PT1828249E - Biomarcadores para a pré-selecção de pacientes para terapêutica anti-igf1r - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "BIOMARCADORES PARA A PRÉ-SELECÇÃO DE PACIENTES PARA TERAPÊUTICA ANTI-IGFlR" 0 presente pedido de patente reivindica o beneficio do pedido provisório de patente norte-americana n° 60/633 156 depositado a 3 de Dezembro de 2004.

Campo de invenção A presente invenção diz respeito a métodos para seleccionar pacientes para uma terapêutica contra o cancro.

Antecedentes da invenção

Os factores de crescimento semelhantes à insulina, também designados por somatomedinas, compreendem o factor de crescimento semelhante a insulina tipo I (IGF-I) e o factor de crescimento semelhante à insulina tipo II (IGF-II) (Klapper, et al., (1983) Endocrinol. 112:2215 and

Rinderknecht, et al., (1978) Febs.Lett. 89:283). Estes factores de crescimento exercem uma actividade mitogénica em diversos tipos de células, incluindo as células tumorais (Macaulay, (1992) Br. J. Câncer 65:311), ao ligarem-se a um receptor comum designado por receptor do factor de crescimento semelhante à insulina tipo I (IGF1R) (Sepp-Lorenzino, (1998) Breast Câncer Research and Treatment 47:235). A interacção dos IGF com o IGF1R activa o receptor, ao desencadear a auto fosforilação do receptor nos resíduos de tirosina (Butler, et al., (1998) Comparative Biochemistry 2 and Physiology 121:19). Por sua vez, depois de activado, o IGF1R fosforila os alvos intracelulares para activar as vias de sinalização celular. Esta activação dos receptores é critica para estimular o crescimento e a sobrevivência de células tumorais. Assim sendo, a inibição da actividade do IGF1R representa um valioso método potencial para tratar ou prevenir o desenvolvimento de cancros humanos e de outras doenças proliferativas.

Diversos tipos de resultados indicam que os IGF-I e IGF-II e o seu receptor IGFlR são mediadores importantes do fenótipo maligno. Concluiu-se que os níveis de IGF-I no plasma são o melhor preditor de risco de cancro da próstata (Chan, et al., (1998) Science 279:563) e há estudos epidemiológicos semelhantes que associam fortemente os níveis de IGF-I no plasma ao risco de cancro da mama, do cólon e do pulmão. A sobrexpressão do receptor do factor de crescimento semelhante à insulina tipo I também foi demonstrada em diversas linhagens de células cancerosas e em tecidos tumorais. 0 IGFlR é sobrexpresso em 40% de todas as linhagens de células de cancro da mama (Pandini, et al., (1999) Câncer Res. 5:1935) e em 15% das linhagens de células de cancro do pulmão. No tecido tumoral do cancro da mama, o IGFlR é sobrexpresso 6-14 vezes e o mesmo IGFlR exibe uma actividade de cinase 2-4 vezes superior, comparativamente à dos tecidos normais (Webster, et al., (1996) Câncer Res. 56: 2781 e Pekonen, et al., (1998) Câncer Res. 48:1343).

Em 90% das biópsias de tecidos de cancro colorrectal são observados níveis elevados de IGFlR em que a intensidade da expressão de IGFlR está correlacionada com a 3 gravidade da patologia. As análises de culturas de células primárias do cancro cervical e de linhas de células do cancro cervical revelaram uma sobrexpressão de IGFlR, respectivamente 3 e 5 vezes superior, comparativamente às células ectocervicais normais (Steller, et al., (1996) Câncer Res. 56:1762). A expressão de IGF1R em células do sarcoma sinovial está também correlacionada com um fenótipo agressivo (isto é, metástases e uma taxa elevada de proliferação; Xie, et al., (1999) Câncer Res. 59:3588).

Presentemente há diversas terapêuticas conhecidas contra o cancro, que têm como alvo é o IGFlR. Por exemplo, há anticorpos anti-IGFlR, patenteados pelas empresas Schering Corp (ver o documento WO 2003/100008) ; Pfizer (ver os documentos WO 2002/53596 ou WO 2004/71529); Pierre Fabre medicament (ver o documento WO 2003/59951), Pharmacia Corp. (ver o documento WO 2004/83248), Immunogen, Inc. (ver o documento WO 2003/106621), Hoffman La Roche (ver o documento WO 2004/87756) e Imclone Systems Inc. (IMC-A12; ver Burtrum et. al Câncer Research 63:8912-8921 (2003)). Além disso, a empresa Novartis patenteou uma molécula de baixo peso molecular inibidora de IGFR, NVP-ADW-742 (ver o documento WO 2002/92599), bem como a empresa Biotech Research Ventures PTE Ltd (ver o documento WO 2003/39538) . A empresa Antisense Therapeutics Ltd. Também dispõe de uma terapêutica anti-sense que inibe a expressão do IGFlR, o ATL-1101.

Os agentes que reduzem a função e/ou a expressão do IGFlR são eficazes no tratamento de alguns oncológicos. No entanto, prevê-se que haja uma parte de pacientes oncológicos que não responda a tais tratamentos. Assim sendo, neste domínio da técnica existe uma necessidade de se dispor de um 4 método para identificar populações de cancros específicos e/ou pacientes com cancros específicos, em que seja maior a probabilidade de responderem a uma ou várias terapêuticas anti-cancro que têm como alvo o IGF1R.

Descrição abreviada da invenção A presente invenção proporciona composições farmacêuticas para tratar um tumor num paciente mamífero que padeça de cancro, em que a referida composição compreende um agente inibidor do IGF1R e em que o tratamento compreende os passos seguintes: (a) seleccionar um paciente mamífero que tenha um tumor que manifeste uma ou várias das características seguintes: (i) fosforilação do substrato 1 do receptor da insulina (IRS-1), na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina; e (b) administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente inibidor do IGF1R; em que o referido agente é: (i) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma região variável da cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ ID NO: 8 e três CDR de uma região variável da cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 da SEQ ID NO: 10; (ii) um anticorpo isolado, ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de 5 imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos seleccionada entre SEQ id NO: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 ou 7 3-98; e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos seleccionada entre as SEQ ID NO: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 ou 58-72; ou um anticorpo isolado de cadeia leve que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre o conjunto constituído pelas SEQ ID NOs: 46-51; ou (iii)

5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 99); 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 100); OU 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 101). 6 0 cancro é seleccionado, preferencialmente, entre o conjunto constituído por cancro da bexiga, cancro de Wilm, cancro ósseo, cancro da próstata, cancro do pulmão, cancro do pulmão de células não pequenas, cancro do cólon, cancro rectal, cancro colorrectal, cancro endometrial, mieloma múltiplo, cancro da mama positivo aos receptores dos estrogénios, cancro da mama negativo aos receptores dos estrogénios, cancro cervical, sarcoma sinovial, cancro do ovário, cancro pancreático, neuroblastoma, rabdomiossarcoma, osteossarcoma e tumores que segregam o péptido intestinal vasoactivo.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona métodos in vitro para a selecção de uma terapia para um paciente mamífero que tenha um tumor, o qual compreende os passos seguintes: (a) determinar se o tumor do paciente manifesta um ou vários dos fenómenos seguintes: (i) fosforilação do IRS-1 na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina; e (b) seleccionar um agente inibidor do IGF1R como elemento de terapia, no caso de se determinar que o tumor do paciente manifesta um ou vários dos fenómenos de (i)-(iii); em que o agente inibidor é: (i) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma região variável da cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ ID NO: 8 e três CDR de uma região variável da cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 de SEQ ID NO: 10;

(ii) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que se liga especif icamente ao IGF1R 7 humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 ou 7 3-98; e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos seleccionada entre as SEQ ID NO: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 ou 58-72; ou um anticorpo isolado de cadeia leve que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre o conjunto constituído pelas SEQ ID NOs: 46-51; ou 7 (iii)

,QH 'OH

Q F

5' -ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 99); 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 100); ou 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 101).

De acordo com uma forma de realização congénere, a invenção proporciona métodos in vitro para identificar um paciente mamifero em que haja a probabilidade de o seu tumor responder a um agente inibidor do IGF1R, consistindo isso em determinar se o paciente possui um tumor que manifesta uma ou várias das caracteristicas seguintes: (i) fosforilação do IRS-1 na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina; e em que o paciente é identificado no caso de se determinar que o tumor manifesta qualquer das caracteristicas de (i)-(iii); em que o agente inibidor é: (i) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que se liga especificamente ao IGFlR humano que compreende três CDR de uma região variável da cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ ID NO: 8 e três CDR de uma região variável da cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 de SEQ ID NO: 10; (ii) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que se liga especificamente ao IGFlR humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 ou 73-98; e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos seleccionada entre as SEQ ID NO: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 ou 58-72; ou um anticorpo isolado de cadeia leve que se liga especificamente ao IGFlR humano que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre o conjunto constituído pelas SEQ ID NOs: 46-51; ou (iii) 9

5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 99); 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 100); ou 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 101).

Em todos os aspectos da presente invenção, o paciente é, preferencialmente, um ser humano.

Descrição abreviada das figuras

Figura 1. A fosforilação do IRS-1 é superior nos tumores do pulmão humano versus amostras de tecidos normais. Resultados das análises de transferência de 'Western' para amostras de tecidos normais e tumorais provenientes de quatro 10 pacientes diferentes. As pistas marcadas com "T" continham tecido tumoral e as pistas marcadas com "N" continham tecido normal.

Figura 2. Anticorpo 19D12/15H12 LCF/HCA: eficácia in vivo. Indica-se o nível de inibição do desenvolvimento tumoral observado em murganhos com xenoenxertos aos quais se administrou o anticorpo 19D12/15H12 LCF/HCA, conjuntamente com o tipo de tumor avaliado e com a linhagem celular utilizada para constituir tal tumor.

Figura 3. A eficácia in vivo do 19D12/15H12 LCF/HCA está correlacionada com a sensibilidade de fosforilação do IRS-1 ao IGF-1. Nas pistas e "+", indica-se a quantidade de IRS-1 fosforilado, em cada linhagem celular avaliada, respectivamente na ausência e na presença de IGF-I. Também está indicado o nível de eficácia in vivo do 19D12/15H12 LCF/HCA para inibir o desenvolvimento da linhagem celular indicada (ver a figura 2).

Figura 4. Sobrexpressão do ARNm do IGF-II em amostras de tumores de ovários humanos. ilustra-se o nível normalizado de expressão do ARNm do IGF-II observado em cada uma das 20 amostras de tecidos de ovários normais e em 36 amostras de tecidos de ovários cancerosos.

Figura 5. Sobrexpressão do ARNm do IGF-II em amostras de tumores colorrectais humanos. Ilustra-se o nível normalizado de expressão do ARNm do IGF-II observado em cada uma das 36 amostras de tecidos de ovários normais e em 36 amostras de tecidos colorrectais cancerosos.

Descrição minuciosa da invenção 11 A presente invenção proporciona composições para o tratamento de cancros e métodos para identificar pacientes em que haja a probabilidade de o cancro ser sensível a um agente inibidor do IGF1R. 0 método é útil, inter alia, para aumentar a possibilidade de vir a ser eficaz a administração, a um paciente, de uma terapia anti-cancro inibidora do IGFlR.

Os termos "IGFlR", "IGFR1", "receptor I do factor de crescimento semelhante à insulina" e "receptor do factor de crescimento semelhante à insulina tipo I" são perfeitamente conhecidos na especialidade. Embora o IGFlR possa pertencer a qualquer organismo, pertence preferencialmente a um animal, mais preferencialmente a um mamífero (v.g., murganho, rato, coelho, ovelha ou cão) e muito mais preferencialmente é de um ser humano. A sequência de nucleótidos e de aminoácidos de um precursor de IGFlR humano típico possui no 'Genbank' o número de registo X04434 ou NM_000875. A clivagem do precursor (v.g., entre os aminoácidos 710 e 711) produz uma subunidade a e uma subunidade β que se associam para formarem um receptor maduro.

Os termos "IGF-I","factor I de crescimento semelhante à insulina" e "factor de crescimento semelhante à insulina de tipo I" também são perfeitamente conhecidos na especialidade. Os termos "IGF-II", "factor II de crescimento semelhante à insulina" e "factor de crescimento semelhante à insulina tipo II " também são perfeitamente conhecidos na especialidade. Embora os IGF-I ou IGF-II possam pertencer a qualquer organismo, pertencem preferencialmente a um animal, mais preferencialmente a um mamífero (v.g., murganho, rato, coelho, ovelha ou cão) e muito mais preferencialmente são de um ser humano. As sequências de ácidos nucleicos e de aminoácidos de um IGF-I e de um IGF-II humanos típicos 12 possuem no 'Genbank' respectivamente os números de registo XM_052648 e NM_000612.

Agentes inibidores do IGF1R 0 termo "agente inibidor do IGFlR" designa: (i) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que se liga especificamente ao IGFlR humano que compreende três CDR de uma região variável da cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ ID NO: 8 e três CDR de uma região variável da cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 da SEQ ID NO: 10; (ii) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que se liga especificamente ao IGFlR humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 4 5 ou 7 3-98; e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos seleccionada entre as SEQ ID NO: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 ou 58-72; ou um anticorpo isolado de cadeia leve que se liga especificamente ao IGFlR humano que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre o conjunto constituído pelas SEQ ID NOs: 46-51; ou (iii) 13

5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 99); 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 100); ou 5' -ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 101).

De acordo com uma forma de realização da invenção, o agente inibidor do IGF1R para administração a um paciente, segundo um método de acordo com a invenção, é um anticorpo isolado anti-receptor 1 do factor de crescimento semelhante à insulina (IGF1R) que compreende uma cadeia leve C, D, E ou F do anticorpo 19D12/15H12 maduro ou não processado e uma cadeia pesada A ou B do anticorpo 19D12/15H12 maduro. De acordo com uma forma de realização da invenção, um agente inibidor do IGF1R para administração a um paciente é um anticorpo isolado que se liga especificamente ao IGF1R 14 que compreende uma ou várias regiões determinantes da complementaridade (as CDR) da cadeia leve F do anticorpo 19D12/15H12 e/ou da cadeia pesada A do anticorpo 19D12/15H12 (v.g., a totalidade das 3 cadeias leves das CDR e a totalidade das 3 cadeias pesadas das CDR).

Indica-se adiante as sequências de aminoácidos e dos nucleótidos das cadeias do anticorpo 19D12/15H12. Os grupos de letras sublinhados a pontilhado indicam o péptido de sinal. Os grupos de letras sublinhados a traço continuo indicam as CDR. Os grupos de letras sem nenhum sublinhado indicam as regiões estruturais da sequência. Os fragmentos maduros não têm péptido de sinal.

