NO329975B1 - H-insulinforloper eller insulinanalogforloper, DNA, vektor, vertcelle, fremgangsmate for fremstilling samt anvendelse. - Google Patents
H-insulinforloper eller insulinanalogforloper, DNA, vektor, vertcelle, fremgangsmate for fremstilling samt anvendelse. Download PDFInfo
- Publication number
- NO329975B1 NO329975B1 NO20021335A NO20021335A NO329975B1 NO 329975 B1 NO329975 B1 NO 329975B1 NO 20021335 A NO20021335 A NO 20021335A NO 20021335 A NO20021335 A NO 20021335A NO 329975 B1 NO329975 B1 NO 329975B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- insulin
- precursor
- chain
- human insulin
- dna
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Substances N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 50
- 239000002243 precursor Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims description 19
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 3
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 31
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 28
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 24
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 15
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 15
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 14
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 claims description 9
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 claims description 7
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 101100379079 Emericella variicolor andA gene Proteins 0.000 abstract 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 abstract 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 30
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 7
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCC(=O)O)=CNC2=C1 GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101500021084 Locusta migratoria 5 kDa peptide Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 108700039926 insulin glulisine Proteins 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse gjelder et syntetisk derivat av proinsulin C-peptid. Proinsulin som omfatter dette derivat har bedre egenskaper enn vanlig ape-proinsulin, særlig blir shittutbyttet ved genteknologisk fremstilling av dette forbedret.
Antallet pasienter med diabetes øker stadig på verdensbasis. Proporsjonalt til dette øker behovet for insulin eller insulinderivater. Det er derfor viktig å optimalisere de foreliggende fremgangsmåter når det gjelder utbyttet av aktiv forbindelse. I europeisk patentskrift EP-B1 0 489 780 foreslås en fremgangsmåte for fremstilling av insulin og derivater derav. De der beskrevne vektorer benyttes ved fremstilling av humant insulin med plasmid pXNT90d5eller som utgangsplasmid for konstruksjon av plasmid pINT302d som er beskrevet i europeisk patentsøknad EP-A 0 821 006, som benyttes for fremstilling av et His(B31) His(B32) Gly(A21) - insulinderivat, eller for konstruksjon av den i europeisk patentsøknad EP-A 0 885 961 beskrevne vektor pINT329d, som benyttes for fremstilling av et Lys(B3) Glu(B29)-insulinderivat.
US4430266 omtaler en fremgangsmåte for å fremstille en insulinforløper, hvor aminosyre 1 i A-kjeden er koblet til aminosyre B30 i B-kjeden med et C-peptid som begynner med sekvensen Arg-Arg-Asp-Val.
Det har nå blitt funnet at spesielt fordelaktig proinsulinderivater er derivatene med formel I
hvori
Fus er en om ønskelig foreliggende fusjonsdel med ønsket sekvens,
B( 1 -3 0) er B -kj eden i humant insulin,
Y står for en aminosyrekjede som terminerer med en basisk aminosyre i C-enden,
n er mellom 2 og 50 og angir lengden av aminosyrekjeden Y, og A( 1 -21) er A-kj eden i humant insulin,
og hvori A- og/eller B-kjeden kan være modifisert ved utbytting, delesjon og/eller adhesjon av aminosyrer.
Sammenkobling av den humane B-kjede og den humane A-kjede ved hjelp av det fordelaktige C-peptid resulterer i et proinsulin som når det gjelder ekspresjonsutbytte forholder seg som villtype proinsulin, men hvis enzymatiske prosessering til insulin lettere kan styres slik at det ikke dannes forstyrrende rester av B-kjeder forlenget med arginin som må fjernes ved den videre bearbeidelse til et legemiddel, hvorved tap av utbytte oppstår.
Sammenkobles en B-kjede, forlenget med di-histidin i C-enden, med A-kjeden til humant insulin som inneholder glycin i posisjon A21 ved hjelp av C-peptidet ifølge oppfinnelsen, observeres et tilnærmet 20% høyere ekspresjonsutbytte sammenlignet med utbyttet som kan oppnås med plasmid pINT90d, og nesten fem ganger høyere utbytte enn hva som ble observert med plasmid pINT302d. I tillegg er, som beskrevet ovenfor, styringen av den enzymatiske prosessering forenklet.
