ES2356830T3 - Biomarcadores para preselección de pacientes para terapia de anti-igf-1r. - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de un tumor en un paciente mamífero con cáncer, en la que la composición comprende un agente inhibidor de IGF1 R y en el que el tratamiento comprende (a) seleccionar un paciente mamífero que presenta un tumor que expresa uno o más de los siguientes: (i) fosforilación del sustrato-1 del receptor de la insulina (IRS-1) en tirosina 896; (ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o (iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina; y (b) administración a dicho paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente inhibidor de IGF1 R; en el que el agente inhibidor es: (i) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al anticuerpo del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una región variable de cadena ligera que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y tres CDR de una región variable de cadena pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10; (ii) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 o 73- 98; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 o 58-72; o un anticuerpo de cadena simple aislado que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en nº ID SEC: 46-51; o (iii) 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (nº ID SECº: 99); 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (nº ID SEC: 100) o 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (nº ID SEC: 101).

Description

La presente solicitud reivindica las ventajas de la solicitud de patente provisional de EEUU nº 60/633.156; presentada el 3 de Diciembre de 2004.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a procedimientos para la selección de pacientes para terapia anti-cáncer. 5

Antecedentes de la invención

Los factores de crecimiento del tipo insulina, también conocidos como somatomedinas, incluyen el factor de crecimiento de tipo insulina I (IGF-1) y factor de crecimiento de tipo insulina II (IGF-II) (Klapper, y col., (1983) Endocrinol. 1 12:2215 y Rinderknecht, y col., (1978) Febs.Lett. 89:283). Estos factores de crecimiento ejercen actividad mitogénica en diversos tipos de células, incluyendo células tumorales (Macaulay, (1992) Br. J. Cancer 10 65:31 1), mediante unión a un receptor común denominado el receptor del factor de crecimiento del tipo insulina I (IGF1 R) (Sepp-Lorenzino, (1998) Breast Cancer Research and Treatment 47:235). La interacción de IGF con IGF1R activa el receptor mediante desencadenamiento de la autofosforilación del receptor en residuos de tirosina (Butler, y col., (1998) Comparative Biochemistry and Physiology 121 :19). Una vez activado, el IGF1 R, a su vez, fosforila dianas intracelulares para activar rutas de señalización celular. Esta activación del receptor es crítica para la 15 estimulación del crecimiento y supervivencia de células tumorales. Por lo tanto, la inhibición de la actividad de IGF1R representa un procedimiento potencialmente valioso para tratar o prevenir el crecimiento de cánceres humanos y otras enfermedades proliferativas.

Diversas líneas de evidencia indican que IGF-I, IGF-II y su receptor IGF1R son mediadores importantes del fenotipo maligno. Se ha encontrado que los niveles en plasma de IGF-1 son la predicción más firme del riesgo de 20 cáncer de próstata (Chan, y col., (1998) Science 279:563) y estudios epidemiológicos similares relacionan estrechamente niveles en plasma de IGF-I con riesgo de cáncer de mama, colon y pulmón.

La sobreexpresión del receptor del factor de crecimiento de tipo insulina I se ha demostrado en diversas líneas de células de cáncer y tejidos de tumor. El IGF1R se sobreexpresa en el 40% de todas las líneas celulares de cáncer de mama (Pandini, y col., (1999) Cancer Res. 5:1935) y en el 15% de las líneas de células de pulmón. En el 25 tejido de tumor de cáncer de mama se sobreexpresa IGF1R de 6 a 14 veces e IGF1R muestra de 2-4 veces más actividad de quinasa en comparación con el tejido normal (Webster, y col., (1996) Cancer Res. 56:2781 y Pekonen, y col., (1998) Cancer Res. 48:1343).

El noventa por ciento de las biopsias de tejido de cáncer colorrectal mostró niveles de IGF1R elevados en los que la extensión de la expresión de IGF1R se correlaciona con la gravedad de la enfermedad. El análisis de 30 cultivos de células de cáncer de cuello uterino primario y líneas celulares de cáncer de cuello uterino reveló sobreexpresión de 3 y 5 veces de IGF1R, respectivamente, en comparación con células ectocervicales normales (Steller, y col., (1996) Cancer Res. 56:1762). La expresión de IGF1R en células de sarcoma sinovial también se correlaciona con un fenotipo agresivo (es decir, metástasis y alta tasa de proliferación; Xie, y col., (1999) Cancer Res. 59:3588). 35

En la actualidad hay varias terapias anti-cáncer conocidas que se dirigen a IGF1R. Por ejemplo, los anticuerpos anti-IGF1R son propiedad de Schering Corp (véase el documento WO 2003/100008); Pfizer (véase el documento WO 2002/53596 o WO 2004/71529); Pierre Fabre medicament (véase el documento WO 2003/59951), Pharmacia Corp. (véase el documento WO 2004/83248), Immunogen, Inc. (véase el documento WO 2003/106621), Hoffman La Roche (véase el documento WO 2004/87756) e lmclone Systems Inc. (IMC- A12; véase Burtrum y col. 40 Cancer Research 63:8912-8921(2003)). Adicionalmente, Novartis es propietaria de un inhibidor de IGFR de molécula pequeña, NVP-ADW-742 (véase el documento WO 2002/92599) como también Biotech Research Ventures PTE Ltd (véase el documento WO 2003/39538). Antisense Therapeutics Ltd. también es propietaria de una terapia antisentido que inhibe la expresión de IGF1R, ATL-1101.

Agentes que reducen la función y/o expresión de IGF1R son efectivos en el tratamiento de algunos 45 pacientes de cáncer. Sin embargo se espera que una parte de los pacientes con cáncer no puedan responder a tales tratamientos. Por lo tanto, persiste una necesidad en la técnica de un procedimiento para identificar poblaciones de cáncer específico y/o pacientes de cáncer específico que lo más probablemente respondan a una o más terapias anti-cáncer que se dirigen a IGF1R.

Sumario de la invención 50

La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas para tratamiento de un tumor en un paciente mamífero con cáncer, en la que la composición comprende un agente inhibidor de IGF1 R y en el que el tratamiento comprende

(a) seleccionar un paciente mamífero que presenta un tumor que expresa uno o más de los siguientes:

(i) fosforilación del sustrato-1 del receptor de la insulina (IRS-1) en tirosina 896;

(ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o

(iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina; y

(b) administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente inhibidor de IGF1 R; en el que el agente inhibidor es: 5

(i) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una región variable de cadena ligera que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y tres CDR de una región variable de cadena pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10;

(ii) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma 10 específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 o 73-98; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 o 58-72; o un anticuerpo de cadena simple aislado que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende una secuencia 15 de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en nº ID SEC: 46-51; o

(iii)

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 99); 20

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 100) o

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 101).

El cáncer se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en cáncer de vejiga, cáncer de Wilm, cáncer de huesos, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de colon,

cáncer de recto, cáncer colorrectal, cáncer del endometrio, mieloma múltiple, cáncer de mama del receptor de estrógeno positivo, cáncer de mama del receptor de estrógeno negativo, cáncer de cuello uterino, sarcoma sinovial, cáncer de ovarios, cáncer de páncreas, neuroblastoma, rabdomiosarcoma, osteosarcoma y tumores de secreción de péptidos intestinales vasoactivos.

En otro aspecto, la presente invención proporciona procedimientos in vitro para la selección de una terapia para un paciente mamífero con un tumor, que comprende:

(a) determinación de si el tumor del paciente expresa uno o más de los siguientes:

(i) fosforilación de IRS-1 en tirosina 896;

(ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o 5

(iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina; y

(b) selección de un agente inhibidor de IGF1 R como la terapia, si se determina que el tumor del paciente expresa uno o más de (i)-(iii); en el que el agente inhibidor es:

(i) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una región variable de cadena ligera 10 que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y tres CDR de una región variable de cadena pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10;

(ii) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 o 73-15 98; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 10, 12-18, 29-34, 40, 41, 42, 44 o 58-72; o un anticuerpo de cadena simple aislado que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionados del grupos que consiste en nº ID SEC: 46-51; o

(iii) 20

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 99);

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 100) o

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 101).

En una realización relacionada la invención proporciona procedimientos in vitro para la identificación de un paciente mamífero cuyo tumor es susceptible de responder a un agente inhibidor de IGF1 R que comprenden la 5 determinación de si el paciente presenta un tumor que expresa uno o más de los siguientes:

(i) fosforilación de IRS-1 en tirosina 896;

(ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o

(iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina; y

en el que el paciente es identificado si se determina que el tumor expresa cualquiera de (i)-(iii); en el que el agente 10 inhibidor es:

(i) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una región variable de cadena ligera que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y tres CDR de una región variable de cadena pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10; 15

(ii) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 o 73-98; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 10, 12-18, 29-34, 40, 41, 42, 44 o 58-72; o un anticuerpo de cadena 20 simple aislado que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionados del grupos que consiste en nº ID SEC: 46-51; o

(iii)

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 99);

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 100) o

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 101).

En todos los aspectos de la presente invención, el paciente es preferiblemente un ser humano.

Breve descripción de las figuras 5

Figura 1. La fosforilación de IRS-1 es mayor en tumor de pulmón humano que en muestras de tejido normal. Resultados de análisis Western blot para muestras de tejido normal y tumoral de cuatro pacientes diferentes. Las líneas marcadas con "T" contenían tejido tumoral y las líneas marcadas con “N” contenían tejido normal.

Figura 2. Anticuerpo 19D12/15H12 LCF/HCA: eficacia in vivo. Se indica el nivel de inhibición del crecimiento de tumor observado en ratones de xenoinjerto a los que se administró anticuerpo 19D12/15H12 10 LCF/HCA junto con el tipo de tumor evaluado y la línea celular usada para establecer cada tumor.

