PT1501565E - Compostos e processos para o revestimento hemocompatível de superfícies - Google Patents

Description

Descrição

Compostos e processos para o revestimento hemocompatível de superfícies A presente invenção refere-se à aplicação de oligo- e/ou polissacarídeos contendo o elemento estrutural do açúcar N-aciIgllcosamina e/ou N-aciIgalactosamina para a preparação de superfícies hemocompatíveis, processos para o revestimento hemocompatível de superfícies com esses oligo- e/ou polissacarídeos, assim como o emprego das superfícies revestidas de maneira hemocompatível.

No corpo humano o sangue entra em contacto com outras superfícies só no caso de uma lesão como do lado interno de vasos sanguíneos naturais. Por isso, o sistema de coagulação do sangue é sempre activado, quando o sangue entra em contacto com superfícies estranhas, para estancar a hemorragia e evitar uma perda de sangue ameaçadora à vida. Já que um implante representa igualmente uma superfície estranha, todos os pacientes, que recebem um implante, que está permanentemente em contacto com o sangue, são tratados durante o período do contacto com o sangue com medicamentos, os chamados anticoagulantes, os quais suprimem a coagulação. Isto serve igualmente para pacientes, nos quais é utilizada uma circulação extracorpórea, tal como, por exemplo, pacientes de hemodiálise. Esta medicação supressora da coagulação é acompanhada no entanto, em parte de consideráveis efeitos colaterais, que vão da queda de cabelos, náuseas e vómitos passando pela trombocitopenia, necroses da pele hemorrágicas e alta tendência de hemorragia até os efeitos colaterais que evoluem para a morte, tal como, por exemplo, hemorragias cerebrais. 1/80

Assim, há a necessidade de materiais hemocompatíveis, não trombogénios, por exemplo, próteses, peças de reposição orgânicas, membranas, cânulas, tubos, recipientes para sangue, stents e outros, os quais em contacto com o sangue não provocam o sistema de coagulação e não levam à coagulação do sangue. A EP-B-0.333.730 descreve um processo para a preparação de substratos hemocompatíveis mediante incorporação, adesão e/ou modificação e ancoramento de políssacarídeo de superfície da célula endoteliai não trombcgénica (HS I). A imobilização deste sulfato de proteoheparana da superfície da célula endoteliai específico HS I sobre superfícies biológicas ou artificiais leva a que superfícies revestidas desta maneira se tornem compatíveis com o sangue e sejam adequadas para o contacto permanente com o sangue. É desvantaj oso ao contrário, que este processo para a obtenção de HS I prevê o cultivo de células endoteliais, de modo que a utilidade económica deste processo é fortemente limitada, pois o cultivo de células endoteliais consome multo tempo e maiores quantidades de células endoteliais cultivadas são unicamente obtidas com custos elevados. O objecto da presente invenção é pôr à disposição substâncias para o revestimento hemocompatível de superfícies bem como processos para o revestimento hemocompatível de superfícies e sua aplicação sobre superfícies para o impedimento ou mínimização de reacções índesejadas. Em especial, o objecto da presente invenção é pôr à disposição produtos medicinais, que permitam um enraizamento controlado contínuo do produto medicinal - por um lado pela supressão das reacções celulares nos primeiros dias e semanas após a implantação com auxílio das substâncias activas e combinações das substâncias activas 2/80 escolhidas e por outro lado, pela preparação de uma superfície antitrombogénica, inerte ou biocompatível, que assegura, que com a diminuição da influência da substância activa não haja mais reacções sobre a superfície estranha formada, que a longo prazo poderia levar igualmente a complicações.

Este objecto é resolvido pelo estudo técnico das reivindicações independentes da presente invenção. Outras concretizações vantajosas da invenção resultam das reivindicações dependentes, da descrição das figuras, assim como dos exemplos. A presente invenção publica polissacarídeos da fórmula geral Ia Fórmula Ia

bem como polissacarídeos estruturalmente muito semelhantes da fórmula geral Ib 3/80 Fórmula Ib

Os políssacarídeos de acordo com. a fórmula Ia apresentam pesos moleculares de 2kD até 400kD, de preferência, de 5kD até ISOkD, mais preferentemente de IDkD até lOOkD e com especial preferência, de 30kD até 80kD. Os políssacarídeos de acordo com a fórmula Ib apresentam pesos moleculares de 2kD até 15kD, de preferência, de 4kD até 13kD, mais preferentemente de 6kD até 12kD e com especial preferência, de 8kD até llkD. A variável n é um número inteiro na faixa de 4 até 1050. De preferência, n é um número Inteiro de 9 até 400, mais preferentemente de 14 até 260 e com especial preferência, um número inteiro entre 19 e 210. A fórmula geral Ia e Ib representa um dissacarídeo, o qual é considerado como elemento estrutural básico do poiissacarídeo de acordo com a invenção e mediante enésimo enfileiramento do elemento estrutural básico, fornece o poiissacarídeo. Este elemento estrutural básico formado por duas moléculas de açúcar não deve ser explicado no sentido de que sob as fórmulas gerais Ia e Ib só surgem políssacarídeos com um número inteiro de moléculas de açúcar. Naturalmente, a fórmula geral Ia, assim como a fórmula Ib também abrangem políssacarídeos com um número ímpar de elementos estruturais de açúcar. Como grupos finais dos oligo- ou políssacarídeos 4/80 há grupos hidróxi.

Os radicais Y e Z representam independentes um do outro, os seguintes grupos acila ou carboxialquila químicos: -CHO, -COCH3, -COG2H5, -COC3H7, -COC4H9, “COCsHu, -COCH(GH3)2, -COCH2CH(CH3)2, -COCH(CH3)C2H5, -COC(CH3)3, -CH2COCf, -C2H4COQ~? -c3H6cocr, -c4h8cooa São preferidos os radicais acila ~COCH3, -COC2H5, -COC3H? bem como os radicais carboxialquila ~CH2C00~, -^H^COCf, -C3H6COCT. Mais preferidos são os grupos acetila e propanoíla bem como o radical carboximetila e carboxietila. Especialmente são preferidos o grupo acetila e o radical carboximetila. Além disso, é preferido se o radical Y representa um grupo acila e o radical Z, um grupo carboxialquila. É mais preferido, se Y representa um radical -COCB3, ~C0C2HS ou -CGC3H7 e especialmente -COCH3. Além disso, é preferido, se Z é um radicai carboxietila ou carboximetila, sendo que o radical carboximetila é especialmente preferido. 0 elemento estrutural do dissacarídeo mostrado conforme a fórmula Ia contém em cada caso um substituto Y e um outro radical Z. Isto deve esclarecer, que o polissacarIdeo de acordo com a invenção contém dois radicais diferentes, a saber, Y e Z. Com isso, a fórmula geral Ia não deve abranger justamente só polissacarideos, os quais contêm os radicais Y e Z em ordem rigidamente alternativa, tal como resultaria no enfileiramento dos elementos estruturais de dissacarídeos, mas também polissacarídeos, os quais compreendem os radicais Y e Z na ordem completamente estatística nos grupos amino. Além disso, a fórmula gerai Ia também deve abranger tais polissacarídeos, que contêm os radicais Y e Z em diferente número. Razões entre o número de radicais Y para o número de 5/80 radicais X podem encontrar-se entre 70%:30%, de preferência, entre 60%:40% e particularmente de preferência, entre 45%:55%. Especialmente são preferidos aqueles polissacarídeos da fórmula gerai Ia, os quais compreendem essenciaimente na metade dos grupos amino o radical Y e na outra metade dos grupos amino, o radical Z numa divisão puramente estatística. O termo "essencialmente a metade" significa no caso ideal exactamente 50 I, no entanto, deve abranger junto a faixa de 45 % até 55 % e especialmente 48 % até 52 %. São preferidos compostos da fórmula geral Ia, na qual os radicais Y e Z têm o seguinte significado: Y = -CHO e Z = -C2H4COG~ Y = -CHO e Z = -CH2COO“ Y = -COCH3 e z = -c2H4«xr Y = -COCH3 e Z = -CH2C00~ Y = -COC2H5 e z = -c2H4axr Y = -COC2H5 e z = -ch2coo~ São especialmente preferidos os compostos da fórmula geral la, na qual os radicais Y e Z têm 0 seguinte significado: Y = -CHO e z = -c2h4coo~ Y = -COCH3 e Z = -CH2COO“ São preferidos os compostos da fórmula geral Ib, na qual Y é um dos seguintes grupos: -CHO, -C0CH3, -C0C2H5 ou -COC3H7.

Além disso, são preferidos os grupos -CHO, -C0CH3, -COC2H5 e especialmente preferido é o grupo -COCH3.

Os compostos da fórmula geral Ib contêm unicamente ainda um pequeno teor de grupos amino livres. Já que com o teste de 6/80 ninidrina não puderam ser mais detectados grupos amino livres, pode concluir-se com base na sensibilidade deste teste, que menos do que 2 I, de preferência, menos do que 1 % e especialmente de preferência, menos do que 0,5 % de todos os grupos -NH-Y apresentam-se como grupos amino livres, isto é, nesta baixa percentagem dos grupos -NH-Y, Y representa hidrogénio. Já que os polissacarideos das fórmulas gerais Ia e Ib contêm grupos carboxilato e grupos amino, as fórmulas gerais Ia e Ib também abrangem sais de metais alcalinos bem como alcalino-terrosos dos polissacarideos correspondentes. Assim, podem ser citados sais de metais alcalinos tais como o sai de sódio, o sal de potássio, o sal de lítio ou sais de metais alcalino-terrosos tais como, por exemplo, o sal de magnésio ou o sal de cálcio. Além disso, com o amoníaco, aminas primárias, secundárias, terciárias e quaternárias, piridina e derivados de piridina podem ser formados sais de amónio, de preferência, sais de alquilamónio e sais de piridínio. Nas bases, as quais formam sais com os polissacarideos, incluem-se bases inorgânicas e orgânicas tais como, por exemplo, NaOH, KOH, LiOH, CaC03, Fe(GH)3, NH4OH, hidróxidos de tetraalquilamónio e compostos semelhantes.

Sulfatos de heparana aparecem de maneira ubiquitária nas superfícies das células de mamíferos. De tipo de célula para tipo de célula eles se diferenciam fortemente no peso molecular, grau de acetilação e grau de sulfatação. Sulfato de heparana hepático apresenta, por exemplo, um grau de acetilação de aproximadamente 50 %, ao contrário do que o sulfato de heparana do glicocálix de células endoteliais pode apresentar um grau de acetilação de até 90% e maior. Heparina apresenta um grau de acetilação unicamente muito baixo de até 7/80 5%. 0 grau de sulfatação encontra-se no sulfato de heparana hepático e heparina em ~2 por unidade de dissacarideo, no sulfato de heparana das células endoteliaís próximo de 0 e nos sulfatos de heparana de outros tipos de células, entre 0 e 2 por unidade de dissacarideo. A figura abaixo mostra uma unidade de tetrasacarideo de uma heparina ou sulfato de heparana com divisão estatística dos grupos sulfato e um grau de sulfatação de 2 por unidade de dissacarideo tal como é típico para heparina:

A todos os sulfatos de heparana é comum com a heparina o decurso da biossíntese. Com isso, em primeiro lugar, forma-se a coreproteína com a região de ligação contendo a xilose. Ela constitui-se da xilose e dois radicais de galactose ligados com a mesma. No último dos dois radicais galactose liga-se depois, alternadamente um ácido glicurónico cada e uma galactosamina, até ser obtido o comprimento de cadeia correspondente. Finalmente, efectua-se uma modificação enzimática de vários estágios deste polissacarídeo precursor comum a todos os sulfatos de heparana e da heparina mediante sulfotransferases e epímerases, que através de suas reacções completas diferentemente geram o amplo espectro de diversos sulfatos de heparana até a heparina.

Heparina é alternadamente formada a partir de D-glusamina e ácido D-glicurónico ou ácido L-idurónico, sendo que a D- 8/80 glicosamina e ácido D-glicurónico estão ligados beta-1,4-glicosidicamente (ácido L-idurónico com ligação alfa-1,4- glicosídíca) no dissacarídeo, o qual forma as sub-unidades da heparina. Essas sub-unidades são novamente ligadas beta-1,4-glicosídicamente entre si e conduzem à heparina. A posição dos grupos sulfonila pode variar. Uma unidade tetrasacarídeo contém em média 4 até 5 radicais de ácido sulfúrico. Sulfato de heparana, também denominado como sulfato de haparitina, contém com excepção do sulfato de heparana hepático menos grupos sulfonila ligados ao N e 0 do que a heparina, mas em compensação, mais grupos N-acetila.

Tal como é nítido na figura 3, os compostos da fórmula geral la (vide figura 3c como exemplo) e os compostos da fórmula geral Ib (vide figura 3b como exemplo) são estruturalmente semelhantes ao sulfato de heparana natural das células endoteliaís, mas evitam as desvantagens descritas acima no emprego de sulfatos de heparana de células endoteliaís.

Uma determinada unidade de pentasacarídeo é responsabilizada peia eficácia antitrombótica, que se reencontra em aproximadamente cada terceira molécula. Através de processos de separação especiais, podem ser produzidas preparações de heparina de diferente activídade antitrombótica. Nas preparações altamente activas, por exemplo, obtidas pela cromatografia de afinidade de antitrombina-III ("High-Affinity"-Heparin), esta sequência activa encontra-se em cada molécula de heparina, ao contrário do que em preparações "no-Affínity", não podem ser comprovadas sequências de pentasacarídeos características e com isso, nenhum impedimento da coagulação. Através do efeito recíproco com este pentasacarídeo, a actividade da antitrombina III, de um inibidor do factor chave da coagulação trombina, é 9/80 essencialmente potencializada (aumento da afinidade de ligação até em torno do factor 2X103) [Stiekema Clín

Nephrology 26, Suppl. n° 1, S3-S8, (1986)].

Os grupos amino da heparina são na maioria das vezes N- suifatados ou N-acetilados. As posições da O-sulfatação ma is importantes são a C2 no ácido ídurónico, bem como a C6 e a C3 na glicosamina. Principalmente o grupos sulfato na C6 é responsabilizado pelo efeito do pentasacarídeo sobre a coagulação plasmátlca, em menor medida também os outros grupos funcionais.

Superfícies de implantes medicinais revestidas com heparina ou sulfatos de heparana são e ficam só limitadamente hemocompatíveis pelo revestimento. A heparina ou sulfato de heparana aplicada sobre a superfície artificial perde parcialmente em drástica proporção o seu efeito antitrombótico, o que é harmonizado com um efeito recíproco limitado devido ao impedimento estérico das unidades de pentasacarídeos citados com antitrombina III.

Em todos os casos observa-se, com base na Imobilização dessas substâncias poiianiónicas, uma forte adsorção da proteína plasmática sobre a superfície heparinizada, o que por um lado neutraliza o efeito supressor de coagulação da heparina ou dos sulfatos de heparana e por outro lado, anula processos de coagulação específicos através das proteínas plasmáticas aderidas e assim, modificadas na estrutura terciária (por exemplo, albumina, fibrinogénio, trombina) e trombócitos aderidos sobre as mesmas.

Assim, por um lado há uma relação entre o efeito recíproco das unidades de pentasacarídeo com antitrombina III limitado 10/80 pela imobilização, por outro lado, ocorrem depósitos de proteínas plasmáticas sobre a camada de heparina ou sulfato de heparana no implante medicinal, o que conduz a perdas das propriedades antitrombóticas do revestimento o que pode se inverter mesmo para o contrário, pois a adsorção das proteínas plasmáticas que se inicia dentro de poucos segundos leva à perda da superfície anticoagulante e as proteínas plasmáticas aderentes mudam sua a estrutura terciária, pelo que se forma uma superfície trombogénica, Foi verificado surpreendentemente, que os compostos da fórmula geral Ia e Ib apesar das diferenças estruturais para com a heparina ou sulfato de heparana apresentam além disso, as propriedades hemocompatíveis da heparina e ademais, na imobilização dos compostos da fórmula geral Ia ou Ib não podem ser observados depósitos dignos de menção de proteínas plasmáticas, que representam um estágio inicial na activação da cascata de coagulação. As propriedades hemocompatíveis dos compostos de acordo com a invenção, também permanecem além disso, após a sua imobilização sobre superfícies artificiais.

Além disso, presume-se que os grupos sulfato da heparina ou dos sulfatos de heparana são necessários para o efeito recíproco com antitrombina III e com isso, emprestam o efeito anticoagulante à heparina ou ao sulfato de heparana. Já que devido a uma dessulfatação amplamente completa, os grupos sulfato nos compostos da fórmula geral Ib são removidos até um pequeno teor inferior a 0,2 grupos sulfato por unidade de dissacarídeo, os compostos conforme a fórmula Ib de acordo com a invenção, como também os compostos conforme a fórmula Ia, não actuam mesmo activamente suprimindo a coagulação, isto é, de maneira anticoagulante.

Os compostos da fórmula geral Ib de acordo com a invenção, 11/80

podem ser preparados a partir da heparina ou de sulfatos de heparana, de modo que inicialmente o polissacarideo é essencialmente completamente dessulfatado e depois é essencialmente completamente N-acilado. 0 termo "essencialmente completamente dessulfatado" significa um grau de dessulfatação maior do que 90%, de preferência, maior do que 95% e particularmente de preferência, maior do que 98%. 0 grau de dessulfatação pode ser determinado de acordo com o chamado teste de ninidrina, que detecta grupos amino livres. A dessulfatação é efectuada na proporção tal, que com DMMB (azul de dimetilmetileno) não é ma is obtida nenhuma reacção de cor. Este teste de cor é adequado para a detecção de polissacarídeos sulfatados, o seu limite de detecção, no entanto, não é conhecido na literatura técnica. A dessulfatação pode ser efectuada, por exemplo, mediante aquecimento do sal de piridinio numa mistura de solventes. Foi comprovada especialmente uma mistura de DMSO, 1,4-dioxano e metanol.

Os sulfatos de heparana assim como heparina foram dessulfatados através de hidrólise total e em seguida, reacilados. Depois foi determinado o número dos grupos sulfato por unidade de dissacarideo (S/D) por meio de RMN- ί q _ C. A tabela 1 abaixo apresenta esses resultados no exemplo da heparina e da heparina (heparina-Ac) dessulfatada, reacetilada.

Tabela 1: Divisão dos grupos funcionais por unidade de dissacarideo no exemplo da heparina e heparina-ac determinada por meio de medições de RMN-^C. 12/80 2-S 6-S 3-S NS N-Ac nh2 S/D Heparina 0, 63 0,88 0,05 0, 90 0,08 0,02 2,4 7 Ac-heparina 0,03 0 0 0 1,00 - 0,03 2-8, 3-S, 6-8: grupos sulfato na posição 2, 3 ou 6 NS: grupos sulfato nos grupos amino N-Ac: grupos acetila nos grupos amino NH2: grupos amino livres S/D: grupos sulfato por unidade de dissacarídeo

Capaz de reprodução, resultou um teor de sulfato de aproximadamente 0,03 grupos sulfato/unidade de dissacarídeo (S/D) na heparina-Ac em comparação com aproximadamente 2,5 grupos sulfato/unidade de dissacarídeo na heparina.

Tal como descrito acima, a diferença nos teores de sulfato de heparina ou sulfatos de heparana e com os dos compostos das fórmulas gerais Ia e Ib tem uma influência essencial sobre a actívidade frente a antitrombina III e sobre o efeito anticoagulante desses compostos.

Os compostos das fórmulas gerais Ia e Ib apresentam um teor de grupos sulfato por unidade de dissacarídeo de menos do que 0,2, de preferência, menos do que 0,07, mais preferentemente menos do que 0,05 e especialmente de preferência, menos de 0,03 grupos sulfato por unidade de dissacarídeo.

Através da remoção dos grupos sulfato da heparina, aos quais se atribuem os mecanismos de efeito supressores da coagulação activos, obtém-se um oligo- ou polissacarídeo inerte quanto a coagulação hemocompat íve1, adequado para o benefício superficial, que por um lado não assume mais nenhum papel activo no processo de coagulação e que por outro lado não é 13/80 reconhecido peio sistema de coagulação como superfície estranha. Este revestimento imita eficazmente o mais alto padrão de hemocompatibilidade pretendido pela natureza e passividade frente aos componentes do sangue activos para a coagulação.

