. Os antagonistas da via IL-6 - IL-6R incluem proteínas de ligação de antigénio, tais como anticorpos e seus fragmentos biologicamente activos, que se ligam a IL-6 e bloqueiam a activação de IL-6R por IL-6. Os antagonistas adicionais da via IL-6 - IL-6R incluem proteínas de ligação de antigénio, tais como anticorpos e seus fragmentos biologicamente activos, que se ligam a IL-6R e bloqueiam a activação de IL-6R por IL-6.

Descreve-se aqui uma terapia de combinação usando os antagonistas da via IL-17RA - IL-17A/IL-17F, da via IL-23 -IL-23R, da via TGF- - TGF- RI/ TGF- RII e/ou da via IL-6 IL-6R mencionadas anteriormente em combinação entre si, bem como em combinação com terapias para a hepatite reconhecidas na especialidade, tal como interferão e em particular INF- , não se lhe limitando. Abrangem-se todas as permutações destas combinações.

Descreve-se aqui uma terapia de combinação usando os antagonistas da via IL-17RA - IL-17A/IL-17F, da via IL-23 -IL-23R, da via TGF- - TGF- RI/ TGF- RII e/ou da via IL-6 IL-6R mencionadas anteriormente em combinação entre si, bem como em combinação com terapias para a hepatite reconhecidas na especialidade, tal como interferão e em particular INF- , não se lhe limitando, bem como com agentes antiviricos, tais como Adefovir dipivoxil, análogos aciclicos de desoxiadenosina monofosfato (Adefovir, Tenofovir disoproxilfumarato), enantiómero (-) do análogo desoxicitidina 2' -desoxi-3' -tiacitidina (Lamivudina), análogos carbociclicos de desoxiguanosina (Entecavir) , L-nucleósidos (S>-L-2r - desoxitimidina, B-L-2' -desoxicitidina e &-L-2' - desoxiadenosina), [ ( —)—β — 2' ,3' -didesoxi-5-fluoro-3' - tiacitidina] (Emtricitabina), Ι-β-2,6-diaminopurina dioxalano (DAPD, amdoxovir) , 2' -fluoro-5-metϋ-β-L- arabinofuranosiluridina (L-FMAU, clevudina), Famciclovir e/ou Penciclovir, não se lhes limitando. Abrangem-se todas as permutações destas combinações. Métodos de diagnóstico

As proteínas de ligação de antigénio aqui descritas podem ser usadas para objectivos de diagnóstico para detectar, diagnosticar ou monitorizar doenças e/ou condições associadas a IL-17A ou IL-17RA. 0 invento proporciona a detecção da presença de IL-17RA numa amostra usando métodos imuno-histoquímicos clássicos conhecidos dos peritos na especialidade (e.g., Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, vol. 15 (Ed. R. H. Burdon e P. H. van Knippenberg, Elsevier, Amsterdão); Zola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, p. 147-158 (CRC Press,

Inc.); Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol. 101:976-985; Jalkanen et al. , 1987, J. Cell. Biol. 105:3087-3096) . A detecção de IL-17RA pode ser efectuada in vivo ou in vitro.

As aplicações de diagnóstico aqui descritas incluem o uso das proteínas de ligação de antigénio para detectar a expressão de IL-17RA e ligação dos ligandos a IL-17RA. Os exemplos de métodos úteis na detecção da presença de IL-17RA incluem imuno-ensaios, tais como o ensaio de imuno-absorção enzimática (ELISA) e o rádio-imuno-ensaio (RIA).

Para aplicações de diagnóstico, a proteína de ligação de antigénio será tipicamente marcada com um grupo de marcação detectável. Os grupos de marcação adequados incluem os seguintes: radioisótopos ou radionuclídeos (e. g., 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, "Tc, 311In, 125I, 131I), grupos fluorescentes (e.g., FITC, rodamina, fósforos de lantanideos), grupos enzimáticos (e.g., peroxidase de rábano, galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina), grupos quimioluminescentes, grupos biotinilo ou epítopos de polipéptido pré-determinados reconhecidos por um repórter secundário (e.g., sequências de par de cremalheira de leucina, locais de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metal, marcadores de epítopo), não se lhes limitando. Em algumas concretizações, o grupo de marcação está acoplado à proteína de ligação de antigénio através de braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o potencial impedimento estérico. São conhecidos na especialidade vários métodos para marcar proteínas e podem ser usados na prática do presente invento.

Descreve-se aqui um método para identificar uma célula ou células que expressam IL-17RA. A proteína de ligação de antigénio está marcada com um grupo de marcação e detecta-se a proteína de ligação de antigénio marcada a IL-17RA. A ligação da proteína de ligação de antigénio a IL-17RA pode ser detectada in vivo. A proteína de ligação de antigénio-IL-17RA é isolada e medida usando técnicas conhecidas na especialidade. Consultar, por exemplo, Harlow e Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor (ed. 1991 e suplementos periódicos); John E. Coligan, ed., 1993, Current Protocols In Immunology New York: John Wiley &

Sons .

Descreve-se aqui um método para detectar a presença de uma molécula de ensaio que compete para a ligação a IL-17RA com as proteínas de ligação de antigénio do invento. Um exemplo de tal ensaio envolveria a detecção da quantidade de proteína de ligação de antigénio livre numa solução contendo uma quantidade de IL-17RA na presença ou ausência da molécula de ensaio. Um aumento da quantidade de proteína de ligação de antigénio livre (i.e., a proteína de ligação de antigénio não ligada a IL-17RA) indicaria que a molécula de ensaio é capaz de competir para ligação a IL-17RA com a proteína de ligação de antigénio. A proteína de ligação de antigénio está marcada com um grupo de marcação. Alternativamente, a molécula de ensaio está marcada e a quantidade de molécula de ensaio livre é monitorizada na presença e ausência de uma proteína de ligação de antigénio.

Descreve-se aqui o uso da proteína de ligação a antigénio IL-17RA em ensaios in vitro para objectivos de investigação, tais como para inibir a produção de moléculas tais como: IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1 , TNF , RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP (tais como MMP3 e MMP 9, não se lhes limitando), GRO , NO e/ou C-telopéptido e semelhantes, não se lhes limitando. Podem usar-se anticorpos dirigidos contra um IL-17RA, por exemplo, na purificação de proteínas IL-17RA por cromatografia de imuno-afinidade. Métodos de tratamento: formulações farmacêuticas, vias de administração

Em algumas concretizações, o invento proporciona composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ou várias proteínas de ligação de antigénio do invento conjuntamente com um diluente, transportador, solubilizante, emulsionante, conservante e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável. Adicionalmente, o invento proporciona métodos de tratar um doente por administração de tal composição farmacêutica. A expressão "doente" inclui indivíduos humanos e animais.

Podem usar-se composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais proteínas de ligação de antigénio para reduzir a actividade de IL-17RA. As composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas no tratamento das consequências, sintomas e/ou patologia associadas a actividade de IL-17RA. As composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas em métodos de inibir a ligação e/ou sinalização de IL-17A e/ou IL-17F a IL-17RA compreendendo proporcionar a proteína de ligação de antigénio do invento a IL-17RA. Em determinadas concretizações, a proteína de ligação de antigénio inibe a ligação e/ou sinalização de IL-17A e IL-17F a IL-17RA. As composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas em métodos de inibir a ligação e/ou sinalização de IL-17A, mas não de IL-17F, a IL-17RA. As composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas em métodos de inibir a ligação e/ou sinalização de IL-17F e não de IL-17A a IL-17RA. Os aspectos do invento incluem anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem a ligação e activação de IL-17RA ou de um complexo heteromérico de IL-17RA e IL-17RC por IL-17A e/ou IL-17F. Os aspectos do invento incluem anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem a ligação e activação de IL-17RA ou de um complexo heteromérico de IL-17RA e IL-17RC pelo heterómero IL-17A/IL-17F. Ao longo do fascículo, quando se faz referência a inibir IL-17A e/ou IL-17F, deve entender-se que tal também inclui inibir heterómeros de IL-17A e IL-17F. Os aspectos do invento incluem anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem parcial ou completamente IL-17RA de formar um complexo receptor funcional quer homomérico, quer heteromérico, tal como o complexo IL-17RA-IL-17RC, não se lhe limitando. Os aspectos do invento incluem anticorpos que se ligam especificamente a IL-17RA humano e inibem parcial ou completamente IL-17RA de formar um complexo receptor funcional quer homomérico, quer heteromérico, tal como o complexo IL-17RA/IL-17RC, não se lhe limitando, e não inibem necessariamente IL-17A e/ou IL-17F ou um heterómero IL-17A/IL-17F de se ligar a IL-17RA ou a um complexo receptor heteromérico IL-17RA.

As composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais proteínas de ligação de antigénio do invento podem ser usadas no tratamento das consequências, sintomas e/ou patologia associadas a actividade IL-17RA. As composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas na inibição da produção de um ou mais de citocina inflamatória, quimiocina, metaloproteínase de matriz ou outra molécula associada a activação de IL-17RA, compreendendo administrar uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA. As composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais proteínas de ligação de antigénio podem ser usadas em métodos de inibir a produção de IL-6, IL-8, GM-CSF, NO, MMP, PGE2 RANKL e/ou C-telopéptido e semelhantes.

As composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais proteínas de ligação de antigénio do invento podem ser usadas para tratar doenças e condições incluindo inflamação, doença auto-imune, artrite, artrite reumatóide, artrite juvenil, artrite reumatóide juvenil, artrite reumatóide juvenil pauciarticular, artrite reumatóide juvenil poliarticular, artrite reumatóide juvenil sistémica, espondilite anquilosante juvenil, artrite psoriática juvenil, esclerodermia juvenil, lúpus eritematoso sistémico juvenil, artrite reumatóide pauciarticular, artrite reumatóide poliarticular, artrite reumatóide sistémica, espondilite anquilosante, dermatomiosite, artrite psoriática, esclerodermia, polimiosite, sarcoidose, psoríase, psoríase de placas, dermatite atópica, aterosclerose, lúpus eritematoso sistémico (SLE), doença intestinal inflamatória (IBD), doença de Crohn, colite ulcerativa, doença celíaca, esclerose múltipla (MS) , asma, DPOC e GVHD, não se lhes limitando.

De preferência, os materiais de formulação aceitáveis são não tóxicos para os recebedores nas dosagens e concentrações utilizadas. Em concretizações específicas, proporcionam-se composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de proteína de ligação a antigénio IL-17RA do invento.

Os materiais de formulação aceitáveis de preferência são não tóxicos para os recebedores nas dosagens e concentrações utilizadas. Em determinadas concretizações, a composição farmacêutica pode conter materiais de formulação para modificar, manter ou conservar, por exemplo, o pH, osmolaridade, viscosidade, clareza, cor, isotonicidade, odor, esterilidade, estabilidade, taxa de dissolução ou libertação, adsorção ou penetração da composição. Em tais concretizações, os materiais de formulação adequados incluem aminoácidos (tais como glicina, glutamina, asparagina, arginina ou lisina); antimicrobianos; antioxidantes (tais como ácido ascórbico, sulfito de sódio ou hidrogenossulfito de sódio); tampões (tais como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos ou outros ácidos orgânicos); agentes de enchimento (tais como manitol ou glicina); agentes quelantes (tais como ácido etilenodiaminatetra-acético (EDTA)) ; agentes complexantes (tais como cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina ou hidroxipropil-beta-ciclodextrina); agentes de carga; monossacáridos; dissacáridos; e outros hidratos de carbono (tais como glicose, manose ou dextrinas); proteínas (tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas) ; corantes, aromatizantes e agentes de diluição; agentes emulsionantes; polímeros hidrofílicos (tais como polivinilpirrolidona) ; polipéptidos de baixo peso molecular; contra-iões formadores de sais (tais como sódio); conservantes (tais como cloreto de benzalcónio, ácido benzóico, ácido salicílico, timerosal, álcool fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, cloro-hexidina, ácido sórbico ou peróxido de hidrogénio) ; solventes (tais como glicerina, propilenoglicol ou polietilenoglicol); álcoois de açúcar (tais como manitol ou sorbitol); agentes de suspensão; tensioactivos ou agentes humidificantes (tais como plurónicos, PEG, ésteres de sorbitano, polissorbatos tais como polissorbato 20, polissorbato, triton, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal); agentes de melhoramento de estabilidade (tais como sacarose ou sorbitol); agentes de melhoramento de tonicidade (tais como halogenetos de metais alcalinos, de preferência cloreto de sódio ou potássio, manitol sorbitol); veículos de entrega; diluentes; excipientes e/ou adjuvantes farmacêuticos, não se lhes limitando. Consultar, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18a edição, (A.R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company. A composição farmacêutica óptima será determinada por um perito na especialidade dependendo, por exemplo, da via de administração pretendida, formato de entrega e dosagem pretendida. Consultar, por exemplo, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, anteriormente. Tais composições podem influenciar o estado físico, estabilidade, taxa de libertação in vivo e taxa de depuração in vivo das proteínas de ligação de antigénio do invento. O veículo ou transportador primário numa composição farmacêutica pode ser de natureza aquosa ou não aquosa. Por exemplo, um veículo ou transportador adequado pode ser água para injecção, soro fisiológico ou fluido cefalorraquidiano artificial, possivelmente suplementado com outros materiais comuns em composições para administração parentérica. São exemplos adicionais de veículos soro fisiológico tamponado neutro ou soro fisiológico misturado com albumina sérica. As composições farmacêuticas podem compreender tampão Tris de pH de cerca de 7,0-8,5 ou tampão de acetato de pH de cerca de 4,0-5,5 e podem incluir adicionalmente sorbitol ou um seu substituto adequado. As composições de proteína de ligação a antigénio IL-17RA podem ser preparadas para armazenamento por mistura da composição seleccionada com o grau de pureza pretendido com agentes de formulação opcionais (REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, anteriormente) sob a forma de um bolo liofilizado ou de uma solução aquosa. Adicionalmente, o produto de proteína de ligação a antigénio IL-17RA pode ser formulado como um liofilizado usando excipientes adequados, tal como sacarose.

As composições farmacêuticas do invento podem ser seleccionadas para entrega parentérica. Alternativamente as composições podem ser seleccionadas para inalação ou para entrega através do tracto digestivo, tal como oralmente. A preparação de tais composições farmaceuticamente aceitáveis está no âmbito da perícia da especialidade.

Os componentes da formulação estão de preferência presentes em concentrações que são aceitáveis para o local de administração. Em determinadas concretizações, são usados tampões para manter a composição a pH fisiológico ou a um pH ligeiramente mais baixo, tipicamente numa gama de pH de cerca de 5 a cerca de 8.

Quando se prevê administração parentérica, as composições terapêuticas para uso neste invento podem ser proporcionadas sob a forma de uma solução aquosa isenta de pirogénios, parentericamente aceitável compreendendo a proteína de ligação a antigénio IL-17RA pretendida num veículo farmaceuticamente aceitável. Um veículo particularmente adequado para injecção parentérica é água destilada estéril na qual a proteína de ligação a antigénio IL-17RA é formulada como uma solução estéril, isotónica, adequadamente conservada. A preparação pode envolver a formulação da molécula pretendida com um agente, tal como microesferas injectáveis, partículas bio-erodíveis, compostos poliméricos (tal como ácido poliláctico ou ácido poliglicólico), pérolas ou lipossomas, que podem proporcionar libertação controlada ou prolongada do produto que pode ser entregue através de uma injecção depot. Em determinadas concretizações, pode também usar-se ácido hialurónico, com o efeito de promover duração prolongada em circulação. Podem ser usados dispositivos de entrega de fármaco implantáveis para introduzir a proteína de ligação de antigénio pretendida.

As composições farmacêuticas do invento podem ser formuladas para inalação. Nestas concretizações, as proteínas de ligação a antigénio IL-17RA são formuladas vantajosamente como um pó seco inalável. As soluções para inalação de proteína de ligação a antigénio IL-17RA também podem ser formuladas com um propulsor para entrega como aerossol. As soluções podem ser nebulizadas. A administração pulmonar e seus métodos de formulação são descritos adicionalmente em pedido de patente internacional publicado como W01994/020069, que descreve a entrega pulmonar de proteínas modificadas quimicamente. Também se abrange que as formulações podem ser administradas oralmente. As proteínas de ligação a antigénio IL-17RA que são administradas desta forma podem ser formuladas com ou sem transportadores vulgarmente usados na composição de formas de dosagem sólidas, tais como comprimidos e cápsulas. Em determinadas concretizações, pode conceber-se uma cápsula para libertar a parte activa da formulação no ponto do tracto gastrointestinal em que a biodisponibilidade é maximizada e a degradação pré-sistémica é minimizada. Podem incluir-se agentes adicionais para facilitar a absorção da proteína de ligação a antigénio IL-17RA. Podem também usar-se diluentes, aromatizantes, ceras de baixo ponto de fusão, óleos vegetais, lubrificantes, agentes de suspensão, agentes de desintegração de comprimidos e aglutinantes.

Uma composição farmacêutica do invento é de preferência proporcionada para compreender uma quantidade eficaz de uma ou várias proteínas de ligação a antigénio IL-17RA numa mistura com excipientes não tóxicos que são adequados para o fabrico de comprimidos. Por dissolução dos comprimidos em água estéril ou outro veículo adequado, podem preparar-se soluções em forma de dose unitária. Os excipientes adequados incluem diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato ou bicarbonato de sódio, lactose ou fosfato de cálcio; ou agentes de ligação, tais como amido, gelatina, ou goma arábica; ou agentes lubrificantes tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco, não se lhes limitando.

Serão evidentes para os peritos na especialidade, composições farmacêuticas adicionais incluindo formulações envolvendo proteínas de ligação a antigénio IL-17RA em formulações de entrega prolongada ou controlada. As técnicas para formular uma variedade de outros meios de entrega prolongada ou controlada, tais como transportadores de lipossoma, partículas bio-erodíveis ou pérolas porosas e injecções depot, são também conhecidas dos peritos na especialidade. Consultar, por exemplo, pedido de patente internacional publicado como W01993/015722, que descreve a libertação controlada de micropartícuias poliméricas porosas para entrega das composições farmacêuticas. As preparações de libertação prolongada podem incluir matrizes poliméricas semipermeáveis sob a forma de artigos enformados, e.g., filmes ou microcápsulas. As matrizes de libertação prolongada podem incluir poliésteres, hidrogéis, polilactídeos (tal como divulgado em patente U.S. N2 3 773 919 e publicação de pedido de patente europeia N2 EP 058481), copolímeros de ácido L-glutâmico e gama etil-L-glutamato ('Sidman et al. , 1983, Biopolymers 2:547-556), poli(2-hidroxietil-inetacrilato) (Langer et al. , 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 e Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105), acetato de etilenovinilo (Langer et al., 1981, anteriormentej ou poli-ácido D (-)-3-hidroxibutírico (publicação de pedido de patente europeia N2 EP 133 988) . As composições de libertação controlada podem também incluir lipossomas que podem ser preparados por qualquer de vários métodos conhecidos na especialidade. Consultar, e.g., Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 82:3688-3692; publicações de pedido de patente europeia N2 EP 036 676; EP 088 046 e EP 143 949.

As composições farmacêuticas usadas para administração in vivo são tipicamente proporcionadas como preparações estéreis. A esterilização pode ser obtida por filtração através de membranas de filtração estéril. Quando a composição é liofilizada, a esterilização usando este método pode ser efectuada antes ou depois de liofilização e reconstituição. As composições para administração parentérica podem ser armazenada sob a forma liofilizada ou numa solução. As composições parentéricas são colocadas geralmente num recipiente com uma entrada de acesso estéril, por exemplo, um saco de solução intravenosa ou um frasquinho com tampa perfurável com uma agulha de injecção hipodérmica.

Descrevem-se aqui formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas que podem ser usadas como composições farmacêuticas, tal como descrito no pedido de patente internacional publicado como W02006/138181. Descrevem-se aqui formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA nas quais a concentração de sal total é inferior a 150 mM.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas que compreendem adicionalmente uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA e um ou mais polióis e/ou um ou mais tensioactivos. As formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas podem compreender uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA, nas quais a concentração total de sal é inferior a 150 mM, que compreendem adicionalmente um ou mais excipientes incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis; agentes de equilíbrio osmótico (agentes de tonicidade); tensioactivos, polióis, antioxidantes; antibióticos; antimicóticos; agentes de enchimento; lioprotectores; agentes anti-espuma; agentes quelantes; conservantes; corantes; e analgésicos, não se lhes limitando. As formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas podem compreender uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA e um ou mais outros agentes farmaceuticamente activos.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA do invento em que a proteína de ligação a antigénio IL-17RA tem uma capacidade tampão por unidade de volume por unidade de pH de pelo menos a de tampão de acetato de sódio em água pura aproximadamente: 2,0 ou 3,0 ou 4,0 ou 5,0 ou 6,50 ou 8,00 ou 10,0 ou 15,0 ou 20,0 ou 30,0 ou 40,0 ou 50,0 ou 75,0 ou 100 ou 125 ou 150 ou 200 ou 250 ou 300 ou 350 ou 400 ou 500 ou 700 ou 1000 ou 1500 ou 2000 ou 2500 ou 3000 ou 4000 ou 5000 mM na gama de pH de 5,0 a 4,0 ou pH 5,0 a 5,5, ou pelo menos 2,0 mM, ou pelo menos 3,0 mM, ou pelo menos 4,0 mM ou pelo menos 5,0 mM, ou pelo menos 7,5 mM, ou pelo menos 10 mM ou pelo menos 20 mM.

Descrevem-se aqui formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas em que, além da capacidade tampão da proteína, a capacidade tampão por unidade de volume por unidade de pH pode ser igual ou inferior à de um tampão de acetato de sódio em água pura 1,0 ou 1,5 ou 2,0 ou 3,0 ou 4,0 ou 5,0 mM na gama de pH 4,0 a 5,0 ou pH 5,0 a 5,5, ou opcionalmente inferior à de 1,0 mM, opcionalmente inferior à de 2,0 mM, opcionalmente inferior à de 2,5 mM, opcionalmente inferior à de 3,0 mM e opcionalmente inferior à de 5,0 mM.