Figura 3. Eficacia in vivo de 19D12/15H12 LCF/HCA, se correlaciona con la sensibilidad de fosforilación de IRS-1 para IGF-I. En las líneas "-" y "+", se muestra la cantidad de IRS-1 fosforilado, en cada línea celular evaluada, en ausencia y presencia de IGF-I, respectivamente. Se indica también el nivel de eficacia in vivo de 19D12/15H12 LCF/HCA inhibición del crecimiento de la línea celular indicada (véase la figura 2). 15

Figura 4. Sobreexpresión de ARNm de IGF-II en muestras de tumor de ovario humano. Se muestra el nivel normalizado de expresión de ARNm de IGF-II observado en cada una de las 20 muestras de tejido de ovario normal y 36 muestras de tejido de ovario canceroso.

Figura 5. Sobreexpresión de ARNm de IGF-II en muestras de tumor colorrectal humano. Se muestra el nivel normalizado de expresión de ARNm de IGF-II observado en cada una de las 36 muestras de tejido de ovario 20 normal y 36 muestras de tejido colorrectal canceroso.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona composiciones para el tratamiento de cáncer y procedimientos para la identificación de pacientes cuyo cáncer es susceptible de responder a un agente inhibidor de IGF1R. El procedimiento es útil, entre otros, para el aumento de la probabilidad de que sea eficaz la administración de una 25 terapia anticáncer inhibidora de IGF1 R en un paciente.

Las expresiones "IGF1R", "IGFR1", "receptor del factor de crecimiento de tipo insulina I" y receptor del factor de crecimiento de tipo insulina, tipo I" son bien conocidos en la técnica. Si bien IGF1R puede ser de cualquier organismo, se prefiere de un animal, más preferiblemente de un mamífero (por ejemplo, ratón, rata, conejo, oveja o perro) y lo más preferiblemente de un ser humano. La secuencia de nucleótidos y aminoácidos de un precursor de 30 IGF1R humano típico tiene en nº de acceso al banco de genes X04434 o NM_000875. La escisión del precursor (por ejemplo, entre aminoácidos 710 y 711) produce una subunidad α y una subunidad β que se asocian para formar un receptor maduro.

Las expresiones “IGF-I”, “factor de crecimiento de tipo insulina I” y “factor de crecimiento de tipo insulina, tipo I” son bien conocidos en la técnica. Los términos "IGF-II", "factor de crecimiento de tipo insulina II" y "factor de 35 crecimiento de tipo insulina, tipo II” son también bien conocidos en la técnica. Si bien IGF-I o IGF-II pueden ser de cualquier organismo, estos son preferiblemente de un animal, más preferiblemente de un mamífero (por ejemplo, ratón, rata, conejo, oveja o perro) y lo más preferiblemente de un ser humano. La secuencia de ácidos nucleicos y aminoácidos de IGF-I e IGF-II humanos típicos tienen el número de acceso al banco de genes XM_052648 y NM_000612, respectivamente. 40

Agentes inhibitorios de IGF1R

El término “agente inhibidor de IGF1 R” se refiere a

(i) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una región variable de cadena ligera que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y tres CDR de una región variable de cadena 45 pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10;

(ii) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 o 73-98; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de 50 aminoácidos de nº ID SEC: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 o 58-72; o un anticuerpo de cadena

simple aislado que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en nº ID SEC: 46-51; o

(iii)

5

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SECº: 99);

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 100) o

5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 101).

En una realización de la invención, un agente inhibidor de IGF1 R para administración a un paciente en un procedimiento de acuerdo con la invención es un anticuerpo del receptor del factor de crecimiento de tipo anti-10 insulina 1 (IGF1R) aislado que comprende una cadena ligera C, D, E o F de 19D12/15H12 madura o no procesada y una cadena pesada A o B de 19D12/15H12 madura. En una realización de la invención un agente inhibidor de IGF1R para administración a un paciente es un anticuerpo aislado que se une de forma específica a IGF1 R, que comprende una o más regiones de determinación complementarias (CDR) de cadena ligera F de 19D12/15H12 y/o cadena pesada A de 19D12/15H12 (por ejemplo, 3 CDR de cadena ligera completas y 3 CDR de cadena pesada 15 completas).

Se muestran a continuación las secuencias de aminoácidos y nucleótidos de las cadenas de anticuerpo 19D12/15H12. El subrayado a puntos indica el péptido de señal. El subrayado continuo indica la CDR. Sin subrayar indica las regiones marco. A los fragmentos maduros les falta el péptido de señal.

Cadena ligera C de 19D12/15H12 modificado (nº ID SEC: 1) 20

(nº ID SEC: 2)

Cadena ligera D de 19D12/15H12 modificado (nº ID SEC: 3 )

(nº ID SEC: 4)

Cadena ligera E de 19D12/15H12 modificado (nº ID SEC: 5)

(nº ID SEC: 6)

Cadena ligera F de 19D12/15H12 (nº ID SEC: 7)

(nº ID SEC: 8)

Cadena pesada A de 19D12/15H12 (nº ID SEC: 9)

(nº ID SEC: 10)

Cadena pesada B de 19D12/15H12 modificado (nº ID SEC: 11)

(nº ID SEC: 12)

Se han registrado plásmidos que comprenden un promotor de CMV unidos de forma operativa a 15H12/19D12, LCC, LCD, LCE, LCF o al 15H12/19D12 HCA o HCB en la American Type Culture Collection (ATCC); 10801 University Boulevard; Manassas, Virginia 20110-2209 el 21 de Mayo de 2003. Los nombres del registro y los números de acceso ATCC para los plásmidos se indican a continuación:

(1) promotor de CMV 15H12/19D12 HCA (γ4)- nombre del registro: “15H12/19D12 HCA (γ4)”. Número de 5 acceso ATCC: PTA-5214

(2) promotor de CMV 15H12/19D12 HCB (γ4)- nombre del registro: “15H12/19D12 HCB (γ4)”. Número de acceso ATCC: PTA-5215

(3) promotor de CMV 15H12/19D12 HCA (γ1)- nombre del registro: “15H12/19D12 HCA (γ1)”. Número de acceso ATCC: PTA-5216 10

(4) promotor de CMV 15H12/19D12 LCC (κ)- nombre del registro: “15H12/19D12 LCC (κ)”. Número de acceso ATCC: PTA-5217

(5) promotor de CMV 15H12/19D12 LCD (κ)- nombre del registro: “15H12/19D12 LCD (κ)”. Número de acceso ATCC: PTA-5218

(6) promotor de CMV 15H12/19D12 LCE (κ)- nombre del registro: “15H12/19D12 LCE (κ)”. Número de 15 acceso ATCC: PTA-5219

(7) promotor de CMV 15H12/19D12 LCF (κ)- nombre del registro: “15H12/19D12 LCF (κ)”. Número de acceso ATCC: PTA-5220

Todas las restricciones de acceso a los plásmidos registrados en ATCC se eliminarán tras otorgamiento de una patente. En una realización de la presente invención un anticuerpo anti-IGF1R o fragmento de unión al antígeno 20 del mismo de la invención comprende cualquiera de las CDR o cadenas pesada o ligera de Ig o regiones variables de las mismas en cualquiera de PTA-5214-PTA-5220. En una realización de la invención el anticuerpo comprende una cadena ligera codificada con el plásmido registrado con el número PTA-5220 y una cadena pesada codificada con el plásmido registrado con el nombre PTA-5214 o PTA-5216.

En una realización un anticuerpo que se une “específicamente” a IGF1R humano se une con Kd de 25 aproximadamente 1,28x10-10 M o menos según medida Biacore o con una Kd de aproximadamente 2,05 x 10-12 o menos según medida KinExA.

Adicionalmente el alcance de la presente invención comprende el uso anterior de cualquier anticuerpo o fragmento de anticuerpo que comprende una o más CDR y/o regiones marco de cualquiera de la inmunoglobulina de cadena ligera o inmunoglobulinas de cadena pesada descritas en los documentos WO 2002/53596; WO 30 2003/59951; WO 2004/83248; WO 2003/106621 o WO 2004/87756 como se identifica por cualquiera de los procedimientos descritos en Chothia y col., J. Mol. Biol. 186:651-663 (1985); Novotny y Haber, Proc. Natl. Acad. Sci. EEUU 82:4592-4596 (1985) o Kabat, E.A. y col., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)).

En una realización de la invención se produce anticuerpo anti-IGF1R mediante un hibridoma que está 35 registrado en la American Type Culture Collection con el nº de registro PTA-2792, PTA-2788, PTA-2790, PTA-2791, PTA-2789 o PTA-2793.

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

40

(nº ID SEC: 13)

(nº ID SEC: 14)

(nº ID SEC: 15)

(nº ID SEC: 16)

5

(nº ID SEC: 17)

(nº ID SEC: 18)

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: 10

(nº ID SEC: 19)

(nº ID SEC: 20)

15

(nº ID SEC: 21)

(nº ID SEC: 22)

(nº ID SEC: 23)

(nº ID SEC: 24)

En una realización de la invención el anticuerpo IGF-1R comprende una inmunoglobulina de cadena ligera, o un fragmento maduro del mismo (es decir, falta de secuencia de señal), o región variable del mismo, que comprende la secuencia de aminoácidos de: 5

(nº ID SEC: 25)

(nº ID SEC: 26)

10

(nº ID SEC: 27)

(nº ID SEC: 28). En una realización de la invención la secuencia de señal es aminoácidos 1-22 de nº ID SEC: 25-28. En una realización de la invención la región variable madura está subrayada.

En una realización de la invención el anticuerpo anti-IGF1R comprende una inmunoglobulina de cadena 15 pesada o un fragmento maduro de la misma (es decir, falta de secuencia de señal), o una región variable del mismo, que comprende la secuencia de aminoácidos de:

(nº ID SEC: 29)

(nº ID SEC: 30)

(nº ID SEC: 31)

(nº ID SEC: 32). En una realización de la invención la secuencia de señal es aminoácidos 1-19 de nº ID SEC: 29-32. En una realización de la invención la región variable madura está subrayada.

