BR112020010579A2 - receptor de antígeno quimérico de alvejamento de bcma e usos do mesmo - Google Patents
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Abstract
A presente invenção refere-se às composições e métodos para tratar doenças associadas à expressão de BCMA. A invenção também se refere a um método para administrar uma terapia de receptor de antígeno quimérico de alvejamento de BCMA (CAR) e um agente terapêutico adicional.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "RECEPTOR DE ANTÍGENO QUIMÉRICO DE ALVEJAMENTO DE BCMA E USOS DO MESMO".
[001] Este pedido reivindica a prioridade do No de Série U.S. 62/593.043 depositado em 30 de novembro de 2017 e No de Série U.S. 62/752.010 depositado em 29 de outubro de 2018, cujo conteúdo de cada um é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[002] O pedido instantâneo contém uma Listagem de Sequências que foi submetida eletronicamente em formato ASCII e está aqui incorporado a título de referência, em sua totalidade. A dita cópia de ASCII, criada em 28 de novembro de 2018, é denominada N2067- 7137WO_SL.txt e tem 1.411.518 bytes de tamanho.
[003] A presente invenção refere-se, em geral, ao uso de células geneticamente manipuladas para expressar um receptor quimérico de antígenos de alvejamento de proteína de antígeno de maturação das células B (BCMA), opcionalmente em combinação com um agente terapêutico adicional, para tratar uma doença associada à expressão de BCMA. A invenção descreve adicionalmente biomarcadores prognósticos para terapias alvejadas para BCMA.
[004] BCMA é um membro do receptor da família de necrose tumoral (TNFR) expresso em células da linhagem de células B. A expressão de BCMA é a mais alta em células B terminalmente diferenciadas que assumem o destino de células plasmáticas de vida longa, incluindo células plasmáticas, plasmoblastos e uma subpopulação de células B ativadas e células B de memória. BCMA está envolvido na mediação da sobrevivência de células plasmáticas para manter imunidade humoral de longa duração. A expressão de BCMA foi recentemente associado a vários cânceres, doenças autoimunes e doenças infecciosas. Os cânceres com expressão aumentada de BCMA incluem alguns cânceres hematológicos, como mieloma múltiplo (MM), linfoma de Hodgkin e não-Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), várias leucemias (por exemplo, leucemia linfocítica crônica (LLC)), e glioblastoma
[005] Dada a necessidade contínua de estratégias aprimoradas para alvejar doenças como câncer, são altamente desejáveis novas composições e métodos para aprimorar os agentes terapêuticos que alvejam BCMA, por exemplo, terapias com receptores quiméricos de antígenos (CAR) anti-BCMA.
[006] A divulgação apresenta, pelo menos em parte, um método de tratamento de uma doença ou distúrbio associado à expressão de antígeno de maturação das células B (BCMA, também conhecido como TNFRSF17, BCM ou CD269). Em determinadas modalidades, o distúrbio é um câncer, por exemplo, um câncer hematológico. Em algumas modalidades, a divulgação apresenta uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, como uma monoterapia ou em uma terapia de combinação com um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa uma molécula de CAR que se liga a BCMA. Em algumas modalidades, a terapia de combinação mantém ou tem melhor eficácia clínica em comparação com a terapia individualmente. Em uma modalidade, a terapia com células que expressam CAR de BCMA e o agente terapêutico adicional estão presentes em uma forma de dose única, ou como duas ou mais formas de dose. Em uma modalidade, é fornecida no presente documento uma composição que compreende uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e um agente terapêutico adicional para uso como um medicamento. Em uma modalidade, é fornecida no presente documento uma composição que compreende uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e um agente terapêutico adicional para uso no tratamento de uma doença associada à expressão de BCMA. Em um aspecto, é fornecido no presente documento um kit que compreende uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, a divulgação apresenta adicionalmente métodos de avaliar ou prever a responsividade de um indivíduo a uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, ou métodos para avaliar ou prever a potência de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA em um indivíduo. Em algumas modalidades, uma terapia com células que expressam CAR de BCMA é produzida ou administrada com base na aquisição de um nível de um biomarcador de uma amostra de paciente.
[007] Em um aspecto, esta invenção apresenta métodos de prever a expansão in vivo de células T de CAR de BCMA em um indivíduo. Em um outro aspecto, são apresentados no presente documento métodos de prever a responsividade de um indivíduo a células T de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, uma razão de células T CD4+:CD8+ maior em um produto de leucaférese isolado do indivíduo pode ser usada para prever maior expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo e/ou respostas clínicas superiores do indivíduo às células T de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, uma razão de células T CD4+:CD8+ menor em um produto de leucaférese isolado do indivíduo pode ser usada para prever menor expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo e/ou respostas clínicas inferiores do indivíduo às células T de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, uma razão de células T CD4+:CD8+ maior em uma cultura de sementes no início da fabricação das células T de CAR de BCMA (por exemplo, em um produto de leucaférese após a remoção de monócitos) pode ser usada para prever maior expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo e/ou respostas clínicas superiores do indivíduo às células T de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, uma razão de células T CD4+:CD8+ menor em uma cultura de sementes no início da fabricação das células T de CAR de BCMA (por exemplo, em um produto de leucaférese após a remoção dos monócitos) pode ser usada para prever menor expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo e/ou respostas clínicas superiores do indivíduo às células T de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, uma razão de células T CD4+:CD8+ maior no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração das células T de CAR de BCMA pode ser usada para prever maior expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo. Em algumas modalidades, uma razão de células T CD4+:CD8+ menor no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração das células T de CAR de BCMA pode ser usada para prever menor expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo.
[008] Em algumas modalidades, uma frequência maior de células T CD8+ com um fenótipo de "memória inicial" (por exemplo, uma frequência mais alta de células T CD45RO-CD27+CD8+) em um produto de leucaférese isolado do indivíduo pode ser usada para prever maior expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo e/ou respostas clínicas superiores do indivíduo às células T de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, uma frequência mais baixa de células T CD8+: com um fenótipo de "memória inicial" (por exemplo, uma frequência mais baixa de células T CD45RO-CD27+CD8+) em um produto de leucaférese isolado do indivíduo pode ser usada para prever menor expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo e/ou respostas clínicas inferiores do indivíduo às células T de CAR de BCMA.
[009] Em algumas modalidades, uma expansão in vitro maior de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação das células T de CAR de BCMA pode ser usada para prever maior expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo. Em algumas modalidades, uma expansão in vitro menor de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação das células T de CAR de BCMA pode ser usada para prever menor expansão in vivo de células T de CAR de BCMA no indivíduo.
[0010] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método de avaliar ou prever uma responsividade do indivíduo a uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, em que o indivíduo tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende: adquirir um valor para um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam
CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou (vi) a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, como medido por duplicação de população no dia 9 (PDL9), em que: (a) um aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de capacidade de resposta aumentada do indivíduo para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (b) uma diminuição no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo de capacidade de resposta diminuída do indivíduo para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, assim avaliando ou prevendo a capacidade de resposta do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[0011] Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA.
Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, duplicação de população no dia 9 (PDL9).
[0012] Em algumas modalidades, o aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de capacidade de resposta aumentada do indivíduo para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, a diminuição no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência de respondedor, é indicativo ou preditivo de capacidade de resposta reduzida do indivíduo para a terapia com células que expressam CAR de BCMA.
[0013] Em algumas modalidades, o aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de um, dois, três ou todos dentre: (a) responsividade aumentada do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; (c) o indivíduo como adequado para a terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0014] Em algumas modalidades, o aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de capacidade de resposta aumentada do indivíduo para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, o aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo do indivíduo como um respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA. Em algumas modalidades, o aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo do indivíduo como adequado para a terapia com células que expressam CAR de BCMA. Em algumas modalidades, o aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de expansão aumentada da terapia com células que expressam CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, como medido pelo número de cópias de transgenes de CAR por µg de DNA usando qPCR.
[0015] Em algumas modalidades, a redução no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo de um, dois ou todos dentre:
(a) responsividade reduzida do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um não respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (c) expansão reduzida da terapia com células que expressam de CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0016] Em algumas modalidades, a redução no valor de um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo de responsividade reduzida do indivíduo à terapia com células que expressam CAR de BCMA. Em algumas modalidades, a redução aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo do indivíduo como um não respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA. Em algumas modalidades, a redução no valor de um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo de expansão reduzida da terapia com células que expressam CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, como medido pelo número de cópias de transgenes de CAR por µg de DNA usando qPCR.
[0017] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo,
células T CD8+) compreende uma razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+), por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo. Em algumas modalidades,
[0018] Em algumas modalidades, a razão que é: (1) maior ou igual a 1 (por exemplo, entre 1 e 5, por exemplo, entre 1 e 3,5); ou (2) maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), é indicativa ou preditiva de um, dois, três, ou todos dentre: (a) responsividade aumentada do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; (c) o indivíduo como adequado para a terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0019] Em algumas modalidades, a razão menor do que 1 (por exemplo, entre 0,001 e 1) é indicativa ou preditiva de um, dois ou todos dentre: (a) responsividade reduzida do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA;
(b) o indivíduo como um não respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (c) expansão reduzida da terapia com células que expressam de CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0020] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) compreende a porcentagem de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) dentre as células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0021] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0022] Em algumas modalidades, a porcentagem de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+ é maior ou igual a 25% (por exemplo, entre 30% e 90%, por exemplo, entre 35% e 85%, por exemplo, entre 40% e 80%, por exemplo, entre 45% e 75%, por exemplo, entre 50% e 75%) é indicativa ou preditiva de um, dois, três ou todos dentre: (a) responsividade aumentada do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; (c) o indivíduo como adequado para a terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de
CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0023] Em algumas modalidades, a porcentagem de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+ é menor que 25% (por exemplo, entre 0,1% e 25%, por exemplo, entre 0,1% e 22%, por exemplo, entre 0,1% e 20%, por exemplo, entre 0,1% e 18%, por exemplo, entre 0,1% e 15%)) é indicativa ou preditiva de um, dois ou todos dentre: (a) responsividade reduzida do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um não respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (c) expansão reduzida da terapia com células que expressam de CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0024] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0025] Em algumas modalidades, a porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ é maior ou igual a 20% (por exemplo, entre 20% e 90%, por exemplo, entre 20% e 80%, por exemplo, entre 20% e 70%, por exemplo, entre 20% e 60%) é indicativa ou preditiva de um, dois, três ou todos dentre:
(a) responsividade aumentada do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; (c) o indivíduo como adequado para a terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0026] Em algumas modalidades, a porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ é menor que 20% (por exemplo, entre 0,1% e 20%, por exemplo, entre 0,1% e 18%, por exemplo, entre 0,1% e 15%, por exemplo, entre 0,1% e 12%, por exemplo, entre 0,1% e 10%) é indicativa ou preditiva de um, dois ou todos dentre: (a) responsividade reduzida do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um não respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (c) expansão reduzida da terapia com células que expressam de CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0027] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0028] Em algumas modalidades, a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ é maior ou igual a 15% (por exemplo, entre 15% e 90%, por exemplo, entre 15% e 80%, por exemplo, entre 15% e 70%, por exemplo, entre 15% e 60%, por exemplo, entre 15% e 50%) é indicativa ou preditiva de um, dois, três ou todos dentre: (a) responsividade aumentada do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; (c) o indivíduo como adequado para a terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0029] Em algumas modalidades, a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ é menor que 15% (por exemplo, entre 0,1% e 15%, por exemplo, entre 0,1% e 12%, por exemplo, entre 0,1% e 10%, por exemplo, entre 0,1% e 8%) é indicativa ou preditiva de um, dois ou todos dentre: (a) responsividade reduzida do indivíduo à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um não respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou
(c) expansão reduzida da terapia com células que expressam de CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0030] Em algumas modalidades, o valor para a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA compreende a expansão em vezes de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação (por exemplo, contagens de células totais no final da fabricação em relação ao início da fabricação) da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, como medido por contagem de células.
[0031] Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente realizar: a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do indivíduo e administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao indivíduo; ou administrar, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo, quando: (a) o indivíduo foi indicado ou previsto como tendo capacidade de resposta aumentada à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo foi indicado ou previsto como um respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; (c) o indivíduo foi indicado ou previsto como adequado para a terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou
(d) a terapia com células que expressam CAR de BCMA foi indicada ou prevista como tendo expressão aumentada no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0032] Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao indivíduo; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é a terapia com células que expressam CAR de BCMA) ao indivíduo; administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo; descontinuar a administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA e opcionalmente administrar uma segunda terapia ao indivíduo; modificar um processo de fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer as células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação a células imunoefetoras CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA geradas pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; ou administrar um pré-tratamento ao indivíduo, em que o pré- tratamento aumenta a razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, o pré-tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia com células que expressam CAR de BCMA usando células (por exemplo, células T) do indivíduo, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo, quando:
(a indivíduo foi indicado ou previsto como tendo capacidade de resposta diminuída à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo foi indicado ou previsto como um não respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (c) a terapia com células que expressam CAR de BCMA foi indicada ou prevista como tendo expressão reduzida no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0033] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende: em resposta a um valor aumentado para um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou (vi) a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, realizar: fabricar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do indivíduo e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao indivíduo; ou administrar, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, uma terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo, tratando, assim, o indivíduo que tem a doença associada à expressão de BCMA.
[0034] Em algumas modalidades, o método compreende: em resposta a um valor aumentado para um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre (i) a (vi), identificar ou prever um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre: (a) o indivíduo como tendo capacidade de resposta aumentada à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; (c) o indivíduo como adequado para a terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (d) a terapia com células que expressam CAR de BCMA como tendo expressão aumentada no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0035] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende: em resposta a um valor reduzido para um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)),
(v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou (vi) a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao indivíduo; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia com células que expressam CAR de BCMA) ao indivíduo; administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo; descontinuar a administração de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e opcionalmente administrar uma segunda terapia ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer as células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação a células imunoefetoras CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA geradas pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; ou administrar um pré-tratamento ao indivíduo, em que o pré- tratamento aumenta a razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, o pré- tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre
1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia com células que expressam CAR de BCMA usando células (por exemplo, células T) do indivíduo, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo, tratando, assim, o indivíduo que tem a doença associada à expressão de BCMA.
[0036] Em algumas modalidades, o método compreende: responder a um valor reduzido para um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre (i) a (vi), identificar ou prever um, dois ou todos dentre: (a) o indivíduo como tendo capacidade de resposta diminuída à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o indivíduo como um não respondedor da terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou (c) a terapia com células que expressam CAR de BCMA como tendo expressão reduzida no indivíduo, por exemplo, conforme medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
[0037] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) compreende uma razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+), por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0038] Em algumas modalidades, o método compreende: em resposta à razão que é:
(1) maior ou igual a 1 (por exemplo, entre 1 e 5, por exemplo, entre 1 e 3,5); ou (2) maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), realizar: a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do indivíduo e administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao indivíduo; ou administração, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo.
[0039] Em algumas modalidades, o método compreende: em resposta à razão que é menor que 1 (por exemplo, entre 0,001 e 1), realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao indivíduo; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia com células que expressam CAR de BCMA) ao indivíduo; administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo; descontinuar a administração de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e opcionalmente administrar uma segunda terapia ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer as células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação a células imunoefetoras CD8+ (células CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA geradas pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; ou administrar um pré-tratamento ao indivíduo, em que o pré- tratamento aumenta a razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, o pré-tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia com células que expressam CAR de BCMA usando células (por exemplo, células T) do indivíduo, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo.
[0040] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) compreende a porcentagem de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) dentre as células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0041] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0042] Em algumas modalidades, o método compreende: em resposta à porcentagem de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+ ser maior ou igual a 25% (por exemplo, entre 30% e 90%, por exemplo, entre 35% e 85%, por exemplo, entre 40% e 80%, por exemplo, entre 45% e 75%, por exemplo, entre 50% e 75%), realizar: fabricar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do indivíduo e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao indivíduo; ou administrar, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, uma terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo.
[0043] Em algumas modalidades, o método compreende: em resposta à porcentagem de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+ é menor que 25% (por exemplo, entre 0,1% e 25%, por exemplo, entre 0,1% e 22%, por exemplo, entre 0,1% e 20%, por exemplo, entre 0,1% e 18%, por exemplo, entre 0,1% e 15%) realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao indivíduo; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia com células que expressam CAR de BCMA) ao indivíduo; administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo; descontinuar a administração de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e opcionalmente administrar uma segunda terapia ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer as células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação a células imunoefetoras CD8+ (células CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+
(por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA geradas pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; ou administrar um pré-tratamento ao indivíduo, em que o pré- tratamento aumenta a razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, o pré- tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia com células que expressam CAR de BCMA usando células (por exemplo, células T) do indivíduo, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo.
[0044] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0045] Em algumas modalidades, o método compreende: em resposta à porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ ser maior ou igual a 20% (por exemplo, entre 20% e 90%, por exemplo, entre 20% e 80%, por exemplo, entre 20% e 70%, por exemplo, entre 20% e 60%), realizar: fabricar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do indivíduo e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao indivíduo; ou administrar, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, uma terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo.
[0046] Em algumas modalidades, o método compreende: em resposta à porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ é menor que 20% (por exemplo, entre 0,1% e 20%, por exemplo, entre 0,1% e 18%, por exemplo, entre 0,1% e 15%, por exemplo, entre 0,1% e 12%, por exemplo, entre 0,1% e 10%) realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao indivíduo; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia com células que expressam CAR de BCMA) ao indivíduo;
administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo; descontinuar a administração de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e opcionalmente administrar uma segunda terapia ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer as células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação a células imunoefetoras CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA geradas pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; ou administrar um pré-tratamento ao indivíduo, em que o pré- tratamento aumenta a razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, o pré- tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia com células que expressam CAR de BCMA usando células (por exemplo, células T) do indivíduo, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo.
[0047] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0048] Em algumas modalidades, o método compreende: em resposta à porcentagem de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ entre células T CD8+ ser maior ou igual a 15% (por exemplo, entre 15% e 90%, por exemplo, entre 15% e 80%, por exemplo, entre 15% e 70%, por exemplo, entre 15% e 60%, por exemplo, entre 15% e 50%), realizar: fabricar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do indivíduo e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao indivíduo; ou administrar, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, uma terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo.
[0049] Em algumas modalidades, o método compreende: em resposta à porcentagem de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ entre células T CD8+ é menor que 15% (por exemplo, entre 0,1% e 15%, por exemplo, entre 0,1% e 12%, por exemplo, entre 0,1% e 10%, por exemplo, entre 0,1% e 8%) realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao indivíduo; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia com células que expressam CAR de BCMA) ao indivíduo; administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo; descontinuar a administração de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e opcionalmente administrar uma segunda terapia ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer as células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação a células imunoefetoras CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; modificar um processo de fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA geradas pelo processo de fabricação modificado ao indivíduo; ou administrar um pré-tratamento ao indivíduo, em que o pré- tratamento aumenta a razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, o pré- tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia com células que expressam CAR de BCMA usando células (por exemplo, células T) do indivíduo, e administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo.
[0050] Em algumas modalidades, o valor para a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA compreende a expansão em vezes de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação (por exemplo, contagens de células totais no final da fabricação em relação ao início da fabricação) da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, como medido por contagem de células.
[0051] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método de avaliar ou prever a potência de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA em um indivíduo, em que o indivíduo tem uma doença associada à expressão de BCMA e em que a terapia com células que expressam CAR de BCMA é fabricada usando células (por exemplo, células T) do indivíduo, que compreende: adquirir um valor para um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou (vi) a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, como medido por duplicação de população no dia 9 (PDL9), em que:
(a) um aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de potência aumentada da terapia com células que expressam CAR de BCMA no indivíduo; ou (b) uma diminuição no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo de potência reduzida da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no indivíduo, assim avaliando ou prevendo a potência da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[0052] Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA. Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de
BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, duplicação de população no dia 9 (PDL9).
[0053] Em algumas modalidades, o aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de expansão aumentada da terapia com células que expressam CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, como medido pelo número de cópias de transgenes de CAR por µg de DNA usando qPCR.
[0054] Em algumas modalidades, a redução no valor de um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo de expansão reduzida da terapia com células que expressam CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, como medido pelo número de cópias de transgenes de CAR por µg de DNA usando qPCR.
[0055] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, em que a terapia com células que expressam CAR de BCMA é fabricada usando células (por exemplo, células T) de um indivíduo, que compreende: adquirir um valor para um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou (vi) a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, como medido por duplicação de população no dia 9 (PDL9), em que: em resposta a um aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, fabricar a terapia com células que expressam CAR de BCMA do indivíduo.
[0056] Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA. Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, duplicação de população no dia 9 (PDL9).
[0057] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método de fabricação de uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, em que a terapia com células que expressam CAR de BCMA é fabricada usando células (por exemplo, células T) de um indivíduo, que compreende:
adquirir um valor para um, dois, três, quatro, cinco, ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou (vi) a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, como medido por duplicação de população no dia 9 (PDL9), em que: em resposta a uma diminuição no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, realizar um, dois, três ou todos dentre: modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação às células efetoras imunes CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO-CD27+CD8+, ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA; modificar um processo de fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA; ou administrar um pré-tratamento ao indivíduo, em que o pré- tratamento aumenta a razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, o pré-tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), e fabricar a terapia com células que expressam CAR de BCMA usando células (por exemplo, células T) do indivíduo.
[0058] Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do indivíduo antes da administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA.
Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de sementes no início da fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após a remoção dos monócitos usando elutriação)). Em algumas modalidades, o método compreende adquirir um valor para a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, duplicação de população no dia 9 (PDL9).
[0059] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+) compreende uma razão da quantidade de células imunoefetoras CD4+ (por exemplo, células T CD4+) para a quantidade de células imunoefetoras CD8+ (por exemplo, células T CD8+), por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0060] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) compreende a porcentagem de Tscm CD8+ (células T de memória de células-tronco) dentre as células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0061] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0062] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0063] Em algumas modalidades, o valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
[0064] Em algumas modalidades, o valor para a proliferação de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação da terapia com células que expressam CAR de BCMA compreende a expansão em vezes de células inoculadas do indivíduo durante a fabricação (por exemplo, contagens de células totais no final da fabricação em relação ao início da fabricação) da terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, como medido por um ensaio divulgado no presente documento, por exemplo, como medido por contagem de células.
[0065] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um, dois, ou todos dentre: (1) um agente que aumenta a eficácia da célula que compreende o ácido nucleico de CAR ou polipeptídeo de CAR; (2) um agente que melhora uma ou mais efeitos colaterais associados à administração da célula que compreende o ácido nucleico de CAR ou polipeptídeo de CAR; (3) um agente que trata a doença associada à expressão de BCMA.
[0066] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um composto de Fórmula (I) (COF1), em que o COF1 é:
(I) ou um sal, éster, hidrato, solvato ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: X é O ou S; R1 é C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, carbocicila, heterocicila, arila ou heteroarila, cada uma das quais é opcionalmente substituída por um ou mais R4; cada um dentre R2a e R2b é independentemente hidrogênio ou C1-C6 alquila; ou R2a e R2b, juntamente com o átomo de carbono ao qual são fixados, formam um grupo carbonila ou um grupo tiocarbonila; cada um de R3 é independentemente C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, halo, ciano, -C(O)RA, -C(O)ORB, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, -S(O)xRE, -S(O)xN(RC)(RD) ou -N(RC)S(O)xRE, em que cada alquila, alquenila, alquinila e heteroalquila é independente e opcionalmente substituída por um ou mais R6; cada R4 é independentemente C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, halo, ciano, oxo, -C(O)RA, -C(O)ORB, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, -S(O)xRE, -S(O)xN(RC)(RD), - N (RC)S(O)xRE, carbocicila, heterocicila, arila ou heteroarila, em que cada alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, carbocicila, heterocicila, arila e heteroarila é independente e opcionalmente substituída por um ou mais R7; cada um dentre RA, RB, RC, RD, e RE é independentemente hidrogênio ou C1-C6 alquila; cada R6 é independentemente C1-C6 alquila, oxo, ciano, -ORB,
-N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, arila ou heteroarila, em que cada arila e heteroarila é independente e opcionalmente substituída por um ou mais R8; cada R7 é independentemente halo, oxo, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD) ou -N(RC)C(O)RA; cada R8 é independentemente C1-C6 alquila, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD) ou -N(RC)C(O)RA; n é 0, 1, 2, 3 ou 4; e x é 0, 1 ou 2, opcionalmente em que: (1) o COF1 é um fármaco de imida imunomodulador (IMiD), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) o COF1 é selecionado dentre o grupo que consiste em lenalidomida, pomalidomida, talidomida, e 2-(4-(terc-butil)fenil)-N-((2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)-1-oxoisoindolin-5-il)metil)acetamida ou a sal farmaceuticamente aceitável das mesmas; (3) o COF1 é selecionado dentre o grupo que consiste em: , , e , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; ou (4) o COF1 é lenalidomida, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.
[0067] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um inibidor da quinase, por exemplo, um inibidor de BTK, por exemplo, ibruinibe.
[0068] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com uma segunda terapia com células que expressam CAR.
[0069] Em algumas modalidades, a segunda terapia com células que expressam CAR é uma terapia com células que expressam CAR de CD19, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD19 divulgada no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD19 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD19 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD19 compreende uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa um CAR de CD19. Em algumas modalidades, o CAR de CD19 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 8, 9 ou 10, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 8, 9 ou 10), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
[0070] Em algumas modalidades, a segunda terapia com células que expressam CAR é uma terapia com células que expressam CAR de CD20, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD20 divulgada no presente documento. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD20 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD20 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD20 compreende uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa um CAR de CD20. Em algumas modalidades, o CAR de CD20 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 11, 12 ou 13), (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 11, 12 ou 13), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
[0071] Em algumas modalidades, a segunda terapia com células que expressam CAR é uma terapia com células que expressam CAR de CD22, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD22 divulgada no presente documento. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD22 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD22 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD22 compreende uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa um CAR de CD22. Em algumas modalidades, o CAR de CD22 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 14 ou 15, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 14 ou 15), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
[0072] Em algumas modalidades, a segunda terapia com células que expressam CAR é uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, o segundo CAR é selecionado dentre o grupo que consiste em um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 divulgado no presente documento), um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 divulgado no presente documento), e um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD19 compreende uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa um CAR de CD19. Em algumas modalidades, o CAR de CD19 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 8, 9 ou 10), (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 8, 9 ou 10), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas. Em algumas modalidades, o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, o CAR de CD20 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 11, 12 ou 13, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 11, 12 ou 13), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas. Em algumas modalidades, o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, o CAR de CD22 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 14 ou 15, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 14 ou 15), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
[0073] Em algumas modalidades, a segunda terapia com células que expressam CAR é uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a um primeiro antígeno e um segundo antígeno, em que o primeiro antígeno é BCMA. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é selecionado dentre o grupo que consiste em CD19, CD20 e CD22. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é CD19. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é CD20. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é CD22.
[0074] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um inibidor de CD19, por exemplo, um inibidor de CD19 divulgado no presente documento. Em algumas modalidades, o inibidor de CD19 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD19 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[0075] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um inibidor de CD20, por exemplo, um inibidor de CD20 divulgado no presente documento. Em algumas modalidades, o inibidor de CD20 é uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338. Em algumas modalidades, o inibidor de CD20 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD20 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[0076] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um inibidor de CD22, por exemplo, um inibidor de CD22 divulgado no presente documento. Em algumas modalidades, o inibidor de CD22 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD22 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[0077] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com uma molécula que se liga ao receptor Fc tipo 2 (FCRL2) ou receptor Fc tipo 5 (FCRL5). Em algumas modalidades, a molécula é uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR que se liga a FCRL2 ou FCRL5. Em algumas modalidades, a molécula é uma molécula de anticorpo multiespecífico, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, que se liga a um primeiro antígeno e um segundo antígeno, em que o primeiro antígeno é FCRL2 ou FCRL5, opcionalmente em que o segundo antígeno é CD3.
[0078] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um polipeptídeo de interleucina-15 (IL-15), um polipeptídeo de receptor alfa de interleucina-15 (IL-15Ra), ou uma combinação tanto de um polipeptídeo de IL-15 como de um polipeptídeo de IL-15Ra, por exemplo, hetIL-15.
[0079] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um inibidor de TGF beta.
[0080] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um inibidor de EGFR, por exemplo, um inibidor de EGFR, por exemplo, um inibidor de EGFRmut-tirosina quinase (TKI). Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR é EGF816. Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR é (R,E)-N-(7-cloro-1-(1-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)azepan-3-il)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metilisonicotinamida. Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR é o composto A40 divulgado na Tabela
27.
[0081] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um antagonista de A2AR de adenosina. Em algumas modalidades, o antagonista de A2AR de adenosina é selecionado dentre o grupo que consiste em PBF509, CPI444, AZD4635, Vipadenante, GBV-2034 e AB928. Em algumas modalidades, o antagonista de A2AR de adenosina é selecionado dentre o grupo que consiste em 5-bromo-2,6-di-(1H- pirazol-1-il)pirimidina-4-amina; (S)-7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra- hidrofuran-3-il)óxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin- 5-amina; (R)-7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3- il)óxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina ou racemato dos mesmos; 7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3- il)óxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina; e 6- (2-cloro-6-metilpiridin-4-il)-5-(4-fluorofenil)-1,2,4-triazin-3-amina.
[0082] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com uma molécula de anticorpo anti-CD73, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-CD73 divulgada no presente documento.
[0083] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um inibidor de ponto de verificação. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor de PD-1. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste em PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 e AMP-224. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 aumenta a expansão de células que expressam CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, durante pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 semanas, por exemplo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 ou 30 vezes. Em algumas modalidades, as células que expressam CAR de BCMA são administradas ao indivíduo antes da administração do inibidor de PD-1. Em algumas modalidades, as células que expressam CAR de BCMA não se expandem ou têm expansão mínima (por exemplo, uma expansão de não mais que 1, 2, 3, 4, 5 ou 10 vezes) no indivíduo no momento da administração do inibidor de PD-1. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor de PD-L1. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe e BMS-936559. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-L1 aumenta a expansão de células que expressam CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, durante pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 semanas, por exemplo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 ou 30 vezes. Em algumas modalidades, as células que expressam CAR de BCMA são administradas ao indivíduo antes da administração do inibidor de PD-L1. Em algumas modalidades, as células que expressam CAR de BCMA não se expandem ou têm expansão mínima (por exemplo, uma expansão de não mais que 1, 2, 3, 4, 5 ou 10 vezes) no indivíduo no momento da administração do inibidor de PD-L1. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor de LAG-3. Em algumas modalidades, o inibidor de LAG-3 é selecionado dentre o grupo que consiste em LAG525, BMS-986016, TSR-033, MK-4280 e REGN3767. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor de TIM-3. Em algumas modalidades, o inibidor de TIM-3 é selecionado dentre o grupo que consiste em MGB453, TSR-022 e LY3321367.
[0084] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com uma molécula de anticorpo que se liga a CD32B.
[0085] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com uma molécula de anticorpo que se liga à IL-17, por exemplo, uma molécula de anticorpo antagonística que se liga à IL-17, por exemplo, CJM112.
[0086] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com uma molécula de anticorpo que se liga à IL-1 beta.
[0087] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o método compreende administrar a terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo em combinação com um inibidor de indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO) e/ou triptofano 2,3- dioxigenase (TDO), por exemplo, um inibidor de IDO1. Em algumas modalidades, o inibidor de IDO e/ou TDO é INCB24360, indoximode, NLG919, epacadostat, NLG919 ou F001287. Em algumas modalidades, o inibidor de IDO e/ou TDO é (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)- nitrosometilideno]-1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α- cicloexil-5H-Imidazo[5,1-a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil- triptofano.
[0088] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo. Em algumas modalidades, a segunda terapia é uma terapia com células que expressam CAR de CD19, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD19 divulgada no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019. Em algumas modalidades,
a terapia com células que expressam CAR de CD19 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD19 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD19 compreende uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa um CAR de CD19. Em algumas modalidades, o CAR de CD19 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 8, 9 ou 10, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 8, 9 ou 10), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
[0089] Em algumas modalidades, a segunda terapia é uma terapia com células que expressam CAR de CD20, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD20 divulgada no presente documento. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD20 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD20 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD20 compreende uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa um CAR de CD20. Em algumas modalidades, o CAR de CD20 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 11, 12 ou 13, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 11, 12 ou 13), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
[0090] Em algumas modalidades, a segunda terapia é uma terapia com células que expressam CAR de CD22, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD22 divulgada no presente documento. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD22 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD22 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD22 compreende uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa um CAR de CD22. Em algumas modalidades, o CAR de CD22 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 14 ou 15, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 14 ou 15), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
[0091] Em algumas modalidades, a segunda terapia é uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, o segundo CAR é selecionado dentre o grupo que consiste em um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 divulgado no presente documento), um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 divulgado no presente documento), e um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD19 compreende uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa um CAR de CD19. Em algumas modalidades, o CAR de CD19 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 8, 9 ou 10, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 8, 9 ou 10), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
Em algumas modalidades, o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, o CAR de CD20 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 11, 12 ou 13, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 11, 12 ou 13), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
Em algumas modalidades, o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 divulgado no presente documento). Em algumas modalidades, o CAR de CD22 compreende uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 14 ou 15, (por exemplo, uma CDR, scFv, ou sequência de aminoácidos de comprimento total divulgada na Tabela 14 ou 15), ou uma sequência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica à mesma e/ou que tem uma, duas, três ou mais substituições, inserções ou deleções, por exemplo, substituições conservadas.
[0092] Em algumas modalidades, a segunda terapia é uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a um primeiro antígeno e um segundo antígeno, em que o primeiro antígeno é BCMA. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é selecionado dentre o grupo que consiste em CD19, CD20 e CD22. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é CD19. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é CD20. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é CD22.
[0093] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo. Em algumas modalidades, a segunda terapia é um inibidor de CD19, por exemplo, um inibidor de CD19 divulgado no presente documento. Em algumas modalidades, o inibidor de CD19 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD19 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[0094] Em algumas modalidades, a segunda terapia é um inibidor de CD20, por exemplo, um inibidor de CD20 divulgado no presente documento. Em algumas modalidades, o inibidor de CD20 é uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338. Em algumas modalidades, o inibidor de CD20 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD20 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[0095] Em algumas modalidades, a segunda terapia é um inibidor de CD22, por exemplo, um inibidor de CD22 divulgado no presente documento. Em algumas modalidades, o inibidor de CD22 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD22 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[0096] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é uma molécula que se liga ao receptor Fc tipo 2 (FCRL2) ou receptor Fc tipo 5 (FCRL5). Em algumas modalidades, a molécula é uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR que se liga a FCRL2 ou FCRL5. Em algumas modalidades, a molécula é uma molécula de anticorpo multiespecífico, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, que se liga a um primeiro antígeno e um segundo antígeno, em que o primeiro antígeno é FCRL2 ou FCRL5, opcionalmente em que o segundo antígeno é CD3.
[0097] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é um inibidor de TGF beta.
[0098] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é um inibidor de EGFR, por exemplo, um inibidor de EGFRmut-tirosina quinase (TKI). Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR é EGF816. Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR é (R,E)-N-(7-cloro-1-(1-(4-(dimetilamino)but-2- enoil)azepan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metilisonicotinamida. Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR é o composto A40 divulgado na Tabela 27.
[0099] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é um antagonista de A2AR de adenosina. Em algumas modalidades, o antagonista de A2AR de adenosina é selecionado a partir do grupo que consiste em PBF509, CPI444, AZD4635, Vipadenante, GBV-2034 e AB928. Em algumas modalidades, o antagonista de A2AR de adenosina é selecionado dentre o grupo que consiste em 5-bromo-2,6-di-(1H-pirazol-1-il)pirimidina-4- amina; (S)-7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3- il)óxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina; (R)- 7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3-il)óxi)metil)piridin-2-il)metil)- 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina ou racemato dos mesmos; 7-(5- metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3-il)óxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H- [1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina; e 6-(2-cloro-6-metilpiridin-4-il)-5-(4- fluorofenil)-1,2,4-triazin-3-amina.
[00100] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é uma molécula de anticorpo anti- CD73, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-CD73 divulgada no presente documento
[00101] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é um inibidor de ponto de verificação. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor de PD-1. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste em PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF- 06801591 e AMP-224. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de PD-1 ou PD-L1 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 aumenta a expansão de células que expressam CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, durante pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 semanas, por exemplo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 ou 30 vezes. Em algumas modalidades, as células que expressam CAR de BCMA são administradas ao indivíduo antes da administração do inibidor de PD-1. Em algumas modalidades, as células que expressam CAR de BCMA não se expandem ou têm expansão mínima (por exemplo, uma expansão de não mais que 1, 2, 3, 4, 5 ou 10 vezes) no indivíduo no momento da administração do inibidor de PD-1. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor de PD-L1. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe e BMS-
936559. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-L1 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de PD-1 ou PD-L1 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-L1 aumenta a expansão de células que expressam CAR de BCMA no indivíduo, por exemplo, durante pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 semanas, por exemplo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 ou 30 vezes. Em algumas modalidades, as células que expressam CAR de BCMA são administradas ao indivíduo antes da administração do inibidor de PD-L1. Em algumas modalidades, as células que expressam CAR de BCMA não se expandem ou têm expansão mínima (por exemplo, uma expansão de não mais que 1, 2, 3, 4, 5 ou 10 vezes) no indivíduo no momento da administração do inibidor de PD-L1. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor de LAG-3. Em algumas modalidades, o inibidor de LAG-3 é selecionado dentre o grupo que consiste em LAG525, BMS-986016, TSR-033, MK-4280 e REGN3767. Em algumas modalidades, o inibidor de LAG-3 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de LAG-3 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor de TIM-3. Em algumas modalidades, o inibidor de TIM-3 é selecionado dentre o grupo que consiste em MGB453, TSR- 022 e LY3321367. Em algumas modalidades, o inibidor de TIM-3 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de TIM-3 ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[00102] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é uma molécula de inibidor que se liga a CD32B.
[00103] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é uma molécula de anticorpo que se liga à IL-17, por exemplo, uma molécula de anticorpo antagonística que se liga à IL-17, por exemplo, CJM112
[00104] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é uma molécula de anticorpo que se liga à IL-1 beta.
[00105] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA e uma segunda terapia ao indivíduo, em que a segunda terapia é um inibidor de indoleamina 2,3- dioxigenase (IDO) e/ou triptofano 2,3-dioxigenase (TDO), por exemplo, um inibidor de IDO1. Em algumas modalidades, o inibidor de IDO e/ou TDO é INCB24360, indoximode, NLG919, epacadostat, NLG919, ou F001287. Em algumas modalidades, o inibidor de IDO e/ou TDO é (4E)-
4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]-1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1- metil-D-triptofano, α-cicloexil-5H-Imidazo[5,1-a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano. Em algumas modalidades, o inibidor de IDO e/ou TDO é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de IDO e/ou TDO ser aumentada no indivíduo após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
[00106] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, a segunda terapia é administrada antes, simultaneamente ou subsequente à administração da terapia com células que expressam CAR de BCMA.
[00107] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, em que o indivíduo recebeu ou está recebendo uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, que compreende: em resposta a um aumento em um valor do nível ou atividade de um antígeno no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), pelo menos em um ponto no tempo após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, em relação a um valor de referência, em que o valor de referência é: (i) o nível ou atividade do antígeno no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), antes do pelo menos um ponto no tempo (por exemplo, o nível ou atividade do antígeno no indivíduo antes de o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, ou o nível ou atividade do antígeno no indivíduo após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, porém antes do pelo menos um ponto no tempo); (ii) o nível ou atividade do antígeno em um indivíduo diferente que tem a doença associada à expressão de BCMA; ou (iii) um nível ou atividade média do antígeno em uma população de indivíduos que tem a doença associada à expressão de BCMA, administrar um inibidor do antígeno ao indivíduo, em que: (1) o antígeno é CD19 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD19, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é: (a) uma terapia com células que expressam CAR de CD19, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD19 divulgada no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019; (b) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 divulgado no presente documento); ou (c) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD19, (2) o antígeno é CD20 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD20, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é: (d) uma terapia com células que expressam CAR de CD20, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD20 divulgada no presente documento;
(e) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 divulgado no presente documento); (f) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD20; ou (g) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338, (3) o antígeno é CD22 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD22, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é: (h) uma terapia com células que expressam CAR de CD22, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD22 divulgada no presente documento; (i) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 divulgado no presente documento); ou (j) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD22, (4) o antígeno é PD1 ou PD-L1 e o inibidor do antígeno é uma molécula de anticorpo anti-PD1 ou uma molécula de anticorpo anti- PD-L1, opcionalmente em que o inibidor do antígeno é:
(k) PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 ou AMP- 224; ou (l) FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe ou BMS-936559, (5) o antígeno é IDO ou TDO e o inibidor do antígeno é um inibidor de IDO e/ou TDO, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é: (m) INCB24360, indoximode, NLG919, epacadostat, NLG919, ou F001287; ou (n) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]- 1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-cicloexil-5H-Imidazo[5,1- a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano, ou (6) o antígeno é TGF-beta e o inibidor do antígeno é um inibidor de TGF beta.
[00108] Em um aspecto, é divulgado no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, em que o indivíduo recebeu ou está recebendo uma terapia com células que expressam CAR de BCMA, que compreende: adquirir um valor do nível ou atividade de um antígeno no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), pelo menos em um ponto no tempo após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, em resposta a um aumento no valor em relação a um valor de referência, em que o valor de referência é: (i) o nível ou atividade do antígeno no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), antes do pelo menos um ponto no tempo (por exemplo, o nível ou atividade do antígeno no indivíduo antes de o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, ou o nível ou atividade do antígeno no indivíduo após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, porém antes do pelo menos um ponto no tempo); (ii) o nível ou atividade do antígeno em um indivíduo diferente que tem a doença associada à expressão de BCMA; ou (iii) um nível ou atividade média do antígeno em uma população de indivíduos que tem a doença associada à expressão de BCMA, administrar um inibidor do antígeno ao indivíduo, em que: (1) o antígeno é CD19 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD19, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é: (a) uma terapia com células que expressam CAR de CD19, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD19 divulgada no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019; (b) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 divulgado no presente documento); ou (c) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD19,
(2) o antígeno é CD20 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD20, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é: (d) uma terapia com células que expressam CAR de CD20, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD20 divulgada no presente documento; (e) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 divulgado no presente documento); (f) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD20; ou (g) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338, (3) o antígeno é CD22 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD22, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é: (h) uma terapia com células que expressam CAR de CD22, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD22 divulgada no presente documento; (i) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 divulgado no presente documento); ou
(j) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD22, (4) o antígeno é PD1 ou PD-L1 e o inibidor do antígeno é uma molécula de anticorpo anti-PD1 ou uma molécula de anticorpo anti- PD-L1, opcionalmente em que o inibidor do antígeno é: (k) PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 ou AMP- 224; ou (l) FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe ou BMS-936559, (5) o antígeno é IDO ou TDO e o inibidor do antígeno é um inibidor de IDO e/ou TDO, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é: (m) INCB24360, indoximode, NLG919, epacadostat, NLG919, ou F001287; ou (n) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]- 1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-cicloexil-5H-Imidazo[5,1- a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano, ou (6) o antígeno é TGF-beta e o inibidor do antígeno é um inibidor de TGF beta.
[00109] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende: administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo, em resposta a um aumento em um valor do nível ou atividade de um antígeno no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo
(por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), pelo menos em um ponto no tempo após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, em relação a um valor de referência, em que o valor de referência é: (i) o nível ou atividade do antígeno no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), antes do pelo menos um ponto no tempo (por exemplo, o nível ou atividade do antígeno no indivíduo antes de o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, ou o nível ou atividade do antígeno no indivíduo após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, porém antes do pelo menos um ponto no tempo); (ii) o nível ou atividade do antígeno em um indivíduo diferente que tem a doença associada à expressão de BCMA; ou (iii) um nível ou atividade média do antígeno em uma população de indivíduos que tem a doença associada à expressão de BCMA, administrar um inibidor do antígeno ao indivíduo, em que: (1) o antígeno é CD19 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD19, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é: (a) uma terapia com células que expressam CAR de CD19, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD19 divulgada no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019; (b) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um
CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 divulgado no presente documento); ou (c) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD19, (2) o antígeno é CD20 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD20, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é: (d) uma terapia com células que expressam CAR de CD20, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD20 divulgada no presente documento; (e) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 divulgado no presente documento); (f) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD20; ou (g) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338, (3) o antígeno é CD22 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD22, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é: (h) uma terapia com células que expressam CAR de CD22, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD22 divulgada no presente documento;
(i) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 divulgado no presente documento); ou (j) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD22, (4) o antígeno é PD1 ou PD-L1 e o inibidor do antígeno é uma molécula de anticorpo anti-PD1 ou uma molécula de anticorpo anti- PD-L1, opcionalmente em que o inibidor do antígeno é: (k) PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 ou AMP- 224; ou (l) FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe ou BMS-936559, (5) o antígeno é IDO ou TDO e o inibidor do antígeno é um inibidor de IDO e/ou TDO, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é: (m) INCB24360, indoximode, NLG919, epacadostat, NLG919, ou F001287; ou (n) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]- 1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-cicloexil-5H-Imidazo[5,1- a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano, ou (6) o antígeno é TGF-beta e o inibidor do antígeno é um inibidor de TGF beta.
[00110] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende: administrar uma terapia com células que expressam CAR de BCMA ao indivíduo, adquirir um valor do nível ou atividade de um antígeno no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), pelo menos em um ponto no tempo após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, em resposta a um aumento no valor em relação a um valor de referência, em que o valor de referência é: (i) o nível ou atividade do antígeno no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), antes do pelo menos um ponto no tempo (por exemplo, o nível ou atividade do antígeno no indivíduo antes de o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, ou o nível ou atividade do antígeno no indivíduo após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA, porém antes do pelo menos um ponto no tempo); (ii) o nível ou atividade do antígeno em um indivíduo diferente que tem a doença associada à expressão de BCMA; ou (iii) um nível ou atividade média do antígeno em uma população de indivíduos que tem a doença associada à expressão de BCMA, administrar um inibidor do antígeno ao indivíduo, em que: (1) o antígeno é CD19 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD19, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é:
(a) uma terapia com células que expressam CAR de CD19, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD19 divulgada no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019; (b) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 divulgado no presente documento); ou (c) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD19, (2) o antígeno é CD20 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD20, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é: (d) uma terapia com células que expressam CAR de CD20, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD20 divulgada no presente documento; (e) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 divulgado no presente documento); (f) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD20; ou (g) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338, (3) o antígeno é CD22 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD22, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é: (h) uma terapia com células que expressam CAR de CD22, por exemplo, uma terapia com células que expressam CAR de CD22 divulgada no presente documento; (i) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA divulgado no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 divulgado no presente documento); ou (j) uma terapia com células que expressam CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD22, (4) o antígeno é PD1 ou PD-L1 e o inibidor do antígeno é uma molécula de anticorpo anti-PD1 ou uma molécula de anticorpo anti- PD-L1, opcionalmente em que o inibidor do antígeno é: (k) PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 ou AMP-224; ou (l) FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe ou BMS-936559, (5) o antígeno é IDO ou TDO e o inibidor do antígeno é um inibidor de IDO e/ou TDO, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é: (m) INCB24360, indoximode, NLG919, epacadostat, NLG919, ou F001287; ou
(n) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]- 1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-cicloexil-5H-Imidazo[5,1- a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano, ou (6) o antígeno é TGF-beta e o inibidor do antígeno é um inibidor de TGF beta.
[00111] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, o valor do nível ou atividade do antígeno compreende o nível de expressão do antígeno no indivíduo, por exemplo, em uma amostra do indivíduo (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, um amostra de biópsia da medula óssea), como medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, imunoistoquímica.
[00112] Em algumas modalidades, o pelo menos um ponto no tempo é 5, 10, 15, 20, 25, 28, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, ou 90 dias após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA.
[00113] Em algumas modalidades, o indivíduo experimenta uma redução na expressão de BCMA após o indivíduo começar a receber a terapia com células que expressam CAR de BCMA.
[00114] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, a terapia com células que expressam CAR de BCMA compreende uma célula que expressa um CAR de BCMA. Em algumas modalidades, o CAR de BCMA compreende uma ou mais dentre (por exemplo, todas as três dentre) a região determinante complementar de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2 e HCDR3 listada na Tabela 3 ou 5 e/ou uma ou mais dentre (por exemplo, todas as três dentre) a região determinante complementar de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3 listada na Tabela 4 ou 5, ou uma sequência com 95 a 99% de identidade com a mesma. Em algumas modalidades, o CAR de BCMA compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) listada na Tabela 2 ou 5 e/ou uma região variável de cadeia leve (VL) listada na Tabela 2 ou 5, ou uma sequência com 95 a 99% de identidade com a mesma.
Em algumas modalidades, o CAR de BCMA compreende uma sequência de aminoácidos de domínio de scFv de BCMA listada na Tabela 2 ou 5 (por exemplo, SEQ ID Nº: 39, SEQ ID Nº: 40, SEQ ID Nº: 41, SEQ ID Nº: 42, SEQ ID Nº: 43, SEQ ID Nº: 44, SEQ ID Nº: 45, SEQ ID Nº: 46, SEQ ID Nº: 47, SEQ ID Nº: 48, SEQ ID Nº: 49, SEQ ID Nº: 50, SEQ ID Nº: 51, SEQ ID Nº: 52, SEQ ID Nº: 53, SEQ ID Nº: 129, SEQ ID Nº: 130, SEQ ID Nº: 131, SEQ ID Nº: 132, SEQ ID Nº: 133, SEQ ID Nº: 134, SEQ ID Nº: 135, SEQ ID Nº: 136, SEQ ID Nº: 137, SEQ ID Nº: 138, SEQ ID Nº: 139, SEQ ID Nº: 140, SEQ ID Nº: 141, SEQ ID Nº: 142, SEQ ID Nº: 143, SEQ ID Nº: 144, SEQ ID Nº: 145, SEQ ID Nº: 146, SEQ ID Nº: 147, SEQ ID Nº: 148, e SEQ ID Nº: 149), ou uma sequência com 95 a 99% de identidade com a mesma.
Em algumas modalidades, o CAR de BCMA compreende uma sequência de aminoácidos de CAR de BCMA de comprimento total mencionada na Tabela 2 ou 5 (por exemplo, resíduos 22 a 483 de SEQ ID Nº: 109, resíduos 22 a 490 de SEQ ID Nº: 99, resíduos 22 a 488 de SEQ ID Nº: 100, resíduos 22 a 487 de SEQ ID Nº: 101, resíduos 22 a 493 de SEQ ID Nº: 102, resíduos 22 a 490 de SEQ ID Nº: 103, resíduos 22 a 491 de SEQ ID Nº: 104, resíduos 22 a 482 de SEQ ID Nº: 105, resíduos 22 a 483 de SEQ ID Nº: 106, resíduos 22 a 485 de SEQ ID Nº: 107, resíduos 22 a 483 de SEQ ID Nº: 108, resíduos 22 a 490 de SEQ ID Nº: 110, resíduos 22 a 483 de SEQ ID Nº: 111, resíduos 22 a 484 de SEQ ID Nº: 112, resíduos 22 a 485 de SEQ ID Nº: 113, resíduos 22 a 487 de SEQ ID Nº: 213, resíduos 23 a 489 de SEQ ID Nº: 214, resíduos 22 a 490 de SEQ ID Nº: 215, resíduos 22 a 484 de SEQ ID Nº: 216, resíduos 22 a 485 de SEQ ID Nº: 217, resíduos 22 a 489 de SEQ ID Nº: 218, resíduos 22 a
497 de SEQ ID Nº: 219, resíduos 22 a 492 de SEQ ID Nº: 220, resíduos 22 a 490 de SEQ ID Nº: 221, resíduos 22 a 485 de SEQ ID Nº: 222, resíduos 22 a 492 de SEQ ID Nº: 223, resíduos 22 a 492 de SEQ ID Nº: 224, resíduos 22 a 483 de SEQ ID Nº: 225, resíduos 22 a 490 de SEQ ID Nº: 226, resíduos 22 a 485 de SEQ ID Nº: 227, resíduos 22 a 486 de SEQ ID Nº: 228, resíduos 22 a 492 de SEQ ID Nº: 229, resíduos 22 a 488 de SEQ ID Nº: 230, resíduos 22 a 488 de SEQ ID Nº: 231, resíduos 22 a 495 de SEQ ID Nº: 232, resíduos 22 a 490 de SEQ ID Nº: 233), ou uma sequência com 95-99% de identidade com a mesma. Em algumas modalidades, o CAR de BCMA é codificado por uma sequência de ácidos nucleicos listada na Tabela 2 ou 5 (por exemplo, SEQ ID Nº: 54, SEQ ID Nº: 55, SEQ ID Nº: 56, SEQ ID Nº: 57, SEQ ID Nº: 58, SEQ ID Nº: 59, SEQ ID Nº: 60, SEQ ID Nº: 61, SEQ ID Nº: 62, SEQ ID Nº: 63, SEQ ID Nº: 64, SEQ ID Nº: 65, SEQ ID Nº: 66, SEQ ID Nº: 67, SEQ ID Nº: 68, SEQ ID Nº: 150, SEQ ID Nº: 151, SEQ ID Nº: 152, SEQ ID Nº: 153, SEQ ID Nº: 154, SEQ ID Nº: 155, SEQ ID Nº: 156, SEQ ID Nº: 157, SEQ ID Nº: 158, SEQ ID Nº: 159, SEQ ID Nº: 160, SEQ ID Nº: 161, SEQ ID Nº: 162, SEQ ID Nº: 163, SEQ ID Nº: 164, SEQ ID Nº: 165, SEQ ID Nº: 166, SEQ ID Nº: 167, SEQ ID Nº: 168, SEQ ID Nº: 169, SEQ ID Nº: 170), ou uma sequência com 95 a 99% de identidade com a mesma.
[00115] Em determinadas modalidades dos aspectos anteriormente mencionados, a doença associada à expressão de BMCA é câncer, opcionalmente em que o câncer é um câncer hematológico. Em algumas modalidades, a doença associada à expressão de BCMA é uma leucemia aguda escolhida dentre um ou mais dentre leucemia linfoide aguda de célula B ("BALL"), leucemia linfoide aguda de célula T ("TALL"), leucemia linfoide aguda (ALL); leucemia mielógena crônica (CML), leucemia linfocítica crônica (CLL); leucemia prolinfocítica de célula B, neoplasia de célula dendrítica plasmacitoide blástica, linfoma de Burkitt, linfoma de células B grandes difusas, linfoma folicular, leucemia de células pilosas, linfoma folicular de células pequenas ou células grandes, condições linfoproliferativas malignas, linfoma MALT, linfoma de célula do manto, linfoma de zona marginal, mieloma múltiplo, mielodisplasia e síndrome mielodisplásica, linfoma não Hodgkin, linfoma plasmablástico, neoplasia de célula dendrítica plasmacitoide, macroglobulinemia de Waldenstrom; um câncer de próstata (por exemplo, câncer de próstata resistente à castração ou resistente à terapia, ou câncer de próstata metastático), câncer pancreático, câncer de pulmão; ou um distúrbio proliferativo celular de plasma (por exemplo, mieloma assintomático (mieloma múltiplo smoldering ou mieloma indolente), gamapatia monoclonal de significância indeterminada (MGUS), macroglobulinemia de Waldenstrom, plasmacitomas (por exemplo, discrasia celular de plasma, mieloma solitário, plasmacitoma solitário, plasmacitoma extramedular e plasmacitoma múltiplo), amiloidose de cadeia leve amiloide sistêmica e síndrome POEMS (também conhecida como síndrome de Crow-Fukase, síndrome de Takatsuki e síndrome PEP)), ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a doença associada à expressão de BCMA é ALL, CLL, DLBCL, ou mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o indivíduo é um paciente humano.
[00116] Os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não se destinam a ser limitativos.
[00117] Títulos, subtítulos ou elementos numerados ou marcados com letras, por exemplo, (a), (b), (i) etc., são apresentados meramente para facilidade de leitura. O uso de títulos ou elementos numerados ou marcados com letras neste documento não requer que os passos ou elementos sejam realizados por ordem alfabética ou que os passos ou elementos sejam necessariamente discretos entre si.
[00118] Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências mencionados aqui são incorporados por referência na sua totalidade.
[00119] Outras características, objetivos e vantagens da invenção serão evidentes a partir da descrição e desenhos e a partir das reivindicações.
[00120] O arquivo de patente ou pedido de patente contém pelo menos uma figura executada a cores. Cópias desta publicação de patente ou pedido de patente com figura(s) a cores serão proporcionadas pelo Gabinete por pedido e pagamento da taxa necessária.
[00121] As Figuras 1A e 1B são um par de gráficos que mostram a porcentagem de células T CD4+ ou CD8+ T dentre as células T CD3+ (Figura 1A) e a razão de células T CD4:CD8 (Figura 1B) em amostras de aférese adquiridas de pacientes com mieloma múltiplo que foram posteriormente determinados como Respondedores (R, NR = 3) ou Não Respondedores (NR, NNR = 5) ao tratamento com uma infusão de CART- BCMA. Esses dados demostram que os Respondedores tiveram uma porcentagem mais alta de células T CD4+ e uma porcentagem mais baixa de células T CD8+ (e, dessa forma, uma razão de CD4:CD8 mais alta) em sua amostra de aférese do que os Não Respondedores. Verificou-se que uma razão de CD4:CD8 maior que cerca de 1,6 é preditiva de resposta a CART-BCMA.
[00122] As Figuras 2A, 2B e 2C são gráficos que mostram que a porcentagem de células T HLADR-CD95+CD27+CD8+ (Figura 2A), células T CD45RO-CD27+CD8+ (Figura 2B), ou células T CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ (Figura 2C) dentre as células T CD8+ é mais alta que em amostras de aférese adquiridas de pacientes com mieloma múltiplo que foram posteriormente determinados como Respondedores (R, NR = 3) a CART-BCMA em comparação com Não Respondedores (NR, NNR = 5). Valores P são mostrados para cada gráfico.
[00123] A Figura 3 é uma série de imagens mostrando a localização das células CD138+ conforme determinado por imunoistoquímica (IHC) em biópsias do núcleo da medula óssea adquiridas antes da administração ("Pré") e no dia 28 e no dia 90 ("3 meses") após a infusão de CART-BCMA do Paciente 13, Paciente 14, Paciente 15, Paciente 16 e Paciente 17. Os resultados do paciente para o tratamento com CART- BCMA são fornecidos nos Exemplos e são referidos no presente documento da seguinte forma: Doença progressiva (PD); Doença estável (SD); Resposta menor (MR); Regressão parcial (PR); e Regressão parcial muito satisfatória (VGPR). As amostras de pré-tratamento, Dia 28 e Dia 90 adquiridas do Paciente 13 tiveram infiltração de células MM CD138+ de 1%, 0% e 0%, respectivamente. As amostras de pré-tratamento, Dia 28 adquiridas do Paciente 14 tiveram infiltração de células MM CD138+ de 80% e 90%, respectivamente. As amostras de pré-tratamento, Dia 28 e Dia 90 adquiridas do Paciente 15 tiveram infiltração de células MM CD138+ de 95%, 5% e 10%, respectivamente. As amostras de pré- tratamento, Dia 28 e Dia 90 adquiridas do Paciente 16 tiveram infiltração de células MM CD138+ de 50%, 5% e 75%, respectivamente. As amostras de pré-tratamento, Dia 28 e Dia 90 adquiridas do Paciente 17 tiveram infiltração de células MM CD138+ de 50%, 5% e 75%, respectivamente.
[00124] A Figura 4 é uma série de imagens mostrando a expressão de proteína de BCMA conforme determinado por IHC em biópsias do núcleo da medula óssea adquiridas antes da administração ("Pré") e no dia 28 e no dia 90 ("3 meses") após a infusão de CART-BCMA do Paciente 13, Paciente 14, Paciente 15, Paciente 16 e Paciente 17.
[00125] A Figura 5 é uma série de imagens que mostram uma comparação entre a expressão da proteína de BCMA conforme determinado por IHC para níveis de mRNA de BCMA, conforme determinado por hibridação in situ (ISH) em biópsias do núcleo da medula óssea adquiridas antes da administração de CART-BCMA do Paciente 13, Paciente 14, Paciente 15, Paciente 16 e Paciente 17.
[00126] As Figuras 6A, 6B e 6C são uma série de imagens mostrando a expressão de proteína de BCMA conforme determinado por IHC, os níveis de mRNA de BCMA conforme determinado por ISH, e os níveis de mRNA de CART-BCMA conforme determinado por ISH em biópsias de medula óssea adquiridas do Paciente 15 (Figura 6A), Paciente 16 (Figura 6B) e Paciente 17 (Figura 6C), antes da administração ("Pré"), e no Dia 28 e Dia 90 ("3 meses") após a infusão de CART-BCMA.
[00127] As Figuras 7A, 7B e 7C são uma série de imagens mostrando os níveis de mRNA de IDO1, IFN-γ, e TGFβ conforme determinado por ISH, em biópsias de medula óssea adquiridas do Paciente 15 (Figura 7A), Paciente 16 (Figura 7B) e Paciente 17 (Figura 7C), antes da administração ("Pré"), e no Dia 28 e Dia 90 ("3 meses") após a infusão de CART-BCMA. As Figuras 7D e 7E são uma série de imagens mostrando os níveis de mRNA de CAR, IFN-γ e IDO1 conforme determinado por ISH, em biópsias adquiridas do Paciente 19 (Figura 7D) e Paciente 20 (Figura 7E), antes da administração ("Pré"), e no Dia 10 e Dia 28 após a infusão de CART-BCMA.
[00128] As Figuras 8A, 8B e 8C são uma série de imagens mostrando a expressão de proteína de PD-L1, PD1, CD3 e FoxP3 conforme determinado por IHC em biópsias de medula óssea adquiridas do Paciente 15 (Figura 8A), Paciente 16 (Figura 8B) e Paciente 17 (Figura 8C), antes da administração ("Pré"), e no Dia 28 e Dia 90 ("3 meses") após a infusão de CART-BCMA. As Figuras 8D e 8E são uma série de imagens mostrando a expressão de proteína de PD1, PD-L1 e FoxP3 conforme determinado por IHC, em biópsias adquiridas do Paciente 19 (Figura 8D) e Paciente 20 (Figura 8E), antes da administração ("Pré"), e no Dia 10 e Dia 28 após a infusão de CART-BCMA.
[00129] A Figura 9 é uma série de imagens mostrando a expressão de proteína de CD19 conforme determinado por IHC em biópsias do núcleo da medula óssea adquiridas antes da administração ("Pré") e no dia 28 e no dia 90 ("3 meses") após a infusão de CART-BCMA do Paciente 13, Paciente 14, Paciente 15, Paciente 16 e Paciente 17.
[00130] A Figura 10 é uma série de imagens mostrando a expressão de proteína de CD20 conforme determinado por IHC em biópsias do núcleo da medula óssea adquiridas antes da administração ("Pré") e no dia 28 e no dia 90 ("3 meses") após a infusão de CART-BCMA do Paciente 13, Paciente 14, Paciente 15, Paciente 16 e Paciente 17.
[00131] As Figuras 11A e 11B são uma série de imagens de microscopia fluorescente espectralmente não misturadas mostrando que as células positivas para BCMA e células positivas para CD19 são populações separadas em biópsias de núcleo de medula óssea adquiridas do Paciente 15 antes da administração ("pré") e no Dia 90 ("3M") após a infusão de CAR-BCMA.
[00132] As Figuras 12A e 12B são uma série de imagens de microscopia pseudofluorescente não misturadas mostrando que a população de células CD19+ CD34dim estava presente nas biópsias do núcleo da medula óssea de pré-tratamento adquiridas do Paciente 15 e
Paciente 17, respectivamente.
[00133] A Figura 13 é uma série de imagens de microscopia pseudo fluorescente espectralmente não combinadas, mostrando que a população de CD19 era CD138 + e CD138- variavelmente nas biópsias de medula óssea pré-tratamento adquiridas do Paciente 15.
[00134] A Figura 14 é um gráfico comparando o nível de carga tumoral em um modelo de tumor KMS11 após o implante e a administração de PBS, células T não transduzidas ("UTD"), ou células T transduzidas com uma ferramenta CAR ("J6MO"), BCMA-4, BCMA-9, BCMA-10 ("MCM998"), BCMA-13 ou BCMA-15. BCMA-10 demonstrou a atividade antitumoral mais potente.
[00135] A Figura 15 é um diagrama mostrando o projeto de um teste clínico (Número NCT: NCT02546167; UPCC 14415) para avaliar a segurança e a viabilidade de infusão de células T autólogas que expressam CART-BCMA em pacientes adultos com mieloma múltiplo.
[00136] A Figura 16A é uma tabela mostrando as características de doença do paciente com MM. A Figura 16B é uma tabela mostrando a presença de linfopenia de linha de base devido à doença e antes das terapias em pacientes com MM.
[00137] As Figuras 17A, 17B e 17C são gráficos mostrando a resposta do paciente para a Coorte 1, Coorte 2 e Coorte 3, respectivamente.
[00138] As Figuras 18A e 18B são uma série de gráficos mostrando a expansão de CART-BCMA avaliado por citometria de fluxo nos pacientes de Coorte 1 e pacientes de Coorte 2/3, respectivamente.
[00139] As Figuras 19A e 19B são uma série de gráficos mostrando a expansão de CART-BCMA avaliado por PCR nos pacientes de Coorte 1 e pacientes de Coorte 2/3, respectivamente. Os gráficos mostram o número de genes de CART detectados por µg de DNA isolado do sangue do paciente (eixo geométrico y) no respectivo dia após a infusão de CART (eixo geométrico x).
[00140] As Figuras 20A e 20B são gráficos mostrando que a expansão de BCMA pode se correlacionar com os resultados clínicos.
[00141] As Figuras 21A, 21B, 21C e 21D são gráficos mostrando a fração de células CD4/CD8 positivas para CAR (CAR+) em vários pontos no tempo após a infusão em Respondedores em comparação com Não Respondedores.
[00142] A Figura 22 é uma série de gráficos mostrando as alterações no nível de expressão de citocina em vários pontos no tempo após a infusão de CART-BCMA. O eixo geométrico y em cada gráfico mostra a alteração em vezes do Dia 0. O eixo geométrico x em cada gráfico mostra os dias após a infusão de CART-BCMA.
[00143] As Figuras 23A e 23B são gráficos mostrando a alteração na expressão de IL-6 em vários pontos no tempo após a infusão de CART- BCMA. O eixo geométrico y em cada gráfico mostra a alteração em vezes do Dia 0. O eixo geométrico x em cada gráfico mostra os dias após a infusão de CART-BCMA.
[00144] As Figuras 24A e 24B são gráficos mostrando a alteração na expressão de IFN-γ em vários pontos no tempo após a infusão de CART- BCMA. O eixo geométrico y em cada gráfico mostra a alteração em vezes do Dia 0. O eixo geométrico x em cada gráfico mostra os dias após a infusão de CART-BCMA.
[00145] As Figuras 25A e 25B são gráficos mostrando o nível sérico de BCMA em 14 doadores normais (Figura 25A) e 12 pacientes com mieloma (Figura 25B).
[00146] As Figuras 26A, 26B, 26C e 26D são gráficos mostrando o nível sérico de BCMA em vários pontos no tempo após a infusão de
CART-BCMA. O eixo geométrico y nas Figuras 26A e 26B mostram os níveis séricos de BCMA no sangue periférico (PB). O eixo geométrico y nas Figuras 26C e 26D mostra a alteração em vezes de nível sérico de BCMA no PB de linha de base. O eixo geométrico x em cada gráfico mostra os dias após a infusão de CART-BCMA.
[00147] As Figuras 27A, 27B e 27C são gráficos mostrando os dados coletados de três pacientes com mieloma múltiplo que receberam tratamento com CART-BCMA. O eixo geométrico y à esquerda mostra a porcentagem de células de CART CD4+ ou CD8+. O eixo geométrico y à direita mostra o nível de BCMA sérico (ng/ml) ou o número de cópias de CART (BBz) por µg de DNA, como avaliado por qPCR.
[00148] As Figuras 28A e 28B são gráficos mostrando subconjuntos de células T CD4+ de doadores normais (Figura 28A) e pacientes com mieloma múltiplo (MM) (Figura 28B). As Figuras 28C e 28D são gráficos mostrando subconjuntos de células T CD8+ de doadores normais (Figura 28C) e pacientes com MM (Figura 28D). As Figuras 28E e 28F são gráficos mostrando subconjuntos de células T CD4+ e CD8+, respectivamente, em amostras de aférese adquiridas de pacientes com MM (pontos em barra representam não respondedores enquanto os pontos representam respondedores).
[00149] A Figura 29 é uma série de gráficos mostrando a diferenciação de células T em amostras de aférese adquiridas de pacientes com MM. O eixo geométrico x mostra a expressão de CD45RO e o eixo geométrico y mostra a expressão de CCR7. O sinal no quadrante superior esquerdo indica fenótipo de células naïve; o sinal no quadrante superior direito indica o fenótipo de memória central (TCM); o sinal no quadrante inferior direito indica o fenótipo de memória efetora (TEM); e o sinal no quadrante inferior esquerdo indica TEMRA. CR corresponde à resposta completa. PD corresponde à doença progressiva. VGPR corresponde à resposta parcial muito satisfatória.
[00150] As Figuras 30A e 30B são um par de gráficos mostrando subconjuntos de células T CD4+ e CD8+ em amostras de aférese adquiridas de pacientes com MM (pontos em barra representam não respondedores enquanto os pontos representam respondedores).
[00151] A Figura 31 é um gráfico mostrando o esquema de tratamento.
[00152] As Figuras 32A, 32B e 32C são um conjunto de gráficos mostrando resultados clínicos. A Figura 32A é um gráfico de Swimmer mostrando a melhor resposta e a sobrevida livre de progressão (PFS) para cada indivíduo. A seta indica resposta em curso. A Figura 32B é um par de imagens de tomografia PET/CT para o indivíduo 03 mostrando a resolução de doença extramedular e derrame pleural maligno após o tratamento. A Figura 32C é um gráfico de Kaplan-Meier mostrando a sobrevida global para a Coorte 1. MR=resposta mínima.; MRD=doença residual mínima; PR=resposta parcial; PD=doença progressiva; sCR=resposta completa restrita; SD=doença estável.
[00153] As Figuras 33A, 33B e 33C são um conjunto de gráficos mostrando a expansão e persistência de CART-BCMA. A Figura 33A é um conjunto de gráficos mostrando os níveis de células de CART-BCMA ao longo do tempo no sangue periférico para cada indivíduo, como medido por citometria de fluxo (% de CAR+ dentro de células T CD3+, ▲, eixo geométrico esquerdo) e PCR quantitativa para sequência de CAR (■, eixo geométrico direito). Consultar a Figura 38 para gráficos de citometria de fluxo representativa. A Figura 33B é um gráfico mostrando que os níveis de pico de CART-BCMA por qPCR se correlacionam com resposta: média 102507 vs. 4187 cópias/µg de DNA para ≥PR vs. <PR, respectivamente (p=0,016, Mann-Whitney). A Figura 33C é um gráfico mostrando que AUC-28 (área sob a curva para níveis de CART-BCMA por qPCR durante os primeiros 28 dias após a infusão) se correlaciona com a resposta: mediana 885181 vs. 26183 (cópias)x(dias)/µg de DNA para ≥PR vs. <PR, respectivamente (p=0,016, Mann-Whitney).
[00154] A Figura 34 é um gráfico mostrando os níveis de BCMA (sBCMA), BAFF, APRIL solúvel e a frequência de células B após as infusões de CART-BCMA. Os níveis séricos no sangue periférico de sBCMA, BAFF e APRIL (ng/ml, eixo geométrico esquerdo) foram medidos por ELISA pré e pós-infusões de CART-BCMA para cada indivíduo conforme indicado acima. Os indivíduos com as respostas clínicas mais profundas (01 (sCR), 03 (VGPR), 15 (VGPR)) tiveram maiores quedas em sBCMA e aumentos recíprocos em BAFF e APRIL. A frequência de células B no sangue periférico (% de CD19+ de gate CD45+CD14-, eixo geométrico direito) foi avaliada por citometria de fluxo em pontos no tempo indicados.
[00155] A Figura 35 é um conjunto de histogramas mostrando a expressão de BCMA por citometria de fluxo em células de MM identificadas (gated) em aspirados de medula para cada indivíduo, antes e depois de infusões de CART-BCMA. Os histogramas hachurados mostram BCMA; histogramas com preenchimento mostram o controle de FMO (fluorescência menos um). O ponto no tempo após a infusão é no Dia 28, a menos que especificado. A porcentagem de células que expressam BCMA bem como a intensidade de fluorescência média de BCMA (MFI) para cada indivíduo são mencionadas na Tabela 37. Observa-se expressão reduzida de BCMA para o indivíduo 03 na recidiva (D164). Consultar a Figura 42 para gating representativo.
[00156] As Figuras 36A, 36B, 36C e 36D são um conjunto de gráficos mostrando previsores de expansão de CART-BCMA in vivo. A razão entre células T CD4+ a CD8+ (razão CD4/CD8) dentro do produto de aférese imediatamente após a coleta (Figura 36A) e dentro da cultura de semente no início da fabricação (ou seja, após a etapa de elutriação para reduzir a contaminação por monócitos) (Figura 36B) foi determinada por citometria de fluxo:. A expansão em vezes in vitro (Figura 36C) foi calculada a partir de contagens de células totais no início e no final da fabricação. A proporção de células T CD8+ dentro do produto de aférese com um fenótipo de CD45RO-CD27+ foi avaliada por citometria de fluxo (Figura 36D). A razão de CD4/CD8 e frequência de células T de CD45RO-CD27+CD8+ antes da fabricação, e o grau de expansão in vitro estavam associados à expansão de pico de CART-BCMA in vivo após a infusão (correlação de Spearman r e valor p mostrados).
[00157] A Figura 37 é um diagrama de CONSORT mostrando o recrutamento do indivíduo.
[00158] A Figura 38 é um conjunto de gráficos mostrando gating representativo e coloração para células de CART-BCMA. A coloração é mostrada para sangue periférico do indivíduo 01, dia +7 depois da primeira infusão de CART-BCMA. As células são identificadas por dispersão frontal e lateral de luz, então, singletos, então, leucócitos CD45+CD14-, então, células T (CD3+CD19-). As células CART-BCMA+ foram identificadas usando BCMA-Fc humano recombinante biotinilado e estreptavidina-PE. O controle negativo era um tubo FMO (fluorescência menos um) (desprovido de BCMA-Fc bisnaga) com estreptavidina-PE. A % de células T CD3+ que expressam CART-BCMA foi calculada pela subtração de células CAR+ em um tubo FMO de células CAR+ no tubo com BCMA-FC biotinilado (ou seja, nesse exemplo 34,7 a 0,9 = 33,8). A situação de ativação de células CART-BCMA+ foi identificada por coloração para HLA-DR (painel inferior direito). A % de células CAR+ que foram ativadas em cada ponto no tempo foi calculada dividindo-se a % de HLA-DR+ por (% de HLA-DR+ mais % de HLA-DR-) (ou seja, nesse exemplo, 32,9/(32,9 + 1,5) = 95,6%).
[00159] A Figura 39 é um conjunto de gráficos mostrando o número absoluto de células T de CART-BCMA+ para cada indivíduo. O # absoluto de células CD3+CAR+ por µl de sangue foi estimado a partir da contagem absoluta de linfócitos (ALC, relatada a partir do diferencial de hemograma clínico completo (CBC)) e os resultados de citometria de fluxo de CART-BCMA (Figura 38), usando a seguinte fórmula: (ALC) (%CD45+CD14-)(%CD3+CD19-)(%CAR+)/10000. Por exemplo, para o indivíduo 01 no dia +7, a ALC era 0,08 x 103 células/µl. O # absoluto estimado de células T CAR+ circulantes nesse ponto no tempo é (0,08)(48,3)(72,1)(33,8)/10000 = 0,019 x 103 células/µl.
[00160] A Figura 40 é um conjunto de gráficos mostrando alterações séricas de citocina após o tratamento com CART-BCMA. Os níveis de 30 citocinas no sangue periférico foram avaliados em vários pontos no tempo por ensaio Luminex. As alterações nas citocinas selecionadas durante os primeiros 28 dias são mostradas. Os indivíduos com respostas mais profundas (01, 03, 15) tiveram o maior aumento em vezes em citocinas, tipicamente em ou antes da expansão de pico de CART-BCMA.
[00161] As Figuras 41A e 41B são um par de gráficos mostrando os níveis de BCMA solúvel de linha de base (sBCMA), expansão de pico e resposta. Os níveis séricos no sangue periférico de sBCMA foram medidos por ELISA pré-tratamento. A Figura 41A é um gráfico mostrando que os nível de sBCMA de linha de base não se estavam significativamente correlacionados com a expansão de pico de CART- BCMA por qPCR (correlação de Spearman r=0,43, p=0,25). A Figura 41B é um gráfico mostrando que os níveis de linha de base de sBCMA não estão significativamente associados à resposta (p=0,56, teste de Mann- Whitney).
[00162] A Figura 42 é um conjunto de gráficos mostrando o gating representativo para células de mieloma e coloração com BCMA. As células de aspirados de medula óssea foram identificadas por dispersão frontal e lateral de luz, então por singletos, então em células CD3-CD14-. As células de mieloma foram identificadas por gating, primeiro, em células CD38hi, então por gating em células do plasma clonal usando CD19, CD56, e coloração kappa/lambda. Nesse exemplo, as células do mieloma são CD19-CD56+kappa+. A % de BCMA + foi determinada usando um tubo FMO desprovido de anticorpo anti-BCMA.
[00163] As Figuras 43A e 43B são um par de gráficos mostrando os níveis de BCMA de linha de base em células de MM, expansão de pico e resposta. A intensidade média de fluorescência do BCMA (MFI) em células do mieloma antes do tratamento não se correlacionou com a expansão de pico de CART-BCMA por qPCR (correlação de Spearman r=0,45, p=0,27) (Figura 43A), nem estava significativamente associada à resposta (p=0,25, teste de Mann-Whitney) (Figura 43B). Um indivíduo (07) não tinha uma amostra de pré-tratamento disponível.
[00164] As Figuras 44A e 44B são um conjunto de gráficos mostrando a expressão de BCMA em linhagens celulares com malignidade de células B. A Figura 44A é um conjunto de histogramas mostrando a expressão de superfície de BCMA em cada linhagem celular. Os histogramas hachurados indicam coloração com anticorpo anti-BCMA marcado com PE e os histogramas com preenchimento mostram a respectiva coloração de controle de isotipo. Na Figura 44B, a expressão foi quantificada e a capacidade de ligação de anticorpo (ABC) plotada para cada linhagem celular testada.
[00165] A Figura 45A é um gráfico mostrando a % de células
CD27+CD45RO-CD8+ na coorte pós-indução e na coorte recidivada/refratária. A Figura 45B é um gráfico mostrando a razão de células CD4/CD8 na coorte pós-indução e na coorte recidivada/refratária. A Figura 45C é um gráfico mostrando a duplicação de população in vitro no Dia 9 na coorte pós-indução e na coorte recidivada/refratária.
[00166] A Figura 46 é um gráfico mostrando o esquema de tratamento. BM asp/Bx = aspirado e biópsia de medula óssea; Cytoxan = ciclofosfamida; D = dia; Lenti = lentivírus; Wk = semana.
[00167] As Figuras 47A a 47C são um painel de swimmer's plots mostrando a melhor resposta e a sobrevida livre de progressão (PFS) para cada indivíduo na Coorte 1 (1 a 5 x 108 células de CART-BCMA individualmente) (Figura 47A), na Coorte 2 (Ciclofosfamida (Cy) + 1 a 5 x 107 células de CART-BCMA) (Figura 47B), e na Coorte 3 (Cy + 1 a 5 x 108 células de CART-BCMA) (Figura 47C). A seta indica resposta em curso. A Figura 47D é um gráfico mostrando a sobrevida global (OS) com base na coorte, plotagem de Kaplan-Meier. Mr=resposta mínima.; MRD=doença residual mínima; PR=resposta parcial; Pd=doença progressiva; sCR=resposta completa restrita; SD=doença estável.
[00168] As Figuras 48A a 48D são gráficos mostrando a expansão e persistência de CART-BCMA. As Figuras 48A a 48C são gráficos mostrando os níveis de células de CART-BCMA ao longo do tempo no sangue periférico para cada coorte, como medido por PCR quantitativa para sequência de CAR. A Figura 48D é um gráfico mostrando os níveis de pico de CART-BCMA por qPCR para cada indivíduo (exceto o ind. 34, para o qual os dados de pico não estão disponíveis). Os níveis de pico mediano de CART-BCMA (barras cinzas) não eram significativamente diferentes entre as coortes (Mann-Whitney).
[00169] As Figuras 49A a 49I são gráficos mostrando citocinas séricas associadas à gravidade e neurotoxicidade de CRS. As concentrações séricas de citocina em pg/ml até o dia 28 foram medidas por ensaio Luminex. As Figuras 49A a 49E: O aumento em vezes de pico mediano em relação à linha de base para cada citocina foi comparado entre os indivíduos sem síndrome de liberação de citocinas (CRS), CRS grau 1, ou CRS grau 2 que não receberam tocilizumabe (CRS gr 0 a 2) e aqueles com CRS grau 3-4 ou CRS grau 2 que receberam tocilizumabe (CRS Gr 3-4 ou Gr 2 + toci). As citocinas mais significativamente associadas à gravidade de CRS foram IL-6 (Figura 49A), IFN-γ (Figura 49B), IL-2Rα (Figura 49C), MIP-1α (Figura 49D) e IL-15 (Figura 49E). As Figuras 49F a 49I: O aumento em vezes de pico mediano em relação à linha de base para cada citocina foi comparado entre os indivíduos sem neurotoxicidade (Sem Ntx) e aqueles com qualquer grau de neurotoxicidade (Qualquer Ntx). As citocinas mais significativamente associadas à neurotoxicidade foram IL-6 (Figura 49F), IFN-γ (Figura 49G), IL-1RA (Figura 49H) e MIP-1α (Figura 49I). As estrelas mostram indivíduos com neurotoxicidade grau 3-4. O valor p exato por teste de Mann-Whitney é mostrado. As linhas horizontais mostram as medianas. IFN-γ = interferon gama; IL-1RA = antagonista do receptor de interleucina 1; IL-2Rα = receptor alfa de interleucina 2; IL-6 = interleucina 6; IL-15 = interleucina 15. MIP-1α = proteína inflamatória de macrófago 1 alfa.
[00170] As Figuras 50A a 50D são gráficos mostrando a concentração solúvel de BCMA (sBCMA), BAFF e APRIL e BCMA a expressão em células MM pré e pós-infusões de CART-BCMA. Figura 50A: As concentrações séricas de sBCMA e APRIL no sangue periférico de linha de base dos indivíduos (sub) foram significativamente aumentadas e diminuídas, respectivamente, em comparação com um painel de doadores saudáveis (HD, n=6) (p = 0,017 e <0,001, respectivamente,
Mann-Whitney). As concentrações de BAFF de linha de base não eram significativamente diferentes. As concentrações medianas são mostradas. Figura 50B: As concentrações séricas de sBCMA diminuem após infusões de CART-BCMA mais significativamente em respondedores hematológicos (PR/VGPR/CR/sCR) do que não respondedores (MR/SD/PD). A concentração média (ng/ml) + SEM são mostradas. *p<0,05 por teste t não pareado. Figura 50C: Exemplos representativos de expressão de BCMA em células de MM por citometria de fluxo. Consultar a Figura 42 quanto à estratégia de gating. FMO=fluorescência menos um. Figura 50D: A intensidade de fluorescência média de BCMA (MFI) em células de MM ao longo do tempo em 18 indivíduos com aspirados em série de medula óssea avaliáveis. A MFI mediana foi significativamente diferente entre o pré-tratamento (pré-tx) e no dia 28 (D28) para respondedores (4000 vs. 944, p=0,02, teste t pareado), porém não para não respondedores (2704 vs. 2140, p=0,19). A MFI mediana não foi significativamente diferente entre pré-tx e o dia 90 (D90) para respondedores (4000 vs.2022, p=0,26). *Ind. 15 não tiveram células de MM detectáveis no D28. #Ind. 03 tiveram células de MM detectáveis no D45 (D28 não realizado) e poucas células de MM para caracterizar no D90. A medula no D164 é mostrada no ponto no tempo D90.
[00171] As Figuras 51A a 51I são gráficos mostrando os previsores de expansão e resposta de CART-BCMA in vivo. A expansão de pico de CART-BCMA no sangue, como medida por qPCR (Figura 51A), bem como a expansão de CART-BCMA total nos primeiros 28 dias (calculada como área sob a curva (AUC)) (Figura 51B), foram ambas associadas a resposta clínica. A expansão de CART-BCMA (Figura 51C) e resposta (Figura 51D) de maior pico também foram associadas a CRS mais grave, definida como grau 3/4 ou grau 2 que exige tocilizumabe. Uma razão mais alta de células T CD4 + para CD8 + (razão CD4/CD8) dentro do produto de leucoférese, determinada por citometria de fluxo, também se correlacionou com a expansão de pico (Figura 51E) e resposta (Figura 51F), enquanto proliferação in vitro, medida como o aumento em vezes de células inoculadas durante a fabricação, se correlacionou apenas com a expansão de pico (Figura 51G), porém não como resposta (p = 0,54, teste de Mann-Whitney, dados não mostrados). As Figuras 51H-I: Uma proporção maior de células T CD8+ dentro do produto de leucoférese com um fenótipo CD45RO-CD27+ foi significativamente associada à expansão de CART-BCMA de pico (Figura 51H), e a um grau menor, a resposta (Figura 51I). Para as Figuras 51A, 51B, 51C, 51F e 51I, a análise foi realizada por teste de Mann-Whitney; as linhas representam os valores medianos. Para a Figura 51D, a análise foi realizada por teste exato de Fisher. Para as Figuras 51E, 51G e 51H, a análise foi realizada por correlação de Spearman.
[00172] A Figura 52 é um diagrama de CONSORT mostrando o recrutamento do indivíduo. ALC = contagem absoluta de linfócitos.
[00173] As Figuras 53A a 53D são gráficos mostrando resultados clínicos adicionais para indivíduos tratados. Figura 53A: Duração de resposta (DOR) para todos os indivíduos com resposta parcial (PR) ou melhor. Figura 53B: Sobrevida global (OS) para todos os indivíduos. Figura 53C: Sobrevida livre de progressão (PFS) por coorte . Figura 53D: PFS para todos os indivíduos. Curvas derivadas pelo método Kaplan-Meier.
[00174] As Figuras 54A a 54C são gráficos mostrando expansão de células de CART-BCMA para a Coorte 1 (Figura 54A), Coorte 2 (Figura 54B) ou Coorte 3 (Figura 54C). A frequência de células T CAR+ dentro de todas as células T CD3+ no sangue periférico, como medida por citometria de fluxo, é mostrada para cada indivíduo.
[00175] A Figura 55 é um painel de gráficos mostrando alterações séricas de citocina após o tratamento com CART-BCMA. As concentrações (pg/ml) de citocinas no sangue periférico foram avaliadas em vários pontos no tempo por ensaio Luminex. O aumento de pico em vezes na linha de base para as citocinas mais frequentemente elevadas nos primeiros 28 dias após a infusão é mostrado, com base na coorte.
[00176] As Figuras 56A a 56L são gráficos mostrando que a expansão de pico de CART-BCMA não está associada às características clínicas de linha de base, expressão de BCMA de linha de base ou concentração de sBCMA. O nível de pico de CART-BCMA (cópias/µg de DNA genômico) por qPCR não foi significativamente associado à idade no recrutamento (acima ou abaixo da mediana) (Figura 56A); anos a partir do diagnóstico (acima ou abaixo da mediana) (Figura 56B); presença de del17p por FISH ou mutação de TP53 por sequenciamento (Figura 56C); número (#) de linhas terapêuticas (acima ou abaixo da mediana) (Figura 56D); sendo penta-refratário a 2 inibidores de proteassoma (IPs), 2 fármacos imunomoduladores (IMiDs) e daratumumabe (dara) (Figura 56E); recebendo terapia imediatamente antes da leucaférese que continha um IMiD (Figura 56F), um PI (Figura 56G), dara (Figura 56H), ou ciclofosfamida (Cytoxan) (Figura 56I); porcentagem de células da medula óssea no sangue pré-tratamento (% de BM PC) (Figura 56J); intensidade média de fluorescência (MFI) de BCMA de linha de base em BM PC (Figura 56K); ou concentração sérica solúvel de BCMA de linha de base (sBCMA) (Figura 56L). Para as Figuras 56A a 56I, análise por teste de Mann-Whitney; a linha representa o valor mediano. Para as Figuras 56J a 56L, análise por correlação de Spearman.
[00177] As Figuras 57A a 57L são gráficos mostrando que a resposta não está associada às características clínicas de linha de base,
expressão de BCMA de linha de base ou concentração de sBCMA. A resposta clínica (≥ resposta parcial (RP)) não foi significativamente associada à idade no recrutamento (Figura 57A); anos a partir do diagnóstico (Figura 57B); presença de del17p pela mutação FISH ou TP53 por sequenciação (Figura 57C); número (#) de linhas terapêuticas (Figura 57D); sendo penta-refratário a 2 inibidores de proteassoma (IPs), 2 fármacos imunomoduladores (IMiDs) e daratumumabe (dara) (Figura 57E); recebendo um regime imediatamente antes da leucaférese que continha um IMiD, um PI, dara ou ciclofosfamida (Cytoxan) (Figuras 57F a 57I); a porcentagem de células plasmáticas da medula óssea pré- tratamento (% de BM PC) (Figura 57J); intensidade média de fluorescência de BCMA de linha de base (MFI) em BM PC (Figura 57K); ou concentração sérica solúvel de BCMA de linha de base (sBCMA) (Figura 57L). Para as Figuras 57C, 57E a 57I, a análise por teste Exato de Fisher. Para as Figuras 57A, 57B, 57D, 57J-57L, análise por teste de Mann-Whitney; a linha representa o valor mediano.
DESCRIÇÃO Definições
[00178] A menos que definidos de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado que é habitualmente entendido por uma pessoa de habilidade comum na técnica à qual pertence a invenção.
[00179] Como usado aqui, o termo "BCMA" se relaciona com o antígeno de maturação de células B. BCMA (também conhecido como TNFRSF17, BCM ou CD269) é um membro da família do receptor de necrose tumoral (TNFR) e é predominantemente expresso em células B terminalmente diferenciadas, por exemplo, células B de memória, e células plasmáticas. O seu ligante é denominado ativador de células B da família TNF (BAFF) e um ligante indutor da proliferação (APRIL). BCMA está envolvido na mediação da sobrevivência de células plasmáticas para manter imunidade humoral de longa duração. O gene de BCMA é codificado no cromossomo 16 produzindo um transcrito de mRNA primário de 994 nucleotídeos de comprimento (NCBI acesso NM_001192.2) que codifica uma proteína com 184 aminoácidos (NP_001183.2). Uma segunda transcrição antissenso derivada do locus BCMA foi descrita, que pode desempenhar um papel na regulação da expressão de BCMA. (Laabi Y. et al., Nucleic Acids Res., 1994, 22:1147- 1154). Variantes de transcritos adicionais foram descritas com importância desconhecida (Smirnova AS et al. Mol Immunol., 2008, 45(4):1179-1183). Uma segunda isoforma, também conhecida como TV4, foi identificada (Uniprot identificador Q02223-2). Como usado aqui, "BCMA" inclui proteínas compreendendo mutações, por exemplo, mutações pontuais, fragmentos, inserções, deleções e variantes de encadeamento de BCMA de tipo selvagem completo.
[00180] Como usado aqui, o termo "CD19" se refere à proteína 19 de Grupamento de Diferenciação que é um determinante antigênico detectável em células precursoras de leucemia. As sequências de aminoácidos e de ácidos nucleicos humanas e murinas podem ser encontradas em uma base de dados pública, tal como GenBank, UniProt e Swiss-Prot. Por exemplo, a sequência de aminoácidos de CD19 humana pode ser encontrada em UniProt/Swiss-Prot Nº de Acesso P15391 e a sequência de nucleotídeos codificando a CD19 humana pode ser encontrada no Nº de Acesso NM_001178098. Como usado aqui, "CD19" inclui proteínas compreendendo mutações, por exemplo, mutações pontuais, fragmentos, inserções, eliminações e variantes de splicing de CD19 de tipo selvagem de comprimento total. CD19 é expresso na maioria dos cânceres de linhagem B, incluindo, por exemplo, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica e linfoma não Hodgkin. Outras células que expressam CD19 são proporcionadas abaixo na definição de "doença associada a expressão de CD19". Também é um marcador inicial de progenitores de células B. Ver, por exemplo, Nicholson et al. Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997). Em um aspecto, a porção de ligação a antígenos do CART reconhece e se liga a um antígeno no domínio extracelular da proteína CD19. Em um aspecto, a proteína CD19 é expressa em uma célula cancerígena.
[00181] O termo "uma" e "um" refere-se a um ou mais de um (isto é, a pelo menos um) do objeto gramatical do artigo. Por exemplo, "um elemento" significa um elemento ou mais de um elemento.
[00182] O termo "cerca de", quando se refere a um valor mensurável, como uma quantidade, uma duração temporal, e similares, pretende abranger variações de ±20% ou, em alguns casos, ±10%, ou em alguns casos ±5%, ou em alguns casos ±1%, ou em alguns casos ±0,1% do valor especificado, uma vez que tais variações são adequadas para realizar os métodos divulgados.
[00183] O termo "Receptor de Antígeno Quimérico" ou alternativamente um "CAR" se refere a um construto de polipeptídeo recombinante compreendendo pelo menos um domínio de ligação ao antígeno extracelular, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização citoplásmica (também referido aqui como "domínio de sinalização intracelular") compreendendo um domínio de sinalização funcional derivado de uma molécula estimuladora como definido abaixo. Em algumas modalidades, os domínios no construto de polipeptídeo CAR estão na mesma cadeia polipeptídica, por exemplo, compreendem uma proteína de fusão quimérica. Em algumas modalidades, os domínios no construto de polipeptídeo CAR não são contíguos uns aos outros, por exemplo, estão em diferentes cadeias polipeptídicas, por exemplo, como proporcionado em um RCAR como descrito neste documento.
[00184] Em um aspecto, a molécula estimuladora do CAR é a cadeia zeta associada ao complexo do receptor de células T. Em um aspecto, o domínio de sinalização citoplásmico compreende um domínio de sinalização primário (por exemplo, um domínio de sinalização primário de CD3 zeta). Em um aspecto, o domínio de sinalização citoplasmático compreende adicionalmente um ou mais domínios de sinalização funcional derivados de pelo menos uma molécula coestimuladora como definida abaixo. Em um aspecto, a molécula coestimuladora é escolhida dentre 4 1BB (isto é, CD137), CD27, ICOS e/ou CD28. Em um aspecto, o CAR compreende uma proteína de fusão quimérica compreendendo um domínio de reconhecimento de antígeno extracelular, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular compreendendo um domínio de sinalização funcional derivado de uma molécula estimuladora. Em um aspecto, o CAR compreende uma proteína de fusão quimérica compreendendo um domínio de reconhecimento de antígeno extracelular, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular compreendendo um domínio de sinalização funcional de uma molécula coestimuladora e um domínio de sinalização funcional derivado de uma molécula estimuladora. Em um aspecto, o CAR compreende uma proteína de fusão quimérica compreendendo um domínio de reconhecimento de antígeno extracelular, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular compreendendo dois domínios de sinalização funcional derivados de uma ou mais molécula(s) coestimuladora(s) e um domínio de sinalização funcional derivado de uma molécula estimuladora. Em um aspecto, o
CAR compreende uma proteína de fusão quimérica compreendendo um domínio de reconhecimento de antígeno extracelular, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular compreendendo pelo menos dois domínios de sinalização funcional derivados de uma ou mais molécula(s) coestimuladora(s) e um domínio de sinalização funcional derivado de uma molécula estimuladora. Em um aspecto, o CAR compreende uma sequência líder opcional no terminal amino (N-ter) da proteína de fusão com CAR. Em um aspecto, o CAR compreende ainda uma sequência líder no terminal N do domínio de reconhecimento de antígeno extracelular, em que a sequência líder é opcionalmente clivada a partir do domínio de reconhecimento de antígeno (por exemplo, um scFv) durante o processamento celular e localização do CAR na membrana celular.
[00185] Um CAR que compreende um domínio de ligação ao antígeno (por exemplo, um scFv, um anticorpo de domínio único, ou TCR (por exemplo, um domínio de ligação alfa de TCR ou domínio de ligação beta de TCR)) que alveja um marcador tumoral específico X, em que X pode ser um marcador tumoral conforme descrito no presente documento, também é chamado de XCAR. Por exemplo, um CAR que compreende um domínio de ligação a antígeno que tem como alvo BCMA é denominado BCMACAR. O CAR pode ser expresso em qualquer célula, por exemplo, um célula imunoefetora conforme descrito no presente documento (por exemplo, uma célula T ou uma célula NK).
[00186] O termo "domínio de sinalização" se refere à porção funcional de uma proteína que atua por transmissão de informação dentro da célula para regular a atividade celular através de vias de sinalização definidas por geração de segundos mensageiros ou funcionamento como efetores por resposta a tais mensageiros.
[00187] O termo "anticorpo", conforme usado no presente documento, refere-se a uma proteína ou sequência de polipeptídeos derivada de uma molécula de imunoglobulina que se liga especificamente a um antígeno. Os anticorpos podem ser policlonais ou monoclonais, de cadeia múltipla ou simples, ou imunoglobulinas intactas, e podem ser derivados de fontes naturais ou de fontes recombinantes. Os anticorpos podem ser tetrâmeros de moléculas de imunoglobulinas.
[00188] O termo "fragmento de anticorpo" se refere a pelo menos uma porção de um anticorpo intacto, ou suas variantes recombinantes, e se refere ao domínio de ligação ao antígeno, por exemplo, uma região variável determinante antigênica de um anticorpo intacto, que é suficiente para conferir reconhecimento e ligação específica do fragmento de anticorpo a um alvo, tal como um antígeno. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, mas não se limitam a, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv, fragmentos de anticorpo scFv, anticorpos lineares, anticorpos de domínio único tais como sdAb (VL ou VH), domínio de VHH camelídeos e moléculas multiespecíficas formados a partir de fragmentos de anticorpo tais como um fragmento bivalente compreendendo dois ou mais, por exemplo, dois fragmentos Fab ligados por uma ponte de dissulfeto na região de dobradiça, ou dois ou mais, por exemplo, duas CDRs isoladas ou outros fragmentos de ligação ao epítopo de um anticorpo ligado. Um fragmento de anticorpo pode também ser incorporado em anticorpos de domínio único, maxicorpos, minicorpos, nanocorpos, intracorpos, diacorpos, triacorpos, tetracorpos, v-NAR e bis-scFv (ver, por exemplo, Hollinger e Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136, 2005). Fragmentos de anticorpo podem também ser enxertados em moldes baseados em polipeptídeos como uma fibronectina tipo III (Fn3) (ver Patente U.S. Nº:
6.703.199, que descreve minicorpos de polipeptídeo de fibronectina).
[00189] O termo "scFv" se refere a uma proteína de fusão compreendendo pelo menos um fragmento de anticorpo compreendendo uma região variável de uma cadeia leve e pelo menos um fragmento de anticorpo compreendendo uma região variável de uma cadeia pesada em que as regiões variáveis de cadeia pesada e leve são ligadas de forma contígua através de um ligante de polipeptídeo flexível curto, e capaz de ser expresso como um polipeptídeo de cadeia única, e em que o scFv retém a especificidade do anticorpo intacto do qual deriva. A menos que seja especificado, como usado aqui, um scFv pode ter as regiões variáveis VL e VH em qualquer ordem, por exemplo, relativamente às extremidades N-terminal e C-terminal do polipeptídeo, o scFv pode compreender VL-ligante-VH ou pode compreender VH-ligante-VL.
[00190] Os termos "região determinante de complementaridade" ou "CDR", conforme usado no presente documento, se referem às sequências de aminoácidos dentro de regiões variáveis de anticorpos que conferem especificidade e afinidade de ligação. Por exemplo, em geral existem três CDRs em cada região variável de cadeia pesada (por exemplo, HCDR1, HCDR2 e HCDR3) e três CDRs em cada região variável de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3). As fronteiras precisas de sequências de aminoácidos de uma dada CDR podem ser determinadas com o uso de qualquer um dentre diversos esquemas bem conhecidos, incluindo aqueles descritos por Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5.ª edição. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (esquema de numeração de "Kabat"), Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948 (esquema de numeração de "Chothia"), ou uma combinação dos mesmos. Sob o esquema de numeração de Kabat, em algumas modalidades, os resíduos de aminoácidos de CDR no domínio variável de cadeia pesada (VH) são numerados de 31 a 35 (HCDR1), 50 a 65 (HCDR2) e 95 a 102 (HCDR3); os resíduos de aminoácidos de CDR no domínio variável de cadeia leve (VL) são numerados de 24 a 34 (LCDR1), 50 a 56 (LCDR2) e 89 a 97 (LCDR3). Sob o esquema de numeração de Chothia, em algumas modalidades, os aminoácidos de CDR no VH são numerados de 26 a 32 (HCDR1), 52 a 56 (HCDR2) e 95 a 102 (HCDR3); e os resíduos de aminoácidos de CDR no VL são numerados de 26 a 32 (LCDR1), 50 a 52 (LCDR2) e 91 a 96 (LCDR3). Em um esquema de numeração combinado de Kabat e Chothia, em algumas modalidades, as CDRs correspondem aos resíduos de aminoácidos que são parte de uma CDR de Kabat, uma CDR de Chothia ou ambas. Por exemplo, em algumas modalidades, os CDRs correspondem a resíduos de aminoácidos 26-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2) e 95-102 (HCDR3) em um VH, por exemplo, um VH de mamífero, por exemplo, um VH humano; e resíduos de aminoácidos 24-34 (LCDR1), 50-56 (LCDR2) e 89-97 (LCDR3) em um VL, por exemplo, um VL de mamífero, por exemplo, um VL humano.
[00191] A porção da composição de CAR da invenção que compreende um anticorpo ou seu fragmento de anticorpo pode existir em uma variedade de formas, por exemplo, nas quais o domínio de ligação a antígeno é expresso como parte de uma cadeia polipeptídica incluindo, por exemplo, um fragmento de anticorpo de domínio único (sdAb), um anticorpo de cadeia simples (scFv), ou, por exemplo, um anticorpo humanizado (Harlow et al., 1999, Em: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow et al., 1989, Em: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Nova Iorque; Houston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird et al., 1988, Science 242:423-426). Em um aspecto, o domínio de ligação a antígeno de uma composição de CAR da invenção compreende um fragmento de anticorpo. Em um aspecto adicional, o CAR compreende um fragmento de anticorpo que compreende um scFv.
[00192] Como usado no presente documento, o termo "domínio de ligação" ou "molécula de anticorpo" (também chamado no presente documento de domínio de ligação "anti-alvo (por exemplo, BCMA)") se refere a uma proteína, por exemplo, uma cadeia de imunoglobulina ou fragmento da mesma, compreendendo pelo menos uma sequência de domínio variável de imunoglobulina. O termo "domínio de ligação" ou "molécula de anticorpo" abrange anticorpos e fragmentos de anticorpos. Em uma modalidade, uma molécula de anticorpo é uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, compreende uma pluralidade de sequências de domínio variável de imunoglobulina, em que uma primeira sequência de domínio variável de imunoglobulina da pluralidade tem especificidade de ligação para um primeiro epítopo e uma segunda sequência de domínio variável de imunoglobulina da pluralidade tem especificidade de ligação para um segundo epítopo. Em uma modalidade, uma molécula de anticorpo multiespecífica é uma molécula de anticorpo biespecífica. Um anticorpo biespecífico tem especificidade para não mais do que dois antígenos. Uma molécula de anticorpo biespecífica é caracterizada por uma primeira sequência de domínio variável de imunoglobulina que tem especificidade de ligação para um primeiro epítopo e uma segunda sequência de domínio variável de imunoglobulina que tem especificidade de ligação para um segundo epítopo. O termo "cadeia pesada de anticorpo" se refere ao maior dos dois tipos de cadeias polipeptídicas presentes em moléculas de anticorpos em suas conformações de ocorrência natural, e que normalmente determina a classe à qual o anticorpo pertence.
[00193] O termo "cadeia leve de anticorpo" se refere ao menor dos dois tipos de cadeias polipeptídicas presentes em moléculas de anticorpos em suas conformações de ocorrência natural. Cadeias leves kappa (κ) e lambda (λ) se relacionam com os dois principais isótipos de cadeias leves de anticorpo.
[00194] O termo "anticorpo recombinante" se refere a um anticorpo que é gerado usando tecnologia de DNA recombinante, tal como, por exemplo, um anticorpo expresso por um sistema de expressão de bacteriófago ou levedura. Também deve ser considerado que o termo significa um anticorpo que foi gerado pela síntese de uma molécula de DNA codificando o anticorpo e tal molécula de DNA expressa uma proteína de anticorpo ou uma sequência de aminoácidos especificando o anticorpo, em que o DNA ou sequência de aminoácidos foram obtidos usando tecnologia de DNA recombinante ou sequência de aminoácidos que está disponível e é bem conhecida na técnica.
[00195] O termo "antígeno" ou "Ag" se refere a uma molécula que provoca uma resposta imune. Esta resposta imune pode envolver a produção de anticorpos ou a ativação de células imunologicamente competentes específicas ou ambas. O perito na técnica compreenderá que qualquer macromolécula, incluindo virtualmente todas as proteínas ou peptídeos, pode servir como um antígeno. Além disso, os antígenos podem ser derivados de DNA recombinante ou genômico. O versado na técnica compreenderá que qualquer DNA, que compreende sequências de nucleotídeos, ou uma sequência de nucleotídeos parcial, que codifica uma proteína que produz uma resposta imune codifica, portanto, um "antígeno", tal como o termo é usado no presente documento. Além disso, o versado na técnica compreenderá que um antígeno não precisa ser codificado apenas por uma sequência de nucleotídeos completa de um gene. É evidente que a presente invenção inclui, porém sem limitação, o uso de sequências de nucleotídeos parciais de mais de um gene e que essas sequências de nucleotídeos estão dispostas em várias combinações para codificar polipeptídeos que produzem a resposta imunológica desejada. Além disso, um perito na técnica compreenderá que um antígeno não precisa ser codificado por um "gene" de modo algum. É prontamente aparente que um antígeno pode ser gerado, sintetizado ou pode ser derivado de uma amostra biológica, ou pode ser uma macromolécula diferente de um polipeptídeo. Tal amostra biológica pode incluir, porém sem limitação, uma amostra de tecido, uma amostra tumoral, uma célula ou um fluido com outros componentes biológicos.
