PT1183020E - (3-tri-halometilfenoxi) (4-halofenil) para o tratamento de diabetes resistentes à insulina e de tipo 2 - Google Patents

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DESCRIÇÃO (3—TRI—HALOMETILFENOXI)(4—HALOFENIL) PARA O TRATAMENTO DE DIABETES RESISTENTES À INSULINA E DE TIPO 2

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se à utilização de derivados e composições de ácido (-)(3-tri-halometilfenoxi)(4-halofenil) acético no tratamento de diabetes resistentes à insulina, e de Tipo 2.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A diabetes mellitus, geralmente designada diabetes, refere-se a um processo de doença derivado de múltiplos factores responsáveis e caracterizado por níveis elevados de glicose plasmática, designado como hiperglicémia. Ver, e.g., LeRoith, D. et. al. , (eds.), DIABETES MELLITUS (Lippincott-Raven Publishers, Filadélfia, PA U.S.A. 1996), e todas as referências aí citadas. De acordo com a Associação Americana de Diabetes, estima-se que Diabetes mellitus afecte aproximadamente 6% da população mundial. A hiperglicémia descontrolada está associada à mortalidade aumentada e prematura devido a um risco maior para doenças microvasculares e macrovasculares, incluindo nefropatia, neuropatia, retinopatia, hipertensão, doença cerebrovascular e doença coronária cardíaca. Deste modo, o controlo da homeostase da glicose é uma abordagem extremamente importante para o tratamento da diabetes. 1

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Existem duas formas principais de diabetes: diabetes Tipo 1 (designada no passado como diabetes dependente da insulina ou IDDM); e diabetes Tipo 2 (designada no passado como diabetes não dependente da insulina ou NIDDM). A diabetes Tipo 1 é o resultado de uma deficiência absoluta de insulina, a hormona que regula a utilização da glicose. Esta deficiência de insulina é normalmente caracterizada por destruição das células β nos Ilhéus de Langerhans no pâncreas, o que normalmente conduz a deficiência absoluta de insulina. A diabetes Tipo 1 possui duas formas: Diabetes Mellitus Imunologicamente Mediada, que resulta de uma destruição autoimune das células β do pâncreas mediada de forma celular; e Diabetes Mellitus Idiopática, que se refere a formas da doença que não possuem etiologias conhecidas. A diabetes Tipo 2 é uma doença caracterizada por resistência à insulina acompanhada por deficiência de insulina relativa, em vez de absoluta. A diabetes Tipo 2 pode variar entre resistência predominante à insulina com deficiência de insulina relativa, a deficiência de insulina predominante com alguma resistência à insulina. Resistência à insulina é a capacidade diminuída da insulina de exercer a sua acção biológica numa gama larga de concentrações. Em indivíduos resistentes à insulina, o corpo segrega quantidades anormalmente elevadas de insulina para compensar para este defeito. Quando estão presentes quantidades inadequadas de insulina para 2

Proc. 3716 compensar a resistência à insulina e controlar adequadamente a glicose, desenvolve-se um estado de tolerância diminuída à glicose. Num número significativo de indivíduos, a segregação de insulina diminui ainda mais e o nível de glicose no plasma sobe, resultando no estado clínico de diabetes. A diabetes Tipo 2 pode ser devida a uma resistência profunda aos efeitos estimuladores reguladores no metabolismo da glicose e lípidos nos principais tecidos sensíveis à insulina: músculo, fígado e tecido adiposo. Esta resistência à capacidade de resposta à insulina resulta na activação insuficiente da incorporação de glicose pela insulina, oxidação e armazenamento no músculo e repressão inadequada de lipólise pela insulina da lipólise em tecido adiposo e da produção de glicose e segregação no fígado. Na diabetes Tipo 2, os níveis de ácidos gordos livres são geralmente elevados em pacientes obesos e alguns não obesos e a oxidação de lípidos é mais elevada. 0 desenvolvimento prematuro de ateroesclerose e a taxa crescente de doenças cardiovasculares e vasculares periféricas são características típicas de doentes com diabetes. A hiperlipidemia é um factor de precipitação importante para estas doenças. A hiperlipidemia é uma condição geralmente caracterizada por um aumento anormal dos lípidos do soro na corrente sanguínea e é um factor de risco importante no desenvolvimento de ateroesclerose e doença cardíaca. Para uma revisão de distúrbios do metabolismo dos lípidos, ver, e.g., Wilson, J. et. al., (ed.), Disorders of Lipid Metabolism, Capítulo 23, Livro Escolar de Endocrinologia, 9a Edição, (W. B. Sanders 3

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Company, Filadélfia, PA U.S.A. 1998; esta referência e todas as referências ai citadas são daqui em diante incorporadas por referência). As lipoproteínas do soro são os transportadores dos lipidos na circulação. São classificadas de acordo com a sua densidade: quilomicrons; lipoproteínas de muito baixa densidade (VLDL); lipoproteínas de densidade intermédia (IDL); lipoproteínas de baixa densidade (LDL); e lipoproteínas de alta densidade (HDL). A hiperlipidemia é normalmente classificada como primária ou hiperlipidemia secundária. A hiperlipidemia primária é geralmente causada por defeitos genéticos, enquanto que a hiperlipidemia secundária é geralmente causada por outros factores, tais como, vários estados de doença, fármacos, e factores da dieta. Alternativamente, a hiperlipidemia pode resultar de uma combinação de causas primárias e secundárias de hiperlipidemia. Os níveis elevados de colesterol estão associados com vários estados de doença, incluindo doença da artéria coronária, angina pectoris, doença da artéria carótida, enfartes, arteriosclerose cerebral, e xantoma. A dislipémia, ou níveis anormais de lipoproteínas no plasma sanguíneo, é uma ocorrência frequente entre diabéticos, e foi demonstrada ser um dos principais contribuidores para o aumento da incidência de eventos coronários e mortes entre sujeitos diabético (ver, e.g., Joslin, E. Ann. Chim. Med. (1927) 5: 1061-1079). Os estudos epidemiológicos desde então confirmaram a associação e demonstraram um aumento de várias vezes nas mortes coronárias entre sujeitos diabéticos quando comparado com sujeitos não diabético (ver, e.g., Garcia, 4

Proc. 3716 M. J. et. al., Diabetes (1974) 23: 105-11 (1974); e Laakso, M. e Lehto, S., Diabetes Reviews (1997) 5 (4): 294-315). Foram descritas várias anomalias lipoproteicas entre sujeitos diabéticos (Howard B., et. al., Artherosclerosis (1978) 30: 153-162).

Estudos prévios dos anos 70 demonstraram a eficácia de 2-acetamidoetil(4-clorofenil)(3-trifluorometilfenoxi)acetato racémico (também conhecido como "halofenato") como um potencial agente terapêutico para tratar diabetes Tipo 2, hiperlipidemia e hiperuricémia (ver, e.g., Bolhofer, W., U.S. 3 517 050; Jain, A. et. al.r N. Eng. J. Med. (1975) 293: 1283-1286; Kudzma, D. et. al., Diabetes (1977) 25: 291-95; Kohl, E. et. al., Diabetes Care (1984) 7: 19-24; McMahon, F. G. et. al., Univ. Mich. Med. Center J. (1970) 36: 247-248; Simori, C. et. al., Lipids (1972) 7: 96-99; Morgan, J. P. et. ai., Clin. Pharmacol. Therap. (1971) 12: 517-524, Aronow, W. S. et. al., Clin. Pharmacol. Ther (1973) 14: 358-365 e Fanelli, G. M. et al., J. Pharm. Experimental Therapeutics (1972) 180: 377-396). Nestes estudos prévios, os efeitos do halofenato racémico na diabetes foi observado quando combinado com sulfonilureias. Foi observado um efeito mínimo na glicose em doentes com diabetes tratados apenas com halofenato racémico. No entanto, foram registados efeitos colaterais significativos incluindo hemorragia gastrointestinal no estômago e úlceras pépticas (ver, e.g., Friedberg, S. J. et. al., Clin. Res. (1986) Vol. 34, N. 2: 682A). 5

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Adicionalmente, existem algumas indicações de interacções fármaco-fármaco de halofenato racémico com agentes tais como sulfato de warfarina (também designado como 3-(alfa-acetonilbenzil)-4-hidroxicoumarino ou Coumadin™ (Dupont Pharmaceuticals, E.I. Dupont de Nemours e Co., Inc., Wilmington, DE U.S.A.) (ver, e.g., Vesell, E. S. e Passantanti, G. 1., Fed. Proc. (1972) 31 (2) : 538) . 0 Coumadin™ é um anticoagulante que actua inibindo a síntese factores coagulantes dependentes da vitamina K (que incluem os Factores II, VII, IX, e X, e as proteínas ant icoagulante C e S) . Crê-se que o Coumadin™ é estereoespecificamente metabolizado por enzimas microssomais hepáticas (as enzimas citocromo P450). As isozimas citocromo P450 envolvidas no metabolismo de Coumadin incluem 2C18, 1A2, e 3A4. 2C9 é provavelmente a forma principal de P450 no fígado humano que modula o metabolismo de fármacos in vivo de vários fármacos incluindo a actividade anticoagulante do Coumadin™ (ver, e.g., Miners, J. 0. et. al., Bri. J. Clin. Pharmacol. (1998) 45: 525-538).

Os fármacos que inibem o metabolismo do Coumadin™ provocam um decréscimo ainda maior nos factores de coagulação dependentes da vitamina K que previnem a coagulação mais do que o desejado em doentes que recebem tal terapêutica (i.e., doentes em risco de embolismo pulmonar ou cerebral devido a coágulos sanguíneos nas suas extremidades inferiores, coração ou outros locais). A simples redução da dose de anticoagulante é muitas vezes difícil uma vez que é necessário manter 6

Proc. 3716 anticoagulação adequada para prevenir a formação de coágulos sanguíneos. A anticoagulação aumentada das interacções fármaco-fármaco tem como resultado um risco significativo para tais doentes com a possibilidade de hemorragia grave de lesões em tecidos moles, locais gastrointestinais (i.e., úlceras gástricas ou no duodeno) ou outras lesões (i.e., aneurisma aórtico). Hemorragia num cenário de anticoagulação demasiada constitui uma emergência médica e pode resultar em morte se não for tratada imediatamente com terapia adequada.

Sabe-se também que o citocromo P450 2C9 está envolvido no metabolismo de vários outros fármacos geralmente utilizados, incluindo dilatina, sulfonilureias, tais como tolbutamida e vários agentes anti-inflamatórios não esteróides, tais como ibuprofeno. A inibição desta enzima pode potencialmente causar outros efeitos adversos relacionados com interacções fármaco- fármaco, adicionalmente às acima descritas para Coumadin™ (ver, e.g., Pelkonen, 0. et, . ai., Xenobiotica (1998) 28: 1203-1253; Linn, J. H. e Lu, A. Y., Clin.

Pharmacokinet. (1998) 35 (5): 361-390). São necessárias soluções para as dificuldades e deficiências acima referidas antes que o halofenato se torne eficiente para tratamento de rotina da resistência à insulina, Diabetes Tipo 2, hiperlipidemia e hiperuricémia. A presente invenção preenche esta e outras necessidades proporcionando composições para aliviar resistência à insulina e Diabetes Tipo 2, enquanto que apresenta um perfil de efeito adverso melhor. 7

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SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona um medicamento para modular Diabetes Tipo 2 num mamífero. 0 medicamento produzido utilizando o estereoisómero (-) de um composto de Fórmula I,

em que R é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em um hidroxilo, aralcoxilo inferior, di-alquilamino inferior-alcoxilo inferior, alcanamido inferior alcoxilo inferior, benzamido-alcoxilo inferior, ureído-alcoxilo inferior, Ν'-alquilo inferior-ureído-alcoxilo inferior, carbamoílo-alcoxilo inferior, alcoxilo inferior substituído com halofenoxilo, fenoxilo substituído com carbamoílo, carbonil-alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior-alquilamino inferior, alquilamino inferior substituído com halo, alquilamino inferior substituído com hidroxilo, alquilamino inferior substituído com alcanoliloxilo inferior, ureído, e alcoxicarbonilamino inferior; e X é um halogénio; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável,

Proc. 3716 em que o composto se encontra substancialmente isento do seu estereoisómero (+).

De modo preferido o estereoisómero (-) compreende um composto de Fórmula II:

em que R2 é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em fenil-alquilo inferior, alcanamido inferior-alquilo inferior, e benzamido-alquilo inferior.

De modo ainda mais preferido, o estereoisómero (-) compreende um composto de Fórmula III:

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Proc. 3716 0 composto preferido de Fórmula III é conhecido como "(-)2-acetamidoetil 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetato" ou "halofenato. A presente invenção proporciona ainda um medicamento para modular resistência à insulina num mamífero. Este medicamento é produzido utilizando o (-) estereoisómero de um composto de Fórmula I; mas de modo preferido utilizando o composto de Fórmula II; e de modo ainda mais preferido utilizando o composto de Fórmula III. 0 presente pedido divulga adicionalmente, apenas para fins informativos, um método para aliviar hiperlipidemia num mamífero. Este método compreende a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula I. Alguns desses métodos compreendem ainda um composto de Fórmula II. Alguns desses métodos compreendem ainda um composto de Fórmula III. 0 presente pedido divulga ainda, apenas para fins informativos, um método para modular hiperuricémia num mamífero. Este método compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula I. Alguns desses métodos compreendem ainda um composto de Fórmula II. Alguns desses métodos compreendem ainda um composto de Fórmula III. 0 presente pedido divulga ainda, apenas para fins informativos, composições farmacêuticas. As composições farmacêuticas compreendem um transportador 10

Proc. 3716 farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficiente de um composto de Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Figura 1 apresenta a inibição da actividade do citocromo P450 2C9 (CYP2C9) por intermédio de ácido halofénico racémico, (-) ácido halofénico e (+) ácido halofénico. A hidroxilação da tolbutamida foi medida na presença de concentrações crescentes destes compostos. 0 ácido halofénico racémico inibiu a actividade do CYP 2C9 com uma IC50 de 0,45 μΜ e (+) ácido halofénico inibiu CYP 2C9 com uma IC50 de 0,22 μΜ. No entanto, o (-) ácido halofénico foi 20 vezes menos potente com uma IC50 aparente de 3,5 μΜ. A Figura 2 apresenta o decurso de tempo do abaixamento de glicose após uma dose oral única de

halofenato racémico, enantiómero (-) de halofenato ou enantiómero (+) de halofenato a 250 mg/kg em ratinhos ob/ob diabéticos. O enantiómero (-) apresentou o início da acção mais rápido e a duração de acção mais longa. A diminuição de glicose foi significativa (p<0,05) para o enantiómero (-) comparado com o controlo para todos os pontos a partir de 3 a 24 horas. O halofenato racémico e o enantiómero (+) foram também significativos (p<0,05) para todos os pontos a partir de 4,5 a 24 horas. A glicose no plasma a 24 horas era 217±16,4 mg/dL em animais tratados com o (-) enantiómero, comparado com 11

Proc. 3716 306±28,5 mg/dL e 259,3±20,8 mg/dL para animais tratados respectivamente com o enantiómero (+) e o racemato. A glicose no plasma nos controlos tratados com veiculo era 408±16,2 mg/dL às 24 horas. 0 enantiómero (-) foi mais eficiente e significativamente diferente (p<0,05) do enantiómero ( + ) em ambos os pontos no tempo à hora 3 e hora 24. A Figura 3 apresenta a capacidade do halofenato racémico e de ambos o (-) e ( + ) enantiómeros de halofenato para baixar a glicose no plasma em ratinhos ob/ob diabéticos após administração oral diária. 0 racemato foi administrado a uma dose de 250 mg/kg/dia e os enantiómeros foram administrados a doses de 125 mg/kg/dia e 250 mg/kg/dia. Foram observados decréscimos significativos nos níveis de glicose em animais tratados com halofenato racémico e ambos os enantiómeros (-) e ( + ) , relativo a animais controlo. Na dose mais baixa (125 mg/kg) de tratamento com os (-) e ( + ) enantiómeros, o enantiómero (-) foi significativo a 6,27 e 30 horas, enquanto que o enantiómero (+) foi significativo apenas a 6 e 27 horas. A Figura 4 apresenta os níveis de insulina no plasma nos ratinhos ob/ob tratados com halofenato racémico e ambos os (-) e (+) enantiómeros de halofenato em ratinhos ob/ob diabéticos após administração oral diária. O racemato foi administrado a uma dose de 250 mg/kg/dia e os enantiómeros foram administrados a doses de 125 mg/kg/dia e 250 mg/kg/dia. Em relação ao controlo veículo, as insulinas foram inferiores nos animais 12

Proc. 3716 tratados quer com o racemato ou com um dos enantiómeros de halofenato. À dose elevada, a redução mais acentuada de insulina no plasma foi verificada a 27 e 30 horas em animais tratados com ambos os (-) e (+) enantiómeros de halofenato após dois dias de tratamento. A Figura 5 apresenta os níveis de glicose no plasma após um jejum durante a noite em ratinhos ob/ob após 5 dias de tratamento com veículo, halofenato racémico a 250 mg/kg/dia, enantiómero (-) de halofenato a 125 mg/kg/dia e 250 mg/kg/dia ou enantiómero ( + ) de halofenato a 125 mg/kg/dia ou 250 mg/kg/dia. Os animais controlo eram hiperglicémicos com níveis de glicose no plasma de 185,4±12,3 mg/dL. Todos os animais tratados com halofenato exibiram reduções significativas (p<0,01) na glicose. As doses elevadas de ambos os enantiómeros baixaram a glicose a níveis quase normais, respectivamente a 127,3±8,0 mg/dL e 127,2±9,7 mg/dL para os animais tratados com o enantiómero (-) e ( + ) enantiómero. A Figura 6 apresenta os níveis de insulina no plasma de jejum durante a noite nos ratinhos ob/ob tratados com veículo, halofenato racémico a 250 mg/kg/dia, enantiómero (-) a 125 mg/kg/dia e 250 mg/kg/dia ou enantiómero (+) de halofenato a 125 mg/kg/dia ou 250 mg/kg/dia durante 5 dias. Foram observadas insulinas plasmáticas significativamente mais baixas em animais recebendo ambas as doses de enantiómero (-). A dose baixa de enantiómero (+) de halofenato não baixou a insulina no plasma, embora 13

Proc. 3716 a dose elevada de enantiómero (+) tenha resultado numa diminuição da insulina no plasma. A Figura 7A apresenta os níveis de glicose no plasma após uma prova de tolerância oral à glicose em ratos obesos Zucker, um modelo de resistência à insulina e Tolerância Deficiente à Glicose. Estes animais foram tratados quer com um controlo de veículo, halofenato racémico, halofenato (-) ou halofenato (+) 5,5 horas antes do teste de tolerância à glicose. 0 racemato foi administrado a 100 mg/kg e ambos os enantiómeros foram administrados a 50 e 100 mg/kg. Nos animais controlo a glicose subiu a >250 mg/dL 30 minutos após o teste de tolerância, uma indicação clara de tolerância deficiente à glicose. A glicose no plasma estava reduzida em ratos que receberam halofenato racémico, especialmente entre 30-60 minutos após o teste de tolerância. Os animais que receberam o halofenato (-) a 100 mg/kg apresentaram o grau mais elevado de diminuição de glicose de todos os animais tratados. Os animais tratados com o halofenato (-) apresentaram níveis inferiores de glicose que persitiram a 90-120 minutos, comparado com os ratos tratados com o racemato ou (+) halofenato. A Figura 7B compara a área incremental debaixo da curva (AUC) para os animais em cada grupo. Foram verificadas alterações significativas (p<0,05) nos grupos tratados com ambas as doses do (-) halofenato. Embora a AUC fosse inferior nos outros grupos comparado com o controlo, as alterações não foram significativas. 14