En una realización de la invención el anticuerpo anti-IFG1R comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de nº ID SEC: 19-24 emparejada con una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de cualquiera de nº ID SEC: 13-18, 5 respectivamente. En una realización de la invención, el anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de cualquiera de nº ID SEC: 25 ó 26 emparejada con una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de cualquiera de nº ID SEC: 29 ó 30. En una realización de la invención el anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena ligera madura que comprende una secuencia de aminoácidos de cualquiera de nº ID SEC: 27 ó 28 emparejada con 10 una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de cualquiera de nº ID SEC: 31 ó 32.

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una cadena pesada de inmunoglobulina o fragmento maduro o región variable de 2.12.1 fx (nº ID SEC: 33) (en una realización de la invención la secuencia líder está subrayada): 15

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende la región variable de cadena pesada de inmunoglobulina madura 2.12.1 fx (aminoácidos 20-144 o nº ID SEC: 33; nº ID SEC: 34):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una cadena ligera de 20 inmunoglobulina o fragmento maduro del mismo o región variable 2.12.1 fx (nº ID SEC: 35) (en una realización de la invención la secuencia líder está subrayada):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende región variable de cadena ligera de inmunoglobulina madura 2.12.1 fx (aminoácidos 23-130 de nº ID SEC: 35; nº ID SEC: 36): 25

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 1 (nº ID SEC: 37):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 2 (nº ID SEC: 38):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena 5 pesada de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 1 (nº ID SEC: 39):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 2 (nº ID SEC: 40):

10

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 3 (nº ID SEC: 41):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina A12 (nº ID SEC: 42): 15

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina A12 (nº ID SEC: 43):

o 20

(nº ID SEC: 105)

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende región variable de cadena pesada de inmunoglobulina 1A (nº ID SEC: 44):

de forma opcional incluyendo una o más de las siguientes mutaciones: R30, S30, N31, S31, Y94, H94, D104, E104.

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende región variable de cadena ligera de inmunoglobulina 1A (nº ID SEC: 45):

5

de forma opcional incluyendo una o más de las siguientes mutaciones: P96, I96, P100, Q100, R103, K103, V104, L104, D105, E105.

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende anticuerpo (fv) 8A1 de cadena simple (nº ID SEC: 46):

10

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende anticuerpo (fv) 9A2 de cadena simple (nº ID SEC: 47):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende anticuerpo (fv) 11A4 de cadena simple (nº ID SEC: 48): 15

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende anticuerpo (fv) 7A4 de cadena simple (nº ID SEC: 49):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende anticuerpo (fv) 11A1 de cadena 20 simple (nº ID SEC: 50):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R comprende anticuerpo (fv) 7A6 de cadena simple (nº ID SEC: 51):

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R o un fragmento de unión al antígeno del mismo 5 (por ejemplo, una inmunoglobulina de cadena pesada o de cadena ligera) comprende una o más regiones determinantes complementarias (CDR) seleccionadas del grupo que consiste en:

sywmh (nº ID SEC: 52)

einpsngrtnynekfkr (nº ID SEC: 53)

grpdyygsskwyfdv (nº ID SEC: 54) 10

rssqsivhsnvntyle (nº ID SEC: 55)

kvenrfs (nº ID SEC: 56); y

fqgshvppt (nº ID SEC: 57)

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGF1R o un fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de inmunoglobulina de cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en: 15

(nº ID SEC: 58);

(nº ID SEC: 59);

20

(nº ID SEC: 60);

(nº ID SEC: 61);

(nº ID SEC: 62);

(nº ID SEC: 63); 5

(nº ID SEC: 64);

(nº ID SEC: 65);

10

(nº ID SEC: 66);

(nº ID SEC: 67);

(nº ID SEC: 68); 15

(nº ID SEC: 69);

(nº ID SEC: 70);

(nº ID SEC: 71);; y

(nº ID SEC: 72);

y/o una región variable de inmunoglobulina de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en:

5

(nº ID SEC: 73);

(nº ID SEC: 74);

(nº ID SEC: 75); 10

(nº ID SEC: 76);

(nº ID SEC: 77);

15

(nº ID SEC: 78);

(nº ID SEC: 79);

(nº ID SEC: 80); 20

(nº ID SEC: 81);

(nº ID SEC: 82);

(nº ID SEC: 83); 5

(nº ID SEC: 84);

(nº ID SEC: 85);

10

(nº ID SEC: 86);

(nº ID SEC: 87);

(nº ID SEC: 88); 15

(nº ID SEC: 89);

(nº ID SEC: 90);

(nº ID SEC: 91);

(nº ID SEC: 92);

5

(nº ID SEC: 93);

(nº ID SEC: 94);

(nº ID SEC: 95); 10

(nº ID SEC: 96);

(nº ID SEC: 97); y

15

(nº ID SEC: 98).

El alcance de la presente invención incluye el uso médico de una composición como se define anteriormente en la que a un paciente se administra un anticuerpo de receptor de factor de crecimiento de tipo antiinsulina 1 (IGF1R) en el que la región variable del anticuerpo está unida a cualquier región constante de inmunoglobulina. En una realización la región variable de cadena ligera está unida a una región constante de cadena 20 κ. En una realización la región variable de cadena pesada está unida a una región constante de cadena γ1, γ2, γ3 o γ4. Cualquiera de las regiones variables de inmunoglobulina descritas en esta invención, en realizaciones de la invención, puede estar unida a cualquiera de las regiones constantes anteriores.

En una realización de la invención, un agente inhibidor de IGF1 R que se pueda administrar a un paciente es AEW-541 (NVP-AEW- 541; NVP-AEW-541-NX-7):

(Novartis; East Hanover, NJ; véase el documento WO 2002/92599); o

(documento WO 2003/39538). 5

En una realización de la invención un agente inhibidor de IGF1 R para administración a un paciente es cualquier ácido nucleico antisentido de IGF1 R. Por ejemplo, en una realización, el ácido nucleico anti-sentido de IGF1R es ATL-1101 (Antisense Therapeutics Ltd; Australia). En una realización, el ácido nucleico antisentido de IGF1R anti-sentido comprende cualquiera de las siguientes secuencias de nucleótidos: 5'-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3' (nº ID SEC: 99), 5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 100), 5’-10 ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 101) o cualquiera ácido nucleico antisentido de IGF1R descrito en cualquiera de los siguientes documentos: solicitud de patente publicada de Estados Unidos nº US20030096769; solicitud internacional publicada nº WO 2003/100059; Fogarty y col., Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 2002 Dec;12(6):369-77; White y col., J Invest Dermatol. 2002 Junio; 118(6):1003-7; White y col., Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 2000 Junio;10(3):195-203; o Wraight y col., Nat Biotechnol. 2000 Mayo;18(5):521-6. 15

En una realización de la invención un agente inhibidor de IGF1R que se puede administrar a un paciente en un procedimiento de acuerdo con la invención es un anticuerpo anti-IGF-I ó II; por ejemplo, cualquier anticuerpo descrito en el documento WO 2003/93317 o EP00492552.

El alcance de la presente invención incluye cualquier compuesto inhibidor de quinasa descrito en las solicitudes internacionales publicadas WO 2004/030627 o WO 2004/030625. En una realización el inhibidor de 20 quinasa es (±)-4-[2-(3-cloro-4-fluoro-fenil)-2-hidroxi-etilamino]-3-[6-(imidazol-1-il)-4-metil-1H-bencimidazol-2-il]-1H-piridin-2-ona:

(de forma opcional en combinación con paclitaxel o con cetuximab).

En una realización de la invención el agente inhibidor de IGR1R es un fragmento soluble de IGF1R (por ejemplo, aminoácidos 30-902 de IGF1R) o ARNsi (ARN de pequeña interferencia) frente a IGF-1R.

En una realización IGF1R comprende la secuencia de aminoácidos descrita en el número de acceso al 5 banco de genes: XM_052648 o NM_000612.

La presente invención también incluye realizaciones en las que el paciente recibe un agente inhibidor de IGF1R junto con uno o más agentes anticáncer, incluyendo, pero sin limitarse a estos paclitaxel, talidomida, docetaxel, gefitinib, temozolomida, lonafamib, tipifarnib, letrozol, doxorubicina, cisplatina, oxaliplatina, camptotecán, topotecán, etopóside, vincristina, vinblastina, raloxifén, gemcitabina, ácido retinoico, tamoxifén, trastuzumab, 10 cetuximab u octreotida; o procedimientos terapéuticos anticáncer incluyendo, pero sin limitarse a estos, tumorectomía quirúrgica o terapia de radiación anti-cáncer. La presente invención incluye además realizaciones en las que se administran dos o más agentes inhibitorios de IGF1R en asociación uno con otro.

El término “en asociación” indica que los componentes de las combinaciones de la invención se pueden formular en una composición simple para liberación simultánea o formularse por separado en dos o más 15 composiciones (por ejemplo, un kit). Adicionalmente cada componente de una combinación de la invención se puede administrar a un sujeto en un momento diferente a cuando se administra el otro componente; por ejemplo, cada administración se puede aplicar no simultáneamente a distintos intervalos durante un periodo dado de tiempo. Además los componentes separados se pueden administrar a un sujeto por la misma o por diferente ruta (por ejemplo, por vía oral, intravenosa, intratumoral). 20

Generación de anticuerpos

Se puede usar cualquier procedimiento adecuado para obtener un anticuerpo con las propiedades biológicas deseadas para inhibir IGF1R. Es deseable preparar anticuerpos monoclonales (mAbs) a partir de diversos huéspedes de mamíferos, tales como ratones, roedores, primates, seres humanos, etc. Se puede encontrar la descripción de técnicas para la preparación de tales anticuerpos monoclonales, por ejemplo, en Stites, y col. (eds.) 25 BASIC AND CLINICAL IMMNUNOLOGY (4ª edición) Lange Medical Publications, Los Altos, CA, y referencias citadas en la misma; Harlow y Lane (1988) ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL CSH Press; Goding (1986) MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND PRACTICE (2ª ed.) Academic Press, Nueva York, NY. Por tanto, se pueden obtener anticuerpos monoclonales mediante una variedad de técnicas familiares para los investigadores especialistas en la técnica. De forma típica se inmortalizan células del bazo de un animal inmunizado con un 30 antígeno deseado, habitualmente mediante fusión con una célula del mieloma. Véase Kohler y Milstein (1976) Eur. J. Immunol. 6:511-519. Procedimientos alternativos de inmortalización incluyen transformación con virus Epstein Barr, oncogenes o retrovirus, u otros procedimientos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Doyle, y col. (ed. 1994 y suplementos periódicos) CELL AND TISSUE CULTURE: LABORATORY PROCEDURES, John Wiley y Sons, Nueva York, NY. Se seleccionan colonias que surgen de células inmortalizadas simples para la producción de 35 anticuerpos de la especificidad y afinidad deseadas para el antígeno, y se puede mejorar el rendimiento de los anticuerpos monoclonales producidos por estas células mediante diversas técnicas, incluyendo inyección en la cavidad peritoneal de un huésped vertebrado. De forma alternativa se pueden aislar secuencias de ADN que codifican un anticuerpo monoclonal o un fragmento de unión al mismo seleccionando una biblioteca de ADN de células B humanas de acuerdo, por ejemplo, con el protocolo general descrito por Huse, y col. (1989) Science 40 246:1275-1281. Se pueden generar anticuerpos modificados, por ejemplo, introduciendo mutaciones en ADN que codifican una cadena de inmunoglobulina, por ejemplo, con uso de técnicas biológicas recombinantes convencionales.

