PT1614418E - Utilização de derivados do ácido (-)(3-tri-halometilfenoxi) (4- halofenil) acético para o tratamento de hiperuricemia - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

UTILIZAÇÃO DE DERIVADOS DO ÁCIDO (-)(3—TRI—HALOMETILFENOXI) (4-HALOFENIL) ACÉTICO PARA O TRATAMENTO DE HIPERURICEMIA

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se à utilização de derivados do ácido (-) (3-tri-halometilfenoxi) (4-halofenil) acético e composições no tratamento da resistência à insulina, diabetes de tipo 2, hiperlipidemia e hiperuricemia.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A Diabetes mellitus, normalmente denominada diabetes, refere-se a um processo de doença derivado de múltiplos factores causadores da doença e caracterizada por níveis elevados de glucose no plasmo, referido como hiperglicemia. Ver, e.g., LeRoith, D. et ai., (eds.), DIABETES MELLITUS (Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA U.S.A. 1996), e todas as referencias aí citadas. De acordo com a Associação Americana da Diabetes, estima-se que a diabetes mellitus afecte aproximadamente 6% da população mundial. A hiperglicemia descontrolada está associada a uma mortalidade prematura e aumentada devido a um risco aumentado de doenças microvasculares e macrovasculares, incluindo nefropatia, neuropatia, retinopatia, hipertensão, doença cerebrovascular e doença coronária cardíaca. Por isso, o controlo da homeostasia da glucose é uma abordagem criticamente importante para o tratamento da diabetes. 1 ΕΡ1614418Β1

Existem dois tipos principais de diabetes: A diabetes de Tipo 1 (anteriormente referida como diabetes dependente da insulina ou IDDM); e a diabetes de Tipo 2 (anteriormente referida como diabetes não dependente da insulina ou NIDDM). A diabetes de Tipo 1 é o resultado de uma deficiência absoluta da insulina, a hormona que regula a utilização da glucose. Esta deficiência em insulina é normalmente caracterizada pela destruição das células β nos ilhéus de Langerhans no pâncreas, que normalmente conduz a uma deficiência de insulina absoluta. A diabetes de Tipo 1 possui duas formas: a Diabetes Mellitus mediada imunologicamente, que resulta de uma destruição autoimunitária mediada a nível celular das células β do pâncreas; e a Diabetes Mellitus idiopática, que se refere às formas da doença que não possuem etiologias conhecidas.

A diabetes de Tipo 2 é uma doença caracterizada pela resistência à insulina acompanhada por uma deficiência de insulina relativa, mais do que absoluta. A diabetes de Tipo 2 pode variar desde resistência predominante à insulina com deficiência de insulina relativa até deficiência de insulina predominante com alguma resistência à insulina. A resistência à insulina é a capacidade diminuída da insulina para exercer a sua acção biológica ao longo de uma vasta gama de concentrações. Nos indivíduos com resistência à insulina, o cropo secreta quantidades anormalmente elevadas de insulina para compensar este defeito. Quando estão presentes quantidades inadequadas de insulina para compensar a resistência à insulina e controlar adequadamente a glucose, desenvolve-se um estado de tolerância à glucose deficiente. Num número significativo de indivíduos, a secreção da insulina diminui ainda mais e o nível de glucose no plasma sobre, resultando num estado clínico da diabetes. A 2 ΕΡ1614418Β1 diabetes de Tipo 2 pode ser devida a uma resistência profunda à insulina estimulando os efeitos reguladores no metabolismo da glucose e dos lípidos nos principais tecidos sensíveis à insulina: músculo, fígado e tecido adiposo. Esta capacidade de resposta de resistência à insulina resulta numa activação pela insulina insuficiente da incorporação de glucose, oxidação e armazenamento no músculo e a repressão pela insulina inadequada da lipólise no tecido adiposo e da produção de glucose e secreção no fígado. Na diabetes de Tipo 2, os níveis de ácidos gordos livres são frequentemente elevados em doentes obesos e alguns doentes não obesos e a oxidação dos lípidos aumenta. 0 desenvolvimento prematuro da aterosclerose e a taxa aumentada de doenças cardiovasculares e periféricas são propriedades caracteristicas dos doentes com diabetes. A hiperlipidemia é um factor de precipitação importante para estas doenças. A hiperlipidemia é um estado geralmente caracterizado por um aumento anormal dos lípidos no soro na corrente sanguínea e é um factor de risco importante no desenvolvimento da aterosclerose e doença cardíaca. Para uma revisão dos distúrbios do metabolismo dos lípidos, ver, e.g., Wilson, J. et al., (ed.), Disorders of Lipid Metabolism, Capítulo 23, Textbook of Endocrinology, 9a Edição, (W.B. Sanders Company, Philadelphia, PA U.S.A. 1998. A lipoproteínas no soro são os veículos para lípidos na circulação. Elas são classificadas de acordo com a sua densidade: quilomicrons; lipoproteínas de densidade muito baixa (VLDL); lipoproteínas de densidade intermédia (IDL); lipoproteínas de baixa densidade (LDL) ; e lipoproteínas de densidade elevada (HDL). A hiperlipidemia é normalmente classificada como hiperlipidemia primária ou secundária. A hiperlipidemia primária é geralmente provocada por defeitos genéticos, enquanto a hiperlipidemia secundária é geralmente 3 ΕΡ1614418Β1 provocada por outros factores, tais como vários estados de doença, fármacos, e factores dietéticos. Alternativamente, a hiperlipidemia pode resultar de uma combinação de causas primárias e secundárias da hiperlipidemia. Os níveis de colesterol elevados estão associados a vários estados de doença, incluindo doença arterial coronária, angina pectoris, doença da artéria carótida, tromboses, arteriosclerose cerebral, e xantoma. A dislipidemia, ou níveis anormais de lipoproteínas no plasma sanguíneo, é uma ocorrência frequente entre os diabéticos, e foi demonstrado ser um dos principais contribuintes para o aumento da incidência de eventos coronários e de mortes entre indivíduos diabéticos (ver, e.g., Joslin, E. Ann. Chim. Med. (1927) 5:1061-1079). Estudos epidemiológicos têm, desde então, confirmado esta associação e apresentaram um aumento de várias vezes nas mortes coronárias entre indivíduos diabéticos, quando comparado com indivíduos não diabéticos (ver, e.g., Garcia, M. J. et al., Diabetes (1974) 23: 105-11 (1974); e Laakso, M. e Lehto, S., Diabetes Reviews (1997) 5(4): 294-315).

Foram descritas várias anormalidades de lipoproteínas entre indivíduos diabéticos (Howard B., et al., Artherosclerosis (1978) 30: 153-162).

Estudos anteriores da década de 1970 demonstraram a eficiência de acetato 2-acetamidoetil (4-clorofenil) (3- trifluorometilfenoxi) racémico (também conhecido como "halofenato") como um agente terapêutico potencial para tratar uma diabetes de Tipo 2, hiperlipidemia e hiperuricemia (ver, e.g., Bolhofer, W., U.S. 3 517 050; Jain, A. et al., N. Eng. J. Med. (1975) 293: 1283-1286; Kudzma, D. et al., Diabetes (1977) 25: 291-95; Kohl, E. et al. , Diabetes Care (1984) 7: 19-24; 4 ΕΡ1614418Β1

McMahon, F.G. et al., Univ. Mich. Med. Center J. (1970) 36: 247- 248; Simori, C. et al., Lipids (1972) 7: 96-99; Morgan, J.P. et al., Clin. Pharmacol. Therap. (1971) 12: 517-524, Aronow, W.S. et al., Clin. Pharmacol Ther (1973) 14: 358-365 e Fanelli, G.M. et al., J. Pharm. Experimental Therapeutics (1972) 180:377-396).

Nesses estudos anteriores, o efeito do halofenato racémico na diabetes foi observado quando foi combinado com sulfonilureias. Foi observado um efeito mínimo na glucose em doentes com diabetes tratados somente com halofenato racémico. Todavia, foram detectados efeitos secundários significativos tais como perdas de sangue gastrointestinais de úlceras pépticas e do estômago (ver, e.g., Friedberg, S.J. et al., Clin. Res. (1986) Vol. 34, No. 2: 682A).

Adicionalmente, houve algumas indicações de interacções fármaco-fármaco de halofenato racémico com agentes, tais como sulfato de warfarina (também referido como 3-(alfa-acetonilbenzil)-4-hidroxicumarina ou Coumadin™ (Dupont

Pharmaceuticals, E. I. Dupont de Nemours e Co., Inc.,

Wilmington, DE U.S.A.) (ver, e.g., Vesell, E. S. e Passantanti, G.T., Fed. Proc. (1972) 31(2): 538). Coumadin™ é um anticoagulante que actua através da inibição da síntese de factores de coagulação dependentes da vitamina K (que incluem os Factores II, VII, IX, e X, e as proteínas ant icoagulantes C e S). Crê-se que o Coumadin™ seja metabolizado de uma forma estereoespecífica através de enzimas microssomais hepáticas (as enzimas do citocromo P450). As isozimas do citocromo P450 envolvidas no metabolismo de Coumadin incluem 2C9, 2C19, 2C8, 2C18, 1A2, e 3A4. É provável que 2C9 seja a forma principal de P450 no fígado humano que modula o metabolismo de fármacos in vivo para vários fármacos, incluindo a actividade anticoagulante 5 ΕΡ1614418Β1 de Coumadin™ (ver, e.g., Miners, J. 0. et al., Bri. J. Clin. Pharmacol. (1998) 45: 525-538).

Os fármacos que inibem o metabolismo da Coumadin™ resultam numa maior diminuição nos factores de coagulação dependentes da vitamina K que previnem a coagulação acima do desejado em doentes que receberam essa terapia (i.e., doentes em risco de embolia pulmonar ou cerebral devido a coágulos sanguíneos nas suas extremidades inferiores, no coração ou em outros locais). A simples redução da dose de anticoagulante é frequentemente difícil, na medida em que é necessário manter uma anticoagulação adequada para prevenir a formação de coágulos sanguíneos. Uma anticoagulação aumentada devido a interacção fármaco-fármaco resulta num risco significativo desses doentes com a possibilidade de hemorragia grave a partir de lesões em tecidos moles, sítios gastrointestinais (i.e., úlceras gástricas ou do duodeno) ou outras lesões (i.e., aneurisma da aorta). A hemorragia à luz de muita anticoagulação constitui uma emergência médica e pode resultar na morte se não for tratado imediatamente com terapia apropriada. 0 citocromo P450 2C9 é também conhecido por estar envolvido no metabolismo de vários outros fármacos normalmente utilizados, incluindo dilantina, sulfonilureias, tais como tolbutamida e vários agentes anti-inflamatórios não esteróides, tais como ibuprofeno. A inibição desta enzima tem o potencial de provocar outros efeitos adversos relacionados com interacções fármaco-fármaco, para além dos descritos acima para Coumadin™ (ver, e.g., Pelkonen, 0. et al., Xenobiotica (1998) 28: 1203-1253;

Linn, J.H. e Lu, A.Y., Clin. Pharmacokinet. (1998) 35(5): 361- 6 390) . ΕΡ1614418Β1 São necessárias soluções para as dificuldades e deficiências acima referidas antes de o halofenato se tornar eficaz para o tratamento de rotina da resistência a insulina, uma diabetes de Tipo 2, hiperlipidemia e hiperuricemia. A presente invenção satisfaz esta e outras necessidades ao proporcionar composições e métodos para aliviar a resistência à insulina, uma diabetes de Tipo 2, hiperlipidemia e hiperuricemia, apresentando simultaneamente um melhor perfil de efeitos adversos.

De acordo utilização de estereoisómero com a presente invenção é proporcionada a uma quantidade terapeuticamente eficaz do ) de um composto de Fórmula I,

em que R é um membro seleccionado a partir do grupo que consiste num hidroxilo, aralcoxilo inferior, di-alquilamino inferior-alcoxilo inferior, alcanamido inferior alcoxilo inferior, benzamido-alcoxilo inferior, ureido-alcoxilo inferior, Ν'-alquilo inferior-ureido-alcoxilo inferior, carbamoil-alcoxilo inferior, alcoxilo inferior substituído com halofenoxilo, fenoxilo substituído com carbamoilo, carbonil-alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior-alquilamino inferior, alquilamino inferior substituído por halo, alquilamino inferior substituído por hidroxilo, alquilamino inferior substituído por alcanoliloxilo inferior, ureído, e alcoxicarbonilamino inferior; e X é um Halogénio; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, 7 ΕΡ1614418Β1 em que o composto é substancialmente isento do seu estereoisómero (+) para tratar hiperuricemia num mamífero.

Algumas dessas utilizações compreendem ainda um composto de Fórmula II:

em que R2 é um membro seleccionado a partir do grupo que consiste em fenil-alquilo inferior, alcanamido inferior-alquilo inferior, e benzamido-alquilo inferior.

Algumas dessas utilizações compreendem ainda um composto de Fórmula III:

0 composto de Fórmula III preferido é conhecido como "(-) 2-acetamidoetil 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) - acetato" ou " (-) halofenato." 8 ΕΡ1614418Β1

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1 apresenta a inibição da actividade do citocromo P450 2C9 (CYP2C9) pelo ácido halofénico racémico, ácido (-) halofénico e ácido (+) halofénico. A hidroxilação de tolbutamida foi medida na presença de concentrações crescentes destes compostos. 0 ácido halofénico racémico inibiu a actividade de CYP 2C9 com uma IC5o de 0,45 μΜ e o ácido (+) halofénico inibiu CYP 2C9 com uma IC50 de 0,22 μΜ. Em contraste, o ácido (-) halofénico foi 20 vezes menos potente com uma IC50 aparente de 3,5 μΜ. A Figura 2 apresenta o decurso de tempo de baixar a glucose após uma dose oral única de halofenato racémico, (-) enantiómero de halofenato ou (+) enantiómero de halofenato a 250 mg/kg em murganhos ob/ob diabéticos. O (-) enantiómero apresentou o início de acção mais rápido e a duração de acção mais longa. A diminuição na glucose foi significativa (p<0,05) para o (-) enantiómero comparada com o controlo para todos os pontos das 3 às 24 horas. 0 halofenato racémico e o (+) enantiómero também foram significativos

(p<0,05) para todos os pontos desde 4,5 até 24 horas. A glucose no plasma às 24 horas foi de 217 ± 16,4 mg/dl em animais tratados com o (-) enantiómeros, em comparação com 306 ± 28,5 mg/dl e 259,3 ± 20,8 mg/dl para animais tratados com o (+) enantiómero e o racemato, respectivamente. A glucose no plasma nos controlos tratados com veículo foi de 408 ± 16,2 mg/dl às 24 horas. O (-) enantiómero foi mais eficaz e significativamente diferente (p<0,05) do (+) enantiómero em ambos os pontos de tempo das 3 horas e 24 horas. 9 ΕΡ1614418Β1 A Figura 3 demonstra a capacidade do halofenato racémico e ambos os (-) e ( + ) enantiómeros de halofenato para baixar a glucose no plasma em murganhos ob/ob diabéticos após a administração oral diária. 0 racemato foi dado a uma dose de 250 mg/kg/dia e os enantiómeros foram administrados a doses de 125 mg/kg/dia e 250 mg/kg/dia. Foram observadas diminuições significativas em níveis de glucose relativamente aos animais de controlo em animais tratados com halofenato racémico e ambos os enantiómeros(-) e (+). Na dose baixa (125 mg/kg) de tratamento com os enantiómeros(-) e ( + ) , o enantiómero (-) foi significativo às 6, 27 e 30 horas enquanto o enantiómero (+) foi significativo apenas às 6 e 27 horas. A Figura 4 apresenta os níveis de insulina no plasma nos murganhos ob/ob tratados com halofenato racémico e ambos os enantiómeros (-) e ( + ) de halofenato em murganhos ob/ob diabéticos após administração oral diária. O racemato foi administrado a uma dose de 250 mg/kg/dia e os enantiómeros foram administrados em doses de 125 mg/kg/dia e 250 mg/kg/dia. Em relação ao veículo de controlo, as insulinas foram mais baixas nos animais tratados com o racemato ou com qualquer um dos enantiómeros de halofenato. Na dose elevada, a maior extensão de insulina no plasma reduzida foi observada às 27 e 30 horas em animais tratados com ambos os enantiómeros (-) e ( + ) de halofenato após dois dias de tratamento. A Figura 5 apresenta níveis de glucose no plasma após um jejum de noite inteira em murganhos ob/ob após 5 dias de tratamento com veículo, o halofenato racémico a 250 mg/kg/dia, (-) enantiómero de halofenato a 125 mg/kg/dia e 10 ΕΡ1614418Β1 250 mg/kg/dia ou (+) enantiómero de halofenato a 125 mg/kg/dia ou 250 mg/kg/dia. Os animais de controlo estavam hiperglicémicos com niveis de glucose no plasma de 185,4 ± 12,3 mg/dl . Todos os animais tratados com halofenato apresentaram reduções significativas (p < 0,01) na glucose. As doses elevadas de ambos os enantiómeros baixaram a glucose até próximo dos niveis normais a 127,3 ±8,0 mg/dl e 127,2 ± 9,7 mg/dl para os animais tratados com o (-) enantiómero e o (+) enantiómero, respectivamente. A Figura 6 apresenta os niveis de insulina no plasma em condições de jejum durante a noite em murganhos ob/ob tratados com veiculo, halofenato racémico a 250 mg/kg/dia, o (-) enantiómero a 125 mg/kg/dia e 250 mg/kg/dia ou o ( + ) enantiómero de halofenato a 125 mg/kg/dia ou 250 mg/kg/dia durante 5 dias. Foram observadas insulinas no plasma significativamente inferiores nos animais que receberam ambas as doses do enantiómero (-). A dose baixa do enantiómero (+) de halofenato não baixou a insulina no plasma, embora a dose elevada do enantiómero (+) resultou num decréscimo da insulina no plasma. A Figura 7A apresenta os niveis de glucose no plasma após uma exposição oral de glucose em ratos gordos Zucker, um modelo de resistência à insulina e Tolerância à Glucose Diminuída. Estes animais foram tratados com um veiculo de controlo, halofenato racémico, (-) halofenato ou com (+) halofenato 5,5 horas antes da exposição à glucose. O racemato foi administrado a 100 mg/kg e ambos os enantiómeros foram administrados a 50 e 100 mg/kg. Nos animais de controlo a glucose subiu para >250 mg/dl 30 minutos após a exposição, uma indicação clara de Tolerância 11 ΕΡ1614418Β1 à Glucose Diminuída. A glucose no plasma foi reduzida nos ratos que tinham recebido halofenato racémico, especialmente entre 30 - 60 minutos após a exposição. Os animais que tinham recebido o (-) halofenato a 100 mg/kg tinham o maior grau de redução dos níveis de glucose de todos os animais tratados. Os animais tratados com o (-) halofenato tinham níveis de glucose mais baixos que persistiram aos 90-120 minutos, em comparação com os ratos tratados com o racemato ou (+) halofenato. A Figura 7B compara a área incremental sob a curva (AUC) para os animais em cada grupo. Foram observadas alterações significativas (p<0,05) nos grupos tratados com ambas as doses do (-) halofenato. Embora a AUC tenha sido inferior nos outros grupos em relação ao controlo, as alterações não foram significativas. A Figura 8 apresenta os resultados de um teste de tolerância à insulina curta em ratos gordos Zucker que foram tratados com um veículo de controlo, (-) halofenato (50 mg/kg/dia) ou (+) halofenato (50 mg/kg/dia) durante 5 dias. Este teste é uma medida da sensibilidade à insulina dos animais de teste, representando o declínio da diminuição na glucose uma medida directa da capacidade de resposta à insulina. Os animais tratados com (-) halofenato eram significativamente mais sensíveis à insulina do que os animais tratados com veiculo (p < 0,01) ou os animais tratados com ( + ) halofenato (p < 0,05) . A Figura 9A apresenta os níveis de colesterol no plasma em ratos Zucker Diabéticos Gordos tratados durante 13 dias com halofenato racémico, (-) enantiómero ou (+) enantiómero a 12 ΕΡ1614418Β1 50 mg/kg/dia, 25 mg/kg/dia ou 25 mg/kg/dia, respectivamente, em relação a um grupo de controlo tratado com veículo. Nos animais tratados com ambos os (-) enantiómero e racemato, o colesterol no plasma diminuiu com o tratamento. O colesterol nos animais tratados com (+) enantiómero permaneceu relativamente constante, enquanto o colesterol subiu nos animais de controlo. A Figura 9B compara as diferenças no colesterol no plasma entre o grupo de controlo e os grupos tratados. O (-) enantiómero foi o mais activo das espécies testadas. A Figura 10A apresenta os níveis de colesterol no plasma em ratos Zucker Diabéticos Gordos tratados durante 14 dias com o (-) enantiómero ou o (+) enantiómero de halofenato a 12,5 mg/kg/dia (Dose baixa) ou 37,5 mg/kg/dia (Dose elevada) em relação a um grupo de controlo tratados com veículo. Nos animais tratados com a dose elevada, o (-) enantiómero resultou na maior extensão de abaixamento de colesterol. A Figura 10B compara as diferenças no colesterol no plasma entre os grupos de controlo e tratados. Estas foram diferenças significativas nos animais tratados com o (-) enantiómero após 7 dias à dose baixa e após, 7 e 14 dias na dose elevada. O (+) enantiómero apresentou significância apenas após 7 dias de tratamento na dose elevada. A Figura 11A apresenta níveis de triglicéridos no plasma em ratos Zucker Diabéticos Gordos tratados com o (-) enantiómero ou o ( + ) enantiómero com 12,5 mg/kg/dia (Dose baixa) ou 37,5 mg/kg/dia (Dose elevada) relativos a um grupo de controlo tratado com veículo. Os animais tratados com a 13 ΕΡ1614418Β1 dose elevada do (-) enantiómero tinham os níveis mais baixos de triglicéridos de todos os grupos de tratamento. A Figura 11B compara as diferenças nos triglicéridos no plasma entre os grupos de controlo e os grupos tratados. Aos 7 dias, a dose elevada de ambos o ( + ) e (-) enantiómeros apresentou um decréscimo significativo nos triglicéridos do plasma. A Figura 12 apresenta níveis de glucose no plasma em ratos Zucker Diabéticos Gordos tratados com veículo, (-) halofenato ou ( + ) halofenato no dia 0, dia 2 e dia 3. O tratamento com o (-) halofenato reduziu significativamente concentrações de glucose no plasma reduzidas em comparação com os animais tratados com veiculo. A Figura 13 apresenta concentrações de glucose no plasma no grupo de controlo de murganhos C57BL/6J db/db versus num grupo tratado com o (-) halofenato. Os níveis de glucose no plasma no grupo de controlo aumentaram progressivamente á medida que os animais envelheceram, enquanto o aumento nos níveis de glucose no plasma no grupo tratado com (-) halofenato foi prevenido ou significativamente retardado. A Figura 14 apresenta níveis de insulina no plasma num grupo de controlo de murganhos C57BL/6J db/db versus num grupo tratado com (-) halofenato. O tratamento com (-) halofenato manteve a concentração de insulina no plasma, enquanto a insulina no plasma no grupo de controlo diminuiu progressivamente. 14 ΕΡ1614418Β1 A Figura 15 mostra a percentagem de murganhos não diabéticos num grupo de controlo de murganhos C57BL/6J db/db versus num grupo tratado com o (-) halofenato. Cerca de 30% dos murganhos no grupo tratado com (-) halofenato não desenvolveram diabetes (níveis de glucose no plasma < 250 mg/dl ), embora todo o grupo de controlo o fez na idade de 10 semanas. A Figura 16 apresenta níveis de triglicéridos no plasma num grupo de controlo de murganhos C57BL/6J db/db versus num grupo tratado com (-) halofenato. 0 tratamento com (-) halofenato aliviou a hiperlipidemia, embora não houvesse alívio no grupo de controlo. A Figura 17 apresenta o efeito de (-) halofenato e de ( + ) halofenato nos níveis de ácido úrico no plasma em ácido oxónico induziu ratos hiperuricémicos. A administração oral de (-) halofenato significativamente reduziu os níveis de ácido úrico no plasma. O (+) halofenato também baixou os níveis de ácido úrico no plasma, mas não foi estatisticamente significativo.

