CN105263536B - 活性剂在衬底上的固定 - Google Patents

Abstract

本发明提供了将活性剂固定至衬底表面的方法，其包括以下步骤：使引物化合物沉积于衬底上，从而形成引发衬底；使所述引发衬底与包括三羟基苯基的化合物的溶液接触，从而形成三羟基苯基处理的引发衬底；以及使所述三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂的溶液接触，从而将所述活性剂固定于所述衬底上。进一步提供了将活性剂固定于衬底上的方法，其包括以下步骤：提供衬底；使包括三羟基苯基的化合物的溶液与活性剂的溶液组合，从而形成活性剂‑三羟基苯基偶联物的溶液；以及使引发衬底与活性剂‑三羟基苯基偶联物的溶液接触，从而将所述活性剂固定于所述衬底上。本发明进一步提供了在其表面上固定有活性剂的衬底和医用装置或装置组件。

Description

活性剂在衬底上的固定

联合研究协议方的名称

所要求的发明内容是在百特医疗用品有限公司(Baxter HealthcareCorporation)与西北大学(Northwestern University)之间的联合研究协议的范围内开展的活动的结果。

技术领域

本发明一般涉及活性剂在衬底上的固定。更特别地，本发明涉及将活性剂固定于衬底上的方法，固定有活性剂的衬底，以及包含固定有活性剂的衬底的医用装置。

背景技术

用于涉及生理流体(诸如血液或组织)与医用装置或装置组件之间的接触的血液透析或其它应用的医用装置和医用装置组件已知被来自接触的蛋白质、细胞和/或细菌沉积物污染。来自血液的蛋白质沉积至医用装置或医用装置组件上对于通常用作医用装置和医用装置组件的衬底的许多材料，尤其聚砜、聚碳酸酯以及硅酮是成问题的。在许多情况下，污染可以削弱功能或导致医用装置故障。这个问题对于用于血液透析机组中的体外血液回路和其组件(诸如管道)是特别显著的。

具有活性剂，例如防污/抗微生物剂的涂层衬底在本领域中是已知的。举例来说，3,4-二羟基苯丙氨酸(DOPA)已经用于合成可以用作粘合性聚合物的含二羟基苯基聚合物，这些粘合性聚合物还提供防污/抗微生物涂层，如美国专利号7,618,937和美国专利申请公布号2010/0028719、2009/0123652、2008/0247984、2008/0169059以及2006/0009550中所描述。通常，来源于DOPA的聚合物包含由与DOPA共聚的肽(赖氨酸)组成的锚定部分，如以下结构(I)中所示，其大批量生产可能费成本。据信，偶合至锚定部分的肽或肽部分一般抵抗或抑制涂布或附着有组合物的表面的蛋白质吸附或细胞污染。

或者，美国专利号7,622,533和美国专利申请公布号2010/0197868描述了一种粘合性聚合物，其包括附着至其的侧接DOPA基团或二羟基苯基(DHDP)衍生物以形成能够结合至相异衬底的粘合性聚合物，如以下结构(II)中所示。

然而，使用这两种方法，DOPA从聚合物中浸出有显著的毒性问题。

发明内容

本发明提供了将活性剂固定于衬底表面上的方法，其包括以下步骤：使引物化合物沉积于衬底上，从而形成引发衬底；使引发衬底与包括三羟基苯基的化合物的溶液接触，从而使三羟基苯基偶合至衬底以提供三羟基苯基处理的引发衬底；以及使三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂的溶液接触，从而将活性剂固定于其表面上。包括三羟基苯基的化合物可以是包括三羟基苯基的小分子或聚合物。聚合物可以是在聚合物的主链中包括三羟基苯基的聚合物，或者，包括至少一个具有侧接三羟基苯基的单体的聚合物。

在一个相关方面，本发明进一步提供了将活性剂固定于衬底上的方法，其包括以下步骤：使引物化合物沉积于衬底上，从而形成引发衬底；使包括三羟基苯基的化合物与活性剂在溶液中组合，从而形成活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液；以及使引发衬底与活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液接触，从而使活性剂-三羟基苯基偶联物的三羟基苯基偶合至引发衬底；以及将活性剂固定于其表面上。包括三羟基苯基的化合物可以是包括三羟基苯基的小分子或聚合物。聚合物可以是在聚合物的主链中包括三羟基苯基的聚合物，或者，包括至少一个具有侧接三羟基苯基的单体的聚合物。

本发明进一步提供了将活性剂固定于衬底表面上的方法，其包括以下步骤：使引物化合物沉积于衬底上，从而形成引发衬底；使引发衬底与没食子酸的溶液接触，从而使没食子酸偶合至衬底以提供没食子酸处理的引发衬底；以及使没食子酸处理的引发衬底与活性剂的溶液接触，从而将活性剂固定于衬底表面上。

在另一个相关方面，本发明提供了在其表面上固定有活性剂的衬底，这个衬底在衬底表面上包括引物化合物的层，其中引物化合物的层包括与其偶合的三羟基苯基，并且其中三羟基苯基包括与其偶合并且从而固定于衬底表面上的活性剂。活性剂可以经由连接子化合物偶合至三羟基苯基和/或引物化合物，以将活性剂固定于衬底上。包括三羟基苯基的化合物可以是包括三羟基苯基的小分子或聚合物。聚合物可以是在聚合物的主链中包括三羟基苯基的聚合物，或者，包括至少一个具有侧接三羟基苯基的单体的聚合物。

在另一个相关方面，本发明提供了包括根据本发明的衬底的医用装置。

本发明的其它方面从以下具体实施方式的评述结合随附权利要求书将为本领域的技术人员显而易见。虽然本发明容许有各种形式的实施方案，但下文描述了本发明的特定实施方案，条件是本公开是说明性的，并且不意图将本发明限于本文所描述的特定实施方案。

附图说明

图1示出了用以下改性的聚砜表面的x射线光电子全谱图：(i)未改性的聚砜表面，(ii)壳寡糖和没食子酸，以及(iii)壳寡糖、没食子酸以及不同浓度的肝素。

图2示出了不同衬底相对于对照的凝血酶转化率(ng/ml)对时间(分钟)的图。

具体实施方式

本发明提供了在其表面上有利地并且牢固地固定有活性剂的衬底和形成其的方法。固定有活性剂的衬底特别有利的是其可以相对便宜地生产，特别相对于涂布有来源于肽-DOPA共聚物的粘合性聚合物的现有技术衬底。固定有活性剂的衬底特别有利的也可以是其展示低毒性，特别相对于使用基于DOPA的粘合性聚合物涂布的现有技术衬底。

本发明提供了将活性剂固定于衬底表面上的方法，其包括以下步骤：使引物化合物(一般包括亲核基团)沉积于衬底上，从而形成引发衬底；使引发衬底与包括三羟基苯基的化合物的溶液接触以使包括三羟基苯基的化合物偶合至引物化合物，从而使三羟基苯基偶合至衬底以提供三羟基苯基处理的引发衬底；以及使三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂的溶液接触以使活性剂偶合至三羟基苯基，从而将活性剂固定于其表面上。这些方法可以进一步包括以下步骤：在使三羟基苯基处理的衬底与活性剂接触之前，使三羟基苯基处理的引发衬底与连接子化合物的溶液接触，从而使连接子化合物偶合至三羟基苯基处理的引发衬底的三羟基苯基和/或引物化合物。

如本文所用的“固定”涵盖使活性剂紧固、附着、粘贴、连接和/或接合至衬底表面中的任一者。活性剂固定至衬底表面可以使用许多不同技术来确认。举例来说，如实施例中所展示，活性剂的固定可以通过使用本领域中已知的试验展示活性剂的活性存在来确认。活性剂的活性可以用功能试验来评估。举例来说，血栓形成试验可以用于检测抗血栓形成剂，诸如肝素、4-羟基香豆素等等。此外，举例来说，活性剂可以用荧光染料、同位素标记或放射性标记作标记，当活性剂固定至衬底时，这种染料或标记可以在衬底上检测到。活性剂的存在还可以用表面光谱来确定，诸如x射线光电子光谱(XPS)、傅立叶变换红外反射-吸收光谱(Fourier transform infrared reflection-absorption spectroscopy，FTIRRAS)以及拉曼光谱(Raman spectroscopy)。此外，阳离子染剂可以用于确认/检测阴离子活性剂的存在，例如，阿尔新蓝(Alcian blue)和甲苯胺蓝(Toluidine blue)与诸如肝素的阴离子活性剂形成复合物。

如本文所用的“偶合”涵盖例如共价键形成、氢键形成、离子键形成(例如，静电吸引)以及范德华相互作用(van der Waals interaction)中的任一者，包括三羟基苯基的化合物经由这些作用可以吸附至/粘合至/偶合至/缔合引物层或连接子化合物，并且活性剂经由这些作用可以吸附至/粘合/偶合至/缔合包括三羟基苯基的化合物或连接子化合物。

如本文所用的“包括三羟基苯基的化合物”涵盖包括三羟基苯基的小分子化合物、聚合物，以及三羟基苯基-连接子偶联物。包括三羟基苯基的聚合物包括三羟基苯基在聚合物主链中的聚合物，和包括至少一个具有侧接三羟基苯基的单体的聚合物。

如本文所用的“三羟基苯基”指的是包含经至少三个羟基取代的苯基环的化合物。因此，三羟基苯基包括包含经三个羟基并且甚至经四个羟基取代的苯基环的化合物。一般来说，包含经至少三个羟基取代的苯基环的化合物是优选的。包含经三个羟基取代的苯基环的化合物是有利的，这是因为除了三个羟基之外，这类化合物具有可用的三个潜在反应性位点，这些位点可以选自(但不限于)未经取代的碳和反应基团。举例来说，两个未经取代的碳和/或反应基团可以使包括三羟基苯基的化合物偶合至引物化合物和活性剂、引物化合物和连接子化合物，或经由额外三羟基苯基上的反应性位点偶合至两种额外的包括三羟基苯基的化合物(即，使得聚合物形成)。具有第三反应性位点的化合物，除了可以用两个反应性位点完成的偶合之外，还可以有利地偶合至连接子化合物、活性剂或另一种包括三羟基苯基的化合物，并且可以特别有利于包括三羟基苯基的聚合物的交联。此外，在不打算受任何特定理论约束的情况下，据信，包含经三个羟基取代的苯基环的化合物优于具有一个或两个羟基的化合物，这是因为通常包含三个羟基的化合物上的未经取代的碳相对更具反应性。举例来说，随着苯基环上羟基的数目增加，氧化速率一般增加并且因此含有三羟基苯基的化合物与具有经仅一个或两个羟基取代的苯基的对应化合物相比通常相对更容易形成类醌物质。因此，包含经至少三个羟基取代的苯基环的化合物通常具有比具有经仅一个或两个羟基取代的苯基的对应化合物上的未经取代的碳相对更具反应性的未经取代的碳。

如本文所用的在包括三羟基苯基的化合物上的“反应性位点”或“反应位点”并不是指羟基部分本身，而是指包括三羟基苯基的化合物上的任何其它位点，活性剂、引物化合物、连接子化合物或额外的包括三羟基苯基的化合物经由这个位点可以偶合至包括三羟基苯基的化合物。举例来说，反应性位点可以包括未经取代的碳和反应基团，这些反应基团可以包括(但不限于)羧基、羧酸酯、酰胺、酰基卤、醛、酮以及酯。当然，包括三羟基苯基的化合物的羟基部分还可以例如通过与具有酸侧链的引物化合物形成酯键来展示反应性，这些引物化合物诸如聚(甲基丙烯酸)、聚(丙烯酸)、聚(谷氨酸)以及聚(苹果酸)。

如本文所用的“聚合物”涵盖具有两个或更多个重复单元的任何化合物，例如，二聚物、三聚物以及更高级寡聚物。重复单元可以是相同的以提供均聚物，或不同的以提供共聚物。

如本文所用的“活性剂”涵盖活性剂(包括本文特定提及的那些)和活性剂-连接子偶联物。

如本文所用的“连接子化合物”涵盖具有至少两个端基以使得连接子化合物可以偶合至并且从而连接两个独立的分子的任何化合物。举例来说，连接子化合物可以经由第一端基偶合至三羟基苯基的反应基团和/或未经取代的碳并且经由第二端基偶合至可聚合部分，以形成可聚合单体。或者，连接子化合物可以经由第一端基偶合至三羟基苯基的反应基团和/或未经取代的碳并且经由第二端基偶合至活性剂以形成三羟基苯基-连接子-活性剂偶联物。

在一个相关方面，本发明进一步提供了将活性剂固定于衬底上的方法，其包括以下步骤：使引物化合物沉积于衬底上，从而形成引发衬底；使包括三羟基苯基的化合物与活性剂在溶液中组合以使包括三羟基苯基的化合物与活性剂偶合，从而形成活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液；以及使引发衬底与活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液接触，从而将活性剂固定于衬底上。包括三羟基苯基的化合物可以是包括三羟基苯基的小分子或聚合物。聚合物可以是在聚合物的主链中包括三羟基苯基的聚合物，或者，包括至少一个具有侧接三羟基苯基的单体的聚合物。活性剂-三羟基苯基偶联物可以包括偶合至连接子化合物的活性剂，这些连接子化合物进一步偶合至三羟基苯基偶联物。组合和接触步骤可以同时进行以使得包括三羟基苯基的化合物与活性剂在引发衬底存在下组合，或者，组合和接触步骤可以独立地并依序进行。

如本文所用的“偶联物”指的是由包括三羟基苯基的化合物、连接子化合物和/或活性剂中的两者或更多者偶合在一起所得的物质。紧接在术语“偶联物”之前提供已经偶联的物质。如上文所定义，偶联物可以通过使将要形成偶联物的两种物质偶合而形成。

在一个相关方面，本发明进一步提供了将活性剂固定于衬底表面上的方法，其包括以下步骤：使引物化合物沉积于衬底上，从而形成引发衬底；使引发衬底与没食子酸的溶液接触以使没食子酸的三羟基苯基偶合至引物化合物，从而形成没食子酸处理的引发衬底；以及使没食子酸处理的引发衬底与活性剂的溶液接触以使活性剂偶合至没食子酸的三羟基苯基，从而将活性剂固定于衬底表面上。这种方法可以进一步包括以下步骤：在使三羟基苯基处理的衬底与活性剂的溶液接触之前，使没食子酸处理的引发衬底与连接子化合物的溶液接触，从而使连接子化合物偶合至没食子酸处理的引发衬底的三羟基苯基和/或引物化合物。

在另一个相关方面，本发明提供了在其表面上固定有活性剂的衬底，这个衬底在衬底表面上包括引物化合物的层，其中引物化合物的层包括与其偶合的三羟基苯基，并且其中三羟基苯基具有与其偶合并且从而固定于衬底表面上的活性剂。包括三羟基苯基的化合物可以是包括三羟基苯基的小分子或聚合物。聚合物可以是在聚合物的主链中包括三羟基苯基的聚合物，或者，包括至少一个具有侧接三羟基苯基的单体的聚合物。活性剂可以经由连接子化合物偶合至三羟基苯基和/或引物化合物，以将活性剂固定于衬底上。

在另一个相关方面，本发明提供了包括根据本发明的衬底的医用装置。包含根据本发明的衬底的医用装置和医用装置组件可以包括有利地促使装置或装置组件抗细菌、防污和/或抗血栓形成的活性剂。当然，活性剂可以展示其它治疗或有益活性。

包含固定至其的活性剂的医用装置和医用装置组件可以是特别有利的，这是因为医用装置或装置组件可以通过将活性剂固定于/至其(衬底)表面上来有效地“涂布”并且从而减少用(相同或相似的)活性剂治疗患者的需要。举例来说，向治疗需要体外血液回路，诸如用于血液透析、清血法或冠状动脉旁路术的患者在程序之前通常施用肝素(或类似作用的活性剂)以防止血液回路泵和管道中形成血凝块。然而，除了抑制凝块形成之外，施用大量的肝素可以促使患者在治疗后容易出血。因此，将有利地使用固定有肝素的血液回路装置，从而减少在程序之前的治疗所需的肝素量以及患者在程序之后经历出血问题和/或需要过长的住院或医疗护理的伴随性风险。