[00196] O termo "efeito antitumoral" refere-se a um efeito biológico que pode ser manifestado de várias formas, incluindo, mas não se limitando a, por exemplo, uma redução no volume tumoral, uma redução do número de células tumorais, uma redução do número de metástases, um aumento da esperança de vida, redução da proliferação de células tumorais, redução da sobrevivência de células tumorais ou melhoria de vários sintomas fisiológicos associados à condição cancerígena. Um "efeito antitumoral" também pode ser manifestado pela capacidade dos peptídeos, polinucleotídeos, células e anticorpos da invenção na prevenção da ocorrência de tumor em primeiro lugar.
[00197] O termo "efeito anticancerígeno" refere-se a um efeito biológico que pode ser manifestado de várias formas, incluindo, mas não se limitando a, por exemplo, uma redução no volume tumoral, uma redução do número de células cancerígenas, uma redução do número de metástases, um aumento da esperança de vida, redução da proliferação de células cancerígenas, redução da sobrevivência de células cancerígenas ou melhoria de vários sintomas fisiológicos associados à condição cancerígena. Um "efeito anticancerígeno" também pode se manifestar pela capacidade dos peptídeos, polinucleotídeos, células e anticorpos para prevenir a ocorrência de câncer logo de início. O termo "efeito antitumoral" se relaciona com um efeito biológico que pode se manifestar por vários meios, incluindo, mas não se limitando a, por exemplo, um decréscimo do volume tumoral, um decréscimo do número de células tumorais, um decréscimo da proliferação de células tumorais ou um decréscimo da sobrevivência de células tumorais. O termo "autólogo" se refere a qualquer material derivado do mesmo indivíduo, o qual será posteriormente reintroduzido no indivíduo.
[00198] O termo "alogeneico" se refere a qualquer material derivado de um animal diferente da mesma espécie do indivíduo no qual o material é introduzido. Dois ou mais indivíduos são considerados alogeneicos um ao outro quando os genes em um ou mais loci não são idênticos. Em alguns aspectos, material alogeneico de indivíduos da mesma espécie pode ser geneticamente bastante diferente para interagir antigenicamente.
[00199] O termo "xenogeneico" se relaciona com um enxerto derivado de um animal de uma espécie diferente.
[00200] O termo "aférese" como usado no presente documento, refere- se ao processo extracorpóreo reconhecido pela técnica pelo qual o sangue de um doador ou paciente é removido do doador ou paciente e passado através de um aparelho que separa o(s) constituinte(s) específico(s) selecionado(s) e retorna o restante à circulação do doador ou paciente, por exemplo, por retransfusão. Dessa forma, no contexto de "uma amostra de aférese" refere-se a uma amostra obtida usando aférese.
[00201] O termo "combinação" se relaciona com uma combinação fixa em uma forma unitária de dosagem ou uma administração combinada em que um composto da presente invenção e um parceiro de combinação (por exemplo, outro fármaco conforme explicado abaixo, também denominado "agente terapêutico" ou "coagente") pode ser administrada independentemente ao mesmo tempo ou separadamente dentro de intervalos de tempo, especialmente quando estes intervalos de tempo permitem que os parceiros de combinação exibam um efeito cooperativo, por exemplo, sinérgico.
Os componentes únicos podem ser embalados em um kit ou separadamente.
Um ou ambos os componentes (por exemplo, pós ou líquidos) podem ser reconstituídos ou diluídos até uma dose desejada antes da administração.
Os termos "coadministração" ou "administração combinada" ou similares, como usados aqui, pretendem abranger a administração do parceiro de combinação selecionado a um único indivíduo em sua necessidade (por exemplo, um paciente) e pretendem incluir os regimes de tratamento em que os agentes não são necessariamente administrados pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo.
O termo "combinação farmacêutica", como usados no presente documento significa um produto que resulta da mistura ou combinação de mais de um ingrediente ativo e inclui tanto combinações fixas como não fixas dos ingredientes ativos.
O termo "combinação fixa" significa que os ingredientes ativos, por exemplo, um composto da presente invenção e um parceiro de combinação, são ambos administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma entidade ou dosagem única.
O termo "combinação não fixa" significa que os ingredientes ativos, por exemplo, um composto da presente invenção e um parceiro de combinação, são ambos administrados a um paciente como entidades separadas simultânea, concomitante ou sequencialmente sem limites de tempo específicos, em que tal administração fornece níveis terapeuticamente eficazes dos dois compostos no corpo do paciente. O último também se aplica à terapia de coquetel, por exemplo, a administração de três ou mais ingredientes ativos.
[00202] O termo "câncer" se refere a uma doença caracterizada pelo crescimento rápido e descontrolado de células aberrantes. As células cancerosas podem se disseminar localmente ou através da corrente sanguínea e sistema linfático para outras partes do corpo. Exemplos de vários cânceres são descritos no presente documento e incluem, porém sem limitação, câncer da mama, câncer da próstata, câncer do ovário, câncer cervical, câncer da pele, câncer pancreático, câncer colorretal, câncer renal, câncer do fígado, câncer do cérebro, linfoma, leucemia, câncer do pulmão e similares. Os cânceres preferenciais tratados pelos métodos descritos no presente documento incluem mieloma múltiplo, linfoma de Hodgkin ou linfoma não Hodgkin.
[00203] Os termos "tumor" e "câncer" são usados alternadamente aqui, por exemplo, os dois termos abrangem tumores sólidos e líquidos, por exemplo, difusos ou em circulação. Conforme usado no presente documento, o termo "câncer" ou "tumor" inclui cânceres e tumores pré- malignos, bem como malignos.
[00204] "Derivado de", conforme esse termo é usado no presente documento, indica uma relação entre uma primeira e uma segunda molécula. Geralmente refere-se à semelhança estrutural entre a primeira molécula e uma segunda molécula e não é conotado nem inclui uma limitação de processo ou fonte numa primeira molécula que é derivada de uma segunda molécula. Por exemplo, no caso de um domínio de sinalização intracelular que é derivado de uma molécula CD3zeta, o domínio de sinalização intracelular retém estrutura suficiente de CD3zeta de modo que tenham a função requerida, a saber, a capacidade para gerar um sinal sob as condições apropriadas. Não é conotado nem inclui uma limitação a um processo particular de produção do domínio de sinalização intracelular, por exemplo, não significa que, para proporcionar o domínio de sinalização intracelular, se deva começar com uma sequência CD3zeta e deletar sequência indesejada, ou impor mutações, para chegar ao domínio de sinalização intracelular.
[00205] A frase "doença associada a expressão de BCMA" inclui, mas não se limita a, uma doença associada a uma célula que expressa BCMA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante) ou afecção associada a uma célula que expressa BCMA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante) incluindo, por exemplo, doenças proliferativas tais como um câncer ou malignidade ou uma afecção pré-cancerosa tal como uma mielodisplasia, uma síndrome mielodisplásica ou uma pré-leucemia; ou uma indicação não relacionada com câncer associada a uma célula que expressa BCMA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante). Para evitar dúvidas, uma doença associada a expressão de BCMA pode incluir uma afecção associada a uma célula que presentemente não expressa BCMA, por exemplo, porque a expressão de BCMA foi decrescentemente regulada, por exemplo, devido a tratamento com uma molécula visando BCMA, por exemplo, um inibidor de BCMA descrito aqui, mas que em um momento expressou BCMA. Em um aspecto, um câncer associado a expressão de BCMA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante) é um câncer hematológico. Em um aspecto, o câncer hematológico é uma leucemia ou um linfoma. Em um aspecto, um câncer associado a expressão de BCMA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante) é uma malignidade de células B plasmáticas diferenciadas. Em um aspecto, um câncer associado a expressão de BCMA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante) inclui cânceres e malignidades incluindo, mas não se limitando a, por exemplo, uma ou mais leucemias agudas incluindo, mas não se limitando a, por exemplo, Leucemia Linfoide aguda de células B ("BALL"), Leucemia Linfoide aguda de células T ("TALL"), leucemia linfoide aguda (ALL); uma ou mais leucemias crônicas incluindo, mas não se limitando a, por exemplo, leucemia mielógena crônica (CML), Leucemia Linfoide Crônica (CLL). Cânceres ou afecções hematológicas adicionais associados a expressão de BMCA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante) compreendem, mas não se limitam a, por exemplo, leucemia pró- linfocítica de células B, neoplasma blástico de células dendríticas plasmacitoides, linfoma de Burkitt, linfoma difuso de grandes células B, Linfoma folicular, Leucemia de células pilosas, linfoma folicular de pequenas células ou grandes células, afecções linfoproliferativas malignas, linfoma MALT, linfoma de células do manto, Linfoma da zona marginal, mieloma múltiplo, mielodisplasia e síndrome mielodisplástica, linfoma não de Hodgkin, linfoma plasmablástico, neoplasma de células dendríticas plasmacitoides, macroglobulinemia de Waldenstrom, e "pré- leucemia" que são um conjunto diversificado de afecções hematológicas unidas pela produção ineficaz (ou displasia) de células sanguíneas mieloides, e similares.
Em algumas modalidades, o câncer é mieloma múltiplo, linfoma de Hodgkin, linfoma não de Hodgkin ou glioblastoma.
Em modalidades, uma doença associada a expressão de BCMA inclui um distúrbio proliferativo de células plasmáticas, por exemplo, mieloma assintomático (mieloma múltiplo assintomático ou mieloma indolente), gamapatia monoclonal de importância indeterminada (MGUS), macroglobulinemia de Waldestrom, plasmacitomas (por exemplo, discrasia de células plasmáticas, mieloma solitário, plasmacitoma solitário, plasmacitoma extramedular, e plasmacitoma múltiplo),
amiloidose de cadeia leve amiloide sistêmica, e síndrome de POEMS (também conhecido como síndrome de Crow-Fukase, doença de Takatsuki, e síndrome de PEP). Outras doenças associadas a expressão de BCMA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante) incluem, mas não se limitam a, por exemplo, cânceres atípicos e/ou não clássicos, malignidades, afecções pré-cancerosas ou doenças proliferativas associadas a expressão de BCMA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante), por exemplo, um câncer descrito aqui, por exemplo, um câncer da próstata (por exemplo, câncer da próstata resistente a castração ou resistente a terapia, ou câncer da próstata metastático), câncer pancreático, ou câncer do pulmão.
[00206] Afecções não relacionadas com câncer que estão associadas a BCMA (por exemplo, BCMA de tipo selvagem ou mutante) incluem infecções virais; por exemplo, HIV, infecções fúngicas, por exemplo, C. neoformans; doença autoimune; por exemplo, artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistêmico (SLE ou lúpus), pênfigo vulgar, e síndrome de Sjogren; doença inflamatória do intestino, colite ulcerativa; imunidade aloespecífica relacionada com transplante distúrbios relacionados com imunidade de mucosas; e respostas imunes indesejadas a agentes biológicos (por exemplo, Fator VIII) onde a imunidade humoral é importante. Em modalidades, uma indicação não relacionada com câncer associada a expressão de BCMA inclui, mas não se limita a, por exemplo, doença autoimune (por exemplo, lúpus), distúrbios inflamatórios (alergia e asma) e transplantação. Em algumas modalidades, a célula expressando um antígeno tumoral expressa, ou em qualquer momento expressou, mRNA codificando o antígeno tumoral. Em uma modalidade, a célula expressando um antígeno tumoral produz a proteína do antígeno tumoral (por exemplo, de tipo selvagem ou mutante), e a proteína do antígeno tumoral pode estar presente em níveis normais ou níveis reduzidos. Em uma modalidade, a células que expressa um antígeno tumoral produziu níveis detectáveis de uma proteína do antígeno tumoral em um momento e subsequentemente produziram substancialmente nenhuma proteína do antígeno tumoral detectável.
[00207] O termo "modificações conservativas de sequências" se refere a modificações de aminoácidos que não afetam nem alteram significativamente as características de ligação do anticorpo ou fragmento de anticorpo contendo a sequência de aminoácidos. Tais modificações conservativas incluem substituições, adições e deleções de aminoácidos. Modificações podem ser introduzidas em um anticorpo ou fragmento de anticorpo da invenção por técnicas comuns conhecidas na técnica, tais como mutagênese dirigida a sítios e mutagênese mediada por PCR. Substituições conservativas são tais que um resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido com uma cadeia lateral similar. As famílias de resíduos de aminoácido que têm cadeias laterais similares foram definidas na técnica. Estas famílias incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares sem carga (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína, triptofano), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Assim, um ou mais resíduos de aminoácidos em um CAR da invenção podem ser substituídos por outros resíduos de aminoácidos da mesma família de cadeias laterais e o CAR alterado pode ser testado usando os ensaios funcionais descritos aqui.
[00208] O termo "estimulação", refere-se a uma resposta primária induzida pela ligação de uma molécula estimulante (por exemplo, um complexo TCR/CD3) com o seu ligante cognato, mediando assim um evento de transdução de sinal, como, porém sem limitação, transdução de sinal através do complexo TCR/CD3. A estimulação pode mediar expressão alterada de certas moléculas, tal como regulação para baixo de TGF-β e/ou reorganização de estruturas do citoesqueleto e similares.
[00209] O termo "molécula estimuladora" refere-se a uma molécula expressa por uma célula T que proporciona a(s) sequência(s) de sinalização citoplasmática(s) que regula(m) a ativação primária do complexo de TCR de maneira estimuladora para pelo menos algum aspecto da via de sinalização de células T. Em algumas modalidades, o domínio contendo ITAM dentro do CAR recapitula a sinalização do TCR primário independentemente de complexos de TCR endógenos. Em um aspecto, o sinal primário é iniciado, por exemplo, por ligação de um complexo TCR/CD3 a uma molécula MHC carregada com peptídeo, e que conduz a mediação de uma resposta de células T, incluindo, mas não se limitando a, proliferação, ativação, diferenciação e similares. Uma sequência de sinalização citoplasmática primária (também referida como "domínio de sinalização primário") que atua de um modo estimulador pode conter um motivo de sinalização que é conhecido como motivo de ativação baseado em tirosina do imunorreceptor ou ITAM. Exemplos de um ITAM contendo uma sequência de sinalização citoplasmática primária que têm uso particular na invenção incluem, porém sem limitação, os derivados de TCR zeta, FcR gama, FcR beta, CD3 gama, CD3 delta, CD3 épsilon, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (também conhecido como "ICOS"), FcεRI e CD66d, DAP10 e DAP12. Em um CAR específico da invenção, o domínio de sinalização intracelular em qualquer um ou mais CARs da invenção compreende uma sequência de sinalização intracelular, por exemplo, uma sequência de sinalização primária de CD3- zeta. O termo "célula apresentadora de antígeno" ou "APC" se refere a uma célula do sistema imune, tal como uma célula acessória (por exemplo, uma célula B, uma célula dendrítica e similares), que exibe um antígeno estranho complexado com complexos de histocompatibilidade principal (MHCs) na sua superfície. Células T podem reconhecer estes complexos usando seus receptores de células T (TCRs). APCs processam antígenos e apresentam estes a células T.
[00210] Um "domínio de sinalização intracelular", tal como o termo é usado no presente documento, se refere a uma porção intracelular de uma molécula. Nas modalidades, o domínio de sinalização intracelular transduz o sinal da função efetora e direciona a célula a desempenhar uma função especializada. Embora o domínio de sinalização intracelular inteiro possa ser empregado, em muitos casos não é necessário usar toda a cadeia. Tanto quanto uma porção truncada do domínio de sinalização intracelular é usada, tal porção truncada pode ser usada em vez da cadeia intacta desde que proceda à transdução do sinal da função efetora. Assim, o termo domínio de sinalização intracelular inclui qualquer porção truncada do domínio de sinalização intracelular suficiente para proceder à transdução do sinal da função efetora.
[00211] O domínio de sinalização intracelular gera um sinal que promove uma função efetora imune da célula contendo o CAR, por exemplo, uma célula CART. Exemplos da função efetora imune, por exemplo, em uma célula CART, incluem atividade citolítica e atividade auxiliadora, incluindo a secreção de citocinas.
[00212] Em uma modalidade, o domínio de sinalização intracelular pode compreender um domínio de sinalização intracelular primário. Os domínios de sinalização intracelulares primários exemplificativos, incluem aqueles derivados das moléculas responsáveis pelo estímulo primário ou estímulo dependente de antígeno. Em uma modalidade, o domínio de sinalização intracelular pode compreender um domínio intracelular coestimulador. Domínios de sinalização intracelulares coestimuladores exemplificativos incluem os derivados de moléculas responsáveis por sinais coestimuladores ou estimulação independente de antígenos. Por exemplo, no caso de um CART, um domínio de sinalização intracelular primário pode compreender uma sequência citoplasmática de um receptor de células T, e um domínio de sinalização intracelular coestimulador pode compreender sequência citoplasmática de molécula correceptora ou coestimuladora.
[00213] Um domínio de sinalização intracelular primário pode compreender um motivo de sinalização que é conhecido como motivo de ativação baseado em tirosina do imunorreceptor ou ITAM. Exemplos de ITAMs contendo sequências de sinalização citoplasmáticas primárias incluem, mas não se limitam a, os derivados de CD3 zeta, FcR gama, FcR beta, CD3 gama, CD3 delta, CD3 épsilon, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (também conhecido como "ICOS"), FcεRI, CD66d, DAP10 e DAP12.
[00214] O termo "zeta" ou alternativamente "cadeia zeta", "CD3-zeta" ou "TCR-zeta" refere-se a CD247. O número de acesso Swiss-Prot P20963 fornece sequências de aminoácidos CD3 zeta humanas exemplificativas. Um "domínio estimulador zeta "ou, alternativamente, um" domínio estimulador CD3-zeta "ou um" domínio estimulador TCR- zeta "refere-se a um domínio estimulador do CD3-zeta ou uma variante do mesmo (por exemplo, uma molécula que tem mutações, por exemplo, mutações pontuais, fragmentos, inserções ou deleções). Em uma modalidade, o domínio citoplasmático de zeta compreende resíduos 52 a 164 de nº de acesso no GenBank BAG36664.1 ou uma variante do mesmo (por exemplo, uma molécula que tem mutações, por exemplo, mutações pontuais, fragmentos, inserções ou deleções). Em uma modalidade, o "domínio estimulador de zeta" ou um "domínio estimulador de CD3-zeta" é a sequência proporcionada como SEQ ID Nº: 1027 ou 1030 ou uma variante do mesmo (por exemplo, uma molécula que tem mutações, por exemplo, mutações pontuais, fragmentos, inserções ou deleções).
[00215] O termo "molécula coestimuladora" se refere ao parceiro de ligação cognato em uma célula T que se liga especificamente a um ligante coestimulador, desse modo mediando uma resposta coestimuladora pela célula T, tal como, mas não se limitando a, proliferação. Moléculas coestimuladoras são moléculas da superfície celular diferentes de receptores de antígenos ou seus ligantes que são necessárias para uma resposta imunológica eficiente. As moléculas coestimuladoras incluem, porém sem limitação, uma molécula MHC de classe I, proteínas do receptor de TNF, proteínas do tipo Imunoglobulina, receptores de citocinas, integrinas, moléculas de sinalização da ativação linfocítica (proteínas SLAM), receptores de células NK ativador, BTLA, receptor de ligante Toll, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8alfa, CD8beta, IL2R beta, IL2R gama, IL7R alfa, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2,
TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Táctil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a e um ligante que se liga especificamente a CD83.
[00216] Um domínio de sinalização intracelular coestimulador refere-se a uma porção intracelular de uma molécula coestimuladora.
[00217] O domínio de sinalização intracelular pode compreender a porção intracelular inteira, ou o domínio de sinalização intracelular nativo inteiro, da molécula da qual é derivado, ou um fragmento funcional do mesmo.
[00218] O termo "4-1BB" refere-se a CD137 ou membro da superfamília de receptores de Fator de necrose tumoral 9. O número de acesso Swiss-Prot P20963 fornece sequências de aminoácidos 4-1BB humanas exemplificativas. Um "domínio coestimulador 4-1BB" refere-se a um domínio cosetimulador de 4-1BB ou uma variante do mesmo (por exemplo, uma molécula que tem mutações, por exemplo, mutações pontuais, fragmentos, inserções ou deleções). Em uma modalidade, o "domínio coestimulador 4-1BB" é a sequência fornecida como SEQ ID Nº: 1022 ou uma variante do mesmo (por exemplo, uma molécula que tem mutações, por exemplo, mutações pontuais, fragmentos, inserções ou deleções).
[00219] A "célula imunoefetora", como tal termo é usado no presente documento, se refere a uma célula que está envolvida em uma resposta imunológica, por exemplo, na promoção de uma resposta imunoefetora. Exemplos de células efetoras imunes incluem células T, por exemplo, células T alfa/beta e células T gama/delta, células B, células matadoras naturais (NK), células T matadoras naturais (NKT), mastócitos e fagócitos derivados da linhagem mieloide.
[00220] A "função imunoefetora" ou "resposta imunoefetora", como tal termo é usado no presente documento, se refere à função ou resposta, por exemplo, de uma célula imunoefetora, que intensifica ou promove um ataque imune de uma célula-alvo. Por exemplo, uma função ou resposta efetora imune se refere a uma propriedade de uma célula T ou NK que promove o extermínio ou a inibição do crescimento ou proliferação, de uma célula-alvo. No caso de uma célula T, a estimulação e a coestimulação primárias são exemplos de função ou resposta efetora imune.
[00221] O termo "função efetora" se refere a uma função especializada de uma célula. A função efetora de uma célula T, por exemplo, pode ser atividade citolítica ou atividade auxiliadora incluindo a secreção de citocinas.
[00222] O termo "codificação" refere-se à propriedade inerente de sequências específicas de nucleotídeos em um polinucleotídeo, como um gene, um cDNA ou um mRNA, para servir como moldes para a síntese de outros polímeros e macromoléculas em processos biológicos tendo uma sequência definida de nucleotídeos (por exemplo, rRNA, tRNA e mRNA) ou uma sequência definida de aminoácidos e as propriedades biológicas daí resultantes. Assim, um gene, cDNA ou RNA, codifica uma proteína se a transcrição e tradução do mRNA correspondente a esse gene produz a proteína em uma célula ou em outro sistema biológico. Tanto a fita codificadora, cuja sequência de nucleotídeos é idêntica à sequência de mRNA e é habitualmente fornecida em listagens de sequências, como a fita não codificadora, usada como modelo para a transcrição de um gene ou cDNA, podem ser denominadas como codificando a proteína ou outro produto desse gene ou cDNA.
[00223] A não ser que especificado de outro modo, uma "sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de aminoácidos" inclui todas as sequências de nucleotídeos que são versões degeneradas umas das outras e que codificam a mesma sequência de aminoácidos. O sintagma "sequência de nucleotídeos que codifica uma proteína ou um RNA" também pode incluir íntrons na medida em que a sequência de nucleotídeos que codifica a proteína pode, em algumas versões, conter íntron (ou íntrons).
[00224] Os termos "quantidade eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz" são aqui usados indistintamente, e se relacionam com uma quantidade de um composto, formulação, material ou composição, como aqui descrito, eficaz para alcançar um resultado biológico particular.
[00225] O termo "endógeno" refere-se a qualquer material de ou produzido dentro de um organismo, célula, tecido ou sistema.
[00226] O termo "exógeno" refere-se a qualquer material introduzido de ou produzido fora de um organismo, célula, tecido ou sistema.
[00227] O termo "expressão" refere-se à transcrição e/ou tradução de uma sequência particular de nucleotídeos acionada por um promotor.
[00228] O termo "vetor de transferência" refere-se a uma composição de matéria que compreende um ácido nucleico isolado e que pode ser utilizado para distribuir o ácido nucleico isolado no interior de uma célula. Numerosos vetores são conhecidos na técnica, incluindo, mas não limitados a, polinucleotídeos lineares, polinucleotídeos associados a compostos iônicos ou anfifílicos, plasmídeos e vírus. Assim, o termo "vetor de transferência" inclui um plasmídeo ou um vírus de replicação autônoma. O termo também deve ser entendido como incluindo adicionalmente compostos não plasmídicos e não virais que facilitam a transferência de ácido nucleico para células, tal como, por exemplo, um composto de polilisina, lipossomo e semelhantes. Exemplos de vetores de transferência virais incluem, mas não estão limitados a, vetores adenovirais, vetores de vírus adenoassociados, vetores retrovirais, vetores lentivirais e semelhantes.
[00229] O termo "vetor de expressão" refere-se a um vetor que compreende um polinucleotídeo recombinante que compreende sequências de controle da expressão operativamente ligadas a uma sequência de nucleotídeos a ser expressa. Um vetor de expressão compreende elementos de atuação cis suficientes para expressão; outros elementos para expressão podem ser fornecidos pela célula hospedeira ou em um sistema de expressão in vitro. Vetores de expressão incluem todos os conhecidos na técnica, incluindo cosmídeos, plasmídeos (por exemplo, nus ou contidos em lipossomos) e vírus (por exemplo, lentivírus, retrovírus, adenovírus e vírus adenoassociados) que incorporam o polinucleotídeo recombinante.
[00230] O termo "lentivírus" se refere a um gênero da família Retroviridae. Os lentivírus são únicos entre os retrovírus por serem capazes de infectar células não se dividindo; podendo fornecer uma quantidade significativa de informação genética ao DNA da célula hospedeira, de modo que são um dos métodos mais eficientes de um vetor de transferência genética. HIV, SIV e FIV são todos exemplos de lentivírus.
[00231] O termo "vetor lentiviral" se refere a um vetor derivado de pelo menos uma porção de um genoma de um lentivírus, incluindo especialmente um vetor lentiviral autoinativador como o proporcionado por Milone et al., Mol. Ther. 17(8): 1.453 a 1.464 (2009). Outros exemplos de vetores de lentivírus que podem ser usados na clínica, incluem, mas não se limitam a, por exemplo, a tecnologia de transferência genética LENTIVECTOR® da Oxford BioMedica, o sistema de vetores LENTIMAX™ da Lentigen e similares. Tipos não clínicos de vetores lentivirais também estão disponíveis e serão conhecidos do perito na técnica.
[00232] O termo "homólogo" ou "identidade" se relaciona com a identidade de sequências de subunidades entre duas moléculas poliméricas, por exemplo, entre duas moléculas de ácido nucleico, tais como duas moléculas de DNA ou duas moléculas de RNA, ou entre duas moléculas polipeptídicas. Quando uma posição de subunidade em ambas as moléculas é ocupada pela mesma subunidade monomérica; por exemplo, quando uma posição em cada uma de duas moléculas de DNA é ocupada por adenina, então são homólogas ou idênticas nessa posição. A homologia entre duas sequências é uma função direta do número de posições correspondentes ou homólogas; por exemplo, se metade (por exemplo, cinco posições em um polímero com dez subunidades de comprimento) das posições em duas sequências forem homólogas, as duas sequências são 50% homólogas; se 90% das posições (por exemplo, 9 de 10) forem correspondentes ou homólogas, as duas sequências são 90% homólogas.
[00233] Formas "humanizadas" de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) são imunoglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulinas ou seus fragmentos (tais como Fv, Fab, Fab', F(ab')2 ou outras subsequências de ligação a antígenos de anticorpos) que contêm uma sequência mínima derivada de imunoglobulina não humana. Na sua maior parte, anticorpos humanizados e fragmentos de anticorpos dos mesmos são imunoglobulinas humanas (anticorpo receptor ou fragmento de anticorpo) em que resíduos de uma região determinante de complementaridade (CDR) do receptor são substituídos por resíduos de uma CDR de uma espécie não humana (anticorpo doador), tal como camundongo, rato ou coelho tendo a especificidade, afinidade e capacidade desejadas. Em alguns casos, resíduos de framework (FR) de Fv da imunoglobulina humana são substituídos por resíduos não humanos correspondentes. Adicionalmente, um anticorpo/fragmento de anticorpo humanizado pode compreender resíduos que não se encontram no anticorpo recebedor nem nas sequências de framework ou CDR importadas. Estas modificações podem adicionalmente refinar e otimizar o desempenho de um anticorpo ou fragmento de anticorpo. Em geral, o anticorpo humanizado ou seu fragmento de anticorpo compreenderá substancialmente todos de pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, em que a totalidade ou substancialmente todas as regiões CDR correspondem às de uma imunoglobulina não humana e a totalidade ou uma porção significativa das regiões FR são as de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo ou fragmento de anticorpo humanizado também pode compreender pelo menos uma porção de uma região constante (Fc) de imunoglobulina, tipicamente a de uma imunoglobulina humana. Para mais detalhes, consultar Jones et al., Nature, 321: 522 a 525, 1986; Reichmann et al., Nature, 332: 323 a 329, 1988; Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593 a 596, 1992.
[00234] "Totalmente humana" se refere a uma imunoglobulina, tal como um anticorpo ou fragmento de anticorpo, na qual toda a molécula é de origem humana ou consiste em uma sequência de aminoácidos idêntica a uma forma humana do anticorpo ou imunoglobulina.
[00235] O termo "isolado" significa alterado ou removido do estado natural. Por exemplo, um ácido nucléico ou um peptídeo naturalmente presente em um animal vivo não é "isolado", mas o mesmo ácido nucléico ou peptídeo parcialmente ou completamente separado dos materiais coexistentes de seu estado natural é "isolado". Um ácido nucleico ou proteína isolados podem existir em forma substancialmente purificada, ou podem existir em um ambiente não nativo tal como, por exemplo, uma célula hospedeira.
[00236] No contexto da presente invenção, as seguintes abreviaturas para as bases de ácidos nucleicos de ocorrência comum são usadas. "A" se refere à adenosina, "C" se refere à citosina, "G" se refere à guanosina, "T" se refere à timidina e "U" se refere à uridina.
[00237] O termo "operacionalmente ligado" ou "controle de transcrição" refere-se à ligação funcional entre uma sequência reguladora e uma sequência de ácido nucleico heteróloga resultando na expressão da última. Por exemplo, uma primeira sequência de ácido nucleico está operacionalmente ligada a uma segunda sequência de ácido nucleico quando a primeira sequência de ácido nucleico é colocada em uma relação funcional com a segunda sequência de ácido nucleico. Por exemplo, um promotor está operacionalmente ligado a uma sequência de codificação se o promotor afetar a transcrição ou expressão da sequência de codificação. Sequências de DNA ligadas operativamente podem ser contíguas entre si e, por exemplo, quando for necessário unir duas regiões codificadoras de proteínas, estão no mesmo quadro de leitura.
[00238] O termo administração "parentérica" de uma composição imunogênica inclui, por exemplo, técnicas de injeção subcutânea (s.c.), intravenosa (i.v.), intramuscular (i.m.) ou intraesterno, intratumoral ou de infusão.
[00239] O termo "ácido nucleico" ou "polinucleotídeo" refere-se a ácido desoxirribonucleico (DNA) ou ácido ribonucleico (RNA) e seus polímeros em forma de fita simples ou dupla. Salvo quando especificamente limitado, o termo abrange ácidos nucleicos que contêm análogos conhecidos de nucleotídeos naturais que têm propriedades de ligação semelhantes às do ácido nucleico de referência e são metabolizados de maneira semelhante em nucleotídeos de ocorrência natural. A menos que indicado de outro modo, uma sequência de ácido nucleico particular também abrange implicitamente suas variantes conservativamente modificadas (por exemplo, substituições de códons degenerados, por exemplo, substituições conservativas), alelos, ortólogos, SNP e sequências complementares, assim como a sequência indicada explicitamente. Especificamente, podem ser obtidas substituições de códons degenerados, por exemplo, substituições conservativas gerando sequências em que a terceira posição de um ou mais (ou todos) códons selecionados é substituída por resíduos de bases mistas e/ou desóxi- inosina (Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985); e Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)).
[00240] Os termos "peptídeo", "polipeptídeo" e "proteína" são utilizados de forma intercambiável e referem-se a um composto constituído por resíduos de aminoácidos ligados covalentemente por ligações peptídicas. Uma proteína ou peptídeo deve conter, pelo menos, dois aminoácidos, e nenhuma limitação é colocada no número máximo de aminoácidos que uma sequência de proteína ou peptídeo pode compreender. Polipeptídeos incluem qualquer peptídeo ou proteína que compreende dois ou mais aminoácidos ligados uns aos outros por ligações peptídicas. Conforme usado no presente documento, o termo se refere a cadeias curtas, que também são vulgarmente referidas na técnica como peptídeos, oligopeptídeos e oligômeros, por exemplo, e com cadeias mais longas, que geralmente são denominadas na técnica como proteínas, das quais há muitos tipos. "Polipeptídeos" incluem, por exemplo, fragmentos biologicamente ativos, polipeptídeos substancialmente homólogos, oligopeptídeos, homodímeros, heterodímeros, variantes de polipeptídeos, polipeptídeos modificados, derivados, análogos, proteínas de fusão, entre outros. Um polipeptídeo inclui um peptídeo natural, um peptídeo recombinante ou uma combinação destes.
[00241] O termo "promotor" se refere a uma sequência de DNA reconhecida pela maquinaria sintética da célula ou uma maquinaria sintética introduzida, requerida para iniciar a transcrição específica de uma sequência polinucleotídica.
[00242] O termo "sequência promotora/reguladora" refere-se a uma sequência de ácidos nucleicos que é necessária para expressão de um produto genético operativamente ligado à sequência promotora/reguladora. Em alguns casos, essa sequência pode ser a sequência principal do promotor e, em outros casos, essa sequência pode também incluir uma sequência intensificadora e outros elementos reguladores que são necessários para a expressão do produto genético. A sequência promotora/reguladora pode, por exemplo, ser aquela que expressa o produto genético de um modo específico para tecidos.
[00243] O termo promotor "constitutivo" refere-se a uma sequência de nucleotídeos que, quando operativamente ligada a um polinucleotídeo que codifica ou especifica um produto genético, faz com que o produto genético seja produzido em uma célula na maioria ou em todas as condições fisiológicas da célula.
[00244] O termo promotor "induzível" refere-se a uma sequência de nucleotídeos que, quando operativamente ligada a um polinucleotídeo que codifica ou especifica um produto genético, faz com que o produto genético seja produzido em uma célula substancialmente apenas quando um indutor que corresponde ao promotor está presente na célula.
[00245] O termo promotor "tecido específico" refere-se a uma sequência nucleotídica que, quando ligada de maneira funcional a um polinucleotídeo codifica ou especifica um gene, faz com que o produto do gene seja produzido numa célula substancialmente apenas se a célula for uma célula do tipo de tecido correspondente ao promotor.
[00246] Os termos "antígeno associado a câncer" ou "antígeno tumoral" se relacionam indistintamente com uma molécula (tipicamente uma proteína, carboidrato ou lipídeo) que é expressa na superfície de uma célula cancerígena, quer inteiramente quer como um fragmento (por exemplo, MHC/peptídeo), e que é útil para o direcionamento preferencial de um agente farmacológico para a célula cancerígena. Em algumas modalidades, um antígeno tumoral é um marcador expresso tanto por células normais como por células cancerígenas, por exemplo, um marcador de linhagem, por exemplo, CD19 em células B. Em algumas modalidades, um antígeno tumoral é uma molécula de superfície celular que está sobre-expressa em uma célula cancerígena em comparação com uma célula normal, por exemplo, sobre-expressão de uma vez, sobre-expressão de duas vezes, sobre-expressão de 3 vezes ou mais em comparação com uma célula normal. Em algumas modalidades, um antígeno de tumor é uma molécula de superfície celular que é inadequadamente sintetizada na célula de câncer, por exemplo, uma molécula que contém deleções, adições ou mutações em comparação com a molécula expressada em uma célula normal. Em algumas modalidades, um antígeno tumoral será expresso exclusivamente na superfície celular de uma célula cancerígena, inteiramente ou como um fragmento (por exemplo, MHC/peptídeo), e não sintetizado ou expresso na superfície de uma célula normal. Em algumas modalidades, os CARs da presente invenção incluem CARs compreendendo um domínio de ligação a antígenos (por exemplo, anticorpo ou fragmento de anticorpo) que se liga a um peptídeo apresentado em MHC. Normalmente, peptídeos derivados de proteínas endógenas enchem as bolsas de moléculas de complexo de histocompatibilidade principal (MHC) de classe I e são reconhecidos por receptores de células T (TCRs) em linfócitos T CD8+. Os complexos de MHC de classe I são constitutivamente expressos por todas as células nucleadas. No câncer, complexos de peptídeo/MHC específicos para vírus e/ou específicos para tumor representam uma classe única de alvos de superfície celular para imunoterapia. Foram descritos anticorpos tipo TCR visando peptídeos derivados de antígenos virais ou tumorais no contexto de antígeno de leucócitos humanos (HLA)-A1 ou HLA-A2 (ver, por exemplo, Sastry et al., J Virol. 2011 85(5):1935 a 1942; Sergeeva et al., Blood, 2011 117(16):4.262 a 4.272; Verma et al., J Immunol 2010 184(4):2.156 a
2.165; Willemsen et al., Gene Ther 2001 8(21) :1.601 a 1.608 ; Dao et al., Sci Transl Med 2013 5(176) :176ra33 ; Tassev et al., Cancer Gene Ther 2012 19(2):84 a 100). Por exemplo, o anticorpo tipo TCR pode ser identificado a partir da triagem de uma biblioteca, tal como uma biblioteca com exibição de fagos de scFv humano.
[00247] O termo "antígeno suportando um tumor" ou "antígeno suportando um câncer" se relaciona indistintamente com uma molécula (tipicamente uma proteína, carbo-hidrato ou lipídeo) que é expressa na superfície de uma célula que é, ela própria, não cancerígena mas que suporta as células cancerígenas, por exemplo, por promoção do seu crescimento ou sobrevivência, por exemplo, resistência a células imunes. Células exemplificativas deste tipo incluem células estromais e células supressoras derivadas de mieloide (MDSCs). O próprio antígeno suportando um tumor não necessita de desempenhar um papel no suporte das células tumorais desde que o antígeno esteja presente em uma célula que suporta células cancerígenas.
[00248] O termo "ligante polipeptídico flexível" ou "ligante", conforme usado no contexto de um scFv, se refere a um ligante peptídico que consiste em aminoácidos tais como resíduos glicina e/ou serina usados isoladamente ou em combinação, para ligar em conjunto regiões de cadeia pesada variável e leve variável. Em uma modalidade, o ligante polipeptídico flexível é um ligante Gly/Ser e compreende a sequência de aminoácidos (Gly-Gly-Gly-Ser)n (SEQ ID Nº: 1038), em que n é um número inteiro positivo igual ou maior que 1. Por exemplo, n=1, n=2, n=3. n=4, n=5 e n=6, n=7, n=8, n=9 e n=10. Em uma modalidade, os ligantes polipeptídicos flexíveis incluem, porém sem limitação, (Gly4 Ser)4 (SEQ ID Nº: 1039) ou (Gly4 Ser)3 (SEQ ID Nº: 1040). Em outra modalidade, os ligantes incluem múltiplas repetições de (Gly2Ser), (GlySer) ou (Gly3Ser) (SEQ ID Nº: 1041). Também estão incluídos no escopo da invenção ligantes descritos em WO2012/138475 incorporado aqui por referência.
[00249] Conforme usado no presente documento, um cap 5’ (também denominado cap de RNA, cap 7-metilguanosina de RNA ou cap m7G de RNA) é um nucleotídeo de guanina modificado que foi adicionado à "frente" ou na extremidade 5' de um RNA mensageiro eucariótico logo após o início da transcrição. O cap 5' consiste em um grupo terminal que está ligado ao primeiro nucleotídeo transcrito. Sua presença é crucial para o reconhecimento pelo ribossomo e proteção de RNases. A adição de cap está acoplada à transcrição e ocorre de modo cotranscricional, de tal forma que cada um influencia o outro. Logo após o início da transcrição, a extremidade 5’ do mRNA sendo sintetizado é ligada por um complexo sintetizador de cap associado a RNA polimerase. Este complexo enzimático catalisa as reações químicas que são necessárias para o capping de mRNA. A síntese prossegue como uma reação bioquímica de múltiplas etapas. A fração de capping pode ser modificada para modular a funcionalidade de mRNA, tal como a sua estabilidade ou a eficiência da tradução.
[00250] Como usado aqui, "RNA transcrito in vitro" se relaciona com RNA, preferencialmente mRNA, que foi sintetizado in vitro. Geralmente, o RNA transcrito in vitro é gerado a partir de um vetor de transcrição in vitro. O vetor de transcrição in vitro compreende um molde que é utilizado para gerar o RNA transcrito in vitro.
[00251] Conforme usado no presente documento, uma "poli(A)" é uma série de adenosinas ligadas por poliadenilação ao mRNA. Na modalidade preferencial de um construto para expressão transiente, a poliA tem entre 50 e 5000 (SEQ ID Nº: 1043), de preferência, maior que 64, com mais preferência, maior que 100, com a máxima preferência, maior que 300 ou 400 (SEQ ID Nº: 2024). As sequências poli(A) podem ser química ou enzimaticamente modificadas para modular a funcionalidade de mRNA como a localização, estabilidade ou eficiência de tradução.
[00252] Como usado no presente documento, "poliadenilação" refere- se à ligação covalente de uma fração poliadenilila ou a sua variante modificada, a uma molécula de RNA mensageiro. Em organismos eucarióticos, a maioria das moléculas de RNA mensageiro (mRNA) são poliadeniladas na extremidade 3'. A cauda 3' poli(A) é uma longa sequência de nucleotídeos adenina (muitas vezes várias centenas) adicionada ao pré-mRNA através da ação de uma enzima, poliadenilato polimerase. Em eucariotas superiores, a cauda poli(A) é adicionada a transcritos que contêm uma sequência específica, o sinal de poliadenilação. A cauda poli(A) e a proteína ligada a ela ajudam a proteger o mRNA da degradação por exonucleases. A poliadenilação também é importante para a terminação da transcrição, exportação do mRNA do núcleo e tradução. A poliadenilação ocorre no núcleo imediatamente após a transcrição do DNA em RNA, mas adicionalmente também pode ocorrer mais tarde no citoplasma. Após a terminação da transcrição, a cadeia de mRNA é clivada pela ação de um complexo de endonuclease associado a RNA polimerase. O sítio de clivagem é geralmente caracterizado pela presença da sequência de base AAUAAA perto do sítio de clivagem. Após a clivagem do mRNA, os resíduos de adenosina são adicionados à extremidade 3’ livre no sítio de clivagem.
[00253] Conforme usado no presente documento, "transiente" refere- se a uma expressão de um transgene não integrado durante um período de horas, dias ou semanas, em que o período de tempo da expressão é menor do que o período de tempo para a expressão do gene se integrado no genoma ou contido dentro de um replicon de plasmídeo estável na célula hospedeira.
[00254] Como usado aqui, os termos "tratar", "tratamento" e "tratando" referem-se à redução ou melhoria da progressão, gravidade e/ou duração de uma doença proliferativa, ou a melhoria de um ou mais sintomas (preferencialmente, um ou mais sintomas discerníveis) de uma doença proliferativa resultante da administração de uma ou mais terapias (por exemplo, um ou mais agentes terapêuticos, tal como um CAR da invenção). Em modalidades específicas, os termos "tratar", "tratamento" e "tratando" referem-se à melhoria de pelo menos um parâmetro físico mensurável de um distúrbio proliferativo, tal como o crescimento de um tumor, não necessariamente discernível pelo paciente. Em outras modalidades, os termos "tratar", "tratamento" e "tratando" se referem à inibição da progressão de uma disfunção proliferativa, seja fisicamente por, por exemplo, estabilização de um sintoma discernível, fisiologicamente por, por exemplo, estabilização de um parâmetro físico ou ambos. Em outras modalidades, os termos "tratar", "tratamento" e "que trata" referem-se à redução ou estabilização do tamanho tumoral ou contagem de células cancerosas.
[00255] O termo "trajetória de transdução de sinal" refere-se à relação bioquímica entre uma variedade de moléculas de transdução de sinal que exercem um papel na transmissão de um sinal de uma porção de uma célula para outra porção de uma célula. A expressão "receptor da superfície celular" inclui moléculas e complexos de moléculas capazes de receber um sinal e transmitir o sinal através da membrana de uma célula.
[00256] O termo "indivíduo" pretende incluir organismos vivos nos quais uma resposta imune pode ser desencadeada (por exemplo, mamíferos, humano).
[00257] O termo uma célula "substancialmente purificada" se refere a uma célula que está essencialmente desprovida de outros tipos de células. Uma célula substancialmente purificada também se refere a uma célula que foi separada de outros tipos de células com os quais está normalmente associada no seu estado de ocorrência natural. Em alguns casos, uma população de células substancialmente purificadas refere-se a uma população homogênea de células. Em outros casos, este termo refere-se simplesmente a células que foram separadas das células com as quais estão naturalmente associadas em seu estado natural. Em alguns aspectos, as células são cultivadas in vitro. Em outros aspectos, as células não são cultivadas in vitro.
[00258] O termo "terapêutico" como usado aqui significa um tratamento. Um efeito terapêutico é obtido pela redução, supressão, remissão ou erradicação de um estado de doença.
[00259] O termo "profilaxia" como aqui utilizado significa a prevenção ou tratamento protetor para uma doença ou estado de doença.
[00260] No contexto da presente invenção, "antígeno tumoral" ou "antígeno de distúrbio hiperproliferativo" ou "antígeno associado a um distúrbio hiperproliferativo" se refere a antígenos que são comuns a distúrbios hiperproliferativos específicos. Em determinados aspectos, os antígenos de distúrbio hiperproliferativo da presente invenção são derivados de, cânceres incluindo, porém sem limitação, melanoma primário ou metastático, timoma, linfoma, sarcoma, câncer de pulmão, câncer de fígado, linfoma não Hodgkin, linfoma de Hodgkin, leucemias, câncer uterino, câncer cervical, câncer de bexiga, câncer de rim e adenocarcinomas, como câncer de mama, câncer de próstata (por exemplo, câncer de próstata resistente à castração ou resistente à terapia ou câncer de próstata metastático), câncer de ovário, câncer de pâncreas e similares, ou um distúrbio proliferativo de célula plasmática, por exemplo, mieloma assintomático (mieloma múltiplo latente ou mieloma indolente), gamopatia monoclonal de significado indeterminado (MGUS), macroglobulinemia de Waldenstrom, plasmacitomas (por exemplo, discrasia de células plasmáticas, mieloma solitário, plasmocitoma solitário, plasmocitoma extramedular e plasmocitoma múltiplo), amiloidose amiloide sistêmica de cadeia leve e síndrome POEMS (também conhecida como síndrome de Crow-Fukase, doença de Takatsuki e síndrome de PEP).
[00261] O termo "transfectado", "transformado" ou "transduzido" se refere a um processo pelo qual ácido nucleico exógeno é transferido ou introduzido na célula hospedeira. Uma célula "transfectada", "transformada" ou "transduzida" é tal que foi transfectada, transformada ou transduzida com ácido nucleico exógeno. A célula inclui a célula principal em questão e sua descendência.
[00262] O termo "se liga especificamente a" se relaciona com um anticorpo ou um ligante, que reconhece e se liga a uma proteína de parceiro de ligação cognato (por exemplo, uma molécula estimuladora e/ou coestimuladora presente em uma célula T) presente em uma amostra, porém cujo anticorpo ou ligante não reconhece nem se liga substancialmente a outras moléculas da amostra.
[00263] "Receptor de antígeno quimérico regulável (RCAR)", como usado aqui, se refere a um conjunto de polipeptídeos, tipicamente dois nas modalidades mais simples, que, quando em uma célula efetora imune, dota a célula de especificidade para uma célula-alvo, tipicamente uma célula cancerígena, e de geração de sinal intracelular. Em algumas modalidades, um RCAR compreende pelo menos um domínio de ligação a antígeno extracelular, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização citoplasmático (também referido aqui como "um domínio de sinalização intracelular") compreendendo um domínio de sinalização funcional derivado de uma molécula estimuladora e/ou molécula coestimuladora como definido aqui no contexto de uma molécula CAR. Em algumas modalidades, o conjunto de polipeptídeos no RCAR não são contíguos entre si, por exemplo, estão em diferentes cadeias polipeptídicas. Em algumas modalidades, o RCAR inclui um interruptor de dimerização que, na presença de uma molécula de dimerização, pode acoplar os polipeptídeos entre si, por exemplo, pode acoplar um domínio de ligação a antígenos a um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o RCAR é expresso em uma célula (por exemplo, uma célula efetora imune) como descrita neste documento, por exemplo, uma célula expressando RCAR (também aqui referida como "célula RCARX"). Em uma modalidade, a célula RCARX é uma célula T, e é referida como uma célula RCART. Em uma modalidade, a célula RCARX é uma célula NK e é referida como uma célula RCARN. O RCAR pode proporcionar a célula expressando RCAR com especificidade para uma célula alvo, tipicamente uma célula cancerígena, e com geração ou proliferação de sinal intracelular regulável, o que pode otimizar uma propriedade efetora imune da célula expressando RCAR. Em modalidades, uma célula RCAR se baseia, pelo menos em parte, em um domínio de ligação ao antígeno para proporcionar especificidade para uma célula-alvo que compreende o antígeno ligado pelo domínio de ligação ao antígeno.
[00264] "Âncora de membrana" ou "domínio de fixação de membrana", tal como o termo é usado aqui, se refere a um polipeptídeo ou fração, por exemplo, um grupo miristoíla, suficiente para ancorar um domínio extracelular ou intracelular à membrana plasmática.
[00265] "Domínio de interruptor", tal como o termo é usado aqui, por exemplo, quando se refere a um RCAR, se relaciona com uma entidade, tipicamente uma entidade à base de um polipeptídeo, que, na presença de uma molécula de dimerização, se associa a outro domínio de interruptor. A associação resulta em um acoplamento funcional de uma primeira entidade ligada, por exemplo, fundida, a um primeiro domínio de interruptor, e uma segunda entidade ligada, por exemplo, fundida, a um segundo domínio de interruptor. Um primeiro e segundo domínios de interruptor são coletivamente referidos como interruptor de dimerização. Em modalidades, o primeiro e segundo domínios de interruptor são iguais entre si, por exemplo, são polipeptídeos tendo a mesma sequência primária de aminoácidos, e são referidos coletivamente como interruptor de homodimerização. Em modalidades, o primeiro e segundo domínios de interruptor são diferentes entre si, por exemplo, são polipeptídeos tendo diferentes sequências primárias de aminoácidos, e são referidos coletivamente como interruptor de heterodimerização. Em modalidades, o interruptor é intracelular. Em modalidades, o interruptor é extracelular. Em modalidades, o domínio de interruptor é uma entidade baseada em um polipeptídeo, por exemplo, baseada em FKBP ou FRB, e a molécula de dimerização é uma molécula pequena, por exemplo, um rapálogo. Em modalidades, o domínio de interruptor é uma entidade baseada em um polipeptídeo, por exemplo, um scFv que se liga a um peptídeo myc, e a molécula de dimerização é um polipeptídeo, um seu fragmento, ou um multímero de um polipeptídeo, por exemplo, um ligante de myc ou multímeros de um ligante de myc que se ligam a um ou mais scFvs de myc. Em modalidades, o domínio de interruptor é uma entidade baseada em um polipeptídeo, por exemplo, receptor de myc, e a molécula de dimerização é um anticorpo ou seus fragmentos, por exemplo, anticorpo para myc.
[00266] "Molécula de dimerização", tal como o termo é usado aqui, por exemplo, quando se referindo a um RCAR, se refere a uma molécula que promove a associação de um primeiro domínio de interruptor a um segundo domínio de interruptor. Em modalidades, a molécula de dimerização não ocorre naturalmente no indivíduo, ou não ocorre em concentrações que irão originar dimerização significativa. Em modalidades, a molécula de dimerização é uma molécula pequena, por exemplo, rapamicina ou um rapálogo, por exemplo, RAD001.
[00267] O termo "bioequivalente" refere-se a uma quantidade de um agente diferente do composto de referência (por exemplo, RAD001), necessária para produzir um efeito equivalente ao efeito produzido pela dose de referência ou quantidade de referência do composto de referência (por exemplo, RAD001). Em uma modalidade, o efeito é o nível de inibição de mTOR, por exemplo, como medido por inibição de quinase
P70 S6, por exemplo, como avaliado em um ensaio in vivo ou in vitro, por exemplo, como medido por um ensaio aqui descrito, por exemplo, o ensaio de Boulay, ou medição de níveis de S6 fosforilados por transferência de western. Em uma modalidade, o efeito é alteração da proporção de células T PD-1 positivas/PD-1 negativas, como medido por separação celular. Em uma modalidade, uma quantidade ou dose bioequivalente de um inibidor de mTOR é a quantidade ou dose que alcança o mesmo nível de inibição de cinase P70 S6 da dose de referência ou quantidade de referência de um composto de referência. Em uma modalidade, uma quantidade ou dose bioequivalente de um inibidor de mTOR é a quantidade ou dose que alcança o mesmo nível de alteração da proporção de células T PD-1 positivas/PD-1 negativas da dose de referência ou quantidade de referência de um composto de referência.
[00268] O termo "dose baixa intensificadora de imunidade" quando usado em conjunto com um inibidor de mTOR, por exemplo, um mTOR alostérico, por exemplo, RAD001 ou rapamicina, ou um inibidor de mTOR catalítico, refere-se a uma de dose de inibidor de mTOR que inibe parcial, mas não totalmente, a atividade de mTOR, por exemplo, como medida pela inibição de atividade de quinase P70 S6. São aqui discutidos métodos para avaliar a atividade de mTOR, por exemplo, por inibição de cinase P70 S6. A dose é insuficiente para resultar em supressão imunológica completa, mas é suficiente para intensificar a resposta imunológica. Em uma modalidade, a dose baixa intensificadora de imunidade de inibidor de mTOR resulta em uma redução do número de células imunoefetoras PD-1 positivas, por exemplo, células T ou células NK, e/ou um aumento do número de células imunoefetoras PD-1 negativas, por exemplo, células T ou células NK, ou um aumento na razão de células imunoefetoras PD-1 negativas (por exemplo, células T ou células NK)/células imunoefetoras PD-1 positivas (por exemplo, células T ou células NK).
[00269] Em uma modalidade, a dose baixa intensificadora de imunidade de inibidor de mTOR resulta em um aumento do número de células T sem tratamento prévio. Em uma modalidade, a dose baixa intensificadora de imunidade de inibidor de mTOR resulta em um ou mais dos seguintes: um aumento da expressão de um ou mais dos seguintes marcadores: CD62Lelevado, CD127elevado, CD27+ e BCL2, por exemplo, em células T de memória, por exemplo, precursores de células T de memória; uma redução na expressão de KLRG1, por exemplo, em células T de memória, por exemplo, precursores de células T de memória; e um aumento no número de precursores de células T de memória, por exemplo, células com qualquer uma ou uma combinação das seguintes características: CD62Lelevado aumentado, CD127elevado aumentado, CD27+ aumentado, KLRG1 reduzido e BCL2 aumentado; em que qualquer uma das alterações descritas acima ocorre, por exemplo, pelo menos transitoriamente, por exemplo, em comparação com um indivíduo não tratado.
[00270] "Refratário", como aqui usado, se relaciona com uma doença, por exemplo, câncer, que não responde a um tratamento. Em modalidades, um câncer refratário pode ser resistente a um tratamento antes ou no início do tratamento. Em outras modalidades, o câncer refratário pode se tornar resistente durante um tratamento. Um câncer refratário também é designado como câncer resistente.
[00271] "Recidivado" ou uma "recaída" como aqui utilizado refere-se ao reaparecimento de uma doença (por exemplo, câncer) ou aos sinais e sintomas de uma doença, tal como um câncer após um período de melhoria ou responsividade, por exemplo, após tratamento prévio de uma terapia, por exemplo, terapia contra o câncer. Por exemplo, o período de capacidade de resposta pode envolver o nível de células cancerígenas que estão abaixo de um determinado limiar, por exemplo, abaixo de 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, ou 1%. O reaparecimento pode envolver o nível de células cancerígenas elevadas acima de um determinado limiar, por exemplo, acima de 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, ou 1%.
[00272] Em um aspecto, um "respondedor" de uma terapia pode ser um indivíduo que tem resposta completa, resposta parcial muito satisfatória, ou resposta parcial após receber a terapia. Em um aspecto, um "não respondedor" de uma terapia pode ser um indivíduo que tem resposta menor, doença estável, ou doença progressiva após receber a terapia. Em algumas modalidades, o indivíduo tem mieloma múltiplo e a resposta do indivíduo a uma terapia de mieloma múltiplo é determinada com base nos critérios de IMWG 2016, por exemplo, como divulgado em Kumar, et al., Lancet Oncol. 17, e328-346 (2016), incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade, por exemplo, como descrito na Tabela 7.
[00273] Intervalos: ao longo desta divulgação, vários aspectos da invenção podem ser apresentados em um formato de intervalo. Deve ser entendido que a descrição em formato de intervalo é meramente apresentada por motivos de conveniência e brevidade e não deve ser interpretada como uma limitação inflexível do escopo da invenção. Consequentemente, a descrição de uma faixa deve ser considerada como tendo especificamente divulgado todas as subfaixas possíveis assim como valores numéricos individuais nesta faixa. Por exemplo, a descrição de uma faixa, tal como de 1 a 6, deve ser considerada como tendo subfaixas especificamente divulgadas, tal como de 1 a 3, de 1 a 4, de 1 a 5, de 2 a 4, de 2 a 6, de 3 a 6 etc., bem como números individuais dentro dessa faixa, por exemplo, 1, 2, 2,7, 3, 4, 5, 5,3 e 6. Como outro exemplo, uma faixa, tal como 95 a 99% de identidade, inclui algo com 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade e inclui subintervalos como 96 a 99%, 96 a 98%, 96 a 97%, 97 a 99%, 97 a 98% e 98 a 99% de identidade. Isso se aplica independentemente da amplitude do intervalo.
[00274] Um "sistema de edição genética", como o termo é usado aqui, se relaciona com um sistema, por exemplo, uma ou mais moléculas, que dirigem e efetuam uma alteração, por exemplo, uma deleção, de um ou mais ácidos nucleicos no sítio ou próximo de um sítio de DNA genômico visado pelo referido sistema. Sistemas de edição genética são conhecidos na técnica e são descritos de modo mais completo abaixo.
[00275] As definições de grupos funcionais específicos e termos químicos são descritas em mais detalhes abaixo. Os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela Periódica dos Elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75.a Ed., capa interna, e os grupos funcionais específicos são geralmente definidos conforme ali descritos. Além disso, os princípios gerais da química orgânica, assim como porções químicas funcionais específicas e reatividade, são descritos em Thomas Sorrell, Organic Chemistry, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith e March, March's Advanced Organic Chemistry, 5.a Edição, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., Nova Iorque, 1989; e Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3.a Edição, Cambridge University Press, Cambridge, 1987.
[00276] O termo "alquila," como usado no presente documento, refere- se a um hidrocarboneto saturado monovalente de cadeia linear ou ramificada como um grupo linear ou ramificado de 1 a 12, 1 a 10 ou 1 a 6 átomos de carbono, chamada no presente documento de C 1-C12 alquila, C1-C10 alquila e alquila C1-C6, respectivamente. Exemplos de grupos alquila incluem, porém sem limitação, metila, etila, n-propila, isopropila, n- butila, iso-butila, sec-butila, sec-pentila, iso-pentila, terc-butila, n-pentila, neopentila, n-hexila, sec-hexila, e similares.
[00277] Os termos "alquenila" e "alquinila" como usado no presente documento referem-se a grupos alifáticos insaturados análogos em comprimento e possíveis substituições às alquilas descritas acima, porém que contêm pelo menos uma ligação dupla ou ligação tripla, respectivamente. Grupos alquenila exemplificativos incluem, porém sem limitação, -CH=CH2 e -CH2CH=CH2.
[00278] O termo "arila" como usado no presente documento, refere-se a um sistema de anel monocíclico, bicíclico ou policíclico, em que pelo menos um anel é aromático. Os grupos arila representativos incluem sistemas de anéis completamente aromáticos, como fenila (por exemplo, (C6) arila), naftila (por exemplo, (C10) arila), e antracenila (por exemplo, (C14) arila), e sistemas de anéis em que um anel de carbono aromático é fundido com um ou mais anéis de carbono não aromáticos, como indanila, ftalimidila, naftimidila ou tetraidronaftila, e similares.
[00279] O termo "carbociclila" como usado no presente documento, refere-se a um sistema de anel hidrocarboneto monocíclico, ou fundido, espiro-fundido e/ou em ponte ou policíclico contendo 3 a 18 átomos de carbono, em que cada anel é completamente saturado ou contém uma ou mais unidades de insaturação, porém em que nenhum anel é aromático. Os grupos carbociclila representativos incluem grupos cicloalquila (por exemplo, ciclopentila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila e similares), e grupos cicloalquenila (por exemplo, ciclopentenila, cicloexenila, ciclopentadienila e similares).
[00280] O termo "carbonila", como usado no presente documento, refere-se a –C=O.
[00281] O termo "ciano", conforme usado no presente documento refere-se a –CN.
[00282] Os termos "halo" ou "halogênio" como usado no presente documento se referem a fluorado (flúor, −F), clorado (cloro, −Cl), bromado (bromo, −Br), ou iodado (iodo, −I).
[00283] O termo "heteroalquila" como usado no presente documento, refere-se a uma cadeia alquila saturada monovalente linear ou ramificada em que pelo menos um átomo de carbono na cadeia é substituído por um heteroátomo, como O, S, ou N, desde que mediante substituição, a cadeia compreenda pelo menos um átomo de carbono. Em algumas modalidades, um grupo hateroalquila pode compreender, por exemplo, 1 a 12, 1 a 10, ou 1 a 6 átomos de carbono, chamado de no presente documento de C1-C12 hateroalquila, C1-C10 hateroalquila e C1-C6 hateroalquila. Em determinados casos, um grupo hateroalquila compreende 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos independentemente selecionados no lugar de 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono individuais na cadeia de alquila. Grupos heteroalquila representativos incluem –CH2NHC(O)CH3, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2NHCH3, -CH2CH2N(CH3)CH3, e similares.
[00284] O termo "heteroarila" como usado no presente documento refere-se a um sistema de anel monocíclico, bicíclico ou policíclico em que pelo menos um anel é aromático e compreende um heteroátomo; e em que nenhum outro anel é heterociclila (como definido abaixo). Os grupos heteroarila representativos incluem sistemas de anel em que (i)
cada anel compreende um heterátomo e é aromático, por exemplo, imidazolila, oxazolila, tiazolila, triazolila, pirrolila, furanila, tiofenila, pirazolila, piridinila, pirazinila, piridazinila, pirimidinila, indolizinila, purinila, naftiridinila e pteridinila; (ii) cada anel é aromático ou carbociclila, pelo menos um anel aromático compreende um heteroátomo e pelo menos um outro anel é um anel hidrocarboneto ou, por exemplo, indolila, isoindolila, benzotienila, benzofuranila, dibenzofuranila, indazolila, benzimidazolila, benztiazolila, quinolila, isoquinolila, cinnolinila, ftalazinila, quinazolinila, quinoxalinila, carbazolila, acridinila, fenazinila, fenotiazinila, fenoxazinila, pirido[2,3-b]-1,4-oxazin-3(4H)-ona, tiazolo-[4,5-c]-piridinila, 4,5,6,7- tetraidrotieno[2,3-c]piridinila, 5,6-di-hidro-4H-tieno[2,3-c]pirrolila, 4,5,6,7,8- tetraidroquinolinila e 5,6,7,8-tetraidroisoquinolinila; e (iii) cada anel é aromático ou carbociclila, e pelo menos um anel aromático compartilha um heteroátomo de ponte com outro anel aromático, por exemplo, 4H- quinolizinila. Em determinadas modalidades, a heteroarila é um anel monocíclico ou bicíclico, em que cada um dos ditos anéis contém 5 ou 6 átomos no anel em que 1, 2, 3 ou 4 dos ditos átomos no anel são um heteroátomo independentemente selecionado dentre N, O e S.
[00285] O termo "heterociclila" como usado no presente documento refere-se a sistemas de anéis monocíclicos ou fundidos, espiro-fundidos e/ou bicíclico e policíclicos em ponte em que pelo menos um anel é saturado ou parcialmente insaturado (porém, não aromático) e compreende um heteroátomo. Uma heterociclila pode ser ligada a seu grupo pendente em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono que resulta em uma estrutura estável e qualquer um dos átomos no anel pode ser opcionalmente substituído. As heterociclilas representativas incluem sistemas de anéis em que (i) cada anel é não aromático e pelo menos um anel compreende um heteroátomo, por exemplo, tetraidrofuranila,
tetraidrotienila, pirrolidinila, pirrolidonila, piperidinila, pirrolinila, decaidroquinolinila, oxazolidinila, piperazinila, dioxanila, dioxolanila, diazepinila, oxazepinila, tiazepinila, morfolinila e quinuclidinila; (ii) pelo menos um anel é não aromático e compreende um heteroátomo e pelo menos um outro anel é um anel de carbono aromático, por exemplo, 1,2,3,4-tetraidroquinolinila; e (iii) pelo menos um anel é não aromático e compreende um heteroátomo e pelo menos um outro anel é aromático e compreende um heteroátomo, por exemplo, 3,4-di-hidro-1H-pirano[4,3- c]piridinila, e 1,2,3,4-tetraidro-2,6-naftiridinila. Em determinadas modalidades, a heterociclila é um anel monocíclico ou bicíclico, em que cada um dos ditos anéis contém 3 oa 7 átomos no anel em que 1, 2, 3 ou 4 dos ditos átomos no anel são um heteroátomo independentemente selecionado dentre N, O e S.
[00286] Conforme descrito no presente documento, os compostos da invenção podem conter porções "opcionalmente substituídas". Em geral, o termo "substituído", seja precedido ou não pelo termo "opcionalmente", significa que um ou mais hidrogênios da porção designada são substituídos por um substituinte adequado. A menos que seja indicado em contrário, um grupo "opcionalmente substituído" pode ter um substituinte adequado em cada posição substituível do grupo, e quando mais de uma posição em qualquer dada estrutura puder ser substituída por mais de um substituinte selecionado dentre um grupo específico, o substituinte pode ser igual ou diferente em cada posição. Combinações de substituintes previstas sob esta invenção são, de preferência, aquelas que resultam na formação de compostos estáveis ou quimicamente viáveis. O termo "estável", como usado no presente documento, refere-se a compostos que são substancialmente alterados quando submetidos a condições para permitir sua produção, detecção, e, em certas modalidades, sua recuperação, purificação, e uso para um ou mais dos propósitos divulgados no presente documento.
[00287] O termo "oxo", como usado no presente documento, refere-se a =O.
[00288] O termo "tiocarbonila", como usado no presente documento, refere-se a C=S.
[00289] Conforme usado no presente documento, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se àqueles sais que são, dentro do escopo do julgamento médico sólido, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais inferiores sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e similares e são proporcionais a uma relação risco/benefício razoável. Sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, Berge et al. descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhes em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1–19, incorporado no presente documento por referência. Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos desta invenção incluem aqueles derivados de ácidos e bases inorgânicos e orgânicos adequados. Exemplos de sais de adição ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis são sais de um grupo amino formado por ácidos inorgânicos como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico ou por ácidos orgânicos como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico ou usando outros métodos conhecidos na técnica como troca iônica. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, formato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato,
hemissulfato, heptanoato, hexanoato, hidroiodeto, 2-hidróxi- etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3- fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, p-toluenossulfonato, undecanoato, sais de valerato e similares. Sais derivados de bases adequadas incluem metal alcalino, metal alcalino-terroso, amônio e sais N+(C1–4 alquila)4-. Os sais de metais alcalinos ou alcalino-terrosos representativos incluem sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio e similares. Sais farmaceuticamente aceitáveis adicionais incluem, quando adequado, cátions de amônio não tóxico, amônio quaternário e amina formados usando contraíons como haleto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, alquil sulfonato inferior e aril sulfonato.
[00290] O termo "solvato" refere-se a formas do composto que estão associadas a um solvente, geralmente por uma reação de solvólise. Essa associação física pode incluir a ligação de hidrogênio. Os solventes convencionais incluem água, metanol, etanol, ácido acético, DMSO, THF, éter dietílico e similares. Os compostos de Fórmula (I), Fórmula (I-a), e/ou Fórmula (II) podem ser preparados, por exemplo, em forma cristalina, e podem ser solvatados. Os solvatos adequados incluem solvatos farmaceuticamente aceitáveis e incluem adicionalmente tanto solvatos estequiométricos como solvatos não estequiométricos. Em certos casos, o solvato será capaz de isolamento, por exemplo, quando uma ou mais moléculas de solvente forem incorporadas na retícula de um cristal do sólido cristalino. "Solvato" engloba tanto solvatos de fase de solução como isoláveis. Os solvatos representativos incluem hidratos, etanolatos e metanolatos.
[00291] O termo "hidrato" refere-se a um composto que está associado à água. Tipicamente, o número das moléculas de água contidas em um hidrato de um composto está em uma razão definida para o número das moléculas de composto no hidrato. Portanto, um hidrato de um composto pode ser representado, por exemplo, pela fórmula geral Rx H2O, em que R é o composto e em que x é um número maior que 0. Um determinado composto pode formar mais de um tipo de hidratos, incluindo, por exemplo, monoidratos (x é 1), hidratos inferiores (x é um número maior que 0 e menor que 1, por exemplo, hemi-hidratos (R0,5 H2O)), e poli-hidratos (x é um número maior que 1, por exemplo, di-hidratos (R2 H2O) e hexa-hidratos (R6 H2O)).
[00292] Será entendido que os compostos que têm a mesma fórmula molecular, porém se diferenciam na natureza ou sequência de ligação de seus átomos ou na disposição de seus átomos no espaço são denominados "isômeros". Os isômeros que se diferem na disposição de seus átomos no espaço são denominados "estereoisômeros".
[00293] Os estereoisômeros que não são imagens espelhadas uns dos outros são denominados "diastereômeros" e aqueles que são imagens espelhadas não sobreponíveis uns dos outros são denominados "enantiômeros". Quando um composto tiver um centro assimétrico, por exemplo, é ligado a quatro grupos diferentes, e um par de enantiômeros é possível. Um enantiômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta de seu centro assimétrico e é descrito pelas regras de sequenciamento R e S de Cahn e Prelog, ou pela maneira na qual a molécula gira o plano de luz polarizada e designado como dextrorrotatório ou levorrotatório (ou seja, como isômeros (+) ou (-) respectivamente). Um composto quiral pode existir tanto como um enantiômero individual quanto como uma mistura do mesmo. Uma mistura contendo proporções iguais dos enantiômeros é denominada uma "mistura racêmica".
[00294] O termo "tautômeros" refere-se a compostos que são formas intercambiáveis de uma estrutura de composto particular e que variam no deslocamento de átomos de hidrogênio e elétrons. Assim, duas estruturas podem estar em equilíbrio através do movimento de elétrons π e um átomo (geralmente H). Por exemplo, enóis e cetonas são tautômeros porque são rapidamente interconvertidos por tratamento com ácido ou base. Outro exemplo de tautomerismo são as formas aci e nitro do fenilnitrometano, que são igualmente formadas por tratamento com ácido ou base.
[00295] As formas tautoméricas podem ser relevantes para a obtenção da reatividade química e atividade biológica ideais de um composto de interesse.
[00296] A menos que seja definido o contrário, as estruturas representadas no presente documento também devem incluir todas as formas isoméricas (por exemplo, enantioméricas, diastereoméricas, e geométricas (ou conformacional)) da estrutura; por exemplo, as configurações de R e S para cada centro assimétrico, isômeros de ligação dupla Z e E, e isômeros conformacionais Z e E. Portanto, os únicos isômeros estereoquímicos assim como misturas enantioméricas, diasterioméricas e geométricas (ou conformacionais) dos compostos presentes estão dentro do escopo da invenção. A menos que seja definido o contrário, todas as formas tautoméricas dos compostos da invenção estão dentro do escopo da invenção. Adicionalmente, a menos que seja definido o contrário, as estruturas representadas no presente documento também se destinam a incluir compostos que diferem apenas na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, os compostos que têm as presentes estruturas que incluem a substituição de hidrogênio por deutério ou trítio, ou a substituição de um carbono por um carbono enriquecido por C- ou C estão dentro do escopo desta invenção. Tais compostos são úteis, por exemplo, como ferramentas analítica, como sondas em ensaios biológicos, ou como agentes terapêuticos de acordo com a presente invenção.
[00297] Quando um enantiômero específico for preferencial, o mesmo pode, em algumas modalidades, ser fornecido substancialmente livre do enantiômero correspondente e também pode ser referido como "opticamente enriquecido". "Opticamente enriquecido", conforme usado no presente documento, significa que o composto é constituído de uma proporção significativamente maior de um enantiômero. Em determinadas modalidades, o composto é constituído de pelo menos cerca de 90% em peso de um enantiômero preferencial. Em outras modalidades, o composto é constituído de pelo menos cerca de 95%, 98% ou 99% em peso de um enantiômero preferencial. Os enantiômeros preferenciais podem ser isolados de misturas racêmicas por qualquer método conhecido por aqueles versados na técnica, incluindo cromatografia líquida de alta pressão quiral (HPLC) e a formação e cristalização de sais quirais ou preparados por sínteses assimétricas. Consultar, por exemplo, Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, Nova Iorque, 1981); Wilen, et al., Tetrahedron 33:2.725 (1977); Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions página 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972).
[00298] Vários aspectos das composições e métodos no presente documento são descritos em maiores detalhes abaixo. As definições adicionais são apresentadas ao longo do relatório descritivo.
Descrição Detalhada
[00299] A presente invenção fornece, pelo menos em parte, um método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença associada à expressão de BCMA, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa uma molécula de CAR que se liga a BCMA (uma "célula que expressa CAR de BCMA"). Em algumas modalidades, a doença associada à expressão de BCMA é um câncer hematológico, por exemplo, ALL, CLL, DLBCL, ou mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada com base na aquisição de um nível de um biomarcador de uma amostra de paciente. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada ao indivíduo em combinação com uma segunda terapia. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA e a segunda terapia são administradas simultânea ou sequencialmente. Receptor de antígeno quimérico (CAR)
[00300] Em um aspecto, são divulgados no presente documento métodos que usam uma célula (por exemplo, uma população de células) que expressa uma molécula de CAR. Em um aspecto, um construto CAR exemplificativo compreende uma sequência líder opcional (por exemplo, uma sequência líder aqui descrita), um domínio de ligação a antígenos (por exemplo, um domínio de ligação a antígenos aqui descrito), uma dobradiça (por exemplo, uma região de dobradiça aqui descrita), um domínio transmembranar (por exemplo, um domínio transmembranar aqui descrito) e um domínio estimulador intracelular (por exemplo, um domínio estimulador intracelular aqui descrito). Em um aspecto, um construto de CAR exemplificativo compreende uma sequência líder opcional (por exemplo, uma sequência líder aqui descrita), um domínio de ligação a antígenos extracelular (por exemplo, um domínio de ligação a antígenos aqui descrito), uma dobradiça (por exemplo, uma região de dobradiça aqui descrita), um domínio transmembranar (por exemplo, um domínio transmembranar aqui descrito), um domínio de sinalização coestimulador intracelular (por exemplo, um domínio de sinalização coestimulador aqui descrito) e/ou um domínio de sinalização primário intracelular (por exemplo, um domínio de sinalização primário aqui descrito).
[00301] Sequências de exemplos não limitadores de vários componentes que podem fazer parte de uma molécula CAR descrita aqui são listadas na Tabela 1, onde "aa" significa aminoácidos, e "na" significa ácidos nucleicos que codificam o peptídeo correspondente. Tabela 1. Sequências de vários componentes de CAR (aa – sequência de aminoácidos, na – sequência de ácidos nucleicos). SEQ ID Descrição Sequência Nº: 1007 Promotor de CGTGAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCC EF-1 CCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGT
1008 Líder (aa) MALPVTALLLPLALLLHAARP 1009 Líder (na) ATGGCCCTGCCTGTGACAGCCCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTGCTGCAT
GCCGCTAGACCC 1010 Líder (na) ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
GCCGCTCGGCCC 1011 Dobradiça de TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD CD8 (aa) 1012 Dobradiça de ACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCG CD8 (na) CAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCA
GTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGAT 1013 Dobradiça de ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQE Ig4 (aa) DPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK
FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKM 1014 Dobradiça de GAGAGCAAGTACGGCCCTCCCTGCCCCCCTTGCCCTGCCCCCGAGTTCCTG Ig4 (na) GGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATG
AGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAGATG 1015 Dobradiça de RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKE IgD (aa) EQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDA
TCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH 1016 Dobradiça de AGGTGGCCCGAAAGTCCCAAGGCCCAGGCATCTAGTGTTCCTACTGCACAGCCC IgD (na) CAGGCAGAAGGCAGCCTAGCCAAAGCTACTACTGCACCTGCCACTACGCGCAAT
1017 Dobradiça/lig GGGGSGGGGS ante de GS (aa) 1018 Dobradiça/lig GGTGGCGGAGGTTCTGGAGGTGGAGGTTCC ante de GS (na) 1019 Transmembrana IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC de CD8 (TM) (aa) 1020 Transmembrana ATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCA de CD8 (TM) CTGGTTATCACCCTTTACTGC (na) 1021 CD8 TM (na) ATCTACATTTGGGCCCCTCTGGCTGGTACTTGCGGGGTCCTGCTGCTTTCA
CTCGTGATCACTCTTTACTGT 1022 Domínio KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL intracelular de 4-1BB (aa) 1023 Domínio AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGA intracelular CCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAA de 4-1BB (na) GAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG 1024 Domínio AAGCGCGGTCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTTAAGCAACCCTTCATGAGG intracelular CCTGTGCAGACTACTCAAGAGGAGGACGGCTGTTCATGCCGGTTCCCAGAG de 4-1BB (na) GAGGAGGAAGGCGGCTGCGAACTG 1025 CD27 (aa) QRRKYRSNKGESPVEPAEPCRYSCPREEEGSTIPIQEDYRKPEPACSP 1026 CD27 (na) AGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCC
GACTTCGCAGCCTATCGCTCC 1027 CD3-zeta RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRR (aa) KNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYD
ALHMQALPPR 1028 CD3-zeta AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAG (na) AACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTT
GCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC 1029 CD3-zeta CGCGTGAAATTCAGCCGCAGCGCAGATGCTCCAGCCTACAAGCAGGGGCAG (na) AACCAGCTCTACAACGAACTCAATCTTGGTCGGAGAGAGGAGTACGACGTG
GCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG 1030 CD3-zeta RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRR (aa) KNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYD
1031 CD3-zeta AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAG (na) AACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTT
GCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC 1032 ligante GGGGS 1033 ligante GGTGGCGGAGGTTCTGGAGGTGGAGGTTCC 1034 Domínio Pgwfldspdrpwnpptfspallvvtegdnatftcsfsntsesfvlnwyrms extracelular psnqtdklaafpedrsqpgqdcrfrvtqlpngrdfhmsvvrarrndsgtyl de PD-1 (aa) cgaislapkaqikeslraelrvterraevptahpspsprpagqfqtlv 1035 Domínio Cccggatggtttctggactctccggatcgcccgtggaatcccccaaccttc extracelular tcaccggcactcttggttgtgactgagggcgataatgcgaccttcacgtgc de PD-1 (na) tcgttctccaacacctccgaatcattcgtgctgaactggtaccgcatgagc ccgtcaaaccagaccgacaagctcgccgcgtttccggaagatcggtcgcaa ccgggacaggattgtcggttccgcgtgactcaactgccgaatggcagagac ttccacatgagcgtggtccgcgctaggcgaaacgactccgggacctacctg tgcggagccatctcgctggcgcctaaggcccaaatcaaagagagcttgagg gccgaactgagagtgaccgagcgcagagctgaggtgccaactgcacatcca tccccatcgcctcggcctgcggggcagtttcagaccctggtc 1036 CAR PD-1 Malpvtalllplalllhaarppgwfldspdrpwnpptfspallvvtegdna (aa) com tftcsfsntsesfvlnwyrmspsnqtdklaafpedrsqpgqdcrfrvtqlp sinal ngrdfhmsvvrarrndsgtylcgaislapkaqikeslraelrvterraevp tahpspsprpagqfqtlvtttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaagg avhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpf mrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynel nlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseig mkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr 1037 CAR PD-1 Atggccctccctgtcactgccctgcttctccccctcgcactcctgctccacg (na) ccgctagaccacccggatggtttctggactctccggatcgcccgtggaatcc cccaaccttctcaccggcactcttggttgtgactgagggcgataatgcgacc ttcacgtgctcgttctccaacacctccgaatcattcgtgctgaactggtacc gcatgagcccgtcaaaccagaccgacaagctcgccgcgtttccggaagatcg gtcgcaaccgggacaggattgtcggttccgcgtgactcaactgccgaatggc agagacttccacatgagcgtggtccgcgctaggcgaaacgactccgggacct acctgtgcggagccatctcgctggcgcctaaggcccaaatcaaagagagctt gagggccgaactgagagtgaccgagcgcagagctgaggtgccaactgcacat ccatccccatcgcctcggcctgcggggcagtttcagaccctggtcacgacca ctccggcgccgcgcccaccgactccggccccaactatcgcgagccagcccct gtcgctgaggccggaagcatgccgccctgccgccggaggtgctgtgcatacc cggggattggacttcgcatgcgacatctacatttgggctcctctcgccggaa cttgtggcgtgctccttctgtccctggtcatcaccctgtactgcaagcgggg tcggaaaaagcttctgtacattttcaagcagcccttcatgaggcccgtgcaa accacccaggaggaggacggttgctcctgccggttccccgaagaggaagaag gaggttgcgagctgcgcgtgaagttctcccggagcgccgacgcccccgccta taagcagggccagaaccagctgtacaacgaactgaacctgggacggcgggaa gagtacgatgtgctggacaagcggcgcggccgggaccccgaaatgggcggga agcctagaagaaagaaccctcaggaaggcctgtataacgagctgcagaagga caagatggccgaggcctactccgaaattgggatgaagggagagcggcggagg ggaaaggggcacgacggcctgtaccaaggactgtccaccgccaccaaggaca catacgatgccctgcacatgcaggcccttccccctcgc
1038 ligante (Gly-Gly-Gly-Ser)n, where n = 1-10 1039 ligante (Gly4 Ser)4 1040 ligante (Gly4 Ser)3 1041 ligante (Gly3Ser) 1042 ligante ASGGGGSGGRASGGGGS 1043 poliA [a]50-5000 1044 CAR PD1 (aa) Pgwfldspdrpwnpptfspallvvtegdnatftcsfsntsesfvlnwyrms psnqtdklaafpedrsqpgqdcrfrvtqlpngrdfhmsvvrarrndsgtyl cgaislapkaqikeslraelrvterraevptahpspsprpagqfqtlvttt paprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplag tcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeee eggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpem ggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglsta tkdtydalhmqalppr 1045 Domínio TKKKYSSSVHDPNGEYMFMRAVNTAKKSRLTDVTL intracelular de ICOS (aa) 1046 Domínio ACAAAAAAGAAGTATTCATCCAGTGTGCACGACCCTAACGGTGAATACATG intracelular TTCATGAGAGCAGTGAACACAGCCAAAAAATCCAGACTCACAGATGTGACC de ICOS (na) CTA 1047 Domínio TM TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWLPIG de ICOS (aa) CAAFVVVCILGCILICWL 1048 Domínio TM ACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCG de ICOS (na) CAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCA
CTT 1049 Domínio RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS intracelular de CD28 (aa) 1050 Domínio AGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCC intracelular CGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGC de CD28 (na) GACTTCGCAGCCTATCGCTCC Domínio de Ligação ao Antígeno de CAR
[00302] Em um aspecto, a porção do CAR que compreende o domínio de ligação a antígenos compreende um domínio de ligação a antígenos que alveja um antígeno tumoral, por exemplo, um antígeno tumoral descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga a: CD19; CD123; CD22; CD30; CD171; CS-1; molécula-1 tipo lectina tipo C, CD33; variante III de receptor de fator de crescimento epidérmico (EGFRvIII); gangliosídeo G2 (GD2); gangliosídeo GD3; membro de família de receptor de TNF; antígeno de maturação de célula B (BCMA); antígeno de Tn ((Tn Ag) ou (GalNAcα-Ser/Thr)); antígeno de membrana específica da próstata (PSMA); Receptor 1 órfão tipo receptor tirosina quinase (ROR1); tirosina quinase 3 tipo Fms (FLT3); glicoproteína 72 associada ao tumor (TAG72); CD38; CD44v6; antígeno carcinoembrionário (CEA); Molécula de adesão de célula epitelial (EPCAM); B7H3 (CD276); KIT (CD117); Subunidade alfa-2 de receptor de Interleucina-13; Mesotelina; Receptor alfa de Interleucina 11 (IL- 11Ra); antígeno de célula-tronco de próstata (PSCA); Serina 21 de protease; receptor 2 de fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR2); antígeno de Lewis(Y); CD24; Receptor beta de fator de crescimento derivado de plaqueta (PDGFR-beta); antígeno-4 embrionário de estágio específico (SSEA-4); CD20; receptor alfa de folato; quinase de proteína de tirosina receptora ERBB2 (Her2/neu); mucina 1, associada à superfície celular (MUC1); receptor de fator de crescimento epidérmico (EGFR); molécula de adesão de célula neural (NCAM); Prostase; fosfatase de ácido prostático (PAP); fator 2 de alongamento mutado (ELF2M); Efrina B2; proteína alfa de ativação de fibroblasto (FAP); receptor de fator de crescimento 1 tipo insulina (receptor de IGF-I), anidrase carbônica IX (CAIX); subunidade de proteassomo (prossomo, macropaína), Tipo Beta, 9 (LMP2); glicoproteína 100 (gp100); proteína de fusão de oncogênio consistindo na região de agrupamento de ponto de ruptura (BCR) e homólogo 1 de oncogênio viral de leucemia murina de Abelson (Abl) (bcr-abl); tirosinase; receptor 2 tipo A de efrina (EphA2); GM1 de Fucosila; molécula de adesão de Lewis de sialila (sLe); gangliosídeo GM3; transglutaminase 5 (TGS5); antígrno associado ao melanoma de alto peso molecular (HMWMAA); gangliosídeo de o-acetil-
GD2 (OAcGD2); receptor beta de folato; marcador 1 endotelial de tumor (TEM1/CD248); marcador 7 relacionado ao tumor endotelial (TEM7R); claudina 6 (CLDN6); receptor de hormônio estimulante de tiroide (TSHR); grupo 5 classe C de receptor acoplado à proteína G, membro D (GPRC5D); quadro de leitura aberto 61 do cromossomo X (CXORF61); CD97; CD179a; cinase de linfoma anaplástico (ALK); ácido polisiálico; específico de placenta 1 (PLAC1); proção de hexassacarídeo de glicoceramida de globoH (GloboH); antígeno de diferenciação de glândula mamária (NY-BR-1); uroplacina 2 (UPK2); receptor celular 1 de vírus de hepatite A (HAVCR1); adenorreceptor beta 3 (ADRB3); panexina 3 (PANX3); receptor 20 acoplado à proteína G (GPR20); complexo de antígeno 6 de linfócito, locus K 9 (LY6K); receptor olfativo 51E2 (OR51E2); proteína de quadro de leitura alternado de TCR gama (TARP); proteína de tumor de Wilms (WT1); antígeno 1 de câncer/testículos (NY- ESO-1); antígeno 2 de câncer/testículos (LAGE-1a); antígeno 1 associado ao melanoma (MAGE-A1); gene 6 variante de translocação de ETS, localizado no cromossomo 12p (ETV6-AML); proteína 17 de espermatozoide (SPA17); família de antígeno X, membro 1A (XAGE1); receptor 2 de superfície celular de ligação de angiopoietina (Tie 2); antígeno-1 de testículos de câncer de melanoma (MAD-CT-1); antígeno-2 de testículos de câncer de melanoma (MAD-CT-2); antígeno 1 Fos- relacionado; proteína de tumor p53 (p53); p53 mutante; prosteína; sobrevivente; telomerase; antígeno-1 de tumor de carcinoma de próstata, antígeno de melanoma reconhecido por células T 1; sarcoma de rato (Ras) mutante; transcriptase reversa de telomerase humana (hTERT); pontos de ruptura de translocação de sarcoma; inibidor de melanoma de apoptose (ML-IAP); ERG (gene de fusão de ETS de protease transmembranar, serina 2 (TMPRSS2)); glucosaminil-transferase V de N-
actila (NA17); proteína de caixa emparelhada Pax-3 (PAX3); receptor de androgênio; ciclina B1; homólogo derivado de neuroblastoma de oncogênio viral de mielocitomatose aviária de v-myc (MYCN); membro C de família homóloga de Ras (RhoC); proteína 2 relacionada à tirosinase (TRP-2); citocromo P450 1B1 (CYP1B1); fator de ligação de CCCTC tipo (proteína de dedo de zinco), antígeno de carcinoma de célula escamosa reconhecido por células T 3 (SART3); proteína de caixa emparelhada Pax-5 (PAX5); proteína de ligação de proacrosina sp32 (OY-TES1); tirosina quinase de proteína específica de linfócito (LCK); proteína 4 de âncora de quinase A(AKAP-4); sarcoma sinovial, ponto de ruptura de X 2 (SSX2); Receptor para endoprodutos de glicação avançada (RAGE-1); renal ubiquitoso 1 (RU1); renal ubiquitoso 2 (RU2); legumaína; vírus do papiloma humano E6 (HPV E6); vírus do papiloma humano E7 (HPV E7); esterase de carboxila intestinal; proteína de choque térmico 70-2 mutada (mut hsp70-2); CD79a; CD79b; CD72; receptor 1 tipo imunoglobulina associada ao leucócito (LAIR1); fragmento de Fc de receptorde IgA (FCAR ou CD89); membro 2 de subfamília A de receptor tipo imunoglobulina de leucócito (LILRA2); membro f de família tipo molécula de CD300 (CD300LF); membro A de família 12 de domínio de lectina tipo C (CLEC12A); antígeno 2 de célula estromal de medula óssea (BST2); tipo receptor 2 de hormônio tipo mucina contendo módulo tipo EGF (EMR2); antígeno 75 de linfócito (LY75); glipicano-3 (GPC3); tipo receptor de Fc 5 (FCRL5); ou polipeptídeo 1 tipo imunoglobulina lambda (IGLL1).
[00303] O domínio de ligação de antígeno pode ser qualquer domínio que se liga a um antígeno incluindo, mas sem limitações, um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo recombinante, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado e um fragmento funcional do mesmo, incluindo, mas sem limitações, um anticorpo de domínio único como um domínio variável de cadeia pesada (VH), um domínio variável de cadeia leve (VL) e um domínio variável (VHH) de nanocorpo derivado de camelídeo, e a um arcabouço alternativo conhecido na especialidade por funcionar como o domínio de ligação de antígeno, como um domínio de fibronectina recombinante, um receptor de célula T (TCR) ou um fragmento dos mesmos, por exemplo, TCR de cadeia única e similares. Em alguns casos, é benéfico que o domínio de ligação ao antígeno seja derivado da mesma espécie na qual o CAR será em última instância usado. Por exemplo, para uso em seres humanos, poderá ser benéfico que o domínio de ligação ao antígeno do CAR compreenda resíduos humanos ou humanizados para o domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo ou fragmento de anticorpo. Domínio Transmembranar de CAR
[00304] Em relação ao domínio transmembranar, em várias modalidades, um CAR pode ser concebido para compreender um domínio transmembranar que está ligado ao domínio extracelular do CAR. Um domínio transmembranar pode incluir um ou mais aminoácidos adicionais adjacentes à região transmembranar, por exemplo, um ou mais aminoácidos associados à região extracelular da proteína de onde a transmembranar foi derivada (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 até 15 aminoácidos da região extracelular) e/ou um ou mais aminoácidos adicionais associados à região intracelular da proteína de onde a proteína transmembranar é derivada (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 até 15 aminoácidos da região intracelular). Em um aspecto, o domínio transmembranar é aquele que está associado a um dos outros domínios do CAR. Em alguns casos, o domínio transmembranar pode ser selecionado ou modificado por substituição de aminoácidos para evitar a ligação de tais domínios aos domínios transmembranar das mesmas ou de diferentes proteínas de membrana de superfície, por exemplo, para minimizar interações com outros membros do complexo do receptor. Em um aspecto, o domínio transmembranar é capaz de homodimerização com outro CAR na superfície celular de uma célula expressando CAR. Em um aspecto diferente, a sequência de aminoácidos do domínio transmembranar pode ser modificada ou substituída de modo a minimizar interações com os domínios de ligação do parceiro de ligação nativo presente no mesmo CART.
[00305] O domínio transmembranar pode ser derivado de uma fonte natural ou de uma recombinante. Quando a fonte é natural, o domínio pode ser derivado de qualquer proteína ligada a membrana ou transmembranar. Em um aspecto, o domínio transmembranar é capaz de sinalizar ao ou aos domínio(s) intracelular(es) sempre que o CAR se liga a um alvo. Um domínio transmembranar de uso particular nesta invenção pode incluir pelo menos a(s) região(ões) transmembranar, por exemplo, da cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de células T, CD28, CD27, CD3 épsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154. Em algumas modalidades, um domínio transmembranar pode incluir pelo menos a(s) região(ões) transmembranar, por exemplo, de KIR2DS2, OX40, CD2, CD27, LFA-1 (CD11a, CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD40, BAFFR, HVEM (LIGHTR), SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD160, CD19, IL2R beta, IL2R gama, IL7R α, ITGA1, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, TNFR2, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Táctil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), SLAMF6 (NTB-A, Ly108),
SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, PAG/Cbp, NKG2D, NKG2C.
[00306] Em alguns casos, o domínio transmembranar pode ser ligado à região extracelular do CAR, por exemplo, o domínio de ligação a antígeno do CAR, através de uma região de dobradiça, por exemplo, uma região de dobradiça de uma proteína humana. Por exemplo, em uma modalidade, a dobradiça pode ser uma dobradiça de Ig (imunoglobulina) humana, por exemplo, uma dobradiça de IgG4 ou uma dobradiça de CD8a. Em uma modalidade, a dobradiça ou espaçador compreende (por exemplo, consiste em) a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 1011. Em um aspecto, o domínio transmembranar compreende (por exemplo, consiste em) um domínio transmembranar de SEQ ID Nº: 1019.
[00307] Em um aspecto, a dobradiça ou espaçador compreende uma dobradiça de IgG4. Por exemplo, em uma modalidade, a dobradiça ou espaçador compreendem uma dobradiça da sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 1013. Em algumas modalidades, a dobradiça ou espaçador compreende uma região de dobradiça codificada por uma sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 1014.
[00308] Em um aspecto, a dobradiça ou espaçador compreende uma dobradiça de IgD. Por exemplo, em uma modalidade, a dobradiça ou espaçador compreendem uma dobradiça da sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 1015. Em algumas modalidades, a dobradiça ou espaçador compreende uma região de dobradiça codificada por uma sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 1016.
[00309] Em um aspecto, o domínio transmembranar pode ser recombinante, em tal caso compreenderá predominantemente resíduos hidrofóbicos, como leucina e valina. Em um aspecto, um tripleto de fenilalanina, triptofano e valina pode ser encontrado em cada extremidade de um domínio transmembranar recombinante.
[00310] Opcionalmente, um ligante oligo ou polipeptídico curto, com entre 2 e 10 aminoácidos de comprimento, pode formar a ligação entre o domínio transmembranar e a região citoplasmática do CAR. Um dupleto glicina-serina proporciona um ligante particularmente adequado. Por exemplo, em um aspecto, o ligante compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 1017. Em algumas modalidades, o ligador é codificado por uma sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 1018.
[00311] Em um aspecto, a dobradiça ou espaçador compreende uma dobradiça de KIR2DS2. Domínio Citoplasmático
[00312] O domínio ou região citoplásmica do CAR inclui um domínio de sinalização intracelular. Um domínio de sinalização intracelular é, de modo geral, responsável pela ativação de pelo menos uma das funções efetoras normais da célula imune em que o CAR foi introduzido.
[00313] Os exemplos de domínios de sinalização intracelulares para uso em um CAR descrito no presente documento incluem as sequências citoplasmáticas do receptor de células T (TCR) e correceptores que atuam em conjunto para iniciar a transdução do sinal após engate do receptor de antígeno, bem como qualquer derivado ou variante dessas sequências e qualquer sequência recombinante que tenha a mesma capacidade funcional.
[00314] É conhecido que sinais gerados através do TCR isoladamente são insuficientes para a ativação total da célula T e que também é necessário um sinal secundário e/ou coestimulador. Assim, pode ser afirmado que a ativação de células T é mediada por duas classes distintas de sequências de sinalização citoplasmática: as que iniciam a ativação primária dependente de antígenos através do TCR (domínios de sinalização intracelular primários) e as que atuam de um modo independente de antígenos para proporcionar um sinal secundário ou coestimulador (domínio citoplasmático secundário, por exemplo, um domínio coestimulador).
[00315] Um domínio de sinalização primário regula a ativação primária do complexo de TCR de um modo estimulador ou de um modo inibidor. Domínios de sinalização intracelulares primários que atuam de um modo estimulador podem conter motivos de sinalização que são conhecidos como motivos de ativação baseados em tirosina do imunorreceptor ou ITAMs.
[00316] Os exemplos de domínios de sinalização intracelular primários contendo ITAMs que têm uso particular na invenção incluem os de TCR zeta, FcR gama, FcR beta, CD3 gama, CD3 delta, CD3 épsilon, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (também conhecido como "ICOS"), FcεRI, DAP10, DAP12, e CD66d. Em uma modalidade, um CAR da invenção compreende um domínio de sinalização intracelular, por exemplo, um domínio de sinalização primário de CD3-zeta, por exemplo, uma sequência de CD3-zeta descrita aqui.
[00317] Em uma modalidade, um domínio de sinalização primário compreende um domínio de ITAM modificado, por exemplo, um domínio de ITAM mutado que tem atividade alterada (por exemplo, aumentada ou decrescida) em comparação com o domínio de ITAM nativo. Em uma modalidade, um domínio de sinalização primário compreende um domínio de sinalização intracelular primário contendo ITAM modificado, por exemplo, um domínio de sinalização intracelular primário contendo ITAM otimizado e/ou truncado. Em uma modalidade, um domínio de sinalização primário compreende um, dois, três, quatro ou mais motivos ITAM. Domínio de Sinalização Coestimuladora
[00318] O domínio de sinalização intracelular do CAR pode compreender o domínio de sinalização de CD3-zeta por si só ou pode ser combinado com qualquer outro domínio (ou domínios) de sinalização intracelular desejado útil no contexto de um CAR da invenção. Por exemplo, o domínio de sinalização intracelular do CAR pode compreender uma porção de cadeia CD3 zeta e um domínio de sinalização coestimulador. O domínio de sinalização coestimulador se refere a uma porção do CAR que compreende o domínio intracelular de uma molécula coestimuladora. Em uma modalidade, o domínio intracelular é projetado de modo a compreender o domínio de sinalização de CD3-zeta e o domínio de sinalização de CD28. Em um aspecto, o domínio intracelular é projetado de modo a compreender o domínio de sinalização de CD3-zeta e o domínio de sinalização de ICOS.
[00319] A molécula coestimuladora pode ser uma molécula da superfície celular que não um receptor de antígenos ou seus ligantes que é necessária para uma resposta eficiente de linfócitos a um antígeno. Os exemplos de tais moléculas incluem CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, antígeno associado à função de linfócitos-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3 e um ligante que se liga especificamente a CD83 e similares. Por exemplo, foi demonstrado que a coestimulação com CD27 intensifica a expansão, a função efetora e a sobrevivência de células CART humanas in vitro e aumenta a persistência e a atividade antitumoral de células T humanas in vivo (Song et al. Blood. 2012; 119(3):696-706). Os exemplos adicionais de tais moléculas coestimuladoras incluem CDS, ICAM-1, GITR, BAFFR, HVEM (LIGHTR), SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp30, NKp44, NKp46, CD160, CD19, CD4, CD8alfa, CD8beta, IL2R beta, IL2R gama, IL7R alfa, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX,
CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, NKG2D, NKG2C e PAG/Cbp.
[00320] As sequências de sinalização intracelular dentro da porção citoplasmática do CAR podem ser ligadas entre si de um modo aleatório ou em uma ordem especificada. Opcionalmente, um ligante oligo- ou polipeptídico curto, por exemplo, com entre 2 e 10 aminoácidos (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos) de comprimento, pode formar a ligação entre sequências de sinalização intracelular. Em uma modalidade, um dupleto glicina-serina pode ser usado como um ligante adequado. Em uma modalidade, um único aminoácido, por exemplo, uma alanina, uma glicina, pode ser usado como ligante adequado.
[00321] Em um aspecto, o domínio de sinalização intracelular é projetado para compreender dois ou mais, por exemplo, 2, 3, 4, 5 ou mais, domínios de sinalização coestimuladores. Em uma modalidade, os dois ou mais, por exemplo, 2, 3, 4, 5 ou mais domínios de sinalização coestimuladores são separados por uma molécula ligante, por exemplo, uma molécula ligante aqui descrita. Em uma modalidade, o domínio de sinalização intracelular compreende dois domínios de sinalização coestimuladores. Em algumas modalidades, a molécula ligante é um resíduo glicina. Em algumas modalidades, o ligante é um resíduo alanina.
[00322] Em um aspecto, o domínio de sinalização intracelular é projetado para compreender o domínio de sinalização de CD3-zeta e o domínio de sinalização de CD28. Em um aspecto, o domínio de sinalização intracelular é projetado para compreender o domínio de sinalização de CD3-zeta e o domínio de sinalização de 4-1BB. Em um aspecto, o domínio de sinalização de 4-1BB é um domínio de sinalização de SEQ ID Nº: 1022. Em um aspecto, o domínio de sinalização de CD3- zeta é um domínio de sinalização de SEQ ID Nº: 1027.
[00323] Em um aspecto, o domínio de sinalização intracelular é projetado para compreender o domínio de sinalização de CD3 zeta e o domínio de sinalização de CD27. Em um aspecto, o domínio de sinalização de CD27 compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 1025. Em um aspecto, o domínio de sinalização de CD27 é codificado por uma sequência de ácidos nucleicos de SEQ ID Nº: 1026.
[00324] Em um aspecto, a célula que expressa CAR descrita no presente documento pode compreender adicionalmente um segundo CAR, por exemplo, um segundo CAR que inclui um domínio de ligação a antígeno diferente, por exemplo, para o mesmo alvo ou um alvo diferente (por exemplo, um alvo diferente de um antígeno associado a câncer descrito no presente documento ou um antígeno associado a câncer diferente descrito no presente documento, por exemplo, CD19, CD33, CLL-1, CD34, FLT3 ou receptor de folato beta). Em uma modalidade, o segundo CAR inclui um domínio de ligação a antígeno para um alvo expresso no mesmo tipo de célula cancerosa que o antígeno associado a câncer. Em uma modalidade, a célula que expressa CAR compreende um primeiro CAR que tem como alvo um primeiro antígeno e inclui um domínio de sinalização intracelular que tem um domínio de sinalização coestimulador, mas não um domínio de sinalização primário, e um segundo CAR que tem como alvo um segundo antígeno diferente e inclui um domínio de sinalização intracelular que tem um domínio de sinalização primário, mas não um domínio de sinalização coestimulador. Sem se ater à teoria, a colocação de um domínio de sinalização coestimulador, por exemplo, 4-1BB, CD28, ICOS, CD27 ou OX-40, no primeiro CAR, e do domínio de sinalização primário, por exemplo, CD3 zeta, no segundo CAR pode limitar a atividade de CAR a células em que ambos os alvos são expressos. Em uma modalidade, a célula expressando CAR compreende um primeiro CAR para um antígeno associado a câncer que inclui um domínio de ligação a antígenos que se liga a um antígeno-alvo descrito aqui, um domínio transmembranar e um domínio coestimulador, e um segundo CAR que visa um antígeno-alvo diferente (por exemplo, um antígeno expresso nesse mesmo tipo de células cancerígenas do primeiro antígeno-alvo) e inclui um domínio de ligação a antígenos, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização primário. Em outra modalidade, a célula expressando CAR compreende um primeiro CAR que inclui um domínio de ligação a antígenos que se liga a um antígeno-alvo descrito aqui, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização primário, e um segundo CAR que visa um antígeno diferente do primeiro antígeno-alvo (por exemplo, um antígeno expresso no mesmo tipo de células cancerígenas das do primeiro antígeno-alvo) e inclui um domínio de ligação a antígenos para o antígeno, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização coestimulador.
[00325] Em outro aspecto, a divulgação apresenta uma população de células que expressam CAR, por exemplo, células CART. Em algumas modalidades, a população de células que expressa CAR compreende uma mistura de células que expressa diferentes CARs. Por exemplo, em uma modalidade, a população de células CART pode incluir uma primeira célula expressando um CAR tendo um domínio de ligação a antígenos para um antígeno associado a câncer descrito aqui, e uma segunda célula expressando um CAR tendo um domínio de ligação a antígenos diferente, por exemplo, um domínio de ligação a antígenos para um antígeno associado a câncer diferente descrito aqui, por exemplo, um domínio de ligação a antígenos para um antígeno associado a câncer descrito aqui que difere do antígeno associado a câncer ligado pelo domínio de ligação a antígenos do CAR expresso pela primeira célula. Como outro exemplo, a população de células que expressam CAR pode incluir uma primeira célula que expressa um CAR que inclui um domínio de ligação a antígeno para um antígeno associado a câncer descrito no presente documento e uma segunda célula que expressa um CAR que inclui um domínio de ligação a antígeno para um alvo diferente de um antígeno associado a câncer conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, a população de células expressando CAR inclui, por exemplo, uma primeira célula expressando um CAR que inclui um domínio de sinalização intracelular primário, e uma segunda célula expressando um CAR que inclui um domínio de sinalização secundário.
[00326] Em outro aspecto, a presente divulgação apresenta uma população de células em que pelo menos uma célula da população expressa um CAR que tem um domínio de ligação a antígeno para um antígeno associado a câncer descrito no presente documento e uma segunda célula que expressa outro agente, por exemplo, um agente que intensifica a atividade de uma célula que expressa CAR. Por exemplo, em uma modalidade, o agente pode ser um agente que inibe uma molécula inibidora. Moléculas inibidoras, por exemplo, PD-1, podem, em algumas modalidades, diminuir a capacidade de uma célula expressando CAR para montar uma resposta imune efetora. Os exemplos de moléculas inibidoras incluem PD-1, PD-L1, CTLA4, TIM3, CEACAM (CEACAM-1, CEACAM-3 e/ou CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM
(TNFRSF14 ou CD270), KIR, A2aR, MHC de classe I, MHC de classe II, GAL9, adenosina e TGF (por exemplo, TGF beta). Em uma modalidade, o agente que inibe uma molécula inibidora compreende um primeiro polipeptídeo, por exemplo, uma molécula inibidora, associado a um segundo polipeptídeo que fornece um sinal positivo à célula, por exemplo, um domínio de sinalização intracelular descrito no presente documento. Em uma modalidade, o agente compreende um primeiro polipeptídeo, por exemplo, de uma molécula inibidora, tal como PD-1, PD-L1, CTLA4, TIM3, CEACAM (CEACAM-1, CEACAM-3 e/ou CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 e TGF beta, ou um fragmento de qualquer um dos mesmos, e um segundo polipeptídeo que é um domínio de sinalização intracelular descrito no presente documento (por exemplo, que compreende um domínio coestimulador (por exemplo, 41BB, CD27, OX40 ou CD28, por exemplo, conforme descrito no presente documento) e/ou um domínio de sinalização primário (por exemplo, um domínio de sinalização de CD3 zeta descrito no presente documento)). Em uma modalidade, o agente compreende um primeiro polipeptídeo de PD-1 ou um seu fragmento, e um segundo polipeptídeo de um domínio de sinalização intracelular descrito aqui (por exemplo, um domínio de sinalização de CD28 descrito aqui e/ou um domínio de sinalização de CD3 zeta descrito aqui). CAR de BCMA
[00327] Em um aspecto, o CAR divulgado no presente documento se liga a BCMA. Os CARs de BCMA exemplificativos podem incluir sequências divulgadas na Tabela 1 ou 16 do documento WO2016/014565, incorporado no presente documento a título de referência. O construto de CAR de BCMA pode incluir uma sequência líder opcional; um domínio de dobradiça opcional, por exemplo, um domínio de dobradiça de CD8; um domínio transmembranar, por exemplo, um domínio transmembranar de CD8; um domínio intracelular, por exemplo, um domínio intracelular de 4-1BB; e um domínio de sinalização funcional, por exemplo, um domínio de CD3 zeta. Em certas modalidades, os domínios são contíguos e estão no mesmo quadro de leitura para formar uma única proteína de fusão. Em outras modalidades, os domínios estão em polipeptídeos separados, por exemplo, tal como em uma molécula RCAR como descrito aqui.
