TWI811957B

TWI811957B - 重組多肽，包含該重組多肽的複合物，以及其用途

Info

Publication number: TWI811957B
Application number: TW111101699A
Authority: TW
Inventors: 馬徹; 李文華; 亞軒楊
Original assignee: 中央研究院
Priority date: 2021-01-14
Filing date: 2022-01-14
Publication date: 2023-08-11
Also published as: TW202233659A; WO2022155403A1

Abstract

本揭示內容是關於一種包含1至20個拷貝的IL-17RB去活化位點(IRIS)序列的重組多肽。本揭示內容亦涵蓋該重組多肽於製備一用於治療癌症之複合物的用途。

Description

重組多肽，包含該重組多肽的複合物，以及其用途

本揭示內容是關於癌症治療的技術領域。更具體來說，本揭示內容是關於一複合物，包含複數個介白素-17受體B (interleukin-17 receptor B，IL-17RB)去活化位點(IL-17RB inactivation site，IRIS)的序列，以及該複合物於治療癌症的用途。

過去，所謂疫苗是指一種用於防止病原性細菌或病毒來感染人類的製劑，且時至今日，疫苗的發展已經取得廣大的成效，舉例來說，已有用於預防天花的牛痘疫苗、用於預防結核病的卡介苗(Bacille Calmette-Guerin (BCG) vaccine)、用於預防B型肝炎的B型肝炎疫苗、用於預防流行性感冒感染的的流行性感冒疫苗等。近年來，也有發展出一類新穎的疫苗類別-癌症疫苗，該疫苗可有效誘發並且持續產生對抗腫瘤的免疫力，其中有些疫苗亦經證實可作為一種配合常規治療(例如外科手術、化學療法，以及放射療法)來使用的潛在輔佐療法，可藉以改善該些常規治療的治療功效。然而，就現今階段而言，對於癌症疫苗的性質-需具備穩健的腫瘤專一性免疫力的激發能力，同時排除其免疫阻力-一事仍備受挑戰。

問題的其中一個關鍵在於，癌症疫苗的發展必須先去找出一個會在癌細胞上表現的標的抗原。並且該特定的會在癌細胞上表現的標的抗原，最好是僅會表現在癌細胞上，並且不表現在正常細胞上，以至於該標的抗原可以被免疫細胞辨識為一種外源外來物，以便使個體的免疫系統可以針對該標的抗原發動一連串的攻擊，最終殲滅該些具有該標的抗原的癌細胞。迄今為止，有眾多的癌症疫苗皆遵循上述原理來發展。

IL-17RB是一種細胞激素受體，它會專一性結合至IL-17B和IL-17E (或稱為IL-25)，但不會結合至IL-17A或IL-17C。有報導指出，IL-17RB的表現量會成比例地表現在一些具有增殖性和侵犯能力的癌細胞中，像是乳癌細胞、子宮頸癌細胞、胃癌細胞、肺癌細胞、胰腺癌細胞，以及甲狀腺癌細胞等。此外，由於IL-17RB會過量表現於癌細胞中，而阻斷IL-17B/E–IL-17RB的訊息傳導途徑則會破壞癌症的惡性(malignancy)特性，因此IL-17RB可作為一種用於治療癌症的治療標的。然而，時下的治療策略是採用抗-IL-17RB單株抗體來作為治療藥劑，但囿於抗體的生產成本較高且作用時間不長的緣故，抗體治療方式並不能帶來令人滿意的治療成效。

有鑑於此，相關領域亟需一種可用以阻斷IL-17RB訊息傳導途徑的新穎方法，據以提供一種用於治療癌症的替代性工具。

下文呈現本揭示內容的簡單概要，以利讀者對本揭示內容有基本的理解。本概要並非對本揭示內容的廣泛性概觀，也非用以鑑別本揭示內容的關鍵性/決定性元件，或勾勒本揭示內容的範圍。它唯一的目的在於以一種簡化的形式呈現本揭示內容某些概念，作為後續呈現更多詳細說明的序幕。

如在本文中所實施和廣泛描述的，本揭示內容的其中一態樣是關於一種重組多肽，包含一1至20個拷貝(copy)的介白素-17受體B (IL-17RB)去活化位點(IRIS)序列，該序列具有一與序列編號：1或序列編號：2至少85％之序列相似度的胺基酸序列，其中當該重組多肽中具有大於一個拷貝的IRIS序列時，各拷貝的IRIS序列是彼此串聯連接。

依據本揭示內容的一特定實施方式，在本揭示內容重組多肽中，該IRIS序列具有該序列編號：1或序列編號：2的胺基酸序列。

依據本揭示內容的一特定實施方式，本揭示內容重組多肽包含兩個拷貝的IRIS序列。

非必要性地，本揭示內容重組多肽可進一步地在其N-端或C-端或二端進行修飾，以防止該重組多肽與該連接子之間發生不想要的反應。依據本揭示內容的某些可任選的實施方式，該重組多肽的N-端具有乙醯化(acetylated)、甲醯化(formylated)、甲基化(methylated)、氨基甲醯化(carbamylated)、聚乙二醇化(pegylated)、磷酸化(phosphorylated)，或醣基化(glycosylated)。此外或可替代地，該重組多肽的C-端具有醯胺化(amidated)、醣基磷脂醯肌醇化(glypiated)、生物素化(biotinylated)，或醣基化。

本揭示內容的另一態樣是關於一種複合物於製備一癌症疫苗的用途；該複合物包含一載體蛋白；複數個本揭示內容重組多肽；以及複數個連接子，用以連接該複數個重組多肽與該載體蛋白；其中，各該連接子的其中一端是連接至各該重組多肽，且另一端是連接至該載體蛋白，並且個別是藉由NHS酯胺反應(NHS ester amine reaction)、硫代琥珀醯亞胺反應(thio-succinimide reaction)、吡啶二硫醇對巰基反應(pyridyldithiol to sulfhydryl reaction)、溴乙醯對巰基反應(bromoacetyl to sulfhydryl reaction)，或碘乙醯對巰基反應(iodoacetyl to sulfhydryl reaction)來進行連接。

適用於本揭示內容複合物中的載體蛋白包括，但不限於，炭疽桿菌水腫因子(edema factor，EF)、炭疽桿菌致死因子(lethal factor，LF)、牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)、CRM9、CRM45、CRM102、CRM103、CRM107、CRM176、CRM197、CRM228、白喉類毒素、大腸桿菌不耐熱性腸毒素(heat-labile enterotoxin，LT)、大腸桿菌耐熱性腸毒素(heat-stable enterotoxin，ST)、人類血清白蛋白、鑰孔笠貝血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin，KLH)、卵白蛋白(ovalbumin)、百日咳類毒素、肺炎球菌黏附素蛋白A (pneumococcal adhesin protein A，PsaA)、肺炎球菌表面蛋白A (pneumococcal surface protein A，PspA)、肺炎鏈球菌溶血素(pneumolysin)、孔蛋白(porin)、綠膿桿菌外毒素A (exotoxin A)、結核菌素、破傷風類毒素、運鐵蛋白結合蛋白(transferrin binding protein)，以及其組合。在本揭示內容的一特定實施方式中，該載體蛋白是CRM197 (序列編號：13)。

依據本揭示內容的某些實施方式，該連接子可以是琥珀醯亞胺基3-(溴乙醯胺)丙酸鹽(succinimidyl 3-(bromoacetamido) propionate，SBAP)、琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-羧酸鹽(succinimidyl 4-(N-maleimido methyl) cyclohexane-1-carboxylate，SMCC)，或N-β-馬來醯亞胺丙基-羥基琥珀醯亞胺酯(N-β-maleimidopropyl-oxysuccinimide ester，BMPS)。在本揭示內容的一特定實施例中，該連接子是SBAP。

進一步地，本揭示內容複合物中的重組多肽可進一步地在其N-端和/或C-端進行修飾。依據本揭示內容的某些可任選的實施方式，該重組多肽的N-端具有乙醯化、甲醯化、甲基化、氨基甲醯化、聚乙二醇化、磷酸化，或醣基化。此外或可替代地，該重組多肽的C-端具有醯胺化、醣基磷脂醯肌醇化、生物素化，或醣基化。

本揭示內容亦涵蓋一種免疫組合物，包含本揭示內容複合物，以及一藥學上可接受的載體。依據本揭示內容的某些實施方式，本揭示內容免疫組合物進一步地包含一佐劑。

本揭示內容的再另一態樣是關於一種用以治療一個體之癌症的方法，其藉由使用本揭示內容複合物或免疫組合物來進行。具體來說，該方法包含對該個體投予一有效量之本揭示內容複合物或免疫組合物的步驟。

例示性之可藉由本揭示內容方法來治療的癌症包括，但不限於，膀胱癌、膽管癌、骨癌、腦瘤、乳癌、子宮頸癌、大腸直腸癌、食道癌、上皮癌、胃癌、胃腸道間質瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)、神經膠質瘤、類淋巴系造血組織腫瘤、肝癌、卡波西氏肉瘤、血癌、肺癌、淋巴瘤、腸癌、黑色素瘤、骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、視網膜母細胞瘤、卵巢癌、腎細胞癌、脾臟癌、鱗狀細胞癌、甲狀腺癌，以及甲狀腺濾泡癌。在本揭示內容的一特定實施方式中，該個體具有乳癌。

依據本揭示內容的某些實施方式，該癌症可以是一原位癌( in situcancer)或一轉移性癌症。在一特定實施方式中，該癌症是一轉移性癌症。

依據本揭示內容的某些實施方式，該個體是人類。

在參閱以下的詳細說明和附隨圖式後，本揭示內容諸多伴隨的特徵和優點當可輕易瞭解。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。

I. 定義

為方便起見，本說明書、實施例和所附申請專利範圍中所使用的特定專有名詞集中在此。除非本說明書另有定義，否則此處所使用的科學與技術詞彙的含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。並且，在和上下文不相衝突的情形下，本說明書所使用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型，而所使用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。具體而言，在本說明書與申請專利範圍中，單數形式「一」(a、an和the)包括複數參考值，但依據上下文而另有指示者除外。此外，在本說明書與申請專利範圍中，「至少一」(at least one)與「一或多」(one or more)表述方式的意義相同，兩者都代表包含了一、二、三或更多。除非另有說明，否則本揭示內容的實踐將採用分子生物學、合成化學、結構生物學和免疫學的常規技術，這些技術均屬於本領域的技術範圍內。這類技術已在公開文獻中詳細闡釋。

雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10％、5％、1％或0.5％之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比(例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者)均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少，應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。

本文所使用之「連接子」(linker)一詞是指，能夠以穩定且共價的方式將本揭示內容重組多肽或封端蛋白(cap protein)與載體蛋白(例如CRM197)進行連接的任何化學團簇(chemical moiety)。連接子可以是，在本揭示內容重組多肽、封端蛋白或載體蛋白於保持活性的條件下，對於酸誘導的切割、光誘導的切割、肽酶(peptidase)誘導的切割、酯酶(esterase)誘導的切割，以及二硫鍵(disulfide bond)的切割等，具有敏感性或基本上具有抗性。適當的連接子是本領域所熟知的，較佳地，連接子會與本揭示內容重組多肽、封端蛋白或載體蛋白上的胺基或巰基結合。因此，連接子較佳是包含可以藉由鎖定(targeting)胺基或巰基且與該些基團形成結合的官能基。

本文所使用之「複合物」(conjugate)一詞是指一種與本揭示內容重組多肽和/或封端蛋白偶聯的載體蛋白(例如CRM197)，並且具有式(I)的結構：式(I) 其中z代表與載體蛋白偶聯的連接子數量，m代表進一步與重組多肽偶聯的連接子數量；z和m個別是1至100之間的整數，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99，或100。首先，與載體蛋白偶聯的連接子數量(即z值)可能會隨著載體蛋白的種類而異(該載體蛋白表面具有一定數量的可與連接子偶聯的活性位點)，也可能會隨著進行偶聯反應的條件而異。舉例來說，載體蛋白CRM197理論上約有40個可以與連接子偶聯的活性位點，但實際上可能約只有20或25個連接子會偶聯在其上(即z = 20或25)。在20個連接子與載體蛋白偶聯(即z = 20)的情況下，其中當約有17個連接子進一步與本揭示內容重組多肽偶聯(即m = 17)時，則可能會約有3個剩餘的連接子可進一步用於與封端蛋白偶聯(即z-m = 3)。在25個連接子與載體蛋白表面偶聯(即z = 25)的情況下，其中當約有17個連接子進一步與本揭示內容重組多肽偶聯(即m = 17)時，則可能會約有8個剩餘的連接子可進一步用於與封端蛋白偶聯(即z-m = 8)。

本文所使用之「治療」(treatment或treating)一詞可以是指一種治癒性(curative)或舒緩性(palliative)的措施。具體來說，本文所使用之「治療」一詞，是指將本揭示內容重組多肽、複合物、免疫組合物和方法施用於一個體，其中該個體是罹患癌症、具有與癌症相關的症狀，或具有繼發於癌症的疾病或病症等，以期達到對於一或多種癌症的症狀或病徵具有部分或完全地減輕、改善、緩解、延遲發作、抑制病程進展、降低嚴重性，和/或降低發病率的目的。

「癌症」(cancer)和「腫瘤」(tumor)一詞在本揭示內容中可交替使用，並且較佳是指或描述在哺乳動物中，通常具有一種不受調控(unregulated)的細胞生長為特徵的生理狀況。這方面的癌症包括原位癌、轉移性癌症，和/或抗藥性癌症。

「個體」(subject)或「病患」(patient)一詞是指，可以用本揭示內容重組多肽、複合物、免疫組合物，以及方法來治療的動物，包括人類物種。除非明確指出一種性別，否則「個體」或「病患」一詞意指男性和女性。據此，「個體」或「病患」一詞包含任何可能受益於癌症治療的哺乳動物。例示性之「個體」或「病患」包括，但不限於，人類、大鼠、小鼠、天竺鼠、猴子、豬、山羊、乳牛、馬、狗、貓、鳥，以及家禽。在一例示性的實施方式中，該個體是小鼠。在另一例示性的實施方式中，該個體是人類。

「投予」(administered、administering或administration)一詞在本揭示內容中可交替使用，用以指稱將本揭示內容重組多肽、複合物、免疫組合物，以及方法施用於一有需要之個體。

本文所使用之「一有效量」(an effective amount)一詞是指一有效的量，在必要的劑量和時間內，對於癌症治療可達到欲求的治療結果。舉例來說，在治療癌症時，本揭示內容重組多肽、複合物、免疫組合物，以及方法將有效防止癌細胞擴散和/或生長。一有效量之藥劑並非必須治癒該疾病或病症，但會對該疾病或病症提供治療，從而延遲、阻礙或防止該疾病或病症的發作，或緩解該疾病或病症症狀。具體有效量或足量會因多種因素而有所差異，這類因素例如待治療的具體病症、病患的身體狀況(例如，病患的體重、年齡或性別)、待治療的哺乳動物或動物的種類、治療的持續時間、並行療法的性質(若有的話)，以及所採用的具體配方等。一有效量可以表示成，舉例來說，活性藥劑的總質量(例如，以克、毫克或微克為單位)，或活性藥劑質量與體重的比率(例如，以毫克/公斤(mg/kg)為單位)。一有效量可以是以適當的形式分為一劑、兩劑或多劑，據以在整個指定期間內一次、兩次或多次施用。較佳地，一有效量是指人體等效劑量(human equivalent dose，HED)，它是用於人類個體的最大安全劑量。HED可以是按照美國食品和藥物管理局(Food and Drug Administration，FDA)所發布的行業指南「估計成人健康志願者治療在初始臨床試驗中的最大安全起始劑量」(Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)來估算用於人類個體的最大安全劑量。

II. 發明詳述

本揭示內容至少部分是基於，發現到阻斷IL-17RB去活化位點(IRIS)的表位可中斷IL-17RB訊息傳導，從而防止癌細胞擴散和/或生長。基於上述發現，本揭示內容旨在提供一種新穎的抗癌策略，其中開發了一種針對IRIS表位的癌症疫苗，該疫苗可以觸發宿主的免疫反應，以阻斷IRIS表位的功能並防止癌症(特別是針對IRIS過度表現的癌症)進行擴散和/或生長。

1. 重組多肽

據此，本揭示內容的第一態樣是涉及一種包含IRIS表位的重組多肽。依據本揭示內容的某些實施方式，該IRIS表位是來自小鼠(即，mIRIS)，並具有一與序列編號：1至少85％之序列相似度的胺基酸序列，例如與序列編號：1至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，或100％之序列相似度的胺基酸序列。依據本揭示內容的某些實施方式，該IRIS表位是來自人類(即，hIRIS)，並具有一與序列編號：2至少85％之序列相似度的胺基酸序列，例如與序列編號：2至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，或100％之序列相似度的胺基酸序列。在一特定的實施例中，該mIRIS具有該序列編號：1的胺基酸序列。在另一實施例中，該hIRIS具有該序列編號：2的胺基酸序列。

取決於所需目的的不同，該重組多肽可以包含1至20個拷貝(即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19，或20個拷貝)的IRIS(即，mIRIS或hIRIS)序列。較佳地，本揭示內容重組多肽包含1至10個拷貝的IRIS；更佳地，本揭示內容重組多肽包含1至5個拷貝的IRIS。依據本揭示內容的一操作實施例，本揭示內容重組多肽包含兩個拷貝的IRIS序列。在該重組多肽中具有大於一個拷貝的IRIS情況下，各拷貝的IRIS是彼此串聯連接。

在本揭示內容的一實施方式中，本揭示內容重組多肽包含一個拷貝的mIRIS (即，mIRIS1)，且具有該序列編號：3的胺基酸序列。在本揭示內容的另一實施方式中，本揭示內容重組多肽包含一個拷貝的hIRIS (即，hIRIS1)，且具有該序列編號：4的胺基酸序列。在本揭示內容的另一實施方式中，本揭示內容重組多肽包含兩個拷貝的mIRIS (即，mIRIS2)，且具有該序列編號：5的胺基酸序列。在本揭示內容的另一實施方式中，本揭示內容重組多肽包含兩個拷貝的hIRIS (即，hIRIS2)，且具有該序列編號：6的胺基酸序列。在本揭示內容的再另一實施方式中，本揭示內容重組多肽包含五個拷貝的mIRIS (即，mIRIS5)，且具有該序列編號：7的胺基酸序列。在本揭示內容的再另一實施方式中，本揭示內容重組多肽包含五個拷貝的hIRIS (即，hIRIS5)，且具有該序列編號：8的胺基酸序列。在本揭示內容的再另一特定實施方式中，本揭示內容重組多肽包含十個拷貝的mIRIS (即，mIRIS10)，且具有該序列編號：9的胺基酸序列。在本揭示內容的再另一實施方式中，本揭示內容重組多肽包含十個拷貝的hIRIS (即，hIRIS10)，且具有該序列編號：10的胺基酸序列。在本揭示內容的又再另一特定實施方式中，本揭示內容重組多肽包含二十個拷貝的mIRIS (即，mIRIS20)，且具有該序列編號：11的胺基酸序列。在本揭示內容的又再另一特定實施方式中，本揭示內容重組多肽包含二十個拷貝的hIRIS (即，hIRIS20)，且具有該序列編號：12的胺基酸序列。

2. 複合物

本揭示內容的另一態樣是關於一種用以製備一癌症疫苗的複合物。該複合物包含一載體蛋白；複數個本揭示內容重組多肽；以及複數個連接子，用以連接該複數個重組多肽與該載體蛋白；其中，各該連接子的其中一端是連接至各該重組多肽，且另一端是連接至該載體蛋白，並且個別是藉由NHS酯胺反應、硫代琥珀醯亞胺反應、吡啶二硫醇對巰基反應、溴乙醯對巰基反應，或碘乙醯對巰基反應來進行連接。

取決於目的的不同，該載體蛋白可以是炭疽桿菌水腫因子(EF)、炭疽桿菌致死因子(LF)、牛血清蛋白(BSA)、CRM9、CRM45、CRM102、CRM103、CRM107、CRM176、CRM197、CRM228、白喉類毒素、大腸桿菌不耐熱性腸毒素(LT)、大腸桿菌耐熱性腸毒素(ST)、人類血清白蛋白、鑰孔笠貝血藍蛋白(KLH)、卵白蛋白、百日咳類毒素、肺炎球菌黏附素蛋白A (PsaA)、肺炎球菌表面蛋白A (PspA)、肺炎鏈球菌溶血素、孔蛋白、綠膿桿菌外毒素A、結核菌素、破傷風類毒素，或運鐵蛋白結合蛋白。依據本揭示內容的一較佳實施方式，該載體蛋白是CRM197，且包含該序列編號：13的胺基酸序列。

依據某些實施方式，本揭示內容重組多肽是藉由一連接子來連接至該載體蛋白上，其中該連接子的其中一端具有NHS酯基，且另一端具有馬來亞醯胺(maleimide)基。在該些實施方式中，該連接子的NHS酯基是經由NHS酯胺反應來連接至該重組多肽的胺基，以及該連接子的馬來亞醯胺基是經由硫代琥珀醯亞胺反應來連接至該載體蛋白的巰基。例示性之連接子具有一NHS基和一馬來亞醯胺基，該連接子包括，但不限於，N-(α-馬來醯亞胺乙醯氧基)琥珀醯亞胺酯(N-(α-maleimidoacetoxy)succinimide ester，AMAS)、BMPS、N-ε-馬來醯胺基己醯基-羥基琥珀醯亞胺酯(N-ε-malemidocaproyl-oxysuccinimide ester，EMCS)、N-(γ-馬來醯亞胺丁醯氧基)琥珀醯亞胺酯(N-(γ-maleimidobutyryloxy)succinimide ester，GMBS)、N-κ-馬來醯亞胺十一烷醯基-氧代磺基琥珀醯亞胺酯(N-κ-maleimidoundecanoyl-oxysulfosuccinimide ester；磺基-KMUS (sulfo-KMUS))、m-馬來醯亞胺苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester，MBS)、SMCC、琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-羧基-(6-胺基己酸))(succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxy-(6-amidocaproate)，LC-SMCC)、琥珀醯亞胺基4-(p-馬來醯亞胺苯基)丁酸鹽(succinimidyl 4-(p-maleimidophenyl)butyrate，SMPB)，以及琥珀醯亞胺基 6-((β-馬來醯亞胺基丙醯胺)己酸鹽)(succinimidyl 6-((β-maleimidopropionamido)hexanoate)，SMPH)。在本揭示內容的一較佳實施例中，該連接子是SMCC。在本揭示內容的另一較佳實施例中，該連接子是BMPS。

依據某些實施方式，本揭示內容重組多肽是藉由一連接子來連接至該載體蛋白上，其中該連接子的其中一端具有NHS酯基，且另一端具有溴乙醯或碘乙醯基。在該些實施方式中，該連接子的NHS酯基是經由NHS酯胺反應來連接至該重組多肽的胺基，以及該連接子的溴乙醯或碘乙醯基是經由溴乙醯對巰基反應或碘乙醯對巰基反應來連接至該載體蛋白的巰基。例示性之連接子是SBAP、琥珀醯亞胺基碘乙酸(succinimidyl iodoacetate，SIA)，或琥珀醯亞胺基(4-碘乙醯)胺基苯甲酸酯(succinimidyl (4-iodoacetyl)aminobenzoate，SIAB)。在本揭示內容的一較佳實施例中，該連接子是SBAP。

依據某些實施方式，本揭示內容重組多肽是藉由一連接子來連接至該載體蛋白上，其中該連接子的其中一端具有NHS酯基，且另一端具有吡啶二硫醇基。在該些實施方式中，該連接子的NHS酯基是經由NHS酯胺反應來連接至該重組多肽的胺基，以及該連接子的吡啶二硫醇基是經由吡啶二硫醇對巰基反應來連接至該載體蛋白的巰基。這類連接子是，舉例來說，4-琥珀醯亞胺氧羰基-α-甲基-α(2-吡啶二硫基)甲苯(4-succinimidyloxycarbonyl-α-methyl-α(2-pyridyldithio)toluene，SMPT)、琥珀醯亞胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸鹽(succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate，SPDP)，或琥珀醯亞胺基6-(3(2-吡啶二硫基)丙醯胺)己酸鹽(succinimidyl 6-(3(2-pyridyldithio)propionamido)hexanoate，LC-SPDP)。

非必要性地，本揭示內容複合物進一步地包含複數個個別連接至該載體蛋白表面的封端蛋白。例示性之適用於本揭示內容中的封端蛋白包括，但不限於，腺相關病毒(adeno-associated virus，AAV)封端蛋白、β-肌動蛋白原(β-actinin)、CapG、CapZ、Cap32/34、CARMIL、細胞遲緩素(cytochalasin)、Ena/VASP、f-肌動蛋白-封端蛋白(f-actin-capping protein)、形成素(formins)、凝溶膠蛋白(gelsolin)、人類巨噬細胞-封端蛋白(human macrophage-capping protein)，以及肌營養素(myotrophin)。該封端蛋白與該載體蛋白之間的連接類似於該重組多肽與該載體蛋白之間的連接。舉例來說，該封端蛋白是藉由一連接子來連接至該載體蛋白上，其中該連接子的其中一端具有NHS酯基，且另一端具有馬來亞醯胺基(例如SMCC或BMPS)，其中該連接子的NHS酯基是經由NHS酯胺反應來連接至該封端蛋白的胺基，以及該連接子的馬來亞醯胺基是經由硫代琥珀醯亞胺反應來連接至該載體蛋白的巰基。或者是，該封端蛋白是藉由一連接子來連接至該載體蛋白上，其中該連接子的其中一端具有NHS酯基，且另一端具有溴乙醯或碘乙醯基(例如SBAP)，其中該連接子的NHS酯基是經由NHS酯胺反應來連接至該封端蛋白的胺基，以及該連接子的溴乙醯或碘乙醯基是經由溴乙醯對巰基反應或碘乙醯對巰基反應來連接至該載體蛋白的巰基。在另一實施例中，該封端蛋白是藉由一連接子來連接至該載體蛋白上，其中該連接子的其中一端具有NHS酯基，且另一端具有吡啶二硫醇基(例如SMPT)，其中該連接子的NHS酯基是經由NHS酯胺反應來連接至該封端蛋白的胺基，以及該連接子的吡啶二硫醇基是經由吡啶二硫醇對巰基反應來連接至該載體蛋白的巰基。

依據某些實施方式，具有複數個連接子連接的載體蛋白是「活化態的載體蛋白」(activated carrier protein)，而沒有任何連接子連接的載體蛋白是「未偶聯的載體蛋白」(unconjugated carrier protein)。此外，活化態的載體蛋白與未偶聯的載體蛋白之間的分子量差異，可能會來自於因進行化學活化反應的緣故而導致分子量增加。「平均活化度」(average activation degree，AAD)是用於闡述複數個連接子連接至載體蛋白表面的連接量(即，與各載體蛋白結合的連接子平均數量)，所述AAD是藉由以下算式來計算：其中CX、C和X個別代表活化態的載體蛋白的分子量、未偶聯的載體蛋白的分子量，以及每次活化的淨增重。依據本揭示內容的某些實施方式，AAD的範圍是約介於1至100之間，舉例來說，AAD的範圍可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99，或100；較佳地，AAD的範圍是約介於1至50之間；更佳地，AAD的範圍是約介於5至25之間；再更佳地，AAD的範圍是約介於10至20之間。依據本揭示內容的一特定實施方式，AAD的範圍約為15。

AAD的數值可能會隨著載體蛋白的種類而變化。依據某些實施方式，該載體蛋白是CRM197，且該AAD的範圍可以是介於10至30之間。在一實施例中，該CRM197的AAD值為15。在另一實施例中，該CRM197的AAD值是介於20至25之間。

進一步地，活化態的載體蛋白可進一步與重組多肽偶聯。在此情況下，「多肽-蛋白比例」(peptide-protein ratio，PPR)是用於闡述複數個重組多肽藉由該連接子連接至該活化態的載體蛋白表面的偶聯量(即，與各活化態的載體蛋白結合的重組多肽平均數量)，所述PPR是藉由以下算式來計算：其中CXPc和Int.c個別代表偶聯數為c的活化態的載體蛋白(例如CRM197)的分子量和訊號強度，而CX和nX個別代表活化態的載體蛋白(例如CRM197)的分子量和每次進行偶聯反應後的淨增重。一般來說，PPR值是少於或等於AAD值，且PPR一般是約介於1至100之間，舉例來說，PPR是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99，或100；較佳地，PPR是約介於1至50之間；更佳地，PPR是約介於1至25之間；再更佳地，PPR是約介於1至10之間。依據本揭示內容的某些較佳實施方式，PPR約為2、3、5、7、8，或10。

PPR可能會隨著載體蛋白的種類而變化。依據某些實施方式，該載體蛋白是CRM197，且該PPR的範圍可以是介於5至20之間。在一實施例中，該CRM197的PPR值為10。

非必要性地，在該活化態的載體蛋白與重組多肽偶聯後，該複合物可進一步與封端蛋白偶聯，據以封蓋(cap)該活化態的載體蛋白表面上沒有被重組多肽佔據的殘餘游離態連接子。封端蛋白可經由與上述相同或相似的方法來與該活化態的載體蛋白進行偶聯/耦接(coupled)。封端步驟(capping step)可以減少複合物上發生不想要的化學反應，從而增進該複合物的穩定性。

上述分子(包括活化態的載體蛋白、未偶聯的載體蛋白、複合物)的分子量可藉由本領域所熟知的方法來確定，例如，凝膠過濾法(也稱為尺寸排阻色譜法(size exclusion chromatography，SEC))；梯度電泳法(例如，原態聚丙烯醯胺凝膠電泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis，native-PAGE)、十二烷基硫酸鈉-PAGE (sodium dodecyl sulfate-PAGE，SDS-PAGE))；質譜法(例如，基質輔助雷射解吸/電離-飛行時間質譜測定法(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)、MALDI-TOF/TOF-MS、基質輔助雷射解吸/電離-三重四極桿-串聯質譜測定法(matrix assisted laser desorption/ionization-triple quadrupole-tandem mass spectrometry，MALDI-QqQ-MS/MS)、表面輔助雷射解吸/電離-飛行時間質譜測定法(surface-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry，SALDI-TOF-MS)、表面增強雷射解吸/電離-飛行時間質譜測定法(surface-enhanced laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)，氣相色譜-質譜測定法(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)、液相色譜-質譜測定法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS)、毛細管電泳-質譜測定法(capillary electrophoresis-mass spectrometry，CE-MS)、離子遷移譜-質譜測定法(ion-mobility spectrometry-mass spectrometry，IMS-MS))。依據本揭示內容的一操作實施例，分子量是藉由凝膠過濾法和MALDI-TOF-MS來確定。

本揭示內容複合物可以與一藥學上可接受的載體一起配製成一藥物組合物。藥學上可接受的載體是任何適用於活體內給藥的載體。適當地，藥學上可接受的載體是可用於口服、鼻用或經黏膜來遞送的載體。藥學上可接受的載體可以包括水、緩衝溶液、葡萄糖溶液，或細菌培養液。藥物組合物中的附加組成成分可以適度地包括賦形劑，例如穩定劑、防腐劑、稀釋劑、乳化劑，以及潤滑劑等。例示性之藥學上可接受的載體或稀釋劑包括穩定劑，例如，碳水化合物(例如，山梨糖醇、甘露糖醇、澱粉、蔗糖、葡萄糖、葡聚醣)；蛋白質(例如，白蛋白或酪蛋白(casein))；含蛋白質的製劑(例如，牛血清或脫脂牛奶)；以及緩衝液(例如，磷酸鹽緩衝液)。特別是當將這類穩定劑添加到藥學組合物中時，該藥學組合物可適用於冷凍乾燥(freeze-drying)或噴霧乾燥(spray-drying)。

或者是，本揭示內容複合物可以與一佐劑一起配製成免疫組合物。「佐劑」是指一種化合物，當該化合物與一製劑中的特定免疫原(例如，本揭示內容複合物)組合使用時，將會導致專一性或非專一性地增強、改變或修飾所得之免疫反應。免疫反應的改變包括用以增強或擴大抗體和細胞免疫反應中的任一種或兩種的專一性。免疫反應的改變也可能意味著減少或抑制某些抗原的專一性免疫反應。佐劑的實例包括油類乳化劑(例如，完全或不完全弗氏(Freund’s)佐劑)、水包油乳化劑佐劑(例如，里比(Ribi)佐劑系統)、含有胞壁醯(muramyl)二肽的語法(syntax)佐劑製劑、鋁鹽佐劑(例如，氫氧化鋁、鋁鹽佐劑(Alhydrogel))、聚陽離子肽(例如，聚精胺酸)、含有非甲基化胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸的寡脫氧核苷酸、人類生長激素、趨化激素(例如，防禦素1 (defensin-1)或防禦素2 (defensin-2)、RANTES、MIP1-α、MIP-2)、細胞激素(例如，介白素-1β、介白素-2、介白素-6、介白素-8、介白素-10或介白素-12；干擾素-γ (IFN-γ)；腫瘤壞死因子-α (TNF-α)；或粒細胞-單核細胞-集落刺激因子(GM-CSF))、胞壁醯二肽變異體(例如，莫拉丁酯(murabutide)、蘇胺醯-MDP(threonyl-MDP)，或胞壁醯三肽)、熱休克蛋白、利什曼原蟲真核起始因子( Leishmaniaeukaryotic initiation factor，LeIF)、細菌ADP-核糖基化外毒素(bacterial ADP-ribosylating exotoxin，bARE)、QS21、羽根A (Quill A)，以及N-乙醯胞壁醯-L-丙胺醯-D-異穀胺醯-L-丙胺酸-2-[1,2-二棕櫚醯-s-甘油-3-(羥基磷醯氧基)]乙醯胺(N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamyl-L-alanine-2-[1,2-dipalmitoyl-s-glycero-3-(hydroxyphosphoryloxy)]ethylamide，MTP-PE)。佐劑可以是與抗原一起施用或單獨施用，並且可以是通過與抗原相同或不同的途徑來施用。單一佐劑分子可以是同時具有佐劑和抗原二者的特性。在一操作實施例中，該佐劑是鋁鹽佐劑Alhydrogel。

3. 用以治療癌症的方法

據此，本揭示內容的另一態樣是提供一種用以治療癌症的方法。該方法利用了第2章節中所述之本揭示內複合物，其中將一有效量之本揭示內容複合物施用於一罹患癌症的個體，據以遏止(suppress)或抑制(inhibit)癌症的生長和/或轉移。

依據本揭示內容的某些實施方式，所述癌症可以是膀胱癌、膽管癌、骨癌、腦瘤、乳癌、子宮頸癌、大腸直腸癌、食道癌、上皮癌、胃癌、胃腸道間質瘤(GIST)、神經膠質瘤、類淋巴系造血組織腫瘤、肝癌、卡波西氏肉瘤、血癌、肺癌、淋巴瘤、腸癌、黑色素瘤、骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、視網膜母細胞瘤、卵巢癌、腎細胞癌、脾臟癌、鱗狀細胞癌、甲狀腺癌，以及甲狀腺濾泡癌。在本揭示內容的一特定實施方式中，該癌症為是乳癌。不受理論所限制，本揭示內容所述癌症是一種原位癌或轉移性癌症。在一特定實施方式中，該癌症是一轉移性癌症。

本揭示內容複合物的有效量會隨著個體的不同而有所差異，這取決於如上文所述之相關因素。一治療有效量可以是涵蓋在單一劑量或多次劑量內。在某些實施方式中，當向一個體施用多次劑量時，對該個體施用多劑的頻率是每天三劑、每天兩劑、每天一劑、每隔天一劑、每三天一劑、每週一劑、每隔週一劑、每月一劑、每隔月一劑、每季一劑、每半年一劑，或每年一劑。在某些實施方式中，對該個體施用多劑的頻率是每週一劑。在某些實施方式中，對該個體施用多劑的頻率是每隔週一劑。在某些實施方式中，當向一個體施用多次劑量時，該多次劑量的第一劑與最後一劑之間的期間為一天、兩天、四天、一週、兩週、三週、一個月、兩個月、三個月、四個月、六個月、九個月、一年、兩年、三年、四年、五年、七年、十年、十五年、二十年，或是該個體的一生。在一特定實施方式中，該多次劑量的第一劑與最後一劑之間的期間約為三週。

在某些實施方式中，本揭示內容所述劑量(例如，單一劑量或多次劑量中的任一劑量)個別包括約介於10奈克與100微克(包括端點值)之間的本揭示內容複合物，舉例來說，包括約為10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990奈克、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99，或100微克的本揭示內容複合物。在某些實施方式中，本揭示內容所述劑量個別包括介於50奈克與5微克之間(包括端點值)的本揭示內容複合物。在一特定實施方式中，本揭示內容所述劑量個別包括500奈克(包括端點值)的本揭示內容複合物。

在本揭示內容方法中，本揭示內容複合物可以通過本領域技術人員藉由已知的適當途徑來投予，包括口服、靜脈內、動脈內、心內、皮內、皮下、經皮，或肌肉內等途徑來投予。一般來說，最適當的給藥途徑會取決於各種不同的因素，包括藥劑的性質(例如，該藥劑在血液循環中的穩定性)，和/或該個體的狀況(例如，該個體是否能夠耐受靜脈內給藥)。

據此，本揭示內容亦涵蓋一種包含本揭示內容複合物的藥物組合物，以及本揭示內容複合物於製備一癌症疫苗的用途等範圍。

下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明，且不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻，其全文皆視為本說明書的一部分。

實施例

材料和方法

1. 複合物的製備

製備 CRM197 原液 (stock solution)：首先，將凍乾的CRM197溶解在預冷的去離子水中；利用30千道耳頓(kDa)之截留分子量(molecular weight cutoff，MWCO)的超離心過濾器組件進行三輪連續過濾，將溶劑更換為預冷的PBS；並將溶液的最終濃度調整至1毫克/毫升。所有的步驟均在4°C下或冰上進行。

以 SBAP 進行活化：使用0.38毫克/毫升之CRM197和SBAP (兩者的莫耳比例為CRM197：SBAP = 1：240)來進行以SBAP活化CRM197的步驟，並以0.1體積莫耳濃度(M)之磷酸鹽緩衝液將混合物的pH值調整至pH = 8。避光反應2小時，在此期間充分攪拌混合物，之後將混合物的溶劑交換成去離子水以終止反應，其中該溶劑交換是藉由使用30千道耳頓之截留分子量的超離心過濾器組件進行三輪連續過濾來進行。收集一小部分混合物以用於後續的MALDI-TOF分析。接著，使用30千道耳頓之截留分子量的超離心過濾器組件進行另外三輪連續過濾，以0.1體積莫耳濃度之磷酸鹽緩衝液將混合物的pH值進一步調整至pH = 9。所有的步驟均在4°C下或冰上進行。

進行多肽偶聯：使用0.15毫克/毫升之CRM197和多肽(兩者的莫耳比例為CRM197：多肽 = 1：30、1：60或1：90)進行多肽偶聯的步驟，並以0.1體積莫耳濃度之磷酸鹽緩衝液將混合物的pH值調整至pH = 9。避光反應2小時，在此期間充分攪拌混合物，之後將10毫克之L-半胱胺酸直接加入混合物中以終止反應，然後使其反應15分鐘。接下來，使用30千道耳頓之截留分子量的超離心過濾器組件進行三輪連續過濾，將混合物的溶劑交換成去離子水。收集一小部分混合物以用於後續的MALDI-TOF分析。之後，使用30千道耳頓之截留分子量的超離心過濾器組件進行三輪連續過濾，將混合物的溶劑從去離子水進一步交換成PBS。最後，在凍乾前使用0.22微米之過濾組件過濾該複合物。在凍乾前，所有的步驟均在4°C下或冰上進行。

2. 質譜法

將適當去鹽(desalted)的樣本(包括載體蛋白、載體：XLnkr，以及疫苗)與基質(含有50％之乙腈、0.1％之三氟乙酸，以及10毫克/毫升之芥子酸(sinapinic acid))以1：1的比例於石蠟封口膜(parafilm)上混和，之後在MALDI-TOF-MS樣本盤上進行共結晶(co-crystalisation)。接著以MALDI-TOF/TOF-MS儀器檢測樣本的荷質比(m/z)值。使用薩維斯基-高萊(Savizky-Golay)方法和敏感性非線性迭代峰值(sensitive nonlinear iterative peak，SNIP)方法對原始數據進行事後平滑(post-smoothing)處理和背景扣除處理，其中半窗口(half window)值和迭代值分別為30和190。

3. 細胞培養

將人類胚胎腎臟細胞株293T (HEK293T)、人類乳癌細胞株MDA-MB-468，以及小鼠乳腺癌細胞株4T1 (其中該4T1細胞已經轉導綠螢光蛋白(GFP)或螢光素酶(GL-4T1))分別培養於達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium，DMEM)和洛斯維-帕克紀念研究所1640 (Roswell Park Memorial Institute 1640，RPMI1640)培養基中，並補充10％之胎牛血清(FBS)和抗生素/抗真菌劑(antibiotics/antimycotics)。將細胞培養於37°C和5％之CO ₂的加濕培養箱中。

4. IL-17RB.ECD 建構體 (construct)

本實驗建構了一種會表現人類IL-17RB胞外域(rhIL-17RB.ECD)的載體，並藉由常規實驗手段進行確認。將載體遞送至大腸桿菌中並表現蛋白，然後將所得之重組蛋白進行純化以備用。

5. 動物實驗

動物的培育和福祉：每項動物實驗於初始是使用約6週大的Balb/c母鼠，使其安置在一個有氣候控制的房間裡，提供12小時/12小時的光/暗循環，並使其可以任意採食和飲水。

動物免疫化流程 1：為了評估本發明疫苗對小鼠的免疫原性，先將Balb/c母鼠(6週大)任意分為兩組：載體(CRM197)組(n = 5)，以及疫苗(CRM197-SBAP-hIRIS1或CRM197-SBAP-hIRIS2)組(n = 5)。於實驗期間，各組小鼠分別於第0天、第14天和第28天採血，以及在第1天和第15天分別接受了皮下注射(總共2劑)：5微克之CRM197加上50微升之佐劑Alhydrogel (在PBS中，共100微升之體積；載體組)；或是5微克之CRM197-SBAP-hIRIS1或CRM197-SBAP-hIRIS2加上50微升之佐劑Alhydrogel (在PBS中，共100微升之體積；疫苗組)。

動物免疫化流程 2：為了評估本發明疫苗所誘導之抗腫瘤的免疫反應，先將Balb/c母鼠(6週大)任意分為三組：PBS組(n = 7)、載體(CRM197)組(n = 8)，以及疫苗(CRM197-SBAP-hIRIS2)組(n = 8)。各組小鼠於第0天移植腫瘤(GL-4T1)，並於實驗期間內定期採血，以及在第1天、第7天、第13天、第19天和第24天分別接受了皮下注射(總共5劑)：PBS單獨(PBS組)；5微克之CRM197加上50微升之佐劑Alhydrogel (在PBS中，共100微升之體積；載體組)；或是5微克之CRM197-SBAP-hIRIS2加上50微升之佐劑Alhydrogel (在PBS中，共100微升之體積；疫苗組)。在第34天實驗結束時犧牲小鼠。

腫瘤移植：於腫瘤移植前一週，將冷凍保存的GL-4T1細胞解凍並於完全培養基中恢復並生長，以及利用螢光顯微鏡或流式細胞術確認GL-4T1細胞中的GFP訊號，以確保GFP訊號存在於絕大多數(＞ 90％)的細胞中。在移植當天，將GL-4T1細胞以胰蛋白酶消化並用PBS洗滌，然後重新懸浮於基質膠(Matrigel)中。然後將GL-4T1細胞(1×10 ³個細胞，共20微升之體積)以原位注射(orthotopically injected)至每隻小鼠的第4個乳腺脂肪墊中。

活體內螢光素酶訊號影像：用異氟醚(isoflurane)麻醉小鼠，以收集同源腫瘤和肺臟，並進行心臟穿刺以收集終點血清，然後藉由宮頸錯位手續(cervix dislocation)執行安樂死。然後將腫瘤和肺臟保存在冰冷的PBS中。將每個腫瘤都進行稱重，並固定於10％之福馬林中，以用於後續的石蠟包埋和切片中。將肺臟浸入D-螢光素(D-luciferin)溶液(在PBS中)，接著以活體內影像系統( in vivoimaging system)進行攝影。每個樣本的影像是連續拍攝兩次，每次30秒，接著以活體影像軟體或ImageJ進行影像處理。