Proc. 3716 A Figura 8 apresenta os resultados de um teste curto de tolerância à insulina em ratos obesos Zucker que foram tratados com um controlo de veiculo, halofenato (-) (50 mg/kg/dia) ou halofenato (+) (50 mg/kg/dia) durante 5 dias. Este teste é uma medida da sensibilidade à insulina dos animais teste, representado o declive na glicose uma medida directa da capacidade de resposta à insulina. Os animias tratados com o halofenato (-) eram significativamente mais sensíveis à insulina do que os animias tratados com o veiculo (p<0,01) ou o halofenato (+) (p<0,05). A Figura 9A apresenta os níveis colesterol no plasma em ratos Zucker obesos Diabéticos tratados durante 13 dias com halofenato racémico, enantiómero (-) ou enantiómero (+), respectivamente a 50 mg/kg/dia, 25 mg/kg/dia ou 25 mg/kg/dia, comparado com um grupo controlo tratado com veículo. Em ambos os animais tratados com os enantiómero (-) e racemato, o colesterol no plasma diminuiu com o tratamento. O colesterol nos animais tratados com o enantiómero ( + ) manteve-se relativamente constante, enquanto que o colesterol aumentou nos animais controlo. A Figura 9B compara as diferenças em colesterol no plasma entre o grupo controlo e os grupos tratados. O enantiómero (-) foi o mais activo das espécies testadas. A Figura 10 A apresenta níveis de colesterol no plasma em ratos Zucker obesos Diabéticos tratados durante 14 dias com enantiómero (-) ou enantiómero (+) de halofenato a 12,5 mg/kg/dia (dose Baixa) ou 37,5 15

Proc. 3716 mg/kg/dia (dose Elevada) em relação a um grupo controlo tratado com veículo. Nos animais tratados com a dose elevada, o enantiómero (-) provocou a descida mais acentuada no colesterol. A Figura 10B compara as diferenças em colesterol no plasma entre os grupos controlo e os tratados. Foram verificadas diferenças significativas nos animais tratados com o enantiómero (-) após 7 dias com a dose baixa e após 7 e 14 dias com a dose elevada. 0 enantiómero (+) mostrou apenas significância após 7 dias de tratamento com a dose elevada. A Figura 11A apresenta os níveis de triglicéridos no plasma em ratos Zucker obesos Diabéticos tratados com enantiómero (-) ou enantiómero (+) a 12,5 mg/kg/dia (Dose baixa) ou 37,5 mg/kg/dia (Dose elevada) em relação a um grupo controlo tratado com veículo. Os animais tratados com a dose elevada de enantiómero (-) exibiram os níveis de triglicéridos mais baixos de todos os grupos de tratamento. A Figura 11B compara as diferenças de triglicéridos no plasma entre os grupos controlo e os tratados. Aos 7 dias a dose elevada de ambos os enantiómeros (+) e (-) exibiu diminuição significativa dos triglicéridos no plasma. A Figura 12 apresenta os níveis de glicose no plasma em ratos Zucker obesos Diabéticos tratados com veículo, halofenato (-) ou halofenato (+) no dia 0, dia 2 e dia 3. O tratamento com halofenato (-) reduziu significativamente as concentrações de glicose no plasma quando comparado com animais tratados com o veículo. 16

Proc. 3716 A Figura 13 apresenta as concentrações de glicose no plasma num grupo controlo de ratinhos db/db C57BL/6J versus num grupo tratado com (-) halofenato. Os níveis de glicose no plasma no grupo controlo aumentaram progressivamente à medida que os animais envelheceram, enquanto que o aumento dos níveis de glicose no plasma no grupo tratado com (-) halofenanato foi evitado ou significativamente retardado. A Figura 14 apresenta os níveis de insulina no plasma num grupo controlo de ratinhos db/db C57BL/6J versus num grupo tratados com halofenato (-) . 0 tratamento com halofenato (-) manteve a concentração de insulina no plasma, enquanto que a insulina no plasma no grupo controlo diminuiu progressivamente. A Figura 15 apresenta a percentagem de ratinhos não diabético num grupo controlo de ratinhos db/db C57BL/6J versus num grupo tratados com halofenato (-) . Cerca de 30% dos ratinhos no grupo tratado com halofenato (-) não desenvolveu diabetes (níveis de glicose no plasma <250 mg/dL), enquanto que todos do grupo controlo desenvolveram à idade de 10 semanas. A Figura 16 apresenta os níveis de triglicéridos no plasma num grupo controlo de ratinhos db/db C57BL/6J versus num grupo tratados com halofenato (-) . O tratamento com halofenato (-) aliviou a hiperlipidemia, enquanto que não houve melhoria no grupo controlo. 17

Proc. 3716 A Figura 17 apresenta os efeitos de halofenato (-) e halofenato (+) nos níveis de ácido úrico no plasma em ratos com hiperuricémia induzida com ácido oxónico. A administração oral de halofenato (-) reduziu significativamente os níveis de ácido úrico no plasma. 0 halofenato (+) também baixou os níveis de ácido úrico no plasma, mas não de modo estatisticamente significativo.

DEFINIÇÕES 0 termo "mamífero" inclui, sem limitação, humanos, animais domésticos (e.g., cães ou gatos), animais de quinta (vacas, cavalos, ou porcos), macacos, coelhos, ratinhos, e animais de laboratório. 0 termo "resistência à insulina" pode ser definido de um modo geral como um distúrbio no metabolismo da glicose. Mais especificamente, resistência à insulina pode ser definido como a capacidade diminuída da insulina para exercer a sua acção biológica ao longo de uma vasta gama de concentrações produzindo menos do que o efeito biológico esperado, (ver, e.g., Reaven, G. M., J. Basic & Clin. Phys. <5 Pharm. (1998) 9: 387-406 e Flier, J. Ann Rev. Med. (1983) 34: 145-60). As pessoas com resistência à insulina têm uma capacidade diminuída para metabolizarem a glicose de modo apropriado e respondem fracamente, se de modo algum, a terapêutica com insulina. As manifestações de resistência à insulina compreendem activação insuficiente da incorporação da glicose pela insulina, oxidação e armazenamento no músculo e repressão 18

Proc. 3716 inadequada de lipólise pela insulina da lipólise em tecido adiposo e da produção de glicose e segregação no fígado. A resistência à insulina pode causar ou contribuir para a síndrome do ovário poliquístico, Tolerância Diminuída à Glicose (IGT), diabetes gestacional, hipertensão, obesidade, ateroesclerose e e uma variedade de outros distúrbios. Finalmente, os indivíduos com resistência à insulina podem evoluir até um ponto em que é atingido um estado diabético. A associação de resistência à insulina com intolerância à glicose, um aumento de triglicéridos no plasma e uma diminuição nas concentrações de colesterol de lipoproteína de elevada densidade, pressão sanguínea alta, hiperuricémia, lipoproteicas de baixa densidade mais pequenas e mais densas, e níveis de circulação mais elevados do inibidor-1 do activator do plasminogénio) , foi designado como "Síndroma X" (ver, e.g., Reaven, G. M., Physiol. Rev. (1995) 75: 473-486). 0 termo "diabetes mellitus" ou "diabetes" significa uma doença ou condição que é geralmente caracterizada por insuficiências metabólicos na produção e utilização de glicose o que resulta na incapacidade de manter níveis adequados de açúcar no sangue no corpo. 0 resultado destas insuficiências é glicose elevada no sangue, designado como "hiperglicémia". As duas formas principais de diabetes são diabetes Tipo 1 e Diabetes Tipo 2. Como acima descrito, a diabetes Tipo 1 é geralmente o resultado de uma deficiência absoluta de insulina, a hormona que regula a utilização da glicose. A diabetes Tipo 2 ocorre frequentemente no caso de níveis de 19

Proc. 3716 insulina normal, ou até elevados, e pode resultar da incapacidade dos tecidos de responderem adequadamente à insulina. A maioria dos doentes diabéticos Tipo 2 apresentam resistência à insulina e apresentam uma deficiência relativa de insulina, em que a seqreqação de insulina não compensa a resistência dos tecidos periféricos para responder à insulina. Adicionalmente, muitos diabéticos Tipo 2 são obesos. Outros tipos de distúrbios da homeostase da glicose incluem Tolerância Diminuída à Glicose, que é um estado metabólico intermédio entre homeostase normal da glicose e diabetes, e Diabetes Mellitus Gestacional, que é intolerância à glicose durante a gravidez em mulheres sem história anterior de Diabetes Tipo 1 ou Tipo 2. 0 termo "diabetes secundária" é diabetes resultante de outras etiologias identificáveis que incluem: defeitos genéticos da função de células β (e.g., diabetes Tipo diabetes do adulto iniciado na juventude, designado como "MODY", que é uma forma de Diabetes Tipo 2 de começo antecipado com transmissão autossomal; ver, e.g., Fajans S. et al., Diabet. Med. (1996) (9 Suppl 6): S90-5 e Bell, G. et. al., Annu. Rev. Physiol. (1996) 58: 171-86; defeitos genéticos na acção da insulina; doenças do pâncreas exócrino {e.g., hemocromatose, pancreatite, e fibrose cística); determinadas doenças endócrinas em que hormonas em excesso interferem com a acção da insulina (e.g., hormona do crescimento na acromegalia e cortisol na síndrome de Cushing); certos fármacos que suprimem a segregação de insulina (e.g., fenitoína) ou inibem a acção da insulina (e.g., estrogénios e glucocorticóides); 20

Proc. 3716 e diabetes causada por infecção (e.g., rubéola, Coxsackie, e CMV); assim como outras sindromes genéticas.

As directrizes para o diagnóstico de Diabetes Tipo 2, tolerância deficiente à glicose, e diabetes gestacional foram apresentadas pela Associação Americana de Diabetes (ver, e.g., The Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus, Diabetes Care, (1999) Vol 2 (Suppl 1):S5-19). 0 termo "ácido halofénico" refere-se à forma acidica de ácido 4-Clorofenil-(3trifluorometilfenoxi)-acético. 0 termo "hiperinsulinémia" refere-se à presença de um nivel anormalmente elevado de insulina no sangue. 0 termo "hiperuricémia" refere-se à presença de um nivel excepcionalmente elevado de ácido úrico no sangue. 0 termo "secretagogo" significa uma substância ou composto que estimula a segregação. Por exemplo, um secretagogo de insulina é uma substância ou composto que estimula a segregação de insulina. 0 termo "hemoglobina" ou "Hb" refere-se a um pigmento respiratório presente em eritrócitos, que é grandemente responsável pelo transporte de oxigénio. Uma molécula de hemoglobina compreende quatro subunidades polipeptidicas (respectivamente dois sistemas de cadeia α e dois sistemas de cadeia β) . Cada subunidade é formada 21

Proc. 3716 pela associação de uma proteína globina e de uma molécula heme que é um complexo ferro-protoporfirina. A classe principal de hemoglobina em hemolisato adulto normal é hemoglobina adulta (mencionada como "HbA"; também designada como HbA0, para a distinguir de hemoglobina glicada, que é designada como "HbAi", descrita infra) possuindo subunidades α2β2 · Componentes vestigiais, tais como, HbA2 (0.282) também também ser encontrados em hemolisato adulto normal.

Entre as classes de hemoglobina HbAs adulta, existe uma hemoglobina glicada (designada como "HbAl", ou "hemoglobina glicosilada") , que pode ser ainda fraccionada em HbAiai, HbAia2, HbAib, e HbAic com um fraccionamento em resina de troca iónica. Todas estas subclasses possuem a mesma estrutura primária, a qual é estabilizada pela formação de uma aldimina (base de Schiff) pelo grupo amino da valina N-terminal na cadeia da subunidade β de hemoglobina HbA normal e glicose (ou, glicose-6-fosfato ou frutose) seguida pela formação de cetoamina por rearranjo de Amadori. 0 termo "hemoglobina glicosilada" (também referida como "HbAic", "GHb", "hemoglobina-glicosilada", "índice de controlo diabético" e "glico-hemoglobina"; aqui designada como "hemoglobina Aic") refere-se a um produto estável da glicosilação não enzimática da cadeia β da hemoglobina por intermédio de glicose plasmática. A hemoglobina Alc compreende a porção principal de hemoglobinas glicadas no sangue. A proporção de 22

Proc. 3716 hemoglobina glicosilada é proporcional ao nivel de glicose no sangue. Deste modo, a taxa de formação de hemoglobina Aic aumenta directamente com o aumento dos níveis de glicose no plasma. Uma vez que a glicosilação ocorre a uma taxa constante durante o período de vida de 120 dias de um eritrócito, as medições dos níveis de hemoglobina glicosilada reflectem o nível médio de glicose no sangue de um indivíduo durante os dois ou três meses precedentes. Assim sendo, a determinação da quantidade de hemoglobina HbA glicosilada, pode constituir um bom índice para o controlo do metabolismo de carboidratos. Deste modo, os níveis de glicose no sangue dos últimos dois meses podem ser estimados com base na razão entre HbAlc e hemoglobina Hb total. A análise da hemoglobina Aic no sangue é utilizada como uma medida permitindo o controlo a longo termo do nível de glicose no sangue (ver, e.g., Jain, S., et. al., Diabetes (1989) 38: 1539-1543; Peters A., et. al., JAMA (1996) 276: 1246-1252) . O termo "sintoma" de diabetes, inclui, mas não está limitado a, poliúria, polidipsia, e polifagia, como aqui utilizados, incorporando a sua utilização comum. Por exemplo, "poliúria" quer dizer a passagem de um volume grande de urina durante um determinado período; "polidipsia" significa sede crónica excessiva; e "polifagia" significa comer em excesso. Outros sintomas de diabetes incluem, e.g., susceptibilidade aumentada para certas infecções (especialmente por fungos e infecções por estafilococos), náusea, e cetoacidose (produção aumentada de corpos cetónicos no sangue). 23

Proc. 3716 0 termo "complicação" de diabetes inclui, mas não está limitado a, complicações microvasculares e complicações macrovasculares. As complicações microvasculares são aquelas complicações que geralmente resultam de danos em pequenos vasos sanguíneos. Estas complicações incluem, e.g., retinopatia (a diminuição ou perda de visão devido a danos nos vasos sanguíneos nos olhos); neuropatia (danos nervosos e problemas nos pés devido a danos nos vasos sanguíneos no sistema nervoso); e nefropatia (doença renal devido danos nos vasos sanguíneos nos rins). As complicações macrovasculares são aquelas complicações que geralmente resultam de grandes danos em vasos sanguíneos grandes. Estas complicações incluem, e.g., doença cardiovascular e doença vascular periférica. Doença cardiovascular refere-se a doenças dos vasos sanguíneos do coração. Ver, e.g., Kaplan, R. M., et. ai. , "Cardiovascular diseases" em Health And Human Behavior, pp. 206-242 (McGraw-Hill, Nova Iorque 1993). A doença cardiovascular é geralmente uma das várias formas, incluindo, e.g., hipertensão (também designada como pressão arterial alta), doença cardíaca coronária, enfarte, e doença cardíaca reumática. Doença vascular periférica refere-se a doenças de quaisquer dos vasos sanguíneos fora do coração. Consiste geralmente num estreitamento dos vasos sanguíneos que transportam sangue para os músculos das pernas e dos braços. O termo "ateroesclerose" engloba doenças vasculares e estados que são reconhecidos e compreendidos por médicos que exercem nas áreas da medicina relevantes. A doença cardiovascular ateroesclerótica, a doença cardíaca 24

Proc. 3716 coronária (também conhecida como doença da artéria ou doença cardíaca isquémica), a doença cerebrovascular e doença dos vasos periféricos são todas manifestações clínicas de ateroesclerose e são, deste modo, englobadas pelos termos "ateroesclerose" e "doença ateroesclerótica". 0 termo "anti-hiperlipidémico" refere-se à diminuição de concentrações de lípidos excessivas no sangue para níveis desejáveis. 0 termo "antiuricémico" refere-se à diminuição de concentrações de ácido úrico excessivas no sangue para níveis desejáveis. 0 termo "hiperlipidemia" refere-se à presença de um nível excepcionalmente elevado lípidos no sangue. A hiperlipidemia pode aparecer pelo menos em três formas: (1) hipercolesterolemia, i.e., um nível de colesterol elevado; (2) hipertrigliceridémia, i.e., um nível elevado de triglicéridos; e (3) hiperlipidemia combinada, i.e., a combinação de hipercolesterolemia e hipertrigliceridémia. 0 termo "modulação" refere-se ao tratamento, prevenção, supressão, melhoramento ou indução de uma função ou estado. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem modular a hiperlipidemia baixando o colesterol num humano, suprimindo assim a hiperlipidemia. 0 termo "tratar" quer dizer a gestão e cuidado de um sujeito humano com o objectivo de combater a doença, 25

Proc. 3716 estado, ou distúrbio e inclui a administração de um composto da presente invenção para impedir o começo dos sintomas ou complicações, aliviar os sintomas ou complicações, ou eliminar a doença, estado, ou distúrbio. 0 termo "prevenir" significa a gestão e cuidado de um sujeito humano de modo que o começo dos sintomas de uma doença, estado ou distúrbio não ocorra. 0 termo "colesterol" refere-se a um álcool esteróide que é um componente essencial das membranas celulares e bainhas de mielina e, como aqui utilizado, incorpora a sua utilização comum. 0 colesterol também funciona como um percursor hormonas esteróides e ácidos biliares. 0 termo "triglicérido(s)" ("TGs"), como aqui utilizado, incorpora a sua utilização comum. Os TGs consistem em três moléculas de ácido gordo esterifiçadas numa molécula de glicerol e serve para armazenar ácidos gordos os quais são utilizados por células musculares para a produção de energia ou são recolhidas e armazenadas no tecido adiposo.

Uma vez que o colesterol e os TGs são insolúveis em água, têm de ser acondicionados em complexos moleculares especiais molecular conhecidos como "lipoproteinas" de modo a serem transportados no plasma. As lipoproteinas podem-se acumular no plasma devido a sobreprodução e/ou remoção deficiente. Existem pelo menos cinco lipoproteinas distintas que diferem em tamanho, composição, densidade, e função. Nas células do intestino 26

Proc. 3716 delgado, os lípidos da dieta são acondicionados em grandes complexos lipoproteicos "quilomicrons", que possuem um teor elevado de TG e baixo de colesterol. No figado, os ésteres de TG e colesterol são empacotados e libertos no plasma como lipoproteína rica em TG designada lipoproteina de densidade muito baixa ("VLDL"), cuja função primária é o transporte endógeno de TGs produzidos no figado ou libertos pelo tecido adiposo. Através de acção enzimática, a VLDL pode ser reduzida e absorvida pelo figado, ou transforma em lipoproteina de densidade intermédia ("IDL"). A IDL, é por sua vez, absorvida pelo figado, ou é adicionalmente modificada para formar a lipoproteina de baixa densidade ("LDL"). A LDL é absorvida e degradada pelo figado, ou é absorvida por tecido extra-hepático. A lipoproteina de elevada densidade ("HDL") ajuda na remoção de colesterol dos tecidos periféricos por um processo designado transporte reverso do colesterol. 0 termo "dislipémia" refere-se a niveis anormais de lipoproteinas no plasma sanguíneo incluindo tanto níveis baixos e/ou elevados de lipoproteinas (e.g., níveis elevados de LDL, VLDL e níveis baixos de HDL).

