KR20120098953A - Ｉｌ-１７ 수용체 ａ 항원 결합 단백질 - Google Patents

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크리스토퍼 멜린
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Abstract

본 발명은 IL-17 수용체 A (IL-17RA 또는 IL-17R) 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체, 상기 항원 결합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열, 및 하나 이상의 IL-17 리간드에 의한 IL-17 수용체 A 활성화에 의해 매개된 질병을 진단 및 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명은 IL-17 수용체 A (IL-17RA 또는 IL-17R) 상의 중화 결정인자 및 그에 결합하는 항체의 확인에 관한 것이다. 본 발명의 측면들은 또한 결합을 위해 본원에 설명된 IL-17RA 중화 항체와 경쟁하는 항체를 포함한다.

Description

ＩＬ-１７ 수용체 Ａ 항원 결합 단백질 {IL-17 RECEPTOR A ANTIGEN BINDING PROTEINS}
<관련 출원에 대한 교차 참조>
본원은 본원에 참고로 포함된 미국 특허 가출원 60/969,895 (2007년 9월 4일), 미국 특허 가출원 60/873,072 (2006년 12월 5일) 및 미국 특허 가출원 60/827,882 (2006년 10월 2일)를 기초로 한 35 U.S.C. §119 하의 우선권을 주장한다.
본 발명은 IL-17 수용체 A (IL-17RA 또는 IL-17R) 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체, 상기 항원 결합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열, 및 하나 이상의 IL-17 리간드에 의한 IL-17 수용체 A 활성화에 의해 매개된 질병을 진단 및 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명은 IL-17 수용체 A (IL-17RA 또는 IL-17R) 상의 중화 결정인자 (determinant) 및 그에 결합하는 항체의 확인에 관한 것이다. 본 발명의 측면들은 또한 결합을 위해 본원에 설명된 IL-17RA 중화 항체와 경쟁하는 항체를 포함한다.
IL-17A는 초기에 활성화된 T 세포에 의해 선택적으로 발현된 전사체로서 확인된 염증성 시토킨이다. IL-17RA는 편재적으로 발현되고, IL-17A에 약 0.5 nM의 친화도로 결합하는 것으로 보인다 (Yao et al., 1995, Immunity 3:811-821). 5개의 추가의 IL-17-유사 리간드 (IL-17B - IL-17F) 및 4개의 추가의 IL-17RA-유사 수용체 (IL-17RB - IL-17RE)가 확인되었다 (Kolls and Linden, 2004, Immunity 21:467-476).
IL-17RC는 IL-17A 및 IL-17F에 결합하는 것으로 나타났다. IL-17RA 결핍 및 IL-17RA 항체 중화가 IL-17A 및 IL-17F 기능을 모두 제거한다는 관찰은 IL-17RC가 IL-17RA의 부재 하에 IL-17A 또는 IL-17F 신호를 전달할 수 없음을 제안한다 ([Toy et al., 2006, J. Immunol. 177:36-39]; [McAllister et al., 2005, J. Immunol. 175:404-412]). 추가로, IL-17RA 결핍 세포에서 IL-17RC의 강제 발현은 IL-17A 또는 IL-17F 기능을 회복시키지 않는다 (Toy et al., 2006, J. Immunol 177:36-39).
IL-17A 및 IL-17F는 활성화된 CD4+ 메모리 T 세포에 의해 주로 발현된다 (Kolls and Linden, 2004, 상기 문헌). IL-17A-생산 병원성 CD4+ T 세포 하위세트인 ThIL-17은 IL-23의 존재 하에 팽창되는 것으로 제안되었다 (Langrish et al., 2005, J. Exp. Med. 201:233-240). 추가로, IL-15 및 TNF 수퍼패밀리 멤버 OX40L은 IL-17A의 발현을 유도하는 것으로 나타났다 ([Nakae et al., 2003b, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100:5986-5990]; [Ziolkowska et al., 2000, J. Immunol. 164:2832-2838]). IL-6 및 TGF-베타는 또한 IL-17A의 발현을 유도한다.
IL-17A 및 IL-17F는 IL-17RA에 결합하여 이를 활성화시킨다. IL-17RA는 면역 반응을 조절하는데 중요한 것으로 나타났다. IL-17RA의 활성화는 시토킨, 케모킨, 성장 인자, 및 수많은 질병의 증상 및/또는 병리학에 기여하는 다른 단백질의 생산을 유발한다. IL-17A는 질병 및 생리학적 효과, 예를 들어 염증, 연골 파괴 및 뼈 흡수를 일으키는 시토킨 및 다른 매개체의 생산을 유도하는 염증성 시토킨이다. IL-17A는 또한 관절염 (류마티스 관절염), 건선, 염증성 장 질병, 다발 경색증 및 천식을 포함하는 많은 염증성 병태에서 일정한 역할을 수행한다 ([Li et al., 2004, Huazhong Univ. Sci. Technolog. Med. Sci. 24:294-296]; [Fujino et al., 2003, Gut. 52:65-70]; [Kauffman et al., 2004, J. Invest. Dermatol. 123: 1037-1044]; [Mannon et al., 2004, N. Engl. J Med. 351:2069-2079]; [Matusevicius et al., 1999, Mult Scler 5, 101-104]; [Linden et al., Eur Respir J. 2000 May; 15(5):973-7]; [Molet et al., 2001, J. Allergy Clin. Immunol. 108:430-438]). 최근의 연구에서는 IL-17F가 염증성 반응의 유도에서 일정한 역할을 수행함을 제안하였다 ([Oda et al., 2006, American J. Resp. Crit. Care Medicine, Jan. 15, 2006]; [Numasaki et al., 2004, Immunol Lett. 95:97-104]).
본 발명의 측면들은 본원에 보다 상세히 설명된 바와 같이 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17 패밀리 멤버, 예를 들어 비제한적으로 IL-17A 및/또는 IL-17F에 의해 매개된 IL-17RA 활성화를 억제하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
도 1은 다양한 IL-17R 항원 결합 단백질 (항체)의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL) 도메인의 CDR (상보성 결정 구역)의 계통발생학적 계통수 (dentogram) 분석을 도시한 것이다.
도 2는 다양한 IL-17R 항원 결합 단백질 (항체)의 가변 중쇄 (VH) 도메인의 CDR의 아미노산 서열의 정렬을 도시한 것이다. CDR1, CDR2 및 CDR3 구역을 강조하여 표시하였다.
도 3은 다양한 IL-17R 항원 결합 단백질 (항체)의 가변 경쇄 (VL) 도메인의 CDR의 아미노산 서열의 정렬을 도시한 것이다. CDR1, CDR2 및 CDR3 구역을 강조하여 표시하였다.
도 4는 IL-17RA-/- 마우스 (낙아웃 (knockout) 마우스 또는 KO 마우스)의 평균 임상 스코어가 관절염의 CIA 모델에서 야생형 (WT) 마우스의 스코어보다 훨씬 더 낮음을 보여준다.
도 5는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 (MOG)-유도된 모델에서 야생형 마우스에 비해 IL-17RA 낙아웃 마우스에 대한 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE) 발병의 지연을 보여준다.
도 6은 MOG-유도된 모델에서 야생형 마우스에 비해 IL-17RA 낙아웃 마우스에서 감소된 임상 스코어를 보여준다.
도 7은 IL-17RA 낙아웃 마우스는 천식의 난알부민-유도된 모델에서 야생형에 비해 BAL액 내의 염증성 세포의 총 수가 감소된 것을 보여준다.
도 8은 IL-17RA 낙아웃 마우스가 천식의 난알부민-유도된 모델에서 야생형에 비해 기관지폐포 세척액 (BAL) 내의 호산구 (도 8A), 중성구 (도 8B) 및 림프구 (도 8C)의 수가 감소된 것을 보여준다. 도 8D는 WT 또는 IL-17RA 낙아웃 마우스 (나이브 (naive) 및 OVA 챌린징된 (challenged))에서 관찰된 BAL액 대식세포에서 변화가 없음을 보여준다.
도 9는 야생형 (WT) 콜라겐-유도된 관절염 (CIA) 모델에서 IL-17RA mAb에 의한 용량-의존 억제를 보여준다. 100 ㎍ 및 300 ㎍ 처리군 대 대조 처리군 (제13, 15 및 16일)에서 IL-17RA mAb를 비교할 때 P<0.05가 나타났다.
도 10은 IL-17RA mAb를 사용한 치료적 처치의 결과를 도시한 것이다. 데이타는 관절염의 표준 CIA 모델에서 야생형 마우스에서 안정화된 평균 임상 스코어를 보여준다. 이들 데이타는 IL-17RA 항원 결합 단백질에 의한 IL-17RA 억제가 류마티스 관절염 (RA)를 치료하는데, 특히 관절 뼈 및 연골의 보존에 치료상 유용할 수 있음을 입증한다.
도 11은 항-IL-17RA mAb를 사용한 치료적 처치가 관절염의 표준 CIA 모델에서 TNFR p55/p75 낙아웃 마우스에서 평균 임상 스코어를 안정화시켰음을 보여준다. 이들 데이타는 IL-17RA 항원 결합 단백질에 의한 IL-17RA 억제가 RA를 치료하는데, 특히 관절 뼈 및 연골의 보존에 치료상 유용할 수 있음을 보여준다. 특히, IL-17RA 억제는 TNF 신호전달에 관계없이 모델에서 질병을 안정화시킬 수 있었다.
도 12는 예시적인 IL-17RA 인간 mAb (AMH14/AML14, AMH22/AML22, AMH19/AML19 및 AMH18/AML18)가 JTC-12 세포 (사이노몰거스 신장 세포주)로부터 사이노몰거스 IL-17-유도된 IL-6 생산을 억제할 수 있었음을 보여준다. (----) 선은 TNF-알파와 조합한 사이노몰거스 IL-17의 양성 대조 값을 나타낸다. (-.-.-) 선은 사이노몰거스 TNF-알파의 양성 대조 값을 나타낸다. (....) 선은 중간 대조 값을 나타낸다.
도 13은 생식세포 계열 잔기에 관련하여 서열 40 (AML14)의 프레임워크 구역의 서열 변이 및 IC50 값에 대한 효과를 보여준다.
도 14는 생식세포 계열로 되돌아간 잔기를 갖는 2개의 변이체 (도 13 참조)가 AMH14/AML14에 관련하여 감소된 IL-17A 억제 활성을 가졌음을 보여주고, 이는 프레임워크 구역 내의 일부 변이는 허용될 수 있지만, 일부 잔기는 활성에 영향을 미칠 수 있음을 나타낸다. (----) 선은 항체의 부재 하에 IL-17 자극의 양성 대조 값을 나타낸다 (약 4062 pg/ml).
도 15는 생식세포 계열로 되돌아간 잔기를 갖는 2개의 변이체 (도 13 참조)가 AMH14/AML14에 관련하여 감소된 IL-17F (TNF-알파와 조합되어) 억제 활성을 가졌음을 보여준다.
도 16A 및 16B는 IL-17RA 항체의 멀티플렉스드 비닝 (multiplexed binning) 결과를 도시한 것이다. 어둡게 한 값은 IL-17RA에 동시에 결합할 수 있는 항체쌍을 나타내고, 이는 이들 항체가 상이한 중화 결정인자에 결합하는 것을 제안한다. 네모친 값은 그들 자체에 대해 쌍을 이룬 항체를 나타낸다.
도 17은 마우스 IL-17RA (서열 432) 및 인간 IL-17RA 서열 내의 대응 도메인을 대체하는 6개의 도메인, 즉 A, B, C, D, E 및 F를 도시한 것이다.
도 18A-18D는 인간 및 마우스 IL-17RA 및 인간/마우스 키메라 (chimera) IL-17RA 단백질에 대한 아미노산 서열을 도시한 것이다.
도 19는 다양한 키메라 단백질에 결합하는 IL-17RA mAb의 능력을 요약한 표이다. 어둡게 한 값은 IL-17RA mAb가 그 특정 키메라에 결합하는 것을 잃는 부위를 나타낸다 (n.d.는 결정되지 않음을 의미한다).
도 20은 서열 431에서 아르기닌 잔기로 대체된 아미노산 잔기를 도시한 것이다.
도 21은 D152R IL-17RA 돌연변이체에 대한 다양한 IL-17RA mAb 결합의 적정 곡선을 도시한 것이다.
도 22는 다양한 IL-17RA mAb에 대한 아르기닌 스캔, 비닝, 및 키메라 데이타의 요약이다.
본원에서 사용되는 섹션 표제는 단지 구조화를 위한 것이고, 설명된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
표준 기술은 재조합 DNA, 올리고뉴클레오티드 합성, 조직 배양 및 형질전환, 단백질 정제 등을 위해 사용될 수 있다. 효소 반응 및 정제 기술은 제조자의 지시에 따라 또는 당업계에서 일반적으로 달성되는 바와 같이 또는 본원에 설명된 바와 같이 수행할 수 있다. 다음 절차 및 기술은 일반적으로 당업계에 잘 공지된 통상적인 방법에 따라, 및 명세서 전체에 인용되거나 논의된 다양한 일반적인 및 보다 특별한 참조문에 설명된 바와 같이 수행할 수 있다 (예를 들어, 임의의 목적으로 본원에 참고로 포함되는 문헌 [Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.] 참조). 특정한 정의가 제공되지 않으면, 본원에 설명된 분석 화학, 유기 화학 및 의학 및 제약 화학과 연관되어 및 상기 학문의 실험 절차 및 기술에서 사용된 명명법은 잘 공지되고 당업계에 일반적으로 사용되는 것이다. 화학 합성, 화학 분석, 제약 제조, 제형, 및 환자의 전달 및 치료를 위한 표준 기술이 사용될 수 있다.
IL-17A, IL-17F 및 IL-17RA.
IL-17A 및 IL-17F의 생물학적 활성은 IL-17RA에 대항하여 생성된 중화 mAb (모노클로날 항체)를 사용하고 IL-17RA가 유전학상 결핍된 마우스 및 세포를 사용하여 본원에서 보여준 바와 같이 IL-17RA에 의존적이다 (아래 실시예 참조).
"IL-17 수용체 A" 또는 "IL-17RA" (본원에서 상호교환가능하게 사용됨, 또한 IL-17 수용체 및 IL-17R은 동일한 수용체를 나타낸다)는 본원에서 사용될 때 IL-17A 및 IL-17F에 결합하고, 그 결과 세포 내에서 신호 전달 경로를 개시시키는 세포 표면 수용체 및 수용체 복합체 (비제한적인 예를 들어, IL-17RA-IL-17RC 복합체)를 의미한다. IL-17RA 단백질은 변이체를 또한 포함할 수 있다. IL-17RA 단백질은 또한 단편, 예를 들어 트랜스멤브레인 및/또는 세포내 도메인의 전부 또는 일부를 갖지 않는 세포외 도메인, 및 세포외 도메인의 단편을 포함할 수 있다. IL-17RA의 클로닝, 특성화 및 제조는 예를 들어, 그 전문이 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 6,072,033에 설명되어 있다. 인간 IL-17RA의 아미노산 서열을 서열 430에 제시한다. 본 발명의 방법에서 유용한 가용형 형태의 huIL-17RA는 세포외 도메인 또는 신호 펩티드가 결핍되는 성숙 형태, 또는 IL-17A 및/또는 IL-17F에 결합하는 능력을 보유하는 세포외 도메인의 단편, 또는 IL-17A 및/또는 IL-17F의 헤테로머 (heteromer) 버전을 포함한다. 다른 형태의 IL-17RA는 IL-17RA가 IL-17A 및/또는 IL-17F에 결합하는 능력을 보유하는 한, 미국 특허 6,072,033에 설명된 바와 같은 서열 430의 천연 IL-17RA에 적어도 70% 내지 99% 상동성인 돌연변이체 및 변이체, 또는 IL-17A 및/또는 IL-17F의 헤테로머 버전을 포함한다. 용어 "IL-17RA"는 또한 IL-17RA 아미노산 서열의 번역후 변형을 포함한다. 번역후 변형은 N- 및 O-연결된 글리코실화를 포함하고 이로 제한되지 않는다.
IL-17RA 항원 결합 단백질
본 발명은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 제공한다. 항원 결합 단백질의 실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 펩티드 및/또는 폴리펩티드 (임의로 번역후 변형을 포함함)를 포함한다. 항원 결합 단백질의 실시태양은 본원에서 다양하게 정의한 바와 같이 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 단편을 포함한다. 본 발명의 측면들은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17A 및/또는 IL-17F가 IL-17RA, 또는 IL-17RA와 IL-17RC의 헤테로머 복합체에 결합하여 활성화시키는 것을 억제하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면들은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17A/IL-17F 헤테로머가 IL-17RA, 또는 IL-17RA와 IL-17RC의 헤테로머 복합체에 결합하여 활성화시키는 것을 억제하는 항체를 포함한다. 명세서 전체에서, IL-17A 및/또는 IL-17F를 억제하는 것을 언급할 때, 이는 IL-17A와 IL-17F의 헤테로머를 억제하는 것도 포함하는 것으로 이해된다. 본 발명의 측면들은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17RA가 호모머 (homomer) 또는 헤테로머 기능적 수용체 복합체, 비제한적인 예를 들어 IL-17RA-IL-17RC 복합체를 형성하는 것을 부분적으로 또는 완전히 억제하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면들은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17RA가 호모머 또는 헤테로머 기능적 수용체 복합체, 비제한적인 예를 들어 IL-17RA/IL-17RC 복합체를 형성하는 것을 부분적으로 또는 완전히 억제하고, 반드시 IL-17A 및/또는 IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F 헤테로머가 IL-17RA 또는 IL-17RA 헤테로머 수용체 복합체에 결합하는 것을 억제하지는 않는 항체를 포함한다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 IL-17RA에 특이적으로 결합한다. "특이적으로 결합하다"는 본원에서 사용될 때 항원 결합 단백질이 다른 단백질에 비해 IL-17RA에 우선적으로 결합하는 것을 의미한다. 일부 실시태양에서, "특이적으로 결합하다"는 IL-17RA 항원 결합 단백질이 다른 단백질에 대해서보다 IL-17RA에 대해 더 높은 친화도를 갖는다는 것을 의미한다. 예를 들어, 평형 해리 상수는 < 10-7 내지 10-11 M, 또는 < 10-8 내지 < 10-10 M, 또는 < 10-9 내지 <10-10 M이다.
본원에 설명된 IL-17RA 항체의 다양한 실시태양을 칭할 때, 이는 또한 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함하는 것으로 이해된다. IL-17RA-결합 단편은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 본원에 설명된 임의의 항체 단편 또는 도메인을 포함한다. 상기 IL-17RA-결합 단편은 본원에 설명된 임의의 스캐폴드 (scaffold) 내에 존재할 수 있다. 상기 IL-17RA-결합 단편은 또한 명세서 전체에서 설명된 바와 같이 IL-17RA의 활성화를 억제하는 능력을 갖는다.
IL-17RA 항원 결합 단백질이 치료 용도로 사용되는 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질의 하나의 특징은 IL-17A 및/또는 IL-17F의 IL-17RA에 대한 결합 및 IL-17RA의 또는 IL-17RA에 의해 매개되는 하나 이상의 생물학적 활성을 억제할 수 있다는 점이다. 상기 항체는 IL-17A 및/또는 IL-17F가 IL-17RA에 결합하여 IL-17RA의 신호전달 및/또는 생물학적 활성을 억제하는 것을 방지하는 능력 때문에 중화 항체인 것으로 여겨진다. 이러한 경우에, 항원 결합 단백질은 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17RA에 대한 IL-17A 및/또는 IL-17F의 결합을 10 내지 100% 사이의 임의의 값으로, 예를 들어 적어도 약 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% 이상 억제한다 (예를 들어, 결합을 본원에 설명된 바와 같은 시험관내 경쟁 결합 분석으로 측정함으로써). 예를 들어, IL-17RA 항체는 이들을 인간 음경 포피 섬유모세포 (HFF) 분석에서 IL-6의 생산에 대해 시험함으로써 (예를 들어 실시예 8 및 9 참조), 또는 당업계에 공지된 임의의 적합한 분석에 의해 중화 능력에 대해 시험할 수 있다. IL-17RA 신호전달 및/또는 생물학적 활성의 억제에 대해 시험하기 위한 IL-17RA의 추가의 생물학적 활성의 단지 예시를 위한 예 (예를 들어, 분석 판독)는 IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP (비제한적인 예를 들어 MMP3 및 MMP9), GROα, NO 및/또는 C-텔로펩티드 (telopeptide) 등 중 하나 이상의 시험관내 및/또는 생체내 측정치를 포함한다.
항원 결합 단백질의 실시태양은 하나 이상의 상보성 결정 구역 (CDR)을 갖는, 본원에서 다양하게 정의한 바와 같은 스캐폴드 구조를 포함한다. 항원 결합 단백질의 실시태양은 하나 이상의 가변 도메인 (중쇄 또는 경쇄의)을 갖는 스캐폴드 구조를 포함한다. 실시태양은 AML1 내지 AML26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 구역 (각각 서열 27-53, 여기서 AML23은 2개의 버전 - 서열 49 및 50을 갖는다) 및/또는 AMH1 내지 AMH26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 구역 (각각 서열 1-26) 및 그의 단편, 유도체, 돌연변이체 및 변이체를 포함하는 항체를 포함한다.
고안되는 스캐폴드의 추가의 예는 피브로넥틴, 네오카르지노스타틴 CBM4-2, 리포칼린, T-세포 수용체, 단백질-A 도메인 (단백질 Z), Im9, TPR 단백질, 징크 핑거 (zinc finger) 도메인, pVIII, 조류 췌장 폴리펩티드, GCN4, WW 도메인, Src 상동성 도메인 3, PDZ 도메인, TEM-1 베타-락타마제, 티오레독신, 포도구균 뉴클레아제, PHD-핑거 도메인, CL-2, BPTI, APPI, HPSTI, 에코틴, LACI-D1, LDTI, MTI-II, 전갈 독소, 곤충 데펜신-A 펩티드, EETI-II, Min-23, CBD, PBP, 시토크롬 b-562, Ld1 수용체 도메인, 감마-크리스탈린, 유비퀴틴, 트랜스페링 (transferring), 및/또는 C-형 렉틴-유사 도메인을 포함한다.
본 발명의 측면들은 가변 도메인, 즉 AML1/AMH1 (서열 27/서열 1), AML2/AMH2 (서열 28/서열 2), AML3/AMH3 (서열 29/서열 3), AML4/AMH4 (서열 30/서열 4), AML5/AMH5 (서열 31/서열 5), AML6/AMH6 (서열 32/서열 6), AML7/AMH7 (서열 33/서열 7), AML8/AMH8 (서열 34/서열 8), AML9/AMH9 (서열 35/서열 9), AML10/AMH10 (서열 36/서열 10), AML11/AMH11 (서열 37/서열 11), AML12/AMH12 (서열 38/서열 12), AML13/AMH13 (서열 39/서열 13), AML14/AMH14 (서열 40/서열 14), AML15/AMH15 (서열 41/서열 15), AML16/AMH16 (서열 42/서열 16), AML17/AMH17 (서열 43/서열 17), AML18/AMH18 (서열 44/서열 18), AML19/AMH19 (서열 45/서열 19), AML20/AMH20 (서열 46/서열 20), AML21/AMH21 (서열 47/서열 21), AML22/AMH22 (서열 48/서열 22), AML23/AMH23 (서열 49 또는 서열 50/서열 23), AML24/AMH24 (서열 51/서열 24), AML25/AMH25 (서열 52/서열 25), AML26/AMH26 (서열 53/서열 26) 및 그의 조합뿐만 아니라, 그의 단편, 유도체, 돌연변이체 및 변이체를 포함하는 항체를 포함한다.
추가의 실시태양에서, 제1 아미노산 서열은 CDR3, CDR2 및 CDR1을 포함하고, 제2 아미노산 서열은 표 1의 CDR3, CDR2 및 CDR1을 포함한다.
다른 실시태양에서, 항원 결합 단백질은 A) 서열 1-26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열의 적어도 하나의 H-CDR1, H-CDR2 또는 H-CDR3을 포함하는 중쇄 아미노산 서열; 및/또는 B) 서열 27-53으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열의 적어도 하나의 L-CDR1, L-CDR2 또는 L-CDR3을 포함하는 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
추가의 변이에서, 항원 결합 단백질은 A) 임의의 서열 1-26의 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 중쇄 아미노산 서열, 및 B) 임의의 서열 27-53의 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 또다른 변이에서, 항원 결합 단백질은 서열 1-26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 아미노산 서열 또는 서열 27-53으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 아미노산 서열에 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시태양에서, CDR은 H-CDR1 (즉, 중쇄의 CDR1 등), H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1 (즉, 경쇄의 CDR1 등), L-CDR2 및 L-CDR3, 및 그의 단편, 유도체, 돌연변이체 및 변이체로부터 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
본 발명의 측면들은 서열 1-26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 구역을 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면들은 서열 27-53으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 구역을 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면들은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 서열 1-26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 구역을 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면들은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 서열 27-53으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 구역을 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면들은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 서열 1-26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 구역, 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 서열 27-53으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 구역을 포함하는 항체를 포함한다.
다른 실시태양에서, 항원 결합 단백질의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 참고 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인에 특정 동일성 %를 가짐으로써 규정된다. 예를 들어, 항원 결합 단백질은 A) 서열 1-26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 아미노산 서열에 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산; 및 B) 서열 27-53으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 아미노산 서열에 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 도메인 아미노산을 포함한다.
본 발명의 측면들은 다음과 같은 예시적인 실시태양을 포함하고 이로 제한되지 않는 다양한 실시태양을 포함한다:
실시태양 1: 완전 쥐 항체가 아니고 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하고 IL-17A가 상기 수용체에 결합하여 활성화시키는 것을 억제하는 모노클로날 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편을 포함하는 단리된 항체.
실시태양 2: 실시태양 1에 있어서, 상기 항체가 IL-17F가 상기 수용체에 결합하여 활성화시키는 것을 추가로 억제하는 것인 항체.
실시태양 3: 실시태양 1에 있어서, 상기 항체가 a. 인간화 항체; b. 키메라 항체; c. 재조합 항체; d. 단일쇄 항체; e. 디아바디 (diabody); f. 트리아바디 (triabody); g. 테트라바디 (tetrabody); h. Fab 단편; i. F(ab')2 단편; j. IgD 항체; k. IgE 항체; l. IgM 항체; m. IgG1 항체; n. IgG2 항체; o. IgG3 항체; 및 p. IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 항체.
실시태양 4: 실시태양 3에 있어서, 상기 항체가
A. a. AML1-26의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 27-53)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH1-26의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 1-26)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열; 또는
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인; 및
B. a. 항체 AM-1의 경쇄 CDR1 (서열 185), CDR2 (서열 186), CDR3 (서열 187) 및 중쇄 CDR1 (서열 107), CDR2 (서열 108), CDR3 (서열 109);
b. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1 (서열 188), CDR2 (서열 189), CDR3 (서열 190) 및 중쇄 CDR1 (서열 110), CDR2 (서열 111), CDR3 (서열 112);
c. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1 (서열 191), CDR2 (서열 192), CDR3 (서열 193) 및 중쇄 CDR1 (서열 113), CDR2 (서열 114), CDR3 (서열 115);
d. 항체 AM-4의 경쇄 CDR1 (서열 194), CDR2 (서열 195), CDR3 (서열 196) 및 중쇄 CDR1 (서열 116), CDR2 (서열 117), CDR3 (서열 118);
e. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1 (서열 197), CDR2 (서열 198), CDR3 (서열 199) 및 중쇄 CDR1 (서열 119), CDR2 (서열 120), CDR3 (서열 121);
f. 항체 AM-6의 경쇄 CDR1 (서열 200), CDR2 (서열 201), CDR3 (서열 202) 및 중쇄 CDR1 (서열 122), CDR2 (서열 123), CDR3 (서열 124);
g. 항체 AM-7의 경쇄 CDR1 (서열 203), CDR2 (서열 204), CDR3 (서열 205) 및 중쇄 CDR1 (서열 125), CDR2 (서열 126), CDR3 (서열 127);
h. 항체 AM-8의 경쇄 CDR1 (서열 206), CDR2 (서열 207), CDR3 (서열 208) 및 중쇄 CDR1 (서열 128), CDR2 (서열 129), CDR3 (서열 130);
i. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133);
j. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1 (서열 212), CDR2 (서열 213), CDR3 (서열 214) 및 중쇄 CDR1 (서열 134), CDR2 (서열 135), CDR3 (서열 136);
k. 항체 AM-11의 경쇄 CDR1 (서열 215), CDR2 (서열 216), CDR3 (서열 217) 및 중쇄 CDR1 (서열 137), CDR2 (서열 138), CDR3 (서열 139);
l. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
m. 항체 AM-13의 경쇄 CDR1 (서열 221), CDR2 (서열 222), CDR3 (서열 223) 및 중쇄 CDR1 (서열 143), CDR2 (서열 144), CDR3 (서열 145);
n. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
o. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1 (서열 227), CDR2 (서열 228), CDR3 (서열 229) 및 중쇄 CDR1 (서열 149), CDR2 (서열 150), CDR3 (서열 151);
p. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
q. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
r. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
s. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
t. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166);
u. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169);
v. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172);
w. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
x. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
y. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1 (서열 257), CDR2 (서열 258), CDR3 (서열 259) 및 중쇄 CDR1 (서열 176), CDR2 (서열 177), CDR3 (서열 178);
z. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1 (서열 260), CDR2 (서열 261), CDR3 (서열 262) 및 중쇄 CDR1 (서열 179), CDR2 (서열 180), CDR3 (서열 181); 또는
z.2. 항체 AM-26의 경쇄 CDR1 (서열 263), CDR2 (서열 264), CDR3 (서열 265) 및 중쇄 CDR1 (서열 182), CDR2 (서열 183), CDR3 (서열 184)로부터의 각각의 CDR에서 총 3개 이하의 아미노산 부가, 치환 및/또는 결실이 상이한 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3 및 중쇄 CDR1, CDR2, CDR3으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 5: 실시태양 4에 있어서, 상기 항체가
a. AML1/AMH1의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 27/서열 1);
b. AML2/AMH2의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 28/서열 2);
c. AML3/AMH3의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 29/서열 3);
d. AML4/AMH4의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 30/서열 4);
e. AML5/AMH5의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 31/서열 5);
f. AML6/AMH6의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 32/서열 6);
g. AML7/AMH7의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 33/서열 7);
h. AML8/AMH8의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 34/서열 8);
i. AML9/AMH9의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 35/서열 9);
j. AML10/AMH10의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 36/서열 10);
k. AML11/AMH11의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 37/서열 11);
l. AML12/AMH12의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 38/서열 12);
m. AML13/AMH13의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 39/서열 13);
n. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
o. AML15/AMH15의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 41/서열 15);
p. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 42/서열 16);
q. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 43/서열 17);
r. AML18/AMH18의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 44/서열 18);
s. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
t. AML20/AMH20의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 46/서열 20);
u. AML21/AMH21의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 47/서열 21);
v. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22);
w. AML23/AMH23의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 49 또는 서열 50/서열 23);
x. AML24/AMH24의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 51/서열 24);
y. AML25/AMH25의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 52/서열 25); 및
z. AML26/AMH26의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 53/서열 26)으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 6: 실시태양 4에 있어서, 상기 항체가
a. 항체 AM-1의 경쇄 CDR1 (서열 185), CDR2 (서열 186), CDR3 (서열 187) 및 중쇄 CDR1 (서열 107), CDR2 (서열 108), CDR3 (서열 109);
b. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1 (서열 188), CDR2 (서열 189), CDR3 (서열 190) 및 중쇄 CDR1 (서열 110), CDR2 (서열 111), CDR3 (서열 112);
c. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1 (서열 191), CDR2 (서열 192), CDR3 (서열 193) 및 중쇄 CDR1 (서열 113), CDR2 (서열 114), CDR3 (서열 115);
d. 항체 AM-4의 경쇄 CDR1 (서열 194), CDR2 (서열 195), CDR3 (서열 196) 및 중쇄 CDR1 (서열 116), CDR2 (서열 117), CDR3 (서열 118);
e. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1 (서열 197), CDR2 (서열 198), CDR3 (서열 199) 및 중쇄 CDR1 (서열 119), CDR2 (서열 120), CDR3 (서열 121);
f. 항체 AM-6의 경쇄 CDR1 (서열 200), CDR2 (서열 201), CDR3 (서열 202) 및 중쇄 CDR1 (서열 122), CDR2 (서열 123), CDR3 (서열 124);
g. 항체 AM-7의 경쇄 CDR1 (서열 203), CDR2 (서열 204), CDR3 (서열 205) 및 중쇄 CDR1 (서열 125), CDR2 (서열 126), CDR3 (서열 127);
h. 항체 AM-8의 경쇄 CDR1 (서열 206), CDR2 (서열 207), CDR3 (서열 208) 및 중쇄 CDR1 (서열 128), CDR2 (서열 129), CDR3 (서열 130);
i. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133);
j. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1 (서열 212), CDR2 (서열 213), CDR3 (서열 214) 및 중쇄 CDR1 (서열 134), CDR2 (서열 135), CDR3 (서열 136);
k. 항체 AM-11의 경쇄 CDR1 (서열 215), CDR2 (서열 216), CDR3 (서열 217) 및 중쇄 CDR1 (서열 137), CDR2 (서열 138), CDR3 (서열 139);
l. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
m. 항체 AM-13의 경쇄 CDR1 (서열 221), CDR2 (서열 222), CDR3 (서열 223) 및 중쇄 CDR1 (서열 143), CDR2 (서열 144), CDR3 (서열 145);
n. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
o. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1 (서열 227), CDR2 (서열 228), CDR3 (서열 229) 및 중쇄 CDR1 (서열 149), CDR2 (서열 150), CDR3 (서열 151);
p. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
q. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
r. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
s. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
t. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166);
u. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169);
v. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172);
w. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
x. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
y. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1 (서열 257), CDR2 (서열 258), CDR3 (서열 259) 및 중쇄 CDR1 (서열 176), CDR2 (서열 177), CDR3 (서열 178);
z. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1 (서열 260), CDR2 (서열 261), CDR3 (서열 262) 및 중쇄 CDR1 (서열 179), CDR2 (서열 180), CDR3 (서열 181); 또는
z.2. 항체 AM-26의 경쇄 CDR1 (서열 263), CDR2 (서열 264), CDR3 (서열 265) 및 중쇄 CDR1 (서열 182), CDR2 (서열 183), CDR3 (서열 184)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 7: 실시태양 2에 있어서, 상기 항체가 a. 인간화 항체; b. 키메라 항체; c. 재조합 항체; d. 단일쇄 항체; e. 디아바디; f. 트리아바디; g. 테트라바디; h. Fab 단편; i. F(ab')2 단편; j. IgD 항체; k. IgE 항체; l. IgM 항체; m. IgG1 항체; n. IgG2 항체; o. IgG3 항체; 및 p. IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 항체.
실시태양 8: 실시태양 7에 있어서, 상기 항체가
A. a. AML14, 18, 19 및 22의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 40, 44, 45 및 48)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH14, 18, 19 및 22의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 14, 18, 19 및 22)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열; 또는
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인;
B. 다음 서열로부터의 각각의 CDR에서 총 3개 이하의 아미노산 부가, 치환 및/또는 결실이 상이한 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3 및 중쇄 CDR1, CDR2, CDR3:
a. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
b. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
c. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163); 또는
d. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172); 및
C. a. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
b. AML18/AMH18의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 44/서열 18);
c. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19); 또는
d. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22)으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 9: a. i. X1YGIS (식에서, X1은 R, S 및 G로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
b. i. WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (식에서, X1은 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 N, S 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 K 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 L 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
c. i. X1QLX2X3DY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y, V 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 F 및 L로 이루어지는 군 중에서 선택된다);
ii. X1QLX2FDY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y 및 V로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
d. i. RASQSX1X2X3X4LA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 I 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 S 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 N 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 A 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및
ii. RASQSX1SSNLA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
e. i. X1X2STRAX3 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 T 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및
ii. X1ASTRAX2 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및
f. i. QQYDX1WPLT (식에서, X1은 N, T 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하고; IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편.
실시태양 10: 실시태양 9에 있어서, 상기 항체가
a. X1YGIS (식에서, X1은 R, S 및 G로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 중쇄 CDR1 아미노산 서열;
b. WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (식에서, X1은 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 N, S 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 K 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 L 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 중쇄 CDR2 아미노산 서열;
c. X1QLX2FDY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y 및 V로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 중쇄 CDR3 아미노산 서열;
d. RASQSX1SSNLA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 경쇄 CDR1 아미노산 서열;
e. X1ASTRAX2 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 경쇄 CDR2 아미노산 서열; 및
f. QQYDX1WPLT (식에서, X1은 N, T 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 경쇄 CDR3 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 11: 실시태양 9에 있어서, 상기 항체가
A. a. AML12, 14, 16, 17, 19 및 22의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 38, 40, 42, 43, 45 및 48)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH12, 14, 16, 17, 19 및 22의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 12, 14, 16, 17, 19 및 22)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열; 또는
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인;
B. 다음 서열로부터의 각각의 CDR에서 총 3개 이하의 아미노산 부가, 치환 및/또는 결실이 상이한 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3 및 중쇄 CDR1, CDR2, CDR3:
a. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
b. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
c. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
d. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
e. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163); 또는
f. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172); 및
C. a. AML12/AMH12의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 38/서열 12);
b. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
c. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 42/서열 16);
d. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 43/서열 17);
e. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
f. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22)으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 12: 실시태양 4의 항체를 포함하는 제약 조성물.
실시태양 14: 실시태양 4에 있어서, 상기 항체가 상기 항체의 유도체인 항체.
실시태양 15: A. a. AML1-26의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 27-53)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH1-26의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 1-26)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열; 또는
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인; 및
B. 다음 서열로부터의 각각의 CDR에서 총 3개 이하의 아미노산 부가, 치환 및/또는 결실이 상이한 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3 및 중쇄 CDR1, CDR2, CDR3:
a. 항체 AM-1의 경쇄 CDR1 (서열 185), CDR2 (서열 186), CDR3 (서열 187) 및 중쇄 CDR1 (서열 107), CDR2 (서열 108), CDR3 (서열 109);
b. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1 (서열 188), CDR2 (서열 189), CDR3 (서열 190) 및 중쇄 CDR1 (서열 110), CDR2 (서열 111), CDR3 (서열 112);
c. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1 (서열 191), CDR2 (서열 192), CDR3 (서열 193) 및 중쇄 CDR1 (서열 113), CDR2 (서열 114), CDR3 (서열 115);
d. 항체 AM-4의 경쇄 CDR1 (서열 194), CDR2 (서열 195), CDR3 (서열 196) 및 중쇄 CDR1 (서열 116), CDR2 (서열 117), CDR3 (서열 118);
e. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1 (서열 197), CDR2 (서열 198), CDR3 (서열 199) 및 중쇄 CDR1 (서열 119), CDR2 (서열 120), CDR3 (서열 121);
f. 항체 AM-6의 경쇄 CDR1 (서열 200), CDR2 (서열 201), CDR3 (서열 202) 및 중쇄 CDR1 (서열 122), CDR2 (서열 123), CDR3 (서열 124);
g. 항체 AM-7의 경쇄 CDR1 (서열 203), CDR2 (서열 204), CDR3 (서열 205) 및 중쇄 CDR1 (서열 125), CDR2 (서열 126), CDR3 (서열 127);
h. 항체 AM-8의 경쇄 CDR1 (서열 206), CDR2 (서열 207), CDR3 (서열 208) 및 중쇄 CDR1 (서열 128), CDR2 (서열 129), CDR3 (서열 130);
i. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133);
j. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1 (서열 212), CDR2 (서열 213), CDR3 (서열 214) 및 중쇄 CDR1 (서열 134), CDR2 (서열 135), CDR3 (서열 136);
k. 항체 AM-11의 경쇄 CDR1 (서열 215), CDR2 (서열 216), CDR3 (서열 217) 및 중쇄 CDR1 (서열 137), CDR2 (서열 138), CDR3 (서열 139);
l. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
m. 항체 AM-13의 경쇄 CDR1 (서열 221), CDR2 (서열 222), CDR3 (서열 223) 및 중쇄 CDR1 (서열 143), CDR2 (서열 144), CDR3 (서열 145);
n. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
o. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1 (서열 227), CDR2 (서열 228), CDR3 (서열 229) 및 중쇄 CDR1 (서열 149), CDR2 (서열 150), CDR3 (서열 151);
p. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
q. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
r. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
s. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
t. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166);
u. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169);
v. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172);
w. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
x. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
y. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1 (서열 257), CDR2 (서열 258), CDR3 (서열 259) 및 중쇄 CDR1 (서열 176), CDR2 (서열 177), CDR3 (서열 178);
z. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1 (서열 260), CDR2 (서열 261), CDR3 (서열 262) 및 중쇄 CDR1 (서열 179), CDR2 (서열 180), CDR3 (서열 181); 또는
z.2. 항체 AM-26의 경쇄 CDR1 (서열 263), CDR2 (서열 264), CDR3 (서열 265) 및 중쇄 CDR1 (서열 182), CDR2 (서열 183), CDR3 (서열 184)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고, IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드.
실시태양 16: 실시태양 15에 있어서, 상기 폴리펩티드가
a. AML1/AMH1의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 27/서열 1);
b. AML2/AMH2의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 28/서열 2);
c. AML3/AMH3의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 29/서열 3);
d. AML4/AMH4의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 30/서열 4);
e. AML5/AMH5의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 31/서열 5);
f. AML6/AMH6의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 32/서열 6);
g. AML7/AMH7의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 33/서열 7);
h. AML8/AMH8의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 34/서열 8);
i. AML9/AMH9의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 35/서열 9);
j. AML10/AMH10의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 36/서열 10);
k. AML11/AMH11의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 37/서열 11);
l. AML12/AMH12의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 38/서열 12);
m. AML13/AMH13의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 39/서열 13);
n. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
o. AML15/AMH15의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 41/서열 15);
p. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 42/서열 16);
q. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 43/서열 17);
r. AML18/AMH18의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 44/서열 18);
s. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
t. AML20/AMH20의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 46/서열 20);
u. AML21/AMH21의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 47/서열 21);
v. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22);
w. AML23/AMH23의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 49 또는 서열 50/서열 23);
x. AML24/AMH24의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 51/서열 24);
y. AML25/AMH25의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 52/서열 25); 및
z. AML26/AMH26의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 53/서열 26)으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산을 포함하고; 상기 폴리펩티드가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 폴리펩티드.
실시태양 17: 실시태양 15에 있어서, 상기 폴리펩티드가
a. 항체 AM-1의 경쇄 CDR1 (서열 185), CDR2 (서열 186), CDR3 (서열 187) 및 중쇄 CDR1 (서열 107), CDR2 (서열 108), CDR3 (서열 109);
b. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1 (서열 188), CDR2 (서열 189), CDR3 (서열 190) 및 중쇄 CDR1 (서열 110), CDR2 (서열 111), CDR3 (서열 112);
c. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1 (서열 191), CDR2 (서열 192), CDR3 (서열 193) 및 중쇄 CDR1 (서열 113), CDR2 (서열 114), CDR3 (서열 115);
d. 항체 AM-4의 경쇄 CDR1 (서열 194), CDR2 (서열 195), CDR3 (서열 196) 및 중쇄 CDR1 (서열 116), CDR2 (서열 117), CDR3 (서열 118);
e. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1 (서열 197), CDR2 (서열 198), CDR3 (서열 199) 및 중쇄 CDR1 (서열 119), CDR2 (서열 120), CDR3 (서열 121);
f. 항체 AM-6의 경쇄 CDR1 (서열 200), CDR2 (서열 201), CDR3 (서열 202) 및 중쇄 CDR1 (서열 122), CDR2 (서열 123), CDR3 (서열 124);
g. 항체 AM-7의 경쇄 CDR1 (서열 203), CDR2 (서열 204), CDR3 (서열 205) 및 중쇄 CDR1 (서열 125), CDR2 (서열 126), CDR3 (서열 127);
h. 항체 AM-8의 경쇄 CDR1 (서열 206), CDR2 (서열 207), CDR3 (서열 208) 및 중쇄 CDR1 (서열 128), CDR2 (서열 129), CDR3 (서열 130);
i. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133);
j. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1 (서열 212), CDR2 (서열 213), CDR3 (서열 214) 및 중쇄 CDR1 (서열 134), CDR2 (서열 135), CDR3 (서열 136);
k. 항체 AM-11의 경쇄 CDR1 (서열 215), CDR2 (서열 216), CDR3 (서열 217) 및 중쇄 CDR1 (서열 137), CDR2 (서열 138), CDR3 (서열 139);
l. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
m. 항체 AM-13의 경쇄 CDR1 (서열 221), CDR2 (서열 222), CDR3 (서열 223) 및 중쇄 CDR1 (서열 143), CDR2 (서열 144), CDR3 (서열 145);
n. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
o. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1 (서열 227), CDR2 (서열 228), CDR3 (서열 229) 및 중쇄 CDR1 (서열 149), CDR2 (서열 150), CDR3 (서열 151);
p. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
q. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
r. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
s. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
t. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166);
u. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169);
v. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172);
w. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
x. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
y. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1 (서열 257), CDR2 (서열 258), CDR3 (서열 259) 및 중쇄 CDR1 (서열 176), CDR2 (서열 177), CDR3 (서열 178);
z. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1 (서열 260), CDR2 (서열 261), CDR3 (서열 262) 및 중쇄 CDR1 (서열 179), CDR2 (서열 180), CDR3 (서열 181); 또는
z.2. 항체 AM-26의 경쇄 CDR1 (서열 263), CDR2 (서열 264), CDR3 (서열 265) 및 중쇄 CDR1 (서열 182), CDR2 (서열 183), CDR3 (서열 184)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 폴리펩티드가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 폴리펩티드.
실시태양 18: 실시태양 15에 있어서, 상기 폴리펩티드가 제약 조성물인 폴리펩티드.
실시태양 19: a) 서열 427의 중쇄 서열 및 서열 429의 경쇄 서열로 이루어지는 항체;
b) 본질적으로 서열 427의 중쇄 서열 및 서열 429의 경쇄 서열로 이루어지는 항체;
c) 서열 427의 중쇄 서열을 포함하는 항체;
d) 서열 429의 경쇄 서열을 포함하는 항체;
e) 서열 427의 중쇄 서열 및 서열 429의 경쇄 서열을 포함하는 항체;
f) 서열 427의 중쇄 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
g) 서열 429의 경쇄 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
h) 서열 427의 중쇄 서열 및 서열 429의 경쇄 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
i) 서열 14의 중쇄 가변 구역 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
j) 서열 40의 경쇄 가변 구역 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
k) 서열 40의 경쇄 가변 구역 서열 및 서열 14의 중쇄 가변 구역 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
l) 서열 146의 중쇄 CDR1, 서열 147의 중쇄 CDR2, 서열 148의 중쇄 CDR3, 서열 224의 경쇄 CDR1, 서열 225의 경쇄 CDR2, 및 서열 226의 경쇄 CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편; 및
m) 서열 148의 중쇄 CDR3 및 서열 226의 경쇄 CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편으로 이루어지는 군 중에서 선택된 단리된 항체.
실시태양 20: 실시태양 19에 있어서, 상기 항체가 제약 조성물인 항체.
실시태양 21: 실시태양 19에 있어서, 상기 항체가 상기 항체의 유도체인 항체.
실시태양 22: 실시태양 7에 있어서, 상기 항체가
A. a. 서열 40의 경쇄 가변 도메인 서열에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. 서열 14의 중쇄 가변 도메인 서열에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열; 또는
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인;
B. 다음 서열로부터의 각각의 CDR에서 총 3개 이하의 아미노산 부가, 치환 및/또는 결실이 상이한 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3 및 중쇄 CDR1, CDR2, CDR3: CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148); 및
C. 서열 40의 경쇄 가변 도메인 및 서열 14의 중쇄 가변 도메인로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 23: 실시태양 16에 있어서, 상기 폴리펩티드가 서열 40의 경쇄 가변 도메인 및 서열 14의 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 폴리펩티드가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 폴리펩티드.
실시태양 24: 실시태양 16에 있어서, 상기 폴리펩티드가 서열 427 및 서열 429를 포함하고, 상기 폴리펩티드가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 폴리펩티드.
실시태양 25: 실시태양 24에 있어서, 상기 폴리펩티드가 제약 조성물인 폴리펩티드.
