BRPI0907196B1

BRPI0907196B1 - Uso de um antagonista de il-17ra-il-17rb

Info

Publication number: BRPI0907196B1
Application number: BRPI0907196-2A
Authority: BR
Inventors: Alison L. Budelsky; Michael R. Comeau; Joel E. Tocker
Original assignee: Kirin-Amgen Inc
Priority date: 2008-02-21
Filing date: 2009-02-20
Publication date: 2021-05-25
Also published as: AU2013205944A1; EP2250200A2; US20110052600A1; AU2009244878A2; AU2009244878A1; CN102037017B; KR101240904B1; US20140322238A1; CN104151428B; CA2715503C; HK1152053A1; CA2715503A1; CN104151428A; WO2009136976A3; MX2010009100A; JP2014122231A; CN102037017A; US20160208004A1; JP5647748B2; WO2009136976A2

Abstract

uso de antagonista de il-17ra-il-17b. a presente invenção se refere a ligado de interleucinal-17 e membros da familia do receptor e a verificação que o receptor e a verificação que o receptor de il-17 a e o receptor de il-17 b formam um complexo receptor heteromérico que é biologicamente ativo. os anttagonistas do complexo de receptor heteromérico il-17ra-il-17rb, são divulgados, bem como vários métodos de uso.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica o benefício sob 35 U.S.C. §119 do Pedido Condicional U. S. Série Número 61/145.901, depositado em 20 de janeiro de 2009 e Pedido Condicional U. S. Série Número 61/066.538, depositado em 21 de fevereiro de 2008, que são incorporados desse modo por referência.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002] A presente invenção diz respeito a ligando de Interleucina-17 e membros da família do receptor e a descoberta que o receptor de IL-17 A e o receptor de IL-17 B forma um complexo heteromérico que é biologicamente ativo. Os antagonistas do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL- 17RB e métodos de uso são divulgados.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[003] A família de Interleucina-17 é um grupo de seis citocinas estruturalmente relacionadas, denominadas IL-17A até IL-17F, que são importantes na regulação de respostas imunes. No nível de estrutura primária, a similaridade maior parece estar na região de terminal C, que contém quatro resíduos de citocina conservados (revistos em Kawaguchi et al., J. Allergy Clin Immunol 114:1265, 2004; Kolls and Linden, Immunity 21:467, 2004). A estrutura cristalina de IL-17F foi determinada e observada dividir as características estruturais com os fatores de desenvolvimento da família de nó de cistina (Hymowitz, et al., 2001, EMBO J. 20:5532-5341), um grupo de ligantes heterodiméricos que ligam e sinalizam através de contraestruturas tanto homodiméricas quanto heteroméricas (Lu, et al., 2005, Nat. Rev. Neurosci. 6: 603-614; Barker, 2004, Neuron 42:529-533).

[004] Os receptores de IL-17 (IL-17R) também formam uma família de proteínas transmembrana tipo I relacionadas. Cinco membros diferentes desta família foram identificados (IL-1RA até IL-1RE), diversos dos quais também apresentam união alternativa incluindo formas solúveis que podem atuar como receptores chamariz (Kolls and Linden, supra; Moseley et al., Cytokine Growth Factor Rev. 14:155, 2003). Embora o IL-17RA possa multimerizar, independente de ligando, e foi mostrado formar um complexo receptor heteromérico biologicamente ativo com IL-17RC (Toy et al., J Immunol. 177:36; 2007), a possibilidade de formação de outros complexos IL-17R heteroméricos (transmembrana ou formas solúveis) e resultando na atividade biológica, se houver, foi previamente desconhecida. Este e outros aspectos das várias formas de realização da invenção, são fornecidos.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[005] A Figura 1 é um gráfico que ilustra os efeitos na hiper- responsividade das vias aéreas de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB. Os círculos abertos descrevem o resultado obtidos em camundongos (N=4) dando MSA e MuFc; os quadrados abertos descrevem os resultados obtidos em camundongos (N=3) dando IL-25 e MuFc; os triângulos fechados obtidos em camundongos (N=3) dando IL-25 e M751.

[006] A Figura 2 representa um Western blot, preparado substancialmente como descrito no Exemplo 11. As linhas 1 e 4 contêm marcadores de peso molecular. O painel A foi manchado com anti-IL-17RA, o Painel B foi manchado com anti-HIS. A linha 2 apresenta um controle positivo IL-17RA:HIS, a linha 3 mostra os resultados da precipitação de IL- 17RA:HIS com IL-17RB:Fc. A linha 5 apresenta um controle positivo IL- 17RD:HIS, a linha 6 indica que o IL-17RD:HIS não pode ser precipitado com IL-17RB:Fc.

[007] A Figura 3 é um gráfico que ilustra a hiper-responsividade das vias aéreas (AHR) de camundongos em um modelo de asma OVA do Exemplo 14, Experimento 1. Os camundongos foram desafiados com as concentrações crescentes de metacolina e a mudança de PENH acima linha de base±SEM foi calculada.

[008] A Figura 4 ilustra a resistência pulmonar (RL) em camundongo em um modelo de asma OVA como descrito no Exemplo 14. A área de resistência das vias aéreas média (R) sob a curva (AUC) é mostrada para cada grupo de tratamento±SEM. A Figura 4a apresenta resultados do Experimento 2, 4b do Experimento 3.

[009] A Figura 5 apresenta a análise da celularidade do fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) como descrito no Exemplo 14, experimento 1. Os resultados mostrados são BALF total (4a), leucócitos, (4b) eosinófilos, (4c) neutrófilos, (4d) linfócitos e (4e) macrófagos. Cada círculo fechado representa a celularidade de BALF de um camundongo. As comparações de análises estatísticas foram realizadas usando-se um ANOVA de via única não paramétrico com o Teste de Comparação Múltipla de Dunn (*p < 0,05).

[0010] A Figura 6 é similar à figura 5, mas apresenta resultados do Experimento 2 do Exemplo 14. Os resultados mostrados são BALF total (4a), leucócitos, (4b) eosinófilos, (4c) neutrófilos, (4d) linfócitos e (4e) macrófagos. As comparações de análises estatísticas foram realizadas usando- se um ANOVA de via única com o Teste de Comparação Múltipla de Bonferroni (*p < 0,05).

[0011] A Figura 7 apresenta resultados do Experimento 3, Exemplo 14. Os resultados mostrados são BALF total (4a), leucócitos, (4b) eosinófilos, (4c) neutrófilos, (4d) linfócitos e (4e) macrófagos. cada círculo fechado representa a celularidade BALF de um camundongo. As comparações de análises estatísticas foram realizadas usando-se um ANOVA de via única não paramétrico com Teste de Comparação Múltipla de Dunn (*p < 0,05).

[0012] A Figura 8 ilustra concentrações de BALF IL-13 de camundongos em um modelo de asma OVA. As concentrações de foram medidas por ELISA em amostras de BALF a partir de camundongos individuais em 3 experimentos separados como descrito no Exemplo 14: (a) Experimento 1, (b) Experimento 2, (c) Experimento 3. Cada círculo fechado indica um valor de um camundongo. As linhas horizontais indicam médias de grupos. As comparações entre os grupos realizadas usando-se um ANOVA de via única. *p < 0,05.

[0013] A Figura 9 apresenta concentrações de BALF IL-5 de camundongos em um modelo de asma OVA. As concentrações de IL-5 foram medidas por ELISA em amostras de BALF de camundongos individuais em 3 experimentos separados como descrito no Exemplo 14: (a) Experimento 1, (b) Experimento 2, (c) Experimento 3. Cada círculo fechado indica um valor de um camundongo. As linhas horizontais indicam médias de grupo. As comparações entre os grupos foram realizadas usando-se um ANOVA de via única. *p < 0,05.

[0014] A Figura 10 ilustra concentrações de soro de IgE determinado por ELISA em camundongos individuais em um modelo de asma OVA como descrito no Exemplo 14, no (a) Experimento 1 (b) Experimento 2 (c) Experimento 3. A concentração de IgE do soro para cada camundongo é indicado com um círculo fechado. As linhas horizontais indicam médias de grupo. As comparações entre os grupos foram realizadas usando-se um ANOVA de via única. *p < 0,05.

[0015] A Figura 11 apresenta registros de histologia de pulmão de grupos de camundongos em um modelo de asma OVA como escrito no Exemplo 14, Experimento 3. *p < 0,0001 usando-se um teste t não em par para as comparações estatísticas.

"DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO"

[0016] Os títulos de seção usados aqui são apenas para os propósitos organizacionais e não devem ser construídos como limitantes do assunto descrito.

[0017] As técnicas padrão podem ser usadas para DNA recombinante, síntese de oligonucleotídeo, cultura e transformação de tecido, purificação de proteína, etc. As reações enzimáticas e as técnicas de purificação podem ser realizadas de acordo com as especificações do fabricante ou como comumente realizado na técnica ou como descrito neste. Os seguintes procedimentos e técnicas podem ser, em geral, realizados de acordo com métodos convencionais bem conhecidos na técnica e como descrito em várias referências gerais e mais específicas que são citadas e debatidas por todo o relatório descritivo. Ver, por exemplo, Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3° ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., que é incorporado neste por referência para qualquer propósito. A não ser que definições específicas sejam fornecidas, a nomenclatura usada em conexão com e os procedimentos e técnicas de laboratório de, química analítica, química orgânica e química medicinal e farmacêutica descrita neste é aquela bem conhecida e comumente usada na técnica. As técnicas padrão podem ser usadas para a síntese química, análises químicas, preparação farmacêutica, formulação e liberação e tratamento de pacientes.

[0018] A caracterização, clonagem e preparação de IL-17RA são descritas, por exemplo, em USPN 6.072.033, concedida em 6 de junho de 2000, que é incorporado neste por referência em sua totalidade. A sequência de aminoácido do IL-17RA humano é mostrado na SEQ ID N°: 10 da USPN 6.072.033 (número de acessão GenBank NM_014339). O IL-17RA humano tem um peptídeo sinalizador de terminal N com um local de clivagem predito aproximadamente entre os aminoácidos 27 e 28. O peptídeo sinalizador é seguido por um domínio extracelular de 293 aminoácidos, um domínio transmembrana de 21 aminoácidos e uma cauda citoplásmica de 525 aminoácidos. As formas solúveis de IL-17RA humano (huIL-17RA) que são úteis nos métodos da presente invenção incluem o domínio extracelular (resíduos 1 a 320 ou resíduos 28 a 320 que excluem o peptídeo sinalizador) ou um fragmento do domínio extracelular que retém a capacidade de ligar IL- 17A. Outras formas de IL-17RA que são úteis na presente invenção incluem muteínas e variações que estão pelo menos entre 70 % e 99 % de identidade de aminoácido ao IL-17RA natural que retém a capacidade de ligar IL-17A, como descrito em maiores detalhes em USPN 6.072.033.

[0019] O Receptor IL-17 B (IL-17RB) em suas muitas formas é conhecido na técnica, tais como aqueles divulgados e descritos em Tian et al., Oncogene 19:2098 (2000). Os exemplos adicionais incluem sequências disponíveis em bancos de dados públicos, tais como, mas não limitado ao N° de Acessão GenBank NM_018725. Além disso, como descrito abaixo, o IL- 17RB também pode incluir fragmentos ou variantes biologicamente ativos.

[0020] O IL-17RA associa-se com IL-17RB para formar um complexo receptor heteromérico que é biologicamente ativo (isto é, na ligação do ligando, o complexo receptor é ativado e transduz um sinal em uma célula em que este é expressado, resultando em uma atividade biológica, tal como indução de mRNAs, secreção de citocinas, mudança na morfologia ou estado de ativação da célula, etc.). Cada membro de um complexo receptor heteromérico é referido como um "componente" ou "subunidade" deste. Como usado neste, "complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB" (ou "complexo receptor heteromérico") refere-se a um complexo que compreende pelo menos IL-17RA e IL-17RB; subunidades ou componentes adicionais também podem formar parte do complexo receptor heteromérico.

[0021] Desta maneira, certos aspectos da invenção são realizados para os agentes (por exemplo, proteínas de ligação de antígeno, como descrito abaixo) e métodos para bloquear a associação de IL-17RA com IL-17RB (e/ou com subunidades receptoras adicionais) e, desse modo, evitando a formação de um complexo de receptor funcional (um complexo receptor que é capaz de ser ativado). Outros aspectos da invenção são realizados para um antagonista que liga o complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB ou uma subunidade ou componente deste e inibe a ligação de ligando (isto é, IL-25) e ativação subsequente do complexo receptor. Ainda, outros aspectos da invenção são realizados para os antagonistas que ligam um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB ou uma subunidade deste e evita que a ativação ocorra. A prevenção de que um complexo receptor funcional seja formado e/ou ativado deve reduzir ou evitar a transdução ou reduzir os efeitos pró-inflamatórios a jusante da ativação de IL-17RA/IL-17RB. Tais métodos e antagonistas devem ser úteis no tratamento de vários distúrbios de inflamação e autoimunes que são influenciados pelo caminho de IL-17/IL- 17R. As formas de realização da invenção são úteis para os ensaios in vitro para a avaliação quanto aos antagonistas ou agonistas do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB e/ou para identificar células que expressam o complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB.

[0022] Além disso, o conhecimento que tanto IL-17RA quanto IL- 17RB são requeridos para formar um complexo receptor de IL-25 funcional leva a agentes adicionais (tais como proteínas de ligação de antígeno) que são úteis na inibição ou antagonização de uma atividade biológica de IL-25. Por exemplo, uma proteína de ligação de antígeno que liga a uma ou mais subunidades do complexo receptor (por exemplo, um anticorpo que liga IL- 17RA ou um anticorpo que liga IL-17RB) e inibe a ligação ou a ativação do complexo receptor por IL-25 será um antagonista útil de IL-25.

[0023] Em algumas formas de realização, os antagonistas da invenção são moléculas "isoladas" ou "substancialmente puras" (ou "substancialmente homogêneo"). O termo "molécula isolada" (onde a molécula é, por exemplo, um polipeptídeo, um peptídeo ou um anticorpo) é uma molécula que, em virtude de sua origem ou fonte de derivação (1) não é associada com os componentes naturalmente associados que a acompanham em seu estado natural, (2) é substancialmente isenta de outras moléculas da mesma espécie (3) é expressado por uma célula de uma espécie diferente ou (4) não ocorre em estado natural. Desta maneira, uma molécula que é quimicamente sintetizada ou sintetizada em um sistema celular diferente da célula a partir da qual esta origina-se naturalmente, será "isolada" destes componentes naturalmente associados.

[0024] Uma molécula também pode ser tornada substancialmente isenta de componentes naturalmente associados por isolamento, usando-se técnicas de purificação bem conhecidas na técnica (isto é, uma proteína "purificada"). A pureza ou homogeneidade da molécula pode ser estimada por diversos meios bem conhecidos na técnica. Por exemplo, a pureza de uma amostra de polipeptídeo pode ser estimada usando-se eletroforese em gel de poliacrilamida e tingimento do gel para visualizar o polipeptídeo usando-se técnicas bem conhecidas na técnica. Para certos propósitos, resolução mais alta pode ser fornecida usando-se HPLC ou outros meios bem conhecidos na técnica para a purificação.

[0025] Um antagonista "isolado" (isto é, uma proteína, um polipeptídeo, um peptídeo ou um anticorpo) é desacompanhado por pelo menos algum dos materiais com os quais este está normalmente associado em seu estado natural, em uma forma de realização que constitui pelo menos cerca de 5 %, em uma outra forma de realização pelo menos cerca de 50 %, em peso, da proteína total em uma dada amostra. Uma proteína "substancialmente pura" compreende pelo menos cerca de 75 % em peso da proteína total, com pelo menos cerca de 80 % sendo específico e pelo menos cerca de 90 % sendo particularmente específico. A definição inclui a produção de uma proteína de um organismo em um organismo ou célula hospedeira diferente. Alternativamente, a proteína pode ser feita em uma concentração significantemente mais alta do que é normalmente visto, através do uso do promotor indutível ou promotor de expressão alta, tal que a proteína é feita em níveis de concentração aumentados.

[0026] Alguns dos muitos aspectos das várias formas de realização da são descritos nestes. 1. Antagonistas de IL-17RA-IL-17RB

[0027] O IL-17RA associa-se com IL-17RB para formar um complexo receptor heteromérico que é biologicamente ativo (isto é, quando ativado pela ligação do ligando, um sinal é transduzido a uma célula que resulta em uma mudança na atividade biológica da célula, por exemplo, indução de mRNAs, secreção de citocinas, mudança na morfologia ou estado de ativação da célula, etc.). Um complexo de receptor heteromérico IL-17RA- IL-17RB é definido como uma associação (tal como, mas não limitado a, interações de proteína-proteína) de pelo menos proteínas IL-17RA e IL-17RB apresentadas como um complexo receptor heteromérico ou a membrana extracelular das células. Este complexo receptor heteromérico, em um mínimo, é requerido para a sinalização de IL-25, isto é, ativação de IL-17RA e/ou IL-17RB. É entendido que o complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB ainda pode compreender proteínas adicionais (isto é, proteínas "acessórias"). Por exemplo, uma molécula sinalizadora conhecida como Act-1 é parte da cascata de sinalização IL-17A e evidência recente indica que esta também pode estar envolvida na sinalização de IL-25 (Claudio et al., J. Immunol. 182:1617, 2009; Swaidani et al., J. Immunol. 182:1631, 2009). A ativação do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB é realizada através da ligação dos membros da família do ligando IL-17, tal como, mas não limitado a, IL-25 (IL-17E). A ativação de complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB inclui, mas não limita-se a, iniciação de cascatas de sinalização intracelular e eventos a jusante, tais como transcrição e tradução de gene.

[0028] As formas de realização são direcionadas a antagonistas, incluindo proteínas de ligação de antígeno, que inibe a associação das subunidades (isto é IL-17RA e IL-17RB e/ou proteínas auxiliares) na formação de um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB, bem como a antagonistas (isto é, proteínas de ligação de antígeno) que inibem a ligação do ligando (isto é, IL-25) a um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB ou subunidade deste. As formas de realização adicionais são direcionadas a antagonistas (incluindo proteínas de ligação de antígeno) que ligam-se a uma ou mais subunidades de um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB e resulta em uma mudança conformacional que evita a associação das subunidades do complexo, a ligação de ligando a este ou ativação deste.

[0029] A "proteína de ligação de antígeno" como usada neste é uma proteína que liga-se especificamente a uma proteína alvo identificada (por exemplo, uma subunidade de um complexo receptor heteromérico 17RA-IL- 17RB ou um complexo receptor heteromérico por si só). "Liga-se especificamente" significa que a proteína de ligação de antígeno tem afinidade mais alta para a proteína alvo identificada do que para uma outra proteína. Tipicamente, "liga-se especificamente" significa que a constante de dissociação de equilíbrio é < 10-7 a 10-11 M, ou <10-8 a <10-10 M ou <10-9 a <10-10 M.

[0030] As proteínas de ligação de antígeno incluem um anticorpo, ou fragmento deste, que liga especificamente uma proteína alvo identificada, como variadamente definida neste, bem como um peptídeo ou polipeptídeo que liga especificamente a proteína alvo identificada. As proteínas de ligação de antígeno que inibem a formação de um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB ou que inibem a ligação do ligando a este ou a sinalização, deste modo, são referidas aqui como antagonistas de IL-17RA-IL-17RB. As formas de realização de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem, desta maneira, ligar a qualquer parte do complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB (isto é, ao complexo por si só ou a uma subunidade deste) e inibe a ativação do receptor. Os subgêneros do gênero de antagonistas de IL- 17RA-IL-17RB compreendem anticorpos, como variadamente definido neste, bem como peptídeos e polipeptídeos.

[0031] Ativando ou ativação de um receptor é definida aqui como o entrosamento de um ou mais caminhos de sinalização intracelular e a transdução de sinalização intracelular (isto é, transdução de sinal) em resposta a uma ligação de molécula a um receptor de ligação de membrana, tal como mas não limitado a, uma interação de receptor:ligando. A transdução de sinal, como usada neste, é a substituição de um sinal pela conversão de uma forma física ou química a uma outra; por exemplo, na biologia celular, o processo pelo qual uma célula converte um sinal extracelular em uma resposta (tal como secreção de citocina, proliferação ou mudança no estado de ativação da célula).

[0032] "Inibição" pode ser medida como um aumento em uma atividade de um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB, por exemplo, uma diminuição na formação de um complexo receptor heteromérico, uma diminuição na ligação de ligando (isto é, IL-17A IL-17F e/ou IL-25) a um complexo receptor heteromérico (ou pelo menos uma subunidade deste) ou uma diminuição em uma atividade biológica em resposta ao ligando, tal como IL-17A, IL-17F e/ou IL-25 (isto é, estímulo da secreção de citocinas, mudanças em números ou estados de ativação de células ou outros efeitos biológicos) por pelo menos 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 100 %. Em uma forma de realização, os antagonistas da invenção diminuem uma atividade de complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB por pelo menos 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou 100 %; em uma outra forma de realização, os antagonistas da invenção inibem uma atividade por pelo menos 35 %, 45 %, 55 %, 65 %, 75 %, 85 %, 95 % ou mais.

[0033] A inibição da formação de um complexo receptor heteromérico pode ser medida por quaisquer meios conhecidos na técnica, tal como mas não limitado aos métodos de co-imunoprecipitação descritos neste. Outros exemplos incluem a análise Forster Resonance Energy Transfer (FRET) e outros métodos que são conhecidos na técnica e que podem ser usados para analisar quantitativa ou qualitativamente a interação de ligando/receptor. A inibição da ligação de ligando pode ser medida por quaisquer meios conhecidos na técnica, tais como FACS, EIA, RIA, os métodos já mencionados e os métodos que são conhecidos na técnica para avaliar a interação de duas ou mais moléculas, incluindo aqueles descritos neste e em USSN 11/906.094.

[0034] Além disso, a "inibição" pode ser medida como uma perda de ativação de IL-25 de um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL- 17RB como medido pelas leituras biologicamente relevantes, tal como mas não limitado à transcrição genética super-regulada (por exemplo, níveis aumentados de IL-5, IL-13, eotaxina, MCP-1 e/ou IL-17RB mRNAs) e/ou tradução de gene e/ou liberação de vários fatores associados com a ativação do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB, que inclui IL-5 e/ou IL-13, bem como qualquer outro mediador pró-inflamatório conhecido na técnica a ser liberado a partir de quaisquer células que expressam IL-17RA e/ou IL-17RB. As leituras biologicamente relevantes adicionais incluem mudanças nos números e/ou aparência de células em uma amostra biológica (tal como celularidade aumentada em amostras de lavagem broncoalveolar, hiperplasia de célula cálice e/ou inflamação vascular/perivascular nas amostras de tecido de pulmão).

[0035] Outras formas de realização de um antagonista de IL-17RA- IL-17RB são direcionadas a Antagonistas de IL-17RA-IL-17RB que ligam a IL-17RA. Em uma forma de realização, os antagonistas inibem parcialmente ou inibem totalmente a associação de subunidades de complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB e, desse modo, evitam a formação de complexo receptor heteromérico. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB não necessita bloquear a ligação de IL-25 ao complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. Nas formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB pode bloquear a ligação de IL-25 ao complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB (ou a uma subunidade deste).

[0036] As formas de realização adicionais de um antagonista de IL- 17RA-IL-17RB são direcionadas a antagonistas de IL-17RA-IL-17RB que ligam-se a IL-17RB. Em uma forma de realização, os antagonistas inibem parcialmente ou inibem totalmente a associação de subunidades do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB e, desse modo, evita a formação do complexo receptor heteromérico. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB não necessita bloquear a ligação de IL-25 ao complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB pode bloquear a ligação de IL-25 ao complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB (ou a uma subunidade deste).

[0037] As formas de realização adicionais de um antagonista de IL- 17RA-IL-17RB são direcionados a antagonistas de IL-17RA-IL-17RB que ligam tanto IL-17RA quanto IL-17RB, incluindo aqueles que ligam um complexo receptor heteromérico. Em uma forma de realização, os agonistas inibem parcialmente ou inibem totalmente associação de subunidades do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB e, desse modo, evita formação do complexo receptor heteromérico. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB não necessita bloquear a ligação de IL-25 ao complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB pode bloquear a ligação de IL-25 ao complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB (ou a uma subunidade deste).

[0038] As várias formas de realização de antagonistas de IL-17RA- IL-17RB descritos acima incluem antagonistas de IL-17RA-IL-17RB que ligam-se a IL-17RA ou IL-17RB ou ao complexo receptor heteromérico e inibe ou impede histericamente a associação das subunidades do complexo receptor heteromérico, desse modo evitando a formação de complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. Em um exemplo de impedimento estérico da associação de subunidades do complexo receptor heteromérico, a ligação de um antagonista a uma subunidade ocorre em um local que é requerido para a associação daquela subunidade com outras subunidades do complexo receptor ou próximas o bastante do local que a disposição espacial do antagonista previne a associação das subunidades do complexo receptor heteromérico. Alternativamente, as várias formas de realização de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descritos acima incluem antagonistas de IL-17RA-IL-17RB que ligam-se a IL-17RA ou IL-17RB ou o complexo receptor heteromérico, e induzem (ou evitam) a alteração conformacional em uma ou mais das subunidades do complexo receptor heteromérico, desse modo, inibindo a formação de um complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB. Em um exemplo de mudança conformacional que evita a associação de subunidades do complexo receptor heteromérico, a ligação de um antagonista a uma subunidade ocorre em um local que pode ser distal de um local que é requerido para a associação daquela subunidade com outras subunidades do complexo receptor e causa uma mudança na conformação da subunidade que evita a associação deste com outras subunidades ou evita a mudança conformacional que é necessária para a associação das subunidades. Similarmente, as várias formas de realização de antagonistas de IL-17RA-IL- 17RB descritas acima incluem antagonistas de IL-17RA-IL-17RB que ligam- se a IL-17RA ou IL-17RB ou o complexo receptor heteromérico e induz (ou evita) a alteração conformacional que inibe a transdução de sinal ou que impede estericamente a transdução de sinal pelo complexo receptor heteromérico.