Cadeia leve C do anticorpo 19D12/15H12 modificado (SEQ ID NO: 1)

ATO TC8 CCA TCA.CAA .GTC MT <^.TTF

^ GCT GÁA ATT ΰΐΟ CTG AOT CAS AGC CCA GAG TCT CP® TCT OTG ACT CCA

GGC GAG AG& QTC ACC ATC ACC TGC CGO GOCQ AGT CAG AGC ATT OGT AGT AGC

TtA CAC TGÕ TAG CA© CA© MA CCA CGT CAG TCT CCA AAG CTT CTC ATC AAG

TAT, SC A ICC CAG TCC CTC TCA GGG GTC CCC TCG AGC TTC AGT GGC AGT GGA

TCT GGG ACA GAT TTC ACC CTC ACC ATC AGT AGC CTC CAG GCT GM GAT GCT

GCA GCG TAT TÂC TGT CAT CAG AGT AGT CGT TTA CCT CAC ACT TTC GGC CM

GGG ACC MS ÔTG OAQ ATC MA CGT ACG (SEQ ID NO: 2) 15

M s P s _I»„ ..JL _L___ Xs ,..Y„ ___J? ^Ar ô E I V L T q S P 0 S li s V T P <s B R V T I T c & A s ......Q.........3...... X G S S h H W Y 0 0 K P G Q s P K li I K Y A δ q s £f s G ¥ P 3 R F 3 G 3 G s 6 T D F T Ií T X § s L E A 1 & A A A Y Y C H Q s s R X» P H T F G 0 0 T £ V B I X R T

Cadeia leve D do anticorpo 19D12/15H12 modificado (SEQ ID NO: 3)

&&A ATT GTG CTG ACT CM MC CCft GAC TCT CTG TCT GTG ACT CÇA

GGC GAG AGA GTC ACC AXC JkCC TGC CGG QCC AGT CM AQC ATT GGT AGT AGC

TTA ÇAC TGG TAC CM CAG ÂAA CCA GGT C&G TCT CCA MG CTT CTC ATC AAQ

TAT GCA TCC CM TCC CTC TCA GG3 GTC CCC TCG AQG TTC AGT GGC AGT GGA TCT GCfâ AC& GAT TTC ACC CTC ACC ATC ACT ACC CTC GAC GCT GAA QAT TTC GGA GTG TAT TAC TGT CAT CAG MT AGT CGT TTA CCT CAC ACT TTC GGC CAA GGG ACC AAG CTO GAC ATC ΑΑΆ DST ACG (SEQ ID NO: 4) 16

F lf.lítKÍ S ί·ί>Λ·»·ί··ί*η· »«......Λ, „χ_β„ _____fe., _t>.....h_ S V p A s i I V h T Q $ P D S h $ v T P

G B 1 V T Ϊ T c A s S I G s S L· H w T Q Q K P S $ s 9 K fc 1» 1 K t_ A s 0 s L s 0 V P B R F S G s Q s G T & F f t T I s s X* B A E D Ψ A V y y c H Q s s R *1 P Η T F G Q G T *e S .1 K R T

Cadeia leve E do anticorpo 19D12/15H12 modificado (SEQ ID NO: 5) atq^tos„ccaj&vcaa cxc &τε tm rn erg ctg ctc too j^T^gaj^jce

GAA ATT GTG CTG ACX CAB AGC OCA ββΤ &CC 0*G fCt ÔTG TCt CCA

OGC GAQ ASA GCC ÃCC CTC TCC TGC CGS GCC AGT CÃS ACC ATT &3T AGT AGC TTA C&C TOS T&C CAQ CAS AAA CCA CGT CAG GCT CCA AGG CTT CTC ÁTC AAG TAT GCA TCC Ç&G TCC CTC TCA GGG ATC GCC GAT AGG TTC AGT GGC AGT GG& TCT GGG ACA GAT TTC ACC CTC ACC ATC AGT AOA CTG GAQ CCT GAA GAT GCT

GCA SOQ TAT TAC TGT CAT CAG AGT AGT CGT TTA CCT CAC ACT TTC GGC CAA GGG ACC AAS GTG GAG ATC AAA CGT ACA (SEQ ID NO: 6) 17 M » F s .JL· G « F í, R J? P Λ R Ϊ V h T Q B P 0 T h B ¥ S F ϋ £ K A T b B C R A „8 0 B I δ s S P H «f ¥ Q Q K P Ç Q A P R L 1« I K Ϋ A S 0 S b S G I P 0 R Ψ S a a G £ G T p F T L T I a R L E P E 0 A h A t ¥ C H „JL· s S R L P U T F o Q 0 T K V E I K a Ϊ

Cadeia leve F do anticorpo 19D12/15H12 (SEQ ID NO: 7)

AGG GGT GAA ATT OTO CTG ACT CAG AGC CCA GST ACC CTC TCT GTG TCT CCA GGC GAG ASA GCC ACC CTC TCC ICC CGG GCC AGT CAG ACC ATT GGT bno

TTA ÇAC TGG TfcC CAG CAG AAA CGA OGT CAG GCT CGA aGG GTT CTC ATC AAS tat gca toc cm tcc ctc tcr ggg atc ccc gat agg to; agt soe agt gga

TCT GGC ACA mt ftc ACC CTC ACC ATC AGT AGA CTG GAG CCT GAA GAT TTC

GCA GTG TAT TftC TGT C&T CAG RCT AGT CGT TTA CCT CAC ACT TTC GGC CAA GGG ACC AAG GTG GAG ATC AAA COT ACA (SEQ ID NO: 8) 18

M _ „a„. P •Γ T «: s·*'·! _jS_ „.JL„ L _ _s__ „.p ....¾.....L... w „v, ? mA„ ma 0 1 B I V L T 0 s P G f & s ¥ a P 0 E R A T It s c X 0 ê L· "H W Y <3 Q X P s 0 A P 1 & 1» I K f h a $ t S G I P D R P s ú s Q s G T P T* I*. T 1 S Λ L £ P £ D P A V Y Y c H_ Q s R L a J P 0 0 0 T X ¥ E I K R T

Cadeia pesada A do anticorpo 19D12/15H12 (HCA; seq id NO: 9)

ATO OftQ TTT CGC CTO AOC .TGG GTT TTC CTT &ST GCT ATA TT* MA gST.OTG

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Mat.tfltt Phe Gly Leu Ser Trp Vai,»»

Oln^Cys Glu Vai Gin teu Vai Gia Se? Gly Gly Sly Leu vai Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ssr Ser Phe

Ala Mefc His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Olu Trp Ile Ser vai lie Asp Thr Aro Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Aap ser Vai tys Gly Arg

Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ma Lys Asn ser Leu Tyr Leu Gin Met Asm ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ma Vai Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu,Gly Asn

Phe Tyg Tvr Gly Mst Asp vai Trp Oly Gin Gly Thr Thr Vai Thr vsl Ser

Ser

Cadeia pesada B do anticorpo 19D12/15H12 modificado (SEQ ID NO: 11)

ATO GAG TTT GGO CTG AGC TOO GTT TTC CTT GTT GCT ATA TTA ARA GST GTC

CAO T5T GAG GTT CAG CTG GTO CAG TCT GSG GGA GGC TTO GTA CAS CCC GGG

GGO TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TTT

QCT ATO CAC TGG GTT CGC CAG OCT CCA G3A AAA GOT CTG GAG TGG ATA TGA

GTT. ATTJSAT ÀCy_...^T..;GGT..;GCC. ÃCA TAC TAT GCA GAC TCC GTG AAG GGC CGA TTC ÂCC ATC TCC ASA GAC AAT GCC MO AAC TCC TTO TAT CTT CAA ATO AAC

AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACT GCT GTG TAT TAC TGT GCA AGA CTG GGG AAC

TTC TAC TAC GGT ATO OAC GTC TOS GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC ra (SEQ ID NO: 12) 20

Hefc Glu Phe Gly Lfeu Ser Trp Vai Phe Leu Vai Ala Ile Leu Lye Giv Vai Míh.ÇKl 01» vai gi» 1»®«. vai Gl*t ser Giy Gly Gly hm vai Gin ftco Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ala Wet Mie Trp vel Arg Gin Ala ?TO Gly Ly# Gly L®« Gle Trp lie Ser

La Asp Ser Vai Uya Gly Arg Phe Thr Tie Ser Arg A$p Aan Ala Lyç asp Ser Lee Tyr Lee Gin Met Asn Ser Leu Arg Ma giu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala Arg

Phé Tyr Tyr Gly Met Aap Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Se:r Ser

Os plasmídeos que compreendem um promotor de CMV funcionalmente ligado aos 15H12/19D12 LCC, LCD, LCE, LCF ou aos 15H12/19D12 HCA ou HCB foram depositados na Colecção Americana de Culturas Tipo (ATCC); 10801 University

Boulevard; Manassas, Virgínia 20110-2209 em 21 de Maio de 2003. As designações de depósito e os números de registo dos plasmídeos na ATCC são os seguintes: (1) promotor de CMV-15H12/19D12 HCA (γ4)- designação de depósito: "15H12/19D12 HCA (γ4)" Número de registo na ATCC: PTA-5214 (2) promotor CMV-15H12/19D12 HCB (γ4)— designação de depósito: "15H12/19D12 HCB (γ4)" Número de registo na ATCC: PTA-5215 (3) promotor CMV-15H12/19D12 HCA (γΐ)— designação de depósito: "15H12/19D12 HCA (γΐ)"; Número de registo na ATCC: PTA-5216 (4) promotor CMV-15H12/19D12 LCC (K)-designação de depósito: "15H12/19D12 LCC (k)"; Número de registo na ATCC: PTA-5217 21 (5) promotor CMV-15H12/19D12 LCD (κ)- designação de depósito: "15H12119D12 LCD (κ)"; Número de registo na ATCC: PTA-5218 (6) promotor CMV-15H12/19D12 LCE (κ)- designação de depósito: "15H12/19D12 LCE (κ)"; Número de registo na ATCC: PTA-5219 (7) promotor CMV-15H12/19D12 LCF (κ)- designação de depósito: "15H12/19D12 LCF (κ)"; Número de registo na ATCC: PTA-5220

Todas as restrições sobre o acesso aos plasmídeos depositados na ATCC serão retiradas após ter sido obtida a concessão de uma patente de invenção. De acordo com uma forma de realização da presente invenção, um anticorpo anti-IGFlR ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, de acordo com a invenção, compreende gualquer uma das CDR ou das cadeias pesadas ou leves da Ig ou suas regiões variáveis em qualquer dos PTA-5214-PTA-5220. De acordo com uma forma de realização da invenção, o anticorpo compreende uma cadeia leve codificada pelo plasmídeo depositado com o número PTA-5220 e uma cadeia pesada codificada pelo plasmideo depositado com o número PTA-5214 ou PTA-5216.

De acordo com uma forma de realização, um anticorpo que se ligue "especificamente" a um IGF1R humano, liga-se com um coeficiente Kd igual a cerca de 1,28X10”10 M ou inferior, segundo medições da 'Biacore', ou com um indice Kd igual a cerca de 2,05X10”12 ou inferior, segundo medições da 'KinExA'.

Além disso, também está compreendida, no âmbito da presente invenção, a utilização supramencionada de qualquer anticorpo ou de qualquer fragmento de anticorpo que compreenda uma ou várias CDR e/ou regiões estruturais das sequências de qualquer uma das imunoglobulinas de cadeias 22 leves ou imunoglobulinas de cadeias pesadas explicitadas nos documentos WO 2002/53596; WO 2003/59951; WO 2004/83248; WO 2003/106621 ou WO 2004/87756, identificadas por qualquer dos métodos descritos por Chothia et al.r J. Mol. Biol. 186:651-663 (1985); Novotny and Haber, Proc. Natl. Acad.

Sei. USA 82:4592-4596 (1985) ou Kabat, E. A. et al.,

Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)).

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR é produzido por um hibridoma que se encontra depositado na Colecção Americana de Culturas Tipo, com os números de depósito PTA-2792, PTA-2788, PTA-2790, PTA-2791, PTA-2789 ou PTA-2793.

De acordo com uma forma de realização da invenção, o anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre o conjunto constituído por: 1 grlggàwrsi rlaeaiagft fâdyymawir qapgkglewv ayisssgstr 53, dyadsvkgrf tísrdnakna lylqmneixa adtayyyev*· dgvattfyyy 301 yygmdvwgqef ttvt.vsea.st kgpavfplap caratsesta algclvkdyf 151 p«pvfcvswn9 galtegvfatf paca CSEO ÍD NO: 13) l vgllesgfgl vqpggslrla ctasfftíae yamawrgap gkglawsai 53 sgsggttfya dsvjçgrffeis retaarttlyl qranalraedfe avyyeakdlg 101 wsdsyyyyyg mdvwgqgttv fevsa (SEQ ÍD MO: 14) t gpglvkpssfc laltctvagg sienyywswi tgpágkglett igriytçgsp SI nyapslkasrv fci*Bvdtakeq ÊâUdnsvta adtavyycav tifgwiifd 101 y*ffggtlvfcv ss (SEQ ÍD NO: 15)' 23 1 avqliesgggp Ivqpggslrl scaasgftfs syamewvrqa pgkglewvsa 51 iisgsggityy adsvkgrfti srdnskntly Iqmnslraed tstvyycakdl iOX gyg<t£yyyyy gratívwgqgtt tftvee (SEQJD NO; 16) 1 pglvkpaetl eltetvgggs iseyyvswir qppgkglewl gyíyyggstn SJ, ytspalksrvfc iavdtskngf alklBsvtaa dtavyycart yssgfyyygsi 101 àwwgggttvt vas (SEQID NO; 17) 1 evqllesggg Ivqpggslrl acaasgftfa ayaíBewrqa pgkgiawvsg Si itgsggstyy âdsvkgjrSti Hxduskntly lqEi&slra«d tâvyycaMp 101 gttvimewfd pwgqgtlvtv «s (SEQ m NO; 16)

De acordo com uma forma de realização da invenção, o anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre o conjunto constituído por: t aavgdxvtft eraaqdirxd lgwyqqkpgle apkrliyaas rlqsgvpsrf Si sgsgegfceft Itisslqpeá fatyyelqht* nyprfctgqgt eveiirtvaa 101 pavfifppeá eqlksgtasv VGllunfypr eakvqw (SEQ 10 NO: 19) 1 diqmtqfpss Isasvgctevt itcraisggir· ndlgwyqqkp gkapkrliya SI asrlhrgvpe rfsgsgsgt© ffclfcieslqp ©àfatyyelq hnaypcafgq 1Õ1 gtkleik (SEQ 10 NO; 20) 1 saleaavgdx vtftcrasqd ixxdlgwyqq kpgkapkrli yaaarlqagv 51 psrfegsgag teftltísal qpedfatyyc Ιφmsyprfcf gqgteeveiix (SEQ m HO: 21) 1 áiqnsfcqsps» laasvgdrvt Itcxasqgix edigwfqqkp gkapkrliya Si asklkrgvps rísgsgsgfce fiitiarlqp edfafcyyclq imsypltfgg 101 gfckveik (SEQ m NO: 22) 24 1 gdrvtieera eqaistflnw yqqfcpgkapfc llihvasslq ggvparfsgs SI gsgtdffcltl sslqpadfafc yyeqgeyMap lfcfgggtfcve ifc (S£QÍONO:23) I ratlacrasq evrgrylawy qqkpgqaprl liygaasrat gipdrCegsg SI egtdftltis rlepedfavf ycq^ygaapx' tfgqgfckvei k (SEQID NO: 24}