Dersom en Lys(B3) Glu(B29) modifisert B-kjede sammenkobles med A-kjeden til humant insulin ved hjelp av det modifiserte C-peptid, observeres forbedrede foldingsegenskaper av proinsulinderivatet sammenlignet med proinsulin kodet av pINT329d. Utbyttet av råfusjonsproteinet er forhøyet og når samme nivå som det som observeres med plasmid pINT90d. I tillegg er styringen av den enzymatiske prosessering forenklet.
En spesielt fordelaktig utførelsesform av det nye C-peptid særpreges ved følgende aminosyresekvens:
Likeså angis mange mulige DNA-sekvenser som koder for det angitte C-peptid.
Et første aspekt ved oppfinnelsen vedrører en forløper for humant insulin eller en insulinanalog, kjennetgnet ved at den har formelen
hvori
Fus er en om ønskelig foreliggende fusjonsdel med ønsket sekvens, B(l-30) er B-kjeden i humant insulin,
Y står for en aminosyrekjede som terminerer med en basisk aminosyre i C-enden,
n er mellom 2 og 50 og angir lengden av aminosyrekjeden Y, og A(l-21) er A-kjeden i humant insulin,
og hvori A- og/eller B-kjeden kan være modifisert ved utbytting, delesjon og/eller adhesjon av aminosyrer, fortrinnsvis hvori Ynstår for aminosyrene 5 til 35 fra C-peptidet i humant insulin eller apeinsulin, spesielt foretrukket hvori Ynstår for aminosyren 11 til 35 i humant insulin.
Ytterligere en gjenstand for oppfinnelsen er en forløper som er beskrevet ovenfor hvori B-kjeden fra humant insulin inneholder modifikasjonene Lys(B3) Glu(B29) eller hvori B- og A-kjeden fra humant insulin inneholder modifikasjonene His(B31) FTis(B32) Gly(A21).
Videre er en gjenstand for oppfinnelsen et DNA som koder for en forløper som beskrevet ovenfor.
Også gjenstand for oppfinnelsen er en vektor som inneholder et DNA som koder for en forløper som beskrevet ovenfor, fortrinnsvis særpreget ved at vektoren er en ekspresjonsvektor som er egnet for ekspresjon i E. coli.
Ytterligere en gjenstand for oppfinnelsen er en E.coli-celle som inneholder en vektor som beskrevet ovenfor.
Nok en gjenstand for oppfinnelsen er en fremgangsmåte for fremstilling av en forløper som beskrevet ovenfor, hvori
(a) et DNA som beskrevet ovenfor, innføres i en vektor som beskrevet ovenfor; (b) vektoren (a) innføres i en E.coli-celle; (c) E.coli-cellen fra (b) inneholdende vektoren fra (a) anvendes for ekspresjon,
og
(d) Forløperen isoleres fra dyrkningsvæsken.
I tillegg er en gjenstand for oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av et DNA som beskrevet ovenfor, hvori
(a) dette DNA fremstilles med utgangspunkt i cDNA for humant insulin eller
apeinsulin ved hjelp av PCR og andre molekylærbiologiske teknikker, og (b) det angjeldende DNA isoleres.
Ytterligere en gjenstand for oppfinnelsen er en fremgangsmåte for fremstilling av humant insulin eller en insulinanalog, hvori
(a) en forløper som beskrevet ovenfor, fremstilles ifølge fremgangsmåten som
er beskrevet ovenfor,
(b) forløperen ifølge (a) foldes under egnede betingelser slik at disulfidbroene dannes på samme måte som i humant insulin og RDVP-Yn-delen og eventuelt fusjonsdelen Fus fjernes enzymatisk, og
(c) det humane insulin eller insulinanalogen renses.
Ytterligere en gjenstand for oppfinnelsen er anvendelse av en forløper som beskrevet ovenfor, for fremstilling av insulin eller en insulinanalog, hvori fremstillingen av insulin eller en insulinanalog fortrinnsvis skjer ifølge fremgangsmåten som er beskrevet ovenfor.
