PT1339678E - Agonistas selectivos do receptor ep4 no tratamento de osteoporose - Google Patents

Description

ΡΕ1339678 1 DESCRIÇÃO "AGONISTAS SELECTIVOS DO RECEPTOR EP4 NO TRATAMENTO DE OSTEOPOROSE"

Antecedentes da Invenção

Esta invenção diz respeito a agonistas de prostaglandina selectivos do receptor EP4, combinações, métodos, estojos e composições farmacêuticas que compreendem os referidos agonistas de prostaglandina que são úteis para prevenir a perda óssea, repor ou aumentar a massa óssea e acentuar o restabelecimento do osso, incluindo o tratamento de condições que se apresentam com baixa massa óssea e/ou deficiências ósseas em vertebrados, e particularmente mamíferos, incluindo humanos. A osteoporose é uma doença sistémica do esqueleto, caracterizada por baixa massa óssea e deterioração do tecido ósseo, com um consequente aumento da fragilidade do osso e susceptibilidade à fractura. Nos E.U.A., a condição afecta mais de 25 milhões de pessoas e causa mais de 1,3 milhões de fracturas em cada ano, incluindo 500 000 fracturas da coluna, 250 000 da bacia e 240 000 do pulso anualmente. As fracturas da bacia constituem a consequência mais séria da osteoporose, com 5-20% de pacientes morrendo dentro de um ano e mais de 50% de sobreviventes ficando incapacitados. 2 ΡΕ1339678

Os idosos estão em maior risco de osteoporose e o problema é por conseguinte prognosticado como aumentando significativamente com o envelhecimento da população. A incidência da fractura a nivel mundial está prevista aumentar três vezes ao longo dos próximos 60 anos e um estudo estima que haverá 4,5 milhões de fracturas da bacia no mundo em 2050.

As mulheres têm maior risco de osteoporose que os homens. As mulheres experimentam uma aceleração aguda de perda óssea durante os cinco anos que se seguem à menopausa. Outros factores que aumentam o risco incluem o fumo, abuso do álcool, um estilo de vida sedentário e baixa entrada de cálcio.

Existem correntemente dois tipos principais de terapia farmacêutica para o tratamento da osteoporose. O primeiro é o uso de compostos anti-reabsortivos para reduzir a reabsorção de tecido ósseo. O estrogénio é um exemplo de um agente anti-reabsortivo. É conhecido que o estrogénio reduz as fracturas. Em aditamento, Black et al. em EP 0605 193A1 reportam que o estrogénio, particularmente quando tomado oralmente, baixa os niveis de LDL no plasma e aumenta os de lipoproteinas de alta densidade (HDL's) benéficas. Contudo, o estrogénio falhou a repor a massa óssea para niveis de adulto jovem no esqueleto osteoporótico 3 ΡΕ1339678 estabelecido. Além disso, a terapia de estrogénio a longo prazo, contudo, tem sido implicada numa variedade de desordens, incluindo um aumento no risco de cancro uterino, cancro do endométrio e possibilidade de cancro da mama, o que é causa de muitas mulheres evitarem este tratamento. Os efeitos secundários indesejáveis significativos associados com a terapia de estrogénio comportam a necessidade de se desenvolverem terapias alternativas para a osteoporose que tenham o efeito desejável sobre o LDL do soro mas não causem efeitos indesejáveis.

Um segundo tipo de terapia farmacêutica para o tratamento da osteoporose é o uso de agentes anabólicos para promover a formação do osso e aumentar a massa óssea. Desta classe de agentes espera-se que restaure o osso do esqueleto osteoporótico estabelecido.

Em aditamento à osteoporose, aproximadamente 20-25 milhões de mulheres e um número crescente de homens têm fracturas vertebrais detectáveis como consequência de massa óssea reduzida, com um adicional de 250 000 fracturas da bacia reportadas recentemente apenas na América. O último caso está associado com uma taxa de mortalidade de 12% dentro dos primeiros dois anos e com uma taxa de 30% de pacientes que requerem cuidados de enfermagem domiciliária após a fractura. Ainda que isto seja já significativo, espera-se que as consequências económicas e médicas da convalescença devidas à lenta ou imperfeita cura destas fracturas ósseas aumente, devido ao envelhecimento da população em geral. 4 ΡΕ1339678

Tem sido mostrado (Bolander et al., 38th Annual Meeting Orthopedic Research Society, 1992) que os estrogénios melhoram a qualidade da cura das fracturas apendiculares. Por conseguinte, a terapia de substituição de estrogénio pode aparentar ser um método para o tratamento da reparação de fracturas. Contudo, a aceitação pelo paciente da terapia de estrogénio é relativamente fraca devido aos seus efeitos secundários, incluindo a ressunção de fluxo menstrual, mastodinia, um risco aumentado de cancro do útero, um risco percebido aumentado de cancro da mama e o uso concomitante de progestinas. Em aditamento, os homens provavelmente objectam o uso do tratamento de estrogénio. Existe a necessidade de uma terapia que seja benéfica para os pacientes que tenham sofrido de fracturas ósseas debilitantes, a qual aumentaria a aceitação por parte do paciente.

Foi demonstrado que a prostaglandina E2 (PGE2) pode repor a perda de osso num modelo de ratazana ovariectomizada (OVX), um modelo para a osteoporose pós-menopáusica (H. z. Ke et al., Bone, 23 (1998) 249-255). Contudo, existem vários efeitos secundários associados com PGE2 (W. S. S. Jee e Y. F. Ma, Bone, 21 (1997) 297-304). A Patente da Grã-Bretanha 1 553 595 revela compostos da fórmula 5 ΡΕ1339678

em que as ligações duplas estão cis ou trans e as variáveis são definidas conforme nela estabelecido. Estes compostos são revelados como tendo actividade espasmogénica e espasmolitica, por exemplo efeitos broncodilatadores e anti-hipertensivos. Os compostos são também revelados como tendo utilidade na inibição da secreção do suco gástrico e como tendo efeitos abortivos. A Patente dos E.U.A. N° 4 115 401 revela compostos da fórmula

em que as variáveis são definidas conforme nela estabelecido. Estes compostos são revelados como tendo efeitos espasmogénicos, cardiovasculares e broncodilatadores . A Patente dos E.U.A. N° 4 113 873 revela compostos da fórmula 6 ΡΕ1339678

em que as variáveis são definidas conforme nela estabelecido. Estes compostos são revelados como tendo utilidade como broncodilatadores, como agentes anti-hiper-tensivos, como aumentadores da contracção espontânea do útero e para o tratamento de desordens gastrointestinais ou úlceras gástricas. A Descrição da Patente da Grã-Bretanha 1 583 163 revela compostos da fórmula

em que as variáveis são definidas conforme nela estabelecido. Estes compostos são revelados como tendo propriedades espasmogénicas, broncodilatadoras, vasoconstritoras, vasodilatadoras e abortivas bem como utilidade na inibição da secreção ácida gástrica. 7 ΡΕ1339678 A Patente dos E.U.A. N° 4 177 346 comummente atribuída revela compostos da fórmula

em que as variáveis são definidas conforme nela estabelecido. Estes compostos são revelados como tendo acti-vidade vasodilatadora, anti-hipertensiva, broncodilatadora, antifertilidade e anti-secretória. A Publicação do Pedido de Patente Internacional N° WO 00/21542 revela que os agonistas do subtipo de receptor EP4 têm utilidade como estimuladores da formação de osso.

Ainda que exista uma variedade de terapias da osteoporose, há uma necessidade contínua e uma pesquisa contínua neste campo da técnica de terapias de osteoporose alternativas. Em aditamento, existe uma necessidade de terapias de cura da fractura óssea. Também há uma necessidade de uma terapia que possa promover o recrescimento do osso em áreas do esqueleto onde existem deficiências tais como deficiências causadas ou produzidas por, por exemplo, tumores ósseos. Além disso, há uma necessidade de uma terapia que possa promover o recrescimento do osso em áreas do esqueleto onde tenha sido completada cirurgia de enxerto ósseo. ΡΕ1339678

Sumário da Invenção

Esta invenção diz respeito a compostos de Fór-

mula I

O

I sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos e e estereoisómeros e misturas diastereoméricas dos referidos compostoss e sais, em que a linha a tracejado é uma ligação ou nenhuma ligação; X é -CH2-; Z é tienilo, tiazolilo ou fenilo; Q é carboxilo, (alcoxi C1-C4) carbonilo ou tetrazolilo; R2 é -Ar ou -Ar1-V-Ar2; V é uma ligação, -0-, -0CH2- ou -CH20-;

Ar é um anel de cinco a oito membros parcialmente saturado, completamente saturado ou completamente insaturado tendo facultativamente um a quatro heteroátomos independentemente seleccionados de entre oxigénio, enxofre e azoto, ou um anel biciclico constituído por dois anéis de cinco ou seis membros parcialmente saturado, completamente saturado ou completamente insaturado, independentemente condensados, tomados independentemente, tendo facultativamente um a quatro heteroátomos independentemente seleccionados de entre oxigénio, azoto e enxofre, tendo o 9 ΡΕ1339678 referido anel parcialmente ou completamente saturado ou anel bicíclico facultativamente um ou dois grupos oxo substituídos no carbono ou um ou dois grupos oxo substituídos no enxofre; e

Ar1 e Ar2 são cada um independentemente um anel de cinco a oito membros parcialmente saturado, completamente saturado ou completamente insaturado tendo facultativamente um a quatro heteroátomos independentemente seleccionados de entre oxigénio, enxofre e azoto, tendo o referido anel parcialmente ou completamente saturado facultativamente um ou dois grupos oxo substituídos no carbono ou um ou dois grupos oxo substituídos no enxofre; a referida porção Ar é facultativamente substituída no carbono ou azoto, num anel se a porção for monocíclica ou em um ou ambos os anéis se a porção for bicíclica, com até três substituintes por anel cada um independentemente seleccionado de entre hidroxi, halo, carboxi, alcoxi C1-C7, (alcoxi C1-C4)alquilo C1-C4, alquilo C1-C7, alcenilo C2-C7, cicloalquilo C3-C7, (cicloalquil C3-C7)alquilo C1-C4, (ciclo-alquil C3-C7)alcanoílo C1-C4, formilo, alcanoílo Ci-C8, (al-canoil Ci-Cô)alquilo Ci-Cg, (alcanoil Ci-C4)amino, (alcoxi C1-C4) carbonilamino, hidroxissulfonilo, aminocarbonilamino ou aminocarbonilamino substituído por mono-N-, di-N,N-, di-N,N'- ou tri-Ν,Ν,Ν'-alquilo C1-C4, sulfonamido, (al-quil C1-C4)sulfonamido, amino, mono-N- ou di-N,N-(alquil Ci-C4)amino, carbamoílo, mono-N- ou di-N,N-(alquil C1-C4)-carbamoílo, ciano, tiol, (alquil Ci-C6)tio, (alquil Ci-C6)-sulfinilo, (alquil C1-C4)sulfonilo e mono-N- ou di-N,N--(alquil C1-C4)aminossulfinilo, em que os referidos substi- 10 ΡΕ1339678 tuintes alquilo e alcoxi na definição de Ar são facultativamente substituídos no carbono com até três fluoro; as referidas porções Ar1 e Ar2 são independentemente e facultativamente substituídas no carbono ou azoto com até três substituintes cada um independentemente seleccionado de entre hidroxi, halo, carboxi, alcoxi C1-C7, (alcoxi C1-C4)alquilo C1-C4, alquilo C1-C7, alcenilo C2-C7, cicloal-quilo C3-C7, (cicloalquil C3-C7) alquilo C1-C4, (cicloalquil C3-C7)alcanoílo C1-C4, formilo, alcanoílo Ci-C8, (alcanoil Ci-C6) alquilo Ci-C6, (alcanoil Ci-C4)amino, (alcoxi C1-C4)-carbonilamino, hidroxissulfonilo, aminocarbonilamino ou aminocarbonilamino substituído por mono-N-, di-N,N-, di-N,N'- ou tri-N,N,N'-alquilo C1-C4, sulfonamido, (alquil C1-C4) sulfonamido, amino, mono-N- ou di-N,N-(alquil

Ci-C4)amino, carbamoílo, mono-N- ou di-N,N-(alquil C1-C4)-carbamoílo, ciano, tiol, (alquil Ci-C6)tio, (alquil Ci-C6)-sulfinilo, (alquil Ci-Cô) sulfonilo e mono-N- ou di-N,N-(alquil C1-C4)aminossulfinilo, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar1 e Ar2 são facultativamente substituídos no carbono com até três fluoro.

Um grupo preferido de compostos, designado por Grupo A, são os compostos da Fórmula Ia,

la 11 ΡΕ1339678 sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos e estereoisómeros e misturas diastereoméricas dos referidos compostos e sais, em que X é -CH2-; Z é

e R2 é Ar em que a referida porção Ar é facultativamente substituída no carbono ou azoto, num anel se a porção for monocíclica ou em um ou ambos os anéis se a porção for bicíclica, com até três substituintes por anel cada um independentemente seleccionado de entre hidroxi, halo, carboxi, alcoxi C1-C7, (alcoxi C1-C4)alquilo C1-C4, alquilo C1-C7, alcenilo C2-C7, cicloalquilo C3-C7, (cicloal-quil C3-C7) alquilo C1-C4, (cicloalquil C3-C7) alcanoílo C1-C4, formilo, alcanoílo Ci-C8, (alcanoil C4-C6)alquilo Ci-C6, (al-canoil C4-C4)amino, (alcoxi C1-C4)carbonilamino, hidro-xissulfonilo, aminocarbonilamino ou aminocarbonilamino substituído por mono-N-, di-N,N-, di-N,N'- ou tri- N,N,N'-alquilo C1-C4, sulfonamido, (alquil C1-C4)sulfona-mido, amino, mono-N- ou di-N,N-(alquil Ci-C4)amino, carba-moílo, mono-N- ou di-N,N-(alquil C4-C4)carbamoílo, ciano, tiol, (alquil Ci-C6)tio, (alquil Ci-C6)sulfinilo, (alquil 12 ΡΕ1339678 C1-C4)sulfonilo e mono-N- ou di-N,N-(alquil C1-C4)aminos-sulfinilo, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar são facultativamente substituídos no carbono com até três fluoro.

Um grupo preferido de compostos dentro do grupo A, designado por Grupo B, são aqueles compostos, sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos e estereoisómeros e misturas diastereoméricas dos referidos compostos e sais, em que Ar é ciclo-hexilo, 1,3-benzodio-xolilo, tienilo, naftilo ou fenilo facultativamente substituído com um ou dois alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, (alcoxi C1-C4)alquilo C1-C4, cloro, fluoro, trifluorometilo ou ciano, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar são facultativamente substituídos com até três fluoro.

Um grupo preferido de compostos dentro do grupo B, designado por Grupo C, são aqueles compostos, sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos e estereoisómeros e misturas diastereoméricas dos referidos compostos e sais, em que a linha a tracejado não é uma ligação; Q é carboxi ou (alcoxi C1-C4)carbonilo; e Z é

Um grupo preferido de compostos dentro do grupo C, designado por Grupo D, são aqueles compostos, sais 13 ΡΕ1339678 farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos e estereoisómeros e misturas diastereoméricas dos referidos compostos e sais, em que Q é carboxi e Ar é fenilo facultativamente substituído com um alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, (alcoxi C1-C4)alquilo C1-C4, cloro, fluoro, trifluorometilo ou ciano, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar são facultativamente substituídos com até três fluoro.

Um composto preferido dentro do grupo D é o composto, sais farmaceuticamente aceitáveis do referido composto e estereoisómeros e misturas diastereoméricas do referido composto e sais, em que Ar é m-trifluoro-metilfenilo.

Um outro composto preferido dentro do grupo D é o composto e sais farmaceuticamente aceitáveis do referido composto e estereoisómeros e misturas diastereoméricas do referido composto e sais, em que Ar é m-clorofenilo.

Um outro composto preferido dentro do grupo D é 0 composto e sais farmaceuticamente aceitáveis do referido composto e estereoisómeros e misturas diastereoméricas do referido composto e sais, em que Ar é m-trifluorome-toxifenilo.

Um grupo especialmente preferido de compostos desta invenção inclui: ácido 5-(3-(2S-(3A-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)- 14 ΡΕ1339678 butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil)-tiofeno-2-carboxíli-co; ácido 5- (3- (2S- (3i?-hidroxi-4- (3-trifluorometoxi-fe-nil)-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil)-tiofeno-2-carbo-xílico; e ácido 5-(3-(2S-(4-(3-cloro-fenil) -3A-hidroxi-butil) - 5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil)-tiofeno-2-carboxilico.

Um outro grupo preferido de compostos dentro do grupo A, são aqueles compostos do Grupo A, sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos e estereoisómeros e misturas diastereoméricas dos referidos compostos, pró-drogas e sais, em que X é -CH2-, Z é — (CH2) 3—, Q é carboxilo ou (alcoxi C1-C4) carbonilo e Ar é fenilo independentemente substituído com um até três ciano, alcoxi C1-C7 substituído com um até três fluoro ou (alcoxi C1-C4)alquilo C1-C4.

Esta invenção é particularmente dirigida a um composto da Fórmula I conforme definido no parágrafo imediatamente precedente, sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos e estereoisómeros e misturas diastereoméricas dos referidos compostos e sais, em que a linha a tracejado não é uma ligação; Q é carboxi ou (alcoxi C1-C4)carbonilo; e Z é

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Esta invenção está particularmente dirigida a um composto da Fórmula I conforme definido no parágrafo imediatamente precedente, sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos e estereoisómeros e misturas diastereoméricas dos referidos compostos e sais, em que Q é carboxi e Ar é fenilo facultativamente substituído com um alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, (alcoxi C1-C4) alquilo C1-C4, cloro, fluoro, trifluorometilo ou ciano, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar são facultativamente substituídos com até três fluoro.

Esta invenção diz ainda respeito a métodos de tratamento de uma condição que se apresenta com baixa massa óssea num mamífero, compreendendo a administração ao referido mamífero de um composto da Fórmula I selectivo do receptor EP4 ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal.

Esta invenção diz particularmente respeito aos métodos em que a referida condição é osteoporose, fragilidade, uma fractura osteoporótica, uma deficiência óssea, perda óssea idiopática infantil, perda de osso alveolar, perda de osso mandibular, fractura óssea, osteotomia, perda óssea associada com peridentite ou crescimento para dentro protético. Nos métodos preferidos desta invenção, o ago-nista selectivo do receptor EP4 é administrado sistemica-mente. Noutros métodos preferidos desta invenção, o ago-nista de EP4 é administrado localmente. 16 ΡΕ1339678

Esta invenção diz particularmente respeito aos métodos em que a condição é uma doença óssea metastável em que a remoção cirúrgica de osso deixa uma deficiência de osso que requer enchimento.

Os métodos desta invenção são especialmente úteis quando a referida condição é fragilidade.

Os métodos desta invenção são também especial mente úteis quando a referida condição é osteoporose.

Os métodos desta invenção são também especial mente úteis quando a referida condição é fractura óssea ou fractura osteoporótica.

Esta invenção diz também respeito a composições farmacêuticas que compreendem um composto da Fórmula I, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal desta invenção e um agente de suporte, veiculo ou diluente farmaceuticamente aceitável. Esta invenção diz também respeito a métodos de tratamento de uma condição que se apresenta com baixa massa óssea num mamífero, compreendendo a administração ao referido mamífero de uma tal composição farmacêutica.

Preferivelmente, são tratados a mulher pós-meno-páusica e o homem com idade acima dos 60. Também preferido 17 ΡΕ1339678 é o tratamento de indivíduos, independentemente da idade, que têm massa óssea significativamente reduzida, isto é, igual ou maior do que 1,5 desvios padrões abaixo dos níveis normais do jovem.

Nos métodos desta invenção, condições que se apresentam com massa óssea baixa incluem aquelas condições como, por exemplo, osteoporose, perda óssea idiopática infantil, perda de osso alveolar, perda de osso mandibular, fractura óssea, osteotomia, perda óssea associada com peridentite ou crescimento para dentro protético. Métodos para o tratamento da "osteoporose secundária" estão também incluídos dentro dos métodos desta invenção. A "osteoporose secundária" inclui osteoporose induzida por glucocorticóide, osteoporose induzida por hipertiroidismo, osteoporose induzida por imobilização, osteoporose induzida por heparina e osteoporose induzida por imunossupressivo num vertebrado, e. g., um mamífero (incluindo um ser humano). Estes métodos são realizados pela administração ao referido vertebrado, e. g., um mamífero, de uma quantidade de tratamento de "osteoporose secundária" de um agonista de prostaglandina selectivo do receptor EP4 de Fórmula I, uma sua pró-droga ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido agonista de prostaglandina selectivo do receptor EP4 ou da referida pró-droga ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto, pró-droga ou sal. 18 ΡΕ1339678

Ainda um outro aspecto desta invenção diz respeito a métodos para o fortalecimento de um enxerto de osso, indução da sinosteose vertebral, aumento da extensão do osso longo, aumento do restabelecimento do osso que se segue à reconstrução facial, reconstrução maxilar ou reconstrução mandibular num vertebrado, e. g. um mamífero (incluindo um ser humano), compreendendo a administração ao referido vertebrado, e. g. um mamífero que sofre de cirurgia de enxerto ósseo, indução da sinosteose vertebral, aumento da extensão do osso longo, reconstrução facial, reconstrução maxilar ou reconstrução mandibular, de uma quantidade que aumenta o osso de um agonista de prosta-glandina selectivo do receptor EP4 de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido agonista de prostaglandina selectivo do receptor EP4, ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal. Os agonistas de prostaglandina selectivos do receptor EP4 desta invenção podem ser aplicados localmente ao sítio da reconstrução do osso ou podem ser administrados sistemicamente.

Esta invenção diz também respeito a um método de tratamento de impotência ou disfunção eréctil, o qual compreende a administração a um paciente com necessidade de tal tratamento de uma quantidade de tratamento de impotência ou disfunção eréctil de um composto da Fórmula I, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal. 19 ΡΕ1339678

Esta invenção diz também respeito a um método de tratamento de um mamífero que se apresenta com função insuficiente compreendendo a administração ao referido mamífero de uma quantidade eficaz na regeneração do rim de um composto da Fórmula I, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal.

Esta invenção diz também respeito a métodos de promoção de crescimento ósseo compreendendo a administração a um mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula I, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor (estatina) de HMG-CoA-redutase ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto.

Uma dosaqem preferida é desde cerca de 0,001 até cerca de 100 mg/kg/dia de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal. Uma dosagem especialmente preferida é desde cerca de 0,01 até 10 mg/kg/dia de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal. 20 ΡΕ1339678

Ainda um outro aspecto desta invenção diz respeito a combinações de um composto de Fórmula I ou um sal far-maceuticamente aceitável do referido composto ou um estere-oisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, e outros compostos conforme descrito abaixo.

Ainda um outro aspecto desta invenção diz respeito a composições farmacêuticas que compreendem um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, e um agente anti-reabsortivo ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido agente e ao uso de tais composições para o tratamento ou prevenção de condições que se apresentam com baixa massa óssea, incluindo osteoporose num vertebrado, e. g. mamíferos (e. g., humanos, particularmente mulheres) ou o uso de tais composições para outros usos de aumento de massa óssea.

As combinações desta invenção compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um primeiro composto, sendo o referido primeiro composto um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal; e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um segundo composto, sendo o referido segundo composto um agente anti-reabsortivo ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido agente tal como um agonista/antago-nista de estrogénio ou um bisfosfonato. 21 ΡΕ1339678

Um outro aspecto desta invenção diz respeito a métodos para o tratamento de vertebrados, e. g. mamíferos, que se apresentam com massa óssea baixa compreendendo a administração ao referido vertebrado, e. g. um mamífero que se apresenta com massa óssea baixa a. uma quantidade de um primeiro composto, sendo o referido primeiro composto um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal; e b. uma quantidade de um segundo composto, sendo o referido segundo composto um agente anti-reabsortivo ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido agente, tal como um agonista/antagonista de estrogénio ou um bisfos-fonato.

Tais composições e métodos também podem ser usados para outros usos de aumento de massa óssea.

Um aspecto preferido deste método é aquele em que a condição que se apresenta com baixa massa óssea é osteoporose.

Um outro aspecto preferido deste método é aquele em que o primeiro composto e o segundo composto são administrados substancialmente simultaneamente.

Um outro aspecto desta invenção é um estojo compreendendo: 22 ΡΕ1339678 a. uma quantidade de um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, e um agente de suporte ou diluente farmaceu-ticamente aceitável numa primeira forma de dosagem unitária; b. uma quantidade de um agente anti-reabsortivo ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido agente, tal como um agonista/antagonista de estrogénio ou um bisfos-fonato, e um agente de suporte ou diluente farmaceuticamen-te aceitável numa segunda forma de dosagem unitária; e c. um recipiente.

Ainda um outro aspecto desta invenção diz respeito a composições farmacêuticas que compreendem um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, e um outro agente anabólico do osso (ainda que o outro agente anabó-lico do osso possa ser um composto da Fórmula I diferente) ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto, e ao uso de tais composições para o tratamento de condições que se apresentam com baixa massa óssea, incluindo oste-oporose em vertebrados, e. g. mamíferos (e. g., humanos, particularmente mulheres) ou o uso de tais composições para outros usos de aumento de massa óssea. Tais composições compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz de um primeiro composto, sendo o referido primeiro composto um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável 23 ΡΕ1339678 do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um segundo composto, sendo o referido segundo composto um outro agente anabólico do osso ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido agente.

Um outro aspecto desta invenção diz respeito a métodos para o tratamento de vertebrados, e. g. mamíferos, que se apresentam com massa óssea baixa compreendendo a administração ao referido vertebrado, e. g. um mamífero que tem uma condição que se apresenta com massa óssea baixa a. uma quantidade de um primeiro composto, sendo o referido primeiro composto um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal; e b. uma quantidade de um segundo composto, sendo o referido segundo composto um outro agente anabólico do osso ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido agente.

Tais composições e métodos também podem ser usados para outros usos de aumento de massa óssea.

Um aspecto preferido deste método é aquele em que a condição que se apresenta com baixa massa óssea é osteoporose.

Um outro aspecto desta invenção é um estojo compreendendo: 24 ΡΕ1339678 a. uma quantidade de um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, e um agente de suporte ou diluente farmaceu-ticamente aceitável numa primeira forma de dosagem unitária; b. uma quantidade de um segundo composto, sendo o referido segundo composto um outro agente anabólico do osso ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido agente numa segunda forma de dosagem unitária; e c. um recipiente.

Quando usado em qualquer dos métodos, estojos e composições acima, certos agentes anabólicos do osso, agonistas/antagonistas de estrogénio e bisfosfonatos são preferidos ou especialmente preferidos.

Os agentes anabólicos do osso preferidos incluem IGF-1, prostaglandinas, agonistas/antagonistas de prosta-glandina, fluoreto de sódio, hormona da paratiróide (PTH), fragmentos activos da hormona da paratiróide, péptidos relacionados com a hormona da paratiróide e fragmentos activos e péptidos relacionados com análogos da hormona da paratiróide, hormonas do crescimento ou secretores da hormona do crescimento e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os agonistas/antagonistas de estrogénio preferidos incluem droloxifeno, raloxifeno, tamoxifeno, 4-hidro- 25 ΡΕ1339678 xi-tamoxifeno, toremifeno, centcromano, levormeloxifeno, idoxifeno, 6-(4-hidroxi-fenil)-5-[4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-ben-zil]-naftalen-2-ol, (4-(2-(2-aza-biciclo[2.2.1]hept-2-il)-etoxi)-fenil)-(6-hidroxi-2-(4-hidroxi-fenil)-benzo[b]tiofen-3-il)-metano-na, ácido 3-(4-(1,2-difenil-but-l-enil)-fenil)-acrilico, 2-(4-metoxi-fenil)-3-[4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-feno-xi]-benzo[b]tiofen-6-ol; cis-6-(4-fluoro-fenil)-5-(4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,7,8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol, (-)-cis-6-fenil-5-(4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenil) -5,6,7,8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol (lasofoxifeno), cis-6-fenil-5-(4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,7, 8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol, cis-1-(6'-pirrolidinoetoxi-3'-piridil)-2-fenil-6-hi-droxi-1, 2,3, 4-tetra-hidro-naftaleno, 1-(4'-pirrolidinoetoxifenil)-2-(4"-fluorofenil)-6-hi-droxi-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina, cis-β-(4-hidroxifenil)-5-(4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,7,8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol, e 1-(4'-pirrolidinoetoxifenil)-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os aqonistas/antaqonistas de estroqénio especialmente preferidos incluem ácido 3-(4-(1,2-difenil-but-l-enil)-fenil)-acrilico, 26 ΡΕ1339678 2-(4-metoxi-fenil)-3-[4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-feno-xi]-benzo[b]tiofen-6-ol; cis-6-(4-fluoro-fenil)-5-(4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,7,8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol, (-)-cis-6-fenil-5-(4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,1,8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol (lasofoxifeno), cís-6-fenil-5-(4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,1, 8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol, cis-1-(6'-pirrolidinoetoxi-3'-piridil)-2-fenil-6-hi-droxi-1,2,3,4-tetra-hidro-naftaleno, 1-(4'-pirrolidinoetoxifenil)-2-(4"-fluorofenil)-6-hi-droxi-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina, cis-6-{4-hidroxifenil)-5-(4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,1, 8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol, 1-(4'-pirrolidinoetoxifenil)-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina, e os seus sais farmaceuti-camente aceitáveis.

Os bisfosfonatos preferidos incluem ácido tilu-drónico, ácido alendrónico, ácido zoledrónico, ácido iban-drónico, ácido risedrónico, ácido etidrónico, ácido clodró-nico e ácido pamidrónico e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Será reconhecido que os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados a partir dos compostos usados como segundos compostos nas combinações desta invenção. Todas estes sais farmaceuticamente aceitáveis assim formados estão dentro do âmbito e alcance desta invenção. As 27 ΡΕ1339678 formas de sal particularmente preferidas incluem hidro-cloreto de raloxifeno, citrato de tamoxifeno e citrato de toremifeno. A frase "condição (condições) que se apresenta(m) com baixa massa óssea" refere-se a uma condição em que o nível de massa óssea está abaixo do normal específico da idade conforme definido em padrões por "Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994). Report of a World Health Organization Study Group. World Health Organization Technical Series 843" da Organização Mundial de Saúde. Incluídas em "condição (condições) que se apresenta(m) com baixa massa óssea" estão as osteoporoses primárias e secundárias, conforme descrito acima. Estão também incluídas a doença peridental, perda de osso alveolar, perda de osso por osteotomia e perda de osso idiopática infantil. A "condição (condições) que se apresenta(m) com baixa massa óssea" também inclui complicações de osteoporose a longo prazo tais como curvatura da coluna espinal, perda de peso e cirurgia protética. A frase "condição que se apresenta com baixa massa óssea" também se refere a um vertebrado, e. g. um mamífero, conhecido como tendo uma probabilidade significativamente mais alta do que a média de desenvolver tais doenças conforme as acima descritas incluindo a osteoporose (e. g., mulheres pós-menopáusicas, homens com idade superior a 50 anos). Outros usos para aumentar ou melhorar 28 ΡΕ1339678 a massa óssea incluem a reposição de osso, o aumento da taxa de cura da fractura óssea, a substituição por inteiro da cirurgia de enxerto de osso, aumento da taxa de sucesso dos enxertos ósseos, aumento do restabelecimento do osso que se segue à reconstrução facial ou reconstrução maxilar ou reconstrução mandibular, reconstrução do osso longo, crescimento interior protético, sinosteose vertebral ou extensão do osso longo.

Os métodos desta invenção também podem ser usados em conjugação com dispositivos ortopédicos tais como gaiolas de fusão espinal, ferragens de fusão espinal, dispositivos de fixação de osso internos e externos, parafusos e pinos.

Os peritos na técnica reconhecerão que o termo massa óssea refere-se actualmente à massa óssea por unidade de área que é algumas vezes (ainda que não estritamente correctamente) referida como densidade mineral óssea. 0 termo "tratando", "tratar" ou "tratamento" conforme aqui usado inclui tratamento preventivo (e. g., profiláctico), paliativo e curativo.

Por "farmaceuticamente aceitável" pretende-se significar que o agente de suporte, veiculo, diluente, excipientes e/ou sal deve ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não deletério para o seu recipiente. 29 ΡΕ1339678 A expressão "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a sais aniónicos não tóxicos contendo aniões tais como (mas sem constituir limitação) cloreto, brometo, iodeto, sulfato, bissulfato, fosfato, acetato, maleato, fumarato, oxalato, lactato, tartarato, citrato, gluconato, metanossulfonato e 4-tolueno-sulfonato. A expressão também diz respeito a sais catiónicos não tóxicos tais como (mas sem constituir limitação) sódio, potássio, cálcio, magnésio, amónio ou benzatina (N, Ν' -dibenziletilenodiamina), colina, etanolamina, dietanolamina, etilenodiamina, megla-mina (N-metilglucamina), benetamina (N-benzilfenetilamina), piperazina e trometamina (2-amino-2-hidroximetil-l,3-pro-panodiol) protonadas. 0 quimico de perícia vulgar reconhecerá que certos compostos de fórmula I desta invenção podem existir em forma tautomérica, isto é, que existe um equilíbrio entre dois isómeros que estão em equilíbrio rápido um com o outro. Um exemplo comum de tautomerismo é o tautomerismo ceto-enólico, isto é,

Exemplos de compostos que podem existir como tautómeros incluem hidroxipiridinas, hidroxipirimidinas e hidroxi-quinolinas. Outros exemplo serão reconhecidos por um 30 ΡΕ1339678 perito na técnica. Todos estes tautómeros e suas misturas estão incluídos nesta invenção. A presente invenção também inclui compostos marcados isotopicamente, os quais são idênticos aos estabelecidos na Fórmula I, excepto no facto de que um ou mais átomos estão substituídos por um átomo que tem uma massa atómica ou número de massa diferente da massa atómica ou número de massa usualmente encontrados na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogénio, carbono, azoto, oxigénio, fósforo, flúor e cloro, tais como 2h, 3h, 13c, 14c, 15n, 18o, 17o, 31p, 32p, 35s, 18f e 36C1, respectivamente. Os compostos de Fórmula I da presente invenção e os sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos, e estereoisómeros e misturas diastereo-méricas dos referidos compostos e sais, que contêm os isótopos acima mencionados e/ou outros isótopos de outros átomos estão dentro do âmbito e alcance desta invenção. Certos compostos marcados isotopicamente da presente invenção, por exemplo aqueles nos quais isótopos radiacti-vos tais como 3H e 14C são incorporados, são úteis em ensaios de distribuição em tecido de droga e/ou substrato. Os isótopos tritiados, isto é, 3H, e de carbono-14, isto é, 14C, são particularmente preferidos pela sua facilidade de preparação e detectabilidade. Além disso, a substituição com isótopos mais pesados tais como deutério, isto é, 2H, pode produzir certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo meia-vida in 31 ΡΕ1339678 vivo aumentada ou necessidades de dosagem reduzida e, por isso podem ser preferidos em algumas circunstâncias. Os compostos de Fórmula I desta invenção isotopicamente marcados e suas pró-drogas podem geralmente ser preparados realizando procedimentos revelados nos Esquemas e/ou nos Exemplos e Preparações abaixo, substituindo um reagente não marcado isotopicamente por um reagente marcado isotopicamente prontamente disponível.

