PT2007756E - Modeladores de transportadores de cassetes de ligação de atp - Google Patents

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PT2007756E
PT2007756E PT77552982T PT07755298T PT2007756E PT 2007756 E PT2007756 E PT 2007756E PT 77552982 T PT77552982 T PT 77552982T PT 07755298 T PT07755298 T PT 07755298T PT 2007756 E PT2007756 E PT 2007756E
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PT77552982T
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Fredrick Van Goor
Brian Bear
Jinglan Zhou
Xiaoqing Yang
Peter D J Grootenhuis
Sara S Hadida Ruah
Mark T Miller
Jason Mccartney
Mehdi Michel Jamel Numa
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Vertex Pharma
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Description

DESCRIÇÃO
"MODELADORES DE TRANSPORTADORES DE CASSETES DE LIGAÇÃO DE ATP"
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção relaciona-se com modeladores de transportadores de Cassetes de Ligação ao ATP ("ATP") ou fragmentos relacionados, incluindo o Regulador Transmembranar de Condutância de Fibrose Cística ("CFTR"), composições relacionadas e métodos derivados. Também aqui descritos estão métodos de tratamento de doenças mediadas por transportadores ABC usando os referidos modeladores.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Os transportadores ABC são uma família de proteínas de transporte membranares que regulam o transporte de uma diversidade de agentes farmacológicos, fármacos potencialmente tóxicos e xenobióticos, assim como aniões. Os transportadores ABC são proteínas homólOgas de membrana que se ligam e usam o trifosfato de adenosina (ATP) para as suas atividades específicas. Alguns desses transportadores foram descobertos enquanto proteínas resistentes a multifármacos (como a glicoproteína MDR1-P, ou a proteína resistente a multifármacos MRP1), defendendo as células malignas contra agentes quimioterapêuticos. Até à data, 48 Transportadores ABC foram identificados e agrupados em 7 famílias com base na sua identidade de sequência e função.
Os transportadores ABC regulam uma variedade de importantes papéis fisiológicos no corpo e fornecem defesa contra compostos ambientalmente nocivos. Devido a isto, eles representam importantes alvos farmacológicos potenciais para o tratamento de doenças associadas com defeitos no transportador, prevenção do transporte de fármacos para fora da célula-alvo, e intervenção Numa outras doenças em que a modelação da atividade do transportador ABC pode ser benéfica.
Um membro da família dos transportadores ABC comummente associado com doença é o canal de aniões mediado por cAMP/ATP, CFTR. 0 CFTR é expresso numa diversidade de tipos celulares, incluindo células epiteliais absortivas e secretórias onde regula o fluxo de aniões através da membrana, assim como a atividade de outros canais iónicos e proteínas. Em células epiteliais, o normal funcionamento do CFTR é crítico para a manutenção do transporte de eletrólitos através do corpo incluindo o tecido respiratório e digestivo. 0 CFTR é composto por aproximadamente 1480 aminoácidos que codificam uma proteína formada por uma repetição em tandem de domínios transmembranares, cada um contendo seis hélices transmembranares e um domínio de ligação nucleotídico. Os dois domínios transmembranares são ligados por um domínio grande, polar, regulador (R) com múltiplos locais de fosforilação que regulam a atividade do canal e o transporte celular. O gene codificante do CFTR foi identificado e sequenciado (ver Gregory, R. J. et ai. (1990) Nature 347:382-386; Rich, D. P. et al. (1990) Nature 347:358-362), (Riordan, J. R. et al. (1989) Science 245:1066-1073). Um defeito neste gene causa mutações no CFTR resultando em Fibrose Cística ("CF"), a doença genética mais comumente fatal em humanos. A Fibrose Cística afeta aproximadamente uma em cada 2,500 crianças nos Estados Unidos da América. No seio da população total dos Estados Unidos da América, até 10 milhões de pessoas transportam uma cópia única do gene defeituoso sem aparentes efeitos sintomatológicos. Em contraste, indivíduos com duas cópias do gene associado a CF sofrem dos efeitos debilitantes e fatais de CF, incluindo a doença pulmonar crónica.
Em pacientes com fibrose cística, mutações no CFTR endogenamente expressas no epitélio respiratório levam a uma redução na secreção de aniões apical causando um desequilíbrio no transporte de fluídos e aniões. 0 decréscimo resultante no transporte de aniões contribui para uma acumulação aumentada de muco no pulmão e infeções microbianas associadas que ultimamente causam a morte em pacientes com CF. Além da doença respiratória, os pacientes de CF tipicamente sofrem de problemas gastrointestinais e insuficiência pancreática que, se deixada por tratar, resulta em morte. Adicionalmente, a maioria dos pacientes masculinos com fibrose cística é infértil e a fertilidade diminui entre pacientes femininas com fibrose cística. Em contraste com os efeitos severos das duas cópias do gene associado com CF, indivíduos com uma cópia do gene associado com CF exibem resistência aumentada à cólera e desidratação resultante de diarreia - talvez explicando a frequência relativamente alta do gene da CF na população. A análise da sequência no gene CFTR do cromossoma CF revelou uma variedade de mutações causadoras de doenças (Cutting, G. R. et ai. (1990) Nature 346:366; Dean, M. et ai. (1990) Cell 61:863-870; e Kerem, B-S. et ai. (1989) Science 245:1073-1080; Kerem, B-S et ai. (1990) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87:8447-8451) . Até à data, mais de 1000 mutações responsáveis por causar doenças no gene da CF foram identificadas (http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/). A mutação mais prevalente é uma deleção da fenilalanina na posição 508 da sequência de aminoácidos do CFTR, e é comummente referida como AF508-CFTR. Esta mutação ocorre em aproximadamente 70% dos casos de fibrose cística e está associada com uma doença grave. A deleção do resíduo 508 em AF508-CFTR previne a proteína resultante de se dobrar corretamente. Isto resulta na incapacidade da proteína mutante para sair do retículo endoplasmático ("ER"), e migrar para a membrana plasmática. Como resultado, o número de canais presentes na membrana é notoriamente inferior aquele observado em células expressando o CFTR wild-type. Além do prejuízo no transporte, a mutação resulta num defeito na entrada do canal. Conjuntamente, o número reduzido de canais na membrana e o defeito na entrada levam a um transporte reduzido de aniões através do epitélio resultando a um transporte defeituoso de iões e fluídos. (Quinton, P. M. (1990), FASEB J. 4:2709-2727). Estudos mostraram, contudo, que os números reduzidos de AF508-CFTR na membrana são funcionais, embora sendo menos do que o CFTR wild-type. (Dalemans et ai. (1991), Nature Lond. 354: 526-528; Denning et ai., supra; Pasyk e Foskett (1995). J. Cell. Biochem. 270: 12347-50). Além do AF508-CFTR, outras mutações causadoras de doenças no CFTR que resultam em defeitos no transporte, síntese e/ou entrada do canal podem ser reguladas a montante ou a jusante para alterar a secreção de aniões e modificar a progressão e/ou gravidade da doença.
Embora o CFTR transporte uma diversidade de moléculas além dos aniões, é claro que este papel (o transporte de aniões) representa um elemento num importante mecanismo de transporte de iões e água através do epitélio. Os outros elementos incluem o canal de Na+ epitelial, ENaC, o co-transportador de Na+/2C1~/K+, a bomba de Na+-K+-ATPase e canais de K+ na membrana basolateral que são responsáveis pela assimilação de cloretos pela célula.
Estes elementos trabalham conjuntamente para obter transporte direcionado via epitélio através da sua expressão e localização seletivas no interior da célula. A absorção de cloreto tem lugar pela atividade coordenada de ENaC e CFTR presentes na membrana apical e a bomba de Na+-K+-ATPase e canais de Cl~ expressos na superfície basolateral da célula. 0 transporte ativo secundário de cloreto a partir da superfície luminal leva à acumulação intracelular de cloreto, que pode então deixar passivamente a célula via canais de Cl”, resultando num transporte vetorial. A disposição do co-transportador Na+/2C1~/K+, da bomba de Na+-K+-ATPase e dos canais basolaterais de K+ da membrana na superfície basolateral e do CFTR na superfície luminal coordenam a secreção de cloreto via CFTR na superfície luminal. Uma vez que a água provavelmente nunca é transportada ativamente por si só, o seu fluxo através do epitélio depende dos pequenos gradientes osmóticos transepiteliais gerados pelo fluxo essencial de sódio e cloro.
Além da Fibrose Cística, a modelação da atividade do CFTR pode ser benéfica para outras doenças não diretamente causadas por mutações no CFTR, tais como doenças secretórias e outras doenças na conformação de proteínas mediadas pelo CFTR. Estas incluem mas não estão limitadas a, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), a síndrome do olho seco e a síndrome de Sjõgren. A COPD é caracterizada por uma limitação na via respiratória que é progressiva e não totalmente reversível. A limitação na via respiratória é devida à hipersecreção mucosa, enfisema, e bronquiolite. Ativadores de CFTR mutante ou wild-type oferecem um potencial tratamento para a hipersecreção mucosa e a desobstrução mucociliar reduzida que é característica da COPD. Especificamente, a secreção de aniões aumentada através do CFTR pode facilitar o transporte de fluídos até ao líquido da superfície respiratória de forma a hidratar a superfície mucosa e a otimizar a viscosidade do fluído periciliar. Isto levaria a uma desobstrução mucociliar aumentada e a uma redução nos sintomas associados com COPD. A síndrome do olho seco é caracterizada por um decréscimo na produção de lágrimas aquosas e um perfil anormal de filme lipídico lacrimal, proteína e mucina. Existem muitas causas para o olho seco, algumas das quais incluem a idade, a cirurgia aos olhos Lasik, a artrite, medicação, queimaduras térmicas/quimicas, alergias, e doenças tais como fibrose cística e síndrome de Sjogren. A secreção de aniões aumentada via CFTR iria aumentar o transporte de fluídos a partir das células endoteliais da córnea e glândulas secretórias na periferia do olho para aumentar a hidratação corneai. Isto ajudaria a aliviar os sintomas associados com a síndrome do olho seco. A síndrome de Sjõgren é uma doença autoimune na qual o sistema imunitário ataca as glândulas produtoras de humidade ao longo do corpo, incluindo o olho, boca, pele, tecido respiratório, fígado, vagina, e intestino. Os sintomas incluem olho, boca e vagina secos, assim como doença pulmonar. A doença é também associada com artrite reumatoide lúpus sistémica, esclerose sistémica, e polimiosite/dermatomiosite. Acredita-se que o tráfego defeituoso de proteínas cause a doença, para o qual as opções de tratamento são limitadas. Modeladores da atividade do CFTR podem hidratar os vários órgãos afetados pela doença e ajudar a reverter os sintomas associados.
Como acima discutido, acredita-se que a deleção do resíduo 508 em AF508-CFTR iniba que a proteína resultante se dobre corretamente, resultando na incapacidade desta proteína mutante para sair do retículo endoplasmático, e migrar para a membrana plasmática. Como resultado, quantidades insuficientes da proteína maturada estão presentes na membrana plasmática e o transporte de cloreto nos tecidos epiteliais é significativamente reduzido. De facto, este fenómeno celular de processamento defeituoso no ER de transportadores ABC por parte da maquinaria do ER, foi também demonstrado como sendo a base subjacente não apenas para a doença da CF, mas também para uma diversidade de doenças isoladas ou hereditariamente adquiridas. As duas formas através das quais a maquinaria do ER pode funcionar defeituosamente incluem a incapacidade à exportação de proteínas do ER levando à sua degradação, ou a acumulação no ER dessas mesmas proteínas defeituosas/erradamente dobradas [Aridor M. et al., Nature Med. 5(7), pp 745- 751 (J 999); Shastry, B. S., et al., Neurochem. International, 43, pp 1-7 (2003); Rutishauser, J. , et al., SwissMed Wkly, 132, pp 211-222 (2002); Morello, J. P. et al., TIPS, 21, pp 466- 469 (2000); Bross P., et al., Human Mut., 14, pp. 186-198 (1999)]. As doenças associadas com a primeira classe de funcionamento deficiente do ER são a fibrose cística (devido à conformação errada AF508-CFTR acima descrita), enfisema hereditário (devido à 1-antitripsina; variantes PiZ-negativas), hemocromatose hereditária, deficiências na coagulação/fibrinólise, tais como a deficiência na proteína C, angioedema hereditário Tipo 1, deficiências no processamento de lípidos tais como hipercolésterolemia familiar, quilomicronemia Tipo I, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, tais como a doença de células I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses (devido a enzimas de processamento lisossomais), Sandhoff/Tay-Sachs (devido à β-hexosaminidase), Crigler-Najjar tipo II (devido à UDP-glucoronil—ácido-siálico transferase), poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus (devido ao recetor de insulina), nanismo Laron (devido ao recetor de hormona de crescimento), deficiência em mieloperoxidase, hipoparatiroidismo primário (devido à hormona preproparatiróide), melanoma (devido à tirosinase). As doenças associadas com a outra classe de funcionamento deficiente do ER são a sindrome de glicoproteina deficiente em carbohidratos (CGD) Tipo 1, enfisema hereditário (devido à al-antitripsina (variante PiZ), hipertiroidismo congénito, osteogénese imperfeita, (devido ao procolagénio Tipo I, II e IV), hipofibrinogenemia hereditária (devido ao fibrinogénio), deficiência ACT (devido a al-antiquimotripsina), diabetes insipidus (Dl), Dl neurohipofiseal (devido à hormona vasopressina/recetor-V2), Dl nefrogénica (devido à aquaporina II), sindrome Charcot-Marie Tooth (devido à proteína 22 mielina periférica), doença de Pelizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas tais como a doença de Alzheimer, (devido à βΑΡΡ e presenilinas) , doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, diversos distúrbios neurológicos relacionados com poliglutamina tal como a doença de Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana, e distrofia miotónica, assim como encefalopatias espongiformes, tais como a doença de Creutzfeldt-Jakob (devido à deficiência no processamento da proteína do prião), doença de Fabry (devido à galactosidade A-lisossomal a) e a sindrome de Gerstmann-Stráussler-Scheinker (devido ao defeito de processamento Prp).
Além da regulação a montante da atividade do CFTR, a redução da secreção de aniões por modeladores CFTR pode ser benéfica para o tratamento de diarreias secretórias, nas quais o transporte de água epitelial é dramaticamente aumentado como resultado de um transporte de cloreto ativado por secretagogo. 0 mecanismo envolve a elevação de cAMP e estimulação do CFTR.
Embora existam numerosos casos de diarreia, as principais consequências das doenças de diarreia, resultando do excessivo transporte de cloreto são similares a todos e incluem desidratação, acidose, deterioração no crescimento e morte.
Diarreias agudas e crónicas representam um importante problema médico em muitas áreas do mundo. A diarreia é tanto um fator significativo na malnutrição como a causa primordial de morte (5 000 000 mortes/ano) em crianças com menos de 5 anos de idade.
As diarreias secretórias são também uma condição perigosa em pacientes de síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) e cistite intersticial (Cl) . Dezasseis milhões de viajantes de países em desenvolvimento até nações industrializadas desenvolvem em cada ano diarreia, com a gravidade e o número de casos de diarreia variando de acordo com o país e a área de migração A diarreia em animais de criação e animais de estimação tais como vacas, porcos e cavalos, ovelhas, cabras, gatos e cães, também conhecida como diarreia animal, é uma causa primordial de morte nestes animais. A diarreia pode resultar de qualquer grande transformação, tal como o desmame e o movimento físico, assim como em resposta a uma variedade de infeções bacterianas e virais e geralmente ocorrendo nas primeiras horas de vida do animal. A bactéria mais comummente causadora de diarreia é a E. coli enterotoxigénica (ETEC) possuindo o antigénio pilus K99. Causas virais comuns da diarreia incluem o rotavirus e o coronavirus. Outros agentes infeciosos incluem criptosporidium, giardia lamblia, e salmonela, entre outros.
Sintomas da infeção rotoviral incluem a excreção de fezes aquosas, desidratação e fraqueza. 0 coronavirus causa uma doença mais severa em animais recém-nascidos e possui uma taxa de mortalidade mais alta que a infeção rotoviral. Muitas vezes, contudo, um jovem animal pode ser infetado com mais do que um virus ou com uma combinação de microrganismos virais e bacterianos ao mesmo tempo. Este facto aumenta dramaticamente a gravidade da doença.
Concordantemente, existe uma necessidade para modeladores da atividade de um transportador ABC, e composições relacionadas, que podem ser usadas para modelar a atividade de um transportador ABC na membrana celular de um mamífero. WO 2005/075435 AI descreve modeladores para transportadores ABC ou fragmentos relacionados. WO 2005/016884 AI relaciona-se com derivados ciclopropilo como os agonistas de recetores NK3 sendo úteis no tratamento de, p.ec., distúrbios psicóticos. WO 2004/041277 AI descreve derivados carbonilamino-benzimidazolo como modeladores de recetores androgénicos. Estes compostos são úteis no aumento do tónus muscular enfraquecido e no tratamento de condições causadas por deficiências de androgénios ou que podem ser melhoradas através da administração de androgénios. EP 1380576 AI descreve um novo composto 1-H-indazolo possuindo excelente atividade inibitória de JNK. WO 2004/056745 A2 relaciona-se com acetamides adamantil como os inibidores da 11-beta hidróxiésteróide desidrogenase. WO 2003/002533 AI descreve indolos triamida-substituidos, benzofuranos e benzotiofenos como inibidores da proteína microssomal de transferência de triacilglicéridos (MTP) e/ou da secreção de apolipoproteina B (Apo B) . Estes compostos são úteis no tratamento de obesidade e distúrbios lipídicos. WO 2004/035571 AI descreve indolos substituídos e o seu uso como inibidores de HCV. Os compostos aqui divulgadors são úteis na inibição da infeção HCV de uma célula e em particular no tratamento da infeção HCV num mamífero.
Existe uma necessidade para métodos de tratamento de doenças mediadas por transportadores ABC usando os referidos modeladores da atividades dos transportadores ABC.
Existe uma necessidade para métodos de modelação da atividade de transportadores ABC numa membrana celular ex vivo de um mamífero.
Existe uma necessidade para modeladores da atividade do CFTR que podem ser usados para modelar a atividade do CFTR na membrana celular de um mamífero
Existe uma necessidade para métodos de tratamento de doenças mediadas pelo CFTR usando os referidos modeladores da atividade do CFTR.
Existe uma necessidade para métodos de modelação da atividade do CFTR numa membrana celular ex vivo de um mamífero.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Foi agora descoberto que compostos desta invenção, e composições farmaceuticamente aceitáveis relacionadas, são úteis enquanto modeladores da atividade de transportadores ABC, particularmente da atividade do CFTR. Estes compostos possuem a fórmula genérica Ic:
ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado, onde Ri, R2, anel A, anel B, e n são abaixo definidos.
Estes compostos e composições farmaceuticamente aceitáveis são úteis no tratamento ou diminuição da gravidade de uma diversidade de doenças, distúrbios, ou condições incluindo, mas não estando limitadas a, fibrose cística, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária deficiências na coagulação/fibrinólise, tais como a deficiência na proteína C, angioedema hereditário Tipo 1, deficiências no processamento de lípidos tais como hipercolésterolemia familiar, quilomicronemia Tipo I, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, tais como a doença de células I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses,
Sandhoff/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo Laron, deficiência em mieloperoxidase, hipoparatiroidismo, melanoma, síndrome de glicoproteína deficiente em carbohidratos (CGD) Tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congénito, osteogénese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência
ACT, diabetes insipidus (DI), DI neurohipofiseal, DI nefrogénica, sindrome Charcot-Marie Tooth, doença de
Pelizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas tais como a doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, diversos distúrbios neurológicos relacionados com poliglutamina tal como a doença de Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana, e distrofia miotónica, assim como encefalopatias espongiformes, tais como a doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Fabry, sindrome de Gerstmann-Stráussler-Scheinker, COPD, doença do olho seco, e sindrome de Sj õgren.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO I. DEFINIÇÕES
Como aqui usadas, as seguintes definições deverão aplicar-se a não ser quando indicado em contrário. 0 termo "transportador ABC" como aqui usado refere-se a uma proteína do transportador ABC ou um fragmento relacionado compreendendo pelo menos um domínio de ligação, onde a referida proteína ou fragmento relacionado está presente in vivo ou in vitro. 0 termo "domínio de ligação" como aqui usado refere-se a um domínio no transportador ABC que se pode ligar a um modelador. Ver, p. ex., Hwang, T. C. et al., J. Gen. Physiol. (1998): 111(3), 477-90. O termo "CFTR" como aqui usado refere-se a um regulador transmembranar de condutância de fibrose cística ou a uma mutação relacionada capaz de regular a atividade do regulador, incluindo, mas não estando limitada a, AF508 CFTR e G551D CFTR (ver, p. ex., http: /./www.genet.sickklds.Gn.ca/cftr/, para mutações CFTR. 0 termo "modelar" como aqui usado refere-se ao aumento ou decréscimo de uma grandeza mensurável, p. ex., atividade. Compostos que modelam a atividade dos transportadores ABC, como a atividade do CFTR, através do aumento da atividade do transportador ABC, p. ex., um canal de aniões CFTR, são denominados de agonistas. Compostos que modelam a atividade dos transportadores ABC, tal como a atividade do CFTR, através do decréscimo da atividade do transportador ABC, p. ex., um canal de aniões CFTR, são denominados de antagonistas. Um agonista interage com um transportador ABC, tal como um canal de aniões CFTR, aumentando a capacidade do recetor para transduzir um sinal intracelular em resposta a uma ligação do ligando endógeno. Um antagonista interage com um transportador ABC, tal como CFTR, e compete com o(s) ligando (s) endógeno (s) ou substrato (s) pelo(s) local (is) de ligação ao recetor para diminuir a capacidade do recetor para transduzir um sinal intracelular em resposta à ligação do ligando endógeno. A frase "tratar ou reduzir a gravidade de uma doença mediada por transportadores ABC" refere-se tanto aos tratamentos para doenças que são diretamente causadas por transportadores ABC e/ou atividades do CFTR, como para a aliviação dos sintomas de doenças não diretamente causadas por transportadores ABC e/ou atividades do canal de aniões do CFTR. Exemplos de doenças cujos sintomas podem ser afetados por transportadores CFTR ou pela atividade do CFTR incluem, mas não estão limitadas a, fibrose cistica, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária deficiências na coagulação/fibrinólise, tais como a deficiência na proteína C, angioedema hereditário Tipo 1, deficiências no processamento de lípidos tais como hipercolésterolemia familiar, quilomicronemia Tipo I, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, tais como a doença de células I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses, Sandhoff/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo Laron, deficiência em mieloperoxidase, hipoparatiroidismo, melanoma, síndrome de glicoproteína deficiente em carbohidratos (CGD) Tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congénito, osteogénese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência ACT, diabetes insipidus (Dl), Dl neurohipofiseal, Dl nefrogénica, síndrome Charcot-Marie Tooth, doença de Pelizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas tais como a doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, diversos distúrbios neurológicos relacionados com poliglutamina tal como a doença de Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana, e distrofia miotónica, assim como encefalopatias espongiformes, tais como a doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Fabry, síndrome de Gerstmann-Stráussler-Scheinker, COPD, doença do olho seco, e síndrome de Sj õgren.
Para os propósitos desta invenção, os elementos químicos estão identificados em concordância com a Tabela Periódica dos Elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry e Physics, 75a Edição. Adicionalmente, os princípios gerais da química orgânica são descritos em "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, e "March's Advanced Organic Chemistry", 5a Edição, Ed. Smith, M.B. e March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001.
Como aqui descrito, compostos da invenção podem ser opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, tal como ilustrados genericamente acima, ou como exemplificado nas classes, subclasses e espécies particulares da invenção.
Como aqui usado, o termo "alifático" engloba os termos "alquil", alquenil", "alquinil", cada um dos quais sendo opcionalmente substituído tal como definido abaixo.
Como aqui usado, um grupo "alquil" refere-se a um grupo hidrocarbonado alifático saturado contendo 1-12 (p. ex., 1- 8, 1-6, ou 1-4) átomos de carbono. Um grupo alquílico pode ser linear ou ramificado. Exemplos de grupos alquílicos incluem, mas não estão limitados a metil, etil, propil, isopropil, butil, isobutil, sec-butil, tert-butil, n-pentil, n-heptil, ou 2-etilhexil. Um grupo alquil pode ser substituído (i.e., opcionalmente substituído) com um ou mais substituintes como halo, fosfo, cicloalifático [p. ex., cicloalquil ou cicloalquenil], heterocicloalifático [p. ex., heterocicloalquil ou heterocicloalquenil], aril, heteroaril, alcóxi, aroil, heteroaroil, acil [p. ex., (alifático)carbonil, (cicloalifático) carbonil, ou (heterocicloalifático) carbonil], nitro, ciano, amido [p. ex., (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino Alquilaminocarbonil, cicloalquilaminocarbonil, heterocicloalquilaminocarbonil, arilaminocarbonil, ou heteroarilaminocarbonil], amino [p. ex., alifáticoamino, cicloalifáticoamino, ou heterocicloalifáticoamino], sulfonil [p. ex., alifático-SC^-] , sulfinil, sulfanil, sulfóxi, ureia, tioureia, sulfamoil, sulfamida, oxo, carbóxi, carbamoil, cicloalifático-óxi, heterocicloalifático-óxi, arilóxi, heteorarilóxi, aralquilóxi, heteroarilalcóxi, alcóxicarbonil, alquilcarbonilóxi, ou hidróxi. Sem limitação, alguns exemplos de grupos alquílicos substituídos incluem carbóxialquil (tal como HOOC-alquil, alcóxicarbonilalquil, e alquilcarbonilóxialquil), cianoalquil, hidróxialquil, alcóxialquil, acilalquil, aralquil, (alcóxiaril)alquil, (sulfonilamino)alquil (tal como (alquil-SCh-amino) alquil) , aminoalquil, amidoalquil, (cicloalifátil)alquil, ou haloalquil.
Como aqui usado, o grupo "alquenil" refere-se a um grupo carbonado alifático que contém 2-8 (p. ex., 2-12, 2-6, ou 2-4) átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla. Como um grupo alquílico, um grupo alquenílico pode ser linear ou ramificado. Exemplos de grupos alquenílicos incluem, mas não estão limitados a, alil, isoprenol, 2-butebol, 2-hexenil. Um grupo alquenílico pode ser opcionalmente substituído pode um ou mais substituintes como halo, fosfo, cicloalifático [p.e., cicloalquil ou cicloalquenil], heterocicloalifático [p.e., heterocicloalquil ou heterocicloalquenil] , aril, heteroaril, alcóxi, aroil, heteroaroil, acil [p. ex., (alifático)carbonil, (cicloalifático)carbonil, ou (heterocicloalifático)carbonil, nitro, ciano, amido [p.e., (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarboilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbobilamino, heteroaralquilcarbonilamino alquilaminocarbonil, cicloalquilaminocarbonil, heterocicloalquilaminocarbonil, arilaminocarbonil, ou heteroarilaminocarbonil], amino (p. ex., alifáticoamino, cicloalifáticoamino, heterocicloalifáticoamino, ou alifáticosulfonilamino] , sulfonil [p. ex., alquil-SC>2-, cicloalifático-S02-, ou aril-SC^-], sulfinil, sulfanil, sulfóxi, ureia, tioureia, sulfamoil, sulfamida, oxo, carbóxi, carbamoil, cicloalifático-óxi, arilóxi, heteroarilóxi, aralquilóxi, heteroaralcóxi, alcóxicarbonil, alquilcarbonilóxi, ou hidróxi. Sem limitação, alguns exemplos de grupos alquenílicos substituídos incluem cianoalquenil, alcóxialquenil, acilalquenil, hidróxialquenil, aralquenil, (alcóxiaril)alquenil, (sulfonilamino)alquenil (tal como (alquil-SCh-amino)alquenil), aminoalquenil, amidoalquenil, (cicloalifático)alquenil, ou haloalquenil.
Como aqui usado, um grupo "alquinil" refere-se a um grupo carbonado alifático que contém 2-8 (p. ex., 2-12, 2-6 ou 2-4) átomos de carbono e possui pelo menos uma ligação tripla. Um grupo alquinílico pode ser linear ou ramificado. Exemplos de um grupo alquinílico incluem, mas não estão limitados a, propargil e butinil. Um grupo alquinílico pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes tais como aroil, heteroaroil, alcóxi, cicloalquilóxi, heterocicloalquilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, aralquilóxi, nitro, carbóxi, ciano, halo, hidróxi, sulfo, mercapto, sulfanil [p. ex., alifáticosulfanil ou cicloalifáticosulfanil), sulfinil (p. ex., alifáticosulfinil ou cicloalifáticosulfinil], sulfonil [p. ex., alifático-S02-, alifáticoamino-S02-, ou cicloalifático-S02-] , amido [p. ex., aminocarbonil, a1quilaminocarbonil, a1qui1carbonilamino, cicloalquilaminocarbonil, heterocicloalquilaminocarbonil, cicloalquilcarbonilamino, arilaminocarbonil, ari1carbonilamino, ara1qui1carbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, heteroarilcarbonilamino ou heteroarilaminocarbonil], ureia, tioureia, sulfamoil, sulfamida, alcóxicarbonil, alquilcarbonilóxi, cicloalifático, heterocicloalifático, aril, heteroaril, acil [p. ex., (cicloalifático)carbonil ou (heterocicloalifático) carbonil], amino [p.ex, alifáticoamino], sulfóxi, oxo, carbóxi, carbamoil, (cicloalifático)óxi, (heterocicloalifático) óxi, ou (heteroaril)alcóxi.
Como aqui usado, um "amido" engloba tanto "aminocarbonil" como carbonilamino. Estes termos quando usados isoladamente ou em ligação com outro grupo referem-se a um grupo amido tal como -N (Rx)-C (0)-RY ou -C (0) -N (Rx) 2, quando usado terminalmente, e -C(0)N(Rx) ou -N (Rx) -C (0) - quando usado internamente, onde Rx e RY são abaixo definidos. Exemplos de grupos amido incluem alquilamido (tal como alquilcarbonilamino ou alquilaminocarbonil), (heterocicloalifático)amido, (heteroaralquil)amido, (heteroaril)amido, (heterocicloalquil)alquilamido, arilamido, aralquilamido, (cicloalquil)alquilamido, ou cicloalquilamido.
Como aqui usado, um grupo "amino" refere-se a -NRXRY onde cada um dos Rx e RY é independentemente hidrogénio, alifático, cicloalifático, (cicloalifático)alifático, aril, aralifático, heterocicloalifático, (heterocicloalifático)alifático, heteroaril, carbóxi, sulfanil, sulfinil, sulfonil, (alifático)carbonil, (cicloalifático)carbonil, ( (cicloalifático)alifático)carbonil, arilcarbonil, (aralifático)carbonil, heterocicloalifático)carbonil, (heterocicloalifático)alifático)carbonil, heteroaril)carbonil, ou (heteroaralifático)carbonil, cada um dos quais como aqui definido e sendo opcionalmente substituído. Exemplos de grupos amino incluem alquilamino, dialquilamino ou arilamino. Quando o termo "amino" não é um grupo terminal (p. ex., alquilcarbonilamino), é representado por -NRX-. Rx possui o mesmo significado que aquele acima definido.
Como aqui usado, um grupo "aril" usado isoladamente ou fazendo parte de uma fração maior como em "aralquil", "aralcóxi", ou "arilóxialquil" refere-se a sistemas em anel monociclicos (p. ex., fenil); biciclicos (p. ex., indenil, naftalenil, tetrahidronaftil, tetrahidroindenil); e triciclicos (p. ex., fluorenil, tetrahidrofluorenil, ou tetrahidroantracenil, antracenil) nos quais o sistema em anel monociclico é benzofundido ou pelo menos um dos anéis num sistema de anéis biciclicos ou triciclicos é benzofundido. Os grupos biciclicos e triciclicos incluem anéis carbociclicos benzofundidos de 2-3 membros. Por exemplo, um grupo benzofundido inclui um grupo fenil fundido com dois ou mais frações carbociclicas C4-8. Um aril é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes incluindo alifático [p. ex., alquil, alquenil, ou alquinil]; cicloalifático; (cicloalifático)alifático; heterocicloalifático; (heterocicloalifático)alifático; aril; heteroaril; alcóxi; (cicloalifático)óxi; (heterocicloalifático)óxi; arilóxi; heteroarilóxi; (aralifático)óxi; (heteroaralifático)óxi; aroil; heteroaroil; amino; oxo (num anel carbocíclico não-aromático de compostos benzofundidos biciclicos ou triciclicos aril), nitro; carbóxi; amido; acil [p. ex., (alifático)carbonil; (cicloalifático)carbonil; ((cicloalifático)alifático)carbonil; (aralifático)carbonil; (heterocicloalifático)carbonil; ((heterocicloalifático)alifático)carbonil; ou (heteroaralifático)carbonil]; sulfonil [p. ex., alifático-SO2- ou amino-S02-]; sulfinil [p. ex., alifático-S(0)- ou cicloalifático-S(0)-]; sulfanil [p. ex., alifático-S-]; ciano; halo; hidróxi; mercapto; sulfóxi; ureia; tioureia; sulfamoil; sulfamida; ou carbamoil. Alternativamente, um aril pode ser não-substituído.
Exemplos não-limitantes de grupos arul substituídos incluem haloaril [p. ex., mono-, di (tal como p,m-dihaloaril), e (trihalo)aril] ; (carbóxi)aril [p. ex., (alcóxicarbonil) aril, ( (aralquil)carbonilóxi) aril, e (alcóxicarbonil) aril]; (amido)aril [p. ex., (aminocarbonil) aril, (((alquilamino)alquil)aminocarbonil)aril, (alquilcarbonil)aminoaril, (arilaminocarbonil) aril, e (((heteroaril)amino)carbonil)aril]; aminoaril [p. ex., ((alquilsulfonil) amino) aril ou ((dialquil)amino)aril]; (cianoalquil)aril; (alcóxi) aril; (sulfamoil) aril [p. ex., (aminosulfonil) aril]; (alquilsulfonil)aril; (ciano)aril; (hidróxialquil) aril; ( (alcóxi)alquil) aril; (hidróxi)aril, ( (carbóxi)alquil)aril; (((dialquil)amino)alquil)aril; (nitroalquil) aril; (((alquilsulfonil) amino)alquil)aril; ( (heterocicloalifático)carbonil)aril; ((alquilsulfonil)alquil) aril; (cianoalquil)aril; (hidróxialquil) aril; (alquilcarbonil) aril; alquilaril; (trihaloalquil)aril; p-amino-m-alcóxicarbonilaril; p-amino-m-cianoaril; p-halo-m-aminoaril; ou (m- (heterocicloalifático)-o-(alquil) ) aril.
Como aqui usado, um composto "aralifático" tal como um grupo "aralquil" refere-se a um grupo alifático (p. ex., um grupo Ci-4 alquil) que é substituído por um grupo aril. "Alifático," "alquil" e "aril" são como aqui definidos. Um exemplo de um composto aralifático tal como um grupo aralquil é benzil.
Como aqui usado, um grupo "aralquil" refere-se a um grupo alquílico (p. ex. , um grupo C1-4 alquil) que é substituído por um grupo aril. Ambos os grupos "alquil" e "aril" foram acima definidos. Um exemplo de um grupo aralquil é benzil. Um grupo aralquil é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes como alifático alifático [p. ex., alquil, alquenil, ou alquinil, incluindo carbóxialquil, hidróxialquil, ou haloalquil como trifluorometil], cicloalifático [p. ex., cicloalquil ou cicloalquenil], (cicloalquil)alquil, heterocicloalquil, (heterocicloalquil)alquil, aril, heteroaril, alcóxi, cicloalquilóxi, heterocicloalquilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, aralquilóxi, heteroaralquilóxi, aroil, heteroaroil, nitro, carbóxi, alcóxicarbonil, alquilcarbonilóxi, amido [p. ex., aminocarbonil, a1qui1carbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, ou heteroaralquilcarbonilamino], ciano, halo, hidróxi, acil, mercapto, alquilsulfanil, sulfóxi, ureia, tioureia, sulfamoil, sulfamida, oxo, ou carbamoil.
Como aqui usado, um "sistema em anel bicíclico" inclui estruturas com 8-12 membros (p. ex., 9, 10, ou 11) que formam dois anéis, onde os dois anéis possuem pelo menos um átomo em comum (p. ex., 2 átomos em comum) . Sistemas em anel bicíclicos incluem compostos bicicloalifáticos (p. ex., bicicloalquil ou bicicloalquenil), bicicloheteroalifáticos, bicíclicoaril, e bicíclicoheteroaril.
Como aqui usado, um grupo "carbocíclico" ou "cicloalifático" engloba um grupo "cicloalquil" e um grupo "cicloalquenil", cada um dos quais sendo opcionalmente substituído como acima definido.
Como aqui usado, um grupo "cicloalquil" refere-se a um anel saturado carbocíclico mono- ou bicíclico (fundido ou em ponte) de 3-10 átomos de carbono (p. ex., 5-10) . Exemplos de grupos cicloalquil incluem ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil, adamantil, norbornil, cubil, octahidro-indenil, decahidro-naftil, biciclo[3,2,1]octil, biciclo[2,2,2]octil, biciclo[3,3,l]nonil, biciclo[3,3,2]decil, biciclo[2,2,2]octil, adamantil, ou ((aminocarbonil)cicloalquil)cicloalquil.
Um grupo "cicloalquenil", como aqui usado, refere-se a anéis carbocíclicos não-aromáticos de 3-10 átomos de carbono (p. ex., 4-8) possuindo uma ou mais ligações duplas. Exemplos de grupos cicloalquenil incluem ciclopentenil, 1,4-ciclohexa-di-enil, cicloheptenil, ciclooctenil, hexahidro-indenil, octahidro-naftil, ciclohexenil, ciclopentenil, biciclo[2,2,2]octenil, ou biciclo[3,3,1]nonenil.
Um grupo cicloalquil ou cicloalquenil pode ser opcionalmente substituído por um ou mais substituintes como fósforo, alifático [p. ex., alquil, alquenil, ou alquinil], cicloalifático, (cicloalifático)alifático, heterocicloalifático, (heterocicloalifático)alifático, aril, heteroaril, alcóxi, (cicloalifático)óxi, (heterocicloalifático)óxi, arilóxi, heteroarilóxi, (aralifático)óxi, (heteroaralifático)óxi, aroil, heteroaroil, amino, amido [p. ex., (alifático)carbonilamino, (cicloalifático)carbonilamino, ( (cicloalifático)alifático)carbonilamino, (aril)carbonilamino, (aralifático)carbonilamino, (heterocicloalifático)carbonilamino, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilamino, (heteroaril)carbonilamino, ou (heteroarailalifático)carbonilamino], nitro, carbóxi [p. ex., HOOC-, alcóxicarbonil, ou alquilcarbonilóxi], acil [p. ex., (cicloalifático)carbonil, ( (cicloalifático)alifático)carbonil, (aralifático)carbonil, (heterocicloalifático)carbonil, ((heterocicloalifático)alifático)carbonil, ou (heteroaralifático)carbonil], ciano, halo, hidróxi, mercapto, sulfonil [p. ex., alquil-SCh- e aril-SCh-], sulfinil [p. ex., alquil-S(0)-], sulfanil [p. ex., alquil-S-], sulfóxi, ureia, tioureia, sulfamoil, sulfamida, oxo, ou carbamoil.
Como aqui usado, o termo "heterocíclico" ou "heterocicloalifático" engloba um grupo heterocicloalquil e um grupo heterocicloalquenil, cada um dos quais sendo opcionalmente substituído como acima definido.
Como aqui usado, um grupo "heterocicloalquil" refere-se a estruturas em anel saturadas de 3-10 membros mono- ou bicíclicas (fundidas ou em ponte) (p. ex., 5- a 10-membros mono- ou bicíclicos), nos quais um ou mais átomos do anel é um heteroátomo (p. ex., N, 0, S, ou combinações relacionadas). Exemplos de um grupo heterocicloalquil incluem piperidil, piperazil, tetrahidropiranil, tetrahidrofuril, 1,4-dioxolanil, 1,4-ditianil, 1,3- dioxolanil, oxazolidil, isoxazolidil, morfolinil, tiomorfolil, octahidrobenzofuril, octahidrocromenil, octahidrotiocromenil, octahidroindolil, octahidropiridinil, decahidroquinolinil, octahidrobenzo[b]tiofenil, 2-oxa-biciclo[2,2,2]octil, 1-aza-biciclo[2,2,2]octil, 3 azabiciclo[3,2,1]octil, e 2,6-dioxa- triciclo [3,3, 1, 03'7] nonil. Um grupo heterocicloalquil monocíclico pode estar fundido com uma fração fenil para formar estruturas, tais como tetrahidroisoquinolina, que poderiam ser classificadas como compostos heteroaril.
Um grupo "heterocicloalquenil", como aqui usado, refere-se a estruturas em anel não-aromáticas mono- ou biciclicas (p. ex., de 5- a 10-membros mono- ou biciclicas) possuindo uma ou mais ligações duplas, e onde um ou mais dos átomos do anel é um heteroátomo (p. ex., N, 0, ou S) . Os compostos heterocicloalifáticos monociclicos e biciclicos são numerados de acordo com a nomenclatura química estandardizada.
Um grupo heterocicloalquil ou heterocicloalquenil pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes como fósforo, alifático [p. ex., alquil, alquenil, ou alquinil], cicloalifático, (cicloalifático)alifático, heterocicloalifático, (heterocicloalifático)alifático, aril, heteroaril, alcóxi, (cicloalifático )óxi, (heterocicloalifático )óxi, arilóxi, heteroarilóxi, (aralifático)óxi, (heteroaralifático)óxi, aroil, heteroaroil, amino, amido [p. ex., (alifático)carbonilamino, (cicloalifático)carbonilamino, ( (cicloalifático)alifático)carbonilamino, (aril)carbonilamino, (aralifático)carbonilamino, (heterocicloalifático)carbonilamino, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilamino, (heteroaril)carbonilamino, ou (heteroaralifático)carbonilamino], nitro, carbóxi [p. ex., HOOC-, alcóxicarbonil, ou alquilcarbonilóxi], acil [p. ex., (cicloalifático)carbonil, ( (cicloalifático)alifático)carboni 1, (aralifático)carbonil, (heterocicloalifático)carbonil, ((heterocicloalifático)alifático)carbonil, ou (heteroaralifático)carbonil], nitro, ciano, halo, hidróxi, mercapto, sulfonil [p. ex., alquilsulfonil ou arilsulfonil], sulfinil [p. ex., alquilsulfinil] , sulfanil [p. ex., alquilsulfanil], sulfóxi, ureia, tioureia, sulfamoil, sulfamida, oxo, ou carbamoil.
Um qrupo "heteroaril", como aqui usado, refere-se a sistemas em anel monocíclicos, bicíclicos, ou tricíclicos possuindo 4 a 15 átomos no anel onde um ou mais átomos do anel é um heteroátomo (p. ex., N, o, S, ou combinações relacionadas) e nas quais o sistema em anel monocíclico é aromático ou pelo menos um dos anéis num sistema em anel bicíclico ou tricíclico é aromático. Um qrupo heteroaril inclui um sistema em anel benzofundido possuindo 2 ou 3 anéis. Por exemplo, um grupo benzofundido inclui grupos benzofundidos com uma ou duas frações heteroalifáticas de 4 a 8 membros (p. ex., indozilil, indolil, isoindolil, 3H-indolil, indolinil, benzo[b]furil, benzo[b]tiofenil, quinolinil, ou isoquinolinil). Alguns exemplos de grupos heteroaril são azetidinil, piridil, lH-indazolil, furil, pirrolil, tienil, tiazolil, oxazolil, imidazolil, tetrazolil, benzofuril, isoquinolinil, benztiazolil, xanteno, tioxanteno, fenotiazina, dihidroindolo, benzo[1,3]dioxolo, benzo[b]furil, benzo[b]tiofenil, indazolil, benzimidazolil, benzotiazolil, puril, cinolil, quinolil, quinazolil, cinolil, ftalazil, quinazolil, quinoxalil, isoquinolil, 4H-quinolizil, benzo-1,2,5-tiadiazolil, ou 1,8-naftiridil.
Sem limitação, compostos heteroaril monocíclicos incluem furil, tiofenil, 2H-pirrolil, pirrolil, oxazolil, tiazolil, imidazolil, pirazolil, isoxazolil, isotiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, 2H-piranil, 4-H-piranil, piridil, piridazil, pirimidil, pirazolil, pirazil, ou 1,3,5-triazil. Os compostos heteroaril monocíclicos são numerados de acordo com a nomenclatura química estandardizada.
Sem limitação, compostos heteroaril bicíclicos incluem indozilil, indolil, isoindolil, 3H-indolil, indolinil, benzo[b]furil, benzo[b] tiofenil , quinolinil, isoquinolinil, indolizinil, isoindolil, indolil, benzo[b]furil, bexo[b]tiofenil, indazolil, benzimidazil, benzotiazolil, purinil, 4H-quinolizil, quinolil, isoquinolil, cinolil, ftalazil, quinazolil, quinoxalil, 1,8-naftiridil, ou pteridil. Os compostos heteroaril bicíclicos são numerados de acordo com a nomenclatura química estandardizada.
Um composto heteroaril é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes como alifático [p. ex., alquil, alquenil, ou alquinil]; cicloalifático; (cicloalifático)alifático; heterocicloalifático; (heterocicloalifático)alifático; aril; heteroaril; alcóxi; (cicloalifático)óxi; (heterocicloalifático)óxi; arilóxi; heteroarilóxi; (aralifático)óxi; (heteroaralifático)óxi; aroil; heteroaroil; amino; oxo (num anel carbocíclico ou heterocíclico não-aromático de um composto heteroaril bicíclico ou triciclico); carbóxi; amido; acil [p. ex., alifáticocarbonil; (cicloalifático)carbonil; ( (cicloalifático)alifático)carbonil; (aralifático)carbonil; (heterocicloalifático)carbonil; ((heterocicloalifático)alifático)carbonil; ou (heteroaralifático)carbonil]; sulfonil [p. ex., alifáticosulfonil ou aminosulfonil]; sulfinil [p. ex., alifáticosulfinil]; sulfanil [p. ex., alifáticosulfanil]; nitro; ciano; halo; hidróxi; mercapto; sulfóxi; ureia; tioureia; sulfamoil; sulfamida; ou carbamoil.
Alternativamente, um composto heteroaril pode ser não-substituido.
Exemplos não-limitantes de compostos heteroaril incluem (halo)heteroaril [p. ex., mono- e di-(halo)heteroaril]; (carbóxi)heteroaril [p. ex., (alcóxicarbonil) heteroaril]; cianoheteroaril; aminoheteroaril [p. ex., ( (alquilsulfonil) amino)heteroaril e ((dialquil)amino)heteroaril]; (amido)heteroaril [p. ex., aminocarbonilheteroaril, ((alquilcarbonil)amino)heteroaril, ((((alquil)amino)alquil)aminocarbonil) heteroaril, ( ( (heteroaril)amino)carbonil)heteroaril, ( (heterocicloalifático)carbonil)heteroaril, e ((alquilcarbonil)amino)heteroaril]; (cianoalquil)heteroaril; (alcdxi)heteroaril; (sulfamoil) heteroaril [p. ex., (aminosulfonil) heteroaril]; (sulfonil) heteroaril [p. ex., (alquilsulfonil) heteroaril]; (hidrdxialquil)heteroaril; (alcdxialquil) heteroaril; (hidróxi) heteroaril; ( (carbóxi)alquil)heteroaril; (((dialquil)amino)alquil]heteroaril; (heterocicloalifático)heteroaril; (cicloalifático)heteroaril; (nitroalquil)heteroaril; (((alquilsulfonil)amino)alquil)heteroaril; ((alquilsulfonil)alquil) heteroaril; (cianoalquil)heteroaril; (acil) heteroaril [e. q., (alquilcarbonil) heteroaril ] ; (alquil) heteroaril, e (haloalquil) heteroaril [p. ex., trihaloalquilheteroaril] .
Um composto "heteroaralifático" (como um qrupo heteroaralquil) como aqui usado, refere-se a um qrupo alifático (p. ex., um grupo C1-4 alquil) que é substituído por um grupo heteroaril. "Alifático," "alquil," e "heteroaril" foram acima definidos.
Um grupo "heteroaralquil", como aqui usado, refere-se a um grupo alquílico (p. ex., um grupo C1-4 alquil) que é substituído por um grupo heteroaril. Ambos os grupos "alquil" e "heteroaril" foram acima definidos. Um grupo heteroaralquil é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes como alquil (incluindo carbóxialquil, hidróxialquil, e haloalquil como trifluorometil), alquenil, alquinil, cicloalquil, (cicloalquil)alquil, heterocicloalquil, (heterocicloalquil)alquil, aril, heteroaril, alcóxi, cicloalquilóxi, heterocicloalquilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, aralquilóxi, heteroaralquilóxi, aroil, heteroaroil, nitro, carbóxi, alcóxicarbonil, alquilcarbonilóxi, aminocarbonil, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, ari1carbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, ciano, halo, hidróxi, acil, mercapto, alquilsulfanil, sulfóxi, ureia, tioureia, sulfamoil, sulfamida, oxo, ou carbamoil.
Como aqui usado, "fração cíclica" e "grupo cíclico" refere-se a sistemas em anel mono-, bi-, e tricíclicos incluindo cicloalifático, heterocicloalifático, aril, ou heteroaril, cada um dos quais como previamente definido.
Como aqui usado, um "sistema em anel bicíclico em ponte" refere-se a sistemas em anel alifáticos heterocíclicos bicíclicos ou sistemas em anel cicloalifáticos nos quais os anéis se encontram ligados em ponte. Exemplos de sistemas em anel biciclicos em ponte incluem, mas não estão limitados a, adamantanil, norbornanil, biciclo[3,2,1] octil , biciclo[2,2,2]octil, biciclo[3,3,1]nonil, biciclo[3,2,3]nonil, 2-oxabiciclo[2,2,2]octil, 1- azabiciclo[2,2,2]octil, 3- azabiciclo[3,2,1]octil, e 2,6-dioxa-triciclo [3,3, 1, O3'7] nonil. Um sistema em anel biciclico ligado em ponte pode ser opcionalmente substituído por um ou mais substituintes como alquil (incluindo carbóxialquil, hidróxialquil, e haloalquil como trifluorometil), alquenil, alquinil, cicloalquil, (cicloalquil)alquil, heterocicloalquil, (heterocicloalquil)alquil, aril, heteroaril, alcóxi, cicloalquilóxi, heterocicloalquilóxi, arilóxi, heteroarilóxi, aralquilóxi, heteroaralquilóxi, aroil, heteroaroil, nitro, carbóxi, alcóxicarbonil, alquilcarbonilóxi, aminocarbonil, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, ari1carbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, ciano, halo, hidróxi, acil, mercapto, alquil, sulfanil, sulfóxi, ureia, tioureia, sulfamoil, sulfamida, oxo, ou carbamoil.
Como aqui usado, um grupo "acil" refere-se a um grupo formil ou Rx-C(0)- (tal como alquil-C(0)-, também referido como "alquilcarbonil") onde Rx e "alquil" foram definidos previamente. Acetil e pivaloil são exemplos de grupos acil.
Como aqui usado, um grupo "aroil" ou "heteroaroil" refere-se a um grupo aril-C (0)- ou heteroaril-C (0)-. A fração aril e heteroaril do grupo aroil ou heteroaroil é opcionalmente substituída como previamente definido.
Como aqui usado, um grupo "alcóxi" refere-se a um grupo alquil-O- onde "alquil" é como previamente definido
Como aqui usado, um grupo "carbamoil" refere-se a um grupo possuindo a estrutura -0-C0-NRxRY ou -NRx-C0-0-Rz, onde Rx e RY foram acima definidos e Rz pode ser alifático, aril, aralifático, heterocicloalifático, heteroaril, ou heteroaralifático.
Como aqui usado, um grupo "carbóxi" refere-se a -COOH, COORx, -0C (0) H, -0C(0)Rx, quando usado enquanto grupo terminal; ou -0C(0)- ou -C(0)0- quando usado enquanto grupo intermédio.
Como aqui usado, um grupo "haloalifático" refere-se a um grupo alifático substituído com 1-3 halOgénio. Por exemplo, o termo haloalquil inclui o grupo -CF3.
Como aqui usado, um grupo "mercapto" refere-se a -SH.
Como aqui usado, um grupo "sulfo" refere-se a -SO3H ou - S03Rx quando usado enquanto grupo terminal ou -S(0)3-quando usado enquanto grupo intermédio.
Como aqui usado, um grupo "sulfamida" refere-se à estrutura -NRX-S (0) 2_NRyRz quando usada enquanto grupo terminal, onde Rx, RY e Rz foram acima definidas.
Como aqui usado, um grupo "sulfonamida" refere-se à estrutura -S(0)2_NRXRY ou -NRX-S (0) 2_RZ quando usada enquanto grupo terminal; ou -S(0)2_NRX- ou -NRX-S(0)2_ quando usada enquanto qrupo intermédio, onde Rx, RY e Rz foram acima definidas.
Como aqui usado, um qrupo "sulfanil" refere-se a -S-Rx quando usado enquanto qrupo terminal e -S- quando usado enquanto grupo intermédio, onde Rx foi acima definido. Exemplos de grupos sulfanil incluem alifático-S-, cicloalifático-S-, aril-S-, ou semelhantes.