De acordo com uma forma de realização da invenção, o anticorpo anti-IGFlR compreende uma cadeia leve de imunoglobulina, ou um seu fragmento maturo (isto é, ao qual falta a sequência de sinal), ou uma sua região variável, compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos: 1 tfKtorvpaqlf Cjllllwfpga gç&iqaifcstap ssl$asvgdr vtitcraagq Si taftltissi - 101 ffiKtffátyyc Iqkngypwfcf gqcrtkveikr fcvaapsvflf ppadeqlksg 151 taswellr» fypreakvgw kvdjialqsgn eqeavteqde tedatyslssfc 301 Itl&kadyek kkvyaeevth qglsepvtka fcurgec ; (SEO IO NO: 25) 1 máffirvpaqM gllllwfpgâ rcdígmtgap afllaasvgdr vffteraggd SI írrálgwygg kpckapkrli vasarlasov parfsgagag tetfclefasl 1°1 qpedfatyyc Ighiuiyprtf gefqteveiir tvaapsvfif ppsdeqlksg 151 taswGllrm fypreakvqw kvdnalqsgn sqssvteqds kdetyslost 201 Itlskadyek hkvyacevth qglsspvtks fnrgec ; fSEQ ÍD NO: 26} 1 radmrvpaqll gllllwfpga rcdigtRCqsp Eslsagvqdr vfcitcmaqg Sl irndlqwyqrot kpcjkapkrli ymmlmw psrfmsvsci tefbltiasl 101 qpedfatyyc Iqhnaypytf gq-gtkleíkr tvaapavfif ppsdeqlksg 151 taswcllrm Êypreakvqw kvdnalqsgn sqesvfcsqds kdstyslsst 201 Itlskadyek hkvyacevth qglsspvtk® fnrgec |$ÊQ ID ND: 27) 25 1 ttámrvpaqll gllllwfpga rcálqptqfp sslfíaavgdE vtítcrasqg 51 irndlgwyqg kpghapkrli. yaasrihrqv psrfsgsgsc? fceftltissl 101 qpsdfáfcyyc Iqhnaypcsf gqgtkleikr tvaapavfif ppsdeqlksg 151 tâ&wellnn fypre&kvqw kvdnalqsgti sgesvtsqdg kdstyslsst 201 Itlskadyek bKvyacevfch gglsapvtks fnrgec (SEQ ID NO: 28) . De acordo com uma forma de realização da invenção, a sequência de sinal compreende os aminoácidos 1- 22 das SEQ ID NOs: 25-28. De acordo com uma forma de realização da invenção, a região variável matura está sublinhada.

De acordo com uma forma de realização da invenção, o anticorpo anti-IGFlR compreende uma cadeia pesada de imunoglobulina ou um seu fragmento maturo (isto é, falta-lhe a sequência de sinal), ou uma sua região variável, que compreende a sequência de aminoácidos seguinte: 1 «efglewvfl vaiifegvgccr vcrlvssqqgl vjcpggalrls eaaoqffcg&d 51 yymswirqap gkglgwsyi ssssgatiyya dsvkgrftls rdntakrtg lyl 101 epnslragdt avyycarvlr fjgwllyyyy yyqmdvwcrqq. ttvfcvaaast 151 kgpsvfplap esrstsesfca algcivkdyf pepvtvsms galtsgvhtf 201 pavlqasgly slsswtvps snfgfcqfcyfce nvc&kpsnck vdkfcverkcc 251 veeppcpapp vagpsvflfp pkpkdtlmiíj xtpevtcvw dvshedpevq 202 fnwyvdgvev hnaktkpxee qfnsfcfrws vltwhgdwl ngkeykckvs 351 akglpspiak tisktkgqpr epqvytlpps reetrsfckrujvs Itclvkgfyp 401 sdiavewesn gqpermyktt ppraldjsdgBf flyskltvdk srwqqgttvfs 451 csvmhealhB hytqkslals pgk ; (SEQ ID NO: 29} 1 litéfglswvfl vallkqyiqcq aqlvgggqgi vkpggslrls eaaaqftfsd 51 qktjflgwvsvl sssqstrdva dsvkgrftie rdnakiisiyl 101 gpmslraedt avyycvrdgv ettfyyyyyq iBdvwgcrqtbv fcvssasfckqp 151 svfplapcsr stséataalg clvkdyfpep vtvswnagal tsgvhtfpav 201 Iqssglysls avvfcvpasRf gtqtytcnvd hkpsnfckvdk tverkçcvec 251 ppcpappvag pavflfppkp kdtlmisrtp evtcwvdvs hedpovqfpw 301 yvdgvevhwa ktkpr&eqfn stfrwsvlt whqdwlngk eykckvsnkg 351 Ipapiekfcis ktkgqprepq vytlppsree mtknqyslte Ivkgfypsdi 401 avewesngqp eanykttpp® IdsdgsffXy ákltvdksrw gqgnvfscav 451 ffllieaXh.rt.hyt qkalslepgk ? {SEQ 3D NO: 30) 26 1 roefglswlfX vailkgvqce vgllesgqql vgpgqalria caasgftfsa 51 ggsqqstyya dsvkqrftls ránskntlyl ÃvyycakÍlVS aqwvyYYyCi ffldwqqgfctv tVSSasfckqp 111 avfplapesr «teêstaalg elvkdyfpap vtvewuagal tegwhtípav 201 igesglyela swtvpasnf gtqtytcnvd hkpâ&fckvâk tverkôevec 251 ppcpappvag psvflfppkp kdtlmisrtp evtevwdva fcedpevqf&tf 101 yvdgveviaaa fctkpre«q£» stfurwgvlt whqdwlrtgk eykckvimkg 151 Ipapíektis ktkggprepq vytlppsree wfckoíprsltc Ivkgfypedi 401 avewesegqp eartyktSppm Idsdgsffly ekltvdksrv qqgnviixíav 451 mheal&aiiyt qkalalspgk ; (SEQ ÍD NO: 31) 1 mefglâwifX SI Yarowvrqap wllkgvgce vqllasqfãi vqpggal ri a.ctasqi tf os qkalawvaai sgggqfctfYa davkstrffcls rdnsrfcfclyl Í8i qroolraedt avyyeakdig waáa^ 1S1 ãvfplâpc&r 201 Iqaeglysls fcyesas fckfp 251 ppcpaiipvag 301 yvãgvevJma 351 Ipapiçkfci»· 401 a^ewesugqp 451 mhéalhJihyt atsestaalg clvkdyfpep vtvswásgÃl fcsgvístfpav ewtvpeenf gtqtyfccsvd íikpsátkvâk tverkcevec pevflfppkj? kdtlrtdsrtp evtcvvvdvs kedp*v<j£aw fctkpreegfn stfrwsvlt whqdwlngk eykckvsakg RSkgqprepq vytlppsres rofckaqvsltc Ivkgfypsdi e&aykfcfcgpss Idsdgsffly akltydkgrw qqpivfacâv qkslalspgk (SEQ id NO: 32) . De acordo com uma forma de realização da invenção, a sequência de sinal é constituída pelos aminoácidos 1-19 das SEQ ID NOs: 2 9-32. De acordo com uma forma de realização da invenção, a região variável matura está sublinhada.

De acordo com uma forma de realização da invenção, o anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos seleccionada entre as SEQ ID NOs: 19-24, emparelhada com uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada respectivamente entre qualquer das SEQ ID NOs: 13-18. De acordo com uma forma de realização da invenção, o anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável de cadeia leve matura que compreende 27 uma sequência de aminoácidos seleccionada entre as SEQ ID NOs: 25 ou 26, emparelhada com uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre as SEQ ID NOs: 2 9 ou 30. De acordo com uma forma de realização da invenção, o anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável de cadeia leve matura que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entras as SEQ ID NOs: 27 ou 28, emparelhada com uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre as SEQ ID NOs: 31 ou 32.

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende uma cadeia pesada de imunoglobulina ou um fragmento maduro ou uma região variável de 2.12.1 fx (SEQ ID NO: 33) (de acordo com uma forma de realização da invenção, a sequência lider está sublinhada): l m&miBanvil vaíikgvqcq vqlvesgggl vl^fgplxXe caasgftfsd Si yypswixqâp gkglewvsyi sssgstrdya davkgrftis rdtaaknsly! 101 qpeelraedt avyycardgv ettfyyyyyf mdv^qgttv tvasastkgp 1S1 avfplapesr sfcsestaalg clvkdyfpep vtvswaegal fcegvbtffAv 201 Xqasgiyslsi swtvps&nt gtqfcytcnvd hkpâafckvdk tvôrkecvse 2S1 ppcpappvag jsavflfppkp kdtlmi srfcp avtcvvvdvs bedpevqfaw 301 yvdgvevhna ktkpreeqfn stfsrwavife whqdwlngk «ykckvsakf 351 lpapiaktia ktkgqprepq vytlpparee Ivkgfypsdi 401 eimyketppre ldedgeífly akltvdkarw qqgavfscsv 451 mbaalhnkyt qkslsXspglc

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende a região variável da cadeia pesada da imunoglobulina matura, designada por 2.12.1 fx (aminoácidos 20-144 ou SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34) : 28 q vqlveegggl vkpggslrls eaasgffcfsd yymawirqap gkglewvsyi Bsegatrdya dsvkgrftia rdnakaaiyl qnmsiraedt avyycardgv ettfyyyyyg mcívwggeffctv tvas

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende uma cadeia leve de imunoglobulina ou um fragmento maduro ou a região variável 2.12.1 fx (SEQ ID NO: 35) (de acordo com uma forma de realização da invenção, a sequência líder está sublinhada): 1 mamEVpaqlI gllllfrtfpqa rcdlgrafegap sslsaavgdr vtitcr&aqd si irrdlgwyqq fcpgkapkrli y&asrlq&gv psrfagagsg teftltisal 101 qpe&fafcyyê Iqlmnyprtf gqgtfcveíkjr tvaapavfif ppadeqlksg 151 fcaawHilmi fypreakvqw kvdnalqago sqesvteqda kdstyalaat 201 Itlskadyek Mfevyscevtb qglaspvtke ffijegec

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende a região variável da cadeia leve da imunoglobulina matura, designada por 2.12.1 fx (aminoácidos 23-130 da SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36):

diqmtqsp sslaasvgdr vtifccrasqd irrdlgwygq kpgkapkrl i yaaerlgsgv psrfstgsgsg teltltleel qpeâfafcyyc Iqteaypjref gqgtkveikF

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina humanizada 7C10; versão 1 (SEQ ID NO: 37): i dwmtqspls Ipvtpgepas iíscrssqaiv hs»g»fcyl<qw ylqkpgqspq 51 lliykvsnrl ygvpdrfsga gjagt&ftlki atveaedvgv yYcfqgsh^p 101 wtfgíjgtkve ik 29

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-iGFlR compreende a região variável da cadeia leve da imunoglobulina humanizada 7C10; versão 2 (SEQ ID NO: 38): X divmfcqfjpls Ipvtpgepas» isçrseqeiv hangntylqw yiqkjsgqspg SI lliykvsml ygvpdxfsgs «pgftdffclM srveaedvgv yycfqgshvp 151 wtfgqgtkvfc ik

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina humanizada 7C10; versão 1 (SEQ ID NO: 39): I qvqlqesgpg Xvkpsfôtlal tctvsgysit gqylwnwirq ppgkglswtsg 51 yiaydgttmy kpslkdriti sacdtskuqfs Iklssvtaad tavyycaryg 5.01 r-vffdywgqg tlvfcvsa

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina humanizada 7C10; versão 2 (SEQ ID NO: 40): 1 qvqlqesgpg Xvkpsetlel fcefcvagysifc ggylwnwirq ppgkgleitfig 51 yisydgtrmy kpalkdrvtl srdtstaíqfs Iklasvtaad tavyycaryg 101 rv£ f dywjqgr fclvfcva#

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina humanizada 7C10; versão 3 (SEQ ID NO: 41): 1 qvqlqesgpg Ivkpsetlsl tctvsgysia ggyiwawirq ppgkglewig 51 yiaydgtnny kpslMnrfci svdtsknqfs ikXssvtaftd fc*vyycaryg 101 rvffdywfqg tlvtvaa 30

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-iGFlR compreende uma região variável de cadeia pesada da imunoglobulina A12 (SEQ ID NO: 42): -r 1 ©vgivfsgae vkkpgsevkv eckafiggtfe eyaiawvrqa pgqglewagg si iípi£gfc<my aqkfqgrvti tedksfcstay íselaslxsed tavyycarap 101 Irflewstqd hyyyyymdvw gkgttvtvga

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende a região variável de cadeia leve da imunoglobulina A12 (SEQ ID NO: 43): 1 sstelfcqdpav svalgqtvri tcqgdalrey yasswyqqkpg qapvlvíygk SI murpsgipdr sXfcifcgaqae deadyycaar

101 qqtKltvlB (SEQ ID NO: 105): I »e«ltqdpw «valgqtvri tcggdslrsy yatwyqqkpg qapilvíyge SI nkxpsglpdr fsgeasgnfca slfcifcgaqae deadyycksr ágsgqàívfg 3,01' ggtlcitvlf

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende uma região variável da cadeia pesada da imunoglobulina IA (SEQ ID NO: 44) : 1 evqlvqsggg Ivhpggslrl scagegEtfr EyamywvTqa pgfcglewvsa. SI igsgggfcyya dsvfcgrgfcis ritnaknalyl qamglraedm avyycárapa 101 wgadafdiwg qgtwvtvss incluindo facultativamente uma ou várias da mutações seguintes: R30, S30, N31, S31, Y94, H94, D104, E104. 31

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-lGFlR compreende uma região variável da cadeia leve da imunoglobulina IA (SEQ ID NO: 45): % diqnitqspsa Isâsrvsgdbnrt iteraeggis swlawyisgkp eknpksHya 51 aaalqsgvpe rfsfsgsgtd ÊtJtisslqp edfatsyyeqq yasyppfcfgp 101 gtkvâik incluindo facultativamente uma ou várias da mutações seguintes: P96, 196, PlOO, Q100, R103, K103, V104, L104, D105, E105

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende o anticorpo de cadeia única (fv) 8A1 (SEQ ID NO: 46): 1 evqlvqagae vkkpgeslti ackgpgyaff aywigitfircqffi pgkglewmgí 51 iyptdsdtry apefqgqvti avdkeiefcay Iqwselkâsd tarnyycarti Í01 rycpggircys gyygmdvwgq gfemvtvssgg ggsggggsgg ffoaeltgdp IS1 avsvalgqtv ritcqqdslr syyaswyqqk pgqapvlviy gfcmxrpsgip 301 ífeisgeasg® taaltitgag âedeôdyycn fetggtkltvl 2S1 g

