ES2624921T3

ES2624921T3 - Proteínas de fijación al antígeno receptor A de la IL-17

Info

Publication number: ES2624921T3
Application number: ES12159091.3T
Authority: ES
Inventors: Joel Tocker; Jacques J. Peschon; David Fitzpatrick; Ai Ching Lim; Christopher Mehlin; James F. Smothers
Original assignee: Kirin Amgen Inc
Current assignee: Amgen K A Inc
Priority date: 2006-10-02
Filing date: 2007-10-01
Publication date: 2017-07-18
Anticipated expiration: 2027-10-01
Also published as: US20200362045A1; EP3165539A1; CA2663537C; WO2008054603A3; CY2018001I1; NO344867B1; BRPI0719762A2; US20100028345A1; IL228672A; NO2020036I1; CL2007002800A1; DK2518085T3; CY1118845T1; LTC2076541I2; DK3165539T3; TW200821326A; AU2007314519A1; US7786284B2; NO20091736L; WO2008054603A9

Abstract

Un anticuerpo monoclonal aislado que se fija específicamente a una IL-17RA humana de SEQ ID NO: 430 y compite para fijarse a dicha IL-17RA con un anticuerpo monoclonal aislado de referencia, donde dicho anticuerpo de referencia comprende un dominio variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 40 y un dominio variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO:14 y donde dicho anticuerpo o fragmento se fija específicamente a un polipéptido que consister de la SEQ ID NO: 431, con una afinidad de fijación de 10-8 a 10-10 M y que no fija específicamente dicho polipéptido donde el residuo de ácido aspártico en la posición 152 de la SEQ ID NO:431 sustituido con una arginina, no fija específicamente dicho polipéptido donde el residuo de ácido aspártico en la posición 154 de la SEQ ID NO:431 sustituido con una arginina, no fija específicamente dicho polipéptido donde el residuo de ácido glutámico en la posición 156 de la SEQ ID NO:431 sustituido con una arginina no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 184 de la SEQ ID NO:431, no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 186 de la SEQ ID NO:431, no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 297 de la SEQ ID NO:431 y no se fija específicamente con un polipéptido que consiste de la SEQ ID NO: 436.

Description

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Proteínas de fijación al antígeno receptor A de la IL-17

Descripción

Campo de la invención

La presente invención se refiere a los anticuerpos contra el receptor A de la IL-17 (IL-17RA o IL-17R), a las secuencias de polinucleótidos que codifican dichos anticuerpos y a las composiciones de los anticuerpos para ser usados en el tratamiento de enfermedades mediadas por la activación del receptor A de la IL-17 por acción de uno o más ligandos IL-17. La presente invención se refiere a la identificación de determinantes neutralizantes en el receptor A de la IL-17 (IL-17RA o IL-17R), y anticuerpos que se fijan al mismo. Los aspectos de la invención también incluyen anticuerpos que compiten para fijarse con los anticuerpos neutralizantes de la IL-17RA descritos en la presente.

Antecedentes

La IL-17A es una citocina inflamatoria que se identificó al principio como un transcripto de expresión selectiva en los linfocitos T activados. El IL-17RA se expresa de manera ubicua y se ha demostrado que se fija a la IL-17A con una afinidad de aproximadamente 0,5 nM (Yao et al., 1995, Immunity 3: 811-821). Se han identificado otros cinco ligandos más de tipo IL-17 (IL-17B a IL-17F) y otros cuatro receptores más de tipo IL-17RA (IL-17RB a IL-17RE) (Kolls y Linden, 2004, Immunity 21: 467-476).

Se ha demostrado que el IL-17RC se fija a la IL-17A y a la IL-17F. Las observaciones de que la deficiencia del IL-17RA y la neutralización del IL-17RA con anticuerpos suprimen el funcionamiento de IL-17A e IL-17F sugieren que el IL-17RC no puede transmitir una señal de IL-17A o IL-17F en ausencia del IL-17RA (Toy et al., 2006, J. Immunol. 177: 36-39; McAllister et al., 2005, J. Immunol. 175: 404-412). Adicionalmente, la expresión forzada del IL17RC en las células sin IL-17RA no restaura el funcionamiento de IL-17A o IL-17F (Toy et al., 2006, J. Immunol. 17: 36-39).

La IL-17A y la IL-17F se expresan predominantemente desde los linfocitos T CD4+ memoria activados (Kolls y Linden, 2004, véase más arriba). Se ha propuesto que un subconjunto de linfocitos T CD4+ patógenos productores de IL-17A, ThIL-17, se expande en presencia de la IL-23 (Langrish et al., 2005, J. Exp. Med. 201: 233-240). Adicionalmente, se ha demostrado que la IL-15 y el miembro de la superfamilia de TNF, OX40L, inducen la expresión de la IL-17A (Nakae et al., 2003b, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100: 5986-5990; Ziolkowska et al., 2000, J. Immunol. 164: 2832-2838). La IL-6 y el TGF-β también inducen la expresión de la IL-17A.

La IL-17A y la IL-17F se fijan al IL-17RA y lo activan. Se ha demostrado que el IL-17RA es importante para regular las respuestas inmunitarias. La activación del IL-17RA conduce a la producción de las citocinas, quimiocinas, factores de crecimiento y otras proteínas que contribuyen a los síntomas y/o la patología de numerosas enfermedades. La IL-17A es una citocina inflamatoria que induce la producción de citocinas y otros mediadores que conducen a enfermedades y efectos fisiológicos tales como la inflamación, la degradación de cartílagos y la resorción ósea. La IL-17A también interviene en una serie de afecciones inflamatorias que incluyen artritis (artritis reumatoide), psoriasis, enteropatía inflamatoria, esclerosis múltiple y asma. (Li et al., 2004, Huazhong Univ. Sci. Technolog. Med. Sci. 24: 294-296; Fujino et al., 2003, Gut. 52: 65-70; Kauffman et al., 2004, J. Invest. Dermatol. 123: 1037-1044; Mannon et al., 2004, N. Engl. J. Med. 351: 2069-2079; Matusevicius et al., 1999, Mult. Scler 5, 101-104; Linden et al., Eur Respir J. mayo de 2000; 15(5): 973-7; Molet et al., 2001, J. Allergy Clin. Immunol. 108: 430-438). Los estudios recientes han sugerido que la IL-17F interviene en la inducción de respuestas inflamatorias (Oda et al., 2006, American J. Resp. Crit. Care Medicine, 15 de enero de 2006; Numasaki et al., 2004, Immunol. Lett. 95: 97104).

Los aspectos de la invención dan a conocer proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente al IL-17RA e inhiben la activación del IL-17RA mediada por los miembros de la familia de la IL-17 tales como, pero sin limitarse a ellos, IL-17A y/o IL-17F, como se describe con más detalle en la presente memoria.

Específicamente, la invención proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o fragmento del mismo, que comprende un cadena pesada variable que es al menos un 90% idéntica a la SEQ ID NO:14 y una cadena ligera variable que es al menos un 90% idéntica a la SEQ ID NO: 40, que se fija específicamente con la IL-17RA de la SEQ ID NO:431, con una afinidad de fijación de 10-8 a 10-10 M y que no fija dicho polipéptido en el que el residuo de ácido aspártico en la posición 152 de la SEQ ID NO:431 sustituido con una arginina, no se fija específicamente a dicho polipéptido en el que el residuo de ácido glutámico en la posición 156 de la SEQ ID NO:431 sustituido con una arginina no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 184 de la SEQ ID NO: 431, no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 186 de la SEQ ID NO:431, no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 297 de la SEQ ID NO: 431 y no se fija específicamente con un polipéptido que consiste de la SEQ ID NO: 436.

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El anticuerpo puede ser un anticuerpo IgG humano

El anticuerpo puede ser un anticuerpo IgG2 humano.

También se proporciona una composición farmacéutica, que comprende un anticuerpo de la invención.

También se proporciona un polinucleótido aislado que codifica el anticuerpo de la invención.

También se proporciona un plásmido que comprende el polinucleótido de la invención.

El plásmido puede ser un vector de expresión.

La invención proporciona una célula aislada, que comprende dicho plásmido de la invención.

Un cromosoma de dicha célula puede comprender el polinucleótido de la invención.

La célula puede ser un hibridoma.

La célula puede comprender el vector de expresión de la invención.

La célula puede seleccionarse del grupo consistente de: a. una célula procariota; b. una célula eucariótica;

c. una célula de mamífero; d. una célula de insecto; y e. una célula CHO.

También se proporciona un método para hacer el anticuerpo que comprende incubar dicha célula aislada bajo condiciones que le permiten expresar dicho polipéptido, así como el anticuerpo hecho por dicho método.

También se proporciona el anticuerpo de la invención o la composición farmacéutica de la invención para su uso en el tratamiento de artritis psoriásica, artritis psoriásica juvenil, psoriasis, psoriasis en placa, dermatitis atópica, asma o enfermedad pulmonar obstructiva crónica.

El anticuerpo o composición farmacéutica para el uso de acuerdo con la invención puede comprender adicionalmente el uso de una segunda composición farmacéutica. La segunda composición farmacéutica puede seleccionarse del grupo consistente de: inhibidores de TNF, receptores de TNF solubles, Etanercept, receptor de TNF soluble tipo I y receptor de TNF soluble tipo II, moléculas receptoras de TNF p78 y/o p55 multiméricas y fragmentos de las mismas, anticuerpos anti-TNF, Infliximab, adalimumab, inhibidores de IL-1, inhibidores del receptor de IL-1, inhibidores de CD28, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID), un fármaco antirreumático de acción lenta (SAARD), y fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad (DMARD).

Breve descripción de los dibujos

En la figura 1 se muestra un dendrograma del análisis filogenético de las CDR (regiones determinantes de la complementariedad) de los dominios variable de cadena pesada (VH) y variable de cadena ligera (VL) de diferentes proteínas (anticuerpos) de fijación al antígeno IL-17R. En la figura 2 se representa un alineamiento de las secuencias de aminoácidos de las CDR de los dominios variables de cadena pesada (VH) de diferentes proteínas (anticuerpos) de fijación al antígeno IL-17R. Se resaltan las regiones CDR1, CDR2 y CDR3. En la figura 3 se representa un alineamiento de las secuencias de aminoácidos de las CDR de los dominios variables de cadena ligera (VL) de diferentes proteínas (anticuerpos) de fijación al antígeno IL-17R. Se resaltan las regiones CDR1, CDR2 y CDR3. En la figura 4 se muestra que las puntuaciones clínicas medias de los ratones IL-17RA–/– (ratones agénicos o KO) son mucho más bajas que las de los ratones genéticamente intactos (WT, por su nombre en inglés) en un modelo de artritis inducida por colágeno (AIC). En la figura 5 se muestra el retraso de la aparición de la encefalomielitis autoinmunitaria experimental (EAE) en los ratones agénicos sin el IL-17RA en comparación con los ratones genéticamente intactos en un modelo inducido por la glucoproteína de la mielina de los oligodendrocitos (MOG, por su nombre en inglés). En la figura 6 se muestra la reducción de las puntuaciones clínicas en los ratones agénicos sin el IL-17RA en comparación con los ratones genéticamente intactos en un modelo inducido por MOG. En la figura 7 se muestra que los ratones agénicos sin el IL-17RA tienen menos cantidad de células inflamatorias en líquido de lavado broncoalveolar (LBA) que el genéticamente intacto en un modelo de asma inducido por la ovalbúmina. En la figura 8 se muestra que los ratones agénicos sin el IL-17RA tienen menos cantidad de eosinófilos (figura 8A), neutrófilos (figura 8B) y linfocitos (figura 8C) en líquido de LBA que los ratones genéticamente intactos en un modelo de asma inducida por la ovalbúmina. En la figura 8D se muestra la ausencia de cambios en los macrófagos del líquido del LBA observada en los ratones WT o en los ratones agénicos sin el IL-17RA (intactos o provocados con OVA).

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En la figura 9 se muestra la inhibición dependiente de la dosis mediante un Acm contra IL-17RA en un modelo genéticamente intacto (WT) de artritis inducida por colágeno (AIC). Se observó una P < 0,05 cuando se comparó el Acm contra el IL-17RA en los grupos de tratamiento con 100 μg y 300 μg frente al grupo de tratamiento de control (días 13, 15 y 16). En la figura 10 se muestran los resultados del tratamiento terapéutico con el Acm contra el IL-17RA. Los datos muestran la estabilización de las puntuaciones clínicas medias de los ratones genéticamente intactos en un modelo estándar de AIC. Estos datos demuestran que la inhibición del IL-17RA mediante una proteína de fijación al antígeno IL-17RA puede ser terapéuticamente útil para tratar la artritis reumatoide (AR), en especial para la protección del hueso y del cartílago de la articulación. En la figura 11 se muestra que el tratamiento terapéutico con el Acm anti-IL-17RA estabilizó las puntuaciones clínicas medias de los ratones agénicos sin TNFR p55/p75 en un modelo estándar de AIC. Estos datos demuestran que la inhibición del IL-17RA mediante una proteína de fijación al antígeno IL-17RA puede ser terapéuticamente útil para tratar la AR, en especial para la protección del hueso y del cartílago de la articulación. En particular, la inhibición del IL-17RA fue capaz de estabilizar la enfermedad en un modelo independiente de la señalización del TNF. En la figura 12 se muestra que los Acm humanos contra el IL-17RA de ejemplo (AMH14/AML14, AMH22/AML22, AMH19/AML19 y AMH18/AML18) fueron capaces de inhibir la producción de IL-16 inducida por la IL-17 de macaco cangrejero a partir de las células JTC-12 (línea celular de riñón de macaco cangrejero). La línea (----) representa el valor del control positivo de la IL-17 de macaco cangrejero en combinación con el TNF-α. La línea (-.-.-) representa el valor del control positivo de TNF-α de macaco cangrejero. La línea (….) representa el valor medio del control. En la figura 13 se muestra la variación de secuencia en las regiones flanqueantes de la SEQ ID NO: 40 (AML14) en relación con los restos en las células reproductoras y el efecto sobre los valores de CI50. En la figura 14 se muestra que las dos variantes que tienen restos que coinciden con los de las células reproductoras (véase la figura 13) reducían la actividad inhibidora de la IL-17A en relación con AMH14/AML14, lo que indica que se toleraba cierta variación en las regiones flanqueantes, pero que algunos restos pueden influir en la actividad. La línea (----) indica el valor del control positivo de la estimulación de la IL-17 en ausencia de anticuerpo (aproximadamente 4062 pg/ml). En la figura 15 se muestra que las dos variantes que tienen restos como los de las células reproductoras (véase la figura 13) reducían la actividad inhibidora de la IL-17F (en combinación con el TNF-α) en relación con AMH14/AML14. En las figuras 16A y 16B se muestran los resultados del encestado multiplexado de los anticuerpos contra el IL-17RA. Los valores sombreados indican parejas de anticuerpos que se fijan simultáneamente al IL-17RA, lo que sugiere que estos anticuerpos se fijan a diferentes determinantes neutralizantes. Los valores recuadrados señalan los anticuerpos emparejados consigo mismos. En la figura 17 se muestra el IL-17RA de ratón (SEQ ID NO: 432) y los 5 dominios, A, B, C, D, E y F que reemplazaron los dominios correspondientes en la secuencia del IL-17RA humano. En las figuras 18A-18D se muestran las secuencias de aminoácidos del IL-17RA humano y de ratón, y las proteínas IL-17RA quiméricas de humano y ratón. La figura 19 es una tabla que resume la capacidad que los Acm contra el IL-17RA tienen para fijarse a las distintas proteínas quiméricas. Los valores sombreados señalan dónde pierden la fijación a una quimera concreta los Acm contra el IL-17RA (n. d. significa que no se determinó). En la figura 20 se representan los restos aminoacídicos que se reemplazaron por un resto arginina en la SEQ ID NO: 431. En la figura 21 se ilustran las curvas del titulación de diferentes Acm contra el IL-17RA al fijarse al mutante D152R del IL-17RA. La figura 22 es un resumen del barrido de argininas, encestado y datos de las quimeras para diferentes Acm contra el IL-17RA.

Descripción detallada de la invención

Los títulos de los apartados utilizados en la presente memoria sólo tienen propósitos organizativos y no se debe considerar que limitan la materia objeto que se describe.

Se pueden utilizar técnicas estándares para el ADN recombinante, la síntesis de oligonucleótidos, el cultivo de tejidos y su transformación, la purificación de proteínas, etc. Las reacciones enzimáticas y las técnicas de purificación se pueden realizar de acuerdo con las especificaciones del fabricante o como se suele llevar a cabo en la técnica o como se describe en la presente memoria. Los siguientes procedimientos y técnicas se pueden realizar por lo general de acuerdo con los procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica y como se describe en diferentes referencias generales y más específicas que se citan y explican a lo largo de la especificación. Véase,

p. ej., Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, tercera edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. A menos que se den a conocer definiciones específicas, la nomenclatura utilizada, así como los procedimientos de laboratorio y las técnicas, de química analítica, química orgánica y química medicinal y farmacéutica descritos en la presente memoria son los bien conocidos y de uso corriente en la técnica. Se pueden utilizar técnicas estándares para la síntesis química, análisis químicos,

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preparación farmacéutica, formulación, y administración y tratamiento de los pacientes.

IL-17A, IL-17F e IL-17RA

La actividad biológica de IL-17A e IL-17F dependen del IL-17RA, como se muestra en la presente memoria con células y ratones que son genéticamente deficientes en el IL-17RA y con los Acm (anticuerpos monoclonales) neutralizantes dirigidos contra el IL-17RA (véanse los ejemplos que vienen a continuación).

«Receptor A de IL-17» o «IL-17RA» (utilizados indistintamente en la presente memoria, así como receptor de IL-17 e IL-17R para referirse al mismo receptor), tal como se utilizan en la presente memoria, hacen referencia al receptor de la superficie celular y a los complejos del receptor (tal como, pero sin limitarse a él, el complejo IL-17RA-IL-17RC), al que se fijan la IL-17A y la IL-17F y, como resultado, inicia una vía de transducción de la señal dentro de la célula. Las proteínas del IL-17RA también pueden incluir variantes. Las proteínas del IL-17RA también pueden incluir fragmentos, tales como el dominio extracelular, que no tienen todo o parte del dominio transmembranario y/o intracelular, así como fragmentos del dominio extracelular. La clonación, la caracterización y la preparación del IL17RA se describen, por ejemplo, en la patente de los EE. UU. n.º 6.072.033. La secuencia de aminoácidos del IL17RA humano se muestra en la SEQ ID NO: 430. Las formas solubles del huIL-17RA útiles en los métodos de la presente invención incluyen el dominio extracelular o la forma madura que carece del péptido señal o un fragmento del dominio extracelular que conserva la capacidad para fijarse a la IL-17A y/o la IL-17F, o una versión heterodimérica de IL-17A y/o IL-17F. Otras formas del IL-17RA incluyen muteínas y variantes que son homólogas al menos entre el 70% y el 99% al IL-17RA nativo de SEQ ID NO: 430 y como se describe en la patente de los EE. UU. n.º 6.072.033, siempre que el IL-17RA conserve la capacidad para fijarse a la IL-17A y/o a la IL-17F, o una versión heterodimérica de IL-17A y/o IL-17F. La terminología «IL-17RA» también incluye las modificaciones postraduccionales de la secuencia de aminoácidos del IL-17RA. Las modificaciones postraduccionales incluyen, pero sin limitarse a ellas, N-y O-glucosilación.

El término "realización" como se usa aquí no se refiere necesariamente al asunto de la invención.

Proteínas de fijación al antígeno IL-17RA

La presente invención proporciona anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA.

Los aspectos de la invención incluyen anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA humano e inhiben la fijación de un heterodímero IL-17A/IL-17F al IL-17RA y la activación del mismo, o de un complejo heterodimérico de IL-17RA e IL-17RC. A lo largo de esta especificación, cuando se hace referencia a inhibir IL-17A y/o IL-17F, se entiende que esto también incluye inhibir heterodímeros de IL-17A e IL-17F. Los aspectos de la invención pueden incluir anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA humano y que inhiben el IL-17RA de forma parcial o completa impidiéndole formar un complejo receptor funcional homodimérico o heterodimérico tal como, pero sin limitarse a éste, un complejo IL-17RA—IL-17RC. Los aspectos de la invención incluyen anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA humano y que inhiben el IL-17RA de forma parcial o completa impidiéndole formar un complejo receptor funcional homodimérico o heterodimérico, tal como, pero sin limitarse a éste, el complejo IL-17RA—IL-17RC, y no inhiben necesariamente la fijación de la IL-17A y/o de la IL-17F o de un heterodímero IL-17A—IL-17F al IL-17RA o a un complejo receptor heterodimérico del IL-17RA.

Los anticuerpos de la invención se fijan específicamente al IL-17RA. «Se fija específicamente», tal y como se utiliza en la presente memoria, significa que el anticuerpo se fija preferiblemente al IL-17RA antes que a otras proteínas. «Se fija específicamente» significa que los anticuerpos de IL-17RA tienen una afinidad más alta por el IL17RA que por otras proteínas. La constante de disociación de equilibrio es de 10–8 a <10–10 M.

En la presente se describen fragmentos del mismo que se fijan al IL-17RA. Un fragmento de fijación al IL17RA comprende cualquiera de los fragmentos o dominios de anticuerpo descritos en la presente memoria que conserve la capacidad para fijarse específicamente al IL-17RA. Dichos fragmentos de fijación al IL-17RA pueden ser cualquiera de los armazones descritos en la presente memoria. Dichos fragmentos de fijación al IL-17RA pueden tener también la capacidad de inhibir la activación del IL-17RA, como se describe a lo largo de esta especificación.

En aspectos de la divulgación, en los que la proteína de fijación al antígeno IL-17RA se utiliza para aplicaciones terapéuticas, una característica de una proteína de fijación al antígeno IL-17RA puede ser la de poder inhibir la fijación de la IL-17A y/o de la IL-17F al IL-17RA y una o más actividades biológicas del IL-17RA, o en las que interviene el IL-17RA. Tales anticuerpos se consideran anticuerpos neutralizantes debido a su capacidad para inhibir la fijación de la IL-17A y/o de la IL-17F y desencadenar la señalización y/o actividad biológica de IL-17RA. En este caso, una proteína de fijación a antígeno se fija específicamente al IL-17RA y puede inhibir la fijación de la IL17A y/o de la IL-17F al IL-17RA con cualquier valor entre el 10 al 100%, tal como al menos aproximadamente 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% o más (por ejemplo, al medir la fijación en un ensayo

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de fijación competitivo in vitro como se describe en la presente memoria). Por ejemplo, se puede analizar la capacidad neutralizadora de los anticuerpos contra el IL-17RA al analizar la producción de IL-6 en un ensayo de fibroblastos de prepucio humano (HFF, por su nombre en inglés) (véanse, por ejemplo, los ejemplos 8 y 9) o cualquier ensayo adecuado conocido en la técnica. Ejemplos, sólo con propósitos ilustrativos, de la actividad biológica adicional del IL-17RA (p. ej., lecturas de ensayo) para analizar la inhibición de la señalización y/o de la actividad biológica del IL-17RA incluyen la medición in vitro y/o in vivo de uno o más de IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, las MMP (tales como, pero sin limitarse a ellas, MMP3 y MMP9) GROα, NO y/o telopéptido C, y similares.

Las realizaciones de las proteínas de fijación a antígeno comprenden un armazón estructural, como los diferentes que se definen en la presente, con una o más regiones determinantes de la complementariedad (CDR, por su nombre en inglés). Las realizaciones de proteínas de fijación al antígenos comprenden un armazón estructural con uno o más dominios variables, ya sean pesados o ligeros. Las realizaciones incluyen un anticuerpo monoclonal asilado o fragmento del mismo, que comprende una cadena pesada variable que es al menos un 90% idéntica a la SEQ ID NO:14 y una cadena ligera variable que es al menos un 90% idéntica a la SEQ ID NO: 40, que fija específicamente con la IL-17RA de la SEQ ID NO: 431 con una afinidad de fijación de 10-8 a 10-10 M y no fija a dicho polipéptido donde el residuo de ácido aspártico en la posición 152 de la SEQ ID NO: 431 sustituido con una arginina, no fija específicamente dicho polipéptido donde el residuo de ácido aspártico en la posición 154 de la SEQ ID NO: 431 sustituido con una arginina, no fija específicamente dicho polipéptido donde el residuo de ácido glutámico en la posición 156 de la SEQ ID NO: 431 sustituido con una arginina no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 184 de la SEQ ID NO: 431, no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 186 de la SEQ ID NO: 431, no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 297 de la SEQ ID NO: 431 y no fija específicamente con un polipéptido que consiste de la SEQ ID NO:

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El anticuerpo puede ser un anticuerpo IgG humano.

El anticuerpo puede ser un anticuerpo IgG2 humano.

Otros ejemplos de armazones que se pueden contemplar incluyen: fibronectina, neocarcinostatina CBM4-2, lipocalinas, receptor de los linfocitos T, dominio de la proteína A (proteína Z), Im9, proteínas TPR, dominios de dedo de cinc, pVIII, polipéptido pancreático aviar, GCN4, dominio de WW, dominio 3 de homología a Src, dominios PDZ, β-lactamasa, TEM-1, tiorredoxina, nucleasa estafilocócica, dominios de dedo de PHD, CL-2, BPTI, APPI, HPSTI, ecotina, LACI-D1, LDTI, MTI-II, toxina de escorpión, péptido de la defensina A de insecto, EETI-II, Min-23, CBD, PBP, citocromo b-562, dominios del receptor de LDL, γ-cristalina, ubicuitina, transferrina y/o dominios de tipo lectina de tipo C.

Aspectos de la invención incluyen anticuerpos que comprenden los siguientes dominios variables: AML1/AMH1 (SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:1), AML2/AMH2 (SEQ ID NO:28/SEQ ID NO:2), AML3/AMH3 (SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:3), AML4/AMH4 (SEQ ID NO:30/SEQ ID NO:4), AML5/AMH5 (SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:5), AML6/AMH6 (SEQ ID NO:32/SEQ ID NO:6), AML7/AMH7 (SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:7), AML8/AMH8 (SEQ ID NO:34/SEQ ID NO:8), AML9/AMH9 (SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:9), AML10/AMH10 (SEQ ID NO:36/SEQ ID NO:10), AML11/AMH11 (SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:11), AML12/AMH12 (SEQ ID NO:38/SEQ ID NO:12), AML13/AMH13 (SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:13), AML14/AMH14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14), AML15/AMH15 (SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:15), AML16/AMH16 (SEQ ID NO:42/SEQ ID NO:16), AML17/AMH17 (SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:17), AML18/AMH18 (SEQ ID NO:44/SEQ ID NO:18), AML19/AMH19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO:19), AML20/AMH20 (SEQ ID NO:46/SEQ ID NO:20), AML21/AMH21 (SEQ ID NO:47/SEQ ID NO:21), AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22), AML23/AMH23 (SEQ ID NO:49 o SEQ ID NO:50/SEQ ID NO:23), AML24/AMH24 (SEQ ID NO:51/SEQ ID NO:24), AML25/AMH25 (SEQ ID NO:52/SEQ ID NO:25), AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26).

En la presente se describen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada seleccionada del grupo consistente de las SEQ ID NO:1-26 y anticuerpos que comprenden una región variable de cadena ligera seleccionada del grupo consistente de las SEQ ID NO:27-53 y anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada seleccionada del grupo consistente de la SEQ ID NO:1-26 que no tiene más de uno, dos, tres, cuatro, cinco, o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos y anticuerpos que comprenden una región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste de las SEQ ID NO: 27-53 que no tiene más de uno, dos, tres, cuatro, cinco, o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos. En la presente se describen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada seleccionada del grupo consistente de las SEQ ID NO:1-26 que no tenga más de uno, dos, tres, cuatro, cinco, o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos y una región variable de cadena ligera seleccionada del grupo consistente de las SEQ ID NO:27-53 que no tenga más de uno, dos, tres, cuatro, cinco, o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos.

Los dominios variables de cadena pesada y ligera de las proteínas de fijación al antígeno pueden definirse por tener un cierto porcentaje de identidad con un dominio variable de cadena pesada y/o ligera de referencia. Por

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ejemplo, la proteína de fijación al antígenos comprende A) un aminoácido del dominio variable de cadena pesada que es al menos un 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idéntico a una secuencia de aminoácidos de cadena pesada seleccionada del grupo consistente de las SEQ ID NO: 1-26; y B) un aminoácido del dominio variable de cadena ligera que es al menos un 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idéntico a una secuencia de aminoácidos de cadena ligera seleccionada del grupo consistente de las SEQ ID NOs: 27-53.

En la presente se describen las siguientes realizaciones ejemplares que no están necesariamente incluidas en la presente invención: Realización 1: un anticuerpo aislado, que comprende un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo que se fija al receptor A de la IL-17 que no es completamente murino y que se fija específicamente al receptor A de la IL-17 e inhibe la fijación de la IL-17A y que ésta active a dicho receptor, en donde el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 224, una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 225, una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 226, una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 147, y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 148. Realización 2: el anticuerpo de la realización 1, en donde dicho anticuerpo inhibe además la fijación de la IL-17F y que ésta active a dicho receptor. Realización 3: el anticuerpo de la realización 1 o de la realización 2, en donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en: a, un anticuerpo humanizado; b, un anticuerpo quimérico; c, un anticuerpo recombinante; d, un anticuerpo de cadena única; e, un dianticuerpo; f, un trianticuerpo; g, un tetranticuerpo; h, un fragmento Fab; i, un fragmento F(ab')2; j, un anticuerpo IgD; k, un anticuerpo IgE; l, un anticuerpo IgM; m, un anticuerpo IgG1; n, un anticuerpo IgG2; o, un anticuerpo IgG3; y p, un anticuerpo IgG4.

Realización 4: el anticuerpo de la realización 3, en donde dicho anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

A.

a, una secuencia de dominio variable de cadena ligera que es idéntica al menos al 80% a una secuencia del dominio variable de la cadena ligera de AML14 (SEQ ID NO: 40); b, una secuencia de dominio variable de cadena pesada que es idéntica al menos al 80% a una secuencia del dominio variable de la cadena pesada de AMH14 (SEQ ID NO: 14); o

c. el dominio variable de cadena ligera de (a) y el dominio variable de cadena pesada de (b); y

B. Una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena ligera y una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena pesada que difiere en no más de un total de tres adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos en cada CDR de las secuencias siguientes:

a.: una CDR1 (SEQ ID NO: 185), CDR2 (SEQ ID NO: 186), CDR3 (SEQ ID NO: 187) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 107), CDR2 (SEQ ID NO: 108), CDR3 (SEQ ID NO:109) de cadena pesada del anticuerpo AM-1;

b.: una CDR1 (SEQ ID NO: 188), CDR2 (SEQ ID NO: 189), CDR3 (SEQ ID NO: 190) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 110), CDR2 (SEQ ID NO: 111), CDR3 (SEQ ID NO:112) de cadena pesada del anticuerpo AM-2;

c.: una CDR1 (SEQ ID NO: 191), CDR2 (SEQ ID NO: 192), CDR3 (SEQ ID NO: 193) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 113), CDR2 (SEQ ID NO: 114), CDR3 (SEQ ID NO:115) de cadena pesada del anticuerpo AM-3;

d.: una CDR1 (SEQ ID NO: 194), CDR2 (SEQ ID NO: 195), CDR3 (SEQ ID NO: 196) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 116), CDR2 (SEQ ID NO: 117), CDR3 (SEQ ID NO:118) de cadena pesada del anticuerpo AM-4;

e.: una CDR1 (SEQ ID NO: 197), CDR2 (SEQ ID NO: 198), CDR3 (SEQ ID NO: 199) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 119), CDR2 (SEQ ID NO: 120), CDR3 (SEQ ID NO:121) de cadena pesada del anticuerpo AM-5;

f.: una CDR1 (SEQ ID NO:200), CDR2 (SEQ ID NO:201), CDR3 (SEQ ID NO:202) y de cadena ligera una CDR1 (SEQ ID NO: 122), CDR2 (SEQ ID NO: 123), CDR3 (SEQ ID NO:124) de cadena pesada del anticuerpo AM-6;

g.: una CDR1 (SEQ ID NO:203), CDR2 (SEQ ID NO:204), CDR3 (SEQ ID NO:205) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 125), CDR2 (SEQ ID NO: 126), CDR3 (SEQ ID NO:127) de cadena pesada del anticuerpo AM-7;

h.: una CDR1 (SEQ ID NO:206), CDR2 (SEQ ID NO:207), CDR3 (SEQ ID NO:208) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 128), CDR2 (SEQ ID NO: 129), CDR3 (SEQ ID NO:130) de cadena pesada del anticuerpo AM-8;

i.: una CDR1 (SEQ ID NO:209), CDR2 (SEQ ID NO:210), CDR3 (SEQ ID NO:211) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 131), CDR2 (SEQ ID NO: 132), CDR3 (SEQ ID NO:133) de cadena pesada del

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anticuerpo AM-9;

j.: una CDR1 (SEQ ID NO:212), CDR2 (SEQ ID NO:213), CDR3 (SEQ ID NO:214) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 134), CDR2 (SEQ ID NO: 135), CDR3 (SEQ ID NO:136) de cadena pesada del anticuerpo AM-10;

k.: una CDR1 (SEQ ID NO:215), CDR2 (SEQ ID NO:216), CDR3 (SEQ ID NO:217) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 137), CDR2 (SEQ ID NO: 138), CDR3 (SEQ ID NO:139) de cadena pesada del anticuerpo AM-11;

l.: una CDR1 (SEQ ID NO:218), CDR2 (SEQ ID NO:219), CDR3 (SEQ ID NO:220) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 140), CDR2 (SEQ ID NO: 141), CDR3 (SEQ ID NO:142) de cadena pesada del anticuerpo AM-12;

m.: una CDR1 (SEQ ID NO:221), CDR2 (SEQ ID NO:222), CDR3 (SEQ ID NO:223) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:143), CDR2 (SEQ ID NO:144), CDR3 (SEQ ID NO:145) de cadena pesada del anticuerpo AM-13;

n.: una CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 146), CDR2 (SEQ ID NO: 147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadena pesada del anticuerpo AM-14;

o.: una CDR1 (SEQ ID NO:227), CDR2 (SEQ ID NO:228), CDR3 (SEQ ID NO:229) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 149), CDR2 (SEQ ID NO: 150), CDR3 (SEQ ID NO:151) de cadena pesada del anticuerpo AM-15;

p.: una CDR1 (SEQ ID NO:230), CDR2 (SEQ ID NO:231), CDR3 (SEQ ID NO:232) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 152), CDR2 (SEQ ID NO: 153), CDR3 (SEQ ID NO:154) de cadena pesada del anticuerpo AM-16;

q.: una CDR1 (SEQ ID NO:233), CDR2 (SEQ ID NO:234), CDR3 (SEQ ID NO:235) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 155), CDR2 (SEQ ID NO: 156), CDR3 (SEQ ID NO:157) de cadena pesada del anticuerpo AM-17;

r.: una CDR1 (SEQ ID NO:236), CDR2 (SEQ ID NO:237), CDR3 (SEQ ID NO:238) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 158), CDR2 (SEQ ID NO: 159), CDR3 (SEQ ID NO:160) de cadena pesada del anticuerpo AM-18;

s.: una CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 161), CDR2 (SEQ ID NO: 162), CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadena pesada del anticuerpo AM-19;

t.: una CDR1 (SEQ ID NO:242), CDR2 (SEQ ID NO:243), CDR3 (SEQ ID NO:244) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 164), CDR2 (SEQ ID NO: 165), CDR3 (SEQ ID NO:166) de cadena pesada del anticuerpo AM-20;

u.: una CDR1 (SEQ ID NO:245), CDR2 (SEQ ID NO:246), CDR3 (SEQ ID NO:247) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 167), CDR2 (SEQ ID NO: 168), CDR3 (SEQ ID NO:169) de cadena pesada del anticuerpo AM-21;

v.: una CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 170), CDR2 (SEQ ID NO: 171), CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadena pesada del anticuerpo AM-22;

w.: una CDR1 (SEQ ID NO:251), CDR2 (SEQ ID NO:252), CDR3 (SEQ ID NO:253) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 173), CDR2 (SEQ ID NO: 174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23;

x.: una CDR1 (SEQ ID NO:254), CDR2 (SEQ ID NO:255), CDR3 (SEQ ID NO:256) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 173), CDR2 (SEQ ID NO: 174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23;

y.: una CDR1 (SEQ ID NO:257), CDR2 (SEQ ID NO:258), CDR3 (SEQ ID NO:259) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 176), CDR2 (SEQ ID NO: 177), CDR3 (SEQ ID NO:178) de cadena pesada del anticuerpo AM-24;

z.: una CDR1 (SEQ ID NO:260), CDR2 (SEQ ID NO:261), CDR3 (SEQ ID NO:262) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 179), CDR2 (SEQ ID NO: 180), CDR3 (SEQ ID NO:181) de cadena pesada del anticuerpo AM-25; o

z.2. una CDR1 (SEQ ID NO:263), CDR2 (SEQ ID NO:264), CDR3 (SEQ ID NO:265) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:182), CDR2 (SEQ ID NO:183), CDR3 (SEQ ID NO:184) de cadena pesada del anticuerpo AM-26; donde dicho anticuerpo fija específicamente con el IL-17 receptor A de IL-17.

Realización 5: el anticuerpo de la realización 4, donde dicho anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

a.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML2/AMH2 (SEQ ID NO: 27/SEQ ID NO:1);

b.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML2/AMH2 (SEQ ID NO:28/SEQ ID NO:2);

c.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML3/AMH3 (SEQ ID

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NO:29/SEQ ID NO:3);

d.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML4/AMH4 (SEQ ID NO:30/SEQ ID NO:4);

e.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML5/AMH5 (SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:5);

f.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML6/AMH6 (SEQ ID NO:32/SEQ ID NO:6)

g.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML7/AMH7 (SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:7);

h.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML8/AMH8 (SEQ ID NO:34/SEQ ID NO:8);

i.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML9/AMH9 (SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:9);

j.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML10/AMH10 (SEQ ID NO:36/SEQ ID NO:10);

k.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML11/AMH11 (SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:11);

l.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML12/AMH12 (SEQ ID NO:38/SEQ ID NO:12);

m.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML13/AMH13 (SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:13); n. un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML14/AMH14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14);

o.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML15/AMH15 (SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:15);

p.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML16/AMH16 (SEQ ID NO:42/SEQ ID NO:16);

q.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML17/AMH17 (SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:17);

r.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML18/AMH18 (SEQ ID NO:44/SEQ ID NO:18);

s.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML19/AMH19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO:19);

t.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML20/AMH20 (SEQ ID NO:46/SEQ ID NO:20);

u.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML21/AMH21 (SEQ ID NO:47/SEQ ID NO:21);

v.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22);

w.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML23/AMH23 (SEQ ID NO: 49 o SEQ ID NO:50/SEQ ID NO:23);

x.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML24/AMH24 (SEQ ID NO:51/SEQ ID NO:24);

y.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML25/AMH25 (SEQ ID NO:52/SEQ ID NO:25); y

z.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26); donde dicho anticuerpo se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 6: el anticuerpo de la realización 4, donde dicho anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

e.: una CDR1 (SEQ ID NO: 197), CDR2 (SEQ ID NO: 198), CDR3 (SEQ ID NO: 199) de cadena ligera y

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una CDR1 (SEQ ID NO: 119), CDR2 (SEQ ID NO: 120), CDR3 (SEQ ID NO:121) de cadena pesada del anticuerpo AM-5;

f.: una CDR1 (SEQ ID NO:200), CDR2 (SEQ ID NO:201), CDR3 (SEQ ID NO:202) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 122), CDR2 (SEQ ID NO: 123), CDR3 (SEQ ID NO:124) de cadena pesada del anticuerpo AM-6;

i.: una CDR1 (SEQ ID NO:209), CDR2 (SEQ ID NO:210), CDR3 (SEQ ID NO:211) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 131), CDR2 (SEQ ID NO: 132), CDR3 (SEQ ID NO:133) de cadena pesada del anticuerpo AM-9;

j.: una CDR1 (SEQ ID NO:212), CDR2 (SEQ ID NO:213), CDR3 (SEQ ID NO:214) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:134), CDR2 (SEQ ID NO:135), CDR3 (SEQ ID NO:136) de cadena pesada del anticuerpo AM-10;

k.: una CDR1 (SEQ ID NO:215), CDR2 (SEQ ID NO:216), CDR3 (SEQ ID NO:217) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:137), CDR2 (SEQ ID NO:138), CDR3 (SEQ ID NO:139) de cadena pesada del anticuerpo AM-11;

l.: una CDR1 (SEQ ID NO:218), CDR2 (SEQ ID NO:219), CDR3 (SEQ ID NO:220) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:140), CDR2 (SEQ ID NO:141), CDR3 (SEQ ID NO:142) de cadena pesada del anticuerpo AM-12;

n.: una CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadena pesada del anticuerpo AM-14;

o.: una CDR1 (SEQ ID NO:227), CDR2 (SEQ ID NO:228), CDR3 (SEQ ID NO:229) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:149), CDR2 (SEQ ID NO:150), CDR3 (SEQ ID NO:151) de cadena pesada del anticuerpo AM-15;

p.: una CDR1 (SEQ ID NO:230), CDR2 (SEQ ID NO:231), CDR3 (SEQ ID NO:232) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:152), CDR2 (SEQ ID NO:153), CDR3 (SEQ ID NO:154) de cadena pesada del anticuerpo AM-16;

q.: una CDR1 (SEQ ID NO:233), CDR2 (SEQ ID NO:234), CDR3 (SEQ ID NO:235) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:155), CDR2 (SEQ ID NO:156), CDR3 (SEQ ID NO:157) de cadena pesada del anticuerpo AM-17;

r.: una CDR1 (SEQ ID NO:236), CDR2 (SEQ ID NO:237), CDR3 (SEQ ID NO:238) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:158), CDR2 (SEQ ID NO:159), CDR3 (SEQ ID NO:160) de cadena pesada del anticuerpo AM-18;

s.: una CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:161), CDR2 (SEQ ID NO:162), CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadena pesada del anticuerpo AM-19;

t.: una CDR1 (SEQ ID NO:242), CDR2 (SEQ ID NO:243), CDR3 (SEQ ID NO:244 de cadena ligera) y una CDR1 (SEQ ID NO:164), CDR2 (SEQ ID NO:165), CDR3 (SEQ ID NO:166) de cadena pesada del anticuerpo AM-20;

u.: una CDR1 (SEQ ID NO:245), CDR2 (SEQ ID NO:246), CDR3 (SEQ ID NO:247) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:167), CDR2 (SEQ ID NO:168), CDR3 (SEQ ID NO:169) de cadena pesada del anticuerpo AM-21;

v.: una CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO:171), CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadena pesada del anticuerpo AM-22;

w.: una CDR1 (SEQ ID NO:251), CDR2 (SEQ ID NO:252), CDR3 (SEQ ID NO:253) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:173), CDR2 (SEQ ID NO:174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23;

x.: una CDR1 (SEQ ID NO:254), CDR2 (SEQ ID NO:255), CDR3 (SEQ ID NO:256) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:173), CDR2 (SEQ ID NO:174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23;

y.: una CDR1 (SEQ ID NO:257), CDR2 (SEQ ID NO:258), CDR3 (SEQ ID NO:259) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:176), CDR2 (SEQ ID NO:177), CDR3 (SEQ ID NO:178) de cadena pesada del anticuerpo AM-24;

z.: una CDR1 (SEQ ID NO:260), CDR2 (SEQ ID NO:261), CDR3 (SEQ ID NO:262) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:179), CDR2 (SEQ ID NO:180), CDR3 (SEQ ID NO:181) de cadena pesada del anticuerpo AM-25; o

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z.2. una CDR1 (SEQ ID NO:263), CDR2 (SEQ ID NO:264), CDR3 (SEQ ID NO:265) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:182), CDR2 (SEQ ID NO:183), CDR3 (SEQ ID NO:184) de cadena pesada del anticuerpo AM-26; donde dicho anticuerpo se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 7: el anticuerpo de la realización 2, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupos consistente de: a. un anticuerpo humanizado; b. un anticuerpo quimérico; c. un anticuerpo recombinante; d. un anticuerpo de cadena única; e. un dianticuerpo; f. un trianticuerpo; g. un tetranticuerpo; h. un fragmento de Fab; i. un fragmento de F(ab')2; j. un anticuerpo IgD; k. un anticuerpo IgE; l, un anticuerpo IgM; m. un anticuerpo IgG1;

n. un anticuerpo IgG2; o. un anticuerpo IgG3; y p un anticuerpo IgG4.

Realización 8: el anticuerpo de la realización 7, donde dicho anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

A.

a.: una secuencia del dominio variable de cadena ligera que es al menos 80% idéntica a una secuencia del dominio variable de cadena ligera de AML 14, 18, 19 y 22 (SEQ ID NO: 40, 44, 45, y 48, respectivamente);

b.: una secuencia del dominio variable de cadena pesada que es al menos 80% idéntica a una secuencia del dominio variable de cadena pesada de AMH 14, 18, 19 y 22 (SEQ ID NO:14, 18, 19, y 22, respectivamente); o c) el dominio variable de cadena ligera de (a) y el dominio variable de cadena pesada de (b);

B.

a.: una CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadena pesada del anticuerpo AM-14;

b.: una CDR1 (SEQ ID NO:236), CDR2 (SEQ ID NO:237), CDR3 (SEQ ID NO:238) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:158), CDR2 (SEQ ID NO:159), CDR3 (SEQ ID NO:160) de cadena pesada del anticuerpo AM-18;

c.: una CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:161), CDR2 (SEQ ID NO:162), CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadena pesada del anticuerpo AM-19; o una CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO:171), CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadena pesada del anticuerpo AM-22; y

C.

a.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML14/AMH14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14);

b.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML18/AMH18 (SEQ ID NO:44/SEQ ID NO:18);

c.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML19/AMH19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO:19); o

d.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22);

Realización 9: un anticuerpo aislado, o un fragmento de fijación al receptor de IL-17 del mismo, que comprende:

a.: una CDR 1 de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

i. X1YGIX, donde X1 se selecciona del grupo consistente de R, S y G;

b.: una CDR2 de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

i. WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG, donde X1 se selecciona del grupo consistente de A, X2 se selecciona del grupo consistente de N, S y K, X3 se selecciona del grupo consistente de N y K, X4 se selecciona del grupo consistente de K y N, y X5 se selecciona del grupo consistente de L y F;

c.: una CDR3 de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

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i. X1QLX2X3DY, donde X1 se selecciona del grupo consistente de R y K, X2 se selecciona del grupo consistente de Y, V y A, y X3 se selecciona del grupo consistente de F y L;

ii. X1QLX2FDY, donde X1 se selecciona del grupo consistente de R y K, y X2 se selecciona del grupo consistente de Y y V:

d.: una CDR1 de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

i. RASQSX1X2X3X4LA, donde X1 se selecciona del grupo consistente de V e I, X2 se selecciona del grupo consistente de I y S, X3 se selecciona del grupo consistente de S y T, X4 se selecciona del grupo consistente de N y S, y X5 se selecciona del grupo consistente de A y N; y

ii. RASQSX1SSNLA, donde X1 se selecciona del grupo consistente de V e I;

e.: una CDR2 de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

i. X1X2STRAX3, donde X1 se selecciona del grupo consistente de G y D, X2 se selecciona del grupo consistente de A y T, y X3 se selecciona del grupo consistente de T y A, y

ii. X1ASTRAX2, donde X1 se selecciona del grupo consistente de G y D y X2 se selecciona del grupo consistente de A y T; y

f.: una CDR3 de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

i. QQYDX1WPLT, donde X1 se selecciona del grupo consistente de N, T e I; donde dicho anticuerpo se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 10: el anticuerpo de la realización 9, donde dicho anticuerpo comprende:

a.: una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada que comprende X1YGIS, donde X1 se selecciona del grupo consistente de R, S y G;

b.: una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada que comprende WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG, donde X1 se selecciona del grupo consistente de A, X2 se selecciona del grupo consistente de N, S y K, X3 se selecciona del grupo consistente de N y K, X4 se selecciona del grupo consistente de K y N, y X5 se selecciona del grupo consistente de L y F;

c.: una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada que comprende X1QLX2FDY, donde X1 se selecciona del grupo consistente de R y K, y X2 se selecciona del grupo consistente de Y y V;

d.: una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera que comprende RASQSX1SSNLA, donde X1 se selecciona del grupo consistente de V e I;

e.: una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera que comprende X1ASTRAX2, donde X1 se selecciona del grupo consistente de G y D, y X2 se selecciona del grupo consistente de A y T; y

f.: una secuencia de aminoácidos de DCR2 de cadena ligera que comprende QQYDX1WPLT, donde X1 se selecciona del grupo consistente de N, T e I; donde dicho anticuerpo se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 11: el anticuerpo de la realización 9, donde dicho anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

A.

a.: una secuencia del dominio variable de cadena ligera que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del dominio variable de cadena ligera de AML12, 14, 16, 17, 19, y 22 (SEQ ID NO:38, 40, 42, 43, 45 y 48 respectivamente);

b.: una secuencia del dominio variable de cadena pesada que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del dominio de cadena pesada de AMH12, 14, 16, 17, 19, y 22 (SEQ ID NO:l2, 14, 16, 17, 19, y 22, respectivamente); o

c.: el dominio variable de cadena ligera de (a) y el dominio variable de cadena pesada de (b);

B.: una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena ligera y una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena pesada que difiere en no más de un total de tres adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos en cada CDR de las secuencias siguientes:

a.: una CDR1 (SEQ ID NO:218), CDR2 (SEQ ID NO:219), CDR3 (SEQ ID NO:220) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:140), CDR2 (SEQ ID NO:141), CDR3 (SEQ ID NO:142) de cadena pesada del anticuerpo AM-12;

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b.: una CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadena pesada del anticuerpo AM-14;

c.: una CDR1 (SEQ ID NO:230), CDR2 (SEQ ID NO:231), CDR3 (SEQ ID NO:232) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:152), CDR2 (SEQ ID NO:153), CDR3 (SEQ ID NO:154) de cadena pesada del anticuerpo AM-16;

d.: una CDR1 (SEQ ID NO:233), CDR2 (SEQ ID NO:234), CDR3 (SEQ ID NO:235) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:155), CDR2 (SEQ ID NO:156), CDR3 (SEQ ID NO:157) de cadena pesada del anticuerpo AM-17;

e.: una CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:161), CDR2 (SEQ ID NO:162), CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadena pesada del anticuerpo AM-19; o

f.: una CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO:171), CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadena pesada del anticuerpo AM-22; y

C.

a.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML12/AMH12 (SEQ ID NO:38/SEQ ID NO:12);

b.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML14/AMH14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14);

c.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML16/AMH16 (SEQ ID NO:42/SEQ ID NO:16);

d.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML17/AMH17 (SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:17);

e.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML19/AMH19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO:19);

c.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22); donde dicho anticuerpo se fija específicamente con el receptor A de IL-17.

Realización 12: una composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo de la realización 4. Realización 14: el anticuerpo de la realización 4, donde dicho anticuerpo es un derivado de dicho anticuerpo. Realización 15: un polipéptido, que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

A.

a.: una secuencia del dominio variable de cadena ligera que es al menos un 80% idéntico a una secuencia del dominio variable de cadena ligera de AML1-26 (SEQ ID NO:27-53, respectivamente);

b.: una secuencia del dominio variable de cadena pesada que es al menos un 80% idéntico a una secuencia del dominio variable de cadena pesada de AMH1-26 (SEQ ID NO: 1-26, respectivamente); o

c.: el dominio variable de cadena ligera de (a) y el dominio variable de cadena pesada de (b); y

B.: una CDR1, CDR2, CDR2 de cadena ligera y una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena pesada que difiere en no más de un total de tres adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos en cada CDR de las siguientes secuencias:

a.: una CDR1 (SEQ ID NO:185), CDR2 (SEQ ID NO:186), CDR3 (SEQ ID NO:187) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:107), CDR2 (SEQ ID NO:108), CDR3 (SEQ ID NO:109) de cadena pesada del anticuerpo AM-1;

b.: una CDR1 (SEQ ID NO:188), CDR2 (SEQ ID NO:189), CDR3 (SEQ ID NO:190) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:110), CDR2 (SEQ ID NO:111), CDR3 (SEQ ID NO:112) de cadena pesada del anticuerpo AM-2;

c.: una CDR1 (SEQ ID NO:191), CDR2 (SEQ ID NO:192), CDR3 (SEQ ID NO:193) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:113), CDR2 (SEQ ID NO:114), CDR3 (SEQ ID NO:115) de cadena pesada del anticuerpo AM-3;

d.: una CDR1 (SEQ ID NO:194), CDR2 (SEQ ID NO:195), CDR3 (SEQ ID NO:196) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:116), CDR2 (SEQ ID NO:117), CDR3 (SEQ ID NO:118) de cadena pesada del anticuerpo AM-4;

e.: una CDR1 (SEQ ID NO:197), CDR2 (SEQ ID NO:198), CDR3 (SEQ ID NO:199) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:119), CDR2 (SEQ ID NO:120), CDR3 (SEQ ID NO:121) de cadena pesada del anticuerpo AM-5;

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f.: una CDR1 (SEQ ID NO:200), CDR2 (SEQ ID NO:201), CDR3 (SEQ ID NO:202) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:122), CDR2 (SEQ ID NO:123), CDR3 (SEQ ID NO:124) de cadena pesada del anticuerpo AM-6;

g.: una CDR1 (SEQ ID NO:203), CDR2 (SEQ ID NO:204), CDR3 (SEQ ID NO:205) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:125), CDR2 (SEQ ID NO:126), CDR3 (SEQ ID NO:127) de cadena pesada del anticuerpo AM-7;

h.: una CDR1 (SEQ ID NO:206), CDR2 (SEQ ID NO:207), CDR3 (SEQ ID NO:208) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:128), CDR2 (SEQ ID NO:129), CDR3 (SEQ ID NO:130) de cadena pesada del anticuerpo AM-8;

i.: una CDR1 (SEQ ID NO:209), CDR2 (SEQ ID NO:210), CDR3 (SEQ ID NO:211) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:131), CDR2 (SEQ ID NO:132), CDR3 (SEQ ID NO:133) de cadena pesada del anticuerpo AM-9;

l.: una CDR1 (SEQ ID NO:218), CDR2 (SEQ ID NO:219), CDR3 (SEQ ID NO:220) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:140), CDR2 (SEQ ID NO: 141), CDR3 (SEQ ID NO:142) de cadena pesada del anticuerpo AM-12;

t.: una CDR1 (SEQ ID NO:242), CDR2 (SEQ ID NO:243), CDR3 (SEQ ID NO:244) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:164), CDR2 (SEQ ID NO:165), CDR3 (SEQ ID NO:166) de cadena pesada del anticuerpo AM-20;

v.: una de cadena ligera CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) y una de cadena pesada CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO:171), CDR3 (SEQ ID NO:172) del anticuerpo AM-22;

z.2. una CDR1 (SEQ ID NO:263), CDR2 (SEQ ID NO:264), CDR3 (SEQ ID NO:265) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:182), CDR2 (SEQ ID NO:183), CDR3 (SEQ ID NO:184) de cadena pesada

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del anticuerpo AM-26;

donde dicho polipéptido se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 16: el polipéptido de la realización 15, donde dicho polipéptido comprende un aminoácido seleccionado del grupo consistente de:

a.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML1/AMH1 (SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:1);

c.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML3/AMH3 (SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:3);

m.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML13/AMH13 (SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:13);

n.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML14/AMH14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14);

z.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26); donde dicho polipéptido se fija específicamente al receptor A de IL

17.

Realización 17: el polipéptido de la realización 15, donde dicho polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

a. una CDR1 (SEQ ID NO:185), CDR2 (SEQ ID NO:186), CDR3 (SEQ ID NO:187) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:107), CDR2 (SEQ ID NO:108), CDR3 (SEQ ID NO:109) de cadena pesada del

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anticuerpo AM-1;

n.: una CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226 de cadena ligera) y una CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadena pesada del anticuerpo AM-14;

w.: una CDR1 (SEQ ID NO:251), CDR2 (SEQ ID NO:252), CDR3 (SEQ ID NO:253) de cadena ligera y

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una CDR1 (SEQ ID NO:173), CDR2 (SEQ ID NO:174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23;

z.2. una CDR1 (SEQ ID NO:263), CDR2 (SEQ ID NO:264), CDR3 (SEQ ID NO:265) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:182), CDR2 (SEQ ID NO:183), CDR3 (SEQ ID NO:184) de cadena pesada del anticuerpo AM-26; donde dicho polipéptido se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 18: el polipéptido de la realización 15, donde dicho polipéptido es una composición farmacéutica. Realización 19: un anticuerpo aislado, seleccionado del grupo consistente de:

a) un anticuerpo que consiste de una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID N0:427 y una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID N0:429; b) un anticuerpo que consiste esencialmente de una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427 y una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO:429; c) un anticuerpo que comprende una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO: 427; d) un anticuerpo que comprende una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO: 429; e) un anticuerpo que comprende una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427 y una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO:429; f) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427; g) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:429; h) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427 y una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO:429; i) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:14; j) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de la región variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40; k) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de la región variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40 y una secuencia de la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:14; l) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una CDR! de cadena pesada de la SEQ ID NO:146, una CDR2 de cadena pesada de la SEQ ID NO:147, una CDR3 de cadena pesada de la SEQ ID NO:148, una CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:224, una CDR2 de cadena ligera de la SEQ ID NO:225, y una CDR3 de cadena ligera de la SEQ IS NO:226; y m) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una DCR3 de cadena pesada de la SEQ ID NO:148 y una CDR3 de cadena ligera de la SEQ ID NO:226.

Realización 20: el anticuerpo de la realización 19, donde dicho anticuerpo es una composición farmacéutica. Realización 21: el anticuerpo de la realización 10, donde dicho anticuerpo es un derivado de dicho anticuerpo.

Realización 22: el anticuerpo de la realización 7, donde dicho anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

A.

a.: una secuencia del domino variable de cadena ligera que es al menos un 80% idéntico a una secuencia del domino variable de cadena ligera de la SEQ ID NO: 40;

b.: una secuencia del domino variable de cadena pesada que es al menos un 80% idéntico a una secuencia del domino variable de cadena pesada de la SEQ ID NO: 14; o c) el dominio variable de cadena ligera de (a) y el dominio variable de cadena pesada de (b);

B.: una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena ligera y una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena pesada que

difiere en no más de un total de tres adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos en cada CDR de las secuencias siguientes: CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) y una CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadena pesada; y

5 C. un dominio variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40 y un dominio variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:14; donde dicho anticuerpo se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 23: el polipéptido de la realización 16, donde dicho polipéptido comprende un dominio variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40 y un dominio variable de cadena pesada de la SEQ ID NO: 14, 10 donde dicho polipéptido se fija específicamente al receptor A de IL-17. Realización 24: el polipéptido de la realización 16, donde dicho polipéptido comprende la SEQ ID NO: 427 y la SEQ ID NO:429, donde dicho polipéptido se fija específicamente al receptor A de IL-17. Realización 25: el polipéptido de la realización 24, donde dicho polipéptido es una composición farmacéutica. Como estructura general, las proteínas de fijación a antígeno de la divulgación comprenden (a) un armazón y (b) una o una pluralidad de CDR. Una 15 «región determinante de la complementariedad» o «CDR», tal y como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una región de la proteína de fijación que constituye los principales puntos de contacto superficiales para la fijación al antígeno. Las realizaciones de la divulgación incluyen una o más CDR incrustadas en un armazón estructural de la proteína de fijación a antígeno. El armazón estructural de las proteínas de fijación a antígeno pueden ser el marco de un anticuerpo, o fragmento o variante del mismo,

20 o puede ser de naturaleza completamente sintética. Ejemplos de diferentes armazones estructurales de las proteínas de fijación a antígeno de la divulgación se describen adicionalmente en la presente memoria a continuación.

Las proteínas de fijación a antígeno de la invención incluyen regiones armazón y una o más CDR. Una

25 proteína de fijación a antígeno de la divulgación puede tener entre una y seis CDR (como típicamente hacen los anticuerpos naturales), por ejemplo, una CDR1 de cadena pesada («H-CDR1»), una CDR2 de cadena pesada («H-CDR2»), una CDR3 de cadena pesada («H-CDR3»), una CDR1 de cadena ligera («L-CDR1»), una CDR2 de cadena ligera («L-CDR2») y una CDR3 de cadena ligera («L-CDR3»).

30 La terminología «natural» y «que se produce de forma natural», tal y como se utiliza a lo largo de esta especificación en relación con los materiales biológicos, tales como péptidos, polipéptidos, ácidos nucleicos, células hospedadoras y similares, se refiere a materiales que se encuentran en la naturaleza. En los anticuerpos que se producen de forma natural, una H-CDR1 suele comprender de aproximadamente cinco (5) a aproximadamente siete

(7) aminoácidos, una H-CDR2 suele comprender de aproximadamente dieciséis (16) a aproximadamente diecinueve 35 (19) aminoácidos, y una H-CDR3 suele comprender de aproximadamente tres (3) a aproximadamente veinticinco

(25) aminoácidos. Una L-CDR1 suele comprender de aproximadamente diez (10) a aproximadamente diecisiete (17) aminoácidos, una L-CDR2 suele comprender aproximadamente siete (7) aminoácidos y una L-CDR3 suele comprender de aproximadamente siete (7) a aproximadamente diez (10) aminoácidos. Las CDR específicas de los diferentes anticuerpos de la invención se dan a conocer en la Tabla 1 y en la Lista de secuencias.

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TABLA 1: Secuencia de Polinucleótidos Correspondiente

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH1 Vh: SEQ ID NO:107 NYYWN SEQ ID NO:266

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH1 Vh: SEQ ID NO:108 SEQ ID NO:267

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH1 Vh: SEQ ID NO:109 SEQ ID NO:268

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH2 Vh: SEQ ID NO:110 GYYWS SEQ ID NO:269

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH2 Vh: SEQ ID NO:111 SEQ ID NO:270

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH2 Vh: SEQ ID NO:112 SEQ ID NO:271

Secuencia de aminoácidos de: SEQ ID NO:113 SYGMH SEQ ID NO:272

CDR 1 de AMH3 Vh

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH3 Vh: SEQ ID NO:114 SEQ ID NO:273

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH3 Vh: SEQ ID NO:115 DTGVY SEQ ID NO:274

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH4 Vh: SEQ ID NO:116 SYGMH SEQ ID NO:275

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH4 Vh: SEQ ID NO:117 SEQ ID NO:276

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH4 Vh: SEQ ID NO:118 DTGVY SEQ ID NO:277

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH5 Vh: SEQ ID NO:119 SYYWS SEQ ID NO:278

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH5 Vh: SEQ ID NO:120 SEQ ID NO:279

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(continuación)

TABLA 1: Secuencia de Polinucleótidos Correspondiente

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH5 Vh: SEQ ID NO:121 SEQ ID NO:280

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH6 Vh: SEQ ID NO:122 RYGIS SEQ ID NO:281

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH6 Vh: SEQ ID NO:123 SEQ ID NO:282

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH6 Vh: SEQ ID NO:124 SEQ ID NO:283

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH7 Vh: SEQ ID NO:125 RYGIS SEQ ID NO:284

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de: SEQ ID NO:126 SEQ ID NO:285

AMH7 Vh

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH7 Vh: SEQ ID NO:127 SEQ ID NO:286

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH8 Vh: SEQ ID NO:128 GYGIS SEQ ID NO:287

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH8 Vh: SEQ ID NO:129 SEQ ID NO:288

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH8 Vh: SEQ ID NO:130 SEQ ID NO:289

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH9 Vh: SEQ ID NO:131 RYGIS SEQ ID NO:290

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH9 Vh: SEQ ID NO:132 SEQ ID NO:291

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH9 Vh: SEQ ID NO:133 SEQ ID NO:292

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH10 Vh: SEQ ID NO:134 SGGYYWS SEQ ID NO:293

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH10 Vh: SEQ ID NO:135 SEQ ID NO:294

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH10 Vh: SEQ ID NO:136 SEQ ID NO:295

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH11 Vh: SEQ ID NO:137 SYGMH SEQ ID NO:296

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH11 Vh: SEQ ID NO:138 SEQ ID NO:297

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH11 Vh: SEQ ID NO:139 DTKDY SEQ ID NO:298

(continuación)

TABLA 1: Secuencia de Polinucleótidos Correspondiente

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH12 Vh: SEQ ID NO:140 SYGIS SEQ ID NO:299

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH12 Vh: SEQ ID NO:141 SEQ ID NO:300

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH12 Vh: SEQ ID NO:142 KQLVFDY SEQ ID NO:301

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH13 Vh: SEQ ID NO:143 SYGMQ SEQ ID NO:302

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH13 Vh: SEQ ID NO:144 SEQ ID NO:303

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH13 Vh: SEQ ID NO:145 SEQ ID NO:304

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH14 Vh: SEQ ID NO:146 RYGIS SEQ ID NO:305

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH14 Vh: SEQ ID NO:147 SEQ ID NO:306

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH14 Vh: SEQ ID NO:148 RQLYFDY SEQ ID NO:307

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH15 Vh: SEQ ID NO:149 SYGMQ SEQ ID NO:308

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH15 Vh: SEQ ID NO:150 SEQ ID NO:309

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH15 Vh: SEQ ID NO:151 SEQ ID NO:310

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH16 Vh: SEQ ID NO:152 SYGIS SEQ ID NO:311

Amino acid: SEQ ID WISAYNGNTK SEQ ID NO:312

sequence de CDR 2 de AMH16 Vh: NO:153 YAQKLQG

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH16 Vh: SEQ ID NO:154 KQLVFDY SEQ ID NO:313

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH17 Vh: SEQ ID NO:155 SYGIS SEQ ID NO:314

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH17 Vh: SEQ ID NO:156 SEQ ID NO:315

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH17 Vh: SEQ ID NO:157 KQLVFDY SEQ ID NO:316

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH18 Vh: SEQ ID NO:158 DYYMH SEQ ID NO:317

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH18 Vh: SEQ ID NO:159 SEQ ID NO:318

(continuación)

TABLA 1: Secuencia de Polinucleótidos Correspondiente

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH18 Vh: SEQ ID NO:160 SEQ ID NO:319

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH19 Vh: SEQ ID NO:161 SYGIS SEQ ID NO:320

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH19 Vh: SEQ ID NO:162 SEQ ID NO:321

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH19 Vh: SEQ ID NO:163 RQLALDY SEQ ID NO:322

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH20 Vh: SEQ ID NO:164 SYSMN SEQ ID NO:323

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH20 Vh: SEQ ID NO:165 SEQ ID NO:324

Secuencia de aminoácidos de: SEQ ID NO:166 PKVGGGMDV SEQ ID NO:325

CDR 3 de AMH20 Vh

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH21 Vh: SEQ ID NO:167 SYSMN SEQ ID NO:326

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH21 Vh: SEQ ID NO:168 SEQ ID NO:327

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH21 Vh: SEQ ID NO:169 PKVGGGMDV SEQ ID NO:328

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH22 Vh: SEQ ID NO:170 RYGIS SEQ ID NO:329

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH22 Vh: SEQ ID NO:171 SEQ ID NO:330

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH22 Vh: SEQ ID NO:172 RQLYFDY SEQ ID NO:331

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH23 Vh: SEQ ID NO:173 SYYWS SEQ ID NO:332

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH23 Vh: SEQ ID NO:174 SEQ ID NO:333

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH23 Vh: SEQ ID NO:175 SEQ ID NO:334

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH24 Vh: SEQ ID NO:176 SYYWS SEQ ID NO:335

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH24 Vh: SEQ ID NO:177 SEQ ID NO:336

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH24 Vh: SEQ ID NO:178 SEQ ID NO:337

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de: SEQ ID NO:179 SGGYYWS SEQ ID NO:338

imagen15

(continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación)

TABLA 1: Secuencia de Polinucleótidos Correspondiente

AMH25 Vh

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH25 Vh: SEQ ID NO:180 SEQ ID NO:339

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH25 Vh: SEQ ID NO:181 SEQ ID NO:340

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AMH26 Vh: SEQ ID NO:182 DYYMS SEQ ID NO:341

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AMH26 Vh: SEQ ID NO:183 SEQ ID NO:342

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMH26 Vh: SEQ ID NO:184 SEQ ID NO:343

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML1 Vl: SEQ ID NO:185 RASQGIRNDLG SEQ ID NO:345

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML1 Vl: SEQ ID NO:186 AASSLQS SEQ ID NO:346

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML1 Vl: SEQ ID NO:187 LQHNSNPFT SEQ ID NO:347

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML2 Vl: SEQ ID NO:188 RASQSVSRNLV SEQ ID NO:348

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML2 Vl: SEQ ID NO:189 GASTRAN SEQ ID NO:349

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML2 Vl: SEQ ID NO:190 QQYKSWRT SEQ ID NO:350

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML3 Vl: SEQ ID NO:191 RASQSISSYLN SEQ ID NO:351

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML3 Vl: SEQ ID NO:192 AASSLQS SEQ ID NO:352

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML3 Vl: SEQ ID NO:193 QQSYSTPFT SEQ ID NO:353

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML4 Vl: SEQ ID NO:194 RASQSVSRNLA SEQ ID NO:354

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML4 Vl: SEQ ID NO:195 GASTRAT SEQ ID NO:355

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML4 Vl: SEQ ID NO:196 QQYNNW PTW T SEQ ID NO:356

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML5 Vl: SEQ ID NO:197 RASQGIRNDLG SEQ ID NO:357

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML5 Vl: SEQ ID NO:198 AASSFQS SEQ ID NO:358

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML5 Vl: SEQ ID NO:199 LQHNSYPPT SEQ ID NO:359

imagen16

TABLA 1: Secuencia de Polinucleótidos Correspondiente

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML6 Vl: SEQ ID NO:200 RASQGIRNDLG SEQ ID NO:360

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML6 Vl: SEQ ID NO:201 AASSLQS SEQ ID NO:361

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML6 Vl: SEQ ID NO:202 LQHKSYPLT SEQ ID NO:362

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML7 Vl: SEQ ID NO:203 RASQGIRNDLG SEQ ID NO:363

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML7 Vl: SEQ ID NO:204 AASSLQS SEQ ID NO:364

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML7 Vl: SEQ ID NO:205 LQHKSYPLT SEQ ID NO:365

Amino acid: SEQ ID RASQGIRNDLG SEQ ID NO:366

sequence de CDR 1 de AML8 Vl: NO:206

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML8 Vl: SEQ ID NO:207 AASSLQS SEQ ID NO:367

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML8 Vl: SEQ ID NO:208 LQHKSYPLT SEQ ID NO:368

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML9 Vl: SEQ ID NO:209 RASQGIRNDLG SEQ ID NO:369

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML9 Vl: SEQ ID NO:210 AASSLQS SEQ ID NO:370

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML9 Vl: SEQ ID NO:211 LQHKSYPLT SEQ ID NO:371

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML10 Vl: SEQ ID NO:212 RASQGIRSWLA SEQ ID NO:372

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML10 Vl: SEQ ID NO:213 AASSLQS SEQ ID NO:373

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML10 Vl: SEQ ID NO:214 QQANNFPRT SEQ ID NO:374

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML11 Vl: SEQ ID NO:215 RASQSVSSNLA SEQ ID NO:375

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML11 Vl: SEQ ID NO:216 GASTRAA SEQ ID NO:376

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AMd11 Vl: SEQ ID NO:217 QHYINWPKWT SEQ ID NO:377

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML12 Vl: SEQ ID NO:218 RASQSISSSLA SEQ ID NO:378

Secuencia de aminoácidos de: SEQ ID NO:219 GASTRAT SEQ ID NO:379

CDR 2 de AML12 Vl

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML12 Vl: SEQ ID NO:220 QQYDNW PLT SEQ ID NO:380

imagen17

TABLA 1: Secuencia de Polinucleótidos Correspondiente

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML13 Vl: SEQ ID NO:221 SEQ ID NO:381

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML13 Vl: SEQ ID NO:222 EVSTRFS SEQ ID NO:382

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML13 Vl: SEQ ID NO:223 MQSIQLPLT SEQ ID NO:383

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML14 Vl: SEQ ID NO:224 RASQSVSSNLA SEQ ID NO:384

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML14 Vl: SEQ ID NO:225 DASTRAT SEQ ID NO:385

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML14 Vl: SEQ ID NO:226 QQYDNW PLT SEQ ID NO:386

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML15 Vl: SEQ ID NO:227 RASQSVSSNLA SEQ ID NO:387

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML15 Vl: SEQ ID NO:228 DASTRAA SEQ ID NO:388

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML15 Vl: SEQ ID NO:229 QQYDNW PLT SEQ ID NO:389

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML16 V1: SEQ ID NO:230 RASQSISTSLA SEQ ID NO:390

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML16 Vl: SEQ ID NO:231 GTSTRAT SEQ ID NO:391

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de: SEQ ID NO:232 QQYDIWPLT SEQ ID NO:392

AML16 Vl

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML17 Vl: SEQ ID NO:233 RASQSVSSNLA SEQ ID NO:393

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML17 Vl: SEQ ID NO:234 GASTRAT SEQ ID NO:394

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML17 Vl: SEQ ID NO:235 QQYDNW PLT SEQ ID NO:395

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML18 Vl: SEQ ID NO:236 SEQ ID NO:396

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML18 Vl: SEQ ID NO:237 WASTRES SEQ ID NO:397

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML18 Vl: SEQ ID NO:238 QQYYSTPFT SEQ ID NO:398

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML19 Vl: SEQ ID NO:239 RASQSISSNLA SEQ ID NO:399

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML19 Vl: SEQ ID NO:240 GASTRAT SEQ ID NO:400

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML19 Vl: SEQ ID NO:241 QQYDTWPLT SEQ ID NO:401

imagen18

TABLA 1: Secuencia de Polinucleótidos Correspondiente

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML20 Vl: SEQ ID NO:242 RASQGISNYLA SEQ ID NO:402

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML20 Vl: SEQ ID NO:243 AASTLQS SEQ ID NO:403

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML20 Vl: SEQ ID NO:244 QKYNRAPFT SEQ ID NO:404

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML21 Vl: SEQ ID NO:245 RASQGISNYLA SEQ ID NO:405

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML21 Vl: SEQ ID NO:246 AASTLQS SEQ ID NO:406

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML21 Vl: SEQ ID NO:247 QKYNRAPFT SEQ ID NO:407

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML22 Vl: SEQ ID NO:248 RASQSVSSNLA SEQ ID NO:408

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML22 Vl: SEQ ID NO:249 DASTRAA SEQ ID NO:409

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML22 Vl: SEQ ID NO:250 QQYDNW PLT SEQ ID NO:410

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML23 Vl versión 1: SEQ ID NO:251 RASQGIINDLG SEQ ID NO:411

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML23 Vl versión 1: SEQ ID NO:252 AASSLQS SEQ ID NO:412

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML23 Vl versión 1: SEQ ID NO:253 LQHNSYPPT SEQ ID NO:413

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML23 Vl versión 2: SEQ ID NO:254 RSSQSLVYSDG HTCLN SEQ ID NO:414

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML23 Vl versión 2: SEQ ID NO:255 KVSNWDS SEQ ID NO:415

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML23 Vl versión 2: SEQ ID NO:256 MQGTHW PLCS SEQ ID NO:416

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de: SEQ ID NO:257 SEQ ID NO:417

AML24 V1

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML24 V1: SEQ ID NO:258 KVSNWDS SEQ ID NO:418

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML24 V1: SEQ ID NO:259 MQGTHW PLCS SEQ ID NO:419

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML25 V1: SEQ ID NO:260 RASQAISIYLA SEQ ID NO:420

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML25 V1: SEQ ID NO:261 AASSLQS SEQ ID NO:421

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML25 V1: SEQ ID NO:262 QQYSSYPRT SEQ ID NO:422

imagen19

TABLA 1: Secuencia de Polinucleótidos Correspondiente

Secuencia de aminoácidos de CDR 1 de AML26 V1: SEQ ID NO:263 RASQSVYSNLA SEQ ID NO:423

Secuencia de aminoácidos de CDR 2 de AML26 V1: SEQ ID NO:264 GASTRAT SEQ ID NO:424

Secuencia de aminoácidos de CDR 3 de AML26 V1: SEQ ID NO:265 QQYYNW PW T SEQ ID NO:425

15 La estructura general y las propiedades de las CDR dentro de los anticuerpos naturales están descritas en la técnica. Brevemente, en un armazón de anticuerpo tradicional, las CDR están insertadas dentro de una secuencia flanqueante en la región variable de la cadena pesada y de la cadena ligera, donde forman las regiones en buena parte responsables de la fijación al antígeno y su reconocimiento. Una región variable comprende al menos tres CDR de cadena pesada o ligera, véase más arriba (Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service NIH, Bethesda, MD; véase también Chothia y Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342: 877-883), dentro de una región flanqueante (regiones flanqueantes denominadas de 1 a 4, FR1, FR2, FR3 y FR4, por Kabat et al, 1991, más arriba; véase también Chothia y Lesk, 1987, más arriba). Véase más adelante. Sin embargo, las CDR dadas a conocer por la presente divulgación no sólo se pueden utilizar para

25 definir el dominio de fijación al antígeno de una estructura de anticuerpo tradicional, sino que también se puede insertar en otros armazones estructurales diferentes, como se describe en la presente memoria.

Los anticuerpos de la invención pueden comprender cualquier región constante conocida en la técnica. La región constante de la cadena ligera puede ser, por ejemplo, una región constante de cadena ligera de tipo κ o λ, p. ej., una región constante de cadena ligera de tipo κ o λ humana. La región constante de la cadena pesada puede ser, por ejemplo, regiones constantes de la cadena pesada de tipo α, δ, ε, γ o μ, p. ej., una región constante de la cadena pesada de tipo α, δ, ε, γ o μ humana. La región constante de cadena ligera o pesada es un fragmento, derivado, variante o muteína de una región constante natural.

35 Otra realización descrita en la presente de una proteína de fijación a antígeno que se fija específicamente a IL-17RA, donde dicha proteína de fijación al antígeno comprende una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena ligera y una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena pesada que difiere en no más de un total de una, dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos de las siguientes secuencias de CDR: CDR1 (SEQ ID NO:185), CDR2 (SEQ ID NO:186), CDR3 (SEQ ID NO:187) y CDR1 (SEQ ID NO:107), CDR2 (SEQ ID NO:108), CDR3 (SEQ ID NO:109) de cadena pesada del anticuerpo AM-1; CDR1 (SEQ ID NO: 188), CDR2 (SEQ ID NO:189), CDR3 (SEQ ID NO: 190) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 110), CDR2 (SEQ ID NO: 111), CDR3 (SEQ ID NO:112) de cadena pesada del anticuerpo AM-2; CDR1 (SEQ ID NO: 191), CDR2 (SEQ ID NO: 192), CDR3 (SEQ ID NO:193) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:113), CDR2 (SEQ ID NO:114), CDR3 (SEQ ID NO:115) de cadena pesada del anticuerpo AM-3; CDR1 (SEQ ID NO:194), CDR2 (SEQ ID NO: 195), CDR3 (SEQ ID NO: 196)

45 de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 116), CDR2 (SEQ ID NO: 117), CDR3 (SEQ ID NO: 118) de cadena pesada del anticuerpo AM-4; CDR1 (SEQ ID NO: 197), CDR2 (SEQ ID NO: 198), CDR3 (SEQ ID NO: 199) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 119), CDR2 (SEQ ID NO: 120), CDR3 (SEQ ID NO: 121) de cadena pesada del anticuerpo AM-5; CDR1 (SEQ ID NO:200), CDR2 (SEQ ID NO:201), CDR3 (SEQ ID NO:202) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 122), CDR2 (SEQ ID NO: 123), CDR3 (SEQ ID NO: 124) de cadena pesada del anticuerpo AM-6; CDR1 (SEQ ID NO:203), CDR2 (SEQ ID NO:204), CDR3 (SEQ ID NO:205) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 125), CDR2 (SEQ ID NO: 126), CDR3 (SEQ ID NO: 127) de cadena pesada del anticuerpo AM-7; CDR1 (SEQ ID NO:206), CDR2 (SEQ ID NO:207), CDR3 (SEQ ID NO:208) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:128), CDR2 (SEQ ID NO:129), CDR3 (SEQ ID NO:130) de cadena pesada del anticuerpo AM-8; CDR1 (SEQ ID NO:209), CDR2 (SEQ ID NO:210), CDR3 (SEQ ID NO:211) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:131), CDR2 (SEQ ID NO:132), CDR3 (SEQ

55 ID NO:133) de cadena pesada del anticuerpo AM-9; CDR1 (SEQ ID NO:212), CDR2 (SEQ ID NO:213), CDR3 (SEQ ID NO:214) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:134), CDR2 (SEQ ID NO:135), CDR3 (SEQ ID NO:136) de cadena pesada del anticuerpo AM-10; CDR1 (SEQ ID NO:215), CDR2 (SEQ ID NO:216), CDR3 (SEQ ID NO:217) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 137), CDR2 (SEQ ID NO:138), CDR3 (SEQ ID NO:139) de cadena pesada del anticuerpo AM-11; CDR1 (SEQ ID NO:218), CDR2 (SEQ ID NO:219), CDR3 (SEQ ID NO:220) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:140), CDR2 (SEQ ID NO:141), CDR3 (SEQ ID NO:142) de cadena pesada del anticuerpo AM12; CDR1 (SEQ ID NO:221), CDR2 (SEQ ID NO:222), CDR3 (SEQ ID NO:223) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 143), CDR2 (SEQ ID NO:144), CDR3 (SEQ ID NO: 145) de cadena pesada del anticuerpo A-13; CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 146), CDR2 (SEQ ID NO: 147), CDR3 (SEQ ID NO: 148) de cadena pesada del anticuerpo AM-14; CDR1 (SEQ ID NO:227),

65 CDR2 (SEQ ID NO:228), CDR3 (SEQ ID NO:229) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:149), CDR2 (SEQ ID

imagen20

25

35

45

55

NO:150), CDR3 (SEQ ID NO:151) de cadena pesada del anticuerpo AM-15; CDR1 (SEQ ID NO:230), CDR2 (SEQ ID NO:231), CDR3 (SEQ ID NO:232) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:152), CDR2 (SEQ ID NO:153), CDR3 (SEQ ID NO: 154) de cadena pesada del anticuerpo AM-16; CDR1 (SEQ ID NO:233), CDR2 (SEQ ID NO:234), CDR3 (SEQ ID NO:235) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 155), CDR2 (SEQ ID NO: 156), CDR3 (SEQ ID NO:157) de cadena pesada del anticuerpo AM-17; CDR1 (SEQ ID NO:236), CDR2 (SEQ ID NO:237), CDR3 (SEQ ID NO:238) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 158), CDR2 (SEQ ID NO:159), CDR3 (SEQ ID NO:160) de cadena pesada del anticuerpo AM-18; CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:161), CDR2 (SEQ ID NO:162), CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadena pesada del anticuerpo AM-19; CDR1 (SEQ ID NO:242), CDR2 (SEQ ID NO:243), CDR3 (SEQ ID NO:244) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 164), CDR2 (SEQ ID NO: 165), CDR3 (SEQ ID NO: 166) de cadena pesada del anticuerpo AM20; CDR1 (SEQ ID NO:245), CDR2 (SEQ ID NO:246), CDR3 (SEQ ID NO:247) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO: 167), CDR2 (SEQ ID NO: 168), CDR3 (SEQ ID NO: 169) de cadena pesada del anticuerpo AM-21; CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO:171), CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadena pesada del anticuerpo AM-22; CDR1 (SEQ ID NO:251), CDR2 (SEQ ID NO:252), CDR3 (SEQ ID NO:253) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:173), CDR2 (SEQ ID NO:174), CDR3 (SEQ ID NO: 175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23; CDR1 (SEQ ID NO:254), CDR2 (SEQ ID NO:255), CDR3 (SEQ ID NO:256) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:173), CDR2 (SEQ ID NO:174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23; CDR1 (SEQ ID NO:257), CDR2 (SEQ ID NO:258), CDR3 (SEQ ID NO:259) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:176), CDR2 (SEQ ID NO:177), CDR3 (SEQ ID NO:178) de cadena pesada del anticuerpo AM-24; CDR1 (SEQ ID NO:260), CDR2 (SEQ ID NO:261), CDR3 (SEQ ID NO:262) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:179), CDR2 (SEQ ID NO:180), CDR3 (SEQ ID NO: 181) de cadena pesada del anticuerpo AM-25; o CDR1 (SEQ ID NO:263), CDR2 (SEQ ID NO:264), CDR3 (SEQ ID NO:265) de cadena ligera y CDR1 (SEQ ID NO:182), CDR2 (SEQ ID NO:183), CDR3 (SEQ ID NO:184) de cadena pesada del anticuerpo AM-26, y fragmentos, derivados, muteínas y variantes de los mismos.

Las CDR descritas en la presente también incluyen secuencias de consenso procedentes de grupos de anticuerpos monoclonales relacionados. Los anticuerpos puede estar relacionados tanto por la homología de la secuencia como por la función, como se muestra en los ejemplos. Tal y como se describe en la presente memoria, una «secuencia de consenso» se refiere a secuencias de aminoácidos que tienen aminoácidos conservados comunes entre una serie de secuencias y aminoácidos variables que varían dentro de determinadas secuencias de aminoácidos. Las secuencias de consenso de CDR incluyen las CDR que corresponden a cada una de H-CDR1, H-CDR2. H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3.

Las secuencias de consenso se determinaron con análisis filogenéticos estándares a partir de las CDR que corresponden a la VH (a saber, pesada variable, etc.) y VL de los anticuerpos anti-IL-17RA. Se emplearon dos estrategias diferentes. En una primera estrategia, las secuencias de consenso se determinaron manteniendo las CDR contiguas dentro de la misma secuencia que corresponde a una VH o VL. En una segunda estrategia, las secuencias de consenso se determinaron por alineamiento de los diferentes tipos de CDR, a saber, las secuencias de H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA descritas en la presente memoria de forma independiente.

En la primera estrategia, brevemente, las secuencias de aminoácidos que corresponden a los dominios variables enteros de VH o de VL se convirtieron al formato FASTA para facilitar el procesamiento de los alineamientos comparativos e inferir filogenias. A continuación, las regiones flanqueantes de estas secuencias se imagen21reemplazaron con una secuencia conectora artificial ( , SEQ ID NO: 448) para poder realizar el examen de las CDR solas sin introducir ninguna ponderación de la posición del aminoácido debido a acontecimientos coincidentes (p. ej., tales como anticuerpos sin relacionar que comparten por casualidad una herencia común de secuencias flanqueantes en las células reproductoras), mientras que sigue manteniendo las CDR contiguas dentro de la misma secuencia que corresponde a VH o VL. Luego, las secuencias de VH o VL de este formato se sometieron a una interrogación por alineamiento de similitud de secuencias con un programa que emplea un algoritmo de tipo ClutalW estándar (véase, Thompson et al, 1994, . 22: 4673-4680). Se emplearon una penalización por creación de huecos de 8,0 junto con una penalización por extensión de huecos de 2,0. De igual modo, este programa generó filogramas (ilustraciones de árboles filogenéticos) basándose en los alineamientos de similitud de secuencias con el método UPGMA (procedimiento de grupos de emparejamientos sin ponderar basado en medias aritméticas) o bien el Neighbor-Joining (véase Saitou y Nei, 1987, Molecular Biology and Evolution 4: 406-425) para construir e ilustrar la similitud y la distinción de grupos de secuencias a través de la comparación y el agrupamiento de la longitud de las ramas. Ambos procedimientos produjeron resultados similares, pero finalmente se utilizaron los árboles procedentes de UPGMA porque el procedimiento emplea un conjunto de suposiciones más simples y más conservativas. Los árboles elaborados con UPGMA se muestran en la figura 1, donde grupos de secuencias similares se definieron por tener menos de 15 sustituciones cada 100 restos (véase la leyenda de las ilustraciones del árbol para conocer la escala) entre secuencias individuales dentro del grupo y se utilizaron para definir las colecciones de secuencias de consenso. Los alineamientos originales de las secuencias que se generaron se emplearon para examinar empíricamente y documentar la aparición de aminoácidos tolerados en cada posición con un grupo de consenso y se muestran en las figuras 2 y 3. Después se prepararon las secuencias de consenso para los grupos de secuencias similares dentro de cada CDR. Los aminoácidos que

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variaban dentro de cada grupo se anotaron con la notación Xn dentro de cada secuencia de consenso.

Las secuencias de consenso de H-CDR1 incluyen las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en: a) X1YGIS (SEQ ID NO: 453), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en R, S y G; b) X1YX2MX3 (SEQ ID NO: 454), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en D y S; X2 se selecciona del grupo que consiste en Y y S; y X3 se selecciona del grupo que consiste en S y N; y c) SYGMX1 (SEQ ID NO: 455), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en H y Q;

Las secuencias de consenso de H-CDR2 incluyen la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: a) WISX1YX2GNTX3YAQX4X5QG (SEQ ID NO: 456), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en A y T; X2 se selecciona del grupo que consiste en N, S y K; X3 se selecciona del grupo que consiste en N y K; X4 se selecciona del grupo que consiste en K y N; y X5 se selecciona del grupo que consiste en L y F; b) X1X2SX3X4X5SX6IX7YADSVKG (SEQ ID NO: 457), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en Y, I y F; X2 se selecciona del grupo que consiste en I y S; X3 se selecciona del grupo que consiste en S y A; X4 se selecciona del grupo que consiste en S y R; y X5 se selecciona del grupo que consiste en G, S y ningún aminoácido; X6 se selecciona del grupo que consiste en T e I; y X7 se selecciona del grupo que consiste en Y y H; y c) VIWYDGX1X2KX3YADSVKG (SEQ ID NO: 458), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en S y N; X2 se selecciona del grupo que consiste en N y K; y X3 se selecciona del grupo que consiste en H e Y.

Las secuencias de consenso de H-CDR3 incluyen la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: a) X1QLX2X3DY (SEQ ID NO: 459), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en R y K; X2 se selecciona del grupo que consiste en Y, V y A; y X3 se selecciona del grupo que consiste en F y L; y b) X1QLX2FDY (SEQ ID NO: 460), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en R y K, y X2 se selecciona del grupo que consiste en Y y V.

La secuencia de consenso de L-CDR1 incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: a) RASQX1IX2X3X4LX5 (SEQ ID NO: 461), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en G, S y A; X2 se selecciona del grupo que consiste en R y S; X3 se selecciona del grupo que consiste en S, I y N; X4 se selecciona del grupo que consiste en W e Y; y X5 se selecciona del grupo que consiste en A y N; b) RASQSX1X2X3X4LA (SEQ ID NO: 462), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en V e I; X2 se selecciona del grupo que consiste en I y S; X3 se selecciona del grupo que consiste en S y T; X4 se selecciona del grupo que consiste en N y S; y X5 se selecciona del grupo que consiste en A y N; y c) RASQSVX1X2NLX3 (SEQ ID NO: 463), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en Y y S; X2 se selecciona del grupo que consiste en S y R; y X3 se selecciona del grupo que consiste en A y V.

La secuencia de consenso de L-CDR2 incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: a) AASSX1QS (SEQ ID NO: 464), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en L y F; b) AASX1LQS (SEQ ID NO: 465), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en S y T; c) X1X2STRAX3, en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en G y D; X2 se selecciona del grupo que consiste en A y T; y X3 se selecciona del grupo que consiste en T y A; y d) GASTRAX1 (SEQ ID NO: 466), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en A, T y N.

Las secuencias de consenso de L-CDR3 incluyen secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en: a) LQHX1SYX2X3T (SEQ ID NO: 467), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en K y N; X2 se selecciona del grupo que consiste en P y N; y X3 se selecciona del grupo que consiste en L, F y P; b) QX1X2X3X4X5PX6T (SEQ ID NO: 468), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en Q y K; X2 se selecciona del grupo que consiste en A, S e Y; X3 se selecciona del grupo que consiste en N, Y y S; X4 se selecciona del grupo que consiste en N, S y R; X5 se selecciona del grupo que consiste en F, T, Y y A; y X6 se selecciona del grupo que consiste en R y F; c) QQYDX1WPLT (SEQ ID NO: 469), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en N, T e I; y d) QX1YX2X3WX4X5X6T (SEQ ID NO: 470), en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en H y Q; X2 se selecciona del grupo que consiste en I, Y, N y K; X3 se selecciona del grupo que consiste en N y S; X4 se selecciona del grupo que consiste en P y R; X5 se selecciona del grupo que consiste en K, ningún aminoácido y T; y X6 se selecciona del grupo que consiste en W y ningún aminoácido.

En las figuras 1, 2, 3, 16A, 16B, 19 y 22 se muestra que existe un patrón claro en los datos entre la homología de secuencias en los dominios de CDR y la función de los anticuerpos, como se determina mediante el encestado de los que compiten entre sí y la determinación de adónde se fijan los anticuerpos al IL-17RA. Así pues, se ha establecido una relación entre la estructura y la función para las clases de anticuerpos para los anticuerpos contra el IL-17RA descritos en la presente memoria.

En una segunda estrategia, se determinaron las secuencias de consenso de CDR para cada CDR por separado, independientemente de su contexto contiguo dentro de la misma secuencia que corresponde a una VH o VL. En esta estrategia, las secuencias de consenso se determinaron con el alineamiento de cada H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 en grupos, a saber, con el alineamiento de las secuencias de H-CDR1 individuales de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA descritas en la presente memoria para determinar una

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secuencia de consenso de H-CDR1, con el alineamiento de las secuencias de H-CDR2 individuales de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA descritas en la presente memoria para determinar una secuencia de consenso de H-CDR2, con el alineamiento de las secuencias de H-CDR3 individuales de las proteínas de fijación al antígeno IL17RA descritas en la presente memoria para determinar una secuencia de consenso de H-CDR3, con el alineamiento de las secuencias de L-CDR1 individuales de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA descritas en la presente memoria para determinar una secuencia de consenso de L-CDR1, con el alineamiento de las secuencias de L-CDR2 individuales de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA descritas en la presente memoria para determinar una secuencia de consenso de L-CDR2, y con el alineamiento de las secuencias de L-CDR3 individuales de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA descritas en la presente memoria para determinar una secuencia de consenso de L-CDR3. Se identificaron las similitudes entre secuencias dentro de cada secuencia de CDR individual. Luego se prepararon las secuencias de consenso para los grupos de secuencias similares dentro de cada CDR. Los aminoácidos que variaban dentro de cada grupo se anotaron con la notación Xn dentro de cada secuencia de consenso.

En la presente se divulga una proteína de fijación a antígeno que se fija específicamente al IL-17RA, en donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos una región de H-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184. Otras realizaciones no necesariamente incluidas en la invención incluyen proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente a IL-17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos una región L-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO: 185-265. Otras realizaciones incluyen proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente a IL-17RA, donde dicha proteína de fijación a antígenos comprende al menos una región H-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184 y al menos una región L-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:185-265.

También se describe en la presente una proteína de fijación a antígeno que se fija específicamente a IL17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos dos regiones de H-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184. Otras realizaciones incluyen proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente a IL17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos dos regiones L-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO: 185-265. Otras realizaciones incluyen proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente a IL17RA, donde dicha proteína de fijación a antígenos comprende al menos dos regiones H-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184 y al menos dos regiones L-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:185-265.

En la presente se describe una proteína de fijación a antígeno que se fija específicamente a IL-17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos tres regiones de H-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184. Otras realizaciones incluyen proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente a IL17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos tres regiones L-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO: 185-265. Otras realizaciones incluyen proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente a IL17RA, donde dicha proteína de fijación a antígenos comprende al menos tres regiones H-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184 y al menos tres regiones L-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:185-265.

En la presente se describe una proteína de fijación a antígeno que se fija específicamente a IL-17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos una, dos o tres regiones H-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO: 107-184, donde dichas regiones H-CDR son al menos un 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idénticas a la H-CDR respectiva. Otras realizaciones incluyen proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente a IL-17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos una, dos o tres L-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:185-265, donde dichas regiones L-CDR son al menos un 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idénticas a la L-CDR respectiva. Otras realizaciones incluyen proteínas de fijación a antígeno que se fijan específicamente a IL-17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos una, dos o tres regiones H-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184, donde dichas regiones H-CDR son al menos un 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idénticas a la H-CDR respectiva, y comprende al menos una, dos o tres regiones L-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:185-265, donde dichas regiones L-CDR son al menos un 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idénticas a la L-CDR respectiva.

También se describe en la presente una proteína de fijación a antígeno que se fija a IL-17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende al menos una región H-CDR que no tiene más de uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184 y/o al menos una región L-CDR que no tiene más de una, dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO:185-265.

También se describe en la presente una proteína de fijación a antígeno que se fija a IL-17RA, donde dicha proteína de fijación a antígeno comprende una, dos o tres regiones H-CDR que no tienen más de uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184 y/o una, dos o tres regiones L-CDR que no tienen más de una, dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, deleciones o

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sustituciones de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO:185-265.

Realizaciones adicionales no necesariamente incluidas en la invención utilizan proteínas de fijación a antígeno que comprende una CDR que no tiene más de una dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos de la secuencia seleccionada de las regiones H-CDR de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184 y una región L-CDR que no tiene más de una, dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO:185-265 (por ejemplo, la proteína de fijación a antígeno tiene dos regiones CDR, una H-CDR y una L-CDH. Una realización específica incluye proteínas de fijación a antígeno que comprende tanto una región H-CDR3 como una L-CDR3.

Como se apreciará por los expertos en la técnica, para cualquier proteína de fijación a antígeno que comprenda más de una CDR de las secuencias proporcionadas en la presente, es útil cualquier combinación de CDR seleccionadas independientemente de la CDR en las secuencias de la TABLA 1. Así, pueden generarse proteínas de fijación a antígeno que comprenden una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR independientemente seleccionadas. Sin embargo, como se apreciará por los expertos en la técnica, las realizaciones específicas generalmente utilizan combinaciones de CDR que son no repetitivas, por ejemplo las proteínas de fijación a antígeno no están generalmente hechas con dos regiones H-CDR2, etc.

En algunas realizaciones, se generan proteínas de fijación a antígeno que comprenden no más de una, dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos de una región H-CDR3 y una región L-CDR3, particularmente con la región H-CDR3 siendo seleccionadas de una secuencia que no tiene más de una, dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos de una región H-CDR3 de cualquiera de las SEQ ID NO:107-184 y la región L-CDR3 estando seleccionada de una secuencia de consenso L-CDR3 que no tiene más de una, dos, tres, cuatro, cinco o seis adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos de una región L-CDR3 de cualquiera de las SEQ ID NO: 185-265

Tal y como se observa en la presente memoria, las proteínas de fijación a antígeno de la presente divulgación pueden comprender un armazón estructural en el cual se pueden injertar las CDR de la divulgación. El género de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA comprende los subgéneros de los anticuerpos, como se definen de muchas maneras en la presente memoria. Los aspectos incluyen realizaciones en donde el armazón estructural es una estructura de anticuerpo tetramérica tradicional. Así pues, las combinaciones de proteínas que se fijan a antígeno descritas en la presente memoria incluyen los componentes adicionales (secuencias flanqueantes, regiones J y D, regiones constantes, etc.) con los que se elabora una cadena ligera y/o pesada.

Las realizaciones incluyen el uso de componentes humanos en el armazón. Una realización de ejemplo de una región variable de VH injertada en un armazón estructural tradicional de anticuerpo se describe en la SEQ ID NO: 427 y una realización de ejemplo de una región variable de VL injertada en un armazón estructural tradicional de anticuerpo se describe en la SEQ ID NO: 429. Por supuesto, se entiende que se puede emplear cualquier armazón de anticuerpo conocido en la técnica.

En la presente se describen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena ligera seleccionada del grupo consistente de AML1 a AML26 y/o una región variable de cadena pesada seleccionada del grupo consistente de AMH1 a AMH26, y fragmentos, derivados, muteínas, y variantes de los mismos. Los anticuerpos incluyen, pero no están limitados a: anticuerpos que comprenden AML1/AMH1 (SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:1), AML2/AMH2 (SEQ ID NO:28/SEQ ID NO:2), AML3/AMH3 (SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:3), AML4/AMH4 (SEQ ID NO:30/SEQ ID NO:4), AML5/AMH5 (SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:5), AML6/AMH6 (SEQ ID NO:32/SEQ ID NO:6), AML7/AMH7 (SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:7), AML8/AMH8 (SEQ ID NO:34/SEQ ID NO:8), AML9/AMH9 (SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:9), AML10/AMH10 (SEQ ID NO:36/SEQ ID NO:10), AML11/AMH11 (SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:11), AML12/AMH12 (SEQ ID NO:38/SEQ ID NO:12), AML13/AMH13 (SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:13), AML14/AMH14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14), AML15/AMH15 (SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:15), AML16/AMH16 (SEQ ID NO:42/SEQ ID NO:16), AML17/AMH17 (SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:17), AML18/AMH18 (SEQ ID NO:44/SEQ ID NO:18), AML19/AMH19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO:19), AML20/AMH20 (SEQ ID NO:46/SEQ ID NO:20), AML21/AMH21 (SEQ ID NO:47/SEQ ID NO:21), AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22), AML23/AMH23 (SEQ ID NO:49 o SEQ ID NO:50/SEQ ID NO:23), AML24/AMH24 (SEQ ID NO:51/SEQ ID NO:24), AML25/AMH25 (SEQ ID NO:52/SEQ ID NO:25), AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26), así como fragmentos de fijación a IL-17RA de los mismos y combinaciones de los mismos.

En la presente se describe un anticuerpo que comprende un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de un dominio variable de cadena ligera seleccionado del grupo que consiste de AML1 a AML26 sólo en los residuos 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ó 1, donde cada una de dichas diferencias de secuencia es independientemente o una deleción, inserción o sustitución de un residuo de aminoácido. En otra realización, el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%,o 99% idéntica a la secuencia de un dominio variable de cadena ligera seleccionado del grupo consistente de AML1 a AML26. En otra realización, el dominio variable de cadena ligera

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comprende una secuencia de aminoácidos que está codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, o 99% idéntica a una secuencia de nucleótidos que codifica un domino variable de cadena ligera seleccionado del grupo consistente de AML1 a AML26. En otra realización, el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que está codificada por un polinucleótido que hibrida bajo condiciones moderadamente rigurosas con el complemento de un polinucleótido que codifica un dominio variable de cadena ligera seleccionado del grupo consistente de AML1 a AML26. En otra realización, el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que está codificada por un polinucleótido que hibrida bajo condiciones moderadamente rigurosas con el complemento de un polinucleótido que codifica un dominio variable de cadena ligera seleccionado del grupo consistente de AML1 a AML26. En otra realización, el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que está codificada por un polinucleótido que hibrida bajo condiciones moderadamente rigurosas con un complemento de un polinucleótido de cadena ligera proporcionado en cualquiera de las secuencias de polinucleótidos AML1 a AML26 (SEQ ID NO:80-106).

En la presente se divulga un anticuerpo que comprende un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de un dominio variable de cadena pesada seleccionado del grupo consistente de AMH1 a AMH26 sólo en 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ó 1 residuos, donde cada una de dichas diferencias de secuencia es independientemente o una deleción, inserción o sustitución de un residuo de aminoácido. En otra realización, el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%,o 99% idéntica a la secuencia de un dominio variable de cadena pesada seleccionado del grupo consistente de AMH1 a AMH26. En otra realización, el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que está codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70%,75%,80%,81%,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91%,92%,93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idéntica a una secuencia de nucleótidos que codifica un domino variable de cadena pesada seleccionado del grupo consistente de AMH1 a AMH26. En otra realización, el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que está codificada por un polinucleótido que hibrida bajo condiciones moderadamente rigurosas o rigurosas con el complemento de un polinucleótido que codifica un dominio variable de cadena pesada seleccionado del grupo consistente de AMH1 a AMH26. En otra realización, el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que está codificada por un polinucleótido que hibrida bajo condiciones moderadamente rigurosas con el complemento de un polinucleótido que codifica un dominio variable de cadena pesada seleccionado del grupo consistente de AMH1 a AMH26. En otra realización, el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que está codificada por un polinucleótido que hibrida bajo condiciones moderadamente rigurosas o rigurosas con un complemento de un polinucleótido de cadena pesada proporcionado en cualquiera de las secuencias de polinucleótidos AMH1 a AMH26 (SEQ ID NO:54-79).

En consecuencia, en diferentes realizaciones, las proteínas de fijación a antígeno de la invención comprenden los armazones de los anticuerpos tradicionales, entre ellos anticuerpos humanos y monoclonales, anticuerpos biespecíficos, dianticuerpos, minianticuerpos, dominios de anticuerpos, anticuerpos sintéticos (a veces denominados en la presente memoria como «imitadores de anticuerpos», anticuerpos quiméricos, fusiones de anticuerpos (a veces denominados «conjugados de anticuerpos») y fragmentos de cada uno, respectivamente. Las CDR y combinaciones de CDR descritas anteriormente se pueden injertar en cualquiera de los armazones que vienen a continuación.

Tal y como se utiliza en la presente memoria, la terminología «anticuerpo» se refiere a las diferentes formas de proteínas monoméricas o multiméricas que comprenden una o varias cadenas polipeptídicas que se fijan específicamente a un antígeno, como se describe de varias maneras en la presente memoria. Los anticuerpos se pueden producir mediante técnicas de ADN recombinante. Los anticuerpos se pueden producir mediante la escisión enzimática o química de anticuerpos naturales. En otro aspecto, el anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en: a) un anticuerpo humano; b) un anticuerpo humanizado; c) un anticuerpo quimérico; d) un anticuerpo monoclonal; e) un anticuerpo policlonal; f) un anticuerpo recombinante; g) un fragmento de anticuerpo que se fija al antígeno; h) un anticuerpo de cadena única; i) un dianticuerpo; j) un trianticuerpo; k) un tetranticuerpo; l) un fragmento Fab; m) un fragmento F(ab')2; n) un anticuerpo IgD; o) un anticuerpo IgE; p) un anticuerpo IgM; q) un anticuerpo IgA; r) un anticuerpo IgG1; s) un anticuerpo IgG2; t) un anticuerpo IgG3; y u) un anticuerpo IgG4.

Una región variable comprende al menos tres CDR de cadena ligera o pesada, véase más arriba (Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service NIH, Bethesda, MD; véase también Chothia y Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342: 877-883), insertadas dentro de una región flanqueante (denominadas regiones flanqueantes de 1 a 4, FR1, FR2, FR3 y FR4, por Kabat et al., 1991, véase más arriba; véase también Chothia y Lesk, 1987, más arriba). Véase más abajo.

Las unidades estructurales tradicionales de los anticuerpos comprenden un tetrámero. Cada tetrámero se compone típicamente de dos parejas idénticas de cadenas polipeptídicas, cada pareja tiene una cadena «ligera» (típicamente tiene una masa molecular de aproximadamente 25 kDa) y una cadena «pesada» (típicamente tiene una masa molecular de aproximadamente 50 a 70 kDa). La porción del extremo amino de cada cadena incluye una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos, principalmente responsables del reconocimiento

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del antígeno. La porción del extremo carboxilo de cada cadena define una región constante principalmente responsable de la función efectora. Las cadenas ligeras humanas se clasifican como cadenas ligeras κ y λ. Las cadenas pesadas se clasifican como μ, δ, γ, α o ε y definen el isotipo del anticuerpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. IgG tiene varias subclases, entre ellas, pero sin limitarse a ellas, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. IgM tiene subclases, entre ellas, pero sin limitarse a ellas, IgM1 e IgM2. Las realizaciones de la invención incluyen todas las clases de anticuerpos que incorporan los dominios variables o las CDR de las proteínas que se fijan a antígenos, como se describe en la presente memoria.

Dentro de las cadenas ligeras y pesadas, las regiones variables y constantes se juntan mediante una región

«J» de aproximadamente doce (12) o más aminoácidos, y la cadena pesada también incluye una región «D» de aproximadamente diez (10) aminoácidos más. Véase, en líneas generales, Paul, W., ed., 1989, Fundamental Immunology, cap. 7, 2.ª ed. Raven Press, N. Y. Las regiones variables de cada pareja de cadenas ligera y pesada forman el sitio de fijación del anticuerpo. Los armazones de la divulgación incluyen tales regiones.

Algunos anticuerpos naturales, por ejemplo los encontrados en los camellos y en las llamas, son dímeros que consisten de dos cadenas pesadas y no incluyen cadenas ligeras. Muldermans et al., 2001, J. Biotechnol. 74: 277-302; Desmyter et al., 2001, J. Biol. Chem. 276: 26285-26290. Los estudios cristalográficos de un anticuerpo de camello han revelado que las regiones CDR3 forman una superficie que interacciona con el antígeno y, por lo tanto, es decisivo para la fijación del antígeno como en los anticuerpos tetraméricos más típicos. La invención engloba anticuerpos diméricos que consisten en dos cadenas pesadas, o fragmentos de las mismas, que se pueden fijar al IL-17RA y/o inhibir la actividad biológica del mismo.

Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera típicamente muestran la misma estructura general de las regiones flanqueantes (FR) relativamente conservadas articuladas por tres regiones hipervariables, a saber, las regiones determinantes de la complementariedad o CDR. Las CDR son las regiones hipervariables de un anticuerpo (o proteína de fijación a antígeno, como describe en la presente memoria), que son responsables del reconocimiento y fijación del antígeno. Las CDR de las dos cadenas de cada pareja están alineadas por las regiones flanqueantes, lo que les permite fijarse a un epítopo específico. Desde el extremo amino al extremo carboxilo, las cadenas ligera y pesada comprenden los dominios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 y FR4. La asignación de los aminoácidos a cada dominio está de acuerdo con las definiciones de Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest. Chothia et al., 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al, 1989, Nature 342: 878-883. Los armazones de la divulgación incluyen tales regiones.

Las CDR constituyen los principales puntos de contacto de la superficie para la fijación del antígeno. Véase,

p. ej., Chothia y Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917. Además, la CDR3 de la cadena ligera y, en especial, la CDR3 de la cadena pesada, puede formar los determinantes más importantes de la fijación del antígeno dentro de las regiones variables de las cadenas ligera y pesada. Véase, p. ej., Chothia y Lesk, 1987, más arriba; Desiderio et al., 2001, J. Mol. Biol. 310: 6033-615; Xu y Davis, 2000, Immunity 13; 37-45; Desmyter et al., 2001, J. Biol. Chem.

276: 26285-26290; y Muyldermans, 2001, J. Biotechnol. 74: 277-302. En algunos anticuerpos, la CDR3 de la cadena pesada constituye la zona principal de contacto entre el antígeno y el anticuerpo. Desmyter et al, 2001, más arriba. Los esquemas de selección in vitro en los que se varía la CDR3 sola se pueden utilizar para variar las propiedades de fijación de un anticuerpo. Muyldermans, 2001, más arriba; Desiderio et al., 2001, más arriba.

Los anticuerpos naturales incluyen típicamente una secuencia señal que dirige el anticuerpo hacia la vía celular de la secreción de proteínas y que no aparece en el anticuerpo maduro. Un polinucleótido que codifica un anticuerpo de la invención puede codificar una secuencia señal natural o una secuencia señal heteróloga como se describe más adelante.

La proteína de fijación a antígeno puede ser un anticuerpo monoclonal que comprende de una(1) a seis (6) de las CDR descritas, como se describe en la presente memoria (véase la tabla 1). Los anticuerpos de la invención pueden ser de cualquier tipo, como los anticuerpos IgM, IgG (que incluye IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgD, IgA o IgE. En una realización específica, la proteína de fijación a antígeno es un anticuerpo de tipo IgG. En una realización aún más específica, la proteína de fijación a antígeno es un anticuerpo de tipo IgG2.

En algunas realizaciones, por ejemplo, cuando la proteína de fijación a antígeno es un anticuerpo con las cadenas ligera y pesada completas, las CDR son todas de la misma especie, p. ej., humanas. Otra alternativa es, por ejemplo en las realizaciones en donde la proteína de fijación a antígeno contiene menos de seis CDR de las secuencias descritas más arriba, otras CDR puede ser de otra especie (p. ej., CDR murinas) o pueden ser CDR humanas diferentes de las descritas en las secuencias. Por ejemplo, se podrían usar las regiones H-CDR3 y L-CDR3 humanas de las secuencias adecuadas identificadas en la presente memoria, con H-CDR1, H-CDR2, L-CDR1 y L-CDR2 que opcionalmente se seleccionan de especies alternativas, o diferentes secuencias de anticuerpos humanos, o combinaciones de las mismas. Por ejemplo, las CDR de la divulgación pueden reemplazar las regiones CDR de los anticuerpos humanizados o quiméricos comercialmente relevantes.

Las realizaciones específicas utilizan componentes del armazón de las proteínas de fijación a antígeno que

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son componentes humanos.

Sin embargo, en algunas realizaciones, los componentes del armazón pueden ser una mezcla de diferentes especies. Como tales, si la proteína de fijación a antígeno es un anticuerpo, tal anticuerpo puede ser un anticuerpo quimérico y/o un anticuerpo humanizado. En general, los «anticuerpos quiméricos» y los «anticuerpos humanizados» se refieren a anticuerpos que combinan regiones de más de una especie. Por ejemplo, los «anticuerpos quiméricos» comprenden tradicionalmente una o más regiones variables de un ratón (o rata, en algunos casos) y la región o regiones constantes de un humano.

Los «anticuerpos humanizados» se refieren de forma general a anticuerpos no humanos en los que las regiones flanqueantes del dominio variable se han permutado por las secuencias que se hallan en los anticuerpos humanos. En general, en un anticuerpo humanizado, el anticuerpo entero, excepto las CDR, está codificado por un polinucleótido de origen humano o es idéntico a tal anticuerpo, excepto dentro de sus CDR. Las CDR, algunas de las cuales o todas están codificadas por ácidos nucleicos que se originan en un organismo no humano, están injertadas en las láminas β flanqueantes de una región variable de anticuerpo humano para crear un anticuerpo cuya especificidad está determinada por las CDR insertadas. La creación de tales anticuerpos se describe en, p. ej., la solicitud de patente internacional WO 92/11018, Jones, 1986, Nature 321: 522-525, Verhoeyen et al., 1988, Science

239: 1534-1536. También se pueden generar anticuerpos humanizados con ratones cuyo sistema inmunitario está manipulado genéticamente. Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20: 639-654. En la presente invención, las CDR identificadas son humanas y, por lo tanto, los anticuerpos humanizados y los quiméricos en este contexto incluyen algunas CDR no humanas; por ejemplo, se podrían generar anticuerpos humanizados que comprenden las regiones H-CDR3 y L-CDR3, con uno o más de las otras regiones CDR que son de un origen especial diferente.

La proteína de fijación al antígeno de IL-17RA es un anticuerpo multiespecífico, y en particular un anticuerpo biespecífico, llamados también algunas veces "dianticuerpos". Estos son anticuerpos que se fijan a dos (o más) antígenos diferentes. Los dianticuerpos pueden fabricarse de una variedad de maneras conocidas en la técnica (Holliger and Winter, 1993, Current Opinion Biotechnol. 4:446-449), por ejemplo, preparados químicamente o a partir hibridomas híbridos.

En una realización, la proteína de fijación al antígeno IL-17RA que es un minianticuerpo. Los minianticuerpos son proteínas de tipo anticuerpo minimizado que comprenden un scFv unido a un dominio CH3. Hu et al., 1996, Cancer Res, 56: 3055-3061.

En una realización, la proteína de fijación al antígeno IL-17RA es un dominio de anticuerpo (dAc); véase, por ejemplo, la patente de los EE. UU. n.º 6.248.516. Los dAc son los dominios de fijación funcionales de los anticuerpos, que corresponden a las regiones variables de las cadenas pesada (VH) o ligera (VL) de los anticuerpos humanos. Los dAc tienen una masa molecular de aproximadamente 13 kDa, o menos de un décimo del tamaño de un anticuerpo completo. Los dAc se expresan bien en muchos hospedadores, entre ellos los sistemas de células bacterianas, de levadura o de mamífero. Además, los dAc son muy estables y conservan la actividad incluso después de estar sometidos a condiciones severas, tales como la liofilización o la desnaturalización por calor. Véase, por ejemplo, las patentes de los EE. UU. n.ºs 6.291.158; 6.582.915; 6.593.081; 6.172.197; publicación de los EE. UU. n.º 2004/0110941; patente europea 0368684; patente de los EE. UU. 6.696.245; y las solicitudes de patente internacional WO 04/058821, WO 04/003019 y WO 03/002609.

En una realización, la proteína de fijación al antígeno IL-17RA es un fragmento de anticuerpo, es decir, un fragmento de cualquiera de los anticuerpos descritos en la presente memoria que conservan especificidad de fijación al IL-17RA. En diferentes realizaciones, los anticuerpos (proteínas) de fijación comprenden, pero sin limitarse a ellos, F(ab), F(ab'), F(ab')2, Fv o fragmentos Fc de una sola cadena. Como mínimo, un anticuerpo, como se quiere decir dentro de la presente memoria, comprende un polipéptido que se fija específicamente al IL-17RA que comprende toda o parte de una región variable de la cadena ligera o pesada, tal como una o varias CDR.

Más ejemplos de fragmentos de anticuerpo que se fijan al IL-17RA incluyen, pero sin limitarse a ellos, (i) el fragmento Fab que consiste en los dominios de VL, VH, CL y CH1, (ii) el fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CH1, (iii) el fragmento de Fv que consiste en los dominios VL y VH de un único anticuerpo; (iv) el fragmento dAc (Ward et al., 1989, Nature 341: 544-546) que consiste en un único dominio variable, (v) regiones CDR aisladas,

(vi) fragmentos F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos, (vii) moléculas de Fv de una sola cadena (scFv), en donde un dominio VH y un dominio VL están unidos por un conector peptídico que permite que los dos dominios estén asociados para formar un sitio de fijación a antígenos (Bird et al., 1988, Science

242: 423-426, Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883), (viii) dímeros de Fv de cadena única biespecíficos (solicitud de patente internacional WO/1993/011161) y (ix) «dianticuerpos» o «trianticuerpos», fragmentos multivalentes o multiespecíficos construidos mediante fusión génica (Tomlinson et al., 2000, Methods Enzymol. 326: 461-479; solicitud de patente internacional WO 94/13804; Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 90: 64444-6448). Los fragmentos de anticuerpo se pueden modificar. Por ejemplo, las moléculas se pueden estabilizar mediante la incorporación de puentes disulfuro que unen los dominios VH y VL (Reiter et al., 1996, Nature Biotech. 14: 1239-1245). Los aspectos de la invención incluyen realizaciones en donde los componentes de estos

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fragmentos que no son las CDR son secuencias humanas.

En una realización, la proteína de fijación al antígeno IL-17RA es un anticuerpo completamente humano. En esta realización, como se describió más arriba, las estructuras específicas comprenden las cadenas ligera y pesada completas descritas que comprenden las regiones CDR. Otras realizaciones utilizan una o varias de las CDR de la divulgación, con las otras CDR, regiones flanqueantes, regiones J y D, regiones constantes, etc., que vienen de otros anticuerpos humanos. Por ejemplo, las CDR de la invención pueden reemplazar las CDR de cualquier número de anticuerpos humanos, en particular los anticuerpos comercialmente relevantes.

Los anticuerpos de cadena única se pueden formar con la unión de los fragmentos del dominio variable de las cadenas ligera y pesada (región Fv) a través de un aminoácido de puente (conector peptídico corto), lo que da lugar a una sola cadena polipeptídica. Se han preparado Fv de cadena única (scFv) mediante la fusión del ADN que codifica un conector peptídico entre los ADN que codifican los dos polipéptidos del dominio variable (VL y VH). Los polipéptidos resultantes se pueden replegar sobre sí mismos para formar monómeros de fijación a antígeno o pueden formar multímeros (p. ej., dímeros, trímeros o tetrámeros), según la longitud de un conector flexible entre los dos dominios variables (Kortt et al., Prot. Eng. 10: 423; Kortt et al., 2001, Biomol. Eng. 18: 95-108). Al combinar diferentes polipéptidos que comprenden VL y VH, se pueden formar scFv multiméricos que se fijan a diferentes epítopos (Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng. 18: 31-40). Las técnicas desarrolladas para la producción de anticuerpos de cadena única incluyen las descritas en la patente de los EE. UU. n.º 4.946.778; Bird, 1988, Science

242: 423; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879; Ward et al., 1989, Nature, 334: 544, de Graaf et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178: 379-87. Los anticuerpos de cadena única derivados de los anticuerpos descritos en la presente son (incluyendo, pero no limitado a, scFvs que comprenden las combinaciones de dominio variable de AML1/AMH1 (SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:1), AML2/AMH2 (SEQ ID NO:28/SEQ ID NO:2), AML3/AMH3 (SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:3), AML4/AMH4 (SEQ ID NO:30/SEQ ID NO:4), AML5/AMH5 (SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:5), AML6/AMH6 (SEQ ID NO:32/SEQ ID NO:6), AML7/AMH7 (SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:7), AML8/AMH8 (SEQ ID NO:34/SEQ ID NO:8), AML9/AMH9 (SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:9), AML10/AMH10 (SEQ ID NO:36/SEQ ID NO:10), AML11/AMH11 (SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:11), AML12/AMH12 (SEQ ID NO:38/SEQ ID NO:12), AML13/AMH13 (SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:13), AML14/AMH14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14), AML15/AMH15 (SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:15), AML16/AMH16 (SEQ ID NO:42/SEQ ID NO:16), AML17/AMH17 (SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:17), AML18/AMH18 (SEQ ID NO:44/SEQ ID NO:18), AML19/AMH19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO:19), AML20/AMH20 (SEQ ID NO:46/SEQ ID NO:20), AML21/AMH21 (SEQ ID NO:47/SEQ ID NO:21), AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22), AML23/AMH23 (SEQ ID NO:49 o SEQ ID NO:50/SEQ ID NO:23), AML24/AMH24 (SEQ ID NO:51/SEQ ID NO:24), AML25/AMH25 (SEQ ID NO:52/SEQ ID NO:25), AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26), y combinaciones de los mismos.

En una realización, la proteína de fijación al antígeno IL-17RA es una proteína de fusión del anticuerpo (a veces denominada en la presente memoria un «conjugado de anticuerpo»). El compañero del conjugado puede ser proteínico o no proteínico; este último se suele generar con grupos funcionales sobre la proteína de fijación a antígeno (véase la discusión sobre modificaciones covalentes de las proteínas de fijación a antígeno) y sobre el compañero del conjugado. Por ejemplo, se conocen conectores en la técnica; por ejemplo, se conocen bien los conectores homo-o heterobifuncionales (véase el catálogo de 1994 de Pierce Chemical Company sobre la sección técnica de los interconectores, páginas 155-200).

En una realización, la proteína de fijación al antígeno IL-17RA es un análogo de anticuerpo, a veces denominada «anticuerpo sintético». Por ejemplo, muchos trabajos recientes utilizan armazones proteicos alternativos

o bien armazones artificiales con CDR injertadas. Tales armazones incluyen, pero sin limitarse a ellas, mutaciones introducidas para estabilizar la estructura tridimensional de la proteína de fijación, así como armazones totalmente sintéticos que consisten, por ejemplo, en polímeros biocompatibles. Véase, por ejemplo, Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function and Bioinformatics, volumen 53, número 1: 121-129, Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20: 639-654. Además, se pueden utilizar los imitadores de anticuerpos peptídicos («IAP»), así como el trabajo basado en los imitadores de anticuerpos que utilizan componentes de fibronección a modo de armazón.

Tal y como se conoce en la técnica, se pueden utilizar muchos programas diferentes para identificar el grado de identidad o similitud de secuencia que una proteína o ácido nucleico tiene con una secuencia conocida.

Con «proteína», tal y como se utiliza en la presente memoria, se hace referencia a al menos dos aminoácidos unidos covalentemente, lo que incluye proteínas, polipéptidos, oligopéptidos y péptidos. En algunas realizaciones, los dos o más aminoácidos unidos covalentemente están unidos mediante un enlace peptídico. La proteína puede estar formada por aminoácidos naturales y enlaces peptídicos, por ejemplo, cuando la proteína se hace con técnicas recombinantes con sistemas de expresión y células hospedadoras, como se describe más adelante. Otra alternativa es que la proteína puede incluir aminoácidos sintéticos (p. ej., homofenilalanina, citrulina, ornitina y norleucina) o estructuras peptidomiméticas, a saber, «análogos de proteínas o peptídicos», tales como peptoides (véase, Simon et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89: 9367), que pueden ser resistentes a proteasas u otras condiciones fisiológicas y/o de conservación. Tales aminoácidos sintéticos se pueden incorporar, en particular, cuando la proteína de fijación a antígeno se sintetiza in vitro mediante procedimientos convencionales

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bien conocidos en la técnica. Además, se puede utilizar cualquier combinación de restos/estructuras peptidomiméticos, sintéticos y naturales. «Aminoácido» también incluye restos de iminoácidos tales como prolina e hidroxiprolina. El «grupo R» o la «cadena lateral» del aminoácido puede estar en la configuración L o en la S. En una realización específica, los aminoácidos están en la configuración L o .

En algunos aspectos, la divulgación se refiere a proteínas de fijación a antígeno recombinantes que se fijan a un IL-17RA, en algunas realizaciones un IL-17RA humano recombinante o porción del mismo. En este contexto, una «proteína recombinante» es una proteína fabricada con técnicas recombinantes que utilizan cualquier tecnología y procedimiento conocidos en la técnica, a saber, mediante la expresión de un ácido nucleico recombinante como se describe en la presente memoria. Los procedimientos y las técnicas para la producción de proteínas recombinantes se conocen bien en la técnica. Las realizaciones de la divulgación incluyen proteínas de fijación a antígeno recombinantes que se fijan al IL-17RA genéticamente intacto y a variantes del mismo.

«Consiste esencialmente en» significa que la secuencia de aminoácidos puede variar aproximadamente un 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15% respecto a la secuencia SEQ ID NO: citada antes y que aún conserva actividad biológica, como se describe en la presente memoria.

En algunas realizaciones, las proteínas de fijación a antígeno de la divulgación son proteínas aisladas o proteínas sustancialmente puras. Una proteína «aislada» no está acompañada de al menos parte del material con el cual suele estar asociada en su estado natural, por ejemplo, que constituye al menos aproximadamente el 5%, o al menos aproximadamente el 50% en peso de la proteína total en una muestra dada. Se entiende que la proteína aislada puede constituir del 5 al 99,9% en peso del contenido de proteína total según las circunstancias. Por ejemplo, la proteína se puede fabricar en una concentración significativamente más alta mediante el uso de un promotor inducible o de un promotor para alta expresión, para que la proteína se fabrique a una concentración cada vez mayor. La definición incluye la producción de una proteína de fijación a antígeno en una amplia variedad de organismos y/o células hospedadoras que se conocen en la técnica.

Para las secuencias de aminoácidos, la identidad y/o similitud de secuencia se determina con los métodos estándares conocidos en la técnica, que incluyen, pero sin limitarse a ellos, el algoritmo de identidad local de secuencias de Smith y Waterman, 1981, Avd. Appl. Math. 2: 482, el algoritmo de alineamiento por identidad de secuencias de Needleman y Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443, la búsqueda por el procedimiento de similitud de Pearson y Lipman, 1988, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 85: 2444, implementaciones computerizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA y TFASTA en el paquete de programas informáticos del Genetics Computer Group, de la Universidad de Wisconsin, 575 Science Drive, Madison, Wis.), el programa para secuencias BestFit descrito por Devereux et al., 1984, Nucl. Acid. Res. 12: 387-395, preferiblemente con los ajustes por defecto, o mediante inspección. Preferiblemente, el porcentaje de identidad se calcula mediante FastDB basándose en los siguientes parámetros: penalización de 1 por discordancia; penalización de 1 por huecos; penalización de 0,33 por el tamaño del hueco; y penalización de 30 por agrupamiento, «Current Methods in Sequence Comparision and Analysis», Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, págs. 127-149 (1988), Alan R. Liss, Inc.

Un ejemplo de un algoritmo útil es PILEUP. PILEUP crea un alineamiento múltiple de secuencias a partir de un grupo de secuencias relacionadas con alineamientos progresivos de dos en dos. También puede representar un árbol que muestra las relaciones de agrupamiento utilizadas para crear el alineamiento. PILEUP utiliza una simplificación del procedimiento de alineamiento progresivo de Feng y Doolittle, 1987, J. Mol. Evol. 35: 351-360; el procedimiento es similar al descrito por Higgins y Sharp, 1989, CABIOS 5: 151-153. Los parámetros de PILEUP útiles incluyen una ponderación por huecos por defecto de 3,00, una ponderación por la longitud de los huecos por defecto de 0,10 y huecos terminales ponderados.

Otro ejemplo de algoritmo útil es el algoritmo BLAST, descrito en: Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215: 403-410; Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402; y Karin et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 90: 5873-5787. Un programa de BLAST particularmente útil es el programa informático WU-BLAST-2 que se obtuvo de Altschul et al., 1996, Methods in Enzymology 266: 460-480. WU-BLAST-2 utiliza varios parámetros de búsqueda, la mayoría de los cuales se corresponden a los valores por defecto. Los parámetros ajustables se establecen con los siguientes valores: intervalo de solapamiento = 1, fracción de solapamiento = 0,125, umbral de palabra (T) = II. Los parámetros HSP S y HSP S2 son valores dinámicos y los fija el propio programa según la composición de la secuencia concreta y la composición de la base de datos concreta contra la cual se busca la secuencia de interés; sin embargo, los valores se pueden ajustar para incrementar la sensibilidad.

Otro algoritmo útil es BLAST con huecos, como se describe en Altschul et al., 1993, Nucl. Acids. Res. 25: 3389-3402. El BLAST con huecos utiliza puntuaciones de sustituciones BLOSUM-62; el parámetro del umbral T se fija en 9; el procedimiento de dos coincidencias para empezar a extender sin huecos carga un coste de 10 + k a la longitud del hueco k; Xu se fija en 16, y Xg se fija en 40 para la etapa de búsqueda en la base de datos, y en 67 para la etapa de salida de los algoritmos. Los alineamientos con huecos están favorecidos por una puntuación que corresponde a aproximadamente 22 bits.

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Por lo general, la homología, similitud o identidad de los aminoácidos entre cada una de las CDR variantes son al menos del 80% con las secuencias descritas en la presente memoria, y más típicamente con homologías o identidades preferiblemente crecientes de al menos el 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 96%, 97%, 98%, 99% y

5 casi del 100%. De manera similar, «porcentaje (%) de identidad de secuencia de ácido nucleico» respecto a la secuencia de ácido nucleico de las proteínas de fijación identificadas en la presente memoria se define como el porcentaje de restos nucleotídicos en una secuencia candidata que son idénticos a los restos nucleotídicos de la secuencia codificante de la proteína de fijación a antígeno. Un procedimiento específico utilizada el módulo BLASTN de WU-BLAST-2 ajustado a los parámetros por defecto, con un intervalo de solapamiento y fracción de solapamiento

10 fijados en 1 y 0,125, respectivamente.

Por lo general, la homología, similitud o identidad de secuencias de ácido nucleico entre las secuencias nucleotídicas que codifican cada una de las CDR variantes y las secuencias nucleotídicas descritas en la presente memoria son al menos del 80% y más típicamente con homologías o identidades preferiblemente crecientes de al

15 menos el 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% y casi el 100%.

Así pues una «CDR variante» es una con la homología, similitud o identidad especificada con la CDR madre de la invención, y con la que comparte la función biológica, que incluye, pero sin limitarse a ellas, al menos el20 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99%

de la especificidad y/o actividad de la CDR madre.

Aunque el sitio o región para introducir una variación de la secuencia de aminoácidos está predeterminada, la mutación propiamente dicha no necesita estar predeterminada. Por ejemplo, para optimizar el funcionamiento de 25 una mutación en un sitio dado, se puede llevar a cabo la mutagénesis aleatoria en el codón o región diana y luego cribar en busca de la combinación óptima de la actividad deseada las variantes de las CDR de la proteína de fijación a antígeno expresadas. Se conocen bien las técnicas para realizar mutaciones de sustitución en sitios predeterminados en el ADN que tiene una secuencia conocida, por ejemplo, la mutagénesis con cebadores en M13 y la mutagénesis por PCR. El cribado de los mutantes se realiza con ensayos de las actividades de la proteína de

30 fijación a antígeno, tal como la fijación al IL-17RA.

Las sustituciones de aminoácidos son típicamente de restos únicos; las inserciones normalmente serán del orden de aproximadamente uno (1) a aproximadamente veinte (20) restos de aminoácidos, aunque se pueden tolerar inserciones considerablemente más grandes. Las deleciones oscilan de aproximadamente uno (1) a

35 aproximadamente veinte (20) restos de aminoácidos, aunque en algunos casos las deleciones pueden ser mucho más grandes.

Se pueden utilizar sustituciones, deleciones, inserciones o cualquier combinación de las mismas para llegar a un derivado o variante final. Por lo general, estos cambios se hacen en unos pocos aminoácidos para disminuir al

40 mínimo la alteración de la molécula, en particular la capacidad inmunógena y la especificidad de la proteína de fijación a antígeno. Sin embargo, se pueden tolerar cambios más grandes en algunas circunstancias. Las sustituciones conservativas se hacen por lo general de acuerdo con el siguiente cuadro descrito como tabla 2.

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TABLA 2 Resto original Sustituciones de ejemplo

Ala Ser

Arg Lys

Asn Gln, His

Asp Glu

Cys Ser

Gln Asn

Glu Asp

Gly Pro

His Asn, Gln

Ile Leu, Val

Leu Ile, Val

Lys Arg, Gln, Glu

Met Leu, Ile

Phe Met, Leu, Tyr

Ser Thr

Thr Ser

Trp Tyr

Tyr Trp, Phe

Val Ile, Leu

Los cambios considerables en el funcionamiento o en la identidad inmunológica se realizan mediante la selección de sustituciones que son menos conservativas que las mostradas en la tabla 2. Por ejemplo, se pueden realizar sustituciones que afectan más significativamente: la estructura del esqueleto del polipéptido en la zona de la alteración, por ejemplo, la estructura α-helicoidal o de lámina β; la carga o hidrofobia de la molécula en el sitio diana;

o la mayor parte de la cadena lateral. Las sustituciones que se espera en general que produzcan los mayores cambios en las propiedades del polipéptido son aquéllas en las que (a) un resto hidrófilo, p. ej., serilo o treonilo, se sustituye por (o con) un resto hidrófobo, p. ej., leucilo, isoleucilo, fenilalanilo, valilo o alanilo; (b) una cisteína o prolina se sustituye por (o con) cualquier otro resto; (c) un resto que tiene una cadena lateral electropositiva, p. ej., lisilo, arginilo o histidilo, se sustituye por (o con) un resto electronegativo, p. ej., glutamilo o aspartilo; o (d) un resto que tiene una cadena lateral voluminosa, p. ej., fenilalanina, se sustituye por (o con) una que no tiene cadena lateral, p. ej., glicina.

Las variantes muestran típicamente la misma actividad biológica cualitativa y desencadenarán la misma respuesta inmunitaria que el análogo natural, aunque también se seleccionan variantes que modifican las características de las proteínas de fijación a antígeno cuando sea necesario. Otra posibilidad es que la variante se puede diseñar de tal forma que se altera la actividad biológica de la proteína de fijación a antígeno. Por ejemplo, los sitios de glucosilación se pueden alterar o retirar como se explica en la presente memoria. Tal modificación de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA, incluidos los anticuerpos, es un ejemplo de un derivado. Un «derivado» de un polipéptido es un polipéptido (p. ej., un anticuerpo) que se ha modificado químicamente, p. ej., por conjugación, con otro resto químico tal como, por ejemplo, polietilenglicol, albúmina (p. ej., seroalbúmina humana), fosforilación y glucosilación.

Otros derivados de anticuerpos contra IL-17RA incluyen conjugados covalentes o agregativos de los anticuerpos contra IL-17RA, o fragmentos de los mismos, con otras proteínas o polipéptidos, tal como mediante la expresión de proteínas de fusión recombinantes que comprenden polipéptidos heterólogos fusionados al extremo amino o al extremo carboxilo de un polipéptido de anticuerpo contra IL-17RA. Por ejemplo, el péptido conjugado puede ser un polipéptido señal (o líder) heterólogo, p. ej., el líder del factor α de la levadura, o un péptido tal como una etiqueta de epítopo. Las proteínas de fusión que contienen el anticuerpo contra IL-17RA pueden comprender la adición de péptidos para facilitar la purificación o la identificación del anticuerpo contra el IL-17RA (p. ej., poli-His). imagen33

Un polipéptido de anticuerpo contra IL-17RA también se puede unir al péptido FLAG

(SEQ ID NO: 447) como se describe en Hopp et al., Bio/Technology 6: 1204, 1988 y en la patente de los EE. UU. n.º 5.011.912. El

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péptido FLAG es muy antigénico y proporciona un epítopo al que se puede unir reversiblemente un anticuerpo monoclonal (Acm) específico, lo que permite un ensayo rápido y facilita la purificación de la proteína recombinante expresada. En el mercado (Sigma, St. Louis, MO) se pueden adquirir los reactivos útiles para preparar proteínas de fusión en las que el péptido FLAG está fusionado a un polipéptido dado.

Los oligómeros que contienen uno más polipéptidos de anticuerpo contra el IL-17RA se pueden emplear como antagonistas del IL-17RA. Los oligómeros pueden estar en forma de dímeros, trímeros u oligómeros más grandes unidos covalentemente o unidos no covalentemente. Se contempla el uso de los oligómeros que comprenden dos o más polipéptidos de anticuerpo contra el IL-17RA, en donde un ejemplo sería un homodímero. Otros oligómeros incluyen heterodímeros, homotrímeros, heterotrímeros, homotetrámeros, heterotetrámeros, etc.

Una realización se dirige a los oligómeros que comprenden varios polipéptidos del anticuerpo contra el IL17RA unidos a través de interacciones covalentes o no covalentes entre los restos peptídicos fusionados con los polipéptidos del anticuerpo contra el IL-17RA. Tales péptidos pueden ser conectores peptídicos (espaciadores) o péptidos que tienen la propiedad de favorecer la oligomerización. Las cremalleras de leucinas y algunos polipéptidos procedentes de anticuerpos se encuentran entre los péptidos que favorecen la oligomerización de los polipéptidos de anticuerpo contra IL-17RA a los que van unidos, como se describe con más detalle a continuación.

En determinadas realizaciones, los oligómeros comprenden de dos a cuatro polipéptidos de anticuerpo contra el IL-17RA. La porción del anticuerpo contra IL-17RA del oligómero puede ser cualquiera de las formas descritas más arriba, p. ej., variantes o fragmentos. Preferiblemente, los oligómeros comprenden polipéptidos de anticuerpo contra el IL-17RA que tienen actividad de fijación al IL-17RA.

En una realización, se prepara un oligómero con los polipéptidos procedentes de las inmunoglobulinas. Se ha descrito la preparación de proteínas de fusión que comprenden determinados polipéptidos heterólogos fusionados a varias porciones de polipéptidos procedentes de anticuerpos (que incluyen el dominio Fc), p. ej., por Ashkenazi et al., 1991, 88: 10535; Bym et al., 1990, Nature, 344: 677; y Hollenbaugh et al., 1992 «Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins» en Current Protocols in Immunology, supl. 4, páginas 10.19.1

10.19.11.

Una realización de la presente invención se dirige a un dímero que comprende dos proteínas de fusión creadas mediante la fusión de un fragmento de fijación al IL-17RA de un anticuerpo contra el IL-17RA con la región Fc de un anticuerpo. El dímero se puede fabricar mediante, por ejemplo, la inserción de una fusión génica que codifica la proteína de fusión en un vector de expresión adecuado, la expresión de la fusión génica en las células hospedadoras transformadas con el vector de expresión recombinante, y que permite que la proteína de fusión expresada se ensamble de una forma muy parecida a las moléculas de anticuerpo, después de lo cual se forman puentes disulfuro intercatenarios entre las porciones Fc para producir el dímero.

La terminología «polipéptido Fc», tal y como se utiliza en la presente memoria, incluye formas nativas y de muteína de los polipéptidos procedentes de la región Fc de un anticuerpo. También se incluyen las formas truncadas de tales polipéptidos que contienen la región bisagra que favorece la dimerización. Las proteínas de fusión que comprenden restos Fc (y los oligómeros que se derivan de ellos) ofrecen la ventaja de que se purifican con facilidad mediante cromatografía de afinidad en columnas con proteína A o proteína G.

Un polipéptido Fc adecuado, descrito en la publicación de PCT WO 93/10151, es un polipéptido de cadena única que se extiende desde la región de la bisagra del extremo amino hasta el extremo carboxilo nativo de la región Fc de un anticuerpo IgG humano. Otro polipéptido Fc útil es la muteína Fc descrita en la patente de los EE. UU. n.º

5.457.035 y en Baum et al., 1994, EMBO J. 13: 3992-4001. La secuencia de aminoácidos de esta muteína es idéntica a la de la secuencia de la Fc nativa presentada en la solicitud patente internacional WO 93/10151, excepto que el aminoácido 19 ha cambiado de Leu a Ala, el aminoácido 20 ha cambiado de Leu a Glu y el aminoácido 22 se ha cambiado de Gly a Ala. La muteína muestra menos afinidad por los receptores de Fc.

En otras realizaciones, la porción variable de las cadenas ligera y/o pesada de un anticuerpo contra IL17RA se puede sustituir por la porción variable de una cadena pesada y/o ligera del anticuerpo.

Alternativamente, el oligómero es una proteína de fusión que comprende varios polipéptidos de anticuerpo contra IL-17RA, con o sin conectores peptídicos (péptidos espaciadores). Entre los conectores peptídicos adecuados se encuentran los descritos en las patentes de los EE. UU. 4.751.180 y 4.935.233.

Otro procedimiento para preparar derivados oligoméricos del anticuerpo contra el IL-17RA implica el uso de una cremallera de leucinas. Los dominios de cremallera de leucinas son péptidos que favorecen la oligomerización de las proteínas en las que se encuentran. Las cremalleras de leucinas se identificaron originalmente en varias proteínas de fijación a ADN (Landschulz et al., 1988, Science 240: 1759) y desde entonces se han encontrado en muchas proteínas diferentes. Entre las cremalleras de leucinas conocidas se encuentran péptidos naturales y los derivados de los mismos que se dimerizan o trimerizan. Ejemplos de dominios de cremallera de leucinas adecuados

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para producir proteínas oligoméricas solubles se describen en la solicitud de PCT WO 94/10308, y la cremallera de leucinas procedente de la proteína D del tensioactivo de pulmón (SPD, por su nombre en inglés) descrito en Hoppe et al., 1994, FEBS Letters 344: 191, incorporado aquí por referencia. El uso de una cremallera de leucinas modificada que permite la trimerización estable de una proteína heteróloga fusionada a ésta se describe en Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6: 267-78. En una estrategia, las proteínas de fusión recombinantes que comprenden un fragmento o derivado de anticuerpo contra el IL-17RA fusionado a un péptido con cremallera de leucinas se expresan en células hospedadoras adecuadas y se recuperan del sobrenadante del cultivo los fragmentos o derivados oligoméricos y solubles de anticuerpo contra el IL-17RA que se formen.

Las modificaciones covalentes también se consideran derivados de las proteínas de fijación al antígeno IL17RA y están incluidas dentro del alcance de esta divulgación, y se hacen por lo general, pero no siempre, de forma postraduccional. Por ejemplo, varios tipos de modificaciones covalentes de la proteína de fijación a antígeno se introducen en la molécula al hacer reaccionar determinados restos aminoacídicos específicos de la proteína de fijación a antígeno con un agente orgánico de modificación que es capaz de reaccionar con determinadas cadenas laterales o los restos del extremo amino o carboxilo.

Los restos cisteinilo se hacen reaccionar con mucha frecuencia con α-haloacetatos (y las correspondientes aminas), tales como el ácido cloroacético o la cloroacetamida, para dar derivados carboximetilados o carboxiamidometilados. Los restos cisteinilo también se modifican al hacerlos reaccionar con bromotrifluoroacetona, ácido α-bromo-β-(5-imidozoíl)propiónico, fosfato de cloroacetilo, N-alquilmaleimidas, disulfuro de 3-nitro-2-piridilo, disulfuro de metilo y 2-piridilo, p-cloromercuriobenzoato, 2-cloromercuri-4-nitrofenol o cloro-7-nitrobenzo-2-oxa-1,3diazol.

Los restos de histidilo se modifican al hacerlos reaccionar con dietilpirocarbonato a pH 5,5-7-0 porque este agente es relativamente específico de la cadena lateral de histidilo. También es útil el bromuro de parabromofenacilo; la reacción se realiza preferiblemente en cacodilato de sodio a 0,1 M a pH 6,0.

Los restos lisinilo y del extremo amino se hacen reaccionar con ácido succínico u otros anhídridos de ácido carboxílico. La modificación con estos agentes tiene el efecto de revertir la carga de los restos de lisinilo. Otros reactivos adecuados para la modificación restos con α-amino incluyen imidoésteres tales como picolinimidato de metilo; fosfato de piridoxal; cloroborohidruro; ácido trinitrobencenosulfónico; O-metilisourea; 2,4-pentanodiona; y reacción con glioxilato catalizada por transaminasa.

Los restos de arginilo se modifican al hacerlos reaccionar con uno o varios reactivos convencionales, entre ellos fenilglioxal, 2,3-butanodiona, 1,2-ciclohexanodiona y ninhidrina. La modificación de los restos de arginina requiere que la reacción se realice en condiciones alcalinas debido al alto pKa del grupo funcional de guanidina. Además, estos reactivos pueden reaccionar con los grupos de la lisina, así como con el grupo ε-amino de la arginina.

Se pueden modificar específicamente los restos de tirosilo, con particular interés en la introducción de las etiquetas espectrales en los restos tirosilo al hacerlos reaccionar con compuestos aromáticos de diazonio o tetranitrometano. Lo más habitual es que el N-acetilimidizol y el tetranitrometano se utilicen para formar especies de tirosilo O-acetilado y derivados 3-nitro, respectivamente. Los restos de tirosilo se yoduran con 125I o 131I para preparar proteínas marcadas para el uso en radioinmunoensayos, en donde resulta adecuado el procedimiento de cloroamina T descrito más arriba.

Los grupos laterales con carboxilo (aspartilo o glutamilo) se modifican selectivamente al hacerlos reaccionar con carbodiimidas (R'—N=C=N—R'), en donde R y R' son opcionalmente grupos alquilo diferentes, tales como 1ciclohexil-3-(2-morfolinil-4-etil)carbodiimida o 1-etil-3-(4-azonia-4,4-dimetilpentil)carbodiimida. Además, los restos aspartilo y glutamilo se convierten en los restos asparraginilo y glutaminilo al hacerlos reaccionar con iones de amonio.

La modificación con agentes bifuncionales es útil para entrecruzar proteínas de fijación a antígeno con una matriz o superficie de apoyo insoluble en agua para usarlas en una serie de procedimientos. Los agentes de entrecruzamiento que se usan habitualmente incluyen, p. ej., 1,1-bis(diazoacetil)-2-feniletano, glutaraldehído, ésteres de N-hidroxisuccinimida, por ejemplo, ésteres con ácido 4-azidosalicílico, imidoésteres homobifuncionales, que incluyen ésteres de disuccinimidilo tales como 3,3'-ditiobis(succinimidilpropionato) y maleimidas bifuncionales tales como bis-N-maleimido-1,8-octano. Los agentes para modificación tales como metil-3-[(pazidofenil)ditio]propioimidato producen intermedios fotoactivables que son capaces de formar entrecruzamientos en presencia de luz. Otra posibilidad es que para la inmovilización de proteínas se empleen las matrices reactivas insolubles en agua tales como glúcidos activados con bromuro de cianógeno y los sustratos reactantes descritos en las patente de los EE. UU. n.ºs 3.969.287; 3.691.016; 4.195.128; 4.247.642; 4.229.537 y 4.330.440.

Los restos de glutaminilo y asparraginilo se desamidan con frecuencia en los correspondientes restos glutamilo y aspartilo, respectivamente. Otra alternativa es que estos restos se desamiden en condiciones levemente ácidas. Cualquiera de las formas de estos restos se encuentra dentro del alcance de esta divulgación.

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Otras modificaciones incluyen la hidroxilación de prolina y lisina, la fosforilación de los grupos hidroxilo de los restos serilo o treonilo, la metilación de los grupos α-amino de la cadena lateral de lisina, arginina e histidina (T.

E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, 1983, págs. 7986), la acetilación de la amina del extremo amino y la amidación de cualquier grupo carboxilo del extremo carboxilo.

Otro tipo de modificación covalente de la proteína de fijación a antígeno incluida dentro del alcance de esta divulgación comprende alterar el patrón de glucosilación de la proteína. Tal y como se sabe en la técnica, los patrones de glucosilación pueden depender de la secuencia de la proteína (p. ej., la presencia o ausencia de restos aminoacídicos concretos para glucosilación, que se explican más adelante) así como del organismo o célula hospedador en la que se sintetiza la proteína. Más adelante se explican una serie de sistemas de expresión.

La glucosilación de los polipéptidos está típicamente unida a un N o unida a un O. Unida a un N se refiere a la formación de un enlace entre el resto glucídico y a la cadena lateral de un resto de asparragina. Las secuencias tri-peptídicas asparragina-X-serina y asparragina-X-treonina, en donde X es cualquier aminoácido salvo prolina, son las secuencias de reconocimiento para la unión enzimática del resto glucídico a la cadena lateral de asparragina. Así pues, la presencia de cualquiera de estas secuencias tripeptídicas en un polipéptido crea un posible sitio de glucosilación. La glucosilación unida a un O se refiere a la formación de un enlace entre uno de los azúcares Nacetilgalactosamina, galactosa o xilosa, a un hidroxiaminoácido, más corrientemente serina o treonina, aunque también se pueden utilizar 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina.

La adición de los sitios de glucosilación a la proteína de fijación a antígeno se lleva a cabo convenientemente por alteración de la secuencia de aminoácidos, de tal forma que contiene una o más de las secuencias tripeptídicas descritas más arriba (para los sitios de glucosilación unidos a un N). La alteración también se puede hacer mediante la adición de, o la sustitución con, uno o más restos de serina o treonina en la secuencia original (para los sitios de glucosilación unidos a un O). Por comodidad, la secuencia de aminoácidos de la proteína de fijación a antígeno se altera preferiblemente a través de cambios a nivel del ADN, en particular al mutar el ADN que codifica el polipéptido deseado en las bases preseleccionadas, de tal forma que se generan codones que se traducirán en los aminoácidos deseados.

Otro medio para incrementar el número de restos de glúcidos sobre la proteína de fijación a antígeno es mediante el acoplamiento químico o enzimático de los glucósidos a la proteína. Estos procedimientos son ventajosos por no necesitar que se produzca la proteína en una célula hospedadora que es capaz de glucosilar un N y un O para unirles un polisacárido. Según el modo de acoplamiento utilizado, se pueden unir uno o varios azúcares a (a) arginina e histidina, (b) grupos carboxilo libres, (c) grupos sulfhidrilo libres, tales como los de las cisteínas, (d) grupos hidroxilo libres, tal como los de serina, treonina o hidroxiprolina, (e) restos aromáticos tales como los de fenilalanina, tirosina o triptófano, o (f) el grupo de amida de la glutamina. Estos procedimientos se describen en la solicitud de patente internacional WO 87/05330 publicada el 11 de septiembre de 1987, y en Aplin y Wriston, 1981, CRC Crit. Rev. Biochem., págs. 259-306.

La retirada de los restos de glúcidos presentes en la proteína de fijación a antígeno original se puede llevar a cabo química o enzimáticamente. La desglucosilación química requiere la exposición de la proteína al compuesto ácido trifluorometanosulfónico, o un compuesto equivalente. Este tratamiento da lugar a la escisión de la mayoría, o de todos, los azúcares, salvo el azúcar conector (N-acetilglucosamina o N-acetilgalactosamina), mientras que el polipéptido permanece intacto. La desglucosilación química está descrita por Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys, 259: 52 y por Edge et al., 1981, Anal. Biochem. 118: 131. La escisión enzimática de los restos de glúcidos sobre los polipéptidos se puede conseguir mediante el uso de una serie de endo-y exoglucosidasas como describen Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol. 138: 350. La glucosilación en los posibles sitios de glucosilación se puede impedir mediante el uso del compuesto tunicamicina, como se describe en Duskin et al., 1982, J. Biol. Chem.

257: 3105. La tunicamicina bloquea la formación de enlaces entre la proteína y el glucósido en un N.

Otro tipo de modificación covalente de la proteína de fijación a antígeno comprende conectar la proteína de fijación a antígeno a diferentes polímeros de naturaleza no proteica, que incluyen, pero sin limitarse a ellos, diversos polioles tales como polietilenglicol, polipropilenglicol o polioxialquilenos, de la manera presentada en las patentes de los EE.UU. n.ºs 4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417; 4.791.192 o 4.179.337. Además, como se sabe en la técnica, se pueden realizar sustituciones de aminoácidos en diferentes posiciones dentro de la proteína de fijación a antígeno para facilitar la adición de polímeros, tales como PEG.

En algunas realizaciones, la modificación covalente de las proteínas de fijación a antígeno de la divulgación comprende la adición de uno o varias marcaciones.

La terminología «grupo marcador» significa cualquier marcación detectable. Ejemplos de grupos marcadores adecuados incluyen, pero sin limitarse a ellos, los siguientes: radioisótopos o radionúclidos (p. ej., 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), grupos fluorescentes (p. ej., FITC, rodamina, fósforos lantánidos), grupos enzimáticos (p. ej., peroxidasa de rábano picante, β-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina), grupos

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quimioluminiscentes, grupos biotinilo o epítopos polipeptídicos predeterminados reconocidos por un indicador secundario (p. ej., secuencias de parejas de cremalleras de leucinas, sitios de fijación para anticuerpos secundarios, dominios de fijación a metales, etiquetas de epítopos). En algunas realizaciones, el grupo marcador se acopla a la proteína de fijación a antígeno a través de brazos espaciadores de diferente longitud para reducir el posible impedimento estérico. En la técnica se conocen una serie de procedimientos para marcar proteínas y se pueden utilizar para poner en práctica la presente invención.

En general, las marcaciones se clasifican en una serie de clases, según el ensayo en el que se tienen que detectar: a) marcaciones isotópicas, que puede ser isótopos radioactivos o pesados; b) marcaciones magnéticas (p. ej., partículas magnéticas); c) restos activos de oxidorreducción; d) colorantes ópticos; grupos enzimáticos (p. ej., peroxidasa de rábano picante, β-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina); e) grupos biotinilados; y f) epítopos polipeptídicos predeterminados que reconoce un indicador secundario (p. ej., secuencias de parejas de cremalleras de leucinas, sitios de fijación para anticuerpos secundarios, dominios que se fijan a metales, etiquetas de epítopos, etc). En algunas realizaciones, el grupo marcador se acopla a la proteína de fijación a antígeno a través de brazos espaciadores de diferente longitud para reducir el posible impedimento estérico. En la técnica se conocen una serie de procedimientos para marcar proteínas y se pueden utilizar para poner en práctica la presente invención.

Las marcaciones específicas incluyen colorantes ópticos, que incluyen, pero sin limitarse a ellos, cromóforos, fósforos y fluoróforos, de los que los últimos son específicos en muchos casos. Los fluoróforos pueden ser bien flúor en «moléculas pequeñas» o flúor en proteínas.

Con «marcación fluorescente» se quiere decir cualquier molécula que se puede detectar gracias a sus propiedades fluorescentes inherentes. Las marcaciones fluorescentes adecuadas incluyen, pero sin limitarse a ellas, fluoresceína, rodamina, tetrametilrodamina, eosina, eritrosina, coumarina, metilcoumarinas, pireno, verde malaquita, estilbeno, amarillo Lucifer, Cascade BlueJ, rojo Texas, IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC Red 640, Cy 5, Cy 5.5, LC Red 705, verde Oregon, los colorantes de Alexa-Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), azul Cascade, amarillo Cascade y R-ficoeritrina (PE) (Molecular Probes, Eugene, OR), FITC, rodamina y rojo Texas (Pierce, Rockford, IL), Cy5, Cy5,5, Cy7 (Amersham Life Science, Pittsburgh, PA). Los colorantes ópticos adecuados, entre ellos los fluoróforos, se describen en Molecular Probes Handbook de Richard P. Haugland.

Las marcaciones fluorescentes adecuadas de naturaleza proteica también incluyen, pero sin limitarse a ellas, proteína fluorescente verde, que incluye una GFP de especies de Renilla, Ptilosarcus o Aequorea (Chalfie et al., 1994, Science, 263: 802-805), EGFP (Clontech Laboratories, Inc., número de acceso de GenBank U55762), proteína fluorescente azul (BFP, Quantum Biotechnologies, Inc., 1801 del Blvd Maisonneuve, West, 8º piso, Montreal, Quebec, Canadá H3H IJ9; Stauber, 1998, Biotechniques 24: 462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6: 178182), proteína fluorescente amarilla mejorada (EYFP, Clontech Laboratories, Inc.), luciferasa (Ichiki et al., 1993, J. Immunol. 150: 5408-5417), β-galactosidasa (Nolan et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2603-2607) y Renilla (solicitudes de patente internacional WO 92/15673, WO 95/07463, WO 98/14605, WO 98/26277, WO 99/49019, patentes de los EE. UU. n.os 5.292.658, 5.418.155, 5.683.888, 5.741.668, 5.777.079, 5.804.387, 5.874.304, 5.876.995, 5.925.558).

Polinucleótidos que codifican proteínas de fijación al antígeno IL-17RA

Dentro de la invención quedan englobados los ácidos nucleicos que codifican anticuerpos de IL-17RA, como se define en las reivindicaciones.

La secuencia de polinucleótidos para las regiones variable de cadena pesada AMH1-26 se encuentran en las SEQ ID NO:54-79, respectivamente, y las secuencias de polinucleótidos para las regiones variables de cadena ligera AML1-26 se encuentran en las SEQ ID NO:80-106, respectivamente, con AML23 teniendo dos versiones, como se muestra en la SEQ ID NO:102 y 103. Las SEQ ID NO para las secuencias de polinucleótidos que codifican las H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 se dan a conocer en la TABLA 1.

Los aspectos incluyen variantes de polinucleótidos (p. ej., debido a la degeneración) que codifican las secuencias de aminoácidos descritas en la presente.

Se describen una variedad de realizaciones, no necesariamente incluidas en la invención, pero no limitadas a las siguientes realizaciones ejemplares: realización 51: un polinucleótido aislado, en donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

A.

b.: una secuencia del dominio variable de cadena pesada que es al menos un 80% idéntico a una

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secuencia del dominio variable de cadena pesada de AMH1-26 (SEQ ID NO:1-26, respectivamente);

B. una DCR1, CDR2, CDR3 de cadena ligera y una CDR1, CDR2, CDR3 de cadena pesada que difiere en no más de un total de tres adiciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos en cada CDR de las secuencias siguientes:

t.: una CDR1 (SEQ ID NO:242), CDR2 (SEQ ID NO:243), CDR3 (SEQ ID NO:244) de cadena ligera y

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una CDR1 (SEQ ID NO:164), CDR2 (SEQ ID NO:165), CDR3 (SEQ ID NO:166) de cadena pesada del anticuerpo AM-20;

z.2. una CDR1 (SEQ ID NO:263), CDR2 (SEQ ID NO:264), CDR3 (SEQ ID NO:265) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:182), CDR2 (SEQ ID NO:183), CDR3 (SEQ ID NO:184) de cadena pesada del anticuerpo AM-26;

donde dicho polipéptido se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 52: el polinucleótido de la realización 51, donde dicho polinucleótido hibrida bajos condiciones rigurosas con el complemento de longitud completa de un polinucleótido seleccionado del grupo consistente de:

a.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML1/AMH1 (SEQ ID NO:80/SEQ ID NO:54);

b.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML2/AMH2 (SEQ ID NO:81/SEQ ID NO:55);

c.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML3/AMH3 (SEQ ID NO:82/SEQ ID NO:56);

d.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML4/AMH4 (SEQ ID NO:83/SEQ ID NO:57);

e.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML5/AMH5 (SEQ ID NO:84/SEQ ID NO:58);

f.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML6/AMH6 (SEQ ID NO:85/SEQ ID NO:59)

g.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML7/AMH7 (SEQ ID NO:86/SEQ ID NO:60);

h.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML8/AMH8 (SEQ ID NO:87/SEQ ID NO:61);

i.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML9/AMH9 (SEQ ID NO:88/SEQ ID NO:62);

j.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML10/AMH10 (SEQ ID NO:89/SEQ ID NO:63);

k.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML11/AMH11 (SEQ ID NO:90/SEQ ID NO:64);

l.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML12/AMH12 (SEQ ID NO:91/SEQ ID NO:65);

m.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML13/AMH13 (SEQ ID NO:92/SEQ ID NO:66);

n.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML14/AMH14 (SEQ ID NO:93/SEQ ID NO:67);

o.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML15/AMH15 (SEQ ID NO:94/SEQ ID NO:68);

p.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML16/AMH16 (SEQ ID NO:95/SEQ ID NO:69);

q.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML17/AMH17 (SEQ ID NO:96/SEQ ID NO:70);

r.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el

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dominio variable de cadena pesada de AML18/AMH18 (SEQ ID NO:97/SEQ ID NO:71);

s.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML19/AMH19 (SEQ ID NO:98/SEQ ID NO:72);

t.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML20/AMH20 (SEQ ID NO:99/SEQ ID NO:73);

u.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML21/AMH21 (SEQ ID NO:100/SEQ ID NO:74);

v.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML22/AMH22 (SEQ ID NO:101/SEQ ID NO:75);

w.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML23/AMH23 (SEQ ID NO: 102 o SEQ ID NO:103/SEQ ID NO:76);

x.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML24/AMH24 (SEQ ID NO:104/SEQ ID NO:77);

y.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML25/AMH25 (SEQ ID NO:105/SEQ ID NO:78); y

z.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML26/AMH26 (SEQ ID NO:106/SEQ ID NO:79);

Realización 53: el polinucleótido de la realización 51, donde dicho polinucleótido hibrida bajo condiciones rigurosas con el complemente de longitud completa de un polinucleótido seleccionado del grupo consistente de:

a.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:345,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:346,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:347 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:266,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:267, y un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:268 del anticuerpo AM-1;

b.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:348,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:349,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:350 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:269,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:270,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:271 del anticuerpo AM-2;

c.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:351,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:352,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:353 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:272,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:273,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:274 del anticuerpo AM-3;

d.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:354,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:355,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:356 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:275,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:276,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:277 del anticuerpo AM-4;

e.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:357,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:358,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:359 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:278,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:279,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:280 del anticuerpo AM-5;

f.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:360,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:361,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:362 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:281,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:282,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:283 del anticuerpo AM-6;

g.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:363,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:364,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:365 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:284,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:285,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:286 del anticuerpo AM-7;

h.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:366,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:367,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:368 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:287,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:288,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:289 del anticuerpo AM-8;

i.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:369,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:370,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:371 y un

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polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:290,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:291,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:292 del anticuerpo AM-9;

j.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:372,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:373,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:374 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:293,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:294,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:295 del anticuerpo AM-10;

k.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:375,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:376,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:377 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:296,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:297,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:298 del anticuerpo AM-11;

l.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:378,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:379,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:380 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:299,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:300,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:301 del anticuerpo AM-12;

m.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:381,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:382,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:383 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:302,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:303,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:304 del anticuerpo AM-13;

n.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:384,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:385,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:386 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:305,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:306,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:307 del anticuerpo AM-14;

o.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:387,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:388,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:389 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:308,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:309,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:310 del anticuerpo AM-15;

p.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:390,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:391,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:392 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:311,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:312,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:313 del anticuerpo AM-16;

q.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:393,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:394,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:395 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:314,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:315,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:316 del anticuerpo AM-17;

r.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:396,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:397,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:398 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:317,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:318,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:319 del anticuerpo AM-18;

s.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:399,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:400,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:401 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:320,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:321,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:322 del anticuerpo AM-19;

t.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:402,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:403,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:404 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:323,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:324,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:325 del anticuerpo AM-20;

u.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:405,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:406,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:407 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:326,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:327,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:328 del anticuerpo AM-21;

v.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:408,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:409,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:410 y

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una CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:329,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:330,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:331 del anticuerpo AM-22;

w.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:411,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:412,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:413 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:332,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:333,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:334 del anticuerpo AM-23;

x.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:414,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:415,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:416 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:332,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:333,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:334 del anticuerpo AM-23;

y.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:417,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:418,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:419 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:335,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:336,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:337 del anticuerpo AM-24;

z.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:420,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:421,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:422 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:338,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:339,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:340 del anticuerpo AM-25; o

z.2. un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:423,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:424,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:425 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:341,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:342,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:343 del anticuerpo AM-26.

Realización 54: el polinucleótido de la realización 51, donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

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z.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26).

Realización 55: El polinucleótido de la realización 51, donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de:

o.: una CDR1 (SEQ ID NO:227), CDR2 (SEQ ID NO:228), CDR3 (SEQ ID NO:229) de cadena ligera y una

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CDR1 (SEQ ID NO:149), CDR2 (SEQ ID NO:150), CDR3 (SEQ ID NO:151) de cadena pesada del anticuerpo AM-15;

Realización 6: el polinucleótido de la realización 2, donde dicho polinucleótido se seleccionad el grupo consistente de:

l.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el

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dominio variable de cadena pesada de AML12/AMH12 (SEQ ID NO:91/SEQ ID NO:65);

r.: un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena ligera y un polinucleótido que codifica el dominio variable de cadena pesada de AML18/AMH18 (SEQ ID NO:97/SEQ ID NO:71);

Realización 57: el polinucleótido de la realización 53, donde dicho polinucleótido se selecciona del grupo consistente de:

g.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:363,un polinucleótido que

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codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:364,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:365 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:284,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:285,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:286 del anticuerpo AM-7;

i.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:369,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:370,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:371 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:290,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:291,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:292 del anticuerpo AM-9;

t.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:402,un polinucleótido que

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codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:403,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:404 y un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:323,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:324,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:325 del anticuerpo AM-20;

v.: un polinucleótido que codifica la CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:408,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:409,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:410 y una CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:329,un polinucleótido que codifica la CDR2 de la SEQ ID NO:330,un polinucleótido que codifica la CDR3 de la SEQ ID NO:331 del anticuerpo AM-22;

Realización 58: un polinucleótido aislado, donde dicho polinucleótido codifica el polipéptido que comprende

a.: una CDR1 de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de:

i. X1YGIS, donde X1 se selecciona del grupo consistente de R, S y G.

b.: una CDR2 de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de:

i. RASQSX1X2X3X4LA, donde X1 se selecciona del grupo consistente de V e I, X2 se selecciona del

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grupo consistente de I y S, X3 se selecciona del grupo consistente de S y T, X4 se selecciona del grupo consistente de N y S, y X5 se selecciona del grupo consistente de A y N; y

ii. RASQSX1SSNLA, donde X1 se selecciona del grupo consistente de V e I;

i. QQYDX1WPLT, donde X1 se selecciona del grupo consistente de N, T e I;

donde dicho polipéptido se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 59: el polinucleótido de la realización 58, donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido donde dicho polipéptido comprende:

Realización 60: un plásmido, que comprende dicho polinucleótido de la realización 51. Realización 61: el plásmido de la realización 60, donde dicho plásmido es un vector de expresión. Realización 62: una célula aislada, que comprende dicho plásmido de la realización 60. Realización 63: la célula aislada de la realización 62, donde un cromosoma de dicha célula comprende dicho polinucleótido. Realización 64: la célula aislada de la realización 62, donde dicha célula es un hibridoma. Realización 65. la célula aislada de la realización 62, donde dicha célula comprende el vector de expresión de la realización 61. Realización 66: la célula aislada de la realización 65, donde dicha célula se selecciona del grupo consistente de: a. a, una célula procariota; b, una célula eucariota; c, una célula de mamífero; d, una célula de insecto; y e, una célula CHO. Realización 67: un procedimiento para fabricar un polipéptido que se fija específicamente al receptor A de IL-17, que comprende incubar dicha célula aislada de la realización 65 bajo condiciones que le permiten expresar dicho polipéptido. Realización 68: el polinucleótido de la realización 51, donde dicho polinucleótido codifica dicho polipéptido y donde dicho polipéptido es un anticuerpo que se fija específicamente al receptor A de IL-17, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de: a, un anticuerpo humanizado; b, un anticuerpo quimérico; c, un anticuerpo recombinante; d, un anticuerpo de cadena única; e, un dianticuerpo; f, un trianticuerpo; g, un tetranticuerpo; h, un fragmento Fab; i, un fragmento F(ab')2; j, un anticuerpo IgD; k, un anticuerpo IgE; l, un anticuerpo IgM; m, un anticuerpo IgG1; n, un anticuerpo IgG2; o, un anticuerpo IgG3; y p, un anticuerpo IgG4. Realización 69: el polinucleótido de la realización 68, donde dicho polinucleótido codifica dicho anticuerpo y donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de:

a) un anticuerpo que consiste de una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427 y una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO:429; b) un anticuerpo que consiste esencialmente de una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427 y una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO:429; c) un anticuerpo que comprende una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427; d) un anticuerpo que comprende una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO:429, e) un anticuerpo que comprende una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO: 427 y una

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secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO:429; f) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427; g) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO:429; h) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427 y una secuencia de cadena ligera de la SEQ ID NO:429; i) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:14; j) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de la región variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40; k) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una secuencia de la región variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40 y una secuencia de la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:14; l) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una CDR1 de cadena pesada de la SEQ ID NO:146, una CDR2 de cadena pesada de la SEQ ID NO:147, una CDR3 de cadena pesada de la SEQ ID NO:148, una CDR1 de cadena ligera de la SEQ ID NO:224, una CDR2 de cadena ligera de SEQ ID NO:225, y una CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NO:226; y m) un anticuerpo o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende una CDR3 de cadena pesada de la SEQ ID NO:148 y una CDR3 de cadena ligera de la SEQ ID NO:226, donde dicho anticuerpo se fija específicamente al receptor A de IL-17.

Realización 70: el polinucleótido de la realización 69, donde dicho anticuerpo comprende un polinucleótido seleccionado del grupo consistente de:

a) una secuencia de polinucleótidos que codifica la cadena pesada que consiste de la SEQ ID NO:426 y una secuencia de polinucleótidos que codifica la cadena ligera que consiste de la SEQ ID NO:428; b) una secuencia de polinucleótidos que codifica la cadena pesada que consiste esencialmente de la SEQ ID NO:426 y una secuencia de polinucleótidos que codifica la cadena ligera que consiste esencialmente de la SEQ ID NO:428; c) una secuencia de polinucleótidos que codifica la cadena pesada que comprende la SEQ ID NO:426; d) una secuencia de polinucleótidos que codifica la cadena ligera que comprende la SEQ ID NO:428; e) una secuencia de polinucleótidos que codifica la cadena pesada que comprende la SEQ ID NO:426 y una secuencia de polinucleótidos que codifica la cadena ligera que comprende la SEQ ID NO:428; f) una secuencia de polinucleótidos que codifica una cadena pesada o un fragmento de fijación al receptor de IL-17 del mismo que comprende la SEQ ID NO:426; g) una secuencia de polinucleótidos que codifica una cadena ligera o un fragmento de fijación al receptor de IL-17 del mismo que comprende la SEQ ID NO:428; h) una secuencia de polinucleótidos que codifica una cadena pesada o un fragmento de fijación al receptor de IL-17 del mismo que comprende la SEQ ID NO:426 y una secuencia de polinucleótidos que codifica una cadena ligera o un fragmento de fijación al receptor de IL-17 del mismo que comprende la SEQ ID NO:428; i) una secuencia de polinucleótidos que codifica una región variable de cadena pesada o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende la SEQ ID NO:67; j) una secuencia de polinucleótidos que codifica una región variable de cadena ligera o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende la SEQ ID NO:93; k) una secuencia de polinucleótidos que codifica una región variable de cadena pesada o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende la SEQ ID NO:67 y una secuencia de polinucleótidos que codifica una región variable de cadena ligera o un fragmento de fijación al receptor A de IL-17 del mismo que comprende la SEQ ID NO:93; l) un polinucleótido que codifica una CDR1 de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO:384, polinucleótido que codifica una CDR2 que comprende la SEQ ID NO:385, polinucleótido que codifica una CDR3 que comprende la SEQ ID NO:386 y un polinucleótido que codifica una CDR1 de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO:305, polinucleótido que codifica una CDR2 que comprende la SEQ ID NO:306, polinucleótido que codifica una CDR3 que comprende la SEQ ID NO:307; y m) un polinucleótido que codifica una CDR3 de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO:307 y un polinucleótido que codifica una CDR3 de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO:386.

Realización 71: el plásmido de la realización 60, donde el polinucleótido es el polinucleótido de la realización

69. Realización 72: la célula aislada de la realización 62, donde el polinucleótido es el polinucleótido de la realización 69. Realización 73: la célula aislada de la realización 65, donde dicho vector de expresión comprende el polinucleótido de la realización 69. Realización 74. la célula aislada de la realización 66, donde dicha célula es una célula CHO y dicha célula CHO comprende el polinucleótido de la realización 69. Realización 75: el procedimiento de acuerdo con la realización 67, donde el polinucleótido es el polinucleótido

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de la realización 69.

Las secuencias de nucleótidos que corresponden a las secuencias de aminoácidos descritas en la presente memoria, para ser utilizadas como sondas o cebadores para el aislamiento de ácidos nucleicos o como secuencias problema para búsquedas en las bases de datos, se pueden obtener mediante la «retrotraducción» de las secuencias de aminoácidos, o mediante la identificación de regiones de identidad de aminoácidos con polipéptidos para los cuales se ha identificado la secuencia de ADN codificante. El procedimiento bien conocido de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se puede emplear para aislar y amplificar una secuencia de ADN que codifica proteínas de fijación al antígeno IL-17RA o una combinación deseada de fragmentos polipeptídicos de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA. Los oligonucleótidos que definen los extremos deseados de la combinación de fragmentos de ADN se emplean como cebadores en 5' y en 3'. Los oligonucleótidos pueden contener adicionalmente sitios de reconocimiento para endonucleasas de restricción que facilitan la inserción de la combinación amplificada de fragmentos de ADN en un vector de expresión. Las técnicas de PCR se describen en Saiki et al., Science 239: 487 (1988); Recombinant DNA Methodology, Wu et al., eds., Academic Press, Inc., San Diego (1989), págs. 189196; y PCR Protocols: A guide to Methods and Applications, Innis et al., eds., Academic Press, Inc. (1990).

Las moléculas de ácido nucleico de la invención incluyen ADN y ARN en forma monocatenaria y bicatenaria, así como las correspondientes secuencias complementarias. El ADN incluye, por ejemplo, ADNc, ADN genómico, ADN sintetizado químicamente, ADN amplificado por PCR y sus combinaciones. Las moléculas de ácido nucleico de la invención incluyen genes o moléculas de ADNc de longitud completa, así como una combinación de fragmentos de los mismos. Los ácidos nucleicos de la invención proceden preferiblemente de fuentes humanas, pero la invención incluye también los procedentes de especies no humanas.

Un «ácido nucleico aislado» es un ácido nucleico que se ha separado de las secuencias genéticas adyacentes presentes en el genoma del organismo del cual se aisló el ácido nucleico, en el caso de los ácidos nucleicos aislados de fuentes naturales. En el caso de los ácidos nucleicos sintetizados enzimáticamente a partir de un modelo o químicamente, tales como los productos de PCR, las moléculas del ADNc o los oligonucleótidos, por ejemplo, se ha de saber que los ácidos nucleicos que son el resultado de tales procedimientos son ácidos nucleicos aislados. Una molécula de ácido nucleico aislado se refiere a una molécula de ácido nucleico en forma de un fragmento separado o como un componente de una construcción de ácido nucleico más grande. Los ácidos nucleicos están sustancialmente libres de material endógeno contaminante. La molécula de ácido nucleico se ha modificado preferiblemente a partir de ADN o ARN aislado al menos una vez en forma sustancialmente pura y en una cantidad o concentración que permite la identificación, la manipulación y la recuperación de sus secuencias nucleotídicas componentes mediante procedimientos bioquímicos estándares (tales como los descritos en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2.ª ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)). Preferiblemente, tales secuencias se dan a conocer y/o se construyen en forma de un marco abierto de lectura ininterrumpido por secuencias no traducidas internas o intrones, que típicamente están presentes en los genes eucariotas. Las secuencias de ADN sin traducir pueden estar presentes en 5' o en 3' de un marco abierto de lectura, donde el mismo no interfiere con la manipulación ni la expresión de la región codificante.

La divulgación también incluye ácidos nucleicos que se hibridan en condiciones moderadamente rigurosas, y más preferiblemente en condiciones muy rigurosas, a los ácidos nucleicos que codifican proteínas de fijación al antígeno IL-17RA. Los parámetros básicos que afectan a la elección de las condiciones de hibridación y la guía para concebir las condiciones adecuadas se presentan en Sambrook, Fritsch y Maniatis (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., capítulos 9 y 11; y Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., apartados 2.10 y 6.3-6.4), y los pueden determinar con facilidad los expertos en la técnica basándose en, por ejemplo, la longitud y/o la composición de bases del ADN. Una manera de conseguir las condiciones moderadamente rigurosas implica el uso de una solución de prelavado que contiene SSC a 5X, SDS al 0,5%, EDTA a 1,0 mM (pH 8,0), tampón de hibridación con formamida aproximadamente al 50%, SSC a 6X y una temperatura de hibridación de aproximadamente 55 ºC (u otras soluciones de hibridación similares, tal como una que contiene formamida aproximadamente al 50%, con una temperatura de hibridación de aproximadamente 42 ºC) y las condiciones de lavado a aproximadamente 60 ºC, en SSC a 0,5X y SDS al 0,1%. Por lo general, las condiciones muy rigurosas se definen como condiciones de hibridación al igual que más arriba, pero con lavados a aproximadamente 68 ºC con SSC a 0,2X y SDS al 0,1%. El SSPE (SSPE a 1X es NaCl a 0,15 M, NaH2PO4 a 10 mM y EDTA a 1,25 mM, pH 7,4) puede sustituir al SSC (SSC a 1X es NaCl a 0,15 M y citrato de sodio a 15 mM) en los tampones de lavado e hibridación; los lavados se realizan durante 15 minutos después terminar la hibridación. Se debe saber que la temperatura de lavado y la concentración de las sales de lavado se pueden ajustar como sea necesario para conseguir un grado deseado de rigor al aplicar los principios básicos que gobiernan las reacciones de hibridación y la estabilidad de la doble hélice, como saben los expertos en la técnica y se describe además a continuación (véase, p. ej., Sambrook et al., 1989). Cuando se hibrida un ácido nucleico a un ácido nucleico diana de secuencia desconocida, se asume que la longitud del híbrido es la del ácido nucleico que se hibrida. Cuando los ácidos nucleicos de secuencia conocida se hibridan, la longitud del híbrido se puede determinar con el alineamiento de las secuencias de los ácidos nucleicos y la identificación de la región o regiones de complementariedad de secuencia óptima. La temperatura de hibridación para los híbridos que se prevé que serán de menos de 50 pares de bases de longitud debe ser de 5 a 10 ºC menos que la temperatura de fusión

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(Tm) del híbrido, en donde la Tm se determina de acuerdo con las ecuaciones que vienen a continuación. Para los híbridos de menos de 18 pares de bases de longitud, Tm (ºC) = 2(n.º de bases A + T) + 4(n.º de bases G + C). Para los híbridos por encima de 18 pares de bases de longitud, Tm (ºC) = 81,5 + 16,6 (log10 [Na+]) + 0,41 (% de G+ C) – (600/N), donde N es el número de bases del híbrido y [Na+] es la concentración de los iones de sodio en el tampón de hibridación ([Na+] para el SSC a 1X = 0,165 M). Preferiblemente, cada ácido nucleico que se hibrida tiene una longitud que es al menos de 15 nucleótidos (o más, preferiblemente al menos 18 nucleótidos, o al menos 20 nucleótidos, o al menos 25 nucleótidos, o al menos 30 nucleótidos, o al menos 40 nucleótidos, o lo más preferiblemente al menos 50 nucleótidos) o al menos el 25% (más preferiblemente al menos el 50%, o al menos el 60% o al menos el 70% y lo más preferiblemente al menos el 80%) de la longitud del ácido nucleico al cual se hibrida, y tiene una identidad de secuencia de al menos el 60% (más preferiblemente al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, y lo más preferiblemente al menos el 99,5%) con el ácido nucleico con el cual se hibrida, en donde la identidad de secuencia se determina al comparar las secuencias de los ácidos nucleicos que se hibridan cuando se alinean de tal modo que se eleva al máximo el solapamiento y la identidad al mismo tiempo que se disminuye al mínimo los huecos en las secuencias, como se describe con más detalle más arriba.

Las variantes se preparan habitualmente mediante mutagénesis específica de sitio de los nucleótidos del ADN que codifica la proteína de fijación a antígeno, mediante el uso de casete o de la mutagénesis por PCR u otros métodos bien conocidos en la técnica para producir el ADN que codifica la variante, y a partir de esto expresar el ADN recombinante en el cultivo celular como se describe en la presente memoria. Sin embargo, los fragmentos de la proteína de fijación a antígeno que comprenden las CDR variantes que tienen hasta aproximadamente 100-150 restos se pueden preparar mediante la síntesis in vitro con las técnicas establecidas. Las variantes muestran típicamente la misma actividad biológica cualitativa que el análogo natural, p. ej., la fijación al IL-17RA y la inhibición de la señalización, aunque también se pueden seleccionar variantes que tienen características modificadas como se describirá con más detalle a más adelante.

Como apreciarán los expertos en la técnica, debido a la degeneración del código genético, se puede fabricar un número muy grande de ácidos nucleicos, todos los cuales codifican las CDR (y las cadenas ligera y pesada u otros componentes de la proteína de fijación a antígeno) de la presente invención. Así pues, tras haber identificado una secuencia de aminoácidos concreta, los expertos en la técnica podrían fabricar cualquier número de ácidos nucleicos diferentes, pues basta modificar la secuencia de uno o más codones de un modo que no cambie la secuencia de aminoácidos de la proteína codificada.

La presente invención también da a conocer sistemas de expresión y construcciones en forma de plásmidos, vectores de expresión, casetes de expresión o transcripción que comprenden al menos un polinucleótido de los anteriores. Además, la invención da a conocer células hospedadoras que comprenden tales sistemas de expresión o construcciones.

Típicamente, los vectores de expresión utilizados en cualquiera de las células hospedadoras contendrán secuencias para el mantenimiento del plásmido y para la clonación y la expresión de las secuencias nucleotídicas exógenas. Tales secuencias, denominadas en conjunto «secuencias flanqueantes», en algunas realizaciones incluirán típicamente una o varias de las siguientes secuencias nucleotídicas: un promotor, una o más secuencias potenciadoras, un origen de replicación, una secuencia de terminación de la transcripción, una secuencia de intrones completa que contiene un sitio de ayuste donante y otro aceptor, una secuencia que codifica una secuencia líder para la secreción polipeptídica, un sitio de fijación al ribosoma, una secuencia de poliadenilación, una región policonectora para insertar el ácido nucleico que codifica el polipéptido a expresar, y un elemento marcador de selección. Cada una de estas secuencias se explica más adelante. Opcionalmente, el vector puede contener una secuencia que codifica una «etiqueta», a saber, una molécula oligonucleotídica localizada en el extremo 5' o 3' de la secuencia codificante de la proteína de fijación al antígeno IL17RA; la secuencia oligonucleotídica codifica una poliHis (tal como hexaHis), u otra «etiqueta» tal como FLAG, HA (hemaglutinina del virus de la gripe) o myc, para las cuales se dispone de anticuerpos en el mercado. Esta etiqueta está típicamente fusionada al polipéptido cuando se expresa el polipéptido, y sirve de medio para la purificación por afinidad, o la detección, de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA a partir de la célula hospedadora. La purificación por afinidad se puede llevar a cabo, por ejemplo, mediante cromatografía en columna con anticuerpos contra la etiqueta como matriz de afinidad. Opcionalmente, la etiqueta se puede retirar posteriormente de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA purificada por diferentes medios, tales como con determinadas peptidasas para que la escindan.

Las secuencias flanqueantes pueden ser homólogas (a saber, de la misma especie y/o cepa que la célula hospedadora), heterólogas (a saber, de una especie diferente de la especie o cepa de la célula hospedadora), híbridas (a saber, una combinación de secuencias flanqueantes con más de un origen), sintéticas o nativas. Como tal, el origen de una secuencia flanqueante puede ser cualquier organismo procariota o eucariota, cualquier organismo vertebrado o invertebrado, o cualquier planta, siempre y cuando la secuencia flanqueante sea funcional

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en la maquinaria de la célula hospedadora, y se pueda activar con dicha maquinaria.

Las secuencias flanqueantes útiles en los vectores de esta invención se pueden obtener mediante cualquiera de los muchos procedimientos bien conocidos en la técnica. Típicamente, las secuencias flanqueantes útiles de la presente memoria se habrán identificado previamente mediante el mapeo y/o mediante digestión con endonucleasas de restricción y, de esta forma, se puede aislar del tejido adecuado con las endonucleasas de restricción adecuadas. En algunos casos, se puede conocer la secuencia nucleotídica completa de una secuencia flanqueante. Aquí, la secuencia flanqueante se puede sintetizar con los procedimientos descritos en la presente memoria para la síntesis o clonación de ácidos nucleicos.

Tanto si se conoce toda o sólo una parte de la secuencia flanqueante, se puede obtener por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y/o por cribado de una genoteca con una sonda adecuada, tal como un oligonucleótido y/o un fragmento de secuencia flanqueante de la misma especie o de una especie diferente. Cuando no se conoce la secuencia flanqueante, un fragmento de ADN que contiene una secuencia flanqueante se puede aislar a partir de un trozo de ADN más grande que puede contener, por ejemplo, una secuencia codificante o incluso uno o varios genes más. El aislamiento se puede realizar mediante la digestión con endonucleasas de restricción para producir el fragmento de ADN adecuado seguido del aislamiento por purificación en gel de agarosa, cromatografía en columna de Qiagen® (Chatsworth, CA) y otros métodos conocidos por el experto en la técnica. La selección de las enzimas adecuadas para realizar este propósito le resultará fácil de entender al experto en la técnica.

Un origen de replicación es típicamente una parte de los vectores de expresión procariotas comprados en el mercado y el origen ayuda a la amplificación del vector en una célula hospedadora. Si el vector elegido no contiene un sitio para el origen de replicación, se puede sintetizar químicamente basándose en una secuencia conocida y ligarlo al vector. Por ejemplo, el origen de replicación del plásmido pBR322 (New England Biolabs, Beverly, MA) es adecuado para la mayoría de las bacterias gramnegativas y muchos orígenes víricos (p. ej., de SV40, de polioma, de adenovirus, de virus de la estomatitis vesicular (VSV) o de papilomavirus tales como el HPV o el BPV) son útiles como vectores de clonación para las células de mamífero. Por lo general, el componente del origen de replicación no se necesita para los vectores de expresión de mamíferos (por ejemplo, el origen del SV40 a menudo se utiliza sólo porque también contiene el promotor temprano del virus).

Una secuencia de terminación de la transcripción típicamente se localiza en 3' del extremo de una región codificante polipeptídica y sirve para terminar la transcripción. Lo normal es que una secuencia de terminación de la transcripción en las células procariotas sea un fragmento rico en G-C seguido de una secuencia de poli-T. Aunque la secuencia se clone con facilidad a partir de una genoteca o incluso se puede comprar en el mercado como parte de un vector, también se puede sintetizar con facilidad mediante los procedimientos para la síntesis de ácidos nucleicos, tales como los descritos en la presente memoria.

Un gen marcador de selección codifica una proteína necesaria para la supervivencia y el crecimiento de una célula hospedadora que crece en un medio de cultivo selectivo. Los genes marcadores de selección típicos codifican proteínas que (a) confieren resistencia a los antibióticos u otras toxinas, p. ej., ampicilina, tetraciclina o kanamicina para las células hospedadoras procariotas; (b) complementan deficiencias auxótrofas de la célula; o (c) suministran nutrientes críticos que no están disponibles en los medios definidos o complejos. Los marcadores de selección específicos son el gen de resistencia a la kanamicina, el gen de resistencia a la ampicilina y el gen de resistencia a la tetraciclina. Ventajosamente, el gen de resistencia a la neomicina también se puede utilizar para la selección en las células hospedadoras procariotas y eucariotas.

Se pueden utilizar otros genes de selección para amplificar el gen que se expresará. La amplificación es el procedimiento por el cual los genes que se necesitan para que se sintetice una proteína crítica para el crecimiento o la supervivencia celular se reiteran en tándem dentro de los cromosomas de generaciones sucesivas de células recombinantes. Los ejemplos de marcadores de selección adecuados para las células de mamífero incluyen los genes de la dihidrofolato reductasa (DHFR) y de la timidina cinasa sin promotor. Los transformantes de las células de mamífero se colocan bajo presión selectiva, en donde sólo los transformantes tienen la adaptación única para sobrevivir en virtud del gen de selección presente en el vector. Se impone la presión de selección al cultivar las células transformadas en las condiciones en las que la concentración del agente de selección en el medio se incrementa sucesivamente, lo que conduce a la amplificación del gen de selección y del ADN que codifica otro gen, tal como un anticuerpo que es una proteína de fijación a antígeno que se fija al polipéptido del IL-17RA. Como resultado, a partir del ADN amplificado se sintetizan cantidades crecientes de un polipéptido, tal como la proteína de fijación al antígeno IL-17RA.

Se suele necesitar un sitio de fijación al ribosoma para iniciar la traducción del ARNm y se caracteriza por tener una secuencia de Shine-Dalgarno (procariotas) o una secuencia de Kozak (eucariotas). El elemento se localiza típicamente en 3' del promotor y en 5' de la secuencia codificante del polipéptido a expresar.

En algunos casos, tales como cuando se desea la glucosilación en un sistema de expresión de la célula

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hospedadora eucariota, se puede manipular las diferentes pre-o prosecuencias para mejorar la glucosilación o el rendimiento. Por ejemplo, se puede alterar el sitio de escisión de la peptidasa de un péptido señal concreto o añadir prosecuencias, que también pueden afectar a la glucosilación. El producto proteico final puede tener, en la posición –1 (respecto al primer aminoácido de la proteína madura) uno o más aminoácidos adicionales nuevos para la expresión, que pueden no haberse retirado totalmente. Por ejemplo, el producto proteico final puede llevar unido al extremo amino uno o dos restos aminoacídicos hallados en el sitio de escisión de la peptidasa. Otra alternativa es usar algunos sitios de escisión enzimática que pueden dar lugar a una forma ligeramente truncada del polipéptido deseado, si la enzima corta en tal zona dentro del polipéptido maduro.

Los vectores de expresión y de clonación de la invención contendrán típicamente un promotor que es reconocido por el organismo hospedador y que está operativamente unido a la molécula que codifica la proteína de fijación al antígeno IL-17RA. Los promotores son secuencias que no se transcriben y que se localizan delante (a saber, en 5') del codón de inicio de un gen estructural (por lo general, a menos de aproximadamente 100 a 1000 pb), y que controlan la transcripción del gen estructural. Los promotores se agrupan convencionalmente en una de estas dos clases: promotores inducibles y promotores constitutivos. Los promotores inducibles inician niveles crecientes de la transcripción a partir del ADN bajo su control en respuesta a algún cambio en las condiciones de cultivo, tal como la presencia o la ausencia de un nutriente o un cambio de temperatura. Los promotores constitutivos, por otra parte, transcriben de manera uniforme el gen al que están unidos operativamente, es decir, con poco o ningún control sobre la expresión génica. Se conoce bien un gran número de promotores reconocidos por muchas posibles células hospedadoras. Un promotor adecuado está operativamente unido al ADN que codifica la cadena pesada o la cadena ligera que comprende una proteína de fijación al antígeno IL-17RA de la divulgación al retirar el promotor desde el ADN original mediante la digestión con enzimas de restricción e introducir en el vector la secuencia promotora deseada.

También se conocen bien en la técnica los promotores adecuados para ser usados con levaduras hospedadoras. Los potenciadores de levadura se utilizan ventajosamente con los promotores de levadura. Se conocen bien los promotores adecuados para ser usados con células hospedadoras de mamífero e incluyen, pero sin limitarse a ellos, los obtenidos de los genomas víricos, tales como el virus del polioma, virus de la difteroviruela aviar, adenovirus (tal como al adenovirus 2), virus del papiloma bovino, virus del sarcoma aviar, citomegalovirus, retrovirus, virus de la hepatitis B y más preferiblemente el virus 40 del simio (SV40). Otros promotores de mamífero adecuados incluyen los promotores de mamíferos heterólogos, por ejemplo, promotores de choque térmico y el promotor de la actina.

Otros promotores que pueden ser de interés incluyen, pero sin limitarse a ellos: promotor temprano de SV40 (Benoist y Chambon, 1981, Nature 290: 304-310); promotor del CMV (Thornsen et al., 1984, Proc. Natl. Acad. USA. 81: 659-663); el promotor contenido en la repetición terminal larga en 3' del virus del sarcoma de Rous (Yamamoto et al., 1980, Cell 22: 787-797); promotor de la timidina cinasa de herpes (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 1444-1445); promotor y secuencias reguladoras del gen de la metalotionina (Prinster et al., 1982, Nature 296: 39-42); y promotores procariotas tales como el promotor de la β-lactamasa (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 3727-3731); o el promotor de tac (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80: 21-25). También son de interés las siguientes regiones de control transcripcional de animales, que muestran especificidad de tejido y que se han utilizado en los animales transgénicos: la región de control del gen I de la elastasa que es activa en las células acinares pancreáticas (Swift et al., 1984, Cell 38: 639-646; Ornitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50: 399-409; MacDonald, 1987, Hepatology 7. 425-515); la región de control del gen de la insulina que está activa en las células β pancreáticas (Hanahan, 1985, Nature Cell 38: 647-658; Adames et al., 1985, Nature 318: 533-538; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7: 1436-1444); la región de control del virus del tumor de mama de ratón que está activo en las células testiculares y de mama, linfocitos y mastocitos (Leder et al., 1986, Cell 45: 485-495); la región de control del gen de la albúmina que está activo en el hígado (Pinkert et al., 1987, Genes and Devel. 1: 268-276); la región de control del gen de la α-feto-proteína que está activado en el hígado (Krumlauf et al., Mol. Cell. Biol. 5: 1639-1648; Hammer et al., 1987, Science 253: 53-58); la región de control del gen de la antitripsina α1 que está activo en el hígado (Kelsey et al., 1987, Genes and Devel. 1:

161: 171); la región de control del gen de la globina β que está activo en las células mieloides (Mogram et al., 1985, Nature, 315: 338-340; Kollias et al., 1986, Cell 46: 89-94); la región de control del gen de la proteína básica de la mielina que está activo en los oligodendrocitos del cerebro (Readhead et al., 1987, Cell 48: 703-712); la región de control del gen de la cadena ligera 2 de la miosina que está activo en el músculo esquelético (Sani, 1985, Nature

314: 283-286); y la región de control del gen de la gonadoliberina que está activo en el hipotálamo (Mason et al., 1986, Science 234: 1372-1378).

En el vector se puede insertar una secuencia potenciadora para incrementar en los eucariotas superiores la transcripción del ADN que codifica la cadena ligera o la cadena pesada que comprende una proteína de fijación al antígeno IL-17RA de la divulgación. Los potenciadores son elementos que actúan en cis del ADN, normalmente de aproximadamente 10 a 300 pb de longitud, que actúan sobre el promotor para incrementar la transcripción. Los potenciadores son relativamente independientes en cuanto a la orientación y a la posición, al haberse localizado tanto en 5' como en 3' de la unidad de transcripción. Se conocen varias secuencias potenciadoras de genes de

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mamífero (p. ej., globina, elastasa, albúmina, α-feto-proteína e insulina). Sin embargo, lo típico es utilizar un potenciador de un virus. El potenciador del SV40, el potenciador del promotor temprano del citomegalovirus, el potenciador del polioma y los potenciadores del adenovirus que se conocen en la técnica son elementos potenciadores de ejemplo para la activación de los promotores eucariotas. Aunque un potenciador se puede posicionar en el vector bien en 5' o bien en 3' de una secuencia codificante, se coloca típicamente en un sitio en 5' del promotor. Una secuencia que codifica una secuencia señal nativa o heteróloga (secuencia líder o péptido señal) se puede incorporar en un vector de expresión para favorecer la secreción extracelular del anticuerpo. La elección del péptido señal o líder depende del tipo de células hospedadoras en las que el anticuerpo se ha de producir, y una secuencia señal heteróloga puede reemplazar la secuencia señal nativa. Los ejemplos de péptidos señal que son funcionales en las células hospedadoras de mamíferos incluyen los siguientes: la secuencia señal para la interleucina 7 (IL-7) descrita en la patente de los EE. UU. n.º 4.965.195; la secuencia señal para el receptor de la interleucina 2 descrita en Cosman et al., 1984, Nature, 312: 768; el péptido señal del receptor de la interleucina 4 descrito en la patente europea n.º EP 0 367 566; el péptido señal del receptor de tipo I de la interleucina 1 descrito en la patente de los EE. UU. n.º 4.968.607; el péptido señal del receptor de tipo II de la interleucina 1 descrito en la patente europea n.º EP 0 460 846.

Los vectores de la expresión de la invención se podrían construir a partir de un vector de partida, tal como un vector disponible en el mercado. Tales vectores pueden o no contener todas las secuencias flanqueantes deseadas. Cuando una o más de las secuencias flanqueantes descritas en la presente memoria ya no están presentes en el vector, se pueden obtener individualmente y ligarlas al vector. El experto en la técnica conoce bien los procedimientos utilizados para obtener cada una de las secuencias flanqueantes.

Después de haber construido el vector y de haberle insertado en el sitio adecuado del vector una molécula de ácido nucleico que codifica una cadena ligera, una cadena pesada, o una cadena ligera y una cadena pesada que comprende una secuencia de fijación al antígeno IL-17RA, el vector completado se puede insertar en una célula hospedadora adecuada para la amplificación y/o expresión del polipéptido. La transformación de un vector de expresión para una proteína de fijación al antígeno IL-17RA en una célula hospedadora seleccionada se puede realizar mediante los procedimientos bien conocidos que incluyen la transfección, la infección, la coprecipitación con fosfato de calcio, la electroporación, la microinyección, la lipofección, la transfección mediada por DEAE-dextrano u otras técnicas conocidas. El procedimiento seleccionado dependerá en parte del tipo de célula hospedadora a utilizar. Estos procedimientos y otros procedimientos adecuados los conoce bien el experto en la técnica y se presentan en, por ejemplo, Sambrook et al., 2001, véase más arriba.

Una célula hospedadora, cuando se cultiva en las condiciones adecuadas, sintetiza una proteína de fijación al antígeno IL-17RA que posteriormente se puede recoger del medio de cultivo (si la célula hospedadora la secreta al medio) o directamente de la célula hospedadora que lo produce (si no se secreta). La selección de una célula hospedadora adecuada dependerá de distintos factores, tales como los niveles de expresión deseados, las modificaciones de polipéptidos que son deseables o necesarias para la actividad (tales como la glucosilación o la fosforilación) y que se pliegue con facilidad en una molécula biológicamente activa. Una célula hospedadora puede ser eucariota o procariota.

Se conocen bien en la técnica las líneas celulares de mamífero disponibles como hospedadoras para la expresión e incluyen, pero sin limitarse a ellas, líneas celulares inmortalizadas disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC), y cualquier línea celular utilizada en el sistema de expresión conocido en la técnica se puede utilizar para fabricar polipéptidos recombinantes de la divulgación. En general, las células hospedadoras se transforman con un vector de expresión recombinante que comprende ADN que codifica un polipéptido del anticuerpo anti-IL-17RA deseado. Entre las células hospedadoras que se pueden emplear están los procariotas, la levadura o células eucariotas superiores. Los procariotas incluyen organismos gramnegativos o grampositivos, por ejemplo, E. coli o bacilos. Las células eucariotas superiores incluyen células de insectos y líneas celulares establecidas de origen mamífero. Los ejemplos de líneas celulares hospedadoras adecuadas de mamífero incluyen la línea COS-7 de células de riñón de mono (ATCC CRL 1651) (Gluzman et al., 1981, Cell 23: 175), células L, células 293, células C127, células 3T3 (ATCC CCL 163), células de ovario de hámster chino (CHO) o sus derivados, tales como CHO de Veggie y las líneas celulares relacionadas que crecen en un medio sin suero (Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28: 31), células HeLa, líneas celulares BHK (ATCC CRL 10) y la línea celular CVI/EBNA procedente de la línea de células de riñón del mono verde africano CVI (ATCC CCL 70) como se describe en McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821, células de riñón embrionario humano, tales como las células 293, 293 EBNA o MSR 293, las células A431 epidérmicas humanas, las células Colo205 humanas, otras líneas celulares de primates transformadas, células diploides normales, cepas celulares procedentes del cultivo in vitro de tejido primario, explantes primarios, HL-60, U937, células HaK o Jurkat. Opcionalmente, las líneas celulares de mamífero tales como HepG2/3B, KB, NIH 3T3 o S49, por ejemplo, se pueden utilizar para la expresión del polipéptido cuando es deseable utilizar el polipéptido en diferentes ensayos de transducción de la señal o de indicadores. Otra alternativa sería que se sintetizara el polipéptido en los eucariotas inferiores, tales como la levadura, o en los procariotas tales como las bacterias. Las levaduras adecuadas incluyen Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, cepas de Kluyveromyces, Candida o cualquier cepa de levadura capaz de expresar los polipéptidos heterólogos. Las cepas bacterianas adecuadas incluyen Escherichia coli, Bacillus subtilis,

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Salmonella typhimurium o cualquier cepa bacteriana capaz de expresar los polipéptidos heterólogos. Si el polipéptido se sintetiza en la levadura o en las bacterias, podría ser deseable modificar el polipéptido producido en ellas, por ejemplo, mediante fosforilación o glucosilación de los sitios adecuados, para obtener el polipéptido funcional. Tales añadidos covalentes se pueden realizar con los procedimientos químicos o enzimáticos conocidos. El polipéptido también se puede producir operativamente al unir el ácido nucleico aislado de la invención a las secuencias de control adecuadas en uno o más vectores de expresión de insecto y emplear un sistema de expresión de insecto. Los materiales y los procedimientos para los sistemas de expresión en baculovirus/células de insecto están disponibles en el mercado en forma de kit de, p. ej., Invitrogen, San Diego, EE. UU. (el kit MaxBac®) y tales procedimientos se conocen bien en la técnica, como se describe en Summers y Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin n.º 1555 (1987), y Luckow y Summers, Bio/Technology 6: 47 (1988). Los sistemas de traducción acelulares también se podrían emplear para producir polipéptidos que utilizan los ARN procedentes de construcciones de ácido nucleico descritos en la presente memoria. Los vectores de clonación y expresión adecuados para el uso con células hospedadoras bacterianas, fúngicas, de levadura y de mamíferos se describen en Pouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, Nueva York, 1985). Una célula hospedadora que comprende un ácido nucleico aislado de la invención, preferiblemente unido operativamente a al menos una secuencia de control de la expresión, es una «célula hospedadora recombinante».

En ciertas realizaciones, las líneas celulares se pueden seleccionar mediante la determinación de qué líneas celulares tienen niveles de expresión altos y producen constitutivamente proteínas de fijación a antígeno con propiedades de fijación al IL-17RA. En otra realización se puede seleccionar una línea celular de la línea de linfocitos B que no fabrica su propio anticuerpo, pero que tiene capacidad para fabricar y secretar un anticuerpo heterólogo.

Identificación de los dominios del IL-17RA humano a los que se unen los anticuerpos neutralizantes

Los ejemplos 14 a 17 describen diferentes estudios que esclarecen los dominios del IL-17RA humano que lo neutralizan al unirse los Acm contra el IL-17RA. Estos dominios se denominan determinantes neutralizantes. Un determinante neutralizante es un tramo contiguo de IL-17RA que, cuando se muta, afecta negativamente a la fijación de al menos uno de los anticuerpos neutralizantes descritos en la presente memoria. Un determinante neutralizante comprende al menos un epítopo. Un determinante neutralizante puede tener características estructurales primarias, secundarias, terciarias y/o cuaternarias. Un anticuerpo neutralizante es cualquiera de los anticuerpos descritos en la presente memoria que se fija específicamente al IL-17RA humano e inhibe la fijación de la IL-17A y/o de la IL-17F y por ende inhibe la señalización y/o actividad biológica de IL-17RA. Los ejemplos de los anticuerpos neutralizantes incluyen los anticuerpos que comprenden AML1/AMH1 (SEQ ID NO: 27/SEQ ID NO: 1), AML2/AMH2 (SEQ ID NO: 28/SEQ ID NO: 2), AML3/AMH3 (SEQ ID NO: 29/SEQ ID NO: 3), AML4/AMH4 (SEQ ID NO: 30/SEQ ID NO: 4), AML5/AMH5 (SEQ ID NO: 31/SEQ ID NO: 5), AML6/AMH6 (SEQ ID NO: 32/SEQ ID NO: 6), AML7/AMH7 (SEQ ID NO: 33/SEQ ID NO: 7), AML8/AMH8 (SEQ ID NO: 34/SEQ ID NO: 8), AML9/AMH9 (SEQ ID NO: 35/SEQ ID NO: 9), AML10/AMH10 (SEQ ID NO: 36/SEQ ID NO: 10), AML11/AMH11 (SEQ ID NO: 37/SEQ ID NO: 11), AML12/AMH12 (SEQ ID NO: 38/SEQ ID NO: 12), AML13/AMH13 (SEQ ID NO: 39/SEQ ID NO: 13), AML14/AMH14 (SEQ ID NO: 40/SEQ ID NO: 14), AML15/AMH15 (SEQ ID NO: 41/SEQ ID NO: 15), AML16/AMH16 (SEQ ID NO: 42/SEQ ID NO: 16), AML17/AMH17 (SEQ ID NO: 43/SEQ ID NO: 17), AML18/AMH18 (SEQ ID NO: 44/SEQ ID NO: 18), AML19/AMH19 (SEQ ID NO: 45/SEQ ID NO: 19), AML20/AMH20 (SEQ ID NO: 46/SEQ ID NO: 20), AML21/AMH21 (SEQ ID NO: 47/SEQ ID NO: 21), AML22/AMH22 (SEQ ID NO: 48/SEQ ID NO: 22), AML23/AMH23 (SEQ ID NO: 49 o SEQ ID NO: 50/SEQ ID NO: 23), AML24/AMH24 (SEQ ID NO: 51/SEQ ID NO: 24), AML25/AMH25 (SEQ ID NO: 52/SEQ ID NO: 25), AML26/AMH26 (SEQ ID NO: 53/SEQ ID NO: 26), así como fragmentos de fijación al IL-17RA de los mismos y combinaciones de los mismos.

Otras realizaciones de anticuerpos neutralizantes de acuerdo con la invención incluyen anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA humano e inhiben la fijación de la IL-17A y/o de la IL-17F a éste y que activen al IL17RA, o a un complejo heterodimérico de IL-17RA e IL-17RC. Otras realizaciones incluyen anticuerpos de acuerdo con la invención que se fijan específicamente al IL-17RA humano e inhiben la fijación de un heterodímero IL-17A/IL17F a éste y que activen al IL-17RA, o a un complejo heterodimérico de IL-17RA e IL-17RC. Otras realizaciones incluyen anticuerpos de acuerdo con la invención que se fijan específicamente al IL-17RA humano e inhiben parcial

o completamente la posibilidad de que el IL-17RA forme un complejo receptor funcional homodimérico o heterodimérico, tal como, pero sin limitarse a él, el complejo IL-17RA—IL-17RC. Otras realizaciones incluyen anticuerpos de acuerdo con la invención que se fijan específicamente al IL-17RA humano e inhiben parcial o completamente la posibilidad de que el IL-17RA forme un complejo receptor funcional homodimérico o heterodimérico, tal como, pero sin limitarse a él, el complejo IL-17RA—IL-17RC, y no necesariamente inhibe la fijación de la IL-17A y/o de la IL-17F, o de un heterodímero IL-17A/IL-17F, al IL-17RA o a un complejo receptor heterodimérico del IL-17RA.

Ejemplos adicionales de anticuerpos neutralizantes incluyen anticuerpos que comprenden al menos una CDR de los anticuerpos que comprenden AML1/AMH1 (SEQ ID NO: 27/SEQ ID NO: 1), AML2/AMH2 (SEQ ID NO: 28/SEQ ID NO: 2), AML3/AMH3 (SEQ ID NO: 29/SEQ ID NO: 3), AML4/AMH4 (SEQ ID NO: 30/SEQ ID NO: 4), AML5/AMH5 (SEQ ID NO: 31/SEQ ID NO: 5), AML6/AMH6 (SEQ ID NO: 32/SEQ ID NO: 6), AML7/AMH7 (SEQ ID NO: 33/SEQ ID NO: 7), AML8/AMH8 (SEQ ID NO: 34/SEQ ID NO: 8), AML9/AMH9 (SEQ ID NO: 35/SEQ ID NO: 9),

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AML10/AMH10 (SEQ ID NO: 36/SEQ ID NO: 10), AML11/AMH11 (SEQ ID NO: 37/SEQ ID NO: 11), AML12/AMH12 (SEQ ID NO: 38/SEQ ID NO: 12), AML13/AMH13 (SEQ ID NO: 39/SEQ ID NO: 13), AML14/AMH14 (SEQ ID NO: 40/SEQ ID NO: 14), AML15/AMH15 (SEQ ID NO: 41/SEQ ID NO: 15), AML16/AMH16 (SEQ ID NO: 42/SEQ ID NO: 16), AML17/AMH17 (SEQ ID NO: 43/SEQ ID NO: 17), AML18/AMH18 (SEQ ID NO: 44/SEQ ID NO: 18), AML19/AMH19 (SEQ ID NO: 45/SEQ ID NO: 19), AML20/AMH20 (SEQ ID NO: 46/SEQ ID NO: 20), AML21/AMH21 (SEQ ID NO: 47/SEQ ID NO: 21), AML22/AMH22 (SEQ ID NO: 48/SEQ ID NO: 22), AML23/AMH23 (SEQ ID NO: 49 o SEQ ID NO: 50/SEQ ID NO: 23), AML24/AMH24 (SEQ ID NO: 51/SEQ ID NO: 24), AML25/AMH25 (SEQ ID NO: 52/SEQ ID NO: 25), AML26/AMH26 (SEQ ID NO: 53/SEQ ID NO: 26), así como fragmentos de fijación al IL-17RA de los mismos y combinaciones de los mismos. Ver Tabla 1.

En las figuras 16A y 16B se muestra que los anticuerpos A: AMH11/AML11, B: AMH4/AML4, C: AMH8/AML8,

D: AMH7/AML7, E: AMH6/AML6, F: AMH10/AML10 y G: AMH18/AML18 compitieron entre sí por fijarse al IL-17RA humano y se clasificaron en un grupo definido (cesta 1). En general, los anticuerpos I: AMH22/AML22, J: AMH23/AML23, K: AMH14/AML14, L: AMH19/AML19, M: AMH12/AML12, N: AMH17/AML17, O: AMH16/AML16 compitieron entre sí para fijarse al IL-17RA humano y como consecuencia se clasificaron en un grupo diferente (cesta 3). En términos generales, los anticuerpos de la cesta 1 no compitieron con los anticuerpos de la cesta 3. El anticuerpo H: AMH1/AML1 era único en su patrón de competición y formó la cesta 2, pero es bastante similar a la cesta 3. El anticuerpo P: AMH26/AML26 formó la cesta 4 y mostró poca competición cruzada con cualquiera de los otros anticuerpos, lo que sugiere que hay un determinante neutralizante único para este anticuerpo. Los anticuerpos

Q: AMH21/AML21 y R: AMH20/AML20 mostraron unos patrones de competición individualmente únicos, pero de considerables similitudes con los anticuerpos de la cesta 3, y formaron las cestas 5 y 6, respectivamente. Este procedimiento identificó grupos de anticuerpos que se fijan a diferentes determinantes neutralizantes y proporciona la prueba de varias especies dentro de un subgénero de anticuerpos con competición cruzada.

El ejemplo 16 describe el uso de proteínas quiméricas del IL-17RA de humano y de ratón para descubrir los determinantes neutralizantes del IL-17RA humano. En la figura 19 se muestra que se identificaron al menos tres determinantes neutralizantes basándose en las regiones que afectan a la fijación de los anticuerpos neutralizantes contra el IL-17RA, a saber, el dominio B que abarca los aminoácidos 75 a 96 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431), el dominio C que abarca los aminoácidos 128 a 154 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431) y el dominio D que abarca los aminoácidos 176 a 197 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431). El dominio B que abarca los aminoácidos 75 a 96 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431) afectó negativamente a la fijación de los anticuerpos neutralizantes AMH1/AML1 y AMH23/AML23. El dominio C que abarca los aminoácidos 128 a 154 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431) afectó negativamente la fijación de los anticuerpos neutralizantes AMH22/AML22 y AMH23/AML23. El dominio D que abarca los aminoácidos 176 a 197 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431) afectó negativamente a la fijación de los anticuerpos neutralizantes AMH1/AML1, AMH22/AML22, AMH14/AML14, AMH19/AML19, AMH23/AML23, AMH21/AML21 y AMH20/AML20. Así pues, los dominios B, C y D se consideran determinantes neutralizantes.

El ejemplo 17 describe el uso de técnicas de barrido con arginina para esclarecer además los dominios del IL-17R humano al que se fijan los anticuerpos neutralizantes contra el IL-17RA. En la figura 22 se presenta un resumen del barrido con arginina, del encestado y de los datos de las quimeras. La metodología de barrido con arginina identificó varios determinantes neutralizantes: AMH18/AML18 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 220 a 284 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431), AMH1/AML1 se fijó a un dominio centrado en el resto de aminoácidos 152 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH22/AML22 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 152 a 198 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH14/AML14 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 152 a 297 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH19/AML19 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 152 a 186 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH23/AML23 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 97 a 297 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH26/AML26 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 138 a 270 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH21/AML21 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 113 a 198 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); y AMH20/AML20 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 152 a 270 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431).

Todos los restos mostrados en la figura 22 se ha demostrado que reducen significativamente o eliminan esencialmente la fijación de un anticuerpo monoclonal humano neutralizante que se fija específicamente al IL-17RA humano.

La divulgación también se refiere a un anticuerpo, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo que se fija específicamente a IL-17RA y compite para fijarse con el anticuerpo AMH14/AML14.

Las realizaciones pueden incluir un anticuerpo, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo que se fija específicamente a IL-17RA y compite para fijarse con el anticuerpo AMH14/AML14.

Las realizaciones pueden incluir un anticuerpo, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo que se fija específicamente a IL-17RA humano de SEQ ID NO:431 pero no se fija específicamente a un polipéptido quimérico que consiste de la SEQ ID NO:434. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a IL-17RA humano de SEQ ID NO:431 pero no se fija específicamente a un

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polipéptido quimérico que consiste de la SEQ ID NO:434. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo que se fija específicamente a IL-17RA humano de SEQ ID NO:431 pero no se fija específicamente a un polipéptido quimérico que consiste de la SEQ ID NO:436.

Las realizaciones pueden incluir un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 75 a 96 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 128 a 154 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 176 a 197 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 152 a 297 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 220 a 284 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 152 a 198 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 152 a 186 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 97 a 297 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 138 a 270 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 113 a 198 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante que comprende los aminoácidos 152 a 270 de la SEQ ID NO: 431 del IL-17RA humano.

Realizaciones adicionales pueden incluir un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija al IL-17RA humano de SEQ ID NO: 431, pero que no se fija a dicho IL-17RA que tiene un aminoácido sustituido por arginina en alguna de E97R, E113R, S115R, H138R, D152R, D154R, E156R, K166R, Q176R, S177R, D184R, E186R, S198R, H215R, S220R, T228R, T235R, E241R, H243R, L270R, Q284R, H297R de la SEQ ID NO: 431, tal como un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija al IL-17RA humano de SEQ ID NO: 431, pero que no se fija a dicho IL-17RA que tiene un aminoácido sustituido por arginina en alguna de D152R, D154R, E156R, D184R, E186R, H297R de la SEQ ID NO: 431, tal como un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL17RA del mismo, que se fija al IL-17RA humano de SEQ ID NO: 431, pero que no se fija a dicho IL-17RA que tiene un aminoácido sustituido por arginina en D152R de la SEQ ID NO: 431.

Realizaciones adicionales incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un epítopo definido por cualquiera de los aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186, H297 de la SEQ ID NO: 431. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un epítopo definido por al menos dos aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en: D152, D154, E156, D184, E186, H297 de la SEQ ID NO: 431. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un epítopo definido por al menos tres aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en: D152, D154, E156, D184, E186, H297 de la SEQ ID NO: 431. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un epítopo definido por al menos cuatro aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en: D152, D154, E156, D184, E186, H297 de la SEQ ID NO: 431. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL17RA del mismo, que se fija específicamente a un epítopo definido por al menos cinco aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en: D152, D154, E156, D184, E186, H297 de la SEQ ID NO: 431. Las realizaciones incluyen un anticuerpo, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un epítopo definido por los aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186, H297 de la SEQ ID NO: 431.

En la presente se describen una variedad de realizaciones que incluyen, pero no se limitan a, las siguientes realizaciones ejemplares que no se incluyen necesariamente en la invención. Realización 101: un anticuerpo monoclonal aislado, o fragmento de fijación al IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a IL-17RA y que compite para fijarse con un anticuerpo seleccionado del grupo consistente de:

A. un anticuerpo aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende

a.: una secuencia del dominio variable de cadena ligera que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del dominio variable de cadena ligera de AML2, 3, 5, 9, 10, 12, 14-17, y 19-25 (SEQ ID NO:28, 29, 31, 35, 36, 38, 40-43, y 45-53, respectivamente);

b.: una secuencia del dominio variable de cadena pesada que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del dominio variable de cadena pesada de AMH2, 3, 5, 9, 10, 12, 14-17, y 19-25 (SEQ ID NO:2, 3, 5, 9, 10, 12, 14-17, y 19-25, respectivamente);

c.: el dominio variable de cadena ligera de (a) y el dominio variable de cadena pesada de (b); donde dicho anticuerpo se fija específicamente con IL-17RA humano;

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B. un anticuerpo aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende

a.: una CDR1 (SEQ ID NO:188), CDR2 (SEQ ID NO:189), CDR3 (SEQ ID NO:190) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:110), CDR2 (SEQ ID NO:111), CDR3 (SEQ ID NO:112) de cadena pesada del anticuerpo AM-2;

b.: una CDR1 (SEQ ID NO:191), CDR2 (SEQ ID NO:192), CDR3 (SEQ ID NO:193) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:113), CDR2 (SEQ ID NO:114), CDR3 (SEQ ID NO:115) de cadena pesada del anticuerpo AM-3;

c.: una CDR1 (SEQ ID NO:197), CDR2 (SEQ ID NO:198), CDR3 (SEQ ID NO:199) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:119), CDR2 (SEQ ID NO:120), CDR3 (SEQ ID NO:121) de cadena pesada del anticuerpo AM-5;

d.: una CDR1 (SEQ ID NO:209), CDR2 (SEQ ID NO:210), CDR3 (SEQ ID NO:211) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:131), CDR2 (SEQ ID NO:132), CDR3 (SEQ ID NO:133) de cadena pesada del anticuerpo AM-9;

e.: una CDR1 (SEQ ID NO:212), CDR2 (SEQ ID NO:213), CDR3 (SEQ ID NO:214) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:134), CDR2 (SEQ ID NO:135), CDR3 (SEQ ID NO:136) de cadena pesada del anticuerpo AM-10;

f.: una CDR1 (SEQ ID NO:218), CDR2 (SEQ ID NO:219), CDR3 (SEQ ID NO:220) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:140), CDR2 (SEQ ID NO:141), CDR3 (SEQ ID NO:142) de cadena pesada del anticuerpo AM-12;

g.: una CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadena pesada del anticuerpo AM-14;

h.: una CDR1 (SEQ ID NO:227), CDR2 (SEQ ID NO:228), CDR3 (SEQ ID NO:229) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:149), CDR2 (SEQ ID NO:150), CDR3 (SEQ ID NO:151) de cadena pesada del anticuerpo AM-15;

i.: una CDR1 (SEQ ID NO:230), CDR2 (SEQ ID NO:231), CDR3 (SEQ ID NO:232) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:152), CDR2 (SEQ ID NO:153), CDR3 (SEQ ID NO:154) de cadena pesada del anticuerpo AM-16;

j.: una CDR1 (SEQ ID NO:233), CDR2 (SEQ ID NO:234), CDR3 (SEQ ID NO:235) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:155), CDR2 (SEQ ID NO:156), CDR3 (SEQ ID NO:157) de cadena pesada del anticuerpo AM-17;

k.: una CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:161), CDR2 (SEQ ID NO:162), CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadena pesada del anticuerpo AM-19;

l.: una CDR1 (SEQ ID NO:242), CDR2 (SEQ ID NO:243), CDR3 (SEQ ID NO:244) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:164), CDR2 (SEQ ID NO:165), CDR3 (SEQ ID NO:166) de cadena pesada del anticuerpo AM-20;

m.: una CDR1 (SEQ ID NO:245), CDR2 (SEQ ID NO:246), CDR3 (SEQ ID NO:247) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:167), CDR2 (SEQ ID NO:168), CDR3 (SEQ ID NO:169) de cadena pesada del anticuerpo AM-21;

n.: una CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO:171), CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadena pesada del anticuerpo AM-22;

o.: una CDR1 (SEQ ID NO:251), CDR2 (SEQ ID NO:252), CDR3 (SEQ ID NO:253) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:173), CDR2 (SEQ ID NO:174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23;

p.: una CDR1 (SEQ ID NO:254), CDR2 (SEQ ID NO:255), CDR3 (SEQ ID NO:256) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:173), CDR2 (SEQ ID NO:174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23;

q.: una CDR1 (SEQ ID NO:257), CDR2 (SEQ ID NO:258), CDR3 (SEQ ID NO:259) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:176), CDR2 (SEQ ID NO:177), CDR3 (SEQ ID NO:178) de cadena pesada del anticuerpo AM-24;

r.: una CDR1 (SEQ ID NO:260), CDR2 (SEQ ID NO:261), CDR3 (SEQ ID NO:262) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:179), CDR2 (SEQ ID NO:180), CDR3 (SEQ ID NO:181) de cadena pesada del anticuerpo AM-25; donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano; y

C. un anticuerpo aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende

imagen59

a.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML2/AMH2 (SEQ ID NO:28/SEQ ID NO:2);

b.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML3/AMH3 (SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:3);

c.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML5/AMH5 (SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:5);

d.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML9/AMH9 (SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:9);

e.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML10/AMH10 (SEQ ID NO:36/SEQ ID NO:10);

f.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML12/AMH12 (SEQ ID NO:38/SEQ ID NO:12);

g.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML14/AMH14 (SEQ ID NO:40/SEQ ID NO:14);

h.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML15/AMH15 (SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:15);

i.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML16/AMH16 (SEQ ID NO:42/SEQ ID NO:16);

j.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML17/AMH17 (SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:17);

k.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML19/AMH19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO:19);

l.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML20/AMH20 (SEQ ID NO:46/SEQ ID NO:20);

m.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML21/AMH21 (SEQ ID NO:47/SEQ ID NO:21);

n.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22);

o.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML23/AMH23 (SEQ ID NO:49 or SEQ ID NO:50/SEQ ID NO:23);

p.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML24/AMH24 (SEQ ID NO:51/SEQ ID NO:24);

q.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML25/AMH25 (SEQ ID NO:52/SEQ ID NO:25); donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano.

Realización 102: el anticuerpo de la realización 101, en donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de:

A. un anticuerpo aislado o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende

a.: una secuencia del dominio variable de cadena ligera que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del domino variable de cadena ligera de AML9, 14, 16, 17, 19-23v2, y 26 (SEQ ID NOs:35, 40, 42, 43, 45-50, y 53, respectivamente);

b.: una secuencia del dominio variable de cadena pesada que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del domino variable de cadena pesada de AMH9, 14, 16, 17, 19-23, y 26 (SEQ ID NOs:9, 14, 16, 17, 19-23, y 26, respectivamente);

B. un anticuerpo aislado o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende

a.: una CDR1 (SEQ ID NO:209), CDR2 (SEQ ID NO:210), CDR3 (SEQ ID NO:211) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:131), CDR2 (SEQ ID NO:132), CDR3 (SEQ ID NO:133) de cadena pesada del anticuerpo AM-9;

c.: una CDR1 (SEQ ID NO:230), CDR2 (SEQ ID NO:231), CDR3 (SEQ ID NO:232) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 152), CDR2 (SEQ ID NO:153), CDR3 (SEQ ID NO:154) de cadena pesada del anticuerpo AM-16;

d.: una CDR1 (SEQ ID NO:233), CDR2 (SEQ ID NO:234), CDR3 (SEQ ID NO:235) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:155), CDR2 (SEQ ID NO: 156), CDR3 (SEQ ID NO:157) de cadena pesada del anticuerpo AM-17;

e.: una CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO: 161), CDR2 (SEQ ID NO:162), CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadena pesada

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del anticuerpo AM-19;

f.: una CDR1 (SEQ ID NO:242), CDR2 (SEQ ID NO:243), CDR3 (SEQ ID NO:244) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:164), CDR2 (SEQ ID NO:165), CDR3 (SEQ ID NO:166) de cadena pesada del anticuerpo AM-20;

g.: una CDR1 (SEQ ID NO:245), CDR2 (SEQ ID NO:246), CDR3 (SEQ ID NO:247) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:167), CDR2 (SEQ ID NO:168), CDR3 (SEQ ID NO:169) de cadena pesada del anticuerpo AM-21;

h.: una CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO:171), CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadena pesada del anticuerpo AM-22;

i.: una CDR1 (SEQ ID NO:251), CDR2 (SEQ ID NO:252), CDR3 (SEQ ID NO:253) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:173), CDR2 (SEQ ID NO:174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23;

j.: una CDR1 (SEQ ID NO:254), CDR2 (SEQ ID NO:255), CDR3 (SEQ ID NO:256) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:173), CDR2 (SEQ ID NO:174), CDR3 (SEQ ID NO:175) de cadena pesada del anticuerpo AM-23;

k.: un domino variable a de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26); donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano; y

C. un anticuerpo aislado o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende

a.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML9/AMH9 (SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:9);

f.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML20/AMH20 (SEQ ID NO:46/SEQ ID NO:20);

g.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML21/AMH21 (SEQ ID NO:47/SEQ ID NO:21);

h.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22);

i.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML23/AMH23 (SEQ ID NO:49 o SEQ ID NO:50/SEQ ID NO:23);

j.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26); donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano.

Realización 103: el anticuerpo de la realización 101, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de:

a.: una secuencia del dominio variable de cadena ligera que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del domino variable de cadena ligera de AML12, 14, 16, 17, 19, y 22 (SEQ ID NO:38, 40, 42, 43, 45, y 48 respectivamente);

b.: una secuencia del dominio variable de cadena pesada que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del domino variable de cadena pesada de AMH12, 14, 16, 17, 19, y 22 (SEQ ID NO:12, 14, 16, 17, 19, y 22, respectivamente);

c.: una CDR1 (SEQ ID NO:230), CDR2 (SEQ ID NO:231), CDR3 (SEQ ID NO:232) de cadena ligera y

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una CDR1 (SEQ ID NO:152), CDR2 (SEQ ID NO:153), CDR3 (SEQ ID NO:154) de cadena pesada del anticuerpo AM-16;

e.: una CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:161), CDR2 (SEQ ID NO:162), CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadena pesada del anticuerpo AM-19;

f.: una CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO:171), CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadena pesada del anticuerpo AM-22; donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano; y

c.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22); donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano.

Realización 104: el anticuerpo de la realización 101, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de:

a.: una secuencia del dominio variable de cadena ligera que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del domino variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40;

b.: una secuencia del dominio variable de cadena pesada que es al menos un 80% idéntica a una secuencia del domino variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:14;

B. un anticuerpo aislado o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende una CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadena pesada; donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano; y C. un anticuerpo aislado o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende un dominio variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40 y un dominio variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:14; donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano.

Realización 105: el anticuerpo de la realización 101, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de: a. un anticuerpo humanizado; b. un anticuerpo quimérico; c. un anticuerpo recombinante; d. un anticuerpo de cadena única; e. un dianticuerpo; f. un trianticuerpo; g. un tetranticuerpo; h. un fragmento de Fab; i. un fragmento de F(ab')2; j. un anticuerpo IgD; k. un anticuerpo IgE; l, un anticuerpo IgM; m. un anticuerpo IgG1; n. un anticuerpo IgG2; o. un anticuerpo IgG3; y p un anticuerpo IgG4. Realización 106: el anticuerpo de la realización 105, donde dicho anticuerpo inhibe a IL-17A humano de fijarse a IL-17RA humano. Realización 107: el anticuerpo de la realización 106, donde dicho anticuerpo inhibe a IL-17A e IL17F de fijarse a IL-17RA humano. Realización 108: el anticuerpo de la realización 106, donde dicho anticuerpo inhibe a IL-17A o IL-17F de fijarse a IL-17RA humano. Realización 109: un anticuerpo monoclonal aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, seleccionado del grupo consistente de:

a) un anticuerpo monoclonal que se fija específicamente a IL-17RA humano de la SEQ ID NO:431 pero no se fija específicamente a un polipéptido quimérico que consiste de la SEQ ID NO: 434; b) un anticuerpo monoclonal que se fija específicamente a IL-17RA humano de la SEQ ID NO:431 pero no se fija específicamente a un polipéptido quimérico que consiste de la SEQ ID NO: 435; y c) un anticuerpo monoclonal que se fija específicamente a IL-17RA humano de la SEQ ID NO:431 pero no se fija específicamente a un polipéptido quimérico que consiste de la SEQ ID NO: 436.

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Realización 110: un anticuerpo monoclonal aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a un determinante neutralizante seleccionado del grupo consistente de:

a) un polipéptido que comprende los aminoácidos 75-96 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano;

b) un polipéptido que comprende los aminoácidos 128-154 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano;

c) un polipéptido que comprende los aminoácidos 176-197 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano;

d) un polipéptido que comprende los aminoácidos 152-297 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano;

e) un polipéptido que comprende los aminoácidos 220-284 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano;

f) un polipéptido que comprende los aminoácidos 152-198 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano;

g) un polipéptido que comprende los aminoácidos 152-186 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano;

h) un polipéptido que comprende los aminoácidos 97-297 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano;

i) un polipéptido que comprende los aminoácidos 138-270 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano;

j) un polipéptido que comprende los aminoácidos 113-198 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano; y

k) un polipéptido que comprende los aminoácidos 152-270 de la SEQ ID NO:431 de IL-17RA humano.

Realización 111: un anticuerpo monoclonal aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a IL-17RA humana de la SEQ ID NO:431, pero que no se fija específicamente a dicha IL17RA que tenga cualquiera de las siguientes sustituciones de aminoácidos E97R, E113R, S115R, H138R, D152R, D154R, E156R, K166R, Q176R, S177R, D184R, E186R, S198R, H215R, S220R, T228R, T235R, E241R, H243R, L270R, Q284R, o H297R de la SEQ ID NO:431. Realización 112: el anticuerpo de la realización 111, donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano de la SEQ ID NO:431, pero que no se fija específicamente a dicha IL-17RA que tenga cualquiera de las siguientes sustituciones de aminoácidos D152R, D154R, E156R, D184R, E186R, o H297R de la SEQ ID NO:431. Realización 113: el anticuerpo de la realización 111, donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano de la SEQ ID NO:431, pero que no se fija específicamente a dicha IL-17RA que tenga un residuo de ácido aspártico en la posición 152 de la SEQ ID NO:431 sustituido con una arginina. Realización 114: el anticuerpo de la realización 111, donde dicho anticuerpo se fija específicamente a un epítopo definido por cualquiera de los aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186, o H297 de la SEQ ID NO:431. Realización 115: el anticuerpo de la realización 114, donde dicho anticuerpo se fija específicamente a un epítopo definido por al menos dos de los siguientes aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186, o H297 de la SEQ ID NO:431.Realización 116: el anticuerpo de la realización 114, donde dicho anticuerpo se fija específicamente a un epítopo definido por al menos tres de los siguientes aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186, o H297 de la SEQ ID NO:431. Realización 118: el anticuerpo de la realización 114, donde dicho anticuerpo se fija específicamente a un epítopo definido por al menos cinco de los siguientes aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186, o H297 de la SEQ ID NO:431. Realización 119: el anticuerpo de la realización 114, donde dicho anticuerpo se fija específicamente a un epítopo definido por los aminoácidos D152, D154, E156, D184, E186, H297 de la SEQ ID NO:431. Realización 120: un anticuerpo monoclonal aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que se fija específicamente a IL-17RA y compite para fijarse con un anticuerpo que comprende:

i. X1YGIS, donde X1 se selecciona del grupo consistente de R, S y G.

i. WISX1YX2GNTX3YAQX X5QG, donde X1 se selecciona del grupo consistente de A, X2 se selecciona del grupo consistente de N, S y K, X3 se selecciona del grupo consistente de N y K, X4 se selecciona del grupo consistente de K y N, y X5 se selecciona del grupo consistente de L y F;

i. RASQSX1X2X3X4LA, donde X1 se selecciona del grupo consistente de V e I, X2 se selecciona del grupo consistente de I y S, X3 se selecciona del grupo consistente de S y T, X4 se selecciona del grupo

consistente de N y S, y X5 se selecciona del grupo consistente de A y N;

ii. RASQSX1SSNLA, donde X1 se selecciona del grupo consistente de V e I;

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i. QQYDX1WPLT, donde X1 se selecciona del grupo consistente de N, T e I;

Realización 121: el anticuerpo de la realización 120, donde dicho anticuerpo comprende

f.: una secuencia de aminoácidos de DCR2 de cadena ligera que comprende QQYDX1WPLT, donde X1 se selecciona del grupo consistente de N, T e I.

Realización 122: el anticuerpo de la realización 120, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de: a. un anticuerpo humanizado; b. un anticuerpo quimérico; c. un anticuerpo recombinante; d. un anticuerpo de cadena única; e. un dianticuerpo; f. un trianticuerpo; g. un tetranticuerpo; h. un fragmento de Fab; i. un fragmento de F(ab')2; j. un anticuerpo IgD; k. un anticuerpo IgE; l, un anticuerpo IgM; m. un anticuerpo IgG1; n. un anticuerpo IgG2; o. un anticuerpo IgG3; y p un anticuerpo IgG4. Realización 123: el anticuerpo de la realización 122, donde dicho anticuerpo inhibe IL-17A humano de fijarse a IL-17RA humano. Realización 124; el anticuerpo de la realización 122, donde dicho anticuerpo inhibe IL-17A e IL-17F humano de fijarse a IL-17RA humano. Realización 125: el anticuerpo de la realización 122, donde dicho anticuerpo inhibe IL-17A o IL-17F humano de fijarse a IL-17RA humano.

Uso de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA para propósitos diagnósticos y terapéuticos

Las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA de la invención se pueden utilizar en ensayos diagnósticos, p. ej., ensayos de fijación para detectar y/o cuantificar el IL-17RA expresado en un tejido o célula. Las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA se pueden utilizar en investigación para inspeccionar además la función del IL-17RA en la enfermedad. Las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA se pueden utilizar para inspeccionar además la función del IL-17RA en la formación de complejos receptores homodiméricos y/o heterodiméricos y la función de dichos complejos en la enfermedad. Las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA se pueden utilizar para inspeccionar adicionalmente la función de la activación del IL-17RA por los complejos del ligando IL-17 homodiméricos y/o heterodiméricos. Las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA se pueden utilizar para inspeccionar adicionalmente la función de la activación del IL-17RA por los complejos del ligando IL-17 homodiméricos y/o heterodiméricos, y cómo dichos complejos del ligando IL-17 homodiméricos y/o heterodiméricos están relacionados con la enfermedad.

Las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA de la presente divulgación se pueden utilizar en la prevención

o el tratamiento de enfermedades o afecciones relacionadas con la actividad de la IL-17A y/o de la IL-17F. Una enfermedad o afección relacionada con la lL-17A y/o con la IL-17F significa cualquier enfermedad, afección o patología cuyo comienzo en un paciente está ocasionado o empeorado por la interacción de IL-17A y/o IL-17F con el IL-17RA. La gravedad de la enfermedad, afección o patología también puede aumentar o disminuir al modular la interacción de la IL-17A y/o de la IL-17F con el IL-17RA o un complejo heterólogo que comprende el IL-17RA y el IL17RC.

Las proteínas de fijación a antígeno de la divulgación que se fijan específicamente al IL-17RA se pueden utilizar en el tratamiento de enfermedades mediadas por el IL-17RA en un paciente que lo necesita. Todos los aspectos de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA descritos a lo largo de esta especificación se pueden utilizar para la preparación de un medicamento para el tratamiento de diferentes afecciones y enfermedades descritas en la presente memoria. Además, la proteína de fijación al antígeno IL-17RA de la divulgación se puede utilizar para impedir que el IL-17RA forme un complejo con su ligando, p. ej., IL-17A y/o IL-17F o cualquier otro miembro de la familia de ligandos de la IL-17 que se fijan al IL-17RA o a un complejo heterólogo que comprende el IL-17RA y el IL-17RC, gracias a lo cual se modula la actividad biológica del IL-17RA en una célula o tejido. Así pues, las proteínas de fijación a antígeno que se fijan al IL-17RA pueden modular y/o inhibir la interacción con otros compuestos de fijación y como tales pueden tener un uso terapéutico a la hora de mejorar las enfermedades mediadas por el IL-17RA. Las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA pueden impedir que la IL-17A y/o la IL-17F se fijen al IL-17RA, lo que puede dar lugar a la alteración de la cascada de transducción de la señal inducida por IL17RA.

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En una serie de afecciones y enfermedades se ha demostrado que el incremento de la cantidad de IL-17A y/o que las señales mediadas por IL-17A intervienen en la patogenia de la enfermedad. Kolls y Linden, 2004, véase más arriba; Miossec, 2003, P. Arthritis Rheum. 48: 594-601); solicitud de patente internacional WO 2005/063290; (Cannetti et al., 2003, J. Immunol. 171: 1009-1015; Charles et al., 1999, J. Immunol. 163: 1521-1528; Cunnane et al., 2000, Online J. Rheumatol. 27: 58-63; Yoshimoto, 1998, J. Immunol. 161: 3400-3407), solicitud de patente internacional WO2005/063290, (Niederau, 1997, Online NLM), solicitud de patente internacional WO2004/002519, (Tsutsui et al., 2000, véase más arriba), (Konishi et al., 2002, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 11340-11345), Ziolkowska et al., 2000, véase más arriba, (Chabaud, 2001, Arth & Rheumatism, 44: 1293). Así pues, se dice que el IL-17RA influye en la patología de estas y otras enfermedades o afecciones descritas en la presente memoria.

Tal y como se describe en la presente memoria, un anticuerpo de rata contra el IL-17RA de ratón equivalente inhibe el curso de una enfermedad y reduce la degradación ósea y del cartílago en un modelo de roedor terapéutico y preventivo de artritis inducida por colágeno (véanse los ejemplos que vienen a continuación). Como una prueba más de la eficacia de interrumpir la vía IL-17A/IL-17RA, los ratones agénicos sin el IL-17RA son resistentes a la artritis inducida por colágeno y el tratamiento con el anticuerpo contra el IL-17RA es eficaz para la artritis inducida en los ratones agénicos sin el TNFR, lo que demuestra un efecto independiente del TNF (véase el ejemplo 6).

La inhibición del IL-17RA mediante las proteínas de fijación a antígeno descritas en la presente memoria representa un mecanismo nuevo y eficaz para inhibir los síntomas y la patología de las enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias y, en particular, la inflamación y la degradación de las articulaciones que aparece en la artritis reumatoide (AR). Los datos preclínicos y los datos de tejidos de pacientes con AR sugieren que se podría proporcionar eficacia en quienes fracasó el tratamiento inhibidor del TNF y conferir un beneficio adicional con la combinación de inhibidores del TNF, inhibidores de la IL-6 e inhibidores de la IL-1.

Las proteínas de fijación a antígeno descritas en la presente memoria se pueden utilizar en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios inhibidores del TNF para el tratamiento o la prevención de las enfermedades y trastornos descritos en la presente memoria, tales como, pero sin limitarse a ellos, todas las formas de receptores solubles del TNF que incluyen el Etanercept (tal como ENBREL®), así como todas las formas de moléculas receptoras del TNF p75 y/o p55 multiméricas o monoméricas y los fragmentos de las mismas; los anticuerpos contra el TNF humano, tales como, pero sin limitarse a ellos, Infliximab (tal como REMICADE®) y D2E7 (tal como HUMIRA®) y similares. Tales inhibidores del TNF incluyen compuestos y proteínas que bloquean la síntesis in vivo o la liberación extracelular del TNF. En una realización específica, la presente divulgación se refiere al uso de una proteína de fijación al antígeno IL-17RA en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con cualquiera de uno o varios de los siguientes inhibidores del TNF: proteínas de fijación al TNF (receptor soluble del TNF de tipo I y receptor soluble del TNF de tipo II («sTNFR»), según se define en la presente memoria), anticuerpos anti-TNF, factor estimulante de colonias de granulocitos; talidomida; BN 50730; tenidap; E 5531; tiapafant PCA 4248; nimesulida; panavir; rolipram; RP 73401; péptido T; MDL 201.449A; hidrocloruro de (1R,3S)-cis-1-[9-(2,6-diaminopurinil)]-3-hidroxi-4-ciclopenteno; (1R,3R)-trans-1-(9(2,6-diamino)purina]-3-acetoxiciclopentano; hidrocloruro de (1R,3R trans-1-(9-adenil)-3-azidociclopentano y (1R,3R)-trans-1-(6-hidroxi-purin-9-il)-3-azidociclopentano. Las proteínas de fijación al TNF se describen en la técnica (patentes europeas EP 308 378, EP 422 339, patente de Gran Bretaña GB 2 218 101, patente europea EP 393 438, solicitud de patente internacional WO 90/13575, patentes europeas EP 398 327, EP 412 486, solicitud de patente internacional WO 91/03553, patente europea EP 418 014, patente japonesa JP 127.800/1991, patente europea EP 433 900, patente de los EE. UU. n.º 5.136.021, patente de Gran Bretaña GB 2 246 569, patente europea EP 464 533, solicitudes de patente internacional WO 92/01002, WO 92/13095, WO 92/16221, patentes europeas EP 512 528, EP 526 905, solicitud de patente internacional WO 93/07863, patente europea EP 568 928, solicitudes de patente internacional WO 93/21946, WO 93/19777, patente europea EP 417 563, solicitud de patente internacional WO 94/06476 y solicitud internacional PCT publicada como WO 1998/01555.

Por ejemplo, las patentes europeas EP 393 438 y EP 422 339 enseñan las secuencias de aminoácidos y de ácido nucleico de un receptor soluble de tipo I del TNF (también conocido como «sTNFR-I» o «inhibidor del TNF de 30 kDa») y de un receptor soluble de tipo II del TNF (también conocido como «sTNFR-II» o «inhibidor del TNF de 40 kDa»), denominados en conjunto los «sTNFR», así como las formas modificadas de los mismos (p. ej., fragmentos, derivados funcionales y variantes). Las patentes europeas EP 393 438 y EP 422 339 también describen procedimientos para aislar los genes responsables de la codificación de los inhibidores, clonar el gen en vectores y tipos celulares adecuados, y expresar el gen para producir los inhibidores. Adicionalmente, se han descrito también formas polivalentes (a saber, moléculas que comprenden más de un resto activo) de sTNFR-I y sTNFR-II. En una realización, la forma polivalente se puede construir mediante el acoplamiento químico de al menos un inhibidor del TNF y otro resto con cualquier conector clínicamente aceptable, por ejemplo, polietilenglicol (solicitudes de patente internacional WO 92/16221 y WO 95/34326), mediante un conector peptídico (Neve et al., (1996) Cytokine, 8(5): 365-370, mediante el acoplamiento químico a la biotina y luego la fijación a la avidina (solicitud de patente internacional WO 91/03553) y, finalmente, combinar moléculas de anticuerpos quiméricos (patente de los EE. UU. n.º 5.116.964, solicitudes de patente internacional WO 89/09622 y WO 91/16437, y patente europea EP 315062).

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Los anticuerpos anti-TNF incluyen el anticuerpo Fab MAK 195F (Holler et al., (1993) 1st International Symposium on Cytokines in Bone Marrow Transplantation, 147); anticuerpo monoclonal anti-TNF CDP 571 (Rankin et al., (1995) British Journal of Rheumatology, 34: 334-342); anticuerpo monoclonal contra el factor de la necrosis antitumoral murino de BAY X 1351 (Kieft et al., (1995), 7th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, página 9); anticuerpo monoclonal anti-TNF CenTNF cA2 (Elliott et al., (1994), Lancet, 344: 1125-1127 y Elliott et al., (1994), Lancet, 344: 1105-1110).

Las proteínas de fijación a antígeno descritas en la presente memoria se pueden utilizar en combinación con todas las formas de inhibidores de IL-1, tales como, pero sin limitarse a ellos, kineret (por ejemplo, ANAKINRA®). El antagonista del receptor de la interleucina-1 (IL-1ra) es una proteína humana que actúa como inhibidor natural de la interleucina-1. Los antagonistas del receptor de la interleucina-1, así como los procedimientos para la fabricación y los procedimientos para utilizar los mismos, se describen en la patente de los EE. UU. n.º 5.075.222; las solicitudes de patente internacional WO 91/08285 y WO 91/17184; la patente AU 9173636; las solicitudes de patente internacional WO 92/16221, WO 93/21946, WO 94/06457, WO 94/21275; la patente francesa FR 2706772; la solicitud de patente internacional WO 94/21235; patente alemana DE 4219626; y las solicitudes de patente internacional WO 94/20517, WO 96/22793 y WO 97/28828. Las proteínas incluyen antagonistas del receptor de IL-1 glucosilados y sin glucosilar. Específicamente, en la patente de los EE. UU. n.º 5.075.222 se describen tres formas preferidas de IL-1ra (IL-1raα, IL-1raβ e IL-1rax), cada una codificada por la misma secuencia de ADN codificante y las variantes de la misma. Los procedimientos para producir inhibidores de IL-1, en particular IL-1ras, también se describen en la patente 5.075.222. Una clase adicional de inhibidores de la interleucina-1 incluye compuestos capaces de impedir específicamente la activación de los receptores celulares de IL-1. Tales compuestos incluyen las proteínas de fijación a IL-1, tales como los receptores solubles y los anticuerpos monoclonales. Tales compuestos también incluyen anticuerpos monoclonales contra los receptores. Una clase más de los inhibidores de la interleucina-1 incluye compuestos y proteínas que bloquean la síntesis in vivo y/o la liberación extracelular de la IL-1. Tales compuestos incluyen agentes que afectan a la transcripción de los genes de IL-1 o el procesamiento de las preproteínas de IL-1.

Las proteínas de fijación a antígeno descritas en la presente memoria se pueden utilizar en combinación con todas las formas de los inhibidores de CD28, tales como, pero sin limitarse a ellos, abatacept.

Las proteínas de fijación a antígeno descritas en la presente memoria se pueden utilizar en combinación con todas las formas de inhibidores de IL-6 y/o del receptor de IL-6, tales como, pero sin limitarse a ellos, abatacept.

Las proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar en combinación con una o más citocinas, linfocinas, uno o varios factores hematopoyéticos y/o un agente antiinflamatorio.

El tratamiento de las enfermedades y trastornos descritos en la presente memoria puede incluir el uso de fármacos de primera línea para el control del dolor y la inflamación en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con el tratamiento con una o varias de las proteínas de fijación a antígeno dadas a conocer en la presente memoria. Estos fármacos se clasifican como fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE). Los tratamientos secundarios incluyen corticoesteroides, antirreumáticos de acción lenta (SAARD, por su nombre en inglés) o fármacos modificadores de la enfermedad. La información referente a los siguientes compuestos se puede encontrar en The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 16.ª edición, Merck, Sharp & Dohme Research Laboratories, Merck & Co., Rahway, N. J. (1992) y en Pharmaprojects, PJB Publications Ltd.

En una realización específica, la presente divulgación se refiere al uso de una proteína de fijación a antígeno y uno o varios AINE para el tratamiento de las enfermedades y trastornos descritos en la presente memoria. Los AINE deben su acción antiinflamatoria, al menos en parte, a la inhibición de la síntesis de prostaglandinas (Goodman y Gilman en «The Pharmacological Basis of Therapeutics», MacMillian 7.ª edicion (1985)). Los AINE se pueden caracterizar al menos en nueve grupos: (1) derivados del ácido salicílico; (2) derivados del ácido propiónico; (3) derivados del ácido acético; (4) derivados del ácido fenámico; (5) derivados del ácido carboxílico; (6) derivados del ácido butírico; (7) oxicams; (8) pirazoles y (9) pirazolonas.

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En la presente se describe el uso de una proteína de fijación de antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con cualquiera de uno o varios derivados del ácido salicílico, ésteres de profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Tales derivados del ácido salicílico, ésteres de profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos comprenden: acetaminosalol, aloxiprin, aspirina, benorilato, bromosaligenina, acetilsalicilato de calcio, trisalicilato de colina y magnesio, salicilato de magnesio, salicilato de colina, diflusinal, etersalato, fendosal, ácido gentísico, salicilato de glicol, salicilato de imidazol, acetilsalicilato de lisina, mesalazina, salicilato de morfolina, salicilato de 1-naftilo, olsalazina, parsalmida, acetilsalicilato de fenilo, salicilato de fenilo, salacetamida, ácido O-acético de salicilamida, salsalato, salicilato de sodio y sulfasalazina. Los derivados del ácido salicílico estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos en este grupo.

En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios derivados del ácido propiónico, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los derivados del ácido propiónico, ésteres del profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos comprenden: alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, dexindoprofeno, fenoprofeno, flunoxaprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, furcloprofeno, ibuprofeno, ibuprofeno alumínico, ibuproxam, indoprofeno, isoprofeno, ketoprofeno, loxoprofeno, miroprofeno, naproxeno, naproxeno sódico, oxaprozina, piquetoprofeno, pimeprofeno, pirprofeno, pranoprofeno, ácido protizínico, piridoxiprofeno, suprofeno, ácido tiaprofénico y tioxaprofeno. Los derivados del ácido propiónico estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos en este grupo.

En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios derivados del ácido acético, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los derivados del ácido acético, ésteres del profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos comprenden: acemetacina, alclofenaco, amfenaco, bufexamaco, cinmetacina, clopiraco, delmetacina, diclofenaco potásico, diclofenaco sódico, etodolaco, felbinaco, fenclofenaco, fencloraco, ácido fenclózico, fentiazaco, furofenaco, glucametacina, ibufenaco, indometacina, isofezolaco, isoxepaco, lonazolaco, ácido metiazínico, oxametacina, oxpinaco, pimetacina, proglumetacina, sulindaco, talmetacina, tiaramida, tiopinaco, tolmetina, tolmetina sódica, zidometacina y zomepiraco. Los derivados del ácido acético estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos en este grupo.

En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios derivados del ácido fenámico, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los derivados del ácido fenámico, ésteres del profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos comprenden: ácido enfenámico, etofenamato, ácido flufenámico, isonixina, ácido meclofenámico, meclofenamato de sodio, ácido medofenámico, ácido mefenámico, ácido niflúmico, talniflumato, terofenamato, ácido tolfenámico y ufenamato. Los derivados del ácido fenámico estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos en este grupo.

En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios derivados del ácido carboxílico, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los derivados del ácido carboxílico, ésteres del profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos que se pueden utilizar comprenden: clidanaco, diflunisal, flufenisal, inoridina, ketorolaco y tinoridina. Los derivados del ácido carboxílico estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos este grupo.

En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios derivados del ácido butírico, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los derivados del ácido butírico, ésteres del profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos comprenden: bumadizón, butibufén, benbufén y xenbucina. Los derivados del ácido butírico estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos en este grupo.

En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios oxicams, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los oxicams, ésteres del profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos comprenden: droxicam, enlolicam, isoxicam, piroxicam, sudoxicam, tenoxicam y 4-hidroxil1,2-benzotiazina 1,1-dióxido 4-(N-fenil)-carboxamida. Los oxicams estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos en este grupo.

En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios pirazoles, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los pirazoles, ésteres del profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos que se pueden utilizar comprenden: difenamizol y epirizol. Los pirazoles estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares se pretende que estén incluidos en este grupo.

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En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varias pirazolonas, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Las pirazolonas, ésteres del profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de las mismas que se pueden utilizar comprenden: apazona, azapropazona, benzpiperilón, feprazona, mofebutazona, morazona, oxifenbutazona, fenilbutazona, pipebuzona, propilfenazona, ramifenazona, suxibozona y tiazolinobutazona. Las pirazalonas estructuralmente relacionadas que tienen unas propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidas en este grupo.

La presente divulgación se refiere al uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios de los siguientes AINE: ácido εacetamidocaproico, S-adenosil-metionina, ácido 3-amino-4-hidroxibutírico, amixetrina, anitrazafeno, antrafenina, bendazaco, lisinato de bendazaco, benzidamina, beprozina, broperamol, bucolomo, bufezolaco, ciprocuazona, cloximato, dazidamina, deboxamet, detomidina, difenpiramida, difenpiramida, difisalamina, ditazol, emorfazona, mesilato de fanetizol, fenflumizol, floctafenina, flumizol, flunixina, fluprocuazona, fopirtolina, fosfosal, guaimesal, guaiazoleno, isonixino, lefetamina HCl, leflunomida, lofemizol, litifazol, clonixinato de lisina, meseclazona, nabumetona, nictindol, nimesulida, orgoteína, orpanoxina, oxaceprol, oxapadol, paranilina, perisoxal, citrato de perisoxal, pifoxima, piproxeno, pirazolaco, pirfenidona, procuazona, proxazol, tielavina B, tiflamizol, timegadina, tolectina, tolpadol, triptamida y los designados por un número de código de la compañía, tales como 480156S, AA861, AD1590, AFP802, AFP860, AI77B, AP504, AU8001, BPPC, BW540C, CHINOIN 127, CN100, EB382, EL508, F1044, FK-506, GV3658, ITF182, KCNTEI6090, KME4, LA2851, MR714, MR897, MY309, ONO3144, PR823, PV102, PV108, R830, RS2131, SCR152, SH440, SIR133, SPAS510, SQ27239, ST281, SY6001, TA60, TAI901 (ácido 4-benzoil-1-indancarboxílico), TVX2706, U60257, UR2301 y WY41770. Los AINE estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares a los AINE también se pretende que estén incluidos en este grupo.

En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios corticoesteroides, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para el tratamiento de las enfermedades y trastornos descritos en la presente memoria, entre ellos la inflamación aguda y crónica, tales como las enfermedades reumáticas, enfermedad de injerto contra huésped y esclerosis múltiple. Los corticoesteroides, ésteres del profármaco y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos incluyen la hidrocortisona y los compuestos que proceden de hidrocortisona, tales como 21-acetoxipregnenolona, alclomerasona, algestona, amcinonida, beclometasona, betametasona, valerato de betametasona, budesonida, cloroprednisona, clobetasol, propionato de clobetasol, clobetasona, butirato de clobetasona, clocortolona, cloprednol, corticoesterona, cortisona, cortivazol, deflazacón, desonida, desoximerasona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato, enoxolona, fluazacort, flucloronida, flumetasona, pivalato de flumetasona, acetónido de flucinolona, flunisolida, fluocinonida, acetónido de fluorocinolona, fluocortina butilo, fluocortolona, hexanoato de fluocortolona, valerato de difluocortolona, fluorometolona, acetato de fluperolona, acetato de fluprednideno, fluprednisolona, flurandenolida, formocortal, halcinonida, halometasona, acetato de halopredona, hidrocortamato, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, butirato de hidro-cortisona, fosfato de hidrocortisona, 21-succinato sódico de hidrocortisona, tebutato de hidrocortisona, mazipredona, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, furoato de mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisolona, 21-diedriaminoacetato de prednisolona, fosfato sódico de prednisolona, succinato sódico de prednisolona, 21-m-sulfobenzoato sódico de prednisolona, 21-estearoglicolato sódico de prednisolona, tebutato de prednisolona, 21-trimetilacetato de prednisolona, prednisona, prednival, prednilideno, 21dietilaminoacetato de prednilideno, tixocortol, triamcinolona, acetónido de triamcinolona, benetónido de triamcinolona y hexacetónido de triamcinolona. Los corticoesteroides estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos en este grupo.

La presente divulgación se refiere al uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios fármacos antirreumáticos de acción lenta (SAARD) o los fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad (DMARDS, por su nombre en inglés), ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para el tratamiento de las enfermedades y trastornos recogidos en la presente memoria, que incluyen la inflamación aguda y crónica, tales como enfermedades reumáticas, enfermedad de injerto contra huésped y esclerosis múltiple. Los SAARD o los DMARDS, los ésteres de profármaco y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos comprenden: alocupreido de sodio, auranofina, aurotioglucosa, aurotioglucánido, azatioprina, brequinar sódico, bucilamina, 3aurotio-2-propanol-1-sulfonato de calcio, clorambucilo, cloroquina, clobuzarit, cuproxolina, ciclofosfamida, ciclosporina, dapsona, 15-desoxiespergualina, diacereína, glucosamina, sales de oro (p. ej., sal de oro de cicloquina, tiomalato de sodio y oro, tiosulfato de sodio y oro), hidroxicloroquina, sulfato de hidroxicloroquina, hidroxiurea, kebuzona, levamisol, lobenzarit, melitina, 6-mercaptopurina, metotrexato, mizoribina, micofenolato de mofetilo, mioral, clormetina, D-penicilamina, imidzoles de piridinol tales como SKNF86002 y SB203580, rapamicina, tioles, timopoyetina y vincristina. Los SAARD o DMARD estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos en este grupo.

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En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios inhibidores de COX2, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para el tratamiento de las enfermedades y trastornos recogidos en la presente memoria, que incluyen la inflamación aguda y crónica. Ejemplos de inhibidores de COX2, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos incluyen, por ejemplo, el celecoxib. Los inhibidores de COX2 estructuralmente relacionados que tienen propiedades analgésicas y antiinflamatorias similares también se pretende que estén incluidos en este grupo. Los ejemplos de inhibidores selectivos de COX2 incluyen, pero sin limitarse a ellos, etoricoxib, valdecoxib, celecoxib, licofelona, lumiracoxib, rofecoxib y similares.

En la presente se describe el uso de una proteína de fijación a antígeno en combinación (pretratamiento, postratamiento o tratamiento concurrente) con uno o varios antimicrobianos, ésteres del profármaco o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para el tratamiento de las enfermedades y trastornos recogidos en la presente memoria, que incluyen la inflamación aguda y crónica. Los antimicrobianos incluyen, por ejemplo, las amplias clases de penicilinas, cefalosporinas y otros β-lactámicos, aminoglucósidos, azoles, quinolonas, macrólidos, rifamicinas, tetraciclinas, sulfamidas, lincosamidas y polimixinas. Las penicilinas incluyen, pero sin limitarse a ellas, penicilina G, penicilina V, meticilina, nafcilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina, floxacilina, ampicilina, ampicilina/sulbactam, amoxicilina, amoxicilina/clavulanato, hetacilina, ciclacilina, bacampicilina, carbenicilina, indanilo de carbenicilina, ticarcilina, ticarcilina/clavulanato, azlocilina, mezlocilina, peperacilina y mecilinam. Las cefalosporinas y otros β-lactámicos incluyen, pero sin limitarse a ellas, cefalotina, cefapirina, cefalexina, cefradina, cefazolina, cefadroxilo, cefaclor, cefamandol, cefotetán, cefoxitina, ceruroxima, cefonicida, ceforadina, cefixima, cefotaxima, moxalactam, ceftizoxima, ceftriaxona, cefoperazona, ceftazidima, imipenem y aztreonam. Los aminoglucósidos incluyen, pero sin limitarse a ellas, estreptomicina, gentamicina, tobramicina, amikacina, netilmicina, kanamicina y neomicina. Los azoles incluyen, pero sin limitarse a ellos, fluconazol. Las quinolonas incluyen, pero sin limitarse a ellos, ácido nalidíxico, norfloxacino, enoxacino, ciprofloxacino, ofloxacino, esparfloxacino y temafloxacino. Los macrólidos incluyen, pero sin limitarse a ellas, eritromicina, espiramicina y azitromicina. Las rifamicinas incluyen, pero sin limitarse a ellas, rifampicina. Las tetraciclinas incluyen, pero sin limitarse a ellas, espiciclina, clortetraciclina, clomociclina, demeclociclina, doxiciclina, guameciclina, limeciclina, meclociclina, metaciclina, minociclina, oxitetraciclina, penimepiciclina, pipaciclina, rolitetetraciclina, sanciclina, senociclina y tetraciclina. Los sulfamidas incluyen, pero sin limitarse a ellos, sulfanilamida, sulfametoxazol, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfisoxazol y cotrimoxazol (trimetoprima/sulfametoxazol). Las lincosamidas incluyen, pero sin limitarse a ellas, clindamicina y lincomicina. Las polimixinas (polipéptidos) incluyen, pero sin limitarse a ellas, polimixina B y colistina.

La actividad más citada de la IL-17A in vitro es la inducción desde las células estromáticas de las citocinas y quimiocinas movilizadoras de los neutrófilos (p. ej., GM-CSF, IL6, IL8). Estas actividades mejoran potentemente en presencia del TNF (Ruddy et al., 2004). De igual forma, las actividades biológicas de la IL-17F también mejoran por el coestímulo del TNF. De interés particular respecto a la función patógena de IL-17A en la destrucción del cartílago y la erosión ósea relacionada con la artritis reumatoide, la IL-17A induce la expresión de NO, MMP, PGE2 y RANKL e interviene en la activación de los linfocitos T y B específicos de antígeno (Kolls y Linden, 2004, véase más arriba; Lubberts et al., 2005, Arthritis. Res. Ther. 7: 29-37). Por lo tanto, las proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar para inhibir la vía de la IL-17A y/o de la IL-17F sobre el IL-17RA y la posterior producción de NO, MMP, PGE2 y/o RANKL, y tratar las enfermedades relacionadas con la inducción que la IL-17A y/o la IL-17F producen sobre NO, MMP, PGE2 y/o RANKL, así como otros mediadores proinflamatorios descritos en la presente memoria.

Además de la presencia de una gran cantidad de IL-17A en el líquido sinovial de los pacientes con artritis reumatoide, una serie de indicios sugieren que la IL-17A es una citocina patógena clave de la artritis. Primero, la administración de IL-17A en las articulaciones de los ratones empeora los síntomas de la artritis inducida por colágeno (Lubberts et al., J. Immunol. 170: 2655-2662). Segundo, IL-17RA-Fc soluble inhibe la degradación del colágeno en los cultivos de explantes óseos y sinoviales de AR humana y atenúa los síntomas en la artritis inducida por colágeno en el ratón (Chabaud y Miossec, 2001, Arthritis Rheum. 44:1293-1303) (Lubberts et al., 2001, J. Immunol. 167: 1004-1013). Como se predijo a partir de la interacción de baja afinidad entre IL-17F e IL-17RA, IL17R-Fc no neutraliza la actividad de la IL-17F y por lo tanto estos efectos son específicos del antagonismo de la IL17A. Tercero, los ratones que carecen de IL-17A son resistentes a la artritis inducida por IL-1 y tienen suprimida la artritis inducida por colágeno (Nakae et al., 2003a, J. Immunol. 171: 6173-6177; Nakae et al., 2003b, véase más arriba). Estos datos indican que la señalización de la IL-17A a través del IL-17RA es un mediador importante de inflamación y de daño articular en la artritis. Las proteínas de fijación al antígeno también se pueden utilizar para inhibir la actividad de la IL-17A y/o IL-17F sobre el IL-17RA, y con ello reducir la inflamación y el daño articular en la artritis.

En la artritis reumatoide se ha demostrado que existe una gran cantidad de IL-17A madura en el suero y en el líquido sinovial de los pacientes. En algunos estudios se demostró que la cantidad de IL-17A se correlaciona con la actividad de la enfermedad y la respuesta al tratamiento modificador de la enfermedad. Se han medido continuamente una cantidad muy elevada de IL-17A en el suero en la artritis idiopática juvenil sistémica y en una enfermedad muy relacionada con ella, la enfermedad de Still iniciada en la edad adulta. Solicitud de patente internacional WO 2005/063290; Cannetti et al., 2003, J. Immunol. 171: 1009-1015; Charles et al., 1999, J. Immunol.

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163: 1521-1528; Cunnane et al., 2000, Online J. Rheumatol. 27: 58-63; Yoshimoto, 1998, J. Immunol. 161: 34003407. Las proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar para inhibir la actividad de la IL-17A y/o IL-17F sobre el IL-17RA y con ello tratar la artritis idiopática juvenil sistémica y la enfermedad de Still iniciada en la edad adulta.

Otras diferentes enfermedades autoinmunitarias se han relacionado con un incremento de la cantidad de IL17A en el tejido enfermo o bien en el suero. Estas incluyen el lupus eritematoso sistémico, la dermatitis atópica, la miastenia grave, la diabetes de tipo I y la sarcoidosis. La IL-17A también puede intervenir en el asma y la EICH (enfermedad de injerto contra huésped). Las proteínas de fijación a antígeno dadas a conocer en la presente memoria se pueden utilizar para reducir los efectos de la vía IL-17A y/o IL-17F/IL-17RA en estas enfermedades.

Las proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar para reducir la actividad del IL-17RA, lo que comprende la administración de una proteína de fijación a antígeno. La presente divulgación también se refiere a procedimientos para inhibir la fijación y/o señalización de IL-17A y/o IL-17F sobre el IL-17RA, que comprenden proporcionar la proteína de fijación a antígeno de la divulgación al IL-17RA. La proteína de fijación a antígeno puede inhibir la fijación y/o señalización de la IL-17A y de la IL-17F sobre el IL-17RA. La proteína de fijación a antígeno puede inhibir la fijación y/o señalización de la IL-17A, pero no de la IL-17F, sobre el IL-17RA. La proteína de fijación a antígeno puede inhibir la fijación y/o señalización de la IL-17F y no de la IL-17A sobre el IL-17RA. Las proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar para tratar las consecuencias, los síntomas y/o la patología relacionada con la actividad del IL-17RA, que comprende la administración de una proteína de fijación a antígeno. Las proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar para inhibir la producción de una o más de una citocina inflamatoria, quimiocina, metaloproteinasa de la matriz u otra molécula relacionada con la activación del IL-17RA, que comprende la administración de una proteína de fijación a antígeno. Las proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar en los procedimientos para inhibir la producción de moléculas tales como, pero sin limitarse a ellas: IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP (tales como, pero sin limitarse a ellas, MMP3 y MMP9), GROα, NO y/o el C-telopéptido y similares, que comprende la administración de una proteína de fijación a antígeno. Las proteínas de fijación a antígeno inhiben las respuestas inmunitarias proinflamatorias y proautoinmunitarias, y se pueden utilizar para tratar enfermedades relacionadas con la actividad de la vía IL-17A y/o IL-17F/IL-17RA.

Aspectos de la divulgación se refieren a anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA humano y que inhiben parcial o completamente a IL-17RA impidiéndole formar un complejo receptor funcional homodimérico o heterodimérico tal como, pero sin limitarse a él, el complejo IL-17RA—IL-17RC y que no necesariamente inhiben la fijación de la IL-17A y/o de la IL-17F o de un heterodímero IL-17A/IL-17F al IL-17RA o a un complejo receptor heterodimérico de IL-17RA. Así pues, los estados de enfermedad relacionados con el IL-17RC también se relacionan con el IL-17RA debido al hecho de que el IL-17RC no puede transmitir la señal sin el IL-17RA. Por ejemplo, véase You, Z. et al., Cancer Res., 1 de enero de 2006; 66(1): 175-83 y You, Z. et al., Neoplasia, junio de 2007; 9(6); 464

70.

Las proteínas de fijación al antígeno de IL-17RA pueden usarse en métodos para tratar una enfermedad asociada a IL-17RA, que comprende administrar una proteína de fijación al antígeno de IL-17-RA. La proteína de fijación al antígeno de IL-17Ra puede usarse para tratar enfermedades que incluyen, artritis psoriásica juvenil, artritis psoriásica, psoriasis, psoriasis en placas, dermatitis atópica, asma, EPOC.

Una variedad de realizaciones no necesariamente incluidas en la invención incluyen pero no están limitadas a, las siguientes realizaciones ejemplares: realización 151:un método para tratar un estado de enfermedad asociado con la activación de IL-17RA en un paciente con necesidad de ello, que comprende administrar a dicho paciente una composición que comprende un anticuerpo que se fija específicamente al Receptor A de IL-17 humano e inhibe la fijación de IL-17A, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de:

A. un anticuerpo aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo que comprende

B. un anticuerpo aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo que comprende

a. una CDR1 (SEQ ID NO:185), CDR2 (SEQ ID NO:186), CDR3 (SEQ ID NO:187) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:107), CDR2 (SEQ ID NO:108), CDR3 (SEQ ID NO:109) de cadena pesada del anticuerpo AM-1;

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z.2. una CDR1 (SEQ ID NO:263), CDR2 (SEQ ID NO:264), CDR3 (SEQ ID NO:265) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:182), CDR2 (SEQ ID NO:183), CDR3 (SEQ ID NO:184) de cadena pesada del anticuerpo AM-26; donde dicho polipéptido se fija específicamente a IL-17RA humano; y

C. un anticuerpo aislado, o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo que comprende

x.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML24/AMH24 (SEQ

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ID NO:51/SEQ ID NO:24);

z.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML26/AMH26 (SEQ ID NO:53/SEQ ID NO:26);

donde dicho polipéptido se fija específicamente aIL-17RA humano.

Realización 152: el método de la realización 1, donde dicho estado de enfermedad seleccionado del grupo consistente de: Aatritis reumatoide, artritis juvenil, artritis reumatoide juvenil, artritis reumatoide juvenil pauciarticular, artritis reumatoide juvenil poliarticular, artritis reumatoide juvenil de inicio sistémico, espondilitis anquilosante juvenil, artritis enteropática juvenil, artritis reumatoide juvenil, artritis reumatoide juvenil, artritis reactiva juvenil, síndrome de Reter juvenil, síndrome de SEA (Seronegatividad, Entesopatía, Síndrome de Artropatía), dermatomiositis juvenil, artritis psoriásica juvenil, esclerodermia juvenil, síndrome sistémico juvenil Lupus eritematoso, vasculitis juvenil, artritis reumatoide pauciarticular, artritis reumatoide poliarticular, artritis reumatoide de inicio sistémico, espondilitis anquilosante, artritis enteropática, artritis reactiva, síndrome de Reter, síndrome de SEA (seronegatividad, entesopatía, síndrome de artropatía), dermatomiositis, artritis psoriásica, esclerodermia, vasculitis , Miolitis, polimiolitis, dermatomiolitis, osteoartritis, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, arteritis, polimialgia reumática, sarcoidosis, esclerodermia, esclerosis, esclerosis biliar primaria, colangitis esclerosante, síndrome de Sjogren, psoriasis, psoriasis en placas, psoriasis gutata, psoriasis inversa, psoriasis pustular, psoriasis eritrodérmica, dermatitis, dermatitis atópica, aterosclerosis, lupus, enfermedad de Still, lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia gravis, enfermedad inflamatoria intestinal (IBD), enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad celíaca, esclerosis múltiple (EM), asma, EPOC, enfermedad de Guillain-Barre, diabetes mellitus tipo I, enfermedad de Graves, enfermedad de Addison, fenómeno de Raynaud, hepatitis autoinmune y enfermedad de injerto contra huésped (EICH). Realización 153: el método de la realización 151 que comprende adicionalmente administrar a dicho sujeto un segundo tratamiento que comprende una composición farmacéutica. Realización 154: el método de la realización 153, donde dicha segunda composición farmacéutica se selecciona del grupo consistente de: inhibidores de TNF, receptores de TNF solubles, Etanercept, ENBREL®, receptor de TNF soluble tipo I y receptor de TNF soluble tipo II, moléculas de receptor de TNF p75 y/o p55 monoméricas o multiméricas y sus fragmentos, anticuerpos anti-TNF, Infliximab, REMICADE®, D2E7 o HUMIRA®, inhibidores de IL-1, inhibidores del receptor de IL-1, inhibidores de CD28, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), un fármaco antirreumático de acción lenta (SAARD) y fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad (DMARD). Realización 155: en método para inhibir la producción de al menos una citoquina, quimioquina, metaloproteinasa de matriz, u otra molécula asociada con la activación de IL-17RA, que comprende administrar el anticuerpo de la realización 151 a un paciente con necesidad de ello. Realización 156: el método de la realización 155, donde dicha citoquina, quimioquina, metaloproteinasa de matriz u otra molécula se selecciona del grupo consistente de: IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, It-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP3, MMP9, GROα, NO, y C-telopéptido. Realización 157: un método para tratar una enfermedad asociada con la activación de IL-17RA en un sujeto con necesidad de ello, que comprende administrar a dicho sujeto una composición que comprende un anticuerpo que se fija específicamente con el Receptor A de IL-17 humano e inhibe la fijación de IL-17A e IL-17F o inhibe la fijación de IL-17A o IL-17F. Realización 158: el método de la realización 157, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de:

a.: una secuencia del dominio variable de cadena ligera que es al menos 80% idéntica a una secuencia del dominio variable de cadena ligera de AML14, 18, 19 y 22 (SEQ ID NO: 40, 44, 45, y 48, respectivamente);

b.: una secuencia del dominio variable de cadena pesada que es al menos 80% idéntica a una secuencia del dominio variable de cadena pesada de AMH14, 18, 19 y 22 (SEQ ID NO:14, 18, 19, y 22, respectivamente); o c) el dominio variable de cadena ligera de (a) y el dominio variable de cadena pesada de (b); donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano;

c.: una CDR1 (SEQ ID NO:239), CDR2 (SEQ ID NO:240), CDR3 (SEQ ID NO:241) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:161), CDR2 (SEQ ID NO:162), CDR3 (SEQ ID NO:163) de cadena pesada del anticuerpo AM-19; o

d.: una CDR1 (SEQ ID NO:248), CDR2 (SEQ ID NO:249), CDR3 (SEQ ID NO:250) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:170), CDR2 (SEQ ID NO:171), CDR3 (SEQ ID NO:172) de cadena pesada del anticuerpo AM-22; donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano; y

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c.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML19/AM 19 (SEQ ID NO:45/SEQ ID NO:19); o

d.: un dominio variable de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada de AML22/AMH22 (SEQ ID NO:48/SEQ ID NO:22); donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano;

Realización 159: el método de la realización 157, donde dicho estado de enfermedad es el estado de enfermedad de la realización 152. Realización 160: un método para inhibir la producción de al menos una citoquina, quimioquina, metaloproteinasa de matriz, u otra molécula asociada con la activación de IL-17RA, que comprende administrar el anticuerpo de la realización 157 a un paciente con necesidad de ello. Realización 161: el método de la realización 160, donde dicha citoquina, quimioquina, metaloproteinasa de matriz, u otra molécula se selcciona del grupo consistente de: IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP3, MMP9, GROα, NO, and C-telopéptido. Realización

162: un método para tratar inflamación y enfermedad autoinmune en un paciente con necesidad de ello que comprende administrar a dicho paciente una composición que comprende un anticuerpo seleccionado del grupo consistente de:

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Realización 163: el método de la realización 162, donde dicha inflamación y enfermedad autoinmune se selecciona del grupo consistente de: artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, artritis psoriásica, psoriasis, psoriasis en placas, dermatitis, dermatitis atópica, lupus eritematoso sistémico, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad celíaca, esquirosis múltiple, asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica. Realización 164: el método de la realización 151, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de: a. un anticuerpo humanizado; b. un anticuerpo quimérico;

c. un anticuerpo recombinante; d. un anticuerpo de cadena única; e. un dianticuerpo; f. un trianticuerpo; g. un tetranticuerpo; h. un fragmento de Fab; i. un fragmento de F(ab')2; j. un anticuerpo IgD; k. un anticuerpo IgE; l, un anticuerpo IgM; m. un anticuerpo IgG1; n. un anticuerpo IgG2; o. un anticuerpo IgG3; y p. un anticuerpo IgG4. Realización 165: el método de la realización 158, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de: a. un anticuerpo humanizado; b. un anticuerpo quimérico; c. un anticuerpo recombinante; d. un anticuerpo de cadena única; e. un dianticuerpo; f. un trianticuerpo; g. un tetranticuerpo; h. un fragmento de Fab; i. un fragmento de F(ab')2; j. un anticuerpo IgD; k. un anticuerpo IgE; l, un anticuerpo IgM; m. un anticuerpo IgG1; n. un anticuerpo IgG2; o. un anticuerpo IgG3; y .p un anticuerpo IgG4. Realización 166: el método de la realización 151, donde dicho anticuerpo se selcciona del grupo consistente de:

B. un anticuerpo aislado o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende una CDR1 (SEQ ID NO:224), CDR2 (SEQ ID NO:225), CDR3 (SEQ ID NO:226) de cadena ligera y una CDR1 (SEQ ID NO:146), CDR2 (SEQ ID NO:147), CDR3 (SEQ ID NO:148) de cadena pesada; donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano; y

C. un anticuerpo aislado o fragmento de fijación a IL-17RA del mismo, que comprende un dominio variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40 y un dominio variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:14;

donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano. Realización 167: el método de la realización 166, donde dicho estado de enfermedad es artritis reumatoide. Realización 168: el método de la realización 166, donde dicho estado de enfermedad es psoriasis. Realización 169: el método de la realización 166, donde dicho estado de enfermedad es enfermedad inflamatoria intestinal. Realización 170: el método de la realización 166, donde dicho estado de enfermedad es asma. Realización 171: el método de la realización 166, donde dicho anticuerpo comprende un dominio variable de cadena ligera de la SEQ ID NO:40 y un dominio variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:14; donde dicho anticuerpo se fija específicamente a IL-17RA humano. Realización 172: el método de la realización 166, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de: a. un anticuerpo humanizado; b. un anticuerpo quimérico; c. un anticuerpo recombinante; d. un anticuerpo de cadena única; e. un dianticuerpo; f. un trianticuerpo; g. un tetranticuerpo; h. un fragmento de Fab; i. un fragmento de F(ab')2; j. un anticuerpo IgD; k. un anticuerpo IgE; l, un anticuerpo IgM; m. un anticuerpo IgG1; n. un anticuerpo IgG2; o. un anticuerpo IgG3; y p. un anticuerpo IgG4. Realización 173: el método de la realización 171, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo consistente de: : a. un anticuerpo humanizado; b. un anticuerpo quimérico;

c. un anticuerpo recombinante; d. un anticuerpo de cadena única; e. un dianticuerpo; f. un trianticuerpo; g. un tetranticuerpo; h. un fragmento de Fab; i. un fragmento de F(ab')2; j. un anticuerpo IgD; k. un anticuerpo IgE; l, un anticuerpo IgM; m. un anticuerpo IgG1; n. un anticuerpo IgG2; o. un anticuerpo IgG3; y p. un anticuerpo IgG4. Realización 174: el método de la realización 167, donde dicho anticuerpo comprende una secuencia de cadena ligera de la sEQ ID NO:429 y una secuencia de cadena pesada de la SEQ ID NO:427. Realización

175: el método de la realización 168, donde dicho anticuerpo comprende una secuencia de cadena ligera de la sEQ ID NO:429 y una secuencia de cadena pesada de la sEQ ID NO:427.

Se entiende que los métodos anteriormente descritos también abarcan métodos comparables para primer y segundo usos médicos y reivindica los mismos, como se describe en otro lugar en esta memoria descriptiva.

La hepatitis vírica crónica afecta a más de 500 millones de personas en todo el mundo, de las que aproximadamente 10 millones viven en los EE. UU. y en Europa con infecciones de hepatitis C crónica. Una proporción significativa de pacientes con hepatitis crónica desarrollan fibrosis hepática progresiva y/o carcinoma hepatocelular. Aunque las vacunas contra la hepatitis vírica están disponibles o en desarrollo, el tratamiento actual para los individuos infectados se basa en largos ciclos de la combinación de fármacos antivíricos e interferón α (INFα). Se cree que el INF-α es beneficioso para tratar la hepatitis vírica a través de sus actividades inmunológicas antivíricas probadas y de sus efectos antiproliferativos sobre los fibroblastos, pero la duración y nivel de su uso es escaso por los graves efectos secundarios.

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Los datos recientes describen cómo el INF-α puede ser directamente apoptósico para las células Th17 (American Association for Immunologists, resumen n.º 42.8, 12-17 de mayo de 2006, Boston). Las células Th17 son un subgrupo distinto de linfocitos T CD4+ responsables de la producción de IL-17A e IL-17F en respuesta a la IL-23 (Harrington et al., Nature ImmNature Imm. 2005, vol. 6, n.º 11, 11331141). Creemos que esto sugiere un nuevo mecanismo de acción para el INF-α en la hepatitis vírica crónica que no implica la acción directa del INF-α sobre el virus ni los fibroblastos, sino acciones indirectas sobre las células Th17. Además, recientemente se ha descubierto que el factor del crecimiento tumoral β (TGF-β) y/o la IL-6, (véase, por ejemplo, Kimera, A. et al., PNAS USA, 17 de julio de 2007; 104(29): 12099-104), ambas citocinas profibróticas, también inducen el desarrollo de las células Th17 al inducir la expresión del receptor de IL-23 y con ello conferir la capacidad de respuesta a la IL-23 (Mangan et al., Nature, 2006, vol. 441, n.º 11, 231-234). La capacidad de respuesta a la IL-23 induce la diferenciación de los linfocitos T CD4+ intactos en células Th17. Tal y como se mencionó más arriba, las células Th17 son responsables de la liberación de IL-17A e IL-17F, y se sabe que la IL-17A tiene diferentes efectos estimulantes sobre los fibroblastos en una serie de tejidos u órganos. En conjunto, creemos que la inhibición de la vía de IL-17RA—IL-17A/IL-17F puede ofrecer un beneficio terapéutico contra la fibrosis progresiva de la hepatitis vírica crónica.

Un beneficio más de la inhibición de la vía IL-17RA—IL-17A/IL-17F en el tratamiento de la hepatitis vírica es que uno puede reducir la dosis de INF-α dado al paciente y, en consecuencia, limitar los efectos secundarios dañinos relacionados con el tratamiento con el INF-α. Otro beneficio más de la inhibición de la vía IL-17RA—IL17A/IL-17F en el tratamiento de la hepatitis vírica es la posibilidad de conseguir un efecto terapéutico sinérgico con el tratamiento con el INF-α en combinación con el tratamiento antagonista de IL-17RA—IL-17A/IL-17F u otros antagonistas como se describe con más detalle a continuación.

Por lo tanto, se trazan los aspectos del anticuerpo de la invención para usarlo en el tratamiento de la patología relacionada con la hepatitis vírica al inhibir la interacción entre el IL-17RA y la IL-17A y/o la IL-17F, lo que inhibe la fibrosis al inhibir la interacción entre el IL-17RA y la IL-17A y/o la IL-17F, y se trata la fibrosis asociada a la hepatitis vírica al inhibir la interacción entre el IL-17RA y la IL-17A y/o la IL-17F. Se pueden utilizar los antagonistas de la vía IL-17RA—IL-17A/IL-17F para inhibir la interacción entre el IL-17RA y la IL-17A y/o la IL-17F. Los antagonistas de la vía IL-17RA—IL-17A incluyen las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA de la invención, así como las proteínas IL-17RA (así como fragmentos biológicamente activos y proteínas de fusión de la misma, tales como proteínas de fusión IL-17RA-Fc), así como las proteínas de fijación a antígeno, tales como anticuerpos y fragmentos biológicamente activos de los mismos, que se fijan a la IL-17A e impiden que la IL-17A active el IL-17RA, así como las proteínas de fijación a antígeno, tales como anticuerpos y fragmentos biológicamente activos de los mismos, que se fijan a la IL-17F e impiden que la IL-17F active el IL-17RA.

En la presente memoria se describen procedimientos para tratar la patología relacionada con la hepatitis vírica al antagonizar la vía IL-23—receptor de IL-23 (IL-23R), procedimientos para inhibir la fibrosis al antagonizar la vía IL-2—IL-23R, procedimientos para tratar la fibrosis relacionada con la hepatitis vírica al antagonizar la vía IL-23— IL-23R. Al antagonizar la vía IL-23—IL-23R, se impide que la IL-23 induzca la diferenciación de las células Th17 y con esto se acaba limitando la cantidad de IL-17A e IL-17F en circulación, lo que puede reducir la patología relacionada con la hepatitis vírica. Los antagonistas de la vía IL-23—IL-23R incluyen las proteínas de fijación a antígeno, tales como anticuerpos y fragmentos biológicamente activos de los mismos, que se fijan a la IL-23 e impiden que la IL-23 active el IL-23R. Otros antagonistas de la vía IL-23—IL-23R incluyen las proteínas de fijación a antígeno, tales como los anticuerpos y fragmentos biológicamente activos de los mismos, que se fijan al IL-23R e impiden que la IL-23 active el IL-23R. Otros antagonistas de la vía de IL-23—IL-23R incluyen las proteínas IL-23R, así como fragmentos biológicamente activos y proteínas de fusión de las mismas, tales como proteínas de fusión de IL-23R-Fc, que se fijan a la IL-23 e impiden que la IL-23 active el IL-23R.

En la presente memoria se describen procedimientos para tratar la patología asociada a la hepatitis vírica al antagonizar la vía TGF-β—TGF-βRI/TGF-βRII, procedimientos para inhibir la fibrosis al antagonizar la vía TGF-β— TGF-βRI/TGF-βRII. Aspectos adicionales de la divulgación se refieren a procedimientos para tratar la fibrosis asociada a la hepatitis vírica al antagonizar la vía TGF-β—TGF-βRI/TGF-βRII. Al antagonizar la vía TGF-β—TGFβRI/TGF-βRII, se impide que el TGF-β induzca el desarrollo de las células Th17 y con ello finalmente se limita la cantidad de IL-17A e IL-17F en circulación, lo que podría reducir la patología asociada a la hepatitis vírica. Los antagonistas de la vía TGF-β—TGF-βRI/TGF-βRII incluyen proteínas de fijación a antígeno, tales como anticuerpos y fragmentos biológicamente activos de los mismos, que se fijan al TGF-β e impiden que el TGF-β active el TGF-βRI y/o el TGF-βRII. Otros antagonistas de la vía TGF-β—TGF-βRI/TGF-βRII incluyen proteínas de fijación a antígeno, tales como anticuerpos y fragmentos biológicamente activos de los mismos, que se fijan al TGF-βRI o al TGF-βRII e impiden que el TGF-β active el TGF-βRI o el TGF-βRII.

En la presente memoria se describen procedimientos para tratar la patología asociada a la hepatitis vírica al antagonizar la vía IL-6—IL-6R, procedimientos para inhibir la fibrosis al antagonizar la vía IL-6—IL-6R, procedimientos para tratar la fibrosis asociada a la hepatitis vírica al antagonizar la vía IL-6—IL-6R. Al antagonizar la vía IL-6—IL-6R se puede reducir la patología relacionada con la hepatitis vírica. Los antagonistas de la vía IL-6—IL6R incluyen proteínas de fijación a antígeno, tales como anticuerpos y fragmentos biológicamente activos de los mismos, que se fijan a la IL-6 e impiden que la IL-6 active el IL-6R. Otros antagonistas de la vía IL-6—IL-6R incluyen proteínas de fijación a antígeno, tales como anticuerpos y fragmentos biológicamente activos de los mismos, que se fijan al IL-6R e impiden que la IL-6 active el IL-6R.

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En la presente memoria se describe la politerapia que utiliza los antagonistas de la vía IL-17RA—IL-17A/IL17F, de la vía IL-23—IL-23R, de la vía TGF-β—TGF-βRI/TGF-βRII y/o de la vía IL-6—IL-6R mencionadas más arriba en combinación de unas con las otras, así como en politerapia con los tratamientos contra la hepatitis reconocidos en la técnica, tales como, pero sin limitarse a ellos, el interferón y en particular el INF-α. Se contemplan todas las permutaciones de estas combinaciones.

También se describe la politerapia que utiliza los antagonistas de la vía IL-17RA—IL-17A/IL-17F, de la vía IL-23—IL-23R, de la vía TGF-β—TGF-βRI/TGF-βRII y/o de la vía IL-6—IL-6R mencionadas más arriba en combinación de unas con las otras, así como en combinación con tratamientos contra la hepatitis reconocidos en la técnica, tales como, pero sin limitarse a ellos, el interferón y en particular el IFN-α, así como con agentes antivíricos, tales como, pero sin limitarse a ellos, adefovir, análogos acíclicos del monofosfato de desoxiadenosina (Adefovir, fumarato de tenofovir), enantiómero (–) del análogo de desoxicitidina 2'-desoxi-3'-tiacitidina (lamivudina), análogos de la desoxiguanosina carbocíclica (entecavir), L-nucleósidos (β-L-2'-desoxitimidina, β-L-2'-desoxicitidina y β-L-2'desoxiadenosina), [(–)-β-2',3'-didesoxi-5-fluoro-3'-tiacitidina] (emtricitabina), dioxalano de 1-β-2,6-diaminopurina (DAPD, amdoxovir), 2'-fluoro-5-metil-β-L-arabinofuranosiluridina (L-FMAU, clevudina), famciclovir y/o penciclovir. Se contemplan todas las permutaciones de estas combinaciones.

Procedimientos diagnósticos

Las proteínas de fijación a antígeno de la divulgación se pueden utilizar para propósitos diagnósticos con el fin de detectar, diagnosticar o monitorizar enfermedades y/o afecciones relacionadas con la IL-17A o el IL-17RA. La divulgación se refierea a la detección de la presencia del IL-17RA en una muestra con los procedimientos inmunohistológicos clásicos conocidos por los expertos en la técnica (p. ej., Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, vol 15 (Eds R. H. Burdon y P. H. van Knippenberg, Elsevier, Amsterdam); Zola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pág. 147-158 (CRC Press, Inc.); Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol.

101: 976-985; Jalkanen et al., 1987, J. Cell. Biol. 105: 3087-3096). La detección del IL-17RA se puede realizar in vivo

o in vitro.

Las aplicaciones diagnósticas descritas en la presente memoria incluyen el uso de las proteínas de fijación a antígeno para detectar la expresión del IL-17RA y la fijación de los ligandos al IL-17RA. Los ejemplos de los procedimiento útiles en la detección de la presencia del IL-17RA incluyen los inmunoensayos, tales como el ensayo inmunoenzimático (ELISA) y el radioinmunoensayo (RIA).

Para las aplicaciones diagnósticas, la proteína de fijación a antígeno se marcará típicamente con un grupo marcador detectable. Los grupos marcadores adecuados incluyen, pero sin limitarse a ellos, los siguientes: radioisótopos o radionúclidos (p. ej., 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), grupos fluorescentes (p. ej., FITC, rodamina, fósforos de lantánidos), grupos enzimáticos (p. ej., peroxidasa de rábano picante, β-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina), grupos quimioluminiscentes, grupos biotinilo o epítopos polipeptídicos predeterminados que serán reconocidos por un indicador secundario (p. ej., pares de secuencias con cremalleras de leucinas, sitios de fijación para anticuerpos secundarios, dominios de fijación a metales, etiquetas de epítopos). En algunas realizaciones, el grupo marcador se acopla a la proteína de fijación a antígeno a través de brazos espaciadores de diferentes longitudes para reducir el posible impedimento estérico. Se conocen en la técnica distintos métodos para marcar proteínas y se pueden utilizar para realizar la presente divulgación.

Un aspecto descrito es para identificar una célula o células que expresan el IL-17RA. La proteína de fijación a antígeno se marca con un grupo marcador y se detecta la fijación al IL-17RA de la proteína de fijación a antígeno marcada. La fijación al IL-17RA de la proteína de fijación a antígeno se puede detectar in vivo. La proteína de fijación a antígeno unida al IL-17RA se aísla y se mide con los métodos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Harlow y Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Nueva York: Cold Spring Harbor (ed. 1991 y suplementos periódicos); John E. Colligan, ed. 1993, Current Protocols in Immunology, Nueva York: John Wiley & Sons.

En la presente memoria se describe un procedimiento para detectar la presencia de una molécula problema que compite por la fijación al IL-17RA con las proteínas de fijación a antígeno de la divulgación. Un ejemplo de tal ensayo implicaría detectar la cantidad de la proteína de fijación a antígeno libre en una solución que contiene una cantidad de IL-17RA en presencia o ausencia de la molécula problema. Un incremento de la cantidad de la proteína de fijación a antígeno libre (a saber, la proteína de fijación a antígeno que no está fijada al IL-17RA) indicaría que la molécula problema es capaz de competir por la fijación al IL-17RA con la proteína de fijación a antígeno. La proteína de fijación a antígeno se marca con un grupo marcador. Otra alternativa es que se marque la molécula problema y se monitorice la cantidad de la molécula problema libre en presencia y en ausencia de una proteína de fijación a antígeno.

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Se describe el uso de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA en los ensayos in vitro para propósitos de investigación se describe dentro de la presente memoria, tal como para inhibir la producción de moléculas tales como, pero sin limitarse a ellas: IL-6, IL-8, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP (tales como, pero sin limitarse a ellas, MMP3 y MMP9), GROα, NO y/o el C-telopéptido y similares. Se pueden utilizar los anticuerpos dirigidos contra un IL-17RA, por ejemplo, para purificar las proteínas IL17RA mediante cromatografía de inmunoafinidad.

Procedimientos de tratamiento: formulaciones farmacéuticas, vías de administración

En algunas realizaciones, la invención da a conocer composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de una o una serie de las proteínas de fijación a antígeno de la invención junto con un diluyente, vehículo, solubilizante, emulsionante, conservante y/o adyuvante farmacéuticamente aceptable. Además, la invención da a conocer procedimientos para tratar un paciente mediante la administración de tal composición farmacéutica. La terminología «paciente» incluye sujetos humanos y animales.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden una o más proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar para reducir la actividad del IL-17RA. Las composiciones farmacéuticas que comprenden una o varias proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar para tratar las consecuencias, síntomas y/o la patología asociada a la actividad del IL-17RA. Las composiciones farmacéuticas que comprenden una o más proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar en los procedimientos de inhibición de la fijación y/o la señalización de IL-17A y/o IL-17F sobre el IL-17RA, que comprende proporcionar la proteína de fijación a antígeno de la divulgación al IL-17RA. En determinadas realizaciones, la proteína de fijación a antígeno inhibe la fijación y/o señalización de IL-17A e IL-17F sobre el IL-17RA. En otras realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden una o varias proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar en los procedimientos de inhibición de la fijación y/o señalización de la IL17A, pero no de la IL-17F, sobre el IL-17RA. En otras realizaciones las composiciones farmacéuticas que comprenden una o varias proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar en los procedimientos de inhibición de la fijación y/o señalización de la IL-17F, y no de la IL-17A, sobre el IL-17RA. Los aspectos de la invención incluyen anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA humano e impiden que la IL-17A y/o la IL-17F se fijen y activen el IL-17RA, o un complejo heterodimérico de IL-17RA e IL-17RC. Los aspectos de la invención incluyen anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA humano e inhiben la fijación del heterodímero de IL-17A/IL-17F y la activación del IL-17RA, o de un complejo heterodimérico de IL-17RA e IL-17RC. A lo largo de la especificación, cuando se hace referencia a la inhibición de la IL-17A y/o de la IL-17F, se debe saber que esto también incluye la inhibición de los heterodímeros de la IL-17A y la IL-17F. Los aspectos de la invención incluyen anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA humano e impiden parcial o totalmente que el IL-17RA forme un complejo receptor funcional homodimérico o heterodimérico, tal como, pero sin limitarse a ellos, el complejo IL-17RA—IL-17RC. Los aspectos de la invención incluyen anticuerpos que se fijan específicamente al IL-17RA humano e impiden parcial o totalmente que el IL-17RA forme un complejo receptor funcional homodimérico o heterodimérico, tal como, pero sin limitarse a ellos, el complejo IL-17RA—IL-17RC, y no necesariamente inhibir la fijación de IL-17A y/o IL-17F o un heterodímero IL-17A/IL-17F al IL-17RA o a un complejo receptor heterodimérico de IL-17RA.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden una o más proteínas de fijación a antígeno de la invención se pueden utilizar para el tratamiento de las consecuencias, síntomas y/o la patología asociada a la actividad del IL-17RA. Las composiciones farmacéuticas que comprenden una o más proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar para inhibir la producción de una o varias entre citocina inflamatoria, quimiocina, metaloproteinasa de la matriz u otra molécula asociada a la activación del IL-17RA, que comprende la administración de una proteína de fijación al antígeno IL-17RA. Las composiciones farmacéuticas que comprenden una o más proteínas de fijación a antígeno se pueden utilizar en los procedimientos para inhibir la producción de IL-6, IL-8, GM-CSF, NO, MMP, PGE2, RANKL y/o C-telopéptido y similares.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden una o varias proteínas de fijación a antígeno de la invención se pueden utilizar para tratar enfermedades y afecciones que incluyen, pero sin limitarse a ellas, artritis psoriásica juvenil, artritis psoriásica, psoriasis, psoriasis en placas, dermatitis atópica, asma, EPOC.

Preferiblemente, los materiales de formulación aceptables no son tóxicos para los destinatarios en las dosis y concentraciones empleadas. En realizaciones específicas, se dan a conocer composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA de la invención.

En ciertas realizaciones, los materiales de formulación aceptables no son tóxicos para los destinatarios en las dosis y concentraciones empleadas. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica puede contener materiales de formulación para modificar, mantener o preservar, por ejemplo, el pH, la osmolaridad, la viscosidad, la transparencia, el color, la isotonicidad, el olor, la esterilidad, la estabilidad, la velocidad de disolución o liberación, la adsorción o la penetración de la composición. En tales realizaciones, los materiales de formulación adecuados incluyen, pero sin limitarse a ellos, aminoácidos (tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina); antimicrobianos; antioxidantes (tales como ácido ascórbico, sulfito de sodio o hidrogenosulfito de sodio); tampones (tales como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos u otros ácidos orgánicos); voluminadores (tales como manitol o glicina); quelantes (tales como ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)); agente complejante (tales como cafeína, polivinilpirrolidona, β-ciclodextrina o hidroxipropil-β-ciclodextrina); sustancias de relleno; monosacáridos; disacáridos; y otros glúcidos (tales como glucosa, manosa o dextrinas); proteínas (tales como seroalbúmina, gelatina

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o inmunoglobulinas); colorantes, saborizantes y diluyentes; emulsionantes; polímeros hidrófilos (tales como polivinilpirrolidona); polipéptidos de baja masa molecular; contraiones formadores de sales (tales como sodio); conservantes (tales como cloruro de benzalconio, ácido benzoico, ácido salicílico, timerosal, alcohol fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, clorhexidina, ácido sórbico o peróxido de hidrógeno); solventes (tales como glicerina, propilenglicol o polietilenglicol); glúcidos polialcohólicos (tales como manitol o sorbitol); agentes de suspensión; tensioactivos o humectantes (tales como plurónicos, PEG, ésteres de sorbitano, polisorbatos tales como polisorbato 20, polisorbato, tritón, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal); estabilizantes (tales como sacarosa o sorbitol); potenciadores de la tonicidad (tales como haluros de metales alcalinos, preferiblemente cloruro de sodio o de potasio, sorbitol, manitol); vehículos para dispensación; diluyentes; excipientes y/o adyuvantes farmacéuticos. Véase, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18.ª edición, (A. R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica óptima la determinará el experto en la técnica en función de, por ejemplo, la vía de administración deseada, el formato de dispensación y la dosis deseada. Véase, por ejemplo, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, véase más arriba. Tales composiciones pueden influir en el estado físico, estabilidad, velocidad de la liberación in vivo y velocidad de la eliminación in vivo de las proteínas de fijación a antígeno de la divulgación. El vehículo o excipiente principal en una composición farmacéutica puede ser de naturaleza acuosa o bien no acuosa. Por ejemplo, un vehículo o excipiente adecuado puede ser agua para la inyección, solución salina fisiológica o líquido cefalorraquídeo artificial, posiblemente complementado con otros materiales habituales de las composiciones para la administración parenteral. Otros vehículos de ejemplo son la solución salina tamponada neutra o la solución salina mezclada con seroalbúmina. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender tampón Tris de aproximadamente pH 7,0-8,5, o tampón acetato de aproximadamente pH 4,0-5,5 y puede además incluir sorbitol o un sustituto adecuado del mismo. En ciertas realizaciones de la divulgación, las composiciones de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA se pueden preparar para el almacenamiento mezclando la composición seleccionada que tiene el grado de pureza deseado con agentes de formulación opcionales (REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, véase más arriba) en forma de una torta liofilizada o una solución acuosa. Además, el producto de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA se puede formular como un liofilizado utilizando los excipientes adecuados, tales como sacarosa.

Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden seleccionar para la administración parenteral. Otra alternativa es que las composiciones se pueden seleccionar para la inhalación o para la administración por el tubo digestivo, tal como por vía oral. La preparación de tales composiciones farmacéuticamente aceptables está dentro de los conocimientos de la técnica.

Los componentes de formulación están presentes preferiblemente en concentraciones que son aceptables para el sitio de administración. En algunas realizaciones se utilizan tampones para mantener la composición a pH fisiológico o a un pH ligeramente más bajo, típicamente dentro de un intervalo de pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 8.

Cuando se contempla la administración parenteral, las composiciones terapéuticas para el uso en esta divulgación se pueden dar a conocer en forma de una solución acuosa aceptable para la vía parenteral, sin pirógenos, que comprende la proteína de fijación al antígeno IL-17RA deseada en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Un vehículo particularmente adecuado para la inyección parenteral es agua destilada estéril en la que la proteína de fijación al antígeno IL-17RA se formula como una solución isotónica estéril, conservada adecuadamente. La preparación puede implicar la formulación de la molécula deseada con un agente, tal como microesferas inyectables, partículas bioerosionables, compuestos poliméricos (tal como ácido poliláctico o ácido poliglucólico), perlas o liposomas, que pueden proporcionar la liberación controlada o continua del producto que se puede administrar a través de una inyección de liberación prolongada. En algunas realizaciones también se puede utilizar el ácido hialurónico, que tiene el efecto de favorecer la duración constante en la circulación. Se pueden utilizar dispositivos de administración de fármacos implantables para introducir la proteína de fijación a antígeno deseada.

Las composiciones farmacéuticas de la divulgación se pueden formular para inhalación. En estas realizaciones, las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA se formulan ventajosamente como un polvo inhalable seco. En realizaciones específicas, las soluciones para inhalación de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA se pueden formular también con un propulsor para la administración en aerosol. En ciertas realizaciones ,las soluciones pueden estar nebulizadas. Por lo tanto, los procedimientos de formulación y de administración pulmonar se describen adicionalmente en la solicitud de patente internacional WO94/020069, que describe la dispensación pulmonar de proteínas modificadas químicamente. También se contempla que las formulaciones se pueden administrar por vía oral. Las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que se administran de esta manera se pueden formular con o sin los vehículos habitualmente utilizados en la formulación de formas de dosificación sólidas, tales como comprimidos y cápsulas. En determinadas realizaciones se puede diseñar una cápsula para liberar la porción activa de la formulación en el punto del tubo digestivo cuando la biodisponibilidad se eleva al máximo y la degradación presistémica se disminuye al mínimo. Se pueden incluir otros agentes para facilitar la adsorción de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA. También se pueden emplear diluyentes, saborizantes, ceras de bajo punto de fusión, aceites vegetales, lubricantes, agentes de suspensión, desintegrantes de comprimidos y aglutinantes.

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Una composición farmacéutica de la divulgación se da a conocer preferiblemente para comprender una cantidad eficaz de una o varias proteínas de fijación al antígeno IL-17RA en una mezcla con excipientes no tóxicos que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Al disolver los comprimidos en agua estéril u otro vehículo adecuado, se pueden preparar soluciones en forma de dosis unitaria. Los excipientes adecuados incluyen, pero sin limitarse a ellos, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio o bicarbonato de sodio, lactosa o fosfato de calcio; o aglutinantes, tales como almidón, gelatina o goma arábiga; o lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco.

Otras composiciones farmacéuticas serán evidentes para los expertos en la técnica, entre ellas las formulaciones que incluyen proteínas de fijación al antígeno IL-17RA en formulaciones de liberación prolongada. Los expertos en la técnica también conocen las técnicas para formular una serie medios de administración prolongada diferentes, tales como los vehículos de liposomas, micropartículas bioerosionables o perlas porosas e inyecciones de liberación prolongada. Véase, por ejemplo, la solicitud de patente internacional WO93/015722, que describe la liberación controlada de micropartículas poliméricas porosas para la administración de composiciones farmacéuticas. Las preparaciones de liberación prolongada pueden incluir matrices de polímeros semipermeables en forma de artículos con forma, p. ej., películas o microcápsulas. Las matrices de liberación prolongada pueden incluir poliésteres, hidrogeles, polilactidas (como se describe en la patente de los EE. UU. n.º 3.773.919 y la publicación de la solicitud de patente europea n.º EP 058481), copolímeros del ácido L-glutámico y γ-etil-L-glutamato (Sidman et al., 1983, Biopolymers 2: 547-556), poli(2-hidroxietil-metacrilato) (Langer et al., 1981, . 15: 167277 y Langer, 1982, Chem. Tech. 12: 98-105), etilenvinilacetato (Langer et al., 1981, véase más arriba) o ácido poliD-(–)-3-hidroxibutírico (publicación de solicitud de patente europea n.º EP 133.988). Las composiciones de liberación prolongada también pueden incluir liposomas que se pueden preparar mediante cualquiera de los diferentes procedimientos conocidos en la técnica. Véase, p. ej., Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 36883692; publicaciones de las solicitudes de patente europea n.os EP 036.676, EP 088.046 y EP 143.949.

Las composiciones farmacéuticas utilizadas para la administración in vivo se dan a conocer típicamente como preparaciones estériles. La esterilización se puede realizar mediante la filtración a través de las membranas de filtración estériles. Cuando se liofiliza la composición, la esterilización con este procedimiento se puede llevar a cabo antes o después de la liofilización y de la reconstitución. Las composiciones para la administración parenteral se pueden conservar en forma liofilizada o en una solución. Las composiciones parenterales se colocan por lo general en un contenedor que tiene un puerto de acceso estéril, por ejemplo, una bolsa o vial de solución intravenosa con un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica.

Aspectos de la divulgación se refieren a formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA, que se pueden utilizar como composiciones farmacéuticas, como se describe en la solicitud de patente internacional WO06138181A2 (PCT/US2006/022599). En la presente memoria se describen formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA en la que la concentración de sales total es de menos de 150 mM.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que además comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA y uno o varios polioles y/o uno o varios tensioactivos. Las formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA pueden comprender una proteína de fijación al antígeno IL-17RA, en la que la concentración de sales total es de menos de 150 mM, que además comprende uno o varios excipientes que incluyen, pero sin limitarse a ellos, sales farmacéuticamente aceptables; equilibrantes osmóticos (agentes de tonicidad); tensioactivos, polioles, antioxidantes; antibióticos; antimicóticos; voluminadores; lioprotectores; antiespumantes; quelantes; conservantes; colorantes; y analgésicos. Las formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA pueden comprender una proteína de fijación al antígeno IL-17RA y uno o varios agentes diferentes farmacéuticamente activos.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA de la invención, en donde la proteína de fijación al antígeno IL-17RA tiene una capacidad de tamponamiento por unidad de volumen por unidad de pH de al menos la de aproximadamente: tampón de acetato de sodio a 2,0 o 3,0 o 4,0 o 5,0 o 6,50 u 8,00 o 10,0 o 15,0 o 20,0 o 30,0 o 40,0 o 50,0 o 75,0 o 100 o 125 o 150 o 200 o 250 o 300 o 350 o 400 o 500 o 700 o 1000 o 1500 o 2000 0 2500 o 3000 o 4000 o 5000 mM en agua pura sobre el margen de pH de 5,0 a 4,0 o de pH de 5,0 a 5,5, o al menos 2,0 mM,

o al menos 3,0 mM, o al menos 4,0 mM o al menos 5,0 mM, o al menos 7,5 mM o al menos 10 mM o al menos 20 mM.

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Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA en donde, exclusivo de la capacidad tamponante de la proteína, la capacidad tamponante por unidad de volumen por unidad de pH de la formulación puede ser igual o menor que la del tampón de acetato de sodio a 1,0 o 1,5 o 2,0 o 3,0 o 4,0 o 5,0 mM en agua pura sobre el margen de pH de 4,0 a 5,0 o de pH de 5,0 a 5,5, u opcionalmente de menos de 1,0 mM, opcionalmente de menos de 2,0 mM, opcionalmente de menos de 2,5 mM, opcionalmente de menos de 3,0 mM y opcionalmente de menos de 5,0 mM.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA de la invención, en donde sobre el margen de ±1 unidad de pH del pH de la formulación, la capacidad tamponante de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA es al menos aproximadamente: 1,00 o 1,50 o 1,63 o 2,00 o 3,00 o 4,00 o 5,00 o 6,50 u 8,00 o 10,0 o 15,0 o 20,0 o 30,0 o 40,0 o 50,0 o 75,0 o 100 o 125 o 150 o 200 o 250 o 300 o 350 o 400 o 500 o 700 o 1000 o 1500 o 2000 o 3000 o 4000 o 5000 mEq/l por unidad de pH, opcionalmente al menos aproximadamente 1,00, opcionalmente al menos aproximadamente 1,50, opcionalmente al menos aproximadamente 1,63, opcionalmente al menos aproximadamente 2,00, opcionalmente al menos aproximadamente 3,00, opcionalmente al menos aproximadamente 5,0, opcionalmente al menos aproximadamente 10,0 y opcionalmente al menos aproximadamente 20,0. En la presente memoria se describen formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA, en donde sobre el margen de ±1 unidad de pH del pH de la formulación, exclusivo de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA, la capacidad tamponante por unidad de volumen por unidad de pH de la formulación es igual o menor a la del tampón de acetato de sodio a 0,50 o 1,00 o 1,50 o 2,00 o 3,00 o 4,00 o 5,00 o 6,50 u 8,00 o 10,0 o 20,0 o 25,0 mM en agua pura sobre el margen de pH de 5,0 a 4,0 o de pH de 5,0 a 5,5.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA, en donde sobre un margen de ±1 unidad de pH de un pH deseado, la proteína proporciona al menos aproximadamente el 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% o 99,5% de la capacidad tamponante de la formulación, opcionalmente al menos aproximadamente el 75%, opcionalmente al menos aproximadamente el 85%, opcionalmente al menos aproximadamente el 90%, opcionalmente al menos aproximadamente el 95%, opcionalmente al menos aproximadamente el 99% de la capacidad tamponante de la formulación.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA, en donde la concentración de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA está entre aproximadamente: 20 y 400, o 20 y 300, o 20 y 250, o 20 y 200, o 20 y 150 mg/ml, opcionalmente entre aproximadamente 20 y 400 mg/ml, opcionalmente entre aproximadamente 20 y 250, y opcionalmente entre aproximadamente 20 y 150 mg/ml.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA, en donde el pH mantenido por la acción tamponante de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA está entre aproximadamente: 3,5 y 8,0, o 4,0 y 6,0, o 4,0 y 5,5, o 4,0 y 5,0, opcionalmente entre aproximadamente 3,5 y 8,0, y opcionalmente entre aproximadamente 4,0 y 5,5.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA, en donde la concentración de sales es de menos de: 150 mM o 125 mM o 100 mM o 75 mM o 50 mM o 25 mM, opcionalmente 150 mM, opcionalmente 125 mM, opcionalmente 100 mM, opcionalmente 75 mM, opcionalmente 50 mM y opcionalmente 25 mM.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA y una o varias sales; polioles; tensioactivos; equilibrantes osmóticos; agentes de tonicidad; antioxidantes; antibióticos; antimicóticos; voluminadores; lioprotectores; antiespumantes; quelantes; conservantes; colorantes; analgésicos; u otros agentes farmacéuticos; todos ellos farmacéuticamente aceptables.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA y uno o varios polioles farmacéuticamente aceptables en una cantidad que es hipotónica, isotónica o hipertónica, preferiblemente aproximadamente isotónica, en particular preferiblemente isotónica, tales como, pero sin limitarse a ellos, uno cualquiera o varios de sorbitol, manitol, sacarosa, trehalosa o glicerol, opcionalmente aproximadamente sorbitol al 5%, manitol al 5%, sacarosa al 9%, trehalosa al 9% o glicerol al 2,5%.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA que además comprende un tensioactivo, preferiblemente uno o varios de polisorbato 20, polisorbato 80, otros ésteres de ácidos grasos de sorbitano, polietoxilatos y poloxámero 188, preferiblemente polisorbato 20 o polisorbato 80, opcionalmente polisorbato 20 o polisorbato 80 de aproximadamente 0,001 al 0,1%, opcionalmente polisorbato 20 o polisorbato 80 del 0,002 al 0,02%, u opcionalmente polisorbato 20 o polisorbato 80 del 0,002 al 0,02%.

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Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA, en donde la formulación está estéril y es adecuada para el tratamiento de un sujeto humano o no humano.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA y un solvente, en donde la proteína de fijación al antígeno IL-17RA tiene una capacidad tamponante por unidad de volumen por unidad de pH de al menos la del acetato de sodio a 4,0 mM en agua sobre el margen de pH de 4,0 a 5,0 o de pH de 5,0 a 5,5, en donde la capacidad tamponante por unidad de volumen de la formulación exclusiva de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA es igual a o menor que la del acetato de sodio a 2,0 mM en agua sobre los mismos márgenes preferiblemente determinados de la misma manera.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA y un solvente, en donde en el pH de la formulación, la capacidad tamponante de la proteína es al menos de 1,63 mEq/l para un cambio de pH de la formulación de ±1 unidad de pH, en donde la capacidad tamponante de la formulación, exclusiva de la proteína, es igual o menor de 0,81 mEq/l al pH de la formulación para un cambio de pH de ±1 unidad de pH.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA que comprenden una proteína de fijación al antígeno IL-17RA, en donde la formulación está en la forma de un liofilizado que tras la reconstitución proporciona una formulación de acuerdo con cualquiera de lo anteriormente dicho o de lo que viene a continuación.

Una realización proporciona formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA en un kit que comprende uno o varios viales que contienen una formulación autotamponada de proteína de fijación al antígeno IL-17RA o un liofilizado de una formulación autotamponada de proteína de fijación al antígeno IL-17RA de acuerdo con cualquiera de lo anteriormente dicho o de lo que viene a continuación, e instrucciones referentes al uso de las mismas.

Una realización proporciona un procedimiento para preparar una formulación autotamponada de proteína de fijación al antígeno IL-17RA o un liofilizado de la misma de acuerdo con cualquiera de lo anteriormente dicho o de lo que viene a continuación, que comprende retirar el tampón residual con un contraión.

Una realización proporciona un procedimiento para preparar una formulación autotamponada de proteína de fijación al antígeno IL-17RA o un liofilizado de la misma de acuerdo con cualquiera de lo anteriormente dicho o de lo que viene a continuación, que comprende retirar el tampón residual con uno cualquiera o varios de lo siguiente en presencia de un contraión: cromatografía, diálisis y/o filtración de flujo tangencial.

Una realización proporciona un procedimiento para preparar una formulación autotamponada de proteína de fijación al antígeno IL-17RA o un liofilizado de la misma de acuerdo con cualquiera de lo anteriormente dicho o de lo que viene a continuación, que comprende retirar el tampón residual con filtración de flujo tangencial.

Una realización proporciona un procedimiento para preparar una formulación autotamponada de proteína de fijación al antígeno IL-17RA o un liofilizado de la misma de acuerdo con cualquiera de lo anteriormente dicho o de lo que viene a continuación, que comprende una etapa de diálisis contra una solución a un pH por debajo del de la preparación y, si es necesario, ajustar el pH después mediante la adición de ácido diluido o base diluida.

Como se explicó más arriba, algunas composiciones proteicas autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA, en particular composiciones farmacéuticas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA, que comprenden, además de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA, uno o varios excipientes tales como los descritos con fines ilustrativos en este apartado y en otras partes de la presente memoria. Se pueden utilizar excipientes en la invención en este sentido para una amplia variedad de propósitos, tales como ajustar las propiedades físicas, químicas o biológicas de las formulaciones, tales como el ajuste de la viscosidad, y/o los procedimientos de la divulgación para mejorar la eficacia y/o para estabilizar tales formulaciones y procedimientos contra la degradación y el deterioro debido a, por ejemplo, tensiones que se producen durante la fabricación, el transporte, el almacenamiento, la preparación antes del uso, la administración y a partir de entonces.

Están disponibles una serie de exposiciones sobre los materiales y procedimientos de formulación y estabilización de proteínas útiles en este sentido, tales como Arakawa et al., «Solvent interactions in pharmaceutical formulations», Pharm. Res. 8(3): 285-91 (1991); Kendrick et al., «Physical stabilization of proteins in aqueous solution» en: RATIONAL DESIGN OF STABLE PROTEIN FORMULATIONS: THEORY AND PRACTICE, Carpenter y Manning, eds. Pharmaceutical Biotechnology. 13: 61-84 (2002) y Randolph et al., «Surfactant-protein interactions», Pharm. . 13: 159-75 (2002), particularmente en las partes relevantes sobre los excipientes y procedimientos de lo mismo para formulaciones autotamponadas de proteínas de acuerdo con la invención actual, en especial como productos y procedimientos farmacéuticos de proteínas para usos médicos humanos y/o veterinarios.

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En la tabla 3 se recogen diferentes excipientes útiles en la invención y se describen además más adelante.

Tabla 3: Tipos de excipientes y sus funciones

Tipo: Función

Líquidos: Liofilizados

Agentes de: Proporciona isotonicidad a la formulación Los estabilizantes incluyen crio-y lioprotectores.

tonicidad /: para que sea adecuada para la inyección. Los ejemplos incluyen polioles, azúcares y

Estabilizantes: Los ejemplos incluyen polioles, sales y aminoácidos. Ayudan a mantener la proteína en un estado más compacto (polioles). Disminuyen al mínimo las interacciones electroestáticas entre proteínas en solución (sales). polímeros. Los crioprotectores protegen a las proteínas de las tensiones de la congelación. Los lioprotectores estabilizan las proteínas en el estado de liofilización.

Voluminadores: No aplicable Se usan para mejorar el acabado del producto y para impedir que exploten. Proporciona fuerza estructural a la torta de liofilización. Los ejemplos incluyen el manitol y la glicina.

Tensioactivos: Impiden/controlan la agregación, la formación de partículas y la absorción del fármaco a la superficie. Los ejemplos incluyen el polisorbato 20 y el 80. Se emplean si se produce el problema de agregación durante la liofilización. Pueden servir para reducir el tiempo de reconstitución. Los ejemplos incluyen el polisorbato 20 y el 80.

Antioxidantes: Controlan la oxidación de la proteína No se suelen emplear, las reacciones moleculares en la torta liofilizada se retrasan enormemente.

Iones metálicos: Se incluye un ion metálico específico en una Se pueden incluir si se incluye un ion metálico

/ Quelantes: formulación líquida sólo como cofactor. Los cationes divalentes, tales como el cinc y el magnesio, se utilizan en las formulaciones de suspensión. Se utilizan quelantes para inhibir las reacciones catalizadas por los iones de metales pesados. específico sólo como cofactor. Los quelantes no se suelen necesitar en las formulaciones liofilizadas.

Conservantes: Particularmente importantes para las formulaciones en multidosis. Protege contra el crecimiento microbiano. Ejemplo: alcohol bencílico. Solo para formulaciones en multidosis. Proporciona protección contra el crecimiento microbiano en la formulación. Normalmente se incluye en el diluyente de reconstitución (p. ej., bWFI).

Las sales se pueden utilizar de acuerdo con determinadas realizaciones de la invención para, por ejemplo, ajustar la fuerza iónica y/o la isotonicidad de una formulación autotamponada y/o para mejorar la solubilidad y/o la estabilidad física de una proteína autotamponante u otro ingrediente de una composición de proteína autotamponante de acuerdo con la invención.

Como se sabe bien, los iones pueden estabilizar el estado nativo de las proteínas mediante su fijación a los restos cargados de la superficie de las proteínas y el apantallamiento de los grupos polares y cargados de la proteína, con lo que se reduce la fuerza de sus interacciones electroestáticas, atractivas y repulsivas. Los iones también pueden estabilizar el estado desnaturalizado de una proteína mediante la fijación, en particular, a los enlaces peptídicos desnaturalizados (-CONH) de la proteína. Además, la interacción iónica con los grupos cargados y los polares en una proteína también puede reducir las interacciones electroestáticas intermoleculares y con ello impedir o reducir la agregación y la insolubilidad de las proteínas.

Las especies iónicas difieren significativamente respecto a su efecto sobre las proteínas. Se han desarrollado varias clasificaciones de los iones y sus efectos sobre las proteínas que se pueden utilizar para formular composiciones de proteínas autotamponantes de acuerdo con la invención. Un ejemplo es la serie de Hofmeister, que ordena los solutos iónicos y no iónicos polares en función de su efecto sobre la estabilidad conformacional de las proteínas en la solución. Los solutos estabilizantes se denominan «cosmótropos». Los solutos desestabilizantes se denominan caótropos. Los cosmótropos se suelen utilizar a concentraciones elevadas (p. ej., sulfato de amonio a > 1 M) para precipitar las proteínas de la solución («precipitación con sal»). Los caótropos se suelen utilizar para desnaturalizar y/o solubilizar las proteínas («solubilización por salinización»). La eficacia relativa de los iones para solubilizar o precipitar con sal define su posición en la serie de Hofmeister.

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Además de su utilidad y sus inconvenientes (como se explica más arriba), las sales también son eficaces para reducir la viscosidad de las formulaciones de proteínas y se pueden utilizar en la invención con ese propósito.

Para mantener la isotonicidad en una formulación parenteral de acuerdo con las realizaciones preferidas de la invención, mejorar la solubilidad y/o estabilidad de la proteína, mejorar las características de viscosidad, evitar los efectos perjudiciales de las sales sobre la estabilidad y agregación de las proteínas, e impedir la degradación de las proteínas mediada por sales, la concentración de sal en las formulaciones autotamponadas de acuerdo con diferentes realizaciones preferidas de la invención es de menos de 150 mM (para los iones monovalentes) y de 150 mEq/l para los iones multivalentes. En este sentido, en determinadas realizaciones particularmente preferidas de la invención, la concentración total de sales es de aproximadamente 75 mEq/l a aproximadamente 140 mEq/l.

Los aminoácidos libres se pueden utilizar en formulaciones autotamponadas de fijación al antígeno IL-17RA de acuerdo con diferentes realizaciones de la divulgación como agentes voluminadores, estabilizantes y antioxidantes, así como otros usos estándares. Sin embargo, los aminoácidos incluidos en las formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA no proporcionan una acción tamponante. Por este motivo, los que tienen una capacidad de tamponamiento significativa, o bien no se emplean, o bien no se emplean a un pH alrededor del cual tienen una actividad tamponante significativa, o bien se utilizan a una concentración baja de tal forma que, como resultado, su capacidad de tamponamiento en la formulación no es significativa. Este es en particular el caso de la histidina y de otros aminoácidos que se utilizan con frecuencia como tampones en las formulaciones farmacéuticas.

Sujetas a la consideración antedicha, la lisina, la prolina, la serina y la alanina se pueden utilizar para estabilizar las proteínas de una formulación. La glicina es útil en la liofilización para garantizar que la estructura y las propiedades de la torta son las correctas. La arginina puede ser útil para inhibir la agregación de las proteínas, tanto en formulaciones líquidas como liofilizadas. La metionina es útil como antioxidante.

Los polioles incluyen azúcares, p. ej., manitol, sacarosa y sorbitol, y alcoholes polihídricos tales como, por ejemplo, glicerol y propilenglicol y, con el propósito de discutirlos en la presente memoria, polietilenglicol (PEG) y las sustancias relacionadas. Los polioles son cosmótropos. Son estabilizantes útiles en formulaciones líquidas y liofilizadas para proteger las proteínas de los procedimientos de degradación física y química. Los polioles también son útiles para ajustar la tonicidad de las formulaciones.

Entre los polioles útiles para seleccionar realizaciones de la invención se encuentra el manitol, que se suele utilizar para asegurar la estabilidad estructural de la torta en las formulaciones liofilizadas. Asegura la estabilidad estructural a la torta. Por lo general, se utiliza con lioprotector, p. ej., la sacarosa. El sorbitol y la sacarosa se encuentran entre los agentes preferidos para ajustar la tonicidad y como estabilizantes para proteger contra las tensiones de la liofilización durante el transporte o la preparación de graneles durante el procedimiento de fabricación. La reducción de los azúcares (que contienen grupos cetona o aldehído libres), tales como glucosa y lactosa, puede glucar los restos de arginina y lisina de la superficie. Por lo tanto, no se suelen encontrar entre los polioles preferidos para el uso de acuerdo con la invención. Además, los azúcares que forman tales especies reactivas, tales como la sacarosa, que se hidroliza a fructosa y glucosa en condiciones ácidas, y en consecuencia ocasiona la glucación, tampoco se encuentra entre los aminoácidos preferidos de la invención en este sentido. El PEG es útil para estabilizar las proteínas y como crioprotector, y se puede utilizar en la invención en este sentido, tal como está en Recombinate®.

Realizaciones de formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA pueden además comprender tensioactivos. Las moléculas de proteína pueden ser propensas a adsorberse sobre las superficies y a la desnaturalización y agregación consecuentes en las interfases aire-líquido, sólido-líquido y líquidolíquido. Estos efectos se escalan por lo general inversamente a la concentración de proteína. Estas interacciones perjudiciales se escalan por lo general inversamente a la concentración de proteína y empeoran típicamente con la agitación física, tal como la generada durante el transporte y la manipulación de un producto.

Los tensioactivos se utilizan por sistema para prevenir, disminuir al mínimo o reducir la adsorción a las superficies. Los tensioactivos útiles de la invención en este sentido incluyen polisorbato 20, polisorbato 80, otros ésteres de ácidos grasos de polietoxilatos de sorbitano, y poloxámero 188.

Los tensioactivos también se utilizan de forma habitual para controlar la estabilidad conformacional de las proteínas. El uso de los tensioactivos, en este sentido es específico de la proteína, ya que lo típico es que un tensioactivo dado estabilice algunas proteínas y desestabilice otras. Los polisorbatos son sensibles a la degradación oxidativa y a menudo, cuando se suministran, contienen una cantidad de peróxidos suficiente para oxidar las cadenas laterales de las proteínas, en especial de la metionina. En consecuencia, los polisorbatos se deben utilizar con cuidado y, cuando se utilizan, deben emplearse a su concentración eficaz más baja. En este sentido, los polisorbatos ejemplifican la regla general de que los excipientes se deben utilizar a su concentración eficaz más baja.

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Realizaciones de formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA pueden además comprender uno o más antioxidantes. Hasta cierto punto, se puede impedir la oxidación perjudicial de las proteínas en las formulaciones farmacéuticas si se mantiene la concentración de oxígeno y temperatura ambientales adecuadas, y se evita la exposición a la luz. Los excipientes antioxidantes se pueden utilizar también para impedir la degradación oxidativa de las proteínas. Entre los antioxidantes útiles en este sentido se encuentran los reductores, depuradores de oxígeno/radicales libres y los quelantes. Los antioxidantes para ser usados en las formulaciones de proteínas terapéuticas de acuerdo con la invención son preferiblemente hidrosolubles y mantienen su actividad a lo largo de la vida útil de un producto. El EDTA es un antioxidante preferido de acuerdo con la invención en este sentido y se puede utilizar en la invención esencialmente del mismo modo que se ha utilizado en las formulaciones del factor ácido de crecimiento del fibroblastos y en los productos tales como Kineret® y Ontak®.

Los antioxidantes pueden dañar a las proteínas. Por ejemplo, los reductores, tales como el glutatión en particular, pueden alterar los puentes disulfuro intramoleculares. Así pues, los antioxidantes para ser usados en la invención se seleccionan para, entre otras cosas, eliminar o reducir suficientemente la posibilidad de que ellos mismos dañen las proteínas de la formulación.

Las formulaciones pueden incluir iones metálicos que son cofactores de proteínas y que son necesarios para formar complejos de coordinación de proteínas, tales como el cinc necesario para formar ciertas suspensiones de insulina. Los iones metálicos pueden inhibir algunos procedimientos que degradan las proteínas. Sin embargo, los iones metálicos también catalizan los procedimientos físicos y químicos que degradan las proteínas.

Los iones de magnesio (10 a 120 mM) se pueden utilizar para inhibir la isomerización del ácido aspártico en ácido isoaspártico. Los iones de Ca2+ (hasta 100 mM) incrementan la estabilidad de la desoxirribonucleasa humana (rhDNasa, Pulmozyme®). Sin embargo, Mg2+, Mn2+ y Zn2+ desestabilizan la rhDNasa. De igual forma, Ca2+ y Sr2+ estabilizan el factor VIII, puede desestabilizarse por Mg2+, Mn2+ y Zn2+, Cu2+ y Fe2+, y su agregación se puede incrementar por los iones de AI3+.

Realizaciones de formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA pueden además comprender uno o varios conservantes. Los conservantes son necesarios cuando se desarrollan formulaciones parenterales de multidosis que implican más de una extracción del mismo contenedor. Su función principal es inhibir el crecimiento microbiano y asegurar la esterilidad del producto a lo largo de su vida útil o los términos de uso del producto farmacológico. Los conservantes utilizados de forma habitual incluyen alcohol bencílico, fenol y m-cresol. Aunque los conservantes se llevan usando desde hace mucho con soluciones parenterales de moléculas pequeñas, cuesta trabajo desarrollar formulaciones de proteínas que incluyan conservantes. Los conservantes casi siempre tienen un efecto desestabilizador (agregación) sobre las proteínas, y esto se ha convertido en un factor importante al limitar su uso en las formulaciones de proteína en multidosis. Hasta la fecha, la mayoría de los fármacos proteicos se han formulado sólo para un único uso. Sin embargo, cuando se pueden formular en multidosis, tienen la ventaja añadida de ser cómodos para el paciente e incrementar la capacidad de comercialización. Un buen ejemplo es el de la hormona de crecimiento humana (hGH), en la que el desarrollo de las formulaciones preservadas ha conducido la comercialización de presentaciones de plumas inyectoras multiuso más cómodas. En el mercado están actualmente disponibles al menos cuatro dispositivos de pluma inyectora que contienen las formulaciones preservadas de hGH. Norditropin® (líquido, Novo Nordisk), Nutropin AQ® (líquido, Genentech) y Genotropin (liofilizado: cartucho de cámara dual, Pharmacia & Upjohn) contienen fenol, mientras que Somatrope® (Eli Lilly) se formula con m-cresol.

Hay que considerar varios aspectos durante la formulación y el desarrollo de las formas farmacéuticas preservadas. Hay que optimizar la concentración eficaz de conservante en el producto farmacológico. Esto requiere la comprobación de un conservante dado en la forma farmacéutica con márgenes de concentración que confieren una eficacia antimicrobiana sin comprometer la estabilidad de la proteína. Por ejemplo, se cribaron con éxito tres conservantes en el desarrollo de una formulación líquida para el receptor (tipo I) de la interleucina 1 mediante la calorimetría de barrido diferencial (DSC, por su nombre en inglés). Los conservantes se ordenaron según su impacto sobre la estabilidad a las concentraciones que se suelen utilizar en los productos comerciales.

Como podría esperarse, el desarrollo de las formulaciones líquidas que contienen conservantes son más difíciles que las formulaciones liofilizadas. Los productos liofilizados se pueden liofilizar sin el conservante y se reconstituyen con un conservante que contiene diluyente en el momento de su uso. Esto acorta el tiempo que un conservante está en contacto con la proteína, lo que disminuye significativamente al mínimo los riesgos de estabilidad asociados. Con las formulaciones líquidas, la eficacia y estabilidad del conservante se ha de mantener durante toda la semivida del producto (aproximadamente de 18 a 24 meses). Un punto importante a destacar es que la eficacia del conservante se tiene que demostrar en la formulación final que contiene el fármaco activo y todos los componentes del excipiente.

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Las formulaciones autotamponadas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA se diseñarán por lo general para vías y procedimientos de administración específicos, para dosis de administración y frecuencias de administración específicas, para tratamientos específicos de enfermedades específicas, con márgenes de biodisponibilidad y persistencia, entre otras cosas. Así pues, las formulaciones se pueden diseñar de acuerdo con la invención para la administración por cualquier vía adecuada, que incluyen, pero sin limitarse a ellas, las vías oral, ótica, oftálmica, rectal y vaginal, y mediante las vías parenterales, que incluyen la inyección intravenosa y la intraarterial, inyección intramuscular e inyección subcutánea.

Las composiciones de acuerdo con la invención se pueden fabricar con procedimientos convencionales bien conocidos para fabricar, formular y utilizar proteínas, en particular las proteínas farmacéuticas. Se describen procedimientos para preparar las composiciones, que comprenden el uso de contraiones para retirar los agentes tamponantes residuales. En este sentido, la terminología contraión es cualquier constituyente polar o cargado que actúa para que el tampón sea desplazado de la composición durante su preparación. Los contraiones útiles en este sentido incluyen, por ejemplo, glicina, cloruro, sulfato y fosfato. La terminología contraión en este sentido se utiliza para significar esencialmente la misma cosa que ion de desplazamiento.

Los tamponantes sobrantes se pueden retirar con los contraiones, mediante una serie de procedimientos bien conocidos que incluyen, pero sin limitarse a ellos, los procedimientos estándares de la diálisis y los procedimientos basados en la difusión a través de membranas de gran resolución, tales como la diafiltración con flujo tangencial. En este sentido, los procedimientos para la retirada del tampón residual que emplean un contraión también, en algunos casos, se pueden realizar con la cromatografía de exclusión por tamaños.

En ciertar realizaciones preferidas relacionadas a este respecto, las composiciones de acuerdo con la invención se preparan mediante un procedimiento que implica la diálisis contra una solución sin tamponar a un pH por debajo del de la preparación que contiene la proteína autotamponante. La solución sin tamponar puede comprender los contraiones, en particular los que facilitan la retirada del tampón residual y no afectan adversamente a la proteína autotamponante ni a la formulación de la misma. Tras la diálisis, se puede ajustar el pH de la preparación al pH deseado con el uso de un ácido diluido o una base diluida.

En ciertas realizaciones relacionadas particularmente preferidas a este respecto, las composiciones de acuerdo con la invención se pueden preparar mediante un procedimiento que implica la diafiltración con flujo tangencial contra una solución sin tamponar a un pH por debajo del de la preparación que contiene la proteína autotamponante. La solución sin tamponar puede comprender contraiones, en particular los que facilitan la retirada del tampón residual y no afectan adversamente a la proteína autotamponante ni a la formulación de la misma. Tras la diafiltración, se puede ajustar el pH de la preparación al pH deseado con un ácido diluido o una base diluida.

Una vez que se ha formulado la composición farmacéutica, se puede conservar en viales estériles como una solución, suspensión, gel, emulsión, sólido, cristal o como un polvo deshidratado o liofilizado. Tales formulaciones se pueden almacenar en una forma lista para usar o bien en una forma (p. ej., liofilizada) que hay que reconstituir antes de la administración. Se describen en la presente memoria kits para elaborar una unidad de administración de dosis unitaria. Los kits de la divulgación pueden contener cada uno un primer contenedor que tiene una proteína seca y un segundo contenedor que tiene una formulación acuosa.En ciertas realizaciones de esta divulgación, se proporcionan kits que contienen jeringuillas rellenadas previamente con una o varias cámaras (p. ej., jeringuillas líquidas o liojeringuillas).

La cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que contiene la proteína de fijación al antígeno IL-17RA a emplear dependerá, por ejemplo, del contexto terapéutico y de los objetivos. El experto en la técnica apreciará que los niveles de dosificación adecuados para el tratamiento variarán en función, en parte, de la molécula suministrada, de la indicación para la cual se utiliza la proteína de fijación al antígeno IL-17RA, de la vía de administración, y del tamaño (masa corporal, superficie corporal o tamaño del órgano) y/o estado (la edad y la salud general) del paciente. En algunas realizaciones, el médico puede ajustar la dosis y modificar vía de administración para obtener el efecto terapéutico óptimo. Una dosis típica puede oscilar de aproximadamente 0,1 µg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg o más, según los factores mencionados anteriormente. En realizaciones específicas, la dosis puede oscilar de 0,1 µg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg, opcionalmente de 1 µg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg o de 10 µg/kg hasta aproximadamente 5 mg/kg.

La frecuencia de las dosis dependerá de los parámetros farmacocinéticos de la proteína de fijación al antígeno IL-17RA concreta utilizada en la formulación. Típicamente, un médico administra la composición hasta que se alcanza una dosis que consigue el efecto deseado. Por lo tanto, la composición se puede administrar como una dosis única o como dos o más dosis (que pueden contener o no la misma cantidad de la molécula deseada) en el tiempo, o como una infusión continua a través de un dispositivo de implantación o catéter. El refinamiento adicional de la dosis adecuada lo hacen por norma los expertos en la técnica y se encuentra en del ámbito de tareas realizadas de forma sistemática por ellos. Las dosis adecuadas se pueden averiguar a través del uso de datos de respuesta a la dosis adecuados. En ciertas realizaciones, las proteínas de fijación a antígeno de la divulgación se pueden administrar a los pacientes a lo largo de un periodo de tiempo extenso. La administración crónica de una proteína de fijación a antígeno de la divulgación disminuye al mínimo la respuesta alérgica o inmunitaria adversa que suele aparecer con las proteínas de fijación a antígeno que no son completamente humanas, por ejemplo, un anticuerpo generado contra un antígeno humano en un animal no humano, por ejemplo, un anticuerpo que no es completamente humano o un anticuerpo no humano producido en una especie no humana.

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La vía de administración de la composición farmacéutica está en concordancia con los procedimientos conocidos, p. ej., por vía oral, mediante inyección por las vías intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimatosa), intracerebroventricular, intramuscular, intraocular, intraarterial, intraportal o intralesional; mediante sistemas de liberación prolongada o mediante dispositivos de implantación. En algunas realizaciones, las composiciones se pueden administrar mediante inyección en embolada o continuamente mediante infusión, o mediante un dispositivo de implantación.

La composición también se puede administrar de forma local mediante la implantación de una membrana, esponja u otro material adecuado sobre el cual se ha absorbido o encapsulado la molécula deseada. En determinadas realizaciones, cuando se utiliza un dispositivo de implantación, el dispositivo se puede implantar en cualquier tejido u órgano adecuado y la administración de la molécula deseada puede ser por difusión, bolo de liberación prolongada o administración continua.

También puede ser deseable utilizar ex vivo composiciones farmacéuticas de la proteínas de fijación al antígeno IL-17RA de acuerdo con la invención. En tales casos, las células, tejidos u órganos que se han retirado del paciente se exponen a composiciones farmacéuticas de proteínas de fijación al antígeno IL-17RA, tras lo cual las células, tejidos y/o órganos se implantan con posterioridad en el paciente.

En particular, las proteínas de fijación al antígeno IL-17RA se pueden administrar con la implantación de determinadas células que han sido manipuladas genéticamente, mediante procedimientos tales como los descritos en la presente memoria, para expresar y secretar el polipéptido. En algunas realizaciones, tales células pueden ser células animales o humanas y pueden ser autólogas, heterólogas o xenógenas. En determinadas realizaciones, las células se pueden inmortalizar. En otras realizaciones, para disminuir la posibilidad de una respuesta inmunitaria, las células se pueden encapsular para evitar la infiltración en los tejidos circundantes. En otras realizaciones, los materiales de encapsulación son típicamente confinamientos o membranas poliméricos, semipermeables y biocompatibles que permiten la liberación del producto o productos proteicos, pero que impiden que las células sean destruidas por el sistema inmunitario del paciente o por otros factores perjudiciales de los tejidos circundantes.

EJEMPLOS

Los siguientes ejemplos, entre ellos los experimentos realizados y los resultados conseguidos, se dan a conocer solo con fines ilustrativos y no se debe considerar que limitan la invención.

Ejemplo 1

Se generaron ratones agénicos sin el IL-17RA tal y como se describe en Ye et al., 2001, J. Exp. Med. 194: 519-527 y se analizaron en un modelo estándar de artritis inducida por colágeno (AIC). Brevemente, los clones genómicos que codifican los IL-17R murinos se aislaron de una genoteca en λ procedente de 129 mediante una sonda de ADNc del IL-17R murino y se mapearon mediante una combinación de PCR, digestión de restricción y análisis de secuencia con las secuencias genómicas depositadas que corresponden al locus de IL-17R en el cromosoma 6 de ratón (n.º de acceso de GenBank/EMBL/DDBJ AC018559). Se construyó un vector para genosustitución al reemplazar 5,7 kb de la secuencia genómica que contiene los exones 4-11 (que corresponde a los nucleótidos 445-1172 del ADNc murino del IL-17R) por un casete de PGKneo. Se insertó un casete de timidina cinasa (MC-TK) en el extremo en 5' del vector. Las células madre embrionarias (CME) procedentes de 129 se electroporaron con el vector de genosustitución y se seleccionaron en presencia de G418 y ganciclovir, como está descrito. Los clones de CME que llevan una mutación selectiva en el IL-17R se identificaron mediante una combinación de PCR y análisis genómico de transferencia Southern, y se inyectaron en los blastocistos de C57BL/6. Los machos quiméricos resultantes se cruzaron con las hembras C57BL/6 para generar ratones heterocigóticos para la mutación de IL-17R (IL-17R+/–), que posteriormente se cruzaron entre sí para generar ratones deficientes en IL17R (IL-17R KO). Estos ratones se llevaron a un fondo de C57BL/6 mediante cinco retrocruzamientos sucesivos con ratones C57BL/6.

Los ratones agénicos sin el IL-17RA mostraron una reducción de la puntuación clínica media en el modelo de AIC, tal como se muestra en la figura 4 (véase también Kolls et al., 2001, J. Ex. Med. 194: 519-527; Lubberts et al., 2005, véase más arriba). Además, los ratones sin el IL-17RA mostraron una incidencia de la enfermedad de sólo el 5%, mientras que los ratones genéticamente intactos mostraron una incidencia de la enfermedad del 71%.

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Ejemplo 2

Se comparó la histopatología de los ratones IL-17RA–/– con AIC y los ratones que expresan el IL-17RA para determinar la correlación entre la artritis inducida y la ausencia de señalización del IL-17RA.

Los ratones se prepararon como se describe en el ejemplo 1. Se sacrificaron los animales entre las quince y veinte semanas de edad y, a continuación, se evaluó la histopatología de las articulaciones de los animales sacrificados. La histopatología del hueso y del cartílago en los ratones agénicos IL-17RA–/– y en los ratones que expresan IL-17A—IL-17R (C57/BL6 genéticamente intactos [n.os 2-18]) mostró una erosión ósea subcondral del astrágalo y una marcada alteración de la arquitectura articular de las articulaciones tarso-metatársicas (erosión del hueso subcondral y del cartílago articular), así como una formación ósea perióstica reactiva (osteofitosis). La histopatología de las articulaciones del tobillo de los ratones deficientes IL-17RA–/– en un modelo de AIC inducida experimentalmente mostró poca inflamación de la articulación, y erosión del hueso y el cartílago de la articulación. Sin embargo, los análisis histopatológicos de una articulación del tobillo de la pata posterior de ratones que expresan el IL-17RA mostraron una marcada inflamación crónica activa. La reducción significativa de incidencia de la inflamación articular y de la erosión del hueso y de la articulación en comparación con ratones genéticamente intactos implica además a IL-17RA y a la señalización del IL-17RA en la inflamación y en la erosión.

Ejemplo 3

Un modelo de ratones del modelo de EAE inducida por el péptido MOG (glucoproteína los de oligodendrocitos de la mielina) deficientes en el IL-17RA mostró un retraso en la aparición de la artritis, así como una reducción global de las puntuaciones clínicas en comparación con ratones genéticamente intactos.

Se prepararon ratones agénicos sin el IL-17RA como se describe en el ejemplo 1. En la figura 5 se muestra la incidencia y la aparición media de la artritis en función del tiempo para los ratones genéticamente intactos para el IL-17RA y agénicos IL-17RA–/–. De los 15 ratones genéticamente intactos que expresan el IL-17RA, los 15 mostraron síntomas artríticos, cuya aparición media fue a los 13 días. En cambio, 14 de los 15 ratones IL-17RA–/– mostraron síntomas artríticos, que aparecieron de media a los 22 días (p < 0,0001 frente al tipo genéticamente intacto).

Las puntuaciones clínicas de los ratones agénicos IL-17RA–/– muestran una puntuación clínica media más baja y una aparición más tardía que los ratones genéticamente intactos. En la figura 6 se muestra la reducción de las puntuaciones clínicas en los ratones agénicos IL-17RA–/– en comparación con los ratones genéticamente intactos en un modelo inducido por MOG. La población agénica IL-17RA–/– mostró una aparición de la artritis significativamente más tardía que la población genéticamente intacta que expresa el IL-17RA. Además, la población agénica IL-17RA–/– tenía una puntuación clínica media más baja en todos los puntos para la aparición de la artritis. La aparición media más tardía de la artritis y la puntuación clínica media más baja de la artritis observadas en los mutantes IL-17RA–/– en comparación con los animales genéticamente intactos que expresan el IL-17RA implica además una señalización del IL-17RA en la inflamación y la erosión.

Ejemplo 4

Los ratones agénicos sin el IL-17RA sensibilizados y expuestos a la ovalbúmina muestran una reducción significativa de las células inflamatorias en líquido del LBA (lavado broncoalveolar) en comparación con los ratones genéticamente intactos. Los ratones agénicos sin el IL-17RA (IL-17RA KO) se prepararon como se describe en el ejemplo 1 y, a continuación, se expusieron a la ovalbúmina por vía intranasal. El número de células inflamatorias de la población agénica sin el IL-17RA se comparó con la población genéticamente intacta que expresa el IL-17RA. En la figura 7 se muestra que los ratones IL-17RA KO tienen menos cantidad total de células inflamatorias en líquido de LBA tras la tercera exposición que los ratones genéticamente intactos que expresan el IL-17RA en un asma inducida por ovalbúmina.

La población de ratones IL-17RA KO se comparó con los ratones genéticamente intactos que expresan el IL-17RA en función de la cantidad de eosinófilos (A), neutrófilos (B), linfocitos (C) y macrófagos (D) en líquido de LBA en un modelo de asma inducido por ovalbúmina. En las figuras 8A-8D se muestra que los ratones agénicos sin el IL-17RA tienen menos cantidad de eosinófilos (8A), neutrófilos (8B) y linfocitos (8C) en líquido de LBA en la población de IL-17RA KO en comparación con la población genéticamente intacta que expresa el IL-17RA. No se observaron cambios en los macrófagos (8D) del líquido del LBA ni en los ratones genéticamente intactos ni en los ratones agénicos sin el IL-17RA (indiferenciados y expuestos a la OVA). Estos datos sugieren que la señalización del IL-17RA es importante para regular las respuestas inflamatorias mediadas por el sistema inmunitario.

Ejemplo 5

Se demostró que los anticuerpos contra el IL-17RA reducen la incidencia de la artritis en un modelo de ratón de AIC (artritis inducida por colágeno) cuando se administraron de manera preventiva y terapéutica. La inhibición del IL-17RA redujo la artritis clínica tanto de manera profiláctica como terapéutica en varios modelos de AIC.

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El Acm neutralizante contra el IL-17RA de ratón equivalente que se administró de manera preventiva redujo las puntuaciones clínicas medias en un modelo de AIC genéticamente intacto de una forma dependiente de la dosis. En la figura 9 se muestra la inhibición dependiente de la dosis mediante el Acm contra IL-17RA en un modelo de AIC genéticamente intacto. Los ratones se trataron con Acm contra el IL-17RA o bien con Ig de control con una pauta de lunes, miércoles y viernes durante 2,5 semanas tras la exposición de refuerzo. La administración de 100 µg y 300 µg de anticuerpos contra el IL-17RA dio lugar a una puntuación clínica más baja durante 18 días tras la exposición de refuerzo en comparación con la Ig de control de isotipo.

Una reducción de la osteopenia y de la erosión del cartílago en la articulación se asoció a la reducción de las puntuaciones clínicas medias en la dosis de 300 µg del Acm contra el IL-17RA. El análisis histopatológico y el análisis de imágenes radiográficas se comparó con el control de IgG. Con los dos tipos de análisis, la articulación del tobillo de la pata trasera del ratón macho CBA/1 tratado con un Acm contra IL-18R (control de isotipo) mostró una marcada inflamación: erosión ósea subcondral del astrágalo, notable alteración de la arquitectura articular de las articulaciones tarso-metatársicas (erosión del hueso subcondral y del cartílago articular) y formación ósea perióstica reactiva (osteofitosis). En marcado contraste, la articulación del tobillo de la pata trasera de un ratón de DBA/1 tratado con 300 µg de Acm anti-IL-17RA mostró espacios articulares bien definidos, ausencia de edema y ausencia de hueso reactivo perióstico o lesiones líticas, lo que que indicó una reducción de la osteopenia y de la erosión del cartílago.

Ejemplo 6

La inhibición del IL-17RA se demostró que era eficaz en un modelo de AIC cuando la dosificación se inició tras la aparición de los signos clínicos (a saber, protocolo de dosificación terapéutica) en un modelo agénico sin p55/p75 del TNFR y en uno genéticamente intacto. El tratamiento de inició aproximadamente a los 6-7 días tras la introducción del colágeno en ambos modelos. En la figura 10 se muestra que el tratamiento terapéutico con el Acm anti-IL-17RA estabilizó las puntuaciones clínicas medias en los dos ratones genéticamente intactos. En la figura 11 se muestra que el tratamiento terapéutico con el Acm anti-IL-17RA estabilizó las puntuaciones clínicas medias en los modelos agénicos sin p55/p75 del TNFR. Los ratones se trataron con un Acm anti-IL-17RA, o bien un Acm anti-IL-1R

o bien con una Ig de control con una pauta de lunes, miércoles y viernes durante 2 semanas tras la aleatorización en los grupos de tratamiento terapéutico. Estos datos son representativos de 2 experimentos independientes realizados en los modelos con AIC genéticamente intacto y agénico sin p55/p75 del TNFR. La administración de los Acm anti-IL-17RA redujo la puntuación clínica en comparación con la IgG de control en los ratones genéticamente intactos en los que se indujo la AIC. Sorprendentemente, la eficacia similar de los Acm anti-IL-17RA en el modelo agénico sin p55/p75 del TNF estabilizó la AIC con independencia de la señalización del TNF. Estos datos sugieren que el tratamiento con la proteína de fijación a antígeno anti-IL-17RA puede detectar los sujetos que no responden a los tratamientos con anti-TNF. La politerapia de una proteína de fijación a antígeno anti-IL-17RA con los tratamientos con anti-TNF puede ser más beneficiosa que cualquiera de las monoterapias por separado.

Ejemplo 7

El desarrollo de anticuerpos monoclonales completamente humanos dirigidos contra el IL-17RA humano se realizó con la tecnología XenoMouse® de Abgenix (ahora Amgen Freemont Inc.) (patentes de los Estados Unidos n.os 6.114.598; 6.162.963; 6.833.268; 7.049.426; 7.064.244, que se incorporan en la presente memoria por referencia en su totalidad; Green et al., 1994, 7: 13-21; Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15: 146-156; Green y Jakobovitis, 1998, J. Ex. Med. 188: 483-495)). La tabla 4 muestra las porciones de la proteína IL17RA utilizadas como inmunógenos y las líneas celulares utilizadas para generar y cribar los anticuerpos anti-IL17RA.

Tabla 4

Reactante: Descripción

IL-17RA-Fc: Dominio extracelular del IL-17RA humano con un dominio Fc humano en el extremo carboxilo. Expresado en una línea celular CHO estable.

IL-17RA-FLAG-poliHis (SEQ ID NO: 431): Dominio extracelular del IL-17RA humano con una etiqueta FLAG-poliHis en el extremo carboxilo. Expresado por transfección transitoria en las células COS PKB.

Células CHO con IL-17RA: IL-17RA humano completo expresado en la superficie de las células CHO.

Los ratones IgG2 de XenoMouse® se inmunizaron o se les administró una inyección de refuerzo con Il-17RA-Fc (grupo 1) e IL-17RA-FLAG-poliHis (grupo 2). Los títulos séricos se monitorizaron por ELISA y los ratones con los mejores títulos se fusionaron para generar hibridomas. Los sobrenadantes policlonales resultantes se cribaron por la fijación al IL-17RA mediante ELISA, y los sobrenadantes positivos se cribaron por la fijación a las células CHO con IL-17RA mediante FMAT. Los sobrenadantes positivos se sometieron a un cribado adicional. Los ratones IgG2 XenoMouse® se inmunizaron con los siguientes inmunógenos: IL-17RA-Fc (grupo 3) e IL-17RA-FLAGpHis (grupo 4) y se analizaron tras inmunizaciones adicionales.

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Ejemplo 8

Se caracterizaron los anticuerpos anti-IL-17RA. Los sobrenadantes de hibridomas no clonales se prepararon en volúmenes de 1 a 2 ml (la concentración de las Ig no se determinó para estos sobrenadantes). Los sobrenadantes de hibridomas no clonales anti-IL-17RA se cribaron inicialmente por FACS por su capacidad para inhibir la fijación de la IL-17A humana biotinilada a las células CHO que sobreexpresan el IL-17RA humano y otra línea de células CHO que sobreexpresa el IL-17RA de macaco cangrejero. Los sobrenadantes no clonales que fueron capaces de inhibir por completo o casi por completo la fijación de la IL-17A humana al huIL-17RA en las CHO y al cinoIL-17RA en las CHO se cribaron posteriormente a varias diluciones en un ensayo de secreción de citocinas/quimiocinas inducidas con IL-17A en una línea celular de fibroblastos de prepucio humano (HFF, por su nombre en inglés). Los sobrenadantes no clonales de anti-IL-17RA se incubaron con las células de HFF (5000 células/pocillo en una placa de 96 pocillos) durante 30 minutos a 36 ºC y, a continuación, se estimularon durante una noche con la IL-17A (5 ng/ml) sola o bien con la IL-17F (20 ng/ml) y el TNF-α (5 ng/ml). A continuación, los sobrenadantes de cultivo de fibroblastos se analizaron mediante ELISA por la presencia de IL-6 o bien GRO-α. Se seleccionaron hibridomas no clonales anti-IL-17RA para la subclonación basándose en su comportamiento en el ensayo por FACS en las CHO que expresan el IL-17RA y el bioensayo con las HFF. Un ejemplo de la selección se muestra en las tablas 5, 6 y 7.

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Tabla 5

% de positivos
% de positivos: IFM Bioensayo con HFF

Control negativo: 1,09 1,57 10 Repetición Ensayos

IL-17 biotinilada (500 ng/ml): 8,85 10,22 77 1:4 dil. 1:32 1:4 1:32 1:128

% de inhibición de la producción de IL-6

Sobrenadante I.D

1: 1,34 1,78 9 56 14

2 (incl. AMH15/AML15): 0,60 3,77 6 80 72 98 91 81

3: 1,04 1,60 8 46 –5

4 (incl. AMH14/AML14): 1,72 0,79 10 90 82 99 92 84

5: 1,59 1,43 11 76 52

6: 1,45 1,93 14 82 79

7: 1,00 1,28 8 71 58

8: 1,43 1,60 14 69 31

9: 1,34 2,28 18 59 20

10: 0,79 1,96 11 58 –2

11: 1,93 1,69 11 72 21

12: 2,23 1,69 8 69 7

13 (incl. AMH21/AML21): 1,49 0,49 6 82 53

14: 1,01 1,25 8 63 23

15: 1,31 1,45 9 74 45

16: 1,39 0,72 8 58 4

17: 0,91 0,94 7 73 38

18: 1,37 2,85 13 49 6

19: 1,47 1,15 8 74 61

20: 1,60 1,20 7 72 46

21: 1,30 1,65 8 47 4

22: 0,93 1,02 8 54 16

23: 1,08 1,12 7 72 59

En la tabla 5, los sobrenadantes de hibridomas no clonales anti-IL-17RA se cribaron por la fijación al IL17RA. La primera mitad de la tabla 5 muestra el % de positivos y la intensidad de fluorescencia media (IFM) en los resultados de la citometría de flujo (a saber, FACS). El % de positivos muestra la inhibición de la fijación de la biotina-huIL-17A a las células CHO huIL-17RA+ debida a los sobrenadantes de hibridomas no clonales. La columna de la IFM muestra la inhibición de la fijación de la huIL-17A biotinilada a las células CHO cino-IL-17RA+ debida a los sobrenadantes de hibridomas no clonales. La segunda mitad de la tabla 5 muestra la intensidad de fijación de los HFF por los Acm y los no clonales según se mide por el % de intensidad de la producción de IL-6. Las primeras 2 columnas muestran un bioensayo IL-17A/HFF con sobrenadantes de hibridomas no clonales y las últimas 4 columnas son resultados del bioensayo IL-17A/HFF de repetición con los sobrenadantes de hibridomas no clonales.

Tabla 6

Resultados de FACS sobre expresan el cino-IL-17RA: células 293 que

Bioensayo de HFF: repetición

Dilución 1:4: 1:32 1:4 1:32 1:128 1: 512

% de positivos
% de positivos: IFM % de inhibición de producción de IL6

Control negativo: 1,09 1,57 1,0

IL-17biot. (500 ng/ml): 8,85 10,22 77

Sobrenadante I.D.

1 (incl. AMH11/AML11): 1,32 1,4 9

2: 0,87 2,92 9

3: 1,0 4,47 16

4: 1,03 5,01 17

5: 0,6 6,53 18

6 (incl. AMH5/AML5): 0,73 4,55 9

7: 0,59 5,18 8

8: 0,45 7,25 7

9: 2,34 2,36 6 61 36

10: 6,76 8,35 64 37 12

11: 0,78 1,16 6 61 24

12: 0,61 1,64 6 74 56 71 67 45 35

13: 2,98 5,48 22 –2 –13

14: 5,34 10,64 49 22 2 3 39 31 34

15: 0,5 3,24 11 51 –7

16 (incl. AMH22/AML22): 0,54 2,93 18 92 72 91 73 73 29

17: 1,25 2,2 17 –8 –76

18: 0,61 0,99 7 73 28

19 (incl. AMH23): 0,69 1,72 10 79 72 86 76 67 50

20: 1,53 1,94 31 5 –31

21: 6,66 9,63 66 –15 4

22: 6,33 10,32 71 1 14

23: 0,3 2,55 7 50 35

24: 0,24 4,11 6 34 15

25: 0,81 0,99 8 –49 11

26: 0,43 1,31 7 67 48

27: 0,7 1,23 11 50 26

28: 0,58 1,32 9 56 47

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(continuación)

Sobrenadante ID.

29 (inc. AMH1/AML1): 0,8 1,85 11 77 76 90 87 79 66

30: 0,69 1,55 11 40 16

31: 0,56 1,96 12 12 –11

32: 0,21 1,11 8 46 7

33: 1,24 1,15 13 68 43

34: 0,74 0,81 11 36 8

35: 0,71 1,37 9 65 21

36: 0,57 1,21 7 78 32

37: 0,59 1,0 8 71 3

38: 0,65 1,43 8 63 –38

39: 0,28 1,23 7 43 –21

40: 0,35 2,48 9 50 –39

41: 0,64 1,61 8 49 –19

42: 0,12 1,04 8 87 68 96 92 80 66

43: 0,21 1,12 11 79 34

44: 0,32 1,33 8 68 –3

45: 0,74 1,68 10 40 –16

46: 0,58 1,74 10 64 7

La tabla 6 muestra los datos de cribado de los sobrenadantes de hibridomas no clonales del IL-17RA. Las columnas del % de positivos y de IFM muestran los resultados de la citometría de flujo (FACS). Las columnas de % de positivos muestran la inhibición de la fijación de la biotina—huIL-17A a las células CHO huIL-17RA+ debida a los sobrenadantes de hibridomas no clonales. La columna de la IFM muestra la inhibición de la fijación de la huIL-17A biotinilada a las células CHO cino-IL-17RA+ debida a los sobrenadantes de hibridomas no clonales. Las primeras 2 columnas del bioensayo con HFF son el bioensayo de HFF/IL-17A con sobrenadantes de hibridomas no clonales y las últimas 4 columnas del bioensayo son resultados del bioensayo de HFF/IL-17A repetido con sobrenadantes de hibridomas no clonales seleccionados. Se seleccionó una serie de sobrenadantes para la subclonación.

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Tabla 7

% de positivos: IFM

Control negativo: 1,09 1,57 10

IL-17biot. (500 ng/ml): 8,85 10,22 77 Bioensayo de HFF

1:4: 1:32 1:128

Sobrenadante I.D.: % de inhibición producción de IL-6 de la

1: 1,85 1,33 10 29 9 21

2: 1,08 1,46 16 90 61 50

3: 1,29 1,39 22 33 10 4

4: 1,55 1,33 18 53 66 58

5: 1,69 0,7 8 76 46 30

6 (incl. AMH13/AML13): 1,52 0,89 6 73 78 75

7: 1,54 0,98 7 79 71 45

8: 1,78 3,44 34 73 63 30

9: 6,34 8,45 53 57 48 34

10: 1,23 1,58 10 82 71 31

11: 1,62 2,1 28 –10 –6 –10

12: 1,15 1,04 16 71 63 37

13: 2,43 1,67 12 58 23 –4

14: 1,43 1,03 13 42 17 18

15: 1,62 1,59 18 67 59 31

16: 1,79 2,2 25 61 57 45

17: 0,91 1,85 10 49 54 23

18 (incl. AMH12/AML12): 1 1,36 6 75 82 61

19 (incl. AMH17/AML17): 1,75 1,23 8 90 81 73

20: 2,31 0,49 9 35 20 38

21 (incl. AMH16/AML16): 1,84 0,76 6 86 90 71

La tabla 7 muestra los datos de cribado de sobrenadantes de hibridoma no clonales de anti-IL-17RA. Las primeras dos columnas son datos de citometría de flujo (FACS). Las columnas con el % de positivos muestran la inhibición de la fijación de la biotina—huIL-17A a las células CHO huIL-17RA+ debida a los sobrenadantes de hibridomas no clonales. La columna de IFM muestra la inhibición de la fijación de la huIL-17A biotinilada a las células CHO cino-IL-17RA+ debida a los sobrenadantes de hibridomas no clonales. Las tres columnas finales muestran los resultados del bioensayo de HFF/IL-17A con los sobrenadantes de hibridomas no clonales. Los sobrenadantes 6, 18, 19 y 21 se seleccionaron para la subclonación.

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Tabla 8

ID de subclón: Bioensayo de HFF/IL-17A CI50 (nM) BIAcore de baja resolución KD (nM)

1. Subclón de (AMH14/AML14): 0,12 0,69

2. Subclón de (AMH14/AML14)2: 0,20 ND

3. Subclón de (AMH14/AML14)3: 0,075 ND

4. Subclón de (AMH21/AML21): 2,3 ND

5. Subclón de (AMH21/AML21): 3,1 ND

6. Subclón de (AMH21/AML21): 3,3 16,7

7. Subclón de (AMH20/AML20): 8,1 ND

8. Subclón de (AMH20/AML20): 6,6 ND

9. Subclón de (AMH20/AML20): 6,7 11,6

10. Subclón de (AMH19/AML19): 0,22 3,1

11. Subclón de (AMH19/AML19): 1,1 ND

12. Subclón de (AMH19/AML19): 0,50 ND

13. Subclón de (AMH13/AML13): > 10 7,6

14. Subclón de (AMH18/AML18): 0,44 ND

15. Subclón de (AMH18/AML18): 0,40 ND

16. Subclón de (AMH18/AML18): 0,17 14,9

17. Subclón de (AMH12/AML12): 3,5 ND

18. Subclón de (AMH12/AML12): 3,7 8,2

20. Subclón de (AMH12/AML12): 5,5 ND

21. Subclón de (AMH17/AML17): 2,5 8,2

22. Subclón de (AMH17/AML17): 5,3 ND

23. Subclón de (AMH17/AML17): 0,57 ND

24. Subclón de (AMH16/AML16): 1,6 ND

25. Subclón de (AMH16/AML16): 2,3 6,2

26. Subclón de (AMH16/AML16): 1,4 ND

27. Subclón de (AMH22/AML22): 0,046 1,5

28. Subclón de (AMH22/AML22): 0,09 ND

29. Subclón de (AMH22/AML22): 0,07 ND

ND = no determinado.

La tabla 8 muestra los valores de CI50 del bioensayo con HFF/IL-17A y los valores de KD de BIAcore® de baja resolución para los hibridomas subclonados. Los valores de KD y CI50 más bajos en los ensayos de fijación de la IL-17A/HFF al IL-17RA mostraban que los Acm contra IL-17RA inhibieron la fijación de la IL-17A al receptor A de la IL-17. Se seleccionaron los anticuerpos para una caracterización posterior basándose en los valores de KD bajos para inhibir la fijación de la IL-17A al IL-17RA humano.

Ejemplo 9

Los clones de Acm humanos contra el IL-17RA que tienen las secuencias de las cadenas ligera y pesada (AMH22/AML22), (AMH19/AML19), (AMH18/AML18) y (AMH14/AML14) se seleccionaron para una caracterización adicional por bioensayo. La tabla 9 que viene a continuación muestra los valores de CI50 para los Ac seleccionados en el bioensayo con HFF y un bioensayo con fibroblastos de pulmón humano contra IL-17A e IL-17F.

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Tabla 9

Acm contra IL-17RA: IL-17A/HFF CI50 (nM) IL-17F/HFF CI50 (nM) IL-17A/fibroblastos de pulmón CI (nM)

(AMH14/AML14): 0,13 0,067 0,04

(AMH22/AML22): 0,10 0,033 0,14

(AMH19/AML19): 0,20 0,087 0,22

(AMH18/AML18): 0,33 0,073 0,081

Los Acm humanos seleccionados inhibieron la fijación de la IL-17A al IL-17RA. Además de los valores de CI50 más bajos observados para la fijación de la IL-17A al IL-17RA, los Acm humanos seleccionados redujeron los valores de CI50 que inhibían la fijación de la IL-17F al IL-17RA (segunda columna). Por lo tanto, los Acm humanos seleccionados inhiben la fijación de la IL-17A al IL-17RA y la fijación de la IL-17F al IL-17RA.

Ejemplo 10

Los Acm humanos contra el IL-17RA de ejemplo se analizaron en un bioensayo con macaco cangrejero que utiliza la línea de células epiteliales de riñón procedentes de macaco cangrejero JTC-12 estimulada con la IL-17A de macaco cangrejero. En la figura 12 se muestran los Acm contra el IL-17RA que tienen las secuencias de las cadenas ligera y pesada (AMH22/AML22), (AMH19/AML19), (AMH18/AML18) y (AMH14/AML14) en la inhibición de la producción de la IL-6 inducida por la IL-17A de macaco cangrejero de la células JTC-12. La línea (---) describe el valor del control positivo de la IL-17 de macaco cangrejero en combinación con el TNF-α. La línea (-.-.-) describe valor del control positivo del TNF-α de macaco cangrejero. La línea (….) describe el valor de control medio. Células JTC-12 se incubaron previamente durante 30 min con Acm anti-IL-17RA y, a continuación, se estimularon durante una noche con la IL-17A de macaco cangrejero (5 ng/ml) y el TNF-α humano (5 ng/ml). En la figura 12 se muestra que cada anticuerpo fue capaz de impedir que la IL-17A de macaco cangrejero se fije al IL-17RA y active al IL-17RA, lo que se determinó mediante la producción de IL-6 a partir de las células JTC-12. El anticuerpo contra la IL-17RA (AMH14/AML14) fue capaz de antagonizar la producción de IL-6 inducida por la IL-17A de macaco cangrejero a partir de las células JTC-12 con un CI50 de aproximadamente 1,2 nM.

Ejemplo 11

Se analizó la fijación in vitro de los Acm contra el IL-17RA. La afinidad de fijación de los anticuerpos contra el IL17RA se midió mediante resonancia de plasmones superficiales con un instrumento BIAcore 3000® con los procedimientos estándares conocidos en la técnica. Los anticuerpos candidatos capturaron en chips CM4 modificados con anticuerpos de cabra anti-IgG (H + L) de humano (Jackson Immuno Research, Bar Harbor, ME). Como referencia se utilizó un chip CM4 revestido con anticuerpos de cabra anti-IgG (H + L) de humano, pero sin anticuerpo capturado. Sobre los chips se hizo fluir huIL-17RA-FLAG-poliHis (SEQ ID NO: 431) soluble a un margen de concentración de 0,46 a 1000 nM durante 2 minutos (fase de asociación) seguido de una fase de disociación de 15-30 minutos. El péptido FLAG, Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys (DYKDDDDK) (SEQ ID NO: 447) que se describe en Hopp et al., Bio/Technology 6: 1204, 1988, y la patente de los EE. UU. n.º 5.011.912, permite el ensayo rápido y la purificación fácil de la proteína recombinante expresada. Los reactantes útiles para preparar las proteínas de fusión en las que el péptido FLAG está fusionado a un polipéptido dado están disponibles de forma comercial (Sigma, St. Louis, MO).

Los experimentos se realizaron a 25 ºC con una velocidad de flujo de 50 µl/min. Los datos se ajustaron a

1:1 Model + Local Rmax utilizando el programa informático BIAeval® (v 4.1).

Tabla 10

Anticuerpo humano: Ka (1/Ms) KD (1/s) KA (1/M) KD (M)

(AMH14/AML14): 2,60 x 105 6,22 x 10-5 4,18 x 109 2,39 x 10-10

(AMH22/AML22): 2,35 x 105 1,17 x 10-4 2,01 x 109 4,98 x 10-10

(AMH19/AML19): 1,42 x 105 1,14 x 10-4 1,25 x 109 8,02 x 10-10

(AMH18/AML18): 1,02 x 105 1,01 x 10-3 1,01 x 108 9,88 x 10-9

La tabla 10 muestra que la KD de los clones de Acm humanos estaban en el orden de 10–10 a 10–9, en donde el clon que tiene las secuencias de cadena pesada y ligera (AMH14/AML14) tienen la afinidad más alta. Cada uno de los datos cinéticos de los anticuerpos monoclonales humanos era coherente con los datos en equilibrio. El anticuerpo con las secuencias variables de las cadenas pesada y ligera (AMH14/AML14; SEQ ID NO: 14 y SEQ ID NO: 40, respectivamente) tenía la afinidad más alta por el IL-17RA, así como la disociación más lenta.

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Ejemplo 12

Se evaluó in vitro el potencial agonista del Acm humano contra el IL-17RA que tiene las secuencias variables de las cadenas pesada y ligera (AMH14/AML14). Con las células HFF se analizó el efecto agonista del Acm contra el IL-17RA (AMH14/AML14). El Acm contra el IL-17RA que tiene las secuencias de las cadenas pesada y ligera (AMH14/AML14) también se analizó en condiciones de entrecruzamiento con anti-F(ab')2 humano de cabra, anti-IgG humana de cabra y anti-IgG humana de ratón para la incubación en las células HFF. El Acm contra el IL17RA recombinante, AMH14/AML14, a 0,01, 0,5, 1, 1,5 y 10 µg/ml, solo y conjugado previamente con anti-IgG humana de ratón (Zymed/Invitrogen, San Diego, CA), anti-F(ab')2 humano de cabra (Cabra a-h-Fab) y anti-IgG humana de cabra (Cabra a-h-IgG) se incubaron durante una noche con células HFF. Las GRO-α se valoraron por ELISA. En este experimento, la IL-17A en monoterapia sirvió como control positivo para la producción de GRO-α. Estos datos son representativos de 2 experimentos independientes. El Acm contra el IL-17RA (AMH L14) en monoterapia no tuvo ningún efecto sobre las células HFF. El Acm anti-IL-17RA con conjugación previa (AMH14/AML14) no tuvo ningún efecto sobre la producción de GRO-α desde las células HFF. Estos datos demuestran que el Acm anti-IL-17RA (AMH14/AML14) bien solo o bien preconjugado e incubado con las células HFF fue incapaz de inducir una respuesta de GRO-α y, por lo tanto, no es un Acm agonista del IL-17RA.

Ejemplo 13

Los efectos de los cambios en las células reproductoras (CR) por el Acm AMH14/AML14 contra el IL-17RA se analizaron en un bioensayo con HFF. En la figura 13 se muestra la variación de secuencia en las regiones flanqueantes de la SEQ ID NO: 40 (AML14) respecto a los restos en las células reproductoras y el efecto sobre los valores de CI50. La SEQ ID NO: 40 (AML14) contiene cuatro restos que no están en las células reproductoras en la región flanqueante, dos en FR2 y dos en FR3. Se utilizaron procedimientos estándares de mutagénesis dirigida específica de sitio para generar versiones A y B de células reproductoras de AMH14/AML14. Estas variantes se analizaron en el bioensayo de IL-17A e IL-17F con HFF: las células HFF se incubaron previamente durante 30 min con diferentes Acm anti-IL-17RA y a continuación se estimularon durante una noche con IL-17 (5 ng/ml).

En la figura 14 se muestra que las dos variantes que tenían los restos cambiados a los de las células reproductoras (véase la figura 13) reducían la actividad inhibidora de la IL-17A respecto al AMH14/AML14, lo que indica que se toleran algunas variaciones en las regiones flanqueantes, pero que algunos restos pueden influir en la actividad. La línea (----) indica el valor del control positivo de la estimulación de la IL-17 en ausencia del anticuerpo (aproximadamente 4062 pg/ml). El control de solo con medio dio un valor de aproximadamente 71 pg/ml.

En la figura 15 se muestra que las dos variantes que tenían los restos cambiados a los de las células reproductoras (véase la figura 13) redujeron la actividad inhibidora de la IL-17F respecto a AMH14/AML14, lo que indica que se toleran algunas variaciones en las regiones flanqueantes, pero que algunos restos pueden influir en la actividad. El valor de control positivo de IL-17F en combinación con la estimulación con el TNF-α en ausencia del anticuerpo era aproximadamente de 10.994 pg/ml, el valor para el TNF-α sólo era de aproximadamente 1534 pg/ml, y el control solo con medio dio un valor de aproximadamente 55 pg/ml.

Ejemplo 14

Se llevaron a cabo estudios para determinar dónde se fijaban al IL-17RA humano las diferentes proteínas de fijación al antígeno IL-17RA (en forma de anticuerpos humanos). El sistema ForteBioTM Octet es uno de los muchos sistemas y técnicas disponibles para medir la fijación al anticuerpo. Los procedimientos utilizados para cribar por la fijación del anticuerpo siguieron esencialmente las recomendaciones del fabricante. Para más información, véase www.fortebio.com. En pocas palabras, los sensores de estreptavidina (ForteBioTM) se empaparon previamente durante 10 minutos en PBSAT (SAB al 1%/PBS + Tween20® al 0,05% [monolaurato de polioxietileno y sorbintano]). El AMH14/AML14 biotinilado a 10 µg/ml en PBSAT se cargó en los sensores durante 900 s. Se puso en marcha una nueva línea de referencia durante 600 s en PBSAT. A continuación, el IL-17RA-FLAG-polyHis de tipo silvestre (SEQ ID NO: 431) a 10 µg/ml en PBSAT se fijó a los sensores durante 900 s. Se puso en marcha una nueva línea de referencia durante 600 s en PBSAT. Durante 900 s se hicieron asociar 200 nM de los siguientes Acm AMH22/AML22, AMH19/AML19 y AMH18/AML18 y luego se disociaron durante 900 s en PBSAT. Los datos demostraron que el AMH18/AML18 no compitió con AMH14/AML14 por la fijación, lo que demuestra que AMH14/AML14 y AMH/AML18 se fijaron a diferentes determinantes neutralizantes. El AMH22/AML22 y el AMH19/AML19 no se fijaron en presencia de AMH14/AML14, lo que sugiere que los tres anticuerpos se fijan al mismo determinante neutralizante, o a uno similar, y por lo tanto se consideran que se fijan juntos.

Ejemplo 15

Se realizaron estudios de competición cruzada para determinar las características de fijación al IL-17RA que tenían los anticuerpos ejemplares contra el IL-17RA. Se utilizó una modificación del procedimiento de encestado multiplexado descrito por Jia et al. (véae Jia et al., J. Immun. Meth. 2004, 288: 91-98). El procedimiento empleó el programa informático y la estación de trabajo Bio-Plex (BioRad, Hercules, CA), así como los reactivos de Luminex® Corp. (Austin, TX). Se siguieron los protocolos básicos del fabricante, salvo cuando se especifica más abajo (véase www.bio-rad.com y www.luminexcorp.com para más detalles). Cada código de perlas de las perlas de Lumienex® revestidas con estreptavidina (Luminex®, n.º L100-L1XX-01, donde «XX» especifica el código de las perlas) se incubaron en 150 µl de anticuerpo de ratón monovalente y biotinilado de captura anti-IgG humana a 50 µg/ml (BD Pharmingen, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, producto núm. 555785) durante 1 hora a temperatura ambiente en la oscuridad y a continuación se lavaron 3 veces con PBSAT. Se evaluó el revestimiento de anti-IgG humana de ratón y las perlas se cuantificaron por FACS. Cada código de perlas se incubó por separado con 10 µl de anticuerpo anti-IL-17RA durante 1 hora a temperatura ambiente y a continuación se lavó. Las perlas se agruparon y a continuación se dispensaron en una placa de filtración de 96 pocillos (Millipore, Billerica, MA, producto n.º MSBVN1250). Se añadieron 80 µl de IL-17RA a 2 µg/ml (SEQ ID NO: 431) a la mitad de los pocillos y tampón a la otra mitad, y se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora, para a continuación lavarlos con PBSAT. Se añadieron 10 µl de un anticuerpo anti-IL-17RA a un pocillo con IL-17RA (SEQ ID NO: 431) y a un pocillo sin IL-17RA, y se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora, para luego lavarlos con PBSAT. Se incluyó una IgG humana irrelevante (Jackson Labs, Bar Harbor, ME, producto n.º 009-000-003) como control negativo. Se añadieron 50 µl de anti-IgG humana de ratón monovalente y conjugada con PE (BD Pharmingen, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, n.º 555787) a cada pocillo y se incubó a temperatura ambiente durante 1 hora, y a continuación se lavó con PBSAT. El anticuerpo monovalente etiquetado con PE detectará la presencia del segundo Acm añadido al pocillo, pero no el primer Acm capturado por el anticuerpo monovalente de ratón anti-IgG humana. Las perlas se resuspendieron en 120 µl de PBSAT y se recogieron al menos 100 eventos/código de perlas en la estación de trabajo Bio-Plex según el protocolo recomendado por el fabricante.

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La intensidad de fluorescencia media (IFM) de la pareja de anticuerpos sin IL-17RA se sustrajo de la señal de la IFM de la correspondiente reacción que contenía el IL-17RA para normalizar por el ruido de fondo. Los criterios para determinar si los dos anticuerpos competían entre sí y por lo tanto «se encestaban» juntos se hizo mediante la determinación del grado al cual era detectable el segundo anticuerpo. Si la IFM normalizada era mayor que la más alta de alguno de los siguientes tres valores, entonces los anticuerpos anti-IL-17RA se consideró que se fijaban simultáneamente al IL-17RA y se consideró que estaban en diferentes cestos (esto es, los anticuerpos no competían entre ellos): la IFM normalizada es 3 veces mayor que el valor de la IFM del anticuerpo emparejado consigo mismo,

o 3 veces mayor que el valor de la IFM del anticuerpo emparejado con un control de huIgG, o una IFM de 300. En términos generales, los anticuerpos asignados a diferentes cestos se fijan a diferentes partes del IL-17RA y los anticuerpos asignados a los mismos cestos se fijan a partes parecidas del IL-17RA.

En las figuras 16A y 16B se muestran los resultados del encestado multiplexado de los anticuerpos anti-IL17RA. Los valores sombreados indican las parejas de anticuerpos que se fijan al IL-17RA simultáneamente, lo que sugiere que estos anticuerpos se fijan a diferentes determinantes neutralizantes. Los valores recuadrados señalan los anticuerpos emparejados contra sí mismos y que compiten entre ellos. Se analizaron los siguientes anticuerpos monoclonales humanos que contienen los dominios variables adscritos a las cadenas ligera y pesada: A: AMH11/AML11, B: AMH4/AML4, C: AMH8/AML8, D: AMH7/AML7, E: AMH6/AML6, F: AMH10/AML10, G: AMH18/AML18,

H: AMH1/AML1, I: AMH22/AML22, J: AMH23/AML23, K: AMH14/AML14, L: AMH L19, M: AMH12/AML12, N: AMH17/AML17, O: AMH16/AML16, P: AMH26/AML26, Q: AMH21/AML21 y R: AMH20/AML20.

En las figuras 16A y 16B también se muestra que los anticuerpos A: AMH11/AML11, B: AMH4/AML4, C: AMH8/AML8, D: AMH7/AML7, E: AMH6/AML6, F: AMH10/AML10 y G: AMH18/AML18 compitieron entre sí por la fijación al IL-17RA humano y, como consecuencia, caen en un grupo definido (cesta 1). En general, los anticuerpos I: AMH22/AML22, J: AMH23/AML23, K: AMH14/AML14, L: AMH19/AML19, M: AMH12/AML12, N: AMH17/AML17, O: AMH16/AML16 compitieron entre sí por la fijación al IL-17RA y, como consecuencia, caen en un grupo definido (cesta 3). En términos generales, los anticuerpos de la cesta 1 no competían con los anticuerpos de la cesta 3.

El anticuerpo H:AMH1/AML1 era único en su patrón de competición y formó la cesta 2, que es muy parecida a la cesta 3. El anticuerpo P: AMH26/AML26 formó la cesta 4 y mostró poca competición cruzada con ninguno de los demás anticuerpos, lo que sugiere que se trata de un determinante neutralizante único para este anticuerpo. Los anticuerpos Q: AMH21/AML21 y R: AMH20/AML20 mostraron patrones de competición individualmente únicos, pero con similitudes considerables a los anticuerpos de la cesta 3 y formaron las cestas 5 y 6, respectivamente. Estos datos proporcionan pruebas de varias especies dentro de un subgénero de anticuerpos que compiten entre sí.

Ejemplo 16

Tal y como se describió más arriba, se crearon y caracterizaron los anticuerpos que se fijan al IL-17RA humano e inhiben, o neutralizan, la fijación de la IL-17A y/o de la IL-17F. Para determinar los determinantes neutralizantes sobre el IL-17RA humano al que se fijan estos diferentes anticuerpos contra el IL-17RA, se construyeron una serie de proteínas quiméricas de IL-17RA de humano y de ratón. Este procedimiento aprovecha que no hay reactividad cruzada con el IL-17RA de ratón entre los diferentes anticuerpos contra el IL-17RA humano.

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Para cada quimera, una o dos regiones del dominio extracelular del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431) se reemplazaron por las correspondientes regiones del IL-17RA de ratón (SEQ ID NO: 432). En la figura 17 se muestra el IL-17RA de ratón (SEQ ID NO: 432) y los 5 dominios, A, B, C, D, E y F, que reemplazaron los dominios correspondientes en la secuencia del IL-17RA humano. Tales métodos se conocen en la técnica, véase, por ejemplo, Stemmer, W. P. C. et al., 1995 Gene 164: 49-53.

Se construyeron seis quimeras de región única y 8 quimeras de región doble en los vectores pTT5. Las construcciones quiméricas de A a F (quimeras de región única) se hicieron sintéticamente mediante PCR por alineamiento de oligonucleótidos antisentido y sentido de 65 nucleótidos que abarcan la proteína desde el sitio de SalI en 5' del codón de inicio hasta el sitio de NotI en 3' del codón de parada. El molde utilizado en la primera ronda de PCR fue una mezcla de oligos (sentido y antisentido) que abarcan la región desde el sitio de SalI hasta el sitio de

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FLAG-poliHis (SEQ ID NO: 432) se expresaron transitoriamente en las células 2936-E (disponibles del Consejo de Nacional Investigación de Canadá [NRCC, por su nombre en inglés]; véase el documento L-11565 del NRCC para más información) como células hospedadoras en frascos cilíndricos. Tales técnicas de expresión transitoria se conocen bien en la técnica, véase, por ejemplo, Durocher, Y et al. 2002 Nucleic Acids Res. 15 de enero; 30(2): E9. Los sobrenadantes se purificaron en una columna HisTrapTM HP según las directrices generales del fabricante (GE Healthcare, Piscataway NJ) y se eluyeron con un gradiente de imidazol estándar (véanse los protocolos recomendados por el fabricante). La proteína purificada se desaló en PBS, pH 7,2.

Las quimeras se alinearon con las herramientas de análisis estándares, tales como ClustalW (EMBL-EBI). Las proteínas quiméricas resultantes se muestran en las figuras 18A-18D. Con referencia a las figuras 17 y 18A18D, la quimera A (SEQ ID NO: 433) es un dominio extracelular del IL-17RA humano con el dominio A de ratón; la quimera B (SEQ ID NO: 434) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con el dominio B de ratón; la quimera C (SEQ ID NO: 435) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con el dominio C de ratón; la quimera D (SEQ ID NO: 436) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con el dominio D de ratón; la quimera E (SEQ ID NO: 437) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con el dominio E de ratón; la quimera F (SEQ ID NO: 438) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con el dominio F de ratón; la quimera G (SEQ ID NO: 439) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con los dominios A y E de ratón; la quimera H (SEQ ID NO: 440) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con los dominios B y E de ratón; la quimera I (SEQ ID NO: 441) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con los dominios C y E de ratón; la quimera J (SEQ ID NO: 442) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con los dominios D y E de ratón; la quimera K (SEQ ID NO: 443) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con los dominios A y F de ratón; la quimera L (SEQ ID NO: 444) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con los dominios B y F de ratón; la quimera M (SEQ ID NO: 445) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con los dominios C y F de ratón; y la quimera N (SEQ ID NO: 446) es el dominio extracelular del IL-17RA humano con los dominios D y F de ratón.

Con unos procedimientos parecidos a los descritos en el ejemplo 15, se realizó el análisis multiplexado con el software y la estación de trabajo Bio-Plex (BioRad, Hercules, CA) para determinar los determinantes neutralizantes sobre IL-17RA humano mediante el análisis de la fijación diferencial de los Acm contra el IL-17RA humano de ejemplo a las proteínas quiméricas en comparación con las proteínas IL-17RA genéticamente intactas. Se utilizaron 12 códigos de perlas de perlas revestidas con pentaHis (Qiagen, Valencia, CA; véase www1.qiagen.com) para capturar la proteína etiquetada con histidinas. Los 12 códigos de perlas permitieron multiplexar los 11 IL-17RA humanos quiméricos y el genéticamente intacto.

Para preparar las perlas, 100 µl del sobrenadante del IL-17RA genéticamente intacto del cultivo de expresión transitoria y 100 µl de la proteína quimérica a 2,5 µg/ml se fijaron a las perlas revestidas con penta-His durante una noche a 4 ºC o 2 horas a temperatura ambiente con agitación vigorosa. Las perlas se lavaron según el protocolo del fabricante y el conjunto de 12 perlas se agrupó y se distribuyó en alícuotas entre 2 o 3 columnas de una placa de filtración de 96 pocillos (Millipore, Billerica, MA, producto n.º MSBVN1250) para los puntos de análisis por duplicado o triplicado, respectivamente. Se añadieron a los pocillos 100 µl de anticuerpos anti-IL-17RA en diluciones de 1/4, se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente y se lavaron. Se añadieron a cada pocillo 100 µl de una dilución 1:100 de anti-Fc de IgG humana conjugada a PE (Jackson Labs., Bar Harbor, ME, producto n.º

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109-116-170), se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente y se lavaron. Las perlas se resuspendieron en SAB al 1%, se agitaron durante 3 minutos y se leyeron en la estación de trabajo Bio-Plex. La fijación del anticuerpo a la proteína quimérica de IL-17RA se comparó con la fijación del anticuerpo al tipo genéticamente intacto del IL-17RA humano del mismo grupo. Se tituló el anticuerpo sobre una escala de aproximadamente 5 unidades logarítmicas. La intensidad de fluorescencia media (IFM) de las proteínas quiméricas se representó en un gráfico como porcentaje de la señal máxima del IL-17RA humano genéticamente intacto. Las mutaciones (a saber, dominios de ratón) que incrementan la CE50 (expresada en nM) para el Acm contra el IL-17RA en 3 veces o más (según se calculó mediante GraphPad Prism®) se consideró que habían afectado negativamente a la fijación del Acm contra el IL-17RA. Con este tipo de procedimientos se esclarecieron los determinantes neutralizantes para diferentes anticuerpos contra el IL-17RA.

La figura 19 es una tabla que resume la capacidad que tienen los Acm contra el IL-17RA para fijarse a las diferentes proteínas quiméricas. Los valores sombreados señalan que el Acm contra el IL-17RA no cumple los criterios de fijación a esta proteína quimérica concreta («n.d.», a saber, «no determinado», significa que no se analizó la quimera). Tal y como se describe más arriba, se dan a conocer los valores de CE50. Un valor de cero indica que no se produce la fijación del anticuerpo. Al valor subrayado se le asignó un valor de CE50 mediante el programa informático GraphPad Prism® incluso aunque la curva de titulación fuera esencialmente plana. La tabla 11 muestra los valores de control en nM para el ensayo.

Tabla 11

Acm: Ratón, intacto Humano, intacto Control 3x intacto Control 2x intacto Control

AMH18/AML18: 0,000 0,061 0,182 0,121

AMH L1: 1,879 0,134 0,403 0,269

AMH22/AML22: 0,000 0,043 0,128 0,085

AMH14/AML14: 3416,000 0,027 0,082 0,055

AMH19/AML19: 770,100 0,062 0,187 0,125

AMH23/AML23: 0,000 0,053 0,158 0,106

AMH26/AML26: 0,000 0,281 0,843 0,562

AMH21/AML21: 0,196 0,018 0,055 0,037

AMH20/AML20: 1,333 0,022 0,066 0,044

Tal y como podemos observar en la figura 19, se identificaron al menos tres determinantes neutralizantes sobre la base de las regiones que afectan a la fijación de los anticuerpos contra el IL-17RA neutralizantes, a saber, dominio B que abarca los aminoácidos 75 a 96 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431), dominio C que abarca los aminoácidos 128 a 154 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431) y dominio D que abarca los aminoácidos 176 a 197 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431). El dominio B que abarca los aminoácidos 75 a 96 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431) afectó negativamente a la fijación de los anticuerpos neutralizantes AMH1/AML1 y AMH23/AML23. El dominio C que abarca los aminoácidos 128 a 154 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431) afectó negativamente la fijación de los anticuerpos neutralizantes AMH22/AML22 y AMH23/AML23. El dominio D que abarca los aminoácidos 176 a 197 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431) afectó negativamente la fijación de los anticuerpos neutralizantes AMH1/AML1, AMH22/AML22, AMH14/AML14, AMH19/AML19, AMH23/AML23, AMH21/AML21 y AMH20/AML20. Las características de fijación de los anticuerpos contra el IL-17RA respecto a dónde se fijaron los anticuerpos al IL17RA humano se confirmó mediante las quimeras dobles. Así pues, los dominios B, C y D se consideran determinantes neutralizantes.

Ejemplo 17

Tal y como se describe más arriba, se crearon y caracterizaron anticuerpos que se fijan al IL-17RA humano e inhiben, o neutralizan, la fijación de la IL-17A y/o de la IL-17F. Para determinar los determinantes neutralizantes del IL-17RA humano al que se fijan estos diferentes anticuerpos contra el IL-17RA, se construyeron una serie de proteínas mutantes del IL-17RA que tienen sustituciones de arginina en determinados restos de aminoácidoss del IL17RA humano. El cribado con arginina es un procedimiento reconocido en la técnica para evaluar dónde se fijan los anticuerpos, u otras proteínas, a otra proteína, véase, por ejemplo, Nanevicz, T. et al., 1995, J. Biol. Chem. 270: 37, 21619-21625 y Zupnick, A., et al., 2006, J. Biol. Chem. 281: 29, 20464-20473. En general, la cadena lateral de la arginina está cargada positivamente y es relativamente voluminosa en comparación con otros aminoácidos, lo que puede destruir la fijación del anticuerpo a la región del antígeno donde se introduce la mutación. El cribado con arginina es un procedimiento que determina si un resto forma parte de un determinante neutralizante y/o un epítopo.

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Se seleccionaron 95 aminoácidos distribuidos por el dominio extracelular del IL-17RA humano para mutarlos con argininas. La selección se sesgó hacia aminoácidos polares o cargados para aumentar al máximo la posibilidad de que el resto esté en la superficie y reduzca la probabilidad de que la mutación dé lugar a una proteína mal plegada. En la figura 20 se describen los restos de aminoácidoss que se reemplazaron con un resto de arginina en la SEQ ID NO: 431. Mediante el uso de los métodos estándares conocidos en la técnica, los oligonucleótidos sentido y antisentido que contienen los restos mutados se diseñaron sobre la base de los criterios proporcionados por el kit del protocolo de Stratagene Quickchange® II (Stratagene/Agilent, Santa Clara, CA). La mutagénesis del huIL-17RA-Flag-pHis genéticamente intacto se realizó con el kit Quickchange® II (Stratagene). Todas las construcciones quiméricas se generaron con la codificación de una etiqueta de FLAG-histidina (seis histidinas) en el extremo carboxilo del dominio extracelular para facilitar la purificación a través de la etiqueta de poli-His.

En análisis multiplexado que utiliza el programa informático y la estación de trabajo Bio-Plex (BioRad, Hercules, CA) se realizó para determinar los determinantes neutralizantes del IL-17RA humano mediante el análisis de la fijación diferencial de los Acm contra el IL-17RA humano de ejemplo a los mutantes de arginina frente a las proteínas IL-17RA genéticamente intactas. Se utilizaron 12 códigos de perlas para perlas revestidas con penta-His (Qiagen, Valencia, CA; véase www1.qiagen.com) que capturan la proteína etiquetada con histidinas. Los 12 códigos de perlas permitieron multiplexar los 11 mutantes de arginina de IL-17RA, y el IL-17RA humano genéticamente intacto (SEQ ID NO: 431).

Para preparar las perlas, del cultivo de expresión transitoria se fijaron 100 µl de los sobrenadantes del IL17RA genéticamente intacto y de los mutantes de arginina del IL-17RA a perlas revestidas con penta-His durante una noche a 4 ºC o 2 horas a temperatura ambiente con agitación vigorosa. Las perlas se lavaron según el protocolo del fabricante y los 12 conjuntos de perlas se agruparon y se distribuyeron en alícuotas en 2 o 3 columnas de una placa de filtración de 96 pocillos (Millipore, Bellerica, MA, producto n.º MSBVBN1250) para los puntos de ensayo por duplicado o triplicado, respectivamente. A los pocillos se les añadieron 100 µl de anticuerpos anti-IL-17RA en diluciones de 1/4, se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente y se lavaron. A cada pocillo se le añadieron 100 µl de una dilución 1:100 de anti-Fc de IgG de humano conjugado a PE (Jackson Labs, Bar Harbor, ME, producto n.º 109-116-170), se incubaron durante 1 hora y a temperatura ambiente y se lavaron. Las perlas se resuspendieron en SAB al 1%, se agitaron durante 3 minutos y se leyeron en la estación de trabajo Bio-Plex. La fijación del anticuerpo a la proteína mutada con arginina del IL-17RA se comparó con la fijación del anticuerpo al IL-17RA humano genéticamente intacto del mismo grupo. Se realizó una titulación del anticuerpo sobre una escala de aproximadamente 5 logaritmos. La intensidad de fluorescencia media (IFM) de las proteínas del IL-17RA mutadas con arginina se representó en gráficamente como porcentaje de la señal máxima del IL-17RA humano genéticamente intacto. Se consideró que los mutantes para los cuales la señal de todos los anticuerpos estaba por debajo del 30% de la del IL-17RA genéticamente intacto estaban a una concentración de proteína demasiado baja sobre la perla debido a la poca expresión del cultivo transitorio, o bien se consideró que posiblemente estaban mal plegados, y se descartaron del análisis: eran T51R, K53R, S55R, H64R, D75R, E110R, Q118R, T121, E123R, S147R, H148R, E158R, T160R, H163R, K191R, T193R, E213R, H251R, T269R, H279R y D293R. Las mutaciones (a saber, sustituciones por arginina) que incrementan 3 veces o más el CE50 para el Acm contra el IL-17RA (según se calculó mediante GraphPad Prism®) se consideró que habían afectado negativamente a la fijación del Acm contra el IL-17RA. Con estos procedimientos se esclarecieron los determinantes neutralizantes y los epítopos de diferentes anticuerpos contra el IL-17RA.

En la figura 21 se ilustran las curvas de titulación de la fijación de diferentes Acm contra el IL-17RA al mutante D152R del IL-17RA (a saber, el ácido aspártico en la posición 152 de la SEQ ID NO: 431 se mutagenizó para que fuera arginina). Los anticuerpos AMH1/AML1, AMH22/AML22, AMH14/AML14, AMH19/AML19, AMH23/AML23, AMH21/AML21 y AMH20/AML20 pierden la capacidad de fijación al mutante D152R del IL-17RA. Los anticuerpos AMH18/AML18 y AMH26/AML26 sólo resultaron afectados marginalmente, pero no cumplen los criterios del punto de corte.

En la figura 22 se presenta un resumen del cribado con arginina, encestado y datos de las quimeras. La metodología de cribado con argininas identificó varios determinantes neutralizantes: AMH18/AML18 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 220 a 284 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH1/AML1 se fijó a un dominio centrado en el resto de aminoácidos 152 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH22/AML22 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 152 a 198 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AM 14/AML14 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 152 a 297 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH19/AML19 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 152 a 186 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH23/AML23 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 97 a 297 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH26/AML26 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 138 a 270 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); AMH21/AML21 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 113 a 198 del IL-17RA humano (SEQ ID NO: 431); y AMH20/AML20 se fijó a un dominio que abarca los aminoácidos 152 a 270 del IL-17RA humano (SEQ ID n. 431).

Todos los restos mostrados en la figura 22 se ha demostrado que impiden la fijación de un anticuerpo monoclonal humano neutralizante que se fija específicamente al IL-17RA humano.

Claims

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Reivindicaciones

1.

Un anticuerpo monoclonal aislado que se fija específicamente a una IL-17RA humana de SEQ ID NO: 430 y compite para fijarse a dicha IL-17RA con un anticuerpo monoclonal aislado de referencia, donde dicho anticuerpo de referencia comprende un dominio variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 40 y un dominio variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO:14 y donde dicho anticuerpo o fragmento se fija específicamente a un polipéptido que consister de la SEQ ID NO: 431, con una afinidad de fijación de 10-8 a 10-10 M y que no fija específicamente dicho polipéptido donde el residuo de ácido aspártico en la posición 152 de la SEQ ID NO:431 sustituido con una arginina, no fija específicamente dicho polipéptido donde el residuo de ácido aspártico en la posición 154 de la SEQ ID NO:431 sustituido con una arginina, no fija específicamente dicho polipéptido donde el residuo de ácido glutámico en la posición 156 de la SEQ ID NO:431 sustituido con una arginina no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 184 de la SEQ ID NO:431, no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 186 de la SEQ ID NO:431, no fija específicamente dicho polipéptido sustituido con arginina en la posición 297 de la SEQ ID NO:431 y no se fija específicamente con un polipéptido que consiste de la SEQ ID NO: 436.
2.

El anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo monoclonal humano.
3.

El anticuerpo de la reivindicación 2, donde el anticuerpo monoclonal es una isoforma de IgG.
4.

Una composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.
5.

Un polinucleótido aislado, donde dicho polinucleótido codifica el anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 3.
6.

Un plásmido, que comprende dicho nucleótido de la reivindicación 5.
7.

El plásmido de la reivindicación 6, donde dicho plásmido es un vector de expresión.
8.

Una célula aislada, que comprende dicho plásmido de la reivindicación 6 o la reivindicación 7.
9.

La célula aislada de la reivindicación 7, donde un cromosoma de dicha célula comprende dicho polinucleótido de la reivindicación 4.
10.

La célula aislada de la reivindicación 8, donde dicha célula es un hibridoma.
11.

La célula aislada de la reivindicación 8, donde dicha célula comprende el vector de expresión de la reivindicación
7.
12. La célula aislada de la reivindicación 8, donde dicha célula es una seleccionada del grupo consistente de:

a.

una célula procariota;

b.

una célula eucariota;

c.

una célula de mamífero;

d.

una célula de insecto; y

e.

una célula CHO.
13.

Un método para hacer el anticuerpo o fragmento del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, que comprende incubar dicha célula aislada de 16 bajo condiciones que le permiten expresar dicho polipéptido.
14.

El anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o la composición farmacéutica de la reivindicación 4 para su uso en el tratamiento de artritis psoriásica juvenil, artritis psoriásica, psoriasis, psoriasis en placas, psoriasis gutata, psoriasis inversa, psoriasis pustular, psoriasis eritrodérmica, dermatitis atópica, asma, COPD.
15.

El anticuerpo para su uso de acuerdo con la reivindicación 14 que comprende además en combinación con un segundo tratamiento que comprende un composición farmacéutica.
16.

El anticuerpo para su uso de acuerdo con la reivindicación 16, donde dicha segunda composición farmacéutica se selecciona del grupo consiste de: inhibidores de TNF, receptores de TNF solubles, Etanercept, receptor de TNF soluble tipo I y receptor de TNF soluble tipo II, moléculas receptoras de TNF p75 y/o p55 monoméricas o multiméricas y fragmentos de las mismas, anticuerpos anti-TNF, Infliximab, adalimumab, inhibidores de IL-1, inhibidores del receptor de IL-1, inhibidores de CD28, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID), un fármaco antirreumático de acción lenta (SAARD), y fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad (DMARD).

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