[0039] Em uma outra forma de realização alternativa, os vários antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descritos acima incluem antagonistas de IL-17RA-IL-17RB que ligam-se a IL-17RA ou IL-17RB ou o complexo receptor heteromérico e induz a alteração conformacional no complexo receptor heteromérico (ou uma subunidade deste) e, desse modo, inibe a ligação de IL-25 (ou um outro ligando) ao complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. As formas de realização ainda incluem antagonistas de IL-17RA-IL-17RB que ligam-se a IL-17RA ou IL-17RB ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB e impedem ou inibem estericamente a ligação do ligando (tal como IL-25) ao complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. Também estão presentes nas formas de realização, antagonistas que ligam-se a IL-17RA ou IL-17RB ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB e inibem (parcial ou totalmente) um caminho de sinalização do complexo receptor, desse modo inibindo a sinalização por intermédio do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB.

[0040] Em uma forma de realização alternativa adicional, um antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se a um ligando (isto é, IL-17A, IL-25, etc) e inibe a sinalização por intermédio de complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. Tais antagonistas podem atuar pela inibição da ligação a uma subunidade de um complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB ou a mais do que uma subunidade. Desta maneira, por exemplo, um antagonista pode permitir que um ligando ligue a uma primeira subunidade receptora, mas evita a interação de uma segunda unidade ao ligando ou à primeira subunidade receptora. Tal inibição pode ocorrer, por exemplo, pelo impedimento estérico de ligação, indução de uma alteração conformacional, etc. de uma tal maneira a fim de inibir (total ou parcialmente) a sinalização por intermédio do complexo de receptor heteromérico IL-17RA- IL-17RB. l.lAntagonistas de IL-17RA-IL-17RB: Anticorpos

[0041] As formas de realização de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB compreendem anticorpos ou fragmentos destes, como variadamente definido neste. Consequentemente, os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB incluem anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, anticorpos biespecíficos, diacorpos, minicorpos, anticorpos de domínio, anticorpos sintéticos (algumas vezes referidos aqui como "miméticos de anticorpo"), anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos totalmente humanos, fusões de anticorpo (algumas vezes referido como "conjugados de anticorpo"), bem como fragmentos destes.

[0042] Os anticorpos de antagonista de IL-17RA-IL-17RB também podem compreender anticorpos de domínio simples que compreendem dímeros de duas cadeias pesadas e não incluem nenhuma cadeia leve, tais como aquelas encontradas em camelos e lhamas (ver, por exemplo Muldermans, et al., 2001, J. Biotechnol. 74:277-302; Desmyter, et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:26285-26290).

[0043] Os anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem compreender um tetrâmero ou fragmentos destes. Cada tetrâmero é tipicamente composto de dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeos, cada particularmente tendo uma cadeia "leve" (tipicamente tendo um peso molecular de cerca de 25 kDa) e uma "pesada" (tipicamente tendo um peso molecular de cerca de 50 a 70 kDa). A porção de terminal amino de cada cadeia que inclui uma região variável é primariamente responsável pelo reconhecimento de antígeno. A porção de terminal carbóxi de cada cadeia define um região constante primariamente responsável pela função atuadora. As cadeias leves humanas são classificadas como cadeias leves capa e lambda. As cadeias pesadas são classificadas como mu, delta, gama, alfa ou épsilon e define o isotipo do anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. O IgG tem diversas subclasses, que inclui, mas não limita-se a IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. O IgM tem subclasses, que incluem, mas não limitam-se a, IgM1 e IgM2. Os anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL- 17RB incluem todos os tais isotipos. para os propósitos exemplares, o fragmentos de anticorpo incluem mas não limitam-se a, F(ab), F(ab'), F(ab')2, Fv e fragmentos Fv de cadeia simples (scfv), bem como anticorpos de cadeia simples. Os anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem compreender qualquer um dos exemplos precedentes.

[0044] A estrutura de anticorpos é bem conhecida na técnica e não necessita ser reproduzida aqui, mas por meio do Exemplo, as regiões variáveis das cadeias pesadas e leves apresentam tipicamente a mesma estrutura geral de regiões de estrutura relativamente conservadas (FR) unidas por três regiões hipervariáveis, também denominadas regiões de determinação de complementaridade ou CDRs. As CDRs são as regiões hipervariáveis de um anticorpo (ou proteína de ligação de antígeno, como resumido aqui), que são responsáveis pelo reconhecimento e ligação de antígeno. Os CDRs das duas cadeias de cada par são alinhados pelas regiões de estrutura, permitindo a ligação a um epítopo específico. Do terminal N ao terminal C, tanto as cadeias leves quanto as pesadas compreendem os domínios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. Em algumas formas de realização, a indicação de aminoácidos a cada domínio pode ocorrer de acordo com as definições de Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest. Ver, Chothia, et al., 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia, et al., 1989, Nature 342:878-883.

[0045] Uma "região determinadora de complementaridade" ou "CDR," como usado neste, refere-se a uma região de proteína de ligação que constitui os pontos de contato de superfície principais para a ligação de antígeno. Uma proteína de ligação da invenção pode ter seis CDRs, por exemplo um CDR1 de cadeia pesada ("CDRH1"), um CDR2 cadeia pesada ("CDRH2"), um CDR3 de cadeia pesada ("CDRH3"), um CDR1 de cadeia leve ("CDRL1"), um CDR2 de cadeia leve ("CDRL2"), um CDR3 de cadeia leve ("CDRL3"). O CDRH1 tipicamente compreende cerca de cinco (5) a cerca de sete (7) aminoácidos, o CDRH2 tipicamente compreende cerca de dezesseis (16) a cerca de dezenove (19) aminoácidos e o CDRH3 tipicamente compreende cerca de três (3) a cerca de vinte e cinco (25) aminoácidos. O CDRL1 tipicamente compreende cerca de dez (10) a cerca de dezessete (17) aminoácidos, o CDRL2 tipicamente compreende cerca de sete (7) aminoácidos e o CDRL3 tipicamente compreende cerca de sete (7) a cerca de dez (10) aminoácidos.

[0046] Em um mínimo, um antagonista de anticorpo IL-17RA-IL- 17RB compreende toda ou parte de uma região variável de cadeia leve ou pesada ou todos ou tanto parte de uma região variável de cadeia leve quanto de cadeia pesada que, especificamente, liga-se a IL-17RA ou IL-17RB ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB. Os exemplos de fragmentos (isto é, "parte") de regiões variáveis compreende os CDRs. Diferentemente estabelecido, em um mínimo, um antagonista de anticorpo IL-17RA-IL-17RB compreende pelo menos um CDR de uma região variável, em que o CDR liga especificamente IL-17RA ou IL-17RB ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB. Em formas de realização alternativas, um antagonista de anticorpo IL-17RA- IL-17RB compreende pelo menos dois ou pelo menos três ou pelo menos quatro ou pelo menos cinco ou pelo menos todos os seis CDRs das regiões variáveis, em que pelo menos um dos CDRs liga especificamente IL-17RA ou IL-17RB ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB. O CDR pode ser de uma cadeia pesada ou leve e pode ser um de qualquer um dos três CDRs dentro de cada cadeia, isto é, os CDRs são, cada um, independentemente selecionados de CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3.

[0047] As formas de realização dos anticorpos de antagonistas de IL- 17RA-IL-17RB podem compreender uma estrutura de armação em que os CDR(s) úteis são enxertados. Algumas formas de realização incluem componentes de estrutura humanos para anticorpos humanizados. Em uma forma de realização, a estrutura de armação é uma estrutura de anticorpo tetramérica tradicional. Desta maneira, as formas de realização dos anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem incluir os componentes adicionais, tais como regiões de estrutura, J e D, regiões constantes, etc. que formam uma cadeia pesada ou leve. As formas de realização dos anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem compreender anticorpos que tem um domínio de Fc modificado, referido como uma variante Fc. Uma "variante Fc" refere-se a uma molécula ou sequência que é modificada a partir de um Fc nativo mas que ainda compreende um local de ligação para o receptor de recuperação, FcRn. Outros exemplos de uma "variante Fc" inclui uma molécula ou sequência que é humanizada a partir de um Fc nativo não humano. Além disso, um Fc nativo compreende locais que podem ser removidos porque estes fornecem características estruturais ou atividade biológica que não são requeridas para as moléculas de infusão da presente invenção. Desta maneira, o termo "variante Fc" compreende uma molécula ou sequência que precisa de um ou mais locais de Fc naturais ou resíduos que afetam ou que estão envolvidos na (1) formação de ligação de bissulfeto, (2) incompatibilidade com uma célula hospedeira selecionada (3) da heterogeneidade de terminal N na expressão em uma célula hospedeira selecionada, (4) glicosilação, (5) interação com o complemento, (6) ligação a um outro receptor de Fc que não um receptor de recuperação ou (7) citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC).

[0048] As formas de realização de anticorpos de antagonistas de IL- 17RA-IL-17RB compreendem anticorpos monoclonais humanos. Os anticorpos monoclonais humanos direcionados contra IL-17RA humano ou IL-17RB ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB podem ser feitos usando-se quaisquer métodos conhecidos na técnica, tais como, mas não limitados à tecnologia XenoMouse™ (ver, por exemplo Patentes dos Estados Unidos N°. 6,114,598; 6,162,963; 6,833,268; 7,049,426; 7,064,244; Green et al, 1994, Nature Genetics 7:13-21; Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15:146-156; Green and Jakobovitis, 1998, J. Ex. Med. 188:483-495). Outros exemplos de fabricação de anticorpos totalmente humanos incluem UltiMab Human Antibody Development System™ and Trans-Phage Technology™ (Medarex Corp., Princeton, NJ), tecnologias de apresentação de fago, tecnologias de apresentação de ribossomo (ver por exemplo Cambridge Antibody Technology, Cambridge, UK), bem como qualquer outro método conhecido na técnica.

[0049] Certas formas de realização de anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB compreende anticorpos quiméricos e humanizados ou fragmentos destes. Em geral, tanto anticorpos quiméricos quanto humanizados refere-se a anticorpos que combinam regiões daquela espécie. Por exemplo, os anticorpos quiméricos tradicionalmente compreende regiões variáveis de uma espécie não humana e as regiões constantes de um ser humano. Os anticorpos humanizados, em geral, referem-se a anticorpos não humanos que tiveram as regiões de estrutura de domínio variável trocados por sequências encontradas em anticorpos humanos. Em geral, em um anticorpo humanizado, o anticorpo total, exceto os CDRs, é codificado por um polinucleotídeo de origem humana ou é idêntico a um tal anticorpo exceto dentro de seus CDRs. Os CDRs, alguns ou todos os quais são codificados por ácidos nucleicos que se originam em um organismo não humano, são enxertados na estrutura de lâmina beta de uma região variável de anticorpo humano para a criação de um anticorpo, cuja especificidade é determinada pelos CDRs enxertados. A criação de tais anticorpos é bem conhecida na técnica (ver, por exemplo, Jones, 1986, Nature 321:522-525; Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-1536). Os anticorpos humanizados também podem ser gerados usando-se camundongos com um sistema imune geneticamente projetado ou por qualquer outro método ou tecnologia conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Roque, et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654). Em algumas formas de realização, os CDRs são humanos e, desta maneira, anticorpo tanto quiméricos quanto humanizados neste contexto podem incluir alguns CDRs não humanos; por exemplo, os anticorpos humanos podem ser gerados compreendendo as regiões de CDRH3 e CDRL3, com uma ou mais das outras regiões de CDR sendo de uma origem especial diferente.

[0050] Em uma forma de realização, os anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB compreendem um anticorpo multiespecífico. Estes são anticorpos que ligam-se a dois (ou mais) antígenos diferentes. Um exemplo de um anticorpo biespecífico conhecidos na técnica são "diacorpos". Os diacorpos podem ser fabricados em uma variedade de maneiras conhecidas na técnica, por exemplo, preparados quimicamente ou de hibridomas híbridos (Holliger and Winter, 1993, Current Opinion Biotechnol. 4:446-449). Uma forma de realização específica de um antagonista de anticorpo IL-17RA-IL- 17RB multiespecífico é um anticorpo que tem a capacidade de ligar tanto ao IL-17RA quanto ao IL-17RB.

[0051] Em formas de realização alternativas, os anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB compreendem um minicorpo. Os minicorpos são proteínas semelhantes a anticorpos minimizados que compreendem um Fv de cadeia simples (scFv; descrito abaixo) unidos a um domínio CH3 (ver, por exemplo Hu, et al., 1996, Cancer Res. 56:3055-3061).

[0052] Em formas de realização alternativas, os anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB compreendem um anticorpo de domínio; por exemplo aqueles descritos na Patente U. S. N° 6.248.516. Os anticorpos de domínio (dAbs) são domínios de ligação funcional de anticorpos, correspondendo às regiões variáveis das cadeias pesadas (VH) ou leves (VL) de anticorpos humanos. Os dAbs têm um peso molecular de aproximadamente 13 kDa ou menos do que um décimo do tamanho de um anticorpo total. Os dAbs são bem expressados em uma variedade de hospedeiros incluindo bactérias, levedura e sistemas celulares de mamíferos. Além disso, os dAbs são altamente estáveis e retêm atividade mesmo após sendo submetido a condições severas, tais como secagem por congelamento ou desnaturação por calor. Ver, por exemplo, Patente US 6,291,158; 6,582,915; 6,593,081; 6,172,197; US Série N° 2004/0110941; Patente européia 0368684; Patente US 6,696,245, WO04/058821, WO04/003019 e WO03/002609.

[0053] Como mencionado previamente, o anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem compreender um fragmento de anticorpo, isto é, um fragmento de qualquer um dos anticorpos mencionados aqui que retêm a especificidade de ligação a IL-17RA ou IL-17RB ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB. Os fragmentos de anticorpo específicos incluem, mas não são limitados ao (i) fragmento Fab que consiste de domínios VL, VH, CL e CH1, (ii) ao fragmento Fd que consiste dos domínios VH e CH1, (iii) ao fragmento Fv que consiste dos domínios VL e VH de um anticorpo simples; (iv) o fragmento dAb (ver, por exemplo, Ward, et al., 1989, Nature 341:544-546) que consiste de uma variável simples, (v) regiões CDR isoladas, (vi) fragmentos de F(ab')2, um fragmento bivalente que compreende dois fragmentos Fab ligados (vii) moléculas Fv de cadeia simples (scFv), em que um domínio VH e um domínio VL são ligados por um ligante de peptídeo permitindo que os dois domínios associam-se para formar um local de ligação de antígeno (ver, por exemplo, Bird, et al., 1988 Science 242:423-426; Huston, et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883), (viii) dímeros Fv de cadeia simples biespecíficos e (ix) "diacorpos" ou "triacorpos", fragmentos multivalentes ou multiespecíficos construídos pela fusão de gene (ver, por exemplo, Tomlinson, et. al., 2000, Methods Enzymol. 326:461-479; WO94/13804; Holliger, et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. 90:6444-6448). Os fragmentos de anticorpo podem ser modificados. Por exemplo, as moléculas podem ser estabilizadas pela incorporação das pontes de bissulfeto que ligam os domínios VH e VL (ver, por exemplo, Reiter, et al., 1996, Nature Biotech. 14:1239-1245). Novamente, como resumido aqui, os componentes que não de CDR destes fragmentos são preferivelmente sequências humanas.

[0054] Em formas de realização adicionais, os anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB compreendem uma proteína de fusão de anticorpo (algumas vezes referido aqui como um "conjugado de anticorpo"). O parceiro conjugado pode ser proteináceo ou não proteináceo; o último, em geral, sendo gerado usando-se grupos funcionais em uma proteína de ligação de antígeno (ver o debate nas modificações das proteínas de ligação de antígeno) e no parceiro conjugado. Por exemplo, os ligantes são conhecidos na técnica; por exemplo, ligantes homo ou hetero-bifuncionais como são bem conhecidos (ver, por exemplo, catálogo 1994 Pierce Chemical Company, seção técnica em reticuladores, páginas 155 a 200, incorporado neste por referência). Os conjugados adequados incluem, mas não são limitados a, rótulos como descrito abaixo, medicamentos e agentes citotóxicos que incluem, mas não limitado a medicamentos citotóxicos (por exemplo, agentes quimioterapêuticos) ou toxinas ou fragmentos ativos de tais toxinas. As toxinas adequadas e seus fragmentos correspondentes incluem cadeia de difteria A, cadeia de exotoxina A, cadeia de ricina A, cadeia de abrina A, curcina, crotina, fenomicinas, enomicina e outros. Os agentes citotóxicos também incluem radioquímicos feitos pela conjugação de radioisótopos para proteínas de ligação de antígeno ou ligação de um radionuclídeo a um agente de quelação que foi covalentemente ligado a uma proteína de ligação de antígeno. As formas de realização adicionais utilizam caliqueamicina, auristatinas, geldanamicina e maitansina.

[0055] Em uma forma de realização, o anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB compreende um análogo de anticorpo, algumas vezes referido como "anticorpos sintéticos". Por exemplo, uma variedade de estruturas de proteína alternativas ou estruturas artificiais podem ser enxertadas com CDRs de anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB. Tais estruturas incluem, mas não limitam-se a, mutações introduzidas para estabilizar a estrutura tri-dimensional da proteína de ligação, bem como estruturas totalmente sintéticas que consistem, por exemplo, de polímeros biocompatíveis. Ver, por exemplo, Korndorfer, et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, Volume 53, Issue 1:121-129; Roque, et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654. Em formas de realização alternativas os anticorpos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem compreender miméticos de anticorpo de peptídeo ou "PAMs", bem como miméticos de anticorpo que utilizam componentes de fibronexão como uma estrutura. 1.2 Antagonistas de IL-17RA-IL-17RB: Peptídeos/Polipeptídeos

[0056] As formas de realização de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB compreendem proteínas na forma de peptídeos e polipeptídeos que ligam-se especificamente a IL-17RA ou IL-17RB ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB, que inibe uma atividade de IL-17A, IL-17F e/ou IL-25. Em algumas formas de realização, os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB inibem a associação das subunidades do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB; induzem (ou evitam) a mudança conformacional nas subunidades receptoras, desse modo, inibindo sua interação; inibe a ligação do ligando (isto é, IL-25) ao complexo receptor heteromérico (ou uma subunidade deste) ou induz a mudança conformacional no complexo receptor heteromérico (ou uma subunidade deste) que inibe a ligação do ligando a este.

[0057] As formas de realização incluem antagonistas de IL-17RA-IL- 17RB recombinantes. Uma "proteína recombinante" é uma proteína feita usando-se técnicas recombinantes, isto é, através da expressão de um ácido nucleico recombinante usando-se métodos conhecidos na técnica.

[0058] Um "peptídeo" como usado aqui, refere-se a molécula de 1 a 100 aminoácidos. Os peptídeos exemplares que ligam-se a IL-17RA ou IL- 17RB ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB que inibem a associação de IL- 17RA e IL-17RB na formação de um complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB ou inibe a sinalização do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB pode compreender aqueles gerados a partir de bibliotecas aleatorizadas. Por exemplo, as sequências de peptídeo de sequências totalmente aleatórias (por exemplo, selecionadas pelos métodos de apresentação de fago ou avaliação de RNA-peptídeo) e sequências em que um ou mais resíduos de uma molécula de ocorrência natural é substituído por um resíduo de aminoácido não aparecem naquela posição na molécula de ocorrência natural. Os métodos exemplares para identificar sequências de peptídeo incluem a apresentação de fago, apresentação de E. coli, apresentação de ribossomo, avaliação de RNA-peptídeo, avaliação química e outros.

[0059] Por "proteína", como usado neste, é entendido pelo menos dois aminoácidos covalentemente ligados, que inclui proteínas, polipeptídeos, oligopeptídeos e peptídeos. Em algumas formas de realização, os dois ou mais aminoácidos covalentemente ligados são ligados por uma ligação de peptídeo. A proteína pode ser feita de aminoácidos de ocorrência natural e de ligações de peptídeo, por exemplo, quando a proteína é feita de maneira recombinante usando-se sistemas de expressão e células hospedeiras, como resumido abaixo. Alternativamente, em algumas formas de realização (por exemplo, quando agentes candidatos proteináceos são avaliados quanto à capacidade de inibir a associação de IL-17RA e IL-17RB) a proteína pode incluir aminoácidos sintéticos (por exemplo, homofenilalanina, citrulina, ornitina e norleucina) ou estruturas peptidomiméticas, isto é, "análogos de peptídeo ou de proteína ", tais como peptóides (ver, Simon et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:9367, incorporado por referência neste), que pode ser resistente a proteases ou outras condições fisiológicas e/ou armazenamento. Tais aminoácidos sintéticos podem ser incorporados, em particular, quando a proteína é sintetizada in vitro por métodos convencionais bem conhecidos na técnica. Além disso, qualquer combinação de resíduos/estruturas peptidomiméticos, sintéticos e de ocorrência natural pode ser usada. "Aminoácido" também inclui resíduos de iminoácido, tais como prolina e hidroxiprolina. O "grupo R" ou "cadeia secundária de aminoácido pode estar na configuração (L) ou (S). Em uma forma de realização específica, os aminoácidos estão na configuração (L) ou (S).

[0060] Um exemplo de uma proteína antagonística é um receptor heteromérico de IL-17RA-IL-17RB solúvel. Os métodos de preparar tais receptores heteroméricos solúveis são conhecidos na técnica e são descritos, por exemplo, na Patente US 6,589,764, concedida em 8 de julho de 2003, incorporado por referência neste. Os complexos de receptor de IL-17A-IL- 17B incluem IL-17RA e IL-17RB (e/ou subunidades adicionais) como proteínas co-expressadas na mesma célula ou como subunidades receptoras ligadas umas às outras (por exemplo, por intermédio de ligações covalentes por quaisquer meios adequados, tal como por intermédio de um reagente de reticulação ou um ligante de polipeptídeo). Em uma forma de realização, um receptor heteromérico é formado de uma proteína de fusão de cada componente receptor com uma porção de uma molécula de anticorpo, tal como uma região Fc. Alternativamente, o receptor de IL-17A-IL-17B heteromérico pode ser formado através de interações não covalentes tais como aquela de biotina com avidina. 2.0 Antagonistas de IL-17RA-IL-17RB

[0061] Como mencionado acima, os antagonistas de IL-17RA-IL- 17RB incluem proteínas de ligação de antígeno de IL-17RA-IL-17RB, que inclui, mas não limita-se a, anticorpos, peptídeos e polipeptídeos, bem como outros antagonistas (incluindo outros polipeptídeos ou proteínas). As formas de realização de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB alternativas (por exemplo, proteínas de ligação de antígeno IL-17RA-IL-17RB) compreendem modificações covalentes de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB. Tais modificações podem ser realizadas de maneira pós-tradução. Por exemplo, diversos tipos de modificações covalentes dos antagonistas de IL-17RA-IL- 17RB são introduzidas na molécula pela reação de resíduos de aminoácido do antagonista com um agente de derivação orgânico que é capaz de reagir com cadeias secundárias selecionadas ou os resíduos de terminal N ou C. O seguinte representa exemplos de tais modificações aos antagonistas de IL- 17RA-IL-17RB.

[0062] Os resíduos de cisteinila são, mais comumente reagidos com α-haloacetatos (e aminas correspondentes), tal como ácido acético ou cloroacetamida, para dar derivados de carboximetila ou carboxiamidometila. Os resíduos de cisteinila também são derivados pela reação de bromotrifluoroacetona, ácido α-bromo-β-(5-imidozoil)propi0nico, fosfato de cloroacetila, N-alquilmaleimidas, bissulfeto de 3-nitro-2-piridila, bissulfeto de metil 2-piridil, p-cloromercuribenzoato, 2-cloromercuri-4-nitrofenol ou cloro- 7-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol. Os resíduos de histidila são derivados pela reação com dietilpirocarbonato em pH de 5,5 a 7.0 porque este agente é relativamente específico para a cadeia de histidila. O brometo de para- bromofenacila também é útil; a reação é preferivelmente realizada em cacodilato de sódio 0,1 M em pH 6,0. Lisinila e resíduos de terminal amino são reagidos com ácido succínico ou outros anidridos de ácido carboxílico. A derivação com estes agentes tem o efeito de reverter a carga dos resíduos de lisinila. Outros agentes adequados para derivar resíduos contendo alfa-amino incluem imidoésteres, tais como picolimidato de metila; fosfato de piridoxal; piridoxal; cloroboroidreto; ácido trinitrobenzenossulfônico; O-metilisouréia; 2,4-pentanodiona e reação catalisada por transaminase com glioxilato. Os resíduos de arginila são modificados pela reação com um ou diversos reagentes convencionais, entre estes fenilglioxal, 2,3-butanodiona, 1,2- cicloexanodiona e ninidrina. A derivação de resíduos de arginina requer que a reação seja realizada em condições alcalinas por causa do pKa alto do grupo funcional de guanidina. Além disso, estes reagentes podem reagir com os grupos de lisina bem como o grupo arginina épsilon-amino.

[0063] A modificação específica de resíduos de tirosila pode ser feita, com interesse particular na introdução de rótulos espectrais em resíduos de tirosila pela reação com compostos de diazônio aromáticos ou tetranitrometano. Mais comumente, N-acetilimidizol e tetranitrometano são usados para formar espécies de O-acetil tirosila e derivados de 3-nitro, respectivamente. Os resíduos de tirosila são iodados usando-se 125I ou 131I para a preparação de proteínas rotuladas para o uso em radioimunoensaio de IL-17, o método de cloramina T descrito acima sendo adequado. Os grupos secundários de carboxila (aspartila ou glutamila) são seletivamente modificados pela reação com carbodiimidas (R'—N=C=N--R'), onde R e R' são grupos alquila opcionalmente diferentes, tais como 1-ciclo-hexil-3-(2- morfolinil-4-etil) carbodiimida ou 1-etil-3-(4-azonia-4,4-dimetilpentil) carbodiimida. Além disso, resíduos de aspartila e glutamila são convertidos a resíduos de asparaginila e glutaminila pela reação com íons de amônio.