일반적인 구조로서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 (a) 스캐폴드, 및 (b) 하나 또는 복수의 CDR을 포함한다. "상보성 결정 구역 " 또는 "CDR"은 본원에서 사용될 때 항원 결합을 위한 주요 표면 접촉 지점을 구성하는 결합 단백질 구역을 나타낸다. 본 발명의 실시태양은 항원 결합 단백질의 스캐폴드 구조 내에 묻힌 하나 이상의 CDR을 포함한다. 항원 결합 단백질의 스캐폴드 구조는 항체 또는 그의 단편 또는 변이체의 프레임워크일 수 있거나, 자연에서 완전히 합성될 수 있다. 본 발명의 항원 결합 단백질의 다양한 스캐폴드 구조의 예를 본원에서 아래에 설명된다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 스캐폴드 구역 및 하나 이상의 CDR을 포함한다. 본 발명의 항원 결합 단백질은 1 내지 6개의 CDR (전형적으로 자연 발생 항체에서 그러한 바와 같이), 예를 들어, 하나의 중쇄 CDR1 ("H-CDR1") 및/또는 하나의 중쇄 CDR2 ("H-CDR2") 및/또는 하나의 중쇄 CDR3 ("H-CDR3") 및/또는 하나의 경쇄 CDR1 ("L-CDR1") 및/또는 하나의 경쇄 CDR2 ("L-CDR2") 및/또는 하나의 경쇄 CDR3 ("L-CDR3")을 가질 수 있다.
용어 "자연 발생"은 펩티드, 폴리펩티드, 핵산, 숙주 세포 등과 같은 생물학적 물질과 연관하여 명세서 전체에서 사용될 때 자연에서 발견되는 물질을 나타낸다. 자연 발생 항체에서, H-CDR1은 대개 약 5 내지 약 7개의 아미노산을 포함하고, H-CDR2는 대개 약 16 내지 약 19개의 아미노산을 포함하고, H-CDR3은 대개 약 3 내지 약 25개의 아미노산을 포함한다. L-CDR1은 대개 약 10 내지 약 17개의 아미노산을 포함하고, L-CDR2는 대개 약 7개의 아미노산을 포함하고, L-CDR3은 대개 약 7 내지 약 10개의 아미노산을 포함한다. 본 발명의 다양한 항체의 특정 CDR를 표 1 및 서열 목록에 제시한다.
Figure pat00001
Figure pat00002
Figure pat00003
Figure pat00004
Figure pat00005
Figure pat00006
Figure pat00007
Figure pat00008
Figure pat00009
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Figure pat00013
자연 발생 항체 내의 CDR의 일반적인 구조 및 특성은 당업계에서 설명되었다. 간단히 설명하면, 전통적인 항체 스캐폴드에서, CDR은 중쇄 및 경쇄 가변 구역에서 프레임워크 내에 묻히고, 여기서 이들은 주로 항원 결합 및 인식을 담당하는 구역을 구성한다. 가변 구역은 프레임워크 구역 (문헌 [Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda, MD]에 의해 프레임워크 구역 1-4, FR1, FR2, FR3 및 FR4로 지정됨; 또한 [Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917] 참조) 내에 적어도 3개의 중쇄 또는 경쇄 CDR (상기 문헌 ([Kabat et al., 1991, 상기 문헌]; 또한 [Chothia and Lesk, 1987, 상기 문헌]; [Chothia et al., 1989, Nature 342: 877-883]) 참조)을 포함한다 (아래 참조). 그러나, 본 발명에서 제공되는 CDR은 전통적인 항체 구조의 항원 결합 도메인을 규정하기 위해 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 본원에 설명된 바와 같이 다양한 다른 스캐폴드 구조 내에 묻힐 수 있다.
본 발명의 항체는 당업계에 공지된 임의의 불변 구역을 포함할 수 있다. 경쇄 불변 구역은 예를 들어 카파- 또는 람다-형 경쇄 불변 구역, 예를 들어 인간 카파- 또는 람다-형 경쇄 불변 구역일 수 있다. 중쇄 불변 구역은 예를 들어 알파-, 델타-, 엡실론-, 감마- 또는 뮤-형 중쇄 불변 구역, 예를 들어 인간 알파-, 델타-, 엡실론-, 감마- 또는 뮤-형 중쇄 불변 구역일 수 있다. 하나의 실시태양에서, 경쇄 또는 중쇄 불변 구역은 자연 발생 불변 구역의 단편, 유도체, 변이체 또는 돌연변이체이다.
다른 실시태양에서, 본 발명은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 제공하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 다음과 같은 CDR 서열과 총 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 치환 및/또는 결실에서 상이한 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3 및 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다: 항체 AM-1의 CDR1 (서열 185), CDR2 (서열 186), CDR3 (서열 187) 및 중쇄 CDR1 (서열 107), CDR2 (서열 108), CDR3 (서열 109); 항체 AM-2의 경쇄 CDR1 (서열 188), CDR2 (서열 189), CDR3 (서열 190) 및 중쇄 CDR1 (서열 110), CDR2 (서열 111), CDR3 (서열 112); 항체 AM-3의 경쇄 CDR1 (서열 191), CDR2 (서열 192), CDR3 (서열 193) 및 중쇄 CDR1 (서열 113), CDR2 (서열 114), CDR3 (서열 115); 항체 AM-4의 경쇄 CDR1 (서열 194), CDR2 (서열 195), CDR3 (서열 196) 및 중쇄 CDR1 (서열 116), CDR2 (서열 117), CDR3 (서열 118); 항체 AM-5의 경쇄 CDR1 (서열 197), CDR2 (서열 198), CDR3 (서열 199) 및 중쇄 CDR1 (서열 119), CDR2 (서열 120), CDR3 (서열 121); 항체 AM-6의 경쇄 CDR1 (서열 200), CDR2 (서열 201), CDR3 (서열 202) 및 중쇄 CDR1 (서열 122), CDR2 (서열 123), CDR3 (서열 124); 항체 AM-7의 경쇄 CDR1 (서열 203), CDR2 (서열 204), CDR3 (서열 205) 및 중쇄 CDR1 (서열 125), CDR2 (서열 126), CDR3 (서열 127); 항체 AM-8의 경쇄 CDR1 (서열 206), CDR2 (서열 207), CDR3 (서열 208) 및 중쇄 CDR1 (서열 128), CDR2 (서열 129), CDR3 (서열 130); 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133); 항체 AM-10의 경쇄 CDR1 (서열 212), CDR2 (서열 213), CDR3 (서열 214) 및 중쇄 CDR1 (서열 134), CDR2 (서열 135), CDR3 (서열 136); 항체 AM-11의 경쇄 CDR1 (서열 215), CDR2 (서열 216), CDR3 (서열 217) 및 중쇄 CDR1 (서열 137), CDR2 (서열 138), CDR3 (서열 139); 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142); 항체 AM-13의 경쇄 CDR1 (서열 221), CDR2 (서열 222), CDR3 (서열 223) 및 중쇄 CDR1 (서열 143), CDR2 (서열 144), CDR3 (서열 145); 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148); 항체 AM-15의 경쇄 CDR1 (서열 227), CDR2 (서열 228), CDR3 (서열 229) 및 중쇄 CDR1 (서열 149), CDR2 (서열 150), CDR3 (서열 151); 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154); 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157); 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160); 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163); 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166); 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169); 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172); 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175); 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175); 항체 AM-24의 경쇄 CDR1 (서열 257), CDR2 (서열 258), CDR3 (서열 259) 및 중쇄 CDR1 (서열 176), CDR2 (서열 177), CDR3 (서열 178); 항체 AM-25의 경쇄 CDR1 (서열 260), CDR2 (서열 261), CDR3 (서열 262) 및 중쇄 CDR1 (서열 179), CDR2 (서열 180), CDR3 (서열 181); 또는 항체 AM-26의 경쇄 CDR1 (서열 263), CDR2 (서열 264), CDR3 (서열 265) 및 중쇄 CDR1 (서열 182), CDR2 (서열 183), CDR3 (서열 184) 및 그의 단편, 유도체, 돌연변이체 및 변이체.
본 발명의 CDR은 또한 관련 모노클로날 항체의 집단으로부터 유래된 컨센서스 서열을 포함한다. 항체는 실시예에서 보인 바와 같이 서열 상동성 및 기능 모두에 의해 관련될 수 있다. 본원에 설명된 바와 같이, "컨센서스 서열"은 많은 서열들 사이에 공통적인 보존적 아미노산 및 주어진 아미노산 서열 내에서 변하는 가변적 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 나타낸다. 본 발명의 CDR 컨센서스 서열은 H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3의 각각에 상응하는 CDR을 포함한다.
컨센서스 서열은 항-IL-17RA 항체의 VH (즉, 가변 중쇄 등) & VL에 상응하는 CDR의 표준 계통발생학 분석을 사용하여 결정하였다. 2가지 상이한 방식을 사용하였다. 제1 방식에서, 컨센서스 서열은 CDR을 VH 또는 VL에 상응하는 동일한 서열 내에서 인접하게 유지함으로써 결정하였다. 제2 방식에서, 컨센서스 서열은 본원에 개시된 IL-17RA 항원 결합 단백질의 다양한 유형의 CDR, 즉, H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 서열을 독립적으로 정렬시킴으로써 결정하였다.
제1 방식에서, 간단히 설명하면, VH 또는 VL의 전체 가변 도메인에 상응하는 아미노산 서열을, 비교 정렬을 처리하고 계통발생학을 추론할 때의 용이함을 위해 FASTA 형식으로 전환시켰다. 이어서, 이들 서열의 프레임워크 구역을 인공 링커 서열 (GGGAAAGGGAAA, 서열 448)로 대체하여, 여전히 CDR을 VH 또는 VL에 상응하는 동일한 서열 내에 인접하게 유지하면서 동시 사건 (예를 들어, 공통적인 생식세포 계열 프레임워크 유산을 우연히 공유하는 관련되지 않은 항체)으로 인한 편향을 가중시키는 임의의 아미노산 위치를 도입하지 않으면서 CDR 단독의 검사가 수행될 수 있도록 하였다. 이어서, 상기 포맷의 VH 또는 VL 서열을 표준 ClutalW-유사 알고리즘을 사용하는 프로그램을 이용하여 서열 유사성 정렬 질의로 처리하였다 (Thompson et al., 1994, Nucleic Acids Res. 22:4673-4680 참조). 8.0의 갭 (gap) 생성 페널티를 2.0의 갭 연장 페널티와 함께 사용하였다. 상기 프로그램은 역시 가지 길이 비교 및 그룹 분류를 통해 서열 군의 유사성 및 차이를 작성 및 설명하기 위해 UPGMA (비가중 평균 결합법) 또는 이웃-결합 (Neighbor-Joining) 방법 ([Saitou and Nei, 1987, Molecular Biology and Evolution 4:406-425] 참조)을 이용하는 서열 유사성 정렬에 기반한 계통도 (계통발생학적 분지도 (tree))를 작성하였다. 두 방법은 유사한 결과를 생성하였지만, 궁극적으로 UPGMA-유래된 분지도를 사용하였고, 이는 상기 방법이 더 간단하고 더 보존적인 가설 세트를 사용하기 때문이다. UPGMA-유래된 분지도를 도 1에 도시하고, 여기서 서열의 유사한 군은 군 내의 개별적인 서열들 사이에서 100개 잔기당 15개 미만의 치환을 갖는 것으로서 규정하였고 (비율 (scale)에 대해서는 분지도 도면의 범례 참조), 컨센서스 서열 컬렉션 (collection)을 규정하기 위해 사용하였다. 생성된 원래의 서열 정렬은 각각의 위치에서 컨센서스 군에서 허용되는 아미노산의 발생을 실험적으로 검사하고 문서화하기 위해 사용하였고, 도 2 및 3에 도시하였다. 이어서, 각각의 CDR 내의 유사한 서열의 군에 대한 컨센서스 서열을 제조하였다. 각각의 군 내에서 상이한 아미노산은 각각의 컨센서스 서열 내에 표기 Xn으로 표기하였다.
H-CDR1 컨센서스 서열은 a) X1YGIS (서열 453) (식에서, X1은 R, S 및 G로 이루어지는 군 중에서 선택된다); b) X1YX2MX3 (서열 454) (식에서, X1은 D 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 Y 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 S 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택된다); 및 c) SYGMX1 (서열 455) (식에서, X1은 H 및 Q로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
H-CDR2 컨센서스 서열은 a) WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (서열 456) (식에서, X1은 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 N, S 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X4는 K 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X5는 L 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다); b) X1X2SX3X4X5SX6IX7YADSVKG (서열 457) (식에서, X1은 Y, I 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 I 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 S 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X4는 S 및 R로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X5는 G, S 및 아미노산 부재로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X6은 T 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X7은 Y 및 H로 이루어지는 군 중에서 선택된다); 및 c) VIWYDGX1X2KX3YADSVKG (서열 458) (식에서, X1은 S 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 H 및 Y로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
H-CDR3 컨센서스 서열은 a) X1QLX2X3DY (서열 459) (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y, V 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 F 및 L로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및 b) X1QLX2FDY (서열 460) (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y 및 V로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
L-CDR1 컨센서스 서열은 a) RASQX1IX2X3X4LX5 (서열 461) (식에서, X1은 G, S 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 R 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 S, I 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X4는 W 및 Y로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X5는 A 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택된다); b) RASQSX1X2X3X4LA (서열 462) (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 I 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 S 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X4는 N 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X5는 A 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택된다); 및 c) RASQSVX1X2NLX3 (서열 463) (식에서, X1은 Y 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 S 및 R로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 A 및 V로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
L-CDR2 컨센서스 서열은 a) AASSX1QS (서열 464) (식에서, X1은 L 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다); b) AASX1LQS (서열 465) (식에서, X1은 S 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택된다); c) X1X2STRAX3 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 T 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택된다); 및 d) GASTRAX1 (서열 466) (식에서, X1은 A, T 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
L-CDR3 컨센서스 서열은 a) LQHX1SYX2X3T (서열 467) (식에서, X1은 K 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 P 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 L, F 및 P로 이루어지는 군 중에서 선택된다); b) QX1X2X3X4X5PX6T (서열 468) (식에서, X1은 Q 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 A, S 및 Y로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 N, Y 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X4는 N, S 및 R로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X5는 F, T, Y 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X6은 R 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다); c) QQYDX1WPLT (서열 469) (식에서, X1은 N, T 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다); 및 d) QX1YX2X3WX4X5X6T (서열 470) (식에서, X1은 H 및 Q로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X2는 I, Y, N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X3은 N 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X4는 P 및 R로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X5는 K, 아미노산 부재 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고; X6은 W 및 아미노산 부재로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
도 1, 2, 3, 16 A, 16B, 19 및 22는 교차-경쟁 비닝 및 항체가 IL-17RA에 결합하는 부위의 결정에 의해 결정되는 바와 같이 CDR 도메인 내의 서열 상동성과 항체 기능 사이에서 데이타 내에 명백한 패턴이 존재함을 보여준다. 따라서, 항체의 클래스에 대한 구조/기능 관계가 본원에 제공되는 IL-17RA 항체에 대해 확립되었다.
제2 방식에서, VH 또는 VL에 상응하는 동일한 서열 내의 그들의 인접한 서열과 상관없이 각각의 별개의 CDR에 대해 CDR 컨센서스 서열을 결정하였다. 본 방식에서, 컨센서스 서열은 군 내의 각각의 H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 정렬함으로써, 즉, 본원에 개시된 IL-17RA 항원 결합 단백질의 개별적인 H-CDR1 서열을 정렬하여 H-CDR1 컨센서스 서열을 결정함으로써, 본원에 개시된 IL-17RA 항원 결합 단백질의 개별적인 H-CDR2 서열을 정렬하여 H-CDR2 컨센서스 서열을 결정함으로써, 본원에 개시된 IL-17RA 항원 결합 단백질의 개별적인 H-CDR3 서열을 정렬하여 H-CDR3 컨센서스 서열을 결정함으로써, 본원에 개시된 IL-17RA 항원 결합 단백질의 개별적인 L-CDR1 서열을 정렬하여 L-CDR1 컨센서스 서열을 결정함으로써, 본원에 개시된 IL-17RA 항원 결합 단백질의 개별적인 L-CDR2 서열을 정렬하여 L-CDR2 컨센서스 서열을 결정함으로써, 및 본원에 개시된 IL-17RA 항원 결합 단백질의 개별적인 L-CDR3 서열을 정렬하여 L-CDR3 컨센서스 서열을 결정함으로써 결정하였다. 각각의 개별적인 CDR 서열 내의 서열들 사이의 유사성을 확인하였다. 이어서, 각각의 CDR 내의 유사한 서열의 군에 대한 컨센서스 서열을 제조하였다. 각각의 군 내에서 다른 아미노산은 각각의 컨센서스 서열 내에 표기 Xn으로 표기하였다.
다른 실시태양에서, 본 발명은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 제공하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 적어도 하나의 H-CDR 구역을 포함한다. 다른 실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 185-265의 적어도 하나의 L-CDR 구역을 포함한다. 다른 실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 적어도 하나의 H-CDR 구역 및 임의의 서열 185-265의 적어도 하나의 L-CDR 구역을 포함한다.
다른 실시태양에서, 본 발명은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 제공하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 적어도 2개의 H-CDR 구역을 포함한다. 다른 실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 185-265의 적어도 2개의 L-CDR 구역을 포함한다. 다른 실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 적어도 2개의 H-CDR 구역 및 임의의 서열 185-265의 적어도 2개의 L-CDR 구역을 포함한다.
다른 실시태양에서, 본 발명은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 제공하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 적어도 3개의 H-CDR 구역을 포함한다. 다른 실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 185-265의 적어도 3개의 L-CDR 구역을 포함한다. 다른 실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 적어도 3개의 H-CDR 구역 및 임의의 서열 185-265의 적어도 3개의 L-CDR 구역을 포함한다.
다른 실시태양에서, 본 발명은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 적어도 1, 2 또는 3개의 H-CDR 구역을 포함하고, 상기 H-CDR 구역은 각각의 H-CDR에 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하다. 다른 실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 185-265의 적어도 1, 2 또는 3개의 L-CDR 구역을 포함하고, 상기 L-CDR 구역은 각각의 L-CDR에 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하다. 다른 실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 적어도 1, 2 또는 3개의 H-CDR 구역 (상기 H-CDR 구역은 각각의 H-CDR에 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하다)을 포함하고, 임의의 서열 185-265의 적어도 1, 2 또는 3개의 L-CDR 구역 (상기 L-CDR 구역은 각각의 L-CDR에 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하다)을 포함한다.
다른 실시태양에서, 본 발명은 IL-17RA에 결합하는 항원 결합 단백질을 제공하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 적어도 하나의 H-CDR 구역 및/또는 임의의 서열 185-265의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 적어도 하나의 L-CDR 구역을 포함한다.
다른 실시태양에서, 본 발명은 IL-17RA에 결합하는 항원 결합 단백질을 제공하고, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 임의의 서열 107-184의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 1, 2 또는 3개의 H-CDR 구역 및/또는 임의의 서열 185-265의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 1, 2 또는 3개의 L-CDR 구역을 포함한다.
추가의 실시태양은 임의의 서열 107-184의 H-CDR 구역 및 임의의 서열 185-265의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 L-CDR 구역 중에서 선택되는 서열의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 하나의 CDR을 포함하는 항원 결합 단백질을 이용한다 (예를 들어, 항원 결합 단백질은 2개의 CDR 구역, 즉, 하나의 H-CDR 및 하나의 L-CDR을 갖는다). 특정 실시태양은 H-CDR3 및 L-CDR3 구역을 모두 포함하는 항원 결합 단백질을 포함한다.
당업자가 이해할 바와 같이, 본원에 제공되는 서열로부터 하나 초과의 CDR을 포함하는 임의의 항원 결합 단백질에 대해, 표 1 서열 내의 CDR로부터 독립적으로 선택되는 CDR의 임의의 조합이 유용하다. 따라서, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 독립적으로 선택된 CDR을 포함하는 항원 결합 단백질이 생성될 수 있다. 그러나, 당업자가 이해할 바와 같이, 특정 실시태양은 일반적으로 비-반복적인 CDR의 조합을 이용하고, 예를 들어, 항원 결합 단백질은 일반적으로 2개의 H-CDR2 구역 등으로 만들어지지 않는다.
일부 실시태양에서, H-CDR3 구역 및 L-CDR3 구역의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함하는 항원 결합 단백질이 생성되고, 특히 H-CDR3 구역은 임의의 서열 107-184의 H-CDR3 구역의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 서열로부터 선택되고, L-CDR3 구역은 임의의 서열 185-265의 L-CDR3 구역의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 L-CDR3 컨센서스 서열로부터 선택된다.
본원에서 보여주는 바와 같이, 본 발명의 항원 결합 단백질은 본 발명의 CDR(들)이 그라프팅 (grafting)될 수 있는 스캐폴드 구조를 포함한다. IL-17RA 항원 결합 단백질의 속 (genus)은 본원에서 다양하게 정의한 바와 같은 항체의 아속 (subgenus)을 포함한다. 측면들은 스캐폴드 구조가 전통적인 사량체 항체 구조인 실시태양을 포함한다. 따라서, 본원에서 설명되는 항원 결합 단백질 조합은 중쇄 및/또는 경쇄를 구성하는 추가의 성분 (프레임워크, J 및 D 구역, 불변 구역 등)을 포함한다.
실시태양은 인간 스캐폴드 성분의 사용을 포함한다. 전통적인 항체 스캐폴드 구조 내로 그라프팅된 VH 가변 구역의 예시적인 실시태양을 서열 427에 제시하고, 전통적인 항체 스캐폴드 구조 내로 그라프팅된 VL 가변 구역의 예시적인 실시태양을 서열 429에 제시한다. 물론, 당업계에 공지된 임의의 항체 스캐폴드를 사용할 수 있음이 이해된다.
한 측면에서, 본 발명은 AML1 내지 AML26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 구역 및/또는 AMH1 내지 AMH26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 구역을 포함하는 항체, 및 그의 단편, 유도체, 돌연변이체 및 변이체를 제공한다. 본 발명의 항체는 AML1/AMH1 (서열 27/서열 1), AML2/AMH2 (서열 28/서열 2), AML3/AMH3 (서열 29/서열 3), AML4/AMH4 (서열 30/서열 4), AML5/AMH5 (서열 31/서열 5), AML6/AMH6 (서열 32/서열 6), AML7/AMH7 (서열 33/서열 7), AML8/AMH8 (서열 34/서열 8), AML9/AMH9 (서열 35/서열 9), AML10/AMH10 (서열 36/서열 10), AML11/AMH11 (서열 37/서열 11), AML12/AMH12 (서열 38/서열 12), AML13/AMH13 (서열 39/서열 13), AML14/AMH14 (서열 40/서열 14), AML15/AMH15 (서열 41/서열 15), AML16/AMH16 (서열 42/서열 16), AML17/AMH17 (서열 43/서열 17), AML18/AMH18 (서열 44/서열 18), AML19/AMH19 (서열 45/서열 19), AML20/AMH20 (서열 46/서열 20), AML21/AMH21 (서열 47/서열 21), AML22/AMH22 (서열 48/서열 22), AML23/AMH23 (서열 49 또는 서열 50/서열 23), AML24/AMH24 (서열 51/서열 24), AML25/AMH25 (서열 52/서열 25), AML26/AMH26 (서열 53/서열 26)를 포함하는 항체, 및 그의 IL-17RA-결합 단편 및 그의 조합물을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 AML1 내지 AML26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 도메인의 서열과 단지 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 잔기가 상이한 아미노산의 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체를 제공하고, 여기서 각각의 상기 서열 차이는 독립적으로 하나의 아미노산 잔기의 결실, 삽입 또는 치환이다. 다른 실시태양에서, 경쇄 가변 도메인은 AML1 내지 AML26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 도메인의 서열에 적어도 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산의 서열을 포함한다. 다른 실시태양에서, 경쇄 가변 도메인은 AML1 내지 AML26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산의 서열을 포함한다. 다른 실시태양에서, 경쇄 가변 도메인은 중등도로 엄격한 조건 하에 AML1 내지 AML26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 상보체 (complement)에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산의 서열을 포함한다. 다른 실시태양에서, 경쇄 가변 도메인은 중등도로 엄격한 조건 하에 AML1 내지 AML26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 상보체에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산의 서열을 포함한다. 다른 실시태양에서, 경쇄 가변 도메인은 중등도로 엄격한 조건 하에 임의의 하나의 AML1 내지 AML26 폴리뉴클레오티드 서열 (서열 80-106)에 제공되는 경쇄 폴리뉴클레오티드의 상보체에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산의 서열을 포함한다.
다른 실시태양에서, 본 발명은 AMH1 내지 AMH26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 도메인의 서열과 단지 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 잔기(들)가 상이한 아미노산의 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체를 제공하고, 여기서 각각의 상기 서열 차이는 독립적으로 하나의 아미노산 잔기의 결실, 삽입 또는 치환이다. 다른 실시태양에서, 중쇄 가변 도메인은 AMH1 내지 AMH26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 도메인의 서열에 적어도 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산의 서열을 포함한다. 다른 실시태양에서, 중쇄 가변 도메인은 AMH1 내지 AMH26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적어도 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산의 서열을 포함한다. 다른 실시태양에서, 중쇄 가변 도메인은 중등도로 엄격한 조건 또는 엄격한 조건 하에 AMH1 내지 AMH26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 상보체에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산의 서열을 포함한다. 다른 실시태양에서, 중쇄 가변 도메인은 중등도로 엄격한 조건 하에 AMH1 내지 AMH26으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 상보체에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산의 서열을 포함한다. 다른 실시태양에서, 중쇄 가변 도메인은 중등도로 엄격한 조건 또는 엄격한 조건 하에 임의의 하나의 AMH1 내지 AMH26 폴리뉴클레오티드 서열 (서열 54-79)에 제공되는 중쇄 폴리뉴클레오티드의 상보체에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산의 서열을 포함한다.
따라서, 다양한 실시태양에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 인간 및 모노클로날 항체, 이중특이적 항체, 디아바디, 미니바디 (minibody), 도메인 항체, 합성 항체 (때때로 본원에서 "항체 모방체 (mimetic)"로서 칭함), 키메라 항체, 항체 융합체 (때때로 "항체 컨쥬게이트 (conjugate)"로서 칭함) 및 그의 각각의 단편을 포함하는 전통적인 항체의 스캐폴드를 포함한다. 상기한 CDR 및 CDR의 조합이 임의의 다음과 같은 스캐폴드 내로 그라프팅될 수 있다.
본원에서 사용될 때, 용어 "항체"는 본원에서 다양하게 정의한 바와 같이, 항원에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 다양한 형태의 단량체성 또는 다량체성 단백질을 나타낸다. 특정 실시태양에서, 항체는 재조합 DNA 기술에 의해 생산된다. 추가의 실시태양에서, 항체는 자연 발생 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생산된다. 다른 측면에서, 항체는 a) 인간 항체; b) 인간화 항체; c) 키메라 항체; d) 모노클로날 항체; e) 폴리클로날 항체; f) 재조합 항체; g) 항원-결합 항체 단편; h) 단일쇄 항체; i) 디아바디; j) 트리아바디; k) 테트라바디; l) Fab 단편; m) F(ab')2 단편; n) IgD 항체; o) IgE 항체; p) IgM 항체; q) IgA 항체; r) IgG1 항체; s) IgG2 항체; t) IgG3 항체; 및 u) IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택된다.
가변 구역은 프레임워크 구역 (문헌 [Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda, MD]에 의해 프레임워크 구역 1-4, FR1, FR2, FR3 및 FR4로 지정됨; 또한 [Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917] 참조) 내에 묻힌 적어도 3개의 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함한다 (상기 문헌 ([Kabat et al., 1991, 상기 문헌]; 또한 [Chothia and Lesk, 1987, 상기 문헌]; [Chothia et al., 1989, Nature 342: 877-883]) 참조) (아래 참조).
전통적인 항체 구조 단위는 대개 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 대개 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 사슬로 이루어지고, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄" (대개 분자량이 약 25 kDa임) 및 하나의 "중쇄" (대개 분자량이 약 50-70 kDa임)를 갖는다. 각각의 사슬의 아미노-말단부는 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 구역을 포함한다. 각각의 사슬의 카르복시-말단부는 주로 효과기 기능을 담당하는 불변 구역을 규정한다. 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로서 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로서 분류되고, 항체의 이소형을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 규정한다. IgG는 몇몇 서브클래스, 비제한적인 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 갖는다. IgM은 서브클래스, 비제한적인 예를 들어 IgM1 및 IgM2를 갖는다. 본 발명의 실시태양은 본원에 기재된 바와 같이 항원 결합 단백질의 가변 도메인 또는 CDR을 포함하는 모든 상기 클래스의 항체를 포함한다.
경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 구역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 구역에 의해 연결되고, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 구역을 포함한다 (일반적으로, 문헌 [Paul, W., ed., 1989, Fundamental Immunology Ch.7, 2nd ed. Raven Press, N.Y] 참조). 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 구역은 항체 결합 부위를 형성한다. 본 발명의 스캐폴드는 상기 구역을 포함한다.
예를 들어 낙타와 라마에서 발견되는 일부 자연 발생 항체는 2개의 중쇄로 이루어지고 경쇄를 갖지 않는 이량체이다 ([Muldermans et al., 2001, J. Biotechnol 74:277-302]; [Desmyter et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:26285-26290]). 낙타 항체의 결정학 연구로 CDR3 구역이 항원과 상호작용하고 따라서 보다 전형적인 사량체 항체에서와 같이 항원 결합에 중요한 표면을 형성하는 것을 밝혔다. 본 발명은 IL-17RA에 결합하고/하거나 그의 생물학적 활성을 억제할 수 있는 2개의 중쇄로 이루어지는 이량체 항체, 또는 그의 단편을 포함한다.
중쇄 및 경쇄의 가변 구역은 대개 3개의 초가변 구역에 의해 연결된 비교적 보존된 프레임워크 구역 (FR)의 동일한 일반적인 구조, 즉, 상보성 결정 구역 또는 CDR을 보인다. CDR은 항원 인식 및 결합을 담당하는 항체 (또는 본원에 약술한 바와 같이 항원 결합 단백질)의 초가변 구역이다. 각각의 쌍의 2개의 사슬로부터의 CDR은 프레임워크 구역에 의해 정렬되고, 이는 특이적 에피토프에 결합할 수 있게 한다. N-말단에서 C-말단까지, 경쇄 및 중쇄는 모두 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 대한 아미노산의 할당은 문헌 ([Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest. Chothia et al., 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917]; [Chothia et al., 1989, Nature 342:878-883])의 정의에 따른다. 본 발명의 스캐폴드는 상기 구역을 포함한다.
CDR은 항원 결합을 위한 주요 표면 접촉 지점을 구성한다 (예를 들어, 문헌 [Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917] 참조). 또한, 경쇄의 CDR3 및 특히 중쇄의 CDR3은 경쇄 및 중쇄 가변 구역 내에서 항원 결합에서 가장 중요한 결정인자를 구성할 수 있다 (예를 들어, [Chothia and Lesk, 1987, 상기 문헌]; [Desiderio et al., 2001, J. Mol. Biol. 310:603-615]; [Xu and Davis, 2000, Immunity 13:37-45]; [Desmyter et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:26285-26290]; 및 [Muyldermans, 2001, J. Biotechnol. 74:277-302] 참조). 일부 항체에서, 중쇄 CDR3은 항원과 항체 사이의 주요 접촉 영역을 구성하는 것으로 보인다 (Desmyter et al., 2001, 상기 문헌). 항체의 결합 특성을 다양화하기 위해 CDR3만 다른 시험관내 선별 계획을 사용될 수 있다 ([Muyldermans, 2001, 상기 문헌]; [Desiderio et al., 2001, 상기 문헌]).
자연 발생 항체는 대개 항체를 단백질 분비를 위한 세포성 경로로 보내고, 성숙 항체 내에 존재하지 않는 신호 서열을 포함한다. 본 발명의 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 아래 설명한 바와 같이 자연 발생 신호 서열 또는 이종성 신호 서열을 코딩할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 항원 결합 단백질은 본원에 약술한 바와 같이 1 내지 6개의 제시된 CDR을 포함하는 모노클로날 항체이다 (표 1 참조). 본 발명의 항체는 IgM, IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 포함), IgD, IgA 또는 IgE 항체를 포함하는 임의의 유형일 수 있다. 특정 실시태양에서, 항원 결합 단백질은 IgG형 항체이다. 보다 더 특정한 실시태양에서, 항원 결합 단백질은 IgG2형 항체이다.
일부 실시태양에서, 예를 들어 항원 결합 단백질이 완전 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체인 경우, CDR은 모두 동일한 종, 예를 들어 인간으로부터의 것이다. 별법으로, 예를 들어 항원 결합 단백질이 상기 약술한 서열로부터의 6개 미만의 CDR을 함유하는 실시태양에서, 추가의 CDR은 다른 종으로부터의 것 (예를 들어, 쥐 CDR)일 수 있거나, 서열에 도시된 것과 상이한 인간 CDR일 수 있다. 예를 들어, 본원에서 확인된 적절한 서열로부터의 인간 H-CDR3 및 L-CDR3 구역이 사용될 수 있고, H-CDR1, H-CDR2, L-CDR1 및 L-CDR2는 임의로 별도의 종, 또는 상이한 인간 항체 서열, 또는 이들의 조합으로부터 선택된다. 예를 들어, 본 발명의 CDR은 상업상 관련 키메라 또는 인간화 항체의 CDR 구역을 대체할 수 있다.
특정 실시태양은 인간 성분인 항원 결합 단백질의 스캐폴드 성분을 이용한다.
그러나, 일부 실시태양에서, 스캐폴드 성분은 상이한 종으로부터의 혼합물일 수 있다. 따라서, 항원 결합 단백질이 항체이면, 상기 항체는 키메라 항체 및/또는 인간화 항체일 수 있다. 일반적으로, "키메라 항체" 및 "인간화 항체"는 모두 하나 초과의 종으로부터의 구역들을 조합한 항체를 나타낸다. 예를 들어, "키메라 항체"는 전통적으로 마우스 (또는 일부 경우에 래트)로부터의 가변 구역(들) 및 인간으로부터의 불변 구역(들)을 포함한다.
"인간화 항체"는 일반적으로 인간 항체에서 발견되는 서열을 교환한 가변-도메인 프레임워크 구역을 가진 비-인간 항체를 나타낸다. 일반적으로, 인간화 항체에서, CDR을 제외한 전체 항체는 인간 기원의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되거나, 그의 CDR 내의 것을 제외한 항체와 동일하다. CDR (그의 일부 또는 전부는 비-인간 유기체에서 기원하는 핵산에 의해 코딩된다)은 인간 항체 가변 구역의 베타-시트 프레임워크에 그라프팅되어 항체를 생성하고, 그의 특이성은 그라프팅된 CDR에 의해 결정된다. 상기 항체의 생성은 예를 들어, WO 92/11018, 문헌 ([Jones, 1986, Nature 321:522-525], [Verhoeyen et al., 1988, Science 239: 1534-1536])에 설명되어 있다. 인간화 항체는 또한 유전 공학 처리된 면역계를 갖는 마우스를 사용하여 생성될 수 있다 (Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654). 본 발명에서, 확인된 CDR은 인간의 것이고, 따라서, 인간화 항체 및 키메라 항체는 모두 본 문맥에서 일부 비-인간 CDR을 포함할 수 있고; 예를 들어, CDRH3 및 CDRL3 구역을 포함하는 인간화 항체가 생성될 수 있고, 여기서 다른 CDR 구역 중 하나 이상은 상이한 종 기원의 것이다.
하나의 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질은 다중특이적 항체, 특히 이중특이적 항체 (또한 때때로 "디아바디"로서 칭함)이다. 이들은 2개 (이상의) 상이한 항원에 결합하는 항체이다. 디아바디는 당업계에 공지된 다양한 방식 (Holliger and Winter, 1993, Current Opinion Biotechnol. 4:446-449)으로, 예를 들어, 화학적으로 또는 하이브리드 하이브리도마로부터 제조할 수 있다.
하나의 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질은 미니바디이다. 미니바디는 CH3 도메인에 연결된 scFv를 포함하는 최소화된 항체-유사 단백질이다 (Hu et al., 1996, Cancer Res. 56:3055-3061).
하나의 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질은 도메인 항체이다 (예를 들어 미국 특허 6,248,516 참조). 도메인 항체 (dAb)는 인간 항체 dAB의 중쇄 (VH) 또는 경쇄 (VL)의 가변 구역에 상응하는 항체의 기능적 결합 도메인이고, 분자량은 약 13 kDa이거나 전체 항체 크기의 1/10 미만이다. dAB는 세균, 효모 및 포유동물 세포 시스템을 포함하는 다양한 숙주 내에서 잘 발현된다. 또한, dAb는 고도로 안정하고, 가혹한 조건, 예를 들어 동결-건조 또는 열 변성으로 처리한 후에도 활성을 보유한다 (예를 들어, US 특허 6,291,158; 6,582,915; 6,593,081; 6,172,197; US 특허 출원 2004/0110941; 유럽 특허 0368684; US 특허 6,696,245, WO04/058821, WO04/003019 및 WO03/002609 참조).
하나의 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질은 IL-17RA에 대한 결합 특이성을 보유하는 본원에서 약술한 임의의 항체의 단편인 항체 단편이다. 다양한 실시태양에서, 항체 결합 단백질은 F(ab), F(ab'), F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편을 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 적어도, 본원에서 의미하는 항체는 경쇄 또는 중쇄 가변 구역의 전부 또는 일부, 예를 들어 하나 이상의 CDR을 포함하는 IL-17RA에 특이적으로 결합할 수 있는 폴리펩티드를 포함한다.
IL-17RA-결합 항체 단편의 추가의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어지는 Fab 단편, (ii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어지는 Fd 단편, (iii) 단일 항체의 VL 및 VH 도메인으로 이루어지는 Fv 단편; (iv) 단일 가변 구역으로 이루어지는 dAb 단편 (Ward et al., 1989, Nature 341:544-546), (v) 단리된 CDR 구역, (vi) F(ab')2 단편 (2개의 연결된 Fab 단편을 포함하는 이가 단편), (vii) 단일쇄 Fv 분자 (scFv) (여기서, VH 도메인 및 VL 도메인은 2개의 도메인이 회합하여 항원 결합 부위를 형성하도록 하는 펩티드 링커에 의해 연결된다) ([Bird et al., 1988, Science 242:423-426], [Huston et al., 1988, Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 85:5879-5883]), (viii) 이중특이적 단일쇄 Fv 이량체 (PCT/US92/09965) 및 (ix) "디아바디" 또는 "트리아바디" (유전자 융합에 의해 구성된 다가 또는 다중특이적 단편) ([Tomlinson et al., 2000, Methods Enzymol 326:461-479]; WO94/13804; [Holliger et al., 1993, Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-6448])를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 항체 단편은 변형될 수 있다. 예를 들어, 분자는 VH 및 VL 도메인을 연결시키는 디술피드 브릿지의 도입에 의해 안정화될 수 있다 (Reiter et al., 1996, Nature Biotech. 14: 1239-1245). 본 발명의 측면들은 이들 단편의 비-CDR 성분이 인간 서열인 실시태양을 포함한다.
하나의 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질은 완전 인간 항체이다. 상기 실시태양에서, 상기 약술한 바와 같이, 특정한 구조는 CDR 구역을 포함하는 도시된 완전 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 추가의 실시태양은 본 발명의 하나 이상의 CDR을 이용하고, 다른 CDR, 프레임워크 구역, J 및 D 구역, 불변 구역 등은 다른 인간 항체로부터 유래한다. 예를 들어, 본 발명의 CDR은 임의의 많은 인간 항체, 특히 상업상 관련 항체의 CDR을 대체할 수 있다.
단일쇄 항체는 아미노산 브릿지 (짧은 펩티드 링커)를 통해 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 (Fv 구역) 단편을 연결시켜 단일 폴리펩티드 사슬을 생성시킴으로써 형성될 수 있다. 상기 단일쇄 Fvs (scFv)는 2개의 가변 도메인 폴리펩티드 (VL 및 VH)를 코딩하는 DNA들 사이에 펩티드 링커를 코딩하는 DNA를 융합시킴으로써 제조되었다. 생성되는 폴리펩티드는 자체에 접힐 수 있어서 항원-결합 단량체를 형성할 수 있거나, 2개의 가변 도메인 사이의 가요성 링커의 길이에 따라 다량체 (예를 들어, 이량체, 삼량체 또는 사량체)를 형성할 수 있다 ([Kortt et al., 1997, Prot. Eng. 10:423]; [Kortt et al., 2001, Biomol. Eng. 18:95-108]). 상이한 VL 및 VH-포함 폴리펩티드를 조합함으로써, 상이한 에피토프에 결합하는 다량체성 scFv를 형성할 수 있다 (Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng. 18:31-40). 단일쇄 항체의 생산을 위해 개발된 기술은 미국 특허 4,946,778; 문헌 ([Bird, 1988, Science 242:423]; [Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879]; [Ward et al., 1989, Nature 334:544], [de Graaf et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178:379-87])에 기재된 것을 포함한다. 본원에 제공된 항체로부터 유래된 단일쇄 항체 (AML1/AMH1 (서열 27/서열 1), AML2/AMH2 (서열 28/서열 2), AML3/AMH3 (서열 29/서열 3), AML4/AMH4 (서열 30/서열 4), AML5/AMH5 (서열 31/서열 5), AML6/AMH6 (서열 32/서열 6), AML7/AMH7 (서열 33/서열 7), AML8/AMH8 (서열 34/서열 8), AML9/AMH9 (서열 35/서열 9), AML10/AMH10 (서열 36/서열 10), AML11/AMH11 (서열 37/서열 11), AML12/AMH12 (서열 38/서열 12), AML13/AMH13 (서열 39/서열 13), AML14/AMH14 (서열 40/서열 14), AML15/AMH15 (서열 41/서열 15), AML16/AMH16 (서열 42/서열 16), AML17/AMH17 (서열 43/서열 17), AML18/AMH18 (서열 44/서열 18), AML19/AMH19 (서열 45/서열 19), AML20/AMH20 (서열 46/서열 20), AML21/AMH21 (서열 47/서열 21), AML22/AMH22 (서열 48/서열 22), AML23/AMH23 (서열 49 또는 서열 50/서열 23), AML24/AMH24 (서열 51/서열 24), AML25/AMH25 (서열 52/서열 25), AML26/AMH26 (서열 53/서열 26)의 가변 도메인 조합을 포함하는 scFv를 포함하고 이로 제한되지 않는다) 및 그의 조합은 본 발명에 포함된다.
하나의 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질은 항체 융합 단백질 (때때로 본원에서 "항체 컨쥬게이트"로서 칭함)이다. 컨쥬게이트 파트너는 단백질성 또는 비-단백질성일 수 있고; 후자는 일반적으로 항원 결합 단백질 (항원 결합 단백질의 공유 변형에 대한 논의 참조) 상의 및 컨쥬게이트 파트너 상의 관능기를 이용하여 생성된다. 예를 들어, 링커는 당업계에 공지되어 있고; 예를 들어, 동종- 또는 이종-이중기능적 링커는 잘 공지되어 있다 (본원에 참고로 포함된 문헌 [1994 Pierce Chemical Company catalog, technical section on cross-linkers, pages 155-200] 참조).
하나의 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질은 항체 유사체 (때때로 "합성 항체"로서 칭함)이다. 예를 들어, 다양한 최근의 작업에서는 그라프팅된 CDR을 갖는 대체 단백질 스캐폴드 또는 인공 스캐폴드를 이용한다. 상기 스캐폴드는 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화시키도록 도입된 돌연변이, 및 예를 들어 생체적합성 중합체로 이루어지는 전체 합성 스캐폴드를 포함하고 이로 제한되지 않는다 (예를 들어, 문헌 [Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, Volume 53, Issue 1: 121-129], [Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654] 참조). 또한, 펩티드 항체 모방체 ("PAM")가 사용될 수 있고, 또한 스캐폴드로서 피브로넥틴 성분을 이용하는 항체 모방체를 기반으로 작용한다.
당업계에 공지된 바와 같이, 단백질 또는 핵산이 공지의 서열에 대해 갖는 서열 동일성 또는 유사성 정도를 확인하기 위해 많은 상이한 프로그램을 사용할 수 있다.
"단백질"은 본원에서 사용될 때 적어도 2개의 공유 부착된 아미노산을 의미하고, 이는 단백질, 폴리펩티드, 올리고펩티드 및 펩티드를 포함한다. 일부 실시태양에서, 2개 이상의 공유 부착된 아미노산은 펩티드 결합에 의해 부착된다. 단백질은 예를 들어 아래 약술한 바와 같이 단백질이 발현 시스템 및 숙주 세포를 이용하여 재조합 방식으로 제조될 때 자연 발생 아미노산 및 펩티드 결합으로 이루어질 수 있다. 별법으로, 단백질은 합성 아미노산 (예를 들어, 호모페닐알라닌, 시트룰린, 오르니틴 및 노르류신) 또는 펩티드모방체 구조, 즉, "펩티드 또는 단백질 유사체", 예를 들어 펩토이드 (peptoid) (본원에 참고로 포함된 [Simon et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:9367] 참조)를 포함할 수 있고, 이는 프로테아제 또는 다른 생리학적 및/또는 저장 조건에 저항성일 수 있다. 상기 합성 아미노산은 특히 항원 결합 단백질이 당업계에 달 공지된 통상적인 방법에 의해 시험관 내에서 합성될 때 포함될 수 있다. 또한, 펩티드모방체, 합성 및 자연 발생 잔기/구조의 임의의 조합이 사용될 수 있다. "아미노산"은 또한 프롤린 및 히드록시프롤린과 같은 이미노산 잔기를 포함한다. 아미노산 "R 기" 또는 "측쇄"는 (L)- 또는 (S)-입체형상으로 존재할 수 있다. 특정 실시태양에서, 아미노산은 (L)- 또는 (S)-입체형상으로 존재한다.
특정 측면에서, 본 발명은 IL-17RA, 일부 실시태양에서 재조합 인간 IL-17RA 또는 그의 일부에 결합하는 재조합 항원 결합 단백질을 제공한다. 상기 측면에서, "재조합 단백질"은 당업계에 공지된 임의의 기술 및 방법을 이용하여 재조합 기술을 이용하여, 즉, 본원에 기재된 바와 같이 재조합 핵산의 발현을 통해 제조된 단백질이다. 재조합 단백질의 생산을 위한 방법 및 기술은 당업계에게 잘 공지되어 있다. 본 발명의 실시태양은 야생형 IL-17RA 및 그의 변이체에 결합하는 재조합 항원 결합 단백질을 포함한다.
"본질적으로 ~로 이루어지는"은 아미노산 서열이 인용된 서열에 비해 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15% 상이할 수 있고, 본원에 설명한 바와 같이 여전히 생물학적 활성을 보유함을 의미한다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 단리된 단백질 또는 실질적으로 순수한 단백질이다. "단리된" 단백질에는 그의 자연 상태에서 정상적으로 회합되는 물질의 적어도 일부가 수반되지 않고, 예를 들어 주어진 샘플 내의 총 단백질의 적어도 약 5 중량% 또는 적어도 약 50 중량%를 구성한다. 단리된 단백질은 상황에 따라 총 단백질 함량의 5 내지 99.9 중량%를 구성할 수 있는 것으로 이해된다. 예를 들어, 단백질은 단백질이 증가된 농도 수준에서 제조되도록 유도가능 프로모터 또는 고발현 프로모터의 사용을 통해 유의하게 보다 고농도로 제조될 수 있다. 정의는 당업계에 공지된 매우 다양한 유기체 및/또는 숙주 세포 내에서 항원 결합 단백질의 생산을 포함한다.
아미노산 서열의 경우에, 서열 동일성 및/또는 유사성은 국소 서열 동일성 알고리즘 (Smith and Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482), 서열 동일성 정렬 알고리즘 (Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48:443), 유사성 검색 방법 (Pearson and Lipman, 1988, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444), 이들 알고리즘의 컴퓨터에 의한 실행 (제네틱스 컴퓨터 그룹 (Genetics Computer Group, 미국 위스콘신주 매디슨 사이언스 드라이브 575)의 위스콘신 제네틱스 소프트웨어 패키지 (Wisconsin Genetics Software Package) 내의 GAP, BESTFIT, FASTA 및 TFASTA), Best Fit 서열 프로그램 (Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387-395)을 포함하고 이로 제한되지 않는 당업계에 공지된 표준 기술에 의해, 바람직하게는 디폴트 세팅을 사용하거나 또는 정밀 검사에 의해 결정한다. 바람직하게는, 동일성 %는 다음 파라미터를 기초로 한 FastDB에 의해 계산된다: 마스매치 (mismatch) 페널티 1; 갭 페널티 1; 갭 크기 페널티 0.33; 및 연결 (joining) 페널티 30 ("Current Methods in Sequence Comparison and Analysis," Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, pp 127-149 (1988), Alan R. Liss, Inc.).