DEFINIÇÕES O termo "mamífero" inclui, sem limitação, seres humanos, animais domésticos (e.g., cães ou gatos), animais de quinta (vacas, cavalos, ou porcas), macacos, coelhos, murganhos, e animais de laboratório. O termo "resistência à insulina" pode ser definido, de um modo geral, como um distúrbio do metabolismo da glucose. Mais especificamente, a resistência à insulina pode ser definida como 15 ΕΡ1614418Β1 a diminuição da capacidade da insulina para exercer a sua acção biológica ao longo de uma vasta gama de concentrações produzindo menos do que o efeito biológico expectado, (ver, e.g., Reaven, G. M., J. Basic & Clin. Phys. & Pharm. (1998) 9: 387-406 e Flier, J. Ann Rev. Med. (1983) 34: 145-60). As pessoas resistentes à insulina possuem uma capacidade diminuída para metabolizar apropriadamente glucose e respondem de maneira fraca, ou não respondem de todo, à terapia com insulina. Manifestações de resistência à insulina incluem uma activação de insulina insuficiente da incorporação de glucose, oxidação e armazenamento no músculo e repressão inadequada da insulina de lipólise em tecido adiposo e da produção de glucose e secreção no fígado. A resistência à insulina podem provocar ou contribuir para a síndrome ovárica policística, Tolerância à Glucose Diminuída (IGT), diabetes gestacional, hipertensão, obesidade, aterosclerose e uma variedade de outros distúrbios. Eventualmente, os indivíduos resistentes à insulina podem progredir até um ponto em que é alcançado um estado diabético. A associação de resistência à insulina com intolerância à glucose, um aumento nos triglicéridos no plasma e uma diminuição nas concentrações de colesterol de lipoproteína de densidade elevada, pressão sanguínea elevada, hiperuricemia, partículas de lipoproteína mais pequenas de baixa densidade, e níveis mais elevados em circulação do inibidor 1 do activador do plasminogénio), tem sido referido como uma "Síndrome X" (ver, e.g., Reaven, G. M., Physiol. Rev. (1995) 75: 473-486). 0 termo "diabetes mellitus" ou "diabetes" significa uma doença ou estado que é geralmente caracterizada por defeitos metabólicos na produção e utilização de glucose que resulta na incapacidade para manter níveis apropriados de açúcar no sangue no corpo. O resultado destes defeitos é glucose elevada no 16 ΕΡ1614418Β1 sangue, referido como "hiperglicemia." Duas formas principais da diabetes são a diabetes de Tipo 1 e a diabetes de Tipo 2. Como descrito acima, a diabetes de Tipo 1 é geralmente o resultado de uma deficiência absoluta de insulina, a hormona que regula a utilização da glucose. A diabetes de Tipo 2 ocorre frequentemente à face de níveis normais, ou mesmo elevados da insulina e pode resultar da incapacidade dos tecidos para responder apropriadamente à insulina. A maioria dos doentes diabéticos de Tipo 2 são resistentes à insulina e possuem uma deficiência da insulina relativa, na qual a secreção da insulina não pode compensar a resistência de tecidos periféricos para responder à insulina. Adicionalmente, muitos diabéticos de Tipo 2 são obesos. Outros tipos de distúrbios de homeostasia de glucose incluem Tolerância à Glucose Diminuída, que é um estádio metabólico intermédio entre a homeostasia de glucose normal e a diabetes, e Diabetes Mellitus Gestacional, que é a intolerância à glucose na gravidez em mulheres sem história prévia de diabetes de Tipo 1 ou de Tipo 2. 0 termo "diabetes secundária" é a diabetes que resulta de outras etiologias identificáveis que incluem: defeitos genéticos da função de células β (e.g., diabetes do tipo de início da maturidade da juventude, referida como "MODY, " que é uma forma de início precoce da diabetes de Tipo 2 com herança autossómica; ver, e.g., Fajans S. et al., Diabet. Med. (1996) (9 Supl 6) : S90-5 e Bell, G. et al., Annu. Rev. Physiol. (1996) 58: 171-86; defeitos genéticos na acção da insulina; doenças do pâncreas exócrinas (e.g., hemocromatose, pancreatite, e fibrose cística); certas doenças endócrinas nas quais as hormonas em excesso interferem com a acção da insulina (e.g., a hormona de crescimento em acromegalia e cortisol na síndrome de Cushing); certos fármacos que suprimem a secreção da insulina (e.g., 17 ΕΡ1614418Β1 fenitoína) ou inibir a acção de insulina (e.g., estrogénios e glucocorticóides); e diabetes provocada por infecção (e.g., rubéola, Coxsackie, e CMV); assim como outras síndromes genéticas.

As directrizes para o diagnóstico para a diabetes de Tipo 2, Tolerância à Glucose Diminuída, e a diabetes gestacional foram delineadas pela American Diabetes Association (ver, e.g., The Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus, Diabetes Care, (1999) Vol 2 (Suppl 1): S5-19). 0 termo "ácido halofénico" refere-se à forma ácida de ácido 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acético. 0 termo "hiperinsulinemia" refere-se à presença de um nível anormalmente elevado de insulina no sangue. 0 termo "hiperuricemia" refere-se à presença de um nível anormalmente elevado de ácido úrico no sangue. 0 termo "secretagogo" significa uma substância ou composto que estimula a secreção. Por exemplo, um secretagogo de insulina é uma substância ou composto que estimula a secreção da insulina. 0 termo "hemoglobina" ou "Hb" refere-se a um pigmento respiratório presente em eritrócitos, que é largamente responsável pelo transporte do oxigénio. Uma molécula de hemoglobina compreende quarto subunidades de polipéptido (dois sistemas de cadeia a e dois sistemas de cadeia β, respectivamente). Cada subunidade é formada pela associação de uma proteína globina e uma molécula heme que é um complexo de 18 ΕΡ1614418Β1 ferro-protoporfirina. A principal classe de hemoglobina que se encontra no hemolisato de adultos normais é a hemoglobina de adulto (referido como "HbA"; também referido como HbAO para a distinguir da hemoglobina glicada, que é referida como "HbAl," descrito infra) possuindo as subunidades α2β2. Os componentes vestigiais, tais como HbA2 (α2δ2) podem também ser encontrados no hemolisato de adultos normais.

Entre classes de HbAs de hemoglobina adulta, existe uma hemoglobina glicada (referida como "HbAl," ou "hemoglobina glicosilada") , que pode ser ainda fraccionada em HbAlal, HbAla2, HbAlb, e HbAlc com um fraccionamento por resina de permuta iónica. Todas estas subclasses possuem a mesma estrutura primária, que é estabilizada pela formação de uma aldimina (base de Schiff) pelo grupo amino da valina N-terminal na cadeia da subunidade β de hemoglobina HbA normal e glucose (ou, glucose-6-fosfato ou frutose) seguido pela formação de cetoamina pelo rearranjo de Amadori. 0 termo "hemoglobina glicosilada" (também referido como "HbAlc,", "GHb", "hemoglobina - glicosilada", "índice de controlo diabético" e "glico-hemoglobina"; de aqui em diante referido como "hemoglobina Alc") refere-se a um produto estável da glicosilação não enzimática da cadeia β da hemoglobina pela glucose no plasma. A hemoglobina Alc compreende a porção principal de hemoglobinas glicadas no sangue. A proporção da hemoglobina glicosilada é proporcional ao nível de glucose no sangue. Por isso, a taxa de formação de hemoglobina Alc aumenta directamente com os níveis crescentes de glucose no plasma. Uma vez que ocorre a glicosilação a uma taxa constante durante a esperança de vida de 120 dias de um eritrócito, medição dos níveis de hemoglobina glicosilada reflecte o nível médio de 19 ΕΡ1614418Β1 glucose no sangue para um indivíduo durante os dois ou três meses precedentes. Por isso, a determinação da quantidade de hemoglobina glicosilada HbAlc pode ser um bom índice para o controlo do metabolismo dos carbo-hidratos. Consequentemente, os níveis de glucose no sangue dos últimos dois meses podem ser estimados com base na proporção de HbAlc para a hemoglobina Hb total. A análise da hemoglobina Alc no sangue é utilizada como uma medição que permite o controlo a longo termo do nível de glucose no sangue (ver, e.g., Jain, S., et al. , Diabetes (1989) 38: 1539-1543; Peters A., et al., JAMA (1996) 276: 1246-1252). 0 termo "sintoma" da diabetes, inclui, mas não está limitado a, poliuria, polidipsia, e polifagia, como aqui utilizado, incorporando a sua utilização comum. Por exemplo, "poliuria" significa a passagem de um grande volume de urina durante um dado período; "polidipsia" significa sede crónica, excessiva; e "polifagia" significa comida excessiva. Outros sintomas da diabetes incluem, e.g., susceptibilidade aumentada para certas infecções (especialmente infecções de fungos e de estafilococos), náusea, e cetoacidose (produção aumentada de corpos cetónicos no sangue). 0 termo "complicação" da diabetes inclui, mas não está limitado a, complicações microvasculares e complicações macrovasculares. As complicações microvasculares são aquelas complicações que resultam geralmente na lesão de vasos sanguíneos pequenos. Estas complicações incluem, e.g., retinopatia (a deficiência ou perda de visão devida a lesão do vaso sanguíneo nos olhos); neuropatia (lesão nervosa e problemas nos pés devido a lesão do vaso sanguíneo para o sistema nervoso); e nefropatia (doença do rim devido a lesão do vaso sanguíneo nos rins). Complicações macrovasculares são aquelas 20 ΕΡ1614418Β1 complicações que geralmente resultam da lesão de vasos sanguíneos grandes. Estas complicações incluem, e.g., doença cardiovascular e doença vascular periférica. A doença cardiovascular refere-se a doenças dos vasos sanguíneos do coração. Ver. e.g., Kaplan, R. M., et al., "Cardiovascular diseases" em HEALTH AND HUMAN BEHAVIOR, pp. 206-242 (McGraw-Hill, New York 1993) . A doença cardiovascular é geralmente uma de várias formas, incluindo, e.g., hipertensão (também referida como pressão sanguínea elevada), doença cardíaca coronária, trombose, e doença cardíaca reumática. A doença vascular periférica refere-se a doenças de qualquer um dos vasos sanguíneos fora do coração. É frequentemente um estreitamento dos vasos sanguíneos que levam o sangue para os músculos da perna e do braço. 0 termo "aterosclerose" compreende doenças e condições vasculares que são reconhecidas e entendidas pelos médicos que exercem nos campos da medicina relevantes. A doença cardiovascular aterosclerótica, doença cardíaca coronária (também conhecida como doença a artéria coronária ou doença cardíaca isquémica), doença cerebrovascular e doença de vaso periférico são todas as manifestações clínicas de aterosclerose e são por isso compreendidas pelos termos "aterosclerose" e "doença aterosclerótica". 0 termo "anti-hiperlipidémico" refere-se à diminuição das concentrações de lípido excessivas no sangue para níveis desejados. 0 termo "antiuricémico" refere-se à diminuição de concentrações excessivas de ácido úrico no sangue para níveis desejados. 21 ΕΡ1614418Β1 0 termo "hiperlipidemia" refere-se à presença de um nível anormalmente elevado de lípidos no sangue. A hiperlipidemia pode surgir em pelo menos três formas: (1) hipercolesterolemia, i.e., um nível de colesterol elevado; (2) hipertrigliceridemia, i.e., um nível de triglicéridos elevado; e (3) hiperlipidemia combinada, i.e., uma combinação de hipercolesterolemia e hipertrigliceridemia. 0 termo "modular" refere-se a tratar, prevenir, suprimir, aumentar ou induzir uma função ou condição. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem modular a hiperlipidemia diminuindo o colesterol num humano, suprimindo desse modo a hiperlipidemia. 0 termo "tratar" significa a gestão e cuidado de um indivíduo humano para o objectivo de combater a doença, estado, ou distúrbio e inclui a administração de um composto da presente invenção para prevenir o início dos sintomas ou complicações, aliviando os sintomas ou complicações, ou eliminar a doença, estado, ou distúrbio. 0 termo "prevenir" significa a gestão e o cuidado de um indivíduo humano de modo a que o início de sintomas de uma doença, estado ou distúrbio não ocorre. 0 termo "colesterol" refere-se a um álcool esteróide que é um componente essencial de membranas celulares e folhas de mielina e, como aqui utilizado, incorpora a sua utilização comum. 0 colesterol também serve como um precursor para hormonas esteróides e ácidos biliares. 22 ΕΡ1614418Β1 0 termo "triglicérido(s)" ("TGs"), como aqui utilizados, incorpora a sua utilização comum. Os TGs consistem em três moléculas de ácidos gordos esterifiçados para uma molécula de glicerol e servem para armazenar ácidos gordos que são utilizados pelas células do músculo para a produção de energia ou são incorporados e armazenados no tecido adiposo.

Dado que o colesterol e os TGs são insolúveis em água, eles podem ser empacotados em complexos moleculares especiais conhecidos como "lipoproteínas" de modo a serem transportados no plasma. As lipoproteínas podem acumular-se no plasma devido à sobreprodução e/ou remoção deficiente. Existem pelo menos cinco lipoproteínas distintas que diferem de tamanho, composição, densidade, e função. Nas células do intestine delgado, os lípidos da dieta são empacotados em grandes complexos de lipoproteína denominados "quilomicrons", que possuem um teor elevado de TG e de baixo teor de colesterol. No fígado, os TG e ésteres de colesterol são empacotados e libertados no plasma como lipoproteínas ricas em TG denominadas lipoproteínas de densidade muito baixa ("VLDL"), cuja função primária é o transporte endógeno de TGs produzido no fígado ou libertado pelo tecido adiposo. Através da acção enzimática, as VLDL podem ser reduzidas e incorporadas pelo fígado, ou transformadas em lipoproteínas de densidade intermédia ("IDL"). IDL, é por sua vez, incorporada pelo fígado, ou é ainda modificada para formar a lipoproteína de baixa densidade ("LDL"). A LDL é incorporada e degradada pelo fígado, ou é incorporada pelo tecido extra-hepático. A lipoproteína de densidade elevada ("HDL") ajuda a remover o colesterol dos tecidos periféricos num processo denominado transporte reverso do colesterol. 23 ΕΡ1614418Β1 0 termo "dislipidemia" refere-se a níveis anormais de lipoproteínas no plasma sanguíneo incluindo níveis deprimidos e/ou elevados de lipoproteínas (e.g., níveis elevados de LDL, VLDL e níveis deprimidos de HDL). A Hiperlipidemia Primária Exemplar inclui, mas não está limitada ao seguinte: (1) Hiperquilomicronemia Familiar, um raro distúrbio genético que provoca uma deficiência numa enzima, LP lipase, que degrada moléculas gordas. A deficiência na LP lipase pode provocar a acumulação de grandes quantidades de gordura ou lipoproteínas no sangue; (2) Hipercolesterolemia Familiar, um distúrbio genético relativamente comum provocado em que o efeito subjacente é uma série de mutações no gene do receptor da LDL que resulta no mal funcionamento dos receptores de LDL e/ou ausência dos receptores da LDL. Isto vai trazer uma eliminação ineficaz da LDL pelos receptores da LDL resultando em níveis elevados de LDL e do colesterol total no plasma; (3) Hiperlipidemia Combinada Familiar, também conhecida como hiperlipidemia de tipo lipoproteína múltipla; um distúrbio herdado em que os doentes e os seus familiares de primeiro grau afectados podem, em tempos vários, manifestar colesterol elevado e triglicéridos elevados. Os níveis de colesterol HDL são frequentemente moderadamente diminuídos; (4) A Apolipoproteína B-100 Deficiente Familiar é uma anormalidade genética dominante autossómica relativamente comum. 0 defeito é provocado por uma mutação de um único 24 ΕΡ1614418Β1 nucleótido que produz uma substituição de glutamina por arginina que pode provocar afinidade reduzida das partículas de LDL para o receptor de LDL. Consequentemente, isto pode provocar níveis de LDL no plasma e de colesterol total elevados; (5) Disbetaliproteinemia Familiar, também referida como Hiperlipoproteinemia de Tipo III, é um distúrbio herdado pouco comum que resulta em subidas moderadas a severas dos níveis de TG e de colesterol no soro com função de apolipoproteína E anormal. Os níveis de HDL são usualmente normais; e (6) Hipertrigliceridemia Familiar, é um distúrbio herdado comum no qual a concentração de VLDL no plasma é elevada. Isto pode provocar níveis de triglicéridos moderados a moderadamente elevados (e normalmente não níveis de colesterol) e podem estar frequentemente associados com níveis baixos de HDL no plasma.