一般来说，根据本发明的方法经由使用可以与偶合至和/或沉积于衬底表面上的引物层偶合的包括三羟基苯基的化合物得到固定于衬底表面上的活性剂。本文所描述的方法可以包括使用引物化合物的溶液和等离子体、包括三羟基苯基的化合物的溶液(例如，三羟基苯基-连接子偶联物的溶液、包括三羟基苯基的小分子化合物(诸如没食子酸)的溶液、以及包括三羟基苯基的聚合物(诸如聚没食子酸)的溶液)、连接子化合物的溶液、活性剂的溶液(包括活性剂-连接子偶联物的溶液)、以及活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液。用于制备引物化合物的溶液、包括三羟基苯基的化合物的溶液、连接子化合物的溶液、活性剂的溶液、以及活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液的溶剂可以是适合于充当引物化合物、包含三羟基苯基的化合物、连接子化合物、活性剂和/或活性剂-三羟基苯基偶联物的载剂的任何溶剂。举例来说，本文所描述的溶液可以包含水溶液，其它溶剂，包括(但不限于)醇、二醇、有机硫(诸如环丁砜)、醚(诸如乙醚和四氢呋喃)、烷烃、芳香族化物、卤烃(诸如氯仿和二氯甲烷)，以及前述物质的组合。当术语“溶液”在本文中使用时，其中所含的组分完全溶解并不是必需的。因此，如本文所用的术语溶液涵盖组分分散于其中的分散体与组分实质上或甚至完全溶解于其中的溶液。一般来说，组分完全溶解是优选的。此外，如本文所用的术语“溶液”包括雾化溶液。

在本发明的一个方面，将活性剂固定于衬底表面上的方法包括以下步骤：

使衬底与引物化合物接触，从而形成引发衬底；

使引发衬底与包含三羟基苯基的化合物接触，从而使三羟基苯基偶合至引发衬底以提供三羟基苯基处理的引发衬底；以及

使三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂接触以使活性剂偶合至三羟基苯基，从而将活性剂固定于衬底上。

在本发明的另一个方面，将活性剂固定于衬底表面上的方法包括以下步骤：

使衬底与引物化合物接触，从而形成引发衬底；

使引发衬底与没食子酸接触以使没食子酸的三羟基苯基偶合至引物化合物，从而形成没食子酸处理的引发衬底；以及

使没食子酸处理的衬底与活性剂接触以使活性剂偶合至三羟基苯基，从而将活性剂固定于衬底上。

在一个相关方面，将活性剂固定于衬底表面上的方法包括以下步骤：

使引物化合物沉积于衬底上，从而形成引发衬底；

使包括三羟基苯基的化合物与活性剂在溶液中组合以使三羟基苯基与活性剂偶合，从而形成活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液；以及

使引发衬底与活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液接触，从而使活性剂-三羟基苯基偶联物的三羟基苯基偶合至引发衬底并且将活性剂固定于衬底上。

在前述实施方案的改进中，这些方法进一步包括用水洗涤引发衬底，从而形成经过洗涤的引发衬底；以及任选地，在使经过洗涤的引发衬底与包括三羟基苯基的化合物的溶液和/或没食子酸溶液接触之前，使诸如氮气的惰性气体流过经过洗涤的引发衬底。

在前述实施方案的另一个改进中，这些方法进一步包括用水洗涤三羟基苯基和/或没食子酸处理的引发衬底，从而形成经过洗涤的三羟基苯基和/或没食子酸处理的引发衬底；以及任选地，在使经过洗涤的三羟基苯基和/或没食子酸处理的引发衬底与活性剂的溶液接触之前，使诸如氮气的惰性气体流过经过洗涤的三羟基苯基和/或没食子酸处理的引发衬底。

在前述实施方案的另一个改进中，这些方法进一步包括用水洗涤在其表面上固定有活性剂的衬底，从而形成经过洗涤的在其表面上固定有活性剂的衬底；以及任选地，使诸如氮气的惰性气体流过经过洗涤的在其表面上固定有活性剂的衬底。

在前述实施方案的另一个改进中，这些方法进一步包括以下步骤：在使三羟基苯基处理的衬底与活性剂的溶液接触之前，使三羟基苯基处理的引发衬底与连接子化合物的溶液接触，从而使连接子化合物偶合至三羟基苯基处理的引发衬底的三羟基苯基和/或引物化合物。

可以选择方法以使得偶合至衬底的活性剂-三羟基苯基偶联物的密度可以受控制。在不打算受任何特定理论限制的情况下，据信，当在使活性剂偶合至三羟基苯基之前使三羟基苯基偶合至引发衬底时，所得三羟基苯基处理的衬底具有偶合至衬底的三羟基苯基的相对密集覆盖。进一步相信，当在使三羟基苯基偶合至引发衬底之前形成活性剂-三羟基苯基偶联物时，所得固定有活性剂的衬底与在使活性剂偶合至三羟基苯基之前制备的三羟基苯基处理的衬底相比具有偶合至表面的活性剂-三羟基苯基偶联物的相对较低密度。当在使三羟基苯基偶合至衬底之前形成活性剂-三羟基苯基偶联物时，可以由本领域的一般技术人员容易地控制条件以使得三羟基苯基的未经取代的碳与引发衬底的偶合优先于存在于活性剂上的任何潜在结合位点或三羟基苯基上的反应基团与引发衬底的偶合。

衬底

一般来说，固定有(或将固定)活性剂的衬底可以是任何衬底。衬底的表面在性质上可以是疏水的或亲水的。适合的衬底可以包括(但不限于)无机氧化物(例如，二氧化硅、惯称为玻璃的材料)、陶瓷、包括金属氧化物的金属、半导体和/或聚合衬底。金属衬底可以包括(但不限于)不锈钢、钴、钛、镍、锆、钽、铬、钨、钼、锰、铁、钒、铌、铪、铝、锡、钯、钌、铱、铑、金、银、铂、前述物质的氧化物、前述物质的合金，以及前述物质的组合。适合的聚合物衬底可以包括(但不限于)丙烯腈丁二烯苯乙烯、聚丙烯腈、聚酰胺、聚碳酸酯、聚酯、聚醚醚酮、聚醚酰亚胺、聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、聚乳酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氨酯、聚氯乙烯、聚偏二氯乙烯、聚醚、聚砜、硅酮、聚二甲基硅氧烷、聚四氟乙烯、聚异戊二烯，以及其掺合物和共聚物。在一个方面，衬底具有从开始就包括适合的反应部分的表面。本发明的衬底还包括具有已经被活化(或改性)以有助于形成均匀引物层的表面的那些。反应部分的适用之处在于其可以用于使引物化合物共价键结至衬底表面。然而，这类反应部分并不必须存在，因为引物化合物在衬底表面上不存在反应部分的情况下将仍然吸附至/粘合至/偶合至/缔合衬底。

根据本发明的衬底可以用于提供医用装置或医用装置组件的一个或多个表面。医用装置或医用装置组件可以是可以得益于在其表面上固定有活性剂的任何医用装置或医用装置组件，特别是与患者的生物流体常规接触的医用装置。医用装置或医用装置组件可以包括(但不限于)仪器、设备、器械、机器、器具、植入物以及其组件和附件，其意图用于人类或其它动物的疾病或其它病状的诊断、治愈、缓解、治疗或预防，或意图影响人类或其它动物的身体的结构或任何功能。例示性医用装置可以包括(但不限于)体外血液回路装置，诸如血液透析和冠状动脉旁路泵以及其组件。自体输血、清血法、血液过滤、血浆除去法以及体外膜氧合也涉及使用体外血液回路用于从患者的循环中移出血液以及在使血液返回至患者的循环之前对其施加工艺。

包括得益于在其表面上固定有活性剂的衬底的特定医用装置和/或医用装置组件包括(但不限于)管道；流体袋；隔片；活塞；夹钳；过滤器；导管，诸如静脉导管、导尿管、弗利导管(Foley catheter)、尿道内导管、动脉内导管、骨内导管、鞘内导管、肺内导管以及疼痛管理导管；气管套管；鼻胃管；透析机组；透析连接器；支架；腹塞；饲管；留置装置；手术工具；针；套管；医用泵；泵壳体；垫圈，诸如硅酮O形环；注射器；手术缝合线；过滤装置；药物重构装置；植入物；金属螺钉；以及金属板。额外的例示性医用装置包括(但不限于)侵入性医用装置、持久性医用装置、医用流体容器、医用流体流动系统、输注泵、患者监视器，以及与患者的生物流体常规接触的任何其它医用装置。

持久性医用装置的实例包括静脉内(I.V.)泵、患者监视器，等等。医用流体流动系统的实例包括I.V.机组、腹膜内机组以及其组件，诸如鲁尔(Luer)接口装置。典型的I.V.机组使用塑料管道将静脉切开的受试者连接至一个或多个医用流体来源，诸如静脉内溶液或药剂容器。I.V.机组任选地包括一个或多个接口装置，其提供流体流径的接口以允许将流体添加至IV管道中或从IV管道抽出。众所周知，接口装置有利地消除了对受试者重复进行静脉切开的需要并且允许立即施用药物或其它流体至受试者。接口装置可以被设计成与采用标准鲁尔接口的连接设备一起使用，氢气这类装置通常被称作“鲁尔接口装置”、“鲁尔活化装置”或“LAD”。LAD可以用一个或多个特征，诸如杀菌指示装置加以改良。各种LAD在美国专利号5,242,432、5,360,413、5,730,418、5,782,816、6,039,302、6,669,681和6,682,509以及美国专利申请公布号2003/0141477、2003/0208165、2008/0021381和2008/0021392中说明，这些专利的公开内容特此以全文引用的方式并入。

I.V.机组或腹膜内机组可以合并有额外任选的组件，包括例如隔片、塞子、活塞、连接器、连接器保护帽、连接器罩、适配器、夹钳、增设机组、过滤器，等等。因此，可以得益于本发明的额外适合的医用装置和医用装置组件包括(但不限于)：I.V.管道、I.V.流体袋、I.V.机组接口装置、隔片、活塞、I.V.机组连接器、I.V.机组连接器帽、I.V.机组连接器罩、I.V.机组适配器、夹钳、I.V.过滤器、I.V.泵、I.V.杆、导管、针、套管、听诊器、患者监视器、腹膜内管道、腹膜内流体袋、用于腹膜内机组的接口装置、腹膜内机组连接器、腹膜内机组适配器以及腹膜内过滤器。代表性接口装置包括(但不限于)：鲁尔接口装置，包括(但不限于)无针鲁尔接口装置。医用装置的表面可以是如本文所描述的任何衬底。

引物化合物

一般来说，引物化合物可以是当沉积于衬底上时在衬底表面上形成一层并且允许三羟基苯基偶合至引物的任何化合物。如本文所用的术语“引物化合物”包括小分子与聚合物。三羟基苯基经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合引物化合物。通常，包括三羟基苯基的化合物通过与引物形成一个或多个共价键而偶合至引物。一般来说，据信，引物化合物与包括三羟基苯基的化合物形成“网状物”。如本文所用的术语“网状物”指的是在三羟基苯基的苯基环的未经取代的碳与任何两种或更多种化合物之间形成的共价键，这些化合物选自引物化合物、包括三羟基苯基的化合物的第二个三羟基苯基(其可以是包括三羟基苯基的小分子和/或包括三羟基苯基的聚合物的三羟基苯基)和/或前述的组合。在共价结合相对高密度的引物化合物和/或包括三羟基苯基的化合物的实施方案中，可以形成交联网状物。在共价结合相对低密度的引物化合物和/或包括三羟基苯基的化合物的实施方案中，所得网状物可能不是交联的。

适合的引物化合物包括亲核基团。适合的亲核基团在本领域中是众所周知的并且可以包括(但不限于)羟基、烷氧化物、胺、亚硝酸盐、硫醇、硫醇盐、咪唑以及其组合。适合的引物化合物包括(但不限于)寡糖，诸如壳寡糖、果寡糖、半乳寡糖、甘露寡糖；聚胺，诸如乙二胺、1,2-二氨基丙烷、六亚甲基二胺、四亚甲基二胺、五亚甲基二胺、四乙基亚甲基二胺、精胺、亚精胺以及聚乙烯胺；聚(甲基丙烯酸)；聚(丙烯酸)；聚(谷氨酸)；聚(苹果酸)；氨基官能化硅烷，包括烷氧基氨基硅烷，诸如氨丙基三乙氧基硅烷、氨丙基二乙氧基甲基硅烷、氨丙基二甲基乙氧基硅烷以及氨丙基三甲氧基硅烷；以及巯基硅烷，诸如巯丙基三甲氧基硅烷和巯丙基甲基二甲氧基硅烷。寡糖上的亲核基团包括胺和羟基；聚胺上的亲核基团包括胺基。当然，其它亲核基团是可能的并且仅提供前述基团以说明本发明的方面。

因为引物化合物可以是小分子或聚合物，所以引物化合物的分子量可以在大分子量范围上适当变化。如下文所描述，通常选择引物化合物的分子量以使得引物化合物完全可溶于所选溶剂中(即，优选地，在不形成饱和引物化合物溶液的情况下)。或者，当等离子体用于使引物化合物沉积于衬底上时，引物化合物可以是任何分子量，条件是这种化合物有适当的挥发性以分散至蒸气相中。

如关于下文实施例中的壳寡糖所描述，据信，引物化合物(壳寡糖)可以经由引物化合物上的亲核物质结合至包括三羟基苯基的化合物，这种亲核物质与三羟基苯基的苯基环上的未经取代的碳共价结合。其它引物化合物有必要包括与上文所提及的类似的亲核基团并且因此可以按类似于壳寡糖的方式结合至包括三羟基苯基的化合物。引物化合物同样可以经由其它机制结合至包括三羟基苯基的化合物。举例来说，存在于壳寡糖上的胺可以与包含羰基部分的包括三羟基苯基的化合物，例如没食子酸形成席夫碱(Schiff base)。具有胺作为亲核基团的其它引物化合物可以按类似方式结合至包含羰基部分的包括三羟基苯基的化合物。

在本发明的实施方案中，引物化合物还可以发挥次要活性剂的功能(诸如抗细菌剂、防污剂、消炎剂、抗血栓形成剂(例如抗凝血剂)，以及其组合)。举例来说，诸如壳寡糖的寡糖除了作为引物化合物的主要预期功能之外可以有利地充当抗细菌剂。作为另一个实例，已经用季胺基官能化的壳聚糖可以用作引物化合物，其还有利地向衬底赋予抗细菌特性。

一般来说，引物化合物在衬底表面上形成实质上均匀的层。如本文所用的“均匀”指的是在衬底表面上每单位面积衬底表面的引物化合物的量/数量密度的均匀度。通常，这个术语指的是在衬底上实质上连续的覆盖。实质上连续的覆盖指的是引物化合物以衬底表面的至少约20％至约100％覆盖率，例如衬底表面的约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％和/或约100％覆盖率存在。引物化合物在衬底上的实质上连续的覆盖有利地得到最终固定于衬底上的活性剂的实质上规则/受控的间隔。给定的引物化合物层的均匀度可以使用已知技术来确认，诸如扫描电子显微术(SEM)、原子力显微术(AFM)、傅立叶变换红外(FTIR)成像、拉曼成像、椭偏光成像、x射线光电子光谱(XPS)结合深度剖析，和/或静态或动态二次离子质谱(SIMS)成像结合深度剖析。另外，如上文所提及，引物化合物和包括三羟基苯基的化合物可以偶合至衬底，例如，通过彼此形成网状物(例如，可以在衬底存在下依序或组合引入引物化合物和包括三羟基的化合物)。网状物层的均匀度也可以使用已知技术来确认，诸如扫描电子显微术(SEM)、原子力显微术(AFM)、傅立叶变换红外(FTIR)成像、拉曼成像、椭偏光成像、x射线光电子光谱(XPS)结合深度剖析，和/或静态或动态二次离子质谱(SIMS)成像结合深度剖析。

范围可以在本文中以“约”或“大约”一个特定值和/或至“约”或“大约”另一个特定值表达。当表达这样的范围时，根据本发明的另一个实施方案包括一个特定值和/或至另一个特定值。类似地，当特定值以近似值，但使用诸如“约”、“至少约”或“小于约”的先行词表达时，应了解，这个特定值形成另一个实施方案。

在不打算受任何特定理论约束的情况下，据信，沉积于衬底表面上的引物层的均匀度取决于衬底表面与引物化合物的疏水/亲水性质，以及引物层暴露于衬底表面的持续时间。举例来说，据信，亲水引物化合物的实质上均匀的层将在亲水表面上比在疏水表面上更快地形成。

