JPH08511507A

JPH08511507A - 哺乳動物宿主の結合組織を処置するための遺伝子導入

Info

Publication number: JPH08511507A
Application number: JP6520222A
Authority: JP
Inventors: シー．グロリオソ，ジョゼフ; エイチエヴァンス，クリストファー; ディーロビンス，ポール
Original assignee: ユニバーシティーオブピッツバーグオブザコモンウェルスシステムオブハイヤーエデュケーション
Priority date: 1993-03-08
Filing date: 1994-03-07
Publication date: 1996-12-03
Also published as: WO1994020517A1; CA2157782A1; EP0701563A1; EP0701563A4

Abstract

(57)【要約】本発明は、組換え法を用いて産物コード化遺伝子を含むＤＮＡベクター分子を作製し、該産物コード化遺伝子を含むＤＮＡベクター分子を用いて哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させることを含んでなる、哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法に関する。非ウイルス手段を用いて哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法を提供する。また、結合組織病理学の研究用のモデル動物を作出する方法も開示する。さらに、本発明はインターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子をin vivoで使用する方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】哺乳動物宿主の結合組織を処置するための遺伝子導入関連出願に対する引照本発明は、1990年12月20日付けでファイルされた、現在係属中の米国出願番号Ｎｏ．０７／６３０，９８１に対する一部継続出願である。発明の背景発明の分野本発明は、哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法に関する。本方法は、該産物コード化遺伝子を含むＤＮＡベクター分子を利用すること、及び該ベクター分子を使用して哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させることを開示する。本発明は、哺乳動物宿主の処置に用いるために、宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法を提供し、このような導入を効果的に行うために非ウイルスベクター媒体を利用する方法をも含む。本発明はまた、結合組織病理学の研究用のモデル動物を作出する方法にも関する。本発明はまた、関節炎に関係した病理学的変化に抵抗するために、末端切断型のインターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を使用する方法に関する。特に、本発明は、軟骨及び他の軟組織に対するインターロイキン−１の破壊作用を緩和するために、インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合領域をコードする遺伝子を、in vivoで哺乳動物宿主の滑膜細胞に導入するための方法を提供する。代替法としては、患者自身の滑膜細胞にin vitroで遺伝子導入し、例えば、関節内注入といった移植法を使って炎症中の関節に戻す。滑膜のin vitro操作の代替法としては、目的の産物コード化遺伝子をリポソームに導入し、直接関節部に注入する。こうして、このリポソームは滑膜細胞に融合し、滑膜組織へのin vivo遺伝子導入が完了する。滑膜を扱うin vitro操作のさらなる代替法としては、目的の産物コード化遺伝子を、「裸の」ＤＮＡとして関節部に導入する。「裸の」ＤＮＡが滑膜組織細胞に入り、その結果、滑膜細胞へのin vivo遺伝子導入が完了する。他の代替法としては、造血系子孫細胞類または成熟リンパ球または骨髄細胞を、in vitroでトランスフェクトし、回収後、当業者に公知である技術を用いて、患者の骨髄に注入することも可能である。関連技術の簡単な説明関節炎は、痛みを伴い、構造変化が起こることもたびたびある関節の炎症を含む。関節炎は、感染、免疫疾患、外傷、及び例えば変形性関節症といったような変形性関節疾患を含む多くの症状に起因し、または関連する。関節の軟骨劣化及び細胞変化に関する生化学については、相当な研究が成された。健全な関節にあっては、軟骨内の細胞（軟骨細胞）及び滑膜包囲細胞（滑膜細胞）は休止状態にある。この休止状態において、上記細胞は、基底レベルのプロスタグランジンＥ₂、及び、例えば、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ及びストロメリシンのような種々の天然プロテイナーゼ類を分泌し、これらは、軟骨退化能を持っている。関節炎病態の進行中、上記細胞類は活性化される。活性化状態において、滑膜細胞及び軟骨細胞は、多量のプロスタグランジンＥ₂及び中性域活性のプロティナーゼ類を合成し、分泌する。病理生理学的に関連性のある細胞活性化因子を同定しようとして様々な努力が払われた結果、サイトカインであるインターロイキン−１は、軟骨細胞及び滑膜細胞を活性化し、in vitroにおいてもin vivoにおいても軟骨破壊を誘発させることが知られるようになった。さらに、インターロイキン−１は滑膜細胞の増殖因子であり、滑膜細胞のマトリックス合成を促進させるが、インターロイキン− １の持つ二つの特性は、これが関節炎に伴う滑膜肥厚に関与しているらしいことを示唆している。対照的に、インターロイキン−１は軟骨細胞による軟骨マトリックス合成を阻害することで、軟骨修復を抑制する。また、インターロイキン− １は、骨吸収を誘導するが、このことによって関節リウマチに見られる骨密度の減少が説明出来るのかも知れない。インターロイキン−１は、炎症を引起し、リンパ球の増殖因子として働き、走化因子でもある。もしかすると、多形核リンパ球（ＰＭＮ）類の活性化因子でもあるかも知れない。充分な濃度では、インターロイキン−１は発熱、筋肉衰弱及び嗜眠症を引き起こすこともある。関節におけるインターロイキン−１の主要供給源は滑膜である。インターロイキン−１は常駐性滑膜細胞から分泌されるが、この滑膜細胞は、大食細胞及び他の白血球類と一体となって炎症状態を引起こす。「非ステロイド系抗炎症剤」として指定される一分類（以降”ＮＳＡＩＤ”と略す）に属する薬剤の開発に、多大な関心が払われてきた。ＮＳＡＩＤは、軟骨合成及び修復を阻害し、炎症を抑制する。ＮＳＡＩＤの作用機序は、生体組織におけるプロスタグランジン合成の阻害に主として関連したものであると考えられる。本剤開発の殆どが、シクロオキシゲナーゼ〔プロスタグランジン前駆体（エンドパーオキサイド）のアラキドン酸からの形成を触媒する極めて重要な酵素〕に対する、より優れた阻害剤の合成に充てられてきた。ＮＳＡＩＤによる抗炎症作用の一部は、炎症中に行われるプロスタグランジン合成及び放出を阻害することによるものであると考えられる。プロスタグランジンは炎症中の白血球浸潤の速度と程度を調節する役割を担っているものと考えられている。ＮＳＡＩＤには、例えば、アセチルサリチル酸（アスピリン）、フェノプロフェン・カルシウム（登録商標；Ｎａｌｆｏｎ，Ｐｕｌｖｕｌｅｓ：ＤｉｓｔａＰｒｏｄｕｃｔｓ社）、イブプロフェン（登録商標；Ｍｏｔｒｉｎ：Ｕｐｊｈｏｎ社）及びインドメタシン（登録商標；インドシン；Ｍｅｒｃｋ，Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ社）が含まれる。これとは対照的に、本発明の基盤をなす研究により、軟骨を退化させる能力を有する中性域活性プロテインキナーゼ類の産生は、プロスタグランジン合成を完全に遮断した場合でも起こることを示される。関節炎における処置は、ＮＳＡＩＤのような標的型薬剤では、例えば関節のような哺乳動物宿主の特異的な部位に到達させることができないことによって妨害される。例えば、経口、静脈内または筋肉内投与のような慣例的なドラッグデリバリー経路は、関節へ薬剤を送達させるのに、滑膜の経血管潅流に依っている。この方法が効果的でない理由は、滑膜毛細血管から関節域への小分子の経滑膜輸送が、一般的には受動拡散によって行われるからなのである。こうした拡散は、送達される分子サイズが大きくなるにつれて、益々非効率的になってしまう。それ故、例えば、タンパク質のような大型の薬剤分子が関節部分に進入することは、実質的に制限されることになる。薬剤の関節内注入は、こうした制約を回避してはいるが、関節内に投与された薬剤の半減期は、一般的に短い。薬剤の関節内注入に関するもう１つの障害は、例えば、関節炎のような慢性的容態を処置するために関節域で許容される薬剤量を得るために、頻繁な注入を繰り返さなければならないことである。従来の治療用薬剤では、選択的に関節だけに到達させることは出来なかったので、持続性のある関節内投与を達成させるためには、哺乳動物宿主を全身的に、高濃度の薬剤に曝さなければならなかった。非標的器官をこのような状態に曝すことは、哺乳動物宿主に胃腸障害、血液学系、心臓血管系、肝臓系及び腎臓系の諸変化といったような重大な副作用を抗関節剤がもたらす傾向をいよいよ増大させることになる。化学的または生化学的手段によって、遺伝物質を哺乳動物宿主細胞内に導入することが出来ることは証明済である。更に、導入遺伝物質を発現させて、特異的なタンパク質を哺乳動物宿主細胞により大量に合成させることもできる。導入された遺伝子物質を保持している細胞は、対応する抗生物質存在下で、形質導入細胞を選択的に生育させる場合の選択マーカーを与える抗生物質耐性遺伝子を含めることがある。インターロイキン−１産生を阻害する化合物もまた既に知られている。米国特許Ｎｏ４，７７８，８０６は、非経口によって、２−２’−〔１，３− プロパン−２−オネジル−ビス（チオ）〕ビス−１Ｈ−イミダゾール、または薬学上許容されるその塩を投与することにより、単核細胞及び／または大食細胞によるインターロイキン−１の産生を阻害する方法を開示する。本特許は、インターロイキン−１の産生を阻害する化合物を開示する。これとは対照的に、本発明の一態様においては、インターロイキン−１に対する結合能を持ち、その作用を緩和する遺伝子治療が用いられている。米国特許Ｎｏ４，７８０，４７０は、４，５−ジアリル−２（置換）イミダゾールを投与することによって、ヒト体内での単核細胞によるインターロイキン− １の産生を阻害する方法を開示する。更に、本特許はインターロイキン−１の産生を阻害するための化合物を開示する。米国特許Ｎｏ．４，７９４，１１４は、チアゾル環、ピロリジン環またはピペリジン環に融合したジアリル置換イミダゾール、または薬学的に許容されるその塩を投与することによって５−リポオキシゲナーゼ経路を遮断する方法を開示する。本特許はまたインターロイキン−１の産生を阻害する化合物を開示する。米国特許Ｎｏ．４，８７０，１０１は、薬学的に許容される、ジスルフィラム、テトラキス〔３−（２，６）−ジ−テルト−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）プロピオニロキシメチル〕メタンまたは２，４−ジ−イソブチル−６−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチル〕−フェノールのような抗オキシダント化合物を有効量投与することによって、インターロイキン−１の放出を阻害し、かつ、インターロイキン−１の介在する病態を緩和する方法を開示する。米国特許Ｎｏ．４，８１６，４３６は、抗関節炎剤としてのインターロイキン −１使用のためのプロセスを開示する。本特許の陳述によれば、製剤化のための適切な媒体と組合わせれば、関節内に注入投与して、関節炎または炎症の処置に供することが可能である。これに対し、本発明は、関節炎に抵抗する方法としてインターロイキン−１と結合し、その作用を緩和することのできる遺伝子を使用および調製する方法を開示する。米国特許Ｎｏ．４，９３５，３４３は、インターロイキン−１βには結合するが、インターロイキン−１αには結合しないモノクローナル抗体を利用して、インターロイキン−１βを検出のためのイムノアッセイ法を開示する。本特許は、モノクローナル抗体はインターロイキン−１βに結合し、インターロイキン−１ βがインターロイキン−１受容体に結合するのを阻害し、それによってインターロイキン−１βの生物学的活性を阻害することを開示する。本特許で開示されているモノクローナル抗体は、組換ＤＮＡ技術を用いる遺伝子工学を利用して、免疫原を調製することによって入手可能である。この免疫原はマウスに注入され、その後、マウス脾臓細胞を骨髄細胞に融合させることによって不死生を獲得するに至る。こうして得られた細胞には、雑種性連続的継代培養系（ハイブリドーマ＝融合雑種腫瘍細胞）があり、更に進んで、これをスクリーニングしてモノクローナル抗体を得ることも出来る。本特許の陳述によれば、その発明に係るモノクローナル抗体は、例えば、患者に免疫処置を施すといったような処置の場でも使用出来るものである。即ち、モノクローナル抗体は、毒素と結合して免疫毒素となることもあり得るし、放射性物質または薬物と結合して放射性薬剤ないし通常薬剤になることもあり得る。米国特許Ｎｏ．４，７６６，０６９は、ヒトインターロイキン−１遺伝子ＤＮＡ配列を含む組換ＤＮＡクローニングベクターを開示する。本特許は、ヒトインターロイキン−１βの調製法及びその回収法を提供する。本特許は、Ｔ細胞及びＢ細胞を剌激し、免疫グロブリン合成を増大させる能力があることを利用したインターロイキン−１のヒト免疫学的試薬としての用途を開示する。米国特許Ｎｏ．４，３９６，６０１は哺乳動物宿主に遺伝的能力を補足的に供与する方法を開示する。即ち、本特許は、宿主から再生能を持つ細胞を摘出した後、遺伝物質が発現され、複製されることのできる宿主細胞の選択にとって有利に働く少なくとも１つのマーカーを含む遺伝物質を用いて処理するプロセスを提供する。本特許は、修飾された宿主細胞は、再生が可能となる条件下に宿主に戻されることを記載する。本発明においては、遺伝子物質は、直接（ａ）宿主細胞にin vivoで、または（ｂ）引き続いて患者の関節に移植して戻すために滑膜細胞にin vitroで導入することが可能である。米国特許Ｎｏ．４、９６８、６０７は、インターロイキン−１に結合性を示す哺乳動物のインターロイキン−１受容体タンパク質をコードするＤＮＡ配列を開示する。上記の先行技術にもかかわらず、哺乳動物宿主の処置に用いるために、少なくとも１つの産物コード化遺伝子を哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞中にin vitroで、あるいは、in vivoで導入する方法に対し、非常に現実的で実質的な必要性が存在している。更に、末端切断型のインターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を、関節炎に関係する有害な病理学的変化に抵抗するのに用いる方法に対する必要性も存在する。特に、インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合領域をコードし、インターロイキン−１に結合してその作用を緩和することのできる遺伝子を、in vivoで宿主の滑膜細胞に発現させる方法に対する必要性も存在する。発明の概要本発明は、前項に述べた要求を満足させるものである。本発明においては、ある遺伝子産物をコードしている、少なくとも一つ以上の遺伝子を宿主の処置に使用するために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞に導入する方法が提供される。本方法は、組換技術を用いてその産物をコードしている遺伝子を含有するＤＮＡベクター分子を生成し、そしてその産物のコード化遺伝子を含むＤＮＡ分子を用いて哺乳動物宿主の結合組織に感染させる事である。ＤＮＡベクター分子としては、標的細胞、または組織内に送達され、そこで目的の遺伝子産物をコードしている遺伝子の安定的発現が保持されるものであれば、如何なるＤＮＡ分子であっても構わない。本発明において好ましく用いられるＤＮＡベクター分子は、ウイルスＤＮＡベクター又はプラスミドＤＮＡウイルス分子のいずれかである。本方法を治療用に用いる場合、その遺伝子産物をコードしている遺伝子を哺乳動物の結合組織内に導入する事が望ましい。特に、本方法が利用する遺伝子としては、以下に挙げるグループから選ばれた物質の内、少なくとも一つ以上をコードする事が可能な一つの遺伝子がある。即ち、（ａ）ヒト・インターロイキン−１レセプターアンタゴニストタンパク質またはそれの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片、（ｂ）ＬａｃＺマーカー遺伝子、β−ガラクトシダーゼタンパク質または、それの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片をコードすることができる（ｃ）可溶性インターロイキン−１・レセプタータンパク質またはそれの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片（ｄ）プロテイナーゼ阻害物質、及び（ｅ）サイトカイン。また、本方法が利用するウイルスベクターとしては、以下に挙げるグループから選ばれる少なくとも一つ以上のベクターが含まれる。即ち、（ａ）ＭＦＧ及びＢＡＧの内から選ばれる少なくとも一つを包含するレトロウイルス・ベクター、（ｂ）アデノ関連ウイルス、（ｃ）アデノウイルス、及び（ｄ）それらだけに限定されるものではないが、単純ヘルペス１もしくは単純ヘルペス２を含むヘルペスウイルス。更に、本発明の他の実施例において利用される遺伝子としては、以下に挙げるグループから選ばれた、少なくとも一つ以上の物質をコードし得る遺伝子類がある。即ち、（ａ）ヒト・インターロイキン−１レセプターアンタゴニストタンパク質またはそれの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片、（ｂ）βガラクトシダーゼタンパク質またはそれの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片をコードし得るＬａｃＺマーカー遺伝子、（ｃ）可溶性インターロイキン１レセプタータンパク質またはそれの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片、（ｄ）プロテイナーゼ阻害物質、及び（ｅ）サイトカイン。