Otras técnicas adecuadas implican la selección de bibliotecas de anticuerpos en fagos o vectores similares. Véase, por ejemplo, Huse y col., Science 246:1275-1281 (1989); y Ward y col., Nature 341 :544-546 (1989). Se 45 pueden usar los polipéptidos y anticuerpos de la presente invención con o sin modificación, incluyendo anticuerpos

quiméricos o humanizados. Frecuentemente los polipéptidos y anticuerpos estarán marcados por unión, bien covalente o no covalente, a una sustancia que proporciona una señal detectable. Se conocen una amplia variedad de etiquetas y técnicas de conjugación y se describen de forma extensiva tanto en la bibliografía científica como en patentes. Etiquetas adecuadas incluyen radionúclidos, enzimas, sustratos, cofactores, inhibidores, restos fluorescentes, restos quimioluminiscentes, partículas magnéticas y similares. Patentes que describen el uso de tales 5 etiquetas incluyen las patentes de Estados Unidos nº 3.817.837; 3.850.752; 3.939.350; 3.996.345; 4.277.437; 4.275.149; y 4.366.241. También se pueden producir inmunoglobulinas recombinantes, véase la patente de Estados Unidos de Cabilly nº 4.816.567; y Queen y col. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029- 10033; o prepararse en ratones transgénicos, véase Mendez y col. (1997) Nature Genetics 15:146-156. Son bien conocidos en la técnica procedimientos adicionales para la producción de anticuerpos quiméricos, humanizados y humanos. Véase, por 10 ejemplo, la patente de Estados Unidos nº 5.530.101, expedida a Queen y col, patente de Estados Unidos nº 5.225.539, expedida a Winter y col, patente de Estados Unidos nº 4.816.397 expedida a Boss y col, todas ellas se incorporan por referencia en su totalidad.

Análisis de tumor

Los procedimientos del presente procedimiento comprenden la determinación de si las células tumorales 15 comprenden uno o más de las siguientes características:

(i) fosforilación de IRS-1 en tirosina 896;

(ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o

(iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina;

Las células tumorales se pueden ensayar para determinar si están presentes algunas de estas 20 características mediante cualquiera de los distintos procedimientos conocidos habitualmente en la técnica. En una realización, se puede determinar la fosforilación de IRS-1 en tirosina mediante análisis western blot con un anticuerpo anti-fosfotirosina. Por ejemplo, se encuentran comercialmente disponibles en PerkinElmer Life y Analytical Sciences, Inc. (Boston, MA) anticuerpos anti-fosfotirosina PY20, PT66 y P-Try-100; y se encuentra comercialmente disponible anticuerpo anti-fosfotirosina 4G10 en Upstate Cell Signaling Solutions (Waltham, MA). El 25 análisis Western blot es un procedimiento convencional que es bien conocido en la técnica. En una realización se puede determinar la fosforilación de IRS-1 en tirosina mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) o immunoprecipitación.

Se encuentra disponibles muchas referencias que proporcionan directrices para la aplicación de las anteriores técnicas (Kohler y col, Hybridoma Techniques (Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York, 1980); 30 Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Elsevier, Amsterdam, 1985); Campbell, Monoclonal Antibody Technology (Elsevier, Amsterdam, 1984); Hurrell, Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications (CRC Press, Boca Raton, FL, 1982); Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, páginas 147-158 (CRC Press, Inc., 1987)).

Dosificación 35

En una realización se administra a un paciente un agente inhibidor de IGF1R a una “dosificación terapéuticamente efectiva” o “cantidad terapéuticamente efectiva” que inhibe preferiblemente una enfermedad o afección (por ejemplo, crecimiento del tumor) en alguna extensión, preferiblemente en al menos aproximadamente 20%, más preferiblemente en al menos aproximadamente 40%, incluso más preferiblemente en al menos aproximadamente 60%, y todavía más preferiblemente en al menos aproximadamente 80-100% respecto a sujetos 40 no tratados. En una realización de la invención, la expresión “cantidad terapéuticamente efectiva” o “dosificación terapéuticamente efectiva” significa aquella cantidad o dosificación de un agente inhibidor de IGF1R (por ejemplo, un anticuerpo anti-IGF1R o fragmento de unión al antígeno del mismo) que dará lugar a una respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, sujeto o huésped que se pretenda por parte del administrador (tal como un investigador, doctor o veterinario) que incluya cualquier alivio medible de los signos, síntomas y/o indicios clínicos de 45 cáncer (por ejemplo, crecimiento del tumor) y/o la prevención, ralentización o retención del progreso o metástasis de cáncer en cualquier grado. La capacidad de un agente inhibidor de IGF1R para inhibir el cáncer se puede evaluar en una sistema de modelo animal predictivo de la eficacia en tumores humanos. De forma alternativa, la eficacia se puede evaluar mediante examen de la capacidad de un tratamiento de la invención o cualquier componente del mismo para inhibir el crecimiento de células tumorales in vitro mediante ensayos bien conocidos por el facultativo 50 especialista. Un especialista en la técnica sería capaz de determinar tales cantidades en base a factores tales como el tamaño del sujeto, la gravedad de los síntomas del sujeto y la composición particular o ruta de administración seleccionada.

Un facultativo puede usar cualquiera de los procedimientos conocidos en la técnica para medir la efectividad de un esquema de dosificación particular de un agente inhibidor de IGF1R. Por ejemplo, el tamaño del 55 tumor se puede determinar en una ruta no invasiva, tal como por rayos X, barrido de tomografía por emisión de positrones (PET); barrido de tomografía computarizada (CT) o generación de imágenes de resonancia magnética (MRI).

Un cáncer o una célula tumoral “responde” a un agente inhibidor de IGF1R si el agente puede proporcionar cualquier alivio medible de los signos, síntomas y/o indicios clínicos de cáncer (por ejemplo, crecimiento del tumor) y/o la prevención, ralentización o retención de la progresión o metástasis de cáncer en cualquier grado.

Los regímenes de dosificación se pueden ajustar para proporcionar la respuesta deseada óptima (por ejemplo, una respuesta terapéutica). Por ejemplo se puede administrar una dosis, se pueden administrar varias 5 dosis dividas en el tiempo o se puede reducir o aumentar proporcionalmente la dosis según se indique por exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso formular composiciones para vía parenteral en forma unitaria de dosificación para facilidad de administración y uniformidad de dosificación.

Un facultativo o veterinario especialista en la técnica puede determinar fácilmente y prescribir la cantidad efectiva de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el facultativo o veterinario podría comenzar con 10 dosis de un agente inhibidor de IGF1R usadas en la composición farmacéutica a niveles inferiores que las requeridas con el fin de conseguir el efecto terapéutico deseado y aumentar de forma gradual la dosificación hasta que se consiga el efecto deseado. La efectividad de una dosis o régimen de tratamiento dados del agente inhibidor de IGF1R se puede determinar, por ejemplo, determinando si el tumor tratado en el paciente retrocede o bien o deja de crecer. 15

En una realización de la invención la administración de un agente inhibidor de IGF1R es mediante inyección próxima al sitio de la diana (por ejemplo, el tumor). En una realización se administra una dosis diaria terapéuticamente efectiva de agente inhibidor de IGF1R o composición farmacéutica del mismo como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más sub-dosis administradas por separado a intervalos apropiados a lo largo del día. En una realización una dosificación “terapéuticamente efectiva” de cualquier anticuerpo anti-IGFR (por ejemplo, 20 19D12/15H12 LCF/HCA) se encuentra en el intervalo de aproximadamente 3 mg/kg (peso corporal) a aproximadamente 20 mg/kg (por ejemplo, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg o 20 mg/kg) por día. En una realización una “dosificación terapéuticamente efectiva” de un agente quimioterapéutico (por ejemplo, un agente inhibidor de IGF1R) es siempre y cuando sea posible como se describe en Physicians' Desk 25 Reference 2003 (Thomson Healthcare; 57ª edición (1 de Noviembre de 2002)) que se incorpora a esta invención por referencia. Por ejemplo en una realización de la invención una dosificación terapéuticamente efectiva de NVP-ADW-742 es aproximadamente 1 mg/kg/día a aproximadamente 50 mg/kg/día (por ejemplo, 5 mg/kg/día, 10 mg/kg/día, 15 mg/kg/día, 20 mg/kg/día, 25 mg/kg/día, 30 mg/kg/día, 35 mg/kg/día, 40 mg/kg/día, 45 mg/kg/día).