[00328] As sequências de moléculas de CAR de BCMA exemplificativas ou fragmentos das mesmas são divulgados nas Tabelas 2 a 5. Em determinadas modalidades, a molécula de CAR de BCMA de comprimento total inclui uma ou mais CDRs, VH, VL, scFv, ou sequências de comprimento total de, BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-15, 149362, 149363, 149364, 149365, 149366, 149367, 149368, 149369, BCMA_EBB-C1978-A4, BCMA_EBB- C1978-G1, BCMA_EBB-C1979-C1, BCMA_EBB-C1978-C7, BCMA_EBB- C1978-D10, BCMA_EBB-C1979-C12, BCMA_EBB-C1980-G4, BCMA_EBB-C1980-D2, BCMA_EBB-C1978-A10, BCMA_EBB-C1978- D4, BCMA_EBB-C1980-A2, BCMA_EBB-C1981-C3, BCMA_EBB-C1978- G4, A7D12.2, C11D5.3, C12A3.2 ou C13F12.1, como divulgado nas Tabelas 2 a 5, ou uma sequência substancialmente (por exemplo, 95 a 99%) idêntica às mesmas.
[00329] As sequências de alvejamento de BMA exemplificativas adicionais que podem ser usadas nos construtos de CAR anti-BCMA são divulgadas nos documentos no WO 2017/021450, WO 2017/011804, WO 2017/025038, WO 2016/090327, WO 2016/130598, WO 2016/210293, WO 2016/090320, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO
2016/154055, WO 2015/166073, WO 2015/188119, WO 2015/158671, US 9.243.058, US 8.920.776, US 9.273.141, US 7.083.785, US
9.034.324, US 2007/0049735, US 2015/0284467, US 2015/0051266, US 2015/0344844, US 2016/0131655, US 2016/0297884, US 2016/0297885, US 2017/0051308, US 2017/0051252, US 2017/0051252, WO 2016/020332, WO 2016/087531, WO 2016/079177, WO 2015/172800, WO 2017/008169, US 9,340,621, US 2013/0273055, US 2016/0176973, US 2015/0368351, US 2017/0051068, US 2016/0368988 e US 2015/0232557, incorporados no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, construtos de CAR BCMA exemplificativos adicionais são gerados usando as sequências VH e VL da Publicação PCT WO2012/0163805 (cujo conteúdo é deste modo incorporado por referência na sua totalidade). Tabela 2. Sequências de Aminoácidos e de Ácidos Nucleicos de domínios scFv anti-BCMA exemplificativos e moléculas de CAR de BCMA. As sequências de aminoácidos das sequências de cadeia pesada variável e cadeia leve variável para cada scFv também são proporcionadas. Nome/ SEQ ID Sequência Descrição Nº: 139109 139109- aa 49 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEW Domínio VSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSA scFv HGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLS
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIK 139109- nt 64 GAAGTGCAATTGGTGGAATCAGGGGGAGGACTTGTGCAGCCTGGAGGATC
GCTGAGACTGTCATGTGCCGTGTCCGGCTTTGCCCTGTCCAACCACGGGA Domínio
TGTCCTGGGTCCGCCGCGCGCCTGGAAAGGGCCTCGAATGGGTGTCGGG scFv
AGGTCGAAATCAAG 139109- aa 79 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
WGQGTTVTVSS 139109- aa 94 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQ
VL 139109- aa 109 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNH
LRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQ completo
HMQALPPR 139109- nt 124 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
GCCTGGAGGATCGCTGAGACTGTCATGTGCCGTGTCCGGCTTTGCCCTGT completo
CAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG CAR 392 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI completo VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDV
WGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCR sem
ASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSL sequência QPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPE -líder ACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR 393 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI completo VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDV sem WGQGTTVTVSSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGK
APKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPY ligante,
TFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFA sem
CDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCS sequência CRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRR -líder GRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLY
QGLSTATKDTYDALHMQALPPR 139103 139103- aa 39 QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGI
SRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYY Domínio
GGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPGTLSLSPGER scFv
139103- nt 54 CAAGTGCAACTCGTGGAATCTGGTGGAGGACTCGTGCAACCCGGAAGATC
GCTTAGACTGTCGTGTGCCGCCAGCGGGTTCACTTTCTCGAACTACGCGAT Domínio
GTCCTGGGTCCGCCAGGCACCCGGAAAGGGACTCGGTTGGGTGTCCGGC scFv
CGTGGACGTTCGGACAGGGCACCAAGCTGGAGATTAAG 139103- aa 69 QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGI
GGMDVWGQGTTVTVSS 139103- aa 84 DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRR
VL 139103- aa 99 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNY
SLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGG completo
ATKDTYDALHMQALPPR 139103- nt 114 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
ACCCGGAAGATCGCTTAGACTGTCGTGTGCCGCCAGCGGGTTCACTTTCTC completo
GCCCTGCCGCCTCGG 139105 139105- aa 40 QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGI
SWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCSVHSFLAY Domínio WGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCR scFv SSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDF
TLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKVEIK 139105- nt 55 CAAGTGCAACTCGTCGAATCCGGTGGAGGTCTGGTCCAACCTGGTAGAAG
CCTGAGACTGTCGTGTGCGGCCAGCGGATTCACCTTTGATGACTATGCTAT Domínio GCACTGGGTGCGGCAGGCCCCAGGAAAGGGCCTGGAATGGGTGTCGGGA scFv ATTAGCTGGAACTCCGGGTCCATTGGCTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCG
139105- aa 70 QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGI
WGQGTLVTVSS 139105- aa 85 DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIY
TKVEIK 139105- aa 100 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDY
CAR SLRAEDTALYYCSVHSFLAYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIV completo MTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLG
TKDTYDALHMQALPPR 139105- nt 115 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
CAR ACCTGGTAGAAGCCTGAGACTGTCGTGTGCGGCCAGCGGATTCACCTTTG completo ATGACTATGCTATGCACTGGGTGCGGCAGGCCCCAGGAAAGGGCCTGGAA
CGCCTCGG 139111
139111- aa 41 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDV Domínio WGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCK scFv SSQSLLRNDGKTPLYWYLQKAGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFT
LKISRVEAEDVGAYYCMQNIQFPSFGGGTKLEIK 139111- nt 56 GAAGTGCAATTGTTGGAATCTGGAGGAGGACTTGTGCAGCCTGGAGGATC
ACTGAGACTTTCGTGTGCGGTGTCAGGCTTCGCCCTGAGCAACCACGGCA Domínio TGAGCTGGGTGCGGAGAGCCCCGGGGAAGGGTCTGGAATGGGTGTCCGG scFv GATCGTCTACTCCGGTTCAACTTACTACGCCGCAAGCGTGAAGGGTCGCTT
GGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATTAAG 139111- aa 71 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
VH WGQGTTVTVSS 139111- aa 86 DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLRNDGKTPLYWYLQKAGQPPQLLIY
VL LEIK 139111- aa 101 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNH
CAR LRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIV completo MTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLRNDGKTPLYWYLQKAGQPPQLLIYEVS
TYDALHMQALPPR 139111- nt 116 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
CAR GCCTGGAGGATCACTGAGACTTTCGTGTGCGGTGTCAGGCTTCGCCCTGA completo GCAACCACGGCATGAGCTGGGTGCGGAGAGCCCCGGGGAAGGGTCTGGA
CCTCGG 139100 139100- aa 42 QVQLVQSGAEVRKTGASVKVSCKASGYIFDNFGINWVRQAPGQGLEWMGWI
NPKNNNTNYAQKFQGRVTITADESTNTAYMEVSSLRSEDTAVYYCARGPYYY Domínio QSYMDVWGQGTMVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVMTQTPLSLPVTPG scFv EPASISCRSSQSLLHSNGYNYLNWYLQKPGQSPQLLIYLGSKRASGVPDRFSG
SGSGTDFTLHITRVGAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIK 139100- nt 57 CAAGTCCAACTCGTCCAGTCCGGCGCAGAAGTCAGAAAAACCGGTGCTAG
CGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACATTTTCGATAACTTCGGAAT Domínio CAACTGGGTCAGACAGGCCCCGGGCCAGGGGCTGGAATGGATGGGATGG scFv ATCAACCCCAAGAACAACAACACCAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCCGC
CAGACTCCGTACACATTCGGACAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG 139100- aa 72 QVQLVQSGAEVRKTGASVKVSCKASGYIFDNFGINWVRQAPGQGLEWMGWI
QSYMDVWGQGTMVTVSS 139100- aa 87 DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLNWYLQKPGQSPQLLIY
139100- aa 102 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAEVRKTGASVKVSCKASGYIFDNFG
LRSEDTAVYYCARGPYYYQSYMDVWGQGTMVTVSSASGGGGSGGRASGGG completo
STATKDTYDALHMQALPPR 139100- nt 117 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
AACCGGTGCTAGCGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACATTTTCGA completo
139101- aa 43 QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSDAMTWVRQAPGKGLEWVSVI
SGSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKLDSSGY Domínio
YYARGPRYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASV scFv
THFTLTINSLQSEDSATYYCQQSYKRASFGQGTKVEIK 139101- nt 58 CAAGTGCAACTTCAAGAATCAGGCGGAGGACTCGTGCAGCCCGGAGGATC
ATTGCGGCTCTCGTGCGCCGCCTCGGGCTTCACCTTCTCGAGCGACGCCA Domínio
TGACCTGGGTCCGCCAGGCCCCGGGGAAGGGGCTGGAATGGGTGTCTGT scFv
GCCAGCTTCGGACAGGGCACTAAGGTCGAGATCAAG 139101- aa 73 QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSDAMTWVRQAPGKGLEWVSVI
YYARGPRYWGQGTLVTVSS 139101- aa 88 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASTLA
VL 139101- aa 103 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSD
SLRAEDTAVYYCAKLDSSGYYYARGPRYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRAS completo
139101- nt 118 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
CAR completo GCCCGGAGGATCATTGCGGCTCTCGTGCGCCGCCTCGGGCTTCACCTTCT
GGCCCTGCCGCCTCGG 139102 139102- aa 44 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYGITWVRQAPGQGLEWMGWI
SAYNGNTNYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGPYYYY Domínio scFv MDVWGKGTMVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVMTQSPLSLPVTPGEPAS
139102- nt 59 CAAGTCCAACTGGTCCAGAGCGGTGCAGAAGTGAAGAAGCCCGGAGCGAG
CGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGGTACACCTTCTCCAACTACGGCAT Domínio
CACTTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGGTGG scFv
CGTACTCGTTCGGACAGGGCACCAAAGTGGAAATCAAG 139102- aa 74 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYGITWVRQAPGQGLEWMGWI
MDVWGKGTMVTVSS 139102- aa 89 EIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYVDWYLQKPGQSPQLLIY
TKVEIK 139102- aa 104 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNY
SLRSEDTAVYYCARGPYYYYMDVWGKGTMVTVSSASGGGGSGGRASGGGG completo
TATKDTYDALHMQALPPR 139102- nt 119 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
GCCCGGAGCGAGCGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGGTACACCTTCT completo
GCAGGCCCTGCCGCCTCGG 139104 139104- aa 45 EVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIV
YSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVW Domínio
GQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPATLSVSPGESATLSCRA scFv
AEDVAVYYCQQYGSSLTFGGGTKVEIK 139104- nt 60 GAAGTGCAATTGCTCGAAACTGGAGGAGGTCTGGTGCAACCTGGAGGATC
ACTTCGCCTGTCCTGCGCCGTGTCGGGCTTTGCCCTGTCCAACCATGGAAT Domínio
GAGCTGGGTCCGCCGCGCGCCGGGGAAGGGCCTCGAATGGGTGTCCGGC scFv
AAGTCGAGATTAAG 139104- aa 75 EVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIV
GQGTTVTVSS 139104- aa 90 EIVLTQSPATLSVSPGESATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTR
VL ASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYGSSLTFGGGTKVEIK 139104- aa 105 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHG
RPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLT completo
QALPPR 139104- nt 120 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
ACCTGGAGGATCACTTCGCCTGTCCTGCGCCGTGTCGGGCTTTGCCCTGT completo
AAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG 139106 139106- aa 46 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDV Domínio
WGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERATLSC scFv
SLEPEDFAVYYCQQYGSSSWTFGQGTKVEIK 139106- nt 61 GAAGTGCAATTGGTGGAAACTGGAGGAGGACTTGTGCAACCTGGAGGATC
ATTGAGACTGAGCTGCGCAGTGTCGGGATTCGCCCTGAGCAACCATGGAA Domínio
TGTCCTGGGTCAGAAGGGCCCCTGGAAAAGGCCTCGAATGGGTGTCAGGG scFv
CCAAGGTCGAAATCAAG 139106- aa 76 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
WGQGTTVTVSS 139106- aa 91 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSKLAWYQQKPGQAPRLLMYGASI
VL 139106- aa 106 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNH
LRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIV completo
ALHMQALPPR 139106- nt 121 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
ACCTGGAGGATCATTGAGACTGAGCTGCGCAGTGTCGGGATTCGCCCTGA completo
CACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG 139107
139107- aa 47 EVQLVETGGGVVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDV Domínio
WGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCR scFv
RLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK 139107- nt 62 GAAGTGCAATTGGTGGAGACTGGAGGAGGAGTGGTGCAACCTGGAGGAAG
CCTGAGACTGTCATGCGCGGTGTCGGGCTTCGCCCTCTCCAACCACGGAA Domínio
TGTCCTGGGTCCGCCGGGCCCCTGGGAAAGGACTTGAATGGGTGTCCGGC scFv
GGGGACTAAGGTCGAGATCAAG 139107- aa 77 EVQLVETGGGVVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
WGQGTTVTVSS 139107- aa 92 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSTNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNR
VL 139107- aa 107 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGVVQPGGSLRLSCAVSGFALSNH
LRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVL completo
DALHMQALPPR 139107- nt 122 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
AACCTGGAGGAAGCCTGAGACTGTCATGCGCGGTGTCGGGCTTCGCCCTC completo TCCAACCACGGAATGTCCTGGGTCCGCCGGGCCCCTGGGAAAGGACTTGA
GACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG 139108 139108- aa 48 QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYIS
SSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARESGDGMD Domínio
VWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTIT scFv
SLQPEDFATYYCQQSYTLAFGQGTKVDIK 139108- nt 63 CAAGTGCAACTCGTGGAATCTGGTGGAGGACTCGTGAAACCTGGAGGATC
ATTGAGACTGTCATGCGCGGCCTCGGGATTCACGTTCTCCGATTACTACAT Domínio
GAGCTGGATTCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGACTGGAATGGGTGTCCTACA scFv
AGTGGACATCAAG 139108- aa 78 QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYIS
VWGQGTTVTVSS 139108- aa 93 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSL
VL 139108- aa 108 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYY
RAEDTAVYYCARESGDGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDI completo
MQALPPR 139108- nt 123 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
ACCTGGAGGATCATTGAGACTGTCATGCGCGGCCTCGGGATTCACGTTCTC completo
GACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG 139110 139110- aa 50 QVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYIS
SSGNTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSTMVRED Domínio
YWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPLSLPVTLGQPASISC scFv
FTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPGTFGQGTKLEIK 139110- nt 65 CAAGTGCAACTGGTGCAAAGCGGAGGAGGATTGGTCAAACCCGGAGGAAG
CCTGAGACTGTCATGCGCGGCCTCTGGATTCACCTTCTCCGATTACTACAT Domínio
GTCATGGATCAGACAGGCCCCGGGGAAGGGCCTCGAATGGGTGTCCTACA scFv
GGAACCTTTGGACAAGGAACTAAGCTCGAGATTAAG 139110- aa 80 QVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYIS
139110- aa 95 DIVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSESLVHNSGKTYLNWFHQRPGQSPRRLIY
GTKLEIK 139110- aa 110 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDY
LRAEDTAVYYCARSTMVREDYWGQGTLVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDI completo
ATKDTYDALHMQALPPR 139110- nt 125 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
ACCCGGAGGAAGCCTGAGACTGTCATGCGCGGCCTCTGGATTCACCTTCT completo
GCCCTGCCGCCTCGG 139112 139112- aa 51 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDV Domínio
WGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQ scFv
QPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIK 139112- nt 66 CAAGTGCAACTCGTGGAATCTGGTGGAGGACTCGTGCAACCCGGTGGAAGCC
TTAGGCTGTCGTGCGCCGTCAGCGGGTTTGCTCTGAGCAACCATGGAATGTC Domínio
CTGGGTCCGCCGGGCACCGGGAAAAGGGCTGGAATGGGTGTCCGGCATCGT scFv
CCTCCCGCTCACATTCGGCGGGGGAACCAAGGTCGAGATTAAG 139112- aa 81 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
WGQGTTVTVSS 139112- aa 96 DIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQ
VL 139112- aa 111 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGM
DTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIRLTQSPS completo
139112- nt 126 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
ACCCGGTGGAAGCCTTAGGCTGTCGTGCGCCGTCAGCGGGTTTGCTCTGA completo
CAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG 139113 139113- aa 52 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDV Domínio
WGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSETTLTQSPATLSVSPGERATLSC scFv
SLQPEDFAVYYCQQYNDWLPVTFGQGTKVEIK 139113- nt 67 GAAGTGCAATTGGTGGAAACTGGAGGAGGACTTGTGCAACCTGGAGGATC
ATTGCGGCTCTCATGCGCTGTCTCCGGCTTCGCCCTGTCAAATCACGGGAT Domínio
GTCGTGGGTCAGACGGGCCCCGGGAAAGGGTCTGGAATGGGTGTCGGGG scFv
GGGACGAAGGTGGAAATCAAA 139113- aa 82 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
WGQGTTVTVSS 139113- aa 97 ETTLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVGSNLAWYQQKPGQGPRLLIYGAST
K 139113- aa 112 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNH
LRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSETT completo
ALHMQALPPR 139113- nt 127 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
ACCTGGAGGATCATTGCGGCTCTCATGCGCTGTCTCCGGCTTCGCCCTGTC completo
GCCTCGG 139114 139114- aa 53 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDV Domínio
WGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCR scFv
RLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIK 139114- nt 68 GAAGTGCAATTGGTGGAATCTGGTGGAGGACTTGTGCAACCTGGAGGATC
ACTGAGACTGTCATGCGCGGTGTCCGGTTTTGCCCTGAGCAATCATGGGAT Domínio
GTCGTGGGTCCGGCGCGCCCCCGGAAAGGGTCTGGAATGGGTGTCGGGT scFv
139114- aa 83 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI
WGQGTTVTVSS 139114- aa 98 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGAS
EIK 139114- aa 113 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNH
LRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVL completo
DALHMQALPPR 139114- nt 128 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
ACCTGGAGGATCACTGAGACTGTCATGCGCGGTGTCCGGTTTTGCCCTGA completo
GG 149362 Domínio 129 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSYYYWGWIRQPPGKGLEWIGSI scFv YYSGSAYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARHWQEWPD 149362-aa AFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSETTLTQSPAFMSATPGDKVIIS
NIESEDAAYYFCLQHDNFPLTFGQGTKLEIK Domínio 150 CAAGTGCAGCTTCAGGAAAGCGGACCGGGCCTGGTCAAGCCATCCGAAAC scFv TCTCTCCCTGACTTGCACTGTGTCTGGCGGTTCCATCTCATCGTCGTACTAC 149362-nt TACTGGGGCTGGATTAGGCAGCCGCCCGGAAAGGGACTGGAGTGGATCG
CAGGGAACCAAGCTGGAAATCAAG VH 171 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSYYYWGWIRQPPGKGLEWIGSI 149362-aa YYSGSAYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARHWQEWPD
AFDIWGQGTMVTVSS VL 192 ETTLTQSPAFMSATPGDKVIISCKASQDIDDAMNWYQQKPGEAPLFIIQSATSP 149362-aa VPGIPPRFSGSGFGTDFSLTINNIESEDAAYYFCLQHDNFPLTFGQGTKLEIK CAR 213 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSYYY completo WGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSAYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAA 149362-aa DTAVYYCARHWQEWPDAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSETTLT
DKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 149362-nt 234 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
GCCATCCGAAACTCTCTCCCTGACTTGCACTGTGTCTGGCGGTTCCATCTCA completo
CGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG 149363 Domínio 130 VNLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLRTSGMCVSWIRQPPGKALEWLARIDW scFv DEDKFYSTSLKTRLTISKDTSDNQVVLRMTNMDPADTATYYCARSGAGGTSATA 149363-aa FDIWGPGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
Domínio 151 CAAGTCAATCTGCGCGAATCCGGCCCCGCCTTGGTCAAGCCTACCCAGAC scFv CCTCACTCTGACCTGTACTTTCTCCGGCTTCTCCCTGCGGACTTCCGGGAT 149363-nt GTGCGTGTCCTGGATCAGACAGCCTCCGGGAAAGGCCCTGGAGTGGCTCG
CGTTCGGACAGGGAACCAAGCTGGAAATCAAG VH 172 QVNLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLRTSGMCVSWIRQPPGKALEWLARI 149363-aa DWDEDKFYSTSLKTRLTISKDTSDNQVVLRMTNMDPADTATYYCARSGAGGT
SATAFDIWGPGTMVTVSS VL 193 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIYNNLAWFQLKPGSAPRSLMYAANK 149363-aa SQSGVPSRFSGSASGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHYYRFPYSFGQGTKLEIK CAR 214 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVNLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLRTSG completo MCVSWIRQPPGKALEWLARIDWDEDKFYSTSLKTRLTISKDTSDNQVVLRMTN 149363-aa MDPADTATYYCARSGAGGTSATAFDIWGPGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGG
KDTYDALHMQALPPR 149363-nt 235 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
GCCTACCCAGACCCTCACTCTGACCTGTACTTTCTCCGGCTTCTCCCTGCG completo
CGCCTCGG 149364 Domínio 131 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIS scFv SSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKTIAAVYAF 149364-aa DIWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPLSLPVTPEEPASISCRS
LKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIK Domínio 152 GAAGTGCAGCTTGTCGAATCCGGGGGGGGACTGGTCAAGCCGGGCGGAT scFv CACTGAGACTGTCCTGCGCCGCGAGCGGCTTCACGTTCTCCTCCTACTCCA 149364-nt TGAACTGGGTCCGCCAAGCCCCCGGGAAGGGACTGGAATGGGTGTCCTCT
CACATTTGGGCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG VH 173 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIS 149364-aa SSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKTIAAVYAF
DIWGQGTTVTVSS VL 194 EIVLTQSPLSLPVTPEEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYL 149364-aa GSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGT
KLEIK CAR 215 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYS completo MNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSL 149364-aa RAEDTAVYYCAKTIAAVYAFDIWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVL
TYDALHMQALPPR 149364-nt 236 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
AGCCGGGCGGATCACTGAGACTGTCCTGCGCCGCGAGCGGCTTCACGTTC completo
GCCCTGCCGCCTCGG 149365 Domínio 132 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYIS scFv SSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLRGAFDI 149365-aa WGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYVLTQSPSVSAAPGYTATISCGG
QAGDEADFYCQVWDSDSEHVVFGGGTKLTVL Domínio 153 GAAGTCCAGCTCGTGGAGTCCGGCGGAGGCCTTGTGAAGCCTGGAGGTTC scFv GCTGAGACTGTCCTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCGACTACTACAT 149365-nt GTCCTGGATCAGACAGGCCCCGGGAAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTACA
ACCAAGCTGACTGTGCTC VH 174 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYIS 149365-aa SSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLRGAFDI
WGQGTMVTVSS VL 195 SYVLTQSPSVSAAPGYTATISCGGNNIGTKSVHWYQQKPGQAPLLVIRDDSVR 149365-aa PSKIPGRFSGSNSGNMATLTISGVQAGDEADFYCQVWDSDSEHVVFGGGTKL
CAR 216 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYY completo MSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSL 149365-aa RAEDTAVYYCARDLRGAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYVLT
ALHMQALPPR 149365-nt 237 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
AGCCTGGAGGTTCGCTGAGACTGTCCTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTC completo
Domínio 133 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKPSGYTVTSHYIHWVRRAPGQGLEWMGMI scFv NPSGGVTAYSQTLQGRVTMTSDTSSSTVYMELSSLRSEDTAMYYCAREGSGS 149366-aa GWYFDFWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYVLTQPPSVSVSPGQTA
LTISGTQAMDEADYYCQAWDDTTVVFGGGTKLTVL Domínio 154 CAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGGGCCGAAGTCAAGAAGCCGGGAGCCT scFv CCGTGAAAGTGTCCTGCAAGCCTTCGGGATACACCGTGACCTCCCACTACA 149366-nt TTCATTGGGTCCGCCGCGCCCCCGGCCAAGGACTCGAGTGGATGGGCATG
GGGCACCAAGTTGACCGTCCTT VH 175 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKPSGYTVTSHYIHWVRRAPGQGLEWMGMI 149366-aa NPSGGVTAYSQTLQGRVTMTSDTSSSTVYMELSSLRSEDTAMYYCAREGSGS
GWYFDFWGRGTLVTVSS VL 196 SYVLTQPPSVSVSPGQTASITCSGDGLSKKYVSWYQQKAGQSPVVLISRDKER 149366-aa PSGIPDRFSGSNSADTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDDTTVVFGGGTKLTVL CAR 217 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKPSGYTVTSH completo YIHWVRRAPGQGLEWMGMINPSGGVTAYSQTLQGRVTMTSDTSSSTVYMELS 149366-aa SLRSEDTAMYYCAREGSGSGWYFDFWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG
149366-nt 238 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
CAR completo AGCCGGGAGCCTCCGTGAAAGTGTCCTGCAAGCCTTCGGGATACACCGTG
CCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG 149367 Domínio 134 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYI scFv YYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARAGIAARLR 149367-aa GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSSVSASVGDRVII
Domínio 155 CAAGTGCAGCTTCAGGAGAGCGGCCCGGGACTCGTGAAGCCGTCCCAGAC scFv CCTGTCCCTGACTTGCACCGTGTCGGGAGGAAGCATCTCGAGCGGAGGCT 149367-nt ACTATTGGTCGTGGATTCGGCAGCACCCTGGAAAGGGCCTGGAATGGATC
TTTCGGACCGGGGACCAAAGTGGACATTAAG VH 176 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYI 149367-aa YYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARAGIAARLR
GAFDIWGQGTMVTVSS VL 197 DIVMTQSPSSVSASVGDRVIITCRASQGIRNWLAWYQQKPGKAPNLLIYAASNL 149367-aa QSGVPSRFSGSGSGADFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPFTFGPGTKVDIK CAR 218 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGG completo YYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSV 149367-aa TAADTAVYYCARAGIAARLRGAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
DALHMQALPPR 149367-nt 239 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
AGCCGTCCCAGACCCTGTCCCTGACTTGCACCGTGTCGGGAGGAAGCATC completo
CCTGCCGCCTCGG 149368 Domínio 135 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGII scFv PIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGGYQLLR 149368-aa WDVGLLRSAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYVLTQPPSVSV
RSGTTASLTITGAQAEDEADYYCSSRDSSGDHLRVFGTGTKVTVL Domínio 156 CAAGTGCAGCTGGTCCAGTCGGGCGCCGAGGTCAAGAAGCCCGGGAGCT scFv CTGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGGGGCACCTTTAGCTCCTACGCC 149368-nt ATCTCCTGGGTCCGCCAAGCACCGGGTCAAGGCCTGGAGTGGATGGGGG
CACCGTGCTG VH 177 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGII 149368-aa PIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGGYQLLR
WDVGLLRSAFDIWGQGTMVTVSS VL 198 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVLYGKNN 149368-aa RPSGVPDRFSGSRSGTTASLTITGAQAEDEADYYCSSRDSSGDHLRVFGTGT
KVTVL CAR 219 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSY completo AISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSL 149368-aa RSEDTAVYYCARRGGYQLLRWDVGLLRSAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGG
YQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 149368-nt 240 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
AGCCCGGGAGCTCTGTGAAAGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGGGGCACCTTT completo
TATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG 149369 Domínio 136 EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGR scFv TYYRSKWYSFYAISLKSRIIINPDTSKNQFSLQLKSVTPEDTAVYYCARSSPEGL 149369-aa FLYWFDPWGQGTLVTVSSGGDGSGGGGSGGGGSSSELTQDPAVSVALGQTI
LTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGHHLLFGTGTKVTVL Domínio 157 GAAGTGCAGCTCCAACAGTCAGGACCGGGGCTCGTGAAGCCATCCCAGAC scFv CCTGTCCCTGACTTGTGCCATCTCGGGAGATAGCGTGTCATCGAACTCCGC 149369-nt CGCCTGGAACTGGATTCGGCAGAGCCCGTCCCGCGGACTGGAGTGGCTTG
TCACCTCTTGTTCGGAACTGGAACCAAGGTCACCGTGCTG VH 178 EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGR 149369-aa TYYRSKWYSFYAISLKSRIIINPDTSKNQFSLQLKSVTPEDTAVYYCARSSPEGL
FLYWFDPWGQGTLVTVSS VL 199 SSELTQDPAVSVALGQTIRITCQGDSLGNYYATWYQQKPGQAPVLVIYGTNNRPS 149369-aa GIPDRFSASSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGHHLLFGTGTKVTVL
CAR 220 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNS completo AAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYSFYAISLKSRIIINPDTSKNQFSLQLK 149369-aa SVTPEDTAVYYCARSSPEGLFLYWFDPWGQGTLVTVSSGGDGSGGGGSGGG
ATKDTYDALHMQALPPR 149369-nt 241 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
AGCCATCCCAGACCCTGTCCCTGACTTGTGCCATCTCGGGAGATAGCGTGT completo
BCMA_EBB-C1978-A4 BCMA_EB 137 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B-C1978- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVEGSGSL A4 - aa DYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTLSLSPGERATLSC
RASQSVSSAYLAWYQQKPGQPPRLLISGASTRATGIPDRFGGSGSGTDFTLTI Domínio
SRLEPEDFAVYYCQHYGSSFNGSSLFTFGQGTRLEIK scFv BCMA_EB 158 GAAGTGCAGCTCGTGGAGTCAGGAGGCGGCCTGGTCCAGCCGGGAGGGT B-C1978- CCCTTAGACTGTCATGCGCCGCAAGCGGATTCACTTTCTCCTCCTATGCCA A4 - nt TGAGCTGGGTCCGCCAAGCCCCCGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGC
CATCTCGGGGTCTGGAGGCTCAACTTACTACGCTGACTCCGTGAAGGGAC Domínio
GGTTCACCATTAGCCGCGACAACTCCAAGAACACCCTCTACCTCCAAATGA scFv
CCTGTTCACGTTCGGACAGGGGACCCGCCTGGAAATCAAG BCMA_EB 179 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B-C1978- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVEGSGSL A4 – aa VH DYWGQGTLVTVSS BCMA_EB 200 EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSAYLAWYQQKPGQPPRLLISGAS B-C1978- TRATGIPDRFGGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSFNGSSLFTFGQ A4 – aa VL GTRLEIK BCMA_EB 221 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYA B-C1978- MSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS A4 - aa LRAEDTAVYYCAKVEGSGSLDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIV
TGIPDRFGGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSFNGSSLFTFGQGTR completo
BCMA_EB 242 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B-C1978- GCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTCGTGGAGTCAGGAGGCGGCCTGGTCC A4 - nt AGCCGGGAGGGTCCCTTAGACTGTCATGCGCCGCAAGCGGATTCACTTTC
CART TCCTCCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAAGCCCCCGGAAAGGGACTGGA completo ATGGGTGTCCGCCATCTCGGGGTCTGGAGGCTCAACTTACTACGCTGACTC
GGCCCTGCCGCCTCGG BCMA_EBB-C1978-G1 BCMA_EB 138 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSRYPMSWVRQAPGKGLEWVSGIS B-C1978- DSGVSTYYADSAKGRFTISRDNSKNTLFLQMSSLRDEDTAVYYCVTRAGSEAS G1 - aa DIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCR
ASQSVSNSLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRL Domínio
EPEDFAIYYCQQFGTSSGLTFGGGTKLEIK scFv
BCMA_EB 159 GAAGTGCAACTGGTGGAAACCGGTGGCGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGAT B-C1978- CATTGAGGCTGTCATGCGCGGCCAGCGGTATTACCTTCTCCCGGTACCCC G1 - nt ATGTCCTGGGTCAGACAGGCCCCGGGGAAAGGGCTTGAATGGGTGTCCG Domínio GGATCTCGGACTCCGGTGTCAGCACTTACTACGCCGACTCCGCCAAGGG scFv ACGCTTCACCATTTCCCGGGACAACTCGAAGAACACCCTGTTCCTCCAAAT
GACTTTCGGAGGCGGCACGAAGCTCGAAATCAAG BCMA_EB 180 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSRYPMSWVRQAPGKGLEWVSGIS B-C1978- DSGVSTYYADSAKGRFTISRDNSKNTLFLQMSSLRDEDTAVYYCVTRAGSEAS G1 - aa
VH BCMA_EB 201 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSNSLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSR B-C1978- ATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAIYYCQQFGTSSGLTFGGGTKLEIK G1 – aa
VL BCMA_EB 222 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSRYP B-C1978- MSWVRQAPGKGLEWVSGISDSGVSTYYADSAKGRFTISRDNSKNTLFLQMSS G1 - aa LRDEDTAVYYCVTRAGSEASDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIV
CART LTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSNSLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRAT completo GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAIYYCQQFGTSSGLTFGGGTKLEIKTTT
BCMA_EB 243 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B-C1978- GCCGCTCGGCCCGAAGTGCAACTGGTGGAAACCGGTGGCGGCCTGGTGC G1 - nt AGCCTGGAGGATCATTGAGGCTGTCATGCGCGGCCAGCGGTATTACCTTCT
CART CCCGGTACCCCATGTCCTGGGTCAGACAGGCCCCGGGGAAAGGGCTTGAA completo TGGGTGTCCGGGATCTCGGACTCCGGTGTCAGCACTTACTACGCCGACTC
GG BCMA_EBB-C1979-C1 BCMA_EB 139 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B-C1979- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAIYYCARATYKREL C1 - aa RYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTVSLSPG Domínio ERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG scFv TDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTRLEIK
BCMA_EB 160 CAAGTGCAGCTCGTGGAATCGGGTGGCGGACTGGTGCAGCCGGGGG B-C1979- GCTCACTTAGACTGTCCTGCGCGGCCAGCGGATTCACTTTCTCCTCCT C1 - nt
ACGCCATGTCCTGGGTCAGACAGGCCCCTGGAAAGGGCCTGGAATGG Domínio GTGTCCGCAATCAGCGGCAGCGGCGGCTCGACCTATTACGCGGATTC scFv AGTGAAGGGCAGATTCACCATTTCCCGGGACAACGCCAAGAACTCCTT
GACGTTCGGACAGGGCACAAGGCTGGAGATTAAG BCMA_EB 181 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWV B-C1979- SAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAIYYCARA C1 - aa
VH BCMA_EB 202 EIVMTQSPGTVSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIY B-C1979- GASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTF C1 - aa
VL BCMA_EB 223 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS B-C1979- SYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNSL C1 - aa
CART GSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTVSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWY completo QQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYY
BCMA_EB 244 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B-C1979- GCCGCTCGGCCCCAAGTGCAGCTCGTGGAATCGGGTGGCGGACTGGTGC C1 - nt AGCCGGGGGGCTCACTTAGACTGTCCTGCGCGGCCAGCGGATTCACTTTC
CART TCCTCCTACGCCATGTCCTGGGTCAGACAGGCCCCTGGAAAGGGCCTGGA completo ATGGGTGTCCGCAATCAGCGGCAGCGGCGGCTCGACCTATTACGCGGATT
CATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG BCMA_EBB-C1978-C7 BCMA_EB 140 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B-C1978- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNTLKAEDTAVYYCARATYKREL C7 - aa RYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPSTLSLSPGE Domínio SATLSCRASQSVSTTFLAWYQQKPGQAPRLLIYGSSNRATGIPDRFSGSGSGT scFv DFTLTIRRLEPEDFAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKVEIK
BCMA_EB 161 GAGGTGCAGCTTGTGGAAACCGGTGGCGGACTGGTGCAGCCCGGAGGAA B-C1978- GCCTCAGGCTGTCCTGCGCCGCGTCCGGCTTCACCTTCTCCTCGTACGCC C7 - nt ATGTCCTGGGTCCGCCAGGCCCCCGGAAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCG Domínio CCATCTCTGGAAGCGGAGGTTCCACGTACTACGCGGACAGCGTCAAGGGA scFv AGGTTCACAATCTCCCGCGATAATTCGAAGAACACTCTGTACCTTCAAATGA
CGCCGTCCTGGACCTTTGGCCAAGGAACCAAAGTGGAAATCAAG BCMA_EB 182 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLE B-C1978- WVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNTLKAEDTAVY C7 - aa
VH BCMA_EB 203 EIVLTQSPSTLSLSPGESATLSCRASQSVSTTFLAWYQQKPGQAPRLLI B-C1978- YGSSNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTIRRLEPEDFAVYYCQQYHSSPS C7 - aa
VL BCMA_EB 224 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGF B-C1978- TFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDN C7 - aa
CART VSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPSTLSLSPGESATLSCRASQSV completo STTFLAWYQQKPGQAPRLLIYGSSNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTIR
STATKDTYDALHMQALPPR BCMA_EB 245 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC
B-C1978- GCCGCTCGGCCCGAGGTGCAGCTTGTGGAAACCGGTGGCGGACTGGTGC C7 - nt AGCCCGGAGGAAGCCTCAGGCTGTCCTGCGCCGCGTCCGGCTTCACCTTC
ATGGGTGTCCGCCATCTCTGGAAGCGGAGGTTCCACGTACTACGCGGACA completo
ATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG BCMA_EBB-C1978-D10 BCMA_EB 141 EVQLVETGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGI B-C1978- SWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARVGKAVP D10 - aa DVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPSSLSASVGDRVTITC
RASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISS Domínio
LQPEDFATYYCQQSYSTPYSFGQGTRLEIK scFv
BCMA_EB 162 GAAGTGCAGCTCGTGGAAACTGGAGGTGGACTCGTGCAGCCTGGACGGTC B-C1978- GCTGCGGCTGAGCTGCGCTGCATCCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCAT D10- nt GCACTGGGTCAGACAGGCGCCAGGGAAGGGACTTGAGTGGGTGTCCGGT Domínio ATCAGCTGGAATAGCGGCTCAATCGGATACGCGGACTCCGTGAAGGGAAG scFv GTTCACCATTTCCCGCGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACTTGCAAATGAA
AGGCTGGAAATCAAG BCMA_EB 183 EVQLVETGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLE B-C1978- WVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVY D10 – aa
VH BCMA_EB 204 DIVMTQTPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIY B-C1978- AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYS D10- aa VL
FGQGTRLEIK BCMA_EB 225 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGRSLRLSCAASGF B-C1978- TFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDN D10 - aa
CART GSGGGGSGGGGSDIVMTQTPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNW completo
BCMA_EB 246 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B-C1978- GCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTCGTGGAAACTGGAGGTGGACTCGTGCA D10 - nt GCCTGGACGGTCGCTGCGGCTGAGCTGCGCTGCATCCGGCTTCACCTTCG
TGGGTGTCCGGTATCAGCTGGAATAGCGGCTCAATCGGATACGCGGACTC completo
CACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG BCMA_EBB-C1979-C12 BCMA_EB 142 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYAMHWVRQRPGKGLEWVASI B-C1979- NWKGNSLAYGDSVKGRFAISRDNAKNTVFLQMNSLRTEDTAVYYCASHQGVA C12- aa YYNYAMDVWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGE
RATLSCRATQSIGSSFLAWYQQRPGQAPRLLIYGASQRATGIPDRFSGRGSGT Domínio
DFTLTISRVEPEDSAVYYCQHYESSPSWTFGQGTKVEIK scFv BCMA_EB 163 GAAGTGCAGCTCGTGGAGAGCGGGGGAGGATTGGTGCAGCCCGGAAGGT B-C1979- CCCTGCGGCTCTCCTGCACTGCGTCTGGCTTCACCTTCGACGACTACGCG C12 - nt ATGCACTGGGTCAGACAGCGCCCGGGAAAGGGCCTGGAATGGGTCGCCT
CAATCAACTGGAAGGGAAACTCCCTGGCCTATGGCGACAGCGTGAAGGGC Domínio
CGCTTCGCCATTTCGCGCGACAACGCCAAGAACACCGTGTTTCTGCAAATG scFv
CATGGACCTTCGGTCAAGGGACCAAAGTGGAGATCAAG BCMA_EB 184 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYAMHWVRQRPGKGLEWVASI B-C1979- NWKGNSLAYGDSVKGRFAISRDNAKNTVFLQMNSLRTEDTAVYYCASHQGVA C12 - aa YYNYAMDVWGRGTLVTVSS
VH BCMA_EB 205 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRATQSIGSSFLAWYQQRPGQAPRLLIYGASQ B-C1979- RATGIPDRFSGRGSGTDFTLTISRVEPEDSAVYYCQHYESSPSWTFGQGTKVE C12 - aa IK
VL BCMA_EB 226 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFDDYA B-C1979- MHWVRQRPGKGLEWVASINWKGNSLAYGDSVKGRFAISRDNAKNTVFLQMN C12 - aa SLRTEDTAVYYCASHQGVAYYNYAMDVWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGG
ASQRATGIPDRFSGRGSGTDFTLTISRVEPEDSAVYYCQHYESSPSWTFGQGT completo
ATKDTYDALHMQALPPR BCMA_EB 247 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B-C1979- GCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTCGTGGAGAGCGGGGGAGGATTGGTGC C12 - nt AGCCCGGAAGGTCCCTGCGGCTCTCCTGCACTGCGTCTGGCTTCACCTTC
AATGGGTCGCCTCAATCAACTGGAAGGGAAACTCCCTGGCCTATGGCGAC completo
CAGGCCCTGCCGCCTCGG BCMA_EBB-C1980-G4 BCMA_EB 143 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1980- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVVRDGM G4- aa DVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSC
RASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGNGSGTDFTLTI Domínio
SRLEPEDFAVYYCQQYGSPPRFTFGPGTKVDIK scFv BCMA_EB 164 GAGGTGCAGTTGGTCGAAAGCGGGGGCGGGCTTGTGCAGCCTGGCGGAT B- C1980- CACTGCGGCTGTCCTGCGCGGCATCAGGCTTCACGTTTTCTTCCTACGCCA G4- nt TGTCCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGC
GATTTCGGGGTCCGGCGGGAGCACCTACTACGCCGATTCCGTGAAGGGCC Domínio
GCTTCACTATCTCGCGGGACAACTCCAAGAACACCCTCTACCTCCAAATGA scFv
CCCCGGCACCAAAGTGGACATCAAG BCMA_EB 185 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1980- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVVRDGM G4- aa VH DVWGQGTTVTVSS BCMA_EB 206 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASS B- C1980- RATGIPDRFSGNGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSPPRFTFGPGTKVDI G4- aa VL K BCMA_EB 227 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYA B- C1980- MSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS G4- aa LRAEDTAVYYCAKVVRDGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVL
GIPDRFSGNGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSPPRFTFGPGTKVDIKTT completo
ALHMQALPPR BCMA_EB 248 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B- C1980- GCCGCTCGGCCCGAGGTGCAGTTGGTCGAAAGCGGGGGCGGGCTTGTGC G4- nt AGCCTGGCGGATCACTGCGGCTGTCCTGCGCGGCATCAGGCTTCACGTTT
ATGGGTGTCCGCGATTTCGGGGTCCGGCGGGAGCACCTACTACGCCGATT completo
CCACCAAGGACACCTATGACGCTCTTCACATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG BCMA_EBB-C1980-D2 BCMA_EB 144 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1980- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKIPQTGTF D2- aa DYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC
RASQSVSSSYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTI Domínio
SRLEPEDFAVYYCQHYGSSPSWTFGQGTRLEIK scFv BCMA_EB 165 GAAGTGCAGCTGCTGGAGTCCGGCGGTGGATTGGTGCAACCGGGGGGAT B- C1980- CGCTCAGACTGTCCTGTGCGGCGTCAGGCTTCACCTTCTCGAGCTACGCC D2- nt ATGTCATGGGTCAGACAGGCCCCTGGAAAGGGTCTGGAATGGGTGTCCGC
CATTTCCGGGAGCGGGGGATCTACATACTACGCCGATAGCGTGAAGGGCC Domínio
GCTTCACCATTTCCCGGGACAACTCCAAGAACACTCTCTATCTGCAAATGAA scFv
CCAGGGAACTCGGCTGGAGATCAAG BCMA_EB 186 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1980- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKIPQTGTF D2- aa VH DYWGQGTLVTVSS BCMA_EB 207 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQRPGQAPRLLIYGAS B- C1980- SRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSPSWTFGQGTRL D2- aa VL EIK BCMA_EB 228 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYA
B- C1980- MSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYL D2- aa QMNSLRAEDTAVYYCAKIPQTGTFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGS
CART GGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQRPG completo QAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHY
MAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR BCMA_EB 249 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B- C1980- GCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTGCTGGAGTCCGGCGGTGGATTGGTGC D2- nt AACCGGGGGGATCGCTCAGACTGTCCTGTGCGGCGTCAGGCTTCACCTTC
ATGGGTGTCCGCCATTTCCGGGAGCGGGGGATCTACATACTACGCCGATA completo
BCMA_EBB-C1978-A10 BCMA_EB 145 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1978- GSGGSTYYADSVKGRFTMSRENDKNSVFLQMNSLRVEDTGVYYCARANYKR A10- aa ELRYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPGTLSLS Domínio PGESATLSCRASQRVASNYLAWYQHKPGQAPSLLISGASSRATGVPDRFSGS scFv GSGTDFTLAISRLEPEDSAVYYCQHYDSSPSWTFGQGTKVEIK BCMA_EB 166 GAAGTGCAACTGGTGGAAACCGGTGGAGGACTCGTGCAGCCTGGCGGCA B- C1978- GCCTCCGGCTGAGCTGCGCCGCTTCGGGATTCACCTTTTCCTCCTACGCG A10- nt ATGTCTTGGGTCAGACAGGCCCCCGGAAAGGGGCTGGAATGGGTGTCAGC
CATCTCCGGCTCCGGCGGATCAACGTACTACGCCGACTCCGTGAAAGGCC Domínio
GGTTCACCATGTCGCGCGAGAATGACAAGAACTCCGTGTTCCTGCAAATGA scFv
TCCCCCTCCTGGACATTCGGACAGGGCACCAAGGTCGAGATCAAG BCMA_EB 187 EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1978- GSGGSTYYADSVKGRFTMSRENDKNSVFLQMNSLRVEDTGVYYCARANYKR A10- aa ELRYYYGMDVWGQGTMVTVSS
VH BCMA_EB 208 EIVMTQSPGTLSLSPGESATLSCRASQRVASNYLAWYQHKPGQAPSLLISGAS B- C1978- SRATGVPDRFSGSGSGTDFTLAISRLEPEDSAVYYCQHYDSSPSWTFGQGTK A10- aa VL VEIK BCMA_EB 229 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYA B- C1978- MSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTMSRENDKNSVFLQMN A10- aa SLRVEDTGVYYCARANYKRELRYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGS
LISGASSRATGVPDRFSGSGSGTDFTLAISRLEPEDSAVYYCQHYDSSPSWTF completo
BCMA_EB 250 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B- C1978- GCCGCTCGGCCCGAAGTGCAACTGGTGGAAACCGGTGGAGGACTCGTGC A10- nt AGCCTGGCGGCAGCCTCCGGCTGAGCTGCGCCGCTTCGGGATTCACCTTT
ATGGGTGTCAGCCATCTCCGGCTCCGGCGGATCAACGTACTACGCCGACT completo
CATGCAGGCCCTGCCGCCTCGG BCMA_EBB-C1978-D4 BCMA_EB 146 EVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1978- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKALVGATG D4- aa AFDIWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLS
CRASQSLSSNFLAWYQQKPGQAPGLLIYGASNWATGTPDRFSGSGSGTDFTL Domínio
TITRLEPEDFAVYYCQYYGTSPMYTFGQGTKVEIK scFv BCMA_EB 167 GAAGTGCAGCTGCTCGAAACCGGTGGAGGGCTGGTGCAGCCAGGGGGCT B- C1978- CCCTGAGGCTTTCATGCGCCGCTAGCGGATTCTCCTTCTCCTCTTACGCCA
D4- nt TGTCGTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGAAAAGGCCTGGAATGGGTGTCCGCG
ATTTCCGGGAGCGGAGGTTCGACCTATTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCG Domínio
CTTTACCATCTCCCGGGATAACTCCAAGAACACTCTGTACCTCCAAATGAAC scFv
TCGGACAGGGTACCAAGGTCGAGATTAAG BCMA_EB 188 EVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1978- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKALVGATG D4- aa VH AFDIWGQGTLVTVSS BCMA_EB 209 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLSSNFLAWYQQKPGQAPGLLIYGASN B- C1978- WATGTPDRFSGSGSGTDFTLTITRLEPEDFAVYYCQYYGTSPMYTFGQGTKVE D4- aa VL IK BCMA_EB 230 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLETGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYA B- C1978- MSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS D4- aa LRAEDTAVYYCAKALVGATGAFDIWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEI
ATGTPDRFSGSGSGTDFTLTITRLEPEDFAVYYCQYYGTSPMYTFGQGTKVEIK completo
YDALHMQALPPR BCMA_EB 251 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B- C1978- GCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTGCTCGAAACCGGTGGAGGGCTGGTGC D4- nt AGCCAGGGGGCTCCCTGAGGCTTTCATGCGCCGCTAGCGGATTCTCCTTC
ATGGGTGTCCGCGATTTCCGGGAGCGGAGGTTCGACCTATTACGCCGACT completo
CGCCTCGG BCMA_EBB-C1980-A2 BCMA_EB 147 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1980- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVLWFGEGF A2- aa DPWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCR
SSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDF Domínio
TLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVDIK scFv BCMA_EB 168 GAAGTGCAGCTGCTTGAGAGCGGTGGAGGTCTGGTGCAGCCCGGGGGAT B- C1980- CACTGCGCCTGTCCTGTGCCGCGTCCGGTTTCACTTTCTCCTCGTACGCCA A2- nt TGTCGTGGGTCAGACAGGCACCGGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCAGCC
ATTTCGGGTTCGGGGGGCAGCACCTACTACGCTGACTCCGTGAAGGGCCG Domínio
GTTCACCATTTCCCGCGACAACTCCAAGAACACCTTGTACCTCCAAATGAAC scFv
CTTCGGAGGAGGAACGAAGGTCGACATCAAGA BCMA_EB 189 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1980- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVLWFGEGF A2- aa VH DPWGQGTLVTVSS BCMA_EB 210 DIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIY B- C1980- LGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGG A2- aa VL TKVDIK BCMA_EB 231 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYA B- C1980- MSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS A2- aa LRAEDTAVYYCVLWFGEGFDPWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVL
RASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVDI completo
TYDALHMQALPPR BCMA_EB 252 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B- C1980- GCCGCTCGGCCCGAAGTGCAGCTGCTTGAGAGCGGTGGAGGTCTGGTGC A2- nt AGCCCGGGGGATCACTGCGCCTGTCCTGTGCCGCGTCCGGTTTCACTTTC
ATGGGTGTCAGCCATTTCGGGTTCGGGGGGCAGCACCTACTACGCTGACT completo
CGCCTCGG BCMA_EBB-C1981-C3 BCMA_EB 148 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1981- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVGYDSS C3- aa GYYRDYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLS
PGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGISDRFSGSG Domínio
SGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGNSPPKFTFGPGTKLEIK scFv BCMA_EB 169 CAAGTGCAGCTCGTGGAGTCAGGCGGAGGACTGGTGCAGCCCGGGGGCT B- C1981- CCCTGAGACTTTCCTGCGCGGCATCGGGTTTTACCTTCTCCTCCTATGCTAT C3- nt GTCCTGGGTGCGCCAGGCCCCGGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCA
ATCAGCGGTAGCGGGGGCTCAACATACTACGCCGACTCCGTCAAGGGTCG Domínio
CTTCACTATTTCCCGGGACAACTCCAAGAATACCCTGTACCTCCAAATGAAC scFv
ACTCGCCGCCAAAGTTCACGTTCGGACCCGGAACCAAGCTGGAAATCAAG BCMA_EB 190 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1981- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVGYDSS C3- aa VH GYYRDYYGMDVWGQGTTVTVSS BCMA_EB 211 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSS B- C1981- RATGISDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGNSPPKFTFGPGTKLE C3- aa VL IK
BCMA_EB 232 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSY B- C1981- AMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN C3- aa SLRAEDTAVYYCAKVGYDSSGYYRDYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGG
RLLIYGTSSRATGISDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGNSPPKF completo
QGLSTATKDTYDALHMQALPPR BCMA_EB 253 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCAC B- C1981- GCCGCTCGGCCCCAAGTGCAGCTCGTGGAGTCAGGCGGAGGACTGGTGC C3- nt AGCCCGGGGGCTCCCTGAGACTTTCCTGCGCGGCATCGGGTTTTACCTTC
ATGGGTGTCCGCAATCAGCGGTAGCGGGGGCTCAACATACTACGCCGACT completo
BCMA_EBB-C1978-G4 BCMA_EB 149 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1978- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKMGWSSG G4- aa YLGAFDIWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERA
TLSCRASQSVASSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASGRATGIPDRFSGSGSGTDF Domínio
TLTISRLEPEDFAVYYCQHYGGSPRLTFGGGTKVDIK scFv BCMA_EB 170 GAAGTCCAACTGGTGGAGTCCGGGGGAGGGCTCGTGCAGCCCGGAGGCA B- C1978- GCCTTCGGCTGTCGTGCGCCGCCTCCGGGTTCACGTTCTCATCCTACGCG G4- nt ATGTCGTGGGTCAGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGC
CATTAGCGGCTCCGGCGGTAGCACCTACTATGCCGACTCAGTGAAGGGAA Domínio
GGTTCACTATCTCCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTCCAAATGA scFv
GCCTGACCTTCGGAGGCGGAACTAAGGTCGATATCAAAA BCMA_EB 191 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIS B- C1978- GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKMGWSSG G4- aa VH YLGAFDIWGQGTTVTVSS BCMA_EB 212 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVASSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGAS B- C1978- GRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGGSPRLTFGGGTKV G4- aa VL DIK BCMA_EB 233 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYA B- C1978- MSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS G4- aa LRAEDTAVYYCAKMGWSSGYLGAFDIWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGG
ASGRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGGSPRLTFGGGT completo
BCMA_EB 254 ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGC B- C1978- TCCACGCCGCTCGGCCCGAAGTCCAACTGGTGGAGTCCGGGGGA G4- nt
CART CTCCGGGTTCACGTTCTCATCCTACGCGATGTCGTGGGTCAGACAG completo GCACCAGGAAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGCCATTAGCGGCTCC
Tabela 3. CDRs de Domínio Variável de Cadeia Pesada de acordo com o esquema de numeração de Kabat (Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5ª Ed.
Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD) Candidato HCDR1 SEQ ID Nº HCDR2 SEQ ID Nº HCDR3 SEQ ID Nº
139109 NHGMS 1051 GIVYSGSTYYAASVKG 1091 HGGESDV 1131
139103 NYAMS 1052 GISRSGENTYYADSVKG 1092 SPAHYYGGMDV 1132
139105 DYAMH 1053 GISWNSGSIGYADSVKG 1093 HSFLAY 1133
139111 NHGMS 1054 GIVYSGSTYYAASVKG 1094 HGGESDV 1134
139100 NFGIN 1055 WINPKNNNTNYAQKFQG 1095 GPYYYQSYMDV 1135
139101 SDAMT 1056 VISGSGGTTYYADSVKG 1096 LDSSGYYYARGPRY 1136
139102 NYGIT 1057 WISAYNGNTNYAQKFQG 1097 GPYYYYMDV 1137
139104 NHGMS 1058 GIVYSGSTYYAASVKG 1098 HGGESDV 1138
139106 NHGMS 1059 GIVYSGSTYYAASVKG 1099 HGGESDV 1139
139107 NHGMS 1060 GIVYSGSTYYAASVKG 1100 HGGESDV 1140
139108 DYYMS 1061 YISSSGSTIYYADSVKG 1101 ESGDGMDV 1141
139110 DYYMS 1062 YISSSGNTIYYADSVKG 1102 STMVREDY 1142
139112 NHGMS 1063 GIVYSGSTYYAASVKG 1103 HGGESDV 1143
139113 NHGMS 1064 GIVYSGSTYYAASVKG 1104 HGGESDV 1144
139114 NHGMS 1065 GIVYSGSTYYAASVKG 1105 HGGESDV 1145
149362 SSYYYWG 1066 SIYYSGSAYYNPSLKS 1106 HWQEWPDAFDI 1146
149363 TSGMCVS 1067 RIDWDEDKFYSTSLKT 1107 SGAGGTSATAFDI 1147
149364 SYSMN 1068 SISSSSSYIYYADSVKG 1108 TIAAVYAFDI 1148
149365 DYYMS 1069 YISSSGSTIYYADSVKG 1109 DLRGAFDI 1149
149366 SHYIH 1070 MINPSGGVTAYSQTLQG 1110 EGSGSGWYFDF 1150
149367 SGGYYWS 1071 YIYYSGSTYYNPSLKS 1111 AGIAARLRGAFDI 1151
149368 SYAIS 1072 GIIPIFGTANYAQKFQG 1112 RGGYQLLRWDVGLLRSAFDI 1152
149369 SNSAAWN 1073 RTYYRSKWYSFYAISLKS 1113 SSPEGLFLYWFDP 1153
BCMA_EBB- SYAMS 1074 AISGSGGSTYYADSVKG 1114 VEGSGSLDY 1154 C1978-A4
BCMA_EBB- RYPMS 1075 GISDSGVSTYYADSAKG 1115 RAGSEASDI 1155 C1978-G1
BCMA_EBB- SYAMS 1076 AISGSGGSTYYADSVKG 1116 ATYKRELRYYYGMDV 1156 C1979-C1
BCMA_EBB- SYAMS 1077 AISGSGGSTYYADSVKG 1117 ATYKRELRYYYGMDV 1157 C1978-C7
BCMA_EBB- DYAMH 1078 GISWNSGSIGYADSVKG 1118 VGKAVPDV 1158 C1978-D10
BCMA_EBB- DYAMH 1079 SINWKGNSLAYGDSVKG 1119 HQGVAYYNYAMDV 1159 C1979-C12
BCMA_EBB- SYAMS 1080 AISGSGGSTYYADSVKG 1120 VVRDGMDV 1160 C1980-G4
BCMA_EBB- SYAMS 1081 AISGSGGSTYYADSVKG 1121 IPQTGTFDY 1161 C1980-D2
BCMA_EBB- SYAMS 1082 AISGSGGSTYYADSVKG 1122 ANYKRELRYYYGMDV 1162 C1978-A10
BCMA_EBB- SYAMS 1083 AISGSGGSTYYADSVKG 1123 ALVGATGAFDI 1163 C1978-D4
BCMA_EBB- SYAMS 1084 AISGSGGSTYYADSVKG 1124 WFGEGFDP 1164 C1980-A2
BCMA_EBB- SYAMS 1085 AISGSGGSTYYADSVKG 1125 VGYDSSGYYRDYYGMDV 1165 C1981-C3
BCMA_EBB- SYAMS 1086 AISGSGGSTYYADSVKG 1126 MGWSSGYLGAFDI 1166 C1978-G4
A7D12,2 NFGMN 1087 WINTYTGESYFADDFKG 1127 GEIYYGYDGGFAY 1167
C11D5,3 DYSIN 1088 WINTETREPAYAYDFRG 1128 DYSYAMDY 1168
C12A3,2 HYSMN 1089 RINTESGVPIYADDFKG 1129 DYLYSLDF 1169
C13F12,1 HYSMN 1090 RINTETGEPLYADDFKG 1130 DYLYSCDY 1170
Tabela 4. CDRs de Domínio Variável de Cadeia Leve de acordo com o esquema de numeração de Kabat (Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5ª Ed.
Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD) Candidato LCDR1 SEQ ID Nº LCDR2 SEQ ID Nº LCDR3 SEQ ID Nº
139109 RASQSISSYLN 1171 AASSLQS 1211 QQSYSTPYT 1251
139103 RASQSISSSFLA 1172 GASRRAT 1212 QQYHSSPSWT 1252
139105 RSSQSLLHSNGYNYLD 1173 LGSNRAS 1213 MQALQTPYT 1253
139111 KSSQSLLRNDGKTPLY 1174 EVSNRFS 1214 MQNIQFPS 1254
139100 RSSQSLLHSNGYNYLN 1175 LGSKRAS 1215 MQALQTPYT 1255
139101 RASQSISSYLN 1176 GASTLAS 1216 QQSYKRAS 1256
139102 RSSQSLLYSNGYNYVD 1177 LGSNRAS 1217 MQGRQFPYS 1257
139104 RASQSVSSNLA 1178 GASTRAS 1218 QQYGSSLT 1258
139106 RASQSVSSKLA 1179 GASIRAT 1219 QQYGSSSWT 1259
139107 RASQSVGSTNLA 1180 DASNRAT 1220 QQYGSSPPWT 1260
139108 RASQSISSYLN 1181 AASSLQS 1221 QQSYTLA 1261
139110 KSSESLVHNSGKTYLN 1182 EVSNRDS 1222 MQGTHWPGT 1262
139112 QASEDINKFLN 1183 DASTLQT 1223 QQYESLPLT 1263
139113 RASQSVGSNLA 1184 GASTRAT 1224 QQYNDWLPVT 1264
139114 RASQSIGSSSLA 1185 GASSRAS 1225 QQYAGSPPFT 1265
149362 KASQDIDDAMN 1186 SATSPVP 1226 LQHDNFPLT 1266
149363 RASQDIYNNLA 1187 AANKSQS 1227 QHYYRFPYS 1267
149364 RSSQSLLHSNGYNYLD 1188 LGSNRAS 1228 MQALQTPYT 1268
149365 GGNNIGTKSVH 1189 DDSVRPS 1229 QVWDSDSEHVV 1269
149366 SGDGLSKKYVS 1190 RDKERPS 1230 QAWDDTTVV 1270
149367 RASQGIRNWLA 1191 AASNLQS 1231 QKYNSAPFT 1271
149368 GGNNIGSKSVH 1192 GKNNRPS 1232 SSRDSSGDHLRV 1272
149369 QGDSLGNYYAT 1193 GTNNRPS 1233 NSRDSSGHHLL 1273
BCMA_EBB-C1978-A4 RASQSVSSAYLA 1194 GASTRAT 1234 QHYGSSFNGSSLFT 1274
BCMA_EBB-C1978-G1 RASQSVSNSLA 1195 DASSRAT 1235 QQFGTSSGLT 1275
BCMA_EBB-C1979-C1 RASQSVSSSFLA 1196 GASSRAT 1236 QQYHSSPSWT 1276
BCMA_EBB-C1978-C7 RASQSVSTTFLA 1197 GSSNRAT 1237 QQYHSSPSWT 1277
BCMA_EBB-C1978-D10 RASQSISSYLN 1198 AASSLQS 1238 QQSYSTPYS 1278
BCMA_EBB-C1979-C12 RATQSIGSSFLA 1199 GASQRAT 1239 QHYESSPSWT 1279
BCMA_EBB-C1980-G4 RASQSVSSSYLA 1200 GASSRAT 1240 QQYGSPPRFT 1280
BCMA_EBB-C1980-D2 RASQSVSSSYLA 1201 GASSRAT 1241 QHYGSSPSWT 1281
BCMA_EBB-C1978-A10 RASQRVASNYLA 1202 GASSRAT 1242 QHYDSSPSWT 1282
BCMA_EBB-C1978-D4 RASQSLSSNFLA 1203 GASNWAT 1243 QYYGTSPMYT 1283
BCMA_EBB-C1980-A2 RSSQSLLHSNGYNYLD 1204 LGSNRAS 1244 MQALQTPLT 1284
BCMA_EBB-C1981-C3 RASQSVSSSYLA 1205 GTSSRAT 1245 QHYGNSPPKFT 1285
BCMA_EBB-C1978-G4 RASQSVASSFLA 1206 GASGRAT 1246 QHYGGSPRLT 1286
A7D12,2 RASQDVNTAVS 1207 SASYRYT 1247 QQHYSTPWT 1287
C11D5,3 RASESVSVIGAHLIH 1208 LASNLET 1248 LQSRIFPRT 1288
C12A3,2 RASESVTILGSHLIY 1209 LASNVQT 1249 LQSRTIPRT 1289
C13F12,1 RASESVTILGSHLIY 1210 LASNVQT 1250 LQSRTIPRT 1290
Tabela 5. Sequências CAR BCMA exemplificativas adicionais Nome SEQ ID Nº: VH A7D12.2 255 VL A7D12.2 259 Domínio scFv A7D12.2 263 CART Completo A7D12.2 267 VH C11D5.3 256 VL C11D5.3 260 Domínio scFv C11D5.3 264 CART Completo C11D5.3 268 VH C12A3.2 257 VL C12A3.2 261 Domínio scFv C12A3.2 265 CART Completo C12A3.2 269 VH C13F12.1 258 VL C13F12.1 262 Domínio scFv C13F12.1 266 CART Completo C13F12.1 270 Transfecção de RNA
[00330] São divulgados no presente documento métodos para produzir um CAR de RNA transcrito in vitro. A presente invenção também inclui um construto de RNA codificando CAR que pode ser diretamente transfectado em uma célula. Um método para gerar mRNA para uso em transfecção pode envolver transcrição in vitro (IVT) de um modelo com iniciadores especialmente planejados, seguido de adição de poliA, para produzir um construto contendo sequências 3' e 5' não traduzidas ("UTR"), um "cap" 5' e/ou Sítio Interno de Entrada do Ribossomo (IRES), o ácido nucleico a ser expresso, e uma cauda poliA, tipicamente com 50 a 2000 bases (SEQ ID Nº: 2025) de comprimento. O RNA produzido deste modo pode transfectar eficientemente diferentes tipos de células. Em um aspecto, o modelo inclui sequências para o CAR.
[00331] Em um aspecto, o CAR anti-BCMA é codificado por um RNA mensageiro (mRNA). Em um aspecto, o mRNA codificando o CAR anti- BCMA é introduzido em uma célula imunoefetora, por exemplo, uma célula T ou uma célula NK, para produção de uma célula que expressa CAR (por exemplo, uma célula CART ou uma célula NK que expressa CAR).
[00332] Em uma modalidade, o RNA CAR transcrito in vitro pode ser introduzido em uma célula como uma forma de transfecção transiente. O RNA é produzido por transcrição in vitro usando um modelo gerado por reação em cadeia de polimerase (PCR). O DNA de interesse de qualquer fonte pode ser diretamente convertido por PCR em um modelo para síntese de mRNA in vitro usando iniciadores apropriados e RNA polimerase. A fonte do DNA pode ser, por exemplo, DNA genômico, DNA plasmídico, DNA fágico, cDNA, sequência de DNA sintética ou qualquer outra fonte apropriada de DNA. O modelo desejado para a transcrição in vitro é um CAR da presente invenção. Por exemplo, o modelo para o CAR de RNA compreende uma região extracelular que compreende um domínio variável de cadeia única de um anticorpo antitumoral; uma região de dobradiça, um domínio transmembranar (por exemplo, um domínio transmembranar de CD8a); e uma região citoplasmática que inclui um domínio de sinalização intracelular, por exemplo, que compreende o domínio de sinalização de CD3-zeta e o domínio de sinalização de 4- 1BB.
[00333] Em uma modalidade, o DNA a ser usado para PCR contém um quadro de leitura aberto. O DNA pode provir de uma sequência de DNA de ocorrência natural do genoma de um organismo. Em uma modalidade, o ácido nucleico pode incluir algumas ou todas as regiões 5' e/ou 3' não traduzidas (UTRs). O ácido nucleico pode incluir éxons e íntrons. Em uma modalidade, o DNA a ser usado para PCR é uma sequência de ácidos nucleicos humana. Em outra modalidade, o DNA a ser usado para PCR é uma sequência de ácidos nucleicos humana incluindo as 5' e 3' UTRs. O DNA pode alternativamente ser uma sequência de DNA artificial que não é normalmente expressa em um organismo de ocorrência natural. Uma sequência de DNA artificial exemplificativa é tal que contém porções de genes que são ligadas em conjunto para formar um quadro de leitura aberto que codifica uma proteína de fusão. As porções de DNA que são ligadas em conjunto podem provir de um único organismo ou de mais do que um organismo.
[00334] PCR é usada para gerar um modelo para transcrição in vitro de mRNA que é usado para transfecção. Métodos para realizar PCR são bem conhecidos na técnica. Iniciadores para uso em PCR são projetados de modo a terem regiões que são substancialmente complementares a regiões do DNA a ser usado como modelo para a PCR. "Substancialmente complementares", conforme usado no presente documento, refere-se a sequências de nucleotídeos nas quais a maioria ou todas as bases da sequência iniciadora são complementares, ou uma ou mais bases não são complementares ou emparelham de modo defeituoso. Sequências substancialmente complementares têm a capacidade para anelar ou hibridar com o alvo de DNA pretendido sob condições de anelamento usadas para PCR. Os iniciadores podem ser projetados de modo a serem substancialmente complementares a qualquer porção do modelo de DNA. Por exemplo, os iniciadores podem ser projetados para amplificarem a porção de um ácido nucleico que é normalmente transcrita em células (o quadro de leitura aberto), incluindo 5' e 3' UTRs. Os iniciadores também podem ser projetados para amplificarem uma porção de um ácido nucleico que codifica um domínio de interesse particular. Em uma modalidade, os iniciadores são projetados para amplificarem a região codificadora de um cDNA humano, incluindo a totalidade ou porções das 5' e 3' UTRs. Iniciadores úteis para PCR podem ser gerados por métodos sintéticos que são bem conhecidos na técnica. "Iniciadores diretos" são iniciadores que contêm uma região de nucleotídeos que são substancialmente complementares aos nucleotídeos no modelo de DNA que estão a montante da sequência de DNA que deve ser amplificada. "A montante" é usado no presente documento para referência a uma localização 5' à sequência de DNA a ser amplificada relativamente à fita de codificação. "Iniciadores reversos" são iniciadores que contêm uma região de nucleotídeos que são substancialmente complementares a um modelo de DNA de fita dupla que estão a jusante da sequência de DNA que deve ser amplificada. "A jusante" é usado no presente documento para referir uma localização 3' à sequência de DNA a ser amplificada relativamente à fita de codificação.
[00335] Qualquer DNA polimerase útil para PCR pode ser usada nos métodos divulgados no presente documento. Os reagentes e polimerase são disponibilizados comercialmente por algumas fontes.
[00336] Estruturas químicas com capacidade para promover a estabilidade e/ou eficiência da tradução também podem ser usadas. O RNA tem preferencialmente 5' e 3' UTRs. Em uma modalidade, a 5' UTR tem entre um e 3000 nucleotídeos de comprimento. O comprimento das sequências de 5' e 3' UTR a serem adicionadas à região codificadora pode ser alterado por diferentes métodos, incluindo, porém sem limitação, projetar iniciadores para PCR que anelam a diferentes regiões das UTRs. Com o uso desta abordagem, a pessoa de habilidade comum na técnica pode modificar os comprimentos das 5' e 3' UTR requeridos para se obter uma eficiência ótima da tradução após transfecção do RNA transcrito.
[00337] As 5' e 3' UTRs podem ser as 5' e 3' UTRs endógenas de ocorrência natural para o ácido nucleico de interesse. Alternativamente, sequências UTR que não são endógenas ao ácido nucleico de interesse podem ser adicionadas por incorporação das sequências UTR nos iniciadores diretos e reversos ou por quaisquer outras modificações do modelo. O uso de sequências UTR que não são endógenas ao ácido nucleico de interesse pode ser útil para modificar a estabilidade e/ou eficiência da tradução do RNA. Por exemplo, sabe-se que elementos ricos em AU em sequências 3' UTR podem diminuir a estabilidade de mRNA. Em consequência, 3' UTRs podem ser selecionadas ou projetadas para aumentar a estabilidade do RNA transcrito com base em propriedades de UTRs que são bem conhecidas na técnica.
[00338] Em uma modalidade, a 5' UTR pode conter a sequência de Kozak do ácido nucleico endógeno. Alternativamente, quando uma 5' UTR que não é endógena ao ácido nucleico de interesse está sendo adicionada por PCR como descrito acima, uma sequência de consenso de Kozak pode ser reprojetada adicionando-se a sequência de 5' UTR. Sequências de Kozak podem aumentar a eficiência da tradução de alguns transcritos de RNA, mas não parecem ser exigidas para todos os
RNAs para permitir uma tradução eficiente. O requisito de sequências de Kozak para muitos mRNAs é conhecido na técnica. Em outras modalidades, a 5' UTR pode ser 5'UTR de um vírus RNA cujo genoma de RNA é estável em células. Em outras modalidades, vários análogos de nucleotídeos podem ser usados na 3' ou 5' UTR para impedir a degradação do mRNA por exonucleases.
[00339] Para permitir a síntese de RNA a partir de um modelo de DNA sem a necessidade de clonagem de genes, um promotor da transcrição deve ser adicionado ao modelo de DNA a montante da sequência a ser transcrita. Quando uma sequência que atua como um promotor para uma RNA polimerase é adicionada à extremidade 5' do iniciador direto, o promotor de RNA polimerase se torna incorporado ao produto de PCR a montante do quadro de leitura aberto que deve ser transcrito. Em uma modalidade preferencial, o promotor é um promotor de polimerase de T7, como descrito aqui noutro local. Outros promotores úteis incluem, porém sem limitação, promotores de RNA polimerase de T3 e SP6. Sequências de nucleotídeos de consenso para promotores de T7, T3 e SP6 são conhecidas na técnica.
[00340] Em uma modalidade preferencial, o mRNA tem um cap na extremidade 5' e uma cauda 3' poli(A) que determinam a ligação de ribossomos, iniciação da tradução e estabilidade do mRNA na célula. Em um modelo de DNA circular, por exemplo, DNA plasmídico, RNA polimerase origina um produto concatamérico longo que não é adequado para expressão em células eucarióticas. A transcrição de DNA plasmídico linearizado na extremidade da 3' UTR origina mRNA de tamanho normal que não é eficaz em transfecção eucariótica mesmo que seja poliadenilado após a transcrição.
[00341] Em um modelo de DNA linear, RNA polimerase do fago T7 pode prolongar a extremidade 3' do transcrito para além da última base do modelo (Schenborn e Mierendorf, Nuc Acids Res., 13:6.223 a 6.236 (1985); Nacheva e Berzal-Herranz, Eur. J. Biochem., 270:1.485-65 (2003)).
[00342] O método convencional de integração de extensões poliA/T em um modelo de DNA é clonagem molecular. No entanto, uma sequência poliA/T integrada em DNA plasmídico pode causar instabilidade do plasmídeo, motivo pelo qual modelos de DNA plasmídico obtidos de células bacterianas são muitas vezes altamente contaminados com deleções e outras aberrações. Isso torna os procedimentos de clonagem não apenas trabalhosos e demorados, mas muitas vezes não confiáveis. É por isso que é altamente desejável um método que permita a construção de modelos de DNA com extensão 3' poliA/T sem clonagem.
[00343] O segmento poliA/T do modelo de DNA transcricional pode ser produzido durante a PCR com o uso de um iniciador reverso contendo uma cauda poliT, como cauda 100T (SEQ ID Nº: 2026) (o tamanho pode ser 50 a 5.000 T (SEQ ID Nº: 2027)), ou após PCR por qualquer outro método, incluindo, porém sem limitação, ligação de DNA ou recombinação in vitro. Caudas poli(A) também fornecem estabilidade a RNAs e reduzem a sua degradação. Geralmente, o comprimento de uma cauda poli(A) está positivamente correlacionado com a estabilidade do RNA transcrito. Em uma modalidade, a cauda poli(A) tem entre 100 e 5000 adenosinas (SEQ ID Nº: 2028).
[00344] Caudas poli(A) de RNAs podem ser adicionalmente estendidas após transcrição in vitro com o uso de uma poli(A) polimerase, tal como poliA polimerase de E. coli (E-PAP). Em uma modalidade, o aumento do comprimento de uma cauda poli(A) de 100 nucleotídeos para entre 300 e 400 nucleotídeos (SEQ ID Nº: 2024) resulta em um aumento de cerca de duas vezes da eficiência da tradução do RNA. Adicionalmente, a ligação de diferentes grupos químicos à extremidade 3' pode aumentar a estabilidade do mRNA. Tal ligação pode conter nucleotídeos modificados/artificiais, aptâmeros e outros compostos. Por exemplo, análogos de ATP podem ser incorporados na cauda poli(A) usando poli(A) polimerase. Análogos de ATP podem aumentar adicionalmente a estabilidade do RNA.
[00345] Caps 5' também fornecem estabilidade a moléculas de RNA. Em uma modalidade preferencial, RNAs produzidos pelos métodos divulgados aqui incluem um cap 5'. O cap 5' é fornecido com o uso de técnicas conhecidas na arte e descritas no presente documento (Cougot, et al., Trends in Biochem. Sci., 29:436 a 444 (2001); Stepinski, et al., RNA, 7:1.468 a 1.495 (2001); Elango, et al., Biochim. Biophys. Res. Commun., 330:958 a 966 (2005)).
[00346] Os RNAs produzidos pelos métodos divulgados no presente documento também podem conter uma sequência de sítio interno de entrada do ribossomo (IRES). A sequência IRES pode ser qualquer sequência viral, cromossômica ou artificialmente planejada que inicia ligação do ribossomo independente de cap a mRNA e facilita a iniciação da tradução. Podem ser incluídos quaisquer solutos adequados para a eletroporação de células, que podem conter fatores que facilitam a permeabilidade e viabilidade celulares, tais como açúcares, peptídeos, lipídeos, proteínas, antioxidantes e surfactantes.
[00347] RNA pode ser introduzido em células-alvo usando qualquer um dentre vários métodos diferentes, por exemplo, métodos comercialmente disponíveis que incluem, porém sem limitação, eletroporação (Amaxa Nucleofector-II (Amaxa Biosystems, Colônia,
Alemanha)), (ECM 830 (BTX) (Harvard Instruments, Boston, Mass.)) ou o Gene Pulser II (BioRad, Denver, Colo.), Multiporator (Eppendort, Hamburgo Alemanha), transfecção mediada por lipossomas catiônicos usando lipofecção, encapsulação de polímeros, transfecção mediada por peptídeos, ou sistemas de administração biolística de partículas como "armas de genes" (consultar, por exemplo, Nishikawa, et al. Hum Gene Ther., 12(8):861-870 (2001). Métodos de Administração não virais
[00348] Em alguns aspectos, métodos não virais podem ser usados para administrar um ácido nucleico que codifica um CAR descrito no presente documento em uma célula ou tecido ou um indivíduo.
[00349] Em algumas modalidades, o método não viral inclui o uso de um transpóson (também denominado elemento de transposição). Em algumas modalidades, um transpóson é um pedaço de DNA que pode se inserir em uma localização em um genoma, por exemplo, um pedaço de DNA que tem a capacidade para se autorreplicar e inserir a sua cópia em um genoma, ou um pedaço de DNA que pode ser removido por splicing de um ácido nucleico mais longo e inserido em outro lugar em um genoma. Por exemplo, um transpóson compreende uma sequência de DNA constituída por repetições invertidas flanqueando genes para transposição.
[00350] Os métodos exemplificativos de administração de ácidos nucleicos com o uso de um transpóson incluem um sistema de transpóson Bela Adormecida (SBTS) e um sistema de transpóson piggyBac (PB). Ver, por exemplo, Aronovich et al. Hum. Mol. Genet.
20.R1(2011):R14-20; Singh et al. Cancer Res. 15(2008):2961–2971; Huang et al. Mol. Ther. 16(2008):580 a 589; Grabundzija et al. Mol. Ther. 18(2010):1.200 a 1.209; Kebriaei et al. Blood. 122.21(2013):166;
Williams. Molecular Therapy 16.9(2008):1.515 a 1.516; Bell et al. Nat. Protoc. 2.12(2007):3.153 a 3.165; e Ding et al. Cell. 122.3(2005):473 a 483, todos os quais estão incorporados no presente documento a título de referência.
[00351] O SBTS inclui dois componentes: 1) um transpóson contendo um transgene e 2) uma fonte de enzima transposase. A transposase pode efetuar transposição do transpóson de um plasmídeo carreador (ou outro DNA doador) para um DNA-alvo, tal como cromossomo/genoma de uma célula hospedeira. Por exemplo, a transposase se liga ao plasmídeo carreador/DNA doador, corta o transpóson (incluindo transgene(s)) removendo-o do plasmídeo, e insere-o no genoma da célula hospedeira. Ver, por exemplo, Aronovich et al. supra.
[00352] Os transpósons exemplificativos incluem um transpóson à base de pT2. Ver, por exemplo, Grabundzija et al. Nucleic Acids Res.
41.3(2013):1.829-47; e Singh et al. Cancer Res. 68.8(2008): 2.961 a
2.971, todos os quais são incorporados no presente documento a título de referência. Transposases exemplificativas incluem uma transposase do tipo Tc1/mariner, por exemplo, a transposase SB10 ou a transposase SB11 (uma transposase hiperativa que pode ser expressa, por exemplo, a partir de um promotor de citomegalovírus). Ver, por exemplo, Aronovich et al.; Kebriaei et al.; e Grabundzija et al., todos os quais são incorporados aqui por referência.
[00353] O uso do SBTS permite integração e expressão eficientes de um transgene, por exemplo, um ácido nucleico codificando um CAR descrito aqui. São proporcionados aqui métodos de geração de uma célula, por exemplo, célula T ou célula NK, que expressa de modo estável um CAR descrito aqui, por exemplo, usando um sistema de transpóson tal como SBTS.
[00354] De acordo com métodos descritos aqui, em algumas modalidades, um ou mais ácidos nucleicos, por exemplo, plasmídeos, contendo os componentes de SBTS são administrados a uma célula (por exemplo, célula T ou NK). Por exemplo, o(s) ácido(s) nucleico(s) é(são) administrado(s) por métodos padrão de administração de ácidos nucleicos (por exemplo, DNA plasmídico), por exemplo, métodos descritos aqui, por exemplo, eletroporação, transfecção ou lipofecção. Em algumas modalidades, o ácido nucleico contém um transpóson compreendendo um transgene, por exemplo, um ácido nucleico codificando um CAR descrito aqui. Em algumas modalidades, o ácido nucleico contém um transpóson compreendendo um transgene (por exemplo, um ácido nucleico codificando um CAR descrito aqui) bem como uma sequência de ácido nucleico codificando uma enzima transposase. Em outras modalidades é proporcionado um sistema com dois ácidos nucleicos, por exemplo, um sistema plasmídico dual, por exemplo, em que um primeiro plasmídeo contém um transpóson compreendendo um transgene, e um segundo plasmídeo contém uma sequência de ácido nucleico codificando uma enzima transposase. Por exemplo, o primeiro e o segundo ácidos nucleicos são coadministrados em uma célula hospedeira.
[00355] Em algumas modalidades, células, por exemplo, células T ou NK, são geradas que expressam um CAR descrito aqui por uso de uma combinação de inserção de genes usando o SBTS e edição genética usando uma nuclease (por exemplo, nucleases dedos de Zinco (ZFNs), Nucleases Efetoras do Tipo Ativador da Transcrição (TALENs), o sistema CRISPR/Cas ou endonucleases de endereçamento remanipuladas por meganuclease manipulada).
[00356] Em algumas modalidades, o uso de um método não viral de administração permite a reprogramação de células, por exemplo, células T ou NK, e infusão direta das células em um indivíduo. As vantagens de vetores não virais incluem, porém sem limitação, facilidade e custo relativamente baixo da produção de quantidades suficientes exigidas para satisfazer uma população de pacientes, estabilidade durante a armazenagem e ausência de imunogenicidade. Construtos de Ácido Nucleico que Codificam um CAR
[00357] A presente invenção também fornece moléculas de ácido nucleico que codificam um ou mais construtos de CAR descritos no presente documento. Em um aspecto, a molécula de ácido nucleico é fornecida como um transcrito de RNA mensageiro. Em um aspecto, a molécula de ácido nucleico é fornecida como um construto de DNA.
[00358] Consequentemente, em um aspecto, a invenção pertence a uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação a antígenos, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular que compreende um domínio estimulador, por exemplo, um domínio de sinalização coestimulador e/ou um domínio de sinalização primária, por exemplo, cadeia zeta.
[00359] As sequências de ácido nucleico codificando as moléculas desejadas podem ser obtidas usando métodos recombinantes conhecidos na técnica, tais como, por exemplo, por rastreio de bibliotecas de células expressando o gene, por derivação do gene a partir de um vetor que é conhecido incluir o mesmo, ou por isolamento diretamente a partir de células e tecidos contendo o mesmo, usando técnicas comuns. Alternativamente, o gene de interesse pode ser produzido de modo sintético, em vez de ser clonado.
[00360] A presente invenção também fornece vetores nos quais é inserido um DNA da presente invenção. Vetores derivados de retrovírus, como o lentivírus, são ferramentas adequadas para alcançar transferência genética de longa duração uma vez que permitem uma integração estável de longa duração de um transgene e a sua propagação em células filhas. Os vetores lentivirais têm a vantagem adicional em relação a vetores derivados de onco-retrovírus, tais como vírus de leucemia murina, de poderem transduzir células não proliferativas, tais como hepatócitos. Os mesmos também têm a vantagem adicional de possuírem baixa imunogenicidade. Um vetor retroviral pode também ser, por exemplo, um vetor gamarretroviral. Um vetor gamarretroviral pode incluir, por exemplo, um promotor, um sinal de empacotamento (ψ), um local de ligação de iniciador (PBS), uma ou mais (por exemplo, duas) repetições terminais longas (LTR) e um transgene de interesse, por exemplo, um gene codificando um CAR. Um vetor gamarretroviral pode não ter genes estruturas virais como gag, pol e env. Os vetores gamarretrovirais exemplificativos incluem Vírus da Leucemia Murina (MLV), Vírus de Formação com Foco no Baço (SFFV) e Vírus do Sarcoma Mieloproliferativo (MPSV) e vetores derivados dos mesmos. Outros vetores gamarretrovirais são descritos, por exemplo, em Tobias Maetzig et al., "Gammaretroviral Vectors: Biology, Technology and Application" Viruses. Junho de 2011; 3(6): 677 a 713.
[00361] Em outra modalidade, o vetor compreendendo o ácido nucleico codificando o CAR desejado da invenção é um vetor adenoviral (A5/35). Em outra modalidade, a expressão de ácidos nucleicos codificando CARs pode ser alcançada usando transposons como sleeping beauty, CRISPR, CAS9 e nucleases de dedo de zinco. Consultar abaixo June et al.. 2009 Nature Reviews Immunology 9.10: 704 a 716, que é incorporado ao presente documento a título de referência.
[00362] Resumindo brevemente, a expressão de ácidos nucleicos naturais ou sintéticos que codificam CARs é tipicamente alcançada ligando-se operativamente um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo CAR, ou suas porções, a um promotor e incorporando o construto em um vetor de expressão. Os vetores podem ser adequados para replicação e integração em eucariotas. Os vetores de clonagem típicos contêm terminadores da transcrição e tradução, sequências de iniciação e promotores úteis para regulação da expressão da sequência de ácidos nucleicos desejada.
[00363] Os construtos de expressão da presente invenção podem também ser usados para imunização de ácido nucleico e terapia genética, usando protocolos padrão de transferência genética. Métodos de transferência genética são conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, a Patente U.S. Nos. 5.399.346, 5.580.859, 5.589.466, incorporadas por referência aqui na sua totalidade. Em outra modalidade, a invenção proporciona um vetor de terapia genética.
[00364] O ácido nucleico pode ser clonado em alguns tipos de vetores. Por exemplo, o ácido nucleico pode ser clonado em um vetor incluindo, mas não se limitando a um plasmídeo, um fagemídeo, um derivado de fago, um vírus animal, e um cosmídeo. Vetores de interesse particular incluem vetores de expressão, vetores de replicação, vetores de geração de sondas, e vetores de sequenciamento.
[00365] Além disso, o vetor de expressão pode ser fornecido a uma célula na forma de um vetor viral. A tecnologia de vetores virais é bem conhecida na técnica e é descrita, por exemplo, em Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1 a 4, Cold Spring Harbor Press, NY e em outros manuais de virologia e biologia molecular. Os vírus que são úteis como vetores incluem, porém sem limitação, retrovírus, adenovírus, vírus adenoassociados, vírus herpes e lentivírus. Em geral, um vetor adequado contém uma origem de replicação funcional em pelo menos um organismo, uma sequência promotora, locais de endonuclease de restrição conveniente, e um ou mais marcadores selecionáveis, (por exemplo, WO 01/96584; WO 01/29058; e Pat. U.S. No. 6.326.193).
[00366] Alguns sistemas de base viral foram desenvolvidos para transferência genética em células de mamífero. Por exemplo, retrovírus fornecem uma plataforma conveniente para sistemas de transferência genética. Um gene selecionado pode ser inserido em um vetor e empacotado em partículas retrovirais com o uso de técnicas conhecidas na arte. O vírus recombinante pode então ser isolado e administrado em células do indivíduo in vivo ou ex vivo. Alguns sistemas retrovirais são conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, vetores de adenovírus são usados. Alguns vetores de adenovírus são conhecidos na técnica. Em uma modalidade, vetores de lentivírus são usados.
[00367] Elementos promotores adicionais, por exemplo, intensificadores, regulam a frequência da iniciação da transcrição. Tipicamente, estes estão localizados na região 30 a 110 pb a montante do sítio de início, apesar de ter sido mostrado que alguns promotores também contêm elementos funcionais a jusante do sítio de início. O espaçamento entre elementos promotores é frequentemente flexível, de modo que a função promotora seja conservada quando elementos são invertidos ou deslocados uns em relação aos outros. No promotor de timidina quinase (tk), o espaçamento entre os elementos promotores pode ser aumentado para 50 bp antes de a atividade começar a declinar. Dependendo do promotor, aparentemente elementos individuais podem atuar cooperativa ou independentemente para ativar a transcrição.
[00368] Um exemplo de um promotor capaz de expressar um transgene de CAR em uma célula T de mamífero é o promotor de EF1a. O promotor EF1a nativo conduz a expressão da subunidade alfa do complexo do fator de alongamento-1, que é responsável pela administração enzimática de aminoacil-tRNAs no ribossomo. O promotor EF1a foi amplamente usado em plasmídeos de expressão de mamíferos e demonstrou-se que é eficaz para dirigir a expressão de CAR a partir de transgenes clonados em um vetor lentiviral. Consultar, por exemplo, Milone et al., Mol. Ther. 17(8): 1.453 a 1.464 (2009).
[00369] Outro exemplo de um promotor é a sequência promotora inicial imediata de citomegalovírus (CMV). Esta sequência promotora é uma sequência promotora constitutiva forte com a capacidade para acionar níveis elevados de expressão de qualquer sequência polinucleotídica operativamente à mesma. No entanto, outras sequências de promotores constitutivos também podem ser usadas, incluindo, mas não se limitando ao, promotor inicial do vírus símio 40 (SV40), vírus do tumor mamário de camundongo (MMTV), promotor de repetições terminais longas (LTR) do vírus da imunodeficiência humana (HIV), promotor de MoMuLV, um promotor do vírus da leucemia aviária, um promotor inicial imediato do vírus Epstein-Barr, um promotor do vírus do sarcoma de Rous, bem como promotores de genes humanos tais como, mas não se limitando a, o promotor da actina, o promotor de miosina, o promotor do fator de alongamento-1α, o promotor de hemoglobina e o promotor de creatina quinase. Além disso, a invenção não deve ser limitada ao uso de promotores constitutivos. Promotores induzíveis também são contemplados como parte da invenção. O uso de um promotor induzível fornece um interruptor molecular com a capacidade para ligar a expressão da sequência polinucleotídica que é operativamente ligada quando tal expressão é desejada ou para desligar a expressão quando a expressão não é desejada. Exemplos de promotores induzíveis incluem, porém sem limitação, um promotor de metalotioneína, um promotor de glicocorticoides, um promotor de progesterona e um promotor de tetraciclina.
[00370] Outro exemplo de um promotor é o promotor de fosfoglicerato cinase (PGK). Em modalidades, pode ser desejado um promotor de PGK truncado (por exemplo, um promotor de PGK com uma ou mais, por exemplo, 1, 2, 5, 10, 100, 200, 300 ou 400 eliminações de nucleotídeo quando comparado com a sequência promotora de PGK de tipo selvagem). As sequências de nucleotídeos de promotores de PGK exemplificativos são fornecidas abaixo. Promotor de PGK TS
GGTTGGGGCACCATAAGCT (SEQ ID Nº: 1291)
Promotores de PGK truncados exemplificativos: PGK100:
GGCGGGGTG (SEQ ID Nº: 1292) PGK200:
GGTAACG (SEQ ID Nº: 1293) PGK300:
CG (SEQ ID Nº: 1294) PGK400:
ACTGCGACGCTTGCCTGCACTTCTTACACGCTCTGGGTCCCAGCCG (SEQ ID Nº: 1295)
[00371] Um vetor também pode incluir, por exemplo, uma sequência sinal para facilitar a secreção, um sinal de poliadenilação e terminador da transcrição (por exemplo, do gene do Hormônio de Crescimento Bovino (BGH)), um elemento permitindo replicação epissômica e replicação em procariotas (por exemplo, origem do SV40 e ColE1 ou outros conhecidos na técnica) e/ou elementos para permitir a seleção (por exemplo, gene de resistência à ampicilina e/ou marcador de zeocina).
[00372] Para avaliar a expressão de um polipeptídeo CAR ou suas porções, o vetor de expressão a ser introduzido em uma célula também pode conter um gene marcador selecionável ou um gene repórter ou ambos para facilitar a identificação e seleção de células de expressão a partir da população de células que se pretende transfectar ou infectar através de vetores virais. Em outros aspectos, o marcador selecionável pode estar contido em uma porção separada de DNA e ser usado em um procedimento de cotransfecção. Marcadores selecionáveis e genes repórter podem ser flanqueados com sequências reguladoras apropriadas para permitir a expressão nas células hospedeiras. Marcadores selecionáveis úteis incluem, por exemplo, genes de resistência a antibióticos, tais como neo e similares.
[00372] Genes repórter são usados para identificar células potencialmente transfectadas e para avaliar a funcionalidade de sequências reguladoras. Em geral, um gene repórter é um gene que não está presente no nem é expresso pelo organismo ou tecido recebedor e que codifica um polipeptídeo cuja expressão é manifestada por alguma propriedade facilmente detectável, por exemplo, atividade enzimática. A expressão do gene repórter é avaliada em um momento adequado depois de o DNA ter sido introduzido nas células recebedoras. Genes repórter adequados podem incluir genes codificando luciferase, beta-
galactosidase, cloranfenicol acetil-transferase, fosfatase alcalina secretada ou o gene da proteína verde fluorescente (por exemplo, Ui-Tei at,. al., 2000 FEBS Letters 479: 79 a 82). Sistemas de expressão adequados são bem conhecidos e podem ser preparados usando técnicas conhecidas ou obtidos comercialmente. Em geral, o construto com a região flanqueadora 5' mínima exibindo o nível mais elevado de expressão do gene repórter é identificado como o promotor. Tais regiões promotoras podem ser ligadas a um gene repórter e usadas para avaliar agentes quanto à capacidade de modular a transcrição conduzida por promotores.
[00373] Em uma modalidade, o vetor pode ainda compreender um ácido nucleico codificando um segundo CAR. Em uma modalidade, o segundo CAR inclui um domínio de ligação a antígeno para um alvo expresso em células de leucemia mieloide aguda, como, por exemplo, CD123, CD34, CLL-1, receptor beta de folato, ou FLT3; ou um alvo expresso em uma célula B, por exemplo, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b ou CD79a. Em uma modalidade, o vetor compreende uma sequência de ácidos nucleicos codificando um primeiro CAR que se liga especificamente a um primeiro antígeno e inclui um domínio de sinalização intracelular tendo um domínio de sinalização coestimulador, mas não um domínio de sinalização primário, e um ácido nucleico codificando um segundo CAR que se liga especificamente a um segundo antígeno diferente e inclui um domínio de sinalização intracelular tendo um domínio de sinalização primário, mas não um domínio de sinalização coestimulador. Em uma modalidade, o vetor compreende um ácido nucleico que codifica um primeiro CAR de BCMA que inclui um domínio de ligação de BCMA, um domínio transmembranar e um domínio coestimulador e um ácido nucleico que codifica um segundo CAR que visa um antígeno que não BCMA (por exemplo, um antígeno expresso em células AML, por exemplo, CD123, CD34, CLL-1, receptor beta de folato ou FLT3; ou um antígeno expresso em uma célula B, por exemplo, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b ou CD79a) e inclui um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização primário. Em outra modalidade, o vetor compreende um ácido nucleico que codifica um primeiro CAR de BCMA que inclui um domínio de ligação de BCMA, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização primária e um ácido nucleico que codifica um segundo CAR que se liga especificamente a um antígeno que não BCMA (por exemplo, um antígeno expresso em células AML, por exemplo, CD123, CD34, CLL- 1, receptor beta de folato ou FLT3, ou um antígeno expresso em uma célula B, por exemplo, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b ou CD79a) e inclui um domínio de ligação ao antígeno para o antígeno, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização coestimulador.
[00374] Em uma modalidade, o vetor compreende um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA descrito no presente documento e um ácido nucleico que codifica um CAR inibidor. Em uma modalidade, o CAR inibidor compreende um domínio de ligação a antígenos que liga um antígeno encontrado em células normais, mas não células cancerígenas, por exemplo, células normais que também expressam BCMA. Em uma modalidade, o CAR inibidor compreende o domínio de ligação a antígenos, um domínio transmembranar e um domínio intracelular de uma molécula inibidora. Por exemplo, o domínio intracelular do CAR inibidor pode ser um domínio intracelular de PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (por exemplo, CEACAM-1, CEACAM-3 e/ou CEACAM-5),
LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 ou CD270), KIR, A2aR, MHC classe I, MHC classe II, GAL9, adenosina e TGF beta.
[00375] Nas modalidades, o vetor pode compreender duas ou mais sequências de ácidos nucleicos que codificam um CAR, por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento e um segundo CAR, por exemplo, um CAR inibitório ou um CAR que se liga especificamente a um antígeno, que não BCMA (por exemplo, um antígeno expresso em células de AML, por exemplo, CD123, CLL-1, CD34, FLT3, ou receptor beta folato; ou células B de expressão de antígenos, por exemplo, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b ou CD79a). Em tais modalidades, as duas ou mais sequências de ácidos nucleicos que codificam o CAR são codificadas por uma única molécula de ácido nucleico na mesma estrutura e como uma única cadeia de polipeptídeo. Neste aspecto, os dois ou mais CARs podem, por exemplo, estar separados por um ou mais sítios de clivagem de peptídeos (por exemplo, um sítio de autoclivagem ou um substrato para uma protease intracelular). Exemplos de sítios de clivagem de peptídeos incluem os seguintes, nos quais os resíduos GSG são opcionais:
[00376] T2A: (GSG) E G R G S L L T C G D V E E N P G P (SEQ ID Nº: 1296)
[00377] P2A: (GSG) A T N F S L L K Q A G D V E E N P G P (SEQ ID Nº: 1297)
[00378] E2A: (GSG) Q C T N Y A L L K L A G D V E S N P G P (SEQ ID Nº: 1298)
[00379] F2A: (GSG) V K Q T L N F D L L K L A G D V E S N P G P (SEQ ID Nº: 1299)
[00380] Os métodos de introdução e expressão de genes em uma célula são conhecidos na técnica. No contexto de um vetor de expressão, o vetor pode ser prontamente introduzido em uma célula hospedeira, por exemplo, célula de mamífero, bacteriana, levedura ou inseto por qualquer método da técnica. Por exemplo, o vetor de expressão pode ser transferido para uma célula hospedeira por meios físicos, químicos ou biológicos.
[00381] Métodos físicos para a introdução de um polinucleotídeo em uma célula hospedeira incluem precipitação com fosfato de cálcio, lipofecção, bombardeamento de partículas, microinjeção, eletroporação e similares. Métodos para produzir células que compreende vetores e/ou ácidos nucleicos exógenos são bem conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1-4, Cold Spring Harbor Press, NY). Um método preferencial para a introdução de um polinucleotídeo em uma célula hospedeira é transfecção com fosfato de cálcio.
[00382] Métodos biológicos para introduzir um polinucleotídeo de interesse em uma célula hospedeira incluem o uso de vetores de DNA e RNA. Vetores virais, e especialmente vetores retrovirais, se tornaram no método mais amplamente usado para inserir genes em células de mamífero, por exemplo, humanas. Outros vetores virais podem ser derivados de lentivírus, poxvírus, vírus herpes simplex I, adenovírus e vírus adenoassociados e similares. Consultar, por exemplo, as Patentes Nos U.S. 5.350.674 e 5.585.362.
[00383] Meios químicos para introduzir um polinucleotídeo em uma célula hospedeira incluem sistemas de dispersão coloidal, tais como complexos de macromoléculas, nanocápsulas, microesferas, esférulas e sistemas à base de lipídeos incluindo emulsões óleo-em-água, micélios, micélios mistos e lipossomos. Um sistema coloidal exemplificativo para uso como veículo de administração in vitro e in vivo é um lipossomo (por exemplo, uma vesícula membranar artificial). Outros métodos de administração alvejada de ácidos nucleicos comuns na técnica estão disponíveis, tais como administração de polinucleotídeos com nanopartículas direcionadas ou outro sistema de administração adequado à escala de submícrons.
[00384] No caso de ser utilizado um sistema de administração não viral, um veículo de administração exemplificativo é um lipossomo. O uso de formulações lipídicas é contemplado para a introdução dos ácidos nucleicos em uma célula hospedeira (in vitro, ex vivo ou in vivo). Em outro aspecto, o ácido nucleico pode ser associado a um lipídeo. O ácido nucleico associado a um lipídeo pode ser encapsulado no interior aquoso de um lipossomo, intercalado na bicamada lipídica de um lipossomo, ligado a um lipossomo via uma molécula de ligação que está associada ao lipossomo e ao oligonucleotídeo, encerrado em um lipossomo, complexado com um lipossomo, disperso em uma solução contendo um lipídeo, misturado com um lipídeo, combinado com um lipídeo, contido como uma suspensão em um lipídeo, contido ou complexado com um micélio ou associado de qualquer outro modo a um lipídeo. Composições associadas a lipídeos, lipídeo/DNA ou lipídeo/vetor de expressão não se limitam a qualquer estrutura particular em solução. Por exemplo, podem estar presentes em uma estrutura de bicamada, como micélios ou com uma estrutura "colapsada". Também podem ser simplesmente intercaladas em uma solução, possivelmente formando agregados que não são uniformes no tamanho ou forma. Lipídeos são substâncias graxas que podem ser lipídeos de ocorrência natural ou sintéticos. Por exemplo, lipídeos incluem as gotículas graxas que ocorrem naturalmente no citoplasma bem como a classe de compostos que contêm hidrocarbonatos alifáticos de cadeia longa e seus derivados, tais como ácidos graxos, álcoois, aminas, aminoálcoois e aldeídos.
[00385] Lipídeos adequados para uso podem ser obtidos a partir de fontes comerciais. Por exemplo, dimiristil-fosfatidilcolina ("DMPC") pode ser obtida junto à Sigma, St. Louis, MO; fosfato de dicetila ("DCP") pode ser obtido junto à K & K Laboratories (Plainview, NY); colesterol ("Choi") pode ser obtido junto à Calbiochem-Behring; dimiristil-fosfatidilglicerol ("DMPG") e outros lipídeos podem ser obtidos junto à Avanti Polar Lipids, Inc. (Birmingham, AL.). Soluções de estoque de lipídeos em clorofórmio ou clorofórmio/metanol podem ser armazenadas a cerca de -20°C. Clorofórmio é usado como o único solvente uma vez que é mais prontamente evaporado do que metanol. "Lipossomo" é um termo genérico que abrange uma variedade de veículos lipídicos uni e multilamelares formados pela geração de bicamadas ou agregados lipídicos encerrados. Os lipossomos podem ser caracterizados como tendo estruturas vesiculares com uma membrana de bicamada fosfolipídica e um meio aquoso interno. Lipossomos multilamelares têm múltiplas camadas lipídicas separadas por meio aquoso. Os mesmos se formam espontaneamente quando fosfolipídeos são suspensos em um excesso de solução aquosa. Os componentes lipídicos sofrem autorrearranjo antes da formação de estruturas fechadas e encerram água e solutos dissolvidos entre as bicamadas lipídicas (Ghosh et al., 1991 Glycobiology 5: 505 a 510). No entanto, composições que têm diferentes estruturas em solução relativamente à estrutura vesicular normal também estão abrangidas. Por exemplo, os lipídeos podem assumir uma estrutura micelar ou existir meramente como agregados não uniformes de moléculas lipídicas. Também são contemplados complexos lipofectamina-ácido nucleico.
[00386] Independentemente do método usado para introduzir ácidos nucleicos exógenos em uma célula hospedeira ou expor de qualquer outro modo uma célula ao inibidor da presente invenção, para confirmar a presença da sequência DNA recombinante na célula hospedeira, uma variedade de ensaios pode ser realizada. Tais ensaios incluem, por exemplo, ensaios de "biologia molecular" bem conhecidos dos peritos na técnica, tais como transferência Southern e Northern, RT-PCR e PCR; ensaios "bioquímicos", tais como detecção da presença ou ausência de um peptídeo particular, por exemplo, por meios imunológicos (ELISAs e transferências Western) ou por ensaios descritos aqui para identificar agentes que caem no escopo da invenção.
[00387] A presente invenção proporciona ainda um vetor compreendendo uma molécula de ácido nucleico codificando CAR. Em um aspecto, um vetor de CAR pode ser diretamente transduzido para uma célula, por exemplo, uma célula T ou célula NK. Em um aspecto, o vetor é um vetor de clonagem ou de expressão, por exemplo, um vetor incluindo, mas não se limitando a, um ou mais plasmídeos (por exemplo, plasmídeos de expressão, vetores de clonagem, minicírculos, minivetores, cromossomos "double minute"), construtos de vetor retroviral e lentiviral. Em um aspecto, o vetor é capaz de expressar o construto de CAR em células T ou células NK de mamíferos. Em um aspecto, a célula T de mamífero é uma célula T humana. Em um aspeto, a célula NK de mamífero é uma célula NK humana. Fontes de Células
[00388] Antes da expansão e modificação genética, uma fonte de células, por exemplo, células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK, é obtida de um indivíduo. É pretendido que o termo "indivíduo" inclua organismos vivos nos quais pode ser induzida uma resposta imune (por exemplo, mamíferos). Exemplos de indivíduos incluem humanos, cães, gatos, camundongos, ratos, e suas espécies transgênicas. As células T podem ser obtidas dentre várias fontes, incluindo células mononucleares do sangue periférico, medula óssea, tecido de linfonodos, sangue do cordão umbilical, tecido do timo, tecido de um sítio de infecção, ascites, efusão pleural, tecido do baço e tumores.
[00389] Em determinados aspectos da presente divulgação pode ser usado qualquer número de linhagens de células imunoefetoras (por exemplo, célula T ou célula NK) disponíveis na técnica. Em certos aspectos da presente invenção, células T podem ser obtidas de uma unidade de sangue recolhido de um indivíduo usando quaisquer técnicas conhecidas do perito, tais como separação com Ficoll™. Em um aspecto preferencial, células do sangue em circulação de um indivíduo são obtidas por aférese. O produto de aférese contém tipicamente linfócitos, incluindo células T, monócitos, granulócitos, células B, outros glóbulos brancos nucleados, glóbulos vermelhos e plaquetas. Em um aspecto, as células recolhidas por aférese podem ser lavadas para remover a fração do plasma e para colocar as células em um tampão ou meio apropriado para passos de processamento subsequentes. Em um aspecto da invenção, as células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS). Em um aspecto alternativo, a solução de lavagem está desprovida de cálcio e pode estar desprovida de magnésio ou pode estar desprovida de muitos se não de todos os cátions divalentes.
[00390] As etapas de ativação inicial, na ausência de cálcio podem levar a uma ativação amplificada. Como será prontamente apreciado pelos peritos na técnica, uma etapa de lavagem pode ser efetuada por métodos conhecidos dos peritos na técnica, tais como por uso de um centrifugador de "fluxo contínuo" semiautomatizado (por exemplo, o processador de células Cobe 2991, o Baxter CytoMate ou o Haemonetics Cell Saver 5) de acordo com as instruções do fabricante. Após a lavagem, as células podem ser ressuspensas em uma variedade de tampões biocompatíveis, tais como, por exemplo, PBS sem Ca, sem Mg, PlasmaLyte A, ou outra solução salina com ou sem tampão. Alternativamente, os componentes indesejáveis da amostra da aférese podem ser removidos e as células podem ser diretamente ressuspensas em meio de cultura.
[00391] É reconhecido que os métodos do pedido podem empregar condições de meio de cultura compreendendo 5% ou menos, por exemplo, 2%, de soro AB humano, e empregar condições e composições do meio de cultura conhecidas, por exemplo, as descritas em Smith et al., "Ex vivo expansion of human T cells for adoptive imunotherapy using the novel Xeno-free CTS Immune Cell Serum Replacement" Clinical & Translational Immunology (2015) 4, e31; doi:10.1038/cti.2014.31.
[00392] Em um aspecto, células T são isoladas de linfócitos do sangue periférico por lise dos eritrócitos e depleção dos monócitos, por exemplo, por centrifugação através de um gradiente de PERCOLLTM ou por elutriação centrífuga contracorrente. Uma subpopulação específica de células T, como células T CD3+, CD4+, CD8+, CD45RA+, e/ou CD45RO+, pode ser adicionalmente isolada por técnicas de seleção positiva ou negativa. Por exemplo, em um aspecto, células T são isoladas por incubação com esférulas conjugadas a anti-CD3/anti-CD28 (por exemplo, 3x28), tais como T CD3/CD28 DYNABEADS® M-450, durante um período de tempo suficiente para a seleção positiva das células T desejadas. Em um aspecto, o período de tempo é cerca de 30 minutos. Em um aspecto adicional, o período de tempo varia desde 30 minutos até 36 horas ou mais e todos os valores inteiros entre aqueles. Em um aspecto adicional, o período de tempo é pelo menos de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 horas. Ainda em outro aspecto preferencial, o período de tempo é 10 até 24 horas. Em um aspecto, o período de tempo de incubação é 24 horas. Tempos de incubação mais longos podem ser usados para isolar células T em qualquer situação em que haja poucas células T em comparação com outros tipos de células, tais como no isolamento de linfócitos infiltrantes em tumores (TIL) de tecido tumoral ou de indivíduos imunocomprometidos. Além disso, o uso de tempos de incubação mais longos pode aumentar a eficiência da captura de células T CD8+. Assim, simplesmente encurtando ou prolongando o tempo, células T são deixadas se ligar às microesferas CD3/CD28 e/ou aumentando ou decrescendo a razão entre microesferas e células T (como adicionalmente descrito no presente documento), subpopulações de células T podem ser preferencialmente selecionadas positiva ou negativamente na iniciação da cultura ou em outros momentos durante o processo. Adicionalmente, aumentando ou decrescendo a razão de anticorpos anti-CD3 e/ou anti-CD28 nas microesferas ou outra superfície, subpopulações de células T podem ser preferencialmente selecionadas positiva ou negativamente na iniciação da cultura ou em outros momentos desejados. O perito reconhecerá que múltiplas rondas de seleção também podem ser usadas no contexto desta invenção. Em certos aspectos, pode ser desejável conduzir o procedimento de seleção e usar as células "não selecionadas" no processo de ativação e expansão. Células "não selecionadas" também podem ser sujeitas a rondas adicionais de seleção.
[00393] O enriquecimento de uma população de células T por seleção negativa pode ser alcançado com uma combinação de anticorpos dirigidos para marcadores de superfície únicos às células negativamente selecionadas. Um método consiste em triagem e/ou seleção de células via imunoaderência magnética negativa ou citometria de fluxo que usa um coquetel de anticorpos monoclonais dirigidos para marcadores da superfície celular presentes nas células negativamente selecionadas. Por exemplo, para enriquecimento quanto a células CD4+ por seleção negativa, um coquetel de anticorpos monoclonais tipicamente inclui anticorpos para CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR e CD8. Em certos aspectos, pode ser desejável enriquecer ou selecionar positivamente quanto a células T reguladoras que tipicamente expressam CD4+, CD25+, CD62Lhi, GITR+, e FoxP3+. Em determinados aspectos, pode ser desejável enriquecer as células que têm CD127baixo. Alternativamente, em certos aspectos, células T reguladoras são depletadas por esférulas conjugadas a anti-C25 ou outro método de seleção similar.
[00394] Os métodos descritos no presente documento podem incluir, por exemplo, seleção de uma subpopulação específica de células imunoefetoras, por exemplo, células T, que são uma população depletada de células T reguladoras, células depletadas de CD25+, usando, por exemplo, uma técnica de seleção negativa, por exemplo, descrita no presente documento. De preferência, a população de células reguladoras T esgotadas contém menos de 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% de células CD25+.
[00395] Em uma modalidade, células reguladoras T, por exemplo, células T CD25+, são removidas da população usando um anticorpo anti- CD25, ou seu fragmento, ou um ligando de ligação de CD25, IL-2. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD25, ou um seu fragmento, ou ligando de ligação de CD25 é conjugado com um substrato, por exemplo, uma esfera, ou é de outra forma revestido em um substrato, por exemplo, uma esfera. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD25, ou seu fragmento, é conjugado com um substrato como descrito neste documento.
[00396] Em uma modalidade, as células reguladoras T, por exemplo, células T CD25+, são removidas da população usando reagente de depleção de CD25 da MiltenyiTM. Em uma modalidade, a razão entre as células e o reagente de depleção de CD25 é 1e7 células para 20 ul, ou 1e7 células para 15 ul, ou 1e7 células para 10 ul, ou 1e7 células para 5 ul, ou 1e7 células para 2,5 ul ou 1e7 células para 1,25 ul. Em uma modalidade, por exemplo, para depleção de células T reguladoras, por exemplo, CD25+, mais de 500 milhões de células/ml são usados. Em um aspecto adicional, uma concentração de células de 600, 700, 800 ou 900 milhões de células/ml é usada.
[00397] Em uma modalidade, a população de células imunoefetoras a ser depletada inclui cerca de 6 x 109 células T CD25+. Em outros aspectos, a população de células imunoefetoras a ser depletada inclui cerca de 1 x 109 a 1 x 1010 células T CD25+ e qualquer valor inteiro intermédio. Em uma modalidade, a população resultante depletada de células T reguladoras tem 2 x 109 células T reguladoras, por exemplo, células CD25+, ou menos (por exemplo, 1 x 109, 5 x 108, 1 x 108, 5 x 107, 1 x 107 ou menos células CD25+).
[00398] Em uma modalidade, as células T reguladoras, por exemplo, células CD25+, são removidas da população com o uso do sistema CliniMAC com um conjunto de tubagem de depleção, como, por exemplo, tubagem 162-01. Em uma modalidade, o sistema CliniMAC é operado em um cenário de depleção tal como, por exemplo, DEPLETION2.1.
[00399] Sem pretender ficar restringido por uma teoria particular, o decréscimo do nível de reguladores negativos de células imunes (por exemplo, decréscimo do número de células imunes indesejadas, por exemplo, células TREG) em um indivíduo antes da aférese ou durante a fabricação de um produto de células expressando CAR pode reduzir o risco de recidiva do indivíduo. Por exemplo, métodos de depleção de células TREG são conhecidos na técnica. Métodos de decréscimo de células TREG incluem, mas não se limitam a, ciclofosfamida, anticorpo anti-GITR (um anticorpo anti-GITR descrito aqui), depleção de CD25, e suas combinações.
[00400] Em algumas modalidades, os métodos de fabricação compreendem redução do número (por exemplo, depleção) de células TREG antes da fabricação da célula expressando CAR. Por exemplo, métodos de fabricação compreendem contatar a amostra, por exemplo, a amostra da aférese, com um anticorpo anti-GITR e/ou um anticorpo anti- CD25 (ou seu fragmento ou um ligante de ligação a CD25), por exemplo, para depletar células TREG antes da fabricação do produto de célula expressando CAR (por exemplo, célula T, célula NK).
[00401] Em uma modalidade, um indivíduo é pré-tratado com uma ou mais terapias que reduzem células TREG antes da recolha de células para fabrico de produto de célula expressando CAR, reduzindo assim o risco de recaída do indivíduo no tratamento com células expressando CAR. Em uma modalidade, os métodos de decréscimo de células TREG incluem, porém sem limitação, administração ao indivíduo de um ou mais dentre ciclofosfamida, anticorpo anti-GITR, depleção de CD25 ou uma combinação dos mesmos. A administração de um ou mais dentre ciclofosfamida, anticorpo anti-GITR, depleção de CD25 ou uma combinação dos mesmos pode ocorrer antes, durante ou após uma infusão do produto de célula que expressa CAR.
[00402] Em uma modalidade, um indivíduo é pré-tratado com ciclofosfamida antes da recolha de células para a fabricação do produto de células expressando CAR, desse modo reduzindo o risco de recidiva do indivíduo ao tratamento com células expressando CAR. Em uma modalidade, um indivíduo é pré-tratado com um anticorpo anti-GITR antes da recolha de células para a fabricação do produto de células expressando CAR, desse modo reduzindo o risco de recidiva do indivíduo ao tratamento com células expressando CAR.
[00403] Em uma modalidade, a população de células a ser removida não consiste nas células T reguladoras nem em células tumorais, mas nas células que afetam negativamente de qualquer outro modo a expansão e/ou função das células CART, por exemplo, células que expressam CD14, CD11b, CD33, CD15 ou outros marcadores expressos por células potencialmente imunossupressoras. Em uma modalidade, é contemplado que tais células sejam removidas concomitantemente com células T reguladoras e/ou células tumorais, ou após a dada depleção, ou em outra ordem.
[00404] Os métodos descritos aqui podem incluir mais do que um passo de seleção, por exemplo, mais do que um passo de depleção. O enriquecimento de uma população de células T por seleção negativa pode ser alcançado, por exemplo, com uma combinação de anticorpos dirigidos para marcadores de superfície únicos às células negativamente selecionadas. Um método consiste em triagem e/ou seleção de células via imunoaderência magnética negativa ou citometria de fluxo que usa um coquetel de anticorpos monoclonais dirigidos para marcadores da superfície celular presentes nas células negativamente selecionadas. Por exemplo, para enriquecimento quanto a células CD4+ por seleção negativa, um coquetel de anticorpos monoclonais pode incluir anticorpos para CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR e CD8.
[00405] Os métodos descritos aqui podem adicionalmente incluir remover células da população que expressam um antígeno tumoral, por exemplo, um antígeno tumoral que não compreende CD25, por exemplo, CD19, CD30, CD38, CD123, CD20, CD14 ou CD11b, para assim proporcionar uma população depletada de T reguladoras, por exemplo, depletada de CD25+, e células depletadas de antígenos tumorais que são adequadas para expressão de um CAR, por exemplo, um CAR descrito aqui. Em uma modalidade, as células que expressam antígenos tumorais são removidas simultaneamente com as células T reguladoras, por exemplo, CD25+. Por exemplo, um anticorpo anti-CD25, ou seu fragmento, e um anticorpo de antígeno antitumoral, ou seu fragmento, podem ser anexados ao mesmo substrato, por exemplo, esférula, que pode ser usado para remover as células ou um anticorpo anti-CD25, ou seu fragmento, ou o anticorpo de antígeno antitumoral, ou seu fragmento, podem ser anexados para separar esférulas, uma mistura das quais pode ser usada para remover as células. Em outras modalidades, a remoção de células reguladoras T, por exemplo, células CD25+, e a remoção das células que expressam antígeno tumoral é sequencial e pode ocorrer, por exemplo, em qualquer ordem.
[00406] Também são proporcionados métodos que incluem remover células da população que expressam um inibidor de pontos de verificação, por exemplo, um inibidor de pontos de verificação descrito aqui, por exemplo, um ou mais de células PD1+, células LAG3+ e células TIM3+, para desse modo proporcionar uma população depletada de células T reguladoras, por exemplo, depletada de CD25+, e depletada de células com um inibidor de pontos de verificação, por exemplo, depletada de células PD1+, LAG3+ e/ou TIM3+. Inibidores de ponto de verificação exemplificativos incluem PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (por exemplo, CEACAM-1, CEACAM-3 e/ou CEACAM-5), LAG3, VISTA,
BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 ou CD270), KIR, A2aR, MHC de classe I, MHC de classe II, GAL9, adenosina, e TGFR beta. Nas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é PD1 ou PD-L1. Em uma modalidade, células expressando inibidor de pontos de verificação são removidas simultaneamente com as células T reguladoras, por exemplo, CD25+. Por exemplo, um anticorpo anti-CD25 ou seu fragmento, e um anticorpo anti- inibidor de pontos de verificação ou seu fragmento, podem ser ligados à mesma microesfera que pode ser usada para remover as células, ou um anticorpo anti-CD25 ou seu fragmento, e o anticorpo anti-inibidor de pontos de verificação ou seu fragmento, podem ser ligados a microesferas separadas, uma mistura das quais pode ser usada para remover as células. Em outras modalidades, a remoção de células T reguladoras, por exemplo, células CD25+, e a remoção das células expressando inibidor de pontos de verificação são sequenciais, e podem ocorrer, por exemplo, em qualquer ordem.
[00407] Em uma modalidade, pode ser selecionada uma população de células T que expressa um ou mais de IFN-γ, TNFα, IL-17A, IL-2, IL-3, IL- 4, GM-CSF, IL-10, IL-13, granzima B e perforina, ou outras moléculas apropriadas, por exemplo, outras citocinas. Métodos de rastreio da expressão de células podem ser determinados, por exemplo, pelos métodos descritos na Publicação PCT No.: WO 2013/126712.
[00408] Para isolamento de uma população de células por seleção positiva ou negativa, a concentração de células e superfície (por exemplo, partículas como esférulas) pode variar. Em certos aspectos, pode ser desejável diminuir significativamente o volume no qual esférulas e células são misturadas em conjunto (por exemplo, aumentar a concentração de células), para assegurar contato máximo de células e esférulas. Por exemplo, em um aspecto, uma concentração de 2 bilhões de células/ml é usada. Em um aspecto, uma concentração de 1 bilhões de células/ml é usada. Em um aspecto adicional, mais de 100 milhões de células/ml são usadas. Em um aspecto adicional, uma concentração de células de 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 milhões de células/ml é usada. Ainda em um aspecto, uma concentração de células desde 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 milhões de células/ml é usada. Em aspectos adicionais, concentrações de 125 ou 150 milhões de células/ml podem ser usadas. O uso de concentrações elevadas pode resultar em rendimento de células, ativação de células, e expansão de células aumentados. Além disso, o uso de elevadas concentrações de células permite uma captura mais eficiente de células que podem expressar fracamente antígenos-alvo de interesse, tais como células T negativas para CD28, ou de amostras onde estão presentes muitas células tumorais (por exemplo, sangue leucêmico, tecido tumoral, etc.). Tais populações de células podem ter valor terapêutico e será desejável obter as mesmas. Por exemplo, o uso de uma concentração elevada de células permite uma seleção mais eficiente de células T CD8+ que normalmente têm expressão mais fraca de CD28.
[00409] Em um aspecto relacionado, pode ser desejável usar concentrações menores de células. Ao diluir significativamente a mistura de células T e superfície (por exemplo, partículas tais como esférulas), interações entre as partículas e células são minimizadas. Tal seleciona células que expressam quantidades elevadas de antígenos desejados a serem ligados às partículas. Por exemplo, células T CD4+ expressam níveis mais elevados de CD28 e são mais eficientemente capturadas do que células T CD8+ em concentrações diluídas. Em um aspecto, a concentração de células usada é 5 X 106/ml. Em outros aspectos, a concentração usada pode ir desde cerca de 1 X 105/ml até 1 X 106/ml, e qualquer valor inteiro entre aqueles.
[00410] Em outros aspectos, as células podem ser incubadas em um rotador durante extensões de tempo variáveis, a velocidades variáveis, a uma temperatura de 2 a 10°C ou à temperatura ambiente.
[00411] Células T para estimulação também podem ser congeladas após uma etapa de lavagem. Sem pretender ficar restringido pela teoria, a etapa de congelamento e descongelamento subsequente fornece um produto mais uniforme por remoção de granulócitos e, em alguma extensão, monócitos da população de células. Após a etapa de lavagem, que remove plasma e plaquetas, as células podem ser suspensas em uma solução de congelação. Embora muitas soluções e parâmetros de congelamento sejam conhecidos na técnica e sejam úteis nesse contexto, um método envolve usar PBS contendo DMSO a 20% e albumina do soro humano a 8%, ou meio de cultura contendo Dextrano 40 a 10% e Dextrose a 5%, Albumina de Soro Humano a 20% e DMSO a 7,5% ou Plasmalyte-A a 31,25%, Dextrose a 5%, NaCl a 0,45%, Dextrano 40 a 10% e Dextrose a 5%, Albumina do Soro Humano a 20%, e DMSO a 7,5% ou outro meio de congelação de células adequado contendo, por exemplo, Hespan e PlasmaLyte A, as células são então congeladas a uma temperatura de -80°C a uma taxa de 1° por minuto e armazenadas na fase de vapor de um tanque de armazenamento de nitrogênio líquido. Outros métodos de congelação controlada podem ser usados, bem como congelamento descontrolado imediatamente a -20°C ou em nitrogênio líquido.
[00412] Em certos aspectos, células criopreservadas são descongeladas e lavadas conforme descrito no presente documento e deixadas repousar durante uma hora à temperatura ambiente antes da ativação com o uso dos métodos da presente invenção.
[00413] Também é contemplada, no contexto da invenção, a coleta de amostras de sangue ou produto de aférese de um indivíduo em um período de tempo antes de poderem ser necessárias as células expandidas conforme descrito no presente documento.
Como tal, a fonte das células a serem expandidas pode ser coletada em qualquer ponto no tempo necessário, e células desejadas, como células imunoefetoras, por exemplo, células T ou células NK isoladas e congeladas para uso posterior em terapia com células, por exemplo, terapia com células T, para quaisquer doenças ou afecções que beneficiem da terapia com células, por exemplo, terapia com células T, como as descritas no presente documento.
Em um aspecto, uma amostra de sangue ou uma aférese é recolhida de um indivíduo geralmente saudável.
Em certos aspectos, uma amostra de sangue ou uma aférese é recolhida de um indivíduo geralmente saudável que está em risco de desenvolver uma doença, mas que ainda não desenvolveu uma doença, e as células de interesse são isoladas e congeladas para uso posterior.
Em certos aspectos, as células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK) podem ser expandidas, congeladas e usadas em um instante posterior.
Em certos aspectos, amostras são coletadas de um paciente pouco tempo após o diagnóstico de uma doença particular como descrito no presente documento, mas antes de quaisquer tratamentos.
Em um aspecto adicional, as células são isoladas de uma amostra de sangue ou uma aférese de um indivíduo antes de quaisquer modalidades de tratamento relevantes, incluindo, mas não se limitando a tratamento com agentes tais como natalizumabe, efalizumabe, agentes antivirais, quimioterapia, radiação, agentes imunossupressores, tais como ciclosporina, azatioprina, metotrexato, micofenolato, e FK506, anticorpos ou outros agentes de imunoablação tais como CAMPATH, anticorpos anti-CD3, citoxano, fludarabina, ciclosporina, FK506, rapamicina, ácido micofenólico, esteroides, FR901228 e irradiação.
[00414] Em um aspecto adicional da presente invenção, células T são obtidas de um paciente diretamente após tratamento que deixa o indivíduo com células T funcionais. A este respeito, foi observado que, após certos tratamentos para câncer, em particular tratamentos com fármacos que danificam o sistema imune, pouco tempo após o tratamento e durante o período no qual pacientes estão normalmente recuperando do tratamento, a qualidade de células T obtidas pode ser ótima ou melhorada quanto à sua capacidade de expansão ex vivo. De igual modo, após manipulação ex vivo com o uso dos métodos descritos no presente documento, essas células podem estar em um estado preferencial para enxertia e expansão in vivo intensificadas. Assim, é contemplado, no contexto da presente invenção, recolher células sanguíneas, incluindo células T, células dendríticas, ou outras células da linhagem hematopoiética, durante esta fase de recuperação. Além disso, em certos aspectos, regimes de mobilização (por exemplo, mobilização com GM- CSF) e condicionamento podem ser usados para criar uma condição em um indivíduo em que a repopulação, recirculação, regeneração, e/ou expansão de tipos de células particulares são favorecidos, especialmente durante uma janela de tempo definida após terapia. Tipos de células ilustrativos incluem células T, células B, células dendríticas e outras células do sistema imune.
[00415] Em uma modalidade, as células imunoefetoras que expressam uma molécula CAR, por exemplo, uma molécula CAR descrita no presente documento, são obtidas a partir de um indivíduo que recebeu uma dose baixa intensificadora de imunidade de um inibidor de mTOR. Em uma modalidade, a população de células imunoefetoras, por exemplo, células T, a ser geneticamente manipulada para expressar um CAR, é coletada após um tempo suficiente ou após dosagem suficiente de baixa dose de intensificação imune de um inibidor de mTOR, de modo que o nível de células efetoras imunes negativas para PD1, por exemplo, células T, ou a razão de células efetoras imunes negativas para PD1, por exemplo, células T/células efetoras imunes positivas para PD1, por exemplo, células T, no indivíduo ou coletadas do indivíduo foi, pelo menos temporariamente, aumentada.
[00416] Em outras modalidades, a população de células efetoras imunes, por exemplo, células T, que foi ou será manipulada para expressar um CAR, pode ser tratada ex vivo por contato com uma quantidade de um inibidor de mTOR que aumenta o número de células efetoras imunes negativas para PD1, por exemplo, células T, ou aumenta a razão de células efetoras imunes negativas para PD1, por exemplo, células T/células efetoras imunes positivas para PD1, por exemplo, células T.
[00417] Em uma modalidade, a população de células T é deficiente em diaglicerol quinase (DGK). Células deficientes em DGK incluem células que não expressam RNA ou proteína de DGK, ou têm atividade de DGK reduzida ou inibida. Células deficientes em DGK podem ser geradas por abordagens genéticas, por exemplo, administração de agentes de interferência de RNA, por exemplo, siRNA, shRNA, miRNA, para reduzir ou prevenir a expressão de DGK. Alternativamente, células deficientes em DGK podem ser geradas por tratamento com inibidores de DGK descritos no presente documento.
[00418] Em uma modalidade, uma população de células T é deficiente em Ikaros. Células deficientes em Ikaros incluem células que não expressam RNA ou proteína de Ikaros, ou têm atividade de Ikaros reduzida ou inibida, células deficientes em Ikaros podem ser geradas por abordagens genéticas, por exemplo, administração de agentes de interferência de RNA, por exemplo, siRNA, shRNA, miRNA, para reduzir ou prevenir a expressão de Ikaros. Alternativamente, células deficientes em Ikaros podem ser geradas por tratamento com inibidores de Ikaros, por exemplo, lenalidomida.
[00419] Em modalidades, uma população de células T é deficiente em DGK e deficiente em Ikaros, por exemplo, não expressa DGK nem Ikaros, ou tem atividade de DGK e Ikaros reduzida ou inibida. Tais células deficientes em DGK e Ikaros podem ser geradas por quaisquer dos métodos descritos no presente documento.
[00420] Em uma modalidade, as células NK são obtidas do indivíduo. Em outra modalidade, as células NK são uma linhagem de células NK, por exemplo, linhagem de células NK-92 (Conkwest). Modificações de células de CAR, incluindo células de CAR alogênico
[00421] Nas modalidades descritas no presente documento, a célula imunoefetora pode ser uma célula imunoefetora alogênica, por exemplo, célula T ou célula NK. Por exemplo, a célula pode ser uma célula T alogeneica, por exemplo, uma célula T alogeneica desprovida de expressão de um receptor de células T (TCR) e/ou antígeno leucocitário humano (HLA) funcionais, por exemplo, HLA de classe I e/ou HLA de classe II e/ou microglobulina beta -2 (β2m). As composições de CAR alogênico e métodos do mesmo foram descritos, por exemplo, nas páginas 227-237 do documento WO 2016/014565, incorporadas no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00422] Em algumas modalidades, uma célula, por exemplo, uma célula T ou uma célula NK, é modificada para reduzir a expressão de um TCR, e/ou HLA, e/ou β2m, e/ou uma molécula inibidora descrita no presente documento (por exemplo, PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, CEACAM (por exemplo, CEACAM-1, CEACAM-3 e/ou CEACAM-5),
LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 ou CD270), KIR, A2aR, MHC classe I, MHC classe II, GAL9, adenosina e TGFR beta), usando, por exemplo, um método descrito no presente documento, por exemplo, siRNA, shRNA, repetições palindrômicas curtas regularmente espaçadas aglomeradas (CRISPR), nuclease com efetor do tipo ativador de transcrição (TALEN), ou endonuclease de dedo de zinco (ZFN).
[00423] Em algumas modalidades, uma célula, por exemplo, uma célula T ou uma célula NK é geneticamente manipulada para expressar uma subunidade de telomerase, por exemplo, a subunidade catalítica de telomerase, por exemplo, TERT, por exemplo, hTERT. Em uma modalidade, tal modificação melhora a persistência da célula em um paciente. Ativação e Expansão de Células T
[00424] As células T podem ser ativadas e expandidas geralmente usando métodos como descrito, por exemplo, nas Patentes nos U.S.
6.352.694; 6.534.055; 6.905.680; 6.692.964; 5.858.358; 6.887.466;
6.905.681; 7.144.575; 7.067.318; 7.172.869; 7.232.566; 7.175.843;
5.883.223; 6.905.874; 6.797.514; 6.867.041; e Publicação do Pedido de Patente U.S. no 20060121005.
[00425] Geralmente, as células T da invenção podem ser expandidas por contato com uma superfície tendo ligado um agente que estimula um sinal associado ao complexo CD3/TCR e um ligante que estimula uma molécula coestimuladora na superfície das células T. Em particular, populações de células T podem ser estimuladas como descrito aqui, tal como por contato com um anticorpo anti-CD3, ou seu fragmento de ligação a antígenos, ou um anticorpo anti-CD2 imobilizado em uma superfície, ou por contato com um ativador de proteína quinase C (por exemplo, briostatina) em conjunção com um ionóforo de cálcio. Para a coestimulação de uma molécula acessória na superfície das células T é usado um ligante que se liga à molécula acessória. Por exemplo, uma população de células T pode ser contatada com um anticorpo anti-CD3 e um anticorpo anti-CD28, sob condições apropriadas para estimular a proliferação das células T. Para estimular a proliferação de células T CD4+ ou células T CD8+, podem ser usados um anticorpo anti-CD3 e um anticorpo anti-CD28. Os exemplos de um anticorpo anti-CD28 incluem
9.3, B-T3, XR-CD28 (Diaclone, Besançon, França) que podem ser usados, bem como outros métodos habitualmente conhecidos na técnica (Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3.975 a 3.977, 1998; Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999; Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2):53 a 63, 1999).
[00426] Em certos aspectos, o sinal estimulador primário e o sinal coestimulador para a célula T podem ser fornecidos por protocolos diferentes. Por exemplo, os agentes que fornecem cada sinal podem estar em solução ou acoplados a uma superfície. Quando acoplados a uma superfície, os agentes podem estar acoplados à mesma superfície (isto é, em formação "cis") ou a superfícies separadas (isto é, em formação "trans"). Alternativamente, um agente pode estar acoplado a uma superfície e o outro agente em solução. Em um aspecto, o agente que fornece o sinal coestimulador está ligado a uma superfície celular e o agente que fornece o sinal de ativação primário está em solução ou acoplado a uma superfície. Em certos aspectos, os dois agentes podem estar em solução. Em um aspecto, os agentes podem estar em forma solúvel, e então serem reticulados a uma superfície, tal como uma célula expressando receptores de Fc ou um anticorpo ou outro agente de ligação que irá se ligar aos agentes. Nesse sentido, consultar, por exemplo, as Publicações dos Pedidos de Patentes Nos U.S. 20040101519 e 20060034810 quanto a células apresentadoras de antígenos artificiais (aAPCs) que são contempladas para uso na ativação e expansão de células T na presente invenção.
[00427] Em um aspecto, os dois agentes são imobilizados em microesferas, na mesma microesfera, isto é, "cis", ou em microesferas separadas, isto é, "trans". A título exemplificativo, o agente que fornece o sinal de ativação primário é um anticorpo anti-CD3 ou um seu fragmento de ligação a antígenos e o agente que fornece o sinal coestimulador é um anticorpo anti-CD28 ou seu fragmento de ligação a antígenos; e os dois agentes são coimobilizados na mesma microesfera em quantidades moleculares equivalentes. Em um aspecto é usada uma razão 1:1 de cada anticorpo ligado às microesferas para expansão de células T CD4+ e crescimento de células T. Em certos aspectos da presente invenção, é usada uma razão de anticorpos anti-CD3:CD28 ligados às microesferas de modo a ser observado um aumento da expansão de células T em comparação com a expansão observada usando uma razão de 1:1. Em um aspecto particular, um aumento de cerca de 1 a cerca de 3 vezes é observado em comparação com a expansão observada usando uma razão de 1:1. Em um aspecto, a razão de anticorpos CD3:CD28 ligados às microesferas está na faixa 100:1 a 1:100 e todos os valores inteiros entre estes. Em um aspecto da presente invenção, mais anticorpo anti- CD28 é ligado às partículas do que anticorpo anti-CD3, isto é, a razão de CD3:CD28 é menor do que um. Em certos aspectos da invenção, a razão de anticorpo anti-CD28 para anticorpo anti-CD3 ligado às esférulas é maior do que 2:1. Em um aspecto particular, é usada uma razão 1:100 de CD3:CD28 de anticorpo ligado a esférulas. Em um aspecto, é usada uma razão 1:75 de CD3:CD28 de anticorpo ligado a microesferas. Em um aspecto adicional, é usada uma razão 1:50 de CD3:CD28 de anticorpo ligado a microesferas. Em um aspecto, é usada uma razão 1:30 de CD3:CD28 de anticorpo ligado a microesferas. Em um aspecto preferencial, é usada uma razão 1:10 de CD3:CD28 de anticorpo ligado a esférulas. Em um aspecto, é usada uma razão 1:3 de CD3:CD28 de anticorpo ligado às esférulas. Ainda em um aspecto, é usada uma razão 3:1 de CD3:CD28 de anticorpo ligado às esférulas.
[00428] Razões entre partículas e células de 1:500 a 500:1 e quaisquer valores inteiros entre estes podem ser usadas para estimular células T ou outras células-alvo. Como aqueles de habilidade comum na técnica podem entender prontamente, a razão entre partículas e células pode depender do tamanho das partículas relativamente à célula-alvo. Por exemplo, microesferas de pequeno tamanho podem ligar somente algumas células, ao passo que microesferas maiores podem ligar muitas. Em certos aspectos, a razão entre células e partículas está na faixa desde 1:100 a 100:1 e quaisquer valores inteiros entre estes e, em aspectos adicionais, a razão que compreende 1:9 até 9:1 e quaisquer valores inteiros entre estes também pode ser usada para estimular células T. A razão de partículas acopladas a anti-CD3 e anti-CD28 para células T que pode resultar em estimulação de células T pode variar como notado acima, no entanto, certos valores preferenciais incluem 1:100, 1:50, 1:40, 1:30, 1:20, 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, e 15:1 com uma razão preferencial sendo pelo menos 1:1 partículas por célula T. Em um aspecto, é usada uma razão entre partículas e células de 1:1 ou menos. Em um aspecto particular, uma razão preferencial partícula:célula é 1:5. Em aspectos adicionais, a razão entre partículas e células pode ser variada dependendo do dia da estimulação. Por exemplo, em um aspecto, a razão entre partículas e células é de 1:1 a 10:1 no primeiro dia e partículas adicionais são adicionadas às células todos os dias ou em dias alternados daí em diante durante um período até 10 dias, a razões finais de 1:1 a 1:10 (com base em contagens de células no dia da adição). Em um aspecto particular, a razão entre partículas e células é 1:1 no primeiro dia da estimulação e ajustada para 1:5 no terceiro e quinto dias da estimulação. Em um aspecto, partículas são adicionadas em uma base diária ou de dias alternados para uma razão final de 1:1 no primeiro dia, e 1:5 no terceiro e quinto dias da estimulação. Em um aspecto, a razão entre partículas e células é 2:1 no primeiro dia da estimulação e ajustada para 1:10 no terceiro e quinto dias da estimulação. Em um aspecto, partículas são adicionadas em uma base diária ou de dias alternados em uma razão final de 1:1 no primeiro dia, e 1:10 no terceiro e quinto dias da estimulação. O versado na técnica entenderá que uma variedade de outras razões podem ser adequadas para uso na presente invenção. Em particular, as razões irão variar dependendo do tamanho das partículas e do tamanho e tipo de células. Em um aspecto, as razões mais típicas para uso se encontram nas proximidades de 1:1, 2:1 e 3:1 no primeiro dia.
[00429] Em aspectos adicionais da presente invenção, as células, tais como células T, são combinadas com esférulas revestidas com agentes, as esférulas e as células são subsequentemente separadas, e então as células são cultivadas. Em um aspecto alternativo, antes da cultura, as microesferas revestidas com agentes e células não são separadas, mas são cultivadas em conjunto. Em um aspecto adicional, as microesferas e células são primeiramente concentradas por aplicação de uma força, tal como uma força magnética, resultando em ligação acrescida de marcadores da superfície celular, desse modo induzindo estimulação de células.
[00430] A título de exemplo, as proteínas da superfície celular podem ser ligadas permitindo-se que microesferas paramagnéticas às quais estão ligadas o anti-CD3 e anti-CD28 (3x28 microesferas) façam contato com as células T.
Em um aspecto, as células (por exemplo, 104 a 109 células T) e microesferas (por exemplo, microesferas paramagnéticas T CD3/CD28 DYNABEADS® M-450 a uma razão de 1:1) são combinadas em um tampão, por exemplo, PBS (sem cátions divalentes, tais como cálcio e magnésio). Mais uma vez, os versados na técnica podem entender prontamente que qualquer concentração de células pode ser usada.
Por exemplo, a célula-alvo pode ser muito rara na amostra e compreender somente 0,01% da amostra ou a totalidade da amostra (isto é, 100%) pode compreender a célula-alvo de interesse.
Em conformidade, qualquer número de células está dentro do contexto da presente invenção.
Em certos aspectos, pode ser desejável diminuir significativamente o volume no qual partículas e células são misturadas em conjunto (isto é, aumentar a concentração de células), para assegurar contato máximo de células e partículas.
Por exemplo, em um aspecto, é usada uma concentração de cerca de 10 bilhões de células/ml, 9 bilhões/ml, 8 bilhões/ml, 7 bilhões/ml, 6 bilhões/ml, 5 bilhões/ml ou 2 bilhões/ml.
Em um aspecto, são usadas mais de 100 milhões de células/ml.
Em um aspecto adicional, uma concentração de células de 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 milhões de células/ml é usada.
Ainda em um aspecto, uma concentração de células desde 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 milhões de células/ml é usada.
Em aspectos adicionais, concentrações de 125 ou 150 milhões de células/ml podem ser usadas.
O uso de concentrações elevadas pode resultar em rendimento de células, ativação de células, e expansão de células aumentados.
Além disso, o uso de concentrações elevadas de células permite uma captura mais eficiente de células que podem expressar fracamente antígenos-alvo de interesse, tais como células T negativas para CD28. Tais populações de células podem ter valor terapêutico e será desejável obtê-las em certos aspectos. Por exemplo, o uso de uma concentração elevada de células permite uma seleção mais eficiente de células T CD8+ que normalmente têm expressão mais fraca de CD28.
[00431] Em uma modalidade, células transduzidas com um ácido nucleico codificando um CAR, por exemplo, um CAR descrito aqui, são expandidas, por exemplo, por um método descrito aqui. Em uma modalidade, as células são expandidas em cultura durante um período de várias horas (por exemplo, cerca de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 18, 21 horas) até cerca de 14 dias (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 dias). Em uma modalidade, as células são expandidas durante um período de 4 até 9 dias. Em uma modalidade, as células são expandidas durante um período de 8 dias ou menos, por exemplo, 7, 6 ou 5 dias. Em uma modalidade, as células, por exemplo, uma célula de CAR de BCMA descrita aqui, são expandidas em cultura durante 5 dias, e as células resultantes são mais potentes do que as mesmas células expandidas em cultura durante 9 dias sob as mesmas condições de cultura. A potência pode ser definida, por exemplo, por várias funções de células T, por exemplo, proliferação, morte de células-alvo, produção, ativação, migração de citocinas, ou suas combinações. Em uma modalidade, as células, por exemplo, uma célula de CAR de BCMA descrita no presente documento, expandidas durante 5 dias exibem um aumento de pelo menos uma, duas, três ou quatro vezes em duplicações de células por estimulação com antígenos em comparação com as mesmas células expandidas em cultura durante 9 dias sob as mesmas condições de cultura. Em uma modalidade, as células, por exemplo, as células expressando um CAR de BCMA descrito no presente documento, são expandidas em cultura durante 5 dias, e as células resultantes exibem produção mais elevada de citocinas pró-inflamatórias, por exemplo, níveis de IFN-γ e/ou GM-CSF, em comparação com as mesmas células expandidas em cultura durante 9 dias sob as mesmas condições de cultura. Em uma modalidade, as células, por exemplo, uma célula de CAR de BCMA descrita no presente documento, expandidas durante 5 dias exibem um aumento de pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco, dez vezes ou mais em pg/ml de produção de citocinas pró-inflamatórias, por exemplo, níveis de IFN-γ e/ou GM-CSF, em comparação com as mesmas células expandidas em cultura durante 9 dias sob as mesmas condições de cultura.
[00432] Em um aspecto da presente invenção, a mistura pode ser cultivada durante várias horas (cerca de 3 horas) até cerca de 14 dias ou qualquer valor horário inteiro entre os mesmos. Em um aspecto, a mistura pode ser cultivada durante 21 dias. Em um aspecto da invenção, as esférulas e as células T são cultivadas em conjunto durante cerca de oito dias. Em um aspecto, as esférulas e células T são cultivadas em conjunto durante 2-3 dias. Também podem ser desejados vários ciclos de estimulação, de modo que o tempo de cultura de células T possa ser de 60 dias ou mais. Condições apropriadas para cultura de células T incluem um meio apropriado (por exemplo, Meio Mínimo Essencial ou meio RPMI 1640 ou X-vivo 15 (Lonza)) que pode conter fatores necessários para a proliferação e viabilidade, incluindo soro (por exemplo, soro fetal de bovino ou humano), interleucina-2 (IL-2), insulina, IFN-γ, IL-4, IL-7, GM- CSF, IL-10, IL-12, IL-15, TGFβ e TNF-α ou quaisquer outros aditivos para o crescimento de células conhecidos do perito. Outros aditivos para o crescimento de células incluem, porém sem limitação, tensoativo,
plasmanato e agentes redutores, tais como N-acetil-cisteína e 2- mercaptoetanol. Os meios podem incluir RPMI 1640, AIM-V, DMEM, MEM, α-MEM, F-12, X-Vivo 15 e X-Vivo 20, Optimizer, com aminoácidos adicionados, piruvato de sódio e vitaminas, sem soro ou suplementados com uma quantidade apropriada de soro (ou plasma) ou um conjunto definido de hormônios e/ou uma quantidade de citocina (ou citocinas) suficiente para o crescimento e expansão de células T. Antibióticos, por exemplo, penicilina e estreptomicina, são incluídos somente em culturas experimentais, não em culturas de células a serem infundidas em um indivíduo. As células-alvo são mantidas sob condições necessárias para suportar o crescimento, por exemplo, uma temperatura (por exemplo, 37 °C) e atmosfera (por exemplo, ar mais 5% de CO2) apropriadas.
[00433] Em uma modalidade, as células são expandidas em um meio apropriado (por exemplo, meio descrito aqui) que inclui uma ou mais interleucinas que resulte em pelo menos um aumento de 200 vezes (por exemplo, 200 vezes, 250 vezes, 300 vezes, 350 vezes) em células ao longo de um período de expansão de 14 dias, por exemplo, medido por um método descrito aqui tal como citometria de fluxo. Em uma modalidade, as células são expandidas na presença de IL-15 e/ou IL-7 (por exemplo, IL-15 e IL-7).
[00434] Em modalidades, métodos descritos aqui, por exemplo, métodos de fabricação de células expressando CAR, compreendem remover células T reguladoras, por exemplo, células CD25+ T, de uma população de células, por exemplo, usando um anticorpo anti-CD25, ou seu fragmento, ou um ligante de ligação a CD25, IL-2. Métodos para remover células T reguladoras, por exemplo, células T CD25+, de uma população de células são descritos no presente documento. Em modalidades, os métodos, por exemplo, métodos de fabricação,
compreendem adicionalmente contatar uma população de células (por exemplo, uma população de células na qual células T reguladoras, tal como células CD25+ T, foram esgotadas; ou uma população de células que foi previamente contatada com um anticorpo anti-CD25, seu fragmento, ou ligando de ligação a CD25) com IL-15 e/ou IL-7. Por exemplo, a população de células (por exemplo, que foi previamente contatada com um anticorpo anti-CD25, seu fragmento, ou ligando de ligação a CD25) é expandida na presença de IL-15 e/ou IL-7.
[00435] Em algumas modalidades, uma célula expressando CAR descrita aqui é contatada com uma composição compreendendo um polipeptídeo de interleucina-15 (IL-15), um polipeptídeo do receptor de interleucina-15 alfa (IL-15Ra), ou uma combinação de um polipeptídeo de IL-15 e um polipeptídeo de IL-15Ra, por exemplo, hetIL-15, durante a preparação da célula expressando CAR, por exemplo, ex vivo. Nas modalidades, uma célula que expressa CAR descrita no presente documento é contatada com uma composição que compreende um polipeptídeo de IL-15 durante a preparação da célula que expressa CAR, por exemplo, ex vivo. Em modalidades, a célula expressando CAR descrita aqui é contatada com uma composição compreendendo uma combinação de um polipeptídeo de IL-15 e um polipeptídeo de IL-15 Ra durante a fabricação da célula expressando CAR, por exemplo, ex vivo. Em modalidades, a célula expressando CAR descrita aqui é contatada com uma composição compreendendo hetIL-15 durante a fabricação da célula expressando CAR, por exemplo, ex vivo.
[00436] Em uma modalidade, a célula que expressa CAR descrita no presente documento é contatada com uma composição que compreende hetIL-15 durante a expansão ex vivo. Em uma modalidade, a célula que expressa CAR descrita no presente documento é contatada com uma composição que compreende um polipeptídeo de IL-15 durante a expansão ex vivo. Em uma modalidade, a célula que expressa CAR descrita no presente documento é contatada com uma composição que compreende um polipeptídeo de IL-15 e um polipeptídeo de IL-15Ra durante a expansão ex vivo. Em uma modalidade, o contato resulta na sobrevivência e proliferação de uma subpopulação de linfócitos, por exemplo, células T CD8+.
[00437] Células T que foram expostas a tempos de estimulação variados podem exibir diferentes características. Por exemplo, produtos típicos de sangue ou células mononucleares do sangue periférico submetidas a aférese têm uma população de células T auxiliadoras (TH, CD4+) que é maior do que a população de células T citotóxicas ou supressoras. A expansão ex vivo de células T por estimulação dos receptores CD3 e CD28 produz uma população de células T que, antes de cerca de 8 a 9 dias, consiste predominantemente em células TH, ao passo que, passados cerca de 8 a 9 dias, a população de células T compreende uma população cada vez maior de células TC. Em conformidade, dependendo do propósito do tratamento, a infusão de um indivíduo com uma população de células T que compreende predominantemente células TH pode ser vantajosa. Similarmente, se um subconjunto de células TC específicas para antígeno tiver sido isolado, pode ser benéfico expandir este subconjunto em um grau maior.
[00438] Ademais, adicionalmente aos marcadores de CD4 e CD8, outros marcadores fenotípicos variam significativamente mas, em grande parte, de modo reproduzível durante o processo da expansão celular. Assim, tal caráter reproduzível permite personalizar um produto de células T ativadas para propósitos específicos.
[00439] Uma vez que um CAR de BCMA é construído, vários ensaios podem ser usados para avaliar a atividade da molécula, tais como mas não se limitando à capacidade de expandir células T após estimulação por antígenos, sustentar a expansão de células T na ausência de reestimulação, e atividades anticancerígenas em modelos in vitro e animais adequados. Os ensaios para avaliar os efeitos de um CAR de BCMA são descritos em mais detalhes abaixo.
[00440] A análise por transferência Western da expressão de CAR em células T primárias pode ser usada para detectar a presença de monômeros e dímeros. Ver, por exemplo, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1.453 a 1.464 (2009). Muito brevemente, as células T (mistura 1:1 de células T CD4+ e CD8+) que expressam os CARs são expandidas in vitro por mais de 10 dias, seguido de lise e SDS-PAGE sob condições de redução. CARs contendo o domínio citoplasmático de TCR- ζ completo e a cadeia TCR-ζ endógena são detectados por transferência Western com o uso de um anticorpo para a cadeia TCR-ζ. Os mesmos subconjuntos de células T são usados para análise SDS-PAGE sob condições não redutoras para permitir a avaliação da formação de dímeros covalentes.
[00441] A expansão in vitro de células T CAR+ após a estimulação de antígeno pode ser medida por citometria de fluxo. Por exemplo, uma mistura de células T CD4+ e CD8+ é estimulada com aAPCs αCD3/αCD28 seguidos por transdução com vetores lentivirais que expressam GFP sob o controle dos promotores a serem analisados. Promotores exemplificativos incluem os promotores do gene IE do CMV, EF-1α, ubiquitina C ou fosfoglicerocinase (PGK). A fluorescência de GFP é avaliada no dia 6 de cultura nos subconjuntos de células T CD4+ e/ou CD8+ por citometria de fluxo. Ver, por exemplo, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1.453 a 1.464 (2009). Alternativamente, uma mistura de células T CD4+ e CD8+ é estimulada com microesferas magnéticas revestidas com αCD3/αCD28 no dia 0 e transduzida com CAR no dia 1 com o uso de um vetor lentiviral bicistrônico que expressa CAR juntamente com eGFP com o uso de sequência de omissão ribossômica 2A. As culturas são reestimuladas com células que expressam BCMA, como linhagens celulares de mieloma múltiplo ou K562-BCMA, após a lavagem. IL-2 exógena é adicionada às culturas em dias alternados a 100 IU/ml. As células T GFP+ são enumeradas por citometria de fluxo com o uso de contagem baseada em microesfera. Ver, por exemplo, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1.453 a 1.464 (2009).
[00442] A expansão sustentada de células T CAR+ na ausência de reestimulação também pode ser medida. Ver, por exemplo, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1.453 a 1.464 (2009). Em resumo, o volume médio de células T (fl) é medido no dia 8 da cultura usando um contador de partículas Coulter Multisizer III, um Nexcelom Cellometer Vision ou Millipore Scepter, após estimulação com esférulas magnéticas revestidas com αCD3/αCD28 no dia 0 e transdução com o CAR indicado no dia 1.
[00443] Modelos de animal podem ser também usados para medir uma atividade de CART. Por exemplo, um modelo de xenoenxerto com o uso de células T CAR+ específicas para BCMA humanas para tratar um mieloma múltiplo humano primário em camundongos com imunodeficiência pode ser usado. Ver, por exemplo, Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1.453 a 1.464 (2009). Muito brevemente, após estabelecimento de MM, os camundongos são randomizados quanto aos grupos de tratamento. Números diferentes de células CART de BCMA podem ser injetados em camundongos com imunodeficiência portadores de MM. Os animais são avaliados quanto à progressão da doença e carga tumoral em intervalos semanais. As curvas de sobrevida para os grupos são comparadas com o uso do teste de log-rank. Adicionalmente, contagens absolutas de células T CD4+ e CD8+ de sangue periférico 4 semanas após a injeção de células T nos camundongos com imunodeficiência podem ser também analisadas. Os camundongos recebem por injeção células de mieloma múltiplo e 3 semanas depois recebem por injeção células T manipuladas para expressarem CAR de BCMA, por exemplo, por um vetor lentiviral bicistrônico que codifica o CAR ligado a eGFP. As células T são normalizadas para 45-50% de células T GFP+ de entrada por mistura com células com transdução simulada antes da injeção e confirmadas por citometria de fluxo. Os animais são avaliados quanto a leucemia em intervalos de 1 semana. As curvas de sobrevida para os grupos de células T CAR+ são comparadas com o uso do teste de log-rank.
[00444] A avaliação de proliferação celular e produção de citocinas foi anteriormente descrita, por exemplo, em Milone et al., Molecular Therapy 17(8): 1.453 a 1.464 (2009). Resumidamente, a avaliação da proliferação mediada por CAR é realizada em placas de microtitulação, misturando células T lavadas com células K562 que expressam BCMA ou outras células de mieloma que expressam BCMA são irradiadas com radiação gama antes do uso. Anticorpos monoclonais anti-CD3 (clone OKT3) e anti-CD28 (clone 9.3) são adicionados a culturas com células KT32-BBL para servir como um controle positivo para estimular a proliferação de células T visto que esses sinais suportam expansão de células T CD8 + a longo prazo ex vivo. As células T são enumeradas em culturas com o uso de microesferas fluorescentes CountBright™ (Invitrogen, Carlsbad, CA) e citometria de fluxo, conforme descrito pelo fabricante. As células T CAR + são identificadas por expressão de GFP com o uso de células T que são manipuladas com vetores lentivirais que expressam CAR ligados a eGFP-
2A. Para células T CAR+ que não expressam GFP, as células T CAR+ são detectadas com proteína de BCMA recombinante biotinilada e um conjugado de avidina-PE secundário. A expressão de CD4+ e CD8+ em células T é também simultaneamente detectada com anticorpos monoclonais específicos (BD Biosciences). As medições de citocinas são realizadas em sobrenadantes recolhidos 24 horas após nova estimulação usando o kit de arranjo de esférulas citométricas de citocinas TH1/TH2 humanas (BD Biosciences, San Diego, CA) de acordo com as instruções do fabricante. A fluorescência é avaliada usando um citômetro de fluxo FACScalibur e os dados são analisados de acordo com as instruções do fabricante.
[00445] A citotoxicidade pode ser avaliada por um ensaio de liberação de 51Cr padrão. Ver, por exemplo, Milone et al., Molecular Therapy 17(8):
1.453 a 1.464 (2009). Resumidamente, as células-alvo (por exemplo, linhagens K562 que expressam BCMA e células de mieloma múltiplo primárias) são carregadas com 51Cr (como NaCrO4, New England Nuclear, Boston, MA) a 37°C por duas horas com agitação frequente, lavadas duas vezes em RPMI completo e colocadas em placas de microtitulação. As células T efetoras são misturadas com células-alvo nos poços em RPMI completo em razões variáveis de célula efetora:célula- alvo (E:T). Poços adicionais contendo meio apenas (liberação espontânea, SR) ou uma solução a 1% de detergente triton-X 100 (liberação total, TR) são também preparados. Após 4 horas de incubação a 37°C, o sobrenadante de cada poço é coletado. O 51Cr liberado é, então, medido com o uso de um contador de partículas gama (Packard Instrument Co., Waltham, MA). Cada condição é realizada pelo menos em triplicado, e a percentagem de lise é calculada com o uso da fórmula: % de Lise = (ER− SR)/(TR – SR), em que ER representa o 51Cr médio liberado para cada condição experimental. Alternativamente, a citotoxicidade também pode ser avaliada usando um Ensaio de Luciferase Bright-Glo™.
[00446] Tecnologias de imagiologia podem ser usadas para avaliar o tráfego específico e a proliferação de CARs em modelos de animais portadores de tumor. Tais ensaios foram descritos, por exemplo, em Barrett et al., Human Gene Therapy 22:1575-1586 (2011). Em resumo, os camundongos NOD/SCID/γc–/– (NSG) ou outros com imunodeficiência receberam por injeção IV células de mieloma múltiplo seguidas de células CART de BCMA depois 7 dias 4 horas após eletroporação com os construtos CAR. As células T são transfectadas estavelmente com um construto lentiviral para expressar luciferase de vagalume, e os camundongos são visualizados quanto à bioluminescência. Alternativamente, a eficácia e a especificidade terapêutica de uma única injeção de células T CAR+ em modelo de xenoenxerto de mieloma múltiplo podem ser medidas do modo seguinte: Os camundongos NSG recebem por injeção células de mieloma múltiplo transduzidas para expressar estavelmente luciferase de vagalume, seguido por uma injeção única na veia da cauda de células T eletroporadas com o construto CAR de BCMA dias depois. Os animais são visualizados em vários momentos após a injeção. Por exemplo, podem ser gerados mapas térmicos de densidade de fótons de tumores positivos para luciferase de vagalume em camundongos representativos no dia 5 (2 dias antes do tratamento) e no dia 8 (24 horas após PBLs de CAR+).
[00447] Alternativamente, ou em combinação com os métodos divulgados no presente documento, métodos e composições para um ou mais dentre: detecção e/ou quantificação de células que expressam CAR (por exemplo, in vitro ou in vivo (por exemplo, monitoramento clínico));
expansão e/ou ativação de célula imune; e/ou seleção específica para CAR, que envolvem o uso de um ligante de CAR, são divulgados. Em uma modalidade exemplificativa, o ligante de CAR é um anticorpo que se liga à molécula de CAR, por exemplo, se liga ao domínio de ligação a antígeno extracelular de CAR (por exemplo, um anticorpo que se liga ao domínio de ligação a antígeno, por exemplo, um anticorpo anti-idiotípico; ou um anticorpo que se liga a uma região constante do domínio de ligação extracelular). Em outras modalidades, o ligante de CAR é uma molécula de antígeno de CAR (por exemplo, uma molécula de antígeno de CAR conforme descrito no presente documento).
[00448] Em um aspecto, um método para detectar e/ou quantificar células que expressam CAR é divulgado. Por exemplo, o ligante de CAR pode ser usado para detectar e/ou quantificar células que expressam CAR in vitro ou in vivo (por exemplo, monitoramento clínico de células que expressam CAR em um paciente ou dosagem de um paciente). O método inclui: fornecer o ligante de CAR (opcionalmente, um ligante de CAR identificado, por exemplo, um ligante de CAR que inclui uma etiqueta, uma microesfera, uma identificação radioativa ou fluorescente); adquirir a célula que expressa CAR (por exemplo, adquirir uma amostra contendo células que expressam CAR, como uma amostra de fabricação ou uma amostra clínica); colocar a célula que expressa CAR em contato com o ligante de CAR sob condições em que a ligação ocorre, detectando, assim, o nível (por exemplo, a quantidade) das células que expressam CAR presentes. A ligação da célula que expressa CAR ao ligante de CAR pode ser detectada com o uso de técnicas-padrão, tais como FACS, ELISA e similares.
[00449] Em outro aspecto, é divulgado um método para expandir e/ou ativar células (por exemplo, células imunoefetoras). O método inclui: fornecer uma célula que expressa CAR (por exemplo, uma primeira célula que expressa CAR ou uma célula de CAR de expressão temporária); colocar a dita célula que expressa CAR em contato com um ligante de CAR, por exemplo, um ligante de CAR conforme descrito no presente documento, sob condições em que a proliferação e/ou expansão de células imunes ocorrem, produzindo, assim, a população de células ativadas e/ou expandidas.
[00450] Em certas modalidades, o ligante de CAR está presente em um substrato (por exemplo, é imobilizado ou ligado a um substrato, por exemplo, um substrato de ocorrência não natural). Em algumas modalidades, o substrato é um substrato não celular. O substrato não celular pode ser um suporte sólido escolhido dentre, por exemplo, uma placa (por exemplo, uma placa de microtitulação), uma membrana (por exemplo, uma membrana de nitrocelulose), uma matriz, um chip ou uma microesfera. Nas modalidades, o ligante de CAR está presente no substrato (por exemplo, na superfície de substrato). O ligante de CAR pode ser imobilizado, ligado ou associado covalente ou não covalentemente (por exemplo, reticulado) ao substrato. Em uma modalidade, o ligante de CAR é ligado (por exemplo, covalentemente ligado) a uma microesfera. Nas modalidades anteriormente mencionadas, a população de células imunes pode ser expandida in vitro ou ex vivo. O método pode incluir adicionalmente cultivar a população de células imunes na presença do ligante da molécula de CAR, por exemplo, com o uso de qualquer um dos métodos descritos no presente documento.
[00451] Em outras modalidades, o método para expandir e/ou ativar as células compreende, ainda, a adição de uma segunda molécula estimuladora, por exemplo, CD28. Por exemplo, o ligante de CAR e a segunda molécula estimuladora podem ser imobilizados a um substrato, por exemplo, uma ou mais microesferas, fornecendo, assim, expansão e/ou ativação de células aumentadas.
[00452] Em ainda outro aspecto, um método para selecionar ou enriquecer uma célula que expressa CAR é fornecido. O método inclui colocar a célula que expressa CAR em contato com um ligante de CAR conforme descrito no presente documento; e selecionar a célula com base na ligação do ligante de CAR.
[00453] Em ainda outras modalidades, um método para depletar, reduzir e/ou exterminar uma célula que expressa CAR é fornecido. O método inclui colocar a célula que expressa CAR em contato com um ligante de CAR conforme descrito no presente documento; e alvejar a célula com base na ligação do ligante de CAR, reduzindo, assim, o número e/ou exterminando a célula que expressa CAR. Em uma modalidade, o ligante de CAR é acoplado a um agente tóxico (por exemplo, uma toxina ou um fármaco de ablação de célula). Em outra modalidade, o anticorpo anti-idiotípico pode causar atividade de célula efetora, por exemplo, atividades de ADCC ou ADC.
[00454] Os anticorpos anti-CAR exemplificativos que podem ser usados nos métodos divulgados no presente documento são descritos, por exemplo, no documento No WO 2014/190273 e por Jena et al., "Chimeric Antigen Receptor (CAR)-Specific Monoclonal Antibody to Detect CD19-Specific T cells in Clinical Trials", PLOS 8 de março de 2013 8:3 e57838, cujo conteúdo está incorporado a título de referência. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-idiotípico reconhece uma molécula de anticorpo anti-CD19, por exemplo, um scFv anti-CD19. Por exemplo, a molécula de anticorpo anti-idiotípico pode competir pela ligação com o clone de mAb de CAR específico para CD19 Nº 136.20.1 descrito em Jena et al., PLOS março de 2013 8:3 e57838; pode ter as mesmas CDRs (por exemplo, um ou mais dentre, por exemplo, todas dentre, CDR1 de VH, CDR2 de VH, CDR3 de CH, CDR1 de VL, CDR2 de VL e CDR3 de VL, usando a definição de Kabat, a definição de Chothia, ou uma combinação das definições de Kabat e Chothia) como o clone de mAb de CAR específico para CD19 Nº 136.20.1; pode ter uma ou mais regiões variáveis (por exemplo, 2) como o clone de mAb e CAR específico para CD19 Nº 136.20.1, ou pode compreender o clone de mAb de CAR específico para CD19 Nº 136.20.1. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-idiotípico foi produzido de acordo com um método descrito em Jena et al.
Em uma outra modalidade, a molécula de anticorpo anti- idiotípico é uma molécula de anticorpo anti-idiotípico descrita no documento WO 2014/190273. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo anti-idiotípico tem as mesmas CDRs (por exemplo, uma ou mais dentre, por exemplo, todas dentre, CDR1 de VH, CDR2 de VH, CDR3 de CH, CDR1 de VL, CDR2 de VL e CDR3 de VL) como uma molécula de anticorpo do documento WO 2014/190273 como 136.20.1; pode ter uma ou mais regiões variáveis (por exemplo, 2) de uma molécula de anticorpo do documento WO 2014/190273, ou pode compreender uma molécula de anticorpo do documento WO 2014/190273 como 136.20.1. Em outras modalidades, o anticorpo anti- CAR se liga a uma região constante do domínio de ligação extracelular da molécula de CAR, por exemplo, conforme descrito no documento WO 2014/190273. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CAR se liga a uma região constante do domínio de ligação extracelular da molécula de CAR, por exemplo, uma região constante de cadeia pesada (por exemplo, uma região de dobradiça de CH2-CH3) ou região constante de cadeia leve. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo anti- CAR compete pela ligação com o anticorpo monoclonal 2D3 descrito no documento WO 2014/190273, tem as mesmas CDRs (por exemplo, uma ou mais dentre, por exemplo, todas dentre, CDR1 de VH, CDR2 de VH, CDR3 de CH, CDR1 de VL, CDR2 de VL e CDR3 de VL) que 2D3, ou tem uma ou mais (por exemplo, 2) regiões variáveis de 2D3, ou compreende 2D3 conforme descrito no documento WO 2014/190273.
[00455] Em alguns aspectos e modalidades, as composições e métodos no presente documento são otimizadas para um subconjunto específico de células T, por exemplo, conforme descrito no documento de número de série US 62/031.699 depositado em 31 de julho de 2014, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, os subconjuntos otimizados de células T exibem uma persistência aumentada em comparação com uma célula T de controle, por exemplo, uma célula T de um tipo diferente (por exemplo, CD8+ ou CD4+) que expressa o mesmo construto.
[00456] Em algumas modalidades, uma célula T CD4+ compreende um CAR descrito no presente documento, tal CAR compreende um domínio de sinalização intracelular adequado para (por exemplo, otimizado para, por exemplo, levando à persistência aumentada em) uma célula T CD4+, por exemplo, um domínio ICOS. Em algumas modalidades, uma célula T CD8+ compreende um CAR descrito no presente documento, tal CAR compreende um domínio de sinalização intracelular adequado para (por exemplo, otimizado para, por exemplo, levando à persistência aumentada de) uma célula T CD8+, por exemplo, um domínio de 4-1BB, um domínio de CD28, ou outro domínio coestimulador diferente de domínio ICOS. Em algumas modalidades, o CAR descrito no presente documento compreende um domínio de ligação a antígeno descrito no presente documento, por exemplo, um CAR que compreende um domínio de ligação a antígenos que alveja BCMA.
[00457] Em um aspecto, é descrito no presente documento um método para tratar um indivíduo, por exemplo, um indivíduo que tem câncer. O método inclui administrar ao dito indivíduo uma quantidade eficaz de:
[00458] 1) uma célula T CD4+ que compreende um CAR (o CARCD4+) que compreende:
[00459] Um domínio de ligação ao antígeno, por exemplo, um domínio de ligação ao antígeno descrito no presente documento, por exemplo, um domínio de ligação ao antígeno que alveja BCMA; um domínio transmembranar; e um domínio de sinalização intracelular, por exemplo, um primeiro domínio coestimulador, por exemplo, um domínio ICOS; e
[00460] 2) uma célula T CD8+ que compreende um CAR (o CARCD8+) que compreende:
[00461] Um domínio de ligação ao antígeno, por exemplo, um domínio de ligação ao antígeno descrito no presente documento, por exemplo, um domínio de ligação ao antígeno que alveja BCMA; um domínio transmembranar; e um domínio de sinalização intracelular, por exemplo, um segundo domínio coestimulador, por exemplo, um domínio 4-1BB, um domínio CD28 ou outro domínio coestimulador diferente do domínio ICOS; em que o CARCD4+ e o CARCD8+ diferem um do outro.
[00462] Opcionalmente, o método inclui adicionalmente administrar:
[00463] 3) uma segunda célula T CD8+ que compreende um CAR (o segundo CARCD8+) que compreende:
[00464] Um domínio de ligação ao antígeno, por exemplo, um domínio de ligação ao antígeno descrito no presente documento, por exemplo, um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a BCMA; um domínio transmembranar; e um domínio de sinalização intracelular, em que o segundo CARCD8+ compreende um domínio de sinalização intracelular, por exemplo, um domínio de sinalização coestimulador, não presente no CARCD8+ e, opcionalmente, não compreende um domínio de sinalização de ICOS.
[00465] Outros ensaios, inclusive aqueles que são conhecidos na técnica também podem ser usados para avaliar os construtos de CAR de BCMA da invenção. Aplicação Terapêutica Doenças e/ou Distúrbios Associados a BCMA
[00466] Em um aspecto, a invenção apresenta métodos para tratar uma doença associada à expressão de BCMA. Em um aspecto, a invenção apresenta métodos para tratar uma doença em que parte do tumor é negativa para BCMA e parte do tumor é positiva para BCMA. Por exemplo, o CAR da invenção é útil para tratar indivíduos que são submetidos a tratamento de uma doença associada à expressão elevada de BCMA, em que o indivíduo foi submetido a tratamento com níveis elevados de BCMA exibe uma doença associada a níveis elevados de BCMA. Nas modalidades, o CAR da invenção é útil para tratar indivíduos que foram submetidos a tratamento de uma doença associada à expressão de BCMA, em que o indivíduo foi submetido a tratamento relacionado à expressão de BCMA exibe uma doença associada à expressão de BCMA.
[00467] Em uma modalidade, a invenção apresenta métodos para tratar uma doença em que BCMA é expresso tanto em células normais como em células cancerígenas, porém é expresso em níveis mais baixos em células normais. Em uma modalidade, o método também compreende selecionar um CAR da invenção que se liga com uma afinidade que permite que o CAR de BCMA se ligue e extermine as células cancerígenas que expressam BCMA, porém menos do que 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ou menos das células normais que expressam BCMA são exterminadas, por exemplo, como determinado por um ensaio descrito no presente documento. Por exemplo, pode ser usado um ensaio de extermínio como citometria de fluxo baseado em CTL de Cr51. Em uma modalidade, o CAR de BCMA tem um domínio de ligação a antígenos que tem uma afinidade de ligação KD de 10-4 M até 10-8 M, por exemplo, 10-5 M até 10-7 M, por exemplo, 10-6 M ou 10-7 M, para o antígeno-alvo. Em uma modalidade, o domínio de ligação a antígenos de BCMA tem uma afinidade de ligação que é pelo menos cinco vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou 1 000 vezes menor do que a de um anticorpo de referência, por exemplo, um anticorpo descrito no presente documento.
[00468] Em um aspecto, a invenção diz respeito a um vetor compreendendo um CAR de BCMA ligada de maneira funcional a um promotor para expressão em células imunoefetoras de mamífero, por exemplo, células T ou células NK. Em um aspecto, a invenção apresenta uma célula imunoefetora recombinante, por exemplo, célula T ou célula NK, que expressa o CAR de BCMA para uso no tratamento de tumores que expressam BCMA, em que a célula imunoefetora recombinante (por exemplo, célula T ou célula NK) que expressa o CAR de BCMA é denominada uma célula que expressa CAR de BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou NK que expressa CAR de BCMA). Em um aspecto, a célula que expressa CAR de BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou NK que expressa CAR de BCMA) da invenção pode colocar uma célula tumoral em contato com pelo menos um CAR de BCMA da invenção expresso em sua superfície, de modo que a célula que expressa CAR de BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou NK que expressa CAR de BCMA) alveje a célula tumoral, e o crescimento do tumor é inibido.
[00469] Em um aspecto, a invenção pertence a um método para inibir o crescimento de uma célula tumoral que expressa BCMA, que compreende colocar a célula tumoral em contato com uma célula que expressa CAR de BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou NK que expressa CAR de BCMA) da presente invenção, de modo que a célula que expressa CAR de BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou NK que expressa CAR de BCMA) seja ativada em resposta ao antígeno e alveje a célula de câncer, em que o crescimento do tumor é inibido.
[00470] Em um aspecto, a invenção diz respeito a um método de tratamento de câncer em um indivíduo. O método compreende administrar ao indivíduo uma célula que expressa CAR de BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou NK que expressa CAR de BCMA) da presente invenção, de modo que o câncer seja tratado no indivíduo. Um exemplo de um câncer que é tratável pela célula que expressa CAR de BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou NK que expressa CAR de BCMA) da invenção é um câncer associado à expressão de BCMA.
[00471] A invenção inclui um tipo de terapia celular no qual células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK) são geneticamente modificadas para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR) e a célula que expressa CAR de BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou NK que expressa CAR de BCMA) é infundida em um receptor necessitado. A célula infundida é capaz de matar células tumorais no recebedor. Ao contrário de terapias com anticorpos, células modificadas com CAR, por exemplo, célula T ou células NK são capazes de se replicar in vivo, resultando em persistência de longa duração que pode levar a controle tumoral sustentado. Em vários aspectos, as células (por exemplo, célula T ou células NK) administradas ao paciente, ou sua progênie, persistem no paciente durante pelo menos quatro meses, cinco meses, seis meses, sete meses, oito meses, nove meses, dez meses, onze meses, doze meses, treze meses, quatorze mês, quinze meses, dezesseis meses, dezessete meses, dezoito meses, dezenove meses, vinte meses, vinte e um meses, vinte e dois meses, vinte e três meses, dois anos, três anos, quatro anos, ou cinco anos após a administração da célula (por exemplo, célula T ou célula NK) ao paciente.
[00472] A invenção também inclui um tipo de terapia celular no qual células efetoras imunes (por exemplo, células T ou células NK) são modificadas, por exemplo, por RNA transcrito in vitro, para expressarem de modo transiente um receptor de antígenos quimérico (CAR) e a célula imunoefetora (por exemplo, célula T ou célula NK) é infundida em um receptor necessitado. A célula infundida é capaz de matar células tumorais no recebedor. Assim, em vários aspectos, as células efetoras imunes (por exemplo, células T ou células NK) administradas ao paciente, estão presentes durante menos de um mês, por exemplo, três semanas, duas semanas, uma semana, após a administração da célula imunoefetora, (por exemplo, célula T ou célula NK) ao paciente.
[00473] Sem se ater a qualquer teoria específica, a resposta de imunidade antitumoral induzida pelas células imunoefetoras modificadas com CAR (por exemplo, células T ou células NK) pode ser uma resposta imunológica ativa ou passiva, ou alternativamente pode se dever a uma resposta imunológica mune direta versus indireta. Em um aspecto, as células imunoefetoras transduzidas com CAR, por exemplo, células T ou células NK, exibem secreção de citocinas pró-inflamatórias específicas e atividade citolítica potente em resposta a células cancerígenas humanas que expressam o BCMA, resistem a inibição de BCMA solúvel, medeiam a morte de espectadores e medeiam a regressão de um tumor humano estabelecido. Por exemplo, células tumorais sem antígenos em um campo heterogêneo de tumor que expressa BCMA podem ser suscetíveis à destruição indireta por células imunoefetoras redirecionadas para BCMA (por exemplo, células T ou células NK) que previamente reagiram contra células cancerígenas positivas para antígenos adjacentes.
[00474] Em um aspecto, as células efetoras imunes modificadas com CAR totalmente humanas (por exemplo, células T ou células NK) da invenção podem ser um tipo de vacina para imunização ex vivo e/ou terapia in vivo em um mamífero. Em um aspecto, o mamífero é um humano.
[00475] No que se refere a imunização ex vivo, pelo menos um dos seguintes ocorre in vitro antes da administração da célula a um mamífero: i) expansão das células, ii) introdução nas células de um ácido nucleico codificando um CAR ou iii) crioconservação das células.
[00476] Procedimentos ex vivo são bem conhecidos na técnica e são discutidos mais completamente abaixo. Em resumo, células são isoladas de um mamífero (por exemplo, um humano) e geneticamente modificadas (isto é, transduzidas ou transfectadas in vitro) com um vetor expressando um CAR divulgado aqui. A célula modificada com CAR pode ser administrada a um recebedor mamífero para proporcionar um benefício terapêutico. O recebedor mamífero pode ser um humano e a célula modificada com CAR pode ser autóloga relativamente ao recebedor.
Alternativamente, as células podem ser alogeneicas, singeneicas ou xenogeneicas relativamente ao recebedor.
[00477] O procedimento para expansão ex vivo de células-tronco hematopoiéticas e progenitoras é descrito na Patente U.S. nº 5.199.942, incorporada aqui por referência, e pode ser aplicado às células da presente invenção. Outros métodos adequados são conhecidos na técnica, consequentemente a presente invenção não está limitada a qualquer método de expansão ex vivo particular das células. Em resumo, cultura e expansão ex vivo de células T compreendem: (1) recolher células-tronco hematopoiéticas e progenitoras CD34+ de um mamífero a partir de recolha de sangue periférico ou explantes de medula óssea; e (2) expandir tais células ex vivo. Para além dos fatores de crescimento celular descritos na Pat. Nº U.S. 5.199.942, outros fatores, tais como flt3- L, IL-1, IL-3 e ligante de c-kit, podem ser usados para a cultura e expansão das células.
[00478] Para além do uso de uma vacina à base de células em termos de imunização ex vivo, a presente invenção também proporciona composições e métodos para imunização in vivo para induzir uma resposta imune dirigida contra um antígeno em um paciente.
[00479] Geralmente, as células ativadas e expandidas como descrito aqui podem ser utilizadas no tratamento e prevenção de doenças que surgem em indivíduos que estão imunocomprometidos. Em particular, as células imunoefetoras modificadas com CAR (por exemplo, células T ou células NK) da invenção são usadas no tratamento de doenças, distúrbios e condições associadas à expressão de BCMA. Em certos aspectos, as células da invenção são usadas no tratamento de pacientes em risco de desenvolver doenças, distúrbios e condições associadas à expressão de BCMA. Assim, a presente invenção fornece métodos para o tratamento ou prevenção de doenças, distúrbios e condições associadas à expressão de BCMA que compreendem administrar a um indivíduo que precisa do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz das células imunoefetoras modificadas com CAR (por exemplo, células T ou células NK) da invenção.
[00480] Em um aspecto, as células que expressam CAR (por exemplo, células CART ou células NK que expressam CAR) das invenções podem ser usadas para tratar uma doença proliferativa, tal como um câncer ou malignidade, ou que é uma afecção pré-cancerosa tal como uma mielodisplasia, uma síndrome mielodisplástica ou uma pré-leucemia. Em um aspecto, o câncer é um câncer hematólico. As condições de câncer hematológico são os tipos de câncer como leucemia e condições linfoproliferativas malignas que afetam o sangue, a medula óssea e o sistema linfático. Em um aspecto, o câncer hematológico é uma leucemia ou um hematológico. Um exemplo de uma doença ou distúrbio associado a BCMA é mieloma múltiplo (também conhecido como MM) (Consultar, Claudio et al., Blood. 2002, 100(6):2175-86; e Novak et al., Blood. 2004, 103(2):689-94). Mieloma múltiplo também conhecido como mieloma de células plasmáticas ou doença de Kahler, é um câncer caracterizado por um acúmulo de células B plasmáticas anormais ou malignas na medula óssea. Frequentemente, as células cancerígenas invadem ossos adjacentes, destroem as estruturas esqueléticas e resultam em dor e fraturas ósseas. A maioria dos casos de mieloma também apresenta a produção de uma paraproteína (também conhecida como proteínas M ou proteínas do mieloma), que é uma imunoglobulina anormal produzida em excesso pela proliferação clonal das células plasmáticas malignas. Níveis séricos de paraproteína no sangue maiores que 30g/l são diagnósticos de mieloma múltiplo, de acordo com os critérios diagnósticos do International
Myeloma Working Group (IMWG) (Consultar, Kyle et al. (2009), Leukemia. 23:3-9). Outros sintomas ou sinais de mieloma múltiplo incluem função renal reduzida ou insuficiência renal, lesões ósseas, anemia, hipercalcemia, e sintomas neurológicos.
[00481] Os critérios para distinguir mieloma múltiplo de outros distúrbios proliferativos de células plasmáticas foram estabelecidos pelo International Myeloma Working Group (Consultar, Kyle et al. (2009), Leukemia. 23:3-9). Todos os três dos seguintes critérios devem ser cumpridos: - Células plasmáticas clonais da medula óssea ≥10% - Presença de proteína monoclonal sérica e/ou urinária (exceto em pacientes com mieloma múltiplo não secretor verdadeiro)
[00482] - Evidência de dano ao órgão-alvo atribuível ao distúrbio proliferativo das células plasmáticas subjacente, especificamente: o Hipercalcemia: cálcio sérico ≥11,5 mg/100 ml o Insuficiência renal: creatinina sérica > 1,73 mmol/l o Anemia: normocrômico, normocítico com um valor de hemoglobina > 2g/100 ml abaixo do limite inferior de normalidade ou um valor de hemoglobina <10g/100ml o Lesões ósseas: lesões líticas, osteopenia severa ou fraturas patológicas.
[00483] Outros distúrbios proliferativos de células plasmáticas que podem ser tratados pelas composições e métodos descritos no presente documento incluem, porém sem limitação, mieloma assintomático (mieloma múltiplo latente ou mieloma indolente), gamapatia monoclonal de importância indeterminada (MGUS), macroglobulinemia de Waldestrom, plasmacitomas (por exemplo, discrasia de células plasmáticas, mieloma solitário, plasmacitoma solitário, plasmacitoma extramedular, e plasmacitoma múltiplo), amiloidose de cadeia leve amiloide sistêmica, e síndrome de POEMS (também conhecido como síndrome de Crow-Fukase, doença de Takatsuki, e síndrome de PEP).
[00484] Dois sistemas de estadiamento são usados no estadiamento do mieloma múltiplo: o Sistema de Estadiamento Internacional (ISS) (Consultar, Greipp et al. (2005), J. Clin. Oncol. 23 (15):3412-3420, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade) e o sistema de Estadiamento de Durie-Salmon (DSS) (Consultar, Durie et al. (1975), Cancer 36 (3): 842-854, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). Os dois sistemas de estadiamento estão resumidos na tabela abaixo: Tabela 6. Sistemas de estadiamento para o estadiamento de mieloma múltiplo Sistema de Estadiamento Salmão de Estadiamento de Durie- Internacional Salmon Estágio Sobrevivência Sobrevivência Critérios Critérios mediana média* β 2M <3,5 62 meses Todos os seguintes: IA: 62 meses mg/l e Nível de hemoglobina IB: 22 meses albumina >10g/dl sérica ≥3,5 Cálcio sérico, normal ou g/dl <12 mg/dl I Raio x ósseo, normal ou apenas 1 plasmocitoma Baixa produção de proteína monoclonal (IgG <5g/dl, IgA<3g/dl, proteína de Bence Jones <4g/dl por 24 horas
Sistema de Estadiamento Salmão de Estadiamento de Durie- Internacional Salmon Estágio Sobrevivência Sobrevivência Critérios Critérios mediana média* Nem o 44 meses Nem o estágio I nem o IIA: 58 meses II estágio I nem estágio III IIB: 354 meses o estágio III β2 M ≥5,5 29 meses Um ou mais dos IIIA: 45 meses mg/l seguintes: IIIB: 24 meses Nível de hemoglobina >8,5g/dl Cálcio sérico, normal ou >12 mg/dl
III Lesões osteolíticas avançadas Alta produção de proteína monoclonal (IgG >7g/dl, IgA>5g/dl, proteína de Bence Jones >12g/dl por 24 horas *O sistema de Estadiamento de Durie-Salmon também inclui uma subclassificação que designa a situação da função renal. A designação de "A" ou "B" é adicionada após o número do estágio, em que "A" indica função renal relativamente normal (valor de creatinina sérica <2,0 mg/dl), e B indica função renal anormal (valor de creatinina sérica >2,0 mg/dl).
[00485] Um terceiro sistema de estadiamento para mieloma múltiplo é chamado de Sistema de Estadiamento Internacional Revisado (R-ISS) (consultar, Palumbo A, Avet-Loiseau H, Oliva S, et al. Journal of clinical oncology : official journal of the American Society of Clinical Oncology 2015;33:2863-9, incorporado no presente documento a título de referência, em sua totalidade). O R-ISS de estágio I inclui ISS de estágio I (nível sérico de β2-microglobulina < 3,5 mg/L e nível sérico de albumina ≥ 3,5 g/dl), sem CA de alto risco [del(17p) e/ou t(4;14) e/ou t(14;16)], e nível de LDH normal (menor que o limite superior de faixa normal). O R-ISS de estágio III inclui ISS de estágio III (nível sérico de β2-microglobulina > 5,5 mg/L) e CA de alto risco ou alto nível de LDH. O R-ISS de estágio II inclui todas as outras combinações possíveis.
[00486] A resposta de pacientes pode ser determinada com base nos critérios de IMWG 2016, conforme divulgado em Kumar S, Paiva B, Anderson KC, et al. International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma. The Lancet Oncology; 17(8):e328-e346 (2016), incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. A Tabela 7 fornece os critérios de IMWG 2016 para avaliação de resposta. Tabela 7. Critérios de IMWG para avaliação de resposta incluindo critérios para doença resposta mínima (MRD) Critérios de resposta* Critérios de IMWG para MRD (exige uma resposta completa conforme definido abaixo) Negativo para MRD Negatividade de MRD na medula (NGF ou NGS, ou ambos) e sustentada por imageamento conforme definido abaixo, intervalo mínimo confirmado de 1 ano. Avaliações subsequentes podem ser usadas para especificar adicionalmente a duração de negatividade (por exemplo, negativo para MRD em 5 anos)† Negativo para MRD Ausência de células plasmáticas clonais fenotipicamente de fluxo aberrantes por NGF‡ em aspirados de medula óssea usando o procedimento de operação padrão EuroFlow para detecção de MRD em mieloma múltiplo (ou método equivalente validado) com uma sensibilidade mínima de 1 em 10⁵ células
Critérios de resposta*
Critérios de IMWG para MRD (exige uma resposta completa conforme definido abaixo) nucleadas ou superior
Sequenciamento Ausência de células plasmáticas clonais pelo NGS no aspirado negativo para MRD de medula óssea em que a presença de um clone é definida como menos de duas leituras de sequenciamento idênticas obtidas após o sequenciamento de DNA de aspirados de medula óssea usando a plataforma LymphoSIGHT (ou método equivalente validado) com sensibilidade mínima de 1 em 10⁵ células nucleadas§ ou superior
Imageamento mais Negatividade para MRD definida por NGF ou NGS mais negativo para MRD desaparecimento de todas as áreas de absorção aumentada de sinalizador encontradas na linha de base ou um PET/CT anterior ou redução para menos que SUV de acúmulo de sangue mediastinal ou redução para menos que aquele do tecido normal circundante¶
Critérios de resposta de IMWG padrão||
Resposta completa Resposta completa conforme definido abaixo mais razão de restrita FLC normal** e ausência de células clonais na biópsia de medula óssea por imunoistoquímica (razão κ/λ ≤4:1 ou ≥1:2 para pacientes κ e λ, respectivamente, após a contagem ≥100 células plasmáticas)††
Resposta completa Imunofixação negativa no soro e urina e desaparecimento de quaisquer plasmocitomas de tecido mole e <5% de células plasmáticas em aspirados de medula óssea
Resposta parcial Proteína M no soro e urina detectável por imunofixação, porém muito satisfatória não por eletroforese ou redução ≥90% da proteína M no soro mais níveis de proteína M na urina <100 mg por 24 h
Critérios de resposta*
Critérios de IMWG para MRD (exige uma resposta completa conforme definido abaixo)
Resposta parcial ≥50% de redução de proteína M no soro mais redução de proteína M na urina em 24 h por ≥90% ou a <200 mg por 24 h;
Se a proteína M no soro e na urina for imensurável, uma redução ≥50% na diferença entre os níveis de FLC envolvidos e não envolvidos será necessária, em vez dos critérios de proteína M;
Se a proteína M no soro e na urina for imensurável, e o teste com luz isento de soro também for imensurável, uma redução ≥50% nas células plasmáticas será necessária em vez da proteína M, desde que a porcentagem de células plasmáticas da medula óssea de linha de base seja ≥30%. Além desses critérios, se presente na linha de base, uma redução ≥50% no tamanho (SPD) §§ de plasmocitomas de tecidos moles também é necessária
Resposta mínima ≥25%, porém ≤49% de redução de proteína M no soro e redução de proteína M na urina em 24 h por 50 a 89%. Além dos critérios listados acima, se presente na linha de base, uma redução ≥50% no tamanho (SPD) §§ de plasmocitomas de tecidos moles também é necessária
Doença estável Não recomendado para uso como um indicador de resposta; a estabilidade da doença é melhor descrita, fornecendo as estimativas de tempo até a progressão.
Não cumpre os critérios de resposta completa, resposta parcial muito satisfatória, resposta parcial, resposta mínima ou doença progressiva
Doença progressiva Qualquer um ou mais dos seguintes critérios: ¶¶,|||| Aumento de 25% a partir do valor de resposta mais baixo
Critérios de resposta*
Critérios de IMWG para MRD (exige uma resposta completa conforme definido abaixo) confirmado em um ou mais dos seguintes critérios:
Proteína M no soro (o aumento absoluto deve ser ≥0,5 g/dl);
Aumento de proteína M no soro ≥1 g/dl, se o componente M mais baixo fosse ≥5 g/dl;
Proteína M na urina (o aumento absoluto deve ser ≥200 mg/24 h);
Em pacientes sem níveis mensuráveis de proteína M no soro e na urina, a diferença entre os níveis de FLC envolvidos e não envolvidos (o aumento absoluto deve ser > 10 mg/dl);
Em pacientes sem níveis mensuráveis de proteína M no soro e na urina e sem níveis mensuráveis de FLC envolvidos, a porcentagem de células plasmáticas da medula óssea independentemente da situação de linha de base (o aumento absoluto deve ser ≥10%);
Aparecimento de uma(s) nova(s) lesão(ões), ≥50% de aumento de nadir em SPD§§ de lesão >1, ou aumento ≥50% no diâmetro mais longo de uma lesão anterior >1 cm no eixo curto;
Aumento ≥50% em células plasmáticas de circulação (mínimo de 200 células por μl) se esta for a única medição de doença
Recidiva clínica A recidiva clínica exige um ou mais dos seguintes critérios:
Indicadores diretos de aumento da doença e/ou disfunção de órgãos-alvo (características de CRAB) relacionados ao distúrbio proliferativo de células plasmáticas clonais subjacentes.
Não é usado no cálculo do tempo até a progressão ou sobrevida livre de progressão, porém é listado
Critérios de resposta*
Critérios de IMWG para MRD (exige uma resposta completa conforme definido abaixo) como algo que pode ser relatado opcionalmente ou para uso na prática clínica;
Desenvolvimento de novos plasmocitomas de tecido mole ou lesões ósseas (fraturas osteoporóticas não constituem progressão);
Aumento definido no tamanho de plasmocitomas ou lesões ósseas existentes.
Um aumento definido é definido como um aumento de 50% (e ≥1 cm) conforme medido serialmente pelo SPD§§ da lesão mensurável;
Hipercalcaemia (>11 mg/dl);
Redução na hemoglobina ≥2 g/dl não relacionada à terapia ou outras condições não relacionadas a mieloma;
Aumento na creatinina sérica de 2 mg/dl ou mais a partir do início da terapia e atribuível a mieloma;
Hiperviscosidade relacionada à paraproteína sérica
Recidiva de Qualquer um ou mais dos seguintes critérios: resposta completa Reaparecimento de proteína M no soro ou urina por (que será usada imunofixação ou eletroforese; apenas se o Desenvolvimento de ≥5% de células plasmáticas na medula desfecho for óssea; sobrevida livre de doenças) Aparecimento de qualquer outro sinal de progressão (ou seja, novo plasmocitoma, lesão óssea lítica, ou hipercalcaemia, consultar acima)
Recidiva de Qualquer um ou mais dos seguintes critérios: negatividade para Perda de estado negativo para MRD (evidência de células MRD (que será
Critérios de resposta* Critérios de IMWG para MRD (exige uma resposta completa conforme definido abaixo) usada apenas se o plasmáticas clonais em NGF ou NGS, ou estado de desfecho for imageamento positivo para recorrência de mieloma); sobrevivência isenta Reaparecimento de proteína M no soro ou urina por de doenças) imunofixação ou eletroforese; Desenvolvimento de ≥5% de células plasmáticas clonais na medula óssea; Aparecimento de qualquer outro sinal de progressão (ou seja, novo plasmocitoma, lesão óssea lítica, ou hipercalcaemia) Para avaliação da MRD, o primeiro aspirado de medula óssea deve ser enviado à MRD (não para morfologia) e essa amostra deve ser coletada com um volume mínimo de 2 ml (para obter células suficientes), porém no máximo 4 a 5 ml para evitar hemodiluição. IMWG=International Myeloma Working Group. MRD=doença residual mínima. NGF=fluxo de próxima geração. NGS=sequenciamento de próxima geração. FLC=cadeia leve livre. Proteína M=Proteína do mieloma. SPD=soma dos produtos dos diâmetros perpendiculares máximos de lesões medidas. Características de CRAB =elevação de cálcio, insuficiência renal, anemia, lesões ósseas líticas. FCM=citometria de fluxo. SUVmax=valor de absorção padronizado máximo. MFC=citometria de fluxo multiparâmetros. ¹⁸F-FDG PET=¹⁸F-fluorodesoxiglicose PET. ASCT=transplante de células-tronco autólogas.
*Todas as categorias de resposta requerem duas avaliações consecutivas feitas a qualquer momento antes de iniciar qualquer nova terapia; para MRD não há a necessidade de duas avaliações consecutivas, porém informações sobre MRD após cada estágio do tratamento são recomendadas (por exemplo, após indução, terapia com altas doses/ASCT, consolidação, manutenção). Os testes de MRD devem ser iniciados apenas no momento da suspeita de resposta completa.
Todas as categorias de resposta e MRD não exigem evidência conhecida de lesões ósseas progressivas ou novas se estudos radiográficos forem realizados. Entretanto,
Critérios de resposta*
Critérios de IMWG para MRD (exige uma resposta completa conforme definido abaixo) estudos radiográficos não são necessários para cumprir esses requisitos de resposta, exceto o requisito de FDG PET, se um estado de imageamento negativo para MRD for relatado. †Negatividade para MRD sustentada, quando relatada, também deve anotar o método usado (por exemplo, fluxo sustentado negativo para MRD, sequenciamento sustentado negativo para MRD). ‡MFC da medula óssea deve seguir as diretrizes de NGF (Paiva B, Gutierrez NC, Rosinol L, et al, Blood 2012; 119: 687-91). O método NGF de referência é uma abordagem de dois tubos de oito cores, que foi amplamente validada.
A abordagem de dois tubos melhora a confiabilidade, consistência e sensibilidade devido à aquisição de um número maior de células.
A tecnologia de oito cores está amplamente disponível globalmente e o método NGF já foi adotado em muitos laboratórios de fluxo em todo o mundo.
O método completo de oito cores é mais eficiente usando uma mistura liofilizada de anticorpos que reduz erros, tempo e custos. 5 milhões de células devem ser avaliadas.
O método FCM empregue deve ter uma sensibilidade de detecção de pelo menos 1 em 10⁵ células plasmáticas.
O ensaio de sequenciamento de §DNA no aspirado de medula óssea deve usar um ensaio validado como LymphoSIGHT (Sequenta). ¶Os critérios usados por Zamagni e colegas (Zamagni E, Nanni C, Mancuso K, et al.
Clin Cancer Res 2015; 21: 4384–90), e painel de especialistas (IMPetUs; Italian Myeloma criteria for PET Use) (Usmani SZ, Mitchell A, Waheed S, et al.
Blood 2013; 121: 1819–23; Nanni C, Zamagni E, Versari A, et al.
Eur J Nucl Med Mol Imaging 2015; 43: 414–21.). As lesões positivas de linha de base foram identificadas pela presença de áreas focais de absorção óssea aumentada, com ou sem lesão subjacente identificada por CT e presente em pelo menos duas fatias consecutivas.
Alternativamente, um SUVmax=2,5 dentro de áreas osteolíticas CT >1 cm de tamanho, ou SUVmax=1,5 dentro de áreas osteolíticas CT ≤1 cm de tamanho foi considerado positivo.
O imageamento deve ser realizado uma vez que a negatividade para MRD é determinada por MFC ou NGS. ||Derivado de critérios de resposta uniforme internacionais para mieloma múltiplo (Durie BG, Harousseau JL, Miguel JS, et al, Leukemia 2006; 20: 1467-73). Definição de resposta menor e clarificações derivadas de Rajkumar e colegas (Rajkumar SV,
Critérios de resposta*
Critérios de IMWG para MRD (exige uma resposta completa conforme definido abaixo) Harousseau JL, Durie B, et al, Blood 2011; 117: 4691-95). Quando o único método para medir a doença é realizado por níveis séricos de FLC: a resposta completa pode ser definida como uma razão normal de FLC de 0,26 a 1,65, além dos critérios de resposta completa listados anteriormente.
Uma resposta parcial muito satisfatória nesses pacientes exige uma redução ≥90% na diferença entre os níveis de FLC envolvidos e não envolvidos.
Todas as categorias de resposta exigem duas avaliações consecutivas feitas a qualquer momento antes da instituição de qualquer nova terapia; todas as categorias também não requerem evidência conhecida de lesões ósseas progressivas ou novas ou plasmocitomas extramedulares se estudos radiográficos forem realizados.
Não são necessários estudos radiográficos para satisfazer esses requisitos de resposta.
As avaliações de medula óssea não precisam ser confirmadas.
Cada categoria, exceto para doença estável, será considerada não confirmada até que o teste confirmatório seja realizado.
A data do teste inicial é considerada como a data de resposta para avaliação de resultados dependentes do tempo como a duração da resposta. **Todas as recomendações referentes a usos clínicos relacionados aos níveis séricos de FLC ou razão de FLC são baseadas nos resultados obtidos com o teste Freelite validado (Binding Site, Birmingham, Reino Unido). ††A presença/ausência de células clonais em imunoistoquímica baseia-se na razão κ/λ/l.
Uma razão anormal κ/λ por imunoistoquímica exige um mínimo de 100 células plasmáticas para análise.
Uma razão anormal que reflete a presença de um clone anormal é κ/λ de >4:1 ou <1:2. ‡‡Atenção especial deve ser dada ao surgimento de uma proteína monoclonal diferente após o tratamento, especialmente no cenário de pacientes que obtiveram uma resposta completa convencional, frequentemente relacionada à reconstituição oligoclonal do sistema imunológico.
Essas bandas geralmente desaparecem com o tempo e, em alguns estudos, foram associadas a um melhor resultado.
Além disso, o aparecimento de κ em IgG monoclonal em pacientes que recebem anticorpos monoclonais deve ser diferenciado do anticorpo terapêutico. §§As medições de plasmocitoma devem ser realizadas a partir da porção CT das varreduras de PET/CT ou MRI, ou varreduras de CT
Critérios de resposta* Critérios de IMWG para MRD (exige uma resposta completa conforme definido abaixo) dedicadas, quando aplicável. Para pacientes com apenas envolvimento cutâneo, as lesões cutâneas devem ser medidas com uma régua. A medição de tamanho de tumor será determinada pela SPD. ¶¶A imunofixação positiva individualmente em um paciente anteriormente classificado como obtendo uma resposta completa não será considerada progressão. Para propósitos de cálculo do tempo até a progressão e sobrevida isenta de progressão, os pacientes que obtiveram uma resposta completa e são negativos para MRD devem ser avaliados usando os critérios listados para doença progressiva. Os critérios para recidiva de uma resposta completa ou recidiva de MRD devem ser usados apenas no cálculo da sobrevida livre de doença. ||||No caso em que um valor é considerado um resultado falso por critério médico (por exemplo, um possível erro de laboratório), esse valor não será considerado ao determinar o valor mais baixo.
[00487] O tratamento padrão para mieloma múltiplo e doenças associadas inclui quimioterapia, transplante de células-tronco (autólogas ou alogênicas), radioterapia e outras terapias medicamentosas. Os fármacos antimieloma frequentemente usados incluem agentes alquilantes (por exemplo, bendamustina, ciclofosfamida e melfalano), inibidores de proteassoma (por exemplo, bortezomibe), corticosteroides (por exemplo, dexametasona e prednisona) e imunomoduladores (por exemplo, talidomida e lenalidomida ou Revlimid®) ou qualquer combinação dos mesmos. Os fármacos com bifosfonato também são frequentemente administrados em combinação com os tratamentos anti- MM padrão para evitar a perda óssea. Pacientes com idade entre 65 e 70 anos são candidatos improváveis para o transplante de células-tronco. Em alguns casos, transplantes autólogos duplos de células-tronco são opções para pacientes com menos de 60 anos de idade com resposta abaixo do ideal ao primeiro transplante. As composições e métodos da presente invenção podem ser administrados em combinação com qualquer um dos tratamentos atualmente prescritos para mieloma múltiplo.
[00488] A primeira fase de tratamento para mieloma múltiplo é terapia de indução. O objetivo da terapia de indução é reduzir o número de células plasmáticas na medula óssea e as moléculas (por exemplo, proteínas) produzidas pelas células plasmáticas. A terapia de indução geralmente compreende uma combinação de 2 ou 3 dos seguintes tipos de fármacos: terapia direcionada, quimioterapia ou corticosteroides. Terapia de indução para pacientes que podem ser submetidos a um transplante de células-tronco
[00489] Os pacientes submetidos a um transplante de células-tronco geralmente têm 70 anos ou menos e geralmente têm boa saúde. Os pacientes podem ser submetidos à terapia de indução seguida de quimioterapia em altas doses e transplante de células-tronco. A terapia de indução é geralmente administrada em vários ciclos e pode incluir um ou mais dos seguintes fármacos: Regime de CyBorD – ciclofosfamida (Cytoxan, Procytox), bortezomibe (Velcade) e dexametasona (Decadron, Dexasone); regime de VRD – bortezomibe, lenalidomida (Revlimid) e dexametasona; talidomida (Thalomid) e dexametasona; lenalidomida e dexametasona em baixa dose; bortezomibe e dexametasona; regime de VTD – bortezomibe, talidomida e dexametasona; bortezomibe, ciclofosfamida e prednisona; bortezomibe, doxorrubicina (Adriamycin) e dexametasona; dexametasona; ou lipossomal (Caelyx, Doxil), vincristina (Oncovin) e dexametasona
Terapia de indução para pacientes que não podem ser submetidos a um transplante de células-tronco
[00490] Os pacientes que não podem ser submetidos a um transplante de células-tronco podem ter ser submetidos à terapia de indução usando um ou mais dos seguintes fármacos: Regime de CyBorD – ciclofosfamida, bortezomibe e dexametasona; lenalidomida (Revlimid) e dexametasona em baixa dose; regime de MPT – melfalano, prednisona e talidomida; regime de VMP – bortezomibe, melfalano e prednisona; regime de MPL – melfalano, prednisona e lenalidomida; melfalano e prednisona; bortezomibe e dexametasona; dexametasona; doxorrubicina lipossomal, vincristina e dexametasona; talidomida e dexametasona; regime de VAD – vincristina, doxorrubicina e dexametasona; ou regime de VRD – bortezomibe, lenalidomida e dexametasona.
[00491] Um outro exemplo de uma doença ou distúrbio associado a BCMA é linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin (Consultar, Chiu et al., Blood. 2007, 109(2):729-39; He et al., J Immunol. 2004, 172(5):3268- 79).
[00492] O linfoma de Hodgkin (HL), também conhecido como doença de Hodgkin, é um câncer do sistema linfático que se origina de glóbulos brancos ou leucócitos. As células anormais que compreendem o linfoma são chamadas de células de Reed-Sternberg. No linfoma de Hodgkin, o câncer se espalha de um grupo de linfonodos para outro. O linfoma de Hodgkin pode ser subclassificado em quatro subtipos patológicos com base na morfologia de células de Reed-Sternberg e na composição celular em torno das células de Reed-Sternberg (conforme determinado por biópsia de linfonodo): HL esclerosante nodular, subtipo de celularidade mista, rico em linfócitos ou predominância de linfócitos, depleção linfocitária. Alguns linfomas de Hodgkin também podem ser linfoma de Hodgkin predominante em linfócitos nodulares ou podem ser não especificados. Os sintomas e sinais do linfoma de Hodgkin incluem inchaço indolor nos linfonodos do pescoço, axilas ou virilha, febre, sudorese noturna, perda de peso, fadiga, prurido ou dor abdominal.
[00493] O linfoma não Hodgkin (NHL) compreende um grupo diverso de cânceres sanguíneos que incluem qualquer tipo de linfoma exceto linfoma de Hodgkin. Os subtipos de linfoma não Hodgkin são classificados principalmente por morfologia celular, aberrações cromossômicas e marcadores de superfície. Os subtipos de NHL (ou cânceres associados a NHL) incluem linfomas de células B, como, porém sem limitação, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crônica de células B (B-CLL), leucemia prolinfocítica de células B (B-PLL), leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) (por exemplo, linfoma intravascular de grandes células B e linfoma primário de células B mediastinal), linfoma folicular (por exemplo, linfoma do centro folicular, célula pequena clivada folicular), leucemia de células ciliadas, linfoma de células B de alto grau (semelhante a Burkitt), linfoma linfoplasmocítico (macroglublinemia de Waldenstrom), linfoma de células do manto, linfomas de células B da zona marginal (por exemplo, linfoma de células B da zona marginal extranodal ou linfoma de tecido linfoide associado à mucosa (MALT), linfoma de células B da zona marginal nodal e linfoma de células B esplênicas da zona marginal), plasmocitoma/mieloma, leucemia/linfoma linfoblástico precursor B (PB- LBL/L), linfoma do sistema nervoso central primário (SNC), linfoma intraocular primário, linfoma linfocítico pequeno (SLL); e linfomas de células T, como, porém sem limitação, linfoma anaplásico de grandes células (ALCL), linfoma/leucemia de células T adultas (por exemplo, latente, crônico, agudo e linfomatoso), linfoma angiocêntrico, linfoma de células T angioimunoblástico, linfomas cutâneos de células T (por exemplo, micose fungoide, síndrome de Sezary, etc.), linfoma de células exterminadoras naturais/T (tipo nasal), linfoma de células T intestinal do tipo enteropatia, leucemia de grandes linfócitos granulares, linfoma/leucemia linfoblástico T precursor (T-LBL/L ), leucemia linfocítica crônica de células T/leucemia prolinfocítica (T-CLL/PLL) e linfoma de células T periféricas não especificado. Os sintomas e sinais do linfoma de Hodgkin incluem inchaço indolor nos linfonodos do pescoço, axilas ou virilha, febre, sudorese noturna, perda de peso, fadiga, prurido, dor abdominal, tosse ou dor no peito.
[00494] O estadiamento é o mesmo para o linfoma de Hodgkin e não- Hodgkin e refere-se à extensão do espalhamento das células cancerígenas no corpo. No estágio I, as células do linfoma estão em um grupo de linfonodos. No estágio II, as células do linfoma estão presentes em pelo menos dois grupos de linfonodos, porém ambos os grupos estão no mesmo lado do diafragma, ou em uma parte de um tecido ou órgão e os linfonodos próximos a esse órgão no mesmo lado do diafragma. No estágio III, as células do linfoma estão nos linfonodos em ambos os lados do diafragma, ou em uma parte de um tecido ou órgão próximo a esses grupos de linfonodos ou no baço. No estágio IV, as células do linfoma são encontradas em várias partes de pelo menos um órgão ou tecido, ou as células do linfoma estão em um órgão e nos linfonodos do outro lado do diafragma. Além da designação do estadiamento em números romanos, os estágios também podem ser descritos pelas letras A, B, E e S, em que A se refere a pacientes sem sintomas, B se refere a pacientes com sintomas, E se refere a pacientes em que o linfoma é encontrado em tecidos fora do sistema linfático e S se refere a pacientes em que o linfoma é encontrado no baço.
[00495] O linfoma de Hodgkin é comumente tratado com radioterapia, quimioterapia ou transplante de célula-tronco hematopoiéticas. A terapia mais comum para linfoma não Hodgkin é R-CHOP, que consiste em quatro quimioterapias diferentes (ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina e prenisolona) e rituximabe (Rituxan®). Outras terapias comumente usadas para tratar o NHL incluem outros agentes quimioterapêuticos, radioterapia, transplante de células-tronco (transplante autólogo ou alogênico de medula óssea) ou terapia biológica, como imunoterapia. Outros exemplos de agentes terapêuticos biológicos incluem, porém sem limitação, rituximabe (Rituxan®), tositumomabe (Bexxar®), epratuzumabe (LymphoCide®) e alemtuzumabe (MabCampath®). As composições e métodos da presente invenção podem ser administrados em combinação com qualquer um dos tratamentos atualmente prescritos para linfoma de Hodgkin ou linfoma não Hodgkin.