並びに、同様に利用されるＤＮＡプラスミドベクターとしては、送達手段を問わず、標的細胞または標的組織に到達した後、直ちにその内部において安定的に保持されるものであれば当業者に公知であるところの如何なるベクターであっても良い。こうした手段の一つとして、ウイルス性またはプラスミドＤＮＡベクター分子を、直接標的細胞または標的組織に送達させる方法がある。この方法においても、以下に挙げるグループの中から選ばれた、少なくとも一つ以上の物質をコードし得る遺伝子を利用する。即ち、（ａ）ヒト・インターロイキン−１レセプターアンタゴニストタンパク質またはそれの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片、（ｂ）βガラクトシダーゼタンパク質またはそれの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片をコードし得るＬａｃＺマーカー遺伝子、（ｃ）可溶性インターロイキン−１・レセプタータンパク質またはそれの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片、（ｄ）プロテイナーゼ阻害剤及び（ｅ）サイトカイン。本発明に対して限定されるという意味ではなく、あくまで一実施例として本発明において開示されている方法においては、インターロイキン− １のコード化配列を含むＤＮＡプラスミド・ベクターをサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターの下流側に連結した。このＤＮＡプラスミド構築物をリポソーム内に封入し、関節内経由で、宿主であるウサギの膝関節内に注入した。インターロイキン−１が発現し、有意量のインターロイキン−１ βを滑膜細胞から回収した。この代替方法として、「裸の」（naked）プラスミドＤＮＡを膝関節に注入し、そのＤＮＡを滑膜組織内に、直接トランスフェクトする方法がある。更に、本発明別の態様では、哺乳動物宿主の処置用として、結合組織の少なくとも一つの細胞に、その遺伝子産物をコードしている少なくとも一つの遺伝子を導入する方法を提供する。本方法の場合には、その遺伝子産物をコードしている遺伝子を結合組織細胞に導入する非ウイルス性媒体を利用する。本方法の更に特殊な例としては、以下に挙げるグループの中の少なくとも一つから選ばれた非ウイルス性媒体を利用している。即ち、（ａ）少なくとも一つのリポソーム、（ｂ）Ｃａ₃（ＰＯ₄）₂、（ｃ）エレクトロポレーション〔電気穿孔法〕及び（ｄ）ＤＥＡＥ−デキストラン。また、遺伝子として利用されるのは、以下に挙げるグループの中から選ばれた少なくとも一つに物質をコードし得る遺伝子である。即ち、（ａ）ヒト・インターロイキン−１・レセプターアンタゴニストタンパク質またはその生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片、（ｂ）β −ガラクトシダーゼタンパク質またはそれの生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片をコードし得るＬａｃＺマーカー遺伝子、（ｃ）可溶性インターロイキン−１レセプタータンパク質又はその生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片、（ｄ）プロティナーゼ阻害物質、（ｅ）可溶性腫瘍壊死因子レセプタータンパク質またはその生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片、及び（ｆ）サイトカイン。本発明の別の態様では、哺乳動物宿主の処置用に、その少なくとも一つの細胞に、ある産物をコードしている少なくとも一つの遺伝子を導入する為の補足的な手段を提供している。この補足的な方法では、標的細胞または組織にＤＮＡベクター分子を送達する為に、ウイルスを用いた生物学的手段が利用される。使用ウイルスは偽ウイルスであり、かつ、そのゲノムが改変されて標的細胞内へ送達された後、その場で複製する能力を保持せずに安定的に維持される能力だけを備える様になったものの方が好ましい。改変ウイルスゲノムに組換ＤＮＡ技術による操作を加え、このウイルスゲノムが目的とする異型遺伝子を含有するＤＮＡベクター分子として働き、標的細胞または組織内で確実に発現される様にする。また、本方法で利用する遺伝子としては、以下に挙げるグループから選ばれた物質の内、少なくとも一つをコードし得る遺伝子である。即ち、（ａ）ヒト・インターロイキン−１レセプターアンタゴニストタンパク質またはその生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片、（ｂ）ガラクトシダーゼタンパク質またはその生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片をコードし得るＬａｃＺマーカー遺伝子、（ｃ）可溶性インターロイキン１・レセプタータンパク質またはその生物学的活性を持つ誘導体若しくは断片。（ｄ）プロテイナーゼ阻害物質及び（ｅ）サイトカイン。本方法の別の態様は、結合組織病態研究用の動物モデルを構築する為の方法であり、ここでは、少なくとも一つの遺伝子を哺乳動物宿主の結合組織細胞の少なくとも一つの細胞に導入する方法を含むものである。本発明の別の態様は、細胞外インターロイキン−１・レセプター結合ドメインをコードしている遺伝子を使用する方法を提供する。この遺伝子は、in vitroでインターロイキン−１と結合して、その作用を中和して、哺乳動物宿主における軟骨破壊を殆ど阻止する事ができる。従来の薬理学的な試みとは異なり、本発明に係る方法は、in vivoの遺伝子治療を用いて関節炎による影響で患者が陥る慢性的衰弱に対処しようとするものである。本発明に係る末端切断型のインターロイキン−１・レセプターをコードしている遺伝子を使用する好ましい方法は、組換ＤＮＡ技術を利用して、末端切断型のインターロイキン−１・レセプターをコードしている遺伝子を包含する感染性レトロウイルス粒子を産生する細胞系を作製することである。このウイルス粒子産生用の細胞系の作製は、以下の手順で行われる。即ち、まず、レトロウイルス・ベクター中の、適切な真核細胞のプロモーターの制御下にある部分に、目的の遺伝子コードを挿入する。次に、遺伝子コードを含むレトロウイルス・ベクターを、レトロウイルスパッケージング細胞系にトランスフェクトさせて、末端切断型インターロイキン−１・レセプターをコードしている遺伝子の発現能を持つウイルス粒子を産生させ、そして、こうして得られたウイルス粒子を用いて、哺乳動物宿主の滑膜細胞に感染させる。更に、特異的な例として、前項で述べた末端切断型インターロイキン−１・レセプターをコードしている遺伝子を使用する方法の場合には、レトロウイルスパッケージング細胞系から得たウイルス粒子を関節内に直接注入することによって、哺乳動物宿主の滑膜細胞で内側が覆われた関節部分に導入する事を伴う。好ましい態様においては、膝関節から回収された滑膜細胞は、in vitroで培養後、遺伝子治療用の送達システムとして用いられる。出願人が特異的に開示した滑膜細胞の使用だけに限定されない事は明らかであろう。in vitroの培養技術用としては、滑膜以外に皮膚細胞の様な他の組織源の利用が可能であろう。本発明に係る遺伝子の使用方法としては、関節炎の予防を目的としても、またその治療を目的としても、両用に利用が可能である。出願人は、膝関節に対する予防的又は治療的用途だけに限定していないのは明らかである。本発明は、如何なる関節炎に対する予防的又は治療的措置に使用する事も可能であろう。本発明の別の態様は、前項で述べた、末端切断型インターロイキン−１レセプターをコードしている遺伝子の使用法であり、滑膜細胞の培養時に、ウイルス粒子に感染させてから本来の関節に自家移植される。本発明に係る遺伝子を使用する本方法の場合もまた、障害を被りがちな如何なる領域に対する予防用としても、関節の治療用としても利用し得る。別の態様では、インターロイキン−１に結合して、その作用を中和する事が出来るインターロイキン−１・レセプターの細胞外インターロイキン−１受容体結合ドメインをコードしている遺伝子を使用する方法としては、組換えＤＮＡ技術を利用して、二つの遺伝子を担うレトロウイルス・ベクターを作製する事を含む。それらの遺伝子の内の一つは、インターロイキン−１レセプターの細胞外インタートロキン−１受容体結合ドメインをコードしており、他の一つは、選別的抗生物質耐性をコードしている。本方法を使用する場合は、レトロウイルス・ベクターをレトロウイルスパッケージング細胞系にトランスフェクトさせて、この遺伝子を担う感染性レトロウイルス粒子を産生する細胞系を得る事を伴う。本発明の別の態様は、インタートロキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１・レセプター結合ドメインをコードしている遺伝子を調製する方法を提供し、以下の過程を含む。即ち、まず、ポリメラーゼ連鎖反応により遺伝子を合成し、この増幅されたインターロイキン−１・レセプターをコードしている配列をレトロウイルス・ベクター中に導入し、レトロウイルス・ベクターをレトロウイルスパッケージング細胞系中に感染させ、そして、レトロウイルスパッケージング細胞系からウイルス粒子を回収する。本発明に係る別の態様では、患者に対して、治療有効量で、非経口投与する為の組成物を提供する。即ち、該組成物は、インタートロキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１・レセプター結合ドメインをコードしている遺伝子及び適切な製剤的担体を含む。本発明に係る別の態様においては、用意された混合物は、予防上有効量で患者に非経口投与する為に、インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン −１・レセプター結合領域をコードしている遺伝子及び適切な製剤的担体を含む組成物を提供する。更に、別の態様では、造血系前駆細胞又は成熟リンパ細胞若しくは骨髄細胞を、本発明の明細書全体を通じて開示されている遺伝子類の中の何れかを含有するＤＮＡベクター分子を用いて感染させる事を伴う。こうしてトランスフェクトした細胞を回収し、当業者には公知で利用可能である技術を用いて、患者の骨髄に移植する。本方法の範囲において、拒絶反応を軽減する為に、受容者の骨髄由来細胞の代わりに提供者の骨髄由来細胞を使用する事も可能であろう。本発明の別の態様では、目的の遺伝子を含むＤＮＡ分子を関節に直接注入した後、in vivoで滑膜細胞をトランスフェクトした。宿主の滑膜細胞をトランスフェクトする事によって、目的の異種遺伝子の安定的発現を助ける為に必要とされる、摘出、培養、in vitroでのトランスフェクション選別、及びＤＮＡベクター含有の滑膜細胞（実施例の項で説明）の移植過程を省く事が出来る。ＤＮＡ分子を関節内に注入する方法には、以下に限定されるものではないが、ＤＮＡ分子をカチオン性リポソーム中に包含させる方法、または、それ自体を関節に直接注入する方法が含まれる。ここで、ＤＮＡ分子は、膝関節への実施例での表現形式とは異なるが、ＤＮＡベクター分子と表現する方が好ましく、それには、ウイルス性ＤＮＡベクター分子でも良いが、更に好ましいのは、ＤＮＡプラスミドベクター分子である。目的の異種遺伝子の発現を確実なものにするため、真核細胞中で活性を持つプロモーター断片を異種遺伝子のコード領域の上流側に直接挿入する。当業者は、公知の手法及びベクター調製技術を利用して、ＤＮＡ分子を滑膜組織内に導入させた後、適切レベルの発現を確実なものとする事が可能であろう。本発明の目的は、哺乳動物宿主の処置用に結合組織細胞中にその遺伝子産物をコードしている少なくとも一つの遺伝子を導入する方法を提供する事である。本発明の目的は、治療のために、哺乳動物宿主の少なくとも一つの結合組織細胞中に、産物をコードしている遺伝子を導入する方法を提供する事である。本発明の目的は、治療的特性を有するタンパク質をコードしている少なくとも一つの遺伝子を、哺乳動物の関節の滑膜基層細胞中に導入する方法を提供する事である。本発明の目的は、結合組織病理研究用の動物モデルを提供する事である。本発明の目的は、インターロイキン−１α及びインターロイキン１βを含む実質的に全てのインターロイキン−１のイソ型と結合し、それらの作用を中和する事の出来るインターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子をin vivoで使用する方法を提供する事である。本発明の目的は、インターロイキン−１の実質的に全てのイソ型と結合し、中和することが可能であるが故に、軟骨破壊をほぼ完全に阻止し、関節部分を覆っている軟組織を保護するという遺伝子を、哺乳動物宿主においてin vivoで使用する方法を提供する事である。本発明の目的は、疾患がきわめて進行しやすい患者の関節炎を予防するため、実質的に全てのインターロイキン−１のイソ型と結合し、それらの作用を中和する事の出来る、インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子をin vivoで使用する方法を提供する事である。本発明の目的は、関節炎患者の治療のため実質的に全てのインターロイキン− １のイソ型と結合し、それらの作用を中和する事の出来る、インターロイキン− １受容体の細胞外インターロイキン−１・レセプター結合ドメインをコードしている遺伝子をin vivoで使用する方法を提供する事である。本発明の目的は、関節炎にみられる慢性的衰弱を呈する病態生理に対応する遺伝子のin vivoで使用する方法を提供する事である。加えて、本発明の目的は、インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードしている遺伝子及び適当な製剤的担体を含む、非経口的投与のための組成物を提供することである。上記及びその他本発明の目的は、以下の明細書で述べられている処、即ち、それらに関する参照用添付図面及び請求項に追加されている目的をみれば、充分に理解されるであろう。図面の簡単な説明図１は、レトロウイルスベクターＭＦＧのＮｃｏｌ及びＢａｍＨＩクローニング部位に挿入されたヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質（ＩＲＡＰ）をコードするｃＤＮＡの構造を示す。図２は、レトロウイルスベクターＭＦＧ中に挿入された選択用ｎｅｏマーカーを有するヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質（ＩＲＡＰ）をコードするｃＤＮＡの構造を示す。図３は、ＬａｃＺ⁺関節内投与してから約１月後の、ウサギの膝から回収された滑膜細胞の顕微鏡写真を示す。；ｎｅｏ滑膜細胞は本発明を利用して得た。図４は、ＭＦＧ−ＩＲＡＰウイルスベクターを利用する本発明の方法を用いて感染させたＨＩＧ−８２細胞（Ｇｅｏｒｅｓｃｕ１９８８）の４種類の培養によるインターロイキン１受容体アンタゴニストタンパク質の産生を表すウエスタンブロットを示す。図５は、ＭＦＧ−ＩＲＡＰ感染したＨＩＧ−８２細胞により条件付けされた培養液の添加による滑膜細胞の阻害を表すデータを示す。図６は、リポフェクション使用時の滑膜細胞によるＬａｃＺ遺伝子の取込み及び発現を示す。ウェル１−リポソーム単独処理したコントロール細胞；ウェル２ −ＤＮＡ単独処理したコントロール細胞；ウェル３−ＤＮＡ＋１５０ｎｍｏｌｅリポソーム；ウェル４−ＤＮＡ＋２４０ｎｍｏｌｅリポソーム；ウェル５− ＤＮＡ＋３００ｎｍｏｌｅリポソーム；ウェル６−ＤＮＡ＋６００ｎｍｏｌｅリポソーム。図７は、インターロイキン−１結合ドメインのアミノ酸アレンジメントを示す。図８Ａ−８Ｃは、ヒト及びマウスのインターロイキン１受容体のアミノ酸配列及びヌクレオチド配列を示す。図９は、レトロウイルスベクター中に挿入された末端切断型インターロイキン −１受容体をコードする遺伝子を示す。発明の詳細な説明本明細書中で用いる「患者」という用語は、ヒトを含むがそれのみに限らない動物界のメンバーを指す。本明細書中で用いる「哺乳動物宿主」という用語は、ヒトを含むがそれのみに限らない動物界のメンバーを指す。本明細書中で用いる「結合組織」という用語は、哺乳動物宿主の靱帯、軟骨、腱および滑膜を含むが、これらに限らない。本明細書中で用いる「DC-chol」という用語は、カチオンコレステロール誘導体を含むカチオンリポソームを意味する。DC-chol分子は、X．GaoおよびL．Huan g，Biochem．Biophys．Res．Commun.，179:280-285（1991）に記載されるような、第三アミノ基と、中程度の長さのスペーサーアーム（２個の原子）と、カルバモイルリンカー結合を含む。本明細書中で用いる「SF-chol」という用語は、カチオンリポソームの一種であると定義される。本明細書中でリポソームに関連して用いられる「生物学的に活性な」という用語は、標的細胞の中へ機能性ＤＮＡおよび／またはタンパク質を導入する能力を指す。本明細書中で核酸、タンパク質、タンパク質断片またはその誘導体に関連して用いられる「生物学的に活性な」という用語は、野生型の核酸またはタンパク質によって誘起される既知の生物学的機能を模倣する核酸またはアミノ酸配列の能力として定義される。本明細書中で用いる「維持（maintenance）」という用語は、リポソーム送達との関連において用いるとき、導入されたＤＮＡが細胞内にとどまる能力を指す。他との関連において用いるとき、それは、治療効果を奏するように標的細胞または組織内にＤＮＡがとどまる能力を指す。結合組織は治療的にターゲッティングするのが難しい器官である。当技術分野で知られている薬物送達（ドラッグデリバリー）の静脈および経口ルートは、こうした結合組織へ接近しにくく、しかも治療薬を哺乳動物宿主の全身にさらすという欠点を抱えている。より詳細には、公知の関節内注入は関節への直接的接近をもたらすものの、注入される薬物の大半は関節内半減期が短い。本発明は、こうした問題を、哺乳動物宿主の処置に用いることのできるタンパク質をコードする遺伝子を哺乳動物宿主の結合組織へ導入することによって解決するものである。より詳しくは、本発明は、抗関節炎特性を有するタンパク質をコードする遺伝子を哺乳動物宿主の結合組織へ導入する方法を提供するものである。