可以对衬底表面进行改性以使得在引物化合物暴露于衬底表面之前改变衬底的亲水/疏水性质以有助于形成均匀引物层。等离子体处理，包括(但不限于)氩气或电晕处理，化学处理，包括(但不限于)酸处理、碱处理，等等，可以用于使非极性疏水衬底表面活化或改性为更具极性/亲水的。举例来说，在一个实施方案中，可以通过衬底表面的氧化对表面进行改性以包括羟基。氧化衬底表面的适合方法在本领域中是已知的并且可以包括例如用任何氧化剂处理衬底表面，这种氧化剂包括(但不限于)过氧化氢、无机过氧化物、高锰酸盐(包括钾、钠、铵以及钙盐)、四氧化锇，以及前述物质的组合。作为另一个实例，可以通过用酸处理、碱处理或氩等离子体处理衬底对聚酯衬底进行活化或改性以包括羟基。对衬底进行活化或改性以包括胺的适合方法包括用酸处理、碱处理或氩等离子体处理聚酰胺衬底。对衬底进行改性以包括硫醇的适合方法包括用酸处理、碱处理或氩等离子体处理聚硫酯衬底。在等离子体处理之后可以使等离子体处理的衬底暴露于气体以产生反应部分。举例来说，等离子体可以用于产生自由基，然后通过暴露于诸如氧气、氨以及硫化氢的气体而产生反应部分并且从而分别产生羟基、胺以及硫醇。

在本发明的实施方案中，通过使衬底表面与引物化合物的溶液接触而使引物化合物沉积于衬底表面上。沉积方法可以包括将衬底完全浸入引物化合物的溶液中，例如，通过浸涂。或者，沉积方法可以包括将引物化合物的溶液喷射或浇铸至衬底表面上，例如，通过旋转浇铸或喷射溶液，诸如雾化溶液。对于具有内腔的衬底，诸如管道，也可以使溶液流入腔中以涂布其内部。溶剂可以是能够充当引物化合物的载剂的任何溶剂。举例来说，水最常用作溶剂，但可以使用有机溶剂，包括(但不限于)醇、二醇、有机硫(诸如环丁砜)、醚(诸如乙醚和四氢呋喃)、卤烃(诸如氯仿和二氯甲烷)，以及前述物质的组合。水一般对于较小和/或带电的引物化合物是优选的，但可以使用常规有机溶剂，尤其对于聚合引物化合物来说。在本文所公开的方法的实施方案中，包含引物化合物的溶液在约7.5至约9.5或约8至约9的范围内或约8.5的pH下。引物化合物的溶液可以进一步包括缓冲剂，包括(但不限于)N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、3-{[三(羟甲基)甲基]氨基}丙磺酸(TAPS)、三(羟甲基)甲胺(Tris)以及N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)。当然，还可以使用一种或多种碳酸盐、磷酸盐以及其它已知的缓冲剂系统用于维持相对高的pH值。

本发明进一步提供了将活性剂固定至衬底表面的方法，其包括以下步骤：通过等离子体沉积使引物化合物沉积于衬底上。如本文所用的术语“等离子体”描述了由离子、电子以及中性物质组成的部分或完全电离气体。举例来说，可以使用包含通过在微真空至中等真空下施加射频而产生的烯丙胺的等离子体处理来使反应胺基的层沉积于衬底表面上。在这个实例中，等离子体处理得到在衬底表面上形成的自由基物质，其将在衬底表面上引发烯丙胺的自由基聚合。另外，在等离子体的蒸气相中形成的自由基可以与在衬底表面上形成的自由基相互作用并且偶合至衬底。

适合的等离子体可以从各种惰性气体和反应气体，以及惰性气体的混合物、反应气体的混合物、和/或惰性气体与反应气体的混合物产生。根据本发明方法使用的等离子体可以通过各种已知的方法产生，诸如通过施加电场和/或磁场。各种类型的电源可以用于产生在所公开的方法中使用的适合等离子体；典型电源包括直流电(DC)、射频(RF)、微波以及激光电源。平行板等离子体源例如使用RF电源以经由气体放电产生等离子体。RF电源的另一个实例是电感耦合等离子体源，其使用电感耦合的RF源产生等离子体。RF电源可以在13.56MHz下或在一般技术人员容易确定的另一个适合频率下操作。微波电源包括例如电子回旋共振(ECR)源。微波频率可以是2.45GHz或一般技术人员容易确定的另一个适合频率。

等离子体可以在各种压力下产生，并且适合的等离子体压力可以由一般技术人员容易地确定。等离子体可以例如在大气压下或在真空下产生。对衬底的损害在较高压力下可能比在较低压力下更为普遍。因此，较低压力的使用可以防止或减少对衬底的损害，从而允许使用增加的暴露时间和/或增加的功率电平。可以产生等离子体的典型压力包括约0.001托至约760托的压力，例如，约0.01托至约100托、约0.05托至约50托和/或约0.1托至约10托，但也可以使用更高和更低的压力。

在本发明的另一个实施方案中，可以通过在引发剂存在下对衬底进行UV照射和/或热处理(例如，在约40℃至约110℃下)以在衬底表面上形成自由基而对衬底表面进行改性以包括自由基作为反应部分。引发剂可以是本领域中已知的当经受UV照射和/或高温(例如介于约40℃与约110℃之间)时能够形成自由基的任何引发剂。适合的引发剂可以包括(但不限于)二苯甲酮；过氧化物，包括(但不限于)过氧化氢、过氧化苯甲酰、过氧化乙酰、过氧化月桂酰、过乙酸叔丁酯、叔丁基氢过氧化物以及二叔丁基过氧化物；二氧化氮；偶氮二异丁腈(AIBN)；以及2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮(DMPA)。在衬底表面上产生的自由基可以通过分别暴露于诸如氧气、氨以及硫化氢的气体而转化成诸如羟基、胺以及硫醇的反应部分。

一旦已经对衬底表面进行改性以包括诸如羟基的反应部分，即可对衬底表面进行进一步改性以使得一个反应部分被不同反应部分置换。举例来说，硫醇可以被羟基置换，反之亦然。

引物化合物经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合衬底表面；当反应部分存在于衬底表面上时，引物化合物有利地吸附至/粘合至/偶合至/缔合反应部分。引物化合物进一步偶合至包括三羟基苯基的化合物，这种化合物经由三羟基苯基上的未经取代的碳或经由三羟基苯基上的反应基团进一步偶合至活性剂(在包括三羟基苯基的化合物偶合至衬底之前或之后)，最终形成固定有活性剂的衬底。包括三羟基苯基的化合物经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合活性剂。通常，包括三羟基苯基的化合物通过与活性剂形成一个或多个共价键而偶合至活性剂。

当通过使衬底表面与引物化合物的溶液接触而使引物化合物沉积于衬底表面上时，引物化合物的溶液中引物化合物的浓度一般可以是任何浓度。通常选择浓度以使得引物化合物完全可溶于所选溶剂中，而不形成饱和引物化合物溶液。另一个考虑因素是当使用较高浓度时进行沉积的持续时间一般较短。例示性引物化合物浓度可以在约0.0001至约100mg/ml、约0.001至约100mg/ml、约0.01至约100mg/ml、约0.05至约100mg/ml、0.0001至约90mg/ml、约0.0001至约80mg/ml、约0.0001至约70mg/ml、约0.0001至约60mg/ml、约0.0001至约50mg/ml、约0.001至约50mg/ml、约0.001至约40mg/ml、约0.001至约30mg/ml、约0.01至约30mg/ml、约0.01至约20mg/ml、约0.01至约15mg/ml、约0.01至约10mg/ml、约0.01至约5mg/ml、约0.05至约5mg/ml、约0.05至约3mg/ml、约0.05至约2mg/ml和/或约0.1至约1.5mg/ml的范围内，例如，约0.1mg/ml和/或约1mg/ml。

可以使衬底表面与引物化合物的溶液接触和/或浸入引物化合物的溶液中持续适合于使引物化合物以所需的引物化合物密度沉积于衬底表面上的任何持续时间。引物化合物在衬底上的沉积速率可以部分取决于引物化合物溶液中引物化合物的浓度、衬底表面与溶液体积比、溶液的离子强度、溶液的pH、以及温度。衬底与引物化合物的溶液接触的持续时间可以针对最终在衬底上提供一层的任何适合的时段而变化，例如，当使用浸涂时约10秒至约24小时。当衬底与引物化合物的溶液接触的持续时间增至超过24小时(并且使用引物化合物的前述例示性浓度之一)时，预期所沉积的引物化合物的量和引物层的均匀度有极小差异(相对于24小时的暴露时间)。在不打算受理论约束的情况下，虽然据信在24小时后引物化合物的沉积可能继续，但预期在24小时后沉积的引物化合物的量将对最终固定于衬底表面上的活性剂的量具有极小影响。

在另一个实施方案中，通过等离子体处理使引物化合物(例如，聚胺)沉积于衬底表面上。可以使衬底表面暴露于等离子体持续各种时段。等离子体暴露的时长可以由一般技术者容易地确定并且使用上文所提及的用于确定引物化合物层的均匀度的光谱技术来确认。此外，暴露时长可以取决于等离子体的反应性而变化。对衬底的损害在较长暴露时间之后可能比较短暴露时间更为普遍。因此，较短暴露时间的使用可以防止或减少对衬底的损害，从而允许使用增加的压力和/或增加的功率电平。通常，使衬底表面暴露约1秒至约2小时，但可以使用更短和更长的暴露时段。一般来说，使衬底表面暴露于等离子体持续约5秒至约1小时、约10秒至约30分钟、约30秒至约20分钟和/或约1分钟至约10分钟。

可以使衬底表面暴露于等离子体持续连续的时段。也可以使衬底表面暴露于等离子体持续间歇(或“脉冲”)时段，即，等离子体沉积过程可以包括衬底表面暴露于等离子体持续一定时段，继之以衬底表面不暴露于等离子体的时段。这类暴露和非暴露时段可以重复多次。对衬底或衬底涂层的损害在连续暴露过程之后可能比脉冲暴露过程更为普遍。因此，脉冲暴露过程的使用可以防止或减少对衬底或衬底涂层的损害，从而允许使用增加的压力和/或增加的功率电平。在脉冲时段上增加的功率电平可以有利地减少衬底暴露于等离子体的时间量，从而减少部分循环时间并且增加制造效率。

包括三羟基苯基的化合物

使引发衬底暴露于包括三羟基苯基的化合物以使三羟基苯基偶合至引发衬底。如先前所描述，包括三羟基苯基的化合物经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合粘合/偶合至/缔合引物化合物。通常，三羟基苯基通过与引物形成一个或多个共价键而偶合至引物。如上文所描述，包括三羟基苯基的化合物涵盖包括三羟基苯基的小分子化合物、聚合物，以及三羟基苯基-连接子偶联物。包括三羟基苯基的聚合物包括三羟基苯基在聚合物主链中的聚合物以及包括侧接三羟基苯基的聚合物。三羟基苯基-连接子偶联物包括偶合至连接子化合物的包括三羟基苯基的小分子或聚合物化合物。

一般来说，适合的三羟基苯基具有至少两个反应性位点以使得三羟基苯基可以结合至由引物层呈现/在引物层上/在引物层内的反应部分，从而形成引物化合物-三羟基苯基网状物，并且还结合至活性剂、另一种包括三羟基苯基的化合物、连接子化合物和/或前述物质的组合中的至少一者。适合的包括三羟基苯基的小分子化合物包括(但不限于)没食子酸、间苯三酚、羧酸、没食子酸酰胺、5-甲基-苯-1,2,3-三酚、3,4,5-三羟基苯甲醛、2,3,4-三羟基苯甲醛、没食子苯乙酮、3,4,5-三羟基苯甲酰胺、2,3,4-三羟基苯甲酸、5-羟基多巴胺盐酸盐、没食子酸甲酯、邻苯三酚、其衍生物以及前述物质的盐。前述小分子化合物还可以用于制备包含三羟基苯基的聚合物。没食子酸经由其三羟基苯基的苯基环上的至少两个未经取代的碳能够结合至引物化合物、活性剂、另一种没食子酸、连接子化合物以及前述物质的组合中的两者，从而将活性剂固定于衬底表面上。如下文针对连接子化合物所描述，没食子酸经由其羧酸部分还能够结合至引物化合物、活性剂、另一种没食子酸、或连接子化合物。因此，没食子酸有利地具有三个羟基以及可以参与并且有助于将活性剂固定于衬底表面上的三个反应性位点。其它包括三羟基苯基的化合物有必要包括至少两个反应性位点，例如，在苯基环和/或反应基团(诸如前述羧酸部分)上的至少两个未经取代的碳，以使得还能够偶合至引物化合物、活性剂、另一种包括三羟基苯基的化合物、连接子化合物以及前述物质的组合中的两者，从而将活性剂固定于衬底表面上。在三羟基苯基的苯基环上的适合反应基团包括(但不限于)羧基、羧酸酯、酰胺、酰基卤、醛、酮以及酯。

连接子化合物

包括三羟基苯基的化合物可以偶合至连接子化合物，从而形成三羟基苯基-连接子偶联物。包括三羟基苯基的化合物经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合连接子化合物。通常，三羟基苯基通过经由三羟基苯基上的未经取代的碳或经由三羟基苯基上的反应基团与连接子化合物形成共价键而偶合至连接子化合物。三羟基苯基上的反应基团可以是可以与连接子化合物上的亲核物质反应的任何反应基团。三羟基苯基上的适合反应基团包括(但不限于)羧基、羧酸酯、酰胺、酰基卤、醛以及酯。三羟基苯基上的反应基团可以偶合至连接子化合物，例如，通过酯基转移或酰胺转移。酯基转移或酰胺转移可以任选地由活化剂化合物促进，诸如N,N'-二环己基碳化二亚胺(DCC)、N,N'-二异丙基碳化二亚胺(DIC)、羟基苯并三唑(HOBt)或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)。当然，如同连接子化合物一样，包括亲核基团的活性剂也可以通过酯基转移或酰胺转移而偶合至三羟基苯基的反应基团。

连接子化合物可以是具有第一端基和第二端基的任何适合化合物，其能够使连接子偶合至三羟基苯基的反应基团和/或未经取代的碳并且偶合至可聚合部分以形成可聚合单体，或偶合至三羟基苯基的反应基团和/或未经取代的碳并且偶合至活性剂以形成三羟基苯基-连接子-活性剂偶联物。聚乙二醇、二胺、二醇以及二硫醇全部是适用的代表性连接子化合物。在一个方面，适合的连接子化合物包括(但不限于)根据式(I)的化合物：

其中n为至少1的整数，R为任何亲核基团，包括(但不限于)羟基、烷氧化物、胺、亚硝酸盐、硫醇、硫醇盐、咪唑以及氨氧基，R”为R或反应基团，包括(但不限于)羧基、羧酸酯、酰胺、酰基卤、醛以及酯，并且其中每个R'是相同或不同的并且可以选自由H和经取代或未经取代的低碳烷基(例如C1至约C5烷基)组成的群组。当使用水溶液时，n通常为约1至5(只要在所选的水性系统中达成溶解度即可)；当使用有机溶剂时，n可以为约1至10。举例来说，适合的连接子化合物可以包括(但不限于)包含第一和第二胺端基的直链双胺，诸如1,3-二氨基丙烷、1,4-二氨基丁烷、1,5-二氨基戊烷和/或1,6-二氨基己烷。

适合的连接子化合物进一步包括具有两个或更多个末端官能团的任何化合物，这些官能团可以偶合至三羟基苯基的反应基团和/或未经取代的碳、可聚合部分和/或活性剂。如本文所用的“末端”指的是任何碳链或分支的最后一个官能团，包括直链化合物的端基以及支链化合物的任何分支端。通常，官能团将为亲核物质。亲核基团在本领域中是众所周知的并且可以包括(但不限于)羟基、烷氧化物、胺、亚硝酸盐、硫醇、硫醇盐、咪唑、氨氧基以及其组合。举例来说，适合的连接子化合物可以包括(但不限于)支链聚乙二醇分子，其中每个分支用亲核基团(包括(但不限于)8-Arm PEG-氨氧基、8-Arm PEG-硫醇、8-Arm PEG-胺、8-Arm PEG-羟基、4-Arm PEG-氨氧基、4-Arm PEG-硫醇、4-Arm PEG-胺、4-Arm PEG-羟基，等等)封端；二硫醇；双胺；以及其它聚亲核物质。

据信，在使包括三羟基苯基的化合物与连接子化合物在溶液中接触后，三羟基苯基上的任何反应基团和/或未经取代的碳可以偶合至连接子化合物，从而形成三羟基苯基-连接子偶联物。连接子化合物经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合三羟基苯基。通常，连接子化合物通过与三羟基苯基形成一个或多个共价键而偶合至三羟基苯基。一般的三羟基苯基-连接子偶联物可以由式(IIa)、(IIb)以及(IIc)表示：