[0064] A derivação com agentes bifuncionais é útil para a reticulação de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB a uma matriz de suporte insolúvel em água ou superfície para o uso em uma variedade de métodos. Os agentes de reticulação comumente usados incluem, por exemplo, 1,1-bis(diazoacetil)-2- feniletano, glutaraldeído, ésteres N-hidroxisuccinimida, por exemplo, ésteres com ácido 4-azidosalicílico, imidoésteres homobifuncionais, incluindo ésteres disuccinimidílicos, tais como 3,3'-ditiobis(succinimidilpropionato) e maleimidas bifuncionais, tais como bis-N-maleimido-1,8-octano. Os agentes derivadores, tais como metil-3-[(p-azidofenil)ditio]propioimidato produzem intermediários fotoativáveis que são capazes de formar reticulações na presença de luz. Alternativamente, as matrizes insolúveis em água reativas, tais como carboidratos ativados por brometo de cianogênio e os substratos reativos descritos na Patente U. S. N° 3,969,287; 3,691,016; 4,195,128; 4,247,642; 4,229,537 e 4,330,440 são utilizados para a imobilização de proteína.

[0065] Os resíduos de glutaminila e asparaginila são frequentemente desamidados aos resíduos de glutamila e aspartila correspondentes, respectivamente. Alternativamente, Estes resíduos são desamidados sob condições brandamente ácidas. Cada forma destes resíduos está dentro do escopo desta invenção. Outras modificações incluem hidroxilação de prolina e de lisina, fosforilação de grupos hidroxila de resíduos de serila ou treonila, a metilação dos grupos alfa-amino de lisina, arginina, e cadeias secundárias de histidina (T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 [1983]), acetilação da amina de terminal amina e a amidação de qualquer grupo carboxila de terminal C.

[0066] Um outro tipo de modificação covalente dos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB incluído dentro do escopo desta invenção compreende alterar o padrão de glicosilação da proteína. Como é conhecido na técnica, os padrões de glicosilação podem depender tanto na sequência da proteína (por exemplo, a presença ou ausência de resíduos de aminoácido de glicosilação particular, debatido abaixo) ou a célula hospedeira ou organismo em que a proteína é produzida. A glicosilação dos polipeptídeos é tipicamente ligada por N ou ligada por O. Ligado por N refere-se à ligação da porção de carboidrato à cadeia secundária de um resíduo de asparagina. As sequência de tripeptídeo asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, onde X é qualquer aminoácido exceto prolina, são as sequências de reconhecimento para a ligação enzimática da porção de carboidrato à cadeia secundária de asparagina. Desta maneira, a presença destas sequências de tri-peptídeo em um polipeptídeo cria um local de glicosilação potencial. A glicosilação ligada por O refere-se à ligação de um dos açúcares N-acetilgalactosamina, galactose ou xilose, a um hidroxiaminoácido, mais comumente serina ou treonina, embora a 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina também possam ser usados. A adição de locais de glicosilação aos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB é convenientemente realizada pela alteração da sequência de aminoácido tal que esta contenha uma ou mais das sequências de tri-peptídeo descritas acima (para locais de glicosilação ligados por N). A alteração também pode ser feita pela adição de ou substituição por um ou mais resíduos de serina ou treonina à sequência de partida (para locais de glicosilação ligados por O). Para comodidade, a sequência e aminoácido da proteína de ligação de antígeno é preferivelmente alterada através das mudanças no nível de DNA, particularmente pela mutação do DNA que codifica o polipeptídeo alvo em bases pré-selecionadas tal que os códons sejam gerados sejam traduzidos nos aminoácidos desejados.

[0067] Um outro meio de aumentar o número de porções de carboidrato nos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB ocorre pela ligação química ou enzimática de glicosídeos à proteína. Estes procedimentos são vantajosos em que estes não requerem a produção da proteína em uma célula hospedeira que tenha capacidades de glicosilação para a glicosilação ligada por N e O. Dependendo do modo de ligação usado, os açúcares podem ser ligados a (a) arginina e histidina, (b) grupos carboxila livres, (c) grupos sulfidrila livres, tais como aqueles grupos sulfidrila livres tais como aqueles de cisteína, (d) grupos hidroxila livres tais como aqueles de serina, treonina ou hidroxiprolina, (e) resíduos aromáticos tais como aqueles de fenilalanina, tirosina ou triptofano ou (f) o grupo amida de glutamina. Estes métodos são descritos no WO 87/05330 publicado em 11 de setembro de 1987 e em Aplin and Wriston, 1981, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306.

[0068] A remoção de porções de carboidrato presente nos agonistas de partida de IL-17RA-IL-17RB pode ser realizada química ou enzimaticamente. A desglicosilação química requer a exposição da proteína ao composto ácido trifluorometanossulfônico ou um composto equivalente. Este tratamento resulta na clivagem da maioria ou de todos os açúcares exceto o açúcar de ligação (N-acetilglicosamina ou N-acetilgalactosamina), enquanto deixa-se o polipeptídeo intacto. A desglicosilação química é descrita por Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52 e por Edge et al., 1981, Anal. Biochem. 118:131. A clivagem enzimática de porções de carboidrato em polipeptídeos pode ser atingida pelo uso de uma variedade de endo e exo-glicosidases como descrito por Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol. 138:350. A glicosilação em locais de glicosilação potenciais pode ser evitada pelo uso do composto tunicamicina como descrito por Duskin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:3105. A tunicamicina bloqueia a formação das ligações de proteína-N-glicosídeo.

[0069] Um outro tipo de modificação covalente dos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB compreende a ligação da proteína de ligação de antígeno a vários polímeros não proteináceos, incluindo, mas não limitado a vários polióis, tais como polietileno glicol (PEG), polipropileno glicol ou polioxialquilenos, da maneira apresentada na Patente U. S. N° 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192 ou 4,179,337. Além disso, como é conhecido na técnica, as substituições de aminoácido podem ser feitas em várias posições dentro de uma proteína de ligação de antígeno para facilitar a adição de polímeros, tais como a adição de polímeros, tal como PEG.

[0070] As modificações covalentes de antagonistas de IL-17RA-IL- 17RB estão incluídas dentro do escopo desta invenção e são, em geral, mas nem sempre, realizadas de maneira pós-tradução. Por exemplo, diversos tipos de modificações covalentes dos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB são introduzidos na molécula pela reação de resíduos de aminoácido específicos dos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB com um agente de derivação orgânico que é capaz de reagir com as cadeias secundárias selecionadas ou os resíduos de N ou C.

[0071] Em algumas formas de realização, a modificação covalente das proteínas de ligação de antígeno da invenção compreende a adição de um ou mais rótulos. Em geral, os rótulos estão em uma variedade de classes, dependendo do ensaio em que estes devem ser detectados: a) rótulos isotópicos, que podem ser radioativos ou isótopos pesados; b) rótulos magnéticos (por exemplo, partículas magnéticas); c) porções ativas de redox; d) pigmentos óticos; grupos enzimáticos (por exemplo, peroxidase de rábano silvestre, beta-galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina); e) grupo biotinilados e f) epítopos de polipeptídeo predeterminados reconhecidos por um repórter secundário (por exemplo, sequências de par de zíper de leucina, locais de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metal, rótulos de epítopo, etc.). Em algumas formas de realização, o grupo de rotulação é ligado a uma proteína de ligação de antígeno por intermédio de membros espaçadores de vários comprimentos para reduzir o impedimento estérico potencial. Vários métodos para a rotulação de proteína são conhecidos na técnica e podem ser usados na realização da presente invenção.

[0072] Os rótulos específicos incluem pigmentos óticos, incluindo, mas não limitado a, cromóforos, fósforos e fluoróforos, como último sendo específico em muitos exemplos. Os fluoróforos podem ser flúoros de "molécula pequena" ou flúoros proteináceos. Por "rótulo fluorescente" é entendido qualquer molécula pode ser detectada por intermédio de suas propriedades fluorescentes inerentes. Os rótulos fluorescentes adequados, mas não são limitados a, fluoresceína, rodamina, tetrametilrodamina, eosina, eritrosina, coumarina, metil-coumarinas, pireno, Malachita verde, estilbeno, amarelo Lucifer, Cascade BlueJ, Texas Red, IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC Red 640, Cy 5, Cy 5.5, LC Red 705, Oregon green, the Alexa-Fluor dyes (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), Cascade Blue, Cascade Yellow e R-ficoeritrina (PE) (Molecular Probes, Eugene, OR), FITC, Rhodamine e Texas Red (Pierce, Rockford, IL), Cy5, Cy5.5, Cy7 (Amersham Life Science, Pittsburgh, PA). Os pigmentos óticos adequados, incluindo fluoróforos, são descritos em Molecular Probes Handbook por Richard P. Haugland, aqui, expressamente incorporado por referência.

[0073] Os rótulos fluorescentes proteináceos adequados também incluem, mas não são limitados a, proteína fluorescente verde, incluindo as espécies Renilla, Ptilosarcus ou Aequorea de GFP (Chalfie et al., 1994, Science 263:802-805), EGFP (Clontech Laboratories, Inc., Genbank Número de Acessão U55762), proteína fluorescente azul (BFP, Quantum Biotechnologies, Inc. 1801 de Maisonneuve Blvd. West, 8° Floor, Montreal, Quebec, Canada H3H 1J9; Stauber, 1998, Biotechniques 24:462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6:178-182), proteína fluorescente amarela intensificada (EYFP, Clontech Laboratories, Inc.), luciferase (Ichiki et al., 1993, J. Immunol. 150:5408-5417), β galactosidase (Nolan et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2603-2607) e Renilla (WO92/15673, WO95/07463, WO98/14605, WO98/26277, WO99/49019, Patente U.S. N°. 5292658, 5418155, 5683888, 5741668, 5777079, 5804387, 5874304, 5876995, 5925558). Todas das referências citadas acima são expressamente incorporados neste por referência.

[0074] Todas das modificações descritas acima das proteínas de ligação de antígeno também devem ser feitas por qualquer outro antagonista proteináceo de IL-17RA-IL-17RB, por exemplo um complexo IL-17RA-IL- 17RB heteromérico ou um polipeptídeo ou agonista de peptídeo como descrito neste. 3.0 Métodos de uso

[0075] A presente invenção também fornece métodos de uso de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB, incluindo por exemplo, o uso de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB para os propósitos diagnósticos ou para os propósitos do tratamento. É entendido que, para o tratamento, o uso de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB é geralmente para a redução ou melhoramento dos sinais e/ou sintomas da doença ou condição pelo qual o tratamento é dado. A invenção fornece os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB como descrito em toda parte desta especificação que pode ser usada na preparação ou fabricação de um medicamento para o tratamento de várias condições e doenças neste. Adicionalmente, uma quantidade efetiva de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB e uma quantidade terapeuticamente efetiva de um ou mais agentes ativos adicionais como descritos neste podem ser usados na preparação ou fabricação de um medicamento útil para os tratamentos descritos. Algumas formas de realização incluem um kit de partes que compreendem um antagonista de IL-17RA-IL-17RB; opcionalmente, um tal kit pode incluir pelo menos um ingrediente ativo adicional para a administração separada, simultânea ou subsequente a um paciente em necessidade destes.

[0076] As formas de realização adicionais incluem os métodos de inibição da ativação IL-17RA e/ou IL-17RB nas células que expressam IL- 17RA e IL-17RB usando um ou mais dos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descritos neste. Por exemplo, um método de inibir a ativação IL-17RA e/ou IL-17RB nas células que expressam IL-17RA e IL-17RB que compreendem a exposição das ditas células a um antagonista de IL-17RA-IL-17RB, em que o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se pelo menos uma sub-unidade ou componente do complexo receptor heteromérico e inibem parcialmente ou inibem totalmente a associação destes com outra subunidade ou componente do complexo receptor heteromérico (por intermédio do impedimento estérico ou mudança conformacional) deste modo evitando formação de complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se mais do que uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico ou liga-se o complexo receptor heteromérico por si próprio. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL- 17RB não necessita inibir a ligação do ligando (tal como IL-25) por um ou mais componentes do complexo receptor heteromérico para inibir a ativação IL-17RA e/ou IL-17RB. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB inibe a ligação do ligando (isto é, IL-25) ao IL-17RA e/ou IL-17RB, e inibe a ativação IL-17RA e/ou IL-17RB. As formas de realização adicionais compreendem um método em que o dito antagonista de IL-17RA-IL-17RB é uma proteína de ligação de antígeno, como definido neste; opcionalmente a proteína de ligação de antígeno está na forma de uma composição farmacêutica.

[0077] As formas de realização adicionais incluem os métodos de inibição da ativação IL-17RA e/ou IL-17RB nas células que expressam pelo menos IL-17RA e IL-17RB in vivo usando um ou mais dos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descritos nestes. Por exemplo, um método de inibir a ativação IL-17RA e/ou IL-17RB nas células que expressam IL-17RA e IL- 17RB in vivo que compreende a exposição das ditas células a um antagonista de IL-17RA-IL-17RB, em que o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se pelo menos uma sub-unidade ou componente do complexo receptor heteromérico e inibe parcialmente ou inibe totalmente a associação destes com outra sub-unidade ou componente do complexo receptor heteromérico (por intermédio do impedimento estérico ou mudança conformacional) portanto inibindo a ativação de complexo de receptor heteromérico IL-17RA- IL-17RB. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL- 17RB liga-se uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se mais do que uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico ou liga-se o complexo receptor heteromérico por si só. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB não necessita bloquear a ligação do ligando (tal como IL-25) a um ou mais componentes do complexo receptor heteromérico para inibir a ativação IL-17RA e/ou IL-17RB. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB inibe a ligação do ligando (isto é, IL-25) a IL-17RA e/ou IL-17RB, e inibe a ativação IL-17RA e/ou IL-17RB. As formas de realização adicionais compreendem um método em que o dito antagonista de IL-17RA-IL-17RB é uma proteína de ligação de antígeno, como definido neste; opcionalmente a proteína de ligação de antígeno está na forma de uma composição farmacêutica.

[0078] As formas de realização adicionais incluem os métodos de redução dos mediadores pró-inflamatórios liberados após a ativação de complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB nas células que expressam o dito complexo in vivo usando um ou mais dos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descritos nestes. Por exemplo, um método de redução da liberação dos mediadores pró-inflamatórios após a ativação de complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB nas células que expressam o dito complexo in vivo que compreende a exposição das ditas células a um antagonista de IL-17RA-IL-17RB, em que o antagonista de IL-17RA-IL- 17RB liga-se pelo menos uma sub-unidade ou componente do complexo receptor heteromérico e inibe parcialmente ou inibe totalmente a formação ou ativação de um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB do complexo receptor heteromérico (por intermédio do impedimento estérico ou mudança conformacional) portanto a redução da liberação dos mediadores pró-inflamatórios. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL- 17RA-IL-17RB liga-se uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se mais do que uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico ou liga-se o complexo receptor heteromérico por si só. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB não necessita inibir a ligação do ligando (tal como IL-25) a um ou mais componentes do complexo receptor heteromérico para reduzir a liberação dos mediadores pró-inflamatórios. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB inibe a ligação do ligando (isto é, IL-25) a IL-17RA e/ou IL-17RB, e reduz a liberação dos mediadores pró-inflamatórios. As formas de realização adicionais compreendem um método em que o dito antagonista de IL-17RA- IL-17RB é uma proteína de ligação de antígeno, como definido neste; opcionalmente a proteína de ligação de antígeno está na forma de uma composição farmacêutica.

[0079] As formas de realização adicionais compreendem os métodos, como descrito neste, em que o mediador pró-inflamatório é pelo menos um dos seguintes: IL-5, IL-6, IL-8, IL-12, IL-13, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G- CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, MMP3, MMP9, GROα, NO, eotaxina, MCP-1, e IL-17RB, bem como qualquer outro mediador pró- inflamatório conhecido na técnica a ser liberado de qualquer uma das células através da ativação de IL-17RA e/ou IL-17RB.

[0080] As formas de realização adicionais incluem os métodos, como descritos acima, do tratamento dos distúrbios associados ao membro da família IL-17, tal como mas não limitado a, distúrbios autoimunes ou inflamatórios com os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB.

[0081] As formas de realização adicionais incluem os métodos do tratamento da inflamação, em que o complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB é bloqueado parcialmente ou totalmente de ser ativado pela administrado de um ou mais dos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descritos nestes. Por exemplo, um método do tratamento da inflamação em um paciente em necessidade deste que compreende a administração ao dito paciente um antagonista de IL-17RA-IL-17RB, em que o antagonista de IL-17RA-IL- 17RB liga-se pelo menos uma sub-unidade ou componente do complexo receptor heteromérico e inibe parcialmente ou inibe totalmente a formação ou ativação do complexo receptor heteromérico (por intermédio do impedimento estérico ou mudança conformacional) portanto facilitando o tratamento da inflamação. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL- 17RB liga-se uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se mais do que uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico ou liga-se o complexo receptor heteromérico por si só. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB não necessita bloquear a ligação do ligando (tal como IL-25) a um ou mais componentes do complexo receptor heteromérico a ser útil no tratamento da inflamação. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB inibe a ligação do ligando (isto é, IL-25) a IL-17RA e/ou IL-17RB, e é útil no tratamento da inflamação. As formas de realização adicionais que compreendem um método em que o dito antagonista de IL-17RA-IL-17RB é um anticorpo, como definido neste; opcionalmente o anticorpo está na forma de uma composição farmacêutica.

[0082] As formas de realização adicionais incluem os métodos de tratamento de um distúrbio autoimune, em que o complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB é bloqueado parcialmente ou totalmente de ser ativado pela administração a um ou mais dos antagonistas de IL-17RA-IL- 17RB descritos nestes. Por exemplo, um método de uso de um distúrbio autoimune em um paciente em necessidade deste que compreende a administração ao dito paciente a um antagonista de IL-17RA-IL-17RB, em que o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se pelo menos uma sub-unidade ou componente do complexo receptor heteromérico e inibe parcialmente ou inibe totalmente a formação ou ativação do complexo receptor heteromérico portanto facilitando o tratamento do distúrbio autoimune. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB liga-se mais do que uma sub-unidade do complexo receptor heteromérico ou liga-se o complexo receptor heteromérico por si só. Em algumas formas de realização, o antagonista de IL-17RA-IL- 17RB não necessita bloquear a ligação do ligando (tal como IL-25) a um ou mais componentes do complexo receptor heteromérico a serem úteis no tratamento de um distúrbio autoimune. Em formas de realização alternativas, o antagonista de IL-17RA-IL-17RB inibe a ligação do ligando (isto é, IL-25) a IL-17RA e/ou IL-17RB, e é útil no tratamento de um distúrbio autoimune. As formas de realização adicionais compreendem um método em que o dito antagonista de IL-17RA-IL-17RB é um anticorpo, como definido neste; opcionalmente o anticorpo está na forma de uma composição farmacêutica.

[0083] As formas de realização adicionais incluem os métodos de tratamento da inflamação e/ou distúrbios autoimunes, como descrito acima, em que os distúrbios incluem, mas não são limitados a, inflamação de cartilagem, e/ou degradação óssea, artrite, artrite reumatóide, artrite juvenil, artrite reumatóide juvenil, artrite reumatóide juvenil pauciarticular, artrite reumatóide juvenil poliarticular, artrite reumatóide juvenil de início sistêmico, espondilite ansilosante juvenil, artrite enteropática juvenil, artrite reativa juvenil, síndrome de Reter juvenil, síndrome de SEA (Seronegatividade, Entesopatia, síndrome de artropatia), dermatomiosite juvenil, artrite psoriática juvenil, escleroderma juvenil, eritematoso de lúpus sistêmico juvenil, vasculite juvenil, artrite reumatóide pauciarticular, artrite reumatóide poliarticular, artrite reumatóide de início sistêmico, espondilite ansilosante, artrite enteropática, artrite reativa, síndrome de Reter, síndrome de SEA (Seronegatividade, Entesopatia, síndrome de Artropatia), dermatomiosite, artrite psoriática, escleroderma, eritematoso de lúpus sistêmico, vasculite, miolite, polimiolite, dermatomiolite, osteoartrite, poliarteritis nodossa, granulomatose de Wegener, arterite, polimialgia reumática, sarcoidose, escleroderma, esclerose, esclerose biliar primária, colangite esclerosante, síndrome de Sjogren, psoríase, placa de psoríase, psoríase guttato, psoríase inversa, psoríase pustular, psoríase eritrodérmica, dermatite, dermatite atópica, atorosclerose, lúpus, doença de Still, eritematoso de lúpus sistêmico (SLE), miastenia grave, doença do intestino inflamatório (IBD), doença de Crohn, colite ulcerativa, doença celíaco, esclerose múltipla (MS), asma (incluindo asma extrínseca e intrínseca bem como condições inflamatórias crônicas relacionadas ou hipersensibilidade, das vias aéreas), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD. isto é, bronquite crônica, enfisema), síndrome do distúrbio respiratório agudo (ARDS), síndrome da angústia respiratória, fibrose cística, hipertensão pulmonar, vasoconstrição pulmonar, injúria pulmonar aguda, aspergilose broncopulmonar alérgica, pneumonia de hipersensibilidade, pneumonia eosinofílica, bronquite, bronquietase de bronquite alérgica, tuberculose, pneumonite de hipersensibilidade, asma ocupacional, distúrbio semelhante a asma, sarcoidose, síndrome da doença das vias aéreas reativas (ou disfunção), bissinose, doença pulmonar intersticial, síndrome hiper-eosinofílico, rinite, sinusite e doença pulmonar parasítica, hiper-responsividade das vias aéreas associadas com condições induzidas virais (por exemplo, vírus sincicial respiratório (RSV), vírus de parainfluenza (PIV), rinovírus (RV) e adenovírus), doença de Guillain-Barre, diabete melito tipo I, doença de Graves, doença de Addison, fenômeno de Raynaud, hepatite autoimune, GVHD e outros.

[0084] As formas de realização adicionais incluem composições farmacêuticas que compreende uma quantidade terapeuticamente efetiva de um ou mais de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB junto com um diluente, carreador, solubilizador, emulsificador, conservante e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável. Além disso, a invenção fornece os métodos de tratamento a um paciente pela administração de tal composição farmacêutica bem como os métodos para a preparação ou fabricação de um medicamento para o uso no tratamento das condições anteriormente mencionadas.

[0085] Os materiais de formulação aceitáveis são não tóxicos aos recipientes nas dosagens e concentrações utilizadas. Em certas formas de realização, a composição farmacêutica pode conter os materiais de formulação para a modificação, manutenção ou preservação, por exemplo, o pH, osmolaridade, viscosidade, claridade, cor, isotonicidade, odor, esterilidade, estabilidade, taxa de dissolução ou liberação, absorção ou penetração da composição. Em tais formas de realização, os materiais de formulação adequados, mas não são limitados a, aminoácidos (tal como glicina, glutamina, asparagina, arginina ou lisina); antimicrobianos; antioxidantes (tal como ácido ascórbico, sulfeto de sódio ou sulfeto de hidrogênio de sódio); tampões (tal como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos ou outros ácidos orgânicos); agentes volumosos (tal como manitol ou glicina); agentes quelantes (tal como ácido tetraacético de etilenodiamina (EDTA)); complexos de agentes (tal como cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina ou hidropropil-beta-ciclodextrina); cargas; monossacarídeos; dissacarídeos; e outros carboidratos (tal como glicose, manose ou dextrinas); proteínas (tal como albumina de soro, gelatina ou imunoglobulinas); corantes, flavorizantes e agentes de diluição; agentes de emulsificação; polímeros hidrofílicos (tal como polivinilpirrolidona); polipeptídeos de peso molecular baixo; contraíons de formação de sal (tal como sódio); conservantes (tal como cloreto de benzalcônio, ácido benzóico, ácido salicílico, timerosal, álcool fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, clorexidina, ácido sórbico ou peróxido de hidrogênio); solventes (tal como glicerina, propileno glicol ou polietileno glicol); álcoois de açúcares (tal como manitol ou sorbitol); agentes de suspensão; tensoativos ou agentes umectantes (tal como plurônicos, PEG, ésteres de sorbitano, polisorbatos tal como polisorbato 20, polisorbato, triton, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal); agentes intensificadores de estabilidade (tal como sacarose ou sorbitol); agentes intensificadores de tonicidade (tal como haletos de metais alcalinos, preferivelmente cloreto de sódio e potássio, manitol sorbitol); veículos de liberação; diluentes; excipientes e/ou adjuvantes farmacêuticos. Ver, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18° Edition, (A.R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company.

[0086] Em certas formas de realização, a ótima composição farmacêutica será determinada por uma pessoa habilitada na técnica dependendo de, por exemplo, a via pretendida de administração, formato de liberação e dosagem desejada. Ver, por exemplo, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, supra. Em certas formas de realização, tais composições podem influenciar o estado físico, estabilidade, taxa de liberação in vivo e taxa de liberação in vivo do antagonista de IL-17RA-IL- 17RB. Em certas formas de realização, o veículo ou carreador primário em uma composição farmacêutica pode ser aquoso ou não aquoso na natureza. Por exemplo, um veículo ou carreador adequado pode ser água para a injeção, solução salina fisiológica ou fluido cerebroespinhal artificial, possivelmente suplementado com outros matoriais comuns na administração parenteral. A solução salina tamponada neutra ou solução salina misturada com albumina de soro são ainda veículos exemplares. Nas formas de realização específicas, as composições farmacêuticas compreendem o tampão Tris de cerca de pH 7.0 a 8.5 ou tampão de acetato de cerca de pH 4.0 a 5.5 e ainda pode incluir sorbitol ou um substituto adequado. Em certas formas de realização, antagonista das composições IL-17RA-IL-17RB pode ser preparadas pela armazenagem da mistura da composição selecionada tendo o grau de pureza com agentes de formulação opcionais (REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, supra) na forma de um bolo liofilizado ou uma solução aquosa. Ainda, em certas formas de realização, o antagonista do produto IL-17RA-IL-17RB pode ser formulado como um liofilizado usando os excipientes apropriados tal como sacarose.

[0087] As composições farmacêuticas da invenção podem ser selecionadas pela liberação parenteral. Alternativamente, as composições podem ser selecionadas pela inalação ou pela liberação através do trato digestivo, tal como oralmente. A preparação de tais composições farmaceuticamente aceitáveis está dentro da habilidade comum na técnica. Os componentes de formulação estão presentes preferivelmente nas concentrações que são aceitáveis ao local de administração. Em certas formas de realização, os tampões são usados para manter a composição no pH fisiológico em um pH levemente inferior, tipicamente dentro de uma faixa de pH de cerca de 5 a cerca de 8.