Os compostos de Fórmula I desta invenção têm átomos de carbono assimétricos e por conseguinte são enantiómeros ou diastereómeros. As misturas diastereomé-ricas podem ser separadas nos seus diastereómeros individuais na base das suas diferenças fisico-quimicas por métodos conhecidos de per si, por exemplo, por croma-tografia e/ou cristalização fraccionada. Os enantiómeros podem ser separados por conversão da mistura enantiomérica numa mistura diastereomérica por reacção com um composto opticamente activo apropriado (e. g., álcool), separação de diastereómeros e conversão (e. g., hidrólise) dos diastereómeros individuais para os enantiómeros puros correspondentes. Os enantiómeros e diastereómeros desta invenção também podem ser preparados pela utilização de materiais de partida enantiomericamente enriquecidos adequados, ou por reacções assimétricas e diastereosse-lectivas para introduzir átomos de carbono assimétrico com a estereoquimica correcta. Todos estes isómeros, incluindo os diastereómeros, enantiómeros e suas misturas são considerados como parte desta invenção. Alguns dos 32 ΡΕ1339678 compostos desta invenção são acídicos e eles formam um sal com um catião farmaceuticamente aceitável. Todos estes sais estão dentro do âmbito e alcance desta invenção e eles podem ser preparados por métodos convencionais. Por exemplo, eles podem ser preparados por simples contacto das entidades acídicas e básicas, usualmente numa razão estequiométrica, em meio aquoso, não aquoso ou parcialmente aquoso, conforme apropriado. Os sais são recuperados ou por filtração, por precipitação com um não solvente seguido por filtração, por evaporação do solvente ou, no caso de soluções aquosas, por liofilização, conforme apropriado.

Os métodos desta invenção resultam em formação de osso tendo como resultado taxas de fractura diminuídas. Esta invenção traz uma contribuição significativa à técnica proporcionando métodos que aumentam a formação de osso resultando na prevenção, retardação e/ou regressão da osteoporose e desordens ósseas relacionadas.

Outras características e vantagens tornar-se-ão aparentes a partir desta descrição e reivindicações que descrevem a invenção.

Descrição Detalhada da Invenção

Em geral, os compostos de Fórmula I desta invenção (daqui em diante colectivamente referidos como "os compostos desta invenção") são feitos por processos que incluem processos análogos aos conhecidos nas técnicas 33 ΡΕ1339678 químicas. Tais processos incluem métodos que podem requerer protecção de funcionalidade remota (e. g., amina primária, amina secundária, álcool secundário, álcool primário, carboxilo em percursores de Fórmula I). A necessidade de tal protecção variará, dependendo da natureza da funcionalidade remota e das condições dos métodos de preparação. A necessidade de tal protecção é prontamente determinada por um perito na técnica. 0 uso de tais métodos de protecção/desprotecção está também dentro da perícia na técnica. 0 termo "grupo de protecção", quando aqui usado, diz respeito a um radical que pode ser ligado a um grupo funcional num substrato que é facilmente ligado e facilmente removido sem afectar outros grupos funcionais do substrato e que previne que o grupo funcional protegido seja removido, alterado ou de outro modo destruído. Para uma descrição geral de grupos de protecção e seus usos, ver T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2a ed., John Wiley and Sons Inc., Nova Iorque, 1991. Os materiais de partida e reagentes para os compostos acima descritos estão também prontamente disponíveis ou podem ser facilmente sintetizados pelos peritos na técnica usando métodos convencionais de síntese orgânica à luz desta revelação.

Em geral, os compostos de Fórmula I são preparados por protecção do grupo hidroxilo de hidroximetil-2-pirrolidinona racémica ou (R), seguido por alquilação do azoto de amida com um haleto alcalino que contém um precursor ácido ou isóstero adequadamente 34 ΡΕ1339678 protegido (Esquema A) . 0 termo "isóstero", quando aqui usado, diz respeito a um grupo funcional que, quando usado no lugar de um outro grupo funcional, aproxima a reactividade do grupo funcional que ele substitui. Em alguns casos, o haleto de alquilo deve ser mais trabalhado para instalar o precursor ácido ou isóstero adequadamente protegido (Esquema Bl). 0 grupo de protecção de hidroxilo é removido, o álcool oxidado ao aldeído que em seguida reage com o anião de um ceto-fosfonato adequado (Esquema C) . A enona resultante de fórmula 8 do Esquema E é em seguida sujeito a redução de ambas a ligação dupla e cetona para dar os álcoois saturados desejados de fórmula 9 do Esquema E. Se desejado, uma redução diastereosselectiva da enona pode ser efectuada para dar, por exemplo, predominantemente o isómero 15— (f?) ou o isómero 15-(5). 0 éster carboxílico ou precursor a um isóstero ácido (e. g., nitrilo) é em seguida convertido no grupo acídico apropriado (ácido carboxílico, tetrazole, etc.).

Um método preferido para a conversão de um nitrilo ao tetrazole desejado é o tratamento do nitrilo com óxido de dibutilestanho e trimetilsililazida, em tolueno em refluxo (S. J. Wittenberger e B. G. Donner, J. Org. Chem., 58 (1993) 4139-4141). Para uma revisão de preparações alternativas de tetrazoles ver R. N. Butler, "Tetrazoles", in Comprehensive Heterocyclic Chemistry; Ed. K. T. Potts; Pergamon Press; Oxford, 1984; Vol. 5, p 791-838.

Esquema Ά 35 ΡΕ1339678

Mais especificamente, os compostos de Fórmula I são preparados pelos procedimentos seguintes. Na primeira sequência geral, que se inicia com o Esquema A, o grupo hidroxilo de 5-(R)-hidroximetil-2-pirrolidinona (Aldrich Chemical, ou preparada conforme descrito por Bruckner et al., Acta Chim. Hung. Tomus, 21 (1959) 106) é adequadamente protegido (onde PG é um grupo de protecção adequado) por reacção de um composto de fórmula 1 num solvente inerte na reacção. Conforme aqui usadas, as expressões "solvente inerte na reacção" e "solvente inerte" dizem respeito a um solvente ou mistura de solventes que não interagem com os materiais de partida, reagentes, intermediários ou produtos de uma maneira que afecta adversamente o rendimento do produto desejado. Aqui, nalguns casos, é descrita uma lista de solventes inertes na reacção preferidos. Contudo, qualquer solvente que satisfaça a definição anterior de solvente inerte na reacção para uma reacção particular pode ser usado nessa reacção. Todas as reacções são realizadas num solvente inerte na reacção a menos que especificamente estabelecido de maneira diferente. Qualquer grupo de protecção de álcool padrão pode ser utilizado, incluindo tetra-hidropiranilo, trimetilsililo, terc-butil-dimetilsi-lilo ou benzilo. Um grupo de protecção preferido é o 36 ΡΕ1339678 terc-butil-dimetilsililo (TBS), o qual pode ser instalado por métodos padrão conforme descrito em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2a ed., John Wiley and Sons Inc., Nova Iorque, 1991. É preferido tratar a 5-(R)-hidroximetil-2-pirrolidinona em cloreto de metileno a 0 °C com 0,1 eq. de 4-dimetilami-nopiridina, 1,1 eq. de cloreto de terc-butil-dimetilsililo e 2 eq. de imidazole (ver, e. g., Tetrahedron Asyiwnetry, 7 (1996) 2113). O azoto de amida é alquilado com um de entre uma variedade de agentes de alquilação (hal-CH2CH2-X-Z-QP, onde hal é um grupo separável tal como brometo ou iodeto, X e Z são conforme descrito no Sumário, e QP é um nitrilo, éster de ácido carboxilico ou outro precursor para um ácido carboxilico ou isóstero de ácido) para introduzir a cadeia lateral desejada. O azoto de amida é primeiro desprotonado com uma base adequada. As bases preferidas incluem hexame-tildissilazoteto de sódio (também aqui referida como NaHMDS ou NaN(SiMe3)2) ou hidreto de sódio num solvente inerte na reacção tal como N,N-dimetilformamida (DMF), tetra-hidro-furano (THF), 1,2-dimetoxietano ou 1,4-dioxano. Um solvente preferido é dmf. O intervalo de temperatura apropriado para a formação do anião está entre -78 °C e a temperatura à qual o solvente refluxa. Uma temperatura preferida para esta reacção é cerca de 0 °C. Após a formação do anião, o agente de alquilação (hal-CH2CH2-X-Z-QP) é adicionado e a solução é agitada a uma temperatura apropriada. O intervalo de temperatura apropriado para a alquilação está entre -20 °C e a temperatura à qual o solvente refluxa. O intervalo de tempera- 37 ΡΕ1339678 tura para esta reacção está entre 0 °C e 100 °C. Os agentes de alquilação típicos são haletos benzílicos, propargílicos, primários, secundários, e sulfonatos benzílicos ou propargílicos, primários, secundários. Os agentes de alquilação preferidos são brometos de alquilo ou iodetos de alquilo.

Muitos dos agentes de alquilação úteis da fórmula hal-CH2CH2-X-Z-QP estão comercialmente disponíveis. Por exemplo, 7-bromo-heptanoato de etilo e 7-bromo-heptano-nitrilo podem ser obtidos de Aldrich Chemical, P. O. Box 355, Milwaukee, Wiscosin 53201, EUA. Existem numerosos métodos conhecidos dos peritos na técnica para a síntese daqueles e de outros agentes de alquilação desejados usados no Esquema anterior (ver, e. g., "The Chemistry of the Carbon-Halogen Bond", Ed. S. Patai; J. Wiley, Nova Iorque, 1973, e/ou "The Chemistry of Halides, Pseudo-Halides, and Azides", Eds. S. Patai e Z. Rappaport, J. Wiley, Nova Iorque, 1983) .

Os haletos de alquilo são também preparados por halogenação de um álcool ou um derivado de álcool. Os cloretos de alquilo são tipicamente preparados a partir dos álcoois com reagentes tais como cloreto de hidrogénio, cloreto de tionilo, pentacloreto de fósforo, cloreto de fosforilo ou trifenilfosfina/tetracloreto de carbono num solvente inerte na reacção. Para a preparação de brometos de alquilo, o álcool é comummente tratado com reagentes tais como brometo de hidrogénio, tribrometo de fósforo, 38 ΡΕ1339678 trifenilfosfina/bromo ou carbonildiimidazole/brometo de alilo num solvente inerte na reacção. Para preparar iodetos de alquilo, o álcool reage tipicamente com reagentes tais como trifenilfosfina/iodo/imidazole ou iodeto de hidrogénio num solvente inerte na reacção. Os cloretos de alquilo são convertidos aos brometos de alquilo ou iodetos de alquilo mais reactivos por tratamento com um sal inorgânico tal como brometo de sódio, brometo de litio, iodeto de sódio ou iodeto de potássio num solvente inerte na reacção tal como acetona ou metiletilcetona. Os sulfonatos de alquilo são também usados como electrófilos ou são convertidos a haletos de alquilo. Os sulfonatos são preparados a partir do álcool usando uma base suave tal como trietilamina ou piridina e um cloreto de sulfonilo num solvente inerte na reacção tal como cloreto de metileno ou éter dietilico. A conversão ao haleto é conseguida pelo tratamento do sulfonato de alquilo com um haleto inorgânico (iodeto de sódio, brometo de sódio, iodeto de potássio, brometo de potássio, cloreto de litio, brometo de litio, etc.) ou um haleto de tetrabutilamónio num solvente inerte na reacção.

Os haletos de alquilo da fórmula hal-CH2CH2-X-Z-QP onde X é CH2 e Z é fenilo, tienilo ou tiazolilo são também preparados conforme se mostra no Esquema Bl. Por exemplo, álcool propargilico é tratado com um composto de fórmula 14 do Esquema Bl contendo o isóstero de ácido (hal-Z-QP) adequadamente protegido, onde o grupo "hal-Z" é um brometo, iodeto ou triflato de arilo, na presença de 39 ΡΕ1339678 iodeto de cobre (I); um catalisador de paládio tal como cloreto de paládio, dicloreto de bis(trifenilfos-fina)paládio ou tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0); e uma amina tal como trietilamina, diisopropilamina ou butilamina num solvente inerte na reacção, preferivelmente um solvente aprótico tal como acetonitrilo, a uma temperatura desde cerca de 0 °C até cerca de 100 °C. Para referências adicionais, ver Tetrahedron, 40 (1984) 1433, e Org. Lett. 2, 12 (2000) 1729. Os alcinos resultantes são em seguida convertidos aos correspondentes alcanos via hidrogenação na presença de um catalisador de paládio ou platina num solvente inerte na reacção tal como metanol, etanol e/ou acetato de etilo a uma temperatura desde cerca de 0 °C até cerca de 50 °C. A porção álcool da molécula é substituída com um grupo separável adequado tal como bromo ou iodo. Para a preparação de brometos de alquilo, o álcool é comummente tratado com reagentes tais como brometo de hidrogénio, tribrometo de fósforo, trifenilfosfina/bromo ou carbonildiimidazole/brometo de alilo. O uso de carbonildi-imidazole/brometo de alilo é preferido. Para preparar iodetos de alquilo, o álcool reage tipicamente com um reagente tal como trifenilfosfina/iodo/imidazole ou iodeto de hidrogénio num solvente inerte na reacção. Os cloretos de alquilo são convertidos aos brometos de alquilo ou iodetos de alquilo mais reactivos por tratamento com um sal inorgânico tal como brometo de sódio, brometo de litio, iodeto de sódio ou iodeto de potássio num solvente inerte na reacção tal como acetona ou metiletilcetona. Os sulfo-natos de alquilo podem ser usados como electrófilos ou são 40 ΡΕ1339678 convertidos a haletos de alquilo. Os sulfonatos de alquilo são preparados a partir do álcool correspondente usando uma base suave tal como trietilamina ou piridina e um cloreto de sulfonilo num solvente inerte na reacção tal como cloreto de metileno ou éter dietílico. A conversão ao haleto é conseguida pelo tratamento do sulfonato de alquilo com um haleto inorgânico tal como, por exemplo, iodeto de sódio, brometo de sódio, iodeto de potássio, brometo de potássio, cloreto de litio ou brometo de litio num solvente inerte na reacção. A conversão ao haleto é conseguida por tratamento do sulfonato de alquilo com um haleto de amónio orgânico tal como haleto de tetrabutilamónio num solvente inerte na reacção. Os cloretos de alquilo são tipicamente preparados a partir dos álcoois com reagentes tais como cloreto de hidrogénio, cloreto de tionilo, pentacloreto de fósforo, cloreto de fosforilo ou trifenilfosfina/tetra-cloreto de carbono.

Esquema Bl

2) hidrogenação 14 3) conversão do haleto

Em alguns casos, conforme se mostra no Esquema B2, é preferido alquilar primeiro com brometo ou iodeto de propargilo e em seguida manipular mais para introduzir o precursor ácido ou isóstero adequadamente protegido. Por exemplo, onde o agente de alquilação é brometo ou iodeto de proparqilo, os compostos de Fórmula 3 do Esquema B2 são 41 ΡΕ1339678 tratados com compostos de Fórmula 14 do Esquema B2 contendo o precursor ou isóstero de ácido (hal-Z-QP) adequadamente protegido, onde o grupo "hal-Z" é um brometo, iodeto ou triflato de arilo, na presença de iodeto de cobre (I); um catalisador de paládio tal como cloreto de paládio, dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio ou tetraquis-(trifenilfosfina)paládio (0); e uma amina tal como trietil-amina, diisopropilamina ou butilamina num solvente inerte na reacção, preferivelmente um solvente aprótico tal como acetonitrilo, a uma temperatura desde cerca de 0 °C até cerca de 100 °C. Para referências adicionais, ver Tetra-hedron, 40 (1984) 1433, e Org. Lett. 2, 12 (2000) 1729. Os alcinos resultantes são em seguida convertidos aos alcanos correspondentes via hidrogenação na presença de um catalisador de paládio ou platina num solvente inerte na reacção tal como metanol, etanol e/ou acetato de etilo a uma temperatura desde cerca de 0 °C até cerca de 50 °C.

Esquema B2

π 1)base, Jx iodeto de propargilo \ ou iodeto de ^ \_/ propargilo V-°^RG

1)hal\z/QP 14 ^ Cul, Pd(0) EtjN 0-.RQ 2) hidrogenação

Esteres de halo-arilo e halo-arilnitrilos de Fórmula 14 do Esquema B2 são preparados por métodos conhecidos dos peritos na técnica. Por exemplo, 2-bro-mo-4-(etoxicarbonil)tiazole é preparado de acordo com o procedimento descrito em J. Org. Chem., 61 (1996) 4623, e 42 ΡΕ1339678 2-bromo-5-(etoxicarbonil)tiazole é preparado de acordo com o procedimento descrito em Helv. Chim. Acta, 25 (1942) 1073. Outros ésteres de halo-arilo e halo-arilnitrilos de Fórmula 14 do Esquema B2 que são úteis nos procedimentos desta invenção, tais como, inter alia, 4-bromobenzoato de etilo e 4-bromobenzonitrilo estão comercialmente disponíveis. 2-Bromo-tiofeno-5-carboxilato de etilo é preparado por esterificação do ácido 2-bromo-tiofeno-5-carboxílico comercialmente disponível.

Os grupos de protecção de álcool de compostos de Fórmula 2 do Esquema A ou Fórmula 4 do Esquema B2 são em seguida removidos. Para uma descrição geral de métodos para a desprotecção de álcoois protegidos, ver T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2a ed., John Wiley and Sons Inc., Nova Iorque, 1991. A remoção do grupo terc-butil-dimetilsililo em compostos de Fórmula 2 e Fórmula 4 do Esquema B2 é preferivelmente realizada por tratamento do composto com fluoreto de tetrabutilamónio ou ácido trifluoroacético num solvente inerte na reacção, preferivelmente solvente aprótico adequado a uma temperatura desde cerca de -30 °C até cerca da temperatura ambiente. Quando aqui usado, o termo "temperatura ambiente" refere-se à temperatura dos ambientes envolventes imediatos, inalterados, da mistura reaccional. A temperatura ambiente está geralmente entre 20 °C e 25 °C. Um solvente especialmente preferido é o cloreto de metileno. Um intervalo de temperatura preferido está entre 0 °C e a temperatura ambiente. Um outro método preferido para remover o grupo TBS é por tratamento do éter silílico 43 ΡΕ1339678 com uma solução aquosa de um ácido mineral num solvente aprótico. Neste caso, é preferido que o éter silílico seja tratado com uma solução aquosa 1 N de ácido clorídrico em metanol à temperatura ambiente. A seguir à desprotecção, os álcoois são oxidados ao aldeído pelo uso de uma modificação da oxidação de Pfitzner-Moffatt [K. E. Pfitzner e Μ. E. Moffatt, J. Am. Chem. Soc.F 87 (1965) 5661] que minimiza a racemização pela evitação do contacto com água. Por exemplo, a oxidação do álcool ao aldeído é alcançada agitando o álcool num solvente inerte na reacção, preferivelmente um solvente hidrocarboneto tal como tolueno, xileno ou, preferivelmente, benzeno, com dimetilsulfóxido, um ácido fraco tal como ácido acético ou, preferivelmente, trifluoroacetato de piridínio, e uma diimida tal como dietilcarbodiimida ou, preferivelmente, dimetilaminopropiletil-carbodiimida ou, se desejado, hidrocloreto de dimetilaminopropiletil-carbodiimida, a temperaturas desde cerca de 0 °C até cerca da temperatura ambiente, durante cerca de uma até cerca de quatro horas. Métodos alternativos para alcançar a oxidação, ainda que minimizando a racemização do centro assimétrico adjacente ao aldeído resultante, são discutidos em detalhe em Tetrahedron Letters, 41 (2000) 1359, e incluem a reacção de Pfitzner-Moffatt usual, oxidação com complexo trióxido de crómio/piridina (J. Org. Chem., 35 (1970) 4000), oxidação com reagente de Dess-Martin (J. Org. Chem., 48 (1983) 4155) ou oxidação com branqueador TEMPO [Tetrahedron Letters, 33 (1992) 5029)] . O aldeído resultante é preferivelmente sujeito 44 ΡΕ1339678 sem purificação, a uma reacção de Horner-Wittig com o sal de sódio ou litio de um fosfonato de Fórmula 7 do Esquema C (R é alquilo inferior, haloalquilo ou arilo) . Os sais de sódio ou litio são pré-formados por tratamento anterior dos fosfonatos com uma base adequada tal como hidreto de sódio ou NaN(SiMe3)2 numa solvente inerte na reacção, preferivelmente etéreo aprótico a uma temperatura desde cerca de 0 °C até cerca de 50 °C. Um solvente preferido é o thf e uma temperatura preferida é a temperatura ambiente. Uma solução do aldeído é então adicionada ao sal do fosfonato num solvente inerte na reacção, preferivelmente um solvente aprótico a uma temperatura desde cerca de 0 °C até cerca de 50 °C para dar enonas de Fórmula 8 do Esquema C. Um solvente preferido é o THF. Uma temperatura preferida é a temperatura ambiente.

Esquema C 0

2 ou 4

O

O 8 Métodos para a preparação de fosfonatos de Fórmula 7 do Esquema Cl podem ser encontrados em Pat. dos 45 ΡΕ1339678 E.U.A. N° 3 932 398, Pat. dos E.U.A. N° 4 177 346, Tetrahedron Letters, 30, 36 (1989) 4787-4790, e Angew. Chem.f 108, 3 (1996) 366-369. Em geral, conforme mostrado no Esquema Cl, os fosfonatos de Fórmula 7 são preparados a partir da reacção dos ésteres de ácido (aril substituído) acético ou metoximetilamida do ácido arilacético com o reagente de lítio derivado de um metilfosfonato de dial-quilo. Estes métodos são também aplicáveis a ésteres cicloalquilacéticos e metoximetilamidas tais como ciclo-hexilacetato de etilo e ciclopentilacetato de etilo. Os ésteres de ácido aril- e cicloalquil-acético são preparados por esterificação do ácido acético correspondente por métodos conhecidos dos peritos na técnica. As metoximetilamidas são preparados por reacção de formação de ligação amida padrão entre o ácido acético correspondente e metoximetilamina. Preferivelmente, o acoplamento da amina com o ácido carboxílico é realizada num solvente inerte na reacção tal como diclorometano ou DMF por um reagente de acoplamento tal como hidrocloreto de 1-(3-dimetilami-nopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC) ou 1,3-diciclo-hexil-carbodiimida (DCC) na presença de um agente de activação de ácido tal como hidrato de 1-hidroxibenzotriazole (HOBT) para originar a metoximetilamida. No caso em que a amina está presente na forma de sal hidrocloreto, é preferível adicionar um equivalente de uma base adequada tal como trietilamina à mistura reaccional. Alternativamente, o acoplamento da amina com o ácido carboxílico é efectuado com um reagente de acoplamento tal como hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi-tris(dimetilamino)fosfónio (BOP) 46 ΡΕ1339678 num solvente inerte na reacção tal como metanol. Tais reacções de acoplamento são geralmente conduzidas a temperaturas desde cerca de -30 °C até cerca de 80 °C, preferivelmente desde cerca de 0 °C até cerca de 25 °C. Para uma discussão de outras condições usadas para acoplamentos amidicos, ver HeubenWeyl, Vol. XV, parte 11, E. Wunsch, Ed., George Theime Verlag, 1974, Estugarda.

Esquema Cl T-

R ,R > xLi 6 (T=0- alquilo,N(OMe)Me)

7

Os ácidos e ésteres arilacéticos necessários de Fórmula 6 do Esquema Cl estão comercialmente disponíveis ou são preparados por métodos bem conhecidos dos peritos na técnica. Conforme mostra o Esquema C2, muitos ácidos (aril substituído por arilo e heteroarilo)acéticos são preparados por acoplamentos de Suzuki dos ácidos arilborónicos ou ésteres de arilboronato apropriados com os haletos de arilo desejados (para uma revisão da reacção de acoplamento de Suzuki ver A. R. Martin e Y. Yang, Acta Chem. Scand., 47 (1993) 221, ou J. Am. Chem. Soc., 122, 17 (2000) 4020). Por exemplo, o éster de 3-pinacolboronato de 3-bromofenil-acetato de etilo é preparado usando o método descrito por Masuda et al., J. Org. Chem., 65 (2000) 164. O referido éster de 3-pinacolboronato de 3-bromofenilacetato de etilo 47 ΡΕ1339678 é em seguida acoplado com o haleto de arilo desejado para dar o ácido 3-aril-fenilacético desejado (ver Synlett., 6 (2000) 829). Os ésteres (aril substituído por hidroxi)acé-ticos são alquilados com haletos de alquilo e haletos ben-zílicos por métodos bem conhecidos dos peritos na técnica.

Esquema C2

o

Para uma revisão da preparação de éteres diarí licos, ver Angew. Chem., Ed. Int., 38, 16 (1999) 2345. Os ácidos arilacéticos substituídos com um encadeamento de éter alquílico são preparados usando condições de Mitsunobu (para uma revisão ver Synthesis, (1981) 1. Tipicamente, o acoplamento entre um componente fenólico e um álcool benzílico é conseguido pela adição de trifenilfosfina e azodicarboxilato de dietilo ou azodicarboxilato de diiso-propilo num solvente inerte na reacção tal como cloreto de 48 ΡΕ1339678 metileno ou THF.

Alternativamente, os fosfonatos de Fórmula 7 do Esquema D são preparados como se mostra no Esquema D. Em geral, fosfito de trietilo é adicionado lentamente a epí-bromo- ou epi-cloridrina (10) a uma temperatura cerca de 135 °C. À medida que o fosfito de trietilo é adicionado, a temperatura cai até cerca de 105 °C. A mistura reaccional é refluxada durante a noite e o produto, um composto de Fórmula 11, é isolado por destilação em vácuo (ver Phosphorus, Sulfur Silicon Relat. Elem., 165 (1992) 71, ou Pat. dos E.U.A. N° 2 627 521). As soluções de Grignard requeridas são preparadas a partir dos haletos de arilo apropriados de acordo com procedimentos bem conhecidos dos peritos na técnica num solvente inerte na reacção, preferivelmente um solvente etéreo tal como THF e arrefecido até aproximadamente -30 °C. Iodeto de cobre (I) catalítico é adicionado seguido pela adição do epóxido de Fórmula 11 [Phosphorus, Sulfur Silicon Relat. Elem., 105 (1995) 45]. Os haletos de arilo necessários (e. g., 3-bro-mo-bifenilo) estão comercialmente disponíveis ou são preparados por métodos bem conhecidos dos peritos na técnica.

Os álcoois resultantes são em seguida oxidados, preferivelmente usando uma oxidação de Swern [Synthesis, (1981) 165-185], ou reagente de Dess-Martin [J. Org. Chem., 48 (1983) 4155] . Procedimentos de oxidação alternativos tais como reacção de Pfitzner-Moffatt, complexo trióxido de crómio/piridina [R. Ratcliffe et al., J. Org. Chem., 35 49 ΡΕ1339678 (1970) 4000], branqueador TEMPO [Tetrahedron Letters, 33 (1992) 5029)], oxidação de Jones, dióxido de manganês, clorocromato de piridínio ou dicromato de piridínio também podem ser utilizados para preparar ceto-fosfonatos de Fórmula 7 do esquema D.

Esquema D hal

R I O

1) R2-Mg-X, Cul 2) [O] 11

R2

O O 7 10

Uma enona de Fórmula 8 do Esquema E (que também pode ser preparada como se mostra no Esquema C) é reduzida a uma mistura de diastereómeros de álcool de Fórmula 9 do esquema E por métodos bem conhecidos dos peritos na técnica. Em geral, a ligação dupla da enona é primeiro reduzida por hidrogenação catalítica. É preferido que a ligação dupla seja reduzida por hidrogenação sobre um catalisador de metal nobre tal como paládio em carbono ou óxido de platina num solvente inerte na reacção tal como acetato de etilo, metanol ou etanol desde a temperatura ambiente até à temperatura de refluxo do solvente a ser usado sob 1-4 atmosferas de hidrogénio. A cetona resultante é em seguida tratada com um agente de redução, preferivelmente tetra-hidretoborato de sódio, num solvente prótico, preferivelmente etanol ou metanol, para dar álcoois de Fórmula 9 do Esquema E. Outros agentes de 50 ΡΕ1339678 redução selectivos bem conhecidos dos peritos na técnica que reduzirão a cetona mas não outros grupos, e. g., tetra-hidretoborato de zinco ou trietil-hidretoborato de litio podem ser empregues com igual facilidade. A selecção da temperatura será baseada na actividade do agente de redução e estará preferivelmente entre cerca de 0 °C e a temperatura ambiente. Se desejado, a mistura de álcoois de Fórmula 9 pode ser separada por cromatografia preparativa ou HPLC para dar o diastereómero 15-(R) desejado.

Numa sequência alternativa mostrada no Esquema E, uma enona de Fórmula 8 do Esquema E é primeiro tratada com um agente de redução hidreto na presença de um catalisador quiral. Quando aqui usado, o termo "agente de redução hidreto" refere-se a compostos que são capazes de reduzir um composto que tem um estado de oxidação mais alto por transferência de hidrogénio para o composto. Um agente de redução hidreto preferido é o catecolborano. Um catalisador quiral preferido para a realização enantiosselectiva de tais reacções é o reagente {R)-2-metil-CBS-oxazaboro-lidina (Aldrich Chemical Co.) (ver o método descrito em Eur. Org. Chem., (1999) 2655). A redução é levada a cabo num solvente inerte na reacção, preferivelmente um solvente aprótico tal como cloreto de metileno, a uma temperatura desde cerca de -100 °C até à temperatura ambiente. Uma temperatura preferida para esta reacção é cerca de -40 °C. Métodos e catalisadores alternativos que são utilizados para efectuar a redução estereosselectiva da enonacarbonilo são descritos em J. Am. Chem. Soc.r 117 (1995) 2675, J. Ajxi. 51 ΡΕ1339678

Chem. Soc., 101 (1979) 5843, Tett. Lett., 31 (1990) 611, Pat. dos E.U.A. N° 6 037 505 e Angew. Chem. Int. Ed.r 37 (1998) 1986. A ligação dupla do álcool alílico é em seguida reduzida. É preferido que a ligação dupla seja reduzida por hidrogenação sobre um catalisador de metal nobre tal como paládio em carbono ou óxido de platina num solvente inerte na reacção tal como acetato de etilo, metanol ou etanol, à desde a temperatura ambiente até à temperatura de refluxo do solvente a ser usado sob 1-4 atmosferas de hidrogénio.

Esquema E

O O

j) Redução ^ biaestereose|ectiva^/s· ^

O 2) Hidrogenação

OH 9 8

Um procedimento alternativo para a preparação de compostos de fórmula 9 do Esquema F é mostrado no Esquema F. Em geral, a tetra-hidro-pirrolizina-3,5-diona (0 com- 52 ΡΕ1339678 posto de fórmula 12 do Esquema F) é preparada conforme descrito em Pat. dos E.U.A. N° 4 663 464 ou J. Med. Chem., 30, 3 (1987) 498-503. O composto de Fórmula 12 do Esquema F é em seguida dissolvido num solvente inerte na reacção, preferivelmente um solvente aprótico a uma temperatura adequada. É preferido que o referido composto seja dissolvido em cloreto de metileno a cerca de 0 °C. A mistura reaccional é em seguida tratada com o regente de Grignard apropriado (para referências adicionais sobre a adição de regentes de Grignard de Fórmula 12 do Esquema F, ver Synth. Commun., 18, 1 (1988) 37-44, e Helv. Chim. Acta, 70 (1987) 2003-2010). A reacção pode ser aquecida à temperatura ambiente para se efectuar a reacção completa. A cetona resultante é em seguida tratada com um agente de redução, preferivelmente tetra-hidretoborato de sódio num solvente prótico, preferivelmente etanol ou metanol. Outros reagen- tes de redução selectivos que reduzirão a cetona mas não outros grupos, e. g., tetra-hidretoborato de zinco ou trietil- -hidretoborato de litio podem ser empregues com igual facilidade. A selecção da temperatura será baseada na actividade do agente de redução, preferivelmente desde cerca de 0 °C até cerca da temperatura ambiente. O grupo hidroxilo resultante é em seguida adequadamente protegido. Os grupos de protecção de álcool padrão tais como tetra-hidropiranilo, trimetilsililo, terc-butil-dimetilsililo ou benzilo podem ser utilizados. Um grupo de protecção preferido é o terc-butil-dimetilsililo que é instalado por métodos padrão conforme descrito em T. w. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2a ed., 53 ΡΕ1339678

John Wiley and Sons Inc., Nova Iorque, 1991. As condições preferidas para esta reacção incluem o tratamento do álcool em DMF à temperatura ambiente com 0,1 eq. de 4-dimetil-aminopiridina, 1,1 eq. de cloreto de terc-butil-dime-tilsililo e 2 eq. de imidazole. O composto de Fórmula 13 do Esquema F resultante é em seguida alquilado no azoto com um de entre uma variedade de agentes de alquilação da fórmula hal-CH2CH2-X-QP para introduzir a cadeia lateral desejada. O azoto de amida é primeiro desprotonado com uma base adequada num solvente inerte na reacção. As bases preferidas para esta reacção incluem NaN(SiMe3)2) ou hidreto de sódio num solvente tal como DMF, tetra-hidrofurano, dimetoxietano ou dioxano. Um solvente especialmente preferido é DMF. O intervalo de temperatura apropriado para a formação de anião é entre -78 °C e cerca da temperatura à qual o solvente refluxa. É preferido que a reacção seja conduzida à temperatura ambiente. Após a formação do anião, o agente de alquilação da fórmula hal-CH2CH2-X-QP é adicionado e a solução é agitada a uma temperatura entre -20 °C e cerca da temperatura à qual o solvente refluxa. A temperatura preferida está entre a temperatura ambiente e 100 °C. Os agentes de alquilação típicos incluem haletos primários e sulfonatos primários. Preferivelmente, é usado um brometo de alquilo ou iodeto de alquilo. O grupo de protecção de álcool é em seguida removido por métodos bem conhecidos dos peritos na técnica (ver T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2a ed., John 54 ΡΕ1339678

Wiley and Sons Inc., Nova Iorque, 1991) para produzir compostos de Fórmula 9.