Ytterligere en gjenstand for oppfinnelsen er anvendelse av et DNA som beskrevet ovenfor for fremstilling av en forløper som beskrevet ovenfor.
Også gjenstand for oppfinnelsen er anvendelse av en vektor som beskrevet ovenfor for fremstilling av en forløper som beskrevet ovenfor.
Ytterligere en gjenstand for oppfinnelsen er anvendelse av en E.coli-celle som beskrevet ovenfor for fremstilling av en forløper som beskrevet ovenfor.
Oppfinnelsen vil nå beskrives ytterligere ved hjelp av eksempler, uten at den skal være begrenset av disse.
Eksempel 1: Ekspresjon av proinsulinderivater
Ekspresjonen skjer som beskrevet i EP-Bl 0 489 780. Ved fermentering i store volumer, kan modifikasjoner innføres. Ved sammenligning av ekspresjonsgraden benyttes imidlertid alltid de samme betingelser.
For arbeid i større målestokk gjelder følgende generelle fermenteringsoppskrift som, som et eksempel, er beskrevet for et volum på 7,5 liter.
Fermenteringsvolum: 7,51
Steriliseringsbetingelser: 21 °C, 20 minutter ved pH 3,5, justert til 7,0 med
NH3etter sterilisering
Fermenteringstemperatur: 37°C
pH-regulering: pH 7,0, justering med 25% ammoniakk i vann.
Omrøringstall: 1500 RPM
Lufttilførsel: 15 Nl/min. (2 wm)
Varighet: Tilnærmet 24 timer
Næringstilførsel: 65% glukose tilføres ved en OTR-verdi på 200
mmol^h"1 med en konstant hastighet på 12 gl^h"<1>Forkultur: En utsåingsampulle utsås i rustig tur og inkuberes i 3-4 timer ved 37°C, 250 RPM til en optisk tetthet
ved 540 nmpå~l.
Utsåing: Fermentoren ble tilsatt tilnærmet 40 ml forkultur. Induksjon: Ved en A540på > 40, tilsettes 40 mg/l (300
mg/fermentor) indolpropionsyre løst i tilnærmet 10 ml av en vandig Na2C03-løsning (med 0,17 g Na2C03).
Her betyr Ni = standard liter, wm = volum/volum/minutt og OTR = oksygentilførsels-hastighet.
Fementeringsmedier:
Sporelementløsning:
Eksempel 2: Fremstilling av insulin
Fremstillingen av insulin skjer ifølge kjente fremgangsmåter, feks. som beskrevet eller diskutert i EP-B1 0 489 780 eller EP-A 0 885 961. For folding og opparbeidelse av det foreliggende fusjonsprotein, anvendes fortrinnsviss fremgangsmåten beskrevet i EP-B1 0 668 282 (se Eksempel 2). Herved kanreaksjonsblandingen filtreres etter foldingen ifølge EP 0 288 809 før ytterligere opparbeidelse.
Eksempel 3: Konstruksjon av plasmid pINT358d, som koder for humant
proinsulin b- RDVP Cn-35-A med derivatisert C-kjede
For fremstilling av plasmidet ble primerne Tir og Insul 1, beskrevet i EP-B1 0 489 780, anvendt. I tillegg ble to nye primersekvenser syntetisert.
Med DNA fra plasmidet pINT90d som templat, ble en PCR utført med primerparene Tir/PINT358revII og Insul l/PINT358fHI utført ifølge EP-B1 0 489 780. Uttak av produktet fra de to reaksjonene ble slått sammen og benyttet i en tredje PCR sammen med primerparet Tir/Insul 1. Produktet fra denne reaksjonen ble knyttet med enzymene Sali og Ncol, og produktet fra denne restriksjonskutting ble etter rensing innsatt i EP-Bl 0 489 780 beskrevne plasmid pINR91d åpnet med Ncol/Sall. Det således fremstilte plasmid ble betegnet pINT358d. Strukturen ble bekreftet ved hjelp av DNA-sekvensanalyse. Kompetente E.coli-celler ble transformert med plasmid-DNA. Ekspresjon av proinsulin i bakterier skjedde ifølge Eksempel l. Etter folding ifølge Eksempel 2, skjer den enzymatiske omsetning av proinsulin til insulin og videre rensing ifølge EP-Bl 0 347 781. Sammenlignet med fremgangsmåten benyttet for pINT90d kan her randfraksjoner oppsamles i ionebytterkromatografitrinnet, da disse ikke er kontaminert med Arg(B3 l)-insulin.