[0088] Quando a administração parenteral está completa, os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem ser fornecidos na forma de um pirogênio livre, parenteralmente solução aquosa aceitável que compreende o receptor desejável da proteína de ligação de antígeno IL-17 em um veículo farmaceuticamente aceitável. Um veículo particularmente desejado para a injeção parenteral é água estéril destilada no qual o antagonista de IL-17RA- IL-17RB é formulado como uma solução estéril, isotônica propriamente conservada. Em certas formas de realização, a preparação pode envolver a formulação da moléculas desejada com um agente, tal como microesferas injetáveis, partículas bio-corrosivas, compostos poliméricos (tal como ácido polilático ou ácido poliglicólico), pérolas ou lipossomos, que podem fornecer a liberação controlada ou sustentado do produto que pode ser liberado por intermédio da injeção de depósito. Em certas formas de realização, o ácido hialurônico também pode ser usado, tendo o efeito de promover a duração sustentada na circulação. Em certas formas de realização, os dispositivos de liberação de medicamento implantável podem ser usados para introduzir a proteína de ligação de antígeno desejada.

[0089] As composições farmacêuticas da invenção podem ser formuladas pela inalação. Nestas formas de realização, antagonista de IL- 17RA-IL-17RB pode ser formulado como um pó inalável seco. As soluções de inalação também podem ser formulados com um propelante para a liberação de aerossol. Em certas formas de realização, as soluções podem ser nebulizadas. A administração pulmonar e métodos de formulação portanto ainda são descritos no Pedido de Patente Internacional N°. PCT/US94/001875, que é incorporado por referência e descreve a liberação pulmonar de proteínas quimicamente modificada.

[0090] É também considerado que as formulações podem ser administradas oralmente. Os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB que são administrados nesta maneira podem ser formulados com ou sem carreadores costumeiramente usados nos compostos de formas de dosagem sólidas tal como tabletes e cápsulas. Em certas formas de realização, uma cápsula pode ser projetada para liberar a porção ativa da formulação no ponto no trato gastrointestinal quando a biodisponibilidade é maximizada e a degradação pré-sistêmica é minimizada. Os agentes adicionais podem ser incluídos para facilitar a absorção do antagonista de IL-17RA-IL-17RB. Diluentes, flavorizantes, ceras de ponto de fusão inferior, óleos vegetais, lubrificantes, agentes de suspensão, agentes desintegrantes de tablete e ligantes também podem ser utilizados.

[0091] Uma composição farmacêutica é preferivelmente fornecida para compreender uma quantidade efetiva de um ou mais antagonistas de IL- 17RA-IL-17RB em uma mistura com excipientes não tóxicos que são adequados para a fabricação de tabletes. Pela dissolução dos tabletes na água estéril em água estéril ou um outro veículo apropriado, as soluções podem ser preparadas na forma de dosagem única. Os excipientes adequados incluem, mas não são limitados a, diluentes inertes, tal como carbonato de cálcio, carbonato de sódio ou bicarbonato, lactose ou fosfato de cálcio; ou agentes de ligação, tal como amido, gelatina ou acácia; ou agentes lubrificantes tal como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco.

[0092] As composições farmacêuticas adicionais serão evidentes aquela pessoa habilitada na técnica, incluindo as formulações que envolvem os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB nas formulações de liberação controlada ou sustentada. As técnicas para a formulação de uma variedade de outros meios de liberação controlados ou sustentados, tal como carreadores de lipossomos, micropartículas biocorróidas ou pérolas porosas e injeções de depósito, também são conhecidos aquela pessoa habilitada na técnica. Ver, por exemplo, Pedido de Patente Internacional N°. PCT/US93/00829, que é incorporado por referência e descreve a liberação controlada de micropartículas poliméricas porosas para a liberação das composições farmacêuticas. As preparações de liberação sustentada podem incluir as matrizes de polímeros semipermeáveis na forma de artigos formados, por exemplo, películas ou microcápsulas. As matrizes de liberação adequadas podem incluir os poliésteres, hidrogéis, polilactídeos (como divulgado na Patente U.S. N°. 3.773.919 e Publicação do Pedido de Patente Européia N°. EP 058481, cada um de que é incorporado por referência), copolímeros de L- glutâmico e gama etil-L-glutamato (Sidman et al., 1983, Biopolimers 2:547556), poli (2-hidroxietil-metacrilato) (Langer, et al., 1981, J. Biomed. Mator. Res. 15:167-277 and Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105), acetato de etileno vinila (Langer, et al., 1981, supra) ou ácido poli-D(-)-3-hidroxibutírico (Publicação do Pedido de Patente Européia N°. EP 133.988). As composições de liberação sustentadas também podem incluir os lipossomos que podem ser preparados por qualquer um dos diversos métodos conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Eppstein, et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82:36883692; Publicação do Pedido de Patente Européia N°. EP 036.676; EP 088.046 e EP 143.949, incorporado por referência.

[0093] As composições farmacêuticas usados pela administração in vivo são tipicamente fornecidos como preparações estéreis. A esterilização pode ser acompanhada pela filtração através das membranas de filtração estéril. Quando a composição é liofilizada, a esterilização usando este método pode ser conduzido antes ou seguindo a liofilização e reconstituição. As composições para a administração parenteral podem ser armazenadas na forma liofilizada ou em uma solução. As composições parenterais geralmente são colocadas em um recipiente tendo uma porta de acesso estéril, por exemplo, um saco de solução intravenosa ou frasco tendo um batente perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica.

[0094] Uma vez que a composição farmacêutica foi formulada, pode ser armazenado nos frascos estéreis como uma solução, suspensão, gel, emulsão, sólido, cristal ou como um pó liofilizado ou desidratado. Tais formulações podem ser armazenadas em uma forma pronto para uso ou em uma forma (por exemplo, liofilizada) que é reconstituído antes da administração. A invenção também fornece kits para a produção de uma unidade de administração de dosagem simples. Os kits da invenção podem cada um conter ambos um primeiro recipiente tendo uma proteína seca e um segundo recipiente tendo uma formulação aquosa. Em certas formas de realização desta invenção, os kits contendo seringas pré-enchidas de câmaras simples e múltiplas (por exemplo, seringas líquidas e lioseringas) são fornecidas.

[0095] A quantidade terapeuticamente efetiva de um antagonista da composição farmacêutica contendo IL-17RA-IL-17RB a ser utilizado dependerá, por exemplo, no contexto terapêutico e objetivos. Uma pessoa habilitada na técnica apreciará que os níveis de dosagem apropriados para o tratamento variará dependendo, em parte, na molécula derivada, a indicação pelo qual o antagonista de IL-17RA-IL-17RB está sendo usado, a via de administração e o tamanho (peso corporal, superfície corporal ou tamanho do órgão) e/ou condição (a idade e saúde geral) do paciente. Em certas formas de realização, o clínico pode titular a dosagem e modificar a via de administração para obter o ótimo efeito terapêutico. Uma dosagem típica pode variar de cerca de 0,1 μg/kg até cerca de 30 mg/kg ou mais, dependendo dos fatores mencionados acima. Em formas de realização específicas, as dosagens podem variar de 0,1 μg/kg até cerca de 30 mg/kg, opcionalmente de 1 μg/kg até cerca de 30 mg/kg ou de 10 μg/kg até cerca de 5 mg/kg. É claro, é entendido que este será determinado pelos médicos qualificados e que estas dosagens são meramente exemplares. A frequência de dosagem dependerá dos parâmetros farmacocinéticos do antagonista particular de IL-17RA-IL- 17RB na formulação usada. Tipicamente, um clínico administra a composição até uma dosagem que é atingida, que atinge o efeito desejado. A composição pode portanto ser administrada como uma dosagem simples ou dois ou mais dosagens (que podem ou não podem conter a mesma quantidade da molécula desejada) no período ou como uma infusão contínua por intermédio de um dispositivo de implantação ou cateter. Ainda o refinamento da dosagem apropriada é rotineiramente feito por aquela pessoa com habilidade comum na técnica e está dentro do âmbito de tarefas rotineiramente realizado neste. As dosagens apropriadas podem ser determinadas através do uso dos dados da resposta de dosagem. Em certas formas de realização, os antagonistas de IL- 17RA-IL-17RB podem ser administrados aos pacientes em toda parte a um período de tempo estendido. A administração crônica de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB pode minimizar a resposta imune adversa ou alérgica comumente com antagonista de IL-17RA-IL-17RB que não são totalmente humanos, por exemplo um anticorpo crescido contra um antígeno humano em um animal não humano, por exemplo, um anticorpo não totalmente humano ou produzido pelo anticorpo não humano em uma espécie não humano.

[0096] A via de administração da composição farmacêutica é de acordo com os métodos conhecidos, por exemplo, oralmente, através da injeção pela via intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intra-parenquimal), intracerebroventricular, intramuscular, intra-ocular, intraarterial, intraportal ou intralesional; pelos sistemas de liberação sustentada ou pelos dispositivos de implantação. Em certas formas de realização, as composições podem ser administradas pela injeção de bolo ou continuamente pela infusão ou pelo dispositivo de implantação.

[0097] A composição também pode ser administrada localmente por intermédio da implantação de uma membrana, esponja ou um outro material apropriado em que a molécula desejada foi absorvida ou encapsulada. Em certas formas de realização, onde um dispositivo de implantação é usado, o dispositivo pode ser implantado em qualquer tecido adequado ou órgão e liberação da molécula desejada pode ser por intermédio de infusão, bolo de liberação cronometrado ou administração contínua.

[0098] Os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descrito neste podem ser usados em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com agentes farmacêuticos usados no tratamento da doença ou condições descritos neste. Em uma forma de realização, os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descritos nestes podem ser usados em combinação (pré- tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um ou mais inibidores TNF para o tratamento ou prevenção das doenças ou distúrbios relacionados neste, tal como mas não limitado a, todas as formas dos receptores TNF solúveis incluindo Etanercept (tal como ENBREL®), bem como todas as formas de moléculas receptoras p75 e/ou p55 TNF monoméricas ou multiméricas e fragmentos deste; anticorpos TNF anti- humanos, tal como mas não limitado a, Infliximab (tal como REMICADE®) e D2E7 (tal como HUMIRA®) e outros. Tais inibidores TNF incluem os compostos e proteínas que bloqueiam a síntese ou liberação extracelular in vivo de TNF. Em uma forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um ou mais dos seguintes inibidores TNF: proteínas de ligação TNF (receptor TNF solúvel de tipo I e receptor TNF solúvel de tipo II ("sTNFRs"), como definido neste), anticorpos anti-TNF, fator de estimulação da colônia de granulócito; talidomida; BN 50730; tenidap; E 5531; tiapafant PCA 4248; nimesulida; panavir; rolipram; RP 73401; peptídeo T; MDL 201,449A; cloridreto de (1R,3S)-Cis-1-[9-(2,6-diaminopurinil)]-3-hidróxi-4- ciclopenteno; (1R,3R)-trans-1-(9-(2,6-diamino)purina]-3-acetoxiciclopentano; cloridreto de (1R,3R)-trans-1-[9-adenil)-3-azidociclopentano e (1R,3R)-trans- 1-(6-hidróxi-purin-9-il)-3-azidociclo-pentano. As proteínas de ligação TNF são divulgadas na técnica (EP 308 378, EP 422 339, GB 2 218 101, EP 393 438, WO 90/13575, EP 398 327, EP 412 486, WO 91/03553, EP 418 014, JP 127,800/1991, EP 433 900, Patente U.S. N°. 5,136,021, GB 2 246 569, EP 464 533, WO 92/01002, WO 92/13095, WO 92/16221, EP 512 528, EP 526 905, WO 93/07863, EP 568 928, WO 93/21946, WO 93/19777, EP 417 563, WO 94/06476 e Pedido Internacional PCT N°. PCT/US97/12244). Por exemplo, EP 393 438 e EP 422 339 mostram as sequências de aminoácidos e ácido nucleico de um receptor TNF solúvel tipo I (também conhecido como "sTNFR-I" ou "inibidor 30kDa TNF") e um receptor TNF solúvel tipo II (também conhecido como "sTNFR-II" ou "inibidor 40kDa TNF"), coletivamente denominado "sTNFRs", bem como as formas modificadas destes (por exemplo, fragmentos, derivados funcionais e variantes). EP 393 438 e EP 422 339 também divulga os métodos para o isolamento dos genes responsáveis para a codificação dos inibidores, clonagem do gene nos vetores adequados e tipos celulares e que expressam o gene para produzir os inibidores. Adicionalmente, as formas polivalentes (isto é, moléculas que compreendem mais do que uma porção ativa) de sTNFR-I e sTNFR-II também foram divulgados. Em uma forma de realização, a forma polivalente pode ser construída pela ligação quimicamente pelo menos um inibidor TNF e uma outra porção com qualquer ligante clinicamente aceitável, por exemplo polietileno glicol (WO 92/16221 e WO 95/34326), por um ligante de peptídeo (Neve et al. (1996), Cytokine, 8(5):365-370, por ligar quimicamente a biotina e então a ligação a avidina (WO 91/03553) e, finalmente, pela combinação das moléculas de anticorpo quimérico (Patente U.S. 5.116.964, WO 89/09622, WO 91/16437 e EP 315062. Os anticorpos anti-TNF incluem o anticorpo MAK 195F Fab (Holler et al. (1993), 1st International Symposium on Cytokines in Bone Marrow Transplantation, 147); anticorpo monoclonal CDP 571 anti-TNF (Rankin et al. (1995), British Journal of Rheumatology, 34:334-342); anticorpo monoclonal do fator de necrose antitumor de murino BAY X 1351 (Kieft et al. (1995), 7th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, page 9); anticorpo monoclonal CenTNF cA2 anti-TNF (Elliott et al. (1994), Lancet, 344:1125-1127 and Elliott et al. (1994), Lancet, 344:1105-1110).

[0099] Os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descritos neste podem ser usados em combinações com todas as formas de inibidores IL-1, tal como mas não limitado a, quiniret (por exemplo ANAKINRA®) (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo). O antagonista do receptor de interleucina-1 (IL-1ra) é uma proteína humana que atua como um inibidor natural de interleucina-1. Antagonistas do receptor de interleucina-1, bem como os métodos de fabricação e métodos de uso destes, são descritos na Patente U.S. N°. 5.075.222; WO 91/08285; WO 91/17184; AU 9173636; WO 92/16221; WO 93/21946; WO 94/06457; WO 94/21275; FR 2706772; WO 94/21235; DE 4219626; WO 94/20517; WO 96/22793 e WO 97/28828. As proteínas incluem glicosilado bem como antagonistas do receptor de IL-1 não glicosilado. Especificamente, três formas de IL-1ra (IL-1raα, IL-1raβ e IL-1rax), cada um sendo codificado pela mesma sequência codificadora de DNA e variantes destes, são divulgados e descritos na Patente U.S. N°. 5.075.222. Os métodos para a produção dos inibidores IL-1, particularmente IL-1ras, também são divulgados na Patente 5.075.222. Uma classe adicional de inibidores de interleucina-1 inclui os compostos capazes de especificamente prevenir a ativação dos receptores celulares ao IL-1. Tais compostos incluem as proteínas de ligação IL-1, tal como receptores solúveis e anticorpo monoclonais. Tais compostos também incluem os anticorpos monoclonais aos receptores. Uma classe adicional de inibidores de interleucina-1 inclui os compostos e proteínas que bloqueiam a síntese in vivo e/ou liberação extracelular de IL-1. Tais compostos incluem os agentes que afetam a transcrição de genes IL-1 ou de processamento de pré-proteínas IL- 1.

[00100] Os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB descritos neste podem ser usados em combinações com todas as formas de inibidores CD28, tal como mas não limitado a, abatacept (por exemplo ORENCIA®) (pré- tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo). Os antagonistas de IL- 17RA-IL-17RB podem ser usados em combinações com um ou mais de citocinas, linfocinas, fatores hematopoiéticos e/ou um agente anti- inflamatório (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo).

[00101] O tratamento das doenças e distúrbios citados neste podem incluem o uso da primeira linha de medicamentos para o controle da dor e/ou inflamação em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com tratamento com um ou mais dos antagonistas de IL-17RA- IL-17RB fornecidos neste. Estes medicamentos são classificados como medicamentos anti-inflamatórios, não esteroidais (NSAIDs). Os tratamentos secundários incluem corticoesteróides, medicamentos antireumáticos que atuam lentamente (SAARDs) ou medicamentos que modificam a doença (DM). A informação diz respeito aos seguintes compostos e podem ser observados em The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Eighteenth Edition, Merck, Sharp & Dohme Research Laboratories, Merck & Co., Rahway, N.J. (2006) e em Pharmaprojects, PJB Publications Ltd.

[00102] Em uma forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB e qualquer de um ou mais NSAIDs para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo). Os NSAIDs devem sua ação inflamatória, pelo menos em parte, a inibição da síntese de prostaglandina (Goodman and Gilman in "The Pharmacological Basis of Therapeutics," MacMillan 7th Edition (1985)). Os NSAIDs podem ser caracterizados em pelo menos nove grupos: (1) derivados do ácido salicílico; (2) derivados do ácido propiônico; (3) derivados do ácido acético; (4) derivados do ácido fenâmico; (5) derivados do ácido carboxílico; (6) derivados do ácido butírico; (7) oxicamos; (8) pirazóis e (9) pirazolonas.

[00103] Em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais derivados do ácido salicílico, ésteres de pró- droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Tais derivados do ácido salicílico, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes compreendem: acetaminosalol, aloxiprina, aspirina, benorilato, bromosaligenina, acetilsalicilato de cálcio, trisalicilato de magnésio de colina, salicilato de magnésio, salicilato de colina, diflusinal, etersalato, fendosal, ácido gentísico, salicilato glicol, salicilato de imidazol, acetilsalicilato de lisina, mesalamina, salicilato de morfolina, salicilato de 1-naftila, olsalazina, parsalmida, acetilsalicilato de fenila, salicilato de fenila, salacetamida, ácido O-acético de salicilamida, salsalato, salicilato de sódio e sulfasalazina. Os derivados do ácido salicílico estruturalmente relacionado tendo propriedades anti-inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos a serem abrangidos por este grupo.

[00104] Em uma forma de realização adicional específica, a presente invenção é direcionada ao uso de antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais derivados de ácido propiônico, ésteres de pró- droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Os derivados de ácido propiônico, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes compreendem: alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, dexindoprofeno, fenoprofeno, flunoxaprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, furcloprofeno, ibuprofeno, alumínio de ibuprofeno, ibuproxam, indoprofeno, isoprofeno, quetoprofeno, loxoprofeno, miroprofeno, naproxeno, naproxeno sódico, oxaprozina, piquetoprofeno, pimeprofeno, pirprofeno, pranoprofeno, ácido protizínico, piridoxiprofeno, suprofeno, ácido tiaprofênico e tioxaprofeno. Os derivados de ácido propiônico estruturalmente relacionados tendo propriedades anti-inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00105] Já em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais derivados do ácido acético, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Os derivados do ácido acético, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes compreendem: acemetacina, alclofenac, amfenac, bufexamac, cinmetacina, clopirac, delmetacina, diclofenaco de potássio, diclofenaco de sódio, etodolac, felbinac, fenclofenac, fenclorac, ácido fenclózico, fentiazac, furofenaco, glucametacina, ibufenaco, indometacina, isofezolaco, isoxepac, lonazolac, ácido metiazínico, oxametacina, oxpinac, pimetacina, proglumetacina, sulindac, talmetacina, tiaramida, tiopinac, tolmetina, tolmetina sódica, zidometacina e zomepirac. Os derivados do ácido acético estruturalmente relacionados tendo propriedades anti-inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00106] Em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais derivados do ácido fenâmico, ésteres de pró- droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Os derivados do ácido fenâmico, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes compreendem: ácido enfenâmico, etofenamato, ácido flufenâmico, isonixina, ácido meclofenâmico, meclofenamato de sódio, ácido medofenâmico, ácido mefenâmico, ácido niflúmico, talniflumato, terofenamato, ácido tolfenêmico e ufenamato. Derivados do ácido fenâmico estruturalmente relacionado tendo propriedades anti-inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00107] Em uma forma de realização específica adicional, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais derivados do ácido carboxílico, ésteres de pró- droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Os derivados do ácido carboxílico, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes que podem ser usados compreendem: clidanac, diflunisal, flufenisal, inoridina, quetorolac e tinoridina. Os derivados do ácido carboxílico estruturalmente relacionado tendo propriedades anti-inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00108] Já em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais derivados do ácido butírico, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Os derivados do ácido butírico, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes compreendem: bumadizon, butibufeno, fenbufeno e xenbucina. Os derivados do ácido butírico estruturalmente relacionado tendo propriedades anti- inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00109] Em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais oxicams, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Os oxicamos, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes compreendem: droxicam, enolicam, isoxicam, piroxicam, sudoxicam, tenoxicam e 4-hidroxil-1,2-benzotiazina 1,1-dióxido 4-(N-fenil)-carboxamida. Os oxicamos estruturalmente relacionados tendo propriedades anti-inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00110] Ainda em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais pirazóis, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Os pirazóis, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes que podem ser usados compreendem: difenamizol e epirizol. Os pirazóis estruturalmente relacionados tendo propriedades anti-inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00111] Em uma forma de realização específica adicional, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou, tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais pirazolonas, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Os pirazolonas, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes que podem ser usados compreendem: apazona, azapropazona, benzpiperilon, feprazona, mofebutazona, morazona, oxifenbutazona, fenilbutazona, pipebuzona, propilfenazona, ramifenazona, suxibuzona e tiazolinobutazona. Os pirazalonas estruturalmente relacionados tendo propriedades anti- inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00112] Em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais dos seguintes NSAIDs: ácido ε- acetamidocapróico, S-adenosil-metionina, ácido 3-amino-4-hidroxibutírico, amixetrina, anitrazafeno, antrafenina, bendazac, lisinato de bendazac, benzidamina, beprozin, broperamol, bucoloma, bufezolac, ciproquazona, cloximato, dazidamina, deboxamet, detomidina, difenpiramida, difenpiramida, difisalamina, ditazol, emorfazona, mesilato de fanetizol, fenflumizol, floctafenina, flumizol, flunixina, fluproquazona, fopirtolina, fosfosal, guaimesal, guaiazoleno, isonixirn, lefetamina HCl, leflunomida, lofemizol, lotifazol, clonixinato de lisina, meseclazona, nabumetona, nictindol, nimesulida, orgoteina, orpanoxin, oxaceprol, oxapadol, paranilina, perisoxal, citrato de perisoxal, pifoxima, piproxeno, pirazolac, pirfenidona, proquazona, proxazol, tielavina B, tiflamizol, timegadina, tolectina, tolpadol, triptamida e aqueles denominados pelo número do código da companhia tal como 480156S, AA861, AD1590, AFP802, AFP860, AI77B, AP504, AU8001, BPPC, BW540C, CHINOIN 127, CN100, EB382, EL508, F1044, FK-506, GV3658, ITF182, KCNTEI6090, KME4, LA2851, MR714, MR897, MY309, ONO3144, PR823, PV102, PV108, R830, RS2131, SCR152, SH440, SIR133, SPAS510, SQ27239, ST281, SY6001, TA60, TAI-901 (ácido 4- benzoil-1-indancarboxílico), TVX2706, U60257, UR2301 e WY41770. Os NSAIDs estruturalmente relacionados tendo propriedades anti-inflamatórias e analgésicos similares aos NSAIDs também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00113] Ainda em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais corticoesteróides, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Os corticoesteróides, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes incluem hidrocortisona e compostos que são derivados de hidrocortisona, tal como 21-acetoxipregnenolona, alclomerasona, algestona, amcinonida, beclometasona, betametasona, valerato de betametasona, budesonida, cloroprednisona, clobetasol, propionato de clobetasol, clobetasona, butirato de clobetasona, clocortolona, cloprednol, corticosterona, cortisona, cortivazol, deflazacon, desonida, desoximerasona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato, enoxolona, fluazacort, flucloronida, flumetasona, pivalato de flumetasona, flucinolona acetonida, flunisolida, fluocinonida, fluorocinolona acetonida, fluocortina butila, fluocortolona, hexanoato de fluocortolona, valerato de diflucortolona, fluorometolona, acetato de fluperolona, acetato de fluprednideno, fluprednisolona, flurandenolida, formocortal, halcinonida, halometasona, acetato de halopredona, hidro-cortamato, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, butirato de hidro-cortisona, fosfato de hidrocortisona, succinato de hidrocortisona 21-sódico, tebutato de hidrocortisona, mazipredona, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, furoato de mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisolona, 21- diedriaminoacetato de prednisolona, fosfato de sódio de prednisolona, succinato de prednisolona sódica, 21-m-sulfobenzoato de prednisolona sódica, 21-estearoglicolato de prednisolona sódica, tebulato de prednisolona, 21- trimetilacetato de prednisolona, prednisona, prednival, prednilideno, 21- dietilaminoacetato de prednilideno, tixocortol, triamcinolona, triamcinolona acetonida, triamcinolona benetonida e triamcinolona hexacetonida. Corticoesteróides estruturalmente relacionados tendo propriedades anti- inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00114] Em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais medicamentos anti-reumáticos que atuação lenta (SAARDs) ou medicamentos anti-reumáticos que modificam a doença (DMARDS), ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. SAARDs ou DMARDS, ésteres de pró-droga e sais farmaceuticamente aceitáveis destes compreendem: alocupreida sódica, auranofina, aurotioglicose, aurotioglicanida, azatioprina, brequinar sódica, bucilamina, 3-aurotio-2- propanol-1-sulfonato de sódio, clorambucila, cloroquina, clobuzarit, cuproxolina, ciclo-fosfamida, ciclosporina, dapsona, 15-deoxiespergualina, diacereina, glucosamina, sais de ouro (por exemplo, sais de ouro de cicloquina, tiomalato de sódio dourado, tiosulfato de sódio dourado), hidroxicloroquina, sulfato de hidroxicloroquina, hidroxiuréia, quebuzona, levamisol, lobenzarit, melitina, 6-mercaptopurina, metotrexato, mizoribina, micofenolato de mofetila, mioral, mostarda de nitrogênio, D-penicilamina, piridinol imidazóis tal como SKNF86002 e SB203580, rapamicina, tióis, timopoietina e vincristina. Os SAARDs ou DMARDs estruturalmente relacionados tendo propriedades anti-inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo.