Esquema F

AcOH

1) R2CH2MgX 2) NaBH4 3) TBSCI

Os compostos de Fórmula 9 do Esquema F são convertidos a compostos de Fórmula I por métodos bem conhecidos dos peritos na técnica. Nos casos em que o grupo QP é um éster carboxilico, podem ser utilizadas condições de hidrólise aquosa acidicas ou básicas. Tipicamente, ésteres de alquilo inferior são hidrolisados 55 ΡΕ1339678 por hidrólise catalisada por base num solvente inerte na reacção desde a temperatura ambiente até cerca da temperatura de refluxo do solvente a ser usado. Preferivelmente, o éster de alquilo inferior é hidrolisado com solução aquosa 1 N de hidróxido de sódio em metanol a uma temperatura adequada, preferivelmente à temperatura ambiente. Quando QP é um éster de benzilo ou um éster de t-butilo, são utilizados métodos de desprotecção padrão conforme descritos em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2a ed., John Wiley and Sons Inc., Nova Iorque, 1991. Quando QP é um nitrilo e não um ácido carboxílico protegido, um método preferido para a preparação do tetrazole é o tratamento do nitrilo com óxido de dibutilestanho e trimetilsililazida em tolueno refluxante (S. J. Wittenberger e B. G. Donner, J. Org. Chem., 58 (1993) 4139-4141). Para uma revisão de preparações alternativas de tetrazoles ver R. N. Butler, "Tetrazoles", in Comprehensive Heterocyclic Chemistry; Ed. K. T. Potts; Pergamon Press; Oxford, 1984; Vol. 5, p 791-838.

Os agonistas selectivos do receptor EP4 de Fórmula I desta invenção estão todos adaptados ao uso terapêutico como agentes que estimulam a formação de osso e aumentam a massa óssea em vertebrados, e. g. mamíferos, e particularmente humanos. Uma vez que a formação óssea está estreitamente relacionada com o desenvolvimento da osteo-porose e desordens relacionadas com o osso, os agonistas usados nos métodos desta invenção, em virtude da sua acção 56 ΡΕ1339678 sobre o osso, previnem, param e/ou fazem regredir a osteo-porose. A utilidade dos agonistas selectivos de EP4 de Fórmula I da presente invenção como agentes medicinais no tratamento de condições que se apresentam com baixa massa óssea (e. g., osteoporose) em vertebrados, e. g. mamíferos (especialmente humanos e particularmente fêmeas humanas) é demonstrada pela actividade destes agonistas em ensaios convencionais, incluindo um ensaio de AMP cíclico, um ensaio in vivo e um ensaio de restabelecimento de fractura (todos eles descritos abaixo). Tais ensaios também proporcionam um meio pelo qual as actividades dos agonistas selectivos de EP4 de Fórmula I desta invenção podem ser comparadas entre elas próprios e com as actividades de outros compostos e composições conhecidos. Os resultados destas comparações são úteis para a determinação dos níveis de dosagem em vertebrados, e. g. mamíferos, incluindo humanos, para o tratamento de tais doenças.

Ensaio In Vivo A actividade de agentes anabólicos de osso na estimulação da formação de osso e no aumento da massa óssea pode ser testada em ratazanas machos ou fêmeas intactas, ratazanas deficientes em hormona do sexo machos (orquidectomia) ou fêmeas (ovariectomia).

Ratazanas machos ou fêmeas de diferentes idades 57 ΡΕ1339678 (tal como de 3 meses de idade) podem ser usadas no estudo. As ratazanas ou estão intactas ou castradas (ovariecto-mizadas ou orquidectomizadas) e são injectadas subcutanea-mente ou sondadas com um composto de Fórmula I desta invenção em diferentes doses (tais como 1, 3 ou 10 mg/kg/dia) durante 30 dias. Nas ratazanas castradas, o tratamento tem inicio no dia seguinte ao da cirurgia (para o propósito de prevenção de perda de osso) ou em momento em que a perda de osso tenha já ocorrido (para o propósito de reposição de massa óssea). Durante o estudo, a todas as ratazanas é dado livre acesso a água e a dieta comercial peletizada (Teklad Rodent Diet N° 8064, Harlan Teklad, Madison, WI) contendo 1,46% de cálcio, 0,99% de fósforo e 4,96 Ul/g de Vitamina D3. A todas as ratazanas são dadas injecções subcutâneas de 10 mg/kg de calceína nos dias 12 e 2 antes do sacrifício. As ratazanas são sacrificadas. São determinadas as finalizações que se seguem.

Medições de Mineral Ósseo Femoral O fémur direito de cada uma das ratazanas é removido na autópsia e examinado usando absorciometria de raios X de energia dual (DXA, QDR 1000/W, Hologic Inc., Waltham, MA) equipada com «software» "Regional High Resolution Scan" (Hologic Inc., Waltham, MA). A dimensão de campo de exame é de 5,08 x 1,902 cm, a resolução é de 0, 0254 x 0, 0127 cm e a velocidade de exame é de 7,25 mm/segundo. As imagens de exame femoral são analisadas e são determinados a área óssea, conteúdo mineral 58 ΡΕ1339678 ósseo (BMC) e a densidade mineral óssea (BMD) dos fémures completos (WF), metáfises femorais distais (DFM), haste femoral (FS) e fémures proximais (PF).

Análises Histomorfométricas do Osso Tibial A tibia direita é removida na autópsia, dissecada do músculo e cortada em três partes. A tibia proximal e a haste tibial são fixadas em etanol a 70%, desidratadas em concentrações graduais de etanol, desengorduradas em acetona, em seguida embebidas em metacrilato de metilo (Eastman Organic Chemicals, Rochester, NY).

Secções frontais de metáfises tibiais proximais de 4 e 10 μπι de espessura são cortadas usando micrótomo Reichert-Jung Polycut S. As secções de 4 μιη são tingidas com tinta Trichrome da Masson modificada enquanto as secções de 10 μπι permanecem não tingidas. Uma secção de 4 μπι e uma de 10 μπι de cada uma das ratazanas são usadas para histomorfometria do osso poroso.

Secções rectas de haste tibial com 10 μπι de espessura são cortadas usando um micrótomo Reichert-Jung Polycut S. Estas secções são usadas para análise histomorfométrica do osso cortical.

Histomorfometria do Osso Poroso

Um sistema de histomorfometria Bioquant OS/2 (R&M Biometrics, Inc., Nashville, TN) é usado para as medições histomorfométricas estáticas e dinâmicas da esponjosa 59 ΡΕ1339678 secundária das metáfises tibiais proximais entre 1,2 e 3,6 mm distais da articulação placo-epifisia de crescimento. Os primeiros 1,2 mm da região metafisia tibial necessitam de ser omitidos de maneira a restringir as medições à esponjosa secundária. As secções de 4 μιη são usadas para determinar índices relacionados com o volume do osso, estrutura do osso e reabsorção óssea, enquanto as secções de 10 μηι são usadas para determinar índices relacionados com a formação do osso e renovação óssea. I) Medições e cálculos relacionados com o volume e estrutura ósseas trabeculares (1) Área metafisia total (TV, mm2): área metafisia entre 1,2 e 3,6 mm distai em relação à articulação placo-epifisia de crescimento. (2) Área óssea trabecular (BV, mm2) : área total do trabéculo no interior da TV. (3) Perímetro ósseo trabecular (BS, mm): comprimento do perímetro total da trabécula. (4) Volume ósseo trabecular: (BV / TV, %) : BV / TV x 100. (5) Número ósseo trabecular: (TBN, N°/mm) : 1,199 / 2 x BS / TV. (6)

Espessura óssea trabecular: (TBT, μιη) : (2000 / 1, 199) x (BV / BS) . (7) Separação óssea trabecular: (TBS, pm) : (2000 x 1,199) x (TV - BV). II. Medições e cálculos relacionados com a reabsorção óssea (1) Número osteoclasto (OCN, N°): número total de osteoclastos no interior da área metafisia total. (2) 60 ΡΕ1339678

Perímetro osteoclasto (OCP, mm) : comprimento do perímetro trabecular coberto por osteoclastos. (3) Número de osteoclastos/mm (OCN/mm, N°/mm): OCN / BS. (4) Perímetro osteoclasto percentual (OCP%, %): OCP / BS x 100. III. Medições e cálculos relacionados com a formação e renovação ósseas (1) Perímetro etiquetado de calceína uma vez (SLS, mm) : comprimento total de perímetro etiquetado com uma etiqueta de calceína. (2) Perímetro etiquetado de calceína duplamente (DLS, mm) : comprimento total de perímetro trabecular etiquetado com duas etiquetas de calceína. (3) Largura inter-etiquetas (ILW, μιη) : distância média entre duas etiquetas de calceína. (4) Perímetro de mineralização em percentagem (PMS, %): (SLS / 2 + DLS) / BS x 100. (5) Taxa de aposição mineral (MAR, pm/dia): ILW / intervalo de etiqueta. (6) Taxa de formação óssea/ ref. superfície (BFR/BS, pm2/d/pm) : (SLS / 2 + DLS) x MAR / BS. (7) Taxa de renovação óssea (BTR, %/y) : (SLS / 2 + DLS) x MAR / BV x 100.

Histomorfometria do Osso Cortical

Um sistema de histomorfometria Bioquant OS/2 (R&M Biometrics, Inc., Nashville, TN) é usado para as medições histomorfométricas estáticas e dinâmicas do osso cortical da haste tibial. São medidas as área de tecido total, área da cavidade medular, perímetro do periósteo, perímetro endocortical, perímetro etiquetado uma vez, perímetro 61 ΡΕ1339678 etiquetado duplamente e largura inter-etiquetas em ambas as superfícies do periósteo e endocortical, e são calculadas as área óssea cortical (área de tecido total - área da cavidade medular), percentagem de área óssea cortical (área cortical / área de tecido total x 100), percentagem de área medular (área da cavidade medular / área de tecido total x 100), percentagem de perímetro etiquetado do periósteo e endocortical [(perímetro etiquetado uma vez / 2 + perímetro etiquetado duplamente) / perímetro total x 100], velocidade de aposição mineral (largura inter-etiquetas / intervalos) e velocidade de formação de osso [velocidade de aposição mineral x (perímetro etiquetado uma vez / 2 + perímetro etiquetado duplamente) / perímetro total] .

Estatística

A estatística pode ser calculada usando pacotes StatView 4.0 (Abacus Concepts, Inc., Berkeley, CA). O teste de análise de variância (ANOVA) seguido por PLSD de Fisher (StatView, Abacus Concepts, Inc., 1918 Bonita Ave, Berkeley, CA 94704-1014) são usados para comparar as diferenças entre os grupos. A sequência de codificação de comprimento total para o receptor EPi é feita conforme revelado em Funk et ai., Journal of Biological Chemistry, 268 (1993) 26767-26772. A sequência de codificação de comprimento total para o receptor EP2 é feita conforme revelado em 62 ΡΕ1339678

Regan et al., Molecular Pharmacology, 46 (1994) 213-220. A sequência de codificação de comprimento total para o

receptor EP3 é feita conforme revelado em Regan et al., Britlsh Journal of Pharmacology, 112 (1994) 377-385. A sequência de codificação de comprimento total para o receptor EP4 é feita conforme revelado em Bastien, Journal of Biological Chemistry, 269 (1994) 11873-11877. Estes receptores de comprimento total são usados para preparar células 293S que expressam os receptores EPi, EP2, EP3 ou ep4. Células 293S que expressam qualquer dos receptores ΕΡχ, EP2, EP3 ou EP4 de prostaglandina E2 são gerados de acordo com métodos conhecidos dos peritos na técnica. Tipicamente, tipos elementares de PCR (reacção em cadeia de polimerase) correspondendo a termos de 5' e 3' do receptor de comprimento total publicado são feitos de acordo com métodos bem conhecidos revelados acima e são usados numa reacção RT-PCR usando o RNA total de rim humano (para ΕΡχ), pulmão humano (para EP2), pulmão humano (para EP3) ou linfócitos humanos (para EP4) como fonte. Produtos de PCR são clonados pelo método de suspensão TA em pCR2.1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) e a identidade do receptor clonado é confirmada por sequenciação de DNA. Células 293S (Mayo, Dept. de Bioquímica, Univ. de Northwestern) são transferidas ("trans-infectadas") com o receptor clonado em pcDNA3 por electroporação. Linhagens de células estáveis que expressam o receptor são 63 ΡΕ1339678 estabelecidas a seguir à selecção de células "trans-infectadas" com G418.

Linhagens de células clonais que expressam o número máximo de receptores são escolhidas a seguir ao ensaio de ligação de 3H-PGE2 a célula completa usando PGE2 não marcado como competidor.

Ensaios de Restabelecimento da Fractura

Ensaio aos Efeitos no Restabelecimento da Fractura Após Administração Sistémica Técnica de Fractura

Ratazanas Sprague-Dawley de 3 meses de idade são anestesiadas com cetamina. Uma incisão de 1 cm é feita na face anteromédia da parte proximal da tíbia ou fémur direito. 0 que se segue descreve a técnica cirúrgica tibial. A incisão é realizada até ao osso e um orifício de 1 mm é furado a 4 mm da face distai da tuberosidade tibial 2 mm medial ao sulco anterior. A pregagem intramedular é feita com tubo de aço inoxidável de 0,8 mm (carga máxima de 36,3 N, inflexibilidade máxima de 61,8 N/mm, testado sob as mesmas condições dos ossos). Não é realizado nenhum alargamento do canal medular. Uma fractura fechada padronizada é produzida 2 mm acima da articulação tibiofibular por dobragem de três pontos usando fórceps ajustáveis especialmente desenhados com mordentes sem corte. Para minimizar os danos no tecido mole, são tomados cuidados para não deslocar a fractura. A pele é fechada com suturas -64- ΡΕ1339678 de «nylon» de monofilamento. A operação é realizada sob condições estéreis. Radiografias de todas as fracturas são tiradas imediatamente depois da pregagem e as ratazanas com fracturas exteriores à área diafisea especificada ou com pregos deslocados são excluídas. Os animais restantes são divididos aleatoriamente nos grupos seguintes com 10-12 animais por cada subgrupo por momento para a testagem do restabelecimento da fractura. O primeiro grupo recebe sondagem diária de veiculo (água:100% etanol = 95:5) a 1 mL/ratazana, enquanto os outros recebem sondagem diária desde 0,01 até 100 mg/kg/dia do composto a ser testado (1 mL/ratazana) durante 10, 20, 40 e 80 dias.

Aos 10, 20, 40 e 80 dias, 10 - 12 ratazanas de cada grupo são anestesiadas com cetamina e sacrificados por sangria. Ambos os ossos tibiofibulares são removidos por dissecção e todos os tecidos moles são removidos. Os ossos de 5 - 6 ratazanas de cada grupo são guardados em etanol a 70% para análise histológica e os ossos de outras 5-6 ratazanas de cada grupo são guardadas numa solução de Ringer tamponizada (+4 °C; pH 7,4) para radiografias e testagem biomecânica que é realizada.

Análise Histológica

Os métodos para análise histológica de ossos fracturados foram anteriormente publicados por Mosekilde e Bak ("The Effects of Growth Hormone on Fracture Healing in Rats: A Histological Description", Bone 14 (1993) 19-27). 65 ΡΕ1339678

Em resumo, o lado da fractura é serrado 8 mm para cada lado da linha de fractura, embebido descalcifiçado em metacrilato de metilo e são cortadas secções frontais num micrótomo Reichert-Jung Polycut com espessura de 8 μπι. Secções meio frontais manchadas com tinta Trichrome de Masson (que incluem não só a tíbia mas também a fíbula) são usadas para visualização da resposta celular e do tecido ao restabelecimento da fractura com e sem tratamento. Secções manchadas de vermelho de Sírius são usadas para demonstrar as características da estrutura de calo e para diferenciar entre osso tecido e osso lamelar no local da fractura. São realizadas as seguintes medidas: (1) abertura da fractura - medida como a distância mais curta entre os extremos do osso cortical na fractura, (2) comprimento do calo e diâmetro do calo, (3) área do calo do volume de osso total, (4) tecido ósseo por área de tecido no interior da área de calo, (5) tecido fibroso no calo, (6) área de cartilagem no calo.

Análise Biomecânica

Os métodos para análise biomecânica foram anteriormente publicados por Bak e Andreassen ("The Effects of Aging on Fracture Healing in Rats", Calcif Tissue int. 45 (1989) 292-297). Em resumo, foram tiradas radiografias de todas as fracturas antes do teste biomecânico. As propriedades mecânicas das fracturas em restabelecimento são analisadas por um procedimento de dobragem de três ou quatro pontos destrutiva. São determinadas a carga máxima, 66 ΡΕ1339678 inflexibilidade, energia em carga máxima, deflexão em carga máxima e estresse máximo.

Ensaio aos Efeitos no Restabelecimento da Fractura Após Administração Local Técnica da Fractura Cães bigles machos e fêmeas de aproximadamente 2 anos de idade são usados sob anestesia no estudo. Frac-turas radiais transversais são produzidas por carga continua lenta em dobragem de três pontos conforme descrito por Lenehan et al. (T. M. Lenehan, M. Balligand, D. M.

Nunamaker, F. E. Wood, "Effects of EHDP on Fracture Healing in Dogs", J. Orthop. Res. 3 (1985) 499-507). O arame é puxado através do local da fractura para se assegurar a rotura anatómica completa do osso. Depois disso, a entrega local de agonistas de prostaglandina no local da fractura é conseguida pela libertação lenta do composto entregue por péletes de libertação lenta ou por administração dos compostos numa formulação adequada tal como solução ou suspensão de gel em pasta durante 10, 15 ou 20 semanas.

Análise Histológica

Os métodos para análise histológica de ossos fracturados foram anteriormente publicados por Peter et al. (C. P. Peter, W. 0. Cook, D. M. Nunamaker, Μ. T. Provost, J. G. Seedor e G. A. Rodan, "Effects of alendronate on fracture healing and bone remodeling in dogs", J. Orthop. Res. 14 (1996) 74-70) e Mosekilde e Bak ("The Effects of 67 ΡΕ1339678

Growth Hormone on Fracture Healing in Rats: A Histological Description", Bone 14 (1993) 19-27) . Em resumo, após o sacrifício, o lado da fractura é serrado 3 cm para cada lado da linha de fractura, embebido descalcifiçado em metacrilato de metilo e são cortadas num micrótomo Reichert-Jung Polycut em secções frontais de espessura de 8 pm. Secções meio frontais manchadas com tinta Masson-Trichrome (incluindo não só a tíbia mas também a fíbula) são usadas para visualização da resposta celular e de tecido ao restabelecimento da fractura com e sem tratamento. Secções manchadas de vermelho de Sírius são usadas para demonstrar as características da estrutura de calo e para diferenciar entre osso tecido e osso lamelar no local da fractura. São realizadas as seguintes medidas: (1) abertura da fractura - medida como a distância mais curta entre os extremos do osso cortical na fractura, (2) comprimento do calo e diâmetro do calo, (3) área do calo do volume de osso total, (4) tecido ósseo por área de tecido no interior da área do calo, (5) tecido fibroso no calo, (6) área de cartilagem no calo.

Análise Biomecânica

Os métodos para análise biomecânica foram anteriormente publicados por Bak e Andreassen ("The Effects of Aging on Fracture Healing in Rats", Caleif. Tissue Int. 45 (1989) 292-297) e Peter et ai. (C. P. Peter, W. 0. Cook, D. M. Nunamaker, Μ. T. Provost, J. G. Seedor e G. A. Rodan, "Effects of Alendronate On Fracture Healing And Bone 68 ΡΕ1339678

Remodeling In Dogs", J. Orthop. Res. 14 (1996) 74-70). Em resumo, foram tiradas radiografias de todas as fracturas antes do teste biomecânico. As propriedades mecânicas das fracturas em restabelecimento são analisadas por um procedimento de dobragem de três ou quatro pontos destrutiva. São determinadas a carga máxima, inflexibilidade, energia em carga máxima, deflexão em carga máxima e «stress» máximo.

Ensaio de Regeneração do Rim O papel de um agonista de prostaglandina na regeneração do rim é investigado pela capacidade da Prostaglandina E2 (PGE2) ou um agonista de prostaglandina selectivo induzir a expressão da Proteina 7 Morfogenética do Osso (BMP-7) em células selvagens do tipo 293S e células 293S "trans-infectadas" com o receptor de EP2. Métodos Células 293S e 293S são cultivadas em meio de Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM, Gibco, BRL; Gaithersburg, MD) . Um dia antes do tratamento com PGE2 ou um agonista de prostaglandina, as células foram colocadas em placas com uma densidade de 1,5·106 células/prato de 10 cm. Geralmente, cerca de 16 a 24 horas mais tarde, a monocamada de células é lavada uma vez com OptiMEM (Gibco, BRL; Gaithersburg, MD) seguido pela adição de 10 mL de OptiMEM/prato na presença e ausência de veiculo (DMSO), PGE2 (10~6 m) ou um agonista de prostaglandina (10~6 M) . As 69 ΡΕ1339678 células são colhidas e o RNA é extraído às 8, 16 e 24 horas. A análise de mancha Northern do RNA total (20 mg/pista) é realizada sondando as manchas com sonda de o o BMP-7 marcada com P. As manchas sao normalizadas para carga de RNA por hibridização com sonda de RNA ribossómica 18s marcada com 32P. PGE2 e os agonistas de prostaglandina induzem a expressão de BMP-7 nas células 293S de EP2 de uma maneira dependente do tempo. Tal indução de expressão não é geralmente observada na linhagem de células progenitoras. Dado o papel conhecido da BMP-7 na regeneração do rim e a capacidade de um agonista de prostaglandina induzir a expressão de BMP-7 em células de rim 293S num tempo e a maneira especifica do receptor indica um papel para o agonista de prostaglandina na regeneração do rim.

Os peritos na técnica reconhecerão que agentes anti-reabsortivos (por exemplo progestinas, polifosfonatos, bifosfonato(s), agonistas/antagonistas de estrogénio, estrogénio, combinações de estrogénio/progestina, Premarin©, estrona, estriol ou 17a- ou 17p-etinil-estradiol) podem ser usados em conjugação com os compostos desta invenção.

Progestinas exemplares estão disponíveis em fontes comerciais e incluem: acetofeneto de algestona, altrenogest, acetato de amadinona, acetato de anagestona, acetato de clormadinona, cingestol, acetato de clogestona, acetato de clomegestona, acetato de delmadinona, deso-gestrol, dimetisterona, didrogestrona, etinerona, diacetato de etinodiol, etonogestrel, acetato de flurogestona, 70 ΡΕ1339678 gestaclona, gestodeno, caproato de gestonorona, gestrinona, haloprogesterona, caproato de hidroxiprogesterona, levonor-gestrel, linestrenol, medrogestona, acetato de medroxipro-gesterona, acetato de melengestrol, diacetato de metino-diol, noretindrona, acetato de noretindrona, noretinodrel, norgestimate, norgestomet, norgestrel, fenpropionato de oxogestona, progesterona, acetato de quingestanol, quinges-trona e tigestol.

Progestinas preferidas são medroxiprogestrona, noretindrona e noretinodrel.

Polifosfonatos que inibem a reabsorção óssea exemplares incluem polifosfonatos do tipo revelado na Patente dos E.U.A. N° 3 683 080, cuja revelação é aqui incorporada por referência. Polifosfonatos preferidos são difosfonatos geminais (também referidos como bis-fosfo-natos). Tiludronato de dissódio é um polifosfonato especialmente preferido. Ácido ibandrónico é um polifosfonato especialmente preferido. Alendronato é um polifosfonato especialmente preferido. Ácido zoledrónico é um polifos-fonato especialmente preferido. Outros polifosfonatos preferidos são ácido 6-amino-l-hidroxi-hexilideno-bifos-fónico e ácido l-hidroxi-3-(metilpentilamino)-propili-deno-bisfosfónico. Os polifosfonatos podem ser administrados na forma do ácido ou de um sal de metal alcalino solúvel ou sal de metal alcalino-terroso. Ésteres hidro-lizáveis dos polifosfonatos são incluidos de modo semelhante. Exemplos específicos incluem ácido etano-l-hidro- 71 ΡΕ1339678 xi-1,1-difosfónico, ácido metano-difosfónico, ácido pen-tano-l-hidroxi-1,1-difosfónico, ácido metano-dicloro-difos-fónico, ácido metano-hidroxi-difosfónico, ácido etano-1-amino-1,1-difosfónico, ácido etano-2-amino-l,1-difosfónico, ácido propano-3-amino-l-hidroxi-l,1-difosfónico, ácido pro-pano-N,N-dimetil-3-amino-l-hidroxi-l,1-difosfónico, ácido propano-3,3-dimetil-3-amino-l-hidroxi-l, 1-difosfónico, ácido fenil-amino-metano-difosfónico, ácido N,N-dimetilamino-metano-difosfónico, ácido N-(2-hidroxietil)amino-metano-difosfónico, ácido butano-4-amino-l-hidroxi-l, 1-difos-fónico, ácido pentano-5-amino-l-hidroxi-l,1-difosfónico, ácido hexano-6-amino-l-hidroxi-l,1-difosfónico e seus ésteres e sais farmaceuticamente aceitáveis.

Em particular, os compostos desta invenção podem ser combinados com um agonista/antagonista de estrogénio de mamífero. Qualquer agonista/antagonista de estrogénio pode ser usado como segundo composto desta invenção. 0 termo agonista/antagonista de estrogénio refere-se a compostos que se ligam com o receptor de estrogénio, inibem a renovação do osso e/ou previnem a perda de osso. Em particular, os agonistas de estrogénio são aqui definidos como compostos químicos capazes de ligação aos sítios de receptor de estrogénio em tecido de mamífero, e que mimam as acções de estrogénio em um ou mais tecidos. Os antagonistas de estrogénio são aqui definidos como compostos químicos capazes de ligação aos sítios de receptor de estrogénio em tecido de mamífero, e que bloqueiam as acções de estrogénio em um ou mais tecidos. Tais actividades são 72 ΡΕ1339678 prontamente determinadas pelos peritos na técnica de ensaios padrão incluindo ensaios de ligação a receptor de estrogénio, métodos histomorfométricos ósseos padrão e de densitómetro padrão, e E. F. Eriksen et ai., "Bone Histomorphometry", Raven Press, New York, 1994, p 1-74, S. J. Grier et al., "The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animais", Inv. Radiol., 31(1) (1996) 50-62; H. W. Wahner e Fogelman I., "The Evaluation of Osteoporosis: Dual-Energy X-Ray Absorptiometry in Clinicai Practice., Martin Dunitz Ltd., Londres, 1994, p 1-296). Uma variedade destes compostos está descrita e referenciada abaixo.

Um agonista/antagonista de estrogénio preferido é o droloxifeno: (fenol, 3-(l-(4-(2-(dimetilamino)etoxi)-fenil)-2-fenil-l-butenil)-, (£)-) e compostos relacionados que são revelados na Pat. dos E.U.A. N° 5 047 431, cuja revelação é aqui incorporada por referência.

Um outro agonista/antagonista de estrogénio preferido é o ácido 3-(4-(1,2-difenilbut-l-enil)-fenil)-acrílico, o qual é revelado em Wilson et al., Endo-crinology, 138 (1997) 3901-3911.

Um outro agonista/antagonista de estrogénio preferido é o tamoxifeno: (etanamina, {Z)~2-, 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxilato de 2-(4-(1,2-difenil-l-bute-nil)fenoxi)-N, N-dimetilo, (1:1)) e compostos relacionados que são revelados na Pat. dos E.U.A. N° 4 536 516, cuja 73 ΡΕ1339678 revelação é aqui incorporada por referência.

Um outro composto relacionado é o 4-hidroxi-tamo-xifeno que é revelado na Patente dos E.U.A. N° 4 623 660, cuja revelação é aqui incorporada por referência.

Um agonista/antagonista de estrogénio preferido é o raloxifeno: (metanona, hidrocloreto de (6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tien-3-il)(4-(2-(1-piperidinil)etoxi)-fenil)-), o qual é revelado na Patente dos E.U.A. N° 4 418 068, cuja revelação é aqui incorporada por referência .

Um outro agonista/antagonista de estrogénio preferido é o toremifeno: (etanamina, (2)-, 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxilato de 2-(4-(4-cloro-l,2-dife-nil-l-butenil)fenoxi)-N, w-dimetilo, (1:1)) que é revelada na Patente dos E.U.A. N° 4 996 225, cuja revelação é aqui incorporada por referência.

Um outro agonista/antagonista de estrogénio preferido é o centcromano: 1-(2-((4-(metoxi-2,2-dimetil-3-fenil-croman-4-il)-fenoxi)-etil)-pirrolidina, a qual é revelada na Patente dos E.U.A. N° 3 822 287, cuja revelação é aqui incorporada por referência. É também preferido o levormeloxifeno.

Um outro agonista/antagonista de estrogénio preferido é o idoxifeno: (E)-1-(2-(4-(1-(4-iodo-fenil)-2- 74 ΡΕ1339678 fenil-but-l-enil)-fenoxi)-etil)-pirrolidinona, o qual é revelado na Patente dos E.U.A. N° 4 839 155, cuja revelação é aqui incorporada por referência.

Um outro aqonista/antaqonista de estroqénio preferido é o 2-(4-metóxi-fenil)-3-[4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-fenoxi]-benzo[b]tiofen-6-ol, o qual é revelado na Patente dos E.U.A. N° 5 488 058, cuja revelação é aqui incorporada por referência.

Um outro agonista/antagonista de estrogénio preferido é o 6-(4-hidroxi-fenil)-5-(4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-benzil)-naftalen-2-ol que é revelado na Patente dos E.U.A. N° 5 484 795, cuja revelação é aqui incorporada por referência.

Um outro agonista/antagonista de estrogénio preferido é o (4-(2-(2-azabiciclo[2.2.1]-hept-2-il)-etoxi)-fenil)-(6-hidroxi-2-(4-hidroxi-fenil)-benzo[b]tiofen-3-il)-metanona que é revelada em companhia com métodos de preparação, na publicação da PCT N° wo 95/10513 cedida a Pfizer Inc.

Outros agonistas/antagonistas de estrogénio preferidos incluem compostos conforme descrito na comummente cedida Patente dos E.U.A. N° 5 552 412, cuja revelação é aqui incorporada por referência.

Compostos especialmente preferidos aqui descritos 75 ΡΕ1339678 são : cis-6-(4-fluoro-fenil)-5-(4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,7,8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol; (-)-cís-6-fenil-5-(4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,7,8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol (lasofoxifeno); cis—6—fenil—5—(4—(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,7, 8-tetra-hidro-naftaleno-2-ol; cís-1-(6'-pirrolidinoetoxi-3'-piridil)-2-fenil-6-hi-droxi-1, 2,3,4-tetra-hidro-naftaleno; 1-(4'-pirrolidinoetoxifenil)-2-(4"-fluorofenil)-6-hi-droxi-1, 2,3, 4-tetra-hidroisoquinolina; cis-6-(4-hidroxifenil)-5-(4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-fenil)-5,6,7,8-tetra-hiro-naftaleno-2-ol; e 1-(4'-pirrolidinoetoxifenil)-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina.

Outros agonistas/antagonistas de estrogénio são descritos na Patente dos E.U.A. N° 4 133 814 (cuja revelação é aqui incorporada por referência). A Patente dos E.U.A. N° 4 133 814 revela derivados de 2-fenil-3-aroil-benzotiofeno e 2-fenil-3-aroilbenzotiofeno-l-óxido.

Os peritos na técnica reconhecerão que outros agentes anabólicos de osso, também referidos como agentes aumentadores da massa óssea, podem ser usados em conjugação com os compostos desta invenção. Um agente aumentador da massa óssea é um composto que aumenta a massa óssea até um nivel que esteja abaixo do limiar da fractura óssea 76 ΡΕ1339678 conforme detalhado no Estudo da Organização Mundial de Saúde, "Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Post menopausal Osteoporosis (1994). Report of a WHO Study Group. World Health Organization Technical Series 843".

Qualquer prostaglandina ou agonista/antagonista de prostaglandina pode ser usada como segundo composto desta invenção. Isto inclui a utilização de dois compostos de Fórmula I diferentes desta invenção. Os peritos na técnica reconhecerão que IGF-1, fluoreto de sódio, hormona da paratiróide (PTH), fragmentos activos de hormona da paratiróide, hormona do crescimento ou secretores da hormona do crescimento podem também usados. Os parágrafos seguintes descrevem exemplos de segundos compostos desta invenção em maior detalhe.

Qualquer prostaglandina pode ser usada como segundo composto em certos aspectos desta invenção. 0 termo prostaglandina refere-se a compostos que são análogos das prostaglandinas naturais PGDi, PGD2, PGE2, PGEi e PGF2 que são úteis no tratamento da osteoporose. Tais compostos ligam-se aos receptores de prostaglandina. Tal ligação é prontamente determinada pelos peritos na técnica de ensaios padrão (e. g., An S. et al., "Cloning and Expression of the EP2 Subtype of Human Receptors for Prostaglandin E2", Biochemical and Biophysical Research Communications, 197(1) (1993) 263-270). 77 ΡΕ1339678

As prostaglandinas são compostos alicíclicos relacionados com o composto básico ácido prostanóico. Os átomos de carbono da prostaglandina básica são numerados sequencialmente a partir do átomo de carbono carboxílico através do anel de ciclopentilo para o átomo de carbono terminal na cadeia lateral adjacente. Normalmente, as cadeias laterais adjacentes têm a orientação trans. A presença de um grupo oxo em C-9 da porção ciclopentilo é indicativa de uma prostaglandina dentro da classe E enquanto PGE2 contém uma ligação dupla insaturada trans em C13-C14 e uma ligação dupla eis na posição C5-C6.

Uma variedade de prostaglandinas é descrita e referenciada abaixo, contudo, outras prostaglandinas serão conhecidas dos peritos na técnica. Exemplos de prostaglandinas são revelados nas Patentes dos E.U.A. Nos 4 171 331 e 3 927 197 (cujas revelações são aqui incorporadas por referência).

Norrdin et al., The Role of Prostaqlandins in Bone In Vivo, Prostaglandins Leukotriene Essential Fatty Acids, 41 (1990) 139-150, é uma revisão das prostaglandinas anabólicas do osso.