유용한 알고리즘의 예는 PILEUP이다. PILEUP은 전진 (progressive) 쌍 (pairwise) 정렬을 이용하여 관련 서열의 군으로부터 다중 서열 정렬을 생성한다. 이는 또한 정렬을 생성하기 위해 사용된 클러스터링 (clustering) 관계를 보여주는 트리를 플로팅할 수 있다. PILEUP는 문헌 [Feng & Doolittle, 1987, J. Mol. Evol. 35:351-360] (방법은 문헌 [Higgins and Sharp, 1989, CABIOS 5:151-153]에 설명된 것과 유사함)의 전진 정렬 방법의 단순형을 사용한다. 유용한 PILEUP 파라미터는 디폴트 갭 가중치 3.00, 디폴트 갭 길이 가중치 0.10 및 가중된 말단 갭을 포함한다.
유용한 알고리즘의 다른 예는 문헌 ([Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410]; [Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]; 및 [Karin et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873-5787])에 기재된 BLAST 알고리즘이다. 특히 유용한 BLAST 프로그램은 문헌 [Altschul et al., 1996, Methods in Enzymology 266:460-480]로부터 입수한 WU-BLAST-2 프로그램이다. WU-BLAST-2는 그 대부분이 디폴트 값으로 설정된 복수의 검색 파라미터를 사용한다. 조정가능한 파라미터는 다음 값으로 설정된다: 오버랩 (overlap) 스팬=1, 오버랩 비율=0.125, 단어 (word) 역치 (T)=II. HSP S 및 HSP S2 파라미터는 운동학적 값이고, 관심있는 서열을 그에 대해 검색하는 특정 서열의 조성 및 특정 데이타베이스의 조성에 따라 프로그램 자체에 의해 확립되지만; 그 값은 민감도를 증가시키기 위해 조정될 수 있다.
추가의 유용한 알고리즘은 문헌 [Altschul et al., 1993, Nucl. Acids Res. 25:3389-3402]에 보고된 바와 같은 갭드 (gapped) BLAST이다. 갭드 BLAST는 BLOSUM-62 치환 스코어; 9로 설정된 역치 T 파라미터; 언갭드 연장을 촉발하기 위한 2-히트 방법, k의 갭 길이 10+k의 비용 (cost)을 설정함; 16으로 설정된 Xu 및 데이타베이스 검색 단계에 대해 40으로 설정되고 알고리즘의 출력 단계에 대해 67로 설정된 Xg를 사용한다. 갭드 정렬은 약 22 비트에 상응하는 스코어에 의해 촉발된다.
일반적으로, 개별적인 변이체 CDR 사이의 아미노산 상동성, 유사성 또는 동일성은 본원에 제시된 서열에 대해 적어도 80%이고, 보다 일반적으로 바람직하게는 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 및 거의 100%의 증가하는 상동성 또는 동일성을 갖는다. 유사한 방식으로, 본원에서 확인된 결합 단백질의 핵산 서열에 관하여 "핵산 서열 동일성 백분율 (%)"은 항원 결합 단백질의 코딩 서열 내의 뉴클레오티드 잔기와 동일한 후보 서열 내의 뉴클레오티드 잔기의 백분율로서 정의된다. 특정 방법은 디폴트 파라미터로 설정된 WU-BLAST-2의 BLASTN 모듈을 이용하고, 여기서 오버랩 스팬 및 오버랩 비율은 각각 1 및 0.125로 설정된다.
일반적으로, 개별적인 변이체 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 본원에 제시된 뉴클레오티드 서열 사이의 핵산 서열 상동성, 유사성 또는 동일성은 적어도 80%이고, 보다 일반적으로 바람직하게는 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 및 거의 100%의 증가하는 상동성 또는 동일성을 갖는다.
따라서, "변이체 CDR"은 본 발명의 모 CDR에 명시된 상동성, 유사성 또는 동일성을 갖는 것이고, 모 CDR의 특이성 및/또는 활성의 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 포함하고 이로 제한되지 않는 생물학적 기능을 공유한다.
아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위 또는 구역은 예정되지만, 돌연변이 자체는 예정될 필요가 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서 돌연변이의 수행을 최적화하기 위해, 랜덤 돌연변이 유발이 표적 코돈 또는 구역에서 수행될 수 있고, 발현된 항원 결합 단백질 CDR 변이체를 목적하는 활성의 최적의 조합에 대해 스크리닝할 수 있다. 공지의 서열을 갖는 DNA 내에 예정된 부위에서 치환 돌연변이를 만들기 위한 기술, 예를 들어, M13 프라이머 돌연변이 유발 및 PCR 돌연변이 유발은 잘 공지되어 있다. 돌연변이체의 스크리닝은 항원 결합 단백질 활성, 예를 들어 IL-17RA 결합의 분석을 이용하여 이루어진다.
아미노산 치환은 대개 단일 잔기의 것이고; 삽입은 대체로 약 1 내지 약 20개의 아미노산 잔기일 것이지만, 상당히 더 큰 삽입이 허용될 수 있다. 결실은 약 1 내지 약 20개의 아미노산 잔기 범위일 수 있지만, 일부 경우에 결실은 훨씬 더 클 수 있다.
치환, 결실, 삽입 또는 그의 임의의 조합이 최종 유도체 또는 변이체에 도달하도록 사용될 수 있다. 일반적으로, 상기 변화는 분자의 변경, 특히 항원 결합 단백질의 면역원성 및 특이성을 최소화하기 위해 몇몇 아미노산에 대해 이루어진다. 그러나, 특정 상황에서 보다 큰 변화가 허용될 수 있다.
보존적 치환은 일반적으로 표 2에 제시된 다음 차트에 따라 만들어진다.
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기능 또는 면역학적 본질에서 실질적인 변화는 표 2에 나타낸 것보다 덜 보존적인 치환을 선택함으로써 만들어진다. 예를 들어, 변경 영역 내의 폴리펩티드 백본의 구조, 예를 들어 알파-나선 또는 베타-시트 구조; 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성; 또는 측쇄의 벌크에 보다 유의하게 영향을 미치는 치환이 만들어질 수 있다. 일반적으로 폴리펩티드의 특성에서 최대 변화를 일으키는 것으로 예상되는 치환은 (a) 친수성 잔기, 예를 들어, 세릴 또는 트레오닐이 소수성 잔기, 예를 들어, 류실, 이소류실, 페닐알라닐, 발릴 또는 알라닐을 치환하거나 (또는 그에 의해 치환되거나); (b) 시스테인 또는 프롤린이 임의의 다른 잔기를 치환하거나 (또는 그에 의해 치환되거나); (c) 양전성 (electropositive) 측쇄를 갖는 잔기, 예를 들어, 라이실, 아르기닐 또는 히스티딜이 음전성 (electronegative) 잔기, 예를 들어, 글루타밀 또는 아스파르틸을 치환하거나 (또는 그에 의해 치환되거나); (d) 부피가 큰 측쇄를 갖는 잔기, 예를 들어, 페닐알라닌이 측쇄를 갖지 않는 것, 예를 들어, 글라이신을 치환하는 (또는 그에 의해 치환되는) 것이다.
변이체는 대개 자연-발생 유사체와 동일한 정성적인 생물학적 활성을 나타내고 동일한 면역 반응을 일으킬 것이지만, 변이체는 또한 필요한 경우 항원 결합 단백질의 특징을 변형시키기 위해 선택된다. 별법으로, 변이체는 항원 결합 단백질의 생물학적 활성이 변경되도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 글리코실화 부위는 본원에 논의된 바와 같이 변경되거나 제거될 수 있다. 항체를 포함한 IL-17RA 항원 결합 단백질의 상기한 변형은 유도체의 한 예이다. 폴리펩티드의 "유도체"는 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 알부민 (예를 들어, 인간 혈청 알부민)과 같은 다른 화학 모이어티에 대한 컨쥬게이션 (conjugation), 인산화 및 글리코실화를 통해 화학적으로 변형된 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)이다.
본 발명의 범위 내의 IL-17RA 항체의 다른 유도체는 IL-17RA 항체 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 이종성 폴리펩티드를 포함하는 재조합 융합 단백질의 발현에 의해서와 같은, IL-17RA 항체 또는 그의 단편의 다른 단백질 또는 폴리펩티드와의 공유 또는 집합적 컨쥬게이트를 포함한다. 예를 들어, 컨쥬게이팅된 펩티드는 이종성 신호 (또는 리더 (leader)) 폴리펩티드, 예를 들어, 효모 알파-팩터 리더, 또는 에피토프 태그와 같은 펩티드일 수 있다. IL-17RA 항체-함유 융합 단백질은 IL-17RA 항체의 정제 또는 확인을 용이하게 하기 위해 첨가된 펩티드 (예를 들어, 폴리-His)를 포함할 수 있다. IL-17RA 항체 폴리펩티드는 또한 문헌 [Hopp et al., Bio/Technology 6: 1204, 1988] 및 미국 특허 5,011,912에 기재된 바와 같이 FLAG 펩티드 DYKDDDDK (서열 447)에 연결될 수 있다. FLAG 펩티드는 고도 항원성이고, 발현된 재조합 단백질의 신속한 분석 및 손쉬운 정제를 가능하게 하는 특정한 모노클로날 항체 (mAb)에 의해 가역적으로 결합된 에피토프를 제공한다. FLAG 펩티드가 주어진 폴리펩티드에 융합되는 융합 단백질을 제조하기 위해 유용한 시약은 상업적으로 이용가능하다 (시그마 (Sigma, 미국 미주리주 세인트루이스)).
하나 이상의 IL-17RA 항체 폴리펩티드를 함유하는 올리고머가 IL-17RA 길항제로서 사용될 수 있다. 올리고머는 공유-연결된 또는 비-공유-연결된 이량체, 삼량체 또는 보다 다량체 올리고머의 형태로 존재할 수 있다. 2개 이상의 IL-17RA 항체 폴리펩티드를 포함하는 올리고머가 사용에 고려되고, 그의 한 예는 동종이량체이다. 다른 올리고머는 이종이량체, 동종삼량체, 이종삼량체, 동종사량체, 이종사량체 등을 포함한다.
한 실시태양은 IL-17RA 항체 폴리펩티드에 융합된 펩티드 모이어티 사이의 공유 또는 비-공유 상호작용을 통해 연결된 다중 IL-17RA 항체 폴리펩티드를 포함하는 올리고머에 관한 것이다. 상기 펩티드는 펩티드 링커 (스페이서), 또는 올리고머화를 촉진하는 특성을 갖는 펩티드일 수 있다. 아래에 보다 상세히 설명하는 바와 같이, 그에 부착된 IL-17RA 항체 폴리펩티드의 올리고머화를 촉진할 수 있는 펩티드 중에 류신 지퍼 및 항체로부터 유래된 특정 폴리펩티드가 있다.
특정 실시태양에서, 올리고머는 2 내지 4개의 IL-17RA 항체 폴리펩티드를 포함한다. 올리고머의 IL-17RA 항체 모이어티는 상기 설명된 임의의 형태, 예를 들어, 변이체 또는 단편으로 존재할 수 있다. 바람직하게는, 올리고머는 IL-17RA 결합 활성을 갖는 IL-17RA 항체 폴리펩티드를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 올리고머는 면역글로불린으로부터 유래된 폴리펩티드를 사용하여 제조된다. 항체-유래된 폴리펩티드 (Fc 도메인 포함)의 다양한 부분에 융합된 특정 이종성 폴리펩티드를 포함하는 융합 단백질의 제조는 예를 들어 문헌 ([Ashkenazi et al., 1991, PNAS USA 88:10535]; [Byrn et al., 1990, Nature 344:677]; 및 [Hollenbaugh et al., 1992 "Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", in Current Protocols in Immunology, Suppl. 4, pages 10.19.1-10.19.11])에 설명되어 있다.
본 발명의 한 실시태양은 IL-17RA 항체의 IL-17RA 결합 단편을 항체의 Fc 구역에 융합시킴으로써 생성된 2개의 융합 단백질을 포함하는 이량체에 관한 것이다. 이량체는 예를 들어 융합 단백질을 코딩하는 유전자 융합체를 적절한 발현 벡터 내로 삽입하고, 유전자 융합체를 재조합 발현 벡터로 형질전환시킨 숙주 세포 내에서 발현시키고, 발현된 융합 단백질이 항체 분자와 같이 조립하도록 함으로써 제조될 수 있고, 이때 Fc 모이어티 사이에 사슬내 디술피드 결합이 형성하여 이량체를 생성한다.
용어 "Fc 폴리펩티드"는 본원에서 사용될 때 항체의 Fc 구역으로부터 유래된 폴리펩티드의 천연 및 돌연변이체 형태를 포함한다. 이량체화를 촉진하는 힌지 구역을 함유하는 상기 폴리펩티드의 말단 절단된 (truncated) 형태가 또한 포함된다. Fc 모이어티 (및 그로부터 형성된 올리고머)를 포함하는 융합 단백질은 단백질 A 또는 단백질 G 컬럼에 비해 친화도 크로마토그래피에 의한 손쉬운 정제라는 잇점을 제공한다.
본원에 참고로 포함된 PCT 출원 WO 93/10151에 기재된 하나의 적합한 Fc 폴리펩티드는 인간 IgG 항체의 Fc 구역의 N-말단 힌지 구역으로부터 천연 C-말단으로 연장하는 단일쇄 폴리펩티드이다. 다른 유용한 Fc 폴리펩티드는 미국 특허 5,457,035 및 문헌 [Baum et al., 1994, EMBO J. 13:3992-4001]에 기재된 Fc 돌연변이체이다. 상기 돌연변이체의 아미노산 서열은 WO 93/10151에 제시된 천연 Fc 서열과 동일하되, 아미노산 19는 Leu에서 Ala로 변경되었고, 아미노산 20은 Leu에서 Glu로 변경되었고, 아미노산 22는 Gly에서 Ala로 변경되었다. 돌연변이체는 Fc 수용체에 대해 감소된 친화도를 보인다.
다른 실시태양에서, IL-17RA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변부는 항체 중쇄 및/또는 경쇄의 가변부를 대체할 수 있다.
별법으로, 올리고머는 펩티드 링커 (스페이서 펩티드)를 갖거나 갖지 않는 다중 IL-17RA 항체 폴리펩티드를 포함하는 융합 단백질이다. 적합한 펩티드 링커 중에 미국 특허 4,751,180 및 4,935,233에 기재된 것이 있다.
올리고머성 IL-17RA 항체 유도체를 제조하기 위한 다른 방법은 류신 지퍼의 사용을 포함한다. 류신 지퍼 도메인은 그들이 발견되는 단백질의 올리고머화를 촉진하는 펩티드이다. 류신 지퍼는 원래 몇몇 DNA-결합 단백질에서 확인되었고 (Landschulz et al., 1988, Science 240: 1759), 그 이후 다양한 상이한 단백질에서 발견되었다. 공지의 류신 지퍼 중에 이량체화 또는 삼량체화하는 자연 발생 펩티드 및 그의 유도체가 있다. 가용형 올리고머성 단백질을 생산하기 위해 적합한 류신 지퍼 도메인의 예는 PCT 출원 WO 94/10308에 기재되어 있고, 폐 계면활성제 단백질 D (SPD)로부터 유래된 류신 지퍼는 본원에 참고로 포함된 문헌 [Hoppe et al., 1994, FEBS Letters 344: 191]에 기재되어 있다. 그에 융합된 이종성 단백질의 안정한 삼량체화를 허용하는 변형 류신 지퍼의 사용은 문헌 [Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-78]에 기재되어 있다. 하나의 방식에서, 류신 지퍼 펩티드에 융합된 IL-17RA 항체 단편 또는 유도체를 포함하는 재조합 융합 단백질을 적합한 숙주 세포 내에서 발현시키고, 형성되는 가용형 올리고머성 IL-17RA 항체 단편 또는 유도체를 배양 상등액으로부터 회수한다.
공유 변형이 또한 IL-17RA 항원 결합 단백질의 유도체로 고려되고, 본 발명의 범위 내에 포함되고, 항상은 아니지만 일반적으로 번역 후에 이루어진다. 예를 들어, 항원 결합 단백질의 몇몇 종류의 공유 변형은 항원 결합 단백질의 특정한 아미노산 잔기를 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시켜 분자 내로 도입된다.
시스테이닐 잔기는 가장 일반적으로 α-할로아세테이트 (및 상응하는 아민), 예를 들어 클로로아세트산 또는 클로로아세트아미드와 반응하여 카르복시메틸 또는 카르복시아미도메틸 유도체를 제공한다. 시스테이닐 잔기는 또한 브로모트리플루오로아세톤, α-브로모-β-(5-이미도조일)프로피온산, 클로로아세틸 포스페이트, N-알킬말레이미드, 3-니트로-2-피리딜 디술피드, 메틸 2-피리딜 디술피드, p-클로로머큐리벤조에이트, 2-클로로머큐리-4-니트로페놀, 또는 클로로-7-니트로벤조-2-옥사-1,3-디아졸과의 반응에 의해 유도체화된다.
히스티딜 잔기는 디에틸피로카르보네이트 (pH 5.5-7.0)와의 반응에 의해 유도체화되고, 이는 상기 물질이 히스티딜 측쇄에 대해 비교적 특이적이기 때문이다. 파라-브로모페나실 브로마이드가 또한 유용하고; 반응은 바람직하게는 0.1M 나트륨 카코딜레이트 (pH 6.0) 내에서 수행된다.
라이시닐 및 아미노 말단 잔기는 숙신산 또는 다른 카르복실산 무수물과 반응한다. 상기 물질을 사용하는 유도체화는 라이시닐 잔기의 전하를 역전시키는 효과를 갖는다. 알파-아미노-함유 잔기를 유도체화하기 위한 다른 적합한 시약은 이미도에스테르, 예를 들어 메틸 피콜린이미데이트; 피리독살 포스페이트; 피리독살; 클로로보로히드라이드; 트리니트로벤젠술폰산; O-메틸이소우레아; 2,4-펜탄디온; 및 글리옥실레이트를 사용하는 트랜스아미나제-촉매된 반응을 포함한다.
아르기닐 잔기는 하나 또는 몇몇 통상적인 시약, 특히 페닐글리옥살, 2,3-부탄디온, 1,2-시클로헥산디온 및 닌히드린과의 반응에 의해 변형된다. 아르기닌 잔기의 유도체화에서는 반응이 구아니딘 관능기의 높은 pKa 때문에 알칼리성 조건에서 수행되는 것을 요구한다. 또한, 상기 시약은 라이신 및 아르기닌 엡실론-아미노기의 기들과 반응할 수 있다.
티로실 잔기의 특정한 변형이 이루어질 수 있고, 이는 방향족 디아조늄 화합물 또는 테트라니트로메탄과의 반응에 의해 티로실 잔기 내로 스펙트럼 표지를 도입하는데 특히 중요하다. 가장 일반적으로, N-아세틸이미다졸 및 테트라니트로메탄이 각각 O-아세틸 티로실 종 및 3-니트로 유도체를 형성하기 위해 사용된다. 티로실 잔기는 방사성 면역 분석에서 사용하기 위한 표지된 단백질을 제조하기 위해 125I 또는 131I를 사용하여 요오드화되고, 상기 설명된 클로라민 T 방법이 적합하다.
카르복실 측기 (아스파르틸 또는 글루타밀)은 카르보디이미드 (R'-N=C=N--R') (식에서, R 및 R'는 임의로 상이한 알킬기임), 예를 들어 1-시클로헥실-3-(2-모르폴리닐-4-에틸) 카르보디이미드 또는 1-에틸-3-(4-아조니아-4,4-디메틸펜틸) 카르보디이미드와의 반응에 의해 선택적으로 변형된다. 또한, 아스파르틸 및 글루타밀 잔기는 암모늄 이온과의 반응에 의해 아스파라기닐 및 글루타미닐 잔기로 전환된다.
다양한 방법에서 사용하기 위해 항원 결합 단백질을 수불용성 지지 매트릭스 또는 표면에 가교결합시키기 위해 이중기능적 물질을 사용하는 유도체화가 유용하다. 일반적으로 사용되는 가교결합제는 예를 들어 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데히드, N-히드록시숙신이미드 에스테르, 예를 들어, 4-아지도살리실산과의 에스테르, 동종이중기능적 이미도에스테르, 예를 들어 디숙신이미딜 에스테르, 예를 들어 3,3'-디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트) 및 이중기능적 말레이미드, 예를 들어 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄을 포함한다. 유도화제, 예를 들어 메틸-3-[(p-아지도페닐)디티오]프로피오이미데이트는 빛의 존재 하에 가교결합을 형성할 수 있는 광활성화가능 중간체를 생성시킨다. 별법으로, 반응성 수불용성 매트릭스, 예를 들어 브롬화시안-활성화된 탄수화물 및 미국 특허 3,969,287; 3,691,016; 4,195,128; 4,247,642; 4,229,537; 및 4,330,440에 기재된 반응성 기질이 단백질 고정을 위해 사용된다.
글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기는 종종 탈아미드화되어 각각 상응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기가 된다. 별법으로, 이들 잔기는 온화한 산성 조건 하에 탈아미드화된다. 두 형태의 이들 잔기는 발명의 범위 내에 있다.
다른 변형은 프롤린 및 라이신의 히드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 히드록실기의 인산화, 라이신, 아르기닌의 알파-아미노기 및 히스티딘 측쇄의 메틸화 (T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, 1983, pp. 79-86), N-말단 아민의 아세틸화 및 임의의 C-말단 카르복실기의 아미드화를 포함한다.
본 발명의 범위 내에 포함되는 항원 결합 단백질의 다른 종류의 공유 변형은 단백질의 글리코실화 패턴을 변경시키는 것을 포함한다. 당업계에 공지된 바와 같이, 글리코실화 패턴은 단백질의 서열 (예를 들어, 아래 논의된 특정 글리코실화 아미노산 잔기의 존재 또는 부재, 또는 단백질이 생산되는 숙주 세포 또는 유기체 모두에 의존할 수 있다. 특정 발현 시스템을 아래에 논의한다.
폴리펩티드의 글리코실화는 일반적으로 N-연결 또는 O-연결된다. N-연결된은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 부착을 나타낸다. 트리-펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 아스파라긴 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드 내의 상기 트리-펩티드 서열의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 생성시킨다. O-연결된 글리코실화는 히드록시아미노산, 가장 일반적으로 세린 또는 트레오닌에 대한 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 자일로스 중 하나의 부착을 나타내지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시라이신이 또한 사용될 수 있다.
항원 결합 단백질에 글리코실화 부위의 첨가는 하나 이상의 상기 설명된 트리-펩티드 서열을 함유하도록 (N-연결된 글리코실화 부위에 대해) 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 달성된다. 변경은 또한 출발 서열에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 첨가 또는 치환에 의해 (O-연결된 글리코실화 부위에 대해) 이루어질 수 있다. 용이함을 위해, 항원 결합 단백질 아미노산 서열은 바람직하게는 특히 목적하는 아미노산으로 번역될 코돈이 생성되도록 예정된 염기에서 표적 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 돌연변이시킴으로써 DNA 수준에서의 변화를 통해 변경된다.
항원 결합 단백질 상의 탄수화물 모이어티의 수를 증가시키는 다른 수단은 단백질에 대한 글리코시드의 화학적 또는 효소적 커플링에 의한 것이다. 상기 절차는 N- 및 O-연결된 글리코실화를 위한 글리코실화 능력을 갖는 숙주 세포 내에서 단백질의 생산을 요구하지 않는 점에서 유리하다. 사용되는 커플링 방식에 따라, 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카르복실기, (c) 시스테인의 것과 같은 유리 술프히드릴기, (d) 세린, 트레오닌 또는 히드록시프롤린의 것과 같은 유리 히드록실기, (e) 페닐알라닌, 티로신 또는 트립토판의 것과 같은 방향족 잔기, 또는 (f) 글루타민의 아미드기에 부착될 수 있다. 이들 방법은 WO 87/05330 (1987년 9월 11일 공개) 및 문헌 [Aplin and Wriston, 1981, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306]에 기재되어 있다.
출발 항원 결합 단백질 상에 존재하는 탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소에 의해 달성될 수 있다. 화학적 탈글리코실화는 단백질을 화합물 트리플루오로메탄술폰산 또는 동등한 화합물에 노출시키는 것을 필요로 한다. 상기 처리는 폴리펩티드를 무손상 상태로 유지시키면서 연결 당 (N-아세틸글루코사민 또는 N-아세틸갈락토사민)을 제외한 대부분의 또는 모든 당의 제거를 일으킨다. 화학적 탈글리코실화는 문헌 ([Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52] 및 [Edge et al., 1981, Anal. Biochem. 118:131])에 설명되어 있다. 폴리펩티드 상의 탄수화물 모이어티의 효소에 의한 절단은 문헌 [Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol. 138:350]에 설명된 바와 같이 다양한 엔도- 및 엑소-글리코시다제의 사용에 의해 달성할 수 있다. 잠재적인 글리코실화 부위에서 글리코실화는 문헌 [Duskin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:3105]에 설명된 바와 같이 화합물 투니카마이신의 사용에 의해 방지할 수 있다. 투니카마이신은 단백질-N-글리코시드 연결의 형성을 차단한다.
항원 결합 단백질의 다른 유형의 공유 변형은 항원 결합 단백질을 다양한 폴리올, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌을 포함하고 이로 제한되지 않는 다양한 비단백질성 중합체에 미국 특허 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192 또는 4,179,337에 기재된 방식으로 연결시키는 것을 포함한다. 또한, 당업계에 공지된 바와 같이, 아미노산 치환은 PEG와 같은 중합체의 첨가를 용이하게 하기 위해 항원 결합 단백질 내에서 다양한 위치에서 이루어질 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 항원 결합 단백질의 공유 변형은 하나 이상의 표지의 첨가를 포함한다.
용어 "표지기"는 임의의 검출가능한 표지를 의미한다. 적합한 표지기의 예는 방사성 동위원소 또는 방사성 핵종 (예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광기 (예를 들어, FITC, 로다민, 란탄족 형광체), 효소 군 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광기, 비오티닐기, 또는 2차 리포터 (예를 들어, 류신 지퍼쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)에 의해 인식되는 예정된 폴리펩티드 에피토프를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 일부 실시태양에서, 표지기는 잠재적인 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 아암 (arm)을 통해 항원 결합 단백질에 커플링된다. 단백질을 표지하기 위한 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 본 발명을 실행하기 위해 사용될 수 있다.
일반적으로, 표지는 이들이 검출되는 분석에 대해 다음과 같은 다양한 클래스로 나누어진다: a) 동위원소 표지 (이는 방사성 또는 중금속 동위원소일 수 있다); b) 자성 표지 (예를 들어, 자성 입자); c) 레독스 활성 모이어티; d) 광학 염료; 효소 군 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제); e) 비오티닐화 기; 및 f) 2차 리포터 (예를 들어, 류신 지퍼쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그 등)에 의해 인식되는 예정된 폴리펩티드 에피토프. 일부 실시태양에서, 표지기는 잠재적인 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 커플링된다. 단백질을 표지하기 위한 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 본 발명을 실행하는데 사용될 수 있다.
특이적인 표지는 발색단, 형광체 및 형광단을 포함하고 이로 제한되지 않는 광학 염료를 포함하고, 후자가 많은 경우에 특이적이다. 형광단은 "소 분자" 형광단 또는 단백질성 형광단일 수 있다.
"형광 표지"는 그의 고유한 형광 특성을 통해 검출할 수 있는 임의의 분자를 의미한다. 적합한 형광 표지는 플루오레세인, 로다민, 테트라메틸로다민, 에오신, 에리트로신, 쿠마린, 메틸-쿠마린, 파이렌, 말라카이트 (Malacite) 그린, 스틸벤, 루시퍼 (Lucifer) 엘로우, 케스케이드 블루제이 (Cascade BlueJ), 텍사스 레드 (Texas Red), IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC Red 640, Cy 5, Cy 5.5, LC Red 705, 오레곤 (Oregon) 그린, Alexa-Fluor 염료 (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), 케스케이드 블루, 케스케이드 옐로우 및 R-피코에리트린 (PE) (몰레큘라 프로브스 (Molecular Probes, 미국 오레곤주 유진)), FITC, 로다민 및 텍사스 레드 (피어스 (Pierce, 미국 일리노이주 록포드)), Cy5, Cy5.5, Cy7 (아머샴 라이프 사이언스 (Amersham Life Science, 미국 펜실베니아주 피츠버그))를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 형광단을 포함하는 적합한 광학 염료는 명백하게 본원에 참고로 포함된 문헌 [Molecular Probes Handbook by Richard P. Haugland]에 기재되어 있다.
적합한 단백질성 형광 표지는 또한 녹색 형광 단백질, 예를 들어 레닐라 (Renilla), 틸로사르쿠스 (Ptilosarcus) 또는 애쿠오레아 (Aequorea) 종의 GFP (Chalfie et al., 1994, Science 263:802-805), EGFP (클론테크 래보래토리스, 인크. (Clontech Laboratories, Inc.), 젠뱅크 (Genbank) 기탁 번호 U55762), 청색 형광 단백질 (BFP, 콴텀 바이오테크놀로지스, 인크. (Quantum Biotechnologies, Inc.), 캐나다 H3H 1J9 퀘벡주 몬트리올 에이쓰 플로어 드 메종느부 블리아드 웨스트 1801); [Stauber, 1998, Biotechniques 24:462-471]; [Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6: 178-182]), 증진 황색 형광 단백질 (EYFP, 클론테크 래보래토리스, 인크.), 루시퍼라제 (Ichiki et al., 1993, J. Immunol. 150:5408-5417), β 갈락토시다제 (Nolan et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2603-2607) 및 레닐라 (WO92/15673, WO95/07463, WO98/14605, WO98/26277, WO99/49019, 미국 특허 5292658, 5418155, 5683888, 5741668, 5777079, 5804387, 5874304, 5876995, 5925558)를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 상기 인용된 참조문은 모두 명백하게 본원에 참고로 포함된다.
IL-17RA 항원 결합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드
본원에 정의한 바와 같이 항체를 포함한 IL-17RA 항원 결합 단백질을 코딩하는 핵산이 본 발명에 포함된다. 중쇄 가변 구역 AMH1-26에 대한 폴리뉴클레오티드 서열을 각각 서열 54-79에 제시하고, 경쇄 가변 구역 AML1-26에 대한 폴리뉴클레오티드 서열을 각각 서열 80-106에 제시하고, 여기서 AML23은 서열 102 및 103에 제시된 2개의 버전을 갖는다. H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 대한 서열 번호를 표 1에 제시한다.
본 발명의 측면들은 본원에 설명된 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 변이체 (예를 들어, 다의성 (degeneracy)으로 인한)를 포함한다.
본 발명의 측면들은 다음과 같은 예시적인 실시태양을 포함하고 이로 제한되지 않는 다양한 실시태양을 포함한다.
실시태양 51: 폴리뉴클레오티드가
A. a. AML1-26의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 27-53)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH1-26의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 1-26)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열; 또는
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인; 및
B. 다음 서열로부터의 각각의 CDR에서 총 3개 이하의 아미노산 부가, 치환 및/또는 결실이 상이한 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3 및 중쇄 CDR1, CDR2, CDR3으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고:
a. 항체 AM-1의 경쇄 CDR1 (서열 185), CDR2 (서열 186), CDR3 (서열 187) 및 중쇄 CDR1 (서열 107), CDR2 (서열 108), CDR3 (서열 109);
b. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1 (서열 188), CDR2 (서열 189), CDR3 (서열 190) 및 중쇄 CDR1 (서열 110), CDR2 (서열 111), CDR3 (서열 112);
c. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1 (서열 191), CDR2 (서열 192), CDR3 (서열 193) 및 중쇄 CDR1 (서열 113), CDR2 (서열 114), CDR3 (서열 115);
d. 항체 AM-4의 경쇄 CDR1 (서열 194), CDR2 (서열 195), CDR3 (서열 196) 및 중쇄 CDR1 (서열 116), CDR2 (서열 117), CDR3 (서열 118);
e. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1 (서열 197), CDR2 (서열 198), CDR3 (서열 199) 및 중쇄 CDR1 (서열 119), CDR2 (서열 120), CDR3 (서열 121);
f. 항체 AM-6의 경쇄 CDR1 (서열 200), CDR2 (서열 201), CDR3 (서열 202) 및 중쇄 CDR1 (서열 122), CDR2 (서열 123), CDR3 (서열 124);
g. 항체 AM-7의 경쇄 CDR1 (서열 203), CDR2 (서열 204), CDR3 (서열 205) 및 중쇄 CDR1 (서열 125), CDR2 (서열 126), CDR3 (서열 127);
h. 항체 AM-8의 경쇄 CDR1 (서열 206), CDR2 (서열 207), CDR3 (서열 208) 및 중쇄 CDR1 (서열 128), CDR2 (서열 129), CDR3 (서열 130);
i. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133);
j. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1 (서열 212), CDR2 (서열 213), CDR3 (서열 214) 및 중쇄 CDR1 (서열 134), CDR2 (서열 135), CDR3 (서열 136);
k. 항체 AM-11의 경쇄 CDR1 (서열 215), CDR2 (서열 216), CDR3 (서열 217) 및 중쇄 CDR1 (서열 137), CDR2 (서열 138), CDR3 (서열 139);
l. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
m. 항체 AM-13의 경쇄 CDR1 (서열 221), CDR2 (서열 222), CDR3 (서열 223) 및 중쇄 CDR1 (서열 143), CDR2 (서열 144), CDR3 (서열 145);
n. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
o. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1 (서열 227), CDR2 (서열 228), CDR3 (서열 229) 및 중쇄 CDR1 (서열 149), CDR2 (서열 150), CDR3 (서열 151);
p. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
q. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
r. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
s. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
t. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166);
u. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169);
v. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172);
w. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
x. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
y. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1 (서열 257), CDR2 (서열 258), CDR3 (서열 259) 및 중쇄 CDR1 (서열 176), CDR2 (서열 177), CDR3 (서열 178);
z. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1 (서열 260), CDR2 (서열 261), CDR3 (서열 262) 및 중쇄 CDR1 (서열 179), CDR2 (서열 180), CDR3 (서열 181); 또는
z.2. 항체 AM-26의 경쇄 CDR1 (서열 263), CDR2 (서열 264), CDR3 (서열 265) 및 중쇄 CDR1 (서열 182), CDR2 (서열 183), CDR3 (서열 184);
상기 폴리펩티드가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 단리된 폴리뉴클레오티드.
실시태양 52: 실시태양 51에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가 엄격한 조건 하에
a. AML1/AMH1의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 80/서열 54);
b. AML2/AMH2의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 81/서열 55);
c. AML3/AMH3의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 82/서열 56);
d. AML4/AMH4의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 83/서열 57);
e. AML5/AMH5의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 84/서열 58);
f. AML6/AMH6의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 85/서열 59);
g. AML7/AMH7의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 86/서열 60);
h. AML8/AMH8의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 87/서열 61);
i. AML9/AMH9의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 88/서열 62);
j. AML10/AMH10의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 89/서열 63);
k. AML11/AMH11의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 90/서열 64);
l. AML12/AMH12의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 91/서열 65);
m. AML13/AMH13의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 92/서열 66);
n. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 93/서열 67);
o. AML15/AMH15의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 94/서열 68);
p. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 95/서열 69);
q. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 96/서열 70);
r. AML18/AMH18의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 97/서열 71);
s. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 98/서열 72);
t. AML20/AMH20의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 99/서열 73);
u. AML21/AMH21의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 100/서열 74);
v. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 101/서열 75);
w. AML23/AMH23의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 102 또는 서열 103/서열 76);
x. AML24/AMH24의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 104/서열 77);
y. AML25/AMH25의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 105/서열 78); 및
z. AML26/AMH26의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 106/서열 79)으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 폴리뉴클레오티드의 전장 상보체에 혼성화하는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 53: 실시태양 51에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가 엄격한 조건 하에
a. 항체 AM-1의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 345), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 346), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 347) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 266), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 267) 및 CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 268);
b. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 348), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 349), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 350) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 269), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 270), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 271);
c. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 351), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 352), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 353) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 272), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 273), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 274);
d. 항체 AM-4의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 354), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 355), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 356) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 275), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 276), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 277);
e. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 357), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 358), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 359) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 278), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 279), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 280);
f. 항체 AM-6의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 360), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 361), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 362) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 281), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 282), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 283);
g. 항체 AM-7의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 363), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 364), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 365) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 284), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 285), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 286);
h. 항체 AM-8의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 366), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 367), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 368) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 287), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 288), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 289);
i. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 369), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 370), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 371) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 290), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 291), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 292);
j. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 372), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 373), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 374) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 293), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 294), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 295);
k. 항체 AM-11의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 375), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 376), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 377) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 296), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 297), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 298);
l. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 378), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 379), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 380) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 299), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 300), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 301);
m. 항체 AM-13의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 381), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 382), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 383) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 302), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 303), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 304);
n. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 384), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 385), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 386) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 305), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 306), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 307);
o. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 387), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 388), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 389) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 308), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 309), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 310);
p. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 390), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 391), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 392) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 311), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 312), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 313);
q. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 393), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 394), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 395) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 314), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 315), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 316);
r. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 396), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 397), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 398) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 317), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 318), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 319);
s. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 399), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 400), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 401) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 320), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 321), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 322);
t. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 402), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 403), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 404) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 323), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 324), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 325);
u. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 405), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 406), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 407) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 326), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 327), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 328);
v. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 408), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 409), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 410) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 329), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 330), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 331);
w. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 411), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 412), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 413) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 332), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 333), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 334);
x. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 414), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 415), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 416) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 332), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 333), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 334);
y. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 417), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 418), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 419) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 335), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 336), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 337);
z. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 420), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 421), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 422) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 338), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 339), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 340); 또는
z.2. 항체 AM-26의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 423), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 424), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 425) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 341), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 342), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 343)으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 폴리뉴클레오티드의 전장 상보체에 혼성화하는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 54: 실시태양 51에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가
a. AML1/AMH1의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 27/서열 1);
b. AML2/AMH2의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 28/서열 2);
c. AML3/AMH3의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 29/서열 3);
d. AML4/AMH4의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 30/서열 4);
e. AML5/AMH5의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 31/서열 5);
f. AML6/AMH6의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 32/서열 6);
g. AML7/AMH7의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 33/서열 7);
h. AML8/AMH8의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 34/서열 8);
i. AML9/AMH9의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 35/서열 9);
j. AML10/AMH10의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 36/서열 10);
k. AML11/AMH11의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 37/서열 11);
l. AML12/AMH12의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 38/서열 12);
m. AML13/AMH13의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 39/서열 13);
n. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
o. AML15/AMH15의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 41/서열 15);
p. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 42/서열 16);
q. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 43/서열 17);
r. AML18/AMH18의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 44/서열 18);
s. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
t. AML20/AMH20의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 46/서열 20);
u. AML21/AMH21의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 47/서열 21);
v. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22);
w. AML23/AMH23의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 49 또는 서열 50/서열 23);
x. AML24/AMH24의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 51/서열 24);
y. AML25/AMH25의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 52/서열 25); 및
z. AML26/AMH26의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 53/서열 26)으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 55. 실시태양 51에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가
a. 항체 AM-1의 경쇄 CDR1 (서열 185), CDR2 (서열 186), CDR3 (서열 187) 및 중쇄 CDR1 (서열 107), CDR2 (서열 108), CDR3 (서열 109);
b. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1 (서열 188), CDR2 (서열 189), CDR3 (서열 190) 및 중쇄 CDR1 (서열 110), CDR2 (서열 111), CDR3 (서열 112);
c. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1 (서열 191), CDR2 (서열 192), CDR3 (서열 193) 및 중쇄 CDR1 (서열 113), CDR2 (서열 114), CDR3 (서열 115);
d. 항체 AM-4의 경쇄 CDR1 (서열 194), CDR2 (서열 195), CDR3 (서열 196) 및 중쇄 CDR1 (서열 116), CDR2 (서열 117), CDR3 (서열 118);
e. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1 (서열 197), CDR2 (서열 198), CDR3 (서열 199) 및 중쇄 CDR1 (서열 119), CDR2 (서열 120), CDR3 (서열 121);
f. 항체 AM-6의 경쇄 CDR1 (서열 200), CDR2 (서열 201), CDR3 (서열 202) 및 중쇄 CDR1 (서열 122), CDR2 (서열 123), CDR3 (서열 124);
g. 항체 AM-7의 경쇄 CDR1 (서열 203), CDR2 (서열 204), CDR3 (서열 205) 및 중쇄 CDR1 (서열 125), CDR2 (서열 126), CDR3 (서열 127);
h. 항체 AM-8의 경쇄 CDR1 (서열 206), CDR2 (서열 207), CDR3 (서열 208) 및 중쇄 CDR1 (서열 128), CDR2 (서열 129), CDR3 (서열 130);
i. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133);
j. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1 (서열 212), CDR2 (서열 213), CDR3 (서열 214) 및 중쇄 CDR1 (서열 134), CDR2 (서열 135), CDR3 (서열 136);
k. 항체 AM-11의 경쇄 CDR1 (서열 215), CDR2 (서열 216), CDR3 (서열 217) 및 중쇄 CDR1 (서열 137), CDR2 (서열 138), CDR3 (서열 139);
l. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
m. 항체 AM-13의 경쇄 CDR1 (서열 221), CDR2 (서열 222), CDR3 (서열 223) 및 중쇄 CDR1 (서열 143), CDR2 (서열 144), CDR3 (서열 145);
n. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
o. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1 (서열 227), CDR2 (서열 228), CDR3 (서열 229) 및 중쇄 CDR1 (서열 149), CDR2 (서열 150), CDR3 (서열 151);
p. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
q. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
r. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
s. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
t. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166);
u. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169);
v. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172);
w. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
x. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
y. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1 (서열 257), CDR2 (서열 258), CDR3 (서열 259) 및 중쇄 CDR1 (서열 176), CDR2 (서열 177), CDR3 (서열 178);
z. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1 (서열 260), CDR2 (서열 261), CDR3 (서열 262) 및 중쇄 CDR1 (서열 179), CDR2 (서열 180), CDR3 (서열 181); 또는
z.2. 항체 AM-26의 경쇄 CDR1 (서열 263), CDR2 (서열 264), CDR3 (서열 265) 및 중쇄 CDR1 (서열 182), CDR2 (서열 183), CDR3 (서열 184)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 56: 실시태양 52에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가
a. AML1/AMH1의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 80/서열 54);
b. AML2/AMH2의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 81/서열 55);
c. AML3/AMH3의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 82/서열 56);
d. AML4/AMH4의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 83/서열 57);
e. AML5/AMH5의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 84/서열 58);
f. AML6/AMH6의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 85/서열 59);
g. AML7/AMH7의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 86/서열 60);
h. AML8/AMH8의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 87/서열 61);
i. AML9/AMH9의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 88/서열 62);
j. AML10/AMH10의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 89/서열 63);
k. AML11/AMH11의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 90/서열 64);
l. AML12/AMH12의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 91/서열 65);
m. AML13/AMH13의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 92/서열 66);
n. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 93/서열 67);
o. AML15/AMH15의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 94/서열 68);
p. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 95/서열 69);
q. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 96/서열 70);
r. AML18/AMH18의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 97/서열 71);
s. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 98/서열 72);
t. AML20/AMH20의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 99/서열 73);
u. AML21/AMH21의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 100/서열 74);
v. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 101/서열 75);
w. AML23/AMH23의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 102 또는 서열 103/서열 76);
x. AML24/AMH24의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 104/서열 77);
y. AML25/AMH25의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 105/서열 78); 및
z. AML26/AMH26의 경쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 및 중쇄 가변 도메인-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 106/서열 79)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 57: 실시태양 53에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가
a. 항체 AM-1의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 345), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 346), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 347) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 266), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 267) 및 CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 268);
b. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 348), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 349), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 350) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 269), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 270), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 271);
c. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 351), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 352), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 353) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 272), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 273), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 274);
d. 항체 AM-4의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 354), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 355), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 356) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 275), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 276), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 277);
e. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 357), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 358), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 359) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 278), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 279), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 280);
f. 항체 AM-6의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 360), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 361), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 362) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 281), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 282), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 283);
g. 항체 AM-7의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 363), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 364), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 365) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 284), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 285), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 286);
h. 항체 AM-8의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 366), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 367), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 368) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 287), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 288), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 289);
i. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 369), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 370), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 371) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 290), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 291), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 292);
j. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 372), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 373), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 374) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 293), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 294), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 295);
k. 항체 AM-11의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 375), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 376), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 377) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 296), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 297), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 298);
l. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 378), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 379), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 380) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 299), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 300), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 301);
m. 항체 AM-13의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 381), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 382), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 383) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 302), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 303), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 304);
n. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 384), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 385), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 386) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 305), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 306), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 307);
o. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 387), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 388), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 389) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 308), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 309), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 310);
p. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 390), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 391), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 392) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 311), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 312), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 313);
q. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 393), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 394), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 395) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 314), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 315), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 316);
r. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 396), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 397), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 398) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 317), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 318), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 319);
s. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 399), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 400), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 401) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 320), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 321), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 322);
t. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 402), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 403), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 404) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 323), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 324), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 325);
u. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 405), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 406), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 407) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 326), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 327), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 328);
v. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 408), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 409), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 410) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 329), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 330), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 331);
w. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 411), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 412), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 413) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 332), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 333), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 334);
x. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 414), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 415), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 416) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 332), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 333), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 334);
y. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 417), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 418), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 419) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 335), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 336), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 337);
z. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 420), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 421), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 422) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 338), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 339), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 340); 또는
z.2. 항체 AM-26의 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 423), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 424), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 425) 및 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 341), CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 342), CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 (서열 343)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 58: 폴리뉴클레오티드가
a. i. X1YGIS (식에서, X1은 R, S 및 G로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
b. i. WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (식에서, X1은 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 N, S 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 K 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 L 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
c. i. X1QLX2X3DY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y, V 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 F 및 L로 이루어지는 군 중에서 선택된다); 및
ii. X1QLX2FDY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y 및 V로 이루어지는 군 중에서 선택된다)
로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
d. i. RASQSX1X2X3X4LA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 I 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 S 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 N 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 A 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및
ii. RASQSX1SSNLA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)
로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
e. i. X1X2STRAX3 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 T 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및
ii. X1ASTRAX2 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택된다)
로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및
f. i. QQYDX1WPLT (식에서, X1은 N, T 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3
을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고,
상기 폴리펩티드가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 단리된 폴리뉴클레오티드.
실시태양 59. 실시태양 58에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가 폴리펩티드를 코딩하고, 상기 폴리펩티드가
a. X1YGIS (식에서, X1은 R, S 및 G로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 중쇄 CDR1 아미노산 서열;
b. WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (식에서, X1은 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 N, S 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 K 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 L 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 중쇄 CDR2 아미노산 서열;
c. X1QLX2FDY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y 및 V로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 중쇄 CDR3 아미노산 서열;
d. RASQSX1SSNLA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 경쇄 CDR1 아미노산 서열;
e. X1ASTRAX2 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 경쇄 CDR2 아미노산 서열; 및
f. QQYDX1WPLT (식에서, X1은 N, T 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 경쇄 CDR3 아미노산 서열을 포함하고; 상기 폴리펩티드가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 60: 실시태양 51의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드.
실시태양 61: 실시태양 60에 있어서, 상기 플라스미드가 발현 벡터인 플라스미드.
실시태양 62: 실시태양 60의 플라스미드를 포함하는 단리된 세포.
실시태양 63: 실시태양 62에 있어서, 상기 세포의 염색체가 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것인 단리된 세포.
실시태양 64: 실시태양 62에 있어서, 상기 세포가 하이브리도마인 단리된 세포.
실시태양 65: 실시태양 62에 있어서, 상기 세포가 실시태양 61의 발현 벡터를 포함하는 것인 단리된 세포.
실시태양 66: 실시태양 65에 있어서, 상기 세포가 a. 원핵 세포; b. 진핵세포; c. 포유동물 세포; d. 곤충 세포; 및 e. CHO 세포로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 단리된 세포.
실시태양 67: 상기 실시태양 65의 단리된 세포를 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드의 발현을 허용하는 조건 하에서 인큐베이팅하는 것을 포함하는, IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드의 제조 방법.