Descrevem-se aqui formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA do invento em que na gama de mais ou menos 1 unidade de pH do pH da formulação, a capacidade tampão da proteína de ligação a antigénio IL-17RA é pelo menos aproximadamente: 1,00 ou 1,50 ou 1,63 ou 2,00 ou 3.00 ou 4,00 ou 5,00 ou 6,50 ou 8,00 ou 10,0 ou 15,0 ou 20,0 ou 30,0 ou 40,0 ou 50,0 ou 75,0 ou 100 ou 125 ou 150 ou 200 ou 250 ou 300 ou 350 ou 400 ou 500 ou 700 ou 1000 ou 1500 ou 2000 ou 2500 ou 3000 ou 4000 ou 5000 mEq por litro por unidade de pH, opcionalmente pelo menos aproximadamente 1,00, opcionalmente pelo menos aproximadamente 1,50, opcionalmente pelo menos aproximadamente 1,63, opcionalmente pelo menos aproximadamente 2,00, opcionalmente pelo menos aproximadamente 3,00, opcionalmente pelo menos aproximadamente 5,0, opcionalmente pelo menos aproximadamente 10,0 e opcionalmente pelo menos aproximadamente 20,0. São aqui descritas formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA, em que na gama de mais ou menos 1 unidade de pH do pH da formulação, além da proteína de ligação a antigénio IL-17RA, a capacidade tampão por unidade de volume por unidade de pH é igual ou inferior à de tampão acetato de sódio em água pura 0,50 ou 1,00 ou 1,50 ou 2,00 ou 3,00 ou 4,00 ou 5,00 ou 6,50 ou 8,00 ou 10,0 ou 20,0 ou 25,0 mM na gama de pH 5,0 a 4.0 ou pH 5,0 a 5,5.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA, em que na gama de mais ou menos 1 unidade de pH do pH pretendido, a proteína proporciona pelo menos aproximadamente 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ou 99,5% da capacidade tampão da formulação, opcionalmente pelo menos aproximadamente 75%, opcionalmente pelo menos aproximadamente 85%, opcionalmente pelo menos aproximadamente 90%, opcionalmente pelo menos aproximadamente 95%, opcionalmente pelo menos aproximadamente 99% da capacidade tampão da formulação.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA, em que a concentração da proteína de ligação a antigénio IL-17RA está entre aproximadamente: 20 e 400, ou 20 e 300, ou 20 e 250, ou 20 e 200, ou 20 e 150 mg/ml, opcionalmente entre aproximadamente 20 e 400 mg/ml, opcionalmente entre aproximadamente 20 e 250 e opcionalmente entre aproximadamente 20 e 150 mg/ml.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA em que o pH mantido pela acção de tamponação da proteína de ligação a antigénio IL-17RA está entre aproximadamente: 3,5 e 8,0, ou 4,0 e 6,0, ou 4,0 e 5,5, ou 4,0 e 5,0, opcionalmente entre aproximadamente 3,5 e 8,0 e opcionalmente entre aproximadamente 4,0 e 5,5.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA em que a concentração de sal é inferior a: 150 mM ou 125 mM ou 100 mM ou 75 mM ou 50 mM ou 25 mM, opcionalmente 150 mM, opcionalmente 125 mM, opcionalmente 100 mM, opcionalmente 75 mM, opcionalmente 50 mM e opcionalmente 25 mM.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA e um ou mais sais; polióis; tensioactivos; agentes de equilíbrio osmótico; agentes de tonicidade; antioxidantes; antibióticos; antimicóticos; agentes de enchimento; lioprotectores; agentes anti-espuma; agentes quelantes; conservantes; corantes; analgésicos; ou agentes farmacêuticos adicionais, farmaceuticamente aceitáveis.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA e um ou mais polióis farmaceuticamente aceitáveis numa quantidade que é hipotónica, isotónica ou hipertónica, de preferência aproximadamente isotónica, particularmente de preferência isotónica, tais como qualquer um ou mais de sorbitol, manitol, sacarose, trehalose, ou glicerol, opcionalmente aproximadamente sorbitol a 5%, manitol a 5%, sacarose a 9%, tre-halose a 9% ou glicerol a 2,5%, não se lhes limitando.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA, compreendendo adicionalmente um tensioactivo, de preferência um ou mais de polissorbato 20, polissorbato 80, outros ésteres de ácido gordo de sorbitano, polietoxilatos e poloxâmero 188, de preferência polissorbato 20 ou polissorbato 80, opcionalmente polissorbato 20 ou polissorbato 80 aproximadamente a 0,001 a 0,1%, opcionalmente polissorbato 20 ou polissorbato 80 a aproximadamente 0,002 a 0,02% ou opcionalmente polissorbato 20 ou polissorbato 80 a 0,002 a 0,02%.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA, em que a formulação é estéril e adequada para tratamento de um indivíduo humano ou não humano.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA e um solvente, em que a proteína de ligação a antigénio IL-17RA tem uma capacidade tampão por unidade de volume por unidade de pH de pelo menos a de acetato de sódio 4,0 mM em água na gama de pH 4,0 a 5,0 ou pH 5,0 a 5,5, em que a capacidade tampão por unidade de volume da formulação além da proteína de ligação a antigénio IL-17RA é igual ou inferior à de acetato de sódio 2,0 mM em água nas mesmas gamas, de preferência determinadas da mesma forma.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA e um solvente em que, ao pH da formulação, a capacidade tampão da proteína é pelo menos 1,63 mEq por litro para uma variação de pH da formulação de mais ou menos 1 unidade de pH, em que a capacidade tampão da formulação além da proteína é igual ou inferior a 0,81 mEq por litro ao pH da formulação para uma variação de pH de mais ou menos 1 unidade de pH.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas compreendendo uma proteína de ligação a antigénio IL-17RA, em que a formulação está sob a forma de um liofilizado que, após reconstituição, proporciona uma formulação de acordo com o anterior ou o seguinte.

Descrevem-se formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas num kit compreendendo um ou mais frasquinhos, contendo uma formulação de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponada ou um liofilizado de formulação de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponada, de acordo com o anterior ou o seguinte, e instruções para o seu uso.

Descreve-se um processo de preparar uma formulação de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponada ou um seu liofilizado de acordo com qualquer do anterior ou seguinte, compreendendo remover tampão residual usando um contra-ião.

Descreve-se um processo de preparar uma formulação de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponada ou um seu liofilizado de acordo com qualquer do anterior ou seguinte, compreendendo remover tampão residual usando qualquer de um ou mais dos seguintes na presença de um contra-ião: cromatografia, diálise e/ou filtração de fluxo tangencial.

Descreve-se um processo de preparar uma formulação de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponada ou um seu liofilizado de acordo com gualguer do anterior ou seguinte, compreendendo remover tampão residual usando filtração de fluxo tangencial.

Descreve-se um processo de preparar uma formulação de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponada ou um seu liofilizado de acordo com gualguer do anterior ou seguinte compreendendo uma etapa de diálise contra uma solução a um pH inferior ao da preparação e seguidamente, caso necessário, ajuste do pH por adição de ácido diluído ou base diluída.

Tal como discutido anteriormente, determinadas composições de proteína, de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas, particularmente composições farmacêuticas de proteína de ligação a antigénio IL-17RA, gue compreendem, além da proteína de ligação a antigénio IL-17RA, um ou mais excipientes, tais como os descritos ilustrativamente nesta secção e agui noutras secções. Os excipientes podem ser usados no invento relativamente a uma vasta gama de objectivos, tais como ajuste das propriedades físicas, guímicas ou biológicas das formulações, tais como ajuste da viscosidade e ou processos do invento gue melhoram a eficácia e ou estabilizam tais formulações e processos contra degradação e deterioração, por exemplo, devido a stress gue ocorre durante o fabrico, transporte, armazenamento, preparação pré-uso, administração e seguidamente.

Estão disponíveis várias exposições sobre estabilização de proteínas e materiais de formulação e métodos úteis a este respeito, tais como Arakawa et al., "Solvent interactions in pharmaceutical formulations", Pharm Res. 8(3): 285-91 (1991); Kendrick et al. , "Physical stabilization of proteins in agueous solution" em: RATIONAL DESIGN OF STABLE PROTEIN FORMULATIONS: THEORY AND PRACTICE, Carpenter e Manning, ed. Pharmaceutical Biotechnology. 13: 61-84 (2002) e Randolph et al., "Surfactant-protein interactions", Pharm Biotechnol. 13: 159-75 (2002), particularmente em partes relativas a excipientes e processos dos mesmos para formulações de proteína auto-tamponadas de acordo com o presente invento, especialmente para produtos farmacêuticos de proteína e processos para uso em medicina veterinária e/ou humana.

Listam-se na tabela 3 vários excipientes úteis no invento e seguidamente descrevem-se adicionalmente.

Os sais podem ser usados de acordo com determinadas concretizações do invento, por exemplo, para ajustar a força iónica e/ou a isotonicidade de uma formulação auto-tamponada e/ou para melhorar a solubilidade e/ou estabilidade física de uma proteína auto-tamponada ou outro ingrediente de uma composição de proteína auto-tamponada de acordo com o invento.

Tal como é bem conhecido, os iões podem estabilizar o estado nativo de proteínas por ligação a resíduos carregados na superfície da proteína e por blindagem de grupos carregados e polares na proteína e reduzir a força das suas interacções electrostáticas, interacções atractivas e repulsivas. Os iões podem também estabilizar o estado desnaturado de uma proteína por ligação, em particular, a ligações peptídicas desnaturadas (-CONH) da proteína. Além disso, a interacção iónica com grupos carregados e polares numa proteína também pode reduzir as interacções electrostáticas intermoleculares e assim prevenir ou reduzir a agregação e insolubilidade da proteína.

As espécies iónicas diferem significativamente nos seus efeitos nas proteínas. Foram desenvolvidas várias classificações de iões por categorias e os seus efeitos nas proteínas que podem ser usadas na formulação de composições de proteína auto-tamponadas de acordo com o invento. Um exemplo é a série de Hofmeister, que categoriza solutos iónicos e não iónicos polares pelo seu efeito na estabilidade conformacional de proteínas em solução. Os solutos estabilizantes são denominados "cosmotrópicos". Os solutos desestabilizantes são denominados caotrópicos. Os agentes cosmotrópicos são normalmente usados em concentrações elevadas (e.g., sulfato de amónio >1 molar) para precipitar proteínas de solução ("salting-out") . Os agentes caotrópicos são normalmente utilizados para desnaturar e/ou para solubilizar proteínas ("salting-in") . A eficácia relativa de iões para "salt-in" e "salt-out" define a sua posição na série de Hofmeister.

Além das suas utilizações e das suas desvantagens (tal como discutido anteriormente) os sais são também eficazes para reduzir a viscosidade de formulações de proteína e podem ser usados no invento para esse fim.

De modo a manter a isotonicidade numa formulação parentérica de acordo com concretizações preferidas do invento, melhorar a solubilidade e/ou estabilidade da proteína, melhorar as características de viscosidade, evitar efeitos prejudiciais de sais na estabilidade e agregação da proteína e evitar degradação da proteína mediada por sal, a concentração de sal em formulações auto-tamponadas de acordo com várias concretizações preferidas do invento é inferior a cerca de 150 mM (como iões monovalentes) e 150 mEq/litro para iões multivalentes. A este respeito, em determinadas concretizações do invento particularmente preferidas, a concentração total de sal é desde cerca de 75 mEq/L a cerca de 140 mEq/L.

Podem usar-se aminoácidos livres em formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas de acordo com várias concretizações do invento como agentes de enchimento, estabilizantes e antioxidantes, bem como outros usos padrão. No entanto, os aminoácidos incluídos nas formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas não proporcionam acção de tamponação. Por este motivo, os que têm capacidade de tamponação significativa ou não são usados ou não são usados a qualquer pH próximo do pH a que têm actividade de tamponação significativa ou são usados a baixa concentração, de modo que consequentemente a sua capacidade de tamponação na formulação não é significativa. Tal é particularmente o caso para histidina e outros aminoácidos que são usados vulgarmente como tampões em formulações farmacêuticas.

Desde que satisfaçam as considerações anteriores, podem usar-se lisina, prolina, serina e alanina para estabilizar proteínas numa formulação. A glicina é útil na liofilização para assegurar uma estrutura e propriedades correctas do bolo. A arginina pode ser útil para inibir agregação de proteína, tanto em formulações líquidas, como liofilizadas. A metionina é útil como um antioxidante.

Os polióis incluem açúcares, e.g., manitol, sacarose e sorbitol e álcoois poli-hídricos tais como, por exemplo, glicerol e propilenoglicol e, para os objectivos da presente discussão, polietilenoglicol (PEG) e substâncias relacionadas. Os polióis são cosmotrópicos. São agentes de estabilização úteis tanto para formulações líquidas, como liofilizadas para proteger proteínas de processos de degradação físicos e químicos. Os polióis são também úteis para ajustar a tonicidade de formulações.

Entre os polióis úteis em concretizações seleccionadas do invento está o manitol, usado vulgarmente para assegurar a estabilidade estrutural do bolo em formulações liofilizadas. Este assegura estabilidade estrutural ao bolo. É usado geralmente com um lioprotector, e.g., sacarose. 0 sorbitol e a sacarose estão entre os agentes preferidos para ajustar a tonicidade e como estabilizantes para proteger contra o stress de congelamento-descongelamento durante transporte ou preparação de lotes durante o processo de fabrico. Os açúcares redutores (que contêm grupos aldeído ou cetona livres), tais como glucose e lactose, podem glicar resíduos superficiais de lisina e arginina. Assim, geralmente não estão entre os polióis preferidos para uso de acordo com o invento. Além disso, os açúcares que formam tais espécies reactivas, tais como sacarose, que são hidrolisados a frutose e glucose em condições acídicas e consequentemente geram glicação, também não estão entre os aminoácidos preferidos do invento a este respeito. PEG é útil para estabilizar proteínas e como um crioprotector e pode ser usado no invento com esta função, tal como se encontra em Recombinate®.

As formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas podem compreender adicionalmente tensioactivos. As moléculas de proteína podem ser susceptíveis de adsorção a superfícies e a desnaturação e consequente agregação nas interfases ar-líquido, sólido-líquido e líquido-líquido. Estes efeitos geralmente escalam inversamente à concentração de proteína. Estas interacções prejudiciais geralmente escalam inversamente à concentração de proteína e tipicamente são exacerbadas por agitação física, tal como a gerada durante transporte e armazenamento de um produto.

Os tensioactivos são usados rotineiramente para evitar, minimizar ou reduzir adsorção superficial. A este respeito, os tensioactivos úteis no invento incluem polissorbato 20, polissorbato 80, outros ésteres de ácido gordo de sorbitano polietoxilatos e poloxâmero 188.

Os tensioactivos são também usados vulgarmente para controlar a estabilidade conformacional da proteína. A este respeito, o uso de tensioactivos é específico da proteína, dado que qualquer determinado tensioactivo estabilizará tipicamente algumas proteínas e desestabilizará outras.

Os polissorbatos são susceptíveis de sofrerem degradação oxidativa e frequentemente são fornecidos com quantidades suficientes de peróxidos para causar oxidação de cadeias laterais de resíduos de proteína, especialmente metionina. Consequentemente, os polissorbatos devem ser usados cuidadosamente e, quando usados, devem ser utilizados à sua concentração eficaz mais baixa. A este respeito, os polissorbatos exemplificam a regra geral que os excipientes devem ser usados nas suas concentrações eficazes mais baixas.

As formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas podem compreender adicionalmente um ou mais antioxidantes. A oxidação prejudicial de proteínas em formulações farmacêuticas pode ser evitada em parte mantendo níveis adequadamente baixos de oxigénio ambiental e temperatura e evitando a exposição à luz. Podem também ser usados excipientes antioxidantes para evitar a degradação oxidativa de proteínas. Neste âmbito, entre os antioxidantes úteis encontram-se os agentes redutores, armadilhas de oxigénio/radicais livres e agentes quelantes. Os antioxidantes para uso em formulações terapêuticas de proteína de acordo com o invento são de preferência solúveis em água e mantêm a sua actividade ao longo do tempo de validade de um produto. A este respeito, EDTA é um antioxidante preferido de acordo com o invento e pode ser usado no invento praticamente da mesma forma como foi usado em formulações de factor de crescimento de fibroblasto acídico e em produtos tais como Kineret® e Ontak®.

Os antioxidantes podem danificar as proteínas. Por exemplo, os agentes redutores, tal como em particular glutationa, podem romper as ligações dissulfureto intramoleculares. Assim, os antioxidantes para uso no invento são seleccionados para, entre outros, eliminar ou reduzir suficientemente a possibilidade de eles próprios danificarem as proteínas na formulação.

As formulações podem incluir iões metálicos que são cofactores de proteínas e que são necessários para formar complexos de coordenação com as proteínas, tal como o zinco que é necessário para formar determinadas suspensões de insulina. Os iões metálicos podem também inibir alguns processos que degradam as proteínas. No entanto, os iões metálicos podem também catalisar processos físicos e químicos que degradam as proteínas.

Podem usar-se iões magnésio (10-120 mM) para inibir a isomerização de ácido aspártico a ácido iso-aspártico. Os iões Ca+2 (até 100 mM) podem aumentar a estabilidade de desoxirribonuclease humana (rhDNase, Pulmozyme®). No entanto, Mg+2, Mn+2 e Zn+2 podem desestabilizar rhDNase. De igual modo, Ca+2 e Sr+2 podem estabilizar Factor VIII, que pode ser desestabilizado por Mg+2, Mn+2 e Zn+2, Cu+2 e Fe+2, e a sua agregação pode ser aumentada por iões Al+3.

As formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas podem compreender adicionalmente um ou mais conservantes. Os conservantes são necessários quando se desenvolvem formulações parentéricas multidose que envolvem mais do que uma extracção do mesmo recipiente. A sua função primária é inibir o crescimento microbiano e assegurar a esterilidade do produto ao longo do tempo de validade ou fim da utilização do produto do fármaco. Os conservantes vulgarmente usados incluem álcool benzílico, fenol e m-cresol. Embora os conservantes tenham uma longa história de utilização com parentéricos de moléculas pequenas, o desenvolvimento de formulações de proteínas que incluem conservantes pode ser um desafio. Os conservantes têm quase sempre um efeito desestabilizador (agregação) em proteínas e tal tornou-se um factor limitante importante para o seu uso em formulações de proteína multidose. Até à data, a maioria dos fármacos de proteína têm sido formulados apenas para utilização única. No entanto, quando são possíveis formulações multidose, elas têm a vantagem adicional de serem convenientes para o doente e terem melhor comercialização. Um bom exemplo é o da hormona de crescimento humana (hGH) em que o desenvolvimento de formulações com conservante levou à comercialização de apresentações em canetas de injecção multiuso, mais convenientes. Estão actualmente disponíveis no mercado pelo menos quatro tais dispositivos em caneta contendo formulações de hGH com conservante. Norditropin® (líquido, Novo Nordisk), Nutropin AQ® (líquido, Genentech) e Genotropin (liofilizado -cassete de câmara dupla, Pharmacia & Upjohn) contêm fenol enquanto Somatrope® (Eli Lilly) é formulado com m-cresol. Têm que se considerar vários aspectos durante a formulação e desenvolvimento de formas de dosagem com conservante. A concentração eficaz de conservante no produto fármaco deve ser optimizada. Tal requer ensaio de um determinado conservante na forma de dosagem, em gamas de concentrações que conferem eficácia anti-microbiana sem comprometer a estabilidade da proteína. Por exemplo, foram rastreados com sucesso três conservantes no desenvolvimento de uma formulação líquida de receptor de interleucina 1 (tipo I) usando calorimetria diferencial de varrimento (DSC). Os conservantes foram classificados com base no seu impacto na estabilidade às concentrações usadas vulgarmente em produtos comerciais.

Tal como seria de esperar, o desenvolvimento de formulações líquidas contendo conservantes é mais difícil do que formulações liofilizadas. Os produtos liofilizados podem ser liofilizados sem o conservante e reconstituídos com um diluente contendo conservante quando são usados. Tal diminui o tempo de contacto entre um conservante e a proteína, minimizando significativamente os riscos de estabilidade associados. Com formulações líquidas, a eficácia do conservante e a estabilidade devem ser mantidas ao longo de toda o tempo de validade do produto ( 18 a 24 meses) . Um ponto importante a evidenciar é que a eficácia do conservante deve ser demonstrada na formulação final contendo o fármaco activo e todos os componentes excipientes.

As formulações de proteína de ligação a antigénio IL-17RA auto-tamponadas serão geralmente concebidas para vias e métodos de administração específicos, para dosagens de administração e frequências de administração específicas, para tratamentos específicos de doenças específicas, em gamas de biodisponibilidade e persistência, entre outros.

Assim, as formulações podem ser concebidas de acordo com o invento para entrega por qualquer via adequada, incluindo oralmente, auricularmente, oftalmicamente, rectalmente e vaginalmente e por vias parentéricas, incluindo injecção intravenosa e intra-arterial, injecção intramuscular, injecção subcutânea, não se lhes limitando.

As composições de acordo com o invento podem ser produzidas usando métodos de rotina, bem conhecidos, para preparar, formular e usar proteínas, particularmente proteínas farmacêuticas. Descrevem-se métodos para preparar as composições, que compreendem o uso de contra-iões para remover agentes de tamponamento residuais. A este respeito, a expressão contra-ião significa qualquer constituinte polar ou carregado que actua para deslocar o tampão da composição durante a sua preparação. Os contra-iões úteis a este respeito incluem, por exemplo, glicina, cloreto, sulfato e fosfato. A este respeito, a expressão contra-ião é usada para significar praticamente o mesmo que ião de substituição. A este respeito, os agentes de tamponamento residuais podem ser removidos usando contra-iões, usando vários métodos bem conhecidos incluindo métodos padrão de diálise e métodos baseados em difusão em membrana de elevado rendimento, tal como diafiltração de fluxo tangencial, não se lhes limitando. A este respeito, os métodos para remoção de tampão residual usando um contra-ião podem também, em alguns casos, ser efectuados usando cromatografia de exclusão de tamanho.