Procedimientos terapéuticos y administración 30

Se puede usar un agente inhibidor de IGF1R para inhibir o reducir el crecimiento o proliferación de cualquier célula, tal como una célula maligna, ya sea in vitro (por ejemplo, en cultivo de células) o in vivo (por ejemplo, dentro del cuerpo de un sujeto que sufre de una enfermedad mediada por expresión o actividad elevada de IGF1R o por expresión elevada de su ligando (por ejemplo, IGF-I o IGF-II)). Se puede conseguir tal inhibición o reducción del crecimiento o proliferación de una célula poniendo en contacto la célula con el agente inhibidor de IGF1R. 35

En una realización un agente inhibidor de IGF1R es para el tratamiento de cáncer en un paciente que se caracteriza por uno o más de las siguientes características: (i) fosforilación de IRS-1 en tirosina 896; (ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o (iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina. Por ejemplo, en una realización, el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de Wilm, cáncer de huesos, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de endometrio, mieloma múltiple, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de colon, cáncer de 40 recto, cáncer colorrectal, cáncer de mama (receptor de estrógeno+ o receptor de estrógeno”), cáncer de cuello uterino, sarcoma sinovial, cáncer de ovarios, cáncer de páncreas, neuroblastoma, rabdomiosarcoma, osteosarcoma, diarrea asociada con tumor carcinoide metastásico o de péptido intestinal vasoactivo (por ejemplo, síndrome de VIPorna o Werner-Morrison).

En una realización esto se determina inicialmente si un paciente prospectivo es tratado con un agente 45 inhibidor de IGF1R que sufre de una variedad de cáncer que es conocido habitualmente por mostrar una de las siguientes características: (i) fosforilación de IRS-1 en tirosina 896; (ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o (iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina. Si se determina que el paciente sufre de un cáncer conocido que se caracteriza por una o más de las 6 características indicadas anteriormente, el paciente se selecciona para el tratamiento con un agente inhibidor de IGF1R. Un tipo de tumor puede ser conocido por comprender cualquiera de 50 las características enumeradas, por ejemplo, si se establece en la bibliografía científica (por ejemplo, revistas periódicas o libros de textos) o si se conoce habitualmente en la técnica por parte de facultativos especialistas o si tal característica se ha observado alguna vez en uno o varios pacientes o tumores, o si se pueden inferir de forma razonable a partir de los datos experimentales (por ejemplo, datos in vitro o in vivo que incluyen datos animales).

En una realización de la invención se analiza un tumor individual del paciente prospectivo y se determina si 55 el tumor muestra una o más de las 6 características: (i) fosforilación de IRS-1 en tirosina 896; (ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; (iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina. En esta realización si se determina que el tumor del paciente está determinado por caracterizarse por una o más de las seis características indicadas anteriormente, el paciente se selecciona para el tratamiento con un agente inhibidor de IGF1 R.

Las células de un tumor de paciente particular pueden obtenerse quirúrgicamente, por ejemplo, por biopsia quirúrgica. Por ejemplo, se puede tomar una biopsia de tumor por biopsia endoscópica, biopsia excisional o incisional o biopsia por aspiración con aguja fina (FNA).

El término “paciente” o “sujeto” incluye cualquier organismo, preferiblemente un animal, más preferiblemente un mamífero (por ejemplo, rato, ratón, perro, gato, conejo) y lo más preferiblemente un ser humano. 5

Como se estableció anteriormente en una realización de la invención, cuando sea posible, se administra un agente inhibidor de IGF1 R a un sujeto de acuerdo con Physicians' Desk Reference 2003 (Thomson Healthcare; 57ª edición (1 de Noviembre de 2002)) o como se describe en este documento.

Se puede administrar un agente inhibidor de IGF1 R mediante una ruta invasiva tal como mediante inyección (véase anteriormente). La administración mediante una ruta no invasiva (por ejemplo, por vía oral; por 10 ejemplo, en una píldora, cápsula o comprimido) se encuentra también dentro del alcance de la presente invención. En una realización de la invención se administra un anticuerpo anti-IGF1 R (por ejemplo, 15H12/19D12 LCF/HCA), o composición farmacéutica del mismo por vía intravenosa, subcutánea, intramuscular, intraarterial o intratumoral.

Se puede administrar un agente inhibidor de IGF1R con dispositivos médicos conocidos en la técnica. Por ejemplo se puede administrar una composición farmacéutica de la invención mediante inyección con una aguja 15 hipodérmica.

Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden administrar con un dispositivo de inyección hipodérmico sin aguja; tal como los dispositivos desvelados en las patentes de Estados Unidos números 6.620.135; 6.096.002; 5.399.163; 5.383.851; 5.312.335; 5.064.413; 4.941.880; 4.790.824 o 4.596.556.

Ejemplos de implantes y módulos bien conocidos para administración de composiciones farmacéuticas 20 incluyen: patente de Estados Unidos número 4.487.603, que describe una bomba de microinfusión implantable para dispensión de la medicación a una velocidad controlada; patente de Estados Unidos nº 4.447.233, que describe una bomba de infusión de la medicación para liberación de la medicación a una velocidad de infusión exacta; patente de Estados Unidos nº 4.447.224, que describe un equipo de infusión implantable de flujo variable para liberación continua de fármaco; patente de Estados Unidos nº 4.439.196, que describe un sistema de liberación de fármaco 25 osmótico que presenta compartimentos multi-cámara. Son bien conocidos por los especialistas en la técnica muchos implantes, sistemas de liberación y módulos de otros tipos.

Composiciones farmacéuticas

Se puede incorporar un agente inhibidor de IGF1R en una composición farmacéutica, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable, adecuado para administración a un sujeto in vivo. El alcance de la presente invención 30 incluye composiciones farmacéuticas que son adecuadas para ser administradas a un sujeto por cualquier ruta incluyendo, por ejemplo, oral, ocular, tópica, pulmonar (inhalación), inyección intratumoral, inyección intravenosa, inyección subcutánea o inyección intramuscular.

Para información general en lo concerniente a las formulaciones, véanse, por ejemplo, Gilman, y col., (eds.) (1990), The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8th Ed., Pergamon Press; A. Gennaro (ed.), Remington's 35 Pharmaceutical Sciences, 18ª edición, (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania.; Avis, y col., (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications Dekker, New York; Lieberman, y col., (eds.) (1990). Formas de dosificación farmacéuticas: Tablets Dekker, New York; y Lieberman, y col., (eds.) (1990), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, Nueva York, Kenneth A. Walters (ed.) (2002) Dermatological and Transdermal Formulations (Drugs and the Pharmaceutical Sciences), voI 119, Marcel Dekker. 40

Los vehículos farmacéuticamente son convencionales y son muy conocidos en la técnica. Ejemplos incluyen vehículos acuosos y no acuosos, estabilizantes, antioxidantes, disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antimicrobianos, tampones, proteínas del suero, agentes de retardo isotónicos y de la absorción, y similares que son fisiológicamente compatibles. Preferiblemente el vehículo es adecuado para inyección en el cuerpo del individuo. 45

Ejemplos de vehículos acuosos y no acuosos adecuados que se pueden usar en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol propilenglicol, polietilenglicol y similares), y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva y ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. Se puede mantener la fluidez apropiada, por ejemplo, con el uso de materiales de recubrimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el 50 caso de dispersiones, y con el uso de tensioactivos.

Ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: antioxidantes solubles en agua tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; y antioxidantes solubles en aceite tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol, y similares; y agentes quelantes metálicos, tales como ácido 55 cítrico, ácido etilendiamintetracético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares.

La prevención de la presencia de microorganismos se puede asegurar tanto por procedimientos de esterilización como con la inclusión de diversos agentes antimicrobianos tales como EDTA, EGTA, parabeno, clorobutanol, ácido fenolsórbico y similares.

Tampones adecuados que se pueden incluir en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen tampones basados en L-histidina, tampones basados en fosfato (por ejemplo, solución salina tamponada con 5 fosfato, pH ~ 7), tampones basados en sorbato o tampones basados en glicina.

Proteínas de suero que se pueden incluir en las composiciones farmacéuticas de la invención pueden incluir albúmina de suero humano.

También se pueden incluir agentes isotónicos tales como azúcares (por ejemplo, sacarosa), etanol, polialcoholes (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido, manitol o sorbitol), citrato de sodio o cloruro 10 de sodio (por ejemplo, solución tamponada) en las composiciones farmacéuticas de la invención. En una realización de la invención el azúcar, por ejemplo, glucosa o sacarosa está presente a una concentración alta (por ejemplo, aproximadamente 10-100 mg/ml, por ejemplo 50 mg/ml, 60 mg/ml o 70 mg/ml).

Se puede conseguir la absorción prolongada de una forma farmacéutica inyectable con la inclusión de agentes que retardan la absorción tales como monoestearato de aluminio y/o gelatina. 15

Se pueden preparar también dispersiones en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos y en aceites.

Vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. Es bien conocido en la técnica el uso de tales medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas. 20

Se pueden preparar soluciones inyectables estériles que comprenden un anticuerpo anti-IGF1R mediante incorporación del anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo en la cantidad requerida en un disolvente apropiado, de forma opcional con uno o una combinación de ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de microfiltración por esterilización. Por lo general se preparan dispersiones mediante incorporación del anticuerpo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros 25 ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos preferidos de preparación son secado a vacío y secado por congelación (liofilización) que dan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado en una solución del mismo filtrada en condiciones de esterilidad previamente.