Os exemplos 5 e 6 mostram, que superfícies, as quais são revestidas com os compostos conforme as fórmulas aerais Ia e/ou Ib de acordo com a invenção, revestidos de modo especialmente covalente, fornecem um revestimento passivador, atrombogénico, hemocompatível, anti-proliferativo e/ou anti-inflamatório. Isto é nitidamente justificado no exemplo da heparina-Ac.

Essencialmente e completamente N-acilado refere-se a um grau de N-acilação maior do que 94 %, de preferência, maior do que 97% e particularmente de preferência, maior do que 98%. A acilação decorre de tal modo completamente, que com a detecção da ninidrina sobre grupos amino livres, não se obtém mais nenhuma reacção de cor. Como agentes de acilação aplicam-se de preferência, cloretos, brometos ou anidridos de ácido carboxílico. Anidrido de ácido acético, anidrido de ácido propiónico, anidrido de ácido butírico, cloreto de ácido acético, cloreto de ácido propiónico ou cloreto de ácido butírico prestam-se, por exemplo, para a preparação dos compostos de acordo com a invenção. Especialmente os anidridos de ácido carboxíiico prestam-se como agentes de acilação.

Como solventes especialmente para os anidridos de ácido carboxíiico aplica-se água deionizada, de preferência, junto com um co-solvente, o qual é acrescentado numa quantidade de 10 até 30% em volume. Como co-solventes prestam-se metanol, etanol, DMSO, DMF, acetona, díoxano, THF, éster etílico de 14/80 ácido acético e outros solventes polares. Ao empregar halogenetos de ácido carboxílico, aplicam-se de preferência, solventes anidros polares tais como DMSO ou DMF.

Como solvente aplica-se água deionizada, de preferência, junto com um co-solvente, o qual é acrescentado numa quantidade de 10 até 30% em volume. Como co-solventes prestam-se metanol, etanol, DMSO, DMF, acetona, dioxano, THE, éster etílico de ácido acético e outros solventes polares.

Os compostos da fórmula geral Ia de acordo com a invenção, apresentam na metade das moléculas de açúcar um grupo carboxiiato e na outra metade um grupo N-acila.

Tais compostos podem ser preparados também a partir dos polissacarídeos ácido hialurónico, sulfato de dermatana, sulfato de condroitina.

Diferenças com relação à heparina e sulfato de heparana resultam na ligação dos monos sacar ideos, que aqui não se apresentam 1,4-glicosidicamente, mas sim, 1,3-glicosidicamente. Os dissacarídeos são novamente ligados uns com os outros 1,4-glicosidicamente. Nos sulfatos de dermatana também antritromboticamente aetivos na coagulação do sangue [Biochem. J 289, 313-330 (1993) ] e nos sulfatos de condroitina, a N-acetí Iglucosainina é substituída por N-acetilgalactosamina, que se diferenciam uma da outra na posição espacial do grupo hidroxila no átomo de carbono 4.

Em virtude da sua estrutura afim, os polissacarídeos são ordenados com base nas presentes diferenças, da seguinte maneira:

Tipo 1) tipo ácido urónico-galactosamína (HexA-GalN)n: 15/80

Nestes íncluem-se sulfato de condroitina e sulfato de dermatana. Para este grupo é típica a ligação beta-1,3-glicosídica do ácido urónico com a galactosamina,

Galactosamina por seu lado, está ligada beta-1,4- glicosidlcamente com o próximo ácido urónico. Sulfato de dermatana diferencia-se do sulfato de condroitina por um alto teor de um outro ácido urónico que também aparece na heparina e no sulfato de heparana, o ácido L-idurónico. 0 grau de sulfatação de sulfato de condroitina encontra-se em 0,1 até 1,3 grupos sulfato por dissacarídeo. Sulfato de dermatana tem com 1,0 até 3,0 grupos sulfato por dissacarídeo, um grau de sulfatação em média, maior do que o sulfato de condroitina e alcança com isso, valores semelhantes à heparina. Os grupos ainino são N-acetilados. A dessulfatação e N-reacetilação conduz aqui, tal como no caso da heparina e do sulfato de heparana a compostos, que são igualmente adequados para o emprego com revestimento atrombogénico.

Tipo 2) Tipo ácido urónico-glicosamina (HexA-GicN)n:

Neste incluem-se heparina, sulfato de heparana e hialuronana.

Heparina e sulfato de heparana são exclusivamente ligados beta-1,4, enquanto que no caso da hialuronana, que também é agregada a este tipo, os monossacarídeos ácido D-glicurónico e D-glicosamína, são monossacarídeos ligados beta-1,3. Este polissacarídeo como único, não possui grupos sulfato e é N-acetílado. O peso molecular em comparação com a heparina e o sulfato de heparana alcança valores máximos de até 8000 kD. A diminuição do comprimento da cadeia e a obtenção dos grupos acetíla ou a N-reacilação, conduz a uma estrutura diferenciáveis da fórmula Ib unicamente na ligação beta-1,3- 16/80 glicosidica dos monossacarídeos.

Outros compostos podem ser preparados também a partir de quitina ou quitosana.

Quitina é um polissacarídeo nitrogenado, cujas unidades monómeras se constituem de N-acetil-D-glicosamina, as quais são ligadas beta-1,4-glicosidicamente. Com isso, resultam polímeros lineares, que se constituem de aproximadamente 2000 elementos estruturais de açúcar e apresentam um peso molecular de aproximadamente 4 00.000 g/rrtol. Quitina apresenta uma solubilidade muito ruim e é quase insolúvel em água, solventes orgânicos assim como em ácidos diluídos ou lixívia diluídas. Uma adição com ácidos fortes conduz a uma hidrólise, na qual se formam D-glicosamina e ácido acético. O tratamento com lixívia fortes conduz ao contrário, à quitosana e ao acetato.

Quitosana pode ser facilmente obtida pela saponificação de quitina. Quitosana constitui-se de glicosamina ligada beta-1,4-glicosidicamente (2-amino-2-desóxi-D-glicose). Quitosana é conhecida com base nas suas propriedades formadoras de película e além disso, é aplicada como material básico para trocadores de íons e como agente para reduzir o nível de colesterol no soro do sangue e para a diminuição de peso.

As substâncias da fórmula geral Ia de acordo com a invenção, podem ser preparadas a partir de quitina, quando a quitina é parcíalmente desacetilada por meio de bases fortes e depois os grupos aramo livres são monocarboalquilados (vide figura 1) · 0 grau de desacetilação, isto é, a quantidade de grupos arrimo primários desmascarados pode ser determinada volumetricamente. A comprovação quantitativa dos grupos amino 17/80 livres é efectuada por melo da reacção de ninidrina.

Dependendo da condução do ensaio, podem ser obtidos graus de desacetilação de 20 até 80%, São preferidos graus de desacetilação de 40 até 60%, especialmente são preferidos 45 até 55%.

Por este processo de síntese são obtidos polissacarídeos, cujos elementos estruturais de açúcar contêm ou um grupo N-acetíla ou um grupo N-carboxialquila com divisão paramente estatística, A quitosana, a qual é facilmente acessível por hidrólise básica dos grupos N-acetila da quitina (vide figura 1), serve da mesma maneira como material de partida para a síntese dos polissacarídeos de acordo com a fórmula Ia. A quitosana possui somente muito poucos grupos N-acetila. Assim, os compostos de acordo com a invenção, podem ser obtidos por um lado, pelo facto, de que essencialmente a metade dos grupos amino livres são carboxialquilados num primeiro estágio e depois os grupos amino livres remanescentes são acilados ou inicialmente é efectuada a acilação e depois os grupos amino livres remanescentes são reagidos com um agente de carboxíalquilação adequado. É preferível, se essencialmente a metade dos grupos amino é acilada e a metade remanescente é carboxialquilada.

Por quitosana parcialmente N-acilada compreende-se um grau de N-acilação de 30 - 70%, de preferência, de 40 - 60% e particularmente de preferência, de 45 - 55%. Especialmente são preferidos derivados de quitosana, os quais compreendem essencialmente na metade dos grupos amino o radical Y e na outra metade dos grupos amino, o radical Z numa divisão 18/80 puramente estatística. 0 termo "essencialmente a metade" significa no caso ideal exactamente 50%, no entanto, deve abranger junto a faixa de 45% até 55%. 0 grau de carboxialquilação e o de acilação podem ser determinados, por exemplo, por meio da RMN-13C (tolerância de falha + 3 %).

Com base no facto, de que num primeiro estágio de reacção um determinado número de grupos axnino livres é acílado ou carboxialquilado, resulta com isso obrigatoriamente, uma divisão totalmente estatística dos radicais acila ou dos radicais carboxiaiquila no polissacarídeo da fórmula geral Ia. A fórmula Ia deve representar, por conseguinte, unicamente um elemento estrutural de dissacarídeo do polissacarídeo de acordo com a invenção, mas não uma sequência alternativa dos grupos acila e grupos carboxiaiquila. A figura abaixo mostra uma unidade de tetrassacarídeo típica de uma quitosana N-acetilada, N-carboximetilada:

COCHg A presente invenção descreve o emprego dos compostos da fórmula geral la e/ou Ib, assim como saís destes compostos para o revestimento, especialmente um revestimento hemocompatível de superfícies naturais e/ou artificiais. Por "hemocompatívei" compreende-se a propriedade dos compostos de 19/80 acordo com a invenção, os nao interagir com as substâiu_.xas uo sistema de coaouJ-açao do sangue ou das plaquetas Θ por conseguiaser não provocar a cascata de coago-s-â^ao do sangue.

Além disso, a invenção publica oligo— θ/ou poiíssecândeos para q revestimento hemocompatxvex de superfícies > oão preferidos oolissacatxdeos dentro dos limites do peso molecular mencionados acima. Os ol 1 cfo- θ/ou polis sacar xdeos destacam—se pelo r a c t o, de conterem o elemento estrutural do açúcar N—acilglicosamina ou N—acligaiactosamina em grande quantidade. Isto significa, que 40 até 60%, de preferência, 45-55% e especialmente de preferencia, 48 — 52 t> dos eiemenlos estruturais do açúcar são N—aci lglicosamirid ou N— acilgalactosamina e apresentam essencialmente os elementos estruturais do açúcar restantes em cada caso num r ad j. cal earboxilo Os oligo— g/ou polissaearxdeos oonsuituem se assim, usualmente em mais de 95 %, de preferência, em mais de 98%, de unicamente dois elementos estruturais do açúcar, sendo que um elemento estrutural do açúcar compreende um radical carboxilo e o outro, um radical N-acila.

Um elemento estrutural do açúcar dos oligo- e/ou polissacarídeos é N-acilglicosamina ou N-acilgalactosamina, de preferência, N-acetilgiucosamina ou N-acetilgalactosamina e no caso do outro, trata-se de ácidos urónicos, de preferência, de ácido glicurónico e ácido idurónico. São preferidos oligo- e/ou polissacarídeos, os quais se constituem essencialmente do açúcar glicosamina ou galactosamxna, sendo qUe essencialmente a metade dos elementos estruturais <gc, açúcar compreende um grupo N-acila, de preferência, um gqUp0 N-acetila e a outra metade dos elementos estruturais glicosamina compreende um grupo 20/80 carboxilato ligado directamente sobre o grupo amino ou sobre um ou mais grupos metiieníla. No caso destes radicais de ácido carboxílico ligados ao grupo amino trata-se de preferência, de grupos carboximetila ou carboxietíla. Além disso, são preferidos oiigo- e/ou polissacarídeos, os quais se constituem essencialmente na metade, isto é, de 48-52%, de preferência, de 49-51% e especialmente de preferência, de 49,5-50,5% de N-acilglicosamína ou de N-acilgalactosamina, de preferência, de N-acetilgiucosamina ou N-acetilgalactosamina e essencialmente na outra metade de um ácido urónico, de preferência, ácido glicurónico e ácido idurónico. Particularmente são preferidos os oiigo- e/ou polissacarídeos, os quais apresentam essencialmente a sequência alternativa (isto é, apesar da taxa de falha estatística na ligação alternativa) dos dois elementos estruturais do açúcar. A taxa das ligações falhas deveria ser inferior a 1%, de preferência, inferior a 0,1%.

Surpreendentemente, demonstrou-se, que para as aplicações de acordo com a invenção, em especial, essencialmente heparina dessuifatada e essencialmente N-acílada, assim como quitosana M-carboxialquilada e N-aciiada como também sulfato de dermatana dessuifatada e essencialmente N-acílada, são particularmente bem adequados o sulfato de condroitina e também ácido hialurónico reduzido no comprimento da cadeia. Especialmente para o revestimento hemocompatível prestam-se a heparina N-acetilada bem como quitosana parcialmente N-carboximetilada e N-acetilada.

Os graus de dessulfatação e acilaçâo definidos por "essencialmente", já foram definidos mais acima. O termo "essencialmente" deve esclarecer, que sâo considerados desvios estatísticos. Uma sequência essencialmente 21/80 alternativa dos elementos estruturais do açúcar significa, que por regra, dois elementos estruturais do açúcar iguais não estão ligados uns aos outros, mas não exclui totalmente uma tai ligação falhada. Correspondentemente "essencialmente à metade" significa aproximadamente 50%, mas permite pequenas oscilações, pois justamente no caso das macro-moléculas preparadas biossinteticamente nunca é obtido o caso ideal e sempre precisam ser considerados certos desvios, pois as enzimas não trabalham perfeitamente e na catálise deve-se contar com uma certa taxa de falha. No caso da heparina natural, ao contrário, apresenta-se uma sequência rigorosamente alternativa de unidades de N-acetilglucosamina e de ácido urónico (ao invés de unidades de glicurona).

Além disso, é publicado um processo para o revestimento hemocompatível de superfícies, as quais são determinadas para o contacto directo com o sangue. Neste processo, é preparada uma superfície natural e/ou artificiai e os oligo- e/ou polissacarídeos descritos acima são imobilizados sobre esta superfície. A imobilização dos oligo- e/ou polissacarídeos nessas superfícies pode ser provocada por meio de efeitos recíprocos hidrófobos, forças van der Waals, efeitos recíprocos electrostáticos iónicos, reticulação transversal dos oligo-e/ou polissacarídeos e/ou pela ligação covalente na superfície. Prefere-se a ligação covalente dos oligo- e/ ou polissacarídeos (ligação side-on), mais preferida é a ligação em ponto único covalente (ligação side-on) e é especialmente preferida a ligação em ponto terminal covalente (ligação end-on) .

Com isso, podem ser empregues superfícies naturais e/ou 22/80 artificiais desejadas de produtos medicinais, por exemplo, superfícies de próteses, órgãos, vasos, aortas, válvulas cardíacas, tubos, peças de reposição orgânicas, implantes, fibras, fibras ocas, stents, cânulas, seringas, membranas, conservas, recipientes para sangue, placas de titulação, Pace-makers cardíacos, meios de adsorção, meios de cromatografia, colunas de cromatografía, díalísadores, peças de ligação, sensores, válvulas, câmaras centrífugas, trocadores de calor, endoscópios, filtros, câmaras de bombas, assim como outras superfícies, as quais devem apresentar propriedades hemocompatíveis. 0 termo produtos medicinais é amplamente abrangido e designa especialmente as superfícies daqueles produtos, que entram em contacto com o sangue temporariamente (por exemplo, endoscópios) ou permanentemente (por exemplo, stents). A seguir, são descritos os processos de revestimento de acordo com a invenção. Superfícies biológicas e/ou artificiais de produtos medicinais podem ser providas conforme o seguinte processo de um revestimento hemocompatível: a) preparação de uma superfície de um produto medicinal e b) aplicação de pelo menos um oiigo- e/o polissacarídeo conforme a fórmula Ia ou Ib de acordo com a invenção e/ou c) de pelo menos um oiigo- e/ou políssacarídeo, o qual contém entre 40% e 60% dos elementos estruturais do açúcar N-acíiglícosamina ou N-acilgalactosamina e essencialmente os elementos estruturais do açúcar restantes apresentam um radical carboniza por elemento estrutural do açúcar. 23/80

Por "aplicação" deve ser compreendida o revestimento pelo menos parcial de uma superfície com os compostos correspondentes, sendo que os compostos são aplicados e/ou introduzidos e/ou imobilizados ou ancorados de outro modo na e/ou na superfície subjacente.

Por "essencialmente os elementos estruturais do açúcar restantes" deve-se compreender, que 93% dos elementos estruturais do açúcar restantes, de preferência, 36% e especialmente de preferência, 98% dos 601-40% restantes dos elementos estruturais do açúcar compreendem um radical carboxila.

De preferência, prepara-se uma superfície não revestida e/ou não hemocompatível. Por superfície "não hemocompativei" devem ser compreendidas tais superfícies, as quais podem activar o sistema de coagulação do sangue, isto é, são mais ou menos trombogénicas.

Uma forma de execução alternativa abrange os estágios: a) preparação de uma superfície de um produto medicinal e b' ) aplicação de uma camada bioestável na superfície do produto medicinal ou a) preparação de uma superfície de um produto medicinal e b) aplicação de pelo menos um oligo- e/ou polissacarídeo conforme a fórmula Ia ou Ib de acordo com a invenção e/ou pelo menos um oligo- e/ou polissacarídeo, o qual contém entre 24/80 40% e 60 % do elemento estrutural do açúcar N-acílglicosamina ou N-acilgalactosamina e essencialmente os elementos estruturais do açúcar restantes apresentam um radical carboxila por elemento estrutural do açúcar. b') aplicação de uma camada bioestável na superfície do produto medicinal e d") aplicação de uma outra camada hemocompatível de pelo menos um oligo- e/ou poilssacarídeo conforme a fórmula Ia ou Ib de acordo com a invenção e/ou peio menos de um oligo- e/ou poilssacarídeo, o qual contém entre 40% e 60% do elemento estrutural do açúcar N-acilglicosamina ou N-acilgalactosamina e essencialmente os elementos estruturais do açúcar restantes apresentam um radical carboxila por elemento estrutural do açúcar. A forma de execução mencionada por último assegura mesmo na avaria mecânica da camada do polímero e com isso, também da camada hemocompatível externa, tal como, por exemplo, no transporte impróprio ou devido a circunstâncias agravadas durante o implante, que o revestimento superficial não perca sua a propriedade, de ser compatível com o sangue.

Por superfície "biológica e artificial" compreende-se a combinação de um produto medicinal artificiai com uma parte artificial, por exemplo, um coração de porco com uma válvula cardíaca artificial.

As camadas individuais são aplicadas de preferência, por processo de imersão ou pulverização, sendo que simultaneamente com a aplicação de uma camada também podem 25/80 ser aplicadas uma ou várias substâncias activas na superfície do produto medicinal, afs) qual(quais) está(estão) contida(s) então, ligada(s) na respectiva camada de modo covalente e/ou adesivo. Assim, simultaneamente com a aplicação de uma camada hemocompatível no produto medicinal podem ser aplicadas uma ou várias substâncias activas.

As substâncias activas, bem como as substâncias, as quais podem ser aplicadas para uma camada bioestável ou biodegradável, são citadas mais abaixo.

Sobre esta primeira camada bioestável ou hemocompatível pode ser aplicada depois, numa outra fase c) não obrigatório, uma camada de substância activa de uma ou mais substâncias activas. Numa forma de execução preferida a ou as substâncias activas são ligadas de modo covalente à camada subjacente. Também a substância activa é aplicada de preferência, no processo de imersão ou de pulverização.

Depois da fase b) ou da fase c) pode seguir uma outra fase d) , a qual abrange a aplicação de pelo menos uma camada biodegradável e/ou peio menos uma camada bioestável sobre a camada hemocompatível ou a camada de substância activa.

Correspondentemente à forma de execução alternativa, após a fase bf) ou fase c) pode seguir uma fase d’), a qual abrange a aplicação ou imobilização de pelo menos um oligo- e/ou polissacarídeo conforme a fórmula Ia ou Ib de acordo com a invenção e/ou peio menos um oligo- e/ou polissacarídeo, o qual contém entre 40% e 60% do elemento estrutural do açúcar N-acilglicosamina ou N-aciIgalactosamina e essencialmente os elementos estruturais do açúcar restantes apresentam um radicai carboxíla por elemento estrutural do açúcar, como camada hemocompatível. De preferência, após a fase b") segue 26/80 a fase d')·

Após a fase d) ou d') pode efectuar-se a aplicação de eventualmente uma outra camada de substância activa de uma ou maís substâncias activas em ou sobre a camada biodegradável e/ou bioestável subjacente ou camada hemocompatível.