Eksempel 4: Konstruksjon av plasmid pINT362d for fremstilling av
Lys(B3)Glu(B29)-RDVP-Ci^35-proinsulin
For konstruksjon av plasmidet ble plasmidene pINT329d og pINT358d anvendt som templat sammen med primerne Tir og Insul 1. I tillegg ble to nye primere, Salforward og 329rev, syntetisert.
Primer Salvorward har sekvensen:
Her angir sekvensdelen skrevet med uthevet skrift sekvensen som hybridiserer til plasmid pINT358d, mens resten av sekvensen er homolog med sekvenser i den B-kjedekodende del av plasmid pINT329d.
Primer 329rev har følgende sekvens:
Heri angir området skrevet med uthevet skrift, området som er homologt med "antisens"-tråden som utgjør enden av B-kjeden og som utgjør tripletten for arginin i plasmid i pINT329d. Resten av sekvensen hybridiserer med plasmid pINT358d. To PCR-reaksjoner ble utført. Her fungerte plasmid pINT329d som templat for primerparet Tir/329rev og pINT358d DNA som templat for primerparet Salforward/Insul 1.
De to reaksjonene førte til fragmenter som overlapper hverandre i området som tilsvarer primeren Salforward. Grunnet dette kunne de to fragmentene forenes i en tredje PCR og ved hjelp av primeren Tir og Insul 1 sammensettes til en DNA-sekvens som koder for insulinanalogen. Dette reaksjonsprodukt ble byttet med restriksjonsenzymene Ncol/Sall og deretter inntatt i pINT9ld åpnet med Sall/NcoL Kompetente celler fra E.coli-stammen K12 MM294 ble transformert med den tilsvarende ligeringsreaksjon. Plasmid-DNA ble isolert fra transformantene ogkarakterisert. Det riktige plasmid gis betegnelsen pINT362d.
Etter ekspresjonen ble det observert et råutbytte av fusjonsprotein tilsvarende utbyttet til pINT90d. Imidlertid er det observerte foldingsutbyttet tilnærmet 40% bedre enn for pINT329d.
Strukturen til fusjonsproteinet kodet av pHMT362d ser ut som følger:
Eksempel 5: Konstruksjon av plasmid pINT349d for fremstilling av His(B31)
His(B32) Gly(A21)-RDVP-CiWS-promsuIm
Deretter ble plasmid pINT140d, hvis DNA koder for insulinanalogen Gly(A21)-insulin, fremstilt.
For dette var det nødvendig med to oligonuleotider for anvendelse som primere i en
PCR:
Oligonukleotid Tir ble anvendt som "sense"-primer og oligonukleotid 140drev som "antisens"-primer:
De to primerne ble benyttet i en standard PCR med DNA fra plasmidet pINT90d. Reaksjonsproduktet ble kuttet med restriksjonsenzymene Ncol og Sali ifølge EP-B1 0 489 780 og deretter innsatt i vektoren pINT69d åpnet på tilsvarende måte. Herved dannes plasmid pINT140d som reisoleres etter transformasjon av E.coli K12 MM294 og karaktriseres ved hjelp av restriksjons- og sekvensanalyse.
Med utgangspunkt i DNA fra plasmid pINT140d, ble to PCR-reaksjoner gjennomført. Den første reaksjonen benytter primeren Tir og som revers primer PINT349a, som har følgende sekvens:
Deri angir sekvensene markert med en stjerne kodonene for nyinnførte aminosyrer.