Exemplos de Hiperlipidemia Primária incluem, mas não estão limitados aos seguintes: (1) Hiperquilomicronemia Familiar, um distúrbio genético raro que causa uma deficiência numa enzima, lipase LP, que degrada moléculas gordas. A deficiência em 27

Proc. 3716 lipase LP pode provocar a acumulação de grandes quantidades de gordura ou lipoproteínas no sangue; (2) Hipercolesterolemia Familiar, um distúrbio genético relativamente comum causado em que o defeito subjacente é uma série de mutações no gene receptor da LDL que resulta no mau funcionamento dos receptores da LDL e/ou na ausência dos receptores da LDL. Isto provoca remoção ineficaz da LDL pelos receptores da LDL resultando em níveis elevados de LDL e de colesterol total no plasma; (3) Hiperlipidemia Familiar Combinada, também conhecida como hiperlipidemia múltipla Tipo lipoproteína; distúrbio herdado em que os doentes e os seus parentes em primeiro grau afectados podem em numerosos momentos manifestarem colesterol alto e triglicéridos elevados. Os níveis de colesterol HDL são em regra moderadamente reduzidos; (4) Apolipoproteína B-100 Defeituosa Familiar é uma anomalia genética autossomal relativamente comum. A anomalia é causada por uma mutação de um único nucleótido que provoca uma substituição de glutamina por arginina o que pode provocar afinidade reduzida das partículas LDL para o receptor de LDL. Consequentemente, isto pode provocar altos níveis no plasma de LDL e de colesterol total; (5) Disbetaliproteinémia Familiar, também designada como Hiperlipoproteinémia de Tipo III, é um distúrbio 28

Proc. 3716 herdado pouco comum que resulta em subidas moderadas a severas dos níveis no soro de TG e colesterol com função anormal da apolipoproteína E. Os níveis de HDL são geralmente normais; e (6) Hipertrigliceridémia Familiar, é um distúrbio comum herdado em que a concentração de VLDL no plasma é elevada. Isto pode provocar níveis de triglicéridos leves a moderadamente elevados (e geralmente não níveis de colesterol) e pode geralmente ser associado com níveis baixos de HDL no plasma.

Os factores de risco em exemplos de Hiperlipidemia Secundária incluem, mas não estão limitados aos seguintes: (1) factores de risco de doença, tais como um historial de diabetes Tipo 1, Diabetes Tipo 2, síndrome de Cushing, hipotiroidismo e certos tipos de falha renal; (2) factores de risco farmacológicos, que incluem, pílulas contraceptivas; hormonas, tais como o estrogénio, e corticosteróides; determinados diuréticos; e numerosos bloqueadores β; (3) factores de risco dietéticos incluem consumo de gordura na dieta por total de calorias maior do que 40%; consumo de gorduras saturadas por total de calorias maior do que 10%; consumo de colesterol superior a 300 mg por dia; utilização habitual e excessiva de álcool; e obesidade. O termos "obeso" e "obesidade" refere-se a, de acordo com a Organização Mundial de Saúde, um índice de Massa Corporal (BMI) superior a 27,8 kg/m2 para homens e 27,3 kg/m2 para mulheres (BMI pesos iguais (kg)/altura 29

Proc. 3716 (m2) . A obesidade está ligada a uma variedade de condições médicas incluindo diabetes e hiperlipidemia. A obesidade é também um factor de risco conhecido para o desenvolvimento de Diabetes Tipo 2 (Ver, e.g., Barrett-Conner, E., Epidemol. Rev. (1989) 11: 172-181; e Knowler, et al., Am. J. Clin. Nutr. (1991) 53: 1543-1551). "Sais Farmaceuticamente Aceitáveis" refere-se ao metal alcali não tóxico, metal terroso alcalino, e sais de amónio geralmente utilizados na indústria farmacêutica incluindo os sais de sódio, potássio, litio, cálcio, magnésio, bário, amónio, e protamina zinco, os quais são preparados por métodos bem conhecidos na técnica. 0 termo também inclui sais de adição ácidos não tóxicos, que são geralmente preparados fazendo reagir os compostos da presente invenção com um ácido orgânico ou inorgânico adequado. Os sais representativos incluem, mas não estão limitados a, cloridrato, bromidrato, sulfato, bissulfato, acetato, oxalato, valerato, oleato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartarato, napsilato, e afins. "Sal de Adição Ácido Farmaceuticamente Aceitável" refere-se aqueles sais que retêm a eficácia biológica e propriedades das bases livres e que não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis ou, formados com ácidos inorgânicos, tais como, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e afins, e ácidos orgânico, tais como, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, 30

Proc. 3716 ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido salicílico e afins. Para uma descrição de sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis como pro-fármacos. Ver, e.g., Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs (Elsevier Science Publishers, Amsterdão 1985). "Éster Farmaceuticamente Aceitável" refere-se aqueles ésteres que mantêm, aquando da hidrólise da ligação éster, a eficácia biológica e propriedades do ácido carboxílico ou álcool e não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis. Para uma descrição de ésteres farmaceuticamente aceitáveis como pro-fármacos, ver Bundgaard, H., supra. Estes ésteres são tipicamente formados a partir do ácido carboxílico correspondente e um álcool. Geralmente, a formação de ésteres pode ser conseguida via técnicas sintéticas convencionais. (Ver, e.g., March Advanced Organic Chemistry, 3a Ed., p. 1157 (John Wiley & Sons, Nova Iorque 1985) e referências aí citadas, e Mark et. al., Encyclopedia of Chemical Technology, (1980) John Wiley & Sons, Nova Iorque). O componente alcoólico do éster compreenderá geralmente: (i) um álcool alifático C2-C12 que pode conter ou uma ou mais ligações duplas e pode ou não conter carbonos ramificados; ou (ii) álcoois aromáticos ou heteroaromáticos C7-C12. A presente invenção também contempla a utilização das composições que são ésteres, como aqui descrito, e ao mesmo tempo são os seus sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis. 31

Proc. 3716 "Amida Farmaceuticamente Aceitável" refere-se aquelas amidas que retêm, aquando da hidrólise da ligação amida, a eficácia biológica e propriedades do ácido carboxilico ou amina e não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis. Para uma descrição de amidas farmaceuticamente aceitáveis como pro-fármacos, ver, Bundgaard, H., ed., supra. Estas amidas são formadas tipicamente a partir do ácido carboxilico correspondente e uma amina. Geralmente, a formação de amida pode ser conseguida via técnicas sintéticas convencionais. Ver, e.g., March et. al., Advanced Organic Chemistry, 3a Ed., p. 1152 (John Wiley & Sons, Nova Iorque 1985), e Mark et. al. , Encyclopedia of Chemical Technology, (John Wiley & Sons, Nova Iorque 1980). A presente invenção também contempla a utilização das composições que são amidas como aqui descrito e ao mesmo tempo são os seus sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA (1) Geral A presente invenção está de derivados preferidos halometilfenoxi)(4-halofenil) seguinte fórmula geral: dirigida para a utilização de ácido (-)(3-tri-acético possuindo a

32

Proc. 3716

Fórmula I

Na Fórmula I, Ré um grupo funcional incluindo, mas não limitado aos seguintes: hidroxilo, aralcoxilo inferior, e.g., fenil-alcoxilo inferior tais como benziloxilo, fenetiloxilo; di-alquilamino inferior-alcoxilo inferior e os seus sais de adição ácidos não tóxicos farmacologicamente aceitáveis, e.g., dimetilaminoetoxilo, cloridrato de dietilaminoetoxilo, citrato de dietilaminoetoxilo, dietilaminopropoxilo; alcanamido inferior alcoxilo inferior, e.g., formamidoetoxilo, acetamidoetoxilo ou acetamidopropoxilo; benzamido-alcoxilo inferior, e.g., benzamidoetoxilo ou benzamidopropoxilo; ureido-alcoxilo inferior, e.g., ureidoetoxilo ou l-metil-2-ureídoetoxilo; Ν'-alquilo inferior -ureido-alcoxilo inferior, i.e., R1NH-C0NH-CnH2n-0- em que R1 representa alquilo inferior e n é um número inteiro possuindo um valor desde 1 a cerca de 5, e.g., N'-etil-ureidoetoxilo ou N'-etilureidopropoxilo; carbamoilo-alcoxilo inferior, e.g., carbamoilmetoxilo ou carbamoiletoxilo; halofenoxilo substituído alcoxilo inferior, e.g., 2-(4-clorofenoxi)etoxilo ou 2- (4clorofenoxi)-2-metilpropoxilo; fenoxilo substituído com carbamoílo, e.g., 2-carbamoilfenoxilo; carboxilo-

alquilamino inferior e os seus sais de adição amino não tóxicos, farmacologicamente aceitáveis, e.g., sal carboximetilamino ciclo-hexilamino ou carboxietilamina; N,N-di-alquilamino inferior-alquilamino inferior e os seus sais não tóxicos em solução ácida, farmacologicamente aceitáveis , e.g., cloridrato de N,N 33

Proc. 3716 dimetilaminoetilamino, N,N-dietilaminoetilamino, citrato de N,N-dietilaminoetilamino, ou citrato de N,N-dimetilaminopropilamino; alquilamino inferior substituído com halo, e.g., 2-cloroetilamino ou 4-clorobutilamino; alquilamino inferior substituído com hidroxilo, e.g., 2-hidroxietilamino, ou 3-hidroxipropilamino; alquilamino inferior substituído por alcanoiloxilo inferior, e.g., acetoxietilamino ou acetoxipropilamino; ureído; alcoxicarbonilamino inferior, e.g., metoxicarbonilamino (i.e., -NHCOOCH3) , ou etioxicarbonilamino (i.e., CHCOOC2H5) . Numa forma de realização preferida, R é seleccionado de modo que é um unidade hidrolizável, tal como um éster ou amida, e aquando da hidrólise da ligação éster ou amida, o composto é biologicamente activo tal como ésteres ou amidas farmaceuticamente aceitáveis como pro-f ármacos. 0 X, na fórmula I, é um halogénio, e.g., cloro, bromo, flúor ou iodo.

Numa forma de realização preferida, a presente invenção diz respeito à utilização de derivados do ácido (-)(3-tri-halometilfenoxi)(4-halofenil) acético possuindo a seguinte fórmula geral:

Fórmula II 34

Proc. 3716

Na Fórmula II, R2 é um grupo funcional incluindo, mas não limitado aos seguintes: hidrogénio, fenil-alquilo inferior, e.g., benzilo; alcanamido inferior -alquilo inferior, e.g., acetamidoetilo; ou benzamido-alquilo inferior, e.g., benzamidoetilo. 0 X, na Fórmula II, é um halogénio, e.g., cloro, bromo, flúor ou iodo.

Numa outra forma de realização preferida, a presente invenção refere-se à utilização de um composto com a fórmula:

Fórmula III 0 composto da Fórmula III é designado como "(-)2-acetamidoetil 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) acetato" (também designado como "halofenato(-)").

As alterações no metabolismo de fármacos mediadas pela inibição das enzimas citocromo P450 têm um potencial muito elevado para precipitar efeitos adversos significativos em doentes. Tais efeitos foram previamente verificados em doentes tratados com halofenato racémico. Nos estudos presentes, verificou-se que o ácido halofénico racémico inibe o citocromo P450 2C9, uma 35

Proc. 3716 enzima que se sabe desempenhar um papel significativo no metabolismo de fármacos específicos. Isto pode conduzir a problemas significativos com interacções de fármacos com anticoagulantes, agentes anti-inflamatórios e outros fármacos metabolizados por esta enzima. No entanto, de modo surpreendente, foi observada uma diferença substancial entre os enantiómeros de ácido halofénico na sua incapacidade para inibir o citocromo P450 2C9, sendo o enantiómero (-) cerca de vinte vezes menos activo enquanto que o enantiómero (+) era muito potente (ver Exemplo 7) . Deste modo, a utilização do enantiómero (-) de compostos na Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III evitará a inibição desta enzima e os efeitos adversos no metabolismo do fármaco previamente observado com halofenato racémico. A presente invenção envolve uma utilização para modular resistência à insulina num mamífero, compreendendo o método: administrar ao mamífero a quantidade terapeuticamente eficaz de um composto com a estrutura geral da Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Numa forma de realização actualmente preferida, o composto tem a estrutura geral da Fórmula II. Numa outra forma de realização preferida, o composto tem a estrutura da Fórmula III. De modo bastante surpreendente, a utilização evita os efeitos adversos associados com a administração de uma mistura racémica de halofenato uma vez que proporciona uma quantidade do estereoisómero (-) dos compostos na Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III que é insuficiente para 36

Proc. 3716 causar os efeitos adversos associados com a inibição do citocromo P450 2C9 . A presente invenção também compreende a utilização para modular Diabetes Tipo 2 num mamífero, compreendendo a utilização: administrar ao mamífero a quantidade terapeuticamente eficaz de um composto com a estrutura geral da Fórmula I ou um seu sal farmaceut icamente aceitável. Numa forma de realização presentemente preferida, o composto tem a estrutura geral da Fórmula II. Numa outra forma de realização preferida, o composto tem a estrutura da Fórmula III. De modo bastante surpreendente, a utilização evita os efeitos adversos associados com a administração de uma mistura racémica de halofenato proporcionando uma quantidade do estereoisómero (-) dos compostos na Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III que é insuficiente para causar os efeitos adversos associados com a inibição do citocromo P450 2C9. (2) (-)Enantiómeros com Fórmula I, Fórmula II e Fórmula

III

Muitos compostos orgânicos existem em formas opticamente activas, i.e., possuem a capacidade de rodar o plano de luz polarizada num plano. Quando descrevendo um composto opticamente activo, os prefixos R e S são utilizados para denotar a configuração absoluta da molécula perto do(s) seu(s) centro(s) quirais. Os prefixos "d" e "1" ou ( + ) e (-) são utilizados para designar o sinal de rotação de luz polarizada num plano 37

Proc. 3716 pelo composto, em que (-) ou 1 significa que o composto é "levogiro" e em que ( + ) ou d significa que o composto é "dextrogiro". Não existe correlação entre a nomenclatura para a estereoquímica absoluta e para a rotação de um enantiómero. Para uma determinada estrutura química, estes compostos, designados "estereoisómeros", são idênticos com a excepção que são imagens um do outro. Um estereoisómero específico pode também ser designado como um "enantiómero", e uma mistura de tais isómeros é geralmente designada como mistura "enantiomérica" ou "racémica". Ver, e.g., Streitwiesser, A. & Heathcock, C. H., Introduction To Organic Chemistry, 2a Edição, Capítulo 7 (MacMillan Publishing Co., U.S.A. 1981). A síntese química da mistura racémica de derivados de halofenatos de ácido (3-tri-halometilfenoxi)(4-halofenil) acético pode ser efectuada pelo métodos descritos na Patente U.S. N° 3 517 050. A síntese dos compostos da presente invenção é descrita adicionalmente nos Exemplos, supra. Os enantiómeros individuais podem ser obtidos por resolução da mistura racémica de enantiómeros utilizando meios convencionais conhecidos e utilizados por peritos na técnica. Ver, e.g., Jaques, J., et. al., em Enantiomers, Racemates, And Resolutions, John Wiley and Sons, Nova Iorque (1981). Outros métodos convencionais de resolução conhecidos de peritos na técnica, incluindo mas não limitados a, cristalização simples e resolução cromatográfica, podem também ser utilizados (ver, e.g., Stereochemistry Of Carbon Compounds (1962) E. L. Eliel, McGraw Hill; Lochmuller, J. Chromatography (1975) 113, 283-302). Adicionalmente, os 38

Proc. 3716 compostos da presente invenção, i.e., os isómeros opticamente puros, podem ser preparados a partir da mistura racémica por resolução enzimática biocatalítica. A resolução enzimática biocatalítica foi descrita anteriormente (ver, e.g., Patentes U.S. N° 5 057 427 e 5 077 217) . Outros métodos para obtenção de enantiómeros incluem síntese estereoespecífica (ver, e.g., Li, A. J. et. al., Pharm. Sei. (1997) 86: 1073-1077). O termo "substancialmente livre do seu estereoisómero (+)", como aqui utilizado, significa que as composições contêm uma proporção substancialmente maior do isómero de halofenato (-) em relação ao isómero ( + ) . Numa forma de realização preferida, o termo "substancialmente livre do seu estereoisómero (+)", como aqui utilizado, significa que a composição é pelo menos 90% em peso do isómero (-) e 10% em peso ou ou menos do isómero ( + ) . Numa forma de realização mais preferida, o termo "substancialente livre do seu estereoisómero (+)", como aqui utilizado, significa que a composição contém pelo menos 99% em peso do isómero (-) e 1 % em peso ou menos do isómero (+). Na forma de realização mais preferida, o termo "substancialente livre do seu estereoisómero (+)", significa que a composição mais do que 99% em peso do isómero (-) . Estas percentagens são baseadas na quantidade total de halofenato numa composição. Os termos "isómero de halofenato (1) opticamente substancialmente puro", "halofenato (1) opticamente substancialmente puro", 'isomero de halofenato (1) opticamente puro" e "halofenato (1) opticamente puro" referem-se todos ao (-) isómero e são 39

Proc. 3716 abrangidos pelas quantidades acima descritas. Adicionalmente, os termos "isómero de halofenato (d) opticamente substancialmente puro", "halofenato (d) opticamente substancialmente puro", "isómero de halofenato (d) opticamente puro" e "halofenato (d) opticamente puro" referem-se todos ao isómero (+) e são abrangidos pelas quantidades acima referidas. 0 termo "excesso enantiomérico" ou "ee" está relacionado com termo "pureza óptica" uma vez que ambos são medidas do mesmo fenómeno. 0 valor de ee será um número de 0 a 100, sendo 0 enantiómero racémico e sendo 100 enantiómero único puro. Um composto que é designado como 98% puro opticamente pode ser descrito como ee 96%. (3) Terapêutica de Combinação Com Agentes Activos

Adicionais

As composições podem ser formuladas e administradas do mesmo modo como acima descrito. "Formulação" é definida como uma preparação farmacêutica que possui uma mistura de numerosos excipientes e ingredientes chave que proporcionam uma forma de um composto ou fármaco estável, desejável e útil. No caso da presente invenção, "formulação" está incluida dentro do significado do termo "composição". Os compostos da presente invenção podem ser utilizados eficazmente sozinhos ou em combinação com um ou mais agentes activos adicionais dependendo da terapêutica alvo desejada (ver, e.g., Turner, N. et. al., Prog. Drug Res. (1998) 51: 33-94; Haffner, S. Diabetes 40

Proc. 3716

Care (1998) 21 : 160-178; e DeFronzo, R. et al., (eds.) ,

Diabetes Reviews (1997) Vol. 5 N. 4) . Vários estudos investigaram os benefícios de terapêuticas de combinação com agentes orais (ver, e.g., Mahler, R., J. Clin. Endocrinol. Metab. (1999) 84: 1165-71; United Kingdom

Prospective Diabetes Study Grupo: UKPDS 28, Diabetes Care (1998) 21: 87-92; Bardin, C. W., (ed.), Current Therapy In

Endocrinology And Metabolism, 6a Edição (Mosby - Year Book, Inc., St. Louis, MO 1997); Chiasson, J. et. al. , Ann. Intern. Med. (1994) 121: 928-935; Coniff, R. et. al., Clin. Ther. (1997) 19: 16-26; Coniff, R. et. al. , Am. J.