Qualquer agonista/antagonista de prostaglandina pode ser usado como segundo composto em certos aspectos desta invenção. O termo agonista/antagonista de prostaglandina refere-se a compostos que se ligam a receptores de prostaglandina (e. g., An S. et al., Cloning and expression 78 ΡΕ1339678 of the EP2 Subtype of Human Receptor for Prostaqlandin E2", Biochemical and Biophysical Research Communications, 197(1) (1993) 263-270) e mimam a acção da prostaglandina in vivo (e. g., estimulam a formação óssea e aumentam a massa óssea). Tais acções são prontamente determinadas pelos peritos na técnica de ensaios padrão (E. F. Eriksen et al., "Bone Histomorphometry", Raven Press, Nova Iorque, 1994, p 1-74; S. J. Grier et al., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animais, Inv. Radiol., 31(1) (1996) 50-62; H. W. Wahner e I. Fogelman, The Evaluation of

Osteoporosis: Dual-Energy X-Ray Absorptiometry in Clinicai Practice, Martin Dunitz Ltd., London, 1994, p 1-296). Uma variedade destes compostos está descrita e referenciada abaixo. Contudo, outros agonistas/antagonistas de prostaglandina serão conhecidos dos peritos na técnica. Exemplos de agonistas/antagonistas de prostaglandina são revelados como se segue. A comummente cedida Patente dos E.U.A. N° 3 932 389, cuja revelação é aqui incorporada por refe rência, revela 2-descarboxi-2-(tetrazol-5-il)-ll-desoxi-15-substituído-ómega-pentanorprostaglandinas úteis para a actividade de formação do osso. A comummente cedida Patente dos E.U.A. N° 4 018 892, cuja revelação é aqui incorporada por refe rência, revela ésteres de p-bifenilo de 16-aril-13,14-di-hidro-PGE2 úteis para a actividade de formação de osso. 79 ΡΕ1339678 A comummente cedida Patente dos E.U.A. N° 4 219 483, cuja revelação é aqui incorporada por referência, revela 2,3,6-substituída-4-pironas úteis para a actividade de formação de osso. A comummente cedida Patente dos E.U.A. N° 4 132 847, cuja revelação é aqui incorporada por referência, revela 2,3,6-substituída-4-pironas úteis para a actividade de formação de osso. A Patente dos E.U.A. N° 4 000 309, cuja revelação é aqui incorporada por referência, revela ésteres de p-bifenilo de 16-aril-13,14-di-hidro-PGE2 úteis para a actividade de formação de osso. A Patente dos E.U.A. N° 3 982 016, cuja revelação é aqui incorporada por referência, revela ésteres de p-bifenilo de 16-aril-13,14-di-hidro-PGE2 úteis para a actividade de formação de osso. A Patente dos E.U.A. N° 4 621 100, cuja revelação é aqui incorporada por referência, revela ciclopentanos substituídos úteis para a actividade de formação de osso. A Pat. E.U.A. N° 5 216 183, cuja revelação é aqui incorporada por referência, revela ciclopentanonas úteis para a actividade de formação de osso. O fluoreto de sódio pode ser usado como segundo 80 ΡΕ1339678 composto em certos aspectos desta invenção. O termo fluoreto de sódio refere-se a fluoreto de sódio em todas as suas formas (e. g., fluoreto de sódio de libertação lenta, fluoreto de sódio de libertação sustentada). O fluoreto de sódio de libertação sustentada é revelado na Patente dos E.U.A. N° 4 904 478, cuja revelação é aqui incorporada por referência. A actividade do fluoreto de sódio é prontamente determinada pelos peritos na técnica de protocolos biológicos (e. g., ver E. F. Eriksen et ai., "Bone Histomorphometry", Raven Press, New York, 1994, p 1-74; S. J. Grier et al., "The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animais", Inv. Radiol., 31(1) (1996) 50-62; H. W. Wahner e I. Fogelman, "The Evaluation of Osteoporosis: Dual-Energy X-Ray Absorptiometry in Clinicai Practice", Martin Dunitz Ltd., London, 1994, páginas 1-296) . A proteína morfogenética do osso pode ser usada como segundo composto desta invenção (e. g., ver Ono et al., Promotion of the Osteogenetic Activity os Recombinant Human Bone Morphoqenetic Protein by Prostaqlandin El, Bone, 19(6) (1996) 581-588).

Qualquer hormona paratiróide (PTH) pode ser usada como segundo composto em certos aspectos desta invenção. O termo hormona paratiróide refere-se à hormona paratiróide, seus fragmentos ou metabolitos e seus análogos estruturais que podem estimular a formação óssea e aumentar a massa óssea. Estão também incluídos péptidos relacionados com a 81 ΡΕ1339678 hormona paratiróide e fragmentos e análogos activos de péptidos relacionados com a paratiróide (ver Publicação da PCT N° WO 94/01460. Tal actividade funcional anabólica do osso é prontamente determinada pelos peritos na técnica de acordo com ensaios padrão (e. g., ver E. F. Eriksen et al., "Bone Histomorphometry", Raven Press, New York, 1994, p 1-74; S. J. Grier et al., "The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animais", Inv. Radiol., 31(1) (1996) 50-62; H. W. Wahner e I. Fogelman, "The Evaluation of Osteoporosis: Dual-Energy X-Ray Absorptiometry in Clinicai Practice", Martin Dunitz Ltd., London, 1994, p 1-296). Uma variedade destes compostos é descrita e referenciada abaixo, contudo, outras hormonas paratiróides serão conhecidas dos peritos na técnica. Exemplos de hormonas paratiróides são revelados nas referências seguintes. "Human Parathyroid Peptide Treatment of Vertebral Osteoporosis", Osteoporosis Int., 3 (Sup 1) 199-203. "PTH 1-34 Treatment of Osteoporosis with Added Hormone Replacement Therapy: Biochemical, Kinetic and Histoloqical Responses", Osteoporosis Int., 1 162-170.

Qualquer hormona do crescimento ou secretor da hormona do crescimento pode ser usada como segundo composto em certos aspectos desta invenção. O termo secretor da hormona do crescimento refere-se a compostos que estimulam a libertação da hormona do crescimento ou mimam a acção da hormona do crescimento (e. g., aumentam a formação de osso 82 ΡΕ1339678 conduzindo a uma massa óssea aumentada). Tais acções são prontamente determinadas pelos peritos na técnica de ensaios padrão bem conhecidos dos peritos na técnica. Uma variedade de tais compostos está revelada nos seguintes Pedidos de Patente PCT publicados: WO 95/14 666, WO 95/13 069,WO 94/19 367, WO 94/13 696 e WO 95/34 311. Contudo, outras hormonas do crescimento ou secretores de hormona do crescimento serão conhecidas dos peritos na técnica.

Em particular, um secretor de hormona do crescimento preferido é a N-[1(R)-[1,2-di-hidro-l-metanos-sulfonilespiro[3H-indolo-3,4'-piperidin]-1'-il)carbonil]-2--(fenilmetiloxi)etil]-2-amino-2-metilpropanamida: MK-677.

Outros secretores da hormona do crescimento preferidos incluem 2-amino-N-(2-(3a-(R)-benzil-2-metil-3-oxo-2,3,3a,4,6,7-hexa-hidro-pirazolo-(4,3-c)piridin-5-il) -1-(R)benziloximetil-2-oxo-etil)-isobutiramida ou seu sal de ácido L-tartárico, 2-amino-N- (1-(R)-benziloximetil-2-(3a-(R)-(4-fluoro-benzil)-2-metil-3- -oxo-2,3,3a,4,6,7-hexa-hidro-pirazolo[4,3—c]piridin-5-il)-2-oxo-etil]isobutiramida, 2-amino-N-(2-(3a-(P)-benzil-3-oxo-2,3,3a,4,6,7-hexa-hidro-pirazolo- (4,3-c)piridin-5-il)-1-(R)-benziloximetil-2-oxo-etil)isobutiramida e 2-amino-N-(1-(2, 4-difluoro-benziloximetil)-2-oxo-2-(3- 83 ΡΕ1339678 oxo-3a-piridin-2-ilmetil-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-2,3,3a,4,6,7-hexa-hidro-pirazolo-[4,3-c]piridin-5-il)-etil}-2-metil-propionamida. O termo "inibidor de HMG-CoA-redutase" pretende incluir compostos que inibem a enzima 3-hidroxi-3-metil-glutaril-coenzima A (HMG-CoA)-redutase. Qualquer inibidor de HMG-CoA-redutase pode ser usado como segundo composto desta invenção, incluindo mevastatina, lovastatina, pravastatina, velostatina, simvastatina, fluvastatina, cerivastatina, mevastatina, dalvastatina, fuindostatina e atorvastatina, ou uma sua pró-droga ou um sal farmaceu-ticamente aceitável do referido composto ou referida pró-droga.

As estatinas aumentam a produção de osteoblastos, as células que produzem osso novo. A expressão do factor de crescimento do osso «Bone Morphogenetic Protein (BMP)» Proteina Morfogenética do Osso é conhecida por aumentar a diferenciação do osteoblasto (S. E. Harris et al., Mol. Cell. Differ., 3 (1995) 137). Por sua vez, as estatinas aumentam a produção da BMP (G. Mundy et al., "Stimulation of Bone Formation in Vitro and in Rodents by Statins", Science, 286 (1999) 1946). Mundy e outros encontraram que as estatinas aumentam a formação de osso novo bem como aumentam o número de células osteoblastos em todos os estágios de diferenciação. É preferido que a referida estatina seja mevasta- 84 ΡΕ1339678 tina, lovastatina, pravastatina, velostatina, simvastatina, fluvastatina, cerivastatina, mevastatina, dalvastatina, fuindostatina e atorvastatina, ou uma sua pró-droga ou um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou referida pró-droga. É especialmente preferido que a referida estatina seja atorvastatina, mais preferivelmente atorvastatina cálcio.

Os inibidores de HMG-CoA-redutase podem ser prontamente preparados por processos conhecidos nas técnicas químicas. Mevastatina, lovastatina, pravastatina, velostatina, simvastatina, fluvastatina, cerivastatina e mevastatina, dalvastatina e fuindostatina podem ser feitas de acordo com o processo estabelecido na Patente dos E.U.A. N° 3 983 140, Patente dos E.U.A. N° 4 231 938, Patente dos E.U.A. N° 4 346 227, Patente dos E.U.A. N° 4 448 784, Patente dos E.U.A. N° 4 450 171, Patente dos E.U.A. N° 4 739 073, Patente dos E.U.A. N° 5 177 080 , Patente dos E.U.A. N° 5 177 080, Pedido de Patente Europeia N° 738 510 A2 e Pedido de Patente Europeia N° 363 934 Al respectivamente, sendo todos aqui encorporados por referência . A atorvastatina pode ser prontamente preparada conforme descrito na Patente dos E.U.A. N° 4 681 893, a qual é aqui incorporada por referência. O sal de hemi-cálcio de atorvastatina, o qual é correntemente vendido 85 ΡΕ1339678 como Lipitor®, pode ser prontamente preparado conforme descrito na Patente dos E.U.A. N° 5 273 995, a qual é aqui incorporada por referência. Outros sais catiónicos farma-ceuticamente aceitáveis de atorvastatina podem ser prontamente preparados por reacção da forma ácido livre de atorvastatina com uma base apropriada, usualmente um equivalente, num co-solvente. A administração dos agonistas selectivos do receptor EP4 de acordo com os métodos desta invenção pode ser via qualquer modo que entrega o agonista selectivo do receptor EP4 sistemicamente e/ou localmente (e. g., no local da fractura óssea, osteotomia ou cirurgia ortopédica) . Tais métodos incluem as vias oral, parentérica, intraduodenal, etc. Geralmente, os compostos desta invenção são administrados oralmente, mas a administração parentérica (e. g., intravenosa, intramuscular, transdérmica, subcutânea, rectal ou intramedular) pode ser utilizada, por exemplo, onde a administração oral é inapropriada para o objectivo ou quando o paciente é incapaz de ingerir a droga.

Os métodos desta invenção são usados para o tratamento e promoção da cura de fracturas ósseas e osteotomias pela aplicação no local (e. g., nos locais de fracturas ósseas de osteotomias) de agonistas selectivos do receptor EP4. Os agonistas selectivos do receptor EP4 desta invenção são aplicados nos locais de fracturas ósseas ou osteotomias, por exemplo, ou por injecção do composto 86 ΡΕ1339678 num solvente adequado (e. g., um solvente oleoso tal como óleo de aráquis) à placa de crescimento da cartilagem ou, em casos de cirurgia aberta, pela aplicação nesse local do composto num veiculo, agente de suporte ou diluente adequado tal como cera de osso, pó de osso desmineralizado, cimentos de osso poliméricos, vedantes de osso, etc. Alternativamente, a aplicação local pode ser feita aplicando uma solução ou dispersão do composto num veiculo, agente de suporte ou diluente adequado sobre a superfície dos implantes, ou incorporando-o nos implantes sólidos ou semi-sólidos convencionalmente usados em cirurqia ortopédica, tal como malha de «dacron», gel-espuma e osso de «kiel» ou próteses.

Em qualquer caso, a quantidade e calendário das composições administradas será, certamente, dependente do indivíduo a ser tratado, da severidade da aflição, da maneira de administrar e do julgamento do médico que faz a prescrição. Por conseguinte, devido à variabilidade de paciente para paciente, as dosagens aqui dadas são um indicador de procedimento e o médico pode titular doses dos compostos para alcançar o tratamento (e. g., aumento da massa óssea) que o médico considera apropriada para o paciente. Considerando o grau de tratamento desejado, o médico deve equilibrar uma variedade de factores tais como o nível de partida de massa óssea, idade do paciente, presença de doença pré-existente, bem como a presença de outras doenças (e. g., doença cardiovascular). 87 ΡΕ1339678

Em geral, é usada uma quantidade de um composto de Fórmula I desta invenção, a qual é suficiente para aumentar a massa óssea até um nivel que está abaixo do limiar da fractura óssea (conforme detalhado no estudo da Organização Mundial de Saúde anteriormente aqui citado).

Os compostos usados nos métodos desta invenção são geralmente administrados na forma de uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um dos compostos desta invenção em conjunto com um agente de suporte, veiculo ou diluente farmaceuticamente aceitável. Deste modo, o agonista selectivo do receptor EP4 pode ser administrado individualmente em qualquer local convencional, em forma de dosagem oral, intranasal, paren-térica, rectal ou transdérmica.

Para administração oral, a composição farmacêutica pode tomar a forma de soluções, suspensões, comprimidos, pílulas, cápsulas, pós e semelhantes. Os comprimidos que contêm vários excipientes tais como citrato de sódio, carbonato de cálcio e fosfato de cálcio são empregues em conjunto com vários desintegrantes tais como amido e preferivelmente amido de batata ou de tapioca e certos silicatos complexos, em conjunto com agentes ligantes tais como polivinilpirrolidona, sacarose, gelatina e acácia. Adicionalmente, agentes de lubrificação tais como estearato de magnésio, sulfato de laurilo e sódio e talco são muitas vezes úteis para o propósito de fabrico de comprimidos. Composições sólidas de um tipo semelhante são também 88 ΡΕ1339678 empregues como agentes de enchimento em cápsulas de gelatina mole e dura cheias; os materiais preferidos neste contexto também incluem lactose ou açúcar de leite bem como polietilenoglicóis de alta massa molecular. Quando suspensões aquosas e/ou elixires são desejados para administração oral, as composições desta invenção podem ser combinadas com vários agentes adoçantes, agentes de aromatização, agentes de coloração, agentes de emulsificação e/ou agentes de suspensão, bem como diluentes como água, etanol, propilenoglicol, glicerina e suas várias combinações.

Para propósitos de administração parentérica, soluções em óleo de sésamo ou de amendoim ou em propilenoglicol aquoso podem ser empregues, bem como soluções aquosas estéreis dos correspondentes sais solúveis em água. Tais soluções aquosas podem ser adequadamente tamponizadas, se necessário, e o diluente líquido é primeiro tornado isotónico com salina ou glucose suficientes. Estas soluções aquosas são especialmente adequadas para propósitos de injecção intravenosa, intramuscular, subcutânea e intraperitoneal. Neste contexto, os meios aquosos estéreis empregues são todos prontamente obteníveis por técnicas padrão bem conhecidas dos peritos na técnica.

Para propósitos de administração transdérmica (e. g., tópica), são preparadas soluções aquosas ou parcialmente aquosas, diluídas, estéreis (usualmente na concentração de cerca de 0,1% a 0,5%), de outro modo 89 ΡΕ1339678 semelhantes às soluções parentéricas anteriores. Métodos de preparação de várias composições farmacêuticas com uma certa quantidade de ingrediente activo são conhecidos, ou tornar-se-ão aparentes à luz desta revelação, dos peritos nesta técnica. Para exemplos de métodos de preparação de composições farmacêuticas, ver "Remington: The Science and Practice of Pharmacy ", Mack Publishing Company, Easton, Pa., 19a Edição, 1995.

Procedimentos Experimentais Gerais

Os espectros de nmr foram registados num espectrómetro Varian Unity 400 (Varian Co., Paio Alto, Califórnia) a cerca de 23 °C em 400 MHz para protão. Os desvios químicos são expressos em partes por milhão. As formas dos picos são indicadas como se segue: s, singleto; d, dupleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; bicarbonato de sódio, singleto largo. Os espectros de massa de ionização quimica a pressão atmosférica (APCI) foram obtidos num Fisons Platform II Spectrometer (Micromass Inc., Beverly, Massachusetts) . Quando se descrevem as intensidades de iões que contêm cloro ou bromo, foi observada a proporção das intensidades esperadas (aproximadamente 3:1 para iões que contêm 35C1/37C1 e 1:1 para iões que contêm 79Br/81Br) e é apenas dada a intensidade do ião de massa mais baixa. A cromatografia de média pressão foi realizada 90 ΡΕ1339678 num sistema de purificação Biotage (Biotage, Dyax Corporation, Charlottesville, Virgínia) sob pressão de azoto. A cromatografia de média pressão foi realizada quer com Baker Silica Gel (40 μιη) (J. T. Baker, Phillipsburg, N. J.) quer com Silica Gel 60 (EM Sciences, Gibbstown, N. J.) em colunas de vidro sob pressão de azoto baixa. A cromatografia radial foi realizada usando um Chromatatron (modelo 7924T, Harrison Research, Paio Alto, Califórnia). A cromatografia preparativa foi realizada usando Analtech Uniplates Silica Gel GF (20 x 20 cm) (Analtech Inc., Newark, DE). A dimetilformamida (DMF), tetra-hidrofurano (THF) e diclorometano (CH2CI2) usados como solventes da reacção foram de grau anidro fornecidos por Aldrich Chemical Company (Milwaukee, Wisconsin). O termo "concentrado" refere-se a remoção do solvente à pressão de trompa de água num evaporador rotativo. O termo "EtOAc" significa acetato de etilo. A abreviatura "h" significa horas. O termo "DMAP" refere-se a dimetilaminopiridina. Os termos "diclorometano" e "cloreto de metileno" são sinónimos e são usados de modo intermutável através desta descrição e nos Exemplos e Preparações.

Exemplo IA Ácido 4—{3—[2-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l- il]-propil}-benzóico

Passo A: 5-(3-Oxo-4-fenil-butil)-pirrolidin-2-ona A uma solução de tetra-hidropirrolizina-3,5-diona (5 g; 36 mmol) em CH2C12 (320 mL) a 0 °C foi adicionado 91 ΡΕ1339678 cloreto de benzilmagnésio (solução 1 M em THF; 39 mL; 39 mmol) gota a gota. A solução foi agitada a 0 °C durante 3 h e foi adicionada de cloreto de amónio aquoso saturado. Após aquecimento até à temperatura ambiente, a solução aquosa foi extraída com CH2C12 (3x) . Os extractos orgânicos combinados foram secos (MgS04), filtrados e concentrados. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (1% de MeOH em CH2C12 a 2% de MeOH em CH2C12) para produzir 5,9021 g de 5-(3-oxo-4-fenil-butil)-pirrolidin-2-ona. 1H-NMR (CDC13) δ 7,35-7,18 (m, 5H), 3,69 (s, 2H) , 3,56 (m, 1H), 2,50 (t, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,15 (m, 1H), 1,73 (m, 2H), 1,61 (m, 1H).

Passo B: 5-(3-Hidroxi-4-fenil-butil)-pirrolidin-2-ona A uma solução de 5-(3-oxo-4-fenil-butil)-pirrolidin-2-ona (5,902 g; 25,52 mmol) em EtOH (30 mL) a 0 °C foi adicionado NaBH4 (485 mg; 12,76 mmol) e a mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 2,5 h. A mistura reaccional foi adicionada com cloreto de amónio aquoso saturado. Foram adicionados água e CH2C12. A camada aquosa foi lavada com CH2C12 (2x) e os extractos orgânicos combinados foram secos (MgS04), filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc até 1% de MeOH em CH2C12) para produzir 4,3 g de 5-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-pirrolidin-2-ona. ^-NMR (CDCI3) δ 7,35-7,16 (m, 5H), 6,02 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,63 (m, 92 ΡΕ1339678 1Η), 2,79 (m, 1H), 2,64 (m, 1H), 2,26 (m, 3H), 1,72-1,22 (m, 6H).

Passo C: 5-[3-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-4-fenil-butil]-pirrolidin-2-ona A uma solução de 5-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-pirrolidin-2-ona (4,3 g; 18,43 mmol) em DMF (86 mL) foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (3,06 g; 20,3 mmol) seguido por imidazole (2,5 g; 3 7 mmol) e DMAP (225 mg) . A mistura reaccional foi agitada durante 24 h e adicionada de cloreto de amónio aquoso saturado. A solução aquosa foi lavada com EtOAc (3x) e os extractos orgânicos combinados foram secos (MgSCM, filtrados e concentrados. O residuo foi purificado por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (CH2C12 até 1% de MeOH em CH2C12 a 2% de MeOH em CH2C12) para produzir 5,94 g de 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-fenil-butil]-pirrolidin-2-ona. ^-NMR (CDC13) δ 7,26-7,10 (m, 5H), 5,68 (m, 1H), 3,83 (m, 5 1H), 3,54 (m, 1H), 2,69 (m, 2H), 2,30- 2,16 (m, 3H), 1, 66-1,35 (m, 5H), 0,82 (s, 9H), -0,06 (d, 3H) , -0,2 (d, 3H) .

Passo D: Éster de metilo do ácido 4-(3-{2-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi) -4-fenil-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico A uma solução de 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi ) -4-fenil-butil] -pirrolidin-2-ona (3,20 g; 9,21 mmol) em DMF (30 mL) a 0 °C foi adicionado NaHMDS (1 M em THF; 93 ΡΕ1339678 11,5 mL; 11,5 mmol) . Após 1 h, foi adicionado éster de metilo do ácido 4-(3-bromo-propil)-benzóico (2,84 g; 11,0 mmol) e a mistura reaccional foi agitada a 70 °C durante 18 h. A DMF foi removida em vácuo e o resíduo foi dissolvido em EtOAc. A solução orgânica foi lavada com água, seca (MgS04), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de média pressão (30% de EtOAc em hexanos) para produzir 3,39 g de éster de metilo do ácido 4-(3 — {2 —[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-fenil-butil]- 1 o X 0 1 LO pirrolidin-l-il}-propil) -benzóico. 1H-NMR (CDC13) (picos seleccionados) δ 7,92 (m, 2H) , 7,25 -7,09 (m, 7H), 3,86 i |s, 3H), 3,80 (m, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,46 (m, 1H), 2,90 i (m, 1H), 2,78-2,57 (m, 4H), 2,38-2,18 (m, 2H), 0, 83 (s, 9H); MS 524,1 (M+l).

Passo E: Éster de metilo do ácido 4-{3-[2-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico A uma solução de éster de metilo do ácido 4 — (3 — {2-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-fenil-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico (3,37 g; 6,43 mmol) em THF (4 mL) a 0 °C foi adicionado fluoreto de

tetrabutilamónio (1 M em THF; 9,6 mL; 9,6 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h e os voláteis foram removidos em vácuo. Foi adicionado EtOAc e a solução orgânica foi lavada com NaHC03 aquoso saturado (2x), água (lx) e água salgada (lx). A solução orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada. O 94 ΡΕ1339678 resíduo foi purificado por cromatografia de média pressão eluindo com um EtOAc para produzir 2,28 g de éster de metilo do ácido 4-{3-[2-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico. ^-NMR (CDC13) (picos seleccionados) δ 7,91 (d, 2H), 7,32-7,15 (m, 7H), 3,86 (s, 3H) , 3,75 (m, 1H), 3,63 (m, 1H), 3,54 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,61 (m, 3H); MS 410,1 (M+l).

Passo F: Ácido 4-{3-[2-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo- pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico A uma solução de éster de metilo do ácido 4 — {3 — [2-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -propil}-benzóico (2,28 g; 5,57 mmol) em MeOH (20 mL) foi adicionado NaOH (5 mL). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h e foi aquecida sob refluxo durante 3 h. Os voláteis foram removidos em vácuo e o resíduo foi diluído com CH2C12 e HC1 1 N. A solução orgânica foi extraída com CH2C12 (2x) e os extractos orgânicos combinados foram lavados com água salgada. A solução orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada para produzir o composto mencionado em título (2,03 g) . 1H-NMR (CDC13) δ 7,98 (d, 2H), 7,34-7,18 (m, 7H), 3,80 (m, 1H), 3,67 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 2,81 (m, 1H), 2,68 (m, 3H), 2, 45-2,27 (m, 2H) , 2,13-1,30 (m, 9H); MS 393,3 (M+l), 394,2 (M-l).

Exemplo 1B 95 ΡΕ1339678 Ácido 4-(3-{2-[3-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico

Passo A: 5-[3-Oxo-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona

Espiras de magnésio (1,13 g) foram agitadas em vácuo num balão de fundo redondo durante 60 h. Et20 anidro (5 mL) foi adicionado e a mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C. Uma solução de cloreto de 3-trif luorometil- benzilo (1,0 mL; 7,5 mmol) em Et20 (25 mL) foi adicionado gota a gota ao longo de 3 h. A mistura reaccional foi agitada durante mais 2,5 h. A solução foi lentamente adicionada via uma seringa e filtrada através de um filtro de seringa Nylon Acrodisc™ para uma solução de tetra-hidro-pirrolizina-3,5-diona (650 mg; 4,68 mmol) em CH2C12 (30 mL) a 0 °C. Após 2 h, a mistura reaccional foi adicionada de HC1 1 N e a solução aquosa foi lavada com CH2C12 (2x). As soluções orgânicas foram combinadas, secas (MgS04), filtradas e concentradas. A cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1) produziu 5-[3-oxo-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (1,376). 1H-NMR (CDC13) δ 7,38 (m, 4H), 3,78 (s, 2H), 3,61 (m, 1H) , 2,58 (t, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,20 (m, 1H), 2,86-1,59 (m, 3H).

Passo B: 5-[3-Hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo B, 5-[3-oxo-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (1,37 g; 4,59 mmol) foi reduzida 96 ΡΕ1339678 com NaBH4 (174 mg) a 0 °C ao longo de 2 h. A purificação por cromatografia de média pressão (2% de EtOAc em CH2CI2) proporcionou 5-[3-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil] -pirrolidin-2-ona (1,19 g) . 1H-NMR (CDC13) δ 7,42 (m, 4H), (m, 1H), 3, 82 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), (m, 1H), 2, 27 (m, 3H), 1,86 (m, 1H), 1,75-1,42 (m, MS 302,2 (M+l).

Passo C: 5-[3-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3- trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo C, 5-[3-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil) -butil] -pirrolidin-2-ona (1,19 g; 3,95 mmol) foi protegida com cloreto de terc-butildimetilsililo (893 mg; 6,22 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão eluindo com EtOAc proporcionou 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona. 1H-NMR (CDC13) δ 7,47-7,32 (m, 4H), 5,73 (m, 1H), 3,86 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 2,75 (m, 2H) , 2,35-2,20 (m, 3H), 1, 70-1, 40 (m, 5H) , 0,81 (s, 9H), -0,05 (d, 3H), -0,3 (d, 3H); MS 416,1 (M+l).

Passo D: Éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo D, 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (250 mg; 97 ΡΕ1339678 0,602 mmol) foi alquilada com NaHMDS (1 M em THF; 0,72 mL; 0,72 mmol) e éster de metilo do ácido 4-(3-bromo-propil)-benzóico (170 mg; 0,663 mmol) para produzir o éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico (300 mg); MS 592,1 (M+l).

Passo E: Éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[3-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico Éster de metilo do ácido 4-(3-{2-[3-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico foi preparado de modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo E. 1H-NMR (CDC13) (picos seleccionados) δ 7,91 (d, 2H), 7,49-7,35 (m, 4H), 7,22 (d, 2H) , 3,85 (s, 3H), 3,80 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 2,98-2,61 (m, 5H). Passo F: Ácido 4-(3—{2—[3-hidroxi-4- (3-trifluorometil- fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo F, éster de metilo do ácido 4—(3—{2—[3— hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico foi hidrolisado à temperatura ambiente ao longo de 24 h para originar o ácido 4—(3—{2—[3— hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico. ^-NMR (CDC13) δ 7,98 (d, 2H), 98 ΡΕ1339678 7, 52 1 ·«* to (m, 4H), 7, 26 (d, 2H), 3,82 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 2, 98-2,66 (m, 5H), 2,34 (m, 2H), 2, 09 (m, 1H), 1, ,95-1,37 (m, 7H); MS 464, ,2 (M+l).

Exemplo 1C Ácido 4-(3—{2—[4—(3-cloro-fenil)-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico

Passo A: 5-[4-(3-Cloro-fenil)-3-oxo-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo A, tetra-hidro-pirrolizina-3,5-diona (2 g; 14 mmol) reagiu com cloreto de 3-clorobenzilmagnésio (0,25 M em Et20; 62 mL; 15,5 mmol) ao longo de 2 h. A purificação por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 2:1 até EtOAc até 5% de MeOH em CH2CI2) produziu 5-[4-(3-cloro-fenil)-3-oxo-butil]-pirrolidin-2-ona (1,9142 g) . 1H-NMR (CDCI3) δ 7,27 (m, 2H), 7,19 (m, 1H), 7,08 (m, 1H), 6,27 (br, 1H), 3,68 (s, 2H), 3,60 (m, 1H), 2,52 (t, 2H), 2,29 (m, 2H), 2,21 (m, 1H), 1,88-1,60 (m, 3H); MS 266,2 (M+l), 264,2 (M-l).

Passo B: 5-[4-(3-Cloro-fenil)-3-hidroxi-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo B, 5-[4-(3-cloro-fenil)-3-oxo-butil]-pirrolidin-2-ona (1,9 g; 7,15 mmol) foi reduzida com NaBH4 (135 mg; 3,57 mmol). A purificação por cromatograf ia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente 99 ΡΕ1339678 (hexanos :EtOAc 1:1 até EtOAc até 5% de MeOH em CH2CI2 até 4% de MeOH em CH2C12 até 8% de MeOH em CH2CI2) produziu 5-[4-(3-cloro-fenil)-3-hidroxi-butil]-pirrolidin-2-ona (1,53

g) · 1H-NMR (CDCI3) δ 7,22 (m, 3H), 7 ,07 (m, 1H), 6,51 (d, 1H), 3,82 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 2, 77 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 2,33-2 ,19 (m, 3H), 2, 04 (d, 1H), 1,74-1, 45 (m, r 5H); : MS 268,2 (M+l).

Passo C: 5-[3-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-cloro- fenil) -butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo C, 5-[4-(3-cloro-fenil)-3-hidroxi-butil]-pirrolidin-2-ona (1,53 g; 5,71 mmol) reagiu com cloreto de terc-butildimetilsililo (0,97 g; 6,4 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão usando um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc até 1% de MeOH em CH2C12 até 2% de MeOH em CH2C12 até 4% de MeOH em CH2C12) proporcionou 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3- cloro-fenil)-butil] -pirrolidin-2-ona (1,77 g) · XH-NMR (CDCI3) 6 7,16 (m, 3H), 7,01 (m, 1H), 5,61 (d, 1H) , 3, 83 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 2,68 (m, 2H), 2,28 (m, 3H) , 1, 73- 1,36 (m, 5H), 0,84 (s, 9H), -0,05 (s, 3H), -0,2 (d, 3H).

Passo D: Éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi) -4-(3-cloro-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo D, 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)- 100 ΡΕ1339678 4-(3-cloro-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (246,5 mg; 0,645 mmol) foi alquilada com NaHMDS (1 M em THF; 0,77 mL; 0,77 mmol) e éster de metilo do ácido 4-(3-bromo-propil)-ben-zóico (200 mg; 0,767 mmol). A purificação por cromatogra-fia de média pressão (hexanos:EtOAc 5:1 até hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc até 1% de MeOH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12) proporcionou o éster de metilo do ácido 4—(3—{2—[3— (terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-cloro-fenil)-butil]-5- oxo-pirrolidin- -1-il}-propil)benzóico (246,3 g) . 1H-NMR (CDC13) δ 7,94 (d, 2H), 7,25- -7,13 (m, 5H) , 7,01 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,82 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,73-2,57 (m, 4H), 2,47-2,27 (m, 2H), 2,12-11,23 (m, 8H), 0,84 (s, 9H), -0,05 (d, 3H), -0,2 (d, 3H) ; MS 558,5 (M+l).

Passo E: Éster de metilo do ácido 4-(3-{2-[4-(3-cloro-fenil ) -3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico Éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[4-(3-cloro-fenil) -3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico foi preparado de modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo E, após purificação por purificação por cromatografia de média pressão (CH2C12 até 1% de MeOH em CH2C12 até 2% de MeOH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12) . 1H-NMR (CDCI3) δ 7, 94 (d, 2H), 7,25-7,19 (m, 5H) , 7,07 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3, 78 (m, 1H), 3,66 (m, 1H) , 3,58 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 2, 76 (m, 1H), 2, 68- 2, 58 (m, 3H), 2 ,45-2,27 (m, 2H), 2,07 (m, 1H), 1,95-1,34 (m, 101 ΡΕ1339678 8Η) .

Passo F: Ácido 4-(3-{2-[4-(3-cloro-fenil)-3-hidroxi-bu-til]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo F, o éster de metilo do ácido 4—(3—{2—[4— (3-cloro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico foi hidrolisado com NaOH 6 N à temperatura ambiente ao longo de 24 h para originar o ácido 4—(3—(2—[4— (3-cloro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico. 1H-NMR (CDCI3) δ 7,98 (d, 2H), 7,27-7,09 (m, 6H), 3,81 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 2,99 (m, 2H) , 2,75 (m, 3H), 2,39 (m, 2H), 2,20-1,30 (m, 9H).