Como aqui usado, um grupo "sulfinil" group refere,5e a -S(0)-Rx quando usado enquanto grupo terminal e -S(0)-quando usado enquanto grupo intermédio, onde Rx foi acima definido. Grupos sulfinil exemplificativos incluem alifático-S(0)-, aril-S (0)-, (cicloalifático(alifático))-S (0)-, cicloalquil-S(0)-, heterocicloalifático-S(0)-, heteroaril-S(0)-, ou semelhantes.
Como aqui usado, um grupo "sulfonil" refere-se a -S(0)2-RX quando usado enquanto grupo terminal e -S(0)2_ quando usado enquanto grupo intermédio, onde Rx foi acima definido. Grupos sulfonil incluem alif ático-S (0) 2- , aril-S (0) 2_/· (cicloalifático(alifático))-S(0)2_, cicloalifático-S {0)2-, heterocicloalifático-S (0)2-, heteroaril-S (0)2-, (cicloalifático(amido(alifático)))-S (0) 2- ou semelhantes.
Como aqui usado, um grupo "sulfóxi" refere-se a -0-S0-Rx ou -S0-0-Rx, quando usado enquanto grupo terminal e -0-S(0)- ou -S(0)-0- quando usado enquanto grupo intermédio, onde Rx foi acima definido.
Como aqui usado, um grupo "halOgénio" ou "halo" refere-se a flúor, cloro, bromo ou iodo.
Como aqui usado, um grupo "alcóxicarbonil," que é englobado pelo termo carbóxi, usado isoladamente ou em ligação com outro grupo regere-se a um grupo como alquil-O-C(0)-.
Como aqui usado, um grupo "alcóxialquil" refere-se a um grupo alquil como alquil-O-alquil-, onde alquil foi acima definido.
Como aqui usado, um grupo "carbonil" refere-se a -C(0)-.
Como aqui usado, um grupo "oxo" refere-se a =0.
Como aqui usado, o termo "fosfo" refere-se a fosfinatos e fosfonatos. Exemplos de fosfinatos e fosfonatos incluem -P (0) (Rp) 2, onde Rp é alifático, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, (cicloalifático)óxi, (heterocicloalifático)óxiaril, heteroaril, cicloalifático ou amino.
Como aqui usado, um grupo "aminoalquil" refere-se à estrutura (Rx) 2N-alquil-.
Como aqui usado, um grupo "cianoalquil" refere-se à estrutura (NC)-alquil-.
Como aqui usado, um grupo "ureia" group refere-se à estrutura -NRx-C0-NRYRz e um grupo "tioureia" refere-se à estrutura -NRX-CS-NRYRZ quando usado enquanto grupo terminal e -NRx-C0-NRY- ou -NRX-CS-NRY- quando usado enquanto grupo intermédio, onde Rx, RY, e Rz foram acima definidos.
Como aqui usado, um grupo "guanidina" refere-se à estrutura -N=C (N (RXRY) ) N (RXRY) ou -NRX-C (=NRX) NRXRY onde Rx e RY foram acima definidos.
Como aqui usado, o termo "amidino" refere-se à estrutura -C= (NRX) N (RXRY) onde Rx e RY foram acima definidos.
No geral, o termo "vicinal" refere-se à colocação de substituintes num grupo que inclui dois ou mais átomos de carbono, onde os substituintes estão ligados a átomos de carbono adjacentes.
No geral, o termo "geminai" refere-se à colocação de substituintes num grupo que inclui dois ou mais átomos de carbono, onde os substituintes estão ligados ao mesmo átomo de carbono.
Os termos "grupo terminal" e "grupo intermédio" referem-se à localização de um grupo na posição de um substituinte. Um grupo é terminal quando o grupo está presente no término do substituinte não adicionalmente ligado ao resto da estrutura química. Carbóxialquil, i.e., Rx0(0)C-alquil é um exemplo de um grupo carbóxi usado terminalmente. Um grupo é intermédio quando o grupo está presente intercaladamente num substituinte da estrutura química. Alquilcarbóxi (p. ex., alquil-C(0)0- ou alquil-OC(0)-) e alquilcarbóxiaril (p. ex., alquil-C(0)0-aril- ou alquil-0(CO)-aril-) são exemplos de grupos carbóxi usados na posição intermédia.
Como aqui usada, uma "cadeia alifática" refere-se a um grupo alifático ramificado ou linear (p. ex., grupos alquil, grupos alquenil, ou grupos alquinil). Uma cadeia alifática linear possui a estrutura -[CH2]W_/· onde v é 1-12. Uma cadeia alifática ramificada é uma cadeia alifática linear que é substituída por um ou mais grupos alifáticos. Uma cadeia alifática ramificada possui a estrutura —[CQQ]v— , onde cada Q é independentemente um hidrogénio ou im grupo alifático; contudo, Q deverá ser um grupo alifático em pelo menos uma das circunstâncias. 0 termo cadeia alifática inclui cadeias alquil, cadeias alquenil, e cadeias alquinil, onde alquil, alquenil, e alquinil são definidas acima. A frase "opcionalmente substituída" é usada intercambiavelmente com a frase "substituída ou não-substituída." Como aqui descrito, os compostos da invenção podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes, tais como os ilustrados genericamente acima, ou como exemplificados em classes, subclasses e espécies particulares da invenção. Como aqui descrito, as variáveis Ri, R2, e R3, e outras variáveis contidas em fórmulas aqui descritas englobam grupos específicos, tais como alquil e aril. A não ser quando indicado em contrário, cada um dos grupos específicos das variáveis Ri, R2, e R3, e outras variáveis aqui contidas podem ser opcionalmente substituídas por um ou mais substituintes aqui descritos. Cada substituinte de um grupo específico é adicionalmente e opcionalmente substituído por um a três halo, ciano, oxo, alcóxi, hidróxi, amino, nitro, aril, cicloalifático, heterocicloalifático, heteroaril, haloalquil, e alquil. Por exemplo, um grupo alquil pode ser substituído por alquilsulfanil e o alquilsulfanil pode ser opcionalmente substituído por um a três halo, ciano, oxo, alcóxi, hidróxi, amino, nitro, aril, haloalquil, e alquil. Como um exemplo adicional, a porção cicloalquil de um (cicloalquil)carbonilamino pode ser opcionalmente substituída por um a três halo, ciano, alcóxi, hidróxi, nitro, halo alquil, e alquil. Quando dois grupos alcóxi estão ligados ao mesmo átomo ou átomos adjacentes, os dois grupos alcóxi podem formar um anel conjuntamente com o(s) átomo(s) aos quais eles estão ligados.
Em geral, o termo "substituído", seja precedido pelo termo "opcionalmente" ou não, refere-se à substituição de radicais de hidrogénio numa dada estrutura por um radical de um substituinte específico. Substituintes específicos são acima descritos nas definições e abaixo na descrição dos compostos e exemplos relacionados. A não ser quando indicado em contrário, um grupo opcionalmente substituído pode ter um substituinte em qualquer posição substituível do grupo, e quando mais do que uma posição numa dada estrutura pode ser substituída por mais do que um substituinte selecionado de um grupo específico, o substituinte pode ser o mesmo ou diferente em cada posição. Um substituinte num anel, tal como como um heterocicloalquil, pode estar ligado a qualquer anel, como um cicloalquil, para formar um sistema de anéis espiro-bicíclicos, p. ex, ambos os anéis partilham um átomo comum. Como qualquer pessoa habilitada no estado da técnica o reconhecerá, combinações de substituintes previstos nesta invenção serão aquelas combinações que resultem na formação de compostos estavelmente ou quimicamente viáveis. A frase "estavelmente ou quimicamente viáveis", como aqui usada, refere-se a compostos que não se encontram substancialmente alterados quando sujeitos a condições que permitam a sua produção, deteção, e preferencialmente a sua recuperação, purificação e isso para um ou mais dos propósitos aqui descritos. Nalgumas formas de realização, um composto estável ou um composto quimicamente viável é aquele que não se encontra substancialmente alterado quando mantido a uma temperatura de 40 °C ou inferior, na ausência de humidade ou quaisquer outras condições quimicamente reativas, durante pelo menos uma semana.
Como aqui usada, uma "quantidade eficaz" é definida como a quantidade requerida para conferir um efeito terapêutico a um paciente em tratamento, e é tipicamente determinada com base na idade, área de superfície, peso e condição do paciente. A relação entre as dosaqens para animais e humanos (baseados em miligrama por metro quadrado de área de superfície corporal é descrita por Freireich et ai., Cancer Chemother. Rep. , 50: 219 (1966) . A área de superfície corporal pode ser determinada aproximadamente através da altura e peso do paciente. Ver, p. ex., Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, New York, 537 (1970). Como aqui usado, "paciente" refere-se a um mamífero, incluindo um humano. A não ser quando indicado em contrário, as estruturas aqui representadas pretendem também incluir todas as formas isoméricas (p. ex., enantiomérica, diastereoisomérica e geométrica (ou conformacional) ) da estrutura; por exemplo, as configurações R e S para cada centro assimétrico, os isómeros de dupla ligação (Z) e (E), e os isómeros conformacionais (Z) e (E) . Consequentemente, isómeros éstereoquímicos isolados assim como misturas enantioméricas, diastereoisoméricas, e geométricas /ou conformacionais) dos compostos presentes encontram-se dentro do âmbito desta invenção. A não ser quando indicado em contrário, todas as formas tautoméricas dos compostos da invenção encontram-se no âmbito da invenção. Adicionalmente, a não ser quando indicado em contrário, as estruturas aqui representadas também pretendem incluir compostos que diferem apenas na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, compostos possuindo as presentes estruturas com exceção da substituição do hidrogénio por deutério ou trítio, ou a substituição de um carbono por carbono 13C- ou 14C-enriquecido encontram-se no âmbito desta invenção. Tais compostos são úteis, por exemplo, enquanto ferramentas ou sondas analíticas em ensaios biológicos.
Compostos da presente invenção são úteis enquanto modeladores de transportadores ABC e são úteis no tratamento de doenças mediadas por transportadores ABC.
II. COMPOSTOS A. Compostos Genéricos A presente invenção relaciona-se com compostos de Fórmula Ic úteis enquanto modeladores da atividade dos transportadores ABC:
Ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado, onde:
Ri é -ZAR4, onde cada ZA é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática Ci-6 linear ou ramificada onde até dois átomos de carbono de ZA são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, -CONRA-, CONRaNRa-, —C02 —, -OCO-, -NRACOr, -0-, -NRAC0NRA-, -0C0NRA-, -NRaNRa- , -nraco-, -s-, -so-, —so2 — , -NRa-, -S02NRa-, -NRaS02-, ou -NRaS02NRa-,
Cada R4 é independentemente RA, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, ou -OCF3,
Cada Ra é independentemente hidrogénio, um composto alifático, a-cicloalifático, heterocicloalifático, um aril, ou um heteroaril;
Cada R-2 é independentemente -ZBRs, onde cada ZB é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática Ci_6 linear ou ramificada opcionalmente substituída com halo, -OH, ciano, C3_io cicloalifático, heterocicloalifático de 3-10 membros, aril monocíclico ou bicíclico de 8-12 membros, Heteroaril de 4-15 membros, ou combinações relacionadas onde até dois átomos de carbono de ZB são opcionakmente e independentemente substituídos por -CO-, -CS-, -CONRB-, conrbnrb-, -co2-, -oco-, -nrbco2-, -o- -NRbC0NRb-, -0C0NRb-, -nrbrb-, -nrbco-, -s-, -so-, - so2-, -nrb-, -so2nrb-, -nrbso2- , ou -NRbS02NRb-,
Cada R5 é independentemente RB, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, ou -OCF3,
Cada Rb é independentemente hidrogénio, um composto C3-10 alifático, um C3-10 cicloalifático, um heterocicloalif ático de 3-10 membros, um monocíclico ou bicíclico aril de 8-12 membros, ou um heteroaril de 4-15 membros; ou, quaisquer dois grupos R2 adjacentes com os átomos aos quais eles estão ligados para formarem um composto carbocíclico ou heterocíclico;
Anel A é um anel monocíclico de 3-7 membros possuindo 0-3 heteroátomos selecionados a partir de N, O, e S;
Anel B é um grupo possuindo fórmula Ia:
Ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado, onde p é 0-2,
Cada R3 e R'3 é independentemente -ZCR6 onde cada Zc é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática C1-6 ramificada ou linear opcionalmente substituída com halo, hidróxi, ou combinações relacionadas, onde até dois átomos de carbono de Zc são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, -CONRc-, -CONRcNRc-, -C02-, - OCO-, -NRcC02-, -O- -NRcCONRc-, -OCONRc-, -NRCNRC-, -NRcCO-,- S-, -SO-, -SO2-, -NRC-, -S02NRc-, -NRcS02-, ou -NRc-, -S02NRc- r
Cada Rg, é independentemente Rc, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, ou -OCF3,
Cada Rc é independentemente hidrogénio, um composto alifático opcionalmente substituído por halo, hidróxi, ou combinações relacionadas, um cicloalifático opcionalmente substituído com alifático, halo, hidróxi, nitro, ciano, ou combinações relacionadas, um heterocicloalifático opcionalmente substituído com alifático, halo, hidróxi, nitro, ciano, ou combinações relacionadas, um aril, ou um heteroaril, qualquer um dos quais podendo ser opcionalmente substituído com halo, hidróxi, ou combinações relacionadas, ou, quaisquer dois grupos R3 adjacentes conjuntamente com os átomos com os quais formam um composto heterocíclico; e n é 1-3, de tal forma que quando o anel A é um ciclopentil não-substituído, n é 1, R2 é 4-cloro, e Ri é hidrogénio, então o anel B não é 2-(tert-butil)indol-5-il, ou (2,6-diclorofenil(carbonil))-3-metil-lH-indol-5-il;e quando o anel A é um ciclopentil não-substituído, n é 0, e Ri é hidrogénio, então o anel B não é
B. Compostos Específicos 1. Grupo Ri
Ri é -ZaR4, onde cada ZA é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática Ci_6 linear ou ramificada onde até dois átomos de carbono de ZA são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, -CONRA-, conranra-, -co2, -oco-, -nraco2-, -0-, -NRaC0NRa-, -0C0NRa-, -NRaNRa-, -NRaC0-, -s-, -so-, -SO2-, -nra-, -so2nra-, -nraso2-, ou -NRAS02NRA-. Cada R4 é independentemente RA, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, ou -OCF3. Cada RA é independentemente hidrogénio, um composto alifático opcionalmente substituído, um cicloalifático opcionalmente substituído, um heterocicloalifático opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, ou um heteroaril opcionalmente substituído.
Em várias formas de realização, Ri é -ZAR4, onde cada ZA é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática C1-6 ramificada ou linear opcionalmente substituída e cada R4 é hidrogénio.
Noutras formas de realização, Ri é -ZAR4, onde cada ZA é uma ligação e cada R4 é hidrogénio. 2 . Grupo R2
Cada R2 é independentemente -ZBR5, onde cada ZB é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática C1-6 ramificada ou linear opcionalmente substituída onde até dois átomos de carbono de ZB são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, -C0NRB-, - C0NRbNRb-, co2-, -oco-, -nrbco2-, -0-, -NRbC0NRb-, -0C0NRb-, - NRbNRb-, -NRbCO-, -s-, -so-, -SO2-, -nrb-, -so2nrb-, -nrbso2-, ou -NRBS02NRB-. Cada R5 é independentemente RB, halo, -OH, NH2, -N02, -CN, -CF3, ou -OCF3. Cada RB é independentemente hidrogénio, um composto alifático opcionalmente substituído, um cicloalifático opcionalmente substituído, um heterocicloalifático opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, ou um heteroaril opcionalmente substituído. Alternativamente, cada um dois dois grupos R2 adjacente conjuntamente com os átomos aos quais estão ligados formam um composto carbocíclico opcionalmente substituído por um composto heterocíciclo ou heteroaril opcionalmente substituído.
Em várias formas de realização, R2 é um composto alifático opcionalmente substituído. Por exemplo, R2 é uma cadeia alifática C1-6 ramificada ou linear opcionalmente substituída. Noutros exemplos, R2 é uma cadeia alquílica Ci_ 6 ramificada ou linear opcionalmente substituída, uma cadeia alquenílica C1-6 ramificada ou linear opcionalmente substituída ou uma cadeia alquinílica C1-6 ramificada ou linear opcionalmente substituída. Em formas de realização alternativas, R2 é uma cadeia alifática C1-6 ramificada ou linear que é opcionalmente substituída com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, cicloalifático, heterocicloalifático, aril, heteroaril, ou combinações relacionadas. Por exemplo, R2 é uma cadeia alquílica C1-6 ramificada ou linear que é opcionalmente substituída com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, cicloalifático, heterocicloalifático, aril, heteroaril, ou combinações relacionadas. Ainda noutros exemplos, R2 é um metil, etil, propil, butil, isopropil, ou tert-butil, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, aril, heteroaril, cicloalifático, ou heterocicloalifático. Ainda noutros exemplos, R2 é um metil, etil, propil, butil, isopropil, ou tert-butil, cada um dos quais não-substituído.
Em várias outras formas de realização, R2 é um alcóxi C1-5 ramificado ou linear opcionalmente substituído. Por exemplo, R2 é um alcóxi C1-5 ramificado ou linear que é opcionalmente substituído com hidróxi, aril, heteroaril, cicloalifático, heterocicloalifático, ou combinações relacionadas. Noutros exemplos, R2 é um metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, ou pentóxi, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de hidróxi, aril, heteroaril, cicloalifático, heterocicloalifático, ou combinações relacionadas.
Noutras formas de realização, R2 é hidróxi, halo, ou ciano.
Em várias formas de realização, R2 é -ZBR5, e ZB é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática C1-4 linear ou ramificada opcionalmente substituída onde até dois átomos de carbono de ZB são opcionalmente e independentemente substituídos por -C(0)-, -0-, -S-, S(0)2-, ou -NH-, e R5 é RB, halo, -OR, -NH2, -N02, -CN, -CF3, ou -OCF3, e RB é hidrogénio ou aril.
Em várias formas de realização, dois grupos R2 adjacentes formam um composto carbocíclico opcionalmente substituído ou um composto heterocíclico opcionalmente substituído. Por exemplo, dois grupos R2 adjacentes formam um composto carbocíclico opcionalmente substituído ou um composto heterocíclico opcionalmente substituído, cada um dos quais se encontra fundido ao grupo fenil de fórmula I, onde o composto carbocíclico ou heterocíclico possui a fórmula Ib:
Cada um dos Zi, Z2, Z3, Z4, e Z5 é independentemente uma ligação, -CR7R'7, -C(0)-, -NR7, ou -0-; cada R7 é independentemente -ZDR8, onde cada ZD é independentemente ligação ou uma cadeia alifática C1-6 ramificada ou linear opcionalmente substituída onde até dois átomos de carbono de ZD são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, -CONR0 -, -C02-, -OCO-, -NRDC02-, -0-, -NRdC0NRd-, -OCONR0-, -NRdRd-, -NRdC0-, -S-, -so-, -so2-, - NRd-, -S02NRd-, -NRdS02-, ou -NRdS02NRd-. Cada R8 é independentemente R°, halo, -OR, -NH2, -N02, -CN, -CF3, ou -OCF3-. Cada Rd é independentemente hidrogénio, um composto cicloalifático opcionalmente substituído, um composto heterocicloalifático opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, ou um heteroaril opcionalmente substituído. Cada R'7 é independentemente hidrogénio, uma cadeia C1-6 alifática opcionalmente substituída, hidróxi, halo, ciano, nitro, ou combinações relacionadas. Alternativamente, qualquer um dos dois grupos R7 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais estão ligados formam num anel carbocíclico de 3-7 membros opcionalmente substituído como um anel ciclobutil opcionalmente substituído, ou qualquer um dos dois grupos R7 e R'7 conjuntamente com o átomo ou átomos aos quais estão ligados formam um anel carbocíclico de 3-7 membros opcionalmente substituído ou um anel heterocarbocíclico.
Em vários outros exemplos, dois grupos R2 adjacentes formam um composto carbocíclico opcionalmente substituído. Por exemplo, dois grupos R2 adjacentes formam um composto carbocíclico opcionalmente substituído de 5-7 membros que é opcionalmente substituído por 1-3 de halo, hidróxi, ciano, oxo, ciano, alcóxi, alquil, ou combinações relacionadas. Num outro exemplo, dois grupos R2 adjacentes formam um composto carbocíclico de 5-6 membros que é opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, oxo, ciano, alcóxi, alquil, ou combinações relacionadas. Ainda noutro exemplo, dois grupos R2 adjacentes formam um composto carbocíclico não-substituído de 5-7 membros.
Em exemplos alternativos, dois grupos R2 adjacentes formam um composto heterocíclico opcionalmente substituído. Por exemplo, dois grupos R2 adjacentes formam um composto heterocíclico opcionalmente substituído de 5-7 membros possuindo 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de N, 0, e S. Em vários exemplos, dois grupos R2 adjacentes formam um composto heterocíclico opcionalmente substituído de 5-6 membros possuindo 1-2 átomos de oxigénio. Noutros exemplos, dois grupos R2 adjacentes formam um composto heterocíclico não-substituído de 5-7 membros possuindo 1-2 átomos de oxigénio. Noutras formas de realização, dois grupos R2 adjacentes formam um anel selecionado de:
Em exemplos alternativos, dois grupos R2 adjacentes formam um composto carbocíclico ou um composto heterocíclico opcionalmente substituído, e um terceiro grupo R2 é ligado em qualquer posição quimicamente viável do fenil de fórmula I. Por exemplo, um composto carbocíclico opcionalmente substituído ou um composto heterocíclico opcionalmente substituído, cada um dos quais é formado por dois grupos R2 adjacentes, um terceiro grupo R2, e o fenil de fórmula I formam um grupo possuindo fórmula Ic:
Zi, Z2, Z3, Z4, e Z5 foram acima definidos na fórmula Ib, e R-2 foi acima definido na fórmula I.
Em várias formas de realização, cada grupo R2 é independentemente selecionado de hidrogénio, halo, -OCH3, -OH, -CH2OH, -CH3, e -OCF3, e/ou dois grupos R2 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais estão ligados formam
Noutras formas de realização, R2 é pelo menos um selecionado de hidrogénio, halo, metóxi, fenilmetóxi, hidróxi, hidróximetil, trifluorometóxi, e metil.
Nalgumas formas de realização, dois grupos R2 adjacentes, conjuntamente com os átomos aos quais eles estão ligados, formam
3. Anel A 0 anel A é um anel monocíclico de 3-7 membros opcionalmente substituído possuindo 0-3 heteroátomos selecionados de N, O, e S.
Em várias formas de realização, o anel A é um composto cicloalifático monocíclico de 3-7 membros opcionalmente substituído. Por exemplo, o anel A é um ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, ou cicloheptil, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, Ci_5 alifático, ou combinações relacionadas.
Noutras formas de realização, o anel A é um composto heterocicloalifático monocíclico de 3-7 membros opcionalmente substituído. Por exemplo, o anel A é um composto heterocicloalifático monocíclico de 3-7 membros opcionalmente substituído possuindo 1-2 heteroátomos independentemente selecionados de N, O, e S. Noutros exemplos, o anel A é tetrahidrofuran-il, tetrahidro-2H-piran-il, pirrolidona-il, ou piperidina-il, cada um dos quais opcionalmente substituído.
Ainda noutros exemplos, o anel A é selecionado de
Cada Rg é independentemente -ZeRi0, onde cada ZE é independentemente uma ligação ou uma cadeia C1-5 alifática linear ou ramificada opcionalmente substituída onde até dois átomos de carbono de ZE são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, -CONRE-, co2-, -oco-, -nreco2-, -0-, -NReC0NRe-, -0C0NRe-, -NReNRe-, - NReC0-, -s-, -so-, -S02-, -NRe-, -S02NRe-, -NReS02- , ou - NReS02NRe-, cada RIO é independentemente RE, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, oxo, ou -OCF3. Cada RE é independentemente hidrogénio, um composto cicloalifático opcionalmente substituído, um composto heterocicloalifático opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, ou um aril opcionalmente substituído. q é 0-5.
Noutras formas de realização, o anel A é selecionado de
Em várias formas de realização, o anel A é
4. Anel B 0 Anel B é um grupo possuindo fórmula Ia:
Ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado, onde p é 0-3.
Cada R.3 e R'3 é independentemente -ZCR.6 onde cada Zc é independentemente uma ligação ou uma cadeia C1-6 alifática linear ou ramificada opcionalmente substituída onde até dois átomos de carbono de Zc são opcionalmente e independentemente substituídos por -CO-, -CS-, -CONRc-, CONRcNRc-, —C02—, -OCO-, -NRcC02-, -O-, -NRcCONRc-, -OCONRc-, -NRCNRC-, -NRcCO, -S-, -SO-, -S02-, -NRC-, -S02NRc-, -NRcS02-, ou NRcS02NRc-. Cada R6 é independentemente Rc, halo, -OH, - NH2, -N02, -CN, ou -OCF3. Cada Rc é independentemente hidrogénio, um composto cicloalifático opcionalmente substituído, um composto heterocicloalifático opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, ou um aril opcionalmente substituído. Alternativamente, qualquer um dos dois grupos R3 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam um composto carbocíclico opcionalmente substituído ou um composto heterocíclico opcionalmente substituído, ou R' 3 e um R3 adjacente, i.e., ligados à posição 2 do indolo de fórmula Ia, conjuntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam um composto heterocíclico opcionalmente substituído.
Em várias formas de realização, o anel B é:
onde q é 0-3 e cada R2o é -ZGR2i onde cada ZG é independentemente uma ligação ou uma cadeia C1-5 alifática linear ou ramificada opcionalmente substituída onde até 2 átomos de carbono de ZG são opcionalmente e independentemente substituídos por -CO-, -CS-, -CONRG-, -CONRgNRg-, —C02 —, -oco-, -nrgco2-, -O-, -NRgC0NRg-, -OCONRg-, -nrgnrg-, -nrgco, -s-, -so-, —so2—, -nrg-, -so2nrg-, -nrgso2-, ou NRGS02NRG-. Cada R2i é independentemente RG, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, ou -OCF3. Cada RG é independentemente hidrogénio, um composto cicloalifático opcionalmente substituído, um composto heterocicloalifático opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, ou um aril opcionalmente substituído.
Por exemplo, o anel B é:
Em várias formas de realização, R'3 é hidrogénio e R3 encontra-se ligado na posição 2, 3, 4, 5, 6, ou 7 do indolo de fórmula Ia. Em vários outros exemplos, R3 encontra-se ligado à posição 2 ou 3 do indolo de fórmula Ia, e R3 é independentemente um composto alifático opcionalmente substituído. Por exemplo, R3 é um grupo acil opcionalmente substituído. Em várias circunstâncias, R3 é um grupo (alcóxi)carbonil opcionalmente substituído. Noutras circunstâncias, R3 é (metóxi)carbonil, (etóxi)carbonil, (propóxi)carbonil, ou (butóxi)carbonil, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ou combinações relacionadas. Noutras circunstâncias, R3 é um grupo (alifático)carbonil opcionalmente substituído. Por exemplo, R3 é um (alquil)carbonil opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, combinações relacionadas. Noutros exemplos, R3 é (metil)carbonil, (etil)carbonil, (propil)carbonil, ou (butil)carbonil, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 of halo, hidróxi, ou combinações relacionadas.
Em várias formas de realização, R3 é um composto (cicloalifático)carbonil opcionalmente substituído ou um composto (heterocicloalifático)carbonil opcionalmente substituído. Em vários exemplos, R3 é um composto (C3-7 cicloalifático)carbonil opcionalmente substituído. Por exemplo, R3 é um grupo (ciclopropil)carbonil, (ciclobutil)carbonil, (ciclopentil)carbonil, (ciclohexil)carbonil, ou (cicloheptil)carbonil, cada um dos quais opcionalmente substituído com alifático, halo, hidróxi, nitro, ciano, ou combinações relacionadas. Em vários exemplos alternativos, R3 é um composto (heterocicloalifático)carbonil opcionalmente substituído. Por exemplo, R3 é um composto (heterocicloalifático)carbonil opcionalmente substituído possuindo 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de N, 0, e S. Noutros exemplos, R3 é um composto (heterocicloalifático)carbonil opcionalmente substituído possuindo 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de N e 0. Ainda noutros exemplos, R3 é um composto (heterocicloalifático)carbonil monocíclico de 4-7 membros opcionalmente substituído possuindo 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de N e 0. Alternativamente, R3 é (piperidin-l-il,)carbonil, (pirrolidin-l-il)carbonil, ou (morfolin-4-il)carbonil , (piperazin-l-il)carbonil, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, nitro, ou alifático.
Ainda noutras circunstâncias, R3 é um composto (alifático)amido opcionalmente substituído como (alifático(amino(carbonil)) que se encontra liqado à posição 2 ou 3 do anel indolo de fórmula Ia. Nalqumas formas de realização, R3 é um composto (alquil(amino)carbonil opcionalmente substituído que se encontra liqado à posição 2 ou 3 do anel indolo de fórmula Ia. Noutras formas de realização, R3 é um composto (alifático(amino))carbonil linear ou ramificado opcionalmente substituído que se encontra liqado à posição 2 ou 3 do anel indolo de fórmula Ia. Em vários exemplos, R3 é (N,N-dimetil(amino))carbonil, (metil(amino))carbonil, (etil(amino))carbonil, (propil(amino))carbonil, (prop-2-il(amino))carbonil, (dimetil(but-2-il(amino)))carbonil, (tert-butil(amino))carbonil, (butil(amino))carbonil, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, cicloalifático, heterocicloalifático, aril, heteroaril, ou combinações relacionadas.
Noutras formas de realização, R3 é um composto (alcóxi)carbonil opcionalmente substituído. Por exemplo, R3 é (metóxi)carbonil, (etóxi)carbonil, (propóxi)carbonil, ou (butóxi)carbonil, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ou combinações relacionadas. Em várias circunstâncias, R3 é um composto Ci-6 alifático linear ou ramificado opcionalmente substituído. Por exemplo, R3 é um composto C1-6 alquil linear ou ramificado opcionalmente substituído. Noutros exemplos, R3 é independentemente um composto metil, etil, propil, butil, isopropil, ou tert-butil opcionalmente substituídos, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, nitro, ou combinações relacionadas. Noutras formas de realização, R3 é um composto C3-6 cicloalifático opcionalmente substituído. Formas de realização exemplificativas incluem ciclopropil, 1-metilcicloprop-l-il, etc. Noutros exemplos, p é 2 e os dois substituintes R3 encontram-se ligados ao indolo de fórmula Ia nas posições 2,4- ou 2,6- ou 2,7-. Formas de realização exemplif icativas incluem 6-F, 3- (C1-6 alifático ou C3-6 cicloalifático opcionalmente substituídos); 7-F-2-(-(Ci_6 alifático ou C3-6 cicloalifático opcionalmente substituídos) ) , 4F-2- (Ci_6 alifático ou C3_6 cicloalifático opcionalmente substituídos); 7-CN-2-( Ci_6 alifático ou C3-6 cicloalifático opcionalmente substituídos); 7-Me-2-( C1-6 alifático ou C3-6 cicloalifático opcionalmente substituídos) e 7-Me-2- (C1-6 alifático ou C3-6 cicloalifático opcionalmente substituídos).
Em várias formas de realização, R3 é hidrogénio. Em várias circunstâncias, R3 é um composto C1-6 alifático linear ou ramificado opcionalmente substituído. Noutras formas de realização, R3 é um composto C3-6 cicloalifático opcionalmente substituído.
Em várias formas de realização, R3 é um composto selecionado de: -H, -CH3, -CH2OH, -CH2CL23, -CH2CL22OH, -CH2CL22CH3, -NH2, halo, -OCH3, -CN, -CF3, -C (0) OCH3CH3, -S(02)CH3, -CH2NH2, -C(0)NH2,
Noutra forma de realização dois grupos R3 adjacentes formam:
Em várias formas de realização, R'3 é independentemente -ZcR6, onde cada Zc é independentemente uma ligação ou uma cadeia Ci_6 alifática linear ou ramificada opcionalmente substituída onde até dois átomos de carbono de Zc são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, -CONRc-, -CONRcNRc-, -C02-, -OCO-, -NRcC02-, -0-, -NRcC0NRc-, -0C0NRc-, -NRCNRC-, NRcC0-,-S- -S0-, -S02- -NRC-, -S02NRc-, -NRcS02- ou -NRcS02NRc-. Cada R6 é independentemente Rc, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, ou -0CF3. Cada Rc é independentemente hidrogénio, um composto alifático opcionalmente substituído, um composto cicloalifático opcionalmente substituído, um composto heterocicloalifático opcionalmente substituído, ou um composto heteroaril opcionalmente substituído. Numa forma de realização, cada Rc é hidrogénio, Ci_6 alifático, ou C3_6 cicloalifático, onde cada um dos compostos alifático ou cicloalifático é opcionalmente substituído com até 4 substituintes -OH. Noutra forma de realização, Rc é hidrogénio, ou Ci_6 alquil opcionalmente substituído Com até 4 substituintes -OH.
Por exemplo, em muitas formas de realização, R'3 é independentemente -ZCR6, onde cada Zc é independentemente uma ligação ou uma cadeia Ci-6 alifática linear ou ramificada opcionalmente substituída onde até dois átomos de carbono de ZC são opcionalmente e independentemente substituídos por -C (O) -, -C(0)NRc-, -C(0)0-, -NRcC(0)0-, -0-, -NRCS (0)2-, ou -NRC-. Cada R6 é independentemente Rc, -OH, ou -NH2. Cada Rc é independentemente hidrogénio, um composto cicloalifático opcionalmente substituído, um composto heterocicloalifático opcionalmente substituído, ou um composto heteroaril opcionalmente substituído. Numa forma de realização, cada Rc é hidrogénio, C1-6 alifático, ou C3-6 cicloalifático, onde qualquer um dos compostos alifático ou cicloalifático é opcionalmente substituído com até 4 substituintes -OH. Noutra forma de realização, Rc é hidrogénio, ou C1-6 alquil opcionalmente substituído com até 4 substituintes -OH.
Noutras formas de realização, R'3 é hidrogénio ou
Onde R31 é H ou um composto C1-2 alifático que é opcionalmente substituído com 1-3 de halo, -OH, ou combinações relacionadas. R32 é -I-R33, onde L é uma ligação, -CH2-, -CH20-, -CH2NHS (0) 2-, -CH2C(0)-, -CH2NHC(0)-, ou -CH2NH-; e R33 é hidrogénio, ou C1-2 alifático, cicloalifático, heterocicloalifático, ou heteroaril, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1 grupo de -OH, -NH2, ou -CN. Por exemplo, numa forma de realização, R31 é hidrogénio e R32 é um composto C1-2 alifático opcionalmente substituído com -OH, -NH2, ou -CN.
Em várias formas de realização, R'3 é independentemente selecionado de um dos seguintes: -H, -CH3, -CH2CL23, -C(0)CH3, -CH2CL22OH, -C(0)0CH3,
5. Termo η n é 1-3.
Em várias formas de realização, n é 1. Noutras formas de realização, n é 2. Ainda noutras formas de realização, n é 3. C. Compostos exemplificativos da presente invenção incluem, mas não estão limitados a, aqueles ilustrados na Tabela 1 abaixo.
Tabela 1: Compostos Exemplificativos da presente invenção.
III. COMPOSTOS SUBGENÉRICOS DA PRESENTE INVENÇÃO
Outro aspeto da presente invenção fornece um composto que é útil na modelação da atividade de um transportador ABC. 0 composto tem fórmula Id:
Ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado.
Ri , R2, e o anel A são acima definidos na fórmula I, e o anel B, R3 e p são acima definidos na fórmula Ia.
Contudo, quando Rj é Η, n é 0, anel A é um ciclopentil não-substituído, e anel B é um indol-5-il substituído com 1-2 de R3, e então cada R3 é independentemente -ZgRi2, onde cada ZG é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática C1-6 linear ou ramificada não-substituída onde até dois átomos de carbono de ZG são opcionalmente e independentemente substituídos por -CS-, -CONRGRG-, -C02-, -OCO-, -NRgC02-, -0,_NRgC0NRg_, -OCONRg-, _NRgNRg_, -s-, -so-, -S02-, _NRg_, -S02NRg-, -NRgS02-, ou -NRgS02NRc-, cada Ri2 é independentemente RO, halo, -OH, -NH2, N02, -CN, ou -OCF3, e cada Rg é independentemente hidrogénio, um composto alifático não-substituído, um composto cicloalifático opcionalmente substituído, um composto heterocicloalifático opcionalmente substituído, um composto aril não-substituído, ou um composto heteroaril opcionalmente substituído; ou qualquer um de dois grupos R3 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam um composto heterocíclico opcionalmente substituído.
Adicionalmente, quando Ri é Η, n é 1, R2 é 4-cloro, anel A é um ciclopentil não-substituído, e o anel B é um indol-5-il substituído com 1-2 de R3, e então cada R3 é independentemente -ZHR22_ onde cada ZH é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática C1-3 linear ou ramificada não-substituída onde até 2 átomos de carbono de ZH são opcionalmente e independentemente substituídos por -CS-, -CONRhNRh-, -CO2- -0-, -co-, -nrhco2-, -0-, -NRhC0NRh-, -0C0NRh-, -NRhNRh-, -S-, -S0-,-SO2-, -NRh-,-S02NRh-, -nrhso2-, ou -NRhS02NRh-, cada R22 é independentemente RH, halo, -OH, -NH2, -NO2, -CN, ou -OCF3, e cada RH é independentemente hidrogénio, um C4 alquil substituído, um C2-6 alquenil opcionalmente substituído, um C2-6 alquinil opcionalmente substituído, um C4 alquenil opcionalmente substituído, um C4 alquinil opcionalmente substituído, um cicloalifático opcionalmente substituído, um heterocicloalifático opcionalmente substituído, um heteroaril opcionalmente substituído, um fenil não-substituído, ou um fenil mono-substituído, ou quaisquer dois grupos R3 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais estão ligados formam um composto heterocíclico opcionalmente substituído.
Outro aspeto da presente invenção fornece um composto que é útil na modelação da atividade de um transportador ABC. 0 composto tem fórmula II:
Ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado.
Ri, R2, e anel A são acima definidos na fórmula I; R3, R'3, e p são acima definidos na fórmula Ia; e Ζχ, Z2, Z3, Z4, e Z5 são acima definidos na fórmula Ib.
Outro aspeto da presente invenção fornece um composto que é útil na modelação da atividade de um transportador ABC. 0 composto tem fórmula lia:
ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado.
Ri, R2, e anel A são acima definidos na fórmula I; R3, R'3, e p são acima definidos na fórmula Ia; e Ζχ, Z2, Z3, Z4, e Z5 são acima definidos na fórmula Ib.
Outro aspeto da presente invenção fornece um composto que é útil na modelação da atividade de um transportador ABC. 0 composto tem fórmula Ilb:
ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado.
Rx, R2, e anel A, são acima definidos na fórmula I; R3, R'3, e p são acima definidos na fórmula Ia; e Ζχ, Z2, Z3, Z4, e Z5 são acima definidos na fórmula Ib.
Outro aspeto da presente invenção fornece um composto que é útil na modelação da atividade de um transportador ABC. 0 composto tem fórmula IIc:
ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado.
Ri, R2 e n são acima definidos na fórmula I; e R3, R'3, e p são acima definidos na fórmula Ia.
Outro aspeto da presente invenção fornece um composto que é útil na modelação da atividade de um transportador ABC. 0 composto tem fórmula Ild:
ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado.
Ambos os qrupos R2, conjuntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam um grupo selecionado de:
R'3 é independentemente selecionado de um dos seguintes: -H, -CH3, -CH2CL23, -C(0)CH3, -CH2CL22OH, -C(0)0CH3,
E cada R3 é independentemente selecionado de -H, -CH3, CH2OH, -CH2CL23, -CH2CL22OH, -CH2CL22CH3, -NH2, halo, -OCH3, -CN, -CF3, -C (0) OCH2CL23, -S(0)2CH3, -CH2NH2, -C(0)NH2,
IV. ESQUEMAS GENÉRICOS DE SÍNTESE
Os compostos de fórmula (I, Ic, Id, II, lia, Ilb, IIc, e Ild) podem ser prontamente sintetizados a partir de matérias-primas conhecidas ou comercialmente disponíveis através de métodos conhecidos. Métodos exemplificativos de síntese para produzir compostos de fórmula (I, Ic, Id, II, lia, Ilb, IIc, e Ild) são abaixo fornecidos nos Esquemas 1-22 apresentados. A preparação dos compostos da invenção é conseguida através do acoplamento de uma amina de anel B com um ácido carboxílico de anel B como ilustrado no Esquema 1.
No que refere ao Esquema 1, o ácido la pode ser convertido no correspondente cloreto ácido lb usando cloreto de tionilo na presença de uma quantidade catalisadora de dimetilformamida. A reação do cloreto ácido com a amina
fornece compostos da invenção I. Alternativamente, o ácido la pode ser diretamente acoplado à amina usando reagentes de ligação conhecidos tais como, por exemplo, HATU na presença de trietilamina. A preparação dos ácidos la pode ser obtida como ilustrado no Esquema 2.
No que refere ao Esquema 2, o nitrilo 2a reage com um bromocloroalcano adequado na presença de hidróxido de sódio e um catalisador de transferência de fase como cloreto de butiltrietilamónio para fornecer o intermediário 2b. A hidrólise do nitrilo de 2b origina o ácido la. Nalgumas circunstâncias, o isolamento do intermediário 2b é desnecessária.
Os fenilacetonitrilos 2a são comercialmente disponíveis ou podem ser preparados como ilustrado no Esquema 3.
No que refere ao Esquema 3, a reação de um brometo de aril 3a com monóxido de carbono na presença de metanol e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) fornece o éster 3b. A redução de 3b com hidrido de alumínio lítio fornece o álcool 3c que é convertido no halido 3d com cloreto de tionilo. A reação de 3d com cianeto de sódio fornece o nitrilo 2a.
Outros métodos de produção do nitrilo 2a são ilustrados nos Esquemas 4 e 5 abaixo.
A preparação e componentes
é ilustrada nos esquemas que se sequem. 0 número de métodos para a preparação de composto de anel B onde o anel B é um indolo foram já reportados. Ver, por exemplo, Angew. Chern. 2005, 44, 606; J. Am. Chern. Soc. 2005, 127, 5342,); J. Comb. Chern. 2005, 7, 130; Tetrahedron 2006,62,3439; J. Chern. Soc. Perkin Trans. 1,2000, 1045.
Um método para a produção de
é ilustrado no
Esquema 6.
No que refere ao Esquema 6, uma nitroanilina 6a é é convertida na hidrazina 6b usando ácido nítrico na presença de HC1 e cloreto estanoso. A reação de 6b com um aldeído ou cetona CH3C(0)R.3 fornece a hidrazona 6c que após tratamento com ácido fosfórico em tolueno origina uma mistura de nitroindolos 6d e 6e. A hidrogenação catalítica na presença de paládio sob carbono fornece uma mistura de aminoindolos 6f e 6g que podem ser separados usando métodos conhecidos tais como, por exemplo, cromatografia.
Um método alternativo é ilustrado no Esquema 7.
a) RjaCOCl, Eí3Ns CH2Cb, b) n-BuLi, THF; c) NaBH*, AcOH; d) KNOj, H2SO,; e) DDQ, 1,4-díoxane; f) NaNG2, HQ SnClz.2HaO. MzO; g) MeCOR3, EíOH; h) PP A; i) Pd/'C4 EtOH or H?, Raney Níf EtOH or MeOH
a) HNO3, H2SO4: b) Me?.NCH{OM<b DMF; c) H2, Raney Ni, EtOH
a) MBS. DMF; b)JFCNQj, FfeSG*; e) HC^C-TMS, PdfEFh^Cl;:, Cul, EtjNj toluene, tbO; d)
Cul, DMP: e) Hj, Raney Ni. MeOH
a) UNO,, HjSO,; b) SOCfc EtOH; c) DMA, DMF; d) Raney Νί, H,, MeOH
a) R3àCH2COR3b, AoOH, BtOH; b) Η3Ρ04ϊ iolmm; c) ih, Pd/C, EtOM
a) KaBH^CN; b) When PG- SGjPh; PhSOaC!, BhK DMA?, CH2Ct2; When P0“ Ac: AeCl, NaHCCb, CH2Ct2; c) Wbea Rv- RCO: (RCO)aO, A1C& CH2Ch; Wien Rv-Br Br2, AeOH; d> RBr or HCÍ; e) BCNth, H4.SO4; f) MaOa, CH2a2 or DDQ, 1,4-dioxanB: g) H'2> Raney Nit EtOH.
a) NaBHiCN; b) RSOjCi. DMAP, BtjN, CH2CÍ2; c> R0C(O>CU AKjR, CH?CI2; d) NaBH,», THF; e) HBr; f) RND3s H3S02; g) MnOa; ,g) RaoeyM, H*. EtOH
a) RjX(X—Βτ, i), zjD.c tiiila.tej ΤΒΑΪ, IMEA, toluene; b) Hj, Raney Ni, EtOH or Hj. Pd/C, EtOH or SnChltíiO, EtOH; e}aSO2NC0s DMF, CH3CN
a} when X-Ci, Br, l, or OTs; R’3X, K^CO^, DMF or CH3CN; b) H;, Pd/C, EtOH or SrCI2,2H20, EtOH or SnCl2,2H20> DIE A* EtOH.
a) Br*, AcOH; b) RC(0)C3, EtjN, CH2€I:; c) MOCR^, PdtPPhjHCb, Cut, EtjN; d) TBAF, THF or tgteOK, PMF or Pd(FPhj) <:U, Caí, DMF: o) H2, Pd/C, EtOH or SnCb, M eO.H or
HCO2NH4, Pd/C, EtOH
a) Br2, AeOH, CHClj; b> R^CsCH, Oil, EtjN, Fd(PFhj)jCfe; c) RCOd, EUN, CHa02; d) TBAF, BMF; «) Raney Νϊ„ H2, MeOH; f) ROK, DMF
a) Brj, AcOH; b) HOCRj,, Pd(PPhj) 2Ci2, CuL Et3N; c) Pd(PPh3)2CÍ2> C«L DMF; d) H2> Pd/C-, EiOH or SnCb, MeOH or HCOjNHí, Pd/C, EtOH
a) HaNR-'j; b) X«Bn Br2, HOAc; X==T; N!S; p) HCsCR3í PdCPPhjfcCb, Cul, EtjN; d) Cnl, DMF or TBAF, THF; ¢) Ha. Pd/C, EtOH or SnClj, MeOH or HCOjNH,, Pd/C, EtOH
a) R'3NH2, DMSOi b) Bta, AeOH; c> TMS-CaCH, Cui, TEA, Pd(PPh3) aCfe; d) Col, DMSO;
e) Raaey Ni MeOH
a) RjaCsCK, Cul, TEA, PdCFPhiOaCk; b) TBAF, THF; c) Raney NU MeOH
a) N MCij, MeOH; b) RC{0)Ci; c> Pd(PPh,)C!2, HC^C-Rj, Cui, EtjN; d) tBoOK.
DMP; e) KN03) H2S04; Q NaBit», NiCi?, MeOH
a) SnCh. EtOH or Pd/C, HCQjNR* or fi2> Pd/C, EiOH or Raney Mi, H>, EtOH
a) FPhj, HBr; b) C!(0)CCHzC0iEl; c) tBaOK; ú) (Boc}20, DMAP; e) KHMDS, R-X; KHMDS, R-X; í) TFA; g) NaNO?, H2SO«; h) LÍAtSrL;, TH.F; i) SnC12, EtOH
a) LiOH; b) EDC, HOBt, EtjN, HNRyRz; c) BHyTHF; d) if RC(0)Ci (Z^RC(OK) or RSOjCi (Z-RSOj-) or RO(CO)Ci {Z~RO(CO}-) or (RO(CO)) %0 (Z** 2HR.O(CQ)~}? EtjR CH2C12
Nos esquemas acima representados, o radical R aqui empregado é um substituinte, p. ex., Rw como acima definido. Qualquer um habilitado no estado da técnica prontamente notará que as vias sintéticas adequadas para os vários substituintes da presente invenção serão aquelas em que as condições de reação e os passos envolvidos não modifiquem os substituintes pretendidos.
V. FORMULAÇÕES, ADMINISTRAÇÕES, E USOS
Concordantemente, num outro aspeto da presente invenção composições farmaceuticamente aceitáveis são fornecidas, onde essas composições compreendem qualquer um dos compostos aqui descritos, e opcionalmente compreendem um transportador farmaceuticamente aceitável, adjuvante ou veiculo. Em certas formas de realização as composições compreendem opcionalmente um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
Será também entendido que alguns dos compostos da presente invenção podem existir na sua forma livre para tratamento, ou quando apropriado, na forma de derivados farmaceuticamente aceitáveis relacionados. Um derivado farmaceuticamente aceitável relacionado inclui, mas não está limitado a, sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres, sais dos referidos ésteres, ou qualquer outro aducto ou derivado em que após administração ao paciente com sua necessidade é capaz de fornecer, direta ou indiretamente, um composto como outrora descrito ou um metabolito ou resíduo relacionado.
Como aqui usado, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aqueles sais que, no âmbito de uma sólida avaliação médica, são considerados úteis para uso em contacto com tecidos de humanos ou animais inferiores sem provocarem toxicidade, irritação, resposta alérgica, e são compatíveis com um rácio razoável de benefício/risco. Um "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a qualquer sal não-tóxico ou sal de um éster de um composto da invenção que, após administração a um recipiente é capaz de fornecer, seja direta ou indiretamente, um composto da invenção ou um metabolito ou resíduo inibitoriamente ativo relacionado.
Sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos do estado da técnica. Por exemplo, S.M. Berge, et al. descreve sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhe no J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção incluem aqueles derivados de ácidos e bases inorgânicos e orgânicos. Exemplos de sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis, não-tóxicos, são os sais do grupo amina formados com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido brómico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico ou com ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido sucínico, ou ácido malónico ou através do uso de outros métodos conhecidos no estado da técnica como a troca iónica. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenosulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroiodeto, 2-hidróxietanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, sulfato de lauril, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, sucinato, sulfato, tartarato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, sais valerato. Sais derivados de bases apropriadas incluem metais alcalinos, metais alcalino-terrosos, amónia e sais N+ (Ci-4 alquilo) 4. Esta invenção também prevê a quaternização de quaisquer grupos alcalinos contendo azoto aqui divulgados. Produtos dispersáveis em água ou óleo podem ser obtidos com a referida quaternização. Sais metálicos alcalinos e alcalino-terrosos representativos incluem sódio, lítio, potássio, cálcio e magnésio. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, quando apropriado, amónia não-tóxica, amónia quaternária, e catiões amina formados usando contra-iões como hálido, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, alquilsulfonato e arilsulfonato.
Como acima descrito, as composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção compreendem adicionalmente um transportador farmaceuticamente aceitável, adjuvante, ou veículo, que, como aqui usado, inclui todo e qualquer solvente, diluente, ou outro veículo líquido, dispersão ou aqente de suspensão, surfatante, aqente isotónico, aqente espessante ou emulsionante, conservante, liqante sólido, lubrificante, como sendo mais adequado à forma de dosagem particular desejada. Remington's Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E.W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa. 1980) divulga vários veículos usados na formulação de composições farmaceuticamente aceitáveis e técnicas conhecidas relacionadas para a sua preparação. Exceto quando o meio veiculador convencional é incompatível com os compostos da invenção, seja pela produção de qualquer efeito biológico indesejável ou de outra forma interagindo de um modo deletério com qualquer um dos componentes da composição farmaceuticamente aceitável, o seu uso é considerado como estando no âmbito desta invenção. Alguns exemplos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, agentes de troca iónica, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas do soro, tais como a albumina do soro humano, substâncias-tampão como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas parciais de glicéridos de ácidos gordos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tal como sulfato de protamina, hidrogenofosfato de disódio, hidrogenofosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, pirrolidina polivinil, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloco polietileno-polioxipropileno, lanolina, açúcares tais como a lactose, glucose e sacarose; amidos como o amido do milho e o amido da batata; celulose e seus derivados como a carboximetilcelulose de sódio, etilcelulose, e acetato de celulose; goma adragante em pó, malte, gelatina; talco, excipientes como a manteiga de cacau, e ceras supositórias, óleos como o óleo de amendoim, óleo da semente do algodão, óleo de cártamo, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo de soja; glicóis, tal como um propilenoglicol ou polietilenoglicol; ésteres tais como oleato de etilo e laurato de etilo; agar, agentes-tampão como o hidróxido de magnésio e o hidróxido de alumínio, ácido algínico, água apirogénica, salina isotónica; solução de Ringer; álcool etílico, e soluções-tampão fosfato, assim como outros lubrificantes compatíveis não tóxicos tais como lauril sulfato de sódio e estearato de magnésio, assim como agentes colorantes, agentes de libertação, agentes de revestimento, adoçantes, agentes aromatizantes e perfumantes; conservantes e antioxidantes podem também estar presentes na composição, de acordo com o julgamento do formulador.
Ainda noutro aspeto, a presente invenção fornece um método de tratamento de uma condição, doença ou distúrbio implicado pela atividade de um transportador ABC. Em certas formas de realização, a presente invenção fornece um método de tratamento de uma condição, doença ou distúrbio implicado por uma deficiência na atividade de um transportador ABC, o método compreendendo a administração de um composto de fórmula (I, Ic, Id, II, lia, Ilb, IIc, e lid) a um sujeito, preferencialmente um mamífero, com sua necessidade relacionada.