其中X可以为卤素、胺、硫醇、醛、羧酸、羧酸酯、酰基卤、酯、丙烯酸酯、乙烯基、C1至C10支链或直链烷基胺、C1至C10支链或直链烷基硫醇、C1至C10支链或直链烷基醛、C1至C10支链或直链烷基羧酸、C1至C10支链或直链烷基羧酸酯、C1至C10支链或直链烷基酰基卤、C1至C10支链或直链烷基酯、或C1至C10支链或直链烷基丙烯酸酯，并且R为连接子化合物。关于所列取代基的碳链的长度，当使用水溶液时，链长通常为C1至C5(只要在所选的水性系统中达成溶解度即可)；当使用有机溶剂时，链长可以为C1至C10。根据化合物(IIa)、(IIb)以及(IIc)，可以在C₂、C₃、C₄、C₅以及C₆中的任何三者上提供三个羟基。举例来说，当包括三羟基苯基的化合物是羧酸，诸如没食子酸(并且因此X为羧基)时，三羟基苯基-连接子偶联物可以具有式(IIa)或式(IIb)：

其中如上述，R为连接子化合物。此外，当三羟基苯基-连接子偶联物是根据(IIa)和(IIb)的没食子酸-连接子偶联物时，在C₃、C₄以及C₅上提供三个羟基，并且在羧基(IIa)或C₂或C₆之一(IIb)上提供连接子R。当包括三羟基苯基的化合物是邻苯三酚时，邻苯三酚-连接子偶联物可以具有式(IIc)：

其中R为连接子化合物，并且可以在C₂、C₃、C₄、C₅以及C₆中的任何连续三者上提供三个羟基。

在使引发衬底与包括三羟基苯基的化合物接触之前，可以使连接子化合物偶合至包括三羟基苯基的化合物。或者，可以使三羟基苯基处理的引发衬底与连接子化合物的溶液接触，从而使连接子化合物偶合至三羟基苯基。连接子化合物也可以偶合至引物化合物(其已经偶合至包括三羟基苯基的化合物)，例如，通过偶合至寡糖的还原端。在三羟基苯基远端的连接子端基可以偶合至活性剂，从而形成三羟基苯基-连接子-活性剂偶联物，或偶合至可聚合部分，以形成可聚合单体。

具有侧接三羟基苯基的可聚合单体/聚合物

在包括三羟基苯基的化合物是聚合物的实施方案中，聚合物可以包括至少一种具有侧接三羟基苯基的单体。具有侧接三羟基苯基的聚合物可以由可聚合单体聚合而成，这些可聚合单体从已经进行改性以包括有包括可聚合部分的连接子化合物的包括三羟基苯基的小分子化合物制备。

可聚合单体可以通过使可聚合部分偶合至三羟基苯基-连接子偶联物而形成。三羟基苯基-连接子偶联物包括在三羟基苯基远端的连接子端基。连接子的远端端基可以与可聚合部分形成共价键。

一般来说，可聚合部分可以为包括可聚合α,β不饱和端基的任何官能团。适合的可聚合部分包括(但不限于)丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、乙酸乙烯酯以及前述物质的酯。在连接子化合物与可聚合部分之间的共价键可以通过酯基转移或酰胺转移形成并且可以由活化剂化合物促进，诸如N,N'-二环己基碳化二亚胺(DCC)、N,N'-二异丙基碳化二亚胺(DIC)、羟基苯并三唑(HOBt)或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)。

在一些实施方案中，包括三羟基苯基的可聚合单体还可以通过使三羟基苯基的苯基环的反应基团和/或未经取代的碳与具有第一端基和第二端基的连接子化合物偶合而形成，其中第一端基为亲核基团并且第二端基为可聚合α,β不饱和端基。这个实施方案的适合连接子化合物包括(但不限于)丙烯酸2-羟乙酯、甲基丙烯酸2-羟乙酯、丙烯酸3-羟丙酯、甲基丙烯酸3-羟丙酯、丙烯酸4-羟丁酯、甲基丙烯酸4-羟丁酯、丙烯酸6-羟己酯、甲基丙烯酸6-羟己酯、N-(3-羟丙基)甲基丙烯酰胺、N-(4-羟丁基)丙烯酰胺、N-(4-羟丁基)甲基丙烯酰胺、N-(6-羟己基)-丙烯酰胺、N-(6-羟己基)甲基丙烯酰胺、N-甲基-N-(2-羟乙基)丙烯酰胺、N-甲基-N-(2-羟乙基)甲基丙烯酰胺、N-甲基-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺、N-甲基-N-(3-羟丙基)甲基丙烯酰胺、N-甲基-N-(4-羟丁基)丙烯酰胺、N-甲基-N-(4-羟丁基)甲基丙烯酰胺、N-甲基-N-(6-羟己基)丙烯酰胺、N-甲基-N-(6-羟己基)甲基丙烯酰胺以及4-氨丁基丙烯酰胺。一般来说，这个实施方案的适合连接子化合物可以包括(但不限于)根据式(III)的化合物：

其中n为0或至少1的整数，R为任何亲核基团，包括(但不限于)羟基、烷氧化物、胺、亚硝酸盐、硫醇以及硫醇盐，并且R'可以选自由氧、NR”以及CR₂”组成的群组，并且每个R”可以是相同或不同的并且可以选自由H和经取代或未经取代的低碳烷基(例如C1至约C5烷基)组成的群组。

一般的包括三羟基苯基的可聚合单体由式(IVa)、(IVb)以及(VIc)表示：

X可以为卤素、胺、硫醇、醛、羧酸、羧酸酯、酰基卤、酯、丙烯酸酯、乙烯基、C1至C10支链或直链烷基胺、C1至C10支链或直链烷基硫醇、C1至C10支链或直链烷基醛、C1至C10支链或直链烷基羧酸、C1至C10支链或直链烷基羧酸酯、C1至C10支链或直链烷基酰基卤、C1至C10支链或直链烷基酯、或C1至C10支链或直链烷基丙烯酸酯，Y可以为可聚合部分，诸如丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、乙酸乙烯酯以及前述物质的酯，并且R为连接子化合物。关于所列取代基的碳链的长度，当使用水溶液时，链长通常为C1至C5(只要在所选的水性系统中达成溶解度即可)；当使用有机溶剂时，链长可以为C1至C10。根据化合物(IVa)、(IVb)以及(IVc)，可以在C₂、C₃、C₄、C₅以及C₆中的任何三者上提供三个羟基。举例来说，当包括三羟基苯基的化合物是羧酸，诸如没食子酸(并且因此X为羧基)时，包括三羟基苯基的可聚合单体可以具有式(IIa)或式(IIb)：

其中R为连接子化合物，并且Y为可聚合部分。此外，当包括三羟基苯基的化合物是没食子酸时，根据(IVa)和(IVb)的可聚合单体在C₃、C₄以及C₅上包含三个羟基，并且在羧基(IVa)或C₂或C₆之一(IVb)上提供连接子R。当包括三羟基苯基的化合物是邻苯三酚时，可聚合单体可以具有式(IVc)：

其中R为连接子化合物，Y为可聚合部分，并且可以在C2、C3、C4、C5以及C6中的任何连续三者上提供三个羟基。

包括三羟基苯基的可聚合单体聚合形成均聚物，或与一种或多种次级可聚合单体(包括可聚合基团)共聚形成含有至少一种具有侧接三羟基苯基的单体的聚合物。如本领域中所知，含有侧接三羟基苯基和一种或多种次级可聚合单体的共聚物可以聚合形成无规共聚物和/或嵌段共聚物。适合的次级可聚合单体可以是包含可聚合部分的任何单体。或者，次级可聚合单体可以具有侧接反应基团(即，将在聚合之后侧接于单体的反应基团)，包括(但不限于)N-羟基琥珀酰亚胺、琥珀酰亚胺等等，以使得当将次级单体并入含有至少一种具有侧接三羟基苯基的单体的聚合物中时，侧接反应基团可以偶合至活性剂，从而形成活性剂-三羟基苯基偶联物，或侧接反应基团可以偶合至衬底，从而形成三羟基苯基处理的衬底。

用于引发具有三羟基苯基的可聚合单体和任选的次级单体的聚合的适合自由基引发剂包括(但不限于)偶氮化合物、有机过氧化物以及其组合。适合的偶氮化合物包括(但不限于)偶氮二异丁腈(AIBN)和1,1-偶氮双(环己甲腈)(ABCN)。适合的有机过氧化物包括(但不限于)环过氧化物、二酰基过氧化物、二烷基过氧化物、氢过氧化物、过氧碳酸酯、过氧二碳酸酯、过氧酯以及过氧缩酮。适合的环过氧化物包括(但不限于)3,6,9-三乙基-3,6,9-三甲基-1,4,7-三过氧壬烷。适合的二酰基过氧化物包括(但不限于)二(3,5,5-三甲基己酰基)过氧化物。适合的二烷基过氧化物包括(但不限于)2,5-二甲基-2,5-二(叔丁基过氧)己烷；2,5-二甲基-2,5-二(叔丁基过氧)-3-己炔；二叔戊基过氧化物；二叔丁基过氧化物；以及叔丁基异丙苯基过氧化物。适合的氢过氧化物包括(但不限于)叔戊基氢过氧化物；和1,1,3,3-四甲基丁基氢过氧化物。适合的过氧碳酸酯包括(但不限于)叔丁基过氧碳酸2-乙基己酯；叔戊基过氧碳酸2-乙基己酯；以及叔丁基过氧碳酸异丙酯。适合的过氧二碳酸酯包括(但不限于)过氧二碳酸二(2-乙基己基)酯；以及过氧二碳酸二仲丁酯。适合的过氧酯包括(但不限于)过氧-2-乙基己酸叔戊酯；过氧新癸酸叔戊酯；过氧特戊酸叔戊酯；过氧苯甲酸叔戊酯；过氧乙酸叔戊酯；2,5-二甲基-2,5-二(2-乙基己酰基过氧)己烷；过氧-2-乙基己酸叔丁酯；过氧新癸酸叔丁酯；过氧新庚酸叔丁酯；过氧特戊酸叔丁酯；过氧二乙基乙酸叔丁酯；过氧异丁酸叔丁酯；过氧-2-乙基己酸1,1,3,3-四甲基丁酯；过氧新癸酸1,1,3,3-四甲基丁酯；过氧特戊酸1,1,3,3-四甲基丁酯；过氧-3,5,5-三甲基己酸叔丁酯；过氧新癸酸异丙苯酯；过氧苯甲酸叔丁酯；以及过氧乙酸叔丁酯。适合的过氧缩酮包括(但不限于)1,1-二(叔戊基过氧)环己烷；1,1-二(叔丁基过氧)环己烷；1,1-二(叔丁基过氧)-3,3,5-三甲基环己烷；以及2,2-二(叔丁基过氧)丁烷。

任选的次级单体可以与一定量的具有三羟基苯基的单体一起包括于共聚物中，这种量为至多约95mol％，例如，约0.5至约95mol％、约0.5至约90mol％、约1至约90mol％、约1至约85mol％、约5至约85mol％、约5至约80mol％、约10至约80mol％、约10至约75mol％、约15至约75mol％、约5至约70mol％、约10至约70mol％、约15至约70mol％、约15至约65mol％、约20至约65mol％、约20至约60mol％、约25至约60mol％、约25至约55mol％、约30至约55mol％、约30至约50mol％、约35至约50mol％、约35至约45mol％和/或约35至约40mol％。

含有侧接三羟基苯基的聚合物可以用反应基团封端，活性剂可以经由这个反应基团偶合至聚合物。反应基团可以是如本文先前所描述的任何反应基团，包括(但不限于)羧基、羧酸酯、酰胺、酰基卤、醛以及酯。反应基团可以包括于可以充当聚合中的链转移剂的化合物中。适合的具有反应基团的链转移剂可以包括(但不限于)3-巯基丙酸、3-巯基丙酸异辛酯以及前述物质的组合。或者，活性剂将经由侧接三羟基苯基上的未经取代的碳偶合至聚合物，并且因此，聚合物的链端不需要能够偶合至活性剂。

如上文所描述，作为含有至少一种具有侧接三羟基苯基的单体的聚合物的包括三羟基苯基的化合物可以偶合至另一种连接子化合物，从而形成可以偶合至活性剂的三羟基苯基-连接子偶联物。连接子化合物经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合三羟基苯基。通常，连接子化合物通过与三羟基苯基的未经取代的碳形成一个或多个共价键而偶合至三羟基苯基。

在主链中具有三羟基苯基的聚合物

在包括三羟基苯基的化合物是聚合物的替代性实施方案中，三羟基苯基可以在聚合物的主链中。在主链中具有三羟基苯基的聚合物可以由具有至少两个反应性位点的包括三羟基苯基的小分子化合物聚合而成。在不打算受任何特定理论约束的情况下，据信，包括三羟基苯基的小分子化合物可以从下文所示的类醌物质，通过在两个或更多个相邻三羟基苯基的苯基环中的未经取代的碳原子之间形成共价键而自聚。

本发明的包括三羟基苯基的化合物的三羟基苯基一般被认为当在溶液中时与类醌物质处于pH依赖性平衡。举例来说，没食子酸(化合物A)与类醌物质(化合物B)之间的平衡如下所示。据信，在更酸性的pH下平衡偏向于三羟基化物质，化合物A。

在包括三羟基苯基的化合物已经与引物层接触之后，三羟基苯基可以经由三羟基苯基的苯基环的未经取代的碳共价结合至由引物化合物层呈现/在引物化合物层上/在引物化合物层内的反应部分，从而形成三羟基苯基处理的衬底。

包括三羟基苯基的小分子化合物也可以原位自聚以形成在聚合物主链中含有三羟基苯基的重复单元的聚合物。在不打算受任何特定理论约束的情况下，据信，三羟基苯基可以从类醌物质，通过在两个或更多个相邻三羟基苯基的苯基环中的未经取代的碳原子之间形成共价键而自聚。因此，在一个实施方案中，活性剂可以偶合的苯基环的未经取代的碳可以是偶合至衬底表面的聚合物链的末端三羟基苯基。

此外，当包括三羟基苯基的化合物是包括侧接三羟基苯基的聚合物时，据信，侧接三羟基苯基的苯基环的未经取代的碳如果很接近聚合物链上的其它侧接三羟基苯基就可以内部交联，或可以交联多个聚合物链。

此外，据信，在三羟基苯基处理的引发衬底暴露于活性剂的溶液后，三羟基苯基上的任何开放结合位点或其上的连接子化合物可以偶合至活性剂，从而将活性剂固定于衬底表面上。活性剂经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合三羟基苯基。通常，活性剂通过与三羟基苯基形成一个或多个共价键而偶合至三羟基苯基(其已经偶合至引物化合物的层)。据信，三羟基苯基可以经由三羟基苯基的苯基环的未经取代的碳原子与活性剂的反应基团共价结合。此外，据信，当活性剂的反应基团是亲核物质时，在三羟基苯基的苯基环的未经取代的碳与活性剂的反应基团之间的共价键可以通过迈克尔加成(Michael addition)而形成。如以下文的肝素所例示，活性剂经由活性剂上的亲核物质结合至三羟基苯基，这种亲核物质与三羟基苯基的苯基环上的未经取代的碳共价结合。其它活性剂有必要包括与下文所描述的类似的亲核基团并且因此将以类似于肝素的方式结合至三羟基苯基。

活性剂经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合偶合至三羟基苯基的连接子。通常，活性剂通过与反应端基形成一个或多个共价键而偶合至连接子，这个连接子偶合至三羟基苯基(其已经偶合至引物化合物的层)。当将偶合至活性剂的连接子化合物的反应基团是包括(但不限于)羧基、羧酸酯、酰胺、酰基卤、醛以及酯的反应基团时，据信，连接子经由连接子上的反应基团和活性剂上的亲核基团偶合至活性剂。进一步相信，当将偶合至活性剂的连接子的反应基团是亲核物质时，连接子可以经由连接子化合物上的残余反应基团偶合至活性剂的还原端，这种活性剂包括(但不限于)肝素、壳聚糖、壳聚糖季铵盐，等等。

包括三羟基苯基的化合物与引发衬底的偶合

在本发明的一个实施方案中，通过使引发衬底表面与包括三羟基苯基的化合物的溶液接触而使包括三羟基苯基的化合物偶合至引发衬底表面。可以将引发衬底完全浸入包括三羟基苯基的化合物的溶液中，例如，通过浸涂。或者，可以将包括三羟基苯基的化合物的溶液喷射或浇铸至引发衬底上，例如，通过旋转浇铸或喷射溶液，诸如雾化溶液。对于具有内腔的衬底，诸如管道，可以使溶液流入腔中以涂布其内部。溶剂可以是能够充当包括三羟基苯基的化合物的载剂的任何溶剂。举例来说，最常使用水，但可以使用其它溶剂，包括(但不限于)醇、二醇、醚(诸如乙醚和四氢呋喃)、卤烃(诸如氯仿和二氯甲烷)，以及前述物质的组合。在本文所公开的方法的实施方案中，包含包括三羟基苯基的化合物的溶液在约7.5至约9.5、约8至约9的范围内和/或约8.5的pH下，因此平衡并不偏向于如上文所提及的任一平衡方向。包括三羟基苯基的化合物的溶液可以进一步包括缓冲剂以将pH维持于前述范围内，这种缓冲剂包括(但不限于)N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、3-{[三(羟甲基)甲基]氨基}丙磺酸(TAPS)、三(羟甲基)甲胺(Tris)、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)，以及其组合。当然，还可以使用柠檬酸盐、碳酸盐、乳酸盐、磷酸盐以及其它已知的缓冲剂系统中的一者或多者。当然，还可以使用碳酸盐、磷酸盐以及其它已知的缓冲剂系统中的一者或多者用于维持相对高的pH值。