Exemplo 1D Ácido 4-(3—{2—[4—(3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il} -propil) -benzóico

Passo A: 5-[4-(3-Fluoro-fenil)-3-oxo-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo A, tetra-hidro-pirrolizina-3,5-diona (2 g; 14 mmol) reagiu com cloreto de 3-fluorobenzilmagnésio (0,25 M em Et20; 62 mL; 15,5 mmol) ao longo de 2,5 h. A purificação por cromatografia de média pressão usando um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc:hexanos 2:1 até EtOAc até 2% de MeOH em CH2CI2 até 10% de MeOH em CH2C12) produziu 5-[4-(3-fluoro-fenil)-3-oxo-butil]-pirrolidin-2-ona (2, 1730 g) . 1H-NMR (CDC13) δ 7,32-7,27 102 ΡΕ1339678 (m, 1H), 7, 00 -6,90 (m, 3H), 6,12 (bs, 1H), 3,69 (s, 2H) 3,59 (m, 1H), 2, 52 (t , 2H), 2,30 (m, 2H) , 2,19 (m, 1H) 1, 75 (m, 2H), 1, 65 (m, 1H) .

Passo B: 5-[4-(3-Fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-pi rrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo B, 5-[4-(3—fluoro-fenil)-3-oxo-butil]-pirrolidin-2-ona (2,17 g; 8,71 mmol) foi reduzida com NaBH4 (165 mg; 4,35 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (hexanos :EtOAc 1:1 até EtOAc até 1% de MeOH em CH2CI2 até 3% de MeOH em CH2C12 até 6% de MeOH em CH2C12) produziu 5-[4-(3—fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-pirrolidin-2-ona (2,23 g) . 1H-NMR (CDCI3) δ 7,27 (m, 1H), 6,94 (m, 3H), 6,38 (m, 1H), 3,82 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 2,79 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,33-2,21 (m, 3H), 1,92 (d, 1H), 1,75-1,40 (m, 5H); MS 252,2 (M+l).

Passo C: 5-[3-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-fluoro-fenil) -butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo C, 5-[4-(3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil] -pirrolidin-2-ona (2,23 g; 8,87 mmol) reagiu com cloreto de terc-butildimetilsililo (1,47 g; 9,76 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão usando um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc até 1% 103 ΡΕ1339678 de MeOH em CH2CI2 até 2% de MeOH em CH2CI2 até 4% de MeOH em CH2CI2) proporcionou 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-fluoro-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (2,84 g). XH-NMR (CDCI3) δ 7,23 (m, 1H), 6,88 (m, 3H) , 5,75 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 2,71 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,25 (m, lH), 1, 70-1,38 (m, 5H) , 0,84 (s, 9H), -0,05 (s, 3H) , -0,2 (s, 3H) .

Passo D: Éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-fluoro-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo D, 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)- 4- (3-fluoro-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (254,7 mg; 0,697 mmol) foi alquilada com NaHMDS (1 M em THF; 0,84 mL; 0,84 mmol) e éster de metilo do ácido 4-(3-bromo-propil)-benzóico (200 mg; 0,778 mmol). A purificação por cromatogra-fia de média pressão (hexanos:EtOAc 5:1 até hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc até 1% de MeOH em CH2CI2 até 5% de MeOH em CH2C12) proporcionou o éster de metilo do ácido 4—(3—{2—[3— (terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-fluoro-fenil)-butil]- 5- oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico (275,3 g) . ^-NMR (CDCI3) (picos seleccionados) δ 7,94 (d, 2H), 7,23 (m, 3H), 6,87 (m, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,86 (m, 1H) , 3,63 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 0,84 (s, 9H) .

Passo E: Éster de metilo do ácido 4-(3-{2-[4-(3-fluoro-fenil ) -3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}- 104 ΡΕ1339678 propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo E, o éster de metilo do ácido 4—(3—{2—[3— (terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3—fluoro-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico (275,3 mg; 0,508 mmol) foi desprotegido para produzir o éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[4-(3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico (217,2 mg). A purificação foi realizada por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (CH2C12 até 1% de MeOH em CH2C12 até 2% de MeOH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12) . 1H-NMR (CDCI3) δ 7, 94 (d, J= =7, 88 Hz, 2H), 7,27 (m, 3H), 6,93 ( ;m, 3H), 3, 88 (s, 3H), 3,78 (m, 1H) , 3,66 (m, 1H), 3,57 ( ;m, 1H), 2, 97 (m, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,64 (m, 4H), 2, 45-2,25 (m, 2H), 2,07 (m, 1H), 1,95-1,30 (m, 7H) .

Passo F: Ácido 4-(3-{2-[4-(3-fluoro-fenil)-3-hidroxi- butil ] -5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo F, o éster de metilo do ácido 4—(3—{2—[4— (3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico foi hidrolisado com NaOH 6 N à temperatura ambiente ao longo de 24 h para originar o ácido 4—(3—{2—[4— (3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}- propil)benzóico. 1H-NMR (CDCI3) δ 7,99 (d, 2H), 7,26 (m, 3H), 6,95 (m, 3H), 3,81 (m, 1H) , 3,65 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,86-2,66 (m, 3H), 2,39 (m, 2H), 2,08 (m, 1H), 2, 00- 1,30 (m, 9H). 105 ΡΕ1339678

Exemplo ΙΕ Ácido 4-{3-[2-(3-hidroxi-4-(3-fenoxi-fenil)-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico

Passo A: 5-[3-Oxo-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo A, tetra-hidro-pirrolizina-3,5-diona (650 mg; 4,68 mmol) e cloreto de 3-fenoxibenzilo (1,20 g; 5,49 mmol) reagiram ao longo de 3,5 h para produzirem 5-[3-oxo-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (924 mg). ^-NMR (CDCI3) δ 7,30 ( m, 3H), 7,10 (m, 1H), 6,99 (m, 2H), 6,92-6,84 (m, 3H), 3,66 (s, 2H), 3,57 (m, 1H), 2,52 (t, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,17 (m, 1H), 1, 80-1,58 (m, 3H) .

Passo B: 5-[3-Hidroxi-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo B, 5-[3-oxo-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]- pirrolidin-2-ona (923,6 mg; 2,86 mmol) foi reduzida com NaBH4 (54 mg; 1,4 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos :EtOAc 1:1 até 2% de MeOH em CH2CI2 até 4% de MeOH em CH2C12 até 10% de MeOH em CH2C12) produziu 5-[3-hidroxi-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (668,3 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,31 (m, 2H), 7,23 (m, 1H), 7,08 (m, 1H), 6,97 (d, 2H), 6,91 (d, 1H), 6,84 (m, 2H), 3,80 (m, 1H), 3,73 (m, 1H) , 2,77-2,03 (m, 2H), 2,40 (m, 2H), 2, 24 (m, 1H), 1,75-1,41 ( m, 5H); MS 326,3 (M+l). 106 ΡΕ1339678

Passo C: 5-[3-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo C, 5-[3-hidroxi-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (668,3 mg; 2,05 mmol) reagiu com cloreto de terc-butildimetilsililo (341 mg; 2,26 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão (CH2CI2 até 1% de MeOH em CH2C12 até 2% de MeOH em CH2CI2) proporcionou 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (673 mg). 1H-NMR (CDCI3) δ 7,32 (m, 2H), 7,22 (m, 1H), 7,09 (m, 1H), 6,99 (d, 2H), 6,89 (d, 1H), 6,83 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 2,76-2,62 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 2,23 (m, 1H), 1, 73-1,34 (m, 5H), 0,84 (s, 9H), -0,03 (d, 3H), -0,16 (d, 3H); MS 440,7 (M+l).

Passo D: Éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi) -4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo D, 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (200 mg; 0,455 mmol) foi alquilada com NaHMDS (1 M em THF; 0,55 mL; 0,55 mmol) e éster de metilo do ácido 4-(3-bromo-propil)- benzóico (128 mg; 0,501 mmol) para produzir o éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil)-benzóico (173,1 g) . ^-nmr (CDC13) δ 7,94 (d, 2H), 7,32 107 ΡΕ1339678 (m, 2H), 7,25- -7,19 (m, 3H), 7, 09 (m, 1H) , 6,98 (d, 2H), 6,88 -6,81 (m, 3H), 3,88 (S, 3H), 3,84 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2, 76- -2,57 (m, 4H), 2,37 (m, 2H), 2,03 (m, 1H), 1,92 -1, 67 (m, 3H) , 1,56 (m, 1H), 1,46 -1,25 (m, 3H), 0,84 (s, 9H), - -0,04 (d, 3H), -0,15 (d, 3H) . Passo E: Éster de metilo do ácido 4-(3- - {2-[3-hidroxi-4 -(3- fenoxi-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-ilJ-propil) benzóico O éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[3-hidroxi-4- (3-fenoxi-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico foi preparado de modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo E, após purificação por cromatografia de média pressão (CH2C12 até 1% de MeOH em CH2C12 até 2% de MeOH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12) . ^-NMR (CDCls) δ 7,94 (d, 2H) , 7,35-7,23 (m, 5H), 7,11 (m, 1H), 7,00 (d, 2H), 6,93-6,85 (m, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,77 (m, 1H), 3,70-3,53 (m, 2H) , 2,97 (m, 1H), 2,77 (m, 1H), 2,62 (m, 3H), 2,46- -2,26 (m, 2H), 2,06 (m, 1H), 1,96-1,28 (m, 7H) . Passo F: Ácido 4-(3—{2—[3-hidroxi-4-(3- -fenoxi-fenil)- butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo F, o éster de metilo do ácido 4—(3—{2—[3— hidroxi-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico foi hidrolisado com NaOH 6 N à temperatura 108 ΡΕ1339678 ambiente ao longo de 24 h para originar o ácido 4—(3—{2—[3— hidroxi-4-(3-fenoxi-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}- propil)benzóico. 1H-NMR (CDCI3) δ 7,99 (d, 2H), 7,37-7,26 (m, 5H), 7,12 (m, 1H), 7,03 -6, 88 (m, 5H), 3,82 (m, 1H), 3,66 (m, 2H), 3,00 (m, 1H), 2, 85-2,60 (m, 4H), 2,41 (m, 2H) , 2,09 (m, 1H), 2,03-1 ,28 (m, 8H) .

Exemplo 1F Ácido 4-{3-[2-(4-bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico

Passo A: 5-(3-Bromo-3-oxo-butil)-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo A, tetra-hidro-pirrolizina-3,5-diona (5 g; 36 mmol) reagiu com cloreto de 3-bromobenzilmagnésio (0,25 M em Et20; 155 mL; 38,8 mmol) ao longo de 2 h. A purificação por cromatografia de média pressão usando um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc até 5% de MeOH em CH2CI2) produziu 5-(3-bromo-3-oxo-butil)-pirrolidin-2-ona (7,84 g) . 1H-NMR (CDC13) δ 7,41-7,11 (m, 4H) , 6,24 (bs, 1H), 3,67 (s, 2H), 3,60 (m, 1H), 2,52 (t, 2H), 2,32 (m, 2H), 2,20 (m, 1H), 1,88-1,60 (m, 3H).

Passo B: 5-(3-Bromo-3-hidroxi-butil)-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo B, 5-(3-bromo-3-oxo-butil)-pirrolidin-2-ona (7,84 g; 25,3 mmol) foi reduzida com NaBH4 (480 mg; 12,6 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 109 ΡΕ1339678 1:1 até EtOAc até 1% de MeOH em CH2CI2 até 3% de MeOH em CH2CI2 até 5% de MeOH em CH2C12 até 8% de MeOH em CH2C12) produziu 5-(3-bromo-3-hidroxi-butil)-pirrolidin-2-ona (6,76 g) . ^-NMR (CDCI3) δ 7, 36-7, 09 (m, 4H), 6,27 (m, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,63 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,62 (m, 1H), 2,32-2,18 (m, 3H), 1,88 (m, 1H) , 1, 73-1, 42 (m, 5H) ; MS 312,2, 314,1 (M+).

Passo C: 5-[3-Bromo-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)- butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo C, 5-(3-bromo-3-hidroxi-butil)- pirrolidin-2-ona (6,76 g; 21,6 mmol) reagiu com cloreto de terc-butildimetilsililo (3,59 g; 23,8 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão usando um gradiente de solvente (CH2C12 até 1% de MeOH em CH2C12 até 3% de MeOH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12 até 8% de MeOH em CH2C12) proporcionou 5-[3-bromo-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-butil]-pirrolidin-2-ona (7,45 g) . ^-NMR (CDC13) δ 7,30 (m, 2H), 7,12 (m, 1H), 7,04 (m, 1H), 5,71 (m, 1H), 3,81 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 2,66 (m, 2H), 2,32-2,17 (m, 3H), 1,70- 1,35 (m, 5H) , 0,82 (s, 9H), -0,06 (d, 3H), -0,24 (d, 3H) ; MS 426,2, 428,2 (M+).

Passo D: 5-[4-Bifenil-3-il-3-(terc-butil-dimetil- silaniloxi) -butil]-pirrolidin-2-ona A uma solução de 5-[3-bromo-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi) -butil]-pirrolidin-2-ona (750 mg; 1,76 mmol) 110 ΡΕ1339678 em DME (15 mL) foi adicionado ácido fenilborónico (236 mg; 1,93 mmol). Acetato de paládio (26,8 mg; 0,120 mmol) e tri-o-tolilfosfina (39,5 mg; 0,130 mmol) foram adicionados, seguido por uma solução de Na2C03 (373 mg; 3,52 mmol) em água (1,8 mL) . A mistura reaccional foi aquecida sob refluxo durante 24 h. A mistura reaccional foi arrefecida e os voláteis foram removidos em vácuo. O resíduo foi diluído com água salgada e EtOAc. A solução aquosa foi lavada com EtOAc (3x) e os extractos orgânicos combinados foram secos (MgS04), filtrados e concentrados. A purificação por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc até 1% de MeOH em CH2C12 até 3% de MeOH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12) proporcionou 5-[4-bifenil-3-il-3-(terc-butil- dimetil-silaniloxi)- -butil]-pirrolidin-2- -ona (713 ,3 mg) . 1H-NMR (CDCls) δ 7,57 (m, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,33 (m, 3H), 7,11 (m, 2H), 5,78 (m, 1H), 3,91 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 2,76 (m, 2H), 2,27 (m, 3H), 1,73-1,38 (m, 5H), 0, 83 (s, 9H), -0,03 (d, 3H), -0,16 (d, 3H); MS 424,3 (M+l).

Passo E: Éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[4-bifenil-3-il-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo D, 5-[4-bifenil-3-il-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-butil]-pirrolidin-2-ona (5,116 g; 12,08 mmol) foi alquilada com éster de metilo do ácido 4— (3 — bromo-propil)-benzóico (3,41 g; 13,3 mmol) ao longo de 20 111 ΡΕ1339678 h. A purificação por cromatografia de média pressão usando um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 5:1 até hexanos :EtOAc 1:1 até EtOAc até 1% de Me OH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12) proporcionou o éster de metilo do ácido 4-(3-(2-[4-bifenil-3-il-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico (275,3 g). 1H-NMR (CDCI3) δ 7,93 (d, 2H) , 7,56 (d, 2H), 7, 43 (m, 3H), 7,34 (m, 3H), 7,23 (m, 2H), 7,12 (m, 1H) , 3, 89 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3, 64 (m, 1H), 3,49 (m, 1H), 2, 95· -2,61 (m, 5H) , 2,30 (m, 2H), 2 ,01 (m, 1H), 1 ,89- 1, 70 (m, 3H), 1 ,59- 1,24 (m, 4H), 0,84 (s, 9H) , -0,04 (d, 3H), -0,16 (d, 3H) .

Passo F: Éster de metilo do ácido 4-{3-[2-(4-bifenil-3-il- 3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]- propil}benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo E, o éster de metilo do ácido 4-(3-(2-(4-bifenil-3-il-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico (5,38 g; 8,97 mmol) foi desprotegido. A purificação por cromatografia de média pressão usando um gradiente de solvente (hexanos até hexanos:EtOAc 2:1 até hexanos:EtOAc 1:1 até 0,5% de MeOH em CH2C12 até 1% de MeOH em CH2C12) proporcionou o éster de metilo do ácido 4—{3 —[2-(4-bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil(benzóico (3,70 g) . ^-NMR (CDC13) δ 7,93 (d, 2H) , 7,57 (d, 2H) , 7,40 (m, 6H) , 7,24 (m, 2H), 7,17 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,80 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 2, 90-2,60 (m, 4H), 2,33 112 ΡΕ1339678 (m, 2H), 2,07 (m, 1H), 1,98-1,34 (m, 8H).

Passo G: Ácido 4-{3-[2-(4-bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propilJbenzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo F, o éster de metilo do ácido 4—{3—[2—(4— bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}benzóico (3,14 g; 6,47 mmol) foi hidrolisado com NaOH 6 N (40 mL) em MeOH (160 mL) à temperatura ambiente ao longo de 24 h para originar o ácido 4—{3—[2-(4-bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico (2,73 g). . XH- -NMR (CDC1 3) δ 7, 98 (d, 2H), 7, 57 (d, 2H), 7, 40 (m, 6H), 7, 26 (m, 2H), 7,18 (m, 1H) , 3,85 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 2,98 (m, 1H) , 2,88 (m, 1H), 2, 70 (m, 3H), 2,36 (m, 2H), 2,08 (m, 1H), 1,85 (m, 3H), 1,69-1,35 (m, 4H); MS 470,1 (M-l), 472,2 (M+l).

Exemplo 1G Ácido 4-(3—{2—[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il} -propil) -benzóico

Passo A: 5-[4-(4-Fluoro-fenil)-3-oxo-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo A, tetra-hidro-pirrolizina-3,5-diona (1,41 g; 10,1 mmol) reagiu com cloreto de 4-fluorobenzilmagnésio (0,25 M em Et20; 50 mL; 12,5 mmol) ao longo de 5 h. A purificação por cromatografia de média pressão (2% de MeOH em CH2C12) produziu 5-[4-(4-fluoro- 113 ΡΕ1339678 fenil)-3- oxo-butil] 1 H- d d olidin- -2-ona (2,64 g) · 1H-NMR (CDC13) δ 7,18 (m, 2H), 7, 03 (m, 2H), 6,34 (m, 1H), 3, 70 (s, 2H), 3,62 (m, 1H), 2,54 (t, 2H), 2,34- -2,15 (m, 3H), 1,82-1,61 (m, 3H).

Passo B: 5-[4-(4-Fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo B, 5-[4-(4—fluoro-fenil)-3-oxo-butil]-pirrolidin-2-ona (2,64 g; 10,6 mmol) foi reduzida com NaBH4 (400 mg; 10,5 mmol) à temperatura ambiente durante 1 h.

Foi junto um adicional de NaBH4 (150 mg; 3,95 mmol) e a mistura reaccional foi agitada durante 20 h. A purificação por cromatografia de média pressão usando um gradiente de solvente (CH2C12 até 2% de MeOH em CH2C12 até 4% de MeOH em CH2C12) produziu 5-[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-pirrolidin-2-ona (2,01 g) . 1H-NMR (CDC13) δ 7,14 (m, 2H), 6,98 (m, 2H), 6,78 (m, 1H), 3,76 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 2,76 (m, 1H), 2,64 (m, 1H), 2,32-2,18 (m, 4H), 1,72-1,47 (m, 5H) .

Passo C: 5-[3-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-4-(4-fluoro-fenil) -butil]-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo C, 5-[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-

butil] -pirrolidin-2-ona (1,95 g; 7,79 mmol) reagiu com cloreto de terc-butildimetilsililo (1,47 g; 9,76 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão (1% de MeOH 114 ΡΕ1339678 em CH2C12) proporcionou 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(4-fluoro-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona. ΧΗ—NMR (CDCI3) δ 7,12 (m, 2H), 6,97 (m, 2H) , 5,75 (m, 1H), 3,83 (m, 1H), 3,60 (m, 1H) , 2,71 (m, 2H), 2,36-2,24 (m, 3H), 1,70-1,38 (m, 5H) , 0,84 (s, 9H), -0,05 (d, 3H), -0,2 (d, 3H).

Passo D: Éster de metilo do ácido 4-(3—{2—[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(4-fluoro-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo D, 5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(4-fluoro-fenil)-butil]-pirrolidin-2-ona (296 mg; 0,809 mmol) foi alquilada com éster de metilo do ácido 4— (3— bromo-propil)-benzóico (276 mg; 1,07 mmol). A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1) proporcionou 0 éster de metilo do ácido 4-(3-(2-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(4-fluoro-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico (250 g) . 1H-NMR (CDC13) (picos seleccionados) δ 7,92 (d, 2H), 7,21 (d, 2H), 7,05 (m, 2H), 6,92 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,76 (m, 1H), 3,62 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 0,81 (s, 9 H) .

Passo E: Éster de metilo do ácido 4-(3-{2-[4-(4-fluoro-fenil ) -3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo E, o éster de metilo do ácido 4-(4-(2-[3- 115 ΡΕ1339678 (terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-(4-fluoro-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico (241,2 mg; 0,445 mmol) foi desprotegido para produzir, após cromatografia de média pressão (hexanos :EtOAc 1:1 até EtOAc até CH2C12 até 3% de MeOH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12), o éster de metilo do ácido 4-(3-(2-[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico (61,1 mg). ΧΗ—nmr (CDCI3) (picos seleccionados) δ 7,93 (d, 2H), 7,24 (d, 2H), 7,14 (m, 2H) , 7,00 (m, 2H), 3,88 (s, 3H) , 3,80-3,51 (m, 3H), 2,98 (m, 1H), 2,32 (m, 2H).

Passo F: Ácido 4-(3-{2-[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi- butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo F, o éster de metilo do ácido 4—(3—{2—[4— (4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)benzóico (61,1 mg; 0,143 mmol) foi hidrolisado com NaOH 6 N (1 mL) em MeOH (5 mL) à temperatura ambiente ao longo de 24 h. A purificação por cromatograf ia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (CH2C12 até 2% de MeOH em CH2C12 até 4% de MeOH em CH2C12 até 6% de MeOH em CH2C12 até 10% de MeOH em CH2C12) produziu o composto mencionado em titulo (45 mg). 1H-NMR (CDCI3) δ 7,97 (d, 2H), 7,25 (m, 2H), 7,14 (m, 2H), 6,99 (m, 2H), 3,75-3,58 (m, 3H), 2,97 (m, 1H), 2,69 (m, 4H), 2,40 (m, 2H) , 2,15-1,35 (m, 9H); MS 413,8 (M+).

Exemplo 2A (Ilustrativo) 116 ΡΕ1339678 Ácido 7-{2S-[3R-hidroxi-4-(3-metoximetil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-heptanóico

Passo A: Éster de etilo do ácido 7-(2£-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanóico A uma solução de éster de etilo do ácido 1-(2R-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanóico (1,63 g; 6,01 mmol) em benzeno anidro (50 mL) foi adicionado hidrocloreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (3,46 g; 18,03 mmol) e DMSO (1,5 L; 24,04 mmol). A solução foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado trifluoroacetato de piridinio (1,28 g; 6,61 mmol). A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 15 minutos e à temperatura ambiente durante 2 h. A solução foi decantada do resíduo oleoso. O resíduo foi lavado com benzeno (3x) e as lavagens de benzeno combinadas foram concentradas em vácuo para produzirem o éster de etilo do ácido 7- (2P-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanóico, o qual foi usado no Passo B sem outra purificação.

Passo B: Éster de etilo do ácido 7-{2R-[4-(3-metoximetil-fenil) -3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-heptanóico A uma solução de éster de dietilo do ácido [3— (3— metoximetil-fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico (1,715 g; 5,46 mmol) em THF (43 mL) a 0 °C foi adicionado NaH (60% em massa em óleo; 240 mg; 6,00 mmol) em porções. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e 117 ΡΕ1339678 uma solução de éster de etilo do ácido 7- (2f?-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanóico (preparado no Passo A, 6,01 mmol assumidos) em THF (32 mL) foi adicionada em porções. A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 15 minutos e à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado ácido acético até se alcançar um pH de 5. EtOAc e água foram adicionados e a solução aquosa foi lavada com EtOAc (3x) . As soluções orgânicas foram combinadas, lavadas com água, secas (MgS04), filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 2:1 até hexanos: EtOAc 1:1 até 1% de MeOH em CH2C12 até 3% de MeOH em CH2C12) para proporcionar o éster de etilo do ácido 7-{2R-[4-(3-metoximetil-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-heptanóico (1,4 g) . 1H—NMR (CDCI3) δ 7,29 (m, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,09 (d, 1H), 6,62 (dd, 1H), 6,19 (d, 1H), 4, 41 (s, 2H), 4,10 (m, 3H), 3,82 (s, 2H), 3,51 (m, 1H), 3,36 (s, 3H), 2,67 (m, 1H), 2,43- 2,18 (m, 5H), 1, 75 (m, 1H) , 1,56 (m, 2H), 1,42-1,17 (m, 9H) .

Passo C: Éster de etilo do ácido 7-{2J?- [3S-hidroxi-4- (3-metoximetil-fenil)-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-1-il}-heptanóico A uma solução de éster de dietilo do ácido 7-{2R-[4-(3-metoximetil-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirro-lidin-l-il}-heptanóico (1,40 g; 3,26 mmol) em CH2C12 anidro 118 ΡΕ1339678 (200 mL) foi adicionada (R)-2-metil-CBS-oxazaborolidina (1 M em tolueno; 0,49 mL; 0,49 mmol) e a solução foi arrefecida até -45 °C. A mistura reaccional foi agitada

durante 20 minutos e foi adicionado catecolborano (1 M em THF; 9,8 mL; 9,8 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante 24 h a -45 °C e THF (100 mL) e HC1 (1 N; 100 mL) foram adicionados. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h e a 40-45 °C durante 1,5 h. A solução foi diluída com CH2C12 e água e as camadas foram separadas. A solução orgânica foi arrefecida até 0 °C e foi lavada com NaOH arrefecido em gelo (0,5 N) seguido por água salgada. A solução orgânica foi de novo lavada com NaOH arrefecido em gelo (0,5 N) seguido por água salgada e foi seca (MgS04), filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (hexanos:EtOAc 5:1 até hexa-nos:EtOAc 2:1 até hexanos:EtOAc 1:1 até 2% de MeOH em CH2C12) proporcionou o éster de etilo do ácido 1-{2R-[3S-hidroxi-4-(3-metoximetil-fenil)-but-l-enil]-5-oxo-pirro-lidin-l-il}-heptanóico (1,2 g) na forma de uma mistura aproximadamente 12:1 de diastereómeros de álcool 3S:3R por análise de HPLC. 1H-NMR (CDCI3) (picos seleccionados) δ 7, 26-7, 07 (m, 4H), 5,67 (m, 1H), 5,43 (m, 1H), 4,39 (s, 2H) , 4,36 (m, 1H), 4,06 (q, 2H), 3,98 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,35 (s, 3H); MS 423,3 (M+l), 430,3 (M-l).

Passo D: Éster de etilo do ácido 7-{2S-[3£-hidroxi-4-(3-metoximetil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-heptanóico 119 ΡΕ1339678 A uma solução de éster de etilo do ácido 1-{2R-[3S-hidroxi-4-(3-metoximetil-fenil)-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-heptanóico (1,2 g; 2,78 mmol) em EtOH (100 mL) foi adicionado paládio a 10% em carbono (120 mg) . A mistura reaccional foi hidrogenada num agitador de Parr a 45 psi (3,45 kPa) durante 24 h. O catalisador foi removido via filtração através de Celite® com a ajuda de EtOH. A purificação por cromatografia de média pressão eluindo com um gradiente de solvente (CH2C12 até 2% de Me OH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12) (2x) proporcionou o éster de etilo do ácido 7-{2S-[3P-hidroxi-4-(3-metoximetil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-heptanóico (1,1 g). ^-NMR (CDC13) δ 7,28 (m, 1H), 7,18 (m, 2H), 7,11 (m, 1H), 4,42 (s, 2H), 4,08 (q, 2H), 3,82 (m, 1H), 3,58 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 2,84 (m, 2H), 2,66 (m, 1H), 2,41-2,23 (m, 4H), 2,08 (m, 1H), 1,78 (m, 1H), 1, 64-1, 37 (m, 9H) , 1,28 (m, 4H), 1,22 (t, 3H).

Passo E: Ácido 7-{2S- [3J?-hidroxi-4- (3-metoximetil-fenil) - butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-heptanóico A uma solução de éster de etilo do ácido 7-{2S-[3R-hidroxi-4-(3-metoximetil-fenil)-butil]-5-oxo-pirroli-din-l-il}-heptanóico (1,1 g; 2,53 mmol) em EtOH (32 mL) foi adicionado NaOH (6 N; 16 mL) . A mistura reaccional foi agitada durante 24 h e foi adicionado HC1 1 N para se obter um pH cerca de 2. Água e CH2C12 foram adicionados e as camadas foram separadas. A solução aquosa foi lavada com 5% de MeOH em CH2C12 (2 vezes) . As camadas orgânicas 120 ΡΕ1339678 combinadas foram secas (MgSCg), filtradas e concentradas para proporcionarem o composto mencionado em titulo do Exemplo 2A (990 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,28 (m, 1H) , 7,18 (m, 2H), 7,11 (m, 1H), 4,43 (s, 2H), 3,83 (m, 1H), 3,57 (m, 2H), 3,40 (S, 3H), 2,91 (m, 1H) , 2,79 (m, 1H) , 2,66 (m, 1H), 2,43-2,25 (m, 4H), 2,10 (m, 1H), 1,83 (m, 1H), 1,66-1,22 (m, 13H); MS 406,3 (M+l), 404,3 (M-l).

Exemplo 2B (Ilustrativo) Ácido 7-[2R-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico

Passo A: Éster de etilo do ácido 7-[2R-(4-naftalen-2-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido (3-naftalen-2-il-2-oxo-propil)-fosfónico (646 mg; 2,21 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 81 mg; 2,02 mmol) reagiu com éster de etilo do ácido 7-(2R-Í. ormil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanóico (1,84 mmol assumidos) ao longo de 163 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de etilo do ácido 7- - [2R-(4-naftalen- o X 0 1 co 1 l-1 -H 1 CN -but-l-enil)-5-oxo- pirrolidir í—1—i1]-heptanóico ( ; 3 4 0 mg) . 1H-NMR (CDC13) δ ^1 ^1 co (m, 3H), 7,65 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,30 (d, 1H), 6,66 (dd, 1H) , 6,24 (d, 1H), 4,10 (m, 3H), 3,99 (s, 2H), 3, 45 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,44-2,18 (m, 5H), 1,75 (m, 1H) , 1, 52 (m, 2H), 1,37-1,06 (m, 9H) ; MS 436,1 (M+l), 434,1 (M-l). 121 ΡΕ1339678

Passo B: Éster de etilo do ácido 7-[2S-(4-naftalen-2-il-3- oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de éster de etilo do ácido 7-[2R-(4-naftalen-2-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -heptanóico (337 mg; 0, 774 mmol) e paládio a 10% em carbono (50 mg) em EtOH (50 mL) foi hidrogenada a 50 psi durante 3 h. A cromatografia de média pressão (hexa-nos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de etilo do ácido 7-[2S-(4-naftalen-2-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -heptanóico (290 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,80 (m, 3H), 7, 6 6 (s, 1H), 7, 47 (m, 2H), 7, 30 (m, 1H), 4,10 (q* 2H), 3, 85 (S, 2H), 3, 52 (m, 2H), 2, 77 (m, 1H) , 2,47 (m, 2H), 2, 26 (m, 4H), 1,98 (m, 2H) , 1, 61- -1,16 (m, 13H) ; MS 438,1 (M+l), 436,1 (M-l).

Passo C: Éster de etilo do ácido 7-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico A uma solução de éster de etilo do ácido 7-[2S-(4-naftalen-2-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico (367 mg; 0,839 mmol) em EtOH (20 mL) foi adicionado NaBH4 (32 mg; 0,839 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante 2 h e foi adicionada água (5 mL) . Os voláteis foram removidos em vácuo e a solução aquosa restante foi lavada com CHC13 (4x10 mL). As soluções orgânicas foram combinadas, secas (MgS04), filtradas e 122 ΡΕ1339678 concentradas. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de etilo do ácido 7-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico (332 mg). 1H-NMR (CDCI3) 6 7,80 (m, , 3H) , 7,65 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 4, 07 (m, 2H), 3, 91 (m, 1H), 3,60 (m, 2H) , 2,98 (m, 1H), 2, 84 (m, 2H), 2, 35 (m, 2H), 2,25 (t, 2H) , 2,10 (m, 1H), 2,01 (m, 1H), 1, 81 (m, 1H) , 1,70 (d, 1H), 1,68- -1,37 (m, 7H) , 1,36-1,20 (m, 7H); MS 440, 1 (M+l).

Passo D: Ácido 7-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidinil]-heptanóico

Uma solução de éster de etilo do ácido 7-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico (327 mg; 0,744 mmol), NaOH (1 M; 0,8 mL) e MeOH (15 mL) foi aquecida sob refluxo durante 4 h. Os voláteis foram removidos em vácuo e foi adicionada água (15 mL). A solução aquosa foi acidificada até um pH de 5 com HC1 1 N e a solução acidica foi lavada com CHCI3 (4x10 mL) . As soluções orgânicas foram combinadas, secas (MgS04), filtradas e concentradas para proporcionarem o ácido 7-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-il]-heptanóico (180 mg). ^-NMR (CDCI3) δ 7,80 (m, 3H), 7,65 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 3,58 (m, 2H), 3,02-2, 80 (m, 3H), 2,34 (m, 4H), 2,08 (m, 2H), 1,67-1,23 (m, 13H); MS 412,1 (M+l), 410,2 (M-l).

Passo E: Sal de sódio do ácido 7-[2S-(3-hidroxi-4-nafta-len-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-il]-heptanóico 123 ΡΕ1339678 A uma solução de ácido 7-[25-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-il]-heptanóico (35 mg; 0,0851 mmol) em MeOH (5 mL) a 0 °C foi adicionado NaOH (1 M; 0,085 mL). A mistura reaccional foi agitada durante 1.5 h a 0 °C e foi concentrada em vácuo, azeotropando com CHCI3 (3x5 mL) para produzir o sal de sódio do composto mencionado em titulo do Exemplo 2B (37 mg) . 1H-NMR (CDC13) δ 7, 69-7, 24 (m, 7H), 3,78 (m, 1H), 3,40 (m, 2H), 2,80 (m, 6H), 2,16-1,70 (m, 4H), 1,43-1,18 (m, 12H).

Exemplo 2C Ilustrativo) Ácido 7-[2R-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico

Passo A: Éster de etilo do ácido 7-[2R-(4-benzo[1,3]di-oxol-5-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il ]-heptanóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido (3-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-oxo-propil)-fosfónico (12,65 g; 44,2 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 1,62 g; 40.5 mmol) reagiu com éster de etilo do ácido 7-(2J?-formil- 5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanóico (36,8 mmol assumidos) ao longo de 24 h. A purificação por cromatografia de média pressão (10% de EtOAc em hexanos até 40% de EtOAc em hexanos) proporcionou o éster de etilo do ácido 7— [2A?— (4 — benzo[1,3]dioxol-5-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -heptanóico (4,18 g) . 1H-NMR (CDCI3) δ 6,76 (d, 1H) , 6,63 (m, 3H), 6,20 (d, 1H), 5,94 (s, 2H) , 4,13 (m, 3H), 124 ΡΕ1339678 3,74 (s, 2H), 3,52 (m, 1H), 2,71 (m, 1H), 2,38 (m, 2H), 2,26 (m, 3H), 1,78 (m, 1H), 1,58 (m, 5H), 1,46-1,19 (m, 6H) . Passo B; Éster de etilo do ácido 7-[2R-(4-benzo[1,3]di- oxol-5-il- 3-hidroxi- -but-1- enil)-5-oxo-pirrolidin- 1-il]-heptanóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de etilo do ácido 7-[2f?-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico (4,18 g; 9,74 mmol) reagiu com NaBH4 (369 mg; 9,74 mmol) em EtOH (32 mL). A adição de NaBH4 foi realizada a 0 °C e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A purificação por cromatogra-fia de média pressão (EtOAc) proporcionou o éster de etilo do ácido 7- [2R- (4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico (3,36 g).

Passo C: Ácido 7- [2J?— (4-benzo [1,3] dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de etilo do ácido 7-[2i?-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirro-lidin-l-il]-heptanóico (3,36 g; 7,79 mmol) foi hidrolisado com NaOH 2 N (11 mL) em MeOH. A purificação por cromatografia de média pressão (50% de EtOAc em hexanos até EtOAc até 5% de MeOH em CH2C12) seguido por uma segunda eluição em coluna com um gradiente de solvente (1% de MeOH 125 ΡΕ1339678 em CH2CI2 até 5% de MeOH em CH2CI2) para proporcionar o ácido 7-[2R-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico (2,26 g) . ^-NMR (CDCI3) δ 6,66 (m, 3H), 5,91 (s, 2H), 5,69 (m, 1H), 5,44 (m, 1H), 4,31 (m, 1H), 4, 01 (m, 1H), 3,45 (m, 1H) , 2,76 (m, 3H), 2,34 (m, 4H), 2,15 (m, 1H), 1,70-1,20 (m, 10H) ; MS 404,3 (M+l), 402,1 (M-l).

Passo D: Sal de sódio do ácido 7-[2i?-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il ]-heptanóico O sal de sódio foi preparado por adição de NaHC03 (4 70 mg; 5,60 mmol) em água a uma solução de ácido 1-[2R-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -heptanóico (2,26 g; 5,60 mmol) em EtOH. A mistura reaccional foi agitada durante 3 h e foi concentrada em vácuo para produzir o sal de sódio composto mencionado em título do exemplo 2C. ^-NMR (CDCI3) δ 6,65 (m, 3H), 5,85 (s, 2 H) , 5,67 (m, 1H) , 5,34 (m, 1H) , 4,24 1H), 4,09 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 2,79 (m, 2H), 2,61 (m, 2H), 2,29 (m, 2H), 2,16 3H), 1,68-1,17 (m, 9H) .

Exemplo 2D (Ilustrativo) Ácido 7-[2S-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico

Passo A: Ácido 7-[2S-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o 126 ΡΕ1339678

Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de ácido 7-[2R-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirro-lidin-l-il]-heptanóico (120 mg; 2,96 mmol), MeOH (30 mL) e 10% de paládio em carbono (14 mg) foi hidrogenada a 50 psi durante 18 h para proporcionar o ácido 7-[25-(4-benzo-[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanóico (71,3 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 6,68 (m, 3H), 5,92 (s, 2H), 3,74 (m, 1H), 3,57 (m, 2H), 2,87 (m, 1H) , 2,72 (m, 1H), 2,54 (m, 1H), 2,31 (m, 4H), 2,10 (m, 1H), 1,99 (m, 1H), 1,66-1,19 (m, 13H); MS 406,3 (M+l), 404,3 (M-l).

Exemplo 2E Ácido 4-{3-[2R-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico

Passo A: Éster de metilo do ácido 4-{3-[2A-(4-benzo[l,3]-dioxol-5-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il ]-propil}-benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido (benzo[1,3]dioxol-5-il-2-oxo-propil)-fosfónico (356 mg; 1,28 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 46 mg; 1,14 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 4-[3-(2R-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-benzóico (1,04 mmol assumidos) ao longo de 24 h. A purificação por cromatografia de média pressão (30% de hexano em EtOAc até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 4-{3-[2R-(4-benzo[1, 3]dioxol-5-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico (202 mg). ^-NMR (CDCI3) δ 7,92 (d, 127 ΡΕ1339678 2H) , 7,18 (d, 2H) , 6,73 (d, 1H), 6,60 (m, 3H), 6,15 (d, 1H) , 5,91 (s, 2H) , 4,08 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,68 (s, 2H) , 3,56 (m, 1H) , 2,79 (m, 1H), 2,59 (t, 2H), 2,34 (m, 2H) , 2,14 (m, 1H) , 1,72 ( m, 3H); MS 450,1 (M+l). Passo B: Éster de metilo do ácido 4- {3- [2J?- (4- benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de metilo do ácido 4-{3-[2P-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirro-lidin-l-il]-propil}-benzóico (202 mg; 0,449 mmol) reagiu com NaBH4 (17 mg; 0,45 mmol) em MeOH (8 mL) a 0 °C ao longo de 2 h. A purificação por cromatografia de média pressão (EtOAc até 2% de MeOH em CH2C12) proporcionou o éster de metilo do ácido 4-{3-[2.R-(4-benzo [1,3] dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico (156 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,94 (d, 2H),7,23 (d, 2H),6,67 (m,3H), 5,92 (s, 2H), 5,66 (m, 1H), 5,45 (m, 1H), 4,28 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,55 (m, 1H), 2,88-2,59 (m, 5H), 2,50-1,61 (m, 7H); MS 452,1 (M+l).

Passo C: Ácido 4-{3-[2R-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidro-xi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de metilo do ácido 4-{3-[2P-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo- 128 ΡΕ1339678 pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico (156 mg; 0,345 mmol) foi hidrolisado com NaOH 2 N em MeOH (5 mL) para produzir o

composto mencionado em titulo do Exemplo 2E ( 120 mg) . 1H-NMR (CDCls) δ 7,99 (d, 2H), 7,26 (m, 2H) , 6,74 (d, 1H), 6,63 (m, 2H), 5, 91 (s, 2H), 5,67 (m, 1H), 5,46 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 3, 99 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 2,94- -2,60 (m, 5H) , 2,36 (m, 2H), 2,14 (m, 1H), 1,87-1,62 (m, 4H) ; MS 436,2 (M-l).

Exemplo 2F Ácido 4-{3-[2S-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico

Passo A: Ácido 4-{3-[2S-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidro-xi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, o ácido 4-{3-[2P-(4-benzo[l,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico (116 mg; 0,265 mmol) foi hidrogenado para produzir o ácido 4-{3-[2S-(4-benzo[1,3]dioxol-5-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzóico (101 mg). 1H-NMR (CDCls) δ 7,99 (d, 2H), 7,26 (m, 2H) , 6,74 (d, 1H) , 6,63 (m, 2H), 5,91 (s, 2H), 5,68 (m, 1H), 5,46 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 2,91 (m, 4H) , 2,84-2,60 (m, 4H), 2,36 (m, 2H), 2,14 (m, 1H), 1,87-1,62 (m, 4H); MS 438,2 (M-l).

Exemplo 3A Ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-tiofen-2-il-butil)-5-oxo- 129 ΡΕ1339678 pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-{3-[2-oxo-5A-(3-oxo-4-tiofen-2-il-but-l-enil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2a, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido (2-oxo-3-tiofen-2-il-propil)-fosfónico (101 mg; 0,407 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 16 mg; 0,41 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3-(2f?-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofen-2-carboxilico (preparado a partir do éster de metilo do ácido 5-[3-(2P-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofen-2-carboxílico de modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo A) (0,34 mol assumidos) ao longo de 17 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-{3-[2-oxo-5R-(3-oxo-4-tiofen-2-il-but-l-enil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico (74 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,60 (d, 1H), 7,21 (m, 1H), 6,96 (m, 1H) , 6,88 (m, 1H), 6,78 (d, 1H), 6,65 (dd, 1H), 6,23 (d, 1H), 4,14 (m, 1H), 4,01 (s, 2H), 3,84 (s, 3H) , 3,58 (m, 1H) , 2, 88-2, 77 (m, 3H), 2,46-2,17 (m, 3H), 1,82 (m, 3H); MS 418,0 (M+l), 416,0 (M-l).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-{3-[2-oxo-5S-(3-oxo-4-tiofen-2-il-butil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico 130 ΡΕ1339678

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de éster de metilo do ácido 5 — {3— [2-oxo-5f?- (3-oxo-4-tiofen-2-il-but-l-enil) - pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico (71 mg; 0,17 mmol) foi hidrogenada em EtOH (20 mL) na presença de paládio a 10% em carbono (50 mg) a 50 psi durante 2 h. Foi adicionado mais catalisador (50 mg) e a mistura reaccional foi hidrogenada a 50 psi durante mais 1 h para proporcionar o éster de metilo do ácido 5-{3-[2-oxo-5S-(3-oxo-4-tiofen-2-il-butil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico (63 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,61 (d, 1H), 7,22 (m, 1H), 6,97 (m, 1H), 6,88 (m, 1H), 6,80 (d, 1H), 3,88 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,65 (m, 1H), 3,52 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,81 (t, 2H), 2,48 (m, 1H), 2,30 (m, 2H), 2, 07-1,80 (m, 4H), 1,55 (m, 3H); MS 419,9 (M+l), 418,0 (M-l).

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-tiofen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de metilo do ácido 5—{3—[2— oxo-5S-(3-oxo-4-tiofen-2-il-butil)-pirrolidin-l-il] -propil]-tiofeno-2-carboxílico (60 mg; 0,143 mmol) foi reduzido com NaBH4 (5 mg; 0,132 mmol) ao longo de 2 h. A purificação por cromatografia de camada fina preparativa (EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5 —{3 —[2S— (3-hidroxi-4-tiofen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil]-tiofeno-2-carboxilico (10 g) . ^-NMR (CDC13) δ 131 ΡΕ1339678 7,61 (d, 1H), 7,18 (d, 1H), 6,96 (m, 1H), 6,85 (d, 1H), 6,81 (d, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,80 (m, 1H), 3,61 (m, 2H), 3, 00 (m, 2H), 2,89 (m, 1H), 2,83 (t, 2H), 2,34 (m, 2H), 2, 10 (m, 1H), 1,98-1,23 (m, 8 H); MS 422,2 (M+l).

Passo D: Ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-tiofen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de metilo do ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-tiofen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (10 mg; 0,024 mmol) foi hidrolisado com NaOH (1M; 0,03 mL) em MeOH (5 mL) ao longo de 29 h para produzir o composto mencionado em titulo do Exemplo 3A (10 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,68 (d, 1H), 7,18 1H), 6,96 (m, 1H) , 6,85 (m, 2H), 3,80 (m, 1H), 3,63 (m 3, 01 (m, 2H), 2,91 (m, 1H), 2,85 (t, 2H), 2,36 (m 2H), 2,11 (m, 1H), 2,00-1,18 (m, 8H).

Exemplo 3B Ácido 5-(3-{2S-[4-(4-cloro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il }-propil)-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2A-[4-(4-cloro-fenil) -3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido [3-(4-cloro-fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico (113 132 ΡΕ1339678 mg; 0,407 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 16 mg; 0,41 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3-(2.R-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofen-2-carboxilico (0,34 mmol assumidos) ao longo de 17 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5 — (3—{2J?— [4 — (4-cloro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (94 mg). ^-NMR (CDCI3) δ 7, 61 (d, 1H), 7,29 (m, 2H), 7, 10 (d, 2H) , 6, 78 (d, 1H), 6, 62 (dd, 1H), 6,18 (d, 1H), 4,13 (m, 1H), 3, 84 (s, 3H), 3, 79 (s, 2H), 3,56 (m, 1H), 2,87- 2,77 (m, 3H) r 2, 47- -2,16 (m, 3H), 1,80 (m, 3H).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-cloro-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de éster de metilo do ácido 5-(3-{2R-[4-(4-cloro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il }-propil)-tiofeno-2-carboxilico (91 mg; 0,204 mmol) foi hidrogenada em EtOH (20 mL) na presença de paládio a 10% em carbono (50 mg) a 50 psi durante 2 h para proporcionar 0 éster de metilo do ácido 5 —(3—{2 S—[4 —(4 — cloro-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)- tiofeno -2- carboxilico (84 mg) 1 H-NMR (CDCI3) δ 7, 61 (d, 1H), 7, 30 (d, 2H), 7 / , 11 (d, 2H), 6,80 (d, 1H), 3,84 (s, 3H), 3, 66 (s, 2H), 3, ,64 (m, 1H), 3,51 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2, 81 (t, 2H), 2, 42 (m, 2H), 2,29 (m, 2H), 2,04-: L, 79 133 ΡΕ1339678 (m, 4H), 1,56 (m, 2H); MS 448,0 (M+l), 446,0 (M-l).

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-cloro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-cloro-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (81 mg; 0,181 mmol) foi reduzido com NaBH4 (7 mg; 0,181 mmol) ao longo de 2 h. A purificação por cromatografia de camada fina preparativa (EtOAc, 2x) proporcionou o éster de metilo do ácido 5— (3— {2S-[4-(4-cloro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l- il}-propil)-tiofeno-2 -carboxílico ( 54 mg) . 1H-NMR ( CDC13) δ 7,61 (d, 1H) , 7,28 (d, 2H), 7,12 (d , 2H), 6,81 (d, 1H), 3,82 (s, 3H), 3, 77 ( :m, 1H), 3,60 (m, 2H) , 2,99 (m, 1H), 2,83 (t, 2H), 2, 77 ( :m, 1H), 2,62 (m, 1H) , 2,34 (m, 2H), 2,09 (m, 1H), 1,97-1,30 (m, 8H); MS 450,0 (M+l).

Passo D: Ácido 5-(3-{2S-[4-(4-cloro-fenil)-3-hidroxi-bu-til]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-cloro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (52 mg; 0,116 mmol) foi hidrolisado com NaOH (1M; 0,14 mL) em MeOH (5 mL) ao longo de 29 h para produzir o ácido 5-(3-{2S-[4-(4-cloro-fenil)- 134 ΡΕ1339678 3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2- carboxilico (16 mg) . 1H-NMR i—1 o Ω O 3) δ 7 ,67 (d, 1H) , 7 ,28 (d, 2H), 7, 12 ( d, 2H), 6,84 (d , 1H) , 3,78 (m, 1H) , 3, 62 (m, 1H) , 3,01 (m, 1H), 2, 85 (t, 2H), 2, 77 (m, 1H), 2, 63 (m, 1H) , 2,36 (m, 2H), 2, 10 (m, 1H), 1,90 (m, 3H), 1, 75 (m, 1H) , 1,69-1 ,24 (m, 4H) ; MS 434 ,0 (M -D .

Exemplo 3C Ácido 5-(3-{2S-[3-hidroxi-4-(2-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2-oxo-5A-[3-oxo-4-(2-trifluorometil-fenil)-but-l-enil]-pirrolidin-1-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido [2-oxo-3-(2-trifluorometil-fenil)-propil]-fosfónico (74 mg; 0,239 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 10 mg; 0,239 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3-(2R-íormil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofen-2-carboxilico (0,239 mmol assumidos) ao longo de 17 h, A purificação por cromatografia de média pressão (hexa-nos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3-{2-oxo-5P-[3-oxo-4-(2-trifluorometil-fenil)-but-l-enil] -pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (32 mg). NMR (CDC13) δ 7,66 (d, 1H) , 7,60 (m, 1H), 7,51 (m, 1H) , 7,39 (m, 1H), 7,28 (m, 1H) , 6,79 (m, 1H), 6,64 (dd, 1H), 6,22 (d, 1H), 4,16 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,78 (s, 2H), 3,60 (m, 1H), 2, 93-2,79 (m, 3H), 2, 48-2, 20 (m, 3H), 135 ΡΕ1339678 1,83 (m, 3H); MS 479,9 (M+l), 478,0 (M-l).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2-oxo-5S-[3-oxo-4-(2-trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2a, Passo D, uma mistura de éster de metilo do ácido 5-(3-{2-OXO-5A-[3-oxo-4-(2-trifluorometil-fenil)-but-1-enil]-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (29 mg; 0,060 mmol) foi hidrogenada em EtOH (20 mL) na presença de paládio a 10% em carbono (40 mg) a 50 psi durante 2 h para proporcionar o éster de metilo do ácido 5-(3-{2-oxo-5S-[3-OXO-4-(2-trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-1-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (29 mg). ^-NMR (CDCI3) δ 7, 66 (d, 1H), 7, 59 (m, 1H) , 7, 52 (m, 1H) , 7, 39 25 (m, 1H), 7, 27 (m, 1H), 6 ,80 (d, 1H), 3, 83 (s, 3H), 3, 78 (s, 2H), 3, 64 (m, 1H), 3 , 55 (m, 1H), 2, 97 (m, 1H), 2, 81 (t, 2H), 2, 48 (m, 1H), 2 ,33 (m, 2H), 2, 05 (m, 2H), 1/ 87 (m, 2H) , 1, 56 (m, 3H); MS 482, .0 (M+l), 480,0 (M-l ) ·

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[3-hidroxi-4-(2-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-1-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, 0 éster de metilo do ácido 5-(3-(2-oxo-5S-[3-oxo-4-(2-trifluorometil-fenil)-butil]-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (26 mg; 0,054 mmol) foi reduzido com NaBH4 (2 mg; 0,054 mmol) ao longo de 2 h, A 136 ΡΕ1339678 purificação por cromatografia de camada fina preparativa (EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[3-hidroxi-4-(2-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirro-lidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (10 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,65 (d, 1H), 7,59 (m, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,36 (m, 2H) , 6 ,81 (d, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,81 (m, 1H), 3,62 (m, 2H) , , 3,02 (m, 2H) , 2,83 (t, 2H), 2 ,78 (m, 1H), 2,34 (m, 2H) , , 2,12 (m, 1H), 2,01-1,35 (m, 8H); MS 484, 0 (M+l) .

Passo D: Ácido 5-(3-{2S-[3-hidroxi-4-(2-trifluorometil-fenil) -butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[3-hidroxi-4-(2-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirro-lidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (10 mg; 0,0207 mmol) foi hidrolisado com NaOH (1M; 0,07 mL) em MeOH (5 mL) aquecido sob refluxo durante 29 h para produzir o ácido 5-(3-{2S-[3-hidroxi-4-(2-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (13 mg). 1H-NMR (CDCI3) δ 7,66 1H) , 7,50 (m, 1H), 7,37 (m, 3H) , 6,84 (d, 1H), 3,83 (m, 1H), 3,64 (m, 2H), 3,04 (m, 2H), 2,85 (t, 2H) , 2,78 (m, 1H), 2,37 (m, 2H), 2,12 (m, 1H), 2,02-1,24 (m, 8H); MS 470,1 (M+l), 468,0 (M-l).

Exemplo 3D Ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico 137 ΡΕ1339678

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-(3—{2J?— [4-(4-fluoro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido [3-(4-fluoro-fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico (106 mg; 0, 407 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 16 mg; 0,407 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3-(2í?-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofen-2-carboxilico (0,407 mmol assumidos) ao longo de 17 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3-{2P-[4-(4-fluoro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (77 mg). ^-NMR (CDCI3) δ 7, 60 (d, 1H), 7, 16 (m, 2H), 7,00 (m, 2H), 6,77 (d, 1H), 6, 62 (dd, 1H), 6,19 (d, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3, 79 (s, 2H), 3,57 (m, 1H) , 2,87- 2, 77 (m, 3H), 2,37 (m, 2H), 2,20 (m, 1H), 1,80 (m, 3H) ; MS 430,0 (M+l), 428, 1 (ΜΙ) ·

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil) -3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de éster de metilo do ácido 5- (3 — {2A?— [4- (4-fluoro-fenil) -3-oxo-but-l-enil] -5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (74 mg; 0,172 mmol) foi hidrogenada em EtOH (20 mL) na presença de 138 ΡΕ1339678 paládio a 10% em carbono (50 mg) a 50 psi durante 2 h para proporcionar o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (72 mg). ^-NMR (CDC13) δ 7,61 (d, 1H) , 7,14 (m, 2H), 7,01 (m, 2H), 6,80 (d, 1H), 3,84 (s, 3H) , 3,66 (s, 2H), 3,64 (m, 1H), 3,51 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,81 (t, 2H), 2,43 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2, 05-1,79 (m, 4H), 1 ,56 ( m, 2H); MS 432, 0 (M+l), 430,1 (M-l ) . Passo C: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4- (4-fluoro- fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il Jpropil) -tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (69 mg; 0,160 mmol) foi reduzido com NaBH4 (6 mg; 0,160 mmol) ao longo de 2 h. A purificação por cromatografia de camada fina preparativa (EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (37 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,61 (d, 1H) , 7,15 (m, 2H), O O r~~~ (m, 2H), 6, ,81 (d, : 3, 82 ( s, 3H), 3, 75 (m, 1H), 3,60 (m, 2H) , 2, 99 (m, : 2, 83 ( t, 2H), 2, 77 (m, 1H), 2,34 (m, 2H) , 2, 10 (m, : 2, 00-1 ,80 (m, 4H), 1,75 (m, 1H), 1,6 8-1,34 (m, 4H) ; 434,3 (M+l).

Passo D: Ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-bu-til]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2- 139 ΡΕ1339678 carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]5-oxo-pirrolidin-l-il} -propil)-tiofeno-2-carboxílico (35 mg; 0,0807 mmol) foi hidrolisado com NaOH (1M; 0,10 mL) em MeOH (5 mL) aquecido sob refluxo ao longo de 29 h para produzir o ácido 5 — (3 — {2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il } -propil ) -tiof eno-2-carboxilico (36 mg). 1H-NMR (CDCls) δ 7,67 (d, 1H), 7,15 (m, 2H), 7,00 (m, 2H) , Oh •N co (d, 1H) , 3,77 i (m, 1H), 3, 62 (m, 2H), 3,01 (m, 1H) , 2,85 (t, 2H), 2, 78 (m, 1H), 2,62 (m, 1H), 2,36 (m, 2H), 2,10 (m, 1H), 2,00-1,72 (m, 4H), 1,69-1,34 (m, 4H); MS 420,1 (M+l), 417,7 (M-l).

Exemplo 3E Ácido 5- (3-{2S-[4- (4-f luoro-f enil) -3J?-hidroxi-butil] -5-oxo-pirrolidin-l-il} -propil)-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2A-[4-(4-fluoro-fenil)-3S-hidroxi-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il} -propil) -tiof eno-2-carboxilico

A uma solução de éster de metilo do ácido 5— (3— {2R-[4-(4-fluoro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (20 mg; 0,047 mmol) e (R)-2-metil-CBS-oxazaborolidina (1 M em tolueno; 0,047 mL; 0, 047 mmol) em tolueno anidro (3,0 mL) a -45 °C foi adicionado catecolborano (1 M em THF; 0,14 mL; 0,14 mmol) gota a gota. A mistura reaccional foi agitada a -45 °C 140 ΡΕ1339678 durante 17 h. Foi adicionado metanol (1 mL) e a mistura reaccional foi aquecida até à temperatura ambiente e foi concentrada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em CHCI3 e a solução orgânica foi lavada com NaOH 1 M (4x5 mL), HC1 (1x5 mL) e água (1x5 mL) . A solução orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada. A purificação por croma-tografia de camada fina preparativa camada fina preparativa (EtOAc) proporcionou 0 éster de metilo do ácido 5-(3-{2P-[4-(4-fluoro-fenil)-3S-hidroxi-but-l-enil]-5-oxo-pir-rolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico na forma de uma mistura aproximadamente 39:1 de diastereómeros de álcool 3S:3R por HPLC. MS 432,1 (M+l).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3K-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, éster de metilo do ácido 5-(3-{2P-[4-(4-fluoro-fenil)-3S-hidroxi-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (15 mg; 0,035 mmol) foi hidrogenada em etanol (10 mL) na presença de paládio a 10% em carbono (5 mg) a 50 psi durante 2 h para proporcionar o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3R-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (11 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,60 (d, 1H) , 7,14 (m, 2H), 7,00 (m, 2H), 6,81 (d, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,77 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,00 (m, 1H) , 2,83 (t, 2H), 2,76 (dd, 1H), 2,63 (dd, 1H), 2,34 (m, 2H) , 2,08 (m, 1H), 1,98-1,42 141 ΡΕ1339678 (m, 8H); MS 434,1 (M+l).

Passo C: Ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3£-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2a, Passo E, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3.R-hidroxi-butil ]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (11 mg; 0,0254 mmol) foi hidrolisado com NaOH (1M; 0,25 mL) em MeOH (4 mL) aquecido sob refluxo durante 3 h para produzir o ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-fenil)-3P-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (9 mg). ^-NMR (CDC13) δ 7, 67 (d, 1H), 7, 14 (m, 2H), 6,99 (m, 2H), 6,83 (d, 1H), 3, 78 (m, 1H), 3, 62 (m, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,85 (t, 2H), 2, 76 (dd, 1H) , 2,64 (dd, 1H), 2,37 (m, 2H), 2,09 (m, 1H), 2, 00- -1, 42 (m, 8H); MS 420,1 (M+l), 418, 0 (M-l) .

Exemplo 3F Ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -propil}-tiofen-2-carboxilico

Passo A: Éster de terc-butilo do ácido 5-{3-[2A-(4-naftalen-2-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido (3-naftalen-2-il-2-oxo-propil)-fosfónico (208 mg; 0,71 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 26 mg; 0,65 mmol) 142 ΡΕ1339678 reagiu com éster de terc-butilo do ácido 5-[3-(2R-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carboxilico (0,589 mol assumidos) ao longo de 18 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de terc-butilo do ácido 5 — {3 — [2R-(4-naftalen-2-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (181 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,79 (m, 3H) , 7,65 (s , 1H), 7,47 (m, 3H) , 7,29 (m, 1H), 6,63 ( m, 2H), 6,22 (d, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,98 (s, 2H), 3,49 ( m, 1H), 2, 73 (m, 1H), 2,63 (m, 2H), . 2,36 (m, 2H), 2,19 ( m, 1H), 1,72 ( m, 3H), 1,54 ( s, 9H); MS 504, 1 (M+l), 502,0 (M-l).

Passo B: Éster de terc-butilo do ácido 5-{3-[2S-(4-naftalen-2-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de éster de terc-butilo do ácido 5—{3—[2R-(4-naftalen-2-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (178 mg; 0,353 mmol) foi hidrogenada em EtOH (40 mL) na presença de paládio a 10% em carbono (75 mg) a 50 psi durante 3 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos :EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de terc-butilo do ácido 5-{3-[2S-(4-naftalen-2-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (144 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,80 (m, 3H) , 7,66 (s, 1H) , 7,48 (m, 3H) , 7,30 (m, 1H), 6,74 (d, 1H) , 3,85 (s, 2H) , 3,59 (m, 143 ΡΕ1339678 1H), 3,48 (m, 1H), 2,89 (m, 1H), 2,73 (t, 2H), 2, 47 (m, 2H), 2,26 (m, 2H), 2,04-1,74 (m, 4H), 1,53 (S, 9H), 1, 50 (m, 2H); MS 506,1 (M+l), 503,8 (M-l).

Passo C: Éster de terc-butilo do ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de terc-butilo do ácido 5—{3— [2S-(4-naftalen-2-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico (142 mg; 0,281 mmol) foi reduzido com NaBH4 (11 mg; 0,281 mmol) ao longo de 2 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de terc-butilo do ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (125 g) · 1H-NMR (CDC13) δ 7,79 (m, 3H), 7,65 (S, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,46 ( m, 2H), 7,32 (d, 1H), 6,76 (d, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,62 ( m, 2H), 2,98 (m, 2H), 2,81 (m, 3 H) , 2,34 (m, 2H) , 2,10 ( m, 1H), 2,04-1,75 (m, 2H), 1, 70- -1,36 (m, 6H), 1,52 (s, 9H) ; MS 508,0 (M+l). Passo D: Ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)- 5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico A uma solução do éster de terc-butilo do ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -propil } -tiof eno-2-carboxilico (123 g; 0,242 mmol) em 144 ΡΕ1339678 CH2C12 (20 mL) a 0 °C foi adicionado TFA (0,19 mL; 0,247 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 23 h e foi concentrada em vácuo. O residuo foi purificado por cromatografia de camada fina preparativa (EtOAc) produzir o composto mencionado em titulo do Exemplo 3F (47 mg) 1H-NMR (CDCla) δ 1, 78 (m 3H), 7,63 (m, 2H), 7, 44 (m, 2H), 7,31 (m, 1H), 6, 78 (m 1H) , 3,89 (m, 1H), 3,57 (m, 2H), 2,94 (m, 2H), 2, 79 (m 3H) , 2,32 (m, 2H), • 2,10- 1, 17 (m, 9H) ; MS 452, 3 (M+l) 450,2 (M-l).

Exemplo 36 Ácido 5-{3-[2S-(4-bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-{3-[2R-(4-bifenil-3-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido (3-bifenil-3-il-2-oxo-propil)-fosfónico (3,217 g; 10,09 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 404 mg; 10,09 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3-(2P-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carboxílico (10,09 mmol assumidos) ao longo de 17 h. A purificação por cromatografia de média pressão (gradiente de solvente de hexanos:EtOAc 9:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5—{3 —[2R-(4-bifenil-3-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -propil}-tiofeno-2-carboxílico (4,0 g). 145 ΡΕ1339678 1H- -NMR (CDC13) δ 7,56 (m , 3H) , 7,49 (m, . 1H), . 7, 42 (m, 4H), 7, 34 ( m, 1H), 7, ,16 ( :d, 1H) , 6,73 (d, 1H), 6,62 (dd, 1H), 6, 22 ( !d, 1H), 4 ,11 (m, 1H), 3,88 (s, 2H) , 3,82 (s, 3H), 3, 54 ( |m, 1H), 2 ,79 (m, 1H), 2,73 (t, 2H) , 2,36 (m, 2H), 2,20 (m, 1H), 1,76 (m, 3H); MS 488,1 (M+l), 486,0 (M-l).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-{3-[2S-(4-bifenil-3-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de éster de metilo do ácido 5 — {3 —[2R-(4-bifenil-3-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo- pirrolidin-l-il] -propil}-tiofeno-2-carboxílico (3,535 mg; 7,25 mmol), 10% de paládio em carbono (750 mg) e EtOH (250 mL) foi hidrogenada a 50 psi durante 2 h para produzir o éster de metilo do ácido 5—{3 —[2S-(4-bifenil-3-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico que foi usado sem outra purificação no Passo C. MS 490,1 (M+l).

Passo C: Éster de etilo do ácido 5-{3-[2S-(4-bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de metilo do ácido 5-{3-[2S-(4-bifenil-3-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil } -tiof eno-2-carboxílico (7,25 mmol) foi tratado com NaBH4 (274 mg; 7,25 mmol) em EtOH à temperatura ambiente 146 ΡΕ1339678 durante 1 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de etilo do ácido 5—{3—[25-(4-bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (1,68 g) ^-NMR (CDC1 3) δ 7,58 (m, 3H), 7, 40 (m, 6H), 7,17 (d, 1H), 6,79 (d, 1H), 4,27 (q. 2H), 3,85 (m, 1H), 3,62 (m, 2H), 3,00 (m, 1H), 2,86 (m, 3H), 2, 71 (m, 1H), 2,34 (m, 2H), 2, 10 (m, 1H), 2,01- -1, 75 (m, 4H), 1, 70- -1, 35 (m, 4H), 1,31 (t, 3H); MS 506,1 (M+l).

Passo D: Ácido 5-{3-[2S-(4-bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de etilo do ácido 5 — {3 —[2S—(4— bifenil-3-il-3-hidroxi-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil } -tiof eno-2-carboxilico (1,882 g; 3,72 mmol) foi hidrolisado com NaOH (1M; 5,6 mL) em MeOH (100 mL) ao longo de 3 h sob refluxo para produzir o composto mencionado em título do Exemplo 3G d, 741 g) · 1H-NMR (CDCI3) δ 7, 66 (d, 1H) , 7 / , 56 (d, 2H) , v, 40 (m, 6H), 7, 17 (d, 1H), 6,82 (d, 1H), 3 / , 85 (m, 1H) , 3, 63 (m, 2H), 3,02 (m, 1H), 2, 86 (m, 3H) , 2, . 72 (m, 1H) , 2, 36 (m, 2H), 2,11 (m, 1H), 2,01-] L, 75 (m, 4H) , 1,71-1,35 (m, 4H); MS 478, 1 (M+l), 476,0 (M-l).

Exemplo 3H Ácido 5-(3-{2S-[4-(3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il} -propil) -tiofeno-2-carboxílico 147 ΡΕ1339678

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2A-[4-(3-fluoro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido [3-(3-fluoro-fenil)-2-oxo-propil)-fosfónico (3,236 mg; 12,4 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 458 mg; 11,4 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3-(2í?-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carboxilico (10,4 mmol assumidos) ao longo de 18 h. A purificação por cromatografia de média pressão eluindo com 20% de EtOAc em hexanos até 80% de EtOAc em hexanos seguido por uma segunda eluição em coluna com 20% de acetona em tolueno até 30% de acetona em tolueno produziu o éster de metilo do ácido 5- (3 —{2R-[4-(3-fluoro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (2,95 g). 1H-NMR (CDC13) δ 7,60 (d, 1H) , 7,27 (m, 1H) , 6,92 (m, 3H), 6.76 (d, 1H), 6,60 (dd, 1H) , 6,18 (d, 1), 4,12 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,80 (s, 2H), 3,56 (m, 1H) , 2,82 (m, 1H), 2.77 (t, 2H), 2,37 (m, 2H), 2,22 (m, 1H), 1,78 (m, 3H).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(3-fluoro-fenil) -3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para 0 Exemplo 2A, Passo D, éster de metilo do ácido 5-(3-{2J?-[4-(3—fluoro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (2,95 g; 6,87 mmol) foi 148 ΡΕ1339678 hidrogenada em MeOH (60 mL) na presença de paládio a 10% em carbono (500 mg) a 50 psi durante 2 h. A purificação por cromatografia de média pressão (50% de EtOAc em hexanos até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5 —(3 —{2S—[4— (3-fluoro-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (2,60 g) . ^-NMR (CDCI3) δ 7,60 (d, 1H), 7,28 (m, 1H), 6,92 (m, 3H) , 6,79 (d, 1H), 3,82 (s, 3H), 3, 67 (s, 2H), 3,62 (m, 1H) , 3,50 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 2, 80 (t, 2H), 2,43 (m, 2H) , 2,27 (m, 2H), 2,04- 1, 76 (m, 4H), 1 ,50 (m, 2H); MS 432 ,2 (M+l), 430, 1 (M- D ·

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(3-fluoro-fenil) -3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(3-fluoro-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (2,60 g; 6,03 mmol) reagiu com NaBH4 (114 mg; 3,01 mmol) em MeOH (30 mL) a 0 °C durante 3 h. A purificação por cromatograf ia de média pressão (EtOAc até 2% de MeOH em CH2C12) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (2,43 g). MS 434,0 (M+l).

Passo D: Ácido 5-(3-{2S-[4-(3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil] -5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico 149 ΡΕ1339678

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(3—fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (2,43 g) foi hidrolisado com NaOH 2 N em MeOH (30 mL) ao longo de 18 h para produzir o ácido 5-(3-{2S-[4-(3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (2,06 g) ·

Passo E: Sal de sódio do ácido 5-(3-{2S-[4-(3-fluoro-fenil) -3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2D, Passo E, o ácido 5-(3-{2S-[4-(3-fluoro-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (2,058 g; 4,905 mmol) reagiu com NaHCCb (412 mg; 4,906 mmol) para produzir o sal de sódio do composto mencionado em titulo do Exemplo 3H. 1H-NMR (CD3OD) δ 7,35 (d, 1H),7,26 (m,1H),6,96 (m, 3H), 6,75 (d, 1H), 3,76 (m, 1H) , 3,67 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,02 (m, 1H), 2,76 (m, 3H), 2,30 (m, 2H), 2,10 (m, 1H), 1, 98-1,28 (m, 9H).

Exemplo 31 Ácido 5-(3-{2S-[4-(4-etil-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il} -propil) -tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2A-[4-(4-etil-fenil) -3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico 150 ΡΕ1339678

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dietilo do ácido [3-(4-etil-fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico (274 mg; 0,915 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 41 mg; 1,01 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3-(2P-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carboxílico (1,01 mmol assumidos) ao longo de 18 h. A purificação por cromato-grafia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) produziu o éster de metilo do ácido 5-(3-{2R-[4-(4-etil-fenil) -3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (227 mg). ^-NMR (CDC13) δ 7,59 (d, 1H) , 7, 13 (d, 2H), 7, 07 (d, 2H) , 6,75 (d, 1H), 6,58 (dd, 1H), 6, 18 (d, 1H), 4, 10 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3, 77 (s, 2H) , 3, 53 (m, 1H), 2, 78 (m, 3H), 2,59 (qr 2H), 2,36 (m, 2H) , 2, 19 (m, 1H), 1, 76 (m, 3H), 1,19 (t, 3H) ; MS 440,2 (M+l).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-etil-fenil) -3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2P-[4-(4-etil-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (227 mg; 0,517 mmol) foi hidrogenado em MeOH (30 mL) na presença de paládio a 10% em carbono a 50 psi durante 1,5 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5 —(3 —{2S—[4— 151 ΡΕ1339678 (4-etil-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno—2—carboxílico (119 mg). 1H-NMR (CDCI3) δ 7,62 (d,

1H), 7, 16 (d, 2H), 7,10 (d, 2H), 6,81 (d, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,65 (s, 2H), 3,63 (m, 1H), 3,49 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,80 (t, 2H), 2,62 (q, 2H), 2,43 (m, 2H), 2,31 (m, 2H), 2, 06- -1, 79 (m, 4H), 1, 48 (m, 2H), 1,. 21 (t, 3H) ; MS 442,2 (M+l).

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-etil-fenil )-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4- (4-etil-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (109 mg; 0,247 mmol) foi reduzido com NaBH4 (5 mg; 0,132 mmol) em MeOH (7 mL) a 0 °C até à temperatura ambiente ao longo de 3 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5—(3-(25-[4— (4-etil-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (77 mg). 1H-NMR (CDCI3) δ 7, 61 (d, 1H), 7, 16 (d, 2H), 7, 10 (d, 2H) , 6,81 (d, 1H), 3, 83 (s, 3H), 3, 77 (m, 1H), 3, 62 (m, 2H) , 3,01 (m, 1H), 2, 83 (t, 2H), 2, 77 (m, 1H), 2, 60 (m, 3H) , 2,35 (m, 2H), 2, 09 (m, 1H), 1, 99- 1,34 (m, 8H), 1,22 (t, 3H) ; MS 444,3 (M+l).

Passo D: Ácido 5-(3-{2S-[4-(4-etil-fenil)-3-hidroxi-bu-til]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2- 152 ΡΕ1339678 carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-etil-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (76 mg) foi hidrolisado com NaOH 2 N em MeOH (7 mL) ao longo de 18 h para produzir o composto mencionado em titulo do Exemplo 31 (58 mg). ΧΗ- -NMR (CD3OD) δ 7,57 (m, 1H) 1 > O co (d, 4H), 6, 88 (d, 1H), 3, 72 ( ;m, 1H), 3 , 63 (m, 1H), 3,52 (m, 1H), 2,99 (m, 1H), 2, 81 ( :t, 2H), 2 ,68 (m, 2H), 2,56 (q* 2H) , 2,27 (m, 2H), 2, 06 ( :m, 1H), 1 ,95-1,25 (m, 6H), 1,16 (t, 3H) ; MS 430,3 (M+l), 428,5 (M-l).

Exemplo 3J Ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3-hidroxi-butil] -5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2J?-[4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il }-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dietilo do ácido [3-(4-fluoro-3-metil-fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico (273 mg; 0,903 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 41 mg; 1,01 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5—[3— (2A-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carboxílico (1,01 mmol assumidos) ao longo de 18 h. A purificação por cromatografia de média pressão (20% de EtOAc em hexanos até EtOAc) produziu o éster de metilo do 153 ΡΕ1339678 ácido 5-(3 — {2R-[4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3-oxo-but-l- enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (174 mg) . 1H- -NMR (CDC1 3) δ 7, 59 (d, 1H), 6, 97 (d, 1H), 6,93 (d, 2H), 6,76 (d, 1H), 6, 60 (dd, 1H), 6, 18 (d, 1H), 4,11 (m, 1H), 3, 82 (s, 3H), 3 r 73 (s, 2H) , 3, 56 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 2, 77 (t, 2H), 2 ,36 (m, 2H) , 2, 22 (s, 3H) , 2,19 (m, 1H), 1,78 (m, 3H); MS 444,2 (M+l), 442,2 (M-l).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, o éster de metilo do ácido 5— (3—{2í?— [4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirro-lidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (174 mg; 0,392 mmol) foi hidrogenado em MeOH (30 mL) na presença de paládio a 10% em carbono (70 mg) a 50 psi durante 1,5 h. A purificação por cromatografia de média pressão (30% de EtOAc em hexanos até EtOAc) produziu éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (114

mg) . 1H-NMR ( CDC1; b) δ 7,60 (d, 1H) , 6,97 (d, 1H), 6,93 (d, 2H), 6,79 (d, 1H) , 3,82 (s, 3H) , 3,63 (m, 1H), 3,60 (s, 2H), 3,50 (m, 1H) , 2,93 (m, 1H), 2, 79 (t, 2H) , 2,42 (m, 2H), 2,33-2,21 (m, 5H), 2,02-1,78 i (m, 4H) , i, 50 (m , 2H); MS 446,1 (M+l).

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l- 154 ΡΕ1339678 il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de metilo do ácido 5 —(3—{2S— [4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3-oxo-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (114 mg; 0,256 mmol) foi reduzido com NaBH4 (5 mg; 0,132 mmol) em MeOH (10 mL) a

0 °C até à temperatura ambiente ao longo de 2,5 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (80 mg). ^-NMR (CDC13) δ 7,59 (d, 1H), 6,98 (d, 1H), 6,93 (m, 2H), 6,80 (d, 1H), 3,81 (s, 3H) , 3,74 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 2,99 (m, 1H), 2,82 (t, 2H), 2,72 (m, 1H), 2,54 (m, 1H), 2,33 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,08 (m, 1H), 1,96-1,32 (m, 8H); MS 448,1 (M+l).

Passo D: Ácido 5-(3-{2S-[4-(4-fluoro-3-metil-fenil)-3- hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(4—fluoro-3-metil-fenil)-3-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (80 mg; 0,179 mmol) foi hidrolisado com NaOH 2 N em MeOH (6 mL) ao longo de 18 h para produzir o composto mencionado em título do Exemplo 3J (56 mg) . 1H-NMR (CD3OD) δ 7,58 (d, 1H), O OO -6,98 (m, 2H) , 6,90 (m, 2 H), 3,69 (m, 2H), 3,55 (m, 1H), 3,04 (m, 155 ΡΕ1339678 1Η), 2,84 (t, 2H), 2,67 (m, 2H), 2,31 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (m, 1H), 1,98-1,27 (m, 7H); MS 432,4 (M-l).

Exemplo 3K Ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-1-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-{3-[2-oxo-5A-(3-oxo-4-fenil-but-l-enil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido (2-oxo-3-fenil-propil)-fosfónico (543 mg; 2,24 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 94 mg; 2,35 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3-(2J?-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carboxílico (2,36 mmol assumidos) ao longo de 18 h. A purificação por cromatogra-fia de média pressão (20% de EtOAc em hexanos até 70% de EtOAc em hexanos) proporcionou o éster de metilo do ácido 5—{3—[2-ΟΧΟ-5Ρ-(3-oxo-4-fenil-but-l-enil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico (315 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,61 (d, 1H), 7,34-7,15 (m, 5H), 6,77 (m, 1H), 6,61 (dd, 1H) , 6,19 (d, 1H), 4,12 (m, , 1H), 3, 85 (s, 3H), 3,82 (s, 2H) , 3,54 (m, 1H), 2,81 (m, , 3H), 2,37 (m, 2H), 2,20 (m, 1H) , 1, 78 (m, 3H); MS 411, 8 (M+l), 409, 7 (M- D . Passo B: Éster de metilo do ácido 5-{3- [2-oxo-5S- - (3-OXO-4- fenil-butil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico 156 ΡΕ1339678

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de éster de metilo do ácido 5 — {3 —[2-ΟΧΟ-5Ρ-(3-oxo-4-fenil-but-l-enil)-pirrolidin-1-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (305 mg; 0,741 mmol) foi hidrogenada em MeOH (30 mL) na presença de paládio a 10% em carbono (100 mg) a 50 psi durante 1,5 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-{3-[2-oxo-5S-(3-oxo-4-fenil-butil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (235 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,62 (d, 1H) , 7,35-7,18 (m, 5H), 6,81 (d, 1H) , 3,84 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 3, 62 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,80 (t, 2H), 2, 43 (m, 2H), 2,26 (m, 2H) , 2,04-1,78 (m, 4H), 1, 48 (m, 2H) ; MS 414, 1 (M+l) .

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de metilo do ácido 5—{3—[2— oxo-5S-(3-oxo-4-fenil-butil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (235 mg; 0,569 mmol) foi reduzido com NaBH4 (11 mg; 0,284 mmol) em MeOH (7 mL) a 0 °C de temperatura ambiente ao longo de 2 h. A purificação por cromatografia de média pressão (30% de EtOAc em hexanos até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5 — {3 —[2s—(3 — hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico (177 g). 1H-NMR (CDC13) δ 7,70 (d, 157 ΡΕ1339678 1Η), 7,32-7,16 (m, 5H) , 6,79 (d, 1H) , 3,80 (m, 4H) , 3,60 (m, 2H), 2,99 (m, 1H), 2,80 (m, 3H), 2,62 (m, 1H), 2,32 (m, 2H), 2,09 (m, 1H), 1,97-1,32 (m, 8H); MS 416,0 (M+l).

Passo D: Ácido 5-{3-[2S-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo- pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de etilo do ácido 5 — {3 —[2S—(3— hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxilico (177 mg; 0,426 mmol) foi hidrolisado com NaOH 2 N em MeOH (7 mL) ao longo de 18 h para produzir o composto mencionado em titulo do Exemplo 3K (132 mg) . 1H-NMR (CD3OD) δ 7, 57 (m, 1H) , 7, 26-7,14 (m, 5H), 6,88 (d, \—1 3, 75 (m, 1H), 3,64 ( m, 1H) , 3,54 (m, 1H), 3, 00 (m, 1H), 2,82 (t, 2H), . 2,71 (m, 2H) , 2,28 (m, 2H), 2,08 (m, 1H) , 1,96-1,26 (m, 7H); MS 402,2 (M+l), 400,4 (M-l).

Exemplo 3L Ácido 5- (3-{2S-[4- (3-cloro-fenil) -3J?-hidroxi-butil] -5-oxo-pirrolidin-l-il }-propil)-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2J?-[4-(3-cloro-fenil) -3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2C, Passo D, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido [3-(3-cloro-fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico (3,68 g; 13,3 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 533 mg; 14,5 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3-(2A-formil- 158 ΡΕ1339678 5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carboxílico (12,1 mmol assumidos) ao longo de 24 h. A purificação por cromatografia de média pressão (15% de acetona em tolueno até 20% de acetona em tolueno) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3-{2R-[4-(3-cloro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (2, 63 g) . ΧΗ- -NMR (cdci3) δ 7, 59 (d, 1H), 7,23 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 7, 04 (m, 1H), 6, 76 (d, 1H), 6,60 (dd, 1H), 6,17 (d, 1H), 4, 12 (m, 1H), 3,82 (s, 3H) , 3,78 (s, 2H), 3,56 (m, 1H), 2, 87- -2,75 (m, 3H), 2,45 -2,28 (m, 2H), 2, 21 (m, 1H), 1,78 (m, 3H).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2R-[4-(3-cloro-fenil) -3S-hidroxi-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il }-propil)-tiofeno-2-carboxílico A uma solução de éster de metilo do ácido 5— (3— {2R-[4-(3-cloro-fenil)-3-oxo-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (2,63 g; 5,91 mmol) e (R)-2-metil-CBS-oxazaborolidina (1 M em tolueno; 5,9 mL; 5,9 mmol) em CH2C12 (140 mL) a -45 °C foi adicionado catecolborano (1 M em THF; 17,7 mL; 17,7 mmol) gota a gota. A mistura reaccional foi agitada durante 18 h e foi adicionado MeOH. Após agitação durante 18 h, os voláteis foram removidos em vácuo e foi adicionado CH2C12. A solução orgânica foi lavada com NaOH 1 N frio (2 vezes), HC1 1 N, água e água salgada. A solução orgânica foi seca (MgSCt), filtrada e concentrada. A purificação por cromatograf ia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até 80% de 159 ΡΕ1339678

EtOAc em hexanos) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3 —{2R-[4-(3-cloro-fenil)-3S-hidroxi-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (870 mg) na forma de uma mistura aproximadamente 10:1 de diastereómeros de álcool 3S:3R por ^-NMR. ΧΗ—NMR (CDC13) δ 7,61 (d, 1H) , 7, 21 (m, 3H), 7,07 (m, 1H), 6, 80 (d, 1H), 5,68 (dd, 1H), 5, 45 (dd, 1H), 4,36 (m, 1H), . 4,01 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3, 51 (m, 1H) , 2,84-2,76 (m, 5H) , 2,44-2,28 (m, 2H), 2,18 (m, 1H), 1,86-1,56 (m, 4H).

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(3-cloro-fenil) -3J?-hidroxi-butil] -5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de éster de metilo do ácido 5-(3 — {2R-[4-(3-cloro-fenil)-3S-hidroxi-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (850 mg) e paládio a 10% em carbono (100 mg) em MeOH (50 mL) foi hidrogenada num agitador de Parr a 50 psi durante 3 h. A hidrogenação foi repetida usando 100 mg de 10% de paládio em carbono durante 6 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(3-cloro-fenil)-3R-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2- carboxilico ( 504 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,61 (d, 1H), 7,23 (m, 3H), 7, 08 (m, 1H), 6,82 (d, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,81 (m, 1H), 3,62 i (m, 2H), 3, 01 (m, 1H), 2,84 (t, 2H) , 2,77 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2, 35 (m, 2H), 2,10 (m, 1H), 1,97-1,43 160 ΡΕ1339678 (m, 8 Η) .

Passo D: Ácido 5-(3-{2S-[4-(3-cloro-fenil)-3J?-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2a, Passo E, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[4-(3-cloro-fenil)-3P-hidroxi-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (504 mg) foi hidrolisado com NaOH 2 N em MeOH (20 mL) a 50 °C ao longo de 4 h para produzir o composto mencionado em titulo do Exemplo 3L (338, 6 mg) . 1H-NMR (CDC13) δ 7,68 (d, 1H), 7,22 (m, 3H), 7, 08 (m, 1H), 6,84 (d, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,64 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2, 82 (m, 4H), 2,64 (m, 1H), 2,38 (m, 2H), 2,12 (m, 1H), 1, 92 (m, 3H), 1,66 (m, 1H), 1,57- -1,19 (m, 3H) ; MS 436,1 (M+l), 434 ,2 (M-l).

Exemplo 3M Ácido 5- (3-{2S- [3J?-hidroxi-4- (3-trifluorometil-fenil) -butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2-oxo-5J?-[3-oxo-4-(3-trifluorometil-fenil)-but-l-enil]-pirrolidin-1-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dietilo do ácido [2-oxo-3-(3-trifluorometil-fenil)-propil]-fosfó-nico (5,026 g; 17,0 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 750 mg; 18,8 mmol) reagiu com éster de metilo do ácido 5-[3- 161 ΡΕ1339678 (2R-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carbo-xílico (18,8 mmol assumidos) ao longo de 24 h. A purificação por cromatografia de média pressão (15% de acetona em tolueno até 20% de acetona em tolueno) produziu o éster de metilo do ácido 5-(3-{2-oxo-5P- [3-oxo-4-(3-trifluorometil-fenil)-but-l-enil]-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2- carboxili< SO (4, 02 g) · 1H-NMR (CDC13) δ 7,61 (d, 1H), 7, 54 (d, 1H), V, 45 (m, 2H), 7,37 (d, 1H), 6,79 (d, 1H), 6/ 6 6 (dd, 1H), 6 ,20 (d, , 1H), 4, 16 (m, 1H), 3, 90 (s, 2H) , 3, 84 (s, 3H), 3, 60 (m, 1H), 1 C oo Cs] 2,78 (m, 3H), 2,48 -2,31 ( m, 2H), 2,23 (m, 1H), 1,82 (m, 3H).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2J?-[3S-hidroxi-4- (3-trifluorometil-fenil)-but-l-enil]-5-oxo- pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo C, o éster de metilo do ácido 5-(3-(2-oxo-5R-[3-OXO-4-(3-trifluorometil-fenil)-but-l-enil] -pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (2,63 g; 5,91 mmol) foi reduzido com catecolborano (1 M em THF; 18,8 mL; 18,8 mmol) na presença de (R)-2-metil-CBS-oxazabo-rolidina (1 M em tolueno; 0,94 mL; 0,94 mmol) a -45 °C ao longo de 18 h. A reacção foi adicionada de HC1 1 N e a mistura foi agitada durante 40 minutos. A solução orgânica foi consecutivamente lavada com NaOH 1 N arrefecido em gelo (3 vezes), HC1 1 N (1 vez), água (1 vez) e água salgada. A solução orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia de média pressão (10% de 162 ΡΕ1339678 acetona em tolueno até 20% de acetona em tolueno) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3—{2R-[3S-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxilico (3 g) na forma de uma mistura aproximadamente 4:1 de diastereómeros de álcool 3S:3R por 1H-NMR. ^-NMR (CDC13) δ 7,60 (d, 1H) , 7,50 (d, 1H), 7, 41 (m, 3H), 6, 79 (d, 1H), 5,70 (dd, 1H), 5, 48 (dd, 1H), 4 ,41 (m, 1H), 4, 00 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,50 (m, 1H), 2, 86-2,77 (m, 5H), 2,42-2,26 (m, 2H), 2,16 (m, 1H), 1,81 (m, 2H), 1 , 72-1 ,54 (m ., 2H) .

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[3R-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-1-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, o éster de metilo do ácido 5-(3-{2R-[3S-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-but-l-enil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (3 g) e 10% de paládio em carbono (400 mg) em MeOH (70 mL) foi hidrogenada num agitador de Parr a 50 psi durante 16 h. A purificação por cromatografia de média pressão (20% de EtOAc em hexanos até 70% de EtOAc em hexanos) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-(3-{2S-[3P-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil)-tiofeno-2-carboxílico (2,26 g) . ^-NMR (CDC13) δ 7,61 (d, 1H), 7, 52- 1 co co (m, 4H), 6,81 (d, 1H), 3,83 (m, 4H), 3,63 (m, 2H), 3,00 (m, 1H), 2, 85 (m, 3 H), 2,74 (m, 1H), 2,34 (m, 2H), 2,10 (m, 1H), 1, 98-1, 45 (m, 8H) . 163 ΡΕ1339678

Passo D: Ácido 5-(3-{2S-[3J?-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de etilo do ácido 5-(3-{2S-[3P-hidroxi-4-(3-trifluorometil-fenil)-butil]-5-oxo-pirro-lidin-l-il}-propil)-tiofeno-2-carboxílico (625 mg) foi hidrolisado com NaOH 2 N em MeOH (20 mL) à temperatura ambiente ao longo de 24 h para produzir o composto mencio-

nado em titulo do Exemplo 3M (599 mg) . ^-NMR (CDC13 ) δ 7,67 (d, 1H), 7,51-7,38 (m, 4H), 6,84 (d, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,63 (m, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,85 (m, 3H), 2, 75 (m, 1H) , 2,37 (m, 2H), 2,11 (m, 1H), 2,00 -1,45 (m, 8H) ; MS 470,2 (M+l), 468,2 (M-l).

Exemplo 4Ά (Ilustrativo) 5S-(3-Hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-1-[6-(2H-tetrazol-5-il)-hexil]-pirrolidin-2-ona

Passo A: 7-(2J?-Formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanonitrilo

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo A, 7-(2P-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanonitrilo (150 mg; 0,67 mmol) foi oxidado para dar origem a 7-(2P-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanonitrilo, o qual foi usado no Passo B sem outra purificação.

Passo B: 7-[2Jl-(4-Naftalen-2-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanonitrilo 164 ΡΕ1339678

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido (3-naftalen-2-il-2-oxo-propil)-fosfónico (196 mg; 0,67 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 27 mg; 0,67 mmol) reagiu com 7-(2R-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptano-nitrilo (0,67 mol assumidos) ao longo de 19 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou 7-[2R-(4-naftalen-2-il-3-oxo-but-l- enil)- -5- -oxo-pirrolidin-1- -il] - heptanonitrilo (74 mg) . 'H- -NMR ( CDC13) δ 7, 79 (m, 3H) , 7,67 (m, 1H), 1, , 46 (m, 2H), 7, 30 (d, r 1H), 6, 65 (dd, 1H), . 6,25 (d, 1H), 4, 10 (m, 1H), 3, 99 (s , 2H), 3, 42 (m, 1H), 2,66 (m, 1H) , 2, 37 (m, 2H), 2, 22 (m , 3H), 1, 76 (m, 1H), 1,52 (m, 2H), 1, 29 (m, 4H), 1, 10 i ;m, 2H) ; MS 389, 1 (M+l), 387,0 (M- D ·

Passo C: 7-[2S-(4-Naftalen-2-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanonitrilo

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, 7-[2R-(4-naftalen-2-il-3-oxo-but-l-enil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanonitrilo (74 g; 0,19 mmol) foi hidrogenado em EtOH (30 mL) na presença de 10% de paládio em carbono (50 mg) a 50 psi durante 3 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos :EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou 7-[2S-(4-naftalen-2- il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanonitrilo (45 mg) . ^-NMR (CDCI3) δ 7,80 (m, 3H), 7,66 (s, 1H), 7, 47 (m, 2H), 7,30 (d , 1H), 3,85 (s, 2H), 3,51 (m, 2H), 2,81 (m, 1H), 2,48 (m , 2H), 2,28 (m, 4H), 1,98 (m, 2H), 1,62 (m, 165 ΡΕ1339678 4Η), 1,44 (m, 4H), 1,22 (m, 2H); MS 391,4 (M+l), 389,3 (ΜΙ) ·

Passo D: 7-[2S-(3-Hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo- pirrolidin-l-il]-heptanonitrilo

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2b, Passo C, 7-[2S-(4-naftalen-2-il-3-oxo-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanonitrilo (42 mg; 0,108 mmol) foi reduzido com NaBH4 (4 mg; 0,11 mmol) em EtOH (20 mL) à temperatura ambiente durante 3 h para produzir o 7-[25-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanonitrilo (40 g) . 1H-NMR (CDC13) δ 7,80 (m, 3H) , 7,65 (m, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,33 (d, 1H), 3,92 (m, 1H) , 3,59 (m, 2H), 3,03-2, 78 (m, 3H), 2,35 (m, 4H), 2,12 (m, 1H), 1,81 (m, 1H), 1,68-1,40 (m, 11H), 1,28 (m, 2H); MS 393,1 (M+l).

Passo E: 5S-(3-Hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-l-[6-(2H- tetrazol-5-il)-hexil]-pirrolidin-2-ona

Uma solução de 7-[2S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-heptanonitrilo (39 mg; 0,0994 mmol), azidotrimetilsilano (150 mg; 1,30 mmol) e óxido de dibutilestanho (25 mg; 0,10 mmol) em tolueno (15 mL) foi aquecida sob refluxo durante 19 h. A mistura reaccional foi arrefecida e foi acidificada até pH 2 com HC1 1 N (5 mL) . Os voláteis foram removidos em vácuo e a solução aquosa foi lavada com EtOAc (4x10 mL) . As soluções orgânicas foram combinadas, secas (MgS04), filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia de 166 ΡΕ1339678 camada fina preparativa (EtOAcrMeOH 9:1) para produzir 5S-(3-hidroxi-4-naftalen-2-il-butil)-1-[6-(2H-tetrazol-5-il)-hexil]-pirrolidin-2-ona (11 mg). 1H-NMR (CDCI3) δ 7,79 (m, 3H), 7,65 (m, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,32 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,52 (m, 1H), 3,03-2,83 (m, 5H), 2, 44 (m, 2H), 2,18 (m, 1H), 1,87-1,20 (m, 14H); MS 436,1 (M+l), 435,2 (M-l).

Exemplo 5A Ácido 2-{3-[2S-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-1-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico

Passo A: Éster de etilo do ácido 2-{3-[2-oxo-5A-(3-oxo-4-fenil-but-l-enil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo B, o anião derivado de éster de dimetilo do ácido (2-oxo-3-fenil-propil)-fosfónico (105 mg; 0,434 mmol) e NaH (60% em massa em óleo; 17 mg; 0, 434 mmol) reagiu com éster de etilo do ácido 2-[3-(2R-formil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiazole-4-carboxílico (preparado a partir do éster de etilo do ácido 2-[3-(2R-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)propil]-tiazole-4-carboxilico de modo análogo ao procedimento descrito para 0 Exemplo 2a, Passo A; 0,359 mmol assumidos) ao longo de 17 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 1:1 até EtOAc) proporcionou o éster de etilo do ácido 2-{3-[2-oxo-5R-(3-oxo-4-fenil-but-l-enil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico (59 mg). ^-NMR (CDCI3) δ 8,03 (s, 167 ΡΕ1339678 1Η), 7,33-7,17 (m, 5H), 6,61 (dd, 1H), 6,20 (d, 1H), 4,40 (q, 2H), 4,19 (m, 1H), 3,82 (s, 2H), 3,60 (m, 1H), 2,98 (m, 2H), 2,80 (m, 1H), 2,44-2,15 (m, 3H), 1,94 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 1,38 (t, 3H); MS 427,0 (M+l), 424,9 (M-l).

Passo B: Éster de etilo do ácido 2-{3-[2-oxo-5S-(3-oxo-4-fenil-butil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo D, uma mistura de éster de etilo do ácido 2 — {3 —[2-oxo-5R-(3-oxo-4-fenil-but-l-enil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxilico (23 mg; 0,0539 mmol) foi hidrogenada em EtOH (15 mL) na presença de paládio a 10% em carbono (15 mg) a 50 psi durante 3 h. A purificação por cromatografia de camada fina preparativa (hexanos:EtOAc 1:1) (2 vezes) proporcionou o éster de etilo do ácido 2—{3— [2-OXO-5S-(3-oxo-4-fenil-butil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico (19 mg). ^-NMR (CDCI3) δ 8,03 (s, 1H), 7,34-7,17 (m, 5H), 4,39 (q, 2H), 3,68 (s, 2H), 3,65 (m, 1H), 3,53 (m, 1H), 2,98 (m, 3H), 2,43 (t, 2H), 2,26 (m, 2H) , 1,98 (m, 4H) , 1,49 (m, 2H) , 1,37 (t, 3H) ; MS 429,0 (M+l).

Passo C: Éster de etilo do ácido 2-{3-[2S-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo C, o éster de etilo do ácido 2-{3-[2-oxo-5S-(3-oxo-4-fenil-butil)-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole- 168 ΡΕ1339678

4-carboxílico (34 mg; 0,0793 mmol) foi reduzido com NaBH4 (3 mg; 0, 079 mmol) em EtOH (10 mL) à temperatura ambiente durante 2 h. A purificação por cromatografia de camada fina preparativa (EtOAc) proporcionou o éster de etilo do ácido 2-{3-[2S-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-1-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico (18 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 8,02 (m, 1H), 7,33-7,18 (m, 5H) , 4,38 (q, 2H) , 3,82 (m, 1H 3,65 (m, 2H), 3,06 (m, 3H), 2,80 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,32 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 1,98 (m, 2H), 1,82 (m, 1H), 1,68-1,42 (m, 4H), 1,37 (t, 3H); MS 431,1 (M+l).

Passo D: Ácido 2-{3-[2S-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo- pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2A, Passo E, o éster de etilo do ácido 2-{3-[2S-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxilico (18 mg; 0,042 mmol) foi hidrolisado com NaOH 1 N (0,06 mL) em MeOH (5 mL) e aquecido sob refluxo durante 3 h para produzir o composto mencionado em título do Exemplo 5A (8 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 8,01 (s, 1H), 7,33-7,18 (m, 5H), 3,83 (m, 1H), 3,66 (m, 2H), 3,09 (m, 1H), 3,02 (t, 2H), 2,81 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,35 (m, 2H), 2,06 (m, 4H), 1,82 (m, 1H), 1, 69-1,38 (m, 4H) ; MS 403,0 (M+l), 401,0 (M-l).

Passo E: Sal de sódio do ácido 2-{3-[2S-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico 169 ΡΕ1339678 0 sal de sódio do composto mencionado em titulo do Exemplo 5A foi preparado de modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 2B, Passo E. 1H-NMR (CDC13) δ 7,58 (s, 1H), 7,25-7,14 (m, 5H), 3,75 (m, 1H) , 3,36 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 2,61 (m, 3H), 2,16-1,20 (m, 12H).

Exemplo 5B 5-(3-Hidroxi-4-fenil-butil)—1—{3—[4-(2H-tetrazol-5-il)-fenil]-propil}-pirrolidin-2-ona

Passo A: 4-(3-{2-[3-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-4-fenil-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzonitrilo

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo D, o anião derivado da 2-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-fenil-butil]-pirrolidin-2-ona (262,8 mg; 0,756 mmol) e NaHMDS (0,83 mL; 0,83 mmol) reagiu com 4-(3-bromo-propil)-benzonitrilo (186 mg; 0,832 mmol) a 70 °C durante 24 h. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 5:1 até hexanos até hexanos:EtOAc 1:1 até 1% de MeOH em CH2C12 até 5% de MeOH em CH2C12) proporcionou 4-(3—{2—[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-fenil-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzonitrilo (257, 6 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,56 (m, 2H) , 7,26 (m, 5H), 7,13 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 3,62 (m, 1H) , 3,48 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 2, 82-2,60 (m, 4H), 2,29 (m, 2H), 1,88-1,25 (m, 7H) ; MS 491,5 (M+l).

Passo B: 4-{3-[2-(3-Hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzonitrilo 170 ΡΕ1339678

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo IA, Passo E, 4-(3 —{2 — [3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4-fenil-butil]-5-oxo-pirrolidin-l-il}-propil)-benzonitrilo (257,6 mg; 0,525 mmol) foi desprotegido com TBAF (1 M em THF; 0,79 mL; 0,79 mmol) ao longo de 24 h. A purificação por cromatografia de média pressão (EtOAc:hexanos 1:1 até EtOAc até 1% de MeOH em CH2CI2 até 3% de MeOH em CH2C12) proporcionou o 4—{3— [2-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzonitrilo (157,8 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 7,56 (m, 2H), 7,26 (m, 7H) , 3,80 (m, 1H), 3, 67-3,55 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,65 (t, 2H), 2,43-2,24 (m, 2H) , 2,08 (m, 1H), 1,89-1,33 (m, 9H); MS 375,3 (M-l).

Passo C: 5-(3-Hidroxi-4-fenil-butil)—1—{3—[4-(2H-tetrazol- 5-il)-fenil]-propil}-pirrolidin-2-ona

De modo análogo ao procedimento descrito para o Exemplo 4A, Passo E, o 4-{3-[2-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-benzonitrilo (157,8 mg; 0,419 mmol) reagiu com azidotrimetilsilano (0,11 mL; 0,84 mmol) e óxido de dibutilestanho (20 mg; 0,08 mmol) em tolueno (8,6 mL) e a mistura foi aquecida sob refluxo durante 60 h. A purificação por cromatografia de média pressão (CH2C12 até 2% de MeOH em CH2C12 até 4% de MeOH em CH2C12 até 6% de MeOH em CH2C12) proporcionou 5-(3-hidroxi-4-fenil-butil)-1-(3-[4-(2H-tetrazol-5-il)-fenil]-propil}-pirrolidin-2-ona (144,7 mg). 1H-NMR (CDC13) δ 8,02 (m, 2H), 7,27 (m, 7H), 3,84 (m, 1H), 3,67 (m, 2H), 3,10 (m, 1H) , 2,84 (m, 1H), 171 ΡΕ1339678 2,67 (m, 2H), 2,53 (m, 1H), 2,42 (m, 1H), 2,14 (m, 1H), 1,97-1,40 (m, 9H) ; MS 420,3 (M+l), 418,3 (M-l).

