PT1011648E

PT1011648E - Combinacao do inibidor de tirosina cinase e castracao quimica para tratar o cancro da prostata

Info

Publication number: PT1011648E
Application number: PT98942057T
Authority: PT
Inventors: Craig A Dionne; John Isaacs; Jeffry L Vaught
Original assignee: Cephalon Inc
Priority date: 1997-08-15
Filing date: 1998-08-13
Publication date: 2002-03-28
Also published as: DK1011648T3; CN1268061A; UA61970C2; WO1999008668A3; DE69802422D1; CN1147317C; WO1999008668A2; HUP0003194A2; NZ517497A; AU737092B2; AU9019298A; HUP0003194A3; HK1028565A1; DK1011648T4; KR20010022878A; BR9812122A; CZ297198B6; DE69802422T3; ES2163293T5; CA2299471C

Description

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DESCRIÇÃO

COMBINAÇÃO DO INIBIDOR DE TIROSINA CINASE E CASTRAÇÃO QUÍMICA, PARA TRATAR O CANCRO DA PRÓSTATA

Antecedentes da invenção A invenção refere-se a oncologia, endocrinologia, andrologia e farmacologia. O cancro da próstata é o cancro mais frequentemente diagnosticado em homens e é responsável por aproximadamente 41.000 mortes nos Estados Unidos, anualmente (Parker, S.L. et al. (1996 CA Câncer J. Clin., 65:5-27). O cancro de próstata numa fase precoce, confinado ao órgão, é muitas vezes tratado por cirurgia ou terapia de radiação, até o paciente morrer de causas não relacionadas.

Os carcinomas como o cancro da mama, cancro do cólon e adenocarcinoma, caracterizam-se por uma divisão celular rápida. Consequentemente, estes cancros são sensíveis a tratamento com agentes quimioterapêuticos que inibem a divisão celular rápida. Pelo contrário, o cancro da próstata não se caracteriza por uma divisão celular rápida. Assim, os agentes quimioterapêuticos convencionais apresentam geralmente uma eficácia baixa contra carcinomas prostáticos.

Os carcinomas prostáticos são muitas vezes sensíveis a manipulação hormonal. 0 tratamento do cancro de próstata actualmente aceite inclui castração cirúrgica, castração química, ou uma combinação de castração cirúrgica e química. A remoção dos testículos, o órgão primário 1 i r u produtor de testosterona, reduz os níveis de androgéneos circulantes para menos de 5% dos níveis normais. Esta redução nos níveis de androgéneos inibe o crescimento do tumor da próstata. Embora os efeitos anti-tumor da castração cirúrgica sejam directos, os efeitos anti-tumor podem ser temporários. A castração cirúrgica conduz muitas vezes a selecção clonal de células de tumor de próstata independentes de androgéneos. Isto resulta num novo crescimento do tumor da próstata, num forma que prolifera sem estimulação de testosterona ou DHT (Isaacs et al. (1981) Câncer Ses. 41:5070-5075; Crawford et al. (1989) N. Eng. J. Med. 321:419-424). A castração química (também designada por castração médica) substitui muitas vezes a castração cirúrgica, como tratamento inicial. A castração química pode ser conseguida por administração de estrogéneos, e.g. dietilstilbestrol (DES); análogos de LHRH, e.g. acetato de leuprolide (LUPRON®) ou acetato de goserelina (ZOLADEX®) ; anti-androgéneos esteróides, e.g. acetato de ciproterona (CPA); anti-androgéneos não esteróides, e.g. flutamida, nilutamida ou CASODEX®; ou uma combinação destes agentes.

As cinases de tirosina ligadas a receptor são proteínas transmembranares que contêm um domínio de ligação ao ligando extracelular, uma sequência transmembranar, e um domínio de tirosina cinase citoplásmico. A tirosina cinase actua na transdução do sinal celular. A proliferação, diferenciação, migração, metabolismo e morte programada das células, são exemplos de respostas celulares mediadas pela tirosina-cinase. 2

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As tirosina-cinases têm sido implicadas na transformação de células epiteliais da próstata e progressão de tumor. As tirosina-cinases implicadas, incluem receptores do factor de crescimento de fibroblastos (FGF), receptores do factor de crescimento epidérmico (EGF) e receptores do factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF). Também estão implicados receptores do tactor de crescimento nervoso (NGF), receptores do factor neurutrófico derivado de cérebro (BDNF) e receptores de neurotrofina-3 (NT-3) e receptores de neurotrofina-4 (NT-4) -

As patentes U.S. Nos 5,516,771, 5,654,427 e 5,650,407 discutem inibidores da tirosina cinase do tipo indolocarbazlo e cancro da próstata. As patentes U.S. Nos. 5,475,110; 5,591,855 e 5,594,009 e WO 96/11933 discutem inibidores de tirosina cinase do tipo pirrolocarbazolo fundido e cancro da próstata.

Sumário da invenção

Verificou-se, inesperadamente, que os inibidores de tirosina cinase exercem os seus efeitos anti-tumor contra o cancro da próstata de mamífero, por meio de um mecanismo independente de hormonas. Verificou-se também que a combinação entre o inibidor de tirosina cinase e um agente de castração química pode ser sinergística.

Com base nestes estudos, a invenção contempla uma composição para o tratamento da progressão do cancro da próstata num mamífero, e.g. um humano. A composição inclui uma quantidade terapeuticamente eficaz administrável de um inibidor de tirosina cinase e de um agente de castração 3

química, ao mamífero. O inibidor de tirosina cinase e o agente de castração química podem inibir sinergisticamente a progressão do tumor da próstata. Os inibidores de tirosina cinase preferidos incluem indolocarbazolos. Os in-dolocarbazolos preferidos incluem os seguintes compostos:

H I

Composto 11-12

4

Composto II-4-LAE 0 composto II-4-LAE é o éster de lisil-p-alaninato do composto II-4, ou um sal do éster farmacologicamente aceitável, e.g. o sal dicloridrato. O composto 11-12 é descrito na patente U.S. No. 4,923,986 ("composto 20"). O composto II-4 é descrito na Pat. U.S. No. 5,461, 146. O composto II-4-LAE é descrito na Pat. U.S. No. 5,650,407 (Exemplo 14) . O inibidor de tirosina cinase pode ser um pirrolocarbazolo fundido. O inibidor de tirosina cinase pode ser administrado por qualquer via adequada, e.g. oral ou parentericamente.

Os agentes de castração química úteis na invenção incluem estrogéneos; agonistas LHRH, e.g. acetato de leuprolide (LUPRON®) e acetato de goserelina (ZOLADEX®) ; antagonistas de LHRH, e.g. ANTIDE® (Ares-Serono) e GANIRELIX® (Akzo Nobel) e anti-androgéneos, e.g. flutamida e nilutamida. O inibidor de tirosina cinase e o agente de castração química são administráveis em formulações separadas. 5 !

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Alternativamente, podem ser formulados em conjunto e administráveis numa única composição. A invenção também contempla uma composição que compreende um inibidor de tirosina cinase e um agente de castração química.

De preferência, o inibidor de tirosina cinase na composição é um inibidor trkA, um inibidor trkB ou um inibidor trkC. De preferência, o inibidor de tirosina cinase na composição é um indolocarbazolo. Os indolocarbazolos preferidos são H »

OH \ (Composto 11-12);

H N

ΜβΟ | OH \ (Composto 11 —4) ; e 6 - u

t

(Composto II-4-LAE).

Alternativamente, o inibidor de tirosina cinase na composição pode ser um pirrolocarbazolo fundido. A composição pode ser formulada para administração oral ou administração parentérica. O agente de castração química pode ser um estrogéneo, um análogo de LHRH, ou um anti-androgéneo, ou uma combinação de dois ou mais destes compostos. Um análogo de LHRH preferido para inclusão na composição, é o acetato de leuprolide. Um anti-androgéneo preferido para inclusão na composição é flutamide. O agente de castração química incluído na composição pode ser uma combinação de um análogo de LHRH e um anti-androgéneo, por exemplo, acetato de leuprolide e flutamida.

Tal como aqui utilizado, o termo "agente de castração química" significa um composto que: (1) inibe a produção de androgéneos do soro, (2) bloqueia a ligação de androgéneos de soro a receptores de androgéneos, ou (3) inibe a conversão de testosterona a DHT, ou uma combinação de dois ou mais destes compostos. 7

Salvo definição em contrário, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado que o vulgarmente entendido por um perito na arte a que pertence a presente invenção. No caso de conflito, o presente pedido, incluindo as definições, servirá de controlo.

Os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem ser limitantes. Outras características e vantagens da invenção serão evidentes a partir da descrição pormenorizada e das reivindicações.

Descrição Sumária das Figuras A Fig. 1 é um gráfico do volume relativo do tumor (magnitude da alteração) versus tempo (dias), num sistema modelo de tumor de próstata de rato, in vivo. Círculos, veículo controlo; triângulos para cima, controlo de monoterapia de composto II-4; quadrados, controlos castrados; triângulos invertidos, tratamento combinação de composto ΙΙ-4/castração. A dosagem do composto II-4 foi de 10 mg/kg, por injecção subcutânea. A administração do composto II-4 é indicada por rectângulos contendo sinais mais, no eixo dos X. A Fig. 2 é um gráfico do volume relativo do tumor (magnitude da alteração em tumores Dunning H) versus tempo (dias) em ratos castrados. Círculos, veículo controlo; quadrados, composto II-4. 0 tempo da administração do composto II-4 é indicado por rectângulos, no eixo dos X. A Fig. 3 é um gráfico do volume relativo de tumor (magnitude da alteração em tumores Dunning H) versus tempo 8 (dias) em ratos previamente tratados com composto II-4. Círculos, composto II-4; quadrados, tratamento com composto ΙΙ-4/castração·. 0 tempo da administração do composto II-4 é indicado por rectângulos, no eixo dos X. A Fig. 4 é um gráfico do volume relativo de tumor (magnitude da alteração) versus tempo (dias) num sistema modelo de tumor de próstata de rato, in vivo. Círculos, veículo controlo; triângulos para cima, controlo de monoterapia de composto 11-12; quadrados, controlos castrados quimicamente, que recebem acetato de leuprolide (LUPRON®) ; triângulos invertidos, tratamento combinação de composto ΙΙ-12/acetato de leuprolide. A dosagem do composto II-4 foi de 10 mg/kg BID, per os. A administração do composto 11-12 é indicada por rectângulos, no eixo dos X.

Descrição pormenorizada O inibidor de tirosina e um agente de castração química, co-administráveis, podem ser co-administráveis concorrentemente em formulações separadas, i.e., uma formulação de tirosina cinase e uma formulação de castração química. As formulações separadas são administráveis "concorrentemente", quando a sua administrabilidade é tal que as actividades farmacológicas do inibidor de tirosina cinase e do agente de castração química ocorrem em simultâneo, no mamífero em tratamento.

Nalgumas formas de concretização da invenção, o inibidor de tirosina cinase e o agente de castração química são formulados numa única composição. 9

' I - -- ι—.

Dc preferência, a dosagem do inibidor de tirosina cinase é de 1 pg/kg a 1 g/kg de peso corporal, por dia. Mais preferencialmente, a dosagem do inibidor de tirosina cinase é de 0,01 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal, por dia. Λ dosagem óptima do inibidor de tirosina cinase irá variar, dependendo de factores como o tipo e extensão de progressão do cancro da próstata, do estado de saúde geral do paciente, da potência do inibidor de tirosina cinase e da via de administração. A optimização da dosagem de tirosina cinase está dentro do âmbito da arte. São conhecidos na arte vários inibidores de tirosina cinase, adequados para utilização na presente invenção. De preferência, o inibidor de tirosina cinase utilizado na presente invenção é um inibidor trkA, um inibidor trk B ou um inibidor trk C. Os inibidores de tirosina cinase do tipo indolocarbazolo adequados, podem ser obtidos utilizando informação encontrada em documentos como Dionne et al., patente U.S. No. 5,516,771, Dionne et al., patente U.S. No. 5,654,427, Lewis et al. patente U.S. No. 5,461,146 e

Mallamo et al., patente U.S. No. 5,650,407.

Nalgumas formas de concretização da invenção, o composto II-4-LAE é preparado e administrável a um paciente humano, de acordo com o seguinte procedimento. Dissolve-se o composto II-4-LAE (dicloridrato) e uma quantidade osmoticamente adequada de manitol, em água destilada e o pH é ajustado para aproximadamcnte 3,5. Esta solução é liofilizada para produzir um pó. Para armazenamento e utilização conveniente, preparam-se alíquotas do pó liofilizado contendo 27,5 mg do composto II-4-LAE e 55 mg de manitol. Na altura da utilização, redissolve-se uma aliquota de pó liofilizado em água esterilizada para 10

injecção, USP, para se obter 1,1 ml contendo 50 mg/ml de manitol e 25 mg/ml do composto II-4-LAE (dicloridrato). Esta solução reconstituída é então diluída com um volume adequado de injecção de dextrose a 5%, USP, para administração da dose desejada de composto II-4-LAE, por infusão intravenosa, durante um período de aproximadamente uma hora. A dosagem do composto II-4-LAE neste processo pode ser convenientemente iniciada a 1 mg/metro2/dia e gradualmente aumentada, por exemplo, para 64 mg/metro2/dia, ou 501 mg/metro2/dia, à medida que o progresso do paciente é monitorizado. São conhecidos vários agentes de castração química. Os agentes de castração química conhecidos, úteis na presente invenção são por vezes classificados como se segue: estrogéneos, agonistas da hormona de libertação da hormona luteinizante (LHRH), antagonistas da LHRH e anti-androgéneos. Os anti-androgéneos podem ser ainda divididos em esteróides e não esteróides.

Os estrogéneos, e.g. dietilstilbestrol (DES), elevam os níveis de globulina de ligação a hormonas sexuais e os níveis de prolactina no plasma. Isto reduz a secreção de LH e a síntese de tesosterona testicular, por meio de uma resposta de "feedback" negativo. A dosagem de DES é muitas vezes de 1 mg/dia a 5 mg/dia. De preferência, evitam-se doses mais elevadas de DES devido a complicações possíveis relacionadas com risco cardiovascular.

Um agonista de LHRH preferido para utilização na presente invenção é o acetato de leuprolide, comercialmente disponível como LUPRON® (Takeda Abbott Pharmaceuticals, Inc.). O nome químico do acetato de leuprolide é acetato de 11

5-oxo-L-prolil-L-histidil-L-triptofil-L-seril-L-tirosil-D-leucil-L-leucil-L-arginil-N-etil-L-prolinamida (sal) . O acetato de leuprolide, um agonista de LHRH, é um inibidor potente da secreção de gonadotrofina, quando administrado continuamente e em doses terapêuticas. Este efeito é reversível por descontinuação da administração do acetato de leuprolide.

Pensa-se que o acetato de leuprolide, e.g. LUPRON DEPOT® actua por um mecanismo de "feedback" negativo. Em humanos, a administração subcutânea de doses diárias únicas de acetato de leuprolide provoca um aumento inicial nos níveis séricos de hormona luteinizante (LH). Em machos, dentro de duas a quatro semanas após o início da administração de acetato de leuprolide, a testosterona sérica diminui para níveis de castrado.

Quando utilizado na presente invenção, o acetato de leuprolide é administrável subcutânea, intramuscular ou intravenosamente. O acetato de leuprolide é administrável, por exemplo, por injecção subcutânea de 1 mg por dia. Nalgumas formas de concretização da invenção, o acetato de leuprolide é administrável numa formulação de depósito. Uma formulação de depósito proporciona, de forma conveniente, a libertação controlada do medicamento, durante um período de tempo alargado, e.g. 1 a 4 meses. Um exemplo de formulação de depósito inclui uma suspensão de microesferas contendo acetato de leuprolide, gelatina purificada, copolímero dos ácidos DL-láctico e glicólico e D-manitol. As microesferas podem ser suspensas num transportador contendo carboximetilcelulose sódio, D-manitol e água. Esta formulação de depósito é comercializada como LUPRON DEPOT® 12

(Takeda Abbott Pharmaceuticals) e é adequada para injecção intramuscular.

Um outro agonista de LHRH adequado para a presente invenção é o acetato de goserelina, comercializado como ZOLADEX® (Zeneca). A estrutura química do acetato de goserelina é acetato de pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But) -Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2. 0 ZOLADEX® é fornecido como uma formulação concebida para injecção subcutânea, com libertação continua durante um período de 28 dias.

Um exemplo de um antagonista de LHRH útil na presente invenção é ANTIDE® (Ares-Serono) , cujo nome químico é D-alaninamida N-acetil-3-(2-naftalenil)-D-alanil-4-cloro-D-fenilalanil-3-(3-piridinil)-D-alanil-L-seril-N6-(3-piridinilcarbonil)-L-lisil-N6-(3-píridinilcarbonil)-D-lisil-L-leucil-N6-(1-metiletil)-L-lisil-L-prolil. Um outro exemplo de um antagonista de LHRH útil é GANIRELIX® (Roche/Akzo Nobel), cujo nome químico é N-Ac-D-Nal, D-pCl-Phe, D-Pal, D-hArg(Et)2, hArg(Et)2, D-Ala.

Exemplos de anti-androgéneos esteróides são o acetato de ciproterona (CPA) e o acetato de megesterol, comercialmente disponível como MEGACE® (Bristol-Myers Oncology). Os anti-androgéneos esteróides podem bloquear receptores de androgéneos prostáticos. Podem também inibir a libertação de LH. 0 CPA é preferencialmente administrado a pacientes humanos, em dosagens de 100 mg/dia a 250 mg/dia.

Os anti-androgéneos não-esteróides bloqueiam os receptores de androgéneos. Podem também causar um aumento 13

nos níveis de LH séricos e nos níveis de testosterona sérica. Um anti-androgéneo não esteróide, preferido, é a flutamida (2-metil-N-[4-nitro-3-(trifluorometil)fenil]propanamida), comercialmente disponível como EULENIX® (Schering Corp.)· A flutamida exerce a sua acção anti-androgénica inibindo a absorção de androgéneo, inibindo a ligação nuclear de androgéneo em tecidos alvo, ou ambos. A flutamida é tipicamente administrada oralmente, e.g. na forma de cápsulas. Um exemplo de dosagem de flutamida é 250 mg, três vezes por dia, i.e. 750 mg por dia.

Um outro anti-androgéneo não esteróide é a nilutamida, cujo nome guímico é 5,5-dimetil-3-[4-nitro-3-(trifluorome-til-4'-nitrofenil)-4,4-dimetilimidazolidina-diona. Quando utilizado na presente invenção, um exemplo de dosagem de nilutamida é 300 mg por dia, seguido de uma dosagem reduzida de 150 mg/dia.

Nalgumas formas de concretização da invenção, o agente de castração química é uma combinação de um agonista de LHRH, como o acetato de leuprolide e um anti-androgéneo, como a flutamida ou nilutamida. Por exemplo, pode-se administrar acetato de leuprolide por injecção subcutânea, intramuscular ou intravenosa e simultaneamente pode-se administrar a flutamida oralmente. 0 inibidor de tirosina cinase pode ser administrado separadamente numa terceira formulação, ou pode ser formulado juntamente com o agonista de LHRH, ou com o anti-androgéneo.

Um outro anti-androgéneo não esteróide, útil na presente invenção, é o CASODEX®. Um exemplo de dosagem de 14 η CASODEX® é de 5 mg a 500 mg por dia, de preferência cerca de 50 mg por dia.

Um exemplo de formulação combinada de acordo com a presente invenção inclui 1-20 mg de composto 11-12 e 100-1000 mg de flutamida, numa cápsula, para administração oral a um paciente humano, uma, duas ou três vezes ao dia. Numa forma de concretização preferida, a formulação inclui um veiculo gue contém polisorbato 80 e polietilenoglicol numa razão de 1:1 (v/v), para aumentar a biodisponibilidade do composto 11-12. Nalgumas formas de concretização, esta formulação oral de composto ΙΙ-12/flutamida é suplementada por uma injecção intramuscular de uma injecção de depósito de acetato de leuprolide, e.g. LUPRON DEPOT®. Uma outra tirosina cinase, como o composto II-4 ou composto II-4-LAE, pode ser substituída pelo composto 11-12 nesta formulação. Outros exemplos de formulações combinadas de acordo com a presente invenção incluem o composto 11-12, composto II-4 ou composto II-4-LAE e um agente de castração química, numa única solução, adequada para infusão intravenosa.

Os inibidores de tirosina cinase e os agentes de castração química podem ser formulados individualmente, ou em combinação, em composições farmacêuticas, por mistura com excipientes e transportadores não tóxicos, farmaceuticamente aceitáveis. Estas composições podem ser preparadas para utilização por administração parentérica, particularmente na forma de soluções ou suspensões líquidas; para administração oral, paticularmente na forma de líquidos, comprimidos ou cápsulas; ou intranasalmente, particularmente na forma de pós, gotas nasais ou aerossóis. 15 11 ' A composição é administrável convenientemente na forma de dosagens unitárias e pode ser preparada por qualquer método conhecido na arte. Estes métodos são descritos, por exemplo, em Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., Easton, Pa., 1980).

As formas de dosagem liquida para administração oral incluem emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Além do composto activo, as formas de dosagem liquida podem conter diluentes inertes vulgarmente utilizados na arte, como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsionantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, álcool benzílico, benzoato de benzilo, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, dimetilformamida, óleos (em particular óleo de semente de algodão, de amendoim, de milho, de gérmen, azeite, óleo de rícino e de sésamo), glicerol, álcool tetrahidrofurfurilico, polietilenoglicóis e ésteres de ácidos gordos de sorbitano e misturas suas derivadas. Além dos diluentes inertes, as composições orais podem também incluir adjuvantes como humectantes, emulsionantes e agentes de suspensão, agentes adoçantes, aromatizantes e perfumantes.

As formas de depósito injectáveis são feitas formando matrizes microencapsuladas do medicamento em polímeros biodegradáveis, tais como poliláctido-poliglicólico. Dependendo da razão entre medicamento e polímero e da natureza do polímero particular utilizado, pode-se controlar a taxa de libertação de medicamento. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). As formulações de depósito injectáveis são 16

também preparadas inserindo o medicamento em lipossomas, ou microemulsões, que são compatíveis com os tecidos corporais.

As formas de dosagem sólida para administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Nestas formas de dosagem sólida, o composto activo é misturado com pelo menos um excipiente ou transportador farmaceuticamente aceitável, inerte, tal como citrato de sódio, ou fosfato de dicálcio e/ou a) agentes de enchimento, ou de volume, como amidos, lactose, sucrose, glucose, manitol e ácido silícico, b) ligantes, como por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sucrose e acácia, c) humectantes como o glicerol, d) agentes desintegrantes como agar-agar, carbonato de cálcio, amido de batata ou de tapioca, ácido algínico, alguns silicatos e carbonato de sódio, 3) agentes retardadores de solução, como a parafina, f) aceleradores de absorção, como compostos de amónio quaternário, g) agentes humectantes, como por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol, h) absorventes, como caolino e argila de bentonite e i) lubrificantes, como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, laurilsulfato de sódio e misturas suas derivadas. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma de dosagem pode também compreender agentes tamponantes. Também se podem utilizar composições sólidas de um tipo semelhante, como agentes de enchimento em cápsulas de gelatina com enchimento mole e duro, utilizando excipientes como lactose ou açúcar do leite, bem como polietilenoglicóis de peso molecular elevado e semelhantes. 17 t r 'uL~L- lí

As formas de dosaqem sólida de comprimidos, drageias, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e capas, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos, bem conhecidos na arte de formulação farmacêutica. Podem conter opcionalmente agentes opacificantes e podem também ser de uma composição tal, que libertem o(s) ingrediente activo apenas, ou preferencialmente, numa certa parte do tracto intestinal, opcionalmente, de um modo controlado. Exemplos de composições adequadas que podem ser utilizadas, incluem substâncias poliméricas e ceras.

Também se podem utilizar composições sólidas de um tipo semelhante como agentes de enchimento, em cápsulas de gelatina de enchimento mole ou duro, utilizando excipientes como a lactose ou açúcar do leite, bem como polietilenoglicóis de peso molecular elevado e semelhantes.

Os compostos activos também podem existir na forma microencapsulada, com um ou mais excipientes, como referido acima. Nas formas de dosagem sólida, o composto activo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte como a sucrose, lactose, ou amido. Estas formas de dosagem podem também compreender, como é prática usual, substâncias adicionais que não os diluentes inertes, e.g. lubrificantes de comprimidos e outros adjuvantes de comprimidos, tais como estearato de magnésio e celulose microcristalina. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem podem também compreender agentes tamponantes. Podem conter opcionalmente agentes opacificantes e podem também ser de uma composição tal, que libertem o(s) ingrediente activo apenas, ou preferencialmente, numa certa parte do tracto intestinal, opcionalmente de um modo controlado. 18

Exemplos de composições adequadas que podem ser utilizadas, incluem substâncias poliméricas e ceras. A invenção é ainda ilustrada pelos seguintes exemplos. Os exemplos são fornecidos apenas para fins ilustrativos e não pretendem, de modo algum, limitar o âmbito ou conteúdo da invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Composto II-4 combinado com castração cirúrgica

Os dados de experiências animais, envolvendo administração de tirosina cinase em combinação com castração cirúrgica, foram considerados relevantes em relação à administração de tirosina cinase, em combinação com castração química. O tumor Dunning H R-3327 (derivado de um tumor de próstata espontâneo num rato Copenhaga idoso) foi utilizado nestas experiências, devido à sua sensibilidade a androgéneos e à sua taxa de crescimento lenta (Isaacs, 1989, Câncer Res. 49:6920-6294). Uma consideração na concepção experimental foi a de que a castração cirúrgica de ratos com tumores Dunning H conduz à cessação, quase imediata, do crescimento do tumor, seguido de uma regressão do tumor, insensível a androgéneos, a cerca de 5-6 semanas após a castração (Isaacs et al. (1981) Câncer Res. 41:5070-5075) . A regressão do tumor Dunning H induzida pelo composto II-4 não era devida a um efeito nos níveis de androgéneo, porque as experiências foram realizadas em ratos 19

implantados com cápsulas silásticas, libertadoras de testosterona. Os níveis de testosterona no soro, medidos no final da experiência, confirmaram que a testosterona era > 1-2 ng/ml. A experiência seguinte tinha três objectivos: 1) determinar se a combinação do composto II-4 com a castração cirúrgica iria proporcionar uma eficácia anti-tumor maior que o composto II-4, ou que a castração cirúrgica, por si só; 2) determinar se o composto II-4 poderia causar uma regressão dos tumores Dunning H que tinham sido seleccionados como insensíveis a hormonas, antes da castração dos animais hospedeiros; e 3) determinar se os tumores tratados com composto II-4 durante vários ciclos de dosagem, ainda permaneciam insensíveis a castração cirúrgica. 0 composto II-4- foi sintetizado na Cephalon, Inc. e formulado (10 mg/ml) num veículo contendo 40% de polietilenoglicol (PEG 1000, Spectrum, Los angeles, CA) , 10% de polivinilpirrolidona (C30, ISP Boundbrook, NJ) , 2% de álcool benzílico (Spectrum, Los Angeles, CA) em água (48%) .

Mantiveram-se ratos Copenhaga, cruzados entre si, macho, adultos, (200-240 q) obtidos da Harlan Sprague Dawley (Indianapolis, IN) a três ratos/gaiola e forneceu-se-lhes uma dieta comercial (Purina Formulab 5001) e água ad libitum. Os animais foram mantidos sob condições de humidade controlada, temperatura controlada, com um ciclo luz/escuro de intervalos de 12 horas. Os ratos foram 20 mantidos em quarentena durante uma semana, antes da manipulação experimental. Os tumores Dunning H R3327 de cancro de próstata de rato foram transplantados utilizando pinças Trocarte. Sacrificou-se um rato Copenhaga macho, adulto, com um tumor Dunning H e o tumor foi isolado. O tumor foi cortado e inocularam-se, subcutaneamente, pequenos pedaços, em ratos Copenhaga macho, adultos.

As experiências foram realizadas segundo as directrizes do Johns Hopkins University Animal Care and Use Committee Protocol No. RA91M517 e do Cephalon Institutional Animal Care and Use Committee Protocol No. 03-008.

Para a castração cirúrgica, os ratos que transportam tumores Dunning H estabelecidos foram anestesiados por injecção intramuscular de KETAMINE™ (4,1 mg/100 g de peso corporal) e XYLAZINE™ (0,85 mg/100 g de peso corporal). Cada rato foi colocado de costas. Fez-se uma pequena incisão (0,5-1 cm) através da pele, na ponta posterior do escroto. Fez-se outra incisão para romper a membrana conjuntiva em torno dos testículos. 0 epidídimo, testículos, vaso deferens, vasos sanguíneos espermáticos e a gordura foram puxados para fora e separados. Quaisquer tecidos remanescentes foram empurrados de novo para o saco e a incisão foi fechada com auto-agrafos. Os auto-agrafos foram removidos 5-7 dias após a cirurgia.

Dividiram-se trinta e 3eis ratos com tumor Dunning H (0,9-18 cm3 em tamanho) em quatro grupo de nove animais, cada. O grupo 1 serviu como veículo controlo. O grupo 2 foi castrado no dia 1. O grupo 3 recebeu injecções do composto II-4 (10 mg/kg, sc) como descrito a seguir. O grupo 4 foi castrado no dia 1 e recebeu injecções do composto II-4, 21

como descrito a seguir. Os grupos 1 e 3 foram implantados subcutaneamente (no flanco) com um tubo silástico selado, de 2 cm de comprimento, cheio com testosterona, no dia 1. Um implante silástico deste tamanho era adequado para manter a testosterona sérica na gama fisiológica de 1-3 ng/ml, cronicamente, durante seis meses. O composto II-4 foi administrado subcutaneamente (10 mg/kg/dia) aos grupos 3 e 4, num ciclo de dosagem periódico de 5 dias, com aproximadamente 10 dias entre os ciclos. O medicamento foi administrado nos dias 1-5, 14-18, 29-33 e 42-46. O veiculo de medicamento foi administrado aos grupos 1 e 2 no mesmo esquema que os grupos tratados com composto II-4.

Dividiram-se oito ratos do grupo 2 em dois grupos de quatro ratos cada, no dia 60. Um grupo foi tratado com composto II-4, 10 mg/kg (subcutâneo) durante 5 dias, seguido de remoção do medicamento durante 9 dias, seguido de um segundo regime de dosagem de cinco dias, a 10 mg/kg/dia (subcutâneo). O segundo grupo recebeu veiculo no mesmo esquema de dosagem.

Dividiram-se sete ratos do grupo 3 da experiência anterior em dois grupos, no dia 60. Um grupo de ratos (N=3) foi castrado. Ambos os grupos foram tratados com composto II-4, 10 mg/kg (subcutâneo) durante 5 dias, seguido de remoção do medicamento durante 9 dias, seguido de um segundo regime de dosagem de cinco dias, como anteriormente.

Os tumores foram medidos em animais anestesiados (vapor de isofluorano durante aproximadamente 1-2 minutos) nos intervalos indicados, utilizando um calibrador vernier. 0 volume de tumor foi calculado utilizando a fórmula: V(cm3) 22

= 0,5236 x comprimento (cm) x largura(cm) [(comprimento(cm) + largura(cm))/2].

Aplicou-se o teste de Dunnett, o teste da soma de classes ("Rank Sum Test") de Mann-Whitney, o teste t de pares, ou o teste de classes assinaladas ("Signed Rank Test"), de significância, para análise estatística, utilizando o programa SigmaStat. 0 crescimento de tumores Dunning H em ratos intactos, tratados com veículos, era linear e observou-se um aumento de aproximadamente 3,5 vezes no volume do tumor, ao longo de 60 dias (Fig. 1) . A castração cirúrgica provocou uma regressão rápida dos tumores, i.e. 25% no dia 5. Observou-se um novo crescimento do tumor em ratos castrados, no dia 12 e alcançou-se a recuperação completa do volume de tumor no dia 38. 0 composto II-4 sozinho (10 mg/kg, sc; 4 ciclos independentes de tratamento com composto II-4: 5 dias de tratamento com medicamento, seguido de remoção do medicamento durante aproximadamente 10 dias) provocou a inibição completa do crescimento do tumor, ou a regressão do tumor induzido. 0 volume de tumor médio em animais tratados com medicamento era significativamente menor (p<0,01) do que nos animais controlo tratados com veiculo, após cada ciclo de administração de composto II-4 (dias 5, 19, 34 e 47; dados não apresentados) . Além disso, cada ciclo de administração de composto II-4 provocou uma regressão relativa do volume de tumor no início de cada ciclo de dosagem (dados não apresentados). 23 (Ρ ^—t

D A combinação do composto ΙΙ-4 com castração cirúrgica provocou a inibição completa do crescimento do tumor, ou induziu a regressão do tumor (Fig. 1). No global, a combinação da administração de composto II-4 e castração cirúrgica foi significativamente mais eficaz do que a castração cirúrgica, só por si. Observou-se um novo crescimento do tumor in vivo, após a remoção do composto II-4, tanto em animais castrados, como não castrados (p<0,01, fig. 1) .

Estes resultados demonstram que o composto II-4 pode ser utilizado em combinação com a castração cirúrgica, para maximizar o nivel e/ou duração de regressão de tumores num modelo in vivo de cancro de próstata, aceite.

Realizaram-se outras experiências, para determinar se o tratamento com composto II-4 provoca a regressão de tumores seleccionados como insensíveis a hormonas, por ablação prévia de androgéneos. Oito ratos do grupo castrado da experiência anterior (sem tratamento prévio com o composto II-4) foram divididos em dois grupos de quatro ratos cada, no dia 60. Um grupo foi tratado com composto II-4, 10 mg/kg, sc durante 5 dias, seguido de remoção do medicamento durante 9 dias, seguido de um segundo regime de dosagem de cinco dias, a 10 mg/kg/dia, sc. O segundo grupo recebeu veículo no mesmo esquema de dosagem. O tratamento com composto II-4 provocou uma regressão significativa do tumor Dunning H insensível a androgéneos, crescido em ratos castrados no dia 3 (p<0,05; Fig. 2).

Observou-se uma regressão máxima no dia 6 (p< 0,05). A remoção de medicamento permitiu que os tumores crescessem de novo. No entanto, o volume de tumor em ratos tratados 24 [ ^ ^ com composto II-4 era significativamente menor (p<0,05) do que em animais tratados com veiculo, mesmo 10 dias após o final do primeiro ciclo de composto II-4. Os tumores Dunning H seleccionados para ser sensíveis a hormonas, através de ablação prévia de androgéneos, eram ainda sensíveis à acção anti-tumor do composto II-4.

Também se realizaram experiências para determinar se o tratamento prévio com composto II-4, de ratos com tumor Dunning H poderia causar a selecção de tumores insensíveis a uma ablação subsequente de androgéneos, por castração cirúrgica. Dividiram-se sete ratos do grupo tratado com composto II-4 da experiência anterior em dois grupos, no dia 60. Um grupo (N=3) foi castrado como descrito acima. Ambos os grupos foram tratados com composto II-4, 10 mg/kg, sc durante 5 dias, seguido de remoção do medicamento durante 9 dias, seguido de um segundo regime de dosagem de cinco dias, como anteriormente. Δ castração cirúrgica provocou uma regressão estatisticamente não significativa dos tumores que tinham sido submetidos a quatro ciclos anteriores e dois ciclos concorrentes de tratamento com composto II-4 (Fig. 3). No global, os dados indicaram que a exposição repetida do composto II-4 não seleccionou uma população de tumores Dunning H, insensíveis a androgéneo. A castração, tratamento com composto II-4 e a combinação de composto II-4 com castração cirúrgica foi bem tolerada. Observou-se uma mortalidade limitada nos grupos controlo e castrados, de animais tratados com veículo ou composto II-4. Em cada caso, a mortalidade ocorreu na altura da medição do tumor, provavelmente devido a uma "overdose" de anestesia. 25

EXEMPLO 2:

Combinação do composto 11-12 e castração química

Sintetizou-se o composto 11-12 na Cephalon, Inc. Formulou-se o dicloridrato do composto 11-12 (10 mg/ml) num veículo contendo 3:2 (v/v) Gelucire (Gattefosse, Saint-Priest, França) em propilenoglicol (Spectrum, Gardena, CA) .

Utilizaram-se nesta experiência ratos Copenhaga cruzados entre si, macho, adultos, (200-240 g) obtidos da

Harlan Sprague Dawley (Indianapolis, IN) . A manutenção e manipulação dos ratos e o transplante de tumores Dunning R-3327 H foram realizadas como descrito no Exemplo 1 (acima).

Dividiram-se quarenta e seis ratos (peso: 380 + 8 g) com tumores Dunning H (1/6-33,2 cm3 de tamanho) em quatro grupos. 0 grupo 1 (N=12) serviu como veículo controlo (1 ml/kg, po BID, dias 0-20 e 31-45) . 0 grupo 2 (N=10) foi tratado com acetato de leuprolide (LUPRON DEPOT®) (5,2 mg/kg, sc aos dias 0 e 21. 0 grupo 3 (N=12) recebeu o composto 11-12 (10 mg/kg, po BID nos dias 0-20 e 31-45) . O grupo 4 (N=12) recebeu uma combinação de acetato de leuprolide (5,3 mg/kg, sc nos dias 0 e 21) e o composto II-12 (10 mg/kg, po BID nos dias 0-20 e 31-45). Os animais dos grupos 1 e 3 foram implantados sc com uma cápsula silástica de 2 cm de comprimento, cheia com testosterona.

As medições do tumor e as análises estatísticas foram realizadas como descrito no exemplo 1 (acima). O crescimento in vivo dos tumores Dunning H era consistente nos animais tratados com veículo. Observou-se 26 1

um aumento de aproximadamente 2,5 vezes no volume do tumor, ao dia 53. 0 início de cada ciclo de tratamento com composto 11-12 (10 mg/kg BID, po durante 21 dias com um período interino isento de medicamento, de dez dias) inibiu o crescimento do tumor Dunning H e levou a uma regressão marcada do tumor. A inibição do crescimento do tumor observada no grupo de tratamento do composto 11-12 era estatisticamente significativa, em comparação com o grupo controlo de veículo. Esta diferença foi observada desde a primeira medição do tumor, i.e. desde o dia 4 até ao final da experiência) . O tratamento com acetato de leuprolide, só por si, também resultou na regressão do tumor. Observou-se um novo crescimento, lento, do tumor, aproximadamente 32 dias após o início dos tratamentos com leuprolide (Fig. 4).

Em comparação com o leuprolide sozinho, ou composto 11-12 sozinho, a combinação de composto ΙΙ-12/leuprolide era significativamente mais eficaz (p<0,05) em manter uma taxa reduzida do crescimento do tumor, do que qualquer dos tratamentos sozinhos (Fig. 4). Observou-se o re-crescimento do tumor no grupo de tratamento com composto 11-12 e no grupo de tratamento com leuprolide, aproximadamente trinta dias após o início dos tratamentos. Pelo contrário, o grupo de tratamento combinação exibia uma duração maior do crescimento de tumor reduzido e era estatisticamente diferente do grupo do composto 11-12 e do grupo leuprolide, aos dias 35 e 39, respectivamente, até ao final da experiência no dia 54 (p<0,05; fig. 4).

Estes resultados experimentais demonstraram que a combinação do composto 11-12 com castração química era sinergística, em termos de eficácia anti-tumor (Figs. 1 e 4) . 27

Outras formas de concretização estão no âmbito das reivindicações.

Lisboa, 19 de Dezembro de 2001

O AGENTE OriCiAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL 28

Claims

}

REIVINDICAÇÕES 1. Composição que compreende um inibidor de tirosina cinase e um agente de castração química, seleccionado do grupo constituído por um estrogéneo, um agonista de LHRH, um antagonista de LHRH e um anti-androgéneo.
2 um indolocarbazolo cuja estrutura é:

(Composto II-4-LAE).

2. Utilização de um inibidor de tirosina cinase e de um agente de castração química, seleccionado do grupo constituído por um estrogéneo, um agonista de LHRH, um antagonista de LHRH e um anti-androgéneo, para a produção de um medicamento para a inibição da progressão de tumor da próstata.
3. Composição de acordo com a reivindicação 1, ou utilização de acordo com a reivindicação 2, em que o inibidor de tirosina cinase é um inibidor trkA, um inibidor trkB, ou um inibidor trkC.
4. Composição de acordo com a reivindicação 1, ou utilização de acordo com a reivindicação 2, em que o inibidor de tirosina cinase é um indolocarbazolo.
5. Composição ou utilização de acordo com a reivindicação 4, em que o indolocarbazolo é seleccionado do grupo constituído por: 1 um indolocarbazolo, cuja estrutura é ·,]

um indolocarbazolo cuja estrutura é:
6. Composição de acordo com a reivindicação 1, ou utilização de acordo com a reivindicação 2, em que o inibidor de tirosina cinase é um pirrolocarbazolo fundido.
7. Composição de acordo com a reivindicação 1, ou utilização de acordo com a reivindicação 2, em que a composição de acordo com a reivindicação 1, ou o medicamento de acordo com a reivindicação 2, são formulados para administração oral.
8. Composição de acordo com a reivindicação 1, ou utilização de acordo com a reivindicação 2, em que a composição de acordo com a reivindicação 1, ou o medicamento de acordo com a reivindicação 2, é formulado para administração parentérica.
9. Composição ou utilização de acordo com a reivindicação 8, em que o agonista de LHRH é acetato de leuprolide.
10. Composição ou utilização de acordo com a reivindicação 8, em que o anti-androgéneo é flutamida.
11. Composição de acordo com a reivindicação 1, ou utilização de acordo com a reivindicação 2, em que o agente de castração química é uma combinação de um agonista de LHRH e um anti-androgéneo.
12. Composição ou utilização de acordo com a reivindicação 3, em que o agonista de LHRH é acetato de leuprolide e o anti-androgéneo é flutamida.
13. Composição de acordo com a reivindicação 1, ou utilização de acordo com a reivindicação 2, em que o inibidor de tirosina cinase e o agente de castração química inibem de forma sinergística a progressão de tumor.
14. Composição de acordo com a reivindicação 1, ou utilização de acordo com a reivindicação 2, em que o inibidor de tirosina cinase e o agente de castração química são administrados em formulações separadas.
15. Composição de acordo com a reivindicação 1, ou utilização de acordo com a reivindicação 2, em que o inibidor de tirosina cinase e o agente de castração química são formulados em conjunto, numa composição única.
16. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3 - 15, para utilização em terapia.
17. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3-15 para utilização na inibição da progressão do tumor de próstata.
18. Utilização da composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3 - 15, para a produção de um medicamento para inibir a progressão do tumor de próstata. Lisboa, 19 de Dezembro de 2001 O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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