包括三羟基苯基的化合物在其溶液中的浓度一般可以是任何浓度。通常选择浓度以使得包括三羟基苯基的化合物完全可溶于所选溶剂中，而不形成包括三羟基苯基的化合物的饱和溶液。此外，因为包括三羟基苯基的化合物可以原位自聚，所以通常选择包括三羟基苯基的化合物的浓度以使得包括三羟基苯基的化合物将以可接受的速率偶合至引发衬底，理想地在没有过度自聚或交联并且因此没有溶液胶凝的情况下。溶液中包括三羟基苯基的化合物的例示性浓度可以在约0.0001至约100mg/ml、约0.001至约100mg/ml、约0.01至约100mg/ml、约0.05至约100mg/ml、0.0001至约90mg/ml、约0.0001至约80mg/ml、约0.0001至约70mg/ml、约0.0001至约60mg/ml、约0.0001至约50mg/ml、约0.001至约50mg/ml、约0.001至约40mg/ml、约0.001至约30mg/ml、约0.01至约30mg/ml、约0.01至约20mg/ml、约0.01至约15mg/ml、约0.01至约10mg/ml、约0.01至约5mg/ml和/或约0.05至约5mg/ml的范围内，例如，约1mg/ml和/或约5mg/ml。

可以使引发衬底与包括三羟基苯基的化合物的溶液接触和/或浸入包括三羟基苯基的化合物的溶液中持续适合于使包括三羟基苯基的化合物偶合至引发衬底的任何持续时间。在本发明的实施方案中，持续时间可以是适合于形成引物化合物和包括三羟基苯基的化合物的网状物的任何持续时间。包括三羟基苯基的化合物在引发衬底上的沉积速率可以部分取决于包括三羟基苯基的化合物在其溶液中的浓度、衬底表面与溶液体积比、溶液的离子强度、溶液的pH、以及温度。引发衬底与包括三羟基苯基的化合物的溶液接触的持续时间可以针对用于使包括三羟基苯基的化合物偶合至引发衬底的任何适合的时段而变化，例如，当使用浸涂时约10秒至约24小时。当引发衬底与包括三羟基苯基的化合物的溶液接触的持续时间增至超过24小时(并且使用包括三羟基苯基的化合物的前述例示性浓度之一)时，预期与引物化合物反应的包括三羟基苯基的化合物的量有极小差异(相对于24小时的暴露时间)。在不打算受理论约束的情况下，虽然据信在24小时后包括三羟基苯基的化合物可以继续偶合至引发衬底，但预期在24小时后所提供的包括三羟基苯基的化合物的量将对最终固定于衬底表面上的活性剂的量具有极小影响，并且此外，据信包括三羟基苯基的化合物在溶液中、甚至在低浓度下自聚的可能性随着时间而增加。

在包括三羟基苯基的化合物包含三羟基苯基-连接子偶联物的本发明的实施方案中，三羟基苯基-连接子偶联物最初通过使包括三羟基苯基的小分子或聚合物化合物的三羟基苯基与连接子化合物上的亲核物质经由三羟基苯基的苯基环上的未经取代的碳或反应基团偶合而形成，并且通常继之以使衬底与三羟基苯基-连接子偶联物的溶液接触。三羟基苯基-连接子偶联物可以通过使包括三羟基苯基的化合物与连接子化合物在溶液中组合而形成。包括三羟基苯基的化合物和/或连接子化合物的溶液可以在能够充当包括三羟基苯基的化合物和/或连接子化合物的载剂的任何溶剂中制备。举例来说，最常使用水，但还可以使用其它溶剂，包括(但不限于)醇、二醇、有机硫(诸如环丁砜)、醚(诸如乙醚和四氢呋喃)、烷烃、芳香族化物、卤烃(诸如氯仿和二氯甲烷)，以及前述物质的组合。

在前述实施方案的改进中，包括三羟基苯基的化合物和连接子化合物的溶液在约7.5至约9.5或约8至约9的范围内或约8.5的pH下。包括三羟基苯基的化合物的溶液和/或连接子化合物的溶液可以进一步包括缓冲剂以将pH维持于前述范围内，这种缓冲剂包括(但不限于)N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、3-{[三(羟甲基)甲基]氨基}丙磺酸(TAPS)、三(羟甲基)甲胺(Tris)以及N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)。当然，还可以使用碳酸盐、磷酸盐以及其它已知的缓冲剂系统中的一者或多者。

溶液中包括三羟基苯基的化合物和连接子化合物的浓度可以是任何浓度。通常选择浓度以使得包括三羟基苯基的化合物和/或连接子化合物完全可溶于所选溶剂中，而不形成饱和溶液。例示性的包括三羟基苯基的化合物和/或连接子化合物浓度可以在约0.0001至约100mg/ml、约0.001至约100mg/ml、约0.01至约100mg/ml、约0.05至约100mg/ml、0.0001至约90mg/ml、约0.0001至约80mg/ml、约0.0001至约70mg/ml、约0.0001至约60mg/ml、约0.0001至约50mg/ml、约0.001至约50mg/ml、约0.001至约40mg/ml、约0.001至约30mg/ml、约0.01至约30mg/ml、约0.01至约20mg/ml、约0.01至约15mg/ml、约0.01至约10mg/ml、约0.01至约5mg/ml、约0.05至约5mg/ml和/或约0.05至约3mg/ml的范围内，例如，约1mg/ml、约1.5mg/ml和/或约3mg/ml。包括三羟基苯基的化合物与连接子化合物的比率可以在约1:8至约8:1、约1:7至约7:1、约1:6至约6:1、约1:5至约5:1、约1:4至约4:1、约1:3至约3:1和/或约1:2至约2:1的范围内，例如，约1:1。

可以通过使引发衬底与三羟基苯基-连接子偶联物的溶液接触而使三羟基苯基-连接子偶联物偶合至引发衬底。可以将引发衬底完全浸入三羟基苯基-连接子偶联物的溶液中，例如，通过浸涂。或者，可以将三羟基苯基-连接子偶联物的溶液喷射或浇铸至引发衬底上，例如，通过旋转浇铸或喷射溶液，诸如雾化溶液。对于具有内腔的衬底，诸如管道，可以使溶液流入腔中以涂布其内部。

三羟基苯基-连接子偶联物溶液中三羟基苯基-连接子偶联物的浓度可以是任何浓度。通常选择三羟基苯基-连接子偶联物的浓度以使得三羟基苯基-连接子偶联物完全可溶于所选溶剂中，而不形成饱和溶液。例示性三羟基苯基-连接子偶联物浓度可以在约0.0001至约100mg/ml、约0.001至约100mg/ml、约0.01至约100mg/ml、约0.05至约100mg/ml、0.0001至约90mg/ml、约0.0001至约80mg/ml、约0.0001至约70mg/ml、约0.0001至约60mg/ml、约0.0001至约50mg/ml、约0.001至约50mg/ml、约0.001至约40mg/ml、约0.001至约30mg/ml、约0.01至约30mg/ml、约0.01至约20mg/ml、约0.01至约15mg/ml、约0.01至约10mg/ml、约0.01至约5mg/ml、约0.05至约5mg/ml和/或约0.05至约3mg/ml的范围内，例如，约1mg/ml、约1.5mg/ml或约3mg/ml。

可以使引发衬底与三羟基苯基-连接子偶联物的溶液接触和/或浸入三羟基苯基-连接子偶联物的溶液中持续适合于使三羟基苯基-连接子偶联物偶合至引发衬底的任何持续时间。据信，三羟基苯基-连接子偶联物可以经由在三羟基苯基远端的连接子化合物的端基中的任一者或两者和三羟基苯基上的任何残余反应基团偶合至引发衬底。在本发明的实施方案中，接触的持续时间可以是适合于在连接子或三羟基苯基中的一者或多者与引发衬底表面上的反应部分(当存在时)之间形成共价键的任何持续时间。三羟基苯基-连接子偶联物与引发衬底偶合的速率可以部分取决于其三羟基苯基-连接子偶联物溶液的浓度、衬底表面与溶液体积比、溶液的离子强度、溶液的pH、以及温度。引发衬底与三羟基苯基-连接子偶联物的溶液接触的持续时间可以针对用于使三羟基苯基-连接子偶联物偶合至引发衬底的任何适合的时段而变化，例如，当使用浸涂时约10秒至约24小时。当引发衬底与三羟基苯基-连接子偶联物的溶液接触的持续时间增至超过24小时(并且使用三羟基苯基-连接子偶联物的前述例示性浓度之一)时，预期偶合至引发衬底表面的三羟基苯基-连接子偶联物的量有极小差异(相对于24小时的暴露时间)。在不打算受理论约束的情况下，虽然据信三羟基苯基-连接子偶联物可以继续偶合至引发衬底，但预期在24小时后所提供的三羟基苯基-连接子偶联物的量将对最终固定于衬底表面上的活性剂的量具有极小影响，并且此外，据信三羟基苯基甚至在低浓度下自聚或交联并且因此溶胶胶凝的可能性随着时间而增加。

活性剂

活性剂可以包括(但不限于)抗微生物剂，诸如抗细菌剂；防污剂；消炎剂，诸如补体抑制剂，包括(但不限于)C1抑制剂，例如依库珠单抗(eculizumab)，和C5抑制剂；抗血栓形成剂，诸如抗凝血剂；以及其组合。举例来说，活性剂可以包括(但不限于)壳聚糖；葡聚糖；线性聚乙二醇(PEG)；环状聚乙二醇(PEG)；聚乙二醇衍生物，包括(但不限于)硫醇封端的PEG、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)封端的PEG以及胺封端的PEG；聚(N-乙烯吡咯烷酮)(PVP)和PVP衍生物，包括(但不限于)硫醇封端的PVP、胺封端的PVP以及羧基封端的PVP；肝素、分级肝素和未分级肝素，以及肝素衍生物，所述肝素衍生物包括(但不限于)依诺肝素(enoxaparin)、达肝素(dalteparin)以及亭扎肝素(tinzaparin)；季铵聚合物；白蛋白；聚乙烯亚胺；4-羟基香豆素衍生物，诸如华法林(warfarin)、杀鼠迷(coumatetralyl)、苯丙羟基香豆素(phenprocoumon)、醋硝香豆醇(acenocoumarol)、双羟香豆素(dicoumarol)、噻氯香豆醇(tioclomarol)以及溴鼠隆(brodifacoum)；以及前述物质的组合。在包含聚乙二醇、壳聚糖或肝素的实施方案中，分子量可以在约500Da至约1,000,000Da、或约1000Da至约500,000Da、约2000Da至约500,000Da、约2000Da至约250,000Da和/或约2000Da至约100,000Da的范围内。一般来说，活性剂包括官能团。适合的官能团包括(但不限于)亲核基团。亲核基团在本领域中是众所周知的并且可以包括(但不限于)羟基、烷氧化物、胺、亚硝酸盐、硫醇、硫醇盐、咪唑以及其组合。壳聚糖上的亲核基团包括胺和羟基；PEG和/或PEG衍生物上的亲核基团包括羟基、硫醇基、胺基；PVP衍生物上的反应基团包括羧基、硫醇基、胺基；肝素和肝素衍生物上的亲核基团包括羟基、羧酸酯以及硫酸酯。硫醇、胺以及羧基封端的PVP衍生物可以如下制备：通过用诸如巯基乙酸或巯基乙胺的适当链转移剂终止PVP聚合，或通过对羧基封端的PVP进一步衍生处理，诸如通过使羧基封端的PVP与半胱胺、继而与诸如三(2-羧乙基)膦(TCEP)或二硫苏糖醇(DTT)的还原剂反应。

据信，在三羟基苯基处理的衬底暴露于活性剂后，三羟基苯基上可用的任何反应性位点(即，苯基环上的反应基团和/或未经取代的碳)或其上的连接子化合物可以偶合至活性剂，从而将活性剂固定于衬底表面上。活性剂经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合三羟基苯基。通常，活性剂通过与三羟基苯基上的未经取代的碳形成一个或多个共价键或经由三羟基苯基上的反应基团偶合至包括三羟基苯基的化合物。三羟基苯基上的反应基团可以是可以与活性剂上的亲核物质反应的任何反应基团。三羟基苯基上的适合反应基团包括(但不限于)羧基、羧酸酯、酰胺、酰基卤、醛以及酯。三羟基苯基上的反应基团可以偶合至连接子化合物，例如，通过酯基转移或酰胺转移。酯基转移或酰胺转移可以任选地由活化剂化合物促进，诸如N,N'-二环己基碳化二亚胺(DCC)、N,N'-二异丙基碳化二亚胺(DIC)、羟基苯并三唑(HOBt)或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)。在共价键在活性剂与三羟基苯基的苯基环的未经取代的碳之间形成的实施方案中，据信，共价键可以通过迈克尔加成而形成。举例来说，活性剂壳聚糖可以经由活性剂上的羟基或胺基偶合至三羟基苯基，这个羟基或胺基与三羟基苯基的苯基环上的未经取代的碳共价结合。其它适合的活性剂有必要包括类似的亲核基团并且因此也可以按类似于壳聚糖的方式偶合至包括三羟基苯基的化合物。

在本发明的一个实施方案中，通过使三羟基苯基处理的引发衬底表面与活性剂接触而使活性剂偶合至三羟基苯基处理的引发衬底表面。活性剂可以在溶液中提供，或如果活性剂是液体，那么可以提供纯的活性剂。可以将三羟基苯基处理的引发衬底完全浸入活性剂的溶液中，例如，通过浸涂。或者，可以将引物化合物的溶液喷射或浇铸至三羟基苯基处理的引发衬底上，例如，通过旋转浇铸或喷射溶液，诸如雾化溶液。对于具有内腔的衬底，诸如管道，可以使溶液流入腔中以涂布其内部。

活性剂溶液的溶剂可以是能够充当活性剂的载剂的任何溶剂。举例来说，最常使用水，但还可以使用其它溶剂，包括(但不限于)醇、二醇、有机硫(诸如环丁砜)、醚(诸如乙醚和四氢呋喃)、卤烃(诸如氯仿和二氯甲烷)，以及前述物质的组合。在本文所公开的方法的一个实施方案中，当使活性剂偶合至三羟基苯基或连接子化合物时，活性剂的溶液在约5.5至约8.5或约6至约8的范围内或约7.5的pH下。活性剂的溶液可以进一步包括缓冲剂以将pH维持于如本领域中所熟知的前述范围内。用于维持这类pH的适合缓冲剂包括(但不限于)N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、3-{[三(羟甲基)甲基]氨基}丙磺酸(TAPS)、三(羟甲基)甲胺(Tris)、4-2-羟乙基-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)以及N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)。当然，还可以使用碳酸盐、磷酸盐以及其它已知的缓冲剂系统中的一者或多者用于维持相对较高的pH值。

在替代性实施方案中，三羟基苯基处理的引发衬底可以与具有较低pH的活性剂的溶液接触。举例来说，当使活性剂偶合至三羟基苯基或连接子化合物时，活性剂的溶液可以在约4至约5.5的范围内的pH下，例如，约4.0、约4.1、约4.2、约4.3、约4.4、约4.5、约4.6、约4.7、约4.8、约4.9、约5、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4和/或约5.5。用于在较低pH下偶合的适合活性剂包括(但不限于)肝素和壳聚糖。活性剂的溶液可以进一步包括缓冲剂以将pH维持于如本领域中所熟知的前述范围内。用于维持这类pH的适合缓冲剂包括乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、磷酸盐中的一者或多者，并且还可以使用其它已知的缓冲剂系统。

活性剂溶液中活性剂的浓度一般可以是任何浓度。通常选择活性剂的浓度以使得活性剂完全可溶于所选溶剂中，而不形成饱和活性剂溶液。一般优选较高浓度以减少使活性剂偶合至三羟基苯基所需的时间。例示性活性剂浓度可以在约0.0001至约100mg/ml、约0.001至约100mg/ml、约0.01至约100mg/ml、约0.05至约100mg/ml、0.0001至约90mg/ml、约0.0001至约80mg/ml、约0.0001至约70mg/ml、约0.0001至约60mg/ml、约0.0001至约50mg/ml、约0.001至约50mg/ml、约0.001至约40mg/ml、约0.001至约30mg/ml、约0.01至约30mg/ml、约0.01至约20mg/ml、约0.01至约15mg/ml、约0.01至约10mg/ml、约0.01至约5mg/ml、约0.05至约5mg/ml和/或约0.05至约3mg/ml的范围内，例如，约1mg/ml、约1.5mg/ml和/或约3mg/ml。