En una realización de la invención un anticuerpo anti-IGR1R de la invención está en una formulación 30 farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de dicho anticuerpo, un tampón y sacarosa. Por ejemplo, en una realización de la invención el tampón es uno cualquiera de tampón fosfato, tampón citrato, tampón histidina, tampón glicina o tampón acetato. La formulación farmacéutica puede encontrarse en cualquier intervalo de pH adecuado. En una realización de la invención el pH es 5,0, 5,5, 6,0, 7,5, o estar entre aproximadamente 5,5 y aproximadamente 6 o entre aproximadamente 5 y aproximadamente 7. 35

Se puede administrar por vía oral un agente inhibidor de IGF1R que incluye un anticuerpo anti-IGF1R o fragmento de unión al antígeno del mismo. Las composiciones farmacéuticas para administración por vía oral pueden contener, además de la composición ligante, aditivos tales como almidón (por ejemplo, almidón de patata, maíz o trigo, o celulosa), derivados de almidón (por ejemplo, celulosa microcristalina o sílice), azúcares (por ejemplo, lactosa), talco, estearato, carbonato de magnesio o fosfato de calcio. Con el fin de asegurar que las composiciones 40 para vía oral que comprenden un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de la invención sean bien toleradas por el sistema digestivo del paciente, se pueden incluir generadores de mucus o resinas. Puede ser también deseable mejorar la tolerancia por la formulación del anticuerpo o fragmento de unión al antígeno en una cápsula que sea insoluble en los jugos gástricos. Se prepara una composición farmacéutica ejemplo de esta invención en la forma de una cápsula mediante llenado de una cápsula de gelatina dura de dos piezas convencional con el 45 anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de la invención en forma de polvo, lactosa, talco y estearato de magnesio. Se ha descrito la administración por vía oral de inmunoglobulinas (Foster, y col., (2001) Cochrane Database System rev. 3:CD001816).

Se puede incluir también un agente inhibidor de IGF1R en una composición farmacéutica para administración por vía tópica. Formulaciones adecuadas para administración por vía tópica incluyen preparaciones 50 líquidas o semilíquidas adecuadas para la penetración a través de la piel en el lugar donde se requiere el tratamiento, tales como linimentos, lociones, cremas, ungüentos o pastas, y gotas adecuadas para administración al ojo, oído o nariz.

Las gotas pueden comprender soluciones o suspensiones acuosas estériles u oleosas estériles y se pueden preparar mediante disolución de un agente inhibidor de IGF1R en una solución acuosa adecuada de un 55 agente bactericida y/o fungicida y/o cualquier otro conservante adecuado, e incluye preferiblemente un agente tensioactivo. La solución resultante se puede clarificar luego por filtración.

Lociones de acuerdo con la presente invención incluyen aquellas adecuadas para aplicación a la piel u ojo. Una loción ocular puede comprender una solución acuosa estéril que contiene de forma opcional un bactericida y se puede preparar mediante procedimientos similares a aquellos para la preparación de gotas. Lociones o linimentos para aplicación a la piel pueden incluir también un agente para secado y para enfriar la piel, tal como un alcohol o acetona, y/o un humectante tal como glicerol o un aceite tal como aceite de ricino o aceite de cacahuete. 5

Cremas, ungüentos o pastas de acuerdo con la presente invención son formulaciones semisólidas del ingrediente activo para aplicación externa. Estas se pueden preparar mezclando un agente inhibidor de IGF1R en forma finamente dividida o en forma de polvo, solo o en solución o suspensión en una fluido acuoso o no acuoso, con la ayuda de maquinaria adecuada, con una base grasa o no grasa. La base puede comprender hidrocarburos tales como parafina dura, blanda o líquida, glicerol, cera de abejas, un jabón metálico; un mucílago; un aceite de 10 origen natural tal como aceite de almendras, maíz, cacahuete, ricino u oliva; grasa de lana o sus derivados, o un ácido graso tal como ácido esteárico u oleico junto con un alcohol tal como propilenglicol o macrogeles. La formulación puede incorporar cualquier agente tensioactivo adecuado tal como un tensioactivo aniónico, catiónico o no iónico tal como ésteres de sorbitán o derivados de polioxietileno de los mismos. Se pueden incluir también agentes de suspensión tales como gomas naturales, derivados de celulosa o materiales inorgánicos tales como 15 sílices silicáceas y otros ingredientes tales como lanolina.

Se puede administrar también un agente inhibidor de IGF1R por inhalación. Una composición farmacéutica para inhalación puede ser un aerosol. Una composición farmacéutica ejemplo para inhalación de un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de la invención puede incluir: un recipiente aerosol con una capacidad de 15 a 20 ml que comprende el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de la invención, un agente lubricante, tal como 20 polisorbato 85 o ácido oleico, dispersado en un propelente, tal como freón, preferiblemente en una combinación de 1,2-diclorotetrafluoroetano y difluoroclorometano. Preferiblemente la composición se encuentra en un recipiente aerosol apropiado adaptado para administración por vía intranasal o inhalación por vía oral.

Kits y artículos de fabricación

Kits y artículos de fabricación de la presente invención incluyen un agente inhibidor de IGF1R, 25 preferiblemente combinado con un vehículo farmacéuticamente aceptable, en una formulación farmacéutica, más preferiblemente en una forma de dosificación farmacéutica tal como una píldora, un polvo, un líquido inyectable, un comprimido, gránulos dispersables, una cápsula, un sello o un supositorio. Véase por ejemplo, Gilman y col. (eds.) (1990), The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8ª edición, Pergamon Press; y Remington’s Pharmaceutical Sciences, véase anteriormente, Easton; Penn; Avis y col. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral 30 Medication Dekker, Nueva York; Lieberman y col. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets Dekker, Nueva York; y Lieberman y col. (eds.) (1990), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, Nueva York.

Los kits y artículos de fabricación de la presente invención también incluyen información, por ejemplo, en la forma de una inserción en el envase o etiqueta, que indica que la diana del agente inhibidor de IGF1R es IGF1R. El 35 término “diana” indica que el agente reduce o inhibe la unión al ligando, actividad de la quinasa, expresión o cualquier otra actividad biológica de IGF1R de algún modo. La inserción o etiqueta pueden ser de cualquier forma, tal como papel o sobre medio electrónico tal como un medio grabado magnéticamente (por ejemplo, un disco magnético flexible) o un CD-ROM.

La etiqueta o inserción pueden incluir también otra información concerniente a las composiciones 40 farmacéuticas y formas de dosificación en el kit o artículo de fabricación.

En general tal información ayuda a pacientes y facultativos en el uso de las composiciones farmacéuticas descritas y formas de dosificación de forma efectiva y segura. Por ejemplo, se puede suministrar la siguiente información referente al agente inhibidor de IGF1R en la inserción: parámetros farmacocinéticos, farmacodinámicos, estudios clínicos, parámetros de eficacia, indicaciones y uso, contraindicaciones, avisos, precauciones, reacciones 45 adversas, sobredosis, dosificación y administración apropiadas, cómo administrar, condiciones de conservación apropiadas, referencias e información de patente.

Ejemplos

En este ejemplo se comparó el nivel de fosforilación de IRS-1 en tejido de tumor de pulmón humano con el de muestras de tejido normal y se encontró que es mayor en células tumorales que en células normales. Igualmente 50 se correlacionó la eficacia in vivo del anticuerpo anti-IGF1R 19D12/15H12 LCF/HCA con la capacidad del IGF-1 para provocar la fosforilación de IRS-1. Además se evaluó el nivel de expresión de ARNm de IGF-II en 56 muestras de tejido de ovario y colorrectal normal y canceroso diferentes y se encontró que es mayor en varias muestras de tejido tumoral.

Preparación de lisado tumoral. Se pesaron en primer lugar tejidos tumorales y se pulverizaron en polvo 55 fino con un pulverizador pre-enfriado en hielo seco. Se transfirieron los polvos tumorales a un tubo y se añadió 4,5 volúmenes de tampón A (es decir, 450 ul de tampón A por 100 mg de tejido). Se sometieron las muestras a ultrasonidos durante 30 segundos, se añadió 0,5 volúmenes de tampón B (es decir, adición de 50 ul de tampón B

por 100 mg de polvo de tejido), y se agitaron las muestras a 13.000 rpm durante 20 minutos a 4º C tras incubación en hielo durante 30 minutos. Se recogieron los sobrenadantes y se determinaron las concentraciones de proteína de los lisados por ensayo Bio-Rad.

Tampón A: Hepes 50 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, glicerol al 5%, MgCl2 1,5 mM, vanadato de sodio 2 mM, NaF 5 mM, inhibidores de proteasa (2 veces EDTA completo C concentrado del catálogo de Roche 1873850), 5 cocktail 1 de inhibidor de fosfatasa (Sigma p2850), cocktail 2 de inhibidor de fosfatasa (Sigma p5726).

Tampón B: tampón A más Triton-100 al 10%.

Preparación de lisado de cultivo celular. Se lavaron las células en PBS una vez, se lisaron en tampón que contiene Hepes 50 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, glicerol al 10%, Triton X-100 al 1%, MgCl2 1,5 mM, Na3VO4 2 mM y cocktail de inhibidor de proteasa (CompleteTM, Roche Diagnostics GmbH; Mannheim, Alemania). Se agitaron 10 muestras a 13.000 rpm durante 10 minutos a 4º C tras incubación en hielo durante 30 minutos. Se recogieron los sobrenadantes y se determinaron las concentraciones de proteína de los lisados por ensayo Bio-Rad.

Análisis Western. Se separaron cantidades iguales de lisados de células o tumorales en un SDS-PAGE, se transfirió a filtros de nitrocelulosa, se tentó con anticuerpos deseados, y se visualizó por ECL (Amersham; Piscataway, NJ). Los anticuerpos para detección de IGFR e IRS-1 eran de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, 15 CA). Anticuerpos contra fosfo-IRS1 [pY896] y fosfo-IRS1 [pY612] eran de Biosource (Camarillo, CA).

Medida de la proteína IGF-II. Se sembraron células de diversas líneas celulares en placas T-175 en medio que contiene FBS al 10%. Después de obtener células se cambió el medio a medio sin suero. Se recogió el medio se agitó el detritus y se liofilizaron los sobrenadantes. Se tripsinizaron las células en las placas y se sometieron a recuento. Se añadió agua a cada muestra de sobrenandante lioflizada (1 ml/2 x 107 células). Se midió IGF-II usando 20 el kit ELISA de IGF-II de DSL (DSL-10-2600). Se determinaron cantidades de IGF-II con la curva estándar y se registraron como nanogramo de IGF-II por 1 x 106 células.