Adicionalmente às camadas de substância activa aplicadas, as camadas bioestáveis, biodegradáveis e/ou hemocompatíveis podem conter outras substâncias activas, as quais foram aplicadas junto com as substâncias bioestáveis e/ou biodegradáveis ou dos oligo- e/ou polissacarideos hemocompatíveis sobre o produto medicinal e estão contidas nas respectivas camadas. De acordo com uma forma de execução preferida a camada bioestável é ligada de forma covalente e/ou adesiva à superfície do produto medicinal e é revestida completa ou incompletamente com uma camada hemocompativei, a qual (de preferência, a covalente) é ligada à camada bioestável.

De preferência, a camada hemocompatível constitui-se de heparina de origem natural de derivados preparados regiosseletivamente com diferentes graus de sulfatação e graus de acetiiação na faixa de peso molecular do pentasacarídeo responsável pelo efeito antitrombótico até o peso molecular padrão da heparina comerciaiizável de aproximadamente 13kD, sulfatos de heparana e seus derivados, oligo- e polissacarídeos do glicocálix de eritrócítos, heparina dessulfatada e N-reacetilada, quitosana N-carboximetilada e/ou parcialmente N-acetilada bem como de misturas dessas substâncias. 27/80 0 obiecto da invenção também são produtos medicinais, os quais foram revestidos conforme um dos processos aqui mencionados de forma hemocompatívei.

Além disso, são objecto desta invenção produtos medicinais, sendo que a superfície dos produtos medicinais é revestida directamente ou através de pelo menos uma camada bioestável e/ou biodegradável intermediária e/ou camada de substância activa com uma camada hemocompatívei, a qual se constitui de pelo menos um oligo- e/ou polissacarídeo, a qual contém entre 40% e 601 do elemento estrutural do açúcar N-acilglicosamina ou N-acilgalactosamina e essencialmente os elementos estruturais do açúcar restantes apresentam um radical carboxila por elemento estrutural do açúcar.

De acordo com uma forma de execução preferida, sob a camada hemocompatívei dos oligo- e/ou polissacarídeos mencionados acima encontra-se pelo menos uma camada bioestável, a qual é ligada de preferência, de forma covalente, à superfície do produto medicinal.

Além disso, é preferível que sobre a camada hemocompatívei se encontre pelo menos uma camada bioestável e/ou pelo menos uma biodegradável, a qual reveste completa ou incompletamente a camada hemocompatívei. Especialmente é preferida uma camada biodegradável que reveste a camada hemocompatívei.

Uma outra forma de execução preferida apresenta entre a camada bioestável inferior e a camada hemocompatívei sobrejacente uma camada de substância activa de pelo menos uma substância activa antíproliferactiva, anti-inflamatória e/ou antitrombótica, que é ligada de forma covalente e/ou adesiva à camada bioestável e/ou hemocompatívei. 28/80 activa ou

Alternativamente à camada de substância adicionalmente à camada de substância activa, a ^amada bioestável inferior e/ou a hemocompativei superior pode conter outras substâncias activas, as qUais são aplicadas preferentemente junto com a aplicação da respectiva camada Fundamentalmente, cada camada, isto é, uma camada bioestável, uma camada biodegradável e uma camada hemocompativei pode conter uma ou mais substâncias activas antiproliferactivas, anti-inflamatórias e/ou antitrombóticas e além disso, entre as camadas mencionadas acima ainda podem encontrar-se camada de substância activa de uma ou mais substâncias activas. São preferidos sistemas de revestimento de duas camadas, de uma camada bioestável e de uma hemocompativei, sendo que a camada hemocompativei é a camada externa e as duas camadas podem conter uma ou mais substâncias activas. Além disso, é preferível, quando sobre ou sob a camada hemocompativei se encontra uma camada de substância activa de uma ou mais substancias activas. Também são preferidos sistemas de três camadas, os quais se constituem de uma camada bioestável, biodegradável e hemocompativei. Com isso, preferentemente a camada mais inferior é uma camada bioestável. Adicionalmente, são possíveis uma Qu duas camadas de substância activa. Também é possível, aplicar duas camadas de substância activa dírectamente uma sobre a outra. Numa outra forma de execução preferida, peio menos uma substância activa é ligada de forma covalente à ou numa camada. pe preferência, nos processos para o revestimento e nos produros medicinais são aplicados como substâncias activas, tacrolimus, pimecrolimus, PI 88, timosina a-1, PETN (tetranitrato qe pentaeritritol), baccatin e seus derivados, docotaxel, colchicina, paclitaxelo e seus derivados, trapidrl, a±fa- e beta-estradiol, dermicidina, tialina (ácido 29/80 2-metiltiazolidin-2,4-dicarboxílico), tialin-Na (sal de sódio de tíaiina), simvastatina, subóxido de carbono macrocíclíco (MCS) e seus derivados, sirolimus, tirfostina, D24851, colchicina, ácido fumárico e seus ésteres, proteína C activada, inibidores da interleucina Ibeta e hormónio estimulador de melanócitos (alfa-MSH) bem como misturas dessas substâncias activas.

As superfícies naturais e/ou artificiais dos produtos medicinais, os quais são revestidos conforme os processos aqui descritos com uma camada hemocompativel dos oligo- e/ou polissacarideos de acordo com a invenção ou com os oligo-e/ou polis sacar ideos, os quais contêm entre 40% e 60% do elemento estrutural do açúcar N-acilglicosamina ou N-acilgalactosamina e essencialmente os elementos estruturais do açúcar restantes apresentam um radical carboxíla por elemento estrutural do açúcar, servem especialmente como implantes ou peças de reposição orgânicas, os quais estão em contacto directo com a circulação sanguínea e com o sangue. Os produtos medicinais revestidos de acordo com a invenção, são especialmente adequados, no entanto, não somente para o contacto directo ou permanente com o sangue, mas sim, destacam-se surpreendentemente também pela propriedade, de reduzir ou mesmo evitar a aderência de proteínas sobre superfícies revestidas desta maneira. A deposição de proteínas do plasma sobre superfícies estranhas em contacto com sangue é uma fase essencial e inicial para o outro evento em relação ao reconhecimento e as medidas iniciais do lado do sistema sanguíneo,

Isto é, por exemplo, importante no diagnóstico ín vi tro de líquidos corpóreos. Assim, a aplicação do revestimento de 30/80 acordo com a invenção evita ou pelo menos reduz, por exemplo, sobre placas de microtitulação ou outros meios portadores, os quais são empregues para processos de detecção de diagnósticos, a deposição não específica de proteínas, as quais perturbam por regra, as reacções de detecção sensíveis e podem levar a uma falsificação do resultado da análise.

Através do emprego do revestimento de acordo com a invenção sobre meios adsorventes ou meios de cromatografia, evita-se ou diminui-se igualmente a deposição não específica de proteínas, pelo que são obtidas melhores separações e podem ser obtidos produtos de maior pureza.

Especialmente stents são revestidos pelos processos de acordo com a invenção. Nos últimos anos, a aplicação de stents na dilatação com balão de vasos sanguíneos obstruídos encontrou sempre maior divulgação. Embora os stents diminuem o risco de uma nova obstrução vascular, eles até agora não estão em condição de evitar completamente tais restenoses.

Ma literatura não é encontrada uma descrição abstracta exacta da restenose. A definição morfológica de restenose mais frequentemente empregada é aquela, que após PTA (angioplastia transluminal percutânea) eficiente estipula a restenose como sendo uma redução do diâmetro vascular para menos do que 50% do normal. Neste caso, trata-se de um valor estipulado empiricamente, cujo significado e referência hemodínâmico fazem falta para a sintomática clínica de uma tal base científica. Na prática, o piorar clínico de um paciente é considerado como sinal de uma restenose da secção do vaso tratado antigamente.

Para a restenose provocada pelo stent há três diferentes 31/80 origens : a. ) No primeiro período após a implantação, a superfície do stent é directamente exposta ao sangue e em virtude da superfície estranha agora presente pode ocorrer uma trombose aguda, que obstrui novamente o vaso sanguíneo, b. ) Com a implantação do stent são provocadas lesões vasculares, que provocam reacções inflamatórias, que têm um papel decisivo para o processo de cura nos primeiros sete dias. Os processos aqui decorrentes estão ligados, entre outros, com a disseminação de factores do crescimento, com o que é iniciada uma proliferação reforçada das células da musculatura lisa e com isso, já conduzem a curto prazo a uma nova oclusão do vaso em virtude do crescimento descontrolado. c. ) Depois de algumas semanas o stent começa a encravar no tecido do vaso sanguíneo. Isto é, porque o stent está completamente envolvido por células dos músculos lisos e não tem mais nenhum contacto com o sangue. Essa cicatrização pode ser pronunciada demais (hiperplasia da neoíntima) e levar ao facto, que não só a superfície do stent é revestida, mas sim, todo o espaço interno do stent é fechado.

Tentou-se inutilmente resolver o problema da restenose através do revestimento dos stents com heparina (J. Whõrle e colaboradores, European Heart Journal (2001) 22 1808-1816). A heparina rotulada como anticoagulante, no entanto, pode ser unicamente a primeira causa mencionada e além disso, apenas numa solução pode desenvolver o seu pleno efeito. Este primeiro problema pode ser quase totalmente evitado, entretanto, por via medicamentosa pela administração de anticoaguiantes. Actualmente, tenta-se resolver o segundo e o 32/80 terceiro problema, inibindo-se o crescimento das células dos músculos lisos localmente no stent. Isto é tentado, por exemplo, com stents radioactivos ou com stents, os quais contêm substâncias activas farmacêuticas.

Assim, a US-A-5.891.108 publica, por exemplo, um stent com moldagem oca, o qual pode conter no seu interior substâncias activas farmacêuticas, as quais são libertadas por inúmeras aberturas no stent. A EP-A-1.127.582 descreve ao contrário, um stent, que na sua superfície apresenta chanf racharas de 0,1-1 mm de profundidade e 7-15 inm de comprimento, as quais são adequadas para a absorção de uma substância activa. Estes reservatórios de substância activa libertam, de forma comparável com as aberturas no stent oco, a substância activa farmacêutica contida pontualmente em alta concentração e durante um espaço de tempo relativamente longo, o que provoca no entanto, que as células dos músculos lisos não estejam mais ou muito lentamente em condições, de revestir o stent. Por isso, o stent é exposto por muito mais tempo ao sangue, o que conduz outra vez crescentemente a oclusões vasculares através de tromboses (Liístro F., Colombo A., Late acu te thrombosis after Paclítaxel elutíng stent implantation. Heart (2001) 86 262-4). O revestimento com fosforilcolina de biocompatíveis representa uma tentativa de solução para este problema (WO 0101957), em que neste caso, a fosforilcolina, um componente da membrana celular dos erítrócitos, como componente da camada de polímero não biodegradável aplicada, deve produzir uma superfície não trombogénica sobre o stent. Com isso, a substância activa, dependendo do peso molecular desta camada de fosforilcolina contendo polímero, é absorvida ou adsorvída sobre a superfície. 33/80

Os stents de acordo com a invenção,, são revestidos com uma camada hemocompatível e possuem uma ou várias outras camadas, que contêm pelo menos uma substância aetiva antiproliferativa e/ou inibidora de inflamações e conforme a necessidade, também antitrombótica. O revestimento hemocompatível de um stent providencia a compatibilidade do sangue necessária e a substância aetiva (ou combinação de substâncias activas), que de preferência, é uniformemente dividida sobre toda a superfície do stent, faz com que o crescimento da superfície do stent com células, especialmente células dos músculos lisos e endotelíais, decorra de uma maneira controlada. Assim, não se realiza uma colonização e sufocamento rápidos da superfície do stent com células, o que poderia conduzir a uma restenose, ao contrário do que a colonização da superfície do stent com células porém, também não é totalmente impedido por uma alta concentração de medicamento, o que traz consigo o perigo de uma trombose.

Assim, o assentamento de substâncias activas assegura, que a substância aetiva ou a combinação de substâncias activas estej a ligada de forma covalente e/ou adesiva à camada subjacente e/ou inserida de forma covalente e/ou adesiva na camada, continuamente liberta e em pequenas doses, de modo a que a colonização da superfície do stent não seja impedida, no entanto, para que sej a evitado um sufocamento. Esta combinação dos dois efeitos concede ao stent de acordo com a invenção, a capacidade, de encravar-se rapidamente na parede do vaso e diminui tanto o risco de uma restenose como também o risco de uma trombose. A libertação da ou das substâncias activas estende-se durante um espaço de tempo de 1 até 12 meses, de preferência, durante 1-3 meses após a implantação. 34/80

Como substâncias activas aplicam-se substâncias antiproliterativas, antiflogísticas como também antitrombóticas. Como substâncias activas antiproliterativas aplicam-se de preferência, cítostáticos, antibióticos de macrolídeo e/ou estatinas. Substâncias activas antiproliferactivas aplicáveis mencionadas são sirolimus (rapamicina), everolímus, pimecrolimus, somatostatina, tacrolímus, bafílomicina, concanamicina, cerivastatina, rosuvastatina, roxitromicina, dunaimicina, ascomicina, eritromicina, midecamicina, josamicina, claritromicina, troleandomícína, folimícina, simvastatina, lovastatína, fluvastatina, atorvastatina, pravastatina, pitavastatina, vinblastina, vincristin, vindesin, vinorelbin, etobosid, teniposid, nimustin, carmustín, lomustin, cíclofosfamida, 4-hidroxioxiciclofosfamida, estramustin, melfalan, ácido betulínico, camptotecin, lapacol, beta-lapacol, podofilotoxin, betulin, tropfosfamid, 2-etii-hidrazida de ácido podofílico, ifosfamid, clorambucil, bendamustin, dacarbazin, busulfan, procarbazin, treosulfan, tremozolomid, hormónio estimulador de meianócitos (alfa-MSH), tiotepa, daunorubicin, doxorubicin, aclarubícin, epirubicin, mitoxantron, idarubícín, bleomicin, mitomicin, dactinomicin, metotrexat, fludarabin, 5'-dihidrogenofosfato de fludarabin, mofebutazon, acemetacina, diclofenaco, lonazolac, dapson, ácido o-carbamoilfenoxiacético, lidocaína, cetoprofen, ácido mefenamínico, piroxicam, meioxícam, fosfato de cioroquina, peniciiamina, hidroxicloroquin, auranofin, aurotíomalato de sódio, oxaceprol, celecoxíb, beta-sitosterina, aderneiionina, mirtecaína, polídocanol, nonivamid, levomentol, benzocaína, aescina, ciadribína, mercaptopurina, tioguanína, cítarabína, fluorouracila, gemeítabina, capecitabína, docetaxei, carboplatína, císplatína, oxaliplatina, amsacrina, irinotecan, topotecan, hidroxicarbamida, miltefosina, 35/80 pentostatina, aldesleucina, tretinoína, asparaginase, trastuzumab, exemestan, letrozol, goserelina, quefalomanina, pegasparase, anastrozol, exemestan, letrozol, formestan, aminoglutetemida, adríamícina, azitromicina, espiramicina, cefarantina, 2w-inibidor de proliferação-SMC, epitílone A e B, mitoxantrone, azatioprin, micofenolatmofetil, c-mic-antísense, b-mic-antisense selectína (antagonista da citocina), inibidor CETP, caderina, ínibidores da citocina, inibidor de COX-2, NFkB, angiopeptina, ciprofloxacina, camptotecina, fluroblastlna, anticorpos monoclonais, que inibem a proliferação das células musculares, antagonistas bFGF, probucol, prostaglandina, ácido fólico e derivados, vitaminas da série B, derivados da vitamina D, tais como por exemplo, calcípotriol e tacalcitol, D24851, timosina aifa-1, ácido fumárico e seus derivados tais como por exemplo, dímetilfumarato, inibidor IL-lbeta, colquitina, doadores de NO tais como tetranitrato de pentaeritritoi e sindnoeimínas, derivados de S-nitroso, tamoxifen, staurosporina, beta-estradiol, alfa-estradiol, estrona, estriol, etinilestradíol, fosfestrol, medroxiprogesterona, cipionatos de estradiol, benzoatos de estradiol, tranilast, camebacaurina e outros terpenóides, que são empregados na terapia de câncer, verapamil, ínibidores da tirosina-cinase (tirfostinas), ciclosporina A, paclitaxel e seus derivados (6-alfa-hidróxi-paclitaxel, bacatina e outros) , olígórtteros do subóxido de carbono (MCS) macrocíclicos produzidos sinteticamente como também obtidos a partir de fontes naturais e seus derivados, molgramostim (rhuGM-CSF), peginterferona oc-2b, lanograstim (r-HuG-CSF), filgrastim, macrogol, dacarbazina, letrozol, goserelina, cefalomanina, trastuzumab, exemestan, basiliximab, daclizumab, elipticina, D-24851 (Calbiochem), colceiriid, cítocalasína A~E, índanoeína, nocadazol, proteína S 100, PI-88, hormónio estimulador de melanócitos (alfa-MSH), 36/80 bacitracina, antagonistas do receptor vitronectina, azelastina, inibidor do tecido estimulador de guanidilciciase da proteinase de metal 1 e 2, ácidos nucleicos livres, ácidos nucieicos incorporados em transmissores de vírus, fragmentos de DNA e RNA, inibidor do actívador de plasminogéneo 1, inibidor do actívador de plasminogéneo 2, inibidores de interleucina Ibeta, antisense oligonucleotídeos, inibidores VEGF, IGF-1 .

Do grupo dos antibióticos aplicam-se além disso, cefadroxila, cefazolína, cefaclor, cefotixína, tobramícina, gentamicina. Influência positiva sobre a fase pós-operatória também tem a penicilina, tal como dicloxacilina, oxacilina, sulfonamidas, metronidazol, antitrombóticos tais como argatroban, aspirina, abciximab, antitrombina sintética, bivalirudina, coumadina, dermicidina, enoxoparína, hemoparína, actívador de plasminogéneo tecídual, receptor da membrana das plaquetas GblIb/IIIa, inibidor do factor Xa, proteína C activada, dermicidina, anticorpos, heparina, hirudina, r-hirudina, PPACK, protamina, prourocinase, estreptocinase, warfarina, urocinase, vasodílatadores tais como dipiramidol, trapidil, nitroprusside, antagonistas PDGF tais como triazolopirimídina e seramina, inibidores ACE tais como captopril, ciiazaprii, lisínoprii, enaiapríl, losartan, inibidores de tioprotease, inibidores de caspaseína, inibidores de apoptose, reguladores de apoptose, tais como oligonucleotídeos p65, NF-kB e Bcl-xL-antisense- e prostaciclina, vapiprost, α, β e γ-interferona, antagonistas de histamina, bloqueadores de serotonína, halofuginona, nifedipina, tocoferol, tranirast, molsidomina, teepolifenóís, epícaquinagalato, epigalocatequinagalato, ácidos bosvelínicos e seus derivados, leflunomid, anacinra, etanercept, suifasalazina, etoposid, dicloxacilina, tetraciclina, triamcinolona, mutamicina, procainímida, ácido 37/80 retinólico, quinidina, disopírirnída, flecaínida, propafenona, sotolol, amidoron. Outras substâncias activas são esteróides (hidrocortisona, betametasona, dexametasona), substâncias não esteroidais (NSAIDS) tais como fenoporfen, ibuprofen, indometacina, naproxen, fenilbutasona e outros. Agentes antivirais tais como aciclovir, ganciclovir e zidovudin são igualmente aplicáveis. Diversos antimicóticos são aplicados neste âmbito. São exemplos clotrimazol, flucitosina, griseofulvin, cetoconazol, miconazol, nistatina, terbinafin. Agentes antiprozoais tais corno cloroquina, mef loquina, quinina são igualmente agentes eficientes, além disso, terpenóides naturais tais como hipocesculin, Barringtogenol-C21-angelat, 14-dehidroagrostitacina, agrosquerína, agrostistaquina, 17-hidroxiagrostistaquína, ovatodiolide, ácido 4,7-oxocicloanisomélico, bacarinóídes Bl, B2, B3, tubeimosid, bruceanóides A,B,C, bruceantinoside C, íadanziosíde N e P, isodesoxielefantopina, tomenfantopina A e B, coronarina A, B, C e D, ácido ursólico, ácido hiptatóico, zeorina, iso-irídogemanai, maitenfoliol, efusantina A, excisanina A e B, longicaurina B, sculponeatina C, camebaunina, leucamenina A e B, 13,18-desidro-6-alfa-senecioiioxichaparina, 1,1l-dimetoxicantin-6-ona, 1-hidróxi-ll-metoxicantin-6-ona, scopolectína, taxamairina A e B, regenilol, triptolid, além disso, cimarina, apocimarina, ácido aristolóquico, anopterina, hidroxianopterina, anemonina, protoanemonina, berberina, cloreto de queliburina, ciclotoxina, sinococulina, bombrestatina A e B, cudraisoflavona A, curcumina, dihidronitidína, cloreto de nítidina, 12-beta-hidroxipregnadien-4,16-dieno 3,20-diona, biloboi, gincogol, ácido gincogólico, helenalina, indicina, N-óxido de indicina, lasiocarpina, inotodiol, glicosidio la, podofilotoxina, justicidina A e B, iarreatina, maloterina, malotocromanol, isobutirilmalotocromanol, maquirosid A, 38/80 marcantina A, maítansina, licoridicína, margetina, pancratistatina, lirioaenina, oxouchinsunina, aristolactama-AII, bíspartenolidina, periplocosid A, galaquinosida, ácido ursólico, desoxipsorospermina, psicorubina, ricina A, sanguinarina, ácido manvuveisico (Manwuweizsãure), metilsorbifolina, sfateliacromeno, stizofilina, mansonina, streblosida, acagenina, dihidrousambaraensina, hidroxiusambarina, estricnopentamina, estricnofilina, usambarina, usambarensina, berberina, liriodenina, oxouchinsunina, dafnoretma, lariciresinol, metoxilariciresinol, siringaresinol, umbeiiferona, afromoson, acetilvismion B, desacetilvismion A, vismion A e B, outros terpenóides naturais tais como hipocesculina, 14-desidroargrostístacina, agroscerina, agrostistacina, 17-hidroxiagrostistacina, ovatodiolide, ácido 4,7-oxicicloanisomélico, iadanzioside N e P, isodesoxielefantopina, tomenfantopina A e B, coronarina A, B, C e D, ácido ursólico, ácido hiptatóico A, zeorina, iso-iridogermanal, maitenfoliol, efusantina a, excisanina A e B, longicaurina B, scuiponeatina.