Em certas formas de realização preferenciais, a presente invenção fornece um método para o tratamento de fibrose cística, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária deficiências na coagulação/fibrinólise, tais como a deficiência na proteína C, angioedema hereditário Tipo 1, deficiências no processamento de lípidos tais como hipercolésterolemia familiar, quilomicronemia Tipo I, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, tais como a doença de células I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses, Sandhoff/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo Laron, deficiência em mieloperoxidase, hipoparatiroidismo, melanoma, sindrome de glicoproteina deficiente em carbohidratos (CGD) Tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congénito, osteogénese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência ACT, diabetes insipidus (Dl), Dl neurohipofiseal, Dl nefrogénica, sindrome Charcot-Marie Tooth, doença de Pelizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas tais como a doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, diversos distúrbios neurológicos relacionados com poliglutamina tal como a doença de Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana, e distrofia miotónica, assim como encefalopatias espongiformes, tais como a doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Fabry, sindrome de Gerstmann-Stráussler-Scheinker, diarreia secretória, doença do rim policístico, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), doença do olho seco, e sindrome de Sjõgren, compreendo o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um composto de fórmula (I, Ic, Id, II, lia, Ilb, IIc, e Ild), ou uma forma de realização relacionada como acima descrita.
De acordo com uma forma de realização preferencial alternativa, a presente invenção fornece um método de tratamento de fibrose cística compreendendo o passo de administração ao referido mamífero de uma composição compreendendo o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um composto de fórmula (I, Ic, Id, II, lia, Ilb, IIc, e Ild), ou uma forma de realização relacionada como acima descrita.
De acordo com a invenção, uma quantidade "eficaz" do composto ou composição farmaceuticamente aceitável é a quantidade eficaz para o tratamento ou diminuição da qravidade de uma ou mais das doenças de fibrose cistica, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária deficiências na coaqulação/fibrinólise, tais como a deficiência na proteína C, anqioedema hereditário Tipo 1, deficiências no processamento de lípidos tais como hipercolésterolemia familiar, quilomicronemia Tipo I, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, tais como a doença de células I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses, Sandhoff/Tay-Sachs, Criqler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo Laron, deficiência em mieloperoxidase, hipoparatiroidismo, melanoma, síndrome de qlicoproteína deficiente em carbohidratos (CGD) Tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo conqénito, osteoqénese imperfeita, hipofibrinoqenemia hereditária, deficiência ACT, diabetes insipidus (Dl), Dl neurohipofiseal, Dl nefroqénica, síndrome Charcot-Marie Tooth, doença de Pelizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas tais como a doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear proqressiva, doença de Pick, diversos distúrbios neurolóqicos relacionados com poliglutamina tal como a doença de Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana, e distrofia miotónica, assim como encefalopatias espongiformes, tais como a doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Fabry, síndrome de Gerstmann-Stráussler-Scheinker, diarreia secretória, doença do rim policistico, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), doença do olho seco, e síndrome de Sjõgren.
Os compostos e composições da presente invenção podem ser administrados usando qualquer quantidade e qualquer via de administração eficaz para o tratamento ou diminuição da gravidade de uma ou mais doenças de fibrose cistica, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária deficiências na coagulação/fibrinólise, tais como a deficiência na proteína C, angioedema hereditário Tipo 1, deficiências no processamento de lípidos tais como hipercolésterolemia familiar, quilomicronemia Tipo I, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, tais como a doença de células I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses, Sandhoff/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo Laron, deficiência em mieloperoxidase, hipoparatiroidismo, melanoma, síndrome de glicoproteína deficiente em carbohidratos (CGD) Tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congénito, osteogénese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência ACT, diabetes insipidus (Dl), Dl neurohipofiseal, Dl nefrogénica, síndrome Charcot-Marie Tooth, doença de Pelizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas tais como a doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, diversos distúrbios neurológicos relacionados com poliglutamina tal como a doença de Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana, e distrofia miotónica, assim como encefalopatias espongiformes, tais como a doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Fabry, síndrome de Gerstmann-Stráussler-Scheinker, diarreia secretória, doença do rim policistico, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), doença do olho seco, e síndrome de Sjõgren. A quantidade exata requerida irá variar de sujeito para sujeito, dependendo da espécie, idade, e condição geral do sujeito, a gravidade da infeção, o agente particular, e o seu modo de administração. Os compostos da invenção são preferencialmente formulados em formas de dosagem unitárias para facilitar a administração e uniformizar a dosagem. A expressão "forma de dosagem unitária" como aqui usada refere-se a uma unidade discreta em termos físicos de um agente apropriado para o paciente a ser tratado. Será entendido, contudo, que o uso total diário de compostos e composições da presente invenção é decidido pelo médico responsável na sequência de um julgamento médico sólido. 0 nível da quantidade eficaz específica para qualquer paciente ou organismo particular dependerá de uma variedade de fatores incluindo o distúrbio a ser tratado, e a gravidade do distúrbio; a atividade do composto específico empregado, a composição específica empregada; a idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do paciente; o tempo de administração, a via de administração, e a taxa de excreção do composto específico empregado; a duração do tratamento, fármacos usados em combinação ou coincidentemente com o composto específico empregado, e outros fatores bem conhecidos no estado da técnica médica. 0 termo "paciente", como aqui usado, refere-se a um animal, preferencialmente um mamífero, e ainda mais preferencialmente um humano.
As composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção podem ser administradas a humanos e outros animais por via oral, rectal, parentérica, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (sob a forma de pós, pomadas, ou gotas), bucal, como um spray oral ou nasal, ou semelhantes, dependendo da gravidade da infeção a ser tratada Em certas formas de realização, os compostos da invenção podem ser administrados oralmente ou parentericamente a níveis de dosagem de cerca de 0,01 mg/kg ate cerca de 50 mg/kg e preferencialmente de cerca de 1 mg/kg a cerca de 25 mg/kg, de peso corporal do sujeito por dia, uma ou mais vezes por dia, para obter o efeito terapêutico desejado.
Formas de dosagem líquidas para administração oral incluem, mas não estão limitadas a, emulsões farmaceuticamente aceitáveis, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires. Além dos compostos ativos, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes comummente usados no estado da técnica tal como, por exemplo, água e outros solventes, agentes solubilizantes e emulsionantes tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, álcool benzílico, benzoato de benzilo, propilenoglicol, 1,3-butilenoglicol, dimetilformamida, óleos (em particular, da óleos da semente do algodão, de amendoim, de milho, de gérmen de trigo, de oliveira, de rícino, e de sésamo), glicerol, álcool tetrahidrofurfuril, polietilenoglicóis, e ésteres de ácidos gordos de sorbitano, e misturas relacionadas. Além de diluentes inertes, as composições orais também podem incluir adjuvantes tais como agentes hidratantes, emulsionantes, e de suspensão, adoçantes, aromatizantes e perfumantes.
Preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquosas injetáveis esterilizadas ou suspensões oleaginosas podem ser formuladas de acordo com o estado da técnica, usando agentes de dispersão adequados ou hidratantes e agentes de suspensão. A preparação injetável esterilizada pode também ser uma solução, suspensão ou emulsão injetável esterilizada num diluente ou solvente parentericamente não-tóxico, por exemplo, uma solução de 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão a água, solução de Ringer, U,5.P e solução de cloreto de sódio isotónica. Adicionalmente, óleos estáveis, esterilizados, são convencionalmente empregados como solvente ou meio de suspensão. Para este propósito, qualquer óleo estável suave pode ser empregado incluindo mono- e diglicéridos sintéticos. Adicionalmente, ácidos gordos tais como ácido oleico são usados na preparação de formulações injetáveis.
As formulações injetáveis podem ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro retentor de bactérias, ou através da incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas esterilizadas que podem ser dissolvidas ou dispersas em água esterilizada ou outro meio injetável esterilizado antes do seu uso.
De forma a prolongar o efeito de um composto da presente invenção, é muitas vezes desejável abrandar a absorção do composto a partir da injeção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser obtido através do uso de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo com baixa solubilidade na água. A taxa de absorção do composto dependerá então da sua taxa de dissolução que, por sua vez, irá depender da forma cristalina e tamanho do cristal. Alternativamente, uma absorção retardada de uma forma de composto administrada parentericamente é acompanhada pela dissolução ou suspensão do composto num veículo oleaginoso. Formas injetáveis de armazenamento são preparadas através da formação de matrizes de microencapsulação do composto em polímeros biodegradáveis tais como polilactato-poliglicolato. Dependendo do rácio de composto para polímero e da natureza do polímero particular empregado, a taxa de libertação do composto pode ser controlada.
Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli (orto ésteres) e poli(anidridos) . As formulações injetáveis de armazenamento podem ser preparadas através do encapsulamento do composto em lipossomas ou microemulsões que são compatíveis com os tecidos corporais.
Composições para administração rectal ou vaginal são preferencialmente supositórios que podem ser preparados por mistura dos compostos desta invenção com excipientes ou veículos adequados não-irritáveis tais como a manteiga de cacau, polietilenoglicol ou uma cera de supositório que é sólida à temperatura ambiente mas líquida à temperatura corporal e desta forma pode fundir-se no reto ou cavidade vaginal e libertar o composto ativo.
Formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, pastilhas, pós, e grânulos. Nas referidas formas de dosagem sólidas, o composto ativo é misturado com pelo menos um excipiente ou veículo inerte, farmaceuticamente aceitável como o citrato de sódio ou o fosfato de dicálcio e/ou a) agentes de enchimento ou tais como amido, lactose, sacarose, glucose, manitol e ácido silicílico; b) agentes de ligação tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarose e acácia; c) agentes humidificantes como o glicerol; d) agentes desintegrantes como o agar-agar, carbonato de cálcio, amido da batata ou da tapioca, ácido algínico, certos silicatos, e carbonato de sódio; e) agente retardantes de solução tais como a parafina; f) aceleradores de absorção como os compostos de amina quaternários; g) agentes hidratantes tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol; h) agentes de absorção tais como o caulim e barro de bentonite; e i) lubrificantes tais como o talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, laurilsulfato de sódio, e misturas derivadas. No caso de cápsulas, comprimidos e pastilhas, a forma de dosagem também pode compreender agentes tamponizantes.
Composições sólidas de um tipo semelhante podem também ser empregadas enquanto agentes de enchimento em cápsulas gelatinosas moles ou duras usando os referidos excipientes como lactose ou açúcar do leite assim como polietilenoglicóis de alto peso molecular. As formas de dosagem sólidas das pastilhas, drageias, cápsulas, comprimidos e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e coberturas tais como revestimento entéricos ou outros revestimentos bem conhecidos no estado da técnica farmacêutica. Eles podem opcionalmente conter agentes opacificantes e podem também fazer parte de uma composição que liberte o(s) ingrediente(s) ativo(s) apenas, ou preferencialmente, numa certa parte do trato intestinal, opcionalmente, de um modo retardado. Exemplos de composições que incorporam estas características e que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. Composições sólidas de um tipo semelhante podem ser empregadas como agentes de enchimento em cápsulas gelatinosas moles e duras usando os referidos excipientes como lactose e açúcar do leite assim como polietilenoglicóis de alto peso molecular e semelhantes.
Os compostos ativos podem também ser na forma microencapsulada com um ou mais excipientes como referido acima. As formas de dosagem sólidas como pastilhas, drageias, cápsulas, comprimidos e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e coberturas tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos no estado da técnica farmacêutica. Nas referidas formas de dosagem sólidas, o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte como por exemplo a sacarose, lactose ou amido. As referidas formas de dosagem podem também compreender, como é prática normal, substâncias adicionais além dos diluentes inertes, p. ex., lubrificantes nas pastilhas e outros agentes tais como o estearato de magnésio e a celulose microcristalina. No caso das cápsulas, pastilhas e comprimidos, as formas de dosagem podem também compreender agentes tamponizantes. Estes podem opcionalmente conter agente opacificantes e podem também fazer parte de uma composição que liberta o(s) ingrediente(s) ativo(s) apenas, ou preferencialmente, numa certa parte do trato intestinal, opcionalmente, de um modo retardado. Exemplos de composições que incorporam estas caracteristicas e que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras.
Forma de dosagem para administração tópica ou transdérmica de um composto desta invenção incluem pomadas, pastas, cremes, loções, géis, pós, soluções, sprays, inalantes ou pensos/adesivos. 0 componente ativo é misturado em condições estéreis com um veiculo farmaceuticamente aceitável e quaisquer conservantes ou agentes tamponizantes que possam ser necessários. Formulações oftalmológicas, gotas para os ouvidos, e gotas para os olhos são também contempladas como fazendo parte do âmbito desta invenção. Adicionalmente, a presente invenção contempla o uso de pensos/adesivos transdérmicos, que possuem a vantagem adicional de fornecerem uma libertação controlada de um composto no organismo. Tais formas de dosagem são preparadas através da dissolução ou dispensa do composto num meio apropriado. Os promotores de absorção podem também ser usados para aumentar o fluxo do composto ao longo da pele. A taxa de absorção pode ser controlada seja através do fornecimento uma membrana que controle a absorção ou através da dispersão do composto numa matriz ou gel polimérico.
Como acima descrito de uma forma genérica, os compostos da invenção são úteis como modeladores dos transportadores ABC. Assim, sem pretenderem ser limitados por qualquer teoria particular, estes compostos e composições são particularmente úteis para o tratamento ou diminuição da gravidade de uma doença, condição ou distúrbio onde a hiperatividade ou inatividade dos transportadores ABC está implicada na doença, condição ou distúrbio. Quando a hiperatividade ou inatividade dos transportadores ABC está implicada numa doença, condição ou distúrbio particular, a doença, condição ou distúrbio podem também ser designada como uma "doença, condição ou distúrbio mediado por transportadores ABC". Concordantemente, aqui descrito está um método de tratamento ou diminuição da gravidade de uma doença, condição, ou distúrbio onde a hiperatividade ou inatividade de um transportador ABC está implicado no estádio da doença. A atividade de um composto utilizado nesta invenção enquanto modelador de um transportador ABC pode ser testado de acordo com métodos descritos no estado da técnica e divulgados nos Exemplos aqui contidos.
Será também entendido que os compostos e as composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser empregadas em terapias de combinação, ou seja, os compostos e as composições farmaceuticamente aceitáveis podem ser administradas concorrencialmente, antes de, ou após, um ou mais procedimentos médicos ou terapêuticos alternativos. A combinação particular de terapias (terapêutica ou procedimentos) a ser empregada num regime de combinação terá em conta a compatibilidade das terapias e/ou procedimentos pretendidos e o efeito terapêutico desejado a ser atingido. Será também entendido que as terapias empregadas podem atingir um efeito desejado para o mesmo distúrbio (por exemplo, um composto da invenção pode ser administrado concorrencialmente com outro agente usado para tratar o mesmo distúrbio), do mesmo modo que podem também atingir diferentes efeitos (p. ex., controlo de qualquer um dos efeitos adversos). Como aqui usados, os agentes terapêuticos adicionais que são normalmente administrados para tratar ou prevenir uma doença, ou condição particular, são conhecidos por serem "apropriados para a doença, ou condição, a ser tratada". A quantidade do agente terapêutico adicional presente nas composições desta invenção não excederá a quantidade que seria normalmente administrada numa composição compreendendo esse agente terapêutico como único ingrediente ativo. Preferencialmente a quantidade do agente terapêutico adicional nas composições presentemente divulgadas irá variar desde cerca 50% a 100% da quantidade normalmente presente numa composição compreendendo esse agente como único ingrediente terapeuticamente ativo.
Os compostos desta invenção ou composições farmaceuticamente aceitáveis relacionadas podem também ser incorporados em composições para revestir um dispositivo médico implantável, tal como próteses, válvulas artificiais, enxertos vasculares, stents e cateteres. Concordantemente, aqui descrita está uma composição para revestir um dispositivo implantável compreendendo um composto da presente invenção como descrito genericamente acima, e em classes e subclasses derivadas, e um veiculo adequado para revestir o referido dispositivo implantável. Também aqui descrito está um dispositivo implantável revestido com uma composição compreendendo um composto da presente invenção como genericamente descrito acima, e em classes e subclasses derivadas, e um veiculo adequado para revestir o referido dispositivo implantável. Revestimentos adequados e métodos de preparação gerais para dispositivos implantáveis revestidos são descritos nas patentes americanas US 6,099,562; 5,886,026; e 5,304,121. Os revestimentos são tipicamente materiais poliméricos biocompativeis tais como um polímero hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietilenoglicol, ácido poliláctico, acetato de etileno vinil, e misturas derivadas. Os revestimentos podem ser opcionalmente recobertos por uma cobertura de fluorosilicano, polissacarídeos, polietilenoglicol, fosfolípidos ou combinações relacionadas para conferir as características de libertação controlada na composição.
Outro aspeto da invenção relaciona-se com a modelação da atividade do transportador ABC numa amostra biológica (p. ex., in vitro), que método compreende o contacto da referida amostra biológica com o composto da Fórmula I ou uma composição compreendendo o referido composto. O termo "amostra biológica", como aqui usado, inclui, sem limitação, culturas celulares ou extratos relacionados, material de biópsia obtido a partir de um mamífero ou extratos relacionados; e sangue, saliva, urina, fezes, sémen, lágrimas, ou outros fluídos corporais ou extratos relacionados. A modelação da atividade do transportador ABC numa amostra biológica é útil numa variedade de aplicações que são conhecidas para aqueles habilitados no estado da técnica. Exemplos de tais aplicações incluem, mas não estão limitadas a, estudo dos transportares ABC em fenómenos biológicos e patológicos; e a avaliação comparativa de novos modeladores para transportadores ABC.
Ainda noutra forma de realização, um método de modelação da atividade de um canal de aniões in vitro ou in vivo, é fornecido compreendendo o passo de contactar o referido canal com um composto de fórmula (I, Ic, Id, II, lia, Ilb, IIc, e Ild). Em formas de realização preferenciais, o canal de aniões é um canal de aniões cloreto ou um canal de aniões bicarbonato. Noutras formas de realização preferenciais, o canal de aniões é um canal de aniões cloreto.
De acordo com uma forma de realização alternativa, a presente invenção fornece um método in vitro de aumentar o número de transportadores ABC funcionais na membrana de uma célula, compreendendo o passo de contactar a referida células com um composto de fórmula (I, Ic, Id, II, lia, Ilb, IIc, e Ild) . 0 termo "transportador ABC funcional" como aqui usado refere-se a um transportador ABC que é capaz de exercer atividade de transporte. Noutras formas de realização preferenciais, o referido transportador ABC é CFTR.
De acordo com outra forma de realização preferencial, a atividade do transportador ABC é medida através da medição do potencial de voltagem transmembranar. Meios para medir o potencial de voltagem através da membrana numa amostra biológica podem empregar qualquer um dos métodos conhecidos no estado da técnica, tais como um ensaio ótico de medição do potencial de membrana. Ou outros métodos eletrofisiológicos. 0 ensaio ótico de determinação do potencial de membrana utiliza sensores FRET sensíveis a voltagem descritos por Gonzalez e Tsien (Ver, Gonzalez, J. E. e R.Y. Tsien (1995) "Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells" Biophys J. 69(4): 1272-80; e Gonzalez; J.K e R.Y. Tsien (1997) "Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer" Chem Biol 4(4): 269-77) em combinação com a instrumentação para medir as mudanças na fluorescência tais como um leitor de voltagem/sensor de iões (VIPR) (ver Gonzalez, J.E., K. Oades, et al. (1999) "Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channel targets" Drug Discov Today 4(9) :431-439) .
Estes ensaios sensíveis a voltagem são baseados na mudança na transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) entre uma sonda solúvel na membrana, sensível à voltagem, DiSBAC2(3), e um fosfolípido fluorescente, CC2-DMPE, que está ancorado à superfície externa da membrana plasmática e atua como dador FRET. Mudanças no potencial de membrana (Vm) levam a que a sonda DiSBAC2(3) carregada negativamente se redistribua ao longo da membrana plasmática e a quantidade de energia transferida para a sonda CC2-DMPE varia concordantemente. As mudanças na emissão de fluorescência podem ser monitorizadas usando VIPR™ II, que é um manuseador de líquidos integrado e detetor de fluorescência desenhado para conduzir ensaios celulares em microplacas de 96- e 384-poços.
Ainda num outro aspeto a presente invenção fornece um kit para uso na medição da atividade de um transportador ABC ou fragmento relacionado numa amostra biológica in vitro ou in vivo compreendendo (i) uma composição compreendendo um composto de fórmula (I, Ic, Id, II, lia, Ilb, IIc, e Ild) ou qualquer uma das formas de realização acima referidas; e (ii) instruções para a) contactar a composição com a amostra biológica e b) medir a atividade do referido transportador ABC ou fragmento relacionado. Numa forma de realização, o kit compreende instruções para a) contactar uma composição adicional com a amostra biológica; b) medir a atividade do referido transportador ABC ou fragmento relacionado na presença do referido composto adicional e, c) comparar a atividade do transportador ABC na presença do composto adicional com a densidade do transportador ABC na presença de uma composição de fórmula (I, Ic, Id, II, lia, Ilb, IIc, e Ild). Em formas de realização preferenciais, o kit é usado para medir a densidade do CFTR.
Para que a invenção aqui descrita possa ser totalmente compreendida, os seguintes exemplos são divulgados. Deverá ser entendido que estes exemplos são apresentados apenas para fins ilustrativos e não devem ser tidos como limitativos desta invenção de modo algum.
VI. PREPARAÇÕES E EXEMPLOS
Procedimento Genérico I: Elementos de Base Ácido
Carboxilico
cloreto de benziltrietilamónio (0,025 equivalentes) e o composto dihalo apropriado (2,5 equivalentes) foram adicionados a um acetonitrilo fenil substituído. A mistura foi aquecida a 70°C e depois 50% de hidróxido de sódio (10 equivalentes) foi lentamente adicionado à mistura. A reacção foi agitada a 70°C durante 12-24 horas to para assegurar uma formação completa da fracção cicloalquil e depois aquecida a 130°C durante 24-48 horas para assegurar uma conversão completa do nitrilo ao ácido carboxilico. A mistura de reacção de cor castanho escuro /preto foi diluída com água e extraída com diclorometano três vezes para remover subprodutos. A solução aquosa alcalina foi acidificada com ácido clorídrico concentrado a um pH inferior a 1 e o precipitado que se começou a formar a pH 4 foi filtrado e lavado com ácido clorídrico 1M duas vezes. 0 material sólido foi dissolvido em diclorometano e extraído duas vezes com ácido clorídrico 1M e uma vez com a solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução orgânica foi secada com sulfato de sódio e evaporada até à secura para originar o ácido cicloalquilcarboxílico. Taxas de produção e pureza foram tipicamente superiores a 90%.
Exemplo 1: Ácido 1-benzo[1,3]dioxol-5-il-ciclopropanocarboxílico
Uma mistura de 2-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)acetonitrilo (5,10 g 31,7 mmol), l-bromo-2-cloro-etano (9,00 mL 109 mmol), e cloreto de benziltrietilamónio (0,181 g, 0,795 mmol) foi aquecida a 70 °C e depois 50% (wt./wt.) de hidróxido de sódio aquoso (26 mL) foi lentamente adicionado à mistura. A reacção foi agitada a 70°C durante 24 horas e depois aquecida a 130 °C durante 48 horas. A mistura de reacção de cor castanho-escuro foi diluída com água (400 mL) e extraída uma vez com um volume equivalente de acetato de etilo e uma vez com um volume equivalente de diclorometano. A solução aquosa alcalina foi acidificada com ácido clorídrico concentrado a um pH inferior a 1 e o precipitado filtrado e lavado com ácido clorídrico 1M. 0 material sólido foi dissolvido em diclorometano (400 mL) e extraído duas vezes com volumes equivalentes de ácido clorídrico 1M e uma vez com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução orgânica foi secada com sulfato de sódio e evaporada até à secura para originar um sólido branco ou esbranquiçado (5,23 g, 80%) ESI-MS m/z calc. 206,1, experimental 207,1 (M+l)+. Tempo de retenção 2,37 minutos. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,07-1,11 (m, 2H) , 1,38-1,42 (m, 2H) , 5,98 (s, 2H) , 6,79 (m, 2H) , 6,88 (m, 1H), 12,26 (s,1H).
Procedimento Genérico II: Elementos de Base Ácido
Carboxilico
Hidróxido de sódio (50 % solução aquosa, 7,4 equivalentes) foi lentamente adicionado a uma mistura do fenil acetonitrilo apropriado, cloreto de benziltrietilamónio (1,1 equivalentes), e o composto dihalo apropriado (2,3 equivalentes) a 70 °C. A mistura foi agitada overnight a 70 °c e a mistura de reacção foi diluída com água (30 mL) e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de sódio e evaporadas até à secura para originar o produto bruto ciclopropanocarbonitrilo, que foi usado directamente no passo seguinte. O produto bruto ciclopropanocarbonitrilo foi sujeito a refluxo em 10% hidróxido de sódio aquoso (7,4 equivalentes) durante 2,5 horas. A mistura de reacção arrefecida foi lavada com éter (100 mL) e a fase aquosa foi acidificada a pH 2 com ácido clorídrico 2M. O sólido precipitado foi filtrado para originar o ácido ciclopropanocarboxílico na forma de um sólido branco.
Uma solução de 5-bromo-2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxolo (11,8 g, 50,0 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) [Pd(PPh3)4, 5,78 g, 5,00 mmol] em metanol (20 mL) contendo acetonitrilo (30 mL) e trietilamina (10 mL) foi agitada sob uma atmosfera de monóxido de carbono (55 PSI) a 75°C (temperatura do banho de óleo) durante 15 horas. A mistura de reacção arrefecida foi filtrado e o filtrado foi evaporado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para originar o produto bruto ácido 2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxolo-5-carboxílico metil éster (11,5 g), que foi usado directamente no passo seguinte.
O produto bruto ácido 2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxolo-5-carboxílico metil éster (11,5 g) foi dissolvido em 20 mL de tetrahidrofurano (THF) anidro foi lentamente adicionado a uma suspensão de hidrido de alumínio lítio (4,10 g, 106 mmol) em THF anidro (100 mL) a 0 °C. A mistura foi então aquecida até à temperatura ambiente. Após ter sido agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, a mistura de reacção foi arrefecida a 0 °C e tratada com água (4,1 g), seguido por hidróxido de sódio (10% solução aquosa, 4,1 mL). A lama resultante foi filtrada e lavada com THF. O filtrado combinado foi evaporado até à secura e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para originar (2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-metanol (7,2 g, 38 mmol, 76 % no final dos dois passos) na forma de um óleo incolor.
Cloreto de tionilo (45 g, 38 mmol) foi lentamente adicionado a uma solução de (2,2-difluorobenzo[1,3]dioxol-5-il)-metanol (7,2 g, 38 mmol) em diclorometano (200 mL) a 0°C. A mistura resultante foi agitada overnight à temperatura ambiente e depois evaporada até à secura. O resíduo foi dividido entre uma solução aquosa de bicarbonato de sódio saturado (100 mL) e diclorometano (100 mL) . A camada aquosa separada foi extraída com diclorometano (150 mL) e a camada orgânica foi secada com sulfato de sódio, filtrada, e evaporada até à secura para originar o produto bruto 5-clorometil-2,2-difluorobenzo [ 1 , 3 ] dioxolo (4,4 g) que foi usado directamente no passo seguinte.
A mistura do produto bruto 5-clorometil-2,2-difluorobenzo [ 1 , 3 ] dioxolo (4,4 g) e cianeto de sódio (1,36 g, 27,8 mmol) em dimetilsulfóxido (50 mL) foi agitada à temperatura ambiente overnight. A mistura de reacção foi vertida sob gelo e extraída com acetato de etilo (300 mL) . A camada orgânica foi secada com sulfato de sódio e evaporada até à secura para originar o produto bruto (2,2-difluorobenzo [1,3]dioxol-5-il)-acetonitrilo (3,3 g) que foi usado directamente no passo seguinte.
Hidróxido de sódio (50% solução aquosa, 10 mL) foi lentamente adicionado a uma mistura do produto bruto (2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-acetonitrilo, cloreto de benziltrietilamónio (3,00 g, 15,3 mmol), e l-bromo-2-cloroetano (4,9 g, 38 mmol) a 70 °C. A mistura foi agitada overnight a 70 °C antes da mistura de reacção ser diluída com água (30 mL) e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de sódio e evaporadas até à secura para originar o produto bruto 1-(2,2-difluorobenzo[1,3]dioxol-5-il)-ciclopropanocarbonitrilo, que foi usado directamente no passo seguinte.
1-(2,2-Difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)- ciclopropanocarbonitrilo (o produto bruto do passo anterior) foi sujeito a refluxo em 10% hidróxido de sódio aquoso (50 mL) durante 2,5 horas. A mistura de reacção arrefecida foi lavada com éter (100 mL) e a fase aquosa foi acidificada a pH 2 com ácido clorídrico 2M. O sólido precipitado foi filtrado para originar ácido 1-(2,2-difluorobenzo[l,3]dioxol-5-il)-ciclopropanocarboxílico na forma de um sólido branco (0,15 g, 1,6% no fim dos quatro passos). ESI-MS m/z calc. 242,04, experimental 241,58 (M+l)+ ; XH NMR (CDC13) δ 7,14-7,04 (m, 2H) , 6, 98-6, 96 (m, 1H) , 1,74-1, 64 (m, 2H) , 1,26-1, 08 (m, 2H) .
A uma solução de benzo[1,3]dioxol-5-il-acetonitrilo (0,50 g, 3,1 mmol) em CH2CI2 (15 mL) foi adicionado gota-a-gota BBr3 (0,78 g, 3,1 mmol) a -78 °C sob atmosfera de N2. A mistura foi lentamente aquecida até à temperatura ambiente e agitada overnight. H2O (10 mL) foi adicionada para neutralizar a reacção e a camada de CH2C12 foi separada. A fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (2x7 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2S04 e purificadas por cromatograf ia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 5:1) para originar (3,4-dihidróxi-fenil)-acetonitrilo (0,25 g, 54%) na forma de um sólido branco. ΧΗ NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 9,07 (s, 1H) , 8,95 (s, 1H) , 6, 68-6, 70 (m, 2H) , 6,55 (dd, J = 8,0, 2,0 Hz, 1H) , 3,32 (s, 2H) .
A uma solução de (3,4-dihidróxi-fenil)-acetonitrilo (0,20 g, 1,3 mmol) em tolueno (4 mL) foi adicionado 2,2-dimetóxi-propano (0,28 g, 2,6 mmol) e TsOH (0,010 g, 0,065 mmol). A mistura foi aquecida sob refluxo overnight. A mistura de reacção foi evaporada para remover o solvente e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com solução de NaHCCR, H20, salmoura, e secadas com Na2S04. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida para originar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 10:1) para originar 2-(2,2-dimetilbenzo[d][1,3]dioxol-5-il) acetonitrilo (40 mg, 20%) . 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 6,68-6,71 (m, 3H), 3,64 (s, 2H) , 1,67 (s, 6H).
A uma mistura de (n-C^g) 4NBr (0,50 g, 1,5 mmol) , tolueno (7
mL) e (3,4-bisbenzilóxi-fenil)-acetonitrilo (14 g, 42 mmol) em NaOH (50 g) e H20 (50 mL) foi adicionado BrCH2CL22Cl (30 g, 0,21 mol) . A mistura de reacção foi agitada a 50°C durante 5h antes de ser arrefecida até à temperatura ambiente. Tolueno (30 mL) foi adicionado e a camada orgânica foi separada e lavada com H20, salmoura, secada com MgS04 anidro, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 10:1) para originar 1-(3,4-bisbenzilóxi-fenil)-ciclopropanocarbonitrilo (10 g, 66%). 1H NMR (DMSO 300 MHz) δ 7,46-7,30 (m, 10H), 7,03 (d, J = 8,4
Hz, 1H) , 6,94 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 6,89 (dd, J = 2,4, 8,4
Hz, 1H) , 5,12 (d, J = 7,5 Hz, 4H) , 1, 66-1, 62 (m, 2H) , 1,42-1,37 (m, 2H) .
A uma solução de 1-(3,4-bis-benzildxi-fenil)-ciclopropanocarbonitrilo (lOg, 28 mmol) em MeOH (50 mL) foi adicionado Pd/C (0,5 g) sob atmosfera de azoto. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente durante 4 h. O catalisador foi removido por filtração através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar 1-(3,4-dihidróxi-fenil)-ciclopropanocarbonitrilo (4,5 g,92%). ΧΗ NMR (DMSO 400 MHz) δ 9,06 (br s, 2H) , 6,67-6,71 (m, 2H) , 6,54 (dd, J = 2,4, 8,4 Hz, 1H) , 1, 60-1,57 (m, 2H) , 1,30- 1,27 (m, 2H).
A uma solução de NaOH (20 g, 0,50 mol) em H20 (20 mL) foi adicionado 1-(3,4-dihidróxi-fenil)-ciclopropanocarbonitrilo (4,4 g, 25 mmol) . A mistura foi aquecida sob refluxo durante 3h antes de ser arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi neutralizada com HC1 (0,5 N) a pH 3-4 e extraída com acetato de etilo (20 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas com MgSCg anidro, e concentradas sob vácuo para originar ácido 1-(3,4-dihidróxi-fenil)- ciclopropanocarboxílico (4,5 g de produto bruto. A partir de 900 mg de produto bruto, 500 mg de ácido 1-(3,4-dihidróxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico puro foi obtido por HPLC preparativo. ΧΗ NMR (DMSO, 300 MHz) δ 12,09 (br s, 1H) , 8,75 (br s, 2H) , 6, 50-6, 67 (m, 3H) , 1,35-1,31 (m, 2H) , 1,01-0,97 (m, 2H).
A uma solução de ácido 1-(4-metóxi-fenil)-ciclopropanocarboxí lico (50 g, 0,26 mol) em MeOH (500 mL) foi adicionado ácido tolueno-4-sulfónico monohidratado (2,5 g, 13 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi aquecida sob refluxo durante 20 horas. MeOH foi removido por evaporação sob vácuo e EtOAc (200 mL) foi adicionado. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHC03 (100 mL) e salmoura, secada com Na2S04 anidro e evaporada sob vácuo para originar ácido 1- (4-metóxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (53 g, 99%). XH NMR (CDC13, 4 0 0 MHz) δ 7,25-7,27 (m, 2H) , 6,85 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 3,80 (s, 3H) , 3,62 (s, 3H) , 1,58 (q, J = 3,6 Hz, 2H), 1,15 (q, J = 3, 6 Hz, 2H) .
A uma solução de ácido 1-(4-metóxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (30,0 g, 146 mmol) em AC2O (300 mL) foi adicionado uma solução de HN03 (14,1 g, 146 mmol, 65%) em AcOH (75 mL) a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada a 0-5°C durante 3 h antes de uma solução aquosa de HC1 (20%) ser adicionada gota-a-gota a 0 °C. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (200 mL x 3) . A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHC03, depois salmoura, secada com Na2S04 anidro e evaporada sob vácuo para originar ácido 1- (4-metóxi-3-nitro-fenil)ciclopropanocarboxílico metil éster (36,0 g, 98%), que foi usado directamente no passo seguinte. iH NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 7,84 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 7,54 (dd, J = 2,1, 8,7 Hz, 1H) , 7,05 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 3,97 (s, 3H) , 3,65 (s, 3H) , 1, 68-1, 64 (m, 2H) , 1,22-1,18 (m, 2H) .
A uma solução de ácido 1-(4-metóxi-3-nitro-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (10,0 g, 39,8 mmol) em CH2CI2 (100 mL) foi adicionado BBr3 (12,0 g, 47,8 mmol) a -
70°C. A mistura foi agitada a -70 °C durante 1 hora, depois permitida aquecer até -30°C e agitada a esta temperatura durante 3 horas. Água (50 mL) foi adicionada gota-a-gota a -20 °C, e a mistura resultante foi permitida aquecer até à temperatura ambiente antes de ser extraída com EtOAc (200 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadad sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 15:1) para originar ácido 1-(4-hidróxi-3-nitro-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (8,3 g,78%). 1H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 10,5 (s, 1H) , 8,05 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 7,59 (dd, J = 2,0,8,8 Hz, 1H) , 7,11 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 3,64 (s, 3H) , 1, 68-1, 64 (m, 2H) , 1,20-1,15 (m, 2H) .
A uma solução de ácido 1-(4-hidróxi-3-nitro-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (8,3 g, 35 mmol) em MeOH (100 mL) foi adicionado Raney-Nickel (0,8 g) sob atmosfera de azoto. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) a 35°C durante 8 horas. O catalisador removido por filtração através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 1:1) para originar ácido 1-(3-amino-4-hidróxi- fenil)ciclopropanocarboxílico metil éster (5,3 g,74%). 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 6,77 (s, 1H) , 6,64 (d, J = 2,0 Hz, 2H) , 3,64 (s, 3H) , 1,55-1,52 (m, 2H) , 1,15-1,12 (m, 2H) .
A uma solução de ácido 1-(3-amino-4-hidróxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (2,0 g, 9,6 mmol) em THF (40 mL) foi adicionado trifosgénio (4,2 g, 14 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 20 minutos a esta temperatura antes de água (20 mL) ser adicionada gota-a-gota a 0 °C. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (lOOmL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar ácido 1-(2-oxo-2,3-dihidro-benzooxazol-5-il)-ciclopropanocarboxílico metil éster (2,0 g, 91 %), que foi usado directamente no passo seguinte. 1R NMR (CDC13, 300 MHz) δ 8,66 (s, 1H) , 7,13-7,12 (m, 2H) , 7,07 (s, 1H) , 3,66 (s, 3H) , 1, 68-1, 65 (m, 2H) , 1,24-1,20 (m, 2H) .
A uma solução de ácido 1-(2-oxo-2,3-dihidro-benzooxazol-5-il)-ciclopropanocarboxílico metil éster (1,9 g, 8,1 mmol) em MeOH (20 mL) e água (2 mL) foi adicionado em porções LÍOH.H2O (1,7 g, 41 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi agitada durante 20 horas a 50°C. MeOH foi removido por evaporação sob vácuo antes de água (100 mL) e EtOAc (50 mL) serem adicionados. A camada aquosa foi separada, acidificada com HC1(3 mol/L) e extraída com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar ácido 1-(2-oxo-2,3- dihidrobenzo[d]oxazol-5- il)ciclopropanocarboxílico (1,5 g, 84%). ΧΗ NMR (DMSO, 400 MHz) 812,32 (brs, 1H) , 11,59 (brs, 1H) , 7,16 (d, J = 8,4
Hz, 1H) , 7,00. (d, J = 8,0 Hz, 1H), 1,44-1,41 (m, 2H) , 1,13-1,10 (m, 2H) . MS (ESI) m/e (M+H+) 218,1.
A uma suspensão agitada de 2-fluoro-4,5-dimetóxi-benzaldeído (3,00 g, 16,3 mmol) em diclorometano (100 mL) foi adicionado BBr3 (12,2 mL, 130 mmol) gota-a-gota a -78 °C sob atmosfera de azoto. Após adição, a mistura foi aquecida a -30°C e agitada a esta temperatura durante 5h. A mistura de reacção foi vertida sob gelo/água e o sólido precipitado foi recolhido por filtração e lavado com diclorometano para originar 2-fluoro-4,5-dihidróxi- benzaldeído (8,0 g) , que foi usado directamente no passo seguinte.
6-Fluoro-benzo[1,3]dioxolo-5-carbaldeído
A uma solução agitada de 2-fluoro-4,5-dihidróxi-benzaldeido (8,0 g) e BrCICH2 (24,8 g, 190 mmol) em DMF anidra (50 mL) foi adicionado CS2CO3 em porções (62,0 g, 190 mmol). A mistura resultante foi agitada a 60 °C overnight e depois vertida sob água. A mistura foi extraída com EtOAc (200 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 mL) , secadas com Na2S04, e evaporadas sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-20% acetato de etilo/éter de petróleo) para originar 6-fluoro- benzo[1,3]dioxolo-5-carbaldeído (700 mg, rendimento no fim dos dois passos: 24%). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 10,19 (s, 1H) , 7,23 (d, J = 5,6, 1H) , 6,63 (d, J = 9,6, 1H) , 6,08 (s, 2H) .
(6-Fluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-metanol
A uma solução agitada de 6-fluoro-benzo[1,3]dioxolo-5-carbaldeído (700 mg, 4,2 mmol) em MeOH (50 mL) foi adicionado NaBfU (320 mg, 8,4 mmol) em porções a 0°C. A mistura foi agitada a esta temperatura durante 30 min e foi então concentrada em vácuo para originar um resíduo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc e a camada orgânica foi lavada com água, secada com Na2S04, e concentrada em vácuo para originar ( 6-fluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il) metanol (650 mg, 92%), que foi usado directamente no passo seguinte.
(6-Fluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-metanol (650 mg, 3,8 mmol) foi adicionado a SOCI2 (20 mL) em porções a 0°C. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente durante lh e então aquecida sob refluxo durante lh. O excesso de SOCI2 foi evaporado sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi alcalinizado com solução aquosa saturada de NaHC03 a pH 7. A fase aquosa foi extraida com EtOAc (50 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 e evaporadas sob pressão reduzida para originar 5-clorometil-6-fluorobenzo[1,3]dioxolo (640 mg, 90%), que foi usado directamente no passo seguinte.
Uma mistura de 5-clorometil-6-fluoro-benzo[1,3]dioxolo (640 mg, 3,4 mmol) e NaCN (340 mg, 6,8 mmol) em DMSO (20 mL) foi agitada a 30°C durante lh e depois vertida sob água. A mistura foi extraida com EtOAc (50 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL) e salmoura (50 mL) , secadas com Na2S04, e evaporadas sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com silcia-gel (5-10% acetato de etilo/éter de petróleo) para originar (6-fluorobenzo[1,3]dioxol-5-il)-acetonitrilo (530 mg, 70%).
'"H-NMR (300 MHz, CDC13) D 6,82 (d, J= 4,8, 1H) , 6,62 (d, J = 5,4, 1H) , 5,99 (s, 2H) , 3,65 (s, 2H) .
Um frasco foi carregado com água (10 mL) , seguido por uma rápida adição de NaOH (10 g, 0,25 mol) em três porções ao longo de um período de 5 min. A mistura foi permitida arrefecer até à temperatura ambiente. Subsequentemente, o frasco foi carregado com tolueno (6 mL), brometo de tetrabutilamónio (50 mg, 0,12 mmol), (6-fluoro- benzo[1,3]dioxol-5-il)-acetonitrilo (600 mg, 3,4 mmol) e 1-bromo-2-cloroetano (1,7 g, 12 mmol). A mistura foi foi agitada vigorosamente a 50°C overnight. O frasco arrefecido foi carregado com tolueno adicional (20 mL) . A camada orgânica foi separada e lavada com água (30 mL) e salmoura (30 mL) . A camada orgânica foi removida em vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-10% acetato de etilo/éter de petróleo) para originar l-(6-fluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-ciclopropanocarbonitrilo (400 mg, 60%). XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 6,73 (d, J = 3,0 Hz, 1H) , 6,61 (d, J = 9,3 Hz, 1H) , 5,98 (s, 2H) , 1, 67-1, 62 (m, 2H) , 1,31-1,27 (m, 2H).
Uma mistura de 1-(6-fluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-ciclopropanocarbonitrilo (400mg, 0,196 mmol) e 10% NaOH (10 mL) foi agitada a 100°C overnight. Após a reacção ter arrefecido, HC1 5% foi adicionado até que pH < 5 e depois EtOAc (30 mL) foi adicionado à mistura de reacção. As camadas foram separadas e as camadas orgânicas combinadas foram evaporadas sob vácuo para originar ácido l-(6-fluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-ciclopropanocarboxílico (330 mg, 76%). ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,2 (s, 1H), 6,87-6,85 (m, 2H) , 6,00 (s, 1H) , 1,42-1,40 (m, 2H) , 1,14-1,07 (m, 2H) .
A uma solução agitada de ácido 1-(4-hidróxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (15,0 g, 84,3 mmol) em DMF (50 mL) foi adicionado hidrido de sódio (6,7 g, 170 mmol, 60% em óleo mineral) a 0 °C. Após a evolução de hidrogénio ter terminado, 2-bromo-l,1-dietóxi-etano (16,5 g, 84,3 mmol) foi adicionado gota-a-gota à mistura de reacção. A reacção foi agitada a 160°C durante 15 horas. A mistura de reacção foi vertida sob gelo (100 g) e foi extraída com CH2C12. As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04. O solvente foi evaporado sob vácuo para originar ácido 1-[4-(2,2-dietóxi-etóxi)-fenil]- ciclopropanocarboxílico (10 g) , que foi usado directamente no passo seguinte sem purificação adicional.
A uma suspensão de ácido 1-[4-(2,2-dietóxi-etóxi)-fenil]-ciclopropanocarboxílico (20 g, ~ 65 mmol) em xileno (100 mL) foi adicionado PPA (22,2 g, 64,9 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida sob refluxo (140°C) durante 1 hora antes de ser arrefecida à temperatura ambiente e decantada a partir do PPA. O solvente foi evaporado sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por HPLC preparativa para fornecer ácido 1-(benzofuran-5-il)ciclopropanocarboxílico (1,5 g, 5%). 1H NMR (400 MHz, DMSO~d6) δ 12,25 (hr s, 1H) , 7,95 (d, J = 2,8 Hz, 1H) , 7,56 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,47 (d, J = 11,6 Hz, 1H) , 7,25 (dd, J = 2,4, 11,2 Hz, 1H) , 6,89 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 1,47-1,44 (m, 2H), 1,17-1,14 (m, 2H).
A uma solução de ácido 1-(benzofuran-6- il) ciclopropanocarboxí lico (370 mg, 1,8 mmol) em MeOH (50 mL) foi adicionado Pt02(75 mg, 20%) à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) a 20°C durante 3d. A mistura de reacção foi filtrada e o solvente foi evaporado em vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por HPLC preparativa para originar ácido 1-(2,3-dihidrobenzofuran-6-il)ciclopropanocarboxílico (155 mg, 42%). ΧΗ NMR (300 MHz, MeOD) δ 7,13 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 6,83 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 6,74 (s, 1H) , 4,55 (t, J = 8,7 Hz, 2H) , 3,18 (t, J = 5,7 Hz, 2H) , 1,56-1,53 (m, 2H) , 1,19-1,15 (m, 2H) .
A uma solução de metil-1- (4- metóxifenil)ciclopropanocarboxilato (10,0 g, 48,5 mmol) em diclorometano (80 mL) foi adicionado EtSH (16 mL) sob um banho de gelo/água. A mistura foi agitada a 0 °C durante 20 min antes de AICI3 (19,5 g, 0,15 mmol) ser adicionado lentamente a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 30 min. A mistura de reacção foi vertida sob gelo/água, a camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com H2O, salmoura, secadas com Na2S04 e evaporadaa sob vácuo para originar ácido 1- (4-hidróxi-fenil)ciclopropanocarboxílico metil éster (8,9 g, 95%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,20-7,17 (m, 2H) , 6,75- 6,72 (m, 2H) , 5,56 (s, 1H) , 3,63 (s, 3H) , 1, 60-1,57 (m, 2H) , 1,17-1,15 (m, 2 H) .
A uma solução de ácido 1-(4-hidróxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (8,9 g, 46 mmol) em CH3CN (80 mL) foi adicionado NIS (15,6 g, 69 mmol) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura de reacção foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 10:1) para originar ácido 1-(4-hidróxi-3,5-diiodo-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (3,5 g, 18%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,65 (s, 2H) , 5,71 (s, 1H) , 3,63 (s, 3H) , 1,59-1,56 (m, 2H) , 1,15-1,12 (m, 2H) .
Uma mistura de ácido 1-(4-hidróxi-3,5-diiodo-fenil) -ciclopropanocarboxílico metil éster (3,2 g, 7,2 mmol), 3- cloro-2-metil-propeno (1,0 g, 11 mmol), K2CO3 (1,2 g, 8,6 mmol), Nal (0,1 g, 0,7 mmol) em acetona (20 mL) foi agitada a 20°C overnight. O sólido foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob vácuo para originar ácido 1-[3,5-diiodo-4-(2-metil-alilóxi)-fenil]- ciclopropanocarboxilico metil éster (3,5 g,97%). 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,75 (s, 2H) , 5,26 (s, 1H) , 5,06 (s, 1H) , 4,38 (s, 2H) , 3,65 (s, 3H) , 1,98 (s, 3H) , 1,62-1,58 (m, 2H), 1,18-1,15 (m, 2H).
A uma solução de ácido 1-[3,5-diiodo-4-(2-metil-alilóxi)-fenil]-ciclopropanocarboxilico metil éster (3,5 g, 7,0 mmol) em tolueno (15 mL) foi adicionado BU3SnH (2,4 g, 8,4 mmol) e A1BN (0,1 g, 0,7 mmol). A mistura foi aquecida sob refluxo overnight. A mistura de reacção foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 20:1) para originar ácido 1-(3,3-dimetil-2,3-dihidro-benzofuran-5-il)-ciclopropanocarboxilico metil éster (1,05 g, 62%). 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,10-7,07 (m, 2H) , 6,71 (d, J = 8 Hz, 1H) , 4,23 (s,2 H) , 3,62 (s, 3H) , 1,58-1,54 (m, 2H), 1,34 (s, 6H), 1,17-1,12 (m, 2H).
A uma solução de ácido 1-(3,3-dimetil-2,3-dihidro-benzofuran-5-il)ciclopropanocarboxilico metil éster (1,0 g, 4,0 mmol) em MeOH (10 mL) foi adicionado LiOH (0040 g, 9,5 mmol) . A mistura foi agitada a 40°C overnight. HC1 (10%) foi adicionado lentamente para ajustar o pH a 5. A mistura resultante foi extraída com acetato de etilo (10 mL x 3) . Os extratos foram lavados com salmoura e secados com Na2S04. O solvente foi removido sob vácuo e o produto bruto foi purificado por HPLC preparativa para originar ácido 1-(3,3-dimetil-2,3-dihidrobenzofuran-5- il)ciclopropanocarboxílico (0,37 g, 41 %). 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,11-7,07 (m, 2H) , 6,71 (d, J = 8 Hz, 1H) , 4,23 (s, 2H) , 1, 66-1, 63 (m, 2 H) , 1,32 (s, 6H) , 1,26-1,23 (m, 2H) .
A uma solução de ácido 3,4,5-trihidróxi-benzóico metil éster (50 g, 0,27 mol) e Na2B4O7(50 g) em água (1000 mL) foi adicionado Me2SO4(120 mL) e solução aquosa de NaOH (25%, 200 mL) sucessivamente à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 6h antes de ser arrefecida a 0 °C. A mistura foi acidificada a pH 2 através da adição de solução aquosa concentrada de Η2304 e depois filtrada. O filtrado foi extraído com EtOAc (500 mL x 3) .
As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida para originar metil 3,4-dihidróxi-5-metóxibenzoato (15,3 g 47%), que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional.
A uma solução de metil 3,4-dihidróxi-5-metóxibenzoato (15,3 g, 0, 0780 mol) em acetona (500 mL) foi adicionado CH2BrCl (34,4 g, 0,270 mol) e K2C03 (75, 0 g, 0,540 mol) a 80°C. A mistura resultante foi aquecida sob refluxo durante 4 h. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente e K2C03 sólido foi removido por filtração. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi lavada com água, secada com Na2S04 anidro, e evaporada sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10:1) para originar metil 7-metóxibenzo[d] [1,3]dioxolo-5-carboxilato (12,6 g, 80%) . ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) 0 7,32 (s, 1H) , 7,21 (s, 1H) , 6,05 (s, 2H) , 3, 93 (s, 3 H) , 3, 88 (s, 3H) .
A uma solução de metil 7-metóxibenzo[d][1,3]dioxolo-5-carboxilato (14 g, 0,040 mol) em THF (100 mL) foi adicionado LiAlH4 (3,1 g, 0,080 mol) em porções à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi arrefecida a 0 °C e tratada com água (3,1 g) e NaOH (10%, 3,1 mL) sucessivamente. A lama foi removida por filtração e lavada com THF. Os filtrados combinados foram evaporados sob pressão reduzida para originar (7-metóxi- benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)metanol (7,2 g, 52%) . ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) 0 6, 55 (s, 1H) , 6,54 (s, 1H) , 5,96 (s, 2H) , 4,57 (s, 2H) , 3,90 (s, 3H) .
A uma solução de SOCI2 (150 mL) foi adicionado (7-metóxibenzo[d][1,3]dioxol-5-il)metanol (9,0 g, 54 mmol) em porções a 0 °C. A mistura foi agitada durante 0,5 h. O excesso de SOCI2 foi evaporado sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi alcalinizado com solução aquosa saturada de NaHCCb a pH ~7. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas para originar 6-(clorometil)-4-metóxibenzo[d][l,3]dioxolo (10 g 94%), que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 6,58 (s, 1H) , 6,57 (s, 1H) , 5,98 (s, 2H) , 4,51 (s, 2H) , 3,90 (s, 3H) .
A uma solução de 6-(clorometil)-4- metóxibenzo[d][l,3]dioxolo (10 g, 40 mmol) em DMSO (100 mL) foi adicionado NaCN (2,4 g, 50 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 3h e vertida sob água (500 mL). A fase aquosa foi extraída com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas para originar o produto bruto, que foi lavado com éter para originar 2- (7-metóxibenzo[d][1,3]dioxol-5-il)acetonitrilo (4,6 g, 45%). NMR (400 MHz, CDC13) δ 6,49 (s, 2H) , 5,98 (s, 2H) , 3,91 (s, 3H) , 3,65 (s, 2H) . 13C NMR (400 MHz, CDC13) δ 148,9, 143,4, 134,6, 123,4, 117,3, 107,2, 101,8, 101,3, 56,3, 23,1.