실시태양 68: 실시태양 51에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가 상기 폴리펩티드를 코딩하고, 상기 폴리펩티드가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 항체이고, 상기 항체가 a. 인간화 항체; b. 키메라 항체; c. 재조합 항체; d. 단일쇄 항체; e. 디아바디; f. 트리아바디; g. 테트라바디; h. Fab 단편; i. F(ab')2 단편; j. IgD 항체; k. IgE 항체; l. IgM 항체; m. IgG1 항체; n. IgG2 항체; o. IgG3 항체; 및 p. IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 69: 실시태양 68에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가 상기 항체를 코딩하고, 상기 항체가
a) 서열 427의 중쇄 서열 및 서열 429의 경쇄 서열로 이루어지는 항체;
b) 본질적으로 서열 427의 중쇄 서열 및 서열 429의 경쇄 서열로 이루어지는 항체;
c) 서열 427의 중쇄 서열을 포함하는 항체;
d) 서열 429의 경쇄 서열을 포함하는 항체;
e) 서열 427의 중쇄 서열 및 서열 429의 경쇄 서열을 포함하는 항체;
f) 서열 427의 중쇄 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
g) 서열 429의 경쇄 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
h) 서열 427의 중쇄 서열 및 서열 429의 경쇄 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
i) 서열 14의 중쇄 가변 구역 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
j) 서열 40의 경쇄 가변 구역 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
k) 서열 40의 경쇄 가변 구역 서열 및 서열 14의 중쇄 가변 구역 서열을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편;
l) 서열 146의 중쇄 CDR1, 서열 147의 중쇄 CDR2, 서열 148의 중쇄 CDR3, 서열 224의 경쇄 CDR1, 서열 225의 경쇄 CDR2 및 서열 226의 경쇄 CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편; 및
m) 서열 148의 중쇄 CDR3 및 서열 226의 경쇄 CDR3를 포함하는 항체 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편으로 이루어지는 군 중에서 선택되고; 상기 항체가 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 70: 실시태양 69에 있어서, 상기 항체가
a) 서열 426으로 이루어지는 중쇄-코딩 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 428로 이루어지는 경쇄-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
b) 본질적으로 서열 426으로 이루어지는 중쇄-코딩 폴리뉴클레오티드 서열 및 본질적으로 서열 428로 이루어지는 경쇄-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
c) 서열 426을 포함하는 중쇄-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
d) 서열 428을 포함하는 경쇄-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
e) 서열 426을 포함하는 중쇄-코딩 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 428을 포함하는 경쇄-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
f) 서열 426을 포함하는 중쇄 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
g) 서열 428을 포함하는 경쇄 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
h) 서열 426을 포함하는 중쇄 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편-코딩 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 428을 포함하는 경쇄 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
i) 서열 67을 포함하는 중쇄 가변 구역 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
j) 서열 93을 포함하는 경쇄 가변 구역 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
k) 서열 67을 포함하는 중쇄 가변 구역 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편-코딩 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 93을 포함하는 경쇄 가변 구역 또는 그의 IL-17 수용체 A 결합 단편-코딩 폴리뉴클레오티드 서열;
l) 서열 384를 포함하는 경쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드, 서열 385를 포함하는 CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드, 서열 386을 포함하는 CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 및 서열 305를 포함하는 중쇄 CDR1-코딩 폴리뉴클레오티드, 서열 306을 포함하는 CDR2-코딩 폴리뉴클레오티드, 서열 307을 포함하는 CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드; 및
m) 서열 307을 포함하는 중쇄 CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드 및 서열 386을 포함하는 경쇄 CDR3-코딩 폴리뉴클레오티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시태양 71: 실시태양 60에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 실시태양 69의 폴리뉴클레오티드인 플라스미드.
실시태양 72: 실시태양 62에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 실시태양 69의 폴리뉴클레오티드인 단리된 세포.
실시태양 73: 실시태양 65에 있어서, 상기 발현 벡터가 실시태양 69의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것인 단리된 세포.
실시태양 74: 실시태양 66에 있어서, 세포가 CHO 세포이고, 상기 CHO 세포가 실시태양 69의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것인 단리된 세포.
실시태양 75: 실시태양 67에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 실시태양 69의 폴리뉴클레오티드인 것인 방법.
핵산의 단리를 위한 프로브 또는 프라이머로서 또는 데이타베이스 검색을 위한 질의 서열로서 사용하기 위한 본원에 설명된 아미노산 서열에 상응하는 뉴클레오티드 서열은 아미노산 서열로부터 "역-번역"에 의해, 또는 그를 위한 코딩 DNA 서열이 확인된 폴리펩티드를 사용하는 아미노산 동일성의 구역의 확인에 의해 얻을 수 있다. IL-17RA 항원 결합 단백질 또는 IL-17RA 항원 결합 단백질 폴리펩티드 단편의 목적하는 조합을 코딩하는 DNA 서열을 단리하고 증폭시키기 위해 잘 공지된 중합효소 연쇄 반응 (PCR) 절차를 사용할 수 있다. DNA 단편의 조합의 목적하는 말단을 규정하는 올리고뉴클레오티드를 5' 및 3' 프라이머로서 사용할 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 추가로 발현 벡터 내로 DNA 단편의 증폭된 조합의 삽입을 용이하게 하기 위해 제한 엔도뉴클레아제에 대한 인식 부위를 함유할 수 있다. PCR 기술은 문헌 ([Saiki et al., Science 239:487 (1988)]; [Recombinant DNA Methodology, Wu et al., eds., Academic Press, Inc., San Diego (1989), pp. 189-196]; 및 [PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al., eds., Academic Press, Inc. (1990)])에 기재되어 있다.
본 발명의 핵산 분자는 단일 가닥 및 이중 가닥 형태의 DNA 및 RNA, 및 상응하는 상보성 서열을 포함한다. DNA는 예를 들어, cDNA, 게놈 DNA, 화학적으로 합성된 DNA, PCR에 의해 증폭된 DNA 증폭된 및 그의 조합을 포함한다. 본 발명의 핵산 분자는 전장 유전자 또는 cDNA 분자와 그의 단편의 조합을 포함한다. 본 발명의 핵산은 우선적으로 인간 공급원으로부터 유래되지만, 본 발명은 비-인간 종으로부터 유래된 것을 또한 포함한다.
"단리된 핵산"은 자연-발생 공급원으로부터 단리된 핵산의 경우에 핵산이 단리되는 유기체의 게놈 내에 존재하는 인접 유전자 서열로부터 분리된 핵산이다. 주형으로부터 효소에 의해 또는 화학적으로 합성된 핵산, 예를 들어 PCR 산물, cDNA 분자 또는 올리고뉴클레오티드의 경우에, 상기 과정으로부터 생성되는 핵산은 단리된 핵산인 것으로 이해된다. 단리된 핵산 분자는 별개의 단편 형태 또는 보다 큰 핵산 구성체의 성분으로서 핵산 분자를 나타낸다. 하나의 바람직한 실시태양에서, 핵산은 오염시키는 내인성 물질이 실질적으로 없다. 핵산 분자는 바람직하게는 실질적으로 순수한 형태로 및 표준 생화학적 방법에 의한 확인, 조작 및 그의 성분 뉴클레오티드 서열의 회수를 가능하게 하는 양 또는 농도로 적어도 1회 단리된 DNA 또는 RNA로부터 유도된다 (예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)]에 약술된 것). 상기 서열은 바람직하게는 대개 진핵세포 유전자 내에 존재하는 내부 비-번역된 서열 또는 인트론에 의해 연속되는 개방 판독 프레임의 형태로 제공되고/되거나 구성된다. 비-번역된 DNA의 서열은 개방 판독 프레임으로부터 5' 또는 3'에 존재할 수 있고, 여기서 이는 코딩 구역의 조작 또는 발현을 저해하지 않는다.
본 발명은 또한 중등도로 엄격한 조건 하에, 보다 바람직하게는 고도로 엄격한 조건 하에 본원에 설명된 바와 같은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 코딩하는 핵산에 혼성화하는 핵산을 포함한다. 혼성화 조건의 선택에 영향을 미치는 기본적인 파라미터 및 적합한 조건을 고안하기 위한 지침은 문헌 ([Sambrook, Fritsch, and Maniatis, 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., chapters 9 and 11]; 및 [Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., sections 2.10 and 6.3-6.4])에 기재되어 있고, 예를 들어, DNA의 길이 및/또는 염기 조성에 기초하여 당업자가 쉽게 결정할 수 있다. 중등도로 엄격한 조건을 달성하는 하나의 방식은 5 x SSC, 0.5% SDS, 1.0 mM EDTA (pH 8.0)를 함유하는 예비세척 용액, 약 50% 포름아미드, 6 x SSC의 혼성화 버퍼, 및 약 55℃의 혼성화 온도 (또는 다른 유사한 혼성화 용액, 예를 들어 약 50% 포름아미드를 함유하는 것, 약 42℃의 혼성화 온도), 및 0.5 x SSC, 0.1% SDS 내에서 약 60℃의 세척 조건의 사용을 포함한다. 일반적으로, 고도로 엄격한 조건은 상기한 바와 같지만 약 68℃, 0.2 x SSC, 0.1% SDS에서 세척하는 혼성화 조건으로서 규정된다. SSPE (1xSSPE는 0.15M NaCl, 10 mM NaH2PO4 및 1.25 mM EDTA, pH 7.4임)가 혼성화 및 세척 버퍼 내의 SSC (1xSSC는 0.15M NaCl 및 15 mM 시트르산나트륨임)를 대체할 수 있고; 세척은 혼성화가 완료된 후 15분 동안 수행한다. 세척 온도 및 세척 염 농도는 목적하는 정도의 엄격도를 달성하기 위해 필요한 경우 당업자에게 공지되고 아래에 더욱 설명되는 바와 같이 혼성화 반응 및 이중체 안정성을 지배하는 기본 원리를 적용함으로써 조정될 수 있음을 이해해야 한다 (예를 들어, [Sambrook et al., 1989] 참조). 핵산을 공지의 서열의 표적 핵산에 혼성화시킬 때, 하이브리드 길이는 혼성화 핵산의 길이인 것으로 가정된다. 공지의 서열의 핵산이 혼성화될 때, 하이브리드 길이는 핵산의 서열을 정렬시키고, 최적 서열 상보성의 구역(들)을 확인함으로써 결정할 수 있다. 길이가 50개 미만의 염기쌍인 것으로 예상되는 하이브리드에 대한 혼성화 온도는 하이브리드의 융점 (Tm)보다 5 내지 10℃ 더 낮아야 하고, 여기서 Tm은 다음 식에 따라 결정된다. 길이가 18개 미만의 염기쌍인 하이브리드에 대해, Tm (℃) = 2(A + T 염기의 #) + 4(G + C 염기의 #)이다. 길이가 18개 초과의 염기쌍인 하이브리드에 대해, Tm (℃) = 81.5 + 16.6(log10 [Na+]) + 0.41(% G + C) - (600/N)이고, 여기서 N은 하이브리드 내의 염기의 수이고, [Na+]는 혼성화 버퍼 내의 나트륨 이온의 농도이다 (1xSSC에 대해 [Na+] = 0.165M). 바람직하게는, 각각의 상기 혼성화 핵산은 길이 가 적어도 15 뉴클레오티드 (또는 보다 바람직하게는 적어도 18 뉴클레오티드, 또는 적어도 20 뉴클레오티드, 또는 적어도 25 뉴클레오티드, 또는 적어도 30 뉴클레오티드, 또는 적어도 40 뉴클레오티드, 또는 가장 바람직하게는 적어도 50 뉴클레오티드), 또는 그가 혼성화하는 본 발명의 핵산의 길이의 적어도 25% (보다 바람직하게는 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 및 가장 바람직하게는 적어도 80%)이고, 그가 혼성화하는 본 발명의 핵산과 적어도 60% 서열 동일성 (보다 바람직하게는 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 및 가장 바람직하게는 적어도 99.5%)을 갖고, 여기서 서열 동일성은 앞에서 보다 상세히 설명한 바와 같이 서열 갭을 최소화하면서 오버랩 및 동일성을 최대화하도록 정렬될 때 혼성화 핵산의 서열을 비교함으로써 결정된다.
본 발명에 따른 변이체는 보통 본원에 약술한 바와 같이 카세트 또는 PCR 돌연변이 유발 또는 당업계에 잘 공지된 다른 기술을 사용하여 항원 결합 단백질을 코딩하는 DNA 내에서 뉴클레오티드의 부위 특이적 돌연변이 유발에 의해 변이체를 코딩하는 DNA를 생산한 후, 재조합 DNA를 세포 배양액 내에서 발현시킴으로써 제조된다. 그러나, 약 100-150개 이하의 잔기를 갖는 변이체 CDR을 포함하는 항원 결합 단백질 단편은 확립된 기술을 이용하는 시험관내 합성에 의해 제조할 수 있다. 변이체는 대개 자연 발생 유사체와 동일한 정성적인 생물학적 활성, 예를 들어, IL-17RA에 대한 결합 및 신호전달 억제를 보이지만, 아래에 보다 충분히 약술되는 바와 같이 변형된 특징을 갖는 변이체가 또한 선택될 수 있다.
당업자가 이해할 바와 같이, 유전자 코드의 다의성 덕분에, 극히 많은 수의 핵산이 제조될 수 있고, 그 전부가 본 발명의 CDR (및 항원 결합 단백질의 중쇄 및 경쇄 또는 다른 성분)을 코딩한다. 따라서, 확인된 특정 아미노산 서열을 가지면, 당업자는 코딩된 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 방식으로 하나 이상의 코돈의 서열을 단순히 변형시킴으로써 임의의 많은 상이한 핵산을 제조할 수 있다.
본 발명은 또한 상기한 바와 같은 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드, 발현 벡터, 전사 또는 발현 카세트의 형태로 발현 시스템 및 구성체를 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 발현 시스템 또는 구성체를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
일반적으로, 임의의 숙주 세포에서 사용되는 발현 벡터는 플라스미드 유지를 위한 및 외인성 뉴클레오티드 서열의 클로닝 및 발현을 위한 서열을 함유할 것이다. 상기한 서열 ("인접 (flanking) 서열"로서 총칭함)은 특정 실시태양에서 일반적으로 다음 뉴클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함할 것이다: 프로모터, 하나 이상의 인핸서 서열, 복제 기점, 전사 종결 서열, 공여체 및 수여체 스플라이스 부위를 함유하는 완전 인트론 서열, 폴리펩티드 분비를 위한 리더 서열을 코딩하는 서열, 리보좀 결합 부위, 폴리아데닐화 서열, 발현시킬 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 삽입하기 위한 폴리링커 구역, 및 선별가능한 마커 요소. 각각의 이들 서열은 아래에서 논의된다.
임의로, 벡터는 "태그 (tag)"-코딩 서열, 즉, IL-17RA 항원 결합 단백질 코딩 서열의 5' 또는 3' 단부에 위치하는 올리고뉴클레오티드 분자를 함유할 수 있고; 올리고뉴클레오티드 서열은 폴리His (예를 들어 헥사His), 또는 다른 "태그", 예를 들어 FLAG, HA (헤마글루티닌 인플루엔자 바이러스) 또는 myc를 코딩하고, 그에 대한 상업적으로 이용가능한 항체가 존재한다. 상기 태그는 일반적으로 폴리펩티드의 발현 시에 폴리펩티드에 융합되고, 숙주 세포로부터 IL-17RA 항원 결합 단백질의 친화도 정제 또는 검출을 위한 수단으로서 역할을 할 수 있다. 친화도 정제는 예를 들어, 친화도 매트릭스로서 태그에 대한 항체를 사용하는 컬럼 크로마토그래피에 의해 달성할 수 있다. 임의로, 태그는 절단을 위한 특정 펩티다제를 사용하는 것과 같은 다양한 수단에 의해 정제된 IL-17RA 항원 결합 단백질로부터 후속적으로 제거할 수 있다.
인접 서열은 상동성 (즉, 숙주 세포와 동일한 종 및/또는 균주로부터), 이종성 (즉, 숙주 세포 종 또는 균주와 다른 종으로부터), 하이브리드 (즉, 하나 초과의 공급원으로부터의 인접 서열들의 조합), 합성 또는 천연일 수 있다. 따라서, 인접 서열의 공급원은 인접 서열이 숙주 세포 기구 내에서 기능적이고, 그에 의해 활성화될 수 있다면 임의의 원핵세포 또는 진핵세포 유기체, 임의의 척추 또는 무척추 유기체, 또는 임의의 식물일 수 있다.
본 발명의 벡터에서 유용한 인접 서열은 당업계에 잘 공지된 임의의 몇몇 방법에 의해 얻을 수 있다. 전형적으로, 본원에서 유용한 인접 서열은 매핑 (mapping)에 의해 및/또는 제한 엔도뉴클레아제 소화에 의해 앞서 확인될 것이고, 따라서 적절한 제한 엔도뉴클레아제를 사용하여 적절한 조직원으로부터 단리될 수 있다. 일부 경우에, 인접 서열의 전체 뉴클레오티드 서열이 공지되어 있을 수 있다. 여기서, 인접 서열은 핵산 합성 또는 클로닝을 위해 본원에 설명된 방법을 이용하여 합성할 수 있다.
인접 서열의 전부 또는 단지 일부가 공지되어 있다면, 중합효소 연쇄 반응 (PCR)을 사용하여 및/또는 동일한 또는 다른 종으로부터의 올리고뉴클레오티드 및/또는 인접 서열 단편과 같은 적합한 프로브를 사용하여 게놈 라이브러리를 스크리닝함으로써 얻을 수 있다. 인접 서열이 공지되어 있지 않은 경우에, 인접 서열을 코딩하는 DNA의 단편은 예를 들어, 코딩 서열 또는 심지어 다른 유전자(들)을 함유할 수 있는 DNA의 보다 큰 조각으로부터 단리할 수 있다. 단리는 제한 엔도뉴클레아제 소화에 의해 적절한 DNA 단편을 제공한 후, 아가로스 겔 정제, Qiagen(등록상표) 컬럼 크로마토그래피 (미국 캘리포니아주 채츠워스) 또는 당업자에게 공지된 다른 방법을 사용하여 단리함으로써 달성할 수 있다. 상기 목적을 달성하기 위해 적합한 효소의 선택은 당업자에게 쉽게 명백할 것이다.
복제 기점은 대개 상업적으로 구입한 원핵세포 발현 벡터의 일부이고, 기점은 숙주 세포 내에서 벡터의 증폭을 돕는다. 선택된 벡터가 복제 기점 부위를 함유하지 않으면, 공지의 서열에 기반하여 화학적으로 합성되고, 벡터 내로 라이게이팅될 수 있다. 예를 들어, 플라스미드 pBR322로부터의 복제 기점 (뉴 잉글랜드 바이오랩스 (New England Biolabs, 미국 매사추세츠주 버벌리))이 대부분의 그람-음성 세균에 대해 적합하고, 다양한 바이러스 기점 (예를 들어, SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, 소수포성 구내염 바이러스 (VSV), 또는 유두종바이러스, 예를 들어 HPV 또는 BPV)이 포유동물 세포 내에서 벡터를 클로닝하기 위해 유용하다. 일반적으로, 포유동물 발현 벡터를 위한 복제 기점 성분은 필요하지 않다 (예를 들어, SV40 기점이 단지 바이러스 조기 프로모터를 또한 함유하기 때문에 종종 사용된다).
전사 종결 서열은 대개 폴리펩티드 코딩 구역의 단부에 대해 3'에 위치하고, 전사를 종결시키는 역할을 한다. 대체로, 원핵 세포 내의 전사 종결 서열은 G-C 풍부 단편에 이은 폴리-T 서열이다. 상기 서열은 라이브러리로부터 쉽게 클로닝되거나, 심지어 벡터의 일부로서 상업적으로 구입되지만, 또한 본원에 기재된 것과 같은 핵산 합성을 위한 방법을 이용하여 쉽게 합성될 수 있다.
선별가능한 마커 유전자는 선별 배양 배지 내에서 성장시킨 숙주 세포의 생존 및 성장에 필요한 단백질을 코딩한다. 전형적인 선별 마커 유전자는 (a) 원핵 숙주 세포에 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어, 암피실린, 테트라사이클린 또는 카나마이신에 대한 내성을 부여하거나; (b) 세포의 영양요구성 결핍을 보충하거나; (c) 복합 또는 한정 배지로부터 이용가능하지 않은 중요한 영양분을 공급하는 단백질을 코딩한다. 특정한 선별가능한 마커는 카나마이신 내성 유전자, 암피실린 내성 유전자 및 테트라사이클린 내성 유전자이다. 유리하게는, 원핵 및 진핵 숙주 세포 모두에서의 선택을 위해 네오마이신 내성 유전자가 또한 사용될 수 있다.
발현될 유전자를 증폭시키기 위해 다른 선별가능한 유전자가 사용될 수 있다. 증폭은 성장 또는 세포 생존에 중요한 단백질의 생산에 요구되는 유전자가 재조합 세포의 연속적인 세대의 염색체 내에서 앞뒤로 일렬로 반복되는 과정이다. 포유동물 세포를 위한 적합한 선별가능한 마커의 예는 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 및 프로모터 미함유 티미딘 키나제 유전자를 포함한다. 포유동물 세포 형질전환체는 벡터 내에 존재하는 선별가능한 유전자의 덕분으로 형질전환체만이 생존하도록 특유하게 적응된 선별 압력 하에 놓인다. 선별 압력은 형질전환된 세포를 배지 내의 선별제의 농도가 연속적으로 증가하여, 선별가능한 유전자 및 IL-17RA 폴리펩티드에 결합하는 항원 결합 단백질 항체와 같은 다른 유전자를 코딩하는 DNA를 모두 증폭시키는 조건 하에 배양함으로써 부여된다. 그 결과, 증폭된 DNA로부터 증가된 양의 폴리펩티드, 예를 들어 IL-17RA 항원 결합 단백질이 합성된다.
리보좀-결합 부위는 대체로 mRNA의 번역 개시를 위해 필요하고, 샤인-달가노 (Shine-Dalgarno) 서열 (원핵세포) 또는 코작 (Kozak) 서열 (진핵세포)을 특징으로 한다. 상기 요소는 대개 프로모터에 대해 3'에, 발현시킬 폴리펩티드의 코딩 서열에 대해 5'에 위치한다.
일부 경우에, 예를 들어 진핵 숙주 세포 발현 시스템 내에서 글리코실화가 요망되는 경우에, 글리코실화 또는 수율을 개선하기 위해 다양한 프리서열 (presequence) 또는 프로서열 (prosequence)을 조작할 수 있다. 예를 들어, 특정 신호 펩티드의 펩티다제 절단 부위를 변경하거나, 프로서열을 첨가할 수 있고, 이는 또한 글리코실화에 영향을 미칠 수 있다. 최종 단백질 생성물은 -1 위치 (성숙 단백질의 제1 아미노산에 비해)에서 발현하기 쉬운 하나 이상의 추가의 아미노산을 가질 수 있고, 이는 완전히 제거되지 않을 수 있다. 예를 들어, 최종 단백질 생성물은 아미노-말단에 부착된, 펩티다제 절단 부위에서 발견되는 1 또는 2개의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 별법으로, 일부 효소 절단 부위의 사용은 효소가 성숙 폴리펩티드 내에서 상기 영역에서 절단시키면 목적하는 폴리펩티드의 약간 말단 절단된 형태를 생성시킬 수 있다.
본 발명의 발현 및 클로닝 벡터는 대개 숙주 유기체에 의해 인식되고 IL-17RA 항원 결합 단백질을 코딩하는 분자에 작동가능하게 연결된 프로모터를 함유할 것이다. 프로모터는 구조 유전자의 전사를 제어하는 구조 유전자의 개시 코돈에 대해 상류 (즉, 5')에 위치하는 비전사된 서열이다 (일반적으로 약 100 내지 1000 bp 내). 프로모터는 통상적으로 2개의 클래스 중 하나에 속한다: 유도가능 프로모터 및 구성적 프로모터. 유도가능 프로모터는 배양 조건의 일부 변화, 예를 들어 영양분의 존재 또는 부재 또는 온도 변화에 반응하여 그들의 제어하에 놓인 DNA의 증가된 수준의 전사를 개시시킨다. 이와 반대로, 구성적 프로모터는 그들이 작동가능하게 연결되는 유전자를 균일하게 전사시키고, 즉, 유전자 발현에 대한 제어가 거의 또는 전혀 없다. 다양한 잠재적인 숙주 세포에 의해 인식되는 매우 많은 프로모터가 잘 공지되어 있다. 적합한 프로모터는 제한 효소 소화에 의해 공급원 DNA로부터 프로모터를 제거하고 목적하는 프로모터 서열을 벡터 내로 삽입함으로써 본 발명의 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 DNA에 작동가능하게 연결된다.
효모 숙주에서 사용하기 위해 적합한 프로모터가 또한 당업계에 잘 공지되어 있다. 효모 인핸서가 효모 프로모터와 함께 유리하게 사용된다. 포유동물 숙주 세포에서 사용하기 위해 적합한 프로모터는 잘 공지되어 있고, 폴리오마 바이러스, 조류폭스 바이러스, 아데노바이러스 (예를 들어 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스 및 가장 바람직하게는 원숭이 바이러스 40 (SV40)과 같은 바이러스의 게놈으로부터 얻는 것을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 다른 적합한 포유동물 프로모터는 이종성 포유동물 프로모터, 예를 들어, 열-쇼크 프로모터 및 액틴 프로모터를 포함한다.
중요할 수 있는 추가의 프로모터는 SV40 조기 프로모터 (Benoist and Chambon, 1981, Nature 290:304-310); CMV 프로모터 (Thornsen et al., 1984, Proc. Natl. Acad. U.S.A. 81:659-663); 라우스 (Rous) 육종 바이러스의 3' 긴 말단 반복부 (long terminal repeat) 내에 함유된 프로모터 (Yamamoto et al., 1980, Cell 22:787-797); 헤르페스 티미딘 키나제 프로모터 (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78: 1444-1445); 메탈로티오닌 유전자로부터의 프로모터 및 조절 서열 (Prinster et al., 1982, Nature 296:39-42); 및 원핵세포 프로모터, 예를 들어 베타-락타마제 프로모터 (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75:3727-3731); 또는 tac 프로모터 (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:21-25)를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 조직 특이성을 보이고 트랜스제닉 동물 내에서 이용된 다음과 같은 동물 전사 제어 구역이 또한 중요하다: 췌장 선 세포에서 활성인 엘라스타제 I 유전자 제어 구역 ([Swift et al., 1984, Cell 38:639-646]; [Ornitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409]; [MacDonald, 1987, Hepatology 7:425-515]); 췌장 베타 세포에서 활성인 인슐린 유전자 제어 구역 (Hanahan, 1985, Nature 315: 115-122); 림프계 세포에서 활성인 면역글로불린 유전자 제어 구역 ([Grosschedl et al., 1984, Cell 38:647-658]; [Adames et al., 1985, Nature 318:533-538]; [Alexander et al., 1987, Mol. Cell Biol. 7: 1436-1444]); 고환, 유방, 림프계 및 비만 세포에서 활성인 마우스 유방 종양 바이러스 제어 구역 (Leder et al., 1986, Cell 45:485-495); 간에서 활성인 알부민 유전자 제어 구역 (Pinkert et al., 1987, Genes and Devel 1: 268-276); 간에서 활성인 알파-페토-단백질 유전자 제어 구역 ([Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol 5: 1639-1648]; [Hammer et al., 1987, Science 253:53-58]); 간에서 활성인 알파 1-항트립신 유전자 제어 구역 (Kelsey et al., 1987, Genes and Devel. 1: 161-171); 골수 세포에서 활성인 베타-글로빈 유전자 제어 구역 ([Mogram et al., 1985, Nature 315:338-340]; [Kollias et al., 1986, Cell 46:89-94]); 뇌 내의 희소돌기아교세포에서 활성인 미엘린 염기성 단백질 유전자 제어 구역 (Readhead et al., 1987, Cell 48:703-712); 골격근에서 활성인 미오신 경쇄-2 유전자 제어 구역 (Sani, 1985, Nature 314:283-286); 및 시상하부에서 활성인 생신선 자극 방출 호르몬 유전자 제어 구역 (Mason et al., 1986, Science 234: 1372-1378).
보다 고등 진핵세포에 의한 본 발명의 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 경쇄 또는 중쇄를 코딩하는 DNA의 전사를 증가시키기 위해 인핸서 서열이 벡터 내로 삽입될 수 있다. 인핸서는 프로모터에 대해 작용하여 전사를 증가시키는, 길이가 보통 약 10-300 bp인 DNA의 시스-작용 요소이다. 인핸서는 비교적 배향 및 위치 독립적이고, 전사 단위에 대해 5' 및 3' 위치 모두에서 발견된다. 포유동물 유전자 (예를 들어, 글로빈, 엘라스타제, 알부민, 알파-페토-단백질 및 인슐린)로부터 이용가능한 몇몇 인핸서 서열이 공지되어 있다. 그러나, 대개 바이러스로부터의 인핸서가 사용된다. 당업계에 공지된 SV40 인핸서, 사이토메갈로바이러스 조기 프로모터 인핸서, 폴리오마 인핸서 및 아데노바이러스 인핸서가 진핵세포 프로모터의 활성화를 위한 예시적인 향상 요소이다. 인핸서는 벡터 내에 코딩 서열에 대해 5' 또는 3'에 위치할 수 있지만, 대개 프로모터로부터 부위 5'에 위치한다. 적절한 천연 또는 이종성 신호 서열 (리더 서열 또는 신호 펩티드)을 코딩하는 서열이 항체의 세포외 분비를 촉진하기 위해 발현 벡터 내로 포함될 수 있다. 신호 펩티드 또는 리더의 선택은 항체가 생산되는 숙주 세포의 종류에 의존하고, 이종성 신호 서열은 천연 신호 서열을 대체할 수 있다. 포유동물 숙주 세포에서 기능적인 신호 펩티드의 예는 인터루킨-7 (IL-7)에 대한 신호 서열 (US 특허 4,965,195에 설명됨); 인터루킨-2 수용체에 대한 신호 서열 (문헌 [Cosman et al., 1984, Nature 312:768]에 설명됨); 인터루킨-4 수용체 신호 펩티드 (EP 특허 0 367 566에 설명됨); 타입 I 인터루킨-1 수용체 신호 펩티드 (미국 특허 4,968,607에 설명됨); 타입 II 인터루킨-1 수용체 신호 펩티드 (EP 특허 0 460 846에 설명됨)을 포함한다.
본 발명의 발현 벡터는 상업적으로 이용가능한 벡터와 같은 출발 벡터로부터 제작될 수 있다. 상기 벡터는 목적하는 인접 서열을 모두 함유할 수 있거나 함유하지 않을 수 있다. 본원에서 설명된 하나 이상의 인접 서열이 벡터 내에 이미 존재하지 않으면, 이들은 개별적으로 얻고 벡터 내로 라이게이팅될 수 있다. 각각의 인접 서열을 얻기 위해 사용되는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
벡터가 제작되고, IL-17RA 항원 결합 서열을 포함하는 경쇄, 중쇄, 또는 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 핵산 분자가 벡터의 적절한 부위 내로 삽입된 후, 완성된 벡터는 증폭 및/또는 폴리펩티드 발현을 위해 적합한 숙주 세포 내로 삽입될 수 있다. 선택된 숙주 세포 내로 IL-17RA 항원 결합 단백질을 위한 발현 벡터를 형질전환시키는 것은 형질감염, 감염, 인산칼슘 동시-침전, 전기천공, 마이크로주사, 리포펙션 (lipofection), DEAE-덱스트란 매개된 형질감염, 또는 다른 공지의 기술을 포함하는 잘 공지된 방법에 의해 달성할 수 있다. 선택된 방법은 부분적으로는 사용할 숙주 세포의 종류에 따라 결정될 것이다. 상기 방법 및 다른 적합한 방법은 당업자에게 잘 알려져 있고, 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., 2001, 상기 문헌]에 기재되어 있다.
숙주 세포는 적절한 조건 하에 배양될 때, IL-17RA 항원 결합 단백질을 합성하고, 이는 후속적으로 배양 배지 (숙주 세포가 이를 배지 내로 분비하는 경우)로부터 또는 그를 생산하는 숙주 세포 (분비되지 않는 경우)로부터 직접 수집될 수 있다. 적절한 숙주 세포의 선택은 다양한 인자, 예를 들어 목적하는 발현 수준, 활성을 위해 바람직하거나 필요한 폴리펩티드 변형 (예를 들어 글리코실화 또는 인산화) 및 생물학적 활성 분자로 접히는 용이성에 따를 것이다. 숙주 세포는 진핵세포 또는 원핵세포일 수 있다.
발현을 위한 숙주로서 이용가능한 포유동물 세포주는 당업계에 잘 공지되어 있고, 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (American Type Culture Collection; ATCC)으로부터 입수가능한 불멸화 세포주를 포함하고 이로 제한되지 않는, 당업계에 공지된 발현계에서 사용되는 임의의 세포주가 본 발명의 재조합 폴리펩티드를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, 숙주 세포는 목적하는 항-IL-17RA 항체 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 포함하는 재조합 발현 벡터로 형질전환된다. 사용될 수 있는 숙주 세포 중에는 원핵세포, 효모 또는 보다 고등 진핵세포가 있다. 원핵세포는 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예를 들어 이. 콜라이 (E. coli) 또는 간균을 포함한다. 보다 고등 진핵세포는 곤충 세포 및 포유동물 기원의 확립된 세포주를 포함한다. 적합한 포유동물 숙주 세포주의 예는 원숭이 신장 세포의 COS-7 주 (ATCC CRL 1651) (Gluzman et al., 1981, Cell 23:175), L 세포, 293 세포, C127 세포, 3T3 세포 (ATCC CCL 163), 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 그들의 유도체, 예를 들어 Veggie CHO 및 무혈청 배지에서 성장하는 관련 세포주 (Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28: 31), HeLa 세포, BHK (ATCC CRL 10) 세포주, 및 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포주 CVI로부터 유래된 CVI/EBNA 세포주 (ATCC CCL 70) ([McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821]에 설명된 바와 같이), 인간 배아 신장 세포, 예를 들어 293, 293 EBNA 또는 MSR 293, 인간 표피 A431 세포, 인간 Colo205 세포, 다른 형질전환된 영장류 세포주, 정상 이배수체 (diploid) 세포, 1차 조직, 1차 체외이식편의 시험관내 배양액으로부터 유래되는 세포주, HL-60, U937, HaK 또는 Jurkat 세포를 포함한다. 임의로, HepG2/3B, KB, NIH 3T3 또는 S49와 같은 포유동물 세포주는 예를 들어 다양한 신호 전달 또는 리포터 분에서 폴리펩티드를 사용하는 것이 바람직할 때 폴리펩티드의 발현을 위해 사용될 수 있다. 별법으로, 저등 진핵세포, 예를 들어 효모 또는 원핵세포, 예를 들어 세균에서 폴리펩티드를 생산하는 것이 가능하다. 적합한 효모는 사카로마이세스 세레비지아에 (Saccharomyces cerevisiae), 쉬조사카로마이세스 폼베 (Schizosaccharomyces pombe), 클루이베로마이세스 (Kluyveromyces) 균주, 칸디다 (Candida), 또는 이종성 폴리펩티드를 발현할 수 있는 임의의 효모 균주를 포함한다. 적합한 세균 균주는 에셔리키아 콜라이 (Escherichia coli), 바실러스 섭틸리스 (Bacillus subtilis), 살모넬라 티피무리움 (Salmonella typhimurium), 또는 이종성 폴리펩티드를 발현할 수 있는 임의의 세균 균주를 포함한다. 폴리펩티드가 효모 또는 세균 내에서 제조되면, 기능적 폴리펩티드를 얻기 위해 생산된 폴리펩티드를 예를 들어 적절한 부위의 인산화 또는 글리코실화에 의해 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 상기 공유 부착은 공지의 화학적 또는 효소적 방법을 이용하여 달성할 수 있다. 폴리펩티드는 또한 본 발명의 단리된 핵산을 하나 이상의 곤충 발현 벡터 내에서 적합한 제어 서열에 작동가능하게 연결시키고, 곤충 발현 시스템을 이용함으로써 생산될 수 있다. 바큘로바이러스/곤충 세포 발현 시스템을 위한 물질 및 방법은 예를 들어, 인비트로겐 (Invitrogen, 미국 캘리포니아주 샌디에고)로부터 키트 형태로 상업적으로 이용가능하고 (MaxBac(등록상표) 키트), 상기 방법은 문헌 ([Summers and Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555 (1987)] 및 [Luckow and Summers, Bio/Technology 6:47 (1988)]에 설명된 바와 같이 당업계에 잘 공지되어 있다. 본원에 개시된 핵산 구성체로부터 유래된 RNA를 이용하여 폴리펩티드를 생산하기 위해 무세포 번역 시스템을 또한 사용할 수 있다. 세균, 진균, 효모, 및 포유동물 세포 숙주에서 사용하기 위해 적절한 클로닝 및 발현 벡터는 문헌 [Pouwels et al., Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, New York, 1985]에 설명되어 있다. 바람직하게는 적어도 하나의 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결된, 본 발명의 단리된 핵산을 포함하는 숙주 세포가 "재조합 숙주 세포"이다.
특정 실시태양에서, 세포주는 어떠한 세포주가 높은 발현 수준을 갖고 IL-17RA 결합 특성을 갖는 항원 결합 단백질을 구성적으로 생산하는지 결정함으로써 선택될 수 있다. 다른 실시태양에서, 그 자체의 항체를 제조하지는 않지만 이종성 항체를 제조하고 분비할 수 있는 능력을 갖는 B 세포 계열로부터의 세포주가 선택될 수 있다.
중화 항체가 결합된 인간 IL-17RA 상의 도메인의 확인
실시예 14-17은 중화 L-17RA mAb가 결합된 인간 IL-17RA 상의 도메인을 규명하는 다양한 연구를 설명한다. 상기 도메인을 중화 결정인자로서 칭한다. 중화 결정인자는 돌연변이 될 때 본원에 개시된 중화 항체의 적어도 하나의 결합에 부정적인 영향을 미치는 IL-17RA의 인접한 스트레치 (stretch)이다. 중화 결정인자는 적어도 하나의 에피토프를 포함한다. 중화 결정인자는 1차, 2차, 3차 및/또는 4차 구조적 특징을 가질 수 있다. 중화 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17A 및/또는 IL-17F의 결합을 억제하여, IL-17RA 신호전달 및/또는 생물학적 활성을 억제하는 본원에 설명된 임의의 항체이다. 중화 항체의 예는 AML1/AMH1 (서열 27/서열 1), AML2/AMH2 (서열 28/서열 2), AML3/AMH3 (서열 29/서열 3), AML4/AMH4 (서열 30/서열 4), AML5/AMH5 (서열 31/서열 5), AML6/AMH6 (서열 32/서열 6), AML7/AMH7 (서열 33/서열 7), AML8/AMH8 (서열 34/서열 8), AML9/AMH9 (서열 35/서열 9), AML10/AMH10 (서열 36/서열 10), AML11/AMH11 (서열 37/서열 11), AML12/AMH12 (서열 38/서열 12), AML13/AMH13 (서열 39/서열 13), AML14/AMH14 (서열 40/서열 14), AML15/AMH15 (서열 41/서열 15), AML16/AMH16 (서열 42/서열 16), AML17/AMH17 (서열 43/서열 17), AML18/AMH18 (서열 44/서열 18), AML19/AMH19 (서열 45/서열 19), AML20/AMH20 (서열 46/서열 20), AML21/AMH21 (서열 47/서열 21), AML22/AMH22 (서열 48/서열 22), AML23/AMH23 (서열 49 또는 서열 50/서열 23), AML24/AMH24 (서열 51/서열 24), AML25/AMH25 (서열 52/서열 25), AML26/AMH26 (서열 53/서열 26) 및 그의 IL-17RA-결합 단편 및 그의 조합을 포함하는 항체를 포함한다.
중화 항체의 추가의 실시태양은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17A 및/또는 IL-17F가 IL-17RA, 또는 IL-17RA와 IL-17RC의 헤테로머 복합체에 결합하여 활성화시키는 것을 억제하는 항체를 포함한다. 추가의 실시태양은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17A/IL-17F 헤테로머가 IL-17RA, 또는 IL-17RA와 IL-17RC의 헤테로머 복합체에 결합하여 활성화시키는 것을 억제하는 항체를 포함한다. 추가의 실시태양은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17RA가 호모머 또는 헤테로머 기능적 수용체 복합체, 비제한적인 예를 들어 IL-17RA-IL-17RC 복합체를 형성하는 것을 부분적으로 또는 완전히 억제하는 항체를 포함한다. 추가의 실시태양은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17RA가 호모머 또는 헤테로머 기능적 수용체 복합체, 비제한적인 예를 들어 IL-17RA/IL-17RC 복합체를 형성하는 것을 부분적으로 또는 완전히 억제하고, 반드시 IL-17A 및/또는 IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F 헤테로머가 IL-17RA 또는 IL-17RA 헤테로머 수용체 복합체에 결합하는 것을 억제하지는 않는 항체를 포함한다.
중화 항체의 추가의 예는 AML1/AMH1 (서열 27/서열 1), AML2/AMH2 (서열 28/서열 2), AML3/AMH3 (서열 29/서열 3), AML4/AMH4 (서열 30/서열 4), AML5/AMH5 (서열 31/서열 5), AML6/AMH6 (서열 32/서열 6), AML7/AMH7 (서열 33/서열 7), AML8/AMH8 (서열 34/서열 8), AML9/AMH9 (서열 35/서열 9), AML10/AMH10 (서열 36/서열 10), AML11/AMH11 (서열 37/서열 11), AML12/AMH12 (서열 38/서열 12), AML13/AMH13 (서열 39/서열 13), AML14/AMH14 (서열 40/서열 14), AML15/AMH15 (서열 41/서열 15), AML16/AMH16 (서열 42/서열 16), AML17/AMH17 (서열 43/서열 17), AML18/AMH18 (서열 44/서열 18), AML19/AMH19 (서열 45/서열 19), AML20/AMH20 (서열 46/서열 20), AML21/AMH21 (서열 47/서열 21), AML22/AMH22 (서열 48/서열 22), AML23/AMH23 (서열 49 또는 서열 50/서열 23), AML24/AMH24 (서열 51/서열 24), AML25/AMH25 (서열 52/서열 25), AML26/AMH26 (서열 53/서열 26) 및 그의 IL-17RA-결합 단편 및 그의 조합을 포함하는 항체로부터의 적어도 하나의 CDR을 포함하는 항체를 포함한다 (표 1 참조).
도 16A 및 16B는 항체 A: AMH11/AML11, B: AMH4/AML4, C: AMH8/AML8, D: AMH7/AML7, E: AMH6/AML6, F: AMH10/AML10 및 G: AMH18/AML18이 인간 IL-17RA에 대한 결합을 위해 서로 경쟁하고, 하나의 규정된 군 (Bin 1)에 속한 것을 보여준다. 일반적으로, 항체 I: AMH22/AML22, J: AMH23/AML23, K: AMH14/AML14, L: AMH19/AML19, M: AMH12/AML12, N: AMH17/AML17, O: AMH16/AML16은 인간 IL-17RA에 대한 결합을 위해 서로 경쟁하고, 그 결과 상이한 군 (Bin 3)에 속하였다. 일반적으로, Bin 1의 항체는 Bin 3의 항체와 경쟁하지 않았다. 항체 H: AMH1/AML1은 그의 경쟁 패턴에 있어서 특유하였고, Bin 2를 형성하였지만, Bin 3에 가장 유사하다. 항체 P: AMH26/AML26은 Bin 4를 형성하였고, 임의의 다른 항체와의 교차-경쟁을 거의 보이지 않았고, 이는 상기 항체에 특유한 중화 결정인자를 제안한다. 항체 Q: AMH21/AML21 및 R: AMH20/AML20은 개별적으로 특유한 경쟁 패턴을 보였지만, Bin 3 항체와 상당한 유사성을 가졌고, 각각 Bin 5 및 6을 형성한다. 상기 방법으로 상이한 중화 결정인자에 대한 항체 결합의 군을 확인하였고, 교차-경쟁 항체의 아속 내의 몇몇 종의 증거를 제공한다.
실시예 16은 인간 IL-17RA 상의 중화 결정인자를 결정하기 위한 인간/마우스 IL-17RA 키메라 단백질의 사용을 설명한다. 도 19는 중화 IL-17RA 항체의 결합에 영향을 미치는 구역에 기초하여 적어도 3개의 중화 결정인자, 즉, 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 75-96에 걸치는 도메인 B, 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 128-154에 걸치는 도메인 C, 및 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 176-197에 걸치는 도메인 D가 확인되었음을 보여준다. 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 75-96에 걸치는 도메인 B는 중화 항체 AMH1/AML1 및 AMH23/AML23의 결합에 부정적인 영향을 미쳤다. 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 128-154에 걸치는 도메인 C는 중화 항체 AMH22/AML22 및 AMH23/AML23의 결합에 부정적인 영향을 미쳤다. 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 176-197에 걸치는 도메인 D는 중화 항체 AMH1/AML1, AMH22/AML22, AMH14/AML14, AMH19/AML19, AMH23/AML23, AMH21/AML21 및 AMH20/AML20의 결합에 부정적인 영향을 미쳤다. 따라서, 도메인 B, C 및 D는 중화 결정인자로서 간주된다.
실시예 17은 IL-17RA 중화 항체가 결합된 인간 IL-17R 상의 도메인을 추가로 규명하기 위해 아르기닌 스캔 기술의 사용을 설명한다. 아르기닌 스캔, 비닝, 및 키메라 데이타의 요약을 도 22에 제시한다. 아르기닌 스캔 방법으로 몇몇 중화 결정인자를 확인하였다: 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 220-284에 걸치는 도메인에 결합된 AMH18/AML18; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 잔기 152에 집중된 도메인에 결합된 AMH1/AML1; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 152-198에 걸치는 도메인에 결합된 AMH22/AML22; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 152-297에 걸치는 도메인에 결합된 AMH14/AML14; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 152-186에 걸치는 도메인에 결합된 AMH19/AML19; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 97-297에 걸치는 도메인에 결합된 AMH23/AML23; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 138-270에 걸치는 도메인에 결합된 AMH26/AML26; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 113-198에 걸치는 도메인에 결합된 AMH21/AML21; 및 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 152-270에 걸치는 도메인에 결합된 AMH20/AML20. 도 22에 도시된 모든 잔기는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 중화 인간 모노클로날 항체를 유의하게 감소시키거나 본질적으로 제거하는 것으로 나타났다.
실시태양은 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, 결합을 위해 임의의 하나의 항체 AMH3/AML3, AMH20/AML20, AMH22/AML22, AMH23/AML23, AMH14/AML14, AMH21/AML21, AMH19/AML19, AMH12/AML12, AMH17/AML17 또는 AMH16/AML16, 또는 그 내부의 임의의 하위세트와 경쟁하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다.
실시태양은 IL-17R에 특이적으로 결합하고, 결합을 위해 임의의 하나의 항체 AMH22/AML22, AMH23/AML23, AMH14/AML14, AMH19/AML19, AMH12/AML12, AMH17/AML17 또는 AMH16/AML16, 또는 그 내부의 임의의 하위세트와 경쟁하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다.
실시태양은 서열 431의 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하지만, 서열 434로 이루어지는 키메라 폴리펩티드에 특이적으로 결합하지 않는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 서열 431의 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하지만, 서열 435로 이루어지는 키메라 폴리펩티드에 특이적으로 결합하지 않는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 서열 431의 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하지만, 서열 436으로 이루어지는 키메라 폴리펩티드에 특이적으로 결합하지 않는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다.
실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 75-96을 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 128-154를 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 176-197을 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 152-297을 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 220-284를 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 152-198을 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 152-186을 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 97-297을 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 138-270을 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 113-198을 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 152-270을 포함하는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다.
추가의 실시태양은 서열 431의 인간 IL-17RA에 결합하지만, 서열 431의 E97R, E113R, S115R, H138R, D152R, D154R, E156R, K166R, Q176R, S177R, D184R, E186R, S198R, H215R, S220R, T228R, T235R, E241R, H243R, L270R, Q284R, H297R 중 임의의 하나에서 아미노산이 아르기닌으로 치환된 상기 IL-17RA에 결합하지 않는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 서열 431의 인간 IL-17RA에 결합하지만, 서열 431의 D152R, D154R, E156R, D184R, E186R, H297R 중 임의의 하나에서 아미노산이 아르기닌으로 치환된 상기 IL-17RA에 결합하지 않는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 서열 431의 인간 IL-17RA에 결합하지만, 서열 431의 D152R에서 아미노산이 아르기닌으로 치환된 상기 IL-17RA에 결합하지 않는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다.
추가의 실시태양은 서열 431의 아미노산 D152, D154, E156, D184, E186, H297 중 임의의 하나에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 서열 431의 D152, D154, E156, D184, E186, H297로 이루어지는 군 중에서 선택되는 적어도 2개의 아미노산에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 서열 431의 D152, D154, E156, D184, E186, H297로 이루어지는 군 중에서 선택되는 적어도 3개의 아미노산에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 서열 431의 D152, D154, E156, D184, E186, H297로 이루어지는 군 중에서 선택되는 적어도 4개의 아미노산에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 서열 431의 D152, D154, E156, D184, E186, H297로 이루어지는 군 중에서 선택되는 적어도 5개의 아미노산에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다. 실시태양은 서열 431의 아미노산 D152, D154, E156, D184, E186, H297에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편을 포함한다.