As substâncias activas são aplicadas individualmente ou combinadas em concentração igual ou diferente. Particularmente são preferidas substâncias activas, as quais além do seu efeito antiproiiferativo também apresentam propriedades imunossupressivas. Nestas tais substâncias activas incluem-se eritromicina, midecamicina, tacrolimus, sírolimus, paclitaxel e losamicina. Além disso, é preferida uma combinação de várias substâncias de efeito antiproiiferativo ou de substâncias activas antiproliferativas com substâncias activas imunossupressivas.

Para a presente invenção são preferidos tacrolimus, 39/80 pimecrolimus, PI 88, tlmosina a-1, PETN, bacatina e seus derivados, docetaxel, colchicina, paclitaxel e seus derivados, trapidil, alfa-e beta-estradiol, dermicidina, simvastatina, subóxido de carbono macrocíclico (MCS) e seus derivados, sirolimus, tirfostine, D24851, colchicina, ácido fumárico e seus ésteres, proteína C activada, inibidores de interleucina Ibeta e harmónio estimulador de melanócitos (a-MSH) e tialina (ácido 2-metiltiazolidin-2,4-dicarboxílico) como também tialin-Na (sal sódico de tialina). A substância activa está contida de preferência, numa concentração farmaceuticamente activa de 0,001-10 mg por cm2 de superfície do stent e por camada de substância activa ou camada contendo substância activa. Outras substâncias activas podem estar contidas em concentração semelhante na mesma ou noutras camadas.

Os produtos medicinais revestidos de acordo com a invenção, especialmente os stents revestidos de acordo com a invenção, podem libertar continuamente e controladamente as substâncias activas e servem para impedir ou reduzir a restenose (vide figura 6). A camada hemocompatívei que reveste directamente o stent constitui-se de preferência, de derivados produzidos sinteticamente de heparína de origem natural com diferentes graus de sulfatação e graus de acetilação na faixa de peso molecular do pentasacarídeo responsável pelo efeito antitrombótico até o peso molecular padrão da heparina comercializável como também de sulfatos de heparana e seus derivados, oligo- e polissacarídeos do glicocálix de eritrócitos, que representam de maneira perfeita a superfície atrombogénica dos eritrócitos, pois aqui, ao contrário da 40/80 fosforilcolina, realiza-se o contacto real do sangue e da superfície dos eritrócitos, da heparina completamente dessulfatada e N-reacetilada, heparina dessulfatada e N-reacetilada, quitosana N-carboximetilada e/ou parcialmente N-acetilada, quitosana e/ou misturas dessas substâncias. Estes stents com um revestimento hemocompatível são preparados, produzindo-se stents tradicionais, por regra, não revestidos e aplicando-se uma camada hemocompatível preferentemente de forma covalente, a qual após a libertação da substância activa e com isso, após diminuição da influência da substância activa e degradação da matriz, disfarça permanentemente a superfície do implante.

Os stents tradicionais, os quais podem ser revestidos conforme os processos de acordo com a invenção, constituem-se de aço inoxidável, nitinol ou de outros metais e ligas ou de polímeros sintéticos.

Uma outra forma de execução preferida dos stents de acordo com a invenção, apresenta um revestimento, o qual é constituído pelo menos por duas camadas. Também podem ser aplicados sistemas de multi-camadas. Nestes tais sistemas de multi-camadas menciona-se como primeira camada aquela, que é directamente aplicada sobre o stent. Como segunda camada menciona-se aquela camada, que é aplicada sobre a primeira camada e assim por diante.

De acordo com a execução de duas camadas, a primeira camada constitui-se de uma camada hemocompatível, a qual é essencialmente e completamente revestida por uma camada biodegradável, que contém pelo menos uma substância activa antiproliferativa, antíflogística e/ou antitrombótica, ligada de forma covalente e/ou adesiva. Igualmente também, são 41/80 aplicadas combinações de substâncias activas, que se apoiam e complementam xnutuamente no seu efeito.

Como substâncias biodegradáveis, as quais podem ser empregues para a camada externa, incluem-se polivaleroiactonas, poli-ε-decalactonas, ácido polilactónico, ácido poliglicólico, polilactídeos, poliglicoiídeos, copolímeros de poiilactídeos e poliglicoiídeos, poli-s-caprolactona, ácido polihidro-xibutíríco, polihidroxibutiratos, polihidroxivalera-tos, polihidroxibutiratos-co-valerato, poli¢1,4-dioxan-2,3-dio-nas), poli(1,3-dioxan-2-onas), poii-p-dioxanonas, poliani-dridos tais como anidridos de ácido polimaleico, polihidróxi-metacriiatos, fibrina, policianoacrilatos, dimetacrilatos de policaprolactona, ácido poii-b-maléico, policaprolactonbutil-acrilatos, polímeros multiblocos tais como por exemplo, de oligocaprolactonodióis e oligodioxanonodiós, polímeros por blocos de éster de poliéster tais como por exemplo, PEG e tereftalato de polibutileno. Polipivotolactonas, trimetil-carbonatos de ácido poliglicólico, glicolídios de policaprolactona, poli-g-etilglutamato, polif DTH- iminocarbonato), poli(DTE-co-DT-carbonato), poli(bisfenol Λ-iramocarbonato) , poij-ortoéster, trimetil-carbonatos de ácido poliglicólico, poiitrimetilcarbonatos, poliiminocarbonatos, poli(N-vinil)-pirrolidona, álcoois polivinílicos, poliesteramidas, ponéster glicolados, polifosfoéster, polifusfazenos, polif-p-carboxifenóxi)propanoj, ácido polihidroxipentanóico, polianidridos, óxido de polietileno-óxido de propileno, poliuretanos macios, poliuretanos com radicais de aminoácidos no backbone, ésteres de poliéster tal como o óxido de polietileno, polialquenoxalatos, poliortoéster bem como seus copolímeros, lipídios, carragenanos, fibrinogénio, amido, colágenio, polímeros à base ae proteína, poixaminoácid03(, poliarninoácidos 42/80 sintéticos, zeína, zeína modificada, polihidroxialcanolatos, ácido pectínico, ácido actinico, fibrina e caseína modificada e não modificada, carboximetilsulfato, albumina, além disso, ácido nialurónico, sulfato de heparana, heparina, sulfato de condroitina, dextrano, b-ciclodextrina e copolímeros com PEG e polipropilenoglicol, goma arábica, guar, gelatina, colagénio, N-hidroxissuccinimida de colagénio, lipídios, fosfolipídios, modificações e copolímeros e/ou misturas das substâncias mencionadas acima. A camada ou camadas contendo substância activa é lentamente degradada pelos componentes do sangue, de modo que a substância activa é libertada correspondentemente à velocidade da degradação da camada externa como também se dissolve da matriz correspondentemente ao seu poder de eluição. A primeira camada hemocompativel assegura a compatibilidade do sangue necessária do stent, logo que a camada biodegradável tenha sido degradada. Através desta degradação biológica da camada externa e a respectiva liberação da substância activa, o crescimento das células é fortemente reduzido apenas durante um determinado período e um crescimento controlado visado é possível, onde a camada externa já foi amplamente degradada. A degradação biológica da camada externa estende-se vantajosamente durante 1 até 36 meses, mas de preferência, durante 1-6 meses, particularmente de preferência, 1-2 meses. Demonstrou-se, que no caso destes stents as restenoses são evitadas ou pelo menos muito fortemente reduzidas. Neste período realizam-se os importantes processos de cura. Finalmente, a camada hemocompativel permanece como superfície atrombogéníca e mascara a superfície estranha de modo tal, que além disso não se pode iniciar nenhuma reacção ameaçadora. 43/80

As quantidades de polímero aplicadas sobre as superfícies dos produtos medicinais, de preferência, stents, encontram-se entre 0,01 mg até 3 mg/camada, de preferência, entre 0,20 mg até 1 mg /camada e especialmente de preferência, entre 0,2 mg até 0,5 mg /camada.

Tais stents podem ser produzidos por um processo para o revestimento hemocompatível de stents, com base no seguinte princípio: a. produção de um stent não revestido, b. aplicação de uma camada hemocompatível de preferência ligada de forma covalente, ou difusão de substância activa na camada hemocompatíVeg c ’ . revestimento essencialmente completo hemocompatível no processo de imersão ou pulver-pelo menos uma substância activa, ou camará zaça o com c' ' · revestimento essencialmente completo e/ou r incompleto da camada hemocompatível no processo pulverização com pelo menos uma camada biodegp^, joioestávei, a qual contém pelo menos uma substâ e/ou representa a própria substância activa. nc ia dt0ou O princípio de revestimento oferece uma ampm variações com relação às exigências apresentadas activa e pode ser dividido em diversos tipos de rev que são igualmenue combináveis entre si. barri sub a stirp dg cia

Cht o.

Princípio de revestimento I: a.) preparação de um stent não revestido; b. ) apliuação de uma camada hemocompatível; c. ) aplicação de uma substância activa ou de uma combinação de substancias activas sobre a camada hemocompatível sem matriz; a.) aplxcaçao de uma substância activa ou de uma combinação de substâncias activas sobre a camada hemocompatível sem matriz e essencialmente revestimento completo e/ou incompleto das camadas com o material biodegradável e/ou bioestável para o controlo da difusão.

Princípio de revestimento II: a. ) preparação de um stent não revestido; b. ) aplicação de uma camada hemocompatível; c. ) essencialmente revestimento completo e/ou revestimento incompleto da camada hemocompatível com pelo menos uma camada biodegradável e/ou bioestável, a qual contém peio menos uma substância activa ligada de forma covalente e/ou adesiva à camada hemocompatível; d. ) essencialmente revestimento completo da camada hemocompatível com pelo menos uma camada biodegradável e/ou bioestável, a qual contém pelo menos uma substância activa ligada de modo covalente à matriz e/ou adesiva e uma outra camada biodegradável e/ou bioestável sem substância activa que reveste total e/ou parcialmente a camada subjacente como barreira de difusão. 45/80

Princípio de revestimento III: a. ) preparação de um stent não revestido; b. ) aplicação de uma camada hemocompatível; c. ) essencialmente revestimento completo da camada hemocompatível com peio menos uma camada biodegradável e/ou bioestável, a qual contém pelo menos uma substância activa ligada de modo covalente e/ou adesiva; d. ) aplicação de uma substância activa ou de uma combinação de substâncias activas ligada de forma covalente na camada subjacente e/ou adesiva; e. ) essencialmente revestimento completo da camada hemocompatível com pelo menos uma camada biodegradável e/ou bioestável, a qual contém pelo menos uma substância activa ligada de modo covalente e/ou adesiva, aplicação de uma substância activa ou de uma combinação de substâncias activas e de uma outra camada biodegradável e/ou bioestável que reveste total e/ou parciaimente a camada subjacente sem substância activa como barreira de difusão.

Princípio de revestimento IV: a. ) preparação de um stent não revestido; b. ) aplicação de uma camada hemocompatível; c. ) essencialmente revestimento completo e/ou incompleto da camada hemocompatível com pelo menos duas camadas biodegradáveis e/ou bíoestáveis, as quais contêm pelo menos, de forma covalente e/ou adesiva, uma substância activa numa 46/80 diferente concentração para cada camada; d. ) essencialmente revestimento completo e/ou incompleto da camada hemocompatível com pelo menos duas camadas biodegradáveis e/ou bioestáveis, as quais contêm pelo menos uma substância activa covalente e/ou adesiva em diferente concentração por camada e pelo menos uma outra camada biodegradável e/ou bioestável, que reveste totalmente e/ou parcialmente a camada subjacente sem substância activa como barreira de difusão; e. ) essencialmente revestimento completo e/ou incompleto da camada hemocompatível com pelo menos uma camada biodegradável e/ou bioestável, a qual contém pelo menos uma substância activa e/ou pelo menos uma outra substância activa do mesmo grupo ou de um outro grupo com propriedades complementares em concentrações iguais ou diferentes, em forma covalente e/ou adesiva; f. ) essencialmente revestimento completo e/ou incompleto da camada hemocompatível com pelo menos duas camadas biodegradáveis e/ou bioestáveis, as quais contêm pelo menos uma substância activa e/ou pelo menos uma outra substância activa do mesmo grupo ou de um outro grupo com propriedades complementares com concentrações iguais ou diferentes e pelo menos uma outra camada sem substância activa biodegradável e/ou bioestável, que reveste completamente e/ou parcialmente a camada subjacente como barreira de difusão; g. ) essencialmente revestimento completo da camada hemocompatível com pelo menos duas camadas biodegradáveis e/ou bioestáveis, as quais contêm pelo menos uma substância activa, covalente e/ou adesiva, com concentrações iguais e/ou 47/80 diferentes e uma outra camada biodegradável e/ou bioestável sem substância activa, que reveste completamente ou também apenas parcialmente a camada subjacente como barreira de difusão e uma camada de substância activa que reveste esta camada, constituída de pelo menos uma substância activa ligada de forma covalente à matriz subjacente e/ou adesiva sem veículo.

Uma outra forma de execução vantajosa representa um stent com um revestimento de pelo menos três camadas, sendo que a primeira camada reveste a superfície do stent com a camada hemocompativei, a segunda camada contém a substância activa e não é biodegradável e foi coberta com uma terceira camada hemocompatível. Neste caso, a camada externa empresta ao stent a compatibilidade sanguínea necessária e a segunda camada serve como reservatório de substância activa. A substância activa, ligada conforme a necessidade, de forma covalente através de uma ligação lábil à hidrólise na matriz e/ou a substância activa necessária para o processo de revestimento, acrescentada na matriz dissolvida no solvente, é portanto continuamente liberada e em pequenas concentrações da segunda camada e difunde desimpedida pela camada hemocompatível externa. Também esta formação da camada fornece o resultado, que a colonização da superfície do stent com células não é impedida, no entanto, é reduzida para uma medida ideal. A primeira camada oferece neste caso, uma minimização de risco para danos da superfície do stent revestida eventualmente ocorridos, por exemplo, por abrasões pela placa existente ou em preparações por exemplo, no grampeamento. Uma outra garantia de segurança resultado pelo facto que também um polímero bioestável se degradará no corpo dentro de um espaço de tempo maís ou menos longo e liberará pelo menos parcialmente a superfície do stent. Aqui são 48/80 igualmente possíveis combinações príncipalmente com material biodegradável, tal como é descrito nos princípios de revestimento.

Tais stents podem ser preparados, produzindo-se um stent tradicional, sobre cuja superfície se aplica uma primeira camada herrtocompatível, se aplica uma camada não biodegradável, a qual contém pelo menos uma substância activa como também combinações com outras substâncias activas de outros grupos, ligada de forma covalente e/ou adesiva e revestir esta camada essencialmente por completo com uma outra camada hemocompatívei.

Substâncias, as quais podem ser tomadas em consideração para a camada bioestável, são todos os materiais resistentes empregues na medicina. Nestes incluem-se ácido poliacrílico e poiíacrílatos tais metacrilato de poliacrilonitrilas, polietilenamína, poiicarbouretanos, de polimetila, poliacrílamida, poiieteramidas, policarbonatos, halogenetos de como metacrilato polibutila, poliamidas, poliimidas, poliviniIcetonas, polivinila, halogenetos de polivinilideno, éter polivinilico, compostos aromáticos de polivinila, éster polivinilico, polivinilpirrolidonas, polioximetíienos, polietileno, polipropileno, politetrafluoretileno, poliuretanos, elastómeros de poliolefina, poliisobutilenos, borrachas EPDM, fluorossilicones, carboximetilquitosana, tereftalato de polietileno, polívaleratos, carboximetilcelulose, celulose, raiom, triacetatos de raiom, nitratos de celulose, acetatos de celulose, hidroxietilocelulose, celulosebutiratos, butiratos de acetato de celulose, copolímeros de acetato de etílvinila, polissulfonas, resinas epóxi, resinas ABS, borrachas EPDM, sílicones tais como polisiloxanos, polivinil-49/80 halogéneos e copolímeros, éteres de celulose, triacetatos de celulose, quitosana e copolímeros e/ou misturas das substâncias mencionadas acima.

Mos sistemas de multi-camadas, a camada recentemente aplicada reveste a camada subjacente essencialmente por completo. "Essencialmente" significa neste contexto, que pelo menos a superfície do stent que está em contacto com a parede do vaso está completamente revestida ou peio menos em 90%, de preferência, 95% e especialmente de preferência, pelo menos 98% da superfície do stent que está revestida.

Os stents de acordo com a invenção, resolvem tanto o problema da trombose aguda como também o problema da hiperpiasía da neoíntima após a implantação do stent. Além disso, os stents de acordo com a invenção servem, com base no seu revestimento, ou como camada individual ou como sistema de multi-camadas, particuiarmente bem para a libertação continua de uma ou várias substâncias activas antiproliterativas, imunossupressivas. Com base nesta capacidade da libertação da substância activa contínua visada em quantidade necessária, os stents revestidos de acordo com a invenção, impedem quase completamente o perigo da restenose.

Além disso, de acordo com o processo descrito, as superfícies de material plástico desejado podem ser desejadas com uma camada hemocompatrvel dos oligo- e/ou polissacarídeos. Como materiais plásticos servem polímeros sintéticos bem como biopolímeros, por exemplo, compostos dos monómeros eteno, acetato de vinila, ácido metacrílico, vinilcarbazol, trifluoretileno, propeno, buteno, metilpenteno, isobuteno, estíreno, cloroestireno, aminoestireno, acrilnitrila, butadieno, éster acrílico, divinilbenzeno, isopreno, cloreto 50/80 de vinila, álcool vinilico, vinilpiridina, vinilpirrolidona, tetrafluoreteno, trifluorcloroeteno, fluoreto de vinila, hexafluorisobuteno, ácido acrílico, acroleína, acrilamida, metacrilamida, ácido maleico, ácido hídroximetíImetacrílico, ácido metiImetacrílico, anidrido de ácido maleico, anidrido de ácido metacrilico, metacrilnitrila, fluorestireno, fluoranilida, 3,4-isotiocianatoestireno, álcool alílico, ácido sulfónico, ácido metalilsulfónico, ácido dialíIftáiíco, ácido cianoacrílico, ácido dimetilaminoetíImetacrílico, ácido lauriImetacrílico, ácido acetaminofeniletoxímetacrílico, ácido glicoldimetacrílico, ácido 2-hidroxietiImetacrílico, formaldeído, fluoral, cloral, óxido de etileno, tetrahidrofurano, óxido de propileno, éter alilglicidila, epicloridrina, glicerina, trimetilpropano, pentaeritritol, sorbitol, ácido ftálico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido adípico, tiofeno, etilenimina, hexametilenadipamida, hexametilensebacamida, hexametilendodecanodiamida, aminoben-zarnida, fenilenodiamina, hidrazidas de amida, dimetil-píperazina, benzimidazol, tetraaminobenzeno, pironas, ε-caprolactama, ácido isoftáiico, ácido glutamínico, leucina, fenilaianína, calina, iisina, uréia, diisocianatos, tiouréia e outros ou misturas dos monómeros mencionados acima. Além disso, podem ser tomados em consideração como polímeros: silicones, celulose e derivados de celulose, óleos, policarbonatos, poliuretanos, agarose, polissacarídeos, dextrano, amido, quitina, glicosaminoglicanos, gelatina, colagénio 1-XXI e outras proteínas.