Med. (1995) 98: 443-451; e Iwamoto, Y. et. al., Diabet.

Med. (1996) 13 365-370; Kwiterovich, P. Am. J. Cardiol (1998) 82 (12A): 3U-17U). Estes estudos indicam que a modulação de diabetes e hiperlipidemia pode ser ainda melhorada pela adição de um segundo agente ao regime terapêutico. A terapêutica de combinação inclui administração de uma única dosagem de formulação farmacêutica que contém um composto com a estrutura geral da Fórmula I (ou Fórmula II ou Fórmula III) e um ou mais agentes activos adicionais, assim como a administração de um composto de Fórmula I (ou Fórmula II ou Fórmula III) e cada agente activo numa dosagem de formulação farmacêutica própria separada. Por exemplo, um composto de Fórmula I e um inibidor da redutase HMG-CoA pode ser administrado ao sujeito humano juntamente numa única dosagem oral da composição, tais como um comprimido ou uma cápsula, ou cada agente pode ser administrado em formulações de dosagem oral separadas. Quando são utilizadas formulações de dosagem oral separadas, um composto de Fórmula I e um ou mais agentes activos 41

Proc. 3716 adicionais podem ser administrados basicamente ao mesmo tempo (i.e., concorrentemente), ou em tempos alternados separados (i.e., sequencialmente). É reconhecido que a terapêutica de combinação inclui todos estes regimes.

Pode ser observado ainda outro exemplo de terapêutica de combinação na modulação de diabetes (ou no tratamento de diabetes e sintomas, complicações, e distúrbios com ela relacionados), em que o compostos com Fórmula I pode ser eficazmente utilizado em combinação com, por exemplo, sulfonilureias (tais como clorpropamida, tolbutamida, aceto-hexamida, tolazamida, gliburida, gliclazida, glinase, glimepirida, e glipizida), biguanidas (tais como metformina), tiazolidinedionas (tais como ciglitazona, pioglitazona, troglitazona, e rosiglitazona); desidroepiandrosterona (também designada como DHEA ou o seu conjugado de éster de sulfato, DHEA-S04); antiglucocorticóides; inibidores de TNFa; inibidores da glucosidase α (tais como acarbose, miglitol, e voglibose), pramlintide (um análogo sintético da hormona humana amilina), outros secretogogos de insulina (tais como repaglinida, gliquidona, e nateglinida), insulina, assim como os agentes activos acima referidos para tratamento de ateroesclerose.

Adicionalmente, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I (ou Fórmula II ou Fórmula III) e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes activos seleccionados a partir do grupo consistindo em: um agente anti-hiperlipidémico; um agente que faz subir HDL no plasma; um agente anti-hipercolesterolémico, tais 42

Proc. 3716 como, um inibidor da biossíntese de colesterol, por exemplo, um inibidor da redutase de HMG-CoA, um inibidor da sintase de HMG-CoA, um inibidor da epoxidase de esqualeno, ou um inibidor da sintetase de esqualeno (também conhecido como inibidor da sintase de esqualeno); um inibidor da acil-coenzima A colesterol aciltransferase; probucol; ácido nicotínico e seus sais; niacinamida; um inibidor da absorção do colesterol; uma resina de troca iónica sequestradora de ácidos biliares; um estimulador de receptores de lipoproteínas de baixa densidade; clofibrato, fenofibrato, e gemfibrozil; vitamina B6 e os seus sais farmeceuticamente aceitáveis; vitamina B12; uma vitamina anti-oxidante; um bloqueador β; um antagonista da angiotensina II; um inibidor da enzima de conversão da angiotensina; um inibidor da agregação de plaquetas; um antagonista dos receptores de fibrinogénio; aspirina; fentiraminas, antagonistas dos receptores adrenérgicos β3,· sulf onilureias, biguanidas, inibidores da glucosidase a, outras secretogogos de insulina, e insulina podem ser utilizados conjuntamente para a preparação de uma composição farmaceuticamente útil para os tratamentos acima descritos. (4) Formulações Farmacêuticas e Métodos de Administração

Os compostos com Fórmula I, Fórmula II, e Fórmula III podem ser distribuídos ou administrados a um mamífero, e.g., um doente ou sujeito humano, sozinhos, na forma de um sal farmaceuticamente aceitável ou seu 43

Proc. 3716 precursor hidrolisável, ou na forma de uma composição farmacêutica em que o composto é misturado com transportadores ou excipiente(s) adequados numa quantidade terapêutica eficaz. "Dose terapeuticamente eficaz", "quantidade terapêutica eficaz", ou, alternativamente, "dose farmacologicamente aceitável" ou "quantidade farmacologicamente aceitável", significa que uma quantidade suficiente do composto da presente invenção, alternativamente, uma combinação, por exemplo, um composto da presente invenção, que se encontra substancialmente sem o seu (+) estereoisómero, e um transportador farmaceuticamente aceitável, estará presente de modo a se alcançar o resultado desejado, e.g., aliviar um sintoma ou complicação da Diabetes Tipo 2 .

Os compostos com Fórmula I, Fórmula II, e Fórmula III podem ser incorporados numa variedade de formulações para administração terapêutica. Mais particularmente, os compostos com Fórmula I (ou Fórmula II ou Fórmula III) podem ser formulados em composições farmacêuticas por combinação com transportadores adequados, farmaceuticamente aceitáveis ou diluentes, e podem ser formulados em preparações em formas sólidas, semi-sólidas, liquidas ou gasosas, tais como comprimidos, cápsulas, pílulas, pós, grânulos, drageias, géis, lamas, unguentos, soluções, supositórios, injecções, inalantes e aerossóis. Como tal, a administração dos compostos pode ser realizada de vários modos, incluindo administração oral, bucal, rectal, parentérica, intraperitoneal, intradérmica, transdérmica, intratraqueal. Mais ainda, o 44

Proc. 3716 composto pode ser administrado num local outro que não de um modo sistémico, numa formulação de depósito ou de libertação sustentada. Adicionalmente, os compostos podem ser administrados num lipossoma.

Adicionalmente, os compostos de Fórmula I, Fórmula II ou Fórmula III podem ser formulados com excipientes, diluentes ou transportadores comuns, e compactados em comprimidos, ou formulados como elixires ou soluções para administração oral conveniente, ou administrados por via intramuscular ou intravenosa. Os compostos podem ser administrados transdermicamente, e podem ser formulados como formas de dosagem de libertação sustentada e afins.

Os compostos de Fórmula I, Fórmula II, ou Fórmula III podem ser administrados sozinhos, em combinação uns com os outros, ou podem ser utilizados em combinação com outros compostos conhecidos (discutido supra). Em formas de dosagem farmacêuticas, os compostos podem ser administrados na forma dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Podem conter partes hidrolisáveis. Podem também ser utilizados independentemente ou em associações adequadas, assim como em combinação com outros compostos farmaceuticamente activos.

As formulações adequadas para utilização na presente invenção podem ser encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company (1985) Filadélfia, PA, 17a ed.), que é aqui incorporado por referência. Além disso, para uma revisão breve de métodos para distribuição de fármaco, ver, Langer, Science (1990) 45

Proc. 3716 249: 1527-1533, que é aqui incorporado por referência. As composições farmacêuticas aqui descritas podem ser produzidas de um modo que é conhecido dos peritos na técnica, i.e., por intermédio de processos convencionais de agitação, dissolução, granulação, fabrico de drageias, pulverização, emulsificação, encapsulamento, aprisionamento ou liofilização. Os métodos e excipientes seguintes são meramente exemplares e não são de modo algum limitantes.

Para injecção, os compostos podem ser formulados em preparações dissolvendo-os, suspendendo-os ou emulsificando-os em solvente aquoso ou não aquoso, tais como, óleos vegetais ou outros similares, glicéridos sintéticos de ácido alifático, ésteres de ácidos alifáticos superiores ou propilenoglicol; e se desejado, com aditivos convencionais, tais como, solubilizantes, agentes isotónicos, agentes de suspensão, agentes emulsionantes, estabilizantes e conservantes. De modo preferido, os compostos da presente invenção podem ser formulados em soluções aquosas, de modo preferido em fisiologicamente compatíveis, tais como, solução de Hanks, solução de Ringer, ou tampão salino fisiológico. Para administração transmucosal, são utilizados na formulação penetrantes apropriados à barreira a ser atravessada. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.

Para administração oral, os compostos com Fórmula I, Fórmula II, ou Fórmula III podem ser facilmente formulados por combinação com transportadores 46

Proc. 3716 farmaceuticamente aceitáveis que são bem conhecidos na técnica. Tais transportadores permitem que os compostos sejam formulados como comprimidos, pílulas, draqeias, cápsulas, emulsões, suspensões lipofílicas e hidrofílicas, líquidos, géis, xaropes, lamas, suspensões e afins, para ingestão oral por um doente a ser tratado. As preparações farmacêuticas para utilização oral podem ser obtidas misturando os compostos com um excipiente sólido, facultativamente moendo uma mistura resultante, e processando a mistura de grânulos, após a adição de auxiliares adequados, se desejado, para se obter comprimidos ou núcleos de drageias. Os excipientes adequados são, em particular, cargas, tais como, açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol, ou sorbitol; preparações de celulose, tais como, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, goma tragacanto, metilcelulose, hidroxipropilmetil-celulose, carboximetilcelulose de sódio, e/ou polivinilpirrolidona (PVP) . Se desejado, podem ser adicionados agentes de desintegração, tais como, a polivinilpirrolidona em ligação cruzada, agar, ou ácido algínico ou um seu sal, tal como, alginato de sódio.

Proporcionam-se núcleos de drageias com revestimento adequado. Para este fim, podem ser utilizadas soluções concentradas de açúcar, que podem facultativamente conter goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, gel carbopol, polietileno glicol, e/ou dióxido de titânio, soluções de laqueamento, e solventes orgânicos ou misturas solventes adequadas. Podem ser adicionados aos revesitmentos dos 47

Proc. 3716 comprimidos ou agentes corantes de drageias ou pigmentos para identificação ou para caraterizar combinações diferentes de doses de composto activo.

As preparação farmacêuticas que podem ser utilizadas oralmente incluem cápsulas de encaixar feitas de gelatina, assim como cápsulas moles, seladas, feitas de gelatina e um plastificante, tal como, glicerol ou sorbitol. As cápsulas de encaixar podem conter os ingredientes activos misturados com cargas, tal como, lactose, ligantes, tais como, amidos, e/ou lubrificantes, tais como, talco ou estearato de magnésio e, facultativamente, estabilizante. Nas cápsulas moles, os compostos activos podem ser dissolvidos ou suspendidos em líquidos adequados, tais como, óleos gordos, parafina líquida, ou polietileno glicóis líquidos. Adicionalmente, podem ser adicionados estabilizantes. Todas as formulações para administração oral devem ser em dosagens adequadas para tal administração.

Para administração bucal, as composições podem tomar a forma de comprimidos ou pastilhas formulados de modo convencional.

Para administração por inalação, os compostos para utilização de acordo com a presente invenção são convenientemente distribuídos na forma de uma apresentação em spray aerossol a partir de pacotes sob pressão ou um nebulizador, com a utilização de um propulsor adequado, e.g., diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de 48

Proc. 3716 carbono ou outro gás adequado, ou a partir de inaladores de pó seco sem propulsor. No caso de um aerossol sob pressão a unidade de dosagem pode ser determinada proporcionando uma válvula para distribuir uma quantidade certa. As cápsulas e as embalagens de, e.g., gelatina para utilização num inalador ou aparelho insuflador podem ser formulados possuindo uma mistura em pó do composto e uma base em pó adequada, tais como, lactose ou amido.

Os compostos podem ser formulados para administração parentérica por injecção, e.g., por injecção bolus ou infusão continua. As formulações para injecção podem ser apresentadas na forma de unidade de dosagem, e.g., em ampolas ou em embalagens multidose, com a adição de um conservante. As composições podem tomar formas, tais como, suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes de formulação, tais como, agentes de suspensão, estabilizantes e/ou de dispersão.

As formulações farmacêuticas para administração parentérica incluem soluções aquosas dos compostos activos numa forma solúvel em água. Adicionalmente, as suspensões dos compostos activos podem ser preparadas como suspensões oleosas adequadas para injecção. Os solventes lipofílicos ou veículos adequados incluem óleos gordos, tais como, óleo de sésamo, ou ésteres de ácidos gordos sintéticos, tais como, etil oleato ou triglicéridos, ou lipossomas. As suspensões aquosas para injecção podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão, tais como, carboximetil 49

Proc. 3716 celulose de sódio, sorbitol, ou dextrano. Facultativamente, a suspensão pode também conter estabilizantes ou agentes adequados que aumentam a solubilidade dos compostos de modo a permitir a preparação de soluções altamente concentradas. Alternativamente, o ingrediente activo pode ser na forma de pó para constituição com um veículo adequado, e.g., água estéril sem pirogénio, antes da utilização.

Os compostos podem também ser formulados em composições rectais, tais como, supositórios ou clisteres de retenção, e.g., contendo bases de supositórios convencionais, tais como, manteiga de cacau, carboceras, polietileno glicóis ou outros glicéridos, os quais derretem todos à temperatura do corpo, e no entanto são sólidos à temperatura ambiente.

Adicionalmente às formulações descritas previamente, os compostos podem também ser formulados como uma preparação de depósito. Tais formulações de longa actuação podem ser administradas por intermédio de implantes (por exemplo subcutaneamente ou intramuscularmente) ou por injecção intramuscular. Deste modo, por exemplo, os compostos podem ser formulados com materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados (por exemplo como uma emulsão num óleo aceitável) ou resinas de troca iónica, ou como derivados moderadamente solúveis, por exemplo, como um sal moderadamente solúvel.

Em alternativa, podem ser empregues outros sistemas de distribuição para compostos farmacêuticos hidrofóbico. 50

Proc. 3716

Os lipossomas e emulsões são exemplos bem conhecidos de veículos de distribuição ou transportadores de fármacos hidrofóbicos. Numa forma de realização actualmente preferida, podem ser utilizados lipossomas de circulação prolongada, i.e., "stealth". Tais lipossomas são descritos de modo geral em Woodle, et. ai., Patente U.S. N° 5 013 556, cujo ensinamento é aqui incorporado por referência. Os compostos da presente invenção podem também ser administrados por meios de libertação controlada e/ou dispositivos de distribuição, tais como, os descritos nas Patentes U.S. N° 3 845 770; 3 916 899; 3 536 809; 3 598 123; e 4 008 719.

Determinados solventes orgânicos, tais como, dimetilsulfóxido (DMSO) podem também ser utilizados, se bem que normalmente implicam uma toxicidade elevada. Adicionalmente, os compostos podem ser distribuídos utilizando um sistema de libertação sustentada, tal como, matrizes semipermeáveis de polímeros sólidos hidrofóbicos contendo o agente terapêutico. Encontram-se estabelecidos numerosos tipos de materiais de libertação sustentada e são bem conhecidos dos peritos na técnica. As cápsulas de libertação sustentada podem, dependendo da sua natureza química, libertar os compostos durante algumas horas até mais de 100 dias.

As composições farmacêuticas podem também compreender transportadores de fase sólida ou de gel ou excipientes adequados. Exemplos de tais transportadores ou excipientes incluem, mas não estão limitados a, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, numerosos 51

Proc. 3716 açúcares, amidos, derivados de celulose, gelatina, e polímeros, tais como, polietileno glicóis.

As composições farmacêuticas adequadas para utilização na presente invenção incluem composições em que os ingredientes activos estão contidos numa quantidade terapêutica eficaz. A quantidade da composição administrada será, certamente, dependente do sujeito a ser tratado, do peso do sujeito, da gravidade do problema, do modo de administração e da avaliação do médico que prescreve a receita. A determinação de uma quantidade eficaz está dentro das capacidades dos peritos na técnica, especialmente à luz das divulgações detalhadas aqui apresentadas.

Para qualquer composto utilizado no método da presente invenção, uma dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios em culturas de células ou modelos animais.

Sobretudo, a toxicidade e eficácia terapêutica dos compostos aqui descritos podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos convencionais em culturas de células ou animais experimentais, e.g., determinando a LD5o, (a dose letal para 50% da população) e a ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A proporção de dose entre o efeito tóxico e terapêutico índice terapêutico e pode ser expresso como a proporção entre LD50 e ED50. Os compostos que exibem índices terapêuticos elevados são preferidos. Os dados obtidos destes ensaios em culturas de células e estudos em 52

Proc. 3716 animais podem ser utilizados na formulação de uma gama de dosagem que não é tóxica para utilização em humano. A dosagem de tais compostos está de modo preferido dentro de um intervalo de concentrações de circulação que incluem a ED5q com pequena ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro deste intervalo dependendo da forma de dosagem utilizada e a via de administração utilizada. A formulação, via de administração e dosagem exactas podem ser escolhidas individualmente pelo médico em função do estado do doente. (Ver, e.g., Fingi et al., 19 75 Em: The Pharmacological Basis of Therapeutics, Cap. D · A quantidade de composto activo que pode ser combinado com um material de transporte para produzir uma única forma de dosagem irá variar dependendo da doença a tratar, a espécie de mamífero, e o modo particular de administração. No entanto, como regra geral, doses unitárias adequadas para os compostos da presente invenção podem, por exemplo, de modo preferido conter entre 100 mg a cerca de 3000 mg do composto activo. Uma dose unitária preferida é entre 500 mg a cerca de 1 500 mg. Uma dose unitária mais preferida é entre 500 a cerca de 1 000 mg. Tais doses unitárias podem ser administrados mais do que uma vez ao dia, por exemplo 2, 3, 4, 5 ou 6 vezes ao dia, mas preferencialmente 1 ou 2 vezes por dia, de tal modo que a dosagem total para um adulto de 70 kg está no intervalo de 0,1 a cerca de 250 mg por kg de peso do sujeito por administração. Uma dosagem preferida é de 5 a cerca de 250 mg por kg de peso do sujeito por administração, e tal terapêutica pode estender-se por 53

Proc. 3716 várias semanas ou meses, e em alguns casos, anos. Entenda-se, no entanto, que o nível específico de dose para qualquer doente em particular dependerá de uma variedade de factores incluindo a actividade do composto específico utilizado; da idade, peso corporal, saúde em geral, sexo e dieta do indivíduo a ser tratado; o tempo e via de administração; a taxa de excreção; outros fármacos que tenham sido administrados previamente; e a gravidade da doença em particular sob terapia, como é bem compreendido por peritos na área.

Uma dosagem típica pode ser um comprimido de 10 a cerca de 1 500 mg tomado uma vez ao dia, ou, múltiplas vezes ao dia, ou uma cápsula de libertação controlada no tempo ou comprimido tomados uma vez ao dia e possuindo um teor proporcionalmente mais elevado do ingrediente activo. O efeito de libertação controlada no tempo pode ser obtido por intermédio dos materiais da cápsula que se dissolvem a diferentes valores de pH, por intermédio de cápsulas que libertam lentamente por pressão osmótica, ou por qualquer outro meio de libertação controlada.