Den andre PCR ble gjennomført med primeren Inul 1 og PINT349b. Primer PINT349b har sekvensen:
Fra posisjon 34 til posisjon 1 i DNA-sekvensen er primeren komplementær til PDSfT349a. Følgelig kan reaksjonsproduktene fra de to PCR-reaksjonene sammenkobles i en tredje PCR med primerne Tir og Insul 1 til DNA-fragmentet som koder for det ønskede proteininsulinderivat. Produktet fra denne reaksjonen kuttes som beskrevet med enzymene Ncol og Sali, innsettes i vektoren pINT91d åpnet med disse enzymene og transformeres inn i E.coli K12. Etter karakterisering av plasmider fra transformater gis den riktige plasmidkonstruksjon betegnelsen pINT349d.
Dersom fusjonsproteinet uttrykkes, observeres en tydelig forhøyelse av utbyttet som fusjonsprotein. Utbyttet er overraskende nok tilnærmet 20% høyere enn utbyttet som oppnås med pDMT90d og tilnærmet 5 ganger høyere enn hva som oppnås med plasmid pINT30d. Foldingshastigheten er i tillegg sammenlignbar med hastigheten som oppnås med pre-proinsulin fra ape, kodet av pINT90d.
Claims (18)
1.
Forløper for humant insulin eller en insulinanalog,karakterisert vedat den har formelen
hvori
Fus er en om ønskelig foreliggende fusjonsdel med ønsket sekvens, B(l -30) er B-kjeden i humant insulin,
Y står for en aminosyrekjede som terminerer med en basisk aminosyre i C-
enden,
n er mellom 2 og 50 og angir lengden av aminosyrekjeden Y, og A( 1 -21) er A-kj eden i humant insulin,
og hvori A- og/eller B-kjeden kan være modifisert ved utbytting, delesjon og/eller adhesjon av aminosyrer.
2.
Forløper iøflge krav 1,karakterisert vedat Y„ står for aminosyren 5 til 35 i C-peptidet fra humant insulin eller apeinsulin.
3.
Forløper ifølge krav 1,karakterisert vedat Ynstår for aminosyrene 11 til 35 fra humant insulin.
4.
Forløper ifølge et hvilket som helst av kravene 1-3,karakterisert vedat B- kjeden fra humant insulin omfatter modifikasjonen Lys(B3)Glu(B29).
5.
Forløper ifølge et hvilket som helst av kravene 1-3,karakterisert vedat B- og A-kjeden fra humant insulin omfatter modifikasjonen His(B3 l)His(B32)Gly(A21).
6.
DNA,karakterisert vedat det koder for en forløper ifølge et hvilket som helst av kravene 1-5.
7.
Vektor,karakterisert vedat den omfatter et DNA ifølge krav 6.
8.
Vektor ifølge krav 7,karakterisert vedat den er en ekspresjonsvektor som er egnet for ekspresjon i E.coli,
9.
E.coli-celle,karakterisert vedat den omfatter en vektor ifølge krav 8.
10.
Fremgangsmåte for fremstilling av en forløper ifølge et hvilket som helst av kravene 1 — 5,karakterisert vedat a) DNA ifølge krav 6 innføres i en vektor ifølge krav 7, b) Vektoren ifølge (a) innføres i en E.coli-celle, c) E.coli-cellen ifølge (b) omfattende vektoren ifølge (a) anvendes for ekspresjon, og d) Forløperen isoleres fra dyrkningsvæsken.
11.
Fremgangsmåte for fremstilling av et DNA ifølge krav 6,karakterisert vedat a) DNA ifølge krav 6 erholdes med utgangspunkt i cDNA for humant insulin eller apeinsulin ved hjelp av PCR og andre molekylærbiologiske teknikker, og b) det angjeldende DNA isoleres.
12.
Fremgangsmåte for fremstilling av humant insulin eller en insulinanalog,karakterisert vedat a) en forløper ifølge fremgangsmåten i krav 10 erholdes, b) forløperen ifølge (a) foldes under egnede betingelser slik at disulfidbroene dannes på samme måte som i humant insulin og hvori RDVP-Yn-delen og eventuelt fusjonsandelen Fus fjernes enzymatisk, og c) det humane insulin eller insulinanalogen renses.