Descrição das figuras

Figura 1 - Mostra um fragmento da estrutura do díssacarídeo da quitina, o qual pode reagir mediante hidrólise básica para formar a quítosana ou mediante desacetilação parcial com N-51/80 carboxialquilação seguinte para formar os compostos da fórmula geral Ia. figura 2 - Mostra um fragmento da estrutura do dissacarídeo da quitosana, o qual pode ser reagido mediante N-acilação parcial com N-carboxialquiiação seguinte ou mediante N-earboxialquilação parcial com N-acilação seguinte para formar os compostos da fórmula geral Ia.

Figura 3 - Mostra uma unidade de tetrasacarídeo de uma heparina ou sulfato de heparana com divisão estatística dos grupos sulfato e com um grau de sulfatação de 2 por unidade de dissacarídeo tal como é típica para heparina (figura 3a). Em comparação com as semelhanças estruturais, a figura 3b mostra um exemplo de um composto de acordo com a fórmula geral Ib e a figura 3c mostra uma secção com estrutura típica para uma quitosana N-carboximetilada, parcialmente N- acetilada.

Figura 4 - Mostra a influência de um stent coronário de aço inoxidável modificado superficialmente, expandido num tubo de PVC sobre a perda de trombócitos (perda de PLT). Como referência foi medido (não revestido) um stent coronário de aço inoxidável não revestido. Como valor nulo aplícou-se a medida da perda de trombócitos no tubo de PVC sem stent coronário de aço inoxidável.

Com isso, SH1 é um. stent revestido de forma covalente com heparina, SH2 é um stent revestido com um sulfato de condroitina; SH3 é um stent revestido com polissacarídeos obtido do giícocálice de eritrócitos e SH4 é um stent coronário de aço inoxidável revestido de forma covalente com heparina~ac. 52/80

Figura 5 - Mostra uma representação gráfica da taxa de restenose de stents revestidos de forma covalente com heparina (heparina-ac) completamente dessulfatada e N-reacetilada e com stents revestidos com olígo- e polissacarídeos do glicocálice de eritrócitos, em comparação com o stent não revestido e com stents revestidos com ácido poliacrílico (PAS] depois de 4 semanas de tempo de implantação no porco.

Figura 6 - Mostra a angiografia coronária quantitativa:

Imagens das secções transversais através do segmento do vaso contendo o stent de um stent (a.) revestido com heparina-ac e em comparação com o de um stent (b.) não revestido (unbe.).

Depois de quatro semanas no ensaio no animal (porco) reconhece-se uma nítida diferença nas espessuras da neoíntima formada.

Figura 7 - Diagrama de eluição de paclitaxel do stent (sem material de veículo).

Figura 8 - Diagrama de eluição de paclitaxel encravado em matriz PLGA.

Figura 9 - Diagrama de eluição de paclitaxel encravado em matriz PLGA e de uma camada de paclitaxel puro que reveste completamente o revestimento básico.

Figura 10 - Diagrama de eluição de uma substância activa hidrófila, inserida na matriz e de um polímero sem substância activa, sobejamente, que reveste completamente o revestimento básico (Topcoat) para o controle da difusão. 53/80

Figura 11 - Diagrama de eluição de colchicina de matriz de PLGA.

Figura 12 - Diagrama de eluição de simvastatina de matriz de PLGA.

Figura 13 - Diagrama de eluição de uma estatina da matriz com poliestireno como camada controladora da difusão que reveste completamente o revestimento básico.

Figura 14 - Comparação do número de trombócitos (número de plaquetas) no sangue segundo Chandler-Loop entre o stent revestido (besch.) e não revestido (unbe.) para o tubo vazio (controle), para o número de plaquetas de sangue recentemente colhido (doador) e após armazenagem de 60 minutos na seringa (seringa 60).

Figura 15 - Comparação do factor de plaquetas teor 4 no sangue recentemente colhido (doador, no tubo vazio (controle) depois de 60 minutos e stents não revestidos (unbe.) com stent revestido (besch.).

Figura 16 - Diagrama comparativo para o factor complementar activado C5a no sangue recentemente colhido (doador), no tubo vazio (controlo) depois de 60 minutos e stents não revestidos (unbe.) com stent revestido (besch.).

Figura 17 - Representação gráfica da taxa do diâmetro da estenose em % com stents revestidos de forma covalente com heparina (heparina-ac) completamente dessulfatada e N- reacetílada e uma segunda camada de poli(D,L-lactid-co-glicolídeo) em comparação com o stent não revestido (após 12 semanas de tempo de implantação no porco). É representado o 54/80 decurso temporal do desenvolvimento da estenose em PLGA, sendo que "taxa de diâmetro da estenose em %" significa o diâmetro do vaso percentual com relação ao estado de partida directamente após aplicação do stent (Post). Para os exames foram utilizados porcos domésticos com idade entre seis a nove meses, o diâmetro do vaso foi medido antes (Pre) e após a aplicação do stent {Post) através de ultra-som intravascular (IVUS). Depois de uma semana (1 WoFUP}, um mês (4WoFUP), seis semanas (6W0FUP) e depois de três meses (12 WoFUP) a faixa com stent foi examinada em cada caso por angiografia coronária e com ultra-som intravascular (IVUS). Os dados obtidos deixam reconhecer um efeito positivo excepcionalmente inesperado, que sem dúvida, é atribuído ao revestimento. Embora os valores da estenose após 3 meses quase não se diferenciem ma is para o stent não revestido e para o stent revestido, a reacção da parede do vaso sobre o stent revestido com PLGA é essencialmente mais moderada. Depois de uma semana o valor da estenose com 6% está significativamente abaixo do valor dos implantes não revestidos com 10,4 %. 0 disfarce da superfície do metal depois de quatro semanas fornece mesmo com 10% (um aumento de 33%), uma taxa de estenose menor em mais do que o factor dois do que o stent não revestido, que depois desse tempo alcança o seu valor máximo de 22,6% (um aumento de 541) . O stent revestido mostra um máximo após seis semanas com meramente 12,33%. Depois de 12 semanas os valores dos dois sistemas igualam-se uns com os outros com aproximadamente 11%.

Figura 18 - Imagens da angiografia coronária quantitativa dos ensaios no animal com relação à figura 1? depois de 1 semana, 4 semanas, 6 semanas e 3 meses de stents revestidos com PLGA aprontados hemocompatíveis no porco. 55/80

Exemplos

Exemplo 1

Preparação de heparína dessulfatada e reacetilada: 100 ml de resina de troca de cátions Amioerlite IR-122 foram enchidos numa coluna com 2 cm de diâmetro, com 400 ml de HC1 3 PI foram transferidos para a forma H+ e lavados com água destilada, até que o eluato estava isento de cloro e com pH neutro. 1 g de sódio-heparina foram dissolvidos em 10 ml de água, colocados na coluna misturadora de cátions e eluídos com 400 ml de água. O eluato foi gotejado num recipiente com 0,7 g de piridina e em seguida, titulado com piridina para pH 6 e seco por eongelamento. 0,9 g do sal de heparina-piridínio num balão redondo com refrigerador de refluxo foi adicionado com 90 ml de uma mistura 6/3/1 de DMSO/1,4-dioxano/metanol (V/V/V) e aquecido durante 24 horas a 90°C. Depois foram acrescentados 823 mg de cloreto de piridinio e aquecidos durante maís 70 horas a 90°C. Em seguida, foi diluído com 100 ml de água e titulado com soda cáustica diluída para pH 9. A heparina dessulfatada foi dializada com água e liofiiízada. 100 mg da heparína dessulfatada foram dissolvidos em 10 ml de água, arrefecidos a 0°C e sob agitação, adicionados com 1,5 ml de metanol. À solução foram acrescentados 4 ml de resina de troca de ânlons Dowex lx na forma OH" e em seguida, 150 μΐ de anidrido de ácido acético e agitada durante 2 horas a 4°C. Depois a resina é filtrada e a solução é dializada com água e líofilizada. 56/80

Exemplo 2

Quitosana N-carboximetilada, parcialmente N-acetilada:

Em 150 ml de HC1 0,1 N foram dissolvidos 2 g de quitosana e sob nitrogénio, fervidos durante 24 horas com refluxo. Depois do arrefecimento à temperatura ambiente o pH da solução foi ajustado com NaOH 2 N para 5,8. A solução foi dializada com água desmineralizada e liofilizada. 1 g da quitosana assim parcialmente hidrolizada foi dissolvido em 100 ml de ácido acético a 1%. Depois de acrescentar 100 ml de metanol foram acrescentados 605 pl de anidrido de ácido acético dissolvidos em 30 ml de metanol e agitado durante 40 minutos à temperatura ambiente. O produto foi precipitado vertendo-o numa mistura de 140 ml de metanol e 60 ml de solução de NH2 a 25 %. Foi filtrado, lavado com metanol e éter dietiiico e seco no vácuo durante a noite. 1 g da quitosana parcialmente hidrolizada e parcialmente N-acetilada foi suspenso em 50 ml de água. Depois de acrescentar 0,57g de monohidrato de ácido giioxílico o derivado de quitosana dissolveu-se dentro dos próximos 45 minutos. O valor do pH da solução foi ajustado com NaOH 2 N para 12. Foi acrescentada uma solução de 0,4 g de cianoborohidreto de sódio na menor quantidade de água possível e agitada durante 45 minutos. O produto foi precipitado em 400 ml de etanol, filtrado, lavado com etanol e seco durante a noite no vácuo.

Exemplo 3

Preparação de heparina N-propionilada dessulfatada: 57/80 100 ml de resina de troca de cátions Amberlite IR-122 foram enchidos numa coluna com 2 cm de diâmetro, com 400 de HC1 3M foram transferidos para a forma H+ e lavados com água destilada, até que o eluato estava isento de cloreto de metíleno e com pH neutro. 1 g de sódío-heparina foi dissolvido em 10 ml de água, colocado na coluna de troca de cátions e eluído com 400 ml de água. O eluato foi gotejado num recipiente com 0,7 g de piridina e em seguida, titulado para pH 6 e líofilizado. 0,9 g do sal de heparina-piridínio em um balão redondo com refrigerador de refluxo foi adicionado com 90 ml de uma mistura 6/3/1 de DMSO/1,4-dioxano/metanol (V/V/V) e aquecido durante 24 horas a 90°C. Em seguida, foi diluído com 100 mi de água e titulado com soda cáustica diluída para pH 9. A heparina dessulfatada foi dializada com água e liofílizada. 100 mg da heparina dessulfatada foram dissolvidos em 10 ml de água, resfriados a 0°C e com agitação adicionados com 1,5 ml de metanol. À solução foram acrescentados 4 ml de resina de troca de ânions Dowex 1x4 na forma OiT e em seguida, colocados 192 μΐ de anidrido de ácido propiónico e agitados durante 2 horas a 4°C. Depois a resina é filtrada e a solução dializada com água e iiofilizada.

Exemplo 4

Quítosana N-carboximetilada, parcialmente N-propionilada:

Em 150 ml de HC1 0,1 N foram dissolvidos 2 g de quítosana e com nitrogénio, fervidos durante 24 horas no refluxo. Depois do resfriamento à temperatura ambiente o pH da solução foi ajustado para com NaOH 2 N para 5,8. A solução foi dializada 58/80 com água e líofilízada. 1 g da quitosana assim parcialmente hidrolizada foi dissolvido em 100 ml de ácido acético a 1 %. Depois de acrescentar 100 ml de metanol, foram acrescentados 772 μΐ de anidrido de ácido propiónico dissolvidos em 30 ml de metanol e agitados durante 40 minutos à temperatura ambiente. 0 produto foi precipitado mediante enchimento em uma mistura de 14 0 ml de metanol e 60 ml de solução de NH3 a 25 %. Foi filtrado, lavado com metanol e éter díetílíco e secado durante a noite com vácuo. 1 g da quitosana parcialmente hidrolizada e parcialmente N-acetilada foi suspenso em 50 mi de água. Depois de acrescentar 0,57 g de monohidrato de ácido glioxiiico o derivado de quitosana dissolveu-se dentro dos próximos 45 minutos. 0 valor do pH da solução foi ajustado com NaOH 2 N para 12. Foi acrescentada uma solução de 0,4 g de cianoborohidreto de sódio na menor quantidade de água possível e agitada durante 45 minutos. O produto foi precipitado em 400 ml de etanol, filtrado, lavado com etanol e secado durante a noite no vácuo.

Exemplo 5

Determinações da hemoeompatibilidade de compostos de acordo com as fórmulas gerais Ia e Ib segundo ISO 10933-4 (exames in vitro)

Para examinar a hemoeompatibilidade dos compostos de acordo com a fórmula Ia e 1b foram revestidas membranas de celulose, tubos de sílicone e stents de aço inoxidável com um composto de acordo com a fórmula Ia ou Ib de forma covalente e 59/80 testados contra heparina bem como contra superfícies de metal não revestidas utilizadas em cada um dos ensaios. 5.1. Membranas de celulose (cuprofan) revestidas com heparina (heparina-ac) dessulfatada, reacetilada.

Para examinar os efeitos recíprocos fisiológicos da coagulação entre o sangue puro citrado e as membranas de cuprofano revestidas com heparina-ac ou com heparina, aplica-se o sistema de perfusão aberto da câmara de Baumgartner modificada por Sakaríassen [Sakaríassen K. S. e outros; J. Lab. Clin. Med. 102 : 522-535 (1983) ] . A câmara composta de quatro peças de construção miais anéis de vedação e parafusos, é fabricada de metacrilato de polimetila e permite o exame paralelo de duas membranas modificadas, de modo que em cada curso já se realiza uma vedação estatística. 0 estilo de construção desta câmara permite condições de perfusão quase laminares.

Depois da perfusão de 5 minutos a 37°C as membranas são retiradas e após fixação das plaquetas de sangue aderidas determina-se a deposição dos trombócitos. Os valores de medição respectivos são fixados em relação à matriz subendotelial altamente trombogénica corno padrão negativo com uma deposição de plaquetas de 100 %. A agregação dos trombócitos é efectuada secundariamente na camada de proteína do plasma que se forma previamente sobre o material estranho. A proteína do plasma fibrinogénio atua como co-factor da agregação das plaquetas. A activação das plaquetas do sangue induzida desta maneira atrai a ligação de toda uma série de proteínas do plasma associadas com a coagulação, tal como por exemplo, vítronectina, fíbronectina e do factor de Wíllebrand na superfície dos trombócitos. Através de sua ação há 60/80 finalmente a agregação irreversível dos trombócitos. A deposição dos trombócitos representa com base nos efeitos recíprocos descritos, uma medida reconhecida para a trombogeneidade de superfícies no caso do contacto da superfície estranha do sangue. Desta realidade resulta a conclusão: quanto menor é a deposição dos trombócitos na superfície perfundida, tanto ma is alta deve ser avaliada a hemocompatíbi1idade da superfície examinada.

Os resultados das membranas revestidas com heparina e revestidas com heparina-ac examinadas, mostram nitidamente o aperfeiçoamento da hemocompatibilidade da superfície estranha através do revestimento com heparina-ac. Membranas revestidas com heparina mostram uma deposição de trombócitos de 45-65%, enquanto que superfícies revestidas com heparina-ac apresentam valores de 0-5% (com relação à matriz subendotelial com deposição de trombócitos de 100 %). A adesão dos trombócitos na superfície heparinizada-ac é extremamente dificultada com base nas proteínas do plasma deficientes, necessárias para a activação das plaquetas do sangue. Ao contrário disso, a superfície revestida com heparina com a adsorção das proteínas do plasma que se inicia imediatamente, oferece óptimas previsões para a activação, deposição e agregação dos trombócitos; e finalmente, o sangue reage mediante activação da cascata de coagulação com os mecanismos de defesa correspondentes na superfície estranha aplicada. Heparina-ac completa muito melhor como heparina as reivindicações feitas à hemocompat ibi1idade da superfície estranha. 0 conjunto de adsorção das proteínas do plasma e deposição dos trombócitos como medida directa para a trombogeneidade de 61/80 ao uma superfície, em função do revestimento oferecido sangue, é particularmente bem mostrado por este teste in-vitro. Por conseguinte, o emprego de heparina ligada de forma covalente como superfície com eficácia antitrombótíca é somente muito limitada até impossível. 0s efeitos recíprocos de heparina imobilizada com sangue invertem-se aqui ao contrario indesejado - a superfície revestida com heparina torna-se trombogénica. isviaentemente, o significado sooressalente de heparina como antílrombotico não é transmissível para heparina ímobílizada de forma covalente. Na administração sistémica ela pode desenvolver plenamente seu efeito em forma dissolvida, quando de modo geral, somente por pouco tempo. De outra maneira, a heparina-ac ("heparina "No-affinity), a qual através da dessuifatação e N-reacetilaçao na verdade, perde totalmente as propriedades antitrombóticas da molécula de partida, mas ao contrário, adquire propriedades antitrombogénicas acentuadas, que são fundamentadas comprovadamente na passividade frente a antitrombina III e da afinidade deficiente frente aos procedimentos iniciadores da coagulação e permanecem após a ligação covalente.

Desta forma, a heparina-ac e com isso, os compostos das fórmulas gerais la e Ib prestam-se ao todo da melhor maneira para o disfarce de superfícies estranhas em contacto com o sistema de coagulação. 5.2. Imobilização sobre silicone:

Através de um tubo de silicone com 1 m de comprimento com 3 mm de diâmetro interno bombearam-se em circuito durante 30 minutos a 40°C, 100 ml de uma mistura de etanol/água 1/1 62/80 (V/V). Depois foram acrescentados 2 ml de 3-(trietoxisilil)-propilamina e bombeou-se em circuito mais 15 horas a 40°C. A seguir, foi lavado ainda em cada caso durante 2 horas com 100 ml de etanol/água e 100 ml de água. 3 mg da heparina (heparína-ac} desacetilada e reacetilada foram dissolvidos a 4°C em 30 ml de tampão MES 0,1M pH 4,75 e adicionados com 30 mg (CMD-CDI (N-cielohexil-N’-(2-morfolinoetil)carbodiimidometil-p-toluenossulfonato). Esta solução foi bombeada durante 15 horas a 4°C em circuito através do tubo. Em seguida, foi lavado com água, solução de NaCl 4M e água durante 2 horas cada. 5.3. Determinação do número de trombócitos (EN30993-4)

Num tubo de síiicone de 1 m de comprimento com 3 mm de diâmetro interno foram empurrados tubinhos de vidro justos com 2 cm de comprimento. Depois o tubo é fechado num círculo com um tubo contraído e hermeticamente fechado e enchido através de seringas com solução de NaCl 0,154 M. Com isso, a solução foi envasada com uma seringa e com a outra seringa retirou-se o ar. Com as duas seringas a solução foi trocada sem bolhas de ar por sangue puro de um voluntário sadio. Em seguida, as perfurações das agulhas de injecção foram fechadas pelo deslizamento dos tubinhos de vidro e o tubo foi tensionado para uma bomba de diálíse. O sangue foi trasfegado mediante bomba durante 10 minutos com uma vazão de 150 ml/min. O teor de trombócitos do sangue foi determinado antes e após a perfusão com um Coulter Counter. Para tubos de silicone não revestidos a perda de trombócitos era de 10%. Ao contrário, em tubos de silicone, que foram revestidos conforme o exemplo 5,2, em média em 0% (número dos ensaios; n-3) . 63/80

Também neste sistema de teste dinâmico, demonstra-se, que a activação de trombócitos em uma superfície revestida com heparina-ac é reduzida. Simultaneamente, pode verificar-se, que a imobilização de heparina exerce um efeito negativo sobre a hemocompatibilidade da superfície empregada. ao contrário, a heparína-ac, correspondentemente à sua natureza passiva, não mostra nenhum efeito no contacto com os trombócitos. 5.4. Exames do sangue puro em stents coronários de aço inoxidável LVM 316

No âmbito das experiências de biocompatibilidade, revestiram-se de forma covalente stents de aço inoxidável LVM 316 com 31 mm de comprimento com heparina-ac. Em uma superfície total de 2 cm2 e uma densidade de deposição de aproximadamente 20 pm/cirh da superfície do stent, a carga de um tal stent importa em aproximadamente 0,35 pg de heparina-ac. Como comparação: a dose diária de heparina usual na profilaxia da trombose importa, ao contrário, em 20-30 mg e corresponderia assim, ao valor pelo menos 60.000 vezes maior.