As composições podem ser preparadas por um processo que envolve diálise contra uma solução sem tampão a um pH inferior ao da preparação contendo a proteína auto-tamponada. A solução sem tampão pode compreender contra-iões, particularmente os que facilitam a remoção do tampão residual e não afectam negativamente a proteína auto-tamponada ou a sua formulação. Após diálise, o pH da preparação pode ser ajustado ao pH pretendido usando ácido diluído ou base diluída.

As composições de acordo com o invento podem ser preparadas por um processo que envolve diafiltração de fluxo tangencial contra uma solução sem tampão a um pH inferior ao da preparação contendo a proteína auto-tamponada. A solução sem tampão pode compreender contra-iões, particularmente os que facilitam a remoção do tampão residual e não afectam negativamente a proteína auto-tamponada ou a sua formulação. Após diafiltração, o pH da preparação pode ser ajustado ao pH pretendido usando ácido diluído ou base diluída.

Uma vez formulada a composição farmacêutica, ela pode ser armazenada em frasquinhos estéreis como uma solução, suspensão, gel, emulsão, sólido, cristal ou como um pó desidratado ou liofilizado. Tais formulações podem ser armazenadas quer numa forma pronta a usar ou numa forma (e.g., liofilizada) que é reconstituída antes de administração. Descrevem-se aqui kits para produzir uma unidade de administração de dose única. Os kits podem cada qual conter um primeiro recipiente com uma proteína seca e um segundo recipiente com uma formulação aquosa. Os kits podem conter seringas pré-preenchidas de câmara simples ou múltipla (e.g., seringas de líquido e seringas lyo) . A quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica contendo proteína de ligação a antigénio IL-17RA a ser utilizada dependerá, por exemplo, do contexto e objectivos terapêuticos. Um perito na especialidade considerará que os níveis de dosagem adequados para tratamento variarão dependendo, em parte, da molécula a ser entregue, da indicação para a qual se usa a proteína de ligação a antigénio IL-17RA, da via de administração e do tamanho (peso corporal, superfície corporal ou tamanho do órgão) e/ou condição (idade e saúde em geral) do doente. Em determinadas concretizações, o médico pode titular a dosagem e modificar a via de administração para obter o efeito terapêutico óptimo. Uma dosagem típica pode estar na gama de cerca de 0,1 yg/kg até cerca de 30 mg/kg ou mais, dependendo dos factores mencionados anteriormente. Em concretizações específicas, a dosagem pode estar na gama de 0,1 yg/kg até cerca de 30 mg/kg, opcionalmente de 1 yg/kg até cerca de 30 mg/kg ou de 10 yg/kg até cerca de 5 mg/kg. A frequência de dosagem dependerá dos parâmetros farmacocinéticos da proteína de ligação a antigénio IL-17RA particular na formulação usada. Tipicamente, um médico administra a composição até se atingir a dosagem que consegue o efeito pretendido. A composição pode assim ser administrada como uma dose única ou como duas ou mais doses (que podem ou não conter a mesma quantidade da molécula pretendida) ao longo do tempo ou como uma infusão continua através de um dispositivo de implante ou cateter. 0 refinamento adicional da dosagem adequada pode ser feito rotineiramente por peritos na especialidade e está no âmbito das tarefas efectuadas por estes rotineiramente. As dosagens adequadas podem ser avaliadas através do uso de dados de dose-resposta adequados. Em determinadas concretizações, as proteínas de ligação de antigénio do invento podem ser administradas aos doentes ao longo de um período de tempo prolongado. A administração crónica de uma proteína de ligação de antigénio do invento minimiza as respostas imunitárias ou alérgicas adversas usualmente associadas a proteínas de ligação de antigénio que não são completamente humanas, por exemplo um anticorpo desenvolvido contra um antigénio humano num animal não humano, por exemplo, um anticorpo não completamente humano ou anticorpo não humano produzido numa espécie não humana. A via de administração da composição farmacêutica é de acordo com métodos conhecidos, e.g., oralmente, através de injecção pelas vias intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intra-parenquimal), intra-cerebroventricular, intramuscular, intra-ocular, intra-arterial, intraportal ou intralesional; por sistemas de libertação controlada ou por dispositivos de implante. Em determinadas concretizações, as composições podem ser administradas por injecção de bolo ou por infusão contínua ou por um dispositivo de implante. A composição também pode ser administrada localmente através de implante de uma membrana, esponja ou outro material adequado no qual a molécula pretendida foi adsorvida ou encapsulada. Em determinadas concretizações, quando se usa um dispositivo de implante, o dispositivo pode ser implantado em qualquer tecido ou órgão adequado e a entrega da molécula pretendida pode ser por difusão, bolo de libertação controlada ou administração contínua.

Pode também ser desejável usar proteína de ligação a antigénio IL-17RA como composições farmacêuticas de acordo com o invento ex vivo. Em tais casos, expõe-se células, tecidos ou órgãos que foram removidos do doente, à proteína de ligação a antigénio IL-17RA como composições farmacêuticas, após o qual as células, tecidos e/ou órgãos são implantados subsequentemente de volta ao doente.

Em particular, a proteína de ligação a antigénio IL-17RA pode ser entregue por implante de determinadas células que foram concebidas por engenharia genética, usando métodos tais como os aqui descritos, para expressar e excretar o polipéptido. Em determinadas concretizações, tais células podem ser células de animal ou humanas e podem ser autólogas, heterólogas ou xenogenésicas. Em determinadas concretizações, as células podem ser imortalizadas. Noutras concretizações, de modo a diminuir as hipóteses de resposta imunológica, as células podem ser encapsuladas para evitar infiltração nos tecidos circundantes. Em concretizações adicionais, os materiais de encapsulação são tipicamente biocompatíveis, cápsulas ou membranas poliméricas semipermeáveis que permitem a libertação do(s) produto(s) de proteína, mas evitam a destruição das células pelo sistema imunitário do doente ou por outros factores prejudiciais para os tecidos circundantes.

EXEMPLOS

Os seguintes exemplos, incluindo as experiências efectuadas e os resultados obtidos, apresentam-se com apenas objectivos ilustrativos e não devem ser interpretados como limitando o invento.

Exemplo 1

Geraram-se ratinhos knockout IL-17RA, tal como descrito em Ye et al., 2001, J. Exp. Med. 194:519-527 e ensaiaram-se num modelo de artrite induzida por colagénio (CIA) padrão.

Sucintamente, isolaram-se clones genómicos que codificam IL-17R murino a partir de uma biblioteca lambda derivada de 129 usando uma sonda de ADNc de IL-17R murino e mapearam-se por uma combinação de PCR, digestão por restrição e análises de sequências usando sequências genómicas depositadas correspondentes ao local IL-17R no cromossoma 6 de ratinho (GenBank/EMBL/DDBJ n2 de accesso AC018559). Construiu-se um vector de direcção a um gene alvo por substituição de 5,7 kb de sequência genómica contendo os exões 4-11 (correspondentes aos nucleótidos 445-1172 do ADNc IL-17R murino) com uma cassete PGKneo. Inseriu-se uma cassete de timidina cinase (MC-TK) na extremidade 5' do vector. Sujeitaram-se células estaminais embrionárias (ES) derivadas de 129 a electroporação com o vector de direcção ao alvo e seleccionaram-se na presença de G418 e ganciclovir, tal como descrito. Identificaram-se os clones ES com uma mutação de direcção ao alvo em IL-17R por uma combinação de PCR e análise de transferência "Southern" genómica e foram injectados em blastócitos C57BL/6. Cruzaram-se as quimeras macho resultantes com fêmeas C57BL/6 para gerar ratinhos heterozigóticos para a mutação IL-17R (IL-17R+/~), que foram subsequentemente cruzados entre si para gerar ratinhos deficientes em IL-17R (IL-17R KO) . Estes ratinhos foram deslocados para uma base C57BL/6 através de cinco cruzamentos sucessivos entre si para ratinhos C57BL/6.

Os ratinhos knockout IL-17RA apresentaram pontuação clinica média reduzida no modelo CIA, tal como apresentado na figura 4 (consultar também Rolls et al., 2001, J. Ex. Med. 194:519-527; Lubberts at al., 2005, anteriormentej. Além disso, os ratinhos knockout IL-17RA apresentaram apenas 5% de incidência da doença, enquanto os ratinhos de tipo selvagem apresentaram 71% de incidência da doença.

Exemplo 2

Comparou-se a histopatologia de CIA induzida em ratinhos IL-17RA -/- e ratinhos que expressam IL-17RA para determinar a correlação entre artrite induzida e a ausência de sinalização IL-17RA.

Prepararam-se ratinhos tal como descrito no exemplo 1. Sacrificaram-se os animais de quinze a vinte dias de idade e analisou-se então a histopatologia das articulações dos animais sacrificados. A histopatologia do osso e cartilagem em ratinhos knock-out IL-17RA -/- e em ratinhos que expressam IL-17A/IL-17R (WT C57/BL6 (N2 2-18)) mostrou erosão óssea subcondral do tálus e ruptura acentuada da articulação das articulações do tarso-metatarso (osso subcondral e erosão da cartilagem articular), bem como formação óssea periosteal reactiva (osteofitose) . A histopatologia das articulações do tornozelo de ratinhos deficientes em IL-17RA -/- num modelo CIA induzido experimentalmente apresentou pequena inflamação das articulações e erosão da cartilagem das articulações e óssea. No entanto, a análise histopatológica de uma articulação do tornozelo da pata traseira de ratinhos que expressam IL-17RA apresentou inflamação activa crónica acentuada. A incidência significativamente reduzida de inflamação das articulações e erosão das articulações e ossos comparativamente a ratinhos de tipo selvagem implica adicionalmente IL-17RA e sinalização IL-17RA em inflamação e erosão.

Exemplo 3

Um modelo de EAE induzido por péptido MOG (glicoproteina oligodendrócito-mielina) de ratinhos deficientes em IL-17RA apresentou um atraso no inicio de artrite, bem como uma redução global nas pontuações clinicas comparativamente a ratinhos de tipo selvagem.

Prepararam-se ratinhos knockout IL-17RA tal como descrito no exemplo 1. A figura 5 apresenta a incidência e a mediana do inicio de artrite em função do tempo para ratinhos IL-17RA -/-e ratinhos IL-17RA de tipo selvagem. Todos os 15 ratinhos de tipo selvagem que expressam IL-17RA apresentaram sintomas de artrite, com um inicio médio aos 13 dias. Contrariamente, 14 dos 15 ratinhos IL-17RA -/- apresentaram sintomas de artrite com um inicio médio de 22 dias (p<0,0001 relativamente ao tipo selvagem).

As pontuações clinicas de ratinhos knockout IL-17RA -/-apresentam uma pontuação clinica média menor, com um inicio mais tardio do que os ratinhos do tipo selvagem. A figura 6 apresenta pontuações clinicas reduzidas em ratinhos IL-17RA -/knockout comparativamente a ratinhos de tipo selvagem num modelo induzido por MOG. A população IL-17RA -/knockout apresentou um inicio de artrite significativamente mais tarde do que a população de tipo selvagem que expressa IL-17RA. Adicionalmente, a população knockout IL-17RA -/- tinha uma pontuação clinica média inferior em todos os pontos de tempo para inicio de artrite. 0 inicio médio de artrite mais longo e a menor pontuação clínica média para artrite observada em mutantes IL-17RA -/- comparativamente a animais de tipo selvagem que expressam IL-17RA implica adicionalmente a sinalização IL-17RA em inflamação e erosão.

Exemplo 4

Os ratinhos IL-17RA KO sensibilizados e provocados com ovalbumina apresentam uma redução significativa das células inflamatórias em fluido BAL (lavagem bronco-alveolar) comparativamente a ratinhos de tipo selvagem. Prepararam-se ratinhos knockout IL-17RA tal como descrito no exemplo 1 e seguidamente provocaram-se intranasalmente com ovalbumina. 0 número de células inflamatórias na população IL-17RA KO foi comparado com o da população de tipo selvagem que expressa IL-17RA. A figura 7 mostra que os ratinhos IL-17RA KO têm números totais menores de células inflamatórias em fluido BAL do que ratinhos de tipo selvagem que expressam IL-17RA em asma induzida por ovalbumina após a terceira provocação. A população de ratinhos IL-17RA KO foi comparada a ratinhos de tipo selvagem que expressam IL-17RA para a incidência de eosinófilos (A), neutrófilos (B), linfócitos (C) e macrófagos (D) em fluido BAL num modelo de asma induzida por ovalbumina. As figuras 8A-8D mostram que os ratinhos IL-17RA KO têm números reduzidos de eosinófilos (8A), neutrófilos (8B) e linfócitos (8C) em fluido BAL na população IL-17RA KO comparativamente à população de tipo selvagem que expressa IL-17RA. Não se verificaram quaisquer alterações nos macrófagos de fluido BAL (8D) em ratinhos de tipo selvagem ou ratinhos IL-17RA KO (naives e provocados com OVA). Estes dados sugerem que a sinalização IL-17RA é importante na regulação das respostas inflamatórias mediadas pelo sistema imunitário.

Exemplo 5

Demonstrou-se que os anticorpos IL-17RA reduzem a incidência de artrite num modelo animal CIA (artrite induzida por colagénio) quando administrados profiláctica e terapeuticamente. A inibição de IL-17RA reduziu a artrite clínica tanto de forma profiláctica, como terapêutica para vários modelos de CIA. 0 substituto neutralizante de mAb IL-17RA de ratinho administrado profilacticamente reduziu as pontuações clinicas médias num modelo CIA de tipo selvagem de uma forma dependente da dose. A figura 9 apresenta a inibição dependente da dose por mAB IL-17RA no modelo CIA de tipo selvagem. Os ratinhos foram tratados com mAb IL-17RA ou Ig de controlo num calendário de segunda-feira, quarta-feira e sexta-feira durante 2,5 semanas após reforço. A administração de 100 pg e 300 pg de anticorpos IL-17RA resultou numa pontuação clinica menor para 18 dias após reforço comparativamente a Ig de controlo de isotipo.

Uma redução na perda de osso e erosão da cartilagem na articulação foi associada com a redução das pontuações clinicas médias à dose de 300 pg do mAb IL-17RA. Compararam-se as análises histopatológicas e análises de imagens radiográficas com o controlo IgG. Através de ambos os meios de análise, a articulação do tornozelo da pata traseira de ratinho CBA/1 macho tratado com um mAb IL-18R (controlo de isotipo) apresentou inflamação acentuada: erosão óssea subcondrial do tálus, ruptura acentuada da articulação das articulações do tarso-metatarso (osso subcondrial e erosão de cartilagem articular) e formação óssea periosteal reactiva (osteofitose) . Em forte contraste, a articulação do tornozelo da pata traseira de um ratinho DBA/1 tratado com 300 pg de mAb anti-IL-17RA apresentou espaços de articulação bem definidos, ausência de edema e ausência de osso periosteal reactivo ou lesões liticas, indicando perda óssea e erosão de cartilagem reduzidas.

Exemplo 6

Também se demonstrou que a inibição de IL-17RA é eficaz num modelo CIA quando se iniciou a dosagem após o inicio de sinais clínicos (i.e, protocolo de dosagem terapêutico) num modelo de tipo selvagem e knockout TNFR p55/p75. O tratamento foi iniciado aproximadamente 6-7 dias após introdução de colagénio em ambos os modelos. A figura 10 demonstra que o tratamento terapêutico com mAb anti-IL-17RA estabilizou as pontuações clínicas médias em ambos os ratinhos de tipo selvagem. A figura 11 demonstra que o tratamento terapêutico com mAb anti-IL-17RA estabilizou as pontuações clinicas médias em modelos TNFR p55/p75 KO. Os ratinhos foram tratados com mAb anti-IL-17RA, mAb anti-IL-lR ou Ig de controlo num calendário de segunda-feira, quarta-feira e sexta-feira durante 2 semanas após randomização para grupos de tratamento terapêutico. Estes dados são representativos de 2 experiências independentes efectuadas em modelos CIA de tipo selvagem e TNFR p55/p75 KO. A administração de mAb anti-IL-17RA demonstrou uma pontuação clinica reduzida comparativamente a IgG de controlo em CIA induzida em ratinhos de tipo selvagem. Surpreendentemente, a eficácia semelhante de mAb anti-IL-17RA no modelo TNF p55/p75 KO estabilizou CIA independentemente da sinalização TNF. Estes dados sugerem que a terapia com proteína de ligação a antigénio anti-IL-17RA pode seleccionar sujeitos insensíveis a terapias anti-TNF. A terapia de combinação de uma proteína de ligação a antigénio anti- IL-17RA com terapias anti-TNF pode ser mais benéfica do que qualquer uma delas sozinha.

Exemplo 7 0 desenvolvimento de anticorpos monoclonais completamente humanos dirigidos contra IL-17RA humano foi efectuado usando tecnologia XenoMouse® de Abgenix (actualmente Amgen Fremont Inc.) (patente dos Estados Unidos N2 6 114 598; 6 162 963; 6 833 268; 7 049 426; 7 064 244, que são aqui incorporadas por referência na sua globalidade; Green et al, 1994, Nature Genetics 7:13-21; Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15:146-156; Green e Jakobovitis, 1998, J. Ex. Med. 188:483-495)). A tabela 4 apresenta as partes da proteína IL-17RA usadas como um imunogénio e linhas celulares usadas para gerar e rastrear anticorpos anti-IL-17RA.

Os ratinhos IgG2 XenoMouse® foram imunizados/reforçados com IL-17RA-Fc (grupo 1) e IL-17RA-FLAG-poli-His (grupo 2) . Monitorizaram-se os títulos séricos por ELISA e fundiram-se os ratinhos com os melhores títulos para gerar hibridomas. Rastrearam-se os sobrenadantes policlonais resultantes para ligação a IL-17RA por ELISA e rastrearam-se os sobrenadantes positivos por ligação a células CHO IL-17RA por FMAT. Sujeitaram-se os sobrenadantes positivos a rastreio adicional. Imunizaram-se ratinhos IgG2 XenoMouse® com os seguintes imunogénios: IL-17RA-FC (grupo 3) e IL-17RA-FLAG-pHis (grupo 4) e foram ensaiados após imunizações adicionais.

Exemplo 8

Caracterizaram-se os anticorpos anti-IL-17RA. Prepararam-se sobrenadantes de hibridoma não clonais em volumes de 1-2 ml (as concentrações de Ig não foram determinadas para estes sobrenadantes). Os sobrenadantes de hibridoma anti-IL-17RA não clonais foram rastreados inicialmente por FACS relativamente à sua capacidade para inibir ligação de IL-17A humano biotinilado a células CHO gue sobrexpressam IL-17RA humano e outra linha celular CHO que sobrexpressa IL-17RA de cinomolgos. Os sobrenadantes não clonais que foram capazes de inibir completamente ou quase completamente a ligação de IL-17A humano a CH0-huIL-17RA e CH0-cynoIL-17RA foram rastreados subsequentemente a várias diluições num ensaio de excreção de citocina/quimiocina induzida por IL-17A, usando uma linha celular de fibroblastos de prepúcio humano (HFF) . Incubaram-se sobrenadantes anti-IL-17RA não clonais com células HFF (5000 células/poço em placa de 96 poços) durante 30 minutos a 36 °C e seguidamente estimularam-se durante a noite com IL-17A (5 ng/ml) sozinho ou IL-17F (20 ng/ml) e TNF-alfa (5 ng/ml). Os sobrenadantes de cultura de fibroblastos foram seguidamente analisados por ELISA para a presença de IL-6 ou GRO-alfa. Seleccionaram-se hibridomas anti-IL-17RA não clonais para sub-clonagem com base no seu desempenho no ensaio CH0-IL-17RA FACS e bio-ensaio HFF. Apresenta-se um exemplo da selecção nas tabelas 5, 6 e 7.

Na tabela 5, rastrearam-se sobrenadantes de hibridoma anti-IL-17RA não clonais para ligação a IL-17RA. A primeira metade da tabela 5 apresenta a % de positivos e a intensidade de fluorescência média (MFI) em resultados de citometria de fluxo (i.e. FACS). A % de positivos mostra inibição de ligação de biotina-huIL-17A a células huIL-17RA+ pelos sobrenadantes de hibridoma não clonais. A coluna MFI apresenta inibição de huIL-17A biotinilado a células IL-17RA+ CHO de cinomolgo pelos sobrenadantes de hibridoma não clonais. A segunda metade da tabela 5 apresenta a intensidade de ligação de HFF para os não clonais e mAb, tal como medido pela % de intensidade de produção de IL-6. As primeiras 2 colunas apresentam um bio-ensaio IL-17A/HFF com sobrenadantes de hibridoma não clonais e as últimas 4 colunas são resultados de repetições do bio-ensaio IL-17A/HFF com sobrenadantes de hibridoma não clonais.

A tabela 6 apresenta dados de rastreio de sobrenadante de hibridoma IL-17RA não clonal. As colunas de % de positivos e MFI apresentam os resultados de citometria de fluxo (FACS). As colunas de % de positivos apresentam a inibição de ligação de biotina-huIL-17A a células huIL-17RA+ CHO pelos sobrenadantes de hibridoma não clonais. A coluna MFI apresenta a inibição de ligação de huIL-17A biotinilado a células IL-17RA+ CHO de cinomolgo pelos sobrenadantes de hibridoma não clonais. As primeiras 2 colunas do bio-ensaio HFF são do bio-ensaio IL-17A/HFF com sobrenadantes de hibridoma não clonais e as últimas 4 colunas de bio-ensaio são resultados de repetições de bio-ensaio IL-17A/HFF com sobrenadantes de hibridoma não clonais seleccionados. Seleccionaram-se vários sobrenadantes para subclonagem.