Os factores de risco em Hiperlipidemia Secundária exemplares incluem, mas não estão limitados aos seguintes: (1) factores de risco da doença, tal como uma história da diabetes de Tipo 1, diabetes de Tipo 2, síndrome de Cushing, hipotroidismo e certos tipos de falência renal; (2) factores de risco do fármaco, que incluem, pílulas de controlo de nascimento; hormonas, tais como estrogénio, e corticosteróides; certos diuréticos; e vários bloqueadores β; 25 ΕΡ1614418Β1 (3) factores de risco de dieta incluem ingestão de gordura na dieta por total de calorias superior a 40%; ingestão de gordura saturada por total de calorias superior a 10%; incorporação de colesterol superior a 300 mg por dia; utilização habitual e excessiva de álcool; e obesidade.

Os termos "obeso" e "obesidade" refere-se a, de acordo com a World Health Organization, um índice de Massa Corporal (BMI) superior a 27,8 kg/m2 para os homens e 27,3 kg/m2 para mulheres (BMI é igual ao peso (kg)/altura (m2) . A obesidade está ligada a uma variedade de condições médicas incluindo diabetes e hiperlipidemia. A obesidade é também um factor de risco conhecido para o desenvolvimento da diabetes de Tipo 2 (ver, e.g., Barrett-Conner, E., Epidemol. Rev. (1989) 11: 172-181; e Knowler, et al., Am. J. Clin. Nutr. (1991) 53:1543-1551). "Sais farmaceuticamente aceitáveis" referem-se aos sais metálicos alcalinos não tóxicos, metal terroso alcalino, e de amónio, normalmente utilizados na indústria farmacêutica incluindo os sais de sódio, potássio, litio, cálcio, magnésio, bário, amónio, e zinco de protamina, que são preparados através de métodos bem conhecidos na técnica. O termo também inclui sais de adição ácida não tóxicos, que são geralmente preparados fazendo reagir os compostos da presente invenção com um ácido orgânico ou inorgânico adequado. Sais representativos incluem, mas não estão limitados a, o cloridrato, bromidrato, sulfato, bissulfato, acetato, oxalato, valerato, oleato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartarato, napsilato, e afins. "Sal de adição ácida farmaceuticamente aceitável" refere-se aos sais que retêm a eficiência e as propriedades biológicas das 26 ΕΡ1614418Β1 bases lives e que não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis, formados com ácido inorgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes, e os ácidos orgânicos, tais como ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido mentanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido p- toluenossulfónico, ácido salicílico e afins. Para uma descrição de sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis como pré-fármacos. Ver, e.g.r Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs (Elsevier Science Publishers, Amsterdam 1985). "Éster farmaceuticamente aceitável" refere-se aos ésteres que retêm, após hidrólise da ligação éster, a eficiência biológica e as propriedades do ácido carboxílico ou álcool e não são biologicamente, ou de qualquer outra foram, indesejáveis. Para uma descrição de ésteres farmaceuticamente aceitáveis com pró-fármacos, ver Bundgaard, H., supra. Estes ésteres são tipicamente formados a partir do ácido carboxílico correspondente e de um álcool. Geralmente, a formação do éster pode ser realizada através de técnicas convencionais de síntese, (ver, e.g., March Advanced Organic Chemistry, 3a Ed., p. 1157 (John Wiley & Sons, New York 1985) e as referências aí citadas, e Mark et ai., Encyclopedia of Chemical Technology, (1980) John Wiley & Sons, New York) . O componente álcool do éster irá geralmente compreender: (i) um álcool alifático C2-Ci2 que pode conter ou não uma ou mais ligações duplas e pode conter ou não carbonos ramificados; ou (ii) um C7-Ci2 aromático ou álcoois heteroaromáticos. A presente invenção também contempla a utilização das composições que são ésteres, como aqui descrito, 27 ΕΡ1614418Β1 e ao mesmo tempo são os seus sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis. "Amida farmaceuticamente aceitável" refere-se àquelas amidas que retêm, após hidrólise da ligação amida, a eficiência biológica e as propriedades do ácido carboxílico ou amina e não são biologicamente, ou de outra forma, indesejáveis. Para uma descrição de amidas farmaceuticamente aceitáveis como pró-fármacos, ver, Bundgaard, H., ed., supra. Estas amidas são tipicamente formadas a partir do ácido carboxílico correspondente e uma amina. Geralmente, a formação da amida pode ser realizada através de técnicas convencionais de síntese. Ver, e.g., March et al. , Advanced Organic Chemistry, 3a Ed., p. 1152 (John Wiley & Sons, New York 1985), e Mark et al., Encyclopedia of Chemical Technology, (John Wiley & Sons, New York 1980). A presente invenção também contempla a utilização das composições que são amidas, como aqui descrito, e ao mesmo tempo são os seus sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis.

DESCRIÇÃO DETALHADA (1) Geral A presente invenção é dirigida à utilização reivindicada de derivados de um ácido (-) (3-tri-halometilfenoxi) (4-halofenil) acético preferido possuindo a seguinte fórmula geral:

CX3 Fórmula I 28 ΕΡ1614418Β1

Na Fórmula I, R é um grupo funcional incluindo, mas não limitado aos seguintes: hidroxilo, aralcoxilo inferior, e.g., fenil-alcoxilo inferior, tal como benziloxilo, fenetiloxilo; di-alquilamino inferior-alcoxilo inferior e os seus sais de adição ácida não tóxicos, farmacologicamente aceitáveis, e.g., dimetilaminoetoxilo, cloridrato de dietilaminoetoxilo, citrato de dietilaminoetoxilo, dietilaminopropoxilo; alcanamido inferior alcoxilo inferior, e.g., formamidoetoxilo, acetamidoetoxilo ou acetamidopropoxilo; benzamido-alcoxilo inferior, e.g., benzamidoetoxilo ou benzamidopropoxilo; ureído-alcoxilo inferior, e.g., ureidoetoxilo ou l-metil-2-ureidoetoxilo; Ν'-alquilo inferior-ureído-alcoxilo inferior, i.e., R1NH-CONH-CnH2n_ 0- em que R1 representa alquilo inferior e n é um inteiro possuindo um valor desde 1 até cerca de 5, e.g., Ν'-etil-ureidoetoxilo ou Ν'-etilureidopropoxilo; carbamoílo-alcoxilo inferior, e.g., carbamoilmetoxilo ou carbamoiletoxilo; alcoxilo inferior substituído por halofenoxilo, e.g., 2-(4-clorofenoxi) etoxilo ou 2-(4-clorofenoxi)-2-metilpropoxilo; fenoxilo substituído por carbamoílo, e.g., 2-carbamoilfenoxilo; carboxi-alquilamino inferior e os seus sais de adição de amina não tóxicos, farmacologicamente aceitáveis, e.g., sal de ciclo-hexilamina carboximetilamino ou carboxietolamina; N,N-di-alquilamino inferior-alquilamino inferior e os seus sais de solução ácida não tóxicos, farmacologicamente aceitáveis, e.g., cloridrato de N,N-dimetilaminoetilamino, N,N-dietilaminoetilamino, citrato de N, N-dietilaminoetilamino, ou citrato de N,N-dimetilaminopropilamino; alquilamino inferior substituído por halo, e.g., 2-cloroetilamino ou 4-clorobutilamino; alquilamino inferior substituído por hidroxilo, e.g., 2-hidroxietilamino, ou 3-hidroxipropilamino; alquilamino inferior substituído por alcanoiloxilo, e.g., acetoxietilamino ou acetoxipropilamino; ureído; alcoxicarbonilamino inferior, e.g., metoxicarbonilamino 29 ΕΡ1614418Β1 (i.e., -NHCOOCH3) , ou etioxicarbonilamino (i.e., CHCOOC2H5) - Numa forma de realização preferida, R é seleccionado de modo a que seja uma unidade hidrolisável, tal como um éster ou amida, e após hidrólise da ligação éster ou amida, o composto é biologicamente activo, tal como ésteres ou amidas farmaceuticamente aceitáveis como pró-fármacos. X, na fórmula I, é um halogénio, e.g., cloro, bromo, flúor ou iodo.

Numa forma de realização preferida, a presente invenção refere-se à utilização reivindicada dos derivados do ácido (-) (3 - tri-halometilfenoxi) (4-halofenil) acético possuindo a fórmula geral:

Na Fórmula II, R2 é um grupo funcional incluindo, mas não limitado aos seguintes: hidrogénio, fenil-alquilo inferior, e.g., benzilo; alcanamido inferior-alquilo inferior, e.g., acetamidoetilo; ou benzamido-alquilo inferior, e.g., benzamidoetilo. X, na Fórmula II, é um halogénio, e.g., cloro, bromo, flúor ou iodo.

Numa outra forma de realização preferida, a presente invenção refere-se à utilização reivindicada de um composto possuindo a fórmula: 30 ΕΡ1614418Β1

0 composto de Fórmula III é referido como " (-) 2-acetamidoetil 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) acetato" (também referido como "(-) halofenato").

As alterações no metabolismo do fármaco mediadas pela inibição das enzimas do citocromo P450 possuem um potencial muito elevado para precipitar os efeitos adversos significativos nos doentes. Esses efeitos foram previamente observados em doentes tratados com halofenato racémico. Nos presentes estudos, observou-se que o ácido halofénico racémico inibe o citocromo P450 2C9, uma enzima conhecida por desempenhar um papel significativo no metabolismo de fármacos específicos. Isto pode conduzir a problemas significativos com interacções do fármaco com anticoagulantes, agentes anti-inflamatórios e outros fármacos metabolizados por esta enzima. Todavia, muito surpreendentemente, foi observada uma diferença substancial entre os enantiómeros do ácido halofénico na sua incapacidade para inibir o citocromo P450 2C9, sendo o (-) enantiómero cerca de vinte vezes menos activo enquanto o (+) enantiómero era muito potente (ver Exemplo 7) . Assim, a utilização do (-) enantiómero dos compostos na Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III irão evitar a inibição desta enzima e os efeitos adversos no metabolismo do fármaco previamente observado com halofenato racémico. 31 ΕΡ1614418Β1 A presente divulgação compreende um método de modulação da resistência à insulina num mamífero, compreendendo o método: administrar a um mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto possuindo a estrutura geral de Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Numa forma de realização presentemente preferida, o composto possui a estrutura geral de Fórmula II. Numa outra forma de realização preferida, o composto possui a estrutura da Fórmula III. Muito surpreendentemente, o método evita os efeitos adversos associados à administração de uma mistura racémica de halofenato proporcionando uma quantidade do estereoisómero (-) dos compostos nas Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III que é insuficiente para provocar os efeitos adversos associados à inibição do citocromo P450 2C9. A presente divulgação também compreende um método de modulação da diabetes de Tipo 2 num mamífero, compreendendo o método: administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto que possui a estrutura geral da Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Numa forma de realização presentemente preferida, o composto possui a estrutura geral da Fórmula II. Numa outra forma de realização preferida, o composto possui a estrutura da Fórmula III. Muito surpreendentemente, o método evita os efeitos adversos associados com a administração de uma mistura racémica do halofenato proporcionando uma quantidade do estereoisómero (-) dos compostos na Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III que é insuficiente para provocar os efeitos adversos associados à inibição do citocromo P450 2C9. A presente divulgação compreende ainda um método de modulação da hiperlipidemia num mamífero, compreendendo o método: administrar a um mamífero uma quantidade 32 ΕΡ1614418Β1 terapeuticamente eficaz de um composto possuindo a estrutura geral da Fórmula I ou um seu sal farmaceut icamente aceitável. Numa forma de realização presentemente preferida, o composto possui a estrutura geral da Fórmula II. Numa outra forma de realização preferida, o composto possui a estrutura de Fórmula III. Muito surpreendentemente, o método evita os efeitos adversos associados com a administração de uma mistura racémica de halofenato, proporcionando uma quantidade do estereoisómero (-) doa compostos na Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III que é insuficiente para provocar os efeitos adversos associados com a inibição de citocromo P450 2C9. A mistura racémica do halofenato (i.e., uma mistura racémica de 1:1 dos dois enantiómeros) possui actividade anti-hiperlipidémica e proporciona terapia e uma redução da hiperglicemia relacionada com a diabetes quando combinada com certos outros fármacos utilizados normalmente para tratar esta doença. Todavia, esta mistura racémica, embora ofereça a expectativa de eficácia, provoca efeitos adversos. 0 termo "efeitos adversos" inclui, mas não está limitado a, náusea, úlceras gastrointestinais, e hemorragia gastrointestinal. Outros efeitos colaterais que foram relatados com o halofenato racémico incluem problemas potenciais com interacções fármaco-fármaco, especialmente incluindo dificuldades controlando a anticoagulação com Coumadin™. A utilização os compostos substancialmente puros da presente invenção resulta em definições relacionadas com a dose mais claras de eficácia, efeitos adversos diminuídos, e consequentemente, um índice terapêutico melhorado. Como tal, foi agora descoberto que é mais desejável e vantajoso administrar o (-) enantiómero de halofenato em vez do halofenato racémico. 33 ΕΡ1614418Β1 A presente invenção compreende ainda a utilização dos compostos reivindicados num método de modulação de hiperuricemia num mamífero, compreendendo o método: administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto que possui a estrutura geral de Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Numa forma de realização presentemente preferida, o composto possui a estrutura geral da Fórmula II. Noutra forma de realização preferida, o composto possui a estrutura da Fórmula III. Muito surpreendentemente, o método evita os efeitos adversos associados com a administração de uma mistura racémica de halofenato proporcionando uma quantidade do estereoisómero (-) dos compostos na Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III que é insuficiente para provocar os efeitos adversos associados com a inibição do citocromo P450 2C9.

(2) (-) Enantiómeros de Fórmula I, Fórmula II e Fórmula III

Muitos compostos orgânicos existem em formas opticamente activas, i.e., podem possuir a capacidade para rodar o plano de luz planopolarizada. Ao descrever um composto opticamente activo, os prefixos R e S são utilizados para descrever a configuração absoluta da molécula à volta do(s) seu(s) centro(s) quiral (ais) . Os prefixos "d" e "1" ou ( + ) e (-) são empregues para designar o sinal da rotação da luz plano-polarizada pelo composto, com (-) ou 1 significando que o composto é "levorotatório" e com ( + ) ou d significando que o composto é "dextrorotatório". Não existe correlação entre a nomenclatura para a estereoquímica absoluta e para a rotação de um enantiómero. Para uma dada estrutura química, estes compostos, denominados "estereoisómeros," são idênticos, excepto que eles são as imagens ao espelho um do outro. Um estereoisómero específico também pode ser referido como um "enantiómero" e uma 34 ΕΡ1614418Β1 mistura desses isómeros é frequentemente designada mistura "enantiomérica" ou "racémica". Ver, e.g., Streitwiesser, A. & Heathcock, C.H., INTRODUCTION TO ORGANIC CHEMISTRY, 2a Edição, Chapter 7 (MacMillan Publishing Co., U.S.A. 1981) . A síntese química da mistura racémica mistura de halofenatos de derivados do ácido (3-tri-halometilfenoxi) (4-halofenil) podem ser realizados através dos métodos descritos na Patente U.S. N°. 3 517 050. A síntese dos compostos da presente invenção são ainda descritos nos Exemplos, supra. Os enantiómeros individuais podem ser obtidos através da resolução da mistura racémica dos enantiómeros utilizando meios convencionais conhecidos dos especialistas na técnica e utilizados por estes. Ver, e.g., Jaques, J., et al. , in ENANTIOMERS, RACEMATES, AND RESOLUTIONS, John Wiley e Sons, New York (1981) . Também podem ser utilizados outros métodos de resolução convencionais conhecidos dos especialistas na técnica, incluindo mas não limitados a, cristalização simples e resolução cromatográfica (ver, e.g., STEREOCHEMISTRY OF CARBON COMPOUNDS (1962) E. L. Eliel, McGraw Hill; Lochmuller, J. Chromatography (1975) 113,283-302) . Adicionalmente, os compostos da presente invenção, i.e., os isómeros opticamente puros, podem ser preparados a partir da mistura racémica através de resolução biocatalítica enzimática. A resolução biocatalítica enzimática foi descrita anteriormente (ver, e.g., Patentes U.S. N°s. 5 057 427 e 5 077 217. Outros métodos de obtenção de enantiómeros incluem a síntese estereoespecífica (ver, e.g., Li, A. J. et al., Pharm. Sei . (1997) 86: 1073-1077) . 0 termo "substancialmente isento do seu (+) estereoisómero", como aqui utilizado, significa que as composições contêm uma proporção substancialmente superior do isómero (-) do halofenato 35 ΕΡ1614418Β1 em relação ao isómero (+). Numa forma de realização preferida, o termo "substancialmente isento do seu (+) estereoisómero", como aqui utilizado, significa que a composição tem pelo menos 90% em peso do (-) isómero e 10% em peso ou menos do ( + ) isómero. Numa forma de realização mais preferida, O termo "substancialmente isento do seu (+) estereoisómero", como aqui utilizado, significa que a composição contém pelo menos 99% em peso do (-) isómero e 1% em peso ou menos do isómero ( + ) . Na forma de realização mais preferida, o termo "substancialmente isento do seu (+) estereoisómero" significa que a composição contém mais do que 99% em peso do isómero (-) . Estas percentagens são baseadas no volume total de halofenato na composição. Os termos "isómero de halofenato substancialmente opticamente puro (1)," "halofenato substancialmente opticamente puro (1)" "isómero de halofenato opticamente puro (1)" e "halofenato opticamente puro (1)" referem-se todos ao (-) isómero e estão por isso compreendidos pelas quantidades acima-descritas. Adicionalmente, os termos "isómero de halofenato substancialmente opticamente puro (d) " "halofenato substancialmente opticamente puro (d) ", "isómero de halofenato opticamente puro (d)" e "halofenato opticamente puro (d) " todos se referem ao ( + ) isómero e estão compreendidos pelas quantidades acima descritas. O termo "excesso enantiomérico" ou "ee" está relacionado com o termo "pureza óptica" na medida em que ambos são medidos do mesmo fenómeno. 0 valor de ee será um número desde 0 até 100, sendo 0 racémico e sendo 100 puro, e único enantiómero. Um composto que é referido como 98% opticamente puro pode ser descrito como 96% ee. 36 ΕΡ1614418Β1 (3) Terapia de Combinação com Agentes Activos Adicionais