본 발명의 측면들은 다음과 같은 예시적인 실시태양을 포함하고 이로 제한되지 않는 다양한 실시태양을 포함한다:
실시태양 101: IL-17RA에 특이적으로 결합하고, 결합을 위해
A. a. AML2, 3, 5, 9, 10, 12, 14-17 및 19-25의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 28, 29, 31, 35, 36, 38, 40-43 및 45-53)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH2, 3, 5, 9, 10, 12, 14-17 및 19-25의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 2, 3, 5, 9, 10, 12, 14-17 및 19-25)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열;
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다);
B. a. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1 (서열 188), CDR2 (서열 189), CDR3 (서열 190) 및 중쇄 CDR1 (서열 110), CDR2 (서열 111), CDR3 (서열 112);
b. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1 (서열 191), CDR2 (서열 192), CDR3 (서열 193) 및 중쇄 CDR1 (서열 113), CDR2 (서열 114), CDR3 (서열 115);
c. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1 (서열 197), CDR2 (서열 198), CDR3 (서열 199) 및 중쇄 CDR1 (서열 119), CDR2 (서열 120), CDR3 (서열 121);
d. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133);
e. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1 (서열 212), CDR2 (서열 213), CDR3 (서열 214) 및 중쇄 CDR1 (서열 134), CDR2 (서열 135), CDR3 (서열 136);
f. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
g. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
h. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1 (서열 227), CDR2 (서열 228), CDR3 (서열 229) 및 중쇄 CDR1 (서열 149), CDR2 (서열 150), CDR3 (서열 151);
i. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
j. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
k. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
l. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166);
m. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169);
n. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172);
o. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
p. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
q. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1 (서열 257), CDR2 (서열 258), CDR3 (서열 259) 및 중쇄 CDR1 (서열 176), CDR2 (서열 177), CDR3 (서열 178);
r. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1 (서열 260), CDR2 (서열 261), CDR3 (서열 262) 및 중쇄 CDR1 (서열 179), CDR2 (서열 180), CDR3 (서열 181)를 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다); 및
C. a. AML2/AMH2의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 28/서열 2);
b. AML3/AMH3의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 29/서열 3);
c. AML5/AMH5의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 31/서열 5);
d. AML9/AMH9의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 35/서열 9);
e. AML10/AMH10의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 36/서열 10);
f. AML12/AMH12의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 38/서열 12);
g. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
h. AML15/AMH15의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 41/서열 15);
i. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 42/서열 16);
j. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 43/서열 17);
k. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
l. AML20/AMH20의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 46/서열 20);
m. AML21/AMH21의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 47/서열 21);
n. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22);
o. AML23/AMH23의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 49 또는 서열 50/서열 23);
p. AML24/AMH24의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 51/서열 24);
q. AML25/AMH25의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 52/서열 25)를 포함하는 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 항체와 경쟁하는 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편.
실시태양 102: 실시태양 101에 있어서, 상기 항체가
A. a. AML9, 14, 16, 17, 19-23v2 및 26의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 35, 40, 42, 43, 45-50 및 53)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH9, 14, 16, 17, 19-23 및 26의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 9, 14, 16, 17, 19-23 및 26)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열;
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다);
B. a. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133);
b. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
c. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
d. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
e. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
f. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166);
g. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169);
h. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172);
i. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
j. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
k. AML26/AMH26의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 53/서열 26)를 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다); 및
C. a. AML9/AMH9의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 35/서열 9);
b. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
c. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 42/서열 16);
d. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 43/서열 17);
e. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
f. AML20/AMH20의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 46/서열 20);
g. AML21/AMH21의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 47/서열 21);
h. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22);
i. AML23/AMH23의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 49 또는 서열 50/서열 23);
j. AML26/AMH26의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 53/서열 26)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 항체.
실시태양 103: 실시태양 101에 있어서, 상기 항체가
A. a. AML12, 14, 16, 17, 19 및 22의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 38, 40, 42, 43, 45 및 48)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH12, 14, 16, 17, 19 및 22의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 12, 14, 16, 17, 19 및 22)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열;
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다);
B. a. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
b. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
c. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
d. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
e. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
f. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다); 및
C. a. AML12/AMH12의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 38/서열 12);
b. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
c. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 42/서열 16);
d. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 43/서열 17);
e. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
f. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 항체.
실시태양 104: 실시태양 101에 있어서, 상기 항체가
A. a. 서열 40의 경쇄 가변 도메인 서열에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. 서열 14의 중쇄 가변 도메인 서열에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열;
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다);
B. 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다); 및
C. 서열 40의 경쇄 가변 도메인 및 서열 14의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 항체.
실시태양 105: 실시태양 101에 있어서, 상기 항체가 a. 인간화 항체; b. 키메라 항체; c. 재조합 항체; d. 단일쇄 항체; e. 디아바디; f. 트리아바디; g. 테트라바디; h. Fab 단편; i. F(ab')2 단편; j. IgD 항체; k. IgE 항체; l. IgM 항체; m. IgG1 항체; n. IgG2 항체; o. IgG3 항체; 및 p. IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 항체.
실시태양 106: 실시태양 105에 있어서, 상기 항체가, 인간 IL-17A가 인간 IL-17RA에 결합하는 것을 억제하는 항체.
실시태양 107: 실시태양 106에 있어서, 상기 항체가, 인간 IL-17A 및 IL-17F가 인간 IL-17RA에 결합하는 것을 억제하는 항체.
실시태양 108: 실시태양 106에 있어서, 상기 항체가, 인간 IL-17A 또는 IL-17F가 인간 IL-17RA에 결합하는 것을 억제하는 항체.
실시태양 109: a) 서열 431의 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하지만 서열 434로 이루어지는 키메라 폴리펩티드에는 특이적으로 결합하지 않는 모노클로날 항체;
b) 서열 431의 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하지만 서열 435로 이루어지는 키메라 폴리펩티드에는 특이적으로 결합하지 않는 모노클로날 항체; 및
c) 서열 431의 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하지만 서열 436으로 이루어지는 키메라 폴리펩티드에는 특이적으로 결합하지 않는 모노클로날 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편.
실시태양 110: a) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 75-96을 포함하는 폴리펩티드;
b) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 128-154를 포함하는 폴리펩티드;
c) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 176-197을 포함하는 폴리펩티드;
d) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 152-297을 포함하는 폴리펩티드;
e) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 220-284를 포함하는 폴리펩티드;
f) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 152-198을 포함하는 폴리펩티드;
g) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 152-186을 포함하는 폴리펩티드;
h) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 97-297을 포함하는 폴리펩티드;
i) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 138-270을 포함하는 폴리펩티드;
j) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 113-198을 포함하는 폴리펩티드; 및
k) 인간 IL-17RA의 서열 431의 아미노산 152-270을 포함하는 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 중화 결정인자에 특이적으로 결합하는 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편.
실시태양 111: 서열 431의 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하지만, 서열 431의 아미노산 치환 E97R, E113R, S115R, H138R, D152R, D154R, E156R, K166R, Q176R, S177R, D184R, E186R, S198R, H215R, S220R, T228R, T235R, E241R, H243R, L270R, Q284R 또는 H297R 중 임의의 하나를 갖는 상기 IL-17RA에는 특이적으로 결합하지 않는 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편.
실시태양 112: 실시태양 111에 있어서, 상기 항체가 서열 431의 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하지만, 서열 431의 아미노산 치환 D152R, D154R, E156R, D184R, E186R 또는 H297R 중 임의의 하나를 갖는 상기 IL-17RA에는 특이적으로 결합하지 않는 것인 항체.
실시태양 113: 실시태양 111에 있어서, 상기 항체가 서열 431의 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하지만, 서열 431의 위치 152에서 아스파르트산 잔기가 아르기닌으로 치환된 상기 IL-17RA에는 특이적으로 결합하지 않는 것인 항체.
실시태양 114: 실시태양 111에 있어서, 상기 항체가 서열 431의 아미노산 D152, D154, E156, D184, E186 또는 H297 중 임의의 하나에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 115: 실시태양 114에 있어서, 상기 항체가 서열 431의 아미노산 D152, D154, E156, D184, E186 또는 H297 중 적어도 2개에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 116: 실시태양 114에 있어서, 상기 항체가 서열 431의 아미노산 D152, D154, E156, D184, E186 또는 H297 중 적어도 3개에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 117: 실시태양 114에 있어서, 상기 항체가 서열 431의 아미노산 D152, D154, E156, D184, E186 또는 H297 중 적어도 4개에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 118: 실시태양 114에 있어서, 상기 항체가 서열 431의 아미노산 D152, D154, E156, D184, E186 또는 H297 중 적어도 5개에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 119: 실시태양 114에 있어서, 상기 항체가 서열 431의 아미노산 D152, D154, E156, D184, E186, H297에 의해 규정된 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
실시태양 120: IL-17RA에 특이적으로 결합하고, 결합을 위해
a. i. X1YGIS (식에서, X1은 R, S 및 G로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
b. i. WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (식에서, X1은 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 N, S 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 K 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 L 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
c. i. X1QLX2X3DY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y, V 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 F 및 L로 이루어지는 군 중에서 선택된다); 및
ii. X1QLX2FDY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y 및 V로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
d. i. RASQSX1X2X3X4LA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 I 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 S 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 N 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 A 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및
ii. RASQSX1SSNLA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
e. i. X1X2STRAX3 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 T 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및
ii. X1ASTRAX2 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및
f. i. QQYDX1WPLT (식에서, X1은 N, T 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 항체와 경쟁하는 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편.
실시태양 121: 실시태양 120에 있어서, 상기 항체가
a. X1YGIS (식에서, X1은 R, S 및 G로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 중쇄 CDR1 아미노산 서열;
b. WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (식에서, X1은 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 N, S 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 K 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 L 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 중쇄 CDR2 아미노산 서열;
c. X1QLX2FDY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y 및 V로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 중쇄 CDR3 아미노산 서열;
d. RASQSX1SSNLA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 경쇄 CDR1 아미노산 서열;
e. X1ASTRAX2 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 경쇄 CDR2 아미노산 서열; 및
f. QQYDX1WPLT (식에서, X1은 N, T 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)를 포함하는 경쇄 CDR3 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
실시태양 122: 실시태양 120에 있어서, 상기 항체가 a. 인간화 항체; b. 키메라 항체; c. 재조합 항체; d. 단일쇄 항체; e. 디아바디; f. 트리아바디; g. 테트라바디; h. Fab 단편; i. F(ab')2 단편; j. IgD 항체; k. IgE 항체; l. IgM 항체; m. IgG1 항체; n. IgG2 항체; o. IgG3 항체; 및 p. IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 항체.
실시태양 123: 실시태양 122에 있어서, 상기 항체가, 인간 IL-17A가 인간 IL-17RA에 결합하는 것을 억제하는 것인 항체.
실시태양 124: 실시태양 122에 있어서, 상기 항체가, 인간 IL-17A 및 IL-17F가 인간 IL-17RA에 결합하는 것을 억제하는 것인 항체.
실시태양 125: 실시태양 122에 있어서, 상기 항체가, 인간 IL-17A 또는 IL-17F가 인간 IL-17RA에 결합하는 것을 억제하는 것인 항체.
진단 및 치료 목적을 위한 IL-17RA 항원 결합 단백질의 용도
본 발명의 IL-17RA 항원 결합 단백질은 진단적 분석, 예를 들어, 조직 또는 세포 내에서 발현된 IL-17RA를 검출하고/하거나 정량하기 위해 결합 분석에서 사용될 수 있다. IL-17RA 항원 결합 단백질은 질병에 있어서 IL-17RA의 역할을 더욱 조사하기 위한 연구에서 사용될 수 있다. IL-17RA 항원 결합 단백질은 호모머 및/또는 헤테로머 수용체 복합체를 형성하는데 있어서 IL-17RA의 역할 및 질병에 있어서 상기 복합체의 역할을 더욱 조사하기 위해 사용될 수 있다. IL-17RA 항원 결합 단백질은 호모머 및/또는 헤테로머 IL-17 리간드 복합체에 대한 IL-17RA 활성화의 역할을 더욱 조사하기 위해 사용될 수 있다. IL-17RA 항원 결합 단백질은 호모머 및/또는 헤테로머 IL-17 리간드 복합체에 대한 IL-17RA 활성화의 역할 및 상기 호모머 및/또는 헤테로머 IL-17 리간드 복합체가 질병에 관련되는 방식을 더욱 조사하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 IL-17RA 항원 결합 단백질은 IL-17A 및/또는 IL-17F 활성과 연관된 질병 또는 병태의 예방 또는 치료를 위해 사용될 수 있다. IL-17A 및/또는 IL-17F과 연관된 질병 또는 병태는 환자에서 그의 발병이 IL-17A 및/또는 IL-17F와 IL-17RA의 상호작용에 의해 유발되거나 악화되는 임의의 질병, 병태 또는 병리학을 의미한다. 질병, 병태 또는 병리학의 중증도는 또한 IL-17A 및/또는 IL-17F와 IL-17RA 또는 IL-17RA 및 IL-17RC를 포함하는 이종성 복합체와의 상호작용을 조정함으로써 증가 또는 감소될 수 있다.
IL-17RA에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항원 결합 단백질은 그를 필요로 하는 환자에서 IL-17RA 매개 질병의 치료에 사용될 수 있다. 본 명세서 전체에서 설명된 IL-17RA 항원 결합 단백질의 모든 측면은 본원에 기재된 다양한 병태 및 질병의 치료용 의약의 제조에서 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 IL-17RA 항원 결합 단백질은 IL-17RA가 그의 리간드, 예를 들어, IL-17A 및/또는 IL-17F, 또는 IL-17RA 또는 IL-17RA 및 IL-17RC를 포함하는 이종성 복합체에 결합하는 임의의 다른 IL-17 리간드 패밀리 멤버와 복합체를 형성하는 것을 억제하여, 세포 또는 조직에서 IL-17RA의 생물학적 활성을 조정하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, IL-17RA에 결합하는 항원 결합 단백질은 다른 결합 화합물과의 상호작용을 조정하고/하거나 억제할 수 있고, 따라서 IL-17RA 매개 질병을 개선하는데 있어서 치료 용도를 가질 수 있다. 특정 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질은 IL-17A 및/또는 IL-17F가 IL-17RA에 결합하는 것을 억제할 수 있고, 이는 IL-17RA-유도된 신호 전달 케스케이드의 붕괴를 야기할 수 있다.
증가된 수준의 IL-17A 및/또는 질병 발병기전에 있어서 IL-17A 매개 신호의 관련은 다양한 병태 및 질병에서 입증되었다 ([Kolls and Linden, 2004, 상기 문헌]; [Miossec, 2003, P. Arthritis Rheum. 48:594-601]; WO2005/063290; [Cannetti et al., 2003, J. Immunol. 171:1009-1015]; [Charles et al., 1999, J. Immunol. 163:1521-1528]; [Cunnane et al., 2000, Online J. Rheumatol. 27:58-63]; [Yoshimoto, 1998, J. Immunol. 161:3400-3407], WO2005/063290, [Niederau, 1997, Online NLM], WO2004/002519, [Tsutsui et al., 2000, 상기 문헌], [Konishi et al., 2002, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:11340-11345], [Ziolkowska et al., 2000, 상기 문헌], [Chabaud, 2001, Arth & Rheumatism, 44:1293]). 따라서, IL-17RA는 본원에 기재된 상기 및 다른 질병 또는 병태의 병리학에 영향을 미치는 것으로 언급된다.
본원에 설명한 바와 같이, 대용 래트 항-마우스 IL-17RA 항체는 질병의 원인을 억제하고, 예방 및 치료적 설치류 콜라겐 유도된 관절염 모델 (아래 실시예 참조) 모두에서 뼈 및 연골 파괴를 감소시킨다. IL-17A/IL-17RA 경로를 중단시키는 효능의 추가의 증거로서, IL-17RA 낙아웃 마우스는 콜라겐-유도된 관절염에 저항성이고, IL-17RA 항체 치료는 TNFR 낙아웃 마우스에서 유도된 관절염에서 효과적이고, 이는 TNF 비의존적인 효과를 보여준다 (실시예 6 참조).
본원에 개시된 항원 결합 단백질을 사용하여 IL-17RA를 억제하는 것은 염증성 및 자가면역 질병, 특히 류마티스 관절염 (RA)에서 발견되는 염증 및 관절 파괴의 증상 및 병리학을 억제하는 신규하고 효과적인 메카니즘을 나타낸다. 전임상 데이타 및 RA 환자 조직으로부터의 데이타는 TNF 억제제 요법에 실패한 사람들에서 효능을 제공하고 TNF 억제제, IL-6 억제제 및 IL-1 억제제와 조합되어 추가의 잇점을 부여할 가능성을 제안한다.
본원에 설명된 항원 결합 단백질은 본원에 인용된 질병 및 질환의 치료 또는 예방을 위해 비제한적으로 모든 형태의 가용형 TNF 수용체, 예를 들어 에타네르셉트 (예를 들어 엔브렐 (ENBREL)(등록상표)) 및 모든 형태의 단량체성 또는 다량체성 p75 및/또는 p55 TNF 수용체 분자 및 그의 단편; 항-인간 TNF 항체, 비제한적인 예를 들어, 인플릭시맙 (예를 들어 레미케이드 (REMICADE)(등록상표)) 및 D2E7 (예를 들어 휴미라 (HUMIRA)(등록상표)) 등과 같은 임의의 하나 이상의 TNF 억제제와 조합되어 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 사용될 수 있다. 상기 TNF 억제제는 TNF의 생체내 합성 또는 세포외 방출을 차단하는 화합물 및 단백질을 포함한다. 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 다음 TNF 억제제와 조합되어 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 사용되는 IL-17RA 항원 결합 단백질의 용도에 관한 것이다: TNF 결합 단백질 (본원에 정의한 바와 같은 가용형 TNF 수용체 타입-I 및 가용형 TNF 수용체 타입-II ("sTNFR")), 항-TNF 항체, 과립구 콜로니 자극 인자; 탈리도마이드; BN 50730; 테니답; E 5531; 티아파판트 PCA 4248; 니메술리드; 파나비르; 롤리프람; RP 73401; 펩티드 T; MDL 201,449A; (1R,3S)-시스-1-[9-(2,6-디아미노푸리닐)]-3-히드록시-4-시클로펜텐 염산염; (1R,3R)-트랜스-1-(9-(2,6-디아미노)퓨린]-3-아세톡시시클로펜탄; (1R,3R)-트랜스-1-[9-아데닐]-3-아지도시클로펜탄 염산염 및 (1R,3R)-트랜스-1-(6-히드록시-푸린-9-일)-3-아지도시클로-펜탄. TNF 결합 단백질은 당업계에 개시되어 있다 (EP 308 378, EP 422 339, GB 2 218 101, EP 393 438, WO 90/13575, EP 398 327, EP 412 486, WO 91/03553, EP 418 014, JP 127,800/1991, EP 433 900, 미국 특허 5,136,021, GB 2 246 569, EP 464 533, WO 92/01002, WO 92/13095, WO 92/16221, EP 512 528, EP 526 905, WO 93/07863, EP 568 928, WO 93/21946, WO 93/19777, EP 417 563, WO 94/06476 및 PCT 국제 특허 출원 PCT/US97/12244).
예를 들어, EP 393 438 및 EP 422 339에서는 가용형 TNF 수용체 타입 I (또한 "sTNFR-I" 또는 "3O kDa TNF 억제제"로도 알려짐) 및 가용형 TNF 수용체 타입 II (또한 "sTNFR-II" 또는 "4O kDa TNF 억제제"로도 알려짐) ("sTNFR"로 총칭함) 및 그의 변형된 형태 (예를 들어, 단편, 기능적 유도체 및 변이체)의 아미노산 및 핵산을 교시하고 있다. EP 393 438 및 EP 422 339에서는 또한 억제제를 코딩하는 것을 담당하는 유전자를 단리하고, 적합한 벡터 및 세포 종류 내에서 유전자를 클로닝하고, 유전자를 발현시켜 억제제를 생산하는 방법을 개시하고 있다. 추가로, sTNFR-I 및 sTNFR-II의 다가 형태 (즉, 하나 초과의 활성 모이어티를 포함하는 분자)도 또한 개시되었다. 하나의 실시태양에서, 다가 형태는 적어도 하나의 TNF 억제제 및 다른 모이어티를 임의의 임상학상 허용되는 링커, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (WO 92/16221 및 WO 95/34326)과 펩티드 링커에 의해 (Neve et al. (1996), Cytokine, 8(5):365-370) 화학적으로 커플링시키고, 비오틴에 화학적으로 커플링시킨 후 아비딘에 결합시키고 (WO 91/03553), 마지막으로 키메라 항체 분자를 조합함으로써 (미국 특허 5,116,964, WO 89/09622, WO 91/16437 및 EP 315062) 제작할 수 있다.
항-TNF 항체는 MAK 195F Fab 항체 (Holler et al. (1993), 1st International Symposium on Cytokines in Bone Marrow Transplantation, 147); CDP 571 항-TNF 모노클로날 항체 (Rankin et al. (1995), British Journal of Rheumatology, 34:334-342); BAY X 1351 쥐 항-종양 괴사 인자 모노클로날 항체 (Kieft et al. (1995), 7th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, page 9); CenTNF cA2 항-TNF 모노클로날 항체 ([Elliott et al. (1994), Lancet, 344: 1125-1127] 및 [Elliott et al. (1994), Lancet, 344: 1105-1110])를 포함한다.
본원에 설명된 항원 결합 단백질은 모든 형태의 IL-1 억제제, 비제한적인 예를 들어 키네렛 (kineret) (예를 들어 ANAKINRA(등록상표))와 조합되어 사용될 수 있다. 인터루킨-1 수용체 길항제 (IL-1ra)는 인터루킨-1의 자연 억제제로서 작용하는 인간 단백질이다. 인터루킨-1 수용체 길항제, 및 그의 제조 방법과 사용 방법은 미국 특허 5,075,222; WO 91/08285; WO 91/17184; AU 9173636; WO 92/16221; WO 93/21946; WO 94/06457; WO 94/21275; FR 2706772; WO 94/21235; DE 4219626; WO 94/20517; WO 96/22793 및 WO 97/28828에 기재되어 있다. 단백질은 글리코실화된 및 비-글리코실화된 IL-1 수용체 길항제를 포함한다. 구체적으로, 3개의 바람직한 형태의 IL-1ra (IL-1raα, IL-1raβ 및 IL-1rax) (각각 동일한 DNA 코딩 서열 및 그의 변이체에 의해 코딩됨)가 미국 특허 5,075,222에 개시되고 설명되어 있다. IL-1 억제제, 특히 IL-1ras를 생산하기 위한 방법은 또한 5,075,222 특허에 개시되어 있다. 인터루킨-1 억제제의 추가의 클래스는 IL-1에 대한 세포성 수용체의 활성화를 특이적으로 방지할 수 있는 화합물을 포함한다. 상기 화합물은 IL-1 결합 단백질, 예를 들어 가용형 수용체 및 모노클로날 항체를 포함한다. 상기 화합물은 또한 수용체에 대한 모노클로날 항체를 포함한다. 인터루킨-1 억제제의 추가의 클래스는 IL-1의 생체내 합성 및/또는 세포외 방출을 차단하는 화합물 및 단백질을 포함한다. 상기 화합물은 IL-1 유전자의 전사 또는 IL-1 프리단백질의 처리에 영향을 미치는 물질을 포함한다.
본원에 설명된 항원 결합 단백질은 모든 형태의 CD28 억제제, 비제한적인 예를 들어 아바타셉트 (예를 들어 ORENCIA(등록상표))와 조합되어 사용될 수 있다.
본원에 설명된 항원 결합 단백질은 모든 형태의 IL-6 및/또는 IL-6 수용체 억제제, 비제한적인 예를 들어 토실리주맙 (예를 들어 ACTEMRA(등록상표))와 조합되어 사용될 수 있다.
항원 결합 단백질은 하나 이상의 시토킨, 림포킨, 조혈 인자(들) 및/또는 소염제와 조합되어 사용될 수 있다.
본원에 인용된 질병 및 질환의 치료는 본원에 제공된 하나 이상의 항원 결합 단백질을 사용하는 치료와 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 통증 및 염증의 제어를 위한 제1선 약물의 사용을 포함한다. 이들 약물은 비-스테로이드성 소염약 (NSAID)으로서 분류된다. 2차 치료는 코르티코스테로이드, 지효성 항류마티스약 (SAARD) 또는 질병 변형 (DM) 약물을 포함한다. 다음 화합물에 관한 정보는 문헌 [The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Sixteenth Edition, Merck, Sharp & Dohme Research Laboratories, Merck & Co., Rahway, N.J. (1992) and in Pharmaprojects, PJB Publications Ltd]에서 찾을 수 있다.
특정 실시태양에서, 본 발명은 본원에 인용된 질병 및 질환의 치료를 위한 항원 결합 단백질 및 임의의 하나 이상의 NSAID의 사용에 관한 것이다. NSAID는 적어도 부분적으로 프로스타글란딘 합성의 억제로 인해 그들의 소염 작용을 갖는다 (Goodman and Gilman in "The Pharmacological Basis of Therapeutics," MacMillan 7th Edition (1985)). NSAID는 적어도 9개의 군을 특징으로 한다: (1) 살리실산 유도체; (2) 프로피온산 유도체; (3) 아세트산 유도체; (4) 페남산 유도체; (5) 카르복실산 유도체; (6) 부티르산 유도체; (7) 옥시캄; (8) 피라졸 및 (9) 피라졸론.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 살리실산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 상기 살리실산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염에는 아세트아미노살롤, 알록시프린, 아스피린, 베노릴레이트, 브로모살리제닌, 아세틸살리실산칼슘, 삼살리실산마그네슘 콜린, 살리실산마그네슘, 콜린 살리실레이트, 디플루시날, 에테르살레이트, 펜도살, 겐티스산, 글리콜 살리실레이트, 이미다졸 살리실레이트, 라이신 아세틸살리실레이트, 메살라민, 모르폴린 살리실레이트, 1-나프틸 살리실레이트, 올살라진, 파르살미드, 페닐 아세틸살리실레이트, 페닐 살리실레이트, 살라세타미드, 살리실아미드 O-아세트산, 살살레이트, 살리실산나트륨 및 술파살라진이 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 살리실산 유도체도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
추가의 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 프로피온산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 프로피온산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염에는 알미노프로펜, 베녹사프로펜, 부클록스산, 카르프로펜, 덱신도프로펜, 페노프로펜, 플루녹사프로펜, 플루프로펜, 플루비프로펜, 푸르클로프로펜, 이부프로펜, 이부프로펜 알루미늄, 이부프록삼, 인도프로펜, 이소프로펜, 케토프로펜, 록소프로펜, 미로프로펜, 나프록센, 나프록센 나트륨, 옥사프로진, 피케토프로펜, 피메프로펜, 피르프로펜, 프라노프로펜, 프로티진산, 피리독시프로펜, 수프로펜, 티아프로펜산 및 티옥사프로펜이 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 프로피온산 유도체도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 아세트산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 아세트산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염에는 아세메타신, 알클로페낙, 암페낙, 부펙사막, 신메타신, 클로피락, 델메타신, 디클로페낙 칼륨, 디클로페낙 나트륨, 에토돌락, 펠비낙, 펜클로페낙, 펜클로락, 펜클로즈산, 펜티아작, 푸로페낙, 글루카메타신, 이부페낙, 인도메타신, 이소페졸락, 이속세팍, 로나졸락, 메티아진산, 옥사메타신, 옥스피낙, 피메타신, 프로글루메타신, 술린닥, 탈메타신, 티아라미드, 티오피낙, 톨메틴, 톨메틴 나트륨, 지도메타신 및 조메피락이 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 아세트산 유도체도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 페남산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 페남산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염에는 엔페남산, 에토페나메이트, 플루페남산, 이소닉신, 메클로페남산, 메클로페나메이트 나트륨, 메도페남산, 메페남산, 니플룸산, 탈니플루메이트, 테로페나메이트, 톨페남산 및 우페나메이트가 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 페남산 유도체도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
추가의 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 카르복실산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 사용될 수 있는 카르복실산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염에는 클리다낙, 디플루니살, 플루페니살, 이노리딘, 케토롤락 및 티노리딘이 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 카르복실산 유도체도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 부티르산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 부티르산 유도체, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염에는 부마디존, 부티부펜, 펜부펜, 및 젠부신이 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 부티르산 유도체도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 옥시캄, 그의 전구약물 에스테르 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 옥시캄, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염은 드록시캄, 에놀리캄, 이속시캄, 피록시캄, 수독시캄, 테녹시캄 및 4-히드록실-1,2-벤조티아진 1,1-디옥시드 4-(N-페닐)-카르복사미드가 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 옥시캄도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 피라졸, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 사용될 수 있는 피라졸, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염에는 디페나미졸 및 에피리졸이 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 피라졸도 도한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
추가의 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 피라졸론, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 사용될 수 있는 피라졸론, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염에는 아파존, 아자프로파존, 벤즈피페릴론, 페프라존, 모페부타존, 모라존, 옥시펜부타존, 페닐부타존, 피페부존, 프로필페나존, 라미페나존, 숙시부존 및 티아졸리노부타존이 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 피라잘론도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 임의의 하나 이상의 다음 NSAID와 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다: ε-아세트아미도카프로산, S-아데노실-메티오닌, 3-아미노-4-히드록시부티르산, 아믹세트린, 아니트라자펜, 안트라페닌, 벤다작, 벤다작 라이시네이트, 벤지다민, 베프로진, 브로페라몰, 부콜롬, 부페졸락, 시프로쿠아존, 클록시메이트, 다지다민, 데복사메트, 데토미딘, 디펜피라미드, 디펜파이라미드, 디피살라민, 디타졸, 에모르파존, 파네티졸 메실레이트, 펜플루미졸, 플록타페닌, 플루미졸, 플루닉신, 플루프로쿠아존, 포피르톨린, 포스포살, 구아이메살, 구아이아졸렌, 이소닉심, 레페타민 HCl, 레플루노미드, 로페미졸, 로티파졸, 라이신 클로닉시네이트, 메세클라존, 나부메톤, 닉틴돌, 니메술리드, 오르고테인, 오르파녹신, 옥사세프롤, 옥사파돌, 파라닐린, 페리속살, 페리속살 시트레이트, 피폭심, 피프록센, 피라졸락, 피르페니돈, 프로쿠아존, 프록사졸, 티엘라빈 B, 티플라미졸, 티메가딘, 톨렉틴, 톨파돌, 트립타미드 및 회사 코드 번호로 명명된 것, 예를 들어 480156S, AA861, AD1590, AFP802, AFP860, AI77B, AP504, AU8001, BPPC, BW540C, CHINOIN 127, CN100, EB382, EL508, F1044, FK-506, GV3658, ITF182, KCNTEI6090, KME4, LA2851, MR714, MR897, MY309, ONO3144, PR823, PV102, PV108, R830, RS2131, SCR152, SH440, SIR133, SPAS510, SQ27239, ST281, SY6001, TA60, TAI-901 (4-벤조일-1-인단카르복실산), TVX2706, U60257, UR2301 및 WY41770. NSAID와 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 NSAID도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 류마티스 질병, 이식편 대 숙주 질병 및 다발 경색증과 같은 급성 및 만성 염증을 포함하는 본원에 인용된 질병 및 질환의 치료를 위한 임의의 하나 이상의 코르티코스테로이드, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 코르티코스테로이드, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염은 히드로코르티손, 및 히드로코르티손으로부터 유래된 화합물, 예를 들어 21-아세톡시프레그네놀론, 알클로메라손, 알게스톤, 암시노니드, 베클로메타손, 베타메타손, 베타메타손 발레레이트, 부데소니드, 클로로프레드니손, 클로베타솔, 클로베타솔 프로피오네이트, 클로베타손, 클로베타손 부티레이트, 클로코르톨론, 클로프레드놀, 코르티코스테론, 코르티손, 코르티바졸, 데플라자콘, 데소니드, 데속시메라손, 덱사메타손, 디플로라손, 디플루코르톨론, 디플루프레드네이트, 에녹솔론, 플루아자코트, 플루클로로니드, 플루메타손, 플루메타손 피발레이트, 플루시놀론 아세토니드, 플루니솔리드, 플루오시놀리드, 플루오로시놀론 아세토니드, 플루오코르틴 부틸, 플루오코르톨론, 플루오로코르톨론 헥사노에이트, 디플루코르톨론 발레레이트, 플루오로메톨론, 플루페롤론 아세테이트, 플루프레드니덴 아세테이트, 플루프레드니솔론, 플루란데놀리드, 포르모코르탈, 할시노니드, 할로메타손, 할로프레돈 아세테이트, 히드로코르타메이트, 히드로코르티손, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손 부티레이트, 히드로코르티손 포스페이트, 히드로코르티손 21-나트륨 숙시네이트, 히드로코르티손 테부테이트, 마지프레돈, 메드리손, 메프레드니손, 메틸프레드니솔론, 모메타손 푸로에이트, 파라메타손, 프레드니카르베이트, 프레드니솔론, 프레드니솔론 21-디에드리아미노아세테이트, 프레드니솔론 인산나트륨, 프레드니솔론 숙신산나트륨, 프레드니솔론 21-m-술포벤조산나트륨, 프레드니솔론 21-스테아로글리콜산나트륨, 프레드니솔론 테부테이트, 프레드니솔론 21-트리메틸아세테이트, 프레드니손, 프레드니발, 프레드닐리덴, 프레드닐리덴 21-디에틸아미노아세테이트, 틱소코르톨, 트리암시놀론, 트리암시놀론 아세토니드, 트리암시놀론 베네토니드 및 트리암시놀론 헥사아세토니드가 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 코르티코스테로이드도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 류마티스 질병, 이식편 대 숙주 질병 및 다발 경색증과 같은 급성 및 만성 염증을 포함하는 본원에 인용된 질병 및 질환의 치료를 위한 임의의 하나 이상의 지효성 항류마티스약 (SAARD) 또는 질병 변형 항류마티스약 (DMARD), 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. SAARD 또는 DMARD, 그의 전구약물 에스테르 및 제약상 허용되는 염에는 알로쿠프레이드 나트륨, 아우라노핀, 아우로티오글루코스, 아우로티오글라카미드, 아자티오프린, 브레퀴나르 나트륨, 부실라민, 칼슘 3-아우로티오-2-프로판올-1-술포네이트, 클로람부실, 클로로퀸, 클로부자리트, 쿠프록솔린, 시클로-포스파미드, 시클로스포린, 다프손, 15-데옥시스퍼구알린, 디아세레인, 글루코사민, 금 염 (예를 들어, 시클로퀸 금 염, 금 나트륨 티오말레이트, 금 나트륨 티오술페이트), 히드록시클로로퀸, 히드록시클로로퀸 술페이트, 히드록시우레아, 케부존, 레바미솔, 로벤자리트, 멜리틴, 6-메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 미조리빈, 미코페놀레이트 모페틸, 미오랄, 질소 머스타드, D-페니실라민, 피리디놀 이미다졸, 예를 들어 SKNF86002 및 SB203580, 라파마이신, 티올, 티모포이에틴 및 빈크리스틴이 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 SAARD 또는 DMARD도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 급성 및 만성 염증을 포함하는 본원에 인용된 질병 및 질환의 치료를 위한 임의의 하나 이상의 COX2 억제제, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. COX2 억제제, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염의 예에는 예를 들어 셀레콕시브가 포함된다. 유사한 진통 및 소염 특성을 갖는 구조적으로 관련된 COX2 억제제도 또한 상기 군에 포함되는 것으로 의도된다. COX-2 선택적 억제제의 예는 에토리콕시브, 발데콕시브, 셀레콕시브, 리코펠론, 루미라콕시브, 로페콕시브 등을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
또다른 특정 실시태양에서, 본 발명은 급성 및 만성 염증을 포함하는 본원에 인용된 질병 및 질환의 치료를 위한 임의의 하나 이상의 항미생물제, 그의 전구약물 에스테르 또는 제약상 허용되는 염과 조합된 (치료전, 치료후 또는 동시 치료) 항원 결합 단백질의 사용에 관한 것이다. 항미생물제는 예를 들어, 넓은 종류의 페니실린, 세팔로스포린 및 다른 베타-락탐, 아미노글리코시드, 아졸, 퀴놀론, 마크롤리드, 리파마이신, 테트라사이클린, 술폰아미드, 린코사미드 및 폴리믹신을 포함한다. 페니실린은 페니실린 G, 페니실린 V, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플록사실린, 암피실린, 암피실린/술박탐, 아목시실린, 아목시실린/클라불라네이트, 헤타실린, 시클라실린, 바캄피실린, 카르베니실린, 카르베니실린 인다닐, 티카르실린, 티카르실린/클라불라네이트, 아즐로실린, 메즐로실린, 페페라실린 및 메실리남을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 세팔로스포린 및 다른 베타-락탐은 세팔로틴, 세파피린, 세팔렉신, 세프라딘, 세파졸린, 세파드록실, 세파클러, 세파만돌, 세포테탄, 세폭시틴, 세루록심, 세포니시드, 세포라딘, 세픽심, 세포탁심, 목사락탐, 세프티족심, 세트리악존, 세포페라존, 세프타지딤, 이미페넴 및 아제트레오남을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 아미노글리코시드는 스트렙토마이신, 겐타미신, 토브라마이신, 아미카신, 네틸미신, 카나마이신 및 네오마이신을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 아졸은 플루코나졸을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 퀴놀론은 날리딕산, 노르플록사신, 에녹사신, 시프로플록사신, 오플록사신, 스파르플록사신 및 테마플록사신을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 마크롤리드는 에리트로마이신, 스피라마이신 및 아지트로마이신을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 리파마이신은 리팜핀을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 테트라사이클린은 스피사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린, 데메클로사이클린, 데옥시사이클린, 구아메사이클린, 리메사이클린, 메클로사이클린, 메타사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 페니메피사이클린, 피파사이클린, 롤리테트라사이클린, 산사이클린, 세노시클린 및 테트라사이클린을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 술폰아미드는 술파닐아미드, 술파메톡사졸, 술파세타미드, 술파디아진, 술프이속사졸 및 코-트리마졸 (트리메토프림/술파메톡사졸)을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 린코사미드는 클린다마이신 및 린코마이신을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 폴리믹신 (폴리펩티드)은 폴리믹신 B 및 콜리스틴을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
시험관 내에서 IL-17A의 대부분의 언급된 활성은 간질 세포에 의한 시토킨 및 케모킨을 동원하는 중성구의 유도이다 (예를 들어 GM-CSF, IL6, IL8). 상기 활성은 TNF의 존재 하에 크게 향상된다 (Ruddy et al., 2004). 이와 유사하게, IL-17F의 생물학적 활성도 또한 TNF 동시 자극에 의해 향상된다. 특히, 류마티스 관절염과 연관된 연골 파괴 및 뼈 침식에서 IL-17A에 대한 병원성 역할에 관하여, IL-17A는 NO, MMP, PGE2 및 RANKL의 발현을 유도하고, 항원 특이적 T 및 B 세포 활성화에서 일정 역할을 한다 ([Kolls and Linden, 2004, 상기 문헌]; [Lubberts et al., 2005, Arthritis. Res. Ther. 7:29-37]). 따라서, 항원 결합 단백질은 IL-17A 및/또는 IL-17F/IL-17RA 경로 및 NO, MMP, PGE2 및/또는 RANKL의 후속적인 생산을 억제하고, NO, MMP, PGE2 및/또는 RANKL 및 본원에서 설명되는 다른 염증유발 매개체의 IL-17A 및/또는 IL-17F 상향조절과 연관되는 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
류마티스 관절염 환자의 윤활액 내의 상승된 수준의 IL-17A의 존재에 추가하여, 일련의 몇몇 증거는 IL-17A가 관절염에서 핵심적인 병원성 시토킨이라는 것을 제안한다. 먼저, 마우스의 관절에 IL-17A를 투여하면 콜라겐-유도된 관절염의 증상을 악화시킨다 (Lubberts et al., 2003, J. Immunol. 170:2655-2662). 두번째로, 가용형 IL-17RA.Fc는 인간 RA 윤활막 및 뼈 체외이식편 배양액에서 콜라겐 붕괴를 억제하고, 마우스에서 콜라겐 유도된 관절염의 증상을 약하게 한다 ([Chabaud and Miossec, 2001, Arthritis Rheum. 44:1293-1303], [Lubberts et al., 2001, J. Immunol 167:1004-1013]). IL-17F 및 IL-17R 사이의 저친화도 상호작용으로부터 예측되는 바와 같이, IL-17R-Fc는 IL-17F의 활성을 중화시키지 않고, 따라서 상기 효과는 IL-17A 길항작용에 특이적이다. 세번째로, IL-17A가 결핍된 마우스는 IL-1-유도된 관절염에 저항성이고, 콜라겐-유도된 관절염을 억류마티스 관절염에서, 성숙 IL-17A의 수준 상승은 환자 혈청 및 윤활액에서 증명되었다. 일부 연구에서, IL-17A 수준은 질병 활성도 및 질병 변형 치료에 대한 반응과 상호관련되는 것으로 나타났다. IL-17A의 극도로 증가한 혈청 수준은 전신 연소성 특발성 관절염 및 밀접하게 관련된 성인-발병 스틸 (Still) 질병에서 일관되게 측정되었다 (WO2005/063290; [Cannetti et al., 2003, J. Immunol. 171: 1009-1015]; [Charles et al., 1999, J. Immunol. 163: 1521-1528]; [Cunnane et al., 2000, Online J. Rheumatol. 27:58-63]; [Yoshimoto, 1998, J. Immunol. 161: 3400-3407]). 항원 결합 단백질은 IL-17A 및/또는 IL-17F/IL-17RA 활성을 억제하여 전신 연소성 특발성 관절염 및 성인-발병 스틸 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
다양한 다른 자가면역 질병이 질병에 걸린 조직 또는 혈청 내의 증가된 IL-17A 수준과 연관되었다. 이들은 전신 홍반성 루푸스, 아토피 피부염, 중증 근무력증, I형 당뇨병 및 사르코이드증을 포함한다. IL-17A는 또한 천식 및 GvHD에 관련될 수 있다. 본원에 교시된 항원 결합 단백질은 상기 질병에서 IL-17A 및/또는 IL-17F/IL-17RA 경로의 효과를 감소시키기 위해 사용될 수 있다.
항원 결합 단백질은 항원 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, IL-17RA 활성을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 항원 결합 단백질을 IL-17RA에 제공하는 것을 포함하는, IL-17A 및/또는 IL-17F의 IL-17RA에 대한 결합 및/또는 신호전달을 억제하는 방법에 관한 것이다. 특정 실시태양에서, 항원 결합 단백질은 IL-17RA에 대한 IL-17A 및 IL-17F의 결합 및/또는 신호전달을 억제한다. 추가의 실시태양에서, 항원 결합 단백질은 IL-17RA에 대한 IL-17A의 결합 및/또는 신호전달을 억제하지만, IL-17F는 억제하지 않는다. 다른 실시태양에서, 항원 결합 단백질은 IL-17RA에 대한 IL-17F의 결합 및/또는 신호전달을 억제하지만, IL-17A는 억제하지 않는다. 항원 결합 단백질은 항원 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, IL-17RA 활성과 연관된 예후, 증상 및/또는 병리학을 치료하는데 사용될 수 있다. 항원 결합 단백질은 항원 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 하나 이상의 염증성 시토킨, 케모킨, 매트릭스 메탈로프로테이나제 또는 IL-17RA 활성화와 연관된 다른 분자의 생산을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 항원 결합 단백질은 항원 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 비제한적으로 IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP (비제한적인 예를 들어 MMP3 및 MMP9), GROα, NO 및/또는 C-텔로펩티드 등과 같은 분자의 생산을 억제하는 방법에서 사용될 수 있다. 항원 결합 단백질은 염증유발 및 자가면역유발 면역 반응을 억제하고, IL-17A 및/또는 IL-17F/IL-17RA 경로의 활성과 연관된 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 제하였다 ([Nakae et al., 2003a, J. Immunol. 171:6173-6177]; [Nakae et al., 2003b, 상기 문헌]). 이들 데이타는 IL-17RA를 통한 IL-17A 신호전달이 관절염에서 염증 및 관절 손상의 중요한 매개체임을 나타낸다. 항원 결합 단백질은 IL-17A 및/또는 IL-17F/IL-17RA 활성을 억제하여 관절염에서 염증 및 관절 손상을 감소시키기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 측면들은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17RA가 호모머 또는 헤테로머 기능적 수용체 복합체, 비제한적인 예를 들어 IL-17RA/IL-17RC 복합체를 형성하는 것을 부분적으로 또는 완전히 억제하고, 반드시 IL-17A 및/또는 IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F 헤테로머가 IL-17RA 또는 IL-17RA 헤테로머 수용체 복합체에 결합하는 것을 억제하지는 않는 항체를 포함한다. 따라서, IL-17RC는 IL-17RA 없이는 신호전달할 수 없다는 사실 때문에 IL-17RC와 연결된 질병 상태는 또한 IL-17RA와 연관된다 (예를 들어, 문헌 [You, Z., et al., Cancer Res., 2006 Jan 1;66(1):175-83] 및 [You, Z., et al., Neoplasia, 2007 Jun;9(6):464-70] 참조).