A tabela 7 apresenta os dados de rastreio de sobrenadante de hibridoma não clonal anti-IL-17RA. As primeiras duas colunas são dados de citometria de fluxo (FACS). As colunas de % de positivos apresentam inibição da ligação de biotina-huIL-17A a células huIL-17RA+ CHO pelos sobrenadantes de hibridoma não clonais. A coluna MFI apresenta inibição de ligação de huIL-17A biotinilado a células IL-17RA+ CHO de cinomolgo pelos sobrenadantes de hibridoma não clonais. As três colunas finais apresentam os resultados do bio-ensaio IL-17A/HFF com sobrenadantes de hibridoma não clonais. Seleccionaram-se os sobrenadantes 6, 18, 19 e 21 para subclonagem.

A tabela 8 apresenta os valores de IC50 do bio-ensaio IL-17A/HFF e os valores de Kd por BIAcore® de baixa resolução para hibridomas subclonados. Os valores de IC50 e Kd inferiores nos ensaios de ligação IL-17A/HFF IL-17RA indicam que os mAb IL-17RA inibiram a ligação de IL-17A a receptor de IL-17A. Seleccionaram-se anticorpos para caracterização adicional com base nos valores baixos de KD para inibir ligação de IL-17A a IL-17RA humano.

Exemplo 9

Seleccionaram-se os clones de mAb de IL-17RA humano com as sequências de cadeia pesada e leve (AMh22/AMl22) , (AMh19/AMl19) , (AMh18/AMl18) e (AMH14/AML14) para caracterização adicional por bio-ensaio. A tabela 9 seguinte apresenta valores de IC50 para os Ab seleccionados no bio-ensaio HFF e um bio-ensaio de fibroblastos primários de pulmão contra IL-17A e IL-17F.

Os mAb humanos seleccionados inibiram a ligação de IL-17A a IL-17RA. Além dos valores de IC50 inferiores verificados para ligação de IL-17A a IL-17RA, os mAb humanos seleccionados apresentaram valores de IC50 de inibição de ligação de IL-17F a IL-17RA (segunda coluna) reduzidos. Assim, os mAb humanos seleccionados inibem tanto ligação IL-17A - IL-17RA, como ligação IL-17F - IL-17RA.

Exemplo 10

Ensaiaram-se exemplos de mAb IL-17RA humano num bio-ensaio de cinomolgo utilizando a linha de células epiteliais de rim derivadas de cinomolgo JTC-12 estimulada com IL-17A de cinomolgo. A figura 12 apresenta mAb de IL-17RA com as sequências de cadeia pesada e leve (AMh22/AMl22) , ( AMh 19/ AMl 19), (AMh18/AMl18) e (AMH14/ AML14) na inibição de produção de IL-6 induzida por IL-17A de cinomolgo de células JTC-12. A linha (----) representa o valor do controlo positivo de IL-17 de cinomolgo em combinação com TNF-alfa. A linha (-.-.-) representa o valor de controlo positivo de TNF-alfa de cinomolgo. A linha (....) representa o valor do meio de controlo. As células JTC-12 foram pré-incubadas durante 30 min com mAb anti-IL-17RA e seguidamente estimularam-se durante a noite com IL-17A de cinomolgo (5 ng/ml) e TNF-alfa humano (5 ng/ml) . A figura 12 indica que cada anticorpo foi capaz de inibir a ligação de IL-17A de cinomolgo a IL-17RA e inibir activação de IL-17RA, tal como determinado pela produção de IL-6 a partir de células JTC-12. 0 anticorpo IL-17RA (AMh14/AMl14) foi capaz de antagonizar a produção de IL-6 induzida por IL-17A de cinomolgo em células JTC-12 com um IC50 de aproximadamente 1,2 nM.

Exemplo 11

Ensaiou-se a ligação de mAb IL-17RA in vitro. As afinidades de ligação de anticorpos IL-17RA foram medidas por ressonância plasmónica de superfície usando um instrumento Biacore 3000® por métodos padrão conhecidos na especialidade. Os anticorpos candidatos foram capturados em chips CM4 derivatizados com anticorpo de cabra anti-IgG (H + L) humano (Jackson Immuno Research, Bar Harbor, ME) . Usou-se como referência um chip CM4 revestido com anticorpo de cabra anti-IgG (H + L) humano mas sem anticorpo capturado. Fez-se passar um fluxo de huIL-17RA-FLAG-poli-His (SEQ ID NO:431) solúvel numa gama de concentração de 0,46-1000 nM por cima dos chips durante 2 minutos (fase de associação) seguido por uma fase de dissociação de 15-30 minutos. O péptido FLAG Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys (DYKDDDDK) (SEQ ID NO:447) tal como descrito em Hopp et ai., Bio/Technology 6:1204, 1988 e patente U.S. 5 011 912 permite um ensaio rápido e fácil purificação da proteína recombinante expressa. Estão disponíveis comercialmente reagentes úteis para preparar proteínas de fusão nas quais o péptido FLAG se encontra fundido a um determinado polipéptido (Sigma, St. Louis, MO).

As experiências foram efectuadas a 25 °C usando um caudal de 50 uL/min. Os dados foram ajustados a um modelo 1:1 + Rmax local usando o utilitário BIAeval® (v4.1).

A tabela 10 evidencia que KD dos clones mAb humanos foi da ordem de lCh10 a lCh9, em que o clone com as sequências de cadeia pesada e leve (AMh14/AMl14) apresenta a afinidade mais elevada. Cada um dos dados cinéticos dos anticorpos monoclonais humanos foi consistente com os dados de equilíbrio. O anticorpo com as sequências variáveis de cadeia pesada e leve (AMH14/AML14; SEQ ID NO: 14 e SEQ ID NO: 40, respectivamente) apresentou a afinidade mais elevada para IL-17RA, bem como a velocidade de dissociação mais baixa.

Exemplo 12 O potencial agonista de mAb IL-17RA humano com as sequências variáveis de cadeia pesada e leve (AMh14/AMl14) foi avaliado in vitro. Ensaiou-se o mAb IL-17RA (AMh14/AMl14) para os seus efeitos agonistas em células HFF. Ensaiou-se também o mAb IL-17RA com as sequências de cadeia pesada e leve mAb (AMh14/AMl14) em condições de ligação cruzada com F(ab')2 de cabra anti-humano, IgG de cabra anti-humano e IgG de ratinho anti-humano antes de incubação em células HFF. Incubou-se durante a noite em células HFF mAb IL-17RA AMh14/AMl14 recombinante a 0, 0,1, 0,5, l, 1,5 e 10 pg/ml, sozinho e previamente reticulado com IgG de ratinho anti-humano (Zymed/Invitrogen, San Diego, CA), F(ab')2 de cabra anti-humano (cabra a-h-Fab) e IgG de cabra anti-humano (cabra a-h IgG) . Avaliou-se GRO-alfa por ELISA. IL-17A sozinho foi usado como controlo positivo para a produção de GRO-alfa nesta experiência. Estes dados são representativos de 2 experiências independentes. mAb IL-17RA (AMh14/AMl14) sozinho não apresentou qualquer efeito em células HFF. A ligação cruzada prévia de mAb anti-IL-17RA (AMh14/AMl14) não teve qualquer efeito na produção de GRO-alfa em células HFF. Estes dados demonstram que mAb anti-IL-17RA (AMh14/AMl14) sozinho ou com ligação cruzada prévia e incubado com células HFF foi incapaz de induzir uma resposta GRO-alfa e portanto não é um mAb agonista para IL-17RA.

Exemplo 13

Os efeitos de alterações da linha germinal (GL) de mAb IL-17RA AMh14/AMl14 foram ensaiados no bio-ensaio HFF. A figura 13 apresenta a variação de sequência nas regiões de esqueleto de SEQ ID NO:40 (AMl14) em relação a resíduos de linha germinal e o efeito nos valores de IC50. SEQ ID NO:40 (AMl14) contém quatro resíduos que não são da linha germinal no esqueleto, dois em FR2 e dois em FR3. Usaram-se métodos padrão de mutagénese dirigida ao local para gerar versões de linha germinal A e B de AMh14/AMl14. Estes variantes foram ensaiados no bio-ensaio HFF IL-17A e IL-17F: pré-incubaram-se células HFF durante 30 min com vários mAb anti-IL-17RA e seguidamente estimularam-se durante a noite com IL-17 (5 ng/ml). A figura 14 mostra que os dois variantes que tinham os resíduos novamente da linha germinal (consultar figura 13) tinham actividade de inibição de IL-17A reduzida em relação a AMh14/AMl14, indicando que foi tolerada alguma variação nas regiões de esqueleto mas que alguns resíduos podem influenciar a actividade. A linha (----)indica o valor de controlo positivo de estimulação IL-17 na ausência de anticorpo (aproximadamente 4062 pg/ml). O controlo de meio sozinho deu um valor de aproximadamente 71 pg/ml. A figura 15 mostra que os dois variantes que tinham os resíduos novamente da linha germinal (consultar a figura 13) tinham actividade de inibição IL-17F reduzida relativamente a AMh14/AMl14, indicando que foi tolerada alguma variação nas regiões de esqueleto mas que alguns resíduos podem influenciar a actividade. O valor de controlo positivo de IL-17F em combinação com estimulação TNF-alfa na ausência de anticorpo foi aproximadamente 10994 pg/ml, o valor de TNF-alfa apenas foi aproximadamente 1534 pg/ml e o controlo de meio sozinho deu um valor de aproximadamente 55 pg/ml.

Exemplo 14

Efectuaram-se estudos para determinar onde as várias proteínas de ligação a antigénio IL-17RA (sob a forma de anticorpos humanos) se ligam a IL-17RA humano. 0 sistema ForteBio™ Octet é um de vários sistemas e técnicas disponíveis para medir ligação de anticorpo. Os métodos usados para rastrear a ligação de anticorpo seguiram essencialmente as recomendações do fabricante. Para mais informações consultar www.fortebio.com. Sucintamente, pré-embeberam-se sensores de estreptavidina (ForteBio™) durante 10 minutos em PBSAT (BSA a 1%/PBS + Tween20® (monolaurato de polioxietilenossorbitano) a 0,05%) . Carregou-se AMh14/AMl14 biotinilado a 10 ug/mL em PBSAT nos sensores durante 900 segundos. Traçou-se uma nova linha de base durante 600 segundos em PBSAT. Seguidamente ligou-se IL-17RA de tipo selvagem-FLAG-poli-His (SEC ID NO:431) a 10 ug/mL em PBSAT aos sensores durante 900 segundos. Estabeleceu-se uma nova linha de base durante 600 segundos em PBSAT. Associaram-se os seguintes mAb AMh22/AMl22, AMh19/AMl19, e AMh18/AMl18 a 200 nM durante 900 segundos, seguido por dissociação durante 900 segundos em PBSAT. Os dados revelaram que AMh18/AMl18 não competiu com AMh14/AMl14 para ligação, evidenciando que AMh14/AMl14 e AMh18/AMl18 se ligam a determinantes de neutralização diferentes. AMh22/AMl22 e AMh19/AMl19 não se ligaram na presença de AMh14/AMl14, sugerindo que todos estes três anticorpos se ligam ao mesmo determinante de neutralização ou a um determinante de neutralização similar e portanto são considerados na mesma divisão.

Exemplo 15

Efectuaram-se estudos de competição cruzada para determinar as características de ligação de IL-17RA de exemplos de anticorpos IL-17RA. Usou-se uma modificação do método de divisão multiplexada descrito por Jia, et al. (consultar Jia, et al. , J. Immun. Meth., 2004, 288:91-98) . O método usou uma estação de trabalho e utilitário Bio-Plex (BioRad, Hercules, CA), bem como reagentes de Luminex® Corp. (Austin, TX) . Seguiu-se basicamente os protocolos dos fabricantes, salvo quando indicado seguidamente (consultar www.bio-rad.com e www.luminexcorp.com para detalhes). Incubou- se cada código pérola de pérolas Luminex® revestidas com estreptavidina (Luminex®, n2 LI 00-L1XX-01, em que "XX" especifica o código da pérola) em 150 ui de anticorpo de captura IgG de ratinho anti-humano biotinilado monovalente (BD Pharmingen, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, produto n2 555785) a 50 ug/ml durante 1 hora à temperatura ambiente no escuro e seguidamente lavou-se 3 vezes com PBSAT. Avaliou-se o revestimento de IgG de ratinho anti-humano e quantificaram-se as pérolas por FACS. Incubou-se separadamente cada código de pérola com 10 ui de anticorpo anti-IL-17RA durante 1 hora à temperatura ambiente e seguidamente lavou-se. Recolheram-se conjuntamente as pérolas e seguidamente adicionaram-se a uma placa de filtro de 96 poços (Millipore, Billerica, MA, produto n2 MSBVN1250). Adicionou-se 80 ui de IL-17RA (SEQ ID NO:431) a 2 ug/ml a metade dos poços e tampão à outra metade, incubou-se à temperatura ambiente durante 1 hora e seguidamente lavou-se com PBSAT. Adicionou-se 10 ui de um anticorpo anti-IL-17RA a um poço com IL-17RA (SEQ ID NO: 431) e um poço sem IL-17RA, incubou-se à temperatura ambiente durante 1 hora e seguidamente lavou-se com PBSAT. Incluiu-se um IgG humano irrelevante (Jackson Labs., Bar Harbor, ME, produto n2 009-000-003) como um controlo negativo. Adicionou-se 50 ul de IgG de ratinho anti-humano monovalente conjugado a PE (BD Pharmingen, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, η2 555787) a cada poço e incubou-se à temperatura ambiente durante 1 hora e seguidamente lavou-se com PBSAT. O anticorpo monovalente marcado com PE detectará a presença do segundo mAb adicionado ao poço, mas não a do primeiro mAb capturado pelo anticorpo monovalente IgG de ratinho anti-humano. Ressuspenderam-se as pérolas em 120 ul de PBSAT e recolheram-se pelo menos 100 eventos/código de pérola no estação de trabalho Bio-Plex, tal como descrito no protocolo recomendado pelo fabricante.

Subtraiu-se a intensidade de fluorescência média (MFI) do par de anticorpo sem IL-17RA ao sinal MFI da reacção correspondente contendo IL-17RA para normalizar para o ruido de fundo. Os critérios para determinar se dois anticorpos apresentam competição cruzada entre si e portanto estão na mesma "divisão" foram dependentes da determinação do nivel em que o segundo anticorpo foi detectável. Quando a MFI normalizada foi superior ao mais elevado de qualquer dos seguintes três valores, considerou-se que os anticorpos anti- IL-17RA se ligam simultaneamente a IL-17RA e considerou-se que estão em divisões diferentes (i.e., os anticorpos não competem cruzadamente): o valor de MFI normalizado é superior a 3 vezes os valores de MFI do anticorpo emparelhado consigo próprio ou 3 vezes o valor de MFI do anticorpo emparelhado com uma controlo huIgG ou uma MFI de 300. Em termos gerais, os anticorpos atribuídos a divisões diferentes ligam-se a partes diferentes de IL-17RA e os anticorpos atribuídos à mesma divisão ligam-se a partes semelhantes de IL-17RA.

As figuras 16A e 16B apresentam os resultados de divisão multiplexada de anticorpos anti-IL-17RA. Os valores a sombreado indicam pares de anticorpos que se ligam a IL-17RA simultaneamente, sugerindo que estes anticorpos se ligam a determinantes de neutralização diferentes. Os valores em caixas indicam que os anticorpos emparelham consigo próprios e competem cruzadamente. Ensaiaram-se os seguintes anticorpos monoclonais humanos contendo os seguintes domínios variáveis pesado e leve: A: AMH11/ AML11, B: AMH4/AML4, C: AMH8/AML8, D: AMh7/AMl7, E: AMh6/AMl6, F: AMh10/AMl10, G: AMh18/AMl18, H: AMhI/AMlI, I: AMH22/AML22, J: AMH2 3/AML2 3, K: AMH14/AML14, L: AMh19/AMl19, M: AMH12/AML12, N: AMH17/AML17, O: AMH16/AML16, P: AMh2 6/AMl2 6, Q: AMh21/AMl21 e R: AMH2 0/AML2 0.

As figuras 16A e 16B mostram também que os anticorpos A: AMh 11/ AMl 11, B: AMH4/AML4, C: AMH8/AML8, D: AMH7/AML7, E: AMh6/AMl6, F: AMhIO/AMlIO e G: AMh18/AMl18 competem entre si para ligação a IL-17RA humano e consequentemente foram atribuídos a um grupo definido (Divisão 1) . Em geral, os anticorpos I: AMH22/AML22, J: AMH23/AML23, K: AMH14/AML14, L: AMh19/AMl19, M: AMH12/AML12, N: AMH17/AML17, O: AMH16/AML16 competem entre si para ligação a IL-17RA humano e consequentemente foram atribuídos a um grupo definido (Divisão 3) . Em termos gerais, os anticorpos da Divisão 1 não competem com os anticorpos da Divisão 3. O anticorpo H: AMhI/AMlI foi único no seu padrão de competição e formou a Divisão 2, mas é mais parecido com a Divisão 3. O anticorpo P: AMH26/AML26 formou a Divisão 4 e apresentou competição cruzada baixa com qualquer dos outros anticorpos, sugerindo um determinante de neutralização único para este anticorpo. Os anticorpos Q: AMh21/AMl21 e R: AMh20/AMl20 apresentaram individualmente padrões de competição únicos, mas com semelhanças consideráveis com os anticorpos da Divisão 3 e formaram as Divisões 5 e 6, respectivamente. Estes dados proporcionam evidência de várias espécies dentro de um subgénero de anticorpos de competição cruzada.

Exemplo 16

Tal como descrito anteriormente, criaram-se e caracterizaram-se anticorpos que se ligam a IL-17RA humano e inibem ou neutralizam a ligação de IL-17A e/ou IL-17F. Para determinar os determinantes de neutralização em IL-17RA humano aos quais se ligam estes vários anticorpos IL-17RA, construíram-se várias proteínas IL-17RA quiméricas humano/ratinho. Este método tem a vantagem de não ter reactividade cruzada dos vários anticorpos IL-17RA com IL-17RA de ratinho. Para cada quimera, substituíram-se uma ou duas regiões do domínio extracelular de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431) pelas regiões correspondentes de IL-17RA de ratinho (SEQ ID NO:432). A figura 17 apresenta IL-17RA de ratinho (SEQ ID NO:432) e os 5 domínios, A, B, C, D, E e F, que substituíram os domínios correspondentes na sequência IL-17RA humano. Tais técnicas são conhecidas na especialidade, consultar por exemplo Stemmer, W.P.C. et al., 1995 Gene 164:49-53.

Construíram-se seis quimeras com regiões simples e 8 com regiões duplas em vectores pTT5. As construções quiméricas A a F (quimeras de região simples) foram preparadas sinteticamente por hibridação por PCR de oligonucleót idos de 65 meros em sentido e anti-sentido que abrangem a proteína desde o local Sail a 5' do códão de iniciação a um local Notl a 3' do códão de terminação. 0 molde usado no primeiro ciclo de PCR foi uma mistura de oligonucleótidos (em sentido e anti-sentido) que abrangem a região desde o local Sail ao local Notl. Efectuou-se PCR em 2 etapas da seguinte forma:

Prepararam-se as construções quiméricas duplas por digestão das quimeras simples A a D com enzimas de restrição Sail e Saci e uma ligação de 3 vias com as quimeras E e F digeridas com Saci e Notl usando pTT5 como o vector de expressão. As quimeras huIL-17RA-FLAG-poli-His (SEQ ID NO:431) e muIL-17RA-FLAG-poli-His (SEQ ID NO:432) foram expressas transitoriamente usando células 2936-E (disponíveis de National Research Council of Canada (NRCC); consultar documento NRCC L-11565 para informação adicional) como células hospedeiras em frascos de rotação. Tais técnicas de expressão transitória são bem conhecidas na especialidade, consultar por exemplo Durocher, Y. et al., 2002 Nucleic Acids Res. 15 Jan;30 (2) :E9. Purificaram-se os sobrenadantes usando uma coluna HisTrap™ HP tal como descrito no guia do fabricante (GE Healthcare, Piscataway NJ) e eluíram-se usando um gradiente de imidazola padrão (consultar os protocolos recomendados pelo fabricante). Dessalinizou-se a proteína purificada para PBS, pH 7,2.

Alinharam-se as quimeras usando ferramentas de análise padrão, tais como ClustalW (EMBL-EBI). As proteínas quiméricas resultantes apresentam-se nas figuras 18A-18D. Relativamente às figuras 17 e 18A-18D, a Quimera A (SEQ ID NO:433) é o domínio extracelular de IL-17RA humano com domínio A de ratinho; a Quimera B (SEQ ID NO:434) é domínio extracelular IL-17RA humano com o domínio B de ratinho; a Quimera C (SEQ ID NO:435) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínio C de ratinho; a Quimera D (SEQ ID NO:436) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínio D de ratinho; a Quimera E (SEQ ID NO:437) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínio E de ratinho; a Quimera F (SEQ ID NO:438) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínio F de ratinho; a Quimera G (SEQ ID NO:439) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínios A e E de ratinho; a Quimera H (SEQ ID NO: 440) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínios B e E de ratinho; a Quimera I (SEQ ID NO:441) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínios C e E de ratinho; a Quimera J (SEQ ID NO:442) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínios D e E de ratinho; a Quimera K (SEQ ID NO: 443) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínios A e F de ratinho; a Quimera L (SEQ ID NO:444) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínios B e F de ratinho; a Quimera M (SEQ ID NO:445) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínios C e F de ratinho; e a Quimera N (SEQ ID NO:446) é domínio extracelular IL-17RA humano com domínios D e F de ratinho.

Usando métodos semelhantes aos descritos no exemplo 15, efectuou-se análise multiplex usando estação de trabalho e utilitário Bio-Plex (BioRad, Hercules, CA) para determinar os determinantes de neutralização em IL-17RA humano, por análise de ligação diferencial de exemplos de mAb IL-17RA humanos a proteínas IL-17RA quiméricas comparativamente a proteínas IL-17RA de tipo selvagem. Usaram-se doze códigos de pérolas de pérolas revestidas com pentaHis (Qiagen, Valencia, CA; consultar wwwl.qiagen.com) para capturar proteína marcada com histidina. Os 12 códigos de pérolas permitiram a análise multiplexada de 11 IL-17RA quiméricas e a de tipo selvagem humana.