[00115] Em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB (pré- tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais inibidores COX2, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Exemplos de inibidores COX2, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes incluem, por exemplo, celecoxib. Os inibidores COX2 estruturalmente relacionados tendo propriedades anti- inflamatórias e analgésicos similares também são pretendidos ser abrangidos por este grupo. Exemplos de inibidores COX-2 selecionados incluem mas não limitado a etoricoxib, valdecoxib, celecoxib, licofelone, lumiracoxib, rofecoxib e outros.

[00116] O tratamento das doenças e distúrbios citados neste podem incluir o uso da primeira linha de medicamentos para o controle das respostas inflamatórias tal como hipersensibilidade nas vias aéreas de um indivíduo afetado em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com tratamento com um ou mais dos antagonistas de IL-17RA- IL-17RB fornecidos neste. Os medicamentos que são frequentemente usados no tratamento de tais doenças ou condições incluem beta2-agonistas, inibidores de leucotrieno, metilxantinas, agentes anti-inflamatórios, agentes anticolinérgicos, broncodilatadores, corticoesteróides e combinações de tais agentes. A informação diz respeito aos seguintes compostos e podem ser observados em The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Eighteenth Edition, Merck, Sharp & Dohme Research Laboratories, Merck & Co., Rahway, N.J. (2006) e in Pharmaprojects, PJB Publications Ltd.

[00117] Ainda em uma forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB (pré- tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais beta-2 agonistas, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Exemplos de beta-2 agonistas, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes incluem, por exemplo, albuterol (Accuneb®, Proair HFA® , Proventil® HFA, Ventolin HFA®), metaproterenol (Alupent® , Alupent® Inhalation Solution, Alupent® Syrup), acetato de pirbuterol (Maxair Autohaler®) e sulfato de terbutalina (Brethair®, Brethine®), beta-2 agonistas de longa atuação, alguns de que são combinados com outros agentes (por exemplo, Advair®, Symbicort®, Serevent® e Foradil®) também são conhecidos e são úteis em combinação com os antagonistas de IL-17RA-IL- 17RB.

[00118] Uma forma de realização adicional da presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais inibidores de leucotrieno, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Exemplos de inibidores de leucotrieno, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes incluem, por exemplo, zileuton (Zyflo®), zafirlukast (Accolato®) e montelukast (Singulair®).

[00119] Ainda em uma forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB (pré- tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais metilxantinas, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Exemplos de metilxantinas, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes incluem, por exemplo, teofilina (por exemplo, Bronkodyl®, Elixophyllin®, Slo-bid®, Slo-Phyllin®, Theo-24®, Theo-Dur®, Theolair®, Uniphyl®) e aminofilina (por exemplo, Phyllocontin®, Truphylline®).

[00120] Em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB (pré- tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais agentes anti-inflamatórios, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Exemplos de tais agentes anti-inflamatórios incluem mas não são limitados a Cromolyn (Nasalcrom®, Intal®, Opticrom®) e nedocromil (Tilade®).

[00121] Uma forma de realização adicional da presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais agentes anticolinérgicos, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Exemplos de tais agentes anticolinérgicos, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis incluem mas não são limitados a brometo de ipratrópio (Atrovent®) e tiotrópio (Spiriva®).

[00122] Em uma forma de realização específica adicional, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB (pré- tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais corticoesteróides, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Exemplos de corticoesteróides inalados incluem dipropionato de beclometasona (Beclovent®, Beconase®, Vancenase® e Vanceril®), triamcinolona acetonida (Azmacort®, Nasacort®, Tri-Nasal®) e flunisolida (Aerobid®, Nasalide®). Exemplos de outros corticoesteróides úteis na presente invenção incluem predisona (Prednisona Intensol®, Sterapred®) e prednisolona (Orapred®, Pediapred®, Prelone®).

[00123] Já em outra forma de realização específica da presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB (pré- tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais beta-2 agonistas inalados, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Exemplos de corticoesteróides, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes incluem, por exemplo, albuterol (Ventolin®, Proventil®), metaproterenol (Alupent®), acetato de pirbuterol (Maxair®), terbutalina (Brethine®, Brethaire®), isoetarina (Bronkosol®) e levalbuterol (Xopenex®).

[00124] Ainda em uma forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB (pré- tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais broncodilatadores (ou agentes anticolinérgicos), ésteres de pró- droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Exemplos de broncodilatadores incluem ipratrópio (Atrovent®) e tiotrópio (Spiriva®).

[00125] O tratamento das doenças e distúrbios citados neste podem incluir o uso da primeira linha de medicamentos para o tratamento ou controle de uma doença infecciosa em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com tratamento com um ou mais dos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB fornecidos neste. Os medicamentos que são frequentemente usados no tratamento de tais doenças ou condições incluem antibióticos, antimicrobianos, agentes antivirais e combinações destes. A informação diz respeito aos seguintes compostos e podem ser observados em The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Eighteenth Edition, Merck, Sharp & Dohme Research Laboratories, Merck & Co., Rahway, N.J. (2006) e em Pharmaprojects, PJB Publications Ltd.

[00126] Ainda em uma outra forma de realização específica, a presente invenção é direcionada ao uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB em combinação (pré-tratamento, pós-tratamento ou tratamento simultâneo) com qualquer um de um ou mais antimicrobianos, ésteres de pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes para o tratamento das doenças e distúrbios citados neste. Antimicrobianos incluem, por exemplo, as amplas classes de penicilinas, cefalosporinas e outros beta-lactamos, aminoglicosídeos, azóis, quinolonas, macrolidas, rifamicinas, tetraciclinas, sulfonamidas, lincosamidas e polimixinas. As penicilinas incluem, mas não são limitados a penicilina G, penicilina V, meticilina, nafcilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina, floxacilina, ampicilina, ampicilina/sulbactam, amoxicilina, amoxicilina/clavulanato, hetacilina, ciclacilina, bacampicilina, carbenicilina, carbenicilina indanil, ticarcilina, ticarcilina/clavulanato, azlocilina, mezlocilina, peperacilina e mecilinaam. As cefalosporinas e outros beta-lactamos incluem, mas não são limitados a cefalotina, cefapirina, cefalexina, cefradina, cefazolina, cefadroxil, cefaclor, cefamandol, cefotetan, cefoxitina, ceruroxima, cefonicid, ceforadina, cefixima, cefotaxima, moxalactam, ceftizoxima, cetriaxona, cefoperazona, ceftazidima, imipenem e aztreonam. Os aminoglicosídeos incluem, mas não são limitados a estreptomicina, gentamicina, tobramicina, amicacina, netilmicina, canamicina e neomicina. Os azóis incluem, mas não são limitados a fluconazol. As quinolonas incluem, mas não são limitados ao ácido nalidíxico, norfloxacina, enoxacina, ciprofloxacina, ofloxacina, esparfloxacina e temafloxacina. Os macrolídeos incluem, mas não são limitados a eritomicina, espiramicina e azitromicina. As rifamicinas incluem, mas não são limitados a rifampina. As tetraciclinas incluem, mas não são limitados a espiciclina, clortetraciclina, clomociclina, demeclociclina, deoxiciclina, guameciclina, limeciclina, meclociclina, metaciclina, minociclina, oxitetraciclina, penimepiciclina, pipaciclina, rolitetraciclina, sanciclina, senociclina e tetraciclina. As sulfonamidas incluem, mas não são limitados a sulfanilamida, sulfametoxazol, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfisoxazol e co-trimoxazol (trimetoprim/sulfametoxazol). Lincosamidas incluem, mas não são limitados a clindamicina e lincomicina. Polimixinas (polipeptídeos) incluem, mas não são limitados a polimixina B e colistina. 4.0 Ensaios de avaliação

[00127] As formas de realização adicionais incluem métodos de avaliação para antagonistas do complexo de receptor heteromérico IL-17RA- IL-17RB. Os formatos do ensaio de avaliação que são conhecidos na técnica e são adaptáveis para a identificação de antagonistas do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB são considerados. Por exemplo: um método de avaliação para um antagonista de um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB, que compreende o fornecimento de um IL-17RA e um e um IL-17RB em um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB; expondo um agente candidato ao dito complexo receptor; e determinando a quantidade da formação do complexo receptor relativo a não ter sido exposto ao agente candidato. A etapa de expor um agente candidato ao complexo receptor pode ser antes, durante, ou após IL-17RA e IL-17RB formam um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB.

[00128] As formas de realização adicionais incluem um método de avaliação para um antagonista do complexo da ativação IL-17RA-IL-17RB do receptor heteromérico, que compreende o fornecimento de um IL-17RA e um IL-17RB em um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB; expondo um agente candidato ao dito complexo receptor; adicionando um ou mais ligantes IL-17; e determinando a quantidade do complexo da ativação IL-17RA-IL-17RB do receptor heteromérico relativo a não ter sido exposto ao agente candidato. Os agentes candidatos que diminuem o complexo da ativação IL-17RA-IL-17RB do receptor heteromérico na presença de um ou mais ligantes IL-17, como medido por uma leitura biologicamente relevante (ver abaixo), são considerados positivos. O ligando IL-17 pode ser IL-17A, IL-17F, IL-25 ou qualquer outro ligando IL-17 que liga-se e ativa IL-17RA, IL-17RB, ou o complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. A ativação é definida em outra parte na especificação. As leituras biológicas relevantes incluem IL-5, IL-6, IL-8, IL-13, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G- CSF, M-CSF, IL-1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP3, MMP9, GROα, NO, bem como qualquer outra molécula conhecida na técnica a ser liberada a partir de qualquer célula que expressa IL-17RA e/ou IL-17RB. A etapa de expor um agente candidato ao complexo receptor pode ser antes, durante, ou após IL-17RA e IL-17RB formam um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. É entendido que um agente candidato pode parcialmente inibir o complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB, isto é, menos do que 100 % de inibição. Sob certas condições do ensaio um agente candidato pode completamente inibir o complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB.

[00129] Em um aspecto, a invenção fornece para os ensaios com base celular para detectar o efeito dos agentes candidatos na associação de IL- 17RA e IL-17RB, o complexo receptor heteromérico 17RA-IL-17RB, bem como ativação do complexo receptor heteromérico 17RA-IL-17RB. Deste modo a invenção fornece pela adição dos agentes candidatos as células para avaliar pelos antagonistas do complexo receptor heteromérico 17RA-IL- 17RB.

[00130] Pelo “agente candidato” ou “medicamento candidato” como usado neste descreve qualquer molécula, tal como mas não limitado a peptídeos, proteínas de fusão de peptídeos (por exemplo, peptídeos que ligam- se a IL-17RA, IL-17RB, ou o complexo receptor heteromérico 17RA-IL- 17RB que são ligados covalentemente ou não covalentemente a outras proteínas, tal como fragmentos de anticorpos ou estruturas com base em proteína conhecida na técnica), proteínas, anticorpos, pequenas moléculas orgânicas incluindo medicamentos conhecidos e candidatos conhecidos, polissacarídeos, ácidos graxos, vacinas, ácidos nucleicos, etc. que podem ser avaliados pela atividade como resumido neste.

[00131] Os agentes candidatos abrangem classes químicas numerosas. Em uma forma de realização, o agente candidato é uma molécula orgânica, preferivelmente pequenos compostos orgânicos tendo um peso molecular de mais do que 100 e menos do que cerca de 2.500 daltons. Incluído são os pequenos compostos orgânicos tendo um peso molecular de mais do que 100 e menos do que cerca de 2.000 daltons, mais preferivelmente menos do que cerca de 1500 daltons, mais preferivelmente menos do que cerca de 1000 daltons, mais preferivelmente menos do que 500 daltons. Agentes candidatos compreendem os grupos funcionais necessários para a interação estrutural com as proteínas, particularmente ligação de hidrogênio e tipicamente incluem pelo menos um de uma amina, carbonila, hidroxila ou grupo carboxila, preferivelmente em pelo menos dos grupos químicos funcionais. Os agentes candidatos frequentemente compreendem estruturas heterocíclicas ou carbono cíclico e/ou estruturas aromáticas ou poliaromáticos substituídos com ou mais dos grupos funcionais acima. Os agentes candidatos também são observados entre as biomoléculas incluindo peptídeos, sacarídeos, ácidos graxos, esteróides, purinas, pirimidinas, derivados, análogos estruturais u combinações destes.

[00132] Os agentes candidatos são obtidos a partir de uma ampla variedade de fontes incluindo bibliotecas dos compostos naturais ou sintéticos. Por exemplo, meios numerosos são disponíveis pela síntese direcionada ou aleatória de uma ampla variedade dos compostos orgânicos e biomoléculas, incluindo a expressão e/ou síntese dos oligonucleotídeos e peptídeos aleatórios. Alternativamente, as bibliotecas dos compostos naturais na forma de bactéria, fungos, extratos animais e vegetais são disponíveis ou já produzido. Adicionalmente, as bibliotecas produzidas sinteticamente ou natural e compostos são prontamente modificados através da química convencional, meios bioquímicos e físicos. Os agentes farmacológicos conhecidos podem ser submetidos as modificações químicas aleatórias ou direcionadas, tal como acilação, alquilação, esterificação, amidificação para produzir os análogos estruturais.

[00133] Nas formas de realização alternativas, os agentes bioativos candidatos podem ser proteínas ou fragmentos de proteínas. Deste modo, por exemplo, extratos celulares contendo as proteínas, ou digestão aleatória ou direcionada dos extratos celulares proteináceo, podem ser usados. Nesta maneira as bibliotecas de proteínas procarióticas e eucarióticas podem ser feitas para a avaliação nos sistemas descritos neste. Incluídos nesta forma de realização são as bibliotecas de bactérias, fungos, vírus e proteínas de mamíferos, incluindo as proteínas humanas.

[00134] Em algumas formas de realização, os agentes candidatos são peptídeos. Nesta forma de realização, pode ser útil para usar as construções de peptídeos que incluem uma estrutura de apresentação. Pela “estrutura de apresentação” ou equivalentes gramaticais neste é significado uma sequência, que, quando fundida aos agentes bioativos candidatos, causam os agentes candidatos para assumir uma forma conformacionalmente restrita. As proteínas interagem com cada outro amplamente através dos domínios conformacionalmente constrangidos. Embora pequenos peptídeos com amino livremente de rotação e terminal de carboxila podem ter funções potentes como é conhecida na técnica, a conversão de tais estruturas de peptídeos nos agentes farmacológicos é difícil devido a incapacidade de predizer as posições de cadeia secundária para a síntese peptidomimética. Portanto a apresentação de peptídeos nas estruturas conformacionalmente impedidas beneficiará ambas gerações de farmacêuticos e também provavelmente conduzirá a interações de afinidade mais alta do peptídeo com a proteína alvo. Este fato foi reconhecido nos sistemas de geração de biblioteca combinatorial usando peptídeos curtos biologicamente gerados nos sistemas de fago de bactérias. Um número de trabalhadores tem construído pequenas moléculas de domínios em que um pode apresentar as estruturas de peptídeos aleatórios. As estruturas de apresentação particular maximizam a acessibilidade ao peptídeo pela apresentação em um arco exterior. Consequentemente, as estruturas de apresentação adequadas incluem, mas não são limitadas a, estruturas de minicorpo, arcos em voltas de lâmina beta e estruturas de haste espiralado- espiral em que os resíduos não críticos a estrutura são estruturas aleatorizadas, domínios de dedo de zinco, ligado por cisteína (bissulfeto), estruturas ligadas a transglutaminase, peptídeos cíclicos, estruturas de arco B, barril hélico ou feixes, motivos de zíper de leucina, etc. Ver Patente U.S. N°. 6.153.380, incorporado por referência.

[00135] De uso particular nos ensaios de avaliação são as bibliotecas de apresentação de fago; ver por exemplo, Patente U.S. N°. 5.223.409; 5.403.484; 5.571.698; e 5.837.500, todos de que são expressamente incorporados por referência em sua totalidade para os métodos de apresentação de fago e construções. Em geral, as bibliotecas de apresentação de fago podem utilizar as inserções da proteína sintética (por exemplo peptídeos), oi podem utilizar o cDNA genômico, digestões, etc.

[00136] Dependendo do ensaio e resultado desejado, uma ampla variedade de tipos celulares pode ser usada, incluindo as células eucarióticas e procarióticas, com células de mamíferos e células humanas, constatando o uso particular na invenção. Em uma forma de realização, as células podem ser geneticamente projetadas, por exemplo estas podem conter os ácidos nucleicos exógenos, tal como aquele que codifica IL-17RA e IL-17RB. Em alguns exemplos, as proteínas IL-17RA e IL-17RB da invenção são projetadas para incluir os rótulos tal como rótulos de epítopos, tal como mas não limitado aquele para o uso nos ensaios de imunoprecipitação ou para os outros usos.

[00137] Os agentes candidatos são adicionados às células e deixados incubar por um período adequado de tempo. A etapa de expor um agente candidato ao complexo receptor pode ser antes, durante, ou após IL-17RA e IL-17RB formam um complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. Em uma forma de realização, a associação de IL-17RA e IL-17RB é avaliado na presença e ausência dos agentes candidatos. Por exemplo, pelo uso de construções alvejadas e anticorpos, experimentos de imunoprecipitação podem ser feitos. Os agentes candidatos que interferem com a associação IL- 17RA e IL-17RB são então testados pela atividade de sinalização do membro da família do ligando IL-17 (tal como IL-17A e IL-17F), tal como pelo teste para a expressão dos genes que são ativados pelo membro da família de ligando IL-17, como mencionado acima.

[00138] Em algumas formas de realização, as proteínas IL-17RA e/ou IL-17RB são proteínas de fusão. Por exemplo, as proteínas receptoras podem ser modificadas em uma maneira para formar as moléculas quiméricas que compreendem uma apoproteína (isto é, a porção de proteína de uma molécula quimérica ou complexo) fundida a outra, polipeptídeos heterólogos ou sequência de aminoácido. Em uma forma de realização, uma tal molécula quimérica compreende uma fusão de um ou mais receptores com um polipeptídeo de rótulo que fornece um epítopo no qual um anticorpo pode seletivamente ligar-se. O rótulo de epítopo é geralmente colocado no terminal amino ou carboxila da proteína receptora. A presença de tais formas rotuladas de epítopos do receptor pode ser detectada usando um anticorpo contra o polipeptídeo de rótulo. Também, a provisão do rótulo de epítopo capacita o polipeptídeo receptor a ser prontamente purificado pela purificação de afinidade usando um anticorpo anti-rótulo ou um outro tipo de matriz por afinidade que liga-se ao rótulo de epítopo. Estes rótulos de epítopo podem ser usados para a imobilização de um suporte sólido, como resumido neste.

[00139] Vários polipeptídeos de rótulo e seus anticorpos respectivos são bem conhecidos na técnica. Exemplos incluem poli-histidina (poli-his) ou rótulos poli-histidina-glicina (poly-his-gly); o polipeptídeo de rotulo flu HA e seu anticorpo 12CA5 [Field et al., Mol. Cell. Biol., 8:2159-2165 (1988)]; o rótulo c-myc e os anticorpos 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 e 9E10 neste [Evan et al., Molecular and Cellular Biology, 5:3610-3616 (1985)]; e o rótulo de glicoproteína D do vírus Herpes Simplex (gD) e seu anticorpo [Paborsky et al., Protein Engineering, 3(6):547-553 (1990)]. Outros polipeptídeos de rótulo incluem o peptídeo FLAGG™- [Hopp et al., BioTechnology, 6:1204-1210 (1988)]; o peptídeo de epítopo KT3 [Martin et al., Science, 255:192-194 (1992)]; peptídeo de epítopo de tubulina [Skinner et al., J. Biol. Chem., 266:15163-15166 (1991)]; e o rótulo do peptídeo da proteína do gene T7 10 [Lutz-Freyermuth et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6393-6397 (1990)].

[00140] Uma variedade dos vetores de expressão pode ser feita. Os vetores de expressão podem ser tanto vetores extracromossômicos auto replicantes ou vetores que integram em um genoma hospedeiro. Geralmente, estes vetores de expressão incluem ácido nucleico transcripcional e de tradução operavelmente ligado ao ácido nucleico que codifica a metaloproteína. O termo "sequências de controle" refere-se as sequências de DNA necessárias para a expressão de uma sequência codificadora operavelmente ligada em um organismo hospedeiro particular. As sequências de controle que são adequadas para procariotas, por exemplo, incluem um promotor, opcionalmente uma sequência operadora e um local de ligação de ribossomo. As células eucarióticas são conhecidas por utilizar os promotores, sinais de poliadenilação e intensificadores.

[00141] Em algumas formas de realização, a inibição de ligação aos ensaios do complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB são realizados in vitro. Por exemplo, os componentes da mistura do ensaio (agente candidato, IL-17RA e IL-17RB) são imobilizados em uma superfície, os outros componentes são adicionados (um de que é rotulado em algumas formas de realização). Por exemplo, IL-17RA ou IL-17RB podem ser ligados a uma superfície, um agente candidato e um IL-17RA rotulado e/ou IL-17RB é adicionado. Após a lavagem, a presença do rótulo é avaliado. Nesta forma de realização, as proteínas IL-17RA e IL-17RB são isoladas como é conhecida na técnica.

[00142] Em geral, a ligação geralmente será feita como é conhecida na técnica e dependerá da composição de dois materiais a serem ligados. Em geral, os ligantes de ligação são utilizados através do uso de grupos funcionais em cada componente que pode ser usado pela ligação. Os grupos funcionais para ligação são grupos amino, grupos carbóxi, grupos oxo, grupos hidroxila e os grupos tióis. Estes grupos funcionais podem então ser ligados, diretamente ou indiretamente através do uso de um ligante. Os ligantes são bem conhecidos na técnica; por exemplo, ligantes homo ou heterobifuncionais como são bem conhecidos (ver 1994 Pierce Chemical Company catalog, technical section on cross-linkers, páginas 155-200, incorporado neste por referência). Os ligantes de ligação incluem, mas não são limitadas a, grupos alquila (incluindo grupos alquila substituído e grupos alquila contendo as porções de heteroátomo), incluindo grupos alquila curtos, ésteres, amida, amina, grupos epóxi e etileno glicol e derivados. Alternativamente, os parceiros de fusão são usados; os parceiros de fusão adequados incluem outros componentes de imobilização, tal como rótulos de histidina para a ligação as superfícies com níquel, componentes funcionais para a ligação de ligantes e rótulos, etc. e rótulos proteináceos.

[00143] Em uma forma de realização, particularmente quando os agentes candidatos são imobilizados em um suporte sólido, um parceiro de fusão adequado é um rótulo de proteína autofluorescente. Os rótulos fluorescentes proteináceos adequados também incluem, mas não são limitadas a, proteína fluorescente verde (GFP), incluindo a espécie de Renilla, Ptilosarcus, ou Aequorea de GFP (Chalfie et al., 1994, Science 263:802-805), EGFP (Clontech Laboratories, Inc., Número de acessão Genbank U55762), proteína fluorescente azul (BFP, Quantum Biotechnologies, Inc. 1801 de Maisonneuve Blvd. West, 8th Floor, Montreal, Quebec, Canada H3H 1J9; Stauber, 1998, Biotechniques 24:462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6:178-182), proteína fluorescente amarela intensificada (EYFP, Clontech Laboratories, Inc.), luciferase (Ichiki et al., 1993, J. Immunol. 150:54085417), β galactosidase (Nolan et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2603-2607) e Renilla (WO92/15673, WO95/07463, WO98/14605, WO98/26277, WO99/49019, Patente U.S. N°. 5292658, 5418155, 5683888, 5741668, 5777079, 5804387, 5874304, 5876995, 5925558). Todos das referências citadas acima são expressamente incorporadas neste por referência.

[00144] Os suportes insolúveis podem ser feitos de qualquer composição em que as composições podem ser ligadas, é realmente separada do material solúvel e é de outra maneira compatível com o método total de avaliação. A superfície de tais suportes pode ser sólida ou poros e de qualquer forma conveniente. Os exemplos de suportes adequados incluem placas microtituladoras, disposições, membranas e pérolas e incluem, mas não são limitadas a, vidro e vidro funcionalizado ou modificado, plásticos (incluindo acrílicos, poliestireno e copolímeros de estireno e outros materiais, polipropileno, polietileno, polibutileno, poliuretano, Teflon, etc.), polissacarídeos, naílon ou nitrocelulose, resinas, sílica ou materiais com base em sílica incluindo silício e silício modificado, carbono, metais, vidros inorgânicos, plásticos, cerâmicas e uma variedade de outros polímeros. Em algumas formas de realização, os suportes sólidos permitem a detecção óptica e não fluorescência apreciável por si só. Além disso, como é conhecido na técnica, o suporte sólido pode ser revestido com qualquer número de materiais, incluindo polímeros, tal como dextranos, acrilamidas, gelatinas, agarose, etc. Suportes sólidos exemplares incluem silício, vidro, poliestireno e outros plásticos e acrílicos. As placas microtituladoras e disposições são especialmente convenientes por causa de um amplo número de ensaios e podem ser realizados simultaneamente, usando pequenas quantidades de reagentes e amostras. A maneira particular de ligação da composição não é crucial deste modo é compatível com os reagentes e métodos totais da invenção, mantendo a atividade da composição e não é difundido.

[00145] Os agentes candidatos são contactados com os outros componentes do ensaio sob condições de reação que favorecem as interações alvos. Geralmente, este será condições fisiológica. As incubações podem ser realizadas em qualquer temperatura que facilite a ótima atividade, tipicamente entre 4 e 40° C. Os períodos de incubação são selecionados para a ótima atividade, mas também pode ser otimizado para facilitar a avaliação de rendimento alto rápido. Tipicamente entre 0,1 e 1 hora será suficiente. O excesso do reagente é geralmente removido ou lavado sempre, no caso dos ensaios de fase sólida. Os formatos dos ensaios são debatidos abaixo.

[00146] Uma variedade de outros reagentes pode ser incluída nos ensaios. Estes incluem sais semelhantes aos reagentes, proteínas neutras, por exemplo albumina, detergentes, etc que podem ser usados para facilitar ótima ligação do agente de apoproteína e/ou reduzir interações não específicas ou fundamentais. Também os reagentes que de outra maneira melhora a eficiência do ensaio, tal como inibidores de protease, inibidores de nuclease, agentes anti-microbianos, etc., podem ser usados. A mistura de componentes pode ser adicionada em qualquer ordem que fornece para a ligação necessária.