As composições podem ser formuladas e administradas do mesmo modo como detalhado abaixo. A "Formulação" é definida como uma preparação farmacêutica que contém uma mistura de vários excipientes e ingredientes chave que proporcionam uma forma relativamente estável, desejável e útil de um composto ou fármaco. Para a presente invenção, a "formulação" está incluída no significado do termo "composição". Os compostos da presente invenção podem ser utilizados eficazmente isoladamente ou em combinação com um ou mais agentes activos adicionais dependendo da terapia alvo desejada (ver, e.g., Turner, N. et al. Prog. Drug Res. (1998) 51: 33-94; Haffner, S. Diabetes Care (1998) 21: 160-178; e DeFronzo, R. et al. (eds. ) , Diabetes Reviews (1997)

Vol. 5 N° . 4) . Vários estudos investigaram os benefícios de terapias de combinação com agentes orais (ver, e.g., Mahler, R.,J. Clin. Endocrinol. Metab. (1999) 84: 1165-71; United

Kingdom Prospective Diabetes Study Group: UKPDS 28, Diabetes Care (1998) 21: 87-92; Bardin, C. W.,(ed.), CURRENT THERAPY IN ENDOCRINOLOGY AND METABOLISM, 6a Edição (Mosby - Year Book, Inc. , St. Louis, MO 1997); Chiasson, J. et al., Ann. Intern. Med. (1994) 121: 928-935; Coniff, R. et al., Clin. Ther. (1997) 19: 16-26; Coniff, R. et al., Am. J. Med. (1995) 98: 443-451; e Iwamoto, Y. et al., Diabet. Med. (1996) 13 365-370; Kwiterovich, P. Am. J. Cardiol (1998) 82 (12A): 3U-17U). Estes estudos indicam que a modulação da diabetes e da hiperlipidemia podem ser ainda melhoradas através da adição de um segundo agente para o regime terapêutico. A terapia de combinação inclui a administração de uma formulação de dosagem farmacêutica única que contém um composto possuindo a estrutura geral de Fórmula I (ou Fórmula II ou Fórmula III) e um ou mais agentes activos adicionais, assim como a administração de um composto de Fórmula 37 ΕΡ1614418Β1 I (ou Fórmula II ou Fórmula III) e cada agente activo na sua própria formulação de dosagem farmacêutica separada. Por exemplo, um composto de Fórmula I e um inibidor da HMG-CoA redutase pode ser administrado a um indivíduo humano juntamente numa composição de dosagem oral única, tal como um comprimido ou cápsula, ou cada agente pode ser administrado em formulações de dosagem oral separada. Quando são utilizadas formulações de dosagem separada, pode ser administrado um composto de Fórmula I e um ou mais agentes activos adicionais essencialmente ao mesmo tempo (i.e., concorrentemente), ou em tempos separadamente escalonados {i.e., sequencialmente). A terapia de combinação é entendida de modo a incluir todos esses regimes.

Um exemplo de terapia de combinação que modula (previne o inicio dos sintomas ou complicações associadas) aterosclerose, em que um composto de Fórmula I é administrado em combinação com um ou mais dos seguintes agentes activo: um agente anti-hiperlipidémico; um agente de subida de HDL no plasma; um agente anti-hipercolesterolémico, tal como um inibidor da biossíntese do colesterol, e.g., um inibidor da hidroximetilglutarilo (HMG) CoA redutase (também referido como estatinas, tal como lovastatina, simvastatina, pravastaína, fluvastatina, e atorvastatina), um inibidor da HMG-CoA sintase, um inibidor da esqualeno epoxidase, ou um inibidor da esqualeno sintetase (também conhecido como inibidor da sintase do esqualeno); Um inibidor da acilcoenzima A colesterol aciltransferase (ACAT), tal como melinamida; probucol; ácido nicotínico e os seus sais e niacinamida; um inibidor da colecção do colesterol, tal como β-sitosterol; um sequestrante de ácido biliar, resina de permuta aniónica, tal como colestiramina, colestipol ou derivados de dialquilaminoalquilo de i, dextranos de ligação reticulada; uma LDL (lipoproteína de baixa densidade) indutor do receptor; 38 ΕΡ1614418Β1 fibratos, tais como clofibrato, bezafibrato, fenofibrato, e gemfibrizol; vitamina B6 (também conhecido como piridoxina) e os seus sais f armaceuticamente aceitáveis, tais como o sal de HC1; vitamina B12 (também conhecida como cianocobalamina) ; a vitamina B3 (também conhecida como ácido nicotinico e niacinamida, supra); vitaminas anti-oxidantes vitaminas, tais como vitamina C e E e beta caroteno; um beta-bloqueador; um antagonista da angiotensina II; um inibidor da enzima que converte a angiotensina; e um inibidor da agregação de plaquetas, tais como os antagonistas do receptor do fibrinogénio (i.e., antagonistas do receptor do fibrinogénio das glicoproteínas Ilb/IIIa) e aspirina. Como referido acima, os compostos da Fórmula I podem ser administrados em combinação com mais do que um agente activo adicional, por exemplo, uma combinação de um composto de Fórmula I com um inibidor da HMG-CoA redutase (e.g., lovastatina, simvastatina e pravastatina) e aspirina, ou um composto de Fórmula I com um inibidor de HMG-CoA redutase e um bloqueador β.

Outro exemplo de terapia de combinação pode ser observado no tratamento de obesidade ou distúrbios relacionados com a obesidade, em que os compostos da Fórmula I pode ser utilizados eficazmente em combinação com, por exemplo, fenilpropanolamina, fentermina, dietilpropiona, mazindol; fenfluramina, dexfenfluramina, fentiramina, agentes agonistas do adrenoreceptor β3; sibutramina, inibidores da lípase gastrointestinal (tais como orlistat), e leptinas. Outros agentes utilizados no tratamento da obesidade ou distúrbios relacionados com a obesidade em que os compostos de Fórmula I podem ser utilizados eficazmente em combinação com, por exemplo, neuropéptido Y, enterostatina, colecitoquinina, bombesina, amilina, receptores da histamina H3, receptores da dopamina D2, 39 ΕΡ1614418Β1 hormona de estimulação dos melanocitos, factor de libertação da corticotrofina, galanina e ácido gama amino butírico (GABA).

Ainda outro exemplo de terapia de combinação pode ser observado na modulação da diabetes (ou tratando a diabetes e os seus sintomas relacionados, complicações, e distúrbios), em que os compostos de Fórmula I podem ser utilizados eficazmente em combinação com, por exemplo, sulfonilureias (tais como clorpropamida, tolbutamida, aceto-hexamida, tolazamida, gliburida, gliclazida, glinase, glimepirida, e glipizida), biguanidas (tal como metformina), tiazolidinedionas (tais como ciglitazona, pioglitazona, troglitazona, e rosiglitazona); desidroepiandrosterona (também referida como DHEA ou o seu éster de sulfato conjugado, DHEA-SO4) ; antiglucocorticóides; inibidores de TNFa; inibidores da α-glucosidase (tais como acarbose, miglitol, e voglibose), pramlintida (um análogo sintético da hormona humana amilina), outros secretagogos como a insulina (tal como repaglinida, gliquidona, e nateglinida), insulina, assim como os agentes activos discutidos acima para tratar aterosclerose.

Outro exemplo de terapia de combinação pode ser obervada em modulação da hiperlipidemia (tratando a hiperlipidemia e as suas complicações relacionadas), em que os compostos de Fórmula I podem ser utilizados eficazmente em combinação com, por exemplo, estatinas (tais como fluvastatina, lovastatina, pravastatina ou simvastatina) , resinas de ligação ao ácido biliar (tais como colestipol ou colestiramina), ácido nicotínico, probucol, betacaroteno, vitamina E, ou vitamina C.

De acordo com a presente invenção, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I (ou Fórmula 40 ΕΡ1614418Β1 II ou Fórmula III) pode ser utilizada para a preparação de uma composição farmacêutica útil para o tratamento da hiperuricemia.

Adicionalmente, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I (ou Fórmula II ou Fórmula III) e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes activos seleccionados a partir do grupo que consiste em: um agente anti-hiperlipidémico; um agente de subida da HDL no plasma; um agente anti-hipercolesterolémico, tal como um inibidor da biossíntese do colesterol, por exemplo, um inibidor da HMG-CoA redutase, um inibidor da HMG-CoA sintase, um inibidor da esqualeno epoxidase, ou um inibidor da esqualeno sintetase (também conhecida como inibidor da esqualeno sintase); um inibidor da acil-coenzima A colesterol aciltransferase; probucol; ácido nicotínico e seus sais; niacinamida; um inibidor da absorção do colesterol; uma resina de permuta iónica de sequestro do ácido biliar; um indutor do receptor de lipoproteína de baixa densidade; clofibrato, fenofibrato, e gemfibrozil; vitamina B6 e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis; vitaminas B12; uma vitamina anti-oxidante; um bloqueador β; um antagonista da angiotensina II; um inibidor da enzima que converte a angiotensina; um inibidor de agregação de plaquetas; um antagonista do receptor do fibrinogénio; aspirina; fentiraminas, agonistas do receptor adrenérgico β3; sulfonilureias, biguanidas, inibidores da a-glucosidase, outros secretagogos da insulina, e a insulina podem ser utilizados em conjunto para a preparação de uma composição farmacêutica útil para os tratamentos acima descritos. (4) Formulações Farmacêuticas e Métodos de Administração

Os compostos de Fórmula I, Fórmula II, e Fórmula III podem ser distribuídos ou administradas a um mamífero, e.g., um doente 41 ΕΡ1614418Β1 ou indivíduo humano, isolado, na forma de um seu sal ou precursor hidrolisável farmaceuticamente aceitáveis, ou na forma de uma composição farmacêutica em que o composto é misturado com veículos ou excipiente (s) adequados numa quantidade terapeuticamente eficaz. Por uma "dose terapeuticamente eficaz", "quantidade terapeuticamente eficaz", ou, independentemente, "dose farmaceuticamente aceitável" ou "quantidade farmaceuticamente aceitável", entende-se uma quantidade do composto da presente invenção suficiente, alternativamente, uma combinação, por exemplo, um composto da presente invenção, que é substancialmente isento do seu estereoisómero ( + ) , e um veículo farmaceuticamente aceitável, estarão presentes de modo a conseguir um resultado desejado, e.g., alívio de um sintoma ou complicação da diabetes de Tipo 2.

Os compostos de Fórmula I, Fórmula II, e Fórmula III que são utilizados nos métodos da presente invenção podem ser incorporados numa variedade de formulações para administração terapêutica. Mais particularmente, os compostos de Fórmula I (ou Fórmula II ou Fórmula III) podem ser formulados em composições farmacêuticas pela combinação com veículos ou diluentes apropriados, farmaceuticamente aceitáveis, e podem ser formulados em preparações em formas sólidas, semi-sólidas, líquidas ou gasosas, tais como comprimidos, cápsulas, pílulas, pós, grânulos, drageias, géis, sedimentos, unguentos, soluções, supositórios, injecções, inalantes e aerossóis. Como tal, a administração dos compostos pode ser conseguida de várias maneiras, incluindo a administração oral, bucal, rectal, parentérica, intraperitoneal, intradérmica, transdérmica, intratraqueia. Além disso, o composto pode ser administrado num outro local para além da maneira sistémica, num depósito ou 42 ΕΡ1614418Β1 formulação de libertação sustentada. Adicionalmente, os compostos podem ser administradas num lipossoma.

Adicionalmente, os compostos de Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III podem ser formulados com excipientes, diluentes ou veículos comuns, e comprimidos em comprimidos, ou formulados como elixires ou soluções para administração oral conveniente, ou administrados pela via intramuscular ou intravenosa. Os compostos podem ser administrados transdermicamente, e podem ser formulados como formas de dosagem de libertação sustentada e semelhantes.

Os compostos de Fórmula I, Fórmula II, ou Fórmula III podem ser administradas isolados, em combinação com uns com os outros, ou estes podem ser utilizados em combinação com outros compostos conhecidos (discutidos supra) . Nas formas de dosagem farmacêutica, os compostos podem ser administrados na forma dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Estes podem conter unidades hidrolisáveis. Estes podem ser também utilizados isolados ou em associação apropriada, assim como em combinação com, outros compostos farmaceuticamente activos.

As formulações adequadas para utilização na presente invenção são encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company (1985) Filadélfia, PA, 17a ed.) . Além disso, para uma breve revisão de métodos para distribuição de fármacos, ver, Langer, Science (1990) 249:1527-1533. As composições farmacêuticas aqui descritas podem ser preparadas de maneira que é conhecida dos especialistas na técnica, í.e., através de mistura convencional, dissolvendo, granulando, preparando drageias, levigando, emulsifiçando, encapsulando, capturando ou processos de liofilização. Os métodos e 43 ΕΡ1614418Β1 excipientes que se seguem são meramente exemplificativos e não são de todo limitativos.

Para injecção, os compostos podem ser formulados em preparações por dissolução, a sua suspensão ou emulsificação num solvente aquoso ou não aquoso, tal como óleos vegetais ou outros, glicéridos de ácidos alifáticos sintéticos, ésteres de ácidos alifáticos superiores ou propilenoglicol; e se desejado, com aditivos convencionais tais como solubilizantes, agentes isotónicos, agentes de suspensão, agentes de emulsificação, estabilizantes e conservantes. De um modo preferido, os compostos da presente invenção podem ser formulados em soluções aquosas, de um modo preferido, em tampões fisiologicamente compatíveis tais como a solução de Harks, solução de Ringer, ou tampão salino fisiológico. Para administração transmucosa, os penetrantes apropriados para a barreira a ser permeada são utilizados na formulação. Estes penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.

Para administração oral, os compostos de Fórmula I, Fórmula II, ou Fórmula III podem ser rapidamente formulados através da combinação com veículos farmaceuticamente aceitáveis que são bem conhecidos na técnica. Estes veículos permitem que os compostos sejam formulados como comprimidos, pílulas, drageias, cápsulas, emulsões, suspensões lipofílicas e hidrofílicas, líquidos, géis, xaropes, sedimentos, suspensões e semelhantes, para ingestão oral por um a doente a ser tratado. As preparações farmacêuticas para utilização oral podem ser obtidas por mistura dos compostos com um excipiente sólido, moendo opcionalmente uma mistura resultante, e processando a mistura de grânulos, após adição de auxiliares adequados, se desejado, para obter núcleos de comprimidos ou drageias. Os excipientes adequados são, em 44 ΕΡ1614418Β1 particular, enchimentos tais como açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol, ou sorbitol; preparações de celulose tais como, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, e/ou polivinilpirrolidona (PVP). Se desejado, os agentes desintegrantes podem ser adicionados, tais como a polivinilpirrolidona reticulada, ágar, ou ácido alginico ou um seu sal tal como alginato de sódio.

Os núcleos das drageias são proporcionados com revestimentos adequados. Para este propósito, podem ser utilizadas soluções concentradas de açúcar, que podem opcionalmente conter goma-arábica, talco, polivinilpirrolidona, carbopol gel, polietilenoglicóis, e/ou dióxido de titânio, soluções lacosas, e solventes orgânicos adequados ou misturas de solventes. Corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos revestimentos dos comprimidos ou drageias para identificação ou para caracterizar diferentes combinações de doses de composto activo.

As preparações farmacêuticas que podem ser utilizadas oralmente incluem cápsulas de encaixe feitas de gelatina, assim como cápsulas macias, seladas feitas de gelatina e um plasticizante, tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas de encaixe podem conter os ingrediente activos na mistura com enchimento, tal como lactose, ligantes tais como amidos, e/ou lubrificantes tais como talco ou estearato de magnésio, opcionalmente, estabilizadores. Em cápsulas moles, os compostos activos podem ser dissolvidos ou suspendidos em líquidos adequados, tais como óleos gordos, parafina líquida, ou polietilenoglicóis. Adicionalmente, os estabilizantes podem ser 45 ΕΡ1614418Β1 adicionados. Todas as formulações para administração oral devem estar em dosagens adequadas para essa administração.

Para administração bucal, as composições podem tomar a forma de comprimidos ou pastilhas formulados de uma forma convencional.

Para administração por inalação, os compostos para utilização de acordo com a presente invenção são convenientemente distribuídos na forma de uma apresentação em spray aerossol em embalagens pressurizadas ou a nebulizador, com a utilização de um propulsor adequado, e.g., diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoro-etano, dióxido de carbono ou outros gases adequados, ou de inaladores de pó seco, sem propulsor. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem de aerossol pode ser determinada proporcionando uma válvula para distribuir uma quantidade medida. As cápsulas e cartuchos de, e.g., gelatina para utilização num inalador ou insuflador podem ser formulados contendo uma mistura em pó do composto e uma base pó adequada tal como lactose ou amido.

Os compostos podem ser formulados para administração parentérica por injecção, e.g., por injecção ou infusão contínua de bólus. As formulações para injecção podem ser apresentadas em forma de dosagem unitária, e.g., em ampolas ou em recipientes multidose, com um conservante adicionado. As composições podem tomar estas formas como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes de formulação tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou dispersão. 46 ΕΡ1614418Β1

As formulações farmacêuticas para administração parentérica incluem soluções aquosas dos compostos activos numa forma solúvel em água. Adicionalmente, as suspensões dos compostos activos podem ser preparadas como suspensões de injecção oleosas apropriadas. Os solventes lipofilicos adequados ou veículos incluem óleos gordos tais como óleo de sésamo , ou ésteres de ácido gordo sintéticos, tais como oleato de etilo ou triglicéridos, ou lipossomas . As suspensões de injecção aquosas podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão, tal como carboximetilcelulose de sódio, sorbitol, ou dextrano. Opcionalmente, a suspensão pode também conter estabilizantes ou agentes adequados que aumentam a solubilidade dos compostos para permitir a preparação de soluções altamente concentradas. Alternativamente, o ingrediente activo pode estar na forma de pó para a constituição com um veiculo adequado, e.g., água estéril isenta de pirogénios, antes da utilização.

Os compostos podem também ser formulados em composições rectais tais como supositórios ou enemas de retenção, e.g., contendo bases de supositório convencionais tais como manteiga de cacau, carboceras, polietilenoglicóis ou outros glicéridos, todos os que fundem à temperatura do corpo, mas que solidificam à temperatura ambiente.

Adicionalmente às formulações descritas previamente, os compostos podem também ser formulados como uma preparação de depósito. Estas formulações de longa actuação podem ser administradas por implante (por exemplo subcutaneamente ou intramuscularmente) ou por injecção intramuscular. Deste modo, por exemplo, os compostos podem ser formulados com materiais adequados poliméricos ou hidrofóbicos (por exemplo como uma emulsão num óleo aceitável) ou resinas de troca iónica, ou como 47 ΕΡ1614418Β1 derivados moderadamente solúveis, por exemplo, como um sal moderadamente solúvel.

Alternativamente, outros sistemas de distribuição para os compostos hidrofóbicos farmacêuticos podem ser empregues. Lipossomas e emulsões são exemplos bem conhecidos de veículos de distribuição ou veículos para fármacos hidrofóbicos. Numa forma de realização presentemente preferida, podem ser empregues lipossomas de longa circulação, i.e., discretos. Estes lipossomas são geralmente descritos em Woodle, et al., Patente U.S. N° 5 013 556. Os compostos da presente invenção podem também ser administrados através de meios de libertação controlada e/ou dispositivos de distribuição tais como os descritos nas Pat. U.S. N°s 3 845 770; 3 916 899; 3 536 809; 3 598 123; e 4 008 719.