Para preparar as pérolas, ligou-se 100 ui de sobrenadante IL-17RA de tipo selvagem de cultura de expressão transitória e 100 ul de proteína quimérica a 2,5 ug/ml a pérolas revestidas com penta-His durante a noite a 4 °C ou 2 horas à temperatura ambiente com agitação vigorosa. Lavaram-se as pérolas tal como no protocolo do fabricante e recolheu-se conjuntamente o conjunto de 12 pérolas e dividiram-se em alíquotas para 2 ou 3 colunas de uma placa de filtro de 96 poços (Millipore, Billerica, MA, produto n2 MSBVN1250) para pontos de ensaio em duplicado ou triplicado, respectivamente. Adicionou-se 100 ul de anticorpos anti-IL-17RA em diluições de 4 vezes aos poços, incubaram-se durante 1 hora à temperatura ambiente e lavaram-se. Adicionou-se a cada poço 100 ul de uma diluição 1:100 de Fc de IgG anti-humano conjugado a PE (Jackson Labs., Bar Harbor, ME, produto n2 109-116-170), incubou-se durante 1 hora à temperatura ambiente e lavou-se. Ressuspenderam-se as pérolas em BSA a 1%, agitaram-se durante 3 minutos e leram-se na estação de trabalho Bio-Plex. Comparou-se a ligação de anticorpo a proteína quimérica IL-17RA a ligação a anticorpo de IL-17RA humano de tipo selvagem no mesmo conjunto. Efectuou-se uma titulação de anticorpo ao longo de aproximadamente uma escala logarítmica de 5. Representou-se graficamente a intensidade de fluorescência mediana (MFI) de proteínas quiméricas como percentagem do sinal máximo de IL-17RA humano de tipo selvagem. Considerou-se que as mutações (i.e., os domínios de ratinho) que aumentam EC50 (expresso em nM) para o mAb IL-17RA 3 vezes ou mais (tal como calculado em GraphPad Prism®) afectaram negativamente a ligação de mAb IL-17RA. Através destes métodos, elucidaram-se os determinantes de neutralização para vários anticorpos IL-17RA. A figura 19 é uma tabela que sumariza a capacidade dos mAb IL-17RA se ligarem a várias proteínas quiméricas. Os valores a sombreado indicam que o mAb IL-17RA não cumpriu os critérios para ligação a essa proteína quimérica específica ("n.d." i.e. "não determinado" significa que não se ensaiou a quimera). Tal como descrito anteriormente, apresentam-se os valores de EC50. Um valor de zero indica que a ligação de anticorpo foi eliminada. Ao valor sublinhado foi atribuído a um valor de EC50 por GraphPad Prism® embora a curva de titulação tenha essencialmente atingido um patamar. A tabela 11 apresenta os valores de controlo em nM para o ensaio.

Tal como pode ser verificado na figura 19, identificaram-se pelo menos três determinantes de neutralização com base nas regiões que afectam a ligação de anticorpos neutralizantes IL-17RA, nomeadamente o domínio B que abrange os aminoácidos 75-96 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431), o domínio C que abrange os aminoácidos 128-154 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431) e o domínio D que abrange os aminoácidos 176-197 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431). 0 domínio B que abrange os aminoácidos 75-96 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431) afectou negativamente a ligação de anticorpos neutralizantes AMhI/AMlI e AMh23/AMl23. 0 domínio C que abrange os aminoácidos 128-154 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431) afectou negativamente a ligação dos anticorpos neutralizantes AMh22/AMl22 e AMh23/AMl23. 0 domínio D que abrange os aminoácidos 176-197 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431) afectou negativamente a ligação dos anticorpos neutralizantes AMH1/AML1, AMH22/AML22, AMH14/AML14, AMH19/AML19, AMh23/AMl23, AMh21/AMl21 e AMh20/AMl20. As caracterí st icas de ligação dos anticorpos IL-17RA relativamente ao local a que os anticorpos se ligam em IL-17RA humano foram confirmadas pelas quimeras duplas. Assim, considera-se que os domínios B, C e D são determinantes de neutralização.

Exemplo 17

Tal como descrito anteriormente, criaram-se e caracterizaram-se anticorpos que se ligam a IL-17RA humano e inibem ou neutralizam a ligação de IL-17A e/ou IL-17F. Para determinar os determinantes de neutralização em IL-17RA humano aos quais se ligam estes vários anticorpos IL-17RA, construíram-se várias proteínas IL-17RA mutantes com substituições de arginina em resíduos de aminoácidos seleccionados de IL-17RA humano. 0 rastreio de arginina é um método reconhecido na especialidade para avaliar em que local é que anticorpos ou outras proteínas se ligam a outra proteína, consultar por exemplo Nanevicz, T., et al., 1995, J. Biol. Chem., 270:37, 21619-21625 e Zupnick, A., et al. , 2006, J. Biol. Chem., 281:29, 20464-20473. Em geral, a cadeia lateral de arginina é carregada positivamente e relativamente volumosa comparativamente a outros aminoácidos, o que pode eliminar a ligação de anticorpo a uma região do antigene em que se introduziu a mutação. O rastreio de arginina é um método que determina se um resíduo faz parte de um determinante de neutralização e/ou epítopo.

Seleccionaram-se 95 aminoácidos distribuídos ao longo do domínio extracelular de IL-17RA humano para mutação para arginina. A selecção foi desviada para aminoácidos carregados ou polares para maximizar a probabilidade do resíduo estar na superfície e reduzir a probabilidade da mutação resultar numa proteína mal enrolada. A figura 20 apresenta os resíduos de aminoácidos que foram substituídos por um resíduo de arginina em SEQ ID NO :431. Usando técnicas padrão conhecidas na especialidade, conceberam-se oligonucleótidos em sentido e anti-sentido contendo os resíduos mutados com base nos critérios proporcionados pelo protocolo do kit Stratagene Quickchange® II (Stratagene/Agilent, Santa Clara, CA) . Efectuou-se mutagénese de HuIL-17RA-Flag-pHis de tipo selvagem (WT) usando um kit Quickchange® II (Stratagene) . Todas as construções quiméricas foram construídas de modo a codificarem uma cauda FLAG-histidina (seis histidinas) no terminal carboxilo do domínio extracelular para facilitar a purificação através da cauda poli-His.

Efectuou-se análise multiplexada usando a estação de trabalho e utilitário Bio-Plex (BioRad, Hercules, CA) para determinar determinantes de neutralização em IL-17RA humano por análise de ligação diferencial de exemplos de mAb IL-17RA humano a mutantes de arginina relativamente a proteínas IL-17RA de tipo selvagem. Usaram-se doze códigos de pérolas de pérolas revestidas com pentaHis (Qiagen, Valencia, CA; consultar wwwl.qiagen.com) para capturar proteína marcada com cauda de histidina. Os 12 códigos de pérolas permitiram a análise multiplexada de 11 mutantes de arginina de IL-17RA e de IL-17RA humano de tipo selvagem (SEQ ID NO:431).

Para preparar as pérolas, ligou-se 100 ul de sobrenadantes de IL-17RA de tipo selvagem e de mutantes de arginina de IL-17RA de cultura de expressão transitória a pérolas revestidas com pentaHis durante a noite a 4 °C ou 2 horas à temperatura ambiente com agitação vigorosa. Lavaram-se as pérolas tal como descrito no protocolo do fabricante e recolheram-se conjuntamente o conjunto de 12 pérolas e separaram-se em alíquotas para 2 ou 3 colunas de uma placa de filtro de 96 poços (Millipore, Bellerica, MA, produto n2 MSBVN1250) para pontos de ensaio em duplicado ou triplicado, respectivamente. Adicionou-se aos poços 100 ui de anticorpos anti-IL-17RA em diluições de 4 vezes, incubou-se durante 1 hora à temperatura ambiente e lavou-se. Adicionou-se a cada poço 100 ui de uma diluição 1:100 de Fc de IgG anti-humano conjugado a PE (Jackson Labs., Bar Harbor, ME, produto n2 109-116-170), incubou-se durante 1 hora à temperatura ambiente e lavou-se. Ressuspenderam-se as pérolas em BSA a 1%, agitaram-se durante 3 minutos e leram-se na estação de trabalho Bio-Plex. Comparou-se a ligação de anticorpo a proteína mutante de arginina IL-17RA a ligação de anticorpo a IL-17RA humano de tipo selvagem do mesmo conjunto. Efectuou-se uma titulação de anticorpo ao longo de aproximadamente uma escala logarítmica de 5. Representou-se graficamente a intensidade de fluorescência mediana (MFI) das proteínas mutantes de arginina de IL-17RA como percentagem do sinal máximo de IL-17RA humano de tipo selvagem. Considera-se que os mutantes para os quais o sinal para todos os anticorpos é inferior a 30% do sinal de IL-17RA de tipo selvagem têm uma concentração de proteína na pérola demasiado baixa, devido a fraca expressão na cultura transitória, ou que estão possivelmente mal enroladas e foram excluídos da análise: estas foram T51R, K53R, S55R, H64R, D75R, El1 OR, Q118R, T121, E123R, S147R, H148R, E158R, T160R, H163R, K191R, T193R, E213R, H251R, T269R, H279R e D293R. Considera-se que as mutações (i.e., substituições por arginina) que aumentam o EC50 para mAb IL-17RA 3 ou mais vezes (tal como calculado em GraphPad Prism®) afectaram negativamente a ligação a mAb IL-17RA. Através destes métodos, elucidaram-se os determinantes de neutralização e epítopos para vários anticorpos IL-17RA. A figura 21 ilustra curvas de titulação de ligação de vários mAb IL-17RA ao mutante D152R IL-17RA (i.e., o ácido aspártico na posição 152 de SEQ ID NO:431 foi mutado para ser uma arginina) . Os anticorpos AMhI/AMlI, AMh22/AMl22, AMh 14/ AMl 14, AMh19/AMl19, AMh23/AMl23, AMh21/AMl21 e AMH20/AML20 perderam a capacidade de se ligar ao mutante D152R IL-17RA. Os anticorpos AMH18/AML18 e AMH26/AML26 foram apenas ligeiramente afectados mas não cumpriram os critérios de exclusão.

Apresenta-se na figura 22, um resumo dos dados de rastreio de argininas, separação em divisões e quimeras. A metodologia de varrimento de arginina identificou vários determinantes de neutralização: AMh18/AMl18 ligou-se a um domínio que abrange os aminoácidos 220-284 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMhI/AMlI ligou-se a um domínio focado no resíduo de aminoácido 152 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh22/AMl22 ligou-se a um domínio que abrange os aminoácidos 152-198 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh14/AMl14 ligou-se a um domínio que abrange os aminoácidos 152-297 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh19/AMl19 ligou-se a um domínio que abrange os aminoácidos 152-186 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh23/AMl23 ligou-se a um domínio que abrange os aminoácidos 97-297 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh26/AMl26 ligou-se a um domínio que abrange os aminoácidos 138-270 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); AMh21/AMl21 ligou-se a um domínio que abrange os aminoácidos 113-198 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431); e AMh20/AMl20 ligou-se a um domínio que abrange os aminoácidos 152-270 de IL-17RA humano (SEQ ID NO:431).

Demonstrou-se que todos os resíduos apresentados na figura 22 eliminam a ligação de um anticorpo monoclonal humano de neutralização que se liga especificamente a IL-17RA humano.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> AMGEN INC. <120> PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO DE ANTIGÉNIO DE RECEPTOR IL-17 <130> A-l116-WO-PCT <140> --a ser atribuído--<141> 2007-10-01 <150> 60/969,895 <151> 2007-09-04 <150> 60/873,072 <151> 2006-12-05 <150> 60/827,882 <151> 2006-10-02 <160> 470

<170> Patentln versão 3.3 <210> 1 <211> 131 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 1

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu val Lys Pro ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly ser lie ser Asn Tyr 20 25 30

Tyr Trp Asn Trp lie Arg Gin Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Asp lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro ser Leu Lys 50 55 60 ser Arg val Thr lie ser val Asp Thr ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Lys Leu ser ser val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Asp Gly Glu Leu Ala Asn Tyr Tyr Gly ser Gly ser Tyr Gin Phe 100 105 HO

Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr 115 120 125 val ser Ser 130

<210> 2 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2

Gin Val Gin Leu Gin Gin Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala val Ser Gly Gly ser Phe ser Gly Tyr 20 25 30

Tyr Trp ser Trp lie Arg Gin pro pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Glu lie Asn His Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60

Ser Arg val Thr lie ser val Asp Thr ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Gly pro Tyr Tyr Phe Asp ser ser Gly Tyr Leu Tyr Tyr Tyr Tyr 10 D 105 110

Gly Leu Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 3 <211> 114

<212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 3

Gin val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly lie Asn Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vat Thr val 100 105 110 ser ser

<210> 4 <211> 114 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly lie Asn Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 ' 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95

Ala Arg Asp Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 ser ser

<210> 5 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 5

Gin val Gin Leu Gin Glu sen Gly Pro Gly Leu val Lys pro ser Glu 15 10 15

Thr Leu Pro Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Arg ser Tyr 20 25 30

Tyr Trp ser Trp lie Arg Gin pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Arg lie Tyr Arg ser Gly Asn Thr lie Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 ser Arg val Thr Met ser lie Asp Thr ser Lys Asn Gin Phe ser Leu 65 70 75 80

Thr Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Glu Asn Tyr Ser Glu Ser Ser Gly Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 6 <211> 124

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6

Gin val Gin Leu val Gin ser Gly Ala Glu val Lys Lys pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Arg Tyr 20 25 30

Gly He Ser Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Asp lie Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Gly Phe Asp 100 105 110

Pro Trp Gly Gin Gly Thr Leu val Thr val ser ser 115 120 <210> 7 <211> 124

<212> PRT <213> Homo sapiens

Gin Val Gin Leu val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 <4Ο0> 7

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Arg Tyr 20 25 30

Gly lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60

Gin Gly Arg val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Thr ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Asp lie Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Gly Phe Asp 100 105 110

Pro Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 124

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8

Gin val Gin Leu Val Gin ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Gly lie ser Trp val Arg Gin Ala pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie ser Ala Tyr asm Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Asn Leu 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Thr ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Asp lie Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Gly Phe Asp 100 105 110

Pro Trp Gly Gin Gly Thr Leu val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 9 <211> 124 <212> PRT <213> Homo sapiens

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 <4Ο0> 9 ser val Lys val ser cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr Leu Thr Arg Tyr 20 25 30

Gly lie ser Trp val Arg Gin Ala pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Arq Asp Tyr Asp lie Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Gly Phe Asp 100 105 110

Pro Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 124

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 10

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser ser Gly 20 25 30

Gly Tyr Tyr Trp ser Trp lie Arg Gin His pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Tyr lie Tyr Phe ser Gly ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

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Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Glu Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Pro Asp Ala Phe Asp 100 105 110

He Trp Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser ser 115 120 <210> 11 <211> 114

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 11

Gin val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly val val Gin Pro Gly Arg 15 10 15 ser Leu Arg Leu ser cys Ala Thr Ser Gly lie Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly wet His Trp vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp vai 35 40 45

Ala Vai lie Trp Tyr Asp Gly ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp ser vai 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Thr Lys Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai 100 105 110 ser Ser

<210> 12 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 12

Gin Vai Gin Leu vai Gin ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Vai Lys Vai Ser cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr 20 25 30

Gly lie Ser Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Lys Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60

Gin Gly Arg vai Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala vai Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Lys Gin Leu vai phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai 100 105 110

Thr Vai Ser Ser 115

<210> 13 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 13

Gin Val Gin Leu Vai Glu ser Gly Gly Gly Vai Vai Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 5er Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met Gin Trp Val Arg Gin Ala pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Asn Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp ser val SO 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Arg Val Arg Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 14 <211> 116

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 14

Gin val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 ser val Lys val ser cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20. 25 30

Gly lie ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie ser Thr Tyr ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60

Gin Gly Arg val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Thr ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Arg Gin Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110

Thr val ser ser 115

<210> 15 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 15

Gin val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly val val Gin pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 5er Tyr 20 25 30

Gly Met Gin Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala val lie Trp Tyr Asp Gly Asn Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Arg val Arg Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp val Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 16 <211> 116

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 16

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr ser Tyr 20 25 30

Gly lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Thr ser Thr val Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Lys Gin Leu Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu val 100 105 110

Thr Val Ser Ser 115

<210> 17 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 17

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ala Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr 20 25 30

Gly lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Ser Ala Tyr Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60

Gin Gly Arg val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Lys Gin Leu Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu val 100 105 110

Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 126

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 18

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp Met His Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asp Leu Ala Gin Arg Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie ser Thr Ala Tyr

65 70 75 SO

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr cys Ser Thr Leu Ser Cys Ser Phe Tyr Trp Tyr 100 105 110

Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125

<210> 19 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 19

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr ser Tyr 20 25 30

Gly lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Ser Ala Tyr Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Thr ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Arg Gin Leu Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110

Thr Val Ser Ser 115

<210> 20 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens

Glu Vai Gin Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Leu vai Gin Pro Gly Gly 15 10 15 <4Ο0> 20

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ser Met Asn Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 40 45

Ser Phe lie Ser Ala Arg Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Pro Lys Vai Gly Gly Gly Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Thr Vai Thr Vai Ser Ser 115

<210> 21 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21

Glu Vai Gin Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Ser Vai Gin Pro Gly Gly 15 10 15 ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser ser Tyr 20 25 30

Ser Met Asn Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 40 45 ser lie lie ser ser Arg ser ser lie lie His Tyr Ala Asp ser vai 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr ile ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Pro Lys Vai Gly Gly Gly Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Thr Vai Thr Vai ser Ser 115

<210> 22 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22

Gin vai Gin Leu vai Gin ser Gly Ala Glu vai Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 ser vai Lys vai ser cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr phe Thr Arg Tyr 20 25 30

Gly lie Ser Trp vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp ile ser Ala Tyr ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60

Gin Gly Arg vai Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 wet Glu Leu Arg ser Leu Arg ser Asp Asp Thr Ala vai Tyr Tyr cys 85 90 95

Ala Arg Arg Gin Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai 100 105 110

Thr Vai Ser Ser 115

<210> 23 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23

Gin vai Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu vai Lys Pro ser Glu 15 10 15

Thr Leu ser Leu Thr cys Thr vai ser Gly Gly ser ile ser ser Tyr 20 25 30

Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Ala Gly Lys Arg Leu Glu Trp rle 35 40 45

Gly Arg lie Tyr pro ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn pro ser Leu Lys 50 55 60

Ser Arg vai Thr Met ser vai Asp Thr ser Lys Asn Gin Phe ser Leu 65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Vai Thr Ala Ala Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Glu Ala Tyr Glu Leu Gin Leu Gly Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 100 105 110

Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Pro Vai Thr Vai Ser Ser 115 120 125

<210> 24 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24

Gin vai Gin Leu Gin Glu ser Gly pro Gly Leu vai Lys pro ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Vai Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Tyr Trp Scr Trp lie Arg Gin Ala Ala Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ilc 35 40 45

Gly Arg lie Tyr Pro 5er Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60

Ser Arg Val Thr Met 5er Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys Ala 85 90 95

Arg Glu Ala Tyr Glu Leu Gin Leu Gly Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 100 105 110

Asp val Trp Gly Gin Gly Thr pro val Thr val ser ser 115 120 125 <210> 25 <211> 124

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie ser ser Gly 20 25 30

Gly Tyr Tyr Trp ser Trp lie Arg Gin hi s pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro ser 50 55 60

Leu Arg ser Arg val Thr lie ser val Asp Thr ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arq Glu Ala Gly Gly Asn Ser Ala Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 100 105 110 val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr val Ser ser 115 120 <210> 26 <211> 125

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26

Gin val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Scr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95

Ala Arg Asp Arg Thr Tyr Tyr Phe Gly Ser Gly ser Tyr Glu Gly Met 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr val Ser Ser 115 120 125 <210> 27 <211> 107

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27

Asp lie Leu Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala ser ser Leu Gin ser Gly val pro ser Arg Phe ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Ser Asn Pro Phe 85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105

<210> 28 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Arg Asn 20 25 30

Leu Val Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala ser Thr Arg Ala Asn Gly lie pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 ser Gly ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Lys Ser Trp Arg Thr 85 90 95

Phe Gly Gin Gly Ser Lys Val Glu lie Lys 10D 105

<210> 29 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 29

Asp lie Gin Met Thr Gin ser Pro Ser Ser Leu ser Ala ser val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr Tie Thr cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly val pro ser Arg Phe ser Gly 50 55 60 ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys ser Tyr Pro Leu 85 90 95

Thr phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 30 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30

Glu lie val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Arg Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Thr 85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 31 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro ser ser Leu ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala ser ser Phe Gin ser civ val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 ser Gly ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro

65 70 75 SO

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys val Glu lie Lys 100 105

<210> 32 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32

Asp lie Gin Met Thr Gin ser pro ser ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg val Thr lie Thr cys Arg Ala ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala ser Ser Leu Gin ser Gly val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 33 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser pro Ser ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 ser Gly ser Gly Thr Glu Phe Thr i_eu Thr lie Ser ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 34 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 34

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro ser ser Leu Ser Ala Ser val Gly 15 10 15

Asp Arg val Thr lie Thr cys Arg Ala ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala ser Ser Leu Gin ser Gly val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin pro

65 70 75 SO

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Leu Gin Hi's Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 35 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala ser ser Leu Gin ser Gly val pro ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 36 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser val Ser Ala ser val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg 5er Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 phe Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin Pro

65 70 75 SO

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Asn phe Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 37 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37

Glu lie val Met Thr Gin ser pro Ala Thr Leu ser val ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys pro Gly Gin Ala pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ala Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Gly Gly ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Thr lie ser Asn Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala val Tyr Tyr Cys Gin His Tyr lie Asn Trp Pro Lys 85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105

<210> 38 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu ser val ser pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Ser 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asn Phe Ala Val Tyr Tyr cys Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 39 <211> 112

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39

Asp rle Val Met Thr Gin Thr Pro Leu ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gin Pro Ala ser lie Ala cys lvs ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 40 45 pro Gin Leu Leu lie lyr gIu val ser Thr Arg phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Phe Tyr Cys Met Gin Scr 55 90 95 rle Gin Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 lit)