本発明は、組換え法を用いて、ある産物をコードする遺伝子を含むウイルスベクターを作製し、該産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを用いて哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させることを含んでなる、哺乳動物宿主の処置に用いるための、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞への少なくとも１つの産物コード化遺伝子の導入方法を提供する。この方法は、好ましくは、治療に用いるために哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞に該産物コード化遺伝子を導入することを含むものである。本発明の一実施態様において、上述した方法は、該遺伝子として、ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質（ＩＲＡＰ）をコードしうる遺伝子を用いることを包含する。本発明のもう一つの実施態様において、上述した方法は、該遺伝子として、β −ガラクトシダーゼをコードしうるＬａｃＺマーカー遺伝子を用いることを包含する。本発明のもう一つの実施態様において、上述した方法は、該遺伝子として、可溶性インターロイキン−１受容体をコードしうる遺伝子を用いることを包含する。本発明の他の実施態様は、該遺伝子として、少なくともプロテイナーゼ阻害剤をコードしうる遺伝子を用いることを含む上述した方法を包含する。より詳細には、この方法は、好ましくは、プロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを包含する。本発明の他の実施態様は、該遺伝子として、少なくとも１つのサイトカインをコードしうる遺伝子を用いることを含む上述した方法を包含する。より詳細には、この方法は、サイトカインとして、インターロイキン−１α、インターロイキン−１β、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン− ４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子βより成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを包含する。本発明の更なる実施態様は、サイトカインとして、少なくとも１つの形質転換成長因子（transforming growth factor）を用いることを含む上述した方法を包含する。より詳細には、この方法は、形質転換成長因子として、ＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを包含する。それぞれの形質転換成長因子はR & D Systems（614 McKinley Place，N.E.，Minneapolis ，MN 55413）から販売されている。本発明の別の実施態様において、上述した方法は、サイトカインとして、少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子を用いることを包含する。繊維芽細胞増殖因子もR & D Systems（614 McKinley Place，N.E.，Minneapolis，MN 55413）から販売されている。本発明の別の実施態様は、ウイルスベクターとして、レトロウイルスベクターを用いることを含む上述した方法を包含する。より詳しくは、この方法には、レトロウイルスベクターとして、ＭＦＧおよびＢＡＧより成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることが含まれる。本発明の好ましい実施態様は、該遺伝子としてヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードしうる遺伝子を用いること、およびレトロウイルスベクターとしてＭＦＧを用いることを含む上述した方法を包含する。本発明の別の好ましい実施態様には、β−ガラクトシダーゼをコードしうる遺伝子としてＬａｃＺマーカー遺伝子を用いること、およびレトロウイルスベクターとしてＭＦＧを用いることを含む上述した方法が含まれる。本発明の他の好ましい実施態様では、β−ガラクトシダーゼをコードしうる遺伝子としてＬａｃＺｎｅｏマーカー遺伝子を用いること、およびレトロウイルスベクターとしてＢＡＧを用いることを含む上述した方法が提供される。本発明の最も好ましい実施態様において、上述した方法は、ＭＦＧおよびＢＡＧより成る群から選ばれるレトロウイルスベクターを用いること、および該遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードしうる遺伝子を用いることを包含する。本発明の別の実施態様では、該遺伝子として少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードしうる遺伝子を用いること、およびレトロウイルスベクターとしてＭＦＧおよびＢＡＧより成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む上述した方法が提供される。本発明の他の実施態様では、レトロウイルスベクターとしてＭＦＧおよびＢＡＧより成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いること、および該遺伝子として先に記載した少なくとも１つのサイトカインをコードしうる遺伝子を用いることを含む上述した方法が提供される。本発明の他の実施態様では、組換え法を用いて、ある産物をコードする遺伝子を含むウイルスベクターを作製し、該産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを用いて哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させることを含んでなる、哺乳動物宿主の処置に用いるための、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞への少なくとも１つの該産物コード化遺伝子の導入方法が提供され、その際、該ウイルスベクターはアデノ関連ウイルス、アデノウイルスおよびヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型または単純ヘルペスウイルス２型）より成る群から選ばれる少なくとも１つのベクターである。この方法は、該遺伝子として、（a）ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質、（b）可溶性インターロイキン−１受容体、（c）β−ガラクトシダーゼをコードしうるＬａｃＺマーカー遺伝子、（d）少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤および（e）少なくとも１つのサイトカインを含む群から選ばれる少なくとも１つの物質をコードしうる遺伝子を用いることを包含する。より詳細には、この方法は、プロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いること、およびサイトカインとして（a）ＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる少なくとも１つの形質転換成長因子、（b）少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子、（c）インターロイキン−１α、（d）インターロイキン−１β、（e）インターロイキン− ２、（f）インターロイキン−３、（g）インターロイキン−４、（h）インターロイキン−５、（i）インターロイキン−６、（j）インターロイキン−７、（k ）インターロイキン−８、（l）インターロイキン−９、（m）インターロイキン −１０、（n）インターロイキン−１１、（o）インターロイキン−１２、（p）腫瘍壊死因子αおよび（q）腫瘍壊死因子βを含む群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを包含する。本発明の他の実施態様は、靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織へ該遺伝子を導入することを含む上述した方法を包含する。この方法では靱帯として十字靱帯（cruciate ligament）を用いることが好ましい。最も好ましくは、この方法には十字靱帯として前十字靱帯（anterior cruciate ligame nt）および後十字靱帯（posterior cruciate ligament）より成る群から選ばれる靱帯を用いることが含まれる。本発明の他の実施態様は、維持および発現が可能なＤＮＡを有する遺伝子を該遺伝子として用いることを含む上述した方法を包含する。本発明の更なる実施態様は、該遺伝子をin vitroで該細胞内に導入することを含む上述した方法を包含する。この方法は、その後、感染細胞を哺乳動物宿主に移植することを包含する。この方法はまた、結合組織細胞に感染させた後であって、その感染細胞を哺乳動物宿主に移植する前に、感染した結合組織細胞を保存することを包含する。当業者には、感染した結合組織細胞を液体窒素下で１０％ＤＭＳＯ中に入れて凍結保存できることが理解されよう。この方法は、関節炎に非常にかかりやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために該方法を用いることを包含する。本発明の方法は、関節炎にかかった哺乳動物宿主に対して治療のために該方法を用いることを包含する。この方法は、靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生させるために該方法を用いることを包含する。この方法には、ヒトである哺乳動物宿主に対して該方法を用いることが含まれる。本発明の別の実施態様は、ある産物をコードする遺伝子を含むウイルスベクターを哺乳動物宿主に直接導入することにより結合組織細胞にin vivo感染させることを含んでなる、上述した哺乳動物宿主の処置に用いるための、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞への少なくとも１つの該産物コード化遺伝子の導入方法を包含する。好ましくは、この方法は関節内注入により哺乳動物宿主に直接導入することを含む。この方法は、関節炎に非常にかかりやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために該方法を用いることを包含する。この方法はまた、関節炎にかかった哺乳動物宿主に対して治療のために該方法を用いることを包含する。さらに、この方法には、先に規定した結合組織を修復および再生させるために該方法を用いることが含まれる。本発明のさらに別の実施態様において、哺乳動物宿主の処置に用いるための、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞への少なくとも１つの産物コード化遺伝子の導入方法は、該産物コード化遺伝子を結合組織細胞に導入するための非ウイルス手段を用いることを包含する。この方法は、少なくとも１つのリポソーム、Ca₃(PO₄)₂、エレクトロポレーションおよびＤＥＡＥ−デキストランより成る群から選ばれる非ウイルス手段を用いることを包含する。この方法には、リポソームとして、DC-cholおよびSF-cholより成る群から選ばれる物質を使用することも含まれる。結合組織細胞へ産物コード化遺伝子を導入するための非ウイルス手段を用いることを含んでなる、哺乳動物宿主の処置に用いるための、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞への少なくとも１つの産物コード化遺伝子の導入方法は、非感染性の送達システムであることが理解されよう。非感染性の送達システムを利用することの利点は、挿入突然変異誘発の排除と、ウイルスにより誘発される疾病の排除にある。リポソームを用いるウイルスベクターは、レトロウイルスの結合組織細胞への感染および組込みに必要とされる細胞分裂によって制限されないことが当業者には理解されよう。上述した非ウイルス手段を用いる方法は、該遺伝子として、（a）ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質、（b）β−ガラクトシダーゼをコードしうるＬａｃＺマーカー遺伝子、（c）可溶性インターロイキン−１受容体、（d）少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤、（e）少なくとも１つの形質転換成長因子、および（f）少なくとも１つのサイトカインを含む群から選ばれる少なくとも１つの物質をコードしうる遺伝子を用いることを包含する。より詳細には、この方法は、サイトカインとして、インターロイキン−１α、インターロイキン−１β、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン− ５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子α、腫瘍壊死因子β、少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子および少なくとも１つの形質転換成長因子を含む群から選ばれるサイトカインを用いることを包含する。好ましくは、この方法には、形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることが含まれる。本発明の別の好ましい実施態様には、プロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む上記の非ウイルス手段を用いる方法を提供することが含まれる。産物コード化遺伝子を結合組織細胞へ導入するために非ウイルス手段を用いる該方法は、靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織へ該遺伝子を導入することを包含する。好ましくは、この方法には靱帯として十字靱帯を用いることが含まれる。十字靱帯は前十字靱帯および後十字靱帯より成る群から選ばれる。本発明の他の実施態様は、上記の非ウイルス手段を用いること、および維持および発現が可能なＤＮＡを有する遺伝子を該遺伝子として用いることを含んでなる、哺乳動物宿主の処置に用いるための、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞への少なくとも１つの産物コード化遺伝子の導入方法を提供する。本発明の更なる実施態様では、産物コード化遺伝子を結合組織細胞へin vitro で導入するために非ウイルス手段を用いること、続いて該遺伝子を有する細胞を哺乳動物宿主へ移植することを含んでなる、哺乳動物宿主の処置に用いるための、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞への少なくとも１つの産物コード化遺伝子の導入方法が提供される。本発明の別の実施態様は、結合組織細胞へ産物コード化遺伝子を導入した後であって、該遺伝子を有する結合組織細胞を哺乳動物宿主に移植する前に、該遺伝子を有する結合組織細胞を保存することを含む方法を提供する。この方法は液体窒素下で１０％ＤＭＳＯ中に入れて凍結させた結合組織細胞を保存することを含む。この方法には、関節炎に非常にかかりやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために該方法を用いることが含まれる。さらに、この方法は、関節炎にかかった哺乳動物宿主に対して治療のために該方法を用いることを包含する。この方法は、靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生させるために該方法を用いることを包含する。本発明の更なる実施態様は、哺乳動物宿主の結合組織細胞へ産物コード化遺伝子を直接導入するためにin vivoで非ウイルス手段を用いることを含んでなる、哺乳動物宿主の処置に用いるための、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞への少なくとも１つの産物コード化遺伝子の導入方法を提供する。非ウイルス手段は少なくとも１つのリポソーム、Ca₃(PO₄)₂およびＤＥＡＥ−デキストランより成る群から選ばれる。好ましくは、この方法は関節内注入によって哺乳動物宿主へin vivo導入することを含む。この方法には、関節炎に非常にかかりやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために該方法を用いることが含まれる。さらに、この方法は、関節炎にかかった哺乳動物宿主に対して治療のために該方法を用いることを包含する。この方法はまた、靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生させるために該方法を用いることを包含する。本発明の他の実施態様は、結合組織病理学の研究用のモデル動物を作る方法を提供する。当業者には理解されるように、一般に、哺乳動物宿主の関節においてインターロイキン−１が過剰に発現されることは関節炎症状を誘起させる原因となる。本発明は、上述した本発明の遺伝子移入技術を使ってモデル動物を作出するための方法を提供する。好ましくは、本発明の方法は、関節炎のためのモデル動物をもたらす上述した本発明の遺伝子移入技術を使ってモデル動物を作出する方法を提供する。例えば、本発明による遺伝子移入法にしたがってウサギの関節においてインターロイキン−１を構成的に発現させると、関節炎の症状が現れる。このモデルウサギは治療薬の試験に用いるのに適していることが当業者には理解されよう。この方法は、（a）組換え法を用いて産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを作製し、そして（b）モデル動物を得るために該産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを用いて哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させることを含んでなる、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞へ少なくとも１つの該産物コード化遺伝子を導入することを包含する。