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende o anticorpo de cadeia única (fv) 9A2 (SEQ ID NO: 47): 1 qvqlvqagaè vrfcpgasvkv acktegytfr aydinwvrqa pgqglawmgr 51 isghygntdh âqkfqgrftfB fckdtststay melraltfdd tavyycarsg 101 wavdywgrgt Ivtvaegggg «339089593 salnftnltqp fcsvsespgfet 1SX vtleçtrssg siaçnyvqvy qqrpgasptt vifedarrps gvpdrfsgal 301 dtasnsaslt isglktedea dyycqsfdat «Iwfgggfek wtvlg

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende o anticorpo de cadeia única (fv) 11A4 (SEQ ID NO: 48) : 32 1 evgilesggg lvqpggalrl ecaAagttfs syaíttawvrqa pgkglewsa Sl isgsggsfcyy adsvkgrtfei srduskntly Itpnsiraed tavyycaaap 201 yssrwysfdp wgqgtmvtira sggfgsgggg sggggsalsy eltqppsvsv IS2 spgqtatlte sfá&lgakyv swyqqkpgqa pvlviyqdfck rpagiperfs M% gsasgsiafcl fcisgfcqavdô adyycgvwdt gfcwfgggtk Ifcvlg

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-lGFlR compreende o anticorpo de cadeia única (fv) 7A4 (SEQ ID NO: 49): 1 avqlvqsgae vkkpgealtl sckggqy&ff nywígwrqm pgkdlewmgi 51 iyptdísdtry apafggqvti avdksistay XqwsBlkaád tafnyy catai 101 rycpggrcys gyygradvwgq gttwtveagg gsaggggagg ggeseifcqdp 151 avavalgqtv rifccrgdslr nyyaswyqqk pggapvlviy gkmirpegip 202 dKrfagaaas» fcãsltitgaq aedeadyyen SEdssgtduw fgggtklfcvl 252 gr

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende o anticorpo de cadeia única (fv) 11A1 (SEQ ID NO: 50) : 1 evqXvesggg wqpgrslrl scaasgffcfs d£artd«*vrqi pgkglewlsg 51 Irhdgscayy agsvkgrfci srdnsmtvy Iqjroalraed tatyycvtgs 102 gssgphafpv sgfegtlvtvs sgsggsggçfg sggggsalsy vltqppsasg 152 tpgqrvt ikc «fsas&igfcy tvawfqqlpg tapklliysa oqrpagvp&r 202 f 3gsk.sgtsa slaísglqee deadyycaaw ddslogpvfg ggtkvtvlg

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR compreende o anticorpo de cadeia única (fv) 7A6 (SEQ ID NO: 51) 33 l evqlvqggae vkkpgeslti aekgefjmff nyvigvvrqm pgkglewtsgí £l iyptdsdtíry apsfqgqvtí sváksistay Iqwselkasd fcarnyycarai 101 rycpggrcys gyygmdvwgg gtlvtvssgg ggeggfgegg ggsgeltqdp 1S1 avsvalgqfcv ritcqgdslr ayytawfggk pgqâpHwy âkakrpsgip 201 drfegssega taeltitgâq aedeadyyco erdsagnitw Cgggtkltvi 2S1 g

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR ou um seu fragmento de ligação ao antigénio (v.g., uma cadeia pesada de imunoglobulina ou de cadeia leve) compreende uma ou várias regiões determinantes da complementaridade (CDR) seleccionadas entre o conjunto constituído por: sywmh (SEQ ID NO: 52); einpsngrtnynekfkr (SEQ ID NO: 53); grpdyygsskwyfdv (SEQ ID NO: 54); rssqsivhsnvntyle (SEQ ID NO: 55); kvenrfs (SEQ ID NO: 56); e fqgshvppt (SEQ ID NO: 57).

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR ou um seu fragmento de ligação ao antigénio compreende uma região variável da cadeia pesada de imunoglobulina seleccionada entre o conjunto constituído por: 1 qvqlvqsgae wkpgasvki sckaagytffc aywtówvkqtr pgqgliswlgè 51 iopsBgírtay nqkfqgkatl tvdkassfcay mqlsslièssd savyyfargr 101 pdyygaekwy fdvwgqgfetv fcv$ (SEQ ED NO: 53); 1 qvqfefqagae ivkpgasvkl ackasgytft aylmhwikqr pgrglewigr SI idSpBnwtkí nekfkskafel tvdkpssfcay malgsltsed savyyearya 101 ycrpntdywgq gttvtvss (SEQ D NO: 59); 34 1 qvqlqqsgae Ivkjjgaavkl Si iopsíigrtny nekfkrkatl 101 pdyygsakwy fdvwgagttv (SEO !D NO: 60); scfcaegytffc sy*«nhwfcfe pgqglewige tvdksasfcay aqlsslfesed aavyyfargr tva , 1 qyflqgagae Imkpgasvfci SI iipgsggtíiy nekfkgkafcf 101 syyfydgdyw gqgfcsvtvss ($m ID NO: 61); sckatgytfg síwiewvkqr pghglewige tadkaanfcay «sqlaeltsed savyycargh 1 qvqiqqpgâV Ivtpgaavfcl 51 ibpasgntoy aekÉkgkatl 101 ygspyyfdyw gggttltvss {SEQ ED NO: 62); sckasgytft sswiíxwakgr pgqglewfge tvdtssstay vdlssltaed savyycarwr ÊCkasgytÉt sywm&wvkqr pgrglewigr tvdkpsatay raglaaltsad savyyeacyd 1 qvglqqpgaa Ivkpgaavkl Si ãdpnsggtky nekfkskatl 101 yygssyfdyw gqgttltve® ÍSEQIDN0:63); 1 qvqlvqsgae wkpgasvkl 51 inpangrtay nqkfqgkatl 101 pdyygsskwy íctvwgqgttv {SEQ O NO: 64); sckasgytft sywmhwvfcqr pgqglewíg< tvdkssstáy mqlsslfcsed savyyfarg: tvs 1 qvqlqqsgae Ivkpgasvkl sckasgytft syvwahwvkqr pgqglewig Sl inpsngrtny nekífcrkatl tvdkssstáy mqlsslfcsed savyyfarg lõl pdyygsskwy fdvwgagttv tvgs (S£Q ID NO: 65); 1 qvqlvqsgae wkpgasvkl sckasgytft sywmhwvkqr pgqglawige Sl inpsngrtrjy «qkfggkatl tvdkssstay mqlssltsèd savyyfargr 101 pdyygsskwy fdvwgqgttv tvss {SEQ ID NO: 66); 35 1 qvqlqqsgae Ivkpgasvkl 51 idpnsggfcky nekfkskafcl 101 yygssyfáyw gqgttvtvss (SEQID NO: 67); sckasgytft sywttihwvkqaf pgrglewàgr tvdkpsstay roqlssltesed savyyearyd 1 qiqlqqsgps Ivrpgasvki 51 iypgsgatky nekfkgkati 101 kfaradywgqg tavfcvsa (SEQ10 NO: 68); sekasgyfcffc dyyihwvkqr pgeglewigw tvdtgsatay mqlaslfcsed savyfcargg 1 qvqlqqsgae Ivkpgasvkl 51 íjspsngxtny aakfkrkâtl ΙΟΙ pdyygsskwy fdvwgagttv (SEO ID NO: 89); sckasgyfcft sywmhwvkqír pggglawiga tvdkssstay Biqlãsltsed a&vyyÉaígr tvss 1 qiqlqqagpe Ivkpgasvki Si idpgsgntky nekfkgkati IO! ttyyyawdyw gggtsvtvaa (SEO ID NO: 70); sckasgytft dyyinwmkqk pgqglewigw fcvdfcasstay BKjlealtaed t.ávyfcarak ekasgytfsd ywiewkqrp ghglewigai adtasatayw qlnsltseds gvyyclhgny 1 vqlqqsgaeX tnkpgaavklS 51 lpgsgstnyh erfkgkatft 101 dfdgwgqgtt Itves (SEQ SD NO: 71); and l qvqllesgaa latkpgasvki 51 ilpgsggtfey nekfkgkatf 101 syyfydgdyw gqgtavtvss (SEQ ID NO: 72); sckatgytfs sfwiewvkqE· pgbglewige tadkssntay mqlssltaed s&vyysârgh e/ou uma região variável da cadeia leve de imunoglobulina seleccionada entre o conjunto constituída por: hnngnfcylaw ylqkpgqspg srveaedlgv yycfqgshvp 1 dvlrotqipvs Ipvslgdqas iscrssqllv 51 lliykvsnrf sgvpdrfsgs gsgtdftlkí 101 ftfgsgekle ikr {SEQ ÍD NO: 73); 36 % dvlmtqfcpls Ipvslgdpas iserssqsiv hsnvatylew yiqkpgqspk 51 lliykvsnrf (sgvpdrfsgs gagtdftlri srveaedlgi yycfqgshvp 101 ptfgggtkls ikr {SEQ !D NO: 74); 1 dvlmtqtpis lpvslgdpas iserssqsiv hsnvntylew ylqkpgqspr si lliykvsnrf sgvpdrfsgs gagtdftlri srveaedlgi yycfqgsbvp 101 ptfgggtkle ikr (SEQ ÍD NO; 75); 1 dvlmtqtpls Ipvslgdpas iacrssqsiv hsnvntylew ylqkpgqspk Si lliykvsnrf sgvpdrfsgs gagtdftlri srvsaedlgi yyefqgshvp 101 ptfgggtkle ikr {SEQ ID NO; 76); 1 dvlmtqtpis ipvelgdpaa iserssqsiv hsrrmfcyiew yigkpgqspr 51 lliykvsnrf sgvpdrfsgs gagtdftlri srveaedlgi yycfqgshvp 101 ptfgggtkle ikr (SEQ ID NO: 77); 1 dvlmfcqfcple Ipvslgdqas iecrssqjàv hsngntylew ylqkpgqspk 51 lliykvsnrf sgvpdrfsgs gsgtdftlki srvÊaedlgv yycfqgshvp 101 stcfgggtkle ikr (SEQ ID NO: 78); 1 dwmtqtpls lpvslgdpas iserssqsiv hsnvnfcylew ylqkpgqspk $1 lliykvsnrf sgvpdrfsgs gágtdftlri srveaedlgi yycfqgshvp 101 ptfgggtkle ikr (SEQ (D NO: 70); 1 dwrutqtpls Ipvslgdpas iserssqsiv hsnvnfcylew ylqkpgqspr 51 lliykvsnrf sgvpdrfsgs gagtdftlri srvesedlgi yycfqgshvp 101 ptfgggtkle ikr {SEQ ID NO: 80); 1 dvlratqtpls Ipvelgdpas iserssqsiv hsnvnfcylew ylqkpgqspr 51 lliykvsnrf sgvpdrfsgs gagtdftlri srveaeâlgi yyefqgshvp 101 pfcfggqfckle ikr (SEQ ID NO: 81);' 37 1 dvlmtgipvs Ipvslgdqas iscrssçiív hnngiitylew ylgkpgqâpq 51 lliykvsnrf sgvpdrf sgs gsgtdffclki srveaedlgv yyçfqgshvp 101 ftfgegtkle ikr (SEQID NO: 82); 1 dvlmtqtplss Ipvslgdgas iscrfsqsiv hsngntylew ylqfcsgq&pk SI lliykvsnrf sgvpdrfsgs gsgtdffclki srvcaedlgv yycfqgshvp 101 rtfgggtkls ikr (SEQ )D NO: 83): 1 dvlmtqtpls Ipvslgdgas iscrssgsiv hsnvnfcylew ylqkjigqspk SI lliykvsnrf sgvpdrfaga gsgcdftlrí srveaedlgi yycfqgshvp 101 ptfgggtkle ikr (SEQ 10 NO: 84): 1 dwmtqtpls lpvalgdpas íscrssqsiv fasnvnfcylew ylqkpgqspk SI lliykvsnrf sgvpdrfsgs gagtdffclri srveaedlgi yycfqgshvp 101 ptfgggtkle ikr (SEQ ID NO: 85); 1 elvjRtgtpls Ipvslgdgas iscrssqtiv hsagdfcyldw £ Iqkpgqspk 51 lliyítvgarf sgvpdrfsga gsgfedffclki srveaedlgv yycfqgshvp 101 pfcfgggtkle ikr (SEQ ID NO: 86); l dvlffltgtpls lpvslgdpas iserssqsiv hgnvntylew yIqkpgqspk 51 lliykvsnrf sgvpdrfsgs gagtdftlri srveaedlgi yycfqgshvp ΙΟΙ ptfgggtklè ikr (SEQ ro NO: 87); 1 dvwttqtplB lpvslgdpas iscrssgsív hsnvntylew ylqkpgqHpr SI lliykvsnrf sgvpdrfsgs gagtdftlri srveaedlgi yycfqgshvp 101 ptfgggtkle ikr (SEQ ID NO: 88); 1 dvimfcqtpvg Isvelgdqas iaeyesqsiv hsfcgntylew ylqkpgqspk 51 lliykiatirf sgvpdrfsgs gsgtdfUki srveasdlgv yycfgaahap 101 rtfgggtkie ikr (SEQ ID NO: 89); 38 1 dvlròtqfcpie ipvsigdqag isekesqgiv hssgntyféw ylqfcpgqspk SI 11 iykvsarf agvpdrfsgs gsgtdffclki srveaedlgv yycfqgship 101 ftfgsgtkle ikr (SEQ ID NO: 90): l diéltqtpls Ipvslgdqas iscrsaqsív hsngtitylew ylqkpgqspk 51 lliykvanrí sgvpdrfsgs gsgfcdftlki srveaedlgv yyefqgsbvp 101 ytfgggtkle ikr (SEQ ID NO: 91): 1 dvlmtqtpls Ipvslgdqas íscrssqsiv fesisvntylew ylqkpgqspk 51 lliykvsotf sgvpdrf®gs gsgtdftlri srveaedlgi yycfqgsbvp lol pfcfgggfckle ikr (SEQ ID NO: 92); 1 dwmtqtpls Ipvslgdpas iecr&sqsiv hsHvntylew ylqkpgqapr SI IMykvsnrf agvpdrfsgs gagtdftlri srveaedlgi yycíqgshvp 101 ptfgggfckle ikr (SEQ ID NO: 93); 1 dvlmtqtpls Ipvslgdqas iserssqsiv hsnvatylev ylqkpgqspk sl lliykvsnrf sgvpdrfsgs gsgtdftlri srveaedlgi yyefqgshvp 101 ptfgggtkla ikr (SEQ 10 NO: 94); 1 dwmtqtpls Ipvslgdpas iserssqsiv hsnvntylew ylqkpgqspk Sl lliykvsnrf sgvpdrfags gagtdftXri srveaedlgl yyefqgsbvp. 101 pfcfgggfckle ikr (SEQ fD NO: 95); l dvlrceqtpla ipvslgdqas iscrsaqtil Isçlgdtylew ylqkpgqspk Sl lliykvenrf agvpdrfsgs gsgtdftlki srveaedlgv yycfqgshvp 101 pefgggtkle ikr (SEQ 10 NO: 96); 1 dvlwtqtpls Ipvslgdqas iserseqfciv hsngfttylew ylqkpgqspk Sl XXiykvtnrf sgvpdrfsgs gsgfcdftlfci srveaedlgv yycfqgthâp 101 ytfgggtkle ikr {SEQ©NO:ST); e 39 I dvlmtqtpls Ipvalgdqag iecrssqsiv fcsngutylew ylgkpggspk 51 iHysissrf sgrvpdrfsga gsgtdmkl srvqaedlgv yyçfqgsskvp 181 ytfgggtítlô ikr A presente invenção também tem por objecto a utilização médica de uma composição, conforme definida anteriormente, em que se administra a um paciente um anticorpo anti-receptor 1 do factor de crescimento í$EO ID NO: BB% semelhante à insulina (IGF1R), em que a região variável do anticorpo é ligada a qualquer região constante da imunoglobulina. De acordo com uma forma de realização, a região variável da cadeia leve é ligada a uma região constante da cadeia k. De acordo com uma forma de realização, a região variável da cadeia pesada é ligada a uma região constante das cadeias γΐ, γ2, γ3 ou γ4. Qualquer das regiões variáveis da imunoglobulina aqui explicitadas, em formas de realização da invenção, pode ser ligada a qualquer das regiões constantes a seguir indicadas.