A uma suspensão de t-BuOK (20,2 g, 0,165 mol) em THF (250 mL) foi adicionado uma solução de TosMIC (16,1 g, 82,6 mmol) em THF (100 mL) a -78 °C. A mistura foi agitada durante 15 minutos, tratada com uma solução de 3-benzilóxi-4-metóxi-benzaldeído (10, Og, 51,9 mmol) em THF (50 mL) gota-a-gota, e continuada a agitar durante 1,5 horas a -78 °C. À mistura de reacção arrefecida foi adicionado metanol (50 mL) . A mistura foi aquecida sob refluxo durante 30 minutos. O solvente foi removido para originar o produto bruto, que foi dissolvido em água (300 mL) . A fase aquosa foi extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/acetato de etilo 10:1) para originar 2-(3-(benzilóxi)-4-metóxifenil)-acetonitrilo (5,0 g, 48%). ΧΗ NMR (300 MHz, C0C13) δ 7,48- 7.33 (m, 5H) , 6, 89-6, 86 (m, 3H) , 5,17 (s, 2H) , 3,90 (s, 3H) , 3,66 (s, 2H) . 13C NMR (75 MHz, C0C13) δ 149, 6, 148, 6, 136,8, 128,8, 128,8, 128,2, 127,5, 127,5, 122,1, 120,9, 118,2, 113,8, 112,2, 71,2, 56,2, 23,3.
BBr3 (17 g, 66 mmol) foi lentamente adicionado a uma solução de 2-(4-cloro-3-metdxifenil)acetonitrilo (12 g, 66 mmol) em diclorometano (120 mL) a -78°C sob atmosfera de azoto. A temperatura de reacção foi lentamente aumentada até à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi agitada overnight e depois vertida sob gelo/água. A camada orgânica foi separada, e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (40 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas com Na2S04, e concentradas sob vácuo para originar (4-cloro-3-hidróxi-fenil)-acetonitrilo (9,3 g, 85%). ΧΗ NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7.34 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,02 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 6,87 (dd, J = 2,1,8,4 Hz, 1H), 5,15 (brs, 1H), 3,72 (s, 2H).
A uma solução de (4-cloro-3-hidróxi-fenil)acetonitrilo (6,2 g, 37 mmol) em CH3CN (80 mL) foi adicionado K2C03 (10 g, 74
mmol) e BnBr (7,6 g, 44 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente overnight. Os solidos foram removidos por filtração e o filtrado foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 50:1) para originar 2-(3-(benzilóxi)-4-clorofenil)acetonitrilo (5,6 g, 60%). 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,48-7,32 (m, 6H) , 6,94 (d, J = 2 Hz, 2H) , 6,86 (dd, J = 2,0, 8,4 Hz, 1H) , 5,18 (s, 2H) , 3,71 (s, 2H) .
A uma suspensão de t-BuOK (20,2 g, 0,165 mol) em THF (250 mL) foi adicionado uma solução de TosMIC (16,1 g, 82,6 mmol) em THF (100 mL) a -78°C. A mistura foi agitada durante 15 minutos, tratada com uma solução de 3-benzilóxi-4-metóxi-benzaldeído (10,0 g, 51,9 mmol ) em THF (50 mL) gota-a-gota, e continuada a agitar durante 1,5 horas a -78 °C. À mistura de reacção arrefecida foi adicionado metanol (50 mL) . A mistura foi aquecida sob refluxo durante 30 minutos. O solvente da mistura de reacção foi removido para originar o produto bruto, que foi dissolvido em água (300 mL) . A fase aquosa foi extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/acetato de etilo 10:1) para originar 2-(3-(benzilóxi)-4-metóxifenil)acetonitrilo (5,0 g, 48%). ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,48-7,33 (m, 5H) , 6,89-6, 86 (m, 3H) , 5,17 (s, 2H) , 3,90 (s, 3H) , 3,66 (s, 2H) . 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 149, 6, 148, 6, 136, 8, 128,8, 128,8, 128,2, 127,5, 127,5, 122,1, 120,9, 118,2, 113,8, 112,2, 71,2, 56,2,23,3.
A uma suspensão de t-BuOK (4,8 g, 40 mmol) em THF (30 mL) foi adicionada uma solução de TosMIC (3, 9 g, 20 mmol) em THF (10 mL) a -78 °C. A mistura foi agitada durante 10 minutos, tratada com uma solução de 3-cloro-4-metóxi-benzaldeído (1,7 g, 10 mmol) em THF (10 mL) gota-a-gota, e continuada a agitar durante 1,5 horas a -78 °C. À mistura de reacção arrefecida foi adicionado metanol (10 mL). A mistura foi aquecida sob refluxo durante 30 minutos.
O solvente da mistura de reacção foi removido para originar o produto bruto, que foi dissolvido em água (20 mL) . A fase aquosa foi extraída com EtOAc (20 mL x 3) . As camdas orgânicas combinadas foram secadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/acetato de etilo 10:1) para originar 2-(3-cloro-4- metóxifenil) acetonitrilo (1,5 g, 83%). 3Η NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,33 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 7,20 (dd, J = 2,4, 8,4
Hz, 1H) , 6,92 (d. J= 8,4 Hz, 1H) , 3,91 (s, 3H) , 3,68 (s. 2H) . 13C NMR (100 MHz, CDC13) δ 154,8, 129, 8, 127,3, 123, 0, 122,7; 117,60, 112,4, 56,2, 22,4.
A uma suspensão de t-BuOK(25,3 g, 0,207 mol) em THF (150 mL) foi adicionada uma solução de TosMIC (20,3 g, 0,104 mol) em THF (50 mL) a -78 °C.. A mistura foi agitada for 15 minutos, tratada com uma solução de 3-fluoro-4-metóxi-benzaldeído (8,00 g, 51,9 mmol) em THF (50 mL) gota-a-gota, e continuada a agitar durante 1,5 horas a -78°C. À mistura de reacção arrefecida foi adicionado metanol (50 mL). A mistura foi aquecida sob refluxo durante 30 minutos. O solvente da mistura de reacção foi removido para originar o produto bruto, que foi dissolvido em água (200 mL). A fase aquosa foi extraída com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/acetato de etilo 10:1) para originar 2-(3-fluoro-4-metóxifenil)acetonitrilo (5,0 g, 58%). XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,02-7,05 (m, 2H) , 6,94 (t, J = 8,4 Hz, 1H) , 3,88 (s, 3H) , 3,67 (s, 2H) . 13C NMR (100 MHz, CDC13) δ 152,3, 147,5, 123,7, 122,5, 117,7, 115,8, 113, 8, 56, 3, 22, 6.
Cloro-2-metóxi-4-metil-benzeno A uma solução de 2-cloro-5-metil-fenol (93 g, 0,65 mol) em CH3CN (700 mL) foi adicionado CH3I (110 g, 0,78 mol) e K2C03 (180 g, 1,3 mol). A mistura foi agitada a 25°C overnight. O sólido foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar l-cloro-2-metóxi-4-metil-benzeno (90 g, 89%). XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,22 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 6, 74-6, 69 (m, 2H) , 3,88 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H) .
A uma solução de l-cloro-2-metóxi-4-metil-benzeno (50 g, 0,32 mol) em CC14 (350 mL) foi adicionado NBS (57 g, 0,32 mol) e AIBN (10 g, 60 mmol) . A mistura foi aquecida sob refluxo durante 3 horas. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo foi purificador por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo =20: 1) para originar 4-bromometil-l-cloro-2-metóxi-benzeno (69 g, 92%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,33-7,31 (m, 1H) , 6,95-6,91 (m, 2H) , 4,46 (s, 2H) , 3,92 (s, 3H) .
A uma solução de 4-bromometil-l-cloro-2-metóxi-benzeno (68,5 g, 0,290 mol) em C2H5OH (90%, 500 mL) foi adicionado
NaCN (28,5 g, 0,580 mol) . A mistura foi agitada a 60°C overnight. Etanol foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em H20. A mistura foi extraída com acetato de etilo (300 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2S04 e purificadas por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 30:1) para originar 2-(4-cloro-3-metóxifenil) acetonitrilo (25 g, 48%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,36 (d, J = 8 Hz, 1H) , 6, 88-6, 84 (m, 2H) , 3,92 (s, 3H) , 3,74 (s, 2H) . 13C NMR (100 MHz, CDC13) δ 155,4, 130,8, 129,7, 122,4, 120,7, 117,5, 111,5, 56,2, 23,5.
A uma solução de ácido 1-(4-metóxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico (50 g, 0,26 mol) em MeOH (500 mL) foi adicionado ácido tolueno-4-sulfónico monohidratado (2,5 g, 13 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi aquecida sob refluxo durante 20 horas. MeOH foi removido por evaporação sob vácuo e EtOAc (200 mL) foi adicionado. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHC03 (100 mL) e salmoura, secada com Na2S04 anidro e evaporada sob vácuo para originar ácido 1-(4- metóxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (53 g, 99%). NMR (CDC13 400 MHz) δ 7,25-7,27 (m, 2H), 6,85 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 3,80 (s, 3H) , 3,62 (s, 3H) , 1,58 (m, 2H) , 1,15 (m, 2H) .
A uma solução de 1-(4-metóxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (30,0 g, 146 mmol) e MOMCL (29,1 g, 364 mmol) em CS2 (300 mL) foi adicionado TÍCI4 (8,30 g, 43,5 mmol) a 5°C. A mistura de reacção foi aquecida a 30°C durante ld e vertida sob gelo/água. A mistura foi extraída com CH2C12 (150 mL x 3) . Os extractos orgânicos combinados foram evaporados sob vácuo para originar ácido 1-(3-clorometil-4-metóxi-fenil)ciclopropanocarboxílico metil éster (38,0 g) , que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional.
A uma suspensão de ácido 1-(3-clorometil-4-metóxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (20 g) em água (350 mL) foi adicionado Bu4NBr (4,0 g) e Na2C03 (90 g, 0,85 mol) à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi aquecida a 65°C overnight. A solução resultante foi acidificada com uma solução aquosa de HC1 (2 mol/L) e extraída com EtOAc (200 mL x3) . A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada com Na2S04 anidro e evaporada sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/acetato de etilo 15:1) para originar ácido 1-(3-hidróximetil-4-metóxi- fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (8,0 g, 39%). 1H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7,23-7,26 (m, 2H) , 6,83 (d, J = 8,0 HZ, 1H) , 4,67 (s, 2H) , 3,86 (s, 3H) , 3,62 (s, 3H) , 1,58 (q, J= 3,6 Hz, 2H) , 1,14-1,17 (m, 2H) .
A uma solução de ácido 1-(3-hidróximetil-4-metóxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (8,0 g, 34 mmol) em CH2C12 (100 mL) foi adicionado imidazolo (5,8 g, 85 mmol) e TBSC1 (7,6 g, 51 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada overnight à temperatura ambiente. A mistura foi lavada com salmoura, secada com Na2S04 anidro e evaporada sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/acetato de etilo 30:1) para originar ácido 1 — [3 — (tert-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-metóxifenil]-ciclopropanocarboxílico metil éster (6,7 g, 56%) . 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,44-7,45 (m, 1H) , 7,19 (dd, J = 2,0,8,4
Hz, 1H) , 6,76 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 4,75 (s, 2H) , 3,81 (s,3 H) , 3,62 (s, 3H) , 1,57-1, 60 (m, 2H) , 1,15- 1,18 (m, 2H) , 0, 96 (s, 9 H) , 0,11 (s,6H) .
A uma solução de ácido 1-[3-(tert-butil-dimetil- silaniloximetil)-4-metóxi-fenil]-ciclopropanocarboxílico metil éster (6,2 g, 18 mmol) em MeOH (75 mL) foi adicionado uma solução de Li0H.H20 (1,5 g, 36 mmol) em água (10 mL) a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada overnight a 40 °C. MeOH foi removido por evaporação sob vácuo. AcOH (1 mol/L, 40 mL) e EtOAc (200 mL) foram adicionados. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada com Na2S04 anidro e evaporada sob vácuo para fornecer ácido 1-(3-hidróximetil-4-metóxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico (5,3 g) .
A uma suspensão de 3-cloro-4-hidróxi-5-metóxi-benzaldeído (10 g, 54 mmol) em diclorometano (300 mL) foi adicionado BBr3 (26,7 g, 107 mmol) gota-a-gota a -40 °C sob atmosfera de azoto. Após adição, a mistura foi agitada a esta temperatura durante 5 h e depois foi vertida sob gelo/água. O sólido precipitado foi filtrado e lavado com éter de petróleo. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para originar 3-cloro-4,5-dihidróxibenzaldeido (9,8 g, 89%), que foi usado directamente no passo seguinte.
A uma solução de 3-cloro-4,5-dihidróxibenzaldeido (8,0 g, 46 mmol) e BrClCH2 (23,9 g, 185 mmol) em DMF anidra (100 mL) foi adicionado CS2CO3 (25 g, 190 mmol) . A mistura foi
agitada a 60 °C overnight e foi então vertida sob água. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (50 mL x 3) . Os extractos combinados foram lavados com salmoura (100 mL) , secados com Na2S04 e concentrados sob pressão reduzida para originar 7-clorobenzo[d] [1,3] dioxolo-5-carbaldeído (6,0 g, 70%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 9,74 (s, 1H) , 7,42 (d, J = 0,4 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,15 (s, 2H).
A uma solução de 7-clorobenzo[d][1,3]dioxolo-5-carbaldeído (6,0 g, 33 mmol) em THF (50 mL) foi adicionado NaBH4 (2,5 g, 64 mmol)) em porções a 0 °C. A mistura foi agitada a esta temperatura durante 30 min e depois vertida sob solução aquosa de NH4CI. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (50 mL x 3) . Os extractos combinados foram secados com Na2S04 e evaporados sob pressão reduzida para gerar (7- clorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)metanol, que foi usado directamente no passo seguinte.
Uma mistura de (7-clorobenzo[d][1,3]-dioxol-5-il)metanol (5,5 g, 30 mmol) e SOCI2 (5,0.mL, 67 mmol) em diclorometano (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante lh e depois vertida sob gelo/água. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (50 mL x 3) . Os extractos combinados foram lavados com água e solução aquosa de NaHC03, secados com Na2S04 e evaporados sob pressão reduzida para originar 4-cloro-6- (clorometil)benzo[d][1,3]dioxolo, que foi directamente usado no passo seguinte.
Uma mistura de 4-cloro-6-(clorometil)benzo[d][1,3]dioxolo (6,0 g, 29 mmol) e NaCN (1,6 g, 32 mmol) em DMSO (20 mL) foi agitada a 40 °C durante lhe foi então vertida sob água. A mistura foi extraída com EtOAc (30 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secadas com Na2SC>4 e evaporadas sob pressão reduzida para originar 2-(7 -clorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il) acetonitrilo (3,4 g, 58%). ΧΗ NMR δ 6,81 (s, 1H) , 6,71 (s, 1H) , 6,07 (s, 2H) , 3,64 (s, 2H) . 13C NMR δ 149,2, 144,3, 124,4, 122,0, 117,4, 114,3, 107,0, 102,3, 23.1.
A uma solução de ácido 1-(3-amino-4- hidróxifenil)ciclopropanocarboxílico metil éster (3,00 g, 14,5 mmol) em DMF foram adicionados trimetil ortoformato (5,30 g, 14,5 mmol) e uma quantidade catalítica de ácido p-toluenosulfónico monohidratado (0,3 g) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar ácido l-benzooxazol-5- ilciclopropanocarboxílico metil éster (3,1 g) , que foi usado directamente no passo seguinte. 3Η NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,09 (s, 1),7,75 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,53-7,51 (m, 1H) , 7,42-7,40 (m, 1H) , 3,66 (s, 3H) , 1, 69-1, 67 (m, 2H) , 1,27-1,24 (m, 2H).
A uma solução de ácido l-benzooxazol-5-il-ciclopropanocarboxílico metil éster (2,9 g) in EtSH (30 mL) foi adicionado AICI3 (5,3 g, 40 mmol) em porções a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente. Água (20 mL) foi adicionada gota-a-gota a 0 °C. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 1:2) para originar ácido 1-(benzo[d]oxazol-5- il) ciclopropanocarboxílico (280 mg, 11% no final dos dois passos). NMR (DMSO, 400 MHz) δ 12,25 (brs, 1H), 8,71 (s, 1H) , 7,70-7, 64 (m, 2H) , 7,40 (dd, J = 1,6, 8,4 Hz, 1H) , 1,49-1,46 (m, 2H) , 1,21-1,18 (m, 2H) . MS (ESI) m/z (M+H+) 204,4 .
A uma suspensão de 3-fluoro-4-hidróxi-5-metóxi-benzaldeído (1,35 g,7,94 mmol) em diclorometano (100 mL) foi adicionado BBr3 (1,5 mL, 16 mmol) gota-a-gota a -78°C sob atmosfera de N2. Após adição, a mistura foi aquecida a - 30°C e então foi agitada a esta temperatura durante 5 h. A mistura de reacção foi vertida sob gelo/água. O sólido precipitado foi recolhido por filtração e lavado com diclorometano para originar 3-fluoro-4,5-dihidróxi-benzaldeído (1,1 g, 89%), que foi usado directamente no passo seguinte.
A uma solução de 3-fluoro-4,5-dihidróxi-benzaldeído (1,5 g, 9,6 mmol) e BrClCH2 (4,9 g, 38,5 mmol) em DMF anidra (50 mL) foi adicionado CS2CO3 (12,6 g, 39 mmol). The mistura foi agitada a 60 °C overnight e foi então vertida sob água. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL) , secadas com Na2S04 e evaporadas sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10:1) para originar 7-fluoro-benzo[1,3]dioxolo-5-carbaldeído (0,80 g, 49%). ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 9,78 (d, . f = 0,9 Hz, 1H) , 7,26 (dd, J = 1,5,9,3 Hz, 1H) , 7,19 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 6,16 (s, 2H) .
A uma solução de 7-fluoro-benzo[1,3]dioxolo-5-carbaldeído (0,80 g, 4,7 mmol) em MeOH (50 mL) foi adicionado NaBH4 (0,36 g, 9,4 mmol) em porções a 0 °C. A mistura foi agitada a esta temperatura durante 30 min e foi então concentrada até à secura. O resíduo foi dissolvido em EtOAc. A camada de EtOAc foi lavada com água, secada com Na2S04 e concentrada até à secura para originar (7-fluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-metanol (0,80 g, 98%), que foi usado directamente no passo seguinte.
A SOCI2 (20 mL) foi adicionado (7-fluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il) -metanol (0,80 g, 4,7 mmol) em porções a 0 °C. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente durante lh e então foi aquecida sob refluxo durante 1 h. O excesso de SOCI2 foi evaporado sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi alcalinizado com solução aquosa saturada de NaHCCb a pH ~7. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (50 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 e evaporadas sob pressão reduzida para originar 6-clorometil-4-fluoro-benzo[1,3]dioxolo (0,80 g, 92%), que foi usado directamente no passo seguinte.
A mistura de 6-clorometil-4-fluoro-benzo[1,3]dioxolo (0,80 g, 4,3 mmol) e NaCN (417 mg, 8,51 mmol) em DMSO (20 mL) foi agitada a 30°C durante lhe foi então vertida sob água. A mistura foi extraída com EtOAc (50 mL x 3) . As camada orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL) e salmoura (50 mL) , secadas com Na2S04 e evaporadas sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para originar 2-(7- fluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)acetonitrilo (530 mg, 70%). NMR (300 MHz, CDC13) δ 6, 68-6, 64 (m, 2H) , 6,05 (s, 2H) , 3,65 (s, 2H). 13 C-NMR 8151,1, 146,2, 134,1, 124,2, 117,5, 110,4, 104,8, 102,8, 23,3.
A uma solução de ácido 1-fenilciclopropanocarboxilico (25 g, 0,15 mol) em CH3OH (200 mL) foi adicionado TsOH (3 g, 0,1 mol) à temperatura ambiente. A mistura foi sujeita a refluxo overnight. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi dissolvido em EtOAc. A camada de EtOAc foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCCb. A camada orgânica foi secada com Na2S04 anidro e evaporada sob pressão reduzida para originar metil 1-fenilciclopropanocarboxilato (26 g, 96%), que foi usado directamente no passo seguinte. ΧΗ NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,37-7,26 (m, 5H) , 3,63 (s, 3H) , 1, 63-1, 60 (m, 2H) , 1,22- 1,19 (m, 2H) .
A uma solução de 1-fenilciclopropanocarboxilato (20,62 g, 0,14 mol) em H2SO4/CH2CI2 (40 mL140 mL) foi adicionado KNO3 (12,8 g, 0,13 mol) em porções a 0 °C. A mistura foi agitada durante 0,5 hr a 0 °C. Gelo/água foi adicionado e a mistura foi extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camadas orgânicas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas para originar metil 1-(4-nitrofenil)ciclopropanocarboxilato (2:1 g, 68%), que foi usado directamente no passo seguinte. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,18 (dd, J = 2,1, 6,9 Hz, 2H) , 7,51 (dd, J = 2,1,6,9 Hz, 2H) , 3,64 (s, 3H) , 1,72-1, 69 (m, 2H) , 1,25-1,22 (m, 2H).
A uma solução de metil 1- (4-nitrofenil)ciclopropanocarboxilato (20 g, 0,09 mol) em MeOH (400 mL) foi adicionado Ni (2 g) sob atmosfera de azoto. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente overnight. O catalisador foi removido por filtração através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 10:1) para originar metil 1-(4-aminofenil)ciclopropanocarboxilato (11,38 g, 66%) . ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,16 (d, J = 8,1 HZ, 2 H) , 6,86 (d,J= 7,8 Hz, 2H) , 4,31 (hr,2H), 3,61 (s,3 H) , 1,55-1,50 (m, 2H) ; 1,30-1,12 (m, 2H) .
A uma solução de metil 1- (4- aminofenil)ciclopropanocarboxilato (10,38 g, 0,05 mol) em acetonitrilo (200 mL) foi adicionado NBS (9,3 g, 0,05 mol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada overnight. Água (200 mL) foi adicionada. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (80 mL x3). As camadas orgânicas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporada para originar metil 1-(4-amino-3- bromofenil)ciclopropanocarboxilato (10,6 g, 78%), que foi que foi usado directamente no passo seguinte. ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) () 7,38 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,08 (dd, J = 1,6, 8,4 Hz, 1H) , 6,70 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,62 (s, 3H) , 1,56- 1,54 (m, 2H) , 1,14-1,11 (m, 2H) .
A uma solução desarejada de metil 1-( 4-amino-3-bromofenil)ciclopropano carboxilato (8 g, 0,03 mol) em Et3N (100 mL) foi adicionado etinil-trimetil-silano (30 g, 0,3 mol), DMAP (5% mol) e Pd(PPh3)2Cl2 (5% mol) sob atmosfera de N2. A mistura foi sujeita a refluxo a 70°C overnight. 0 sólido insolúvel foi removido por filtração e lavado com EtOAc (100 mL x 3) . O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para originar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 20:1) para originar metil l-(4-amino-3((trimetilsilil)etinil)fenil)ciclopropanocarboxilato (4,8 g, 56%). XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,27 (s, 1H) , 7,10 (dd, J = 2,1,8,4 Hz, 1H) , 6,64 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 3,60 (s, 3H), 1,55-1,51 (m, 2H) , 1,12-1,09 (m, 2H), 0,24 (s, 9 H) .
A uma solução desarejada de metil 1-(4-amino-3-((trimetilsilil)etinil)fenil) ciclopropanocarboxilato (4,69 g, 0,02 mol) em DMF (20 mL) foi adicionado Cul (1,5 g, 0, 008 mol) sob atmosfera de N2 à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 3 hr à temperatura ambiente. O sólido insolúvel foi removido por filtração e lavado com EtOAc (50 mL x 3) . O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para originar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 20:1) para originar Metil 1-(lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxilato (2,2 g, 51 %). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,61 (s, 1H),7,33 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,23-7,18 (m, 2H) , 6,52-6,51 (m, 1H) 3,62 (s, 3H) , 1, 65-1, 62 (m, 2H) , l,29-l,23(m, 2H) .
A uma solução de metil 1-(lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxilato (1,74 g, 8 mmol) em CH3OH (50 m L) e água (20 mL) foi adicionado LiOH (1,7 g, 0,04 mol). A mistura foi aquecida a 45°C durante 3 hr. Água foi adicionada e a mistura foi acidificada com HC1 concentrado a pH ~3 antes de ser extraída com EtOAc (20 mL x 3) . As camadas orgânicas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas para originar ácido 1-(lH-indol-5-il) ciclopropanocarboxílico (1,4 g, 87%). ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) 7,43 (s, 1H) , 7,30-7,26 (m, 2H) , 7,04 (dd, J = 1,5, 8,4 Hz, 1H), 6,35 (s, 1. H), 1,45-1,41 (m, 2H), 1,14-1,10 (m, 2H) .
A uma solução de ácido 1-(4-hidróxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (7,0 g, 3,6 mmol) em tert-butil éster acrílico (50 mL) foi adicionado Na (42 mg, 1,8 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 110°C durante 1 h. Após arrefecer até à temperatura ambiente, a mistura resultante foi neutralizada com água e extraída com EtOAc (100 mL x 3) . Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 20:1) para originar ácido 1 — [4 — (2-tert-butóxicarbonil-etóxi)-fenil]ciclopropanocarboxílico metil éster (6,3 g, 54%) e matéria-prima inicial não-reactante (3,0 g) . XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,24 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 6,84 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 4,20 (t, J = 6,6 Hz, 2H) , 3,62 (s, 3H) , 2,69 (t, J = 6,6 Hz, 2H) , 1,59-1,56 (m, 2H), 1,47 (s, 9 H), 1,17- 1,42 (m, 2H).
Uma solução de ácido 1-[4-(2-tert-butóxicarbonil-etóxi)-fenil]-ciclopropanocarboxílico metil éster (6,3 g, 20 mmol) em HC1 (20%, 200 mL) foi aquecida a 110°C durante 1 h. Após arrefecer até à temperatura ambiente, a mistura resultante foi filtrada. O sólido foi lavado com água e secado sob vácuo para originar ácido 1-[4-(2-carbóxi-etóxi)-fenil]ciclopropanocarboxílico metil éster (5,0 g, 96%). ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO) δ 7,23-7,19 (m, 2H), 6,85-6,81 (m, 2H), 4,13 (trJ= 6,0 Hz, 2H) , 3,51 (s,3 H) , 2,66 (t, J = 6,0 Hz, 2H) , 1,43-1,39 (m, 2H) , 1,14-1,10 (m, 2H) .
A uma solução de ácido 1-[4-(2-carbóxi-etóxi)-fenil]-ciclopropanocarboxílico metil éster (5,0 g, 20 mmol) em CH2C12 (50 mL) foram adicionados cloreto de oxalilo (4,8 g, 38 mmol) e duas gotas de DMF a 0°C. A mistura foi agitada a 0-5 °C durante lhe depois evaporada sob vácuo. À mistura resultante foi adicionado CH2C12 (50 mL) a 0 °C e a agitação foi mantida a 0-5 °C durante 1 h. A reacção foi lentamente neutralizada com água e foi extraída com EtOAc (50 mL x 3). Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 20:1-2:1) para originar ácido 1-(4-oxocroman-6-il)ciclopropanocarboxílico (830 mg, 19%) e metil 1-(4-oxocroman-6-il)ciclopropanocarboxilato (1,8 g, 38%). Ácido 1-(4-oxocroman-6-il)ciclopropano-carboxílico: NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,33 (br s, 1H), 7,62 (d, J = 2,0
Hz, 1H) , 7,50 (dd, J = 2,4,8,4 Hz, 1H) , 6, 9S (d, J = 8,4
Hz, 1H) , 4,50 (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 2,7S (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 1,44-1,38 (m, 2H) , 1,10-1,07 (m, 2H) . MS (ESI) m/z (M+H+) 231,4. 1-(4-Oxocroman-6-il)ciclopropanocarboxilato: XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,83 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 7,48 (dd, J = 2,4,8,4 Hz, 1H) , 6,93 (d,J= 8,4Ήζ, 1H) , 4,55-4,52 (m, 2H) , 3,62 (s, 3H) , 2,80 (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 1,62-1,56 (m, 2H), 1, 18-1, IS (m, 2H) .
A uma solução de Metil 1-(4-Oxocroman-6- il) ciclopropanocarboxilato (1,0 g, 4,1 mmol) em MeOH (20 mL) e água (20 mL) foi adicionado LÍ0H.H20 (0,70 g, 16 mmol) em porções à temperatura ambiente. A mistura foi agitada overnight a temperatura ambiente antes de MeOH ser removido por evaporação sob vácuo. Água e Et20 foram adicionados ao resíduo e a camada aquosa foi separada, acidificada com HC1 e extraída com EtOAc (50 mL x 3) . Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar ácido 1- (4-hidróxi-4-metóxicroman-6-il)ciclopropanocarboxílico (480 mg, 44%). XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 12,16 (s, 1H) , 7,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,47 (dd, J = 2,0, 8,4 Hz, 1H) , 6,93 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,83-3,80 (m, 2H), 3,39 (s, 3H), 3,28-3,25 (m, 2H), 1,71-1,68 (m, 2H), 1,25-1,22 (m, 2H). MS (ESI) m/z (M+H+) 263, 1.
A ácido trifluoroacético (20 mL) foi adicionado NaBH4 (0,70 g, 130 mmol) em porções a 0 °C sob atmosfera de N2. Após agitação durante 5 min, uma solução de ácido 1- ( 4-oxo-croman-6-il)ciclopropanocarboxílico metil éster (1,6 g, 6,5 mmol) foi adicionado a 15 °C. A mistura de reacção foi agitada durante 1 h à temperatura ambiente antes de ser lentamente neutralizada com água. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (50 mL x 3) . Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar ácido l-croman-6-il- ciclopropanocarboxílico metil éster.(1,4 g, 92%), que foi usado directamente no passo seguinte. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7, 07-7, 00 (m, 2H) , 6,73 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 4,17 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 3,62 (s, 3H), 2,79-2,75 (m, 2H), 2,05- 1,96 (m, 2H) , 1,57-1,54 (m, 2H) , 1,16-1,13 (m, 2H) .
A uma solução de ácido l-croman-6-il- ciclopropanocarboxílico metil éster (1,4 g, 60 mmol) em MeOH (20 mL) e água (20 mL) foi adicionado LÍOH.H2O (1,0 g, 240 mmol ) em porções à temperatura ambiente. A mistura foi agitada overnight à temperatura ambiente antes do solvente MeOH ser removido por evaporação sob vácuo. Água e Et20 foram adicionados e a camada aquosa foi separada, acidificada com HC1 e extraída com EtOAc (50 mL x 3) . Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar 1-(4-hidróxi-4-metóxicroman-6-il)ciclopropanocarboxílico (1,0 g, 76%). IH NMR (400 MHz, DMSO) 012,10 (br s, 1H), 6,95 (d, J = 2,4 Hz, 2H) , 6,61-6,59 (m, 1H) , 4, 09-4, 06 (m, 2H) , 2,70-2, 67 (m, 2H) , 1, 88-1, 86 (m, 2H) , 1,37-1,35 (m, 2H), 1,04-1,01 (m, 2H). MS (ES!) m/z (M+H+) 217,4.
A uma suspensão agitada de AICI3 (58 g, 440 mmol) em CS2 (500 mL) foi adicionado cloreto de acetilo (7,4 g, 95 mmol) à temperatura ambiente. Após agitação durante 5 min, metil 1-(4-metóxifenil)ciclopropanocarboxilato (15 g, 73 mmol) foi adicionado. A mistura de reacção foi aquecida sob refluxo durante 2 h antes de gelo/água ser adicionado cuidadosamente à mistura à temperatura ambiente. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (150 mL x 3). Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob pressão reduzida para originar ácido 1-(3-acetil-4-hidróxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (15 g, 81 %) , que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. ΧΗ NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 12,28 (s, 1H) , 7,67 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,47 (dd, J = 2,0,8,4 Hz, 1H) , 6,94 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 3,64 (s, 3H) , 2,64 (s, 3H) , 1, 65-1, 62 (m, 2H) , l,18-l,16(m, 2H) .
A uma solução agitada de ácido 1-(3-acetil-4-hidróxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (14,6 g, 58,8 mmol) em EtOH (500 mL) foram adicionados cloreto de hidroxilamina (9,00 g, 129 mmol) e acetato de sódio (11,6 g, 141 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi aquecida sob refluxo overnight. Após remoção de EtOH sob vácuo, água (200 mL) e EtOAc (200 mL) foram adicionados. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar ácido 1-[4-hidróxi-3-(1- hidróxi-imino-etil)-fenil]-ciclopropanocarboxílico metil éster (14,5 g, 98%), que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 11,09 (s, 1H), 7,39 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,14 (s, 1H) , 6, 91 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 3,63 (s, 3H) , 2,36 (s, 3H) , 1, 62-1,59 (m, 2H) , 1,18-1,15 (m, 2H) .
A solução de ácido 1-[4-hidróxi-3-(1-hidróxi-imino-etil)-fenil]ciclopropanocarboxílico metil éster (10,0 g, 40,1 mmol) em AC2O (250 mL) foi aquecida a 45 °C durante 4 h. O AC2O foi removido por evaporação sob vácuo antes de água (100 mL) e EtOAc (100 mL) serem adicionados. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (100 mL x 2) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar (E)-metil 1-(3-(1-(acetóxi-imino)etil)-4- hidróxifenil)ciclopropanocarboxilato (10,5 g, 99%), que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional.
Uma solução de (E)-metil 1-(3-(1-(acetóxi-imino)etil)-4-hidróxifenil)ciclopropanocarboxilato (10,5 g, 39,6 mmol) e piridina (31,3 g, 396 mmol) em DMF (150 mL) foi aquecida a 125°C durante 10 h. A mistura de reacção arrefecida foi vertida sob água (250 mL) e foi extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 50:1) para originar Metil 1-(3-metilbenzo[d]isoxazol-5-il)ciclopropanocarboxilato (7,5 g, 82%). 1H NMR (CDCI3 300 MHz) δ 7,58-7,54 (m, 2H) , 7,48 (dd, J = 1,5, 8,1 Hz, 1H) , 3,63 (s, 3H) , 2,58 (s, 3H) , 1,71-1,68 (m, 2H) , 1,27-1,23 (m, 2 H) .
A uma solução de Metil 1-(3-metilbenzo[d]isoxazol-5-il) ciclopropanocarboxilato (1,5 g, 6,5 mmol) em MeOH (20 mL) e água (2 mL) foi adicionado LÍOH.H2O (0,80 g, 19 mmol) em porções à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente overnight antes de MeOH ser removido por evaporaçãocsob vácuo. Água e Et20 foram adicionados e a camada aquosa foi separada, acidificada com HC1 e extraída com EtOAc (50 mL x 3). Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar ácido 1- (3-metilbenzo[d]isoxazol-5-il)ciclopropanocarboxílico (455 mg, 32%). ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,40 (br s, 1H) , 7,76 (s, 1H) , 7, 60-7,57 (m, 2H) , 2,63 (s, 3H) , 1,52-1,48 (m, 2H) , 1,23-1,19 (m, 2H) . MS (ESI) m/z (M+H+) 218,1.
A uma solução de ácido 1-(3,4- dihidróxifenil)ciclopropanocarboxilico (4,5 g) em MeOH (30 mL) foi adicionado TsOH (0,25 g, 1,3 mmol). A agitação foi mantida a 50 °C overnight antes da mistura ser arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatograf ia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 3:1) para originar ácido 1-(3,4-dihidróxi-fenil)-ciclopropanocarboxilico metil éster (2,1 g) . 1H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 8,81 (brs, 2H) , 6,66 (d,J= 2,1 Hz, 1H) , 6,61 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 6,53 (dd, J = 2,1,8,1 Hz, 1H) , 3,51 (s, 3H), 1,38-1,35 (m, 2H), 1,07-1,03 (m, 2H).
A uma solução de ácido 1-(3,4-dihidróxi-fenil)-ciclopropanocarboxílico metil éster (1,0 g, 4,8 mmol) em tolueno (30 mL) foi adicionado TsOH (0,10 g, 0,50 mmol) e ciclobutanona (0,70 g, 10 mmol). A mistura de reacção foi aquecida sob refluxo durante 2 h antes de ser concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 15:1) para originar metil 1-(espiro[benzo[d] [1,3]dioxolo-2,1 'ciclobutano]-5-il)ciclopropanocarboxilato (0,6 g, 50%). ΧΗ NMR (CDC13, 300 MHz) δ 6, 78-6, 65 (m, 3H) , 3,62 (s, 3H) , 2, 64-2,58 (m, 4H) , 1, 89-1,78 (m, 2H) , 1,56-1,54 (m, 2H), 1,53-1,12 (m, 2H).
A uma mistura de metil 1-(espiro[benzo[d][1,3]dioxolo-2,1'-ciclobutano]-5-il)ciclopropanocarboxilato (0,60 g, 2,3 mmol) em THF/H2O (4:1, 10 mL) foi adicionado LiOH (0,30 g,
6,9 mmol) . A mistura foi agitada a 60°C durante 24 h. HC1 (0,5 N) foi adicionado lentamente à mistura a 0 °C até pH 2-3. A mistura foi extraída com EtOAc (10 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com MgSCb anidro, e lavadas com éter de petróleo para originar ácido 1-(espiro[benzo[d] [1,3]-dioxolo-2,1'-ciclobutano]-5-il)ciclopropanocarboxílico (330 mg, 59%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 6, 78-6, 65 (m, 3H) , 2, 65-2,58 (m, 4H) , 1, 86-1,78 (m, 2H) , 1, 63-1, 60 (m, 2H) , 1,26-1,19 (m, 2H) .
A uma suspensão de CS2CO3 (270 g, 1,49 mol) em DMF (1000 mL) foram adicionados ácido 3,4-dihidróxibenzóico etil éster (54,6 g, 0,3 mol) e 1,2-dibromoetano (54,3 g, 0,29 mol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada a 80°C overnight e depois vertida sob gelo/água. A mistura foi extraída com EtOAc (200 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (200 mL x 3) e salmoura (100 mL) , secadas com Na2S04 e concentradas até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 50: 1) para originar ácido 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxino-6-carboxílico etil éster (18 g, 29%) . 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,53 (dd, J = 1,8, 7,2 Hz, 2H) , 6, 84-6, 87 (m, 1H) , 4,22- 4.34 (m, 6H), 1,35 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
A uma suspensão de L1AIH4 (2,8 g, 74 mmol) em THF (20 mL) foi adicionado gota-a-gota uma solução de ácido 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxino-6-carboxílico etil éster (15 g, 72 mmol) em THF (10 mL) a 0 °C sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante lh e depois neutralizada cuidadosamente com adição de água (2,8 mL) e NaOH (10%, 28 mL) com arrefecimento. O sólido precipitado foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado até à secura para obter (2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxin-6-il)-metanol (10,6 g) . ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 6, 73-6, 78 (m, 3H) , 5,02 (t, J = 5,7 Hz, 1H) , 4.34 (d, J = 6,0 Hz, 2H) , 4,17-4,20 (m, 4H) .
Uma mistura de (2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxin-6-il) metanol (10,6 g) em SOCI2 (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min e depois vertida sob gelo/água. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCCU (solução saturada), água e salmoura, secadas com Na2S04 e concentradas até à secura para originar 6-clorometil-2,3- dihidrobenzo [ 1,4 ] dioxino (12 g, 88% no final dos dois passos), que foi usado directamente no passo seguinte.
Uma mistura de 6-clorometil-2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxino (12,5 g, 67,7 mmol) e NaCN (4,30 g, 87,8 mmol) em DMSO (50 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi vertida sob água (150 mL) e depois extraída com diclorometano (50 mL x 4) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL x 2) e salmoura (50 mL) , secadas com Na2S04 e concentradas até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 50:1) para originar 2-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)acetonitrilo na forma de um óleo de cor amarela (10,2 g, 86%) . 1H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 6, 78-6, 86 (m, 3H) , 4,2S (s, 4H) , 3,63 (s, 2H) . A seguinte Tabela 3 contém uma lista de elementos de base ácidos carboxílicos que se encontram disponíveis comercialmente, ou preparados por um de três métodos acima descritos:
Tabela 2: Elementos de Base Ácido Carboxílicos.
Procedimentos Específicos: Sintese de elementos de base aminolndolo
3-Nitro-fenilamina (27,6 g, 0,2 mol) foi dissolvidq numa mistura de H2O (40 mL) e 37% HC1 (40 mL) . Uma solução de NaN02 (13,8 g, 0,2 mol) em H20 (60 mL) foi adicionada à mistura a 0 °C, e depois uma solução de SnCl2.H20 (135,5 g, 0,6 mol) em HC1 37% (100 mL) foi adicionada a essa temperatura. Após agitação a 0 °C durante 0,5 h, o material insolúvel foi isolado por filtração e depois lavado com água para originar o sal hidrocloreto de (3-nitrofenil)hidrazina (27,6 g, 73%).
Uma solução de hidróxido de sódio (10%, 15 mL) foi adicionada lentamente a uma suspensão agitada de hidrocloreto de (3-nitrofenil)hidrazina (1,89 g, 10 mmol) em etanol (20 mL) até pH 6. em ácido acético (5 mL) foi adicionado à mistura seguido por propionaldeído (0,7 g, 12 mmol). Após agitação durante 3 h à temperatura ambiente, a mistura foi vertida sob gelo-água e o precipitado resultante foi isolado por filtração, lavado com água e secado com ar para obter (E)-1-(3-nitrofenil)-2-propilidenohidrazina, que foi usado directamente no passo seguinte.
Uma mistura de (E)-1-(3-nitrofenil)-2-propilidenohidrazina dissolvido em H3PO4 85 % (20 mL) e tolueno (20 mL) foi aquecida a 90-100 °C durante 2 h. Após arrefecimento, o tolueno foi removido sob pressão reduzida. O óleo resultante foi alcalinizado a pH 8 com NaOH 10 %. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camdas orgânicas combinadas foram secadas, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para originar uma mistura de 3-metil-4-nitro-lH-indolo e 3-metil-6-nitro-lH-indolo [1,5 g no tal, 86 %, no final dos dois passos para hidrocloreto de (3-nitrofenil)hidrazina] que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional.
A mistura bruta dos passos anteriores (3 g, 17 mmol) e Pd-C 10% (0,5 g) em etanol (30 mL) foi agitada overnight sob H2 (1 atm) à temperatura ambiente. Pd-C foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo sólido foi purificado por cromatografia em coluna para originar 3-metil-lH-indol-6-amina (0,6 g, 24%). XH NMR (CDC13) δ 7,59 (br s. 1H) , 7,34 (d, J = 8,0
Hz, 1H) , 6,77 (s, 1H) , 6,64 (s, 1H) , 6,57 (m, 1H) , 3,57 (brs, 2H), 2,28 (s, 3H); MS (BSI) m/e (M+H,) 147,2.
A uma mistura de 5-nitro-lH-indolo (6,0 g, 37 mmol) e AICI3) (24 g, 0,18 mol) em CH2CI2 (100 mL) a 0 °C foi adicionado 2-bromo-2-metil-propano (8,1 g, 37 mmol) gota-a-gota. Após ter sido agitada a 15°C overnight, a mistura foi vertida sob gelo (100 mL) . Os sais precipitados foram removidos por filtração e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (30 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas com Na2S04 e concentradas sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 20:1) para originar 3-tert-butil-5-nitro-lH-indolo (2,5 g, 31 %) . ΧΗ NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,49 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 8,31 (brs, 1H) , 8,05 (dd, J = 2,0,8,8 Hz, 1H) , 7,33 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 6,42 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 1,42 (s, 9 H) .
A uma solução de 3-tert-butil-5-nitro-lH-indolo (2,5 g, 12 mmol) em MeOH (30 mL) foi adicionado Raney-Nickel (0,2 g) sob atmosfera protegida de N2. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) a 15°C durante lh. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado até à secura sob vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para originar 3-tert-butil-lH-indol-5-amina (0,43 g, 19%). XH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7,72 (br, 5, 1H) , 7,11 (d,J=8,4Hz, 1H) , 6,86 (d,J=2,0Hz, 1H) , 6,59 (dd,J= 2,0, 8,4 Hz, 1H) , 6,09 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 1,37 (s, 9 H); MS (ESI) m/e (M+H+) 189,1.
A uma mistura de 3-fluoro-4-nitroanilina (6,5 g, 42,2 mmol) em AcOH (80 mL) e clorofórmio (25 mL) foi adicionado gota-a-gota Br2 (2,15 mL, 42,2 mmol) a 0°C. Após adição, a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e depois vertida sob gelo/água. A mistura foi alcalinizada NaOH (10%) aquoso a pH - 8,0-9,0 sob arrefecimento e depois extraída com EtOAc (50 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (80 mL x 2) e salmoura (100 mL) , secadas com Na2S04 e concentradas sob pressão reduzida para originar 2-bromo-5-fluoro-4-nitroanilina (9 g, 90%) . 1H-NMR (400 MHz, DMSO-de) δ 8,26 (d, J = 8,0, Hz, 1H) , 7,07 (brs, 2H) , 6,62 (d, J = 9,6 Hz, 1H) .
Uma mistura de 2-bromo-5-fluoro-4-nitroanilina (9,0 g, 38,4 mmol), 3,3-dimetilbut-l-ina (9,95 g, 121 mmol), Cul (0.5 g, 2,6 mmol), Pd(PPh3)2CÍ2 (3,4 g, 4,86 mmol) e EtsN (14 mL, 6,9 mmol) em tolueno (100 mL) e água (50 mL ) foi aquecida a 70°C durante 4 h. A camada aquosa foi separada e a camada orgânica foi lavada com água (80 mL x 2) e salmoura (100 mL) , secadas com Na2S04 e concentradas sob pressão reduzida até à secura. O resíduo foi recristalizado com éter para originar 2-(3,3-dimetilbut-l-inil)-5-fluoro-4-nitroanilina (4,2 g, 46%). 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,84 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,84 (brs, 2H) , 6,54 (d, J = 14,4 Hz, 1H) , 1,29 (s, 9H) .
A uma solução de 2-(3,3-dimetilbut-l-inil)-5-fluoro-4-nitroanilina (4,2 g, 17,8 mmol) em diclorometano (50 mL) e EtsN (10,3 mL, 71,2 mmol) foi adicionado cloreto de butiril (1,9 g, 17,8 mmol) a 0°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante lhe depois vertida sob água. A fase aquosa foi separada e a camada orgânica foi lavada com água (50 mL x 2) e salmoura (100 mL), secada com Na2S04 e concentrada sob pressão reduzida até à secura. O resíduo foi lavado com éter para originar N- (2-(3,3-dimetilbut-l-inil) -5-fluoro-4-nitrofenil)butiramida (3.5 g, 67%), que fou usada no passo seguinte sem purificação adicional.
Uma solução de N-(2-(3,3-dimetilbut-l-inil)-5-fluoro-4-nitrofenil)butiramida (3,0 g, 9,8 mmol) e TBAF (4.5 g, 17,2 mmol) em DMF (25 mL) foi aquecida a 100 °C overnight. A mistura foi vertida sob água e depois extraída com EtOAc (80 mL x 3). Os extractos combinados foram lavados com água (50 mL) e salmoura (50 mL) , secados com Na2S04 e concentrados sob pressão reduzida até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 20:1) para originar o composto 2-tert-butil-6-fluoro-5-nitro-lH-indolo (1,5 g, 65%) . 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,30 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 7,12 (d, J = 11,6 Hz, 1H) , 6,35 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 1,40 (s, 9H) .
Uma suspensão de 2-tert-butil-6-fluoro-5-nitro-lH-indolo (1,5 g, 6,36 mmol) e Ni (0,5 g) em MeOH (20 mL) foi agitada sob atmosfera de H2 (1 atm) à temperatura ambiente durante 3 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida até à secura. O resíduo foi recristalizado em éter para originar 2-tert-butil-6-fluoro-lH-indol-5-amina (520 mg, 38%) . 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,46 (hrs, 1H) , 6,90 (d, J =8,7 Hz, 1H) , 6,75 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,37 (brs, 2H) , 1,29 (s, 9H) ; MS (ESI) m/e 206, 6.
Uma solução de N-(2-(3,3-dimetilbut-l-inil)-5-fluoro-4-nitrofenil)butiramida (500 mg, 1,63 mmol) e t-BuOK (0,37 g, 3,26 mmol) em DMF (10 mL) foi aguecida a 70 °C durante 2 h. A mistura foi vertida sob água e depois extraída com EtOAc (50 mL x 3). Os extractos combinados foram lavados com água (50 mL) e salmoura (50 mL) , secados com Na2S04 e concentrados sob pressão reduzida para originar 6-tert-butóxi-2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo (100 mg, 21 %). 1H- NMR (300 MHz, DMSO~d6) 811,35 (brs, 1H) , 7,99 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H), 6,25 (s, 1H), 1,34 (s, 9H), 1,30 (s, 9H).
Uma suspensão de 6-tert-butóxi-2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo (100 mg, 0,36 mmol) e Raney-Nickel (0,5 g) em MeOH (15 mL) foi agitada sob atmosfera de H2 (1 atm) a à temperatura ambiente durante 2,5 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida até à secura. O resíduo foi recristalizado em éter para originar 6-tert-butóxi-2-tert-butil-lH-indol-5-amina (30 mg, 32%). 1H-NMR (300 MHz, MeOD) 6,98 (s, 1H), 6,90 (s, 1H) , 5,94 (d, J = 0,6 Hz, 1H) , 1,42 (s, 9H) , 1,36 (s, 9H); MS (ESI) m/e 205,0.
N-tert-Butil-4-nitroanilina
Uma solução de 1-fluoro-4-nitro-benzeno (1 g, 7,1 mmol) e tert-butilamina (1,5 g, 21 mmol) em DMSO (5 mL) foi agitada a 75 °C overnight. A mistura foi vertida sob água (10 mL) e extraída com EtOAc (7 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas com Na2SC>4 e concentradas sob vácuo até à secura. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 30:1) para originar N-tert-butil-4-nitroanilina (1 g,73%). 1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,03-8, 00 (m, 2H) , 6,61-6,57 (m, 2H) , 4,67 (brs, 1H) , 1,42 (s, 9H) .
A uma solução de N-tert-butil-4-nitroanilina (1 g, 5,1 mmol) em AcOH (5 mL) foi adicionado Br2 (0,86 g, 54 mmol) gota-a-gota a 15 °C. Após adição, a mistura foi agitada a 30 °C durante 30 min e depois filtrada. O bolo filtrado foi alcalinizado a pH 8-9 com NaHCCb aquoso. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (10 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas com Na2S04 e concentradas sob vácuo para originar (2-bromo-4-nitro-fenil)-tert-butil-amina (0,6 g, 43%). 1H-NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,37 (dd, J = 2,4 Hz, 1H) , 8,07 (dd, J = 2,4, 9,2 Hz, 1H) , 6,86 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 5,19 (brs, 1H) , 1,48 (s, 9H) .
A uma solução de (2-bromo-4-nitro-fenil)-tert-butil-amina (0,6 g, 2,2 mmol) em EtsN (10 mL) foi adicionado Pd(PPh3)2CÍ2 (70 mg, 0,1 mmol), Cul (20,9 mg, 0,1 mmol) e etinil-trimetil-silano (0,32 g, 3,3 mmol) sucessivamente sob atmosfera protegida de N2. A mistura de reacção foi aquecida a 70°C overnight. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi lavado com EtOAc (10 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas com Na2S04 e concentradas sob vácuo até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 20:1) para gerar tert-butil-(4-nitro-2- trimetilsilaniletinil-fenil)-amina (100 mg, 16%). 1H-NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,20 (d, J = 2,4, Hz, 1H) , 8,04 (dd, J = 2,4,9,2 Hz, 1H) , 6,79 (d, J = 9,6 Hz, 1H) , 5,62 (brs, 1H) , 1,41 (s, 9H) , 0,28 (s, 9H) .
A uma solução de tert-butil-(4-nitro-2- trimetilsilaniletinil-fenil)-amina (10 mg, 0,035 mmol) em DMF (2 mL) , foi adicionado Cul (13 mg, 0,07 mmol) sob atmosfera protegida de N2. A mistura de reacção foi agitada a 100°C overnight. Nesta altura, EtOAc (4 mL) foi adicionado à mistura. A mistura foi filtrada e o filtrado foi lavado com água, salmoura, seco com Na2S04 e concentrado sob vácuo para originar l-tert-butil-5-nitro-lH-indolo (7 mg, 93%). 1H-NMR (CDC13, 300 MHz) δ 8,57 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 8,06 (dd, J = 2,4,9,3 Hz, 1H) , 7,65 (d, J = 9,3 Hz, 1H) , 7,43 (d, J = 3,3 Hz, 1H) , 6,63 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 1,76 (s, 9H).