Certos solventes orgânicos tais como dimetilsulfóxido (DMSO) também podem ser empregues, embora usualmente com o custo da maior toxicidade. Adicionalmente, os compostos podem ser distribuídos utilizando um sistema de libertação sustentada, tal como matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o agente terapêuticos. Vários tipos de materiais de libertação sustentada foram estabelecidos e são bem conhecidos pelos especialistas na técnica. As cápsulas de libertação sustentada podem, dependendo da sua natureza química, libertação dos compostos desde poucas horas até mais de 100 dias.

As veículos Exemplos limitam composições farmacêuticas também podem compreender ou excipientes de fase sólida ou gel adequados, destes veículos ou excipientes incluem, mas não se a, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários 48 ΕΡ1614418Β1 açúcares, amidos, derivados de celulose, gelatina, e polímeros tais como polietilenoglicóis.

As composições farmacêuticas adequadas para utilização na presente invenção incluem composições em que os ingredientes activos estão contidos numa quantidade terapeuticamente eficaz. A quantidade de composição administrada será, obviamente, dependente do indivíduo a ser tratado, do peso do indivíduo, da gravidade da aflição, a maneira de administração e o julgamento do médico que prescreve. A determinação de uma quantidade eficaz está no âmbito da capacidade dos especialistas na técnica, especialmente à luz da divulgação detalhada aqui proporcionada.

Para qualquer composto utilizado na presente invenção, uma dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios de cultura de células ou modelos animais.

Além disso, a toxicidade e eficácia terapêutica dos compostos aqui descritos podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos convencionais em culturas de células ou animais experimentais, e.g., por determinação do LD5o, (a dose letal para 50% da população) e a ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população) . A proporção de dose entre o efeito tóxico e terapêutico é o índice terapêutico e pode ser expressa como a proporção entre LD50 e ED50. Os compostos que exibem elevados índices terapêuticos são preferidos. Os dados obtidos destes ensaios de células de cultura e estudos animais podem ser utilizados na formulação de um intervalo de dosagem que não é tóxico para a utilização em humanos. A dosagem destes compostos reside, de um modo preferido, num intervalo de concentrações circulantes que incluem a ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar neste intervalo dependendo da forma de 49 ΕΡ1614418Β1 dosagem empregue e a via de administração utilizada. A formulação exacta, via de administração e dosagem podem ser seleccionadas pelo médico do indivíduo em relação ao estado do doente. (ver, e.g., Fingi et al. 1975 In: The Pharmacological

Basis of Therapeutics, Cap. 1). A quantidade de composto activo que pode ser combinada com um material veiculo para produzir uma forma de dosagem única irá variar dependendo da doença tratada, da espécie de mamífero, e do particular modo de administração. No entanto, como guia geral, as doses unitárias adequadas para os compostos da presente invenção podem, por exemplo, de um modo preferido, conter entre 100 mg a 3000 mg do composto activo. Uma unidade de dose preferida está entre 500 mg a 1500 mg. Uma dose unitária mais preferida está entre 500 a 1000 mg. Estas doses unitárias podem ser administradas mais do que uma vez por dia, por exemplo 2, 3, 4, 5 ou 6 vezes por dia, mas, de um modo preferido, 1 ou 2 vezes por dia, de modo a que a dosagem total diária para um adulto de 70 kg está no intervalo de 0,1 a 250 mg por kg de peso do indivíduo por administração. Uma dosagem preferida é 5 a 250 mg por kg peso do indivíduo por administração, e esta terapia pode estender-se por várias semanas ou meses, e em alguns casos, anos. Deve ser entendido, no entanto, que o nível específico de dose para qualquer particular doente depende de uma variedade de factores incluindo a actividade do composto específico empregue; a idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do indivíduo a ser tratado; o tempo e via de administração; a taxa de excreção; outros fármacos que foram previamente administrados; e a gravidade da doença particular que sofre a terapia, como é bem entendido pelos especialistas da área. 50 ΕΡ1614418Β1

Uma dosagem típica pode ser um comprimido de 10 a cerca de 1500 mg tomados uma vez por dia, ou, múltiplas vezes por dia, ou uma cápsula de libertação programada ou comprimido tomado uma vez por dia e contendo um conteúdo proporcionalmente elevado de ingrediente activo. O efeito de libertação programada pode ser obtido através de materiais de cápsula que dissolve a diferentes valores de pH, através e cápsulas que libertam lentamente por pressão osmótica, ou por qualquer outro meio conhecido de libertação controlada.

Pode ser necessária a utilização de dosagens fora destes intervalos em alguns casos como será óbvio para os especialistas na técnica. Além disso, é notado que o clínico ou o médico assistente saberá como e quando interromper, ajuste, ou terapia terminal em conjunção com a resposta individual do doente. (5) Grupos de Protecção

Certos compostos possuindo a estrutura geral de Fórmula I e II pode requerer a utilização de grupos de protecção para permitir a sua elaboração bem sucedida na estrutura desejada. Os grupos de protecção podem ser seleccionados com referência a Greene, T. W., et al., Protective groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Inc., 1991. Os grupos de bloqueamento são rapidamente removíveis, i.e., estes podem ser removidos, se desejado, através de procedimentos que não causam clivagem ou outras rupturas das porções remanescentes da molécula. Estes procedimentos incluem hidrólise química e enzimática, tratamento com agentes químicos de redução ou de oxidação sob condições suaves, tratamento com ião fluoreto, tratamento com um catalisador de metal de transição e um nucleófilo, e hidrogenação catalítica. 51 ΕΡ1614418Β1

Exemplos de grupos de protecção hidroxilo adequados são: trimetilsililo, trietilsililo, o-nitrobenziloxicarbonilo, p-nitrobenziloxicarbonilo, t-butildifenilsililo, t-butildimetilsililo, benziloxicarbonilo, t-butiloxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetiloxicarbonilo, e aliloxicarbonilo. Exemplos de grupos de protecção do carboxilo adequados são benzidrilo, o-nitrobenzilo, p-nitrobenzilo, 2-naftilmetilo, alilo, 2-cloroalilo, benzilo, 2,2,2-tricloroetilo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo, 2-(trimetilsilil)etilo, fenacilo, p-metoxibenzilo, acetonilo, p-metoxifenilo, 4-piridilmetilo e t-butilo. (6) Processo

Processos para produzir os compostos são apresentados de forma geral nos Esquemas 1 e 2 (e posteriormente descritos nos Exemplos): 52 ΕΡ1614418Β1

Esquema 1

53 ΕΡ1614418Β1

Esquema 2

De acordo com o Esquema 1, um acetonitrilo substituído com fenilo é convertido num ácido acético substituído com fenilo. 0 ácido acético substituído com fenilo é convertido num derivado de ácido activado (e.g., ácido clorídrico), seguido por halogenação no carbono alfa e esterificação com um álcool. 0 éster halogenado é tratado com um fenol substituído (e.g., 3- trifluorometilfenol) , produzindo um éter de arilo, que é hidrolisado para formar um derivado de ácido carboxílico. 0 derivado de ácido é convertido num derivado de ácido activado e subsequentemente tratado com um nucleófilo (e.g., N-acetiletanolamina) para produzir o produto desejado.

De acordo com o Esquema 2, um ácido acético substituído com fenilo é convertido num derivado de ácido activado (e.g., ácido 54 ΕΡ1614418Β1 clorídrico) seguido por halogenação no carbono alfa. A porção de ácido activado da molécula é feita reagir com um nucleófilo (e.g., N-acetiletanolamina) para proporcionar um ácido protegido. 0 ácido protegido, halogenado é tratado com um fenol substituído (e.g., 3-trifluorometilfenol), produzindo o produto desejado.

Os estereoisómeros dos compostos podem ser preparados utilizando reactivos ou reagentes ou catalisadores na sua forma enantiomérica única no processo sempre que possível ou por separação da mistura de estereoisómeros por métodos convencionais, discutidos supra e nos Exemplos. Alguns dos métodos preferidos incluem a utilização da separação microbiana, separando os sais diastereoméricos formados com ácidos quirais ou bases quirais e cromatografia utilizando suportes quirais. (7) Kits

Adicionalmente, a presente invenção revela kits com doses unitárias dos compostos de Fórmula I, Fórmula II, ou Fórmula III seja em doses orais ou injectáveis. Adicionalmente aos recipientes que contêm as doses unitárias haverá um pacote de informação inserido descrevendo a utilização e os benefícios correspondentes dos fármacos no alívio dos sintomas e/ou complicações associadas com a diabetes de Tipo 2 assim como no alivio de hiperlipidemia e hiperuricemia. Os compostos preferidos e as doses unitárias são aqueles aqui descritos acima. 55 ΕΡ1614418Β1

EXEMPLOS

Os compostos de Fórmula I, Fórmula II, ou Fórmula III podem ser rapidamente preparados utilizando o processo apresentado no Esquema 1, supra, e a partir dos seguintes exemplos. EXEMPLO 1

Este exemplo refere-se à preparação de Metil Bromo-(4-clorofenil)-acetato. o * soa. o.

CeHrOOa 170 60

CgHgBfOP} 263.52 0 composto inicial listado no Esquema 1, i.e., ácido 4-clorofenilacético, está rapidamente disponível de várias fontes comerciais (e.g., Aldrich e Fluka).

Um reactor Morton de 5-L equipado com um agitador magnético, um controlo de temperatura interno, e um funil de adição foi ventilado através de um purificador de gás e carregado com ácido p-clorof enilacét ico (720 g, 4,2 moles) e SOCI2 (390 mL, 630 g, 5,3 moles). A reacção foi agitada, aquecida e mantida a 55°± 5°C durante 1 hora. Foi então adicionado bromo (220 mL, 670 g, 5,3 moles) durante 20 min. e agitado a 55°± 5°C durante 16 horas. A temperatura foi subida para 80°C durante 7 horas e depois arrefecido para 9°C num banho de água gelada. Fui então adicionado cuidadosamente metanol (2,0 L, 1,6 kg, 49,4 moles). O solvente foi eliminado para obter 2 líquidos pesando 1,28 kg. 56 ΕΡ1614418Β1

Estes foram dissolvidos numa mistura de 0,84 L de água e 2,1 L de éter e separados. A fase orgânica foi lavada uma vez com 0,78 L 25% (p:p) NaCl aquosa e seca sobre 0,13 kg de MgS04. Esta foi filtrada através de um filtro de papel Whatman #1 e eliminado de solvente para obter 0,985 kg de liquido laranja. 0 NMR de protão demonstrou isto ser 80% de produto e 19% de éster não bromado. A HPLC demonstrou ser 82% de produto e 18% de éster não bromado. A HPLC foi realizada numa coluna Zorbax SB-C8 a 30°C medindo 250 X 4, 6 mm e um tamanho de partícula de 5 μ. A fase móvel foi de 60:40 (v:v) de acetonitrilo: 0,1% H3PO4 a

1,5 mL/min. A detecção foi a 210 nm. A amostra injectada de 1 pL foi dissolvida em acetonitrilo a uma concentração de 10 mg/mL. O produto possui um tempo de retenção de 5,0 min. e o do éster não bromado foi de 3,8 min. Este produto bruto foi purificado por destilação sob vácuo para obter 96% de produto puro com um rendimento de 84%. 0 NMR de protão do produto (CDCI3, 300 MHz) apresentou desvios a 3,79 (s, 3H) , 5,32 (s, 1H) e 7,20-7,55 (m, 4H) ppm. EXEMPLO 2

Este exemplo refere-se à preparação de Metil 4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetato.

344.72

CgHeBfGOj 263.52

CjHjFjO 162.11

Este passo foi semelhante ao mesmo passo em U.S. 3 517 050 com uma excepção, foi utilizado t-butóxido de potássio em vez de metóxido de sódio para prevenir a criação do éter metílico 57 ΕΡ1614418Β1 correspondente. Um reactor Morton de 5-L equipado com um

agitador superior, um detector de temperatura interior, e um funil de adição e sob uma atmosfera de azoto foi carregado com metil bromo-(4-clorofenil)-acetato (830 g, 3,0 moles) e THF (600 mL) . O reactor foi arrefecido para 14°± 3°C num banho de água gelada e depois foi adicionada uma solução de trifluorometil-m-cresol (530 g, 3,3 moles) arrefecida de forma semelhante, em t-butóxido de potássio a 1,0 M em THF (3,1 L, 3,1 moles). A reacção prosseguiu exotermicamente com uma subida de temperatura típica excedendo 25°C e a adição foi controlada para manter uma temperatura de 15°± 2°C e agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A HPLC foi realizada numa coluna

Zorbax SB-C8 a 30°C medindo 250 x 4, 6 mm e tamanho de partícula de 5 μ. A fase móvel foi de 60:40 (v:v) de acetonitrilo: 0, 1% de H3PO4 a 1,5 mL/min. A detecção foi a 210 nm. A amostra injectada de 1 pL foi dissolvida em acetonitrilo a uma concentração de 10 mg/mL. O produto possuiu um tempo de retenção de 9,6 min., o éster de partida eluída a 5, 0 min., o fenol a 3, 0 e o éster não bromado a 3,8 min. O solvente foi eliminado utilizando um evaporador de rotação para obter uma lama amarela que foi

dissolvida numa mistura de 4,0 L de água e 12,0 L de éter. A mistura foi separada e a fase orgânica foi lavada uma vez com 1,6 L de 5% (p:p) NsOH aquoso seguido por 1,6 L de água e finalmente 1,6 L de NaCl aquoso a 25% (p:p). A fase orgânica foi seca sobre 0,32 kg de MgSCh e filtrada através de filtro de papel Whatman #1. 0 solvente foi eliminado para obter 1,0 kg de cristais húmidos esbranquiçados. Este foi recristalizado no evaporador de rotação dissolvendo em 1,0 L metilciclo-hexano a 75°C e depois arrefecendo para 20°C. Os cristais foram filtrados através de papel de filtro Whatman #1 e lavado com três porções de 0,25 L de metilciclo-hexano frio (15°C) . 0 produto em teste húmido (0,97 kg) foi seco durante a noite para obter 0,81 kg de 58 ΕΡ1614418Β1 98% de produto puro que corresponde a um rendimento de 7 9%. 0 NMR do produto de protão (CDC13, 300 MHz) permite desvios a 3,75 (s, 3H) , 5,63 (s, 1H) e 7, 05-7,55 (m, 8H) . EXEMPLO 3

Este exemplo refere-se à preparação de ácido 4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acético

Um reactor Morton de 12-L com agitador magnético, controlador de temperatura interno, um condensador de refluxo e sob uma atmosfera de azoto foi carregado com metil 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetato (810 g, 2,3 moles) e etanol absoluto (5,8 L) e aquecido com agitação a 57°C para dissolver o sólido. Foi adicionada uma solução de KOH (520 g, 9,3 moles) em 0,98 L de água. A solução foi sujeita a refluxo durante 30 min. e o solvente foi eliminada através de um evaporador de rotação para obter 2,03 kg de uma mistura de dois líquidos quase incolores. Estes foram dissolvidos em água (16 L) e tratados com 16 g de Norite neutro, depois filtrado através de uma pilha de terra da infusão retida em papel de filtro Whatman #1. 0 pH do filtrado foi diminuído a partir de um intervalo inicial de 13 até um intervalo de 1 a 2 através da adição de um total de 2,75 L de HC1 a 3 M (8,25 moles) . Formou-se um sólido muito pegajoso após a adição dos primeiros 2,30 L de ácido e foi adicionado éter (7 L) neste ponto. As duas camadas foram 59 ΕΡ1614418Β1 separadas e a camada orgânica foi seca sobre MgS04 (230 g) e filtrado através de papel de filtro Whatman #1. O solvente foi depois eliminado para obter 0,85 kg de xarope esbranquiçado. O material foi então recristalizado num evaporador de rotação através da adição de metilciclo-hexano (800 mL) e arrefecimento para 18°C com rotação lenta. A temperatura foi então baixada para 5°C, os cristais foram filtrados, e lavados 5 vezes com porções de 0,10 L de met ilciclo-hexano frio (0°C) para obter 0,59 kg de cristais húmidos. Os cristais húmidos foram secos para obter 0,48 kg (rendimento de 62%) de produto sem ácido p-clorofenilacético detectável no NMR de protão. 0 produto de NMR de protão (CDCI3, 300 MHz) apresenta desvios de 5,65 (s, 1H) , 7,02-7,58 (m, 8H) e 10,6 (s, 1H) . EXEMPLO 4

Este exemplo refere-se à preparação de enantiómeros resolvidos de ácido 4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acético.

Um reactor Morton de 12-L de topo aberto com um agitador superior foi carregado com ácido 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)- acético (350 g, 1,06 moles) e isopropanol (4,0 L) e aquecido para 65°± 3°C. Foi adicionada uma lama de (-) cinchonidina (300 g, 1,02 moles) em isopropanol (2,0 L), passando todos os sólidos para o reactor com mais 0,8 L de 60 ΕΡ1614418Β1 isopropanol. A temperatura caiu de 65° para 56°C e formou-se um último lugar uma solução transparente, laranja e a mistura foi mantida a 55°± 5°C durante 2 horas. Foram recolhidos cristais finos por de filtração através de papel de filtro Whatman #1, lavando uma vez com 0,7 L de isopropanol quente (55°C) . Os cristais foram secos durante 16 horas à temperatura ambiente num forno de vácuo de 12,6 L num fluxo de azoto de 5 LPM. O sólido seco pesava 0,37 kg e possuía um excesso enantiomérico de 80% (ee) do enantiómero ( + ) . O excesso enantiomérico foi determinado por HPLC utilizando uma coluna de 250 x 4, 6 mm R,R-WhelkO-l à temperatura ambiente. As amostras injectadas foram de 20 pL de soluções de 2 mg/mL das amostras em etanol. A coluna foi eluída com 95:5:0,4, hexano:isopropanol:ácido acético num fluxo de 1 mL/min. A detecção foi a 210 nm. O enantiómero ( + ) foi eluído a 7 a 8 min. e o enantiómero (-) a 11 a 13 min. 0 líquido mãe caiu uma segunda colheita quase imediatamente que foi filtrada, lavada, e seca de modo a produzir 0,06 kg de sal que possui um ee de 90% do (-)-enantiómero. De um modo semelhante também foram obtidas a terceira, quarta e quinta colheitas que pesaram 0,03 kg, 0,03 kg e 0,7 kg, respect ivamente; com excessos de (-) enantiómero de 88%, 89% e 92%, respectivamente. O sal bruto (+) (320 g) foi recristalizado a partir de uma mistura de etanol (5,9 L) metanol (1,2 L). A mistura foi aquecida com agitação superior para dissolver, arrefecido até à temperatura ambiente durante 16 horas, filtrada e lavada duas vezes com 0,20 L de 5:1 (v:v) etanol: metanol. Os cristais foram secos para obter 0,24 kg do (+) enantiómero que possui uma ee de 97%. Isto correspondeu a uma recuperação de 80% deste isómero. O sal resolvido foi suspenso numa mistura de éter (6,5 L) e água (4,0 L) com agitação superior. O pH foi baixado para 0-1 como medido por tiras de indicação de pH com uma solução de H2SO4 61 ΕΡ1614418Β1 concentrado (0,13 L) em água (2,5 L). As fases foram separadas e a fase orgânica e foi lavada duas vezes com porções de 6,5 L de água. Foi adicionado éter (1,9 L) e a camada orgânica foi lavada mais uma vez com 6,5 L de água. Após a separação final, foi adicionado 0,1 L de 25% (p:o) de NaCl aquoso limpando qualquer emulsão ligeira. O produto foi seco sobre 0,19 kg de MgSCq, filtrado e o solvente foi removido para obter 0,13 kg de xarope esbranquiçado que solidifica sob arrefecimento. Isto correspondeu a uma recuperação de 97% do produto que tinha uma ee de 95% do ( + ) enantiómero. [α]ο+5,814° (c. =0, 069 em álcool metilico) . O sal (-) bruto combinado, (200 g) foi recristalizado a partir de isopropanol (3, 1 L) . A mistura foi aquecida para dissolver quase todo o sólido e o filtrado para remover sólidos insolúveis. A mistura foi então arrefecida com agitação à temperatura ambiente durante 16 horas, filtradas, lavadas, e secas para obter 0,16 kg do (-) enantiómero que possui uma ee de 97%. Isto corresponde a uma recuperação de 49% deste isómero. O (-) enantiómero do ácido foi isolado do mesmo modo que descrito acima para o ácido ( + ) . 0 sal resolvido foi suspenso em éter e água, o pH baixou com H2S04 concentrado, e o produto foi extraído na fase orgânica. EXEMPLO 5 A. Preparação de cloreto de (-) 4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetilo 62 ΕΡ1614418Β1