[00496] A expressão de BCMA também foi associada à macroglobulinemia de Waldenstrom (WM), também conhecida como linfoma linfoplasmocítico (LPL). (Consultar, Elsawa et al., Blood. 2006, 107(7):2882-8). A macroglobulinemia de Waldenstrom foi anteriormente considerada relacionada ao mieloma múltiplo, porém mais recentemente foi classificada como um subtipo de linfoma não-Hodgkin. A WM é caracterizada pela proliferação descontrolada de linfócitos de células B, resultando em anemia e produção de quantidades excessivas de paraproteína ou imunoglobulina M (IgM), que espessa o sangue e resulta em síndrome de hiperviscosidade. Outros sintomas ou sinais de WM incluem febre, sudorese noturna, fadiga, anemia, perda de peso, linfadenopatia ou esplenomegalia, visão turva, tontura, sangramento nasal, sangramento gengival, hematomas incomuns, disfunção ou insuficiência renal, amiloidose ou neuropatia periférica.
[00497] O tratamento padrão de WM consiste em quimioterapia, especificamente com rituximabe (Rituxan®). Outros fármacos quimioterápicos podem ser usados em combinação, como clorambucila (Leukeran®), ciclofosfamida (Neosar®), fludarabina (Fludara®), cladribina (Leustatin®), vincristina e/ou talidomida. Corticosteriodes, como prednisona, também podem ser administrados em combinação com a quimioterapia. A plasmaférese, ou troca plasmática, é comumente usada durante o tratamento do paciente para aliviar alguns sintomas, removendo a paraproteína do sangue. Em alguns casos, o transplante de células-tronco é uma opção para alguns pacientes.
[00498] Um outro exemplo de uma doença ou distúrbio associado a BCMA é câncer no cérebro. Especificamente, a expressão de BCMA foi associada a astrocitoma ou glioblastoma (Consultar, Deshayes et al, Oncogene. 2004, 23(17):3005-12, Pelekanou et al., PLoS One. 2013, 8(12):e83250). Astrocitomas são tumores que surgem de astrócitos, que são um tipo de célula glial no cérebro. O glioblastoma (também conhecido como glioblastoma multiforme ou GBM) é a forma mais maligna de astrocitoma e é considerado o estágio mais avançado de câncer no cérebro (estágio IV). Há duas variantes de glioblastoma: glioblastoma de células gigantes e gliossarcoma. Outros astrocitomas incluem astrocitoma pilocítico juvenil (JPA), astrocitoma fibrilar, xantroastrocitoma pleomórfico (PXA), tumor neuroepitelial desembrioplásico (DNET) e astrocitoma anaplásico (AA).
[00499] Os sintomas ou sinais associados ao glioblastoma ou astrocitoma incluem aumento da pressão no cérebro, dores de cabeça, convulsões, perda de memória, alterações de comportamento, perda de movimento ou sensação de um lado do corpo, disfunção da linguagem, comprometimento cognitivo, comprometimento visual, náusea, vômito e fraqueza nos braços ou pernas.
[00500] A remoção cirúrgica do tumor (ou ressecção) é o tratamento padrão para a remoção do máximo de glioma possível, sem danificar ou com danos mínimos ao cérebro circundante normal. A terapia de radiação e/ou quimioterapia são frequentemente usadas após a cirurgia para suprimir e retardar a doença recorrente de quaisquer células cancerígenas remanescentes ou lesões satélites. A radioterapia inclui radioterapia no cérebro inteiro (radiação por feixe externo convencional), radioterapia conformal tridimensional direcionada e radionuclídeos direcionados. Os agentes quimioterápicos comumente usados para tratar o glioblastoma incluem temozolomida, gefitinibe ou erlotinibe e cisplatina. Inibidores da angiogênese, como o Bevacizumabe (Avastin®), também são comumente usados em combinação com quimioterapia e/ou radioterapia.
[00501] O tratamento de apoio também é frequentemente usado para aliviar sintomas neurológicos e melhorar a função neurológica e é administrado em combinação com qualquer uma das terapias para câncer descritas no presente documento. Os agentes de apoio primários incluem anticonvulsivos e corticosteroides. Dessa forma, as composições e métodos da presente invenção podem ser usados em combinação com qualquer um dos tratamentos padrão ou de apoio para tratar um glioblastoma ou astrocitoma.
[00502] As doenças e distúrbios não relacionados ao câncer associados à expressão de BCMA também podem ser tratados pelas composições e métodos divulgados no presente documento. Exemplos de doenças e distúrbios não relacionados a câncer associados à expressão de BCMA incluem, porém sem limitação: infecções virais; por exemplo, HIV, infecções fúngicas, por exemplo,C. neoformans; doença do intestino irritável; colite ulcerativa, e distúrbios relacionados à imunidade da mucosa.
[00503] As células efetoras imunes (por exemplo, células T ou células NK) modificadas com CAR da presente invenção podem ser administradas isoladamente ou como uma composição farmacêutica em combinação com diluentes e/ou com outros componentes tais como IL-2 ou outras citocinas ou populações de células.
[00504] A presente invenção proporciona composições e métodos para o tratamento de câncer. Em um aspecto, o câncer é um câncer hematológico, incluindo, mas não se limitando a, o câncer hematológico é uma leucemia ou um linfoma. Em um aspecto, as células que expressam CAR (por exemplo, células CART ou células NK que expressam CAR) da invenção podem ser usadas para tratar cânceres e malignidades tais como, mas não se limitando a, por exemplo, leucemias agudas incluindo mas não se limitando a, por exemplo, leucemia linfoide aguda de células B ("BALL"), leucemia linfoide aguda de células T ("TALL"), leucemia linfoide aguda (ALL); uma ou mais leucemias crônicas incluindo mas não se limitando a, por exemplo, leucemia mielógena crônica (CML), leucemia linfocítica crônica (CLL); cânceres hematológicos ou afecções hematológicas adicionais incluindo mas não se limitando a, por exemplo, leucemia pró-linfocítica de células B, neoplasma blástico de células dendríticas plasmacitoides, linfoma de Burkitt, linfoma difuso de grandes células B, Linfoma folicular, Leucemia de células pilosas, linfoma folicular de pequenas células ou grandes células, afecções linfoproliferativas malignas, linfoma MALT, linfoma de células do manto, Linfoma da zona marginal, mieloma múltiplo, mielodisplasia e síndrome mielodisplásica, linfoma não de Hodgkin, linfoma plasmablástico, neoplasma de células dendríticas plasmacitoides, macroglobulinemia de Waldenstrom e "pré- leucemia" que são um conjunto diversificado de afecções hematológicas unidas pela produção ineficaz (ou displasia) de células sanguíneas mieloides e similares. Além disso, uma doença associada à expressão de BCMA inclui, porém sem limitação, por exemplo, cânceres atípicos e/ou não clássicos, malignidades, afecções pré-cancerosas ou doenças proliferativas que expressam BCMA.
[00505] Nas modalidades, uma composição descrita no presente documento pode ser usada para tratar uma doença incluindo, porém sem limitação, um distúrbio proliferativo de células plasmáticas, por exemplo, mieloma assintomático (mieloma múltiplo assintomático ou mieloma indolente), gamapatia monoclonal de importância indeterminada (MGUS), macroglobulinemia de Waldestrom, plasmacitomas (por exemplo, discrasia de células plasmáticas, mieloma solitário, plasmacitoma solitário, plasmacitoma extramedular, e plasmacitoma múltiplo), amiloidose de cadeia leve amiloide sistêmica, e síndrome de POEMS (também conhecido como síndrome de Crow-Fukase, doença de Takatsuki, e síndrome de PEP).
[00506] Nas modalidades, uma composição descrita no presente documento pode ser usada para tratar uma doença incluindo, porém sem limitação, um câncer, por exemplo, um câncer descrito no presente documento, por exemplo, um câncer de próstata (por exemplo, câncer de próstata resistente à castração ou resistente à terapia, ou câncer de próstata metastático), câncer de pâncreas ou câncer de pulmão.
[00507] A presente invenção também fornece métodos para inibir a proliferação ou reduzir uma população de células que expressam BCMA, sendo que os métodos compreendem colocar uma população de células que compreende uma célula que expressa BCMA em contato com uma célula que expressa CAR de BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou célula NK que expressa CAR de BCMA) da invenção que se liga à célula que expressa BCMA. Em um aspecto específico, a presente invenção fornece métodos para inibir a proliferação ou reduzir a população de células cancerígenas que expressam BCMA, sendo que os métodos compreendem colocar a população de células cancerígenas que expressam BCMA em contato com uma célula que expressa CAR anti- BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou célula NK que expressa CAR de BCMA) da invenção que se liga à célula que expressa BCMA. Em um aspecto, a presente invenção fornece métodos para inibir a proliferação ou reduzir a população de células cancerígenas que expressam BCMA, sendo que os métodos compreendem colocar a população de células cancerígenas que expressam BCMA em contato com uma célula que expressa CAR anti-BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou célula NK que expressa CAR de BCMA) da invenção que se liga à célula que expressa BCMA. Em determinados aspectos, a célula que expressa CAR anti-BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou célula NK que expressa CAR de BCMA) da invenção reduz a quantidade, o número ou porcentagem de células e/ou células cancerígenas em pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 65%, pelo menos 75%, pelo menos 85%, pelo menos 95% ou pelo menos 99% em um indivíduo com ou modelo animal para leucemia mieloide ou outro câncer associado às células que expressam BCMA em relação a um controle negativo. Em um aspecto, o indivíduo é um humano.
[00508] A presente invenção também fornece métodos para prevenir, tratar e/ou gerenciar uma doença associada às células que expressam BCMA (por exemplo, um câncer hematológico ou câncer atípico que expressa BCMA), em que os métodos compreendem administrar a um indivíduo em necessidade uma célula que expressa CAR anti-BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou célula NK que expressa CAR de
BCMA) da invenção que se liga à célula que expressa BCMA. Em um aspecto, o indivíduo é um humano. Exemplos não limitadores de distúrbios associados a células que expressam BCMA incluem infecções virais ou fúngicas e distúrbios relacionados à imunidade mucosal.
[00509] A presente invenção também fornece métodos para prevenir, tratar e/ou gerenciar uma doença associada às células que expressam BCMA, sendo que os métodos compreendem administrar a um indivíduo em necessidade uma célula que expressa CAR anti-BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou célula NK que expressa CAR de BCMA) da invenção que se liga à célula que expressa BCMA. Em um aspecto, o indivíduo é um humano.
[00510] A presente invenção fornece métodos para prevenir a recidiva de câncer associada às células que expressam BCMA, sendo que os métodos compreendem administrar a um indivíduo que precisa do mesmo uma célula que expressa CAR anti-BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou célula NK que expressa CAR de BCMA) da invenção que se liga à célula que expressa BCMA. Em um aspecto, os métodos compreendem administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma célula que expressa CAR anti-BCMA (por exemplo, célula CART de BCMA ou célula NK que expressa CAR de BCMA) descrita no presente documento que se liga à célula que expressa BCMA em combinação com uma quantidade eficaz de outra terapia. Métodos de uso de Biomarcadores para Avaliar a Eficácia de CAR, Adequabilidade do Indivíduo ou Adequabilidade da Amostra
[00511] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de avaliar ou monitorar a eficácia de uma terapia com células que expressam CAR (por exemplo, uma terapia com CAR de BCMA), em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo portador de um câncer, por exemplo, um câncer hematológico), ou a adequabilidade de uma amostra (por exemplo, uma amostra de aférese) para uma terapia com CAR (por exemplo, uma terapia com CAR de BCMA). O método inclui adquirir um valor de eficácia para a terapia com CAR, adequabilidade do indivíduo ou adequabilidade da amostra, em que o dito valor é indicativo da eficácia ou adequabilidade da terapia com células que expressam CAR.
[00512] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, a terapia com células que expressam CAR compreende uma pluralidade (por exemplo, uma população) de células imunoefetoras que expressam CAR, por exemplo, uma pluralidade (por exemplo, uma população) de células T ou células NK, ou uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade, a terapia com células que expressam CAR é uma terapia com BCMACAR.
[00513] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, o indivíduo é avaliado antes de receber, durante ou após receber, a terapia com células que expressam CAR.
[00514] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, um respondedor (por exemplo, um respondedor completo) tem, ou é identificado como tendo, um maior nível ou atividade de um, dois ou mais (todos) dentre GZMK, PPF1BP2, ou células T naïve em comparação com um não respondedor.
[00515] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, um não respondedor tem, ou é identificado como tendo, um maior nível ou atividade de uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete ou mais (por exemplo, todas) dentre IL22, IL- 2RA, IL-21, IRF8, IL8, CCL17, CCL22, células T efetoras, ou células T reguladoras, em comparação com um respondedor.
[00516] Em uma modalidade, um recidivante é um paciente que tem, ou que é identificado como tendo, um nível de expressão aumentado de um ou mais dentre (por exemplo, 2, 3, 4 ou todos dentre) os seguintes genes, em comparação com não recidivantes: MIR199A1, MIR1203, uc021ovp, ITM2C e HLA-DQB1 e/ou níveis de expressão reduzidos de um ou mais dentre (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, ou todos dentre) os seguintes genes, em comparação com não recidivadores: PPIAL4D, TTTY10, TXLNG2P, MIR4650-1, KDM5D, USP9Y, PRKY, RPS4Y2, RPS4Y1, NCRNA00185, SULT1E1 e EIF1AY.
[00517] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, um não respondedor tem, ou é identificado como tendo, uma porcentagem mais alta de um marcador de exaustão de células imunes, por exemplo, um, dois ou mais inibidores de ponto de verificação imunes (por exemplo, PD-1, PD-L1, TIM-3 e/ou LAG-3). Em uma modalidade, um não respondedor tem, ou é identificado como tendo, uma porcentagem mais alta de células imunoefetoras que expressam PD-1, PD-L1, ou LAG-3 (por exemplo, células T CD4+ e/ou células T CD8+) (por exemplo, células T CD4+ e/ou células T CD8+ que expressam CAR) em comparação com a porcentagem de células imunoefetoras que expressam PD-1 ou LAG-3 de um respondedor.
[00518] Em uma modalidade, um não respondedor tem, ou é identificado como tendo, uma porcentagem mais alta de células imunes com um fenótipo esgotado, por exemplo, células imunes que coexpressam pelo menos dois marcadores de exaustão, por exemplo, coexpressam PD-1, PD-L1 e/ou TIM-3. Em outras modalidades, um não respondedor tem, ou é identificado como tendo, uma porcentagem mais alta de células imunes com um fenótipo esgotado, por exemplo, células imunes que coexpressam pelo menos dois marcadores de exaustão, por exemplo, coexpressam PD-1 e LAG-3.
[00519] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, um não respondedor tem, ou é identificado como tendo, uma porcentagem mais alta de células PD-1/PD- L1+/LAG-3+ na população de células que expressam CAR (por exemplo, uma população de células BCMACAR+) em comparação com um respondedor (por exemplo, um respondedor completo) à terapia com células que expressam CAR.
[00520] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, um respondedor parcial tem, ou é identificado como tendo, uma porcentagem mais alta de células PD-1/PD- L1+/LAG-3+ do que um respondedor, na população de células que expressa CAR (por exemplo, uma população de células BCMACAR+).
[00521] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, um não respondedor tem, ou é identificado como tendo, um fenótipo esgotado de PD1/PD-L1+ CAR+ e coexpressão de LAG3 na população de células que expressam CAR (por exemplo, uma população de células BCMACAR +).
[00522] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, um não respondedor tem, ou é identificado como tendo, uma porcentagem mais alta de células PD-1/PD- L1+/TIM-3+ na população de células que expressam CAR (por exemplo, uma população de células BCMACAR+) em comparação com o respondedor (por exemplo, um respondedor completo).
[00523] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, um respondedor parcial tem, ou é identificado como tendo, uma porcentagem mais alta de células PD-1/PD- L1+/TIM-3+ do que respondedores, na população de células que expressa CAR (por exemplo, uma população de células BCMACAR+).
[00524] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, a presença de células T CD8+ CD27+ CD45RO- em uma amostra de aférese é um preditor positivo da resposta do indivíduo a uma terapia com células que expressam CAR (por exemplo, uma terapia com BCMACAR).
[00525] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, uma alta porcentagem de células T PD1+ CAR+ e LAG3+ ou TIM3+ em uma amostra de aférese é um preditor de prognóstico insatisfatório da resposta do indivíduo a uma terapia com células que expressam CAR (por exemplo, uma terapia com BCMACAR).
[00526] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, o respondedor (por exemplo, o respondedor completo ou parcial) tem um, dois, três ou mais (ou todos) dos seguintes perfis: tem um número maior de células imunoefetoras CD27+ em comparação com um valor de referência, por exemplo, um número não respondedor de células imunoefetoras CD27+; (i) tem um número maior de células T CD8+ em comparação com um valor de referência, por exemplo, um número não respondedor de células T CD8+; tem um número menor de células imunes que expressam um ou mais inibidores de ponto de verificação, por exemplo, um inibidor de ponto de verificação selecionado dentre PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3, ou KLRG-1, ou em uma combinação, em comparação com um valor de referência, por exemplo, um número não respondedor de células que expressam um ou mais inibidores de ponto de verificação; ou tem um número maior de uma, duas, três, quatro ou mais
(todas) células TEFF em repouso, células TREG em repouso, células CD4 naïve, células de memória não-estimuladas ou células T de memória iniciais, ou uma combinação dos mesmos, em comparação com um valor de referência, por exemplo, um número não respondedor de células T EFF em repouso, células TREG em repouso, células CD4 naïve, células de memória números ou células T de memória iniciais.
[00527] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos divulgados no presente documento, o nível ou atividade de citocina de (vi) é escolhido dentre uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais dentre (ou todas) a citocina CCL20/MIP3a, IL17A, IL6, GM-CSF, IFN-γ, IL10, IL13, IL2, IL21, IL4, IL5, IL9 ou TNFα, ou uma combinação dos mesmos. A citocina pode ser escolhido dentre um, dois, três, quatro ou mais (todos) dentre IL-17a, CCL20, IL2, IL6 ou TNFa. Em uma modalidade, um nível ou atividade aumentado de uma citocina é escolhido dentre um ou ambos IL-17a e CCL20, é indicativo de aumento da capacidade de resposta ou redução da recidiva.
[00528] Nas modalidades, o respondedor, um não respondedor, um recidivador ou um não recidivador identificado pelos métodos no presente documento pode ser adicionalmente avaliado de acordo com critérios clínicos. Por exemplo, um respondedor completo tem ou é identificado como, um indivíduo que tem uma doença, por exemplo, um câncer, que exibe uma resposta completa, por exemplo, uma remissão completa, a um tratamento. Uma resposta completa pode ser identificada, por exemplo, usando as NCCN Guidelines®, ou Cheson et al, J Clin Oncol 17:1244 (1999) e Cheson et al., "Revised Response Criteria for Malignant Lymphoma", J Clin Oncol 25:579-586 (2007) (ambas aqui incorporadas a título de referência na sua totalidade), como descrito neste documento. Um respondedor parcial tem ou é identificado como, um indivíduo que tem uma doença, por exemplo, um câncer, que exibe uma resposta parcial, por exemplo, uma remissão parcial, a um tratamento. Uma resposta parcial pode ser identificada, por exemplo, usando NCCN Guidelines® ou os critérios de Cheson, como descrito aqui. Um "não respondedor" tem ou é identificado como, um indivíduo que tem uma doença, por exemplo, um câncer, que não exibe uma resposta a um tratamento, por exemplo, o paciente tem doença estável ou doença progressiva. Um não respondedor pode ser identificado, por exemplo, usando NCCN Guidelines® ou os critérios de Cheson, como descrito aqui.
[00529] Alternativamente, ou em combinação com os métodos divulgados no presente documento, responsivo ao dito valor, realizando um, dois, três quatro ou mais dos seguintes: administrar, por exemplo, a um respondedor ou um não recidivador, uma terapia com células que expressam CAR; administrar uma dosagem alterada de uma terapia com células que expressam CAR; alterar o programa ou curso do tempo de uma terapia com células que expressam CAR; administrar, por exemplo, a um não respondedor ou um respondedor parcial, um agente adicional em combinação com uma terapia com células que expressam CAR, por exemplo, um inibidor de ponto de verificação, por exemplo, um inibidor de ponto de verificação descrito no presente documento; administrar a um não respondedor ou respondedor parcial uma terapia que aumenta o número de células T mais jovens no indivíduo antes do tratamento com uma terapia com células que expressam CAR; modificar um processo de fabricação de uma terapia com células que expressam CAR, por exemplo, enriquecer as células T mais jovens antes da introdução de um ácido nucleico que codifica um CAR ou aumentar a eficiência da transdução, por exemplo, para um indivíduo identificado como um não respondedor ou um respondedor parcial; administrar uma terapia alternativa, por exemplo, para um não respondedor ou respondedor parcial ou recidivador; ou se o indivíduo for, ou é identificado como, um não respondedor ou um recidivador, diminuir a população de células TREG e/ou assinatura gênica TREG, por exemplo, por um ou mais dentre depleção de CD25, administração de ciclofosfamida, anticorpo anti-GITR, ou uma combinação dos mesmos.
[00530] Em determinadas modalidades, o indivíduo é pré-tratado com um anticorpo anti-GITR. Em determinadas modalidades, o indivíduo é tratado com um anticorpo anti-GITR antes da infusão ou reinfusão. Terapias de Combinação
[00531] Uma célula que expressa CAR descrita no presente documento pode ser usada em combinação com outros agentes e terapias conhecidos. Administrado "em combinação", como usado aqui, significa que dois (ou mais) tratamentos diferentes são administrados ao indivíduo durante a aflição do indivíduo com o distúrbio, por exemplo, os dois ou mais tratamentos são administrados depois de o indivíduo ter sido diagnosticado com o distúrbio e antes de o distúrbio ter sido curado ou eliminado ou o tratamento ter cessado por outros motivos. Em algumas modalidades, a administração de um tratamento ainda está ocorrendo quando a administração do segundo começa, de modo que ocorre sobreposição em termos da administração. Tal é por vezes referido aqui como "administração simultânea" ou "concorrente". Em outras modalidades, a administração de um tratamento termina antes de a administração do outro tratamento começar. Em algumas modalidades de qualquer um dos casos, o tratamento é mais eficaz devido à administração combinada. Por exemplo, o segundo tratamento é mais eficaz, por exemplo, é observado um efeito equivalente com menos do segundo tratamento, ou o segundo tratamento reduz sintomas em maior extensão, do que seria observado se o segundo tratamento fosse administrado na ausência do primeiro tratamento, ou a situação análoga é observada com o primeiro tratamento. Em algumas modalidades, a administração é tal que a redução em um sintoma, ou outro parâmetro relacionado com o distúrbio, é maior do que seria observado com um tratamento administrado na ausência do outro. O efeito dos dois tratamentos pode ser parcialmente aditivo, totalmente aditivo ou mais do que aditivo. A administração pode ser tal que um efeito do primeiro tratamento administrado ainda é detectável quando o segundo é administrado.
[00532] Uma célula expressando CAR descrita aqui e o pelo menos um agente terapêutico adicional podem ser administrados simultaneamente, na mesma composição ou em composições separadas ou sequencialmente. Para administração sequencial, a célula expressando CAR descrita aqui pode ser administrada em primeiro lugar, e o agente adicional pode ser administrado em segundo lugar, ou a ordem da administração pode ser invertida.
[00533] A terapia com CAR e/ou outros agentes, procedimentos ou modalidades terapêuticos podem ser administrados durante períodos de disfunção ativa ou durante um período de remissão ou doença menos ativa. A terapia com CAR pode ser administrada antes do outro tratamento, em simultâneo com o tratamento, pós-tratamento ou durante remissão da disfunção.
[00534] Quando administrados em combinação, a terapia com CAR e o agente adicional (por exemplo, segundo ou terceiro agente) ou todos, podem ser administrados em uma quantidade ou dose que é maior, menor ou igual à quantidade ou dosagem de cada agente usado individualmente, por exemplo, como uma monoterapia. Em certas modalidades, a quantidade ou dosagem administrada da terapia com CAR, do agente adicional (por exemplo, segundo ou terceiro agente), ou todos, é menor (por exemplo, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40% ou pelo menos 50%) do que a quantidade ou dosagem de cada agente usado individualmente, por exemplo, como uma monoterapia. Em outras modalidades, a quantidade ou dosagem da terapia com CAR, do agente adicional (por exemplo, segundo ou terceiro agente) ou todos, que resulta em um efeito desejado (por exemplo, tratamento de câncer) é menor (por exemplo, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40% ou pelo menos 50% menor) do que a quantidade ou dosagem de cada agente usado individualmente, por exemplo, como uma monoterapia, requerida para alcançar o mesmo efeito terapêutico. Classe de Compostos Talidomida
[00535] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um membro da classe de compostos talidomida. Em algumas modalidades, membros da classe de compostos talidomida incluem, porém sem limitação, lenalidomida (CC-5013), pomalidomida (CC-4047 ou ACTIMID), talidomida, ou sais ou derivados das mesmas. Em algumas modalidades, o composto pode ser uma mistura de um, dois, três, ou mais membros da classe de compostos talidomida. Os análogos de talidomida e as propriedades imunomoduladoras de análogos de talidomida são descritos em Bodera e Stankiewicz, Recent Pat Endocr Metab Immune Drug
Discov. setembro de 2011;5(3):192-6, que está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. O complexo estrutural de análogos de talidomida e da ubiquitina E3 é descrito em Gandhi et al., Br J Haematol. março de 2014;164(6):811-21, que está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. A modulação da ubiquitina ligase E3 por análogos de talidomida é descrita em Fischer et al., Nature. 7 agosto de 2014;512(7512):49-53, que está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00536] Em algumas modalidades, o composto compreende um composto de Fórmula (I): (I) ou um sal, éster, hidrato, solvato ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: X é O ou S; R1 é C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, carbocicila, heterocicila, arila ou heteroarila, cada uma das quais é opcionalmente substituída por um ou mais R4; cada um dentre R2a e R2b é independentemente hidrogênio ou C1-C6 alquila; ou R2a e R2b, juntamente com o átomo de carbono ao qual são fixados, formam um grupo carbonila ou um grupo tiocarbonila; cada um de R3 é independentemente C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, halo, ciano, -C(O)RA, -C(O)ORB, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, -S(O)xRE, -S(O)xN(RC)(RD) ou -N(RC)S(O)xRE, em que cada alquila, alquenila,
alquinila e heteroalquila é independente e opcionalmente substituída por um ou mais R6; cada R4 é independentemente C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, halo, ciano, oxo, -C(O)RA, -C(O)ORB, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, -S(O)xRE, -S(O)xN(RC)(RD), -N (RC)S(O)xRE, carbocicila, heterocicila, arila ou heteroarila, em que cada alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, carbocicila, heterocicila, arila e heteroarila é independente e opcionalmente substituída por um ou mais R7; cada um dentre RA, RB, RC, RD, e RE é independentemente hidrogênio ou C1-C6 alquila; cada R6 é independentemente C1-C6 alquila, oxo, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, arila ou heteroarila, em que cada arila e heteroarila é independente e opcionalmente substituída por um ou mais R8; cada R7 é independentemente halo, oxo, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD) ou -N(RC)C(O)RA; cada R8 é independentemente C1-C6 alquila, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD) ou -N(RC)C(O)RA; n é 0, 1, 2, 3 ou 4; e x é 0, 1 ou 2.
[00537] Em algumas modalidades, X é O.
[00538] Em algumas modalidades, R1 é heterociclila. Em algumas modalidades, R1 é uma heterociclila com 6 membros ou uma heterociclila com 5 membros. Em algumas modalidades, R1 é uma heterociclila contendo nitrogênio. Em algumas modalidades, R1 é piperidinila (por exemplo, piperidina-2,6-dionila).
[00539] Em algumas modalidades, cada R2a e R2b é independentemente hidrogênio. Em algumas modalidades, R2a e R2b juntamente com o carbono ao qual os mesmos são ligados formam um grupo carbonila.
[00540] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 heteroalquila, -N(RC)(RD) ou -N(RC)C(O)RA. Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 heteroalquila (por exemplo, CH2NHC(O)CH2-fenil-t-butil), -N(RC)(RD) (por exemplo, NH2), ou -N(RC)C(O)RA (por exemplo, NHC(O)CH3).
[00541] Em uma modalidade, X é O. Em uma modalidade, R1 é heterociclila (por exemplo, piperidina-2,6-dionila). Em uma modalidade, cada R2a e R2b é independentemente hidrogênio. Em uma modalidade, n é 1. Em uma modalidade, R3 é -N(RC)(RD) (por exemplo, -NH2). Em uma modalidade, o composto compreende lenalidomida, por exemplo, 3-(4- amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma. Em uma modalidade, o composto é lenalidomida, por exemplo, de acordo com a seguinte fórmula: .
[00542] Em uma modalidade, X é O. Em uma modalidade, R1 é heterociclila (por exemplo, piperidinil-2,6-dionila). Em algumas modalidades, R2a e R2b juntamente com o carbono ao qual os mesmos são ligados formam um grupo carbonila. Em uma modalidade, n é 1. Em uma modalidade, R3 é -N(RC)(RD) (por exemplo, -NH2). Em uma modalidade, o composto compreende pomalidomida, por exemplo, 4- amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)isoindolina-1,3-diona, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma. Em uma modalidade, o composto é pomalidomida, por exemplo, de acordo com a seguinte fórmula: .
[00543] Em uma modalidade, X é O. Em uma modalidade, R1 é heterociclila (por exemplo, piperidinil-2,6-dionila). Em uma modalidade, R2a e R2b juntamente com o carbono ao qual os mesmos são ligados formam um grupo carbonila. Em uma modalidade, n é 0. Em uma modalidade, o composto compreende talidomida, por exemplo, 2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)isoindolina-1,3-diona, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma. Em uma modalidade, o produto é talidomida, por exemplo, de acordo com a seguinte fórmula: .
[00544] Em uma modalidade, X é O. Em uma modalidade, R1 é heterociclila (por exemplo, piperidina-2,6-dionila). Em uma modalidade, cada R2a e R2b é independentemente hidrogênio. Em uma modalidade, n é 1. Em uma modalidade, R3 é C1-C6 heteroalquila (por exemplo, CH2NHC(O)CH2-fenil-t-butila). Em uma modalidade, o composto compreende 2-(4-(terc-butil)fenil)-N-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1- oxoisoindolin-5-il)metil)acetamida, ou um sal farmaceuticamente da mesma. Em uma modalidade, o composto tem a estrutura conforme mostrado na seguinte fórmula: .
[00545] Em algumas modalidades, o composto é um composto de Fórmula (I-a): (I-a) ou um sal, éster, hidrato ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[00546] O anel A é carbocicila, heterocicila, arila ou heteroarila, cada uma das quais é opcionalmente substituída por um ou mais R4; M está ausente, C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila ou C1-C6 heteroalquila, em que cada alquila, alquenila, alquinila e heteroalquila é opcionalmente substituída por um ou mais R4; cada um dentre R2a e R2b é independentemente hidrogênio ou C1-C6 alquila; ou R2a e R2b, junto com o átomo de carbono ao qual são fixados para formar um grupo carbonila ou grupo tiocarbonila; R3a é hidrogênio, C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, halo, ciano, -C(O)RA, -C(O)ORB, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, -S(O)xRE, -S(O)xN(RC)(RD) ou -N(RC)S(O)xRE, em que cada alquila, alquenila, alquinila e heteroalquila é opcionalmente substituída por um ou mais R6; cada um de R3 é independentemente C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, halo, ciano, -C(O)RA, -C(O)ORB, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, -S(O)xRE, -S(O)xN(RC)(RD) ou -N(RC)S(O)xRE, em que cada alquila, alquenila, alquinila e heteroalquila é independente e opcionalmente substituída por um ou mais R6; cada R4 é independentemente C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila,
C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, halo, ciano, oxo, -C(O)RA, -C(O)ORB, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, -S(O)xRE, -S(O)xN(RC)(RD), -N(RC)S(O)xRE, carbocicila, heterocicila, arila ou heteroarila, em que cada alquila, alquenila, alquinila, carbocicila, heterocicila, arila ou heteroarila é independente e opcionalmente substituída por um ou mais R7; cada um dentre RA, RB, RC, RD, e RE é independentemente hidrogênio ou C1-C6 alquila; cada R6 é independentemente C1-C6 alquila, oxo, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, arila ou heteroarila, em que cada arila ou heteroarila é independente e opcionalmente substituída por um ou mais R8; cada R7 é independentemente halo, oxo, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD) ou -N(RC)C(O)RA; cada R8 é independentemente C1-C6 alquila, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD) ou -N(RC)C(O)RA; n é 0, 1, 2 ou 3; o é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e x é 0, 1 ou 2.
[00547] Em algumas modalidades, X é O.
[00548] Em algumas modalidades, M está ausente.
[00549] Em algumas modalidades, o Anel A é heterociclila. Em algumas modalidades, o Anel A é heterociclila, por exemplo, um heterociclila com 6 membros ou uma heterociclila com 5 membros. Em algumas modalidades, o Anel A é uma heterociclila contendo nitrogênio. Em algumas modalidades, o Anel A é piperidinila (por exemplo, piperidina-2,6-dionila).
[00550] Em algumas modalidades, M está ausente e o Anel A é heterociclila (por exemplo, piperidinila, por exemplo, piperidina-2,6- dionila).
[00551] Em algumas modalidades, cada R2a e R2b é independentemente hidrogênio. Em algumas modalidades, R2a e R2b juntamente com o carbono ao qual os mesmos são ligados formam um grupo carbonila.
[00552] Em algumas modalidades, R3a é hidrogênio, -N(RC)(RD) ou -N(RC)C(O)RA. Em algumas modalidades, R3a é hidrogênio. Em algumas modalidades, R3a é -N(RC)(RD) (por exemplo, -NH2). Em algumas modalidades, R3a é -N(RC)C(O)RA (por exemplo, NHC(O)CH3).
[00553] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 heteroalquila (por exemplo, CH2NHC(O)CH2-fenil-t-butil). Em algumas modalidades, n é 0 ou 1. Em algumas modalidades, n é 0. Em algumas modalidades, n é 1.
[00554] O composto pode compreender um ou mais centros quirais ou se apresentar como um ou mais estereoisômeros. Em algumas modalidades, o composto compreende um único centro quiral e é uma mistura de estereoisômeros, por exemplo, um estereoisômero R e um estereoisômero S. Em algumas modalidades, a mistura compreende uma razão entre estereoisômeros R e estereoisômeros S, for por exemplo, uma razão de cerca de 1:1 entre estereoisômeros R e estereoisômeros S (ou seja, uma mistura racêmica). Em algumas modalidades, a mistura compreende uma razão entre estereoisômeros R e estereoisômeros S de cerca de 51:49, cerca de 52: 48, cerca de 53:47, cerca de 54:46, cerca de 55:45, cerca de 60:40, cerca de 65:35, cerca de 70:30, cerca de 75:25, cerca de 80:20, cerca de 85:15, cerca de 90:10, cerca de 95:5, ou cerca de 99:1. Em algumas modalidades, a mistura compreende uma razão entre estereoisômeros S e estereoisômeros R de cerca de 51:49, cerca de 52: 48, cerca de 53:47, cerca de 54:46, cerca de 55:45, cerca de 60:40, cerca de 65:35, cerca de 70:30, cerca de 75:25, cerca de 80:20, cerca de 85:15, cerca de 90:10, cerca de 95:5, ou cerca de 99:1. Em algumas modalidades, o composto é um único estereoisômero de Fórmula (I) ou Fórmula (I-a), por exemplo, um único estereoisômero R ou um único estereoisômero S. Inibidores da quinase
[00555] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor da quinase. Em uma modalidade, o inibidor de quinase é um inibidor de CDK4, por exemplo, um inibidor de CDK4 aqui descrito, por exemplo, um inibidor de CDK4/6, como, por exemplo, cloridrato de 6- Acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H- pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (também referido como palbociclibe ou PD0332991). Em uma modalidade, o inibidor de quinases é um inibidor de BTK, por exemplo, um inibidor de BTK aqui descrito, tal como, por exemplo, ibrutinibe. Em uma modalidade, o inibidor de cinases é um inibidor de mTOR, por exemplo, um inibidor de mTOR aqui descrito, tal como, por exemplo, rapamicina, um análogo de rapamicina, OSI-027. O inibidor de mTOR pode ser, por exemplo, um inibidor de mTORC1 e/ou um inibidor de mTORC2, por exemplo, um inibidor de mTORC1 e/ou inibidor de mTORC2 aqui descrito. Em uma modalidade, o inibidor de cinases é um inibidor de MNK, por exemplo, um inibidor de MNK aqui descrito, tal como, por exemplo, 4-amino-5-(4-fluoroanilino)-pirazolo [3,4- d] pirimidina. O inibidor de MNK pode ser, por exemplo, um inibidor de MNK1a, MNK1b, MNK2a e/ou MNK2b. Em uma modalidade, o inibidor de cinases é um inibidor de PI3K/mTOR duplo aqui descrito, tal como, por exemplo, PF-04695102. Em uma modalidade, o inibidor de quinase é um inibidor de DGK, por exemplo, um inibidor de DGK descrito no presente documento, tal como, por exemplo, DGKinh1 (D5919) ou DGKinh2 (D5794).
[00556] Em uma modalidade, o inibidor de cinases é um inibidor de BTK selecionado de ibrutinibe (PCI-32765); GDC-0834; RN-486; CGI- 560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; e LFM-A13. Em uma modalidade preferencial, o inibidor de BTK não reduz nem inibe a atividade de cinase de cinase induzível por interleucina-2 (ITK), e é selecionado de GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC- 292; ONO-4059; CNX-774; e LFM-A13.
[00557] Em uma modalidade, o inibidor da quinase é um inibidor de BTK, por exemplo, ibrutinibe (PCI-32765). Em modalidades, uma célula expressando CAR descrita aqui é administrada a um indivíduo em combinação com um inibidor de BTK (por exemplo, ibrutinibe). Em modalidades, uma célula expressando CAR descrita aqui é administrada a um indivíduo em combinação com ibrutinibe (também denominado PCI- 32765). A estrutura do ibrutinibe (1-[(3R)-3-[4-Amino-3-(4-fenoxifenil)-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]piperidin-1-il]prop-2-en-1-ona) é mostrada abaixo.
[00558] Em modalidades, o indivíduo tem CLL, linfoma de células do manto (MCL) ou linfoma linfocítico de pequenas células (SLL). Por exemplo, o indivíduo tem uma deleção no braço curto do cromossomo 17 (del(17p), por exemplo, em uma célula leucêmica). Em outros exemplos, o indivíduo não tem uma del(17p). Em modalidades, o indivíduo tem CLL ou SLL recidivado, por exemplo, o indivíduo foi previamente administrado com uma terapia contra câncer (por exemplo, previamente administrado com uma, duas, três ou quatro terapias contra câncer anteriores). Em modalidades, o indivíduo tem CLL ou SLL refratário.
Em outras modalidades, o indivíduo tem linfoma folicular, por exemplo, linfoma folicular recidivado ou refratário.
Em algumas modalidades, ibrutinibe é administrado a uma dosagem de cerca de 300-600 mg/dia (por exemplo, cerca de 300-350, 350-400, 400-450, 450-500, 500-550 ou 550-600 mg/dia, por exemplo, cerca de 420 mg/dia ou cerca de 560 mg/dia), por exemplo, oralmente.
Em modalidades, o ibrutinibe é administrado a uma dose de cerca de 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 420 mg, 440 mg, 460 mg, 480 mg, 500 mg, 520 mg, 540 mg, 560 mg, 580 mg, 600 mg (por exemplo, 250 mg, 420 mg ou 560 mg) diariamente durante um período de tempo, por exemplo, diariamente durante um ciclo de 21 dias, ou diariamente durante um ciclo de 28 dias.
Em uma modalidade, são administrados 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou mais ciclos de ibrutinibe.
Em algumas modalidades, ibrutinibe é administrado em combinação com rituximabe.
Ver, por exemplo, Burger et al. (2013) Ibrutinib In Combination With Rituximab (iR) Is Well Tolerated and Induces a High Rate Of Durable Remissions In Patients With High-Risk Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL): New, Updated Results Of a Phase II Trial In 40 Patients, Abstract 675 apresentado na 55ª ASH Annual Meeting and Exposition, Nova Orleans, LA 7-10 de dezembro.
Sem estar limitado pela teoria, acredita-se que a adição de ibrutinib potencializa a resposta proliferativa de células T e pode deslocar células T de um fenótipo adjuvante T 2 (Th2) para adjuvante T 1 (Th1). Th1 e Th2 são fenótipos de células T auxiliadoras, com Th1 versus Th2 dirigindo diferentes vias de resposta imunológica.
Um fenótipo Th1 está associado a respostas pró-inflamatórias, por exemplo, para exterminar células, como patógenos/vírus intracelulares ou células cancerígenas, ou perpetuando respostas autoimunes. Um fenótipo Th2 está associado ao acúmulo eosinofílico e respostas anti-inflamatórias. Inibidores de EGFR
[00559] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de Receptor de Fator de Crescimento Epidérmico (EGFR).
[00560] Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR é (R,E)-N-(7- cloro-1-(1-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)azepan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol- 2-il)-2-metilisonicotinamida (Composto A40) ou um composto divulgado na Publicação de PCT Nº WO 2013/184757.
[00561] Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR, (R,E)-N-(7- cloro-1-(1-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)azepan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol- 2-il)-2-metilisonicotinamida (Composto A40) ou um composto divulgado na Publicação de PCT Nº WO 2013/184757, é um inibidor de tirosina quinase irreversível covalente. Em determinadas modalidades, o inibidor de EGFR, (R,E)-N-(7-cloro-1-(1-(4-(dimetilamino) but-2-enoil)azepan-3-il)- 1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metilisonicotinamida (Composto A40) ou um composto divulgado na publicação PCT Nº WO 2013/184757 inibe a ativação de mutações de EGFR (L858R, ex19del). em outras modalidades, o inibidor de EGFR, (R,E)-N-(7-cloro-1-(1-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)azepan- 3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metilisonicotinamida (Composto A40) ou um composto divulgado na Publicação de PCT Nº WO 2013/184757 não inibe, ou substancialmente não inibe, EGFR do tipo selvagem (wt). O composto A40 demonstrou eficácia em pacientes com NSCLC mutante de EGFR. Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR, (R,E)-N-(7-cloro-1-(1-(4- (dimetilamino)but-2-enoil)azepan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2- metilisonicotinamida (Composto A40) ou um composto divulgado na Publicação de PCT Nº WO 2013/184757, é um inibidor de tirosina quinase irreversível covalente também inibe uma ou mais quinases na família de quinases TEC. As quinases de família Tec incluem, por exemplo, ITK, BMX, TEC, RLK e BTK, e são fundamentais na propagação de receptor das células T e na sinalização de receptor de quimioquina (Schwartzberg et al. (2005) Nat. Rev. Immunol. p. 284-95). Por exemplo, o Composto A40 pode inibir ITK com uma IC50 bioquímica de 1,3 nM. ITK é uma enzima fundamental para a sobrevivência de células Th2 e sua inibição resulta em uma mudança no equilíbrio entre células Th2 e Th1.
[00562] Em algumas modalidades, o inibidor de EGFR é escolhido a partir de um ou mais dentre erlotinibe, gefitinibe, cetuximabe, panitumumabe, necitumumabe, PF-00299804, nimotuzumabe ou RO5083945. Inibidores de Receptor de Adenosina A2A
[00563] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um antagonista de receptor de adenosina A2a (A2aR) (por exemplo, um inibidor de via A2aR, por exemplo, um inibidor de adenosina, por exemplo, um inibidor de A2aR ou CD-73). Em algumas modalidades, o antagonista de A2aR é escolhido dentre PBF509 (Palobiofarma/Novartis), CPI444/V81444 (Corvus/Genentech), AZD4635/HTL-1071 (AstraZeneca/Heptares), Vipadenante (Redox/Juno), GBV-2034 (Globavir), AB928 (Arcus Biosciences), Teofilina, Istradefilina (Kyowa Hakko Kogyo), Tozadenante/SYN-115 (Acorda), KW-6356 (Kyowa Hakko Kogyo), ST-4206 (Leadiant Biosciences) ou Preladenante/SCH 420814 (Merck/Schering).
[00564] Em algumas modalidades, o antagonista de A2aR compreende PBF509 ou um composto divulgado na patente US Nº
8.796.284 ou na Publicação de Pedido Internacional nº WO 2017/025918,
incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00565] Em algumas modalidades, o antagonista de A2aR compreende um composto de fórmula (I): em que R1 representa um anel heteroarila com cinco membros selecionado dentre o grupo que consiste em um anel pirazol, tiazol, e triazol opcionalmente substituído por um ou dois átomos de halogênio ou por um ou dois grupos metila; R2 representa um átomo de hidrogênio; R3 representa um átomo de bromo ou cloro; R4 representa independentemente: um grupo heteroarila com cinco membros substituído por um ou mais átomos de halogênio ou por um ou mais grupos selecionados dentre o grupo que consiste em alquila, cicloalquila, alcóxi, alquiltio, amino, mono ou dialquilamino um grupo —N(R5)(R6) em que R5 e R6 representam independentemente: um átomo de hidrogênio; um grupo alquila ou cicloalquila de 3 a 6 átomos de carbono, linear ou ramificado, opcionalmente substituído por um ou mais átomos de halogênio ou por um ou mais grupos selecionados dentre o grupo que consiste em cicloalquila (3 a 8 átomos de carbono), hidróxi, alcóxi, amino, mono e dialquilamino (1 a 8 átomos de carbono);
ou R5 e R6 formam juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual os mesmos são ligados um grupo heterocíclico saturado de 4 a 6 membros em que um heteroátomo adicional pode ser inserido, que é opcionalmente substituído por um ou mais átomos de halogênio ou por um ou mais grupos alquila (1 a 8 átomos de carbono), hidróxi, alcóxi inferior, amino, mono ou dialquilamino, ou
[00566] c) um grupo —OR7 ou —SR7, em que R7 representa independentemente: um grupo alquila (1 a 8 átomos de carbono) ou cicloalquila (3 a 8 átomos de carbono), linear ou ramificado, opcionalmente substituído por um ou mais átomos de halogênio ou por um ou mais grupos selecionados dentre o grupo que consiste em alquila (1 a 8 átomos de carbono), alcóxi (1 a 8 átomos de carbono), amino, mono e dialquilamino (1 a 8 átomos de carbono); ou
[00567] Um anel fenila opcionalmente substituído por um ou mais átomos de halogênio.
[00568] Em determinadas modalidades, o antagonista de A2aR compreende 5-bromo-2,6-di-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-amina.
[00569] Em determinadas modalidades, o antagonista de A2AR é CPI444/V81444. CPI-444 e outros antagonistas de A2aR são divulgados na Publicação de Pedido Internacional Nº WO 2009/156737, incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em certas modalidades, o antagonista de A2aR é (S)-7-(5-metilfuran-2-il)-3- ((6-(((tetra-hidrofuran-3-il)óxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5- d]pirimidin-5-amina. Em certas modalidades, o antagonista de A2aR é (R)-7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3-il)óxi)metil)piridin-2- il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina ou racemato do mesmo. Em certas modalidades, o antagonista de A2aR é 7-(5-metilfuran-2-il)-3-
((6-(((tetra-hidrofuran-3-il)óxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5- d]pirimidin-5-amina.
[00570] Em certas modalidades, o antagonista de A2aR é AZD4635/HTL-1071. Os antagonistas de A2aR são divulgados na Publicação de Pedido Internacional Nº WO 2011/095625, incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em certas modalidades, o antagonista de A2aR é 6-(2-cloro-6-metilpiridin-4-il)-5-(4- fluorofenil)-1,2,4-triazin-3-amina.
[00571] Em certas modalidades, a antagonista de A2aR é ST-4206 (Leadiant Biosciences). Em determinadas modalidades, o antagonista de A2aR é um antagonista de A2aR descrito na Patente U.S. No 9.133.197, incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00572] Em determinadas modalidades, o antagonista de A2AR é um antagonista de A2aR descrito na Patente US Nos 8.114.845 e 9.029.393, Publicação de Pedido US Nos 2017/0015758 e 2016/0129108, incorporadas no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00573] Em algumas modalidades, o antagonista de A2aR é istradefilina (Número de Registro CAS: 155270-99-8). Istradefilina também é conhecida como KW-6002 ou 8-[(E)-2-(3,4-dimetoxifenil)vinil]- 1,3-dietil-7-metil-3,7-di-hidro-1H-purina-2,6-diona. Istradefilina é divulgada, por exemplo, em LeWitt et al. (2008) Annals of Neurology 63 (3): 295 a 302).
[00574] Em algumas modalidades, o antagonista de A2aR é tozadenante (Biotie). O Tozadenante também é conhecido como SYN115 ou 4-hidróxi-N-(4-metóxi-7-morfolin-4-il-1,3-benzotiazol-2-il)-4- metilpiperidina-1-carboxamida. O Tozadenante bloqueia o efeito de adenosina endógena nos receptores de A2a, resultando na potenciação do efeito de dopamina no receptor de D2 e inibição do efeito de glutamato no receptor de mGluR5. Em algumas modalidades, o antagonista de A2aR é preladenante (Número de Registro do CAS: 377727-87-2). O Preladenante também é conhecido como SCH 420814 ou 2-(2-Furanil)-7- [2-[4-[4-(2-metoxietóxi)fenil]-1-piperazinil]etil]7H-pirazolo[4,3- e][1,2,4]triazolo[1,5-c]pirimidina-5-amina. O Preladenante foi desenvolvido como um fármaco que atuou como um antagonista potente e seletivo no receptor de A2A de adenosina.
[00575] Em algumas modalidades, o antagonista de A2aR é vipadenano. O Vipadenano também é conhecido como BIIB014, V2006 ou 3-[(4-amino-3-metilfenil)metil]-7-(furan-2-il)triazolo[4,5-d]pirimidin-5- amina.
[00576] Outros antagonistas de A2aR exemplificativos incluem, por exemplo, ATL-444, MSX-3, SCH-58261, SCH-412,348, SCH-442,416, VER-6623, VER-6947, VER-7835, CGS-15943 ou ZM-241,385. Inibidores de IDO/TDO
[00577] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de indolamina 2,3-dioxigenase (IDO) e/ou triptofano 2,3- dioxigenase (TDO). Em algumas modalidades, o inibidor de IDO é escolhido dentre (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]-1,2,5- oxadiazol-3-amina (também conhecida como epacadostat ou INCB24360), indoximode (NLG8189), (1-metil-D-triptofano), α-ciclo-hexil- 5H-Imidazo[5,1-a]isoindol-5-etanol (também conhecido como NLG919), indoximode, BMS-986205 (anteriormente F001287).
[00578] Em algumas modalidades, o inibidor de IDO/TDO é indoximode (New Link Genetics). O Indoximode, o D isômero de 1-metil-
triptofano, é um inibidor de trajetória de indolamina 2,3-dioxigenase (IDO) de molécula pequena administrado de modo oral que perturba os mecanismos através dos quais os tumores escapam da destruição imunomediada.
[00579] Em algumas modalidades, o inibidor de IDO/TDO é NLG919 (New Link Genetics). NLG919 é um inibidor de trajetória potente de IDO (indolamina-(2,3)-dioxigenase) com Ki/EC50 de 7 nM/75 nM em ensaios livres de célula.
[00580] Em algumas modalidades, o inibidor de IDO/TDO é epacadostate (Número de Registro do CAS: 1204669-58-8). O Epacadostate também é conhecido como INCB24360 ou INCB024360 (Incyte). O Epacadostate é um inibidor de indolamina 2,3-dioxigenase (IDO1) potente e seletivo com IC50 de 10 nM, altamente seletivo em relação a outras enzimas relacionadas como IDO2 ou triptofano 2,3- dioxigenase (TDO).
[00581] Em algumas modalidades, o inibidor de IDO/TDO é F001287 (Flexus/BMS). F001287 é um inibidor de indolamina 2,3-dioxigenase 1 (IDO1) de molécula pequena. CAR CD19
[00582] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com uma terapia com células que expressam CAR de CD19.
[00583] Em uma modalidade, o domínio de ligação ao antígeno do CAR de CD19 tem uma especificidade de ligação idêntica ou semelhante ao fragmento FMC63 scFv descrito em Nicholson et al. Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997). Em uma modalidade, o domínio de ligação ao antígeno do CAR de CD19 inclui o fragmento scFv descrito em Nicholson et al. Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997).
[00584] Em algumas modalidades, o CAR de CD19 inclui um domínio de ligação ao antígeno (por exemplo, um domínio de ligação ao antígeno humanizado) de acordo com a Tabela 3 do documento no WO2014/153270, incorporado ao presente documento a título de referência. A WO2014/153270 também descreve métodos de avaliar a ligação e eficácia de vários construtos CAR.
[00585] Em um aspecto, a sequência scFv murina parental é o construto de CAR19 fornecido na Publicação PCT WO2012/079000 (incorporada no presente documento a título de referência). Em uma modalidade, o domínio de ligação anti-CD19 é um scFv descrito no documento no documento no WO2012/079000.
[00586] Em uma modalidade, a molécula CAR compreende a sequência de polipeptídeos de fusão fornecida como a SEQ ID Nº: 12 na publicação PCT WO2012/079000, que fornece um fragmento scFv de origem murina que se liga especificamente a CD19 humano.
[00587] Em uma modalidade, o CAR CD19 compreende uma sequência de aminoácidos fornecida como SEQ ID Nº: 12 na publicação PCT WO2012/079000. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos é
[00588] (MALPVTALLLPLALLLHAARP)diqmtqttsslsaslgdrvtiscrasqdisk ylnwyqqkpdgtvklliyhtsrlhsgvpsrfsgsgsgtdysltisnleqediatyfcqqgntlpytfgggtkl eitggggsggggsggggsevklqesgpglvapsqslsvtctvsgvslpdygvswirqpprkglewlg viwgsettyynsalksrltiikdnsksqvflkmnslqtddtaiyycakhyyyggsyamdywgqgtsvtv sstttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgr kkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrree ydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstat kdtydalhmqalppr (SEQ ID Nº: 2029), ou uma sequência substancialmente homóloga à mesma. A sequência opcional do peptídeo de sinalização é mostrada em letras maiúsculas e parênteses.
[00589] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos é:
[00590] Diqmtqttsslsaslgdrvtiscrasqdiskylnwyqqkpdgtvklliyhtsrlhsgvpsrf sgsgsgtdysltisnleqediatyfcqqgntlpytfgggtkleitggggsggggsggggsevklqesgpg lvapsqslsvtctvsgvslpdygvswirqpprkglewlgviwgsettyynsalksrltiikdnsksqvflk mnslqtddtaiyycakhyyyggsyamdywgqgtsvtvsstttpaprpptpaptiasqplslrpeacrp aaggavhtrgldfacdiyiwaplagtcgvlllslvitlyckrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpe eeeggcelrvkfsrsadapaykqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqegly nelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr (SEQ ID Nº: 2030), ou uma sequência substancialmente homóloga à mesma.
[00591] Em uma modalidade, o CAR CD19 tem a designação USAN TISAGENLECLEUCEL-T. Em modalidades, CTL019 é feito por uma modificação de genes de células T mediada por inserção estável via transdução com um vetor lentiviral (LV) deficiente em replicação autoinativador contendo o transgene CTL019 sob o controle do promotor EF-1 alfa. CTL019 pode ser uma mistura de células T positivas e negativas quanto ao transgene que são administradas ao indivíduo com base na percentagem de células T positivas quanto ao transgene.
[00592] Em outras modalidades, o CAR CD19 compreende um domínio de ligação ao antígeno (por exemplo, um domínio de ligação ao antígeno humanizado) de acordo com a Tabela 3 de WO2014/153270, incorporada aqui por referência.
[00593] A humanização de anticorpo CD19 murino pode ser desejada para o cenário clínico, onde os resíduos específicos de camundongo podem induzir uma resposta de antígeno humano-anti-camundongo (HAMA) em pacientes que receberam tratamento CART19, ou seja, tratamento com células T transduzidas com o construto de CAR19. A produção, caracterização e eficácia de sequências de CAR CD19 humanizadas é descrita no Pedido Internacional WO2014/153270 o qual é incorporado aqui por referência na sua totalidade, incluindo os Exemplos 1 a 5 (p. 115-159).
[00594] Em algumas modalidades, construtos CAR CD19 são descritos na publicação PCT Nº WO 2012/079000, incorporada ao presente documento a título de referência, e a sequência de aminoácidos dos construtos murinos CAR CD19 e scFv é mostrada na Tabela 8 abaixo, ou uma sequência substancialmente idêntica a qualquer uma das sequências mencionadas anteriormente (por exemplo, pelo menos 85%, 90%, 95% ou mais idêntica a qualquer uma das sequências descritas no presente documento). Tabela 8. Construtos de CAR CD19 SEQ ID Nº Região CTL019 1300 sequência de aminoácidos completa de CTL019 1301 sequência de nucleotídeos completa de CTL019 1302 Domínio scFv CTL019 mCAR1 1303 scFv mCAR1 1304 sequência de aminoácidos completa de mCAR1 mCAR2 1305 scFv mCAR2 1306 sequência de aminoácidos de mCAR2 1307 sequência de aminoácidos completa de mCAR2 mCAR3 1308 scFv mCAR3 1309 sequência de aminoácidos completa de mCAR3 SSJ25-C1
SEQ ID Nº Região
1310 Sequência de VH SSJ25-C1
1311 VL SSJ25-C1
CAR1 Humanizado
1312 Domínio scFv CAR1
1313 CAR 1 – Completo - aa
CAR2 Humanizado
1314 Domínio scFv CAR2 - aa (o ligante está sublinhado)
1315 Domínio scFv CAR2 - nt
1316 CAR 2 - Completo - aa
1317 CAR 2 - Completo - nt
1318 CAR2 - scFv solúvel - aa
CAR3 Humanizado
1319 Domínio scFv CAR3
1320 CAR 3 – Completo – aa
CAR4 Humanizado
1321 Domínio scFv CAR4
1322 CAR 4 – Completo - aa
CAR5 Humanizado
1323 Domínio scFv CAR5
1324 CAR 5 – Completo - aa
CAR6 Humanizado
1325 Domínio scFv CAR6
1326 CAR6 –Completo – aa
CAR7 Humanizado
1327 Domínio scFv CAR7
SEQ ID Nº Região
1328 CAR 7 Completo - aa
CAR8 Humanizado
1329 Domínio scFv CAR8
1330 CAR 8 – Completo - aa
CAR9 Humanizado
1331 Domínio scFv CAR9
1332 CAR 9 – Completo - aa
CAR10 Humanizado
1333 Domínio scFv CAR10
1334 CAR 10 Completo - aa
CAR11 Humanizado
1335 Domínio scFv CAR11
1336 CAR 11 Completo - aa
CAR12 Humanizado
1337 Domínio scFv CAR12
1338 CAR 12 – Completo - aa
CART19 murino
1339 HCDR1 (Kabat)
1340 HCDR2 (Kabat)
1341 HCDR3 (Kabat)
1342 LCDR1 (Kabat)
1343 LCDR2 (Kabat)
1344 LCDR3 (Kabat)
CART19 a humanizado
1345 HCDR1 (Kabat)
SEQ ID Nº Região 1346 HCDR2 (Kabat) 1347 HCDR3 (Kabat) 1348 LCDR1 (Kabat) 1349 LCDR2 (Kabat) 1350 LCDR3 (Kabat) CART19 b humanizado 1351 HCDR1 (Kabat) 1352 HCDR2 (Kabat) 1353 HCDR3 (Kabat) 1354 LCDR1 (Kabat) 1355 LCDR2 (Kabat) 1356 LCDR3 (Kabat) CART19 c humanizado 1357 HCDR1 (Kabat) 1358 HCDR2 (Kabat) 1359 HCDR3 (Kabat) 1360 LCDR1 (Kabat) 1361 LCDR2 (Kabat) 1362 LCDR3 (Kabat)
[00595] Os construtos CAR CD19 contendo domínios scFv anti-CD19 humanizados são descritos na publicação PCT Nº WO 2014/153270, incorporada ao presente documento a título de referência.
[00596] As sequências de sequências CDR murinas e humanizadas dos domínios scFv anti-CD19 são mostradas na Tabela 9 para os domínios variáveis de cadeia pesada e na Tabela 10 para os domínios variáveis de cadeia leve. As SEQ ID Nºs referem-se àquelas encontradas na Tabela 8. Tabela 9. SEQ ID Nºs CDR (Kabat) de Domínio Variável de Cadeia Pesada de Anticorpo de CD19 Candidato HCDR1 HCDR2 HCDR3 murine_CART19 SEQ ID Nº: 1339 SEQ ID Nº: 1340 SEQ ID Nº: 1341 humanized_CART19 a SEQ ID Nº: 1345 SEQ ID Nº: 1346 SEQ ID Nº: 1347 humanized_CART19 b SEQ ID Nº: 1351 SEQ ID Nº: 1352 SEQ ID Nº: 1353 humanized_CART19 c SEQ ID Nº: 1357 SEQ ID Nº: 1358 SEQ ID Nº: 1359 Tabela 10. SEQ ID Nºs CDR (Kabat) de Domínio Variável de Cadeia Leve de Anticorpo de CD19 Candidato LCDR1 LCDR2 LCDR3 murine_CART19 SEQ ID Nº: 1342 SEQ ID Nº: 1343 SEQ ID Nº: 1344 humanized_CART19 a SEQ ID Nº: 1348 SEQ ID Nº: 1349 SEQ ID Nº: 1350 humanized_CART19 b SEQ ID Nº: 1354 SEQ ID Nº: 1355 SEQ ID Nº: 1356 humanized_CART19 c SEQ ID Nº: 1360 SEQ ID Nº: 1361 SEQ ID Nº: 1362
[00597] Qualquer CAR CD19 conhecido, por exemplo, o domínio de ligação ao antígeno CD19 de qualquer CAR CD19 conhecido, na técnica pode ser usado de acordo com a presente divulgação. Por exemplo, LG- 740; CAR CD19 descrito na Patente No US 8.399.645; Patente No US
7.446.190; Xu et al., Leuk Lymphoma. 2013 54(2):255 a 260(2012); Cruz et al., Blood 122(17):2.965 a 2.973 (2013); Brentjens et al., Blood, 118(18):4.817 a 4.828 (2011); Kochenderfer et al., Blood 116(20):4.099 a
4.102 (2010); Kochenderfer et al., Blood 122 (25):4.129 a 4.139(2013); e
16th Annu Meet Am Soc Gen Cell Ther (ASGCT) (15 a 18 de maio, Salt Lake City) 2013, Abst 10.
[00598] Os CARs CD19 exemplificativos incluem CARs CD19 descritos no presente documento, por exemplo, em uma ou mais tabelas descritas no presente documento, ou um CAR anti-CD19 descrito em Xu et al. Blood 123.24(2014):3750-9; Kochenderfer et al. Blood
122.25(2013):4129-39, Cruz et al. Blood 122.17(2013):2965-73, NCT00586391, NCT01087294, NCT02456350, NCT00840853, NCT02659943, NCT02650999, NCT02640209, NCT01747486, NCT02546739, NCT02656147, NCT02772198, NCT00709033, NCT02081937, NCT00924326, NCT02735083, NCT02794246, NCT02746952, NCT01593696, NCT02134262, NCT01853631, NCT02443831, NCT02277522, NCT02348216, NCT02614066, NCT02030834, NCT02624258, NCT02625480, NCT02030847, NCT02644655, NCT02349698, NCT02813837, NCT02050347, NCT01683279, NCT02529813, NCT02537977, NCT02799550, NCT02672501, NCT02819583, NCT02028455, NCT01840566, NCT01318317, NCT01864889, NCT02706405, NCT01475058, NCT01430390, NCT02146924, NCT02051257, NCT02431988, NCT01815749, NCT02153580, NCT01865617, NCT02208362, NCT02685670, NCT02535364, NCT02631044, NCT02728882, NCT02735291, NCT01860937, NCT02822326, NCT02737085, NCT02465983, NCT02132624, NCT02782351, NCT01493453, NCT02652910, NCT02247609, NCT01029366, NCT01626495, NCT02721407, NCT01044069, NCT00422383, NCT01680991, NCT02794961, ou NCT02456207, cada um dos quais está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.
CAR CD20
[00599] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com uma terapia com células que expressam CAR de CD20.
[00600] Em uma modalidade, o CAR de CD20 compreende um ou mais dentre: LC CDR1, LC CDR2, LC CDR3, HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, VH, VL, um scFv, ou sequência de comprimento total de um construto das Tabelas 11, 12, 13, por exemplo, CAR20-1, CAR20-2, CAR20-3, CAR20-4, CAR20-5, CAR20-6, CAR20-7, CAR20-8, CAR20-9, CAR20-10, CAR20-11, CAR20-12, CAR20-13, CAR20-14, CAR20-15, ou CAR20-16, ou uma sequência substancialmente idêntica à mesma (por exemplo, uma sequência que compartilha 80%, 85%, 90% ou 95% de identidade com a mesma). Cada sequência de aminoácidos de CAR de CD20 completa na Tabela 11 inclui uma sequências de peptídeos de sinalização opcional de 21 aminoácidos correspondentes à sequência de aminoácidos: MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEQ ID Nº: 2031). Cada sequência de nucleotídeos de CAR completo na Tabela 11 inclui uma sequência de peptídeos de sinalização de nucleotídeo opcional correspondente aos primeiros 63 nucleotídeos correspondentes à sequência de nucleotídeos:
ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCT CCACGCCGCTCGGCCC (SEQ ID Nº: 2032). Tabela 11. Construtos de CAR CD20 SEQ ID Nº: Região de Ab CD20-C3H2 1363 (Kabat) HCDR1 1364 (Kabat) HCDR2 1365 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: Região de Ab
1366 (Chothia) HCDR1
1367 (Chothia) HCDR2
1368 (Chothia) HCDR3
1369 (IMGT) HCDR1
1370 (IMGT) HCDR2
1371 (IMGT) HCDR3
1372 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1373 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1374 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1375 VH
1376 VH de DNA
1377 (Kabat) LCDR1
1378 (Kabat) LCDR2
1379 (Kabat) LCDR3
1380 (Chothia) LCDR1
1381 (Chothia) LCDR2
1382 (Chothia) LCDR3
1383 (IMGT) LCDR1
1384 (IMGT) LCDR2
1385 (IMGT) LCDR3
1386 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1387 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1388 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1389 VL
1390 VL de DNA
SEQ ID Nº: Região de Ab
1391 Ligante
1392 scFv (VH-ligante-VL)
1393 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1394 sequência de aminoácidos de CAR completa
1395 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C5H1
1396 (Kabat) HCDR1
1397 (Kabat) HCDR2
1398 (Kabat) HCDR3
1399 (Chothia) HCDR1
1400 (Chothia) HCDR2
1401 (Chothia) HCDR3
1402 (IMGT) HCDR1
1403 (IMGT) HCDR2
1404 (IMGT) HCDR3
1405 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1406 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1407 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1408 VH
1409 VH de DNA
1410 (Kabat) LCDR1
1411 (Kabat) LCDR2
1412 (Kabat) LCDR3
1413 (Chothia) LCDR1
1414 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: Região de Ab
1415 (Chothia) LCDR3
1416 (IMGT) LCDR1
1417 (IMGT) LCDR2
1418 (IMGT) LCDR3
1419 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1420 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1421 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1422 VL
1423 VL de DNA
1424 Ligante
1425 scFv (VH-ligante-VL)
1426 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1427 sequência de aminoácidos de CAR completa
1428 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C2H1
1429 (Kabat) HCDR1
1430 (Kabat) HCDR2
1431 (Kabat) HCDR3
1432 (Chothia) HCDR1
1433 (Chothia) HCDR2
1434 (Chothia) HCDR3
1435 (IMGT) HCDR1
1436 (IMGT) HCDR2
1437 (IMGT) HCDR3
1438 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
SEQ ID Nº: Região de Ab
1439 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1440 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1441 VH
1442 VH de DNA
1443 (Kabat) LCDR1
1444 (Kabat) LCDR2
1445 (Kabat) LCDR3
1446 (Chothia) LCDR1
1447 (Chothia) LCDR2
1448 (Chothia) LCDR3
1449 (IMGT) LCDR1
1450 (IMGT) LCDR2
1451 (IMGT) LCDR3
1452 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1453 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1454 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1455 VL
1456 VL de DNA
1457 Ligante
1458 scFv (VH-ligante-VL)
1459 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1460 sequência de aminoácidos de CAR completa
1461 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C2H2
1462 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: Região de Ab
1463 (Kabat) HCDR2
1464 (Kabat) HCDR3
1465 (Chothia) HCDR1
1466 (Chothia) HCDR2
1467 (Chothia) HCDR3
1468 (IMGT) HCDR1
1469 (IMGT) HCDR2
1470 (IMGT) HCDR3
1471 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1472 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1473 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1474 VH
1475 VH de DNA
1476 (Kabat) LCDR1
1477 (Kabat) LCDR2
1478 (Kabat) LCDR3
1479 (Chothia) LCDR1
1480 (Chothia) LCDR2
1481 (Chothia) LCDR3
1482 (IMGT) LCDR1
1483 (IMGT) LCDR2
1484 (IMGT) LCDR3
1485 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1486 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1487 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
SEQ ID Nº: Região de Ab
1488 VL
1489 VL de DNA
1490 Ligante
1491 scFv (VH-ligante-VL)
1492 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1493 sequência de aminoácidos de CAR completa
1494 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C2H3
1495 (Kabat) HCDR1
1496 (Kabat) HCDR2
1497 (Kabat) HCDR3
1498 (Chothia) HCDR1
1499 (Chothia) HCDR2
1500 (Chothia) HCDR3
1501 (IMGT) HCDR1
1502 (IMGT) HCDR2
1503 (IMGT) HCDR3
1504 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1505 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1506 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1507 VH
1508 VH de DNA
1509 (Kabat) LCDR1
1510 (Kabat) LCDR2
1511 (Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: Região de Ab
1512 (Chothia) LCDR1
1513 (Chothia) LCDR2
1514 (Chothia) LCDR3
1515 (IMGT) LCDR1
1516 (IMGT) LCDR2
1517 (IMGT) LCDR3
1518 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1519 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1520 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1521 VL
1522 VL de DNA
1523 Ligante
1524 scFv (VH-ligante-VL)
1525 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1526 sequência de aminoácidos de CAR completa
1527 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C2H4
1528 (Kabat) HCDR1
1529 (Kabat) HCDR2
1530 (Kabat) HCDR3
1531 (Chothia) HCDR1
1532 (Chothia) HCDR2
1533 (Chothia) HCDR3
1534 (IMGT) HCDR1
1535 (IMGT) HCDR2
SEQ ID Nº: Região de Ab
1536 (IMGT) HCDR3
1537 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1538 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1539 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1540 VH
1541 VH de DNA
1542 (Kabat) LCDR1
1543 (Kabat) LCDR2
1544 (Kabat) LCDR3
1545 (Chothia) LCDR1
1546 (Chothia) LCDR2
1547 (Chothia) LCDR3
1548 (IMGT) LCDR1
1549 (IMGT) LCDR2
1550 (IMGT) LCDR3
1551 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1552 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1553 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1554 VL
1555 VL de DNA
1556 Ligante
1557 scFv (VH-ligante-VL)
1558 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1559 sequência de aminoácidos de CAR completa
1560 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
SEQ ID Nº: Região de Ab
CD20-C3H1
1561 (Kabat) HCDR1
1562 (Kabat) HCDR2
1563 (Kabat) HCDR3
1564 (Chothia) HCDR1
1565 (Chothia) HCDR2
1566 (Chothia) HCDR3
1567 (IMGT) HCDR1
1568 (IMGT) HCDR2
1569 (IMGT) HCDR3
1570 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1571 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1572 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1573 VH
1574 VH de DNA
1575 (Kabat) LCDR1
1576 (Kabat) LCDR2
1577 (Kabat) LCDR3
1578 (Chothia) LCDR1
1579 (Chothia) LCDR2
1580 (Chothia) LCDR3
1581 (IMGT) LCDR1
1582 (IMGT) LCDR2
1583 (IMGT) LCDR3
1584 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
SEQ ID Nº: Região de Ab
1585 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1586 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1587 VL
1588 VL de DNA
1589 Ligante
1590 scFv (VH-ligante-VL)
1591 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1592 sequência de aminoácidos de CAR completa
1593 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C3H3
1594 (Kabat) HCDR1
1595 (Kabat) HCDR2
1596 (Kabat) HCDR3
1597 (Chothia) HCDR1
1598 (Chothia) HCDR2
1599 (Chothia) HCDR3
1600 (IMGT) HCDR1
1601 (IMGT) HCDR2
1602 (IMGT) HCDR3
1603 VH
1604 VH de DNA
1605 (Kabat) LCDR1
1606 (Kabat) LCDR2
1607 (Kabat) LCDR3
1608 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: Região de Ab
1609 (Chothia) LCDR2
1610 (Chothia) LCDR3
1611 (IMGT) LCDR1
1612 (IMGT) LCDR2
1613 (IMGT) LCDR3
1614 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1615 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1616 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1617 VL
1618 VL de DNA
1619 Ligante
1620 scFv (VH-ligante-VL)
1621 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1622 sequência de aminoácidos de CAR completa
1623 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C3H4
1624 (Kabat) HCDR1
1625 (Kabat) HCDR2
1626 (Kabat) HCDR3
1627 (Chothia) HCDR1
1628 (Chothia) HCDR2
1629 (Chothia) HCDR3
1630 (IMGT) HCDR1
1631 (IMGT) HCDR2
1632 (IMGT) HCDR3
SEQ ID Nº: Região de Ab
1633 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1634 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1635 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1636 VH
1637 VH de DNA
1638 (Kabat) LCDR1
1639 (Kabat) LCDR2
1640 (Kabat) LCDR3
1641 (Chothia) LCDR1
1642 (Chothia) LCDR2
1643 (Chothia) LCDR3
1644 (IMGT) LCDR1
1645 (IMGT) LCDR2
1646 (IMGT) LCDR3
1647 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1648 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1649 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1650 VL
1651 VL de DNA
1652 Ligante
1653 scFv (VH-ligante-VL)
1654 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1655 sequência de aminoácidos de CAR completa
1656 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C5H2
SEQ ID Nº: Região de Ab
1657 (Kabat) HCDR1
1658 (Kabat) HCDR2
1659 (Kabat) HCDR3
1660 (Chothia) HCDR1
1661 (Chothia) HCDR2
1662 (Chothia) HCDR3
1663 (IMGT) HCDR1
1664 (IMGT) HCDR2
1665 (IMGT) HCDR3
1666 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1667 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1668 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1669 VH
1670 VH de DNA
1671 (Kabat) LCDR1
1672 (Kabat) LCDR2
1673 (Kabat) LCDR3
1674 (Chothia) LCDR1
1675 (Chothia) LCDR2
1676 (Chothia) LCDR3
1677 (IMGT) LCDR1
1678 (IMGT) LCDR2
1679 (IMGT) LCDR3
1680 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1681 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
SEQ ID Nº: Região de Ab
1682 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1683 VL
1684 VL de DNA
1685 Ligante
1686 scFv (VH-ligante-VL)
1687 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1688 sequência de aminoácidos de CAR completa
1689 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C5H3
1690 (Kabat) HCDR1
1691 (Kabat) HCDR2
1692 (Kabat) HCDR3
1693 (Chothia) HCDR1
1694 (Chothia) HCDR2
1695 (Chothia) HCDR3
1696 (IMGT) HCDR1
1697 (IMGT) HCDR2
1698 (IMGT) HCDR3
1699 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1700 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1701 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1702 VH
1703 VH de DNA
1704 (Kabat) LCDR1
1705 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: Região de Ab
1706 (Kabat) LCDR3
1707 (Chothia) LCDR1
1708 (Chothia) LCDR2
1709 (Chothia) LCDR3
1710 (IMGT) LCDR1
1711 (IMGT) LCDR2
1712 (IMGT) LCDR3
1713 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1714 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1715 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1716 VL
1717 VL de DNA
1718 Ligante
1719 scFv (VH-ligante-VL)
1720 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1721 sequência de aminoácidos de CAR completa
1722 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C5H4
1723 (Kabat) HCDR1
1724 (Kabat) HCDR2
1725 (Kabat) HCDR3
1726 (Chothia) HCDR1
1727 (Chothia) HCDR2
1728 (Chothia) HCDR3
1729 (IMGT) HCDR1
SEQ ID Nº: Região de Ab
1730 (IMGT) HCDR2
1731 (IMGT) HCDR3
1732 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1733 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1734 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1735 VH
1736 VH de DNA
1737 (Kabat) LCDR1
1738 (Kabat) LCDR2
1739 (Kabat) LCDR3
1740 (Chothia) LCDR1
1741 (Chothia) LCDR2
1742 (Chothia) LCDR3
1743 (IMGT) LCDR1
1744 (IMGT) LCDR2
1745 (IMGT) LCDR3
1746 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1747 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1748 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1749 VL
1750 VL de DNA
1751 Ligante
1752 scFv (VH-ligante-VL)
1753 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1754 sequência de aminoácidos de CAR completa
SEQ ID Nº: Região de Ab
1755 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C8H1
1756 (Kabat) HCDR1
1757 (Kabat) HCDR2
1758 (Kabat) HCDR3
1759 (Chothia) HCDR1
1760 (Chothia) HCDR2
1761 (Chothia) HCDR3
1762 (IMGT) HCDR1
1763 (IMGT) HCDR2
1764 (IMGT) HCDR3
1765 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1766 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1767 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1768 VH
1769 VH de DNA
1770 (Kabat) LCDR1
1771 (Kabat) LCDR2
1772 (Kabat) LCDR3
1773 (Chothia) LCDR1
1774 (Chothia) LCDR2
1775 (Chothia) LCDR3
1776 (IMGT) LCDR1
1777 (IMGT) LCDR2
1778 (IMGT) LCDR3
SEQ ID Nº: Região de Ab
1779 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1780 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1781 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1782 VL
1783 VL de DNA
1784 Ligante
1785 scFv (VH-ligante-VL)
1786 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1787 sequência de aminoácidos de CAR completa
1788 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C8H2
1789 (Kabat) HCDR1
1790 (Kabat) HCDR2
1791 (Kabat) HCDR3
1792 (Chothia) HCDR1
1793 (Chothia) HCDR2
1794 (Chothia) HCDR3
1795 (IMGT) HCDR1
1796 (IMGT) HCDR2
1797 (IMGT) HCDR3
1798 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1799 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1800 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1801 VH
1802 VH de DNA
SEQ ID Nº: Região de Ab
1803 (Kabat) LCDR1
1804 (Kabat) LCDR2
1805 (Kabat) LCDR3
1806 (Chothia) LCDR1
1807 (Chothia) LCDR2
1808 (Chothia) LCDR3
1809 (IMGT) LCDR1
1810 (IMGT) LCDR2
1811 (IMGT) LCDR3
1812 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1813 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1814 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1815 VL
1816 VL de DNA
1817 Ligante
1818 scFv (VH-ligante-VL)
1819 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1820 sequência de aminoácidos de CAR completa
1821 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C8H3
1822 (Kabat) HCDR1
1823 (Kabat) HCDR2
1824 (Kabat) HCDR3
1825 (Chothia) HCDR1
1826 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: Região de Ab
1827 (Chothia) HCDR3
1828 (IMGT) HCDR1
1829 (IMGT) HCDR2
1830 (IMGT) HCDR3
1831 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1832 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1833 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1834 VH
1835 VH de DNA
1836 (Kabat) LCDR1
1837 (Kabat) LCDR2
1838 (Kabat) LCDR3
1839 (Chothia) LCDR1
1840 (Chothia) LCDR2
1841 (Chothia) LCDR3
1842 (IMGT) LCDR1
1843 (IMGT) LCDR2
1844 (IMGT) LCDR3
1845 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1846 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1847 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1848 VL
1849 VL de DNA
1850 Ligante
1851 scFv (VH-ligante-VL)
SEQ ID Nº: Região de Ab
1852 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1853 sequência de aminoácidos de CAR completa
1854 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C8H4
1855 (Kabat) HCDR1
1856 (Kabat) HCDR2
1857 (Kabat) HCDR3
1858 (Chothia) HCDR1
1859 (Chothia) HCDR2
1860 (Chothia) HCDR3
1861 (IMGT) HCDR1
1862 (IMGT) HCDR2
1863 (IMGT) HCDR3
1864 (Chothia e Kabat combinados) HCDR1
1865 (Chothia e Kabat combinados) HCDR2
1866 (Chothia e Kabat combinados) HCDR3
1867 VH
1868 VH de DNA
1869 (Kabat) LCDR1
1870 (Kabat) LCDR2
1871 (Kabat) LCDR3
1872 (Chothia) LCDR1
1873 (Chothia) LCDR2
1874 (Chothia) LCDR3
1875 (IMGT) LCDR1
SEQ ID Nº: Região de Ab
1876 (IMGT) LCDR2
1877 (IMGT) LCDR3
1878 (Chothia e Kabat combinados) LCDR1
1879 (Chothia e Kabat combinados) LCDR2
1880 (Chothia e Kabat combinados) LCDR3
1881 VL
1882 VL de DNA
1883 Ligante
1884 scFv (VH-ligante-VL)
1885 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
1886 sequência de aminoácidos de CAR completa
1887 sequência de ácidos nucleicos de CAR completa
CD20-C2
1888 VH
1889 VH de DNA
1890 VL
1891 VL de DNA
CD20-C3
1892 VH
1893 VH de DNA
1894 VL
1895 VL de DNA
CD20-C5
1896 VH
1897 VH de DNA
SEQ ID Nº: Região de Ab
1898 VL
1899 VL de DNA
CD20-C6
1900 VH
1901 VH de DNA
1902 VL
1903 VL de DNA
CD20-C7
1904 VH
1905 VH de DNA
1906 VL
1907 VL de DNA
CD20-C8
1908 VH
1909 VH de DNA
1910 VL
1911 VL de DNA
CD20-3m
1912 VH
1913 VH de DNA
1914 VL
1915 VL de DNA
1916 Ligante
1917 scFv (VH-ligante-VL)
CD20-3J
SEQ ID Nº: Região de Ab
1918 VH
1919 VH de DNA
1920 VL
1921 VL de DNA
1922 Ligante
1923 scFv (VH-ligante-VL)
CD20-3H5k1
1924 VH
1925 VH de DNA
1926 VL
1927 VL de DNA
1928 Ligante
1929 scFv (VH-ligante-VL)
CD20-3H5k3
1930 VH
1931 VH de DNA
1932 VL
1933 VL de DNA
1934 Ligante
1935 scFv (VH-ligante-VL)
CD20-Ofa
1936 (Kabat) HCDR1
1937 (Kabat) HCDR2
1938 (Kabat) HCDR3
1939 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: Região de Ab
1940 (Chothia) HCDR2
1941 (Chothia) HCDR3
1942 (IMGT) HCDR1
1943 (IMGT) HCDR2
1944 (IMGT) HCDR3
1945 VH
1946 VH de DNA
1947 (Kabat) LCDR1
1948 (Kabat) LCDR2
1949 (Kabat) LCDR3
1950 (Chothia) LCDR1
1951 (Chothia) LCDR2
1952 (Chothia) LCDR3
1953 (IMGT) LCDR1
1954 (IMGT) LCDR2
1955 (IMGT) LCDR3
1956 VL
1957 VL de DNA
1958 Ligante
1959 scFv (VH-ligante-VL)
1960 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
CD20-3
1961 VH
1962 VL
1963 Ligante
SEQ ID Nº: Região de Ab 1964 scFv (VH-ligante-VL) CD20-8aBBz 1965 VH 1966 VH de DNA 1967 VL 1968 VL de DNA 1969 Ligante 1970 scFv (VH-ligante-VL) 1971 scFv de DNA (VH-ligante-VL)
[00601] Uma visão geral das identificações de sequências de sequências CDR (Kabat) dos domínios scFv de CD20 da Tabela 11 são mostradas na Tabela 12 para os domínios variáveis de cadeia pesada e na Tabela 13 para os domínios variáveis de cadeia leve. As SEQ ID Nºs referem-se àquelas encontradas na Tabela 11.
Tabela 12. SEQ ID Nºs CDR (Kabat) de Domínio Variável de Cadeia Pesada de moléculas de CAR de CD20
Candidato HCDR1 HCDR2 HCDR3
CD20-C3H2 1363 1364 1365
CD20-C5H1 1396 1397 1398
CD20-C2H1 1429 1430 1431
CD20-C2H2 1462 1463 1464
CD20-C2H3 1495 1496 1497
CD20-C2H4 1528 1529 1530
CD20-C3H1 1561 1562 1563
CD20-C3H3 1594 1595 1596
CD20-C3H4 1624 1625 1626
CD20-C5H2 1657 1658 1659
CD20-C5H3 1690 1691 1692
CD20-C5H4 1723 1724 1725
CD20-C8H1 1756 1757 1758
CD20-C8H2 1789 1790 1791
CD20-C8H3 1822 1823 1824
CD20-C8H4 1855 1856 1857
Tabela 13. SEQ ID Nºs CDR (Kabat) de Domínio Variável de Cadeia Leve de Moléculas de Anticorpo de CD20 Candidato LCDR1 LCDR2 LCDR3 CD20-C3H2 1377 1378 1379 CD20-C5H1 1410 1411 1412 CD20-C2H1 1443 1444 1445 CD20-C2H2 1476 1477 1478 CD20-C2H3 1509 1510 1511 CD20-C2H4 1542 1543 1544 CD20-C3H1 1575 1576 1577 CD20-C3H3 1605 1606 1607 CD20-C3H4 1638 1639 1640 CD20-C5H2 1671 1672 1673 CD20-C5H3 1704 1705 1706 CD20-C5H4 1737 1738 1739 CD20-C8H1 1770 1771 1772 CD20-C8H2 1803 1804 1805 CD20-C8H3 1836 1837 1838 CD20-C8H4 1869 1870 1871 Inibidores de CD20 adicionais
[00602] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de CD20.
[00603] Em uma modalidade, o inibidor de CD20 é um anticorpo anti- CD20 ou fragmento do mesmo. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoespecífico e, em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo biespecífico. Em uma modalidade, o inibidor de CD20 é um anticorpo monoclonal de camundongo/ser humano quimérico, por exemplo, rituximabe. Em uma modalidade, o inibidor de CD20 é um anticorpo monoclonal humano, tal como ofatumumabe. Em uma modalidade, o inibidor de CD20 é um anticorpo humanizado, tal como ocrelizumabe, veltuzumabe, obinutuzumabe, ocaratuzumabe ou PRO131921 (Genentech). Em uma modalidade, o inibidor de CD20 é uma proteína de fusão que compreende uma porção de um anticorpo anti-CD20, tal como TRU-015 (Trubion Pharmaceuticals). CAR CD22
[00604] Em algumas modalidades, a célula que expressa CAR de BCMA é administrada em combinação com uma terapia com células que expressam CAR de CD22 (por exemplo, células que expressam um CAR que se liga a CD22 humano).
[00605] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de CD22 inclui um domínio de ligação ao antígeno de acordo com o documento No WO2016/164731, incorporadas no presente documento a título de referência.
[00606] As sequências de CAR de CD22 são fornecidas abaixo. Em algumas modalidades, o CAR de CD22 é CD22-65. Em algumas modalidades, o CAR de CD22 é CD22-65s. Em algumas modalidades, o CAR de CD22 é CD22-65ss.
[00607] Sequência de scFv de CD22-65 de CAR de CD22 humano
[00608] EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSMLSNSDTWNWIRQ
HPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYY CSSYTSSSTLYVFGTGTQLTVL (SEQ ID Nº: 1972)
[00609] Sequência de scFc de CD22-65s de CAR de CD22 humano (ligante mostrado em itálico e sublinhado)
[00610] EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSMLSNSDTWNWIRQ
DVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLY VFGTGTQLTVL (SEQ ID Nº: 2036)
[00611] Sequência de scFc de CD22-65ss de CAR de CD22 humano
[00612] EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSMLSNSDTWNWIRQ
SGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLYVFGTGT QLTVL (SEQ ID Nº: 1973)
[00613] Região variável de cadeia pesada de CAR CD22 humano
[00614] EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSMLSNSDTWNWIRQ
SPSRGLEWLGRTYHRSTWYDDYASSVRGRVSINVDTSKNQYSLQLNAV TPEDTGVYYCARVRLQDGNSWSDAFDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID Nº: 1974)
[00615] Região variável de cadeia leve de CAR CD22 humano
[00616] QSALTQPASASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQ
HPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYY CSSYTSSSTLYVFGTGTQLTVL (SEQ ID Nº: 1975)
Tabela 14. CDRs de Domínio Variável de Cadeia Pesada de CAR CD22 (CD22-65) Candidato HCDR1 SEQ ID Nº: HCDR2 SEQ ID Nº: HCDR3 SEQ ID Nº: CD22-65 GDSMLSN 1976 RTYHRSTWYDDYASSVRG 1978 VRLQDGNSWSDAFDV 1980 Combinado SDTWN CD22-65 Kabat SNSDTWN 1977 RTYHRSTWYDDYASSVRG 1979 VRLQDGNSWSDAFDV 1981 Tabela 15. CDRs de Domínio Variável de Cadeia Leve de CAR CD22 (CD22-65) As sequências de CDR de LC nesta tabela têm a mesma sequência sob o Kabat ou definições combinadas.
Candidato LCDR1 SEQ ID Nº: LCDR2 SEQ ID Nº: LCDR3 SEQ ID Nº: CD22-65 TGTSSDVGGYNYVS 1982 DVSNRPS 1983 SSYTSSSTLYV 1984 Combinado
[00617] Em algumas modalidades, o domínio de ligação a antígeno compreende uma CDR1 de HC, uma CDR2 de HC e uma CDR3 de HC de quaisquer sequências de aminoácidos de domínio de ligação de cadeia pesada listadas na Tabela 14. Nas modalidades, o domínio de ligação a antígeno compreende ainda uma CDR1 de LC, uma CDR2 de LC e uma CDR3 de LC. Em modalidades, o domínio de ligação a antígeno compreende uma CDR1 de LC, uma CDR2 de LC e uma CDR3 de LC de sequências de aminoácidos listadas na Tabela 15.
[00618] Em algumas modalidades, o domínio de ligação a antígeno compreende uma, duas, ou todas dentre CDR1 de LC, CDR2 de LC e CDR3 de LC de quaisquer sequências de aminoácidos de domínio de ligação de cadeia leve listadas na Tabela 15, e uma, duas ou todas dentre CDR1 de HC, CDR2 de HC e CDR3 de HC de quaisquer sequências de aminoácidos de domínio de ligação de cadeia pesada listadas na Tabela 14.
[00619] Em algumas modalidades, as CDRs são definidas de acordo com o esquema de numeração de Kabat, o esquema de numeração de Chothia ou uma combinação dos mesmos.
[00620] A ordem em que os domínios VL e VH aparecem no scFv pode ser variada (isto é, orientação VL-VH ou VH-VL), e em que qualquer uma, duas, três ou quatro cópias do "G4S" (SEQ ID Nº: 1032), em que cada subunidade compreende a sequência GGGGS (SEQ ID Nº: 1032) (por exemplo, (G4S)3 (SEQ ID Nº: 1040) ou (G4S)4 (SEQ ID Nº: 1039)), pode conectar os domínios variáveis para criar a totalidade do domínio scFv. Alternativamente, o construto de CAR pode incluir, por exemplo, um ligante que inclui a sequência GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID Nº: 1985). Alternativamente, o construto de CAR pode incluir, por exemplo, um ligante que inclui a sequência LAEAAAK (SEQ ID Nº: 2033). Em uma modalidade, o construto de CAR não inclui um ligante entre os domínios de VL e VH.
[00621] Estes clones continham uma alteração de resíduos Q/K no domínio sinal do domínio coestimulador derivado de cadeia CD3zeta. Inibidores de CD22 adicionais
[00622] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de CD20. Em algumas modalidades, o inibidor de CD20 é uma molécula pequena ou uma molécula de anticorpo anti-CD20.
[00623] Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoespecífico, opcionalmente conjugado a um segundo agente como um agente quimioterápico. Por exemplo, em uma modalidade, o anticorpo é um conjugado de anticorpo monoclonal anti-CD22 e MMAE (por exemplo, DCDT2980S). Em uma modalidade, o anticorpo é um scFv de um anticorpo anti-CD22, por exemplo, um scFv de anticorpo RFB4. Esse scFv pode ser fundido a todo ou um fragmento da exotoxina A de Pseudomonas (por exemplo, BL22). Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoclonal anti-CD22 humanizado (por exemplo, epratuzumabe). Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento do mesmo compreende a porção Fv de um anticorpo anti-CD22, que é opcionalmente fundido covalentemente a todo ou um fragmento ou (por exemplo, um fragmento de 38 KDa de) exotoxina A de Pseudomonas (por exemplo, moxetumomabe pasudotox). Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD22 é um anticorpo biespecífico anti-CD19/CD22, opcionalmente conjugado a uma toxina. Por exemplo, em uma modalidade, o anticorpo anti-CD22 compreende uma porção biespecífica anti-CD19/CD22 (por exemplo, dois ligantes scFv, que reconhecem CD19 e CD22 humanos) opcionalmente ligada a toda ou uma porção de toxina de difteria (DT), por exemplo, os primeiros 389 aminoácidos de toxina de difteria (DT), DT 390, por exemplo, uma toxina direcionada a ligante, tal como DT2219ARL). Em outra modalidade, a porção biespecífica (por exemplo, anti-CD19/anti-CD22) está ligada a uma toxina, tal como cadeia de ricina A desglicosilada (por exemplo, Combotox).
[00624] Em algumas modalidades, o inibidor de CD22 é uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, por exemplo, um anticorpo biespecífico que se liga a CD20 e CD3. As moléculas de anticorpo exemplificativas que se ligam a CD20 e CD3 são divulgadas nos documentos WO2016086189 e WO2016182751, incorporados no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo biespecífica que se liga a CD20 e CD3 é XENP13676 como divulgado na Figura 74, SEQ ID NOs: 323, 324 e 325 do documento WO2016086189.
CAR Multiespecífico
[00625] Em algumas modalidades, a molécula de CAR divulgada no presente documento é uma molécula de CAR multiespecífica, por exemplo, biespecífica que compreende uma, duas ou mais especificidades de ligação, por exemplo, uma primeira especificidade de ligação para um primeiro antígeno, por exemplo, um epítopo de célula B, e uma segunda especificidade de ligação para um antígeno igual ou diferente, por exemplo, epítopo de célula B.
[00626] Em uma modalidade, a primeira e a segunda especificidades de ligação são uma molécula de anticorpo, por exemplo, um domínio de ligação a antígeno (por exemplo, um scFv). Dentro de cada molécula de anticorpo (por exemplo, scFv) de uma molécula de CAR biespecífico, a VH pode estar a montante ou a jusante da VL. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de anticorpo (por exemplo, scFv) a montante é disposto com a sua VH (VH1) a montante da sua VL (VL1) e o anticorpo ou fragmento de anticorpo (por exemplo, scFv) a jusante é disposto com a sua VL (VL2) a montante da sua VH (VH2), de modo que a molécula de CAR biespecífica global tenha a disposição VH1-VL1-VL2-VH2 de uma orientação de N-terminal para C-terminal.
[00627] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de anticorpo ou domínio de ligação a antígeno (por exemplo, scFv) a montante é disposto com a sua VL (VL1) a montante da sua VH (VH1) e o anticorpo ou fragmento de anticorpo (por exemplo, scFv) a jusante é disposto com a sua VH (VH2) a montante da sua VL (VL2), de modo que a molécula de CAR biespecífica global tem a disposição VL1-VH1-VH2-VL2, de uma orientação de N-terminal para C-terminal.
[00628] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de anticorpo (por exemplo, scFv) a montante é disposto com a sua VL (VL 1)
a montante da sua VH (VH1) e o anticorpo ou fragmento de anticorpo ou domínio de ligação a antígeno (por exemplo, scFv) a jusante é disposto com a sua VL (VL2) a montante da sua VH (VH2), de modo que a molécula de CAR biespecífica global tem a disposição VL1-VH1-VL2-VH2, de uma orientação de N-terminal para C-terminal.
[00629] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de anticorpo ou domínio de ligação a antígeno (por exemplo, scFv) a montante é disposto com a sua VH (VH1) a montante da sua VL (VL1) e o anticorpo ou fragmento de anticorpo (por exemplo, scFv) a jusante é disposto com a sua VH (VH2) a montante da sua VL (VL2), de modo que a molécula de CAR biespecífica global tem a disposição VH1-VL1-VH2-VL2, de uma orientação de N-terminal para C-terminal.
[00630] Em qualquer uma das configurações supracitadas, opcionalmente, um ligante é disposto entre os dois anticorpos ou fragmentos de anticorpo ou domínios de ligação a antígeno (por exemplo, scFvs), por exemplo, entre VL1 e VL2, se o construto estiver disposto como VH1-VL1-VL2-VH2; entre VH1 e VH2, se o construto estiver disposto como VL1-VH1-VH2-VL2; entre VH1 e VL2, se o construto estiver disposto como VL1-VH1-VL2-VH2; ou entre VL1 e VH2 se o construto estiver disposto como VH1-VL1-VH2-VL2. Em geral, o ligante entre os dois fragmentos de anticorpo ou domínios de ligação a antígeno, por exemplo, scFvs, deve ser longo o suficiente para evitar desemparelhamento entre os domínios dos dois scFvs. O ligante pode ser um ligante conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o ligante é um ligante (Gly4-Ser)n (SEQ ID Nº: 2034), em que n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 1 (SEQ ID Nº: 1032), por exemplo, o ligante tem a sequência de aminoácidos Gly4- Ser (SEQ ID Nº: 1032). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n,
em que n = 3 (SEQ ID Nº: 1040). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 4 (SEQ ID Nº: 1039). Em algumas modalidades, o ligante compreende, por exemplo, consiste em, a sequência de aminoácidos: LAEAAAK (SEQ ID Nº: 2033).
[00631] Em qualquer uma das configurações supracitadas, opcionalmente, um ligante é disposto entre o VL e VH dos primeiros domínios de ligação a antígeno, por exemplo, scFv. Opcionalmente, um ligante está disposto entre o VL e o VH dos segundos domínios de ligação a antígeno, por exemplo, scFv. Em construtos que têm múltiplos ligantes, quaisquer dois ou mais dos ligantes podem ser iguais ou diferentes. Em conformidade, em algumas modalidades, um CAR biespecífico compreende VLs, VHs, e opcionalmente um ou mais ligantes em uma disposição como descrita aqui.
[00632] Em algumas modalidades, cada molécula de anticorpo, por exemplo, cada domínio de ligação a antígeno (por exemplo, cada scFv) compreende um ligante entre as regiões de VH e VL. Em algumas modalidades, o ligante entre as regiões de VH e VL é um ligante (Gly4- Ser)n (SEQ ID Nº: 2034), em que n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 1 (SEQ ID Nº: 1032), por exemplo, o ligante tem a sequência de aminoácidos Gly4-Ser (SEQ ID Nº: 1032). Em outras modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 3 (SEQ ID Nº: 1040). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 4 (SEQ ID Nº: 1039). Em algumas modalidades, as regiões de VH e VL são conectadas sem um ligante.
[00633] Em certas modalidades, a molécula de CAR é uma molécula de CAR biespecífica tendo uma primeira especificidade de ligação para um primeiro epítopo de célula B e uma segunda especificidade de ligação para um antígeno de célula B igual ou diferente. Por exemplo, em algumas modalidades, a molécula CAR biespecífica tem uma primeira especificidade de ligação para BCMA e uma segunda especificidade de ligação para um ou mais dentre BCMA, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b ou CD79a. Em algumas modalidades, a molécula CAR biespecífica tem uma primeira especificidade de ligação para BCMA e uma segunda especificidade de ligação para CD19. Em algumas modalidades, a molécula CAR biespecífica tem uma primeira especificidade de ligação para BCMA e uma segunda especificidade de ligação para CD20. Em algumas modalidades, a molécula CAR biespecífica tem uma primeira especificidade de ligação para BCMA e uma segunda especificidade de ligação para CD22.
[00634] Em uma modalidade, a molécula de CAR é uma molécula de CAR biespecífica que tem uma especificidade de ligação, por exemplo, uma primeira e/ou uma segunda especificidade de ligação, para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22. Em uma modalidade, a especificidade de ligação é configurada com a sua VL (VL1) a montante da sua VH (VH1) e o anticorpo ou fragmento de anticorpo ou domínios de ligação a antígeno (por exemplo, scFv) a jusante é disposto com a sua VL (VL2) a montante da sua VH (VH2), de modo que a molécula de CAR biespecífica global tem a disposição VL1-VH1-VL2-VH2, de uma orientação de N-terminal para C-terminal. Em algumas modalidades, a primeira e/ou a segunda especificidades de ligação, para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22 (por exemplo, primeiro e/ou segundo scFv para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22) compreendem um ligante entre as regiões de VH e VL. Em algumas modalidades, o ligante entre as regiões de VH e VL é um ligante (Gly4-Ser)n (SEQ ID Nº: 2034), em que n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 1 (SEQ ID Nº: 1032), por exemplo, o ligante tem a sequência de aminoácidos Gly4-Ser (SEQ ID Nº: 1032). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 3 (SEQ ID Nº: 1040). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 4 (SEQ ID Nº: 1039). Em algumas modalidades, as regiões de VH e VL são conectadas sem um ligante.
[00635] Em outra modalidade, a especificidade de ligação, por exemplo, uma primeira e/ou uma segunda especificidades de ligação, para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22 é configurada com a sua VL (VL 1) a montante da sua VH (VH1) e o anticorpo ou fragmento de anticorpo ou domínios de ligação a antígeno (por exemplo, scFv) a jusante é disposto com a sua VH (VH2) a montante da sua VL (VL2), de modo que a molécula de CAR biespecífica global tem a disposição VL1-VH1-VH2-VL2, de uma orientação de N-terminal para C-terminal. Em algumas modalidades, a primeira e/ou a segunda especificidades de ligação, para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22 (por exemplo, primeiro e/ou segundo scFv para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22) compreendem um ligante entre as regiões de VH e VL. Em algumas modalidades, o ligante entre as regiões de VH e VL é um ligante (Gly4-Ser)n (SEQ ID Nº: 2034), em que n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, o ligante é (Gly 4-Ser)n, em que n= 1 (SEQ ID Nº: 1032), por exemplo, o ligante tem a sequência de aminoácidos Gly4-Ser (SEQ ID Nº: 1032). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 3 (SEQ ID Nº: 1040). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 4 (SEQ ID Nº: 1039). Em algumas modalidades, as regiões de VH e VL são conectadas sem um ligante.
[00636] Em outra modalidade, a especificidade de ligação, por exemplo, uma primeira e/ou uma segunda especificidades de ligação, para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22 é configurada com a sua VH (VL1) a montante da sua VL (VH1) e o anticorpo ou fragmento de anticorpo ou domínio de ligação a antígeno (por exemplo, scFv) a jusante é disposto com a sua VL (VL2) a montante da sua VH (VH2), de modo que a molécula de CAR biespecífica global tenha a disposição VH1-VL1-VL2- VH2, de uma orientação de N-terminal para C-terminal. Em algumas modalidades, a primeira e/ou a segunda especificidades de ligação, para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22 (por exemplo, primeiro e/ou segundo scFv para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22) compreendem um ligante entre as regiões de VH e VL. Em algumas modalidades, o ligante entre as regiões de VH e VL é um ligante (Gly4-Ser)n (SEQ ID Nº: 2034), em que n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, o ligante é (Gly 4-Ser)n, em que n= 1 (SEQ ID Nº: 1032), por exemplo, o ligante tem a sequência de aminoácidos Gly4-Ser (SEQ ID Nº: 1032). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 3 (SEQ ID Nº: 1040). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 4 (SEQ ID Nº: 1039). Em algumas modalidades, as regiões de VH e VL são conectadas sem um ligante.
[00637] Em outra modalidade, a especificidade de ligação, por exemplo, uma primeira e/ou uma segunda especificidades de ligação, para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22 é configurada com a sua VH (VH1) a montante da sua VL (VL1) e o anticorpo ou fragmento de anticorpo ou domínio de ligação a antígeno (por exemplo, scFv) a jusante é disposto com a sua VH (VH2) a montante da sua VL (VL2), de modo que a molécula de CAR biespecífica global tenha a disposição VH1-VL1-VH2- VL2, de uma orientação de N-terminal para C-terminal. Em algumas modalidades, a primeira e/ou a segunda especificidades de ligação, para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22 (por exemplo, primeiro e/ou segundo scFv para BCMA, CD19, CD20 e/ou CD22) compreendem um ligante entre as regiões de VH e VL. Em algumas modalidades, o ligante entre as regiões de VH e VL é um ligante (Gly4-Ser)n (SEQ ID Nº: 2034), em que n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, o ligante é (Gly 4-Ser)n, em que n= 1 (SEQ ID Nº: 1032), por exemplo, o ligante tem a sequência de aminoácidos Gly4-Ser (SEQ ID Nº: 1032). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 3 (SEQ ID Nº: 1040). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 4 (SEQ ID Nº: 1039). Em algumas modalidades, as regiões de VH e VL são conectadas sem um ligante.
[00638] Em algumas modalidades, a molécula de CAR biespecífica compreende uma primeira especificidade de ligação para BCMA, por exemplo, qualquer uma das especificidades de ligação para BCMA descritas no presente documento, e uma segunda especificidade de ligação para CD19, por exemplo, qualquer uma das especificidades de ligação para CD19 conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a molécula de CAR biespecífica compreende uma primeira especificidade de ligação para BCMA, por exemplo, qualquer uma das especificidades de ligação para BCMA descritas no presente documento, e uma segunda especificidade de ligação para CD20, por exemplo, qualquer uma das especificidades de ligação para CD20 conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a molécula de CAR biespecífica compreende uma primeira especificidade de ligação para BCMA, por exemplo, qualquer uma das especificidades de ligação para BCMA descritas no presente documento, e uma segunda especificidade de ligação para CD22, por exemplo, qualquer uma das especificidades de ligação para CD22 conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, a primeira e a segunda especificidades de ligação estão em uma cadeia de polipeptídeo contígua, por exemplo,
uma cadeia única. Em algumas modalidades, a primeira e a segunda especificidades de ligação, opcionalmente, compreendem um ligante conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o ligante é um ligante (Gly4-Ser)n (SEQ ID Nº: 2034), em que n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 1 (SEQ ID Nº: 1032), por exemplo, o ligante tem a sequência de aminoácidos Gly4-Ser (SEQ ID Nº: 1032). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n = 3 (SEQ ID Nº: 1040). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 4 (SEQ ID Nº: 1039). Em algumas modalidades, o ligante compreende, por exemplo, consiste em, a sequência de aminoácidos: LAEAAAK (SEQ ID Nº: 2033).