[00147] Em uma forma de realização, qualquer um dos ensaios resumidos pode utilizar os sistemas robóticos para avaliação de rendimento alto. Muitos sistemas são geralmente direcionados ao uso de 96 (ou mais) bem placas microtituladoras, mas como será apreciado por aquele na técnica, qualquer número de placas diferentes ou configurações podem ser usadas. Além disso, qualquer ou todas as etapas resumidas neste podem ser automáticas; deste modo, por exemplo, os sistemas podem ser completamente ou parcialmente automáticos.

[00148] Como será apreciado por aquele na técnica, existe uma ampla variedade de componentes que podem ser usados, incluindo, mas não limitado a, um ou mais armas robóticas; manipuladores de placa para o posicionamento de microplacas; manipuladores de extremidade automáticos para remover e substituir extremidades dos reservatórios nas placas de contaminação não cruzadas; montagens de extremidade para a distribuição da amostra com extremidades disponíveis; montagens de extremidade lavável pela distribuição de amostra; blocos de carregamento de 96 reservatórios; suportes de reagente esfriado; posições de pipeta de placa microtituladora (opcionalmente esfriado); empilhando-se torres para placas e extremidades; e sistemas de computadores.

[00149] Os sistemas microfluídicos ou totalmente robóticos incluem partícula líquida automática, manipulação de organismo e célula incluindo pipetação de rendimento alto para realizar todas as etapas de aplicações de avaliação. Este inclui partícula líquida, manipulações de organismo e célula tal como aspiração, dispensação, misturação, diluição, lavagem, transferência volumétrica correta; restauração e descarte das extremidades de pipeta; e pipetação repetitiva dos volumes idênticos para as liberações múltiplas a partir de uma aspiração de amostra simples. Estas manipulações são as partículas líquidas livres de contaminação cruzada, transferências de organismo e célula. Este instrumento realiza a replicação automática das amostras de microplacas aos filtros, membranas, e/ou placas filhas, transferências de densidade alta, diluições em série de placa total e operação de capacidade alta.

[00150] Em uma forma de realização, partículas quimicamente derivadas, placas, tubos, partícula magnética, ou outra matriz de fase sólida com especificidade aos componentes de ensaio são usados. As superfícies de ligação de microplacas, tubos ou qualquer matrizes de fase sólida incluem superfícies não polares, superfícies altamente polares, revestimento de dextrano modificado para promover a ligação covalente, revestimento de anticorpo, meio de afinidade para ligar-se as proteínas de fusão ou peptídeos, proteínas fixas em superfícies tal como proteína A ou G recombinante, resinas de nucleotídeos ou revestimentos e outra matriz de afinidade são úteis nesta invenção.

[00151] Em uma forma de realização, as plataformas para as placas de multi reservatórios, multi-tubos, minitubos, placas bem profundas, tubos de microfungos, criofrascos, placas bem quadradas, filtros, fragmentos, fibras ópticas, pérolas e outras matrizes de fase sólida ou plataforma com vários volumes são acomodados em uma plataforma modular elevada para capacidade adicional. Esta plataforma modular inclui um agitador orbital de velocidade variável, eletroporador e cobertas de trabalho de posição múltipla para as amostras de fonte, diluição de amostra e reagente, placas de ensaio, reservatórios reagente e amostra, extremidades de pipeta e uma estação de lavagem ativa.

[00152] Em uma forma de realização, sistemas de termoregulação e termociclo são usados para estabilizar a temperatura dos trocadores de calor tal como bloqueadores controlado ou plataforma para fornecer o controle de temperatura exata das amostras de incubação de 4° C a 100° C.

[00153] Em algumas formas de realização, a instrumentação incluirá um detector, que pode ser uma ampla variedade de detectores diferentes, dependente dos rótulos e ensaio. Em uma forma de realização, os detectores úteis incluem um microscópio com os canais múltiplos de fluorescência; leitores de placa para fornecer a detecção fluorescente, ultravioleta e espectrofotométrica visível com ponto final de comprimento de onda simples ou duplo e capacidade cinética, transferência da energia de ressonância de fluorescência (FRET), sistemas SPR, luminescência, resfriamento brusco, excitação de dois fótons e redistribuição de intensidade; câmeras CCD para capturar e transformar os dados e imagens nos formatos quantificáveis; e uma estação de trabalho de computador. Estes intensificarão o monitoramente do tamanho, desenvolvimento e expressão fenotípica dos marcadores específicos nas células, tecidos e organismos; validação alvo; otimização de folha; análise de dados, mineração, organização e integração das avaliações de rendimento alto com os bancos de dados proprietários e públicos.

[00154] O complexo receptor heteromérico 17RA-IL-17RB é a forma biologicamente ativa do receptor e foi mostrado neste para responder á ativação específico por ligando pela liberação de mediadores pró- inflamatórios. É conhecida na técnica que vários estados da doença, como exemplificado neste, são associados com níveis fisiológicos aumentados dos membros da família do ligando IL-17. Em uma forma de realização, as proteínas de ligação do antígeno IL-17RA-IL-17RB são úteis para a detecção do complexos de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB nas amostras biológicas e identificação das células ou tecidos que expressam o dito complexo. Este deve ser o valor considerável pela comunidade de busca.

[00155] As proteínas de ligação de antígeno de uma invenção podem ser usadas para os propósitos diagnósticos para detectar, diagnosticar, ou monitorar e/ou condições associadas com IL-17 ou o receptor IL-17RA ou IL- 17RB. A invenção fornece para a detecção na presença do receptor de IL-17 em uma amostra usando os métodos imunohistológico clássico conhecido aquela pessoa habilitada na técnica (por exemplo, Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoensaios, vol 15 (Eds R.H. Burdon and P.H. van Knippenberg, Elsevier, Amsterdam); Zola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc.); Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol. 101:976-985; Jalkanen et al., 1987, J. Cell Biol. 105:3087-3096). A detecção do receptor de IL-17 pode ser realizada in vivo ou in vitro.

[00156] As aplicações diagnósticas fornecidas neste incluem o uso das proteínas de ligação de antígeno para detectar a expressão das proteínas IL-17 IL-17RA e IL-17RB e ligação dos ligantes ao receptor de IL-17. Exemplos de métodos úteis na detecção na presença do receptor de IL-17 incluem imunoensaios, tal como o ensaio imunosorvente ligado por enzima (ELISA) e o radioimunoensaio (RIA). Como resumido acima, o uso da co- imunoprecipitação é muito útil para detectar o complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB. Para as aplicações diagnósticos, a proteína de ligação de antígeno tipicamente pode ser rotulada com um grupo de rotulação detectável como definido neste.

[00157] Um aspecto da invenção fornece para a identificação de uma célula ou células que expressam o complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB. Em uma forma de realização específica, a proteína de ligação de antígeno é rotulada com um grupo de rotulação e a ligação da proteína de ligação de antígeno rotulado ao receptor de IL-17 é detectado. Em uma forma de realização específica adicional, a ligação da proteína de ligação de antígeno ao receptor de IL-17 detectado in vivo. Em uma forma de realização específica adicional, o receptor de proteína de ligação de antígeno de IL-17 é isolado e medido usando as técnicas conhecidas na técnica. Ver, por exemplo, Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor (ed. 1991 e suplementos periódicos); John E. Coligan, ed., 1993, Current Protocols In Immunology New York: John Wiley & Sons. 5.0 Fabricação de Antagonistas de IL-17RA-IL-17RB

[00158] As células hospedeiras adequadas para a expressão de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB incluem procariotas, levedura, ou células eucarióticas mais altas. A clonagem apropriada e vetores de expressão para o uso com hospedeiros bacterianos, fúngicos, levedura e de mamífero são descritos, por exemplo, em Pouwels et al. Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, New York, (1985). As células de tradução livre de célula também devem ser utilizadas para produzir os polipeptídios LDCAM usando RNAs derivados de construções DNA divulgados neste.

[00159] Procariotas incluem organismos gram positivos ou gram negativos, por exemplo, E. coli ou Bacilli. As células hospedeiras procarióticas adequadas para a transformação incluem, por exemplo, E. coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium e várias outras espécies dentro do gênero Pseudomonas, Streptomyces e Staphylococcus. Em uma célula hospedeira procariótica, tal como E. coli, uma antagonista IL-17RA-IL-17RB pode incluir um resíduo de metionina de terminal N para facilitar a expressão do polipeptídeo recombinante na célula hospedeira procariótica. O Met de terminal N pode ser clivado a partir de antagonista IL-17RA-IL-17RB recombinante expressado.

[00160] Os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem ser expressados nas células hospedeiras de levedura, preferivelmente a partir do gênero Saccharomyces (por exemplo, S. cerevisiae). Outro gênero de levedura, tal como Pichia , K. lactis ou Kluyveromyces, também pode ser utilizado. Os vetores de levedura frequentemente conterão uma origem da sequência de replicação a partir de um plasmídeo de levedura 2D, uma sequência de replicação automática (ARS), uma região promotora, sequências para a poliadenilação, sequências para a terminação de transcrição e um gene marcador selecionável. As sequências promotoras adequadas para os vetores de levedura incluem, entre outros, promotores para a metalotioneina, 3- fosfoglicerato quinase (Hitzeman et al., J. Biol. Chem. 255:2073, 1980) ou outras enzimas glicolíticas (Hess et al., J. Adv. Enzyme Reg. 7:149, 1968; e Holland et al., Biochem. 17:4900, 1978), tal como enolase, gliceraldeído-3- fosfato desidrogenase, hexocinase, descarboxilase de piruvato, fosfofrutocinase, glucose-6-fosfato isomerase, 3-fosfoglicerato mutase, piruvato quinase, triosefosfato de isomerase, fosfoglicose de isomerase e glucoquinase. Outros vetores adequados e promotores para o uso na expressão de levedura ainda são descritos em Hitzeman, EPA-73,657 ou em Fleer et. al., Gene, 107:285-195 (1991); e van den Berg et. al., Bio/Technology, 8:135-139 (1990). Uma outra alternativa é o promotor ADH2 reprimível de glicose descrito por Russell et al. (J. Biol. Chem. 258:2674, 1982) e Beier et al. (Nature 300:724, 1982). Os vetores oscilantes replicáveis tanto na levedura quanto E. coli pode ser construído pela inserção das sequências de DNA a partir do pBR322 para a seleção e replicação em E. coli (gene Ampr e origem de replicação) nos vetores de levedura descrita acima.

[00161] A sequência líder do α-fator de levedura pode ser utilizada para direcionar a secreção do antagonista IL-17RA-IL-17RB. A sequência líder do α-fator é frequentemente inserida entre a sequência promotora e a sequência do gene estrutural. Ver, por exemplo, Kurjan et al., Cell 30:933, 1982; Bitter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:5330, 1984; Patente U.S. 4.546.082; e EP 324.274. Outras sequências líder adequadas para facilitar a secreção dos polipeptídeos recombinantes a partir dos hospedeiros de levedura são conhecidos aquela pessoa habilitada na técnica. Uma sequência líder pode ser modificada próxima em sua extremidade final 3' para conter um ou mais locais de restrição. Este facilitará a fusão da sequência líder ao gene estrutural.

[00162] Os protocolos de transformação de levedura são conhecidos aquela pessoa habilitada na técnica. Um tal protocolo é descrito por Hinnen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75:1929, 1978. O protocolo Hinnen et al. seleciona para os transformantes Trp+ em um meio seletivo, em que o meio seletivo consiste de 0,67 % da base de nitrogênio de levedura, 0,5 % de ácidos casaminos, 2 % de glicose, 10 μg/ml de adenina e 20 μg/ml de uracila. As células hospedeiras de levedura transformada pelos vetores contendo a sequência promotora ADH2 podem ser desenvolvidas para a indução da expressão em um meio "rico". Um exemplo de um meio rico é um que consiste de 1 % de extrato de levedura, 2 % de peptona e 1 % de glicose suplementado com 80 μg/ml de adenina e 80 μg/ml de uracila. A derrepressão do promotor ADH2 ocorre quando a glicose é exaurida do meio.

[00163] Os sistemas de cultura celular do hospedeiro de inseto ou mamífero também deve ser utilizado para expressar os antagonistas recombinantes de IL-17RA-IL-17RB. Os sistemas de bacilovírus para a produção das proteínas heterólogas nas células de insetos são revisados por Luckow and Summers, Bio/Technology 6:47 (1988). As linhas celulares estabelecidas da origem de mamífero também podem ser utilizadas. Exemplos das linhas da célula hospedeira de mamífero adequado incluem a linha COS-7 das células de rim de macaco (ATCC CRL 1651) (Gluzman et al., Cell 23:175, 1981), células L, células C127, células 3T3 (ATCC CCL 163), células de ovário de Hâmster Chinês (CHO), células HeLa e linhas celulares BHK (ATCC CRL 10) e a linha celular CV-1/EBNA-1 derivada a partir da linha celular do rim de macaco verde Africano CVI (ATCC CCL 70) como descrito por McMahan et al. (EMBO J. 10: 2821, 1991).

[00164] As sequências de controle de tradução e transcripcional para os vetores de expressão da célula hospedeira de mamífero podem ser taxados de genomas virais. As sequências promotoras comumente usadas e sequências intensificadoras são derivadas do vírus de Polioma, Adenovírus 2, vírus de símio 40 (SV40) e citomegalovírus humano. As sequências de DNA derivadas do genoma viral SV40, por exemplo, origem SV40, promotor precoce e tardio, intensificador, locais de união de poliadenilação podem ser usados para fornecer outros elementos genéticos para a expressão de uma sequência do gene estrutural em uma célula hospedeira de mamífero. Os promotores tardio e precocemente viral são particularmente útil por causa de ambos são facilmente obtidos a partir de um genoma viral como um fragmento que também pode conter uma origem viral de replicação (Fiers et al., Nature 273:113, 1978). Os fragmentos SV40 menores também podem ser usados, fornecido pela sequência de aproximadamente 250 bp que estende-se a partir do local Hind III em direção do local Bgl I localizado a origem viral SV40 do local de replicação é incluído.

[00165] Os vetores de expressão exemplares para o uso nas células hospedeiras podem ser construídos como divulgado por Okayama and Berg (Mol. Cell. Biol. 3:280, 1983). Um sistema útil para a expressão do nível alto estável dos cDNAs de mamíferos nas células epiteliais mamíferas de murino C127 podem ser construídos substancialmente como descrito por Cosman et al. (Mol. Immunol. 23:935, 1986). Um vetor de expressão alto útil, PMLSV N1/N4, descrito por Cosman et al., Nature 312:768, 1984 foram depositados como ATCC 39890. Os vetores de expressão de mamífero úteis adicionais são descritos em EP-A-0367566 e no Pedido de Patente U.S. série N°. 07/701.415, depositado em 16 de Maio de 1991, incorporado por referência neste. Os vetores podem ser derivados a partir de retrovírus. No lugar da sequência de sinal natural e além disso a uma metionina iniciadora, uma sequência de sinal heterólogo pode ser adicionado, tal como a sequência de sinal para IL-7 descrito na Patente dos Estados Unidos 4.965.195; a sequência de sinal para o receptor IL-2 descrito em Cosman et al., Nature 312:768 (1984); o peptídeo de sinal IL-4 descrito em EP 367.566; o peptídeo de sinal receptor de tipo I IL-1 descrito em Patente U.S. 4.968.607; e o peptídeo de sinal receptor do tipo II IL-1 descrito em EP 460.846.

[00166] Os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB, como uma proteína homogênea, purificada ou isolada de acordo com a invenção, pode ser produzido pelos sistemas de expressão recombinante como descrito acima ou purificado de células de ocorrência natural.

[00167] Um processo para a produção de antagonistas de IL-17RA-IL- 17RB que compreende a cultura de uma célula hospedeira transformada com um vetor de expressão que compreende uma sequência de DNA que codifica pelo menos um antagonista IL-17RA-IL-17RB sob condições suficientes para promover a expressão do dito antagonista IL-17RA-IL-17RB. O antagonista IL-17RA-IL-17RB é então recuperado a partir dos extratos celulares ou meio de cultura, depende do sistema de expressão utilizado. Como é conhecido pelo técnico habilitado, produz para a purificação de uma proteína recombinante variará de acordo de tais fatores como o tipo de células hospedeiras utilizadas e se ou não a proteína recombinante é secretada no meio de cultura. Por exemplo, quando os sistemas de expressão que secretam a proteína recombinante são utilizados, o meio de cultura primeiro pode ser concentrado usando um filtro de concentração de proteína comercialmente disponível, por exemplo, uma unidade de ultrafiltração Amicon ou Millipore Pellicon. Seguindo a etapa de concentração, o concentrado pode ser aplicado a uma matriz de purificação tal como um meio de filtração em gel. Alternativamente, uma resina trocadora de ânion pode ser utilizado, por exemplo, uma matriz ou substrato tendo grupos de dietilaminoetila pendente (DEAE). As matrizes podem ser acrilamida, agarose, dextrano, celulose ou outros tipos comumente utilizados na purificação de proteína. Alternativamente, uma etapa trocadora de cátion pode ser utilizada. Os trocadores de cátion adequado incluem várias matrizes insolúveis que compreendem grupos de sulfopropila ou carboximetila. Finalmente, uma ou mais etapas de cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa (RP- HPLC) que utiliza o meio RP-HPLC hidrofóbico, (por exemplo, gel de sílica tendo metila pendente ou outros grupos alifáticos) podem ser utilizados para purificar os antagonistas adicionais de IL-17RA-IL-17RB. Alguns ou todas das etapas de purificação precedente, em várias combinações, são bem conhecidos e podem ser utilizados para fornecer uma proteína recombinante substancialmente homogênea.

[00168] É possível para utilizar uma coluna por afinidade que compreende IL-17RA, ou IL-17RB, ou tanto IL-17RA quanto IL-17RB, ou uma proteína de complexo de receptor heteromérico IL-17RA-IL-17RB para purificar a afinidade expressada pelos antagonistas de IL-17RA-IL-17RB. Os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB podem ser removidos a partir de uma coluna de afinidade usando técnicas convencionais, por exemplo, em um tampão de eluição com alto teor de sal e então submetido a diálise em um tampão salino inferior para o uso ou pela mudança de pH ou outros componentes depende da matriz de afinidade utilizada. Alternativamente, a coluna de afinidade pode compreender um anticorpo que liga-se os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB.

[00169] A proteína recombinante produzida na cultura bacteriana pode ser isolada pelo rompimento inicial das células hospedeiras, centrifugação, extração a partir dos grânulos celulares se um polipeptídeo insolúvel, ou de um fluido sobrenadante se um polipeptídeo solúvel, seguido por um ou mais concentrações, salinização, troca de íon, purificação por afinidade ou etapas de cromatografia de exclusão de tamanho. Finalmente, RP-HPLC pode ser utilizado pelas etapas de purificação final. As células microbianas podem ser rompidas por qualquer método conveniente, incluindo ciclo de congelamento-descongelamento, sonicação, rompimento mecânico, ou uso de agentes de lise de célula.

[00170] As células hospedeiras de levedura transformada podem ser utilizadas para expressar os antagonistas de IL-17RA-IL-17RB como um polipeptídeo secretado a fim de simplificar a purificação. O polipeptídeo recombinante secretado a partir da fermentação da célula hospedeira de levedura pode ser purificado pelos métodos análogos aqueles divulgados por Urdal et al. 1984, J. Chromatog. 296:171. Urdal et al. descreve duas etapas HPLC de fase reversa sequencial para a purificação de IL-2 humano recombinante em uma coluna HPLC preparativa.

[00171] Todas as referências citadas dentro do corpo da presente especificação são portanto expressamente incorporado por referência em sua totalidade. Nos seguintes exemplos, tanto atual quanto profética, são fornecidos para o propósito de ilustração das formas de realização específicas ou características da presente invenção e não limite deste escopo. EXEMPLOS

[00172] IL-17RD.HIS humano, anticorpo policlonal anti-hIL-17RA de cabra, anticorpo policlonal anti-hIL-17RB de cabra, anticorpo policlonal anti- hIL-17RC de cabra e todos os kits ELISA foram obtidos de R & D Systems (Minneapolis, MN) e usado de acordo com as especificações do fabricante. O IL-13 de murino foi obtido de Invitrogen Biosource (Carlsbad, CA). A albumina de soro de murino (MSA) foi obtido de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Os anticorpos monoclonais contra IL-25, IL-17RA e IL-17RB humano e camundongo foram gerados substancialmente como descrito por Yao et al. (Yao, et al., 1995, Immunity 3: 811-821; Yao, et al., 1995, J. Immunol. 155:5483-5486; Yao, 1997, Cytokine 9:794-800). Os cDNAs que codifica o IL-17RA humano e camundongo foram previamente descritos (ver as três referências Yao, supra). O IL-17RB humano e camundongo codifica as estruturas de leitura de abertura idêntico aquele previamente descrito (Tian, et al., 2000, Oncogene 19(17):2098-2109). Os cDNAs que codifica o IL-25 de murino foram previamente descrito (Hurst, et al., 2002, J Immunol. 169(1):443-453.). O IL-25 de murino foi expressado em E.coli e purificado como descrito (Hurst et al. supra). A região extracelular de IL-17RA humano foi fundido foi fundido ao poli HIS ou Fc IgG1 humano (IL-17RA:HIS ou IL- 17RA:Fc, respectivamente); a região extracelular de IL-17RB humano foi fundido ao poli HIS (IL-17RB.HIS) ou Fc IgG1 humano (IL-17RB.Fc) substancialmente como descrito em Yao, et al., 1995, Immunity (supra). Em alguns experimentos, IL-25, IL-17RA Fc e IL-17RB Fc de murino e humano comercialmente disponível foram usados (R & D Systems). Exemplo 1

[00173] Este exemplo demonstra o requerimento por IL-17RB para uma resposta a IL-25 in vivo. IL-17RB-/- de camundongos foi gerado usando os métodos que são conhecidos na técnica. Brevemente, um vetor de alvejamento do gene foi construído pela substituição da sequência genômica contendo éxon 3 do IL-17RB de mistura com um cassete PGKneo. Um cassete de timidina quinase (MC-TK) foi inserido na extremidade final de 5' do vetor. As células de haste derivado embriônico 129 (ES) foram eletroporados com o vetor de alvejamento e selecionadona presença de G418 e ganciclovir como descrito (Kolls, J, et al. 1994. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91:215-219). Os clones ES que realizam uma mutação alvejada em IL-17RB foram identificados por uma combinação de PCR e análise Southern blot genômica e foram injetados nos blastocistos Swiss Black. As quimeras machos foram cruzadas a Swiss Black fêmeas para gerar os camundongos heterozigotos para a mutação IL-17RB que foram subsequentemente intercruzados para gerar os camundongos deficientes IL-17RB. Estes camundongos foram movidos a um fundamento C57BL/6 pelos 5 cruzamentos sucessivos com camundongos C57BL/6, usando tecnologia Marker-Assisted Accelerated Backcrossing (MAX-BAXSM) (Charles River Laboratories, Wilmington, MA). Os camundongos que foram identificados serão 99,5 % de C57BL/6 foram usados para estabelecer uma colônia de geração para produzir os camundongos para o uso experimental.

[00174] Os camundongos C57BL/6 de controle (WT) ou camundongos IL-17RB-/- (KO) foram dados 50 microL MSA (Sigma-Aldrich, St. Louis MO; 10 micrograms/mL) ou IL-25 de camundongo (Amgen; 10 micrograms /mL) intranasalmente (IN), uma vez por dia por quatro dias, substancialmente como descrito por Hurst, et al (J. Immunol. 169:443, 2002). No dia 5, o fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) e tecido de pulmão foram coletados de camundongos e analisados.

[00175] A lavagem broncoalveolar (BAL) foi realizada pela intubação dos camundongos anestesiados com uma injeção de 300 microL IP de 2,5 % de Avertina (2-2-2-tribromoetanol, Sigma) e pulverizando-se os pulmões com dois volumes de 600 microL de PBS de Dulbecco gelado (Gibco). As células de fluido BAL foram granuladas pela centrifugação a 1000 rpm por 10 minutos e recolocados em suspensão com PBS + 5 % de soro bovino fetal (FBS; HyClone; Logan, UT) pela contagem e análise pela celularidade de leucócito total bem como pelas mudanças nos números vários tipos de células usando uma máquina de hematologia ADVIA® 120 (um analisador benchtop pelo processamento e análise das espécimes de hematologia; Siemens Diagnostics, Tarrytown, NY). O BALF também foi testado pelas concentrações de proteína IL-5 e IL-13 por ELISA (R&D Systems; limite de detecção: IL-5, 31 pg/mL; IL-13, 62 pg/mL).

[00176] Os níveis de mRNAs por vários mediadores inflamatórios no tecido de pulmão foram determinados pela expressão TaqMan® (um método de reação de cadeia de polimerase em tempo real com base em fluoroforo rápido) usando iniciadores Assays-On-Demand TaqMan® (Applied Biosystems, Foster City, CA) substancialmente como descrito previamente (Hartel, C., et al, 1999 Scand.J.Immunol. 49(6):649-654). A análise TaqMan® foi realizada no sistema ABI Prism 7900HT Fast RT-PCR (Applied Biosystems). A expressão relativa de cada gene ao beta-actina, HPRT, ou expressão do gene GAPDH em cada grupo de tratamento foi determinado pelo sistema de detecção da sequência 2.2.3 (Applied Biosystems). Os resultados para dois experimentos separados são mostrados nas Tabelas 1 a 4 abaixo.

[00177] O camundongo IL-17RB KO com experimento do desafio IN IL-25 foi repetido substancialmente na mesma maneira, com a adição de um meio de desafio de interleucina-13 de camundongo (IL-13; Invitrogen Biosource™, Carlsbad, CA; dosado uma vez por dia por quatro dias, com 50 microL em 10 microgramas/mL); os resultados são mostrados nas Tabelas 3-4 abaixo.