Essas experiências foram efectuadas no Instituto para Fisiologia em RWTH Aachem com um sistema de Chandier-Loop hemodinâmico estabilizado [A. Henseler, B, Oedekoven, 0.

Andersson, K. Mottaghy; KARDIOTECHNIK 3 (1999)]. Stents revestidos e não revestidos foram expandidos em tubos de PVC (medicai grade PVC) com 600 mm de comprimento e 4 mm de diâmetro interno e testados. Os resultados desses ensaios confirmam as experiências discutidas com relação aos tubos de silicone. A perda de plaquetas de sangue no perfusado de 50% a ser atribuída inicialmente ao stent, é reduzida pelo benefício da superfície do stent com heparina-ac 64/80 aproximadamente em mais de 80 A influência dos stents coronários de aço inoxidável modificados superficialmente, expandidos no tubo sobre a perda de trombócitos é avaliada em outros testes de Chandler durante os 45 minutos da perfusâo do sangue puro. Para isso, examina-se primeiro o tubo de PVC sem stent, do qual resulta o valor zero. O tubo vazio mostra um perda de plaquetas médio de 27,4 % com relação ao sangue do doador com um desvio padrão de meramente 3,6 I. Com base nesse valor básico expandem-se stents modificados superficialmente de modo diferente em tubos de PVC e com condições análogas examinam-se para a perda de plaquetas provocadas pelos mesmos. Também aqui, verifica-se outra vez, que a superfície revestida pelo stent, que perfaz meramente cerca de 0,84 % de toda a superfície do teste, provoca um efeito significativo e reproduzível sobre o teor de trombócitos. Com relação ao tubo vazio (valor básico), a experiência do stent polido, quimicamente não beneficiado superficialmente, fornece uma perda de trombócitos média adicional de 22,7 %. Com isso, essa superfície estranha medindo menos do que 1 % em comparação com o tubo vazio de PVC provoca uma perda de trombócitos aproximadamente comparável. Disto desvia-se directamente, que o aço inoxidável LVM 316 medicinal empregado como material de stent, embora esta superfície do teste só perfaz 0,84 % de toda a superfície, comparada com uma superfície de PVC medicai grade, induz um dano das plaquetas aproximadamente 100 vezes mais intenso.

Os benefícios da superfície examinada nos stents coronários de aço inoxidável estão em condição, de reduzir muito nitidamente a enorme extensão do dano das plaquetas induzidas pelo stent (vide figura 4). Como mais eficiente comprovou-se 65/80 a heparina-ac {SH4) com 81,5 %.

Considerando-se portanto, os efeitos dos stents revestidos com heparina-ac sobre a perda de trombócitos, resultam valores bem sincronizados. A correlação das perdas de trombócitos no perfusado ou da adesão dos trombócitos nas superfícies oferecidas mostram a confiança das determinações. 5.4.1 Revestimento hemocompatível covalente de stents

Stents não expandidos de aço inoxidável medicinal LVM 316 foram desengordurados no banho de ultra-som durante 15 minutos com acetona e etanol e secados a 100°C na estufa de secagem. Depois, eles foram imersos durante 5 minutos em uma solução a 2% de 3-aminopropiltrietoxissilano em uma mistura de etanol/água (50/50 : (v/v) e em seguida, secados durante 5 minutos a 100°C. Em seguida, os stents foram lavados durante a noite com água desmineralizada. 3 mg de heparina dessulfatada e reacetiiada foram dissolvidos a 4o em 30 ml de tampão MES 0,1M (ácido 2- (N-morfolíno)etanossulfônico) em pH 4,75 e adicionados com 30 mg de N-ciciohexil-N'-(2-morfolinoetí1)carbodiimid-p-tolulenossulfonato. Nesta solução, 10 stents foram agitados durante 15 minutos a 4°C. Em seguida, foi lavado com água, solução de NaCl 4M e água durante 2 horas cada.

5.4.2 Determinação do teor de glicosamina do stents revestidos por meio de HPLC

Hidrólise: os stents revestidos são colocados em pequenos tubos de hidrólise e deixados em repouso com 3 ml de HC1 3M 66/80 durante exacto um minuto à temperatura ambiente. As amostras de metal são removidas e os tubinhos após o fechamento são incubados durante 16 horas na estufa de secagem a 100°C. Depois deixa-se resfriar, evapora-se três vezes à secura e retoma-se em 1 mi de água desgasifiçada e filtrada e mede-se com relação a um padrão igualmente hidrolizado na HPLC:

Stent N° Área de amostra heparina-ac [g/amostra] Área [cm2 J heparina-ac [g/amostra] heparina-ac [pmoi/crrh] 1 129,021 2,70647E-07 0,74 3,65739E-07 41,92 2 125,615 2,63502E-07 0,74 3,56084E-07 40,82 3 38,244 1,93072E-07 0,74 2,60908E-07 29, 91 4 105,455 2,G7243E-07 0,74 2,80058E-07 32,10 5 119, 061 2,33982E-07 0, 74 3,16192E-07 36,24 6 129,202 2,53911E-07 0,74 3,43124E-07 39, 33 7 125,766 2,53957E-07 0,74 3,43185E-07 39, 34

Exemplo 6

Experiências in vivo de stents coronários revestidos (figura 51 6.1. Experiência in vivo de stents coronários revestidos com heparina-ac

Com base nos dados para a hemocompatibilidade, que forneceu a heparina-ac nos ensaios in vitro, examinou-se a aptidão da superfície da heparina-ac como revestimento atrombogénico de stents de metal in vivo (no ensaio animal). 0 objectivo dos ensaios constituiu-se primaríamente, em avaliar a influência do revestimento com heparina-ac sobre a reacção vascular induzida com o stent. Além do registo de possíveis resultados 67/80 trombóticos, abrangeram-se os parâmetros relevantes para processos restenóticos tais como área da neoíntima, lúmen vascular e grau da estenose.

Os ensaios animais foram efectuados no Inselspítal Bem (Suíça) com a condução do Prof. Hess, um cardiologista de renome. Para as experiências foram usados porcos domésticos com idade de 6-9 meses, um modelo animal estabilizado e reconhecido há muito tempo para a avaliação de stents.

De acordo com a invenção, neste ensaio não foram registados nem acontecimentos agudos, subagudos, nem espectaculares. 0 que pode ser avaliado como confirmação das propriedades atrombogénicas da heparina-ac. Depois de quatro semanas, os animais sofrem eutanásia, os segmentos das artérias coronárias testados são removidos e analisados histomorfometricamente.

Referências de uma possível toxicidade aguda ou subcrónica, reacções de sensibilização ou outras irritações como consequência da implantação de stents revestidos com heparina-ac não foram verificadas durante toda a fase do ensaio, especialmente na avaliação histológica. Durante a implantação do stent assim como no follow-up, foram determinados registos angiográficos coronários, que permite uma avaliação com respeito à reacção vascular sobre a implantação do stent. A diferença entre o stent de controlo não revestido e o stent revestido com heparina-ac é nítida. A formação de uma camada de neoíntima acentuada é reconhecida no stent de controlo não revestido. Já depois de quatro semanas, o efeito promotor de proliferação da superfície do stent não revestido sobre o tecido adjacente é mostrado numa extensão tal, que por fim, há o perigo da oclusão vascular na 68/80 região do stent. No caso do stent revestido com heparina-ac pode reconhecer-se, ao contrário, uma camada de neoíntima nitidamente mais fina, que responde por um encravamento regulado do stent com obtenção de um amplo lúmen vascular livre.

Os dados histomorfometricamente e angiográficos coronários detalhados alicerçam esta informação, onde se pode verificar analogamente, que através do revestimento com heparina-ac (SH4) a hiperplasia da neoíntima ("restenose") foi reprimida em aproximadamente 17-20% em comparação com o stent de controlo não revestido.

Este resultado é inesperado e simultaneamente notável. Seguramente não se exige de uma superfície atrombogénica, que adicionalmente à preparação de propriedades biocompatíveis, ela também influencia os processos que levam a uma hiperplasia da neoíntima, isto é, o de evitar restenoses.

Por um lado, através do denso revestimento permanente da superfície do stent com heparina-ac evita-se um contacto celular directo com a superfície de metal. Já que na literatura técnica discute-se a emissão de determinados íons de metal para o tecido implantado como sendo uma causa provável da restenose, numa interrupção do contacto directo com o metal provocada pelo revestimento pode estar fundamentada uma eficácia anti-restenótica.

Por outro lado, um tal efeito colateral positivo é inteíramente plausível, pois sobre uma superfície atrombogénica passiva com a falta de uma agregação de trombócitos também faltam, os efeitos prolí ferativos dos factores de crescimento libertados com isso. Falta assim um 69/80 estímulo decisivo, partindo do lado luminal, da proliferação neointimal,

Exemplo 7

Experiências ín vivo de stents coronários revestidos com heparina-ac ligada de forma covalente e de uma outra camada sobrejacente de PLGA 50/50 7.1 Hemocompatibilidade da matriz empregada ín vitro

Para a avaliação da hemocompatibilidade de PLGA50/5G, stents de aço inoxidável foram revestidos com o polímero e testados no Instituto para Fisiologia de RWTH Aachen com auxílio de teste de sangue puro ín vitro. O sistema de Chandler-Loop estabilizado e padronizado empregado, é um sistema tubular fechado dinâmico, que satisfaz sem o emprego de uma bomba. No âmbito das experiências de hemocompatibilidade determinaram-se fórmula hematológica, factor de plaquetas 4 (PF4 e factor complementar 5a (C5a) (vide figuras 14-16). Para fins de comparação, aplica-se o stent não revestido.

Execução do ensaio:

Sangue doado é retomado em 1,5 U/ml de heparina. Os stents são introduzidos em tubos de PVC (I.D. 3,5 mm, L=95cm) e fixos por meio de catéter de balão. Gs 4 tubos (K3-K6) e dois tubos vazios (Ll, L2) são enchidos com respectivamente 7,5 ml de solução de cloreto de sódio isotónico e girados durante 15 minutos com 5 rotações/minuto a 37°C no Chandler-Loop. Os tubos completamente esvaziados são cuidadosamente enchidos com sangue doado heparínizado (7,5 ml) e girados durante 60 minutos a 5 rotações/minuto. Correspondentemente aos 70/80 anticoagulantes retiram-se amostras em monoprovetas ou recipientes para amostras (PF4-CTAD, C5a-EDTA, BB-EDTA) e transformam-se. A determinação do número de trombócitos não mostra nenhuma diferença significativa entre os tubos de controlo vazios, os stents revestidos e não revestidos. 0 PF4 libertado encontra-se nos stents revestidos e não revestido no mesmo nível. A determinação do facto complementar activado 5 (C5a) mostra no caso do stent revestido uma menor activação do que nos stents não revestidos. 7.2 Hemocompatibiiidade da matriz empregada in vivo. 0 objectivo dos ensaios constítuiu-se primariamente em avaliar a influência do revestimento PLGA sobre a reacção vascular induzida pelo stent. Para as experiências foram usados 28 porcos domésticos com idade de seis até nove meses. As regiões testadas foram examinadas depois de uma semana (IWoFPU) , urn mês (4WoFUP) , seis semanas (6W0FUP) e depois de três meses (12WoFPU). Os dados obtidos deixam reconhecer um efeito notadamente positivo inesperado, que é atribuído sem dúvida, à presença de PLGA 50/50. Embora os valores da estenose depois de 3 meses para o stent não revestido e para o stent revestido quase não se alteram mais, a reacção da parede vascular sobre o stent revestido com PLGA é essencialmente ma is moderada. Depois de uma semana, o valor da estenose com 6% encontra-se significativamente abaixo do valor dos implantes não revestidos com 10,4%. O disfarce da superfície de metal fornece depois de quatro semanas mesmo com 101 (um aumento de 33%) uma taxa de estenose menor em mais do que o íactor dois do que o stent não revestido, que após este tempo alcança um valor máximo de 22,6% (um aumento 71/80 de 54 %) . 0 stent revestido mostra um máximo após seis semanas com meramente 12,33%. Depois de 12 semanas os valores dos dois sistemas igualam-se corri aproximadamente 11% um com o outro (figura 16).

Os dados para os processos restenóticos foram determinados por meio de coronarioangiografia quantitativa (QCA) e exames de ultra-som intravasculares (IVUS).

Exemplo 8

Ensaios para o revestimento de superfícies com_tacrolimus: Pré-ensaios com azul de toluidina: Já que tacrolimus só é mal comprovado quimicamente, executam-se os primeiros pré-ensaios com azul de toluidina (Aldrich).

Produtos químicos:

Tubinhos de aço inoxidável LVM 316: 2,5 cm de comprimento, 2 mm de diâmetro

Poliactídeo: Fluka, Lot. 398/555/123500, H n° 0409 Azul de toluidina: Aldrich, Lot. 19,816-1, H n° 0430 Tampão PBS pH 7,4: 14,24 g de Na2HP04, 2,72 g de NaH2P04 e 9 g de NaCl

Execução: O stent é pesado numa balança de análise e o peso é anotado. Num pequeno tubo de hidrólise são dissolvidos 0,5 g de polilactídeo em 2 ml de CHCI3. Para isso, aquece-se no banho-maria a aproximadamente 65°C. A solução é arrefecida depois, no congelador. A estes acrescentam-se 200 pg de azul de 72/80 toluidina em 2 00 μΐ de CHCI3. Nesta solução imerge-se o stent. Depois de alguns minutos, o stent é retirado da solução com uma pinça e na saída é movimentado durante tanto tempo ao ar, até que o solvente evapora. Depois, o stent ê imerso uma segunda vez. Após a secagem ao ar, o stent é pendurado ainda durante cerca de 10 minutos para a liofilização. Depois da secagem, o stent é novamente pesado. Da diferença de peso calcula-se a quantidade do polilactideo imobilizado com azul de toluidina (amostra 1).

Este ensaio é repetido com a mesma solução mais uma vez (amostra 2).

Para a amostra 3, a solução resultante do ensaio 1 (1,93 ml) (amostra 1) e ensaio 2 (amostra 2)é adicionada com 0,825 mg de azul de toluidina em 0, 825 mi de CHC13 e 250 mg de polilactideo. 0 polilactideo é dissolvido sob aquecimento.

Depois um stent é imerso duas vezes na mesma tal como descrito acima.

Resultados:

Os stents não tratados tinham um peso de 176,0 mg e 180,9 mg. Depois da imersão na solução de polilactideo, os stents pesaram 200,9 e 205,2 mg. A solução de imersão contém 500 mg de polilactideo e 2 00 pg de azul de toluidina; desta razão pode calcular-se a quantidade de azul de toluidina ligada para as amostras 1 e 2. Na amostra 3, 2,755 ml de solução contêm 1 mg de azul de toluidina e 638,6 mg de polilactideo (consumo do peso inicial da amostra i + 2; aproximadamente 50 mg) . Aqui, dois stents sâo colocados num preparado, para obter maiores absorções. Já 73/80 que a solução de imersão era muito viscosa e por isso, resultou um revestimento muito espesso, ela foi diluída com 2,625 ml de clorofórmio para 4 ml.

Concentrações na solução de imersão:

Amostra volume (rol) c {polilactídeo mg/ml) c (azul de toluidina pg/ml) 1 2,2 227, 3 90, 9 2 2,2 227,3 90, 9 3 2,7 55 231,8 363,0 4 4,0 134,5 212,5

Peso dos tubínhos e revestimento calculado da mesma:

Amostra Peso vazio Peso total Pl e azul de toluidina Toluidina azul 1 176,0 mg 200,9 mg 24,9 mg 9,96 gg 2 180,9 mg 205,2 mg 24,3 mg 9,72 pg 3 317,2 mg 410,8 mg 93,6 mg 135,73 pg 4 180,8 mg 194,8 mg 14,8 mg 23,38 pg

Exemplo 9

Poder de eluição dos revestimentos com diferentes concentrações:

Como pré-ensaio retoma-se um espectro UV-VIS de urna solução de azul de toluidina em etanol (C = 0,1 mg/ml) e determina-se a absorção máxima. A concentração de azul de toluidina na solução é determinada na absorção máxima de 627 mn. Para 74/80 isso, produz-se antes uma curva de calibração.

Um stent é pendurado num béquer com 25 ml de solução de cloreto de sódio fisiológica num tampão fosfato, pH 7,4 (14,24 g de NaH2P04, 2,72 g de K2HP04 e 9 g de NaCl) e cuidadosamente agitado à temperatura ambiente. Depois de 0,5, 1, 2, 3, 6, 24, 48 e 120 horas retira-se em cada caso uma amostra de 3 ml, mede-se espectroscopicamente e recoloca-se no preparado.

Tempo/h abs,sl c(ng/ml) abs,s2 C (ng/ml) abs,s3 c (ng/ml) abs, s4 c (ng/ml) 0 0,0002 0 -0,0002 0 0,0036 0 0,0063 0 0, 5 -0,0011 0 0,0011 6,4 0,0095 29,2 0,0125 30,7 1 0,0003 0,5 0,0014 7,9 0,0164 63,3 0,0121 28,7 2 0,0007 2, 5 0,0008 5,0 0,0256 108, 9 0,0131 33,7 3 -0,0004 0 0,0006 4,0 0,0294 127,7 0,0136 36,1 6 0,0013 5,4 0,0015 8,4 0,0333 147,0 0,0142 39,1 24 0,0017 7,4 0,0020 10,8 0,0527 246, 0 0,0239 176 48/96 0,0024 10,9 0,0033 17,3 0,1096 524,8 0,0147 41,6 120 0,0017 7,4 0,0038 19,8 0,1110 531,7 0,0161 48,5

Absorção das amostras depois de diferentes períodos. Para calcular a concentração diminui-se a diferença da cubeta (abs. em T = 0) do valor medido.

Depois de 12 ou 13 dias, interrompe-se o ensaio. Ainda havia um revestimento em todos os stents após o decurso do ensaio. Para a determinação das quantidades de azul de toluidina ou de poiilactídeo dissolvidos, os stents foram lavados com água e etanol e depois pendurados durante uma hora para a liofilízação, para depois pesá-los. 75/80 s. Peso final Peso inicial PL + Tb PL + Tb dissolvidos Azul de toluidina dissolvida Azul de toluidina restante 1 196,5 200,9 mg 24,9 mg 4,4 mg 1,76 pg 8,2 pg 2 199, 4 205, 2 24,3 mg 5, 8 mg 2,32 pg 3,48 pg 3 385,4 410, 8 93,6 mg 25,4 mg 36, 83 pg 98,8 pg 4 191,3 194,8 14,8 mg 3,5 mg 5,52 pg 17,86 pg

Em concentrações de 90 pg de azul de tcluidina por ml de solução de imersão as quantidades de azul de toluidina libertadas são tão baixas, que as absorções encontram-se no limite de medição do espectómetro. Numa concentração de 200 pg/ml os maiores após poucas horas encontram-se na faixa mensurável. Para a medição, recomenda-se colocar duas amostras num béquer (recipiente de eluição), para obter maiores absorções. Na maior concentração de polilactídeo/azul de toluidina parece ajustar-se um efeito de saturação. Enquanto a taxa de eluição nas amostras mais finas decorre quase linear. Em todos os stents reconhece-se sempre ainda o revestimento após vários dias.

Depois de aproximadamente 2 semanas, em média A - 1/5 do azul de toluidina ligado dissolve. Disto resulta, que as amostras ainda teriam eluído azul de toluidina aproximadamente durante mais 8 até 10 semanas. A solução de imersão não pode ser viscosa demais e deveria ser arrefecida para que o clorofórmio não evapore rápido demais na retirada das amostras, pois senão a espessura do revestimento torna-se grande demais e desigual demais. Aqui, a concentração de polilactideo na amostra 4 parece ser suficiente (134 mg/ml). Às vezes, em maiores concentrações a solução torna-se extremamente viscosa e o polilactideo só 76/80 pode ser dificilmente dissolvida.