Um frasco de evaporação de 2-L com agitação magnética, adaptador de Claissen, termómetro interno e um condensador de refluxo direccionado para um purificador de gás foi carregado com ácido (-) 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acético (143 g, 0,42 mole baseado numa pureza de 97%) e CHCI3 (170 mL) e aquecido até à fervura para dissolver. Foi adicionado SOCI2 (38 mL, 62, 1 g, 0,52 mole). A mistura foi aquecida até ao refluxo O O 00 VD final) durante 4,5 horas e depois eliminada de voláteis para obter 151 g de um liquido amarelo, túrbido (rendimento aparente de 103%). O material foi utilizado no passo seguinte sem posterior purificação. B. Preparaçao de Cloreto de (+) 4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetilo

Um frasco de evaporação de 3-L com agitação magnética, adaptador de Claissen, termómetro interno e um condensador de refluxo dirigido para um purificador de gás foi carregado com (+) ácido 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acético (131 g, 0,37 mole) e CHCI3 (152 mL) e aquecido até à fervura de modo a 63 ΕΡ1614418Β1 dissolver. Foi adicionado SOCI2 (35 mL, 56,5 g, 0,48 mole) . A mistura foi aquecida até ao refluxo (70°C final) durante 4 horas e depois eliminado de voláteis para obter 139 g de líquido. O material foi utilizado no passo seguinte sem posterior purificação. EXEMPLO 6 A. Preparação de (-) 2-Acetamidoetil 4-Clorofenil-(3- trifluorometilfenoxi)-acetato

Um frasco de 3-L de fundo redondo com agitação magnética, termómetro interno, sob uma atmosfera de azoto e num banho de água gelada foi carregado com DMF (420 mL) , piridina (37 mL, 36 g, 0,46 mole) e N-acetoetanolamina (39 mL, 43 g, 0,42 mole). A mistura foi arrefecida para 0o até 5°C e foi adicionada uma solução de cloreto de (-) 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetilo bruto (151 g, 0,42 mole com base num rendimento de 100% do passo anterior) em éter (170 mL) durante um período de 40 min. De modo a manter a temperatura do frasco abaixo dos 13°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e dissolvida através da adição de água (960 mL) seguida de acetato de etilo (630 mL) . A adição da água prosseguiu exotermicamente elevando a temperatura de 24° para 34°C. A adição de acetato de etilo provocou uma queda da temperatura para 30°C. As camadas 64 ΕΡ1614418Β1 foram separadas e a fase aquosa foi extraída uma vez com acetato de etilo (125 mL). As camadas orgânicas combinadas foram extraídas uma vez com 7% (p:p) de NaHCCç aquoso (125 mL) e cinco vezes com porções de 60 mL de água e depois duas vezes com porções de 60 mL de 25% (p:p) de NaCl aquoso. O produto foi seco sobre MgS04 (42 g) e filtrado através de um filtro de papel Whatman #1. O solvente foi removido utilizando um evaporador de rotação para obter 160 g de um xarope amarelo correspondendo a um rendimento de 80% com base no NMR de protão que apresenta 87% de produto, 8% EtOAc, 4% de amida não bromada, e 1% de DMF. Este xarope foi dissolvido em MTBE (225 mL) à temperatura ambiente e foram adicionados hexanos a 85% (400 mL) arrefecidos (-15°C), com agitação. Formaram-se dois líquidos, depois cristais, depois a mistura formou um sólido. A massa sólida foi raspada para um funil de Buchner ajustado com Whatman #1, empacotado e lavado três vezes com porções de 100 mL de 1:1 (v:v) MTBE: hexanos para obter 312 g de produto húmido que seca até 127 g, correspondendo a um rendimento de 73%. B. Preparação de (+) 2-Acetamidoetil 4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetato

Um frasco de 3-L de fundo redondo com agitador magnético, termómetro interno, sob uma atmosfera de azoto e num banho de água gelada foi carregado com DMF (365 mL) , piridina (33 mL, 32,3 g, 0,41 mole) e N-acetoetanolamina (34 mL, 38,1 g, 0,37 65 ΕΡ1614418Β1 mole) . A mistura foi arrefecida até 0o até 5°C e foi adicionada uma solução de cloreto de ( + ) 4-clorofenil- (3- trifluorometilfenoxi)-acetilo bruto (139 g, 0.,7 mole baseado no rendimento de 100% do passo anterior) em éter (155 mL) durante um período de 25 min. De modo a manter a temperatura do frasco abaixo de 13°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente 40 horas e dissolvida através da adição de água (850 ml) seguido por acetato de etilo (550 mL) . A adição de água prosseguiu exotermicamente subindo a temperatura desde 24° até 34°C. A adição de acetato de etilo provocou uma queda da temperatura para 30 °C. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída uma vez com acetato de etilo (110 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas duas vezes com porções de 55 mL de água e depois cinco vezes com porções de 55 mL de 25% (p:p) de NaCl aquoso e secas sobre 30 g de MgSCU e filtradas através de papel de filtro Whatman #1. O solvente foi eliminado utilizando um evaporador de rotação para obter 168 g de líquido amarelo que corresponde a um rendimento de 8 6% com base na NMR de protão que apresenta 7 9% de produto, 9% de EtOAc, 8% de amida não bromada, e 4% de DMF. O produto foi cristalizado numa proveta de 800 mL dissolvendo em MTBE (200 mL) à temperatura ambiente, arrefecendo até -15° durante 1,4 horas, adicionando 200 mL de hexanos a 85% e depois arrefecendo 1 hora. A massa sólida foi removida por raspagem num funil de Buchner ajustado com Whatman #1, empacotado e lavado uma vez com 1:1 (v:v) MTBE: hexanos (100 mL) para obter 201 g de produto húmido. 0 produto foi seco sob fluxo de azoto e triturado com 85% de hexanos (700 mL) utilizando um agitador superior. O material foi filtrado e seco para obter 87 g de produto. [a]D +2, 769° (c.=0, 048 em álcool metílico) . [oí]d-2,716° (c.=0, 049 em álcool metílico). Os enantiómeros (+) e (-) foram também analisados através de HPLC utilizando uma coluna de 250 x 4, 6 mm R, R- 66 ΕΡ1614418Β1

WhelkO-1 à temperatura ambiente. As amostras injectadas foram de 20 pL de soluções de 2 mg/mL das amostras em etanol. A coluna foi eluida com 60:40, isopropanol:hexano a um fluxo de 1 mL/min. A detecção foi de 220 nm. 0 (+) enantiómero eluido a 5,0 até 5,2 min. e o (-) enantiómero a 5,7 até 5,9 min. EXEMPLO 7

Este exemplo refere-se à inibição do citocromo P450 2C9 (CYP2C9) pelos compostos. A actividade de hidroxilação da tolbutamida (100 μΜ de 14C-tolbutamida; 1 mM NADPH) foi avaliada em misturas de microssomas do figado humano (0,6 mg proteina/mL)) durante 60 minutos a 37°C tanto com como sem os compostos de teste. Foram testados ácido halofénico racémico, ácido (-) halofénico e ácido (+) halofénico (0,25 μΜ até 40 μΜ) . Como apresentado na Figura 1, o ácido halofénico racémico inibiu a actividade de hidroxilação da tolbutamida mediada por CYP2C9 em microssomas de figado humano com uma IC50 aparente de 0,45 μΜ. Foi observada uma diferença substancial na capacidade dos enantiómeros de ácido halofénico para inibir o CYP2C9. 0 ácido (+) halofénico tinha uma IC50 aparente de 0,22 μΜ enquanto o ácido (-) halofénico foi quase 20 vezes menos potente com uma IC5o aparente de 3,6 μΜ. EXEMPLO 8

Este exemplo refere-se ao decurso de tempo da redução da glucose para os compostos. 67 ΕΡ1614418Β1 A. Material e Métodos

Foram adquiridos a The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA) murganhos C57BL/6J ob/ob, machos de 9-10 semanas de idade. Os animais foram colocados em gaiolas (4-5 murganhos/gaiola) em condições de laboratório convencionais a 22°C e 50% de humidade relativa, e foram mantidos numa dieta de ração de Purina para roedores e água ad libitum. Antes do tratamento, o sangue foi recolhido a partir da veia da cauda de cada animal. Foram utilizados os murganhos que tinham os níveis de glucose no plasma em condições de não jejum entre 300 e 500 mg/dl . Cada grupo de tratamento consistiu em 10 murganhos que foram distribuídos de modo a que os níveis médios de glucose fossem equivalentes em cada grupo no início do estudo . Os murganhos foram doseados oralmente uma vez por sonda esofágica com veículo, halofenato racémico (250 mg/kg), (-) halofenato (250 mg/kg) ou ( + ) halofenato (250 mg/kg) . Todos os compostos foram distribuídos numa formulação líquida que continha 5% (v/v) de sulfóxido de dimetilo (DMSO) , 1% (v/v) de tween 80 e 2,7% (p/v) de metilcelulose. 0 volume da sonda esofágica foi de 10 mL/kg.

Foram retiradas amostras de sangue às 1,5, 3, 4,5, 6, 7,5, 9 e 24 horas após a dose e analisadas para glucose no plasma. As concentrações de glucose no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando o método da glucose oxidase (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA) . A significância das diferenças entre grupos (comparando os grupos tratados com fármacos com os tratados com veículo ou entre grupos tratados com fármaco) foi avaliada utilizando o teste t de Student não emparelhado. 68 ΕΡ1614418Β1 B. Resultados

Como ilustrado na Figura 2, o halofenato racémico reduziu significativamente as concentrações de glucose no plasma na maioria dos pontos de tempo com o pico de actividade às 9 horas. 0 (-) halofenato apresentou uma redução da glucose no plasma apenas às 1,5 horas e alcançou o seu pico de actividade às 3 horas. As concentrações de glucose no plasma permaneceram baixas até às 24 horas. 0 (+) Halofenato não apresentou actividade significativa até às 4,5 horas e o pico de actividade foi às 7,5 horas. A glucose no plasma começou a recair mais tarde. Houve diferenças significativas entre os enantiómeros (-) e (+) de halofenato nos pontos de tempo de 3 e 24 horas. A actividade do (-) halofenato foi mais rápida no inicio e manteve-se mais tempo. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 9

Este exemplo refere-se à actividade de diminuição de Glucose dos compostos. A. Materiais e Métodos

Foram adquiridos de The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA) murganhos C57BL/6J ob/ob machos, de 8-9 semanas de idade. Os animais foram colocados em gaiolas (4-5 murganhos/gaiola) em condições de laboratório convencionais a 22°C e 50% de humidade relativa, e foram mantidos numa dieta de ração de Purina para roedores e água ad libitum. Antes do tratamento, o sangue foi recolhido da veia da cauda de cada animal. Foram utilizados os murganhos que tinham níveis de glucose no plasma em condições de não jejum entre 300 e 520 mg/dl . Cada grupo de tratamento 69 ΕΡ1614418Β1 consistiu em 10 murganhos que foram distribuídos de modo a que os níveis médios de glucose fossem equivalentes em cada grupo como o início do estudo. Os murganhos foram doseados oralmente por sonda esofágica uma vez por dia durante 5 dias com veículo, halofenato racémico (250 mg/kg), (-) halofenato (125 e 250 mg/kg) ou (+) halofenato (125 e 250 mg/kg). O halofenato racémico foi distribuído em metilcelulose a 2,7% (p/v) e ambos o (-) enantiómero e o (+) enantiómero foram distribuídos numa formulação líquida que continha 5% (v/v) de sulfóxido de dimetilo (DMSO), 1% (v/v) de tween 80 e 2,7% (p/v) de metilcelulose. O volume da sonda esofágica foi de 10 mL/kg. Foram retiradas amostras de sangue às 3, 6, 27, 30 e 120 horas após a primeira dose e analisadas em relação à glucose e insulina no plasma. Os animais foram colocados em jejum durante a noite (14 horas) antes da amostragem das 120 horas. As concentrações de glucose no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando o método da glucose oxidase (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA) . As concentrações de insulina no plasma foram determinadas utilizando o kit "Rat Insulin RIA Kit" de Linco Research Inc. (St. Charles, MO, USA) . A diferença significativa entre grupos (comparando os tratados com fármaco com os tratados com veiculo) foi avaliada utilizando o teste t de Student não emparelhado. B. Resultados

Como ilustrado na Figura 3, o (-) halofenato reduziu significativamente as concentrações de glucose no plasma às 6, 27 e 30 horas. O (-) halofenato em ambos os níveis de dosagem baixou significativamente as concentrações de glucose no plasma às 6, 27 e 30 horas. A dose elevada (250 mg/kg) também foi activa às 3 horas. 0 (+) halofenato a 125 mg/kg apresentou 70 ΕΡ1614418Β1 redução da glucose no plasma às 6 e 27 horas, enquanto a 250 mg/kg, foram observadas reduções das concentrações de glucose no plasma às 3, 6, 27 e 30 horas. Os níveis de insulina no plasma são apresentados na Figura 4. O halofenato racémico reduziu significativamente a insulina às 6 e 27 horas. As insulinas no plasma foram reduzidas significativamente no grupo de (-) halofenato às 27 horas a ambas as doses e foram reduzidas significativamente às 30 horas nos animais tratados com 250 mg/kg/dia. O (+) halofenato reduziu significativamente a insulina às 27 e 30 horas em ambas as doses. A 125 mg/kg/dia foi também observada uma redução significativa após 6 horas. Após o jejum durante a noite (às 120 horas), todos os tratamentos reduziram as concentrações de glucose no plasma significativamente (Figura 5). As insulinas no plasma foram reduzidas significativamente em todos os grupos tratados com halofenato excepto o (+) halofenato a 125 mg/kg/dia (Figura 6). EXEMPLO DE REFERÊNCIA 10

Este exemplo refere-se ao melhoramento na Resistência à Insulina e Tolerância à Glucose Diminuída para os compostos. A. Materiais e Métodos

Ratos Zucker fa/fa machos, de 8-9 semanas de idade (Charles River) foram colocados em gaiolas (2-3 ratos/gaiola) em condições de laboratório convencionais a 22°C e 50% de humidade relativa, e foram mantidos numa dieta de ração de Purina para roedores e água ad libitum. Antes do tratamento, os ratos foram atribuídos a 6 grupos com base no peso corporal. Cada grupo de tratamento consistiu em 8 ratos. Os ratos foram doseados oralmente uma vez por sonda esofágica com veículo, halofenato 71 ΕΡ1614418Β1 racémico (100 mg/kg) , (-) halofenato (50 ou 100 mg/kg) ou ( + ) halofenato (50 ou 100 mg/kg) . Todos os compostos foram distribuídos numa formulação líquida que continha 5% (v/v) de sulfóxido de dimetilo (DMSO) , 1% (v/v) de tween 80 e 2,7% (p/v) de metilcelulose. O volume da sonda esofágica foi de 10 mL/kg. Todos os ratos receberam uma exposição a glucose oral (1,9 g/kg) 5,5 horas após o tratamento e 4 horas após retirar a comida. As amostras de sangue foram retiradas aos 0, 15, 30, 60, 90, 120, e 180 minutos após a exposição à glucose para medição da glucose no plasma. Os grupos de veículo, (-) halofenato (50 mg/kg) e (+) halofenato (50 mg/kg) foram sujeitos a uma exposição a insulina após uma sonda esofágica diária dos respectivos tratamentos durante 5 dias. No dia 5, os ratos receberam a insulina por via intravenosa (0,75 U/kg) 5,5 horas após a última dose e 4 horas após retirar a comida. Foram retiradas amostras de sangue aos 3, 6, 9, 12, 15 e 18 minutos após a injecção de insulina para a medição de glucose no plasma. As concentrações de glucose no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando o método da glucose oxidase (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, U.S.A.). Foi avaliada a diferença significativa entre grupos (comparando os grupos tratados com fármaco com os grupos tratados com veículo ou entre grupos tratados com fármaco) utilizando teste t de Student não emparelhado. B. Resultados

Como ilustrado na Figura 7A, ratos gordos Zucker com Tolerância à Glucose Diminuída tinham níveis de glucose no plasma inferiores após uma exposição a glucose após o tratamento com halofenato. O (-) halofenato foi o mais eficaz a baixar a glucose e tinha um efeito que persistiu mais do que o racemato ou o (+) enantiómero. A Figura 7B apresenta a área de incremento 72 ΕΡ1614418Β1 sob a curva (AUC) para todos os grupos de tratamento. Os animais tratados com o (-) halofenato apresentaram reduções significativas na área da glucose em relação aos controlos tratados com veiculo. Embora a AUC tenha diminuído nos grupos tratados com o racemato ou ( + ) halofenato, os efeitos não foram tão grandes como nos ratos tratados com (-) halofenato e as diferenças não foram estatisticamente significativas.