可以使三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂或活性剂的溶液接触和/或浸入活性剂或活性剂的溶液中持续适合于使活性剂与三羟基苯基处理的衬底的三羟基苯基偶合的任何持续时间。活性剂偶合至三羟基苯基处理的引发衬底的速率可以部分取决于活性剂溶液中活性剂的浓度、衬底表面与溶液体积比、溶液的离子强度、以及温度。三羟基苯基处理的衬底与活性剂或活性剂的溶液接触的持续时间可以针对用于在衬底上提供一层的任何适合的时段而变化，例如，当使用浸涂时约10秒至约24小时。当三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂的溶液接触的持续时间增至超过24小时(并且使用活性剂的前述例示性浓度之一)时，预期固定至衬底表面的活性剂的量有极小差异(相对于24小时的暴露时间)。在不打算受理论约束的情况下，虽然据信活性剂可以继续固定于三羟基苯基处理的引发衬底上，但预期在24小时后固定的活性剂的量将对固定有活性剂的所得衬底的活性(抗细菌、抗微生物等)具有极小影响。

在包括三羟基苯基的化合物包含三羟基苯基-连接子偶联物的本发明的实施方案中，活性剂可以经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合至/偶合至/缔合偶合至三羟基苯基的连接子。通常，活性剂通过与在三羟基苯基远端的连接子化合物的端基形成一个或多个共价键而偶合至与三羟基苯基偶合的连接子。当将偶合至活性剂的连接子化合物的基团是包括(但不限于)羧基、羧酸酯、酰胺、酰基卤、醛以及酯的反应基团时，据信，连接子经由连接子上的反应基团和活性剂上的亲核基团偶合至活性剂。进一步相信，当将偶合至活性剂的连接子的端基是诸如羟基、烷氧化物、胺、亚硝酸盐、硫醇以及硫醇盐的亲核物质时，连接子可以偶合至活性剂，包括(但不限于)肝素、壳聚糖、壳聚糖季铵盐，等等。

如上文所描述的“活性剂”涵盖活性剂-连接子偶联物。在活性剂包含活性剂-连接子偶联物的本发明的实施方案中，活性剂-连接子偶联物最初通过使连接子化合物上的亲核物质与活性剂的反应基团偶合或通过使活性剂上的亲核物质与连接子化合物上的反应基团偶合而形成，继而使三羟基苯基处理的衬底与活性剂-连接子偶联物的溶液接触。活性剂经由共价键形成、氢键形成、离子键形成、范德华相互作用或前述的组合吸附至/粘合/偶合至/缔合连接子化合物。连接子化合物可以是如本文先前所描述的任何连接子化合物。通常，活性剂通过与连接子化合物的端基形成一个或多个共价键而偶合至连接子化合物。据信，当连接子经由包括(但不限于)羧基、羧酸酯、酰胺、酰基卤、醛以及酯的反应基团偶合至活性剂时，连接子经由连接子上的反应基团和活性剂上的亲核基团偶合至活性剂。进一步相信，当连接子的反应基团是诸如羟基、烷氧化物、胺、亚硝酸盐、硫醇以及硫醇盐的亲核物质时，连接子可以经由连接子化合物上的亲核基团偶合至活性剂的反应基团，这种活性剂包括(但不限于)肝素、壳聚糖、壳聚糖季铵盐，等等。

活性剂-连接子偶联物可以通过使连接子化合物与活性剂在溶液中组合而形成。活性剂和/或连接子化合物的溶液可以在能够充当活性剂和/或连接子化合物的载剂的任何溶剂中制备。举例来说，最常使用水，但还可以使用其它溶剂，包括(但不限于)醇、二醇、醚(诸如乙醚和四氢呋喃)、卤烃(诸如氯仿和二氯甲烷)，以及前述物质的组合。

在前述实施方案的改进中，活性剂和/或连接子化合物的溶液在约5.5至约9.5或约8至约9的范围内、或约8.5、或约6至约8、或约7.5的pH下。活性剂的溶液和/或连接子化合物的溶液可以进一步包括缓冲剂以将pH维持于前述范围内，这种缓冲剂包括(但不限于)N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、3-{[三(羟甲基)甲基]氨基}丙磺酸(TAPS)、三(羟甲基)甲胺(Tris)以及N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)。当然，还可以使用柠檬酸盐、碳酸盐、乳酸盐、磷酸盐以及其它已知的缓冲剂系统中的一者或多者。

在替代性实施方案中，活性剂和/或连接子化合物的溶液可以维持于较低pH下。举例来说，当使活性剂偶合至连接子化合物以形成活性剂-连接子偶联物时，可以使用乙酸盐缓冲溶液，其具有在约4至约5.5的范围内、约4.1、约4.2、约4.3、约4.4、约4.5、约4.6、约4.7、约4.8、约4.9、约5、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4和/或约5.5的pH。用于在较低pH下偶合至连接子化合物的适合活性剂包括(但不限于)肝素和壳聚糖。活性剂和/或连接子化合物的溶液可以进一步包括缓冲剂以将pH维持于如本领域中所熟知的前述范围内。用于维持这类pH的适合缓冲剂包括乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、磷酸盐中的一者或多者，并且还可以使用其它已知的缓冲剂系统。

溶液中活性剂和连接子化合物的浓度可以是任何浓度。在一些实施方案中，可以将活性剂直接添加至连接子化合物的溶液中，而不首先形成活性剂溶液。在替代性实施方案中，可以将活性剂于活性剂溶液中提供至连接子化合物的溶液。通常选择浓度以使得活性剂和/或连接子化合物完全可溶于所选溶剂中，而不形成饱和溶液。例示性活性剂和/或连接子化合物浓度可以在约0.0001至约100mg/ml、约0.001至约100mg/ml、约0.01至约100mg/ml、约0.05至约100mg/ml、0.0001至约90mg/ml、约0.0001至约80mg/ml、约0.0001至约70mg/ml、约0.0001至约60mg/ml、约0.0001至约50mg/ml、约0.001至约50mg/ml、约0.001至约40mg/ml、约0.001至约30mg/ml、约0.01至约30mg/ml、约0.01至约20mg/ml、约0.01至约15mg/ml、约0.01至约10mg/ml、约0.01至约5mg/ml、约0.05至约5mg/ml和/或约0.05至约3mg/ml的范围内，例如，约1mg/ml、约1.5mg/ml和/或约3mg/ml。活性剂与连接子化合物的比率可以在约1:8至约8:1、约1:7至约7:1、约1:6至约6:1、约1:5至约5:1、约1:4至约4:1、约1:3至约3:1和/或约1:2至约2:1的范围内，例如，约1:1。

可以通过使三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂-连接子偶联物的溶液接触而使活性剂-连接子偶联物偶合至三羟基苯基处理的引发衬底。可以将三羟基苯基处理的引发衬底完全浸入活性剂-连接子偶联物的溶液中，例如，通过浸涂。或者，可以将活性剂-连接子偶联物的溶液喷射或浇铸至引发衬底上，例如，通过旋转浇铸或喷射溶液，诸如雾化溶液。对于具有内腔的衬底，诸如管道，可以使溶液流入腔中以涂布其内部。

活性剂-连接子偶联物溶液中活性剂-连接子偶联物的浓度可以是任何浓度。通常选择活性剂-连接子偶联物的浓度以使得活性剂-连接子偶联物完全可溶于所选溶剂中，而不形成饱和溶液。例示性活性剂-连接子偶联物浓度可以在约0.0001至约100mg/ml、约0.001至约100mg/ml、约0.01至约100mg/ml、约0.05至约100mg/ml、0.0001至约90mg/ml、约0.0001至约80mg/ml、约0.0001至约70mg/ml、约0.0001至约60mg/ml、约0.0001至约50mg/ml、约0.001至约50mg/ml、约0.001至约40mg/ml、约0.001至约30mg/ml、约0.01至约30mg/ml、约0.01至约20mg/ml、约0.01至约15mg/ml、约0.01至约10mg/ml、约0.01至约5mg/ml、约0.05至约5mg/ml和/或约0.05至约3mg/ml的范围内，例如，约1mg/ml、约1.5mg/ml和/或约3mg/ml。

可以使三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂-连接子偶联物的溶液接触和/或浸入活性剂-连接子偶联物的溶液中持续适合于使活性剂-连接子偶联物偶合至三羟基苯基处理的引发衬底的任何持续时间。据信，活性剂-连接子偶联物可以经由在活性剂远端的连接子化合物的端基和活性剂上的残余亲核基团中的任一者或两者偶合至三羟基苯基处理的引发衬底。进一步相信，活性剂-三羟基苯基偶联物可以偶合至三羟基苯基处理的引发衬底的三羟基苯基和引物化合物中的任一者或两者。在本发明的实施方案中，接触的持续时间可以是适合于在连接子或活性剂中的一者或多者与三羟基苯基处理的引发衬底的引物化合物和/或三羟基苯基中的一者或多者之间形成共价键的任何持续时间。活性剂-连接子偶联物偶合至三羟基苯基处理的引发衬底的速率可以部分取决于其活性剂-连接子偶联物溶液的浓度、衬底表面与溶液体积比、溶液的离子强度、溶液的pH、以及温度。三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂-连接子偶联物的溶液接触的持续时间可以针对用于使活性剂-连接子偶联物偶合至三羟基苯基处理的引发衬底的任何适合的时段而变化，例如，当使用浸涂时约10秒至约24小时。当衬底与活性剂-连接子偶联物的溶液接触的持续时间增至超过24小时(并且使用活性剂-连接子偶联物的前述例示性浓度之一)时，预期固定至衬底表面的活性剂的量有极小差异(相对于24小时的暴露时间)。在不打算受理论约束的情况下，虽然据信活性剂-连接子偶联物可以继续固定于衬底上，但预期在24小时后固定的活性剂的量将对固定有活性剂的所得衬底的活性(抗细菌、抗微生物等)具有极小影响。

具有任选的连接子的活性剂-三羟基苯基偶联物

在本发明的实施方案中，活性剂-三羟基苯基偶联物最初通过使活性剂的亲核物质与三羟基苯基上的反应基团偶合或通过使三羟基苯基的亲核物质与活性剂的反应基团偶合而形成，继而使引发衬底与活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液接触。活性剂-三羟基苯基偶联物可以通过使包括三羟基苯基的化合物与活性剂在溶液中组合而形成。如先前所描述，包括三羟基苯基的化合物包括三羟基苯基-连接子偶联物。因此，活性剂-三羟基苯基偶联物涵盖偶合至连接子化合物的活性剂，这些连接子化合物进一步偶合至三羟基苯基。偶合至连接子化合物的活性剂可以如上文针对活性剂-连接子偶联物所描述而形成，并且偶合至连接子化合物的包括三羟基苯基的化合物可以如上文针对三羟基苯基-连接子偶联物所描述而形成。这些然后可以分别与包括三羟基苯基的化合物或活性剂进一步反应，以形成活性剂-三羟基苯基偶联物。一般的活性剂-三羟基苯基偶联物可以由式(Va-c)和(VIa-c)表示：

其中X可以为卤素、胺、硫醇、醛、羧酸、羧酸酯、酰基卤、酯、丙烯酸酯、乙烯基、C1至C10支链或直链烷基胺、C1至C10支链或直链烷基硫醇、C1至C10支链或直链烷基醛、C1至C10支链或直链烷基羧酸、C1至C10支链或直链烷基羧酸酯、C1至C10支链或直链烷基酰基卤、C1至C10支链或直链烷基酯、或C1至C10支链或直链烷基丙烯酸酯，并且R为连接子化合物。关于所列取代基的碳链的长度，当使用水溶液时，链长通常为C1至C5(只要在所选的水性系统中达成溶解度即可)；当使用有机溶剂时，链长可以为C1至C10。根据化合物(Va-c)和(VIa-c)，可以在C₂、C₃、C₄、C₅以及C₆中的任何三者上提供三个羟基。举例来说，当包括三羟基苯基的化合物是羧酸，诸如没食子酸(并且因此X为羧基)时，活性剂-三羟基苯基偶联物可以具有式(Va)、(Vb)、(VIa)或(VIb)：

其中R为连接子化合物，并且活性剂(Active Agent)表示活性剂。此外，当包括三羟基苯基的化合物是没食子酸时，与根据(Va)、(Vb)、(VIa)以及(VIb)的活性剂-三羟基苯基偶联物一致，在C₃、C₄以及C₅上提供三个羟基，并且在羧基(IVa)或C₂或C₆之一(IVb)上提供连接子。当包括三羟基苯基的化合物是邻苯三酚时，活性剂-三羟基苯基偶联物可以具有式(Vc)或(VIc)：

其中R为连接子化合物，并且可以在C₂、C₃、C₄、C₅以及C₆中的任何连续三者上提供三个羟基。

在活性剂以纯液体提供的本发明的实施方案中，活性剂可以是其中形成活性剂-三羟基苯基偶联物的溶剂。在活性剂的溶液与包括三羟基苯基的化合物的溶液组合的本发明的实施方案中，活性剂和/或包括三羟基苯基的化合物的溶液可以在能够充当活性剂和/或包括三羟基苯基的化合物的载剂的任何溶剂中制备。举例来说，最常使用水，但还可以使用有机溶剂，包括(但不限于)醇、二醇、有机硫(诸如环丁砜)、醚(诸如乙醚和四氢呋喃)、烷烃、芳香族化物、卤烃(诸如氯仿和二氯甲烷)，以及前述物质的组合。

在前述实施方案的改进中，活性剂的溶液和/或包括三羟基苯基的化合物的溶液在约7.5至约9.5或约8至约9的范围内或约8.5的pH下。活性剂的溶液和/或包括三羟基苯基的化合物的溶液可以进一步包括缓冲剂以将pH维持于前述范围内，这种缓冲剂包括(但不限于)N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、3-{[三(羟甲基)甲基]氨基}丙磺酸(TAPS)、三(羟甲基)甲胺(Tris)以及N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)。当然，还可以使用柠檬酸盐、碳酸盐、乳酸盐、磷酸盐以及其它已知的缓冲剂系统中的一者或多者。在替代性实施方案中，活性剂的溶液和/或包括三羟基苯基的化合物的溶液可以具有较低pH。举例来说，乙酸盐缓冲溶液可以用于在约4至约5.5的范围内、约4.1、约4.2、约4.3、约4.4、约4.5、约4.6、约4.7、约4.8、约4.9、约5、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4和/或约5.5的pH下使活性剂沉积。用于在较低pH下在溶液中偶合至包括三羟基苯基的化合物的适合活性剂包括(但不限于)肝素。

溶液中活性剂和包括三羟基苯基的化合物的浓度一般可以是任何浓度。在一些实施方案中，可以将活性剂直接添加至包括三羟基苯基的化合物的溶液中，而不首先形成活性剂溶液。在替代性实施方案中，可以将活性剂于活性剂溶液中提供至包括三羟基苯基的化合物的溶液。通常选择浓度以使得活性剂和/或包括三羟基苯基的化合物完全可溶于所选溶剂中，而不形成饱和溶液。例示性活性剂和/或包括三羟基苯基的化合物浓度可以在约0.0001至约100mg/ml、约0.001至约100mg/ml、约0.01至约100mg/ml、约0.05至约100mg/ml、0.0001至约90mg/ml、约0.0001至约80mg/ml、约0.0001至约70mg/ml、约0.0001至约60mg/ml、约0.0001至约50mg/ml、约0.001至约50mg/ml、约0.001至约40mg/ml、约0.001至约30mg/ml、约0.01至约30mg/ml、约0.01至约20mg/ml、约0.01至约15mg/ml、约0.01至约10mg/ml、约0.01至约5mg/ml、约0.05至约5mg/ml和/或约0.05至约3mg/ml的范围内，例如，约1mg/ml、约1.5mg/ml和/或约3mg/ml。活性剂与包括三羟基苯基的化合物的比率可以取决于活性剂是小分子还是聚合物以及包括三羟基苯基的化合物是小分子还是聚合物而变化。举例来说，当活性剂是聚合物并且包括三羟基苯基的化合物是小分子时，一种活性剂可以偶合数千种包括三羟基苯基的化合物。或者，当活性剂是小分子并且包括三羟基苯基的化合物是聚合物时，一种包括三羟基苯基的化合物可以偶合至数千种活性剂。因此，活性剂与包括三羟基苯基的化合物的适合比率可以在约1:5,000至约5,000:1的范围内，包括所有中间范围，诸如约1:5至约5:1、约1:4至约4:1、约1:3至约3:1和/或约1:2至约2:1，例如，约1:1。