Exemplo 10

Revestimento do stent de acordo com o processo de pulverização

Os stents não expandidos preparados segundo o exemplo 1 e exemplo 2, são pesados e pendurados horizontalmente numa vara de metal fina (d = 0,2 mm), que está inserida no eixo de rotação da instalação de rotação e avanço e gira com 28 rotações/minuto. Os stents são aplicados de modo tal, que o lado interno dos stents não toque a vareta. Numa amplitude do avanço de 2,2 cm e uma velocidade do avanço de 4 cm/s e uma distância de 6 cm entre stent e bocal, o stent é pulverizado com a respectiva solução de pulverização. Depois da secagem (aproximadamente 15 minutos) à temperatura ambiente e seguindo na saída durante a noite, pesa-se novamente.

Exemplo 11

Revestimento dos stents com matriz pura Preparação da solução de pulverização: 176 mg de polilactídeo são pesados e completados com clorofórmio para 20 g. Os stents são pulverizados com 3 ml cada da solução de pulverização e depois da pulverização são pesados e a espessura da camada resultante é determinada pela medição sob o microscópio com aumento de 100 vezes. 77/80

Stent N° Antes do revestimento Após o revestimento Massa do reve st íme nto Espessura da camada 1 0,0193 g 0,0205 g 1,2 mg 10,4 μηι 2 0,0193 g 0,0205 g 1,2 mg 10,4 pm 3 0,0204 g 0,0216 g 1,2 mg 10,4 μιη 4 0,0206 g 0,0217 g 1,1 mg 10,4 μη

Exemplo 12

Revestimento dos stents com substância activa pura

Preparação da solução de pulverização: 44 mg de taxol são dissolvidos em 6 g de clorofórmio. Os stents são pesados antes e após a pulverização.

Stent Pré- Pós- Massa do n° revestimento revestimento revestimento 1 0,0194 g 0,0197 g 0,30 mg

Exemplo 13

Determinação do poder de eluição em tampão PBS

Cada stent é adicionado num recipiente suficientemente pequeno com 2 ml de tampão PBS, fechado com parafina e incubado na estufa de secagem a 37°C. Depois do decurso dos intervalos de tempo seleccionados pipeta-se em cada caso o sobrenadante e mede-se a sua absorção ultravioleta em 306 mn.

Exemplo 14

Revestimento do stent preparado de forma hemocompatível com 78/80 matriz carregada com substância activa (figura 7)

Solução de pulverização: polilactídeo RG2G5/taxol a partir de 145,2 mg de polilactídeo e 48,4 mg de taxol é completada para 22 g com clorofórmio.

Sten 4~ L· solução de pulverização peso anterior (g) peso posterior (g) massa do revestimento massa da substância activa substância activa gg/mm2 espessura da camada 1 0,8 ml 0,02180 0,02215 0,35 mg 14 6 gg 1,97 7,9 gm 2 0,8 ml 0,02105 0,021421 0,37 mg 154 gg 2,08 6,7 gm _· 0,8 ml 0,02247 0,02285 0,38 mg 158 gg 2,14 9,8 gm 4 0,8 ml 0,02395 0,02432 0,37 mg 154 gg 2,08 11,0 gm 5 0,8 ml 0,02247 0,02286 0,39 mg 163 gg 2,20 9,1 gm 6 0,8 ml 0,02442 0,02482 0,40 mg 167 gg 2,26 12,2 gm

Exemplo 15

Revestimento dos stents com matriz carregada com substância activa e substância activa como Topcoat (figura 8)

Basiscoat: 19,8 mg de polilactídeo e 6,6 mg de taxol são completados com clorofórmio para 3 g

Topcoat: 8,8 g de taxol são completados com clorofórmio para 2 g.

Stent solução de pulverização peso anterior <g) peso posterior (g) massa do reves timento massa da substânci a activa substância activa gg/irtm2 espessura da camada 1 0,85 ml 0,0235 0, 0238 0,30 mg 131 gg 1,56 9, 7 gm 2 0,85 ml 0,0260 0,0264 0,40 mg 175 gg 2,09 10,1 gm

Exemplo 16 79/80

Revestimento dos stents com polilactídeo contendo uma substância activa hidrófila e uma matriz livre de substância activa (figura 9)

Soluções de pulverização

Basiscoat: 22 mg de polilactídeo e 22 mg de substância activa hidrófila são pesadas e completadas com clorofórmio para 5 g. Topcoat: 22 mg de polilactídeo e 22 mg de poliestireno são pesados e completados com clorofórmio para 5 g.

Solução de pulverização Antes do revestimento Após o revestimento Massa do revestimento Massa da substância activa 0,85 ml 0,0135 g 0,0143 g 0,8 mg 200 pg

Lisboa, 26 de Janeiro de 2007 80/80

Claims (51)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Compostos da fórmula geral Ia e Ib Fórmula Ia