Pode ser necessário em alguns casos utilizar dosagens fora deste intervalo como será óbvio para os peritos na técnica. Adicionalmente, realça-se que o clínico ou médico responsável pelo tratamento saberá como e quando interromper, ajustar, ou terminar a terapêutica de acordo com a resposta de cada doente. 54

Proc. 3716 (5) Grupos de Protecgão

Determinados compostos com a estrutura geral da Fórmula I e II podem tornar necessário a utilização de grupos de protecção para permitir a sua elaboração bem sucedida na estrutura desejada. Os grupos de protecção podem ser escolhidos tendo como referência Greene, T. W., et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Inc., 1991. Os grupos bloqueadores são facilmente removíveis, i.e., podem ser removidos, se desejado, por processos que não irão causar clivagem ou outra perturbação das restantes porções da molécula. Tais processos incluem hidrólise química e enzimática, tratamento com agentes químicos redutores ou oxidantes sob condições moderadas, tratamento com ião fluoreto, tratamento com um metal de transição catalítico e um nucleófilo, e hidrogenação catalítica.

Exemplos de grupos de protecção hidroxilo adequados são: trimetilsililo, trietilsililo, o-nitrobenziloxicarbonilo, p-nitrobenziloxicarbonilo, t-butildifenilsililo, t-butildimetilsililo, benziloxicarbonilo, t-butiloxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetiloxicarbonilo, e aliloxicarbonilo. Exemplos de grupos de protecção carboxilo adequados são: benzidrilo, o-nitrobenzilo, p-nitrobenzilo, 2-naftilmetilo, alilo, 2-cloroalilo, benzilo, 2,2,2-tricloroetilo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo, 2-(trimetilsilil)etilo, fenacilo, p-metoxibenzilo, acetonilo, p-metoxifenilo, 4-piridilmetilo e t-butilo. 55

Proc. 3716 (6) Processo

Os processos para produção dos compostos da presente invenção are representados de modo geral nos Esquemas 1 e 2 (e melhor descritos nos Exemplos):

Esquema 1: m®3

1, S90% tt&J? 0. 2.. f&r-, ' 3. VlB MM m®§ o. V'OM. K<Xí*;H!*0

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Esquema 2: 56

Proc. 3716 Cí

OH 1 J CVí · v tie t io.ttij.0 2< &i :>mi r.a 3. H“ acet x i.eta tioiatuina

De acordo com o Esquema 1, um fenil acetonitrilo substituído é convertido num ácido fenil acético substituído. 0 ácido fenil acético substituído é convertido num derivado ácido activado (e.g., cloreto ácido), seguido de halogenação do carbono alfa e esterificação com um álcool. 0 éster halogenado é tratado com um fenol substituído (e.g., 3-trifluorometilfenol), produzindo um éter de arilo, que é hidrolisado para formar um derivado de ácido carboxílico. 0 derivado ácido é convertido num derivado ácido activado e subsequentemente tratado com um nucleófilo (e.g., N-acetiletanolamina) para gerar o produto desejado.

De acordo com o Esquema 2, um ácido fenilacético substituído é convertido num derivado ácido activado (e.g., cloreto ácido) seguido por halogenação no carbono 57

Proc. 3716 alfa. A porção ácida activada da molécula é feita reagir com um nucleófilo (e.g., N-acetiletanolamina) para proporcionar um ácido protegido. 0 ácido halogenado, protegido é tratado com um fenol substituído (e.g., 3-trifluorometilfenol), produzindo o produto desejado.

Os estereoisómeros dos compostos podem ser preparados utilizando sempre que possível no processo agentes reactivos ou reagentes ou catalizadores numa única das suas formas enantiomérica ou resolvendo a mistura de estereoisómeros por intermédio de métodos convencionais, supra discutido e nos Exemplos. Alguns dos métodos preferidos incluem a utilização de resolução microbiana, resolução dos sais diastereoméricos formados com ácidos quirais ou bases quirais e cromatografia utilizando suportes quirais. (7) "Kits"

Adicionalmente, a presente invenção proporciona a utilização de kits com doses unitárias dos compostos de Fórmula I, Fórmula II, ou Fórmula III em doses orais ou injectáveis. Para além dos recipientes contendo as doses unitárias encontrar-se-à um folheto informativo descrevendo a utilização e os benefícios proporcionados dos fármacos no alívio de sintomas e/ou complicações associadas com a Diabetes Tipo 2, assim como, no alívio de hiperlipidemia e hiperuricémia. Os compostos e as doses unitárias preferidas são os aqui acima descritos. 58

Proc. 3716

EXEMPLOS

Os compostos com Fórmula I, Fórmula II, ou Fórmula III da presente invenção podem ser facilmente preparados utilizando o processo apresentado no Esquema 1, supra, e a partir dos seguintes exemplos. EXEMPLO 1

Este exemplo refere-se à preparaçao de MetilBromo-(4-clorofenil)-acetato. D ? SOCij.

0 composto inicial apresentado no Esquema 1, i.e., ácido 4-clorofenilacético, está disponível a partir de numerosas fontes comerciais (e.g., Aldrich e Fluka).

Um reactor Morton 5-L equipado com um agitador magnético, controlo da temperatura do recipiente, e um funil adicional foi ventilado através de um purificador de gás e carregado com ácido p-clorofenilacético (720 g, 4,2 moles) e S0C12 (390 mL, 630 g, 5,3 moles). A reação foi agitada, aquecida e mantida a 55±5°C durante 1 hora. Foi então adicionado brometo (220 mL, 670 g, 5,3 moles) durante 20 min. e agitada a 55±5°C durante 16 horas. A 59

Proc. 3716 temperatura foi elevada para 80 °C durante 7 horas e depois baixa para 9°C num banho de gelo de água. Foi depois adicionado cuidadodamente metanol (2,0 L, 1,6 kg, 49,4 moles). O solvente foi removido para se obterem 2 líquidos pesando 1,28 kg. Estes foram dissolvidos numa mistura de 0,84 L de água e 2,1 L de éter e separados. A fase orgânica foi lavada uma vez com 0,78 L de NaCl aquoso a 25% (p:p) e seca sobre 0,13 kg de MgS04. Este foi filtrado através de papel de filtro Whatman #1 e foi removido o solvente para se obter 0,985 kg de líquido cor de laranja. A RMN de protões demostrou que isto consistia em 80% de produto e 19% de éster não-bromado. A HPLC demonstrou 82% de produto e 18% de éster não-bromado. A HPLC foi efectuada numa coluna Zorbax SB-C8 a 30°C medindo 250 X 4,6 mm e com tamanho de partícula de 5 μ. A fase móvel era 60:40 (v:v) acetonitrilo: H3P04 a 0,1% a 1,5 mL/min. A detecção foi a 210 nm. A amostra injectada de 1 pL foi dissolvida em acetonitrilo a uma concentração de 10 mg/mL. O produto apresentou um tempo de retenção de 5,0 min. e o do éster não-bromado foi de 3,8 min. Este produto bruto foi purificado por destilação em vácuo para se obter produto 96% puro com um rendimento de 84%. O produto de RMN de protões (CDCI3, 300 MHz) exibui desvios a 3,79 (s, 3H), 5,32 (s, 1H) e 7,20-7,55 (m, 4H) ppm. 60

Proc. 3716 EXEMPLO 2

Este exemplo refere-se à preparação de Metil 4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetato.

Este passo foi semelhante ao mesmo passo na Patente U.S. 3 517 050 com uma excepção, foi utilizado t-butóxido de potássio em vez de metóxido de sódio para impedir a produção do éter metilico correspondente. Um reactor Morton de 5-L equipado com um agitador superior, um detector de temperatura do recipiente, e um funil adicional e sob uma atmosfera de azoto foi carregado com metil bromo-(4-clorofenil)-acetato (830 g, 3,0 moles) e THF (600 mL). O reactor foi arrefecido a 14±3°C num banho de gelo de água e depois foi adicionada uma solução com uma temperatura semelhante de trifluorometil-m-cresol (530 g, 3,3 moles) em t-butóxido de potássio 1,0 M em THF (3,1 L, 3,1 moles). A reacção progrediu exotermicamente com uma subida típica de temperatura excedendo os 25°C e a adição foi controlada para manter a temperatura de 15+2°C e agitando à temperatura ambiente durante 2 horas. A HPLC foi efectuada numa coluna Zorbax SB-C8 a 30°C medindo 250 x 4,6 mm e com tamanho de partícula de 5 μ. A fase móvel era 60:40 (v:v) acetonitrilo: H3PO4 a 0,1% a 1,5 mL/min. A detecção foi a 210 nm. A amostra injectada 61

Proc. 3716 de 1 pL foi dissolvida em acetonitrilo a uma concentração de 10 mg/mL. O produto apresentou um tempo de retenção de 9.6 min., o éster de partida eluiu a 5,0 min., o fenol a 3.,0 e o éster não-bromado a 3,8 min. O solvente foi removido utilizando um evaporator giratório para se obter uma lama amarela lodosa que foi dissolvida numa mistura de 4,0 L de água e 12,0 L de éter. A mistura foi separada e a fase orgânica foi lavada uma vez com 1,6 L de NaOH aquoso a 5% (p:p) seguido por 1,6 L de água e finalmente 1.6 L de NaCl aquoso a 25% (p:p) . A fase orgânica foi seca sobre 0,32 kg de MgS04 e filtrada através de papel de filtro Whatman #1. O solvente foi removido para se obter 1,0 kg de cristais branco-sujo húmidos. Estes foram recristalizados no evaporador giratório dissolvendo-os em 1,0 L de metilciclo-hexano a 75°C e depois arrefecendo a 20°C. Os cristais foram filtrados através de papel de filtro Whatman #1 e lavados com três porções de 0,25 L de metilciclo-hexano fresco (15°C). O produto molhado (0,97 kg) foi seco durante a noite para se obter 0,81 kg de produto 98% puro o que corresponde a um rendimento de 79%. O produto de RMN de protões (CDCI3, 300 MHz) apresenta desvios a 3.,75 (s, 3H) , 5,63 (s, 1H) e 7.05-7,55 (m, 8H) . 62

Proc. 3716 EXEMPLO 3

Este exemplo refere-se à preparação de Ácido 4-Clorofenil- (3-trifluorometilfenoxi)-acético

*ί£ιΚ * HjO Cf, % kJ-*l r v /**\ 0—ç ψ

Um reactor Morton de 12-L com agitador magnético, controlador da temperatura do recipiente, um condensador de refluxo e sob uma atmosfera de azoto foi carregado com metil clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetato (810 g, 2,3 moles) e etanol absoluto (5,8 L) e aquecido com agitação a 57°C para dissolver o sólido. Foi adicionada uma solução de KOH (520 g, 9,3 moles) em 0,98 L de água. A solução foi submetida a refluxo durante 30 min. e o solvente foi removido por intermédio de um evaporador giratório para se obter 2,03 kg de uma mistura de dois líquidos quase incolores. Estes foram dissolvidos em água (16 L) e tratados com 16 g de Norit neutro, depois foram filtrados através de uma almofada de terra de infusão retida em papel de filtro Whatman #1. O pH do filtrado foi diminuído de um valor inicial de 13 para um valor de 1 ou 2 adicionando um total de 2,75 L de HC1 3 M (8,25 moles). Formou-se um sólido muito pegajoso após a adição dos primeiros 2,30 L de ácido e neste momento adicionou-se éter (7 L). As duas camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre MgS04 (230 g) e filtrada através 63

Proc. 3716 de papel de filtro Whatman #1. 0 solvente foi depois removido para se obter 0,85 kg de um xarope branco água. O material foi depois recristalizado no evaporador giratório adicionando metilciclo-hexano (800 mL) e arrefecendo a 18°C com rotação lenta. A temperatura foi depois reduzida para 5°C, os cristais foram filtrados, e lavados 5 vezes com porções de 0,10 L de metilciclo-hexano frio (0°C) para se obter 0,59 kg de cristais molhados. Os cristais molhados foram secos para se obter 0,48 kg de produto (rendimento de 62%) sem ácido p-clorofenil acético detectável na RMN de protões. The produto de RMN de protões (CDC13, 300 MHz) exibe desvios a 5,65 (s, 1H) , 7, 02-7,58 (m, 8H) e 10,6 (s, 1H) . EXEMPLO 4

Este exemplo refere-se à preparação de enantiómeros resolvidos de Ácido Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acético.

Um reactor Morton de topo aberto de 12 L com um agitador superior foi carregado com ácido 4-clorofenil-(3-trifluorometil-fenoxi) acético (350 g, 1,06 moles) e isopropanol (4,0 L) e aquecido a 65±3°C. Foi adicionada 64

Proc. 3716 uma lama de cinconidina (-) (300 g, 1,02 moles) em isopropanol (2,0 L) , todo o sólido foi enxaguado para o interior do reactor com 0,8 L adicionais de isopropanol. A temperatura baixou de 65 para 56°C e formou-se no final uma solução transparente, cor de laranja e a mistura foi mantida a 55±5°C durante 2 horas. Foram recolhidos por filtração cristais finos através de papel de filtro Whatman #1, lavando uma vez com 0,7 L de isopropanol quente. Os cristais foram secos durante 16 horas à temperatura ambiente numa estufa de vácuo de 12,6 L sob um fluxo de azoto a 5 LPM. 0 sólido seco pesava 0,37 kg e possuia um excesso enantiómerico (ee) de 80% do enantiómero (+). 0 excesso enantiomérico foi determinado por intermédio de HPLC utilizando uma coluna WhelkO-1 de 250 x 4,6 mm à temperatura ambiente. As amostras injectadas foram 20 pL de soluções de 2 mg/mL das amostras em etanol. A coluna foi eluida com hexano:isopropanol: ácido acético, 95:5:0,4, a um fluxo de 1 mL/min. A detecção foi a 210 nm. O enantiómero ( + ) eluiu entre 7 a 8 min. e o enantiómero (-) entre 11 a 13 min. O licor primordial produziu uma segunda colheita quase imediatamente que foi filtrada, lavada, e seca para produzir 0.06 kg de sal que possui um ee de 90% do enantiómero (-) . Foram obtidas de modo semelhante, uma terceira, quarta e quinta colheitas pesando respectivamente 0,03 kg, 0,03 kg e 0,7 kg; com excesso do enantiómero (-) respectivamente de 88%, 89% e 92%. O sal bruto ( + ) (320 g) foi recristalizado a partir de uma mistura de etanol (5,9 L) metanol (1,2 L) . A mistura foi aquecida com agitação superior para 65

Proc. 3716 dissolver, arrefecida à temperatura ambiente durante 16 horas, filtrada e lavada duas vezes com 0,20 L de etanol:metanol 5:1 (v:v). Os cristais foram secos para se obter 0,24 kg do enantiómero ( + ) que possuía um ee de 97%. Isto correspondeu a uma recuperação de 80% do isómero. O sal resolvido foi suspendido numa mistura de éter (6,5 L) e água (4,0 L) com agitação superior. O pH foi reduzido para 0-1 como medido por fitas indicadoras de pH com uma solução de H2SO4 concentrada (0,13 L) em água (2,5 L). As fases foram separadas e a fase orgânica e lavadas duas vezes com porções de 6,5 L de água. Foi adicionado éter (1,9 L) e a camada orgânica foi lavada uma vez mais com 6,5 L de água. Após a separação final, foi adicionado 0,1 L de NaCl aquoso 25% (p:p) para limpar qualquer vestígio de emulsão. O produto foi seco sobre 0,19 kg de MgS04, filtrado e o solvente removido para se obter 0,13 kg de xarope branco água que solidifica quando arrefecido. Isto correspondeu a uma recuperação de 97% de produto que possuía um ee de 95% do ( + ) enantiómero. [a] d+5,814°(c.= 0, 069 em álcool metílico) . O (-) sal bruto combinado (200 g) foi recristalizado a partir de isopropanol (3,1 L) . A mistura foi aquecida para dissolver a maioria do sólido e filtrada rapidamente para remover os sólidos insolúveis. A mistura foi então arrefecida com agitação à temperatura ambiente durante 16 horas, filtrada, lavada, e seca para se obter 0,16 kg do enantiómero (-) que possui um ee de 97%. isto correspondeu a uma recuperação de 49% deste isómero. O enantiómero (-) do ácido foi isolado do mesmo modo como acima descrito para o ( + ) ácido. O sal resolvido foi 66

Proc. 3716 suspendido em éter e água, o pH foi bixado com H2SO4 concentrado, e o produto foi extraído na fase orgânica. EXEMPLO 5 A. Preparação de Cloreto de (-)4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetilo

Um frasco de evaporação de 2 L com agitador magnético, adaptador de Claissen, termómetro no recipiente e um condensador de refluxo dirigido para um purificador de gás foi carregado com ácido (-) clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) acético (143 g, 0,42 mole baseado numa pureza de 97%) e CHCI3 (170 mL) e aquecido até à fervura de modo a dissolver. Foi adicionado SOCI2 (38 mL, 62,1 g, 0,52 mole) . A mistura foi aquecida até refluxo (68°C final) durante 4,5 horas e depois foram removidos os voláteis para se obter 151 g de líquido amarelo turvo (rendimento aparente de 103%) . O material foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. 67

Proc. 3716 B. Preparação de Cloreto de (+)4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetilo n jr\ > % α Wí 0 W7 0.· S\ / V* & Um frasco de evaporação de 3 L com agitador magnético, adaptador de Claissen, termómetro no recipiente e um condensador de refluxo direccionado para um purificador de gás foi carregado com ácido (+)clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) acético (131 g, 0,37 mole) e CHCI3 (152 mL) e aquecido até à fervura de modo a dissolver. Foi adicionado SOCI2 (35 mL, 56,5 g, 0,48 mole). A mistura foi aquecida até refluxo (70°C final) durante 4 horas e depois liberta de voláteis para se obter 139 g de liquido. O material utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. EXEMPLO 6 A. Preparação de (-) 2-Acetamidoetil-4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetato CH3 * ho^SyCM> CisHgCl^íjQi ^ ( CíHoNOj ° 349.14 CF3 Toaír

Cl DMF cal, ]>ixidíiiâ etfter 10° c

Cl-

C«H}7aF3N04 415.80

Ql ^ 0

CF, 68

Proc. 3716

Um frasco de evaporação de 3 L com agitador magnético, termómetro no recipiente, sob uma atmosfera de azoto e num banho de gelo de água foi carregado com DMF (420 mL), piridina (37 mL, 36 g, 0,46 mole) e N-acetoetanolamina (39 mL, 43 g, 0,42 mole). A mistura foi arrefecida entre 0o a 5°C e foi adicionada uma solução de cloreto de (-)4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetilo bruto (151 g, 0,42 mole baseado num rendimento de 100% do passo anterior) em éter (170 mL) durante um período de 40 min. de modo a manter a temperatura do recipiente abaixo de 13°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e dissolvida adicionando água (960 mL) seguida de acetato de etilo (630 mL) . A adição de água progrediu exotermicamente subindo a temperatura de 24 0 para 34°C. A adição de acetato de etilo provocou uma descida na temperatura para 30 °C. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída uma vez com acetato de etilo (125 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram extraídas uma vez com NaHC03 aquoso (125 mL) a 7% (p:p) e cinco vezes com porções de 60 mL de água e depois duas vezes com porções de 60 mL de NaCl aquoso a 25% (p:p) . O produto foi seco sobre MgS04 (42 g) e filtrada através de papel de filtro Whatman #1. O solvente foi removido utilizando um evaporador giratório para se obter 160 g de um xarope amarelo correspondendo a um 80% rendimento com base na RMN de protões que exibe 87% de produto, 8% de EtOAc, 4% de amida não bromada, e 1% de DMF. Este xarope foi dissolvido em MTBE (225 mL) à temperatura ambiente e arrefecido (-15°C). Foi adicionado hexanos a 85% (400 mL) com agitação. Formaram-se dois líquidos, depois cristais, 69