Tabela 4: Análise IL-5, IL-13, eotaxina, MCP-1, IL-9, IL-10, IL-17A e IL- 17RA mRNAs em pulmões de camundongos IL-17RB KO e WT em resposta ao desafio IN IL-25

[00178] Para os experimentos de histopatologia de pulmão, os camundongos foram submetidos a eutanásia pela asfixia CO2. Os pulmões foram coletados, fixados em 10 % de formalina tamponada neutra (NBF), processada, dividido em 6 mícrons e tingidos com hematoxilina e eosina (H&E) ou cepa Schiff de ácido periódico (PAS) substancialmente como descrito (Harkema, J. R. e J. A. Hotchkiss, Am. J. Pathol. 141:307; 1992); o grau de escala usado na análise das seções de tecidos é mostrado abaixo pelas quatro categorias diferentes. A contagem de inflamação média total para cada grupo é relacionada na Tabela 5. Tabela 5: Análise histológica da inflamação de tecido de pulmão e hiperplasia de célula de goblet em camundongos IL-17RB KO e WT desafiado com IN IL-25

Contagem média relacionada ± SD. Hiperplasia de célula goblet (cepa PAS) 0 = normal 1 = mínimo, hiperplasia de célula goblet em grande bronquíolo 2 = brando, hiperplasia de célula goblet em grande e médio bronquíolo 3 = moderado, hiperplasia de célula goblet em grande, médio e alguns pequenos bronquíolos 4 = marcado, hiperplasia de célula goblet em todas vias aéreas Inflamação peribronquial 0 = normal 1 = mínimo, eosinófilo/macrófago/bainhas de linfócito (descontínuo pela camada simples), no edema 2 = brando, eosinófilo/macrófago/bainhas de linfócito (2-5 células); mínimo edema, fibroplasia 3 = moderado, eosinófilo/macrófago/bainhas de linfócito (5-10 células); edema e fibroplasia presente 4 = marcado, eosinófilo/macrófago/bainhas de linfócito (>10 células); edema e fibroplasia marcado Broncopneumonia 5 = normal 1 = mínimo, acúmulo focal de macrófagos/neutrófilos/eosinófilos/MNGCs 2 = brando, acúmulo focal de macrófagos/neutrófilos/eosinófilos/MNGCs 3 = moderado, multiacúmulo focal de macrófagos/neutrófilos/eosinófilos/MNGCs 4 = marcado, multiacúmulo focal de macrófagos/neutrófilos/eosinófilos/MNGCs Perivasculite/vasculite pulmonar 0 = normal 1 = mínimo, eosinófilo/linfócito/bainhas de macrófago (descontínuo pela camada simples), nenhuma infiltração íntima/hiperplasia 2 = brando, eosinófilo/linfócito/bainhas de macrófago (2-5 células); infiltração íntima de eosinófilo focal e hiperplasia endotelial 3 = moderado, eosinófilo/linfócito/bainhas de macrófago (5-10 células); infiltração eosinófilo íntima focalmente extensiva e hiperplasia endotelial com poucos MNGCs 4 = marcado, eosinófilo/linfócito/bainhas de macrófago (>10 células); parede de vasos algumas vezes eliminado e MNGCs proeminentes; vasculite discreta presente

[00179] Em camundongos C57BL/6 de tipo selvagem, os efeitos da administração intranasal de IL-25 incluindo (1) números de leucócito BALF total aumentado, incluindo números aumentados de eosinófilos BALF, neutrófilos, linfócitos e macrófagos e BALF aumentados nas concentrações IL-5 e IL-13 (Tabelas 1 e 3), (2) níveis mRNA de pulmão aumentado de IL-5, IL-13, eotaxina e MCP-1 (Tabelas 2 e 4) e (3) hiperplasia de célula goblet em vias respiratórias grandes e médias e inflamação perivascular/vascular robusta que envolve tanto as artérias quanto veias, mas não capilares alveolares (Tabela 5). Nenhuma destes efeitos foram observados na administração intranasal de camundongos IL-25 a IL-17RB KO (Tabelas 1-5). IL-17RA mRNA é presente em camundongos IL-17RB KO (Tabelas 2 e 4). Estes dados demonstram que IL-17RB é requerido para todos das atividades IL-25 no pulmão que foram medidos para determinar. Exemplo 2

[00180] Este exemplo demonstra o requerimento por IL-17RA para uma resposta a IL-25 in vivo. A geração de camundongos C57BL/6 IL-17RA- /- foram previamente descritos (Ye, P., et al, 2001 J. Exp. Med. 194:519-527). Os camundongos C57BL/6 de controle (WT) ou camundongos IL-17RA-/- (KO) foram tratados substancialmente como descrito no Exemplo 1 pelos camundongos IL-17RB-/-; os resultados são mostrados nas Tabelas 6 e 7 abaixo.

N= 4; os valores mostrados são expressão do gene relativo ao β-actina (2E-ΔCt) (média ± SD). Tecido de pulmão de camundongos tratados IL-13 não foi analisado neste experimento

[00181] Os tecidos de pulmão foram divididos, preparados pela análise histológica, tingido e analisado substancialmente como descrito no Exemplo 1. A contagem da inflamação média total para cada grupo é relacionada na Tabela 8. Tabela 8: Análise histológica do tecido de pulmão em camundongos IL-17 RA KO vs. WT

[00182] O experimento foi repetido na mesma maneira substancialmente; os resultados são mostrados nas Tabelas 9 e 10 abaixo. A análise histológica dos pulmões não foi realizada neste experimento. Tabela 9: Análise de BALF em camundongos KO vs. WT

[00183] Nos camundongos C57BL/6 de tipo selvagem, os efeitos da administração IN de IL-25 incluído: (1) números de leucócitos BALF totais aumentados, números aumentados de eosinófilos BALF, neutrófilos, linfócitos e macrófagos e BALF IL-5 aumentado e concentrações IL-13 (Tabelas 1 e 4), (2) hiperplasia de célula goblet nas vias respiratórias grandes e médias e inflamação perivascular/vascular robusta que envolve tanto as artérias quanto veias, mas não capilares alveolares (Tabela 3) e (3) níveis de mRNA pulmão aumentado de IL-5, IL-13, eotaxina, MCP-1 e IL-17RB (Tabelas 2 e 5). Nenhum destes efeitos foram observados na administração intranasal de camundongos IL-25 a IL-17RA KO (Tabelas 1 a 5), ainda através de IL-17RB mRNA é presente em camundongos IL-17RA KO. Estes dados demonstram que IL-17RA é requerido pelas atividades IL-25 no pulmão. Exemplo 3

[00184] Este exemplo demonstra o requerimento por IL-17RA e IL- 17RB para uma resposta a IL-25 in vitro. A geração de esplenócitos foram previamente descritas ( Hamilton, et al., 1978, J Clin Invest. 62(6): 1303-12). Brevemente, baços individuais de C57BL/6 WT, C57BL/6 IL-17RB KO e camundongos C57BL/6 IL-17RA KO foram removidos assepticamente e tratados com 0,4 mg/mL de colagenase D (Roche Applied Science, Indianapolis, IN) e 0,1 % de DNAse-I (Roche Applied Science) em RPMI 1640 (Gibco-Invitrogen, Carlsbad, CA) para gerar suspensões celulares simples. Os esplenócitos foram cultivados a 2,0 X 107 de células/ml em meio DMEM completo (Gibco-Invitrovgen) sozinho ou com adição de 1 micrograma/mL de Concanavalina A (Con A; Sigma-Aldrich), ou IL-25 (Amgen) nas concentrações finais indicadas. As células foram cultivadas por 72 horas a 37° C em um incubador umidificado a 5 % de CO2. Os tensoativos foram examinados pelas concentrações IL-5 e IL-13 por ELISA (R&D Systems). Os ensaios de esplenócitos foram relacionados duas vezes para cada grupo de genótipo usando diferentes ninhadas de animais IL-17RA KO, IL-17RB KO e WT; os dados a partir de dois experimentos separados são mostrados abaixo (Tabelas 11 a 14). Tabela 11: Produção IL-5 e IL-13 pelos esplenócitos IL-17RA KO e WT estimulados por IL-25

[00185] Produção induzida pelo estímulo IL-25 de IL-5 e IL-13 pelos esplenócitos C57BL/6de tipo selvagem cultivado. Esta produção de citocina não foi induzida pelo estímulo IL-25 de esplenócitos IL-17RB KO ou IL- 17RA KO (Tabelas 11 a 14). Con A, um controle positivo para a ativação de esplenócito, esplenócitos KO induzidos por IL-17RB para produzir esplenócitos IL-13 e IL-17RA KO para produzir IL-5 e IL-13. Estímulo Con A não induz os esplenócitos IL-17RB KO para produzir IL-5 em um experimento, mas induz a produção IL-5 de esplenócitos IL-17RB KO em um segundo experimento. Estes dados de cultura celular in vitro fornece o suporte adicional que tanto IL-17RB quanto IL-17RA são necessários para a sinalização IL-25. Exemplo 4

[00186] Este exemplo caracteriza a capacidade de anticorpos anti-IL- 17RB-M735 e anti-IL-25-M819 para inibir uma resposta IL-25 in vitro. As suspensões celulares simples de esplenócitos foram preparadas usando os baços de camundongos BALB/C naturais e diluídos a 4 x 107 células/mL no meio DMEM completo (Gibco-Invitrogen, Carlsbad, CA). As células (100 microL) foram adicionadas as placas de 96 reservatórios por uma concentração final de 4 x 106 células/reservatório com as seguintes condições: Apenas meio 10 ng/mL de muIL-25 (controle de estímulo) 10 ng/mL de muIL-25 + 100 ng/mL de muIL-17RB.muFc (controle de bloqueio) 10 ng/mL de muIL-25 + 463, 154, 51, 17, 5,7, 1,9, 0,64, 0,21, 0,07, 0,023, 0,007, 0,003 ng/ml anti muIL-17RB M735 10 ng/mL de muIL-25 + 1000, 100, 10, 1,0 ou 0,1 ng/mL anti muIL-25 M819.

[00187] Três amostras biológicas separadas, cada amostra que consiste de esplenócitos a partir de dois baços de camundongos BALB/c naturais, foram testados para cada condição listada acima e este foi repetido três vezes em três experimentos separados. As culturas foram incubadas por 72 horas a 37° e 10 % CO2, no qual os períodos de tensoativos foram coletados e submetidos ao ensaio pelas concentrações IL-5 por ELISA. Tanto M735 quanto M819 inibiu a secreção induzida por IL-25 de esplenócitos de camundongos IL-5; os valores IC50 calculados pela inibição da produção IL- 5 induzida por IL-25 pelos esplenócitos BALB/c cultivados para cada anticorpo em 3 experimentos de esplenócitos separados são mostra abaixo nas Tabelas 15 a 16.

[00188] Produção IL-5 induzida por IL-25 foi inibida tanto por anti-IL- 17RB M735 quanto anti-IL-25-M819. Estes dados fornecem o suporte adicional que IL-17RB é necessário para a sinalização IL-25 em esplenócitos. Exemplo 5

[00189] Este exemplo caracteriza a capacidade de vários anticorpos anti-IL-17RA para inibir uma resposta IL-25 in vitro. As suspensões de células simples de esplenócitos foram preparados substancialmente como descrito acima por exemplo 4. As células (100 microL) foram adicionadas as placas de 96 reservatórios por uma concentração final de 4 x 106 células/reservatório com as seguintes condições: Apenas meio 10 ng/mL de muIL-25 (controle de estímulo) 10 ng/mL de muIL-25 + 100 ng/mL de muIL-17RB.muFc (controle de bloqueio) 10 ng/mL de muIL-25 + nenhum 1000, 100, 10, 1,0 ou 0,1 ng/mL de anticorpos monoclonais anti muIL-17RA.

[00190] Três amostras biológicas separadas, cada amostra que consiste de esplenócitos a partir de dois camundongos, foram testados para cada condição. As culturas foram incubadas por 72 horas a 37° e 10 % de CO2, no qual o período dos sobrenadantes foram coletados e submetidos ao ensaio pelas concentrações IL-5 por ELISA. Um painel de oito diferentes anticorpos monoclonais IL-17RA anti-camundongo de rato foi testado. Nenhuma desta secreção induzida IL-25 inibiu significantemente IL-5 pelos esplenócitos de camundongo.

[00191] Além disso a estes anticorpos anti-camundongo de rato, um anticorpo monoclonal IL-17RA anti-camundongo de camundongo, M751, foi avaliado duas vezes neste ensaio de esplenócito. A secreção induzida IL-25- inibiu M751 de esplenócitos de camundongo por IL-5. O IC50 calculado por anti-mIL-17RA M751 nos 2 experimentos de esplenócitos separados é mostrado abaixo na Tabela 17. O anti-IL-17RA-M751 foi portanto o melhor inibidor anti-IL-17RA da produção IL-5 induzida por IL-25 neste ensaio de esplenócito, mas não foi tão potente a um inibidor comparado com anti-IL- 17RB-M735 (Tabela 15). Tabela 17: Valores IC50 de anti-IL-17RA-M751

Exemplo 6

[00192] Este exemplo demonstra a inibição de uma resposta IL-25 in vivo com um anticorpo contra IL-17RA, M751, no qual a atividade inibiu IL- 25 em um bioensaio in vitro (previamente descrito). Os camundongos BALB/c foram dados em albumina de soro de murino (MSA; Sigma, 10μg/mL) ou IL-25 camundongo (Amgen, TO; 10 μg/mL) intranasalmente, uma vez por dia por quatro dias. Nos dias 1 a 4, quatro horas antes a instilação intranasal de MSA ou IL-25, os camundongos foram injetados intraperitonealmente com 200 microgramas de um anticorpo anti-IL-17RA de neutralização (M751), um anticorpo anti-IL-17A de neutralização (M210), ou um anticorpo de controle de isotipo (Fc de murino; Amgen). No dia 5, fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) e tecido de pulmão foram coletados e analisados como previamente descrito. Os resultados de dois experimentos separados são mostrados nas Tabelas 18 a 21 abaixo. Tabela 18: Análise de celularidade BALF, concentrações IL-5 e IL-13 em camundongos BALB/c tratados com IN IL-25 na presença ou ausência de um anticorpo de bloqueio ao IL-17RA M751 de camundongo - Experimento 1

[00193] As amostras abaixo na faixa de detecção de IL-5 ELISA foram projetados no valor de 31 pg/mL. As amostras abaixo na faixa de detecção de IL-13 ELISA foram projetados no valor de 62 pg/mL. Tabela 19: Análise de celularidade BALF, concentrações IL-5 e IL-13 nos

[00194] O tratamento com celularidade BALF induzida por IL-25 inibe anti-IL-17RA mab M751, bem como BALF IL-5 induzido por IL-25 e concentrações IL-13 e indução do transcrito de pulmão. Em contraste, o tratamento com anti-IL-17A mab M210 não significantemente afeta celularidade BALF induzida por IL-25 (embora os dados sugerem os efeitos possíveis deste anticorpo em níveis de neutrófilo BALF induzido por IL-25). Estes dados, junto com aquele previamente descrito nos camundongos IL- 17RA KO, indica que IL-17RA é requerido por celularidade BALF induzida por IL-25 e aumenta nas concentrações IL-5 e IL-13. Os efeitos in vivo de IL- 25 não parece ser mediado através de IL-17A, com a exceção de recrutamento de neutrófilo induzido por IL-25, como mostrado pelo tratamento anti-IL-17A significantemente que reduz influxo de neutrófilo induzido por IL-25 no BALF. Exemplo 7

[00195] Este exemplo ilustra a indução de hipersensibilidade das vias aéreas (AHR) por IL-25 e os efeitos destes de anti-IL-17RA-M751 e anti-IL- 17A-M210. Os camundongos BALB/c foram dados MSA ou IL-25 IN de camundongo diariamente, em um período de quatro dias, substancialmente como previamente descrito. No dia 5, a sensibilidade das vias aéreas (AHR) ao desafio de metacolina (MCh) foi primeiro medido não invasivamente em camundongos livres, conscientes com um pletismografia de corpo total (Buxco Electronics, Troy, NY). A pausa intensificada (PENH) foi medida com base na forma de onda da pressão na pletismografia da caixa em resposta ao aumento das concentrações do desafio MCh e é relacionado como a mudança da porcentagem relativa as leituras de linha de base realizado antes da exposição MChS. O PC200 é a concentração de MCh requerido para induzir um PENH 200 % acima da linha de base e é relacionado aqui nas Tabelas 22 e 23 abaixo. Tabela 22: Desafio AHR ao MCh de camundongos BALB/c tratados com IN IL-25 na presença ou ausência de um anticorpo de bloqueio ao mouse IL- 17RA ou IL-17A

N= 5/grupo; os valores mostrados são (média ± SD) Tabela 23: Desafio AHR a metacolina de camundongos BALB/c tratados com IN IL-25 na presença ou ausência de um anticorpo de bloqueio ao IL-17RA M751 de camundongo

N=4/grupo; os valores mostrados são (média ± SD)

[00196] A hipersensibilidade de vias aéreas também foi medida em camundongos ventilados mecanicamente e anestesiados intranasalmente dosado com IL-25 e tratado com antiIL-17RA-M751. Os camundongos BALB/c foram dados MSA ou camundongo IL-25 IN diariamente, em um período de quatro dias, substancialmente como previamente descrito. No dia 5, os camundongos foram sedados com cloridreto de xilazina (20 mg/kg intraperitonealmente) e anestesiados com pentobarbital de sódio (100 mg/kg interperitonealmente). A traquéia foi canulada com uma agulha metálica e o camundongo foi conectado a um pequeno ventilador animal (flexiVent, SCIREQ: Scientific Respiratory Equipment, Montreal, Canada). Cada camundongo foi ventilado com inspiração sinusoidal e expiração passiva com uma taxa de 150 respiração/minuto e amplitude de 10 mL/kg e peso por camundongo. Uma pressão expiratória e positiva (PEEP) de 3,0 cmH2O foi estabelecida pela conexão do camundongo a uma coluna de água.

[00197] Após o camundongo ser ventilado por um minuto, os pulmões foram dilatados duas vezes a capacidade pulmonar total (TLC, pressão de amplitude de 30 cmH2O). Um aerossol de solução salina ou concentrações aumentadas de acetil-beta-metilcolina (MCh, Sigma-Aldrich) foram liberadas ao pulmão por 15 segundos seguido por 15 segundos de ventilação. O seguinte aerossol e ventilação, um volume de 2,5 Hz conduz oscilação (VD) que foi aplicada a abertura de vias respiratórias. Cada uma das oscilações 10 a 2,5 Hz VD tem 0,20 mL de amplitude e durou 1,25 segundos. Antes da próxima dosagem de MCh, os pulmões foram dilatados duas vezes por TLC. A pressão e as medições de volume no período no sistema respiratório foram registradas pelo pequeno ventilador animal e resistência do sistema respiratório (R) foi calculado pelo ajuste de dados ao modelo de compartimento simples do sistema respiratório onde Ptr = RV + EV+ PO (Ptr = pressão traqueal, V = volume/tempo, E = elasticidade = pressão/volume, V = volume, PO = pressão de linha de base). A resistência de pulmão medida em concentrações diferentes de MCh são mostrados na Figura 2.

[00198] Estes resultados demonstram que, além disso para inibir a atividade IL-25 in vitro bem como celularidade BALF induzida por IL-25 e concentrações IL-5 e IL-13 aumentadas in vivo, IL-25 inibido por M751 induzido por AHR, indicando que um anticorpo que liga-se a IL-17RA e inibe uma atividade de IL-25 e será útil no tratamento ou melhoramento das condições mediadas por IL-25 que envolvem AHR. Exemplo 8

[00199] Este exemplo demonstra a inibição de uma resposta IL-25 in vivo com um anticorpo contra IL-17RB (M735) ou um anticorpo contra IL-25 (M819), ambos de que inibiu a atividade IL-25 em um bioensaio in vitro (descrito acima). Os camundongos BALB/c foram dados em PBS ou IL-25 de camundongo intranasalmente e injetado intraperitonealmente com 250 microgramas de um anticorpo anti-mouse IL-17RB camundongo de neutralização (M735), um anticorpo IL-25 anti-camundongo de rato de neutralização (M819), um anticorpo IgG1 de murino de controle irrelevante (muIgG1; Amgen), uma proteína Fc de murino (muFc; Amgen), ou IgG de rato total (Pierce, Rockford IL). No dia 5, o fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) foi coletado e analisado como previamente descrito. Os experimentos repetidos separados foram realizados; no segundo, concentrações de proteínas BALF IL-5 e IL-13 não foram determinadas. Os resultados são mostrados nas Tabelas 24 a 26 abaixo.

Exemplo 9

[00200] Este exemplo ilustra a indução da reação da hipersensibilidade das vias aéreas (AHR) por IL-25 e os efeitos destes de um anticorpo contra IL-17RB (M735) ou um anticorpo contra IL-25 (M819). Uma série de experimentos foram realizados substancialmente como previamente descrito; AHR foi medido não invasivamente em camundongos livres, conscientes com um pletismografia de corpo total. Os resultados dos três experimentos separados são mostrados nas tabelas 27 a 29 abaixo. Tabela 27: Valores AHR dos camundongos desafiados IN IL-25 na ausência ou presença de um anticorpo de bloqueio ao anti-IL-17RB (M735)

N= 5; os valores mostrados são (média ± SD) Tabela 28: Valores AHR dos camundongos desafiados IN IL-25 na ausência ou presença de um anticorpo de bloqueio ao anti-IL-17RB (M735) ou um anticorpo de bloqueio ao IL-25 (M819)

N= 5; os valores mostrados são (média ± SD) Tabela 29: Valores AHR dos camundongos desafiados IN IL-25 na ausência ou presença de um anticorpo de bloqueio ao anti-IL-17RB (M735) ou um anticorpo de bloqueio ao IL-25 (M819)

[00201] Estes resultados indicam que IL-25 aumenta AHR, no qual o efeito pode ser moderado pelo anti-IL-17RB ou anti-IL-25. Exemplo 10

[00202] Este exemplo fornece a confirmação histológica que as respostas IL-25 in vivo são bloqueadas pelo tratamento com um anticorpo contra IL-17RB (M735), um anticorpo contra IL-25 (M819), ou um anticorpo contra IL-17RA (M751). Os camundongos BALB/c foram dados PBS ou IL- 25 de camundongo intranasalmente e injetado intraperitonealmente com 200 microgramas de um anticorpo anti-IL-17RB de neutralização (M735), 200 microgramas de um anticorpo anti-IL-25 de neutralização (M819), 200 microgramas de um anticorpo anti-IL-17RA de neutralização (M751), 200 microgramas de um anticorpo anti-IL17A de neutralização (M210), ou um anticorpo de controle de isotipo substancialmente como previamente descrito. Os camundongos foram submetidos a eutanásia no dia 5 do estudo pela asfixia de CO2. Os pulmões foram coletados, fixados, processados, divididos, tingidos e avaliados como descrito. Um resumo dos resultados da histopatologia são mostrados na Tabela 30 abaixo. Tabela 30: Análise histológica da inflamação do tecido pulmonar e hiperplasia de célula goblet em camundongos desafiados com IN IL-25 e tratados com anti-IL-17RA, anti-IL-17A, anti-IL-25, anti-IL-17RB ou controle

N=5/grupo; Contagem média relacionad a ± SD.

[00203] Os camundongos desafiados com IL-25 e tratados com o controle de isotipo tem as lesões mais profundas e uma contagem média de 7,6 ± 2,2 versus camundongos desafiados com MSA e tratados com o controle de isotipo, que tem uma contagem média de 1,8 ± 0,8. O tratamento de camundongos com um anticorpo contra IL-17A tem essencialmente nenhum efeito nas lesões pulmonares como indicado pela contagem média de 6,8 ± 1,3. Em contraste, os tratamentos com anti-IL-17RA (contagem 1,0 ± 0,7), anti-IL-25 (contagem 1,4 ± 1,1) ou anti-IL-17RB (contagem 1,8 ± 1,5) foram todos efetivos na inibição da inflamação induzida por IL-25 ao nível do fundamento, sugere que o bloqueio de IL-25 ou uma das proteínas envolvidas no complexo receptor foram igualmente os tratamentos efetivos. Exemplo 11

[00204] Este exemplo demonstra uma associação entre IL-17RA e IL- 17RB. Uma série de imunoprecipitações foi realizada usando os domínios extracelulares de IL-17RA humano e IL-17RB humano fundido a região Fc de IgG humano (R&D Systems, Minneapolis, MN) ou a um rótulo de poliistidina (Amgen). Cinquenta microL de pasta de proteína G foi adicionado a um tubo Eppendorf, lavado com solução salina tamponada por fosfato (PBS) e incubado com 2 microgramas de proteína IL-17RA.Fc ou IL- 17RB.Fc por uma hora a 4° C com rotação. No final desta incubação, 2 microgramas da proteína receptora solúvel inversa (isto é, IL-17RA-HIS foi adicionado a IL-17RB:Fc e IL-17RB-HIS foi adicionado a IL-17RA:Fc) foi adicionado e esta combinação final foi incubada durante a noite a 4° C com rotação.