A uma solução de l-tert-butil-5-nitro-lH-indolo (6,5 g, 0,030 mol) em MeOH (100 mL) foi adicionado Raney-Nickel (0,65 g, 10%) sob atmosfera protegida de N2. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) a 30°C durante 1 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob vácuo até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (PE/EtOAc 1:2) para originar l-tert-butil-lH-indol-5-amina (2,5 g, 45%). 1H-NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7,44 (d, J = 8,8
Hz, 1H) , 7,19 (dd, J = 3,2 Hz, 1H) , 6,96 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 6,66 (d, J = 2,0,8,8 Hz, 1H) , 6,26 (d, J = 3,2 Hz, 1H) , 1,67 (s, 9H) . MS (ESI) m/e (M+H+) 189,2.
(2-Bromo-4-nitro-fenil)-metil-amina A uma solução de metil-(4-nitro-fenil)-amina (15,2 g, 0,1 mol) em AcOH (150 mL) e CHCI3 (50 mL) foi adicionado Br2 (16,0 g, 0,1 mol) gota-a-gota a 5 °C. A mistura foi agitada a 10°C durante lh e depois alcalinizada com solução aquosa saturada de NaHCCd. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (100 mL x 3), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar (2-bromo-4-nitro-fenil)-metil-amina (2-bromo-4-nitro-fenil)-metil-amina (23,0 g, 99%), que foi usada no passo seguinte sem purificação adicional. ΧΗ NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,37 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 8,13 (dd, J = 2,4, 9,0 Hz, 1H) , 6,58 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 5,17 (brs, 1H) , 3, 01 (d, J = 5,4 Hz, 3H) .
A uma solução de (2-bromo-4-nitro-fenil)-metil-amina (22,5 g, 97,4 mmol) em tolueno (200 mL) e água (100 mL) foram adicionados sucessivamente Et2N (19,7 g, 195 mmol),
Pd(PPh3)2Cl2 (6,8 g, 9,7 mmol), Cul (0,7 g, 3,9 mmol) e 3,3-dimetil-but-l-ina (16,0 g, 195 mmol) sob atmosfera protegida de N2. A mistura foi aquecida a 70°C durante 3 horas e depois arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (100 mL x 3). Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar [2-(3 ,3- dimetil-but-l-inil)-4-nitro-fenil]-metil-amina (20,1 g, 94%) , que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. XH NMR (400 MHz, CDC13) 08,15 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 8,08 (dd, J = 2,8,9,2 Hz, 1H) , 6,50 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,30 (brs, 1H), 3,00 (s, 3H), 1,35 (s, 9H).
Uma solução de [2-(3,3-dimetil-but-l-inil)-4-nitro-fenil]-metil-amina (5,0 g, 22,9 mmol) e TBAF (23,9 g, 91,6 mmol) em THF (50 mL) foi aquecida sob refluxo overnight. 0
solvente foi removido por evaporação sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em salmoura (100 mL) e EtOAc (100 mL) . A fase orgânica foi separada, secada com Na2S04 e evaporada
sob vácuo para originar 2-tert-butil-l-metil-5-nitro-lH-indolo (5,0 g, 99%), que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. ΧΗ NMR (CDCl3,400 MHz) δ 8,47 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 2,4, 9,2 Hz, 1H), 7,26-7,28 (m, 1H), 6,47 (s, 1H), 3,94 (s, 3H), 1,50 (s, 9H).
A uma solução de 2-tert-butil-l-metil-5-nitro-lH-indolo (3,00 g, 13,7 mmol) em MeOH (30 mL) foi adicionado Raney-Nickel (0,3 g) sob atmosfera de azoto. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente overnight. A mistura foi filtrada através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (PE/EtOAc 20:1) para originar 2-tert-butil-l-metil-lH-indol-5-amina (1,7 g, 66%). ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,89-6,9 (m, 1H) , 6,66 (dd, J = 2,4,8,7 Hz, 1H) , 6,14 (d, J = 0,6 Hz, 1H) , 3,83 (s, 3H) , 3,40 (brs, 2H) , 1,45 (s, 9H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 203,1.
A uma solução de 4-nitro-anilina (25 g, 0,18 mol) in HOAc (150 mL ) foi adicionado Br2 liquido (30 g, 0,19 mol) gota-a-gota à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 horas. O sólido foi recolhido por filtração e vertido sob água (100 mL), que foi alcalinizado com solução aquosa saturada de NaHCCq a pH 7 e extraído com EtOAc (300 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida para originar 2-bromo-4-nitroanilina (30 g, 80%), que foi usado directamente no passo seguinte.
A uma solução desoxigenada de 2-bromo-4-nitroanilina (2,17 g, 0,01 mmol), etinil-ciclopropano (1 g, é mmol) e Cul (10 mg, 0,05 mmol) em trietilamina (20 mL) foi adicionado Pd(PPh3)2CÍ2 (210 mg, 0,3 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi aquecida a 70°C e agitada durante 24 horas. O sólido foi removido por filtração e lavado com EtOAc (50 mL x 3). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para originar 2-(ciclopropiletinil)-4-nitroanilina (470 mg, 23%). XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,14 (d, J= 2,7 Hz, 1H) , 7,97 (dd, J = 2,7,9,0 Hz, 1H) , 6,63 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 4,81 (brs, 2H) , 1,55-1,46 (m, 1H) , 0, 98-0, 90 (m, 2H) , 0,89-0,84 (m, 2H) .
A uma solução de 2-(ciclopropiletinil)-4-nitroanilina (3,2 g, 15,8 mmol) e piridina (2,47 g, 31,7 mmol) em CH2C12 (60 mL) foi adicionado cloreto de butiril (2,54 g, 23,8 mmol) a 0 °C. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. A mistura resultante foi vertida sob gelo-água. A camada orgânica foi separada. A fase aquosa foi extraída com CH2C12 (30 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para originar N-(2-(ciclopropiletinil)fenil)-4-nitrobutiramida (3,3 g,7 6%) . XH NMR (400 MHz, CDClõ) δ 8,61 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 8,22 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,18 (brs, 1H), 8,13 (dd, J = 2,4,9,2 Hz, 1H) , 2,46 (t, J= 7,2 Hz, 2H) , 1,83-1, 76 (m, 2H), 1,59-1,53 (m, 1H), 1,06 (t, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,03-1,01 (m, 2H) , 0,91-0,87 (m, 2H) .
Uma mistura de N-(2-(ciclopropiletinil)fenil)-4- nitrobutiramida (3,3 g, 0,01 mol) e TBAF (9,5 g, 0,04 mol) em THF (100 mL) foi aguecida sob refluxo durante 24 horas. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente e vertida sob gelo/água. A mistura foi extraída com CH2CI2 (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para originar 2-ciclopropil-5-nitro-lH-indolo (1,3 g,64%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,44 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 8,40 (brs, 1H) , 8,03 (dd, J = 2,0,8,8 Hz, 1H) , 7,30 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 6,29 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 2,02-1,96 (m, 1H) 1,07-1,02 (m, 2H), 0,85-0,81(m, 2H).
A uma solução de 2-ciclopropil-5-nitro-lH-indolo (1,3 g, 6,4 mmol) em MeOH (30 mL) foi adicionado Raney-Nickel (0,3 g) sob atmosfera de azoto. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente overnight. O catalisador foi filtrado através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar o produto bruto, gue foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1) para originar 2- ciclopropil-lH-indol-5-amina (510 mg, 56%) . 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 6,89 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,50 (d, J = 1,6
Hz, 1H) , 6,33 (dd, J = 2,0,8,4 Hz, 1H) , 5,76 (s, 1H) , 4,33 (brs, 2H) , 1,91-1,87 (m, 1H) , 0, 90-0,85(m, 2H) , 0,70-0,66 (m, 2H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 173,2.
A uma mistura de 5-nitro-lH-indolo (6 g, 36,8 mmol) e AICI3 (24 g, 0,18 mol) em CH2CI2 (100 mL) foi adicionado 2-bromo-2-metil-propano (8,1 g, 36,8 mmol) gota-a-gota a 0 °C. Após ser agitada a 15°C overnight, a mistura de reacção foi vertida sob gelo (100 mL) . Os sais precipitados foram removidos por filtração e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (30 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas com Na2S04 e concentradas sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 20:1) para originar 3-tert-butil-5 -nitro-lH-indolo (2,5 g, 31 %) . ΧΗ NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,49 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 8,31 (brs, 1H) , 8,05 (dd, J = 2,0,8,8 Hz, 1H) , 7,33 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 6,42 (d, J= 1,6 Hz, 1H), 1,42 (s, 9H).
A uma solução de 3-tert-butil-5-nitro-lH-indolo (2,5 g, 11,6 mmol) em MeOH (30 mL) foi adicionado Raney-Nickel (0,2 g) sob atmosfera protegida de N2. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) a 15°C durante 1 hr. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob vácuo até à secura. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para originar 3-tert-butil-lH-indol-5-amina (0,43 g, 19%). XH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7,72(brs, 1H) , 7,11 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,86 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 6,59 (dd, J = 2,0,8,4 Hz, 1H),6,09 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 1,37 (s, 9H); MS (BSI) m/e (M+H+) 189,1.
A uma solução de 4-nitroanilina (50 g, 0,36 mol) em AcOH (500 mL) foi adicionado Br2 líquido (60 g, 0,38 mol) gota-a-gota a 5 °C. A mistura foi agitada durante 30 min a essa temperatura. O sólido insolúvel foi recolhido por filtração e vertida sob EtOAc (200 mL) . A mistura foi alcalinizada com solução aquosa saturada de NaHCCh a pH 7. A camada orgânica foi separada. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (300 mL x 3) . As camada orgânicas combinadas foram secadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar 2-bromo-4-nitroanilina (56 g, 72%), que foi usado directamente no passo seguinte.
A uma solução desoxigenada de 2-bromo-4-nitroanilina (2,17 g, 0,01 mmol), etinil-benzeno (1,53 g, 0,015 mol) e Cul (10 mg, 0,05 mmol) em trietilamina (20 mL) foi adicionado Pd(PPh3)2C12 (210 mg, 0,2 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi aquecida a 70 °C e agitada durante 24 horas. O sólido foi removido por filtração e lavado com EtOAc (50 mL x 3). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para originar 4-nitro-2-(feniletinil)anilina (340 mg, 14%) . 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,37-8,29 (m, 1H) , 8, 08-8, 00 (m, 1H), 7,56-7,51 (m, 2H), 7,41-7,37 (m, 3H), 6,72 (m, 1H), 4,95 (brs, 2H).
A uma solução de 4-nitro-2-(feniletinil)anilina (17 g, 0,07 mmol) e piridina (11,1 g, 0,14 mol) em CH2CI2 (100 mL) foi adicionado cloreto de butiril (11,5 g, 0,1 mol) a 0 °C. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. A mistura resultante foi vertida sob gelo-água. A camada orgânica foi separada. A fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (30 m L x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para originar N-(2-(feniletinil)fenil)-4-nitrobutiramida (12 g, 55%). 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,69 (d, J=9r2 Hz, 1H) , 8,39 (d, J=2r8 Hz, 1H) , 8,25-8,20 (m, 2H) , 7,58-7,55 (m, 2H) , 7,45-7,42 (m, 3H) , 2,49 (t, J=7,2 Hz, 2H) , 1,85-1,79 (m, 2H) , 1,06 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Uma mistura de N-(2-(feniletinil)fenil)-4-nitrobutiramida (5,0 g, 0,020 mol) e TBAF (12,7 g, 0,050 mol) em THF (30 mL) foi aquecida sob refluxo durante 24 h. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e vertida sob gelo/água. A mistura foi extraída com CH2C12 (50 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para originar 5-nitro-2-fenil-lH-indolo (3,3 g, 69%). XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,67 (s, 1H) , 8,06 (dd, J = 2,0,8,8 Hz, 1H) , 7,75 (d, J =7,6 Hz, 2H) , 7,54 (d, J=8,8 Hz, 1H) , 7,45 (t, J=7,6 Hz, 2H) , 7,36 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 6,95 (s, 1H) .
A uma solução de 5-nitro-2-fenil-lH-indolo (2,83 g, 0,01 mol) em MeOH (30 mL) foi adicionado Raney-Nickel (510 mg) sob atmosfera de azoto. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente overnight. O catalisador foi filtrado através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1) para originar 2-fenil-lH-indol-5-amina (1,6 g, 77%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,76 (d, J=7,6 Hz, 2H) , 7,39 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,24 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 6,60 (d, J=lr2 Hz, 1H) , 6,48 (dd, J = 2,0,8,4 Hz, 1H) , 4,48 (brs, 2H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 209, 0 .
A uma solução de 2-bromo-l-fluoro-3-nitrobenzeno (1,0 g, 5,0 mmol) em CH3OH (50 mL) foi adicionado NÍCI2 (2,2 g, 10 mmol) e NaBfU (0,50 g 14 mmol) a 0 °C. Após a adição, a mistura foi agitada durante 5 min. Água (20 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc (20 mL x 3). As camadas orgânicas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar 2-bromo-3-fluoroanilina (600 mg, 70%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7, 07-7,02 (m, 1H) , 6, 55-6, 49(m, 1H) , 4,22 (br s, 2H) .
A uma solução de 2-bromo-3-fluoroanilina (2,0 g, 11 mmol) em CH2CI2 (50 mL) foi adicionado cloreto de butiril (1,3 g, 13 mmol) e piridina (1,7 g, 21 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. Água (20 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com CH2CI2 (50 mL x 3) . As camadas orgânicas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar N-(2-bromo-3-f luorofenil) butiramida (2,0 g, 73%), que foi usado directamente no passo seguinte.
A uma solução de N-(2-bromo-3-fluorofenil)butiramida (2,0 g, 7,0 mmol) em Et3N (100 mL) foi adicionado 4,4-dimetilpent-2-ina (6,0 g, 60 mmol), Cul (70 mg, 3,8 mmol), e Pd(PPh3)2Cl2 (500 mg) sucessivamente à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. A mistura foi aquecida a 80°C overnight. A mistura arrefecida foi filtrada e o filtrado foi extraído com EtOAc (40 mL x 3) . As camadas orgânicas foram lavadas com NaCl saturado, secadas com Na2SC>4 anidro, e evaporadas sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (10% EtOAc em éter de petróleo) para originar N-(2-(3,3-dimetilbut-l-inil)-3-fluorofenil)butiramida (1,1 g,55%). 1H NMR (400 MHz, CDCL3) (5 8,20 (d, J= 7,6, 1H) , 7,95 (s, 1H) , 7,21 (m, 1H) , 6,77 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 2,39 (t, J = 7,6 Hz, 2H) , 1,82-1,75 (m, 2H), 1,40 (s, 9 H), 1,12 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
A uma solução de N-(2-(3,3-dimetilbut-l-inil)-3-tluorofenil)butiramida (6,0 g, 20 mmol) em DMF (100 mL) foi adicionado t-BuOK(5, 0 g, 50 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 90°C overnight antes de ser vertida sob água e extraída com EtOAc (loa mL x 3) . As camadas orgânicas foram lavadas com NaCl saturado e água, secadas com Na2S04 anidro, e evaporadas sob vácuo para originar 2-tert-butil-4-fluoro-lH-indolo (5,8 g,97%). ΧΗ NMR(400MHz, CDC13) (58,17 (brs, 1H) , 7,11 (d,J=7,2Hz, 1H) , 7, 05-6, 99 (m, 1H) , 6,76-6,71 (m, 1H) , 6,34 (m, 1H) , 1,41 (s, 9 H) .
A uma solução de 2-tert-butil-4-fluoro-lH-indolo (2,5 g, 10 mmol) em H2SO4 (30 mL) foi adicionado KNO3 (1,3 g, 10 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 0,5 ha -10°C. A mistura foi vertida sob água e extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camdas orgânicas foram lavadas com NaCl saturado e água, secadas com Na2S04 anidro, e evaporadas sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (10% EtOAc em éter de petróleo) para originar 2-tert-butil-4-fluoro-5-nitro-l H-indolo (900 mg, 73%). XH NMR (400 MHz, CDC13) (58,50 (br s, 1H) , 7,86 (dd, J = 7,6,8,8 Hz, 1H) , 7, 13 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 6,52 (dd, J = 0,4, 2,0 Hz, 1H), 1,40 (s, 9 H).
A uma solução de 2-tert-butil-4-fluoro-5-nitro-lH-indolo (2,1 g, 9,0 mmol) em metanol (50 mL) foi adicionado NÍCI2 (4,2 g, 18 mmol) e NaBH4 (1,0 g, 2 7 mmol) a 0 °C. Após a adição, a mistura foi agitada durante 5 min. Água (20 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc (30 mL x 3). As camadas orgânicas foram lavadas com NaCl saturado e águas, secadas com Na2S04 anidro, evaporadas sob vácuo para originar 2-tert-butil-A-íluoro-lH-indol-5-amina (900 mg, 50%). ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,80 (brs, 1H) , 6,91 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,64 (dd, J = 0,9,2,4 Hz, 1H) , 6,23 (s, 1H) , 1,38 (s, 9 H) .
6-Nitro-2,3,4,9-tetrahidro-lH-carbazolo (0,100 g, 0,462 mmol) foi dissolvido num frasco de cintilação de 40 mL contendo um agitador magnético e 2 mL de etanol. Cloreto de estanho (II) dihidratado (1,04 g, 4,62 mmol) foi adicionado à mistura de reacção e a suspensão resultante foi aquecida a 70°C durante 16 h. A mistura de reacção bruta foi então diluída com 15 mL de uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e extraída três vezes com um volume equivalente de acetato de etilo. Os extractos de acetato de etilo foram combinados, secados com sulfato de sódio, e evaporados até à secura para produzir 2,3,4,9-tetrahidro-ΙΗ-carbazol-6-amina (82 mg, 95%) que foi usado sem purificação adicional.
2-Bromo-6-fluorο-4-nitrο-fenilamina A uma solução de 2-fluoro-4-nitro-fenilamina (12 g, 77 mmol) em AcOH (50 mL) foi adicionado Br2 (3, 9 mL, 77 mmol) gota-a-gota a 0 °C. A mistura foi agitada a 20°C durante 3 h. A mistura de reacção foi alcalinizada com solução aquosa saturada de NaHCCb, e extraída com EtOAc (100 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo para originar 2-bromo-6-f luoro · : 4-nitro-fenilamina (18 g, 97%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,22 (m, 1H) , 7,90 (dd, J = 2,4, 10,8 Hz, 1H) , 4,88 (brs, 2H) .
A uma solução de 2-bromo-6-fluoro-4-nitro-fenilamina (11 g, 47 mmol) em Et3N desidratado (100 mL) foi adicionado Cul (445 mg, 5% mol) , Pd(PPh3)2Cl2 (550 mg, 5% mol) e 3,3-
dimetil-but-l-ina (9,6 g, 120 mmol) sob atmosfera protegida de N2. A mistura foi agitada a 80 °C durante 10 h. A mistura de reacção foi filtrada, vertida sob gelo (100 g) , e extraída com EtOAc (50 mL x 3) . Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 50:1) para originar 2-(3,3-dimetilbut-l-inil)-6-fluoro-4-nitro-fenilamina (4,0 g, 36%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,02 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 7,84 (dd, J = 2,4, 10,8 Hz, 1H) , 4,85 (brs, 2H) , 1,36 (s, 9 H) .
A uma solução de 2-(3,3-dimetil-but-l-inil)-6-fluoro-4-nitro-f enilamina (4,0 g, 17 mmol) e piridina (2,7 g, 34 mmol) em CH2CI2 anidro (30 mL) foram adicionados e cloreto de butiril (1,8 g, 17 mmol) gota-a-gota a 0 °C. Após agitação durante 5 h a 0 °C, a mistura de reacção foi vertida sob gelo (50 g) e extraída com CH2CI2 (30 mL x 3) . Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar N-[2-(3,3-dimetil-but-l-inil)-6-fluoro-4-nitro-fenil]-butiramida (3,2 g, 62%) , que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. XH NMR (300 MHz, DMSO) δ 8,10 (dd, J = 1,5, 2,7 Hz, 1H) , 7,95 (dd, J = 2,4,9,6 Hz, 1H) , 7,22 (brs, 1H) , 2,45 (t, J = 7,5 Hz, 2H) , 1,82 (m, 2H) , 1,36 (s, 9 H) , 1,06 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
A uma solução de N-[2-(3,3-dimetil-but-l-inil)-6-fluoro-4-nitro-fenil]butiramida (3,2 g, 10 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionado t-BuOK (2,3 g, 21 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 120°C durante 2h antes de ser arrefecida até à temperatura ambiente. Água (50 mL) foi adicionado à mistura de reacção e a mistura resultante foi extraída com CH2CI2 (30 mL x 3) . Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar 2-tert-butil-7-fluoro-5-nitro-lH-indolo (2,0 g, 81 %), que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. ΧΗ NMR (300 MHz; CDCI3) δ 9,95 (brs, 1H), 8,30 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 1,8, 11,1 Hz, 1H) , 6,43 (dd, J= 2,4,3,3 Hz, 1H) , 1,43 (s, 9 H) .
A uma solução de 2-tert-butil-7-fluoro- 5-nitro-lH-indolo (2,0 g, 8,5 mmol) em MeOH (20 mL) foi adicionado Ni (0,3 g) sob atmosfera de azoto. A mistura de reacção foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente overnight. O catalisador foi removido por filtração através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo 100:1) para originar 2-tert-butil-7-fluoro-lH-indol-5-amina (550 mg, 24%). ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,87 (brs, 1H) , 6,64 (d,J= 1,5 Hz, 1H) , 6,37 (dd, J= 1,8,12,3 Hz, 1H) , 6,11 (dd, J = 2,4,3,6 Hz, 1H) , 1,39 (s, 9 H) . MS CBSI) m/z CM+H+) 207 .
A uma solução agitada de 2-amino-3-bromo-5-nitrobenzonitrilo (2,4 g, 10 mmol) em Et3N seco (60 mL) foi adicionado Cul (380 mg, 5% mol) e Pd(PPh3)2Cl2 (470 mg, 5% mol) à temperatura ambiente. 3,3-dimetil-but-l-ina (2,1 g, 25 mmol) foi adicionada gota-a-gota à mistura à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi agitada a 80°C durante 10 h. A mistura de reacção foi filtrada e o filtrado foi vertido sob gelo (60 g), extraída com acetato de etilo. As fases foram separadas e a fase orgânica foi secada com Na2S04. O solvente foi removido sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna (2-10% EtOAc em éter de petróleo) para originar 2-amino-3-(3,3-dimetilbut-l-inil)-5- nitrobenzonitrilo (1,7 g, 71 %). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) 6 8,28 (d, J = 2,7 Hz, 1H) , 8,27 Cd, J = 2,7 Hz, 1H) , 5,56 (hr s, 2H) , 1,37 (s, 9 H) .
A uma solução de 2-amino-3-(3,3-dimetilbut-l-inil)- 5-nitrobenzonitrilo (1,7 g, 7,0 mmol) em THF (35 mL) foi adicionado TBAF (9,5 g, 28 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida sob refluxo overnight. A mistura de reacção foi arrefecida e o THF foi removido sob pressão reduzida. Água (50ml) foi adicionada ao resíduo e a mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram secadas com Na2S04 e o solvente foi evaporado sob vácuo para originar 0,87 g do produto bruto 2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo-7-carbonitrilo que foi usado directamente no passo seguinte sem purificação adicional.
A uma solução do produto bruto 2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo-7-carbonitrilo (0,87 g, 3,6 mmol) em MeOH (10 mL) foi adicionado NÍCI2.6H2O (1,8 g, 7,2 mmol) a -5°C. A mistura de reacção foi agitada durante 30 min, depois NaBH4 (0,48g, 14,32 mmol) foi adicionado à mistura de reacção a 0 °C. Após 5 min, a mistura de reacção foi neutralizada com água, filtrada e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 e concentradas sob vácuo para originar o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna (5-20% EtOAc em éter de petróleo) para originar 5-amino-2-tert-butil-lH-indol-7-carbonitrilo (470 mg, 32% no final dos dois passos) . ΧΗ NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,25 (s, 1H) , 7,06 (d,J = 2,4Hz, 1H) , 6,84 (d,J = 2,4 Hz, 1H) , 6,14 (d,J = 2,4. Hz, 1H) , 3,57 (brs, 2H) , 1,38 (s, 9 H) . MS (ESI) m/z: 214 (M+H+) .
Exemplo 40: Metil 5-amino-2-tert-butil-lH-indolo-7- carboxilato
2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo-7-carbonitrilo (4,6 g, 19 mmol) foi adicionado a uma solução de KOH em EtOH (10%, 100 mL) e a mistura foi aquecida sob refluxo overnight. A solução foi evaporada para remover o álcool, uma pequena quantidade de água foi adicionada, e depois a mistura foi acidificada com ácido clorídrico diluído. Após incubação num refrigerador, um sólido de cor amarela/laranja precipitou, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (15% EtOAc em éter de petróleo) para originar ácido 2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo-7-carboxílico (4,0 g, 77%). ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 10,79 (brs, 1H) , 8,66 (s, 1H) , 8,45 (s, 1H) , 6,57 (s, 1H) , 1,39 (s, 9 H) .
S0C12 (3, 6 g, 30 mol) foi adicionado gota-a-gota a uma solução de ácido 2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo-l-
carboxílico (4,0 g, 15 mol) e metanol (30 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada a 80°C durante 12 h. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5% EtOAc em éter de petróleo) para originar metil 2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo-7-carboxilato (2,95 g, 70%) . ΧΗ NMR (CDCI3, 300 MHz) 8 9, 99 (brs, 1H) , 8,70 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 8,65 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 6,50 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 4,04 (s, 3H) , 1,44 (s, 9H) .
Uma solução de 2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo-7-carboxilato (2,0 g, 7,2 mmol) e Raney-Nickel (200 mg) em CH3OH (50 mL) foi agitada durante 5 h à temperatura ambiente sob atmosfera de H2. O catalisador foi removido por filtração através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar metil 5-amino-2-tert-butil-lH-indolo-7-carboxilato (1,2 g,68%) ΧΗ NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 9,34 (brs, 1H) , 7,24 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 7,10 (s, 1H) , 6,12 (d,J= 1,6 Hz, 1H) , 3,88 (s, 3H) , 1,45 (s, 9H) .
A uma solução de metil 2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo-7-carboxilato (6,15 g,22,3 mmol) e diclorometano (30ml) foi adicionado DIBAL-H (1,0 M, 20 mL, 20 mmol) a 78 °C. A mistura foi agitada durante 1 h antes de água (10 mL) ser adicionada lentamente. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (120 mL x 3) . Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar (2-tert-butil-5-nitro-lH-indol-7-i)metanol (4,0 g, 73%), que foi usado no passo seguinte directamente.
Uma mistura de (2-tert-butil-5-nitro-lH-indol-7-il)metanol (4,0 g, 16 mmol) e Raney-Nickel (400 mg) em CH3OH (100 mL) foi agitada durante 5h à temperatura ambiente sob atmosfera de H2. O catalisador foi removido por filtração através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar (5-amino-2-tert-butil-lH-indol-7-il)metanol (3,4g, 80%). XH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 8,53 (br s, 1H) , 6,80 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 6,38 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 4,89 (s, 2H), 1,37 (s, 9H).
Exemplo 42: 2-(1-Metilciclopropil)-lH-indol-5-amina
A uma solução de ciclopropiletinil-trimetil-silano (3,0 g, 22 mmol) em éter (20 mL) foi adicionado gota-a-gota n-BuLi (8,6 mL, 21,7 mol, 2,5 M solução em hexano) a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h antes de sulfato de dimetil (6,85 g, 54,3 mmol) ser adicionado gota-a-gota a -10 °C. A solução resultante foi agitada a 10°C e então a 20 °C durante 30 min de cada vez. A reacção foi neutralizada através da adição de uma mistura de solução aquosa saturada de NH4C1 e amónia aquosa 25% (1:3, 100 mL). A mistura foi então agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A fase aquosa foi extraída com dietil éter (3 x 50 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas sucessivamente com 5% ácido clorídrico aquoso (100 mL) , 5% solução de NaHC03 aquoso (100 mL) , e água (100 mL) . As camadas orgânicas foram secadas com NaS04 anidro e concentradas à pressão ambiente. Após destilação fraccional sob pressão reduzida, trimetil-(1-metil-ciclopropiletinil)-silano (1,7 g, 52%) foi obtido na forma de um líquido incolor. ΧΗ NMR (400 MHz, CDCI3) δ 1,25 (s, 3Η) , 0, 92-0, 86 (m, 2Η) , 0,58-0,56 (m, 2Η), 0,15 (s, 9 Η) .
A uma solução de trimetil-(1-metil-ciclopropiletinil)-silano (20 g, 0,13 mol) em THF (250 mL) foi adicionado TBAF (69 g, 0,26 mol). A mistura foi agitada overnight a 20 °C. A mistura foi vertida sob água e a camada orgânica foi separada. A fase aquosa foi extraída com THF (50 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e destiladas sob pressão atmosférica para originar 1-etinil-l-metilciclopropano (7,0 g, contendo 1/2 THF, 34%). XH NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,82 (s, 1H) , 1,26 (s, 3H) , 0, 90-0, 88 (m, 2H) , 0,57-0,55 (m, 2H) .
A uma solução de 4-nitro-fenilamina (50 g, 0,36 mol) em AcOH (500 mL) foi adicionado Br2 (60 g, 0,38 mol) gota-a-gota a 5°C. A mistura foi agitada durante 30 min a essa temperatura. O sólido insolúvel foi recolhido por filtração e alcalinizado com solução aquosa saturada de NaHCCh a pH 7. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (300 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas e evaporadas sob pressão reduzida para obter o composto 2-bromo-4-nitroanilina (56 g, 72%), que foi usado directamente no passo seguinte.
A uma solução desoxigenada de 2-bromo-4-nitroanilina (430 mg, 2,0 mmol) e 1-etinil-l-metil-ciclopropano (630 mg; 8,0 mmol) em trietilamina (20 mL) foi adicionado Cul (7 6 mg, 0,40 mmol) e Pd (PPhs) 2) CI2 (140 mg, 0,20 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi aquecida a 70°C e agitada durante 24 h. O sólido foi removido por filtração e lavado com EtOAc (50 mL x 3). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para originar 2-(((1- metilciclopropil)etinil)-4-nitroanilina (340 mg, 79%). NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,15-8,14 (m, 1H) , 7, 98-7, 95 (m, 1H) , 6,63 (d,J= 6,9 Hz, 1H) , 4,80 (brs, 2H) , 1,38 (s, 3H), 1,04-1,01 (m, 2H), 0,76-0,73 (m, 2H).
A uma solução de 2-((1-metilciclopropil)etinil)-4-nitroanilina (220 mg, 1,0 mmol) e piridina (160 mg, 2,0 mol) em CH2CI2 (20 mL) foi adicionado cloreto de butiril (140 mg, 1,3 mmol) a 0 °C. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 3 h. A mistura foi vertida sob gelo-água. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (30 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida para originar N-[2-(l-metilciclopropil-etinil)-4-nitro-fenil]-butiramida (230 mg, 82%), que foi directamente usado no passo seguinte.
Uma mistura de N-[2-(1-metil-ciclopropiletinil)-4-nitro-fenil ] -butiramida (1,3 g, 4,6 mmol) e TBAF (2,4 g, 9,2 mmol) em THF (20 mL) foi aquecida sob refluxo durante 24 h. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e vertida sob gelo/água. A mistura foi extraída com CH2CI2 (30 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para originar 2-(1-metilciclopropil)-5-nitro-lH-indolo (0,70 g, 71 %) . XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,56 (brs, 1H) , 8,44 (d, J = 2,0 Hz, 1H), ~,01 (dd, J = 2,4,8,8 Hz, 1H) , 7,30 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 6,34 (d, J= 1,6 Hz, 1H) , 1,52 (s, 3H) , 1,03-0,97 (m, 2H) , 0, 89-0,83 (m, 2H) .
A uma solução de 2-(1-metilciclopropil)-5-nitro-lH-indolo (0,70 g, 3,2 mmol) em EtOH (20 mL) foi adicionado Raney-Nickel (100 mg) sob atmosfera de azoto. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente overnight. O catalisador foi removido por filtração através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1) para produzir 2-(1-metilciclopropil) -lH-indol-5-ilamina (170 mg, 28%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,65 (brs, 1H) , 7,08 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,82 (s, 1H) , 6,57 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,14 (s, 1H) , 3,45 (brs; 2H) , 1,47 (s, 3H) , 0,82-0,78 (m, 2H) , 0, 68-0, 63 (m, 2H) .
A uma suspensão de NaH (42 g, 1,1 mol, 60%) em THF (400 mL) foi adicionado gota-a-gota uma solução de metil 3-oxobutanoato (116 g, 1,00 mol) em THF (100 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 0,5 h a essa temperatura antes de Mel (146 g, 1,1 mol) ser adicionado gota-a-gota a 0 °C. A mistura resultante foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 1 h. NaH (42 g, 1,05 mol, 60%) foi adicionado em porções a 0 °C e a mistura resultante foi continuada a agitar durante 0,5 h a esta temperatura. Mel (146 g, 1,05 mol) foi adicionado gota-a-gota a 0 °C. A mistura de reacção foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada overnight. A mistura foi vertida sob gelo/água e a camada orgânica foi separada. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (500 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar metil 2,2-dimetil-3-oxobutanoato (85 g) , que foi usado directamente no passo seguinte.
A uma suspensão de PCI5 (270 g, 1,3 mol) em CH2CI2 (1000 mL) foi adicionado gota-a-gota metil 2,2-dimetil-3-oxobutanoato (85 g) a 0 °C, seguido pela adição de aproximadamente 30 gotas de DMF desidratado. A mistura foi aquecida sob refluxo overnight. A mistura de reacção foi arrefecida à temperatura ambiente e lentamente vertida sob gelo/água. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (500 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de NaHCCb e secadas com Na2S04 anidro. O solvente foi evaporado e o resíduo foi destilado sob pressão reduzida para originar metil 3-cloro-2,2-dimetilbut-3-enoato (37 g, 23%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 5,33 (s, 1H) , 3,73 (s, 3H) , 1,44 (s, 6H) .
Uma mistura de metil 3-cloro-2,2-dimetilbut-3-enoato (33 g, 0,2 mol) e NaOH (9,6 g, 0,24 mol) em água (200 mL) foi aquecida sob refluxo durante 5 h. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente e extraída com éter. A camada orgânica foi descartada. A camada aquosa foi acidificada com solução de HC1 20% arrefecida e extraída éter (200 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar ácido 3- cloro-2,2-dimetil-but-3-enóico (21 g, 70%), que foi usado directamente no passo seguinte. ΧΗ NMR (400 MHz, COCI3) δ 7,90 (brs, 1H) , 5,37 (dd, J = 2,4,6,8 Hz, 2H) , 1,47 (s, 6H) .
NH3 líquido foi condensado num frasco de fundo de 250 mL com 3 aberturas, a -78°C. Na (3,98 g, 0,173 mol) foi adicionado ao frasco em porções. A mistura foi agitada durante 2 h a -78 °C antes de DMSO anidro (20 mL) ser adicionado gota-a-gota a - 78°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente mais nenhum NH3 fosse libertado. Uma solução de ácido 3-cloro-2,2-dimetil-but-3-enóico (6,5 g, 43 mmol) em DMSO (10 mL) foi adicionada gota-a-gota a -40 °C. A mistura foi aquecida e agitada a 50°C durante 5 h, depois agitada à temperatura ambiente overnight. Uma solução turva, de cor verde azeitona foi vertida sob solução de HC1 20% arrefecida e depois extraída três vezes com éter. Os extractos de éter foram secados com Na2S04 anidro e concentrados para originar o produto bruto ácido 2.2- dimetil-but-3-inóico (2 g) , que foi usado directamente no passo seguinte. ΧΗ NMR (400 MHz, COCI3) δ 2,30 (s, 1H), 1,52 (s, 6H) .
A uma solução de diazometano (~10 g) em éter (400 mL) foi adicionado gota-a-gota ácido 2,2-dimetil-but-3-inóico (10,5 g, 93,7 mmol) a 0°C. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente e agitada overnight. A mistura foi destilada sob pressão atmosférica para originar o produto bruto metil 2.2- dimetilbut-3-inoato (14 g) , que foi usado directamente no passo seguinte. ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 3,76 (s, 3H), 2,28 (s, 1H), 1,50 (s, 6H).
A uma solução desoxigenada de composto 2-bromo-4-nitroanilina (9,43 g,43,7 mmol), metil 2,2-dimetilbut-3- inoato (5,00 g, 39,7 mmol), Cul (754 mg, 3,97 mmol) e trietilamina (8,03 g, 79,4 mmol) em tolueno/H20 (100/30 mL) foi adicionado Pd(PPh3)4 (6,17 g, 3,97 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi aquecida a 70°C e agitada durante 24 h. Após arrefecimento, o sólido foi removido por filtração e lavado com EtOAc (50 mL x 3) . A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi lavada com EtOAc (50 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) para obter metil 4-(2-amino-5-nitrofenil)-2,2-dimetilbut-3-inoato (900 mg, 9%). XH NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,17 (d, J = 2,8 Hz, 1H) , 8,01 (dd, J= 2,8, 9,2 Hz, 1H) , 6,65 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 5,10 (brs, 2H), 3,80 (s, 3H), 1,60 (s, 6H).
A uma solução de metil 4-(2-amino-5-nitrofenil)-2,2-dimetilbut-3-inoato (260 mg, 1,0 mmol) e piridina (160 mg, 2,0 mol) em CH2C12 (20 mL) foi adicionado cloreto de butiril (140 mg, 1,3 mmol) a 0°C. A mistura de reacção foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 3 h antes da mistura ser vertida sob gelo-água. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com CH2C12 (30 mL x 3) . As camdas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida para obter metil 4-(2-butiramido-5-nitrofenil)-2,2-dimetilbut-3-inoato (150 mg, 45%), que foi usado directamente no passo seguinte. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,79 (brs, 1H) , 8,71 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 8,24 (d, J = 2,8
Hz, 1H) , 8,17 (dd, J = 2,8,9,2 Hz, 1H) , 3,82 (s, 3H) , 2,55 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,85-1,75 (m, 2H) , 1,63 (s, 6H), 1,06 (t, J = 6,8 Hz, 3H) .
A uma solução desoxigenada de metil 4-(2-butiramido-5-nitrofenil)-2,2-dimetilbut-3-inoato (1,8 g, 5,4 mmol) em acetonitrilo (30 mL) foi adicionado Pd (CH3CN) 2CI2 (0,42 g, 1,6= mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi aquecida sob refluxo durante 24 h. Após arrefecimento da mistura até à temperatura ambiente, o sólido foi removido por filtração e lavado com EtOAc (50 mL x 3). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para originar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 30/1) para originar metil 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanoato (320 mg, 23%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 9,05 (brs, 1H) , 8,52 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 8,09 (dd, J = 2,0,8,8 Hz, 1H) , 7,37 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 6,54 (d,J= 1,6 Hz, 1H) , 3,78 (d,J= 9,6 Hz, 3H) , 1,70 (s, 6H) .
Metil 2-(5-amino-lH-indol-2-il)-2-metilpropanoato
Uma suspensão de metil 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanoato (60 mg, 0,23 mmol) e Raney-Nickel (10 mg) em MeOH (5 mL) foi hidrogenada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente overnight. O catalisador foi removido por filtração através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1) para originar metil 2-(5-amino-lH-indol-2-il)-2-metilpropanoato (20 mg, 38%). XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,37 (br s, 1H) , 7,13 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,87 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 6,63 (dd, J = 2,0,8,4 Hz, 1H) , 6,20 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 3,72 (d, J = 7,6
Hz, 3H) , 3,43 (br s, 1H) , 1,65 (s, 6H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 233,2.
Uma mistura de metil 4-(2-butiramido-5-nitrofenil)-2,2-dimetilbut-3-inoato (0,50 g, 1,5 mmol) e TBAF (790 mg, 3,0 mmol) em DMF (20 mL) foi aquecida a 70°C durante 24 h. A mistura de reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e vertida sob gelo/água. A mistura foi extraída com éter (30 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob pressão reduzida para originar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 20/1) para originar 2-isopropil-5-nitro-lH-indolo (100 mg, 33%). 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,68 (s, 1H) , 8,25 (hr s, 1H) , 8,21 (dd, J = 2,4, 10,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,41 (s, 1H) , 3,07- 3,14 (m, 1H) , 1,39 (d, J = 6,8 Hz, 6H) .
Uma suspensão de 2-isopropil-5-nitro-lH-indolo (100 mg, 0,49 mmol) e Raney-Nickel (10 mg) em MeOH (10 mL) foi hidrogenada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente overnight. O catalisador foi removido por filtração através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna (éter de
petróleo/acetato de etilo = 5/1) para originar 2-isopropil-lH-indol-5-amina (35 mg, 41 %) . ΧΗ NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,69 (hr s, 1H) , 7,10 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,86 (d, J = 2,4Hz, 1H) , 6,58 (dd, J= 2,4,8,8 Hz, 1H) , 6,07 (t, J = 1,2 Hz, 1H), 3,55 (hr s, 2H), 3,06-2,99 (rn, 1H), 1,33 (d, J = 7,2 Hz, 6H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 175,4.
Exemplo 45: 1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(l-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida
Álcool 2-Aminobenzilíco (60,0 g, 0,487 mol) foi dissolvido em acetonitrilo (2,5 L) e colocado sob refluxo. Hidrobrometo de trifenilfosfina (167 g, 0,487 mol) foi adicionado e a mistura foi aquecida sob refluxo durante 3 h. A mistura de reacção foi concentrada em aproximadamente 500 mL e deixada a repousar à temperatura ambiente durante 1 h. O precipitado foi filtrada e lavado com acetonitrilo gelado seguido por hexano. O sólido foi secado overnight a 40°C sob vácuo para originar brometo de trifenil (2-aminobenzil)fosfónio (193 g, 88%).
A uma suspensão de brometo de trifenil (2-aminobenzil)fosfónio (190 g, 0,43 mol) em diclorometano anidro (1 L) foi adicionado etil cloreto de malonilo (55 ml, 0,43 mol). A reacção foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente. A mistura foi evaporada até à secura antes de etanol (400 mL) ser adicionado. A mistura foi aquecida sob refluxo até que uma solução clara fosse obtida. A solução foi mantida à temperatura ambiente durante 3 h. O precipitado foi filtrado, lavado com etanol gelado seguido por hexano e depois desidratado. Uma segunta colheita foi obtida a partir da fracção-mãe da mesma forma. De forma a remover etanol residual ambas as fracções foram combinadas e dissolvidas em diclorometano (aproximadamente 700 mL) sob aquecimento e evaporadas. O sólido foi secado overnight a 50°C sob vácuo para originar brometo de trifenil((etil(2-carbamoil)acetato)-2-benzil)-fosfónio (139 g, 58%) .
Brometo de trifenil((etil(2-carbamoil)acetato)-2- benzil)fosfónio (32,2 g, 57,3 mmol) foi adicionado a tolueno anidro (150 mL) e a mistura foi aquecida sob refluxo. Tert-butóxido de potássio fresco (7,08 g, 63,1 mmol) foi adicionado em porções ao longo de 15 minutos. O refluxo foi mantido por mais 30 minutos. A mistura foi filtrada quente através de um bloco de celite e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (0-30% acetato de etilo em hexano ao longo de 45 min) para originar etil 2-(lH-indol-2-il)acetato (9,12 g, 78%).
A uma solução de etil 2-(lH-indol-2-il)acetato (14,7 g, 72,2 mmol) em diclorometano (150 mL) foi adicionado 4-dimetilaminopiridina (8,83 g, 72,2 mmol) e ditert-butilcarbonato (23,7 g, 108 mmol) em porções. Após agitação durante 2 h à temperatura ambiente, a mistura foi diluída com diclorometano, lavada com água, secada com sulfato de magnésio e purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (0 a 20% EtOAc em hexano) para originar tert-butil 2-( (etóxicarbonil)metil)-lH-indolo-l-carboxilato (20,0 g, 91%) .
tert-Butil 2-((etóxicarbonil)metil)-lH-indolo-l-carboxilato (16,7 g, 54,9 mmol) foi adicionado a THF anidro (100 mL) e arrefecido a -78°C. Uma solução de hexametildisilazano de potássio 0,5M (165 mL, 82 mmol) foi adicionado lentamente de tal forma que a temperatura interna permaneceu abaixo de -60 °c. A agitação foi mantida durante 30 minutos a -78°C. A esta mistura, iodeto de metilo (5,64 mL, 91 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada durante 30 min à temperatura ambiente e depois arrefecida a -78°C. Uma solução de hexametildisilazano de potássio 0,5M (210 mL, 104 mmol) foi adicionada lentamente e a mistura foi agitada durante mais 30 minutos a -78°C. Mais iodeto de metilo (8,6 mL, 137 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 1,5 h à temperatura ambiente. A reacção foi neutralizada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio e dividida entre água e diclorometano. A fase aquosa foi extraída com diclorometano e as fases orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de magnésio e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (0 a 20% acetato de etilo em hexano) para originar tert-butil 2- (2-(etóxicarbonil)propan-2-il)-lH-indolo-l-carboxilato (17,1 g,94%) .
tert-Butil 2-(2-(etóxicarbonil)propan-2-il)-lH-indolo-1-carboxilato (22,9 g, 69,1 mmol) foi dissolvido em diclorometano (200 mL) antes de TFA (70 mL) ser adicionado. A mistura foi agitada durante 5h à temperatura ambiente. A mistura foi evaporada até à secura, colocada em diclorometano e lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, água, e salmoura. O produto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (0-20% EtOAc em hexano) para originar etil 2-(lH-indol-2-il)-2-metilpropanoato (12,5 g, 78%).
Etil 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanoato
Etil 2-(lH-indol-2-il)-2-metilpropanoato (1,0 g, 4,3 mmol) foi dissolvido em ácido sulfúrico concentrado (6 mL) e arrefecido a -10°C (mistura sal/gelo). Uma solução de nitrato de sódio (370 mg, 4,33 mmol) em ácido sulfúrico concentrado (3 mL) foi adicionado gota-a-gota durante 30 min. A agitação foi mantida por mais 30 min a -10°C. A mistura foi vertida sob gelo e o produto foi extraído com diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma pequena quantidade de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. O produto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-30% EtOAc em hexano) para originar etil 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanoato (0,68 g, 57%).
A uma solução arrefecida de L1AIH4 (1,0 M em THF, 1,1 mL, 1,1 mmol) em THF (5 mL) a 0 °C foi adicionada uma solução de etil 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanoato (0,20 g, 0,72 mmol) em THF (3,4 mL) gota-a-gota. Após adição, a mistura foi permitida aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada durante 3 h. A mistura foi arrefecida a 0 °C antes de água (2 mL) ser lentamente adicionada seguido por cuidadosa adição de 15% NaOH (2 mL) e água (4 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 0,5 h e foi filtrada através de um bloco de celite usando acetato de etilo. A camada orgânica foi separada da camada aquosa, secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (acetato de etilo/hexano = 1/1) para originar 2-metil-2- (5-nitro-lH-indol-2-il)propan-l-ol (0,098 g, 58%).
A uma solução de 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propan-l-ol (0, 094 g, 0,40 mmol) em etanol (4 mL) foi adicionado cloreto de estanho (II) dihidratado (0,451 g, 2,0 mmol). A mistura foi aquecida no microondas a 120°C durante 1 h. A mistura foi diluída com acetato de etilo e água antes de ser neutralizada com solução aquosa saturada de NaHC03. A mistura de reacção foi filtrada através de um bloco de celite usando acetato de etilo. A camada orgânica foi separada da camada aquosa, secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida para originar 2-(5-amino-lH-indol-2-il)-2-metilpropan-l-ol (0,080 g, 98%).
Exemplo 46: 2-(Piridin-2-il)-lH-indol-5-amina
A uma solução de 2-iodo-4-nitroanilina (3,0 g, 11 mmol) em DMF (60mL) e Et3N (60 mL) foi adicionado 2-etinilpiridina (3,0 g, 45 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 ( 600 mg) e Cul (200 mg) sob atmosfera de N2. A mistura de reacção foi agitada a 60°C durante 12 h. A mistura foi diluída com água e extraída com diclorometano (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2S04 anidro e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-10% acetato de etilo/éter de petróleo) para originar 4-nitro-2-(piridin-2-iletinil) anilina (1,5 g, 60%). 1H NMR (300 MHz, C0C13) δ 8,60 (s, 1H) , 8,13 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 1,8, p,9 Hz, 1H) , 7, 87-7, 80 (m, 2H) , 7,42-7,39 (m, 1H) , 7,05 (brs, 2H) , 6,80 (d, J = 6,9 Hz, 1H) .
5-Nitro-2-(piridin-2-il)-lH-indolo A uma solução de 4-nitro-2-(piridin-2-iletinil)anilina (1,5 g, 6,3 mmol) em DMF (50 mL) foi adicionado t-BuOK (1,5 g, 13 mmol). A mistura de reacção foi agitada a 90 °C durante 2 h. A mistura foi diluída com água e extraída com diclorometano (3 x 50 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2S04 anidro e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-10% acetato de etilo/éter de petróleo) para originar 5-nitro-2-(piridin-2-il)-l H-indolo (1,0 g, 67% de rendimento). ΧΗ NMR (300 MHz, d-DMSO) δ 12,40 (s, 1H), 8,66 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 8,58 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 8,07-7,91 (m, 3 H) , 7,59 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,42-7,37 (m, 2H).
A uma solução de 5-nitro-2-(piridin-2-il)-lH-indolo (700 mg, 2,9 mmol) em EtOH (20 mL) foi adicionado SnCl2 (2,6 g, 12 mmol). A mistura foi aquecida sob refluxo durante 10 h. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2S04 anidro e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-10% acetato de etilo/éter de petróleo) para originar 2-(piridin-2-il)-lH-indol-5-amina (120 mg, 20%). XH NMR (400 MHz, C0C13) δ 9,33 (brs, 1H) , 8,55 (dd, J = 1,2,3,6 Hz, 1H) , 7,76-7, 67 (m, 2H) , 7,23 (d, J = 6,4 Hz, 1H) , 7,16-7,12 (m, 1H) , 6,94 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 6,84 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 6,71-6,69 (dd, J = 2,0,8,4 Hz, 1H) .
A uma solução de 2-iodo-4-nitroanilina (2,0 g, 7,6 mmol) e 2- ('tertbutildimetilsililóxi) -acetaldeído (3,5 g, 75% pureza, 15 mmol) em metanol (30 mL) foi adicionado TFA (1,5 mL) a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada a esta temperatura durante 30 min antes de NaCNBH3 ( 900 mg, 15 mmol) ser adicionado em porções. A mistura foi agitada durante 2 h e foi então neutralizada com água. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (30 mL x 3), os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5 % acetato de etilo/éter de petróleo) para originar [2-(tert-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-(2-iodo-4-nitrofenil)-amina (800 mg, 25 %) . XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,57 (d, J = 2,7 Hz, 1H) , 8,12 (dd, J = 2,4 ,9,0 Hz, 1H) , 6,49 (d, J = 9,3 Hz, 1H) , 5,46 (hr s, 1H), 3,89 (t, J = 5,4 Hz, 2H) , 3,35 (q, J= 5,4 Hz, 2H) , 0,93 (s, 9 H) , 0,10 (s, 6H) .
A uma solução de [2-(tert-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-(2-iodo-4-nitro-fenil) amina (800 mg, 1,9 mmol) em Et3N (20 mL) foi adicionado Pd(PPh3)2Cl2 (300 mg, 0, 040 mmol), Cul (76 mg, 0,040 mmol) e 3,3-dimetil-but-l-ina (880 mg, 5,7 mmol) sucessivamente sob atmosfera protegida de N2. A mistura de reacção foi aquecida a 80 °C durante 6 h e permitida arrefecer até à temperatura ambiente. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (30 mL x 3). Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo para originar ácido 5-{2-[2-(tert-butil-dimetil-silaniloxi ) -etilamino]-5-nitro-fenil}-3,3-dimetil-pent-4-inóico etil éster (700 mg, 82 %) , que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,09 (s, 1H) , 8,00 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 6,54 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 6,45 (hrs, 1H) , 4,17-4,10 (m, 4H) , 3,82 (t, J = 5,6 Hz, 2H) , 3,43 (q, J= 5:6 Hz, 2H) , 2,49 (s, 2H), 1,38 (s, 6H), 1,28 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,84 (s, 9 H) , 0, 00 (s, 6H) .
Uma solução de ácido 5-{2-[2-(tert-butil-dimetil- silaniloxi)-etilamino ]-5-nitrofenil}-3,3-dimetil-pent-4-
inóico etil éster (600 mg, 1,34 mmol) e PdCÍ2 (650 mg) em CH3CN (30 mL) foi aquecida sob refluxo overnight. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (30 mL x 3). Os extractos orgânicos combinados foram secados com Na2S04 anidro e evaporados sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em THF (20 mL) e TBAF (780 mg, 3,0 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, o solvente foi removido sob vácuo, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (10% acetato de etilo/éter de petróleo) para originar ácido 3—[1— (2 — hidróxi-etil)-5-nitro-l H-indol-2-il]-3-metil-butírico etil éster (270 mg, 60 %). XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,45 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 8,05 (dd, J = 2,1,9,0 Hz, 1H) , 6,36 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 6,48 (s, 1H) , 4,46 (t, J= 6,6 Hz, 2H) , 4,00- 3,91 (m, 4H) , 2,76 (s, 2H) , 1,61 (s,6 H) , 0,99 (t, J= 7,2
Hz, 1H), 0,85 (s, 9 H), 0,03 (s, 6H).