免疫組織化學：在免疫組織化學的部分，將腫瘤樣本切片用抗-ERK1/2抗體(1：20倍稀釋，GeneTex)進行染色，接著用蘇木精(hematoxylin)進行複染，之後再進行定量分析。

血清採集和酵素免疫測定法：在血清採集的部分，藉由頜下靜脈(submandibular vein)穿刺以獲得小鼠全血，並以13,200每分鐘轉數(RPM)離心2分鐘。收集上清液並再次以13,200每分鐘轉數離心2分鐘以去除殘留的血液細胞和血凝塊，然後於-20°C下保存。將96孔ELISA微量盤的每個孔中各加入50微升之5微克/毫升之純化的重組人類或小鼠IL-17RB胞外域(稀釋於PBS中)，並於4°C下反應過夜。然後，將微量盤用含有0.1％之Tween-20的PBS (即PBST)洗滌3次，每次5分鐘，然後在37°C下用1％之BSA進行封閉1小時。將微量盤用PBST洗滌3次，每次5分鐘，然後將小鼠血清加入微量盤中，並在37°C下再反應1小時。將微量盤用PBST洗滌3次，每次5分鐘，然後將抗-小鼠IgG-HRP加入微量盤中，並在37°C下反應1小時。之後，將微量盤用PBST洗滌3次，每次5分鐘，接著以3,3’5,5’-四甲基聯苯胺(3,3’5,5’-tetramethylbenzidine，TMB)進行呈色反應2分鐘，再加入1體積莫耳濃度之HCl終止反應。最後，以微量盤讀值儀測量該微量盤的吸光度，測量的光密度(optical density，OD)波長為450奈米。

6. 統計分析

以獨立式學生t檢定來進行兩組之間的比較，並將實驗數據表示為平均值±標準差(平均值 ± SD)。每項實驗至少進行三次重複。P ＜ 0.05視為具有統計學上的顯著意義。

實施例 1 疫苗的製備

為了評估將IRIS表位用作癌症疫苗的可能性，本實施例於是個別建構了各種不同之含有一或多個拷貝的小鼠或人類IRIS合成序列之重組多肽的複合物，建構方法係遵循「材料和方法」章節中所述之步驟來進行。該些重組多肽為mIRIS1 (含有一個拷貝的小鼠IRIS合成序列)、hIRIS1 (含有一個拷貝的人類IRIS合成序列)、mIRIS2 (含有兩個拷貝的小鼠IRIS合成序列)、hIRIS2 (含有兩個拷貝的人類IRIS合成序列)、mIRISn (含有n個拷貝的小鼠IRIS合成序列)，以及hIRISn (含有n個拷貝的人類IRIS合成序列)；序列編號：3至12)。將兩個輔助的甘胺酸殘基添加到每個拷貝的小鼠或人類IRIS序列的C-端，並且將該重組多肽的C-端進一步與所選偶聯位點進行融合。此外，在重組多肽的N-端進行乙醯化，以防止該重組多肽與本研究所使用之連接子之間發生不想要的化學反應。作為例示，在以下的研究中，將含有兩個拷貝的小鼠或人類IRIS合成序列(n = 2；mIRIS2或hIRIS2)(序列編號：5和6)之重組多肽的複合物用於製備癌症疫苗。

癌症疫苗是依據第1圖所示之步驟來製備。簡言之，將一未偶聯的載體蛋白CRM197 (其表面具有多個活性位點(約有40個一級胺基團))以相容的連接子SBAP進行活化(步驟1，活化)。根據經驗，CRM197上的40個一級胺基團中，可能大約會有20至25個一級胺基團被活化。接著，將活化態的載體蛋白與重組多肽偶聯，其中該重組多肽是如上文所述之已與適當的偶聯位點進行融合後的重組多肽；從而產生複合物(步驟2，偶聯)。將CRM197上未偶聯的位點進行封端(capping)以製備出一種抗-IL-17RB的疫苗(步驟3，封端)。

實施例 2 疫苗的化學特性

在本實施例中，是對實施例1之所得疫苗以質譜法(MS)進行定性和定量確認。具體來說，是將疫苗先進行MS分析，再將MS數據用於計算多肽-蛋白比例(PPR)，此為化學複合物的一般性定量特徵。以MALDI-TOF來檢測未偶聯的CRM197 (即，載體蛋白)、CRM197-SBAP (即，載體：XLnkr)，以及CRM197-SBAP-hIRIS2 (即，疫苗)的分子量，實驗結果提供於第2圖。相較於未偶聯的CRM197，可以發現到CRM197-SBAP具有明顯的分子量位移。這兩種蛋白質之間的差異可使用算式(1)來計算平均活化度(AAD)，該AAD反映出各CRM197所連接的平均連接子個數： (1) 其中CX和C個別是CRM197-SBAP和CRM197的分子量，X是每次活化的淨增重。CRM197-SBAP (即載體：XLnkr)的AAD估計為15.04 (約為15)，代表每個CRM197平均獲得15.04個SBAP (約為15個SBAP；k值)分子。

此外，發現到CRM197-SBAP-hIRIS2具有廣泛分佈的峰，這反映出與CRM197-SBAP偶聯的重組多肽hIRIS2的數量(範圍從5至17，由以下PPR公式計算出)，並且每個峰的訊號強度反映出CRM197-SBAP-hIRIS2的量，其中並涵蓋了特定的hIRIS2偶聯個數。依據MS數據，上述PPR由算式(2)來計算： (2) 其中CXPc和Int.c分別為結合數為c之CRM197-SBAP-hIRIS2的分子量和訊號強度；CX和nX分別為CRM197-SBAP的分子量和每次偶聯的淨增重。CRM197-SBAP-hIRIS2 (即疫苗)的PPR估計為9.94 (約為10)，這代表每個CRM197-SBAP平均獲得9.94個hIRIS2 (約為10個hIRIS2)分子。

實施例 3 疫苗對於誘導小鼠體液 (humoral) 免疫反應的功效

本實施例研究了本發明疫苗於活體內的免疫原性。為此，將Balb/c小鼠用疫苗CRM197-SBAP-hIRIS2 (n = 5；疫苗組)或用對照CRM197 (n = 5；載體組)進行免疫化。對於各組，將特定治療劑(5微克/劑)與Alhydrogel佐劑(50微克/劑)一起給予，並在第1天和第15天分別給予治療(總共兩劑)。在接種前(第0天)、接種期間(第14天)和接種後(第28天)收集小鼠血清，並以ELISA檢測其中對抗純化之重組人類IL-17RB胞外域 (rhIL-17RB.ECD)的抗體。如第3A圖所示，用疫苗免疫化第28天的小鼠血清表現出對rhIL-17RB.ECD有明顯的反應性，表明疫苗在小鼠中有成功誘導出強烈的免疫反應，但在用對照CRM197免疫化的小鼠的血清中沒有發現可檢測到的反應性。總結上述，這些數據表明，疫苗(而非CRM197)能夠在接種疫苗的小鼠體內誘導出對抗rhIL-17RB.ECD的體液免疫反應。

進一步地，本研究還研究了與hIRIS1或hIRIS2偶聯的疫苗(即CRM197-SBAP-hIRIS1或CRM197-SBAP-hIRIS2)，以及具有各種不同PPR的疫苗的免疫原性。

為此目的，於是製備了具有多種不同PPR的疫苗，其中CRM197-SBAP-hIRIS1的PPR分別為2.09、3.63和7.51，以及CRM197-SBAP-hIRIS2的PPR分別為1.73、4.95和7.40。實驗結果提供於第3B圖。本實驗發現到用CRM197-SBAP-hIRIS1免疫化的小鼠(每組n = 3-5)有表現出較弱的免疫反應(即EC ₅₀與PPR之間的相關性較低)。相反地，用CRM197-SBAP-hIRIS2免疫化的小鼠則表現出較佳的免疫反應(即EC ₅₀與PPR之間呈現出線性相關性)。進一步地，以ELISA驗證其中的優勢性IgG亞型，實驗結果清楚說明優勢性IgG亞型是IgG1而非IgG2a (第3C圖)，表明在此免疫背景下傾向於觸發T _H2免疫反應。綜上所述，這些數據證明，疫苗CRM197-SBAP-hIRIS2具有顯著的免疫原性，特別是在PPR較高時，並且在這種免疫條件下所觸發的免疫反應主要是T _H2型。

實施例 4 本發明疫苗於小鼠同源模型中抑制腫瘤生長和轉移

本實施例研究了本發明疫苗於小鼠同源腫瘤模型中對於抑制腫瘤生長和轉移的能力。首先，在第0天將1×10 ³個4T1-GFP-luc細胞原位移植到Balb/c小鼠的第4個乳腺脂肪墊中，接著再對小鼠施打PBS (n = 7；PBS組)、CRM197 (n = 8；載體組)，或CRM197-SBAP-mIRIS2 (n = 8；疫苗組)。一週後，以活體內影像系統(IVIS)檢查來自移植細胞的螢光素酶訊號，以確認該些細胞的活力。疫苗接種流程如在「材料和方法」中所述，一共接種了五劑的特定治療劑，五劑分別在第1天、第7天、第13天、第19天和第24天接種。在第34天時，犧牲小鼠，並採集腫瘤和肺臟以用於後續分析中。

實驗結果發現到，用該疫苗免疫化的小鼠可以成功地誘發出大量對抗IL-17RB的IgG，特別是在接種第10天之後(第4A圖)。此外，在移植後第20天，發現到PBS組與疫苗組之間的原發性腫瘤大小具有相當大的差異(第4B圖)，並且時間上大致可以對應到出現IgG反應的時間(第4A圖)。兩組之間原發性腫瘤大小的差異會隨著時間的推移變得越來越明顯，並且在研究結束時達到了統計學上的顯著意義(p ＜ 0.05)(第4B圖)。在研究終點時，也觀察到原發性腫瘤的重量有同樣的現象；與PBS組相比，疫苗組的原發性腫瘤重量有明顯降低(第4C圖)。此外，在第13天時，疫苗組的原發性腫瘤所發出的螢光強度遠低於兩個控制組(第4D圖)。綜上，這些數據證實本發明疫苗具有觸發對抗IL-17RB之免疫反應的能力，進而有助於抑制原發性腫瘤的生長。本發明疫苗經證實是一種對於治療癌症具有前景的治療方法。

本實施例更進一步研究了本發明疫苗對於抑制腫瘤移動的作用。在實驗終點時，採集肺臟組織並進行螢光檢測。在兩個控制組(即PBS組和載體組)中都發現到有大型多灶性(multi-foci)的轉移性團塊(clump)，而在疫苗組中僅發現到小型單一偶發性轉移性病灶點(數據未顯示)。此外，以檢測肺臟中的螢光強度來對轉移性腫瘤進行定量，發現到與兩個控制組相比，疫苗組的螢光強度有顯著降低(第4E圖)。這些數據顯著表明，癌症的疾病進展和傳播已因使用本發明疫苗治療而受到控制。

腫瘤轉移的情形另以一種分析方法-風險差異假設檢定(risk difference hypothesis testing)來進行評估。實驗結果總結在表1。實驗結果顯示，與兩個控制組相比，疫苗組的遠端轉移風險降低了將近50％ (表1)。總結來說，這些數據強有力證明本發明疫苗可以抑制癌症的遠端轉移現象。

表1 特定治療組中的腫瘤遠端轉移風險

腫瘤轉移免疫化	真	假	風險
PBS	5	2	71％
載體	6	2	75％
疫苗	2	6	25％

本實驗還研究了腫瘤發生學(tumorigenesis)上的背後機制，特別是針對IL-17RB經由ERK1/2依賴性細胞活化在腫瘤發生學上所起到的作用進行研究。為此目的，於是檢查了經IHC染色的原發性腫瘤切片中是否存在ERK1/2的活化形式(即磷酸化的ERK1/2，pERK1/2)，實驗結果提供於第4F圖。疫苗組中的pERK1/2的表現量明顯低於兩個控制組。因此，這些數據表明，本發明疫苗是藉由抑制ERK1/2途徑來有助於抑制腫瘤進展。

綜上所述，本揭示內容提供了一種可以有效抑制腫瘤生長和轉移的潛力癌症疫苗。

當可理解，上文有關實施方式的敘述僅作為例示性的實施方式，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可對其進行各種更動與修飾。上文的說明書、實施例和實驗數據對本揭示內容作為例示性實施方式中的結構和使用方式做出完整的描述。儘管上文已描述本揭示內容中各樣的實施方式有一定程度的特性，或參照一或多個個別的實施方式，本發明所屬領域技術具有通常知識者仍可在不悖離本揭示內容精神和範圍情形下，對已揭示的實施方式進行眾多修改。

無

在參閱以下的詳細說明，申請專利範圍和附隨圖式後，本揭示內容和其他特徵、態樣和優點將更明顯易懂，其中：

第1圖是一示意圖，其闡述依據本揭示內容的一實施例來製備本發明疫苗；

第2圖是基質輔助雷射解吸/電離-飛行時間質譜測定法(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)的實驗結果，用以確認所製備的特定產物。上欄：載體蛋白(即CRM197)的MALDI-TOF-MS訊號；中欄：載體：XLnkr (即，經連接子SBAP所活化的CRM197，CRM197-SBAP)的MALDI-TOF-MS訊號；下欄：疫苗(即本揭示內容複合物，CRM197-SBAP-hIRIS2)的MALDI-TOF-MS訊號；

第3A-3C圖說明本發明疫苗於活體內誘發免疫反應以對抗重組人類IL-17RB (rhIL-17RB)的功效。第3A圖：在疫苗接種後的第0、14和28天，取得載體組(CRM197)和疫苗組(CRM197-SBAP-hIRIS2)的小鼠血清，並進行酵素免疫測定法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)分析，以確認該些血清於對抗rhIL-17RB (特別是針對其胞外域(ectodomain)，即rhIL-17RB.ECD)的反應性。該疫苗的半效應濃度(half maximal effective concentration，EC ₅₀)是進一步地以該酵素免疫測定法的實驗結果來進行分析，並以實心圓點繪製。第3B圖：小鼠抗血清的EC ₅₀(倍數稀釋(fold dilution))的實驗結果，其中該小鼠是經疫苗CRM197-SBAP-hIRIS1或CRM197-SBAP-hIRIS2 (於特定的多肽-蛋白比例(peptide-protein ratio，PPR)下)進行免疫化(immunized)。第3C圖：在免疫反應較高的各小鼠中，IgG亞型(即IgG1和IgG2a)之EC ₅₀的實驗結果；以及

第4A-4F圖說明在小鼠同源(syngeneic)腫瘤模式中，本發明疫苗對於腫瘤生長和腫瘤轉移的治療功效。第4A圖：酵素免疫測定法的實驗結果闡述控制組Balb/c小鼠(n = 5)所產生的免疫力，該些小鼠是循「材料和方法」中所述之治療性疫苗接種流程來進行，其中該控制組小鼠僅給予疫苗CRM197-SBAP-hIRIS2，且沒有進行原位(orthotopically)腫瘤移植。對IL-17RB具有專一性的IgG反應是以線條來呈現，而EC ₅₀是以圓點來呈現。第4B圖：在PBS組、載體控制組(CRM197)，以及疫苗組(CRM197-SBAP-hIRIS2)中的小鼠腫瘤生長結果。T-檢定是在PBS組與疫苗組之間進行，並標示出各階段的p值。第4C圖：於實驗終點，在特定治療組中的小鼠原發性(primary)腫瘤的腫瘤重量。第4D圖：於治療第13天，在特定治療組中的小鼠原發性腫瘤的螢光訊號強度。第4E圖：在特定治療組別中的小鼠轉移至肺臟的腫瘤螢光訊號強度。第4F圖：在特定治療組中的小鼠腫瘤pERK1/2免疫組織化學(immunohistochemical，IHC)染色的H-分數(H-score)。不顯著(non-significant，NS)：p ＞ 0.05；*：p ＜ 0.05。

               序列表
          <![CDATA[<110> 中央研究院]]>
          <![CDATA[<120> 重組多肽，包含該重組多肽的複合物，以及其用途]]>
          <![CDATA[<130> P4148-TW]]>
          <![CDATA[<140> TW111101699]]>
          <![CDATA[<141> 2022-01-14]]>
          <![CDATA[<150> US63/137,709]]>
          <![CDATA[<151> 2021-01-14]]>
          <![CDATA[<160> 13]]>
          <![CDATA[<170> BiSSAP 1.3.6]]>
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          <![CDATA[<223> 合成序列]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val 
          1               5                   10                  15      
          Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln 
                      20                  25                  30          
          His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His 
                  35                  40                  45              
          Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr 
              50                  55                  60                  
          Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro 
                      100                 105                 110         
          Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly 
                  115                 120                 125             
          Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp 
              130                 135                 140                 
          Leu Arg Asp Leu Gly Gly 
          145                 150 
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 150]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成序列]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln 
                      20                  25                  30          
          His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His 
                  35                  40                  45              
          Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp 
              50                  55                  60                  
          Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile 
                          85                  90                  95      
          Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro 
                      100                 105                 110         
          Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly 
                  115                 120                 125             
          Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp 
              130                 135                 140                 
          Leu Arg Asp Leu Gly Gly 
          145                 150 
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 300]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成序列]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val 
          1               5                   10                  15      
          Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln 
                      20                  25                  30          
          His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His 
                  35                  40                  45              
          Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr 
              50                  55                  60                  
          Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro 
                      100                 105                 110         
          Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly 
                  115                 120                 125             
          Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp 
              130                 135                 140                 
          Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg 
                          165                 170                 175     
          Asp Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly 
              210                 215                 220                 
          Gly Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Val Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val 
                          245                 250                 255     
          Gln His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln 
                      260                 265                 270         
          His Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Val Gln His 
                  275                 280                 285             
          Thr Leu Thr Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly 
              290                 295                 300 
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 300]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成序列]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln 
                      20                  25                  30          
          His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His 
                  35                  40                  45              
          Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp 
              50                  55                  60                  
          Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile 
                          85                  90                  95      
          Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro 
                      100                 105                 110         
          Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly 
                  115                 120                 125             
          Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp 
              130                 135                 140                 
          Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg 
                          165                 170                 175     
          Asp Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu 
                  195                 200                 205             
          Gly Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly 
              210                 215                 220                 
          Gly Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu 
                          245                 250                 255     
          Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln 
                      260                 265                 270         
          His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly Leu Gln His 
                  275                 280                 285             
          Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu Gly Gly 
              290                 295                 300 
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 536]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成序列]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Met Gly Ala Asp Asp Val Val Asp Ser Ser Lys Ser Phe Val Met Glu 
          1               5                   10                  15      
          Asn Phe Ser Ser Tyr His Gly Thr Lys Pro Gly Tyr Val Asp Ser Ile 
                      20                  25                  30          
          Gln Lys Gly Ile Gln Lys Pro Lys Ser Gly Thr Gln Gly Asn Tyr Asp 
                  35                  40                  45              
          Asp Asp Trp Lys Glu Phe Tyr Ser Thr Asp Asn Lys Tyr Asp Ala Ala 
              50                  55                  60                  
          Gly Tyr Ser Val Asp Asn Glu Asn Pro Leu Ser Gly Lys Ala Gly Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Val Val Lys Val Thr Tyr Pro Gly Leu Thr Lys Val Leu Ala Leu Lys 
                          85                  90                  95      
          Val Asp Asn Ala Glu Thr Ile Lys Lys Glu Leu Gly Leu Ser Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Glu Pro Leu Met Glu Gln Val Gly Thr Glu Glu Phe Ile Lys Arg Phe 
                  115                 120                 125             
          Gly Asp Gly Ala Ser Arg Val Val Leu Ser Leu Pro Phe Ala Glu Gly 
              130                 135                 140                 
          Ser Ser Ser Val Glu Tyr Ile Asn Asn Trp Glu Gln Ala Lys Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Glu Leu Glu Ile Asn Phe Glu Thr Arg Gly Lys Arg Gly Gln 
                          165                 170                 175     
          Asp Ala Met Tyr Glu Tyr Met Ala Gln Ala Cys Ala Gly Asn Arg Val 
                      180                 185                 190         
          Arg Arg Ser Val Gly Ser Ser Leu Ser Cys Ile Asn Leu Asp Trp Asp 
                  195                 200                 205             
          Val Ile Arg Asp Lys Thr Lys Thr Lys Ile Glu Ser Leu Lys Glu His 
              210                 215                 220                 
          Gly Pro Ile Lys Asn Lys Met Ser Glu Ser Pro Asn Lys Thr Val Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Glu Lys Ala Lys Gln Tyr Leu Glu Glu Phe His Gln Thr Ala Leu 
                          245                 250                 255     
          Glu His Pro Glu Leu Ser Glu Leu Lys Thr Val Thr Gly Thr Asn Pro 
                      260                 265                 270         
          Val Phe Ala Gly Ala Asn Tyr Ala Ala Trp Ala Val Asn Val Ala Gln 
                  275                 280                 285             
          Val Ile Asp Ser Glu Thr Ala Asp Asn Leu Glu Lys Thr Thr Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Leu Ser Ile Leu Pro Gly Ile Gly Ser Val Met Gly Ile Ala Asp Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Val His His Asn Thr Glu Glu Ile Val Ala Gln Ser Ile Ala Leu 
                          325                 330                 335     
          Ser Ser Leu Met Val Ala Gln Ala Ile Pro Leu Val Gly Glu Leu Val 
                      340                 345                 350         
          Asp Ile Gly Phe Ala Ala Tyr Asn Phe Val Glu Ser Ile Ile Asn Leu 
                  355                 360                 365             
          Phe Gln Val Val His Asn Ser Tyr Asn Arg Pro Ala Tyr Ser Pro Gly 
              370                 375                 380                 
          His Lys Thr Gln Pro Phe Leu His Asp Gly Tyr Ala Val Ser Trp Asn 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Val Glu Asp Ser Ile Ile Arg Thr Gly Phe Gln Gly Glu Ser Gly 
                          405                 410                 415     
          His Asp Ile Lys Ile Thr Ala Glu Asn Thr Pro Leu Pro Ile Ala Gly 
                      420                 425                 430         
          Val Leu Leu Pro Thr Ile Pro Gly Lys Leu Asp Val Asn Lys Ser Lys 
                  435                 440                 445             
          Thr His Ile Ser Val Asn Gly Arg Lys Ile Arg Met Arg Cys Arg Ala 
              450                 455                 460                 
          Ile Asp Gly Asp Val Thr Phe Cys Arg Pro Lys Ser Pro Val Tyr Val 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Asn Gly Val His Ala Asn Leu His Val Ala Phe His Arg Ser Ser 
                          485                 490                 495     
          Ser Glu Lys Ile His Ser Asn Glu Ile Ser Ser Asp Ser Ile Gly Val 
                      500                 505                 510         
          Leu Gly Tyr Gln Lys Thr Val Asp His Thr Lys Val Asn Ser Lys Leu 
                  515                 520                 525             
          Ser Leu Phe Phe Glu Ile Lys Ser 
              530                 535

Claims

一種重組多肽，包含一2至20個拷貝(copy)的介白素-17受體B(interleukin-17 receptor B，IL-17RB)去活化位點(IL-17RB inactivation site，IRIS)序列，該序列包含序列編號：1或序列編號：2的胺基酸序列，其中各拷貝的IRIS序列是彼此串聯連接。
如請求項1所述之重組多肽，其中該重組多肽的N-端具有乙醯化(acetylated)、甲醯化(formylated)、甲基化(methylated)、氨基甲醯化(carbamylated)、聚乙二醇化(pegylated)、磷酸化(phosphorylated)，或醣基化(glycosylated)；和/或該重組多肽的C-端具有醯胺化(amidated)、醣基磷脂醯肌醇化(glypiated)、生物素化(biotinylated)，或醣基化。
一種複合物，包含一載體蛋白；複數個該請求項1所述之重組多肽；以及複數個連接子，用以連接該複數個重組多肽與該載體蛋白；其中，各該連接子的其中一端是連接至各該重組多肽，且另一端是連接至該載體蛋白，並且個別是藉由NHS酯胺反應(NHS ester amine reaction)、硫代琥珀醯亞胺反應(thio-succinimide reaction)、吡啶二硫醇對巰基反應(pyridyldithiol to sulfhydryl reaction)、溴乙醯對巰基反應(bromoacetyl to sulfhydryl reaction)，或碘乙醯對巰基反應(iodoacetyl to sulfhydryl reaction)來進行連接。
如請求項3所述之複合物，其中該載體蛋白是炭疽桿菌水腫因子(edema factor，EF)、炭疽桿菌致死因子(lethal factor，LF)、牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)、CRM9、CRM45、CRM102、CRM103、CRM107、CRM176、CRM197、CRM228、白喉類毒素、大腸桿菌不耐熱性腸毒素(heat-labile enterotoxin，LT)、大腸桿菌耐熱性腸毒素(heat-stable enterotoxin，ST)、人類血清白蛋白、鑰孔笠貝血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin，KLH)、卵白蛋白(ovalbumin)、百日咳類毒素、肺炎球菌黏附素蛋白A(pneumococcal adhesin protein A，PsaA)、肺炎球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A，PspA)、肺炎鏈球菌溶血素(pneumolysin)、孔蛋白(porin)、綠膿桿菌外毒素A(exotoxin A)、結核菌素、破傷風類毒素，或運鐵蛋白結合蛋白(transferrin binding protein)。
如請求項4所述之複合物，其中該載體蛋白是CRM197。
如請求項3所述之複合物，其中該連接子是琥珀醯亞胺基3-(溴乙醯胺)丙酸鹽(succinimidyl 3-(bromoacetamido)propionate，SBAP)、琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-羧酸鹽(succinimidyl 4-(N-maleimido methyl)cyclohexane-1-carboxylate，SMCC)，或N-β-馬來醯亞胺丙基-羥基琥珀醯亞胺酯(N-β-maleimidopropyl-oxysuccinimide ester，BMPS)。
如請求項3所述之複合物，其中該重組多肽的N-端具有乙醯化、甲醯化、甲基化、氨基甲醯化、聚乙二醇化、磷酸化，或醣基化；和/或該重組多肽的C-端具有醯胺化、醣基磷脂醯肌醇化、生物素化，或醣基化。
一種如請求項3所述之複合物的用途，其係用於製備一用以治療一個體之癌症的藥物。
如請求項8所述之用途，其中該癌症是膀胱癌、膽管癌、骨癌、腦瘤、乳癌、子宮頸癌、大腸直腸癌、食道癌、上皮癌、胃癌、胃腸道間質瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)、神經膠質瘤、類淋巴系造血組織腫瘤、肝癌、卡波西氏肉瘤、血癌、肺癌、淋巴瘤、腸癌、黑色素瘤、骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、視網膜母細胞瘤、卵巢癌、腎細胞癌、脾臟癌、鱗狀細胞癌、甲狀腺癌，或甲狀腺濾泡癌中的任一種。
如請求項9所述之用途，其中該個體具有乳癌。
如請求項8所述之用途，其中該癌症是一轉移性癌症。
如請求項8所述之用途，其中該個體是人類。