<210> 40 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40

Glu lie val Met Thr sin ser pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu ser cys Arg Ala Ser Gin Ser val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Pro Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser i eu Gin ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 41 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Pro Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Ala Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42

Glu lie val Met Thr Gin ser Pro Ala Thr Leu ser val ser pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Thr Ser 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys pro Gly Gin Ala pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Thr Ser Thr Arg Ala Thr Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 ser Gly ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala val Tyr Phe Cys Gin Gin Tyr Asp lie Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 43 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu ser val ser pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 ' 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala val Tyr Ser cys Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys val Glu lie Lys 100 105

<210> 44 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44

Asp lie val Met Thr Gin ser pro asp ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys Lys Thr Ser Gin ser Val Leu Tyr ser 20 25 30

Ser Lys Asn Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 3b 40 45

Pro Leu Asn Leu Leu lie Tyr Trp Ala ser Thr Arg Glu Ser Gly Val SO 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 SO rle Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr cys Gin Gin 85 90 95

Tyr Tyr ser Thr pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Tie 100 105 110

Lys

<210> 45 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser val ser pro Gly 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Tnp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Asp 50 55 60

Asn Gly ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gin Gin Tyr Asp Thr Trp Pro Leu 85 90 95

Thr phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 46 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 46

Asp lie Gin Met Thr Gin ser Pro ser ser Leu ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Phe Pro Glu Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe ser Gly 50 55 60 ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser ser Leu Gin pro

65 70 75 SO

Glu Asp val Ala Thr Tyr Tyr cys Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Phe 85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys val Asp lie Lys 100 105

<210> 47 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47

Asp lie Gin Met Thr Gin ser pro ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg val Thr lie Thr cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Phe Pro Glu Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala ser Thr Leu Gin ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Phe 85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Tie Lys 100 105

<210> 48 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48

Glu lie val Met Thr Gin ser Pro Ala Thr Leu ser val ser pro Gly 15 10 15

Glu Arg Val Thr Leu ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp phe Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg pro Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Ala Gly He Pro Ala Arg Phe ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin ser

65 70 75 SO

Glu Asp Phe Ala val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu S5 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 49 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49

Asp lie Gin Met Thr Gin ser pro ser ser Leu ser Ala ser val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie lie Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala ser ser Leu Gin ser Gly val pro ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Phe Thr lie ser ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 50 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 15 10 15

Gin Pro Ala Ser lie ser cys Arg Ser ser Gin ser Leu val Tyr ser 20 25 30

Asp Gly His Thr cys Leu Asn Trp Phe Gin Gin Arg pro Gly Gin ser 35 40 45

Pro Arg Arg Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Trp Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin Gly 85 90 95

Thr His Trp Pro Leu cys ser phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie 100 105 110

Lys

<210> 51 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 51

Asp lie Val Met Thr Gin ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 15 10 15

Gin pro Ala ser lie ser cys Arg ser ser Gin ser Leu val Tyr ser 20 25 30

Asp Gly His Thr cys Leu Asn Trp Phe Gin Gin Arg Pro Gly Gin ser 35 40 45

Pro Arg Arg Leu lie Tyr Lys val ser Asn Trp Asp ser Gly val pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin Gly 85 90 95

Thr His Trp pro Leu cys ser Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie 10 D 105 110

Lys

<210> 52 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 ID 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ala lie Ser lie Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys pro Gly Lys Ala Pro Lys ser Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Val ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ser Ser Tyr Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 53 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53

Glu Tie Leu Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45 ser Gly Ala ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Tyr Asn Trp Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 54 <211> 393 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 54 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctcaggtgg ctccatcagt aattactact ggaactggat ccggcagtcc 120 ccagggaagg gactggagtg gattggggat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccac tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatggggaa 300 ctcgccaatt actatggttc ggggagttat cagttctact actactacgg tatggacgtc 360 tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tea 393

<210> 55 <211> 381 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 55 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggaatg gattggggaa atcaatcata gtggacgcac caattacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtttatt actgtgcgag aggcccttat 300 taetttgata gtagtggtta cctttactac tactacggtt tggacgtctg gggccaaggg 360 accacggtca ccgtctcctc a 381

<210> 56 <211> 342 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 56 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggaat caacttcagt agetatggea tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaacactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatact 300 ggggtctact ggggccaggg aaccctggtc accgtctcct ca 342

<210> 57 <211> 342 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 57 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggaat caacttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaacactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatact 300 ggggtctact ggggccaggg aaccctggtc accgtctcct ca 342

<210> 58 <211> 375 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 58

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgcccctc bU acctgcactg tctctggtgg ctccatcaga agttactact ggagctggat ccggcagccc 120

gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atctatcgca gtgggaacac catctacaac ISO ccctccctca agagtcgagt caccatgtca atagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 acgctgagtt ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agagaattac 300 tctgagagta gtggtctcta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375

<210> 59 <211> 372 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 59 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta caccttaacc agatatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggttgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca cgtccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaagggat 300 tacgatattt tgactggtta ttataacggg ttcgacccct ggggccaggg aaccctggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 60 <211> 372

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 60 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 50 tcctgcaagg cttctggtta caccttaacc agatatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggttgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca cgtccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaagggat 300 tacgatattt tgactggtta ttataacggg ttcgacccct ggggccaggg aaccctggtc 360 accgtctcct ca 372

<210> 61 <211> 372 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 61 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtaa cacctttacc ggctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180 gcacagaacc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaagggat 300 tacgatattt tgactggtta ttataacggg ttcgacccct ggggccaggg aaccctggtc 360 accgtctcct ca 372

<210> 62 <211> 372 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 62 caggttcagc tggtgcagtc tggagttgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta caccttaacc agatatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggttgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaagggat 300 tacgatattt tgactggtta ttataacggg ttcgacccct ggggccaggg aaccctggtc 360 accgtctcct ca 372

<210> 63 <211> 372 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 63 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120 cagcaccccg ggaagggcct ggaqtqgatt gggtacatct atttcagtgg gagcgcctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcgcc atatcagtgg acacgtctaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tatattactg tgcgagagaa 300 tactatgata gtagtggtta ccccgatgct tttgatatct ggggccaagg gacaatggtc 360 accgtctcct ca 372

<210> 64 <211> 342 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 64 caggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa cgtccggaat caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaatattat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acaqcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatacg 300 aaggactact ggggccaggg aaccctggtc accgtctcct ca 342

<210> 65 <211> 348 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 65 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta caccctcacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatgggatgg atcagcactt acaaaggtaa cacaaactat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atqgaactga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaaagcag 300 ctcgtctttg actactgggg tcagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348

<210> 66 <211> 363 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 6 6 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcagtgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaaataa gaaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggacgt 300 gttagggact actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363

<210> 67 <211> 350 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 67 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaage ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agatatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcactt acagtggtaa eacaaactat ISO gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atetgaegae acggccgtgt attactgtgc gagaeggeag 300 ctttactttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcagc 350

<210> 68 <211> 363 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 68 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agetatggea tgcagtgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaaataa gaaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggacgt 300 gttagggact actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363

<210> 69 <211> 348 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 6 9 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaage ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaaqtat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagtctac 240 atggagctga ggagcctgag atetgaegae acggccgtgt attactgtgc gagaaagcag 300 ctcgtctttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348

<210> 70 <211> 348 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 70 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggccgc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg ctactggtta caccttgacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acagtggtaa tacaaagtat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaaagcag 300 ctcgtctttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348

<210> 71 <211> 378 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 71 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata ctccttcacc gactactaca tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatgggatgg atgcacccta acagtggtgg cacagactta 180 gcacagaggt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaggggga 300 tattgtagta ctttgagctg ctccttctac tggtacttcg atctctgggg ccgtggcacc 360 ctggtcactg tctcctca 378

<210> 72 <211> 348 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 72 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta caccttgacc agctatggaa tcagttgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acagtggtaa cacaaagtat ISO gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaaggcag 300 ctcgcgttgg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348

<210> 73 <211> 354 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 73 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagc agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcattc attagtgcta gaagtagtac catatactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagacctaaa 300 gtggggggcg gtatggacgt ctggggccaa ggaaccacgg tcaccgtctc ctca 354

<210> 74 <211> 354 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 74 gaggtgcagt tggtggagtc tgggggaggc tcggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtttcaatc attagtagta gaagtagtat catacactac ISO gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagacctaaa 300 gtggggggcg gtatggacgt ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354

<210> 75 <211> 348 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 75 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta eacctttacc agatatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acagtggtaa cacaaactat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagacggcag 300 ctttactttg actactgggg ccaqgqaacc ctqqtcaccg tctcctca 348

<210> 76 <211> 375 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 76 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tcactggtgg ctccatcagg agttactact ggagctggat ccggcagccc 120 gccgggaaga gactggagtg gattgggcgt atctatccca gtgggagaac caactacaac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agaggcatat 300 gagctgcaac tgggcctcta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccccg 360 gtcaccqtct cctca 375

<210> 77 <211> 375 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 77 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tcactggtgg ctccatcagg agttactact ggagctggat ccggcaggcc 120

gccgggaaga gactggagtg gattgggcgt atctatccca gtgggagaac caactacaac ISO ccctccctca agagtcgagt caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agaggcatat 300 gagctgcaac tgggcctcta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccccg 360 gtcaccgtct cctca 375

<210> 78 <211> 372 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 78 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gaacacctac 180 tacaacccgt ccctcaggag tcgagttacc atatcagttg acacgtctaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgaactctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagag 300 gccggtggta actccgccta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ca 372

<210> 79 <211> 375 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 79 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta qtggtagtac catatactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatcgc 300 acgtattact ttggttcggg gagttatgaa gggatggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375

<210> 80 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 80 gacatcctga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtcggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctqgtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatcc ISO aggttcagcg gcagtggctc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagta acccattcac tttcggccct 300 gggaccaaaq tggatatcaa a 321

<210> 81 <211> 318 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 81 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga angagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agaaacttag tctggtacca gcagagacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggg gcatccacta gggccaatgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc agggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataaaagct ggcggaçgtt cggccaaggg 300 tccaaggtgg aaatcaaa 318

<210> 82 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 82 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta ccccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321

<210> 83 <211> 324 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 83 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt aggaatttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggccçacgtg gacgttcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaa 324 <210> 84 <211> 321

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 84 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaagcca 120 gggaaagccc ctaaacgcct gatctatgct gcatccagtt tccaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagga ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctccgac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321

<210> 85 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 85 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataaaagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 86 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 86 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataaaagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 87 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 87 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataagagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 88 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 88 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacta 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctacgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataaaagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 89 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 89 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagg agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctttgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacaatt tccctcggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321

<210> 90 <211> 324 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 90 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccgctgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcggtgggtc tgggacagcg ttcactctca ccatcagcaa cctacagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcac tatataaact ggcctaagtg gacgttcggc 300 caagggacca agqtggacat caaa 324

<210> 91 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 91 gaaatagtaa tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagLattagc agcagcttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaaaattttg cagtttatta ctgtcagcaa tatgataact ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 92 <211> 336 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 92 gatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 60 atcgcctgca agtctagtca gagcctcctg catagtgatg gaaagaccta tttgtattgg 120 tacctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct atgaagtttc cacccggttc 180 tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agccgggtgg aggctgagga tgttggggtt ttttactgca tgcaaagtat acagcttccg 300 ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaa 336

<210> 93 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 93 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctcctgggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggttcca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggcccct catctatgat gcatccacca gggccactgg tgtcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tatgataact ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 94 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 94 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagtcacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggttcca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggcccct catctatgat gcatccacca gggccgctgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tatgataact ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 95 <211> 324

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 95 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtattagc accagcttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt acatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtcaacag tatgatatct ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tgqagatcaa acga 324

<210> 96 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 9 6 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttattc ctgtcagcag tatgataact ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 97 <211> 339 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 97 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agaccagcca gagtgtttta tacagctcca aaaacaagaa cttcttagct 120 tggtatcagc agaaaccagg acagcctctt aacctgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300 ccattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa 339

<210> 98 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 98 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtattagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg acaatgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtcagcag tatgatacct ggcctctcac tttcggcggc 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 99 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 99 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaatttc ctgagctcct gatctatgct gcatccactt tacaatcagg ggtcccatct ISO cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagatgttg caacttatta etgtcaaaag tataaccgtg ccccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321

<210> 100 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 100 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaatttc ctgagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct ISO cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagatgttg caacttatta etgtcaaaag tataaccgtg ccccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321

<210> 101 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 101 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagtcacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggttcca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggcccct catctatgat gcatccacca gggccgctgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tatgataact ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 102 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 102 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 60 atctcttgcc gggcaagtxa gggcattata aatgatUag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaaqtgg qgtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactttca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctccgac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321

<210> 103 <211> 339 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 103

gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc SO atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta tatagtgatg gacacacctg cttyaattgg 120 tttcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt ataaggtttc taactgggac 180 tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aggctgacga tgttggggtt tattactgca tgcaaggtac acactggcct 300 ctgtgcagtt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaa 339

<210> 104 <211> 339 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 104 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta tatagtgatg gacacacctg ctLgaattgg 120 tttcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt ataaggtttc taactgggac 180 tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aggctgacga tgttggggtt tattactgca tgcaaggtac acactggcct 300 ctgtgcagtt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaa 339

<210> 105 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 105 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca ggccattagc atttatttag cctggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aagttcagcg gcagtgtatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tatagtagtt accctcggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321

<210> 106 <211> 321 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 106 gaaatattga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgtttac agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccagactcct catctctggt gcttccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tattataact ggccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321

<210> 107 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 107

Asn Tyr Tyr Trp Asn 1 5

<210> 108 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 108

Asp lie Tyr Tyr ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro ser Leu Lys Ser IS 10 15 <210> 109 <211> 23

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 109

Asp Gly Glu Leu Ala Asn Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Gin Phe Tyr 15 10 15

Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 20

<210> 110 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 110

Gly Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 111 <211> 16

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111

Glu lie Asr His ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Pro ser Leu Lys ser 15 10 15 <210> 112 <211> 19

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 112

Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Ser ser Gly Tyr Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 15 10 15

Leu Asp Val

<210> 113 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 113

Ser Tyr Gly Met His 1 5

<210> 114 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 114

Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser val Lys 15 10 15

Gly

<210> 115 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 115

Asp Thr Gly val Tyr 1 5 <210> 116 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 116

Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 117 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 117

Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn I ys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly

<210> 118 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 118

Asp Thr Gly val Tyr 1 5 <210> 119 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 119 ser Tyr Tyr Trp ser 1 5 <210> 120 <211> 16

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 120

Arg lie Tyr Arg Ser Gly Asn Thr lie Tyr Asn Pro ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 121 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 121

Glu Asn Tyr ser olu Ser Ser Gly Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 15 10 15 val

<210> 122 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 122

Arg Tyr Gly lie Ser 1 5 <210> 123 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 123

Trp lie Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 15 10 15

Gly

<210> 124 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 124

Arg Asp Tyr Asp lie Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Gly Phe Asp Pro 15 10 15 <210> 125 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 125

Arg Tyr Gly lie Ser 1 5 <210> 126 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 126

Trp lie ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 15 10 15

Gly

<210> 127 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 127

Arg Asp Tyr Asp lie Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Gly Phe Asp Pro 15 10 15 <210> 128 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 128

Gly Tyr Gly lie ser 1 5 <210> 129 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 129

Trp lie ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Asn Leu Gin 15 10 15

Gly

<210> 130 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 130

Arg Asp Tyr Asp lie Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Gly Phe Asp Pro 15 10 15 <210> 131 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 131

Arg Tyr Gly lie Ser 1 5 <210> 132 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 132

Trp lie Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 15 10 15

Gly

<210> 133 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 133

Arg Asp Tyr Asp lie Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Gly Phe Asp Pro 15 10 15 <210> 134 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 134

Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp ser 1 5 <210> 135 <211> 16

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 135

Tyr lie Tyr Phe Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys ser 15 10 15 <210> 136 <211> 14

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 136

Glu Tyr Tyr Asp ser ser Gly Tyr Pro Asp Ala phe Asp lie 15 10 <210> 137 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 137 ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 138 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 138

Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp ser val Lys 15 10 15

Gly

<210> 139 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 139

Asp Thr Lys asp Tyr 1 5

<210> 140 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 140

Ser Tyr Gly rle Ser 1 5 <210> 141 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 141

Trp lie ser Thr Tyr Lys Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 15 10 15

Gly

<210> 142 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 142

Lys Gin Leu val Phe Asp Tyr 1 5

<210> 143 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 143 ser Tyr Gly Met Gin 1 5 <210> 144 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 144 val lie Trp Tyr Asp Gly Asn Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp ser val Lys 15 10 15

Gly

<210> 145 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 145

Gly Arg val Arg Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp val 1 5 10 <210> 146 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 146

Arg Tyr Gly lie Ser

<210> 147 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 147

Trp lie ser Thr Tyr ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 15 10 15

Gly

<210> 148 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 148

Arg Gin Leu Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 149 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 149 ser Tyr Gly Met Gin 1 5 <210> 150 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 150 val lie Trp Tyr Asp Gly Asn Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly

<210> 151 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 151

Gly Arg val Arg Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp val 1 5 10 <210> 152 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 152

Ser Tyr Gly lie Ser 1 5 <210> 153 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 153

Trp lie ser Ala Tyr Asn Gly ash Thr Lys Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 15 10 15

Gly

<210> 154 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 154

Lys Gin Leu val phe Asp Tyr 1 5 <210> 155 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 155 ser Tyr Gly lie ser 1 5 <210> 156 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 156

Trp lie ser Ala Tyr ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 15 10 15

Gly

<210> 157 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 157

Lys Gin Leu val Phe Asp Tyr 1 5 <210> 158 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 158

Asp Tyr Tyr Met His 1 5

<210> 159 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 159 ττρ Met Hi's Pro Asn ser Gly Gly Thr Asp Leu Ala Gin Arg Phe Gin 15 10 15

Gly

<210> 160 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 160

Gly Gly Tyr cys Scr Thr Leu 5cr Cys Ser Phe Tyr Trp Tyr Phe Asp 15 10 15

Leu

<210> 161 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 161 ser Tyr Gly lie Ser 1 5 <210> 162 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 162

Trp lie Ser Ala Tyr Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 1 5 10 15

Gly

<210> 163 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 163

Arg Gin Leu Ala Leu Asp Tyr 1 5 <210> 164 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 164

Ser Tyr Ser Met Asn 1 5

<210> 165 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 165

Phe lie Ser Ala Arg Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp ser val Lys IS 10 15

Gly

<210> 166 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 166

Pro Lys val Gly Gly Gly Met Asp val 1 5 <210> 167 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 167 ser Tyr ser Met Asn 1 5 <210> 168 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 168

He rle ser ser Arg ser ser lie lie His Tyr Ala Asp ser val Lys 15 10 15

Gly

<210> 169 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 169

pro Lys val Gly Gly Gly Met Asp val 1 S <210> 170 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 170

Arg Tyr Gly lie Ser 1 5 <210> 171 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 171

Trp lie ser Ala Tyr ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 15 10 15

Gly

<210> 172 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 172

Arg Gin Leu Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 173 <211> 5

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 173

Ser Tyr Tyr Trp Ser 1 5

<210> 174 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 174

Arg lie Tyr Pro Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn pro ser Leu Lys ser 15 10 15 <210> 175 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 175

Glu Ala Tyr Glu Leu Gin Leu Gly Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 15 10 15 val

<210> 176 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 176 ser Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 177 <211> 16

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 177

Arg lie Tyr pro Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn pro ser Leu Lys ser IS 10 15 <210> 178 <211> 17

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 178

Glu Ala Tyr Glu Leu Gin Leu Gly Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 15 10 15 val

<210> 179 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 179

Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp ser 1 5 <210> 180 <211> 13

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 180

Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro ser Leu Arg ser 1 5 10 <210> 181 <211> 14

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 181

Glu Ala Gly Gly Asn ser Ala Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp val 15 10

<210> 182 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 182

Asp Tyr Tyr Met ser 1 5

<210> 183 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 183

Tyr lie ser ser ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp ser vai Lys 1 S 10 15

Gly

<210> 184 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 184

Asp Arg Thr Tyr Tyr Phe Gly ser Gly ser Tyr Glu Gly Met Asp vai 15 10 15 <210> 185 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 185

Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp Leu Gly 1 5 10 <210> 186 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 186

Ala Ala ser ser Leu Gin ser 1 5

<210> 187 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 187

Leu Gin His Asn Ser Asn Pro Phe Thr 1 5 <210> 188 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 188

Arg Ala Ser Gin Ser vai Ser Arg Asn Leu vai 1, 5 10

<210> 189 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 189

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Asn 1 5

<210> 190 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 190

Gin Gin Tyr Lys Ser Trp Arg Thr 1 5 <210> 191 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 191

Arg Ala Ser Glr Ser lie Ser ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 192 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 192

Ala Ala ser ser Leu Gin ser 1 5 <210> 193 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 193

Gin Gin ser ryr ser Thr Pro Phe Thr l 5 <210> 194 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 194

Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Arg Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 195 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 195

Gly Ala ser Thr Arg Ala Thr 1 5

<210> 196 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 196

Gin Gin Tyr Asn Asn Trp pro Thr Trp Thr 1 5 10 <210> 197 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 197

Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp Leu Gly 1 5 10 <210> 198 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 198

Ala Ala Ser ser Phe Gin ser 1 5 <210> 199 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 199

Leu Gin His Asn ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> 200 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 200

Arg Ala ser Gin Gly lie Arg Asn Asp Leu Gly 15 10 <210> 201 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 201

Ala Ala Ser Ser Leu Gin ser 1 5

<210> 202 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 202

Leu Gin His Lys Ser Tyr pro Leu Thr 1 5 <210> 203 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 203

Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp Leu Gly 1 5 10 <210> 204 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 204

Ala Ala Ser ser Leu Gin ser 1 5 <210> 205 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 205

Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 206 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 206

Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp Leu Gly 1 5 10 <210> 207 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 207

Ala Ala ser ser Leu Gin ser l 5 <210> 208 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 208

Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu Thr 1 S

<210> 209 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 209

Arg Ala ser Gin Gly lie Arg Asn Asp Leu Gly 1 5 10 <210> 210 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 210

Ala Ala Ser ser Leu Gin ser 1 5 <210> 211 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 211

Leu Gin His Lys Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 212 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 212

Arg Ala ser Gin Gly lie Arg Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 213 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 213

Ala Ala ser ser Leu Gin ser 1 5 <210> 214 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 214

Gin Gin Ala Asn Asn Phe Pro Arg Thr 1 5 <210> 215 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 215

Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Asn Leu Ala 15 10 <210> 216 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 216

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ala 1 5 <210> 217 <211> 10

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 217

Gin His Tyr rle Asn Trp pro Lys Trp Thr 1 5 10 <210> 218 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 218

Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Ser Leu Ala 15 10 <210> 219 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 219

Gly Ala ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 220 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 220

Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 221 <211> 16

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 221

Lys ser ser Gin Ser Leu Leu hís ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr 15 10 15

<210> 222 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 222

Glu val ser Thr Arg Phe ser 1 5

<210> 223 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 223

Met Gin ser lie Gin Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 224 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 224

Arg Ala Ser Gin Ser Val ser ser Asn Leu Ala 15 10 <210> 225 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 225

Asp Ala ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 226 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 226

Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 227 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 227

Arg Ala Ser Gin Ser Val 5er Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 228 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 228

Asp Ala Ser Thr Arg Ala Ala 1 5 <210> 229 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 229

Gin Gin Tyr Asp Asr Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 230 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 230

Arg Ala ser Gin ser lie ser Thr ser Leu Ala 1 5 10 <210> 231 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 231

Gly Thr Ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 232 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 232

Gin Gin Tyr Asp lie Trp pro Leu Thr 1 5 <210> 233 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 233

Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser ser Asr Leu Ala 1 5 10 <210> 234 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 234

Gly Ala ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 235 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 235

Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu Thr 1 5

<210> 236 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 236

Lys Thr Ser Gin Ser Val Leu Tyr Ser Ser Lys Asn Lys Asn Phe Leu 15 10 15

Ala

<210> 237 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 237

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 238 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 238

Gin Gin Tyr Tyr ser Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 239 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 239

Arg Ala ser Gin ser lie ser ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 240 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 240

Gly Ala ser Thr Arg Ala Thr 1 5

<210> 241 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 241

Gin Gin Tyr Asp Thr Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 242 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 242

Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 243 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 243

Ala Ala Ser Thr Leu Gin ser 1 5 <210> 244 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 244

Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Phe Thr 1 5 <210> 245 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 245

Arg Ala Ser Gin Gly lie ser Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 246 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 246

Ala Ala ser Thr Leu Gin ser 1 5 <210> 247 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 247

Gin Lys Tyr Asn Arg Ala pro Phe Thr 1 5 <210> 248 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 248

Arg Ala ser Gin ser val ser ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 249 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 249

Asp Ala Ser Thr Arg Ala Ala 1 5 <210> 250 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 250

Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu Thr 1 S <210> 251 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 251

Arg Ala ser Gin Gly lie lie Asn asp Leu Gly 15 10 <210> 252 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 252

Ala Ala Ser ser Leu Gin ser 1 5

<210> 253 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 253

Leu Gin His Asn ser Tyr pro Pro Thr 1 5

<210> 254 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 254

Arg ser ser Gin ser Leu val Tyr ser Asp Gly His Thr cys Leu ash 15 10 15 <210> 255 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 255

Lys val Ser Asn Trp Asp Ser 1 5 <210> 256 <211> 10

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 256

Met Gin Gly Thr His Trp Pro Leu Cys Ser 1 5 10 <210> 257 <211> 16

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 257

Arg Ser ser Gin ser Leu val Tyr ser Asp Gly His Thr cys Leu Asn 15 10 15 <210> 258 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 258

Lys Val Ser Asn Trp Asp Ser 1 5 <210> 259 <211> 10

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 259

Met Gin Gly Thr His Trp Pro Leu Cys ser 1 5 10 <210> 260 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 260

Arg Ala ser Gin Ala lie ser lie Tyr Leu Ala 15 10 <210> 261 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 261

Ala Ala ser ser Leu Gin ser 1 5 <210> 262 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 262

Gin Gin Tyr Ser Ser Tyr Pro Arg Thr 1 5 <210> 263 <211> 11

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 263

Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 264 <211> 7

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 264

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 265 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 265

Gin Gin Tyr Tyr Asn Trp Pro Trp Thr

<210> 266 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 266 aattactact ggaac 15 <210> 267 <211> 75

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 267 ccagggaagg gactggagtg gattggggat atctattaca gtgggagçaç çaaçtaraac 60 ccctccctca agagt 75

<210> 268 <211> 69 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 268 gatggggaac tcgccaatta ctatggttcg gggagttatc agttctacta ctactacggt 60 atggacgic 69

<210> 269 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 269

ggttactact ggagc 15 <210> 270 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 270 gaaatcaatc atagtggacg caccaattac aacccgtccc tcaagagt 48

<210> 271 <211> 57 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 271

ggcccttatt actttgatag tagtggttac ctttactact actacggttt ggacgtc 57 <210> 272 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 272 agctatggca tgcac 15 <210> 273 <211> 51

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 273 gttatatggt atgatggaag taataaacac tatgcagact ccgtgaaggg c 51

<210> 274 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 274 gatactgggg tctac 15

<210> 275 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 275 agctatggca tgcac 15

<210> 276 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 276 gttatatggt atgatggaag taataaacac tatgcagact ccgtgaaggg c 51

<210> 277 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 277 gatactgggg tctac 15

<210> 278 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 278 agttactact ggagc 15

<210> 279 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 279 cgtatctatc gcagtgggaa caccatctac aacccctccc tcaagagt 48

<210> 280 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 280 gagaattact ctgagagtag tggtctctac tactactacg gtatggacgt c 51

<210> 281 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 281

agatatggta tcagc 15 <210> 282 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 282 tggatcagcg cttacaatgg taacacaaac tatgcacaga agctccaggg c 51

<210> 283 <211> 45 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 283

agggattacg atattttgac tggttattat aacgggttcg acccc 45 <210> 284 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 284

agatatggta tcagc 15 <210> 285 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 285 tggatcagcg cttacaatgg taacacaaac tatgcacaga agctccaggg c 51

<210> 286 <211> 45 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 286

agggattacg atattttgac tggttattat aacgggttcg acccc 45 <210> 287 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 287

ggctatggta tcagc 15 <210> 288 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 288 tggatcagcg cttacaatgg taacacaaac tatgcacaga acctccaggg c 51

<210> 289 <211> 45 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 289

agggattacg atattttgac tggttattat aacgggttcg acccc 45 <210> 290 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 290

agatatggta tcagc 15 <210> 291 <211> 50 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 291 tggatcagcg cttacaatgg taacacaaac tatgcacaga agctccaggg 50

<210> 292 <211> 45 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 292

agggattacg atattttgac tggttattat aacgggttcg acccc 45 <210> 293 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 293

agtggtggtt actactggag c 21 <210> 294 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 294 tacatctatt tcagtgggag cgcctactac aacccgtccc tcaagagt 48

<210> 295 <211> 42 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 295

gaatactatg atagtagtgg ttaccccgat gcttttgata tc 42 <210> 296 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 296

agctatggca tgcac 15 <210> 297 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 297 gttatatggt atgatggaag taataaatat tatgcagact ccgtgaaggg c 51

<210> 298 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 298 gatacgaagg actac 15 <210> 299 <211> 15

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 299

agctatggta tcagc 15 <210> 300 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 300 tggatcagca cttacaaagg taacacaaac tatgcacaga agctccaggg c 51

<210> 301 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 301

aagcagctcg tctttgacta c 21 <210> 302 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 302

agctatggca tgcag 15 <210> 303 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 303 gttatatggt atgatggaaa taagaaatac tatgcagact ccgtgaaggg c 51

<210> 304 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 304

ggacgtgtta gggactacta ctacggtatg gacgtc 36 <210> 305 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 305 agatatggta tcagc 15

<210> 306 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 306 tggatcagca cttacagtgg taacacaaac tatgcacaga agctccaggg c 51

<210> 307 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 307

cggcagcttt actttgacta c 21 <210> 308 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 308

agctatggca tgcag 15 <210> 309 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 309 gttatatggt atgatggaaa taagaaatac tatgcagact ccgtgaaggg c 51

<210> 310 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 310

ggacgtgtta gggactacta ctacggtatg gacgtc 36 <210> 311 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 311

agctatggta tcagc 15 <210> 312 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 312 tggatcagcg cttacaatgg taacacaaag tatgcacaga agctccaggg c 51

<210> 313 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 313

aagcagctcg tctttgacta c 21 <210> 314 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 314

agctatggta tcagc 15 <210> 315 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 315 tggatcagcg cttacagtgg taatacaaag tatgcacaga agctccaggg c 51

<210> 316 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 316

aagcagctcg tctttgacta c 21 <210> 317 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 317

gactactaca tgcac 15 <210> 318 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 318 tggatgcacc ctaacagtgg tggcacagac ttagcacaga ggtttcaggg c 51

<210> 319 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 319 gggggatatt gtagtacttt gagctgctcc ttctactggt acttcgatct c 51

<210> 320 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 320

agctatggaa tcagt 15 <210> 321 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 321 tggatcagcg cttacagtgg taacacaaag tatgcacaga agttccaggg c 51

<210> 322 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 322

aggcagctcg cgttggacta c 21 <210> 323 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 323

agctatagca tgaac 15 <210> 324 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 324 ttcattagtg ctagaagtag taccatatac tacgcagact ctgtgaaggg c 51 <210> 325 <211> 27

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 325

cctaaagtgg ggggcggtat ggacgtc 27 <210> 326 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 326

agctatagca tgaac 15 <210> 327 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 327 atcattagta gtagaagtag tatcatacac tacgcagact ctgtgaaggg c 51

<210> 328 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 328

cctaaagtgg ggggcggtat ggacgtc 27 <210> 329 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 329

agatatggta tcagc 15 <210> 330 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 330 tggatcagcg cttacagtgg taacacaaac tatgcacaga agctccaggg c 51

<210> 331 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 331 cggcagcttt actttgacta c 21

<210> 332 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 332

agttactact ggagc 15 <210> 333 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 333 cgtatctatc ccagtgggag aaccaactac aacccctccc tcaagagt 48

<210> 334 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 334 gaggcatatg agctgcaact gggcctctac tactactacg gtatggacgt c 51

<210> 335 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 335

agttactact ggagc 15 <210> 336 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 336 cgtatctatc ccagtgggag aaccaactac aacccctccc tcaagagt 48

<210> 337 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 337 gaggcatatg agctgcaact gggcctctac tactactacg gtatggacgt c 51 <210> 338 <211> 21

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 338

agtggtggtt actactggag c 21 <210> 339 <211> 39 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 339

tacagtggga acacctacta caacccgtcc ctcaggagt 39 <210> 340 <211> 42 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 340

gaggccggtg gtaactccgc ctactactac ggtatggacg tc 42 <210> 341 <211> 15 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 341

gactactaca tgagc 15 <210> 342 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 342 tacattagta gtagtcgtag taccatatac tacgcagact ctgtgaaggg c 51

<210> 343 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 343 gatcgcacgt attactttgg ttcggggagt tatgaaggga tggacgtc 48

<210> 344 <211> 88 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 344

Glu lie val Met Thr Gin ser Pro Ala Thr Leu Ser val ser pro Gly IS 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin ser val 5er Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg pro Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala ser Thr Arg Ala Thr Gly val pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 85

<210> 345 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 345

cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc 33 <210> 346 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 346

gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 347 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 347

ctacagcata atagtaaccc attcact 27 <210> 348 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 348

agggccagtc agagtgttag cagaaactta gtc 33 <210> 349 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 349 ggggcatcca ctagggccaa t 21

<210> 350 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 350

cagcagtata aaagctggcg gacg 24 <210> 351 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 351

cgggcaagtc agagcattag cagctattta aat 33 <210> 352 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 352

gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 353 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 353

caacagagtt acagtacccc attcact 27 <210> 354 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 354

agggccagtc agagtgttag taggaattta gcc 33 <210> 355 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 355

ggtgcatcca ccagggccac t 21 <210> 356 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 356 cagcagtata ataactggcc cacgtggacg 30

<210> 357 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 357

cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc 33 <210> 358 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 358

gctgcatcca gtttccaaag t 21 <210> 359 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 359

ctacagcata atagttaccc tccgacg 27 <210> 360 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 360

cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc 33 <210> 361 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 361

gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 362 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 362

ctacagcata aaagttaccc gctcact 27 <210> 363 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 363 cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc 33

<210> 364 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 364

gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 365 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 365

ctacagcata aaagttaccc gctcact 27 <210> 366 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 366

cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc 33 <210> 367 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 367

gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 368 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 368

ctacagcata agagttaccc gctcact 27 <210> 369 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 369

cgggcaagtc agggcattag aaatgattta 30 <210> 370 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 370 gctgcatcca gtttgcaaag t 21

<210> 371 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 371

ctacagcata aaagttaccc gctcact 27 <210> 372 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 372

cgggcgagtc agggtattag gagctggtta gcc 33 <210> 373 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 373

gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 374 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 374

caacaggcta acaatttccc tcggacg 27 <210> 375 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 375

agggccagtc agagtgttag cagcaactta gcc 33 <210> 376 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 376

ggtgcatcca ccagggccgc t 21 <210> 377 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 377 cagcactata taaactggcc taagtggacg 30

<210> 378 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 378

agggccagtc agagtattag cagcagctta gcc 33 <210> 379 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 379

ggtgcatcca ccagggccac t 21 <210> 380 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 380

cagcaatatg ataactggcc gctcact 27 <210> 381 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 381 aagtctagtc agagcctcct gcatagtgat ggaaagacct atttgtat 48

<210> 382 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 382

gaagtttcca cccggttctc t 21 <210> 383 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 383

atgcaaagta tacagcttcc gctcact 27 <210> 384 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 384

agggccagtc agagtgttag cagcaactta gcc 33 <210> 385 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 385

gatgcatcca ccagggccac t 21 <210> 386 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 386

cagcagtatg ataactggcc gctcact 27 <210> 387 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 387

agggccagtc agagtgttag cagcaactta gcc 33 <210> 388 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 388

gatgcatcca ccagggccgc t 21 <210> 389 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 389

cagcagtatg ataactggcc gctcact 27 <210> 390 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 390

agggccagtc agagtattag caccagctta gcc 33 <210> 391 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 391

ggtacatcca ccagggccac t 21 <210> 392 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 392

caacagtatg atatctggcc gctcact 27 <210> 393 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 393

agggccagtc agagtgttag cagcaactta gcc 33 <210> 394 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 394

ggtgcatcca ccagggccac t 21 <210> 395 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 395

cagcagtatg ataactggcc gctcact 27 <210> 396 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 396 aagaccagcc agagtgtttt atacagctcc aaaaacaaga acttcttagc t 51

<210> 397 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 397 tgggcatcta cccgggaatc c 21 <210> 398 <211> 27

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 398

cagcaatatt atagtactcc attcact 27 <210> 399 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 399

agggccagtc agagtattag cagcaactta gcc 33 <210> 400 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 400

ggtgcatcca ccagggccac t 21 <210> 401 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 401

cagcagtatg atacctggcc tctcact 27 <210> 402 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 402

cgggcgagtc agggcattag caattattta gcc 33 <210> 403 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 403

gctgcatcca ctttacaatc a 21 <210> 404 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 404 caaaagtata accgtgcccc attcact 27 <210> 405 <211> 33

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 405

cgggcgagtc agggcattag caattattta gcc 33 <210> 406 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 406

gctgcatcca ctttgcaatc a 21 <210> 407 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 407

caaaagtata accgtgcccc attcact 27 <210> 408 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 408

agggccagtc agagtgttag cagcaactta gcc 33 <210> 409 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 409

gatgcatcca ccagggccgc t 21 <210> 410 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 410

cagcagtatg ataactggcc gctcact 27 <210> 411 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 411 cgggcaagtc agggcattat aaatgattta ggc 33 <210> 412 <211> 21

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 412

gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 413 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 413

ctacagcata atagttaccc tccgacg 27 <210> 414 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 414 aggtctagtc aaagcctcgt atatagtgat ggacacacct gcttgaat 48

<210> 415 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 415

aaggtttcta actgggactc t 21 <210> 416 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 416

atgcaaggta cacactggcc tctgtgcagt 30 <210> 417 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 417 aggtctagtc aaagcctcgt atatagtgat ggacacacct gcttgaat 48

<210> 418 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 418 aaggtttcta actgggactc t 21

<210> 419 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 419

atgcaaggta cacactggcc tctgtgcagt 30 <210> 420 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 420

cgggcgagtc aggccattag catttattta gcc 33 <210> 421 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 421

gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 422 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 422

caacagtata gtagttaccc tcggacg 27 <210> 423 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 423

agggccagtc agagtgttta cagcaactta gcc 33 <210> 424 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 424

ggtgcttcca ccagggccac t 21 <210> 425 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 425 cagcagtatt ataactggcc gtggacg 27

<210> 426 <211> 1409 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0>

<221> CDS <222> (16) . . (1398) <400> 426 gtcgacgccg ccacc atg gag tgg acc tgg agg gtc ctt ttc ttg gtg gca 51 Met Glu Trp Thr Trp Arg Val Leu Phe Leu val Ala 15 10 gca gca aca ggt gcc cac tcc cag gtt cag ctg gtg cag tct gga get 99

Ala Ala Thr Gly Ala His Ser Gin Val Gin l eu Val Gin Ser Gly Ala 15 20 25 gag gtg aag aag cct gag gcc tea gtg aag gtc tcc tgc aag get tct 147

Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser val Lys Val Ser cys Lys Ala ser 30 35 40 ggt tac acc ttt acc aga tat ggt ate age tgg gtg ega cag gcc cct 195

Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Gly lie ser Trp val Arg Gin Ala Pro 45 50 55 60 gga caa ggg ctt gag tgg atg gga tgg ate age act tac agt ggt aac 243

Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp lie ser Thr Tyr ser Gly Asn 65 70 75 aca aac tat gca cag aag etc cag ggc aga gtc acc atg acc aca gac 291

Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu Gin Gly Arg val Thr Met lhr Thr Asp 80 85 90 aca tcc aeg age aca gcc tac atg gag ctg agg age ctg aga tct gac 339

Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp 95 100 105 gac aeg gcc gtg tat tac tgt geg aga egg cag ctt tac ttt gac tac 387

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gin leu Tyr Phe Asp Tyr 110 115 120 tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc gtc tcc tea get age acc aag ggc 435

Trp Gly Gin Gly Thr leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 125 130 135 140 cca teg gtc ttc ccc ctg geg ccc tgc tcc agg age acc tcc gag age 483

Pro Ser val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg ser Thr ser Glu ser 145 - 150 155 aca geg gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccg gtg 531

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 160 165 170 acg gtg teg tgg aac tea ggc get ctg acc age gac gtg cac acc ttc 579

Thr val ser Trp Asn ser Gly Ala Leu Thr ser Gly Val His Thr Phe 175 180 185 cca get gtc eta cag tcc tea gga etc tac tee etc age age gtg gtg 627 pro Ala val Leu Gin ser ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val val 190 195 200 acc gtg ccc tcc age aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gta 675

Thr val Pro ser ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr cys Asn val 205 210 215 220 gat cac aag ccc age aac acc aag gtg gac aag aca gtt gag ege aaa 723

Asp His Lys Pro ser Asn Thr Lys VaT Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys 225 230 235 tgt tgt gtc gag tgc cca ccg tgc cca gca cca cct gtg gca gga ccg 771

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 240 245 250 tea gtc ttc etc ttc cec cca aaa cce aag gac ace etc atg ate tee 819 ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 255 260 265 egg ace cct gag gtc aeg tgc gtg gtg gtg gac gtg age cac gaa gac 867

Arg lhr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 270 275 280 ccc gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat 915

Pro Glu val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 285 290 295 300 gcc aag aca aag cca egg gag gag cag ttc aac age aeg ttc cgt gtg 963

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg val 305 310 315 gtc age gtc etc acc gtt gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aag gag 1011

Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 320 325 330 tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa ggc etc cca gcc ccc ate gag aaa 1059

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Tie Glu Lys 335 340 345 acc ate tcc aaa acc aaa gqg cag ccc ega gaa cca cag gtg tac acc 1107

Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vat Tyr Thr 350 355 360 ctg ccc cca tcc egg gag gag atg acc aag aac cag gtc age ctg acc 1155

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 365 370 375 380 tgc ctg gtc aaa ggc ttc tac ccc age gac ate gcc gtg gag tgg gag 1203

Cys Leu Val Lys Gty Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala vat Glu Trp Glu 385 390 395 age aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc aca cct ccc atg ctg 1251

Ser Asn Gty Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu 400 405 410 gac tcc gac ggc tcc ttc ttc etc tac age aag etc acc gtg gac aag 1299

Asp Ser Asp Gty Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vat Asp Lys 415 420 425 age agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tea tgc tcc gtg atg cat gag 1347

Ser Arg Trp Gin Gin Gty Asn Val Phe Ser Cys Ser vat Met His Glu 430 435 440 get ctg cac aac cac tac aeg cag aag age etc tcc ctg tet ccg ggt 1395

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gty 445 450 455 460 aaa tgagcggccg c 1409

Lys

<210> 427 <211> 461 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 427

Met Glu Trp Thr Trp Arg Val Leu Phe Leu val Ala Ala Ala Thr Gly 15 10 15 Αία His ser Gin Vai Gin Leu Vai Gin ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys 20 25 30

Pro Gny Ala Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Thr Arg Tyr Gly lie Ser Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60

Glu Trp Met Gly Trp II e Ser Thr Tyr 5er Gly Asn Thr Asn Tyr Ala 6S 70 75 S0

Gin Lys Leu Gin Gly Arg Vai Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg ser Asp Asp Thr Ala Vai 100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gin Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 115 120 125

Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Pile 130 135 140

Pro Leu Ala Pro cys ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 145 150 155 160