可以通过使引发衬底与活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液接触而使活性剂-三羟基苯基偶联物偶合至引发衬底。可以将引发衬底完全浸入活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液中，例如，通过浸涂。或者，可以将活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液喷射或浇铸至引发衬底上，例如，通过使用诸如雾化溶液的溶液旋转浇铸或喷射。对于具有内腔的衬底，诸如管道，可以使溶液流入腔中以涂布其内部。

活性剂-三羟基苯基偶联物溶液中活性剂-三羟基苯基偶联物的浓度可以是任何浓度。通常选择活性剂-三羟基苯基偶联物的浓度以使得活性剂-三羟基苯基偶联物完全可溶于所选溶剂中，而不形成饱和溶液。例示性活性剂-三羟基苯基偶联物浓度可以在约0.0001至约100mg/ml、约0.001至约100mg/ml、约0.01至约100mg/ml、约0.05至约100mg/ml、0.0001至约90mg/ml、约0.0001至约80mg/ml、约0.0001至约70mg/ml、约0.0001至约60mg/ml、约0.0001至约50mg/ml、约0.001至约50mg/ml、约0.001至约40mg/ml、约0.001至约30mg/ml、约0.01至约30mg/ml、约0.01至约20mg/ml、约0.01至约15mg/ml、约0.01至约10mg/ml、约0.01至约5mg/ml、约0.05至约5mg/ml和/或约0.05至约3mg/ml的范围内，例如，约1mg/ml、约1.5mg/ml和/或约3mg/ml。

可以使引发衬底与活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液接触和/或浸入活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液中持续适合于使活性剂-三羟基苯基偶联物的三羟基苯基偶合至引发衬底的任何持续时间。在本发明的实施方案中，持续时间可以是适合于形成引物化合物和活性剂-三羟基苯基偶联物的三羟基苯基的网状物的任何持续时间。活性剂-三羟基苯基偶联物与引发衬底偶合的速率可以部分取决于活性剂-三羟基苯基偶联物溶液中活性剂-三羟基苯基偶联物的浓度、衬底表面与溶液体积比、溶液的离子强度、溶液的pH、以及温度。引发衬底与活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液接触的持续时间可以针对用于使三羟基苯基与引发衬底偶合的任何适合的时段而变化，例如，当使用浸涂时约10秒至约24小时。当衬底与活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液接触的持续时间增至超过24小时(并且使用活性剂-三羟基苯基偶联物的前述例示性浓度之一)时，预期固定至衬底表面的活性剂的量有极小差异(相对于24小时的暴露时间)。在不打算受理论约束的情况下，虽然据信活性剂-三羟基苯基偶联物可以继续固定于衬底上，但预期在24小时后固定的活性剂的量将对固定有活性剂的所得衬底的活性(抗细菌、抗微生物)具有极小影响。

根据本发明的方法、衬底以及医用装置可以鉴于以下实施例而更好地理解，这些实施例仅意图说明这些方法、衬底以及医用装置并且不意味着以任何方式限制其范围。

实施例

实施例1

肝素浓度对肝素固定至聚砜衬底上的影响

将抗血栓形成剂肝素固定至聚砜衬底上。通过改变肝素溶液中肝素的浓度来分析肝素浓度对肝素固定于聚砜衬底上的影响。肝素溶液中肝素的浓度为0.1mg/mL、1.0mg/mL或5.0mg/mL。衬底如下制备。

将聚砜衬底浸入溶解于10mM Bicine(pH 8.5)中的壳寡糖引物化合物(1mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚砜衬底浸入其中的溶液24小时。将衬底从溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得引发衬底浸入溶解于10mM Bicine(pH 8.5)中的没食子酸(1mg/mL)的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液24小时。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入溶解于补充有600mM NaCl的10mM至300mM乙酸盐(pH 4.5)的肝素(0.1mg/mL、1.0mg/mL或5.0mg/mL肝素)的溶液中。温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的肝素溶液24小时。将衬底从肝素溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗，得到在其表面上固定有肝素的聚砜衬底。

因此，实施例1说明了肝素固定至根据本发明的聚砜衬底上。使用XPS并且经由固定于衬底表面上的阴离子肝素的阿尔新蓝染色来确认肝素的固定。

图1示出了用壳寡糖、没食子酸以及不同水平的肝素改性的聚砜表面的x射线光电子光谱全谱图。“PS”是未处理的聚砜表面，“GA”是根据实施例1制备的具有壳寡糖和没食子酸的聚砜衬底。“0.1”是根据实施例1制备的用壳寡糖、没食子酸以及0.1mg/mL肝素溶液改性的聚砜衬底。“1.0”是根据实施例1制备的用壳寡糖、没食子酸以及1.0mg/mL肝素溶液改性的聚砜衬底。“5.0”是根据实施例1制备的用壳寡糖、没食子酸以及5.0mg/mL肝素溶液改性的聚砜衬底。O1s表示氧信号，N1s表示氮信号，C1s表示碳信号，并且S2s和S2p表示硫信号。N1s信号在包括壳寡糖-没食子酸层的所有表面上观测到。S1s和S2p峰不存在于“GA”迹线中，指示壳寡糖和没食子酸的层已经沉积于衬底表面上。存在于“0.1”、“1.0”以及“5.0”迹线中的S1s和S2p峰确认肝素已经固定于衬底上。

元素组成可以获自XPS分析并且组成数据提供于下表中。

元素数据进一步表明，如由所检测的硫的百分比确定的固定于浸没入肝素溶液中24小时的衬底上的肝素量并不强烈依赖于肝素溶液中的肝素在所测试范围内的浓度。

实施例2

肝素固定至聚砜衬底上

将抗血栓形成剂肝素固定至聚砜衬底上。将聚砜衬底浸入溶解于10mM Bicine缓冲剂(pH 8.4)中的壳寡糖引物化合物(1mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚砜衬底浸入其中的溶液90分钟。将衬底从溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得引发衬底浸入没食子酸(1.5mg/mL)于100mM Bicine缓冲剂(pH 7.6)中的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液90分钟。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入肝素(1mg/mL)于0.3M乙酸钠和0.6M氯化钠溶液中的溶液中。温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的肝素溶液约12小时。将衬底从肝素溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗，得到在其表面上固定有肝素的聚砜衬底。如实施例10中所描述，使用固定于衬底上的阴离子肝素的阿尔新蓝染色来确认肝素的固定。

因此，实施例2说明了肝素固定至根据本发明的聚砜衬底上。

实施例3

固定有肝素的聚砜衬底的抗血栓活性

将抗血栓形成剂肝素固定至聚砜衬底上。将聚砜衬底浸入溶解于10mM Bicine缓冲剂(pH 8.4)中的壳寡糖引物化合物(1.3mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚砜衬底浸入其中的溶液15分钟。将衬底从溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得引发衬底浸入溶解于100mM Bicine缓冲剂(pH 7.7)中的没食子酸(3.5mg/mL)的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液30分钟。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入肝素(1.1mg/mL)于0.3M乙酸钠和0.6M氯化钠溶液中的溶液中。温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的肝素溶液30分钟。将衬底从肝素溶液中移出并且使其干燥，得到在其表面上固定有肝素的聚砜衬底。

通过测定血液样品中凝血酶原至凝血酶的转化率来评估固定有肝素的聚砜衬底的抗血栓形成活性。测定含有未涂布的聚砜衬底(指定为PS)的血液样品、没食子酸处理的引发对照衬底(根据实施例5中用于形成没食子酸处理的引发衬底的程序制备，指定为COS/GA)、以及含有根据本发明的固定有活性剂肝素(指定为1mg/mL肝素)的聚砜衬底的样品中凝血酶原至凝血酶的转化率，并且与对照血液样品(指定为血液)中的凝血酶转化率相比较。如图2中所示，当在血液中孵育聚砜衬底时，包含未涂布的聚砜衬底的血液样品相对于对照血液样品并不展示降低的凝血酶转化率。相比之下，包含固定有肝素(1mg/mL肝素)的聚砜衬底的血液样品相对于包含未处理的聚砜衬底的样品与对照血液样品显示改善的抗血栓形成活性。

使用Siemens EnzygnostF1+2(单克隆)试验试剂盒测量F 1+2。在凝血酶原转化成活性凝血酶期间，在凝血级联期间形成F1+2片段。F1+2片段的测量允许定量所形成的凝血酶。通过在2mL含有0.4U/mL肝素的人类血液中在轻微搅动下孵育聚砜衬底2小时来测定F1+2水平。经过2小时获取血液样品的等分试样以测定凝血酶随时间的转化率。然后，根据用于测定F1+2的Siemens EnzygnostF1+2(单克隆)试验试剂盒的包装说明书来操作血液样品。

因此，实施例3展示了肝素固定至聚砜衬底上并且在其固定之后肝素的活性保留。虽然不含肝素的聚砜衬底PS被凝血酶污染，并且没食子酸处理的引发对照衬底COS/GA被凝血酶污染，但用肝素(1mg/mL肝素)处理的聚砜衬底相对于PS有利地展示降低的凝血酶转化率，从而确认抗血栓形成剂肝素固定于衬底表面上并且在固定于那个表面上之后其活性保留。

实施例4

固定有肝素的聚砜衬底的抗血栓活性

将抗血栓形成剂肝素固定至聚砜衬底上。将聚砜衬底浸入溶解于10mM Bicine缓冲剂(pH 8.4)中的壳寡糖引物化合物(0.1mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚砜衬底浸入其中的溶液10分钟。将衬底从溶液中移出。将所得引发衬底浸入溶解于100mMBicine缓冲剂(pH 7.7)中的没食子酸(1mg/mL)的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液30分钟。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入肝素(5mg/mL)于0.3M乙酸钠和0.6M氯化钠溶液中的溶液中。温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的肝素溶液30分钟。将衬底从肝素溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗，得到在其表面上固定有肝素的聚砜衬底。

通过测定血液样品中凝血酶原至凝血酶的转化率来评估固定有肝素的聚砜衬底的抗血栓形成活性。测定含有未涂布的聚砜衬底(指定为PS)的血液样品、没食子酸处理的引发对照衬底(根据实施例5中用于形成没食子酸处理的引发衬底的程序制备，指定为COS/GA)、以及含有根据本发明的固定有活性剂肝素(指定为5mg/mL肝素)的聚砜衬底的样品中凝血酶原至凝血酶的转化率，并且与对照血液样品(指定为血液)中的凝血酶转化率相比较。如图2中所示，当在血液中孵育聚砜衬底时，含有未涂布的聚砜衬底的血液样品并不展示降低的凝血酶转化率。相比之下，含有固定有肝素的聚砜衬底的血液样品相对于含有未处理的聚砜衬底的样品与对照血液样品显示改善的抗血栓形成活性。

如实施例3中所描述，使用Siemens EnzygnostF1+2(单克隆)试验试剂盒测量F1+2。

因此，实施例4展示了肝素固定至聚砜衬底上并且在其固定之后肝素的活性保留。虽然不含肝素的聚砜衬底PS被凝血酶污染，并且没食子酸处理的引发对照衬底COS/GA被凝血酶污染，但用肝素(5mg/mL肝素)处理的聚砜衬底相对于PS有利地展示降低的凝血酶转化率，从而确认抗血栓形成剂肝素固定于衬底表面上并且在固定于那个表面上之后其活性保留。

实施例5

固定有肝素的聚砜衬底的抗血栓活性

将抗血栓形成剂肝素固定至聚砜衬底上。将聚砜衬底浸入溶解于10mM Bicine(pH8.4)中的壳寡糖引物化合物(5mg/mL，10,000MW)的溶液中。在室温下温和搅动聚砜衬底浸入其中的溶液24小时。将衬底从溶液中移出。将所得引发衬底浸入溶解于100mM Bicine(pH7.7)中的没食子酸(2.5mg/mL)的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液20小时。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入肝素(1mg/mL)于0.3M乙酸钠和0.6M氯化钠溶液(pH 5.17)中的溶液中。温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的肝素溶液24小时。将衬底从肝素溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗并在层流罩中干燥，得到在其表面上固定有肝素的聚砜衬底。

通过测定血液样品中凝血酶原至凝血酶的转化率来评估根据本发明的固定有活性剂肝素的聚砜衬底的抗血栓形成活性。测定含有未涂布的聚砜衬底(指定为PS)的血液样品、没食子酸处理的引发对照衬底(指定为COS/GA)、以及含有固定有活性剂肝素(指定为24h肝素)的聚砜衬底的样品的凝血酶原至凝血酶的转化率。将前述衬底中的每一者与对照血液样品(指定为血液)中的凝血酶转化率相比较。在血液中孵育衬底并且测定凝血酶转化率。如图2中所示，未处理的聚砜衬底和没食子酸处理的引发衬底相对于对照血液样品并不展示改善的抗血栓形成活性(即，降低的凝血酶转化率)，然而，固定有肝素(24h肝素)的聚砜衬底相对于未处理的聚砜衬底有利地展示降低的凝血酶转化率，从而确认抗血栓形成剂肝素固定于衬底表面上。此外，图2示出了使用相同浓度的肝素但较短浸渍时间(1mg/mL，30分钟，实施例3)将肝素固定至其的衬底与使用24小时浸渍时间(24h肝素，实施例5)将肝素固定至其的衬底相比具有类似的抗血栓形成活性。

因此，实施例5显示肝素固定至聚砜衬底上并且在其固定之后肝素的活性保留。

实施例6

固定于聚砜/聚异戊二烯衬底上的肝素对血液和洗涤的稳定性

除了利用浓HCl:30％H₂O₂(1:1)的混合物预处理衬底以增强湿润性之外，如实施例5中所描述来制备根据本发明的固定有肝素的多组分聚砜和聚异戊二烯流动池。将这个池用HCl:过氧化物溶液填充并且使其静置约5分钟。然后用蒸馏水清洗这个池。然后，如实施例5中所描述将肝素固定至衬底。通过视觉和显微镜检查来评估根据本发明的固定有活性剂肝素的聚砜/聚异戊二烯衬底的抗血栓形成活性。设置实验以针对血栓形成比较未改性的聚砜/聚异戊二烯流动池与固定有肝素的聚砜/聚异戊二烯流动池。两个血液环路装配有硅酮管道、血液储存器以及聚砜/聚异戊二烯流动池，一个环路具有未改性的流动池并且一个环路具有肝素改性的池。利用滚压泵以在连续环路中提供50mL/min的流动速率。用约175mL血液填充并引发环路，使血液再循环2小时。相同的血源用于两个环路以去除供体的可变性。在完成再循环之后，用盐水冲洗环路，然后用加热至85℃的>400mL/min流量的水洗涤不少于60分钟的时段。分析两个池，然后将这个过程重复3个周期。在完成最后一个周期之后，光学分析显示在肝素改性的流动池上没有可见的血栓。相比之下，未改性的流动池具有大面积的肉眼可见的血栓。使用SEM的分析显示在未改性的流动池上非常密集的纤维蛋白结构。相比之下，肝素改性的流动池仅含有除了在SEM中在高放大率下之外都不可见的少量纤维蛋白结构。

因此，实施例6展示根据本发明的固定有活性剂肝素的衬底可以有利地加以洗涤和再使用。

实施例7

使用壳寡糖作为引物化合物将肝素固定至聚碳酸酯衬底上

将抗血栓形成剂肝素固定至聚碳酸酯衬底上。将聚碳酸酯衬底浸入溶解于10mMBicine缓冲剂(pH 8.0)中的壳寡糖引物化合物(1mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚碳酸酯衬底浸入其中的溶液24小时。将衬底从溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得引发衬底浸入没食子酸(2mg/mL)于100mM Bicine缓冲剂(pH 7.5)中的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液24小时。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入肝素(1mg/mL)于0.3M乙酸钠和0.6M氯化钠溶液中的溶液中。温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的肝素溶液约24小时。将衬底从肝素溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗，得到在其表面上固定有肝素的聚碳酸酯衬底。

因此，实施例7说明了肝素固定至根据本发明的聚碳酸酯衬底上。如实施例10中所描述，使用固定于衬底上的阴离子肝素的阿尔新蓝染色来确认肝素的固定。

实施例8

使用聚乙烯亚胺作为引物化合物将肝素固定至聚碳酸酯衬底上

将抗血栓形成剂肝素固定至聚碳酸酯衬底上。将聚碳酸酯衬底浸入溶解于10mMBicine缓冲剂(pH 8.0)中的聚乙烯亚胺(PEI)引物化合物(1mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚碳酸酯衬底浸入其中的溶液24小时。将衬底从溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得引发衬底浸入没食子酸(2mg/mL)于100mM Bicine缓冲剂(pH 7.5)中的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液24小时。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入肝素(1mg/mL)于0.3M乙酸钠和0.6M氯化钠溶液中的溶液中。温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的肝素溶液约24小时。将衬底从肝素溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗，得到在其表面上固定有肝素的聚碳酸酯衬底。