この方法はサイトカインおよびプロテイナーゼより成る群から選ばれる物質を該遺伝子として用いることを含む。この方法はサイトカインとしてインターロイキン−１α、インターロイキン−１βおよび腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）より成る群から選ばれる物質を用いることを含む。この方法はプロテイナーゼとしてマトリックス・メタロプロテイナーゼを用いることを含む。マトリックス・メタロプロテイナーゼはコラゲナーゼ、ゼラチナーゼおよびストロメリシンより成る群から選ばれる酵素である。「コラゲナーゼ、ゼラチナーゼおよびストロメリシン」という用語の使用には複数が含まれ、単数に限らないことが明らかだろう。当技術分野では、マトリックス・メタロプロテイナーゼとして多くのコラゲナーゼ、ゼラチナーゼおよびストロメリシンを本発明において使用できることが公知である。本発明の更なる実施態様は、モデル動物を得るべく、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞へ少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入するために非ウイルス手段を用いることを含んでなる、結合組織病理学の研究用のモデル動物を作出する方法を提供する。非ウイルス手段は少なくとも１つのリポソーム、Ca₃(PO₄)₂、エレクトロポレーションおよびＤＥＡＥ−デキストランより成る群から選ばれる。この方法はサイトカインおよびプロテイナーゼより成る群から選ばれる物質を該遺伝子として用いることを包含する。この方法はサイトカインとしてインターロイキン−１α、インターロイキン−１βおよびＴＮＦ−αより成る群から選ばれる物質を用いることを含む。この方法はまたプロテイナーゼとしてマトリックス・メタロプロテイナーゼを用いることを含む。マトリックス・メタロプロテイナーゼとしてはコラゲナーゼ、ゼラチナーゼおよびストロメリシンより成る群から選ばれる酵素が含まれる。本発明の更なる実施態様は、該遺伝子として、（a）ヒトインターロイキン− １受容体アンタゴニストタンパク質またはその生物学的に活性な誘導体もしくは断片、（b）β−ガラクトシダーゼをコードしうるＬａｃＺマーカー遺伝子またはその生物学的に活性な誘導体もしくは断片、（c）可溶性インターロイキン −１受容体タンパク質またはその生物学的に活性な誘導体もしくは断片、（d）プロテイナーゼ阻害剤、（e）可溶性腫瘍壊死因子受容体タンパク質またはその生物学的に活性な誘導体もしくは断片、および（f）サイトカインを含む群から選ばれる少なくとも１つの物質をコードしうる遺伝子を使用すること、ならびにＤＮＡベクターとして、任意のＤＮＡベクターを用いること、好ましくは、採用した送達方法の如何にかかわらず、送達したときに標的細胞または組織内に安定した状態で維持され得る当業者に知られたプラスミドまたはウイルスベクターを用いることを包含する。本発明の一実施態様では、対象遺伝子を含むＤＮＡ分子の直接関節内注入の後に滑膜細胞がin vivoでトランスフェクトされる。宿主滑膜細胞のトランスフェクションは、対象の異種遺伝子の安定した発現を促進するための分離、培養、in vitroトランスフェクション、選択およびＤＮＡベクター含有滑膜細胞の移植（「実施例」に記述される）の要件を回避する。関節内へのＤＮＡ分子の注入方法としては、カチオンリポソームへのＤＮＡ分子のカプセル化または関節内へのＤＮＡ分子自体の直接注入があるが、これらに限らない。滑膜組織のin vivoトランスフェクション後の対象の異種遺伝子の発現は、真核細胞内で作用するプロモーター断片を異種遺伝子のコード領域の上流に直接挿入することにより確実にされる。当業者であれば、滑膜組織へのＤＮＡ分子の挿入後に適切な発現レベルを確保するための公知のベクター構築法を利用することができよう。本発明の一例として（限定ではない）、ＣＭＶプロモーターの下流に連結されたインターロイキン−１βコード配列を含むＤＮＡプラスミドベクターがリポソーム内にカプセル化され、そして宿主ウサギの膝関節に注入された。関節内注入部位の滑膜組織からは相当量のインターロイキン−１βが回収されたので、インターロイキン−１βが滑膜組織において発現されていた。本発明の更なる実施態様は、哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞へ少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入するための別の方法を提供する。この別法は、標的細胞または組織へＤＮＡベクター分子を送達するためにウイルスを利用する生物学的手段を用いることを包含する。好ましくは、ウイルスは偽ウイルスであり、偽ウイルスは標的細胞内への送達および安定した維持を可能にする能力のみを有し、標的細胞または組織内で複製する能力を保持しないようにそのゲノムが変異されているものである。変異ウイルスゲノムを組換えＤＮＡ法によってさらに操作して、標的細胞または組織内で発現される対象の異種遺伝子を含むＤＮＡベクター分子としてウイルスゲノムが機能するようにする。この方法はまた、該遺伝子として、（a）ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質またはその生物学的に活性な誘導体もしくは断片、（b）β−ガラクトシダーゼタンパク質またはその生物学的に活性な誘導体もしくは断片をコードしうるＬａｃＺマーカー遺伝子、（c）可溶性インターロイキン−１受容体タンパク質またはその生物学的に活性な誘導体もしくは断片、（d）プロテイナーゼ阻害剤、（e）可溶性腫瘍壊死因子受容体タンパク質またはその生物学的に活性な誘導体もしくは断片、および（f）サイトカインを含む群から選ばれる少なくとも１つの物質をコードしうる遺伝子を使用することを包含する。以下の実施例は、制限としてではなく、本発明の例示として提供されるものである。実施例Ｉ AAVのパッケージング組換え体アデノ関連ウィルス（AAV）ベクターの複製及びパッケージングに必要なシスのみにしか作用しない配列は、AAV末端リピートである。ウィルスの複製及びパッケージングに影響を及ぼすことなく４kbまでのDNAをその末端反復間に挿入することができる。ウィルスrepタンパク質及びウィルスカプシドタンパク質は、アデノ関連ウィルスヘルパーにおいてそうであるようにウィルス複製のためにトランスである必要がある。組換え体AAVベクターをパッケージするためには、末端リピートと治療用遺伝子を含むプラスミドを、rep及びカプシドタンパク質を発現するプラスミドと同時に細胞中に共トランスフェクトする。次にトランスフェクトされた細胞に、トランスフェクトの約48〜72時間後において、アデノ関連ウィルス及び細胞から単離されたウィルスを感染させる。上清を約56℃ に加熱し、アデノ関連ウィルスを不活化し、組換え体AAVの純粋なウィルストックを残す。実施例II エレクトロポレーションエレクトロポレーションにかける結合組織細胞を、約10⁷細胞/mlの濃度でヘペス緩衝生理食塩水（HBS）中に置く。エレクトロポレーションされるDNAを、約５〜20μg/ml（HBS）の濃度で加える。混合物をキュベット中に入れ、Bio-RADエレクトロポレーション装置（1414 Harbour Way South，Richmond，CA 94804）のキュベットホルダーに挿入する。殆どの真核生物細胞種においてDNA を導入するためには約960マイクロファラッドの静電容量で250〜300ボルトが必要である。DNA及び細胞をBio-RADの装置のホルダーに挿入した後、ボタンを押し、細胞-DNA溶液に設定電圧をかける。細胞はキュベットから除去され、プラスチック皿上に再プレート化される。実施例III 図１に示したように、ヒトインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IRAP）をコードするcDNAを、レトロウィルスベクターMFGのNcoI及びBamHIクローニング部位に挿入した。具体的には、IRAP cDNAからのPstIからBamHIのフラグメントを、NcoI部位（IRAPの翻訳開始部位を示す）からPstI部位（NcoI部位から約12塩基対下流）までの合成オリゴヌクレオチドアダプターに結合し、NcoI及びBamHIで消化したMFGバックボーンに結合する、３つの部分の連結反応において行った。この１つの合成オリゴ体と２つのDNAフラグメントを含む３つの部分の連結は、クローニングの分野における当業者に周知である。LTRは長い末端リピート（lon g terminal repeats）を意味し、5'SDは5'スプライス供与体を意味し、3'SAは3' スプライス受容体を意味する。図１のまっすぐな矢印と曲がった矢印はそれぞれスプライシングされていないmRNAとスプライシングされたmRNAを示す。IRAPはスプライシングされたメッセージによりコードされる。図２は、選択可能なneo遺伝子マーカーを有するヒトインターロイキン-1受容体アンタゴニストタンパク質（IRAP）をコードするcDNAを示す。図３は、Lac Z⁺ 、neo ⁺滑膜細胞の関節内注射の１か月後のウサギの膝から得た滑膜の低出力顕微鏡写真を示す。組織はβ−ガラクトシダーゼの存在について組織化学的に染色した。エオシンで対比染色したこの顕微鏡写真は、強く染色された移植細胞の領域を示しており、これらの細胞が宿主動物関節の滑膜内層をコロニー化したことを示している。実施例IV 動物モデル哺乳類の関節の滑膜に遺伝子を移す本発明の方法は、従来は可能でなかった関節病理の発生と分析を可能とする。これは、可能性のある関節炎誘発性（arthri otogenic）化合物を関節に到達させる他の方法としては関節内注射しかなかったことによるものである。そのような化合物は関節から短時間に消失してしまうばかりでなく、これらの化合物のボーラス注射の効果は、それらが長期間にわたって定常的に生成されるような生理的条件を正確に模倣するものではない。これに対し、本発明の遺伝子移送技術は、関節炎過程に関与することが知られているかあるいは推測されている選択されたタンパク質を長期間、例えば少なくとも３か月間にわたって関節内に発現させることを可能とする。従って本発明の動物モデルは、それぞれの遺伝子産物の関節炎過程に対する重要性を個々に評価することを可能にする。候補となる遺伝子は、限定するものではないが、例えばインターロイキン-1（IL-1）α、IL-1β及びTNF-αのようなサイトカイン、並びに例えばコラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、及びストロメリシンのようなマトリックスメタロプロテイナーゼをコードするものである。さらに本発明の遺伝子移送技術は、治療用として可能性のあるタンパク質のスクリーニングに使用するのにも適している。この使用においては、本発明の動物モデルは、その滑膜が可能性のある抗関節炎タンパク質をコードする遺伝子を発現する関節において開始される。タンパク質の候補は、限定するものではないが、例えばメタロプロテイナーゼの組織阻害剤のようなプロテイナーゼの阻害剤、並びに例えば形質転換成長因子βのようなサイトカインである。実施例Ｖ滑膜細胞を遺伝子治療のデリバリーシステムとして使用するための方法４mlのネムブトール（nembutol）の静脈内注射によりウサギを屠殺し、迅速に膝の毛を剃る。滑膜を各膝から無菌的な条件下に外科的に取り出し、トリプシン及びコラゲナーゼ（平衡ゲイ塩溶液中の0.2% w/v）によるそれぞれ約30分及び約２時間の連続的な消化により細胞をその周囲のマトリックスから取り出す。このようにして回収した細胞を、10%のウシ胎児血清、100U/mlのペニシリン及び約10 0）g/mlのストレプトマイシンを補充した４mlのハムF₁₂栄養培地を入れた25cm² 培養フラスコに接種し、95%の空気及び５%のCO₂の雰囲気中で37℃においてインキュベートする。約３〜４日のインキュベートの後、細胞は集団となる。この段階で培養培地を除去し、細胞シートを約５mlのグレイ平衡化塩溶液で２回洗浄し、リンパ球のような非接着細胞を除去する。次いで接着細胞をトリプシン（平衡塩溶液中の0.25% w/v）により処理する。この処理により、繊維芽細胞のＢ型滑膜細胞は脱着されるが、マクロファージ、多形核白血球及びＡ型滑膜細胞は培養容器に結合したまま残される。脱着された細胞を回収し、1:2の分割比で25cm²培養容器中に再接種し、培地を加え、培養物をインキュベーターに戻す。集団が形成されたらこの手順を繰り返す。３回目のこの過程の後で、細胞は均一に繊維芽細胞であり、Ｂ型滑膜細胞の均一な集団を含む。この段階で、細胞に前記レトロウィルスベクターを感染させる。感染の後、約１mg/mlのG418を補充した新しい栄養培地（GIBCO/BRL，P.O．Box 68，Grand Island，NY 14072-0068）に細胞を移し、インキュベーターに戻す。３日毎に培地を換え、その間、neo^-細胞が死滅しneo⁺細胞が増殖して集団を形成する。集団が形成されたときに上記したように細胞をトリプシン処理し、継代培養する。X-galで染色してneo⁺細胞がLac Z⁺でもあることを確認するために１つのフラスコを取っておく。継代培養が集団を形成したとき培地を回収し、IRAP、可溶性IL-1R及び本明細書中に記載したその他の適当な遺伝子産物の存在について試験する。これで製造された滑膜細胞は移植できる状態となる。移植の前日に、上記したようにしてトリプシン処理することにより細胞を回収する。次いでこれらの細胞を栄養培地に懸濁し、未処理プラスチック遠心管中で一晩インキュベートする。これらの条件において細胞は接着しないが、トリプシン処理により除去されたそれらの細胞表面タンパク質を再生する。翌朝、細胞を遠心分離により回収し、ゲイ平衡化塩溶液中へ再懸濁することにより数回洗浄し、最終的にグレイ溶液中に約10⁶ 〜10⁷細胞/mlの濃度で再懸濁する。この懸濁液の約１mlを関節内注射により宿主ウサギの膝関節中に導入する。このためには、25-ゲージ皮下針を有する１mlシリンジを使用する。注射は膝蓋腱を通して行う。Ｘ線不透性染料を注射して行った実験により、この方法により物質が関節の全ての部分にうまく導入されることが確認された。実施例VI 実施例ＶのＢ型滑膜細胞の均一な集団の繊維芽細胞を全体として一様に製造するための方法を行って、ウサギ滑膜繊維芽細胞の培養物を増殖させた。次いでこれらの増殖したウサギ滑膜繊維芽細胞の培養物に、β−ガラクトシダーゼ（Lac Z）及びネオマイシン類縁体G418に対する耐性（neo⁺）をコードするマーカー遺伝子を有する両栄養性レトロウィルスベクターを感染させた。感染及び約１mg/m lのG418を含む選択培地中での増殖の後、全ての細胞がβ−ガラクトシダーゼについての組織化学的染色において陽性に染色された。 Lac Zマーカー遺伝子を有するneo選択細胞を宿主ウサギの膝に移植して戻し、これらの遺伝子のインビボにおける持続性と発現を調べた。移植の２週間後、宿主動物膝の滑膜中のLac Z⁺細胞の島が観察された。これにより、本発明の方法の、マーカー遺伝子をウサギ滑膜に導入しそれをその場で発現する能力が確認された。実施例VII neo選択Lac Z⁺滑膜細胞を細胞培養物から回収し、ゲイ平衡塩溶液中に懸濁し、宿主ウサギの膝関節中に関節内注射した（それぞれの膝に約10⁵〜10⁷細胞）。反対側の対照の膝にはキャリア溶液のみを与えた。移植後３か月までの間にウサギを屠殺し、その滑膜と周囲被膜を回収した。それぞれの試料を３種の方法により分析する。第３の滑膜は、全体的にβ−ガラクトシダーゼの存在について組織化学的に染色した。第２の部分は、細菌β−ガラクトシダーゼに特異的な抗体を使用する免疫細胞化学試験に使用する。最後の部分はトリプシン及びコラゲナーゼにより消化して、回収された細胞をG 418の存在下に培養する。滑膜組織のかたまりの染色により、肉眼で見えるLac Z⁺細胞の広範な範囲を明らかになった。対照の滑膜は無色のままであった。滑膜の組織化学的試験により β−ガラクトシダーゼについて強く陽性に染色された細胞の島の存在が明らかになった。これらの細胞は、滑膜内層の表皮層上に存在し、対照滑膜には存在しなかった。そのような組織からLac Z⁺，neo⁺細胞を増殖させることが可能であった。対照組織から回収された細胞はLac Z^-であり、G 418を培地に加えたとき死滅した。これは、移植された形質導入滑膜繊維芽細胞が宿主動物関節の滑膜をうまく再コロニー化し、２つのマーカー遺伝子、Lac Z及びneoを発現し続けることを示している。移植滑膜細胞中での関節内Lac Z及びneo発現は、一次細胞の使用により３か月、HIG-82細胞系の使用により１か月維持された。実施例VIII 本明細書の実施例中にこれまで記載した実施例の方法に基づき、そして当業者に周知の標準的な組換え体技術を使用して図１に示すようにヒトIRAP遺伝子をMF Gベクター中に導入した。ウサギ由来の滑膜細胞培養物のこのウィルスベクターによる感染の後、IRAPが培養培地に分泌された。ヒトもしくはウサギIL-1αもしくはIL-1βを認識しないIPAR特異的ウサギポリクローナル抗体またはウサギIRAPを使用して、当業者に周知のウェスタンブロッティングを行った。図４は、MFG-IRAPを感染させたHIG-82細胞の４つの培養物によるIRAP製造を明らかにするウェスタンブロットを示す。IRAPの３つの形態は、組換え体標準と共に移動する１つの非グリコシル化形態及び２つのより大きなグリコシル化形態を示す。図４に示すウェスタンブロッティングの結果は、本発明のMFG-IRAPベクターの感染の後、HIG-82滑膜細胞系（Georgescu，1988）によりI RAPが生成されたことを示している。図４のウェスタンブロッティングは、ならし培地のIRAP濃度が50ng/mlくらい高いものであることを示している。これはほぼ500ng IRAP/10⁶細胞/日に相当する。図４のレーン１及びレーン２は、宿主動物滑膜組織は第３日（レーン２）及び第６日（レーン１）においてかなりの量の HIG-IRAPを分泌することを示している。レーン３はヒト組換え体IRAPを示している。レーン６は、ウサギ滑膜細胞がMFG-IRAPによる感染の後、前記分子のより大きなグリコシル化物を生成することを示している。レーン７は、本来のウサギ滑膜細胞はこのグリコシル化形態を生成しないことを示している。図５は、IRAP⁺滑膜細胞でならした培地が、組換え体ヒトIL-1 βに曝された関節軟骨細胞中の中性メタロプロテイナーゼの誘導をブロックすることを示している。