IL-17RA 항원 결합 단백질은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, IL-17RA 연관 질병을 치료하는 방법에서 사용될 수 있다. IL-17RA 항원 결합 단백질은 염증, 자가면역 질병, 연골 염증 및/또는 뼈 파괴, 관절염, 류마티스 관절염, 연소성 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 소수관절형 연소성 류마티스 관절염, 다관절형 연소성 류마티스 관절염, 전신 발병 연소성 류마티스 관절염, 연소성 강직척추염, 연소성 장병성 관절염, 연소성 반응성 관절염, 연소성 레터 (Reter) 증후군, SEA 증후군 (혈청 반응 음성, 부착부병증, 관절병증 증후군), 연소성 피부근염, 연소성 건선성 관절염, 연소성 경피증, 연소성 전신 홍반성 루푸스, 연소성 혈관염, 소수관절형 류마티스 관절염, 다관절형 류마티스 관절염, 전신 발병 류마티스 관절염, 강직척추염, 장병성 관절염, 반응성 관절염, 레터 증후군, SEA 증후군 (혈청 반응 음성, 부착부병증, 관절병증 증후군), 피부근염, 건선성 관절염, 경피증, 전신 홍반성 루푸스, 혈관염, 근염, 다발성 근염, 피부근염, 골관절염, 결절성 다발동맥염, 베게너 (Wegener) 육아종증, 동맥염, 류마티스성 다발성 근육통, 사르코이드증, 경피증, 경화증, 원발성 담즙성 경화증, 경화성 담관염, 쇼그렌 (Sjogren) 증후군, 건선, 판상 건선, 적상 건선, 역위 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 피부염, 아토피 피부염, 동맥경화증, 루푸스, 스틸 질병, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론 (Crohn) 질병, 궤양 대장염, 복강 질병, 다발 경색증 (MS), 천식, COPD, 길랑-바레 (Guillain-Barre) 질병, I형 당뇨병, 그레이브스 (Graves) 질병, 애디슨 (Addison) 질병, 레이노 (Raynaud) 현상, 자가면역 간염, GVHD 등을 포함하고 이로 제한되지 않는 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 측면들은 다음과 같은 예시적인 실시태양을 포함하고 이로 제한되지 않는 다양한 실시태양을 포함한다:
실시태양 151: 환자에게 인간 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하고 IL-17A의 결합을 억제하는 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 환자에서 IL-17RA 활성화와 연관된 질병 상태를 치료하는 방법에 있어서, 상기 항체는
A. a. AML1-26의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 27-53)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH1-26의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 1-26)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열;
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다);
B. a. 항체 AM-1의 경쇄 CDR1 (서열 185), CDR2 (서열 186), CDR3 (서열 187) 및 중쇄 CDR1 (서열 107), CDR2 (서열 108), CDR3 (서열 109);
b. 항체 AM-2의 경쇄 CDR1 (서열 188), CDR2 (서열 189), CDR3 (서열 190) 및 중쇄 CDR1 (서열 110), CDR2 (서열 111), CDR3 (서열 112);
c. 항체 AM-3의 경쇄 CDR1 (서열 191), CDR2 (서열 192), CDR3 (서열 193) 및 중쇄 CDR1 (서열 113), CDR2 (서열 114), CDR3 (서열 115);
d. 항체 AM-4의 경쇄 CDR1 (서열 194), CDR2 (서열 195), CDR3 (서열 196) 및 중쇄 CDR1 (서열 116), CDR2 (서열 117), CDR3 (서열 118);
e. 항체 AM-5의 경쇄 CDR1 (서열 197), CDR2 (서열 198), CDR3 (서열 199) 및 중쇄 CDR1 (서열 119), CDR2 (서열 120), CDR3 (서열 121);
f. 항체 AM-6의 경쇄 CDR1 (서열 200), CDR2 (서열 201), CDR3 (서열 202) 및 중쇄 CDR1 (서열 122), CDR2 (서열 123), CDR3 (서열 124);
g. 항체 AM-7의 경쇄 CDR1 (서열 203), CDR2 (서열 204), CDR3 (서열 205) 및 중쇄 CDR1 (서열 125), CDR2 (서열 126), CDR3 (서열 127);
h. 항체 AM-8의 경쇄 CDR1 (서열 206), CDR2 (서열 207), CDR3 (서열 208) 및 중쇄 CDR1 (서열 128), CDR2 (서열 129), CDR3 (서열 130);
i. 항체 AM-9의 경쇄 CDR1 (서열 209), CDR2 (서열 210), CDR3 (서열 211) 및 중쇄 CDR1 (서열 131), CDR2 (서열 132), CDR3 (서열 133);
j. 항체 AM-10의 경쇄 CDR1 (서열 212), CDR2 (서열 213), CDR3 (서열 214) 및 중쇄 CDR1 (서열 134), CDR2 (서열 135), CDR3 (서열 136);
k. 항체 AM-11의 경쇄 CDR1 (서열 215), CDR2 (서열 216), CDR3 (서열 217) 및 중쇄 CDR1 (서열 137), CDR2 (서열 138), CDR3 (서열 139);
l. 항체 AM-12의 경쇄 CDR1 (서열 218), CDR2 (서열 219), CDR3 (서열 220) 및 중쇄 CDR1 (서열 140), CDR2 (서열 141), CDR3 (서열 142);
m. 항체 AM-13의 경쇄 CDR1 (서열 221), CDR2 (서열 222), CDR3 (서열 223) 및 중쇄 CDR1 (서열 143), CDR2 (서열 144), CDR3 (서열 145);
n. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
o. 항체 AM-15의 경쇄 CDR1 (서열 227), CDR2 (서열 228), CDR3 (서열 229) 및 중쇄 CDR1 (서열 149), CDR2 (서열 150), CDR3 (서열 151);
p. 항체 AM-16의 경쇄 CDR1 (서열 230), CDR2 (서열 231), CDR3 (서열 232) 및 중쇄 CDR1 (서열 152), CDR2 (서열 153), CDR3 (서열 154);
q. 항체 AM-17의 경쇄 CDR1 (서열 233), CDR2 (서열 234), CDR3 (서열 235) 및 중쇄 CDR1 (서열 155), CDR2 (서열 156), CDR3 (서열 157);
r. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
s. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
t. 항체 AM-20의 경쇄 CDR1 (서열 242), CDR2 (서열 243), CDR3 (서열 244) 및 중쇄 CDR1 (서열 164), CDR2 (서열 165), CDR3 (서열 166);
u. 항체 AM-21의 경쇄 CDR1 (서열 245), CDR2 (서열 246), CDR3 (서열 247) 및 중쇄 CDR1 (서열 167), CDR2 (서열 168), CDR3 (서열 169);
v. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172);
w. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 251), CDR2 (서열 252), CDR3 (서열 253) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
x. 항체 AM-23의 경쇄 CDR1 (서열 254), CDR2 (서열 255), CDR3 (서열 256) 및 중쇄 CDR1 (서열 173), CDR2 (서열 174), CDR3 (서열 175);
y. 항체 AM-24의 경쇄 CDR1 (서열 257), CDR2 (서열 258), CDR3 (서열 259) 및 중쇄 CDR1 (서열 176), CDR2 (서열 177), CDR3 (서열 178);
z. 항체 AM-25의 경쇄 CDR1 (서열 260), CDR2 (서열 261), CDR3 (서열 262) 및 중쇄 CDR1 (서열 179), CDR2 (서열 180), CDR3 (서열 181);
z.2. 항체 AM-26의 경쇄 CDR1 (서열 263), CDR2 (서열 264), CDR3 (서열 265) 및 중쇄 CDR1 (서열 182), CDR2 (서열 183), CDR3 (서열 184)를 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다); 및
C. a. AML1/AMH1의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 27/서열 1);
b. AML2/AMH2의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 28/서열 2);
c. AML3/AMH3의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 29/서열 3);
d. AML4/AMH4의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 30/서열 4);
e. AML5/AMH5의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 31/서열 5);
f. AML6/AMH6의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 32/서열 6);
g. AML7/AMH7의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 33/서열 7);
h. AML8/AMH8의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 34/서열 8);
i. AML9/AMH9의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 35/서열 9);
j. AML10/AMH10의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 36/서열 10);
k. AML11/AMH11의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 37/서열 11);
l. AML12/AMH12의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 38/서열 12);
m. AML13/AMH13의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 39/서열 13);
n. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
o. AML15/AMH15의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 41/서열 15);
p. AML16/AMH16의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 42/서열 16);
q. AML17/AMH17의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 43/서열 17);
r. AML18/AMH18의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 44/서열 18);
s. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
t. AML20/AMH20의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 46/서열 20);
u. AML21/AMH21의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 47/서열 21);
v. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22);
w. AML23/AMH23의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 49 또는 서열 50/서열 23);
x. AML24/AMH24의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 51/서열 24);
y. AML25/AMH25의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 52/서열 25);
z. AML26/AMH26의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 53/서열 26)를 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 152: 실시태양 151에 있어서, 상기 질병 상태가 염증, 자가면역 질병, 연골 염증 및/또는 뼈 파괴, 관절염, 류마티스 관절염, 연소성 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 소수관절형 연소성 류마티스 관절염, 다관절형 연소성 류마티스 관절염, 전신 발병 연소성 류마티스 관절염, 연소성 강직척추염, 연소성 장병성 관절염, 연소성 반응성 관절염, 연소성 레터 증후군, SEA 증후군 (혈청 반응 음성, 부착부병증, 관절병증 증후군), 연소성 피부근염, 연소성 건선성 관절염, 연소성 경피증, 연소성 전신 홍반성 루푸스, 연소성 혈관염, 소수관절형 류마티스 관절염, 다관절형 류마티스 관절염, 전신 발병 류마티스 관절염, 강직척추염, 장병성 관절염, 반응성 관절염, 레터 증후군, SEA 증후군 (혈청 반응 음성, 부착부병증, 관절병증 증후군), 피부근염, 건선성 관절염, 경피증, 혈관염, 근염, 다발성 근염, 피부근염, 골관절염, 결절성 다발동맥염, 베게너 육아종증, 동맥염, 류마티스성 다발성 근육통, 사르코이드증, 경피증, 경화증, 원발성 담즙성 경화증, 경화성 담관염, 쇼그렌 증후군, 건선, 판상 건선, 적상 건선, 역위 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 피부염, 아토피 피부염, 동맥경화증, 루푸스, 스틸 질병, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론 질병, 궤양 대장염, 복강 질병, 다발 경색증 (MS), 천식, COPD, 길랑-바레 질병, I형 당뇨병, 그레이브스 질병, 애디슨 질병, 레이노 현상, 자가면역 간염 및 이식편 대 숙주 질병 (GVHD)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 153: 실시태양 151에 있어서, 상기 대상에게 제약 조성물을 포함하는 제2 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시태양 154: 실시태양 153에 있어서, 상기 제2 제약 조성물이 TNF 억제제, 가용형 TNF 수용체, 에타네르셉트, 엔브렐(등록상표), 가용형 TNF 수용체 타입-I 및 가용형 TNF 수용체 타입-II, 단량체성 또는 다량체성 p75 및/또는 p55 TNF 수용체 분자 및 그의 단편, 항-TNF 항체, 인플릭시맙, 레미케이드(등록상표), D2E7 또는 휴미라 (HUMIRA)(등록상표), IL-1 억제제, IL-1 수용체 억제제, CD28 억제제, 비-스테로이드성 소염약 (NSAID), 지효성 항류마티스약 (SAARD) 및 질병 변형 항류마티스약 (DMARD)으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 155: 실시태양 151의 항체를 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 적어도 하나의 시토킨, 케모킨, 매트릭스 메탈로프로테이나제 또는 IL-17RA 활성화와 연관된 다른 분자의 생산을 억제하는 방법.
실시태양 156: 실시태양 155에 있어서, 상기 시토킨, 케모킨, 매트릭스 메탈로프로테이나제 또는 다른 분자가 IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP3, MMP9, GROα, NO 및 C-텔로펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 157: 대상에게 인간 IL-17 수용체 A에 특이적으로 결합하고 IL-17A 및 IL-17F의 결합을 억제하거나 IL-17A 또는 IL-17F의 결합을 억제하는 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상에서 IL-17RA 활성화와 연관된 질병 상태를 치료하는 방법.
실시태양 158: 실시태양 157에 있어서, 상기 항체가
A. a. AML14, 18, 19 및 22의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 40, 44, 45 및 48)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH14, 18, 19 및 22의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 14, 18, 19 및 22)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열;
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다);
B. a. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
b. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
c. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
d. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172)를 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다); 및
C. a. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
b. AML18/AMH18의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 44/서열 18);
c. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
d. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 159: 실시태양 157에 있어서, 상기 질병 상태가 실시태양 152의 질병 상태인 방법.
실시태양 160: 실시태양 157의 항체를 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 적어도 하나의 시토킨, 케모킨, 매트릭스 메탈로프로테이나제 또는 IL-17RA 활성화와 연관된 다른 분자의 생산을 억제하는 방법.
실시태양 161: 실시태양 160에 있어서, 상기 시토킨, 케모킨, 매트릭스 메탈로프로테이나제 또는 다른 분자가 IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP3, MMP9, GROα, NO 및 C-텔로펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 162: 환자에게
A. a. AML14, 18, 19 및 22의 경쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 40, 44, 45 및 48)에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. AMH14, 18, 19 및 22의 중쇄 가변 도메인 서열 (각각 서열 14, 18, 19 및 22)에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열;
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다);
B. a. 항체 AM-14의 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148);
b. 항체 AM-18의 경쇄 CDR1 (서열 236), CDR2 (서열 237), CDR3 (서열 238) 및 중쇄 CDR1 (서열 158), CDR2 (서열 159), CDR3 (서열 160);
c. 항체 AM-19의 경쇄 CDR1 (서열 239), CDR2 (서열 240), CDR3 (서열 241) 및 중쇄 CDR1 (서열 161), CDR2 (서열 162), CDR3 (서열 163);
d. 항체 AM-22의 경쇄 CDR1 (서열 248), CDR2 (서열 249), CDR3 (서열 250) 및 중쇄 CDR1 (서열 170), CDR2 (서열 171), CDR3 (서열 172)를 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다); 및
C. a. AML14/AMH14의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 40/서열 14);
b. AML18/AMH18의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 44/서열 18);
c. AML19/AMH19의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 45/서열 19);
d. AML22/AMH22의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 (서열 48/서열 22)를 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 환자에서 염증 및 자가면역 질병을 치료하는 방법.
실시태양 163: 실시태양 162에 있어서, 상기 염증 및 자가면역 질병이 관절염, 류마티스 관절염, 강직척추염, 건선성 관절염, 건선, 판상 건선, 피부염, 아토피 피부염, 전신 홍반성 루푸스, 염증성 장 질병, 크론 질병, 궤양 대장염, 복강 질병, 다발 경색증, 천식 및 만성 폐색 폐 질병으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 164: 실시태양 151에 있어서, 상기 항체가 a. 인간화 항체; b. 키메라 항체; c. 재조합 항체; d. 단일쇄 항체; e. 디아바디; f. 트리아바디; g. 테트라바디; h. Fab 단편; i. F(ab')2 단편; j. IgD 항체; k. IgE 항체; l. IgM 항체; m. IgG1 항체; n. IgG2 항체; o. IgG3 항체; 및 p. IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 165: 실시태양 158에 있어서, 상기 항체가 a. 인간화 항체; b. 키메라 항체; c. 재조합 항체; d. 단일쇄 항체; e. 디아바디; f. 트리아바디; g. 테트라바디; h. Fab 단편; i. F(ab')2 단편; j. IgD 항체; k. IgE 항체; l. IgM 항체; m. IgG1 항체; n. IgG2 항체; o. IgG3 항체; 및 p. IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 166: 실시태양 151에 있어서, 상기 항체가
A. a. 서열 40의 경쇄 가변 도메인 서열에 적어도 80% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열;
b. 서열 14의 중쇄 가변 도메인 서열에 적어도 80% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열;
c. (a)의 경쇄 가변 도메인 및 (b)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다);
B. 경쇄 CDR1 (서열 224), CDR2 (서열 225), CDR3 (서열 226) 및 중쇄 CDR1 (서열 146), CDR2 (서열 147), CDR3 (서열 148)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다); 및
C. 서열 40의 경쇄 가변 도메인 및 서열 14의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 IL-17RA-결합 단편 (여기서, 상기 항체는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합한다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 167: 실시태양 166에 있어서, 상기 질병 상태가 류마티스 관절염인 방법.
실시태양 168: 실시태양 166에 있어서, 상기 질병 상태가 건선인 방법.
실시태양 169: 실시태양 166에 있어서, 상기 질병 상태가 염증성 장 질병인 방법.
실시태양 170: 실시태양 166에 있어서, 상기 질병 상태가 천식인 방법.
실시태양 171: 실시태양 166에 있어서, 상기 항체가 서열 40의 경쇄 가변 도메인 및 서열 14의 중쇄 가변 도메인을 포함하고; 여기서 상기 항체가 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
실시태양 172: 실시태양 166에 있어서, 상기 항체가 a. 인간화 항체; b. 키메라 항체; c. 재조합 항체; d. 단일쇄 항체; e. 디아바디; f. 트리아바디; g. 테트라바디; h. Fab 단편; i. F(ab')2 단편; j. IgD 항체; k. IgE 항체; l. IgM 항체; m. IgG1 항체; n. IgG2 항체; o. IgG3 항체; 및 p. IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 173: 실시태양 171에 있어서, 상기 항체가 a. 인간화 항체; b. 키메라 항체; c. 재조합 항체; d. 단일쇄 항체; e. 디아바디; f. 트리아바디; g. 테트라바디; h. Fab 단편; i. F(ab')2 단편; j. IgD 항체; k. IgE 항체; l. IgM 항체; m. IgG1 항체; n. IgG2 항체; o. IgG3 항체; 및 p. IgG4 항체로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
실시태양 174: 실시태양 167에 있어서, 상기 항체가 서열 429의 경쇄 서열 및 서열 427의 중쇄 서열을 포함하는 것인 방법.
실시태양 175: 실시태양 168에 있어서, 상기 항체가 서열 429의 경쇄 서열 및 서열 427의 중쇄 서열을 포함하는 것인 방법.
상기한 방법은 또한 본 명세서의 다른 부분에서 설명된 바와 같이 제1 및 제2 의료 용도에 상당하는 방법을 포함하고 그에 대해 청구하는 것으로 이해된다.
만성 바이러스성 간염은 만성 C형 간염에 감염된 미국 및 유럽에서 약 1천만명을 포함하여 전세계에서 5억명이 넘는 사람에서 침범하고 있다. 상당한 비율의 만성 간염 환자는 진행형 간 섬유증 및/또는 간세포 암종을 발병한다. 바이러스성 간염 백신이 이용가능하고 개발중이지만, 감염된 개인에 대한 현재의 요법은 장기 과정의 항바이러스 약물과 인터페론-알파 (INF-α)의 조합에 의존한다. INF-α는 그의 입증된 항바이러스 면역 활성 및 섬유모세포에 대한 항증식 효과를 통해 바이러스성 간염을 치료하는데 유익한 것으로 생각되지만, 그의 사용의 지속 시간과 수준은 심각한 부작용 때문에 제한된다.
최근의 데이타는 INF-α가 Th17 세포에 대해 직접 세포자멸성일 수 있는 방식을 설명한다 (American Association for Immunologists, abstract no. 42.8, May 12-16, 2006, Boston). Th17 세포는 IL-23에 반응하여 IL-17A 및 IL-17F를 생산하는 것을 담당하는 CD4+ T-세포의 구별되는 하위세트이다 ([Harrington, et al., Nature Imm, 2005 vol. 6, no. 11, 1123-1132] 및 [Park, et al., Nature Imm, 2005 vol. 6, no. 11, 1133-1141]). 바이러스 또는 섬유모세포에 대한 INF-α의 직접 작용을 포함하지 않지만, Th17 세포에 대한 간접 작용을 포함하는 만성 바이러스성 간염에 있어서 INF-α에 대한 새로운 작용 메카니즘을 제안하는 것으로 생각된다. 또한, 최근에 종양 괴사 인자-베타 (TGF-β) 및/또는 IL-6 (예를 들어, [Kimera, A., et al., PNAS U.S.A., 2007 Jul 17;104(29):12099-104] 참조) (둘 모두 전섬유성 시토킨임)이 또한 IL-23 수용체 발현을 상향조절하여, IL-23에 대한 반응성을 부여함으로써 TH17 세포의 발달을 유도하는 것으로 밝혀졌다 (Mangan, et al., Nature, 2006 vol. 441 no. 11, 231-234). IL-23에 대한 반응성은 나이브 CD4+ T-세포의 TH17 세포로의 분화를 유도한다. 상기 언급한 바와 같이, TH17 세포는 IL-17A 및 IL-17F를 방출시키는 것을 담당하고, IL-17A는 많은 조직 및 장기에서 섬유모세포에 대한 다양한 자극 효과를 갖는 것으로 알려져 있다. 종합하면, IL-17RA - IL-17A/IL-17F 경로의 억제가 만성 바이러스성 간염의 진행성 섬유증에서 치료 이익을 제공할 수 있는 것으로 생각된다.
바이러스성 간염의 치료에서 IL-17RA - IL-17A/IL-17F 경로를 억제하는 추가의 잇점은 환자에게 제공되는 INF-α의 용량을 감소시키고, 그 결과 INF-α 요법과 연관된 유해한 부작용을 제한할 수 있다는 점이다. 바이러스성 간염의 치료에 있어서 IL-17RA - IL-17A/IL-17F 경로를 억제하는 추가의 잇점은 IL-17RA - IL-17A/IL-17F 길항제 요법 또는 아래에 보다 상세히 설명되는 다른 길항제와 조합되어 INF-α 요법의 상승적 치료 효과를 달성할 수 있는 가능성이다.
따라서, 본 발명의 측면들은 IL-17RA 및 IL-17A 및/또는 IL-17F 사이의 상호작용을 억제함으로써 바이러스성 간염과 연관된 병리학을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면들은 IL-17RA 및 IL-17A 및/또는 IL-17F 사이의 상호작용을 억제함으로써 섬유증을 억제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면들은 IL-17RA 및 IL-17A 및/또는 IL-17F 사이의 상호작용을 억제함으로써 바이러스성 간염과 연관된 섬유증을 치료하는 방법에 관한 것이다. IL-17RA - IL-17A/IL-17F 경로의 길항제는 IL-17RA 및 IL-17A 및/또는 IL-17F 사이의 상호작용을 억제하기 위해 사용될 수 있다. IL-17RA - IL-17A 경로의 길항제는 본원에 설명된 IL-17RA 항원 결합 단백질, 및 IL-17RA 단백질 (및 그의 생물학적 활성 단편 및 융합 단백질, 예를 들어 IL-17RA-Fc 융합 단백질), 및 IL-17A에 결합하여 IL-17A가 IL-17RA를 활성화시키는 것을 억제하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 생물학적 활성 단편, 및 IL-17F에 결합하여 IL-17F가 IL-17RA를 활성화시키는 것을 억제하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 생물학적 활성 단편을 포함한다.
추가의 측면들은 IL-23 - IL-23 수용체 (IL-23R) 경로를 길항함으로써 바이러스성 간염과 연관된 병리학을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면들은 IL-23 - IL-23R 경로를 길항함으로써 섬유증을 억제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면들은 IL-23 - IL-23R 경로를 길항함으로써 바이러스성 간염과 연관된 섬유증을 치료하는 방법에 관한 것이다. IL-23 - IL-23R 경로를 길항함으로써, TH17 세포의 IL-23-유도된 분화를 방지하고, 그에 의해 궁극적으로 순환 IL-17A 및 IL-17F의 양을 제한할 수 있고, 이는 바이러스성 간염과 연관된 병리학을 감소시킬 수 있다. IL-23 - IL-23R 경로에 대한 길항제는 IL-23에 결합하여 IL-23이 IL-23R을 활성화시키는 것을 차단하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 생물학적 활성 단편을 포함한다. IL-23 - IL-23R 경로에 대한 추가의 길항제는 IL-23R에 결합하여 IL-23이 IL-23R을 활성화시키는 것을 차단하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 생물학적 활성 단편을 포함한다. IL-23 - IL-23R 경로에 대한 추가의 길항제는 IL-23에 결합하여 IL-23이 IL-23R을 활성화시키는 것을 차단하는 IL-23R 단백질 및 그의 생물학적 활성 단편 및 융합 단백질, 예를 들어 IL-23R-Fc 융합 단백질을 포함한다.
추가의 측면들은 TGF-β - TGF-βRI/TGF-βRII 경로를 길항함으로써 바이러스성 간염과 연관된 병리학을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면들은 TGF-β - TGF-βRI/TGF-βRII 경로를 길항함으로써 섬유증을 억제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면들은 TGF-β - TGF-βRI/TGF-βRII 경로를 길항함으로써 바이러스성 간염과 연관된 섬유증을 치료하는 방법에 관한 것이다. TGF-β - TGF-βRI/TGF-βRII 경로를 길항함으로써, TH17 세포의 TGF-β-유도된 발달을 방지하고, 그에 의해 궁극적으로 순환 IL-17A 및 IL-17F의 양을 제한할 수 있고, 이는 바이러스성 간염과 연관된 병리학을 감소시킬 수 있다. TGF-β - TGF-βRI/TGF-βRII 경로에 대한 길항제는 TGF-β에 결합하여 TGF-β가 TGF-βRI 및/또는 TGF-βRII를 활성화시키는 것을 차단하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 생물학적 활성 단편을 포함한다. TGF-β - TGF-βRI/TGF-βRII 경로에 대한 추가의 길항제는 TGF-βRI 또는 TGF-βRII에 결합하여 TGF-β가 TGF-βRI 또는 TGF-βRII를 활성화시키는 것을 차단하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 생물학적 활성 단편을 포함한다.
추가의 측면들은 IL-6 - IL-6R 경로를 길항함으로써 바이러스성 간염과 연관된 병리학을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면들은 IL-6 - IL-6R 경로를 길항함으로써 섬유증을 억제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면들은 IL-6 - IL-6R 경로를 길항함으로써 바이러스성 간염과 연관된 섬유증을 치료하는 방법에 관한 것이다. IL-6 - IL-6R 경로를 길항함으로써, 바이러스성 간염과 연관된 병리학을 감소시킬 수 있다. IL-6 - IL-6R 경로에 대한 길항제는 IL-6에 결합하여 IL-6이 IL-6R을 활성화시키는 것을 차단하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 생물학적 활성 단편을 포함한다. IL-6 - IL-6R 경로에 대한 추가의 길항제는 IL-6R에 결합하여 IL-6이 IL-6R을 활성화시키는 것을 차단하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 생물학적 활성 단편을 포함한다.
추가의 측면들은 서로와의 조합으로 및 당업계에 인정되는 간염 요법, 비제한적인 예를 들어 인터페론, 특히 INF-α와의 조합으로 상기 언급된 IL-17RA - IL-17A/IL-17F 경로, IL-23 - IL-23R 경로, TGF-β - TGF-βRI/TGF-βRII 경로, 및/또는 IL-6 - IL-6R 경로의 길항제를 사용하는 조합 요법을 포함한다. 상기 조합의 모든 변경이 고려된다.
추가의 측면들은 서로와의 조합으로 및 당업계에 인정되는 간염 요법, 비제한적인 예를 들어 인터페론, 특히 INF-α 및 항바이러스제, 비제한적인 예를 들어 아데포비르 디피복실, 데옥시아데노신 모노포스페이트의 비환식 유사체 (아데포비르, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트), 데옥시시티딘 유사체 2'-데옥시-3'-티아시티딘의 (-) 에난티오머 (라미부딘), 탄소환 데옥시구아노신 유사체 (엔테카비르), L-뉴클레오시드 (β-L-2'-데옥시티미딘, β-L-2'-데옥시시티딘 및 β-L-2'-데옥시아데노신), [(-)-β-2',3'-디데옥시-5-플루오로-3'-티아시티딘] (엠트리시타빈), 1-β-2,6-디아미노퓨린 디옥살란 (DAPD, 암독소비르), 2'-플루오로-5-메틸-β-L-아라비노푸라노실유리딘 (L-FMAU, 클레부딘), 팜시클로비르 및/또는 펜시클로비르와의 조합으로 상기 언급한 IL-17RA - IL-17A/IL-17F 경로, IL-23 - IL-23R 경로, TGF-β - TGF-βRI/TGF-βRII 경로, 및/또는 IL-6 - IL-6R 경로의 길항제를 사용하는 조합 요법을 포함한다. 상기 조합의 모든 변경이 고려된다.
진단 방법
본 발명의 항원 결합 단백질은 IL-17A 또는 IL-17RA와 연관된 질병 및/또는 병태를 검출하거나, 진단하거나, 모니터링하기 위해 진단 목적으로 사용될 수 있다. 본 발명은 당업자에게 공지된 전통적인 면역조직학적 방법을 사용하는 샘플 내 IL-17RA의 존재의 검출을 제공한다 (예를 들어, [Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, vol 15 (Eds R.H. Burdon and P.H. van Knippenberg, Elsevier, Amsterdam)]; [Zola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc.)]; [Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol 101:976-985]; [Jalkanen et al., 1987, J. Cell Biol. 105:3087-3096]). IL-17RA의 검출은 생체 내에서 또는 시험관 내에서 수행할 수 있다.
본원에 제공된 진단 용도는 IL-17RA의 발현 및 IL-17RA에 대한 리간드의 결합을 검출하기 위한 항원 결합 단백질의 사용을 포함한다. IL-17RA의 존재의 검출에서 유용한 방법의 예는 면역분석, 예를 들어 효소 결합 면역흡착 분석 (ELISA) 및 방사성 면역 분석 (RIA)을 포함한다.
진단 용도를 위해, 항원 결합 단백질은 대개 검출가능한 표지기로 표지될 것이다. 적합한 표지기는 방사성 동위원소 또는 방사성 핵종 (예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광기 (예를 들어, FITC, 로다민, 란탄 계 원소 형광체), 효소 군 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광기, 비오티닐기 또는 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프 (예를 들어, 류신 지퍼쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 일부 실시태양에서, 표지기는 잠재적인 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 커플링된다. 단백질을 표지하기 위한 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있고, 본 발명을 실행하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 한 측면은 IL-17RA를 발현하는 세포(들)을 확인하는 것을 제공한다. 특정 실시태양에서, 항원 결합 단백질을 표지기로 표지하고, IL-17RA에 대한 표지된 항원 결합 단백질의 결합을 검출한다. 추가의 특정 실시태양에서, IL-17RA에 대한 항원 결합 단백질의 결합은 생체 내에서 검출된다. 추가의 특정 실시태양에서, 당업계에 공지된 기술을 사용하여 항원 결합 단백질-IL-17RA를 단리하고 측정한다 (예를 들어, [Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor (ed. 1991 and periodic supplements)]; [John E. Coligan, ed., 1993, Current Protocols In Immunology New York: John Wiley & Sons] 참조).
본 발명의 추가의 측면은 IL-17RA에 대한 결합을 위해 본 발명의 항원 결합 단백질과 경쟁하는 시험 분자의 존재를 검출하는 것을 제공한다. 상기한 한 분석의 예는 시험 분자의 존재 또는 부재 하에 일정량의 IL-17RA를 함유하는 용액 내에서 유리 항원 결합 단백질의 양을 검출하는 것을 포함할 것이다. 유리 항원 결합 단백질 (즉, IL-17RA에 결합되지 않은 항원 결합 단백질)의 양의 증가는 시험 분자가 IL-17RA 결합을 위해 항원 결합 단백질과 경쟁할 수 있음을 나타낼 것이다. 하나의 실시태양에서, 항원 결합 단백질을 표지기로 표지한다. 별법으로, 시험 분자를 표지하고, 항원 결합 단백질의 존재 및 부재 하에 유리 시험 분자의 양을 모니터링한다.
본 발명의 측면들은 비제한적으로 IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP (비제한적인 예를 들어 MMP3 및 MMP9), GROα, NO 및/또는 C-텔로펩티드 등과 같은 분자의 생산을 억제하기 위한 것과 같은 연구 목적을 위한 시험관내 분석에서 IL-17RA 항원 결합 단백질의 사용을 포함한다. IL-17RA에 대항하여 생성된 항체는 예를 들어 면역친화도 크로마토그래피에 의해 IL-17RA 단백질을 정제하는데 사용될 수 있다.
치료의 방법: 제약 제형, 투여 경로
일부 실시태양에서, 본 발명은 치료 유효량의 하나 또는 복수의 본 발명의 항원 결합 단백질을 제약상 허용되는 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제, 및/또는 보조제와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 제약 조성물을 투여함으로써 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 용어 "환자"는 인간 및 동물 대상을 포함한다.
하나 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 IL-17RA 활성을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 하나 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 IL-17RA 활성과 연관된 예후, 증상 및/또는 병리학을 치료하는데 사용될 수 있다. 하나 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 본 발명의 항원 결합 단백질을 IL-17RA에 제공하는 것을 포함하는, IL-17RA에 대한 IL-17A 및/또는 IL-17F의 결합 및/또는 신호전달을 억제하는 방법에서 사용될 수 있다. 특정 실시태양에서, 항원 결합 단백질은 IL-17RA에 대한 IL-17A 및 IL-17F의 결합 및/또는 신호전달을 억제한다. 추가의 실시태양에서, 하나 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 IL-17RA에 대한 IL-17A의 결합 및/또는 신호전달을 억제하지만, IL-17F를 억제하지 않는 방법에서 사용될 수 있다. 다른 실시태양에서, 하나 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 IL-17RA에 대한 IL-17F의 결합 및/또는 신호전달을 억제하지만, IL-17A를 억제하지 않는 방법에서 사용될 수 있다. 본 발명의 측면들은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17A 및/또는 IL-17F가 IL-17RA, 또는 IL-17RA 및 IL-17RC의 헤테로머 복합체에 결합하여 활성화시키는 것을 억제하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면들은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17A/IL-17F 헤테로머가 IL-17RA, 또는 IL-17RA 및 IL-17RC의 헤테로머 복합체에 결합하여 활성화시키는 것을 억제하는 항체를 포함한다. 명세서 전체에서, IL-17A 및/또는 IL-17F를 억제하는 것을 언급할 때, 이는 IL-17A와 IL-17F의 헤테로머를 억제하는 것도 포함하는 것으로 이해된다. 본 발명의 측면들은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17RA가 호모머 또는 헤테로머 기능적 수용체 복합체, 비제한적인 예를 들어 IL-17RA - IL-17RC 복합체를 형성하는 것을 부분적으로 또는 완전히 억제하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면들은 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하고, IL-17RA가 호모머 또는 헤테로머 기능적 수용체 복합체, 비제한적인 예를 들어 IL-17RA/IL-17RC 복합체를 형성하는 것을 부분적으로 또는 완전히 억제하고, 반드시 IL-17A 및/또는 IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F 헤테로머가 IL-17RA 또는 IL-17RA 헤테로머 수용체 복합체에 결합하는 것을 억제하지는 않는 항체를 포함한다.
하나 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 IL-17RA 활성과 연관된 예후, 증상 및/또는 병리학을 치료하는 방법에서 사용될 수 있다. 하나 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 하나 이상의 염증성 시토킨, 케모킨, 매트릭스 메탈로프로테이나제 또는 IL-17RA 활성화와 연관된 다른 분자의 생산을 억제하는 방법에 사용될 수 있다. 하나 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 IL-6, IL-8, GM-CSF, NO, MMP, PGE2, RANKL 및/또는 C-텔로펩티드 등의 생산을 억제하는 방법에서 사용될 수 있다.
하나 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 염증, 자가면역 질병, 연골 염증 및/또는 뼈 파괴, 관절염, 류마티스 관절염, 연소성 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 소수관절형 연소성 류마티스 관절염, 다관절형 연소성 류마티스 관절염, 전신 발병 연소성 류마티스 관절염, 연소성 강직척추염, 연소성 장병성 관절염, 연소성 반응성 관절염, 연소성 레터 증후군, SEA 증후군 (혈청 반응 음성, 부착부병증, 관절병증 증후군), 연소성 피부근염, 연소성 건선성 관절염, 연소성 경피증, 연소성 전신 홍반성 루푸스, 연소성 혈관염, 소수관절형 류마티스 관절염, 다관절형 류마티스 관절염, 전신 발병 류마티스 관절염, 강직척추염, 장병성 관절염, 반응성 관절염, 레터 증후군, SEA 증후군 (혈청 반응 음성, 부착부병증, 관절병증 증후군), 피부근염, 건선성 관절염, 경피증, 전신 홍반성 루푸스, 혈관염, 근염, 다발성 근염, 피부근염, 골관절염, 결절성 다발동맥염, 베게너 육아종증, 동맥염, 류마티스성 다발성 근육통, 사르코이드증, 경피증, 경화증, 원발성 담즙성 경화증, 경화성 담관염, 쇼그렌 증후군, 건선, 판상 건선, 적상 건선, 역위 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 피부염, 아토피 피부염, 동맥경화증, 루푸스, 스틸 질병, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론 질병, 궤양 대장염, 복강 질병, 다발 경색증 (MS), 천식, COPD, 길랑-바레 질병, I형 당뇨병, 그레이브스 질병, 애디슨 질병, 레이노 현상, 자가면역 간염, GVHD 등을 포함하고 이로 제한되지 않는 질병 및 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있다.
바람직하게는, 허용되는 제형화 물질은 사용된 용량 및 농도에서 수여체에 무독성이다. 특정 실시태양에서, 치료 유효량의 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
특정 실시태양에서, 허용되는 제형화 물질은 바람직하게는 사용된 용량 및 농도에서 수여체에 무독성이다. 특정 실시태양에서, 제약 조성물은 예를 들어, 조성물의 pH, 몰삼투압, 점도, 청정도, 색상, 등장성, 냄새, 멸균성, 안정성, 해리 또는 방출 속도, 흡착 또는 관통을 변형, 유지 또는 보존하기 위해 제형화 물질을 함유할 수 있다. 상기 실시태양에서, 적합한 제형화 물질은 아미노산 (예를 들어 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신); 항미생물제; 항산화제 (예를 들어 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 버퍼 (예를 들어 보레이트, 비카르보네이트, Tris-HCl, 시트레이트, 포스페이트 또는 다른 유기산); 벌킹제 (예를 들어 만니톨 또는 글라이신); 킬레이팅제 (예를 들어 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA)); 착화제 (예를 들어 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-시클로덱스트린 또는 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린); 충전제; 단당류; 이당류; 및 다른 탄수화물 (예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질 (예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색, 향미 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체 (예를 들어 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩티드; 염-형성 반대이온 (예를 들어 나트륨); 보존제 (예를 들어 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알콜, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르빈산 또는 과산화수소); 용매 (예를 들어 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알콜 (예를 들어 만니톨 또는 소르비톨); 현탁화제; 계면활성제 또는 습윤제 (예를 들어 플루로닉 (pluronic), PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트, 예를 들어 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 향상제 (예를 들어 수크로스 또는 소르비톨); 등장성 향상제 (예를 들어 알칼리 금속 할라이드, 바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 제약학적 보조제를 포함하고 이로 제한되지 않는다 ([REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18" Edition, (A.R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company] 참조).
특정 실시태양에서, 최적 제약 조성물은 예를 들어, 의도된 투여 경로, 전달 포맷 및 바람직한 용량에 따라 당업자가 결정할 것이다 (예를 들어, [REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 상기 문헌] 참조). 특정 실시태양에서, 상기 조성물은 본 발명의 항원 결합 단백질의 물리적인 상태, 안정성, 생체내 방출율 및 생체내 청소율에 영향을 미칠 수 있다. 특정 실시태양에서, 제약 조성물 내의 1차 비히클 또는 담체는 성질이 수성 또는 비-수성일 수 있다. 예를 들어, 적합한 비히클 또는 담체는 가능하게는 비경구 투여용 조성물에서 일반적인 다른 물질을 보충한 주사용수, 생리학적 염수 용액 또는 인공 뇌척수액일 수 있다. 중성 완충 염수 또는 혈청 알부민과 혼합한 염수가 추가의 예시적인 비히클이다. 특정 실시태양에서, 제약 조성물은 약 pH 7.0-8.5의 Tris 버퍼, 또는 약 pH 4.0-5.5의 아세테이트 버퍼를 포함하고, 소르비톨 또는 그에 대한 적합한 대체물을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질 조성물은 동결건조 케이크 (cake) 또는 수용액의 형태로 목적하는 순도를 갖는 선택된 조성물을 선택적인 제형화 물질 (REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 상기 문헌)과 혼합함으로써 저장을 위해 제조될 수 있다. 또한, 특정 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질 제품은 수크로스와 같은 적절한 부형제를 사용하여 동결건조물로서 제형화할 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 비경구 전달을 위해 선택될 수 있다. 별법으로, 조성물은 흡입을 위해 또는 소화관을 통한, 예를 들어 경구 전달을 위해 선택될 수 있다. 상기 제약상 허용되는 조성물의 제조는 당업계의 기술 범위 내에 있다.
제형화 성분은 바람직하게는 투여 부위에 허용되는 농도로 존재한다. 특정 실시태양에서, 버퍼는 생리학적 pH 또는 약간 더 높은 pH, 일반적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내에서 조성물을 유지하기 위해 사용된다.
비경구 투여가 고려될 때, 본 발명에서 사용하기 위한 치료 조성물은 제약상 허용되는 비히클 내에 목적하는 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는, 발열원이 없는 비경구로 허용되는 수용액의 형태로 제공될 수 있다. 비경구 주사를 위한 특히 적합한 비히클은 멸균 증류수이고, 여기에서 IL-17RA 항원 결합 단백질은 적절하게 보존된 멸균 등장액으로 제형화된다. 특정 실시태양에서, 제제는 데포 (depot) 주사를 통해 전달될 수 있는 제품의 제어 또는 지속 방출을 제공할 수 있는 주사가능 미세구, 생체-분해성 입자, 중합성 화합물 (예를 들어 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 (bead) 또는 리포좀과 같은 물질을 사용하는 목적하는 분자의 제형화를 포함할 수 있다. 특정 실시태양에서, 순환계 내의 지속 기간을 증진시키는 효과를 갖는 히알루론산이 또한 사용될 수 있다. 특정 실시태양에서, 목적하는 항원 결합 단백질을 도입하기 위해 이식가능한 약물 전달 장치가 사용될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 흡입을 위해 제형화될 수 있다. 이들 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질은 유리하게는 건조한 흡입가능 분말로서 제형화된다. 특정 실시태양에서, IL-17RA 항원 결합 단백질 흡입 용액은 또한 에어로졸 전달을 위한 추진제를 사용하여 제형화될 수 있다. 특정 실시태양에서, 용액은 분무될 수 있다. 폐 투여 및 그를 위한 제형화 방법은 화학적으로 변형된 단백질의 폐 전달을 설명하는 본원에 참고로 포함된 국제 특허 출원 PCT/US94/001875에 추가로 설명되어 있다. 제형이 경구로 투여될 수 있음이 또한 고려된다. 상기 방식으로 투여되는 IL-17RA 항원 결합 단백질은 정제 및 캡슐과 같은 고체 투여형의 조제에서 관습적으로 사용되는 담체를 사용하거나 사용하지 않고 제형화될 수 있다. 특정 실시태양에서, 캡슐은 생체이용율이 최대화되고 전신 도입전 파괴가 최소화되는 위장관 내의 지점에서 제형의 활성 부분을 방출하도록 설계될 수 있다. IL-17RA 항원 결합 단백질의 흡수를 용이하게 하기 위해 추가의 물질이 포함될 수 있다. 희석제, 향미제, 저융점 왁스, 식물유, 윤활제, 현탁화제, 정제 붕해제 및 결합제가 또한 사용될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 바람직하게는 유효량의 하나 또는 복수의 IL-17RA 항원 결합 단백질을 정제의 제조에 적합한 무독성 부형제와의 혼합물로 포함하도록 제공된다. 정제를 멸균수 또는 다른 적절한 비히클에 용해시킴으로써, 용액은 단위 투여 형태로 제조될 수 있다. 적합한 부형제는 불활성 희석제, 예를 들어 탄산칼슘, 탄산나트륨 또는 중탄산나트륨, 락토스 또는 인산칼슘; 또는 결합제, 예를 들어 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 또는 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 탈크를 포함하고 이로 제한되지 않는다.
IL-17RA 항원 결합 단백질을 지속- 또는 제어-전달 제형 내에 포함하는 제형을 포함하는 추가의 제약 조성물은 당업자에게 명백할 것이다. 다양한 다른 지속- 또는 제어-전달 수단, 예를 들어 리포좀 담체, 생체-분해성 미세입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사를 제형화하기 위한 기술은 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 제약 조성물의 전달을 위한 다공성 중합성 미세입자의 제어 방출을 설명하는 본원에 참고로 포함된 국제 특허 출원 PCT/US93/00829를 참조한다. 지속-방출 제제는 성형품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐 형태의 반투과성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다. 지속 방출 매트릭스는 폴리에스테르, 히드로겔, 폴리락티드 (각각 본원에 참고로 포함된 미국 특허 3,773,919 및 유럽 특허 출원 공개 EP 058481에 개시된 바와 같이), L-글루탐산 및 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체 (Sidman et al., 1983, Biopolymers 2:547-556), 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) ([Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277] 및 [Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105]), 에틸렌 비닐 아세테이트 (Langer et al., 1981, 상기 문헌) 또는 폴리-D(-)-3-히드록시부티르산 (유럽 특허 출원 공개 EP 133,988)을 포함할 수 있다. 지속 방출 조성물은 또한 당업계에 공지된 임의의 몇몇 방법에 의해 제조될 수 있는 리포좀을 포함할 수 있다 (예를 들어, 본원에 참조로 포함된 문헌 [Eppstein et al., 1985, Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 82:3688-3692]; 유럽 특허 출원 공개 EP 036,676; EP 088,046 및 EP 143,949 참조).
생체내 투여를 위해 사용되는 제약 조성물은 대개 멸균 제제로서 제공된다. 멸균은 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 달성할 수 있다. 조성물을 동결건조할 때, 상기 방법을 이용하는 멸균은 동결건조 및 재구성 전에 또는 후에 수행될 수 있다. 비경구 투여를 위한 조성물은 동결건조 형태 또는 용액으로 저장될 수 있다. 비경구 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트 (access port)가 있는 용기, 예를 들어, 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 스토퍼 (stopper)가 있는 정맥내 용액 백 또는 바이알에 넣어진다.
본 발명의 측면들은 자가 완충성 (self-buffering) IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 포함하고, 이는 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 국제 특허 출원 WO 06138181A2 (PCT/US2006/022599)에 기재된 바와 같이 제약 조성물로서 사용될 수 있다. 한 실시태양은 총 염 농도가 150 mM 미만인, IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공한다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질 및 하나 이상의 폴리올 및/또는 하나 이상의 계면활성제를 추가로 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공한다. 한 실시태양은 제약상 허용되는 염; 삼투 균형제 (등장제); 계면활성제, 폴리올, 항산화제; 항생제; 항진균제; 벌킹제; 동결보호제; 소포제; 킬레이팅제; 보존제; 염료; 및 진통제를 포함하고 이로 제한되지 않는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는, 총 염 농도가 150 mM 미만인, IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공한다. 한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질 및 하나 이상의 다른 제약상 활성 물질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공한다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공하고, 여기서 IL-17RA 항원 결합 단백질은 pH 단위당 단위 부피당 버퍼 용량이 pH 5.0 내지 4.0 또는 pH 5.0 내지 5.5의 범위에 걸쳐 순수한 물 중 적어도 약 2.0 또는 3.0 또는 4.0 또는 5.0 또는 6.50 또는 8.00 또는 10.0 또는 15.0 또는 20.0 또는 30.0 또는 40.0 또는 50.0 또는 75.0 또는 100 또는 125 또는 150 또는 200 또는 250 또는 300 또는 350 또는 400 또는 500 또는 700 또는 1,000 또는 1,500 또는 2,000 또는 2,500 또는 3,000 또는 4,000 또는 5,000 mM 아세트산나트륨 버퍼, 또는 적어도 2.0 mM 또는 적어도 3.0 mM 또는 적어도 4.0 mM 또는 적어도 5.0 mM 또는 적어도 7.5 mM 또는 적어도 10 mM 또는 적어도 20 mM이다.
한 실시태양은 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제제를 제공하고, 여기서, 단백질의 버퍼 용량을 제외하고, 제형의 pH 단위당 단위 부피당 버퍼 용량은 pH 4.0 내지 5.0 또는 pH 5.0 내지 5.5의 범위에 걸쳐 순수한 물 중 1.0 또는 1.5 또는 2.0 또는 3.0 또는 4.0 또는 5.0 mM 이하의 아세트산나트륨 버퍼, 또는 임의로 1.0 mM 미만, 임의로 2.0 mM 미만, 임의로 2.5 mM 미만, 임의로 3.0 mM 미만 및 임의로 5.0 mM 미만이다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공하고, 여기서 제형의 pH로부터 ± 1 pH 단위의 범위에 걸쳐, IL-17RA 항원 결합 단백질의 버퍼 용량은 적어도 약 1.00 또는 1.50 또는 1.63 또는 2.00 또는 3.00 또는 4.00 또는 5.00 또는 6.50 또는 8.00 또는 10.0 또는 15.0 또는 20.0 또는 30.0 또는 40.0 또는 50.0 또는 75.0 또는 100 또는 125 또는 150 또는 200 또는 250 또는 300 또는 350 또는 400 또는 500 또는 700 또는 1,000 또는 1,500 또는 2,000 또는 2,500 또는 3,000 또는 4,000 또는 5,000 mEq/리터/pH 단위, 임의로 적어도 약 1.00, 임의로 적어도 약 1.50, 임의로 적어도 약 1.63, 임의로 적어도 약 2.00, 임의로 적어도 약 3.00, 임의로 적어도 약 5.0, 임의로 적어도 약 10.0 및 임의로 적어도 약 20.0이다. 한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공하고, 여기서 제형의 pH로부터 ± 1 pH 단위의 범위에 걸쳐, IL-17RA 항원 결합 단백질을 제외하고, 제형의 pH 단위당 단위 부피당 버퍼 용량은 pH 5.0 내지 4.0 또는 pH 5.0 내지 5.5 범위에 걸쳐 순수한 물 중 0.50 또는 1.00 또는 1.50 또는 2.00 또는 3.00 또는 4.00 또는 5.00 또는 6.50 또는 8.00 또는 10.0 또는 20.0 또는 25.0 mM 이하의 아세트산나트륨 버퍼이다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공하고, 여기서 목적하는 pH로부터 ± 1 pH 단위의 범위에 걸쳐, 단백질은 제형의 버퍼 용량의 적어도 약 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 99.5%, 임의로 제형의 버퍼 용량의 적어도 약 75%, 임의로 적어도 약 85%, 임의로 적어도 약 90%, 임의로 적어도 약 95%, 임의로 적어도 약 99%를 제공한다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공하고, 여기서 IL-17RA 항원 결합 단백질의 농도는 약 20 내지 400, 또는 20 내지 300, 또는 20 내지 250, 또는 20 내지 200, 또는 20 내지 150 mg/ml, 임의로 약 20 내지 400 mg/ml, 임의로 약 20 내지 250, 임의로 약 20 내지 150 mg/ml이다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공하고, 여기서 IL-17RA 항원 결합 단백질의 완충 작용에 의해 유지되는 pH는 약 3.5 내지 8.0, 또는 4.0 내지 6.0, 또는 4.0 내지 5.5, 또는 4.0 내지 5.0, 임의로 약 3.5 내지 8.0, 임의로 약 4.0 내지 5.5이다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공하고, 여기서 염 농도는 150 mM 또는 125 mM 또는 100 mM 또는 75 mM 또는 50 mM 또는 25 mM, 임의로 150 mM, 임의로 125 mM, 임의로 100 mM, 임의로 75 mM, 임의로 50 mM, 임의로 25 mM 미만이다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질 및 하나 이상의 제약상 허용되는 염; 폴리올; 계면활성제; 삼투 균형제; 등장제; 항산화제; 항생제; 항진균제; 벌킹제; 동결보호제; 소포제; 킬레이팅제; 보존제; 염료; 진통제; 또는 추가의 제약학적 물질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공한다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질 및 저장성, 등장성 또는 고장성, 바람직하게는 대략 등장성, 특히 바람직하게는 등장성인 양의 하나 이상의 제약상 허용되는 폴리올, 비제한적인 예를 들어 임의의 하나 이상의 소르비톨, 만니톨, 수크로스, 트레할로스, 또는 글리세롤, 임의로 약 5% 소르비톨, 5% 만니톨, 9% 수크로스, 9% 트레할로스, 또는 2.5% 글리세롤을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공한다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하고, 계면활성제, 바람직하게는 하나 이상의 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 소르비탄의 다른 지방산 에스테르, 폴리에톡실레이트 및 폴록사머 188, 바람직하게는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80, 임의로 약 0.001 내지 0.1% 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80, 임의로 약 0.002 내지 0.02% 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80, 또는 임의로 0.002 내지 0.02% 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공한다.
한 실시태양은 제형이 멸균되고, 인간 또는 비-인간 대상의 치료에 적합한 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공한다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질 및 용매를 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공하고, 여기서 IL-17RA 항원 결합 단백질은 pH 단위당 단위 부피당 버퍼 용량이 pH 4.0 내지 5.0 또는 pH 5.0 내지 5.5의 범위에 걸쳐 물 중 적어도 4.0 mM 아세트산나트륨이고, 여기서 IL-17RA 항원 결합 단백질을 제외한 제형의 단위 부피당 버퍼 용량은 바람직하게는 동일한 방식으로 결정된 동일한 범위에 걸쳐 물 중 2.0 mM 이하의 아세트산나트륨이다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질 및 용매를 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제제를 제공하고, 여기서 제형의 pH에서 단백질의 버퍼 용량은 ± 1 pH 단위의 제형의 pH 변화에 대해 적어도 1.63 mEq/리터이고, 단백질을 제외한 제형의 버퍼 용량은 제형의 pH에서 ± 1 pH 단위의 pH 변화에 대해 0.81 mEq/리터 이하이다.
한 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질을 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 제공하고, 여기서 제형은 재구성 시에 임의의 상기 또는 아래에 개시된 바에 따른 제형을 제공하는 동결건조물 형태로 존재한다.
한 실시태양은 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형을 임의의 상기 또는 아래에 개시된 바에 따르고 그의 사용에 관한 지시에 따른 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형 또는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형의 동결건조물을 함유하는 하나 이상의 바이알을 포함하는 키트 내에 제공한다.
한 실시태양은 반대 이온을 사용하여 잔류 버퍼를 제거하는 것을 포함하는, 임의의 상기 또는 아래에 개시된 바에 따른 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형 또는 그의 동결건조물을 제조하기 위한 방법을 제공한다.
한 실시태양은 반대 이온의 존재 하에 크로마토그래피, 투석 및/또는 접선 유동 (tangential flow) 여과 중의 임의의 하나 이상의 방법을 이용하여 잔류 버퍼를 제거하는 것을 포함하는, 임의의 상기 또는 아래에 개시된 바에 따른 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형 또는 그의 동결건조물을 제조하기 위한 방법을 제공한다.
한 실시태양은 접선 유동 여과를 이용하여 잔류 버퍼를 제거하는 것을 포함하는, 임의의 상기 또는 아래에 따른 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제제 또는 그의 동결건조물을 제조하기 위한 방법을 제공한다.
한 실시태양은 제제의 pH 미만의 pH에서 용액에 대해 투석하고, 그 후 필요한 경우에 묽은 산 또는 묽은 염기의 첨가에 의해 pH를 조정하는 단계를 포함하는, 임의의 상기 또는 아래에 따른 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제제 또는 그의 동결건조물을 제조하기 위한 방법을 제공한다.
상기 논의한 바와 같이, 특정 실시태양은 IL-17RA 항원 결합 단백질에 추가로 본 섹션 및 본원의 다른 곳에서 예시한 것과 같은 하나 이상의 부형제를 포함하는 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 조성물, 특히 제약학적 IL-17RA 항원 결합 단백질 조성물을 제공한다. 이와 관련하여 부형제는 제형의 물리적, 화학적 또는 생물학적 특성을 조정하는 것, 예를 들어 점도의 조정 및/또는 유효성을 개선하고/하거나, 예를 들어, 제조, 선적, 보관, 사용전 준비, 투여 동안 및 그 후 일어나는 스트레스로 인한 파괴 및 손상 (spoilage)에 대해 상기 제형 및 방법을 안정화시키기 위해 본 발명의 방법을 조정하는 것과 같은 매우 다양한 목적을 위해 본 발명에서 사용될 수 있다.
이와 관련하여 유용한 단백질 안정화 및 제형화 물질 및 방법에 관하여 다양한 설명, 예를 들어, 각각 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 문헌 ([Arakawa et al., "Solvent interactions in pharmaceutical formulations," Pharm Res. 8(3): 285-91 (1991)]; [Kendrick et al., "Physical stabilization of proteins in aqueous solution," in: RATIONAL DESIGN OF STABLE PROTEIN FORMULATIONS: THEORY AND PRACTICE, Carpenter and Manning, eds. Pharmaceutical Biotechnology. 13: 61-84 (2002)] 및 [Randolph et al., "Surfactant-protein interactions," Pharm Biotechnol 13: 159-75 (2002)])이 특히 부분적으로 본 발명에 따른 자가 완충성 단백질 제제에 대한 것과 동일한 부형제 및 공정에 관계된, 특히 수의학 및/또는 인간 의학 용도를 위한 단백질 제약 제품 및 공정에 대해 이용가능하다.
본 발명에서 유용한 다양한 부형제를 표 3에 나열하고, 아래에 추가로 설명한다.
Figure pat00015
예를 들어, 자가 완충성 제형의 이온 강도 및/또는 등장성을 조정하고/하거나 자가 완충성 단백질 또는 본 발명에 따른 자가 완충성 단백질 조성물의 다른 성분의 용해도 및/또는 물리적 안정성을 개선하기 위해 본 발명의 특정 실시태양에 따라 염이 사용될 수 있다.
잘 알려진 바와 같이, 이온은 단백질의 표면 상의 전하를 띈 잔기에 결합함으로써 및 단백질 내의 전하를 띈 극성기를 차폐하고 그들의 정전기적 상호작용, 견인 및 반발 상호작용의 강도를 감소시킴으로써 천연 상태의 단백질을 안정화시킬 수 있다. 이온은 또한 특히, 단백질의 변성된 펩티드 연결 (-CONH)에 결합함으로써 변성 상태의 단백질을 안정화시킬 수 있다. 또한, 단백질 내의 전하를 띈 극성기와의 이온적 상호작용은 또한 분자내 정전기적 상호작용을 감소시켜, 단백질 응집 및 불용성을 방지하거나 감소시킬 수 있다.
이온 종들은 단백질에 대한 그들의 효과에 있어서 상당히 상이하다. 본 발명에 따른 자가 완충성 단백질 조성물을 제형화하는데 사용될 수 있는 이온 및 단백질에 대한 그들의 효과의 많은 카테고리의 순위 결정 (ranking)이 개발되었다. 그의 한 예는 호프메이스터 (Hofmeister) 시리즈이고, 이는 이온성 및 극성 비-이온성 용질을 용액 내의 단백질의 입체형상 안정성에 대한 효과에 의해 순위를 결정한다. 안정화 용질은 "코스모트로픽 (kosmotropic)"으로 불린다. 탈안정화 용질은 카오트로픽 (chaotropic)으로 불린다. 코스모트로프는 일반적으로 용액으로부터 단백질을 침전시키기 위해 ("염석 (salt-out)") 고농도 (예를 들어, >1 몰 황산암모늄)로 사용된다. 카오트로프는 일반적으로 단백질을 변성시키고/시키거나 가용화시키기 위해 ("염용 (salt-in)") 사용된다. "염석" 및 "염용"시키는 이온의 상대적인 유효성이 호프메이스터 시리즈에서 그들의 위치를 규정한다.
염은 그들의 효용성 및 그들의 단점 (상기 논의한 바와 같이)에 추가로 또한 단백질 제제의 점도를 감소시키기 위해 효과적이고, 상기 목적으로 본 발명에서 사용될 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시태양에 따른 비경구 제형 내의 등장성을 유지하고, 단백질 용해도 및/또는 안정성을 개선하고, 점도 특징을 개선하고, 단백질 안정성 및 응집에 대한 유해한 염 효과를 방지하고, 염-매개 단백질 분해를 방지하기 위해, 본 발명의 다양한 바람직한 실시태양에 따른 자가 완충성 제형 내의 염 농도는 150 mM (1가 이온에 대해) 및 150 mEq/리터 (다가 이온에 대해) 미만이다. 이와 관련하여, 본 발명의 특히 바람직한 특정 실시태양에서, 총 염 농도는 약 75 mEq/L 내지 약 140 mEq/L이다.
유리 아미노산은 본 발명의 다양한 실시태양에 따른 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형에서 벌킹제, 안정화제 및 항산화제로서 및 다른 표준 용도로 사용될 수 있다. 그러나, 자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형 내에 포함된 아미노산은 완충 작용을 제공하지 않는다. 이러한 이유로 인해, 유의한 버퍼 용량을 갖는 아미노산은 사용되지 않거나, 유의한 완충 활성을 갖는 임의의 pH에서 사용되지 않거나, 낮은 농도로 사용되고, 그 결과로서 제형 내의 그들의 버퍼 용량은 유의하지 않다. 이는 히스티딘 및 제약 제형에서 버퍼로서 일반적으로 사용되는 다른 아미노산의 경우에 특히 그러하다.
상기 사항을 고려하여, 라이신, 프롤린, 세린 및 알라닌이 제형 내에서 단백질을 안정화하기 위해 사용될 수 있다. 글라이신은 정확한 케이크 구조 및 특성을 보장하기 위해 동결건조 시에 유용하다. 아르기닌은 액체 및 동결건조된 제형 모두에서 단백질 응집을 억제하기 위해 유용할 수 있다. 메티오닌은 항산화제로서 유용하다.
폴리올은 당, 예를 들어, 만니톨, 수크로스 및 소르비톨 및 다가 알콜, 예를 들어, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜 및 본원에서 논의의 목적으로 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 관련 물질을 포함한다. 폴리올은 코스모트로픽 물질이다. 이들은 물리적 및 화학적 분해 과정으로부터 단백질을 보호하기 위해 액체 및 동결건조된 제형 모두에서 유용한 안정화제이다. 폴리올은 또한 제형의 등장성을 조정하기 위해 유용하다.
본 발명의 선택된 실시태양에서 유용한 폴리올 중에 만니톨이 있고, 이는 동결건조된 제형 내에서 케이크의 구조적 안정성을 보장하기 위해 일반적으로 사용된다. 이는 케이크에 대한 구조적 안정성을 보장한다. 이는 일반적으로 동결보호제, 예를 들어, 수크로스와 함께 사용된다. 소르비톨 및 수크로스는 등장성을 조정하기 위해 및 운반 동안 동결-해동 스트레스에 대해 또는 제조 공정 동안 벌크의 제조에 대해 보호하기 위한 안정화제로서 바람직한 물질이다. 환원당 (유리 알데히드 또는 케톤기를 함유한다), 예를 들어 글루코스 및 락토스는 표면 라이신 및 아르기닌 잔기를 당화시킬 수 있다. 따라서, 이들은 일반적으로 본 발명에 따라 사용하기 위한 바람직한 폴리올이 아니다. 또한, 그러한 반응성 종을 형성하는 당, 예를 들어 산성 조건 하에 프룩토스 및 글루코스로 가수분해되고 따라서 당화를 초래하는 수크로스도 또한 이와 관련하여 본 발명의 바람직한 아미노산이 아니다. PEG는 단백질을 안정화시키기 위해 및 냉동보호제로서 유용하고, 이와 관련하여 본 발명에서 Recombinate(등록상표) 내에서와 같이 사용될 수 있다.
자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형의 실시태양은 계면활성제를 추가로 포함한다. 단백질 분자는 표면 상에 흡착하고, 변성하고, 후속적으로 공기-액체, 고체-액체 및 액체-액체 계면에서 응집하기 쉬울 수 있다. 이들 효과는 일반적으로 단백질 농도에 역비례한다. 이들 유해한 상호작용은 일반적으로 단백질 농도에 역비례하고, 대개 제품의 선적 및 취급 동안 발생하는 것과 같은 물리적인 교반에 의해 악화된다.
계면활성제는 표면 흡착을 방지하거나, 최소화하거나, 감소시키기 위해 통상적으로 사용된다. 이와 관련하여 본 발명에서 유용한 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 소르비탄 폴리에톡실레이트의 다른 지방산 에스테르, 및 폴록사머 188을 포함한다.
계면활성제는 또한 단백질 입체형상 안정성을 제어하기 위해 일반적으로 사용된다. 임의의 주어진 계면활성제는 대개 일부 단백질을 안정화시키고, 다른 단백질은 탈안정화시킬 것이므로, 이와 관련하여 계면활성제의 사용은 단백질-특이적이다.
폴리소르베이트는 산화적 분해를 받기 쉽고, 종종 공급될 때 단백질 잔기 측쇄, 특히 메티오닌의 산화를 일으키도록 충분한 양의 퍼옥시드를 함유한다. 따라서, 폴리소르베이트는 조심스럽게 사용되어야 하고, 사용될 때 그들의 최저 유효 농도에서 사용되어야 한다. 이와 관련하여, 폴리소르베이트는 부형제가 그들의 최저 유효 농도 내에서 사용되어야 하는 일반적인 규칙의 예이다.
자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형의 실시태양은 하나 이상의 항산화제를 추가로 포함한다. 단백질의 유해한 산화는 주변 산소 및 온도의 적절한 수준을 유지하고, 빛에 대한 노출을 방지함으로써 제약 제형 내에서 어느 정도까지는 방지될 수 있다. 단백질의 산화적 분해를 방지하기 위해 항산화제 부형제가 또한 사용될 수 있다. 이와 관련하여 유용한 항산화제에는 환원제, 산소/유리 라디칼 스캐빈저 (scavenger) 및 킬레이팅제가 있다. 본 발명에 따른 치료적 단백질 제형에서 사용하기 위한 항산화제는 바람직하게는 수용성이고, 제품의 저장 수명 동안 그들의 활성을 유지한다. 이와 관련하여 EDTA가 본 발명에 따라 바람직한 항산화제이고, 산성 섬유모세포 성장 인자의 제형화에서 및 키네렛(등록상표) 및 Ontak(등록상표)와 같은 제품에서 사용된 것과 동일한 방식으로 본 발명에서 사용될 수 있다.
항산화제는 단백질을 손상시킬 수 있다. 예를 들어, 특히 글루타티온과 같은 환원제는 분자내 디술피드 연결기를 파괴할 수 있다. 따라서, 본 발명에서 사용하기 위한 항산화제는 특히 제형 내의 단백질을 손상시킬 가능성을 제거하거나 충분히 감소시키기 위해 선택된다.
본 발명에 따른 제형은 단백질 보조-인자이고, 단백질 배위 착물을 형성하기 위해 필요한 금속 이온, 예를 들어 특정 인슐린 현탁액을 형성하기 위해 필요한 아연을 포함할 수 있다. 금속 이온은 또한 단백질을 분해하는 일부 과정을 억제할 수 있다. 그러나, 금속 이온은 또한 단백질을 분해하는 물리적 및 화학적 과정을 촉매한다.
마그네슘 이온 (10-120 mM)은 아스파르트산의 이소아스파르트산으로의 이성체화를 억제하기 위해 사용될 수 있다. Ca+2 이온 (100 mM 이하)은 인간 데옥시리보뉴클레아제 (rhDNase, Pulmozyme(등록상표)) 안정성을 증가시킬 수 있다. 그러나, Mg+2, Mn+2 및 Zn+2는 rhDNase를 탈안정화시킬 수 있다. 이와 유사하게, Ca+2 및 Sr+2은 Mg+2, Mn+2 및 Zn+2에 의해 탈안정화될 수 있는 팩터 VIII을 안정화시킬 수 있고, Cu+2 및 Fe+2 및 그의 응집은 Al+3 이온에 의해 증가될 수 있다.
자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형의 실시태양은 하나 이상의 보존제를 추가로 포함한다. 보존제는 동일한 용기로부터 1회 이상 채취하는 것을 포함하는 다수-용량 비경구 제형을 개발하기 위해 필요하다. 이들 1차 기능은 미생물 성장을 억제하고, 약물 제품의 저장 수명 또는 사용 기간 전체 동안 제품 멸균성을 보장하는 것이다. 일반적으로 사용되는 보존제는 벤질 알콜, 페놀 및 m-크레졸을 포함한다. 보존제는 소-분자 비경구 제제에서 오랫동안 사용되었지만, 보존제를 포함하는 단백질 제제의 개발은 도전받을 수 있다. 보존제는 거의 항상 단백질에 대해 탈안정화 효과 (응집)를 갖고, 이는 다수-용량 단백질 제제에서 이들의 사용을 제한하는 주요 요인이 되고 있다. 지금까지, 대부분의 단백질 약물은 단일 사용을 위해서만 제형화되었다. 그러나, 다수-용량 제형이 가능한 경우에, 이들은 환자 편의성과 증가된 시장성의 추가의 잇점이 있다. 우수한 예가 보존된 제형의 개발을 통해 보다 편리한 다수-사용 주사 펜 (pen)의 상업화를 이끈 인간 성장 호르몬 (hGH)이다. hGH의 보존된 제형을 함유하는 적어도 4가지의 상기 펜 장치가 현재 시장에서 이용가능하다. Norditropin(등록상표) (액체, 노보 노르디스크 (Novo Nordisk)), Nutropin AQ(등록상표) (액체, 제넨테크 (Genentech)) & Genotropin (동결건조형 - 이중 챔버 카트리지, 파마시아 앤 업존 (Pharmacia & Upjohn))은 페놀을 함유하고, Somatrope(등록상표) (일라이 릴리 (Eli Lilly))는 m-크레졸을 사용하여 제형화된다.
보존된 투여형의 제형화 및 개발 동안 몇몇 측면을 고려할 필요가 있다. 약물 제품 내의 유효 보존제 농도는 최적화되어야 한다. 여기에는 단백질 안정성을 손상하지 않으면서 항-미생물 효과를 부여하는 농도 범위로 투여형 내의 주어진 보존제를 시험하는 것이 필요하다. 예를 들어, 시차 주사 열량법 (DSC)을 이용하여 인터루킨-1 수용체 (타입 I)에 대한 액체 제형의 개발에서 3개의 보존제가 성공적으로 스크리닝되었다. 보존제는 시판 제품에서 일반적으로 사용되는 농도에서 안정성에 대한 그들의 효과에 기초하여 순위를 결정하였다.
예상되는 바와 같이, 보존제를 함유하는 액체 제형의 개발은 동결건조된 제형보다 더욱 도전받고 있다. 동결-건조된 제품은 보존제 없이 동결건조되고, 사용 시점에 희석제를 함유하는 보존제로 재구성될 수 있다. 이는 보존제가 단백질과 접촉하는 시간을 단축시키고, 이는 연관된 안정성 위험을 유의하게 최소화시킨다. 액체 제형에 있어서, 보존제 유효성 및 안정성은 전체 제품 저장 기간 (~18 내지 24개월)에 걸쳐 유지되어야 한다. 주목해야하는 중요한 점은 보존제 유효성이 활성 약물 및 모든 부형제 성분을 함유하는 최종 제형 내에서 입증되어야 하는 것이다.
자가 완충성 IL-17RA 항원 결합 단백질 제형은 일반적으로 특히 생체이용율 및 지속성의 범위에서 특정한 투여 경로 및 방법을 위해, 특정한 투여량 및 투여 빈도를 위해, 특정한 질병의 특정한 치료를 위해 설계될 것이다. 따라서, 제형은 본 발명에 따라 비제한적으로 경구, 귀, 눈, 직장 및 질을 통한 것을 포함하는 임의의 적합한 경로에 의해 및 비경구 경로, 예를 들어 정맥내 및 동맥내 주사, 근육내 주사 및 피하 주사에 의해 전달을 위해 설계될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 단백질, 특히 제약학적 단백질을 제조하고, 제형화하고, 사용하는 잘 공지된 통상적인 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 이와 관련하여 본 발명의 많은 측면의 바람직한 실시태양에서, 조성물을 제조하는 방법은 잔류 완충제를 제거하기 위해 반대 이온의 사용을 포함한다. 이와 관련하여, 용어 반대 이온은 그의 제조 동안 조성물로부터 버퍼를 치환하는 작용을 하는 임의의 극성 또는 전하를 띈 구성분이다. 이와 관련하여 유용한 반대 이온은 예를 들어, 글라이신, 클로라이드, 술페이트 및 포스페이트를 포함한다. 이와 관련하여 용어 반대 이온은 치환 이온과 동일한 것을 의미하도록 사용된다.
잔류 완충제는 투석 및 고성능 막 확산-기반 방법, 예를 들어 접선 유동 투석여과의 표준 방법을 포함하고 이로 제한되지 않는 다양한 공지의 방법을 이용하여 이와 관련한 반대 이온을 사용하여 제거될 수 있다. 이와 관련한 반대 이온을 사용하는 잔류 버퍼 제거를 위한 방법은 또한 일부 경우에 크기 배제 크로마토그래피를 이용하여 수행할 수 있다.
이러한 측면에서 관련된 특정한 바람직한 실시태양에서, 본 발명에 따른 조성물은 자가 완충성 단백질을 함유하는 제제의 pH 미만의 pH에서 버퍼 비함유 용액에 대한 투석을 포함하는 공정에 의해 제조된다. 이와 관련한 본 발명의 특히 바람직한 실시태양에서, 버퍼 비함유 용액은 반대 이온, 특히 잔류 버퍼의 제거를 용이하게 하고 자가 완충성 단백질 또는 그의 제형에 불리한 영향을 미치지 않는 것을 포함한다. 이와 관련한 본 발명의 추가의 특히 바람직한 실시태양에서, 투석 후에 제제의 pH는 묽은 산 또는 묽은 염기를 사용하여 목적하는 pH로 조정된다.
이와 관련한 특히 바람직한 특정 실시태양에서, 본 발명에 따른 조성물은 자가 완충성 단백질을 함유하는 제제의 pH 미만의 pH에서 버퍼 비함유 용액에 대한 접선 유동 투석여과를 포함하는 공정에 의해 제조된다. 이와 관련한 본 발명의 특히 바람직한 실시태양에서, 버퍼 비함유 용액은 반대 이온, 특히 잔류 버퍼의 제거를 용이하게 하고 자가 완충성 단백질 또는 그의 제형에 불리한 영향을 미치지 않는 것을 포함한다. 이와 관련한 본 발명의 추가의 특히 바람직한 실시태양에서, 투석여과 후에 제제의 pH는 묽은 산 또는 묽은 염기를 사용하여 목적하는 pH로 조정된다.
일단 제약 조성물이 제형화되면, 이를 멸균 바이알 내에 용액, 현탁액, 겔, 에멀젼, 고체, 결정으로서 또는 탈수 또는 동결건조 분말로서 저장할 수 있다. 상기 제형은 바로 사용되는 (ready-to-use) 형태 또는 투여 전에 재구성되는 형태 (예를 들어, 동결건조 형태)로 저장될 수 있다. 본 발명은 또한 단일-용량 투여 단위를 생산하기 위한 키트를 제공한다. 본 발명의 키트는 각각 건조된 단백질을 갖는 제1 용기 및 수성 제형을 갖는 제2 용기를 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 실시태양에서, 단일 및 다수-챔버의 예비-충전된 시린지 (syring) (예를 들어, 액체 시린지 및 리오시린지 (lyosyring))를 포함하는 키트가 제공된다.
사용될 IL-17RA 항원 결합 단백질-함유 제약 조성물의 치료 유효량은 예를 들어 치료 환경 및 목표에 따라 결정될 것이다. 당업자는 치료를 위한 적절한 투여량 수준이 부분적으로 전달되는 분자, IL-17RA 항원 결합 단백질이 사용되는 적응증, 투여 경로 및 환자의 체격 (체중, 체표면적 또는 장기 크기) 및/또는 상태 (연령 및 전반적인 건강)에 따라 변할 것임을 알 것이다. 특정 실시태양에서, 임상의는 최적 치료 효과를 얻기 위해 투여량을 적정하고 투여 경로를 변형시킬 수 있다. 전형적인 투여량은 상기 언급된 인자에 따라 약 0.1 ㎍/kg 내지 약 30 mg/kg 이상일 수 있다. 특정 실시태양에서, 투여량은 0.1 ㎍/kg 내지 약 30 mg/kg, 임의로 1 ㎍/kg 내지 약 30 mg/kg 또는 10 ㎍/kg 내지 약 5 mg/kg일 수 있다.
투여 빈도는 사용된 제형 내의 특정 IL-17RA 항원 결합 단백질의 약동학 파라미터에 따를 것이다. 대개, 임상의는 목적하는 효과를 달성하는 투여량이 도달될 때까지 조성물을 투여한다. 따라서, 조성물은 시간이 지남에 따라 단일 용량으로서 또는 2회 이상 용량 (동일한 양의 목적하는 분자를 함유할 수 있거나 함유하지 않을 수 있는)으로서, 또는 이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 적절한 투여량의 추가의 미세조정은 통상적으로 당업자에 의해 이루어지고, 이들이 통상적으로 수행하는 업무의 범위 내에 있다. 적절한 투여량은 적절한 용량-반응 데이타의 사용을 통해 확인될 수 있다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 연장된 시간 기간 내내 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 항원 결합 단백질의 만성 투여는 완전 인간이 아닌 항원 결합 단백질, 예를 들어 비-인간 동물 내의 인간 항원에 대해 생산된 항체, 예를 들어, 비-인간 종에서 생산된 비-완전 인간 항체 또는 비-인간 항체와 일반적으로 연관되는 불리한 면역 또는 알레르기 반응을 최소화시킨다.
제약 조성물의 투여 경로는 공지의 방법에 따르고, 예를 들어, 경구, 정맥내, 복강내, 뇌내 (실질내), 뇌실내, 근육내, 눈내, 동맥내, 문맥내 또는 병변내 경로에 의해 주사를 통해; 지속 방출 시스템 또는 이식 장치에 의한다. 특정 실시태양에서, 조성물은 볼러스 (bolus) 주사에 의해, 또는 주입에 의해 연속적으로 또는 이식 장치에 의해 투여될 수 있다.
조성물은 또한 목적하는 분자가 그 위해 흡수되거나 캡슐화되는 막, 스폰지 또는 다른 적절한 물질의 이식을 통해 국소적으로 투여될 수 있다. 특정 실시태양에서, 이식 장치가 사용되는 경우에, 장치는 임의의 적합한 조직 또는 장기 내로 이식될 수 있고, 목적하는 분자의 전달은 확산, 시한 (timed)-방출 볼러스 또는 연속 투여를 통할 수 있다.
본 발명에 따른 IL-17RA 항원 결합 단백질 제약 조성물을 생체 외에서 사용하는 것이 또한 바람직할 수 있다. 상기 경우에, 환자로부터 제거된 세포, 조직 또는 장기를 IL-17RA 항원 결합 단백질 제약 조성물에 접촉시키고, 그 후 세포, 조직 및/또는 장기를 후속적으로 환자에게 다시 이식한다.
특히, IL-17RA 항원 결합 단백질은 폴리펩티드를 발현하고 분비하도록 본원에 설명된 것과 같은 방법을 사용하여 유전 공학 처리된 특정 세포를 이식함으로써 전달될 수 있다. 특정 실시태양에서, 상기 세포는 동물 또는 인간 세포일 수 있고, 자가성, 이종성 또는 이종발생성일 수 있다. 특정 실시태양에서, 세포는 불멸화될 수 있다. 다른 실시태양에서, 면역학적 반응 기회를 감소시키기 위해, 세포는 둘러싸는 조직의 침윤을 피하도록 캡슐화될 수 있다. 추가의 실시태양에서, 캡슐화 물질은 단백질 생성물(들)의 방출을 허용하지만, 환자의 면역계에 의한 또는 둘러싸는 조직으로부터의 다른 유해 인자에 의한 세포의 파괴를 방지하는, 대개 생체적합성의 반투과성 중합성 인클로져 (enclosure) 또는 막이다.
본 명세서 내에 인용된 모든 참조문은 그 전문을 본원에 참고로 명백하게 포함한다.
실시예
수행된 실험과 달성된 결과를 포함하는 다음 실시예는 단지 예시의 목적으로만 제공되고, 본 발명을 제한하는 것으로 간주하지 않아야 한다.
실시예 1
IL-17RA 낙아웃 마우스를 문헌 [Ye et al., 2001, J. Exp. Med. 194:519-527]에 기재된 바와 같이 생성시키고, 표준 콜라겐 유도 관절염 (CIA) 모델에서 시험하였다. 간단히 설명하면, 쥐 IL-17R cDNA 프로브를 사용하여 129 유도 람다 라이브러리로부터 쥐 IL-17R을 코딩하는 게놈 클론을 단리하고, PCR, 제한 소화, 및 마우스 염색체 6 상의 IL-17R 로커스에 상응하는 기탁된 게놈 서열 (GenBank/EMBL/DDBJ 기탁 번호 ACO18559)을 사용한 서열 분석의 조합을 통해 매핑하였다. 유전자 표적화 벡터를, 엑손 4-11 (쥐 IL-17R cDNA의 뉴클레오티드 445-1,172에 상응)을 함유하는 5.7 kb의 게놈 서열을 PGKneo 카세트로 대체하여 제조하였다. 티미딘 키나제 카세트 (MC-TK)를 벡터의 5' 말단 내에 삽입하였다. 129 유도 배아 줄기 (ES) 세포를 표적화 벡터로 전기천공하고, 설명된 바와 같이 G418 및 간시클로비르의 존재 하에 선택하였다. IL-17R에 표적화된 돌연변이를 보유하는 ES 클론은 PCR 및 게놈 서던 블롯 분석의 조합을 통해 확인하고, C57BL/6 포배 내로 주사하였다. 생성되는 수컷 키메라를 C57BL/6 암컷과 교배시켜 IL-17R 돌연변이 (IL-17R+/-)에 대해 이종접합성인 (heterozygous) 마우스를 생성시킨 후, 이를 이종교배시켜 IL-17R-결핍 마우스 (IL-17R KO)를 생성시켰다. 상기 마우스는 C57BL/6 마우스에 대한 5회 연속 역교배에 의해 C57BL/6 배경으로 이동하였다.
IL-17RA 낙아웃 마우스는 도 4에 제시된 바와 같이 (또한 문헌 [Kolls et al., 2001, J. Ex. Med. 194:519-527]; [Lubberts et al., 2005, 상기 문헌] 참고) CIA 모델에서 감소된 평균 임상 스코어를 보였다. 또한, IL-17RA 낙아웃 마우스는 단지 5%의 질병 발생을 보인 반면에, 야생형 마우스는 71%의 질병 발생을 보였다.
실시예 2
유도된 관절염과 IL-17RA 신호전달 부재 사이의 상관관계를 결정하기 위해서 CIA-유도된 IL-17RA -/- 마우스 및 IL-17RA 발현 마우스의 조직병리학을 비교하였다.
마우스를 실시예 1에 설명된 바와 같이 준비하였다. 동물을 15 내지 20주령에서 희생시킨 후, 희생시킨 동물의 관절의 조직병리학을 조사하였다. IL-17RA -/- 낙아웃 마우스 및 IL-17A/IL-17R 발현 마우스 (WT C57/BL6 (No. 2-18))의 뼈 및 연골의 조직병리학은 복사뼈의 연골하 뼈 침식 및 발목뼈-중족골 관절의 현저한 관절 구조 붕괴 (연골하 뼈 및 관절 연골 침식), 및 반응성 골막성 뼈 형성 (osteophytosis)을 보였다. 실험적으로 유도된 CIA 모델에서 IL-17RA가 결핍된 마우스로부터의 발목 관절의 조직병리학은 관절 염증 및 관절 연골 및 뼈 침식을 거의 보이지 않았다. 그러나, IL-17RA 발현 마우스 뒷발의 발목 관절에 대한 조직병리학적 분석은 현저한 만성 활성형 염증을 보였다. WT 마우스에 비해 관절 염증 및 관절 및 뼈 침식의 유의하게 감소된 발생은 추가로 염증 및 침식에 IL-17RA 및 IL-17RA 신호전달이 관련됨을 나타낸다.
실시예 3
IL-17RA가 결핍된 MOG (미엘린 희소돌기아교세포 당단백질)-펩티드-유도된 EAE 모델 마우스의 모델은 WT 마우스에 비해 관절염 발병의 지연 및 임상 스코어의 전반적인 감소를 보였다.
IL-17RA 낙아웃 마우스를 실시예 1에 설명된 바와 같이 준비하였다. 도 5는 IL-17RA -/- 및 IL-17RA 야생형 마우스 모두에 대한 시간의 함수로서 관절염의 발생률 및 중간 발병을 보여준다. 15마리의 IL-17RA 발현 야생형 마우스 모두가 관절염 증상을 보였고, 평균 발병은 13일이었다. 이와 대조적으로, 15마리의 IL-17RA -/- 마우스 중 14마리가 관절염 증상을 보였고, 평균 발병은 22일이었다 (p<0.000l 대 야생형).
IL-17RA -/- 낙아웃 마우스의 임상 스코어는 야생형 마우스보다 더 낮은 평균 임상 스코어 및 더 늦은 발병을 보여준다. 도 6은 MOG-유도된 모델에서 야생형 마우스에 비해 IL-17RA -/- 낙아웃 마우스에서 감소된 임상 스코어를 보여준다. IL-17RA -/- 낙아웃 집단은 IL-17RA 발현 야생형 집단보다 유의하게 더 늦은 관절염의 발병을 보였다. 또한, IL-17RA -/- 낙아웃 집단은 관절염 발병의 모든 시점에서 보다 낮은 평균 임상 스코어를 보였다. IL-17RA-발현 야생형 동물에 비해 IL-17RA -/- 돌연변이체에서 관찰된 관절염의 보다 늦은 평균 발병 및 관절염에 대한 보다 낮은 평균 임상 스코어는 추가로 염증 및 침식에 IL-17RA 신호전달이 관련됨을 나타낸다.
실시예 4
난알부민 감작화 및 챌린징된 IL-17RA KO 마우스는 야생형 마우스에 비해 BAL (기관지폐포 세척) 액에서 염증성 세포의 유의한 감소를 보인다. IL-17RA KO 마우스를 실시예 1에 설명된 바와 같이 준비한 후, 난알부민으로 비내 챌린징하였다. IL-17RA KO 집단에서 염증성 세포의 수를 IL-17RA 발현 야생형 집단과 비교하였다. 도 7은 제3 챌린지 후에 난알부민-유도된 천식에서 IL-17RA 발현 야생형 마우스보다 IL-17RA KO 마우스에서 BAL액 내의 염증성 세포의 총 수가 감소됨을 보여준다.
천식의 난알부민-유도된 모델에서 BAL액 내의 호산구 (A), 중성구 (B), 림프구 (C) 및 대식세포 (D)의 발생에 대해 IL-17RA KO 마우스 집단을 IL-17RA 발현 야생형 마우스와 비교하였다. 도 8A-8D는 IL-17RA KO 마우스가 IL-17RA 발현 야생형 집단에 비해 IL-17RA KO 집단에서 BAL액 내의 호산구 (8A), 중성구 (8B) 및 림프구 (8C)의 감소된 수를 갖는다는 것을 보여준다. BAL액 대식세포의 변화 (8D)는 야생형 또는 IL-17RA KO 마우스 (나이브 및 OVA-챌린징된)에서 관찰되지 않았다. 이들 데이타는 IL-17RA 신호전달이 면역-매개된 염증성 반응을 조절하는데 중요함을 제안한다.
실시예 5
IL-17RA 항체는 예방 및 치료 목적으로 투여될 때 CIA (콜라겐 유도된 관절염) 마우스 모델에서 관절염의 발생을 감소시키는 것으로 밝혀졌다. IL-17RA 억제는 CIA의 몇몇 모델에 대해 예방 및 치료 방식 모두에서 임상 관절염을 감소시켰다.
예방 목적으로 투여된 대용 중화 마우스 IL-17RA mAb는 야생형 CIA 모델에서 용량 의존 방식으로 평균 임상 스코어를 저하시켰다. 도 9는 야생형 CIA 모델에서 IL-17RA mAb에 의한 용량 의존적 억제를 보여준다. 마우스를 부스트 (boost) 후 2.5주 동안 월요일, 수요일 및 금요일에 IL-17RA mAb 또는 대조군 Ig로 처리하였다. 100 ㎍ 및 300 ㎍의 IL-17RA 항체의 투여는 이소형 대조군 Ig에 비해 부스트 후 18일 동안 보다 낮은 임상 스코어를 발생시켰다.
뼈 손실 및 관절 내 연골 침식의 감소는 300 ㎍ 용량의 IL-17RA mAb에서 평균 임상 스코어의 감소와 관련되었다. 조직병리학적 분석 및 방사선 영상 분석을 IgG 대조군과 비교하였다. 두 분석에 의해, IL-18R mAb (이소형 대조군)으로 처리된 CBA/1 수컷 마우스의 뒷발의 발목 관절은 현저한 염증, 복사뼈의 연골하 뼈 침식, 발목뼈-중족골 관절의 현저한 관절 구조 붕괴 (연골하 뼈 및 관절 연골 침식), 및 반응성 골막성 뼈 형성을 보였다. 이와 매우 대조적으로, 300 ㎍ 항-IL-17RA mAb로 처리된 DBA/1 마우스의 뒷발의 발목 관절은 잘 한정된 관절 공간을 보였고, 부종의 결여 및 골막성 반응성 뼈 또는 뼈 용해성 병변의 결여는 감소된 뼈 손실 및 연골 침식을 나타내었다.
실시예 6
IL-17RA 억제는 또한 야생형 및 TNFR p55/p75 KO 모델에서 임상 징후의 발병 후에 투여가 개시될 때 (즉, 치료 목적의 투여 프로토콜) CIA 모델에서 효과적인 것으로 밝혀졌다. 처치는 두 모델에서 콜라겐을 도입한 지 약 6-7일 후에 개시하였다. 도 10은 항-IL-17RA mAb를 사용한 치료적 처치가 두 야생형 마우스 모두에서 평균 임상 스코어를 안정화시킴을 보여준다. 도 11은 항-IL-17RA mAb를 사용한 치료적 처치가 TNFR p55/p75 KO 모델에서 평균 임상 스코어를 안정화시킴을 보여준다. 마우스를 치료적 처치군으로 무작위 선발한 후 2주 동안 월요일, 수요일 및 금요일 스케쥴로 항-IL-17RA mAb, 항-IL-1R mAb, 또는 대조군 Ig로 처리하였다. 상기 데이타는 WT 및 TNFR p55/p75 KO CIA 모델 모두에서 수행된 2회의 독립적인 실험의 데이타이다. 항-IL-17RA mAb는 CIA 유도 야생형 마우스에서 대조군 IgG에 비해 감소된 임상 스코어를 보였다. 놀랍게도, TNF p55/p75 KO 모델에서 항-IL-17RA mAb의 유사한 효능이 TNF 신호전달과 무관하게 CIA를 안정화시켰다. 상기 데이타는 항-IL-17RA 항원 결합 단백질 요법이 항-TNF 요법에 대한 비-반응자를 선발할 수 있음을 제안한다. 항-IL-17RA 항원 결합 단백질 요법과 항-TNF 요법의 조합 요법이 단독의 경우보다 더 유리할 수 있다.
실시예 7
인간 IL-17RA에 대항하여 생성된 완전 인간 모노클로날 항체의 개발은 아브제닉스 (Abgenix) (현재 암젠 프레몬트 인크. (Amgen Fremont Inc.)) XenoMouse(등록상표) 기술을 사용하여 수행하였다 (그 전문이 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 6,114,598; 6,162,963; 6,833,268; 7,049,426; 7,064,244; [Green et al., 1994, Nature Genetics 7:13-21]; [Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15:146-156]; [Green and Jakobovitis, 1998, J. Ex. Med. 188:483-495]). 표 4는 면역원으로서 사용된 IL-17RA 단백질의 일부 및 항-IL-17RA 항체를 생성하고 스크리닝하기 위해 사용되는 세포주를 제시한다.
시약 설명
IL-17RA.Fc C-말단 인간 Fc 도메인이 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인.
안정한 CHO 세포주에서 발현됨.
IL-17RA-FLAG-폴리His
(서열 431)		 C-말단 FLAG-폴리His 태그가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인.
COS PKB 세포에서 일시 형질감염에 의해 발현됨.
IL-17RA CHO 세포 CHO 세포의 표면에서 발현된 전장 인간 IL-17RA.
IgG2 XenoMouse(등록상표) 마우스를 IL-17RA-Fc (1군) 및 IL-17RA-FLAG-폴리His (2군)로 면역화/부스팅하였다. 혈청 역가를 ELISA로 모니터링하고, 가장 우수한 역가를 갖는 마우스를 교배하여 하이브리도마를 생성시켰다. 생성되는 폴리클로날 상등액을 ELISA에 의해 IL-17RA에 대한 결합에 대해 스크리닝하고, 양성 상등액을 FMAT에 의해 IL-17RA CHO 세포에 대한 결합에 대해 스크리닝하였다. 양성 상등액을 추가의 스크리닝에 적용하였다. IgG2 XenoMouse(등록상표) 마우스를 면역원, 즉 IL-17RA-Fc (3군) 및 IL-17RA-FLAG-pHis (4군)으로 면역화시키고, 추가의 면역화 후에 시험하였다.
실시예 8
항-IL-17RA 항체를 특성화하였다. 비-클로날 하이브리도마 상등액을 1-2 ml의 부피로 제조하였다 (Ig 농도는 상기 상등액에 대해 결정되지 않았다). 항-IL-17RA 비-클로날 하이브리도마 상등액을 처음에 인간 IL-17RA를 과다발현하는 CHO 세포 및 사이노몰거스 IL-17RA를 과다발현하는 다른 CHO 세포주에 대한 비오티닐화 인간 IL-17A 결합을 억제하는 능력에 대해 FACS에 의해 스크리닝하였다. 이어서, 인간 IL-17A의 CHO-huIL-17RA 및 CHO-cynoIL-17RA에 대한 결합을 완전히 또는 거의 완전히 억제할 수 있는 비-클로날 상등액을 인간 음경 포피 섬유모세포 (HFF) 세포주를 사용하는 IL-17A-유도된 시토킨/케모킨 분비 분석에서 여러 희석액으로 스크리닝하였다. 항-IL-17RA 비-클로날 상등액을 HFF 세포 (96웰 플레이트 내의 5000 세포/웰)와 함께 36℃에서 30분 동안 인큐베이팅한 후, IL-17A (5 ng/ml) 단독으로 또는 IL-17F (20 ng/ml) 및 TNF-알파 (5 ng/ml)로 철야 자극하였다. 이어서, 섬유모세포 배양 상등액을 IL-6 또는 GRO-알파의 존재에 대해 ELISA로 분석하였다. 항-IL-17RA 비-클로날 하이브리도마를 CHO-IL-17RA FACS 분석 및 HFF 생물학적 분석에서 그의 성능을 기초로 하여 서브클로닝을 위해 선택하였다. 선택의 예를 하기 표 5, 6 및 7에 나타낸다.
Figure pat00016
표 5에서, 항-IL-17RA 비-클로날 하이브리도마 상등액을 IL-17RA에 대한 결합에 대해 스크리닝하였다. 표 5의 처음 절반은 유세포 분석 (즉, FACS) 결과에서 % 양성 및 평균 형광 강도 (MFI)를 보여준다. % 양성은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 의한 huIL-17RA+ CHO 세포에 대한 비오틴-huIL-17A 결합의 억제를 보여준다. MFI 컬럼은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 의한 cyno IL-17RA+ CHO 세포에 대한 비오티닐화 huIL-17A 결합의 억제를 보여준다. 표 5의 나머지 절반은 IL-6 생산 강도 %에 의해 측정되는 비-클로날 및 mAb의 HFF 결합 강도를 보여준다. 처음 2개의 컬럼은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 대한 IL-17A/HFF 생물학적 분석을 보여주고, 나머지 4개의 컬럼은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 대한 반복 IL-17A/HFF 생물학적 분석 결과이다.
Figure pat00017
Figure pat00018
Figure pat00019
표 6은 IL-17RA 비-클로날 하이브리도마 상등액 스크리닝 데이타를 보여준다. % 양성 및 MFI 컬럼은 유세포 분석 (FACS) 결과를 보여준다. % 양성 컬럼은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 의한 huIL-17RA+ CHO 세포에 대한 비오틴-huIL-17A 결합의 억제를 보여준다. MFI 컬럼은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 의한 cyno IL-17RA+ CHO 세포에 대한 비오티닐화 huIL-17A 결합의 억제를 보여준다. 처음 2개의 HFF 생물학적 분석 컬럼은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 대한 IL-17A/HFF 생물학적 분석을 보여주고, 나머지 4개의 생물학적 분석 컬럼은 선택된 비-클로날 하이브리도마 상등액에 대한 반복 IL-17A/HFF 생물학적 분석 결과이다. 많은 상등액을 서브클로닝을 위해 선택하였다.
Figure pat00020
표 7은 항-IL-17RA 비-클로날 하이브리도마 상등액 스크리닝 데이타를 보여준다. 처음 2개의 컬럼은 유세포 분석 데이타 (FACS)이다. % 양성 컬럼은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 의한 huIL-17RA+ CHO 세포에 대한 비오틴-huIL-17A 결합의 억제를 보여준다. MFI 컬럼은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 의한 cyno IL-17RA+ CHO 세포에 대한 비오티닐화 huIL-17A 결합의 억제를 보여준다. 나머지 3개의 컬럼은 비-클로날 하이브리도마 상등액에 대한 반복 IL-17A/HFF 생물학적 분석 결과를 보여준다. 상등액 6, 18, 19 및 21을 서브클로닝을 위해 선택하였다.
서브 클론 ID IL-17A/HFF 생물학적 분석
IC50 (nM)		 저해상 BIAcore KD (nM)
1. (AMH14/AML14)의 서브클론 0.12 0.69
2. (AMH14/AML14)2의 서브클론 0.20 ND
3. (AMH14/AML14)3의 서브클론 0.075 ND
4. (AMH21/AML21)의 서브클론 2.3 ND
5. (AMH21/AML21)의 서브클론 3.1 ND
6. (AMH21/AML21)의 서브클론 3.3 16.7
7. (AMH20/AML20)의 서브클론 8.1 ND
8. (AMH20/AML20)의 서브클론 6.6 ND
9. (AMH20/AML20)의 서브클론 6.7 11.6
10. (AMH19/AML19)의 서브클론 0.22 3.1
11. (AMH19/AML19)의 서브클론 1.1 ND
12. (AMH19/AML19)의 서브클론 0.50 ND
13. (AMH13/AML13)의 서브클론 >10 7.6
14. (AMH18/AML18)의 서브클론 0.44 ND
15. (AMH18/AML18)의 서브클론 0.40 ND
16. (AMH18/AML18)의 서브클론 0.17 14.9
17. (AMH12/AML12)의 서브클론 3.5 ND
18. (AMH12/AML12)의 서브클론 3.7 8.2
20. (AMH12/AML12)의 서브클론 5.5 ND
21. (AMH17/AML17)의 서브클론 2.5 8.2
22. (AMH17/AML17)의 서브클론 5.3 ND
23. (AMH17/AML17)의 서브클론 0.57 ND
24. (AMH16/AML16)의 서브클론 1.6 ND
25. (AMH16/AML16)의 서브클론 2.3 6.2
26. (AMH16/AML16)의 서브클론 1.4 ND
27. (AMH22/AML22)의 서브클론 0.046 1.5
28. (AMH22/AML22)의 서브클론 0.09 ND
29. (AMH22/AML22)의 서브클론 0.07 ND
ND = 결정되지 않음
표 8은 서브클로닝된 하이브리도마에 대한 IL-17A/HFF 생물학적 분석 IC50 값 및 저해상 BIAcore(등록상표) KD 값을 보여준다. IL-17A/HFF IL-17RA 결합 분석에서 보다 낮은 IC50 및 KD 값은 IL-17RA mAb가 IL-17A의 IL-17 수용체 A에 대한 결합을 억제함을 보여주었다. 인간 IL-17RA에 대한 IL-17A의 결합을 억제하기 위한 낮은 KD 값을 기초로 하여 추가의 특성화를 위한 항체를 선택하였다.
실시예 9
중쇄 및 경쇄 서열 (AMH22/AML22), (AMH19/AML19), (AMH18/AML18) 및 (AMH14/AML14)을 갖는 IL-17RA 인간 mAb 클론을 추가의 생물학적 분석 특성화를 위해 선택하였다. 하기 표 9는 IL-17A 및 IL-17F 모두에 대한 HFF 생물학적 분석 및 1차 폐 섬유모세포 생물학적 분석에서 선택된 Ab의 IC50 값을 보여준다.
IL-17RA mAb IL-17A/HFF IC50 (nM) IL-17F/HFF IC50 (nM) IL-17A/폐 섬유모세포 IC50 (nM)
(AMH14/AML14) 0.13 0.067 0.04
(AMH22/AML22) 0.10 0.033 0.14
(AMH19/AML19) 0.20 0.087 0.22
(AMH18/AML18) 0.33 0.073 0.081
선택된 인간 mAb는 IL-17RA에 대한 IL-17A의 결합을 억제하였다. IL-17RA에 대한 IL-17A의 결합에서 관찰된 더 낮은 IC50 값에 추가하여, 선택된 인간 mAb는 IL-17RA에 대한 IL-17F의 결합을 억제하는 감소된 IC50 값을 보였다 (제2 컬럼). 따라서, 선택된 인간 mAb는 IL-17A - IL-17RA 결합 및 IL-17F - IL-17RA 결합을 모두 억제한다.
실시예 10
예시적인 IL-17RA 인간 mAb를, 사이노몰거스 IL-17A로 자극된 사이노몰거스-유래된 신장 상피 세포주 JTC-12를 사용하는 사이노몰거스 생물학적 분석으로 시험하였다. 도 12는 JTC-12 세포로부터 사이노몰거스 IL-17A-유도된 IL-6 생산의 억제에서 중쇄 및 경쇄 서열 (AMH22/AML22), (AMH19/AML19), (AMH18/AML18) 및 (AMH14/AML14)을 갖는 IL-17RA mAb를 보여준다. (----) 선은 TNF-알파와 조합한 사이노몰거스 IL-17의 양성 대조 값을 나타낸다. (-.-.-) 선은 사이노몰거스 TNF-알파의 양성 대조 값을 나타낸다. (....) 선은 중간 대조 값을 나타낸다. JTC-12 세포를 30분 동안 항-IL-17RA mAb와 함께 예비인큐베이팅한 후, 사이노몰거스 IL-17A (5 ng/ml) 및 인간 TNF-알파 (5 ng/ml)로 철야 자극하였다. 도 12는 각각의 항체가 사이노몰거스 IL-17A가 IL-17RA에 결합하는 것을 억제하고 IL-17RA 활성화를 억제할 수 있었음을 보여주고, 이것은 JTC-12 세포로부터 IL-6의 생산에 의해 결정된다. IL-17RA 항체 (AMH14/AML14)는 JTC-12 세포로부터 사이노몰거스 IL-17A-유도된 IL-6의 생산을 길항할 수 있었고, IC50은 약 1.2 nM이었다.
실시예 11
IL-17RA mAb의 시험관내 결합을 분석하였다. IL-17RA 항체의 결합 친화도는 당업계에 공지된 표준 방법에 의해 Biacore 3000(등록상표) 기기를 사용하는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하였다. 항체 후보를 염소 항-인간 IgG (H + L) 항체 (잭슨 이뮤노 리서치 (Jackson Immuno Research, 미국 메인주 바 하버))로 유도체화된 CM4 칩 상에 포획하였다. 염소 항-인간 IgG (H + L) 항체로 코팅되었지만 포획된 항체가 존재하지 않는 CM4 칩을 대조용으로 사용하였다. 0.46-1000 nM의 농도 범위에서 가용형 huIL-17RA-FLAG-폴리His (서열 431)을 2분 동안 (회합기), 이어서 15-30분 동안 (해리기) 칩 위에 유동시켰다. 문헌 [Hopp et al., Bio/Technology 6: 1204, 1988] 및 미국 특허 5,011,912에 기재된 바와 같은 FLAG 펩티드, 즉 Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys (DYKDDDDK) (서열 447)은 발현된 재조합 단백질의 신속한 분석 및 손쉬운 정제를 가능하게 한다. FLAG 펩티드가 주어진 폴리펩티드에 융합된 융합 단백질을 제조하기 위해 유용한 시약은 상업적으로 이용가능하다 (시그마).
50 ㎕/분의 유속을 사용하여 25℃에서 실험을 수행하였다. 데이타를 BIAeval 소프트웨어(등록상표) (v4.1)를 사용하여 1:1 모델 + Local Rmax에 피팅하였다.
인간 항체 ka (1/Ms) KD (1/s) KA (1/M) KD (M)
(AMH14/AML14) 2.60 x 105 6.22 x 10-5 4.18 x 109 2.39 x 10-10
(AMH22/AML22) 2.35 x 105 1.17 x 10-4 2.01 x 109 4.98 x 10-10
(AMH19/AML19) 1.42 x 105 1.14 x 10-4 1.25 x 109 8.02 x 10-10
(AMH18/AML18) 1.02 x 105 1.01 x 10-3 1.01 x 108 9.88 x 10-9
표 10은 인간 mAb 클론의 KD가 약 10-10 내지 10-9이고, 중쇄 및 경쇄 서열 (AMH14/AML14)을 갖는 클론이 가장 높은 친화도를 갖는다는 것을 보여준다. 각각의 인간 모노클로날 항체의 동역학적 데이타는 평형 데이타와 일치하였다. 중쇄 및 경쇄 가변 서열 (AMH14/AML14; 각각 서열 14 및 서열 40)을 갖는 항체는 IL-17RA에 대한 가장 높은 친화도 및 가장 느린 오프-레이트 (off-rate)를 보였다.
실시예 12
중쇄 및 경쇄 가변 서열 (AMH14/AML14)를 갖는 IL-17RA 인간 mAb의 작용제 능력을 시험관 내에서 평가하였다. IL-17RA mAb (AMH14/AML14)를 HFF 세포에 대한 그의 작용제 효과에 대해 시험하였다. 또한, 중쇄 및 경쇄 서열 (AMH14/AML14)를 갖는 IL-17RA mAb를 HFF 세포와 인큐베이팅하기 전에 염소 항-인간 F(ab')2, 염소 항-인간 IgG 및 마우스 항-인간 IgG와 가교결합하는 조건 하에 시험하였다. 0, 0.1, 0.5, 1, 1.5 및 10 ㎍/ml의 재조합 IL-17RA mAb AMH14/AML14를 단독으로 및 쥐 항-인간 IgG (자이메드 (Zymed)/인비트로겐), 염소 항-인간 F(ab')2 (염소 a-h-Fab) 및 염소 항-인간 IgG (염소 a-h IgG)로 예비 가교결합된 형태로 HFF 세포와 함께 철야 인큐베이팅하였다. GRO-알파를 ELISA로 평가하였다. IL-17A 단독은 이 실험에서 GRO-알파 생산을 위한 양성 대조군으로 기능하였다. 데이타는 2회의 독립적인 실험을 나타낸다. IL-17RA mAb (AMH14/AML14) 단독은 HFF 세포에 대한 어떠한 효과도 보이지 않았다. 항-IL-17RA mAb (AMH14/AML14)의 예비 가교결합은 HFF 세포로부터 GRO-알파 생산에 대해 어떠한 효과도 보이지 않았다. 상기 데이타는 항-IL-17RA mAb (AMH14/AML14)가 단독으로 또는 예비 가교결합되어 HFF 세포와 함께 인큐베이팅될 때 GRO-알파 반응을 유도할 수 없고, 따라서 IL-17RA에 대한 작용제 mAb가 아님을 입증한다.
실시예 13
IL-17RA mAb AMH14/AML14에 대한 생식세포 계열 (GL) 변화의 효과를 HFF 생물학적 분석으로 시험하였다. 도 13은 생식세포 계열 잔기에 관련하여 서열 40 (AML14)의 프레임워크 구역의 서열 변이 및 IC50 값에 대한 효과를 보여준다. 서열 40 (AML14)은 프레임워크 내에 4개의 비-생식세포 계열 잔기 (2개는 FR2 내에, 2개는 FR3 내에 존재함)를 함유한다. 표준 부위 지정 돌연변이 유발 방법을 사용하여 AMH14/AML14의 생식세포 계열 버전 A 및 B를 생성시켰다. 상기 변이체를 IL-17A 및 IL-17F HFF 생물학적 분석으로 시험하였다: HFF 세포를 다양한 항-IL-17RA mAb와 함께 30분 동안 예비 인큐베이팅한 후, IL-17 (5 ng/ml)로 철야 자극하였다.
도 14는 생식세포 계열로 되돌아간 잔기를 갖는 2개의 변이체 (도 13 참조)가 AMH14/AML14에 관련하여 감소된 IL-17A 억제 활성을 가졌음을 보여주고, 이는 프레임워크 구역 내의 일부 변이는 허용될 수 있지만, 일부 잔기는 활성에 영향을 미칠 수 있음을 나타낸다. (----) 선은 항체의 부재 하에 IL-17 자극의 양성 대조 값을 나타낸다 (약 4062 pg/ml). 배지만의 대조군은 약 71 pg/ml의 값을 보여주었다.
도 15는 생식세포 계열로 되돌아간 잔기를 갖는 2개의 변이체 (도 13 참조)가 AMH14/AML14에 관련하여 감소된 IL-17F 억제 활성을 가졌음을 보여주고, 이는 프레임워크 구역 내의 일부 변이는 허용될 수 있지만, 일부 잔기는 활성에 영향을 미칠 수 있음을 나타낸다. 항체의 부재 하에 TNF-알파 자극과 조합한 IL-17F의 양성 대조 값은 약 10994 pg/ml이었고, TNF-알파만의 값은 약 1534 pg/ml이었고, 배지만의 대조군은 약 55 pg/ml의 값을 보여주었다.
실시예 14
다양한 IL-17RA 항원 결합 단백질 (인간 항체의 형태로)이 인간 IL-17RA에 결합하는지를 결정하기 위한 연구를 수행하였다. ForteBio™ Octet System은 항체 결합을 측정하기 위해 이용가능한 몇몇 시스템 및 기술 중의 하나이다. 항체 결합을 스크리닝하기 위해 사용되는 방법은 필수적으로 제조자의 권장사항을 따라 수행하였다. 보다 많은 정보에 대해서는 www.fortebio.com을 참조한다. 간단히 설명하면, 스트렙타비딘 센서 (ForteBio™)를 10분 동안 PBSAT (1% BS A/PBS + 0.05% Tween20(등록상표) (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트) 내에 미리 침지시켰다. PBSAT 중의 10 ㎍/mL의 비오티닐화 AMH14/AML14를 900초 동안 센서에 로딩하였다. 새로운 기저선이 PBSAT에서 600초 동안 확립되었다. 이어서, PBSAT 중의 10 ㎍/mL의 야생형 IL-17RA-FLAG-폴리His (서열 431)을 900초 동안 센서에 결합시켰다. 새로운 기저선이 PBSAT에서 600초 동안 확립되었다. 200 nM의 다음과 같은 mAb, 즉 AMH22/AML22, AMH19/AML19, 및 AMH18/AML18을 PBSAT 중에서 900초 동안 회합시킨 후, 900초 동안 해리시켰다. 데이타는 AMH18/AML18이 결합을 위해 AMH14/AML14와 경쟁하지 않음을 보여주고, 이것은 AMH14/AML14 및 AMH18/AML18이 상이한 중화 결정인자에 결합함을 나타낸다. AMH22/AML22 및 AMH19/AML19는 AMH14/AML14의 존재 하에 결합하지 않고, 이것은 3개의 모든 이들 항체가 동일하거나 유사한 중화 결정인자에 결합하고, 따라서 함께 비닝하는 것으로 간주되는 것을 제안한다.
실시예 15
예시적인 IL-17RA 항체의 IL-17RA 결합 특징을 결정하기 위해서 교차-경쟁 연구를 수행하였다. 지아 (Jia) 등에 의해 설명된 멀티플렉스드 비닝 방법의 변형을 사용하였다 ([Jia, et al., J. Immun. Meth., 2004, 288:91-98] 참조). 이 방법은 Bio-Plex Workstation 및 소프트웨어 (바이오라드 (BioRad, 미국 캘리포니아주 허큘레스)), 및 루미넥스 코프 (Luminex(등록상표) Corp., 미국 텍사스주 오스틴)의 시약을 이용하였다. 아래에 제시되는 것을 제외하고는 제조자의 기본 프로토콜을 따랐다 (상세한 내용에 대해서는 www.bio-rad.com 및 www.luminexcorp.com 참조). 스트렙타비딘-코팅된 Luminex(등록상표) 비드 (Luminex(등록상표), #L100-L1XX-01, 여기서 "XX"는 비드 코드를 특정함)의 각각의 비드 코드를 150 ㎕의 50 ㎍/ml 비오티닐화 1가 마우스-항-인간 IgG 포획 항체 (비디 파밍겐 (BD Pharmingen), 벡톤 디킨슨 (Becton Dickinson), 미국 뉴저지주 프랭클린 레이크스, 제품 #555785) 중에서 1시간 동안 실온에서 암소에서 인큐베이팅한 후, PBSAT로 3회 세척하였다. 마우스-항-인간 IgG 코팅을 평가하고, 비드를 FACS로 정량하였다. 각각의 비드 코드를 별개로 10 ㎕의 항-IL-17RA 항체와 1시간 동안 실온에서 인큐베이팅한 후, 세척하였다. 비드를 모은 후, 96-웰 필터판 (밀리포어 (Millipore, 미국 매사추세츠주 빌러리카), 제품 #MSBVN1250)에 분배하였다. 80 ㎕의 2 ㎍/ml IL-17RA (서열 431)을 웰의 1/2에 첨가하고, 나머지 1/2에는 버퍼를 첨가한 후, 실온에서 1시간 동안 인큐베이팅하고, PBSAT로 세척하였다. 10 ㎕의 항-IL-17RA 항체를 IL-17RA (서열 431)이 존재하는 하나의 웰에, IL-17RA가 존재하지 않는 하나의 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이팅한 후, PBSAT로 세척하였다. 무관한 인간-IgG (잭슨 랩스. (Jackson Labs., 미국 메인주 바 하버), 제품 #009-000-003)를 음성 대조군으로서 포함시켰다. 50 ㎕의 PE-컨쥬게이팅된 1가 마우스-항-인간 IgG (비디 파밍겐, 벡톤 디킨슨, #555787)을 각각의 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이팅한 후, PBSAT로 세척하였다. PE-태깅된 1가 항체는 웰에 첨가된 제2 mAb의 존재를 검출할 것이지만, 1가 마우스-항-인간 IgG 항체에 의해 포획된 제1 mAb는 검출하지 않을 것이다. 비드를 120 ㎕의 PBSAT에 재현탁시키고, 제조자의 권장 프로토콜에 따라 Bio-Plex 워크스테이션으로 적어도 100개의 사건/비드 코드를 수집하였다.
IL-17RA가 없는 항체쌍의 중간 형광 강도 (MFI)를 배경 노이즈 (noise)에 대해 정규화하기 위해 IL-17RA를 함유하는 상응하는 반응의 MFI 신호로부터 차감하였다. 2개의 항체가 서로 교차-경쟁하고, 따라서 함께 "비닝"되는지를 결정하기 위한 기준은 제2 항체가 검출가능한 정도를 결정하는 것이다. 정규화된 MFI가 임의의 다음 3개의 값 중 가장 높은 것보다 큰 경우에, 항-IL-17RA 항체는 동시에 IL-17RA에 결합하는 것으로 간주되고, 상이한 Bin에 속하는 것으로 간주되었다 (즉, 항체는 교차-경쟁하지 않았다): 정규화된 MFI는 자체와 쌍을 이룬 항체의 MFI 값의 3배, 또는 huIgG 대조군과 쌍을 이룬 항체의 MFI 값의 3배, 또는 300의 MFI를 초과한다. 일반적으로 말하면, 상이한 빈에 할당된 항체는 IL-17RA의 상이한 부분에 결합하고, 및 동일한 Bin(들)에 할당된 항체는 IL-17RA의 유사한 부분에 결합한다.
도 16A 및 16B는 항-IL-17RA 항체의 멀티플렉스드 비닝의 결과를 도시한 것이다. 어둡게 한 값은 IL-17RA에 동시에 결합하는 항체쌍을 나타내고, 이는 상기 항체가 상이한 중화 결정인자에 결합하는 것을 제안한다. 네모친 값은 항체가 그 자체에 대해 쌍을 이루고 교차-경쟁함을 나타낸다. 설명된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 함유하는 다음 모노클로날 인간 항체를 시험하였다: A: AMH11/AML11, B: AMH4/AML4, C: AMH8/AML8, D: AMH7/AML7, E: AMH6/AML6, F: AMH10/AML10, G: AMH18/AML18, H: AMH1/AML1, I: AMH22/AML22, J: AMH23/AML23, K: AMH14/AML14, L: AMH19/AML19, M: AMH12/AML12, N: AMH17/AML17, O: AMH16/AML16, P: AMH26/AML26, Q: AMH21/AML21, 및 R: AMH20/AML20.
도 16A 및 16B는 또한 항체 A: AMH11/AML11, B: AMH4/AML4, C: AMH8/AML8, D: AMH7/AML7, E: AMH6/AML6, F: AMH10/AML10 및 G: AMH18/AML18이 인간 IL-17RA에 대한 결합을 위해 서로 경쟁하고, 그 결과 하나의 규정된 군 (Bin 1)에 속한 것을 보여준다. 일반적으로, 항체 I: AMH22/AML22, J: AMH23/AML23, K: AMH14/AML14, L: AMH19/AML19, M: AMH12/AML12, N: AMH17/AML17, O: AMH16/AML16은 인간 IL-17RA에 대한 결합을 위해 서로 경쟁하고, 그 결과 하나의 규정된 군 (Bin 3)에 속하였다. 일반적으로, Bin 1의 항체는 Bin 3의 항체와 경쟁하지 않았다.
항체 H: AMH1/AML1은 그의 경쟁 패턴에 있어서 특유하였고, Bin 2를 형성하였지만, Bin 3에 가장 유사하다. 항체 P: AMH26/AML26은 Bin 4를 형성하였고, 임의의 다른 항체와의 교차-경쟁을 거의 보이지 않았고, 이는 상기 항체에 특유한 중화 결정인자를 제안한다. 항체 Q: AMH21/AML21 및 R: AMH20/AML20은 개별적으로 특유한 경쟁 패턴을 보였지만, Bin 3 항체와 상당한 유사성을 가졌고, 각각 Bin 5 및 6을 형성하였다. 상기 데이타는 교차-경쟁하는 항체의 아속 내의 몇몇 종의 증거를 제공한다.
실시예 16
상기 설명된 바와 같이, 인간 IL-17RA에 결합하고 IL-17A 및/또는 IL-17F의 결합을 억제하거나 중화시키는 항체를 생성하고 특성화하였다. 상기 다양한 IL-17RA 항체가 결합된 인간 IL-17RA 상의 중화 결정인자를 결정하기 위해, 많은 키메라 인간/마우스 IL-17RA 단백질을 제작하였다. 상기 방법은 다양한 IL-17RA 항체와 마우스 IL-17RA의 비-교차 반응성을 이용한다. 각각의 키메라에 대해, 인간 IL-17RA 세포외 도메인 (서열 431)의 1 또는 2개의 구역이 마우스 IL-17RA (서열 432)의 상응하는 구역(들)로 대체되었다. 도 17은 마우스 IL-17RA (서열 432) 및 인간 IL-17RA 서열 내의 대응 도메인을 대체하는 6개의 도메인, 즉 A, B, C, D, E 및 F를 도시한 것이다. 상기 기술은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Stemmer, W.P.C. et al., 1995 Gene 164:49-53] 참조).
6개의 단일-구역 키메라 및 8개의 이중-구역 키메라를 pTT5 벡터로 제조하였다. 개시 코돈의 5'의 SalI 부위로부터 종결 코돈의 3'의 NotI 부위까지의 단백질에 걸치는 65-mer 센스 및 안티센스 올리고뉴클레오티드의 PCR 어닐링 (annealing)에 의해 키메라 구성체 A 내지 F (단일 구역 키메라)를 합성 방식으로 제조하였다. 제1 라운드의 PCR에 사용된 주형은 SalI 부위로부터 NotI 부위까지의 구역에 걸치는 올리고 (센스 및 안티센스)의 혼합물이었다. PCR은 다음과 같이 2단계로 수행하였다:
Figure pat00021
이중 키메라 구성체는 단일 키메라 A 내지 D를 SalI 및 SacI 제한 효소로 소화시킨 후, 발현 벡터로서 pTT5를 사용하여 SacI 및 NotI로 소화된 키메라 E 및 F와 3자 (3-way) 라이게이션시켜 제조하였다. 키메라, 즉 huIL-17RA-FLAG-폴리His (서열 431), 및 muIL-17RA-FLAG-폴리His (서열 432)을 롤러 병 내에서 숙주 세포로서 2936-E 세포 (내셔널 리서치 카운슬 오브 캐나다 (National Research Council of Canada) (NRCC)로부터 입수가능; 추가의 정보에 대해서는 NRCC 문서 L-11565를 참조)를 사용하여 일시 발현시켰다. 상기 일시 발현 기술은 당업계에 잘 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Durocher, Y. et al., 2002 Nucleic Acids Res. Jan 15;30(2):E9] 참조). 상등액을 제조자의 일반적인 지침 (지이 헬쓰케어 (GE Healthcare, 미국 뉴저지주 피스카타웨이))에 따라 HisTrap™ HP 컬럼을 사용하여 정제하고, 표준 이미다졸 구배 (제조자의 권장 프로토콜 참조)를 사용하여 용출시켰다. 정제된 단백질은 PBS (pH 7.2) 내로 탈염시켰다.
표준 분석 도구, 예를 들어 ClustalW (EMBL-EBI)를 사용하여 키메라를 정렬시켰다. 생성되는 키메라 단백질을 도 18A-18D에 제시한다. 도 17 및 18A-18D를 참고로 하여, 키메라 A (서열 433)은 마우스 도메인 A가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 B (서열 434)는 마우스 도메인 B가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 C (서열 435)는 마우스 도메인 C가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 D (서열 436)는 마우스 도메인 D가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 E (서열 437)는 마우스 도메인 E가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 F (서열 438)는 마우스 도메인 F가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 G (서열 439)는 마우스 도메인 A 및 E가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 H (서열 440)는 마우스 도메인 B 및 E가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 I (서열 441)는 마우스 도메인 C 및 E가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 J (서열 442)는 마우스 도메인 D 및 E가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 K (서열 443)는 마우스 도메인 A 및 F가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 L (서열 444)은 마우스 도메인 B 및 F가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 M (서열 445)은 마우스 도메인 C 및 F가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이고; 키메라 N (서열 446)은 는 마우스 도메인 D 및 F가 존재하는 인간 IL-17RA 세포외 도메인이다.
실시예 15에 기재된 바와 유사한 방법을 사용하여, 키메라 대 야생형 IL-17RA 단백질에 대한 예시적인 인간 IL-17RA mAb의 차별적인 결합을 분석함으로써 인간 IL-17RA 상의 중화 결정인자를 결정하기 위해 Bio-Plex Workstation 및 소프트웨어 (바이오라드)를 사용하는 멀티플렉스 분석을 수행하였다. 펜타His-코팅된 비드 (퀴아겐 (Qiagen, 미국 캘리포니아주 발렌시아); www1.qiagen.com 참조)의 12개의 비드 코드를 사용하여 히스티딘-태깅된 단백질을 포획하였다. 12개의 비드 코드는 11개의 키메라 및 야생형 인간 IL-17RA의 멀티플렉싱을 허용하였다.
비드를 제조하기 위해, 일시 발현 배양액의 100 ㎕의 야생형 IL-17RA 상등액 및 100 ㎕의 2.5 ㎍/ml 키메라 단백질을 격렬하게 교반하면서 펜타-His-코팅된 비드에 4℃에서 밤새 또는 실온에서 2시간 동안 결합시켰다. 비드를 제조자의 프로토콜에 따라 세척하고, 12 비드 세트를 모은 후, 각각 2회 또는 3회 분석점을 위해 96-웰 필터판 (밀리포어, 제품 #MSBVN1250)의 2개 또는 3개의 컬럼으로 분취하였다. 4배 희석액의 100 ㎕의 항-IL-17RA 항체를 웰에 첨가하고, 1시간 동안 실온에서 인큐베이팅하여 세척하였다. PE-컨쥬게이팅된 항-인간 IgG Fc (잭슨 랩스., 제품 #109-116-170)의 100 ㎕의 1:100 희석액을 각각의 웰에 첨가하고, 1시간 동안 실온에서 인큐베이팅하여 세척하였다. 비드를 1% BSA에 재현탁시키고, 3분 동안 교반하고, Bio-Plex 워크스테이션에서 판독하였다. IL-17RA 키메라 단백질에 대한 항체 결합을 동일한 풀 (pool)로부터의 인간 IL-17RA 야생형에 대한 항체 결합과 비교하였다. 약 5 로그 스케일로 항체의 적정을 수행하였다. 키메라 단백질의 중간 형광 강도 (MFI)를 최대 야생형 인간 IL-17RA 신호의 백분율로서 그래프로 나타내었다. IL-17RA mAb에 대한 EC50 (nM로 표현)을 3배 이상 증가시키는 (GraphPad Prism(등록상표)에 의해 계산될 때) 돌연변이 (즉, 마우스 도메인)는 IL-17RA mAb 결합에 부정적인 영향을 미치는 것으로 간주되었다. 이들 방법을 통해, 다양한 IL-17RA 항체에 대한 중화 결정인자가 규명되었다.
도 19는 다양한 키메라 단백질에 결합하는 IL-17RA mAb의 능력을 요약한 표이다. 어둡게 한 값은 IL-17RA mAb가 특정 키메라 단백질에 결합하기 위한 기준을 충족시키지 않는 부위를 나타낸다 ("n.d.", 즉 "결정되지 않음"은 키메라가 분석되지 않았음을 의미한다). 상기 설명된 바와 같이, EC50 값이 제시된다. 0의 값은 항체 결합이 제거되었음을 나타낸다. 밑줄친 값은 적정 곡선이 본질적으로 평탄하지만 GraphPad Prism(등록상표)에 의해 할당된 EC50 값이었다. 표 11은 분석에서의 대조 값 (nM)을 보여준다.
mAb mu WT huWT 대조군 3x wt 대조군 2x wt 대조군
AMH18/AML18 0.000 0.061 0.182 0.121
AMH1/AML1 1.879 0.134 0.403 0.269
AMH22/AML22 0.000 0.043 0.128 0.085
AMH14/AML14 3416.000 0.027 0.082 0.055
AMH19/AML19 770.100 0.062 0.187 0.125
AMH23/AML23 0.000 0.053 0.158 0.106
AMH26/AML26 0.000 0.281 0.843 0.562
AMH21/AML21 0.196 0.018 0.055 0.037
AMH20/AML20 1.333 0.022 0.066 0.044
도 19에 도시된 바와 같이, 중화 IL-17RA 항체의 결합에 영향을 미치는 구역에 기초하여 적어도 3개의 중화 결정인자, 즉, 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 75-96에 걸치는 도메인 B, 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 128-154에 걸치는 도메인 C, 및 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 176-197에 걸치는 도메인 D가 확인되었다. 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 75-96에 걸치는 도메인 B는 중화 항체 AMH1/AML1 및 AMH23/AML23의 결합에 부정적인 영향을 미쳤다. 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 128-154에 걸치는 도메인 C는 중화 항체 AMH22/AML22 및 AMH23/AML23의 결합에 부정적인 영향을 미쳤다. 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 176-197에 걸치는 도메인 D는 중화 항체 AMH1/AML1, AMH22/AML22, AMH14/AML14, AMH19/AML19, AMH23/AML23, AMH21/AML21 및 AMH20/AML20의 결합에 부정적인 영향을 미쳤다. 항체가 인간 IL-17RA에 결합하는 부위에 관련된 IL-17RA 항체의 결합 특징이 이중 키메라에 의해 확인되었다. 따라서, 도메인 B, C 및 D는 중화 결정인자인 것으로 간주된다.
실시예 17
상기 설명된 바와 같이, 인간 IL-17RA에 결합하고, IL-17A 및/또는 IL-17F의 결합을 억제하거나 중화시키는 항체를 생성시키고 특성화하였다. 이들 다양한 IL-17RA 항체가 결합하는 인간 IL-17RA 상의 중화 결정인자를 결정하기 위해서, 인간 IL-17RA의 선택된 아미노산 잔기에 아르기닌 치환을 갖는 많은 돌연변이체 IL-17RA 단백질을 제조하였다. 아르기닌 스캐닝은 항체, 또는 다른 단백질이 또다른 단백질에 결합하는 부위를 평가하기 위한 당업계에 인정되는 방법이다 (예를 들어 [Nanevicz, T., et al., 1995, J. Biol. Chem., 270:37, 21619-21625] 및 [Zupnick, A., et al., 2006, J. Biol. Chem., 281:29, 20464-20473] 참조). 일반적으로, 아르기닌 측쇄는 양대전되고, 다른 아미노산에 비해 비교적 부피가 크고, 따라서 돌연변이가 도입되는 항원 구역에 대한 항체 결합을 붕괴시킬 수 있다. 아르기닌 스캐닝은 잔기가 중화 결정인자 및/또는 에피토프의 일부인지를 결정하는 방법이다.
인간 IL-17RA 세포외 도메인 전체에 걸쳐 분포하는 95개의 아미노산을 아르기닌으로의 돌연변이를 위해 선택하였다. 선택은 잔기가 표면에 존재할 가능성을 최대화하고 미스폴딩된 단백질을 생성시키는 돌연변이의 가능성을 감소시키기 위해 대전된 또는 극성 아미노산 쪽으로 편중되었다. 도 20은 서열 431에서 아르기닌 잔기로 대체된 아미노산 잔기를 도시한 것이다. 당업계에 공지된 표준 기술을 사용하여, 돌연변이된 잔기를 함유하는 센스 및 안티센스 올리고뉴클레오티드를 Stratagene Quickchange(등록상표) II 프로토콜 키트 (스트라타젠 (Stratagene)/아질런트 (Agilent), 미국 캘리포니아주 산타클라라))에서 제시된 기준을 기초로 하여 설계하였다. 야생형 (WT) HuIL-17RA-Flag-pHis의 돌연변이 유발은 Quickchange(등록상표) II 키트 (스트라타젠)를 사용하여 수행하였다. 모든 키메라 구성체는 폴리-His 태그를 통한 정제를 용이하게 하기 위해 세포외 도메인의 카르복시 말단 상에 FLAG-히스티딘 태그 (6개의 히스티딘)를 코딩하도록 제조하였다.
아르기닌 돌연변이체 대 야생형 IL-17RA 단백질에 대한 예시적인 인간 IL-17RA mAb의 차별적인 결합을 분석함으로써 인간 IL-17RA 상의 중화 결정인자를 결정하기 위해 Bio-Plex Workstation 및 소프트웨어 (바이오라드)를 사용하는 멀티플렉스 분석을 수행하였다. 펜타His-코팅된 비드 (퀴아겐; www1.qiagen.com 참조)의 12개의 비드 코드를 사용하여 히스티딘-태깅된 단백질을 포획하였다. 12개의 비드 코드는 11개의 IL-17RA 아르기닌 돌연변이체 및 야생형 인간 IL-17RA (서열 431)의 멀티플렉싱을 허용하였다.
비드를 제조하기 위해, 일시 발현 배양액의 100 ㎕의 야생형 IL-17RA 및 IL-17RA 아르기닌 돌연변이체 상등액을 격렬하게 교반하면서 펜타-His-코팅된 비드에 4℃에서 밤새 또는 실온에서 2시간 동안 결합시켰다. 비드를 제조자의 프로토콜에 따라 세척하고, 12 비드 세트를 모은 후, 각각 2회 또는 3회 분석점을 위해 96-웰 필터판 (밀리포어, 제품 #MSBVN1250)의 2개 또는 3개의 컬럼으로 분취하였다. 4배 희석액의 100 ㎕의 항-IL-17RA 항체를 웰에 첨가하고, 1시간 동안 실온에서 인큐베이팅하여 세척하였다. PE-컨쥬게이팅된 항-인간 IgG Fc (잭슨 랩스., 제품 #109-116-170)의 100 ㎕의 1:100 희석액을 각각의 웰에 첨가하고, 1시간 동안 실온에서 인큐베이팅하여 세척하였다. 비드를 1% BSA에 재현탁시키고, 3분 동안 교반하고, Bio-Plex 워크스테이션에서 판독하였다. IL-17RA 아르기닌 돌연변이체 단백질에 대한 항체 결합을 동일한 풀로부터의 인간 IL-17RA 야생형에 대한 항체 결합과 비교하였다. 약 5 로그 스케일로 항체의 적정을 수행하였다. IL-17RA 아르기닌 돌연변이체 단백질의 중간 형광 강도 (MFI)를 최대 야생형 인간 IL-17RA 신호의 백분율로서 그래프로 나타내었다. 모든 항체로부터의 신호가 야생형 IL-17RA의 30% 미만인 돌연변이체는 일시 배양액 내에서의 빈약한 발현에 의해 비드 상의 단백질 농도가 너무 낮거나 또는 미스폴딩 가능성이 있는 것으로 간주되었고, 분석으로부터 배제하였다: 이들은 T51R, K53R, S55R, H64R, D75R, E110R, Q118R, T121, E123R, S147R, H148R, E158R, T160R, H163R, K191R, T193R, E213R, H251R, T269R, H279R, 및 D293R이었다. IL-17RA mAb에 대한 EC50을 3배 이상 증가시키는 (GraphPad Prism(등록상표)에 의해 계산될 때) 돌연변이 (즉, 아르기닌 치환)는 IL-17RA mAb 결합에 부정적인 영향을 미치는 것으로 간주되었다. 이들 방법을 통해, 다양한 IL-17RA 항체에 대한 중화 결정인자가 규명되었다.
도 21은 D152R IL-17RA 돌연변이체 (즉, 서열 431에서 위치 152의 아스파르트산이 아르기닌으로 돌연변이됨)에 대한 다양한 IL-17RA mAb 결합의 적정 곡선을 도시한 것이다. 항체 AMH1/AML1, AMH22/AML22, AMH14/AML14, AMH19/AML19, AMH23/AML23, AMH21/AML21, 및 AMH20/AML20은 D152R IL-17RA 돌연변이체에 결합하는 능력을 상실하였다. 항체 AMH18/AML18 및 AMH26/AML26은 단지 미약한 영향만을 받았지만, 컷오프 (cutoff) 기준을 만족시키지 못하였다.
아르기닌 스캔, 비닝, 및 키메라 데이타의 요약을 도 22에 제시한다. 아르기닌 스캔 방법으로 몇몇 중화 결정인자를 확인하였다: 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 220-284에 걸치는 도메인에 결합된 AMH18/AML18; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 잔기 152에 집중된 도메인에 결합된 AMH1/AML1; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 152-198에 걸치는 도메인에 결합된 AMH22/AML22; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 152-297에 걸치는 도메인에 결합된 AMH14/AML14; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 152-186에 걸치는 도메인에 결합된 AMH19/AML19; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 97-297에 걸치는 도메인에 결합된 AMH23/AML23; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 138-270에 걸치는 도메인에 결합된 AMH26/AML26; 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 113-198에 걸치는 도메인에 결합된 AMH21/AML21; 및 인간 IL-17RA (서열 431)의 아미노산 152-270에 걸치는 도메인에 결합된 AMH20/AML20. 도 22에 도시된 모든 잔기는 인간 IL-17RA에 특이적으로 결합하는 중화 인간 모노클로날 항체의 결합을 제거하는 것으로 밝혀졌다.
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cctgcagcct 240 gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tataaccgtg ccccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 101 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 101 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagtcacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggttcca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggcccct catctatgat gcatccacca gggccgctgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tatgataact ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 102 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 102 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 60 atctcttgcc gggcaagtca gggcattata aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactttca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctccgac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 103 <211> 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ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca ggccattagc atttatttag cctggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aagttcagcg gcagtgtatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tatagtagtt accctcggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 106 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 106 gaaatattga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgtttac agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccagactcct catctctggt gcttccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tattataact ggccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 107 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Asn Tyr Tyr Trp Asn 1 5 <210> 108 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Asp Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 109 <211> 23 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<213> Homo sapiens <400> 301 aagcagctcg tctttgacta c 21 <210> 302 <211> 15 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 302 agctatggca tgcag 15 <210> 303 <211> 51 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 303 gttatatggt atgatggaaa taagaaatac tatgcagact ccgtgaaggg c 51 <210> 304 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 304 ggacgtgtta gggactacta ctacggtatg gacgtc 36 <210> 305 <211> 15 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 305 agatatggta tcagc 15 <210> 306 <211> 51 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 306 tggatcagca cttacagtgg taacacaaac tatgcacaga agctccaggg c 51 <210> 307 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 307 cggcagcttt actttgacta c 21 <210> 308 <211> 15 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 308 agctatggca tgcag 15 <210> 309 <211> 51 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 309 gttatatggt atgatggaaa taagaaatac tatgcagact ccgtgaaggg c 51 <210> 310 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 310 ggacgtgtta gggactacta ctacggtatg gacgtc 36 <210> 311 <211> 15 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 311 agctatggta 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gtc 33 <210> 349 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 349 ggggcatcca ctagggccaa t 21 <210> 350 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 350 cagcagtata aaagctggcg gacg 24 <210> 351 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 351 cgggcaagtc agagcattag cagctattta aat 33 <210> 352 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 352 gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 353 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 353 caacagagtt acagtacccc attcact 27 <210> 354 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 354 agggccagtc agagtgttag taggaattta gcc 33 <210> 355 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 355 ggtgcatcca ccagggccac t 21 <210> 356 <211> 30 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 356 cagcagtata ataactggcc cacgtggacg 30 <210> 357 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 357 cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc 33 <210> 358 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 358 gctgcatcca gtttccaaag t 21 <210> 359 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 359 ctacagcata atagttaccc tccgacg 27 <210> 360 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 360 cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc 33 <210> 361 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 361 gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 362 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 362 ctacagcata aaagttaccc gctcact 27 <210> 363 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 363 cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc 33 <210> 364 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 364 gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 365 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 365 ctacagcata aaagttaccc gctcact 27 <210> 366 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 366 cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc 33 <210> 367 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 367 gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 368 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 368 ctacagcata agagttaccc gctcact 27 <210> 369 <211> 30 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 369 cgggcaagtc agggcattag aaatgattta 30 <210> 370 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 370 gctgcatcca 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ggtgcttcca ccagggccac t 21 <210> 425 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 425 cagcagtatt ataactggcc gtggacg 27 <210> 426 <211> 1409 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (16)..(1398) <400> 426 gtcgacgccg ccacc atg gag tgg acc tgg agg gtc ctt ttc ttg gtg gca 51 Met Glu Trp Thr Trp Arg Val Leu Phe Leu Val Ala 1 5 10 gca gca aca ggt gcc cac tcc cag gtt cag ctg gtg cag tct gga gct 99 Ala Ala Thr Gly Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala 15 20 25 gag gtg aag aag cct ggg gcc tca gtg aag gtc tcc tgc aag gct tct 147 Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 30 35 40 ggt tac acc ttt acc aga tat ggt atc agc tgg gtg cga cag gcc cct 195 Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro 45 50 55 60 gga caa ggg ctt gag tgg atg gga tgg atc agc act tac agt ggt aac 243 Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Ser Gly Asn 65 70 75 aca aac tat gca cag aag ctc cag ggc aga gtc acc atg acc aca gac 291 Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 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Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 190 195 200 acc gtg ccc tcc agc aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gta 675 Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val 205 210 215 220 gat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aca gtt gag cgc aaa 723 Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys 225 230 235 tgt tgt gtc gag tgc cca ccg tgc cca gca cca cct gtg gca gga ccg 771 Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 240 245 250 tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc 819 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 255 260 265 cgg acc cct gag gtc acg tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac 867 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 270 275 280 ccc gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat 915 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 285 290 295 300 gcc aag aca aag cca cgg gag gag cag ttc aac agc acg ttc cgt gtg 963 Ala 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gtg gac aag 1299 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 415 420 425 agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag 1347 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 430 435 440 gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt 1395 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 445 450 455 460 aaa tgagcggccg c 1409 Lys <210> 427 <211> 461 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 427 Met Glu Trp Thr Trp Arg Val Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Arg Tyr Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala 65 70 75 80 Gln Lys Leu Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr 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165 170 175 Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val 180 185 190 Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr 195 200 205 Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp 210 215 220 Asn Glu Ser Thr Pro Tyr Gln Val Leu Leu Glu Ser Phe Ser Asp Ser 225 230 235 240 Glu Asn His Ser Cys Phe Asp Val Val Lys Gln Ile Phe Ala Pro Arg 245 250 255 Gln Glu Glu Phe His Gln Arg Ala Asn Val Thr Phe Thr Leu Ser Lys 260 265 270 Phe His Trp Cys Cys His His His Val Gln Val Gln Pro Phe Phe Ser 275 280 285 Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ala Val Thr Val Pro Cys Pro 290 295 300 Val Ile Ser Asn Thr Thr Val Pro Lys Pro Val Ala Asp Tyr Ile Pro 305 310 315 320 Leu Trp Glu Pro Arg Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp 325 330 335 Lys Gly Ser Ser His His His His His His 340 345 <210> 445 <211> 346 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 445 Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser 20 25 30 Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu 35 40 45 Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His 50 55 60 Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu 65 70 75 80 His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile 85 90 95 Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala 100 105 110 Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Lys 115 120 125 Phe Gln Phe Leu Ser Met Leu Gln His His Arg Lys Arg Trp Arg Phe 130 135 140 Ser Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Gly Gln Glu Tyr Glu Val Thr 145 150 155 160 Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln 165 170 175 Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val 180 185 190 Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr 195 200 205 Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp 210 215 220 Asn Glu Ser Thr Pro Tyr Gln Val Leu Leu Glu Ser Phe Ser Asp Ser 225 230 235 240 Glu Asn His Ser Cys Phe Asp Val Val Lys Gln Ile Phe Ala Pro Arg 245 250 255 Gln Glu Glu Phe His Gln Arg Ala Asn Val Thr Phe Thr Leu Ser Lys 260 265 270 Phe His Trp Cys Cys His His His Val Gln Val Gln Pro Phe Phe Ser 275 280 285 Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ala Val Thr Val Pro Cys Pro 290 295 300 Val Ile Ser Asn Thr Thr Val Pro Lys Pro Val Ala Asp Tyr Ile Pro 305 310 315 320 Leu Trp Glu Pro Arg Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp 325 330 335 Lys Gly Ser Ser His His His His His His 340 345 <210> 446 <211> 346 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 446 Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser 20 25 30 Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu 35 40 45 Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His 50 55 60 Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu 65 70 75 80 His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile 85 90 95 Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala 100 105 110 Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg 115 120 125 Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe 130 135 140 Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr 145 150 155 160 Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Lys 165 170 175 Ser Lys Ile Ile Phe Val Pro Asp Cys Glu Asp Ser Lys Met Lys Met 180 185 190 Thr Thr Ser Cys Val Ser Ser Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr 195 200 205 Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp 210 215 220 Asn Glu Ser Thr Pro Tyr Gln Val Leu Leu Glu Ser Phe Ser Asp Ser 225 230 235 240 Glu Asn His Ser Cys Phe Asp Val Val Lys Gln Ile Phe Ala Pro Arg 245 250 255 Gln Glu Glu Phe His Gln Arg Ala Asn Val Thr Phe Thr Leu Ser Lys 260 265 270 Phe His Trp Cys Cys His His His Val Gln Val Gln Pro Phe Phe Ser 275 280 285 Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ala Val Thr Val Pro Cys Pro 290 295 300 Val Ile Ser Asn Thr Thr Val Pro Lys Pro Val Ala Asp Tyr Ile Pro 305 310 315 320 Leu Trp Glu Pro Arg Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp 325 330 335 Lys Gly Ser Ser His His His His His His 340 345 <210> 447 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 447 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 448 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 448 Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala 1 5 10 <210> 449 <211> 88 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 449 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val 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Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 85 <210> 452 <211> 88 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 452 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 85 <210> 453 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Variable amino acid <400> 453 Xaa Tyr Gly Ile Ser 1 5 <210> 454 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Variable amino acid <400> 454 Xaa Tyr Xaa Met Xaa 1 5 <210> 455 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Variable amino acid <400> 455 Ser Tyr Gly Met Xaa 1 5 <210> 456 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (14)..(15) <223> Variable amino acid <400> 456 Trp Ile Ser Xaa Tyr Xaa Gly Asn Thr Xaa Tyr Ala Gln Xaa Xaa Gln 1 5 10 15 Gly <210> 457 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(6) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Variable amino acid <400> 457 Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Ile Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 458 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(8) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Variable amino acid <400> 458 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Xaa Xaa Lys Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 459 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(5) <223> Variable amino acid <400> 459 Xaa Gln Leu Xaa Xaa Asp Tyr 1 5 <210> 460 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Variable amino acid <400> 460 Xaa Gln Leu Xaa Phe Asp Tyr 1 5 <210> 461 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(9) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Variable amino acid <400> 461 Arg Ala Ser Gln Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 462 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(9) <223> Variable amino acid <400> 462 Arg Ala Ser Gln Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Ala 1 5 10 <210> 463 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(8) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Variable amino acid <400> 463 Arg Ala Ser Gln Ser Val Xaa Xaa Asn Leu Xaa 1 5 10 <210> 464 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Variable amino acid <400> 464 Ala Ala Ser Ser Xaa Gln Ser 1 5 <210> 465 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Variable amino acid <400> 465 Ala Ala Ser Xaa Leu Gln Ser 1 5 <210> 466 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Variable amino acid <400> 466 Xaa Xaa Ser Thr Arg Ala Xaa 1 5 <210> 467 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(8) <223> Variable amino acid <400> 467 Leu Gln His Xaa Ser Tyr Xaa Xaa Thr 1 5 <210> 468 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(6) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Variable amino acid <400> 468 Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr 1 5 <210> 469 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Variable amino acid <400> 469 Gln Gln Tyr Asp Xaa Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 470 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(5) <223> Variable amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(9) <223> Variable amino acid <400> 470 Gln Xaa Tyr Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Thr 1 5 10 2/131 Express Mail No. EV 947188189 US

Claims (1)

  1. a. i. X1YGIS (식에서, X1은 R, S 및 G로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
    b. i. WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (식에서, X1은 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 N, S 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 N 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 K 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 L 및 F로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
    c. i. X1QLX2X3DY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y, V 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 F 및 L로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및
    ii. X1QLX2FDY (식에서, X1은 R 및 K로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 Y 및 V로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
    d. i. RASQSX1X2X3X4LA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 I 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 S 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X4는 N 및 S로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X5는 A 및 N으로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및
    ii. RASQSX1SSNLA (식에서, X1은 V 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
    e. i. X1X2STRAX3 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X3은 T 및 A로 이루어지는 군 중에서 선택된다), 및
    ii. X1ASTRAX2 (식에서, X1은 G 및 D로 이루어지는 군 중에서 선택되고, X2는 A 및 T로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및
    f. i. QQYDX1WPLT (식에서, X1은 N, T 및 I로 이루어지는 군 중에서 선택된다)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3
    을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 인간 IL-17 수용체 A 결합 단편을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 염증, 자가면역 질병, 연골 염증 및/또는 뼈 파괴, 관절염, 류마티스 관절염, 연소성 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 소수관절형 연소성 류마티스 관절염, 다관절형 연소성 류마티스 관절염, 전신 발병 연소성 류마티스 관절염, 연소성 강직척추염, 연소성 장병성 관절염, 연소성 반응성 관절염, 연소성 레터 증후군, SEA 증후군 (혈청 반응 음성, 부착부병증, 관절병증 증후군), 연소성 피부근염, 연소성 건선성 관절염, 연소성 경피증, 연소성 전신 홍반성 루푸스, 연소성 혈관염, 소수관절형 류마티스 관절염, 다관절형 류마티스 관절염, 전신 발병 류마티스 관절염, 강직척추염, 장병성 관절염, 반응성 관절염, 레터 증후군, SEA 증후군 (혈청 반응 음성, 부착부병증, 관절병증 증후군), 피부근염, 건선성 관절염, 경피증, 혈관염, 근염, 다발성 근염, 피부근염, 골관절염, 결절성 다발동맥염, 베게너 육아종증, 동맥염, 류마티스성 다발성 근육통, 사르코이드증, 경피증, 경화증, 원발성 담즙성 경화증, 경화성 담관염, 쇼그렌 증후군, 건선, 판상 건선, 적상 건선, 역위 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 피부염, 아토피 피부염, 동맥경화증, 루푸스, 스틸 질병, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론 질병, 궤양 대장염, 복강 질병, 다발 경색증 (MS), 천식, COPD, 길랑-바레 질병, I형 당뇨병, 그레이브스 질병, 애디슨 질병, 레이노 현상, 자가면역 간염 및 이식편 대 숙주 질병 (GVHD) 환자를 치료하기 위한 방법.
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