因此，实施例8说明了肝素固定至根据本发明的聚碳酸酯衬底上。如实施例10中所描述，使用固定于衬底上的阴离子肝素的阿尔新蓝染色来确认肝素的固定。

实施例9

确认包括三羟基苯基的化合物偶合至引物化合物的硝酸银测试

使多种包括三羟基苯基(THP)的化合物偶合至引发聚砜衬底，并且使用硝酸银测试来确认THP固定至衬底。将聚砜衬底浸入溶解于10mM Bicine缓冲剂(pH 8.0)中的壳寡糖引物化合物(1mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚砜衬底浸入其中的溶液24小时。将衬底从溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得引发衬底浸入溶解于100mM Bicine缓冲剂(pH 7.5)中的选自没食子酸(2mg/mL)、邻苯三酚(2mg/mL)或2,4,6-三羟基苯甲醛(2mg/mL)的包括三羟基苯基(THP)的化合物之一的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的THP溶液24小时。将衬底从THP溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。在温和搅动下，将所得THP处理的引发衬底浸入50mM硝酸银溶液的溶液中约16小时。将衬底从硝酸银溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将预期，如果THP偶合至引发衬底，那么包括三羟基苯基的化合物上的任何还原基团使硝酸银还原。发现，THP已经使银离子还原成银纳米粒子，使得聚砜衬底呈棕色。

因此，实施例9印证了经由使THP偶合至壳寡糖同时维持其反应性，多样的THP基团固定至根据本发明的聚砜衬底上的确认结果。

实施例10

确认肝素固定于衬底上的阿尔新蓝测试

将抗血栓形成剂肝素固定至聚碳酸酯衬底上。将聚碳酸酯衬底浸入溶解于10mMBicine缓冲剂(pH 8.0)中的壳寡糖引物化合物(1mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚碳酸酯衬底浸入其中的溶液24小时。将衬底从溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得引发衬底浸入没食子酸(2mg/mL)于100mM Bicine缓冲剂(pH 7.5)中的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液24小时。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入肝素(1mg/mL)于0.3M乙酸钠和0.6M氯化钠溶液中的溶液中。温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的肝素溶液约24小时。将衬底从肝素溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。在温和搅动下，将在其表面上固定有肝素的所得聚碳酸酯衬底浸入阿尔新蓝溶液中约3小时。将衬底从阿尔新蓝溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将预期，固定于衬底上的任何阴离子活性剂(诸如肝素)与阳离子阿尔新蓝染料复合。发现，肝素与阿尔新蓝形成复合物，使得聚砜衬底染蓝色。

因此，实施例10说明了肝素固定至根据本发明的聚碳酸酯衬底上的确认结果。

实施例11

聚乙二醇固定于聚砜衬底上

将防污剂聚乙二醇(PEG)固定至聚砜衬底上。将聚砜衬底浸入溶解于10mM Bicine(pH 8.4)中的壳寡糖引物化合物(1mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚砜衬底浸入其中的溶液24小时。将衬底从溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得引发衬底浸入溶解于100mM Bicine(pH 7.7)中的没食子酸(2.5mg/mL)的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液24小时。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入NH2封端的PEG、SH封端的PEG和/或NHS封端的PEG(1mg/mL，5,000MW)于0.3M乙酸钠和0.6M氯化钠溶液(pH 5.17)中的溶液中。温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的PEG溶液24小时。将衬底从PEG溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗，得到在其表面上固定有PEG的聚砜衬底。

因此，实施例11说明了根据本发明可以达成聚乙二醇固定至聚砜衬底上的方式。

实施例12

聚乙烯吡咯烷酮固定于聚砜衬底上

将防污剂聚乙烯吡咯烷酮(PVP)固定至聚砜衬底上。将聚砜衬底浸入溶解于10mMBicine(pH 8.4)中的壳寡糖引物化合物(1mg/mL，10,000Mw)的溶液中。在室温下温和搅动聚砜衬底浸入其中的溶液24小时。将衬底从溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得引发衬底浸入溶解于100mM Bicine(pH 7.7)中的没食子酸(2.5mg/mL)的溶液中。在室温下温和搅动引发衬底浸入其中的没食子酸溶液24小时。将衬底从没食子酸溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗。将所得没食子酸处理的引发衬底浸入NH2封端的PVP(1mg/mL，5,000MW)于10mM Bicine(pH 8.5)中的溶液中。在环境温度下温和搅动没食子酸处理的引发衬底浸入其中的PVP溶液至多24小时。将衬底从PVP溶液中移出并且用经过过滤的蒸馏水冲洗，得到在其表面上固定有PVP的聚砜衬底。

因此，实施例12说明了根据本发明可以达成聚乙烯吡咯烷酮固定至聚砜衬底上的方式。

当然，其它活性剂、连接子化合物以及包括三羟基苯基的化合物可以用于前述程序中。

Claims (61)

1.一种将活性剂固定于衬底表面上的方法，其包括以下步骤：

使包括亲核基团的引物化合物沉积于衬底上，从而形成引发衬底；

使所述引发衬底与包括三羟基苯基的化合物的溶液接触，从而形成三羟基苯基处理的引发衬底；以及

使所述三羟基苯基处理的引发衬底与包括亲核基团的活性剂的溶液接触，从而形成在其表面上固定有活性剂的衬底，并且所述包括三羟基苯基的化合物选自由以下组成的群组：没食子酸、没食子酸酰胺、5-甲基-苯-1,2,3-三酚、3,4,5-三羟基苯甲醛、2,3,4-三羟基苯甲醛、没食子苯乙酮、3,4,5-三羟基苯甲酰胺、2,3,4-三羟基苯甲酸、5-羟基多巴胺盐酸盐、没食子酸甲酯、邻苯三酚、前述物质的盐，以及其组合。

2.一种将活性剂固定于衬底表面上的方法，其包括以下步骤：

使包括亲核基团的引物化合物沉积于所述衬底上，从而形成引发衬底；

使包括三羟基苯基的化合物与包括亲核基团的活性剂在溶液中组合，从而形成活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液；以及

使所述引发衬底与所述活性剂-三羟基苯基偶联物的溶液接触，从而使所述活性剂-三羟基苯基偶联物的所述三羟基苯基偶合至所述引发衬底并且形成在其表面上固定有活性剂的衬底，并且所述包括三羟基苯基的化合物选自由以下组成的群组：没食子酸、没食子酸酰胺、5-甲基-苯-1,2,3-三酚、3,4,5-三羟基苯甲醛、2,3,4-三羟基苯甲醛、没食子苯乙酮、3,4,5-三羟基苯甲酰胺、2,3,4-三羟基苯甲酸、5-羟基多巴胺盐酸盐、没食子酸甲酯、邻苯三酚、前述物质的盐，以及其组合。

3.如权利要求1所述的方法，其进一步包括以下步骤：用水洗涤所述引发衬底，从而形成经过洗涤的引发衬底；以及在使所述引发衬底与所述包括三羟基苯基的化合物的溶液接触之前，使氮气流过所述经过洗涤的引发衬底。

4.如权利要求1所述的方法，其进一步包括以下步骤：用水洗涤所述三羟基苯基处理的引发衬底，从而形成经过洗涤的三羟基苯基处理的引发衬底；以及在使所述三羟基苯基处理的引发衬底与活性剂的溶液接触之前，使氮气流过所述经过洗涤的三羟基苯基处理的引发衬底。

5.如权利要求1所述的方法，其进一步包括以下步骤：在使所述三羟基苯基处理的衬底与活性剂的溶液接触之前，使所述三羟基苯基处理的引发衬底与连接子化合物的溶液接触，从而使所述连接子化合物偶合至所述三羟基苯基处理的引发衬底的所述三羟基苯基和/或所述引物化合物。

6.如权利要求1或2所述的方法，其中所述衬底选自由以下组成的群组：金属衬底、聚合物衬底以及其组合。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述衬底是金属衬底。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述金属选自由以下组成的群组：不锈钢、钴、钛、镍、锆、钽、铬、钨、钼、锰、铁、钒、铌、铪、铝、锡、钯、钌、铱、铑、金、银、铂、前述物质的氧化物、前述物质的合金，以及前述物质的组合。

9.如权利要求6所述的方法，其中所述衬底是聚合物衬底。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述聚合物选自由以下组成的群组：丙烯腈丁二烯苯乙烯、聚丙烯腈、聚酰胺、聚酯、聚醚醚酮、聚醚酰亚胺、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚偏二氯乙烯、聚醚、聚砜、硅酮、聚二甲基硅氧烷、聚四氟乙烯，以及其掺合物和共聚物。

11.如权利要求1或2所述的方法，其中使包括亲核基团的引物化合物沉积于衬底上包括使所述衬底与所述引物化合物的溶液接触，所述方法进一步包括以下步骤：在使所述衬底与所述引物化合物的溶液接触之前，对所述衬底的表面进行改性。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述衬底的表面是通过用选自由等离子体处理、电晕处理以及化学处理组成的群组的处理对所述衬底的表面进行处理来改性。

13.如权利要求1或2所述的方法，其中所述衬底是无机氧化物衬底。

14.如权利要求1或2所述的方法，其中所述衬底包含医用装置或医用装置组件的表面。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述医用装置包含体外血液回路或体外血液回路的组件。

16.如权利要求14所述的方法，其中所述衬底包含选自由以下组成的群组的医用装置或医用装置组件的表面：流体袋、隔片、活塞、透析机组、留置装置、手术工具、垫圈以及药物重构装置。

17.如权利要求1或2所述的方法，其中所述衬底与引物化合物的溶液接触持续介于10秒至24小时之间的时段。

18.如权利要求1或2所述的方法，其中所述引物化合物选自由以下组成的群组：寡糖、聚胺、氨基官能化硅烷、巯基硅烷以及其组合。

19.如权利要求1或2所述的方法，其中所述活性剂选自由以下组成的群组：抗微生物剂、防污剂、消炎剂、抗血栓形成剂以及其组合。

20.如权利要求1或2所述的方法，其中所述活性剂包含抗微生物剂，并且所述抗微生物剂是抗细菌剂。

21.如权利要求1或2所述的方法，其中所述活性剂包含抗血栓形成剂，并且所述抗血栓形成剂是抗凝血剂。

22.如权利要求1或2所述的方法，其中所述活性剂是消炎剂，并且所述消炎剂是补体抑制剂。

23.如权利要求19所述的方法，其中所述活性剂选自由以下组成的群组：壳聚糖、线性聚乙二醇、环状聚乙二醇、聚乙二醇衍生物、未分级肝素、肝素衍生物、季铵聚合物、白蛋白、聚乙烯亚胺、4-羟基香豆素衍生物，以及前述物质的组合。

24.如权利要求1或2所述的方法，其中所述活性剂是肝素。

25.如权利要求11所述的方法，其中所述引物化合物的溶液在7.5至9.5的范围内的pH下。

26.如权利要求1或2所述的方法，其中所述包括三羟基苯基的化合物的溶液在7.5至9.5的范围内的pH下。

27.如权利要求1或2所述的方法，其中活性剂的溶液在3至9.5的范围内的pH下。

28.如权利要求1所述的方法，其中所述三羟基苯基在所述包括三羟基苯基的化合物与所述引物化合物之间形成一个或多个共价键，从而形成所述三羟基苯基处理的引发衬底。

29.如权利要求1或2所述的方法，其中所述活性剂与所述包括三羟基苯基的化合物形成一个或多个共价键，从而形成所述在其表面上固定有活性剂的衬底。

30.一种在其表面上固定有活性剂的衬底，所述衬底在所述衬底表面上包含包括亲核基团的引物化合物的层，其中所述引物化合物的层包括与其偶合的包括三羟基苯基的化合物，并且其中所述包括三羟基苯基的化合物包括与其偶合的包括亲核基团的活性剂，从而形成在其表面上固定有活性剂的衬底，并且所述包括三羟基苯基的化合物选自由以下组成的群组：没食子酸、没食子酸酰胺、5-甲基-苯-1,2,3-三酚、3,4,5-三羟基苯甲醛、2,3,4-三羟基苯甲醛、没食子苯乙酮、3,4,5-三羟基苯甲酰胺、2,3,4-三羟基苯甲酸、5-羟基多巴胺盐酸盐、没食子酸甲酯、邻苯三酚、前述物质的盐，以及其组合。

31.如权利要求30所述的衬底，其中所述衬底是金属或聚合的。

32.如权利要求30所述的衬底，其进一步包含偶合至所述三羟基苯基和/或所述引物化合物的连接子化合物，其中所述连接子化合物包括与其偶合的活性剂，从而形成在其表面上固定有活性剂的衬底。

33.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中衬底上的引物层具有在0.1nm至100μm范围内的厚度。

34.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中所述引物选自由以下组成的群组：寡糖、聚胺、氨基官能化硅烷以及其组合。

35.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中所述活性剂选自由以下组成的群组：抗微生物剂、防污剂、消炎剂、抗血栓形成剂，以及前述物质的组合。

36.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中所述活性剂包含抗微生物剂，并且所述抗微生物剂是抗细菌剂。

37.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中所述活性剂包含抗血栓形成剂，并且所述抗血栓形成剂是抗凝血剂。

38.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中所述活性剂包含消炎剂，并且所述消炎剂是补体抑制剂。

39.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中所述活性剂选自由以下组成的群组：壳聚糖、葡聚糖、聚乙二醇衍生物、PEG、聚(N-乙烯吡咯烷酮)(PVP)、硫醇封端的PVP、胺封端的PVP、羧基封端的PVP、肝素、肝素衍生物、季铵聚合物、白蛋白、聚乙烯亚胺、4-羟基香豆素衍生物，以及前述物质的组合。

40.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中所述引物化合物共价结合至所述三羟基苯基。

41.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中所述三羟基苯基共价结合至所述活性剂。

42.一种医用装置，其包含如权利要求30至41中任一项所述的衬底。

43.如权利要求42所述的医用装置，其中所述医用装置包含体外血液回路。

44.如权利要求42所述的医用装置，其中所述医用装置选自由以下组成的群组：管道、流体袋、隔片、活塞、夹钳、过滤器以及针。

45.如权利要求42所述的医用装置，其中所述医用装置包含管道，所述衬底包含聚砜，所述引物化合物包含寡糖，并且所述活性剂包含肝素。

46.如权利要求1或2所述的方法，其中使引物化合物沉积于衬底上的步骤包括使衬底与引物化合物的溶液接触，从而形成引发衬底。

47.如权利要求13所述的方法，其中所述无机氧化物包含二氧化硅。

48.如权利要求1或2所述的方法，其中所述包括三羟基苯基的化合物包含没食子酸。

49.如权利要求45所述的医用装置，其中所述包括三羟基苯基的化合物是没食子酸。

50.如权利要求45所述的医用装置，其中所述包括三羟基苯基的化合物是邻苯三酚。

51.如权利要求42所述的医用装置，其中所述衬底是无机氧化物衬底。

52.如权利要求42所述的医用装置，其中所述衬底是陶瓷衬底。

53.如权利要求42所述的医用装置，其中所述衬底是半导体衬底。

54.如权利要求1或2所述的方法，其中所述衬底是陶瓷衬底。

55.如权利要求1或2所述的方法，其中所述衬底是半导体衬底。

56.如权利要求14所述的方法，其中所述衬底包含选自由以下组成的群组的医用装置或医用装置组件的表面：气管套管、鼻胃管以及饲管。

57.如权利要求14所述的方法，其中所述衬底包含选自由以下组成的群组的医用装置或医用装置组件的表面：过滤装置、透析连接器、医用泵、泵壳体、管道以及硅酮O形环。

58.如权利要求14所述的方法，其中所述衬底包含选自由以下组成的群组的医用装置或医用装置组件的表面：过滤器、导管、注射器、手术缝合线、以及腹塞。

59.如权利要求14所述的方法，其中所述衬底包含选自由以下组成的群组的医用装置或医用装置组件的表面：植入物。

60.如权利要求19所述的方法，其中所述活性剂是分级肝素。

61.如权利要求30至32中任一项所述的衬底，其中所述活性剂选自由以下组成的群组：依诺肝素、达肝素、亭扎肝素、华法林、杀鼠迷、苯丙羟基香豆素、醋硝香豆醇、双羟香豆素、噻氯香豆醇、溴鼠隆，以及前述物质的组合。