Proc. 3716 depois a mistura formou um sólido. A massa do sólido foi raspada para um funil de Buchner forrado com Whatman #1, compactada e lavada três vezes com porções de 100 mL de MTBE:hexanos 1:1 (v:v) para se obter 312 g de produto molhado que seco tem 12 7 g, correspondendo a um rendimento de 73%. B. Preparação de (+)2-Acetamidoetil4-Clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetato

Um frasco de fundo redondo de 3 L com agitador magnético, termómetro no recipiente, sob uma atmosfera de azoto e num banho de gelo de água foi carregado com DMF (365 mL) , piridina (33 mL, 32,3 g, 0,41 mole) e N-acetoetanolamina (34 mL, 38,1 g, 0,37 mole). A mistura foi arrefecida para entre 0o a 5°C e foi adicionada uma solução de (+) cloreto de 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi)-acetilo bruto (139 g, 0,37 mole com base num rendimento de 100% do passo anterior) em éter (155 mL) durante um período de 25 min. de modo a manter a temperatura do recipiente abaixo dos 13°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 40 horas e dissolvida adicionando água (850 mL) seguida de acetato de etilo (550 mL) . A adição de água prosseguiu exotermicamente subindo a temperatura de 24° para 34°C. A adição de acetato de etilo provocou uma descida da 70

Proc. 3716 temperatura para 30°C. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída uma vez com acetato de etilo (110 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas duas vezes com porções de 55 mL de água e depois cinco vezes com porções de 55 mL de NaCl aquoso a 25% (p:p) e secas sobre 30 g de MgS04 e filtradas através de papel de filtro Whatman #1. O solvente foi removido utilizando um evaporador giratório para se obter 168 g de um líquido amarelo correspondendo a um rendimento de 86% com base na NMR de protões que apresenta 79% de produto, 9% de EtOAc, 8% de amida não bromada, e 4% de DMF. O produto foi cristalizado num copo de vidro de 800 mL por dissolução em MTBE (200 mL) à temperatura ambiente, arrefecimento a -15°C durante 1,4 horas, por adição de 200 mL de hexanos a 85% e depois por arrefecimento durante 1 hora. A massa do sólido foi raspada para um funil de Buchner forrado com Whatman #1, compactada no fundo e lavada uma vez com MTBE:hexanos 1:1 (v:v) (100 mL) para se obter 201 g do produto molhado. O produto foi seco sob fluxo de azoto e triturado com hexanos a 85% ( 700 mL) utilizando uma agitador superior. O material foi filtrado e seco para se obter 87 g do produto. [a]D+2, 769° (c.= 0, 048 em álcool metílico). [a]D-2.716° (c.= 0,049 em álcool metílico). Os (+) e (-) enantiómeros foram também analisados por HPLC utilizando uma coluna R,R WhelkO-1 com 250 x 4, 6 mm à temperatura ambiente. As amostras injectadas foram 20 pL de soluções de 2 mg/mL das amostras em etanol. A coluna foi eluída com isopropanol:hexano 60:40 a um fluxo de 1 mL/min. A detecção foi a 220 nm. O enantiómero (+) eluiu 71

Proc. 3716 entre 5,0 a 5,2 min. e o enantiómero (-) entre 5,7 a 5,9 min. EXEMPLO 7

Este exemplo refere-se à inibição do citocromo P450 2C9 (CYP2C9).

Foi avaliada a actividade de hidroxilaçao da Tolbutamida (100 μΜ14 C-tolbutamida; NADPH 1 mM) em microssomas misturado de figado humano (0,6 mg proteína/mL)) durante 60 minutos a 37°C tanto com, como sem compostos teste. Foram testados ácido racémico halofénico, (-) ácido halofénico e (+) ácido halofénico (0,25 μΜ a 40 μΜ) . Como demonstrado na Figura 1, ácido racémico halofénico inibiu a actividade de hidroxilação da tolbutamida mediada por CYP2C9 em microssomas de figado humano com uma IC50 aparente de 0,45 μΜ. Verificou-se uma diferença substancial da capacidade dos enantiómeros de ácido halofénico para inibir CYP2C9. O ( + ) ácido halofénico tinha uma IC50 aparente de 0,22 μΜ enquanto que o (-) ácido halofénico era quase 20 vezes menos potente com uma IC50 aparente de 3,6 μΜ. EXEMPLO 8

Este exemplo refere-se ao decurso de tempo de abaixamento de glicose. 72

Proc. 3716 A. Material e Métodos

Foram comprados ratinhos C57BL/6J ob/ob macho, com 9-10 semanas de idade, do The Jackson Laboratory (Bar

Harbor, ME, USA). Os animais foram mantidos (4-5 ratinhos/caixa) em condições convencionais de laboratório a 22°C e 50% de humidade relativa, e foram mantidos numa dieta de ração de roedor Purina e água ad libitum. Antes do tratamento, foi recolhido sangue da veia da cauda de cada animal. Os ratinhos que apresentavam niveis de

glicose no plasma de não jejum entre 300 e 500 mg/dL foram utilizados. Cada grupo de tratamento consistiu em 10 ratinhos que foram distribuídos de modo que os níveis de glicose fossem equivalentes em cada grupo no início do estudo. Os ratinhos receberam doses orais uma vez através de sonda com veículo, halofenato racémico (250 mg/kg), halofenato (-) (250 mg/kg) ou halofenato (+) (250 mg/kg).

Todos os compostos foram distribuídos numa formulação líquida contendo dimetil sulfóxido (DMSO) a 5% (v/v),

tween 80 a 1% (v/v) e metilcelulose a 2, 7% (w/v) . O volume de alimentação por sonda foi de 10 mL/kg. Foram recolhidas amostras de sangue a 1,5, 3, 4,5, 6, 7,5, 9 e 24 horas após a dose e analisada para glicose plasmática. As concentrações de glicose no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando o método da glicose oxidase (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA). A significância das diferenças entre grupos (comparando tratado com fármaco com tratado com veículo ou entre grupos tratados com fármaco) foi avaliada utilizando o teste t de Student independente. 73

Proc. 3716 B. Resultados

Como ilustrado na Figura 2, o halofenato racémico reduziu significativamente as concentrações de glicose no plasma na maioria dos tempos com o pico de actividade a 9 horas. 0 halofenato (-) exibiu uma redução de glicose no plasma tão cedo como ao fim de 1,5 horas e alcançou o seu pico de actividade ao fim de 3 horas. As concentrações de glicose no plasma mantiveram-se baixas até 24 horas. 0 halofenato (+) não exibiu actividade significativa até 4,5 horas e o pico da actividade foi ao fim de 7,5 horas. A glicose no plasma começou depois a recuperar. Verificaram-se diferenças significativas entre (-) e (+) enantiómeros de halofenato nos tempos 3 e 24 horas. A actividade do halofenato (-) teve um início mais rápido e foi mantida por mais tempo. EXEMPLO 9

Este exemplo refere-se à actividade de abaixamento da Glicose. A. Materiais e Métodos

Foram comprados ratinhos ob/ob C57BL/6J macho, com 8-9 semanas ao The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA). Os animais foram mantidos (4-5 ratinhos/caixa) em condições convencionais de laboratório a 22°C e 50% de humidade relativa, e foram mantidos com uma dieta de ração para roedor Purina e água ad libitum. Antes do 74

Proc. 3716 tratamento, foi recolhido sangue da veia da cauda de cada animal. Foram utilizados ratinhos que possuíam em situação de não jejum níveis de glicose no plasma entre 300 e 520 mg/dL. Cada grupo de tratamento era consistindo em 10 ratinhos que foram distribuídos de modo que os níveis médios de glicose fossem equivalentes em cada grupo como no princípio do estudo. Os ratinhos receberam doses orais por alimentação através de sonda uma vez a dia durante 5 dias com veículo, halofenato racémico (250 mg/kg), halofenato (-) (125 e 250 mg/kg) ou halofenato (+) (125 e 250 mg/kg). O halofenato racémico foi distribuído em 2,7% (p/v) de metilcelulose e ambos os enantiómero (-) e enantiómero (+) foram distribuídos numa formulação líquida contendo dimetil sulfóxido (DMSO) a 5% (v/v), tween 80 a 1% (v/v) e metilcelulose a 2,7% (p/v). O volume de alimentação através de sonda foi de 10 mL/kg. Foram retiradas amostras de sangue à hora 3, 6, 27, 30 e 120 após a primeira dose e analisadas para glicose e insulina no plasma. Os animais foram submetidos a jejum durante a noite (14 horas) antes das 120 horas de recolha de amostras. As concentrações de glicose no plasma foram determinadas colorimetricamante utilizando o método da oxidase da glicose (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA). As concentrações de insulina no plasma foram determinadas utilizando o Kit Rat Insulin RIA da Linco Research Inc. (St. Charles, MO, USA). A significância das diferenças entre os grupos (comparando os tratados com fármaco com os tratados com veículo) foi avaliada utilizando o Teste t de Student independente. B. Resultados 75

Proc. 3716

Tal como ilustrado na Figura 3, o halofenato (-) reduziu significativamente as concentrações de glicose no plasma a 6, 27 e 30 horas. O halofenato (-) nos dois níveis dosagem baixou significativamente as concentrações de glicose no plasma a 6, 27, e 30 horas. A dose elevada (250 mg/kg) foi também activa à hora 3. O halofenato (+) a 125 mg/kg exibiu redução da glicose no plasma a 6 e 27 horas, enquanto que a 250 mg/kg, foram observadas concentrações reduzidas de glicose no plasma a 3, 6, 27 e 30 horas. Os níveis de insulina no plasma estão representados na Figura 4. O halofenato racémico reduziu significativamente a insulina a 6 e 27 horas. As insulinas no plasma foram significativamente reduzidas no grupo de halofenato (-) a 27 e 30 horas com ambas as doses e foi significativamente reduzida às 30 horas nos animais tratados com 250 mg/kg/dia. O halofenato (+) reduziu significativamente a insulina a 27 e 30 horas com ambas as doses. A 125 mg/kg/dia foi também observada uma redução significativa após 6 horas. Após jejum durante a noite (a 120 horas), todo os tratamentos reduziram significativamente as concentrações de glicose no plasma (Figura 5). As insulinas no plasma foram reduzidas significativamente em todos os grupos tratados com halofenato excepto o de halofenato (+) a 125 mg/kg/dia (Figura 6). EXEMPLO 10

Este exemplo refere-se à melhoria na Resistência à Insulina e Tolerância Diminuída à Glicose. 76

Proc. 3716 A. Materiais e Métodos

Mantiveram-se ratos fa/fa Zucher macho, com 8-9 semanas de idade (Charles River), (2-3 ratos/caixa) sob condições convencionais de laboratório a 22°C e 50% de humidade relativa, e foram mantidas com uma dieta de ração para roedor Purina e água ad libitum. Antes do tratamento, os ratos foram distribuídos por 6 grupos com base no peso corporal. Cada grupo de tratamento era consistindo em 8 ratos. Os ratos receberam doses orais por alimentação através de sonda com veículo, halofenato racémico (100 mg/kg), halofenato (-) (50 ou 100 mg/kg) ou halofenato ( + ) (50 ou 100 mg/kg) . Todos os compostos foram distribuídos numa formulação líquida continham dimetil sulfóxido (DMSO) a 5% (v/v) , tween 80 a 1% (v/v) e metilcelulose 2,7% (p/v). 0 volume de alimentação através de sonda foi de 10 mL/kg. Todos os ratos receberam um teste de tolerância à glicose oral (1,9 g/kg) 5,5 horas após o tratamento e 4 horas após a retirada da comida. Foram recolhidas amostras de sangue a 0, 15, 30, 60, 90, 120, e 180 minutos após o teste de tolerância à glicose para medição de glicose no plasma. OS grupos do veículo, halofenato (-) (50 mg/kg) e halofenato (+) (50 mg/kg) foram sujeitos a um teste de tolerância à insulina após alimentação através de sonda diária dos tratamentos respectivos durante 5 dias. No dia 5, os ratos receberam a insulina intravenosa (0,75 U/kg) 5,5 horas após a última dose e 4 horas após a remoção da comida. Foram recolhidas amostras de sangue a 3, 6, 9, 12, 15 e 18 minutos após a injecção de insulina para medição da glicose no plasma. As concentrações de glicose 77

Proc. 3716 no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando o método da oxidase da glicose (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, U.S.A.). A significância das diferenças entre grupos (comparando o tratado com fármaco com o tratado com veículo ou entre grupos tratados com fármaco) foi avaliada utilizando Teste t de Student independente. B. Resultados

Como ilustrado na Figura 7A, ratos Zucker obesos com Tolerância Diminuída à Glicose possuíam níveis inferiores de glicose no plasma após um teste de tolerância à glicose após tratamento com halofenato. 0 halofenato (-) foi o mais eficaz a baixar a glicose e teve um efeito que persistiu mais tempo do que o racemato ou enantiómero (+). A Figura 7B apresenta a área incremental sob a curva (AUC) para todos os grupos de tratamento. Os animais tratados com o halofenato (-) exibiram reduções significativas na área da glicose em relação aos controlos tratados com veículo. Embora a AUC estivesse reduzida nos grupos tratados com o racemato ou halofenato ( + ) , os efeitos não foram tão grandes como nos ratos tratados com halofenato (-) e as diferenças não foram significativamente significativas.

As alterações à sensibilidade à insulina foram avaliadas monitorizando a queda da glicose após uma injecção intravenosa de insulina. 0 declive da linha é uma indicação directa da sensibilidade à insulina do animal teste. Como apresentado na Figura 8, a 78

Proc. 3716 sensibilidade à insulina foi significativamente aumentada após 5 dias de tratamento com halofenato (-) comparado com os controlos tratados com veiculo (p<0,01) e animais tratados com halofenato (+) (p<0,05). 0 tratamento com halofenato (+) teve um efeito pequeno na sensibilidade à insulina que não foi significativamente diferente do controlo tratado com veiculo (p=0,083). 0 tratamento com halofenato (-) reduziu substancialmente a resistência à insulina em ratos Zucker obesos, um modelo bem estabelecido de Tolerância Diminuída à Glicose e resistência à insulina. EXEMPLO ILUSTRATIVO 11

Este exemplo refere-se à actividade de abaixamento de lipidos. A. Materiais e métodos

Foram obtidos ratos Zucker obesos diabéticos macho (ZDF) dos GMI Laboratories (Indianapolis, IN) com 9 semanas de idade. Foram administrados veiculo ou enantiómeros de halofenato por alimentação através de sonda oral diariamente tendo inicio aos 74 dias de idade. Foram obtidas amostras iniciais de sangue para análises um dia antes do tratamento e nos tempos indicados no protocolo de tratamento. 0 sangue foi analisado para triglicéridos no plasma e colesterol por técnicas convencionais. 79

Proc. 3716 B. Resultados

Na experiência I os animais receberam uma dose de 25 mg/kg/dia. Como apresentado na Figura 9A e Figura 9B, verificou-se um decréscimo significativo no colesterol no plasma apenas em animais tratados com o halofenato (-) após 7 e 13 dias de tratamento. Na experiência II, os animais com 107 dias de idade receberam doses diárias de 12,5 mg/kg/dia ou de 37,5 mg/kg/dia do (-) e (+) enantiómeros de halofenato. Como apresentado na Figura 10A e Figura 10B, o colesterol no plasma baixou significativamente com a dose elevada após 7 dias mas não após 14 dias de tratamento com o halofenato (+). Contrariamente, para o halofenato (-) à dose baixa, observou-se uma descida significativa no colesterol após 7 dias. Verificou-se um declínio muito maior do colesterol no plasma que foi aparente após 7 e 14 dias de tratamento. Como apresentado na Figura 11A e Figura 11B, foi também verificado um decréscimo significativo dos triglicéridos no plasma 7 dias após tratamento com a dose elevada que foi de uma maior magnitude em animais tratados com o enantiómero (-) de halofenato. EXEMPLO 12

Este exemplo refere-se a actividade de abaixamento da glicose de análogos de halofenato (±) e análogos de halofenato (-) . 80

Proc. 3716 A. Materiais e métodos

Foram comprados ratinhos ob/ob C57BL/6J macho, com 8-9 semanas de idade, do The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA). Os animais foram mantidos (4-5 ratinhos/caixa) sob condições convencionais de laboratório a 22±3°C de temperatura e 50+20% de humidade relativa, e foram mantidos com uma dieta de ração para roedor Purina e água ad libitum. Antes do tratamento, foi recolhido sangue da veia da cauda de cada animal. Foram utilizados ratinhos que possuíam níveis de glicose no plasma em não jejum entre 250 e 500 mg/dL. Cada grupo de tratamento era consistindo em 8-10 ratinhos que foram distribuídos de modo a que os níveis médios de glicose fossem equivalentes em cada grupo no início do estudo. Os ratinhos receberam doses orais por alimentaçãooatravés de sonda uma vez a dia durante 1-3 dias com veículo, (-) ácido halofénico, análogo (±) 14, 29, 33, 34, 35, 36, 37, ou 38 a 125 mg/kg ou análogo (-) 29, 36, 37 ou 38 a 150 mg/kg. Os compostos foram distribuídos numa formulação líquida contendo dimetil sulfóxido (DMSO) a 5% (v/v),

tween 80 a 1% (v/v) e metilcelulose a 0,9% (p/v) . O volume de alimentação através de sonda foi de 10 mL/kg. Foram recolhidas amostras de sangue 6 horas após cada dose e analisadas para glicose plasmática. O consumo de comida e O peso corporal foram medidos diariamente. As concentrações de glicose no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando o método da oxidase da glicose (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA). As diferenças significativas entre grupos (comparando os 81

Proc. 3716 tratados com fármaco com tratados com veículo) foram avaliadas utilizando o teste t de Student independente. B. Resultados

Como ilustrado na Tabela 2, os compostos foram avaliados em 5 experiências diferentes. Uma dose única de (-) ácido halofénico reduziu significativamente as concentrações de glicose no plasma a 6 horas. 0 análogo 14 baixou significativamente as concentrações de glicose no plasma a 6, 30 e 54 horas. O análogo 33 baixou significativamente as concentrações de glicose no plasma a 6 e 54 horas. O análogo 29 e 38 baixou significativamente as concentrações de glicose no plasma a 6, 30 e 54 horas. O análogo 35 e 36 baixou significativamente as concentrações de glicose no plasma a 30 e 54 horas. O análogo 37 baixou significativamente as concentrações de glicose no plasma a 54 horas. A dose única dos análogos (-) 29, 36, 37 e 38 reduziu significativamente as concentrações de glicose no plasma a 6 horas. Os compostos dos tratamentos não afectaram o consumo de comida pelos animais e o peso corporal.