軟骨細胞は通常、1 U/10⁶細胞以下のゼラチナーゼをその培養培地中に分泌する。図５は、約5 U/mlまたは10 U/mlまでのIL-1を加えた場合、ゼラチナーゼ生成はそれぞれ4 U及び6 U/10⁸細胞を越えるまで増加することを示している。本発明の方法により使用されるMFG-IRAP感染HIG-82細胞によりならした培地の添加により、IL-1処理軟骨細胞によるゼラチナーゼ生成が阻害された。5 U/ml IL-1（図５右図）では、阻害率は一方の培養について100％であり、他方については41％であった。10 U/ml IL-1では、競争的阻害剤に予測されるように、阻害率は38%及び18%に減少した（図５左図）。これらのデータは、MFG-IRAP により感染されたHIG-82細胞により生成されるIRAPが生物学的に活性であることを示している。実施例IX この実施例は、リポソームによる感染（リポフェクション）を使用した、滑膜細胞によるLac Z遺伝子の取り込みと発現を示すものである。６ウェルプレート中に含まれる滑膜細胞培養物に、リポフェクションによりLac Z遺伝子を形質導入した。各ウェルの内容は以下の通りである。ウェル１リポソームのみで処理された対照細胞ウェル２ DNAのみで処理された対照細胞ウェル３ DNA＋150nmolリポソームウェル４ DNA＋240nmolリポソームウェル５ DNA＋300nmolリポソームウェル６ DNA＋600nmolリポソーム滑膜繊維芽細胞の亜集団培養物（sub-confluent cultures）を含むウェル３〜６は、150〜600nmol/ウェルの「DC-コール」リポソームあるいは「SF-コール」と複合化した６μｇのDNAを感染させた。３日後、細胞をβ−ガラクトシダーゼの発現について組織化学的に染色した（図６）。表１は、選択を行わない滑膜細胞培養物のLac Z⁺表現型への変換においてリポソーム「DC-コール」及び「SF-コール」を使用した結果を示す。表１は、約300n mol/ウェルの濃度の「DC-コール」リポソームが、全体で滑膜細胞培養物中の約3 0％の滑膜細胞を選択することなくLac Z⁺表現型へ変換したことを示している。D C-コールについてのウェル６においては、高いリポソーム濃度の毒性効果により発現が減少している。本発明の別の態様においては、インターロイキン-1の中和のための遺伝子及び該遺伝子の使用方法が提供される。インターロイキン-1は、関節炎における軟骨破壊の主要媒介物である。インターロイキン-1はまた炎症も起こし、骨吸収の非常に強力な誘発物である。これらの効果の多くは、プロスタグランジンE₂、中性プロテイナーゼ、即ちコラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、及びストロメリシン、及びプラスミノーゲンアクティベータの細胞合成を強力に増加させるインターロイキン-1の能力によるものである。インターロイキン-1の軟骨に対する異化作用は、その軟骨細胞による軟骨マトリックスの合成を抑制する能力により増悪される。インターロイキン-1は、関節炎の関節から吸引される滑液中に高濃度で存在し、動物における組換え体インターロイキン-1の関節内注射により軟骨破壊及び炎症が発生することが示されている。インターロイキン-1には幾つかの種類があり、例えば17,000ダルトンの非グリコシル化ポリペプチドである。２つの種類は以前にクローン化されている、インターロイキン−１α及びインターロイキン−１βである。α形態は約５のplを有し、β形態は約７のplを有する。これらのアイソフォームの存在にもかかわらず、インターロイキン-1α及びインターロイキン-1βは実質的に同一の生物学的性質を有し、同一の表面受容体を有する。Ｉ型インターロイキン-1受容体は、80kD a（キロダルトン）の糖タンパク質であり、図７に示したようにジスルフィド架橋により１つに保持された３つの免疫グロブリン様ドメインに配置された319アミノ酸の細胞外インターロイキン-1結合部分を含む。21アミノ酸膜貫通ドメインが前記細胞外部分を217アミノ酸の細胞質ドメインに結合している。図8 A〜8Cはヒト及びマウスインターロイキン-1受容体のアミノ酸及びヌクレオチド配列を示す。図8Bにおいては、インターロイキン-1受容体の21アミノ酸膜貫通領域を太い実線で示した。図8A及び8Bにおいては、PCRのための5'及び3'オリゴヌクレオチドの位置を細い短い線でそれぞれ示した。膜貫通ドメインのまさに5'の、停止コドンに変異されるリシンアミノ酸は図8Bにおいて実線の円で示した。これまでのところ、滑膜は関節炎の関節におけるインターロイキン-1の主要な、そしておそらくは唯一の関節内供給源であると考えられる。関節炎の関節から回収した滑膜は高いレベルのインターロイキン-1を分泌する。滑膜内層に存在する滑膜細胞及び浸潤する血液単核細胞の両方がインターロイキン-1を生成する。本発明は、高い親和性でインターロイキン-1に結合する能力を有するが、細胞外で放出され、従ってシグナル形質導入においては不活性である、インターロイキン-1受容体の末端切断型（truncated form）をコードする遺伝子をインビボで使用する方法を提供する。この末端が切断され改変された受容体のインターロイキン-1に対する結合は、インターロイキン-1の関節内活性を阻害する。インターロイキン-1に結合し中和することができるインターロイキン-1受容体の細胞外インターロイキン-1結合ドメインをコードする遺伝子を使用するこの方法は、切断された可溶性の活性形態の前記受容体をコードする、末端切断型インターロイキン-1受容体遺伝子を有するレトロウィルスベクターを使用することを含む。新規なインターロイキン-1受容体遺伝子の発現は、真核細胞内で活性なベクター中に含まれる調節配列により制御される。この組換え体ウィルスベクターは、該組換え体ベクターを有する感染性ウィルス粒子の製造のために必要なウィルスタンパク質を安定にトランスに発現する細胞系にトランスフェクトされる。これらのウィルス粒子は、インビボにおける直接のウィルス感染により組換え体インターロイキン-1受容体を宿主動物滑膜細胞に到達させるのに使用される。レトロウィルスベクターに挿入される可溶性ヒトインターロイキン-1受容体は、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）により製造することができる。ヒトインターロイキン-1受容体の5'リーダー配列に相補的なオリゴヌクレオチド（GCGGATCCCCTC CTAGAAGCT）及びインターロイキン-1受容体の膜貫通ドメインから直ぐ上流の領域に相補的なオリゴヌクレオチド（GCGGATCCCATGTGCTACTGG）をPCRのプライマーとして使用する。膜貫通ドメインに隣接するインターロイキン-1受容体の領域についてのプライマーは、１つの塩基の変化を含み、アミノ酸319（AAG）における lysコドンが停止コドン（TAG）に変化している。膜貫通ドメインの直ぐ上流に翻訳停止コドンを挿入することにより、前記細胞により分泌されるインターロイキン-1受容体の末端切断型が生成される。BamHI認識配列（GGATCC）をPCRプライマーの5'末端に付加し、増幅の後、得られるインターロイキン-1受容体フラグメントをBamHI部位にクローン化する。ヒトT-細胞からのcDNAライブラリーを、インターロイキン-1受容体cDNAの供給源として使用する。cDNAライブラリーからのインターロイキン-1受容体の適当な領域を増幅するためには、DNAに相補的プライマーを付加し、サーモサイクラー及び当業者に周知の標準的なPCR反応条件を使用して、50サイクルのアニーリング、プライマー延長、及び変性を行う。PCR法を使用したインターロイキン-1可溶性受容体の増幅の後、得られたフラグメントをBamHIで消化し、pLJレトロウィルスベクターに挿入する。pLJレトロウィルスベクターはA.J．Korman及びR.C．Mulliganから入手可能である。Alan J．Korman，J．Daniel Frantz，Jack L.Strominger及びR ichard C．Mulligan共著のProc．Natl．Acad.Sci.，Vol．84，pp．2150-2154（1 987年4月）も参照されたい。制限酵素分析を行い、挿入物の正確な方向を決定した。標準的なCaPO₄トランスフェクション方法、及びウィルスベクターが安定に組み込まれており、抗生物質G 418に対する耐性に基づいて選択される細胞を使用して、末端切断型インターロイキン-1受容体を有するレトロウィルスベクターを CRIP（Proc．Natl．Acad．Sci.，Vol．85，pp．6460-6464（1988），O．Danos a nd R.C．Mulligan）パッケージング細胞系中に移す。ネオマイシン耐性（neo-r ）遺伝子を含むウィルスベクターは細胞系にG 418に対する耐性を与えることができる。CRIP細胞系は、ベクターウィルスRNAを感染性粒子にパッケージングするのに必要な３種のウィルスタンパク質を発現する。さらに、CRIP細胞系により生成されたウィルス粒子は、ヒト細胞を含む広範な種類の哺乳類細胞に効率よく感染することができる。この細胞系により生成されたレトロウィルス粒子は全て複製欠陥を有するが、滑膜細胞中に安定に組み込まれる能力を有し、これによりこれらの細胞の受け継がれ得る形質となる。この方法により製造されたウィルスストックは実質的にヘルパーウィルス粒子による汚染がなく、また非病原的である。より具体的には、末端切断型インターロイキン-1遺伝子は、例えば、適当な真核生物プロモーター、例えば図９に示したpLJベクターのような遺伝子移送ベクター内に既に含まれているレトロウィルスプロモーターの制御下にある、レトロウィルスベクター中に挿入することができる。図９は、pLJインターロイキン受容体レトロウィルスベクターの構造及び部分制限エンドヌクレアーゼマップを示す。参照番号10は、レトロウィルスベクターに挿入されたインターロイキン-1受容体を示す。参照番号12は、図８に示したpLJインターロイキン受容体レトロウィルスベクターの構造の各末端の長い末端リピート（LTR）を示す。これらのLTR はウィルス転写とインターロイキン-1受容体の発現を制御する。抗生物質ネオマイシンに対する耐性をコードする細菌遺伝子（neo-r）を参照番号16で示す。シミアンウィルス40エンハンサープロモーター（SV40）は、参照番号18に示され、これはneo-r遺伝子の発現を制御する。参照番号20及び22はそれぞれ、得られたインターロイキン受容体フラグメントがクローン化される部位を示す。異なる真核生物プロモーターを含むその他のベクターを使用し、インターロイキン-1受容体発現の一般的に最大のレベルを得ることができることも当業者に理解されるであろう。トランスフェクション、及びやはりpLJベクターに含まれるネオマイシン耐性遺伝子の発現について選択することにより単離された安定な形質転換体により、末端切断され改変されたインターロイキン-1受容体を含むベクターをレトロウィルスパッケージング細胞系（CRIP）中に導入する。CRIP細胞系は、外来レトロウィルスRNAのパッケージングに必要なタンパク質の全てを発現する。G418選択CRIP細胞系により生成されたウィルス粒子は、哺乳類細胞に感染し、インターロイキン-1末端切断型受容体を安定に発現することができる組換え体レトロウィルスを有する。ウィルス粒子を使用し、ウィルスを関節空間に注射することによりインビボで直接滑膜細胞に感染させる。本発明の別の態様は、本明細書中にこれまで記載したウィルス粒子を使用して、哺乳類宿主の関節の内層から得た培養中の滑膜細胞に感染させる方法を提供する。この培養中の滑膜細胞の感染の利点は、インターロイキン-1受容体レトロウィルス構築物を有する感染細胞を、G418を使用してネオマイシン耐性遺伝子の発現について選択できることである。インターロイキン-1受容体を発現する感染滑膜細胞は、その後関節内注射により関節に移植して戻すことができる。移植された細胞は、関節空間内で高いレベルの可溶性インターロイキン-1受容体を発現し、これによりインターロイキン-1α及びインターロイキン-1βを含むインターロイキン-1の実質的に全てのアイソフォームに結合し、これを中和する。関節内の滑膜細胞の移植に使用される方法は日常的なものであり、慢性的な炎症性関節疾患の治療に使用されるものとしては比較的重要でない方法である。滑膜は開放手術の間にも関節から回収することができるが、今日では特に膝については関節鏡により滑膜切除をすることが広く行われている。関節鏡は、小さな穿剌傷から膝内に挿入される小さな中空のロッドである。関節鏡は、ファイバー選択システム（fibre-option system）の関節内への挿入を可能とするばかりでなく、手術用具の接近も可能とし、滑膜組織を関節鏡を使用して採取することができる。このような方法は、「脊髄」麻酔下に行うことができ、患者はその日のうちに帰宅することができる。この方法により、この遺伝子治療を受ける患者から十分な滑膜を得ることができる。切除された組織に含まれる滑膜細胞は、結合組織マトリックスの酵素的消化により無菌的に回収することができる。一般的には、滑膜を約１ミリメーターの直径の切片に切断し、トリプシン（グレイ平衡塩溶液中の0.2% W/V）で37℃において30分間、そしてコラゲナーゼ（グレイ平衡塩溶液中の0.2% W/V）で37℃において２時間、連続的に消化する。この消化から回収した細胞を、平方センチメートル当たり10⁴〜10⁵細胞の濃度で、10%胎児ウシ血清と抗生物質を補充したハンクF₁₂ 培地を含むプラスチック培養皿に接種する。３〜７日後、培養培地を取り除く。リンパ球のような非接着細胞をゲイ平衡塩溶液で洗浄することにより除去し、新しい培地を加える。接着細胞はこの時点でそのまま使用できるようになり、増殖させて集団を形成させるか、１回以上の継代培養を行う。継代培養することにより、細胞数を増やし、マクロファージのような非分割細胞を除去することができる。このように回収された細胞は遺伝子操作の後、トリプシン処理やかき取ること等の手段により培養皿から取り出し、標準懸濁物とすることができる。ゲイ平衡塩溶液もしくはその他の適当な組成の等張塩溶液、あるいは生理食塩水が適当なキャリアである。次いで、細胞の懸濁物を宿主哺乳類動物の関節に注射することができる。この種の関節内注射は日常的なものであり、医師の診察室において簡単に行うことができる。手術は必要ない。この方法により非常に大きな数の細胞を導入することができ、必要に応じ繰り返して注射することができる。本発明のまた別の態様は、本明細書にこれまで記載した製造方法により製造された遺伝子である。このレトロウィルスに保有された遺伝子は、非経口投与のために、適当な薬学的キャリア、例えば緩衝化された生理食塩水に混合することができる。この遺伝子は、治療上有効な量で患者に投与することができる。より具体的には、この遺伝子を薬学的に適当なキャリア中に治療上有効な量含有させて、関節内注射により投与することができる。本発明のまた別の態様においては、この遺伝子を予防的な手段として患者に投与し、関節炎が進行している可能性が非常に高いと診断された患者における関節炎の進行を防止することができる。より具体的には、このレトロウィルスに保有された遺伝子を適当な薬学的キャリア中に予防上有効な量含有させて、関節内注射を含む非経口注射により投与することができる。実施例Ｘ CMVプロモーターの下流に連結されたインターロイキン-1βコード配列を含むD NAプラスミドベクター分子の50マイクログラムをカチオン性リポソーム中に封入し、ゲイ生物学的緩衝液と混合し、ウサギの膝関節中に関節内注射した。注射の 48時間後に、１ナノグラムのインターロイキン-1βをその膝関節領域から回収した。即ち、DNA含有リポソーム溶液の滑膜組織領域中への注射により、リポソームの滑膜細胞への融合、DNAプラスミドベクターの滑膜細胞中への移送、そしてその後のIL-1β遺伝子の発現が促進されたものである。さらに、封入していない（即ち裸の）DNAを関節領域中に注射し、その後の滑膜細胞中でのIL-1β遺伝子の発現を測定することにより、DN Aベクターの滑膜細胞中へのトランスフェクションを監視することができる。従って、いずれの方法も、本発明において同様に例示した滑膜のインビトロ操作の信頼のできる代替手段として利用することができる。当業者であれば、哺乳類宿主の結合組織細胞中にインビトロで、あるいはインビボで、治療的特性を有するタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子を導入する方法が本発明により提供されることが理解されるであろう。この方法は、維持及び発現の可能なDNAを有する遺伝子を使用することを含む。当業者であれば、本発明により、哺乳類宿主の関節炎症状の治療のために、哺乳類宿主の結合組織中の少なくとも１の細胞中に、その産物をコードする少なくとも１つの遺伝子を導入する方法が提供されることが理解されるであろう。当業者であれば、哺乳類宿主の結合組織を修復し、再生させる方法が本発明により提供されることが理解されるであろう。さらに本発明により、結合組織病理の研究のための動物モデルを製造する方法が提供されることが理解されるであろう。当業者であれば、本発明により、インターロイキン-1の実質的に全てのアイソフォームに結合し中和することができるインターロイキン-1受容体の細胞外インターロイキン-1結合ドメインをコードする遺伝子を使用する方法及び製造する方法が提供され、これにより哺乳類宿主の軟骨を病理学的劣化から実質的に保護する方法が提供されることが理解されるであろう。さらに、当業者であれば、本発明の遺伝子を使用する方法により炎症が軽減され、関節の軟組織が保護され、関節炎に罹患する患者において起こる骨の損失が抑制されることが理解されるであろう。本明細書にこれまで記載した発明に使用されるウィルスベクターが、例えば末端切断型インターロイキン-1受容体遺伝子を保有するレトロウィルスベクターで形質導入された患者からの自己滑膜細胞の直接の関節内注射または移植により、インビボであるいは培養中に滑膜細胞をトランスフェクトするのに使用できることは、当業者であれば理解するであろう。上記においては説明の目的で本発明の特定の態様を記載したが、添付の請求の範囲に定義された本発明を逸脱することなく本発明の詳細についての多数の変形が可能であることは当業者に明らかであろう。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年３月３１日【補正内容】請求の範囲１．哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、組換え法を用いて該産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを作製し、そして該産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを用いて哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させる、ことを含む上記方法。２．治療に用いるために哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に前記の産物コード化遺伝子を導入することを含む、請求項１に記載の方法。３．前記の遺伝子としてヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。４．前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。５．前記の遺伝子として少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。６．前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項５に記載の方法。７．前記の遺伝子として少なくとも１つのサイトカインをコードする遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。８．前記のサイトカインとして、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１およびインターロイキン− １２より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項７に記載の方法。９．前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項７に記載の方法。 10．前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項９に記載の方法。 11．前記のサイトカインとして少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子を用いることを含む、請求項７に記載の方法。 12．前記のウイルスベクターとしてレトロウイルスベクターを用いることを含む、請求項２に記載の方法。 13．前記のレトロウイルスベクターとしてＭＦＧおよびＢＡＧより成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項12に記載の方法。 14．前記の遺伝子としてヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードする遺伝子を用いること、および前記のレトロウイルスベクターとしてＭＦＧを用いることを含む、請求項13に記載の方法。 15．前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項13に記載の方法。 16．前記の遺伝子として少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項13に記載の方法。 17．前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項16に記載の方法。 18．前記の遺伝子として少なくとも１つのサイトカインをコードする遺伝子を用いることを含む、請求項13に記載の方法。 19．前記のサイトカインとして、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１およびインターロイキン−１２より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項18に記載の方法。 20．前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項18に記載の方法。 21．前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項20 に記載の方法。 22．前記のサイトカインとして少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子を用いることを含む、請求項18に記載の方法。 23．前記のウイルスベクターとしてアデノ関連ウイルス、アデノウイルスおよびヘルペスウイルスより成る群から選ばれる少なくとも１つのベクターを用いることを含む、請求項１に記載の方法。 24．前記の遺伝子としてヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項23に記載の方法。 25．前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項23に記載の方法。 26．前記の遺伝子として少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項23に記載の方法。 27．前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項26に記載の方法。 28．前記の遺伝子として少なくとも１つのサイトカインをコードする遺伝子を用いることを含む、請求項23に記載の方法。 29．前記のサイトカインとして、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１およびインターロイキン−１２より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項28に記載の方法。 30．前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項28に記載の方法。 31．前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項30 に記載の方法。 32．前記のサイトカインとして少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子を用いることを含む、請求項28に記載の方法。 33．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織へ前記の遺伝子を導入することを含む、請求項１に記載の方法。 34．前記の靱帯として十字靱帯を用いることを含む、請求項33に記載の方法。 35．前記の十字靱帯として、前十字靱帯および後十字靱帯より成る群から選ばれる靱帯を用いることを含む、請求項34に記載の方法。 36．前記の遺伝子として、維持および発現が可能なＤＮＡを有する遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。 37．前記の遺伝子を前記の細胞内にin vitroで導入することを含む、請求項１に記載の方法。 38．続いて前記の感染細胞を哺乳動物宿主へ移植することを含む、請求項37に記載の方法。 39．結合組織細胞への感染後であって、哺乳動物宿主への感染細胞の移植前に、感染させた結合組織細胞を保存することを含む、請求項37に記載の方法。 40．前記の感染させた結合組織細胞を液体窒素下で１０％ＤＭＳＯ中に保存することを含む、請求項39に記載の方法。 41．関節炎を非常に発症しやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項38に記載の方法。 42．治療のために関節炎にかかった哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項38に記載の方法。 43．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生するために前記の方法を用いることを含む、請求項38に記載の方法。 44．ヒトである哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項43に記載の方法。 45．前記の産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを直接的に哺乳動物宿主へ導入することにより前記の細胞にin vivo感染させることを含む、請求項14に記載の方法。 46．関節内注入によって哺乳動物宿主へ直接導入することを含む、請求項45に記載の方法。 47．関節炎を非常に発症しやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項45に記載の方法。 48．治療のために関節炎にかかった哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項45に記載の方法。 49．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生するために前記の方法を用いることを含む、請求項45に記載の方法。 50．ヒトである哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項45に記載の方法。 51．哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、結合組織細胞内に該産物コード化遺伝子を導入するための非ウイルス手段を用いることを含み、該非ウイルス手段が少なくとも１つのリポソーム、Ca₃(PO₄)₂ 、エレクトロポレーションおよびＤＥＡＥ−デキストランより成る群から選ばれる上記方法。 52．前記のリポソームとしてＤＣ−コレステロールおよびＳＦ−コレステロールより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項51に記載の方法。 53．前記の遺伝子としてヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項51に記載の方法。 54．前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項51に記載の方法。 55．前記の遺伝子として少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項51に記載の方法。 56．前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項55に記載の方法。 57．前記の遺伝子として少なくとも１つのサイトカインをコードする遺伝子を用いることを含む、請求項51に記載の方法。 58．前記のサイトカインとして、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１およびインターロイキン−１２より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項57に記載の方法。 59．前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項57に記載の方法。 60．前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項59 に記載の方法。 61．前記のサイトカインとして少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子を用いることを含む、請求項57に記載の方法。 62．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織へ前記の遺伝子を導入することを含む、請求項51に記載の方法。 63．前記の靱帯として十字靱帯を用いることを含む、請求項62に記載の方法。 64．前記の十字靱帯として、前十字靱帯および後十字靱帯より成る群から選ばれる靱帯を用いることを含む、請求項63に記載の方法。 65．前記の遺伝子として、維持および発現が可能なＤＮＡを有する遺伝子を用いることを含む、請求項51に記載の方法。 66．前記の遺伝子を前記の細胞内にin vitroで導入することを含む、請求項51に記載の方法。 67．続いて前記の遺伝子を有する細胞を哺乳動物宿主へ移植することを含む、請求項66に記載の方法。 68．前記の産物コード化遺伝子を結合組織細胞内に導入した後であって、該遺伝子を有する結合組織細胞を哺乳動物宿主へ移植する前に、該遺伝子を有する結合組織細胞を保存することを含む、請求項67に記載の方法。 69．前記の遺伝子を有する結合組織細胞を液体窒素下で１０％ＤＭＳＯ中に保存することを含む、請求項68に記載の方法。 70．関節炎を非常に発症しやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項67に記載の方法。 71．治療のために関節炎にかかった哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項67に記載の方法。 72．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生するために前記の方法を用いることを含む、請求項67に記載の方法。 73．哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、哺乳動物宿主の結合組織細胞内に該産物コード化遺伝子を直接導入するための非ウイルス手段をin vivoで用いることからなり、該非ウイルス手段が少なくとも１つのリポソーム、Ca₃(PO₄)₂およびＤＥＡＥ−デキストランより成る群から選ばれる上記方法。 74．関節内注入によって哺乳動物宿主へin vivo導入することを含む、請求項73 に記載の方法。 75．関節炎を非常に発症しやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項73に記載の方法。 76．治療のために関節炎にかかった哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項73に記載の方法。 77．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生するために前記の方法を用いることを含む、請求項73に記載の方法。 78．結合組織病理学の研究用のモデル動物を作出する方法であって、（a）組換え法を用いて産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを作製し、そして（b）モデル動物を得るために該産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを用いて哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させることにより、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入することを含む上記方法。 79．前記の遺伝子としてサイトカインおよびプロテイナーゼより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項78に記載の方法。 80．前記のサイトカインとしてインターロイキン−１α、インターロイキン−１ βおよびＴＮＦ−αより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項79 に記載の方法。 81．前記のプロテイナーゼとしてマトリックス・メタロプロテイナーゼを用いることを含む、請求項79に記載の方法。 82．前記のマトリックス・メタロプロテイナーゼとしてコラゲナーゼ、ゼラチナーゼおよびストロメリシンより成る群から選ばれる酵素を用いることを含む、請求項78に記載の方法。 83．結合組織病理学の研究用のモデル動物を作出する方法であって、モデル動物を得るために哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入するための非ウイルス手段を用いることからなり、該非ウイルス手段が少なくとも１つのリポソーム、Ca₃(PO₄)₂ 、エレクトロポレーションおよびＤＥＡＥ−デキストランより成る群から選ばれる上記方法。 84．前記の遺伝子としてサイトカインおよびプロテイナーゼより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項83に記載の方法。 85．前記のサイトカインとしてインターロイキン−１α、インターロイキン−１ βおよびＴＮＦ−αより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項84 に記載の方法。 86．前記のプロテイナーゼとしてマトリックス・メタロプロテイナーゼを用いることを含む、請求項84に記載の方法。 87．前記のマトリックス・メタロプロテイナーゼとしてコラゲナーゼ、ゼラチナーゼおよびストロメリシンより成る群から選ばれる酵素を用いることを含む、請求項86に記載の方法。 88．関節炎に関係した有害な病理学的変化に抵抗するために末端切断型のインターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を用いる方法であって、組換え法を用いて末端切断型のインターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を含むレトロウイルスパッケージング細胞系を作製し、末端切断型インターロイキン−１受容体をコードする該遺伝子を、適当な真核生物プロモーターの制御下にあるレトロウイルスベクターに挿入し、末端切断型インターロイキン−１受容体をコードする該遺伝子を発現しうるウイルス粒子を生産するために、末端切断型インターロイキン−１受容体をコードする該遺伝子を含むレトロウイルスベクターをレトロウイルスパッケージング細胞系にトランスフェクトし、そして該レトロウイルスパッケージング細胞系から得られたウイルス粒子を用いて哺乳動物宿主の炎症を起こした関節の滑膜細胞に感染させる、ことを含む上記方法。 89．哺乳動物宿主の関節内腔にある滑膜細胞において複製して発現するＤＮＡを有する前記の遺伝子を用いる、請求項88に記載の方法。 90．関節炎を非常に発症しやすい患者において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項88に記載の方法。 