[00639] Em algumas modalidades, a molécula de CAR divulgada no presente documento compreende um CAR biespecífico que compreende uma primeira e uma segunda especificidades de ligação, por exemplo, conforme descrito no presente documento (por exemplo, duas moléculas de anticorpo, por exemplo, dois scFvs conforme descrito no presente documento). Em algumas modalidades, o CAR biespecífico compreende duas moléculas de anticorpo, em que a primeira especificidade de ligação, por exemplo, a primeira molécula de anticorpo (por exemplo, o primeiro domínio de ligação a antígeno, por exemplo, o primeiro scFv) está mais próximo do domínio transmembranar, também denominado no presente documento molécula de anticorpo proximal (por exemplo, domínio de ligação a antígeno proximal) e a segunda especificidade de ligação, por exemplo, a segunda molécula de anticorpo (por exemplo, o segundo domínio de ligação a antígeno, por exemplo, o segundo scFv) está adicionalmente afastado da membrana, também denominado no presente documento molécula de anticorpo distal (por exemplo, o domínio de ligação a antígeno distal). Dessa forma, a partir da terminação N até
C, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação distal, por exemplo, uma molécula de anticorpo distal (por exemplo, um domínio de ligação a antígeno distal, por exemplo, um scFv ou scFv2 distal), opcionalmente, um ligante, seguido por uma especificidade de ligação proximal, por exemplo, uma molécula de anticorpo proximal (por exemplo, um domínio de ligação a antígeno proximal, por exemplo, um scFv ou scFv1 proximal), opcionalmente, por meio de um ligante, a um domínio transmembranar e um domínio intracelular, por exemplo, conforme descrito no presente documento.
Em algumas modalidades, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação proximal ou distal para BCMA, por exemplo, uma especificidade de ligação de BCMA conforme descrito no presente documento.
Em uma modalidade, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação proximal para BCMA, por exemplo, uma especificidade de ligação de BCMA conforme descrito no presente documento, e uma especificidade de ligação distal para CD19, por exemplo, uma especificidade de ligação CD19 conforme descrito no presente documento.
Em uma modalidade, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação proximal para BCMA, por exemplo, uma especificidade de ligação de BCMA conforme descrito no presente documento, e uma especificidade de ligação distal para CD20, por exemplo, uma especificidade de ligação CD20 conforme descrito no presente documento.
Em uma modalidade, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação proximal para BCMA, por exemplo, uma especificidade de ligação de BCMA conforme descrito no presente documento, e uma especificidade de ligação distal para CD22, por exemplo, uma especificidade de ligação CD22 conforme descrito no presente documento.
Em uma modalidade, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação distal para BCMA, por exemplo, uma especificidade de ligação de BCMA conforme descrito no presente documento, e uma especificidade de ligação proximal para CD19, por exemplo, uma especificidade de ligação CD19 conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação distal para BCMA, por exemplo, uma especificidade de ligação de BCMA conforme descrito no presente documento, e uma especificidade de ligação proximal para CD20, por exemplo, uma especificidade de ligação CD20 conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação distal para BCMA, por exemplo, uma especificidade de ligação de BCMA conforme descrito no presente documento, e uma especificidade de ligação proximal para CD22, por exemplo, uma especificidade de ligação CD22 conforme descrito no presente documento.
[00640] Em uma modalidade, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação distal à membrana para BCMA, por exemplo, uma especificidade de ligação de VL1-VH1 para BCMA, e uma especificidade de ligação proximal à membrana para CD19, CD20 ou CD22, por exemplo, uma especificidade de ligação VL2-VH2 ou VH2-VL1 para CD19. Em uma modalidade, a primeira e a segunda especificidades de ligação estão em uma cadeia de polipeptídeo contígua, por exemplo, uma cadeia única. Em algumas modalidades, a primeira e a segunda especificidades de ligação, opcionalmente, compreendem um ligante conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o ligante é um ligante (Gly4-Ser)n (SEQ ID Nº: 2034), em que n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 1 (SEQ ID Nº: 1032), por exemplo, o ligante tem a sequência de aminoácidos Gly4-Ser (SEQ ID Nº: 1032). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n = 3 (SEQ ID Nº: 1040). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 4 (SEQ ID Nº: 1039). Em algumas modalidades, o ligante compreende, por exemplo, consiste em, a sequência de aminoácidos: LAEAAAK (SEQ ID Nº: 2033).
[00641] Em uma modalidade, a molécula CAR compreende uma especificidade de ligação proximal à membrana para BCMA, por exemplo, uma especificidade de ligação de VL1-VH1 para BCMA, e uma especificidade de ligação distal à membrana para CD19, CD20 ou CD22, por exemplo, uma especificidade de ligação VL2-VH2 ou VH2-VL1 para CD19, CD20 ou CD22. Em uma modalidade, a primeira e a segunda especificidades de ligação estão em uma cadeia de polipeptídeo contígua, por exemplo, uma cadeia única. Em algumas modalidades, a primeira e a segunda especificidades de ligação, opcionalmente, compreendem um ligante conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o ligante é um ligante (Gly4-Ser)n (SEQ ID Nº: 2034), em que n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 1 (SEQ ID Nº: 1032), por exemplo, o ligante tem a sequência de aminoácidos Gly4-Ser (SEQ ID Nº: 1032). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n = 3 (SEQ ID Nº: 1040). Em algumas modalidades, o ligante é (Gly4-Ser)n, em que n= 4 (SEQ ID Nº: 1039). Em algumas modalidades, o ligante compreende, por exemplo, consiste em, a sequência de aminoácidos: LAEAAAK (SEQ ID Nº: 2033). Inibidor de FCRL2 ou FCRL5
[00642] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de FCRL2 ou FCRL5. Em algumas modalidades, o inibidor de FCRL2 ou FCRL5 é uma molécula de anticorpo anti-FCRL2, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, por exemplo, um anticorpo biespecífico que se liga a FCRL2 e CD3. Em algumas modalidades, o inibidor de FCRL2 ou FCRL5 é uma molécula de anticorpo anti-FCRL5, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífico, por exemplo, um anticorpo biespecífico que se liga a FCRL5 e CD3. Em algumas modalidades, o inibidor de FCRL2 ou FCRL5 é uma célula que expressa CAR de FCRL2. Em algumas modalidades, o inibidor de FCRL2 ou FCRL5 é uma terapia com células que expressam CAR de FCRL5.
[00643] As moléculas de anticorpo anti-FCRL5 exemplificativas são divulgadas nos documentos US20150098900, US20160368985, WO2017096120 (por exemplo, anticorpos ET200-001, ET200-002, ET200-003, ET200-006, ET200-007, ET200-008, ET200-009, ET200-010, ET200-011, ET200-012, ET200-013, ET200-014, ET200-015, ET200-016, ET200-017, ET200-018, ET200-019, ET200-020, ET200-021, ET200-022, ET200-023, ET200-024, ET200-025, ET200-026, ET200-027, ET200-028, ET200-029, ET200-030, ET200-031, ET200-032, ET200-033, ET200-034, ET200-035, ET200-037, ET200-038, ET200-039, ET200-040, ET200-041, ET200-042, ET200-043, ET200-044, ET200-045, ET200-069, ET200-078, ET200-079, ET200-081, ET200-097, ET200-098, ET200-099, ET200-100, ET200-101, ET200-102, ET200-103, ET200-104, ET200-105, ET200-106, ET200-107, ET200-108, ET200-109, ET200-110, ET200-111, ET200-112, ET200-113, ET200-114, ET200-115, ET200-116, ET200-117, ET200-118, ET200-119, ET200-120, ET200-121, ET200-122, ET200-123, ET200-125, ET200-005 e ET200-124 divulgados no documento WO2017096120), incorporados no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00644] As moléculas de CAR de FCRL5 são divulgadas no documento WO2016090337, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.
IL-15 e/ou IL-15Ra
[00645] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com IL-15. Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um complexo de IL15/IL- 15Ra. Em algumas modalidades, o complexo de IL-15/IL-15Ra é escolhido dentre NIZ985 (Novartis), ATL-803 (Altor) ou CYP0150 (Cytune). Complexos de IL-15/IL-15Ra exemplificativos
[00646] Em uma modalidade, o complexo de IL-15/IL-15Ra compreende IL-15 humano complexado com uma forma solúvel de IL- 15Ra humano. O complexo pode compreender IL-15 covalentemente ou não covalentemente ligado a uma forma solúvel de IL-15Ra. Em uma modalidade particular, a IL-15 humana é não covalentemente ligada a uma forma solúvel de IL-15Ra. Em uma modalidade particular, a IL-15 humana da composição compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 1001 na Tabela 16 e a forma solúvel de IL-15Ra humana compreendem sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº:1002 na Tabela 16, conforme descrito no documento No WO 2014/066527, incorporado a título de referência em sua totalidade. As moléculas descritas no presente documento podem ser produzidas por vetores, células hospedeiras e métodos descritos no documento no WO 2007/084342, incorporado a título de referência em sua totalidade.
Tabela 16. Sequências de aminoácidos e nucleotídeos de complexos de IL-15/IL-15Ra exemplificativos NIZ985 SEQ ID IL-15 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSC Nº: 1001 humano KVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILAN
HIVQMFINTS SEQ ID IL-15Ra ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFK Nº: 1002 Solúvel RKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDP Humano ALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPA
YPQG Outros complexos de IL-15/IL-15Ra exemplificativos
[00647] Em uma modalidade, o complexo de IL-15/IL-15Ra é ALT-803, uma proteína de fusão Fc de IL-15/IL-15Ra (complexo solúvel de IL- 15N72D:IL-15RaSu/Fc). ALT-803 é divulgado no documento no WO 2008/143794, incorporado a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a proteína de fusão Fc de IL-15/IL-15Ra compreende as sequências conforme divulgado na Tabela 17.
[00648] Em uma modalidade, o complexo de IL-15/IL-15Ra compreende IL-15 fundida ao domínio sushi de IL-15Ra (CYP0150, Cytune). O domínio sushi de IL-15Ra refere-se a um domínio que começa no primeiro resíduo de cisteína após o peptídeo de sinalização de IL- 15Ra e que termina no quarto resíduo de cisteína após o referido peptídeo de sinalização. O complexo de IL-15 fundido ao domínio sushi de IL-15Ra é divulgado nos documentos WO 2007/04606 e WO 2012/175222, incorporados a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a fusão de domínio sushi de IL-15/IL-15Ra compreende as sequências conforme divulgado na Tabela 17. Tabela 17. Sequências de aminoácidos de outros complexos de IL-15/IL- 15Ra exemplificativos ALT-803 (Altor) SEQ ID Nº: IL-15N72D NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMK 1003 CFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTES
GCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS SEQ ID Nº: IL-15RaSu/ ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTS 1004 Fc SLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIREPKSCDKTHTCPPCP
EALHNHYTQKSLSLSPGK Fusão de domínio sushi de IL-15/IL-15Ra (Cytune) SEQ ID IL-15 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMK Nº:1005 humano CFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTES
GCKECEELEXKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS Em que X é E ou K SEQ ID Domínios ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTS Nº:1006 sushi e de SLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP dobradiça de IL-15Ra humana
Inibidor de PD-1
[00649] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de PD-1. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 é escolhido de PDR001 (Novartis), Nivolumabe (Bristol-Myers Squibb), Pembrolizumabe (Merck & Co), Pidilizumabe (CureTech), MEDI0680 (Medimmune), REGN2810 (Regeneron), TSR-042 (Tesaro), PF- 06801591 (Pfizer), BGB-A317 (Beigene), BGB-108 (Beigene), INCSHR1210 (Incyte) ou AMP-224 (Amplimmune). Inibidores de PD-1 Exemplificativos
[00650] Em uma modalidade, o inibidor de PD-1 é uma molécula de anticorpo anti-PD-1. Em uma modalidade, o inibidor de PD-1 é uma molécula de anticorpo anti-PD-1 como descrita no documento US 2015/0210769, publicado em 30 de julho de 2015, intitulado "Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof,", incorporado por referência na sua totalidade.
[00651] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis regiões determinantes de complementaridade (CDRs) (ou coletivamente todas as CDRs) de uma região variável de cadeia pesada e leve que compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na Tabela 18 (por exemplo, das sequências de região variável de cadeia pesada e leve de BAP049- Clone-E ou BAP049-Clone-B divulgadas na Tabela 18), ou codificada por uma sequência de nucleotídeos mostrada na Tabela 18. Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com a definição de Kabat (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 18). Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com a definição de Chothia (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 18). Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com as definições de CDR combinadas tanto de Kabat quanto de Chothia (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 18). Em uma modalidade, a combinação de CDR de Kabat e Chothia de CDR1 de VH compreende a sequência de aminoácidos GYTFTTYWMH (SEQ ID Nº: 541). Em uma modalidade, uma ou mais das CDRs (ou coletivamente todas as CDRs) têm uma, duas, três, quatro, cinco, seis ou mais alterações, por exemplo, substituições de aminoácidos (por exemplo, substituições de aminoácidos conservativas) ou deleções, em relação a uma sequência de aminoácidos mostrada na Tabela 18, ou codificadas por uma sequência de nucleotídeos mostrada na Tabela 18.
[00652] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos de de VHCDR1 de SEQ ID Nº: 501, uma sequência de aminoácidos de VHCDR2 de SEQ ID Nº: 502; e uma sequência de aminoácidos VHCDR3 de SEQ ID Nº: 503; e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos de VLCDR1 de SEQ ID Nº: 510; uma sequência de aminoácidos VLCDR2 de SEQ ID Nº: 511; e uma sequência de aminoácidos VLCDR3 de SEQ ID Nº: 512, cada uma divulgada na Tabela
18.
[00653] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH que compreende uma VHCDR1 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 524, uma VHCDR2 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 525 e uma VHCDR3 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 526; e uma VL que compreende uma VLCDR1 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 529, uma VLCDR2 codificada pela sequência nucleotídica de
SEQ ID Nº: 530 e uma VLCDR3 codificada pela sequência nucleotídica de SEQ ID Nº: 531, cada uma divulgada na Tabela 18.
[00654] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 506, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 506. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 520, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 520. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 516, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 516. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 506, e uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 520. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 506 e uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 516.
[00655] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 507, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 507. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 521 ou 517, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 521 ou 517. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 507 e uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 521 ou 517.
[00656] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 508, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 508. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 522, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 522. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 518, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 518. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 508, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 522. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 508 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
518.
[00657] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 509, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 509. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 523 ou 519, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 523 ou 519. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 509 e uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 523 ou 519.
[00658] As moléculas de anticorpo descritas no presente documento podem ser produzidas por vetores, células hospedeiras e métodos descritos no documento No US 2015/0210769, incorporado a título de referência em sua totalidade. Tabela 18. Sequências de aminoácidos e nucleotídeos de moléculas de anticorpo anti-PD-1 exemplificativas HC de BAP049-Clone-B SEQ ID Nº: 501 (Kabat) HCDR1 SEQ ID Nº: 502 (Kabat) HCDR2 SEQ ID Nº: 503 (Kabat) HCDR3 SEQ ID Nº: 504 (Chothia) HCDR1 SEQ ID Nº: 505 (Chothia) HCDR2 SEQ ID Nº: 503 (Chothia) HCDR3 SEQ ID Nº: 506 VH SEQ ID Nº: 507 VH de DNA SEQ ID Nº: 508 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 509 Cadeia pesada de DNA LC de BAP049-Clone-B SEQ ID Nº: 510 (Kabat) LCDR1 SEQ ID Nº: 511 (Kabat) LCDR2 SEQ ID Nº: 512 (Kabat) LCDR3 SEQ ID Nº: 513 (Chothia) LCDR1
HC de BAP049-Clone-B
SEQ ID Nº: 514 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 515 (Chothia) LCDR3
SEQ ID Nº: 516 VL
SEQ ID Nº: 517 VL de DNA
SEQ ID Nº: 518 Cadeia leve
SEQ ID Nº: 519 Cadeia leve de DNA
HC de BAP049-Clone-E
SEQ ID Nº: 501 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 502 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 503 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 504 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 505 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 503 (Chothia) HCDR3
SEQ ID Nº: 506 VH
SEQ ID Nº: 507 VH de DNA
SEQ ID Nº: 508 Cadeia pesada
SEQ ID Nº: 509 Cadeia pesada de DNA
LC de BAP049-Clone-E
SEQ ID Nº: 510 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 511 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 512 (Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 513 (Chothia) LCDR1
HC de BAP049-Clone-B
SEQ ID Nº: 514 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 515 (Chothia) LCDR3
SEQ ID Nº: 520 VL
SEQ ID Nº: 521 VL de DNA
SEQ ID Nº: 522 Cadeia leve
SEQ ID Nº: 523 Cadeia leve de DNA
HC de BAP049-Clone-B
SEQ ID Nº: 524 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 525 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 526 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 527 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 528 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 526 (Chothia) HCDR3
LC de BAP049-Clone-B
SEQ ID Nº: 529 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 530 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 531 (Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 532 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: 533 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 534 (Chothia) LCDR3
HC de BAP049-Clone-E
SEQ ID Nº: 524 (Kabat) HCDR1
HC de BAP049-Clone-B SEQ ID Nº: 525 (Kabat) HCDR2 SEQ ID Nº: 526 (Kabat) HCDR3 SEQ ID Nº: 527 (Chothia) HCDR1 SEQ ID Nº: 528 (Chothia) HCDR2 SEQ ID Nº: 526 (Chothia) HCDR3 LC de BAP049-Clone-E SEQ ID Nº: 529 (Kabat) LCDR1 SEQ ID Nº: 530 (Kabat) LCDR2 SEQ ID Nº: 531 (Kabat) LCDR3 SEQ ID Nº: 532 (Chothia) LCDR1 SEQ ID Nº: 533 (Chothia) LCDR2 SEQ ID Nº: 534 (Chothia) LCDR3 Outros Inibidores de PD-1 Exemplificativos
[00659] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é Nivolumabe (Bristol-Myers Squibb), também conhecida como MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558 ou OPDIVO®. Nivolumabe (clone 5C4) e outros anticorpos anti-PD-1 são divulgados em US 8,008,449 e WO 2006/121168, incorporadas por referência na sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de Nivolumabe, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 19.
[00660] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é Pembrolizumabe (Merck & Co), também conhecida como Lambrolizumabe, MK-3475, MK03475, SCH-900475 ou KEYTRUDA®. Pembrolizumabe e outros anticorpos anti-PD-1 são divulgados em Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44, US
8.354.509 e WO 2009/114335, incorporados por referência na sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve, ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de Pembrolizumabe, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 19.
[00661] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é Pidilizumabe (CureTech), também conhecido como CT-011. Pidilizumabe e outros anticorpos anti-PD-1 são divulgados em Rosenblatt, J. et al. (2011) J Immunotherapy 34(5): 409-18, US 7.695.715, US 7.332.582 e US 8.686.119, incorporados por referência na sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve, ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de Pidilizumabe, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 19.
[00662] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é MEDI0680 (Medimmune), também conhecido como AMP-514. MEDI0680 e outros anticorpos anti-PD-1 são divulgados nos documentos US
9.205.148 e WO 2012/145493, incorporados por referência na sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de MEDI0680.
[00663] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é REGN2810 (Regeneron). Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve, ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de REGN2810.
[00664] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é PF- 06801591 (Pfizer). Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD- 1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de PF-06801591.
[00665] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é BGB-A317 ou BGB-108 (Beigene). Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de BGB-A317 ou BGB-108.
[00666] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é INCSHR1210 (Incyte), também conhecido como INCSHR01210 ou SHR-
1210. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de INCSHR1210.
[00667] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é
TSR-042 (Tesaro), também conhecido como ANB011. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de TSR-042.
[00668] Outros anticorpos anti-PD-1 incluem os descritos, por exemplo, nos documentos WO 2015/112800, WO 2016/092419, WO 2015/085847, WO 2014/179664, WO 2014/194302, WO 2014/209804, WO 2015/200119, US 8.735.553, US 7.488.802, US 8.927.697, US
8.993.731 e US 9.102.727, incorporados a título de referência em sua totalidade.
[00669] Em uma modalidade, o anticorpo anti-PD-1 é um anticorpo que compete pela ligação e/ou se liga ao mesmo epítopo em PD-1 que um dos anticorpos anti-PD-1 descritos no presente documento.
[00670] Em uma modalidade, o inibidor de PD-1 é um peptídeo que inibe a trajetória de sinalização de PD-1, por exemplo, como descrito no documento no U.S. 8,907,053, incorporado por referência na sua totalidade. Em uma modalidade, o inibidor de PD-1 é uma imunoadesina (por exemplo, uma imunoadesina que compreende uma porção de ligação extracelular ou PD-1 de PD-L1 ou PD-L2 fundido a uma região constante (por exemplo, uma região de Fc de uma sequência de imunoglobulina)). Em uma modalidade, o inibidor de PD-1 é AMP-224 (B7-DCIg (Amplimmune), por exemplo, divulgado nos documentos WO 2010/027827 e WO 2011/066342, incorporados a título de referência em sua totalidade).
Tabela 19. Sequências de aminoácidos de outras moléculas de anticorpo anti-PD-1 exemplificativas Nivolumabe SEQ ID Nº: 535 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 536 Cadeia leve Pembrolizumabe SEQ ID Nº: 537 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 538 Cadeia leve Pidilizumabe SEQ ID Nº: 539 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 540 Cadeia leve Inibidores de PD-L1
[00671] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de PD-L1. Em algumas modalidades, o inibidor de PD-L1 é escolhido dentre FAZ053 (Novartis), Atezolizumabe (Genentech/Roche), Avelumabe (Merck Serono e Pfizer), Durvalumabe (MedImmune/AstraZeneca) ou BMS-936559 (Bristol- Myers Squibb). Inibidores de PD-L1 Exemplificativos
[00672] Em uma modalidade, o inibidor de PD-L1 é uma molécula de anticorpo anti-PD-L1. Em uma modalidade, o inibidor de PD-L1 é uma molécula de anticorpo anti-PD-L1 conforme divulgado no documento no US 2016/0108123, publicado em 21 de abril de 2016, intitulado "Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof", incorporado a título de referência em sua totalidade.
[00673] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis regiões determinantes de complementaridade (CDRs) (ou coletivamente todas as CDRs) de uma região variável de cadeia pesada e leve que compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na Tabela 20 (por exemplo, das sequências de região variável de cadeia pesada e leve de BAP058- Clone O ou BAP058-Clone N divulgadas na Tabela 20), ou codificada por uma sequência de nucleotídeos mostrada na Tabela 20. Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com a definição de Kabat (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 20). Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com a definição de Chothia (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 20). Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com as definições de CDR combinadas tanto de Kabat quanto de Chothia (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 20). Em uma modalidade, a combinação de CDR de Kabat e Chothia de CDR1 de VH compreende a sequência de aminoácidos GYTFTSYWMY (SEQ ID Nº: 647). Em uma modalidade, uma ou mais das CDRs (ou coletivamente todas as CDRs) têm uma, duas, três, quatro, cinco, seis ou mais alterações, por exemplo, substituições de aminoácidos (por exemplo, substituições de aminoácidos conservativas) ou deleções, em relação a uma sequência de aminoácidos mostrada na Tabela 20, ou codificadas por uma sequência de nucleotídeos mostrada na Tabela 20.
[00674] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos de de VHCDR1 de SEQ ID Nº: 601, uma sequência de aminoácidos de VHCDR2 de SEQ ID Nº: 602; e uma sequência de aminoácidos VHCDR3 de SEQ ID Nº: 603; e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos de VLCDR1 de SEQ ID Nº: 609; uma sequência de aminoácidos VLCDR2 de SEQ ID Nº: 610; e uma sequência de aminoácidos VLCDR3 de SEQ ID Nº: 611, cada uma divulgada na Tabela
20.
[00675] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma VH que compreende uma VHCDR1 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 628, uma VHCDR2 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 629 e uma VHCDR3 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 630; e uma VL que compreende uma VLCDR1 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 633, uma VLCDR2 codificada pela sequência nucleotídica de SEQ ID Nº: 634 e uma VLCDR3 codificada pela sequência nucleotídica de SEQ ID Nº: 635, cada uma divulgada na Tabela 20.
[00676] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 606, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 606. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 616, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 616. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 620, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 620. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
624, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 624. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 606 e uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 616. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 620 e uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 624.
[00677] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 607, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 607. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 617, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 617. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 621, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 621. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 625, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 625. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 607 e uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 617. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 621 e uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 625.
[00678] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 608, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 608. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 618, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 618. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 622, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 622. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 626, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 626. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 608, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 618. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 622 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 626.
[00679] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 615, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 615. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 619, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ
ID Nº: 619. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 623, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 623. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 627, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 627. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 615 e uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 619. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 623 e uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 627.
[00680] As moléculas de anticorpo descritas no presente documento podem ser produzidas por vetores, células hospedeiras e métodos descritos em US 2016/0108123, incorporada por referência em sua totalidade. Tabela 20. Sequências de aminoácidos e nucleotídeos de moléculas de anticorpo anti-PD-L1 exemplificativas HC de BAP058-Clone O SEQ ID Nº: 601 (Kabat) HCDR1 SEQ ID Nº: 602 (Kabat) HCDR2 SEQ ID Nº: 603 (Kabat) HCDR3 SEQ ID Nº: 604 (Chothia) HCDR1 SEQ ID Nº: 605 (Chothia) HCDR2
HC de BAP058-Clone O
SEQ ID Nº: 603 (Chothia) HCDR3
SEQ ID Nº: 606 VH
SEQ ID Nº: 607 VH de DNA
SEQ ID Nº: 608 Cadeia pesada
SEQ ID Nº: 615 Cadeia pesada de DNA
LC de BAP058-Clone O
SEQ ID Nº: 609 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 610 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 611(Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 612 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: 613 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 614 (Chothia) LCDR3
SEQ ID Nº: 616 VL
SEQ ID Nº: 617 VL de DNA
SEQ ID Nº: 618 Cadeia leve
SEQ ID Nº: 619 Cadeia leve de DNA
HC de BAP058-Clone N
SEQ ID Nº: 601 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 602 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 603 (Kabat) HCDR3
HC de BAP058-Clone O
SEQ ID Nº: 604 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 605 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 603 (Chothia) HCDR3
SEQ ID Nº: 620 VH
SEQ ID Nº: 621 VH de DNA
SEQ ID Nº: 622 Cadeia pesada
SEQ ID Nº: 623 Cadeia pesada de DNA
LC de BAP058-Clone N
SEQ ID Nº: 609 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 610 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 611(Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 612 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: 613 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 614 (Chothia) LCDR3
SEQ ID Nº: 624 VL
SEQ ID Nº: 625 VL de DNA
SEQ ID Nº: 626 Cadeia leve
SEQ ID Nº: 627 Cadeia leve de DNA
HC de BAP058-Clone O
SEQ ID Nº: 628 (Kabat) HCDR1
HC de BAP058-Clone O
SEQ ID Nº: 629 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 630 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 631 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 632 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 630 (Chothia) HCDR3
BAP058-Clone O LC
SEQ ID Nº: 633 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 634 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 635 (Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 636 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: 637 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 638 (Chothia) LCDR3
BAP058-Clone N HC
SEQ ID Nº: 628 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 629 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 630 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 631 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 632 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 630 (Chothia) HCDR3
BAP058-Clone N LC
HC de BAP058-Clone O SEQ ID Nº: 633 (Kabat) LCDR1 SEQ ID Nº: 634 (Kabat) LCDR2 SEQ ID Nº: 635 (Kabat) LCDR3 SEQ ID Nº: 636 (Chothia) LCDR1 SEQ ID Nº: 637 (Chothia) LCDR2 SEQ ID Nº: 638 (Chothia) LCDR3 Outros Inibidores de PD-L1 Exemplificativos
[00681] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 é Atezolizumabe (Genentech/Roche), também conhecida como MPDL3280A, RG7446, RO5541267, YW243.55.S70 ou TECENTRIQ™. Atezolizumabe e outros anticorpos anti-PD-L1 são divulgados no documento No US 8.217.149, incorporado a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de Atezolizumabe, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 21.
[00682] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 é Avelumabe (Merck Serono e Pfizer), também conhecida como MSB0010718C. Avelumabe e outros anticorpos anti-PD-L1 são divulgados no documento no WO 2013/079174, incorporado a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de Avelumabe, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 21.
[00683] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 é Durvalumabe (MedImmune/AstraZeneca), também conhecida como MEDI4736. Durvalumabe e outros anticorpos anti-PD-L1 são divulgados no documento no US 8.779.108, incorporado a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de Durvalumabe, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 21.
[00684] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 é BMS-936559 (Bristol-Myers Squibb), também conhecida como MDX-1105 ou 12A4. BMS-936559 e outros anticorpos anti-PD-L1 são divulgados em US 7.943.743 e WO 2015/081158, incorporadas por referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-L1 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de BMS-936559, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 21.
[00685] Os anticorpos anti-PD-L1 adicionalmente conhecidos incluem aqueles descritos, por exemplo, nos documentos WO 2015/181342, WO 2014/100079, WO 2016/000619, WO 2014/022758, WO 2014/055897, WO 2015/061668, WO 2013/079174, WO 2012/145493, WO 2015/112805, WO 2015/109124, WO 2015/195163, U.S. 8.168.179, U.S.
8.552.154, U.S. 8.460.927 e U.S. 9.175.082, incorporados a título de referência em sua totalidade.
[00686] Em uma modalidade, o anticorpo anti-PD-L1 é um anticorpo que compete pela ligação e/ou se liga ao mesmo epítopo em PD-L1 que um dos anticorpos anti-PD-L1 descritos no presente documento. Tabela 21. Sequências de aminoácidos de outras moléculas de anticorpo anti-PD-L1 exemplificativas Atezolizumabe SEQ ID Nº: 639 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 640 Cadeia leve Avelumabe SEQ ID Nº: 641 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 642 Cadeia leve Durvalumabe SEQ ID Nº: 643 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 644 Cadeia leve BMS-936559 SEQ ID Nº: 645 VH SEQ ID Nº: 646 VL Inibidores de LAG-3
[00687] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de LAG-3. Em algumas modalidades, o inibidor de LAG-3 é selecionado dentre LAG525 (Novartis), BMS-986016 (Bristol-Myers Squibb) ou TSR-033 (Tesaro).
Inibidores de LAG-3 Exemplificativos
[00688] Em uma modalidade, o inibidor de LAG-3 é uma molécula de anticorpo anti-LAG-3. Em uma modalidade, o inibidor de LAG-3 é uma molécula de anticorpo anti-LAG-3 conforme divulgado no documento no US 2015/0259420, publicado em quinta-feira, 17 de setembro de 2015, intitulado "Antibody Molecules to LAG-3 and Uses Thereof", incorporado a título de referência em sua totalidade.
[00689] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis regiões determinantes de complementaridade (CDRs) (ou coletivamente todas as CDRs) de uma região variável de cadeia pesada e leve que compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na Tabela 22 (por exemplo, das sequências de região variável de cadeia pesada e leve de BAP050- Clone I ou BAP050-Clone J divulgadas na Tabela 22), ou codificada por uma sequência de nucleotídeos mostrada na Tabela 22. Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com a definição de Kabat (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 22). Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com a definição de Chothia (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 22). Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com as definições de CDR combinadas tanto de Kabat quanto de Chothia (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 22). Em uma modalidade, a combinação de CDR de Kabat e Chothia de CDR1 de VH compreende a sequência de aminoácidos GFTLTNYGMN (SEQ ID Nº: 766). Em uma modalidade, uma ou mais das CDRs (ou coletivamente todas as CDRs) têm uma, duas, três, quatro, cinco, seis ou mais alterações, por exemplo, substituições de aminoácidos (por exemplo, substituições de aminoácidos conservativas) ou deleções, em relação a uma sequência de aminoácidos mostrada na Tabela 22, ou codificadas por uma sequência de nucleotídeos mostrada na Tabela 22.
[00690] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos de de VHCDR1 de SEQ ID Nº: 701, uma sequência de aminoácidos de VHCDR2 de SEQ ID Nº: 702; e uma sequência de aminoácidos VHCDR3 de SEQ ID Nº: 703; e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos de VLCDR1 de SEQ ID Nº: 710; uma sequência de aminoácidos VLCDR2 de SEQ ID Nº: 711; e uma sequência de aminoácidos VLCDR3 de SEQ ID Nº: 712, cada uma divulgada na Tabela
22.
[00691] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma VH que compreende uma VHCDR1 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 736 ou 737, uma VHCDR2 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 738 ou 739, e uma VHCDR3 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 740 ou 741; e uma VL que compreende uma VLCDR1 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 746 ou 747, uma VLCDR2 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 748 ou 749, e uma VLCDR3 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 750 ou 751, cada uma divulgada na Tabela 22. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma VH que compreende uma VHCDR1 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 758 ou 737, uma VHCDR2 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 759 ou 739, e uma VHCDR3 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 760 ou 741; e uma VL que compreende uma VLCDR1 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 746 ou 747, uma VLCDR2 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 748 ou 749, e uma VLCDR3 codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 750 ou 751, cada uma divulgada na Tabela
22.
[00692] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 706, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 706. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 718, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 718. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 724, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 724. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 730, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 730. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 706, e uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 718. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 724 e uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 730.
[00693] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 707 ou 708, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99%
ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 707 ou 708. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 719 ou 720, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 719 ou 720. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 725 ou 726, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 725 ou 726. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 731 ou 732, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 731 ou 732. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 707 ou 708, e uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 719 ou 720. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 725 ou 726, e uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 731 ou 732.
[00694] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 709, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 709. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 721, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 721. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 727, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 727. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 733, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 733. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 709, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 721. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 727 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 733.
[00695] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 716 ou 717, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 716 ou 717. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 722 ou 723, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 722 ou 723. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 728 ou 729, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 728 ou 729. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 734 ou 735, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 734 ou 735. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 716 ou 717 e uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 722 ou 723. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 728 ou 729 e uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 734 ou 735.
[00696] As moléculas de anticorpo descritas no presente documento podem ser produzidas por vetores, células hospedeiras e métodos descritos no documento no US 2015/0259420, incorporado a título de referência em sua totalidade. Tabela 22. Sequências de aminoácidos e nucleotídeos de moléculas de anticorpo anti-LAG-3 exemplificativas HC de BAP050-Clone I SEQ ID Nº: 701 (Kabat) HCDR1 SEQ ID Nº: 702 (Kabat) HCDR2 SEQ ID Nº: 703 (Kabat) HCDR3 SEQ ID Nº: 704 (Chothia) HCDR1 SEQ ID Nº: 705 (Chothia) HCDR2 SEQ ID Nº: 703 (Chothia) HCDR3 SEQ ID Nº:706 VH SEQ ID Nº: 707 VH de DNA SEQ ID Nº: 708 VH de DNA SEQ ID Nº: 709 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 716 Cadeia pesada de DNA
SEQ ID Nº: 717 Cadeia pesada de DNA
LC de BAP050-Clone I
SEQ ID Nº: 710 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 711 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 712 (Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 713 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: 714 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 715 (Chothia) LCDR3
SEQ ID Nº: 718 VL
SEQ ID Nº: 719 VL de DNA
SEQ ID Nº: 720 VL de DNA
SEQ ID Nº: 721 Cadeia leve
SEQ ID Nº: 722 Cadeia leve de DNA
SEQ ID Nº: 723 Cadeia leve de DNA
HC de BAP050-Clone J
SEQ ID Nº: 701 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 702 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 703 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 704 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 705 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 703 (Chothia) HCDR3
SEQ ID Nº: 724 VH
SEQ ID Nº: 725 VH de DNA
SEQ ID Nº: 726 VH de DNA
SEQ ID Nº: 727 Cadeia pesada
SEQ ID Nº: 728 Cadeia pesada de DNA
SEQ ID Nº: 729 Cadeia pesada de DNA
LC de BAP050-Clone J
SEQ ID Nº: 710 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 711 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 712 (Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 713 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: 714 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 715 (Chothia) LCDR3
SEQ ID Nº: 730 VL
SEQ ID Nº: 731 VL de DNA
SEQ ID Nº: 732 VL de DNA
SEQ ID Nº: 733 Cadeia leve
SEQ ID Nº: 734 Cadeia leve de DNA
SEQ ID Nº: 735 Cadeia leve de DNA
HC de BAP050-Clone I
SEQ ID Nº: 736 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 737 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 738 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 739 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 740 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 741 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 742 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 743 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 744 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 745 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 740 (Chothia) HCDR3
SEQ ID Nº: 741 (Chothia) HCDR3
LC de BAP050-Clone I
SEQ ID Nº: 746 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 747 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 748 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 749 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 750 (Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 751 (Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 752 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: 753 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: 754 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 755 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 756 (Chothia) LCDR3
SEQ ID Nº: 757 (Chothia) LCDR3
HC de BAP050-Clone J
SEQ ID Nº: 758 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 737 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 759 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 739 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 760 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 741 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 761 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 743 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 744 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 745 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 760 (Chothia) HCDR3
SEQ ID Nº: 741 (Chothia) HCDR3
LC de BAP050-Clone J
SEQ ID Nº: 746 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 747 (Kabat) LCDR1
SEQ ID Nº: 748 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 749 (Kabat) LCDR2
SEQ ID Nº: 750 (Kabat) LCDR3 SEQ ID Nº: 751 (Kabat) LCDR3 SEQ ID Nº: 752 (Chothia) LCDR1 SEQ ID Nº: 753 (Chothia) LCDR1 SEQ ID Nº: 754 (Chothia) LCDR2 SEQ ID Nº: 755 (Chothia) LCDR2 SEQ ID Nº: 756 (Chothia) LCDR3 SEQ ID Nº: 757 (Chothia) LCDR3 Outros Inibidores de LAG-3 Exemplificativos
[00697] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 é BMS-986016 (Bristol-Myers Squibb), também conhecida como BMS986016. BMS-986016 e outros anticorpos anti-LAG-3 são divulgados nos documentos No WO 2015/116539 e US 9.505.839, incorporados a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve, ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de BMS-986016, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 23.
[00698] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 é TSR-033 (Tesaro). Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti- LAG-3 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de TSR-033.
[00699] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 é IMP731 ou GSK2831781 (GSK e Prima BioMed). IMP731 e outros anticorpos anti-LAG-3 são divulgados nos documentos No WO 2008/132601 e US 9.244.059, incorporados a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve, ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de IMP731, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 23. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de GSK2831781.
[00700] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 é IMP761 (Prima BioMed). Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-LAG-3 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de IMP761.
[00701] Outros anticorpos anti-LAG-3 conhecidos incluem aqueles descritos, por exemplo, nos documentos No WO 2008/132601, WO 2010/019570, WO 2014/140180, WO 2015/116539, WO 2015/200119, WO 2016/028672, US 9.244.059, US 9.505.839, incorporados a título de referência em sua totalidade.
[00702] Em uma modalidade, o anticorpo anti-LAG-3 é um anticorpo que compete pela ligação e/ou se liga ao mesmo epítopo em LAG-3 que um dos anticorpos anti-LAG-3 descritos no presente documento.
[00703] Em uma modalidade, o inibidor de anti-LAG-3 é uma proteína
LAG-3 solúvel, por exemplo, IMP321 (Prima BioMed), por exemplo, conforme divulgado no documento no WO 2009/044273, incorporado a título de referência em sua totalidade. Tabela 23. Sequências de aminoácidos de outras moléculas de anticorpo anti-LAG-3 exemplificativas BMS-986016 SEQ ID Nº: 762 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 763 Cadeia leve IMP731 SEQ ID Nº: 764 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 765 Cadeia leve Inibidores de TIM-3
[00704] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de TIM-3. Em algumas modalidades, o inibidor de TIM-3 é MGB453 (Novartis) ou TSR-022 (Tesaro). Inibidores de TIM-3 Exemplificativos
[00705] Em uma modalidade, o inibidor de TIM-3 é uma molécula de anticorpo anti-TIM-3. Em uma modalidade, o inibidor de TIM-3 é uma molécula de anticorpo anti-TIM-3 conforme divulgado no documento No US 2015/0218274, publicado em 6 de agosto de 2015, intitulado "Antibody Molecules to TIM-3 and Uses Thereof", incorporado a título de referência em sua totalidade.
[00706] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis regiões determinantes de complementaridade (CDRs) (ou coletivamente todas as
CDRs) de uma região variável de cadeia pesada e leve que compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na Tabela 24 (por exemplo, das sequências de região variável de cadeia pesada e leve de ABTIM3- hum11 ou ABTIM3-hum03 divulgadas na Tabela 24), ou codificada por uma sequência de nucleotídeos mostrada na Tabela 24. Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com a definição de Kabat (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 24). Em algumas modalidades, as CDRs estão de acordo com a definição de Chothia (por exemplo, conforme apresentado na Tabela 24). Em uma modalidade, uma ou mais das CDRs (ou coletivamente todas as CDRs) têm uma, duas, três, quatro, cinco, seis ou mais alterações, por exemplo, substituições de aminoácidos (por exemplo, substituições de aminoácidos conservativas) ou deleções, em relação a uma sequência de aminoácidos mostrada na Tabela 24, ou codificadas por uma sequência de nucleotídeos mostrada na Tabela 24.
[00707] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos de VHCDR1 de SEQ ID Nº: 801, uma sequência de aminoácidos de VHCDR2 de SEQ ID Nº: 802; e uma sequência de aminoácidos VHCDR3 de SEQ ID Nº: 803; e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos de VLCDR1 de SEQ ID Nº: 810; uma sequência de aminoácidos VLCDR2 de SEQ ID Nº: 811; e uma sequência de aminoácidos VLCDR3 de SEQ ID Nº: 812, cada uma divulgada na Tabela
24. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos de VHCDR1 de SEQ ID Nº: 801, uma sequência de aminoácidos de VHCDR2 de SEQ ID Nº: 820 e uma sequência de aminoácidos de VHCDR3 de SEQ ID Nº: 803; e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos de VLCDR1 de SEQ ID Nº: 810; uma sequência de aminoácidos VLCDR2 de SEQ ID Nº: 811 e uma sequência de aminoácidos de VLCDR3 de SEQ ID Nº: 812, cada uma divulgada na Tabela 24.
[00708] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 806, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 806. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 816, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 816. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 822, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 822. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 826, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 826. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 806, e uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 816. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma VH que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 822 e uma VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 826.
[00709] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 807, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 807. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 817, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 817. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 823, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 823. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 827, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 827. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 807 e uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 817. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma VH codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 823 e uma VL codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 827.
[00710] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 808, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 808. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 818, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 818. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 824, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 824. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 828, ou uma sequência de aminoácidos pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 828. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 808, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 818. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti- TIM-3 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 824 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 828.
[00711] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 809, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 809. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 819, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 819. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 825, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 825. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 829, ou uma sequência nucleotídica pelo menos 85%, 90%, 95% ou 99% ou mais idêntica à SEQ ID Nº: 829. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ
ID Nº: 809 e uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 819. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 825 e uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos de SEQ ID Nº: 829.
[00712] As moléculas de anticorpo descritas no presente documento podem ser produzidas por vetores, células hospedeiras e métodos descritos no documento no US 2015/0218274, incorporado a título de referência em sua totalidade. Tabela 24. Sequências de aminoácidos e nucleotídeos de moléculas de anticorpo anti-TIM-3 exemplificativas ABTIM3-hum11 SEQ ID Nº: 801 (Kabat) HCDR1 SEQ ID Nº: 802 (Kabat) HCDR2 SEQ ID Nº: 803 (Kabat) HCDR3 SEQ ID Nº: 804 (Chothia) HCDR1 SEQ ID Nº: 805 (Chothia) HCDR2 SEQ ID Nº: 803 (Chothia) HCDR3 SEQ ID Nº: 806 VH SEQ ID Nº: 807 VH de DNA SEQ ID Nº: 808 Cadeia pesada SEQ ID Nº: 809 Cadeia pesada de DNA SEQ ID Nº: 810 (Kabat) LCDR1 SEQ ID Nº: 811 (Kabat) LCDR2
ABTIM3-hum11
SEQ ID Nº: 812 (Kabat) LCDR3
SEQ ID Nº: 813 (Chothia) LCDR1
SEQ ID Nº: 814 (Chothia) LCDR2
SEQ ID Nº: 815 (Chothia) LCDR3
SEQ ID Nº: 816 VL
SEQ ID Nº: 817 VL de DNA
SEQ ID Nº: 818 Cadeia leve
SEQ ID Nº: 819 Cadeia leve de DNA
ABTIM3-hum03
SEQ ID Nº: 801 (Kabat) HCDR1
SEQ ID Nº: 820 (Kabat) HCDR2
SEQ ID Nº: 803 (Kabat) HCDR3
SEQ ID Nº: 804 (Chothia) HCDR1
SEQ ID Nº: 821 (Chothia) HCDR2
SEQ ID Nº: 803 (Chothia) HCDR3
SEQ ID Nº: 822 VH
SEQ ID Nº: 823 VH de DNA
SEQ ID Nº: 824 Cadeia pesada
SEQ ID Nº: 825 Cadeia pesada de DNA
SEQ ID Nº: 810 (Kabat) LCDR1
ABTIM3-hum11 SEQ ID Nº: 811 (Kabat) LCDR2 SEQ ID Nº: 812 (Kabat) LCDR3 SEQ ID Nº: 813 (Chothia) LCDR1 SEQ ID Nº: 814 (Chothia) LCDR2 SEQ ID Nº: 815 (Chothia) LCDR3 SEQ ID Nº: 826 VL SEQ ID Nº: 827 VL de DNA SEQ ID Nº: 828 Cadeia leve SEQ ID Nº: 829 Cadeia leve de DNA Outros Inibidores de TIM-3 Exemplificativos
[00713] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 é TSR-022 (AnaptysBio/Tesaro). Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve, ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de TSR-022. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de APE5137 ou APE5121, por exemplo, conforme divulgado na Tabela 25. APE5137, APE5121 e outros anticorpos anti- TIM-3 são divulgados no documento No WO 2016/161270, incorporado a título de referência em sua totalidade.
[00714] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 é o clone de anticorpo F38-2E2. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-TIM-3 compreende uma ou mais das sequências de CDR (ou coletivamente todas as sequências de CDR), a sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve ou a sequência de cadeia pesada ou cadeia leve de F38-2E2.
[00715] Outros anticorpos anti-TIM-3 conhecidos incluem aqueles descritos, por exemplo, nos documentos No WO 2016/111947, WO 2016/071448, WO 2016/144803, US 8.552.156, US 8.841.418 e US
9.163.087, incorporados a título de referência em sua totalidade.
[00716] Em uma modalidade, o anticorpo anti-TIM-3 é um anticorpo que compete pela ligação e/ou se liga ao mesmo epítopo em TIM-3 que um dos anticorpos anti-TIM-3 descritos no presente documento. Tabela 25. Sequências de aminoácidos de outras moléculas de anticorpo anti-TIM-3 exemplificativas APE5137 SEQ ID Nº: 830 VH SEQ ID Nº: 831 VL APE5121 SEQ ID Nº: 832 VH SEQ ID Nº: 833 VL Inibidores de TGF-β
[00717] Em determinadas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um fator de crescimento de transformação beta (também conhecido como inibidor de TGF-β, TGFβ, TGFb ou TGF-beta, usado de forma intercambiável no presente documento).
[00718] O TGF-β pertence a uma grande família de citocinas estruturalmente relacionadas incluindo, por exemplo, proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs), fatores de crescimento e de diferenciação, activinas e inibinas. Em algumas modalidades, os inibidores de TGF-β descritos no presente documento podem se ligar e/ou inibir um ou mais isoformas de TGF-β (por exemplo, um, dois ou todos os TGF-β1, TGF-β2 ou TGF-β3).
[00719] Em algumas modalidades, o inibidor de TGF-β compreende XOMA 089, ou um composto divulgado na Publicação de Pedido Internacional Nº WO 2012/167143, que está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00720] O XOMA 089 também é conhecido como XPA.42.089. XOMA 089 é um anticorpo monoclonal totalmente humano que especificamente se liga e neutraliza ligantes 1 e 2 de TGF-beta.
[00721] A região variável de cadeia pesada de XOMA 089 tem a sequência de aminoácidos de:
GIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLW EVRALPSVYWGQGTLVTVSS (SEQ ID Nº: 1986) (divulgada como SEQ ID Nº: 6 no documento WO 2012/167143). A região variável de cadeia leve de XOMA 089 tem a sequência de aminoácidos de:
IRPSGIPERISGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDRDSDQYVFGTG TKVTVLG (SEQ ID Nº: 1987) (divulgada como SEQ ID Nº: 8 no documento WO 2012/167143).
[00722] XOMA 089 se liga com alta afinidade às isoformas humanas de TGF-β. Em geral, XOMA 089 se liga com alta afinidade a TGF-β1 e
TGF-β2, e em menor grau a TGF-β3. Nos ensaios de Biacore, a KD de XOMA 089 em TGF-β humano é 14,6 pM para TGF-β1, 67,3 pM para TGF-β2, e 948 pM para TGF-β3. Dada a ligação de alta afinidade a todas as três isoformas de TGF-β, em determinadas modalidades, espera-se que XOMA 089 se ligue a TGF-β1, 2 e 3 em uma dose de XOMA 089, conforme descrito no presente documento. XOMA 089 reage de forma cruzada com TGF-β de roedores e macacos cynomolgus e mostra atividade funcional in vitro e in vivo, tornando espécies de roedores e macacos cynomolgus relevantes para estudos toxicológicos.
[00723] Em algumas modalidades, o inibidor de TGF-β compreende fresolimumabe (Número de Registro do CAS: 948564-73-6). O Fresolimumabe também é conhecido como GC1008. O Fresolimumabe é um anticorpo monoclonal humano que se liga a e inibe isoformas 1, 2 e 3 de TGF-beta.
[00724] A cadeia pesada de fresolimumabe tem a sequência de aminoácidos de:
NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSLGK (SEQ ID Nº: 1988).
[00725] A cadeia leve de fresolimumabe tem a sequência de aminoácidos de:
WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE VTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID Nº: 1989).
[00726] Fresolimumabe é divulgado, por exemplo, na Publicação de Pedido Internacional Nº WO 2006/086469, e Patentes US Nos 8.383.780 e
8.591.901, que estão incorporadas no presente documento a título de referência em sua totalidade. Moléculas de Anticorpo Anti-CD73
[00727] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com uma molécula de anticorpo anti-CD73. Em uma modalidade, uma molécula de anticorpo anti-CD73 é uma molécula de anticorpo completa ou um fragmento de ligação a antígeno da mesma. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo anti-CD73 é escolhida dentre qualquer uma das moléculas de anticorpo mencionadas na Tabela 26. Em outras modalidades, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende uma sequência de domínio variável de cadeia pesada, uma sequência de domínio variável de cadeia leve, ou ambas, como divulgado na Tabela
26. Em determinadas modalidades, a molécula de anticorpo anti-CD73 se liga a uma proteína CD73 e reduz, por exemplo, inibe ou antagoniza, uma atividade de CD73, por exemplo, CD73 humano.
[00728] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento WO2016/075099, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é MEDI 9447, por exemplo, como divulgado no documento
WO2016/075099. Nomes alternativos para MEDI 9447 incluem clone 10.3 ou 73combo3. MEDI 9447 é um anticorpo IgG1 que inibe, por exemplo, antagoniza, uma atividade de CD73. MEDI 9447 e outra molécula de anticorpo anti-CD73s também são divulgados no documento WO2016/075176 e US2016/0129108, cujos conteúdos totais estão incorporados no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00729] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de MEDI 9477. A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada de MEDI 9477 é divulgado como a SEQ ID Nº: 1990 (consultar a Tabela 26). A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de MEDI 9477 é divulgado como a SEQ ID Nº: 1991 (consultar a Tabela 26).
[00730] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento WO2016/081748, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é 11F11, por exemplo, como divulgado no documento WO2016/081748. 11F11 é um anticorpo IgG2 que inibe, por exemplo, antagoniza, uma atividade de CD73. Os anticorpos derivados de 11F11, por exemplo, CD73.4 e CD73.10; clones de 11F11, por exemplo, 11F11-1 e 11F11-2; e outras moléculas de anticorpo anti-CD73 são divulgados no documento WO2016/081748 e US 9.605.080, cujos conteúdos totais estão incorporados no presente documento em sua totalidade.
[00731] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de 11F11-1 ou 11F11-2. A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada de 11F11-1 é divulgado como a SEQ ID Nº: 1998 (consultar a Tabela 26). A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de 11F11-1 é divulgado como a SEQ ID Nº: 1999 (consultar a Tabela 26). A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada de 11F11-2 é divulgado como a SEQ ID Nº: 1994 (consultar a Tabela 26). A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de 11F11-2 é divulgado como a SEQ ID Nº: 1995 (consultar a Tabela 26). Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende uma cadeia pesada, uma cadeia leve, ou ambas, de 11F11-1 ou 11F11-2. As sequências de aminoácidos de cadeia pesada e leve de 11F11-1 são divulgadas como SEQ ID Nº: 1996 e SEQ ID Nº:1997, respectivamente (consultar a Tabela 26). As sequências de aminoácidos de cadeia pesada e leve de 11F11-2 são divulgadas como SEQ ID Nº: 1992 e SEQ ID Nº:1993, respectivamente (consultar a Tabela 26).
[00732] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada, por exemplo, no documento US
9.605.080, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00733] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é CD73.4, por exemplo, como divulgado no documento US 9.605.080. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de CD73.4. A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada de CD73.4 é divulgado como a SEQ ID Nº: 2000 (consultar a Tabela 26). A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de 11F11-2 é divulgado como a SEQ ID Nº: 2001 (consultar a Tabela 26).
[00734] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é CD73.10, por exemplo, como divulgado no documento US 9.605.080. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de CD73.10. A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada de CD73.10 é divulgado como a SEQ ID Nº: 2002 (consultar a Tabela 26). A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de 11F11-2 é divulgado como a SEQ ID Nº: 2003 (consultar a Tabela 26).
[00735] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento WO2009/0203538, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é 067-213, por exemplo, como divulgado no documento WO2009/0203538.
[00736] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de 067-213. A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada de 067-213 é divulgado como a SEQ ID Nº: 2004 (consultar a Tabela 26). A sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve de 067-213 é divulgado como a SEQ ID Nº: 2005 (consultar a Tabela 26).
[00737] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento US 9.090.697, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é TY/23, por exemplo, como divulgado no documento US 9.090.697. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de TY/23.
[00738] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento WO2016/055609, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpos anti-CD73 divulgado no documento WO2016/055609.
[00739] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento WO2016/146818, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpos anti-CD73 divulgado no documento WO2016/146818.
[00740] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento WO2004/079013, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpos anti-CD73 divulgado no documento WO2004/079013.
[00741] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento WO2012/125850, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpos anti-CD73 divulgado no documento WO2012/125850.
[00742] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento WO2015/004400, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpos anti-CD73 divulgado no documento WO2015/004400.
[00743] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento WO2007/146968, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpos anti-CD73 divulgado no documento WO2007146968.
[00744] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento US2007/0042392, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpos anti-CD73 divulgado no documento US2007/0042392.
[00745] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada no documento US2009/0138977, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpos anti-CD73 divulgado no documento US2009/0138977.
[00746] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgada em Flocke et al., Eur J Cell Biol. 1992 Jun;58(1):62-70, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpos anti- CD73 divulgado em Flocke et al., Eur J Cell Biol. 1992 Jun;58(1):62-70.
[00747] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 é um anticorpo anti-CD73 divulgado em Stagg et al., PNAS. janeiro de 2010 107(4): 1547-1552, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo anti-CD73 é TY/23 ou TY11.8, como divulgado em Stagg et al. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-CD73 compreende um domínio variável de cadeia pesada, um domínio variável de cadeia leve, ou ambos, de um anticorpo anti-CD73 divulgado em Stagg et al. Tabela 26: Sequências de moléculas de anticorpo anti-CD73 exemplificativas WO201/6075099 MEDI 9447 SEQ ID Nº: 1990 VH SEQ ID Nº: 1991 VL WO2016/081748 11F11-2 SEQ ID Nº: 1992 HC SEQ ID Nº: 1993 LC SEQ ID Nº: 1994 VH SEQ ID Nº: 1995 VL kapa WO2016/081748
11F11-1 SEQ ID Nº: 1996 HC SEQ ID Nº: 1997 LC SEQ ID Nº: 1998 VH SEQ ID Nº: 1999 VL kapa US9605080 CD73.4 SEQ ID Nº: 2000 VH SEQ ID Nº: 2001 VL kapa US9605080 CD73.10 SEQ ID Nº: 2002 VH SEQ ID Nº: 2003 VL kapa US9388249 067-213 SEQ ID Nº: 2004 VH SEQ ID Nº: 2005 VL
[00748] As moléculas de anticorpo anti-CD73 usadas nas terapias de combinação divulgadas no presente documento podem incluir qualquer uma das sequências de VH/VL divulgadas na Tabela 26, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica às mesmas (por exemplo, pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica às mesmas). As sequências exemplificativas de anticorpos de CD73 incluem: as sequências de aminoácidos de VH e VL de MEDI 9447, SEQ ID Nºs: 1990 a 1991, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica às mesmas (por exemplo, pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica às SEQ ID Nºs: 1990 a 1991). as sequências de aminoácidos de HC e LC de 11F11-2, SEQ ID Nºs: 1992 a 1993, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica às mesmas (por exemplo, pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica às SEQ ID Nºs: 1992 a 1993). as sequências de aminoácidos de VH e VL de 11F11-2, SEQ ID Nºs: 1994 a 1995, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica às mesmas (por exemplo, pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica às SEQ ID Nºs: 1994 a 1995). as sequências de aminoácidos de HC e LC de 11F11-1, SEQ ID Nºs: 1996 e 1997, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica às mesmas (por exemplo, pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica às SEQ ID Nºs: 1996 e 1997); as sequências de aminoácidos de VH e VL de 11F11-1, SEQ ID Nºs: 1998 a 1999, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica às mesmas (por exemplo, pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica às SEQ ID Nºs: 1998 a 1999). as sequências de aminoácidos de VH e VL de CD73.4, SEQ ID Nºs: 2000 a 2001, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica às mesmas (por exemplo, pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica às SEQ ID Nºs: 2000 a 2001); as sequências de aminoácidos de VH e VL de CD73.10, SEQ ID Nºs: 2002 a 2003, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica às mesmas (por exemplo, pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica às SEQ ID Nºs: 2002 a 2003); ou as sequências de aminoácidos de VH e VL de 067-213, SEQ ID Nºs: 2004 a 2005, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica às mesmas (por exemplo, pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais idêntica às SEQ ID Nºs: 2004-2005). Inibidor de IL-17
[00749] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de interleucina-17 (IL-17).
[00750] Em algumas modalidades, o inibidor de IL-17 é secuquinumabe (Números de Registro CAS: 875356-43-7 (cadeia pesada) e 875356-44-8 (cadeia leve)). Secuquinumabe também é conhecido como AIN457 e COSENTYX®. Secuquinumabe é um anticorpo IgG1/κ monoclonal recombinante humano que se liga especificamente à IL-17A. O mesmo é expresso em uma linhagem celular recombinante de Ovário de Hamster Chinês (CHO).
[00751] Secuquinumabe é descrito, por exemplo, no documento WO 2006/013107, US 7.807.155, US 8.119.131, US 8.617.552 e EP 1776142. A região variável de cadeia pesada de secuquinumabe tem a sequência de aminoácidos de:
WVAAINQDGSEKYYVGSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRVEDTAVY YCVRDYYDILTDYYIHYWYFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID Nº: 2006) (divulgada como SEQ ID Nº: 8 no documento WO 2006/013107). A região variável de cadeia leve de secuquinumabe tem a sequência de aminoácidos de:
YGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPCT FGQGTRLEIKR (SEQ ID Nº: 2007) (divulgada como SEQ ID Nº: 10 no documento WO 2006/013107). A CDR1 de cadeia pesada de secuquinumabe tem a sequência de aminoácidos de NYWMN (SEQ ID
Nº: 2008) (divulgada como SEQ ID Nº: 1 no documento WO 2006/013107). A CDR2 de cadeia pesada de secuquinumabe tem a sequência de aminoácidos de AINQDGSEKYYVGSVKG (SEQ ID Nº: 2009) (divulgada como SEQ ID Nº: 2 no documento WO 2006/013107). A CDR3 de cadeia pesada de secuquinumabe tem a sequência de aminoácidos de DYYDILTDYYIHYWYFDL (SEQ ID Nº: 2010) (divulgada como SEQ ID Nº: 3 no documento WO 2006/013107). A CDR1 de cadeia leve de secuquinumabe tem a sequência de aminoácidos de RASQSVSSSYLA (SEQ ID Nº: 2011) (divulgada como SEQ ID Nº: 4 no documento WO 2006/013107). A CDR2 de cadeia leve de secuquinumabe tem a sequência de aminoácidos de GASSRAT (SEQ ID Nº: 2012) (divulgada como SEQ ID Nº: 5 no documento WO 2006/013107). A CDR3 de cadeia leve de secuquinumabe tem a sequência de aminoácidos de GASSRAT (SEQ ID Nº: 2013) (divulgada como SEQ ID Nº: 6 no documento WO 2006/013107).
[00752] Em algumas modalidades, o inibidor de IL-17 é CJM112. CJM112 também é conhecido como XAB4. CJM112 é um anticorpo monoclonal completamente humano (por exemplo, do isotipo IgG1/κ) que alveja IL-17A.
[00753] CJM112 é divulgado, por exemplo, no documento WO 2014/122613. A cadeia pesada de CJM112 tem a sequência de aminoácidos de:
ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGK (SEQ ID Nº: 2014) (divulgada como SEQ ID Nº: 14 no documento WO 2014/122613). A cadeia leve de CJM112 a sequência de aminoácidos de:
KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID Nº: 2015) (divulgada como SEQ ID Nº: 44 no documento WO 2014/122613).
[00754] CJM112 pode se ligar à IL-17A de ser humano, cynomolgus, camundongo e rato e neutralizar a bioatividade dessas citocinas in vitro e in vivo. IL-17A, um membro da família de IL-17, é a principal citocina pró- inflamatória que foi indicada para exercer funções importantes em muitas condições mediadas pelo sistema imune, como psoríase e cânceres (Witowski et al. (2004) Cell Mol. Life Sci. p. 567-79; Miossec e Kolls (2012) Nat. Rev. Drug Discov. p. 763-76).
[00755] Em algumas modalidades, o inibidor de IL-17 é ixequizumabe (Número de Registro CAS: 1143503-69-8). O ixequizumabe também é conhecido como LY2439821. O ixequizumabe é um anticorpo monoclonal IgG4 humanizado que alveja IL-17A.
[00756] O ixequizumabe é divulgado, por exemplo, no documento WO 2007/070750, No U.S. 7.838.638 e No U.S. 8.110.191. A região variável de cadeia pesada de ixequizumabe tem a sequência de aminoácidos de:
ARYDYFTGTGVYWGQGTLVTVSS (SEQ ID Nº: 2016) (divulgada como SEQ ID Nº: 118 no documento WO 2007/070750). A região variável de cadeia leve de ixequizumabe tem a sequência de aminoácidos de:
QLLIYKVSNRFIGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHL PFTFGQGTKLEIK (SEQ ID Nº: 2017) (divulgada como SEQ ID Nº: 241 no documento WO 2007/070750).
[00757] Em algumas modalidades, o inibidor de IL-17 é brodalumabe (Número de Registro CAS: 1174395-19-7). Brodalumabe também é conhecido como AMG 827 ou AM-14. Brodalumabe se liga ao receptor A de interleucina-17 (IL-17RA) e impede que a IL-17 ative o receptor.
[00758] Brodalumabe é divulgado, por exemplo, no documento WO 2008/054603, US 7.767.206, US 7.786.284, US 7.833.527, US 7.939.070, US 8.435.518, US 8.545.842, US 8.790.648, e US 9.073.999. A CDR1 de cadeia pesada de brodalumabe tem a sequência de aminoácidos de RYGIS (SEQ ID Nº: 2018) (divulgada como SEQ ID Nº: 146 no documento WO 2008/054603). A CDR2 de cadeia pesada de brodalumabe tem a sequência de aminoácidos de WISTYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID Nº: 2019) (divulgada como SEQ ID Nº: 147 no documento WO 2008/054603). A CDR3 de cadeia pesada de brodalumabe tem a sequência de aminoácidos de RQLYFDY (SEQ ID Nº: 2020) (divulgada como SEQ ID Nº: 148 no documento WO 2008/054603). A CDR1 de cadeia leve de brodalumabe tem a sequência de aminoácidos de RASQSVSSNLA (SEQ ID Nº: 2021) (divulgada como SEQ ID Nº: 224 no documento WO 2008/054603). A CDR2 de cadeia pesada de brodalumabe tem a sequência de aminoácidos de DASTRAT (SEQ ID Nº: 2022) (divulgada como SEQ ID Nº: 225 no documento WO 2008/054603). A CDR3 de cadeia pesada de brodalumabe tem a sequência de aminoácidos de QQYDNWPLT (SEQ ID Nº: 2023) (divulgada como SEQ ID Nº: 226 no documento WO 2008/054603). Inibidor de IL-1β
[00759] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de interleucina-1 beta (IL-1β).
[00760] A família de citocinas de interleucina-1 (IL-1) é um grupo de citocinas pleotrópicas secretadas com uma função central na inflamação e resposta imunológica. Aumentos em IL-1 são observados em múltiplos ambientes clínicos incluindo câncer (Apte et al. (2006) Cancer Metastasis Rev. p. 387-408; Dinarello (2010) Eur. J. Immunol. p. 599-606). A família de IL-1 compreende, inter alia, IL-1 beta (IL-1β) e IL-1alfa (IL-1a). IL-1β é elevada no câncer de pulmão, mama e colorretal (Voronov et al. (2014) Front Physiol. p. 114) e está associada a prognóstico ruim (Apte et al. (2000) Adv. Exp. Med. Biol. p. 277-88). Sem o desejo de se vincular à teoria, acredita-se que, em algumas modalidades, a IL-1β secretada, derivada do microambiente tumoral e por células malignas, promova a proliferação de células tumorais, aumente a invasividade e atenue a resposta imunológica antitumoral, em parte recrutando neutrófilos inibidores (Apte et al. (2006) Cancer Metastasis Rev. p. 387-408; Miller et al. (2007) J. Immunol. p. 6933- 42). Dados experimentais indicam que a inibição de IL-1β resulta em uma redução na carga tumoral e metástase (Voronov et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. p. 2645-50).
[00761] Em algumas modalidades, o inibidor de IL-1β é escolhido dentre Anakinra ou Rilonacept.
[00762] Em algumas modalidades, o inibidor de IL-1β é Anakinra (Amgen), também conhecido como Kineret. Anakinra é um antagonista de IL-1Ra que compete com a IL-1β pela ligação ao receptor de superfície celular.
[00763] Em algumas modalidades, o inibidor de IL-1β é Rilonacept (Regeneron), também conhecido como Arcalyst. Rilonacept é uma proteína de fusão que consiste nos domínios de ligação ao ligante das porções extracelulares do componente de receptor de interleucina-1 humana (IL-1R1) e proteína acessória de receptor de IL-1 (IL-1RAcP) ligada à porção cristalizável por fragmento (região Fc) De IgG1 humana. Rilonacept é um inibidor de IL-1β que, por exemplo, liga e neutraliza IL-1. Inibidor de CD32B
[00764] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um inibidor de CD32B.
[00765] Em algumas modalidades, o inibidor de CD32B é uma molécula de anticorpo anti-CD32B. As moléculas de anticorpo anti- CD32B exemplificativas são divulgadas nos documentos US8187593, US8778339, US8802089, US20060073142, US20170198040, US20130251706, e WO2009083009, incorporados no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo anti-CD32B é uma molécula divulgada no documento US20170198040. Agentes Quimioterápicos
[00766] Em algumas modalidades, a terapia com células que expressam CAR de BCMA é administrada em combinação com um agente quimioterápico. Agentes quimioterapêuticos exemplificativos incluem uma antraciclina (por exemplo, doxorrubicina (por exemplo, doxorrubicina lipossômica)), um alcaloide de vinca (por exemplo, vinblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina), um agente alquilante (por exemplo, ciclofosfamida, dacarbazina, melfalano, ifosfamida, temozolomida), um anticorpo para células imunes (por exemplo,
alentuzumabe, gentuzumabe, rituximabe, tositumomabe), um antimetabólito (incluindo, por exemplo, antagonistas do ácido fólico, análogos de pirimidina, análogos de purina e inibidores de adenosina desaminase (por exemplo, fludarabina)), um inibidor de mTOR, um agonista da proteína relacionada com o TNFR induzida por glicocorticoides (GITR) TNFR, um inibidor de proteassomas (por exemplo, aclacinomicina A, gliotoxina ou bortezomibe), um imunomodulador tal como talidomida ou um derivado de talidomida (por exemplo, lenalidomida).
[00767] Agentes quimioterapêuticos gerais considerados para uso em terapias de combinação incluem anastrozol (Arimidex®), bicalutamida (Casodex®), sulfato de bleomicina (Blenoxane®), bussulfano (Myleran®), injeção de bussulfano (Busulfex®), capecitabina (Xeloda®), N4- pentoxicarbonil-5-desóxi-5-fluorocitidina, carboplatina (Paraplatin®), carmustina (BiCNU®), clorambucil (Leukeran®), cisplatina (Platinol®), cladribina (Leustatin®), ciclofosfamida (Cytoxan® ou Neosar®), citarabina, citosina arabinosídeo (Cytosar-U®), injeção de lipossomo de citarabina (DepoCyt®), dacarbazina (DTIC-Dome®), dactinomicina (Actinomicina D, Cosmegan), hidrocloreto de daunorrubicina (Cerubidine®), injeção de lipossomo de citrato de daunorrubicina (DaunoXome®), dexametasona, docetaxel (Taxotere®), hidrocloreto de doxorrubicina (Adriamycin®, Rubex®), etoposide (Vepesid®), fosfato de fludarabina (Fludara®), 5- fluorouracila (Adrucil®, Efudex®), flutamida (Eulexin®), tezacitibina, Gencitabina (difluorodesoxicitidina), hidroxiureia (Hydrea®), Idarrubicina (Idamycin®), ifosfamida (IFEX®), irinotecano (Camptosar®), L- asparaginase (ELSPAR®), leucovorina cálcica, melfalano (Alkeran®), 6- mercaptopurina (Purinethol®), metotrexato (Folex®), mitoxantrona (Novantrone®), milotarg, paclitaxel (Taxol®), fênix (Ítrio90/MX-DTPA),
pentostatina, polifeprosano 20 com implante de carmustina (Gliadel®), citrato de tamoxifeno (Nolvadex®), teniposida (Vumon®), 6-tioguanina, tiotepa, tirapazamina (Tirazone®), hidrocloreto de topotecano para injeção (Hycamptin®), vinblastina (Velban®), vincristina (Oncovin®) e vinorrelbina (Navelbine®).
[00768] Agentes alquilantes exemplificativo incluem, sem limitação, mostardas de nitrogênio, derivados etilenimina, alquilsulfonatos, nitrosoureias e triazenos: mostarda de uracila (Aminouracil Mustard ®, Chlorethaminacil®, Demethyldopan®, Desmethyldopan®, Haemanthamina®, Nordopan®, Uracil nitrogen mustard®, Uracillost®, Uracilmostaza®, Uramustin®, Uramustine®), clormetino (Mustargen®), ciclofosfamida (Cytoxan®, Neosar®, Clafen®, Endoxan®, Procytox®, RevimmuneTM), ifosfamida (Mitoxana®), melfalano (Alkeran®), Clorambucil (Leukeran®), pipobromano (Amedel®, Vercyte®), trietilenomelamina (Hemel®, Hexalen®, Hexastat®), trietilenotiofosforamina, Temozolomida (Temodar®), tiotepa (Thioplex®), bussulfano (Busilvex®, Myleran®), carmustina (BiCNU®), lomustina (CeeNU®), estreptozocina (Zanosar®) e Dacarbazina (DTIC-Dome®). Os agentes alquilantes exemplificativos adicionais incluem, sem limitação, Oxaliplatina (Eloxatin®); Temozolomida (Temodar® e Temodal®); Dactinomicina (também conhecida como actinomicina-D, Cosmegen®); Melfalano (também conhecido como L- PAM, L-sarcolisina, e mostarda de fenilalanina, Alkeran®); Altretamina (também conhecida como hexametilmelamina (HMM), Hexalen®); Carmustina (BiCNU®); Bendamustina (Treanda®); Busulfano (Busulfex® e Myleran®); Carboplatina (Paraplatin®); Lomustina (também conhecida como CCNU, CeeNU®); Cisplatina (também conhecida como CDDP, Platinol® e Platinol®-AQ); Clorambucila (Leukeran®); Ciclofosfamida (Cytoxan® e Neosar®); Dacarbazina (também conhecida como DTIC, DIC e imidazol carboxamida, DTIC-Dome®); Altretamina (também conhecida como hexametilmelamina (HMM), Hexalen®); Ifosfamida (Ifex®); Prednumustina; Procarbazina (Matulane®); Mecloretamina (também conhecida como mostarda de nitrogênio, mustina e cloridrato de mecloroetamina, Mustargen®); Estreptozocina (Zanosar®); Tiotepa (também conhecida como tiofosfoamida, TESPA e TSPA, Thioplex®); Ciclofosfamida (Endoxan®, Cytoxan®, Neosar®, Procytox®, Revimmune®); e HCl de Bendamustina (Treanda®).
[00769] Exemplos de inibidores de mTOR incluem, por exemplo, temsirolimo; ridaforolimo (anteriormente conhecido como deferolimo, dimetilfosfinato de (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2 [(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R, 23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)- 1,18-di-hidróxi-19,30-dimetóxi-15,17,21,23, 29,35-hexametil-2,3,10,14,20- pentaoxo-11,36-dioxa-4-azatriciclo[30.3.1.04,9] hexatriaconta-16,24,26,28- tetraen-12-il]propil]-2-metóxicicloexila, também conhecido como AP23573 e MK8669, e descrito na Publicação PCT Nº WO 03/064383); everolimo (Afinitor® ou RAD001); rapamicina (AY22989, Sirolimus®); simapimod (CAS 164301-51-3); emsirolimo, (5-{2,4-Bis[(3S)-3-metilmorfolin-4- il]pirido[2,3-d]pirimidin-7-il}-2-metóxifenil)metanol (AZD8055); 2-Amino-8- [trans-4-(2-hidroxietóxi)cicloexil]-6-(6-metóxi-3-piridinil)-4-metil-pirido[2,3- d]pirimidin-7(8H)-ona (PF04691502, CAS 1013101-36-4); e N2-[1,4-dioxo- 4-[[4-(4-oxo-8-fenil-4H-1-benzopiran-2-il)morfolínio-4-il]metóxi]butil]-L- arginilglicil-L-α-aspartil-serina-, (SEQ ID Nº: 2035), sal interno (SF1126, CAS 936487-67-1), e XL765.
[00770] Exemplos de imunomoduladores incluem, por exemplo, afutuzumabe (comercializado pela Roche®); pegfilgrastim (Neulasta®); lenalidomida (CC-5013, Revlimid®); talidomida (Thalomid®), actimida (CC4047); e IRX-2 (mistura de citocinas humanas incluindo interleucina 1,
interleucina 2 e interferon γ, CAS 951209-71-5, comercializado pela IRX Therapeutics).
[00771] Exemplos de antraciclinas incluem, por exemplo, doxorrubicina (Adriamycin® e Rubex®); bleomicina (lenoxane®); daunorrubicina (cloridrato de daunorrubicina, daunomicina e cloridrato de rubidomicina, Cerubidine®); daunorrubicina lipossômica (lipossomo de citrato de daunorrubicina, DaunoXome®); mitoxantrona (DHAD, Novantrone®); epirrubicina (Ellence™); idarrubicina (Idamycin®, Idamycin PFS®); mitomicina C (Mutamycin®); geldanamicina; herbimicina; ravidomicina; e desacetilravidomicina.
[00772] Exemplos de alcaloides da vinca incluem, por exemplo, tartarato de vinorelbina (Navelbine®), Vincristina (Oncovin®) e Vindesina (Eldisine®); vinblastina (também conhecida como sulfato de vinblastina, vincaleucoblastina e VLB, Alkaban-AQ® e Velban®); e vinorelbina (Navelbine®).
[00773] Exemplos de inibidores de proteassomas incluem bortezomibe (Velcade®); carfilzomibe (PX-171-007, (S)-4-Metil-N-((S)-1-(((S)-4-metil-1- ((R)-2-metiloxiran-2-il)-1-oxopentan-2-il)amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il)- 2-((S)-2-(2-morfolinoacetamido)-4-fenilbutanamido)-pentanamida); marizomibe (NPI-0052); citrato de ixazomibe (MLN-9708); delanzomibe (CEP-18770); e O-Metil-N-[(2-metil-5-tiazolil)carbonil]-L-seril-O-metil-N- [(1S)-2-[(2R)-2-metil-2-oxiranil]-2-oxo-1-(fenilmetil)etil]-L-serinamida (ONX-0912). Agentes de combinação adicionais Tabela 27. Os agentes terapêuticos selecionados que podem ser administrados em combinação com a terapia com células que expressam CAR de BCMA, por exemplo, como um agente único ou em combinação com outros imunomoduladores descritos no presente documento. Cada publicação listada nesta Tabela é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade, incluindo todas as fórmulas estruturais nas mesmas.
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A1 Sotrastaurina EP 1682103
US 2007/142401
WO 2005/039549
A2 Mono-hidrato de WO 2004/005281 HCl de nilotinibe No U.S. 7.169.791 TASIGNA®
HCl • H20
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A7 WO 2009/141386
US 2010/0105667
A8 WO 2010/029082
A10 WO 2011/076786
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A11 Deferasirox WO 1997/049395
EXJADE®
A12 Letrozol US 4.978.672
FEMARA®
A13 WO 2013/124826 US 2013/0225574
A14 WO 2013/111105
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A15 WO 2007/121484
A16 Mesilato de WO 1999/003854 imatinibe
GLEEVEC®
Mesilato
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A17 EP 2099447
US 7.767.675
US 8.420.645
Sal di-hidroclórico
A18 Fosfato de WO 2007/070514 EP ruxolitinibe 2474545 JAKAFI® no U.S. 7,598.257 WO 2014/018632
H3PO4
A19 Panobinostat WO 2014/072493
WO 2002/022577
EP 1870399
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A20 Osilodrostat WO 2007/024945 A21 WO 2008/016893 EP 2051990 No U.S. 8,546.336 A23 ceritinibe WO 2008/073687 No U.S.
8.039.479 ZYKADIA™
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A24 US 8.415.355
US 8.685.980
A25 WO 2010/007120
A26 Anticorpo monoclonal humano para PRLR US 7.867.493
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A27 WO 2010/026124 EP 2344474 No U.S. 2010/0056576
WO 2008/106692
A28 WO 2010/101849
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A30 WO 2011/101409 A31 Anticorpo monoclonal humano para HER3 WO 2012/022814 EP 2606070 US 8.735.551 A32 Conjugado de fármaco e anticorpo (ADC) WO 2014/160160 Ab: 12425 (consultar Tabela 1, parágrafo
[00191]) Ligante: SMCC (consultar parágrafo [00117]) Carga útil: DM1 (consultar parágrafo
[00111]) Consultar ainda Reivindicação 29 A33 Anticorpo monoclonal ou Fab para M-CSF WO 2004/045532
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A35 Midostaurina WO 2003/037347 EP 1441737
US 2012/252785
A36 Everolimus WO 2014/085318 AFINITOR®
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A37 WO 2007/030377 US 7,482,367
A38 Diaspartato de WO2002/010192 pasireotida US 7.473.761 SIGNIFOR®
A40 WO 2013/184757
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A41 WO 2006/122806
A42 WO 2008/073687 US 8,372,858
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A43 WO 2010/002655 No U.S. 8.519.129 A44 WO 2010/002655 no U.S.
8.519.129
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A45 WO 2010/002655
A46 Valspodar EP 296122
AMDRAY™
A47 Succinato de WO 98/35958 vatalanibe succinato
Designação Nome Genérico Estrutura do Composto Patentes/Publicações de Composto de Pedido de Patente Marca Registrada A48 Inibidor de IDH WO2014/141104 A49 Inibidor de BCR-ABL WO2013/171639 WO2013/171640 WO2013/171641 WO2013/171642 A50 Inibidor de cRAF WO2014/151616 A51 Inibidor competitivo de ERK1/2 ATP WO2015/066188 Métodos de Entrega de Biopolímero
[00774] Em algumas modalidades, uma ou mais células que expressam CAR, conforme divulgado no presente documento, podem ser administradas ou distribuídas ao indivíduo por meio de um arcabouço de biopolímero, por exemplo, um implante de biopolímero. Os arcabouços de biopolímero podem sustentar ou intensificar a entrega, a expansão e/ou a dispersão das células que expressam CAR descritas no presente documento. Um arcabouço de biopolímero compreende um polímero biocompatível (por exemplo, não induz substancialmente uma resposta inflamatória ou imunológica) e/ou biodegradável que pode ser de ocorrência natural ou sintético.
[00775] Os exemplos de biopolímeros adequados incluem, porém sem limitação, ágar, agarose, alginato, alginato/cimento de fosfato de cálcio (CPC), beta-galactosidase (β-GAL), (1,2,3,4,6-penta-acetil-a-D- galactose), celulose, quitina, quitosana, colágeno, elastina, gelatina, colágeno de ácido hialurônico, hidroxiapatita, poli(3-hidroxibutirato-co-3-
hidróxi-hexanoato) (PHBHHx), poli(láctido), poli(caprolactona) (PCL), poli(láctido-co-glicólido) (PLG), óxido de polietileno (PEO), poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA), óxido de polipropileno (PPO), álcool polivinílico (PVA), seda, proteína de soja e isolado de proteína de soja, sozinhos ou em combinação com qualquer outra composição polimérica, em qualquer concentração e em qualquer razão. O biopolímero pode ser aumentado ou modificado com moléculas promotoras de adesão ou migração, por exemplo, peptídeos miméticos de colágeno que se ligam ao receptor de colágeno de linfócitos e/ou moléculas estimuladoras para intensificar a distribuição, a expansão ou a função, por exemplo, atividade anticancerígena, das células a serem distribuídas. O arcabouço de biopolímero pode ser um injetável, por exemplo, um gel ou uma composição semisólida ou sólida.
[00776] Em algumas modalidades, as células que expressam CAR descritas no presente documento são inoculadas no arcabouço de biopolímero antes da distribuição ao indivíduo. Em modalidades, o arcabouço de biopolímero compreende, ainda, um ou mais agentes terapêuticos adicionais descritos no presente documento (por exemplo, outra célula que expressa CAR, um anticorpo ou uma molécula pequena) ou agentes que intensificam a atividade de uma célula que expressa CAR, por exemplo, incorporados ou conjugados nos biopolímeros do arcabouço. Em modalidades, o arcabouço de biopolímero é injetado, por exemplo, por via intratumoral, ou cirurgicamente implantado no tumor ou dentro de uma proximidade do tumor suficiente para mediar um efeito antitumoral. Exemplos adicionais de composições de biopolímeros e métodos para sua administração são descritos em Stephan et al., Nature Biotechnology, 2015, 33:97-101; e WO2014/110591.
Composições Farmacêuticas e Tratamentos
[00777] Composições farmacêuticas da presente invenção podem compreender uma célula expressando CAR, por exemplo, uma pluralidade de células expressando CAR, como descrito aqui, em combinação com um ou mais transportadores, diluentes ou excipientes farmacêutica ou fisiologicamente aceitáveis. Tais composições podem compreender tampões, tais como solução salina tamponada neutra, solução salina tamponada com fosfato e semelhantes; carboidratos, tais como glicose, manose, sacarose ou dextranos, manitol; proteínas; polipeptídeos ou aminoácidos como glicina; antioxidantes; agentes quelantes, tais como EDTA ou glutationa; adjuvantes (por exemplo, hidróxido de alumínio); e conservantes. As composições da presente invenção são em um aspecto formuladas para administração intravenosa.
[00778] As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas de uma maneira apropriada à doença a ser tratada (ou prevenida). A quantidade e a frequência da administração serão determinadas por fatores como a condição do paciente e o tipo e a gravidade da doença do paciente, embora dosagens apropriadas possam ser determinadas por ensaios clínicos.
[00779] Em uma modalidade, a composição farmacêutica está substancialmente desprovida, por exemplo, não há níveis detectáveis de um contaminante, por exemplo, selecionado do grupo consistindo em endotoxina, micoplasma, lentivírus competente para replicação (RCL), p24, ácido nucleico de VSV-G, HIV gag, esférulas revestidas com anti- CD3/anti-CD28 residual, anticorpos de camundongo, soro humano reunido, albumina de soro bovino, soro bovino, componentes do meio de cultura, componentes de células de empacotamento ou plasmídeos de vetores, uma bactéria e um fungo. Em uma modalidade, a bactéria é, pelo menos, uma selecionada a partir do grupo que consiste em Alcaligenes faecalis, Candida albicans, Escherichia coli, Haemophilus influenza, Neisseria meningitides, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumonia, e Streptococcus pyogenes do grupo A.
[00780] Quando é indicada "uma quantidade imunologicamente eficaz", "uma quantidade eficaz antitumoral", "uma quantidade eficaz inibidora de tumores" ou "quantidade terapêutica", a quantidade precisa das composições da presente invenção a ser administrada pode ser determinada por um médico considerando diferenças individuais na idade, peso, tamanho do tumor, extensão da infecção ou metástase, e afecção do paciente (indivíduo). Pode ser geralmente afirmado que uma composição farmacêutica compreendendo as células T descritas aqui pode ser administrada a uma dosagem de 104 até 109 células/kg de peso do corpo, em alguns casos 105 até 106 células/kg de peso do corpo, incluindo todos os valores inteiros nesses intervalos. Composições de células T também podem ser administradas múltiplas vezes nessas dosagens. As células podem ser administradas usando técnicas de infusão que são habitualmente conhecidas em imunoterapia (ver, por exemplo, Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988).
[00781] Em certos aspectos, pode ser desejado administrar células T ativadas a um indivíduo e então subsequentemente retirar sangue (ou realizar uma aférese), ativar células T a partir daí de acordo com a presente invenção, e reinfundir no paciente estas células T ativadas e expandidas. Esse processo pode ser realizado múltiplas vezes a cada período de algumas semanas. Em certos aspectos, células T podem ser ativadas de recolhas de sangue desde 10 cc até 400 cc. Em certos aspectos, células T são ativadas de recolhas de sangue de 20 cc, 30 cc, 40 cc, 50 cc, 60 cc, 70 cc, 80 cc, 90 cc ou 100 cc.
[00782] A administração das composições em questão pode ser efetuada de qualquer maneira conveniente, incluindo por inalação de aerossol, injeção, ingestão, transfusão, implantação ou transplantação. As composições aqui descritas podem ser administradas a um paciente transarterialmente, subcutaneamente, intradermicamente, intratumoralmente, intranodalmente, intramedularmente, intramuscularmente, por injeção intravenosa (i.v.) ou intraperitonealmente. Em um aspecto, as composições de células T da presente invenção são administradas a um paciente por injeção intradérmica ou subcutânea. Em um aspecto, as composições de células que expressam CAR (por exemplo, célula T ou célula NK) da presente invenção são administradas por injeção i.v. As composições de células que expressam CAR (por exemplo, células T ou células NK) podem ser injetadas diretamente em um tumor, linfonodo ou sítio da infecção.
[00783] Em um aspecto particular exemplificativo, indivíduos podem ser submetidos a leucaférese, em que leucócitos são recolhidos, enriquecidos ou depletados ex vivo para selecionar e/ou isolar as células de interesse, por exemplo, células efetoras imunes (por exemplo, células T ou células NK). Estes isolados de célula imunoefetora (por exemplo, célula T ou célula NK) podem ser expandidos por métodos conhecidos na técnica e tratados de modo que um ou mais construtos de CAR da invenção possam ser introduzidos, criando assim uma célula que expressa CAR (por exemplo, célula T de CAR ou célula NK que expressa CAR) da invenção. Os indivíduos necessitados podem ser subsequentemente submetidos a tratamento padrão com quimioterapia de dose elevada seguido de transplantação de células-tronco do sangue periférico. Em certos aspectos, após ou de modo concorrente com o transplante, os indivíduos recebem uma infusão das células que expressam CAR expandidas (por exemplo, células T ou células NK de CAR) da presente invenção. Em um aspecto adicional, células expandidas são administradas antes ou após cirurgia.
[00784] Nas modalidades, linfodepleção é realizada em um indivíduo, por exemplo, antes de administrar uma ou mais células que expressam um CAR descrito no presente documento, por exemplo, um CAR de ligação a BCMA descrito no presente documento. Nas modalidades, a linfodepleção compreende administrar um ou mais dentre melfalano, citoxano, ciclofosfamida e fludarabina.
[00785] A dosagem dos tratamentos acima a ser administrada a um paciente irá variar com a natureza precisa da afecção sendo tratada e o recebedor do tratamento. O escalamento de dosagens para administração humana pode ser realizado de acordo com práticas aceites na técnica. A dose para CAMPATH, por exemplo, irá geralmente se situar na gama de 1 até cerca de 100 mg para um paciente adulto, habitualmente administrada diariamente durante um período entre 1 e 30 dias. A dose diária preferencial é 1 até 10 mg por dia apesar de, em alguns casos, doses maiores até 40 mg por dia poderem ser usadas (descrito na Patente U.S. No. 6,120,766).
[00786] Em uma modalidade, o CAR é introduzido em células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK), por exemplo, usando transcrição in vitro, e o indivíduo (por exemplo, humano) recebe uma administração inicial de células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK) CAR da invenção, e uma ou mais administrações subsequentes das células efetoras imunes (por exemplo, células T ou células NK) CAR da invenção, em que a uma ou mais administrações subsequentes são administradas menos de 15 dias, por exemplo, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 ou 2 dias após a administração anterior. Em uma modalidade, mais do que uma administração das células efetoras imunes (por exemplo, células T, células NK) CAR da invenção são administradas ao indivíduo (por exemplo, humano) por semana, por exemplo, 2, 3 ou 4 administrações das células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK) CAR da invenção são administradas por semana. Em uma modalidade, o indivíduo (por exemplo, indivíduo humano) recebe mais do que uma administração das células efetoras imunes (por exemplo, células T ou células NK) CAR por semana (por exemplo, 2, 3 ou 4 administrações por semana) (também referido aqui como ciclo), seguido de uma semana sem administrações de células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK) CAR, e então uma ou mais administrações adicionais das células efetoras imunes (por exemplo, células T, células NK) CAR (por exemplo, mais de uma administração das células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK) CAR por semana) são administradas ao indivíduo. Em outra modalidade, o indivíduo (por exemplo, indivíduo humano) recebe mais do que um ciclo de células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK) CAR, e o tempo entre cada ciclo é menor do que 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 ou 3 dias. Em uma modalidade, as células imunoefetoras (por exemplo, células T ou células NK) CAR são administradas em dias alternados para 3 administrações por semana. Em uma modalidade, as células imunoefetoras imunes (por exemplo, células T ou células NK) CAR da invenção são administradas durante pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais semanas.
[00787] Em um aspecto, as células que expressam CAR de BCMA (por exemplo, CARTs de BCMA ou células NK que expressam CAR de BCMA) são geradas usando vetores virais lentivirais, como lentivírus. As células que expressam CAR (por exemplo, CARTs ou células NK que expressam CAR) geradas desse modo terão expressão de CAR estável.
[00788] Em um aspecto, células expressando CAR, por exemplo, CARTs, são geradas usando um vetor viral tal como um vetor gama- retroviral, por exemplo, um vetor gama-retroviral descrito aqui. CARTs geradas usando estes vetores podem ter expressão estável de CAR.
[00789] Em um aspecto, as células que expressam CAR (por exemplo, CARTs ou células NK que expressam CAR) expressa temporariamente vetores CAR durante 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 dias após a transdução. A expressão transiente de CARs pode ser efetuada por administração de vetores RNA CAR. Em um aspecto, o RNA CAR é transduzido na célula, por exemplo, célula T ou célula NK, por eletroporação.
[00790] Uma questão potencial que pode surgir em pacientes sendo tratados usando células que expressam CAR de expressão transitória (por exemplo, CARTs ou células NK que expressam CAR) (particularmente com células que expressam CAR contendo scFv murino (por exemplo, CARTs ou células NK que expressam CAR)) é anafilaxia após múltiplos tratamentos.
[00791] Sem ficar restringido por esta teoria, acredita-se que tal resposta anafilática poderá ser causada pelo fato de um paciente desenvolver uma resposta anti-CAR humoral, isto é, anticorpos anti-CAR tendo um isótipo anti-IgE. Se crê que células produtoras de anticorpos em um paciente sofrem uma troca de classe do isótipo IgG (que não causa anafilaxia) para o isótipo IgE quando há uma pausa de dez até quatorze dias de exposição ao antígeno.
[00792] Se um paciente estiver em risco elevado de gerar uma resposta de anticorpos anti-CAR durante a terapia com CAR transiente (como aquelas geradas por transduções de RNA), pausas na infusão da célula expressando CAR (por exemplo, célula NK expressando CART ou CAR) não devem durar mais do que dez até quatorze dias.
[00793] A invenção é adicionalmente descrita em detalhes com referência aos exemplos experimentais a seguir. Esses exemplos são fornecidos somente para propósitos ilustrativos e não se destinam a serem limitadores salvo se especificado de outro modo. Assim, a invenção não deve de modo nenhum ser considerada como estando limitada aos seguintes exemplos, ao invés disso, deve ser considerada como abrangendo quaisquer e todas as variações que se tornarem evidentes em resultado dos ensinamentos fornecidos no presente documento.
[00794] Sem descrição adicional, se crê que o perito na técnica pode, usando a descrição precedente e os seguintes exemplos ilustrativos, preparar e utilizar as composições da presente invenção e praticar os métodos reivindicados. Os seguintes exemplos de trabalho salientam especificamente vários aspectos da presente invenção, e não devem ser considerados limitadores de modo nenhum do restante da divulgação. Exemplo 1: BCMA-CART em Mieloma Múltiplo CART-BCMA (MCM998) demonstra atividade antitumoral potente in vivo
[00795] O nível de carga tumoral em um modelo de tumor KMS11 após a infusão de PBS, células T não transduzidas ("UTD"), ou células T transduzidas com uma ferramenta CAR ("J6MO"), BCMA-4, BCMA-9, BCMA-10 ("MCM998"), BCMA-13 ou BCMA-15 foi avaliado. BCMA-10 demonstrou a atividade antitumoral mais potente (Figura 14).
[00796] CART-BCMA em teste clínico de mieloma múltiplo (Número NCT: NCT02546167; UPCC 14415)
[00797] Um estudo piloto de centro único aberto para avaliar a segurança e a viabilidade da infusão de células T autólogas que expressam receptores de antígeno quimérico específicos para BCMA com domínios de sinalização em tandem 4-1BB e CD3zeta (chamados no presente documento de "CART-BCMA") em pacientes adultos com mieloma múltiplo(MM) foi projetado (Figura 15).
[00798] Os pacientes foram divididos em três grupos (Figura 15). Os pacientes da Coorte 1 receberam 1 a 5x108 células de CART-BCMA fornecidas como uma infusão de dose dividida ao longo de 3 dias. Os pacientes da Coorte 2 receberam uma infusão de ciclofosfamida antes da administração de 1 a 5x107 células de CART-BCMA fornecidas como uma infusão de dose dividida ao longo de 3 dias. Os pacientes da Coorte 3 receberam uma infusão de ciclofosfamida antes da administração de 1 a 5x108 células de CART-BCMA fornecidas como uma infusão de dose dividida ao longo de 3 dias. A Figura 16A fornece características de doença do paciente. A Figura 16B fornece informações sobre a presença de linfopenia de linha de base devido à doença e antes das terapias. Fabricação e dosagem de CART-BCMA (MCM998)
[00799] Todos os produtos de CART-BCMA foram fabricados com sucesso com dose limiar alvo mínima. Os produtos fabricados tiveram uma eficiência mediana de transdução de 22,5% (9,6 a 33,3%); uma expansão mediana em vezes de 20,7 (7,9 a 60,4); duplicação mediana da população de 4,4 (2,98 a 5,92); razão de CD4/CD8 de aférese mediana de 1,03 (0,61 a 3,2); e razão mediana de CD4/CD8 de produto de 1,72 (0,84 a 3,9). Treze dentre os quatorze pacientes atingiram a dose alvo máxima de 5 x 108 ou 5x107. O paciente 2 da Coorte 1 recebeu 1,9 x 108 células, incluindo 69% de células T no produto. Doze dentre os quatorze pacientes receberam 100% da dose planejada. O Paciente 1 e o Paciente 3 da Coorte 1 receberam apenas as duas primeiras infusões (40%)
devido a febres no Dia 2. Esses dados demostram que a fabricação de CART-BCMA é viável em pacientes com mieloma múltiplo fortemente pré- tratados. Resultados Clínicos
[00800] A atividade clínica é mostrada nas Figuras 17A, 17B e 17C para as Coortes 1, 2 e 3, respectivamente.
[00801] A expansão de CART-BCMA foi avaliada por citometria de fluxo (Figuras 18A e 18B) e por PCR (Figuras 19A e 19B). A expansão in vivo de CART-BCMA pode se correlacionar e prever a resposta à terapia (Figuras 20A e 20B). Nenhuma correlação foi observada entre a expressão de superfície de BCMA em células de mieloma múltiplo como determinado por citometria de fluxo e resultados clínicos (dados não mostrados). Exemplo 2: Análise correlativa de dados de testes clínicos
[00802] Para identificar os biomarcadores preditivos de resposta de paciente ao tratamento com CART-BCMA, os parâmetros mencionados na Tabela 28 foram analisados. Tabela 28 Parâmetros de biomarcador Parâmetro Tipo de amostra Tecnologia Perfil de liberação: QC e informativo Produto Vários: Expansão, contagem de células T, CD4/CD8, CAR+, IFN-γ, citotox CART PK Medula óssea (BM), Fluxo, qPCR sangue Citocinas séricas Sangue MSD/Luminex Imunofenótipo Aférese e Produto Fluxo Análise de assinatura gênica Aférese e Produto RNAseq Diversidade de TCR Aférese e Produto Sequenciamento profundo Proteínas séricas Soro: pré e pós infusão Somascan Expressão alvo Medula óssea (BM), ELISA: Níveis de BCMA, ligantes sangue solúveis (superfície e solúvel) infiltração/supressão tumoral de Medula óssea (BM) ISH/IHC células T (CAR)
[00803] A fração de células CAR+ CD4/ CD8 nas amostras dos pacientes foi adquirida em vários pontos no tempo após a infusão de CART-BCMA para Respondedores (paciente com resposta completa (CR), resposta parcial muito satisfatória (VGPR) ou resposta parcial (PR)) e Não Respondedores (pacientes com resposta menor (MR), doença estável (SD) ou doença progressiva (PD)) (Figuras 21A, 21B, 21C e 21D). Esses dados demostram que os Respondedores tiveram maior persistência de população de células CAR+ CD4/CD8 ao longo do tempo, em comparação com Não respondedores. Avaliação de níveis de citocina
[00804] A alteração no nível de expressão de citocina em vários pontos no tempo após a infusão de CART-BCMA foi avaliada (Figura 22). Esses dados demonstram que as maiores alterações de linha de base (Dia 0) ocorreram no nível de IL-6 (Figuras 23A e 23B), IL-10, monocina induzida por interferon gama (MIG) e IFN-γ (Figuras 24A e 24B). Sobretudo, IFN-γ pode diferenciar os Respondedores do tratamento com CART-BCMA dos Não Respondedores. Avaliação de níveis de BCMA no soro
[00805] O nível sérico de BCMA foi avaliado em 14 doadores normais e 12 pacientes com mieloma (Figuras 25A e 25B). BCMA estava presente em doadores normais em uma concentração sérica de cerca de 40 ng/ml, e em pacientes com mieloma em uma concentração sérica mediana de 176 ng/ml na linha de base. Os níveis séricos de BCMA também foram adquiridos em vários pontos no tempo após a infusão de CART-BCMA (Figuras 26A, 26B, 26C e 26D). Esses dados demonstram que alguns pacientes com altos níveis séricos de BCMA de linha de base responderam bem ao tratamento com CART-BCMA (Figura 26A). Além disso, os níveis séricos de BCMA poderiam servir como um marcador de resposta ao tratamento com CART-BCMA (Figuras 26C e 26D). Avaliação da porcentagem de células CART CD4+ e CD8+
[00806] A porcentagem de células CART CD4+ e CD8+ foi adquirida em vários pontos no tempo após a infusão de CART-BCMA em três pacientes (Figuras 27A, 27B e 27C). Os Respondedores conforme mostrado nas Figuras 27A e 27C tiveram uma expansão considerável de células T de CAR como observado por altos números de cópia BBz. A expansão foi principalmente ativada por CARTs CD8+. Embora os não respondedores também tivessem altos níveis de BCMA, nenhuma expansão foi observada (Figura 27B). Avaliação de subconjuntos de células T CD4+ e CD8+
[00807] O nível de subconjuntos de células T CD4+ e CD8+ de doadores normais e pacientes com mieloma múltiplo (MM) foi comparado (Figuras 28A, 28B, 28C e 28D). Os pacientes com MM apresentaram uma porcentagem mais baixa de células Tnl em comparação com doadores normais. O nível de células Tscm e Te foram similares em doadores normais e pacientes com MM. Os pacientes com MM apresentaram uma porcentagem mediana mais alta de células. O nível de subconjuntos de células T CD4+ e CD8+ em amostras de aférese também foi adquirido a partir de pacientes com MM (Figuras 28E e 28F).
[00808] A diferenciação de células T em amostras de aférese foi adquirida a partir de pacientes com MM (Figura 29). O nível de subconjuntos de células T CD4+ e CD8+ (por exemplo, células CD4+ ou CD8+ baseadas na expressão de PD1, CD27, e/ou GzB) também foi determinado em pacientes com MM (Figuras 30A e 30B).
Exemplo 3: Correlações preditivas de resposta à terapia com células T de receptor de antígeno quimérico (CAR) de BCMA em pacientes com mieloma múltiplo
[00809] Este exemplo descreve estudos que tiveram como objetivo descobrir biomarcadores que poderiam prever a resposta clínica de indivíduos ao tratamento com CART-BCMA antes da fabricação do CART-BCMA.
[00810] Amostras de sangue periférico foram coletadas de um total de oito pacientes humanos com mieloma múltiplo (MM) e foram coradas com um painel de citometria de fluxo de 14 parâmetros e analisadas em um instrumento de citometria de fluxo.
[00811] Esses pacientes com MM receberam tratamento com CART- BCMA conforme descrito no Exemplo 1. Com base em respostas clínicas 28 dias após a infusão, as amostras de paciente foram classificadas como Respondedores (R, definido como pacientes com CR, VGPR ou PR, NR = 3) ou Não Respondedores (NR, definido como pacientes com MR, SD, ou PD, NNR = 5).
[00812] Para identificar uma assinatura de biomarcador que está correlacionada com a resposta clínica, o pré-gating foi realizado para limitar a análise a viável, singleto, linfócitos. Subsequentemente, os dados pré-identificados foram usados para a mineração de dados e identificação de biomarcador, usando flowType (Aghaeepour et al. Bioinformatics. 28(7):1009-1016, 2012), um algoritmo automatizado bioestatístico, com base em R+ (https://www.r-project.org/about.html). FlowType usa um algoritmo de limiar ou agrupamento simples para particionar cada densidade de canal/marcador em uma população de células positiva e negativa com base no pressuposto de que a expressão de um marcador está ativada ou desativada (ou seja, há duas populações distintas). Essas partições são então combinadas para gerar um conjunto de fenótipos multidimensionais. Além disso, e para permitir a exclusão de marcadores da identificação de subconjuntos, a cada marcador também poderia ser atribuído um valor 'neutro' (ou seja, o marcador é excluído de um fenótipo). Este algoritmo gera um número total de fenótipos possíveis de 3N em que N é o número de marcadores (N=14 no presente experimento).
[00813] O comprimento de um fenótipo foi limitado a um máximo de quatro marcadores para permitir a identificação de fenótipos biologicamente significativos, visto que muitos marcadores podem levar à geração de fenótipos com contagens muito pequenas de células que seriam difíceis de interpretar. Este processo gerou um conjunto de 1.697 fenótipos possíveis. Além desses fenótipos exploratórios, um subconjunto de combinações dos fenótipos acima, como razão de CD4:CD8, Células T viáveis (%), a % de Monócitos, e % de células B também foram considerados.
[00814] Para medir o poder preditivo de cada fenótipo, um teste T foi utilizado para avaliar a diferença entre as frequências celulares dos fenótipos medidos (o número de células nesse fenótipo dividido pelo número total de células na população parental) entre os Respondentes (R) e Não Respondedores (NR). Os fenótipos mais estatisticamente significativos foram selecionados para confirmação manual usando FlowJo.
[00815] Verificou-se que a razão CD4:CD8 é um diferenciador evidente nas amostras de aférese, em termos de resposta clínica (Figuras 1A e 1B). A área que mais provavelmente separa os Respondedores de Não Respondedores corresponde a uma faixa de razão de CD4: CD8 entre 1 e 1,6, sugerindo que pacientes com níveis mais altos de populações de CD4 (por exemplo, uma razão de CD4: CD8 maior ou igual a 1,6) em suas amostras de aférese provavelmente responderão ao tratamento com CART-BCMA (Figura 1B).
[00816] Níveis mais altos das populações de células T tronco de memória CD8+ (TSCM) HLADR-CD95+CD27+ (Figura 2A), CD45RO- CD27+ (Figura 2B), e CCR7+CD45RO-CD27+ (Figura 2C) também foram observados em Respondedores em comparação com Não Respondedores, sugerindo que pacientes com níveis mais altos dessas populações de TSCM em suas amostras de aférese provavelmente responderão ao tratamento com CART-BCMA.
[00817] A análise, descrita acima, de células T nas amostras de aférese de fabricação pré-BCMA de pacientes com mieloma múltiplo demonstrou uma alta razão de CD4: CD8 em pacientes que responderam posteriormente à terapia com CART-BCMA e uma baixa razão de CD4:CD8 em Não Respondedores. Dessa forma, a seleção de pacientes com uma alta razão de CD4:CD8 em seu material de aférese pode potencializar um resultado do tratamento mais eficaz. Além disso, esses dados e as ferramentas de bioiformática sugerem que os biomarcadores imunológicos poderiam ser integrados como um meio para identificar quais pacientes têm maior probabilidade de responder à terapia com CART-BCMA, levando a uma abordagem personalizada ideal à terapia celular. Exemplo 4: Análise de biópsias tumorais de Mieloma Múltiplo
[00818] As amostras de biópsia do núcleo da medula óssea foram adquiridas de pacientes recrutados no estudo clínico da Universidade da Pensilvânia, intitulado "Pilot Study Of Redirected Autologous T Cells Engineered To Contain an Anti-BCMA scFv Coupled To TCRζ And 4-1BB Signaling Domains in Patients With Relapsed and/or Refractory Multiple
Myeloma"(Número NCT: NCT02546167; UPCC 14415) para análise. As amostras de biópsia do núcleo da medula óssea foram coletadas antes da administração ("Pré-tratamento" ou "Pré") ou no Dia 28, Dia 43 ou Dia 90 após a infusão. As amostras de biópsia foram fixadas em formalina com descalcificação Immunocal ™ e embebidas em parafina; e a qualidade do processamento da amostra foi confirmada por hibridização in situ (ISH) ao gene de manutenção de RNA de PPIB. Análise de localização de célula de MM CD138+ e expressão de BCMA
[00819] Os dados de localização das células CD138 + MM das amostras de biópsia da medula óssea do Paciente 13, Paciente 14, Paciente 15, Paciente 16 e Paciente 17 foram adquiridos antes da administração ("Pré-tratamento" ou "Pré") e no Dia 28 e Dia 90 ("3 meses") após a infusão (Figura 3). O paciente 13 teve expressão mínima de CD138 em suas amostras de pré-tratamento, Dia 28 e Dia 90 (Figura 3). O paciente 14 teve um número aumentado de células de MM CD138+ em sua amostra no Dia 28 em comparação com a amostra de pré- tratamento (Figura 3). O Paciente 15, o Paciente 16 e o Paciente 17 apresentaram infiltração extensa de células de MM CD138+ de linha de base, seguido de uma redução nas amostras no Dia 28 e um aumento nas amostras em três meses (Figura 3).