De acordo com uma forma de realização da invenção, um agente inibidor do IGF1R, para administração a um paciente, é o AEW-541 (NVPAEW-541; NVP-AEW-541-NX-7):

(Novartis; East 2002/92599); ou 40

(WO 2003/39538).

De acordo com uma forma de realização da invenção, um agente inibidor do IGF1R, para administração a um paciente, é qualquer ácido nucleico anti-sense do IGF1R. Por exemplo, de acordo com uma forma de realização, o ácido nucleico anti-sense do IGF1R é o ATL-1101 (Antisense Therapeutics Ltd; Austrália). De acordo com uma forma de realização, o ácido nucleico anti-sense do IGFlR compreende qualquer das sequências nucleotidicas a seguir indicadas: 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 99), 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 100), 5' -ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 101) ou qualquer ácido nucleico anti-sense do IGFlR explicitado em qualquer dos documentos seguintes: pedido de patente de invenção norte-americana já publicado com o número US20030096769; pedido de patente de invenção internacional já publicado com o número WO 2003/100059; Fogarty et ai., Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 2002 Dec; 12(6):369-77; white et ai., J Invest Dermatol. 2002 Jun; 118 (6):1003-7; White et ai., Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 2000 Jun; 10 (3):195-203; ou Wraight et ai., Nat Biotechnol. 2000 May; 18(5):521-6.

De acordo com uma forma de realização da invenção, um agente inibidor do IGFlR, que pode ser administrado a um paciente, segundo um método de acordo com a invenção, é um anticorpo anti-IGF-l ou II; por exemplo, qualquer anticorpo explicitado nos documentos WO 2003/93317 ou EP00492552. 41

No âmbito da presente invenção também está compreendido qualquer composto inibidor de cinases, explicitado nos pedidos de patentes de invenção internacionais já publicados com os números WO 2004/030627 ou WO 2004/030625. De acordo com uma forma de realização, o inibidor das cinases é o composto (±)-4-[2-(3-cloro-4-fluorofenil)-2-hidroxi-etilamino]-3-[6-(imidazol-l-il)-4-metil-lH-benzimidazol-2-il]-lH-piridin-2-ona:

(facultativamente em combinação com paclitaxel ou com cetuximab).

De acordo com uma forma de realização da invenção, o agente inibidor do IGF1R é um fragmento solúvel de IGF1R (v.g., os aminoácidos 30-902 do IGF1R) ou siRNA (ARN interferente curto) contra o IGF-1R.

De acordo com uma forma de realização, o IGF1R compreende as sequências de aminoácidos depositadas no Genbank com os números de admissão XM_052648 ou NM_000612. A presente invenção compreende também os casos em que o paciente recebe simultaneamente um agente inibidor do IGFlR em associação com um ou vários agentes diferentes contra o cancro, incluindo, mas sem nenhuma limitação, os seleccionados entre paclitaxel, talidomida, docetaxel, gefitinib, temozolomida, lonafarnib, tipifarnib, letrozol, 42 doxorrubicina, cis-platina, oxaliplatina, camptotecan, topotecan, etopósido, vincristina, vinblastina, raloxifeno, gemcitabina, ácido retinóico, tamoxifeno, trastuzumab, cetuximab ou octreotido; ou os procedimentos terapêuticos contra o cancro, incluindo, mas sem nenhuma limitação, a tumorectomia cirúrgica ou a terapia por radiação anti-cancro. A presente invenção compreende também os casos em que se administra dois ou mais agentes inibidores do IGF1R em associação entre si. 0 termo "em associação" indica que os componentes das combinações da invenção podem ser formulados numa composição única para administração simultânea ou podem ser formulados separadamente em duas ou várias composições (v.g., um estojo). Além disso, cada componente de uma combinação da invenção pode ser administrado a um indivíduo num momento diferente daquele em que é administrado o outro componente; por exemplo, cada administração pode ser aplicada de forma não simultânea em diversos intervalos distribuídos ao longo de um determinado período. Mais ainda, os componentes separados podem ser administrados a um indivíduo pela mesma via ou por uma via diferente (v.g., pelas vias oral, intravenosa, intratumoral).

Geração de anticorpos É possível utilizar qualquer método adequado para gerar um anticorpo com as propriedades biológicas desejadas para inibir o IGF1R. É desejável preparar anticorpos monoclonais (mAb) a partir de diversos hospedeiros mamíferos, tais como murganhos, roedores, primatas, seres humanos, etc.. É possível encontrar a descrição de técnicas para a preparação de tais anticorpos monoclonais v.g., na obra de Stites et al. (eds.) 43 BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY (4a ed.) Lange Medicai Publications, Los Altos, CA, e referências ali citadas; Harlow e Lane (1988) ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL CSH Press; Goding (1986) MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND PRACTICE (2a ed.) Academic Press, New York, NY. Assim, os anticorpos monoclonais podem ser obtidos por meio de diversas técnicas familiares aos pesquisadores especializados na matéria. De uma forma típica, são utilizados esplenócitos de um animal imunizado com um antigénio desejado, os quais são imortalizados, vulgarmente por fusão com uma célula de mieloma. Ver Kohler e Milstein (1976) Eur. j. Immunol. 6:511-519. Os métodos alternativos para a imortalização compreendem a transformação com o vírus de Epstein Barr, oncogenes ou retrovírus, ou outros métodos conhecidos na especialidade. Ver, v.g., Doyle, et al. (edições de 1994 e suplementos periódicos) CELL AND TISSUE CULTURE: LABORATORY PROCEDURES, John Wiley and Sons, New York, NY. As colónias resultantes das células singulares imortalizadas são submetidas a uma pesquisa de rastreio para a produção de anticorpos com as desejadas especificidades e afinidades para o antigénio, podendo a produção dos anticorpos monoclonais gerados por tais células ser intensificada por meio de diversas técnicas, incluindo a injecção na cavidade peritoneal de um hospedeiro vertebrado. Em alternativa, é possível isolar as sequências de ADN que codifiquem um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação, efectuando uma pesquisa de rastreio de um banco de ADN proveniente de células B humanas, v.g., em conformidade com o protocolo geral descrito por Huse et al. (1989), Science 246:1275-1281. Por exemplo, é possível gerar anticorpos modificados introduzindo mutações no ADN que codifica uma 44 cadeia de imunoglobulina, por exemplo, utilizando técnicas biológicas recombinantes convencionais.

Outras técnicas adequadas compreendem a selecção de bancos de anticorpos em vectores bacteriófagos ou semelhantes. Ver, v.g., Huse et al., Science 246:1275-1281 (1989); e Ward et al., Nature 341:544-546 (1989). Os polipéptidos e anticorpos da presente invenção podem ser utilizados com ou sem modificação, incluindo os anticorpos quiméricos ou humanizados. Frequentemente, os polipéptidos e os anticorpos irão ser identificados e marcados juntando-lhes, de forma covalente ou não covalente, uma substância que proporcione um sinal detectável. Sãos já conhecidos diversos marcadores e técnicas de conjugação, exaustivamente descritos em literatura cientifica e de patentes de invenção. Os marcadores adequados compreendem os seleccionados entre radionuclideos, enzimas, substratos, cofactores, inibidores, radicais fluorescentes, radicais quimioluminescentes, partículas magnéticas e não só. As patentes de invenção que explicam a utilização de tais marcadores são as patentes de invenção norte-americanas n°s 3 817 837; 3 850 752; 3 939 350; 3 996 345; 4 277 437; 4 275 149; e 4 366 241. Além disso, é possível produzir imunoglobulinas recombinantes, ver a patente de invenção norte-americana n° 4 816 567 de Cabilly; e a publicação de Queen et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 86:10029-10033; ou podem ser produzidas em murganhos transgénicos, ver a publicação de Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156. Há outros métodos para a produção de anticorpos quiméricos, humanizados e humanos que são perfeitamente conhecidos na especialidade. Ver, v.g., a patente de invenção norte-americana n° 5 530 101, atribuída a Queen et al., a patente de invenção norte-americana n° 5 225 539, atribuída a Winter et 45 al, e a patente de invenção norte-americana n° 4 816 397, atribuída a Boss et al., considerando-se todas elas integralmente aqui incorporadas por referência.

Análise de tumores

Os métodos da presente invenção compreendem o passo que consiste em determinar se as células tumorais manifestam uma ou várias das caracteristicas seguintes: (i) fosforilação do IRS-1 na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina. É possível analisar as células tumorais para se determinar se estão presentes quaisquer destas caracteristicas, praticando qualquer dos diversos métodos vulgarmente conhecidos na especialidade. De acordo com uma forma de realização, é possível determinar a fosforilação do IRS-1 na tirosina por análise de transferência de Western com um anticorpo anti-fosfotirosina. Por exemplo, os anticorpos PY20, PT66 e PTry-100 anti-fosfotirosina podem ser obtidos, em termos comerciais, na empresa 'Perkin Elmer Life and Analytical Sciences, Inc.' (Boston, MA); e o anticorpo 4G10 anti-fosfotirosina pode ser obtido, em termos comerciais, na empresa 'Upstate Cell Signaling Solutions' (Waltham, MA). A análise por transferência de Western é um método convencional perfeitamente conhecido na especialidade. De acordo com uma forma de realização, a fosforilação do IRS-1 na tirosina pode ser determinada por meio de um ensaio imunoenzimático (ELISA) ou por imunoprecipitação. São inúmeras as obras já publicadas que enunciam os preceitos para a aplicação das técnicas supramencionadas (Kohler et al., Hybridoma Techniques (Cold Spring Harbor 46

Laboratory, New York, 1980); Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Elsevier, Amsterdam, 1985); Campbell, Monoclonal Antibody Technology (Elsevier, Amsterdam, 1984); Hurrell, Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications (CRC Press, Boca Raton, FL, 1982); Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc., 1987)).

Dosagem

De acordo com uma forma de realização, administra-se a um paciente um agente inibidor do IGF1R, segundo uma "dose terapeuticamente eficaz" ou numa "quantidade terapeuticamente eficaz" que iniba, preferencialmente, uma doença ou patologia (v.g., o crescimento de um tumor) numa proporção qualquer, de preferência pelo menos igual a cerca de 20%, mais preferencialmente pelo menos igual a cerca de 40%, ainda mais preferencialmente pelo menos igual a cerca de 60% e ainda muito mais preferencialmente pelo menos igual a cerca de 80%-100%, comparativamente com pacientes não tratados. De acordo com uma forma de realização da invenção, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "dose terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade ou dose de um agente inibidor do IGF1R (v.g., um anticorpo anti-IGFlR ou um seu fragmento de ligação ao antigénio) que consiga desencadear uma resposta biológica ou médica de um tecido, sistema, paciente ou hospedeiro, pretendida pelo especialista que a administra (por exemplo, um investigador, um médico ou um veterinário), a qual pode ser qualquer mitigação mensurável dos sinais, sintomas e/ou indícios clínicos de cancro (v.g., o crescimento de um tumor) e/ou a prevenção, atenuação ou 47 interrupção da progressão ou de metástases de cancro, em qualquer grau. A aptidão de um agente inibidor do IGF1R para inibir o cancro pode ser avaliada num sistema com modelos de animais, que permita prever a eficácia em tumores de seres humanos. Em alternativa, é possível avaliar a eficácia examinando a aptidão de um tratamento da invenção ou de qualquer seu componente para inibir o desenvolvimento de células tumorais in vitro, por meio de ensaios experimentais perfeitamente conhecidos pelos especialistas na matéria. Qualquer vulgar especialista na matéria irá ser capaz de determinar tais quantidades com base em factores tais como a massa corporal do paciente, a gravidade dos sintomas do paciente e a composição particular ou a via de administração seleccionadas.

Um médico pode utilizar qualquer um de diversos métodos conhecidos na especialidade para medir a eficácia de uma posologia particular de um agente inibidor do IGF1R. Por exemplo, é possível determinar o tamanho de um tumor, de uma forma não invasiva, por exemplo, obtendo imagens por radiografia, tomografia por emissão de positrões (PET), tomografia computadorizada (CT) ou obtendo imagens por ressonância magnética (RMI).

Diz-se que uma célula cancerosa ou tumoral é "responsiva" a uma agente inibidor do IGF1R se o agente conseguir proporcionar qualquer mitigação mensurável dos sinais, sintomas e/ou indícios clínicos do cancro (v.g., o desenvolvimento do tumor) e/ou a prevenção, atenuação ou interrupção da progressão ou de metástases do cancro, num grau qualquer.

As posologias podem ser ajustadas para se conseguir obter a resposta desejada óptima (v.g., uma resposta 48 terapêutica). Por exemplo, é possível administrar uma dose, é possível administrar várias doses divididas ao longo do tempo ou é possível reduzir ou aumentar proporcionalmente a dose, conforme indicado pelas exigências da situação terapêutica. É especialmente vantajoso formular composições parentéricas em formas unitárias de dosagem, por razões de facilidade de administração e de uniformidade de dosagem.