A uma solução de ácido 3-[1-(2-hidróxi-etil)-5-nitro-lH-indol-2-il]-3-metil-butírico etil éster (700 mg, 2,1 mmol) em THF (25 mL) foi adicionado DIBAL-H (1,0 M, 4,2 mL, 4,2 mmol) a -78°C. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 1 h. Água (2 mL) foi adicionada e a mistura resultante foi extraída com EtOAc (15 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro e evaporadas sob vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (15 % acetato de etilo/éter de petróleo) para originar 3-[1-(2-hidróxi-etil)-5-nitro-lH-indol-2-il]-3-metil-butan-l-ol (300 mg, 49%). XH NMR (300 MHz, d-DMSO) δ 8,42 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 7,95 (dd, J= 1,2, 8,7 Hz, 1H) , 6,36 (d, J= 9,3 Hz, 1H) , 6,50 (s, 1H) , 5,25 (br s, 1H) , 4,46-4,42 (m, 4H) , 3,69-3,66 (m, 2 H), 3,24-3,21 (m, 2 H), 1,42 (s, 6H) .
Uma solução de 3-[1-(2-hidróxi-etil)-5-nitro-lH-indol-2-il]-3-metil-butan-l-ol (300 mg, 1,03 mmol) e Raney-Nickel (200 mg,) em CH3OH (30 mL) foi agitada durante 5 h à temperatura ambiente sob uma atmosfera de H2. O catalisador foi filtrado através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado sob vácuo para originar um resíduo, que foi purificado por TLC preparativa para originar 3-[5-amino-l-(2-hidróxi-etil)-lH-indol-2-il]-3-metil-butan-l-al (70 mg, 26%). XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,07 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,83 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 6,62 (dd, J = 2,1,8,4 Hz, 1H) , 6,15 (s, 1H) , 4,47 (t, J = 5,4 Hz, 2H) , 4,07 (t, J = 5,4
Hz, 2H) , 3,68 (t,J= 5,7 Hz, 2H) , 2,16 (t,J= 5,7 Hz, 2H) , 4,00-3,91 (m, 4 H) , 2,76 (s, 2H) , 1,61 (s, 6H) , 1,42 (s, 6H) .
5-Nitro-2-(piridin-2-il)-lH-indolo (1,0 g, 4,2 mmol) foi adicionado a HCl/MeOH (2M, 50 mL). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 1 h e o solvente foi evaporado sob vácuo. PtCh (200 mg) foi adicionado a uma solução do resíduo em MeOH (50 mL) e a mistura de reacção foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) à temperatura ambiente durante 2 h. O catalisador foi filtrado através de um bloco de celite e o solvente foi evaporado sob vácuo para originar 2-(piperidin-2-il)-1H-indol-5-amina (1,0 g), que foi directamente usado no passo seguinte.
A uma solução de 2-(piperidin-2-il)-lH-indol-5-amina (1,0 g) em EtsN (25 mL) e THF (25mL) foi adicionado B0C2O (640 mg, 2,9 mmol). A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente overnight. A mistura foi diluída com água e extraída com diclorometano (3 x 25 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2S04 anidro e concentradas em vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-10% acetato de etilo/éter de petróleo) seguido por HPLC preparativa para originar tert-butil 2-(5-amino-lH-indol-2-il)piperidina-l-carboxilato (15 mg, 1% no final de 2 passos). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,82 (s, 1H) , 7,58 (s, 1H) , 7,22 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,02 (drJ= 1,6, 8,0 Hz, 1H) , 6A2 (s, 1H) , 6,25 (s, 1H) , 3,91-3,88 (m, 1H) , 3,12-3,10 (m, 1H) , 2,81-2,76 (m, 1H) , 2,06-1, 97 (m, 4H) , 1,70-1,58 (m, 2H) , 1,53 (s, 9 H) .
3-Nitroanilina (28 g, 0,20 mol) foi dissolvida numa mistura de H2O (40 mL) e HC1 37% (40 mL) . Uma solução de NaNCR (14 g, 0,20 mol) em H20 (60 mL) foi adicionada à mistura a 0°C, e depois uma solução de SnCÍ2.H20 (140 g, 0,60 mol) em HC1 37% (100 mL) foi adicionada. Após agitação a 0°C durante 0,5 h, o material insolúvel foi isolado por filtração e foi lavado com água para originar hidrocloreto de (3-nitrofenil)hidrazina (28 g, 73%).
Hidrocloreto de (3-Nitrofenil)hidrazina (30 g, 0,16 mol) e ácido 2-oxo-propiónico etil éster (22 g, 0,19 mol) foram dissolvidos em etanol (300 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h antes do solvente ser evaporado sob pressão reduzida para originar (E)-etil 2- (2-(3-nitrofenil)hidrazono)propanoato, que foi que foi usado directamente no passo seguinte.
(E)-Etil 2-(2-(3-nitrofenil)hidrazono)propanoato foi dissolvido em tolueno (300 mL) e PPA 00 g) foi adicionado. A mistura foi aquecida sob refluxo overnight e depois foi arrefecida até à temperatura ambiente. O solvente foi decantado e evaporado para originar uma mistura bruta que foi utilizada no passo seguinte sem purificação adicional (15 g, 40%).
Ácido 4-Nitro-lH-indolo-2-carboxílico e Ácido 6-nitro-lH-indolo-2-carboxílico
Uma mistura de etil 6-nitro-lH-indolo-2-carboxilato (0,5 g) e 10 % NaOH (20 mL) foi aquecida sob refluxo overnight e depois foi arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi extraída com éter e a fase aquosa foi acidificada com HC1 a pH 1-2. O sólido insolúvel foi isolado por filtração para originar a mistura bruta que foi utilizada no passo seguinte sem purificação adicional (0,3 g, 68%).
Uma mistura de ácido 6-nitro-lH-indolo-2-carboxílico (12 g, 58 mmol) e SOCI2 (50 mL, 64 mmol) em benzeno (150 mL) foi aquecida sob refluxo durante 2 h. O benzeno e o excesso de SOCI2 foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em CH2CI2 anidro (250 mL) e NH3.H2O (22 g, 0,32 mol) foi adicionado gota-a-gota a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. O sólido insolúvel foi isolado por filtração para obter a mistura bruta (9,0 g, 68%), que foi usada directamente no passo seguinte.
6-Nitro-lH-indolo-2-carboxamida (5,0 g, 24 mmol) foi dissolvida em CH2CI2 (200 mL) . Et3N (24 g, 0,24 mol) e (CF3CO)20 (51 g, 0,24 mol) foram adicionados gota-a-gota à mistura à temperatura ambiente. A mistura foi continuada a agitar durante lhe foi então vertida sob água (100 mL). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (10 0 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para originar o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar uma amostra impura de 4-nitro-lH-indolo-2-carbonitrilo (2,5 g, 55%).
Uma mistura de 6-nitro-lH-indolo-2-carbonitrilo (2,5 g, 13 mmol) e Raney-Nickel (500 mg) em EtOH (50 mL) foi agitada a temperatura ambiente sob atmosfera de H2 (1 atm) durante 1 h. Raney-Nickel foi removido via filtração e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para originar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar 6-amino-lH-indolo-2-carbonitrilo (1,0 g, 49 %) . XH NMR (DMSO-de) δ 12,75 (br s, 1H) , 7,82 (d, J = 8
Hz, 1H) , 7,57 (s, 1H) , 7,42 (s, 1H) , 7,15 (d, J = 8 Hz, 1H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 158,2.
A uma solução de 6-nitroindolo (4,9 g 30 mmol) em DMF (24 mL) e CH3CN (240 mL) foi adicionado gota-a-gota uma solução de CISO2NCO (5,0 mL) em CH3CN (39 mL) a 0 °C. Após adição, a reacção foi permitida aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada durante 2 h. A mistura foi então vertida sob gelo/água e alcalinizada com solução aquosa saturada de NaHCCb a pH 7-8. A mistura foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2S04 e concentradas para originar 6-nitro-lH-indolo-3-carbonitrilo (4,6 g, 82%).
Uma suspensão de 6-nitro-lH-indolo-3-carbonitrilo (4,6 g, 25 mmol) e 10% Pd-C (0,46 g) em EtOH (50 mL) foi agitada sob atmosfera de H2 (1 atm) à temperatura ambiente overnight. Após filtração, o filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1) para originar 6-amino-lH-indolo-3-carbonitrilo (1,0 g, 98%) na forma de um sólido cor-de-rosa. ΧΗ NMR (DMSO-de) δ 11,51 (s, 1H) , 7,84 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,62 (s, 1H) , 6,56 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 5,0 (s, 2H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 157,1.
A uma solução de o-tolilamina (21 g, 0,20 mol) e ΕόβΝ (22 g, 0,22 mol) em CH2CI2 foi adicionado cloreto de 2,2-dimetil-propionilo (25 g, 0,21 mol) a 10°C. Após adição, a mistura foi agitada overnight à temperatura ambiente. A mistura foi lavada com HC1 aquoso (5%, 80 mL) , solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura. A camada orgânica foi secada com Na2S04 e concentrada sob vácuo para originar N-o-tolilpivalamida (35 g, 91 %) . 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,88 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 7,15-7,25 (m, 2H) , 7,05 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 2,26 (s, 3H), 1,34 (s, 9 H).
A uma solução de N-o-tolilpivalamida (30,0 g, 159 mmol ) em THF desidratado (100 mL) foi adicionado gota-a-gota n-BuLi (2,5 M em hexano, 190 mL) a 15°C. Após adição, a mistura foi agitada overnight a 15 °C. A mistura foi arrefecida num banho de água/gelo e tratada com NH4CI saturado. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro, filtradas, e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar 2-tert-butil-lH-indolo (24 g, 88%). ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,99 (hr. s, 1H) , 7,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 7,05 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,06 -7,13 (m, 2H) , 6,26 (s, 1H) , 1,39 (s, 9 H) .
A uma solução de 2-tert-butil-lH-indolo (10 g, 48 mmol) em AcOH (40 mL) foi adicionado NaBH4 a 10°C. A mistura foi agitada durante 20 minutos a 10 °C antes de ser tratada gota-a-gota com H20 sob arrefecimento com gelo. A mistura foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 anidro, filtradas, e concentradas sob vácuo para originar 2-tert-butilindolina (9,8 g), que foi usado directamente no passo seguinte.
A uma solução de 2-tert-butilindolina (9,7 g) em H2S04 (98%,80 mL) foi lentamente adicionado KNO3 (5,6 g, 56 mmol) a 0°C. Após adição, a mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi cuidadosamente vertida sob gelo, alcalinizada com Na2CC>3 a pH 8 e extraída com acetato de etilo. Os extractos combinados foram lavados com salmoura, secados com Na2S04 anidro e concentrados sob vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para originar 2-tert-butil-6-nitroindolina (4,0 g, 31 % no final dos dois passos) . 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,52 (dd, J = 1,8, 8,1 Hz, 1H) , 7,30 (s, 1H) , 7,08 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 3,76 (t, J = 9,6 Hz, 1H) , 2, 98 - 3, 07 (m, 1H) , 2,82 - 2,91 (m, 1H) , 0,91 (s,9H).
A uma solução de 2-tert-butil-6-nitroindolina (2,0 g, 9,1 mmol) em 1,4-dioxano (20 mL) foi adicionado DDQ (6,9 g, 30 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida sonb refluxo durante 2,5 h antes de ser filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para originar 2-tert-butil-6-nitro-lH-indolo (1,6 g, 80%). 1H NMR (300 MHz, CDCL3) δ 8,30 (br. s, 1H) , 8,29 (s, 1H) , 8,00 (dd, J = 2,1, 8,7 Hz, 1H) , 7,53 (d, J = 9,3 Hz, 1H) , 6, 38 (s, 1H), 1,43 (s, 9 H) .
A uma solução de 2-tert-butil-6-nitro-lH-indolo (1,3 g, 6,0 mmol) em MeOH (10 mL) foi adicionado Raney-Nickel (0,2 g). A mistura foi hidrogenada sob 1 atm de hidrogénio à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura de reacção foi filtrada e o filtrado foi concentrado. 0 resíduo foi lavado com éter de petróleo para originar 2-tert-butil-lH-indol-6-amina (1,0 g, 8 9%). XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) 0 10,19 (s, 1H) , 6,99 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 6,46 (s, 1H) , 6,25 (dd, J = 1,8, 8,1 Hz, 1H) , 5,79 (d, J= 1,8 Hz, 1H) , 4,52 (s, 2H) , 1,24 (s, 9 H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 189,1.
A uma mistura de 6-nitroindolo (1,0 g, 6,2 mmol), triflato de zinco (2,1 g, 5,7 mmol), e TBAI (1,7 g, 5,2 mmol) em tolueno anidro (11 mL) foi adicionado DIEA (1,5 g, 11 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto. A mistura de reacção foi agitada durante 10 min a 120 °C, seguida pela adição de brometo de t-butilo (0,71 g, 5,2 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 45 min a 120°C. O sólido foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 20:1) para originar 3-tert-butil-6-nitro-lH-indolo (0,25 g, 19%) na forma de um sólido de cor amarela. 1H-NMR (CDCI3) δ 8,32 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 8,00 (dd, J = 2,1,14,4 Hz, 1H) , 7,85 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 1,46. (s, 9H) .
Uma suspensão de 3-tert-butil-6-nitro-lH-indolo (3,0 g, 14 mmol) e Raney-Nickel (0,5 g) foi hidrogenada sob atmosfera de H2 (1 atm) à temperatura ambiente durante 3 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etilo = 4:1) para originar 3-tert- butil-lH-indol-6-amina (2,0g, 77%) na forma de um sólido de cor cinzenta. ΧΗ NMR (CDCI3) δ 7,58 (m, 2H) , 6,73 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 6,66 (s, 1H) , 6,57(dd, J = 0,8,8,6 Hz, 1H) , 3,60 (br, 2H), 1,42 (s, 9H).
A uma mistura de HNO3 (98%, 30 mL) e H2SO4 (98%, 30 mL) foi adicionado gota-a-gota l-metil-3-trifluorometil-benzeno (10 g, 63 mmol) a 0 °C. Após adição, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min e foi então vertida sob gelo/água. O precipitado foi filtrado e lavado com água para originar l-metil-2,4-dinitro-5-trifluorometil-benzeno (2,0 g, 13%) .
Uma mistura de l-metil-2,4-dinitro-5-trifluorometil-benzeno (2,0 g, 8,0 mmol) e DMA (1,0 g, 8,2 mmol) em DMF (2 0 roL) foi agitada a 100°C durante 30 min. A mistura foi vertida sob gelo-água e agitada durante 1 h. O precipitado foi filtrado e lavado com água para originar (E)-2-(2,4-dinitro-5-(trifluorometil)fenil)-N,N-dimetiletenamina (2,1 g, 86%) .
Uma suspensão de (E)-2-(2,4-dinitro-5- (trifluorometil)fenil)-N,N-dimetiletenamina (2,1 g, 6,9 mmol) e Raney-Nickel (1 g) em etanol (80 mL) foi agitada sob atmosfera de H2 (1 atm) à temperatura ambiente durante 5 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar 5-(trifluorometil)-lH-indol-6-amina (200 mg, 14%). 1H NMR (DMSO-de) δ 10,79 (br s, 1H) , 7,55 (s, 1H) , 7,12 (s, 1H) , 6,78 (s, 1H) , 6,27 (s, 1H) , 4,92 (s, 2H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) : 200,8 .
1-(Fenilsulfonil)indolina A uma mistura de DMAP (1,5 g) , cloreto de benzenosulfonil (24,0 g, 136 mmol) e indolina (14,7 g, 124 mmol) em CH2CI2 (200 mL) foi adicionado gota-a-gota EtsN (19,0 g, 186 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente overnight. A camada orgânica foi lavada com água (2x) , secada com Na2S04 e concentrada até à secura sob pressão reduzida para originar 1-(fenilsulfonil)indolina (30,9 g, 96%) .
A uma suspensão de AICI2 (144 g, 1,08 mol) em CH2CI2 (1070 mL) foi adicionado anidrido acético (54 mL). A mistura foi agitada durante 15 minutos antes de uma solução de 1-(fenilsulfonil)indolina (46,9 g, 0,180 mol) em CH2CI2 (1070 mL) ser adicionada gota-a-gota. A mistura foi agitada durante 5 h e foi neutralizada pela lenta adição de gelo. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com CH2C12. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de NaHCCA e salmoura, secadas com Na2S04, e concentradas sob vácuo para originar 1-(1-(fenilsulfonil)indolin-5-il)etanona (42,6 g).
A TFA (1600 mL) a 0 °C foi adicionado borohidrido de sódio (64,0 g, 1,69 mol) durante lh. A esta mistura foi adicionada gota-a-gota uma solução de 1- (1- (fenilsulfonil)indolin-5-il)etanona (40,0 g, 0,133 mol) em TFA (700 mL) durante 1 h. A mistura foi então agitada overnight a 25°C. Após diluição com H20 (1600 mL), a mistura foi alcalinizada através da adição de pellets de hidróxido de sódio a 0 °C. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2S04 e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar 5-etil-l-(fenilsulfonil)indolina (16,2 g, 47% no final dos dois passos).
Uma mistura de 5-etil-l-(fenilsulfonil)indolina (15 g, 0,050 mol) em HBr (48%, 162 mL) foi aquecida sob refluxo durante 6 h. A mistura foi alcalinizada com solução aquosa saturada de NaOH a pH 9 e então foi extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada com Na2S04, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar 5-etilindolina (2,5 g, 32%).
A uma solução de 5-etilindolina (2,5 g, 17 mmol) em H2SO4 (98%, 20 mL) foi lentamente adicionado KNO3 (1,7 g, 17 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 - 10 °C durante 10 minutos. A mistura foi então cuidadosamente vertida sob gelo, alcalinizada com solução de NaOH a pH 9, e extraída com acetato de etilo. Os extractos combinados foram lavados com salmoura, secos com Na2S04 e concentrados até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar 5-etil-6-nitroindolina (1, 9 g, 58%) .
A uma solução de 5-etil-6-nitroindolina (1,9 g, 9,9 mmol) em CH2CI2 (30 mL) foi adicionado MnCA (4,0 g, 46 mmol) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 8 h. O sólido foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado até à secura para originar 5-etil-6-nitro-lH-indolo (1,9 g) .
Uma suspensão de 5-etil-6-nitro-lH-indolo (1,9 g, 10 mmol) e Raney-Nickel (1 g) foi hidrogenada sob atmosfera de H2 (1 atm) à temperatura ambiente durante 2 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar 5-etil-lH-indol-6-amina (760 mg, 48% no final dos dois passos) . ΧΗ NMR (CDCI3) δ 7,90 (hr s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,78 (s, 2H), 6,39 (s, 1H) , 3,39 (br s, 2H) , 2,63 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 1,29 (trJ= 6,9 Hz, 3H) ; MS (BSI) m/e (M+H+) 161,1.
A uma mistura de HNO3 (95%, 80 mL) e H2SO4 (98%, 80 mL) foi lentamente adicionado ácido 2-metilbenzóico (50 g, 0,37 mol) a 0°C. Após adição, a mistura de reacção foi agitada abaixo dos 30°C durante 1,5 h. A mistura foi então vertida sob gelo/água e agitada durante 15 min. O precipitado foi filtrado e lavado com água para originar ácido 2-metil-3,5-dinitrobenzóico (70 g, 84%).
Uma mistura de ácido 2-metil-3,5-dinitrobenzóico (50 g, 0,22 mol) em SOCI2 (80 mL) foi aquecida sob refluxo durante 4 h e depois foi concentrada até à secura. O resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (50 mL) , ao qual EtOH (80 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi vertida sob gelo-água e extraída com EtOAc (3 x 100 mL) . Os extractos combinados foram lavadas com Na2C03 saturado (80 mL) , água (2 x 100 mL) e salmoura (100 mL) , secados com Na2S04 e concentrados até à secura para originar etil 2-metil-3,5-dinitrobenzoato (50 g, 88%)
Uma mistura de etil 2-metil-3,5-dinitrobenzoato (35 g, 0,14 mol) e DMA (32 g, 0,27 mol) em DMF (200 mL) foi aquecida a 100°C durante 5 h. A mistura foi vertida sob gelo/água e o sólido precipitado foi filtrado e lavado com água para originar (E)-etil 2-(2-(dimetilamino)vinil)-3, 5- dinitrobenzoato (11 g,48%)
Uma mistura de (E)-etil 2-(2-(dimetilamino)vinil)-3,5-dinitrobenzoato (11 g, 0,037 mol) e SnCÍ2 (83 g, 0,37 mol) em etanol foi aquecida sob refluxo durante 4 h. A mistura foi concentrada até à secura e o resíduo foi vertido sob água e alcalinizado usando solução aquosa saturada de Na2CC>3 a pH 8. O sólido precipitado foi filtrado e o filtrado foi extraído com acetato de etilo (3 x 100 mL). Os extractos combinados foram lavados com água (2 x 100 mL) e salmoura (150 mL), secados com Na2S04, e concentrados até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar etil 6-amino-lH-indolo- 4-carboxilato (3,0 g, 40%) . ΧΗ NMR (DMSO-de) δ 10,76 (br s, 1H) , 7,11-7,14 (m, 2H) , 6,81-6,82 (m, 1H) , 6, 67-6, 68 (m, 1H) , 4,94 (br s, 2H) , 4,32-4,25 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 1,35- 1,31 (t, J = 7,2, 3H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 205, 0.
A uma solução agitada de HNO3 (60 mL) e H2SO4 (80 mL) foi adicionado gota-a-gota 1-fluoro-3-metilbenzeno (28 g, 25 mmol) sob arrefecimento por gelo a uma taxa tal que a temperatura não subiu acima dos 35°C. A mistura foi permitida agitar durante 30 min à temperatura ambiente e foi então vertida sob gelo/água (500 mL). O precipitado resultante (uma mistura de 1-fluoro-5-metil-2,4- dinitrobenzeno e 1-fluoro-3-metil-2,4-dinitrobenzeno, 32 g, ca. rácio 7:3) foi recolhido por filtração e purificado por recristalização com 50 mL de éter isopropílico para originar 1-fluoro-5-metil-2,4-dinitro-benzeno puro na forma de um sólido branco (18 g, 36%).
Uma mistura de 1-fluoro-5-metil-2,4-dinitro-benzeno (10 g, 50 mmol), DMA (12 g, 100 mmol) e DMF (50 mL) foi aquecida a 100°C durante 4h. A solução foi arrefecida e vertida sob água. O sólido vermelho precipitado foi recolhido, lavado com água, e seco para originar (E)-2-(5-fluoro-2,4-dinitrofenil)-N,N-dimetiletenamina (8,0 g, 63%).
Uma suspensão de (E)-2-(5-fluoro-2,4-dinitrofenil)-N.N-dimetiletenamina (8,0 g, 31 mmol) e Raney-Nickel (8 g) em EtOH (80 mL) foi agitada sob atmosfera de H2 (40 psi) à temperatura ambiente durante 1 h. Após filtração, o filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1) para originar 5-fluoro-lH-indol-6-amina (1,0 g, 16%) na forma de um sólido com cor castanha. ΧΗ NMR (DMSO-de) δ 10,56 (br s, 1H) , 7,07 (d, J = 12 Hz, 1H) , 7,02 (m, 1H) ,
6,71 (d, J = 8 Hz, 1H) , 6-,1 7 (s, 1H) , 3,91 (br s, 2H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 150,1.
A uma solução agitada de HNO3 (55 mL) e H2SO4 (79 mL) foi adicionado gota-a-gota l-cloro-3-metilbenzeno (25,3 g, 200 mmol) sob arrefecimento por gelo a uma taxa tal que a temperatura não subiu acima dos 35°C. A mistura foi permitida agitar durante 30 min à temperatura ambiente e foi então vertida sob gelo/água (500 mL). O precipitado resultante foi recolhido por filtração e purificado por recristalização para originar l-cloro-5-metil-2,4-dinitrobenzeno (26 g, 60%).
Uma mistura de l-cloro-5-metil-2,4-dinitro-benzeno (11,6 g, 5 0,0 mmol), DMA (11,9 g, 100 mmol) em DMF (50 mL) foi aquecida a 100°C durante 4 h. A solução foi arrefecida e vertida sob água. Um sólido vermelho precipitado foi recolhido por filtração, lavado com água, e secado para originar (E)-2- (5-cloro-2,4-dinitrofenil)-N,N- dimetiletenamina (9,84 g, 72%).
Uma suspensão de (E)-2-(5-cloro-2,4-dinitrofenil)-N,N-dimetiletenamina (9,8 g, 36 mmol) e Raney-Nickel (9,8 g) em EtOH (140 mL) foi agitada sob atmosfera de H2 (1 atm.) à temperatura ambiente durante 4 h. Após filtração, o filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/acetato de etilo =10: 1) para originar 5-cloro-lH-indol-6-amina (0,97 g, 16%) na forma de um pó com cor cinzenta. ΧΗ NMR (CDCI3) δ 7,85 (hr s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,34 (s, 1H) , 3,91 (hr s, 1H) ; MS (ESI) m/e (M+H+) 166,0.
A uma mistura de HNO3 (95%, 80 mL) e H2SO4 (98%, 80 mL) foi lentamente adicionado ácido 3-metilbenzóico (50 g, 0,37 mol) a 0 °C. Após adição, a mistura foi agitada abaixo dos 30°C durante 1,5 horas. A mistura foi então vertida sob gelo/água e agitada durante 15 min. O sólido precipitado foi filtrado e lavado com água para originar uma mistura de ácido 3-metil-2,6-dinitro-benzóico e ácido 5-metil-2,4-dinitrobenzóico (70 g, 84%). A uma solução desta mistura (70 g, 0,31 mol) em BtOH (150 mL) foi adicionado gota-a-gota SOCI2 (54 g, 0,45 mol) . A mistura foi aquecida sob refluxo durante 2 h antes de ser concentrada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre EtOAc (100 mL) e Na2C03 aquoso (10%, 120 mL) . A camada orgânica foi lavada com salmoura (50 mL) , secada com Na2S04, e concentrada até à secura para originar etil 5-metil-2,4-dinitrobenzoato (20 g) , que foi mantido à parte. A camada aquosa foi acidificada com HC1 a pH 2-3 e o sólido precipitado foi filtrado, lavado com água, e secado com ar para originar ácido 3-metil-2,6-dinitrobenzóico (39 g,47%).
Uma mistura de ácido 3-metil-2,6-dinitrobenzóico (39 g, 0,15 mol) e SOCI2 (80 mL) foi aquecida sob refluxo durante 4 h. O excesso de SOCI2 foi retirado por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo foi adicionado gota-a-gota a uma solução de EtOH (100 mL) e EtsN (50 mL). A mistura foi agitada a 20°C durante lhe depois concentrada até à secura. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (100 mL), lavado com Na2C03 (10 %, 40 mL x 2), água (50 mL x 2) e salmoura (50 mL) , secado com Na2S04 e concentrado para originar etil 3-metil-2,6-dinitrobenzoato (20 g, 53%).
Uma mistura de etil 3-metil-2,6-dinitrobenzoato (35 g, 0,14 mol) e DMA (32 g, 0,27 mol) em DMF (200 mL) foi aquecida a 100°C durante 5 h. A mistura foi vertida sob gelo/água. Ο sólido precipitado foi filtrado e lavado com água para originar (E)-etil 3-(2-(dimetilamino)vinil)-2,6- dinitrobenzoato (25 g,58%).
Uma mistura de (E)-etil 3-(2-(dimetilamino)vinil)-2, 6-dinitrobenzoato (30 g, 0,097 mol) e Raney-Nickel (lOg) em EtOH (1000 mL) foi hidrogenada à temperatura ambiente sob 50 psi durante 2 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar etil 6-amino-2H-indolo-7-carboxilato na forma de um sólido esbranquiçado (3,2 g, 16%). XH NMR (DMSO-de) δ 10,38 (s, 1H) , 7,42 (d, J = 8,7
Hz, 1H) , 6,98 (t, J = 3,0 Hz, 1H) , 6,65 (s, 2H) , 6,48 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6, 27-6, 26 (m, 1H) , 4,38 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,35 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Uma mistura de etil 5-metil-2,4-dinitrobenzoato (39 g, 0,15 mol) e DMA (32 g, 0,27 mol) em DMF (200 mL) foi aquecida a 100°C durante 5 h. A mistura foi vertida sob gelo/água e o sólido precipitado foi filtrado e lavado com água para originar (E)-etil 5-(2-(dimetilamino)vinil)-2,4- dinitrobenzoato (15 g, 28%).
Uma mistura de (E)-etil 5-(2-(dimetilamino)vinil)-2,4-dinitrobenzoato (15 g, 0,050 mol) e Raney-Nickel (5 g) em EtOH (500 mL) foi hidrogenada à temperatura ambiente sob 50 psi of hidrogénio durante 2 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel para originar etil 6-amino-lH-indolo-5-carboxilato (3,0 g, 30%). ΧΗ NMR (DMSO-d6) δ 10,68 (s, 1H) , 7,99 (s, 1H) , 7,01-7,06 (m, 1H) , 6,62 (s, 1H) , 6,27-6,28 (m, 1H) , 6,16 (s, 2H) , 4,22 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 1,32-1,27 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
A uma suspensão de NaH (60% em óleo mineral, 8,4 g, 0,21 mol) em THF (200 mL) foi adicionado gota-a-gota uma solução de 2-tert-butil-4-metilfenol (33 g, 0,20 mol) em THF (100 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 15 min e depois ácido fosfórico-clorídrico dietil éster (37 g, 0,21 mol) foi adicionado gota-a-gota a 0 °C. Após adição, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. A reacção foi neutralizada com NH4CI saturado (300 mL) e depois extraída com Et20 (350 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2S04 anidro, e depois evaporadas sob vácuo para originar fosfato de 2-tert-butil-4-metilfenil dietil (contaminado com óleo mineral) na forma de um óleo incolor (60 g, ~ 100%), que foi usado directamente no passo seguinte.
A NH3 (líquido, 1000 mL) foi adicionado uma solução de fosfato de 2-tert-butil-4-metilfenil dietil (60 g, correspondendo ao produto bruto do passo anterior, cerca de 0,2 mol) em Et20 (anidro, 500 mL) a -78°C sob atmosfera de N2. Lítio sob a forma de metal foi adicionado à solução em pequenas porções até que uma cor azul se tornasse persistente. A mistura de reacção foi agitada a -78°C durante 15 min e depois foi neutralizada com NH4CI saturado até que a mistura se tornasse incolor. NH3 líquido foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em água. A mistura foi extraída com Et20 (400 mL x 2) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2S04 e evaporadas para originar l-tert-butil-3-metilbenzeno (contaminado com óleo mineral) na forma de um óleo incolor (27 g, 91 %) , que foi usado directamente no passo seguinte.
A HNO3 (95%, 14 mL) foi adicionado H2SO4 (98 %, 20 mL) a 0 °C e depois 1-tert-butil-3-metilbenzeno (7,4 g, 50 mmol, correspondendo ao produto bruto do passo anterior) gota-a-gota com a temperatura a ser mantida abaixo de 30°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min, vertida sobre gelo (100 g) , e extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, antes de serem evaporadas para originar um óleo acastanhado, que foi purificado por cromatografia em coluna para originar uma mistura de l-tert~butil-5-metil-2,4-dinitrobenzeno e l-tert-butil-3-metil-2,4-dinitrobenzeno (2: 1 por NMR) na forma de um óleo amarelo (9,0 g, 61 %).
Uma mistura de l-tert-butil-5-metil-2,4-dinitrobenzeno e 1-tert-butil-3-metil-2,4-dinitrobenzeno (9,0 g, 38 mmol, 2:1 por NMR) e DMA (5,4 g, 45 mmol) em DMF (50 mL) foi aquecida sob refluxo durante 2 h antes de ser arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi vertida sob água-gelo e extraída com EtOAc (50 mL x 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, antes de serem evaporadas para originar um +óleo acastanhado, que foi purificado por cromatografia em coluna para originar (E)-2-(5-tert-butil-2,4-dinitrofenil)-N,N-dimetiletenamina (5,0 g, 68%).
Uma solução de (E)-2-(5-tert-butil-2,4-dinitrofenil)-N,N-dimetilethen-amina (5,3 g, 18 mmol) e cloreto de estanho (II) dihidratado (37 g, 0,18 mol) em etanol (200 mL) foi aquecida sob refluxo overnight. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente foi removido por vácuo. A lama residual foi diluída com água (500 mL) e foi alcalinizada com Na2CC>3 10% aquoso a pH 8. A suspensão resultante foi extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL) . O extracto de acetato de etilo foi lavado com água e salmoura, secado com Na2SC>4, e concentrado. O sólido residual foi lavado com CH2CI2 para originar um pó amarelo, que foi purificado por cromatografia em coluna para originar 5-tert-butil-lH-indol-6-amina (0,40 g, 12%). ΧΗ NMR (DMSO-de) δ 10,34 (br s, 1H) , 7,23 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H) , 6,65 (s, 1H) , 6,14 (s, 1H) , 4,43 (br s, 2H) , 2,48 (s, 9 H); MS (ESI) m/e (M+H+) 189,1.
Um equivalente do ácido carboxilico apropriado e um equivalente da amina apropriada foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida (DMF) contendo trietilamina (3 equivalentes). Hexafluorofosfato de o-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio (HATU) foi adicionado e a solução foi permitida agitar. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna preparativa de fase reversa para produzir o produto puro.
2-tert-Butil-lH-indol-5-amina (19 mg, 0,10 mmol) e ácido 1-(4-metóxifenil)ciclopropanocarboxílico (19 mg, 0,10 mmol) foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida (1,00 mL) contendo trietilamina (28 pL, 0,20 mmol). Hexafluorofosfato de o-(7-azabenzotriazol-l-il)N,N,N',N'-tetrametilurónio (42 mg, 0,11 mmol) foi adicionado à mistura e a solução resultante foi permitida agitar durante 3 horas. A mistura de reacção bruta foi filtrada e purificada por HPLC de fase reversa. ESI-MS m/z calc. 362,2, experimental 363,3 (M+l)+; Tempo de retenção 3,48 minutos.
Um equivalente do ácido carboxilico apropriado foi colocado num frasco secado em estufa sob atmosfera de azoto. Um mínimo (3 equivalentes) de cloreto de tionilo e uma quantidade catalítica de N,N-dimetilformamida foram adicionados e a solução foi permitida agitar durante 20 minutos a 60°C. O excesso de cloreto de tionilo foi removido sob vácuo e o sólido resultante foi ressuspenso num mínimo de piridina anidra. Esta solução foi lentamente adicionada a uma solução agitada de um equivalente da amina apropriada dissolvida num mínimo de piridina anidra. A mistura resultante foi permitida agitar durante 15 horas a 110 °C. A mistura foi evaporada até à secura, ressuspensa em diclorometano, e depois extraída três vezes com HC1 IN. A camada orgânica foi então secada com sulfato de sódio, evaporada até à secura, e depois purificada por cromatografia em coluna.
Ácido 1-Benzo[1,3]dioxol-5-il-ciclopropanocarboxílico (2,07 g, 10,0 mmol) foi dissolvido em cloreto de tionilo (2,2 mL) sob atmosfera de N2. N, N-dimetilf ormamida (0,3 mL) foi adicionada e a solução foi permitida agitar durante 30 minutos. 0 excesso de cloreto de tionilo foi removido sob vácuo e o sólido resultante foi dissolvido em diclorometano anidro (15 mL) contendo trietilamina (2,8 mL, 20,0 mmol). Etil 5-amino-lH-indolo-2- carboxilato (2,04 g, 10,0 mmol) em 15 mL de diclorometano anidro foi lentamente adicionado à reacção. A solução resultante foi permitida agitar durante 1 hora. A mistura de reacção foi diluída com 50 mL de diclorometano e lavada três vezes com 50 mL de HC1 IN, bicarbonato de sódio aquoso saturado, e cloreto de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi secada com sulfato de sódio e evaporada até à secura para produzir etil 5-(1-(benzo[d][l,3]dioxol- 5-il)ciclopropanocarboxamido)-1 H-indolo-2-carboxilato na forma de um sólido cinzento (3,44 g, 88 %) . ESI-MS m/z calc. 392,4; experimental 393,1 (M+l+) Tempo de retenção 3,17 minutos. NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,80 (s, 1H) , 8,64 (s, 1H), 7,83 (m, 1H),7,33-7,26 (m, 2H), 7,07 (m, 1H), 7,02 (m, 1H) , 6, 96-6, 89 (m, 2H) , 6,02 (s, 2H) , 4,33 (q, J = 7, 1Hz, 2H) , 1,42-1,39 (m, 2H) , 1,33 (t, J = 7,1 Hz, 3H) , 1, 06-1,03 (m, 2H) .
Ácido 1-benzo[1,3]dioxol-5-il-ciclopropanocarboxílico (1,09 g, 5,30 mmol) foi dissolvido em 2 mL of cloreto de tionilo sob atmosfera de azoto. Uma quantidade catalítica (0,3 mL) de N,I7-dimetilformamida (DMF) foi adicionada e a mistura de reacção foi agitada durante 30 minutos. O excesso de cloreto de tionilo foi evaporado e o resíduo resultante foi dissolvido em 15 mL de diclorometano. Esta solução foi lentamente adicionada a uma solução de 2-tert-butil-lH-indol-5-amina (1,0 g, 5,3 mmol) em 10 mL de diclorometano contendo trietilamina (1,69 mL, 12,1 mmol). A solução resultante foi permitida agitar durante 10 minutos. O solvente foi evaporado até à secura e a mistura de reacção bruta foi purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel usando usando um gradiente de 5-50 % de acetato de etilo em hexanos. As fracções puras foram combinadas e evaporadas até à secura para produzir a um pó cor-de-rosa pálido (1,24 g 62%). ESI-MS m/z calc. 376,18, experimental 377.3 (M+l)+. Tempo de retenção de 3,47 minutos. 1H NMR(4 0 0MHz, DMSO) δ 10,77 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,56 (d, J = 1,4 Hz, 1H) , 7,15 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7,05-6, 87 (m, 4H) , 6.03 (s, 3H) , 1,44 - 1,37 (m, 2H) , 1,33 (s, 9H) , 1,05-1,00 (m, 2H) .
l-Metil-2-(1-metilciclopropil)-lH-indol-5-amina (20,0 mg, 0,100 mmol) e ácido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxílico (20,6 mg, 0,100 mmol) foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida (1 mL) contendo trietilamina (42,1 pL, 0,300 mmol) e um agitador magnético. Hexafluorofosfato de o- (7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N' .N'-tetrametilurónio (42 mg, 0,11 mmol) foi adicionado à mistura e a solução resultante foi permitida agitar durante 6h a 80 °C. O produto bruto foi então purificado por HPLC preparativa utilizando um gradiente de 0-99% acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir 1- (benzo[d] [l,3]dioxol-5-il)-N-(l-metil-2-(1- metilciclopropil)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 388,2, experimental 389,2 (M+l)+. Tempo de retenção de 3,05 minutos.
1,l-Dimetil-2,3-dihidro-lH-pirrolo[l,2-a]indol-7-amina (40,0 mg, 0,200 mmol) e ácido 1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxilico (41,2 mg, 0,200 mmol) foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida (1 mL) contendo trietilamina (84,2 pL, 0,600 mmol) e um agitador magnético. Hexafluorofosfato de 0-(7 -Azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio (84 mg, 0,22 mmol) foi adicionado à mistura e a solução resultante foi permitida agitar durante 5 minutos à temperatura ambiente. O produto bruto foi então purificado por HPLC preparativa utilizando um gradiente de 0-99% acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1,1-dimetil-2,3-dihidro-lH-pirrolo[l,2-a]-indol-7-il)ciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 388,2, experimental 389,2 (M+l)+. Tempo de retenção de 2,02 minutos. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO~d6) δ 8,41 (s, 1H) , 7,5 9 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,15 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7, 06 - 7, 02 (m, 2H) , 6, 96 - 6, 90 (m, 2H) , 6,03 (s, 2H) , 5,98 (d, J = 0,7 Hz, 1H) , 4,06 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 2,35 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 1,42- 1,38 (m, 2H) , 1,34 (s, 6H) , 1,05-1,01 (m,2H).
Cloreto de 1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarbonil (45 mg, 0,20 mmol) e metil 5-amino-2-tert-butil-lH-indolo-7-carboxilato (49,3 mg, 0,200 mmol) foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida (2 mL) contendo um agitador magnético e trietilamina (0,084 mL, 0,60 mmol). A solução resultante foi permitida agitar durante 10 minutos à temperatura ambiente. O produto bruto foi então purificado por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% acetonitrilo em água contendo 0,05% ácido trifluoroacético para produzir metil 5-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamido)-2-tert-butil-lH-indolo-7 carboxilato. ESI-MS m/z calc. 434,2, experimental 435,5. (M+l)+. Tempo de retenção de 2,12 minutos.
A uma solução de ácido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il) ciclopropanocarboxílico (0,075 g, 0,36 mmol) em acetonitrilo (1,5 mL) foram adicionados HBTU (0,138 g, 0,36 mmol) e EtsN (152 pL, 1,09 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos antes de uma solução de 2-(5-amino-lH-indol-2-il)-2-metilpropan-l-ol (0,074 g, 0,36 mmol) em acetonitrilo (1,94 mL) ser adicionada. Após adição, a mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em diclorometano. A camada orgânica foi lavada com HC1 IN (1x3 mL) e solução aquosa saturada de NaHCCb (1x3 mL) . A camada orgânica foi secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (acetato de etilo/hexano = 1/1) para originar 1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(l-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (0,11 g, 75%). ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,64 (s, 1H) , 8,38 (s, 1H) , 7,55 (s, 1H) , 7,15 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7, 04-6, 90 (m, 4H) , 6,06 (s, 1H) , 6,03 (s, 2H) , 4,79 (t, J = 2,7 Hz, 1H) , 3,46 (d, J = 0,0 Hz, 2H) , 1,41-1,39 (m, 2H) , 1,26 (s, 6H) , 1,05-1, 02 (m, 2H) .
2,3,4,9-Tetrahidro-lH-carbazol-6-amina (81,8 mg, 0,439 mmol) e ácido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxílico (90,4 mg, 0,439 mmol) foram dissolvidos em acetonitrilo (3 mL) contendo diisopropiletilamina (0,230 mL, 1,32 mmol) e um agitador magnético. Hexafluorofosfato de o-(7-azabenzotriazol-l-il) -N,N,N',N'-tetrametilurónio (183 mg, 0,482 mmol) foi adicionado à mistura e a solução resultante foi permitida agitar durante 16 h a 70°C. O solvente foi evaporado e o produto bruto foi então purificado com 40g de silica-gel utilizando um gradiente de 5-50% de acetato de etilo em hexanos para produzir 1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)-N-(2,3,4,9-tetrahidro-lH-carbazol-6- il) ciclopropanocarboxamida na forma de um pó de cor bege (0,115 g, 70%) após secura. ESI-MS m/z calc. 374,2, experimental 375,3 (M+l)+. Tempo de retenção de 3,43 minutos. NMR (400 MHz, DMSO~d6) δ 10,52 (s, 1H) , 8,3 9 (s, 1H) , 7,46 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,10 - 6,89 (m, 5H) , 6,03 (s, 2H) , 2, 68 - 2, 65 (m, 2H) , 2,56 - 2,54 (m, 2H) , 1,82 - 1,77 (m, 4H) , 1,41 - 1,34 (m, 2H) , 1, 04 - 0, 97 (m, 2H) .
Cloreto de 1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarbonil (43 mg, 0,19 mmol) e tert-butil 4-(5-amino-lH-indol-2-il)piperidina-l-carboxilato (60 mg, 0,19 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (1 mL) contendo um agitador magnético e trietilamina (0,056 mL, 0040 mmol). A solução resultante foi permitida agitar durante dois dias à temperatura ambiente. O produto bruto foi então evaporado até à secura, dissolvido num mínimo de N,N- dimetilformamida, e depois purificada por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% de acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir tert-butil 4-(5-(1-(benzo [d] [ 1,3] dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-2-il)piperidina-2- carboxilato. ESI-MS m/z calc. 503,2, experimental 504,5. (M+l)+. Tempo de retenção de 1,99 minutos.
tert-Butil 2- (2-etdxi-2-oxoetil)-lH-indolo-l-carboxilato (3,0 g, 9,9 mmol) foi adicionado a THF anidro (29 mL) e arrefecida à -78 °C. Uma solução de hexametildisilazano de potássio 0,5M (20 mL, 9,9 mmol) foi adicionada lentamente de tal forma que a temperatura interna permaneceu abaixo de -60 °C. A agitação foi mantida durante lha -78 °C. Iodeto de metilo (727 pL, 11,7 mmol) foi adicionado à mistura. A mistura foi agitada durante 30 minutos à temperatura ambiente. A mistura foi neutralizada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio e dividida entre água e diclorometano. A fase aquosa foi extraída com diclorometano e as fases orgânicas combinadas foram secadas com Na2SC>4 e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (etilacetato/hexano = 1/9) para originar tert-butil 2-(l-etóxi-l-oxopropan-2-il)-lH-indolo-l-carboxilato (2,8 g, 88%) .
tert-Butil 2- (l-etóxi-l-oxopropan-2-il)-lH-indolo-1- carboxilato (2,77 g, 8,74 mmol) foi dissolvido em diclorometano (25 mL) antes de TFA (9,8 mL) ser adicionado. A mistura foi agitada durante 1,5 h à temperatura ambiente. A mistura foi evaporada até à secura, colocada em diclorometano e lavada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, água, e salmoura. 0 produto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (0-20% EtOAc em hexano) para originar etil 2-(lH-indol-2-il)propanoato (0,92 g, 50%).
Etil 2-(lH-indol-2-il)propanoato (0,91 g, 4,2 mmol) foi dissolvido em ácido sulfúrico concentrado (3,9 mL) e arrefecido a -10°C (mistura sal/gelo). Uma solução de nitrato de sódio (0,36 g, 4,2 mmol) em ácido sulfúrico concentrado (7,8 mL) foi adicionado gota-a-gota durante 35 min. A agitação foi mantida por mais 30 min a -10 °C. A mistura foi vertida sob gelo e o produto foi extraído com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma pequena quantidade de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. O produto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-30% EtOAc em hexano) para originar etil 2- (5-nitro-lH-indol-2-il)propanoato (0,34 g, 31 %).
A uma solução de etil 2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanoato (0,10 g, 0,38 mmol) em etanol (4 mL) foi adicionado cloreto de estanho dihidratado (0,431 g, 1,91 mmol). A mistura foi aquecida no microondas a 120°C durante lh. A mistura foi diluída com acetato de etilo antes de água e solução aquosa saturada de NaHCCh serem adicionadas. A mistura de reacção foi filtrada através de um bloco de celite usando acetato de etilo. A camada orgânica foi separada da camada aquosa. A camada orgânica foi secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida para originar etil 2-(5-amino-lH-indol-2-il)propanoato (0,088 g, 99%).
A uma solução de ácido 1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxílico (0,079 g, 0,384 mmol) em acetonitrilo (1,5 mL) foram adicionados HBTU (0,146 g, 0,384 mmol) e EtsN (160 pL, 1,15 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi permitida agitar à temperatura ambiente durante 10 min antes de uma solução de etil 2- (5-amino-lH-indol-2-il)propanoato (0,089 g, 0,3 84 mmol) em acetonitrilo (2,16 mL) foi adicionado. Após adição, a mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em diclorometano. A camada orgânica foi lavada com HC1 IN (1x3 mL) e depois solução aquosa saturada de NaHCCb (1x3 mL) . A camada orgânica foi secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. 0 material bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (acetato de etilo/hexano = 1/1) para originar etil 2-(5-(1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-2-il)propanoato (0,081 g, 50%). XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,51 (s, 1H) , 7,67 (s, 1H) , 7,23-7,19 (m, 2H) , 7,04-7,01 (m, 3H) , 6,89 (d, J = 0,0 Hz, 1H) , 6,28 (s, 1H) , 6,06 (s, 2H) , 4,25-4,17 (m, 2H) , 3,91 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 1,72-1,70 (m, 2H), 1,61 (s, 2H), 1,29 (t, J = 7,1 HZ, 4H) , 1,13-1,11 (m, 2H) .
Etil 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanoato (4,60 g, 16,7 mmol) foi dissolvido em THF/água (2:1, 30 mL) . Li0H.H20 (1,40 g, 33,3 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada a 50 °C durante 3 h. A mistura foi acidificada pela cuidadosa adição de HC1 3N. O produto foi extraída com acetato de etilo e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secadas com sulfato de magnésio para originar 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanóico (4,15 g, 99%) .
Ácido 2-Metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)-propanóico (4,12 g, 16,6 mmol) foi dissolvido em acetonitrilo (80 mL) . EDC (3,80 g, 0,020 mmol), HOBt (2,70 g, 0,020 mmol), Et3N (6,9 mL, 0,050 mmol) e cloreto de amónio (1,34 g, 0,025 mmol) foram adicionados e a mistura foi agitada overnight à temperatura ambiente. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com sulfato de magnésio e secadas para originar 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanamida (4,3 g, 99%).
2-Metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanamida (200 mg, 0,81 mmol) foi ressuspenso em THF (5 ml) e arrefecido a 0 °C.
Uma solução do complexo borano-THF (1,0 M, 2,4 mL, 2,4 mmol) foi adicionado lentamente e a mistura foi permitida agitar overnight à temperatura ambiente. A mistura foi arrefecida a 0 °C e cuidadosamente acidificada com HC1 3N. THF retirado por evaporação, água foi adicionada e a mistura foi lavada com acetato de etilo. A camada aquosa foi alcalinizada com 50% NaOH e a mistura foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas para originar 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propan-2-amina (82 mg, 43%).
2-Metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propan-l-amina (137 mg, 0,587 mmol) foi dissolvido em THF (5 mL) e arrefecido a 0 °C. EtsN (82 pL, 0,59 mmol) e di-tert-butil dicarbonato (129 mg, 0,587 mmol) foram adicionados e a mistura foi agitada à temperatura ambiente overnight. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etilo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (10-40% acetato de etilo em hexano) para originar tert-butil 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propilcarbamato (131 mg, 67%).
A uma solução de tert-butil 2-metil-2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propilcarbamato (80 mg, 0,24 mmol) em THF (9 mL) e água (2 mL) foi adicionado formato de amónio (60 mg, 0,96 mmol) seguido por 10% Pd/C (50 mg) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. Pd/C foi removido por filtração e o solvente orgânico foi removido por evaporação. A fase aquosa remainescente foi extraída com diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de magnésio e evaporadas para originar tert-butil 2-(5-amino-lH-indol-2-il}-2-metilpropilcarbamato (58 mg, 80%).
tert-Butil 2-(5-amino-lH-indol-2-il)-2-metilpropilcarbamato (58 mg, 0,19 mmol), ácido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-6-il)ciclopropanocarboxílico (47 mg, 0,23 mmol), EDC (45 mg, 0,23 mmol), HOBt (31 mg, 0,23 mmol) e EtsN (80 pL, 0,57 mmol) foram dissolvidos em DMF (4 mL) e agitados overnight à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com água e extraída com etilacetato. As fases orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de magnésio e evaporadas até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (10-30% acetato de etilo em hexano) para originar tert-butil 2-(5-(1-(benzo [d] [1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamido)-1H -indol-2-il)-2-
metilpropilcarbamato (88 mg, 94%) . 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,32 (s, 1H) , 7,62 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 7,18 -7,16 (m, 2H) , 7,02 - 6, 94 (m, 3H) , 6,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 6,19 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 6,02 (s, 2H) , 4,54 (m, 1H) , 3,33 (d, J = 6,2 Hz, 2H) , 1,68 (dd, J = 3,7,6,8 Hz, 2H) , 1,36 (s, 9H) , 1,35 (s, 6H) , 1,09 (dd, J = 3,7,6,8 Hz, 2H) .
A uma solução agitada de (S)-(2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil 4-metilbenzenosulfonato (1,58 g, 5,50 mmol) em DMF anidra (10 mL) sob atmosfera de azoto, foi adicionado 2-tert-butil-5-nitro-lH-indolo (1,00 g, 4.58 mmol) seguido por Cs2C03 (2, 99 g, 9,16 mol) . A mistura foi agitada e aquecida a 80°C sob atmosfera de azoto. Após 20 horas, 50% de conversão foi observada por LCMS. A mistura de reacção foi re-tratada com CS2CO3 (2,99 g, 9,16 mol) e (S) — (2,2 — dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil 4-metilbenzenosulfonato
(1,58 g, 5,50 mmol) e aquecida a 80°C durante 24 horas. A mistura de reacção foi arrefecida à temperatura ambiente. Os sólidos foram filtrados e lavados com acetato de etilo e hexano (1:1) . As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com água (2 x 10 mL) e salmoura (2 x 10 mL) . A camada orgânica foi secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (diclorometano /hexano = 1,5/1) para originar (R)-2-tert-butil-l-((2,2- dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-5-nitro-lH-indolo (1,0 g, 66%). XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,48 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 8,08 (dd, J = 2,2, 9,1 Hz, 1H) , 7,49 (d, J = 9,1 Hz, 1H) , 6,00 (s, 1H) , 4,52-4,45 (m, 3H) , 4,12 (dd, J = 6,0, 8,6 Hz, 1H) , 3,78 (dd, J = 6,0,8,6 Hz, 1H) , 1,53 (s, 3H) , 1,51 (s,9H), 1,33 (s, 3H) .
A uma solução agitada de (R)-2-tert-butil-l-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-5-nitro-lH-indolo (1,0 g, 3,0 mmol) em etanol (20 mL) e água (5 mL) foi adicionado formato de amónio (0,76 g, 12 mmol) seguido por lenta adição de 10 % paládio sob carbon (0,4 g) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reacção foi filtrada através de um bloco de celite e lavada com acetato de etilo. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o produto bruto foi dissolvido em acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água (2x5 mL) e salmoura (2x5 mL) . A camada orgânica foi secada com
Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida para originar (R)-2-tert-butil-l-((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil-lH-indol-5-amina (0,89 g, 98%). 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,04 (d, J = 4 Hz, 1H) , 6,70 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 6,48 (dd, J = 2,2,8,6 Hz, 1H) , 6,05 (s, 1H, ) , 4,38-4,1 (m, 2H) , 4,21 (dd, J = 7,5, 16,5 Hz, 1H) , 3,87 (dd, J = 6,0, 8,6 Hz, 1H) , 3,66 (dd, J = 6,0,8,6 Hz, 1H) , 3,33 (br s, 2H), 1AO (s, 3H), 1,34 (s, 9H), 1,25 (s, 3H).
A ácido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxílico (0,73 g. 3,0 mmol) foi adicionado cloreto de tionilo (660 pL, 9,0 mmol) e DMF (20 pL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 30 minutos antes do excesso de cloreto de tionilo ser evaporado sob pressão reduzida. Ao cloreto ácido resultante, diclorometano (6,0 mL) e EtsN (2,1 mL, 15 mmol) foram adicionados. Uma solução de (R)-2-tert-butil-1-((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil-lH-indol-5-amina (3,0 mmol) em diclorometano (3,0 mL) foi adicionada à solução de cloreto ácido arrefecida. Após adição, a mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. A mistura de reacção foi filtrada e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (acetato de etilo/hexano = 3/7) para originar N-((R)-2-tert-butil-l-((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (1,33 g, 84%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,48 (d, J = 2 Hz, 1H) , 7,31 (dd, J = 2,8 Hz, 1H) , 7,27 (dd, J = 2,8 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8 Hz, 1H) , 7,14 (d, J = 8 Hz, 1H) , 7,02 (dd, J = 2,8 Hz, 1H) , 6,92 (br s, 1H) , 6,22 (s, 1H) , 4,38-4,05 (m, 3H) , 3,91 (dd, J = 5, 8 Hz, 1H) , 3,75 (dd, J = 5,8 Hz, 1H) , 2,33 (q, J = 8 Hz, 2H) , 1,42 (s, 3H) , 1,37 (s, 9H) , 1,22 (s, 3H) , 1,10 (q, J = 8
Hz, 2H).
A uma solução agitada de N-(2-tert-butil-l-((2,2-dimetil-l ,3-dioxolan-4-il)metil)-lH-indol-5-il) -1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (1,28 g, 2,43 mmol) em metanol (34 mL) e água (3,7 mL) foi adicionado ácido para-toluenosulfónico hidratado (1,87 g, 9,83 mmol) . A mistura de reacção foi agitada e aquecida a 80°C durante 25 minutos. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto foi dissolvido em acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCCg (2 x 10 mL) e salmoura (2 x 10 mL) . A camada orgânica foi secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (acetato de etilo/hexano = 13/7) para originar N-((R)-2-tert-butil-l- ((2,3-dihidróxipropil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (0,96 g. 81 %) . ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,50 (d, J = 2
Hz, 1H) , 7,31 (dd, J = 2,8 Hz, 1H) , 7,27 (dd, J = 2,8 Hz, 1H) , 7,23 (d, J = 8 Hz, 1H) , 7,14 (d, J = 8 Hz, 1H) , 7,02 (br s, 1H, ) , 6,96 (dd, J = 2,8 Hz, 1H) , 6,23 (s, 1H) , 4,35 (dd, J = 8, 15 Hz, 1H), 4,26 (dd, J = 4, 15 Hz, IH,), 4,02- 3,95 (m, 1H), 3,60 (dd, J = 4, 11 Hz, 1H), 3,50 (dd, J = 5, II Hz, 1H) , 1,75 (q, J = 8 Hz, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,14 (q, J = 8 Hz, 3H).
A uma solução de N-(2-tert-butil-l-(2,3-dihidróxipropil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il) ciclopropano-carboxamida (97 mg, 0,20 mmol) em DMSO (1 mL) foi adicionado periodinano de Dess-Martin (130 mg, 0,30 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. O sólido foi removido por filtração e lavado com EtOAc. O filtrado foi dividido entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc duas vezes e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secadas com MgS04. Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado por TLC preparativa para produzir ácido 3- (2-tert-butil-5-(1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-l-il)-2- oxopropanóico que foi usado sem purificação adicional.
A uma solução de ácido 3-(2-tert-butil-5-(1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-l-il)-2-oxopropanóico (50 mg, 0,10 mmol) em MeOH (1 mL) foi adicionado NaBH4 (19 mg, 0,50 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min. A mistura resultante foi dividida entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc duas vezes e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secadas com MgS04 anidro. Após a remoção do solvente, o resíduo foi colocado em DMSO e purificado por LC/MS preparativa para originar ácido 3- (2-tertbutil-5-(1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)- lH-indol-l-il)-2-hidróxipropanóico. ΧΗ NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,36 (s), 7,27-7,23 (m, 2H) , 7,15- 7,11 (m, 2H) , 6,94 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,23 (s, 1H) , 4,71 (s, 3H) , 4,59 (q, J = 10,3 Hz, 1H), 4,40-4,33 (m, 2H) , 1,70 (d, J = 1,9 Hz, 2H), 1. IS (q, J = 4,0 Hz, 2H) . 13C NMR (400 MHz, CDC13) δ 173,6, 173,1, 150,7, 144,1, 143,6, 136,2, 135,4, 134,3, 131,7, 129, 2, 129, 0, 127, 6, 126, 7, 116, 6, 114,2, 112,4, 11004, 110, 1, 99, 7, 70,3, 48,5, 32, 6, 30, 9, 30,7, 16, 8. MS (ESI) m/e (M+H+) 501,2.
A uma solução de ácido 1-(3,4- dihidróxifenil)ciclopropanocarboxilico (190 mg, 1,0 mmol) em MeOH (3 mL) foi adicionado ácido 4-metilbenzenosulfónico (19 mg, 0,10 mmol). A mistura foi aquecida a 80°C overnight. A mistura de reacção foi concentrada em vácuo e dividida entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc duas vezes e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHC03 saturado e salmoura e secadas com MgS04. Após a remoção do solvente, o resíduo foi secado em vácuo para produzir metil 1-(3,4- dihidróxifenil)ciclopropanocarboxilato (190 mg, 91 %) que foi usado sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, DMSO-dô) δ 6,76-6,71 (m, 2H) , 6,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 3,56 (s, 3H) , 1,50 (q, J = 3,6 Hz, 2H) , 1,08 (q, J = 3,6 Hz, 2H) .
A uma solução de metil 1-(3,4- dihidróxifenil)ciclopropanocarboxilato (21 mg, 0,10 mmol) e CD2Br2 (35 mg, 0,20 mmol) em DMF (0,5 mL) foi adicionado
CS2CO3 (19 mg, 0,10 mmol) . A mistura foi aquecida a 120°C durante 30 min. A mistura de reacção foi dividida entre
EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc duas vezes e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com em NaOH e salmoura antes de serem secadas com MgS04. Após a remoção do solvente, o resíduo foi secado em vácuo para produzir metil 1-(2,2-dideutériobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxilato (22 mg) que foi usado sem purificação adicional. ΧΗ NMR (400 MHz, CDCI3) δ 6,76-6,71
(m, 2H) , 6,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 3,56 (s, 3H) , 1,50 (q, J = 3,6 Hz, 2H) , 1,08 (q, J = 3,6 Hz, 2H) .
A uma solução de Metil 1-(2,2-
dideutériobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxilato (22 mg, 0,10 mmol) em THF (0,5 mL) foi adicionado NaOH (IN, 0,25 mL, 0,25 mmol). A mistura foi aquecida a 80°C durante 2h. A mistura de reacção foi dividida entre EtOAc e NaOH IN. A camada aquosa foi extraída com EtOAc duas vezes, neutralizada com HC1 IN e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secadas com MgS04. Após a remoção do solvente, o resíduo foi secado em vácuo para produzir ácido 1-(2,2- dideutériobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxílico (21 mg) que foi usado sem purificação adicional.
A uma solução de ácido 1-(2,2- dideutériobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxílico (21 mg, 0,10 mmol), (R)-2-tert-butil-l-((2,2-dimetil-l,3- dioxolan-4-il)metil)-lH-indol-5-amina (30 mg, 0,10 mmol), HATU (42 mg, 0,11 mol) em DMF (1 mL) foi adicionado trietilamina (0,030 mL, 0,22 mmol). A mistura foi aquecida à temperatura ambiente durante 5 min. A mistura de reacção foi dividida entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc duas vezes e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaOH IN, HC1 IN, e salmoura antes de serem secadas com MgS04. Após a remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (20-40% acetato de etilo/hexano) para produzir (R)-N-(2-tert-butil-l- ((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-dideutériobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (24 mg, 49% a partir de metil 1-(3,4-dihidróxifenil)ciclopropanocarboxilato). MS (ESI) m/e (M+H+) 493,5.
A uma solução de (R)-N-(2-tert-butil-l-((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-dideutériobenzo [d] [1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (24 mg, 0,050 mmol) , em metanol (0,5 mL) e água (0,05 mL) foi adicionado ácido 4-metilbenzenosulfónico (2,0 mg, 0,010 mmol) . A mistura foi aquecida a 80°C durante 30 min. A mistura de reacção foi dividida entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc duas vezes e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHC03 saturado e salmoura antes de serem secadas com MgS04. Após a remoção do solvente, o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para produzir (R) -N- (2-tert-butil-l- ( (2,2- dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-lH-indol-5-il) -1-(2,2- dideutériobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (12 mg, S2%) . XH NMR (400 MHz, C0C13) δ 7,44 (d, J = 2,0
Hz, 1H) , 7,14 (dd, J = 22,8, 14,0 Hz, 2H) , 6, 95-6, 89 (m, 2H) , 6,78 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 6,14(s, 1H) , 4,28 (dd, J = 15,1, 8,3 Hz, 1H) , 4,19 (dd, J = 15,1, 4,5 Hz, 1H) , 4,05 (q, J = 7,1 Hz, 1H) , 3,55 (dd, J = 11,3, 4,0 Hz, 1H) , 3,45 (dd, J = 11,3, 5,4 Hz, 1H) , 1,60 (q, J = 3,5 Hz, 2H) , 1,35 (s, 9H) , 1,02 (q, J = 3,5 Hz, 2H) . 13C NMR (400 MHz, COCl3) δ 171,4, 149, 3, 147, 1, 146, 5, 134,8, 132,3, 129, 2, 126, 5, 123, 6, 114,3, 111,4, 110,4, 109, 0, 107, 8, 98,5, 70,4, 63, 1, 46, 6, 31, 6, 30,0, 29, 8, 15,3. MS (ESI) m/e (M+H+) 453,5.
Será adicionalmente notado que o análogo mono-deuterado deste composto pode ser sintetizado por substituição do reagente CHDBR2 por CD2BR2 e seguindo os procedimentos descritos no Exemplo 74. Adicionalmente, análogos deuterados dos compostos como aqui descritos tal como os da fórmula I podem ser produzidos usando métodos sintéticos conhecidos assim como a metodologia aqui descrita. Os análogos deuterados incluem tanto análogos mono- e di-deuterados dos compostos da presente invenção. Os análogos mono- e di-deuterados dos compostos exibem atividade mensurável quando testados usando os ensaios aqui descritos.
A ácido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxílico (0,068 g, 0,33 mmol) foi adicionado cloreto de tionilo (72 pL, 0,99 mmol) e DMF (20 pL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 30 minutos antes do excesso de cloreto de tionilo ser evaporado sob pressão reduzida. Ao ácido clorídrico resultante, diclorometano (0,5 mL) e EtsN (230 pL, 1,7 mmol) foram adicionados. Uma solução de 4-(5-amino-lH-indol-2-il)-4-metilpentanenitrilo (0,33 mmol) em diclorometano (0,5 mL) foi adicionado à solução de cloreto ácido e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. A mistura resultante foi diluída com diclorometano e lavada com HC1 IN (2x2 mL) , solução aquosa saturada de NaHCCL (2x2 mL) e salmoura (2x2 mL). A camada orgânica foi secada com Na2S04 anidro e evaporada sob pressão reduzida para originar 1-(benzo[d][l,3]dioxol-5-il)-N-(2-(4-ciano-2-metilbutan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida.
Uma mistura de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(4-ciano-2-metilbutan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (0,060 g, 0,15 mmol) e KOH (0,081 g, 1,5 mmol) em EtOH/água 50% (2 mL) foi aquecida no microondas a 100°C durante 1 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto foi dissolvido em DMSO (1 mL), filtrado, e purificado por HPLC preparativa de fase reversa para originar ácido 4-(5-(1-(benzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-2-il)-4-metilpentanóico. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ 11,98 (s, 1H) , 10,79 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,15 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7,03-6, 90 (m, 4H) , 6,05 (s, 1H) , 6,02 (s, 2H) , 1, 97-1, 87 (m, 4H) , 1,41-1,38 (m, 2H) , 1,30 (s, 6H), 1, 04-1, 02 (m, 2H) .
2-(5-Nitro-lH-indol-2-il)propan-l-ol A uma solução arrefecida de LiAlH4 (1,0 M em THF, 1,2 mL, 1,2 mmol) em THF (5,3mL) a 0 °C foi adicionada uma solução de etil 2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propanoato (0,20 g, 0,76 mmol) em THF (3,66 mL) gota-a-gota. Após adição, a mistura foi permitida aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura foi arrefecida a 0 °C. Água (2 mL) foi lentamente adicionada seguida por cuidadosa adição de 15% NaOH (2 mL) e água (4 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 0,5 h e foi então filtrada através de um bloco de celite usando acetato de etilo. A camada orgânica foi separada da camada aquosa, secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (acetato de etilo/hexano = 1/1) para originar 2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propan-l-ol (0,14 g, 81 %).
A uma solução de 2-(5-nitro-lH-indol-2-il)propan-l-ol (0,13 g, 0,60 mmol) em etanol (5 mL) foi adicionado cloreto de estanho dihidratado (0,67 g, 3,0 mmol). A mistura foi aquecida no microondas a 120°C durante 1 h. A mistura foi diluída com acetato de etilo antes de água e solução aquosa saturada de NaHCCL serem adicionados. A mistura de reacção foi filtrada através de um bloco de celite usando acetato de etilo. A camada orgânica foi separada da camada aquosa, secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida para originar 2-(5-amino-lH-indol-2-il)propan-l-ol (0,093 g, 82%).
A uma solução de ácido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxílico (0,10 g, 0,49 mmol) em acetonitrilo (2,0 mL) foram adicionados HBTU (0,185 g, 0,49 mmol) e EtsN (205 pL, 1,47 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi permitida agitar à temperatura ambiente durante 10 minutos antes de uma lama de 2-(5-amino-lH-indol-2-il)propan-l-ol (0,093 g, 0,49 mmol) em acetonitrilo (2,7 mL) ser adicionada. Após adição, a mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 5,5 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em diclorometano. A camada orgânica foi lavada com HC1 ln (1x3 mL) e solução aquosa saturada de NaHCCb (1x3 mL) . A camada orgânica foi secada com Na2S04, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (acetato de etilo/hexano = 13/7) para originar 1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(l-hidróxipropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (0,095 g, 51 %) . ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,74 (s, 1H) , 8,38 (s, 1H) , 7,55 (s, 1H) , 7,14 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7,02-6, 90 (m, 4H) , 6,06 (s, 1H) , , 6,02 (s, 2H) , 4,76 (t, J = 5,3 Hz, 1H) , 3,68-3,63 (m, 1H), 3,50-3,44 (m, 1H), 2,99-2,90 (tJ:?, 1H), 1,41-1,38 (m, 2H) , 1,26 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,05-1,02 (m, 2H) .
2-tert-Butil-N-metil-lH-indol-5-amina (20,2 mg, 0,100 mmol) e ácido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxílico (20,6 mg, 0,100 mmol) foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida (1 mL) contendo trietilamina (42,1 pL, 0,300 mmol) e um agitador magnético. Hexafluorofosfato de o- (7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio (42 mg, 0,11 mmol) foi adicionado à mistura e a solução resultante foi permitida agitar durante 16 h a 80 °C. O produto bruto foi então purificado por HPLC preparativa utilizando um gradiente de 0-99% de acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir 1-(benzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-lH-indol-5-il)-N-metilciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 390,2, experimental 391,3 (M+l)+. Tempo de retenção de 3,41 minutos.
Hidrido de sódio (0,028 g, 0,70 mmol, 60% por peso numa dispersão em óleo) foi lentamente adicionado a uma solução agitada de N-(2-tert-butil-lH-indol-5-il)-1- (benzo[d][1,3]dioxol-6-il)ciclopropanocarboxamida (0,250 g, 0, 664 mmol) numa mistura de 4,5 mL de tetrahidrofurano (THF) anidro e 0,5 mL de N,N-dimetilformamida (DMF) anidra. A suspensão resultante foi permitida agitar durante 2 minutos e depois iodometano (0,062 mL, 1,0 mmol) foi adicionado à mistura de reacção. Duas alíquotas adicionais de hidrido de sódio e iodometano foram requeridas para consumir toda a matéria-prima inicial que foi monitorizada por LC/MS. O produto da reacção bruto foi evaporado até à secura, redissolvido num mínimo de DMF e purificado por cromatografia LC/MS preparativa para produzir o produto puro (0,0343 g, 13%) ESI-MS m/z calc. 404,2, experimental 405,3 (M+l/. Tempo de retenção de 3,65 minutos.
Etil 5-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indolo-2-carboxilato (1,18 g, 3,0 mmol) foi adicionado a uma solução de LiBH4 (132 mg, 6,0 mmol) em THF (10 mL) e água (0,1 mL) . A mistura foi permitida agitar durante 16h a 25°C antes de ser neutralizada com água (10 mL) e lentamente acidificada por adição de HC1 IN. A mistura foi extraída com três porções de 50 mL de acetato de etilo. Os extractos orgânicos foram secados com Na2S04 e evaporados para produzir 1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(hidróximetil)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (770 mg, 73%). Uma pequena quantidade foi adicionalmente purificada por HPLC de fase reversa. ESI-MS m/z calc. 350,4, experimental 351,3 (M+l)+;
Tempo de retenção de 2,59 minutos.
Etil 5-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indolo-2-carboxilato (392 mg, 1,0 mmol) e LiOH (126 mg, 3 mmol) foram dissolvidos em H20 (5 mL) e 1,4-dioxano (3 mL). A mistura foi aquecida num banho de óleo a 100°C durante 24 horas antes de ser arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi acidificada com HC1 IN e foi extraída com três porções de 20 mL de diclorometano. Os extractos orgânicos foram secados com Na2S04 e evaporados para produzir ácido 5 — (1 — (benzo[d][1,3]-dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-1H-indolo-2-carboxílico (302 mg, 83%) . Uma pequena quantidade foi posteriormente purificada por HPLC de fase reversa. ESI-MS m/z calc. 364,1, experimental 365,1 (M+l)+. Tempo de retenção de 2,70 minutos.
Ácido 5-(1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropano- carboxamido)-1 H-indolo-2-carboxílico (36 mg, 0,10 mmol) e 2-metilpropan-2-amina (8,8 mg, 0,12 mmol) foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida (1,0 mL) contendo trietilamina (28 pL, 0,20 mmol). Hexafluorofosfato de o-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio (46 mg, 0,12 mmol) foi adicionado à mistura e a solução resultante foi permitida agitar durante 3 horas. A mistura foi filtrada e purificada por HPLC de fase reversa para produzir 5-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-N-tert-jbutii-lH-indolo-2-carboxamida. ESI-MS m/z calc. 419,2, experimental 420,3 (M+l)+. Tempo de retenção 3,12 minutos.
Uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (50 mg, 0,13 mmol) foi dissolvida em AcOH (2 mL) e aquecida até 45 °C. À mistura foi adicionada uma solução de NaNCh (9 mg) em H2O (0,03 mL). A mistura foi permitida agitar durante 30 min a 45 °C antes do precipitado ser recolhido e lavado com Et2<D. Este material foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. Ao produto bruto, 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N- (2-tert-butil-3-nitroso-lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxamida, foi adicionado AcOH (2 mL) e pó de zinco (5 mg). A mistura foi permitida agitar durante lh à temperatura ambiente. EtOAc e H2O foram adicionados à mistura. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCCL, secada com MgSCL, e concentrada em vácuo. O resíduo foi colocado em DMF (1 mL) e foi purificado usando HPLC preparativa. LCMS: m/z 3 92,3; Tempo de retenção de 2,18 min.
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (120 mg, 0,31 mmol) em DMF-THF anidro (3,3 mL, 1:9), foi adicionado NaH (60% em óleo mineral, 49 mg, 1,2 mmol) à temperatura ambiente. Depois de 30 min sob atmosfera de N2, a suspensão foi arrefecida a -15°C e uma solução de cloreto de metanosulf onil (1,1 eq.) em DMF (0,5 mL) foi adicionado gota-a-gota. A mistura de reacção foi agitada durante 30 min a -15°C e depois durante 6 h à temperatura ambiente. Água (0,5 mL) foi adicionada a 0 °c, o solvente foi removido, e o resíduo foi diluído com MeOH, filtrado e purificado por HPLC preparativa para originar 1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-3-(metilsulfonil)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida. ΧΗ
NMR (400 MHz, DMSO) δ 11,6 (s, 1H), 8,7 (s, 1H) , 7,94 (d, J =1,7 Hz, 1H) , 7,38 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 7,33 (dd, J1 = 1,9 Hz, J= 8,7 Hz, 1H) , 7,03 (d, J= 1,7 Hz, 1H) , 6,95 (dd, J1 = 1,7 Hz, J2 =8,0 Hz, 1H) , 6,90 (d, J=8,0 Hz, 1H) , 6,02 (s, 2H), 3,07 (s, 3H), 1,56-1,40 (m, 9H), 1,41 (dd, Jl =4,0 Hz, J2 =6,7 Hz, 2H) , 1,03 (dd, JI =4,0 Hz,J2 =6,7 Hz, 2H) . MS (ESI) m/e (M+H+) 455,5.
N-bromosuccinimida recentemente recristalizada (0,278 g, 1,56 mmol) foi adicionada em porções a uma solução de 1-(benzo[d] [l,3]dioxol-5-il)-N-(lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxamida (0,500 g, 1,56 mmol) em N,N-dimetilformamida (2 mL) ao longo de 2 minutos. A mistura de reacção foi protegida da luz e goi agitada mecanicamente durante 5 minutos. A solução verde resultante foi vertida sob 40 mL de água. O precipitado cinzento que se formou foi filtrado e lavado com água para produzir 1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(3-bromo-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (0,564 g, 91 %) . ESI-MS m/z calc. 398,0, experimental 399,3 (M+l)+. Tempo de retenção de 3,38 minutos. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) 11,37 (s, 1H) , 8,71 (s, 1H) , 7,67 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,50 (d, J = 2,6
Hz, 1H) , 7,29 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,22 (dd, J = 2,0,8,8
Hz, 1H) , 7,02 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 6, 96 - 6, 88 (m, 2H) , 6,03 (s, 2H) , 1,43 - 1,40 (m, 2H) , 1, 09 - 1, 04 (m, 2H) .
Ácido borónico fenil (24,6 mg, 0,204 mmol) foi adicionado a uma solução de 1-(benzo[d][1,3]-dioxol-5-il)-N-(3-bromo-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (39,9 mg, 0,100 mmol) em etanol (1 mL) contendo FibreCat 1001 (6 mg) e solução aquosa de carbonato de potássio 1M (0,260 mL). A mistura de reacção foi então aquecida a 130 °C num reactor micro-ondas durante 20 minutos. O produto bruto foi então purificado por HPLC preparativa utilizando um gradiente de 0-99% acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(3-fenil-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 396,2, experimental 397,3 (M+l)+. Tempo de retenção de 3,52 minutos. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,27 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 8,66 (s, 1H) , 8,08 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 7,65-7,61 (m, 3H) , 7,46-7,40 (m, 2H), 7,31 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 7,25-7,17 (m, 2H) , 7,03 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 6, 98-6, 87 (m, 2H) , 6,02 (s, 2H), 1,43-1,39 (m, 2H), 1,06-1,02 (m, 2H).
POCI3 (12 g, 80 mmol) foi adicionado gota-a-gota a DMF (40 mL) mantido a -20 °C. Após a adição ter sido completada, a mistura de reacção foi permitida aquecer até a 0 °C e foi agitada durante 1 h. 1-(Benzo[d][ 1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (3,0 g, 8,0 mmol) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 25 °C. Após agitação durante 30 minutos a mistura de reacção foi vertida sob gelo e agitada durante 2 h. A mistura foi então aquecida a 100°C durante 30 min. A mistura foi arrefecida e o sólido precipitado foi recolhido e lavado com água. O sólido foi então dissolvido em 200 mL de diclorometano e lavado com 200 mL de uma solução aquosa saturada de NaHCCh. As camadas orgânicas foram secadas com Na2S04 e evaporadas para produzir 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil- 3-formil-lH-indol-5-il)ciclopropano-carboxamida (2,0 g, 61 %) . ESI-MS m/z calc. 404,5, experimental 405,5 (M+l)+; Tempo de retenção de 3,30 minutos. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,48 (s, 1H) , 10,39 (s, 1H) , 8,72 (s, 1H) , 8,21 (s, 1H) , 7 ,3S-7,31 (m, 2H) , 7, 04-7,03 (m, 1H) , 6, 97-6, 90 (m, 2H) , 6,03 (s, 2H) , 1,53 (s, 9H) , 1,42-1,39 (m, 2H) , 1, OS-1, 03 (m, 2H).
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-3-formil-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (100 mg, 0,2S mmol) em diclorometano (5 mL) foi adicionado hidrocloreto de hidrdxilamina (21 mg, 0,30 mmol) . Após agitação durante 48 h, a mistura foi evaporada até à secura e purificada por cromatografia em coluna (0-100% acetato de etilo/hexanos) para produzir (Z)-1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-3-((hidróxi-imino)metil)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (81 mg, 77%). ESI-MS m/z calc. 419,5, experimental 420,5 (M+l)+; Tempo de retenção 3,42 minutos. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,86 (s, 0,5H), 10,55 (s, 0,5H), 8,56-8,50 (m, 2H) , 8,02 (m, 1H) , 7,24-7,22 (m, 1H) , 7,12-7,10 (m, 1H) , 7,03 (m, 1H) , 6, 96-6, 90 (m, 2H) , 6,03 (s, 2H) , 1,43 (s, 9H) , 1,40-1,38 (m, 2H) , 1,04-1,01 (m,2H).
(Z)-1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-3-((hidróxi-imino)-metil)-lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxamida (39 mg, 0,090 mmol) foi dissolvido em anidrido acético (1 mL) e aquecido sob refluxo durante 3 h. A mistura foi arrefecida num banho de gelo e o precipitado foi recolhido e lavado com água. O sólido foi posteriormente secado sob vácuo elevado para produzir 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-3-ciano-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 401,5, experimental 402,5 (M+l)+; Tempo de retenção de 3,70 minutos. NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,72 (s, 1H) , 8,79 (s, 1H) , 7,79 (s, 1H) , 7,32 (m, 2H) , 7,03-7,02 (m, 1H) , 6, 95-6, 89 (m, 2H) , 6,03 (s,2H), 1,47 (s, 9H) , 1,43-1,41 (m, 2H) , 1, 06-1, 04 (m, 2H) .
Uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (75 mg, 0,20 mmol) e iodometano (125 /J.L, 2,0 mmol) em N,N- dimetilf ormamida (1 mL) foi aquecida a 120°C num tubo selado durante 24 h. A reacção foi filtrada e purificada por HPLC de fase reversa. ESI-MS m/z calc. 390,5, experimental 391,3 (M+l)+; Tempo de retenção de 2,04 minutos. NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,30 (s, 1H) , 8,39 (s, 1H) , 7,51 (m, 1H) , 7,13-7,11 (m, 1H) , 7,03-6, 90 (m, 4H) , 6,03 (s, 2H) , 2,25 (s, 3H) , 1,40-1,38 (m, 1H) , 1,03-1,01 (m, 2H) .
Aproximadamente 100 pL de dióxido de etileno foi condensado num tubo de reacção a -78°C. Uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (200 mg, 0,50 mmol) e tricloreto de índio (20 mg, 0,10 mmol) em diclorometano (2 mL) foi adicionado e a mistura de reacção foi irradiada num micro-ondas durante 20 min a 100°C. Os componentes voláteis foram removidos e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (0-100 % acetato de etilo/hexanos) para originar 1-(benzo[d][l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-3-(2-hidróxietil)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (5 mg, 3%). ESI-MS m/z calc. 420,5, experimental 421,3 (M+l)+;
Tempo de retenção de 1,67 minutos. 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ 8,78 (s, 1H) , 7,40 (m, 1H) , 7,33 (s, 1H) , 7,08 (m, 1H) , 6, 95 - 6, 87 (m, 3H) , 6,79 (m, 1H) , 5,91 (s, 2H) , 3,51 (dd, J = 5,9, 7,8 Hz, 2H) , 2, 92 - 2,88 (m, 2H) , 2,64 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 1,50 (m, 2H), 1,41 (s,9H), 1,06 (m, 2H).
A uma solução de etil 2-(5-(1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-2-il)acetato (0,010 g, 0,025 mmol) em THF (0,3 mL) foram adicionados LÍOH.H2O (0,002 g, 0,05 mmol) e água (0,15 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Diclorometano (3 mL) foi adicionado à mistura de reacção e a camada orgânica foi lavada com HC1 IN (2 x 1,5 mL) e água (2 x 1,5 mL) . A camada orgânica foi secada com Na2S04 e filtrada. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para originar ácido 2-(5-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5- il) ciclopropanocarboxamido)-lH-indol- 2-il)-acético. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,53 (s, 1H) , 10,90 (s, 1H) , 8,42 (s, 1H) , 7,57 (s, 1H), 7,17(d,J=8,6Hz, 1H), 7,0S- 6, 90 (m, 4H) , 6.17 (s, 1H) , 6, 02 (s, 2H) , 3,69 (s, 2H) , 1,41-1,39 (m, 2H), 1, 04-1, 02 (m, 2H) .
Metil 5-(1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamido)-2-tert-butil-lR-indolo-l-carboxilato (30 mg, 0,069 mmol) foi dissolvido numa mistura de 1,4-dioxano (1,5 mL) e água (2 mL) contendo um agitador magnético e hidróxido de litio (30 mg, 0,71 mmol) . A solução resultante foi agitada a 70°C durante 45 minutos. O produto bruto foi então acidificado com ácido clorídrico 2,6 M e extraído três vezes com um volume equivalente de diclorometano. Os extractos de diclorometano foram combinados, secados com sulfato de sódio, filtrados, e evaporados até à secura. O resíduo foi dissolvido nummínimo de N,N-dimetilformamida e depois purificado por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir ácido 5-(1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamido)-2-tert-butil-lH-indolo-7-carboxílico. ESI-MS m/z calc. 434,2, experimental 435,5. Tempo de retenção de 1,85 minutos. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,05 (s, 1H) , 9,96 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 7,89 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 7,74 (d, J= 2,0 Hz, 1H) , 7,02 (d, J = 1,6 Ηζ,.ΙΗ), 6, 96-6, 88 (m, 2H) , 6,22 (d, J = 2,3 Hz, 1H) , 6,02 (s, 2H) , 1,43 - 1,40 (m, 2H) , 1,37 (s, 9H) , 1, 06-1, 02 (m, 2H) .
1-(Benzo[d][l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butilindolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (50 mg, 0,13 mmol) foi dissolvido em dicloroetano (0,20 mL) e 2,2-dimetil-l,3-dioxan-5-ona (0,20 mL). Ácido trifluoroacético foi adicionado (0,039 mL) e a solução resultante foi permitida agitar durante 20 minutos. Triacetóxiborohidrido de sódio foi adicionado (55 mg, 0,26 mmol) e a mistura de reacção foi agitada durante 30 minutos. A mistura de reacção bruta foi então evaporada até à secura, dissolvida em N,N-dimetilformamida e purificada por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05%.
1-(Benzo[d][l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-l-(1,3-dihidróxipropan-2-il)indolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (40,3 mg, 0,0711 mmol na forma do sal ácido trifluoracético) foi dissolvido em tolueno (1 mL). À solução resultante foi adicionado 2,3,5,6- tetraclorociclohexa-2,5-dieno-l,4-diona (35 mg, 0,14 mmol). A suspensão resultante foi aquecida a 100°C num banho de óleo durante 10 minutos. O produto bruto foi então evaporado até à secura, dissolvido em 1 mL de N,N-dimetilformamida e purificado por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% de acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir 1-(benzo[d] [l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-l-(1,3-dihidróxipropan-2-il)-lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 450,2, experimental 451,5 (M+l)+. Tempo de retenção de 1,59 minutos.
1-(Benzo[d][l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-7-ciano-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (375 mg, 0,934 mmol) foi dissolvido em 35 mL de acetato de etilo. A solução foi recirculada através de um reactor de hidrogenação de fluxo continuo contendo 10% paládio sob carbonp a 100°C sob pressão de 100 bar de hidrogénio durante 8 h. O produto bruto foi então evaporado até à secura e purificado em 12 g of silica-gel utilizando um gradiente de 0-100% de acetato de etilo (contendo trietilamina 0,5%) em hexanos para produzir N-(7-(aminometil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il)-1-(benzo[d][1,3]-dioxol-5-il)-ciclopropanocarboxamida (121 mg, 32%). ESI-MS m/z calc. 405,2, experimental 406,5 (M+l)+. Tempo de retenção de 1,48 minutos.
5-(1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido )-2-tert-but.il-lH-indolo-7-carboxami da 1-(Benzo[d][l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-7-ciano-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (45 mg, 0,11 mmol) foi ressuspenso numa mistura de metanol (1,8 mL) , peróxido de hidrogénio aquoso 30% (0,14 mL, 4,4 mmol) e hidróxido de sódio aquoso 10% (0,150 mL) . A suspensão resultante foi agitada durante 72 h à temperatura ambiente.
O peróxido de hidrogénio foi então neutralizado com sulfito de sódio. A mistura de reacção foi diluída com 0,5 mL de N, N-dimetilformamida, filtrada, e purificada por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir 5-(1-(benzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropano-carboxamido)-2-tert-butil-lH-indolo-l-carhoxamida. ESI-MS m/z calc. 419,2, experimental 420,3 (M+l)+. Tempo de retenção de 1,74 minutos.
N-(7-(Aminometil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il) -1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il) ciclopropanocarboxamida (20 mg, 0,049 mmol) foi dissolvido em DMF (0,5 mL) contendo trietilamina (20,6 pL, 0,147 mmol) e um agitador magnético. Cloreto de metanosulfonil (4,2 pL, 0,054 mmol) foi então adicionado à mistura de reacção. A mistura de reacção foi permitida agitar durante 12 h à temperatura ambiente. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% de acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir 1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-7-(metilsulfonamidometil)-lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 483,2, experimental 484,3 (M+l)+. Tempo de retenção de 1,84 minutos.
N-(7-(Aminometil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il) -1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (20 mg, 0,049 mmol) foi dissolvido em DMF (0,5 mL) contendo trietilamina (20,6 pL, 0,147 mmol) e um agitador magnético. Cloreto de acetilo (4,2 pL, 0,054 mmol) foi então adicionado à mistura de reacção. A mistura de reacção foi permitida agitar durante 16 h à temperatura ambiente. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% de acetonitrilo em água contendo ácido trif luoroacético 0,05% para produzir Λ7-(7-(acetamidometil) -2-tert-butil-lH-indol-5-il)-1-(benzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 447,2, experimental 448,3 (M+l)+. Tempo de retenção de 1,76 minutos .
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (120 mg, 0,31 mmol) em DMF-THF anidro (3,3 mL, 1:9) foi adicionado NaH (60% em óleo mineral, 49 mg, 1,2 mmol) à temperatura ambiente. Após 30 min sob atmosfera de N2, a suspensão foi arrefecida a -15°C e uma solução de cloreto de acetilo (1,1 eq.) em DMF (0,5 mL) foi adicionado gota-a-gota. A mistura de reacção foi agitada durante 30 min a -15°C e depois durante 6 h à temperatura ambiente. Água (0,5 mL) foi adicionada a 0 °C, solvente foi removido, e o resíduo
foi diluído com MeOH, filtrado e purificado por HPLC preparativa para originar N-(l-acetil-2-tert-butil-lH-indol-5-il)-1-(benzo[d][l,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamida. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,9 (s, 1H) , 7,74 (d, J=2fl Hz, 1H) , 7,54 (d, J=9,0 Hz, 1H) , 7,28 (dd, J1 =2,1 Hz, J2 =9,0 Hz, 1H) , 7,01 (d, J=lr5 Hz, 1H) , 6,93 (dd, J1 =1,7 Hz, J2 =8,0 Hz, 1H) , 6,89 (d, J=8,0
Hz, 1H) , 6,54 (bs, 1H) , 6,02 (s, 2H) , 2,80 (s, 3H) , 1,42-1,40 (m, 11H), 1,06-1, OS (m, 2H) . MS (BSI) m/e (M+H+) 419,3.
A uma solução de tert-butil 2-(2-tert-butil-5-(1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)- 6-fluoro-lH-indol-l-il)etilcarbamato (620 mg, 1,08 mmol) em CH2CI2 (8 mL) foi adicionado TFA (2 mL) . A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h antes de ser neutralizada com NaHC03 sólido. A solução foi dividida entre H2O e CH2CI2. A camada orgânica foi secada com MgS04, filtrada e concentrada para produzir o produto na forma de um sólido de cor creme (365 mg, 71 %) . ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,38 (s, 1H) , 7,87 (hr s, 3H, NH/), 7,52 (s, 1H) , 7,45-7,38 (m, 3H) , 7,32 (dd, J = 8,3, 1,5 Hz, 1H) , 6,21 (s, 1H) , 4,46 (m, 2H) , 3,02 (m, 2H) , 1,46 (m, 2H) , 1,41 (s,9H), 1,14 (m, 2H). HPLC tempo de retençã 1,66 min, 10-99 % CH3CN, análise de 3 min; ESI-MS 474,4 m/z (M+H+) .
A uma solução de N-(1-(2-aminoetil)-2-tert-butil-6-fluoro-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il) ciclopropano-carboxamida (47 mg, 0,10 mmol) e Et3N (28 pL, 0,20 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionado cloreto de acetilo (7,1 pL, 0,10 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h antes de ser filtrada e purificada por HPLC de fase reversa (10 - 99 % CH3CN/H20) para produzir N-(1-(2-acetamidoetil)-2-tert-butil-6-fluoro-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida. ΧΗ NMR (400 Hz, DMSO-dg) δ 8,35 (s, 1H) , 8,15 (t, J = 5,9 Hz, 1H) , 7,53 (s, 1H) , 7,43-7,31 (m, 4H) , 6,17 (s, 1H) , 4,22 (m, 2H) , 3,30 (m, 2H) , 1,85 (s, 3H) , 1,47 (m, 2H) , 1,41 (s, 9H) , 1,13 (m, 2H) . HPLC tempo de retenção 2,06 min, 10-99 % CH3CN, análise de 3 min; ESI-MS 516, 4 m/z (M+H+) .
1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-IH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (320 mg, 0,84 mmol) foi dissolvido numa mistura composta por DMF anidra (0,5 mL) e THF anidro (5 mL) sob atmosfera de N2. NaH (60% em óleo mineral, 120 mg, 3,0 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente. Após 30 min de agitação, a mistura de reacção foi arrefecida a -15°C antes de uma solução de epiclorohidrina (79 pL, 1,0 mmol) em DMF anidra (1 mL) ser adicionada gota-a-gota. A mistura de reacção foi agitada durante 15 min a -15°C, e depois durante 8 h à temperatura ambiente. MeOH (1 mL) foi adicionado e a mistura foi aquecida durante 10 min a 105°C num forno microondas. A mistura foi arrefecida, filtrada and purificada por HPLC preparativa para originar 1-(benzo[d] [l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-I-(2-hidróxi-3-metóxi-propil)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 0 8,44 (s, 1H) , 7,59 (d, J= 1,9 Hz, 1H) , 7,31 (d, J = 8,9 Hz, 1H) , 7,03 (dd, J = 8,7, 1,9 Hz, 2H) , 6,95 (dd, J= 8,0, 1,7 Hz, 1H) , 6,90 (d, J= 8,0 Hz, 1H) , 6,16 (s, 1H) , 6,03 (s, 2H) , 4,33 (dd, J = 15,0,4,0 Hz, 1H) , 4,19 (dd, J = 15,0, 8,1 Hz, 1H), 4,02 (ddd, J= 8,7, 4,8
Hz, 1H) , 3,41-3,32 (m, 2H) , 3,30 (s, 3H) , 1,41 (s, 9H) , 1,41-1,38 (m, 2H) , 1,03 (dd, J= 6,7, 4,0 Hz, ~H). MS (ESI) mie (M+H+) 465,0.
1-(Benzo[d][ 1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxamida (320 mg, 0,84 mmol) foi dissolvido numa mistura composta por DMF anidra (0,5 mL) e THF anidro (5 mL) sob atmosfera de N2. NaH (60% em óleo mineral, 120 mg, 3,0 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente. Após 30 min de agitação, a mistura de reacção foi arrefecida a -15°C antes de uma solução de epiclorohidrina (79 pL, 1,0 mmol) emDMF anidra (1 mL) ser adicionado gota-a-gota. A mistura de reacção foi agitada durante 15 min a -15°C, depois durante 8 h à temperatura ambiente. MeNH2 (2,0 M em MeOH, 1,0 mL) foi adicionado e a mistura foi aquecida durante 10 min a 105°C num forno microondas. A mistura foi arrefecida, filtrada e purificada por HPLC preparativa para originar 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-l-(2-hidróxi-3-(metilamino)propil)-lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxamida. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-dô) δ 8,50 (s, 1H) , 7, 60-7,59 (m, 1H) , 7,35 (dd, J = 14,3,8,9 Hz, 1H) , 7,10 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 1H) , 6,94 (dd, J = 8,0, 1,6 Hz, 1H) , 6,91 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,20 (d, J = 2,3 Hz, 1H) , 6,03 (s, 2H) , 2,82 (d, J = 4,7 Hz, 1H) , 2,72 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 2,55 (dd, J = 5,2,5,2 Hz, 1H), 2,50 (s, 3H), 1,43 (s, 9H) , 1,39 (dd, J = 6,4,3,7 Hz, 2H) , 1,04 (dd, J = 6,5, 3,9 Hz, 2H) . MS (ESI) m/e (M+H+) 464, 0.
A uma solução agitada de (R)-N-(2-tert-butil-l-(2,3-dihidróxipropil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluoro-benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (3,0 g, 6,1 mmol) em diclorometano (20 mL) foi adicionado trietilamina (2 mL) e para-toluenosulfonilcloreto (1,3 g, 7,0 mmol). Após 18 horas, a mistura de reacção foi dividida entre 10 mL de água e 10 mL de acetato de etilo. A camada orgânica foi secada com sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna com sílica-gel (0-60% acetato de etilo/hexano) fornecendo (R)-3-(2-tert-butil-5-(1-(2,2- difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-1 H-indol-l-il)-2-hidróxipropil-4-metilbenzenosulfonato (3,21 g,8 6%) . LC/MS (M+l)+ = 641,2. XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,77 (d, 2H, J= 16 Hz), 7:55 (d, IH, J= 2 Hz), 7,35 (d, 2H, J = 16 Hz), 7,31 (m, 3H) , 6,96 (s, 1H) , 6,94 (dd, 1H, J = 2,8 Hz), 6,22 (s, 1H) , 4,33 (m, 1H) , 4,31 (dd, IH, J= 6, 15 Hz), 4,28 (dd, IH, J= 11, 15 Hz), 4,18 (m, IH) , 3,40 (dd, tH, J= 3,6 Hz), 3,36 (dd, IH, J= 3,6 Hz), 2,46 (s, 3H) , 2040 (br s, IH), 1,74 (m, 2H), 1AO (s, 9H), 1,11 (m,2 H).
A uma solução agitada de (R)-3-(2-tert-butil-5-(1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-l-il)-2-hidrdxipropil-4-metilbenzenosulfonato (3,2 g, 5,0 mmol) em DMF (6 mL) foi adicionado azida de sódio (2,0 g, 30 mmol). A reacção foi aquecida a 80°C durante 2 h. A mistura foi dividida entre 20 mL de acetato de etilo e 20 mL de água. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi evaporada. O resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna (0-85% de acetato de etilo/hexano) para originar (R)-N-(l-(3~azido-2-hidróxipropil)-2-tert-butil-lR-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)-ciclopropanocarboxamida (2,48 g) . LC/MS (M+l + ) = 512,5. XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,55 (d, 1H, J= 2 Hz), 7,31 (m, 3H) , 6,96 (s, 1H) , 6,94 (dd, 1H, J= 2,8 Hz), 6,22 (s, 1H) , 4,33 (m, 1H),4,31 (dd, IHrJ=6r 15 Hz), 4,28 (dd, IH, J= 11, 15 Hz), 4,18 (m, 1H), 3,40 (dd, IH, J = 3, 6 Hz), 3,36 (dd, 1H, J = 3, 6 Hz), 2,40 (hr s, 1H), 1,74 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,11 (m, 2H) .
A uma solução agitada de (R)-N-(1-(3-azido-2-hidróxipropil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (2,4 g, 4,0 mmol) em MeOH (25 mL ) foi adicionado Pd/C 5% (2,4 g) num balão preenchido com gás de hidrogénio. Após 18 h, a mistura de reacção foi filtrada através de um bloco de celite e lavada com 300 mL de acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com HC1 IN e evaporada para originar (S)-N-(1-(3-amino-2-hidróxipropil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluoro-benzo[d][l,3]-dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (1,37 g) . MS (M+l + ) = 486, 5.
A uma solução agitada de (R)-N-(1-(3-amino-2-hidróxipropil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (0,10 g, 0,20 mmol) em metanol (1 mL) foram adicionadas 2 gotas de trietilamina e cloreto de metilcloroformilo (0,020 mL, 0,25 mmol) . Após 30 min, a mistura de reacção foi filtrada e purificada usando HPLC de fase reversa fornecendo (S)-metil 3-(2-tert-butil-5-(1-(2,2- difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-l-il)-2-hidróxipropilcarbamato. O tempo de retenção numa análise de 3 minutos foi de 1,40 min. LC/MS (M+l)+ = 544,3. ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,52 (d, 1H, J= 2Hz) , 7,30 (dd, 1H, J= 2,8 Hz), 7,28 (m, 1H) , 7,22 (d, 1H, J= 8 Hz), 7,14 (d, 1H, J= 8 Hz), 7,04 (hr s, 1H), 6,97 (dd, 1H, J= 2,8 Hz), 6,24 (s, 1H) , 5,19 (1H, br s), 4,31 (dd, 1H,J= 6,15 Hz), 4,28 (dd, 1H,J= 11,15 Hz), 4,18 (m, 1H) , 3,70 (s, 3H), 3,40 (dd, 1H, J = 3, 6 Hz), 3,36 (dd, 1H, J= 3, 6 Hz), 3,26 (m, 1H) , 1,74 (m, 2H) , 1,40 (s, 9H) , 1,11 (m, 2H).
1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butilindolin-5-il)ciclopropanocarboxamida A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (851 mg, 2,26 mmol) em ácido acético (60 mL) foi adicionado NaBfhCN (309 mg, 4,91 mmol) a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada durante 5 min à temperatura ambiente após o que nenhum reageagente inicial foi detecteado por LCMS. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-40% acetato de etilo/hexanos) para originar 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butilindolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (760 mg, 89%).
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butilindolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (350 mg, 0,93 mmol, 1 eq) em metanol anidro (6,5 mL) e AcOH (65 pL) foi adicionado ácido 4-oxobutanóico (15% em água, 710 mg, 1,0 mmol) à temperatura ambiente. Após 20 min de agitação, NaBfhCN (130 mg, 2,0 mmol) foi adicionado numa porção única e a mistura de reacção foi agitada durante outras 4 h à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi neutralizada através da adição de AcOH (0,5 mL) a 0 °C e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-75% acetato de etilo/hexanos) para originar ácido 4-(5-(1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-2-tert-butilindolin-l-il)butanóico (130 mg, 30%).
Ácido 4-(5-(1-(Benzo[d] [1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamido)-2-tert-butilindolin-l-il)butanóico (130 mg, 0,28 mmol) foi colocado numa mistura de acetonitriio-H20-TFA. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo obtido foi dissolvido em CDCI3. Após uma breve exposição à luz do sol (5-10 min), a solução tornou-se violeta. A mistura foi agitada aberta para a atmosfera à temperatura ambiente até completo desaparecimento da matéria-prima inicial (8 h) . O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa para originar ácido 4-(5-(1-(benzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-2-tert-butil-lH-indol-l-il)butanóico. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,52 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 7,18 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 7,16 (s, 1H) , 7,03 (dd, J = 9,4, 1,9 Hz, 1H) , 7, 00-6, 98 (m, 2H) : 6,85 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,16 (s, 1H) , 6,02 (s, 2H) , 4,29- 4,24 (m, 2H) , 2,48 (dd, J = 6,9,6,9 Hz, 2H) , 2,12-2,04 (m, 2H) , 1,69 (dd, J = 6,8, 3,7 Hz, 2H) , 1,43 (s, 9H) , 1,09 (dd, J = 6,8,3,7 Hz, 2H) . MS (ESI) m/e (M+H+) 463, 0.
A uma solução de ácido 4-(5-(1-(benzo[d][1,3 ]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-2-tert-butil-lH-indol-l-il)butandico (10 mg) em DMF anidra (0,25 mL) foram sucessivamente adicionados Et3N (9,5 mL, 0,069 mmol) e HBTU (8,2 mg, 0,022 mmol). Após agitação durante 10 min a 60°C, etanolamina (1,3 pL, 0,022 mmol) foi adicionada, e a mistura foi agitada durante outras 4 h a 60 °C. 1- (Benzo[d] [l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-l - (4 - (2-hidróxietil-amino)-4-oxobutil)-lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxamida (5,8 mg, 64%) foi obtida após purificação por HPLC preparativa. MS (ESI) m/e (M+H+) 506, 0 .
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butilindolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (62 mg, 0,16 mmol) em DMF anidra (0,11 mL) e THF (1 mL) foi adicionado NaH (60% em óleo mineral, 21 mg, 0,51 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. Após 30 min de agitação, a mistura de reacção foi arrefecida a 0 °C e 2-cloro-N,N-dimetilacetamida (11 mL, 0,14 mmol,) foi adicionado. A mistura de reacção foi agitada durante 5 min a 0 °C e depois durante 10 h à temperatura ambiente. A mistura foi purificada por HPLC preparativa e o sólido resultante foi dissolvido em DMF (0,6 mL) na presença de Pd-C (10 mg) . A mistura foi agitada aberta para a atmosfera overnight à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi filtrada e purificada por HPLC preparativa fornecendo 1-(benzo[d] [l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-l-(2-(dimetilamino)-2-oxoetil)-lH-indol-5- il)ciclopropanocarboxamida. MS (ESI) m/e (M+H+) 462,0.
A uma solução de N-(2-tert-butil-l-(2-cianoetil)indolin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamida (71 mg, 0,17 mmol) em diclorometano anidro (1 mL) foi adicionado cloroacetaldeído (53 pL, 0,41 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. Após 20 min de agitação, NaBH(OAc)3 (90 mg, 0,42 mmol) foi adicionado em duas porções. A mistura de reacção foi agitada overnight à temperatura ambiente. O produto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (2-15% acetato de etilo/hexanos) fornecendo N-(2-tert-butil-l-(2-cloroetil)indolin-5-il)-1-(2,2- difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (51 mg, 63%).
N- (2-tert-butil-l-(2-cloroetil)indolin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (51 mg), NaCN (16 mg, 0,32 mmol) e Kl (catalisador) em EtOH (0,6 mL) e água (0,3 mL) foram combinados e aquecidos a 110°C durante 30 min num micro-ondas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (2-15% acetato de etilo/hexanos) fornecendo N-(2-tert-butil-l-(2-cianoetil)indolin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (24 mg, 48%).
N- (2-tert-butil-l-(2-cianoetil)indolin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropano-carboxamida (24 mg, 0,050 mmol) foi colocado KOH aquoso 50% (0,5 mL) e 1,4-dioxano (1 mL). A mistura foi aquecida a 125 °C durante 2 h. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa. O resíduo foi dissolvido em CDCI2 (1 mL) e então brevemente exposto à luz do sol. A solução violeta que se formou foi agitada até completo desaparecimento da matéria-prima inicial (1 h). 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa fornecendo ácido 3-(2-tert-butil-b-{1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-l-il) propanóico. MS (ESI) m/e (M+H+) 485,0.