[00820] Os resultados dos pacientes para o tratamento com CART- BCMA e a % estimada de infiltração de CD138 são fornecidos na Tabela
29.
Tabela 29. Resultados dos pacientes ao tratamento com CART-BCMA e % estimada de infiltração de CD138 Coloração com % estimada de infiltração de CD138 CD138 Paciente Pré Dia 28 Dia 90 D43 Resposta Sobrevida livre de progressão (PFS) Paciente 7 50% Regressão parcial (PR) 1,5 Paciente 8 70% Doença progressiva (PD) 0,5 Paciente 12 40% Doença estável (SD) 1,5 Paciente 13 1% 0% 0% Resposta menor (MR) 4+ Paciente 14 80% 90% Doença estável (SD) 1,5 Paciente 15 95% 5% 10% Regressão parcial muito satisfatória (VGPR) Paciente 16 50% 5% 95% Regressão parcial (PR) 2+ Paciente 17 50% 5% 75% Regressão parcial (PR) 2+
[00821] Os dados de expressão de BCMA de amostras de biópsia de núcleo de medula óssea foram adquiridos de forma similar e analisados (Figura 4).
[00822] Uma discordância entre a expressão da proteína de BCMA conforme medida por IHC e a expressão de mRNA de BCMA conforme medida por ISH foi observada no Paciente 13 e no Paciente 14 (Figura 5).
[00823] No Paciente 15, altos níveis de proteína e mRNA de BCMA foram observados nas amostras de pré-tratamento, seguido de uma redução marcada nas amostras no Dia 28 e uma recorrência nas amostras no Dia 90 (Figura 6A). Células positivas raras para CARLo foram observadas nas amostras no Dia 28 e Dia 90 (Figura 6A). No Paciente 16, uma redução marcada no proteína de BCMA e sinal de mRNA foi observada no Dia 28, seguido de um aumento no Dia 90 (Figura 6B). Células positivas raras para CARLo foram observadas no Dia 28 e Dia 90 (Figura 6B). No paciente 17, uma redução no número de células positivas para BCMA e uma redução no sinal/célula de mRNA de BCMA foram observadas no Dia 28 (Figura 6C). O sinal/célula de mRNA de BCMA retornou ao nível da linha de base no Dia 90 (Figura 6C). O sinal de mRNA equívoco de CARLo foi detectado no Dia 90 (Figura 6C).
[00824] Em suma, a variabilidade na proteína de BCMA e na expressão de mRNA foi observada na linha de base e pareceu correlacionar-se com a resposta no conjunto de amostras examinado. Uma infiltração reduzida de células positivas para CD138 foi observada em 3 dentre 5 pacientes em 28 dias e foi associada à expressão reduzida de proteína de BCMA e mRNA. Uma infiltração aumentada de células positivas para CD138 foi observada nesses mesmos pacientes em 3 meses e foi associada a um retorno de expressão de BCMA.
[00825] Análise de níveis de mRNA de IDO1, IFN-γ e TGFβ
[00826] A expressão de níveis de mRNA de IDO1, IFN-γ e TGFβ foi determinada por ISH em amostras de biópsia de núcleo de medula óssea no Pré-tratamento, no Dia 28 e no Dia 90 adquiridas do Paciente 15 (Figura 7A), Paciente 16 (Figura 7B) e Paciente 17 (Figura 7C).
[00827] No Paciente 15, um aumento nos níveis de mRNA de IDO1 foi observado nas amostras no Dia 28 e Dia 90 em comparação com a amostra de Pré-tratamento (Figura 7A). Uma alteração mínima foi observada no nível de mRNA de IFN-γ em todas as amostras (Figura 7A). Uma redução nos níveis de mRNA de TGFβ foi observada nas amostras no Dia 28 e no Dia 90 em comparação com a amostra de Pré-tratamento, e essa alteração pode ocorrer devido a uma redução no nível de células de MM (Figura 7A).
[00828] No Paciente 16, um aumento nos níveis de mRNA de IDO1 foi observado no local de células de MM persistentes (Figura 7B). Células raras positivas para mRNA de IFN-γ foram observadas nas amostras no
Dia 28 e no Dia 90, enquanto um aumento acentuado nos níveis de mRNA do TGFβ foi observado nas células de MM na amostra no Dia 90 em relação à linha de base (Figura 7B).
[00829] No Paciente 17, um aumento nos níveis de mRNA de IDO1 foi observado na amostra no Dia 28 em comparação com a amostra de Pré- tratamento (Figura 7C). Um baixo nível de mRNA de IFN-γ foi observado em todos os pontos no tempo (Figura 7C). Uma redução nos níveis de mRNA de TGFβ foi observada na amostra no Dia 28 em comparação com a amostra de Pré, e essa alteração pode ocorrer devido a uma redução no nível de células de MM (Figura 7C).
[00830] Esses dados mostram que um aumento modesto na expressão do mRNA de IDO1 foi observado na medula óssea no Dia 28.
[00831] Uma análise de ISH similar foi conduzida nas amostras de biópsia de Pré-tratamento, no Dia 10, e no Dia 28 adquiridas do Paciente 19 (Figura 7D) e do Paciente 20 (Figura 7E). Um aumento na expressão de mRNA de IFN-γ e IDO1 foi observado no Dia 10. Análise de níveis de expressão de proteína de PD-L1, PD1, CD3 e FoxP3
[00832] O nível de expressão de proteína de PD-L1, PD1, CD3 e FoxP3 foi determinado por IHC em biópsias de núcleo de medula óssea no Pré-tratamento, no Dia 28 e no Dia 90 adquiridas do Paciente 15 (Figura 8A), Paciente 16 (Figura 8B) e Paciente 17 (Figura 8C).
[00833] No Paciente 15, um aumento na expressão de células estromais de PD-L1 foi observado no Dia 90 (Figura 8A). Nenhuma alteração na expressão de PD1, CD3 ou FoxP3 foi observado nas amostras testadas (Figura 8A).
[00834] No Paciente 16, um aumento na expressão de célula estromal de PD-L1 foi observado no Dia 90 (Figura 8B). Nenhuma infiltração de células PD1+ foi detectada (Figura 8B). Nenhuma alteração no número de células CD3+ ou FoxP3+ foi detectada (Figura 8B).
[00835] No Paciente 17, a expressão de células estromais de PD-L1 foi observado em todos os pontos no tempo (Figura 8C). Nenhuma alteração na infiltração de células PD1+ foi detectada e nenhuma alteração na expressão de CD3 ou FoxP3 foi observada nas amostras testadas (Figura 8C).
[00836] Uma análise de IHC similar foi conduzida nas amostras de biópsia de Pré-tratamento, no Dia 10, e no Dia 28 adquiridas do Paciente 19 (Figura 8D) e do Paciente 20 (Figura 8E). Esses dois pacientes mostraram um aumento em PD1 ou PD-L1 nas amostras no Dia 10.
[00837] Esses dados mostram que, embora alterações consistentes em PD-L1, PD1, CD3 e FoxP3 não tenham sido observadas, a regulação crescente de PD-L1 e/ou PD1 em alguns pacientes pode representar um potencial mecanismo de escape. Análise de níveis de expressão de proteína CD19
[00838] A expressão de proteína de CD19 foi determinada por IHC em biópsias de núcleo de medula óssea no Pré-tratamento, no Dia 28 e no Dia 90 adquiridas do Paciente 13, Paciente 14, Paciente 15, Paciente 16 e Paciente 17 (Figura 9). Um aumento na proporção relativa de células de MM positivas para CD19 foi observado no Paciente 15 e no Paciente 17 em 28 dias e 3 meses (Figura 9).
[00839] As células positivas para BCMA e as células positivas para CD19 foram determinadas como populações separadas nas biópsias de núcleo de medula óssea de Pré-tratamento e no Dia 90 adquiridas do Paciente 15 (Figuras 11A e 11B).
[00840] A população de células CD19+ CD34dim estava presente nas biópsias de medula óssea de Pré-tratamento adquiridas do Paciente 15 (Figura 12A) e do Paciente 17 (Figura 12B).
[00841] A população de CD19 é variavelmente CD138+ e CD138- nas amostras de Pré-tratamento adquiridas do Paciente 15 (Figura 13).
[00842] Esses dados sugerem que uma terapia de combinação incluindo um CART-BCMA e uma terapia direcionada para CD19 pode ser benéfica no tratamento de pacientes com MM. Análise de níveis de expressão de proteína CD20
[00843] A expressão de proteína de CD20 foi determinada por IHC em biópsias do núcleo da medula óssea adquiridas antes da administração e no Dia 28 e no Dia 90 após a infusão de CART-BCMA do Paciente 13, Paciente 14, Paciente 15, Paciente 16 e Paciente 17 (Figura 10). As células de MM positivas para CD20 preexistentes foram observadas em amostras adquiridas do paciente 14 (Figura 10). Uma emergência de células de MM positivas para CD20 foi observada no paciente 15 e no paciente 17 (Figura 10).
[00844] Esses dados sugerem que uma terapia de combinação incluindo um CART-BCMA e uma terapia direcionada para CD20 pode ser benéfica no tratamento de pacientes com MM. Exemplo 5: Atividade clínica e biológica de células T de Receptor de Antígeno Quimérico específico para Antígeno de Maturação de células B (CART-BCMA) em mieloma múltiplo refratário Sumário
[00845] As células T de receptor de antígeno quimérico (CAR) estão surgindo como uma nova terapia promissora em neoplasias hematológicas. O antígeno de maturação de células B (BCMA) é um receptor de superfície celular com expressão amplamente restrita a células plasmáticas, tornando-o um alvo racional para a terapia para mieloma múltiplo (MM). Um estudo de fase I de células T autólogas transduzidas com um CAR específico para BCMA completamente humano inovador contendo domínios de sinalização CD3ζ e 4-1BB (CART-BCMA) foi conduzido em indivíduos com MM recidivado/refratário após 3 ou mais linhas de terapia anteriores. Aqui são relatados resultados maduros da Coorte 1 deste estudo, usando uma dose de 1 a 5 x 108 células CART-BCMA administradas sem condicionamento quimioterápico anterior. Nove indivíduos com uma mediana de 9 linhas de terapia anteriores foram tratados; todos tinham citogenética de alto risco. As células T de CAR foram fabricadas com sucesso e foram detectáveis após infusão em todos os casos. Quatro indivíduos (44%) tiveram uma resposta objetiva (1 RP, 2 VGPR, 1 sCR), com duração mediana de resposta de 4 meses, incluindo 1 indivíduo com resposta completa e restrita em andamento 21 meses após o tratamento com CART-BCMA. Em comparação com não respondedores, os respondedores tiveram uma magnitude maior de expansão de CART-BCMA in vivo, que por sua vez foi associada à razão de CD4:CD8 pré-fabricação e à magnitude da expansão durante a fabricação. A síndrome de liberação de citocina foi o evento adverso relacionado ao tratamento mais frequente, ocorrendo em 8 dos 9 indivíduos (3 grau 3/4). Encefalopatia de grau 4 foi observada em 2 indivíduos. A sobrevida global média é estimada em 551 dias. As infusões de CART-BCMA administradas sem quimioterapia linfodepletante são clinicamente ativas em pacientes com MM fortemente pré-tratados e representam uma abordagem inovadora à terapia com MM. Resultados Projeto de protocolo e recrutamento
[00846] Um estudo de fase I (NCT02546167) foi aberto para avaliar a viabilidade, segurança, atividade clínica e atividade biológica da fabricação e administração de células CART-BCMA a pacientes com mieloma recidivado/refratário. A expressão de BCMA nas células do mieloma foi avaliada por citometria de fluxo, porém nenhum nível pré-
especificado foi necessário para o recrutamento. Após uma suspensão de duas semanas da terapia, os indivíduos foram submetidos à leucaférese em estado estacionário para coletar células T para a fabricação de CART-BCMA, tipicamente um processo de 3 a 4 semanas. A terapia anti- mieloma poderia ser retomada durante a fabricação até duas semanas antes da primeira infusão de CART-BCMA. As células CART-BCMA foram administradas em uma unidade de pesquisa ambulatorial durante 3 dias em infusões intravenosas de dose dividida (10% da dose administrada no dia 0; 30% no dia 1 e 60% no dia 2), conforme testes anteriores de CTL019 em adultos (Porter et al., Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015)). Nas coortes 2 e 3 (descritas abaixo), ciclofosfamida (Cy) foi administrada para linfodepleção 3 dias antes da primeira infusão de CART-BCMA (Figura 31).
[00847] Inicialmente, um projeto padrão de escalonamento de dose 3+3 foi usado, explorando três coortes sequenciais: 1) 1 a 5 x 108 células CART-BCMA individualmente; 2) Cy 1,5 g/m2 + 1-5 x 107 células CART- BCMA; e 3) Cy 1,5 g/m2 + 1 a 5 x 108 células CART-BCMA. O protocolo foi posteriormente alterado para permitir o tratamento de indivíduos adicionais em cada coorte, para obter mais informações sobre a segurança e eficácia das células CART-BCMA com e sem o condicionamento linfodepletante (ou seja, Cy), e em uma dose mais alta (1 a 5 x 108) e mais baixa (1 a 5 x 107) dose. São relatados aqui os resultados para os 9 indivíduos tratados na Coorte 1 com células CART- BCMA individualmente, agora com acompanhamento maduro. O recrutamento e acompanhamento de Coortes 2 e 3 estão em andamento.
[00848] Doze indivíduos consentiram durante o recrutamento na Coorte 1; 2 nunca coletaram células T (1 inelegível devido a doença pulmonar restritiva grave; 1 com rápida progressão da doença/declínio clínico). Dez produziram células CART-BCMA com sucesso; 1 nunca foi infundido devido à rápida progressão/declínio clínico e 9 foram infundidos entre novembro de 2015 e setembro de 2016 (Figura 37). Características de indivíduo e produto de CART-BCMA
[00849] Os dados demográficos dos indivíduos, linhas de terapia anteriores e características da doença estão resumidos na Tabela 30, com detalhes individuais mostrados na Tabela 32. A idade média dos indivíduos tratados era de 57 anos, sendo 67% do sexo masculino. Esses indivíduos apresentaram uma média de 9 linhas de terapia anteriores e 8/9 (89%) eram duplamente refratários a pelo menos 1 inibidor de proteassoma e agente imunomodulador. Todos apresentaram pelo menos 1 anormalidade citogenética de alto risco; 67% apresentaram deleção 17p ou uma mutação TP53. A carga tumoral de linha de base era alta (média de 80% de células de mieloma na biópsia da medula óssea pré-tratamento) e 2/9 (22%) apresentaram doença extramedular. A contagem absoluta média de linfócitos (ALC) e a contagem total de CD3 pré-leucaférese foram 830 e 325 células/µl, respectivamente, e declinaram para 500 e 258 células/µl, respectivamente, no momento das infusões de CART-BCMA, refletindo a doença avançada e extenso tratamento prévio nesta coorte.
[00850] Todos os 9 indivíduos fabricaram com sucesso células de CART-BCMA objetivo mínimo (1 x 108), embora um indivíduo exigisse 2 tentativas de leucaférese/fabricação. A eficiência média da transdução foi de 22,2% (faixa de 9,6 a 33,3%), com expansão média de 12,7 vezes de células inoculadas durante a fabricação. Os produtos finais eram compreendidos de uma média de 96% de células T CD3+, com razão média de CD4/CD8 de 1,6. Seis indivíduos receberam todas as 3 infusões planejadas de CART-BCMA, com 3 (indivíduos 01, 03 e 15)
recebendo apenas 40% da dose planejada (3a infusão mantida devido a febres e sinais de CRS). Detalhes adicionais de fabricação, características de produto, e dosagem para cada indivíduo são mostrados na Tabela 33. Resultados Clínicos
[00851] Quatro dentre 9 indivíduos (44%) obtiveram uma resposta parcial (PR) ou melhor, incluindo 1 PR, 2 com respostas parciais muito satisfatórias (VGPR), e 1 com resposta completa restrita (sCR). Dois indivíduos adicionais apresentaram resposta mínima (MR), e 3 não apresentaram resposta (Figura 32A). O tempo médio até a primeira resposta foi de 14 dias. Com base nas estimativas de Kaplan-Meier, a duração média de resposta (para aqueles com PR ou melhor) foi de 120 dias (faixa de 29 a 665+); e sobrevida livre de progressão média (PFS) foi de 65 dias (faixa 13 a 679+). Três indivíduos não apresentaram mieloma detectável por citometria de fluxo (sensibilidade estimada 10-5) de aspirados de medula realizados no dia 28 (indivíduos 01, 15) ou no dia 45 (indivíduo 03) após infusões de CART-BCMA. Os indivíduos 03 e 15 atingiram VGPR, porém progrediram em 5 e 4 meses, respectivamente. O indivíduo 01 apresentou 11 linhas de terapia anteriores, era refratário a bortezomibe, lenalidomida, carfilzomibe e pomalidomida, e apresentou deleção 17p juntamente com mutações en TP53 e NRAS, refletindo uma doença de risco muito baixo. O mesmo estava progredindo rapidamente antes da terapia com CART-BCMA, com 70% de células plasmáticas da medula óssea, M-spike sérico de 2,0 g/dl, M-spike na urina em 24 horas de 3900 mg, kappa livre de soro de 6794 mg/l, hipercalcemia e insuficiência renal aguda (creatinina sérica de 1,82 mg/dl). O mesmo apresentou teve evolução gradual de sua resposta de RP (dia 14) para VGPR (mês 3), CR (mês 6) e, então, para sCR (mês 9), e permanece na sCR 21 meses após a infusão de CART-BCMA. Um indivíduo (03) com envolvimento extramedular dos músculos e da pleura paraespinhal teve resposta metabólica completa em PET/CT 5 semanas após a infusão de CART-BCMA, incluindo resolução do derrame pleural maligno (Figura 32B), demonstrando capacidade das células CART-BCMA de trafegar para fora de compartimentos de sangue e medula. O outro indivíduo (08) com doença extramedular não apresentou resposta. No momento do corte de dados (9/11/17), 5 indivíduos morreram, e a sobrevida global média estimada (Figura 32C) foi de 551 dias (faixa de 24 a 679+). Segurança
[00852] Eventos adversos de grau 3 ou superior foram observados em 8/9 (88%) dos indivíduos e estão resumidos na Tabela 31, com todos os eventos adversos de cada indivíduo listados na Tabela 34. A síndrome de liberação de citocina (CRS), uma complicação bem descrita de terapia com células T de CAR, foi observada em 8 indivíduos: 1 de grau 1, 4 de grau 2, 3 de grau 3 e 1 de grau 4. O tempo médio de início da CRS foi de 3,5 dias após a primeira infusão (intervalo de 1 a 8), com duração média de 8 dias (faixa de 3 a 12) e duração média de internação de 9 dias (faixa de 3 a 40). A CRS foi associada a elevações na ferritina e proteína C- reativa. Quatro indivíduos receberam tocilizumabe, o anticorpo de receptor anti-IL6, com 3 exigindo uma segunda administração (indivíduos 01, 03, 08) e dois exigindo cuidados na unidade de terapia intensiva.
[00853] A neurotoxicidade é um evento adverso comum após a terapia com células T de CAR, que varia de confusão leve ou defeitos de concentração a déficits neurológicos focais, encefalopatia global, afasia, convulsões e/ou obtundação. O indivíduo 01 apresentou confusão de grau 1, que foi resolvida sem intervenção, no cenário de CRS de grau 3. Dois indivíduos (03 e 08) desenvolveram neurotoxicidade severa (grau 4)
após as infusões de CART-BCMA. Ambos apresentaram alta carga tumoral com doença extramedular e progressão rápida no momento do tratamento, e ambos receberam tocilizumabe para CRS grave. O indivíduo 03 desenvolveu obtundação e convulsões recorrentes que exigem intubação, no cenário de aumento da contagem de linfócitos periféricos, sugerindo rápida proliferação de CART-BCMA. A MRI do cérebro no dia 15 mostrou melhora difusa da substância branca mais pronunciada nos lobos posteriores, com o apagamento sulcal sugestivo de edema cerebral precoce. Nesse momento, o edema cerebral ainda não havia sido descrito como consequência da terapia com células T CAR (Abbasi et al., JAMA 317, 2271 (2017)), e seu quadro clínico e radiológico foi considerado mais consistente com a síndrome da encefalopatia reversível posterior (PRES). O mesmo recebeu esteroides intravenosos em altas doses (metilprednisolona 1 g/dia x 3 dias) sem melhora e, então, recebeu ciclofosfamida 1,5 g/m2 no dia 17, com rápida melhora neurológica em 48 horas, próximo da resolução completa do melhora anormal em MRI no dia 23, e nenhum déficit neurológico residual. Detalhes adicionais são descritos separadamente (Garfall et al., Blood 128, 5702-5702 (2016), incorporado a título de referência em sua totalidade).
[00854] O indivíduo 08 apresentou mieloma rapidamente progressivo no momento das infusões de CART-BCMA, com 80% de células plasmáticas da medula e envolvimento extramedular da pele, linfonodos, fígado, adrenais e rins, além de disfunção renal progressiva (Cr 2,87 g/dl). O mesmo desenvolveu CRS de grau 4 no dia 15 associado à piora da lesão renal, fibrilação atrial, hipóxia, hipotensão, coagulopatia, delírio e transaminite. O mesmo apresentou estabilização hemodinâmica após tocilizumabe, porém apresentou encefalopatia/obtundação progressiva grau 4, exigindo intubação no dia 17. O MRI do cérebro era pouco notável, sem evidência de edema cerebral, porém mieloma progressivo na base do crânio foi observado. O mesmo recebeu esteroides com melhora na condição mental e foi extubado no dia 20. No dia 22, o mesmo desenvolveu choque recorrente e hipóxia que exige intubação; hemoculturas mostraram posteriormente candidemia. O sangue periférico agora mostrou 13% de células plasmáticas circulantes e os laboratórios confirmaram mieloma progressivo; nesse cenário, sua família optou apenas pelo cuidado com conforto e expirou no dia 24. Nenhuma outra morte ocorreu durante o estudo. Cinética de enxerto e persistência de CART-BCMA
[00855] Todos os indivíduos infundidos tinham células CART-BCMA detectáveis no sangue periférico por análise de qPCR, e as células T CAR+ foram detectáveis em 8/9 indivíduos por citometria de fluxo (Figura 33A; Figura 38 para coloração representativa). A expansão atingiu o pico no dia 10 para a maioria dos indivíduos, com células CART-BCMA compreendendo mais de 75% de todas as células T CD3+ circulantes nos dois indivíduos (01, 03) com maior expansão, correspondendo a 5300 e 8700 células CART-BCMA circulantes por µl de sangue, respectivamente, no pico da expansão (Figura 39). Apesar da predominância de células T CD4+ na pré-infusão do produto CART-BCMA, as células CART-BCMA que circulam no sangue eram predominantemente CD8+ e eram altamente ativadas, com uma média de 94% (faixa de 33 a 98%) de células CAR+ CD3+ que expressam HLA-DR durante o pico de expansão (Tabela 35). Os níveis de CART-BCMA em aspirados de medula geralmente refletiram aqueles do sangue periférico e também eram elevados no fluido pleural e no líquido cefalorraquidiano para o indivíduo 03 (Tabela 36). As células CART-BCMA mostraram uma duração limitada de detecção no sangue na maioria dos indivíduos. Em todos, exceto em 2 indivíduos (01, 03), as células CART-BCMA não eram mais detectáveis por citometria de fluxo após o dia 28, porém permaneceram detectáveis por qPCR até o dia 60 em 7/8 testados, incluindo no indivíduo 01 (em CR restrita), que continua a ter células detectáveis em 21 meses (Figura 33A). As respostas foram significativamente associadas à expansão de pico por qPCR (média de 102507 cópias/µg de DNA para ≥PR vs. 4187 cópias/µg para <PR, p=0,016), bem como com persistência ao longo dos primeiros 28 dias, como medido pela área sob a curva (AUC0-28d) (média de 885181 cópias*dias/µg de DNA para ≥PR vs. 26183 cópias*dias/µg de DNA para <PR, p=0,016) (Figura 33B). Alterações em fatores solúveis pós-CART-BCMA
[00856] Um total de 30 citocinas foi quantificado no soro do sangue periférico antes e depois da infusão de CART-BCMA. As alterações mais consistentes em relação à linha de base (aumento > 5 vezes) foram observadas para IL-6, IL-10, monocina induzida por interferon-gama (MIG, CXCL9), IP10 e receptor alfa de IL-1 (Figura 40). Os aumentos de citocinas foram mais pronunciados em indivíduos com maior expansão e resposta, com pico no momento da expansão máxima e com manifestações clínicas de síndrome de liberação de citocinas, similares aos padrões descritos anteriormente com as células T CAR direcionadas a CD19 (Porter et al., Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015); Teachey et al., Cancer Discov. 6, 664-679 (2016)). Todos os indivíduos com as respostas mais profundas (01, 03, 15) apresentaram concentrações de IL-6, IL-10 e MIG de pico >50 vezes acima da linha de base. O momento de CRS também foi associado à resposta, com início mediano de 2 dias (faixa de 1 a 3) após a primeira infusão em indivíduos com PR ou melhor, em comparação com 4,5 dias (faixa de 4 a 8) em indivíduos PR (p = 0,029, teste de Mann-Whitney).
[00857] O BCMA é derramado da superfície das células plasmáticas por clivagem mediada por gama-secretase (Laurent et al., Nat Commun 6, 7333 (2015)), levando a uma forma solúvel (sBCMA) que é detectável em circulação. Níveis elevados de sBCMA são encontrados em pacientes com mieloma e concentrações mais altas de sBCMA estão associadas a piores resultados clínicos (Sanchez et al., Br. J. Haematol. 158, 727-738 (2012)). O impacto do CART-BCMA na concentração sérica de sBCMA, bem como de seus ligantes BAFF e APRIL, foi avaliado em série. Em comparação com um painel de doadores saudáveis (HD, n = 6, sBCMA mediana 41,6 ng/ml, faixa de 25,2 a 84,4), a maioria dos indivíduos apresentou uma concentração elevada de sBCMA no sangue na linha de base (média de 1532 ng/ml, faixa de 78,2 a 6101,3), juntamente com a supressão concomitante de APRIL (média de 0,04 ng/ml, faixa de 0,01 a 0,96, em comparação com HD, média de 5,69 ng/ml, faixa de 3,07 a 6,24). As concentrações de BAFF (média de 0,84 ng/ml, faixa de 0,51 a 4,98) não foram significativamente diferentes de HD (média de 0,93 ng/ml, faixa de 0,58 a 1,24). A concentração de sBCMA de linha de base não se correlacionou com a resposta (Figura 41), porém o declínio na concentração de sBCMA após CART-BCMA foi mais pronunciada nos indivíduos com as respostas mais profundas (01, 03, 15). sBCMA também começou a subir novamente no momento da progressão para os indivíduos 03, 07, 15 (Figura 34), sugerindo que a concentração de sBCMA no sangue pode ser um biomarcador útil para avaliar a carga da doença do mieloma.
[00858] Todos os indivíduos apresentaram frequências deprimidas de células B CD19+ no sangue na linha de base (média de 1,9% de gate CD45+CD14-, faixa de 0,1% a 4,5%), provavelmente devido à supressão imunológica do mieloma progressivo e terapia prévia extensa. No entanto, ao contrário de pacientes tratados com células T CAR direcionadas a CD19, que causam aplasia prolongada de células B (Maude et al., N. Engl. J. Med. 371, 1507-1517 (2014)), 6 de 9 indivíduos tratados com células CART-BCMA tiveram recuperação de células B, tipicamente 2 a 3 meses após as infusões. A recuperação de células B foi mais pronunciada em indivíduos com as respostas mais profundas (01, 03, 15) e, geralmente, embora nem sempre, foi associada a um aumento na concentração sérica de BAFF e/ou APRIL (Figura 34), ligantes conhecidos por promover o desenvolvimento, proliferação e sobrevivência normais de células B (Rickert et al., Immunol. Rev. 244, 115-133 (2011)). É importante ressaltar que a frequência de células B permanece normal no indivíduo 01, apesar da persistência prolongada das células CART-BCMA circulantes, consistente com a ausência anteriormente relatada de expressão de BCMA na maioria das células B circulantes (Seckinger et al., Cancer Cell 31, 396-410 (2017); O'Connor et al., J. Exp. Med. 199, 91-98 (2004)). Expressão de BCMA em células de mieloma
[00859] Oito indivíduos foram avaliados quanto à expressão de BCMA por citometria de fluxo nas células do mieloma antes do tratamento, e todos tinham expressão detectável de BCMA (Figura 35) (consultar a Figura 42 para gating representativa). A intensidade da linha de base de BCMA variou de indivíduo para indivíduo e não parece se correlacionar com o grau de expansão ou resposta de CART-BCMA (Figura 43) nesta pequena coorte. Pós-tratamento, 7 indivíduos apresentaram células de mieloma avaliáveis para expressão de BCMA. Um indivíduo (03) apresentou uma redução significativa de intensidade de coloração com BCMA, em relação ao controle de fluorescência menos um (FMO), no momento da progressão (dia 164) em comparação com o pré-tratamento,
sugerindo uma regulação decrescente de expressão da superfície, seleção imune de BCMA-dim/variantes negativas e/ou aumento de supressão da superfície celular. Previsores de expansão de CART-BCMA
[00860] Conforme descrito acima, e compatível com estudos de células T CAR anteriores (Turtle et al., Sci. Transl. Med. 8, 355ra116 (2016); Porter et al., Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015); Ali et al., Blood 128, 1688-1700 (2016)), os indivíduos respondedores tiveram maior expansão e persistência das células CART-BCMA e liberação mais profunda de citocinas do que os que não respondedores. Para explorar características de pré-tratamento potencialmente associadas à forte expansão, as características do produto CART-BCMA antes, durante e no final da fabricação foram analisadas. Verificou-se que uma razão mais alta de CD4/CD8 no produto de leucaférese, bem como na cultura de sementes no início da fabricação (ou seja, após a etapa de elutriação para remover monócitos), estava associada a uma maior expansão de CART-BCMA em indivíduos (Figuras 36A e 36B), enquanto o número total de células T CD3 no produto de leucaférese ou cultura de sementes, ou a razão CD4/CD8 no produto final no final da fabricação não estava (dados não mostrados). A expansão em vezes de células inoculadas durante a fabricação também se correlacionou com a expansão de CART-BCMA in vivo (Figura 36C), sugerindo que a capacidade proliferativa in vitro pode prever a atividade in vivo. Por fim, análises anteriores em pacientes com CLL que receberam células T de CAR direcionadas para CD19 demonstraram que uma melhor expansão de células T de CAR e respostas clínicas estavam associadas a uma porcentagem maior de células T CD8+ no espécime de leucaférese que expressa um fenótipo CD27+CD45RO- (24). As células T CD8+ nos produtos de leucaférese de 9 indivíduos tratados apenas com células CART-BCMA foram examinadas e uma correlação similar foi encontrada entre a frequência de células CD27+CD45RO- e a expansão de CART- BCMA in vivo (Figura 36D). Discussão
[00861] A terapia com células T CAR está emergindo como uma opção terapêutica promissora para malignidades de células B, com potencial para controle duradouro da doença após um único tratamento, diferenciando-a de outras terapias que exigem a administração repetida e/ou contínua. Neste relatório, o potencial da terapia com células T CAR em mieloma avançado e refratário é demonstrado, com 4/9 indivíduos atingindo uma resposta parcial ou melhor, incluindo uma remissão completa e restrita em andamento 21 meses após a infusão, bem como 2 indivíduos adicionais com respostas menores. Isso é notável, dadas as características biológicas altamente adversas do mieloma dos indivíduos recrutados, incluindo alta carga tumoral, progressão rápida da doença e genética de alto risco. Os produtos de células T CAR foram fabricados com sucesso em todos os indivíduos, apesar da linfocitopenia das células T de linha de base, e o enxerto também foi observado em todos os indivíduos, embora os níveis de pico e a persistência de células T CAR variem significativamente entre os indivíduos.
[00862] O mieloma está associado a déficits quantitativos e funcionais nas células T, particularmente em doenças refratárias mais avançadas, com razões de células T CD4/CD8 invertidas, atividade antitumoral ex vivo comprometida e aquisição de um fenótipo esgotado ou senescente (Kay, et al., Blood 98, 23-28 (2001); Dhodapkar, et al., J. Exp. Med. 198, 1753-1757 (2003); Suen, et al., Leukemia 30, 1716-1724 (2016)). Neste estudo, as respostas correlacionaram-se com o grau de expansão in vivo,
que por sua vez foi associado a uma maior razão de células T CD4/CD8 pré-fabricação, frequência de pré-fabricação de células T CD45RO- CD27+CD8+ e magnitude de proliferação in vitro durante a fabricação. Isso sugere que produtos de CART-BCMA mais eficazes podem ser derivados de indivíduos com um compartimento de células T menos diferenciadas e mais "tipo naïve", como observado anteriormente em um teste de CLL usando células T CAR direcionadas para CD19 (Fraietta, et al., Blood 128, 57-57 (2016)). Essas constatações sugerem que as características das células T fenotípicas e/ou funcionais pré-tratamento podem eventualmente ajudar a prever indivíduos que provavelmente respondem ou não à terapia com CART-BCMA. As mesmas também sugerem que o tratamento de pacientes no início de sua doença, quando as células T podem ser intrinsecamente "ajustadas", pode ser mais eficaz.
[00863] A expansão das células T CAR observadas e a atividade clínica também são notáveis devido à falta de quimioterapia administrada como condicionamento pré-infusão nesta coorte. Demonstrou-se que os quimioterápicos, como a ciclofosfamida, aumentam a imunidade antitumoral mediada por células T por meio de múltiplos mecanismos potenciais, incluindo a redução de "depósitos" celulares, levando à disponibilidade aumentada de IL-7 e IL-15; depleção de populações de células supressoras, como células T reguladoras; indução de dano da mucosa com liberação de agonistas de receptores do tipo Toll que melhoram a maturação das células apresentadoras de antígeno; e alteração de microbiota intestinal (Gattinoni, et al., Nat. Rev. Immunol. 6, 383-393 (2006); Viaud, et al., Science 342, 971-976 (2013)). Dessa forma, a transferência adotiva de células T específicas para tumores, incluindo células T CAR, em seres humanos comumente seguiu alguma forma de condicionamento linfodepletante (Porter, et al., Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015); Rapoport, et al., Nat. Med. 21, 914-921 (2015); Noonan, et al., Sci. Transl. Med. 7, 288ra278 (2015); Morgan, et al., Science 314, 126-129 (2006)), com alguns estudos mostrando que aumentos incrementais na intensidade do condicionamento levam a melhores resultados clínicos e de enxerto (Turtle, et al., Sci. Transl. Med. 8, 355ra116 (2016); Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 26, 5233-5239 (2008)). Compatível com isso, estudos iniciais de terapia com células T CAR administrados sem condicionamento linfodepletante observaram apenas expansão de baixo nível e persistência limitada de células T transferidas, embora, reconhecidamente, esses estudos usassem construtos de CAR de primeira geração desprovidos de domínios co-estimuladores e continham sequências imunogênicas, o que também contribuiu para um enxerto insatisfatório (Pule, et al., Mol. Ther. 15, 825-833 (2007); Park, et al., Mol. Ther. 15, 825-833 (2007); Till, et al., Blood 112, 2261-2271 (2008)).
[00864] Este estudo demonstra claramente, no entanto, que pelo menos em alguns pacientes (por exemplo, indivíduo 01), o condicionamento quimioterápico não é necessário para enxerto robusto e sustentado de células T CAR e eficácia clínica. As condições que podem ter contribuído para esse sucesso incluem a inclusão do domínio co- estimulador de 4-1BB no construto CAR, alta carga tumoral com ampla disponibilidade de antígeno e linfopenia de linha de base significativa na população de pacientes. No entanto, dados os efeitos benéficos conhecidos do condicionamento quimioterápico, conforme descrito acima, é provável que a linfodepleção aumente a proporção de indivíduos que apresentam expansão e persistência bem-sucedidas de CART-BCMA, e talvez respostas clínicas. Esta questão será abordada nas Coortes 2 e 3 que recebem ciclofosfamida antes das células CART-BCMA.
[00865] Juntamente com o teste anterior de células T CAR-BCMA específico, relatado pelo NCI (Ali, et al., Blood 128, 1688-1700 (2016)), este estudo valida BCMA como um alvo altamente atraente em mieloma. Isso foi reforçado ainda mais pela atividade pré-clínica e clínica inicial promissora observada com anticorpos biespecíficos e conjugados anticorpo-fármaco que alvejam BCMA (Tai, et al., Blood 123, 3128-3138 (2014); Hipp, et al., Leukemia 31, 1743-1751 (2017); Cohen, et al., Blood 128, 1148-1148 (2016)). Além disso, relatórios preliminares de dois outros estudos de células T CAR específicas para BCMA, administradas em conjunto com quimioterapia linfodepletante e em populações de pacientes pré-tratados com menos intensidade, mostraram taxas de resposta ainda mais altas, várias das quais duraram >1 ano no momento do relatório (Fan, et al., J. Clin. Oncol. 35, abstr LBA3001 (2017); Berdeja, et al., J. Clin. Oncol. 35, abstr 3010 (2017)). Sobretudo, nenhum desses estudos relatou toxicidade inesperada fora do alvo ou fora do tumor, confirmando a expressão limitada do BCMA no tecido normal e diferenciando-a de outros potenciais alvos de células T CAR no mieloma (por exemplo CD138, CD38, CS1/SLAMF7) com expressão amplamente distribuída (Jiang, et al., Mol. Oncol. 8, 297-310 (2014); Drent, et al., Haematologica 101, 616-625 (2016); Chu, et al., Clin. Cancer Res. 20, 3989-4000 (2014)).
[00866] Uma questão importante não respondida para as células T CAR direcionadas para BCMA é se há um limiar de expressão de BCMA nas células de MM necessário para o reconhecimento e extermínio ideais. Este estudo não exigiu nenhum nível específico de BCMA como um requisito de elegibilidade, ao contrário dos outros 3 estudos de células CAR T específicos para BCMA relatados, que exigiam pelo menos 50% das células de mieloma para expressar BCMA por imunoistoquímica
(IHC) ou citometria de fluxo (Ali, et al., Blood 128, 1688-1700 (2016); Fan, et al., J. Clin. Oncol. 35, abstr LBA3001 (2017); Berdeja, et al., J. Clin. Oncol. 35, abstr 3010 (2017)). No teste de NCI, apenas 52/85 (62%) de biópsias de medula óssea pré-selecionadas coradas para BCMA por IHC atingiram esse limiar, significando que mais de um terço dos pacientes com MM potencialmente elegíveis teriam sido excluídos (Ali, et al., Blood 128, 1688-1700 (2016)). Embora seja possível que essa abordagem possa enriquecer para pacientes com maior probabilidade de resposta, também pode excluir aqueles que poderiam se beneficiar e, pelo menos nesta coorte inicial deste estudo, as respostas não se correlacionaram com a expressão de BCMA de linha de base por citometria de fluxo (Figura 43). Conjuntos de dados maiores são necessários para atender mais completamente esta questão. Outra questão refere-se à potencial regulação decrescente de BCMA ou à seleção de variantes dim/negativas para BCMA pós-terapia com células T pós-CAR, conforme observado em 1 paciente até o momento, tanto neste estudo como no estudo NCI (Ali, et al., Blood 128, 1688-1700 (2016)). Estudos maiores e acompanhamento mais longo ajudarão a determinar a verdadeira frequência desse fenômeno, porém sugere que pode ser um meio de escape de células de MM.
[00867] As toxicidades primárias de células T CAR permanecem síndrome de liberação de citocina (CRS) e neurotoxicidade. A frequência e gravidade de CRS nesta coorte foram similares àquelas relatadas em testes de células T CAR direcionadas para CD19 (Maude, et al., N. Engl. J. Med. 371, 1507-1517 (2014); Porter, et al., Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015)), e felizmente foi revogada com a terapia de bloqueio do receptor de IL-6. Dada a aparente falta de impacto de tocilizumabe na expansão e persistência de células T CAR infundidas, estudos estão agora em andamento (por exemplo, NCT02906371), explorando seu uso inicialmente após a infusão, mesmo que a CRS seja apenas de baixo grau, o que pode limitar o desenvolvimento de toxicidade grave ou com risco de vida. A neurotoxicidade foi relatada em até 50% de indivíduos em alguns testes de células T CAR (Turtle, et al., Sci. Transl. Med. 8, 355ra116 (2016); Turtle, et al., J. Clin. Invest. 126, 2123-2138 (2016); Kochenderfer, et al., J. Clin. Oncol. 33, 540-549 (2015)), e continua a ser um desafio. Isto pode ocorrer concomitantemente ou subsequente à CRS, e geralmente não melhora (ou pode piorar) após o tocilizumabe. A presença de células T CAR no sistema nervoso central (SNC) (como avaliado pela análise do líquido cefalorraquidiano) por si só não prevê necessariamente neurotoxicidade, porém a neurotoxicidade foi associada ao início precoce de CRS e à rápida elevação de citocinas inflamatórias (por exemplo IL6, IFN-gama) tanto no soro quanto no SNC, talvez levando ao aumento da permeabilidade vascular do SNC (Gust, et al., Cancer Discov., (2017)). Casos leves são tratados com apoio, com esteroides geralmente administrados para casos mais graves. Felizmente, a maioria dos casos foi reversível e autolimitada, embora casos fatais com edema cerebral tenham sido relatados (Abbasi, et al., JAMA 317, 2271 (2017); Gust, et al., Cancer Discov., (2017)). A experiência neste estudo demonstrando a reversão rápida de uma síndrome do tipo PRES no indivíduo 03 usando ciclofosfamida sugere que essa pode ser uma opção razoável para tentar em casos refratários a esteroides, especialmente se os sintomas estiverem associados à extensa expansão concomitante de células T CAR.
[00868] Em suma, as células T autólogas que expressam um CAR totalmente humano específico para BCMA poderiam expandir e induzir respostas objetivas, mesmo sem quimioterapia linfodepletante, em pacientes com MM refratários. Coortes subsequentes que exploram diferentes níveis de dose em conjunto com o condicionamento da ciclofosfamida ajudarão a otimizar ainda mais a segurança e a eficácia dessa abordagem. Materiais e métodos Indivíduos
[00869] Os indivíduos apresentaram mieloma múltiplo que recidivaram ou eram refratários (definido como progredindo em ou 60 dias após a terapia mais recente) após pelo menos três linhas anteriores de terapia ou duas linhas anteriores se forem duplamente refratários a um inibidor de proteassoma e IMiD. Outros critérios de elegibilidade essenciais incluíam doenças mensuráveis; um status de desempenho do ECOG de 0 a 2; creatinina sérica ≤ 2,5 mg/dl ou depuração estimada de creatinina ≥30 ml/min; contagem absoluta de neutrófilos ≥1000/μl e contagem de plaquetas ≥50.000/μl (≥30.000/μl se as células plasmáticas da medula óssea tiverem ≥50% da celularidade); SGOT ≤ 3x o limite superior de bilirrubina normal e total ≤ 2,0 mg/dl (exceto para pacientes em que a hiperbilirrubinemia é atribuída à síndrome de Gilbert); fração de ejeção do ventrículo esquerdo ≥ 45%; falta de doença autoimune ativa; e falta de envolvimento do sistema nervoso central com mieloma. Todos os indivíduos apresentaram um MRI de linha de base do cérebro e avaliações em série por um neurologista do estudo designado. O consentimento informado foi obtido de cada indivíduo e o estudo foi conduzido com a aprovação de IRB da Universidade da Pensilvânia, de acordo com a Declaração de Helsinki. Projeto de Estudo
[00870] Este teste clínico foi um estudo aberto de fase 1, em que o objetivo principal era a segurança. O grau de toxicidade foi determinado de acordo com National Cancer Institute's Common Terminology Criteria for Adverse Events versão 4.0, com exceção da síndrome de liberação de citocinas, que foi classificada de acordo com o Sistema de Classificação de CRS da Universidade da Pensilvânia (Tabela 38), conforme descrito (Porter, et al., Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015)). O estudo foi aprovado pelo Recombinant DNA Advisory Committee, FDA, Abramson Cancer Center Clinical Trials Scientific Review Committee, e o Penn Institutional Biosafety Committee and Institutional Review Board. O teste foi registrado em clinicaltrials.gov sob NCT02546167, e foi conduzido conforme descrito em "Protocol design and enrollment" na seção Resultados e na Figura 31. As respostas do mieloma foram avaliadas por critérios atualizados do International Myeloma Working Group (Kumar, et al., Lancet Oncol. 17, e328-346 (2016), incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). O corte de dados para essa análise foi 9/11/17. Fabricação e Infusões de CART-BCMA
[00871] As células T do sangue periférico foram estimuladas e transduzidas com um vetor lentiviral que codifica o CAR: fragmento variável de cadeia única anti-BCMA humano fundido com o domínio de dobradiça e transmembranar de CD8 e os domínios de sinalização intracelular 4-1BB e CD3z humano. As células CART-BCMA foram fabricadas na Clinical Cell and Vaccine Production Facility na Universidade da Pensilvânia, credenciada pelo FACT(http://www.factwebsite.org), conforme anteriormente descrito (Porter, et al., Sci. Transl. Med. 7, 303ra139 (2015); Kalos, et al., Sci. Transl. Med. 3, 95ra73 (2011)). A frequência das células CD3, CD4 e CD8 foi determinada por citometria de fluxo no produto de leucaférese, na cultura de sementes no início da fabricação (após a elutriação para reduzir monócitos) (Powell et al., Cytotherapy 11, 923-935 (2009)), e no final da fabricação. A expansão em vezes e a duplicação da população de células inoculadas foram medidas por contagem de células em um Coulter MultisizerTM. As células CART-BCMA foram formuladas e criopreservadas até o momento da infusão, então, administradas seguindo o desempenho de testes de controle de qualidade e revisão da garantia de qualidade por infusão intravenosa durante 3 dias, com 10%, 30% e 60% da dose administrada em cada dia. Medição de expansão de CART-BCMA
[00872] O processamento das amostras da pesquisa, o congelamento e as análises laboratoriais foram realizados no Translational and Correlative Studies Laboratory da Universidade da Pensilvânia, usando procedimentos operacionais padrão estabelecidos (SOPs) para recebimento, processamento, congelamento e análise de amostras. As células CART-BCMA foram quantificadas de amostras do sangue periférico ou medula óssea obtidas em pontos no tempo especificados pelo protocolo. As amostras foram coletadas tubos Vacutainer de tampa lavanda (K2EDTA) ou tampa vermelha (sem aditivo) (Becton Dickinson). Os tubos de tampa lavanda foram entregues ao laboratório dentro de duas horas após a coleta da amostra. As amostras foram processadas dentro de 16 horas de coleta de acordo com o SOP estabelecido. As PBMCs foram purificadas, processadas e armazenadas na fase de vapor de nitrogênio líquido. Os tubos de tampa vermelha foram processados dentro de duas horas após a coleta, incluindo o tempo de coagulação, e o soro foi isolado por centrifugação, dividido em alíquotas e armazenado a - 80°C.
[00873] As células foram avaliadas por citometria de fluxo diretamente após o processamento de Ficoll-Paque. A imunofenotipagem de PBMC foi realizada usando cerca de 2 × 105 a 5 × 105 células totais por condição, dependendo do rendimento celular nas amostras. Apenas os controles secundários de FMO (fluorescência menos um) foram usados para CART-BCMA e para avaliação de BCMA. Os reagentes e protocolos usados para citometria de fluxo são descritos nos Métodos Suplementares.
[00874] O DNA genômico foi isolado diretamente do sangue total ou do aspirado de medula e a análise de qPCR foi realizada usando a tecnologia ABI TaqMan e um ensaio validado para detectar a sequência de transgene de CAR integrada, conforme descrito (Kalos, et al., Sci. Transl. Med. 3, 95ra73 (2011)) usando triplicatas de 200 ng de DNA genômico por ponto no tempo para amostras de sangue periférico e medula. Para determinar o número de cópias de DNA por unidade, uma curva padrão de oito pontos foi gerada consistindo em 5 a 106 cópias do plasmídeo lentiviral adicionadas a 100 ng de DNA genômico de controle não transduzido. O número de cópias do plasmídeo presente na curva padrão foi verificado usando qPCR digital com o mesmo conjunto de iniciadores/sondas e realizado em um instrumento de PCR digital QuantStudio 3D (Life Technologies). Cada ponto de dados (amostra e curva padrão) foi avaliado em triplicata com um valor Ct positivo em três dentre três réplicas com uma porcentagem de coeficiente de variação menor que 0,95% para todos os valores quantificáveis. Para controlar a qualidade do DNA interrogado, uma reação de amplificação paralela foi realizada usando 20 ng de DNA genômico e uma combinação de iniciador/sonda específica para uma sequência genômica não transcrita a montante do gene CDKN1A (p21), conforme descrito (Kalos, et al., Sci. Transl. Med. 3, 95ra73 (2011)). Essas reações de amplificação geraram um fator de correção para ajustar a entrada calculada versus a entrada real de DNA. Cópias de transgene por micrograma de DNA foram calculadas de acordo com a fórmula: cópias por micrograma de DNA genômico = (cópias calculadas a partir da curva padrão de CART-BCMA) × fator de correção/(quantidade de DNA avaliada em nanogramas) × 1000 ng. Medição de Citocinas Séricas
[00875] O painel magnético de 30 plex de citocinas humanas (LHC6003M) é da Life Technologies.
[00876] As amostras de soro coletadas 1 dia antes da infusão de CART-BCMA ou a partir da linha de base e em pontos no tempo programados até 28 dias após a infusão foram criopreservadas a -80°C. As amostras em lote foram descongeladas e analisadas de acordo com os protocolos dos fabricantes. As placas de ensaio foram medidas usando um instrumento FlexMAP 3D, e a aquisição e análise de dados foram realizadas usando o software xPONENT. A qualidade dos dados foi examinada com base nos seguintes critérios. A curva padrão de cada analito tem um valor de 5P R2 > 0,95 com ou sem ajuste menor usando o software xPONENT. Para passar no controle de qualidade, os resultados para um soro de controle interno precisavam estar dentro dos 95% de IC (intervalo de confiança) derivados dos dados históricos de controle interno para > 25 dos analitos testados. Nenhum teste adicional foi realizado nas amostras com resultados fora da faixa baixa (<OOR). As amostras com resultados que estavam fora da faixa alta (>OOR) ou mais que duas vezes o valor máximo da curva padrão (SC max) foram testadas novamente em diluições mais altas. Os resultados que passaram nos controles de qualidade ou reensaios acima foram relatados.
Medição de BCMA, BAFF e APRIL solúveis
[00877] Os conjuntos de anticorpos para BCMA humano (DY193), APRIL (DY884B) e BAFF (DT124-05) eram da R&D Systems. O bead- strip ELISA e o reservatório de 4 colunas (SOW-A16735) eram da Assay Depot. O substrato ADHP de ELISA (10010469) era da Cayman Chemical. As placas de ensaio (OX1263) eram da E&K Scientific. Todos os reagentes de ELISA foram preparados de acordo com os protocolos de DuoSet ELISA exceto para o Reagente de Cor B, que foi suplementado com ADHP em 100 uM. Devido ao volume limitado de soros e à falta de disponibilidade de um ensaio Luminex para BCMA, APRIL e BAFF, os três analitos foram medidos usando bead-strips ELISA. Em vez de revestir o anticorpo de captura (cAB) nos poços de uma placa ELISA, o mesmo foi revestido nas superfícies das macrosferas, o que permitiu a medição de três analitos usando 100ul de soro. Os ensaios foram configurados usando bead-strips em placas de ensaio com base em um mapa de ensaio seguindo o protocolo para conjuntos de anticorpos. No final do ensaio, uma placa de substrato por 12 bead-strips foi preparada pela adição de 100 ul/poço de solução de substrato (1:1 de reagente de cor A e ADHP). Cada bead-strip foi colocada em uma coluna da placa de substrato de acordo com o mapa de ensaio. O desenvolvimento de cor durou 10 a 30 minutos. As placas foram lidas em um instrumento FLUO STAR OMEGA. O controle de qualidade de dados foi realizado conforme descrito nos dados Luminex. Avaliação de células do mieloma de medula óssea, incluindo expressão de BCMA
[00878] A avaliação de citometria de fluxo de material de aspirado de medula óssea foi realizada diretamente no aspirado após uma breve etapa de lise de glóbulos vermelhos com cloreto de amônio. O procedimento foi adaptada a partir do protocolo EuroFlow conforme descrito em (Flores-Montero, et al., Leukemia 31, 2094-2103 (2017)). Brevemente, até 2 ml de aspirado de medula óssea foram diluídos com 48 ml de solução de Pharm Lyse (BD Biosciences Cat# 555899) e incubados durante 15 minutos à temperatura ambiente em um dispositivo de agitação. As células foram, então, coletadas por centrifugação durante 10 minutos em 800g, lavadas duas vezes com tampão de citometria de fluxo (PBS com 1% de soro fetal bovino), coradas com corante de viabilidade L/D Aqua (Thermo Fisher Cat# L34957). A coloração de superfície foi realizada com uma mistura de anticorpos para CD45, CD19, CD138, CD38, CD14, CD56, CD20, CD3, CD269 (BCMA), CD274 (PD- L1). Apenas os controles secundários de FMO (fluorescência menos um) foram usados para avaliação de BCMA. Alíquotas de células PBMC doadoras normais foram coradas em paralelo como controles. As células foram, então, lavadas antes da permeabilização/fixação usando reagente Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) durante 20 minutos à temperatura ambiente, lavadas, e coradas com uma mistura de anticorpos a cadeias leves da imunoglobulina kappa e lambda. As amostras foram, então, lavadas antes da ressuspensão em PBS e a aquisição em um citômetro de fluxo de 17 cores LSR Fortessa Special Order Research Product (BD) equipado com um laser violeta, azul, verde e vermelho. Os arquivos do modo de lista foram analisados usando FlowJo (Treestar) ou FCS Express. Estatística
[00879] A análise estatística do estudo é principalmente descritiva devido à natureza piloto do teste e ao pequeno tamanho da amostra de pacientes. O método de Kaplan-Meier foi usado para estimar a duração da resposta, a sobrevida livre de progressão e a sobrevida global e os tempos médios de sobrevida associados. O teste de Mann-Whitney foi usado para avaliar a significância da associação entre resposta e a expansão de pico de CART-BCMA, área sob a curva de expansão nos primeiros 28 dias (AUC-28), níveis de BCMA solúvel de linha de base e expressão de BCMA de linha de base em células de MM.
As correlações de Spearman foram usadas para medir as correlações entre duas variáveis contínuas.
A significância da correlação de Spearman contra a hipótese nula de não correlação foi calculada com base na permutação.
A análise foi realizada usando Graphpad Prism versão 6.0. Tabela 30. Características do indivíduo Característica (n=9) Média (faixa) ou % Idade 57 (44-70) Gênero 67% do sexo masculino; 33% do sexo feminino Tempo médio desde o diagnóstico (anos) 4,9 (1,8 – 9,6) Citogenética de alto risco* 100% Mutação de Del 17p ou TP53 67% Linhas de terapia anteriores 9 (4 a 11) Len/Bort/Pom/Carf/Dara (% de expostos) 100%/100%/100%/100%/44% Len/Bort/Pom/Carf/Dara (% de refratários) 78%/ 89%/ 89%/ 89%/ 44% % Dual-/%Quad-/% Penta-refratários 100%/56%/33% SCT autólogo 78% Doença extramedular 22% % de células plasmáticas da medula óssea 80 (15-95) Contagem absoluta de linfócitos no Dia 0 (células/µl) 500 (200 – 1420) Contagem absoluta de CD3 no Dia 0 (células/µl) 258 (117 – 1354) LDH no Dia 0 (xx/xx) 175 (109 – 385) Creatinina sérica no Dia 0 (mg/dl) 1,58 (0,83 – 2,87) Hemoglobina no Dia 0 (g/dl) 8,7 (6,4 – 11,3) Plateletas no Dia 0 (x 103/ µl) 100 (13 – 221) *Inclui carótipo complexo, ganho de 1q, deleção de 17p, e/ou t(4;14). Bort=bortezomibe; Carf=carfilzomibe; Dara=daratumumabe; Del=deleção; Duplamente refratário = refratário a um inibidor de proteassoma (PI) e agente imunomodulador (IMiD); LDH=lactato desidrogenase; Len=lenalidomida; Penta-refratário=refratário a 2 PIs, 2 IMiDs, e dara; Pom=pomalidomida; Quadruplamente refratário =refratário a 2 PIs e 2 IMiDs; SCT=transplante de célula-tronco.
Tabela 31. Eventos adversos de grau 3 ou superior
Classificação 3 Classificação 4 Classificação 5 Todos Evento n (%) n (%) n (%) n (%) Hipofosfatemia 4 (44%) 0 0 4 (44%) Síndrome de liberação de citocina 2 (22%) 1 (11%) 0 3 (33%) Trombocitopenia 2 (33%) 1 (11%) 0 3 (33%) Neurotoxicidade* 0 2 (22%) 0 2 (22%) Anemia 2 (22%) 0 0 2 (22%) Infecção pulmonar 0 2 (22%) 0 2 (22%) Neutropenia 0 2 (22%) 0 2 (22%) Hipocalcemia 1 (11%) 1 (11%) 0 2 (22%) Hipocalemia 2 (22%) 0 0 2 (22%) Morte NOS** 0 0 1 (11%) 1 (11%) Fadiga 1 (11%) 0 0 1 (11%) Infecção-outro (candidemia) 0 1 (11%) 0 1 (11%) Infecção do trato urinário 1 (11%) 0 0 1 (11%) Fosfatase alcalina elevada 1 (11%) 0 0 1 (11%) AST elevada 1 (11%) 0 0 1 (11%) Fibrinogênio reduzido 1 (11%) 0 0 1 (11%) Linfopenia 0 1 (11%) 0 1 (11%) Leucopenia 0 1 (11%) 0 1 (11%) Hiponatremia 1 (11%) 0 0 1 (11%) Derrame pleural 1 (11%) 0 0 1 (11%) Hipertensão 1 (11%) 0 0 1 (11%) N=número de indivíduos que apresentaram o evento.
A toxicidade de grau mais alto experimentada pelo indivíduo é relatada na tabela. *Neurotoxicidade inclui 1 indivíduo com convulsões de grau 3, delírio de grau 4 e síndrome de leucoencefalopatia posterior reversível de grau 4 (RPLS), também conhecida como síndrome de encefalopatia reversível posterior (PRES); e 1 indivíduo com delírio de grau 3 e encefalopatia de grau 4. **Morte NOS (não especificada, de outro modo) no indivíduo 08 com candidemia e mieloma rapidamente progressivo; a família optou por adotar apenas medidas de conforto.
Métodos Suplementares Reagentes e protocolos para citometria de fluxo
[00880] Os anticorpos para painéis de detecção de células T eram V450 anti-CD45 (clone HI30), V500 anti-CD14 (clone M5E2), Ax488 anti- CD56 (clone B159), PerCP-Cy5.5 anti-CD4 (clone RPA-T4), APC-H7 anti- CD8 (clone SK1) (todos de BD Bioscience). Também, BV605 anti-CD3 (clone OKT3), BV711 anti-HLA-DR (clone L243), PE-Cy7 anti-CD19 (clone H1B19) foram usados junto à Biolegend. A expressão de CART- BCMA foi avaliada usando uma proteína recombinante de BCMA-Fc bis- biotinilada e o reagente de coloração secundário Estreptavidina-PE junto à BD Bioscience (cat#554061). As células foram ressuspensas em 100 μl de PBS contendo soro fetal bovino a 1%, azida de sódio a 0,02% e BCMA-Fc bis-biotinilado e incubadas durante 30 minutos em gelo, lavadas, ressuspensas em 100 μl de PBS contendo soro fetal bovino a 1%, azida de sódio a 0,02%, anticorpos de superfície e SA-PE, e incubadas durante 30 minutos em gelo, lavadas, ressuspensas em 250ul de PBS contendo soro fetal bovino 1% e de azida de sódio a 0,02% e adquiridas usando um citômetro de fluxo Fortessa equipado com laser violeta (405 nm), azul (488 nm), verde (532 nm) e vermelho (628 nm). Os dados foram analisados usando o software FlowJo (Versão 10, Treestar). Os valores de compensação foram estabelecidos usando o software eBiosciene UltraComp eBeads (eBioscience cat#01-222-42) e DIVA.
Tabela 32. Características individuais do indivíduo Anos # Iso- Último tx antes da Ind. Idade Sexo Raça desde Cariótipo FISH Mutação linha tipo aférese, infusão** Dx s* +11, NRAS, IgG Pom/Dex 01 66 M branco 9,6 46XY -16q, TP53, 11 K Pom/Dex -17p TP53 IgA +1q, +4p, Carfilz/Len/Dex 02 68 M branco 6,3 46XY n/a 9 K -17p Carfilz/Cyclo/Dex IgA +1q, t(4;14), - D-PACE 03 54 F branco 3,1 n/a n/a 4 L 16q D-AC +1q, -4, +11, NRAS, Carfilz/Pano 07 44 M branco 1,8 K n/a 9 -14, -16 TP53 Pom/Dex-ACE IgA complex +1q, -1p, -4, Carfilz/Pom/Dex 08 70 M branco 3,3 n/a 6 L o -17p Carfilz/Pom/Dex t(11;14), -16q, Daratumumabe 09 61 M branco 6,6 K 46XY nenhuma 9 -17p Dex de pulso Pom/Dex IgG KRAS, 10 47 M branco 4,9 n/a +1q, t(11;14) 7 Pom/Cyclo/Dex + L SF3B1 troca plasmática IgG +1q, t(4;14), - VDT-PACE 11 57 F AA 6,3 46XX n/a 10 L 17p VDT-PACE NRAS, IgA KRAS, Pembro/Pom/Dex 15 51 F Asiático 4,7 46XX +1q, t(11;14) 7 K BIRC3, Pom/Dex
KIT *Uma linha de terapia foi definida como por critérios de IMWG. A radiação não foi contada como uma linha. **Terapia mais recente recebida antes da coleta de células T ("aférese" - linha superior) e infusão de CART-BCMA ("infusão" – linha inferior). Toda a terapia foi realizada por pelo menos duas semanas antes da aférese e novamente por pelo menos duas semanas antes da infusão. Carfilz = carfilzomibe; ciclo = ciclofosfamida; D-AC = dexametasona + doxorrubicina infusional e ciclofosfamida; D-PACE = dexametasona + cisplatina infusional, doxorrubicina, ciclofosfamida, e etoposide; Dex = dexametasona; Dx = diagnóstico; Len = lenalidomida; Pano = panobinostat; Pembro = pembrolizumabe; Pom = pomalidomida; Pom/Dex-ACE = pomalidomida, dexametasona + doxorrubicina infusional, ciclofosfamida, e etoposide; Tx = tratamento; VDT- PACE = bortezomibe, dexametasona, talidomida + cisplatina infusional, doxorrubicina, ciclofosfamida, e etoposide; Yrs = anos.
Tabela 33. Detalhes de fabricação e produto de CART-BCMA %CD3+ em CD4: CD8 %CD3 Total #CAR Melhor %CD3+ CD4: CD8 CD4: CD8 Exp em Duplicação Efic. de Ind. cultura de em cultura de + na fornecido (x resposta em af em af na coleta vezes de pop trans (%) sementes sementes coleta 108)
01 28,4 3,20 52,6 2,04 98,4 2,40 43,5 4,54 9,6 2,0* sCR
02 41,9 0,80 63 0,40 69,1 1,31 12,7 3,67 18,2 5,0 MR
03 25,2 2,33 58,4 2,47 97,6 1,72 17,9 4,16 25,9 2,0* VGPR
07 10,2 2,18 20,3 1,47 94,9 1,60 38,9 5,28 24,2 5,0 PR
08 9,2 0,62 20,8 0,31 92,5 2,99 7,9 2,98 22,7 5,0 FD
09 54,6 0,77 86,8 0,49 87,5 1,69 10,0 3,33 22,2 5,0 SD
10 19,2 1,09 47,3 1,07 96,7 1,32 11,5 3,52 16,5 1,77 FD
11 5,56 1,14 21,4 0,81 96,9 1,20 8,7 3,11 19,4 5,0 MR
15 39,8 0,82 90,8 0,71 96 1,24 22,6 4,50 33,3 2,0* VGPR
A frequência das células CD3+, CD3+ CD4+ e CD3+ CD8+ totais foi avaliada por citometria de fluxo no produto de aférese, no início da fabricação ("cultura de sementes" após elutriação) e no final da fabricação ("na coleta"). Aph = produto de aférese; fold exp = expansão em vezes; pop dblgs = duplicação de população; trans eff = eficiência de transdução.
MR = resposta mínima; PD = doença progressiva; PR = resposta parcial; sCR = resposta completa restrita; SD = doença estável; VGPR = resposta parcial muito satisfatória *Os indivíduos 01, 03 e 15 receberam apenas 40% de dose planejada devido a febres/CRS inicial.
Tabela 34. Eventos adversos individuais de indivíduo Classifi- Ind. Grau 1 Grau 2 Classificação 3 Classificação 4 cação 5 Olho seco DIC Anemia Linfopenia Boca seca Vertigem Fadiga Sintomas similares aos da Íleo CRS gripe Náusea Alk phos Distúrbio de metabolismo aumentada – outro (deficiência de Vômito ferro) AST aumentada Febre Mialgia Hipocalcemia Creatinina aumentada Dor de cabeça Hipocalemia 01 Trombocitopenia Isquemia cerebrovascular Hipofosfatemia Distúrbio músculo-esquelético – Distúrbio do sistema outro (dores musculares nervoso – outro (confusão) generalizadas) Distúrbio vascular – outro Retenção urinária (edema) Transtorno respiratório – outro (edema pulmonar e atelectasia) Distúrbio cutâneo/SQ – outro (lesão cutânea) Hipertensão Taquicardia sinusal Trombocitopenia Transtornos gastrointestinais – outro (diarreia) Náusea Fadiga 02
CRS Tontura Dor de cabeça Transtorno respiratório – outro (congestão nasal e sinusal, tosse) Bradicardia sinusal SVT CRS Neutropenia Distúrbio do ouvido – outro Fadiga UTI Leucopenia (ouvidos cheios, dificuldade de audição) Infecção – outro (bacteremia Fibrinogênio Hipocalcemia provocada por S. mitis/S. oralis) reduzido Distúrbio ocular – outro RPLS (dificuldade de leitura) Infecção do trato respiratório Hipofosfatemia 03 superior Delírio Constipação Convulsão Linfopenia Edema Derrame pleural Hipernatremia Febre Hipertensão Distúrbio músculo-esquelético – Hipocalemia outro (descondicionamento, base dolorosa do crânio)
Hipomagnesemia Hemorragia intracraniana Dor óssea Distúrbio respiratório – outro (gotejamento pós-nasal) Comprometimento da concentração Hipotensão Dor de cabeça Rouquidão Distúrbio cutâneo/SQ – outro (equimose) Distúrbio cutâneo/SQ – CRS Anemia outro (erupção cutânea na face) Dispepsia Hipocalemia 07 Hipoalbuminemia Hiponatremia Hipocalcemia Taquicardia sinusal Infecção CRS Morte pulmonar NOS Distúrbio geral – outro Trombocitopenia 08 (rigidez) Delírio Encefalopatia Infecção – outro (fungemia) Constipação Anemia Calafrios Derrame pericárdico Fadiga CRS 09 Trombocitopenia Neutropenia Anorexia Hipocalcemia Hipocalemia Dor de cabeça Calafrios Trombocitopenia 10 Febre Náusea CRS Hipofosfatemia Fadiga Infecção – outro (Clostridium difficile) Trombocitopenia 11 Hipocalcemia Dor de cabeça Transtorno respiratório – outro (tosse, congestão) Hipocalcemia Fadiga Trombocitopenia Neutropenia Dor de cabeça CRS 15 Tosse Infecção – outro (teste positivo para toxina Shiga) Dispneia Hipotensão
[00881] Todos os eventos independentemente da atribuição estão listados. Se um evento ocorreu mais de uma vez no mesmo paciente, o grau mais alto é relatado. Alk phos = fosfatase alcalina; AST = aspartato aminotransferase; CRS=síndrome de liberação de citocina; DIC = coagulação intravascular disseminada; NOS = não especificado de outro modo; RPLS = síndrome de leucoencefalopatia posterior reversível; SQ = subcutâneo; SVT = taquicardia supraventricular; UTI = infecção do trato urinário Tabela 35. Características de células CART-BCMA+ no sangue periférico na expansão de pico Dia de % de CAR+ % de CAR+ % de CAR+ % de HLADR+ Melhor Ind. pico de CD3+ de CD4+ de CD8+ de CAR+ resposta 01 10 89,5 8,6 92,3 97 sCR 02 9 2,8 1,4 5,0 82 MR 03 14 76,2 13,7 85,9 97 VGPR 07 10 29,2 7,3 39,3 89 PR 08 16 9,3 0,4 16,9 95 FD 09 11* * * * * SD 10 30 1,9 0,1 2,0 21 FD 11 8 18,2 14,6 25,2 94 MR 15 10 28,1 6,3 51,0 96 VGPR
[00882] As células CART-BCMA foram associadas por citometria de fluxo como na Figura 38. No dia do pico de expansão, a frequência de células CAR+ nas populações CD3+, CD4+ e CD8 + é listada. O status de ativação na expansão de pico (como medido por % de células CAR+ que expressam HLA-DR) também é mostrado. MR = resposta mínima; PD = doença progressiva; PR = resposta parcial; sCR = resposta completa restrita; SD = doença estável; VGPR = resposta parcial muito satisfatória
[00883] *Pico determinado por qPCR; células CAR+ não detectáveis por fluxo.
Tabela 36. Enxerto de CART-BCMA por qPCR no sangue, medula óssea, e outros locais Sangue no BM no Dia Sangue em BM em 3 Ind. Outro (local, dia) Dia 28 28 3 meses meses 01 23447,33 10458,66 4373,95 n/a n/a 02 454,57 383,62 334,90 n/a n/a CSF, D4: 3285,88 CSF, D16: 158038,74 03 220081,08* 109964,97* 9517,67 9934,97 Fluido pleural, D8: 23941,97 Fluido pleural, D18: 144516,62 BM, D164: 105,81 07 1757,60 2140,31 n/a n/a n/a 08 n/a n/a n/a n/a n/a 09 32,15 16,75 n/a n/a n/a 10 62,64 0 n/a n/a n/a 11 731,44 n/a n/a n/a 15 724,49 1084,16 32,58 99,48 n/a
[00884] Os níveis de CART-BCMA (cópias/µg de DNA genômico) foram geralmente comparáveis no sangue e medula nos pontos de tempo testados. CART-BCMA foi encontrado em altos níveis em CSF e no fluido pleural do indivíduo 03. BM = medula óssea; CSF = líquido cefalorraquidiano. *Ensaios realizados no dia 45. Tabela 37. Detalhes de BCMA em células de mieloma Pré-tx % de Pré-tx FMO Pré-tx BCMA Pós-tx % de Pós-tx FMO Pós-Tx Melhor Ind. BCMA+ MFI MFI BCMA+ MFI BCMA MFI resposta 01 95 568 10864 n/a n/a n/a sCR 02 93 355 2375 97 483 3254 MR 19 78 03 84 265 1873 268 VGPR (d164) (d164) 07 n/a n/a n/a 84 273 1426 PR 08 99 124 6859 n/a n/a n/a FD 09 28 50 103 93,7 204 1116 SD 10 83 192 1998 99 54 2140 FD 11 81 332 1844 62 49 831 MR 15 99 249 24842 100 362 (d90) 30685 (d90) VGPR
[00885] As células do mieloma da medula óssea foram identificadas e a expressão de BCMA analisada A % de células do mieloma que expressam BCMA, bem como a intensidade média de fluorescência (MFI) para BCMA e controle negativo de FMO são mostradas. n/a = não disponível. Pré-tx=pré-tratamento. Pós-tx = pós-tratamento, no ponto no tempo no dia 28, exceto onde especificado em contrário. Tabela 38. Sistema de classificação Penn para Síndrome de Liberação de Citocina (CRS) Grau de Toxicidade CRS da Universidade da Pensilvânia 1 2 3 4 5 Reação Reação moderada que Reação mais severa: Complicações Morte moderada: exige fluidos intravenosos Hospitalização necessária para o gerenciamento de com risco de Tratados ou nutrição parenteral; sintomas relacionados à disfunção de órgãos, vida, como com alguns sinais de disfunção incluindo LFTs de grau 4 ou creatinina de grau 3 hipotensão que cuidados de de órgãos (ou seja, relacionados à CRS e não atribuíveis a quaisquer exige pressores apoio, como creatinina de grau 2 ou outras condições. Isto exclui o gerenciamento de febre de alta dose ou antipiréticos, testes de função hepática ou mialgia. Inclui hipotensão tratada com IVFs* ou hipóxia que exige antieméticos de grau 3 [LFTs] pressores de baixa dose, coagulopatia que exige ventilação relacionados à CRS e não plasma fresco congelado (FFP) ou crioprecipitado e mecânica. atribuíveis a nenhuma hipóxia que exige oxigênio suplementar (oxigênio da outra condição). cânula nasal, oxigênio de alto fluxo, Pressão Positiva Hospitalização para Contínua das Vias Aéreas [CPAP] ou Pressão Positiva tratamento de sintomas Bilateral das Vias Aéreas [BiPAP]). Pacientes relacionados à CRS, admitidos para tratamento de suspeita de infecção incluindo febre com devido à febre e/ou neutropenia podem apresentar neutropenia associada. CRS de grau 2.
*Definida como hipotensão que exige múltiplos bolos de fluido para suporte de pressão arterial. Exemplo 6: Expressão de superfície de BCMA em malignidades de células B que não são mieloma múltiplo Materiais e métodos
[00886] As seguintes linhagens celulares de linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) do subtipo de células B ativadas foram testadas: HBL-1, Oci-Ly3 e TMD-8. Adicionalmente, as seguintes linhagens de
DLBCL do subtipo de células B de centro germinal (GCB) foram testadas: SuDHL-4, SuDHL-6 e SuDHL-10. As linhagens de mieloma múltiplo (MM) U266 e KMS11 serviram como controles positivos e a linhagem de leucemia linfoblástica aguda Nalm6 bem como a linhagem de leucemia mielógena crônica (CML) K562 foram usadas como controles negativos. As células foram coradas com um anticorpo anti-BCMA marcado com PE (Biolegend, cat#357504) em diluição 1:50. A capacidade de ligação ao anticorpo (ABC) foi determinada com o kit de quantificação Quantum Simply Cellular (Bangs Laboratories, cat#815) de acordo com o protocolo do fabricante. As células foram analisadas em um citômetro de fluxo BD Fortessa e os dados analisados usando FlowJo. Resultados
[00887] A Figura 44A mostra os histogramas de expressão de BCMA e na Figura 44B, a capacidade de ligação ao anticorpo de cada linhagem celular é plotada. Ambas as linhagens de controle positivo apresentaram alta expressão de BCMA, como observado nos histogramas e por quantificação (Figuras 44A e 44B). Todas as outras linhagens apresentaram expressão de BCMA significativamente inferior. Entretanto, todas as linhagens de DLBCL testadas, com a exceção de Oci-Ly3, foram distintamente positivas para BCMA. HBL-1 e SuDHL-6 mostraram a expressão mais alta com uma capacidade de ligação a anticorpo >5.000. Exemplo 7: Previsores de Expansão de Células T e Respostas Clínicas após a terapia com células T do Receptor de Antígeno Quimérico Específico para Antígeno de Maturação de Células B (CART-BCMA) para mieloma múltiplo recidivado/refratário (MM) Antecedentes:
[00888] O MM recidivado/refratário (rel/ref) está associado à disfunção imune progressiva, incluindo reversão de razão de células T CD4:CD8 e aquisição de fenótipos de células T diferenciados terminalmente. As células T de CAR direcionadas para BCMA têm atividade promissora em MM, porém os fatores que preveem uma expansão in vivo robusta e as respostas não são conhecidas. Em um estudo de CART-BCMA de fase 1 (células T autólogas que expressam um CAR específico para BCMA humano com domínios de sinalização de CD3ζ/4-1BB) em pacientes refratários com MM (média de 7 anteriores, 96% de citogenética de alto risco), resposta parcial (PR) ou melhor foi observada em 12/25 (47%) (Cohen et al, ASH 2017, #505, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). Recentemente, demonstrou-se em pacientes com CLL que recebem células T de CAR direcionadas para CD19 que determinados fenótipos de células T antes da geração do produto T de CAR estavam associados à expansão in vivo aprimorada e resultados clínicos (Fraietta et al, Nat Med 2018, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). Dessa forma, este estudo procurou identificar características clínicas ou imunológicas pré- tratamento associadas à expansão e/ou resposta de CART-BCMA. Métodos:
[00889] Três coortes foram recrutadas: 1) 1 a 5 x 108 células CART individualmente; 2) ciclofosfamida (Cy) 1,5 g/m2 + 1 a 5 x 107 células CART; e 3) Cy 1,5 g/m2 + 1 a 5 x 108 células CART. A análise fenotípica de células mononucleares do sangue periférico (PB) e medula óssea (BM), alíquotas de leucaférese congeladas e fenótipo e cinética in vitro de crescimento de CART-BCMA durante a fabricação foram realizadas por citometria de fluxo. A expansão in vivo de CART-BCMA foi avaliada por citometria de fluxo e qPCR. As respostas foram avaliadas por critérios de IMWG.
Resultados:
[00890] As respostas (≥PR) foram observadas em 4/9 pts (44%, 1 sCR, 2 VPGR, 1 PR) na coorte 1; 1/5 (20%, 1 PR) na coorte 2; e 7/11 (64%, 1 CR, 3 VGPR, 3 PR) na coorte 3. A partir de 09/07/2018, 3/25 (12%) permanecem livres de progressão 11, 14 e 32 meses após as infusões. Conforme anteriormente descrito, as respostas foram associadas à expansão de CART-BCMA de pico in vivo (p=0,002) bem como a expansão no primeiro mês após a infusão (AUC-28, p=0,002). Nenhuma característica clínica ou relacionada ao MM de linha de base foi significativamente associada à expansão ou resposta, incluindo idade, isótipo, tempo desde o diagnóstico, # terapias anteriores, sendo quad ou penta-refratário, presença de mutação de del 17p ou TP53, hemoglobina sérica, porcentagem de células de MM na BM, intensidade de BCMA de células de MM ou concentração de BCMA solúvel. O regime de tratamento administrado antes da leucaférese ou infusões de CART- BCMA também não teve valor preditivo. Verificou-se, no entanto, que razões mais altas de células T CD4:CD8 no produto de leucaférese estavam associadas a uma maior expansão de CART-BCMA in vivo (Spearman's r = 0,56, p = 0,005) e resposta clínica (PR ou melhor; p = 0,014, Mann-Whitney). Além disso, e similar aos dados de CLL, verificou- se que uma maior frequência de células T CD8 no produto de leucaférese com um fenótipo de "memória precoce" de CD45RO-CD27+ também estava associada a uma expansão aprimorada (Spearman's r = 0,48, p = 0,018) e resposta (p=0,047). A análise dos dados de fabricação confirmou que uma razão de CD4:CD8 maior no início da cultura estava associada a uma expansão maior (r = 0,41, p = 0,044) e, em menor grau, respostas (p = 0,074), enquanto os números absolutos de células T ou razão de CD4:CD8 no produto final CART-BCMA não estava (p=NS). A expansão in vitro durante a fabricação associou-se à expansão in vivo (r=0,48, p=0,017), porém não foi diretamente preditiva de resposta. No momento da infusão de CART-BCMA, a frequência de células T totais, células T CD8+, células NK, células B e células CD3+CD56+ no PB ou BM não estava associada à expansão ou resposta clínica subsequente de CART- BCMA; pré-infusão de razão de CD4:CD8 maior de PB e BM se correlacionou com a expansão (r=0,58, p=0,004 e r=0,64, p=0,003, respectivamente), porém não com a resposta. Conclusões:
[00891] Neste estudo, verificou-se que a expansão de CART-BCMA e respostas em pacientes com MM intensamente pré-tratados não estavam associadas à carga tumoral ou a outras características clínicas, porém se correlacionaram com determinadas características imunológicas antes da coleta e fabricação de células T, ou seja, preservação de razão CD4:CD8 e frequência aumentada de células T CD8 com um fenótipo de CD45RO- CD27+. Isso sugere que pacientes com sistemas imunológicos menos desregulados podem gerar produtos de células T de CAR mais eficazes em MM e tem implicações para otimizar a seleção de pacientes, o tempo de coleta de células T e técnicas de fabricação para tentar superar essas limitações em pacientes com MM. Exemplo 8: Previsores clínicos de aptidão das células T para a fabricação e eficácia de células T de CAR no mieloma múltiplo Introdução:
[00892] O ambiente clínico e as características do produto celular ideais para a terapia com células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) no mieloma múltiplo (MM) são incertos. Nos pacientes com CLL tratados com células T de CAR anti-CD19 (CART19), a prevalência de um fenótipo de células T de memória inicial (early-mem) (CD27+
CD45RO- CD8+) no momento da leucaférese foi preditiva de resposta clínica independentemente de outro paciente ou fatores específicos de doença e foi associado à capacidade aumentada de expansão de células T in vitro e ativação responsiva a CD19 (Fraietta et al. Nat Med 2018, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). A adequação de células T é, portanto, o principal determinante de resposta à terapia com células T de CAR. Neste estudo, as amostras de leucaférese de pacientes com MM obtidas após o término da terapia de indução (pós-ind) foram comparadas com aquelas obtidas em pacientes recidivados/refratários (rel/ref) para frequência de células T de memória precoces, razão CD4/CD8 e expansão de células T in vitro. Métodos:
[00893] As amostras de leucaférese criopreservadas foram analisadas quanto à porcentagem de células T de memória precoces e razão de CD4/CD8 por citometria de fluxo e cinética de expansão in vitro durante a estimulação com microesferas anti-CD3/anti-CD28. Amostras pós-ind foram obtidas entre 2007 e 2014 de testes com MM anteriormente relatados em que células T autólogas expandidas ex vivo foram infundidas após ASCT para facilitar a reconstituição imune (NCT01245673, NCT01426828, NCT00046852); as amostras rel/ref eram de pacientes com MM tratados em um estudo de fase um de CART- BCMA (NCT02546167). Resultados:
[00894] A coorte pós-ind inclui 38 pacientes com idade média de 55 anos (faixa de 41 a 68) e exposição anterior à lenalidomida (22), bortezomibe (21), dexametasona (38), ciclofosfamida (8), vincristina (2), talidomida (8), e doxorrubicina (4); o tempo médio entre a primeira terapia sistêmica e a leucaférese foi de 152 dias (faixa de 53 a 1886), com uma média de uma linha de terapia anterior (faixa de 1 a 4). A coorte rel/ref incluiu 25 pacientes com idade média de 58 anos (faixa de 44 a 75), 7 linhas de terapia anteriores médias (faixa de 3 a 13) e anteriormente expostos à lenalidomida (25), bortezomibe (25), pomalidomida (23), carfilzomibe/oprozomibe (24), daratumumabe (19), ciclofosfamida (25), SCT autólogo (23), SCT alogênico (1) e anti-PD1 (7). O teor médio de células plasmáticas da medula óssea na leucaférese foi menor na coorte pós-ind (12,5%, faixa de 0 a 80, n = 37) em comparação com a coorte rel/ref (65%, faixa de 0 a 95%). A porcentagem de células T de memória inicial foi maior na coorte pós-ind vs rel/ref (média de 43,9% vs 29,0%, p=0,001, Figura 45A). De modo semelhante, a razão de CD4/CD8 foi maior na coorte pós-ind vs rel/ref (média de 2,6 vs 0,87, p<0,0001, Figura 45B). A magnitude de expansão de células T in vitro durante a fabricação (medida como duplicação da população no dia 9 ou PDL9), que se correlacionou com a resposta a CART19 em CLL, foi maior na coorte pós- ind vs rel/ref (média de PDL9 5,3 vs 4,5, p=0,0008, Figura 45C). Coletar dados de ambas as coortes, o PDL9 correlacionou-se com a porcentagem de células T de memória inicial (Spearman’s rho 0,38, multiplicidade ajustada p=0,01) e a razão de CD4/CD8 (Spearman's rho 0,42, multiplicidade ajustada p=0,005). Na coorte pós-ind, não houve associação significativa entre a porcentagem de células T de memória inicial e o tempo de desde o diagnóstico de MM, a duração da terapia, a exposição a terapias específicas (incluindo ciclofosfamida, bortezomibe ou lenalidomida) ou o teor de células plasmáticas da medula óssea no momento de aférese.
No entanto, na coorte pós-ind, houve uma tendência de menor porcentagem de fenótipo de memória inicial (29% vs 49%, p=0,07) e menor razão de CD4/CD8 (média de 1,4 vs 2,7, p=0,04) entre os pacientes que necessitaram > duas linhas de terapia antes da aférese (n=3) em comparação com o restante da coorte (n=35).
Conclusão:
[00895] Em pacientes com MM, a frequência do fenótipo de células T de memória inicial, um biomarcador de aptidão validado funcionalmente para a fabricação de células T de CAR, foi significativamente maior nos produtos de leucaférese obtidos após a terapia de indução em comparação com o cenário recidivado/refratário, como a razão de CD4/CD8 e magnitude da expansão de células T in vitro. Este resultado sugere que as células T de CAR para MM produziriam melhores respostas clínicas nos pontos iniciais do curso da doença, em períodos de carga de doença relativamente baixa e antes da exposição a múltiplas linhas de terapia. Exemplo 9: Combinações de inibidor de PD-1 como a terapia de resgate para pacientes com mieloma múltiplo (MM) recidivado/refratário progredindo após as células CART direcionadas para BCMA Antecedentes:
[00896] As células T autólogas que expressam um receptor de antígeno quimérico (CAR) específico para o antígeno de maturação de células B (células CART-BCMA) mostram atividade em MM refratário, porém recidivas permanecem comuns. Os anticorpos anti-PD-1 (Abs) aumentam a atividade das células CART pré-clinicamente e induzem a reexpansão de células CART e respostas em pacientes com DLBCL progredindo após as células CART específicas para CD19 (Chong et al, Blood 2017, aqui incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). Os IMiDs lenalidomida (len) e pomalidomida (pom) podem aumentar a eficácia, porém também a toxicidade, das células CART e dos inibidores de PD-1 em MM. Elotuzumabe (elo) tem atividade clínica anti-MM em combinação com
IMiDs e dexametasona (dex) e sinergiza com Ab anti-PD-1 em modelos pré-clínicos. Métodos:
[00897] Os resultados de 25 indivíduos recrutados em um estudo de fase 1 de células CART-BCMA em MM recidivado/refratário foram descritos anteriormente (Cohen et al., ASH 2017, # 505, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). Cinco indivíduos foram identificados e examinados retrospectivamente que progrediram após CART-BCMA e receberam uma combinação de inibidor de PD-1 (pembrolizumabe (pembro)) como sua próxima terapia. As respostas foram avaliadas por critérios de IMWG. Os níveis de CART- BCMA foram avaliados por citometria de fluxo e pré-tratamento de qPCR, 2 a 4 semanas após a primeira dose de pembro, então, q4 semanas até a progressão. A dosagem de pembro era 200mg a cada 3 semanas; a dosagem de dex era 20 a 40 mg/semana. Resultados:
[00898] As características de cinco indivíduos são mostradas na Tabela 39. As linhas médias anteriores foram 9; todos tinham citogenética de alto risco. Todos eram refratários a pom, 2 a pembro/pom/dex e 1 a elo. A melhor resposta a CART-BCMA foi PR em 2, MR em 2 e PD em 1. O tempo médio entre o CART-BCMA e a terapia à base de pembro foi de 117 dias. Todos os pacientes ainda tinham células CART-BCMA detectáveis por qPCR, com 2 (pts. 07 e 21) ainda detectáveis por fluxo, no início da terapia de resgate. O primeiro pt. (02) recebeu pembro/pom/dex e teve MR, porém progrediu em 2 meses, sem reexpansão de CART-BCMA detectável. O segundo pt. (07) apresentou MM de cadeia leve kappa de progresso rápido 2 meses após o CART- BCMA e progrediram anteriormente em pembro/pom/dex. O mesmo iniciou elo/pembro/pom/dex e teve MR no dia 12 (kappa livre 1446 a 937 mg/l), associado à expansão robusta de células CART-BCMA (875,64 a 20505,07 cópias/µg de DNA por qPCR; 0,7% a 6,4 % de células CD3+ periféricas por fluxo). As células CART-BCMA reexpandidas eram predominantemente CD8+ e altamente ativadas (89% de HLA-DR+, a 18% de pré-terapia). Essa resposta teve curta duração, no entanto, com progressão 1 semana depois e retorno dos níveis de CART-BCMA à linha de base na semana 5. Três indivíduos subsequentes receberam elo/pembro/dex com len ou pom; com 2 MR e 1 SD e PFS de 3 a 4 meses. Nenhum teve reexpansão de células CART-BCMA. Modulação imune não específica foi observada e incluiu razão de células T CD4:CD8 (n=5), frequência de células NK aumentada/células T reduzida (n=4) e regulação crescente de HLA-DR em células T negativas para CAR (n=2). Uma fenotipagem mais detalhada do CART e de outras células imunológicas, incluindo a expressão de PD-1, está em andamento. Em relação à toxicidade, pt. 02 apresentaram febre de baixo grau e mialgias autolimitantes 4 semanas após pembro/pom/dex, associadas à elevação moderada em ferritina/PCR, sugestiva de CRS moderada. Nenhuma outra CRS foi observada, incluindo pt. 07 apesar da reexpansão de CART-BCMA. Um paciente (17) desenvolveu afasia expressiva recorrente começando 2 meses após elo/pembro/pom/dex, sem sinais de CRS e sem expansão observada de células CART-BCMA no sangue ou CSF. Isso foi resolvido com a interrupção da terapia e a retirada gradual da dose de esteroides. Conclusões:
[00899] Este estudo demonstra que uma combinação de inibidor de PD1 pode induzir a reexpansão de células CART e resposta anti-MM em um paciente com MM progredindo após a terapia com CART-BCMA.
Visto que esse paciente progrediu anteriormente em pembro/pom/dex, a atividade clínica observada provavelmente estava relacionada às células CART, com elotuzumabe também possivelmente contribuindo. Esta observação de prova de princípio sugere que um subconjunto de pacientes pode responder ao bloqueio do ponto de verificação ou a outras abordagens de modulação imunológica após a terapia com células BCMA CART, merecendo mais estudos. Tabela 39. Características do paciente Melhor CART D0 a Melhor PFS pós- qPCR de qPCR de Pembro CART CART de pico Pt Idade/Sexo Coorte CART Pembro D0 Regime de Pembro Pembro (Dias) pós- pré- Resposta (Dias) Resposta Pembro^ Pembro^ 2 68/M 1 MR 117 Pembro/Pom/Dex MR 67 331,59 128,82 7 44/M 1 PR 51 Elo/Pembro/Pom/Dex MR 18 875,64 20505,07 13 59/M 2 MR 149 Elo/Pembro/Len/Dex MR 105 50,34 50,72 17 64/F 3 PR 134 Elo/Pembro/Pom/Dex MR 130 405,56 320,61 21 73/M 3 FD 34 Elo/Pembro/Len/Dex SD 83 8372,96 433,28 8 Coorte 1==5x10 células CART-BCMA individualmente; Coorte 2=1,5 g/m2 de Cy e 5x107 de células; Coorte 3=1,5 g/m2 de Cy e 5x108 células Pembro=Pembrolizumabe; Elo=Elotuzumabe; Pom=Pomalidomida; Len=Lenalidomida; Dex=Dexametasona; Cy= ciclofosfamida SD=doença estável; MR=resposta mínima; PR=resposta parcial; PD=doença progressiva; PFS=sobrevida livre de progressão; As ^^unidades são cópias/µg de DNA genômica
[00900] Exemplo 10: Atividade clínica e biológica de células T de Receptor de Antígeno Quimérico específico para Antígeno de Maturação de células B (CART-BCMA) em mieloma múltiplo refratário: um teste aberto de centro único fase 1 Sumário
[00901] Antecedentes: As células T de receptor de antígeno quimérico
(CAR) são uma nova terapia promissora em neoplasias hematológicas. O antígeno de maturação de células B (BCMA) é um receptor de superfície celular com expressão amplamente restrita a células plasmáticas, tornando-o um alvo racional para a terapia para mieloma múltiplo (MM). Métodos: Um estudo de fase I de células T autólogas lentiviralmente transduzidas com um CAR específico para BCMA completamente humano inovador contendo domínios de sinalização CD3ζ e 4-1BB (CART-BCMA) foi conduzido em indivíduos com MM recidivado/refratário. Vinte e cinco indivíduos foram tratados em 3 coortes de dose: 1) 1 a 5 x 108 células CART-BCMA individualmente; 2) Ciclofosfamida (Cy) 1,5 g/m2 + 1 a 5 x 107 células CART-BCMA; e 3) Cy 1,5 g/m2 + 1 a 5 x 108 células CART-BCMA. Nenhum nível de expressão BCMA pré-especificado foi necessário. Constatações: Os indivíduos tinham uma média de 7 linhas de terapia anteriores; 96% eram duplamente refratários a um inibidor de proteassoma e a um fármaco imunomodulador; 96% tinham citogenética de alto risco. As células T de CAR foram produzidas com sucesso em todos os casos. As toxicidades incluíram síndrome de liberação de citocinas e neurotoxicidade, que foram de grau 3/4 em 8 (32%) e 3 (12%) indivíduos, respectivamente, e reversíveis. As células CART-BCMA se expandiram em todos os indivíduos, de forma mais consistente na coorte
3. As respostas clínicas foram observadas em 4/9 (44%) na coorte 1, 1/5 (20%) na coorte 2, e 7/11 (63%) na coorte 3, incluindo 5 respostas parciais, 5 parciais muito satisfatórias e duas completas. Três indivíduos apresentaram respostas em andamento em 11, 14 e 32 meses. A expressão de BCMA reduzida em células de MM residuais foi observada nos respondedores; a expressão aumentou na progressão na maioria. As respostas estavam associadas à expansão de CART-BCMA, que estava associada à razão de células T CD4:CD8 e à frequência de células T
CD45RO-CD27+CD8+ no produto de leucaférese pré-fabricação. Interpretação: As infusões de CART-BCMA administradas com ou sem quimioterapia linfodepletante são clinicamente ativas em pacientes com MM fortemente pré-tratados e representam uma abordagem inovadora à terapia com MM.
[00902] Este estudo fornece validação clínica adicional de BCMA como um alvo racional para a terapia de mieloma e caracteriza a segurança e a eficácia de um construto de CAR específico para BCMA completamente humano inovador contendo um domínio coestimulador de 4-1BB. Este estudo descreve adicionalmente a atividade biológica e clínica de células T de CAR específicas para BCMA, com e sem quimioterapia linfodepletante; demonstra expressão dinâmica de BCMA em células de mieloma pós-infusão, particularmente em pacientes respondedores; e identifica potenciais biomarcadores inovadores de expansão de células T de CAR e resposta clínica. Métodos Projeto de Estudo e Participantes
[00903] Os indivíduos elegíveis tinham MM recidivado e/ou refratário após pelo menos 3 regimes anteriores ou 2 regimes anteriores, se duplamente refratários a um inibidor de proteassoma (PI) e fármaco imunomodulador (IMiD). Outros critérios de elegibilidade essenciais na triagem incluíam o status de desempenho de ECOG (Eastern Cooperative Oncology Group) de 0 a 2; creatinina sérica ≤ 2,5 mg/dl ou depuração estimada de creatinina ≥30 ml/min; contagem absoluta de neutrófilos ≥1000/μl e contagem de plaquetas ≥50.000/μl (≥30.000/μl se as células plasmáticas da medula óssea tiverem ≥50% da celularidade); SGOT ≤ 3 vezes o limite superior de bilirrubina normal e total ≤ 2,0 mg/dl; fração de ejeção do ventrículo esquerdo ≥ 45%; falta de doença autoimune ativa; e falta de envolvimento do sistema nervoso central com mieloma. Nenhum nível de expressão BCMA pré-especificado em células de MM foi necessário.
[00904] Este teste clínico (NCT02546167) foi um estudo aberto de centro único de fase 1. Inicialmente, um projeto padrão de escalonamento de dose 3+3 foi usado, explorando três coortes sequenciais: 1) 1 a 5 x 108 células CART-BCMA individualmente; 2) Ciclofosfamida (Cy) 1,5 g/m2 + 1 a 5 x 107 células CART-BCMA; e 3) Cy 1,5 g/m2 + 1 a 5 x 108 células CART-BCMA. O protocolo foi alterado para expandir cada coorte para 9 indivíduos tratados, para obter mais informações sobre a segurança e eficácia das células CART-BCMA com e sem o condicionamento linfodepletante, e em uma dose mais alta (1 a 5 x 108) e mais baixa (1 a 5 x 107) dose. Uma alteração subsequente interrompeu o recrutamento na coorte 2 após 5 indivíduos devido à eficácia abaixo do ideal e permitiu até 13 indivíduos na coorte 3; entretanto, as limitações de financiamento, por fim, encerraram o recrutamento após 11 indivíduos da Coorte 3 tratados (n total=25 tratados). Procedimentos
[00905] Após uma suspensão de duas semanas da terapia (4 semanas para anticorpos monoclonais), os indivíduos foram submetidos à leucaférese em estado estacionário para coletar células T para a fabricação de CART-BCMA. A terapia anti-mieloma poderia ser retomada durante a fabricação até 2 semanas antes da primeira infusão de CART- BCMA. As células CART-BCMA foram administradas de forma intravenosa durante 3 dias (10% de dose no dia 0; 30% no dia 1, e 60% no dia 2), conforme descrito em Porter DL, et al., Sci Transl Med 2015; 7(303): 303ra139. A dose de 30% ou 60% pode ser mantida se os indivíduos desenvolverem sinais de CRS. Cy foi administrada 3 dias antes da primeira infusão de CART-BCMA. As avaliações clínicas e laboratoriais foram realizadas como na Figura 46.
[00906] As células CART-BCMA foram fabricadas na Clinical Cell and Vaccine Production Facility credenciada pelo FACT na Universidade da Pensilvânia, conforme descrito em Porter DL, et al., Sci Transl Med 2015; 7(303): 303ra139; Kalos M, et al., Sci Transl Med 2011; 3(95): 95ra73. A frequência de células CD3, CD4 e CD8 foi determinada por citometria de fluxo na cultura de sementes no início e no final da fabricação. A expansão em vezes e a duplicação da população de células inoculadas foram medidas por contagem de células em um Coulter MultisizerTM. Após a fabricação e os testes de controle de qualidade, as células CART- BCMA foram criopreservadas até o momento da infusão.
[00907] Os dados sobre eventos adversos (EAs) foram coletados desde o momento da primeira infusão de CART-BCMA (ou administração de Cy para as coortes 2 e 3). O grau de toxicidade foi determinado de acordo com National Cancer Institute's Common Terminology Criteria for Adverse Events versão 4.0, com exceção da síndrome de liberação de citocinas, que foi classificada de acordo com o Sistema de Classificação de CRS da Universidade da Pensilvânia (Tabela 38) (Porter DL, et al., Sci Transl Med 2015; 7(303): 303ra139). As respostas do mieloma foram avaliadas por critérios atualizados do International Myeloma Working Group (Kumar S, et al., Lancet Oncol. 2016, 17 (8): e328-46).
[00908] O processamento das amostras da pesquisa, o congelamento e as análises laboratoriais foram realizados no Translational and Correlative Studies Laboratory na Universidade da Pensilvânia, conforme descrito (Maude SL, et al., N Engl J Med 2014; 371(16): 1507-17; Porter DL, et al., Sci Transl Med 2015; 7(303): 303ra139; Kalos M, et al., Sci Transl Med 2011; 3(95): 95ra73). As células CART-BCMA foram quantificadas de amostras do sangue periférico ou medula óssea por citometria de fluxo e PCR quantitativa. Os reagentes e protocolos para citometria de fluxo são descritos nos Métodos Suplementares. O DNA genômico foi isolado diretamente do sangue total ou do aspirado de medula e a análise de qPCR foi realizada usando a tecnologia ABI TaqMan e um ensaio validado para detectar a sequência de transgene de CAR integrada como por Métodos Suplementares e descrito em Kalos M, et al., Sci Transl Med 2011; 3(95): 95ra73.
[00909] Os níveis séricos de citocinas foram avaliados em amostras criopreservadas em lotes, usando o painel magnético de citocinas humanas de 30 plex (LHC6003M) junto à Life Technologies, conforme descrito em Maude SL, et al., N Engl J Med 2014; 371(16): 1507-17. A medição das concentrações solúveis de BCMA, BAFF e APRIL no soro foi realizada por ELISA usando conjuntos de anticorpos para BCMA humano (DY193), APRIL (DY884B) e BAFF (DT124-05) junto à R&D Systems. Consultar Métodos Suplementares para detalhes.
[00910] A avaliação citométrica de fluxo de células de MM, incluindo a expressão de BCMA, em material aspirado de medula óssea fresco foi adaptada do protocolo EuroFlow, conforme descrito em Flores-Montero J, et al., Leukemia 2017; 31(10): 2094-103 e nos Métodos Suplementares. A avaliação citométrica de fluxo de fenótipo de células T em amostras de leucaférese criopreservadas foi realizada e analisada conforme descrito em Fraietta JA, et al., Nat Med 2018; 24(5): 563-71. Resultados
[00911] O objetivo principal foi avaliar a segurança de CART-BCMA em pacientes com mieloma recidivado/refratário. O desfecho primário foi a incidência de EAs de grau 3 ou superior relacionados ao estudo, incluindo toxicidades limitantes de dose (DLTs). Uma DLT foi definida como um EA grave E inesperado, cuja relação com a terapia de estudo não poderia ser descartada, ocorrendo dentro de 4 semanas após o recebimento da terapia de protocolo. A toxicidade hematológica não foi considerada uma DLT devido à natureza refratária da doença subjacente e à mielossupressão esperada de ciclofosfamida. Além disso, qualquer morte relacionada ao tratamento de protocolo, bem como qualquer toxicidade de órgãos de grau 4 ou toxicidade neurológica de grau 4 esperada que não se resolveu ou melhorou para grau 2 ou menos dentro de 4 semanas após o início, apesar do gerenciamento médico, também foi considerada uma DLT. Os objetivos secundários foram avaliar a viabilidade da fabricação de células CART-BCMA e a atividade clínica. Os desfechos secundários foram a frequência de fabricação bem- sucedida e os resultados clínicos, incluindo taxas de resposta, sobrevida livre de progressão e sobrevida global. Os desfechos explanatórios incluíam expansão e persistência de CART-BCMA in vivo; alterações na concentração de citocinas séricas e BCMA solúvel e expressão de BCMA em células de MM. Análise estatística
[00912] A análise estatística do estudo é principalmente descritiva devido à natureza piloto do teste e ao pequeno tamanho de cada coorte. O método de Kaplan-Meier foi usado para estimar a duração da resposta, a sobrevida livre de progressão e a sobrevida global e os tempos médios de sobrevida associados. A associação entre um desfecho binário (por exemplo, resposta) e um fator contínuo (por exemplo, números de células T de CAR) foi avaliada usando o teste de Mann-Whitney. A associação entre um desfecho binário e um fator categórico (por exemplo, presença ou ausência de deleção 17p) foi avaliada usando o teste Exato de Fisher. As correlações de Spearman foram usadas para medir as correlações entre duas variáveis contínuas. A significância da correlação de Spearman contra a hipótese nula de não correlação foi calculada com base na permutação. Devido ao fato de as análises estatísticas realizadas aqui serem de natureza exploratória e geradora de hipóteses, nenhum ajuste dos valores p foi feito para múltiplas comparações. Os valores p exatos são relatados quando for aplicável. A análise foi realizada usando Graphpad Prism versão 6.0. Resultados
[00913] De novembro de 2015 a dezembro de 2017, 34 indivíduos consentiram e 29 foram elegíveis e iniciaram a fabricação, com 25 recebendo infusões de CART-BCMA. Quatro não foram tratados devido à rápida progressão da doença/deterioração clínica durante a terapia de fabricação e ligação de ponte (Figura 52). As características de linha de base e linhas de terapia anteriores estão resumidas na Tabela 40, com detalhes individuais mostrados na Tabela 42. Os indivíduos tinham uma média de 7 linhas de terapia anteriores, com 96% duplamente refratários a um inibidor de proteassoma (PI) e fármaco imunomodulador (IMID), 72% de refratário a daratumumabe e 44% penta-refratários a 2 IPs, 2 IMIDs e daratumumabe. Noventa e seis % apresentaram pelo menos 1 anormalidade citogenética de alto risco; 68% apresentaram deleção 17p ou uma mutação TP53. A carga tumoral de linha de base era alta (média de 65% de células de mieloma na biópsia da medula óssea) e 28% apresentaram doença extramedular.
Tabela 40. Características do indivíduo Característica (n=25) Média (faixa) ou %
Idade 58 (44 - 75)
Gênero 68% do sexo masculino; 32% do sexo feminino
Tempo médio desde o diagnóstico (anos) 4,6 (1,8 – 14,5)
Citogenética de alto risco* 96%
Mutação de Del 17p ou TP53 68%
Linhas de terapia anteriores 7 (3 - 13)
Len/Bort/Pom/Carf**/Dara (% de expostos) 100%/100%/92%/96%/76%
Len/Bort/Pom/Carf/Dara (% de refratários) 76%/ 88%/ 88%/ 80%/ 72%
% Dual-/%Quad-/% Penta-refratários 96%/56%/44%
SCT Autólogo Anterior 92%
Doença extramedular 28%
% de células plasmáticas da medula óssea 65 (0 – 95)
Contagem absoluta de células T CD3+(células/µl) 538 (151 – 1529) pré-leucáferese***
LDH no Dia 0 (unidades/l) 175 (75 – 385)
Creatinina sérica no Dia 0 (mg/dl) 0,93 (0,55 – 2,87)
Hemoglobina no Dia 0 (g/dl) 9,1 (6,4 – 12,4)
Plaquetas no Dia 0 (x 103/ µl) 128 (13 – 316) *Inclui carótipo complexo, ganho de 1q, deleção de 17p, t(14;16), e/ou t(4;14). **Inclui 1 paciente que recebeu oprozomibe. ***n=23 (indivíduos 01 e 02 não teve contagens de células T pré-aférése). Faixa normal = 900 a 3245 células/µl Bort=bortezomibe; Carf=carfilzomibe; Dara=daratumumabe; Del=deleção; Duplamente refratário = refratário a um inibidor de proteassoma (PI) e agente imunomodulador (IMiD); LDH=lactato desidrogenase; Len=lenalidomida; Penta-refratário=refratário a 2 PIs, 2 IMiDs, e dara; Pom=pomalidomida; Quadruplamente refratário =refratário a 2 PIs e 2 IMiDs; SCT=transplante de célula-tronco.
[00914] Todos os indivíduos produziram com sucesso o objetivo-alvo mínimo das células de CART-BCMA, embora 1 indivíduo tenha exigindo duas tentativas de leucaférese e fabricação. Os produtos finais eram compreendidos de uma média de 97% de células T CD3+, com razão média de CD4/CD8 de 1,7. Vinte e um indivíduos receberam todas as 3 infusões planejadas de CART-BCMA, com 4 recebendo 40% da dose planejada (3a infusão mantida devido à CRS inicial). Detalhes adicionais de fabricação, características de produto, e dosagem para cada indivíduo são mostrados na Tabela 43.
[00915] Eventos adversos de grau 3 ou superior, independentemente de atribuição, foram observados em 24/25 indivíduos (96%) e estão resumidos na Tabela 41, com eventos adversos individuais de cada indivíduo listados na Tabela 44. A síndrome de liberação de citocina (CRS) foi observada em 22/25 indivíduos (88%), e era de grau 3/4 na escala de classificação Penn (Porter DL, et al., Sci Transl Med 2015; 7(303): 303ra139) (Tabela 38) em 8 (32%), todos que foram tratados na dose de 1 a 5 x 108. O tempo médio até o início da CRS foi de 4 dias (faixa de 1 a 11), com uma duração média de 6 dias (faixa de 1 a 18) e duração média de internação de 7 dias (faixa de 0 a 40). A CRS foi associada a elevações na ferritina e proteína C-reativa, conforme anteriormente descrito (Maude SL, et al., N Engl J Med 2014; 371(16): 1507-17). Sete indivíduos (28%) receberam bloqueio de IL-6 com tocilizumabe (n=6) ou siltuximabe (n=1).
Tabela 41. Eventos adversos de grau 3 ou superior, independentemente de atribuição Classificação 3 Classificação 4 Classificação 5 Todos Evento n n n n (%) Leucopenia 3 8 0 11 (44%) Neutropenia 2 9 0 11 (44%) Linfopenia 3 6 0 9 (36%) Síndrome de liberação de citocina 7 1 0 8 (32%) Trombocitopenia 3 4 0 7 (28%) Hipofosfatemia 7 0 0 7 (28%) Neutropenia febril 6 0 0 6 (24%) Hiponatremia 6 0 0 6 (24%) Anemia 4 1 0 5 (20%) Hipocalcemia 3 2 0 5 (20%) AST aumentada 2 1 0 3 (12%) Hipocalemia 2 1 0 3 (12%) Neurotoxicidade* 1 2 0 3 (12%) Hipertensão 3 0 0 3 (12%) Infecção pulmonar 2 0 0 2 (8%) Hipoalbuminemia 2 0 0 2 (8%) Taquicardia supraventricular 1 0 0 1(4%) Papiledema 1 0 0 1 (4%) Dor abdominal 1 0 0 1 (4%) Morte NOS** 0 0 1 1 (4%) Fadiga 1 0 0 1 (4%) Infecções – outro (fungemia) 0 1 0 1 (4%) Sepse 0 1 0 1 (4%) Infecção do trato urinário 1 0 0 1 (4%) Alk phos aumentada 1 0 0 1 (4%) Fração de ejeção diminuída 1 0 0 1 (4%) Fibrinogênio reduzido 1 0 0 1 (4%) Hiperglicemia 0 1 0 1 (4%) Hipoglicemia 1 0 0 1 (4%) Derrame pleural 1 0 0 1 (4%) Hemorragia pleural 0 1 0 1 (4%)
[00916] A toxicidade de grau mais alto experimentada pelo indivíduo é relatada na tabela. n=número de indivíduos que apresentaram o evento; Alk phos = fosfatase alcalina; AST = aspartato aminotransferase. *Neurotoxicidade inclui 1 indivíduo com convulsões de grau 3, delírio de grau 4 e síndrome de leucoencefalopatia posterior reversível de grau 4 (RPLS) (também conhecida como síndrome de encefalopatia reversível posterior (PRES)); e 1 indivíduo com delírio de grau 3 e encefalopatia de grau 4; e 1 indivíduo com encefalopatia de grau 3. **Morte NOS (não especificada, de outro modo) no indivíduo 08 com candidemia e mieloma rapidamente progressivo; a família optou por adotar apenas medidas de conforto.
[00917] A neurotoxicidade foi observada em 7/25 indivíduos (28%), e foi moderada (grau 1/2) em 4 (confusão temporária e/ou afasia). Três (12%) apresentaram encefalopatia de grau 3/4, incluindo 1 indivíduo (03) na coorte 1 com DLT de PRES (síndrome de encefalopatia reversível posterior) com obtundação grave, convulsões recorrentes e edema cerebral leve em MRI (imageamento por ressonância magnética) que foi totalmente resolvido após tratamento com metilprednisolona em altas doses (1 g/dia x 3) e ciclofosfamida 1,5 g/m2. Os outros não apresentaram alterações objetivas em MRI. Todos os três indivíduos com neurotoxicidade grave apresentaram alta carga tumoral (2 com doença extramedular); receberam uma dose de 5 x 108 células CART-BCMA; e apresentaram CRS de grau 3 ou 4. A única outra DLT foi cardiomiopatia de grau 3 e hemorragia pleural de grau 4/hemotórax espontâneo no indivíduo 27 (coorte 3) no cenário de CRS, coagulopatia, trombocitopenia e extensas lesões nas costelas mielomatosas; todas essas toxicidades totalmente resolvidas. Um indivíduo (08) que apresentou encefalopatia de grau 4 e CRS melhorou inicialmente com tocilizumabe e esteroides,
então, desenvolveu candidemia e mieloma progressivo/leucemia de células plasmáticas em evolução. A família optou por cuidado com conforto e o mesmo foi a óbito no dia 24. Nenhuma outra morte ocorreu durante o estudo. Não foram observadas toxicidades fora do alvo inesperadas.
[00918] Em relação aos resultados clínicos, as respostas objetivas (resposta parcial (PR) ou melhor) foram confirmadas em 4/9 indivíduos (44%) na coorte 1, 1/5 (20%) na coorte 2 e 7/11 (63%) na coorte 3 (Figuras 47A a 47C), incluindo 5 PR, 5 respostas parciais muito satisfatórias (VGPR), 1 resposta completa (CR) e 1 resposta completa restrita (sCR). Dessa forma, a taxa de resposta global foi de 12/25 (48%), e foi de 11/20 (55%) na dose mais eficaz de 1 a 5 x 108 células CART- BCMA. Cinco indivíduos adicionais apresentaram resposta mínima (MR). Quatro dentre 7 indivíduos com doença extramedular responderam (Figura 32B). Quatro indivíduos (01, 03, 15, 19) não apresentaram mieloma detectável (ou seja, negativo para MRD) por citometria de fluxo (sensibilidade estimada 10-5) dos aspirados de medula pós-infusão nos meses 1 e/ou 3. O tempo médio até a primeira resposta foi de 14 dias. Com base nas estimativas de Kaplan-Meier, a duração média de resposta (para PR ou melhor) foi de 124,5 dias (faixa de 29 a 939+) (Figura 53A). No momento do corte de dados, 3 indivíduos (01, 19, 33) permaneceram livres de progressão em 953, 427 e 322 dias (aproximadamente 32, 14 e 11 meses), respectivamente. Todos os outros indivíduos progrediram, e a sobrevida livre de progressão média (PFS) é de 65, 57 e 125 dias para as coortes 1, 2 e 3, respectivamente (Figura 53C). No momento de corte de dados, 13 indivíduos foram a óbito, com a sobrevida global média de 502 dias para todos os indivíduos (Figura 53B), e 359 dias, 502 dias, e não alcançaram as coortes 1, 2 e 3, respectivamente (Figura 47D).
[00919] Todos os indivíduos infundidos apresentaram células CART- BCMA detectáveis no sangue periférico por qPCR (Figuras 48A a 48C), e 24/25 apresentaram células T CAR+ detectáveis por citometria de fluxo (Figuras 54A a 54C; a Figura 38 para coloração representativo). A expansão geralmente atingiu o pico entre os dias 10 e 14 e parecia mais uniforme na coorte 3 com condicionamento de Cy e a dose mais alta de células CART-BCMA, enquanto era mais heterogênea nas coortes 1 e 2, embora essa diferença não tenha atingido significância estatística (Figura 48D). Apesar da predominância de células T CD4+ no produto infundido, as células CART-BCMA que circulam no sangue eram predominantemente CD8+ e eram altamente ativadas, com uma média de 94% (faixa de 21 a 94%) de células CAR+ CD3+ que expressam HLA-DR durante o pico de expansão (Tabela 45). Os níveis de CART-BCMA em aspirados de medula geralmente refletiram aqueles do sangue periférico e também eram elevados no fluido pleural e no líquido cefalorraquidiano para o indivíduo 03 e o fluido pleural do indivíduo 27, demonstrando tráfego amplamente distribuído (Tabela 46). Após a expansão de pico, os níveis de células CART-BCMA por qPCR declinaram de forma log-linear na maioria dos pacientes (Figuras 48A a 48C), e ainda foram detectáveis 3 meses após a infusão em 20/20 (100%) indivíduos testados, e em 6 meses 14/17 (82%) testados. O indivíduo 01 (na CR restrita) continuou a apresentar células detectáveis por qPCR quando testado pela última vez 2,5 anos após a infusão.
[00920] Trinta citocinas foram quantificadas no soro do sangue periférico antes e depois da infusão de CART-BCMA. Dezenove dessas foram aumentadas > 5 vezes acima da linha de base em mais de um indivíduo, com os aumentos mais frequentes observados para IL-6, IL-10, monocina induzida por interferon-gama (MIG, CXCL9), IP-10, IL-8, GM-
CSF e antagonista do receptor de IL-1 (IL-1RA) (Figura 55). A CRS mais grave (Grau 3/4 ou Grau 2 recebendo tocilizumabe) foi associada a aumentos de múltiplas citocinas (Tabela 47), mais significativamente com IL-6, IFN-γ, receptor alfa de IL-2 (IL2-Rα), proteína inflamatória de macrófagos 1 alfa (MIP-1a), e IL-15 (Figuras 49A-49E). A neurotoxicidade foi mais fortemente associada a aumentos em IL-6, IFN-γ, IL-1RA e MIP- 1α, (Figuras 49F a 49I, consultar a Tabela 48 para análise completa). Diferenças significativas não foram observadas nos aumentos em vezes de citocinas de pico entre as Coortes 1 e 3, que receberam a mesma dose de células CART-BCMA com ou sem condicionamento de Cy, respectivamente (Figura 55).
[00921] A concentração sérica de sBCMA, bem como de seus ligantes BAFF e APRIL, também foi avaliada. Em comparação com um painel de doadores saudáveis (HD), os indivíduos recrutados apresentaram níveis de sBCMA significativamente elevados e de APRIL reduzidos na linha de base, com alta variabilidade entre os indivíduos (Figura 50A). As concentrações de BAFF nos indivíduos não foram significativamente diferentes de HD. As avaliações em série de sBCMA sérica mostraram reduções após as infusões de CART-BCMA, que foram mais pronunciadas em indivíduos respondedores em comparação com não respondedores (Figura 50B) e aumentaram à medida que os indivíduos desenvolveram doença progressiva, sugerindo que a concentração sérica de sBCMA pode ser um biomarcador auxiliar útil para avaliar a carga da doença do mieloma.
[00922] Vinte indivíduos foram avaliados quanto à expressão da superfície de BCMA em células de MM por citometria de fluxo realizada em aspirados de medula frescos antes do tratamento, e todos apresentaram expressão detectável de BCMA, embora a intensidade variasse (intensidade de fluorescência média mediana (MFI) = 3741, faixa de 206 a 24842; consultar a Figura 42 para gating representativo). Dos 18 indivíduos com expressão em série de BCMA avaliável (Figura 50C), em 1 mês (n=16), 3 meses (n=8) e/ou 5,5 meses (n=1), 12 (67%) tiveram um declínio na intensidade de BCMA, pelo menos, 1 ponto após a infusão, incluindo 8/9 respondedores e 4/9 não respondedores (Figura 50D). A intensidade de BCMA foi mais baixa nas células de MM residuais 1 mês pós-CART-BCMA e aumentou de volta à linha de base na maioria, porém não em todos os indivíduos com testes subsequentes. Detalhes de indivíduo individuais são fornecidos na Tabela 49.
[00923] As respostas foram significativamente associadas à expansão de pico por qPCR (média de 75339 cópias/µg de DNA para ≥PR vs. 6368 cópias/µg para <PR, p=0,0002), bem como com persistência ao longo dos primeiros 28 dias, como medido pela área sob a curva (AUC0-28d) (média de 561796 cópias*dias/µg de DNA para ≥PR vs. 52391 cópias*dias/µg de DNA para <PR, p=0,0002) (Figuras 51A-51B). Tanto a expansão como a resposta eram mais prováveis no cenário de CRS mais grave (grau 3/4 ou grau 2 que exige tocilizumabe) (Figuras 51C-51D). Nem expansão nem resposta foram significativamente associadas à idade, anos desde o diagnóstico, número de linhas de terapia anteriores, presença de mutação del17p ou TP53, sendo penta-refratários, terapia pré-aférese mais recente, porcentagem de células de MM na medula óssea, concentração sérica de sBCMA de linha de base, ou intensidade de BCMA de célula de MM (Figuras 56A a 56L e 57A a 57L).
[00924] Para explorar outras características de pré-tratamento potencialmente associadas à expansão e/ou resposta, as características do produto CART-BCMA antes, durante e no final da fabricação foram analisadas. Verificou-se que uma maior razão de células T CD4/CD8 no produto de leucaférese, pré-fabricação, estava associada a uma maior expansão de CART-BCMA in vivo (Figura 51E) e, em menor grau, a resposta (Figura 51F), enquanto os números absolutos de células T CD3+, CD4+ ou CD8+ no produto de leucaférese ou a razão de CD4/CD8 no produto final de CART-BCMA no final da fabricação não estavam (dados não mostrados). A expansão em vezes de células inoculadas durante a fabricação também se correlacionou com a expansão de CART-BCMA in vivo (Figura 51G), sugerindo que a capacidade proliferativa in vitro pode prever a atividade in vivo. Finalmente, as células T CD8+ nos produtos de leucaférese em indivíduos tratados com células CART-BCMA foram examinadas e verificou-se que indivíduos com frequências mais altas de células T CD27+CD45RO-CD8+ eram mais propensos a ter expansão e resposta clínica robustas in vivo (Figuras 51Ha 51I). Discussão
[00925] A terapia com células T CAR está emergindo como uma opção terapêutica promissora para malignidades de células B, com potencial para controle duradouro da doença após um único tratamento, diferenciando-a de outras terapias que exigem a administração repetida e/ou contínua. Neste relatório, o potencial da terapia com células T CAR foi demonstrado no mieloma refratário avançado, com 12/25 indivíduos (48%) atingindo uma resposta parcial ou melhor, incluindo 7/11 (63%) tratados em doses ideais (> 108 células CART-BCMA) após quimioterapia linfodepletante. Três indivíduos tiveram remissões em andamento > 11 meses após a terapia com CART-BCMA, incluindo uma sCR em andamento em 2,5 anos. Isso é notável, dadas as características biológicas altamente adversas do mieloma dos indivíduos recrutados, incluindo alta carga tumoral, progressão rápida da doença e genética de alto risco. A atividade clínica valida adicionalmente BCMA como um alvo altamente atraente em mieloma. Sobretudo, essa atividade foi observada apesar do fato de que este estudo, ao contrário do estudo anterior, não excluiu pacientes com baixa expressão de BCMA ou alta carga tumoral, e não usou linfodepleção ou Cy individualmente, em comparação com Cy + fludarabina no estudo anterior (Ali SA, et al., Blood 2016; 128(13): 1688- 700; Brudno JN, et al., J Clin Oncol 2018; 36(22): 2267-80). Os produtos de células T CAR foram fabricados com sucesso em todos os indivíduos, apesar da linfocitopenia das células T de linha de base, e o enxerto também foi observado em todos, embora os níveis de pico e a persistência de células T CAR variem significativamente entre os indivíduos.
[00926] Neste estudo, as respostas correlacionaram-se com o grau de expansão in vivo, que por sua vez foi associado a uma maior razão de células T CD4/CD8 pré-fabricação, frequência de pré-fabricação de células T CD45RO-CD27+CD8+ e magnitude de proliferação in vitro durante a fabricação. Isso sugere que produtos de CART-BCMA mais eficazes podem ser derivados de indivíduos com um compartimento de células T menos diferenciado, mais naïve e/ou tipo memória de células- tronco. Esses dados sugerem que as características das células T fenotípicas e/ou funcionais pré-tratamento podem ajudar na previsão de resposta à terapia com CART-BCMA. As mesmas também sugerem que o tratamento de pacientes no início de sua doença, quando as células T podem ser intrinsecamente "ajustadas", ou modificando técnicas de fabricação para gerar células T de CAR+ mais fenotipicamente favoráveis
[00927] A transferência adotiva bem-sucedida de células T específicas para tumores, incluindo células T CAR, em seres humanos comumente seguiu alguma forma de condicionamento linfodepletante (Turtle CJ, et al., Sci Transl Med 2016; 8(355): 355ra116; Maude SL, et al., N Engl J Med 2014; 371(16): 1507-17; Porter DL, et al., Sci Transl Med 2015; 7(303): 303ra139; Dudley ME, et al., J Clin Oncol 2008; 26(32): 5233-9), que demonstrou aumentar a imunidade antitumoral mediada por células T através de múltiplos mecanismos potenciais, incluindo redução de "depósitos" celulares, levando à disponibilidade aumentada de citocinas homeostáticas e depleção de populações de células supressoras, como células T reguladoras, entre outros (Gattinoni L, et al., Nat Rev Immunol 2006; 6(5): 383-93). Este estudo demonstra que a linfodepleção não é absolutamente necessária para a expansão de células T de CAR e atividade clínica robusta e sustentada, como observado com indivíduos 01 e 03 na Coorte1. Entretanto, a expansão a curto prazo foi observada de forma mais consistente na Coorte 3, em que os indivíduos receberam condicionamento de Cy, em comparação com a Coorte1 (Figuras 48A e 48C), demonstrando um efeito de linfodepleção na cinética das células T de CAR após transferência adotiva. É possível que a modificação da linfodepleção (por exemplo, adição de fludarabina à Cy) aumente ainda mais a atividade das células CART-BCMA.
[00928] Uma questão importante não respondida para as células T CAR direcionadas para BCMA é se há um limiar de expressão de BCMA nas células de MM necessário para o reconhecimento e extermínio ideais. No teste de NCI anteriormente relatado, 52/85 (62%) de biópsias de medula óssea pré-selecionadas coradas para BCMA por IHC atingiram seu limiar pré-especificado para elegibilidade, significando que mais de um terço dos pacientes com MM potencialmente elegíveis teriam sido excluídos (Ali SA, et al., Blood 2016, 128(13): 1688-700). Este estudo não exigiu nenhum nível específico de BCMA como um requisito de elegibilidade e identificou a expressão de BCMA de células de MM por citometria de fluxo em todos os indivíduos, consistente com dados recentes de que a citometria de fluxo é mais sensível que a IHC com esse propósito (Salem DA, et al., Leuk Res 2018; 71: 106-11). A intensidade de BCMA de linha de base por citometria de fluxo não se correlacionou com expansão ou resposta neste estudo (Figuras 56A a 56L e 57A a 57L), sugerindo que a exclusão de pacientes com base na expressão\ de BCMA de linha de base provavelmente não é necessária.
[00929] A dinâmica observada de expressão de superfície de BCMA nas células de MM, com as células de MM residuais de vários indivíduos neste estudo, tendo uma intensidade de BCMA significativamente reduzida após a terapia com células T de CAR (Figuras 50A a 50D), destaca uma área importante para futuras pesquisas sobre resistência à terapia com CART-BCMA. A inframodulação de expressão de BCMA também foi observada em pelo menos 1 indivíduo no estudo NCI (Brudno JN, et al., J Clin Oncol 2018; 36(22): 2267-80), sugerindo que pode ser um meio comum de escape de células de MM das terapias com células T de direcionadas para BCMA. A expressão de BCMA de superfície aumentou subsequentemente na maioria dos indivíduos após a progressão, sugerindo um mecanismo transcricional ou pós-traducional, como dispersão aumentada da superfície celular. Alternativamente, pode haver seleção imune para variantes clonais dim/negativas para BCMA, que são subsequentemente superadas por clones de BCMA+ residuais após a perda de células CART-BCMA. Isso sugere que a maioria dos pacientes que progridem após CART-BCMA permanecerá candidato a terapias adicionais direcionadas para BCMA.
[00930] As toxicidades primárias de células T CAR permanecem síndrome de liberação de citocina (CRS) e neurotoxicidade. A frequência e gravidade de CRS neste estudo foram similares àquelas relatadas em testes de células T CAR direcionadas para CD19 (Maude SL, et al., N. Engl. J. Med. 2014, 371(16): 1507-17; Porter DL, et al., Sci Transl Med 2015; 7(303): 303ra139), e foi revogada com a terapia de bloqueio do receptor de IL-6. Embora o número de pacientes seja pequeno, os aumentos de citocinas séricas de pico não pareceram diferir significativamente com ou sem linfodepleção de Cy, quando a dose de células T de CAR foi mantida a mesma (Coorte 1 vs. 3, Figura 55). Curiosamente, entretanto, o aumento médio em vezes de pico de IL-6 e várias outras citocinas (por exemplo IFN-γ, IL-10, GMCSF, IL-17) neste estudo foram de 1 a 2 ordens de magnitude menores que aqueles relatados no estudo das células T de CAR NCI BCMA (Brudno JN, et al., J Clin Oncol 2018; 36(22): 2267-80), apesar de uma carga tumoral mais alta neste estudo. Uma explicação para essa diferença pode ser os domínios coestimuladores usados nos 2 construtos de CAR, uma vez que os domínios CD28, como aqueles usados no construto de CAR NCI, foram associados à proliferação de células T de CAR e à liberação de citocinas mais rápidas do que domínios 4-1BB (Milone MC, et al., Mol Ther 2009; 17(8): 1453-64), como usado neste construto de CAR. No entanto, o pequeno número de pacientes e as múltiplas diferenças entre os estudos em relação aos critérios de inclusão, dose, cronograma e regime de linfodepleção impedem conclusões definitivas.
[00931] A neurotoxicidade foi relatada em até 50% de indivíduos em alguns testes de células T CAR (Turtle CJ, et al., Sci Transl Med 2016; 8(355): 355ra116; Turtle CJ, et al., J Clin Invest 2016; 126(6): 2123-38; Kochenderfer JN, et al., J Clin Oncol 2015; 33(6): 540-9); pode ocorrer simultaneamente com ou subsequente à CRS; frequentemente não melhora com tocilizumabe; e é reversível na maioria dos casos, porém não em todos. A neurotoxicidade tem sido associada ao início precoce de
CRS e à rápida elevação de citocinas inflamatórias tanto no soro quanto no SNC, talvez levando ao aumento da permeabilidade vascular do SNC (Gust J, et al., Cancer Discov 2017). Consistente com isso, este estudo identificou aumentos séricos de pico de IL-6, IFN-γ e MIP-1α como os mais associados à neurotoxicidade neste estudo (Figuras 49A a 49I). Curiosamente, a neurotoxicidade também foi associada ao aumento em vezes de pico em IL-1RA, um inibidor endógeno dos efeitos pró- inflamatórios de IL-1α e IL-1β, que foram implicados na neurotoxicidade associada às células T de CAR (Giavridis T, et al., Nat Med 2018; 24(6): 731-8; Norelli M, et al., Nat Med 2018; 24(6): 739-48). Isso talvez reflete a indução de um mecanismo de feedback (finalmente ineficaz) em pacientes com neurotoxicidade e sugere que o aumento do bloqueio de IL-1 através de anacinra recombinante de IL-1RA pode ter benefício terapêutico nesse cenário, conforme demonstrado em modelos pré- clínicos (Giavridis T, et al., Nat Med 2018; 24(6): 731-8; Norelli M, et al., Nat Med 2018; 24(6): 739-48). Este estudo demonstrando a reversão rápida de uma síndrome do tipo PRES no indivíduo 03 sugere que a ciclofosfamida também pode ser uma opção em casos refratários a esteroides.
[00932] Em suma, as células T autólogas que expressam um CAR totalmente humano específico para BCMA poderiam expandir e induzir respostas objetivas, tanto com como sem quimioterapia linfodepletante, em indivíduos com MM refratário avançado, e representam uma abordagem terapêutica novo promissora. O perfil de toxicidade parece similar àquele observado nas células T de CAR direcionadas para CD19 em malignidades de células B. Os desafios incluem a progressão da doença durante a fabricação, o potencial de escape do antígeno devido a alterações na expressão de BCMA e a durabilidade de respostas.
Estudos subsequentes que exploram populações de pacientes intensamente pré-tratados/refratários, construtos de CAR de alvejamento de antígenos duplos, regimes de linfodepleção ou protocolos de fabricação inovadores e produtos de CART prontos para uso podem otimizar ainda mais a segurança e a eficácia a longo prazo dessa abordagem. Métodos Suplementares
[00933] Reagentes e protocolos para citometria de fluxo: Os anticorpos para painéis de detecção de células T de CAR eram V450 anti-CD45 (clone HI30), V500 anti-CD14 (clone M5E2), Ax488 anti-CD56 (clone B159), PerCP-Cy5.5 anti-CD4 (clone RPA-T4), APC-H7 anti-CD8 (clone SK1) (todos de BD Bioscience). Também, BV605 anti-CD3 (clone OKT3), BV711 anti-HLA-DR (clone L243), PE-Cy7 anti-CD19 (clone H1B19) foram usados junto à Biolegend. A expressão de CART-BCMA foi avaliada usando uma proteína recombinante de BCMA-Fc bis-biotinilada e o reagente de coloração secundário Estreptavidina-PE junto à BD Bioscience (cat#554061). As células foram ressuspensas em 100 μl de PBS contendo soro fetal bovino a 1%, azida de sódio a 0,02% e BCMA- Fc bis-biotinilado e incubadas durante 30 minutos em gelo, lavadas, ressuspensas em 100 μl de PBS contendo soro fetal bovino a 1%, azida de sódio a 0,02%, anticorpos de superfície e SA-PE, e incubadas durante 30 minutos em gelo, lavadas, ressuspensas em 250ul de PBS contendo soro fetal bovino 1% e de azida de sódio a 0,02% e adquiridas usando um citômetro de fluxo Fortessa equipado com laser violeta (405 nm), azul (488 nm), verde (532 nm) e vermelho (628 nm). Os dados foram analisados usando o software FlowJo (Versão 10, Treestar). Os valores de compensação foram estabelecidos usando o software eBioscience UltraComp eBeads (eBioscience cat#01-222-42) e DIVA.
[00934] PCR Quantitativa: O DNA genômico foi isolado diretamente do sangue total ou do aspirado de medula e a análise de qPCR foi realizada usando a tecnologia ABI TaqMan e um ensaio validado para detectar a sequência de transgene de CAR integrada conforme descrito em Kalos M, et al., Sci Transl Med 2011; 3(95): 95ra73 usando triplicatas de 200 ng de DNA genômico por ponto no tempo para amostras de sangue periférico e medula. Para determinar o número de cópias de DNA por unidade, uma curva padrão de oito pontos foi gerada consistindo em 5 a 106 cópias do plasmídeo lentiviral adicionadas a 100 ng de DNA genômico de controle não transduzido. O número de cópias do plasmídeo presente na curva padrão foi verificado usando qPCR digital com o mesmo conjunto de iniciadores/sondas e realizado em um instrumento de PCR digital QuantStudio 3D (Life Technologies). Cada ponto de dados (amostra e curva padrão) foi avaliado em triplicata com um valor Ct positivo em três dentre três réplicas com uma porcentagem de coeficiente de variação menor que 0,95% para todos os valores quantificáveis. Para controlar a qualidade do DNA interrogado, uma reação de amplificação paralela foi realizada usando 20 ng de DNA genômico e uma combinação de iniciador/sonda específica para uma sequência genômica não transcrita a montante do gene CDKN1A (p21), conforme descrito em Kalos M, et al., Sci Transl Med 2011; 3(95): 95ra73. Essas reações de amplificação geraram um fator de correção para ajustar a entrada calculada versus a entrada real de DNA. Cópias de transgene por micrograma de DNA foram calculadas de acordo com a fórmula: cópias por micrograma de DNA genômico = (cópias calculadas a partir da curva padrão de CART-BCMA) × fator de correção/(quantidade de DNA avaliada em nanogramas) × 1000 ng.
[00935] Medição de citocinas séricas: O painel magnético de 30 plex de citocinas humanas (LHC6003M) é da Life Technologies. As amostras de soro coletadas na linha de base e em pontos no tempo programados até 28 dias após a infusão foram criopreservadas a -80°C. As amostras em lote foram descongeladas e analisadas de acordo com os protocolos dos fabricantes. As placas de ensaio foram medidas usando um instrumento FlexMAP 3D, e a aquisição e análise de dados foram realizadas usando o software xPONENT. A qualidade dos dados foi examinada com base nos seguintes critérios. A curva padrão de cada analito tem um valor de 5P R2 > 0,95 com ou sem ajuste menor usando o software xPONENT. Para passar no controle de qualidade, os resultados para um soro de controle interno precisavam estar dentro dos 95% de IC (intervalo de confiança) derivados dos dados históricos de controle interno para > 25 dos analitos testados. Nenhum teste adicional foi realizado nas amostras com resultados fora da faixa baixa (<OOR). As amostras com resultados que estavam fora da faixa alta (>OOR) ou mais que duas vezes o valor máximo da curva padrão (SC max) foram testadas novamente em diluições mais altas. Os resultados que passaram nos controles de qualidade ou reensaios acima foram relatados.
[00936] Medição de BCMA solúvel, BAFF e APRIL: Os conjuntos de anticorpos para BCMA humano (DY193), APRIL (DY884B) e BAFF (DT124-05) eram da R&D Systems. O bead-strip ELISA e o reservatório de 4 colunas (SOW-A16735) eram da Assay Depot. O substrato ADHP de ELISA (10010469) era da Cayman Chemical. As placas de ensaio (OX1263) eram da E&K Scientific. Todos os reagentes de ELISA foram preparados de acordo com os protocolos de DuoSet ELISA exceto para o Reagente de Cor B, que foi suplementado com ADHP em 100 uM. Devido ao volume limitado de soros e à falta de disponibilidade de um ensaio
Luminex para BCMA, APRIL e BAFF, os três analitos foram medidos usando bead-strips ELISA. Em vez de revestir o anticorpo de captura (cAB) nos poços de uma placa ELISA, o mesmo foi revestido nas superfícies das macrosferas, o que permitiu a medição de três analitos usando 100ul de soro. Os ensaios foram configurados usando bead-strips em placas de ensaio com base em um mapa de ensaio seguindo o protocolo para conjuntos de anticorpos. No final do ensaio, uma placa de substrato por 12 bead-strips foi preparada pela adição de 100 ul/poço de solução de substrato (1:1 de reagente de cor A e ADHP). Cada bead-strip foi colocada em uma coluna da placa de substrato de acordo com o mapa de ensaio. O desenvolvimento de cor durou 10 a 30 minutos. As placas foram lidas em um instrumento FLUO STAR OMEGA. O controle de qualidade de dados foi realizado conforme descrito nos dados Luminex.
[00937] Avaliação de células do mieloma de medula óssea, incluindo expressão de BCMA: A avaliação de citometria de fluxo de material de aspirado de medula óssea foi realizada diretamente no aspirado após uma breve etapa de lise de glóbulos vermelhos com cloreto de amônio. O procedimento foi adaptada a partir do protocolo EuroFlow conforme descrito em Flores-Montero J, et al., Leukemia 2017, 31(10). 2094-103. Brevemente, até 2 ml de aspirado de medula óssea foram diluídos com 48 ml de solução de Pharm Lyse (BD Biosciences Cat# 555899) e incubados durante 15 minutos à temperatura ambiente em um dispositivo de agitação. As células foram, então, coletadas por centrifugação durante 10 minutos em 800g, lavadas duas vezes com tampão de citometria de fluxo (PBS com 1% de soro fetal bovino), coradas com corante de viabilidade L/D Aqua (Thermo Fisher Cat# L34957). A coloração de superfície foi realizada com uma mistura de anticorpos para CD45, CD19, CD138, CD38, CD14, CD56, CD20, CD3, CD269 (BCMA), CD274 (PD-
L1). Apenas os controles secundários de FMO (fluorescência menos um) foram usados para avaliação de BCMA.
Alíquotas de células PBMC doadoras normais foram coradas em paralelo como controles.
As células foram, então, lavadas antes da permeabilização/fixação usando reagente Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) durante 20 minutos à temperatura ambiente, lavadas, e coradas com uma mistura de anticorpos a cadeias leves da imunoglobulina kappa e lambda.
As amostras foram, então, lavadas antes da ressuspensão em PBS e a aquisição em um citômetro de fluxo de 17 cores LSR Fortessa Special Order Research Product (BD) equipado com um laser violeta, azul, verde e vermelho.
Os arquivos do modo de lista foram analisados usando FlowJo (Treestar) ou FCS Express.
Tabela 42. Características individuais do indivíduo Anos # Último tx antes da aférese, Ind. Idade Sexo Raça Isotipo Cariótipo FISH Mutação desde Dx linhas* infusão** Coorte 1 Pom/Dex NRAS, TP53, 01 66 M branco 9,6 IgGK 46XY +11, -16q, -17p 11 TP53 Pom/Dex Carfilz/Len/Dex 02 68 M branco 6,3 IgAK 46XY +1q, +4p, -17p n/a 9 Carfilz/Cyclo/Dex 03 54 F branco 3,1 IgAL n/a +1q, t(4;14), -16q n/a 4 D-PACE D-AC 07 44 M branco 1,8 K n/a +1q, -4, +11, -14, -16 NRAS, TP53 9 Carfilz/Pano Pom/Dex-ACE Carfilz/Pom/Dex 08 70 M branco 3,3 IgAL complexo +1q, -1p, -4, -17p n/a 6 Carfilz/Pom/Dex 09 61 M branco 6,6 K 46XY t(11;14), -16q, -17p nenhuma 9 Daratumumabe Dex de pulso Pom/Dex 10 47 M branco 4,9 IgGL n/a +1q, t(11;14) KRAS, SF3B1 7 Pom/Cyclo/Dex + troca plasmática 11 57 F AA 6,3 IgGL 46XX +1q, t(4;14), -17p n/a 10 VDT-PACE VDT-PACE Pembro/Pom/Dex NRAS, KRAS, 15 51 F Asiático 4,7 IgAK 46XX +1q, t(11;14) 7 BIRC3, KIT Pom/Dex Coorte 2 12 51 F branco 2,8 IgAL 46XX +1q, -1p, t(4;14), +17p TET2 5 CyBorD CyBorD 13 59 M branco 9,4 IgGL 46XY +11, -16q, -17p n/a 10 ASCT de Salvamento VD-CE 14 54 F branco 4,9 IgGK 46XX t(11;14), -16q, -17p n/a 7 Venetoclax nenhuma 16 54 M branco 4,1 IgGK complexo +1q, -16q, -17p BRAF 7 D-CE Radiação de D-CE + 22 45 M branco 2,7 IgGL 46XY t(11;14), +1q, -17p n/a 7 D-ACE nenhuma Coorte 3 17 64 F branco 5,0 IgAK 46XX t(14;16), +1q, -1p, +11 n/a 7 CPI-610 D-AC Dara/Ixa/Pom/Dex 19 58 M branco 4,1 L 46XY r(11;14), +1q, +17, -17p n/a 5 Dara/Ixa/Pom/Dex 20 61 M branco 2,6 IgGL n/a t(4;14), +1q, -17p n/a 6 Carfilz/cyclo/pom/dex VD-AC Dara/Pom/Dex 21 73 M branco 2,5 IgAK 46XY +1q, +14, +17, -17p TET2 5 Bort/Pom/Dex Carfilz/Pom/Dex/Nelfin VD- 23 63 M branco 2,3 IgGK 46XY nenhuma nenhuma 6
PCE Selinexor/Dex 25 51 M AA 4,5 IgGK 46XY t(11;14), +1q FLT3 7 Bort/Venetoclax/Dex + XRT t(11;14), +1q, -1p, Carfilz/Venetoclax/Dex 27 58 F AA 10,3 IgGK complexo BRAF, TET2 13 -16, -17p Carfilz/Venetoclax/Dex 29 60 F branco 1,8 IgGK 45X,-X nenhuma TET2, RB1, TP53 3 VDT-PACE nenhuma Carfilz/Cyclo/Dex 32 65 F branco 14,5 IgGL 46XX t(4;14), +1q, -17 TET2, TET2 6 Carfilz/Cyclo/Dex 33 75 M branco 8,8 IgGK hiperdip +5, +9, +11, +15, -17p RAD21 5 Pembro/Len/Dex nenhuma 34 47 M branco 2,0 IgGL 46XY +1q, -1p, +14q MYCN, TPMT 4 Carfilz/Pom/Dex VD-PACE *Uma linha de terapia foi definida como por critérios de IMWG. A radiação não foi contada como uma linha. **Terapia mais recente recebida antes da coleta de células T ("aférese" - linha superior) e infusão de CART-BCMA ("infusão" – linha inferior). Toda a terapia foi realizada por pelo menos duas semanas antes da aférese e novamente por pelo menos duas semanas antes da infusão (4 semanas para anticorpos monoclonais).
[00938] AA = Afro-americano; ASCT = transplante autólogo de células- tronco; Bort = bortezomibe; Carfilz = carfilzomibe; ciclo = ciclofosfamida; CPI-610 = inibidor de BET em investigação; CyBorD = ciclofosfamida, bortezomibe, dexametasona; D-AC = dexametasona + doxorrubicina infusional e ciclofosfamida; D-ACE = dexametasona + doxorrubicina infusional, ciclofosfamida e etoposide; D-CE: dexametasona + ciclofosfamida infusional e etoposide; D-PACE = dexametasona + cisplatina infusional, doxorrubicina, ciclofosfamida e etoposide; Dara = daratumumabe; Dex = dexametasona; Dx = diagnóstico; hyperdip = hiperdiploide; ixa = ixazomibe; K = cadeia leve kappa; L = cadeia leve lambda; Len = lenalidomida; Nelfin = nelfinavir; Pano = panobinostat; Pembro = pembrolizumabe; Pom = pomalidomida; Pom/Dex-ACE = pomalidomida, dexametasona + doxorrubicina infusional, ciclofosfamida e etoposide; Tx = tratamento; VD-AC = bortezomibe, dexametasona + doxorrubicina infusional e ciclofosfamida; VD-CE = bortezomibe, dexametasona + ciclofosfamida infusional e etoposide; VD-PCE = bortezomibe, dexametasona + cisplatina infusional, ciclofosfamida, etoposide; VDT-PACE = bortezomibe, dexametasona, talidomida + cisplatina infusional, doxorrubicina, ciclofosfamida e etoposide; Yrs = anos.
Tabela 43. Detalhes de fabricação e produto de CART-BCMA
CD4: Melhor % de Total CD8 em % de CD4: Exp Efic. de resposta CD3+ em Duplicação #CAR+ Ind. cultura CD3+ na CD8 na em trans cultura de de pop fornecido de coleta coleta vezes (%) sementes (x 108) sementes Coorte 1 01 52,6 2,04 98,4 2,40 43,5 4,54 9,6 2,0* sCR 02 63 0,40 69,1 1,31 12,7 3,67 18,2 5,0 MR 03 58,4 2,47 97,6 1,72 17,9 4,16 25,9 2,0* VGPR 07 20,3 1,47 94,9 1,60 38,9 5,28 24,2 5,0 PR 08 20,8 0,31 92,5 2,99 7,9 2,98 22,7 3,5 FD 09 86,8 0,49 87,5 1,69 10,0 3,33 22,2 5,0 SD 10 47,3 1,07 96,7 1,32 11,5 3,52 16,5 1,77 FD 11 21,4 0,81 96,9 1,20 8,7 3,11 19,4 5,0 MR 15 90,8 0,71 96 1,24 22,6 4,50 33,3 2,0* VGPR Coorte 2 12 80 0,38 96,2 3,23 31,7 4,98 21,7 0,5 SD 13 72 0,50 86,9 1,72 14,0 3,84 24,2 0,5 MR 14 94,6 0,81 98,9 2,21 60,4 5,92 31,8 0,5 SD 16 50,9 1,06 98,1 0,84 30,6 4,94 21,9 0,5 PR 22 65,1 0,46 98,4 1,39 49,3 5,62 11 0,5 SD Coorte 3 17 84,4 0,59 97,3 1,87 56,8 5,83 27,4 5,0 PR 19 88,1 0,91 94,9 2,09 16,8 4,07 13,7 5,0 CR 20 70 0,70 97,4 2,17 32,3 5,02 8,4 5,0 VGPR 21 83,5 0,46 98,9 3,26 45,9 5,52 7,5 5,0 SD 23 74,7 0,42 97,6 1,46 45,1 5,77 11 5,0 MR 25 69,2 0,54 99 0,93 23,7 4,57 10,7 2,0* PR 27 69 0,91 97,9 0,90 25,1 4,65 15 5,0 VGPR 29 29,8 2,49 91,7 4,55 23,0 4,52 8,3 5,0 SD 32 71 1,23 98,3 1,87 40,0 5,32 8,9 5,0 MR 33 83,6 0,33 96,5 1,78 31,1 4,96 8,6 5,0 PR 34 62,7 1,73 96,4 4,02 29,3 4,87 14,7 5,0 VGPR A frequência das células CD3+, CD3+ CD4+ e CD3+ CD8+ totais foi avaliada por citometria de fluxo no início da fabricação ("cultura de sementes" após elutriação) e no final da fabricação ("na coleta"). Aph = produto de aférese; fold exp = expansão em vezes; pop dblgs = duplicação de população; trans eff = eficiência de transdução.
MR = resposta mínima; PD = doença progressiva; PR = resposta parcial; sCR = resposta completa restrita; SD = doença estável; VGPR = resposta parcial muito satisfatória *Os indivíduos 01, 03, 15 e 25 receberam apenas 40% de dose planejada devido a febres/CRS inicial.
Tabela 44. Eventos adversos individuais de indivíduo Classificação Ind.
Classificação 1 Grau 2 Classificação 3 Classificação 4 5
Coorte 1
Olho seco DIC Anemia Linfopenia
Boca seca Vertigem Fadiga
Vômito Íleo CRS
Sintomas similares aos Náusea Alk phos da gripe aumentada Febre Distúrbio de AST aumentada Infecção pulmonar metabolismo – outro Hipocalcemia (deficiência de ferro) Creatinina aumentada Hipocalemia Mialgia Trombocitopenia Hipofosfatemia 01 Dor de cabeça Distúrbio músculo- esquelético – outro Isquemia (dores musculares cerebrovascular generalizadas) Distúrbio do sistema Retenção urinária nervoso – outro (confusão) Transtorno respiratório – outro (edema Distúrbio vascular – pulmonar e atelectasia) outro (edema) Distúrbio cutâneo/SQ – outro (lesão cutânea)
Hipertensão
02 Taquicardia sinusal Trombocitopenia
Transtornos gastrointestinais – outro (diarreia) Náusea Fadiga
CRS Tontura Dor de cabeça Transtorno respiratório – outro (congestão nasal e sinusal, tosse) Bradicardia sinusal SVT CRS Neutropenia Distúrbio do ouvido – Fadiga UTI Leucopenia outro (ouvidos cheios, Infecção – outro Fibrinogênio Hipocalcemia dificuldade de audição) (bacteremia provocada reduzido
RPLS Distúrbio ocular – outro por S. mitis/S. oralis) Hipofosfatemia (dificuldade de leitura) Delírio Infecção do trato Engripamento Constipação respiratório superior Derrame pleural Edema Linfopenia Hipertensão Febre Hipernatremia 03 Hipocalemia Distúrbio músculo- esquelético – outro Hipomagnesemia (descondicionamento, Dor óssea base dolorosa do crânio) Comprometimento da concentração Hemorragia intracraniana Dor de cabeça Distúrbio respiratório – Rouquidão outro (gotejamento pós- Distúrbio cutâneo/SQ – nasal) outro (equimose) Hipotensão Infecção – outro CRS Anemia (infecção do trato Dispepsia Hipocalemia respiratório superior) 07 Hipoalbuminemia Hiponatremia Distúrbio cutâneo/SQ – outro (erupção cutânea Hipocalcemia na face) Transtornos respiratórios, torácicos – outro (hemotórax)
Taquicardia sinusal Infecção CRS Morte NOS pulmonar Distúrbio geral – outro Trombocitopenia
08 (rigidez) Delírio Encefalopatia
Infecção – outro (fungemia)
Constipação Anemia Infecção pulmonar Calafrios Derrame pericárdico
Fadiga CRS 09 Trombocitopenia Neutropenia
Anorexia Hipocalcemia
Hipocalemia Dor de cabeça
Calafrios Trombocitopenia 10 Febre
Náusea CRS Hipofosfatemia
Fadiga Infecção – outro (Clostridium difficile) Trombocitopenia 11 Hipocalcemia Dor de cabeça
Transtorno respiratório – outro (tosse, congestão)
Hipocalcemia Fadiga Trombocitopenia Neutropenia
Hipocalemia CRS Hipoglicemia
Dor de cabeça Infecção – outro (teste positivo para toxina Tosse Shiga) 15 Dispneia Alk phos aumentada Transtornos Hipotensão respiratórios – outro (congestão nasal)
Alopécia
Coorte 2
Anemia Infecção – outro Neutropenia Sepse 12 (adenovírus) febril Vômito Neutropenia
Fadiga Leucopenia Febre Hipocalcemia Diarreia Infecção do trato Neutropenia respiratório superior Fadiga ALT aumentada AST aumentada Anorexia 13 Tontura Prurido Distúrbio do tecido cutâneo/subcutâneo – outro (lesões nos ouvidos bilaterais) Dor nas costas CRS Anemia Neutropenia 14 Dor em extremidade Neutropenia Leucopenia febril Colite Sintomas similares aos Neutropenia Linfopenia da gripe febril Hipocalcemia Neutropenia
CRS Hipocalemia Trombocitopenia Hipoalbuminemia Hipomagnesemia Leucopenia Epistaxe 16 Parestesia Confusão Rouquidão Dor de garganta Hipotensão Fadiga Náusea Neutropenia Linfopenia febril 22 Mialgia CRS Leucopenia Insônia Coorte 3 Diarreia Calafrios Neutropenia 17 Hipocalcemia CRS Leucopenia Hipocalemia Artralgia
Dor nas costas
Dor de cabeça
Neuropatia sensorial periférica
Insônia
Náusea Distúrbios do ouvido e CRS do labirinto – outro Calafrios Linfopenia (alergias sazonais) Hipofosfatemia Transtornos gastrointestinais – outro Hipertensão 19 (intoxicação alimentar)
Febre
Sinusite
Infecção do trato respiratório superior
Constipação Fadiga CRS AST aumentada
Diarreia ALT aumentada Hiponatremia
Vômito Hipofosfatemia
Calafrios Disfasia 20 CPK aumentada Letargia
Hipocalemia Confusão
Dor nas costas Hipotensão
Rinite alérgica
Alk phos aumentada CRS Linfopenia
Hipocalcemia Transtorno cutâneo – Neutropenia 21 outro (celulite) Hiponatremia Trombocitopenia
Epistaxe Leucopenia
Hemorragia anal CRS Neutropenia febril Náusea Dor abdominal
Edema de membros Colite 23 Hipoalbuminemia Diarreia
Hipocalcemia Vômito
Tremor Dor
Trombocitopenia
Hipocalemia
Náusea Hipoalbuminemia CRS
Dor facial Hipocalemia Hipocalcemia
Fadiga Hipercalcemia Papiledema
25 Hipomagnesemia
Dor de cabeça
Neuropatia sensorial periférica
Diarreia Bradicardia sinusal CRS Anemia
Náusea Edema de membros SVT Trombocitopenia
Dor oral Infecção do trato AST aumentada Hiperglicemia urinário Fadiga Fração de ejeção Hipocalcemia Creatinina aumentada diminuída Dor Hipocalemia Neutropenia Linfopenia Infecções – outro Hemorragia 27 (infecção do trato Hipernatremia Leucopenia pleural respiratório superior) Sibilo Hipoalbuminemia Dor nas costas Hiponatremia Mialgia Encefalopatia Dor em extremidade Hipertensão Pele seca
Hematoma
Náusea Calafrios Dor abdominal Linfopenia
Fadiga CRS Hiponatremia Leucopenia
Dor Hipoalbuminemia Hipofosfatemia 29 Transtornos respiratórios – Outro (garganta arranhada, tosse leve)
Náusea Diarreia Anemia Linfopenia
Fadiga Encefalopatia CRS Trombocitopenia 32 Alopécia Rinite alérgica Neutropenia Leucopenia
Hipoalbuminemia
Hipocalcemia
Hiponatremia
Hipofosfatemia
Dor oral Calafrios Neutropenia Neutropenia febril Diarreia CRS
Fadiga Hipoalbuminemia
Sintomas similares aos 33 da gripe
Artralgia
Dor no flanco
Rinite alérgica
Diarreia CRS Leucopenia Linfopenia
Náusea Trombocitopenia Hipofosfatemia Neutropenia
Taquicardia sinusal Hipocalcemia Hiponatremia 34 Confusão Sintomas similares aos da gripe ALT aumentada AST aumentada
Todos os eventos independentemente da atribuição estão listados.
Se um evento ocorreu mais de uma vez no mesmo paciente, o grau mais alto é relatado.
Alk phos = fosfatase alcalina; ALT = alanina aminotransferase; AST = aspartato aminotransferase; CPK = creatinina fosfoquinase; CRS=síndrome de liberação de citocina; DIC = coagulação intravascular disseminada; NOS = não especificado de outro modo; RPLS = síndrome de leucoencefalopatia posterior (também conhecida como síndrome de encefalopatia reversível posterior (PRES)); SQ = subcutâneo; SVT = taquicardia supraventricular; UTI = infecção do trato urinário
Tabela 45. Características de células CART-BCMA+ no sangue periférico na expansão de pico % de Melhor resposta Dia de % de CAR+ % de CAR+ % de HLADR+ Ind.
CAR+ de pico de CD4+ de CD8+ de CAR+ CD3+ Coorte 1 01 10 89,5 8,6 92,3 97 sCR 02 9 2,8 1,4 5,0 82 MR 03 14 76,2 13,7 85,9 97 VGPR 07 10 29,2 7,3 39,3 89 PR 08 16 9,3 0,4 16,9 95 FD 09 11* * * * * SD 10 30 1,9 0,1 2,0 21 FD 11 8 18,2 14,6 25,2 94 MR 15 10 28,1 6,3 51,0 96 VGPR Coorte 2 12 10 2,0 0,8 2,3 76 SD 13 13 8,4 2,9 13,2 92 MR 14 10 7,8 3,5 10,6 95 SD 16 14 47,1 12,1 50,3 98 PR 22 9 4,3 0,6 8,6 94 SD Coorte 3 17 9 22,1 10,4 27,4 96 PR 19 15 9,7 8,9 10,2 87 CR 20 15 59,2 22,4 65,1 99 VGPR 21 9 16,0 9,2 19,9 97 SD 23 10 13,8 6,6 17,3 93 MR 25 10 5,1 3,8 5,9 85 PR 27 14 42,9 4,9 47,3 88 VGPR 29 7 4,1 2,8 15,0 77 SD 32 10 36,2 6,1 46,4 97 MR 33 11 41,8 29,8 46,9 91 PR 34 ** ** ** ** ** VGPR
As células CART-BCMA foram associadas por citometria de fluxo como na Figura 38. No dia do pico de expansão, a frequência de células CAR+ nas populações CD3+, CD4+ e CD8 + é listada.
O status de ativação na expansão de pico (como medido por % de células CAR+ que expressam HLA-DR) também é mostrado.
MR = resposta mínima; PD = doença progressiva; PR = resposta parcial; sCR = resposta completa restrita; SD = doença estável; VGPR = resposta parcial muito satisfatória *Pico determinado por qPCR; células CAR+ não detectáveis por fluxo. **Nenhuma amostra disponível entre os dias 10 a 21, então, o pico não poderia ser determinado.
Tabela 46. Enxerto de CART-BCMA por qPCR no sangue, medula óssea, e outros locais Sangue no Dia BM no Dia Sangue em BM em Ind.
Outro (local, dia) 28 28 3 meses 3 meses Coorte 1 01 23447,33 10458,66 4373,95 n/a n/a 02 454,57 383,62 334,90 n/a n/a CSF, D4: 3285,88 CSF, D16: 158038,74 03 220081,08* 109964,97* 9517,67 9934,97 Fluido pleural, D8: 23941,97 Fluido pleural, D18: 144516,62 07 1757,60 2140,31 n/a n/a n/a 08 n/a n/a n/a n/a n/a 09 32,15 16,75 n/a n/a n/a 10 62,64 0,00 n/a n/a n/a 11 731,44 n/a 218,26 n/a n/a 15 724,49 1084,16 32,58 99,48 n/a Coorte 2 12 140,60 25,59 n/a n/a n/a 13 193,80 43,64 94,70 27,04 n/a 14 66,69 255,76 8,80 0,00 n/a 16 25919,10 22077,89 n/a n/a n/a 22 34,56 22,09 77,71 63,76 n/a Coorte 3 17 1639,98 1398,82 1392,25 649,69 n/a 19 12987,83 6578,03 153,88 117,53 n/a 20 43463,65 28086,46 4107,95 5223,76 n/a 21 8372,96 1161,92 96,11 n/a n/a 23 5946,81 n/a 102,68 n/a n/a 25 256,33 259,97 149,20 160,33 n/a 27 51014,95 41242,37 14271,48 9634,66 Fluido pleural, D15: 58511,99 29 738,84 210,05 n/a n/a n/a 32 6983,98 7055,94 58,15 15,72 n/a 33 7539,99 5142,13 230,66 39,09 n/a 34 5199,07 1512,03 n/a n/a n/a
[00939] Os níveis de CART-BCMA (cópias/µg de DNA genômico) foram geralmente comparáveis no sangue e medula nos pontos de tempo testados.
CART-BCMA foi encontrado em altos níveis em CSF e no fluido pleural do indivíduo 03, e fluido pleural do indivíduo 27. BM = medula óssea; CSF = líquido cefalorraquidiano. n/a = não disponível. *Ensaios realizados no dia 45. Tabela 47. Aumento de pico em vezes em citocinas séricas e gravidade de síndrome de liberação de citocina (CRS) Aumento de pico Aumento de pico Citocina médio em vezes: CRS médio em vezes: CRS Valor p Gr 0-2 Gr 3-4 ou Gr 2 + toci IL-6 3,88 76,26 <0,0001 IFN-γ 1,26 11,95 <0,0001 IL-2Rα 4,13 18,40 <0,0001 MIP-1α 1,35 3,47 <0,0001 IL-15 1,71 12,81 0,0004 IL-1RA 2,33 19,68 0,0036 MCP-1 2,11 6,99 0,0044 GM-CSF 2,69 36,27 0,0052 IL-1β 1,28 2,23 0,0052 MIG 6,81 39,14 0,008 MIP-1β 1,49 2,39 0,013 IL-5 2,84 35,32 0,019 VEGF 1,93 3,68 0,022 IL-17 1,16 3,13 0,026 IL-7 2,24 6,18 0,10 IP-10 6,63 10,97 0,10 IL-8 8,65 30,72 0,20 IL-4 1,29 1,95 0,24 IL-10 13,84 15,82 0,53
[00940] As concentrações séricas de citocina em pg/ml até o dia 28 foram medidas por ensaio Luminex.
O aumento de pico mediano em vezes em relação à linha de base para cada citocina listada para indivíduos sem CRS, CRS de grau 1 ou CRS de grau 2 que não receberam tocilizumabe (CRS gr 0 a 2) foi comparado com o aumento de pico médio em vezes para indivíduos com CRS de grau 3-4 ou CRS de grau 2 que receberam tocilizumabe (CRS Gr 3-4 ou Gr 2 + toci). O valor p exato por teste de Mann-Whitney é listado quando aplicável.
Tabela 48. Aumento de pico em vezes em citocinas séricas e neurotoxicidade Aumento de pico médio Aumento de pico médio em Citocina Valor p em vezes: Sem neurotox vezes: Qualquer neurotox IL-6 3,92 76,26 0,0002 IFN-γ 1,28 15,77 0,0002 IL-1RA 2,33 19,68 0,0015 MIP-1α 1,53 3,47 0,006 GM-CSF 3,46 36,27 0,013 IL-15 1,76 10,54 0,016 IL-1β 1,32 3,70 0,018 IP-10 5,80 20,44 0,019 IL-7 3,29 10,28 0,019 IL-2Rα 4,46 20,86 0,019 VEGF 1,93 3,68 0,050 MIP-1β 1,56 2,24 0,056 MIG 7,17 39,14 0,057 MCP-1 2,13 6,41 0,066 IL-8 8,65 36,77 0,12 IL-17 1,32 1,57 0,19 IL-5 5,15 8,54 0,26 IL-4 1,47 2,20 0,40 IL-10 13,70 27,51 0,41
[00941] As concentrações séricas de citocina em pg/ml até o dia 28 foram medidas por ensaio Luminex.
O aumento médio em vezes de pico na linha de base para cada citocina listada para indivíduos sem neurotoxicidade (neurotox) foi comparado com o aumento médio em vezes de pico para indivíduos com qualquer grau de neurotoxicidade.
O valor p exato por teste de Mann-Whitney é listado.
Tabela 49. Detalhes de BCMA em células de mieloma Pré % Pré FMO Pré BCMA D28 D28 FMO D28 BCMA D90 D90 BCMA D90 BCMA Melhor Suj + MFI MFI %+ MFI MFI %+ MFI MFI resposta Coorte 1 01 95 568 10864 n/a n/a n/a n/a n/a n/a sCR 02 93 355 2375 97 483 3254 n/a n/a n/a MR 03 84 265 1873 n/a n/a n/a 19* 78* 268* VGPR 07 n/a n/a n/a 84 273 1426 n/a n/a n/a PR 08 99 124 6859 n/a n/a n/a n/a n/a n/a FD 09 28 53 206 94 204 1116 n/a n/a n/a SD 10 83 192 1998 99 54 2140 n/a n/a n/a FD 11 81 332 1844 62 49 832 n/a n/a n/a MR 15 99 249 24842 n/a n/a n/a 100 362 30685 VGPR Coorte 2 12 100 -142 6755 100 187 7268 n/a n/a n/a SD 13 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a MR 14 99 192 4317 98 172 2388 n/a n/a n/a SD 16 97 366 4039 48 394 850 93 488 3819 PR 22 100 321 5947 99 271 4947 100 126 5599 SD Coorte 3 17 87 646 2667 27 295 784 76 350 1543 PR 19 98 429 2923 65 316 992 n/a n/a n/a CR 20 89 394 2643 29 369 944 36 185 377 VGPR 21 99 314 2704 86 252 1108 n/a n/a n/a SD 23 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a MR 25 97 283 4000 54 259 833 92 223 2501 PR 27 100 618 6548 74 242 964 70 159 616 VGPR 29 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a SD 32 92 176 3482 85 169 1472 n/a n/a n/a MR 33 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a PR 34 100 303 17109 92 1607 5001 100 309 11232 VGPR
[00942] As células do mieloma da medula óssea foram identificadas e a expressão de BCMA analisada como na Figura 55 A porcentagem de células do mieloma que expressam BCMA (% +), bem como a intensidade média de fluorescência (MFI) para BCMA e controle negativo de FMO (fluorescência menos um) são mostradas. n/a = não disponível. Pre=pré-tratamento. D28 = dia 28 pós-tratamento. D90 = dia 90 pós- tratamento. Sub = indivíduo. *realmente D164.
[00943] As divulgações de cada e todas as patentes, pedidos de patentes e publicações citados no presente documento são, deste modo, incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade. Embora esta invenção tenha sido divulgada com referência a aspectos específicos, é evidente que outros aspectos e variações desta invenção podem ser concebidos por outros versados na técnica sem se afastar do verdadeiro espírito e escopo da invenção. As reivindicações anexas destinam-se a ser interpretadas de modo a incluir todos esses aspectos e variações equivalentes.
Claims (93)
1. Método para avaliar ou prever uma capacidade de resposta de sujeito a uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, sendo que o sujeito tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende: adquirir um valor para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou (vi) a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, conforme medido por duplicações de população pelo dia 9 (PDL9), em que: (a) um aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de capacidade de resposta aumentada do sujeito para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (b) uma diminuição no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo de capacidade de resposta diminuída do sujeito para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, assim avaliando ou prevendo a capacidade de resposta do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de um, dois, três ou todos dentre: (a) capacidade de resposta aumentada do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (c) o sujeito como adequado para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a diminuição no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo de um, dois ou todos dentre: (a) capacidade de resposta diminuída do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um não respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (c) expansão diminuída da terapia celular de expressão de
CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) compreende uma razão da quantidade entre células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+), por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a razão é: (1) maior ou igual a 1 (por exemplo, entre 1 e 5, por exemplo, entre 1 e 3,5); ou (2) maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), é indicativa ou preditiva de um, dois, três ou todos dentre: (a) capacidade de resposta aumentada do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (c) o sujeito como adequado para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
6. Método, de acordo com a reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que a razão menor do que 1 (por exemplo, entre 0,001 e 1) é indicativa ou preditiva de um, dois ou todos dentre: (a) capacidade de resposta diminuída do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um não respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (c) expansão diminuída da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) compreende porcentagem de Tscm CD8+ (células T de memória de célula tronco) entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a porcentagem de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+ maior ou igual a 25% (por exemplo, entre 30% e
90%, por exemplo, entre 35% e 85%, por exemplo, entre 40% e 80%, por exemplo, entre 45% e 75%, por exemplo, entre 50% e 75%) é indicativa ou preditiva de um, dois, três ou todos dentre: (a) capacidade de resposta aumentada do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (c) o sujeito como adequado para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
10. Método, de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que a porcentagem de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+ menor do que 25% (por exemplo, entre 0,1% e 25%, por exemplo, entre 0,1% e 22%, por exemplo, entre 0,1% e 20%, por exemplo, entre 0,1% e 18%, por exemplo, entre 0,1% e 15%)) é indicativa ou preditiva de um, dois ou todos dentre: (a) capacidade de resposta diminuída do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um não respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (c) expansão diminuída da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ maior ou igual a 20% (por exemplo, entre 20% e 90%, por exemplo, entre 20% e 80%, por exemplo, entre 20% e 70%, por exemplo, entre 20% e 60%) é indicativa ou preditiva de um, dois, três ou todos dentre: (a) capacidade de resposta aumentada do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (c) o sujeito como adequado para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
13. Método, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizado pelo fato de que a porcentagem de células CD45RO- CD27+CD8+ entre células T CD8+ menor do que 20% (por exemplo, entre 0,1% e 20%, por exemplo, entre 0,1% e 18%, por exemplo, entre 0,1% e 15%, por exemplo, entre 0,1% e 12%, por exemplo, entre 0,1% e 10%) é indicativa ou preditiva de um, dois ou todos dentre:
(a) capacidade de resposta diminuída do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um não respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (c) expansão diminuída da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ maior ou igual a 15% (por exemplo, entre 15% e 90%, por exemplo, entre 15% e 80%, por exemplo, entre 15% e 70%, por exemplo, entre 15% e 60%, por exemplo, entre 15% e 50%) é indicativa ou preditiva de um, dois, três ou todos dentre: (a) capacidade de resposta aumentada do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (c) o sujeito como adequado para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (d) expansão aumentada da terapia celular de expressão de
CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
16. Método, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ menor do que 15% (por exemplo, entre 0,1% e 15%, por exemplo, entre 0,1% e 12%, por exemplo, entre 0,1% e 10%, por exemplo, entre 0,1% e 8%) é indicativa ou preditiva de um, dois ou todos dentre: (a) capacidade de resposta diminuída do sujeito à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um não respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (c) expansão diminuída da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o valor para a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA compreende a expansão em vezes de células semeadas do sujeito durante a fabricação (por exemplo, contagens de célula total no fim da fabricação em relação ao começo da fabricação) da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido por contagem celular.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que compreende ainda realizar:
a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito e administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito; ou a administração, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito, quando: (a) o sujeito foi indicado ou previsto como tendo capacidade de resposta aumentada à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito foi indicado ou previsto como um respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (c) o sujeito foi indicado ou previsto como adequado para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (d) a terapia celular de expressão de CAR de BCMA foi indicada ou prevista como tendo expansão aumentada no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes de CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que compreende ainda realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao sujeito; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é a terapia celular de expressão de CAR de BCMA) ao sujeito;
administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito; descontinuar a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA e administrar opcionalmente uma segunda terapia ao sujeito; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação às células efetoras imunes CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; ou administrar um pré-tratamento ao sujeito, em que o pré- tratamento aumenta a razão entre a quantidade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, o pré-tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito, quando: (a) o sujeito foi indicado ou previsto como tendo capacidade de resposta diminuída à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito foi indicado ou previsto como um não respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (c) a terapia celular de expressão de CAR de BCMA foi indicada ou prevista como tendo expansão diminuída no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes de CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
20. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta a um valor aumentado para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou (vi) a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, realizar: a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito e administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito; ou a administração, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito, assim tratando o sujeito que tem a doença associada à expressão de BCMA.
21. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta a um valor diminuído para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)),
(v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou (vi) a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao sujeito; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA) ao sujeito; administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito; descontinuar a administração de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e administrar opcionalmente uma segunda terapia ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação às células efetoras imunes CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; ou administrar um pré-tratamento ao sujeito, em que o pré- tratamento aumenta a razão entre a quantidade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, o pré-tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5,
por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito, assim tratando o sujeito que tem a doença associada à expressão de BCMA.
22. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta a um valor aumentado para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), identificar ou prever um, dois, três ou todos dentre: (a) o sujeito como tendo capacidade de resposta aumentada à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (c) o sujeito como adequado para a terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (d) a terapia celular de expressão de CAR de BCMA como tendo expansão aumentada no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes de CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
23. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta a um valor diminuído para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), identificar ou prever um, dois ou todos dentre: (a) o sujeito como tendo capacidade de resposta diminuída à terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (b) o sujeito como um não respondedor da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (c) a terapia celular de expressão de CAR de BCMA como tendo expansão diminuída no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes de CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 23, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) compreende uma razão da quantidade entre células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+), por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
25. Método, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta à razão ser: (1) maior ou igual a 1 (por exemplo, entre 1 e 5, por exemplo, entre 1 e 3,5); ou (2) maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), realizar: a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito e administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito; ou a administração, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito.
26. Método, de acordo com a reivindicação 24 ou 25, caracterizado pelo fato de que compreende:
em resposta à razão menor que 1 (por exemplo, entre 0,001 e 1), realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao sujeito; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA) ao sujeito; administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito; descontinuar a administração de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e administrar opcionalmente uma segunda terapia ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação às células efetoras imunes CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CD45RO-CD27+CD8+CCR7+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito;
modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; ou administrar um pré-tratamento ao sujeito, em que o pré- tratamento aumenta a razão entre a quantidade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, o pré-tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito.
27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 26, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) compreende porcentagem de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 27, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
29. Método, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta à porcentagem de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+ ser maior ou igual a 25% (por exemplo, entre 30% e 90%, por exemplo, entre 35% e 85%, por exemplo, entre 40% e 80%, por exemplo, entre 45% e 75%, por exemplo, entre 50% e 75%), realizar: a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito e administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito; ou a administração, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito.
30. Método, de acordo com a reivindicação 28 ou 29, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta à porcentagem de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+ ser menor do que 25% (por exemplo, entre 0,1% e 25%, por exemplo, entre 0,1% e 22%, por exemplo, entre 0,1% e 20%, por exemplo, entre 0,1% e 18%, por exemplo, entre 0,1% e 15%), realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao sujeito; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA) ao sujeito; administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito; descontinuar a administração de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e administrar opcionalmente uma segunda terapia ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação às células efetoras imunes CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; ou administrar um pré-tratamento ao sujeito, em que o pré- tratamento aumenta a razão entre a quantidade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, o pré- tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito.
31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 30, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
32. Método, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta à porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ ser maior ou igual a 20% (por exemplo, entre 20% e
90%, por exemplo, entre 20% e 80%, por exemplo, entre 20% e 70%, por exemplo, entre 20% e 60%), realizar: a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito e administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito; ou a administração, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito.
33. Método, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta à porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+ ser menor do que 20% (por exemplo, entre 0,1% e 20%, por exemplo, entre 0,1% e 18%, por exemplo, entre 0,1% e 15%, por exemplo, entre 0,1% e 12%, por exemplo, entre 0,1% e 10%), realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao sujeito; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA) ao sujeito; administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito; descontinuar a administração de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e administrar opcionalmente uma segunda terapia ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação às células efetoras imunes CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; ou administrar um pré-tratamento ao sujeito, em que o pré- tratamento aumenta a razão entre a quantidade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, o pré-tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito.
34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 33, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
35. Método, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que compreende: em resposta à porcentagem de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ entre células T CD8+ ser maior ou igual a 15% (por exemplo, entre 15% e 90%, por exemplo, entre 15% e 80%, por exemplo, entre 15% e 70%, por exemplo, entre 15% e 60%, por exemplo, entre 15% e 50%), realizar: a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito e administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito; ou a administração, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito.
36. Método, de acordo com a reivindicação 34 ou 35, caracterizado pelo fato de que compreende:
em resposta à porcentagem de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ entre células T CD8+ ser menor do que 15% (por exemplo, entre 0,1% e 15%, por exemplo, entre 0,1% e 12%, por exemplo, entre 0,1% e 10%, por exemplo, entre 0,1% e 8%), realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao sujeito; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA) ao sujeito; administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito; descontinuar a administração de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e administrar opcionalmente uma segunda terapia ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação às células efetoras imunes CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; ou administrar um pré-tratamento ao sujeito, em que o pré- tratamento aumenta a razão entre a quantidade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, o pré-tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito.
37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 36, caracterizado pelo fato de que o valor para a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA compreende a expansão em vezes de células semeadas do sujeito durante a fabricação (por exemplo, contagens de célula total no fim da fabricação em relação ao começo da fabricação) da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido por contagem celular.
38. Método para avaliar ou prever a potência de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA em um sujeito, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem uma doença associada à expressão de BCMA e em que a terapia celular de expressão de CAR de BCMA é fabricada com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito, que compreende: adquirir um valor para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)),
(iii) o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou (vi) a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, conforme medido por duplicações de população pelo dia 9 (PDL9), em que: (a) um aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de potência aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito; ou
(b) uma diminuição no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de potência diminuída da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, assim avaliando ou prevendo a potência da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
39. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, é indicativo ou preditivo de expansão aumentada da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes de CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
40. Método, de acordo com a reivindicação 38 ou 39, caracterizado pelo fato de que a diminuição no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, é indicativo ou preditivo de expansão diminuída da terapia celular de expressão de CAR de BCMA no sujeito, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido pelo número de cópia de transgenes de CAR por µg de DNA com o uso de qPCR.
41. Método para fabricar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, caracterizado pelo fato de que a terapia celular de expressão de CAR de BCMA é fabricada com o uso de células (por exemplo, células T) de um sujeito que compreende:
adquirir um valor para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou (vi) a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, conforme medido por duplicações de população pelo dia 9 (PDL9), em que: em resposta a um aumento no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, fabricar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células do sujeito.
42. Método para fabricar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, caracterizado pelo fato de que a terapia celular de expressão de CAR de BCMA é fabricada com o uso de células (por exemplo, células T) de um sujeito que compreende: adquirir um valor para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)),
(v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou (vi) a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, conforme medido por duplicações de população pelo dia 9 (PDL9), em que: em resposta a uma diminuição no valor de um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre (i) a (vi), em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, realizar um, dois, três ou todos dentre: modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação às células efetoras imunes CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO-CD27+CD8+, ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou administrar um pré-tratamento ao sujeito, em que o pré- tratamento aumenta a razão entre a quantidade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, o pré- tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), e fabricar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito.
43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 42, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) compreende uma razão da quantidade entre células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+), por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
44. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 43, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) compreende porcentagem de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco)
entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 44, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células HLADR-CD95+CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
46. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 45, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 46, caracterizado pelo fato de que o valor para o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ compreende a porcentagem de células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+ entre células T CD8+, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, citometria de fluxo.
48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 47, caracterizado pelo fato de que o valor para a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA compreende a expansão em vezes de células semeadas do sujeito durante a fabricação (por exemplo, contagens de célula total no fim da fabricação em relação ao começo da fabricação) da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, conforme medido por contagem celular.
49. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 48, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um, dois ou todos dentre: (1) um agente que aumenta a eficácia da célula que compreende o ácido nucleico de CAR ou polipeptídeo de CAR; (2) um agente que ameniza um ou mais efeitos colaterais associados à administração da célula que compreende o ácido nucleico de CAR ou polipeptídeo de CAR; (3) um agente que trata a doença associada à expressão de BCMA.
50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um composto de Fórmula (I) (COF1), em que o COF1 é: (I) ou um sal, éster, hidrato, solvato ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: X é O ou S; R1 é C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, carbociclila, heterociclila, arila ou heteroarila, em que cada um é opcionalmente substituído por um ou mais R4; cada um dentre R2a e R2b é, independentemente, hidrogênio ou C1-C6 alquila; ou R2a e R2b junto com o átomo de carbono ao qual são ligados forma um grupo carbonila ou um grupo tiocarbonila;
cada um dentre R3 é, independentemente, C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, halo, ciano, -C(O)RA, -C(O)ORB, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, -S(O)xRE, -S(O)xN(RC)(RD), ou -N(RC)S(O)xRE, em que cada alquila, alquenila, alquinila e heteroalquila é, independentemente, e opcionalmente substituída por um ou mais R6; cada R4 é, independentemente, C1-C6 alquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, C1-C6 heteroalquila, halo, ciano, oxo, -C(O)RA, -C(O)ORB, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, -S(O)xRE, -S(O)xN(RC)(RD), -N (RC)S(O)xRE, carbociclila, heterociclila, arila, ou heteroarila, em que cada alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, carbociclila, heterociclila, arila e heteroarila é, independentemente, e opcionalmente substituída por um ou mais R7; cada um dentre RA, RB, RC, RD, e RE é, independentemente, hidrogênio ou C1-C6 alquila; cada R6 é, independentemente, C1-C6 alquila, oxo, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), -N(RC)C(O)RA, arila, ou heteroarila, em que cada arila e heteroarila é, independentemente, e opcionalmente substituída por um ou mais R8; cada R7 é, independentemente, halo, oxo, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), ou -N(RC)C(O)RA; cada R8 é, independentemente, C1-C6 alquila, ciano, -ORB, -N(RC)(RD), -C(O)N(RC)(RD), ou -N(RC)C(O)RA; n é 0, 1, 2, 3 ou 4; e x é 0, 1 ou 2, opcionalmente em que: (1) o COF1 é um fármaco de imida imunomodulador (IMiD), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) o COF1 é selecionado dentre o grupo que consiste em lenalidomida, pomalidomida, talidomida, e 2-(4-(terc-butil)fenil)-N-((2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)-1-oxoisoindolin-5-il)metil)acetamida ou a sal farmaceuticamente aceitável das mesmas; (3) o COF1 é selecionado dentre o grupo que consiste em: , , , e , ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos; ou (4) o COF1 é lenalidomida, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.
51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um inibidor de quinase, por exemplo, um inibidor de BTK, por exemplo, ibrutinibe.
52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 51, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com uma segunda terapia celular de expressão de CAR, opcionalmente em que a segunda terapia celular de expressão de CAR é: (1) uma terapia celular de expressão de CAR de CD19, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD19 descrita no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019, opcionalmente em que a terapia celular de expressão de CAR de CD19 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA,
por exemplo, após a expressão de CD19 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (2) uma terapia celular de expressão de CAR de CD20, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD20 descrita no presente documento, opcionalmente em que a terapia celular de expressão de CAR de CD20 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD20 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (3) uma terapia celular de expressão de CAR de CD22, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD22 descrita no presente documento, opcionalmente em que a terapia celular de expressão de CAR de CD22 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD22 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (4) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento), opcionalmente em que o segundo CAR é selecionado dentre o grupo que consiste em um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 descrito no presente documento), um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 descrito no presente documento), e um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 descrito no presente documento); ou (5) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a um primeiro antígeno e um segundo antígeno, em que o primeiro antígeno é BCMA, opcionalmente em que o segundo antígeno é selecionado dentre o grupo que consiste em CD19, CD20 e CD22.
53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 52, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um inibidor de CD19, por exemplo, um inibidor de CD19 descrito no presente documento, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD19 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 53, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um inibidor de CD20, por exemplo, um inibidor de CD20 descrito no presente documento, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífica, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD20 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 54, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um inibidor de CD22, por exemplo, um inibidor de CD22 descrito no presente documento, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD22 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 55, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com uma molécula que se liga ao receptor Fc tipo 2 (FCRL2) ou receptor Fc tipo 5 (FCRL5), opcionalmente em que a molécula é: (1) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR que se liga a FCRL2 ou FCRL5; ou (2) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífica, que se liga a um primeiro antígeno e um segundo antígeno, em que o primeiro antígeno é FCRL2 ou FCRL5, opcionalmente em que o segundo antígeno é CD3.
57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 56, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um polipeptídeo de interleucina-15 (IL-15), um polipeptídeo alfa receptor de interleucina-15 (IL-15Ra), ou uma combinação de um polipeptídeo de IL-15 e um polipeptídeo de IL-15Ra, por exemplo, hetIL-15.
58. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 57, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um inibidor de TGF beta.
59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um inibidor de EGFRmut-tirosina quinase (TKI), por exemplo, EGF816.
60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 59, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um antagonista de A2AR de adenosina, opcionalmente em que: (1) o antagonista de A2AR de adenosina é selecionado dentre o grupo que consiste em PBF509, CPI444, AZD4635, Vipadenant, GBV-2034, e AB928; ou (2) o antagonista de A2AR de adenosina é selecionado dentre o grupo que consiste em 5-bromo-2,6-di-(1H-pirazol-1-il)pirimidina- 4-amina; (S)-7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3- il)oxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina; (R)- 7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3-il)oxi)metil)piridin-2-il)metil)- 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina, ou racemato do mesmo; 7-(5- metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3-il)oxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H- [1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina; e 6-(2-cloro-6-metilpiridin-4-il)-5-(4- fluorofenil)-1,2,4-triazin-3-amina.
61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com uma molécula de anticorpo anti-CD73, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-CD73 descrita no presente documento.
62. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 61, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um inibidor de ponto de verificação, opcionalmente em que o inibidor de ponto de verificação é:
(1) um inibidor de PD-1, opcionalmente em que o inibidor de PD-1 é selecionado dentre o grupo que consiste em PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591, e AMP-224, opcionalmente em que o inibidor de PD-1 aumenta a expansão de células que expressam CAR de BCMA no sujeito; (2) um inibidor de PD-L1, opcionalmente em que o inibidor de PD-L1 é selecionado dentre o grupo que consiste em FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe, e BMS-936559, opcionalmente em que o inibidor de PD-L1 aumenta a expansão de células que expressam CAR de BCMA no sujeito; (3) um inibidor de LAG-3, opcionalmente em que o inibidor de LAG-3 é selecionado dentre o grupo que consiste em LAG525, BMS- 986016, TSR-033, MK-4280 e REGN3767; ou (4) um inibidor de TIM-3, opcionalmente em que o inibidor de TIM-3 é selecionado dentre o grupo que consiste em MGB453, TSR-022 e LY3321367.
63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 62, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com uma molécula de anticorpo que se liga a CD32B.
64. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com uma molécula de anticorpo que se liga a IL-17, por exemplo, uma molécula de anticorpo antagonista que se liga à IL-17, por exemplo, CJM112.
65. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 64, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com uma molécula de anticorpo que se liga a IL-1 beta.
66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 65, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito em combinação com um inibidor de indolamina 2,3-desoxigenase (IDO) e/ou triptofano 2,3- desoxigenase (TDO), por exemplo, um inibidor de IDO1, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é escolhido dentre: (1) INCB24360, indoximod, NLG919, epacadostat, NLG919 ou F001287; ou (2) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]-1,2,5- oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-ciclo-hexil-5H-imidazo[5,1- a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano.
67. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é: (1) uma terapia celular de expressão de CAR de CD19, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD19 descrita no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019, opcionalmente em que a terapia celular de expressão de CAR de CD19 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD19 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (2) uma terapia celular de expressão de CAR de CD20, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD20 descrita no presente documento, opcionalmente em que a terapia celular de expressão de CAR de CD20 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD20 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (3) uma terapia celular de expressão de CAR de CD22, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD22 descrita no presente documento, opcionalmente em que a terapia celular de expressão de CAR de CD22 é administrada após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD22 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (4) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento), opcionalmente em que o segundo CAR é selecionado dentre o grupo que consiste em um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 descrito no presente documento), um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 descrito no presente documento), e um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 descrito no presente documento); ou (5) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico que se liga a um primeiro antígeno e um segundo antígeno, em que o primeiro antígeno é BCMA, opcionalmente em que o segundo antígeno é selecionado dentre o grupo que consiste em CD19, CD20 e CD22.
68. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é: (1) um inibidor de CD19, por exemplo, um inibidor de CD19 descrito no presente documento, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD19 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; (2) um inibidor de CD20, por exemplo, um inibidor de CD20 descrito no presente documento, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífica, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD20 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (3) um inibidor de CD22, por exemplo, um inibidor de CD22 descrito no presente documento, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de CD22 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
69. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é a molécula que se liga ao receptor Fc tipo 2 (FCRL2) ou receptor Fc tipo 5 (FCRL5), opcionalmente em que a molécula é:
(1) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR que se liga a FCRL2 ou FCRL5; ou (2) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífica, que se liga a um primeiro antígeno e um segundo antígeno, em que o primeiro antígeno é FCRL2 ou FCRL5, opcionalmente em que o segundo antígeno é CD3.
70. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é um inibidor de TGF beta.
71. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é um inibidor de EGFRmut-tirosina quinase (TKI), por exemplo, EGF816.
72. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é um antagonista de A2AR de adenosina, opcionalmente em que: (1) o antagonista de A2AR de adenosina é selecionado dentre o grupo que consiste em PBF509, CPI444, AZD4635, Vipadenant, GBV-2034, e AB928; ou (2) o antagonista de A2AR de adenosina é selecionado dentre o grupo que consiste em 5-bromo-2,6-di-(1H-pirazol-1-il)pirimidina-4-amina; (S)- 7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3-il)oxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-
[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina; (R)-7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra- hidrofuran-3-il)oxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5- amina, ou racemato do mesmo; 7-(5-metilfuran-2-il)-3-((6-(((tetra-hidrofuran-3- il)oxi)metil)piridin-2-il)metil)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin-5-amina; e 6-(2- cloro-6-metilpiridin-4-il)-5-(4-fluorofenil)-1,2,4-triazin-3-amina.
73. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é uma molécula de anticorpo anti-CD73, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-CD73 descrita no presente documento.
74. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é um inibidor de ponto de verificação, opcionalmente em que o inibidor de ponto de verificação é: (1) um inibidor de PD-1, opcionalmente em que o inibidor de PD-1 é selecionado dentre o grupo que consiste em PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591, e AMP-224, opcionalmente em que o inibidor de PD-1 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de PD-1 ou PD-L1 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, opcionalmente em que o inibidor de PD- 1 aumenta a expansão de células que expressam CAR de BCMA no sujeito; (2) um inibidor de PD-L1, opcionalmente em que o inibidor de
PD-L1 é selecionado dentre o grupo que consiste em FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe, e BMS-936559, opcionalmente em que o inibidor de PD-L1 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de PD-1 ou PD-L1 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, opcionalmente em que o inibidor de PD-L1 aumenta a expansão de células que expressam CAR de BCMA no sujeito; (3) um inibidor de LAG-3, opcionalmente em que o inibidor de LAG-3 é selecionado dentre o grupo que consiste em LAG525, BMS- 986016, TSR-033, MK-4280 e REGN3767, opcionalmente em que o inibidor de LAG-3 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de LAG- 3 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA; ou (4) um inibidor de TIM-3, opcionalmente em que o inibidor de TIM-3 é selecionado dentre o grupo que consiste em MGB453, TSR-022 e LY3321367, opcionalmente em que o inibidor de TIM-3 é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de TIM-3 ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
75. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é uma molécula de anticorpo que se liga a CD32B.
76. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é uma molécula de anticorpo que se liga à IL-17, por exemplo, uma molécula de anticorpo antagonista que se liga à IL-17, por exemplo, CJM112.
77. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é uma molécula de anticorpo que se liga a IL-1 beta.
78. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito, em que a segunda terapia é um inibidor de indolamina 2,3-desoxigenase (IDO) e/ou triptofano 2,3- desoxigenase (TDO), por exemplo, um inibidor de IDO1, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é escolhido dentre: (1) INCB24360, indoximod, NLG919, epacadostat, NLG919 ou F001287; ou (2) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]-1,2,5- oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-ciclo-hexil-5H-imidazo[5,1- a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano, opcionalmente em que: o inibidor de IDO e/ou TDO é administrado após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, após a expressão de IDO e/ou TDO ser aumentada no sujeito após a administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
79. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
67 a 78, caracterizado pelo fato de que a segunda terapia é administrada antes de, concomitante com, ou subsequente à administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
80. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que o sujeito recebeu ou recebe uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA que compreende: em resposta a um aumento de um valor do nível ou atividade de um antígeno no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), em pelo menos um ponto no tempo após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA em relação a um valor de referência, em que o valor de referência é: (i) o nível ou atividade do antígeno no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), anterior ao pelo menos um ponto no tempo (por exemplo, o nível ou atividade do antígeno no sujeito antes do sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, ou o nível ou atividade do antígeno no sujeito após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, mas antes do pelo menos um ponto no tempo); (ii) o nível ou atividade do antígeno em um sujeito diferente que tem a doença associada à expressão de BCMA; ou (iii) um nível médio ou atividade do antígeno em uma população de sujeitos que têm a doença associada à expressão de BCMA, administrar um inibidor do antígeno ao sujeito, em que: (1) o antígeno é CD19 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD19, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é:
(a) uma terapia celular de expressão de CAR de CD19, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD19 descrita no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019; (b) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 descrito no presente documento); ou (c) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD19, (2) o antígeno é CD20 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD20, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é: (d) uma terapia celular de expressão de CAR de CD20, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD20 descrita no presente documento; (e) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 descrito no presente documento); (f) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD20; ou (g) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífica, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338,
(3) o antígeno é CD22 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD22, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é: (h) uma terapia celular de expressão de CAR de CD22, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD22 descrita no presente documento; (i) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 descrito no presente documento); ou (j) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD22, (4) o antígeno é PD1 ou PD-L1 e o inibidor do antígeno é uma molécula de anticorpo anti-PD1 ou uma molécula de anticorpo anti- PD-L1, opcionalmente em que o inibidor do antígeno é: (k) PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591, ou AMP- 224; ou (l) FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe, ou BMS-936559, (5) o antígeno é IDO ou TDO e o inibidor do antígeno é um inibidor de IDO e/ou TDO, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é: (m) INCB24360, indoximod, NLG919, epacadostat, NLG919 ou F001287; ou (n) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]-
1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-ciclo-hexil-5H- imidazo[5,1-a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano, ou (6) o antígeno é TGF-beta e o inibidor do antígeno é um inibidor de TGF beta.
81. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que o sujeito recebeu ou recebe uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA que compreende: adquirir um valor do nível ou atividade de um antígeno no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), em pelo menos um ponto no tempo após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, em resposta a um aumento no valor em relação a um valor de referência, em que o valor de referência é: (i) o nível ou atividade do antígeno no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), anterior ao pelo menos um ponto no tempo (por exemplo, o nível ou atividade do antígeno no sujeito antes do sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, ou o nível ou atividade do antígeno no sujeito após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, mas antes do pelo menos um ponto no tempo); (ii) o nível ou atividade do antígeno em um sujeito diferente que tem a doença associada à expressão de BCMA; ou (iii) um nível médio ou atividade do antígeno em uma população de sujeitos que têm a doença associada à expressão de BCMA,
administrar um inibidor do antígeno ao sujeito, em que: (1) o antígeno é CD19 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD19, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é: (a) uma terapia celular de expressão de CAR de CD19, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD19 descrita no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019; (b) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 descrito no presente documento); ou (c) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD19, (2) o antígeno é CD20 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD20, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é: (d) uma terapia celular de expressão de CAR de CD20, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD20 descrita no presente documento; (e) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 descrito no presente documento); (f) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD20; ou
(g) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífica, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338, (3) o antígeno é CD22 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD22, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é: (h) uma terapia celular de expressão de CAR de CD22, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD22 descrita no presente documento; (i) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 descrito no presente documento); ou (j) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD22, (4) o antígeno é PD1 ou PD-L1 e o inibidor do antígeno é uma molécula de anticorpo anti-PD1 ou uma molécula de anticorpo anti- PD-L1, opcionalmente em que o inibidor do antígeno é: (k) PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591, ou AMP- 224; ou (l) FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe, ou BMS-936559, (5) o antígeno é IDO ou TDO e o inibidor do antígeno é um inibidor de IDO e/ou TDO, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é:
(m) INCB24360, indoximod, NLG919, epacadostat, NLG919 ou F001287; ou (n) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]- 1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-ciclo-hexil-5H- imidazo[5,1-a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano, ou (6) o antígeno é TGF-beta e o inibidor do antígeno é um inibidor de TGF beta.
82. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende: administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito, em resposta a um aumento em um valor do nível ou atividade de um antígeno no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), em pelo menos um ponto no tempo após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA em relação a um valor de referência, em que o valor de referência é: (i) o nível ou atividade do antígeno no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), anterior ao pelo menos um ponto no tempo (por exemplo, o nível ou atividade do antígeno no sujeito antes do sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, ou o nível ou atividade do antígeno no sujeito após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, mas antes do pelo menos um ponto no tempo); (ii) o nível ou atividade do antígeno em um sujeito diferente que tem a doença associada à expressão de BCMA; ou
(iii) um nível médio ou atividade do antígeno em uma população de sujeitos que têm a doença associada à expressão de BCMA, administrar um inibidor do antígeno ao sujeito, em que: (1) o antígeno é CD19 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD19, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é: (a) uma terapia celular de expressão de CAR de CD19, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD19 descrita no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019; (b) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 descrito no presente documento); ou (c) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD19, (2) o antígeno é CD20 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD20, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é: (d) uma terapia celular de expressão de CAR de CD20, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD20 descrita no presente documento; (e) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 descrito no presente documento);
(f) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD20; ou (g) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífica, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338, (3) o antígeno é CD22 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD22, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é: (h) uma terapia celular de expressão de CAR de CD22, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD22 descrita no presente documento; (i) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 descrito no presente documento); ou (j) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD22, (4) o antígeno é PD1 ou PD-L1 e o inibidor do antígeno é uma molécula de anticorpo anti-PD1 ou uma molécula de anticorpo anti- PD-L1, opcionalmente em que o inibidor do antígeno é: (k) PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591, ou AMP- 224; ou (l) FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe, ou BMS-936559,
(5) o antígeno é IDO ou TDO e o inibidor do antígeno é um inibidor de IDO e/ou TDO, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é: (m) INCB24360, indoximod, NLG919, epacadostat, NLG919 ou F001287; ou (n) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]- 1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-ciclo-hexil-5H- imidazo[5,1-a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano, ou (6) o antígeno é TGF-beta e o inibidor do antígeno é um inibidor de TGF beta.
83. Método para tratar um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizado pelo fato de que compreende: administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito, adquirir um valor do nível ou atividade de um antígeno no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), em pelo menos um ponto no tempo após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, em resposta a um aumento no valor em relação a um valor de referência, em que o valor de referência é: (i) o nível ou atividade do antígeno no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), anterior ao pelo menos um ponto no tempo (por exemplo, o nível ou atividade do antígeno no sujeito antes do sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, ou o nível ou atividade do antígeno no sujeito após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA, mas antes do pelo menos um ponto no tempo); (ii) o nível ou atividade do antígeno em um sujeito diferente que tem a doença associada à expressão de BCMA; ou (iii) um nível médio ou atividade do antígeno em uma população de sujeitos que têm a doença associada à expressão de BCMA, administrar um inibidor do antígeno ao sujeito, em que: (1) o antígeno é CD19 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD19, opcionalmente em que o inibidor de CD19 é: (a) uma terapia celular de expressão de CAR de CD19, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD19 descrita no presente documento, por exemplo, CTL119 ou CTL019; (b) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD19 (por exemplo, um CAR de CD19 descrito no presente documento); ou (c) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD19, (2) o antígeno é CD20 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD20, opcionalmente em que o inibidor de CD20 é: (d) uma terapia celular de expressão de CAR de CD20, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD20 descrita no presente documento; (e) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD20 (por exemplo, um CAR de CD20 descrito no presente documento); (f) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD20; ou (g) uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecífica, que se liga a CD20 e CD3, por exemplo, THG338, (3) o antígeno é CD22 e o inibidor do antígeno é um inibidor de CD22, opcionalmente em que o inibidor de CD22 é: (h) uma terapia celular de expressão de CAR de CD22, por exemplo, uma terapia celular de expressão de CAR de CD22 descrita no presente documento; (i) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um primeiro CAR e um segundo CAR, em que o primeiro CAR é um CAR de BCMA (por exemplo, um CAR de BCMA descrito no presente documento) e o segundo CAR é um CAR de CD22 (por exemplo, um CAR de CD22 descrito no presente documento); ou (j) uma terapia celular de expressão de CAR que compreende uma célula que expressa um CAR multiespecífico, por exemplo, um CAR biespecífico, que se liga a BCMA e CD22, (4) o antígeno é PD1 ou PD-L1 e o inibidor do antígeno é uma molécula de anticorpo anti-PD1 ou uma molécula de anticorpo anti- PD-L1, opcionalmente em que o inibidor do antígeno é:
(k) PDR001, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Pidilizumabe, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591, ou AMP- 224; ou (l) FAZ053, Atezolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe, ou BMS-936559, (5) o antígeno é IDO ou TDO e o inibidor do antígeno é um inibidor de IDO e/ou TDO, opcionalmente em que o inibidor de IDO e/ou TDO é: (m) INCB24360, indoximod, NLG919, epacadostat, NLG919 ou F001287; ou (n) (4E)-4-[(3-cloro-4-fluoroanilino)-nitrosometilideno]- 1,2,5-oxadiazol-3-amina, 1-metil-D-triptofano, α-ciclo-hexil-5H- imidazo[5,1-a]isoindol-5-etanol, ou o isômero D de 1-metil-triptofano, ou (6) o antígeno é TGF-beta e o inibidor do antígeno é um inibidor de TGF beta.
84. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 80 a 83, caracterizado pelo fato de que o valor do nível ou atividade do antígeno compreende o nível de expressão do antígeno no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de biópsia, por exemplo, uma amostra de biópsia de medula óssea), conforme medido por um ensaio descrito no presente documento, por exemplo, imuno-histoquímica.
85. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 80 a 84, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um ponto no tempo é 5, 10, 15, 20, 25, 28, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, ou 90 dias após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
86. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
80 a 85, caracterizado pelo fato de que o sujeito sofre uma diminuição na expressão de BCMA após o sujeito começar a receber a terapia celular de expressão de CAR de BCMA.
87. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 86, caracterizado pelo fato de que a terapia celular de expressão de CAR de BCMA compreende uma célula que expressa um CAR de BCAM, em que: (i) o CAR de BCMA compreende uma ou mais dentre (por exemplo, todas as três de) região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, e HCDR3 listadas na Tabela 3 ou 5 e/ou uma ou mais dentre (por exemplo, todas as três dentre) região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3 listadas na Tabela 4 ou 5, ou uma sequência com 95 a 99% de identidade das mesmas; (ii) o CAR de BCMA compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) listada na Tabela 2 ou 5 e/ou uma região variável de cadeia leve (VL) listada na Tabela 2 ou 5, ou uma sequência com 95 a 99% de identidade da mesma; (iii) o CAR de BCMA compreende uma sequência de aminoácidos de domínio scFv de BCMA listada na Tabela 2 ou 5 (por exemplo, SEQ ID Nº: 39, SEQ ID Nº: 40, SEQ ID Nº: 41, SEQ ID Nº: 42, SEQ ID Nº: 43, SEQ ID Nº: 44, SEQ ID Nº: 45, SEQ ID Nº: 46, SEQ ID Nº: 47, SEQ ID Nº: 48, SEQ ID Nº: 49, SEQ ID Nº: 50, SEQ ID Nº: 51, SEQ ID Nº: 52, SEQ ID Nº: 53, SEQ ID Nº: 129, SEQ ID Nº: 130, SEQ ID Nº: 131, SEQ ID Nº: 132, SEQ ID Nº: 133, SEQ ID Nº: 134, SEQ ID Nº: 135, SEQ ID Nº: 136, SEQ ID Nº: 137, SEQ ID Nº: 138, SEQ ID Nº: 139, SEQ ID Nº: 140, SEQ ID Nº: 141, SEQ ID Nº: 142, SEQ ID Nº: 143, SEQ ID Nº: 144, SEQ ID Nº: 145, SEQ ID Nº: 146, SEQ ID Nº: 147, SEQ ID Nº:
148, e SEQ ID Nº: 149), ou uma sequência com 95 a 99% de identidade da mesma; (iv) o CAR de BCMA compreende uma sequência de aminoácidos de CAR de BCMA de comprimento completo listada na Tabela 2 ou 5 (por exemplo, resíduos 22 a 483 da SEQ ID Nº: 109, resíduos 22 a 490 da SEQ ID Nº: 99, resíduos 22 a 488 da SEQ ID Nº: 100, resíduos 22 a 487 da SEQ ID Nº: 101, resíduos 22 a 493 da SEQ ID Nº: 102, resíduos 22 a 490 da SEQ ID Nº: 103, resíduos 22 a 491 da SEQ ID Nº: 104, resíduos 22 a 482 da SEQ ID Nº: 105, resíduos 22 a 483 da SEQ ID Nº: 106, resíduos 22 a 485 da SEQ ID Nº: 107, resíduos 22 a 483 da SEQ ID Nº: 108, resíduos 22 a 490 da SEQ ID Nº: 110, resíduos 22 a 483 da SEQ ID Nº: 111, resíduos 22 a 484 da SEQ ID Nº: 112, resíduos 22 a 485 da SEQ ID Nº: 113, resíduos 22 a 487 da SEQ ID Nº: 213, resíduos 23 a 489 da SEQ ID Nº: 214, resíduos 22 a 490 da SEQ ID Nº: 215, resíduos 22 a 484 da SEQ ID Nº: 216, resíduos 22 a 485 da SEQ ID Nº: 217, resíduos 22 a 489 da SEQ ID Nº: 218, resíduos 22 a 497 da SEQ ID Nº: 219, resíduos 22 a 492 da SEQ ID Nº: 220, resíduos 22 a 490 da SEQ ID Nº: 221, resíduos 22 a 485 da SEQ ID Nº: 222, resíduos 22 a 492 da SEQ ID Nº: 223, resíduos 22 a 492 da SEQ ID Nº: 224, resíduos 22 a 483 da SEQ ID Nº: 225, resíduos 22 a 490 da SEQ ID Nº: 226, resíduos 22 a 485 da SEQ ID Nº: 227, resíduos 22 a 486 da SEQ ID Nº: 228, resíduos 22 a 492 da SEQ ID Nº: 229, resíduos 22 a 488 da SEQ ID Nº: 230, resíduos 22 a 488 da SEQ ID Nº: 231, resíduos 22 a 495 da SEQ ID Nº: 232, resíduos 22 a 490 da SEQ ID Nº: 233), ou uma sequência com 95 a 99% de identidade da mesma; ou (v) o CAR de BCMA é codificado por uma sequência de ácido nucleico listada na Tabela 2 ou 5 (por exemplo, SEQ ID Nº: 54, SEQ ID Nº: 55, SEQ ID Nº: 56, SEQ ID Nº: 57, SEQ ID Nº: 58, SEQ ID
Nº: 59, SEQ ID Nº: 60, SEQ ID Nº: 61, SEQ ID Nº: 62, SEQ ID Nº: 63, SEQ ID Nº: 64, SEQ ID Nº: 65, SEQ ID Nº: 66, SEQ ID Nº: 67, SEQ ID Nº: 68, SEQ ID Nº: 150, SEQ ID Nº: 151, SEQ ID Nº: 152, SEQ ID Nº: 153, SEQ ID Nº: 154, SEQ ID Nº: 155, SEQ ID Nº: 156, SEQ ID Nº: 157, SEQ ID Nº: 158, SEQ ID Nº: 159, SEQ ID Nº: 160, SEQ ID Nº: 161, SEQ ID Nº: 162, SEQ ID Nº: 163, SEQ ID Nº: 164, SEQ ID Nº: 165, SEQ ID Nº: 166, SEQ ID Nº: 167, SEQ ID Nº: 168, SEQ ID Nº: 169, SEQ ID Nº: 170), ou uma sequência com 95 a 99% de identidade da mesma.
88. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 87, caracterizado pelo fato de que a doença associada à expressão de BCMA é câncer, opcionalmente em que o câncer é um câncer hematológico.
89. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 88, caracterizado pelo fato de que a doença associada à expressão de BCMA é uma leucemia aguda escolhida dentre um ou mais dentre leucemia linfoide aguda de célula B ("BALL"), leucemia linfoide aguda de célula T ("TALL"), leucemia linfoide aguda (ALL); leucemia mielógena crônica (CML), leucemia linfocítica crônica (CLL); leucemia prolinfocítica de célula B, neoplasia de célula dendrítica plasmacitoide blástica, linfoma de Burkitt, linfoma de células B grandes difusas, linfoma folicular, leucemia de células pilosas, linfoma folicular de células pequenas ou células grandes, condições linfoproliferativas malignas, linfoma MALT, linfoma de célula do manto, linfoma de zona marginal, mieloma múltiplo, mielodisplasia e síndrome mielodisplásica, linfoma não Hodgkin, linfoma plasmablástico, neoplasia de célula dendrítica plasmacitoide, macroglobulinemia de Waldenstrom; um câncer de próstata (por exemplo, câncer de próstata resistente à castração ou resistente à terapia, ou câncer de próstata metastático), câncer pancreático, câncer de pulmão; ou um distúrbio proliferativo celular de plasma (por exemplo, mieloma assintomático (mieloma múltiplo smoldering ou mieloma indolente), gamapatia monoclonal de significância indeterminada (MGUS), macroglobulinemia de Waldenstrom, plasmacitomas (por exemplo, discrasia celular de plasma, mieloma solitário, plasmacitoma solitário, plasmacitoma extramedular e plasmacitoma múltiplo), amiloidose de cadeia leve amiloide sistêmica e síndrome POEMS (também conhecida como síndrome de Crow-Fukase, síndrome de Takatsuki e síndrome PEP)), ou uma combinação dos mesmos.
90. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 89, caracterizado pelo fato de que a doença associada à expressão de BCMA é ALL, CLL, DLBCL, ou mieloma múltiplo.
91. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 90, caracterizado pelo fato de que o sujeito é um paciente humano.
92. Terapia celular de expressão de CAR de BCMA para uso em um método de tratamento de um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizada pelo fato de que o método compreende: em resposta a um valor aumentado para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO- CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou
(vi) a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência não responsivo, realizar: a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito e administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito; ou a administração, por exemplo, iniciar a administração ou continuar a administração, de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito, assim tratando o sujeito que tem a doença associada à expressão de BCMA.
93. Terapia celular de expressão de CAR de BCMA para uso em um método de tratamento de um sujeito que tem uma doença associada à expressão de BCMA, caracterizada pelo fato de que o método compreende: em resposta a um valor diminuído para um, dois, três, quatro, cinco ou todos dentre: (i) o nível ou atividade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação ao nível ou atividade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), em uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, (ii) o nível ou atividade de Tscm CD8+ (células T de memória de célula-tronco) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iii) o nível ou atividade de células HLADR- CD95+CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (iv) o nível ou atividade de células CD45RO-CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), (v) o nível ou atividade de células CCR7+CD45RO- CD27+CD8+ no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese) ou uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou
(vi) a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, em comparação com um valor de referência, por exemplo, um valor de referência responsivo, realizar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou todos dentre: administrar um regime de dosagem alterado de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, um regime de dosagem com uma dose mais alta e/ou administração mais frequente do que um regime de dosagem de referência) ao sujeito; administrar uma segunda terapia (por exemplo, uma segunda terapia que não é uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA) ao sujeito; administrar uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e uma segunda terapia ao sujeito; descontinuar a administração de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA e administrar opcionalmente uma segunda terapia ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecimento para células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) em relação às células efetoras imunes CD8+ (células T CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, enriquecer para Tscm CD8+ (por exemplo, células HLADR-CD95+CD27+CD8+, células CD45RO- CD27+CD8+ ou células CCR7+CD45RO-CD27+CD8+) antes de introduzir um ácido nucleico que codifica um CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; modificar um processo de fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, aumentar a proliferação de células semeadas do sujeito durante a fabricação da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA gerada pelo processo de fabricação modificado ao sujeito; ou administrar um pré-tratamento ao sujeito, em que o pré- tratamento aumenta a razão entre a quantidade de células efetoras imunes CD4+ (por exemplo, células T CD4+) e a quantidade de células efetoras imunes CD8+ (por exemplo, células T CD8+) no sujeito, por exemplo, em uma amostra do sujeito (por exemplo, uma amostra de aférese (por exemplo, uma amostra de leucaférese), uma cultura de semente no começo da fabricação de uma terapia celular de expressão de CAR de BCMA (por exemplo, uma amostra de leucaférese após monócitos serem removidos com o uso de elutriação)), ou no sangue periférico e/ou medula óssea do sujeito antes da administração da terapia celular de expressão de CAR de BCMA, por exemplo, o pré-tratamento aumenta a razão para maior ou igual a 1,6 (por exemplo, entre 1,6 e 5, por exemplo, entre 1,6 e 3,5), fabricar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA com o uso de células (por exemplo, células T) do sujeito, e administrar a terapia celular de expressão de CAR de BCMA ao sujeito, assim tratando o sujeito que tem a doença associada à expressão de BCMA.
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