13.
Anvendelse av en forløper ifølge et hvilket som helst av kravene 1 - 5 for fremstilling av insulin eller en insulinanalog.
14.
Anvendelse ifølge krav 13, hvori fremstillingen av insulin eller en insulinanalog skjer ifølge fremgangsmåten i krav 12.
15.
Anvendelse av et DNA ifølge krav 6 for fremstilling av en forløper ifølge et hvilket som helst av kravene 1-5.
16.
Anvendelse av en vektor ifølge krav 8 for fremstilling av en forløper ifølge et hvilket som helst av kravene 1-5.
17.
Anvendelse av en E.coli-celle ifølge krav 9 for fremstilling av en forløper ifølge et hvilket som helst av kravene 1-5.
18.
Anvendelse ifølge et av kravene 15,16 eller 17, hvor fremstillingen av forløperen skjer ifølge fremgangsmåten fra krav 10.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19947456A DE19947456A1 (de) | 1999-10-02 | 1999-10-02 | C-Peptid zur verbesserten Herstellung von Insulin und Insulinanaloga |
| PCT/EP2000/009017 WO2001025278A1 (de) | 1999-10-02 | 2000-09-15 | C-peptid zur verbesserten herstellung von insulin und insulinanaloga |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20021335D0 NO20021335D0 (no) | 2002-03-18 |
| NO20021335L NO20021335L (no) | 2002-06-03 |
| NO329975B1 true NO329975B1 (no) | 2011-01-31 |
Family
ID=7924253
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20021335A NO329975B1 (no) | 1999-10-02 | 2002-03-18 | H-insulinforloper eller insulinanalogforloper, DNA, vektor, vertcelle, fremgangsmate for fremstilling samt anvendelse. |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6534288B1 (no) |
| EP (1) | EP1222207B1 (no) |
| JP (1) | JP4681784B2 (no) |
| KR (1) | KR100823463B1 (no) |
| CN (1) | CN1193042C (no) |
| AT (1) | ATE380196T1 (no) |
| AU (1) | AU778369B2 (no) |
| BR (2) | BR0014464A (no) |
| CA (1) | CA2385857C (no) |
| CY (1) | CY1107860T1 (no) |
| DE (2) | DE19947456A1 (no) |
| DK (1) | DK1222207T3 (no) |
| ES (1) | ES2295054T3 (no) |
| HK (1) | HK1049016B (no) |
| HU (1) | HU228313B1 (no) |
| IL (2) | IL148942A0 (no) |
| MX (1) | MXPA02003103A (no) |
| NO (1) | NO329975B1 (no) |
| NZ (1) | NZ518066A (no) |
| PL (1) | PL203195B1 (no) |
| PT (1) | PT1222207E (no) |
| SI (1) | SI1222207T1 (no) |
| TW (1) | TWI265168B (no) |
| WO (1) | WO2001025278A1 (no) |
| ZA (1) | ZA200202520B (no) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7176278B2 (en) | 2001-08-30 | 2007-02-13 | Biorexis Technology, Inc. | Modified transferrin fusion proteins |
| US20050250676A1 (en) * | 2001-11-19 | 2005-11-10 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Method of activating insulin receptor substrate-2 to stimulate insulin production |
| US20040038864A1 (en) * | 2002-06-27 | 2004-02-26 | Per Balschmidt | Use of dimethyl sulfone as isotonicity agent |
| DE10235168A1 (de) | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Preproinsulin |
| ATE517119T1 (de) * | 2003-12-03 | 2011-08-15 | Novo Nordisk As | Einzelketteninsulin |
| CN1663960B (zh) * | 2004-03-01 | 2012-07-04 | 重庆富进生物医药有限公司 | 高效表达重组人胰岛素原及其类似物的新型c肽 |
| US8927015B2 (en) * | 2006-04-12 | 2015-01-06 | Emisphere Technologies, Inc. | Formulations for delivering insulin |
| DE102008025008A1 (de) | 2008-05-24 | 2009-11-26 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008003568A1 (de) | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008003566A1 (de) | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| CA2711752A1 (en) * | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Novel insulin derivatives having an extremely delayed time-action profile |
| DE102008025007A1 (de) | 2008-05-24 | 2009-11-26 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| WO2009087081A2 (de) * | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue insulinderivate mit extrem verzögertem zeit-/wirkungsprofil |