91．関節炎にかかった患者を治療するために前記の方法を用いることを含む、請求項88に記載の方法。 92．哺乳動物宿主の炎症を起こした関節内腔にある滑膜細胞に前記のウイルス粒子を直接導入することにより、哺乳動物宿主の滑膜細胞に感染させることを含む、請求項88に記載の方法。 93．非経口注入によって前記のウイルス粒子を導入することを含む、請求項92に記載の方法。 94．関節内注入によって前記のウイルス粒子を導入することを含む、請求項92に記載の方法。 95．関節内注入を用いることにより、形質導入した滑膜細胞を患者の関節に移植することを含む、請求項130に記載の方法。 96．前記のウイルス粒子を他の滑膜細胞に導入することにより、哺乳動物宿主の滑膜細胞に感染させることを含む、請求項130に記載の方法。 97．インターロイキン−１と結合して、それを中和することができるインターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子を用いる方法であって、組換え法を用いて、インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン −１結合ドメインをコードする第１の遺伝子と選択可能な抗生物質耐性をコードする第２の遺伝子を保有するレトロウイルスベクターを作製し、そして該レトロウイルスベクターをレトロウイルスパッケージング細胞系にトランスフェクトして、非病原性で、複製に欠陥があるが組込み能のある、両栄養的で、感染性の、該遺伝子を保有するレトロウイルス粒子を産生する細胞系を得る、ことを含む上記方法。 98．前記の細胞系由来のレトロウイルス粒子を哺乳動物宿主の炎症を起こした関節内腔にある滑膜細胞に直接感染させることによって前記の遺伝子を導入することを含む、請求項97に記載の方法。 99．培養下の自己由来の滑膜細胞の形質導入により前記の遺伝子を導入し、培養物を抗生物質で処理することにより滑膜細胞系を選択し、そして選択した滑膜細胞を哺乳動物の冒された関節内に移植することを含む、請求項97に記載の方法。 100.前記のウイルス粒子の導入が非経口注入による、請求項97に記載の方法。 101.前記のウイルス粒子の導入が関節内注入による、請求項97に記載の方法。 102.インターロイキン−１と結合して、それを中和することができるインターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子を調製する方法であって、タンパク質分泌のためのシグナル配列を含む上記の細胞外インターロイキン −１結合ドメインのポリメラーゼ連鎖反応により該遺伝子を合成し、増幅されたインターロイキン−１受容体コード配列をレトロウイルスベクターに導入し、該レトロウイルスベクターを両栄養的レトロウイルスパッケージング細胞系にトランスフェクトし、そして該レトロウイルスパッケージング細胞系から該遺伝子を含むウイルス粒子を回収する、ことを含む上記方法。 103.請求項102の方法により調製された遺伝子。 104.インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子および適当な製剤上の担体を含有する、治療上有効な量で患者に非経口投与するための組成物。 105.インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子および適当な製剤上の担体を含有する、予防上有効な量で患者に非経口投与するための組成物。 106.哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の滑膜組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、組換えＤＮＡ法を用いて該産物コード化遺伝子を含むＤＮＡベクター分子を作製し、そして該ＤＮＡベクター分子を哺乳動物宿主の関節内に注入し、続いて該ＤＮＡベクター分子が滑膜細胞に接触する、ことを含む上記方法。 107.前記のＤＮＡベクター分子を予防的に導入する、請求項106に記載の方法。 108.関節内に注入する前に、前記のＤＮＡベクター分子をリポソーム内に保持させる、請求項106に記載の方法。 109.関節内に注入する前に、前記のＤＮＡベクター分子をリポソーム内に保持させる、請求項107に記載の方法。 110.前記のＤＮＡベクター分子がプラスミドである、請求項108に記載の方法。 111.前記のＤＮＡベクター分子がプラスミドである、請求項109に記載の方法。 112.前記の遺伝子としてヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項106に記載の方法。 113.前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項106に記載の方法。 114.前記の遺伝子として少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項106に記載の方法。 115.前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項114に記載の方法。 116.前記の遺伝子として少なくとも１つのサイトカインをコードする遺伝子を用いることを含む、請求項106に記載の方法。 117.前記のサイトカインとして、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１およびインターロイキン−１２より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項116に記載の方法。 118.前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項116に記載の方法。 119.前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項11 8に記載の方法。 120.前記の遺伝子として可溶性の腫瘍壊死因子受容体をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項106に記載の方法。 121.哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、組換え法を用いて該産物コード化遺伝子を含むＤＮＡベクター分子を作製し、そして該ＤＮＡベクター分子を含む偽ウイルスを用いて哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させる、ことを含む上記方法。 122.前記のＤＮＡベクターが変異ウイルスゲノム分子であって、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞において発現される対象の異種遺伝子を含む、請求項121に記載の方法。 123.前記の単純ヘルペスウイルスベクターが単純ヘルペスウイルス１型および単純ヘルペスウイルス２型より成る群から選ばれる、請求項23に記載の方法。 124.滑膜細胞が関節から取り出された滑膜細胞である、請求項130に記載の方法。 125.滑膜細胞が膝関節から取り出されたものである、請求項123に記載の方法。 126.滑膜細胞が皮膚細胞である、請求項130に記載の方法。 127.前記の遺伝子として可溶性の腫瘍壊死因子受容体をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。 128.前記の遺伝子として可溶性の腫瘍壊死因子受容体をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項13に記載の方法。 129.前記の遺伝子として可溶性の腫瘍壊死因子受容体をコードする遺伝子を用いることを含む、請求項23に記載の方法。 130.関節炎に関係した有害な病理学的変化に抵抗するために末端切断型のインターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を用いる方法であって、組換え法を用いて末端切断型のインターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を含むレトロウイルスパッケージング細胞系を作製し、末端切断型インターロイキン−１受容体をコードする該遺伝子を、適当な真核生物プロモーターの制御下にあるレトロウイルスベクターに挿入し、末端切断型インターロイキン−１受容体をコードする該遺伝子を発現しうるウイルス粒子を生産するために、末端切断型インターロイキン−１受容体をコードする該遺伝子を含むレトロウイルスベクターをレトロウイルスパッケージング細胞系にトランスフェクトし、そして哺乳動物宿主の関節内腔へ移植するための形質導入された滑膜細胞を作るべく、前記のウイルス粒子を培養下の滑膜細胞に直接導入することにより哺乳動物宿主の滑膜細胞に感染させる、ことを含む上記方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｎ 5/10 9162−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 15/09 ＺＮＡ 9281−4Ｂ 5/00 Ｂ // Ａ６１Ｋ 38/00 9455−4ＣＡ６１Ｋ 37/54 38/22 9455−4Ｃ 37/02 38/46 9455−4Ｃ 37/64 38/55 9455−4Ｃ 37/24 (72)発明者エヴァンス，クリストファーエイチアメリカ合衆国 15211 ペンシルバニア州ピッツバーグ，メイプルテラス 111番地 (72)発明者ロビンス，ポールディーアメリカ合衆国 15232 ペンシルバニア州ピッツバーグ，エルマーストリート 5816番地

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、組換え法を用いて該産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを作製し、そして該産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを用いて哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させる、ことを含む上記方法。２．治療に用いるために哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に前記の産物コード化遺伝子を導入することを含む、請求項１に記載の方法。３．前記の遺伝子として、ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。４．前記の遺伝子として、β−ガラクトシダーゼをコードしうるＬａｃＺマーカー遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。５．前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。６．前記の遺伝子として、少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。７．前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項５に記載の方法。８．前記の遺伝子として、少なくとも１つのサイトカインをコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。９．前記のサイトカインとして、インターロイキン−１α、インターロイキン− １β、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項８に記載の方法。 10．前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項８に記載の方法。 11．前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項10 に記載の方法。 12．前記のサイトカインとして少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子を用いることを含む、請求項８に記載の方法。 13．前記のウイルスベクターとしてレトロウイルスベクターを用いることを含む、請求項１に記載の方法。 14．前記のレトロウイルスベクターとしてＭＦＧおよびＢＡＧより成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項13に記載の方法。 15．前記の遺伝子としてヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードしうる遺伝子を用いること、および前記のレトロウイルスベクターとしてＭＦＧを用いることを含む、請求項14に記載の方法。 16．β−ガラクトシダーゼをコードしうる前記の遺伝子としてＬａｃＺマーカー遺伝子を用いること、および前記のレトロウイルスベクターとしてＭＦＧを用いることを含む、請求項14に記載の方法。 17．β−ガラクトシダーゼをコードしうる前記の遺伝子としてＬａｃＺｎｅｏマーカー遺伝子を用いること、および前記のレトロウイルスベクターとしてＢＡＧを用いることを含む、請求項14に記載の方法。 18．前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項14に記載の方法。 19．前記の遺伝子として少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項14に記載の方法。 20．前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項19に記載の方法。 21．前記の遺伝子として少なくとも１つのサイトカインをコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項14に記載の方法。 22．前記のサイトカインとして、インターロイキン−１α、インターロイキン− １β、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項21に記載の方法。 23．前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項21に記載の方法。 24．前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項23 に記載の方法。 25．前記のサイトカインとして少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子を用いることを含む、請求項21に記載の方法。 26．前記のウイルスベクターとしてアデノ関連ウイルス、アデノウイルスおよびヘルペスウイルスより成る群から選ばれる少なくとも１つのベクターを用いることを含む、請求項１に記載の方法。 27．前記の遺伝子としてヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項26に記載の方法。 28．前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項26に記載の方法。 29．前記の遺伝子としてβ−ガラクトシダーゼをコードしうるＬａｃＺマーカー遺伝子を用いることを含む、請求項26に記載の方法。 30．前記の遺伝子として少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項26に記載の方法。 31．前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項30に記載の方法。 32．前記の遺伝子として少なくとも１つのサイトカインをコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項26に記載の方法。 33．前記のサイトカインとして、インターロイキン−１α、インターロイキン− １β、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項32に記載の方法。 34．前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項32に記載の方法。 35．前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項34 に記載の方法。 36．前記のサイトカインとして少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子を用いることを含む、請求項33に記載の方法。 37．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織へ前記の遺伝子を導入することを含む、請求項１に記載の方法。 38．前記の靱帯として十字靱帯を用いることを含む、請求項37に記載の方法。 39．前記の十字靱帯として、前十字靱帯および後十字靱帯より成る群から選ばれる靱帯を用いることを含む、請求項38に記載の方法。 40．前記の遺伝子として、維持および発現が可能なＤＮＡを有する遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。 41．前記の遺伝子を前記の細胞内にin vitroで導入することを含む、請求項１に記載の方法。 42．続いて前記の感染細胞を哺乳動物宿主へ移植することを含む、請求項41に記載の方法。 43．結合組織細胞への感染後であって、哺乳動物宿主への感染細胞の移植前に、感染させた結合組織細胞を保存することを含む、請求項41に記載の方法。 44．前記の感染させた結合組織細胞を液体窒素下で１０％ＤＭＳＯ中に保存することを含む、請求項43に記載の方法。 45．関節炎を非常に発症しやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項42に記載の方法。 46．治療のために関節炎にかかった哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項42に記載の方法。 47．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生するために前記の方法を用いることを含む、請求項42に記載の方法。 48．