Medida de ARNm de IGF-II. Se prepararon ARN de muestras tumorales y se sintetizaron ADNc. Se analizó la expresión de IGF-II en 20 ng de muestra de ADNc en un ensayo de PCR con 5’-nucleasa fluorogénico con sondas y cebadores específicos usando el sistema de detección de secuencia ABI Prism 7700 (Applied Biosystems; Foster 25 City, CA). Se normalizaron los números CT mediante determinación de expresión de ARNm de Ubiquitina (gen de referencia) en todas las muestras:

IGF2/directo: AGGAGCTCGAGGCGTTCAG (nº ID SEC: 102)

IGF2/inverso: GTCTTGGGTGGGTAGAGCAATC (nº ID SEC: 103)

Sonda: AGGCCAAACGTCACCGTCCCC (nº ID SEC: 104) 30

Modelos de xenoinjerto en ratones. Se inocularon subcutáneamente de cuatro a cinco millones de células tumorales humanas (H322, H838, A2780, ES2, MCF7, SW527, SK-N-AS, SK-N-MC) en Matrigel en cada ratón desnudo. Cuando el tamaño del tumor alcanzaba al menos aprox. 50 mm3, se inició el tratamiento con 19D12/15H12 LCF/HCA y se continuó con dosificación dos veces por semana. Se inyectó en cada ratón desnudo 19D12/15H12 LCF/HCA por vía intraperitoneal, a 0,004 mg/ratón, 0,02 mg/ratón, 0,1 mg/ratón o 0,5 mg/ratón. Se midieron los 35 volúmenes de tumor por Labcat.

Nivel de fosforilación de IRS-1 en cáncer de pulmón humano y muestras de tejido normal. Se obtuvieron de pacientes doce pares de muestras de muestras de tejido de pulmón humano normal y canceroso. Se prepararon lisados celulares a partir de las muestras de tejido y se sometieron a análisis western blot, con tinción con anti-fosfo-IRS1 [pY896] como se describió anteriormente. También se midió IRS-1 mediante tinción con un 40 anticuerpo anti-IRS.

Los datos de western blot generados en estos experimentos se indican en la figura 1. En 6 de los 12 pares de muestras evaluadas (50%), se observaron mayores niveles de fosfo-IFS-1 en muestras de tejido tumoral que en la muestra de tejido normal correspondiente.

Se observaron resultados similares cuando se midió el nivel de fosforilación de IRS-1 en muestras de tejido 45 colorrectal normal y canceroso. Las muestras de tejido colorrectal se evaluaron de forma esencialmente idéntica a las muestras de tejido de pulmón.

Correlación de eficacia in vivo de 19D12/15H12 LCF/HCA con fosforilación de IRS-1. Para evaluar la eficacia in vivo del anticuerpo 19D12/15H12LCF/HCA, se administraron a ratones desnudos que portan xenoinjertos de tumor humano el anticuerpo o un isótopo de control, y se evaluó el volumen del tumor en el tiempo como se 50 descrió anteriormente.

Para evaluar la fosforilación de IRS-1 en líneas de células tumorales, se cultivaron líneas celulares en presencia o ausencia de 100 ng/ml de IGF-1. Se prepararon luego lisados celulares de células A2780, ES2, H322, H838 y SK-N-AS y se evaluaron por análisis western blot como se describió anteriormente.

Los resultados de los experimentos de eficacia in vivo se indican en la figura 2. Se encontró que el anticuerpo 19D12/15H12LCF/HCA es efectivo en la inhibición del crecimiento de diversos tipos de tumores in vivo (por ejemplo, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de ovarios, cáncer de mama, neuroblastoma).

Se indican en la figura 3 los resultados de los experimentos que miden la fosforilación de IRS-1 basal y estimulada por IGF-1 en células tumorales. Las líneas celulares A2780, H322 y SK-N-SA evaluadas mostraron la 5 mayor fosforilación de IRS-1 basal y estimulada por IGF-1.

Las líneas celulares que eran más sensibles, in vivo, para la inhibición del crecimiento por 19D12/15H12 LHF/HCA (figura 2) fueron las que mostraban la mayor forforilación de IRS-1 basal y estimulada por IGF-1 (figura 3).

Expresión de ARNm de IGF-II en muestras de tumor de ovario y colorrectal.

Se obtuvieron muestras de tejido de ovario y colorrectal normal y canceroso de múltiples pacientes de 10 cáncer. Se evaluó la expresión del nivel de ARNm de IGF-II, por análisis Taqman, como se describió anteriormente. El nivel de expresión de ARNm de IGF-II de cada muestra de tejido de ovario se indica en la figura 4 y el nivel de expresión de ARNm de IGF-II en cada muestra de tejido colorrectal se describe en la figura 5. En estos experimentos se encontró que el 20% de las muestras de tumor de ovarios sobreexpresan ARNm de IGF-II en comparación con muestras de tejido de ovarios normales. Se encontró que el cincuenta y tres por ciento de las 15 muestras colorectales sobreexpresan ARNm de IGF-II en comparación con muestras colorectales normales adyacentes.

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> Schering Corporation

<120> BIOMARCADORES PARA PRESELECCIÓN DE PACIENTES PARA TERAPIA ANTI-IGF1R 20

<130> JB06257WI

<150> 60/633.156

<151> 2004-12-03

<160> 105

<170> PatentIn versión 3.3 25

<210> 1

<211> 384

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220> 30

<223> Cadena ligera C de 19D12/15H12 modificado

<220>

<221> CDS

<222> (1)…(384)

<400> 1 35

<210> 2

<211>128

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 2

<210> 3

<211> 384

<212> ADN

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Cadena ligera D de 19D12/15H12 modificado

<220>

<221> CDS

<222> (1)…(384) 10

<400> 3

<210> 4

<211> 128

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 4

<210> 5

<211> 384 5

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Cadena ligera E de 19D12/15H12 modificado

<220> 10

<221> CDS

<222> (1)…(384)

<400> 5

<210> 6

<211> 128

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 6

<210> 7

<211> 384

<212> ADN

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Cadena ligera F de 19D12/15H12

<220>

<221> CDS

<222> (1)…(384) 10

<400> 7

<210> 8

<211> 128

<212> PRT

<213> Secuencia sintética 5

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 8

<210> 9

<211> 411

<212> ADN

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Cadena pesada A de 19D12/15H12

<220>

<221> CDS

<222> (1)…(411) 10

<400> 9

<210> 10

<211> 137

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 10

<210> 11

<211> 411

<212> ADN

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Cadena pesada B de 19D12/15H12 modificado

<220>

<221> CDS

<222> (1)…(411) 10

<400> 11

<210> 12

<211> 137

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 12

<210> 13

<211> 174

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de cadena pesada de inmunoglobulina

<400> 13

<210> 14

<211> 124

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de cadena pesada de inmunoglobulina

<400> 14

<210> 15

<211> 112

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de cadena pesada de inmunoglobulina

<400> 15

<210> 16

<211> 125

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de cadena pesada de inmunoglobulina

<400> 16

<210> 17

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de cadena pesada de inmunoglobulina

<400> 17

<210> 18

<211> 122

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de cadena pesada de inmunoglobulina

<400> 18

<210> 19

<211> 136

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de cadena ligera de inmunoglobulina

<400> 19

<210> 20 10

<211> 107

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de cadena ligera de inmunoglobulina

<400> 20

<210> 21 5

<211> 100

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de cadena ligera de inmunoglobulina 10

<400> 21

<210> 22

<211> 107

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de cadena ligera de inmunoglobulina

<400> 22

<210> 23

<211> 92

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220> 5

<223> Región variable de cadena ligera de inmunoglobulina

<400> 23

<210> 24

<211> 91 10

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de cadena ligera de inmunoglobulina

<400> 24 15

<210> 25

<211> 236

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 25

<210> 26

<211> 236

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 26

<210> 27

<211> 236

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 27

<210> 28

<211> 236

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 28

<210> 29

<211> 473

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 29 5

<210> 30

<211> 470

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220> 5

<223> Inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 30

<210> 31

<211> 470

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 31

<210> 32

<211> 470

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 32

<210> 33

<211> 470

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Cadena pesada de inmunoglobulina de 2.12.1 fx

<400> 33

<210> 34

<211> 125

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> región variable de cadena pesada de inmunoglobulina de 2.12.1 fx

<400> 34

<210> 35 10

<211> 236

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> cadena ligera de inmunoglobulina de 2.12.1 fx 15

<400> 35

<210> 36

<211> 108

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220> 5

<223> región variable de cadena ligera de inmunoglobulina de 2.12.1 fx

<400> 36

<210> 37

<211> 112 10

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> región variable de cadena ligera de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 1

<400> 37 15

<210> 38

<211> 112

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> región variable de cadena ligera de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 2

<400> 38

<210> 39

<211> 117

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> región variable de cadena pesada de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 1

<400> 39

<210> 40

<211> 117

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> región variable de cadena pesada de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 2

<400> 40

<210> 41

<211> 117

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> región variable de cadena pesada de inmunoglobulina 7C10 humanizada; versión 3

<400> 41

<210> 42

<211> 130

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> región variable de cadena pesada de inmunoglobulina A12

<400> 42

<210> 43

<211> 109

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> región variable de cadena ligero de inmunoglobulina A12

<400> 43

<210> 44

<211> 119

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> región variable de cadena pesada de inmunoglobulina A1

<220>

<212> MISC_FEATURE

<222> (1) … (119) 10

<223> Posibles mutaciones: R30, S30, N31, S31, Y94, H94, D104, E104

<400> 44

<210> 45

<211> 107

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> región variable de cadena ligera de inmunoglobulina A1

<220>

<212> MISC_FEATURE

<222> (1) … (107) 10

<223> Posibles mutaciones: P96, 196, P100, Q100, R103, K103, V104, L104, D105, E105