As alterações na sensibilidade à insulina foram avaliadas através da monitorização da queda na glucose após uma injecção intravenosa de insulina. 0 declínio da linha é uma indicação directa da sensibilidade à insulina do animal de teste. Como

apresentado na Figura 8, a sensibilidade à insulina foi melhorada significativamente após 5 dias de tratamento com (-) halofenato comparado com os controlos tratados com veículo (p < 0,01) e os animais tratados com ( + ) halofenato (p < 0,05). O tratamento com (+) halofenato teve um efeito pequeno na sensibilidade à insulina que não foi significativamente diferente do controlo tratado com veículo (p = 0,083). O tratamento com (-) halofenato reduziu substancialmente a resistência à insulina nos ratos gordos Zucker, um modelo bem estabelecido de Tolerância à Glucose Diminuída e resistência à insulina. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 11

Este exemplo refere-se à actividade dos compostos para baixar o nível de lípidos. 73 ΕΡ1614418Β1 A. Materiais e métodos

Foram obtidos de GMI Laboratories (Indianapolis, IN) ratos Zucker gordos diabéticos (ZDF) machos de 9 semanas de idade. Foram administrados veiculo ou enantiómeros de halofenato através de sonda esofágica oral numa base diária com início aos 74 dias de idade. As amostras de sangue inicias foram obtidas para análise um dia antes do tratamento e nos tempos indicados no protocolo do tratamento. 0 sangue foi analisado em relação aos triglicéridos e colesterol no plasma através de técnicas convencionais. B. Resultados

Na experiência I os animais receberam uma dose de 25 mg/kg/dia. Como apresentado na Figura 9A e na Figura 9B, foi observada uma diminuição significativa no colesterol do plasma apenas nos animais tratados com o (-)halofenato após 7 e 13 dias de tratamento. Na Experiência II, os animais aos 107 dias de idade receberam doses diárias de 12,5 mg/kg/dia ou 37,5 mg/kg/dia dos enantiómeros (-) e (+) de halofenato. Como observado na Figura 10A e na Figura 10B, o colesterol no plasma foi significativamente mais baixo na dose elevada após 7 dias mas não após 14 dias de tratamento com o ( + ) halofenato. Em contraste, para o (-) halofenato na dose inferior, foi observada uma diminuição significativa no colesterol após 7 dias. Na dose elevada foi observado um declínio muito maior no colesterol no plasma que foi óbvio após 7 e 14 dias de tratamento. Como observado na Figura 11A e Figura 11B, foi também observada uma diminuição significativa nos triglicéridos do plasma 7 dias após o tratamento a uma dose elevada, que foi de maior magnitude nos animais tratados com o enantiómero (-) do halofenato. 74 ΕΡ1614418Β1 EXEMPLO DE REFERÊNCIA 12

Este exemplo refere-se a uma actividade de baixar os níveis de glucose dos análogos de (±) halofenato e análogos de (-) halofenato. A. Materiais e métodos

Foram adquiridos a The Jackson Laboratory murganhos C57BL/6J ob/ob, machos, de 8-9 semanas de idade, (Bar Harbor, ME, USA) . Os animais foram colocados em gaiolas (4-5 murganhos/gaiola) em condições de laboratório convencionais a 22 ± 3°C de temperatura e 50 ± 20% de humidade relativa, e foram mantidos numa dieta de ração de Purina para roedores e água ad libitum. Antes do tratamento, o sangue foi recolhido a partir da veia da cauda de cada animal. Foram utilizados os murganhos que tinham níveis de glucose no plasma em condições de não jejum entre 250 e 500 mg/dl . Cada grupo de tratamento consistiu em 8-10 murganhos que foram distribuídos de modo a que os níveis médios de glucose fossem equivalentes em cada grupo no início do estudo. Os murganhos foram doseados oralmente por sonda esofágica uma vez por dia durante 1-3 dias com veículo, ácido (-) halofénico, análogo (±) 14, 29, 33, 34, 35, 36, 37, ou 38 a 125 mg/kg ou análogo (-) 29, 36, 37 ou 38 a 150 mg/kg. Os compostos foram distribuídos numa formulação líquida contendo 5% (v/v) de sulfóxido de dimetilo (DMSO) , 1% (v/v) de tween 80 e 0,9% (p/v) de metilcelulose. O volume da sonda esofágica foi de 10 mL/kg. As amostras de sangue foram recolhidas às 6 horas após cada dose e analisadas em relação à glucose no plasma. A ingestão de alimentos e o peso corporal foram medidos diariamente. As concentrações de glucose no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando o método da glucose oxidase (Sigma 75 ΕΡ1614418Β1

Chemical Co, St. Louis, MO, USA) . A diferença significativa entre os grupos (comparando tratados com fármaco com tratados com veículo) foi avaliada utilizando o teste t de Student não emparelhado. B. Resultados

Como ilustrado na Tabela 2, os compostos foram avaliados em 5 experiências diferentes. Uma única dose de ácido (-) halofénico reduziu significativamente as concentrações de glucose no plasma às 6 horas. 0 análogo 14 baixou significativamente as concentrações de glucose no plasma às 6, 30 e 54 horas. O análogo 33 baixou significativamente as concentrações de glucose no plasma às 6 e 54 horas. O análogo 29 e 38 baixaram significativamente as concentrações de glucose no plasma às 6, 30 e 54 horas. O análogo 35 e 36 baixaram significativamente as concentrações de glucose no plasma às 30 e 54 horas. O análogo 37 baixou significativamente as concentrações de glucose no plasma às 54 horas. Uma dose única dos análogos (-) 29, 36, 37 e 38 reduziram significativamente as concentrações de glucose no plasma às 6 horas. Os tratamentos com o composto não afectaram a ingestão de alimento do animal e o peso corporal.

76 ΕΡ1614418Β1

Tabela 1: Análogos de (±) e (—) Halofenato. Compostos descritos em referência à Fórmula II.

Composto Na. X cx3 R* Ácido halofénico Cl cf3 H 14 F cf3 (CH2) 2NHAc 29 Br cf3 (CH2) 2NHAc 33 Cl cf3 (CH2)3CH3 35 Cl cf3 (CH2) 2N(CH3) 2 36 Cl cf3 (CH2) 2NHCOPh 37 Cl cf3 CH2CONH2 38 Cl cf3 CH2CON (CH3) 2

Tabela 2 Actividades de Reduzir os Níveis de Glucose de (±)Halofenato e Análogos de (-)Halofenato

Pré-dose 6 horas 30 horas 54 horas Glucose (mg/mL) Glucose (mg/mL) Valor de P vs. veh Glucose (mg/mL) Valor de P vs. veh Glucose (mg/mL) Valor de P vs. veh Veículo 318 ± 18 303 ± 19,8 NA NA Ácido (-) halofénico 312,9 ± 17,7 163,8 ± 11,8 0,0011 NA NA Veículo 360,2 ± 27,8 405, 8 ± 25, 8 356, 0 ± 27, 6 386, 1 ± 20, 6 Análogo (±) 14 361,0 ± 17,1 328,9 ± 34,1 0,0444 267,0 ± 21,3 0,0099 293, 0 ± 29, 4 0,0092 Veiculo 291,6 ± 18,5 363, 0 ± 25,1 340,8 ± 30,0 351,5 ± 23, 8 Análogo (±) 33 292,0 ± 19,1 227,5 ± 13,2 0,0001 298,0 ± 15, 3 0,1119 286, 6 ± 9, 9 0,0125 Veiculo 387,1 ± 14,3 371,5 ± 24,2 326,2 ± 22,5 374,0 ± 37, 9 Análogo (±) 29 387,1 ± 16, 0 299, 7 ± 24,5 0,0259 237,4 ± 14, 9 0,0020 293,3 ± 9, 7 0,0268 Análogo (±) 387,0 ± 319, 6 ± 0,0834 276, 8 ± 0,0504 286,2 ± 0,0458 77 ΕΡ1614418Β1

35 18,0 26, 7 17, 6 31,5 Análogo (±) 37 387,4 ± 18,8 345, 4 ± 19, 7 NS 312,5 ± 21,7 NS 385, 1 ± 14,7 0,0210 Veiculo 329, 6 ± 16, 1 362,8 ± 23,2 346, 5 ± 24,6 379,2 ± 24,4 Análogo (±) 36 329,7±17,6 300,5±27,3 0,0522 249,7±8,6 0,0008 272,2±18,4 0,0013 Análogo (±) 38 329,4±18,9 303,2±18,2 0,0312 245,6±15,6 0,0014 243,1±10,6 0,0000 Veiculo 373,0±13,6 405,8±33,7 NA NA Análogo (-) 36 373,2±15,5 281,1±18,2 0,0019 NA NA Análogo (-) 37 373,4±16,1 271,7±22,5 0,0018 NA NA Análogo (-) 38 373,4±16,1 251,2±23,6 0,0007 NA NA Análogo (-) 29 372,2+17,1 333,5±16,1 0,0353 NA NA EXEMPLO DE REFERENCIA 13

Este exemplo refere-se a uma comparaçao entre as actividades de (-) halofenato e (+) halofenato. A. Materiais e métodos

Foram adquiridos ratos machos de 8-9 semanas de idade ZDF a Genetic Models, Inc. (Indianapolis, IN). Os animais foram colocados em gaiolas (3 ratos/gaiola) em condições de laboratório convencionais a 22 ± 3°C de temperatura e 50 ± 20% de humidade relativa, e foram mantidos numa dieta de ração de

Purina para roedores e água ad libitum. Antes do tratamento, foi recolhido sangue da veia da cauda de cada animal. Os ratos que tinham níveis de glucose no plasma após 4 horas de jejum entre 200 e 500 mg/dl foram utilizados. Cada grupo de tratamento consistiu em 8-10 ratos que foram distribuídos de modo a que os 78 ΕΡ1614418Β1 níveis de glucose médios foram equivalentes em cada grupo no início do estudo. Os ratos foram doseados oralmente através de sonda esofágica uma vez por dia durante 3 dias com veículo, (-) halofenato ou (+) halofenato a 50 mg/kg. Os compostos foram distribuídos numa formulação líquida contendo 5% (v/v) de sulfóxido de dimetilo (DMSO) , 1% (v/v) tween 80 e 0,9% (p/v) de metilcelulose. O volume da sonda esofágica foi de 5 mL/kg. Foram retiradas amostras de sangue às 5 horas após a dose nos dias 2 e 3. As concentrações de glucose no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando o método da glucose oxidase (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA) . A diferença significativa entre grupos (comparando os tratados com fármaco e os tratados com veículo) foi avaliada utilizando o teste t de Student não emparelhado. B. Resultados A administração oral de (-) halofenato a 50 mg/kg reduz significativamente as concentrações da glucose no plasma, embora o (+) halofenato nos mesmos níveis de dosagem não conseguiram reduzir as concentrações de glucose no plasma em comparação com animais tratados com veiculo (Figura 12). EXEMPLO 14

Este exemplo refere-se a um estudo farmacocinético de (±) halofenato e (-) halofenato. A. Materiais e métodos

Foram adquiridos ratos machos de 225-250 g SD a Charles River. Os animais foram colocados em gaiolas (3 ratos/gaiola) em 79 ΕΡ1614418Β1 condições de laboratório convencionais a 22 ± 3°C de temperatura e 50 ± 20% de humidade relativa, e foram mantidos numa dieta de ração de Purina para roedores e água ad libitum. Foi colocado um cateter na artéria carótida esquerda sob pentobarbital de sódio (50 mg/kg i.p.) e os animais foram deixados recuperar durante 2 dias antes do tratamento. Foram administradas doses únicas de (±) halofenato ou (-) halofenato a 50 mg/kg através de sonda esofágica oral. Os compostos foram distribuídos numa formulação líquida contendo 5% (v/v) de sulfóxido de dimetilo (DMSO), 1% (v/v) de tween 80 e 0,9% (p/v) de metilcelulose. O volume da sonda esofágica foi de 5 mL/kg. As amostras de sangue foram recolhidas a 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a dose. As amostras de plasma foram analisadas para cada ácido enantiomérico (ácido (-) halofénico e ácido (+) halofénico) através de um ensaio de HPLC específico quiral, uma vez que os ésteres são pró-fármacos, que são concebidos para se converterem nos seus ácidos enantioméricos respectivos in vivo. B. Resultados

Após a administração oral de (±) halofenato, ambos o ácido (-) halofénico e o ácido (+) halofénico foram detectados nas amostras de plasma. Como apresentado na tabela 3, pareceu que os dois ácidos enantioméricos tinham diferentes perfis disposicionais. A eliminação do ácido (-) halofénico foi muito mais lenta do que a do ácido ( + ) halofénico. Como resultado, a AUC do ácido (-) halofénico foi significativamente superior do que a AUC para o ácido (+) halofénico, 4708,0 vs. 758,0 pg-h/mL e a semi-vida terminal foi de 46,8 vs. 14,3 horas.

Após a administração oral de (-) halofenato, o perfil disposicional do ácido (-) halofénico foi basicamente idêntico à 80 ΕΡ1614418Β1 administração do (±) halofenato na medida em que a semi-vida terminal é a mesma (Tabela 2) . A Cmax e a AUC do ácido (±) halofénico foram proporcionalmente mais elevados simplesmente devido à quantidade mais elevada de (-) halofenato administrado (Tabela 3). 0 ácido (+) halofénico também foi detectado no plasma, mas a concentração foi muito mais baixa do que a do ácido (-) halofénico. Foi especulado que o ácido (+) halofénico se formou in vivo uma vez que a semi-vida terminal (Ti$) de ambos os ácidos foi semelhante.

Estes resultados sugerem que a utilização de (-) halofenato é mais desejável uma vez que a AUC do ácido (-) halofénico foi significativamente superior à AUC para o ácido (+) halofénico.

Tabela 3: Análise farmacocinética de Halofenato (-) (Enantiómero -) e Halofenato (+) (Enantiómero +) Fármaco administrado (-) Halofenato (N = 3) (-) Halofenato (N = 1) Enantiómero - + - + Dose administrada* 50 mg/kg 0 (metabolito) 25 mg/kg 25 mg/kg Cmax (gg/mL) 114,6 ± 29,7 2,4 ± 0,5 65,2 30,5 Tmax (horas) 8-12 6-12 12 6 AUC (μς . h/mL) 7159 ± 1103 164,3 ± 79,3 4708 758 Tíí (horas) 46,4 ± 4,7 41,7 ± 11,8 46, 8 14,3 A dose de cada enantiómero em (±) halofenato é 50% da dose total da mistura racémica. 81 ΕΡ1614418Β1

Tabela 4: Concentrações no plasma de ácido (-) halofénico e ácido (+) halofénico após uma única dose de (-) halofenato.

Tempo Composto analisado (pg/mL) (horas) ácido (-) halofénico ácido (+) halofénico Rato 8 Rato 9 Rato 11 Rato 8 Rato 9 Rato 11 0 BOL BOL BOL BOL BOL BOL 1 81,2 23, 7 61, 0 1, 12 BOL BOL 2 100, 1 30,4 87, 8 1,27 BOL 1, 09 4 122,3 36, 9 94,5 1, 67 BOL 1, 95 6 128,3 5 6,5 116, 3 2, 96 BOL 1,73 8 128,2 79,0 127, 8 2,58 BOL 2, 06 12 135, 3 80, 6 104, 8 2, 85 2,23 2, 08 24 82,5 73, 1 66, 5 2,22 1,29 1, 86 48 56,2 44,5 47, 1 1, 64 1, 03 1, 14 72 39, 7 37,4 30, 8 1,25 BQL BQL 96 31, 1 N/A 24, 6 BQL N/A BQL 120 20,3 N/A N/A BQL N/A N/A *BQL = Abaixo do Limite Quantificável <1,0 pg/mL N/A = amostra não disponível EXEMPLO DE REFERÊNCIA 15

Este exemplo refere-se à prevenção do desenvolvimento da diabetes e ao alívio de hipertrigliceridemia pelo (-) halofenato. A. Materiais e métodos

Foram adquiridos murganhos machos, de 4 semanas de idade, C57BL/6J db/db murganhos a The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA). Os animais foram colocados em gaiolas (5 82 ΕΡ1614418Β1 murganhos/gaiola) em condições de laboratório convencionais a 22 ± 3°C de temperatura e 50 ± 20% de humidade relativa, e foram mantidos numa dieta de ração Purina para roedores (#8640) e água ad libitum. Antes do tratamento, foi recolhido sangue da veia da cauda de cada animal para determinar as concentrações de glucose, insulina e triglicéridos no plasma. Os murganhos foram distribuídos de modo a que os níveis médios de glucose e o peso corporal fossem equivalentes em cada grupo no início do estudo. 0 grupo de controlo (20 murganhos) foi colocado sob ração em pó misturada com 5% de sacarose e o grupo de tratamento (20 murganhos) foi colocado sob ração em pó misturada com 5% de sacarose e (-) halofenato. A quantidade de (-) halofenato na ração foi ajustada continuamente de acordo com o peso corporal do animal e a ingestão de alimentos para encontrar a dosagem alvo de 150 mg/kg/dia. Foram retiradas amostras de sangue às 8-10 AM uma vez por semana durante 9 semanas em condições de não jejum. A ingestão de alimentos e o peso corporal foram medidos a cada 1-3 dias. As concentrações de glucose e de triglicéridos no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando kits de Sigma Chemical Co (N° . 315 e N° . 339, St. Louis, MO, USA) . Os níveis de insulina no plasma foram medidos utilizando o kit de ensaio de RIA adquirido a Linco Research (St. Charles, MO).

Foram avaliadas as diferenças significativas entre os grupos (comparando os tratados com o fármaco com os tratados com o veículo) utilizando o teste t de Student não emparelhado. B. Resultados

Os murganhos C57BL/6J db/db às 4 semanas de idade estão num estado pré-diabético. As suas concentrações de glucose no plasma são normais, mas as concentrações de insulina no plasma são significativamente elevadas. Como ilustrado na Figura 13, as 83 ΕΡ1614418Β1 concentrações de glucose no plasma em ambos os grupos foram normais no início da experiência. Após o decurso normal do desenvolvimento da diabetes, os níveis de glucose no plasma no grupo de controlo aumentou progressivamente à medida que os animais envelheceram, enquanto o aumento dos níveis de glucose no plasma no grupo tratado com (-) halofenato foi evitado ou atrasado significativamente. Como apresentado na Figura 15, cerca de 30% dos murganhos não desenvolveu diabetes no grupo tratado com (-) halofenato quando a diabetes é definida como níveis de glucose no plasma >250 mg/dl . Por outro lado, nenhum dos murganhos no grupo de controlo estava livre da diabetes às 10 semanas de idade. Consistente com a descoberta de glucose no plasma, a insulina no plasma no grupo de controlo diminuiu progressivamente, indicando deterioração da capacidade do pâncreas para secretar insulina. O tratamento com (-) halofenato manteve a concentração de insulina no plasma, indicando a prevenção da deterioração da função pancreática (Figura 14). A Figura 16 apresenta a progressão das concentrações de triglicéridos no plasma versus a idade em murganhos C57BL/6J db/db. A administração de (-) halofenato aliviou o aumento da concentração de triglicéridos no plasma durante o decorrer da experiência. EXEMPLO 16

Este exemplo descreve a preparação de (-) 2-Acetamidoetil 4-Clorofenil-(3-trifluoro metilfenoxi)-acetato((-halofenato). 84 ΕΡ1614418Β1

Foi combinado ácido 4-clorofenilacático com 1,2-dicloroetano e a solução resultante foi aquecida até 45°C. Foi adicionado cloreto de tionilo à mistura de reacção, que foi aquecida a 60°C durante 18 horas. A reacção foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente e foi então adicionada lentamente a uma solução de N-acetiletanolamina em diclorometano. Após agitação durante 30 min., a reacção foi interrompida com carbonato de potássio aquoso e tiossulfato de sódio. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre sulfato de magnésio e filtrada. A remoção do solvente através de evaporação sob rotação proporcionou N-acetilaminoetil 2-bromo-2-(4-clorofenil)acetato como um óleo.