Preparação 1 Éster de metilo do ácido 5- [3- (2J?-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carboxílico

Passo A: 5R-(terc-Butil-dimetil-silaniloximetil)-l-prop-2-inil-pirrolidin-2-ona

A uma solução de 5R-(terc-butil-dimetil-silanilo-ximetil)-pirrolidin-2-ona (Tetrahedron "Asimmetry", 7 (1996) 2113) (10,24 g; 44,6 mmol) em DMF (650 mL) a 0 °C foi adicionado NaHMDS (1 M em THF; 49 mL; 49 mmol) gota a gota. A mistura reaccional foi agitada mecanicamente à temperatura ambiente durante 2 h para produzir uma suspensão espessa. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e brometo de propargilo (80% em tolueno; 5,0 mL; 45 mmol) em dmf (50 mL) foi lentamente adicionado. A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 2 h e à temperatura ambiente durante 0,5 h. Cloreto de amónio saturado aquoso (700 mL) e água foram adicionados. A solução foi lavada com EtOAc (3x600 mL) . As soluções orgânicas foram combinadas, lavadas com água (4x300 mL) e depois com água salgada (1x300 mL) . A solução orgânica foi seca (Na2S04), filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia de média pressão (10% de EtOAc em hexanos até 25% de EtOAc em hexanos) proporcionou 5R-(terc-butil-dimetil-silaniloxi-metil)-l-prop-2-inil-pirrolidin-2-ona (9,85 g) . ^-NMR (CDCI3) δ 4,58 (dd, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,77 (dd, 1H), 3,70 172 ΡΕ1339678 (d, 1H), 3,61 (m, 1H), 2,50-2, 28 (m, 2H) , 2,18 (m, 1H) , 2,10 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 0,87 (s, 9H), 0,05 (S, 6H); MS 268,2 (M+l).

Passo B: Éster de metilo do ácido 5-{3-[2J?-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-prop-l-inil}-tiofeno-2-carboxílico

Uma mistura de 5J?- (terc-butil-dimetil-silaniloxi-metil)-l-prop-2-inil-pirrolidin-2-ona (8,64 g; 32,3 mmol), éster de metilo do ácido 5-bromo-tiofeno-2-carboxílico (7,5 g; 33,9 mmol), Cul (308 mg; 1,62 mmol), tetraquis(tri-fenilfosfina)paládio (0) (1,9 g; 1,62 mmol), trietilamina (5,0 mL; 36 mmol) e CH3Cn (300 mL) foi aquecida sob refluxo durante 19 h. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e os voláteis foram removidos em vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (500 mL) e a solução orgânica foi lavada com água (3x200 mL) seguido por água salgada (1x200 mL) . A solução orgânica foi seca (Na2S04), filtrada e concentrada. A purificação por croma-tografia de média pressão (10% de EtOAc em hexanos até 25% de EtOAc em hexanos) (2 vezes) proporcionou o éster de metilo do ácido 5 — {3 —[2R-(terc-butil-dimetil-silaniloxi-metil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-prop-l-inil}-tiofeno-2-carboxílico (11,42 g) . 1H-NMR (CDCI3) δ 7,61 (d, 1H), 7,09 (d, 1H), 4,81 (d, 1H), 3,98 (d, 1H), 3,87 (m, 1H) , 3,85 (s, 3H), 3,78 (dd, 1H), 3,63 (dd, 1H), 2,49-2,29 (m, 2H), 2,11 (m, 1H), 1,82 (m, 1H; 0,85 (s, 9H), 0,03 (s, 6H); MS 408,0 (M+l). 173 ΡΕ1339678

Passo C: Éster de metilo do ácido 5-{3-[2R-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico

Uma mistura de éster de metilo do ácido 5 — {3 — [2i?— (terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -prop-l-inil } -tiof eno-2-carboxilico (11,4 g; 28 mmol) em EtOH (200 mL) foi hidrogenada num agitador de Parr a 50 psi na presença de 10% de paládio em carbono (1,2 g) durante 3 h. O catalisador foi removido por filtração através de Celite® com a ajuda de EtOH e a solução orgânica foi concentrada em vácuo. A hidrogenação foi repetida usando EtOH (200 mL) e 10% de paládio em carbono (1,2 g) durante 24 h. A purificação por cromatografia de média pressão (25% de EtOAc em hexanos até 50% de EtOAc em hexanos) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-{3-[2.R-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiofeno-2-carboxílico (10,2 g) . 1H-NMR (CDCI3) δ 7,64 (d, 1H), 6,83 (d, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,64 (m, 3H), 3,13 (m, 1H), 2,86 (t, 2H), 2,51-2,24 (m, 2H), 2,12-1,78 (m, 4H), 0,88 (s, 9H), 0,04 (s, 6H).

Passo D: Éster de metilo do ácido 5-[3-(2J?-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno-2-carboxílico A uma solução de éster de metilo do ácido 5— {3— [2R-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-5-oxo-pirrolidin-l-il] -propil}-tiofeno-2-carboxílico (1,5 g; 3,64 mmol) em 174 ΡΕ1339678

MeOH (40 mL) foi adicionado HC1 1 N (18 mL) e a mistura reaccional foi agitada durante 1,5 h. Os voláteis foram removidos em vácuo e a solução aquosa foi lavada com CH2C12 (3x50 mL). As soluções orgânicas foram combinadas, lavadas com água salgada, secas (MgS04), filtradas e concentradas. A purificação por cromatografia de média pressão (5% de MeOH em CH2C12) proporcionou o éster de metilo do ácido 5-[3-(2P-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiofeno- 2-carboxilico (689 mg) 1H-NMR (CDC1 3) δ 7,59 (d, 1H), 6,79 (d, 1H), 3, 82 (s, 3H), 3,75 (m, 1H), 3,62 (m, 3H), 3,07 (m, 1H), 2, 82 (t, 2H) , 2,44 (m, 1H) , 2,26 (m, 2H), 2,09-1,83 (m, 4H) ; MS 298,2 (M+l). PREPARAÇÃO 2 Éster de etilo do ácido 7-(2J?-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanóico

De modo análogo ao procedimento descrito para a Preparação 1, Passo A, o anião derivado da 5R-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-pirrolidin-2-ona (18,83 g; 82,1 mmol) e NaHMDS (1 M em THF; 90 mL; 90 mmol) foi alquilada com 7-bromo-heptanoato de etilo (16 mL; 82 mmol). A mistura reaccional foi agitada a 60 °C durante 16 h e foi manipulada de modo análogo ao descrito para a Preparação 1, Passo A. O residuo cru foi dissolvido em MeOH (600 mL) e HC1 1 N (300 mL) foi adicionado. A solução foi agitada durante 3 h e os voláteis foram removidos em vácuo. A solução aquosa foi diluída com CH2C12 (300 mL) e a solução orgânica foi lavada com água (2x75 mL) seguida por água 175 ΡΕ1339678 salgada (1x75 mL) . A solução orgânica foi seca (Na2S04), filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia de média pressão (EtOAc) proporcionou o éster de etilo do ácido 7-(2R-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanóico (21,2 g) . XH-NMR (CDC13) δ 4,12 (q, 2H), 3,80 (dd, 1H) , 3,66 (m, 3H), 2,97 (m, 1H), 2,54-2,27 (m, 5H), 2,04 (m, 2H), 1,67-1,28 (m, 8H), 1,26 (t, 3H); MS 272,3 (M+l).

Preparação 3 7-(2i?-Hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanonitrilo

De modo análogo ao procedimento descrito para a Preparação 1, Passo A, o anião derivado da 5-R- (terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-pirrolidin-2-ona (20 g; 87 mmol) e NaHMDS (1 M em THF; 96 mL; 96 mmol) foi alquilada com 7-bromo-heptanonitrilo (13 mL; 87 mmol). A mistura reacci-onal foi agitada a 60 °C durante 24 h e foi manipulada conforme descrito para a Preparação 1, Passo A. O resíduo cru foi dissolvido em MeOH (350 mL) e HC1 1 N (154 mL) foi adicionado. A solução foi agitada durante 2 h e os voláteis foram removidos em vácuo. A solução aquosa foi diluída com CH2CI2 (3x200 mL) e as soluções orgânicas foram combinadas e lavadas com água salgada (1x150 mL). A solução orgânica foi seca (Na2S04), filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia de média pressão (1% de MeOH em EtOAc até 4% de MeOH em EtOAc) proporcionou o 7-(2R-hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-heptanonitrilo (10,3 g) . 1H-NMR (CDCI3) δ 3,76 (dd, 1H), 3,62 (m, 3H), 2,97 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,33-1,94 (m, 5H), 1,92 (m 176 ΡΕ1339678 1Η), 1,66-1,41 (m, 6H), 1,30 (m, 2H); MS 225,3 (M+l).

Preparação 4 Éster de metilo do ácido 4-(3-bromo-propil)-benzóico

Passo A: Éster de metilo do ácido 4-(3-hidroxi-prop-l-inil)-benzóico A uma solução de 4-iodobenzoato de metilo (20 g; 76 mmol), álcool propargílico (5,55 g; 99,0 mmol) e trietilamina (20 mL) em acetonitrilo (200 mL) foi adicionado diclorobis(trifenilfosfina)paládio (II) (1,55 g; 2,21 mmol) seguido por Cul (454 mg; 2,38 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. Foi adicionada água e a solução aquosa foi lavada com EtOAc (3x). As soluções orgânicas foram combinadas, secas (MgS04), filtradas e concentradas. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 9:1 até hexanos:EtOAc 4:1) produziu o éster de metilo do ácido 4-(3-hidroxi-prop-l-inil)-benzóico (12,65 g).

Passo B: Éster de metilo do ácido 4-(3-hidroxi-propil)-benzóico

Uma solução de éster de metilo do ácido 4—(3 — hidroxi-prop-l-inil)-benzóico (12,65 g) em EtOAc (75 mL) e MeOH (75 mL) foi hidrogenada a 50 psi num agitador de Parr na presença 10% de paládio em carbono (2 g) durante 24 h. O catalisador foi removido por filtração através de Celite® e o filtrado foi concentrado. A reacção foi repetida por adição de 10% de paládio em carbono (2 g) e 177 ΡΕ1339678 hidrogenação num agitador de Parr durante 24 h. Após filtração através de Celite®, a solução foi concentrada em vácuo para produzir o éster de metilo do ácido 4—(3— hidroxi-prop-l-inil)-benzóico (11,98 g).

Passo C: Éster de metilo do ácido 4-(3-bromo-propil)-benzóico

Uma solução de éster de metilo do ácido 4-(3-hidroxi-propil)-benzóico (11,98 g) e 1,1'-carbonildiimi-dazole (9,0 g; 55,50 mmol) em CH3CN (200 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. Brometo de alilo foi adicionado e a mistura reaccional foi aquecida em refluxo durante 20 h, A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e foi adicionado NaHC03 aquoso saturado. A solução aquosa foi lavada com EtOAc (3x) e as soluções orgânicas foram combinadas, secas (MgS04), filtradas e concentradas. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 9:1) produziu o composto mencionado em titulo da Preparação 4.

Preparação 5 Éster de etilo do ácido 2-[3- (2J?-Hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiazole-4-carboxílico

Passo A: Éster de metilo do ácido 2-bromo-tiazole-4-carboxílico

Uma solução fria de nitrito de sódio (228 mg; 3,31 mmol) em água (2,0 mL) foi adicionada gota a gota a uma mistura de éster de etilo do ácido 2-amino-tiazole-4- 178 ΡΕ1339678 carboxílico (J. Am. Chem. Soc., 68 (1946) 266) (500 mg; 2,90 mmol), CuS04 penta-hidratado (2100 g; 8,41 mmol), NaBr (1,134; 11,02), H2S04 (3,0 mL) e água (3,0 mL) a desde -5

°C até 0 °C. A mistura reaccional foi agitada a 0 °C

durante 20 min e à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura reaccional foi ajustada até pH 9 com NaOH 1 N (105 mL) e a solução orgânica foi lavada com CHC13 (4x50 mL) . As soluções orgânicas foram combinadas, secas (MgS04), filtradas e concentradas. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 39:1 até hexanos:EtOAc 19:1) produziu o éster de metilo do ácido 2-bromo-tiazole-4-carboxílico (257 mg).

Passo B: Éster de etilo do ácido 2-{3-[2R-(terc-butil- dimetil-silaniloximetil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-prop-l-inil}-tiazole-4-carboxílico

Substituindo os materiais de partida apropriados, o composto do Passo B foi preparado usando um procedimento análogo ao descrito para a Preparação 4, Passo A, usando tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) e Cul como catalisadores.

Passo C: Éster de etilo do ácido 2-{3-(2R-(terc-butil- dimetil-silaniloximetil)-5-oxo-pirrolidin-l-il]-propil}-tiazole-4-carboxílico

Substituindo os materiais de partida apropriados, o composto do Passo C foi preparado usando um procedimento análogo ao descrito para a Preparação 4, Passo B. 179 ΡΕ1339678

Passo D: Éster de etilo do ácido 2-[3-(2J?-Hidroximetil-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil]-tiazole-4-carboxílico A uma solução de éster de etilo do ácido 2 — {3 — [2R-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-5-oxo-pirrolidin-1—11]-tiazole-4-carboxílico (306 mg; 0,717 mmol) em THF (20 mL) a 0 °C foi lentamente adicionado BU4NF (1 M em THF; 1,1 mL; 1,1 mmol). A mistura reaccional foi aquecida até à temperatura ambiente e foi agitada durante 2 h. NaHC03 aquoso saturado foi adicionado e os voláteis foram concentrados em vácuo. A solução aquosa foi lavada com CHCI3 (4x10 mL) . As soluções orgânicas foram combinadas, secas (MgS04), filtradas e concentradas para produzirem o composto mencionado em titulo da Preparação 5 (225 mg).

Preparação 6 Éster de dietilo do ácido [3-(4-fluoro-3-metil-fenil)-2- oxo-propil]-fosfónico

Passo A: Éster de dietilo do ácido [3-(4-fluoro-3-metil-fenil)-2-hidroxi-propil]-fosfónico A uma solução de brometo de 4-fluoro-3-metilfenilmagnésio (0,5 M em Et20; 15,5 mL; 7,75 mmol) em THF (10 mL) a -30 °C foi adicionado Cul (196 mg; 1,03 mmol) e a mistura reaccional foi agitada durante 10 minutos. A mistura reaccional foi aquecida a -15 °C e foi adicionado éster de dietilo do ácido oxiranilmetil-fosfónico (1 g; 5,2 180 ΡΕ1339678 mmol) em THF (10 mL). A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 2 h. Cloreto de amónio aquoso saturado foi adicionado e o produto foi extraído com EtOAc. A solução orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia de média pressão (20% de EtOAc em hexanos até 70% de EtOAc em hexanos) produziu o éster de dietilo do ácido [3-(4-fluoro-3-metil-fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico (1,37 g).

Passo B: Éster de dietilo do ácido [3-(4-fluoro-3-metil- fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico A uma solução de éster de dietilo do ácido [3—(4— fluoro-3-metil-fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico (1,37 g; 4,51 mmol) em CH2CI2 (30 mL) foi adicionado reagente de Dess-Martin (Chemical Abstracts N° 87413-04-0; 2,10 g; 4,96 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e foi adicionado mais CH2C12. a solução orgânica foi lavada com NaHC03 (2 vezes) e uma vez com água salgada. A solução orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia de média pressão (20% de EtOAc em hexanos até 70% de EtOAc em hexanos) produziu o composto mencionado em título da Preparação 6 (1,1 g).

Preparação 7 Éster de dietilo do ácido [3-(3-metoximetil-fenil)-2-oxo- propil ]-fosfónico 181 ΡΕ1339678

Substituindo os materiais de partida apropriados, o composto mencionado em título da Preparação 7 foi preparado seguindo um procedimento análogo ao descrito para a Preparação 6.

Preparação 8 Éster de dietilo do ácido [3-(4-etil-fenil)-2-oxo-propil]- fosfónico

Substituindo os materiais de partida apropriados, o composto mencionado em título da Preparação 8 foi preparado seguindo um procedimento análogo ao descrito para a Preparação 6.

Preparação 9 Éster de dietilo do ácido {3-[3-(2-metoxi-etil)-fenil]-2- oxo-propil}-fosfónico

Substituindo os materiais de partida apropriados, o composto mencionado em título da Preparação 9 foi preparado seguindo um procedimento análogo ao descrito para a Preparação 6.

Preparação 10 Éster de dimetilo do ácido [2-oxo-3-(3-trifluorometil-fenil)-propil]-fosfónico

Passo A: N-Metoxi-N-metil-2-(3-trifluorometil-fenil)-acetamida A uma solução de hidrocloreto de N,0-dimetil- 182 ΡΕ1339678 hidroxilamina (1,577 g; 16,2 mmol) em DMF (25 mL) e CH2C12 (25 mL) a 0 °C foi adicionada trietilamina (2,25 mL). Após agitação durante 5 minutos, foram adicionados ácido 3-trifluorometilfenil-acético (3,0 g; 14,7 mmol), HOBT (3,177 g; 23,5 mmol) e EDC (3,10 g; 16,2 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h e foi concentrada em vácuo. O residuo foi diluído com EtOAc e a solução orgânica foi consecutivamente lavada com NaOH 1 N (2 vezes), água e água salgada. A solução orgânica foi seca (MgSCb), filtrada e concentrada em vácuo. A cromatografia de média pressão (20% de EtOAc em hexanos até 50% de EtOAc em hexanos) produziu N-metoxi-N-metil-2-(3-trifluorometil-fenil)-acetamida.

Passo B: Éster de dimetilo do ácido [2-oxo-3-(3- trifluorometil-fenil)-propil]-fosfónico A uma solução de metilfosfonato de dimetilo (9,4 g; 75,8 mmol) em tolueno (80 mL) a -78 °C foi lentamente adicionado n-BuLi (2,5 M em hexanos; 28 mL; 70 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante lhe uma solução de N-metoxi-N-metil-2-(3-trifluorometil-fenil)-acetamida (14,39 g) em tolueno (50 mL) foi lentamente adicionada. A mistura reaccional foi agitada durante 2,5 h e foi adicionado AcOH (40 mL) . A mistura reaccional foi aquecida até à temperatura ambiente e foi adicionada água. A camada orgânica foi lavada com água seguida de água salgada. A solução orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada em vácuo. A cromatograf ia de média pressão (CH2C12 até 2% de MeOH em CH2C12) proporcionou o composto mencionado em título da Preparação 10 (9,37 g) . 1H-NMR (CDC13) δ 7,52 183 ΡΕ1339678 (m, 1H), 7,44 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 3,96 (s, 2H) , 3,87 (s, 3H) , 3, 76 (s, 3H) , 3,12 (d, 2H) .

Preparação 11 Éster de dimetilo do ácido [3-(3-cloro-fenil)-2-oxo- propil]-fosfónico

Substituindo os materiais de partida apropriados, o composto mencionado em titulo da Preparação 11 foi preparado seguindo um procedimento análogo ao descrito para a Preparação 10.

Preparação 12 Éster de dimetilo do ácido [3-(3-bromo-fenil)-2-oxo- propil]-fosfónico

Substituindo os materiais de partida apropriados, o composto mencionado em titulo da Preparação 12 foi preparado seguindo um procedimento análogo ao descrito para a Preparação 10.

Preparação 13 Éster de dimetilo do ácido [2-oxo-3-(3-trifluorometoxi-fenil)-propil]-fosfónico

Substituindo os materiais de partida apropriados, o composto mencionado em título da Preparação 13 foi preparado seguindo um procedimento análogo ao descrito para a Preparação 10. MS 327,1 (M+l), 325,1 (M-l).

Preparação 14 184 ΡΕ1339678 Éster de dimetilo do ácido [3-(3-cloro-fenil)-2-oxo- propil]-fosfónico A uma solução de metilfosfonato de dimetilo (17,93 g; 144 mmol) em THF (270 mL) a -78 °C foi lentamente adicionado n-BuLi (2,5 M; 64,2 mL; 160,6 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante lhe foi lentamente adicionado éster de metilo do ácido (3-cloro-fenil)-acético (26,93 g; 146 mmol). A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada durante 24 h. Foi adicionado ácido acético (15 mL) e os voláteis foram remidos em vácuo. O resíduo foi diluído com CH2C12 e a solução orgânica foi cuidadosamente lavada com NaHCCb aquoso saturado (3 vezes). A camada orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada em vácuo. A purificação por croma-tografia de média pressão (20% de EtOAc em hexanos até EtOAc) produziu o composto mencionado em título (9,28 g) .

Preparação 15-24

Substituindo os materiais de partida apropriados, foram preparados os fosfonatos seguintes (Preparações 15- 24) de uma maneira análoga ao procedimento descrito para a Preparação 14.

Preparação 15: Éster de dimetilo do ácido [3-(3-fluoro- fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico

Preparação 16: Éster de dimetilo do ácido [3-(4-fluoro- fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico

Preparação 17: Éster de dimetilo do ácido [3-(4-cloro- PE1339678 - 185 - Preparação 18: fenil)-2-oxo-propil]-fosfónico Éster de dimetilo do ácido (3-naftalen-2-il-2-oxo-propil)-fosfónico Preparação 19: Éster de dimetilo do ácido (2-oxo-3-tiofen-2-il-propil]-fosfónico Preparação 20: Éster de dimetilo do ácido (3-ciclo-hexil-2-oxo-propil)-fosfónico Preparação 21: Éster de dimetilo do ácido (2-oxo-3-fenil-propil)-fosfónico Preparação 22: Éster de dimetilo do ácido (3-benzo-[1,3]dioxol-5-il-2-oxo-propil)-fosfónico Preparação 23: Éster de dimetilo do ácido [2-oxo-3-(3-fenoxi-fenil)-propil]-fosfónico Preparação 24: Éster de dimetilo do ácido [2-oxo-3-(2-trifluorometil-fenil)-propil]-fosfónico Preparação 25 Éster de dimetilo do ácido (3-bifenil-3-il-2-oxo-propil)- fosfónico

Passo A: Éster de metilo do ácido bifenil-3-il-acético

Uma mistura de ácido fenilborónico (1,000 g; 8,20 mmol), 3-bromofenilacetato de metilo (1,691 g; 7,38 mmol), Na2C03 (1,738 g; 16,4 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (0,474 g; 0,41 mmol), tolueno (30 mL) e água (5 mL) foi aquecida sob refluxo durante 20 h. A mistura reaccional foi diluída com água (20 mL) e os voláteis foram removidos em vácuo. A solução aquosa foi lavada com EtOAc 186 ΡΕ1339678 (4x20 mL). As soluções orgânicas foram combinadas, lavadas com NaOH 1 N (15 mL) seguido por água (15 mL) . A solução orgânica foi seca (MgSCg), filtrada e concentrada em vácuo. A purificação por cromatografia de média pressão (hexanos:EtOAc 79:1 até hexanos:EtOAc 39:1) produziu o éster de metilo do ácido bifenil-3-il-acético (1,316 g).

Passo B: Éster de dimetilo do ácido (3-bifenil-3-il-2-oxo-propil)-fosfónico O composto mencionado em titulo da Preparação 25 foi preparado a partir do éster de metilo do ácido bifenil-3-il-acético do Passo A seguindo um procedimento análogo ao descrito para a Preparação 14.

Preparação 2 6

Tetra-hidro-pirrolizina-3,5-diona O composto mencionado em titulo da Preparação 26 foi preparado seguindo o procedimento descrito na Patente dos E.U.A. N° 4 663 464.

Lisboa, 20 de Novembro de 2007

Claims (14)

1. ΡΕ1339678 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto da fórmula I

   um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, em que: a linha a tracejado é uma ligação ou nenhuma ligação; X é -CH2-; Z é tienilo, tiazolilo ou fenilo; Q é carboxilo, (alcoxi C1-C4)carbonilo ou tetrazolilo; R2 é -Ar ou -Ar1-V-Ar2; V é uma ligação, -0-, -0CH2- ou -CH20-; 2 ΡΕ1339678 Ar é um anel de cinco a oito membros parcialmente saturado, completamente saturado ou completamente insatu-rado tendo facultativamente um a quatro heteroátomos independentemente seleccionados de entre oxigénio, enxofre e azoto, ou um anel biciclico constituído por dois anéis de cinco ou seis membros parcialmente saturado, completamente saturado ou completamente insaturado, independentemente condensados, tomados independentemente, tendo facultativamente um a quatro heteroátomos independentemente seleccionados de entre azoto, enxofre e oxigénio, tendo o referido anel parcialmente ou completamente saturado ou anel biciclico facultativamente um ou dois grupos oxo substituídos no carbono ou um ou dois grupos oxo substituídos no enxofre; e Ar1 e Ar2 são cada um independentemente um anel de cinco a oito membros parcialmente saturado, completamente saturado ou completamente insaturado tendo facultativamente um a quatro heteroátomos independentemente seleccionados de entre oxigénio, enxofre e azoto, tendo o referido anel parcialmente ou completamente saturado facultativamente um ou dois grupos oxo substituídos no carbono ou um ou dois grupos oxo substituídos no enxofre; a referida porção Ar é facultativamente substituída no carbono ou azoto, num anel se a porção for monocíclica ou em um ou ambos os anéis se a porção for bicíclica, com até três substituintes por anel cada um independentemente seleccionado de entre hidroxi, halo, carboxi, alcoxi C1-C7, 3 ΡΕ1339678 (alcoxi C1-C4) alquilo C1-C4, alquilo C1-C7, alcenilo C2-C7, cicloalquilo C3-C7, (cicloalquil C3-C7)alquilo C1-C4, (ciclo-alquil C3-C7)alcanoilo C1-C4, formilo, alcanoilo Ci-C8, (al-canoil Ci-C6) alquilo Ci-C6, (alcanoil C1-C4)amino, (alcoxi C1-C4) carbonilamino, hidroxissulfonilo, aminocarbonilamino ou aminocarbonilamino substituído por mono-N-, di-N,N-, di-N,N'- ou tri-N,N,N'-alquilo C1-C4, sulfonamido, (alquil Cq-C4)sulfonamido, amino, mono-N- ou di-N,N-(alquil Ci-C4)ami-no, carbamoílo, mono-N- ou di-N,N-(alquil C1-C4)carbamoílo, ciano, tiol, (alquil Ci-C6)tio, (alquil Ci-C6) sulfinilo, (alquil Ci-C6) sulfonilo e mono-N- ou di-N,N-(alquil cq-C4)aminossulfinilo, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar são facultativamente substituídos no carbono com até três fluoro; e as referidas porções Ar1 e Ar2 são independentemente e facultativamente substituídas no carbono ou azoto com até três substituintes cada um independentemente seleccionado de entre hidroxi, halo, carboxi, alcoxi C1-C7, (alcoxi Ci-C4) alquilo C1-C4, alquilo C1-C7, alcenilo C2-C7, cicloalquilo C3-C7, (cicloalquil C3-C7)alquilo C1-C4, (cicloalquil C3-C7)alcanoilo C1-C4, formilo, alcanoilo Ci-Cg, (alcanoil Ci-C6)alquilo C1-C6, (alcanoil C1-C4)amino, (alcoxi C1-C4)carbonilamino, hidroxissulfonilo, aminocarbonilamino ou aminocarbonilamino substituído por mono-N-, di-N,N-, di-N,Ν'- ou tri-N,N,N'-alquilo C1-C4, sulfonamido, (alquil C1-C4) sulfonamido, amino, mono-N- ou di-N,N-(alquil C1-C4) amino, carbamoílo, mono-N- ou di-N,N-(alquil C1-C4)carbamoílo, ciano, tiol, (alquil Ci-Ce)tio, (alquil Ci-C6) sulfinilo, (alquil C1-C4) sulfonilo e mono-N- ou di-N, N-(alquil C1-C4) amino- 4 ΡΕ1339678 ssulfinilo, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar1 e Ar2 são facultativamente substituídos no carbono com até três fluoro.
2. 2. Um composto de acordo com a reivindicação 1 da fórmula Ia

   um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido compostoou sal, em que: X é -CH2-; Z é

   ou 9 \ e R2 é Ar em que a referida porção Ar é facultativamente substituída no carbono ou azoto, num anel se a porção for monociclica ou em um ou ambos os anéis se a porção for bicíclica, com até três substituintes por anel 5 ΡΕ1339678 cada um independentemente seleccionado de entre hidroxi, halo, carboxi, alcoxi C1-C7, (alcoxi C1-C4) alquilo C1-C4, alquilo C1-C7, alcenilo C2-C7, cicloalquilo C3-C7, (ciclo-alquil C3-C7)alquilo C1-C4, (cicloalquil C3-C7)alcanoilo Ci-C4, formilo, alcanoilo Ci-C8, (alcanoil Ci-C6)alquilo Ci-C6, (alcanoil Ci-C4)amino, (alcoxi C1-C4) carbonilamino, hidro-xissulfonilo, aminocarbonilamino ou aminocarbonilamino substituído por mono-N-, di-N,N-, di-N,N'- ou tri-N,N, N' -alquilo C1-C4, sulfonamido, (alquil C1-C4) sulfonamido, amino, mono-N- ou di-N,N-(alquil Ci-C4)amino, carbamoílo, mono-N- ou di-N, N-(alquil C1-C4)carbamoílo, ciano, tiol, (alquil Ci-C6)tio, (alquil Ci-Cê) sulfinilo, (alquil Ci- C4) sulf onilo e mono-N- ou di-N, N- (alquil C1-C4) aminos-sulfinilo, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar1 e Ar2 são facultativamente substituídos no carbono com até três fluoro.
3. 3. Um composto de acordo com a reivindicação 2, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, em que Ar é ciclo-hexilo, 1,3-benzo-dioxolilo, tienilo, naftilo ou fenilo facultativamente substituído com um ou dois alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, (alcoxi C1-C4)alquilo C1-C4, cloro, fluoro, trifluorometilo ou ciano, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar são facultativamente substituídos com até três fluoro.
4. 4. Um composto de acordo com a reivindicação 3, 6 ΡΕ1339678 um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, em que a linha a tracejado não é uma ligação; Q é carboxi ou (alcoxi C1-C4)carbonilo; e Z é
5. 5. Um composto de acordo com a reivindicação 4, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, em que Q é carboxi e Ar é fenilo facultativamente substituído com um alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, (alcoxi C1-C4)alquilo C1-C4, cloro, fluoro, trifluorometilo ou ciano, em que os referidos substituintes alquilo e alcoxi na definição de Ar são facultativamente substituídos com até três fluoro.
6. 6. Um composto de acordo com a reivindicação 5, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, em que Ar é m-trifluorometilfenilo.
7. 7. Um composto de acordo com a reivindicação 5, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, em que Ar é m-clorofenilo. 7 ΡΕ1339678
8. 8. Um composto de acordo com a reivindicação 5, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, em que Ar é m-trifluorometoxifenilo.
9. 9. Um composto seleccionado de entre ácido 5-(3- (2S- (3-R-hidroxi-4- (3-trifluorometil-fenil) -butil) -5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil)-tiofeno-2-carboxílico; ácido 5—(3— (2S-(3.R-hidroxi-4-(3-trifluorometoxi-fenil)-butil)-5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil)-tiofeno-2-carboxílico; e ácido 5-(3- (25- ( 4- (3-cloro-fenil) -3.R-hidroxi-butil) -5-oxo-pirrolidin-l-il)-propil)-tiofeno-2-carboxilico.
10. 10. Um composto de acordo com a reivindicação 3, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, em que a linha a tracejado não é uma ligação; Q é carboxi ou (alcoxi C1-C4)carbonilo; e z é "ô" - -o-
11. 11. Um composto de acordo com a reivindicação 10 um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, em que Q é carboxi e Ar é fenilo facultativamente substituído com um alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, (alcoxi C1-C4)alquilo C1-C4, cloro, fluoro, trifluorometilo ou ciano, em que os referidos substituintes alquilo e ΡΕ1339678 alcoxi na definição de Ar são facultativamente substituídos com até três fluoro.
12. 12. 0 uso de um composto de acordo com a reivindicação 1, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, no fabrico de um medicamento para tratar uma condição que se apresenta com massa óssea baixa num mamífero.
13. 13. 0 uso de acordo com a reivindicação 12, em que a referida condição é osteoporose, fragilidade, uma fractura osteoporótica, uma deficiência óssea, perda óssea idiopática infantil, perda de osso alveolar, perda de osso mandibular, fractura óssea, osteotomia, perda óssea associada com peridentite ou crescimento para dentro protético.
14. 14. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com a reivindicação 1, um sal farmaceuticamente aceitável do referido composto ou um estereoisómero ou mistura diastereomérica do referido composto ou sal, e um agente de suporte, veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 20 de Novembro de 2007 1 ΡΕ1339678 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição US 3927197 A US 40188S2 A US 4219483A US 4132847 A US 4000303 A US 3982016 A US 4621120 A US 5216163 A US 4904478 A WO 9401460 A WO 95:4668 A WO 9513089 A WO 94 :9367 A WO 9413596 A WO 9534311 A US 3S83140 A US 4231938 A US 4340227 A US 4448784 A US 4450171 A US 4739073 A US 5177080 A EP 738510 A2 EP 363934 AI US 4681893 A US 5273995 A EP 0685133 AI GB 1553595 A US 4115401 A US 415 3873 A GB 1583163 A US 4177348 A WO 0021542 A US 3932389 A US 2627521 A US 6037505 A US 4853464 A CA 947041014 US 3683000 A US 5047431A US 4536516 A US 4623660 A US 4418068 A US 4986225 A US 3822287 A US 4839155 A US 5488058 A US 5484798 A WO 9510513 A US 5552412 A US 4133814 A US 4171331 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição * BOLANDER «t aí. SSmAnmiai Meeting cmopattc Resewcft Sooefy; 1992 * KE, HZ. et a!. Bone, 1998, vtó. 23,249-255 • JEE, W.S.S.: MA, Y.F. Bme. 1937, v& 21,287-304 • GREEME,, T. W.; WUTS, P. β. M. 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