Gly cys Leu vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro vai Thr vai Ser Trp 165 170 175

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu 180 185 190

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro ser 195 200 205

Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr cys Asn Vai Asp His Lys Pro 210 215 220

Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Cys Cys Vai Glu 225 230 235 240

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro ser val Phe Leu 245 250 255

Phe pro pro Lys pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270 val Thr cys val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin 275 280 285 phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300

Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 305 310 315 320

Thr val val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350

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Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380

Gly Phe Tyr pro ser asp lie Ala val Glu Trp Glu ser Asn Gly Gin 385 390 395 400

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Ser Phe Phe Leu Tyr 5er Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430

Gin Gly Asn Val Phe Ser cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445

Hi's Tyr Thr Gin Lys 5er Leu Ser Leu ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 428 <211> 741

<212> ADN <213> Homo sapiens <22 0> <221> CDS <222> (24)..(725) <400> 428 gtcgacgttt aaacgccgcc acc atg gaa gcg ccg gcg cag ctt etc ttc etc 53

Met Glu Ala Pro Ala Gin Leu Leu Phe Leu 15 10 ctg eta etc tgg etc cca gat acc act gga gaa ata gtg atg aeg cag 101

Leu Leu Leu Trp Leu Pro Asp Thr Thr Gly Glu lie Val Met Thr Gin 15 20 25 tet cca gcc acc ctg tet gtg tet cct ggg gaa aga gcc acc etc tcc 149

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Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly ser Gly ser Gly Thr Asp 75 80 85 90 ttc act etc acc ate age age ctg cag tet gaa gat ttt gca gtt tat 341

Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr 95 100 105 tac tgt cag cag tat gat aac tgg ccg etc act ttc ggc gga ggg acc 389

Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr 110 115 120 aag gtg gag ate aaa cgt aeg gtg get gca cca tet gtc ttc ate ttc 437

Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Tie Phe 125 130 135 ccg cca tet gat gag cag ttg aaa tet gga act gcc tet gtt gtg tgc 485

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Leu Leu Asn Asn Phe Tyr pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys val 155 160 165 170 gat aac gcc etc caa teg ggt aac tee cag gag agt gtc aca gag cag 581

Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu ser val Thr Glu Gin 175 180 185 gac age aag gac age acc tac age etc age age ace ctg aeg ctg age 629

Asp Ser Lys Asp ser Thr Tyr ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser 190 195 200 aaa gca gae tac gag aaa cac aaa gtc tac gcc tgc gaa gtc acc cat 677

Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu val Thr His 205 210 215 cag gac ctg age teg ccc gtc aca aag age ttc aac agg gga gag tgt 725

Gin Gly Leu ser ser Pro val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 220 225 230 taggatccgc ggeege 741

<210> 429 <211> 234 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 429

Met Glu Ala Pro Ala Gin Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro 15 10 15

Asp Thr Thr Gly Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30

Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser cys Arg Ala ser Gin ser 35 40 45

Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro 50 55 60

Arg pro Leu lie Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala 65 70 75 80

Arg Phe ser Gly ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser 85 90 95

Ser Leu Gin ser Glu Asp Phe Ala val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp 100 105 110

Asn Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys val Glu lie Lys Arg 115 120 125

Thr Val Ala Ala Pro Ser val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 130 135 140

Leu Lys Ser Gly Thr Ala ser val val cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser 165 170 175

Gly Asn ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190

Tyr ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser ser Pro 210 215 220 val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230

<210> 430 <211> 866 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 430

Met Gly Ala Ala Arg ser pro pro ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu 15 10 15

Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala ser 20 25 30

Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu val cys ser Gin Pro Gly Leu 35 40 45

Asn cys Thr val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp He His SO S5 60

Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gin lie Gin Leu 65 70 75 80

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Glu Leu ser val Leu Gin Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys val Arg 115 120 125

Phe Glu Phe Leu ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe 130 135 140

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Glu Asn His ser cys Phe Glu His Met His His lie Pro Ala Pro Arg 245 250 255

Pro Glu Glu Phe His Gin Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu Arg Asn 260 265 270

Leu Lys Gly cys cys Arg His Gin Val Gin lie Gin Pro Phe Phe Ser 275 280 285

Ser cys Leu Asn Asp cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser cys Pro 290 295 300

Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro lie Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp BOS 310 315 320

Val Tyr Trp Phe lie Thr Gly lie Ser lie Leu Leu Val Gly Ser Val 325 330 335 lie Leu Leu lie Val Cys Met Thr Trp Arg Leu Ala Gly Pro Gly Ser 340 345 350

Glu Lys Tyr Ser Asp Asp Thr Lys Tyr Thr Asp Gly Leu Pro Ala Ala 355 360 365

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Ser Ala Asp His Pro Leu Tyr Val Asp val val Leu Lys Phe Ala Gin 385 390 395 400

Phe Leu Leu Thr Ala Cys Gly Thr Glu val Ala Leu Asp Leu Leu Glu 405 410 413

Glu Gin Ala lie Ser Glu Ala Gly val Met Thr Trp val Gly Arg Gin 420 425 430

Lys Gin Glu Met val Glu ser Asn ser Lys lie He val Leu cys ser 435 440 445

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Val Arg Leu Arg Cys Asp His Gly Lys Pro Val Gly Asp Leu Phe Thr 465 470 475 480

Ala Ala Met Asn Met He Leu Pro Asp Phe Lys Arg Pro Ala Cys Phe 485 490 495

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Phe Glu Glu Val Tyr Phe Arg He Gin Asp Leu Glu Met Phe Gin Pro 530 535 540

Gly Arg Met His Arg Val Gly Glu Leu Ser Gly Asp Asn Tyr Leu Arg 545 550 555 560

Ser Pro Gly Gly Arg Gin Leu Arg Ala Ala Leu Asp Arg Phe Arg Asp 565 570 575

Trp Gin Val Arg Cys Pro Asp Trp Phe Glu Cys Glu Asn Leu Tyr ser 580 585 590

Ala Asp Asp Gin Asp Ala pro ser Leu Asp Glu Glu val Phe Glu Glu 595 500 605 pro Leu Leu Fro pro Gly Thr Gly lie val Lys Arg Ala Pro Leu val 610 615 620

Arg Glu Pro Gly ser Gin Ala cys Leu Ala lie Asp Pro Leu val Gly 625 630 635 640

Glu Glu Gly Gly Ala Ala Val Ala Lys Leu Glu Pro His Leu Gin Pro G45 650 655

Arg Gly Gin pro Ala pro Gin Pro Leu His Thr Leu Val Leu Ala Ala 660 665 670

Glu Glu Gly Ala Leu Val Ala Ala val Glu Pro Gly Pro Leu Ala Asp 675 680 685

Gly Ala Ala val Arg Leu Ala Leu Ala Gly Glu Gly Glu Ala Cys Pro 690 695 700

Leu Leu Gly Ser Pro Gly Ala Gly Arg Asn Ser Val Leu Phe Leu Pro 705 710 715 720

Val Asp Pro Glu Asp Ser Pro Leu Gly Ser ser Thr Pro Met Ala Ser 725 730 735

Pro Asp Leu Leu Pro Glu Asp Val Arg Glu His Leu Glu Gly Leu Met 740 745 750

Leu Ser Leu Phe Glu Gin Ser Leu Ser Cys Gin Ala Gin Gly Gly Cys 755 750 765

Ser Arg pro Ala Met val Leu Thr Asp Pro His Thr pro Tyr Glu Glu 770 775 7S0

Glu Gin Arg Gin ser val Gin ser Asp Gin Gly lyr lie ser Arg Ser 785 790 795 800

Ser Pro Gin pro pro Glu Gly Leu Thr Glu Met Glu Glu Glu Glu Glu 805 810 815

Glu Glu Gin Asp Pro Gly Lys Pro Ala Leu Pro Leu Ser Pro Glu Asp 820 825 830

Leu Glu ser Leu Arg ser Leu Gin Arg Gin Leu Leu Phe Arg Gin Leu 835 840 845

Gin Lys Asn Ser Gly Trp Asp Thr Met Gly ser Glu Ser Glu Gly Pro 850 855 860

Ser Ala 865

<210> 431 <211> 344 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição de sequência artificial: construção sintética <400> 431

Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala val Pro Gly Pro Leu Leu 15 10 15

Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala ser 20 25 30

Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gin Pro Gly Leu 35 40 45

Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp He His 50 55 60

Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gin lie Gin Leu 65 70 75 80

His Phe Ala His Thr Gin Gin Gly Asp Leu Phe Pro val Ala His rle 85 90 95

Glu Trp Thr Leu Gin Thr Asp Ala Ser He Leu Tyr Leu Glu Gly Ala 100 105 110

Glu Leu ser val Leu Gin Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg 115 120 125

Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe 130 135 140

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Val His His Leu Pro Lys Pro lie Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gin 165 170 175 ser Lys Asn phe Leu val pro Asp tys Glu His Ala Arg Met Lys val 130 185 190

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Glu Asn His Ser Cys Phe Glu His Met His His lie Pro Ala Pro Arg 245 250 255 pro Glu Glu Phe His Gin Arg ser Asn val Thr Leu Thr Leu Arg Asn 260 265 270

Leu Lys Gly cys cys Arg His Gin val Gin lie Gin pro Phe Phe Ser 275 280 285

Ser Cys leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser Cys Pro 290 295 300

Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro lie Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp 305 310 315 320

Glu Pro Arg Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly 325 330 335

Ser Ser His His His His His His 340

<210> 432 <211> 322 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 432

Met Ala lie Arg Arg Cys Trp Pro Arg Val val Pro Gly Pro Ala Leu 15 10 15

Gly Trp Leu Leu Leu Leu Leu Asn Val Leu Ala Pro Gly Arg Ala scr 20 25 30

Pro Arg Leu Leu Asp Phe pro Ala Pro Val Cys Ala Gin Glu Gly Leu 35 40 45

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Ser Vai Ser Ser Thr Gin His Gly Glu Leu vai Pro vai Leu His vai 85 90 95

Glu Trp Thr Leu Gin Thr Asp Ala ser lie Leu Tyr Leu Glu Gly Ala 100 105 110

Glu Leu Ser Vai Leu Gin Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys vai Lys 115 120 125

Phe Gin Phe Leu Ser Met Leu Gin His His Arg Lys Arg Trp Arg Phe 130 135 140

Ser Phe Ser His Phe Vai Vai Asp Pro Gly Gin Glu Tyr Glu vai Thr 145 150 155 160 val His His Leu pro Lys pro lie pro Asp Gly Asp pro Asn His Lys 165 170 175

Ser Lys lie lie Phe Val Pro Asp Cys Glu Asp Ser Lys Met Lys Met 180 185 190

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Val Glu Thr Leu Asp Thr Gin His Leu Arg Val Asp Phe Thr Leu Trp 210 215 220

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Glu Asn His Ser Cys Phe Asp Val Val Lys Gin lie Phe Ala Pro Arg 245 250 255

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Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ala Val Thr Val Pro Cys Pro 290 295 300 val lie Ser Asn lhr lhr Val Pro Lys Pro val Ala Asp Tyr lie Pro 305 310 315 320

Leu Trp

<210> 433 <211> 344 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição de sequência artificial: construção sintética <400> 433

Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala val Pro Gly Pro Leu Leu 15 10 15

Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser 20 25 30

Leu Arg Leu Leu Asp Phe Pro Ala Pro Val Cys Ala Gin Glu Gly Leu 35 40 45

Ser cys Arg Val Lys Asn Ser Thr cys Leu Asp Asp Ser Trp He His 50 55 60 pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gin lie Gin Leu 65 70 75 80

His Phe Ala His Thr Gin Gin Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His lie 85 90 95

Glu Trp Thr Leu Gin Thr Asp Ala Ser lie Leu Tyr Leu Glu Gly Ala 100 105 110

Glu Leu Ser Val Leu Gin Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg 115 120 125

Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe 130 135 140

Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gin Glu Tyr Glu Val Thr 145 150 155 160

Val His His Leu Pro Lys Pro lie Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gin 165 170 175

Ser Lys Asn Phe Leu val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys val 180 185 190

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Leu Lys Gly Cys Cys Arg His Gin val Gin lie Gin pro Phe Phe ser 275 280 285

Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His ser Ala Thr val ser cys Pro 290 295 300

Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro lie Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp 305 310 315 320

Glu Pro Arg Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly 325 330 335

Ser Ser His His His His His His 340

<210> 434 <211> 344 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição de sequência artificial: construção sintética <400> 434

Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala val Pro Gly Pro Leu Leu 15 10 15

Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala ser 20 25 30

Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu val Cys ser Gin pro Gly Leu 35 40 45

Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr cys Leu Asp Asp ser Trp lie His 50 55 60 pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asn lie Tyr lie Asn Leu

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Glu Trp Thr Leu Gin Thr Asp Ala ser lie Leu Tyr Leu Glu Gly Ala 100 105 110

Glu Leu Ser Val Leu Gin Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg 115 120 125 phe Glu Phe Leu ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe 130 135 140

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Val His His Leu Pro Lys Pro lie Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gin 165 170 175

Ser Lys Asn Phe Leu val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys val 180 185 190

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Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gin Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp 210 215 220

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Glu Asn His ser cys Phe Glu His Met His His lie Pro Ala Pro Arg 245 250 255

Pro Glu Glu Phe His Gin Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu Arg Asn 260 265 270

Leu Lys Gly cys cys Arg His Gin val Gin He Gin pro Phe Phe Ser 275 280 285

Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser Cys Pro 290 295 300

Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro lie Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp 305 310 315 320

Glu Pro Arg Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly 325 330 335

Ser Ser nis tn's nis in's His His 340

<210> 435 <211> 344 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição de sequência artificial: construção sintética <4Ο0> 435

Met Gly Ala Ala Arg ser pro pro ser Ala val pro Gly pro Leu Leu 15 10 15

Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser 20 25 30

Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys ser Gin Pro Gly Leu 35 40 45

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His Phe Ala Hi's Thr Gin Gin Gly Asp Leu Phe pro val Ala his lie 85 90 95

Glu Trp Thr Leu Gin Thr Asp Ala Ser lie Leu Tyr Leu Glu Gly Ala 100 105 110

Glu Leu Ser Val Leu Gin Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu cys val Lys 115 120 125

Phe Gin Phe Leu Ser Met Leu Gin His His Arg Lys Arg Trp Arg Phe 130 135 140 ser Phe ser His Phe Val val Asp Pro Gly Gin Glu Tyr Glu val Thr 145 150 155 160

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Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val 180 185 190

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Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gin Lèu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp 210 215 220

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Glu Asn His Ser Cys Phe Glu His Met His His Tie Pro Ala Pro Arg 245 250 255

Pro Glu Glu Phe His Gin Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu Arg Asn 260 265 ?70

Leu Lys Gly cys cys Arg His Gin val Gin lie Gin pro Phe phe ser 275 280 285

Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr val ser cys Pro 290 295 300

Glu Met pro Asp Thr pro Glu pro lie pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp 305 310 315 320

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Ser ser His His His His His His 340

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Glu ile vai Leu Thr Gin ser pro Ala Thr Leu ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys pro Gly Gin Ala pro Arg Leu Leu ile 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Vai Tyr Tyr Cys 85

<210> 452 <211> 88 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: construção sintética <400> 452

Glu rle vai Leu Thr Gin ser Pro Ala Thr Leu ser Leu ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys pro Gly Gin Ala pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser ser Leu Glu Pro 65 70 75 SO

Glu Asp Phe Ala val Tyr Tyr cys 85

<210> 453 <211> 5 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1) .. (1) <223> Aminoácido variável <400> 453

Xaa Tyr Gly lie Ser 1 5 <210> 454 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (3) . . (3) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (5) .. (5) <223> Aminoácido variável <400> 454

Xaa Tyr Xaa Met Xaa 1 5

<210> 455 <211> 5 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0>

<221> MOD_RES <222> (5) . . (5) <223> aminoácido variável <400> 455

Ser Tyr Gly Met Xaa 1 5 <210> 456 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (14)..(15) <223> Aminoácido variável <400> 456

Trp lie Ser Xaa Tyr Xaa Gly Asn Thr Xaa Tyr Ala Gin xaa xaa Gin 15 10 15

Gly <210> 457 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (4)..(6) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (8) .. (8) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Aminoácido variável <400> 457

Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Xaa lie Xaa Tyr Ala Asp Ser val Lys 15 10 15

Gly

<210> 458 <211> 17 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (7) .. (8) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Aminoácido variável <4Ο0> 458

Val lie Trp Tyr Asp Gly Xaa Xaa Lys Xaa Tyr Ala Asp ser val Lys 15 10 15

Gly

<210> 459 <211> 7 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (1) .. (1) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (4) . . (5) <223> Aminoácido variável <400> 459 xaa Gin Leu Xaa Xaa Asp Tyr 1 5 <210> 460 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Aminoácido variável <400> 460

Xaa Gin Leu xaa phe Asp Tyr 1 5 <210> 461 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (5) . . (5) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (7) .. (9) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Aminoácido variável <400> 461

Arg Ala Ser Gin Xaa lie Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 15 10 <210> 462 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição de sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (6)..(9) <223> Aminoácido variável <400> 462

Arg Ala ser Gin ser xaa xaa xaa xaa Leu Ala 1 5 10 <210> 463 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (7)..(8) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Aminoácido variável <400> 463

Arg Ala Ser Gin Ser Val Xaa Xaa Asn Leu Xaa 1 5 10 <210> 464 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (5) . . (5) <223> Aminoácido variável <400> 464

Ala Ala Ser Ser Xaa Gin Ser 1 5 <210> 465 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> M0D_RES <222> (4) . . (4) <223> aminoácido variável <400> 465

Ala Ala ser xaa Leu Gin ser 1 5 <210> 466 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1) .. (2) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (7) . . (7) <223> aminoácido variável <400> 466

Xaa Xaa Ser Thr Arg Ala Xaa 1 5 <210> 467 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (7) . . (8) <223> Aminoácido variável <400> 467

Leu Gin His Xaa Ser Tyr Xaa Xaa Thr 1 5 <210> 468 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (2)..(6) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (8) . . (8) <223> Aminoácido variável <4Ο0> 468

Gin xaa Xaa xaa xaa xaa Pro xaa ihr 1 5

<210> 469 <211> 9 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (5) . . (5) <223> aminoácido variável <400> 469

Gin Gin Tyr Asp Xaa Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 470 <211> 10

<212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (4) . . (5) <223> Aminoácido variável <22 0> <221> MOD_RES <222> (7) .. (9) <223> Aminoácido variável <400> 470

Gin Xaa Tyr Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Thr 1 5 10

Lisboa, 2015-03-17

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Anticorpo isolado ou seu fragmento compreendendo uma sequência de aminoácidos da CDR1 de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO:224, uma sequência de aminoácidos da CDR2 de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO :225, uma sequência de aminoácidos da CDR3 de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO :226, uma sequência de aminoácidos da CDR1 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 146, uma sequência de aminoácidos da CDR2 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 147 e uma sequência de aminoácidos da CDR3 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 148, em que o referido anticorpo ou seu fragmento se liga ao receptor A de IL-17 humano.
2. Anticorpo isolado ou seu fragmento da reivindicação 1, em que o referido anticorpo compreende uma sequência de aminoácidos de um domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO:40 e uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 14, em que o referido anticorpo ou seu fragmento se liga ao receptor A de IL-17 humano.
3. Anticorpo isolado ou seu fragmento da reivindicação 1, em que o referido anticorpo ou seu fragmento compreende uma sequência de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO :427 e uma sequência de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO:429, em que o referido anticorpo ou seu fragmento se liga ao receptor A de IL-17 humano.
4. Anticorpo ou seu fragmento de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que o referido anticorpo é um anticorpo IgG2.
5. Composição farmacêutica, compreendendo o anticorpo ou seu fragmento de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 .
6. Polinucleótido isolado, em que o referido polinucleótido codifica o anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4.
7. Plasmídeo, compreendendo o polinucleótido da reivindicação 6.
8. Plasmídeo da reivindicação 7, em que o referido plasmídeo é um vector de expressão.
9. Célula isolada, compreendendo o referido vector de expressão da reivindicação 8, em que a referida célula é seleccionada do grupo que consiste de: a. uma célula procariótica; b. uma célula eucariótica; c. uma célula de mamífero; d. uma célula de insecto; e e. uma célula CHO.
10. Método de produzir o anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, compreendendo incubar a referida célula isolada da reivindicação 9 sob condições que permitem a expressão do referido anticorpo.
11. Anticorpo ou seu fragmento de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 ou a composição farmacêutica da reivindicação 5 para uso no tratamento de uma doença ou condição patológica associada com activação do receptor A de IL-17, em que a doença ou condição patológica é seleccionada do grupo que consiste de inflamação, doença auto-imune, artrite, artrite reumatóide, artrite juvenil, artrite reumatóide juvenil, artrite reumatóide pauciarticular, artrite reumatóide juvenil pauciarticular, artrite reumatóide poliarticular, artrite reumatóide juvenil poliarticular, forma sistémica da artrite reumatóide juvenil, espondilite anquilosante, espondilite anquilosante juvenil, artrite psoriática, artrite psoriática juvenil, psoríase, psoríase em placas, forma sistémica da artrite reumatóide, dermatomiosite, dermatite atópica, esclerodermia, esclerodermia juvenil, polimiosite, sarcoidose, aterosclerose, lúpus eritematoso sistémico, lúpus eritematoso sistémico juvenil, doença inflamatória dos intestinos, doença de Crohn, colite ulcerativa, doença celíaca, esclerose múltipla, asma, doença pulmonar obstrutiva crónica e doença do enxerto contra hospedeiro.
12. Anticorpo ou seu fragmento para uso de acordo com a reivindicação 11 compreendendo adicionalmente administrar um segundo tratamento compreendendo uma composição farmacêutica.
13. Anticorpo isolado, compreendendo um anticorpo produzido pela célula CHO da reivindicação 9, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada por uma sequência compreendendo SEQ ID NO :42 6 e uma cadeia leve codificada por uma sequência compreendendo SEQ ID NO:428.
14. Composição farmacêutica compreendendo o anticorpo da reivindicação 13. Lisboa, 2015-03-17