Fórmula II 82

Proc. 3716

Tabela 1: análogos de halofenato (+) e (-) . Compostos descritos com referência à Fórmula II.

Cmposto n° X CX3 R2 Ácido halofénico Cl CF3 H 14 F CF3 (CH2)2NHAc 29 Br CF3 (CH2)2NHAc 33 Cl CF3 (CH2)3CH3 35 Cl CF3 (CH2)2N_(CH3)2 36 Cl CF3 (CH2)2NHCOPh 37 Cl CF3 CH2CONH2 38 Cl CF3 CH2CON_(CH3)2

Tabela 2: Actividades de abaixamento de Glicose de Análogos de Halofenato (±) e Halofenato (-)

Predose 6 horas 30 horas 54 horas Glucose (mg/dl) Glucose (mg/dl) VALOR P Glucose (mg/dl) P VALUE Glucose (mg/dl) VALOR P vs. veíc, Vs. veíc. vs. veíc. Veículo 313_18 303_19.8 NA NA (-)_ ácido halofénico 312.9_17.7 163.8_11.8 0.0011 NA NA Veículo 360.2_27.8 405.8_25.8 356.0_27.6 386.1_20.6 (_) Análogo 14 361.0_17.1 328.9_34.1 0.0444 267.0_21.3 0.0099 293.0_29.4 0.0092 Veículo 291.6_18.5 363.0_25.1 340.8_30.0 351.5_23.8 (+) Análogo 33 292.0_19.1 227.5_13.2 0.0001 298.0_15.3 0.1119 286.6_9.9 0.0125 Veículo 387.1_14.3 371.5_24.2 326.2_22.5 374.0_37.9 (_) Análogo 29 387.1_16.0 299.7_24.5 0.0259 237.4_14.9 0.0020 293.3_9.7 0.0268 83

Proc. 3716

Predose 6 horas 30 horas 54 horas Glucose (mg/dl) Glucose (mg/dl) VALOR P Glucose (mg/dl) VALOR P Glucose (mg/dl) VALOR P vs. veíc. vs. veíc. vs. veíc. (_J Análogo 35 387.0_18.0 319.6_26.7 0.0834 276.8_17.6 0.0504 286.2_31.5 0.0458 (_J Análogo 37 387.4_18.8 345.4_19.7 NS 312.5_21.7 NS 285.1_14.7 0.0210 Veículo 329.6_16.1 361.8_23.2 346.5_24.6 379.2_24.4 (_) Análogo 36 329.7_17.6 300.5_27.3 0.0522 249.7_8.6 0.0008 272.2_18.4 0.0013 (_) Análogo 38 329.4_18.9 303.2_18.2 0.0312 245.6_15.6 0.0014 243.1_10.6 0.0000 Veículo 373.0_13.6 405.8_33.7 NA NA (-) Análogo 36 373.2_15.5 281.1_18.2 0.0019 NA NA (-) Análogo 37 373.4_16.1 271.7_22.5 0.0018 NA NA (-) Análogo 38 373.4_16.1 251.2_23.6 0.0007 NA NA (-) Análogo 29 372.2_17.1 333.5_16.1 0.0353 NA NA EXEMPLO 13

Este exemplo refere-se a uma comparação entre as actividades do halofenato (-) e halofenato (+). A. Materiais e métodos

Foram adquiridos ratos ZDF macho com 8-9 semanas de idade da Genetic Models, Inc. (Indianapolis, IN). Os animais foram mantidos (3 ratos/caixa) sob condições convencionais de laboratório a 22±3°C de temperatura e 84

Proc. 3716 50±20% de humidade relativa, e foram mantidos com uma dieta de ração para roedor Purina e água ad libitum. Antes do tratamento, foi recolhido sangue da veia da cauda de cada animal. Foram utilizados os ratos que tinham níveis de glicose no plasma com 4 horas de jejum entre 200 e 500 mg/dL. Cada grupo de tratamento era consistindo em 8-10 ratos que foram distribuídos de modo que os níveis médios de glicose fossem equivalentes em cada grupo no início do estudo. Os ratos receberam doses orais por alimentação através de sonda uma vez ao dia durante 3 dias com veículo, halofenato (-) ou halofenato (+) a 50 mg/kg. Os compostos foram distribuídos numa formulação líquida contendo dimetil sulfóxido (DMSO) a 5% (v/v), tween 80 a 1% (v/v) e metilcelulose a 0,9% (p/v). O volume de alimentação através de sonda foi de 5 mL/kg. Foram recolhidas amostras de sangue 5 horas após a dose no dia 2 e 3. As concentrações de glicose no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando o método da oxidase da glicose (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA) . As diferenças significativas entre os grupos (comparando os tratados com fármaco com os tratados com veículo) foi avaliada utilizando o Teste t de Student independente. B. Resultados A administração oral de halofenato (-) a 50 mg/kg reduziu significativamente as concentrações de glicose no plasma, enquanto que halofenato (+) aos mesmos níveis de dosagem não reduziu as concentrações de glicose no plasma 85

Proc. 3716 quando comparado com animais tratados com veiculo (Figura 12) . EXEMPLO 14

Este exemplo refere-se a um estudo farmacocinético de (±) halofenato e (-) halofenato. A. Materiais e métodos

Foram adquiridos ratos SD macho com 225-250 g da Charles River. Os animais foram mantidos (3 ratos/caixa) sob condições convencionais de laboratório a 22±3°C de temperatura e 50±20% de humidade relativa, e foram mantidos com uma dieta de ração para roedor Purina e água ad libitum. Foi colocado um catéter na artéria carótida esquerda sob pentobarbital de sódio (50 mg/kg i.p.) e os animais recuperaram durante 2 dias antes do tratamento. Foram administradas doses individuais de (±) halofenato ou halofenato (-) a 50 mg/kg por alimentação através de sonda oral. Os compostos foram distribuídos numa formulação liquida contendo dimetil sulfóxido (DMSO) a 5% (v/v), tween 80 a 1% (v/v) e metilcelulose a 0,9% (p/v). O volume de alimentação através de sonda foi de 5 mL/kg. Foram recolhidas amostras de sangue a 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a dose. As amostras de plasma foram analisadas para cada ácido enantiomérico ((-) ácido halofénico e (+) ácido halofénico) por intermédio de um ensaio HPLC quiral especifico, uma vez que os 86

Proc. 3716 ésteres são pro-fármacos, que são concebidos para se converter nos seus respectivos ácidos enantioméricos in vivo. B. Resultados

Após administração oral de halofenato (±) , foram detectados nas amostras de plasma (-) ácido halofénico e (+) ácido halofénico. Como apresentado na tabela 3, parece que os dois ácidos enantioméricos possuem perfis de disposição diferentes. A eliminação de (-) ácido halofénico foi muito mais baixa do que a de ( + ) ácido halofénico. Como resultado, a AUC do (-) ácido halofénico foi siqnificativamente mais elevada do que a AUC para (+) ácido halofénico, 4 708, 0 vs. 758, 0 pg-h/mL e a semi-vida terminal foi 46,8 vs. 14,3 horas.

Após administração oral de (-) halofenato, o perfil de disposição do (-) ácido halofénico era basicamente idêntico à administração de (±) halofenato uma vez que a semi-vida terminal é a mesma (Tabela 2). A Cmax e AUC do (-) ácido halofénico eram proporcionalmente mais elevadas simplesmente devido à maior quantidade de halofenato (-) administrados (Tabela 3). O (+) ácido halofénico foi também detectado no plasma mas a concentração era mais baixa do que a do (-) ácido halofénico. Especula-se que o ( + ) ácido halofénico se formou in vivo uma vez que a semi-vida terminal (Ti/2) de ambos os ácidos era similar.

Estes resultados sugerem que a utilização de halofenato (-) é mais desejável uma vez que a AUC do (-) 87

Proc. 3716 ácido halofénico era significativamente mais elevada do que a AUC para o (+) ácido halofénico.

Tabela 3: Análise Farmacocinética de halofenato (-) (Enantiómero -) e halofenato (+) (Enantiómero +) Fármaco administrado (-) Halofenato(n = 3) (_) Halofenato(n = 1) Enantiómero - + - + Dose administrada* 50 mg/kg 0 (metabolite) 25 mg/kg 25 mg/kg Cmax(Pg/rnL) 114.6 _29.7 2.4 _0.5 65.2 30.5 Tmax(horas) 8 - 12 6-12 12 6 AUC (Pg h/mL) 7159 _1103 164.3 79.3 4708 758 Ti/2(horas) 46.4 _4.7 41.7 _11.8 46.8 14.3 A dose de cada enantiómero em (±) halofenato é 50% da dose total da mistura racémica. 88

Proc. 3716

Tabela 4: Concentrações no Plasma de (-) ácido halofénico e (+) ácido halofénico após uma dose individual de halofenato (-).

Compoosto Analisado (pg/mL) Tempo (hora) _(-) ácido halofénico _(+) ácido halofénico Rat 8 Rat 9 Rat 11 Rat 8 Rat 9 Rat 11 0 BOL BOL BOL BOL BOL BOL 1 81.2 23.7 61.0 1.12 BOL BOL 2 100.1 30.4 87.8 1.27 BOL 1.09 4 122.3 36.9 94.5 1.67 BOL 1.95 6 128.3 56.5 116.3 2.96 BOL 1.73 8 128.2 79.0 127.8 2.58 BOL 2.06 12 135.3 80.6 104.8 2.85 2.23 2.08 24 82.5 73.1 66.5 2.22 1.29 1.86 48 56.2 44.5 47.1 1.64 1.03 1.14 72 39.7 37.4 30.8 1.25 BQL BQL 96 31.1 N/A 24.6 BQL N/A BQL 120 20.3 N/A N/A BQL N/A N/A *BQL = Abaixo do Limite Quantificável < 1.00 pg/mL N/A = Amostra não disponível EXEMPLO 15

Este exemplo refere-se à prevenção do desenvolvimento de diabetes e o alívio da hipertrigliceridémia por intermédio de halofenato (-). A. Materiais e métodos 89

Proc. 3716

Foram adquiridos ratinhos db/db C57BL/6J, macho, com 4 semanas de idade, do The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA). Os animais foram mantidos (5 ratinhos/caixa) sob condições convencionais de laboratório a 22±3°C de temperatura e 50±20% de humidade relativa, e foram mantidos com uma dieta de ração em pó para roedor Purina (#8640) e água ad libitum. Antes do tratamento, foi recolhido sangue da veia da cauda de cada animal para determinar as concentrações de glicose, insulina e triglicéridos no plasma. Os ratinhos foram distribuídos de modo que os níveis de glicose médios e o peso corporal fossem equivalentes em cada grupo no início do estudo. O grupo controlo (20 ratinhos) foi mantido com ração em pó misturada com sacarose a 5% e o grupo de tratamento (20 ratinhos) foi mantido com ração em pó misturada com sacarose a 5% e (-) halofenato. A quantidade de halofenato (-) na ração foi ajustada continuamente de acordo com o peso corporal do animal e o consumo de comida para ir ao encontro da dosagem alvo de 150 mg/kg/dia. Foram recolhidas amostras de sangue às 8-10 da manhã uma vez por semana durante 9 semanas em condições de não jejum. O consumo de comida e o peso corporal foram medidos cada 1-3 dias. As concentrações de glicose e triglicéridos no plasma foram determinadas colorimetricamente utilizando kits da Sigma Chemical Co (N° 315 e N° 339, St. Louis, MO, USA) . Os níveis de insulina no plasma foram medidos utilizando um kit de ensaio RIA comprado à Linco Research (St. Charles, MO). As diferenças significativas entre grupos (comparando os tratados com fármaco com os tratados com veículo) foram avaliadas utilizando o Teste t de Student independente. 90

Proc. 3716 B. Resultados

Os ratinhos db/db C57BL/6J às 4 semanas de idade estão num estado pré-diabético. As suas concentrações de glicose no plasma são normais, mas as concentrações de insulina no plasma são significativamente elevadas. Como ilustrado na Figura 13, as concentrações de glicose no plasma em ambos os grupos eram normais no inicio da experiência. Seguindo o curso normal de desenvolvimento da, os níveis de glicose no plasma no grupo controlo aumentaram progressivamente à medida que os animais envelheceram, enquanto que o aumento dos níveis de glicose no plasma no grupo tratado com halofenato (-) foi evitado ou significativamente retardado. Como apresentado na Figura 15, cerca de 30% dos ratinhos não desenvolveram diabetes no grupo tratado com halofenato (-) quando a diabetes é definida como níveis de glicose no plasma >250mg/dL. Por outro lado, nenhum dos ratinhos no grupo controlo se encontra sem diabetes às 10 semanas de idade. De modo consistente com o verificado com a glicose no plasma, a insulina no plasma no grupo controlo decresceu progressivamente, indicando deterioração da capacidade do pâncreas de segregar insulina. 0 tratamento com halofenato (-) manteve a concentração de insulina no plasma, indicando prevenção da deterioração da função pancreática (Figura 14). A Figura 16 apresenta a progressão das concentrações de triglicéridos no plasma versus idade em ratinhos db/db C57BL/6J. A administração de halofenato (-) aliviou o 91

Proc. 3716 aumento da concentração de triglicéridos no plasma durante o período da experiência. EXEMPLO 16

Este exemplo descreve a preparação de (-)2-Acetamidoetil Clorofenil-(3-trifluoro metilfenoxi)-acetato(halofenato(-)).

1} 2. BroHiiaa 3, ánolatnlna

Cloreto de tioailo

CHg O, O O

Combinou-se 4-Clorofenilácido acético com 1,2-dicloroetano e a solução resultante foi aquecida a 45°C. Foi adicionado cloreto de tionilo à mistura de reacção, a qual foi aquecida a 60°C durante 18 horas. Deixou-se a reacção arrefecer até à temperatura ambiente e foi depois lentamente adicionada a uma solução de N-acetiletanolamina em diclorometano. Após agitação durante 30 min., a reacção foi interrompida com carbonato de potássio aquoso e tiossulfato de sódio. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre sulfato de magnésio e filtrada. A remoção do solvente por evaporação com rotação proporcionou N-acetilaminoetil 2-bromo-2-(4-clorofenil)acetato como um óleo. 92

Proc. 3716

1, KCHWPA 2, Resolução

Adicionou-se 3-hidroxibenzotrifluoreto a uma solução de hidróxido de potássio em isopropanol. Foi adicionado N-acetilaminoetil 2-bromo-2-(4-clorofenil)acetato em isopropanol à solução de isopropanol/fenóxido e agitado à temperatura ambiente durante 4 horas. 0 isopropanol foi removido por destilação sob vácuo, e o lodo resultante foi dissolvido em acetato de etilo e lavado duas vezes com água e uma vez com solução salina. Após secagem sobre sulfato de magnésio e filtração, o solvente foi removido para produzir o produto bruto como um óleo. 0 produto bruto foi dissolvido em tolueno/hexanos (1:1 v/v) quente e arrefecido para entre 0 e 10°C para cristalizar o produto. 0 bolo do filtrado foi lavado com hexanos/tolueno (1:1 v/v) e depois seco sob vácuo a 50°C. 0 isolado sólido foi dissolvido em isopropanol 1:6 (v/v) quente em hexanos. Após arrefecimento, formou-se o 2-Acetamidoetil 4-Clorofenil-(3-trifluoro metilfenoxi)- acetato racémico puro como um sólido cristalino. 0 sólido foi recuperado por filtração, o bolo do filtrado foi lavado com isopropanol 1:6 (v/v) em hexanos e seco sob vácuo a 50°C.

0 composto racémico foi dissolvido numa solução de isopropanol (IPA) a 20% e hexano a 80% a 2,5% (p/p) . A 93

Proc. 3716 solução resultante foi passada num Whelk-0 R,R Chiral Stationary Phase (CSP) de modo contínuo até que >98% do extracto de ee fosse removido. 0 solvente foi evaporado do extracto sob pressão reduzida para proporcionar (-) 2-Acetamidoetil 4-Clorofenil-(3-trifluoro metilfenoxi)- acetato. (A resolução do leito em movimento simulado foi executada por Universal Pharm Technologies LLC de 70 Flagship Drive, North Andover, MA 01845.) EXEMPLO ILUSTRATIVO 17

Este exemplo refere-se à diminuição dos níveis de ácido úrico no plasma através da administração de (-) halofenato. A. Materiais e métodos

Foram adquiridos ratos SD macho, com peso 275-300 g de Charles River. Os animais foram mantidos (3 ratos/caixa) sob condições convencionais de laboratório a 22±3°C de temperatura e humidade relativa de 50±20%, e foram mantidos com uma dieta em pó de ração para roedor Purina (#8640) e água ad libitum. Para ser estabelecido um estado hiperuricémico, os animais foram submetidos a uma dieta contendo 2,5% (p/p) de ácido oxónico (Sigma

Chemical Co, St. Louis, MO, USA) durante a experiência. O ácido oxónico eleva o ácido úrico no plasma inibindo a uricase. Os ratos foram submetidos a rastreio de níveis de ácido úrico no plasma 3 dias após terem começado a dieta, e foram excluídos os que apresentavam níveis 94

Proc. 3716 extremos de ácido úrico no plasma. Os ratos foram distribuídos por um de três grupos e os níveis médios de ácido úrico eram equivalentes em cada grupo. Os ratos receberam doses orais por alimentação através de sonda uma vez por dia durante 3 dias com veículo, halofenato (-) ou halofenato (+) a 50 mg/kg. No 4o dia, os respectivos ratos receberam halofenato (-) ou halofenato ( + ) a 100 mg/kg e todos os ratos receberam uma injecção i.p. de ácido oxónico (250 mg/kg) 4 horas após a alimentação através de sonda oral. O halofenato (-) e o halofenato (+) foram distribuídos numa formulação líquida contendo dimetil sulfóxido (DMSO) a 5% (v/v) , tween 80 a 1% (v/v) e metilcelulose a 0,9% (p/v). O ácido oxónico foi distribuído numa formulação líquida contendo metilcelulose a 0,9% (p/v). Os volumes de alimentação através de sonda e injecção foram de 5 mL/kg. Foram recolhidas amostras de sangue após 6 horas da alimentação através de sonda oral no dia 4. Os níveis de ácido úrico no plasma foram determinados colorimetricamente utilizando o Infinity Uric Acid Reagent (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA). A diferença significativa entre os grupos (comparando tratados com fármaco com tratados com veículo) foi avaliada utilizando o Teste t de Student independente. B. Resultados

Como apresentado na Figura 17, a administração oral de halofenato (-) reduziu significativamente os níveis de ácido úrico no plasma. O halofenato (+) também baixou os 95

Proc. 3716 níveis de ácido úrico no plasma, mas não de modo estatisticamente significativo. EXEMPLO 18

Este exemplo refere-se à inibição de isoformas de citocromo P450. A. Materiais e métodos

Utilizaram-se os seguintes substratos de sonda para investigar o potencial inibidor do artigo de teste nas isoformas de citocromo P450 1A2, 2A6, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1 e 3A4: fenacetina a 100 μΜ (CYP1A2), coumarino a 1 μΜ (CY) 2A6), tolbutamida a 150 μΜ (CYP2C9), S-mefenitoína a 50 μΜ (CYP2C19), dextrometorfano a 16 μΜ (CYP2D6), clorzoxazona a 50 μΜ (CYP2E1), e testosterona a 80 μΜ (CYP3A4). A actividade de cada isoforma foi determinada em microssomas hepáticos humanos na presença e ausência do artigo de teste. A menos que de outro modo indicado, todas as incubações foram efectuadas a 37°C. O tamanho da amostra foi N= 3 para todas as condições de teste e de controlo positivo e N= 6 para todas as condições de controlo do veículo. O (-) ácido halofénico (MW = 330) foi preparado à temperatura ambiente como soluções mãe a 1000 X em metanol, depois diluída com tampão Tris para se obter as concentrações finais de 0,33, 1,0, 3,3, 10 e 33,3 μΜ, cada contendo metanol a 0,1%. Foi incluído um controlo de 96

Proc. 3716 veículo (VC) consistindo em microssomas e substrato em tampão Tris contendo metanol a 0,1% sem o artigo de teste para todos os grupos da experiência. Foram preparadas misturas de controlo positivo (PC) utilizando os seguintes inibidores conhecidos de CYP450: furafilino a 5 μΜ (CYP1A2), tranilcipromina a 250 μΜ (CYP2A6), sulfafenazole a 50 μΜ (CYP2C9), omeprazole a 10 μΜ (CYP2C19), quinidina a 1 μΜ (CYP2D6), 4-metilpirazole a 100 μΜ (CYP2E1), e cetoconazole a 5 μΜ (CYP3A4). Foi incluído um controlo de interferência cromatográfica (CIC) para investigar a possibilidade de interferência cromatográfica causada pelo artigo de teste e seus metabolitos. O artigo de teste (a 33,3 pg/mL) foi incubado com proteína microssomal IX, NRS IX, e 10 pL de um orgânico adequado por um período de tempo adequado como abaixo descrito.