Um médico ou um veterinário com vulgares aptidões nesta especialidade consegue determinar facilmente e prescrever a quantidade eficaz da composição farmacêutica necessária. Por exemplo, o médico ou o veterinário, pode começar com doses de um agente inibidor do IGF1R, utilizado na composição farmacêutica, em níveis inferiores aos necessários para se conseguir obter o desejado efeito terapêutico, aumentando gradualmente a dosagem até ser alcançado o efeito desejado. É possível determinar a eficácia de uma determinada dose ou regime de tratamento com um agente inibidor do IGF1R, por exemplo, determinado se um tumor que esteja a ser tratado no paciente diminui de tamanho ou pára de crescer.

De acordo com uma forma de realização da invenção, a administração do agente inibidor do IGF1R faz-se por injecção proximal ao local visado (v.g., o tumor). De acordo com uma forma de realização, administra-se uma dose diária, terapeuticamente eficaz, do agente inibidor do IGF1R, ou da composição farmacêutica que o contém, em duas, quatro, cinco, seis ou mais subdoses administradas separadamente em intervalos convenientes ao longo do dia. De acordo com uma forma de realização, uma dose "terapeuticamente eficaz" de qualquer anticorpo anti-IGFlR (v.g., o anticorpo 19D12/15H12 LCF/HCA) está compreendida no intervalo entre cerca de 3 49 mg/kg (massa corporal) e cerca de 20 mg/kg (v.g., 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg. 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg. 19 mg/kg ou 20 mg/kg) por dia. De acordo com uma forma de realização, uma "dose terapeuticamente eficaz" de um agente quimioterapêutico (v.g., um agente inibidor do IGF1R) é aquela que venha a ser possível, conforme explicitado na obra 'Physicians' Desk Reference 2003' (Thomson Healthcare; 57a edição (1 de Novembro de 2002)) que aqui se considera incorporada por referência. Por exemplo, de acordo com uma forma de realização da invenção, uma dose terapeuticamente eficaz de NVP-ADW-742 está compreendida entre cerca de 1 mg/kg/dia e cerca de 50 mg/kg/dia (v.g., 5 mg/kg/dia, 10 mg/kg/dia, 15 mg/kg/dia, 20 mg/kg/dia, 25 mg/kg/dia, 30 mg/kg/dia, 35 mg/kg/dia, 40 mg/kg/dia, 45 mg/kg/dia). Métodos terapêuticos e administração É possível utilizar um agente inibidor do IGF1R para inibir ou reduzir o crescimento ou a proliferação de qualquer célula, tal como uma célula maligna, quer in vitro (v.g., em cultura celular) quer in vivo (v.g., dentro do corpo de um paciente que padeça de uma doença mediada pela expressão ou actividade elevada do IGF1R ou pela expressão elevada do seu ligando (v.g., IGF-I ou IGF-II)). Tal inibição ou redução do crescimento ou da proliferação de uma célula podem ser conseguidas fazendo contactar a célula com o agente inibidor do IGF1R.

De acordo com uma forma de realização, o agente inibidor do IGF1R serve para tratar o cancro num paciente, 50 caracterizado por uma ou várias das características seguintes: (i) fosforilação do IRS-1 na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina. Por exemplo, de acordo com uma forma de realização, o cancro é um cancro vesical, cancro de Wilm, cancro ósseo, cancro da próstata, cancro do pulmão, cancro endometrial, mieloma múltiplo, cancro pulmonar das células não pequenas (NSCLC), cancro do cólon, cancro rectal, cancro colorrectal, cancro da mama (receptor de estrogénios + ou receptor de estrogénios"), cancro cervical, sarcoma sinovial, cancro dos ovários, cancro pancreático, neuroblastoma, rabdomiossarcoma, osteossarcoma, diarreia associada ao tumor que segrega o péptido intestinal vasoactivo ou carcinóide metastático (v.g., VlPoma ou síndroma da Werner-Morrison).

De acordo com uma forma de realização, determina-se inicialmente se um eventual paciente, para ser tratado com um agente inibidor do IGF1R, padece de alguma variedade de cancro sobre a qual se saiba que manifesta, vulgarmente, uma das características seguintes: (i) fosforilação do IRS-1 na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina. No caso de se determinar que o paciente padece de um cancro conhecido pelo facto de ser caracterizado por uma ou várias das 6 características supramencionadas, selecciona-se o paciente para tratamento com um agente inibidor do IGFlR. Um determinado tipo de tumor pode ser conhecido pelo facto de apresentar qualquer das características enumeradas, por exemplo, se isso estiver explicitado na literatura científica (v.g., jornais e publicações periódicas) ou se 51 isso for vulgarmente conhecido na especialidade por técnicos especializados na matéria ou se uma tal caracteristica tiver alguma vez sido observada em um ou diversos pacientes ou tumores, ou se isso puder ser razoavelmente inferido a partir de dados experimentais (v.g.f dados obtidos in vitro ou in vivo, incluindo os dados obtidos com animais).

De acordo com uma forma de realização da invenção, analisa-se o tumor individual de um eventual paciente e determina-se se o tumor exibe uma ou várias das 6 caracteristicas: (i) fosforilação do IRS-1 na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina. De acordo com esta forma de realização, no caso de se determinar que o tumor do paciente se caracteriza por uma ou várias das 6 caracteristicas supramencionadas, selecciona-se o paciente para tratamento com um agente inibidor do IGF1R.

As células de um tumor de um paciente particular podem ser obtidas por via cirúrgica, por exemplo, por biopsia cirúrgica. Por exemplo, é possível realizar uma biopsia tumoral por métodos de biopsia endoscópica, por métodos de biópsia excisional ou incisional ou por métodos de biópsia por aspiração com uma agulha fina (AAF).

Os termos "paciente" ou "indivíduo" compreendem qualquer organismo, de preferência um animal, mais preferencialmente um mamífero (v.g., rato, murganho, cão, gato, coelho) e muito mais preferencialmente um ser humano.

Conforme se disse anteriormente, de acordo com uma forma de realização da invenção, quando possível, administra-se um agente inibidor do IGF1R a um indivíduo, em conformidade com os preceitos da obra 'Physicians' Desk 52

Reference 2003' (Thomson Healthcare; 57a edição (1 de Novembro de 2002)) ou conforme aqui explicitado. É possível administrar um agente inibidor do IGF1R por uma via invasiva, por exemplo, por injecção (ver supra). A administração por uma via não invasiva (v.g., oralmente; por exemplo, em pílulas, cápsulas ou comprimidos) também está contida no âmbito da presente invenção De acordo com uma forma de realização da invenção, administra-se um anticorpo anti-IGFlR (v.g., o anticorpo 15H12/19D12 LCF/HCA), ou uma composição farmacêutica que o contenha, pelas vias intravenosa, subcutânea, intramuscular, intra-arterial ou intratumoral. É possível administrar um agente inibidor do IGF1R recorrendo a dispositivos médicos conhecidos na especialidade. Por exemplo, é possível administrar uma composição farmacêutica da invenção por injecção com uma agulha hipodérmica.

As composições farmacêuticas da invenção também podem ser administradas por meio de um dispositivo de injecção hipodérmica sem agulha, tal como os dispositivos descritos nas patentes de invenção norte-americanas n°s 6 620 135; 6 096 002; 5 399 163; 5 383 851; 5 312 335; 5 064 413; 4 941 880; 4 790 824 ou 4 596 556.

Como exemplos de documentos respeitantes a implantes e módulos perfeitamente conhecidos para a administração de composições farmacêuticas refere-se: a patente de invenção norte-americana n° 4 487 603, que descreve uma bomba de microinfusão implantável para fornecer um medicamento a uma velocidade controlada; a patente de invenção norte-americana n° 4 447 233, que descreve uma bomba de infusão de um medicamento para fornecer um medicamento com uma velocidade de infusão exacta; a patente de invenção norte-americana n° 4 447 224, que descreve um dispositivo de 53 infusão implantável, com fluxo variável, para a administração continua de um fármaco; a patente de invenção norte-americana n° 4 439 196, que descreve um sistema de administração osmótica de um fármaco, que possui compartimentos com diversas câmaras. Há muito mais implantes, sistemas de administração e módulos que são perfeitamente conhecidos pelos especialistas na matéria.

Composições farmacêuticas É possível incorporar um aqente inibidor do IGF1R numa composição farmacêutica, conjuntamente com um veiculo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, adequada para administração a um paciente in vivo. Consideram-se abrangidas no âmbito da presente invenção as composições farmacêuticas que são adequadas para administração a um paciente através de uma via qualquer, incluindo por exemplo, as vias oral, ocular, tópica, pulmonar (inalação), injecção intratumoral, injecção intravenosa, injecção subcutânea ou injecção intramuscular.

Para se obter uma informação geral sobre formulações ver, v.g., Gilman, et al., (eds.) (1990), The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8a Ed., Pergamon Press; A. Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edição, (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania; Avis, et al., (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications Dekker, New York; Lieberman, et al., (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets Dekker, New York; e Lieberman, et al., (eds.) (1990), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, New York, Kenneth A. Walters (ed.) (2002) Dermatological and Transdermal Formulations 54 (Drugs and the Pharmaceutical Sciences), Vol 119, Mareei Dekker.

Os veículos farmaceuticamente aceitáveis são os convencionais e perfeitamente conhecidos na especialidade. Como exemplos, refere-se os veículos aquosos e não aquosos, agentes estabilizadores, antioxidantes, solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antimicrobianos, tampões, proteínas séricas, agentes isotónicos e retardadores da absorção e outros que sejam fisiologicamente compatíveis. De preferência, o veículo é conveniente para injecção no corpo de um paciente.

Como exemplos de veículos aquosos e não aquosos adequados, que é possível utilizar nas composições farmacêuticas da invenção, refere-se os seleccionados entre água, etanol, polióis (tais como glicerol, propileno-glicol, polietileno-glicol e outros), e suas misturas adequadas, óleos vegetais, tais como o azeite, e ésteres orgânicos injectáveis, tais como o oleato de etilo. É possível manter a fluidez adequada, por exemplo, recorrendo à utilização de materiais de revestimento, tais como a lecitina, ou mantendo as partículas com o tamanho conveniente, no caso das dispersões, e ainda recorrendo à utilização de agentes tensioactivos.

Como exemplos de agentes antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis refere-se: os antioxidantes solúveis em água, tais como os seleccionados entre ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e outros; e os agentes antioxidantes solúveis em óleos, tais como os seleccionados entre palmitato de ascorbilo, hidroanisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, gaiato de propilo, α-tocoferol e outros; e os 55 agentes quelantes de metais, tais como os seleccionados entre ácidos cítrico, ácido etilenodiamina-tetracético (edta), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e outros. A prevenção da presença de microrganismos pode ser garantida por processos de esterilização e também pela inclusão de diversos agentes microbianos, tais como EDTA, EGTA, parabeno, clorobutanol, fenol, ácido sórbico e outros.

Os agentes tampão adequados, que é possível incorporar nas composições farmacêuticas da invenção, compreendem os seleccionados entre os agentes tampão à base de histidina, os agentes tampão à base de fosfatos (v.g., soluto salino tamponado com fosfato, pH = 7), os agentes tampão à base de sorbatos ou os agentes tampão à base de glicina.

As proteínas séricas, que é possível incorporar nas composições farmacêuticas da invenção, podem compreender a albumina do soro humano.

Também é possível incorporar nas composições farmacêuticas da invenção agentes isotónicos, tais como os açúcares (v.g., sacarose), etanol, poliálcoois (v.g., glicerol, propileno-glicol, polietileo-glicol líquido, manitol ou sorbitol), citrato de sódio ou cloreto de sódio (v.g., soluto salino tamponado). De acordo com uma forma de realização da invenção, o açúcar, por exemplo, a glicose ou a sacarose, encontra-se presente numa concentração elevada (v.g., cerca de 10-100 mg/mL, v.g., 50 mg/mL, 60 mg/mL ou 70 mg/mL). A absorção prolongada de uma forma farmacêutica injectável pode ser conseguida mediante a inclusão de agentes que retardem a absorção, tais como o monoestearato de alumínio e/ou gelatina. 56

Também é possível preparar dispersões em glicerol, polietileno-glicóis líquidos e suas misturas e em óleos.

Os veículos farmaceuticamente aceitáveis compreendem as soluções ou dispersões aquosas estéreis e os pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injectáveis estéreis. A utilização de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente activas é perfeitamente conhecida na especialidade. É possível preparar soluções injectáveis estéreis que contenham um anticorpo anti-lGFlR, incorporando o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antigénio, na quantidade necessária num solvente adequado, facultativamente com um dos ingredientes ou com uma combinação dos ingredientes supramencionados, conforme necessário, seguindo-se a esterilização por microfiltração. De um modo geral, faz-se a preparação de dispersões incorporando o anticorpo num veiculo estéril que contenha um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários seleccionados entre os enumerados anteriormente. No caso dos pós estéreis para a preparação de soluções injectáveis estéreis, os métodos preferidos para a preparação são a secagem hipobárica e a secagem por refrigeração (liofilização), que proporcionam um pó do ingrediente activo mais qualquer ingrediente desejado suplementar proveniente de uma sua solução previamente filtrada e esterilizada.

De acordo com uma forma de realização da invenção, um anticorpo anti-IGFlR da invenção está contido numa formulação farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido anticorpo, um agente tampão e sacarose. Por exemplo, de acordo com uma forma de realização da invenção, o agente tampão é um qualquer 57 seleccionado entre tampão fosfato, tampão citrato, tampão histidina, tampão glicina ou tampão acetato. A formulação farmacêutica deve ter um valor de pH compreendido num intervalo conveniente. De acordo com uma forma de realização da invenção, o valor do pH é igual a 5,0, 5,5, 6,0, 7,5, ou está compreendido entre cerca de 5,5 e cerca de 6 ou entre cerca de 5 e cerca de 7.

Um agente inibidor do IGF1R, incluindo um anticorpo anti-IGFlR ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, pode ser administrado oralmente. As composições farmacêuticas para administração oral podem conter, para além da composição aglutinante, aditivos tais como o amido (v.g., amido de batata, milho ou trigo, ou celulose), derivados de amido (v.g., celulose microcristalina ou silica), açúcares (v.g., lactose), talco, estearatos, carbonato de magnésio ou fosfato de cálcio. Com a finalidade de se garantir que as composições orais que contêm um anticorpo da invenção, ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, são bem toleradas pelo sistema digestivo do paciente, é possível incorporar-lhes resinas ou agentes formadores de muco. Também pode ser desejável melhorar a tolerância, fazendo a formulação do anticorpo, ou do seu fragmento de ligação ao antigénio, numa cápsula que seja insolúvel no suco gástrico. Prepara-se uma composição farmacêutica exemplificativa da presente invenção, sob a forma de uma cápsula, enchendo uma cápsula de gelatina dura convencional, feita de duas peças, com o anticorpo da invenção, ou com um seu fragmento de ligação ao antigénio, numa forma porfirizada, e com lactose, talco e estearato de magnésio. A administração oral de imunoglobulinas foi já descrita (Foster, et al.r (2001) Cochrane Database System rev. 3:CD001816). 58

Também é possível incorporar um agente inibidor do IGF1R numa composição farmacêutica para administração tópica. As formulações adequadas para administração tópica compreendem as preparações líquidas ou semilíquidas adequadas para penetração através da pele até ao local em que o tratamento é necessário, por exemplo, linimentos, loções, cremes, unguentos ou pastas, e gotas adequadas para administração nos olhos, ouvidos ou nariz.