ヒトである哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項47に記載の方法。 49．前記の産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを直接的に哺乳動物宿主へ導入することにより前記の細胞にin vivo感染させることを含む、請求項１に記載の方法。 50．関節内注入によって哺乳動物宿主へ直接導入することを含む、請求項49に記載の方法。 51．関節炎を非常に発症しやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項49に記載の方法。 52．治療のために関節炎にかかった哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項49に記載の方法。 53．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生するために前記の方法を用いることを含む、請求項49に記載の方法。 54．ヒトである哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項49に記載の方法。 55．哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、結合組織細胞内に該産物コード化遺伝子を導入するために非ウイルス手段を用いることを含み、該非ウイルス手段が少なくとも１つのリポソーム、Ca₃(PO₄)₂ 、エレクトロポレーションおよびＤＥＡＥ−デキストランより成る群から選ばれる上記方法。 56．前記のリポソームとしてＤＣ−コレステロールおよびＳＦ−コレステロールより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項55に記載の方法。 57．前記の遺伝子としてヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項55に記載の方法。 58．β−ガラクトシダーゼをコードしうる前記の遺伝子としてＬａｃＺマーカー遺伝子を用いることを含む、請求項55に記載の方法。 59．前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項55に記載の方法。 60．前記の遺伝子として少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項55に記載の方法。 61．前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項60に記載の方法。 62．前記の遺伝子として少なくとも１つのサイトカインをコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項55に記載の方法。 63．前記のサイトカインとして、インターロイキン−１α、インターロイキン− １β、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項62に記載の方法。 64．前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項62に記載の方法。 65．前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項64 に記載の方法。 66．前記のサイトカインとして少なくとも１つの繊維芽細胞増殖因子を用いることを含む、請求項62に記載の方法。 67．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織へ前記の遺伝子を導入することを含む、請求項55に記載の方法。 68．前記の靱帯として十字靱帯を用いることを含む、請求項67に記載の方法。 69．前記の十字靱帯として、前十字靱帯および後十字靱帯より成る群から選ばれる靱帯を用いることを含む、請求項68に記載の方法。 70．前記の遺伝子として、維持および発現が可能なＤＮＡを有する遺伝子を用いることを含む、請求項55に記載の方法。 71．前記の遺伝子を前記の細胞内にin vitroで導入することを含む、請求項55に記載の方法。 72．続いて前記の遺伝子を有する細胞を哺乳動物宿主へ移植することを含む、請求項71に記載の方法。 73．前記の産物コード化遺伝子を結合組織細胞内に導入した後であって、該遺伝子を有する結合組織細胞を哺乳動物宿主へ移植する前に、該遺伝子を有する結合組織細胞を保存することを含む、請求項72に記載の方法。 74．前記の遺伝子を有する結合組織細胞を液体窒素下で１０％ＤＭＳＯ中に保存することを含む、請求項73に記載の方法。 75．関節炎を非常に発症しやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項72に記載の方法。 76．治療のために関節炎にかかった哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項72に記載の方法。 77．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生するために前記の方法を用いることを含む、請求項72に記載の方法。 78．哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、結合組織細胞内に該産物コード化遺伝子を直接導入するために非ウイルス手段をin vivoで用いることからなり、該非ウイルス手段が少なくとも１つのリポソーム、Ca₃(PO₄)₂およびＤＥＡＥ−デキストランより成る群から選ばれる上記方法。 79．関節内注入によって哺乳動物宿主へin vivo導入することを含む、請求項78 に記載の方法。 80．関節炎を非常に発症しやすい哺乳動物宿主において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項78に記載の方法。 81．治療のために関節炎にかかった哺乳動物宿主に対し前記の方法を用いることを含む、請求項78に記載の方法。 82．靱帯、軟骨、腱および滑膜より成る群から選ばれる結合組織を修復および再生するために前記の方法を用いることを含む、請求項78に記載の方法。 83．結合組織病理学の研究用のモデル動物を作出する方法であって、（a）組換え法を用いて産物をコードする遺伝子を含むウイルスベクターを作製し、そして（b）該産物コード化遺伝子を含むウイルスベクターを用いて、モデル動物をもたらす哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させることにより、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入することを含む上記方法。 84．前記の遺伝子としてサイトカインおよびプロテイナーゼより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項83に記載の方法。 85．前記のサイトカインとしてインターロイキン−１α、インターロイキン−１βおよびＴＮＦ−αより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項84に記載の方法。 86．前記のプロテイナーゼとしてマトリックス・メタロプロテイナーゼを用いることを含む、請求項84に記載の方法。 87．前記のマトリックス・メタロプロテイナーゼとしてコラゲナーゼ、ゼラチナーゼおよびストロメリシンより成る群から選ばれる酵素を用いることを含む、請求項83に記載の方法。 88．結合組織病理学の研究用のモデル動物を作出する方法であって、モデル動物をもたらす哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入するために非ウイルス手段を用いることからなり、該非ウイルス手段が少なくとも１つのリポソーム、Ca₃(PO₄)₂、エレクトロポレーションおよびＤＥＡＥ−デキストランより成る群から選ばれる上記方法。 89．前記の遺伝子としてサイトカインおよびプロテイナーゼより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項88に記載の方法。 90．前記のサイトカインとしてインターロイキン−１α、インターロイキン−１ βおよびＴＮＦ−αより成る群から選ばれる物質を用いることを含む、請求項89 に記載の方法。 91．前記のプロテイナーゼとしてマトリックス・メタロプロテイナーゼを用いることを含む、請求項89に記載の方法。 92．前記のマトリックス・メタロプロテイナーゼとしてコラゲナーゼ、ゼラチナーゼおよびストロメリシンより成る群から選ばれる酵素を用いることを含む、請求項91に記載の方法。 93．関節炎に関係した有害な病理学的変化に抵抗するために末端切断型のインターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を用いる方法であって、組換え法を用いて末端切断型のインターロイキン−１受容体をコードする遺伝子を含むレトロウイルスパッケージング細胞系を作製し、末端切断型インターロイキン−１受容体をコードする該遺伝子を、適当な真核生物プロモーターの制御下にあるレトロウイルスベクターに挿入し、末端切断型インターロイキン−１受容体をコードする該遺伝子を発現しうるウイルス粒子を生産するために、末端切断型インターロイキン−１受容体をコードする該遺伝子を含むレトロウイルスベクターをレトロウイルスパッケージング細胞系にトランスフェクトし、そして該レトロウイルスパッケージング細胞系から得られたウイルス粒子を用いて哺乳動物宿主の滑膜細胞に感染させる、ことを含む上記方法。 94．哺乳動物宿主の関節内腔にある滑膜細胞において複製および発現することが可能なＤＮＡを有する前記の遺伝子を用いる、請求項93に記載の方法。 95．関節炎を非常に発症しやすい患者において関節炎の発症を実質的に防止するために前記の方法を用いることを含む、請求項93に記載の方法。 96．関節炎にかかった患者を治療するために前記の方法を用いることを含む、請求項93に記載の方法。 97．前記のウイルス粒子を哺乳動物宿主の関節内腔にある滑膜細胞に直接導入することにより、哺乳動物宿主の滑膜細胞に感染させることを含む、請求項93に記載の方法。 98．非経口注入によって前記のウイルス粒子を導入することを含む、請求項97に記載の方法。 99．関節内注入によって前記のウイルス粒子を導入することを含む、請求項97に記載の方法。 100.あとで患者の関節内に移植しうる形質導入滑膜細胞を形成するために、前記のウイルス粒子を培養下の滑膜細胞に直接導入することによって哺乳動物宿主の滑膜細胞に感染させることを含む、請求項93に記載の方法。 101.関節内注入を用いることによって患者の関節内に形質導入滑膜細胞を移植することを含む、請求項100に記載の方法。 102.前記のウイルス粒子を他の滑膜細胞に導入することによって哺乳動物宿主の滑膜細胞に感染させることを含む、請求項93に記載の方法。 103.インターロイキン−１と結合して、それを中和することができるインターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子を用いる方法であって、組換え法を用いて、インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン −１結合ドメインをコードする第１の遺伝子と選択可能な抗生物質耐性をコードする第２の遺伝子を保有するレトロウイルスベクターを作製し、そして該レトロウイルスベクターをレトロウイルスパッケージング細胞系にトランスフェクトして、非病原性で、複製に欠陥があるが組込み能があり、両栄養的で、感染性の、該遺伝子を保有するレトロウイルス粒子を産生する細胞系を得る、ことを含む上記方法。 104.前記の細胞系からのレトロウイルス粒子を哺乳動物宿主の関節内腔にある滑膜細胞に直接感染させることによって前記の遺伝子を導入することを含む、請求項103に記載の方法。 105.培養下の自己由来の滑膜細胞の形質導入により前記の遺伝子を導入し、培養物を抗生物質で処理することにより滑膜細胞の細胞系を選択し、そして選択した滑膜細胞を哺乳動物の冒された関節内に移植することを含む、請求項103に記載の方法。 106.前記のウイルス粒子の導入が非経口注入による、請求項103に記載の方法。 107.前記のウイルス粒子の導入が関節内注入による、請求項103に記載の方法。 108.インターロイキン−１と結合して、それを中和することができるインターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子を調製する方法であって、タンパク質分泌のためのシグナル配列を含む上記の細胞外インターロイキン −１結合ドメインのポリメラーゼ連鎖反応により該遺伝子を合成し、増幅されたインターロイキン−１受容体コード配列をレトロウイルスベクターに導入し、該レトロウイルスベクターを両栄養的レトロウイルスパッケージング細胞系にトランスフェクトし、そして該レトロウイルスパッケージング細胞系から該遺伝子を含むウイルス粒子を回収する、ことを含む上記方法。 109.請求項108の方法により作製された遺伝子。 110.インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子および適当な製剤上の担体を含有する、治療上有効な量で患者に非経口投与するための組成物。 111.インターロイキン−１受容体の細胞外インターロイキン−１結合ドメインをコードする遺伝子および適当な製剤上の担体を含有する、予防上有効な量で患者に非経口投与するための組成物。 112.哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の滑膜組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、組換えＤＮＡ法を用いて該産物コード化遺伝子を含むＤＮＡベクター分子を作製し、そして該ＤＮＡベクター分子を哺乳動物宿主の関節内に注入し、続いて該ＤＮＡベクター分子が滑膜細胞に接触する、ことを含む上記方法。 113.前記のＤＮＡベクター分子を予防的に導入する、請求項112に記載の方法。 114.関節内に注入する前に、前記のＤＮＡベクター分子をリポソーム内に保持させる、請求項112に記載の方法。 115.関節内に注入する前に、前記のＤＮＡベクター分子をリポソーム内に保持させる、請求項113に記載の方法。 116.前記のＤＮＡベクター分子がプラスミドである、請求項114に記載の方法。 117.前記のＤＮＡベクター分子がプラスミドである、請求項115に記載の方法。 118.前記の遺伝子として、ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項112に記載の方法。 119.前記の遺伝子として可溶性インターロイキン−１受容体をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項112に記載の方法。 120.前記の遺伝子として、β−ガラクトシダーゼをコードしうるＬａｃＺマーカー遺伝子を用いることを含む、請求項112に記載の方法。 121.前記の遺伝子として、少なくとも１つのプロテイナーゼ阻害剤をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項112に記載の方法。 122.前記のプロテイナーゼ阻害剤としてメタロプロテイナーゼの組織阻害剤を用いることを含む、請求項121に記載の方法。 123.前記の遺伝子として、少なくとも１つのサイトカインをコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項112に記載の方法。 124.前記のサイトカインとして、インターロイキン−１α、インターロイキン− １β、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β より成る群から選ばれる少なくとも１つの物質を用いることを含む、請求項123 に記載の方法。 125.前記のサイトカインとして少なくとも１つの形質転換成長因子を用いることを含む、請求項124に記載の方法。 126.前記の形質転換成長因子としてＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃およびＴＧＦ−αより成る群から選ばれる成長因子を用いることを含む、請求項12 5に記載の方法。 127.前記の遺伝子として可溶性の腫瘍壊死因子受容体をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項112に記載の方法。 128.インターロイキン−１βをコードする前記の遺伝子がＣＭＶプロモーター断片の下流に隣接して配置される、請求項124に記載の方法。 129.哺乳動物宿主の処置に用いるために、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞内に少なくとも１つの産物コード化遺伝子を導入する方法であって、組換え法を用いて該産物コード化遺伝子を含むＤＮＡベクター分子を作製し、そして該ＤＮＡベクター分子を含む偽ウイルスを用いて哺乳動物宿主の結合組織細胞に感染させる、ことを含む上記方法。 130.前記のＤＮＡベクターが変異ウイルスゲノム分子であって、哺乳動物宿主の結合組織の少なくとも１つの細胞において発現される対象の異種遺伝子を含む、請求項129に記載の方法。 131.前記の単純ヘルペスウイルスベクターが単純ヘルペスウイルス１型および単純ヘルペスウイルス２型より成る群から選ばれる、請求項26に記載の方法。 132.滑膜細胞が関節から取り出された滑膜細胞である、請求項100 に記載の方法。 133.滑膜細胞が膝関節から取り出されたものである、請求項132に記載の方法。 134.滑膜細胞が皮膚細胞である、請求項100に記載の方法。 135.前記の遺伝子として可溶性の腫瘍壊死因子受容体をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項１に記載の方法。 136.前記の遺伝子として可溶性の腫瘍壊死因子受容体をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項14に記載の方法。 137.前記の遺伝子として可溶性の腫瘍壊死因子受容体をコードしうる遺伝子を用いることを含む、請求項26に記載の方法。