Foi adicionado 3-hidroxibenzotrifluoreto a uma solução de hidróxido de potássio em isopropanol. Foi adicionado N-acetilaminoetil 2-bromo-2-(4-clorofenil) acetato em isopropanol à solução de isopropanol/fenóxido e agitado à temperatura ambiente durante 4 horas. 0 isopropanol foi removido através de destilação sob vácuo, e a lama resultante foi dissolvida em acetato de etilo e lavada duas vezes com água e uma vez com soro fisiológico. Após secagem sobre sulfato de magnésio e filtração, o solvente foi removido para produzir um produto bruto como um 85 ΕΡ1614418Β1 óleo. 0 produto bruto foi dissolvido numa mistura de tolueno/hexanos quente (1:1 v/v) e arrefecido até entre 0 e 10°C para cristalizar o produto. 0 bolo do filtrado foi lavado com hexanos/tolueno (1:1 v/v) e depois seco sob vácuo a 50°C. 0 sólido isolado foi dissolvido em isopropanol 1:6 (v/v) em hexanos quente. Após o arrefecimento, o racémico puro 2-Acetamidoetil 4-Clorofenil-(3-trifluoro metilfenoxi)-acetato formou-se como um sólido cristalino. 0 sólido foi recolhido através de filtração, o bolo do filtrado foi lavado com 1:6 (v/v) isopropanol em hexanos e seco sob vácuo a 50°C. O composto racémico foi dissolvido numa solução de 20% de isopropanol (IPA) e 80% de hexano a 2,5% (p/p) . A solução resultante foi passada sobre uma Whelk-0 R, R Chiral Stationary Phase (CSP) de um modo continuo até >98% ee do extracto poder ser removido. O solvente foi evaporado a partir do extracto sob pressão reduzida para produzir (-) 2-Acetamidoetil 4-Clorofenil-(3-trifluoro metilfenoxi)-acetato. (A resolução de Leito em

Movimento Simulado foi realizada através de Universal Pharm Technologies LLC of 70 Flagship Drive, North Andover, MA 01845.) EXEMPLO 17

Este exemplo refere-se à descida dos níveis de ácido úrico no plasma através da administração de (-) halofenato. A. Materiais e métodos

Ratos SD machos, com um peso de 275-300 g foram adquiridos a Charles River. Os animais foram colocados em gaiolas (3 ratos/gaiola) em condições convencionais de laboratório a 22 ± 3°C de temperatura e 50 ± 20% de humidade relativa, e foram 86 ΕΡ1614418Β1 mantidos numa dieta em pó de ração Purina para roedores (#8640) e água ad libitum. Para estabelecer um estado hiperuricémico, os animais foram colocados numa dieta contendo 2,5% (p/p) de ácido oxónico (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA) ao longo da experiência. O ácido oxónico eleva o ácido úrico no plasma através da inibição da uricase. Os ratos foram rastreados para os níveis de ácido úrico no plasma 3 dias após terem sido colocados sob a dieta, e aqueles que tinham níveis extremos de ácido úrico no plasma foram excluídos. Os ratos foram atribuídos a um dos três grupos e os níveis de ácido úrico médio foram equivalentes em cada grupo. Os ratos foram doseados oralmente através de sonda esofágica uma vez por dia durante 3 dias com veículo, (-) halofenato ou (+) halofenato a 50 mg/kg. No quarto dia, os ratos respectivos receberam (-) halofenato ou (+) halofenato a 100 mg/kg e todos os ratos receberam uma injecção i.p. de ácido oxónico (250 mg/kg) 4 horas após a sonda esofágica oral. O (-) halofenato e o (+) halofenato foram distribuídos numa formulação líquida contendo 5% (v/v) de sulfóxido de dimetilo (DMSO) , 1% (v/v) de tween 80 e 0,9% (p/v) de metilcelulose. O ácido oxónico foi distribuído numa formulação líquida contendo 0,9% (p/v) de metilcelulose. Os volumes da sonda esofágica e da injecção foram de 5 mL/kg. Foram retiradas amostras de sangue 6 horas após a sonda esofágica oral no dia 4. Os níveis de ácido úrico no plasma foram determinados colorimetricamente utilizando o Infinity Uric Acid Reagent (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA) . A diferença significativa entre os grupos (comparando os tratados com fármaco com os tratados com veículo) foi avaliada utilizando o teste t de Student não emparelhado. 87 ΕΡ1614418Β1 B. Resultados

Como apresentado na Figura 17, a administração oral de (-) halofenato reduziu significativamente os níveis do ácido úrico no plasma. (+) Halofenato também baixou os níveis de ácido úrico no plasma, mas não foi estatisticamente significativo. EXEMPLO 18

Este exemplo refere-se à inibição das isoformas do citocromo P450 pelos compostos. A. Materiais e métodos

Foram utilizados os seguintes substratos de sonda para investigar o potencial inibidor do artigo a testar nas isoformas do citocromo P450 1A2, 2A6 , 2C9, 2C19, 2D6, 2E1 e 3A4: 100 μΜ fenacetina (CYP1A2), 1 μΜ coumarina (CY) 2A6) , 150 μΜ tolbutamida (CYP2C9) , 50 μΜ S-mefenitoína (CYP2C19), 16 μΜ dextrometorfano (CYP2D6) , 50 μΜ clorzoxazona (CYP2E1), e 80 μΜ testosterona (CYP3A4). A actividade de cada isoforma foi determinada em microssomas hepáticos humanos na presença e ausência do artigo a testar.

Salvo referência em contrário, todas as incubações foram realizadas a 37°C. 0 tamanho da amostra foi de N = 3 para todas as condições de teste e controlo positivo e N = 6 para todas as condições de veículo de controlo. 0 ácido (-) halofénico (PM = 330) foi preparado à temperatura ambiente como stocks de 1000X em metanol, depois diluído com tampão Tris para alcançar concentrações finais de 0,33, 1,0, 3,3, 10 e 33,3 μΜ, cada uma contendo metanol a 0,1%. Foi incluído um veículo de controlo 88 ΕΡ1614418Β1 (VC) consistindo em microssomas e substrato em tampão Tris contendo metanol a 0, 1% sem o artigo a testar, para todos os grupos experimentais. Foram preparadas misturas de controlo positivo (PC) utilizando os seguintes inibidores de CYP450 conhecidos: 5 μΜ furafilina (CYP1A2), 250 μΜ tranilcipromina (CYP2A6), 50 μΜ sulfafenazole (CYP2C9), 10 μΜ omeprazole (CYP2C19), 1 μΜ quinidina (CYP2D6), 100 μΜ 4-metilpirazole (CYP2E1), e 5 μΜ cetoconazole (CYP3A4). Foi incluído um controlo de interferência cromatográfica (CIC) para investigar a possibilidade de interferências cromatográficas pelo artigo a testar e os seus metabolitos. O artigo a testar (a 33,3 pg/mL) foi incubado com IX de proteína microssómica, IX NRS, e 10 pL de um orgânico apropriado durante um período de tempo apropriado como descrito abaixo.

Foram utilizados neste estudo lotes estáveis, congelados de microssomas hepáticos misturados de homens e mulheres adultos preparados através de centrifugação diferencial de homogenatos de fígado (ver, e.g., Guengerich, F.P. (1989) . Analysis and characterization of enzymes. In Principies and Methods of Toxicology (A.W. Hayes, Ed.), 777-813. Raven Press, New York.).

Foram preparadas misturas de incubação em tampão Tris para conter proteína microssómica (1 mg/mL), cada concentração dos substratos de sonda (como stocks de 100X), e o artigo a testar (a cada concentração) ou PC como apropriado para cada isoforma.

Após uma pré-incubação de 5-minutos a 37° C, o sistema de regeneração de NADPH (NRS) foi adicionado para iniciar as reacções, e as amostras foram incubadas a 37 °C durante os seguintes períodos de tempo: 30 minutos para fenacetina (CYP1A6), 20 minutos para a coumarina (CYP2A6) , 40 minutos para tolbutamida (CYP2C9), 30 minutos para S-mefenitoína (CYP2C19), 15 minutos para dextrometorfano (CYP2D6), 20 minutos para 89 ΕΡ1614418Β1 clorozoxazona (CYP2E1), e 10 minutos para testosterona (CYP3A4). As reacções de incubação foram terminadas no tempo apropriado com a adição de um volume igual de metanol, excepto para as incubações com S-mefenitoína, que foram terminadas com a adição de 100 pL de ácido perclórico. Todos os substratos foram avaliados próximo das suas respectivas concentrações de Km, como anteriormente indicado.

Após cada incubação, as actividades das isoformas de P450 foram determinadas através da medição das taxas de metabolismo para os respectivos substratos de sonda. Os metabolitos monitorizados para cada substrato de sonda foram como se segue: acetaminofeno para CYP1A2; 7-hidroxicoumarina para CYP2A6; 4-hidroxitolbutramida para CYP2C9; 4-hidroximefenitoína para CYP2C19; dextrorfano para CYP2D6; 6-hidroxiclorzoxazona para CYP2E1; e 6β-hidroxitestosterona para CYP3A4. As actividades foram analisadas utilizando HPLC (In Vitro Technologies, Inc., Baltimore, MD). A inibição foi calculada utilizando a seguinte equação:

Percentagem de inibição = [(veiculo de controlo - tratamento)/ veículo de controlo] x 100

Os resultados a percentagem de inibição para o artigo de teste foram apresentados num formato de tabela. As estatísticas descritivas (média e desvio padrão) da concentração de cada artigo de teste foram calculadas, depois apresentadas para demonstrar a potência de inibição. Os valores da IC50 foram também calculados para o artigo de teste utilizando uma equação de ajuste de curva de 4 parâmetros utilizando Softmax 2.6.1. 90 ΕΡ1614418Β1

As medições de tempo, temperatura, e concentração neste exemplo são aproximadas. B. Resultados

Os resultados para cada uma das 7 isoformas de citocromo P450, expressos como actividade metabólica e percentagem de inibição, são apresentados nas Tabelas 5-8. 0 ácido (-) halofénico inibiu a produção de 4-hidroxitolbutamida (CYP2C9, IC50 = 11 μΜ) e também inibiu a produção de 4-hidroximefenitoina (CYP2C19) nos níveis de dose de 10 e 33 μΜ. A inibição de outras isoformas de CYP450 não foi observada. Deve ser referido que a IC50 para CYP2C9 nesta experiência foi de aproximadamente três vezes a relatada no Exemplo 7 (11 μΜ em comparação com 3, 6 μΜ) .

Este resultado é muito provavelmente devido a, pelo menos em parte, à utilização de uma pureza inferior do ácido (-) halofénico (ee inferior) no Exemplo 7.

Tabela 5: Actividades microssómicas hepáticas de fenacetina (CYP1A2) e coumarina (CYP2A6) em microssomas humanos de homens e mulheres incubados com ácido (-) halofénico em doses de 0,33, 1,0, 3,3, 10, e 33,3 pM

Controlo/ Artigo a testar Cone. (μΜ) Fenacetina Coumarina Produção de AC (pmol/tng proteína/min) % Inibição Produção de 7-HC (pmol/mg proteína/min) % Inibição CIC 33, 3 0,00 ± 0,00 NA 0,00 ± 0,00 NA vc 0,1% 118 ± 2 0 32,0 ± 1,4 0 FUR 5 54,5 ± 1,3 54 NA NA TRAN 250 NA NA 0,00 ± 0,00 100 Ácido (-) 0,33 116 ± 2 1 33,3 ± 0,7 -4 halofénico 1,0 118 ± 2 0 32, 6 ± 0,7 -2 3,3 119 ± 2 -1 32,1 ±0,7 0 10 119 ± 2 -1 33,1 ± 0,7 -3 33, 3 119 ± 2 -1 32,3 ±0,7 -1 IC50 NA NA Os valores são a média ± o desvio padrão de N = 3 amostras (VC: N = 6). Abreviaturas: Cone, concentração; AC, acetaminofeno, 7-HC, 7-hidroxicoumarina; CIC, controlo de interferência cromatográfica, VC, veiculo de controlo (metanol a 0,1%); NA não aplicável; FUR, furafilina; TRAN, tranilcipromina. 91 ΕΡ1614418Β1

Tabela 6: Actividades mlcrossómlcas hepáticas de tolbutamida (CYP2C9) e S-mefenitoina (CYP2C19) em mlcrossomas humanos de homens e mulheres Incubados com ácido (-) halofénico em doses de 0,33, 1,0, 3,3, 10, e 33,3 pM

Controlo/ Artigo a testar Cone. <μΜ) Tolbutamida S-mefenitoína Produção de 4—OH TB (pmol/mg proteína/min) % Inibição Produção de 4—OH ME (pmol/mg proteína/min) % Inibição CIC 33, 3 0,00 ± 0,00 NA 0,00 ± 0,00 NA VC 0,1% 43,0 ± 1,4 0 3,17 ± 0,29 0 OMP 10 NA NA 1,58 ± 0,05 50 SFZ 50 BQL -100 NA NA Ácido (-) 0,33 41,0 ± 0,9 5 3,03 ± 0,03 4 halofénico 1,0 38, 6 ± 0,5 10 3,01 ± 0,07 5 3, 3 34,2 ± 0,2 21 2,69 ± 0,12 15 10 22,07 ±0,6 47 2,43 ± 0,09 23 33,3 12,7 ±0,2 71 1,80 ± 0,07 43 IC50 -11,335 μΜ >33,3 μΜ

Os valores são a média ± o desvio padrão de N = 3 amostras (VC: N = 6) . Abreviaturas: Cone, concentração; 4-OH TB, 4-hidroxitolbutamida; 4-OH ME, 4-hidroximefenitoína; CIC, controlo de interferência cromatográfica; VC, veiculo de controlo (metanol a 0,1%); NA, não aplicável; OMP, omeprazole; SFZ, sulfafenazole, BQL, abaixo do limite quantificável.

Tabela 7: Actividades microssómicas hepáticas de dextrometorfano (CYP2D6) e clorzoxazona (CYP2E1) em microssomas humanos de homens e mulheres incubados com ácido (-) halofénico em doses de 0,33, 1,0, 3,3, 10, e 33,3 pM

Controlo/ Artigo a testar Cone. (μΜ) Dextrometorfano Clorzoxazona Produção de DEX (pmol/mg proteína/min) % Inibição Produção de 6—OH CZX (pmol/mg proteína/min) % Inibição CIC 33,3 0, 00 ± 0,00 NA 0,00 ± 0,00 NA VC 0, 1% 111 ± 6 0 24 6 ± 5 0 4-MP 100 NA NA BQL -100 QUIN 1 BQL -100 NA NA Ácido (-) 0,33 107 ± 4 3 238 ± 4 3 halofénico 1,0 110 ± 2 1 244 ± 1 1 3,3 104 ± 3 6 239 ± 4 3 10 107 ± 1 4 244 ± 6 1 33,3 106 ± 4 5 239 ± 4 3 IC50 NA NA Os valores são a média ± o desvio padrão de N = 3 amostras (VC: N = 6) . Abreviaturas: Cone, concentração; DEX, dextrofano; 6-OH CZX, 6-hidroxiclorozoxazona; CIC, controlo de interferência cromatográfica; VC, veiculo de controlo (metanol a 0,1%); NA, não aplicável; 4- MP, 4-metilpirazole; QUINN, quinidina, BQL, abaixo do limite quantificável. 92 ΕΡ1614418Β1

Tabela 8: Actividades mlcrossomals hepáticas da testosterona (CYP3A4) em mlcrossomas humanos de homens e mulheres Incubados com doses de ácido (-) halofénlco de 0,33, 1,0, 3,3, 10, e 33,3 μΜ

Controlo/artigo a testar (Cone. μΜ) Testosterona Produção de 6β-ΟΗΤ (pmol/mg proteina/min) % Inibição CIC 33, 3 0,00 ± 0,00 NA vc 0,1% 1843 ± 9 0 KTZ 5 32,4 ± 0,2 98, 2 (-) 0, 33 1816 ± 12 1,5 Acido halofénico 1, 0 1851 ± 14 0 3, 3 1810 + 3 1,8 10 1819 ± 4 1,3 33, 3 1816 ± 6 1,5 IC50 NA Os valores são a média ± o desvio padrão de N = 3 amostras (VC: N = 6) . Abreviaturas: Cone, concentração; 6β- OHT, ββ-hidroxitestosterona ; CIC, controlo de interferência cromatográfica; VC veículo de controlo (metanol e 0,1%); NA, não aplicável; KTZ, cetoconazole; BQL, abaixo do limite quantificável.

Embora a invenção anterior tenha sido descrita em detalhe para efeitos de clareza de entendimento, é óbvio que podem ser realizadas certas modificações dentro do âmbito das reivindicações em anexo.

Lisboa, 3 de Novembro de 2011 93

Claims (12)

1. ΕΡ1614418Β1 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização do estereoisómero (-) de um composto de Fórmula I,

   R é um membro seleccionado a partir do grupo que consiste num hidroxilo, aralcoxilo inferior, di-alquilamino inferior-alcoxilo inferior, alcanamido inferior alcoxilo inferior, benzamido-alcoxilo inferior, ureido-alcoxilo inferior, Ν'-alquilo inferior-ureido-alcoxilo inferior, carbamoílo-alcoxilo inferior, alcoxilo inferior substituído por halofenoxilo, fenoxilo substituído por carbamoílo, carbonilo-alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior-alquilamido inferior, alquilamino inferior substituído por halo, alquilamino inferior substituído por hidroxilo, alquilamino inferior substituído por alcanoliloxilo inferior, ureido, e r alcoxicarbonilamino inferior; e cada X é independentemente um halogénio; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e ΕΡ1614418Β1 em que o estereoisómero (-) é substancialmente isento do estereoisómero (+) do composto, na preparação de um medicamento para tratar hiperuricemia num mamífero. Estereoisómero (-) de um composto de Fórmula I,

   R é um membro seleccionado a partir do grupo que consiste num hidroxilo, aralcoxilo inferior, di-alquilamino inferior-alcoxilo inferior, alcanamido inferior alcoxilo inferior, benzamido-alcoxilo inferior, ureido-alcoxilo inferior, Ν'-alquilo inferior-ureido-alcoxilo inferior, carbamoílo-alcoxilo inferior, alcoxilo inferior substituído por halofenoxilo, fenoxilo substituído por carbamoilo, carbonilo-alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior-alquilamino inferior, alquilamino inferior substituído por halo, alquilamino inferior substituído por hidroxilo, alquilamino inferior substituído por alcanoliloxilo inferior, ureido, e alcoxicarbonilamino inferior; e cada X é independentemente um halogénio; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e em que o estereoisómero (-) é substancialmente isento do estereoisómero (+) do composto, para utilização no tratamento de hiperuricemia num mamífero.
2. 2 ΕΡ1614418Β1
3. 3. Utilização da reivindicação 1 ou o composto da reivindicação 2 para utilização no tratamento de hiperuricemia num mamífero, em que o composto é um composto de Fórmula II,

   em que: R2 é um membro seleccionado a partir do grupo que consiste em fenil-alquilo inferior, alcanamido inferior- alquilo inferior, e benzamido- alquilo inferior.
4. 4. Utilização da reivindicação 1 ou o composto da reivindicação 2 para utilização no tratamento de hiperuricemia num mamífero, em que o composto é (-) 2-acetamidoetil 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) acetato.
5. 5. Utilização da reivindicação 1 ou o composto da reivindicação 2 para utilização no tratamento de hiperuricemia num mamífero, em que o medicamento é formulado para infusão intravenosa, distribuição transdérmica, ou distribuição oral.
6. 6. Utilização da reivindicação 1 ou o composto da reivindicação 2 para utilização no tratamento de hiperuricemia num mamífero, em que a quantidade administrada é 100 mg até 3000 mg por dia. 3 ΕΡ1614418Β1
7. 7. Utilização da reivindicação 2 para utilização no tratamento em que a quantidade administrada
8. 8. Utilização da reivindicação 2 para utilização no tratamento em que a quantidade administrada
9. 9. Utilização da reivindicação 2 para utilização no tratamento em que o estereoisómero (-) é trifluorometilfenoxi) acético aceitável. 1 ou o composto da reivindicação de hiperuricemia num mamífero, é 500 mg até 1500 mg por dia. 1 ou o composto da reivindicação de hiperuricemia num mamífero, é 1 até 250 mg por kg por dia. 1 ou o composto da reivindicação de hiperuricemia num mamífero, o ácido (-) 4-clorofenil-(3-i um seu sal farmaceuticamente
10. 10. Utilização ou composto de qualquer uma das reivindicações acima, em que o estereoisómero (-) é utilizado num excesso enantiomérico em relação ao estereoisómero (+) de pelo menos 80%.
11. 11. Utilização ou composto da reivindicação 10, em que o estereoisómero (-) é utilizado num excesso enantiomérico em relação ao estereoisómero (+) de pelo menos 98%.
12. 12. Utilização da reivindicação 1 ou o composto da reivindicação 2 para utilização no tratamento de hiperuricemia num mamífero, em que o mamífero é o humano. Lisboa, 3 de Novembro de 2011 4