| BR122013025625B1 (pt) | 2008-10-17 | 2021-08-03 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Composição farmacêutica, seu uso e método de preparação da mesma, kit e dispositivo |
| DK2498802T3 (en) | 2009-11-13 | 2015-04-13 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition comprising a GLP-1 agonist, insulin and a methionine |
| MY159565A (en) | 2009-11-13 | 2017-01-13 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition comprising a glp-1 agonist and methionine |
| HUE031181T2 (en) | 2010-08-30 | 2017-06-28 | Sanofi Aventis Deutschland | Use of AVE0010 for the manufacture of a medicament for the treatment of type 2 diabetes |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| KR101983982B1 (ko) | 2011-08-29 | 2019-05-30 | 사노피-아벤티스 도이칠란트 게엠베하 | 2형 당뇨병 환자의 혈당 조절에 사용하기 위한 약제학적 병용물 |
| AR087744A1 (es) | 2011-09-01 | 2014-04-16 | Sanofi Aventis Deutschland | Composicion farmaceutica para uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa |
| TWI780236B (zh) | 2013-02-04 | 2022-10-11 | 法商賽諾菲公司 | 胰島素類似物及/或胰島素衍生物之穩定化醫藥調配物 |
| BR112016013832A2 (pt) | 2014-01-09 | 2017-08-08 | Sanofi Sa | Uso de análogo e/ou derivado de insulina, formulação farmacêutica e processo para a preparação da mesma, kit e dispositivo médico |
| CN105960249B (zh) | 2014-01-09 | 2021-03-16 | 赛诺菲 | 胰岛素类似物和/或胰岛素衍生物的稳定化药物制剂 |
| WO2015104310A1 (en) | 2014-01-09 | 2015-07-16 | Sanofi | Stabilized pharmaceutical formulations of insulin aspart |
| CN107206058A (zh) | 2014-12-12 | 2017-09-26 | 赛诺菲-安万特德国有限公司 | 甘精胰岛素/利西拉来固定比率配制剂 |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA811972B (en) * | 1980-03-27 | 1982-11-24 | Lilly Co Eli | Process for producing an insulin precursor |
| US4430266A (en) * | 1980-11-28 | 1984-02-07 | Eli Lilly And Company | Process for producing an insulin precursor |
| HRP940432B1 (en) * | 1994-08-05 | 2003-10-31 | Pliva Pharm & Chem Works | Dna sequences encoding biosynthetic insulin precursors and process for preparation of insulin |
| EP0821006B1 (de) * | 1996-07-26 | 2004-04-21 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Insulinderivate mit erhöhter Zinkbindung |
| DE19726167B4 (de) * | 1997-06-20 | 2008-01-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung |
-
1999
- 1999-10-02 DE DE19947456A patent/DE19947456A1/de not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-09-15 CA CA2385857A patent/CA2385857C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 NZ NZ518066A patent/NZ518066A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-09-15 EP EP00960664A patent/EP1222207B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 PL PL354078A patent/PL203195B1/pl unknown
- 2000-09-15 JP JP2001528218A patent/JP4681784B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 BR BR0014464-9A patent/BR0014464A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-09-15 AT AT00960664T patent/ATE380196T1/de active
- 2000-09-15 AU AU72877/00A patent/AU778369B2/en not_active Expired
- 2000-09-15 PT PT00960664T patent/PT1222207E/pt unknown
- 2000-09-15 MX MXPA02003103A patent/MXPA02003103A/es active IP Right Grant
- 2000-09-15 DK DK00960664T patent/DK1222207T3/da active
- 2000-09-15 DE DE50014830T patent/DE50014830D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 BR BRPI0014464A patent/BRPI0014464B8/pt unknown
- 2000-09-15 IL IL14894200A patent/IL148942A0/xx unknown
- 2000-09-15 WO PCT/EP2000/009017 patent/WO2001025278A1/de active IP Right Grant
- 2000-09-15 CN CNB008137137A patent/CN1193042C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 KR KR1020027004275A patent/KR100823463B1/ko active IP Right Grant
- 2000-09-15 SI SI200030981T patent/SI1222207T1/sl unknown