[00205] Na próxima manhã, os tubos foram centrifugados a 12.000 rpm por 1 minuto e as pérolas G de proteínas foram lavadas com PBS, então tampão RIPA (Sigma-Aldrich, St. Louis MO). As pérolas foram recolocadas em suspensão em 60 microL de tampão de amostra de 2x Tris-Glicina SDS (Invitrogen, Carlsbad CA) com 10 % de beta-mercaptoetanol (Invitrogen, Carlsbad, CA) e armazenada em gelo ou a -20° C. As amostras foram analisadas em um gel de acrilamida de 10 mini reservatórios a 4 a 20 % de Tris-Glicina (Novex ®-Invitrogen, Carlsbad CA) e transferido a membrana de nitrocelulose (Invitrogen, Carlsbad CA). As membranas foram bloqueadas usando tampão de bloqueamento Odyssey®, um tampão de bloqueamento Western Blot otimizado pelos ensaios infravermelhos (Li-cor® Biosciences, Lincoln, NE) em temperatura ambiente por 1 hora ou durante a noite a 4° C com balanço leve. As membranas foram então incubadas com anticorpo primários diluídos 1:1000 a 1:5000 no tampão de bloqueamento Odyssey® contendo 0,1 % de Tween-20 por 60 minutos a 4° C com agitação leve. As membranas foram lavadas 4 vezes em PBS + 0,1 % de Tween-20 e então incubadas no anticorpo secundário diluído 1:10.000 em tampão de bloqueamento Odyssey® contendo 0,1 % de Tween-20 por 60 minutos a 4° C com agitação leve. As membranas foram lavadas 4 vezes em PBS + 0,1 % Tween-20 e as proteínas foram visualizadas usando um sistema de imagem infra-vermelho Li-Cor® Odyssey®. Os seguintes anticorpos foram usados: Anticorpo primários: Afinidade Anti-hIL-17RA de cabra purificada pelo anticorpo policlonal purificado (R&D Systems, Minneapolis, MN) Afinidade Anti-hIL-17RB de cabra purificada pelos anticorpo policlonal (R&D Systems, Minneapolis, MN) Afinidade Anti-hIL-17RC de cabra purificada pelo anticorpo policlonal (R&D Systems, Minneapolis, MN) IgG anti-camundongo dew coelho Alexa Fluor® 680 (H+L) (Invitrogen, Carlsbad, CA; Alexa Fluor680: Berlier JE et al., J Histochem Cytochem 51, 1699-712 (2003))

[00206] Um blot representativo é mostrado na Figura 2. No curso de diversos experimentos, IL-17RB.Fc foi capaz de imunoprecipitar IL- 17RA.HIS. Neste sistema experimental, IL-17RA.Fc também foi capaz de imunoprecipitar IL-17RC.HIS, demonstrando que este sistema pode produzir as interações bioquímicas entre as proteínas que foram demonstradas antes em outros sistemas (Toy, D. et al, JI, 2006, 177: 36) Nenhum IL-17RA.Fc ou IL- 17RB.Fc foram capazes de imunoprecipitar IL-17RD.HIS (R&D Systems, Minneapolis, MN), sugerindo que a interação IL-17RA e IL-17RB é única a estas proteínas e não inerente para todos os membros da família IL-17R. esta é a primeira descrição de uma interação bioquímica entre IL-17RA e IL- 17RB. Exemplo 12

[00207] O desenvolvimento dos anticorpos monoclonais humanos totais direcionados contra IL-17RA humano foi realizado usando tecnologia Abgenix (now Amgen Fremont Inc.) XenoMouse® (Patente dos Estados Unidos N°s. 6.114.598; 6.162.963; 6.833.268; 7.049.426; 7.064.244, que são incorporados neste por referência em sua totalidade; Green et al, 1994, Nature Genetics 7:13-21; Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15:146-156; Green and Jakobovitis, 1998, J. Ex. Med. 188:483-495)), como descrito em USSN 11/906.094 (incorporado neste por referência) Como descrito neste, os anticorpos anti-IL-17RA totalmente humanos foram avaliados por sua capacidade de inibir a ligação IL-17A humana ao IL-17RA humano (e ao IL- 17RA cinomolgo). Um painel de anticorpos foi identificado e selecionado pela propagação adicional e análise; a sequência de aminoácido das cadeias leves e pesadas variáveis são mostrados na listagem de seqüência a tabela que resume as várias seqüências é mostrada abaixo. Um anticorpo, 3.454.1, mostrou a evidência de duas versões da cadeia leve variável. Tabela 31: Resumo de anticorpos anti-huIL-17A

[00208] Os anticorpos foram ainda caracterizados com relação a sua capacidade de inibir a atividade biológica IL-17A e/ou IL-17F e no qual os domínios de IL-17RA foram importantes para a ligação de anticorpo. Ensaio de secreção de citocina/quimiocina induzida por IL-17A/IL-17F

[00209] Estes ensaios utilizam uma linha celular de fibroblasto do prepúcio humano (HFF). Os anticorpos anti-IL-17RA são incubados com as células HFF (5000 células/reservatório em placas de 96 reservatórios) por 30 minutos a 36° C; as culturas são então estimuladas durante a noite com IL- 17A (5 ng/ml) sozinho ou IL-17F (20 ng/ml) e TNF-alfa (5 ng/ml). Os sobrenadantes de cultura de fibroblasto são analisados por ELISA pela presença de IL-6 ou GRO-alfa. Os anticorpos foram capazes de inibir uma atividade biológica de IL-17A e de IL-17F como mostrado por uma redução na quantidade de IL-6 e/ou GRO-alfa produzido neste ensaio. Ensaio de competição cruzada

[00210] Os estudos de competição cruzada foram realizados para determinar as características de ligação IL-17RA de certos anticorpos, como descrito em USSN 11/906.094. Uma modificação do método de união multiplexada descrito por Jia, et al. foi usado (ver Jia, et al., J. Immun. Meth., 2004, 288:91-98), que utiliza o Bio-Plex Workstation e software (BioRad, Hercules, CA), bem como reagentes de Luminex® Corp. (Austin, TX). Os protocolos básicos dos fabricantes são geralmente seguidos. Os anticorpos foram testados em combinações em forma de pares; se dois anticorpos completamente cruzados com cada outro, estes foram agrupados ou "unidos" juntos. Geralmente debatendo, os anticorpos projetados por uniões diferentes ligam-se às partes diferentes de IL-17RA e anticorpos projetados nas mesmas uniões ligam-se às partes similares de IL-17RA. Avaliação de determinantes de neutralização: quimeras Hu/Mu

[00211] Os estudos foram conduzidos para determinar onde os vários antagonistas IL-17RA (na forma de anticorpos humanos) ligam-se ao IL- 17RA humano, usando um número de IL-17RA de camundongo/humano quimérico. Este método leva vantagem da reatividade não cruzada de vários anticorpos IL-17RA com IL-17RA de camundongo. Para cada quimera, uma ou duas regiões de domínio extracelular IL-17RA humano é/são substituídos com as regiões correspondentes de IL-17RA de camundongo. Seis regiões simples e 8 quimeras de região dupla foram construídas; análise múltipla usando o Bio-Plex Workstation e software (BioRad, Hercules, CA) foi realizada para determinar os determinantes de neutralização em IL-17RA humano pela análise dos mAbs IL-17RA humanos exemplares da ligação diferencial versus proteínas IL-17RA de tipo selvagem. Avaliação de determinantes de neutralização: Varredura de arginina

[00212] Os estudos adicionais foram conduzidos usando um número de proteínas IL-17RA mutantes tendo substituições de arginina para selecionar os resíduos de aminoácidos de IL-17RA humano. A varredura de arginina é um método de reconhecimento da técnica de avaliação onde os anticorpos, ou outras proteínas, ligam-se a uma outra proteína, ver por exemplo Nanevicz, T., et al., 1995, J. Biol. Chem., 270:37, 21619-21625 and Zupnick, A., et al., 2006, J. Biol. Chem., 281:29, 20464-20473. Em geral, a cadeia secundária de arginina é positivamente carregada e relativamente volumosa como comparado a outros aminoácidos, que podem romper a ligação de anticorpo a uma região de antígeno onde a mutação é introduzida. A varredura de arginina é um método que determina se um resíduo é parte de um determinante de neutralização e/ou um epítopo. Noventa e cinco aminoácidos distribuídos em toda parte do domínio extracelular IL-17RA humano foram selecionados para a mutação a arginina. A seleção foi inclinada a direção de aminoácidos carregados ou polares para maximizar a possibilidade do resíduo de ser na superfície e reduzir a semelhança da mutação resultante na proteína mal dobrada.

[00213] Usando-se técnicas padrão conhecidas na técnica, oligonucleotídeos sentido e anti-sentido contendo os resíduos foram projetados com base no critério fornecido pelo kit de protocolo II Stratagene Quickchange® (Stratagene/Agilent, Santa Clara, CA). A mutagênese do HuIL-17RA-Flag-pHis de tipo selvagem (WT) foi realizada usando um kit II Quickchange® (Stratagene). Todas as construções quiméricas foram construídas para codificar um rótulo de FLAG-histidina (seis histidinas) no terminal carbóxi do domínio extracelular para facilitar a purificação por intermédio do rótulo poli-His, análise Multiplex usando o Bio-Plex Workstation e software (BioRad, Hercules, CA) foi realizada para determinar a neutralização dos determinantes em IL-17RA humano pela análise de certos IL-17RA mAbs humanos de ligação diferencial aos mutantes de arginina versus proteínas IL-17RA de tipo selvagem.

[00214] Os resultados destes estudos são resumidos na Tabela 32 abaixo. Tabela 32: Resumo de propriedades de certos anticorpos IIL-17RA

Exemplo 13

[00215] Este exemplo descreve um ensaio de re-estímulo de IL-25 que é útil para a avaliação dos efeitos de antagonistas de IL-17RA-IL-17RB em uma atividade biológica de IL-25. As células mononucleares sanguíneas periféricas humanas (PBMC) são isoladas de doadores normais e estimuladas por 24 horas a 5 x 106 células/ml na presença de linfopoietina estromal tímica (TSLP (Quentmeier et al., Leukemia. 2001 Aug;15(8):1286), 100 nanogramas/ml; disponível de R&D Systems, Minneapolis, MN). Os PBMC são então coletados e apresentados nas culturas de re-estímulo na presença de IL-2 (10 nanogramas/ml, R&D Systems, Minneapolis, MN) e IL-25 (10 nanogramas/ml; R&D Systems, Minneapolis, MN), na presença ou ausência de agentes a ser testado pela atividade inibidora. As culturas de re-estímulo são preparadas como uma suspensão celular simples e diluída a 4 x 107 células/mL; 100 microL de células são adicionadas às placas de 48 reservatórios para uma concentração final de 4 x 106 células/reservatório. Após três dias, os fluidos sobrenadantes são coletados e testados pelo IL-5 por ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN). Os agentes testados incluem as formas solúveis de IL-17RB (previamente descrito) e um painel de anticorpos monoclonais e policlonais resumidos abaixo: • MAB1771: anti-HuIL-17RA MuIgG2b (R&D Systems) • MAB1207: anti-HuIL-17RB MuIgG2b (R&D Systems) • AF177: IgG policlonal de cabra anti-HuIL-17RA (R&D Systems) • Diversos anti-HuIL-17RA HuIgG2 totalmente humanos (descritos no Exemplo 12)

[00216] Os resultados são teste de vários agentes em diversos ensaios de re-estímulo diferentes que utilizam PBMC a partir de doadores diferentes são mostrados na Tabela 33 abaixo. Tabela 33: Produção IL-5 de TSLP tratado por PBMC humano estimulado com IL-2 + IL-25 na presença ou ausência de vários inibidores IL-17RB e IL- 17RA.

[00217] Um painel de anticorpos humanos que liga-se ao IL-17RA foi testado, em três ensaios de re-estímulo separados que utilizam o doador PBMC diferente, nos dias diferentes e com as preparações diferentes de anticorpo. Estes resultados são mostrados na Tabela 34 abaixo. Tabela 34: Produção IL-5 de TSLP tratado por PBMC humano estimulado com IL-2 + IL-25 na presença ou ausência de vários anticorpos IL-17RA.

[00218] Substancialmente os resultados similares foram obtidos com as preparações adicionais destes anticorpos. Os resultados indicam que certos anticorpos que ligam-se IL-17RA e inibem IL-17A também inibem IL-25. Exemplo14

[00219] Este exemplo descreve um modelo de camundongo de asma. Os camundongos (por exemplo, BALB/c) foram sensibilizados com antígeno (por exemplo, ovalbumina [OVA]) pela injeção intraperitoneal do antígeno em alume ou outro adjuvante. Diversos esquemas de sensibilização são conhecidos na técnica; um esquema é para injetar 10 microgramas de OVA em alume três vezes em um intervalo de tempo (isto é, no dia -21, dia -14 e dia -7). Os camundongos foram então desafiados com antígeno pela exposição aerossol (5 % de OVA) ou administração intranasal (0,1 mg de OVA). A lista de desafio pode ser selecionada de juntamente termos mais curtos (isto é, desafios diariamente nos dias 1, 2 e 3) ou termos mais longos (isto é, desafio semanalmente por duas ou três semanas). Os pontos finais que são medidos podem incluir AHR, número de células de fluido BAL e composição, níveis de citocina de linfonodo de drenagem de pulmão in vitro, níveis IgE de soro e avaliação histopatológica de tecido pulmonar. Outros modelos de animais de asma são conhecidos e incluem o uso de outros animais (por exemplo, camundongos C57BL/6), lista de sensibilização (por exemplo, inoculação intranasal, uso de outros adjuvantes ou nenhum adjuvante, etc.) e/ou antígenos (incluindo peptídeos tal como aqueles derivados de OVA ou outros antígenos proteináceos, extratos de barata, extratos de erva-de-santiago ou outros extratos tal como aqueles usados nos regimes de dessensibilização, etc.). Os efeitos dos anticorpos ao IL-17RA, IL- 17RB, IL-17 e IL-25 foram avaliados neste modelo, usando grupos de camundongos como mostrado abaixo.

[00220] Os camundongos BALB/c fêmeas foram imunizados IP com OVA em alume nos dias -21, -14 e -7 e foram expostos a um desafio aerossol com OVA em PBS nos dias 1 a 3. Os camundongos foram injetados IV com anticorpo no dia antes OVA do desafio aerossol (dia -1) nos experimentos 1 e 2, ou IP com anticorpo no dia do primeiro desafio aerossol OVA (dia 1) 30 minutos antes do desafio OVA no Experimento 3, ou foram injetados IP com Dexametasona (Dex), um controle positivo, ou solução salina tamponada por fosfato (PBS ), um controle negativo, 30 minutos antes de cada exposição de aerossol ao OVA (dias 1 a 3) nos Experimentos 1 e 3. Um grupo OVA comparado por idade foi incluído por comparação. A hipersensibilidade das vias aéreas (AHR) ao desafio MCh foi medido 48 horas após a desafio OVA final. Os camundongos foram sacrificados 72 horas após o desafio OVA final e soro, fluido BAL, linfonodos de drenagem de pulmão e pulmões foram coletados pela análise. Uma série de três experimentos foi realizada. Experimento 1 contém os seguintes grupos de tratamento: • Grupo 1, camundongo não desafiado iniciado, n=10 • Grupo 2, PBS, IP, n=10 • Grupo 3, 1 mg/kg Dex, IP, n=10 • Grupo 4, 500 microgramas de controle de isotipo mIgG1 ab, IV, n=10 • Grupo 5, 500 microgramas anti-IL-17RB M735 mAb, IV, n=10 • Grupo 6, 500 microgramas de anti-mIL-17RA mAb M751 quimérico, IV, n=10 • Grupo 7, 500 microgramas de controle IgG ab de rato, IV, n=10 • Grupo 8, 500 microgramas anti-mIL-25 M819, IV, n=10 • Grupo 9, 500 microgramas anti-mIL-17 mAb M210, IV, n=10 Experimento 2 contém os seguintes grupos de tratamento: • Grupo 1, camundongo não desafiado iniciado, n=10 • Grupo 2, 500 microgramas de controle de isotipo ab mIgG1, IV, n=10 • Grupo 3, 500 microgramas de anti-mIL-17RA mAb M751 quimérico, IV, n=10 Experimento 3 contém os seguintes grupos de tratamento: • Grupo 1, camundongo não desafiado iniciado, n=10 • Grupo 2, PBS, IP, n=10 • Grupo 3, 1 mg/kg Dex, IP, n=10 • Grupo 4, 500 microgramas de controle de isotipo ab mIgG1, IP, n=10 • Grupo 5, 500 microgramas de anti-IL-17RB M735 mAb, IP, n=10 • Grupo 6, 500 microgramas de anti-mIL-17RA mAb M751 quimérica, IP, n=10 • Grupo 7, 500 microgramas de controle IgG ab de rato, IP, n=10 • Grupo 8, 500 microgramas de anti-mIL-25 M819, IP, n=10 • Grupo 9, 500 microgramas de anti-mIL-17 mAb M210, IP, n=10 • Grupo 10, 500 microgramas de anti-mIL-17F mAb M850, IP, n=10

[00221] Os anticorpos de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou IL- 25 mas não ao IL-17A reduz AHR em um modelo de asma de OVA de camundongo; resultados são mostrados nas Figuras 1 a 3. A porcentagem média da mudança em PENH relativo a linha de base é relacionada para cada grupo de tratamento ± SE do experimento 1 (Figura 1). A hipersensibilidade das vias aéreas foi medida substancialmente como previamente descrita no Exemplo 7. O grau de broncoconstrição foi expressado como uma porcentagem de mudança em PENH relativo a linha de base. O tratamento com anticorpos de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou IL-25, mas não ao IL-17A, reduz AHR em resposta ao desafio MCh comparado com os camundongos tratados com PBS ou anticorpos de controle (Figura 3).

[00222] A resistência pulmonar (RL) em resposta ao desafio de metacolina foi medido nos experimentos 2 e 3 nos camundongos mecanicamente ventilado. As medições de pressão e volume em tempo no sistema respiratório foram registrados pelo pequeno ventilador de animais e resistência do sistema respiratório (R=cmH2O/mL) foi calculado pelo ajuste de dados ao modelo de compartimento simples do sistema respiratório onde Ptr = RV + EV+ PO (Ptr = pressão traqueal, V = volume/tempo, E = elasticidade = pressão/volume, V = volume, PO = pressão de linha de base). A resistência das áreas das vias aéreas (R) sob a curva (AUC) é calculada por levar a soma de todas as medições R para cada concentração de metacolina para cada camundongo. No experimento 2, o tratamento com um anticorpo de neutralização ao IL-17RA reduz a resistência pulmonar em resposta ao desafio de metacolina comparada com os camundongos tratados por anticorpos (Figura 4a). No experimento 3, o tratamento com anticorpos de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou IL-25 mas não ao IL-17A reduz a resistência pulmonar ao desafio de metacolina comparado com os camundongos tratados pelo anticorpo de controle (Figura 4b).

[00223] Os efeitos dos anticorpos no número celular BALF e composição foram também determinados; os resultados são mostrados nas Figuras 5 a 7. No experimento 1, os anticorpos de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou IL-25 mas não ao IL-17A significantemente reduz leucócitos totais BALF (Figura 5a), eosinófilos (Figura 5b) e linfócitos (Figura 5d) comparados com os tratamentos de anticorpo de controle apropriados neste modelo de asma OVA de camundongo. Os anticorpos de neutralização ao IL- 17RB ou IL-17RA mas não ao IL-17A significantemente reduz neutrófilos totais BALF (Figura 5c). O anticorpo de neutralização ao IL-25 reduz neutrófilos totais BALF mas este não foi significante (Figura 5c).

[00224] No experimento 2, anticorpo de neutralização ao IL-25, IL- 17RB e IL-17RA significantemente reduz leucócitos totais BALF (Figura 6a), eosinófilos (Figura 6b) e linfócitos (Figura 6d) comparado com os tratamentos de anticorpo de controle apropriado neste modelo de asma OVA de camundongo. Estes anticorpos não tem um efeito significante no neutrófilo BALF totais (Figura 6c) ou números de macrófago (Figura 6e).

[00225] No experimento 3, anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL- 17RA, ou IL-25 mas não ao IL-17A ou IL-17F significantemente reduz leucócitos totais BALF (Figura 7a), eosinófilos (Figura 7b) e linfócitos (Figura 7d) neste modelo de asma OVA de camundongo. Anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou IL-25 mas não ao IL-17A ou IL-17F reduz neutrófilos totais BALF (Figura 7c), mas apenas os anticorpos IL-17RB e IL-25 tem um efeito significante. O anticorpo de neutralização ao IL-17RB ou IL-17RA mas não ao IL-25, IL-17A ou IL-17F reduz macrófagos totais BALF (Figura 7e), mas apenas o anticorpo IL-17RA tem um efeito significante.

[00226] O anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou IL-25, mas não ao IL-17A ou IL-17F, significantemente reduz as concentrações BALF IL-13 como mostrado na Figura 8a (Experimento 1) e Figura 8c (Experimento 3). As concentrações BALF IL-13 foram inferiorizadas em camundongos tratados com anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou IL-25 mas não significantemente no experimento 2, possivelmente devido ao nível inferior da indução total e IL-13 comparado com que tipicamente observa neste modelo de camundongo (Figura 8b).

[00227] O anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou IL-25, mas não ao IL-17A ou IL-17F, também reduz as concentrações BALF IL-5 neste modelo de asma OVA de camundongo, mas no experimento 1 apenas o grupo tratado por anti-IL-25 mAb foi significantemente inferior comparado com controle de isotipo dos camundongos tratados por anticorpo (Figura 9a), enquanto no experimento 3 os grupos testados anti-IL-17RB, anti-IL-17RA e anti-IL-25 mAb foram todos significantemente reduzidos (Figura 9c). Além disso, as concentrações BALF IL-5 foram significantemente reduzidas pelo tratamento com anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA e IL-25 no experimento 2 (Figura 9b).

[00228] Similarmente, o anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL- 17RA, ou IL-25, mas não ao IL-17A ou IL-17F, reduz as concentrações IgE de soro total neste modelo de asma OVA de camundongo. No experimento 1, anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou concentrações IgE de soro total reduzido por IL-25, mas apenas o grupo tratado com o anticorpo de neutralização ao IL-25 significantemente reduz as concentrações IgE de soro total comparado com o controle apropriado de anticorpo de isotipo tratado pelo grupo (Figura 10a). No experimento 2, anticorpo de neutralização ao IL- 25, IL-17RB, ou IL-17RA reduz as concentrações IgE de soro total mas não significantemente comparado com o grupo tratado de anticorpo de controle (Figura 10b). No experimento 3, anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL- 17RA, ou IL-25 mas não ao IL-17A ou IL-17F significantemente reduz as concentrações IgE de soro total comparado com seus grupos tratados de anticorpo de controle apropriado (Figura 10c).

[00229] Os pulmões de 8 camundongos de cada grupo de tratamento no experimento 3 foram histologicamente analisados. As seções de tecido pulmonar foram tingidos com H&E ou PAS e então armazenados por um patologista como previamente descrito por exemplo 1. O tratamento com anticorpo de neutralização ao IL-17RB, IL-17RA, ou IL-25 mas não ao IL- 17A ou IL-17F significantemente reduz as fontes de inflamação neste modelo de asma OVA de camundongo (Figura 11).

[00230] Estes resultados demonstram que o tratamento com anti-IL- 17RB mAb M735, anti-IL-17RA mAb M751, ou anti-IL-25 mAb M819 significantemente diminui os parâmetros múltiplos de inflamação nestes modelos de asma induzida por OVA de camundongo, que é considerado como um modelo de condições de inflamação pulmonar tal como asma em humanos. Em contraste, o tratamento com anti-IL-17A mAb ou anti-IL-17F mAb não significantemente diminui a inflamação neste modelo. Deste modo, IL-25 e seus receptores IL-17RB e IL-17RA desempenham um papel em mediar a inflamação neste modelo de asma OVA de camundongo.

Claims

1. Uso de um antagonista de IL-17RA-IL-17RB, em que dito antagonista de IL-17RA-IL-17RB é um anticorpo que se liga especificamente ao IL-17RA humano, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para inibir a ativação do complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB em uma célula que expressa pelo menos IL-17RA e IL-17RB, IN VIVO, de modo que tal ativação do complexo de receptor heteromérico IL- 17RA-IL-17RB por IL-25 é parcial ou totalmente inibida.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a liberação de pelo menos um mediador pró-inflamatório é parcial ou totalmente inibida.

3. Uso de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o mediador pró-inflamatório é selecionado do grupo que consiste de: IL-5, IL-6, IL-8, IL-13, CXCL1, CXCL2, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL- 1β, TNFα, RANK-L, LIF, PGE2, IL-12, MMP3, MMP9, GROα e NO.

4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser em um indivíduo afligido por uma doença autoimune ou inflamatória.

5. Uso de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a doença autoimune ou inflamatória é selecionada do grupo que consiste de Síndrome do Distúrbio Respiratório Agudo (ARDS), síndrome da angústia respiratória, bronquite e hiper-responsividade das vias aéreas associadas com condições induzidas virais, tais como vírus sincicial respiratório (RSV), vírus parainfluenza (PIV), rinovírus (RV) e adenovírus.

6. Uso de acordo com a reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que o medicamento reduz parcial ou totalmente ou melhora os sinais e/ou sintomas da doença autoimune ou inflamatória.

7. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é selecionado do grupo que consiste de: a) um anticorpo, ou um fragmento do mesmo, compreendendo um CDR1 de cadeia leve, um CDR2 de cadeia leve, um CDR3 de cadeia leve de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 38, e um CDR1 de cadeia pesada, um CDR2 de cadeia pesada, um CDR3 de cadeia pesada de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 12; b) um anticorpo, ou um fragmento do mesmo, compreendendo um CDR1 de cadeia leve, um CDR2 de cadeia leve, um CDR3 de cadeia leve de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 40, e um CDR1 de cadeia pesada, um CDR2 de cadeia pesada, um CDR3 de cadeia pesada de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 14; c) um anticorpo, ou um fragmento do mesmo, compreendendo um CDR1 de cadeia leve, um CDR2 de cadeia leve, um CDR3 de cadeia leve de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 42, e um CDR1 de cadeia pesada, um CDR2 de cadeia pesada, um CDR3 de cadeia pesada de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 16; d) um anticorpo, ou um fragmento do mesmo, compreendendo um CDR1 de cadeia leve, um CDR2 de cadeia leve, um CDR3 de cadeia leve de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 43, e um CDR1 de cadeia pesada, um CDR2 de cadeia pesada, um CDR3 de cadeia pesada de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 17; e) um anticorpo, ou um fragmento do mesmo, compreendendo um CDR1 de cadeia leve, um CDR2 de cadeia leve, um CDR3 de cadeia leve de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 45, e um CDR1 de cadeia pesada, um CDR2 de cadeia pesada, um CDR3 de cadeia pesada de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 19; e f) um anticorpo, ou um fragmento do mesmo, compreendendo um CDR1 de cadeia leve, um CDR2 de cadeia leve, um CDR3 de cadeia leve de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 46 e um CDR1 de cadeia pesada, um CDR2 de cadeia pesada, um CDR3 de cadeia pesada de uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 22.

8. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é selecionado do grupo que consiste de: a) um anticorpo ou fragmento compreendendo um domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO. 38 e um domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 12; b) um anticorpo ou fragmento compreendendo um domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO. 40 e um domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 14; c) um anticorpo ou fragmento compreendendo um domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO. 42 e um domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 16; d) um anticorpo ou fragmento compreendendo um domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO. 43 e um domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 17; e) um anticorpo ou fragmento compreendendo um domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO. 45 e um domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 19; e f) um anticorpo ou fragmento compreendendo um domínio variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO. 48 e um domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 22.

9. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo IgG monoclonal humano.

10. Uso de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo IgG2 monoclonal humano.