As gotas podem conter soluções ou suspensões aquosas ou oleosas estéreis e podem ser preparadas dissolvendo um agente inibidor do IGF1R numa solução aquosa adequada contendo um agente bactericida e/ou fungicida e/ou quaisquer outros agentes conservantes adequados e contendo, preferencialmente, um agente tensioactivo. A solução resultante pode ser clarificada depois por filtração.

As loções de acordo com a presente invenção compreendem as que são adequadas para aplicação à pele ou aos olhos. Uma solução ocular pode compreender uma solução aquosa estéril, contendo facultativamente um agente bactericida, e pode ser preparada por métodos semelhantes aos utilizados para a preparação de gotas. As loções ou linimentos para aplicação à pele também podem conter um agente para acelerar a secagem e para arrefecer a pele, por exemplo, um álcool ou a acetona, e/ou um agente humectante, tal como o glicerol, ou um óleo, tal como óleo de rícino ou o óleo de amendoim.

Os cremes, unguentos ou pastas de acordo com a presente invenção são formulações semi-sólidas do ingrediente activo para aplicação externa. Podem ser preparados misturando um agente inibidor do IGF1R, numa forma finamente dividida ou porfirizada, por si só ou em solução ou suspensão num fluido 59 aquoso ou não aquoso, com a ajuda de maquinaria adequada, com uma base gordurosa ou não gordurosa. A base pode compreender hidrocarbonetos, tais como a parafina liquida dura, mole ou liquida, glicerol, cera de abelhas, um sabão metálico; uma mucilagem; um óleo de origem natural, tal como os óleos de amêndoas, milho, amendoim, ricino ou azeite; lanolina ou seus derivados, ou ácido gordo, tal como o ácido esteárico ou ácido oleico, conjuntamente com um álcool, tal como o propileno-glicol ou macrogeles. A formulação pode conter quaisquer agentes tensioactivos adequados, por exemplo, um agente tensioactivo aniónico, catiónico ou não iónico, por exemplo os ésteres de sorbitano ou os seus derivados de polioxietileno. Também é possível incorporar agentes de suspensão, tais como gomas naturais, derivados de celulose ou materiais inorgânicos, tais como sílicas, e outros ingredientes, tais como a lanolina.

Um agente inibidor do IGFlR também pode ser administrado por inalação. Uma composição farmacêutica adequada para inalação pode ser um aerossol. Uma composição farmacêutica exemplificativa para a inalação de um anticorpo da invenção, ou de um seu fragmento de ligação ao antigénio, pode compreender: um recipiente para aerossol com uma capacidade para 15-20 mL, contendo o anticorpo da invenção, ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, um agente lubrificante, tal como o polissorbato 85 ou o ácido oleico, dispersos num agente propulsor, tal como o 'freon', de preferência numa combinação de 1,2-diclorotetrafluoroetano e difluoroclorometano. De preferência, a composição está contida num recipiente adequado para aerossol, adaptado para administração por inalação, quer intranasal quer oral. 60

Estojos e produtos industriais

Os estojos e produtos industriais da presente invenção compreendem um agente inibidor do IGF1R, de preferência combinado com um veiculo farmaceuticamente aceitável, numa formulação farmacêutica, mais preferencialmente numa forma de dosagem farmacêutica seleccionada entre pilulas, pós, líquidos injectáveis, comprimidos, grânulos dispersáveis, cápsulas, trociscos ou supositórios. Ver, por exemplo, Gilman et al. (eds.) (1990), The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8a Ed., Pergamon Press; e Remington's Pharmaceutical Sciences, supra, Easton, Penn.; Avis et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications Dekker, New York; Lieberman et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets Dekker, New York; e Lieberman et al. (eds.) (1990), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, New York.

Os estojos e produtos industriais da presente invenção contêm também informação, por exemplo, sob a forma de um rótulo ou de um folheto informativo, indicando que o alvo do agente inibidor do IGF1R é o IGF1R. O termo "alvo" indica que o agente reduz ou inibe a ligação do ligando, a actividade de cinase, a expressão ou qualquer outra actividade biológica do IGF1R, de uma maneira qualquer. O rótulo ou folheto informativo pode ter uma forma qualquer, por exemplo, pode ser apresentado em papel ou em forma electrónica, por exemplo, num meio de registo magnético (v.g., um disco flexível) ou um CD-ROM. O rótulo ou folheto informativo também pode conter outra informação respeitante às composições farmacêuticas e 61 às formas de dosagem existentes no estojo ou no produto industrial.

De um modo geral, tal informação ajuda os pacientes e os médicos a utilizar as composições farmacêuticas, contidas nas embalagens, e as formas de dosagem de uma maneira eficiente e segura. Por exemplo, no folheto informativo pode estar contida a informação a seguir indicada, respeitante ao agente inibidor do IGFlR: farmacocinética, farmacodinâmica, estudos clínicos, parâmetros de eficácia, indicações e formas de utilização, contra indicações, avisos importantes, precauções, reacções adversas, sobredosagem, dosagem e administração convenientes, como aplicar, condições convenientes de armazenagem, referências e informação sobre patentes de invenção.

Exemplos

Neste exemplo comparou-se o nivel de fosforilação do IRS-1, em tecidos de tumores pulmonares humanos, com o de amostras de tecidos normais e concluiu-se que nas células tumorais era mais elevado do que nas células normais. De igual modo, estabeleceu-se a correlação da eficácia in vivo do anticorpo anti-IGFlR, designado por 19D12/15H12 LCF/HCA, com a aptidão do IGF-1 para causar a fosforilação do IRS-1. Além disso, avaliou-se o nível de expressão do ARNm do IGF-II em 56 amostras diferentes de tecidos normais, de ovários cancerosos e de tecidos colorrectais e concluiu-se que era elevada em diversas amostras de tecidos tumorais.

Preparação do Usado tumoral. Em primeiro lugar efectuou-se a pesagem dos tecidos tumorais que foram micronizados de modo a obter-se um pó fino, com um pulverizador pré- -arrefecido sobre neve carbónica. Os pós 62 tumorais foram transferidos para um tubo e acrescentou-se-lhes 4,5x o volume de tampão A (isto é, 450 pL de tampão A por cada 100 pg de tecido) . Efectuou-se o tratamento das amostras por meio de ultra-sons durante 30 segundos, acrescentou-se 0, 5x o volume de tampão B (isto é, acrescentou-se 50 pL de tampão B por cada 100 pg de pó de tecidos) e depois efectuou-se a centrifugação das amostras a 13000 rpm durante 20 minutos a 4°C após a incubação sobre gelo durante 30 minutos. Efectuou-se a colheita dos sobrenadantes e determinou-se a concentração de proteínas nos lisados, por meio do protocolo de ensaio 'Bio-Rad'.

Tampão A: Hepes 50 mM a pH 7,4, NaCl 150 mM, glicerol a 5%, MgC12 1,5 mM, vanadato de sódio 2 mM, NaF 5 mM, inibidores de proteases (concentrado C completo 2x isento de edta, da Roche, n° de catálogo 1 873 580), mistura 1 inibidora de fosfatases (Sigma p2850), mistura 2 inibidora de fosfatases (Sigma p5726).

Tampão B: tampão A mais 10% de Triton X-100

Preparação dos lisados das culturas de células. Efectuou-se a lavagem das células em PBS uma vez e depois realizou-se a citólise em tampão contendo Hepes 50 mM a pH 7,4, NaCl 150 mM, glicerol a 10%, 1% de Triton X-100, MgC12 1,5 mM, Na3V04 2 mM e mistura inibidora de proteases (meio TM completo, Roche Diagnostics GmbH; Mannheim, Alemanha). Submeteu-se as amostras a uma centrifugação a 13 000 rpm durante 10 minutos a 4°C após incubação sobre gelo durante 30 minutos. Efectuou-se a colheita dos sobrenadantes e fez-se a determinação das concentrações das proteínas dos lisados, pelo protocolo experimental 'Bio-Rad'.

Análises 'Western'. Foram utilizadas quantidades iguais de lisados celulares ou tumorais que foram separados 63 segundo um protocolo de 'SDS-PAGE', transferidos para filtros de nitrocelulose, hibridados com os anticorpos desejados e visualizados por ECL (Amersham; Piscataway, NJ) . Os anticorpos para a detecção dos IGFR e do IRS-1 provieram da empresa Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) . Os anticorpos contra fosfo-IRSl [pY896] e fosfo-lRSl[pY612] provieram de Biosource (Camarillo, CA).

Medição da proteína IGF-II. Com células provenientes de diversas linhas celulares fez-se uma aplicação sobre placas T-175 em meio contendo 10% de FBS. Depois de as células estarem fixadas, substituiu-se o meio por um outro meio isento de soro. Recolheu-se o meio, removeu-se os resíduos centrifugados e efectuou-se a liofilização dos sobrenadantes. As células sobre as placas foram tripsinizadas e contadas. Acrescentou-se água a cada amostra de sobrenadante liofilizado (1 mL/2xl07 células). Mediu-se a proteína IGF-II, utilizando para tal o kit 'IGF-II ELISA' da DSL (DSL-10-2600). Efectuou-se a determinação das quantidades de IGF-II pela curva normalizada, tendo os valores sido registados em nanogramas (ng) de IGF-II por cada lxlO6 células.

Medição do ARNm de IGF-II. Obteve-se os ARN a partir das amostras tumorais e efectuou-se a síntese dos ADNc. Analisou-se a expressão de IGF-II em 20 ng de amostra de ADNc, de acordo com o protocolo experimental de PCR com 5'-nuclease fluorogénica com sondas e iniciadores específicos, utilizando para tal o sistema de detecção de sequências 'ABI Prism 7700' (Applied Biosystems; Foster City, CA). Efectuou-se a normalização dos números de CT determinando a expressão de ARNm de ubiquitina (gene de referência) em todas as amostras. IGF2/directo: AGGAGCTCGAGGCGTTCAG (SEQ ID NO: 102) 64 IGF2/inverso: GTCTTGGGTGGGTAGAGCAATC (SEQ ID NO: 103) sonda: AGGCCAAACGTCACCGTCCCC (SEQ ID NO: 104)

Modelos de xenoenxertos em murganhos. Em cada um dos murganhos pelados efectuou-se a inoculação subcutânea de 4 a 5 milhões de células tumorais humanas (H322, H838, A2780, ES2, MCF7, SW-527, SK-N-AS, SK-N-MC) em Matrigel. Quando o tamanho do tumor atingiu pelo menos aproximadamente 50 mm3, iniciou-se o tratamento com 19D12/15H12 LCF/HCA, tendo prosseguido com administração de doses duas vezes por semana. Injectou-se o anticorpo 19D12/15H12 LCF/HCA em cada um dos murganhos pelados, por via intraperitoneal, à razão de 0,004 mg/murganho, 0,02 mg/murganho, 0,1 mg/murganho ou 0,5 mg/murganho. Os volumes dos tumores foram medidos por 'Labcat'. Nível de fosforilação do IRS-1 em amostras de tecidos normais e de cancro do pulmão hwnano. Foram obtidas, a partir dos pacientes, 12 pares de amostras de tecidos normais e de tecidos cancerosos de pulmão humano. Efectuou-se a preparação dos lisados celulares a partir das amostras de tecidos, tendo sido depois submetidos a análises de transferência de 'Western' e coloração com anti-fosfo-IRSl [pY896], conforme descrito antes. Mediu-se a quantidade total de IRS-1 por coloração com o anticorpo anti-lRS.

Os dados da transferência de Western gerados nestas experiências estão ilustrados na figura 1. Em 6 dos 12 pares de amostras avaliados (50%), nas amostras de tecidos tumorais foram observados niveis de fosfo-lRS-1 mais elevados do que nas correspondentes amostras de tecidos normais.

Foram observados resultados semelhantes quando o nível de fosforilação do IRS-1 foi medido em amostras de tecidos 65 colorrectais normais e cancerosos. Concluiu-se que as avaliações feitas em amostras de tecidos colorrectais eram essencialmente idênticas às avaliações feitas em amostras de tecidos pulmonares.

Correlação da eficácia in vivo do 19D12/15H12 LCF/HCA com fosforilação do IRS-1. Para se avaliar in vivo a eficácia do anticorpo 19D12/15H12 LCF/HCA, administrou-se a murganhos pelados, portadores de xenoenxertos de tumores humanos, o anticorpo e um isotipo de contraprova de referência e depois avaliou-se os volumes tumorais ao longo do tempo, conforme descrito anteriormente.

Para se avaliar a fosforilação do IRS-1 em linhagens de células tumorais, manteve-se tais linhagens de células em desenvolvimento na presença ou na ausência de IGF-I na concentração de 100 ng/mL. Depois efectuou-se a preparação dos lisados celulares de células A2780, ES2, H322, H838 e SK-N-AS e efectuou-se uma avaliação por análise de transferência de Western, conforme descrito antes.

Os resultados das experiências de eficácia in vivo estão ilustrados na figura 2. Concluiu-se que o anticorpo 19D12/15H12 LCF/HCA é eficaz para inibir o desenvolvimento de diversos tipos de tumores in vivo (v.g., cancro pulmonar das células não pequenas, cancro do ovário, cancro da mama e neuroblastoma).