<400> 45

<210> 46

<211> 251

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> cadena ligera fv 8A1

<400> 46

<210> 47

<211> 245

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> cadena simple fv 9A2

<400> 47

<210> 48

<211> 245

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> cadena simple fv 11A4

<400> 48

<210> 49

<211> 251

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> cadena simple fv 7A4

<400> 49

<210> 50

<211> 249

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> cadena simple fv 11A1

<400> 50

<210> 51

<211> 251

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> cadena simple fv 7A6

<400> 51

<210> 52

<211> 5

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> CDR

<400> 52

<210> 53 10

<211> 17

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> CDR 15

<400> 53

<210> 54

<211> 15

<212> PRT 20

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> CDR

<400> 54

25

<210> 55

<211> 16

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220> 30

<223> CDR

<400> 55

<210> 56

<211> 7 5

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> CDR

<400> 56 10

<210> 57

<211> 9

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 15

<220>

<223> CDR

<400> 57

<210> 58 20

<211> 123

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada 25

<400> 58

<210> 59

<211> 118

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 59

<210> 60

<211> 123

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 60

<210> 61

<211> 120

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 61

<210> 62

<211> 120

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 62

<210> 63

<211> 120

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 63

<210> 64

<211> 123

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 64

<210> 65

<211> 124

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 65

<210> 66

<211> 124

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 66

<210> 67

<211> 120

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 67

<210> 68

<211> 117

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 68

<210> 69

<211> 124

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 69

<210> 70

<211> 120

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 70

<210> 71

<211> 115

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 71

<210> 72

<211> 120

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena pesada

<400> 72

<210> 73

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 73

<210> 74

<211> 113

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 74

<210> 75

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 75

<210> 76

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 76

<210> 77

<211> 113

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 77

<210> 78

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<220>

<221> misc_feature

<222> (28) .. (28) 10

<223> Xaa puede ser cualquier aminoácido de origen natural

<220>

<221> misc_feature

<222> (101) .. (101)

<223> Xaa puede ser cualquier aminoácido de origen natural 15

<400> 78

<210> 79

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 79

<210> 80

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 80

<210> 81

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 81

<210> 82

<211> 113

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 82

<210> 83

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 83

<210> 84

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 84

<210> 85

<211> 113

<212> PRT 5

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 85

<210> 86

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 86

<210> 87

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 87

<210> 88

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 88

<210> 89

<211> 113 5

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 89 10

<210> 90

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 90

<210> 91

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 91

<210> 92

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 92

<210> 93

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 93

<210> 94

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 94

<210> 95

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 95

<210> 96

<211> 113 5

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 96 10

<210> 97

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 97

<210> 98

<211> 113

<212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Región variable de inmunoglobulina de cadena ligera

<400> 98

<210> 99

<211> 14

<212> ADN

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Cebador

<400> 99

ctccgcttcc tttc 14

<210> 100 10

<211> 18

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> anti-sentido 15

<400> 100

atctctccgc ttcctttc 18

<210> 101

<211> 18

<212> ADN 20

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> anti-sentido

<400> 101

atctctccgc ttcctttc 18 25

<210> 102

<211> 19

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220> 5

<223> cebador

<400> 102

aggagctcga ggcgttcag 19

<210> 103

<211> 22 10

<212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> cebador

<400> 103 15

gtcttgggtg ggtagagcaa tc 22

<210> 104

<211> 21

<212> ADN

<213> Secuencia artificial 20

<220>

<223> cebador

<400> 104

aggccaaacg tcaccgtccc c 21

<210> 105 25

<211> 109

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Región variable de cadena ligera de inmunoglobulina A12 30

<400> 105

Claims (25)

1. REIVINDICACIONES

   1. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de un tumor en un paciente mamífero con cáncer, en la que la composición comprende un agente inhibidor de IGF1 R y en el que el tratamiento comprende

   (a) seleccionar un paciente mamífero que presenta un tumor que expresa uno o más de los siguientes:

   (i) fosforilación del sustrato-1 del receptor de la insulina (IRS-1) en tirosina 896;

   (ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o 5

   (iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina; y

   (b) administración a dicho paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente inhibidor de IGF1 R; en el que el agente inhibidor es:

   (i) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al anticuerpo del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una región variable de cadena ligera 10 que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y tres CDR de una región variable de cadena pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10;

   (ii) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 o 73-15 98; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 o 58-72; o un anticuerpo de cadena simple aislado que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en nº ID SEC: 46-51; o

   (iii) 20

   5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SECº: 99);

   5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 100) o

   5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 101).
2. 2. La composición de la reivindicación 1, en la que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer 5 de vejiga, cáncer de Wilm, cáncer de huesos, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de colon, cáncer de recto, cáncer colorrectal, cáncer del endometrio, mieloma múltiple, cáncer de mama del receptor de estrógeno positivo, cáncer de mama del receptor de estrógeno negativo, cáncer de cuello uterino, sarcoma sinovial, cáncer de ovarios, cáncer de páncreas, neuroblastoma, rabdomiosarcoma, osteosarcoma y tumores de secreción de péptidos intestinales vasoactivos. 10
3. 3. La composición para su uso en el tratamiento de un tumor de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el agente inhibidor es:

   un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGR1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 38; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la 15 secuencia de aminoácidos nº ID SEC: 40.
4. 4. La composición para su uso en el tratamiento de un tumor de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en la nº ID SEC: 38; y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en la nº ID SEC: 40. 20
5. 5. La composición para su uso en el tratamiento de un tumor de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el agente inhibidor es un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno que se une de forma específica a IGF1 R humano comprende tres CUR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en el nº ID SEC: 8 y tres COR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos presenada en nº ID SEC: 10. 25
6. 6. La composición de la reivindicación 4, en la que el paciente es humano.
7. 7. La composición para su uso en el tratamiento de un tumor de acuerdo con la reivindicación 5, en la que el anticuerpo o fragmento comprende una región variables de cadena ligera que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y una región variable de cadena pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10.
8. 8. La composición de la reivindicación 1, en la que el cáncer es cáncer de huesos. 30
9. 9. La composición para su uso en el tratamiento de un tumor de acuerdo con la reivindicación 4, en la que el anticuerpo o fragmento es un anticuerpo.
10. 10. La composición para su uso en el tratamiento de un tumor de acuerdo con la reivindicación 9, en la que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
11. 11. La composición para su uso en el tratamiento de un tumor de acuerdo con la reivindicación 9, en la que el 35 anticuerpo es un anticuerpo recombinante.
12. 12. Un procedimiento in vitro para la selección de una terapia para un paciente mamífero con un tumor, que comprende:

    (a) determinación de si el tumor del paciente expresa uno o más de los siguientes:

    (i) fosforilación de IRS-1 en tirosina 896;

    (ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o 5

    (iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina; y

    (b) selección de un agente inhibidor de IGF1 R como la terapia, si se determina que el tumor del paciente expresa uno o más de (i)-(iii); en el que el agente inhibidor es:

    (i) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una región variable de cadena ligera 10 que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y tres CDR de una región variable de cadena pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10;

    (ii) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 o 73-15 98; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 o 58-72; o un anticuerpo de cadena simple aislado que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupos que consiste en nº ID SEC: 46-51; o

    (iii) 20

    5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 99);

    5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 100) o

    5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 101).
13. 13. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que el agente inhibidor es un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en el nº ID SEC: 38; y 5 tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en la nº ID SEC: 40.
14. 14. El procedimiento de la reivindicación 13, en el que el anticuerpo aislado o el fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en la nº ID SEC: 38, y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de 10 aminoácidos presentada en la nº ID SEC: 40.
15. 15. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que el agente inhibidor es un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano y que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en el nº ID SEC: 8 y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en nº 15 ID SEC: 10.
16. 16. El procedimiento de la reivindicación 15, en el que el anticuerpo o fragmento comprende una región variable de cadena ligera que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y una región de variable de cadena pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10.
17. 17. El procedimiento de la reivindicación 14 en el que el paciente es humano. 20
18. 18. La composición de la reivindicación 4, en la que el cáncer es cáncer de colon o cáncer de pulmón de células no pequeñas.
19. 19. El procedimiento de la reivindicación 14, en el que el cáncer es cáncer de colon o cáncer de pulmón de células no pequeñas.
20. 20. Un procedimiento in vitro para la identificación de un paciente mamífero cuyo tumor es susceptible de 25 responder a un agente inhibidor de IGF1 R que comprende la determinación de si el paciente presenta un tumor que expresa uno o más de los siguientes:

    (i) fosforilación de IRS-1 en tirosina 896;

    (ii) fosforilación de IRS-1 en tirosina 612; o

    (iii) fosforilación de IRS-1 en cualquier tirosina; en la que el paciente se identifica si se determina 30 que el tumor expresa cualquiera de (i) a (iii);

    en la que el agente inhibidor es:

    (i) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al anticuerpo del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una región variable de cadena ligera que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y tres CDR de una 35 región variable de cadena pesada que comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10;

    (ii) un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 2, 4, 6, 8, 19-28, 35-38, 43, 45 o 73-98; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que 40 comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 10, 12-18, 29-34, 39, 40, 41, 42, 44 o 58-72; o un anticuerpo de cadena simple aislado que se une de forma específica a IGF1 R humano que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en nº ID SEC: 46-51; o

    (iii) 45

    5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC 99);

    5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 100) o

    5’-ATCTCTCCGCTTCCTTTC-3’ (nº ID SEC: 101). 5
21. 21. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que el agente inhibidor es un anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica al IGF1 R humano que comprende tres CDR de una inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 38; y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de nº ID SEC: 40.
22. 22. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que el anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno 10 del mismo comprende una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos descrita en el nº ID SEC: 38, y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la nº ID SEC: 40.
23. 23. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que el agente inhibidor es anticuerpo aislado o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une de forma específica a IGF1 R humano y que comprende tres CDR de una 15 inmunoglobulina de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en nº ID SEC: 8 y tres CDR de una inmunoglobulina de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos presentada en la nº ID SEC: 10.
24. 24. El procedimiento de la reivindicación 23, en el que el anticuerpo o fragmento comprende una región variable de cadena ligera que comprende aminoácidos 20-128 de nº ID SEC: 8 y una región variable de cadena pesada que 20 comprende aminoácidos 20-137 de nº ID SEC: 10.
25. 25. El procedimiento de la reivindicación 22, en el que el paciente es humano.