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-6-fluoroindolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (340 mg, 0,86 mmol) em MeOH anidro (5,7 mL) contendo 1 % de ácido acético, foi adicionado glioxal 40% em água (0,60 mL, 5,2 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. Após 20 min de agitação, NaBH3CN (120 mg, 1,9 mmol) foi adicionado numa porção e a mistura de reacção foi agitada overnight à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (10-40% acetato de etilo/hexanos) fornecendo um óleo de cor amarela pálida que foi tratado com 50/50 CH3CN-H20 contendo TFA 0,05% e CDC13. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (20-35% acetato de etilo/hexanos) para originar 1-(benzo[d][l,3]dioxol-5-il)-N-(2-tertbutil-6-fluoro-1-(2-hidróxietil)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida. 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,02 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 7,30 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 6,93 (dd, J = 1,6, 7,9 Hz, 1H) , 6,90 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 6,90 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 6,78 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,08 (s, 1H) , 5,92 (s, 2H) , 4,21 (dd, J = 6,9, 6,9 Hz, 2H) , 3,68 (m, 2H) , 2,28 (s, 1H) , 1,60 (dd, J = 3,7, 6,7 Hz, 2H) , 1,35 - 1,32 (m, 9H) , 1,04 (dd, J = 3,7, 6,8 Hz, 2H) . MS (ESI) m/e (M+H+) 439, 0.
A uma suspensão de PCC (606 mg, 2,82 mmol) em diclorometano anidro (8 mL) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2 foi adicionado uma solução de 3-benzilóxi-l-propanol (310 mg, 1,88 mmol) em diclorometano anidro. A mistura de reacção foi agitada overnight à temperatura ambiente, filtrada através de um bloco de celite, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (1-10% acetato de etilo/hexanos) para originar 3-(benzilóxi)propanal (243 mg, 79%).
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-6-fluoroindolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (160 mg, 0,50 mmol) em diclorometano anidro (3,4 mL) foi adicionado 3-(benzilóxi)propanal (160 mg, 0,98 mmol) à temperatura ambiente. Após 10 min de agitação, NaBH(OAc)3 (140 mg, 0,65 mmol) foi adicionado numa porção única e a mistura de reacção foi agitada durante 4 h à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi colocado numa mistura de 50/50 CH3CN-H20 contendo TFA 0,05%. A mistura foi concentrada até à secura e o resíduo foi dissolvido em CDCI2 (5 mL) e brevemente exposto à luz do sol. A solução violeta foi agitada aberta para a atmosfera à temperatura ambiente durante 2 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi tratado com Pd-C (10 mg) em MeOH (2 mL) sob pressão de 1 atm de H2 durante 2 h. O catalisador foi filtrado através de um bloco de celite e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por TLC preparativa (30% acetato de etilo/hexanos) para fornecer 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N- (2-tert-butil-6-fluoro-1-(3-hidróxipropil)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (18 mg, 8% a partir de 1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-6-fluoroindolin-5-il)ciclopropano-carboxamida). ΧΗ NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,11 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,31 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 6,94 (dd, J = 7,9, 1,7 Hz, 1H) , 6,91 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 6,85 (d, J = 11,7 Hz, 1H) , 6,79 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,10 (s, 1H) , 5,94 (s, 2H) , 4,25-4,21 (m, 2H) , 3,70 (dd, J = S,7, S, 7 Hz, 2H) , 1, 93-1, 86 (m, 2H) , 1,61 (dd, J = 6,8,3,7 Hz, 2H) , 1,35 (s, 9H) , 1,04 (dd, J = 6,8,3,7 Hz, 2H) . MS (ESI) m/e (M+H+) 453,0.
A uma solução de 1-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butilindolin-5-il)ciclopropano-carboxamida (73 mg, 0,19 mmol) em diclorometano anidro (1,2 mL) foi adicionado cloroacetaldeído (60 pL, 0,24 mmol) à temperatura ambiente. Após 10 min de agitação, NaBH(OAc)3 (52 mg, 0,24 mmol) foi adicionado numa porção única e a mistura de reacção foi agitada durante outros 30 min à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por HPLC preparativa para originar o indolino, que foi oxidado no correspondente indolo quando colocado em CDCI3. O indolo resultante foi tratado com NaN3 (58 mg, 0,89 mmol) e Nal (catalisador) em DMF anidra (0,8 mL) durante 2 h a 85°C. A mistura de reacção foi purificada por HPLC preparativa fornecendo N-(1-(2-azidoetil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il)-l-(benzo[d][l,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamida (15 mg, 18% a partir de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tertbutilindolin-5-il)ciclopropanocarboxamida).
Uma solução de N-(1-(2-azidoetil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il)-1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (13 mg, 0,029 mmol) em MeOH-AcOH (0,2 mL, 99:1) na presença de Pd-C (2 mg) foi agitada à temperatura ambiente sob pressão de 1 atm de H2 durante 2 h, filtrada através de um bloco de celite, e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi tratado com AcCl (0,05 mL) e EtsN (0,05 mL) em THF anidro (0,2 mL) a 0 °C durante 30 min e depois 1 h à temperatura ambiente. A mistura foi purificada por HPLC preparativa fornecendo N-(1-(2-acetamidoetil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il) -1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida. MS (ESI) m/e (M+H+) 462,0.
A uma solução de N-(2-tert-butil-l-(2,3-dihidróxipropil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]-dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (172 mg, 0,35 mmol) em diclorometano anidro (1,4 mL) a 0 °C na presença de EtsN (56 pL, 0040 mmol) foi adicionado TsCl (71 mg, 0,37 mmol). A mistura de reacção foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente antes de ser arrefecida a 0 °c e outra porção de TsCl (71 mg, 0,37 mmol) foi adicionada. Após 1 h de agitação à temperatura ambiente, a mistura foi purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (10-30% acetato de etilo/hexanos) fornecendo 3-(2-tert-butil-5- (1-(2,2- difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-l-il)-2- hidróxipropil-4-metilbenzeno-sulfonato (146 mg, 64%).
N-(2-tert-Butil-l-(3-ciano-2-hidróxipropil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)- ciclopropanocarboxamida (145 mg, 0,226 mmol) foi tratado com NaCN na forma de pó (34 mg, 0,69 mmol) em DMF anidra (1,5 mL) a 85°C durante 2 h. A mistura de reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente antes de ser diluida com diclorometano (10 mL) e solução aquosa saturada de NaHCCb (10 mL) . A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 10 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, secadas com sulfato de sódio, filtradas e depois concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (25-55% acetato de etilo/hexanos) fornecendo N-(2-tert-butil-l-(3-ciano-2-hidróxipropil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5- il) ciclopropanocarboxamida (89 mg, 79%). 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,43 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 7,20-7,16 (m, 2H) , 7,08 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,04 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,94 (s, 1H) , 6,88 (dd, J = 8,7, 2,0 Hz, 1H) , 6,16 (s, 1H) , 4,32- 4,19 (m, 3H), 2,83 (s, 1H), 2,40 (dd, J = 5,2, 5,2 Hz, 2H), 1,62 (dd, J = 6,6, 3,6 Hz, 2H) , 1,35 (s, 9H) , 1,04 (dd, J = 6,9,3,9 Hz, 2H) . MS (ESI) m/e (M+Hj 496, 0.
A uma solução de N- (2-tert-butil-l-(3-ciano-2-hidróxipropil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2- difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (27 mg, 0,054 mmol) em DMF anidra (1,2 mL) foram sucessivamente adicionados NH4CI (35 mg, 0,65 mmol) e NaN3 (43 mg, 0,65 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi agitada durante 4 h a 110 °C no microondas, pnto em que 50% da matéria-prima inicial foi convertida no produto desejado. A mistura de reacção foi purificada por HPLC preparativa para fornecer N- (2-tert-butil-l-(2-hidróxi-3-(2H-tetrazol-5-il)propil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida. MS (ESI) m/e (M+H+) 539, 0.
Uma solução de N-(2-tert-butil-l-(3-ciano-2- hidróxipropil)-lH-indol-5-il)-1-(2,2- difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida (14 mg, 0,028 mmol) em metanol (0,8 mL) e NaOH 4M (0,8 mL) foi agitada a 60 °C durante 4 h. A mistura de reacção foi neutralizada com HC1 4M e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para fornecer ácido 4- (2-tert-butil-5-(1-(2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-l-il) -3-hidróxibutanóico. MS (ESI) m/e (M+H+) 515,0.
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-l- (2-cloroetil)indolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (66 mg, 0,15 mmol) em etanol (0,8 mL) e água (0,4 mL) foram adicionados NaCN (22 mg, 0,45 mmol) e Kl (catalisador) à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi agitada durante 30 min a 110°C no microondas antes de ser purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-15% acetato de etilo/hexanos) para fornecer 1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-l-(2-ciano-etil)indolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (50 mg, 77%).
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-l- (2-cianoetil)indolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (50 mg, 0,12 mmol) em DMF anidra (2,6 mL) foi adicionado NH4C1 (230 mg, 4,3 mmol) e NaN3 (280 mg, 4,3 mmol) . A mistura de reacção foi agitada durante 30 min a 110°C no microondas, filtrada, e purificada por HPLC preparativa. O resíduo sólido foi dissolvido in CDCI3 (3 mL) e brevemente exposto à luz do sol (2 a 4 min) , o que iniciou a mudança de cor (violeta) . Após 2 h de agitação aberta para a atmosfera à temperatura ambiente, o solvente foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para originar N- (1- (2-(2H-tetrazol-5-il)etil)-2-tert-butil-lH-indol-5-il)-1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida. MS (ESI) m/e (M+H+) 473, 0.
A uma solução de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-6-fluoroindolin-5-il)ciclopropano-carboxamida (150 mg, 0,38 mmol) em diclorometano anidro (2,3 mL) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2 foi adicionado tetrahidropiran-3-carbaldeído (54 mg, 0,47 mmol). Após 20 min de agitação, NaBH(OAc)3 (110 mg, 0,51 mmol) foi adicionado nua porção única à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi agitada durante 6 h à temperatura ambiente antes de ser purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (5-20% acetato de etilo/hexanos) para fornecer 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-6-fluoro-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)indolin-5-il)ciclopropanocarboxamida (95 mg, 50%). CDCI3 foi adicionado ao indolino e a solução foi permitida agitar overnight à temperatura ambiente. A solução foi concentrada para originar 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-tert-butil-6-fluoro-l-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida. MS (ESI) m/e (M+H+) 493,0.
Metil 5-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropano- carboxamido)-lH-indolo-2-carboxilato (100 mg, 0,255 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (2 mL) sob uma atmosfera de árgon. A solução foi arrefecida a 0 °C num banho de água/gelo antes de lítio metal (0,85 mL, 1,6 M em dietil éter) ser adicionado por seringa. A mistura foi permitida aquecer até à temperatura ambiente. O produto bruto foi então dividido entre uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio (5 mL) e diclorometano (5 mL) . As camadas orgânicas foram combinadas, secadas com sulfato de sódio, filtradas, evaporadas até à secura, e purificadas com 12 g de sílica-gel utilizando um gradiente de 20-80% acetato de etilo em hexanos para produzir 1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(2-hidróxipropan-2-il)-2H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (35 mg, 36%) na forma de um sólido branco. ESI-MS m/z calc. 378,2, experimental 379, 1 (M+l) + . Tempo de retenção de 2,18 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ 10,78 (s, 1H) , 8,39 (s, 1H) , 7,57 (d, J = 1,7 Hz, 1H) , 7,17 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7,03 - 6, 90 (m, 4H) , 6,12 (d, J= 1,5 Hz, 1H) , 6,03 (s, 2H) , 5,18 (s, 1H) , 1,50 (s, 6H) , 1,41 - 1,38 (m, 2H) , 1,05-0, 97 (m, 2H) .
Ácido trifluoroacético (0,75 mL) foi adicionado a uma solução de tert-butil 2-(5-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamido)-lH-indol-2-il)-2-metilpropilcarbamato (77 mg, 0,16 mmol) em diclorometano (3 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. A mistura foi evaporada, dissolvida em diclorometano, lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, secada com sulfato de magnésio e evaporada até à secura para originar N-(2-(l-amino-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)-l-(benzo[d][l,3]dioxol-5- il) ciclopropanocarboxamida (53 mg, 86%) . ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 9,58 (8, 1H) , 7,60 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 7,18 -7,15 (m, 2H) , 7,02 - 6, 94 (m, 3H) , 6,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 6,14 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 6,02 (8, 2H) , 2,84 (s, 2H) , 1,68 (dd, J = 3,6, 6,7 Hz, 2H) , 1,32 (s, 6H) , 1,08 (dd, J = 3,7, 6,8 Hz, 2H) .
A uma solução de N-(2-(l-amino-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)-1-(benzo[d][l,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamida (20 mg, 0,051 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionado carbonato de potássio (35 mg, 0,26 mmol) e iodometano (7,0 pL, 0,11 mmol) . A mistura foi agitada durante 2 h. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de magnésio, evaporadas, co-evaporadas com tolueno (3x) e purificadas por cromatografia em coluna com sílica-gel (0-30% EtOAc em hexano) para originar 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(1-(Dimetilamino)-2-metilpropan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (7 mg, 33%). ΧΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 9,74 (s, 1H) , 7,58 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 7,20 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7,15 (s, 1H) , 7,01 - 6,95 (m, 3H) , 6,85 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,10 (d, J = 0,9 Hz, 1H) , 6,02 (s, 2H) , 2,43 (s, 2H) , 2,24 (s, 6H) , 1,68 (dd, J = 3~7, 6,7 Hz, 2H), 1,33 (s, 6H), 1,08 (dd, J = 3,7, 6,8Hz, 2H).
A uma solução de N-(2-(l-amino-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)-l-(benzo[d][l,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamida (21 mg, 0,054 mmol) em diclorometano (1 mL) foi adicionado piridina (14 pL, 0,16 mmol) seguido por anidrido acético (6,0 pL, 0,059 mmol). A mistura foi agitada durante 2 h. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com diclorometano, evaporada, coevaporada com tolueno (3x) e purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (60-100% acetato de etilo em hexano) para originar N- (2- (1-acetamido-2-metilpropan-2-il)-l H-indol-5-il)-1-(benzo[d][1,3]-dioxol-5-il) ciclopropanocarboxamida (17 mg, 73%). ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO) δ 10,79 (s, 1H) , 8,39 (s, 1H) , 7,66 (t, J = 6,2 Hz, 1H) , 7,56 (d, J = 1,7 Hz, 1H) , 7,18 - 7,14 (m, 1H) , 7,02-6,89 (m, 4H) , 6,08 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 6,03 (s, 2H) , 3,31 (d, J = 6,2 Hz, 2H) , 1,80 (s, 3H) , 1,41 - 1,38 (m, 2H) , 1,26 (s, 6H) , 1,04 - 1,01 (m, 2H) .
1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(4-ciano-2-metilbutan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (83 mg, 0,20 mmol) foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (1 mL) contendo cloreto de amónio (128 mg, 2,41 mmol), azida de sódio (156 mg, 2,40 mmol), e um agitador magnético. A mistura de reacção foi aquecida a 110°C durante 40 minutos num reacto micro-ondas. O produto bruto foi filtrado e depois purificado por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir 1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(2-metil-4-(lH-tetrazol-5-il)butan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 458,2, experimental 459, 2 (M+l) + . Tempo de retenção de 1,53 minutos. ΧΗ NMR (400 MHz, CD3CN) 9,23 (s, 1H) , 7,51 -7,48 (m, 2H) , 7,19 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7,06 -7,03 (m, 2H) , 6, 95 - 6, 89 (m, 2H) , 6,17 (dd, J = 0,7,2,2 Hz, 1H) , 6,02 (s, 2H) , 2,61 - 2,57 (m, 2H) , 2,07 - 2, 03 (m, 2H) , 1,55-1,51 (m,2H), 1,39 (s, 6H) , 1,12-1,09 (m, 2H) .
tert-Butil 2-(5-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclo- propanocarboxamido)-1H-indol-2-il)piperidina-l-carboxilato (55 mg, 0,11 mmol) foi dissolvido em diclorometano (2,5 mL) contendo ácido trifluoroacético (1 mL). A mistura de reacção foi agitada durante 6 h à temperatura ambiente. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa usando um gradiente de 0-99% acetonitrilo em água contendo ácido trifluoroacético 0,05% para produzir 1- (benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(piperidin-2-il)-lH-indol- 5-il)ciclopropanocarboxamida. ESI-MS m/z calc. 403,2, experimental 404,4 (M+l)+. Tempo de retenção de 0,95 minutos .
A uma solução de 4-tert-butil-fenilamina (447 g, 3,00 mol) em DMF (500 mL) foi adicionado gota-a-gota NBS (531 g, 3,00 mol) em DMF (500 mL) à temperatura ambiente. Após finalização, a mistura de reacção foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, salmoura, secada com Na2S04 e concentrada. O produto bruto foi directamente usado no passo seguinte sem purificação adicional.
2-Bromo-4-tert-butil-fenilamina (160 g, 0,71 mol) foi adicionado gota-a-gota a H2SO4 (410 mL) à temperatura ambiente para produzir uma solução límpida. Esta solução límpida foi então arrefecida de -5 a -10 °C. Uma solução de KNO3 (83 g, 0,82 mol) em H2SO4 (410 mL) foi adicionada gota-a-gota enquanto que a temperatura foi mantida entre -5 e -10 °C. Após finalização, a mistura de reacção foi vertida sob gelo/água e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com Na2C03 5% e salmoura, secadas com Na2S04 e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (acetato de etilo/éter de petróleo 1:10) para originar 2-bromo-4-tert-butil-5-nitro-fenilamina na forma de um sólido amarelo (150 g, 78%).
A uma mistura de 2-bromo-4-tert-butil-5-nitro-fenilamina (27,3 g, 100 mmol) em tolueno (200 mL) e água (100 mL) foi adicionado Et3N (27,9 mL, 200 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (2,11 g, 3,00 mmol), Cul (950 mg, 0,500 mmol) e trimetilsilil acetileno (21,2 mL, 150 mmol) sob uma atmosfera de azoto. A mistura de reacção foi aquecida a 70 °C num frasco de pressão selado durante 2,5 h, arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada através de um pequeno bloco de celite. O bolo filtrado foi lavado com EtOAc. O filtrado combinado foi lavado com solução de NH4OH 5% e água, secado com Na2S04 e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (0 - 10 % acetato de etilo/éter de petróleo) para fornecer 4-tert-butil-5-nitro-2-trimetilsilaniletinil-fenilamina na forma de um líquido viscoso de cor castanha (25 g, 81 %).
A uma solução de 4-tert-butil-5-nitro-2-trimetilsilaniletinil-fenilamina (25 g, 86 mmol) em DMF (100 mL) foi adicionado Cul (8,2 g, 43 mmol) sob uma atmosfera de azoto. A mistura foi aquecida a 135°C num frasco de pressão selado overnight, arrefecida à temperatura ambiente e filtrada através de um pequeno bloco de celite. O bolo filtrado foi lavado com EtOAc. O filtrado combinado foi lavado com água, secado com Na2S04 e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (10 - 20 % acetato de etilo/hexano) para fornecer 5-tert-butil-6-nitro-qH-indolo na forma de um sólido amarelo (13 g, 69 %).
Raney-Nickel (3 g) foi adicionado a 5-tert-butil-6-nitro-lH-indolo (15 g, 67 mmol) em metanol (100 mL) . A mistura foi agitada sob hidrogénio (1 atm) a 30°C durante 3 h. O catalisador foi removido por filtração. O filtrado foi secado com Na2S04 e concentrado. O óleo viscoso de cor castanha escura foi purificado por cromatografia em coluna (10 - 20 % acetato de etilo/éter de petróleo) para originar 5-tert-butil-lH-indol-6-ilamina na forma de um sólido de cor cinzenta (11 g, 87 %). ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,3 (br s, 1H) , 7,2 (s, 1H) , 6,9 (m, 1H) , 6,6 (s, 1H) , 6,1 (m, 1H), 4,4 (br s, 2H), 1,3 (s, 9H).
Uma pessoa habilitada no estado da técnica química pode usar os exemplos e os esquemas conjuntamente com as metodologias de síntese conhecidas para sintetizar compostos da presente invenção, incluindo os compostos da Tabela 3, abaixo.
VII. ENSAIOS PARA DETECTAR E MEDIR AS PROPRIEDADES DE CORRECÇÃO DE AF508-CFTR DOS COMPOSTOS Métodos óticos para determinação do potencial de membrana para determinar as propriedades de modelação AF508-CFTR dos compostos O ensaio ótico de determinação do potencial de membrana utiliza sensores FRET sensíveis a voltagem descritos por Gonzalez e Tsien (Ver, Gonzalez, J. E. e R.Y. Tsien (1995) "Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells" Biophys J. 69(4): 1272-80; e Gonzalez; J.K e R.Y. Tsien (1997) "Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer" Chem Biol 4(4): 269-77) em combinação com a instrumentação para medir as mudanças na fluorescência tais como um leitor de voltagem/sensor de iões (VIPR) (ver Gonzalez, J.E., K. Oades, et al. (1999) "Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channel targets" Drug Discov Today 4(9) :431-439) .
Estes ensaios sensíveis a voltagem são baseados na mudança na transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) entre uma sonda solúvel na membrana, sensível à voltagem, DiSBAC2(3), e um fosfolípido fluorescente, CC2-DMPE, que está ancorado à superfície externa da membrana plasmática e atua como dador FRET. Mudanças no potencial de membrana (Vm) levam a que a sonda DiSBAC2(3) carregada negativamente se redistribua ao longo da membrana plasmática e a quantidade de energia transferida para a sonda CC2-DMPE varia concordantemente. As mudanças na emissão de fluorescência podem ser monitorizadas usando VIPR™ II, que é um manuseador de líquidos integrado e detetor de fluorescência desenhado para conduzir ensaios celulares em microplacas de 96- e 384-poços.
Identificação de Compostos de Correção
Para identificar pequenas moléculas que corrigem o efeito de transporte associado com AF508-CFTR; um formato de ensaio de adição única de HTS foi desenvolvido. As células foram incubadas com meio sem soro durante 16-24 horas numa incubadora de cultura de tecidos a 37 °C, 5% CO2, 90% humidade na presença ou ausência (controlo negativo) de um composto de teste. As células foram subsequentemente lavadas com solução de Krebs Rigers e carregadas com uma sonda de redistribuição sensível a voltagem. Para ativar AF508-CFTR, 10 μΜ forskolina e do potenciador CFTR, genisteína (20 μΜ) , foram adicionados conjuntamente com meio desprovido de Cl” a cada poço. A adição de meio desprovido de Cl” promoveu um efluxo de Cl” em resposta à ativação de AF508-CFTR e a despolarização da membrana resultante foi oticamente monitorizada usando sondas sensíveis a voltagem.
Identificação de Compostos Potenciadores
Para identificar potenciadores de AF508-CFTR, um formato de ensaio de dupla adição de HTS foi desenvolvido. Durante a primeira adição, um meio livre de Cl” com ou sem compostos de teste foi adicionado a cada poço. Após 22 segundos, uam segunda adição de meio livre de Cl” contendo 2-10 μΜ forskolina foi adicionado para ativar AF508-CFTR. A concentração extracelular de Cl” após as duas adições foi de 28 mM, o que promoveu um efluxo de Cl” em resposta à ativação de AF508-CFTR e a despolarização da membrana resultante foi opticamente monitorizada usando sondas de FRET sensíveis a voltagem.
Soluções:
Solução Banho #1: (em Mm) NaCl 160, KC1 4,5, CaC]_2 2, MgC]_2 1, HEPES 10, pH 7,4 com NaOH.
Solução Banho Desprovida de Cloreto: Sais cloreto da Solução Banho #1 são substituídos por sais gluconato. CC2-DMPE: Preparada como uma solução stock 10 mM em DMSO e armazenada a -20°C.
DiSBAC2(3) : Preparada como uma solução stock 10 mM em DMSO e armazenada a -20°C.
Cultura de Células
Fibroblastos murinos NIH 3T3 expressando estavelmente AF508-CFTR são usados para medições óticas de determinação do potencial de membrana. As células são mantidas a 37 °C com 5% CO2 e 90% humidade em meio Dulbecco's Modified Eagle Medium suplementado com 2 mM de glutamina, 10% de soro fetal bovino, 1 x NEAA, β-ΜΕ, IX pen/strep, e 25 mM HEPES em frascos de cultura de 175 cm2. Para todos os ensaios óticos, as células foram plaqueadas a 20,000/poço em microplacas de 384-poços revestidas com matrigel e mantidas durante 2 hrs a 37 °C antes da cultura a 27 °C durante 24 hrs para o ensaio de potenciação. Para os ensaios de correção, as células são mantidas a 27 °C ou 37 °C com ou sem os compostos durante 16-24 hrs.
Ensaios Eletrofisiológicos para medição as propriedades de modelação AF508-CFTR dos compostos Ensaio com câmara de Ussing
As experiências com a câmara de Ussing foram realizadas em células epiteliais respiratórias polarizadas expressando AF508-CFTR de modo a caracterizar adicionalmente os modeladores AF508-CFTR identificados nos ensaios óticos. Células epiteliais FRT crescidas em insertos de cultura de células Costar® Snapwell™ foram montadas numa câmara de Ussing (Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA), e as monocamadas foram constantemente sujeitas a corrente de curto-circuito usando um sistema de grampeamento de voltagem (Department of Bioengineering, University of Iowa, IA, e, Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA) . A resistência transepitelial foi medida aplicando um pulso de 2 mV. Sob essas condições, o epitélio FRT apresentou resistências de 4 ΚΩ/cm2 ou superiores. As soluções foram mantidas a 27 °C e borbulhadas com ar. 0 potencial zero do eléctrodo e a resistência do fluido foram corrigidos usando um inserto desprovido de células. Sob essas condições, a corrente reflecte o fluxo de Cl” através de AF508-CFTR expresso na membrana apical. 0 Isc foi obtido digitalmente usando uma interface MP100A-CE e o software AcqKnowledge (v3.2.6; BIOPAC Systems, Santa Barbara, CA).
Identificação de Compostos de Correcção 0 protocolo tipico utilizou um gradiente de concentração de Cl” basolateral a apical. Para estabelecer este gradiente, um aro normal foi usado na membrana basolateral, enquanto que o NaCl apical foi substituído por gluconato de sódio equimolar (titulado a pH 7,4 com NaOH) para originar um grande gradiente de concentração de Cl” através do epitélio. Todas as experiências foram realizadas em monocamadas intactas. Para a ativação completa de AF508-CFTR, forskolina (10 μΜ) e o inibidor de PDE, IBMX (100 μΜ), foram aplicados seguidos pela adição do potenciador de CFTR, a genisteína (50 μΜ).
Como observado noutros tipos celulares, a incubação a baixas temperaturas de células FRT estavelmente expressando AF508-CFTR aumenta a densidade funcional de CFTR na membrana plasmática. Para determinar a atividade dos compostos de correcção, as células foram incubadas com 10 μΜ do composto de teste durante 24 horas a 37 °C e foram subsequentemente lavadas 3x antes da análise. O ISc mediado por cAMP e genisteína em células tratadas com composto foi normalizado aos controlos a 27 °C e 37 °C e expresso como percentagem da atividade. A pré-incubação das células com os compostos de correcção aumentou significativamente o ISc mediado por cAMP e genisteína quando comparado com os controlos a 37 °C.
Identificação dos Compostos Potenciadores 0 protocolo típico utilizou um gradiente de concentração de Cl” basolateral a apical. Para estabelecer este gradiente, um aro normal foi usado na membrana basolateral e foi permeabilizado com nistatina (360 pg/ml), enquanto que o NaCl apical foi substituído por gluconato de sódio equimolar (titulado a pH 7,4 com NaOH) para originar um grande gradiente de concentração de Cl” através do epitélio. Todas as experiências foram realizadas 30 min após a permeabilização por nistatina. Forskolina (10 μΜ) e todos os compostos de teste foram adicionados a ambos os lados dos insertos da cultura de células. A eficácia dos potenciadores AF508-CFTR putativos foi comparada com aquela de um conhecido potenciador, genisteína.
Soluções
Solução basolateral (em mM): NaCl (135), CaCÍ2 (1,2), MgCÍ2 (1,2), K2HP04 (2,4), KHP04 (0,6), ácido N-2-hidróxietilpiperazina-N'-2-etanosulfónico (HEPES) (10), e dextrose (10). A solução foi titulada a pH 7,4 com NaOH.
Solução apical (in mM) : Igual à solução basolateral com
NaCl a ser substituído por Gluconato de Sódio (135) .
Cultura de Células
Células epiteliais de rato Fisher (FRT) expressando AF508-CFTR (FRTaf508”cftr) foram usadas para as experiências com câmara de Ussing para modeladores putativos AF508-CFTR identificados a partir dos nossos ensaios ópticos. As células foram cultivadas em insertos de cultura de células Costar® Snapwell™ e mantidas durante 5 dias a 37 °C e 5% CO2 em meio Ham's F12 modificado (Coon's) suplementado com 5% de soro fetal bovino, 100 U/ml de penicilina, e 100 pg/ml de estreptomicina. Antes da sua utilização para a caracterização da atividade potenciadora dos compostos, as células foram incubadas a 27 °C durante 16 - 48 hrs para corrigir o AF508-CFTR. Para determinar a atividade dos compostos de correcção, as células foram incubadas a 27 °C ou 37 °C na presença e na ausência dos compostos durante 24 horas. A corrente AF508-CFTR macroscópica ( Iafsos-cftr) em células NIH3T3 estavelmente expressando AF508-CFTR normalizadas em relação à temperatura e compostos de teste, foram monitorizadas usando técnicas perforated-patch-recording. Sumariamente, as medições de grampeamento de voltagem de IAf508 foram realizadas à temperatura ambiente usando um amplificador de grampeamento de voltagem Axopatch 200B (Axon Instruments Inc., Foster City, CA). Todas as medições foram realizadas numa frequência de amostragem de 10 kHz e submetidas a um filtro passa-baixo a 1 kHz. As pipetas apresentavam uma resistência de 5-6 ΜΩ quando preenchidas com a solução intracelular. Sob essas condições de medição, o potencial reverso calculado para Cl~ (ECi) à temperatura ambiente foi de -28 mV. Todas as medições apresentaram uma resistência de selo > 20 GQ e uma resistência de série < 15 GQ. A geração de pulso, aquisição de dados, e análise foram realizados usando um PC equipado com uma interface Digidata 1320 A/D em conjugação com Clampex 8 (Axon Instruments Inc.) . O banho continha < 250 pL de solução salina e foi continuamente sujeito a perfusão a uma taxa de 2 ml/min usando um sistema de perfusão por gravidade.
Identificação dos Compostos de Correcção
Para determinar a atividade dos compostos de correção para o aumento da densidade de AF508-CFTR funcional na membrana plasmática, usou-se as técnicas perforated-patch-recordíng acima descritas para medir a densidade de corrente nas 24 hrs após tratamento com os composto de correção. Para ativar totalmente AF508-CFTR, 10 μΜ foskolina e 20 μΜ genisteina foram adicionadas às células. Nas condições de medição usadas, a densidade de corrente no período de incubação 24 hrs a 27 °C foi mais elevado que aquele observado no período de incubação 24 hrs a 37 °C. Os resultados são consistentes com os efeitos conhecidos para incubações a baixas temperaturas na densidade de AF508-CFTR na membrana plasmática. Para determinar os efeitos dos compostos de correção na densidade de corrente CFTR, as células foram incubadas com 10 μΜ do composto de teste durante 24 horas a 37 °C e a densidade de corrente foi comparada com os controlos a 27 °C e 37 °C (% de atividade). Antes da gravação, as células foram lavadas 3x com meio de gravação extracelular para remover qualquer vestígio do composto de teste. A pré-incubação com 10 μΜ dos compostos de correção aumentou significativamente a corrente dependente de cAMP e genisteina quando comparada com os controlos a 37 °C.
Identificação dos Compostos Potenciadores A capacidade dos potenciadores AF508-CFTR para aumentar a corrente AF508-CFTR macroscópica (Iafsos-cftr) em células NIH 3T3 estavelmente expressando AF508-CFTR foi também investigada usando técnicas perforated-patch-recording. Os potenciadores identificados dos ensaios óticos mostraram um aumento dose-dependente em Iafsos-cftr com potência semelhante e eficácia à observada nos ensaios óticos. Em todas as células examinadas, o potencial de reversão antes e durante a aplicação do potenciador foi certa de -30 mV, que é calculado ECi (-28 mV) .
Soluções
Solução intracelular (em mM): Cs-aspartato (90), CsCl (50), MgCl2 (1), HEPES (10), e 240 pg/ml anf otericina-B (pH ajustado a 7,35 com CsOH).
Solução extracelular (em mM): N-metil-D-glucamina (NMDG)-Cl (150), MgCl2 (2), CaCl2 (2), HEPES (10) (pH ajustado a 7,35 com HC1) .
Cultura de Células
Fibroblastos NIH3T3 murinos expressando estavelmente AF508-CFTR são usados para as medições das células completas. As células são mantidas a 37 °C com 5% C02 e 90% humidade em meio Dulbecco's Modified Eagle Medium suplementado com 2 mM de glutamina, 10% de soro fetal bovino, 1 x NEAA, β-ΜΕ, IX pen/strep, e 25 mM HEPES em frascos de cultura de 175 cm2. Para as medições das células completas, 2 500 - 5 000 células foram plaqueadas em lâminas de vidro revestidas com poli-L-lisina e mantidas durante 24-48 horas a 27 °C antes de uso para testar a atividade dos potenciadores; e incubadas com ou sem o composto de correção a 37 °C para medir a atividade dos compostos de correção.
As atividades de canal-isolado de AF508-CFTR normalizadas à temperatura estavelmente expressas em células NIH3T3 e as atividades dos compostos potenciadores foram observadas usando enxertos membranares excisados. Brevemente, medições de grampeamento de voltagem da atividade de canal-isolado foram realizadas à temperatura ambiente com um amplificador de grampeamento de voltagem Axopatch 200B (Axon Instruments Inc.). Todas as medições foram realizadas a uma frequência de amostragem de 10 kHz e submetidas a um filtro passa-baixo a 400 Hz. As pipetas de amostragem foram fabricadas a partir da Corning Kovar Sealing #7052 (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL) e tinham uma resistência de 5 - 8 ΜΩ quando preenchido com solução extracelular. O AF508-CFTR foi ativado após excisão, através da adição de 1 mM de Mg-ATP, e 75 nM da proteina-cinase dependente de cAMP, subunidade catalítica (PKA, Promega Corp. Madison, WI). Após a atividade de canal ter estabilizado, o enxerto foi sujeito a perfusão usando um sistema de microprefusão por gravidade. O influxo foi colocado adjacentemente ao enxerto, resultando numa troca completa de solução durante 1-2 segundos. Para manter a atividade AF508-CFTR durante o rápido procedimento de perfusão, o inibidor de fosfatase não-específico F“ (lOmM NaF) foi adicionado ao banho de solução. Sob essas condições de medição, a atividade do canal permaneceu constante ao longo da duração da medição dos enxertos (até 60 min). Correntes eléctricas produzidas pelo movimento de carga positiva das soluções intra- para a extracelular (com aniões a moverem—se em sentido oposto) são mostradas como correntes eléctricas positivas. O potencial eléctrico da pipeta (Vp) foi mantido a 80 mV. A atividade do canal foi analisada a partir de enxertos de membrana contendo < 2 canais ativos. O número máximo de aberturas simultâneas determinou o número de canais ativos durante o curso da experiência. Para determinar a amplitude da corrente de um canal isolado, os dados gravados ao longo de 120 segundos para a atividade de AF508-CFTR foram filtrados "off-line" a 100 Hz e então usados para construir histogramas de amplitude em todos os pontos que foram ajustados com funções gaussianas usando software Bio-Patch Analysis (Bio-Logic Comp. France). A corrente microscópica total e a probabilidade de abertura (Po) foram determinadas a partir dos 120 segundos da atividade do canal. O Po foi determinado usando o software Bio-Patch ou através da relação Po = I/i(N), onde I = corrente média, i = amplitude de corrente do canal isolado, e N = número de canais ativos no enxerto.
Soluçõess
Solução extracelular (em mM) : NMDG (150), ácido aspártico (150), CaCio (5), MgCl2 (2), e HEPES (10) (pH ajustado a 7,35 com Tris base).
Solução intracelular (em mM) : NMDG-C1 (150), MgCÍ2 (2), EGTA (5), TES (10), e Tris base (14) (pH ajustado a 7,35 com HC1) .
Cultura de Células
Fibroblatos NIH3T3 murinos expressando estavelmente AF508-CFTR são usados para medições de grampeamento de voltagem de membrana excisadas. As células são mantidas a 37 °C com 5% C02 e 90% humidade em meio Dulbecco's Modified Eagle
Medium suplementado com 2 mM de glutamina, 10% de soro fetal bovino, 1 x NEAA, β-ΜΕ, IX pen/strep, e 25 mM HEPES em frascos de cultura de 175 cm2. Para as mediç das células completas, 2500-5000 células foram plaqueadas em lâminas de vidro revestidas com poli-L-lisina e mantidas durante 24-48 horas a 27 °C antes de uso.
Compostos da invenção são úteis enquanto modeladores de transportadores de cassetes de ligação de ATP. Usando os procedimentos acima descritos, as atividades, isto é, EC50s, dos compostos da presente invenção foram medidas como estando compreendidas entre cerca de 3,8 nM a cerca de 13,5 μΜ. Adicionalmente, usando estes métodos acima descritos, as eficácias dos compostos da presente invenção foram medidas como estando compreendendida entre cerca de 35% a cerca de 110%.
Lisboa, 12 de outubro de 2015

Claims (17)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula Ic:
    Ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado, onde Ri é -ZAR4, onde cada ZA é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática Ci-6 linear ou ramificada onde até dois átomos de carbono de ZA são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, -CONRa-, -CONRaNRa-, -C02-, -OCO-, -NRACOr, -0-, -NRaC0NRa-, -0C0NRa-, -NRaNRa- , -nraco-, -s-, -so-, -so2-, -nra-, -so2nra-, -nraso2-, ou -nraso2nra-, Cada R4 é independentemente RA, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, ou -OCF3, Cada Ra é independentemente hidrogénio, um composto alifático, a-cicloalifático, heterocicloalifático, um aril, ou um heteroaril; Cada R2 é independentemente -ZBR5, onde cada ZB é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática Ci-6 linear ou ramificada opcionalmente substituída com halo, -OH, ciano, C3-10 cicloalif ático, heterocicloalifático de 3-10 membros, aril monocíclico ou bicíclico de 8-12 membros, heteroaril de 4-15 membros, ou combinações relacionadas onde até dois átomos de carbono de ZB são opcionakmente e independentemente substituídos por -CO-, -CS-, -CONRB- , -C0NRbNRb-, -C02-, -OCO-, -NRbC02-, -0- -NRbC0NRb-, - oconrb-, -nrbrb-, -nrbco-, -s-, -so-, - so2-, -nrb-, -so2nrb-, -nrbso2-, ou -nrbso2nrb-, Cada R5 é independentemente RB, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, ou -OCF3, Cada Rb é independentemente hidrogénio, um composto C3-10 alifático, um C3_i0 cicloalif ático, um heterocicloalifático de 3-10 membros, um monociclico ou biciclico aril de 8-12 membros, ou um heteroaril de 4-15 membros; ou, quaisquer dois grupos R2 adjacentes com os átomos aos quais eles estão ligados para formarem um composto carbociclico ou heterociclico; Anel A é um anel monociclico de 3-7 membros possuindo 0-3 heteroátomos selecionados a partir de N, O, e S; Anel B é um grupo possuindo fórmula Ia:
    Ou um sal farmaceuticamente aceitável relacionado, onde p é 0-2, Cada R3 e R'3 é independentemente -ZCR6 onde cada Zc é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática C1-6 ramificada ou linear opcionalmente substituída com halo, hidróxi, ou combinações relacionadas, onde até dois átomosde carbono de Zc são opcionalmente e independentemente substituídos por -CO-, -CS-, -CONRc-, -CONRcNRc-, -C02-, -OCO-, -NRcC02-, -O- -NRcCONRc-, -OCONRc-, -NRCNRC-, -NRcCO-,-S-, -SO-, - S02-, -NRC-, -S02NRc-, -NRcS02-, ou -NRc-, -S02NRc-, Cada R6, é independentemente Rc, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, ou -OCF3, Cada Rc é independentemente hidrogénio, um composto alifático opcionalmente substituído por halo, hidróxi, ou combinações relacionadas, um cicloalifático opcionalmente substituído com alifático, halo, hidróxi, nitro, ciano, ou combinações relacionadas, um heterocicloalifático opcionalmente substituído com alifático, halo, hidróxi, nitro, ciano, ou combinações relacionadas, um aril, ou um heteroaril, qualquer um dos quais podendo ser opcionalmente substituído com halo, hidróxi, ou combinações relacionadas, ou, quaisquer dois grupos R3 adjacentes conjuntamente com os átomos com os quais formam um composto heterocíclico; e n é 1-3, fornecido de tal forma que quando o anel A é um ciclopentil não-substituído, n é 1, R2 é 4-cloro, e Ri é hidrogénio, então o anel B não é 2-(tert-butil)indol-5-il, ou (2,6- diclorofenil(carbonil))-3-metil-lH-indol-5-il;e quando o anel A é um ciclopentil não-substituído, n é 0, e Ri é hidrogénio, então o anel B não é
  2. 2. O composto da reivindicação 1, onde Ri é -ZAR4, ZA é uma ligação, e R4 é hidrogénio. 3. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-2, onde R2 é uma cadeia alifática C1-6 ramificada ou linear que é opcionalmente substituída com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, C3-10 cicloalif ático, heterocicloalifático de 3-10 membros, aril monocíclico ou bicíclico de 8-12 membros, heteroaril de 4-15 membros, ou combinações relacionadas.
  3. 4. O composto de qualquer uma das Reivindicações 1-2, onde R2 é um alcóxi C1-5 ramificado ou linear que é opcionalmente substituído com 1-3 de hidróxi, aril monocíclico ou bicíclico de 8-12 membros, heteroaril de 4-15 membros, C3-10 cicloalif ático, heterocicloalifático de 3-10 membros, ou combinações relacionadas.
  4. 5. O composto de qualquer uma das Reivindicações 1-2, onde R2 é hidróxi, halo, ou ciano.
  5. 6. O composto de qualquer uma das Reivindicações 1-2, onde R2 é -ZBR5; ZB é independentemente uma liqação ou uma cadeia alifática C1-4 linear ou ramificada, que é opcionalmente substituída com halo, hidróxi, ciano, C3-10 cicloalifático, heterocicloalif ático de 3-10 membros, aril monocíclico ou bicíclico de 8-12 membros, heteroaril de 4-15 membros onde até dois átomos de carbono de ZB são opcionalmente e independentemente substituídos por -CO-, -O-, -S-, S(0)2-, ou -NH-; R5 é RB, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, ou -OCF3, e RB é hidroqénio ou aril.
  6. 7. O composto de qualquer uma das Reivindicações 1-2, onde dois qrupos R2 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais se encontram liqados, formam um composto carbocíclico ou um composto heterocíclico ou um composto heteroaril, cada um dos quais se encontra ligado ao fenil de fórmula I e se encontra opcionalmente substituído com halo, hidróxi, ciano, C3-10 cicloalifático, heterocicloalif ático de 3-10 membros, aril monocíclico ou bicíclico de 8-12 membros, heteroaril de 4-15 membros onde o composto carbocíclico ou o composto heterocíclico possui fórmula Ib:
    Cada um dos Zi, Z2, Z3, Z4, e Z5 é independentemente uma ligação, -CR.7R'7, -C(O)-, -NR7, ou -0-; e cada ZD é independentemente uma ligação ou uma cadeia alifática C1-6 ramificada ou linear opcionalmente substituída com halo, hidróxi, ciano, C3-10 cicloalifático, heterocicloalif ático de 3-10 membros, aril monocíclico ou bicíclico de 8-12, membros, heteroaril de 4-15 membros e onde até dois átomos de carbono de ZD são opcionalmente e independentemente substituídos por -CO-, -CS-, -CONR0 -, -CO2-, -OCO-, -NRdC02-, -O-, -NRdCONRd-, -OCONR0-, - NRdRd-, -NRdCO-, -S-, -SO-, -SO2-, -nrd-, -S02NRd-, - NRdS02-, ou -NRdS02NRd- ; Cada Rs é independentemente R°, halo, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, ou -OCF3-; Cada Rd é independentemente hidrogénio, um composto cicloalifático, um composto heterocicloalifático, um aril, ou um heteroaril; e Cada R'7 é independentemente hidrogénio, uma cadeia C1-6 alifática, hidróxi, halo, ciano, nitro, ou combinações relacionadas. 8. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-2, ou 7, onde dois qrupos R2 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam um composto carbocíclico de 5-6 membros que é opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, oxo, ciano, alcóxi, alquil, ou combinações relacionadas. 9. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-2, ou 7, onde dois grupos R2 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam um composto heterociclico de 5-7 membros possuindo 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de N, 0, e S e sendo opcionalmente substituídos com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, C3-10 cicloalifático, heterocicloalifático de 3-10 membros, aril monocíclico ou bicíclico de 8-12 membros, heteroaril de 4-15 membros.
  7. 10. O composto de qualquer uma das Reivindicações 1-2, ou 7, onde dois grupos R2 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam um composto heterociclico selecionado de:
    11. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1- 2, onde cada qrupo R2 é independentemente seleccionado de hidroqénio, halo, -OCH3, -OH, -CH2OH, -CH3, e -OCF3, ou dois qrupos R2 adjacentes conjuntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam
    12. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-11, onde o anel A é um ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, ou cicloheptil, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, Ci-5 alifático, ou combinações relacionadas. 13. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-11, onde o anel A é um composto heterocicloalifático monocíclico de 3-7 membros opcionalmente substituído. 14. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-11, onde o anel A é um selecionado de
    Cada Rg é independentemente -ZeRio, onde cada ZE é independentemente uma ligação ou uma cadeia Ci-6 alifática linear ou ramificada onde até dois átomos de carbono de ZE são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, - CONRe-, -C02-, -oco-, -nreco2-, -0-, -NReC0NRe-, -0C0NRe-, -NReNRe-, -nreco-, -s-, -so-, —so2 — , -nre-, -S02NRe-, -NReS02-, ou -NReS02NRe- ; Cada Rio é independentemente RE, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, oxo, ou -OCF3, Cada Re é independentemente hidrogénio, um composto cicloalifático, um composto heterocicloalifático, um aril, ou um aril; e q é 0-5 15. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1- 14, onde o anel B é
    16. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1- 15, onde o anel B é
    17. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-15, onde um dos R'3 ou R3 é um grupo acil. 18. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-15, um dos R3 ou R'3 é um (alcóxi)carbonil substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ou combinações relacionadas. 19. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-15, um dos R3 ou R'3 é um (alifático) carbonil substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ou combinações relacionadas.
  8. 20. O composto de qualquer uma das Reivindicações 1- 15, onde um dos R3 ou R'3 é um (cicloalifático)carbonil ou um (heterocicloalifático)carbonil, e cada um é opcionalmente substituído com 1-3 de alifático, halo, hidróxi, nitro, ciano, ou combinações relacionadas.
  9. 21. O composto da Reivindicação 20, onde um dos R3 ou R'3 é (piperidina-l-il,)carbonil, (pirrolidina-l-il) carbonil, (morfolina-4-il)carbonil, (piperazina-l-il) carbonil, (ciclopropil)carbonil, (ciclobutil)carbonil, (ciclopentil)carbonil, (ciclohexil)carbonil, ou (cicloheptil)carbonil, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1-3 de halo, hidróxi, ciano, nitro, alifático, ou combinações relacionadas.
  10. 22. O composto de qualquer uma das Reivindicações 1-15, onde R3 é (alifático) amido que se encontra liqado à posição 2 ou 3 no anel indolo de fórmula Ia.
  11. 23. O composto de qualquer uma das Reivindicações 1- 15 ou 22, onde R3 é (N,N-dimetil(amino))carbonil, (metil(amino))carbonil, (etil(amino))carbonil, (propil(amino))carbonil, (prop-2-il(amino))carbonil, (dimetil(but-2-il(amino)))carbonil, (tertbutil(amino))carbonil, (butil(amino))carbonil, cada um dos quais substituído com 1-3 de halo, hidróxi, cicloalifático, heterocicloalifático, aril, heteroaril, ou combinações relacionadas. 24. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1- 15 onde R'3 é
    onde R31 é H ou um qrupo Ci- 2 alifático que se encontra substituído com 1-3 de halo, -OH, ou combinações relacionadas, R32 é -L-R33, onde L é uma liqação, -CH2-, -CH20-, -CH2NHS (0) 2_, CH2C(0)-, -CH2NHC(0)-, ou -CH2NH-, e R33 é hidrogénio, ou um grupo C1-2 alifático, cicloalifático, heterocicloalifático, ou heteroaril, cada um dos quais opcionalmente substituído com 1 de -OH, -NH2, ou -CN. 25. 0 composto da Reivindicação 24, onde R'3 é independentemente seleccionado de um dos seguintes: -H, -CH3, -CH2CH3, -C(0)CH3, -CH2CH2OH, -C(0)0CH3,
    26. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1-25, onde R3 é hidroqénio. 27. 0 composto de qualquer uma das Reivindicações 1- 15, onde R'3 é independentemente -ZCR6, onde cada Zc é independentemente uma liqação ou uma cadeia alifática C1-6 linear ou ramificada onde até dois átomos de carbono de Zc são opcionalmente e independentemente substituídos por -C0-, -CS-, -CONRc-, -CONRcNRc-, -C02-, -OCO-, -NRcC02-, -0-, -NRcC0NRc, -0C0NRc-, -NRCNRC-, -NRcC0-, -S-, -S0-, -S02-, -Nrc-, -S02NRc-, -NRcS02-, ou -NRcS02NRc-, onde cada R6 é independentemente Rc, halo, -OH, -NH2, -NO2, -CN, ou -OCF3, e cada Rc é independentemente hidrogénio, um composto alifático opcionalmente substituído com halo, hidróxi, ou combinações relacionadas, um composto cicloalifático opcionalmente substituído com alifático, halo, hidróxi, nitro, ciano, ou combinações relacionadas, um composto heterocicloalifático opcionalmente substituído com alifático, halo, hidróxi, nitro, ciano, ou combinações relacionadas, ou um heteroaril opcionalmente substituído com halo, hidróxi, ou combinações relacionadas. 28. 0 composto da Reivindicação 1 é selecionado de
    29. 0 composto da Reivindicação 28, onde o composto é
  12. 30. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto como descrito em qualquer uma das Reivindicações 1-29 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
  13. 31. Um método in vitro de modelação da atividade de um transportador ABC numa amostra biolóqica compreendendo o passo de contactar o referido transportador ABC com um composto da Reivindicação 1.
  14. 32. Um método in vitro de modelação da atividade de um transportador ABC numa amostra biolóqica compreendendo o passo de contactar o referido transportador ABC com um composto como mostrado em qualquer uma das Reivindicações 1-29 ou com uma composição farmacêutica da Reivindicação 30.
  15. 33. O método de qualquer uma das Reivindicações 31-32, onde o transportador ABC é CFTR.
  16. 34. Um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-29, ou uma composição farmacêutica da Reivindicação 30 para uso no tratamento ou diminuição da gravidade de uma doença num paciente, onde a referida doença é selecionada de fibrose cística, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária deficiências na coagulação/fibrinólise, tais como a deficiência na proteína C, angioedema hereditário Tipo 1, deficiências no processamento de lípidos tais como hipercolésterolemia familiar, quilomicronemia Tipo I, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, tais como a doença de células I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses, Sandhoff/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo Laron, deficiência em mieloperoxidase, hipoparatiroidismo, melanoma, síndrome de glicoproteína deficiente em carbohidratos (CGD) Tipo 1, enfisema hereditário, hipertiroidismo congénito, osteogénese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência ACT, diabetes insipidus (Dl), Dl neurohipofiseal, Dl nefrogénica, síndrome Charcot-Marie Tooth, doença de Pelizaeus-Merzbacher, doenças neurodegenerativas tais como a doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, diversos distúrbios neurológicos relacionados com poliglutamina tal como a doença de Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana, e distrofia miotónica, assim como encefalopatias espongiformes, tais como a doença de Creutzfeldt-Jakob (devido à deficiência no processamento da proteína do prião), doença de Fabry, síndrome de Gerstmann-Stráussler-Scheinker, COPD, doença do olho seco, e síndrome de Sjõgren. 35. 0 método in vitro de qualquer uma das Reivindicações 31 a 33 ou o composto para uso da Reivindicação 34, onde o composto é selecionado de
  17. 36. Um kit para uso na medição da atividade de um transportador ABC ou fragmento relacionado numa amostra biológica in vitro ou in vivo compreendendo: (i) uma composição compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-29; e (ii) instruções para: a) contactar a composição com a amostra biolóqica; e b) medir a atividade do referido transportador ABC ou fraqmento relacionado. 37. 0 kit da Reivindicação 36, compreende adicionalmente instruções para: a) contactar uma composição adicional com a amostra biolóqica; b) medir a atividade do referido transportador ABC ou fraqmento relacionado na presença do referido composto adicional; e c) comparar a atividade do transportador ABC na presença do composto adicional com a densidade do transportador ABC na presença de uma composição de fórmula (I). 38. 0 kit da Reivindicação 36 ou Reivindicação 37, onde o kit é usado para medir a densidade do CFTR. Lisboa, 12 de outubro de 2015
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