Os resultados das experiências de medição da fosforilação do IRS-1 basal e do estimulado com IGF-I, em células tumorais, estão ilustrados na figura 3. As linhagens de células A2780, H322 e SK-N-AS avaliadas manifestaram a maior fosforilação do IRS-I basal e do estimulado com IGF-I. 66

As linhagens de células mais sensíveis, in vivo, à inibição do crescimento, por acção do anticorpo 19D12/15H12 LCF/HCA (figura 2), foram aquelas que revelaram a maior fosforilação do IRS-1 basal e do estimulado por IGF-I (figura 3). Nível de expressão de ARNm do IGF-II em amostras de tumores de ovários e colorrectais. A partir de diversos pacientes com cancro foram obtidas amostras de tecidos normais e de cancros de ovários e colorrectais. Avaliou-se o nivel de expressão de ARNm de IGF-II, pelo protocolo de análise 'Taqman', conforme descrito supra. 0 nível de expressão de ARNm de IGF-II de cada amostra de tecido de ovário está ilustrado na figura 4 e o nível de expressão de ARNm de IGF-II de cada amostra de tecido colorrectal está ilustrado na figura 5. Nestas experiências concluiu-se que em 20% das amostras de tumores de ovários há sobrexpressão de ARNm de IGF-II, comparativamente com as amostras de tecidos de ovários normais. Concluiu-se que em 53% das amostras colorrectais houve sobrexpressão do ARNm de IGF-II, comparativamente com as amostras colorrectais normais adjacentes 67 LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> Schering Corporation

<120> BIOMARCADORES PARA A PRÉ-SELECÇÃO DE PACIENTES PARA TERAPÊUTICA ANTI-IGFlR

<130> JB06257WI <150> 60/633,156 <151> 2004-12-03 <160> 105 <170> Patentln versão 3.3

<210> 1 <211> 384 <212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Cadeia-C leve 19D12/15H12 modificada <220> <221> CDS <222> (1)..(384) <400> 1 68 âtg t m CCS toa, caa etc atfc ggg ttt ctg ctg tm gtt QCá gse 48 Met Ssr tro Ser 01» teu 11® GÍ.y Phe teu Leu teu Trp Vel tro Ala 1 5 10 15 tcc agg ggt gas att S^3 cte act ç&g agç EÇ& gac tofc ctS tet gtg 56 Ser Arg oty Olu He Vai teu Thr SlB Ser .sro Àsp Ssr teu Ser 'Val 20 2$ 30 aet CCí» gsg age gte ase ate ãcc tge egg gee agt càg age att 164 Tftr Pró Giy QIu Arg vai Thr lia fhr Cys Arg Âia Ssr Gin Ssr U« 40 4S qqt agt. age fcfca CSC tgg tac sag sag âSâ cca §gt eag tet cca aag 192 Gly Ser so Set teti His ?rp Tyr S5 Gin Siii fcys Aro Oiy Gin S#r &ro Lys efcfc ctc ate aág fcat gea. tsç cag tçç etc tea 999 gtc eee tçg «99 240 teu Leu lie Lys Tyr Ala Ser 01« Ser teu Ser OXy Vai Are Ssr Ârg 6S 70 7S 80 etc sgt me- &st SSâ tçt 3S9 gat tfcc aec Ctç ace ato m age 288 Phe Ser <ay Ser Gly Ser Gly Thr &sp Phe Thr teu Thr Xle Ser Ser ss 90 9S etc 9«S gct gaa gat get gea gcg tat tac tgt eat cag agfc agt egt 336 Qlu Ma Glu Mp ÃIvSh Alá Ala Tyr Tyr vm His Oln tex Ser Arg 10® 105 110 fcfca cefc eae set ttc ggc eaa ggg acc aag gtg gag âtiC asa egt aeg 384 teu Fm Ris Thr Ph® Qlf Gin ©iy Thr ly® VSal Glh Ila Lys Arg Thr 115 12» 125

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REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o EPO não assume nenhuma responsabilidade.

Patentes de invenção citadas na descrição • US 63315604 P [0001] • WO 2003100008 A [0006] • WO 200253596 A [0006] [0035] • WO 200471529 A [0006] • WO 200359951 A [0006] [0035] • WO 200483248 A [0006] [0035] • WO 2003106621 A [0006] [0035] • WO 200487756 A [0006] [0035] • WO 200292599 A [0006] [0065] • WO 200339538 A [0006] [0065] • US 20030096769 A [0066] • WO 2003100059 A [0066] • WO 200393317 A [0067] • EP 00492552 A [0067] • WO 2004030627 A [0068] • WO 2004030625 A [0068] • US 3817837 A [0074] • US 3850752 A [0074] • US 3939350 A [0074] • US 3996345 A [0074] 189

us 4277437 A us 4275149 A us 4366241 A us 4816567 A us 5530101 A, us 5225539 A, us 4816397 A, us 6620135 B us 6096002 B us 5399163 B us 5383851 B us 5312335 B us 5064413 B us 4941880 B us 4790824 B us 4596556 B us 4487603 A us 4447233 A us 4447224 A us 4439196 A us 60633156 B

[0074] [0074] [0074] [0074]

Queen [0074] Winter [0074] Boss [0074] [0093] [0093] [0093] [0093] [0093] [0093] [0093] [0093] [0093] [0094] [0094] [0094] [0094] [0137]

Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • Klapper et al. Endocrinol., 1983, vol. 112, 2215 [0003] • Rinderknecht et al. Febs.Lett., 1978, vol. 89, 283 [0003] • Macaulay. Br. j. Câncer, 1992, vol. 65, 311 [0003] • Sepp-Lorenzino. Breast Câncer Research and Treatment, 1998, vol. 47, 235 [0003] 190 • Butler et al. Comparative Biochemistry and Physiology, 1998, vol. 121, 19 [0003] • Chan et al. Science, 1998, vol. 279, 563 [0004]

Pandini et al. Câncer Res., 1999, vol. 5, 1935 [0005] Webster et al. Câncer Res., 1996, vol. 56, 2781 [0005] Pekonen et al. Câncer Res., 1998, vol. 48, 1343 [0005] Steller et al. Câncer Res., 1996, vol. 56, 1762 [0005] • Xie et al. Câncer Res., 1999, vol. 59, 3588 [0005] • Burtrum. Câncer Research, 2003, vol. 63, 8912-8921 [0006] • Chothia et al. J. Mol. Biol., 1985, vol. 186, 651-663 [0035] • Novotny; Haber. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1985, vol. 82, 4592-4596 [0035] • Kabat, E. A. et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest. National Institutes of Health, 1987 [0035] • Fogarty et al. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., December 2002, vol. 12 (6), 369-77 [0066] • White et al. J Invest Dermatol., June 2002, vol. 118 (6), 1003-7 [0066] • White et al. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., June 2000, vol. 10 (3), 195-203 [0066] • Wraight et al. Nat Biotechnol., May 2000, vol. 18 (5), 521-6 [0066] • BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY. Lange Medicai Publications [0073] • Harlow; Lane. ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL. CSH Press, 1988 [0073] • Goding. MONOCLONAL ANTIBODIES: principles and practice. Academic Press, 1986 [0073] • Kohler; Milstein. Eur. J. Immunol., 1976, vol. 6, 511-519 [0073] 191 • CELL AND TISSUE CULTURE: LABORATORY PROCEDURES. John Wiley and Sons, 1994 [0073] • Huse et al. Science, 1989, vol. 246, 1275-1281 [0073] [0074] • Ward et al. Nature, 1989, vol. 341, 544-546 [0074] • Queen et al. Proc. Nat'l Acad. Sei. USA, 1989, vol. 86, 10029-10033 [0074] • Mendez et al. Nature, 1997, vol. 15, 146-156 [0074] • Kohler et al. Hybridoma Techniques. Cold Spring Harbor Laboratory, 1980 [0077] • Tijssen. Practice and Theory of Enzyme Immunoassays. Elsevier, 1985 [0077] • Campbell. Monoclonal Antibody Technology. Elsevier, 1984 [0077] • Hurrell. Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications. CRC Press, 1982 [0077] • Zola. Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques. CRC Press, Inc, 1987, 147-158 [0077] • Physicians' Desk Reference 2003. Thomson Healthcare, 01 November 2002 [0083] [0090] • The Pharmacological Bases of Therapeutics. Pergamon Press, 1990 [0096] [0115] • Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Co, 1990 [0096] • Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications. Dekker, 1993 [0096] [0115] • Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets. Dekker, 1990 [0096] [0115] • Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems. Dekker, 1990 [0096] [0115] 192 • Drugs and the Pharmaceutical Sciences. Dermatological and Transdermal Formulations. Mareei Dekker, 2002, vol. 119 [0096] • Foster et al. Cochrane Datahase System rev., 2001, vol. 3, CD001816 [0109]

Claims (25)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica utilizável para tratar um tumor num paciente mamífero com cancro, em que a composição compreende um agente inibidor de IGF1R e em que o tratamento consiste nos passos seguintes (a) seleccionar um paciente mamífero que tenha um tumor que manifeste uma ou várias das características seguintes: (i) fosforilação do substrato 1 do receptor da insulina (IRS-1) na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina; e (b) administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente inibidor do IGF1R; em que o referido agente é: (i) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma região variável da cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ ID NO: 8 e três CDR de uma região variável da cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 da SEQ ID NO: 10; (ii) um anticorpo isolado, ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 ou 73-98; e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 ou 58-72; ou um anticorpo isolado de cadeia 2 única que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre o conjunto constituído pelas SEQ ID NOs: 46-51; ou (iii)

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que o cancro é seleccionado entre o conjunto constituído por cancro da bexiga, cancro de Wilm, cancro ósseo, cancro da próstata, cancro do pulmão, cancro do pulmão de não pequenas células, cancro do cólon, cancro rectal, cancro colorrectal, cancro 3 endometrial, mieloma múltiplo, cancro da mama positivo ao receptor dos estrogénios, cancro da mama negativo aos receptores dos estrogénios, cancro cervical, sarcoma sinovial, cancro do ovário, cancro pancreático, neuroblastoma, rabdomiossarcoma, osteossarcoma e tumores produtores de péptido intestinal vasoactivo.

3. Composição utilizável para tratar um tumor, de acordo com a reivindicação 1, em que o agente inibidor é: um anticorpo isolado, ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 38; e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 40.

4. Composição utilizável para tratar um tumor, de acordo com a reivindicação 3, em que o anticorpo isolado, ou o seu fragmento de ligação ao antigénio, compreende uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 38; e uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 40.

5. Composição utilizável para tratar um tumor, de acordo com a reivindicação 1, em que o agente inibidor é um anticorpo isolado, ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina 4 que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 8 e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 10.

5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 99); 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-S' (SEQ ID NO: 100); ou 5' -ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 101).

6. Composição de acordo com a reivindicação 4, em que o paciente é um ser humano.

7. Composição utilizável para tratar um tumor, de acordo com a reivindicação 5, em que o anticorpo, ou o seu fragmento, compreende uma região variável de cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 da SEQ ID NO: 10.

8. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que o cancro é um cancro ósseo.

9. Composição utilizável para tratar um tumor, de acordo com a reivindicação 4, em que o anticorpo, ou o seu fragmento, é um anticorpo.

10. Composição utilizável para tratar um tumor, de acordo com a reivindicação 9, em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

11. Composição utilizável para tratar um tumor, de acordo com a reivindicação 9, em que o anticorpo é um anticorpo recombinante. 5

12. Método in vitro para seleccionar uma terapêutica para um paciente mamífero que tenha um tumor, o qual compreende os passos seguintes: (a) determinar se o tumor do paciente manifesta uma ou várias das características seguintes: (i) fosforilação do substrato 1 do receptor da insulina (IRS-1) na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina; e (b) administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente inibidor do IGF1R; em que o referido agente é: (i) um anticorpo isolado, ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma região variável da cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ ID NO: 8 e três CDR de uma região variável da cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 de SEQ ID NO: 10; (ii) um anticorpo isolado, ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 ou 73-98; e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 ou 58-72; ou um anticorpo isolado de cadeia única que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre o conjunto constituído pelas SEQ ID NOs: 46-51; ou 6

-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 99) ; -ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 100); -ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO: 101) .

13. Método de acordo com a reivindicação 12, em que o agente inibidor é um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 38; e três CDR de uma cadeia pesada 7 de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 40.

14. Método de acordo com a reivindicação 13, em que o anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio compreende uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 38; e uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 40.

15. Método de acordo com a reivindicação 12, em que o agente inibidor é um anticorpo isolado, ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao iGFlR humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 8 e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 10.

16. Método de acordo com a reivindicação 15, em que o anticorpo ou o seu fragmento compreende uma região variável de cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ 10 NO: 8 e uma região variável de cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 da SEQ ID NO: 10.

17. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o paciente é um ser humano.

18. Composição de acordo com a reivindicação 4, em que o cancro é o cancro do cólon ou o cancro pulmonar de não pequenas células.

19. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o cancro é o cancro do cólon ou o cancro pulmonar de não pequenas células.

20. Método in vitro para identificar um paciente mamífero com um tumor que provavelmente responde a um agente inibidor do IGF1R, o qual consiste em determinar se o paciente tem um tumor que manifeste uma ou várias das características seguintes: (i) fosforilação do substrato 1 do receptor da insulina (IRS-1) na tirosina 896; (ii) fosforilação do IRS-1 na tirosina 612; ou (iii) fosforilação do IRS-1 em qualquer tirosina; em que o paciente é identificado no caso de se determinar que o tumor manifesta uma qualquer das características (i)-(iii); em que o agente inibidor é: (i) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma região variável da cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ ID NO: 8 e três CDR de uma região variável da cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 de SEQ ID NO: 10; (ii) um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos da 9 SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 ou 73-98; e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10, 12- 18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 ou 58-72; ou um anticorpo isolado de cadeia única que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre o conjunto constituído pelas SEQ ID NOs: 46-51; ou (iii)

99) ; 100) ; ou 101) . 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (SEQ ID NO 10

21. Método de acordo com a reivindicação 20, em que o agente inibidor é um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 38; e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 40.

22. Método de acordo com a reivindicação 21, em que o anticorpo isolado ou o seu fragmento de ligação ao antigénio compreende uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 38; e uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 40.

23. Método de acordo com a reivindicação 20, em que o agente inibidor é um anticorpo isolado ou um seu fragmento de ligação ao antigénio, que se liga especificamente ao IGF1R humano que compreende três CDR de uma cadeia leve de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por seq id no: 8, e três CDR de uma cadeia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos designada por SEQ ID NO: 10.

24 Método de acordo com a reivindicação 23, em que o anticorpo ou o seu fragmento compreende uma região variável de cadeia leve que compreende os aminoácidos 20-128 da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20-137 da SEQ ID NO: 10. 11 11 que o

25. Método de acordo com a reivindicação 22, em paciente é um ser humano. 1/3 ο υ re Ν Ο 7000- 6000- 5000- 4000“ 3000- 2000- 1000“ 0- ηΎΤΠΤηΎ^ΗΎΠΤΠΎΙΧίΤίΤΓΠ"!11!11! ; ίηΐ"Π' I ΤΊΊΤΗΤ ΎΤ Γΐ tttíV 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 Ovário normal (1-20) Cancro do ovário (21-56)n& q A2780 ovário ES2 ovário H322 NSCLG H838 NSCLC SK-N-AS Neuro- bfastoma IGF-i 100 ng/mL - + + - + — + + fosfo-IRS-1 <=£> igl Eficácia in vivo 50-63% 32% 74-102% 24% 82-87% 2/3 Tumor Maximal Tipo de tumor Linhagem celular Inibição do crescimento NSCLC H322 84-102% NSCLC H8S8 24% Ovário A2780 56-63% Ovário £32 30% Mama (ER+) MGF7 68% Mama (ER-) SW-527 56% Neurobtastoma SK-N-AS 82-87% Neuroblastoma SK-N-MC 59% C normalizado 9000 8000· 7000 6000· 5000· 4000· 3000- 2000 1000 0· fidr*L , ' -1 1^Τ1ΤηΐΊηΐ30}1ΤΐηΤΊ3^Τ1>ι1Ί"^ΤΤΠ,,η,ηί·}<\Ίί f TnW TrrtrrrW rrrrrrrfVr Norma! Tumor 3/3 3/3

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