Neste estudo utilizaram-se lotes estáveis, congelados de misturas de microssomas hepáticos de macho e fêmea adultos preparados por centrifugação diferencial de homogenatos de fígado (ver, e.g., Guengerich, F. P. (1989). Analysis and characterization of enzymas. Em Principies and Methods of Toxicology (A. W. Hayes, Ed.), 777-813. Raven Press, Nova Iorque). As misturas de incubação foram preparadas em tampão Tris de modo a conterem proteína microssomal (1 mg/mL), cada concentração dos substratos de sonda (como soluções mãe 100X) , e o artigo de teste (a cada concentração) ou PC como adequado para cada isoforma. Após uma pré-incubação de 5 minutos a 37°C, foi adicionado sistema de regeneração de NADPH (NRS) para iniciar as reacções, e as 97

Proc. 3716 amostras foram incubadas a 37°C durante os seguintes períodos de tempo: 30 minutos para fenacetina (CYP1A6), 20 minutos para coumarino (CYP2A6), 40 minutos para tolbutamida (CYP2C9), 30 minutos para S-mefenitoína (CYP2C19), 15 minutos para dextrometorfano (CYP2D6), 20 minutos para clorozoxazona (CYP2E1), e 10 minutos para testosterona (CYP3A4). As reacções de incubação foram terminadas no momento adequado com a adição de um volume igual de metanol, excepto para as incubações com S-mefenitoína, que foram terminadas com a adição de 100 pL de ácido perclórico. Todos os substratos foram avaliados perto das suas respectivas concentrações Km, como previamente indicado.

Após cada incubação, foram determinadas as actividades das isoformas de P450 medindo as taxas de metabolismo para os substratos de sonda respectivos. Os metabolitos monitorizados para cada substrato de sonda foram os seguintes: acetaminofeno para CYP1A2; 7- hidroxicoumarino para CYP2A6; 4-hidroxitolbutramida para CYP2C9; 4-hidroximefenitoína para CYP2C19; dextrorfano para CYP2D6; β-hidroxiclorzoxazona para CYP2E1; e 6β-hidroxitestosterona para CYP3A4. AS actividades foram analisadas utilizando HPLC (In Vitro Technologies, Inc., Baltimore, MD). A inibição foi calculada utilizando a seguinte equação:

Percentagem de Inibição=[ (controlo veículo-tratamento)/controlo veículo] x 100 98

Proc. 3716

Os dados da percentagem de inibição para o artigo de teste foram apresentados num formato de tabela. Foram calculadas estatísticas descritivas (média e desvio padrão) de cada concentração de artigo de teste, depois apresentadas para demonstrar potência inibidora. Os valores IC50 foram também calculados para o artigo de teste utilizando uma equação de curva de 4 parâmetros no Softmax 2.6.1.

As medidas de tempo, temperatura, e concentração neste exemplo são aproximadas. B. Resultados

Os resultados para cada das 7 isoformas de citocromo P450, expressos como actividade metabólica e percentagem de inibição, estão apresentados nas Tabelas 5-8. 0 (-) ácido halofénico inibiu a produção de 4-hidroxitolbutamida (CYP2C9, IC50= 11 μΜ) e inibiu também a produção de 4-hidroximefenitoína (CYP2C19) nos níveis de dose 10 e 33 μΜ. A inibição de outras isoformas de CYP450 não foi observada. Deve-se notar que a IC50 para CYP2C9 nesta experiência foi aproximadamente três vezes a reportada no Exemplo 7 (11 μΜ comparado com 3,6 μΜ). Este resultado é provavelmente devido, pelo menos em parte, à utilização de um (-) ácido halofénico de pureza inferior (ee inferior) no Exemplo 7. 99

Proc. 3716

Tabela 5: Actividades microssomals hepáticas da fenacetina (CYP1A2) e coumarino (CYP2A6) em microssomas macho e fêmea humanos incubados com (-) ácido halofénico às doses de 0,33, 1,0, 3,3, 10, e 33,3 μΜ

Controlo/Artigo de Teste Cone (PM) Phenacetin Coumarin Produção AC (pmol/mg proteína/min) % Inibição Produção 7-HC (pmol/mg proteína/min) % Inibição CIC 33.3 0.00 _0.00 NA 0.00 _0.00 NA VC 0.1% 118_2 0 32.0 _1.4 0 FUR 5 54.5 _1.3 54 NA NA TRAN 250 NA NA 0.00 _0.00 100 (') 0.33 116 _2 1 33.3 _0.7 -_4 ácido 1.0 118 _2 0 32.6 _0.7 -_2 halofénico 3.3 119 _2 -_1 32.1 _0.7 0 10 119_2 -_1 33.1 _0.7 -_3 33.3 119 _2 -_1 32.3 _0.7 -_1 ICõo NA NA

Os valores são a média ± desvio padrão de N= 3 amostras (VC: N= 6) . Abreviaturas: Cone, concentração; AC, acetaminofeno; 7-HC, 7-hidroxicoumarino; CIC, controlo de interferência cromatográfica; VC, controlo de veículo; NA, não se aplica; FUR, furafilina; TRAN, tranileipromina. 100

Proc. 3716 Tabela 6: tolbutamida

Activldades (CYP2C9) e microssomals hepáticas S-mefenitoina (CYP2C19) da em microssomas macho e fêmea humanos incubados com (-) ácido halofénico às doses de 0,33, 1,0, 3,3, 10, e 33,3 μΜ

Controloo/Artigo de Teste Cone(PM) Tolbutamida S- Mefenitoina 4- OH TB Produção (pmol/mg proteína/min) % Inibição 4- OH ME Produção (pmol/mg proteína/min) % Inibição CIC 33.3 0.00_0.00 NA 0.00_0.00 NA VC 0.1% 43.0 _1.4 0 3.17 _0.29 0 OMP 10 NA NA 1.58 _0.05 50 SFZ 50 BQL -100 NA NA (-)c ácido 0.33 41.0 _0.9 5 3.03 0.03 4 halofénico 1.0 38.6 _0.5 10 3.01 0.07 5 3.3 34.2 _0.2 21 2.69 _0.12 15 10 22.7 _0.6 47 2.43 _0.09 23 33.3 12.7 _0.2 71 1.80 _0.07 43 IC50 -11.335 PM >33.3 PM

Os valores são a média ± desvio padrão de N= 3 amostras (VC: N= 6). Abreviaturas: Cone, concentração; 4-OH TB, 4-hidroxitolbutamida; 4-OH ME, 4-hidroximefenitoína; CIC, controlo de interferência cromatográfica; VC, controlo de veiculo; NA, não se aplica; OMP, omeprazole; SFZ, sulfafenazole; BQL, abaixo do limite quantificável. 101

Proc. 3716

Tabela 7: Activldades microssomals hepáticas de dextrometorfano (CYP2D6) e clorzoxazona (CYP2E1) em microssomas macho e fêmea humanos incubados com (-) ácido halofénico às doses de 3, 10, e 33,3 μΜ

Controlo/ Artigo de Teste Cone (μΜ) Dextrometorfano Clorzoxazona Produção DEX (pmol/mg proteína/min) %Inibição Produção 6-OH CZX (pmol/mg proteína/min) %Inibição CIC 33, 3 0,00±0,00 NA 0,00±0,00 NA VC 0, 1% 111±6 0 246±5 0 4-MP 100 NA NA BQL -100 QUIN 1 BQL -100 NA NA (-) ácido 0, 33 107±4 3 238+4 3 halofénico 1,0 110±2 1 2 44±1 1 3,3 104±3 6 239±1 3 10 107±1 4 2 44±6 1 33,3 106±4 5 239±4 3 ic50 NA NA

Os valores são a média ± desvio padrão de N= 3 amostras (VC: N= 6). Abreviaturas: Cone, concentração; DEX, dextrorfano; 6-OH CZX, 6-hidroxiclorzoxazona; CIC, controlo de interferência cromatográfica; VC, controlo de veiculo (metanol a 0,1%); NA, não se aplica; 4-MP, 4-metilpirazole; QUIN, quinidina; BQL, abaixo do limite quantificável. 102

Proc. 3716

Tabela 8: Actividades microssomals hepáticas da testosterona (CYP3A4) em microssomas macho e fêmea humanos incubados com (-) ácido halofénico às doses de 0,33, 1,0, 3,3, 10, e 33,3 μΜ.

Controlo/ Artigo de teste Cone (μΜ) Testosterone Produção 6β- OHT (pmol/mg protein/min) % Inibição CIC 33.3 0,00±0,00 NA VC 0.1% 1843±9 0 KTZ 5 32,4±0,2 98,2 (-) 0,33 1816±12 1,5 Ácido 1,0 1851±14 0 halofénico 3,3 1810±13 1,8 10 1819±4 1,3 33,3 1816±12 1,5 IC50 NA

Os valores sao a média ± desvio padrao de N= 3 amostras (VC: N= 6). Abreviaturas: Cone, concentração; 6β-0ΗΤ, 6β-hidroxitestosterona; CIC, controlo de interferência cromatográfica; VC, controlo de veiculo (metanol a 0,1%); NA, não se aplica; KTZ, cetoconazole; BQL, abaixo do limite quantificável.

Embora a invenção anterior tenha sido descrita em detalhe com o objectivo de clareza de compreensão, será óbvio que poderão ser executadas algumas alterações no âmbito das reivindicações anexas.

Lisboa 18 de Setembro de 2006 103

Claims (46)

1. Proc. 3716 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização do (-) estereoisómero de um composto de Fórmula I,

   em que: R é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em um hidroxilo, aralcoxilo inferior, di-alquilamino inferior -alcoxilo inferior, alcanamido inferior alcoxilo inferior, benzamido-alcoxilo inferior, ureido-alcoxilo inferior, N'-inferior alquil-ureido-inferior alcoxilo, carbamoilo-alcoxilo inferior, halofenoxilo substituído alcoxilo inferior, carbamoílo substituído fenoxilo, carbonilo-alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior-alquilamino inferior, halo substituído alquilamino inferior, hidroxilo substituído alquilamino inferior, alcanoliloxilo inferior substituído alquilamino inferior, ureído, e alcoxicarbonilamino inferior; e cada X é independentemente um halogénio; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e 1 Proc. 3716 em que o estereoisómero (-) é substancialmente livre do estereoisómero (+) do composto, na preparação de um medicamento para modular diabetes de Tipo II num mamífero.
2. 2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é um composto de Fórmula II,

   em que: R2 é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em um fenilo-alquilo inferior, alcanamido inferior-alquilo inferior, e benzamido-alquilo inferior.
3. 3. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é (-) 2-acetamidoetil 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) acetato.
4. 4. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é administrado por infusão intravenosa, distribuição transdérmica, ou distribuição oral. 2 Proc. 3716
5. 5. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a quantidade a ser administrada é cerca de 100 mg a cerca de 3000 mg por dia.
6. 6. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a quantidade a ser administrada é cerca de 500 mg a cerca de 1 500 mg por dia.
7. 7. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a quantidade a ser administrada é cerca de 5 a cerca de 250 mg por kg por dia.
8. 8. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é para ser administrado juntamente com um transportador farmaceuticamente aceitável.
9. 9. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto modula a hiperglicémia reduzindo os níveis de glicose no sangue no mamífero.
10. 10. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto modula a hemoglobina Aic no mamífero.
11. 11. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto modula uma complicação microvascular associada com diabetes.
12. 12. Utilização de acordo com a reivindicação 11, em que a complicação microvascular é retinopatia, neuropatia ou nefropatia. 3 Proc. 3716
13. 13. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto previne o desenvolvimento de diabetes num mamifero.
14. 14. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é para ser administrado em combinação com um composto seleccionado a partir do qrupo consistindo em: uma sulfonilureia ou outra secretogoqo de insulina, uma tiazolidinodiona, um inibidor da glucosidase a, ou insulina.
15. 15. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto modula a sindrome do ovário poliquistico.
16. 16. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto modula Tolerância Diminuída à Glicose.
17. 17. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto modula obesidade.
18. 18. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto modula diabetes gestacional.
19. 19. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que R é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em um hidroxilo, aralcoxilo inferior, di-alquilamino inferior-alcoxilo inferior, alcanamido inferior alcoxilo inferior, benzamido-alcoxilo inferior, ureído-alcoxilo inferior, N'-alquilo inferior-ureído-alcoxilo inferior, carbamoílo- alcoxilo inferior, alcoxilo inferior substituído com 4 Proc. 3716 halofenoxilo, fenoxilo substituído com carbamoílo, carbonilo-alquilamino inferior, N, N-di-alquilamino inferior-alquilamino inferior, alquilamino inferior substituído com halo, alquilamino inferior substituído com hidroxilo, alquilamino ureído inferior substituído com alcanoliloxilo inferior e alcoxicarbonilamino inferior.
20. 20. Utilização de acordo com a reivindicação 2, em que R2 é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em um alquilo inferior, alcanamido inferior- alquilo inferior, e benzamido- alquilo inferior.
21. 21. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o estereoisómero (-) do composto de Fórmula I está numa quantidade em peso de pelo menos 90% relativo à quantidade total do composto de Fórmula I.
22. 22. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o estereoisómero (-) do composto de Fórmula I está numa quantidade em peso de pelo menos 99% relativo à quantidade total do isómero (-) do composto de Fórmula I.
23. 23. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o estereoisómero (-) é (-) ácido 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) acético.
24. 24. Utilização do estereoisómero (-) de um composto de Fórmula I, 5 Proc. 3716

    em que: R é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em um hidroxilo, aralcoxilo inferior, di-alquilamino inferior-alcoxilo inferior, alcanamido inferior alcoxilo inferior, benzamido-alcoxilo inferior, ureído-alcoxilo inferior, Ν'-alquil inferior -ureído- alcoxilo inferior, carbamoil-alcoxilo inferior, alcoxilo inferior substituído com halofenoxilo, fenoxilo substituído com carbamoílo, carbonil-alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior-alquilamino inferior, alquilamino inferior substituído com halo, alquilamino inferior substituído com hidroxilo, alquilamino inferior substituído com alcanoliloxilo inferior, ureído, e alcoxicarbonilamino inferior; e cada X é um halogénio; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e em que o estereoisómero (-) se encontra substancialente livre do estereoisómero (+) do 6 Proc. 3716 composto, na preparação de um medicamento para modular resistência à insulina num mamifero.
25. 25. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o composto é um composto de Fórmula II,

    ífF em que: R2 é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em um fenil-alquilo inferior, alcanamido inferior-alquilo inferior, e benzamido-alquilo inferior.
26. 26. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o composto é (-) 2-acetamidoetil 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) acetato.
27. 27. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o composto é para ser administrado por infusão intravenosa, distribuição transdérmica, ou distribuição oral. 7 Proc. 3716
28. 28. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que a quantidade a ser administrada é cerca de 100 mq a cerca de 3 000 mq por dia.
29. 29. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que a quantidade a ser administrada é cerca de 500 mg a cerca de 1 500 mg por dia.
30. 30. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que a quantidade a ser administrada é cerca de 5 a cerca de 250 mg por kg por dia.
31. 31. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o composto é para ser administrado juntamente com um transportador farmaceuticamente aceitável.
32. 32. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o composto modula a hiperglicémia reduzindo os níveis de glicose no sangue no mamífero.
33. 33. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o composto modula a hemoglobina AiC no mamífero.
34. 34. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o composto modula uma complicação microvascular associada com diabetes.
35. 35. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que a complicação microvascular é retinopatia, neuropatia ou nefropatia. 8 Proc. 3716
36. 36. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o composto previne o desenvolvimento de diabetes num mamífero.
37. 37. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o composto é administrado em combinação com um composto seleccionado a partir do grupo constituído por sulfonilureia ou outra secretogogo de insulina, uma tiazolidinodiona, um inibidor da glicosidase a, ou insulina.
38. 38. Utilização de acordo com a composto modula a síndrome
39. 39. Utilização de acordo com a composto modula Tolerância
40. 40. Utilização de acordo com a composto modula obesidade.
41. 41. Utilização de acordo com a composto modula diabetes g< reivindicação 24, em que o do ovário poliquístico. reivindicação 24, em que o Diminuída à Glicose. reivindicação 24, em que o reivindicação 24, em que o stacional.
42. 42. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que R é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em um hidroxilo, aralcoxilo inferior, di-alquilamino inferior-alcoxilo inferior, alcanamido inferior alcoxilo inferior, benzamido-alcoxilo inferior, ureído-alcoxilo inferior, Ν'- alquilo inferior-ureído-alcoxilo inferior, carbamoílo- alcoxilo inferior, alcoxilo inferior substituído com 9 Proc. 3716 halofenoxilo, fenoxilo substituído com carbamoílo, carbonilo-alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior-alquilamino inferior, alquilamino inferior substituído com halo, alquilamino inferior substituído com hidroxilo, alquilaminoureído inferior substituído com alcanoliloxilo inferior, e alcoxicarbonilamino inferior.
43. 43. Utilização de acordo com a reivindicação 25, em que R2 é um membro seleccionado a partir do grupo consistindo em um alquilo inferior, alcanamido inferior -alquilo inferior, e benzamido- alquilo inferior.
44. 44. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o estereoisómero (-) do composto de Fórmula I está numa quantidade em peso de pelo menos 90% em relação à quantidade total do composto de Fórmula I.
45. 45. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o estereoisómero (-) do composto de Fórmula I está numa quantidade em peso de pelo menos 99% em relação à quantidade total do composto de Fórmula I.
46. 46. Utilização de acordo com a reivindicação 42, em que o estereoisómero (-) é ácido (-) 4-clorofenil-(3-trifluorometilfenoxi) acético ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Lisboa 18 de Setembro de 2006 10