- 2000-09-15 ES ES00960664T patent/ES2295054T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 HU HU0202755A patent/HU228313B1/hu unknown
- 2000-09-29 TW TW089120149A patent/TWI265168B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-10-02 US US09/676,787 patent/US6534288B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-03-18 NO NO20021335A patent/NO329975B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-03-28 ZA ZA200202520A patent/ZA200202520B/xx unknown
- 2002-03-31 IL IL148942A patent/IL148942A/en active IP Right Grant
-
2003
- 2003-02-18 HK HK03101211.8A patent/HK1049016B/zh not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-01-18 CY CY20081100078T patent/CY1107860T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO329975B1 (no) | H-insulinforloper eller insulinanalogforloper, DNA, vektor, vertcelle, fremgangsmate for fremstilling samt anvendelse. | |
| AU615760B2 (en) | Insulin analogues | |
| AU638277B2 (en) | Fusion proteins, their preparation and use | |
| US6777207B2 (en) | Method for making insulin precursors and insulin precursor analogues having improved fermentation yield in yeast | |
| CA2392840C (en) | Method for making insulin precursors and insulin precursor analogs | |
| NO177009B (no) | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av insulinanaloger | |
| NO810986L (no) | Bakteriell polypeptid-ekspresjon under anvendelse av tryptofon-promoter-operator | |
| NO300640B1 (no) | Fremgangsmåte ved fremstilling av nye insulinforbindelser | |
| NO301483B1 (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av humaninsulinanaloger | |
| DE102005046113A1 (de) | Verfahren zur Amidierung von Polypetiden mit C-terminalen basischen Aminosäuren unter Verwendung spezifischer Endoproteasen | |
| CN110128521A (zh) | 用于生产重组融合蛋白的辅助蛋白、编码基因、重组融合蛋白、重组表达载体及制备方法 | |
| RU2354702C2 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pHINS11, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК-ПРЕДШЕСТВЕННИК ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА, КЛЕТКА Escherichia coli, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК pHINS11, ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli JM109/pHINS11 - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА-ПРЕДШЕСТВЕННИКА ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА | |
| CN113801233B (zh) | 一种索玛鲁肽的制备方法 | |
| CN113249288B9 (zh) | 一种表达glp-1类似物的重组菌及其应用 | |
| CN101605889A (zh) | 含有高表达分泌胰岛素前体的融合蛋白、编码该融合蛋白的dna和胰岛素的制备方法 | |
| CN113801234B (zh) | 一种索玛鲁肽衍生物及其应用 | |
| CN112646044B (zh) | TFF2-Fc融合蛋白及其高效表达生产方法 | |
| CN114380903A (zh) | 一种胰岛素或其类似物前体 | |
| FI97549C (fi) | Menetelmä vierasproteiinien valmistamiseksi Streptomycessoluissa | |
| Son et al. | Effects of temperature shift strategies on human preproinsulin production in the fed-batch fermentation of recombinant Escherichia coli | |
| RU2325440C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pGG-1, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ПРОИНСУЛИНА GLARGIN ЧЕЛОВЕКА И ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BGG18 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ПРОИНСУЛИНА GLARGIN | |
| RU2337964C2 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pAS-2, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ПРОИНСУЛИНА Aspart ЧЕЛОВЕКА, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli BAS2 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ПРОИНСУЛИНА Aspart | |
| Roytrakul et al. | A Rapid and Simple Method for Construction and Expression of a Synthetic | |
| HUT72848A (en) | Dna sequences encoding novel biosynthetic insulin precursors and process for preparation of insulin | |
| JP2004514450A (ja) | 酵母における異種ポリペチドの産生 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |