JP2001518455A - 単純疱疹ウイルスの処置のための免疫原性の複合ポリペプチド - Google Patents

単純疱疹ウイルスの処置のための免疫原性の複合ポリペプチド

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JP2001518455A
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ジマーマン，ダニエル・エイチ
ローゼンタール，ケネス・エス
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セル−サイ・コーポレーシヨン
ノースイースタン・オハイオ・ユニバーシテイーズ・カレツジ・オブ・メデイシン
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Abstract

(57)【要約】 単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ−１）のＩＣＰ２７タンパク質からの３２２−３３２ペプチド（Ｈ１）のような単純疱疹ウイルス特異的な抗原ペプチド、およびマウスのインビトロ試験でＴＨ１様の応答を導き出すβ−２Ｍ（ａａ３５−５０）のようなＴ細胞結合リガンド（ＴＣＢＬ）からのペプチドを含有するように化学的に合成されたペプチド構築物は、ＨＳＶでの攻撃に対して保護的であった。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
（（１）発明の分野） 本発明は、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）に曝露された、もしくはこれによる感
染症の危険のある患者の免疫系を活性化するのに有用な免疫原性組成物を形成す
るのに使用され得るペプチド複合体(peptide conjugate)に関する。より具体的 には、本発明は、直接に共有結合された、もしくは連結基(linking group)を介 する、単純疱疹ウイルス特異的ペプチドおよび免疫調節ペプチドの双方を含有す
る免疫原性の複合ペプチド(conjugated peptide)、ならびに、単純疱疹ウイルス
の治療、予防もしくは診断における、こうしたペプチド複合体を含有する組成物
および診断製品、ならびにこれらを使用する方法に関する。
【０００２】 （（２）発明の背景） 単純疱疹ウイルスタイプ１（ＨＳＶ−１）およびその緊密なよく似たもの(cou
sin)、単純疱疹ウイルスタイプ２（ＨＳＶ−２）は、唇の近くで見出される普遍
的な口唇ヘルペスおよびまた陰部ヘルペスのような多様な良性疾患を引き起こす
。単純疱疹ウイルスはまた、眼（例えば、盲目につながる潜在性を伴う角結膜炎
）、脳（例えば脳炎）の感染に際して重大な疾患も引き起こし得る。新生児、Ａ
ＩＤＳ患者もしくは移植患者のような免疫抑制される個人がとりわけ攻撃を受け
やすい。免疫無防備状態の個人および新生児のＨＳＶ感染は、播種性かつ生命を
脅かす疾患につながり得る。多くのウイルスと異なり、ある個人がＨＳＶに感染
すれば、ウイルスはニューロン中で潜伏状態のままであり、そしてストレスもし
くは免疫抑制により再活性化され得、そして再発性疾患を引き起こし得る。
【０００３】 単純疱疹ウイルスのワクチンは、初発感染を予防するための予防薬、ならびに
再発性疾患を予防もしくは改善するための治療の双方としての使用に対する潜在
性を有する。ＨＳＶの予防もしくは治療のためのワクチンは現在利用可能でない
。生菌ワクチンの開発は、ＨＳＶが潜伏感染を確立しそして潜在的に細胞の腫瘍
性転化を促進する能力を有するために妨げられてきた。生存弱毒化ワクチン、死
菌ワクチンおよびサブユニットワクチンの有効性は、保護細胞媒介性の免疫応答
を導き出すことの困難により問題にされてきた。
【０００４】 細胞性免疫、ならびにとりわけ細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）および遅延型
過敏症（ＤＴＨ）応答は、ＨＳＶの制御に重要である。これらの応答は、適切な
活性化後にＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞により開始されるＴＨ１型の免疫応答に
包含される。ＣＤ８ Ｔ細胞は、ＭＨＣＩ分子により提示される８〜９アミノ酸
のペプチドを認識し、そして感染した細胞のＣＴＬ殺傷の標的となる。しかしな
がら、これらおよび他のＣＴＬエピトープ含有ペプチドでの免疫感作は、まれに
保護的免疫を導き出す。なぜならこれらのペプチドは、認識されかつ免疫系に提
示されるのに小さすぎるからである。こうしたペプチドをワクチンとして使用す
るためには、ペプチドは、それを免疫系に対しより見えるものとすることができ
る様式で修飾もしくは提示されなければならない。理想的には、この修飾もしく
は提示の様式は、それ自身免疫系に見えないべきであり、そして当該ペプチドに
対する適切なＴ細胞および免疫系全体の発達を助長すべきである。
【０００５】 Ｔ細胞応答は、活性化に応答して産生されるサイトカインの特徴により分類さ
れ得る。Ｔ１（ＴＨ１：ＣＤ４ Ｔ細胞およびＴＣ１：ＣＤ８ Ｔ細胞）応答は
、インターフェロン−γ、インターロイキン−２、リンホトキシンαの産生、マ
ウスでのＩｇＧ２ａ産生の優先的刺激、およびＤＴＨ反応の誘発に関連する。Ｔ
２（ＴＨ２およびＴＣ２）応答は、インターロイキン−４、インターロイキン−
１０の産生、体液性応答の優先的刺激、ＩｇＧ１産生、およびＴ１応答の阻害に
関連する。Ｔ２応答の刺激は感染性疾患を悪化させることができ、これら疾患は
保護的Ｔ１応答により制御される。
【０００６】 伝統的に、小ペプチドは、免疫応答を導き出すために担体タンパク質に結合さ
れなければならない。しばしば、ＫＬＨのような大型タンパク質が使用される。
しかしながら、不均質の（不純な）ＫＬＨはより均質の調製物より良好な免疫応
答を生じることが観察された。にもかかわらず、これらの複合体は、Ｔ２に関連
した応答の産生を促進する傾向があり、そして、抗体がペプチドおよび担体双方
に対して発生される。
【０００７】 この応答を、主としてもしくは本質的に、マウスＩｇＧ２ａもしくはヒトＩｇ
Ｇ３に向ける他の方法、すなわちＴＨ１に関連した経路を見出すことが望ましい
であろう。担体は、応答を所望されない方向に向けているべきでないことが、本
発明者の一人により以前に提案され、また、ＫＬＨ分子がこの応答をＴＨ２の方
向に主に向けているようであるため、別の担体が考慮されるべきであると結論さ
れた。同様に、費用、製造の容易さ、および安定性のような他の因子が考慮に入
れられる必要がある。
【０００８】 主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩのβ−２−ミクログロブリンタ
ンパク質由来のＴ細胞結合リガンド（ＴＣＢＬ）（とりわけ、下で「β−２Ｍ
３８−５０」もしくは、あるいは「ペプチドＪ」と称されるアミノ酸位置ａａ３
８−５０で）に複合化された(conjugated)ヒト結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏ
ｓｉｓ）ペプチドでの以前の血清学的研究は、ＴＨ１様の応答を誘発した。一方
、ＭＨＣIIβ２ １３５−１４９（ペプチドＧ）のような、しかしＴＣＢＬを使
用する類似のペプチド構築物は、ＴＨ２様の応答を誘発した（ジンマーマン（Ｚ
ｉｍｍｅｒｍａｎ）ら、Ｖａｃｃ．Ｒｅｓ．５：１０３−１１８、１９９５）。
【０００９】 一般に、適当なＴ細胞リガンドを用いる、複合ポリペプチドへの抗原ペプチド
の組込みは、明確なＴ細胞応答を導き出すことができる。当該構築物中に組込ま
れるＴ細胞結合リガンドは、その応答がＴＨ１応答かもしくはＴＨ２応答か、ま
たは混合された応答か、あるいは主にこれらの応答の一者もしくは他者であるの
かどうかを決定することができる。いずれかの特定の疾患を引き起こす微生物に
ついては、いずれかのもしくは双方の型の応答が望ましいかもしくは好ましいか
も知れない。しかしながら、ＴＨ１（ＤＴＨ）型の応答の導出は、成熟した抗体
応答に関連する、ＴＨ２応答よりむしろＴＨ１（例えばＤＴＨ）応答により通常
は成功裏に解消される感染性病原体に対してとりわけ有用であることが期待され
るとみられる。複合ポリペプチドの技術は、小ペプチドに、大型のタンパク質担
体を伴わずに適切なＴＨ１応答（適切な場合には、もしくは／およびＴＨ２応答
）を導き出させることにおいて有効である。
【００１０】 本発明者の一人は、以前に、ペプチドエピトープへのＴ細胞結合リガンドの付
加が免疫応答の性質（すなわち、ＴＨ１もしくはＴＨ２）を変え得ることを報告
した。ある複合ポリペプチド由来の抗体は、慣習的なペプチド−ＫＬＨ複合体(c
onjugate)を使用することにより製造される抗体が奏するよりも良好に、天然の 分子を認識することができた。
【００１１】 異種複合体(heteroconjugate)により誘導される抗体がより幅広い特異性を有 し、その結果それらが線状の形態のものだけでなく、天然の分子中にあるペプチ
ドエピトープを認識したことが示された。いくつかの場合には、ＫＬＨに複合さ
れたペプチドの使用は、天然の分子中のエピトープを認識することが可能でなか
った。従って、初発感染を予防するのに有効であるとみられるＨＳＶのワクチン
、ならびに、ＨＳＶに関連する頻繁な再発性疾患に罹っている個体の治療法を提
供することが高度に望ましいとみられる。
【００１２】 （発明の要約） 本発明は、一緒に共有結合された最低２種のＴ細胞特異的結合ペプチドを含ん
で成るある複合ポリペプチドに関し、ここで、第一のペプチドは１個の特定のク
ラスもしくはサブクラスのＴ細胞に結合しかつ主にＴ１もしくはＴ２型の応答を
導き出し、そして、第二のペプチドは単純疱疹ウイルス特異的抗原ペプチドであ
り、また、ここで、当該ポリペプチドはそれを必要とするヒトに投与される場合
にＴＨ１関連抗体を導き出すことが可能である。
【００１３】 本発明の複合ペプチドでＴ細胞特異的結合分子として使用されるペプチドは、
ヘルパーＴ細胞（ＴＨ）、サプレッサーＴ細胞（ＴＳ）、細胞傷害性Ｔリンパ球
（ＣＴＬ）などのような特定のクラスもしくはサブクラスのＴ細胞に特異的にも
しくは少なくとも優先的に結合し、かつ、免疫系をＨＳＶ特異的抗原ペプチドに
対する主にＴ１型の免疫応答に向ける、分子の部分もしくはこうした部分の類似
物であるペプチドである。これらの複合ポリペプチドは、米国特許第５，６５２
，３４２号で、本発明者の一人により、より一般的に開示されたもの（「異種機
能性の(heterofunctional)細胞性免疫学的試薬」とその中で称されている）のよ
うな、幅広いスペクトル抗体を誘導するがしかし所望のＴ１特異性を付加的に提
供するという、他の複合ペプチドで以前にみられた利点を提供する。
【００１４】 とりわけ、本発明は、単純疱疹ウイルスによる感染症の治療もしくは予防のた
めのワクチン中の免疫原として有効な免疫原性の複合ポリペプチドを提供し、前
記ポリペプチドは、式Ｐ1−ｘ−Ｐ2もしくはＰ2−ｘ−Ｐ1により表わされ、ここ
でＰ1は、ＩＣＰ２７タンパク質、糖タンパク質Ｂ、リボヌクレオチド還元酵素 、ＩＣＰ４、ＩＣＰ３４．５、糖タンパク質Ｅおよび糖タンパク質Ｆから成る群
から選択される単純疱疹ウイルスタイプ１もしくはタイプ２からの単純疱疹ウイ
ルス特異的な抗原ペプチドを表わし；Ｐ2は、あるクラスもしくはサブクラスの Ｔ細胞への結合を促進しかつ主にＴＨ１型の免疫応答をペプチドＰ1に向ける免 疫タンパク質の一部分である免疫調節ペプチドを表わし；そして、ｘは、共有結
合もしくは二価のペプチド連結基を表わし、これは切断可能もしくは非切断可能
でありうる。
【００１５】 本発明はまた、ヒト被験者において、単純疱疹ウイルスすなわちＨＳＶのタイ
プ１もしくはタイプ２に対して、感染に対する免疫を導き出すためのこうした複
合ポリペプチドを含有する製薬学的に有効な組成物にも関する。本発明の複合ポ
リペプチドに加え、こうした組成物は、適する免疫学的アジュバントもまた包含
してよく、そして好ましくは包含することができる。
【００１６】 同様に、本発明は、上に定義されるような複合ポリペプチドの治療上もしくは
予防的に有効な量を、それを必要とするヒト患者に投与することにより、ＨＳＶ
感染症を治療もしくは予防するための、こうした複合ポリペプチドおよびそれを
含有する製薬学的に有効な組成物の使用に関する。
【００１７】 本発明はまた、ＨＳＶによる個体での感染症（活動性もしくは潜伏性）の存在
を診断するための診断アッセイにも関し、ここで、診断されるべき個人からのＴ
細胞が、上の式Ｐ1−ｘ−Ｐ2もしくはＰ2−ｘ−Ｐ1に対する複合ポリペプチドと
混合され、そしてその後、前にＨＳＶでプライムされた(primmed)Ｔ細胞と複合 ポリペプチドとの間の反応を検出する。当該複合ポリペプチドは反応の検出を助
長するように標識されうる。
【００１８】 本発明は、今や、以下の説明および好ましい態様として、ならびに付随する図
面の助けを借りて、さらに詳細に記述されるであろう。
【００１９】 ＨＳＶ免疫Ｔ細胞は、投薬を受けたことのない(niave)もしくは非免疫Ｔ細胞 に比較して、複合ポリペプチドの存在下で異なって挙動するとみられるか、もし
くは、さもなければ異なるとみられることが期待される。
【００２０】 （発明の詳細な記述および好ましい態様） 上記および下記に開示され、かつ、本明細書に記述される実験で使用されるよ
うなペプチドについては、そのアミノ酸配列が、以下のような一文字表記もしく
は３文字の同定記号により示される。すなわち
【００２１】
【表１】
【００２２】 本明細書で明記されるアミノ酸配列のいずれにおいても、所望の生物学的活性
に悪影響を及ぼさない特定のアミノ酸の変化が企図されかつ本発明の範囲内にあ
ることが理解されるべきである。好ましい抗原ペプチドの目的の領域は高度に保
存されるとは言え、天然の、および自発的に発生するアミノ酸の変化がとりわけ
企図される。いくつかの場合には、上に与えられた指針内かつ下により詳細に論
考される、その配列が、ＨＳＶの２種もしくはそれ以上の天然のおよび自発的に
発生する変異体に対応する、ペプチドの混合物を使用することが有利でありうる
。
【００２３】 なおさらに、当該技術分野で十分認識されるとおり、例えば特異的結合部位を
提供するため、あるいは、ペプチドの放射活性のもしくは放射性同位体または蛍
光の標識を導入する目的上、特定のアミノ酸置換をなすことがしばしば有利であ
る。例えば毒素および薬物のような、当該技術分野で公知のような、他の型の同
定標識で標識を付けること(tagging)もまた、本発明の複合ペプチド中にもしく はそれとともに有利に包含されうる。こうした「設計された」アミノ酸配列もま
た、本発明の抗原ペプチドの範囲内にある。
【００２４】 加えて、Ｎ末端およびＣ末端のアミノ酸が、遊離の酸（アミノもしくはカルボ
キシル基）、またはその塩、エステル、エーテル、もしくはアミドとして存在し
うることもまた認識されている。とりわけ、Ｃ末端のアミド末端基、およびＮも
しくはＣ末端でのアセチル化、例えばミリスチルなどは、当該ペプチドの免疫学
的特性に影響を及ぼすことなく有用なことがよくある。
【００２５】 本発明の複合ポリペプチドのペプチドＰ1およびＰ2（下で定義されるとおり）
は、例えばメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．）、１９６３、Ｊ
．ｏｆ Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、８５：２１４９−２１５４により記述され
るような固相ペプチド合成のような、タンパク質を合成するための慣習的方法に
より製造され得る。遺伝子工学技術により本発明の新規複合ペプチドもしくはそ
のペプチド成分を製造することもまた、本発明の範囲内および当該技術の熟練内
にある。
【００２６】 本発明の複合ポリペプチドは、式 Ｐ1−ｘ−Ｐ2 （Ｉ）もしくは Ｐ2−ｘ−Ｐ1 （II） により表わされうる。
【００２７】 上式において、Ｐ1は、単純疱疹ウイルスのタンパク質からの単純疱疹ウイル ス特異的抗原ペプチドを表わす。この抗原ペプチドは、好ましくは、以下の単純
疱疹ウイルスのタンパク質ＩＣＰ２７、糖タンパク質Ｂ、リボヌクレオチド還元
酵素、ＩＣＰ４、ＩＣＰ３４．５、糖タンパク質Ｅおよび糖タンパク質Ｆの一か
ら選択されるものである。単純疱疹ウイルスタイプ１もしくはタイプ２のＩＣＰ
２７タンパク質、および単純疱疹ウイルスタイプ１の糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）が
とりわけ好ましい。
【００２８】 Ｐ2は、あるクラスもしくはサブクラスのＴ細胞への結合を促進しかつ主にＴ Ｈ１型の免疫応答をペプチドＰ1に向けることができる、免疫タンパク質の一部 分である免疫調節ペプチドを表わす。
【００２９】 ｘは、共有結合、または切断可能なもしくは非切断可能な二価のペプチド連結
基を表わす。
【００３０】 好ましい抗原ペプチドＰ1は、単純疱疹ウイルスタイプ１（ＨＳＶ−１）のＩ ＣＰ２７タンパク質のアミノ酸残基３２２ないし３３２（ＬＹＲＴＦＡＧＮＰＲ
Ａ）（配列番号１）（下でペプチドＨ１と称されうる）を含んで成るペプチド、
ＨＳＶ−１のＩＣＰ２７タンパク質のアミノ酸残基ＡＥＩＤＹＡＴＬＧＶＧＶ（
配列番号２）（下でペプチドＨ２と称されうる）を含んで成るペプチド；ＨＳＶ
−１のＩＣＰ２７タンパク質のアミノ酸残基４４８ないし４５６（ＤＹＡＴＬＧ
ＶＧＶ）（配列番号３）を含んで成るペプチド；ＨＳＶ−１の糖タンパク質Ｂか
らのアミノ酸残基４９８ないし５０５（ＳＳＩＥＦＡＲＬ）（配列番号４）（下
でペプチドＢ１と称されうる）を含んで成るペプチド、ＨＳＶ−１の糖タンパク
質Ｃからのアミノ酸残基１２８ないし１３９（ＤＲＲＤＰＬＡＲＹＧＳＲ）（配
列番号５）を含んで成るペプチドを包含する。
【００３１】 加えて、ＨＳＶ−２の糖タンパク質Ｄからの、例えば、残基９ないし２１（Ｌ
ＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＤ）（配列番号７）、残基８ないし２３（ＳＬＫＭＡＤ
ＰＲＮＲＦＲＧＫＤＬＰ）（配列番号８）もしくはアミノ酸残基１ないし３０（
ＫＲＡＬＡＤＡＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＤＬＰＶＬＤＱＬＴＤ）（配列番号
６）（ボシュ（Ｂｏｓｃｈ）ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１：３６０７、１９８７；
ウェイジャー（Ｗｅｉｊｅｒ）ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：５０１、１９８８を
参照）のような、配列番号６の残基１ないし３０から取られる約１０から約３０
個までの連続するアミノ酸残基を含んで成るペプチドもまた、ペプチドＰ1とし て有効に使用されうる。
【００３２】 ＨＳＶ特異的抗原ペプチドは、保護的Ｔ細胞応答を導き出すことが見出された
ＨＳＶタイプ１もしくはタイプ２のタンパク質のいずれかから選ばれうる。タイ
プ１およびタイプ２の双方で見出されるＩＣＰ２７タンパク質がとりわけ興味深
い。
【００３３】 ＩＣＰ２７は、ＨＳＶの初期(early)核タンパク質であり、これは保護的Ｔ細 胞応答を導き出すが、しかし保護的抗体応答を導き出さない。ラウス（Ｒｏｕｓ
ｅ）らは、Ｔ細胞応答の２５％までが、自然の感染の間にＩＣＰ２７に向けられ
ることを示した。ＩＣＰ２７タンパク質は主にＴＨ１応答を導き出す（マニカン
（Ｍａｎｉｃｋａｎ Ｅ）らおよびラウス（Ｒｏｕｓｅ Ｂ．）１９９５、Ｊ．
Ｖｉｒｏｌ．６９：４７１１−４７１６）。ＨＳＶの核タンパク質として、ＩＣ
Ｐ２７タンパク質はまた、それが突然変異を受ける免疫学的選択下にあるはずが
ないことにおいて有利である。とりわけ、ａａ３２２−３３２のペプチドは、Ｂ
ａｌｂ／ｃマウスからの細胞傷害性Ｔ細胞により認識される（Ｈ２ｄ主要組織適
合群）。（バンクス（Ｂａｎｋｓ）ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：６１３−６１６
、１９９３）。核抗原として、ＩＣＰ２７タンパク質およびそのペプチドは、保
護的抗体応答を導き出すことができない。
【００３４】 しかしながら、ＩＣＰ２７のａａ３２２−３３２のペプチド（Ｈ１）は、それ
自身中でかつ独力で免疫応答を誘導するのに不十分である。
【００３５】 アミノ酸残基ａａ４４８ないし４５６のＩＣＰ２７タンパク質のペプチドはま
た、これらの著者、例えば、ラウス（Ｒｏｕｓｅ）らにより、Ｔ細胞エピトープ
を含有するＣＴＬペプチドとしても同定され、そして、ペプチドＰ1として使用 され得る。
【００３６】 目的の別のＨＳＶ特異的抗原ペプチドは、ＨＳＶ−１からの糖タンパク質Ｂ（
ｇＢ）のａａ４９８ないし５０５のペプチドである。このペプチドは、ネストさ
れた(nested)重なり合う合成ペプチドのライブラリーを、感染していない細胞の
標的細胞への転換について試験することにより、細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球（Ｃ
ＴＬ）標的として同定された（ハンケ（Ｈａｎｋｅ）ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５
：１１７７−１１８６、１９９１）。細胞をペプチドとともにインキュベーショ
ンし、そしてその後、ＨＳＶ−１での感染により免疫にされたマウス中に存在す
るＣＴＬで攻撃した。
【００３７】 ペプチド４９８−５０５は、以下の配列（配列番号４） Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ を有する。
【００３８】 また免疫原性だがしかしより小さく強力であるより長いペプチド４９７−５０
７もまた使用されうる。すなわち Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ
Ｇｌｕ Ｐｈｅ （配列番号８） ｇＢペプチドは、前者のペプチドがＨ−２Ｋbマウス（例えばＣ５７Ｂ１／６ ）で免疫学的応答を導き出す一方、後者はＢａｌｂ−Ｃマウスで応答を導き出す
ことにおいて、ＩＣＰ２７ペプチドと異なる。
【００３９】 より一般的には、文献、例えば、ケレ（Ｋｏｅｌｌｅ）ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．
６８：２８０３−２８１０、１９９４；コース（Ｃｏｓｅ）ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ
．６９：５８４４−５８５２、１９９５；ハイリゲンハウス（Ｈｅｉｌｉｇｅｎ
ｈａｕｓｅ）ら、Ｅｙｅ、９：８９−９５、１９９５；ダムホフ（Ｄａｍｈｏｆ
）ら、Ａｒｃｈ．Ｖｉｒｏｌ．１３０：１８７−１９３、１９９３；ヴァクスマ
ン（Ｗａｃｈｓｍａｎ）ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１０：４４７−４５４、１９９２
（これらの開示はそっくりそのまま本明細書に組み込まれる）に記述されるよう
な、糖タンパク質ｇＢおよびｇＤからのペプチドは、ＣＴＬおよび保護的応答を
導き出しうる。こうしたＴ細胞エピトープ含有ペプチドすなわちＰ1が保護的抗 体応答を導き出さない場合でさえ、産生される抗体は、ビリオンおよび感染した
細胞表面に結合することが可能であるはずであり、そして従って治療的および免
疫学的活性のみならずしかしまた免疫学的診断的アッセイに関しても本発明の複
合ポリペプチドにおいて有用であるとみられる。
【００４０】 本発明においては、抗原ペプチドＰ1がＴ細胞結合ペプチドＰ2に複合される。
主にＴＨ１型の免疫応答と関連するいかなるＴ細胞結合ペプチドも、本発明でペ
プチドＰ2として使用されうる。より具体的には、ペプチドＰ2は、好ましくは、
Ｔ細胞へのその結合を促進する免疫タンパク質の部分から選ばれる。好ましい一
例は、β−２−ミクログロブリンからのペプチドＪ（β−２Ｍ ３５−５０）で
あり（パーラム（Ｐａｒｈａｍ）ら、１９８３、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２５
８：６１７９；ジンマーマン（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ）ら）。他の関連するβ−２
Ｍペプチドは、米国５，６５２，３４２により完全に記述されるとおり、アミノ
酸残基２４ないし５８およびアミノ酸残基５８ないし８４を包含する。本発明の
複合ポリペプチドのペプチドＰ2として使用されうる他のペプチドの例は、共通 に譲渡された米国特許第５，６５２，３４２号に見出されることができ、その開
示はそれの引用によりそっくりそのまま本明細書に組み込まれる。これらもしく
は他の適するＴ細胞結合ペプチドの選択のための指針は、その中ならびにジンマ
ーマン（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ）らの論文で論考される。例えば、Ｂ７（フリーマ
ン（Ｆｒｅｅｍａｎ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６２：９０９）；Ｂ７０（アズマ
（Ａｚｕｍａ）ら、１９９３、Ｎａｔｕｒｅ ３６６：７６）；ＧＬ１（ハスコ
ック（Ｈａｔｈｃｏｃｋ）ら、１９９３、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６２：９０５）；
ＣＤ５８（アルラナンダム（Ａｒｕｌａｎａｎｄａｍ）ら、１９９３、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１１６１３）、ＣＤ４０（ファン・エッ
セン（ｖａｎ Ｅｓｓｅｎ）ら、１９９５、Ｎａｔｕｒｅ ３７８：６２０）；
およびＩＣＡＭ−１（ベッカー（Ｂｅｃｋｅｒ）ら、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１５１：７２２４）のような既知の分子が挙げられうる。Ｐ2として他の 潜在的に有用な免疫原性ペプチドは、例えば、ａ．ａ．残基２２３−２２９もし
くは２２３−２３０を含んで成るＭＨＣクラス１α３ドメイン（ペプチドＥ、サ
ルター（Ｓａｌｔｅｒ）ら、Ｎａｔｕｒｅ、３４５：４１、１９９０）；インタ
ーロイキンＩβ、残基１６３−１７１（ネンコニ（Ｎｅｎｃｏｎｉ）ら、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１３９：８００、１９８７）；ＭＨＣクラスII β２ドメイン、
ａ．ａ．１３５−１４９（コニッヒ（Ｋｏｎｉｇ）ら、Ｎａｔｕｒｅ ３５６：
７９６、１９９２）；カマロタ（Ｃａｍｍａｒｏｔａ）ら、Ｎａｔｕｒｅ ３５
６：７９９、１９９２）を包含する。読者はさらなる詳細についてこれらの文献
の論文に参照させられる。
【００４１】 本発明の複合ポリペプチドは、抗原性の特異的ペプチドＰ1をＴ細胞結合ペプ チドＰ2に直接結合すること、または、ペプチドＰ1およびＰ2を慣習的技術によ る、もしくは、より具体的には前述の米国５，６５２，３４２（その開示はそれ
の引用によりそっくりそのまま本明細書に組み込まれる）に詳細に記述されるよ
うな、連結基を介して結合することにより製造されうる。ｘが二価の連結基を表
わす場合には、それは例えばグリシン−グリシンのような１個もしくはそれ以上
のアミノ酸、または、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチ
オ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシ
スクシミドエステル（ＭＢＳ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミド（ＥＤＣ）のような二官能性の化学連結基、またはペプチド
を連結するのに普遍的に使用されるいずれかの他の試薬から構成されうる。再度
、引用が、さらなる詳細について、米国６，５６２，３４２の開示になされる。
【００４２】 連結基は、一般に、使用の条件下で非切断可能であることができるが、しかし
ながら、切断可能な基もまた、複合ペプチドがその標的Ｔ細胞に結合した後にペ
プチドＰ1もしくはペプチドＰ2を分離することが望ましい場合には、使用されう
る。例えば、連結基ｘは、酵素的に切断可能であるものでありうるか、もしくは
、切断が、例えばＵＶ放射への曝露を包含する光活性化によるように誘導されう
る。
【００４３】 本発明の免疫原性複合ペプチドは、ＨＳＶに対する免疫応答（後に続く実施例
で示されるような）を導き出し得、その応答は、ＴＨ１に特徴的な抗体ＩｇＧ２
ａ（マウス）もしくはＩｇＧ３（ヒト）の多数の例、および／またはＤＴＨ応答
により証明されるとおり、所望のＴＨ１に向けられ得る。
【００４４】 抗原ペプチドＰ1およびＴ細胞結合ペプチドＰ2の順序は、通常、臨界的でなく
、そして逆にすることができる。例えば、第一のペプチド＝Ｐ1かつ第二のペプ チド＝Ｐ2の場合には、複合ペプチドは順序Ｐ1−ｘ−Ｐ2もしくはＰ2−ｘ−Ｐ1 を有しうる。また、ペプチドＰ1およびペプチドＰ2は相互に直接結合されうる（
すなわち、ｘが直接のペプチド結合である）一方、いくつかの場合には、小リン
カー配列もしくはより大きなヘテロリンカー分子が、２種のペプチドを結合する
のに有利に使用されうる。例えば、スペーサーとして、１個もしくは数個、約５
個まで、好ましくは約３個までの、グリシンのような中性アミノ酸が、ペプチド
を連結するのに使用されうる。好ましいスペーサーペプチドはＧＧＧであるが、
しかしながら、スペーサーはより大きくもしくはより小さく作成されることがで
き、そして、アミノ酸グリシンのほかにも他の分子を包含するように変えられう
る。ヘテロリンカーの例として、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピ
リジルチオ）プロピネート（ＳＰＤＰ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒド
ロキシスクシミド（ＭＢＳ）、ならびに前述の米国特許第５，６５２，３４２号
に開示されるものを制限なしに包含する、ペプチドを連結するのに使用される他
の試薬のいずれも挙げられうる。ペプチドＰ１およびＰ２が直接に結合されない
場合、連結基は、一般に、かつ、好ましくは、いずれかの二価の連結基であるこ
とができる。連結基は、切断可能でありうるか、または、生理学的条件下もしく
は適切な誘因により非切断可能でありうる。
【００４５】 複合ポリペプチド中のアミノ酸の総数はとりわけ臨界的でないとは言え、実際
的局面から、いずれのアミノ酸スペーサーもしくはリンカーも包含するアミノ酸
の最小数は、十分な抗原提示および免疫原性を得るために、一般に最低約１５も
しくは１６、好ましくは最低約２０であることができる。さらに、合成技術によ
る製造の容易さの実際的考慮から、アミノ酸の最大数は、しばしば、約１００未
満、好ましくは約７０より大きくない、とりわけ約５０より大きくないことがで
きる。しかしながら、複合ポリペプチドが遺伝子工学技術により製造されうる場
合には、ずっとより大きな分子が有用でありうる。
【００４６】 本発明の複合ポリペプチド、例えばＰ1としてペプチドＪ（β−２Ｍ、３８− ５０）およびＰ2としてペプチドＨ１が、ＨＳＶによる感染を予防するためのＴ Ｈ１に向けられた免疫応答のための予防的ワクチンとして免疫応答を指図するの
に、または、ウイルス負荷量を低下させそしてＨＳＶによる感染症を制御もしく
は治療するために、おそらく他の治療とともに、ＨＳＶに感染した人でのＴＨ１
に向けられた免疫応答のための治療的ワクチンとして免疫応答を指図するのに、
使用されうる。当該複合ポリペプチドははまた、ＨＳＶによる感染を予防するた
めにＴＨ１、ＴＨ２もしくは混合ＴＨ１／ＴＨ２に向けられた免疫応答を誘導す
る予防的ワクチンとして免疫応答を指図するのに、または、ウイルス負荷量を低
下させそしてＨＳＶによる感染を制御もしくは治療するために、おそらく他の治
療とともに、ＨＳＶウイルスに対するＴＨ１、ＴＨ２もしくは混合ＴＨ１／ＴＨ
２に向けられた免疫応答を誘導する治療的ワクチンとして免疫応答を指図するの
にも使用されうる。
【００４７】 本発明の複合ポリペプチドは、予防的もしくは治療的のいずれかでワクチンと
して使用されうる。予防的に提供される場合、当該ワクチンは、ＨＳＶのいかな
る証拠にも先立って提供される。本発明のワクチンの予防的投与は、哺乳動物で
ＨＳＶ疾患を予防もしくは弱毒化するのに役立つはずである。好ましい一態様に
おいて、ＨＳＶについての危険の大きいヒトが、本発明のワクチンで予防的に治
療される。治療的に提供される場合、当該ワクチンは、ＨＳＶ抗原に対する患者
自身の免疫応答、そして、これゆえに疾患の制御を高めるように提供される。
【００４８】 免疫原性の複合ポリペプチドが純粋なもしくは本質的に純粋な形態で投与され
ることが可能である一方、それを製薬学的組成物、製剤(formulation)もしくは 製剤(preparation)として提示することが好ましい。
【００４９】 臨床的およびヒトの使用の双方のための本発明の製剤は、１種もしくはそれ以
上の製薬学的に許容できる担体および場合によっては他の治療薬成分と一緒に、
上述されたような複合ポリペプチドを含んで成る。担体（１種もしくは複数）は
、製剤の他の成分と適合性であるという意味において「許容でき」なくてはなら
ず、また、その受領体に対し有害であってはならない。当該製剤は、便宜的には
、単位投与剤形で提示されることができ、また、製薬学的技術で公知のいずれか
の方法により製造されうる。
【００５０】 一般に、当該製剤は、有効成分を、液体担体もしくは微細に分割された固体担
体または双方との連合に均一にかつ緊密にもたらすこと、そしてその後、必要な
場合は、生成物を所望の製剤に造形することにより製造される。
【００５１】 例えば、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、鼻、経口、直腸、膣などのような、
いずれかの投与経路に適する製剤が使用されうる。一般に、当該製剤は、受領体
の血液と好ましくは等張である溶液とともに、有効成分の滅菌水性溶液を含んで
成ることができる。こうした製剤は、便宜的には、固体の有効成分を、塩化ナト
リウム（例えば、０．１〜２．０Ｍ）、グリシンなどのような生理学的に適合性
の物質を含有する水中に溶解すること、そして、水性溶液を生じさせるために生
理学的条件と適合性の緩衝されたｐＨを有すること、そして溶液を滅菌にするこ
とにより、製造されうる。これらは、単位もしくは複数の用量の容器、例えば、
封止されたアンプルもしくはバイアル中に存在しうる。
【００５２】 本発明の製剤は安定剤を組み込みうる。具体的に説明する安定剤は、それだけ
でもしくは混合状態としてのいずれかで使用されうる、ポリエチレングリコール
、タンパク質、糖、アミノ酸、無機酸および有機酸を包含する。これらの安定剤
は、使用される場合には、好ましくは、免疫原の１重量部分あたり約０．１ない
し約１０，０００重量部分の量で組み込まれる。２種もしくはそれ以上の安定剤
が使用されることになる場合は、それらの総重量は、好ましくは、上に明記され
た範囲内にある。これらの安定剤は、適切な濃度およびｐＨの水性溶液中で使用
される。こうした水性溶液の特定の浸透圧は、一般に、約０．１ないし３．０オ
スモルの範囲に、好ましくは約０．３ないし約１．２の範囲にある。当該水性溶
液のｐＨは、約５．０ないし約９．０の範囲内、好ましくは６〜８の範囲内にあ
るよう調節される。本発明の免疫原の処方においては抗吸着剤が使用されうる。
【００５３】 付加的な製薬学的方法が、作用の持続時間を制御するのに使用されうる。制御
放出製剤は、当該複合ポリペプチドと複合体を形成するもしくはこれを吸収する
ポリマーの使用により達成されうる。制御された送達は、適切な巨大分子（例え
ば、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニルピロリドン、エチレンビニルアセ
テート、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースもしくはプロタミン硫
酸）および巨大分子の濃度、ならびに放出を制御するための組込みの方法を選択
することにより果たされうる。制御放出製剤により作用の持続時間を制御する別
の可能な方法は、ポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）もし
くはエチレンビニルアセテートコポリマーのようなポリマー素材の粒子中に当該
複合ポリペプチドを組み込むことである。あるいは、これらの作用物質をポリマ
ー粒子中に組み込む代わりに、これらの素材を、例えばコアセルベーション技術
、もしくは界面重合により製造されるマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロ
キシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメ
タクリレート）マイクロカプセル中、または、コロイド薬物送達系、例えばリポ
ソーム、アルブミン微小球体、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカ
プセルもしくはマクロエマルジョン中に閉じ込めることが可能である。
【００５４】 経口製剤が所望される場合は、当該組成物は、乳糖、ショ糖、デンプン、タル
ク、ステアリン酸マグネシウム、晶質セルロース、メチルセルロース、カルボキ
シメチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウムもしくはとりわけアラ
ビアゴムのような典型的な担体と組み合わせられうる。これらの担体は、同様に
、他の腔、例えば、鼻、直腸などを介して投与されるように製造するために使用
されうる。
【００５５】 本発明の複合ポリペプチドは、キットの形態、単独、もしくは上述されたよう
な製薬学的組成物の形態で供給されうる。
【００５６】 ワクチン投与は慣習的方法により実施され得る。例えば、免疫原性ポリペプチ
ドが、生理的食塩水もしくは水のような適する希釈剤、または完全もしくは不完
全アジュバント中で使用され得る。当該免疫原は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮
下などのような、抗体産生に適切ないずれかの経路により投与され得る。免疫原
は、一度、あるいは、例えばＣＤ４+もしくはＣＤ８+ Ｔ細胞および／またはＨ
ＳＶ抗原に対して向けられる抗体の有意の力価が得られるまで、定期的間隔で投
与されうる。とりわけ、本発明の抗原性ポリペプチドは、ＴＨ１関連抗体および
ＴＨ１免疫応答の他の局面を導き出す。非免疫細胞に対する免疫細胞の存在は、
免疫原で間欠的に投与されたＴ細胞に応答してのサイトカイン分泌、リンパ増殖
、細胞活性化マーカー、細胞傷害性、もしくは変えられた代謝を測定することに
よりインビトロで、または、インビボで当該複合ポリペプチドを使用するＤＴＨ
により評価されうる。抗体が、慣習的イムノアッセイを使用して血清中で検出さ
れうる。
【００５７】 上に示されたとおり、本発明のワクチンの投与は、予防的もしくは治療的のい
ずれであってもよい。予防的に提供される場合、当該免疫原は、とりわけ発生の
重大な危険にある患者では、いずれかの証拠に先立ち、もしくはＨＳＶによるい
ずれかの症状に先立ち提供される。当該免疫原の予防的投与は、ヒトでの疾患Ｈ
ＳＶを予防もしくは弱毒化するのに役立つ。治療的に提供される場合、当該免疫
原は、疾患の発生に（もしくはその後）、または当該疾患のいずれかの症状の発
生時に提供される。当該免疫原の治療的投与は疾患を弱毒化するのに役立つ。
【００５８】 本発明はまた、それを必要とするヒト患者に、式（Ｉ）のポリペプチドのよう
な本発明の複合ポリペプチドの治療上有効な量を投与することによる、単純疱疹
ウイルス（ＨＳＶ）の治療もしくは予防方法にも関する。
【００５９】 本発明により、免疫応答は、少なくとも、主に、ＴＨ１に特徴的な抗体ＩｇＧ
２ａ（マウス）およびおそらくそれによりＩｇＧ３（ヒト）の例により明示され
るとおり、少なくとも所望のＴＨ１応答に向けられる。これらのペプチドは、し
かしながら、ＴＨ１の導き出された免疫応答に加え、ＴＨ２免疫応答、そしてと
りわけ混合ＴＨ１／ＴＨ２免疫応答を導き出しうる。
【００６０】 本発明は、従って、抗原性の複合ポリペプチドを提供し、これは、ＨＳＶを中
和しそしてＨＳＶに感染した細胞を殺すための免疫応答を導き出すための強力な
ワクチンを提供する。従って、本発明のワクチンは、ＨＳＶについて危険にさら
された、もしくはＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２を包含するＨＳＶに曝露された患
者を免疫感作するのに使用され得る。
【００６１】 慣習的な固相ペプチド合成もしくはペプチド合成のための他の慣習的な手段に
より製造されうる当該複合ポリペプチドは、しかしながら、当該ペプチドはまた
遺伝子工学技術によっても製造されうる。本発明のペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、組換え遺伝子技術についての公知の技術のいずれかにより製造され得る
。例えば、引用が、米国５，１４２，０２４中の組換えタンパク質およびペプチ
ドの開示、ならびその中に挙げられる文献の本体になされ得、その開示はこれの
引用により本明細書に組み込まれる。
【００６２】 従って、本発明はまた、前に記述されたとおり、その後の直接連結もしくは連
結基を介する連結のための抗原ペプチドもしくは免疫調節ペプチドをコードする
、または、より好ましくは、上述されたような式Ｐ1−ｘ−Ｐ2もしくはＰ2−ｘ −Ｐ1の複合ポリペプチドをコードする、核酸配列の全部もしくは一部を含んで 成る組換えＤＮＡ分子、およびベクターも提供する。本発明での使用に適する発
現ベクターは、当該核酸配列に操作上連結された最低１個の発現制御要素を含ん
で成る。この発現制御要素は、当該核酸配列の発現を制御かつ調節するようにベ
クター中に挿入される。発現制御要素の例は、ｌａｃ系、ファージλのオペレー
ターおよびプロモーター領域、酵母のプロモーター、ならびに、ポリオーマ、ア
デノウイルス、レトロウイルスもしくはＳＶ４０由来のプロモーターを包含する
がしかしこれらに制限されない。付加的な好ましいもしくは必要とされる操作上
の要素は、リーダー配列、終止コドン、ポリアデニル酸化シグナル、ならびに、
その宿主系での当該核酸配列の適切な転写およびその後の翻訳に必要なもしくは
好ましいいずれかの他の配列を包含するがしかしこれらに制限されない。必要と
されるもしくは好ましい発現制御要素の正しい組み合わせが選ばれた宿主系に依
存することができることが、当業者により理解されることができる。発現ベクタ
ーは、当該宿主系での当該核酸配列を含有する発現ベクターの移入(transfer)お
よびその後の複製に必要な付加的要素を含有すべきであることが、さらに理解さ
れることができる。こうした要素の例は、複製開始点および選択可能なマーカー
を包含するがしかしこれらに制限されない。こうしたベクターが、慣習的方法（
例えば、“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ”、ジョン ワイリー アンド サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ
ａｎｄ Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク州ニューヨーク、中のアウスベル（Ａｕｓ
ｕｂｅｌ）ら、（１９８７）を参照）を使用して容易に構築されるか、もしくは
商業的に入手可能であることが、当業者によりさらに理解されることができる。
【００６３】 本発明の別の局面は、その中に、上述されたような免疫原性の複合ポリペプチ
ドをコードする核酸配列の全部もしくは一部を含有する組換え発現ベクターが挿
入された宿主生物体に関する。本発明により包含される核酸配列で形質転換され
た宿主細胞は、動物、植物、昆虫および酵母細胞のような真核生物、ならびに大
腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のような原核生物を包含する。それにより遺伝子を運搬す
るベクターが細胞中に導入されうる手段は、微小注入、電気穿孔、形質導入、ま
たは、ＤＥＡＥ−デキストラン、リポフェクション、リン酸カルシウム、もしく
は当業者に既知の他の手順（例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”、コールド スプリング ハーバー
プレス（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨー
ク州プレインビュー中のサンブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら（１９８９）を参
照）を使用するトランスフェクションを包含するがしかしこれらに制限されない
。
【００６４】 好ましい一態様においては、真核生物細胞中で機能する真核生物発現ベクター
が使用される。こうしたベクターの例は、レトロウイルスベクター、ワクシニア
ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、鶏痘
ウイルスベクター、ｐＣＤＮＡ３（インヴィトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
）、カリフォルニア州サンディエゴ）のようなプラスミド、もしくはバキュロウ
イルス移入(transfer)ベクターを包含するがしかしこれらに制限されない。好ま
しい真核生物細胞系は、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＮＩＨ／３Ｔ
３細胞、２９３細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、Ｔ２細胞、樹状細胞、単
球もしくはエプスタイン−バーウイルスで形質転換されたＢ細胞を包含するがし
かしこれらに制限されない。ＮＩＨ／３Ｔ３、ＣＯＳ−７、ＣＨＯ、２９３細胞
（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、Ｔ２細胞、樹状細胞もしくは単球のような哺
乳動物細胞が、当該タンパク質の適正なプロセシングおよび修飾を確実にするた
めに、一般に好ましい。
【００６５】 宿主細胞により発現される組換えタンパク質は、粗ライセートとして得られる
ことができるか、もしくは、分別沈殿法(differential precipitation)、分子ふ
るいクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、等電点電気泳動、ゲ
ル電気泳動、アフィニティおよび免疫アフィニティクロマトグラフィーなどを包
含しうる、当該技術分野で既知の標準的タンパク質精製手順により精製され得る
。(例えば、“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ” ジョン ワイリー アンド サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ ｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク州ニューヨーク、中のアウスベル（Ａ
ｕｓｕｂｅｌ）ら、（１９８７）を参照）。免疫アフィニティクロマトグラフィ
ーの場合には、組換えタンパク質は、抗原ペプチドに特異的な抗体をそれに結合
した樹脂を含有するカラムを通る通過により精製されうる（“Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ” ジョン
ワイリー アンド サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）、ニュ
ーヨーク州ニューヨーク、中のアウスベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）ら、（１９８７）
）。
【００６６】 例として、組換え発現ベクターを使用して製造されるワクチンが使用されうる
。ワクチンをある個人に提供するために、免疫原性の複合ポリペプチドの全部も
しくは一部をコードする遺伝子配列が、上述されるような発現ベクター中に挿入
され、そして、免疫にされるべき哺乳動物に導入される。前述のワクチンで使用
されうるベクターの例は、欠損レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクタ
ー、ワクシニアウイルスベクター、鶏痘ウイルスベクター、もしくは他のウイル
スベクター（マリガン（Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｒ．Ｃ．）、（１９９３）Ｓｃｉｅ ｎｃｅ ２６０：９２６−９３２）を包含するがしかしこれらに制限されない。
その核配列を運搬するウイルスベクターが、ＨＳＶのいずれかの証拠に先立つか
、もしくはＨＳＶに悩まされる哺乳動物での疾患の進行を媒介する(mediate)た めのいずれかで、哺乳動物に導入され得る。
【００６７】 哺乳動物へのウイルスベクターの投与方法の例は、細胞のエクスビボでのウイ
ルスへの曝露、または冒されている組織中へのレトロウイルスもしくはウイルス
のプロデューサー(producer)細胞株の注入、またはウイルスの静脈内投与を包含
するがしかしこれらに制限されない。投与されるべき免疫原性の複合ポリペプチ
ドをコードする適切な核酸配列を運搬するウイルスベクターの量は、ウイルス粒
子の力価を基礎とする。例として、投与されるべき免疫原の範囲は、哺乳動物、
好ましくはヒトあたり約１０6ないし約１０11個のウイルス粒子でありうる。免 疫後に、ワクチンの有効性が、特定のサイトカイン産生もしくは疾患の後退によ
り評価されるような、抗原を認識する抗体もしくは免疫細胞の産生により評価さ
れ得る。当業者は、ＣＴＬリンパ増殖などのような前述のパラメータを評価する
ための慣習的方法を知っているとみられる。
【００６８】 さらに、本発明の複合ポリペプチド、およびそれをコードするＤＮＡ配列は、
米国５，５９３，９７２（その開示はそれの引用によりそっくりそのまま本明細
書に組み込まれる）に開示されるような遺伝子免疫感作(genetic immunization)
技術で使用されうる。遺伝子免疫感作技術により、ヌクレオチド配列が調節配列
に操作上連結されて、その核酸分子が投与される個体の細胞での発現を可能にす
る。生じる細胞がその後、予防的もしくは治療的免疫感作に使用されうる。
【００６９】 本発明の方法においてワクチンとして使用される場合、当該ワクチンは、最も
便宜的には注入により、筋肉内に、表皮内に、非経口で、経口でもしくは皮下に
宿主中に導入され得る。普遍的な液体もしくは固体のベヒクルのいずれかが使用
されることができ、それらは宿主に許容できかつ宿主に対するいかなる有害な副
作用もしくはワクチンに対するいかなる不利益な影響も有しない。生理学的ｐＨ
、例えばｐＨ６．８ないし７．４、好ましくはｐＨ７で、リン酸緩衝生理的食塩
水（ＰＢＳ）が、単独でもしくは適するアジュバントとともに担体として使用さ
れうる。免疫原性ポリペプチドの濃度は、動物での前臨床試験で約０．２ｍｌの
ような、一般に約０．１から１ｍｌまで、そしてヒトで約１ｍｌのような約０．
５ｍｌから約２ｍｌまでの臨床的溶媒の体積中に、注入あたり約２５μｇ／ｋｇ
のような約０．１から２００μｇ／ｋｇまで変動しうる。複数の注入が最初の注
入後に必要とされることができ、そして、複数の注入が与えられる場合は、約２
から４週間まで、例えば動物で約２週間、およびヒトで約８週間の間隔で与えら
れうる。
【００７０】 本発明のワクチン中の免疫原性ポリペプチドの好ましい濃度は、１０から２５
μｇ／ｋｇまでの範囲にあることができるが、しかしながら、より高用量が必要
とされるように投与されうる。
【００７１】 以下は、本発明の複合ポリペプチドの多様な態様についての応用の例示である
が、しかし、本発明は以下に記述される実施例に制限されないことが理解される
。
【００７２】 実施例 Ｉ．ペプチド これらの試験で使用された複合ポリペプチドの１種のＴ細胞結合ペプチドＰ2 は、β−２ミクログロブリン、ａａ３５−４７、ペプチドＪ（下線をつけられて
示される）の領域を包含し、そして、ＭＨＣクラスＩ様の作用のためのスペーサ
ーを包含するよう改変された ペプチドＪ ＤＬＬ ＫＮＧ ＥＲＩ ＥＫＶ ＥＧＧ Ｃ−アミド（配列番号
９） 抗原ペプチドＰ1およびペプチドＪとの複合は、合計で３個のグリシン残基の ため、Ｃ末端のシステインの代わりに用いられた１個の付加的なグリシンのスペ
ーサーを含有した。従って、当該複合ポリペプチド（Ｊ−Ｈ１）は、以下の式 ＤＬＬ ＫＮ ＧＥＲ ＩＥＫ ＶＥＧ ＧＧＬ ＹＲＴ ＦＡＧ ＮＰＲ Ａ （配列番号１０） ここで、下線をつけられた部分はペプチドＨ１を表わす、 を有した。同様に、ポリペプチド（Ｊ−Ｈ２）が、式 ＤＬＬ ＫＮ ＧＥＲ ＩＥＫ ＶＥＧ ＧＧＡ ＥＩＤ ＹＡＴ ＬＧＶ ＧＶ （配列番号１１） をもち製造される。
【００７３】 本発明に従って製造され得る、もしくは対照としての他の代表的ポリペプチド
を、以下の表１に示す。
【００７４】
【表２】
【００７５】 当該ペプチドは、ＦＭＯＣ処置および最初の８残基のための二重カップリング
(double coupling)プロトコルを使用して合成されうる。通常、当該ペプチドは 、アミドの形態としてのカルボキシル末端をもち製造される。当該ペプチドは調
製ＨＰＬＣを使用して精製されることができ、そして分析的ＨＰＬＣ、アミノ酸
分析および質量分析光度計(mass spectrophotometer)により分析されうる。当該
ペプチドは、ＨＰＬＣの基準により９５％より大きく、通常は９８％より大きく
純粋であるべきである。乾燥ペプチドを乾燥剤とともにガラスバイアル中で−２
０℃で保存する。 II．複合ポリペプチドの製造 複合ポリペプチドは、いかなる複合化段階(conjugation step)も伴わない単一
ペプチドとして、または、チオエーテル法もしくは当業者に既知のいずれかの他
の複合方法を使用することによるペプチドＰ1およびペプチドＰ2の複合により、
合成されうる。
【００７６】 以下の試験のための製剤は、約１０００μｇ／ｍｌのペプチドを含有するよう
に調節され、そして融解の準備ができているアリコートで凍結されて（−２０℃
）保存され、そしてアジュバント（例えば、ミョウバン、ＭＰＬ、ＩＣＦＡ、Ｑ
Ｓ２１、ＳＦ５９、ＳＡＦ−１）および／もしくは担体（例えばリポソームもし
くはノヴァソーム（Ｎｏｖａｓｏｍｅ））と共同して投与されうる。とりわけ、
当該ペプチドは、ノヴァソーム（Ｎｏｖａｓｏｍｅ）アジュバント中で乳化され
うる。例えば、ハンター（Ｈｕｎｔｅｒ）のタイターマックス（ＴｉｔｅｒＭａ
ｘ）（ＣＹＴＲＸ）のような他のアジュバントもまた使用されうる。 III．免疫感作、抗血清の収集および処理 マウス試験動物を使用する腹腔内攻撃モデルを、ＨＳＶ疾患の優勢な提示は腹
腔内でないとは言え、選択した。なぜなら、疾患の再現可能な経過がウイルス攻
撃後に発生するからであり；症状が容易に検出されかつ疾患の経過が質的に評価
され得るために、ウイルス攻撃の用量が十分に定義され得かつ腹腔内注入により
容易に送達され得るからであり；そして、生存の適切なパラメータが容易に評価
されうるからである。免疫機能の研究もまた、試験ワクチンに対する応答をさら
に特徴づけるために、インビトロで実施されうる。 ＩＣＰ２７のペプチドＨ１についての手順Ａ 一連の実験で、３週齢のＢａｌｂ／ｃ雌性マウス（タコニック ファームズ（
Ｔａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓ）、ニューヨーク州ジャーマンタウン）の群（群あ
たり１２匹）を、以下の予定に従って免疫しそして試験放血した。予定Ａ：第０
および１４日に免疫、そして２週間後、各群の９匹のマウスを、腹腔内に投与さ
れた致死用量（＜ＬＤ50）のＨＳＶ（Ｈ１２９臨床株）で穏やかに攻撃する。こ
の点に関して、幼若Ｂａｌｂ／ｃマウスは、疾患の定義された経過を示し、それ
は、腹部腫脹、嗜眠、対麻痺から、１ないし２週以内の死亡まで進行する。従っ
て、ワクチン投与の有効性が容易に決定されうる。
【００７７】 以下の表２は、試験されたペプチドに関して各群を同定する。
【００７８】
【表３】
【００７９】 *１２匹のマウスの群を示されたとおり２群に分割した。 ペプチドの用量は、基礎として１００μｇのＪＨ１を使用して、モル濃度を基礎
として決定した（０．０３３μモル／動物） **３匹の感染したがしかし生存しているマウスは、ＤＴＨもしくは天然に免疫感
作にされた抗血清に利用可能であった。
【００８０】 各免疫感作は、３３ｎモルの複合ポリペプチドもしくは複合されない抗原ペプ
チドＨ１（ＪＨ１ワクチンの１００μｇに同等）から成った。ペプチドを、ノヴ
ァソーム（Ｎｏｖａｓｏｍｅ）リポソームアジュバント（５０ｖ／ｖ％）と混合
した。マウスを、接種の間の２週間の間隔を伴い２度免疫感作した。付加的な２
週間の後、マウスの大部分は、ＨＳＶ−１のＥＫＮ臨床株での腹腔内攻撃を受領
した。マウスを毎日症状について評価した。ＤＴＨの評価を、ＨＳＶ−１攻撃を
受領しなかった３匹のマウスで最初のワクチン投与６週間後に実施した。血液を
、免疫感作前およびウイルス攻撃前にＥＬＩＳＡ研究のため選択されたマウスか
ら得た。結果を、症状について（毎日を基礎とする）図１に、また、ワクチン投
与かつ致死より下(sub-lethal)の攻撃後の生存について図２に示す。
【００８１】 図１では、症状を、 １−非特異的な軽度の症状 ２−腹部の軽度の腫脹 ３−腹部の有意の腫脹および倦怠 ４−無能力化(incapacitation) ５−死亡 のように毎日得点をつけた。
【００８２】 図１から、以下の結論が引き出されうる。すなわち １．ワクチン投与されない（ＮＯ ＶＡＣ）マウスは、攻撃後第１０日まで軽度
の症状を表わし、この時点でそれらは腹部の有意の腫脹および倦怠に苦しめられ
た。１匹のマウスのみが回復した。 ２．ＪＨ１ワクチン投与されたマウスは疾患から保護され、そして２匹のマウス
のみが有意の症状を示し、これらのマウスのうち１匹が死亡した。 ３．Ｈ１ペプチド、ＧＨ１もしくはＬＨ１複合ペプチドでワクチン投与されたマ
ウスは、感染の経過を通じてより重症の症状および死亡を表わした。 ４．Ｈ１ペプチド、ＧＨ１もしくはＬＨ１複合ポリペプチドでのワクチン投与は
疾患の症状を悪化させるようであった。
【００８３】 図２から、最大の生存が、ワクチン投与されない、およびＪＨ１ワクチン投与
されたマウスについて観察されたことがみられる。Ｈ１ペプチド、ＧＨ１もしく
はＬＨ１複合体でのワクチン投与は疾患の症状を悪化させるようであった。
【００８４】 ＤＴＨ応答を、最後の免疫感作後４週間に、ワクチン投与されたマウス、およ
び３匹の疾患から回復したワクチン投与されないＨＳＶで攻撃されたマウス（Ｃ
）について評価した。右耳介の腫脹を、紫外線で不活性化されたＨＳＶの注入後
４８時間に測定し、そして緩衝液で注入されていた左耳介と比較した。結果を図
３に示す。
【００８５】 別の一連の平行実験で、Ｂａｌｂ／ｃ雌性マウス（ｎ＝９）を、上述されたＨ
ＳＶ−１攻撃実験についてと同一のプロトコルに従い、Ｈ１ペプチド、またはＪ
Ｈ１、ＧＨ１もしくはＬＨ１複合ポリペプチドでワクチン投与した。図３からみ
られるとおり、ＤＴＨが、炎症により誘発された発赤により質的に観察され、ま
た、ワクチン投与されないＨＳＶ−１で攻撃されたマウス（Ｃ）およびＪＨ１で
ワクチン投与されたマウスについて定量的に測定されたが、しかし、ＧＨ１、Ｌ
Ｈ１もしくはＨ１ペプチドでワクチン投与されたマウスについてはされなかった
。
【００８６】 上述されたと類似の試験を実施した。Ｂａｌｂ／ｃマウス（４週齢）（ｎ＝６
）を、ワクチン投与しなかった（ＮＯ ＶＡＣ）か、または、Ｈ１ペプチドもし
くは示された複合ポリペプチドでワクチン投与しかつ２週間後に再ワクチン投与
した。マウスをその後、２週間後にＬＤ50のＨＳＶ−１で攻撃した。症状を、 １−非特異的な軽度の症状 ２−腹部の軽度の腫脹 ３−腹部の有意の腫脹および倦怠 ４−無能力化 ５−死亡 のように毎日得点をつけた。
【００８７】 結果を、症状について図４に、生存について図５に、そしてＤＴＨについて図
６に示す。
【００８８】 ワクチン投与されないマウス、およびＨ１ペプチド、ＧＨ１もしくはＬＨ１異
種複合体でワクチン投与されたマウスは、重症の症状および死亡を表わした。し
かしながら、ＪＨ１でワクチン投与されたマウスは疾患の症状および死亡から保
護された（図４および５を参照）。
【００８９】 ＤＴＨ応答を、ワクチン投与されたマウス、および３匹の疾患から回復したワ
クチン投与されないＨＳＶで攻撃されたマウス（Ｃｔｒｌ）について、最終免疫
感作４週間後に評価した。
【００９０】 この実験で使用されたプロトコルは図３のものとわずかに異なった。右耳介の
腫脹を、紫外線で不活性化されたＨＳＶの注入前ならびに２４、４８および９６
時間後にマイクロメーターにより測定し、そして、感染していないベロ細胞抽出
物で注入した左耳介と比較した。結果を図６に示す。
【００９１】 図６から、ＤＴＨが、ワクチン投与されないＨＳＶ−１で攻撃された（Ｃ）お
よびＪＨ１でワクチン投与された群のマウスの全部について、炎症により誘発さ
れた発赤により質的かつ量的に各日に観察されたことがみられる。若干の腫脹が
、ＧＨ１、ＬＨ１もしくはＨ１ペプチドでワクチン投与されたマウスの数匹（し
かし全部でない）について観察されたが、しかし、発赤はされなかった。
【００９２】 上の結果から、複合ポリペプチド（ここで、Ｔ細胞結合ペプチドがＴｈ１型の
免疫応答を主に導き出す、例えばペプチドＪ）での免疫が、ＨＳＶ−１での腹腔
内感染の後に疾患および死亡からの保護を提供することが理解される。
【００９３】 抗原ペプチド、例えばペプチドＨ１に対する抗体応答はＥＬＩＳＡにより検出
不可能である。
【００９４】 本発明の複合ポリペプチドで免疫感作にされたマウスは、ＨＳＶ−１に対する
ＤＴＨ応答についての能力を発達する。
【００９５】 抗原ペプチド単独も、ＬＨ１複合ポリペプチド（Ｔ細胞結合ペプチドＬは主に
ＴＨ２型の応答を導き出すことを特徴とする）も、ＧＨ１複合ポリペプチドも、
保護を導き出さず、そして、実際、ＨＳＶ攻撃の後に、悪化された疾患および死
亡率を有しうる。これらのポリペプチドはＤＴＨ応答を導き出さなかった。
【００９６】 保護およびＤＴＨ応答の導出は、本発明の複合ポリペプチドでの免疫感作がＴ
Ｈ１のＴ細胞応答を刺激すること、および、Ｔ細胞応答が保護に十分であること
を示す。
【００９７】 これらの試験は、従って、ＨＳＶに対する抗原ペプチドに対するＴＨ１型の免
疫応答を導き出すＴ細胞特異的結合ペプチドを共有結合することもしくは複合す
ること(conjugating)が、ＴＨ１型のＴ細胞応答の発生を高めかつ促進しうるこ とを確証する。これらの研究は、この免疫応答が感染性の攻撃からの保護を導き
出すのに十分であり得ることを示す最初のものであると考えられる。 糖タンパク質ＢのペプチドＢ１についての手順Ｂ 単純疱疹ウイルスの治療のための有効なワクチンとしての本発明の複合ペプチ
ドの有効性をさらに確立するために、ＨＳＶ−１もしくはＨＳＶ−２双方で見出
される糖タンパク質ＢのＴ細胞エピトープ（ａａ４９８−５０５、ＳＳＩＥＦＡ
ＲＬ）であるＨＳＶのエピトープＢ１（ハンケ（Ｈａｎｋｅ）ら、Ｊ．Ｖｉｒｏ
ｌ．６５：１１７７−８６；およびボンニュ（Ｂｏｎｎｅａｕ）ら、Ｖｉｒｏｌ
ｏｇｙ １９５：６２−７０を参照）を選択し、そして上述されたようなペプチ
ドＪもしくはペプチドＧもしくはペプチドＬのいずれかを用いて評価した。すな
わち、上の表１に記述されたような複合ペプチドＧＢ１、ＪＢ１およびＬＢ１を
、Ｂａｌｂ／ｃマウスの代わりに、Ｃ５７ＢＩ６マウスを、Ｂ１複合ペプチドも
しくは複合されないＢ１ペプチド（配列番号４）でワクチン投与したことを除き
、前に記述されたと同一条件下で試験した。生存の結果を表７に示す。Ｂ１ペプ
チドもしくは複合ペプチドＬＢ１で免疫感作にされたマウスは、ＨＳＶ−１攻撃
から保護されず（第８日後、それぞれ９中０、もしくは９中１の生存）、そして
、事実、Ｂ１およびＬＢ１で免疫感作にされたマウスは、対照（ワクチン投与さ
れない）マウスより悪く進行した(fared)（第８日後に９中２の生存）。
【００９８】 対照的に、複合ペプチドＧＢ１もしくはＪＢ１でワクチン投与されたマウスは
、それぞれ５５．５％（９中５）および４４．４％（９中４）の生存を有し、部
分的保護を暗示する。
【００９９】 図６に関連して前に記述されたような３匹の攻撃されない免疫感作にされたマ
ウスで実施されたＤＴＨ試験では、ＪＢ１複合ペプチドワクチンで免疫感作にさ
れたマウスおよびＨＳＶで攻撃された生存するマウスのみがＤＴＨ応答を表わし
た。ＧＢワクチン投与されたマウスおよびＢペプチドでワクチン投与されたマウ
スはＤＴＨ応答を表わさなかった。
【０１００】 ワクチン投与されかつ攻撃されないマウス、ワクチン投与されかつ攻撃された
マウス、およびワクチン投与されずかつ攻撃されたマウスの抗体応答を、ＥＬＩ
ＳＡアッセイにより測定した。血清を、最初の免疫感作７週間後もしくはウイル
ス攻撃２週間後に得た。Ｂ１ペプチドもしくは感染した細胞の抽出物を抗原とし
てＥＬＩＳＡプレートに結合した。結果を表３に示し、そして２もしくは３匹の
マウスから採取されたプールされた血清から取った。この結果を、関連しない抗
原に対して得られた吸光度を差し引くことにより、非特異的応答について補正し
た。
【０１０１】
【表４】
【０１０２】 表３に報告された結果から、特異的抗体が複合ペプチドワクチンでの免疫感作
後に検出されなかったことがみられる。また、ウイルス抗原全体に対する応答で
の有意差が、免疫感作されないマウスについて観察されなかった。
【０１０３】 ウイルス攻撃に際してＪＢ１ワクチンで予備免疫感作されたマウスについての
Ｂ１ペプチドに対する大きな応答は、免疫感作のプライム−ブースト(prime-boo
st)機構、すなわち抗体産生と矛盾しない。
【０１０４】 ポリペプチドＪＨ１およびＧＨ１での試験の結果がポリペプチドＪＢ１および
ＧＢ１での結果と比較される場合、ＧＨ１ポリペプチドでの保護の欠如に比較し
て、ＧＢ１ポリペプチドによりもたらされる保護が、ペプチドＪ複合ポリペプチ
ドの双方が保護を与えた一方、Ｂ細胞（Ｔｈ２）およびＴ細胞（Ｔｈ１）応答双
方を導き出すペプチドＧの結果でありうることが推測される。同様に、Ｂ１ペプ
チドがＣＴＬエピトープおよびＢ細胞エピトープ双方を表わすと考えられる。
【０１０５】 従って、当業者は、上の結果を考慮して、ＨＳＶ抗原ペプチドのエピトープの
性質を基礎として、標的細胞の発現、および、ＴＣＢＬが向けられる応答の性質
、保護的免疫の型、そして、従って、本発明の複合ポリペプチドおよびそれを基
礎とするＨＳＶに対するワクチンを形成するためのＴＣＢＬおよび抗原ペプチド
の最も適切な組み合わせを決定することができるであろう。
【０１０６】
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＨＳＶ−１での腹腔内攻撃後のワクチン投与されないおよびワクチン投与され
たマウス（ＨＳＶ−１のＩＣＰ２７からの抗原ペプチドを基礎とした複合ポリペ
プチド、もしくは抗原ペプチド単独を使用して）の、ウイルス攻撃後の症状の状
態の結果（攻撃後日数に対する平均症状得点）をプロットするグラフである。
【図２】 図１で示された研究で使用されたと同一のワクチン投与されたおよびワクチン
投与されないマウスの、ウイルス攻撃後の生存の結果（攻撃後日数に対する生存
体(survivors)の％）をプロットするグラフである。
【図３】 図１に示された研究で使用されたような、３匹の生存するワクチン投与されな
いマウスおよびワクチン投与された攻撃されないマウスのそれぞれ３匹について
の遅延型過敏症（４８時間後の腫脹のようなＤＴＨ応答）の結果をプロットする
グラフである。
【図４】 図１に類似の、しかし、ＬＤ50のＨＳＶ−１でワクチン投与されたおよびワク
チン投与されないマウスの攻撃後の第二の試験処置におけるグラフである。
【図５】 図２に類似の、しかし図４を調製するのに使用されたマウスの生存についての
グラフである。
【図６】 図４を調製するのに使用された、ワクチン投与されないおよびワクチン投与さ
れたマウスについての腫脹（％）としての遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答のグラフ
である（複合ポリペプチドもしくは抗原ＨＳＶペプチド単独のいずれかを使用す
る）。
【図７】 ワクチン投与されないおよびワクチン投与されたマウスについての生存パーセ
ント対時間（攻撃後日数）のグラフである（ＨＳＶ−１の糖タンパク質Ｂからの
抗原ペプチドを基礎とした複合ポリペプチド、もしくは抗原ペプチド単独を使用
する）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 14/035 Ｃ０７Ｋ 14/47 14/47 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ローゼンタール，ケネス・エス アメリカ合衆国オハイオ州44333アクロ ン・ハーベストドライブ320 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 BA23 NA14 ZB332 4C085 AA03 BA79 BB11 4H045 AA10 AA30 BA15 BA16 BA17 BA18 BA42 BA53 DA86 EA29 EA31 EA53

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 単純疱疹ウイルスによる感染症の治療もしくは予防のための
    ワクチン中の免疫原として有効な免疫原性の複合ポリペプチドであって、前記ポ
    リペプチドが式Ｐ1−ｘ−Ｐ2もしくはＰ2−ｘ−Ｐ1により表わされ、 式中、Ｐ1が、ＩＣＰ２７、糖タンパク質Ｂ、リボヌクレオチドレダクターゼ 、ＩＣＰ４、ＩＣＰ３４．５、糖タンパク質Ｅおよび糖タンパク質Ｆから成る群
    から選択される、単純疱疹ウイルスタイプ１もしくはタイプ２のタンパク質から
    の単純疱疹ウイルス特異的抗原ペプチドを表わし； Ｐ2が、Ｔ細胞の１種のクラスもしくはサブクラスへの結合を促進する免疫タ ンパク質の一部でありかつ主にＴＨ１型の免疫応答をペプチドＰ1に向ける免疫 調節ペプチドを表わし；そして ｘが、共有結合、または切断可能なもしくは非切断可能なペプチド連結基を表
    わすポリペプチド。
  2. 【請求項２】 ペプチドＰ1が、 ＬＹＲ ＴＦＡ ＧＮＰ ＲＡ （配列番号１） ＡＥＩ ＤＹＡ ＴＬＧ ＶＧＶ （配列番号２） ＤＹＡ ＴＬＧ ＶＧＶ （配列番号３） および ＳＳＩ ＥＦＡ ＲＬ （配列番号４） から成る群から選択される、請求項１に記載の複合ポリペプチド。
  3. 【請求項３】 ぺプチドＰ2が、 ＤＬＬ ＫＮＧ ＥＲＩ ＥＫＶ Ｅ （配列番号１９） およびＮＧＱ ＥＥＫ ＡＧＶ ＶＳＴ ＧＬＩ （配列番号２０） から成る群から選択される、請求項１に記載の複合ポリペプチド。
  4. 【請求項４】 ＤＬＬ ＫＮＥ ＧＥＲ ＩＥＫ ＶＥＧ ＧＧＬ ＹＲＴ ＦＡＧ ＮＰＲ Ａ （Ｊ−Ｈ１） （配列番号１０） ＤＬＬ ＫＮＧ ＥＲＩ ＥＫＶ ＥＧＧ ＧＳＳ ＩＥＦ ＡＲＬ （Ｊ−Ｂ
    １） （配列番号１６）および ＮＧＱ ＥＥＫ ＡＧＶ ＶＳＴ ＧＬＩ ＧＧＧ ＳＳＩ ＥＦＡ ＲＬ （
    Ｇ−Ｂ１） （配列番号１７） から成る群から選択される、請求項１に記載の複合ポリペプチド。
  5. 【請求項５】 請求項１に記載の複合ポリペプチド、および製薬学的に有効
    な担体を含んで成る、単純疱疹ウイルスの治療もしくは予防で有効な組成物。
  6. 【請求項６】 請求項１に記載の複合ポリペプチドの治療上有効な量を、そ
    れを必要とする患者に投与することを含んで成る、単純疱疹ウイルスの治療もし
    くは予防方法。
  7. 【請求項７】 個体からのＴ細胞を請求項１で定義されるような式Ｐ1−ｘ −Ｐ2もしくはＰ2−ｘ−Ｐ1により表わされる複合ポリペプチドと混合すること 、そしてＴ細胞と複合ペプチドとの間の反応を検出することを含んで成る、単純
    疱疹ウイルスによる、個体での活動性もしくは潜伏性の感染症の存在の診断方法
    。
  8. 【請求項８】 複合ポリペプチドが、前記反応の検出を助長するために検出
    可能な種で標識されている、請求項１の方法。
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