   o- J n

   n na qual n representa um número inteiro entre 4 e 1050, Y e z independentes um do outro, representam os radicais -CHO, -C0CH3, -COC2H5, -COC3H7, -COC4H9, -COCsHu, -COCH(CH3)2, -COCH2CH(CH3)2, -CQCH(CH3)C2H5f -C0C(CH3) 3, -CH2C00~, -C2H4COO~, -CsHgCOO^, -C^HsCOO", bem com os sais destes compostos.
2. 2. Compostos da fórmula geral Ia de acordo com a reivindicação 1, na qual Y e Z independentes um do outro, representam os radicais -C0CH3, -COC2H5, -COC3H7, -CH2C0CT, -1/21 C2H4COO bem como sais destes compostos.
3. 3. Compostos da fórmula geral Ib de acordo com a reivindicação 1, na qual Y representa os radicais -CGCH3f -COC2H5, -COC3H7, bem como sais destes compostos.
4. 4. Processo para a preparação dos compostos da fórmula geral la, caracterizado pelo facto de que sulfato de heparana e/ou heparina de sulfato de heparana por meio de ácido é essencialmente completamente dessulfatada e em seguida, N-acilada.
5. 5. Processo para a preparação dos compostos da fórmula geral lb, caracterizado pelo facto de que a) quitosana é parcialmente N-carboxialquilada e depois N-acilada ou b) quitosana é parcialmente N-acilada e depois N- earboxialquilada ou cj quitina é parcialmente desacetilada e depois N- carboxialquilada.
6. 6. Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo facto de que os grupos amino da quitosana ou quitina são essencialmente acilados à metade e carboxialquilados para formar outras metades.
7. 7. Compostos da fórmula geral Ia e/ou Ib obteníveis por um processo como definido numa das reivindicações 4-6.
8. 8. Compostos da fórmula geral Ia e/ou Ib de acordo com uma 2/21 das reivindicações 1, 2, 3 ou 7, caracterizados pelo facto de que o teor de grupos sulfato por unidade de dissacarídeo· importa em menos do que 0,05.
9. 9. Compostos da fórmula geral Ia e/ou Ib de acordo com uma das reivindicações 1, 2, 3, 7 ou 8, caracterizados pelo facto· de que o teor de grupos amino livres importa em menos do que 1% com relação a todos os grupos -NH-Y-.
10. 10. Compostos da fórmula geral Ia e/ou Ib de acordo com uma das reivindicações 1-3, 7-9, caracterizados pelo facto de que a sequência dos elementos estruturais do açúcar é essencialraente alternativa.
11. 11. Compostos da fórmula geral Ia e/ou Ib de acordo com uma das reivindicações 1-3, 7-10, caracterizados pelo facto de que 45%-55% de todos os grupos amino portam o radical Y e os grupos amino restantes, o radical Z.
12. 12. Aplicação dos compostos da fórmula geral Ia e/ou Ib para a preparação de superfícies hemocompatíveis de produtos medicinais.
13. 13. Aplicação de acordo com a reivindicação 12, caracterizada peio facto de que os compostos da fórmula geral Ia e/ou Ib são ligados de maneira covalente à superfície.
14. 14. Aplicação de oligo- e/ou polissacarídeos para o revestimento hemocompatível de superfícies, caracterizada pelo facto de que os oligo- e/ou polissacarídeos contêm entre 40% e 60% do elemento estrutural do açúcar N-acilglícosamina ou N-acilgalactosamina e essencialmente os elementos estruturais do açúcar restantes apresentam um radical 3/21 carboxila por elemento estrutural do açúcar.
15. 15. Aplicação de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo facto de que esaencialmente cada segundo elemento estrutural do açúcar dos oligo- e/ou polissacarídeos é N-acilglicosamina ou N-acilgalactosamina.
16. 16. Aplicação de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizada peio facto de que no caso da N-acilglicosamina se trata de N-acetilglucosamina e no caso da N-acilgaiactosamina, de N-acetilgalactosamina.
17. 17. Aplicação de acordo com. a reivindicação 14, 15 ou 16, caracterizada pelo facto de que no caso dos elementos estruturais do açúcar restantes se trata de ácidos urónicos.
18. 18. Aplicação de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo facto de que no caso dos ácidos urónicos se trata essencialmente de ácido D-glícurónico e de ácido L-idurónico.
19. 19. Aplicação de acordo com as reivindicações 12-18, caracterizada pelo facto de que a sequência dos elementos estruturais do açúcar é essencialmente alternativa.
20. 20 · Aplicação de acordo com as reivindicações 14-19, caracterizada pelo facto de que os oligo- e/ou Pclissacarídeos abrangem sulfato de heparana essencialmente dessuifurado e essencialmente N-acilado bem como quitosana parcialmente N-carboxialquilada e N-acilada.
21. 21. Processo para o revestimento hemocompatível de •superfícies de produtos medicinais biológicos e/ou artificiais, abrangendo as seguintes fases: 4/21 a) preparação de uma superfície de um produto medicinal e b) aplicação de pelo menos um oligo- e/ou polissacarídeo como definida em uma das reivindicações 1-3, 7-11, 14-20 como camada hemocompatível nessa superfície e/ou b') aplicação de uma camada bioestável na superfície do produto medicinal ou da camada hemocompatível.
22. 22. Processo de acordo com a reivindicação 21, em que a camada hemocompatível ou a camada bioestável é submetida no processo de imersão ou pulverização com pelo menos uma camada-biodegradável e/ou bioestável, a qual contém pelo menos uma substância activa ligada de maneira covalente e/ou adesiva.
23. 23. Processo de acordo com a reivindicação 21, abrangendo a outra fase c): c. aplicação de pelo menos uma substância activa na e/ou sobre a camada hemocompatível ou sobre a camada bioestável.
24. 24. Processo de acordo com a reivindicação 23, em que pelo menos uma substância activa é aplicada e/ou introduzida no processo de imersão ou de pulverização sobre e/ou na camada hemocompatível ou na camada bioestável e/ou pelo menos uma substância activa é ligada mediante copulação de maneira covalente e/ou adesiva à camada hemocompatível ou à camada bioestável.
25. 25. Processo de acordo com as reivindicações 21 - 24, abrangendo a outra fase d): 5/21 d. aplicação de pelo menos uma camada bioestável e/ou pelo menos uma camada bioestável na camada hemocompatível ou na camada da substância activa, ou d’) aplicação de pelo menos um oligo- e/ou polissacarídeo como definida em uma das reivindicações 1-3, 7-11, 14-20 como camada hemocompatível na camada bioestável ou na camada de substância activa.
26. 26. Processo de acordo com uma das reivindicações 21 - 25, abrangendo· a outra fase e.) : e. aplicação de pelo menos uma substância activa na e/ou sobre pelo· menos uma camada biodegradável e/ou bioestável ou sobre a camada hemocompatível.
27. 27. Processo de acordo com a reivindicação 26, no qual pelo menos uma substância activa no processo qe imersão ou pulverização é aplicada e/ou introduzida sobre e/ou na camada pelo menos biodegradável e/ou bioestável 0u na camada hemocompatível e/ou pelo menos uma substância activa » 1igada através de copulação covalente e/ou adesiva à camada pelo menos biodegradável e/ou bioestável Qu à carmda hemocompatível.
28. 28. Processo de acordo com uma das reivindicações 2c-27 no qual a camada bioestável e/ou biodegradável a ->· , , x e uigada de maneira covalente e/ou adesiva à superfíCi 0 ^ ^ "-e do produto medicinal e a camada hemocc-moaí ível é liciaH-, , =*α'α3 ae maneira ColnPletament? covalente à camada bioestável e esta é ou parcialmente revestida. 6/21
29. 29. Processo de acordo com uma das reivindicações 21-28, caracterizado pelo facto de que a camada hemocompativei se constitui de heparina de origem natural de derivados preparados régiosseletivamente com diferentes graus de sulfatação e graus de acilação na faixa de peso molecular do polissacarídeo responsável pelo efeito antitrombótico até o peso molecular padrão da heparina comercializável de aproximadamente 13kD, de sulfatos de heparana e seus derivados, oligo- e polissacarídeos do glicocálix de eritrócitos, heparina dessuifatada e N-reac(et)etilada, quitosana N-earboximetilada e/ou parcialmente N-ac(et)ilada bem como de misturas dessas substâncias.
30. 30. Processo de acordo com uma das reivindicações 21-29, caracterizado pelo facto de se aplicarem como substâncias biodegradáveis para a camada biodegradável, polihidroxibutírico, polihidroxivaleratos, poli(1,4-dioxan-2,3-poii-para-dioxanonas, polivalerolactonas, poli-s-decalactonas, ácido polilactônico, ácido pliglícólico, polilactídeos, poliglicolidas, copolimeros de polilactídeos e poligli colidas, ροϋ-ε-caprolactona, ácido polihidroxibutíratos, pollhidroxibutiratos-co-valerato, dionas) , poli(1,3-dioxan-2-onas), polianídridos tais como anidridos de ácido polimaléico, polihidróxi-metacrilatos, fibrina, policianoacrilatos, dlmetacrilatos de policaprolactona, ácido poli-b-maleico, policaprolactonbutil-acrilatos, polímeros multiblocos tais como por exemplo, de oligocaprolactonodióis e oligodioxanonodiós, polímeros por blocos de éster de poliéter tais como por exemplo, PEG e tereftalato de polibutileno. Polipivotolactonas, trimetil-carbonatos de ácido poliglicólico, glicolídeos de policaprolactona, poli-g-etilglutamato, poli(DTH-iminocarbonato), poli(DTE-co-DT-7/21 carbonato), poli(bisfenol A-iminocarbonato), poliortoéster, trimetil-carbonatos de ácido poligiieólico, politrimetilcarbonatos, poliiminocarbonatos, poli(N-vinil)-pirrolidona, álcoois polivinílicos, poliesteramidas, poliéster glicolados, polifosfoéster, polifosfazenos, poli[-p-carboxifenoxi)propano], ácido polihidroxípentanóico, polianidridos, óxido de polietileno-óxido de propileno, poliuretanos macios, poliuretanos com radicais de aminoácidos no backbone, ésteres de poliéter tal como o óxido de polietileno, poliaIquenoxalatos, poliortoéster bem como seus copolímeros, lipídios, carragenanas, fibrinogémo, amido, colageno, polímeros à base de proteína, poliaminoácidos, poliaminoácidos sintéticos, zeína, zeína modificada, políhidroxialcanolatos, ácido· pectíníco, ácido· actínaco, fibrina e caseína modificada e não modificada, carboximetilsulfato, albumina, além disso, ácido hialurónico, quitosana e seus derivados, e seus derivados, sulfato de heparana, heparina, sulfato de condroitina, dextrano, b-ciclodextrina e copolímeros com PEG e polipropilenoglicol, goma arábica, guar, gelatina, colageno, N-hidroxissuccinimida de colageno, lipídios, fosfolipídios, modificações e copolímeros e/ou misturas das substâncias mencionadas acima.
31. 31. Processo de acordo com uma das reivindicações 21-30, caracterizado pelo facto de se aplicarem como substâncias bioestáveis para a camada bioestável, ácido poliacrílico e de polimetila, p o1iao ri1amida, polieteramidas, policarbonatos, halogenetos de poliacrilatos tais metacrilato de poliacrilonitrilas, polietilenamina, policarbouretanos, como metacrilato polibutila, poliamidas, poliimidas, polivinilcetonas, polivinila, halogenetos de polivinílideno, éter polivinílico, compostos aromáticos de polivinila, éster polivinílico, 8/21 polivinilpirrolidonas, polioximetilenos, óxido de politetrametileno, polietilenc, polipropileno, politetrafluoretileno, poliuretanos, silício de polieteruretano-polieteruretano, silício-poliuretano, silício-policarbonatouretano, elastõmeros de poliolefina, poliisobutilenos, borrachas EPDM, fluorossilicones, carboximetiiquitosana, poliarileteretercetona, polieteretercetona, tereftalato de oolietileno, polivaleratos, carboximetilcelulose, celulose, raiom, triacetatos de raiom, nitratos de celulose, acetatos de celulose, hidroxietilcelulose, celulosebutiratos, butiratos de acetato de celulose, copolímeros de acetato de etilvinila, polissulfonas, resinas epóxi, resinas ABS, borrachas EPDM, silicones tais como polissiloxanos, polidimetilsiloxano·, polivinil-halogêneos e copolímeros, éteres de celulose, triacetatos de celulose, quitosana e copolímeros e/ou misturas das substâncias mencionadas acima.
32. 32. Processo de acordo com uma das reivindicações 21-31, caracterizado pelo facto de que as substâncias activas são seleccionadas (rapamicina) , tacrolimus, bafílomicina, concanamicina, cerivastatina, rosuvastatina, do grupo, o qual abrange sirolimus everolimus, pimecrolimus, somatostatina, roxitromicina, dunaimicina, ascomicma, eritromicina, midecamicina, josamicina, claritromicina, troleandomicina, folimicina, simvastatina, lovastatína, fluvastatina, atorvastatina, pravastatxna, pitavastatina, vinblastína, vincristina, vindesina, vinorelbina, etobosida, teniposida, nimustina, carmustina, lomustxna, ciclotosfamida, 4-hidroxíoxiciclofosfamida, estramustma, melfalan, ifosfamida, tropfosfamida, timosma a-1, clorambucíla, bendamustina, dacarbazina, busulfan, procarbazma, treosulfan, tremozolomida, tiotepa, daunorrubicina, 9/21 doxorrubicina, a c1a r rub x c ί n a, ®pírrubicina, mi toxant£OPf idarrubicina, bleomicina, mitoraicina, daetinomícína, metotrexato, fludarabina, (ácido 2-metiltiazolidin-2,4-dicarboxílico), tialin-Na (sal sódico de tialina), 5' -dihídrogenofosfato de fludarabina, cladribina, mercaptopurina, tioguanina, citarabina, fluorouracila, gemcitabina, capecitabina, docetaxel, carboplatina, cisplatina, oxaliplatina, amsacrina, irinotecan, topotecan, hidroxicarbamida, míItefosina, pentostatina, aldesleucina, tretinoína, asparaginase, pegasparase, anastrozol, exemestan, letrozoi, formestan, aminoglutetemida, adriamicína, azitromicina, espiramicina, cefarantina, dermicidina, 2w-inibidor de proliferação-SMC, epitilona A e B, mitoxantrona, azatíoprina, micofenolatrnofetil, c-mic-antisense, b-mic-antisense, ácido betulínico, camptotecina, PI-88 (oligossacarídeo sulfatado), hormónio estimulador de melanóeitos (α-MSH), proteína C activada, inibidor ILl-β, ácido fumáríco e seus ésteres, calcipotriol, tacalcitrol, lapacol, β-lapacoi, podofilotoxina, betulina, 2-etil-hidrazída de ácido podofílico, molgramostim (rhuGM-CSF), peginterferon a-2b, lanograstim (r-HuG-CSF), filgrastim, macrogol, dacarbazina, exemestan, letrozoi, goserelina, cefalomanina, basiliximab, trastuzumab, daclizumab, selectina (antagonista da citocina), inibidor CETP, caderina, inibidores da citocina, inibidor de COX-2, NFkB, angiopeptina, ciprofloxacina, camptotecina, fluroblastina, anticorpos monoclonais, que inibem a proliferação das células musculares, antagonistas bFGF, probucol, prostaglandina, 1,ll-dimetoxicantin-6-ona, l-hidròxi-ll-metoxicantin-6-ona, scopolectina, colchicina, doadores de NO tais como doadores de NO tais como tetranitrato de pentaeritritol e smdnoeimin-as, derivados de S-nitroso, tamoxifen, staurosporina, beta-estradiol, alfa-estradiol, estriol, 10/21 estrona, etinilestradiol, fosfestroi, medroxiprogesterona, cipionatos de estradiol, benzoatos de estradiol, tranilast, camebacaurina e outros terpenóides, que são empregados na terapia de câncer, verapamil, iníbidores da tirosina-cinase (tirfosrinas}, ciclosporina A, paclítaxei e seus derivados tais como β-α-hidróxi-paclítaxei, bacatina, taxotere e outros, oligômeros do subóxido de carbono (MCS) macrocíclicos preparados sinteticamente como também obtidos a partir de fontes nactivas e seus derivados, mofebutazona, acemetacina, diclofenaco, lonazolaco, dapson, ácido o-carbamoilfenoxiacético, lidocaína, cetoprofen, ácido mefenamínico, piroxicam, meloxicam, fosfato de cloroquina, penicilamina, hidroxicloroquin, auranofin, aurotiomalato de sódio, oxaceprol, celecoxib, beta-sitosterina, ademetionina, mirtecaína, poiidocanol, nonivamid, levomentol, benzocaína, aescina, eliptícina, D-24851 (Calbiochem), colcemida, eitocalasina A-E, indanocina, nocadazol, proteína S 100, bacitracina, antagonistas do receptor vitronectina, azelastina, inibidor do tecido estimulador de guanidilciclase da proteinase de metal 1 e 2, ácidos nucleicos livres, ácidos nucleicos incorporados em transmissores de vírus, fragmentos de DNA e RNA, inibidor do aetivador de plasminogéneo 1, inibidor do aetivador de plasminogéneo 2, oligonucleotídeos antisense, inibidores VEGF, IGF-1, substâncias activas do grupo dos antibióticos tais como cefadroxil, cefazolina, cefaclor, cefotixina, tobramicina, gentamicina, penicilinas tais como dicloxacilina, oxacilina, sulfonamidas, metronidazol, antitrombóticos tais como argatroban, aspirina, abeiximab, antitrombina sintética, bivalirudina-, coumadína, enoxoparina, heparina dessulfatada e N-reacetilada, aetivador do plasminogênio tecidual, receptor da membrana das plaquetas Gbflb/IJIa, inibidor do· fator Xa, anticorpos, heparina, hirudina, r-hirudina, PPACK, protamina, tialina-Na, 11/21 estreptocinase, prourocinase, estreptocinase, warfarina, urocibase' vasodilatadores tais como dipiramidol, trapi^i-1' nitroprussíde, antagonistas PDGF tais como triazolopirimid10,3 e seramina, inibidores ACE tais como captopril, cilazaprxx' lisinopril, enalapril, losartan, inibidorse de tioproteaseS/ prostaciclina, vapiprost, α, β e γ-interferona, antagonistaS de histamina, bloqueadores de serotonina, reguladores ae apoptose tais como oligonucleotídios p65, NF-kB ou Blc-xL-antisense, halofuginona, nifedipina, tocoferol, vitamina Bl/ B2, B6 e B12, ácido fólico, tranirast, molsidomina, tepolifenóis, epicatequin-galato, epigalocatequingalato, ácido boswelínico e seus derivados, leflunomid, anaquinra, etanercept, sulfasalazina, etoposid, dicloxacilina, tetraciclina, triamcinoioma, mutamicina, procalnimida, ácido retinólico, quinidina, dísopirimida, flecalnida, propafenona, sotoloi, amidoron, esteróides naturais e preparados sinteticamente tais como briofilina A, inotodiol, maquirosida A, galaquinosida, mansonina, estreblosida, hidrocortisona, betametasona, dexametasona, substâncias não esteroidais (NSAIDS) tais como fenoporfen, ibuprofen, indometacina, naproxen, fenilbutasona e outros agentes antivirais tais como aciciovir, ganciciovir e zidovudin, antimicóticos tais como clotrimazol, flucitosina, griseofulvin, cetoconazol, miconazol, nistatina, terbinafin, agentes antiprozoais tais como cloroquina, mefloquina, quinina, além disso, terpenóides naturais tais como hipocescuiina, barringtogenol-C21-angelat, 14-deshidroagrostitacina, agrosquerina, agrostistacina, 17-hidroxiagrostistacina, ovatodiolide, ácido 4,7-oxicicloanisomélico, bacarinóides Bl, B2, Β3 e B7, tubeimosid, bruceanol A,B e C, bruceantinoside C, iadanzioside N e P, isodesoxielefantopina, tornenfantopina A e B, coronarina A, B, C e D, ácido ursólico, ácido hiptatôico A, zeorina, iso-iridogemanal, maitenfoliol, efusantina A, 12/21 excisanina A e B, longicaurina B, sculponeatina C, camebaunina, leocamenina A e b, 13,18-desidro-6-alfa-senecioiloxichaparina, td-xamairina A θ B, jrecjsnilol, triptolid, além disso, cimarina, apocimarina, ácido aristolóq-uico, a π ορ uerincí, h i d r οχia n opt θγχπβ, a πθηιο nina, protoanemonxna, berberma, cloreto do cheliburma, cictoxxn, sinoeoculina, bombrestatina A e B, cudraisoflavona A, curcumina, dihidronitidina, cloreto· de nitídína, 12-beta-hidroxipregnadien 3,20-diona, bilobol, gincogol, ácido gincogólico, helenalina, indicina, N-óxido de indicina, lasiocarpina, inotodiol, glicosídio la, podofilotoxina, justicidina A e B, larreatína, maloterina, malotocromanol, isobutírílmalotocromanol, maquirosid A, marcantina A, maitansina, licorídicina, margetina, pancratistatina, liríodenina, bispsrtenolidma, oxouchinsunina, aristolactam-AII, bispartenolidina, periplocosida A, galaquinosida, ácido ursólico, desoxipsorospermina, psicorubina, ricina A, sanguinarina, ácido manvuvéisico, metilsorbifolina, hormônio estimulador de melanócitos (alfa-MSH), sfateliacromeno, stizofilina, mansonina, streblosida, acagenina, dihidrousambaraensína, hidroxiusambarina, estricnopentamina, estricnofilina, usambarina, usambarensina, berberina, liríodenina, oxouchinsunina, dafnoretina, lariciresinol, metoxilariciresinol, siringaresinol, umbeliferona, afromoson, acetilvismíon B, desacetilvismion A, vismion A e B.
33. 33. Processo de acordo com uma das reivindicações 21-32, caracterízado pelo facto de que a aplicação ou imobilização dos oligo- e/ou polis sacar ídeos como definida em uma das reivindicações 1-3, 7-11, 14-20 é efectuada mediante efeitos recíprocos hidrófobos, forças van der Waals, efeitos recíprocos eletrostáticos, pontes de hidrogénio, efeitos recíprocos iónicos, retículação transversa e/ou ligação 13/21 covalente .
34. 34. Produto medicinal obtenível por um processo como definido numa das reivindicações 21-33.
35. 35. Produto medicinal, sendo que a superfície do produto medicinal é revestida ddrectamente e/ou através de pelo menos uma camada bioestável e/ou biodegradável intermediária e/ou uma camada de substância activa com uma camada hemocompatível de pelo menos um oligo- e/ou poiíssacarídeo como definido nas reivindicações 1-3, 7-11, 14-20.
36. 36. Produto medicinal de acordo com a reivindicação 35, sendo que abaixo da camada hemocompatível ou entre duas camadas hemocompatíveis se encontra pelo menos uma camada bioestável e/ou biodegradável.
37. 37. Produto medicinal de acordo com a reivindicação 35 ou 36, sendo que a camada hemocompatível é revestida completamente e/ou de forma incompleta com pelo menos uma outra camada bioestável e/ou biodegradável sobrejacente.
38. 38. Produto medicinal de acordo com a reivindicação 36 ou 37, sendo que pelo menos uma camada de substância activa se encontra entre a camada bioestável e/ou biodegradável e a camada hemocompatível, a qual contém pelo menos uma substância activa antiproliferativa, anti-inflamatória e/ou antitrombótica ligada de maneira covalente e/ou adesiva.
39. 39. Produto medicinal de acordo com uma das reivindicações 35-38, sendo que pelo menos uma substância activa antiproliferativa, anti-inflamatória e/ou antitrombótica está ligada de maneira covalente e/ou adesiva na e/ou sobre a 14/21 camada hemocompatível e/ou sobre a camada bioestável e/ou biodegradável.
40. 40. Produto medicinal de acordo com uma das reivindicações 35-39, caracterizado pelo facto de que as substâncias activas empregadas são seleccionadas do grupo, o qual abrange sirolimus (rapamicina), everolimus, pímecrolimus, somatostatina, tacrolimus, roxitromicína, dunaimicina, ascomicxna, bafilomicina, eritromicina, midecamicna, josamicina, concanamicina, claritromicina, troleandomicina, folimicina, cerivastatina, simvastatina, iovastatina, fluvastatina, rosuvastatina, atorvastatina, pravastatina, pitavastatina, vinblastina, vincristina, vindesina, vlnorelbina, etobosida, teniposida, nimustina, carmustina, lomustina, ciclofosfamida, 4-hidroxioxiciclofosfamida, estramustina, melfalan, ifosfamida, tropfosfamida, clorambucil, bendamustin, dacarbazin, busulfan, procarbazin, treosulfan, timosin-a-1, tremozolomida, tiotepa, tialina (ácido 2-metiltiazolídin-2,4-dicarboxílico), tialin-Na (sal sódico de tialina), aunorrubicina, doxorrubicina, aclarrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, idarrubicina, bleomicina, mitomicina, dactinomicina, metotrexat, fludarabina, 5!-dihidrogenofosfato· de fludarabina,cladribina, mercaptopurina, tioguanina, citarabina, fluorouracila, gemcitabína, capecitabina, docetaxel, carboplatina, cisplatina, oxaliplatina, amsacrina, irinotecan, topotecan, hidroxicarbamida, miltefosina, pentostatina, aldesleucina, tretinoína, asparaginase, pegasparase, anastrozol, exemestan, letrozol, formestan, aminoglutetemida, adriamicina, azitromicina, espiramicina, cefarantina, 2w-inibidor de proliferação-SMC, epotilona A e B, mitoxantrona, azatioprin, rnícofenolatmofetil, c-mic-antisense, b-mic-antisense, ácido petulínico, camptotecín, PI-88 (oligossacarídio sulfatado), 15/21 hormónio estimulador de melanócitos(α-MSH), proteína C activada, inibidor ILl-β, ácido fumáriCo e seus ésteres, dermicidina, calcipotriol, tacalcitrol, lapacol, β-lapacol, podofilotoxina, betulina, 2-etil-hidrazida de ácido podofílico, molgramostím (rhuGM-CSF), Peginterferona a-2b, lanograstim (r-HuG-cSF), filgrastim, macrogol, dacarbazina, letrozoi, goserelina, cefalomanina, trastuzumab, exemestan, basiliximab, dâclrzumab, selectina (antagonj_sta da dtocinai, inibidor CETP, caderina, inibidores da citocina, inibidor de C0X'2' NFkB' angiopeptina, ciprofloxazina/ camptotecina, fluroblastina, anticorpos monoclonais, aue inibem a proliferação das células musculares, antagonistas bFGF, probucol, prostaglandina, 1,ll-dimetoxicantin-6-ona, 1-hidróxi-ll-metoxicantin-6-ona, scopolectina, colchícina, doadores de NO tais como tetranitrato de pentaeritritol e sindnoeiminas, derivados de S-nitroso, tamoxifen, staurosporina, beta-estradiol, alfa-estradiol, estriol, estigna, etinilesuradiol, fosfestrol, medroxiprogesterona, cipionatos de estradiol, benzoatos de estradiol, tranilast, camebacaurina e outros terpenóides, que são empregados na terapia de câncer, verapamil, inibidors da tirosina-cinase (tirfostínas), ciclosporina Ά, paclitaxel e seus derivados como 6-alfa-hidróxi-paclitaxe, bacatina, taxotere e outros, oligómeros do subóxido de carbono (MCS) macrociclicos produzidos sinteticamente como também obtidos a partir de fontes naturais e seus derivados, mofebutazona, acemetacina, diclofenaco, ionazolaco, dapson, ácido o-carbamoilfenoxiacético, lidocaína, cetoprofen, ácido mefenamínico, piroxicam, meloxicam, fosfato de cloroquina, penícilamina, hidroxicloroquin, auranofin, aurotiomalato de sódio, oxaceprol, celecoxib, beta-sitosterina, ademetionina, mirtecaína, polidocanol, nonívamid, 1 e.vomen-tol, benzocaína, aescina, elipticina, D-24851 (Caibiochem), colcemida, 16/21 citocalasina Ά-Ε, indanocina, nocadazol, proteína S 100, bacitracina, antagonistas do receptor vitronectina, azelastina, inibidor do tecido estimulador de guanidilciclase da proteinase de metal 1 e 2, ácidos nucleicos livres, ácidos nucleicos incorporados em· transmissores de vírus, fragmentos de DNA e RNA, inibidor do activador de plasminogéneo 1, inibidor do activador de plasminogéneo 2, oligonucleotídeos antisense, inibidores VEGF, IGF-1, substâncias activas do grupo dos antibióticos tais como cefadroxil, cefazolina, cefaclor, cefotixina, tobramicina, gentamicina, penicilinas tais como dicloxacilina, oxacilina, suifonamídas, metronidazol, antitrombóticos tais como argatroban, aspirina, abciximab, antitrombina sintética, bivalirudina, coumadina, enoxoparina, heparina dessulfatada e N-reacetilada, activador do plasminogéneo tecidual, receptor da membrana das plaquetas GblIb/IIIa, inibidor do fator Xa, anticorpos, heparina, hirudina, r-hirudina, PPACK, protamina, prourocinase, estreptocinase, warfarina, urocinase, vasodilatadores tais como dipiramidol, trapidil, nitroprusside, antagonistas PDGF tais como triazoiopirímidina e seramina, inibidores ACE tais como captopril, cilazapril, lisinopril, enalapril, losartan, inibidores de tioprotease, prostaciclina, vapiprost, α,β e y-interferona, antagonistas de hístamína, bloqueadores de serotonina, inibidores da apoptose, reguladores de apoptose, tal como oligonucleotidios p65, NF-kB ou Bcl-xL-antisense, halofuginona, nifedipina, tocoferol, tranirast, molsidomina, teepolifenóis, epicatequinagalato, epigalocatequinagalato, ácidos bosvelínicos e seus derivados, leflunomid, anacinra, etanercept, sulfasalazína, etoposid, dicloxacilina, tetraciclina, triamcinolona, mutamicina, procainimida, ácido retinólico, quinidina, disopirimida, flecainida, propafenona, sotolol, anuaorcn, esteróides naturais e preparados sinteticamente tais como briofilina A, inotodiol, maquirosida 17/21 A' galaquinosida, mansonina, . , , . , ' esrrebiosida, hiarocortisona, betainetasona, dexametasona, · ~ , . . . substancias nao esteroiaais (NSAIDS) tais como fenoDoroQ„ .. ~ . *· Aen, ibuprofen, índometacma, naproxen, fenilbutasona e outrno . . . . ^os agentes anuvirais tais como aciclovir, ganciclovir e zido^-w-: ~ , . . ,. . -o-./uaxn, antimicoticos tais como ciotrimazol, flucitosina, griseofulvin, cetoconazol, miconazol, nistatina, terbinafm, agentes antiprozoais tais como cioroquina, mefloquina, quinina< aléJn disg0/ t0rpen6ides naturais tais como hipocesculina, barringtogenoI-C21-angelat, 14-desidroagrostitacina, agrosquerina, agrostistacina, 17-hidroxiagrostistacína, ovatodiolida, ácido 4,7- oxicicloanisomélico, bacarinóides Bl, B2r B3 e B7, tubeimosid, bruceanóides ArB e C, bruceantinosida C, iadanziosida N e F, isodesoxielefantopina, tomenfantopina A e B, coronanna A, B, C e D, ácido ursólico, ácido hiptatóico A, zeorina, iso-iridogemanal, maitenfoliol, efusantina A, excisanina A e B, longicaurina S, sculponeatina C, camebaunina, leucamenina A e b, 13,18-desidro-6-alfa-senecioíloxichaparina, taxamairina A e B, regenilol, triptolid, além· disso·, cimarina, apocimarina, ácido aristolóquico, anopterina, hidroxianopterina, anemonina, Protoanemonina, berberina, cloreto de chelíburina, cictoxin, sinococulina, bombrestatina A e B, cudraisoflavona A, curcumina, dihidronitidina, cloreto de nitidina, 12-beta-hidroxipregnadien 3,20-diona, bilobol, gincogol, ácido gincogólico, helenalina, indicina, N-óxido de indicina, lasiocarpina, inotodiol, glicosídio la, podofilotoxina, justicidina A e B, larreatina, maloterína, malotocromanol, isobutirilraalot ocromanol, maquirosid A, marcantina A, maitansina, licoridicina, margetina, pancratistatina, líriodenina, bíspsrtenolidina, oxouchínsunina, aristolactam-All, bispartenolidina, periplocosida A, galaquinosida, ácido ursólico, desoxipsorospermina, psicorrubina, ricina A, 18/21 ma nvuve í s i c ο, sanguinarina, ácido manvuveísico, metilsorbifolina, sfateliacromeno, stizofilina, mansonina, estreblosida, acagerina, dihidrousambaraensina, hidroxiusambarina, estricnopentamina, estricnofilina, usambarina, usambarensina, berberina, liriodenina, oxouchinsunina, dafnoretina, laricirresinol, metoxilaricirresinol, siringarresinol, umbeliferona, afromoson, acetiivismion B, desacetilvismion A, vismion A e B.
41. 41. Produto medicinal de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo facto de que no caso das substâncias activas empregadas se trata de tacrolimus, pimecrolimus, PI 88, timosina α-1, PETN, bacatinas e seus derivados, docetaxel, colchicina, paclitaxel e seus derivados, trapidil, α e β-estradiol, dermicidina, tialin-sódio, simvastatina, subóxido de carbono macrociclico (MCS) e seus derivados, sirolimus, tirfostina, D24851, colchicina, ácido fumárico e seus ésters, proteína C activada, interleucína, inibidores 1β e hormónio estimulador de melanócitos (a-MSH), bem como misturas dessas substâncias activas.
42. 42. Produto medicinal de acordo com uma das reivindicações 34-41, caracterizado peio facto de que no caso· do produto medicinal se trata de próteses, órgãos, vasos, aortas, válvulas cardíacas, tubos, peças de reposição orgânicas, implantes, fibras, fibras ocas, stents, cânulas, seringas, membranas, conservas, recipientes para sangue, placas de titulação, pace-makers, meios adsorventes, meios de crornatografiav colunas de cromatografia, diaiisadores, peças de ligação, sensores, válvulas, câmaras de centrifugação, rocadores de calor, endoscópios, filtros, câmaras de bombeamento. 19/21
43. 43. Produtos medicinais de acordo com a reivindicação 42, caracterizados pelo facto de que no caso do produto medicinal se trata de um stent.
44. 44. Stents de acordo corri a reivindicação 43, em que as quantidades de polímero aplicados se encontra entre 0,01 mg até 3 mg/camada, de preferência, 0,20 mg até 1 mg e especialmente de preferência, enrre 0,2 mg até 0,5 mg / camada.
45. 45. Stent de acordo com a reivindicação 4 3 ou 44, caraeterizado pelo facto de que a substância activa antiproliferativa, anti-inflamatória e/ou antitrombótica está contida em uma concentração farmaceuticamente activa de 0,001 - 10 mg por cm2 de superfície do stent e por camada.
46. 46. Aplicação do stent como definido numa das reivindicações 43-45 para impedir ou reduzir a restenose.
47. 47. Aplicação do stent como definido numa das reivindicações 43 - 46 para a liberação contínua de pelo menos uma substância activa antiproliferativa, anti-inflamatória e/ou antitrombótica.
48. 48. Aplicação dos produtos medicinais como definidos em uma das reivindicações 34-41 para o contacto directo com o sangue.
49. 49. Aplicação dos produtos medicinais como definidos numa das reivindicações 34-41 para impedir ou reduzir a aderência de proteínas nas superfícies revestidas dos produtos medicinais.
50. 50. Aplicação de acordo com a reivindicação 48 ou 4 9, 20/21 caracterízada peio facto de que a superfície revestida hemocompatível de placas de microtitulação ou outros meios de veículos para processos de detecção diagnósticos impede ou reduz a deposição não específica de proteínas.
51. 51. Aplicação de acordo com a reivindicação 48 ou 49, caracterízada pelo facto de que a superfície revestida hemocompatível de meios de adsorção ou meios de cromatografia impede ou reduz a deposição não específica de proteínas. Lisboa, 26 de Janeiro de 2007 21/21